TWI814279B - 抗cd40抗體及其用途 - Google Patents

Abstract

本發明提供新穎抗CD40抗體、包括該等新穎抗體之組合物、編碼該等抗體之核酸、及製造與使用其的方法。

Description

抗CD40抗體及其用途

本申請案尤其係關於新穎抗CD40抗體、包括該等新抗體之組合物、編碼該等抗體之核酸及製造與使用其的方法。

癌症療法包含廣泛範圍之治療性途徑，包括手術、放射及化學療法。儘管各種途徑允許醫藥從業者可用較寬廣選擇之治療來治療癌症，但現有療法存在多種缺點，諸如，缺乏優於正常、健康細胞靶向癌細胞的選擇性及癌症針對治療的抗性之發展。 基於靶向療法(其優於正常細胞優先干擾癌細胞之細胞過程)之當前的途徑已導致具有相比於諸如放射治療之非靶向療法更少副效應的化學治療方案。 癌症免疫治療，特定言之活化宿主之免疫系統之T細胞以預防癌細胞之增殖或殺死癌細胞的試劑之發展，已作為補充現有護理之標準的有前景的治療性方法出現。參見例如，Miller等人 Cancer Cell, 27, 439-449 (2015)。此類免疫治療途徑包括用於調變免疫系統殺死癌細胞之抗體的發展。舉例而言，抗PD-1阻斷抗體派立珠單抗(pembrolizumab) (Keytruda®)及尼沃單抗(nivolumab) (Opdivo®)已在美國及歐盟經批准用以治療諸如不可切除性或轉移性黑素瘤及轉移性非小細胞肺癌的疾病。抑制免疫抑制性蛋白質(諸如，CTLA-4)之成果已導致抗CTLA-4抗體(諸如，曲美單抗(tremelimumab)及伊派利單抗(ipilimumab) (Yervoy®))之發展及臨床評價。 仍存在對於補充現有護理之治療性標準的替代途徑及額外癌症治療。

人類CD40 (SEQ ID NO: 40)為在抗原呈遞細胞上表現之腫瘤壞死因子(TNF)受體超家族成員(TNF超家族成員5)，該等抗原呈遞細胞諸如，B細胞、樹突狀細胞(DC)及單核球以及非免疫細胞，包括某些類型之腫瘤細胞。當由人類CD40配位體(SEQ ID NO: 41)活化時，人類CD40活化抗原呈遞細胞且誘使來自固有免疫系統及適應性免疫系統兩者的反應。促效CD40試劑可用於誘使免疫系統預防腫瘤細胞之增殖及/或殺死腫瘤細胞，且因此提供實體腫瘤之有效治療性治療。 本發明提供與人類CD40 (SEQ ID NO: 40)特異性結合之抗CD40抗體及其結合片段。例示性CDR之胺基酸序列以及例示性抗CD40抗體之重鏈及輕鏈之V _H區及V _L區的胺基酸序列提供於下文實施方式中。 本文所描述之抗CD40抗體之V _H鏈及V _L鏈提供可在存在或不存在CD40配位體(CD40L)時活化人類CD40而不與CD40L-CD40結合相互作用競爭的異位促效受體反應。此外，本發明抗CD40抗體藉由與CD40之相互作用可增強CD40L與CD40結合。 抗CD40抗體可包括更改抗體之特性之修飾及/或突變，該等特性諸如，延長半衰期、增加或減少ADCC、或增加促效活性，如此項技術中已知。 本文提供包含編碼本發明之抗CD40抗體之核苷酸序列的核酸，同樣的為包含核酸之載體。另外，本文提供用包含編碼所揭示之抗CD40抗體之核苷酸序列之載體轉化的原核及真核宿主細胞，以及經工程改造以表現核苷酸序列的真核(諸如，哺乳動物)宿主細胞。亦提供藉由培養宿主細胞及回收抗體來製造抗體的方法，且進一步在下文實施方式中論述。 在另一態樣中，本發明提供包括本文所描述之抗CD40抗體之組合物。組合物一般而言包含一或多種如本文所描述之抗CD40抗體及/或其鹽、及一或多種賦形劑、載劑或稀釋劑。 本發明提供用抗CD40抗體治療經診斷具有實體腫瘤之個體(諸如，人類個體)的方法。該方法一般而言涉及向個體投與一定量之本文所描述之可有效地提供治療效益的抗CD40抗體。個體可經診斷具有可最新診斷、復發或復發及頑抗性的多種實體腫瘤中之任一者。通常以靜脈內輸注或瘤內注射在介於約0.001 mg/kg至約4 mg/kg之範圍內的劑量下來投與抗CD40抗體。通常以一週兩次、一週一次、每兩週一次、每三週一次、每四週一次、每五週一次、每六週一次、每七週一次或每八週一次靜脈內輸注或瘤內注射來投與抗CD40抗體。 可投與抗CD40抗體作為單一治療劑(單藥療法)或輔助通常(但非必需)用於治療實體腫瘤之彼等之其他治療劑，或與該等其他治療劑一起投與。治療劑通常應以其經批准之劑量、投與途徑及投與頻率來使用，但可以更低之劑量來使用。 抗CD40抗體可經由各種投與途徑或模式來投與，該等投與途徑或模式包括但不限於靜脈內輸注及/或注射、皮下注射及瘤內注射。投與量應視投與途徑、給藥時程、所治療之癌症之類型、所治療之癌症的階段及其他參數(諸如，患者之年齡及體重)而定，如此項技術中所熟知。經預測以提供治療效益之具體例示性給藥排程在實施方式中提供。 基於本文提出之資料，預期，本文所描述之抗CD40抗體將向診斷具有實體腫瘤之個體提供治療效益。

相關申請案之交叉參考本申請案根據35 U.S.C. § 119(e)主張2016年5月27日申請之美國臨時申請案第62/342,417號之權益，其內容以引用之方式在此將其全部內容併入至本文中。 序列表本申請案含有序列表，該序列表已以ASCII格式以電子方式提交且其全部內容以引用之方式併入本文中。在2017年5月17日創建之該ASCII複本命名為381493-285GENERIC_SL.txt且大小為106,226位元組。 本發明係關於特異性結合人類CD40 (SEQ ID NO: 40)之抗體及片段、包含抗體之組合物、編碼抗CD40抗體之聚核苷酸、能夠製造抗體之宿主細胞、適用於製造抗體及結合片段之方法及組合物，及使用其之各種方法。 如熟習技術者應瞭解，抗體在本質上為「模組化」的。在本發明中，描述組成抗體之各種「模組」之各種具體實施例。作為具體非限制性實例，描述V _HCDR、V _H鏈、V _LCDR及V _L鏈的各種具體實施例。希望，所有具體實施例可彼此組合，如同明確單獨地描述各具體組合。 7.1 縮寫本文所描述之抗體、結合片段、ADC及聚核苷酸在多個實施例中係藉助於其各別多肽或聚核苷酸序列來描述。除非另外指明，否則多肽序列係以N→C取向提供；聚核苷酸序列以5'→3'取向。對於多肽序列，針對基因編碼的胺基酸可使用習知三個字母縮寫或一個字母縮寫，如以下表1中所指出。

表1 編碼的胺基酸縮寫
胺基酸	三個字母縮寫	一個字母縮寫
丙胺酸	Ala	A
精胺酸	Arg	R
天冬醯胺	Asn	N
天冬胺酸	Asp	D
半胱胺酸	Cys	C
麩胺酸	Glu	E
麩醯胺	Gln	Q
甘胺酸	Gly	G
組胺酸	His	H
異白胺酸	Ile	I
白胺酸	Leu	L
離胺酸	Lys	K
甲硫胺酸	Met	M
苯丙胺酸	Phe	F
脯胺酸	Pro	P
絲胺酸	Ser	S
蘇胺酸	Thr	T
色胺酸	Trp	W
酪胺酸	Tyr	Y
纈胺酸	Val	V

某些序列係用指定胺基酸殘基屬於某些類別(例如，脂族、疏水性的等)之結構化學式來定義。如本文所使用之基因編碼的胺基酸屬於之各種類別在以下表2中指出。一些胺基酸可能屬於多於一種類別。半胱胺酸(其含有硫氫基)及脯胺酸(其構形上受限)並未指定類別。

表2 編碼的胺基酸類別
類別	胺基酸
脂族	A, I, L,V
芳族	F, Y, W
非極性	M, A, I, L, V
極性	N, Q, S, T
鹼性	H, K, R
酸性	D, E
小型的	A, G

用於本文揭示之各種例示性抗體之縮寫提供於以下表3中：

表 3 抗體縮寫
純系 / 名稱	縮寫	V H 序列 ( 圖 2A 至圖 2G)	V L 序列 ( 圖 2A 至圖 2G)
AD163.9.3	muAb1	muAb1 V H	SEQ ID NO:101	muAb1 V L	SEQ ID NO:151
AD166.4.4	muAb2	muAb2 V H	SEQ ID NO:102	muAb2 V L	SEQ ID NO:152
AD175.14.11	muAb3	muAb3 V H	SEQ ID NO:103	muAb3 V L	SEQ ID NO:153
AD163.10.7	muAb4	muAb4 V H	SEQ ID NO:104	muAb4 V L	SEQ ID NO:154
AD165.1.2	muAb5	muAb5 V H	SEQ ID NO:105	muAb5 V L	SEQ ID NO:155
AD163.162.1	muAb6	muAb6 V H	SEQ ID NO:106	muAb6 V L	SEQ ID NO:156
AD163.27.12	muAb7	muAb6 V H	SEQ ID NO:106	muAb7 V L	SEQ ID NO:157
AD163.7.2	muAb8	muAb8 V H	SEQ ID NO:107	muAb8 V L	SEQ ID NO:158
AD164.14.6	muAb9	muAb9 V H	SEQ ID NO:108	muAb9 V L	SEQ ID NO:159
AD164.76.3	muAb10	muAb10 V H	SEQ ID NO:109	muAb10 V L	SEQ ID NO:160
人類化的muAb6 #1	huAb6-1	huAb6-1 V H	SEQ ID NO:110	huAb6-1 V L	SEQ ID NO:161
人類化的muAb6 #2	huAb6-2	huAb6-2 V H	SEQ ID NO:111	huAb6-1 V L	SEQ ID NO:161
人類化的muAb6 #3	huAb6-3	huAb6-3 V H	SEQ ID NO:112	huAb6-1 V L	SEQ ID NO:161
人類化的muAb8 #1	huAb8-1	huAb8-1 V H	SEQ ID NO:113	huAb8-1 V L	SEQ ID NO:162
人類化的muAb8 #2	huAb8-2	huAb8-2 V H	SEQ ID NO:114	huAb8-1 V L	SEQ ID NO:162
人類化的muAb8 #3	huAb8-3	huAb8-3 V H	SEQ ID NO:115	huAb8-1 V L	SEQ ID NO:162
人類化的muAb9 #1	huAb9-1	huAb9-1 V H	SEQ ID NO:116	huAb9-1 V L	SEQ ID NO:163
人類化的muAb9 #2	huAb9-2	huAb9-2 V H	SEQ ID NO:117	huAb9-1 V L	SEQ ID NO:163
人類化的muAb9 #3	huAb9-3	huAb9-3 V H	SEQ ID NO:118	huAb9-1 V L	SEQ ID NO:163
人類化的muAb9 #4	huAb9-4	huAb9-1 V H	SEQ ID NO:116	huAb9-4 V L	SEQ ID NO:164
人類化的muAb9 #5	huAb9-5	huAb9-2 V H	SEQ ID NO:117	huAb9-4 V L	SEQ ID NO:164
人類化的muAb9 #6	huAb9-6	huAb9-3 V H	SEQ ID NO:118	huAb9-4 V L	SEQ ID NO:164
人類化的muAb9 #7	huAb9-7	huAb9-7 V H	SEQ ID NO:119	huAb9-7 V L	SEQ ID NO:165
人類化的muAb9 #8	huAb9-8	huAb9-8 V H	SEQ ID NO:120	huAb9-7 V L	SEQ ID NO:165
人類化的muAb9 #9	huAb9-9	huAb9-9 V H	SEQ ID NO:121	huAb9-9 V L	SEQ ID NO:166
再人類化的muAb9版本#1	huAb9 rehu#1	huAb9 rehuVH4 V H	SEQ ID NO:122	huAb9 VK1 V L	SEQ ID NO:167
再人類化的muAb9版本#2	huAb9 rehu#2	huAb9 rehuVH4 V H	SEQ ID NO:122	huAb9 rehuVK2 V L	SEQ ID NO:168
再人類化的muAb9版本#3	huAb9 rehu#3	huAb9 rehuVH3 V H	SEQ ID NO:123	huAb9 rehuVK1 V L	SEQ ID NO:169
人類化的muAb9 A2I	huAb9 A2I	huAb9-2V H	SEQ ID NO:117	huAb9A2I V L	SEQ ID NO:170
人類化的muAb9 A2V	huAb9 A2V	huAb9-2V H	SEQ ID NO:117	huAb9A2V V L	SEQ ID NO:171

