TWI790445B - 對cd73具有特異性的結合分子及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明提供對CD73具有特異性的結合分子及其用途，具體而言，本發明提供結合CD73且抑制CD73活性的分離的抗體或其抗原結合部分。本發明亦提供本發明分離的抗體或其抗原結合部分在治療疾病中的用途。本發明亦提供編碼本發明分離的抗體或其抗原結合部分的核酸分子，用於表現本發明分離的抗體或其抗原結合部分的表達載體、宿主細胞及製備方法。

Description

對CD73具有特異性的結合分子及其用途
本發明係關於與CD73特異性地結合的分離的抗體或其抗原結合部分，以及本發明的分離的抗體或其抗原結合部分在治療疾病中的用途，以及使用本發明的分離的抗體或其抗原結合部分的治療方法。
CD73(ecto-5'-nucleotidase)是一種大小約70kDa的膜結合/游離蛋白，由N端、C端兩個亞基及一段柔性連接組成，C端通過醣基磷脂醯肌醇(glycosylphosphatidylinositol，GPI)錨定在細胞膜上。其通過N端、C端兩個亞基打開、關閉狀態的切換是CD73發揮酶活性作用(Knapp,K.等人(2012),Structure,20(12),2161-2173)。在腺苷通路中，CD73能將CD39水解產生的AMP繼續水解為腺苷。腺苷發揮多種免疫抑制作用，例如抑制CD4+ T和CD8+ T增殖、抑制NK細胞活性、促Treg增殖等等。
眾多報導表明，CD73在胃癌、三陰性乳腺癌、非小細胞腺癌、直腸腺癌、結直腸癌、腎癌、卵巢癌、前列腺癌、口腔鱗癌、頭頸鱗癌等多種腫瘤組織中高表現，且提示預後不良(Vijayan,D.等人，(2017),Nature reviews Cancer,17,709)。腫瘤微環境CD73表現的增強與腫瘤增殖、轉移、新生血管形成及患者生存期短相關(Allard,B.等人，(2017),Immunological reviews,276(1),121-144)。伴隨著CD73高表現，增加的腺苷通過活化腫瘤 內在和宿主介導的促腫瘤機制，限制免疫細胞浸潤、限制細胞毒性和細胞因子(如干擾素)的產生來抑制腫瘤免疫，引起強烈的免疫抑制(Ohta,A.等人，(2016),Front Immunol,7,109)。免疫抑制是癌症的典型特徵，克服抑制性屏障至關重要。因此，通過抑制CD73減少腫瘤微環境中腺苷的生成，從而活化免疫、抑制腫瘤生長，是極具潛力的治療方向。
抗體可以通過拮抗CD73向活性形式變構抑制CD73的酶活性，但目前還沒有抗體直接結合CD73活性位點從而抑制其酶活性的報導。同時，雖然CD73是非常有潛力的治療靶點，但仍需更多研究以確定CD73靶點的應用前景，並開發相關藥物及組合療法。
本發明提供特異性結合CD73的分離的抗體或抗原結合部分及其在治療疾病中的用途。
在一方面，本發明提供一種分離的抗體或其抗原結合部分，其中，上述的分離的抗體或其抗原結合部分包含含有HCDR1、HCDR2、HCDR3序列的重鏈可變區；以及含有LCDR1、LCDR2、LCDR3序列的輕鏈可變區，其中：(a)上述HCDR1包含選自SEQ ID NO：5、18、31、43和56及其保守修飾形式的胺基酸序列；(b)上述HCDR2包含選自SEQ ID NO：6、19、32、44和57及其保守修飾形式的胺基酸序列；(c)上述HCDR3包含選自SEQ ID NO：7、20、33、45和58及其保守修飾形式的胺基酸序列； (d)上述LCDR1包含選自SEQ ID NO：10、23、36、48和61及其保守修飾形式的胺基酸序列；(e)上述LCDR2包含選自SEQ ID NO：11、24、37、49和62及其保守修飾形式的胺基酸序列；以及(f)上述LCDR3包含選自SEQ ID NO：12、25、38、50和63及其保守修飾形式的胺基酸序列。
在某些實施方案中，上述的分離的抗體或其抗原結合部分包含：1)(a)包含SEQ ID NO：5的HCDR1，(b)包含SEQ ID NO：6的HCDR2，(c)包含SEQ ID NO：7的HCDR3，(d)包含SEQ ID NO：10的LCDR1，(e)包含SEQ ID NO：11的LCDR2，以及(f)包含SEQ ID NO：12的LCDR3；2)(a)包含SEQ ID NO：18的HCDR1，(b)包含SEQ ID NO：19的HCDR2，(c)包含SEQ ID NO：20的HCDR3，(d)包含SEQ ID NO：23的LCDR1，(e)包含SEQ ID NO：24的LCDR2，以及(f)包含SEQ ID NO：25的LCDR3；3)(a)包含SEQ ID NO：31的HCDR1，(b)包含SEQ ID NO：32的HCDR2，(c)包含SEQ ID NO：33的HCDR3，(d)包含SEQ ID NO：36的LCDR1，(e)包含SEQ ID NO：37的LCDR2，以及(f)包含SEQ ID NO：38的LCDR3；4)(a)包含SEQ ID NO：43的HCDR1，(b)包含SEQ ID NO：44的HCDR2，(c)包含SEQ ID NO：45的HCDR3，(d)包含SEQ ID NO：48的LCDR1，(e)包含SEQ ID NO：49的LCDR2，以及(f)包含SEQ ID NO：50的LCDR3；或者5)(a)包含SEQ ID NO：56的HCDR1，(b)包含SEQ ID NO：57的HCDR2，(c)包含SEQ ID NO：58的HCDR3，(d)包含SEQ ID NO：61的LCDR1，(e)包含SEQ ID NO：62的LCDR2，以及(f)包含SEQ ID NO：63的LCDR3。
在某些實施方案中，上述的分離的抗體或其抗原結合部分包含：(a)包含SEQ ID NO：5的HCDR1，(b)包含SEQ ID NO：6的HCDR2，(c)包 含SEQ ID NO：7的HCDR3，(d)包含SEQ ID NO：10的LCDR1，(e)包含SEQ ID NO：11的LCDR2，以及(f)包含SEQ ID NO：12的LCDR3。
在某些實施方案中，上述的分離的抗體或其抗原結合部分包含：(a)包含SEQ ID NO：18的HCDR1，(b)包含SEQ ID NO：19的HCDR2，(c)包含SEQ ID NO：20的HCDR3，(d)包含SEQ ID NO：23的LCDR1，(e)包含SEQ ID NO：24的LCDR2，以及(f)包含SEQ ID NO：25的LCDR3。
在某些實施方案中，上述的分離的抗體或其抗原結合部分包含：(a)包含SEQ ID NO：31的HCDR1，(b)包含SEQ ID NO：32的HCDR2，(c)包含SEQ ID NO：33的HCDR3，(d)包含SEQ ID NO：36的LCDR1，(e)包含SEQ ID NO：37的LCDR2，以及(f)包含SEQ ID NO：38的LCDR3。
在某些實施方案中，上述的分離的抗體或其抗原結合部分包含：(a)包含SEQ ID NO：43的HCDR1，(b)包含SEQ ID NO：44的HCDR2，(c)包含SEQ ID NO：45的HCDR3，(d)包含SEQ ID NO：48的LCDR1，(e)包含SEQ ID NO：49的LCDR2，以及(f)包含SEQ ID NO：50的LCDR3。
在某些實施方案中，上述的分離的抗體或其抗原結合部分包含：(a)包含SEQ ID NO：56的HCDR1，(b)包含SEQ ID NO：57的HCDR2，(c)包含SEQ ID NO：58的HCDR3，(d)包含SEQ ID NO：61的LCDR1，(e)包含SEQ ID NO：62的LCDR2，以及(f)包含SEQ ID NO：63的LCDR3。
在某些實施方案中，上述的分離的抗體或其抗原結合部分包含：(i)上述重鏈可變區(VH)包含選自以下組的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列：SEQ ID NO：3、16、29、41、54、66、67、76、77和78及其保守修飾形式的胺基酸序列；以及 (ii)上述輕鏈可變區(VL)包含選自以下組的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列：SEQ ID NO：8、21、34、46、59、68、69、70、79和80及其保守修飾形式的胺基酸序列。
在某些實施方案中，上述的重鏈可變區包含與選自(i)中的重鏈可變區至少90%，至少95%，至少96%，至少97%，至少98%，至少99%或者100%同源性的胺基酸序列；上述的輕鏈可變區包含與選自(ii)中的輕鏈可變區至少90%，至少95%，至少96%，至少97%，至少98%，至少99%或者100%同源性的胺基酸序列。
在某些实施方案中，上述的分离的抗体或其抗原结合部分包含：1)重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO：3的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO：8的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；2)重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO：16的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO：21的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；3)重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO：29的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO：34的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；4)重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO：41的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO：46的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；5)重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO：54的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO：59的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列； 6)重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO：66的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO：68的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；7)重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO：66的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO：69的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；8)重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO：66的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO：70的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；9)重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO：67的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO：68的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；10)重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO：67的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO：69的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；11)重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO：67的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO：70的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；12)重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO：76的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO：79的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；13)重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO：76的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO：80的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列； 