7.2 定義除非本文中另外定義，否則結合本發明使用之科學與技術術語應具有由一般技術者通常理解之含義。 7.3 抗 CD40 抗體及結合片段在一個態樣中，本發明係關於特異性結合人類CD40受體(亦稱為腫瘤壞死因子受體超家族成員5，TNFRSF5、Bp50及CD40L受體)之抗體及/或其結合片段。 如本文所使用，術語「抗體」 (Ab)係指與特定抗原(此處為CD40)特異性結合之免疫球蛋白分子。在一些實施例中，本發明之抗CD40抗體與人類CD40結合且因此調變(例如，活化)免疫系統。所得免疫系統反應抑制諸如腫瘤細胞之細胞的增殖，且在一些個例中對於腫瘤細胞為細胞毒性的。本發明之抗CD40抗體包含輕鏈可變域及重鏈可變域兩者中之互補決定區(CDR)，亦稱為高變區。可變域之更高度保守部分稱為框架(FR)。如此項技術中已知，描繪抗體之高變區之胺基酸位置/邊界可視上下文及此項技術中已知之各種定義而變化。可變域內之一些位置可視為雜交高變位置，原因在於此等位置可根據一個準則集合認為在高變區內而根據不同準則集合認為在高變區外部。此等位置中之一或多者亦可在延長高變區中找到。本發明提供包含此等雜交高變位置中之修飾的抗體。天然重鏈及輕鏈之可變域各自包含由三個CDR連接之四個FR區(大部分藉由採用β片構形)，該三個CDR形成連接(且在一些情況下形成β片結構之一部分)β片結構之環。各鏈中之CDR由FR區緊密結合在一起，且與來自另一鏈之CDR促使形成抗體之靶結合位點。參見Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institute of Health, Bethesda, Md. 1987)。如本文所使用，除非另外指明，否則免疫球蛋白胺基酸殘基之編號係根據Kabat等人之免疫球蛋白胺基酸殘基編號系統來進行。 本發明之抗體可為多株、單株、基因工程改造及/或在本質上另外修飾的，包括但不限於嵌合抗體、人類化抗體、人類抗體、靈長類化抗體、單鏈抗體等。在各種實施例中，抗體包含抗體之恆定區之全部或一部分。在一些實施例中，恆定區為選自以下各者之同型：IgA (例如，IgA ₁或IgA ₂)、IgD、IgE、IgG (例如，IgG ₁、IgG ₂、IgG ₃或IgG ₄)及IgM。在具體實施例中，本文所描述之抗CD40抗體包含IgG ₁。在其他實施例中，抗CD40抗體包含IgG ₂。在其他具體實例中，抗CD40抗體包含IgG ₄。如本文所使用，抗體之「恆定區」包括天然恆定區、同種異型或天然變異體，諸如D356E及L358M、或人類IgG ₁中之A431G。參見例如, Jefferis及Lefranc, MAbs, 1(4): 332-338 (2009年7月-8月)。 抗CD40抗體之輕恆定區可為κ (kappa)輕區或λ (lambda)區。λ輕區可為已知亞型中之任一者，例如，λ ₁、λ ₂、λ ₃或λ ₄。在一些實施例中，抗CD40抗體包含κ (kappa)輕區。 如本文所使用，術語「單株抗體」並不限於經由融合瘤技術製造之抗體。單株抗體藉由此項技術中可用的或已知之任何方式自單一純系獲得，包括任何真核、原核或噬菌體純系。用於本發明之單株抗體可使用此項技術中已知之廣泛多種技術來製備，包括融合瘤技術、重組技術及噬菌體展示技術或其組合之使用。在本發明之多種使用(包括人類中之抗CD40抗體在活體內之使用)中，可適當地使用嵌合抗體、靈長類化抗體、人類化抗體或人類抗體。 如本文所使用，術語「嵌合」抗體係指具有源自非人類免疫球蛋白(諸如，大鼠或小鼠抗體)之可變序列及通常選自人類免疫球蛋白模板之人類免疫球蛋白恆定區的抗體。用於製造嵌合抗體之方法為此項技術中已知。參見例如, Morrison, 1985, Science 229(4719):1202-7；Oi等人 ,1986, BioTechniques 4:214-221；Gillies等人 ,1985, J. Immunol. Methods 125:191-202；美國專利第5,807,715號、第4,816,567號、及第4,816,397號。 非人類(例如，鼠類)抗體之「人類化」形式為含有源自非人類免疫球蛋白之極少序列的嵌合免疫球蛋白。一般而言，人類化抗體將包含實質上所有至少一個及典型地兩個可變域，其中所有或實質上所有CDR區與非人類免疫球蛋白之彼等區相對應且所有或實質上所有FR區為人類免疫球蛋白序列之彼等區。人類化抗體亦可包含免疫球蛋白恆定區(Fc)的至少一部分，通常人類免疫球蛋白共同序列之彼部分。抗體人類化之方法為此項技術中已知。參見例如, Riechmann等人 ,1988, Nature 332:323-7；頒予Queen等人之美國專利第5,530,101號、第5,585,089號、第5,693,761號、第5,693,762號及第6,180,370號；EP239400；PCT公開案WO 91/09967；美國專利第5,225,539號；EP592106；EP519596；Padlan, 1991, Mol. Immunol., 28:489-498；Studnicka等人 ,1994, Prot. Eng. 7:805-814；Roguska 等人 ,1994, Proc. Natl. Acad. Sci. 91:969-973；及美國專利第5,565,332號。 「人類抗體」包括具有人類免疫球蛋白之胺基酸序列之抗體，且包括自人類免疫球蛋白庫或自針對一或多種人類免疫球蛋白轉殖基因且並不表現內源性免疫球蛋白之動物分離的抗體。人類抗體可利用各種此項技術中已知之方法(包括噬菌體展示方法)使用源自人類免疫球蛋白序列之抗體庫來製備。參見美國專利第4,444,887號及第4,716,111號；及PCT公開案WO 98/46645、WO 98/50433、WO 98/24893、WO 98/16654、WO 96/34096、WO 96/33735及WO 91/10741。人類抗體亦可使用不能表現功能內源性免疫球蛋白但可表現人類免疫球蛋白基因之轉殖基因小鼠來製造。參見例如，PCT公開案WO 98/24893、WO 92/01047、WO 96/34096、WO 96/33735；美國專利第5,413,923號、第5,625,126號、第5,633,425號、第5,569,825號、第5,661,016號、第5,545,806號、第5,814,318號、第5,885,793號、第5,916,771號及第5,939,598號。另外，諸如LakePharma, Inc. (Belmont, CA)或Creative BioLabs (Shirley, NY)之公司可參與以使用類似於上文所描述之技術提供針對所選擇之抗原的人類抗體。識別所選擇抗原決定基之全人類抗體可使用被稱作「定向選擇」之技術來產生。在此方法中，所選擇非人類單株抗體(例如，小鼠抗體)用於引導識別相同抗原決定基之完全人類抗體的選擇(參見Jespers等人, 1988, Biotechnology 12:899-903)。 「靈長類化抗體」包含猴可變區及人類恆定區。用於製造靈長類化抗體之方法為此項技術中已知。參見例如，美國專利第5,658,570號、第5,681,722號及第5,693,780號。 本發明之抗CD40抗體包括能夠特異性地結合CD40 (例如，人類CD40 (SEQ ID NO: 40))之全長(完整)抗體分子。 亦揭示能夠特異性地結合人類CD40之抗CD40結合片段。抗體結合片段之實例包括(藉助於實例且非限制的)Fab、Fab'、F(ab') ₂、Fv片段、單鏈Fv片段及單一域片段。 Fab片段含有輕鏈之恆定域及可變域與重鏈之第一恆定域(CH1)及可變域。Fab'片段與Fab片段之不同之處在於：在重鏈CH1域之羧基端處之幾個殘基的添加，包括來自抗體鉸鏈區之一或多個半胱胺酸。F(ab')片段係藉由裂解在F(ab') ₂胃蛋白酶消化產物之鉸鏈半胱胺酸處之雙硫鍵來製造。抗體片段之其他化學偶合法為一般技術者已知。Fab及F(ab') ₂片段缺乏完整抗體之Fc片段，從動物之循環更快速清除，且具有比完整抗體更低的非特異性組織結合性(參見例如，Wahl等人, 1983, J. Nucl. Med. 24:316)。 「Fv」片段為含有完全靶識別及結合位點之抗體的最小片段。此區由緊密非共價締合之一個重鏈可變域及一個輕鏈可變域的二聚體(V _H-V _L二聚體)構成。在此組態中，各可變域之三個CDR相互作用以定義V _H-V _L二聚體之表面上的靶結合位點。通常，六個CDR賦予抗體以靶結合特異性。然而，在一些情況下，即使單一可變域(或僅包含對標靶具有特異性之三個CDR之Fv的一半)可具有識別及結合標靶的能力，但其比完整結合位點具有更低的親和力。 「單鏈Fv」或「scFv」抗體結合片段包含抗體之V _H域及V _L域，其中此等域存在於單一多肽鏈中。一般而言，Fv多肽進一步包含在V _H域與V _L域之間的多肽連接子，該多肽連接子使得scFv能夠形成用於靶結合之所需結構。 「單一域片段」係由對人類CD40具有足夠親和力的單一V _H域或V _L域組成。在一具體實施例中，單一域片段為駱駝化片段(參見例如，Riechmann, 1999, Journal of Immunological Methods 231:25-38)。 本發明之抗CD40抗體包括衍生抗體。舉例而言，但並不限制性，衍生抗體通常藉由糖基化、乙醯化、聚乙二醇化、磷酸化、醯胺化、利用已知保護/阻斷基團衍化、蛋白質分解性裂解、連接至細胞配位體或其他蛋白質來修飾。可利用已知技術來進行諸多化學修飾中之任一者，該等技術包括(但不限於)特異性化學裂解、乙醯化、甲醯化、衣黴素(tunicamycin)之代謝合成等。另外，衍生物例如使用Ambryx技術(參見例如, Wolfson, 2006, Chem. Biol. 13(10):1011-2)可含有一或多個非天然胺基酸。 抗CD40抗體或結合片段可為其序列已經修飾以更改至少一個恆定區介導的生物效應功能的抗體或片段。舉例而言，在一些實施例中，抗CD40抗體可經修飾以相對於未經修飾之抗體減少至少一個恆定區介導的生物效應功能，例如，減少與Fc受體(FcγR) (諸如，FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIB、FcγRIIIA及/或FcγRIIIB)中之一或多者的結合。FcγR結合可藉由使抗體在對於FcγR相互作用必需之特定區處之免疫球蛋白恆定區區段突變來減少(參見例如，Canfield及Morrison, 1991, J. Exp. Med. 173:1483-1491；及Lund等人, 1991, J. Immunol. 147:2657-2662)。抗體之FcγR結合能力之減少亦可減少依賴於FcγR相互作用之其他效應功能，諸如，助噬作用、吞噬及抗原依賴性細胞毒性(「ADCC」)。 本文所描述之抗CD40抗體或結合片段包括已經修飾以相對於未經修飾之抗體獲得或改良至少一個恆定區介導的生物效應功能例如以增強FcγR相互作用的抗體(參見例如，美國專利申請案第2006/0134709號)。舉例而言，本發明之抗CD40抗體可具有以比對應野生型恆定區較大親和力結合FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIB、FcγRIIIA及/或FcγRIIIB的恆定區。 因此，本發明之抗體可具有使助噬作用、吞噬或ADCC增加或減少的生物活性之更改。此類更改為此項技術中已知。舉例而言，減少ADCC活性之抗體中之修飾描述於美國專利第5,834,597號中。例示性ADCC降低變異體對應於「突變3」 (亦稱為「M3」，展示於美國專利第5,834,597號之圖4中)，其中殘基234及殘基237 (使用EU編號)經丙胺酸取代。突變3 (亦稱為「M3」)變異可用於多種抗體同型，例如，IgG ₂。 在一些實施例中，本發明之抗CD40抗體具有較低水準之海藻糖或缺乏海藻糖。缺乏海藻糖之抗體已與增強的ADCC活性相關，尤其在較低劑量之抗體下。參見Shields等人, 2002, J. Biol. Chem. 277:26733-26740；Shinkawa等人, 2003, J. Biol. Chem. 278:3466-73。製備較低海藻糖抗體之方法包括在大鼠骨髓瘤YB2/0細胞(ATCC CRL 1662)中生長。YB2/0細胞表現較低水準之編碼α-1,6-海藻糖基轉移酶(一種對於多肽之海藻糖基化必需的酶)之FUT8 mRNA。 本發明之抗CD40抗體可包含經修飾(或變異) CH2域或完整Fc域，該等經修飾(或變異) CH2域或完整Fc域包括如相比於對應野生型CH2或Fc區之結合增加與FcγRIIB結合及/或減少與FcγRIIIA結合的胺基酸取代。變異CH2域或變異Fc域已描述於美國專利申請案第2014/0377253號中。變異CH2或變異Fc域通常包括在位置263、位置266、位置273及位置305處之一或多個取代，其中Fc域中之殘基之編號為如Kabat中之EU指數之彼編號。在一些實施例中，抗CD40抗體包含選自以下各者之一或多個取代：相對於野生型CH2域的V263L、V266L、V273C、V273E、V273F、V273L、V273M、V273S、V273Y、V305K及V305W。在具體實施例中，CH2域之一或多個取代係選自相對於人類IgG ₁之CH2域的V263L、V273E、V273F、V273M、V273S及V273Y。舉例而言，IgG ₁CH2域之一或多個取代可為V273E。在另一具體實施例中，本發明之抗CD40抗體包含變異IgG ₁CH2區，該變異IgG ₁CH2區包含胺基酸取代V263L。 可提供如相比於對應野生型CH2或Fc區之結合而增加與FcγRIIB之結合及/或減少與FcγRIIIA之結合的變異CH2或變異Fc域的其他實例包括在Vonderheide等人 Clin. Cancer Res., 19(5), 1035-1043 (2013)中發現的彼等域，該等域諸如人類IgG ₁中之S267E或S267E/L328F。 在一些實施例中，抗CD40抗體或結合片段包括例如藉由突變在涉及FcRn相互作用之特定區處之免疫球蛋白恆定區區段增加或減少其針對胎兒Fc受體(FcRn)之結合親和力的修飾(參見例如，WO 2005/123780)。在特定實施例中，IgG類別之抗CD40抗體經突變使得重鏈恆定區之胺基酸殘基250、314及428中之至少一者單獨經取代或以其任何組合經取代，該等組合諸如，在位置250及位置428處、或在位置250及位置314處、或在位置314及位置428處、或在位置250、位置314及位置428處，其中位置250及位置428為特定組合。對於位置250，取代胺基酸殘基可為除蘇胺酸以外之任何胺基酸殘基，該胺基酸殘基包括(但不限於)：丙胺酸、半胱胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、苯丙胺酸、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、離胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、天冬醯胺、脯胺酸、麩醯胺、精胺酸、絲胺酸、纈胺酸、色胺酸或酪胺酸。對於位置314，取代胺基酸殘基可為除白胺酸以外之任何胺基酸殘基，該胺基酸殘基包括(但不限於)：丙胺酸、半胱胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、苯丙胺酸、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸、天冬醯胺、脯胺酸、麩醯胺、精胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、纈胺酸、色胺酸或酪胺酸。對於位置428，取代胺基酸殘基可為除甲硫胺酸以外之任何胺基酸殘基，該胺基酸殘基包括(但不限於)：丙胺酸、半胱胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、苯丙胺酸、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、離胺酸、白胺酸、天冬醯胺、脯胺酸、麩醯胺、精胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、纈胺酸、色胺酸或酪胺酸。已知修飾Fc效應功能之例示性取代為Fc取代M428L，其可結合Fc取代T250Q發生。合適胺基酸取代之額外特定組合係在美國專利第7,217,797號之表1中鑑別出。此類突變增加與FcRn之結合，此保護抗體免遭降解且延長其半衰期。 抗CD40抗體可具有插入至其CDR中之一或多者中的一或多個胺基酸，例如如Jung及Plückthun, 1997, Protein Engineering 10:9, 959-966；Yazaki等人, 2004, Protein Eng. Des Sel. 17(5):481-9. 電子出版2004年8月17日；及美國專利申請案第2007/0280931號中所描述。 具有針對人類CD40之親和力的抗CD40抗體可能為治療性及診斷用途所需的。因此，本發明涵蓋具有針對人類CD40之結合親和力的抗體。在具體實施例中，結合人類CD40之抗CD40抗體具有至少約1000 nM之親和力但可呈現更高親和力，例如，至少約900 nM、800 nM、700 nM、600 nM、500 nM、400 nM、300 nM、250 nM、200 nM、150 nM、100 nM、90 nM、80 nM、70 nM、60 nM、50 nM、40 nM、30 nM、25 nM、20 nM、15 nM、10 nM、7 nM、6 nM、5 nM、4 nM、3 nM、2 nM、1 nM、0.1 nM、0.01 nM或甚至更高。在一些實施例中，抗體以在約1 pM至約1000 nM範圍內之親和力或在前述值中之任一者之間變化的親和力結合人類CD40。 抗CD40抗體針對人類CD40之親和力可使用此項技術中熟知或本文所描述之技術來測定，諸如但非限制性的，ELISA、等溫滴定熱量測定(ITC)、表面電漿子共振或螢光極化分析。 抗CD40抗體一般而言包含重鏈及輕鏈，該重鏈包含具有在本文中被稱為(以N→C次序) V _HCDR#1、V _HCDR#2及V _HCDR#3之三個互補決定區(「CDR」)的可變區(V _H)，該輕鏈包含具有在本文中被稱為(以N→C次序) V _LCDR#1、V _LCDR#2及V _LCDR#3之三個互補決定區的可變區(V _L)。本文提供例示性CDR之胺基酸序列以及例示性抗CD40之重鏈及輕鏈之V _H區及V _L區的胺基酸序列。抗CD40抗體之具體實施例包括此等例示性CDR及/或V _H及/或V _L序列，以及與此類抗體競爭結合人類CD40的抗體。 在一些實施例中，抗CD40抗體之CDR之胺基酸序列係選自以下序列：

CDR	序列 (N→C)	標識符
V HCDR#1:	GYTFTSYWIT GYTFTGYWIQ GYTFTDYYMN GFTFSDYYMS GYSITTNYNWN GYTFTSYWMH GYTFTDYYIN GYSITSNYYWN GYSISSNYYWN GYDITSNYYWN	(SEQ ID NO:1) (SEQ ID NO:2) (SEQ ID NO:3) (SEQ ID NO:4) (SEQ ID NO:5) (SEQ ID NO:6) (SEQ ID NO:7) (SEQ ID NO:8) (SEQ ID NO:9) (SEQ ID NO:10)
V HCDR#2:	EINPGSGSTNYNEKFKS EILPGGDHTKYNEKFRG DINPNNGGTSYNQKFKG FIRNKANGYTTEFSASVKG YIRHDGTNNYNPSLKN NIDPSNGETHYNQKFKD WIFPGSGSVYCNEQFKG YIRYDGSNNYNPSLKN NIDPSNGETHYAQKFQG WIFPGSGSVYSNEQFKG YIRYDGSNNYNPSLKS YIRYDGSNNYNPSLKG	(SEQ ID NO:11) (SEQ ID NO:12) (SEQ ID NO:13) (SEQ ID NO:14) (SEQ ID NO:15) (SEQ ID NO:16) (SEQ ID NO:17) (SEQ ID NO:18) (SEQ ID NO:19) (SEQ ID NO:20) (SEQ ID NO:21) (SEQ ID NO:22)
V HCDR#3:	NRGTGDY VGGDY RGGLGRGTYALDY YGGLRQGWYFDV LDY  ERIYYSGSTYDGYFDV SLGKFAY	(SEQ ID NO:31) (SEQ ID NO:32) (SEQ ID NO:33) (SEQ ID NO:34) (SEQ ID NO:35) (SEQ ID NO:36) (SEQ ID NO:37)
V LCDR#1:	RSSQSLVHSYGNTYLH RSSQSLVNSNENTYLH RASQDISNYLN RASQDIRNYLN RSSQSLENSYGNTFLN SASSSLSYMH KASQSVVTAVA RSSQSLENTNGNTFLN RSSQSLENSNGNTFLN	(SEQ ID NO:51) (SEQ ID NO:52) (SEQ ID NO:53) (SEQ ID NO:54) (SEQ ID NO:55) (SEQ ID NO:56) (SEQ ID NO:57) (SEQ ID NO:58) (SEQ ID NO:59)
V LCDR#2:	KVSNRIS KVFNRYS YTSRLHL YTSRLHS RVSNRFC DTSKLAS SASNRYT RVSNRFS RISNRFS	(SEQ ID NO:61) (SEQ ID NO:62) (SEQ ID NO:63) (SEQ ID NO:64) (SEQ ID NO:65) (SEQ ID NO:66) (SEQ ID NO:67) (SEQ ID NO:68) (SEQ ID NO:69)
V LCDR#3:	SQSTHVPYT FQSTHVPWT QQGNTLPLT QQGKTLPWT LQVTHVPYT QQWSSNPWT QQYSSYPYT LQVTHVPFT	(SEQ ID NO:81) (SEQ ID NO:82) (SEQ ID NO:83) (SEQ ID NO:84) (SEQ ID NO:85) (SEQ ID NO:86) (SEQ ID NO:87) (SEQ ID NO:88)

在一些實施例中，抗CD40抗體之各CDR彼此獨立地經選擇以在序列上對應於提供於表3中之抗體的各別CDR。在一些實施例中，抗CD40抗體為IgG，且具有在序列上對應於提供於表3中之抗體之V _H及V _L的V _H及V _L。 在一些實施例中，抗CD40抗體包含V _H鏈及V _L鏈，該V _H鏈在序列上對應於以下SEQ ID NO中之任一者的V _H鏈：SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:108或SEQ ID NO:109，該V _L鏈在序列上對應於以下SEQ ID NO中之任一者：SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:159或SEQ ID NO:160。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:101之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:151之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:102之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:152之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:103之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:153之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:104之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:154之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:105之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:155之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:106之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:156之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:106之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:157之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:107之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:158之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:108之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:159之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:109之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:160之V _L鏈。 本文描述具有以上CDR之抗CD40抗體之具體例示性實施例。在一些實施例中，抗CD40抗體具有SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 61及SEQ ID NO: 81之CDR。在一些實施例中，抗CD40抗體具有SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 62及SEQ ID NO: 82之CDR。在一些實施例中，抗CD40抗體具有SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 63及SEQ ID NO: 83之CDR。在一些實施例中，抗CD40抗體具有SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 64及SEQ ID NO: 84之CDR。在一些實施例中，抗CD40抗體具有SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 65及SEQ ID NO: 85之CDR。在一些實施例中，抗CD40抗體具有SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 66及SEQ ID NO: 86之CDR。在一些實施例中，抗CD40抗體具有SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO: 66及SEQ ID NO: 86之CDR。在一些實施例中，抗CD40抗體具有SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 67及SEQ ID NO: 87之CDR。在一些實施例中，抗CD40抗體具有SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 67及SEQ ID NO: 87之CDR。在一些實施例中，抗CD40抗體具有SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 68及SEQ ID NO: 88之CDR。在一些實施例中，抗CD40抗體具有SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 68及SEQ ID NO: 88之CDR。在一些實施例中，抗CD40抗體具有SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 68及SEQ ID NO: 88之CDR。 在一些實施例中，抗CD40抗體適合於向人類投與。在一具體實施例中，抗CD40抗體為人類化的。在另一具體實施例中，抗CD40抗體之CDR之胺基酸序列係選自：

CDR	序列 (N→C)	標識符
V HCDR#1:	GYTFTSYWMH GYTFTDYYIN GYSITSNYYWN GYSISSNYYWN GYDITSNYYWN	(SEQ ID NO:6) (SEQ ID NO:7) (SEQ ID NO:8) (SEQ ID NO:9) (SEQ ID NO:10)
V HCDR#2:	WIFPGSGSVYCNEQFKG YIRYDGSNNYNPSLKN NIDPSNGETHYAQKFQG WIFPGSGSVYSNEQFKG YIRYDGSNNYNPSLKS YIRYDGSNNYNPSLKG	(SEQ ID NO:17) (SEQ ID NO:18) (SEQ ID NO:19) (SEQ ID NO:20) (SEQ ID NO:21) (SEQ ID NO:22)
V HCDR#3:	LDY ERIYYSGSTYDGYFDV SLGKFAY	(SEQ ID NO:35) (SEQ ID NO:36) (SEQ ID NO:37)
V LCDR#1:	SASSSLSYMH KASQSVVTAVA RSSQSLENTNGNTFLN	(SEQ ID NO:56) (SEQ ID NO:57) (SEQ ID NO:58)
V LCDR#2:	DTSKLAS SASNRYT RVSNRFS	(SEQ ID NO:66) (SEQ ID NO:67) (SEQ ID NO:68)
V LCDR#3:	QQWSSNPWT QQYSSYPYT LQVTHVPFT	(SEQ ID NO:86) (SEQ ID NO:87) (SEQ ID NO:88)