14)重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO：77的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO：79的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；15)重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO：77的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO：80的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；16)重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO：78的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO：79的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；17)重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO：78的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO：80的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，上述的分離的抗體或其抗原結合部分，其中，上述重鏈可變區及輕鏈可變區分別包含與選自1)-17)中重鏈可變區及輕鏈可變區至少90%，至少95%，至少96%，至少97%，至少98%，至少99%或者100%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，上述的分離的抗體是IgG。
在某些實施方案中，上述的分離的抗體是IgG1、IgG2或IgG4。
在某些實施方案中，上述的分離的抗體是單株抗體、嵌合抗體、人源化抗體、人改造抗體、人抗體、Fv、單鏈抗體(scFv)、Fab、Fab’，Fab’-SH或者F(ab’)2。
在某些實施方案中，上述的分離的抗體或其抗原結合部分包含重鏈和輕鏈，其中： (I)上述重鏈包含選自以下組的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列：SEQ ID NO：13、15、26、27、39、51、52、64、71、72、81、82、83、86、87、90、91、124、125、126和127及其保守修飾形式的胺基酸序列；以及(II)上述輕鏈包含選自以下組的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列：SEQ ID NO：14、28、40、53、65、73、74、75、84、85、88和89及其保守修飾形式的胺基酸序列。
在某些實施方案中，上述的重鏈包含與選自(I)中的重鏈至少90%，至少95%，至少96%，至少97%，至少98%，至少99%或者100%同源性的胺基酸序列；上述的輕鏈包含與選自(II)中的輕鏈至少90%，至少95%，至少96%，至少97%，至少98%，至少99%或者100%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，上述的分離的抗體或其抗原結合部分包含：1)重鏈，其包含與SEQ ID NO：13的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：14的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；2)重鏈，其包含與SEQ ID NO：15的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：14的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；3)重鏈，其包含與SEQ ID NO：26的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：28的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；4)重鏈，其包含與SEQ ID NO：27的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：28的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列； 5)重鏈，其包含與SEQ ID NO：39的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：40的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；6)重鏈，其包含與SEQ ID NO：51的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：53的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；7)重鏈，其包含與SEQ ID NO：52的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：53的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；8)重鏈，其包含與SEQ ID NO：64的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：65的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；9)重鏈，其包含與SEQ ID NO：71的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：73的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；10)重鏈，其包含與SEQ ID NO：71的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：74的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；11)重鏈，其包含與SEQ ID NO：71的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：75的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；12)重鏈，其包含與SEQ ID NO：72的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：73的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列； 13)重鏈，其包含與SEQ ID NO：72的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：74的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；14)重鏈，其包含與SEQ ID NO：72的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：75的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；15)重鏈，其包含與SEQ ID NO：81的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：84的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；16)重鏈，其包含與SEQ ID NO：81的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：85的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；17)重鏈，其包含與SEQ ID NO：82的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：84的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；18)重鏈，其包含與SEQ ID NO：82的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：85的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；19)重鏈，其包含與SEQ ID NO：83的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：84的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；20)重鏈，其包含與SEQ ID NO：83的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：85的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列； 21)重鏈，其包含與SEQ ID NO：90的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：84的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；22)重鏈，其包含與SEQ ID NO：90的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：85的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；23)重鏈，其包含與SEQ ID NO：91的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：84的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；24)重鏈，其包含與SEQ ID NO：91的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：85的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；25)重鏈，其包含與SEQ ID NO：86的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：88的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；26)重鏈，其包含與SEQ ID