在一些實施例中，抗CD40抗體包含V _H鏈及V _L鏈，該V _H鏈在序列上對應於以下SEQ ID NO中之任一者：SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:117、SEQ ID NO:118、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:122或SEQ ID NO: 123，該V _L鏈在序列上對應於以下SEQ ID NO中之任一者：SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:169、SEQ ID NO:170或SEQ ID NO: 171。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:110之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:161之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:111之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:161之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:112之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:161之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:113之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:162之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:114之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:162之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:115之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:162之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:116之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:163之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:117之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:163之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:118之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:163之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:116之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:164之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:117之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:164之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:119之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:165之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:120之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:165之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:121之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:166之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:117之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:167之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:117之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:168之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:117之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:169之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:117之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:170之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:117之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:171之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:118之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:164之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:122之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:167之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:122之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:168之V _L鏈。在一些實施例中，抗CD40抗體包含在序列上對應於SEQ ID NO:123之V _H鏈及在序列上對應於SEQ ID NO:169之V _L鏈。 在一些實施例中，抗CD40抗體與參考抗體在活體外分析中競爭結合人類CD40。在一些實施例中，抗CD40抗體競爭結合表現人類CD40之細胞上之人類CD40。參考抗體可為本文所描述之抗CD40抗體中之任一者。在一些實施例中，參考抗體為提供於表3中之抗體。在具體實施例中，參考抗體係選自：抗體AD163.9.3 (「muAb1」)、抗體AD166.4.4 (「muAb2」)、抗體AD175.14.11 (「muAb3」)、抗體AD163.10.7 (「muAb4」)、抗體AD165.1.2 (「muAb5」)、抗體AD163.162.1 (「muAb6」)、抗體AD163.27.12 (「muAb7」)、抗體AD163.7.2 (「muAb8」)、抗體AD164.14.6 (「muAb9」)及抗體AD164.76.2 (「muAb10」)。在一些實施例中，參考抗體為提供於表3中之抗體之人類化版本。在一些實施例中，參考抗體為muAb6、muAb8或muAb9之人類化版本。在一具體實施例中，參考抗體為huAb9-2。在另一實施例中，參考抗體為huAb9-5。在另一具體實施例中，參考抗體為huAb9 A2I。 抗CD40抗體之序列之轉譯後修飾可發生諸如抗體重鏈之C端末端上之一或多個(例如，1、2、3個或更多個)胺基酸殘基之裂解。 在一些實施例中，抗CD40抗體包含根據SEQ ID NO: 130至SEQ ID NO: 135中任一者之重鏈及根據SEQ ID NO: 140至SEQ ID NO: 142之輕鏈。在某些實施例中，抗CD40抗體包含根據SEQ ID NO: 130或SEQ ID NO: 131之重鏈及根據SEQ ID NO: 140之輕鏈。在某些實施例中，抗CD40抗體包含根據SEQ ID NO: 132或SEQ ID NO: 133之重鏈及根據SEQ ID NO: 140之輕鏈。在某些實施例中，抗CD40抗體包含根據SEQ ID NO: 134或SEQ ID NO: 135之重鏈及根據SEQ ID NO: 140之輕鏈。在某些實施例中，抗CD40抗體包含根據SEQ ID NO: 132或SEQ ID NO: 133之重鏈及根據SEQ ID NO: 141之輕鏈。在某些實施例中，抗CD40抗體包含根據SEQ ID NO: 132或SEQ ID NO: 133之重鏈及根據SEQ ID NO: 142之輕鏈。 本文所描述之抗CD40抗體一般而言與人類CD40特異性地結合。用於與來自其他物種(例如，來自猴，例如，食蟹獼猴)之CD40結合之抗體之交叉反應性可提供諸如能夠在猴動物模型中針對生物活性進行測試的優勢。此類動物模型測試可用於篩檢抗CD40抗體以選擇例如有利藥物動力學的特性。在一些實施例中，抗CD40抗體與獼猴CD40結合。 競爭分析包括(但不限於)：放射性物質標記免疫分析(RIA)、酶聯結免疫吸附分析(ELISA)、夾心ELISA、螢光活化細胞分選(FACS)分析及表面電漿子共振分析。 在於參考抗體與測試抗體(無論物種或同型)之間進行抗體競爭分析中，吾人可用可偵測標記(諸如，螢光團、生物素或酶學(或甚至放射性)標記)將參考物首先標記以使得隨後能夠進行識別。在此情況下，與未標記之測試抗體一起培育表現人類CD40之細胞，添加經標記之參考抗體，且量測結合標記之強度。若測試抗體與經標記之參考抗體競爭與重疊抗原決定基結合，則強度將相對於在無測試抗體之情況下進行之對照反應而減少。 在此分析之一具體實施例中，首先測定在分析條件(例如，指定細胞密度)下產生80%最大結合之經標記之參考抗體的濃度(「conc _80%」)，且在10× conc _80%之未標記測試抗體及conc _80%之標記參考抗體之情況下進行競爭分析。 抑制可表達為抑制常數或K _i，其根據以下式來計算： K _i= IC ₅₀/ (1 + [參考Ab濃度]/K _d), 其中IC ₅₀為產生參考抗體之結合減少50%之測試抗體的濃度，且K _d為參考抗體之解離常數(一種其針對人類CD40之親和力的量測值)。與本文揭示之抗CD40抗體競爭之抗體可具有在本文所描述之分析條件下10 pM至1000 nM之K _i。 在各種實施例中，若在於所使用之特異性分析條件下80%最大結合的參考抗體濃度下及在比參考抗體濃度高10倍之測試抗體濃度下，測試抗體使參考抗體之結合減少至少約20%或更多，例如，至少約20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或甚至更多，或在前述值中之任一者之間變化的百分比，則測試抗體被認為與參考抗體競爭。 本文所描述之抗CD40抗體能夠藉由經由至少兩種作用機制活化人類CD40來促效人類CD40 (SEQ ID NO:40)。在一些實施例中，抗CD40抗體在不存在CD40L (SEQ ID NO:41)之情況下結合人類CD40，且增強人類CD40之信號傳導。在一些實施例中，抗CD40抗體結合人類CD40L-CD40結合複合物，且增強人類CD40之信號傳導。在一些實施例中，抗CD40抗體與選自列於表3中之人類化抗體之對照抗體競爭結合人類CD40 (SEQ ID NO:40)，且不依賴於人類CD40配位體(SEQ ID NO:41) (亦即，在不存在或存在CD40L之情況下)活化人類CD40。 抗CD40抗體對於人類CD40-CD40L相互作用之效果可利用此項技術中已知之分析來測定，該等分析諸如描述於實例2中之CD40L競爭分析。在含有抗CD40抗體之樣品中量測之OD ₄₅₀與獲自同型對照抗體樣品之OD ₄₅₀的比率(「OD ₄₅₀比率」)可用於測定抗CD40抗體對於與人類CD40結合之人類CD40L的效果。OD ₄₅₀之比率為1指示無效果；小於1指示與CD40L競爭；大於1指示CD40L與CD40結合增強。在一些實施例中，抗CD40抗體增加(亦即，增強)人類CD40L (SEQ ID NO:41)針對人類CD40 (SEQ ID NO:40)之結合，如由OD ₄₅₀比率所測定。利用OD ₄₅₀比率之CD40L與CD40結合之增強至少約為1.2，諸如約1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.2、2.4、2.5、2.6、2.8、3.0或更大。 適用於評定抗體是否與如本文所描述之參考抗體競爭結合人類CD40之特異性分析及分析條件提供於實例2中。抗體競爭可利用如實例2中或描述於章節8.4.3中之競爭結合方案中所描述之表面電漿子共振分析來測定。 儘管促效抗CD40抗體活化免疫系統以發揮抗腫瘤效果，但跨越所有細胞類型之較寬廣全身性免疫活化可導致非所需的副效應。因此，在一些實施例中，如相比於參考抗CD40抗體，抗CD40抗體優於B細胞免疫反應選擇性地活化樹突狀細胞介導的免疫反應。在一些實施例中，參考抗CD40抗體為CP-870,893。在一些實施例中，如相比於在描述於章節8.1.3中之分析中之相同劑量之參考抗CD40抗體下的IL-12p70的產量，在活化樹突狀細胞中抗CD40抗體具有類似活性，例如，在給定劑量下在約200%內之IL-12p70之產量，諸如，在約180%、150%、130%、110%、100%、90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、25%、20%、15%、10%或約5%內。在一些實施例中，如相比於參考抗CD40抗體，在活化B細胞中抗CD40抗體具有更低效能。在描述於章節8.5.3中之分析中，抗CD40抗體與參考抗CD40抗體之B細胞EC ₅₀比率可大於約1.5，諸如約2、3、4、5、6、8、10、15、20、30、40、50或更大。在一些實施例中，如相比於參考抗CD40抗體，抗CD40抗體在活化樹突狀細胞中具有類似活性且在活化B細胞中具有更低效能。 7.4 編碼抗 CD40 抗體之聚核苷酸、製備抗體之表現系統及方法本發明涵蓋編碼抗CD40抗體之免疫球蛋白輕鏈基因及重鏈基因之核酸分子、包含此類核酸之載體及能夠製造本發明之抗CD40抗體之宿主細胞。 本發明之抗CD40抗體可藉由在宿主細胞中重組表現免疫球蛋白輕鏈基因及重鏈基因來製備。為以重組方式表現抗體，用攜載編碼抗體之免疫球蛋白輕鏈及重鏈之DNA片段之一或多個重組表現載體來轉染宿主細胞，使得在宿主細胞中表現輕鏈及重鏈且視情況分泌至培養宿主細胞之培養基中，可從該培養基回收抗體。標準重組DNA方法用於獲得抗體重鏈及輕鏈基因，將此等基因併入至重組表現載體中且將載體引入至宿主細胞中，該等宿主細胞諸如描述於Molecular Cloning; A Laboratory Manual, 第二版 (Sambrook, Fritsch及Maniatis (編), Cold Spring Harbor, N. Y., 1989), Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel, F.M.等人, 編, Greene Publishing Associates, 1989)中及美國專利第4,816,397號中之彼等。 為產生編碼此類抗CD40抗體之核酸，首先獲得編碼輕鏈可變區及重鏈可變區之DNA片段。此等DNA可藉由擴增及修飾編碼輕鏈可變序列及重鏈可變序列之生殖系DNA或cDNA來獲得，例如使用聚合酶鏈反應(PCR)。人類重鏈及輕鏈可變區基因之生殖系DNA序列為此項技術中已知(參見例如，「VBASE」人類生殖系序列資料庫；亦參見Kabat, E. A.等人, 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第五版, U.S. Department of Health and Human Services, NIH公開案第91-3242號；Tomlinson等人, 1992, J. Mol. Biol. 22T:116-198；及Cox等人, 1994, Eur. J. Immunol. 24:827-836；其中之各者之內容以引用之方式併入本文中)。 一旦獲得編碼抗CD40抗體相關之V _H區段及V _L區段之DNA片段，則可進一步利用標準重組DNA技術操縱此等DNA片段例如以將可變區基因轉化成全長抗體鏈基因、Fab片段基因或scFv基因。在此等操縱中，編碼V _L或V _H之DNA片段可操作地連接至編碼另一蛋白質(諸如，抗體恆定區或可撓性連接子)之另一DNA片段。如用於此情況下，術語「可操作地連接」欲意謂兩個DNA片段接合使得由兩個DNA片段編碼之胺基酸序列仍同框。 編碼V _H區之經分離DNA可藉由將編碼V _H之DNA可操作地連接至編碼重鏈恆定區(CH1、CH2、CH3及視情況CH4)之另一DNA分子來轉化成全長重鏈基因。人類重鏈恆定區基因之序列為此項技術中已知(參見例如，Kabat, E.A., 等人, 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第五版, U.S. Department of Health and Human Services, NIH公開案第91-3242號)且涵蓋此等區之DNA片段可藉由標準PCR擴增來獲得。 重鏈恆定區可為IgG ₁、IgG ₂、IgG ₃、IgG ₄、IgA、IgE、IgM或IgD恆定區，但在某些實施例中為IgG ₁或IgG ₄。對於Fab片段重鏈基因，編碼V _H之DNA可可操作地連接至僅編碼重鏈CH1恆定區之另一DNA分子。 編碼V _L區之經分離DNA可藉由將編碼V _L之DNA可操作地連接於編碼輕鏈恆定區CL之另一DNA分子來轉化成全長輕鏈基因(以及Fab輕鏈基因)。人類輕鏈恆定區基因之序列為此項技術中已知(參見例如，Kabat等人, 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第五版, U.S. Department of Health and Human Services, NIH公開案第91-3242號)且涵蓋此等區之DNA片段可藉由標準PCR擴增來獲得。輕鏈恆定區可為κ或λ恆定區，但在某些實施例中為κ恆定區。為建立scFv基因，將編碼V _H及V _L之DNA片段可操作地連接於編碼可撓性連接子(例如，編碼胺基酸序列(Gly4~Ser) ₃(SEQ ID NO:200))之另一片段，使得V _H及V _L序列可被表現為鄰接單鏈蛋白質，其中V _L區及V _H區由可撓性連接子接合(參見例如， Bird等人, 1988, Science 242:423-426；Huston等人, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883；McCafferty等人, 1990, Nature 348:552-554)。 為表現本發明之抗CD40抗體，將如上文所描述獲得之編碼部分或全長輕鏈及重鏈之DNA插入至表現載體中，使得基因可操作地連接於轉錄及轉譯控制序列。在此上下文中，術語「可操作地連接」欲意謂，將抗體基因接合至載體中使得在載體內之轉錄及轉譯控制序列提供調整抗體基因之轉錄及轉譯之其預定功能。選擇表現載體及表現控制序列以與所用表現宿主細胞相容。可將抗體輕鏈基因及抗體重鏈基因插入至獨立載體中，或更通常將兩個基因插入至同一表現載體中。 利用標準方法(例如，抗體基因片段及載體上之互補限制位點之接合，或在不存在限制位點時平頭端接合)將抗體基因插入至表現載體中。在插入抗CD40抗體相關之輕鏈或重鏈序列之前，表現載體可能已經攜載抗體恆定區序列。舉例而言，將抗CD40單株抗體相關之V _H序列及V _L序列轉化成全長抗體基因之一種方法係分別地將其插入至已經編碼重鏈恆定區及輕鏈恆定區之表現載體中，使得V _H區段可操作地連接於在載體內之CH區段，且V _L區段可操作地連接於在載體內之CL區段。可替代地或另外，重組表現載體可編碼促進抗體鏈自宿主細胞分泌之信號肽。抗體鏈基因可選殖至載體中，使得信號肽同框連接於抗體鏈基因之胺基端。信號肽可為免疫球蛋白信號肽或異源信號肽(亦即，來自非免疫球蛋白蛋白質之信號肽)。 除抗體鏈基因以外，本發明之重組表現載體攜載控制抗體鏈基因在宿主細胞中表現之調節序列。術語「調節序列」意欲包括啟動子、強化子及控制抗體鏈基因之轉錄或轉譯的其他表現控制元件(例如，聚腺苷酸化信號)。此類調節序列(例如)描述於Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA, 1990中。熟習此項技術者應瞭解，表現載體之設計(包括調節序列之選擇)可能視諸如待轉化之宿主細胞之選擇、所需蛋白質之表現量等因素而定。用於哺乳動物宿主細胞表現之合適調節序列包括在哺乳動物細胞中引導較高蛋白質表現量之病毒元件，諸如，源自巨細胞病毒(CMV) (諸如，CMV啟動子/強化子)、猴病毒40 (SV40) (諸如，SV40啟動子/強化子)、腺病毒(例如，腺病毒主要晚期啟動子(AdMLP))及多瘤病毒的啟動子及/或強化子。對於病毒調節元件及其序列之進一步描述，參見例如，Stinski之美國專利第5,168,062號、Bell等人之美國專利第4,510,245號及Schaffner等人之美國專利第4,968,615號。 除抗體鏈基因及調節序列以外，本發明之重組表現載體可攜載額外序列，該等額外序列諸如調節載體在宿主細胞中之複製的序列(例如，複製起點)及可選標記基因。可選標記基因有助於已引入載體之宿主細胞之選擇(參見例如，均為Axel等人之美國專利第4,399,216號、第4,634,665號及第5,179,017號)。舉例而言，在已引入載體之宿主細胞上，可選擇標記基因通常賦予對諸如G418、潮黴素或甲胺喋呤之藥物之抗性。合適可選標記基因包括二氫葉酸還原酶(DHFR)基因(適用於用甲胺喋呤選擇/擴增DHFR ^-宿主細胞)及neo基因(用於G418選擇)。對於輕鏈及重鏈之表現，利用標準技術將編碼重鏈及輕鏈之表現載體轉染至宿主細胞中。術語「轉染」之各種形式意欲涵蓋通常用於將外源性DNA引入至原核或真核宿主細胞中之廣泛多種技術，例如，電穿孔、脂質體轉染、磷酸鈣沈澱、DEAE-聚葡萄糖轉染及類似者。 有可能在原核宿主細胞或真核宿主細胞中表現本發明之抗體。在某些實施例中，抗體之表現係在最佳分泌正確地摺疊及免疫主動抗體之真核細胞(例如，哺乳動物宿主細胞)中進行。用於表現本發明之重組抗體之例示性哺乳動物宿主細胞包括中國倉鼠卵巢(CHO細胞) (包括DHFR ^-CHO細胞，其描述於Urlaub及Chasin, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220中，與DHFR可選標記一起使用，例如，如Kaufman及Sharp, 1982, Mol. Biol. 159:601-621中所描述)、NSO骨髓瘤細胞、COS細胞及SP2細胞。當將編碼抗體基因之重組表現載體引入至哺乳動物宿主細胞中時，抗體係藉由培養宿主細胞持續足以允許抗體在宿主細胞中表現或將抗體分泌至生長宿主細胞之培養基中之時間段來製造。可使用標準蛋白質純化方法自培養基回收抗體。宿主細胞亦可用於製造完整抗體之部分，諸如，Fab片段或scFv分子。應瞭解，以上程序上之變化形式係在本發明之範疇內。舉例而言，可能需要用編碼本發明之抗CD40抗體之輕鏈或重鏈(但並非兩者)之DNA轉染宿主細胞。 重組DNA技術亦可用於將編碼對於與人類CD40結合不必需之輕鏈及重鏈中之任一者或兩者之DNA的一些或所有移除。自此類截斷DNA分子表現之分子亦由本發明之抗體涵蓋。 對於本發明之抗CD40抗體之重組表現，可用本發明之兩種表現載體共轉染宿主細胞，第一載體編碼源自多肽之重鏈且第二載體編碼源自多肽之輕鏈。兩種載體可含有相同可選標記，或其可各自含有獨立可選標記。可替代地，可使用編碼重鏈多肽及輕鏈多肽兩者之單一載體。 一旦核酸編碼抗CD40抗體之一或多個部分，則可將其他更改或突變引入至編碼序列中，例如以產生編碼具有不同CDR序列之抗體、具有針對Fc受體親和力減少之抗體或不同亞類之抗體的核酸。 本發明之抗CD40抗體亦可利用化學合成法(例如，利用描述於Solid Phase Peptide Synthesis, 第2版, 1984 The Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.中之方法)來製造。變異抗體亦可使用無細胞平台來產生(參見例如，Chu等人, Biochemia 第2期, 2001 (Roche Molecular Biologicals)及Murray等人, 2013, Current Opinion in Chemical Biology, 17:420-426)。 一旦已利用重組表現製造本發明之抗CD40抗體，則其可藉由此項技術中已知之任何純化免疫球蛋白分子之方法來純化，例如，藉由層析(例如，離子交換、親和性及篩分管柱層析)、離心、不同可溶性、或藉由純化蛋白質之任何其他標準技術。此外，可將本發明之抗CD40抗體融合至本文所描述或此項技術中另外已知便於純化之異源多肽序列。 一旦分離，則抗CD40抗體可(若需要)例如藉由高效液相層析(參見例如，Fisher, Laboratory Techniques In Biochemistry And Molecular Biology, Work及Burdon, 編, Elsevier, 1980)或藉由Superdex ^TM75管柱凝膠過濾層析(Pharmacia Biotech AB, Uppsala, Sweden)來進一步純化。 7.5 醫藥組合物本文所描述之抗CD40抗體可呈組合物形式，該等組合物包含抗體及一或多種載劑、賦形劑及/或稀釋劑。組合物可經調配以用於特定用途，諸如用於獸醫用途或人類中之醫藥用途。所使用之組合物(例如，乾粉、液體調配物等)及賦形劑、稀釋劑及/或載劑之形式將視抗體之意欲用途及(對於治療性用途)投與模式而定。 對於治療性用途，組合物可作為包括醫藥學上可接受之載劑之無菌、醫藥組合物之一部分來提供。此組合物可呈任何合適的形式(視向例如人類個體之個體(亦即，患者)投與其之所需方法而定)。醫藥組合物可利用各種途徑來向個體投與，該等途徑諸如，經口、經皮、皮下、鼻內、經靜脈內、肌內、瘤內、鞘內、表面或局部。在任何給定情況下之最合適投與途徑將視特定抗體、個體、及疾病之性質與嚴重程度以及個體之生理條件而定。通常，醫藥組合物應經靜脈內或皮下投與。 醫藥組合物可宜以每劑量含有預定量之本文所描述之抗CD40抗體的單位劑量形式存在。包括於單位劑量中之抗CD40抗體之數量將視所治療之疾病以及如此項技術中所熟知之其他因素而定。此類單位劑量可呈含有適合於單次投與之一定量之抗體的凍乾乾粉形式，或呈液體形式。可將乾粉單位劑量形式封裝在具有注射器、合適數量之稀釋液及/或適用於投與之其他成分的套組中。呈液態形式之單位劑量可宜呈預填有適合於單次投與之一定量的抗CD40抗體的注射器形式來提供。 醫藥組合物亦可呈含有適合於多次投與之一定量之抗CD40抗體的塊體形式來提供。 可藉由使具有所需純度之抗體與視情況選用之此項技術中通常採用之醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑(以上所有在均本文中均被稱為「載劑」)，亦即，緩衝劑、穩定劑、防腐劑、離子等張劑、非離子清潔劑、抗氧化劑及其他混雜添加劑混合來製備用於儲存為凍乾調配物或水溶液的醫藥組合物。參見Remington's Pharmaceutical Sciences, 第16版 (Osol, 編 1980)。此類添加劑在所採用劑量及濃度下對於接受者應為無毒性的。 緩衝劑幫助將pH維持在接近生理學條件之範圍內。其可在廣泛多種濃度下存在，但應通常以介於約2 mM至約50 mM範圍內之濃度存在。用於本發明之合適緩衝劑包括有機酸及無機酸及其鹽兩者，諸如：檸檬酸鹽緩衝液(例如，檸檬酸一鈉-檸檬酸二鈉混合物、檸檬酸-檸檬酸三鈉混合物、檸檬酸-檸檬酸單鈉混合物等)、丁二酸鹽緩衝液(例如，丁二酸-丁二酸一鈉混合物、丁二酸-氫氧化鈉混合物、丁二酸-丁二酸二鈉混合物等)、酒石酸鹽緩衝液(例如，酒石酸-酒石酸鈉混合物、酒石酸-酒石酸鉀混合物、酒石酸-氫氧化鈉混合物等)、磷酸鹽緩衝液(例如，磷酸-磷酸一鈉混合物、磷酸-磷酸二鈉混合物、磷酸一鈉-磷酸二鈉混合物等)、葡糖酸鹽緩衝液(例如，葡萄糖酸-葡糖酸鈉混合物、葡萄糖酸-氫氧化鈉混合物、葡萄糖酸-葡糖酸鉀混合物等)、草酸鹽緩衝液(例如，草酸-草酸鈉混合物、草酸-氫氧化鈉混合物、草酸-草酸鉀混合物等)、乳酸鹽緩衝液(例如，乳酸-乳酸鈉混合物、乳酸-氫氧化鈉混合物、乳酸-乳酸鉀混合物等)及乙酸鹽緩衝液(例如，乙酸-乙酸鈉混合物、乙酸-氫氧化鈉混合物等)。另外，可使用反丁烯二酸鹽緩衝液、組胺酸緩衝液及三甲胺鹽，諸如，2-胺基-2-羥甲基-丙-1,3-二醇(亦即，Tris、THAM或參(羥甲基)胺基甲烷)。 可添加有時被稱為「穩定劑」之等張劑以確保本發明之液體組合物之等張性，且該等等張劑包括多羥基糖醇、例如三元醇或更高糖醇，諸如，丙三醇、赤藻糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨醇及甘露醇。穩定劑係指廣泛類別之賦形劑，該等賦形劑在功能上可介於增積劑至添加劑(其使治療劑溶解或有助於防止變性或黏著至容器壁)範圍。典型穩定劑可為：多羥基糖醇(上文列舉)；胺基酸，諸如，精胺酸、離胺酸、甘胺酸、麩醯胺、天冬醯胺、組胺酸、丙胺酸、鳥胺酸、白胺酸、2-苯丙胺酸、麩胺酸、蘇胺酸等；有機糖或糖醇，諸如，乳糖、海藻糖、水蘇糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、核糖醇、肌醇、半乳糖醇、甘油及類似者，包括諸如肌醇之環醇；聚乙二醇；胺基酸聚合物；含硫還原劑，諸如，尿素、麩胱甘肽、硫辛酸、硫乙醇酸鈉、硫代甘油、α-單硫代甘油及硫代硫酸鈉；低分子量多肽(例如，10個殘基或更少之肽)；親水性聚合物，諸如，聚乙烯吡咯啶酮單醣，諸如木糖、甘露糖、果糖、葡萄糖；雙醣，諸如，乳糖、麥芽糖、蔗糖及海藻糖；及三醣，諸如，棉子糖；以及多醣，諸如聚葡萄糖。穩定劑可以介於每重量之抗CD40抗體0.5重量%至10重量%範圍內之量存在。 可添加非離子界面活性劑或清潔劑(亦稱為「潤濕劑」)以幫助溶解醣蛋白以及保護糖蛋白免於攪拌誘發的聚集，其亦准許調配物暴露於剪切應力表面而不導致蛋白質之變性。合適非離子界面活性劑包括聚山梨醇酯(20、80等)、泊洛沙姆(poloxamer) (184、188等)及普洛尼克(pluronic)多元醇。非離子界面活性劑可以約0.05 mg/mL至約1.0 mg/mL之範圍存在。 適合於經由靜脈內輸注投與之水性組合物之具體例示性實施例包含10 mg/mL之抗CD40抗體，15 mM組胺酸緩衝液，pH 6.0，8.0% (w/v)蔗糖及0.05% (w/v)聚山梨醇酯80。在某些實施例中，抗CD40抗體為描述於表3中之人類化抗體中之任一者。組合物可呈凍乾粉末形式，該凍乾粉末在用2.0 mL無菌水或其他適合於注射或輸注之溶液(例如，0.9%鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)、乳酸化林格氏溶液等)復水後，提供上文水性組合物。組合物或其他實施例之組合物亦可呈預填有一定量之適合於單次投與抗CD40抗體之組合物的注射器或其他適合於注射及/或輸注的器件形式。 7.6 使用方法 7.6.1 治療效益本文所提供之資料表明，本文所描述之在腫瘤細胞存在下促效CD40之抗CD40抗體在活體內針對此等實體腫瘤發揮強效抗腫瘤活性。因此，抗CD40抗體、結合片段及/或包含抗CD40抗體之醫藥組合物可用於治療學上治療實體腫瘤。 一般而言，該等方法涉及向具有實體腫瘤之人類患者投與有效量之促效CD40的抗CD40抗體，且殺死腫瘤細胞及/或降低腫瘤細胞之增殖以提供治療效益。可用抗CD40抗體治療之實體腫瘤包括(但不限於)：腎上腺癌、骨癌、腦癌、乳癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、胃癌、頭頸癌、腎臟癌、肝癌、肺癌(例如，非小細胞肺癌、間皮瘤)、頭頸癌(例如，頭部及頸部之鱗狀細胞癌)、淋巴瘤(例如，B細胞淋巴瘤)、黑素瘤(例如，晚期惡性黑素瘤、皮膚黑素瘤)、口腔癌、卵巢癌、陰莖癌、前列腺癌、胰臟癌、皮膚癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌及陰道癌。在一些實施例中，實體腫瘤為頭頸癌、肺癌、黑素瘤或胰臟癌。 癌症可為最新診斷的且未經治療，或可為復發的、頑抗性、或復發及頑抗性、或轉移性形式之實體腫瘤。實際上，小鼠PC3預防性模型中之活體內資料(圖12)展示，相比於用同型抗體給藥，抗CD40抗體在減少腫瘤大小上係有效的。 不希望受理論限制，咸信，抗CD40抗體藉由促效CD40活化免疫系統。接著，後續免疫反應對鄰接腫瘤細胞發揮抗腫瘤效果，而不管CD40表現量。因此，預測本發明之抗CD40抗體針對CD40陽性實體腫瘤或CD40陰性實體腫瘤有效。 本發明之抗CD40抗體可單獨投與(單藥療法)或輔助其他抗癌療法及/或靶向或非靶向抗癌劑，或與其他抗癌療法及/或靶向或非靶向抗癌劑一起投與。無論係作為單藥療法投與或輔助其他療法或試劑，抑或與其他療法或試劑一起投與，投與一定量之抗CD40抗體，使得整體治療方案提供治療效益。 治療效益意謂，與無療法(當合適時)或已知護理標準相比，使用抗CD40抗體以治療患者體內之癌症，產生任何經證實的臨床效益。臨床效益可利用一般技術者已知之任何方法來評定。在一個實施例中，臨床效益係根據客觀反應率(ORR) (使用RECIST版本1.1測定)、反應持續時間(DOR)、無演進存活(PFS)及/或整體存活(OS)來評定。在一些實施例中，完全反應指示治療效益。在一些實施例中，部分反應指示治療效益。在一些實施例中，穩定疾病指示治療效益。在一些實施例中，增加整體存活指示治療效益。在一些實施例中，治療效益可構成疾病演進之及時改良及/或症狀或生活品質之改良。在其他實施例中，治療效益不能解釋為疾病控制之時間段增加，而係顯著地減少症狀負荷，從而使得生活品質改良。如對熟習此項技術者顯而易見的係，治療效益可使用單獨抗CD40抗體(單藥療法)或輔助其他抗癌療法及/或靶向或非靶向抗癌劑，或與其他抗癌療法及/或靶向或非靶向抗癌劑一起來觀測。 通常，治療效益係使用經設計以量測新治療針對癌症之反應的標準臨床測試來評定。為分析本文所描述之抗CD40抗體之治療性效益，可使用以下測試之一個或組合：(1)實體腫瘤之反應評價標準(the Response Evaluation Criteria In Solid Tumors，RECIST)版本1.1；(2)美國東部腫瘤協作組(ECOG)表現狀態(the Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) Performance Status)；(3)免疫相關反應準則(irRC)；(4)由腫瘤抗原之評定可評估的疾病；(5)經驗證患者報導結果量表；及/或(6)針對整體存活及無演進存活之Kaplan - Meier估計。 腫瘤負荷改變之評定係癌症療法之臨床評價的重要特徵。腫瘤縮小(目標反應)及疾病演進之發展之時間兩者均為癌症臨床試驗中之重要端點。標準化反應準則，被稱為RECIST (實體腫瘤之反應評價標準)，在2000年出版。在2009年發佈更新(RECIST 1.1)。RECIST準則通常用於目標反應為初級研究端點之臨床試驗，以及進行穩定疾病之評定、腫瘤演進或演進分析之時間的試驗，此係因為，此等結果量測係基於解剖腫瘤負荷之評定及其對於試驗療程之改變。表4提供用於測定研究藥物(諸如，本文所描述之抗CD40抗體)之目標腫瘤反應之反應準則的定義。