NO：86的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：89的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；27)重鏈，其包含與SEQ ID NO：87的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：88的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；28)重鏈，其包含與SEQ ID NO：87的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：89的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列； 29)重鏈，其包含與SEQ ID NO：124的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：84的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；30)重鏈，其包含與SEQ ID NO：124的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：85的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；31)重鏈，其包含與SEQ ID NO：125的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：84的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列；32)重鏈，其包含與SEQ ID NO：125的胺基酸序列至少85%同源性的胺基酸序列，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：85的胺基酸至少85%同源性的胺基酸序列。
在某些實施方案中，上述重鏈及輕鏈分別包含與選自1)-32)中重鏈及輕鏈至少90%，至少95%，至少96%，至少97%，至少98%，至少99%或者100%同源性的胺基酸序列。
在另一方面，本發明提供一種分離的抗體或其抗原結合部分，含有SEQ ID NO：71所示的重鏈，以及含有SEQ ID NO：73所示的輕鏈。
在又一方面，本發明提供一種分離的抗體或其抗原結合部分，含有基本上由SEQ ID NO：72組成的重鏈，以及含有基本上由SEQ ID NO：74組成的輕鏈。
在再一方面，本發明提供一種分離的抗體或其抗原結合部分，含有SEQ ID NO：72所示的重鏈，以及含有SEQ ID NO：75所示的輕鏈。
在另一方面，本發明提供一種分離的抗體或其抗原結合部分，含有基本上由SEQ ID NO：81組成的重鏈，以及含有基本上由SEQ ID NO：85組成的輕鏈。
在又一方面，本發明提供一種分離的抗體或其抗原結合部分，含有基本上由SEQ ID NO：82組成的重鏈，以及含有基本上由SEQ ID NO：84組成的輕鏈。
在再一方面，本發明提供一種分離的抗體或其抗原結合部分，含有基本上由SEQ ID NO：83組成的重鏈，以及含有基本上由SEQ ID NO：85組成的輕鏈。
在另一方面，本發明提供一種分離的抗體或其抗原結合部分，含有基本上由SEQ ID NO：124組成的重鏈，以及含有基本上由SEQ ID NO：85組成的輕鏈。
在又一方面，本發明提供一種分離的抗體或其抗原結合部分，含有基本上由SEQ ID NO：125組成的重鏈，以及含有基本上由SEQ ID NO：85組成的輕鏈。
在某些實施方案中，上述的分離的抗體或其抗原結合部分為CD73拮抗劑或CD73的5’核苷酶拮抗劑。
在某些實施方案中，上述CD73是人CD73。
在另一方面，本發明提供一種用於在患有腫瘤的受試者中降低腺苷水平的方法，包括向上述受試者給予有效量的上述的分離的抗體或其抗原結合部分。
在又一方面，本發明提供一種用於在患有腫瘤的受試者中提高T細胞反應的方法，包括施用有效劑量的上述的分離的抗體或其抗原結合部分。
在再一方面，本發明提供一種用於刺激受試者中的免疫反應的方法，包括對受試者施用有效劑量的上述的分離的抗體或其抗原結合部分。
在某些實施方案中，上述受試者是患有腫瘤的受試者。
在某些實施方案中，上述受試者具有表現CD73的腫瘤細胞和/或含有CD73的腫瘤微環境。
在另一方面，本發明提供一種用於抑制受試者中腫瘤細胞的生長的方法，包括對受試者施用有效劑量的上述的分離的抗體或其抗原結合部分。
在又一方面，本發明提供上述的分離的抗體或其抗原結合部分在製備藥物中的用途，上述藥物用於降低腫瘤細胞和/或腫瘤微環境中的腺苷水平。
在再一方面，本發明提供一種上述的分離的抗體或其抗原結合部分在製備藥物中的用途，上述藥物用於刺激患腫瘤的受試者中T細胞的反應。
在另一方面，本發明提供上述的分離的抗體或其抗原結合部分在製備藥物中的用途，上述藥物用於刺激受試者中的免疫反應。
在某些實施方案中，上述受試者是患有腫瘤的受試者。
在某些實施方案中，上述受試者具有表現CD73的腫瘤細胞和/或含有CD73的腫瘤微環境。
在另一方面，本發明提供上述的分離的抗體或其抗原結合部分在製備藥物中的用途，上述藥物用於抑制受試者中腫瘤細胞的生長。
在又一方面，本發明提供用於降低腫瘤細胞和/或腫瘤微環境中的腺苷水平的上述的分離的抗體或其抗原結合部分。
在再一方面，本發明提供用於刺激患有腫瘤的個體中T細胞的反應的上述的分離的抗體或其抗原結合部分。
在另一方面，本發明提供用於刺激受試者中的免疫反應的上述的分離的抗體或其抗原結合部分。
在某些實施方案中，上述受試者患有腫瘤的受試者。
在某些實施方案中，上述受試者具有表現CD73的腫瘤細胞和/或含有CD73的腫瘤微環境。
在另一方面，本發明提供用於抑制受試者中腫瘤細胞的生長的上述的分離的抗體或其抗原結合部分。
在又一方面，本發明提供一種分離的核酸組合物，其包含：(I)第一核酸，包含選自SEQ ID NO：4、17、30、42、55、92、93、102、103和104所示的核苷酸序列，其中，上述第一核酸編碼上述的分離的抗體或其抗原結合部分的重鏈可變區(VH)；以及(II)第二核酸，包含選自SEQ ID NO：9、22、35、47、60、94、95、96、105和106所示的核苷酸序列，其中，上述的第二核酸編碼上述的分離的抗體或其抗原結合部分的輕鏈可變區(VL)。
在某些實施方案中，上述的分離的核酸組合物，其包含：1)含有SEQ ID NO：4所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：9所示的所述第二核酸；2)含有SEQ ID NO：17所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：22所示的所述第二核酸；3)含有SEQ ID NO：30所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：35所示的所述第二核酸； 4)含有SEQ ID NO：42所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：47所示的所述第二核酸；5)含有SEQ ID NO：55所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：60所示的所述第二核酸；6)含有SEQ ID NO：92所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：94所示的所述第二核酸；7)含有SEQ ID NO：92所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：95所示的所述第二核酸；8)含有SEQ ID NO：92所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：96所示的所述第二核酸；9)含有SEQ ID NO：93所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：94所示的所述第二核酸；10)含有SEQ ID NO：93所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：95所示的所述第二核酸；11)含有SEQ ID NO：93所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：96所示的所述第二核酸；12)含有SEQ ID NO：102所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：105所示的所述第二核酸；13)含有SEQ ID NO：102所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：106所示的所述第二核酸；14)含有SEQ ID NO：103所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：105所示的所述第二核酸；15)含有SEQ ID NO：103所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：106所示的所述第二核酸； 16)含有SEQ ID NO：104所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：105所示的所述第二核酸；17)含有SEQ ID NO：104所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：106所示的所述第二核酸。
在另一方面，本發明提供一種表現載體組合物，其包含：(I)第一表現載體，其中，所述的第一表現載體含有選自SEQ ID NO：4、17、30、42、55、92、93、102、103和104所示的核苷酸序列；以及(II)第二表現載體，其中，所述的第二表現載體含有選自SEQ ID NO：9、22、35、47、60、94、95、96、105和106所示的核苷酸序列。
在某些實施方案中，上述的表現載體組合物，其包含：1)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：9所示的核苷酸序列；2)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：17所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：22所示的核苷酸序列；3)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：30所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：35所示的核苷酸序列；4)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：42所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：47所示的核苷酸序列； 5)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：55所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：60所示的核苷酸序列；6)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：92所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：94所示的核苷酸序列；7)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：92所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：95所示的核苷酸序列；8)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：92所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：96所示的核苷酸序列；9)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：93所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：94所示的核苷酸序列；10)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：93所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：95所示的核苷酸序列；11)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：93所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：96所示的核苷酸序列；12)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：102所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：105所示的核苷酸序列； 