表 4
反應	準則
完全反應(CR)	所有靶病變消失。任何病理性淋巴結(無論係靶抑或非靶)必須在短軸線上減少至＜10 mm。
部分反應(PR)	靶病變之總直徑至少減少30%，以基線總直徑作為參考。
演進性疾病(PD)	靶病變之總直徑至少增加20%，以研究中之最小總和(若其為研究中之最小的，此包括基線總和)作為參考。除相對增加20%以外，總和亦必須表明至少5 mm之絕對增加。(注意：一或多個新病變之外觀亦被認為為演進)。
穩定疾病(SD)	既無適合PR之足夠縮小，亦無適合PD之足夠的增大，當對於研究時以最小總直徑作為參考。

可用於測定本文所描述之抗CD40抗體之治療效益之二級結果量測包括：客觀反應率(ORR)、無演進存活(PFS)、整體存活(OS)、整體反應持續時間(DOR)及反應深度(DpR)。ORR被定義為達成完全反應(CR)或部分反應(PR)之參與者的比例。PFS被定義為自抗CD40抗體之第一次給藥日至疾病演進或死亡(無論哪個首先發生)的時間。OS被定義為自診斷之日或針對疾病之治療開始起診斷具有疾病之患者仍存活之時間長度。DOR被定義為自參與者之初始CR或PR至疾病演進之時間的時間。DpR被定義為在最大反應點處觀測到之腫瘤縮小相比於基線腫瘤負荷的百分比。ORR及PFS兩者之臨床端點可根據上文所描述之RECIST 1.1準則來測定。 展示於表5中之表現狀態之ECOG等級用於描述患者在其護理自身之能力、日常活動及生理能力方面的功能水準。該等級係由美國東部腫瘤協作組(ECOG) (現今ECOG-ACRIN癌症研究組之一部分)研發，且在1982年公開。

表 5
分級	ECOG 表現狀態
0	完全有活力的，能夠進行所有疾病前表現而無限制
1	受限於身體上費力活動但可走動，且能夠進行輕度或久坐性質的工作，例如，輕家務、辦公室工作
2	可走動，且能夠進行所有自身護理但不能夠進行任何工作活動；起床走動超過清醒時數之50%
3	僅能夠進行有限自身護理；受限於床或椅子超過清醒時數之50%
4	完全喪失能力；不能進行任何自身護理；完全受限於床或椅子
5	死亡

可用於完全表徵及測定針對免疫治療試劑之反應(諸如，基於抗體之癌症療法)的另一組準則係免疫相關反應準則(irRC)，該準則係針對實體腫瘤之量測在2009年研發，且在2013年更新(Wolchok, 等人 Clin. Cancer Res. 2009; 15(23): 7412-7420及Nishino, 等人 Clin. Cancer Res. 2013; 19(14): 3936-3943，其中之各者以全文引用的方式併入本文中)。經更新irRC準則通常用於評估免疫治療劑(諸如，本文所描述之抗CD40抗體)對於腫瘤負荷之效果，且根據表6定義反應。

表 6
反應	準則
完全反應(CR)	在相隔不少於4週之兩個連續觀測中所有靶病變消失
部分反應 (PR)	靶病變之總最長直徑至少減少30%，以基線總直徑作為參考。
演進性疾病 (PD)	靶病變之總直徑至少增加20%，以研究中之最小總和(若其為研究中之最小的，此包括基線總和)作為參考。(注意：一或多個新病變之外觀並不認為為演進。新病變之量測包括於量測之總和中)。
穩定疾病 (SD)	既無適合PR之足夠縮小，亦無適合PD之足夠的增大，當對於研究時以最小總直徑作為參考。

由使用本文所描述之抗CD40抗體治療實體腫瘤(無論係作為單藥療法投與或輔助其他療法或試劑，抑或與其他療法或試劑一起投與)產生之一個例示性治療效益為完全反應。由使用本文所描述之抗CD40抗體治療實體腫瘤(無論係作為單藥療法投與或輔助其他療法或試劑，抑或與其他療法或試劑一起投與)產生之另一例示性治療效益為部分反應。 經驗證患者報導結果量表亦可用於指由各患者經由特定報導系統提供的反應。並非所聚焦之疾病，此類結果量表係關於當管理慢性病狀時所保留的功能。經驗證患者報導結果量表之一個非限制性實例為來自美國國家衛生研究院(the United States National Institutes of Health)之PROMIS® (患者報導結果量測資訊系統)。舉例而言，用於成年癌症患者之PROMIS®生理功能儀器可評估針對上肢(例如，靈巧性)、下肢(例如，步行或運動性)及中樞區(例如，頸部、背部運動性)之功能的自身報導能力，且包括常規日常活動，諸如日常雜務。 Kaplan - Meier曲線(Kaplan及Meier, J. Am. Stat. Assoc. 1958; 53(282): 457-481)亦可用於估計經歷抗CD40抗體療法之癌症患者相比於標準護理法的整體存活及無演進存活。 7.6.2 輔助療法抗CD40抗體可用於輔助或併用具有抗癌特性之其他藥劑或治療法。當輔助使用時，抗CD40抗體及其他藥劑可共同調配成單一之組合醫藥調配物，或可在單一協同給藥方案上或在不同給藥方案上分開調配及投與。輔助或併用抗CD40抗體投與之藥劑通常具有針對抗CD40抗體之互補活性，使得抗體與其他藥劑彼此沒有不利影響。 可輔助或併用抗CD40抗體投與之藥劑包括(但不限於)：烷基化劑、血管生成抑制劑、抗體、抗代謝物、抗有絲分裂劑、抗增生劑、抗病毒劑、極光(aurora)激酶抑制劑、細胞凋亡啟動子(例如，Bcl-2家族抑制劑)、死亡受體路徑之活化劑、Bcr-Abl激酶抑制劑、BiTE (雙特異性T細胞銜接劑)抗體、抗體藥物結合物、生物反應調節劑、週期素依賴型激酶抑制劑、細胞週期抑制劑、環加氧酶-2抑制劑、DVD、白血病病毒癌基因同源物(ErbB2)受體抑制劑、生長因子抑制劑、熱衝擊蛋白質(HSP)-90抑制劑、組蛋白脫乙醯基酶(HDAC)抑制劑、激素療法、免疫藥物、細胞凋亡蛋白質之抑制劑(IAP)之抑制劑、插入抗生素、激酶抑制劑、驅動蛋白抑制劑、Jak2抑制劑、雷帕黴素之哺乳動物標靶(mTor)抑制劑、微RNA、有絲分裂原活化胞外信號調節之激酶抑制劑、非類固醇抗炎藥(NSAID)、聚ADP(腺苷二磷酸)-核糖聚合酶(PARP)抑制劑、白金化學治療劑、布魯頓氏(Bruton's)酪胺酸激酶(BTK)抑制劑(例如，依魯替尼(ibrutinib)、阿卡拉如替尼(acalabrutinib))、polo樣激酶(Plk)抑制劑、磷酸肌醇-3激酶(PI3K)抑制劑、蛋白酶體抑制劑、嘌呤類似物、嘧啶類似物、受體酪胺酸激酶抑制劑、類視黃素/類維生素D植物鹼、小型抑制性核糖核酸(siRNA)、拓樸異構酶抑制劑、泛素連接酶抑制劑及類似者，以及此等藥劑中之一或多者之組合。 免疫藥物之實例包括(但不限於)干擾素、免疫檢查點抑制劑及其他免疫增強劑。干擾素包括干擾素α、干擾素α-2a、干擾素α-2b、干擾素β、干擾素γ-1a、ACTIMMUNE® (干擾素γ-1b)或干擾素γ-n1、其組合及類似者。免疫檢查點抑制劑包括靶向PD-1 (例如，派立珠單抗及尼沃單抗)、PD-L1 (例如，杜瑞魯單抗(durvalumab)、艾特立珠單抗(atezolizumab)、艾吾魯單抗(avelumab)、MEDI4736、MSB0010718C及MPDL3280A)及CTLA4 (細胞毒性淋巴細胞抗原4；例如，伊派利單抗、曲美單抗)的抗體。免疫增強試劑包括活化T細胞之抗OX40促效抗體。在某些實施例中，展示於表3中之人類化抗CD40抗體輔助派立珠單抗來投與。在其他某些實施例中，展示於表3中之人類化抗CD40抗體輔助尼沃單抗來投與。 抗CD40抗體亦可用於增強放射療法之療效。放射療法之實例包括外部光束放射療法、內部放射療法(亦即，近接療法)及全身性放射療法。 7.7 . 劑量及投與方案所投與抗CD40抗體之量將視各種因素而定，該等因素包括但不限於：所治療實體腫瘤之特定類型、所治療實體腫瘤之階段、投與模式、投與頻率、所需治療效益及其他參數(諸如，患者之年齡、體重及其他特徵等)。針對特定模式及投與頻率之有效提供治療效益的劑量之測定係在熟習此項技術者之能力內。 有效提供治療效益之劑量可首先自活體內動物模型或臨床來估計。用於廣泛多種疾病之合適動物模型為此項技術中已知。 本文揭示之抗CD40抗體可利用適合於待治療之病狀之任何途徑來投與。在一些實施例中，抗CD40抗體為列於表3中之人類化抗體中之任一者。抗CD40抗體通常應非經腸投與，亦即，輸注、皮下、肌內、靜脈內(IV)、皮內、鞘內、藥團、瘤內(IT)注射或硬膜外((Shire等人, 2004, J. Pharm. Sciences93(6):1390-1402))。在一個實施例中，抗CD40抗體作為小瓶中之凍乾粉末提供。小瓶可含有21 mg之抗CD40抗體。在投與之前，用注射用無菌水(SWFI)或其他合適介質復水凍乾粉末以得到含有10 mg/mL抗CD40抗體之溶液。在一些實施例中，所得復水溶液進一步用鹽水或其他合適介質稀釋，且經由每7天兩次、每7天一次、每14天一次、每21天一次、每28天一次、每35天一次、每42天一次、每49天一次或每56天一次IV輸注來投與。在一些實施例中，對於第一循環，輸注歷經90分鐘進行。在一些實施例中，後續輸注歷經60分鐘。在其他實施例中，所得復水溶液進一步用鹽水或其他合適介質稀釋，且經由每7天兩次、每7天一次、每14天一次、每21天一次、每28天一次、每35天一次、每42天一次、每49天一次或每56天一次IT注射來投與。 在一個例示性實施例中，抗CD40抗體為列於表3中之人類化抗體中之任一者。抗CD40抗體以每7天一次IV輸注形式按以下劑量來投與：0.005 mg/kg、0.01 mg/kg、0.02 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.6 mg/kg、0.8 mg/kg、1.0 mg/kg、1.1 mg/kg、1.2 mg/kg、1.3 mg/kg、1.4 mg/kg、1.5 mg/kg、1.6 mg/kg、1.7 mg/kg、1.8 mg/kg、1.9 mg/kg、2.0 mg/kg、2.2 mg/kg、2.4 mg/kg、2.6 mg/kg、2.8 mg/kg、3.0 mg/kg、3.2 mg/kg、3.4 mg/kg、3.6 mg/kg、3.8 mg/kg或4.0 mg/kg。 在另一例示性實施例中，抗CD40抗體為列於表3中之人類化抗體中之任一者。抗CD40抗體以每14天一次IV輸注形式按以下劑量來投與：0.005 mg/kg、0.01 mg/kg、0.02 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.6 mg/kg、0.8 mg/kg、1.0 mg/kg、1.1 mg/kg、1.2 mg/kg、1.3 mg/kg、1.4 mg/kg、1.5 mg/kg、1.6 mg/kg、1.7 mg/kg、1.8 mg/kg、1.9 mg/kg、2.0 mg/kg、2.2 mg/kg、2.4 mg/kg、2.6 mg/kg、2.8 mg/kg、3.0 mg/kg、3.2 mg/kg、3.4 mg/kg、3.6 mg/kg、3.8 mg/kg或4.0 mg/kg。 在另一例示性實施例中，抗CD40抗體為列於表3中之人類化抗體中之任一者。抗CD40抗體以每28天一次IV輸注形式按以下劑量來投與：0.005 mg/kg、0.01 mg/kg、0.02 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.6 mg/kg、0.8 mg/kg、1.0 mg/kg、1.1 mg/kg、1.2 mg/kg、1.3 mg/kg、1.4 mg/kg、1.5 mg/kg、1.6 mg/kg、1.7 mg/kg、1.8 mg/kg、1.9 mg/kg、2.0 mg/kg、2.2 mg/kg、2.4 mg/kg、2.6 mg/kg、2.8 mg/kg、3.0 mg/kg、3.2 mg/kg、3.4 mg/kg、3.6 mg/kg、3.8 mg/kg或4.0 mg/kg。 在另一例示性實施例中，抗CD40抗體為列於表3中之人類化抗體中之任一者。抗CD40抗體以每7天一次IT注射形式按以下劑量來投與：0.001 mg/kg、0.002 mg/kg、0.003 mg/kg、0.004 mg/kg、0.005 mg/kg、0.006 mg/kg、0.007 mg/kg、0.008 mg/kg、0.009 mg/kg、0.01 mg/kg、0.015 mg/kg、0.02 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.6 mg/kg、0.8 mg/kg、1.0 mg/kg、1.1 mg/kg、1.2 mg/kg、1.3 mg/kg、1.4 mg/kg、1.5 mg/kg、1.6 mg/kg、1.7 mg/kg、1.8 mg/kg、1.9 mg/kg或2.0 mg/kg。 在另一例示性實施例中，抗CD40抗體為列於表3中之人類化抗體中之任一者。抗CD40抗體以每14天一次IT注射形式按以下劑量來投與：0.001 mg/kg、0.002 mg/kg、0.003 mg/kg、0.004 mg/kg、0.005 mg/kg、0.006 mg/kg、0.007 mg/kg、0.008 mg/kg、0.009 mg/kg、0.01 mg/kg、0.015 mg/kg、0.02 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.6 mg/kg、0.8 mg/kg、1.0 mg/kg、1.1 mg/kg、1.2 mg/kg、1.3 mg/kg、1.4 mg/kg、1.5 mg/kg、1.6 mg/kg、1.7 mg/kg、1.8 mg/kg、1.9 mg/kg或2.0 mg/kg。 在另一例示性實施例中，抗CD40抗體為列於表3中之人類化抗體中之任一者。抗CD40抗體以每28天一次IT注射形式按以下劑量來投與：0.001 mg/kg、0.002 mg/kg、0.003 mg/kg、0.004 mg/kg、0.005 mg/kg、0.006 mg/kg、0.007 mg/kg、0.008 mg/kg、0.009 mg/kg、0.01 mg/kg、0.015 mg/kg、0.02 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.6 mg/kg、0.8 mg/kg、1.0 mg/kg、1.1 mg/kg、1.2 mg/kg、1.3 mg/kg、1.4 mg/kg、1.5 mg/kg、1.6 mg/kg、1.7 mg/kg、1.8 mg/kg、1.9 mg/kg或2.0 mg/kg。 當輔助其他試劑(諸如，其他化學治療劑)投與或與該等其他試劑一起投與時，抗CD40抗體可能以與其他藥劑相同的時程或以不同時程投與。當以相同時程投與時，抗CD40抗體可在其他藥劑之前、之後投與，或與該等其他藥劑一起同時投與。在抗CD40抗體輔助護理標準投與或與護理標準一起投與之一些實施例中，抗CD40抗體可在開始標準療法之前起始，例如，在開始護理標準療法之前一天、若干天、一週、若干週、一月或甚至若干月。 在一個例示性實施例中，將抗CD40抗體輔助尼沃單抗(OPDIVO®)使用以治療非小細胞肺癌。在一些實施例中，抗CD40抗體為列於表3中之人類化抗體中之任一者。抗CD40抗體經由每7天一次IV輸注按以下劑量來投與：0.005 mg/kg、0.01 mg/kg、0.02 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.6 mg/kg、0.8 mg/kg、1.0 mg/kg、1.1 mg/kg、1.2 mg/kg、1.3 mg/kg、1.4 mg/kg、1.5 mg/kg、1.6 mg/kg、1.7 mg/kg、1.8 mg/kg、1.9 mg/kg、2.0 mg/kg、2.2 mg/kg、2.4 mg/kg、2.6 mg/kg、2.8 mg/kg、3.0 mg/kg、3.2 mg/kg、3.4 mg/kg、3.6 mg/kg、3.8 mg/kg或4.0 mg/kg。尼沃單抗藉由每兩週一次以3 mg/kg之劑量經60分鐘靜脈內輸注來投與。輔助抗CD40抗體/尼沃單抗療法持續直至疾病演進或患者不再耐受。 在另一例示性實施例中，將抗CD40抗體輔助尼沃單抗(OPDIVO®)使用以治療非小細胞肺癌。在一些實施例中，抗CD40抗體為列於表3中之人類化抗體中之任一者。抗CD40抗體經由每14天一次IV輸注按以下劑量來投與：0.005 mg/kg、0.01 mg/kg、0.02 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.6 mg/kg、0.8 mg/kg、1.0 mg/kg、1.1 mg/kg、1.2 mg/kg、1.3 mg/kg、1.4 mg/kg、1.5 mg/kg、1.6 mg/kg、1.7 mg/kg、1.8 mg/kg、1.9 mg/kg、2.0 mg/kg、2.2 mg/kg、2.4 mg/kg、2.6 mg/kg、2.8 mg/kg、3.0 mg/kg、3.2 mg/kg、3.4 mg/kg、3.6 mg/kg、3.8 mg/kg或4.0 mg/kg。尼沃單抗藉由每兩週一次以3 mg/kg之劑量經60分鐘靜脈內輸注來投與。輔助抗CD40抗體/尼沃單抗療法持續直至疾病演進或患者不再耐受。 在另一例示性實施例中，將抗CD40抗體輔助尼沃單抗(OPDIVO®)使用以治療非小細胞肺癌。在一些實施例中，抗CD40抗體為列於表3中之人類化抗體中之任一者。抗CD40抗體經由每28天一次IV輸注按以下劑量來投與：0.005 mg/kg、0.01 mg/kg、0.02 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.6 mg/kg、0.8 mg/kg、1.0 mg/kg、1.1 mg/kg、1.2 mg/kg、1.3 mg/kg、1.4 mg/kg、1.5 mg/kg、1.6 mg/kg、1.7 mg/kg、1.8 mg/kg、1.9 mg/kg、2.0 mg/kg、2.2 mg/kg、2.4 mg/kg、2.6 mg/kg、2.8 mg/kg、3.0 mg/kg、3.2 mg/kg、3.4 mg/kg、3.6 mg/kg、3.8 mg/kg或4.0 mg/kg。尼沃單抗藉由每兩週一次以3 mg/kg之劑量經60分鐘靜脈內輸注來投與。輔助抗CD40抗體/尼沃單抗療法持續直至疾病演進或患者不再耐受。 在另一例示性實施例中，將抗CD40抗體輔助尼沃單抗(OPDIVO®)使用以治療非小細胞肺癌。在一些實施例中，抗CD40抗體為列於表3中之人類化抗體中之任一者。抗CD40抗體以每7天一次IT注射形式按以下劑量來投與：0.001 mg/kg、0.002 mg/kg、0.003 mg/kg、0.004 mg/kg、0.005 mg/kg、0.006 mg/kg、0.007 mg/kg、0.008 mg/kg、0.009 mg/kg、0.01 mg/kg、0.015 mg/kg、0.02 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.6 mg/kg、0.8 mg/kg、1.0 mg/kg、1.1 mg/kg、1.2 mg/kg、1.3 mg/kg、1.4 mg/kg、1.5 mg/kg、1.6 mg/kg、1.7 mg/kg、1.8 mg/kg、1.9 mg/kg或2.0 mg/kg。尼沃單抗藉由每兩週一次以3 mg/kg之劑量經60分鐘靜脈內輸注來投與。輔助抗CD40抗體/尼沃單抗療法持續直至疾病演進或患者不再耐受。 在另一例示性實施例中，將抗CD40抗體輔助尼沃單抗(OPDIVO®)使用以治療非小細胞肺癌。在一些實施例中，抗CD40抗體為列於表3中之人類化抗體中之任一者。抗CD40抗體以每14天一次IT注射形式按以下劑量來投與：0.001 mg/kg、0.002 mg/kg、0.003 mg/kg、0.004 mg/kg、0.005 mg/kg、0.006 mg/kg、0.007 mg/kg、0.008 mg/kg、0.009 mg/kg、0.01 mg/kg、0.015 mg/kg、0.02 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.6 mg/kg、0.8 mg/kg、1.0 mg/kg、1.1 mg/kg、1.2 mg/kg、1.3 mg/kg、1.4 mg/kg、1.5 mg/kg、1.6 mg/kg、1.7 mg/kg、1.8 mg/kg、1.9 mg/kg或2.0 mg/kg。尼沃單抗藉由每兩週一次以3 mg/kg之劑量經60分鐘靜脈內輸注來投與。輔助抗CD40抗體/尼沃單抗療法持續直至疾病演進或患者不再耐受。 在另一例示性實施例中，將抗CD40抗體輔助尼沃單抗(OPDIVO®)使用以治療非小細胞肺癌。在一些實施例中，抗CD40抗體為列於表3中之人類化抗體中之任一者。抗CD40抗體以每28天一次IT注射形式按以下劑量來投與：0.001 mg/kg、0.002 mg/kg、0.003 mg/kg、0.004 mg/kg、0.005 mg/kg、0.006 mg/kg、0.007 mg/kg、0.008 mg/kg、0.009 mg/kg、0.01 mg/kg、0.015 mg/kg、0.02 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.6 mg/kg、0.8 mg/kg、1.0 mg/kg、1.1 mg/kg、1.2 mg/kg、1.3 mg/kg、1.4 mg/kg、1.5 mg/kg、1.6 mg/kg、1.7 mg/kg、1.8 mg/kg、1.9 mg/kg或2.0 mg/kg。尼沃單抗藉由每兩週一次以3 mg/kg之劑量經60分鐘靜脈內輸注來投與。輔助抗CD40抗體/尼沃單抗療法持續直至疾病演進或患者不再耐受。 在另一例示性實施例中，將抗CD40抗體輔助派立珠單抗(Keytruda®)使用以治療非小細胞肺癌。在一些實施例中，抗CD40抗體為列於表3中之人類化抗體中之任一者。抗CD40抗體經由每7天一次IV輸注按以下劑量來投與：0.005 mg/kg、0.01 mg/kg、0.02 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.6 mg/kg、0.8 mg/kg、1.0 mg/kg、1.1 mg/kg、1.2 mg/kg、1.3 mg/kg、1.4 mg/kg、1.5 mg/kg、1.6 mg/kg、1.7 mg/kg、1.8 mg/kg、1.9 mg/kg、2.0 mg/kg、2.2 mg/kg、2.4 mg/kg、2.6 mg/kg、2.8 mg/kg、3.0 mg/kg、3.2 mg/kg、3.4 mg/kg、3.6 mg/kg、3.8 mg/kg或4.0 mg/kg。派立珠單抗藉由每三週一次以2 mg/kg之劑量經30分鐘靜脈內輸注來投與。輔助抗CD40抗體/派立珠單抗療法持續直至疾病演進或患者不再耐受。 在另一例示性實施例中，將抗CD40抗體輔助派立珠單抗(Keytruda®)使用以治療非小細胞肺癌。在一些實施例中，抗CD40抗體為列於表3中之人類化抗體中之任一者。抗CD40抗體經由每14天一次IV輸注按以下劑量來投與：0.005 mg/kg、0.01 mg/kg、0.02 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.6 mg/kg、0.8 mg/kg、1.0 mg/kg、1.1 mg/kg、1.2 mg/kg、1.3 mg/kg、1.4 mg/kg、1.5 mg/kg、1.6 mg/kg、1.7 mg/kg、1.8 mg/kg、1.9 mg/kg、2.0 mg/kg、2.2 mg/kg、2.4 mg/kg、2.6 mg/kg、2.8 mg/kg、3.0 mg/kg、3.2 mg/kg、3.4 mg/kg、3.6 mg/kg、3.8 mg/kg或4.0 mg/kg。派立珠單抗藉由每三週一次以2 mg/kg之劑量經30分鐘靜脈內輸注來投與。輔助抗CD40抗體/派立珠單抗療法持續直至疾病演進或患者不再耐受。 在另一例示性實施例中，將抗CD40抗體輔助派立珠單抗(Keytruda®)使用以治療非小細胞肺癌。在一些實施例中，抗CD40抗體為列於表3中之人類化抗體中之任一者。抗CD40抗體經由每28天一次IV輸注按以下劑量來投與：0.005 mg/kg、0.01 mg/kg、0.02 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.6 mg/kg、0.8 mg/kg、1.0 mg/kg、1.1 mg/kg、1.2 mg/kg、1.3 mg/kg、1.4 mg/kg、1.5 mg/kg、1.6 mg/kg、1.7 mg/kg、1.8 mg/kg、1.9 mg/kg、2.0 mg/kg、2.2 mg/kg、2.4 mg/kg、2.6 mg/kg、2.8 mg/kg、3.0 mg/kg、3.2 mg/kg、3.4 mg/kg、3.6 mg/kg、3.8 mg/kg或4.0 mg/kg。派立珠單抗藉由每三週一次以2 mg/kg之劑量經30分鐘靜脈內輸注來投與。輔助抗CD40抗體/派立珠單抗療法持續直至疾病演進或患者不再耐受。 在另一例示性實施例中，將抗CD40抗體輔助派立珠單抗(Keytruda®)使用以治療非小細胞肺癌。在一些實施例中，抗CD40抗體為列於表3中之人類化抗體中之任一者。抗CD40抗體以每7天一次IT注射形式按以下劑量來投與：0.001 mg/kg、0.002 mg/kg、0.003 mg/kg、0.004 mg/kg、0.005 mg/kg、0.006 mg/kg、0.007 mg/kg、0.008 mg/kg、0.009 mg/kg、0.01 mg/kg、0.015 mg/kg、0.02 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.6 mg/kg、0.8 mg/kg、1.0 mg/kg、1.1 mg/kg、1.2 mg/kg、1.3 mg/kg、1.4 mg/kg、1.5 mg/kg、1.6 mg/kg、1.7 mg/kg、1.8 mg/kg、1.9 mg/kg或2.0 mg/kg。派立珠單抗藉由每三週一次以2 mg/kg之劑量經30分鐘靜脈內輸注來投與。輔助抗CD40抗體/派立珠單抗療法持續直至疾病演進或患者不再耐受。 在另一例示性實施例中，將抗CD40抗體輔助派立珠單抗(Keytruda®)使用以治療非小細胞肺癌。在一些實施例中，抗CD40抗體為列於表3中之人類化抗體中之任一者。抗CD40抗體以每14天一次IT注射形式按以下劑量來投與：0.001 mg/kg、0.002 mg/kg、0.003 mg/kg、0.004 mg/kg、0.005 mg/kg、0.006 mg/kg、0.007 mg/kg、0.008 mg/kg、0.009 mg/kg、0.01 mg/kg、0.015 mg/kg、0.02 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.6 mg/kg、0.8 mg/kg、1.0 mg/kg、1.1 mg/kg、1.2 mg/kg、1.3 mg/kg、1.4 mg/kg、1.5 mg/kg、1.6 mg/kg、1.7 mg/kg、1.8 mg/kg、1.9 mg/kg或2.0 mg/kg。派立珠單抗藉由每三週一次以2 mg/kg之劑量經30分鐘靜脈內輸注來投與。輔助抗CD40抗體/派立珠單抗療法持續直至疾病演進或患者不再耐受。 在另一例示性實施例中，將抗CD40抗體輔助派立珠單抗(Keytruda®)使用以治療非小細胞肺癌。在一些實施例中，抗CD40抗體為列於表3中之人類化抗體中之任一者。抗CD40抗體以每28天一次IT注射形式按以下劑量來投與：0.001 mg/kg、0.002 mg/kg、0.003 mg/kg、0.004 mg/kg、0.005 mg/kg、0.006 mg/kg、0.007 mg/kg、0.008 mg/kg、0.009 mg/kg、0.01 mg/kg、0.015 mg/kg、0.02 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.6 mg/kg、0.8 mg/kg、1.0 mg/kg、1.1 mg/kg、1.2 mg/kg、1.3 mg/kg、1.4 mg/kg、1.5 mg/kg、1.6 mg/kg、1.7 mg/kg、1.8 mg/kg、1.9 mg/kg或2.0 mg/kg。派立珠單抗藉由每三週一次以2 mg/kg之劑量經30分鐘靜脈內輸注來投與。輔助抗CD40抗體/派立珠單抗療法持續直至疾病演進或患者不再耐受。 如熟習此項技術者應瞭解，上文所描述之各種試劑之建議劑量可能需要調整以使患者反應最佳化且使治療效益最大化。 8. 實例為了說明之目的提供以下實例(高亮顯示本文所描述之抗CD40抗體之例示性實施例之某些特徵及特性)，且為非限制性的。 實例 1 ：小鼠抗人類 CD40 抗體之產生單株抗體係藉由用過度表現人類CD40之小鼠3T12細胞腹膜內免疫Balb/C小鼠或SJL小鼠來產生。收集脾，且使脾細胞與多發性骨髓瘤細胞株NS0融合。使用胺基喋呤選擇融合瘤。篩檢且次選殖表現具有促效活性之抗CD40抗體之所選擇融合瘤，以分離單獨純系。 為篩檢具有促效活性之抗體，研發出一組功能分析，其包括NFκB路徑刺激、單核球活化、樹突狀細胞(DC)活化及CD40配位體(CD40L)競爭。在此等分析中，包括抗人類CD40 G28-5 (小鼠IgG ₁) (Biolegend)作為陽性對照，且同型匹配小鼠抗體(mIgG ₁)作為陰性對照。 8.1.1. HEK293 藍色 CD40 NF κ B 報導分析將穩定表現人類CD40及NFκB報導基因之HEK293藍色CD40細胞株(InVivogen)維持在補充有30 μg/mL殺稻瘟菌素及100 μg/mL勻黴素之DMEM、10%加熱不活化胎牛血清(FBS)中。在HEK293藍色CD40細胞之表面上之CD40之活化觸發導致NFκB活化及後續分泌胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)之信號級聯。將含有促效抗CD40之融合瘤上清液與2.5×10 ⁵個/毫升之HEK293藍色CD40細胞一起培育刺激SEAP產生，SEAP利用比色酶分析來量測。因此，SEAP之含量對應於融合瘤上清液中之抗CD40之活性。 8.1.2. 單核球活化分析單核球活性分析係使用單核球細胞株THP1-XBlue細胞(InVivogen)來進行。此細胞株穩定地表現NFκB及AP-1-誘導性SEAP報導基因，且維持在具有10%加熱不活化FBS及200 μg/mL勻黴素之RPMI 1640中。在該分析中，5×10 ⁵個/毫升THP1-XBlue細胞首先用40 ng/mL IFNγ預致敏24小時，且隨後與測試樣品一起再培育24小時。促效抗CD40誘導之SEAP活性係利用酶促分析來監測。 8.1.3. 原代樹突狀細胞 IL-12p70 產量分析亦針對其活化源自單核球之樹突狀細胞(moDC)之能力來篩檢抗CD40純系。活化係利用IL-12p70產量來監測。以Ficoll梯度來首先分離人類周邊血液單核細胞(PBMC)。簡言之，將來自健康人類供體，用相同體積之PBS稀釋的全血添加至Leucosep (Greiner Bio One)管，該管在玻璃料下含有Ficoll-Paque Plus(15 mL)。接著，在1,000 g下將血液離心15分鐘而無制動。採集PBMC且用PBS洗滌一次，在室溫下在1,300 rpm下離心5分鐘，並用RPMI 1640洗滌一次。將細胞再懸浮於培養基(RPMI1640+10%加熱不活化FBS)中。隨後，自PBMC用來自StemCell之富集套組分離單核球，且將該等單核球在補充有10 ng/mL GM-CSF及20 ng/mL IL-4之StemSep無血清培養基中在37℃、5% CO ₂下培養6天。在第3天將新鮮GM-CSF及IL-4添加至培養物以幫助維持DC分化。在培養物中6天之後，源自單核球之不成熟DC經受FACS分析以驗證不成熟DC表現型：Lin-、CD80/CD86+、HLA-DR+或CD11c+。不成熟moDC用IFNγ來預致敏，且用含有抗CD40抗體之樣品在補充有GM-CSF及IL-4之StemSep無血清培養基中刺激48小時。收集培養物上清液，且利用市售ELISA套組分析IL-12p70產量。篩檢結果及代表性活性概述於表1-1中。 表1-1展示跨越經分離融合瘤之促效抗CD40活性的範圍。所有新純系均證實與文獻CD40抗體G28-5(參見例如，Bishop, G. A. Journal of Immunology 188, 4127-4129 (2012))相當之單核球活化。純系AD166.4.4及AD175.14.11證實，單核球活化但並不展示樹突狀細胞活化。其餘純系顯示與G28-5相當之單核球活化，以及如與G28-5相比增強的樹突狀細胞活化。