13)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：102所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：106所示的核苷酸序列；14)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：103所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：105所示的核苷酸序列；15)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：103所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：106所示的核苷酸序列；16)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：104所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：105所示的核苷酸序列；或者17)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：104所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：106所示的核苷酸序列。
在另一方面，本發明提供一種表現載體，其包含：(I)第一核酸序列，其中，所述的第一核酸序列含有選自SEQ ID NO：4、17、30、42、55、92、93、102、103和104所示的核苷酸序列；以及(II)第二核酸序列，其中，所述的第二核酸序列含有選自SEQ ID NO：9、22、35、47、60、94、95、96、105和106所示的核苷酸序列。
在某些實施方案中，上述的表現載體，其包含：1)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：9所示的核苷酸序列； 2)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：17所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：22所示的核苷酸序列；3)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：30所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：35所示的核苷酸序列；4)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：42所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：47所示的核苷酸序列；5)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：55所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：60所示的核苷酸序列；6)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：92所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：94所示的核苷酸序列；7)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：92所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：95所示的核苷酸序列；8)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：92所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：96所示的核苷酸序列；9)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：93所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：94所示的核苷酸序列； 10)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：93所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：95所示的核苷酸序列；11)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：93所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：96所示的核苷酸序列；12)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：102所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：105所示的核苷酸序列；13)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：102所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：106所示的核苷酸序列；14)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：103所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：105所示的核苷酸序列；15)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：103所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：106所示的核苷酸序列；16)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：104所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：105所示的核苷酸序列；或者17)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：104所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：106所示的核苷酸序列。
在另一方面，本發明提供一種分離的核酸組合物，其包含：(I)第一核酸，包含選自SEQ ID NO：97、98、107、108、109、112、113、116和117所示的核苷酸序列，其中，所述的第一核酸編碼上述分離的抗體或其抗原結合部分的重鏈；以及(II)第二核酸，包含選自SEQ ID NO：99、100、101、110、111、114和115所示的核苷酸序列，其中，所述的第二核酸編碼上述分離的抗體或其抗原結合部分的輕鏈。
在某些實施方案中，上述的分離的核酸組合物，其包含：1)含有SEQ ID NO：97所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：99所示的所述第二核酸；2)含有SEQ ID NO：97所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：100所示的所述第二核酸；3)含有SEQ ID NO：97所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：101所示的所述第二核酸；4)含有SEQ ID NO：98所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：99所示的所述第二核酸；5)含有SEQ ID NO：98所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：100所示的所述第二核酸；6)含有SEQ ID NO：98所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：101所示的所述第二核酸；7)含有SEQ ID NO：107所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：110所示的所述第二核酸；8)含有SEQ ID NO：107所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：111所示的所述第二核酸； 9)含有SEQ ID NO：108所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：110所示的所述第二核酸；10)含有SEQ ID NO：108所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：111所示的所述第二核酸；11)含有SEQ ID NO：109所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：110所示的所述第二核酸；12)含有SEQ ID NO：109所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：111所示的所述第二核酸；13)含有SEQ ID NO：116所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：110所示的所述第二核酸；14)含有SEQ ID NO：116所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：111所示的所述第二核酸；15)含有SEQ ID NO：117所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：110所示的所述第二核酸；16)含有SEQ ID NO：117所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：111所示的所述第二核酸；17)含有SEQ ID NO：112所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：114所示的所述第二核酸；18)含有SEQ ID NO：112所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：115所示的所述第二核酸；19)含有SEQ ID NO：113所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：114所示的所述第二核酸；20)含有SEQ ID NO：113所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：115所示的所述第二核酸。
在另一方面，本發明提供一種表現載體組合物，其包含：(I)第一表現載體，其中，所述的第一表現載體含有選自SEQ ID NO：97、98、107、108、109、112、113、116和117所示的核苷酸序列；以及(II)第二表現載體，其中，所述的第二表現載體含有選自SEQ ID NO：99、100、101、110、111、114和115所示的核苷酸序列。