表1-1 促效抗 -CD40 純系篩檢之概述
純系	單核球活化 1(THP1-Xblue, OD 655)	moDC 活化 (IL-12p70, pg/mL)
AD163.7.2	0.13	905.3
AD163.9.3	0.19	2216.3
AD163.10.7	0.16	1318.8
AD163.27.12	0.12	1514.5
AD163.162.1	0.11	2155.5
AD164.14.6	0.15	878
AD164.76.3	0.16	769.8
AD165.1.2	0.14	719.8
AD166.4.4	0.24	0
AD175.14.11	0.2	0
G28-5	0.12	138.8
muIgG1	0.06	0
1單核球活化為在OD 655處記錄自THP1-XBlue細胞所釋放的SEAP活性

使用標準PCR技術，自融合瘤AD163.9.3、AD166.4.4、AD175.14.11、AD163.10.7、AD165.1.2、AD163.162.1、AD163.27.12、AD163.7.2、AD164.14.6及AD164.76.3，分別地選殖編碼十種單株抗體之重鏈及輕鏈可變區之cDNA序列，且使用標準DNA定序技術對該等cDNA序列進行定序。由DNA編碼之完全對應抗體胺基酸序列展示於圖2A至圖2C中。 實例 2 ： 小鼠抗人類 CD40 抗體之抗原決定基分類BIAcore分析及ELISA方法用於根據其與彼此或CD40配位體(CD40L)競爭與CD40結合之能力來對小鼠抗人類CD40促效抗體進行分類。 BIAcore分析係使用BIAcore T100儀器在12℃下來進行。首先將山羊抗小鼠Fc抗體(Pierce，目錄號31170)固定在CM5感應器晶片上，隨後在表面上俘獲第一測試抗體。在利用50 μg/mL之小鼠同型抗體混合物進行阻斷之後，用人類CD40之細胞外域之可溶形式(Creative BioMart，目錄號CD402221H)來注射流動細胞。隨後，注射第二測試抗體或CD40L (PeproTech，目錄號0308145)以量測其與CD40及第一測試抗體之複合物的結合。如表2-1中所展示，將本發明之抗CD40抗體分類成三個抗原決定基組。抗原決定基組1由AD163.7.2 (「muAb8」)及AD175.14.11 (「muAb3」)例示，其阻斷CD40L與CD40結合。抗原決定基組2係自純系AD163.162.1 (「muAb6」)及AD163.27.12 (「muAb7」)測定，其並不與CD40L或抗原決定基組1中之抗體競爭。第三抗原決定基組由純系AD163.9.3 (「muAb1」)、AD166.4.4 (「muAb2」)及AD165.1.2 (「muAb5」)例示，其並不與CD40L競爭與CD40結合，而與抗原決定基組1及組2中之抗體競爭。

表 2-1 利用 BIAcore 分析之抗原決定基分類
第一抗體	第二抗體
muAb6	muAb1	muAb2	muAb7	muAb5	muAb8	muAb3	CD40L
muAb6	—	X	X	X	X	Y	Y	Y
muAb1	X	—	X	X	X	X	X	Y
muAb2	X	X	—	X	X	X	X	Y
muAb7	X	X	X	—	X	Y	Y	Y
muAb5	X	X	X	X	—	X	X	Y
muAb8	Y	X	X	Y	X	—	X	X
muAb3	Y	X	X	Y	X	X	—	X
X：不能結合之第二抗體；Y：同時結合

研發ELISA分析以量測抗CD40抗體對於人類CD40-CD40L相互作用之效果。簡言之，將CD40-人類Fc (huFc)融合蛋白質(Creative BioMart)與抗CD40抗體或同型對照抗體混合，且將其添加至塗佈有HA標記之CD40L (R&D Systems)的96孔盤。CD40-huFc複合物對盤結合之CD40L之結合係利用結合HRP之抗人類Fc抗體(Jackson ImmunoResearch)來偵測。在用TMB (3, 3', 5, 5'-四甲基聯苯胺)基質顯色之後，在OD ₄₅₀處讀取盤。 抗CD40抗體對於CD40-CD40L相互作用之效果係藉由計算含有抗CD40抗體之樣品中之OD ₄₅₀與含有同型對照抗體之樣品中之OD ₄₅₀的比率(「OD ₄₅₀比率」)來測定。OD ₄₅₀比率≤0.1，展示抑制人類CD40L與人類CD40結合。OD ₄₅₀比率在0.1與1之間，展示部分抑制CD40L與CD40結合。OD ₄₅₀比率＞1，展示增強的人類CD40L針對人類CD40之結合，由此增強CD40信號傳導。 資料概述於表2-2中。阻斷CD40與CD40L結合之抗體muAb8及muAb3顯示少於0.1之比率。抗體muAb6及muAb7展示約0.5之比率，從而表明對於CD40-CD40L相互作用之適度效果。抗體muAb1、muAb2、muAb4、muAb5、muAb9及muAb10顯示約1或大於1之OD ₄₅₀比率，從而指示無效果或促進CD40與CD40L結合的效果。

表 2-2 與 CD40 競爭 CD40L 結合
抗體	在抗 CD40 抗體之情況下的 OD 450	OD 450 比率
muAb8	0.066	0.08
muAb3	0.068	0.09
muAb7	0.328	0.41
muAb6	0.455	0.57
muAb1	1.779	2.22
muAb4	1.343	1.68
muAb9	1.883	2.35
muAb10	2.107	2.63
muAb5	0.989	1.24
muAb2	1.025	1.28

實例 3 ： 小鼠抗人類 CD40 抗體之人類化抗體V區之人類化係如由Queen, C.等人 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989; 86:10029-10033)所概述來進行。CDR之典型結構係根據Huang等人(Methods, 2005; 36:35-42)來測定。鑑別具有相同或最類似CDR典型結構之人類可變生殖系序列，且選擇合適人類V _H、V _L及J區段序列以提供抗CD40可變區之構架。在構架位置(在其中電腦模型表明與CDR顯著接觸)處，用來自鼠類抗CD40 V區之胺基酸取代原始人類構架胺基酸(回復突變)。除非另外規定，否則使用在重鏈中具有天然變異D356E及L358M之人類IgG ₁的恆定區與κ輕鏈。人類化抗體之V _H區及V _L區之完整胺基酸序列展示於圖2D至圖2G中。 根據上文所描述之方法將抗CD40純系AD163.162.1 (「muAb6」)人類化。muAb6之人類化版本為huAb6-1、huAb6-2及huAb6-3。抗體huAb6-1攜載V _H(SEQ ID NO: 110)構架回復突變：M48I、V67A、I69L及A71V。抗體huAb6-2攜載V _H(SEQ ID NO: 111)構架回復突變M48I及A71V。抗體huAb6-3攜載VH (SEQ ID NO: 112)構架回復突變M48I及A71V，以及V _HCDR生殖系改變N60A、K64Q及D65G，以增加與人類生殖系序列之一致性。抗體huAb6-1、huAb6-2及huAb6-3攜載V _L(SEQ ID NO: 161)構架回復突變：A43S、L46R、L47W及F71Y。 抗CD40純系AD163.7.2 (「muAb8」)之人類化版本為huAb8-1、huAb8-2及huAb8-3 (圖2D至圖2E)。抗體huAb8-1攜載V _H(SEQ ID NO: 113)構架回復突變：M48I、V67A、I69L、A71V、K73R、Y91F及R94S。抗體huAb8-2攜載V _H(SEQ ID NO: 114)構架回復突變：M48I、V67A、I69L、A71V、K73R、Y91F及R94S；以及VH CDR C59S突變。抗體huAb8-3攜載V _H(SEQ ID NO: 115)構架回復突變：M48I、A71V及R94S。抗體huAb8-1、huAb8-2及huAb8-3均攜載V _L(SEQ ID NO: 162)構架回復突變：A43S及Y87F。 抗CD40純系AD164.14.6 (「muAb9」)經人類化以提供huAb9-1、huAb9-2、huAb9-3、huAb9-4、huAb9-5及huAb9-6。抗體huAb9-1及huAb9-4顯示V _H(SEQ ID NO: 116)構架回復突變：I48M、V67I及V71R。抗體huAb9-2及huAb9-5攜載V _H(SEQ ID NO: 117)構架回復突變：I48M及V71R。抗體huAb9-3及huAb9-6攜載V _H(SEQ ID NO: 118)構架回復突變：I48M及V71R，以及額外兩個CDR生殖系改變T30S及N65S，以改良與人類生殖系序列之一致性。抗體huAb9-1、huAb9-2及huAb9-3攜載V _L(SEQ ID NO: 163)構架回復突變：I2A、Y36F及Y87F。抗體huAb9-4、huAb9-5及huAb9-6攜載V _L(SEQ ID NO: 164)構架回復突變I2A。純系AD164.14.6進一步經修飾以藉由恢復V _L之構架回復突變I2A來移除在輕鏈之第二位置處發現之信號肽裂解位點。抗體huAb9 A2I及huAb9 A2V攜載V _H(SEQ ID NO:117)及分別地含有構架回復突變A2I (SEQ ID NO: 170)及A2V (SEQ ID NO: 171)之V _L，防止非所需裂解產物之形成。 產生具有人類IgG1重鏈恆定區及κ輕鏈恆定區之本發明實例中之人類化抗體。C端離胺酸可藉由在人類IgG1重鏈之蛋白質表現之後進行轉譯後加工來部分裂解。因此，huAb9-5具有根據SEQ ID NO: 130或SEQ ID NO: 131之重鏈及根據SEQ ID NO: 140之輕鏈。抗體huAb9-5亦製造成具有在重鏈恆定區中之V273E及V273Y胺基酸突變，分別地對應於根據SEQ ID NO: 132或SEQ ID NO: 133及SEQ ID NO: 134或SEQ ID NO: 135之重鏈，以及具有根據SEQ ID NO: 140之輕鏈。產生具有人類IgG1 V273E重鏈恆定區之抗體huAb9 A2I及huAb9 A2V。因此，huAb9 A2I具有根據SEQ ID NO: 132或SEQ ID NO 133之重鏈及根據SEQ ID NO: 141之輕鏈。類似地，huAb9 A2V具有根據SEQ ID NO: 132或SEQ ID NO: 133之重鏈及根據SEQ ID NO: 142之輕鏈。 實例 4 ： 人類化抗人類 CD40 抗體之表徵為確保人類化抗CD40抗體保留親本鼠類抗體之促效特性及其他所需特性，進行一組表徵分析以測定本發明之人類化抗體之NFκB活化、CD40結合動力學、物種交叉反應性及抗原決定基類別。 8.4.1. NF κ B 活化利用本發明之人類化抗CD40抗體之NFκB活化係在HEK293藍色CD40 NFκB報導細胞中評價。將活化表示為在OD ₆₅₅處量測之SEAP (所分泌胚胎鹼性磷酸酶)報導基因活性。所量測最大OD ₆₅₅及半最大活化之濃度(EC ₅₀)概述於表4-1中。

表4-1 HEK293 藍色CD40 NF κB 報導細胞中之NF κB 活化
人類化抗體	EC 50(μg/mL)	最大活化 (OD 655)
huAb6-1	1.09	0.26
huAb6-2	1.21	0.20
huAb6-3	4.31	0.32
huAb8-1	0.14	0.45
huAb8-3	0.07	0.46
huAb9-1	0.19	0.26
huAb9-2	0.29	0.27
huAb9-3	0.18	0.27
huAb9-4	5.55	0.61
huAb9-5	1.13	0.67
huAb9-6	5.95	0.54

8.4.2. CD40 結合動力學及物種交叉反應性所揭示人類化抗CD40抗體之結合親和力係利用BIAcore及流動式細胞測量術分析兩者來分析。 CD40結合動力學係利用BIAcore分析用BIAcore T200儀器來分析。簡言之，將山羊抗小鼠Fc抗體(Pierce，目錄號31170)或山羊抗人類Fc (Pierce，目錄號31125)固定在CM5感應器晶片上，隨後在測試表面上俘獲抗CD40抗體。隨後，注射人類CD40之細胞外域之可溶形式 (Creative BioMart，目錄號CD402221H)或獼猴(cynomolgus/cyno) CD40 (Creative BioMart，目錄號CD40-8824C)，且量測結合及解離。 表面電漿子共振資料指示，人類化huAb8-1、huAb9-5、huAb9 A2I及huAb9 A2V抗體保留與其親本純系AD163.7.2 (「muAb8」)或純系AD164.14.6 (「muAb9」)類似的結合親和力(K _D)，且展示與人類或獼猴CD40之類似結合(表4-2)。

表4-2 由 BIAcore 量測之親和力*
抗體	人類CD40	獼猴CD40
k a(1/Ms)	k d(1/s)	K D(M)	k a(1/Ms)	k d(1/s)	K D(M)
muAb6	7.6E+04	4.8E-03	6.3E-08	未測定
muAb7	7.5E+04	4.8E-03	6.4E-08	未測定
muAb8	1.0E+06	4.2E-03	4.1E-09	未測定
muAb3	6.9E+04	1.2E-02	1.7E-07	未測定
muAb1	4.7E+05	1.6E-02	3.5E-08	未測定
muAb2	2.8E+06	9.6E-03	3.5E-09	未測定
muAb4	2.3E+06	1.7E-01	7.6E-08	未測定
muAb5	2.3E+06	2.0E-03	8.8E-10	未測定
muAb10	2.6E+06	3.4E-02	1.3E-08	未測定
muAb9	2.8E+06	5.2E-02	1.9E-08	未測定
huAb8-1	7.7E+05	2.3E-03	3.0E-09	1.0E+06	7.1E-03	7.1E-09
huAb9-5	1.7E+06	2.6E-02	1.5E-08	1.8E+06	2.4E-02	1.3E-08
huAb9 A2I	1.3E+06	2.2E-01	1.7E-07	1.7E+06	2.5E-01	1.5E-07
huAb9 A2V	1.5E+06	2.6E-01	1.7E-07	1.9E+06	2.7E-01	1.4E-07

*數目係指科學記數法，例如，3.0E-09 = 3.0 × 10 ^-9。 亦在用人類或獼猴CD40穩定地轉染之HEK293細胞以及源自獼猴或人類PBMC之B細胞上針對與細胞表面CD40之結合，來評價人類化抗CD40抗體。將人類化抗CD40抗體與HEK293轉染物在冰上一起培育15分鐘，且用結合螢光之抗人類二級抗體(Jackson ImmunoResearch)來偵測結合。細胞之FACS分析確認，人類化抗體與人類及獼猴CD40穩定細胞株結合。對比而言，在用小鼠、大鼠或狗CD40進行之類似實驗中未觀測到結合。 亦針對其與原代表現人類及獼猴CD40之細胞結合之能力來評定抗CD40抗體。將自人類或獼猴血液分離之PBMC與同螢光染料CF640R結合之抗CD40抗體一起培育。在FACS分析之後，利用FlowJo (FlowJo, LLC)軟體對資料進行分析。此等結果表明，人類化抗體與源自人類及獼猴PBMC兩者之原代CD40陽性細胞結合。 8.4.3. 抗原決定基分類流動式細胞測量術分析及ELISA方法用於根據其與彼此或CD40配位體(CD40L)競爭與CD40結合之能力來將人類化促效抗CD40抗體分類。 研發流動式細胞測量術分析以分析抗體是否與另一抗體競爭結合人類CD40。在此分析中，將自完全人類IgG ₂抗人類CD40抗體純系21.4.1製備(參見Gladue, RP.等人, Cancer Immunol. Immunother. 2011; 60:1009-17及美國專利第7,618,633號)之CP-870,893用作參考抗體。CP-870,893之重鏈及輕鏈分別為： QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 181)，及 DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIYSWLAWYQQKPGKAPNLLIYTASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANIFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 182)。 所有抗CD40人類或人類化抗體(包括huAb6-1、huAb8-1、huAb9 A2I及CP-870,893)均用Alexa Fluor (AF)-488來標記。將具有1 μg/mL之固定濃度之各螢光標記抗體分別地與遞增量之其他未標記之抗CD40抗體(介於0.5 ng/mL直至50 μg/mL範圍內)混合，且與穩定表現人類CD40之HEK293細胞一起培育。接著，利用流動式細胞測量術來監測螢光標記抗體之結合。 在表4-3中概述由平均螢光強度(MFI)之劑量依賴性減少鑑別的競爭抗體及由恆定MFI鑑別的非競爭性抗體。儘管huAb6-1並不與huAb8-1競爭結合人類CD40，但huAb9 A2I及CP-870,893兩者均與huAb6-1及huAb8-1競爭。另外，huAb9 A2I及CP-870,893與彼此競爭。

表 4-3 利用流動式細胞測量術分析的抗原決定基分類
第一抗體	第二抗體
huAb6-1	huAb8-1	huAb9 A2I	CP-870,893
huAb6-1	—	Y	X	X
huAb8-1	Y	—	X	X
huAb9 A2I	X	X	—	X
CP-870,893	X	X	X	—
X：相互競爭；Y：相互不競爭

本發明之人類化抗體之抗原決定基分類亦由量測抗CD40抗體及CD40複合物與如實例2中所描述之盤結合之CD40L之結合之ELISA分析來確認。在此分析中，如上文製備之CP-870,893用作參考抗CD40抗體。將遞增量之抗CD40抗體或人類IgG ₁(huIgG ₁)對照抗體與1 μg/mL之CD40-huFc融合蛋白質一起培育，且添加至塗佈有CD40L之盤。如圖3中所展示，人類化抗體huAb8-1及huAb8-3阻斷CD40及CD40L之相互作用(左上方)；huAb6-1及huAb6-2展示對於CD40-CD40L相互作用之極小效果(右上方)；且huAb9-5及huAb9-6促進CD40與CD40L結合(左下方)。如相比於展示對於CD40-CD40L相互作用極小效果之CP-870,893，人類化抗體huAb9 A2I亦促進CD40與CD40L結合(右下方)。 結果與在使用表現CD40L之細胞的基於流動式細胞測量術之分析中獲得之彼等結果一致(圖4)。將CD40L+ Jurkat細胞與在1 μg/mL之恆定濃度下之結合螢光染料Alexa Fluor 488的可溶人類CD40蛋白質一起培育。結合螢光染料之CD40針對Jurkat細胞表面CD40L之結合係在人類化抗體huAb9 A2I及參考抗CD40抗體CP-870,893存在下利用流動式細胞測量術分析來量測。在樣品中之huAb9 A2I之量增加時，偵測到螢光強度增強；但參考抗體CP-870,893則不。此等結果表明，huAb9 A2I促進CD40與CD40L+ Jurkat細胞結合，而參考CP-870,893則不。 huAb9 A2I對於由CD40L驅動之CD40信號傳導之功能影響亦係以包含表現CD40及CD40L兩者之細胞之分析來測定。將表現CD40之細胞(描述於章節8.1.1中之HEK293藍色CD40 NFκB報導細胞)與CD40L-或CD40L+ Jurkat細胞以1:1之比率混合，且與在3 μg/mL下之huAb9 A2I、CP-870,893或對照抗體一起培育。CD40信號傳導係利用SEAP報導活性經由如章節8.4.1中所描述之比色分析來量測。當將CD40報導細胞與CD40L- Jurkat細胞共培養(圖5A)時，CD40信號傳導僅在添加huAb9 A2I或CP-870,893之後顯著增強，但在用對照抗體處理或不添加時則不。儘管兩種抗體均活化CD40，但在於此等條件下刺激CD40上，huAb9 A2I並不比CP-870,893顯著更強效。當將CD40報導細胞與CD40L+ Jurkat細胞共培養(圖5B)時，細胞表面CD40L活化CD40，如由SEAP報導活性所指示。使用CP-870,893之處理並不進一步增強CD40活性信號傳導，其中SEAP報導活性類似於對照huIgG1或huIgG2同型或無抗體(僅培養基)處理。對比而言，用huAb9 A2I之處理進一步增加CD40信號傳導，其中報導活性顯著大於CP-870,893及對照處理(p＜0.001)。 此等資料指示，當細胞表面CD40由飽和量之細胞表面CD40L活化時，huAb9 A2I藉由如與等效量之已知抗CD40抗體CP-870,893相比影響更大下游NFκB信號傳導來進一步增強CD40活化。 實例 5 ： 抗 CD40 抗體之 Fc 區變異體CD40之較大促效活性可經由修飾Fc區以增強FcγRIIB結合來達成(Li及 Ravetch, Science, 2011; 333:1030-1034；及White, 等人, J. Immunol, 2011; 187:1754-1763)。將在人類IgG1恆定區中之位置273處之兩個突變(V273E及V273Y)引入至人類化抗CD40抗體huAb6-1、huAb8-1、huAb9-5及huAb9 A2I中。Fc突變對於與Fcγ受體結合之影響係利用FACS分析及利用抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)來監測。具有Fc修飾之人類化抗CD40之促效活性係經由NF-kB報導體、B細胞、源自單核球之DC及T細胞的活化來監測。 8.5.1. Fc γ 受體結合及 ADCC 功能將遞增量之抗CD40人類IgG ₁抗體及其Fc變異體與穩定表現不同人類Fcγ受體之CHO細胞一起培育，該等受體包括具有F或V多形現象之FcγRI (CD64)、FcγRIIA (CD32a)、FcγRIIB (CD32b)及FcγRIIIA (CD16)。用結合螢光之抗人類F(ab') ₂特異性二級抗體(Jackson ImmunoResearch)來偵測結合。突變V273E或V273Y減少與FcγRIIIA (CD16F或V)結合，同時維持FcγRI (CD64)結合且增強FcγRIIA (CD32a)或FcγRIIB (CD32b)結合(圖6A至圖6B)。 使用標準方案來量測人類化抗CD40抗體之Fc變異體之ADCC(Law 等人, 2005, Cancer Res. 65:8331-8)。在一說明性實例中，針對RL細胞中之抗體huAb9-5，如與野生型IgG ₁相比，在恆定區變異V273E或V273Y之情況下ADCC減少(圖7)。 8.5.2. 在 Fc γ R 結合時 ， 促效活性增強為評估Fcγ受體結合對於抗CD40之促效活性之影響，具有huIgG ₁V273E突變之huAb9 A2I用於處理與穩定表現不同人類Fcγ受體之CHO細胞共培養之HEK293藍色CD40 NFκB報導細胞，且監測NFκB活性。如表5-1中所展示，刺激NFκB活化中之CP-870,893之促效活性不依賴於Fcγ受體結合，而發現huAb9 A2I之促效活性則依賴於Fcγ受體結合。當將報導細胞與表現CD32a、CD32b或CD64之CHO細胞共培養時刺激NFκB活性中之huAb9 A2I的效能，比當與不表現Fcγ受體，或表現CD16V或CD16F之CHO細胞共培養時的高十倍。

表5-1 NFκB 活性 (EC 50, nM)
CHO (FcγR)	huAb9 A2I (huIgG 1V273E)	CP-870,893 (huIgG 2)
FcγR陰性	0.72	0.03
CD16F	0.39	0.03
CD16V	0.30	0.02
CD32a	0.08	0.02
CD32b	0.07	0.02
CD64	0.01	0.02

8.5.3. Fc 變異體對於 B 細胞增殖Fc V273E或V273Y突變對於抗CD40之促效活性之影響亦用B細胞增殖分析來評價。在此分析中，人類B細胞利用B細胞富集套組(StemCell Technologies)經由陰性選擇來富集。將經純化B細胞以5 × 10 ⁵個/毫升，200微升/孔接種至96孔盤的AIM-V無血清培養基(GIBCO)中。添加經連續稀釋的抗CD40抗體，並與B細胞一起培養6天。在培養之最後16小時中，將1 μCi之H ³TdR添加至培養物之各孔，且藉由H ³TdR併入來測定B細胞增殖。利用閃爍計數器以每分鐘計數(CPM)來記錄與H ³TdR併入相關聯之放射性。相比於對應人類IgG1野生型抗體，抗CD40 (huAb6-1、huAb8-1及huAb9-5)人類IgG1 Fc變異體V273E及V273Y展示增強B細胞活化(圖8)。然而，當相比於CP-870,893時，huAb9 A2I (人類IgG ₁V273E)在刺激B細胞增殖上展示約降低十倍的效能(右下方曲線)。 8.5.4. Fc 變異體對於 DC IL-12p70 製造Fc V273E或V273Y突變對於抗CD40之促效活性之影響進一步用DC活化分析使用如讀出之IL-12p70來評價。在此分析中，不成熟DC首先係源自從人類PBMC純化且用IL4及GM-CSF處理的單核球。DC成熟及IL-12p70製造係在用IFNγ預致敏之後由抗CD40誘導。V273E或V273Y Fc突變的版本藉由增強IL-12p70製造而增強DC活化之效能。如圖9所說明，如與具有野生型huIgG ₁之其對應抗體相比，具有huIgG ₁Fc變異V273E或V273Y之huAb6-1 (左上方)、huAb8-1 (右上方)及huAb9-5 (左下方)展示增加的IL-12p70製造。對於huAb6-1及huAb8-1，具有huIgG ₁V273Y突變之變異體比具有V273E突變之變異體在增強活體外IL-12p70製造時更有效。對於huAb9-5，具有huIgG ₁V273E或V273Y之變異體展示類似效能。在huAb9 A2I (右下方曲線)之情況下，具有huIgG ₁V273E突變之變異體在刺激DC以製造IL-12p70上表明與CP-870,893類似的效能。 8.5.5. Fc 變異體對於同種異體 DC 及 T 細胞共培養中之 T 細胞活化為證實抗CD40可經由刺激諸如DC之抗原呈遞細胞來驅動T細胞活化，在同種異體DC及T細胞共培養中測試抗CD40 Fc變異體。在此分析中，使用上文所描述之方法，樹突狀細胞(5 × 10 ³個)首先源自單核球，接著與自不同供體純化之1 × 10 ⁵個T細胞混合。將各種量之具有野生型人類IgG ₁恆定區或其Fc變異體V273Y之抗CD40抗體huAb6-1、huAb8-1或huAb9-5添加至DC及T細胞共培養物。在培育4天之後，採集上清液，且利用ELISA量測IFN-γ。 圖10說明在與自兩種不同供體對之細胞共培養中展示增強IFN-γ製造的例示性抗體。在各情況下，huAb6-1、huAb8-1及huAb9-5之V273Y變異體證實T細胞活化，如藉由如與同型對照huIgG ₁抗體相比IFN-γ顯著增加所證明。 實例 6 ： 抗 CD40 抗體之活體內抗腫瘤活性針對具有野生型人類IgG ₁或Fc變異體之人類化抗CD40抗體huAb6-1、huAb9-5及huAb9 A2I對於在人類免疫細胞存在下抑制帶有前列腺PC3腫瘤之NSG小鼠中之腫瘤生長的能力，對該等抗體進行評定。 用PC3細胞(1 × 10 ⁶個)、經純化T細胞(5 × 10 ⁵個)及自體DC (1 × 10 ⁵個)之混合物對NSG小鼠進行皮下接種。緊接在接種之後，以1 mg/kg之抗CD40抗體或對照抗體之單一劑量進行腹膜內注射。用測徑規每隔一天量測腫瘤體積。如相比於同型對照抗體，包括huAb6-1、huAb9-5、huAb9 A2I及其Fc變異體V273E或V273Y之抗CD40抗體在PC3模型中減少腫瘤生長，如圖11中所展示。 實例 7 ： 小鼠同系腫瘤模型中之概念驗證研究歸因於本發明之例示性抗CD40抗體之小鼠CD40結合的缺乏，使用鼠類CD40促效抗體1C10 muIgG ₁來進行小鼠中之藥理學效果的評價。類似於上文所論述之huIgG ₁Fc V273E突變，具有鼠類IgG ₁(muIgG ₁) Fc之1C10證實與muFcγRIIB之強結合及與muFcγRI及muFcγRIV之極小結合，功能性等效於人類FcγRIII。類似於本發明之抗CD40抗體，1C10 muIgG ₁證實在活體外及活體內刺激小鼠脾B細胞活化上的效能。因此，具有鼠類IgG ₁恆定區之抗鼠類CD40抗體1C10用作概念驗證分子以探究可能臨床發展路徑，該等路徑包括使用瘤內遞送或與抗PD-1抗體之共同投藥的組合療法。 8.7.1. 瘤內投與其中小鼠具有兩側皮下腫瘤之CT26同系模型用於研究瘤內投與。在第0天，將每小鼠的活細胞(1 × 10 ⁵個)皮下接種至雌性Balb/c小鼠之右後及左後側腹中。在第12天，將動物隨機分組，其中每組十隻小鼠。在給藥開始時之右側腹之平均腫瘤體積約為85 mm ³。在第一次給藥24小時之後，將來自各組中之三隻動物處死以用於進行血清ALT評定。針對兩個腫瘤之生長，對剩餘動物進行監測。每週兩次對腫瘤體積進行測定。經由電子測徑規獲取腫瘤之長(L)、寬(W)及高(H)之量測值，且根據以下方程式來計算體積：L × W × H / 2。緊接著在隨機分組之後，開始抗體給藥。 當將抗CD40抗體1C10直接注射至一個腫瘤中(3 mg/kg，一週2至3次)時，在注射位點(「IT給藥」)以及在遠端部位(「未IT給藥」)兩處之腫瘤之生長減少，從而表明全身性抗腫瘤免疫力之建立(圖12)。利用由VetScan (Abaxis Inc., Union City, CA)量測之肝酶ALT來監測肝毒性。抗CD40抗體1C10之瘤內(IT)給藥招致ALT升高比全身性腹膜內(IP)給藥低。 8.7.2. 與抗 PD-1 抗體之共同投藥的組合療法藉由在第0天將每小鼠1 × 10 ⁵個活細胞皮下接種至雌性BALB/c小鼠之右側腹中來建立CT26腫瘤。在第15天將動物隨機分組。在同系CT26小鼠模型中，將抗CD40抗體1C10 (0.6 mg/kg)結合專用抗PD1 muIgG _2a抗體(10 mg/kg)一週兩次進行IP給藥。組合投與方案顯示顯著抗腫瘤活性(10隻小鼠中之7隻展示腫瘤消退，對比於對照中之0隻及在抗PD1或抗CD40處理組中之各者中10隻中之1隻)，從而支持此組合之發展(圖13)。 抗CD40抗體1C10之處理係以0.6 mg/kg進行，該劑量為用於此模型中之單藥療法的亞治療性劑量。在一些情況下，在各單株抗體之此類劑量下維持抗腫瘤療效之水準可提供減少的毒性，如例如由肝酶水準所證明。在此實驗中，組合治療並不增加肝酶水準、脾重量或細胞介素(諸如，TNFα或IL-6)水準(圖14)。利用VetScan量測肝酶水準，且用MILLIPLEX Map小鼠細胞介素套組(EMD Millipore)量測細胞介素水準。 本申請案中之所有公開案、專利、專利申請案及其他文獻出於所有目的特此以其全文引用之方式併入，引用程度如同各單獨公開案、專利、專利申請案或其他文獻出於所有目的以引用之方式併入所單獨地指示的相同。 儘管已說明及描述各種具體實施例，但應瞭解，在不脫離本發明之精神及範疇之情況下，可進行各種改變。

第1圖展示人類CD40受體(SEQ ID NO: 40)之胺基酸序列及人類CD40配位體(SEQ ID NO: 41)之胺基酸序列。 圖2A至圖2G提供例示性小鼠抗CD40抗體及人類化抗CD40抗體之V _H及V _L的胺基酸序列。圖2A展示muAb1至muAb3之V _H胺基酸序列及V _L胺基酸序列；圖2B展示muAb4至muAb7之V _H胺基酸序列及V _L胺基酸序列；圖2C展示muAb8至muAb10之V _H胺基酸序列及V _L胺基酸序列；圖2D展示muAb6及muAb8之人類化抗體之V _H胺基酸序列及V _L胺基酸序列；圖2E展示muAb8及muAb9之人類化抗體之V _H胺基酸序列及V _L胺基酸序列；圖2F展示muAb9之其他人類化抗體之V _H胺基酸序列及V _L胺基酸序列；及圖2G展示muAb9之另外人類化抗體之V _H胺基酸序列及V _L胺基酸序列。 圖3提供競爭實驗對於人類CD40在CD40L與例示性抗CD40抗體之間的結果。左上方展示與CD40L競爭之例示性抗CD40抗體；右上方展示並不與CD40L顯著競爭之抗體；左下方展示增強CD40-CD40L相互作用之抗體；右下方展示抗CD40抗體huAb9 A2I及CP-870,893之效果。Y軸描繪在650 nm下之光學密度(OD)；x軸描繪以μg/mL為單位之抗體劑量(「樣品」)。 圖4展示結合螢光染料之人類CD40在1 μg/mL之固定濃度下在增加抗體huAb9 A2I、CP-870,893、人類IgG ₁(「huIgG1」)同型或人類IgG ₂(「huIgG2」)同型之量的存在下在表現人類CD40L的Jurkat細胞上的結合。Y軸描繪表示結合之平均螢光強度(「MFI」)；x軸描繪以μg/mL為單位之抗體劑量(「樣品」)。 圖5A至圖5B展示在3 μg/mL下之抗體劑量(「樣品」)或僅培養基對於來自HEK293藍色CD40 NFκB報導細胞(與Jurkat D1.1細胞混合(1:1比率))之NFκB信號的效果。將抗體huAb9 A2I、CP-870,893、人類IgG ₁(「huIgG1」)同型或人類IgG ₂(「huIgG2」)同型或僅培養基添加至個別樣品。圖5A描繪含有CD40L陰性(「CD40L-」) Jurkat D1.1細胞之培養物中之NFκB信號。圖5B描繪含有CD40L陽性 (「CD40L+」) Jurkat D1.1細胞之培養物中之NFκB信號。Y軸描繪在625 nm下之OD；x軸描繪抗體或僅培養基治療(「樣品」)。 圖6A至圖6B展示表現CD16F、CD16V、CD32a、CD32b或CD64的CHO細胞中之抗體劑量(「樣品」) (以μg/mL為單位)之huAb9-5與野生型huIgG ₁或與V273Y或V273E變異體、或CP-870,893的結合。圖6A展示表現CD16F (左上方)、CD16V (右上方)、CD32a (左下方)或CD32b (右下方)之CHO細胞上之抗CD40抗體的結合。圖6B展示表現CD64之CHO細胞上之抗CD40抗體的結合。Y軸描繪表示結合之平均螢光強度(MFI)；x軸描繪以μg/mL為單位之抗體劑量(「樣品」)。 圖7展示如與具有野生型人類IgG ₁之huAb9-5相比，抗體huAb9-5之恆定區變異體V273E或V273Y在RL細胞中的抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)。Y軸描繪RL細胞中之細胞毒性百分比；x軸描繪以μg/mL為單位之抗體劑量(「樣品」)。 圖8展示具有野生型人類IgG ₁、或恆定區變異體V273E或V273Y之抗體huAb6-1 (左上方)、huAb9-5 (左下方)、huAb8-1 (右上方)對於B細胞增殖的效果。右下方曲線展示具有人類IgG ₁V273E變異體或CP-870,893之huAb9 A2I的B細胞增殖效果。Y軸描繪以每分鐘計數(CPM)為單位之B細胞增殖；x軸描繪以μg/mL為單位之抗體劑量(「樣品」)。 圖9展示具有野生型人類IgG ₁、或恆定區變異體V273E或V273Y之抗體huAb6-1 (左上方)、huAb9-5 (左下方)及huAb8-1 (右上方)對於樹突狀細胞(DC)活化的效果，如藉由以pg/mL為單位之IL-12p70產量所量測。右下方曲線展示具有人類IgG ₁V273E變異體或CP-870,893之huAb9 A2I的DC活化。Y軸描繪以pg/mL為單位之IL-12p70；x軸描繪以μg/mL為單位之抗體劑量(「樣品」)。 圖10展示huAb6-1、huAb8-1或huAb9-5之V273Y變異體對於DC及T細胞共培養物的效果，如藉由以pg/mL為單位之干擾素-γ (IFN-γ)產量所量測。 圖11展示抗體huAb6-1 (上方)、huAb9-5 (中間)或huAb9 A2I (下方)對於預防性PC3小鼠模型中之腫瘤體積(mm ³)的效果。 圖12展示在瘤內(IT)或腹膜內(IP)遞送抗CD40抗體1C10或mIgG1同型之後在攜載兩側建立CT26同系腫瘤之小鼠模型中的活體內效果。在一側向一個腫瘤投與IT給藥，其中在腫瘤另一側不注射。 圖13展示在一週給藥兩次抗CD40抗體1C10 (以0.6 mg/kg)、抗PD-1抗體(以10 mg/kg)或1C10及抗PD-1抗體兩者之組合治療之後，在CT26小鼠同系模型中對於腫瘤體積(mm ³)的效果。 圖14展示在給藥抗CD40抗體1C10 (「抗CD40」)、抗PD-1抗體(「抗PD-1」)或組合治療(「抗CD40+抗PD-1」) 24小時之後，CT26小鼠同系模型中之ALT (左上方)水準、TNFα (「TNFa」，左下方)水準或IL-6 (右下方)水準。右上方曲線展示給藥4天後脾重量。