在某些實施方案中，上述的表現載體組合物，其包含：1)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：97所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：99所示的核苷酸序列；2)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：97所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：100所示的核苷酸序列；3)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：97所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：101所示的核苷酸序列；4)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：98所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：99所示的核苷酸序列；5)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：98所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：100所示的核苷酸序列；6)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：98所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：101所示的核苷酸序列； 7)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：107所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：110所示的核苷酸序列；8)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：107所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：111所示的核苷酸序列；9)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：108所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：110所示的核苷酸序列；10)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：108所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：111所示的核苷酸序列；11)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：109所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：110所示的核苷酸序列；12)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：109所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：111所示的核苷酸序列；13)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：116所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：110所示的核苷酸序列；14)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：116所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：111所示的核苷酸序列； 15)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：117所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：110所示的核苷酸序列；16)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：117所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：111所示的核苷酸序列；17)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：112所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：114所示的核苷酸序列；18)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：112所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：115所示的核苷酸序列；19)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：113所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：114所示的核苷酸序列；或者20)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：113所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：115所示的核苷酸序列。
在另一方面，本發明提供一種表現載體，其包含：(I)第一核酸序列，含有選自SEQ ID NO：97、98、107、108、109、112、113、116和117所示的核苷酸序列；以及(II)第二核酸序列，含有選自SEQ ID NO：99、100、101、110、111、114和115所示的核苷酸序列。
在某些實施方案中，上述的表現載體，其包含： 1)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：97所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：99所示的核苷酸序列；2)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：97所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：100所示的核苷酸序列；3)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：97所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：101所示的核苷酸序列；4)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：98所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：99所示的核苷酸序列；5)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：98所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：100所示的核苷酸序列；6)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：98所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：101所示的核苷酸序列；7)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：107所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：110所示的核苷酸序列；8)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：107所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：111所示的核苷酸序列； 9)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：108所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：110所示的核苷酸序列；10)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：108所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：111所示的核苷酸序列；11)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：109所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：110所示的核苷酸序列；12)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：109所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：111所示的核苷酸序列；13)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：116所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：110所示的核苷酸序列；14)第一核酸序列載體，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：116所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：111所示的核苷酸序列；15)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：117所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：110所示的核苷酸序列；16)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：117所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：111所示的核苷酸序列； 17)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：112所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：114所示的核苷酸序列；18)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：112所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：115所示的核苷酸序列；19)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：113所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：114所示的核苷酸序列；或者20)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：113所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列體，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：115所示的核苷酸序列。
在另一方面，本發明提供一種細胞，含有任一項上述的表現載體組合物。
在又一個方面，本發明提供一種製備分離的抗體或其抗原結合部分的方法，包括：在上述的細胞中表現所述分離的抗體或其抗原結合部分，並且從上述細胞中分離出所述抗分離的抗體或其抗原結合部分。
在另一方面，本發明提供一種藥物組合物，其包含上述的分離的抗體或其抗原結合部分，及藥學上可接受的載體。