<![CDATA[<110> 美商艾伯維生物醫療股份有限公司(ABBVIE BIOTHERAPEUTICS INC.)]]>
          <![CDATA[<120> 抗CD40抗體及其用途]]>
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          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 7]]>
          Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Ile Asn 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210> 8]]>
          <![CDATA[<211> 11]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 8]]>
          Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asn Tyr Tyr Trp Asn 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210> 9]]>
          <![CDATA[<211> 11]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 9]]>
          Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asn Tyr Tyr Trp Asn 
          1               5                   10      
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          <![CDATA[<211> 11]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<400> 10]]>
          Gly Tyr Asp Ile Thr Ser Asn Tyr Tyr Trp Asn 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210> 11]]>
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          <![CDATA[<400> 11]]>
          Glu Ile Asn Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 
          1               5                   10                  15      
          Ser 
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          <![CDATA[<211> 17]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<400> 12]]>
          Glu Ile Leu Pro Gly Gly Asp His Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Arg 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210> 13]]>
          <![CDATA[<211> 17]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 13]]>
          Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210> 14]]>
          <![CDATA[<211> 19]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 14]]>
          Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Phe Ser Ala Ser 
          1               5                   10                  15      
          Val Lys Gly 
          <![CDATA[<210> 15]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 15]]>
          Tyr Ile Arg His Asp Gly Thr Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210> 16]]>
          <![CDATA[<211> 17]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 16]]>
          Asn Ile Asp Pro Ser Asn Gly Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 
          1               5                   10                  15      
          Asp 
          <![CDATA[<210> 17]]>
          <![CDATA[<211> 17]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 17]]>
          Trp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Ser Val Tyr Cys Asn Glu Gln Phe Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210> 18]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 18]]>
          Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210> 19]]>
          <![CDATA[<211> 17]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 19]]>
          Asn Ile Asp Pro Ser Asn Gly Glu Thr His Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210> 20]]>
          <![CDATA[<211> 17]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 20]]>
          Trp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Ser Val Tyr Ser Asn Glu Gln Phe Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210> 21]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 21]]>
          Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210> 22]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 22]]>
          Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Gly 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210> 23]]>
          <![CDATA[<400> 23]]>
          000
          <![CDATA[<210> 24]]>
          <![CDATA[<400> 24]]>
          000
          <![CDATA[<210> 25]]>
          <![CDATA[<400> 25]]>
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          <![CDATA[<210> 26]]>
          <![CDATA[<400> 26]]>
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          <![CDATA[<210> 27]]>
          <![CDATA[<400> 27]]>
          000
          <![CDATA[<210> 28]]>
          <![CDATA[<400> 28]]>
          000
          <![CDATA[<210> 29]]>
          <![CDATA[<400> 29]]>
          000
          <![CDATA[<210> 30]]>
          <![CDATA[<400> 30]]>
          000
          <![CDATA[<210> 31]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 31]]>
          Asn Arg Gly Thr Gly Asp Tyr 
          1               5           
          <![CDATA[<210> 32]]>
          <![CDATA[<211> 5]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 32]]>
          Val Gly Gly Asp Tyr 
          1               5   
          <![CDATA[<210> 33]]>
          <![CDATA[<211> 13]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 33]]>
          Arg Gly Gly Leu Gly Arg Gly Thr Tyr Ala Leu Asp Tyr 
          1               5                   10              
          <![CDATA[<210> 34]]>
          <![CDATA[<211> 12]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 34]]>
          Tyr Gly Gly Leu Arg Gln Gly Trp Tyr Phe Asp Val 
          1               5                   10          
          <![CDATA[<210> 35]]>
          <![CDATA[<211> 3]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 35]]>
          Leu Asp Tyr 
          1           
          <![CDATA[<210> 36]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 36]]>
          Glu Arg Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Asp Gly Tyr Phe Asp Val 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210> 37]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 37]]>
          Ser Leu Gly Lys Phe Ala Tyr 
          1               5           
          <![CDATA[<210> 38]]>
          <![CDATA[<400> 38]]>
          000
          <![CDATA[<210> 39]]>
          <![CDATA[<400> 39]]>
          000
          <![CDATA[<210> 40]]>
          <![CDATA[<211> 277]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 智人]]>
          <![CDATA[<400> 40]]>
          Met Val Arg Leu Pro Leu Gln Cys Val Leu Trp Gly Cys Leu Leu Thr 
          1               5                   10                  15      
          Ala Val His Pro Glu Pro Pro Thr Ala Cys Arg Glu Lys Gln Tyr Leu 
                      20                  25                  30          
          Ile Asn Ser Gln Cys Cys Ser Leu Cys Gln Pro Gly Gln Lys Leu Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Asp Cys Thr Glu Phe Thr Glu Thr Glu Cys Leu Pro Cys Gly Glu 
              50                  55                  60                  
          Ser Glu Phe Leu Asp Thr Trp Asn Arg Glu Thr His Cys His Gln His 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Tyr Cys Asp Pro Asn Leu Gly Leu Arg Val Gln Gln Lys Gly Thr 
                          85                  90                  95      
          Ser Glu Thr Asp Thr Ile Cys Thr Cys Glu Glu Gly Trp His Cys Thr 
                      100                 105                 110         
          Ser Glu Ala Cys Glu Ser Cys Val Leu His Arg Ser Cys Ser Pro Gly 
                  115                 120                 125             
          Phe Gly Val Lys Gln Ile Ala Thr Gly Val Ser Asp Thr Ile Cys Glu 
              130                 135                 140                 
          Pro Cys Pro Val Gly Phe Phe Ser Asn Val Ser Ser Ala Phe Glu Lys 
          145                 150                 155                 160 
          Cys His Pro Trp Thr Ser Cys Glu Thr Lys Asp Leu Val Val Gln Gln 
                          165                 170                 175     
          Ala Gly Thr Asn Lys Thr Asp Val Val Cys Gly Pro Gln Asp Arg Leu 
                      180                 185                 190         
          Arg Ala Leu Val Val Ile Pro Ile Ile Phe Gly Ile Leu Phe Ala Ile 
                  195                 200                 205             
          Leu Leu Val Leu Val Phe Ile Lys Lys Val Ala Lys Lys Pro Thr Asn 
              210                 215                 220                 
          Lys Ala Pro His Pro Lys Gln Glu Pro Gln Glu Ile Asn Phe Pro Asp 
          225                 230                 235                 240 
          Asp Leu Pro Gly Ser Asn Thr Ala Ala Pro Val Gln Glu Thr Leu His 
                          245                 250                 255     
          Gly Cys Gln Pro Val Thr Gln Glu Asp Gly Lys Glu Ser Arg Ile Ser 
                      260                 265                 270         
          Val Gln Glu Arg Gln 
                  275         
          <![CDATA[<210> 41]]>
          <![CDATA[<211> 261]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 智人]]>
          <![CDATA[<400> 41]]>
          Met Ile Glu Thr Tyr Asn Gln Thr Ser Pro Arg Ser Ala Ala Thr Gly 
          1               5                   10                  15      
          Leu Pro Ile Ser Met Lys Ile Phe Met Tyr Leu Leu Thr Val Phe Leu 
                      20                  25                  30          
          Ile Thr Gln Met Ile Gly Ser Ala Leu Phe Ala Val Tyr Leu His Arg 
                  35                  40                  45              
          Arg Leu Asp Lys Ile Glu Asp Glu Arg Asn Leu His Glu Asp Phe Val 
              50                  55                  60                  
          Phe Met Lys Thr Ile Gln Arg Cys Asn Thr Gly Glu Arg Ser Leu Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Leu Asn Cys Glu Glu Ile Lys Ser Gln Phe Glu Gly Phe Val Lys 
                          85                  90                  95      
          Asp Ile Met Leu Asn Lys Glu Glu Thr Lys Lys Glu Asn Ser Phe Glu 
                      100                 105                 110         
          Met Gln Lys Gly Asp Gln Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser 
                  115                 120                 125             
          Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly 
              130                 135                 140                 
          Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr 
                          165                 170                 175     
          Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala 
                  195                 200                 205             
          Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His 
              210                 215                 220                 
          Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn 
          225                 230                 235                 240 
          Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe 
                          245                 250                 255     
          Gly Leu Leu Lys Leu 
                      260     
          <![CDATA[<210> 42]]>
          <![CDATA[<400> 42]]>
          000
          <![CDATA[<210> 43]]>
          <![CDATA[<400> 43]]>
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          <![CDATA[<400> 45]]>
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          <![CDATA[<400> 46]]>
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          <![CDATA[<400> 48]]>
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          <![CDATA[<400> 50]]>
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 51]]>
          Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu His 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210> 52]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 52]]>
          Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Asn Ser Asn Glu Asn Thr Tyr Leu His 
          1               5                   10                  15      
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          <![CDATA[<211> 11]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 53]]>
          Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210> 54]]>
          <![CDATA[<211> 11]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 54]]>
          Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Tyr Leu Asn 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210> 55]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 55]]>
          Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Ser Tyr Gly Asn Thr Phe Leu Asn 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210> 56]]>
          <![CDATA[<211> 10]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 56]]>
          Ser Ala Ser Ser Ser Leu Ser Tyr Met His 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210> 57]]>
          <![CDATA[<211> 11]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 57]]>
          Lys Ala Ser Gln Ser Val Val Thr Ala Val Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210> 58]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 58]]>
          Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Thr Asn Gly Asn Thr Phe Leu Asn 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210> 59]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 59]]>
          Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Ser Asn Gly Asn Thr Phe Leu Asn 
          1               5                   10                  15      
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          <![CDATA[<400> 60]]>
          000
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          <![CDATA[<211> 7]]>
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          Lys Val Phe Asn Arg Tyr Ser 
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          Tyr Thr Ser Arg Leu His Leu 
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          <![CDATA[<211> 7]]>
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          <![CDATA[<211> 7]]>
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          <![CDATA[<400> 69]]>
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          <![CDATA[<400> 81]]>
          Ser Gln Ser Thr His Val Pro Tyr Thr 
          1               5                   
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          <![CDATA[<400> 82]]>
          Phe Gln Ser Thr His Val Pro Trp Thr 
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          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
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          <![CDATA[<400> 83]]>
          Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Leu Thr 
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          <![CDATA[<211> 9]]>
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          <![CDATA[<400> 84]]>
          Gln Gln Gly Lys Thr Leu Pro Trp Thr 
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          Leu Gln Val Thr His Val Pro Tyr Thr 
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          Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Trp Thr 
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          Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr 
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          Leu Gln Val Thr His Val Pro Phe Thr 
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          <![CDATA[<400> 89]]>
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          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 101]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Ile Thr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Glu Ile Asn Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asn Arg Gly Thr Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser 
                  115     
          <![CDATA[<210> 102]]>
          <![CDATA[<211> 114]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 102]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Ala Lys Leu Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Ile Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Asp His Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Arg Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ser Asp Thr Ser Ser Asn Thr Val Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Thr Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Val Gly Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Ser Ser 
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          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 103]]>
          Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Arg Gly Gly Leu Gly Arg Gly Thr Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp 
                      100                 105                 110         
          Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120         
          <![CDATA[<210> 104]]>
          <![CDATA[<211> 113]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 104]]>
          Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Ser Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly 
                      20                  25                  30          
          Lys Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr 
                  35                  40                  45              
          Thr Thr Glu Phe Ser Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg 
              50                  55                  60                  
          Asp Asn Ser Gln Ser Ile Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ala Leu Arg Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Gly Gly Leu Arg Gln 
                          85                  90                  95      
          Gly Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 
                      100                 105                 110         
          Ser 
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          <![CDATA[<211> 112]]>
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          <![CDATA[<400> 105]]>
          Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Phe Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Thr Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Asn Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 
                  35                  40                  45              
          Met Gly Tyr Ile Arg His Asp Gly Thr Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Lys Asn Arg Ile Ser Ile Ile Arg Asp Thr Pro Lys Asn Gln Phe Phe 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 
                      100                 105                 110         
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<400> 106]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Ile Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asn Gly Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Arg Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Asp Gly Tyr Phe 
                      100                 105                 110         
          Asp Val Trp Gly Thr Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 125 
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          Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Ser Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
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          Gly Trp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Ser Val Tyr Cys Asn Glu Gln Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 
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          Thr Val Ser Ala 
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          Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asn 
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          Met Gly Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 
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          Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 
                      100                 105                 110         
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          Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 
          1               5                   10                  15      
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          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
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          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
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          Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asn Gly Glu Thr His Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
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          Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
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          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
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          Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
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          Gly Trp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Ser Val Tyr Cys Asn Glu Gln Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Ser Ser Leu Gly Lys Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser 
                  115     
          <![CDATA[<210> 116]]>
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          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 116]]>
          Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 
                  35                  40                  45              
          Met Gly Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Lys Asn Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                      100                 105                 110         
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          <![CDATA[<400> 117]]>
          Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 
                  35                  40                  45              
          Met Gly Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Lys Asn Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                      100                 105                 110         
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          Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asn 
                      20                  25                  30          
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          Met Gly Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                      100                 105                 110         
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          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asn 
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          Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 
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          Met Gly Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Tyr 
          65                  70                  75                  80  
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                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                      100                 105                 110         
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          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
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                      20                  25                  30          
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          Met Gly Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                      100                 105                 110         
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          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ile Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Asp Ile Thr Ser Asn 
                      20                  25                  30          
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              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Tyr 
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          Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
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          <![CDATA[<400> 122]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asn 
                      20                  25                  30          
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          Met Gly Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Lys Asn Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 
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          <![CDATA[<400> 123]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Tyr Trp Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 
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          Met Gly Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Lys Asn Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Phe Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                      100                 105                 110         
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 130]]>
          Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
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              50                  55                  60                  
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          Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 
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          Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 
              290                 295                 300                 
          His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 
                          325                 330                 335     
          Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 
                      340                 345                 350         
          Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 
                  355                 360                 365             
          Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 
              370                 375                 380                 
          Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 
                          405                 410                 415     
          Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 
                      420                 425                 430         
          Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440         
          <![CDATA[<210> 133]]>
          <![CDATA[<211> 441]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 133]]>
          Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 
                  35                  40                  45              
          Met Gly Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Lys Asn Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                      100                 105                 110         
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 
                  115                 120                 125             
          Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
              130                 135                 140                 
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
                          165                 170                 175     
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 
                      180                 185                 190         
          Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
                  195                 200                 205             
          Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 
              210                 215                 220                 
          Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 
                          245                 250                 255     
          Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Glu Lys Phe Asn Trp 
                      260                 265                 270         
          Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 
                  275                 280                 285             
          Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 
              290                 295                 300                 
          His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 
                          325                 330                 335     
          Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 
                      340                 345                 350         
          Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 
                  355                 360                 365             
          Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 
              370                 375                 380                 
          Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 
                          405                 410                 415     
          Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 
                      420                 425                 430         
          Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
                  435                 440     
          <![CDATA[<210> 134]]>
          <![CDATA[<211> 442]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 134]]>
          Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 
                  35                  40                  45              
          Met Gly Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Lys Asn Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                      100                 105                 110         
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 
                  115                 120                 125             
          Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
              130                 135                 140                 
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
                          165                 170                 175     
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 
                      180                 185                 190         
          Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
                  195                 200                 205             
          Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 
              210                 215                 220                 
          Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 
                          245                 250                 255     
          Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Tyr Lys Phe Asn Trp 
                      260                 265                 270         
          Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 
                  275                 280                 285             
          Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 
              290                 295                 300                 
          His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 
                          325                 330                 335     
          Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 
                      340                 345                 350         
          Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 
                  355                 360                 365             
          Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 
              370                 375                 380                 
          Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 
                          405                 410                 415     
          Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 
                      420                 425                 430         
          Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440         
          <![CDATA[<210> 135]]>
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          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 135]]>
          Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
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                  35                  40                  45              
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          65                  70                  75                  80  
          Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                      100                 105                 110         
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 
                  115                 120                 125             
          Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
              130                 135                 140                 
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
                          165                 170                 175     
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 
                      180                 185                 190         
          Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
                  195                 200                 205             
          Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 
              210                 215                 220                 
          Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 
                          245                 250                 255     
          Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Tyr Lys Phe Asn Trp 
                      260                 265                 270         
          Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 
                  275                 280                 285             
          Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 
              290                 295                 300                 
          His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 
                          325                 330                 335     
          Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 
                      340                 345                 350         
          Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 
                  355                 360                 365             
          Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 
              370                 375                 380                 
          Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 
                          405                 410                 415     
          Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 
                      420                 425                 430         
          Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
                  435                 440     
          <![CDATA[<210> 136]]>
          <![CDATA[<400> 136]]>
          000
          <![CDATA[<210> 137]]>
          <![CDATA[<400> 137]]>
          000
          <![CDATA[<210> 138]]>
          <![CDATA[<400> 138]]>
          000
          <![CDATA[<210> 139]]>
          <![CDATA[<400> 139]]>
          000
          <![CDATA[<210> 140]]>
          <![CDATA[<211> 219]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 140]]>
          Asp Ala Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Thr 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Asn Thr Phe Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Val 
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 
                  115                 120                 125             
          Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 
              130                 135                 140                 
          Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 
                          165                 170                 175     
          Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 
                      180                 185                 190         
          Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 
                  195                 200                 205             
          Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215                 
          <![CDATA[<210> 141]]>
          <![CDATA[<211> 219]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 141]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Thr 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Asn Thr Phe Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Val 
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 
                  115                 120                 125             
          Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 
              130                 135                 140                 
          Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 
                          165                 170                 175     
          Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 
                      180                 185                 190         
          Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 
                  195                 200                 205             
          Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215                 
          <![CDATA[<210> 142]]>
          <![CDATA[<211> 219]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 142]]>
          Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Thr 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Asn Thr Phe Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Val 
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 
                  115                 120                 125             
          Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 
              130                 135                 140                 
          Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 
                          165                 170                 175     
          Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 
                      180                 185                 190         
          Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 
                  195                 200                 205             
          Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215                 
          <![CDATA[<210> 143]]>
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          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 151]]>
          Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Lys Phe Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Ile Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Leu Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Pro Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
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          <![CDATA[<400> 152]]>
          Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Asn Ser 
                      20                  25                  30          
          Asn Glu Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Phe Asn Arg Tyr Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Ser 
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
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          <![CDATA[<400> 153]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Pro Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Leu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Leu 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105         
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          <![CDATA[<400> 154]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 
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          Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
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          65                  70                  75                  80  
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                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys Leu Glu Met Lys 
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          <![CDATA[<400> 155]]>
          Asp Ala Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Gly Asn Thr Phe Leu Asn Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
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          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
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                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
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          Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Leu Ser Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Trp Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
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          Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Leu Ser Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
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              50                  55                  60                  
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          Asp Gly Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Trp Thr 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105     
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          <![CDATA[<400> 158]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Thr Val Gly 
          1               5                   10                  15      
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                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ala Leu Thr Ile Arg Thr Met Gln Ser 
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          Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105         
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          Asp Ala Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Thr 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Asn Thr Phe Leu Asn Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Leu Gln Val 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
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          <![CDATA[<400> 160]]>
          Asp Ala Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Ser 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Asn Thr Phe Leu Asn Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Leu Gln Val 
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
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          <![CDATA[<211> 106]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 161]]>
          Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Leu Ser Tyr Met 
                      20                  25                  30          
          His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr 
                  35                  40                  45              
          Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Trp Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105     
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          <![CDATA[<400> 162]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Val Thr Ala 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105         
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          <![CDATA[<400> 163]]>
          Asp Ala Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Thr 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Asn Thr Phe Leu Asn Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Leu Gln Val 
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
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          Asp Ala Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Thr 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Asn Thr Phe Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Val 
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
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          Asp Ala Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Glu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Thr 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Asn Thr Phe Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Val 
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
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          <![CDATA[<400> 166]]>
          Asp Ala Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ala Val Leu Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Thr 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Asn Thr Phe Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Val 
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
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          <![CDATA[<400> 167]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Thr 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Asn Thr Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 
                  35                  40                  45              
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              50                  55                  60                  
          Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Val 
                          85                  90                  95      
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          <![CDATA[<400> 168]]>
          Asp Ala Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Thr 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Asn Thr Phe Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Val 
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 169]]>
          Asp Ala Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Thr 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Asn Thr Phe Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 
                  35                  40                  45              
          Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Val 
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210> 170]]>
          <![CDATA[<211> 112]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 170]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Thr 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Asn Thr Phe Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Val 
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210> 171]]>
          <![CDATA[<211> 112]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 171]]>
          Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Thr 
                      20                  25                  30          
          Asn Gly Asn Thr Phe Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
                  35                  40                  45              
          Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Val 
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210> 172]]>
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          <![CDATA[<400> 173]]>
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          <![CDATA[<400> 175]]>
          000
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          <![CDATA[<400> 176]]>
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          <![CDATA[<210> 177]]>
          <![CDATA[<400> 177]]>
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          <![CDATA[<210> 178]]>
          <![CDATA[<400> 178]]>
          000
          <![CDATA[<210> 179]]>
          <![CDATA[<400> 179]]>
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          <![CDATA[<400> 180]]>
          000
          <![CDATA[<210> 181]]>
          <![CDATA[<211> 452]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 181]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val Cys Ser Tyr 
                      100                 105                 110         
          Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 
                  115                 120                 125             
          Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 
                          165                 170                 175     
          His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 
                  195                 200                 205             
          Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 
              210                 215                 220                 
          Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 
                          245                 250                 255     
          Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 
                      260                 265                 270         
          His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 
                  275                 280                 285             
          Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 
              290                 295                 300                 
          Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 
                          325                 330                 335     
          Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 
                      340                 345                 350         
          Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 
                  355                 360                 365             
          Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 
              370                 375                 380                 
          Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 
                          405                 410                 415     
          Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 
                      420                 425                 430         
          Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 
                  435                 440                 445             
          Ser Pro Gly Lys 
              450         
          <![CDATA[<210> 182]]>
          <![CDATA[<211> 214]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 182]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Tyr Ser Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ile Phe Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 
          <![CDATA[<210> 183]]>
          <![CDATA[<400> 183]]>
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          <![CDATA[<210> 191]]>
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          <![CDATA[<211> 15]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 200]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10                  15  
          

Claims (4)

1. 一種抗CD40抗體或其結合片段用於製備治療癌症之醫藥品之用途，其中該抗體或其結合片段具有根據SEQ ID NO：132或SEQ ID NO：133之重鏈序列及根據SEQ ID NO：141之輕鏈序列，及其中該癌症係實體腫瘤。
2. 如請求項1之用途，其中該抗CD40抗體或其結合片段為人類或人類化。
3. 如請求項1或2之用途，其中該抗CD40抗體或其結合片段為IgG。
4. 如請求項3之用途，其中該抗CD40抗體或其結合片段包含κ輕鏈恆定區。