在又一方面，本發明提供一種試劑盒，其包含上述的分離的抗體或其抗原結合部分。
在另一方面，本發明提供一種治療腫瘤的方法，其包括向有需要的受試者給予有效劑量的上述的分離的抗體或其抗原結合片段，或上述的藥物組合物。在一些實施方式中，所述的腫瘤選自實體瘤或血液瘤。在一 些實施方式中，所述的腫瘤選自膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、卵巢癌、前列腺癌、睪丸癌、食道癌、胃腸道癌、胰腺癌、結腸直腸癌、結腸癌、腎癌、頭頸癌、肺癌(小細胞癌或非小細胞肺癌)、胃癌、骨癌、肝癌、甲狀腺癌、皮膚癌、中樞神經系統腫瘤、淋巴瘤、白血病、骨髓瘤、肉瘤和病毒相關癌。
在另一方面，本發明提供上述的抗體或其抗原結合片段，或上述的藥物組合物在製備用於治療腫瘤的藥物中的應用。在一些實施方式中，所述的腫瘤選自實體瘤或血液瘤。在一些實施方式中，所述的腫瘤選自膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、卵巢癌、前列腺癌、睪丸癌、食道癌、胃腸道癌、胰腺癌、結腸直腸癌、結腸癌、腎癌、頭頸癌、肺癌(小細胞癌或非小細胞肺癌)、胃癌、骨癌、肝癌、甲狀腺癌、皮膚癌、中樞神經系統腫瘤、淋巴瘤、白血病、骨髓瘤、肉瘤和病毒相關癌。
在另一方面，本發明提供用於治療腫瘤的上述的抗體或其抗原結合片段或上述的藥物組合物。在一些實施方式中，所述的癌症選自實體瘤或血液瘤。在一些實施方式中，所述的癌症選自膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、卵巢癌、前列腺癌、睪丸癌、食道癌、胃腸道癌、胰腺癌、結腸直腸癌、結腸癌、腎癌、頭頸癌、肺癌(小細胞癌或非小細胞肺癌)、胃癌、骨癌、肝癌、甲狀腺癌、皮膚癌、中樞神經系統腫瘤、淋巴瘤、白血病、骨髓瘤、肉瘤和病毒相關癌。
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說明：CDR和框架區所有胺基酸編號均根據Kabat系統的EU索引(Kabat,E.A.等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，U.S.Department of Health and Human Services,NIH公佈第91-3242號)註釋。所有序列均不包含訊號肽。aa：amino acid,nt：nucleotide.
圖1顯示陽性複製與可溶性huCD73蛋白結合能力測定。
圖2顯示陽性複製與天然CD73蛋白結合能力測定。
圖3顯示可溶性重組人CD73酶活性阻斷。
圖4顯示基於細胞的酶活性阻斷實驗。
圖5顯示CD73抗體逆轉的CD4+T細胞增殖。
圖6顯示抗體阻斷的CD4+T細胞CD73酶活性。
圖7顯示抗體逆轉的CD4+ T細胞IFN-γ釋放。
圖8顯示CD73抗體介導的CD73內吞。
圖9顯示ELISA檢測人源化抗體、嵌合抗體的親和力。
圖10顯示FACs檢測人源化抗體、嵌合抗體的親和力。
圖11顯示人源化抗體阻斷的細胞表面5’外核苷酸酶活性。
圖12顯示人源化抗體阻斷的U87-MG細胞5’外核苷酸酶活性。
圖13顯示人源化CD73抗體逆轉的CD4+T細胞增殖。
圖14顯示人源化CD73抗體逆轉的CD4+ T細胞IFN-γ釋放。
圖15A及圖15B顯示人源化抗體對異種移植動物模型腫瘤的5’外核苷酸酶活性的抑制效果。
圖16顯示人源化抗體在A375人黑色素瘤異種移植模型上的抑瘤效果。
本文闡述特異性結合至CD73且由此降低CD73活性的分離抗體，具體而言為單株抗體，例如人單株抗體(「拮抗性抗CD73抗體」)。在某些實施方案中，本文所述抗體源自特定重鏈及輕鏈種系序列，且/或包含包括特定胺基酸序列的特定結構特徵，例如CDR區。本文提供分離的抗體以及製備這些抗體的方法。本文亦提供單獨使用所述抗體或使用所述抗體與其他治療劑(例如抗體)和/或癌症療法的組合來減緩腫瘤生長的方法。因此，本文所述抗CD73抗體可用於眾多治療應用的治療中，包括例如抑制腫瘤生長、抑制轉移及增強針對腫瘤的免疫反應。
為更容易地理解本說明書，首先定義某些術語。其他定義陳述於說明書通篇中。
如本文所使用的術語「分化簇73」或「CD73」指一種酶(核苷酸酶)，該種酶能夠將細胞外核苷5’單磷酸轉換成核苷，即將腺苷單磷酸(AMP)轉換成腺苷。CD73通常以經由醣基磷脂醯肌醇(GPI)鍵錨定至細胞膜的二聚體形式出現，具有胞外酶活性，且在訊號轉導中起作用。CD73的主要功能為將細胞外核苷酸(例如5'-AMP)轉換成腺苷，腺苷是一種高度免疫 阻抑性的分子。因此，外-5'-核苷酸酶催化嘌呤及嘧啶核糖核苷及去氧核糖核苷單磷酸去磷酸化成相應的核苷。儘管CD73具有廣泛的底物特異性，但其偏好嘌呤核糖核苷。
CD73亦稱為外-5'核酸酶(5'-NT，EC 3.1.3.5)。術語「CD73」包括由細胞天然表現的CD73的任何變體或亞型。因此，本文所述抗體可與來自非人物種的CD73(例如食蟹猴CD73)交叉反應。另一選擇為，這些抗體可特異性針對人CD73且可不展現與其他物種的任何交叉反應性。CD73或其任何變體及亞型可自天然表現其的細胞或組織分離或使用業內所熟知技術和/或本文所述的方法以重組方式產生。
已鑑定出人CD73的兩個亞型，該二者共享相同的N末端及C末端部分。亞型1(登錄號NP_002517.1；SEQ ID NO：1)代表由574個胺基酸及9個外顯子組成的最長蛋白質。亞型2(登錄號NP_001191742.1)編碼由524個胺基酸組成、缺少胺基酸404-453的較短蛋白質。亞型2缺少一個可替換的框內外顯子，從而產生僅具有8個外顯子、但具有相同的N及C末端序列的轉錄本。
食蟹猴(cyno)CD73蛋白質序列為SEQ ID NO：2提供所示。術語食蟹猴(cynomolgus)及食蟹猴(cyno)均指食蟹猴(Macaca fascicularis)物種，且在本說明書通篇中可互換使用。
如本文所使用的術語「抗體」可包括完整抗體及其任何抗原結合片段(即「抗原結合部分」)或單鏈。在一個實施方案中，「抗體」指包含藉由二硫鍵互連的至少兩個重(H)鏈及兩個輕(L)鏈的糖蛋白或其抗原結合部分。每一重鏈包含重鏈可變區(在本文中縮寫為VH)及重鏈恆定區。在某些天然存在的IgG、IgD及IgA抗體中，重鏈恆定區包含三個結構域，CH1、CH2及CH3。在某些天然存在的抗體中，每一輕鏈包含輕鏈可變區(在本文 中縮寫為VL)及輕鏈恆定區。輕鏈恆定區包含一個結構域CL。可將VH及VL區進一步細分成超變區(稱為互補決定區(CDR))及更保守的區域(稱為框架區(FR))，二者間雜排列。在本文中，VH區的CDR縮寫為HCDR，即VH區的三個CDR可以縮寫為HCDR1、HCDR2、HCDR3；VL區的CDR縮寫為LCDR，即VL區的三個CDR可以縮寫為LCDR1、LCDR2、LCDR3。每一VH及VL由三個CDR及四個FR構成，其自胺基末端至羧基末端按下列順序佈置：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈及輕鏈的可變區含有與抗原相互作用的結合結構域。抗體的恆定區可介導免疫球蛋白與宿主組織或因子(包括免疫系統的各種細胞(例如效應細胞)及經典補體系統的第一組分(C1q))的結合。
抗體的重鏈可或可不含有末端賴胺酸(K)或末端甘胺酸及賴胺酸(GK)。因此，本文所提供的任何重鏈序列及重鏈恆定區序列可以以GK或G結尾，或缺少K或GK，無論該序列的最後一個胺基酸為何。這是因為末端的賴胺酸，有時是甘胺酸與賴胺酸，在抗體表現期間會被切去。
抗體通常以高親和力特異性結合至其同源抗原，高親和力由10-7M至10-11M或更小的解離常數(KD)所反映。通常認為大於約10-6M的任何KD指示非特異性結合。如本文所使用的，「特異性結合」至抗原的抗體指以高親和力結合至抗原且實質上相同的抗原、但不以高親和力結合至不相關抗原的抗體，高親和力意指具有10-7M或更小、優選10-8M或更小、甚至更優選5×10-9M或更小、且最佳介於10-8M與10-10M之間或更小的KD。若抗原展現與給定抗原的高度序列同一性，例如若其展現與給定抗原的序列至少80%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%或更大的序列同一性，則該抗原與給定抗原「實質上相同」。舉例而言，特異性結合至人CD73的抗 體亦可與來自某些非人靈長類動物物種(例如食蟹猴)的CD73交叉反應，但不可與來自其他物種的CD73，或與除CD73外的抗原交叉反應。
免疫球蛋白可來自普遍已知同型中的任一者，包括(但不限於)IgA、分泌性IgA、IgG及IgM。IgG同型在某些物種中分成多個子類：在人中分成IgG1、IgG2、IgG3及IgG4，在小鼠中分成IgG1、IgG2a、IgG2b及IgG3。在某些實施方案中，本文所述抗CD73抗體具有人IgG1或IgG2子型。免疫球蛋白(例如人IgG1)以若干異型存在，其彼此相差至多幾個胺基酸。舉例而言，「抗體」可包括天然存在的及非天然存在的抗體；單株及多株抗體；嵌合及人源化抗體；人及非人抗體；全合成抗體；及單鏈抗體。
如本文所使用，術語抗體的「抗原結合部分」指抗體的保留特異性結合至抗原(例如人CD73)的能力的一個或多個片段。已顯示，抗體的抗原結合功能可由全長抗體的片段來實施。抗體(例如本文所述的抗CD73抗體)的「抗原結合部分」這一術語所涵蓋的結合片段的實例包括(i)Fab片段，其是由VL、VH、CL及CH1結構域所組成的單價片段；(ii)F(ab')2片段，其是包含藉由二硫橋在鉸鏈區處連接的兩個Fab片段的二價片段；(iii)Fd片段，其由VH及CH1結構域組成；(iv)Fv片段，其由抗體的一條單臂的VL及VH結構域組成，(v)dAb片段(Ward等人，(1989),Nature,341：544-546)，其由VH結構域組成；及(vi)分離的互補決定區(CDR)，或(vii)兩個或更多個分離的CDR的組合，這些CDR可視情況藉由合成接頭連結。另外，儘管Fv片段的兩個結構域VL及VH由不同的基因編碼，但其可利用重組方法藉由合成接頭來連結這些結構域，使它們能夠被製備成為單一蛋白鏈，其中VL及VH區配對形成單價分子(稱為單鏈Fv(scFv))；參見例如Bird等人，(1988),Science 242：423-426；及Huston等人，(1988),Proc.Natl.Acad.Sci.,USA 85：5879-5883)。這些單鏈抗體亦欲涵蓋於術語抗體的「抗原結合部分」內。 這些及其他潛在構建體闡述於Chan及Carter,(2010),Nat.Rev.Immunol.,10：301。這些抗體片段系使用本發明所述技術領域中具通常知識者已知的習用技術來獲得，並且從這些片段中篩選可以按照與完整抗體相同的方式使用者。抗原結合部分可通過重組DNA技術或通過酶或化學裂解完整免疫球蛋白來產生。
術語「保守修飾形式的胺基酸序列」指這樣的胺基酸修飾，它不顯著影響或改變包含該胺基酸序列的抗體的結合特性，該修飾包括胺基酸置換、增加和缺失。修飾可通過例如定點誘變和PCR介導的誘變等標準技術引入本發明的抗體中。保守胺基酸置換系其中的胺基酸殘基被具有相似側鏈的胺基酸殘基替換的置換。在本領域中已經確定具有相似側鏈的胺基酸殘基家族。這些家族包括具有鹼性側鏈的胺基酸(如賴胺酸、精胺酸、組胺酸)，具有酸性側鏈的胺基酸(如天冬胺酸、穀胺酸)，具有不帶電的極性側鏈的胺基酸(如甘胺酸、天冬醯胺、穀胺醯胺、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸)，具有非極性側鏈的胺基酸(如丙胺酸、纈胺酸、亮胺酸、異亮胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸)，具有β-支化側鏈的胺基酸(如蘇胺酸、纈胺酸、異亮胺酸)、和具有芳香側鏈的胺基酸(如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)。因此，本發明的抗體的CDR區中的一個或多個胺基酸殘基可以被來自相同側鏈家族的其他胺基酸殘基替代，並且使可用此處說明的功能測定方法對經改變的抗體的保留功能進行測試。優選的是，保守修飾在數目上不超過1個或2個。
「雙特異性」或「雙功能抗體」是具有兩個不同重鏈/輕鏈對、從而產生特異性針對不同抗原的兩個抗原結合位點的人工雜合抗體。雙特異性抗體可通過多種方法(包括雜交瘤融合或連接Fab'片段)來產生。例如，參 見Songsivilai及Lachmann,Clin.Exp.Immunol.,79：315-321,(1990)；Kostelny等人，J.Immunol.,148,1547-1553,(1992)。
如本文所使用，術語「單株抗體」指展示針對特定表位的單一結合特異性及親和力的某一抗體，或者是抗體組合物，其中抗體組合物中的所有的抗體皆展示針對特定表位的單一結合特異性及親和力。通常，這些單株抗體將源自單一抗體編碼細胞或核酸，且將在不有意引入任何序列變化的條件下增殖。因此，術語「人單株抗體」指具有源自人種系免疫球蛋白序列的可變區、及任選的恆定區的單株抗體。在一個實施方案中，人單株抗體是通過例如通過融合來自轉基因或轉染色體非人動物(例如具有包含人重鏈轉基因及輕鏈轉基因的基因組的轉基因小鼠)獲得的B細胞與永生細胞獲得的雜交瘤產生的。
如本文所使用的，術語「重組人抗體」包括通過重組方式製備、表現、產生或分離的所有人抗體，例如(a)自對人免疫球蛋白基因轉基因或轉染色體的動物(例如小鼠)或自其製備的雜交瘤分離的抗體，(b)自經轉化以表現該抗體的宿主細胞，例如自轉染瘤分離的抗體，(c)自重組、組合人抗體文庫分離的抗體，及(d)通過涉及將人免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列的任何其他方式製備、表現、產生或分離的抗體。這些重組人抗體包含利用具體人種系免疫球蛋白序列且由種系基因編碼、但包括在例如抗體成熟期間發生的後續重排及突變的可變區及恆定區。如本領域已知(例如，參見Lonberg,(2005),Nature Biotech.,23(9)：1117-1125)，可變區含有由重排以形成特異性針對外源抗原的抗體的不同基因編碼的抗原結合結構域。除重排之外，可變區可進一步經多個單一胺基酸變化(稱為體細胞突變或超突變)修飾以增加抗體對外源抗原的親和力。恆定區將進一步因應抗原而改變(即同型切換)。因此，因應抗原的編碼輕鏈及重鏈免疫球蛋白多肽的 經重排及體細胞突變的核酸序列可與原始種系序列不相同，但將實質上相同或相似(即具有至少80%同一性)。
「人」抗體(HuMAb)指具有這樣的可變區的抗體：可變區中的框架區及CDR區皆源自人種系免疫球蛋白序列。另外，若抗體含有恆定區，則恆定區亦源自人種系免疫球蛋白序列。本文所述抗體可包括不由人種系免疫球蛋白序列編碼的胺基酸殘基(例如，通過體外隨機誘變或位點特異性誘變或通過體內體細胞突變引入的突變)。然而，如本文所使用的，術語「人抗體」並不欲包括源自另一哺乳動物物種(例如小鼠)種系的CDR序列已移植至人框架序列上的抗體。「人」抗體與「全人」抗體兩個術語以同義使用。
「人源化」抗體指這樣的抗體，其中，非人抗體的CDR結構域以外的一些、大部分或所有胺基酸被源自人免疫球蛋白的相應胺基酸替代。在抗體的人源化形式的一個實施方案中，CDR結構域以外的一些、大部分或所有胺基酸已被來自人免疫球蛋白的胺基酸替代，而一個或多個CDR區內的一些、大部分或所有胺基酸未發生變化。可容許存在胺基酸的小添加、缺失、插入、取代或修飾，只要其不消除抗體結合具體抗原的能力即可。「人源化」抗體保留類似於原始抗體的抗原特異性的抗原特異性。
「嵌合抗體」指可變區源自一個物種且恆定區源自另一物種的抗體，例如可變區源自小鼠抗體且恆定區源自人抗體的抗體。
「經修飾的重鏈恆定區」指包含恆定結構域CH1、鉸鏈、CH2及CH3的重鏈恆定區，其中一個或多個恆定結構域來自不同同型(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)。在某些實施方案中，經修飾的恆定區包括人IgG2 CH1結構域及融合至人IgG1 CH2結構域的人IgG2鉸鏈及人IgG1 CH3結構域。在 某些實施方案中，這些經修飾恆定區亦包括相對於野生型胺基酸序列，一個或多個結構域內的胺基酸修飾。
如本文所使用的，「同型」指由重鏈恆定區基因編碼的抗體類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD及IgE抗體)。
「異型」指特定同型群內的天然存在的變體，這些變體相差幾個胺基酸(例如，參見Jefferis等人，(2009),mAbs,1：1)。本文所述抗體可具有任何異型。
除非本文在別處另有說明，否則所有胺基酸編號均根據Kabat系統的EU索引(Kabat,E.A.等人，(1991),Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，U.S.Department of Health and Human Services,NIH公佈第91-3242號)。
「識別抗原的抗體」及「特異性針對抗原的抗體」在本文中可與術語「特異性結合至抗原的抗體」互換使用。
如本文所使用的，術語「分離的抗體」欲指這樣的抗體，其實質游離於其他具有不同抗原特異性的抗體(例如，特異性結合至CD73的分離的抗體實質游離於特異性結合除CD73外的抗原的抗體)。然而，特異性結合至CD73的表位的分離的抗體可具有針對不同物種的其他CD73蛋白的交叉反應性。
如本文所使用，「抑制CD73」的抗體指抑制CD73的生物功能和/或酶功能的抗體。這些功能包括，例如，抗體的抑制CD73酶活性、例如CD73調控的腺苷產生，或cAMP產生減少的能力。
如本文所使用，「可內化」的抗體指在結合至細胞表面抗原後可穿過細胞膜的抗體。內化包括抗體介導的受體(例如CD73)內化。在一些實 施方案中，抗體以T1/2等於約10min或更短的速率「內化」至表現CD73的細胞中。
「效應物功能」指抗體Fc區與Fc受體或配體的相互作用，或源自其的生物化學事件。示例性「效應物功能」包括C1q結合、補體依賴性細胞毒性(CDC)、Fc受體結合、FcγR介導的效應物功能(例如ADCC及抗體依賴性細胞介導的吞噬作用(ADCP))及下調細胞表面受體(例如B細胞受體；BCR)。這些效應物功能通常需要組合Fc區與結合結構域(例如抗體可變結構域)。
「Fc受體」或「FcR」是結合至免疫球蛋白的Fc區的受體。結合至IgG抗體的FcR包括FcγR家族的受體，包括這些受體的等位基因變體及可變剪接形式。FcγR家族由三種活化性受體(在小鼠中為FcγR I、FcγR Ⅲ及FcγR Ⅳ；在人類中為FcγR I A、FcγR Ⅱ A及FcγR Ⅲ A)及一種抑制性受體(FcγR Ⅱ B)組成。人FcγR的多種特性概述於表A中。大部分固有效應細胞類型共表現一種或多種活化FcγR及抑制性FcγR Ⅱ B，而天然殺傷(NK)細胞選擇性表現一種活化Fc受體(小鼠中的FcγR Ⅲ及人中的FcγR Ⅲ A)，但不表現小鼠及人中的抑制性FcγR Ⅱ B。人IgG1結合至大部分人Fc受體且認為其所結合的活化Fc受體類型等效於鼠類IgG2a。
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「鉸鏈」、「鉸鏈結構域」或「鉸鏈區」或「抗體鉸鏈區」指重鏈恆定區的連結CH1結構域與CH2結構域且包括鉸鏈之上部分、中間部分及下部分的結構域(Roux等人，J.Immunol.,1998,161：4083)。鉸鏈提供抗體的結合區域與效應物區域之間的不同柔性且亦提供兩個重鏈恆定區之間的分子間二硫鍵連接的位點。
術語「鉸鏈」包括野生型鉸鏈以及其變體(例如非天然存在的鉸鏈或經修飾鉸鏈)。例如，術語「IgG2鉸鏈」包括野生型IgG2鉸鏈及具有1個、2個、3個、4個、5個、1-3個、1-5個、3-5個和/或至多5個、4個、3個、2個或1個突變(例如取代、缺失或添加)的變體。
術語「CH1結構域」指將可變結構域與重鏈恆定結構域中的鉸鏈連接的重鏈恆定區。術語「CH1結構域」包括野生型CH1結構域以及其變體(例如非天然存在的CH1結構域或經修飾的CH1結構域)。例如，術語「CH1結構域」包括野生型CH1結構域及其具有1個、2個、3個、4個、5個、1-3個、1-5個、3-5個和/或至多5個、4個、3個、2個或1突變(例如取代、缺失或添加)的變體。
示例性CH1結構域包括具有改變抗體的生物活性(例如ADCC、CDC或半衰期)的突變的CH1結構域。本文提供影響抗體生物活性的CH1結構域修飾。
術語「CH2結構域」指連接重鏈恆定結構域中的鉸鏈與CH3結構域的重鏈恆定區。術語「CH2結構域」包括野生型CH2結構域以及其變體(例如非天然存在的CH2結構域或經修飾的CH2結構域)。例如，術語「CH2結構域」包括野生型CH2結構域及其具有1個、2個、3個、4個、5個、1-3個、1-5個、3-5個和/或至多5個、4個、3個、2個或1個突變(例如取代、缺失或添加)的變體。示例性CH2結構域包括具有改變抗體的生物活性(例如ADCC、CDC或半衰期)的突變的CH2結構域。
術語「CH3結構域」指在重鏈恆定結構域中為CH2結構域的C末端的重鏈恆定區。術語「CH3結構域」包括野生型CH3結構域以及其變體(例如非天然存在的CH3結構域或經修飾的CH3結構域)。例如，術語「CH3結構域」包括野生型CH3結構域及其具有1個、2個、3個、4個、5個、1-3個、1-5個、3-5個和/或至多5個、4個、3個、2個或1個突變(例如取代、缺失或添加)的變體。示例性CH3結構域包括具有改變抗體的生物活性(例如ADCC、CDC或半衰期)的突變的CH3結構域。本文提供影響抗體生物活性的CH3結構域修飾。
「CL結構域」指輕鏈的恆定結構域。術語「CL結構域」包括野生型CL結構域及其變體。
「天然序列Fc區」或「天然序列Fc」包含與自然界中發現的Fc區的胺基酸序列相同的胺基酸序列。天然序列人Fc區包括天然序列人IgG1Fc區；天然序列人IgG2Fc區；天然序列人IgG3Fc區；及天然序列人IgG4Fc區以及其天然變體。天然序列Fc包括Fc的多個異型(例如，參見Jefferis等人(2009)mAbs 1：1)。
術語「表位」或「抗原決定簇」指抗原(例如CD73)上免疫球蛋白或抗體特異性結合的位點。蛋白質抗原內的表位可自連續胺基酸(通常為線 性表位)或通過蛋白質的三級折疊並置的非連續胺基酸二者形成(通常為構象表位)。在暴露於變性溶劑時，通常但不始終保留自連續胺基酸形成的表位，而在用變性溶劑處理時通常丟失由三級折疊形成的表位。在獨特空間構象中，表位通常包括至少3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個或15個胺基酸。確定由給定抗體結合表位的方法(即表位定位)為本領域所熟知，且包括例如免疫印跡及免疫沉澱分析，其中測試重疊或連續肽(例如來自CD73)與給定抗體(例如抗CD73抗體)的反應性。確定表位的空間構象的方法包括本領域中的技術及那些本文所述者，例如X光結晶學、2維核磁共振及HDX-MS(例如，參見Epitope Mapping Protocolsin Methods in Molecular Biology，第66卷，G.E.Morris編輯(1996))。
術語「表位定位」指鑑定抗原上參與抗體-抗原識別的分子決定簇的方法。
關於兩種或更多種抗體的術語「結合至相同表位」意指這些抗體結合至胺基酸殘基的同一區段，如通過給定方法所確定。用於確定抗體是否結合至與本文所述抗體「相同的CD73上的表位」的技術包括例如表位定位方法，例如抗原：抗體複合物晶體的X光分析(其提供表位的原子解析度)及氫/氘交換質譜法(HDX-MS)。其他方法監測抗體與抗原片段(例如蛋白水解片段)或抗原的突變變化形式的結合，其中由於抗原序列內胺基酸殘基的修飾所致的結合損失通常視為可指示表位組分(例如丙胺酸掃描誘變-Cunningham & Wells,(1985),Science,244：1081)。另外，亦可使用表位定位的計算組合方法。這些方法取決於所關注抗體自組合噬菌體展示肽文庫親和分離特異性短肽的能力。
「與另一抗體競爭與靶結合」的抗體指抑制(部分抑制或完全抑制)另一抗體與靶的結合的抗體。可使用已知競爭實驗(例如實施例中所述的那 些)來確定兩種抗體是否彼此競爭結合至靶，即一種抗體是否抑制另一抗體與靶的結合以及抑制程度。在某些實施方案中，抗體與另一抗體競爭與靶的結合，且抑制至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%的該結合。抑制或競爭的程度可依賴於哪種抗體為「封閉抗體」(即先與靶一起溫育的冷抗體)而不同。競爭測定可如例如以下文獻中所述來實施：Ed Harlow及David Lane,Cold Spring Harb Protoc,2006,doi：10.1101/pdb.prot4277或「UsingAntibodies」，Ed Harlow及David Lane,Cold Spring Harbor Laboratory Press,ColdSpring Harbor,NY,USA 1999的第11章。競爭性抗體結合至相同表位、重疊表位或毗鄰表位(例如，由位阻作用所證實的)。
其他競爭性結合測定包括：固相直接或間接放射性免疫測定(RIA)、固相直接或間接酶免疫測定(EIA)、夾心競爭測定(參見Stahli等人，Methods in Enzymology,9：242,(1983))；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(參見Kirkland等人，J.Immunol.,137：3614,(1986))；固相直接標記測定、固相直接標記夾心分析(參見Harlow及Lane,Antibodies：ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor Press,(1988))；使用I-125標記的固相直接標記RIA(參見Morel等人，Mol.Immunol.,25(1)：7,(1988))；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(Cheung等人，Virology,176：546,(1990))；及直接標記RIA。(Moldenhauer等人，Scand.J.Immunol.,32：77,(1990))。
如本文所使用，術語「特異性結合(specific binding)」、「選擇性結合(selectivebinding)」、「選擇性結合(selectively binds)」及「特異性結合(specifically binds)」指抗體結合至預定抗原上的表位但不結合至其他抗原。通常，抗體(i)當在BIACORE® 2000表面等離子共振儀器中通過例如使用預定抗原(例如重組人CD73)作為分析物及抗體作為配體的表面等離子共振 (SPR)技術或抗體與抗原陽性細胞的結合的Scatchard分析測定時，以約小於10-7M、例如約小於10-8M、10-9M或10-10M或甚至更小的平衡解離常數(KD)結合，及(ii)結合至預定抗原且親和力系其與除預定抗原或密切相關抗原外的非特異性抗原(例如BSA、酪蛋白)結合的親和力的至少兩倍。因此，除非另有指示，否則「特異性結合至人CD73」的抗體指以10-7M或更小、例如約小於10-8M、10-9M或10-10M或甚至更小的KD結合至可溶性或細胞結合的人CD73的抗體。「與食蟹猴CD73交叉反應」的抗體指以10-7M或更小、例如小於10-8M、10-9M或10-10M或甚至更小的KD結合至食蟹猴CD73的抗體。在某些實施方案中，在標準結合分析中，不與來自非人物種的CD73交叉反應的抗體展現針對這些蛋白質基本上不可檢測的結合。
如本文所使用的，術語「Kassoc」或「Ka」欲指具體抗體-抗原相互作用的締合速率常數(association rate constant)，而如本文所使用，術語「Kdis」或「Kd」欲指具體抗體-抗原相互作用的解離速率常數(dissociation rate constant)。如本文所使用，術語「KD」欲指平衡解離常數，其系自Kd對Ka的比率(即Kd/Ka)獲得且以摩爾濃度(M)表示。可使用本領域充分確立的方法測定抗體的KD值。測定抗體的KD的優選方法系通過使用表面等離子共振，優選使用生物傳感器系統，例如Biacore®表面等離子共振系統或流式細胞術或Scatchard分析。
術語「EC50」在使用抗體或其抗原結合片段的體外或體內分析背景下指誘導50%最大反應，即介於最大反應與基線之間之中途的反應的抗體或其抗原結合部分的濃度。
如由抗體(例如抗CD73抗體)介導的抗體或受體(例如CD73)的「內化速率」可由例如內化的T1/2表示，例如如實施例中所顯示的那樣。通過將抗體的重鏈恆定區變成經修飾的重鏈恆定區(例如含有IgG2鉸鏈及IgG2 CH1結構域者)，抗CD73抗體的內化速率可增強或增加至少10%、30%、50%、75%、2倍、3倍、5倍或更大，從而使T1/2縮短至少10%、30%、50%、75%、2倍、3倍、5倍或更大。例如，經修飾的重鏈恆定區可增加內化速率，使得T1/2不再是10分鐘，而是縮短至5分鐘(即內化速率增加到兩倍或T1/2減小至二分之一)。「T1/2」定義為：自將抗體添加至細胞中之時開始算，達到最大內化的一半時的時間。最大內化水平可為內化對抗體濃度所作的圖上的平臺段處的內化水平。修飾的重鏈恆定區可使抗體的最大內化程度增加至少10%、30%、50%、75%、2倍、3倍、5倍或更大。比較不同抗體(例如具有經修飾的重鏈恆定區的抗體及不具有經修飾的重鏈恆定區的同一種抗體)的內化功效的另一方式是通過比較其在給定抗體濃度(例如100nM)下或在給定時刻(例如2分鐘、5分鐘、10分鐘或30分鐘)的內化水平。內化水平的比較亦可通過比較內化的EC50水平來進行。
如本文所使用的術語「天然存在」在應用於目標時指可在自然界中發現目標的事實。例如，存在於可自自然界來源分離且尚未在實驗室中經人有意修飾的生物體(包括病毒)中的多肽或多核苷酸序列是天然存在的。
「多肽」指包含至少兩個連續連接的胺基酸殘基的鏈，且鏈的長度無上限。蛋白質中之一或多個胺基酸殘基可含有修飾，例如(但不限於)醣基化、磷酸化或二硫鍵。「蛋白質」可包含一個或多個多肽。
如本文所使用，術語「核酸分子」意欲包括DNA分子及RNA分子。核酸分子可為單鏈或雙鏈，且可為cDNA。亦提供本文所述SEQ ID NOs中所述序列的「保守序列修飾」，即不消除由核苷酸序列編碼或含有胺基酸序列的抗體與抗原的結合的核苷酸及胺基酸序列修飾。這些保守序列修飾包括保守核苷酸及胺基酸取代以及核苷酸及胺基酸添加及缺失。例如，可通過本領域已知的標準技術(例如定點誘變及PCR介導的誘變)將修飾引入 本文所述的SEQ ID NOs中。保守序列修飾包括保守胺基酸取代，其中胺基酸殘基被替換為具有類似側鏈的胺基酸殘基。具有類似側鏈的胺基酸殘基的家族是本領域中已有定義的。這些家族包括具有鹼性側鏈的胺基酸(例如賴胺酸、精胺酸、組胺酸)、具有酸性側鏈的胺基酸(例如天冬胺酸、穀胺酸)、具有不帶電極性側鏈的胺基酸(例如甘胺酸、天冬醯胺、穀胺醯胺、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸)、具有非極性側鏈的胺基酸(例如丙胺酸、纈胺酸、亮胺酸、異亮胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸)、具有β分枝側鏈的胺基酸(例如蘇胺酸、纈胺酸、異亮胺酸)及具有芳香族側鏈的胺基酸(例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)。因此，抗CD73抗體中的預測的非必需胺基酸殘基優選被來自同一側鏈家族的另一胺基酸殘基替代。鑑定不消除抗原結合的核苷酸及胺基酸保守取代的方法為本領域所熟知(例如，參見Brummell等人，Biochem.,32：1180-1187,(1993)；Kobayashi等人，Protein Eng.,12(10)：879-884,(1999)；及Burks等人，Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,94：412-417,(1997))。作為另一選擇，在另一實施方案中，可通過例如飽和誘變沿抗CD73抗體編碼序列的全部或一部分隨機引入突變，且可針對改良的結合活性篩選所得經修飾抗CD73抗體。
對於核酸而言，術語「實質同源性」表示，兩個核酸或其指定序列在最佳比對及比較(其中適當插入或缺失核苷酸)時有至少約80%的核苷酸、通常至少約90%至95%、且更優選至少約98%至99.5%的核苷酸相同。作為另一選擇，當區段在選擇性雜交條件下與鏈的互補物雜交，則存在實質同源性。
對於多肽而言，術語「實質同源性」表示，兩個多肽或其指定序列在最佳比對及比較(其中適當插入或缺失核苷酸)時有至少約80%的胺基酸、通常至少約90%至95%、且更優選至少約98%至99.5%的胺基酸相同。
兩條序列之間的同一性%在最佳比對序列時隨這些序列所共享的相同位置數而變化(即同源性%=相同位置數/總位置數×100)，其中最佳比對系考慮到為達成兩條序列的最佳比對而需要引入的空位數及每一空位的長度來確定。兩條序列之間的序列比較及同一性百分數測定可使用數學算法來完成，如下文非限制性實施例中所述。
兩條核苷酸序列之間的同一性百分數可使用GCG軟體包(可在http：//www.gcg.com上獲得)中的GAP程序、使用NWSgapdna.CMP矩陣及空位權重40、50、60、70或80以及長度權重1、2、3、4、5或6來測定。兩條核苷酸或胺基酸序列之間之同一性百分數亦可使用已納入比對程序(ALIGN program,2.0版)中的E.Meyers及W.Miller(CABIOS,4：11-17,(1989))算法、使用PAM120權重殘基表、空位長度罰分12及空位罰分4來測定。另外，兩條胺基酸序列之間的同一性百分數可使用已納入GCG軟體包(可在http：//www.gcg.com上獲得)中的空位程序中的Needleman及Wunsch(J.Mol.Biol.,(48)：444-453,(1970))算法、使用Blossum 62矩陣或PAM250矩陣及空位權重16、14、12、10、8、6或4以及長度權重1、2、3、4、5或6來測定。
本文所述的核酸及蛋白質序列可進一步用作「詢問序列」來實施針對公共數據庫的檢索，以例如鑑定相關序列。這些檢索可使用Altschul等人，(1990),J.Mol.Biol.,215：403-10的NBLAST及XBLAST程序(2.0版)來實施。BLAST核苷酸檢索可使用NBLAST程序、評分=100、字長=12來實施，以獲得與本文所述核酸分子同源的核苷酸序列。BLAST蛋白質檢索可使用XBLAST程序、評分=50、字長=3來實施，以獲得與本文所述蛋白質分子同源的胺基酸序列。為獲得用於比較目的的空位比對，可如Altschul等人，(1997),Nucleic Acids Res.,25(17)：3389-3402中所述使用空位 BLAST。在使用BLAST及空位BLAST程序時，可使用各程序(例如XBLAST及NBLAST)的預設參數。參見www.ncbi.nlm.nih.gov。
這些核酸可存在於完整細胞中，存在於細胞溶解物中，或以部分純化或實質上純淨的形式存在。當通過標準技術實施純化以清除其他細胞組分或其他污染物例如其他細胞核酸(例如染色體的其他部分)或蛋白質)時，核酸是「分離的」或「實質上純淨」的，這些標準技術包括堿/SDS處理、CsCl顯帶、柱層析、瓊脂糖凝膠電泳及本領域熟知的其他方法。參見F.Ausubel等人編輯，Current Protocols in Molecular Biology,Greene Publishingand Wiley Interscience,New York,(1987)。
核酸(例如cDNA)可根據標準技術進行突變以提供基因序列。對於編碼序列，這些突變可視需要影響胺基酸序列。具體而言，涵蓋與天然V序列、D序列、J序列、恆定序列、切換序列及本文所述的其他這些序列實質上同源或源自其的DNA序列。
如本文所使用，術語「載體」欲指能夠轉運與其連接的另一核酸的核酸分子。一類載體為「質體」，其指其他DNA區段可連接至其中的環形雙鏈DNA環。另一類載體為病毒載體，其中其他DNA區段可連接至病毒基因組中。某些載體能夠在已引入其的宿主細胞中進行自主複製(例如，具有細菌複製起點的細菌載體及游離型哺乳動物載體)。其他載體(例如非游離型哺乳動物載體)可在引入宿主細胞中時整合至該宿主細胞的基因組中，並藉此隨宿主基因組一同複製。另外，某些載體能夠引導與其可操作連接的基因的表現。這些載體在本文中稱為「重組表現載體」(或簡稱為「表現載體」)。一般而言，用於重組DNA技術中的表現載體通常呈質體形式。在本說明書中，「質體」與「載體」可互換使用，這是因為質體是載體的最常 用形式。然而，本發明亦包括提供等效功能的其他形式的表現載體，例如病毒載體(例如複製缺陷型反轉錄病毒、腺病毒及腺相關病毒)。
如本文所使用，術語「重組宿主細胞」(或簡稱為「宿主細胞」)欲指包含並非天然存在於細胞中的核酸的細胞，且可為已引入重組表現載體中的細胞。應理解，這些術語不僅欲指具體個體細胞，亦欲指此細胞的子代。由於突變或環境影響可使後續各代發生某些改變，故該子代實際上可能與親代細胞不同，但仍包括於如本文所使用的術語「宿主細胞」的範疇內。
如本文所使用的，術語「抗原」指任何天然或合成免疫原性物質，例如蛋白質、肽或半抗原。抗原可為CD73或其片段。
「免疫反應」指脊椎動物內針對外源藥劑的生物反應，該反應保護生物體免受這些藥劑及其所致疾病的影響。免疫反應由免疫系統的細胞(例如T淋巴球、B淋巴球、自然殺手(NK)細胞、巨噬細胞、嗜酸性球、肥大細胞、樹突狀細胞或嗜中性球)及由這些細胞中的任一者或肝臟產生的可溶性大分子(包括抗體、細胞介素及補體)的作用來介導，該作用導致選擇性靶向、結合、損傷、破壞和/或自脊椎動物身體消除侵襲性病原體、感染病原體的細胞或組織、癌性細胞或其他異常細胞或(在自體免疫或病理性炎症的情形下)正常人細胞或組織。免疫反應(response或reaction)包括例如活化或抑制T細胞(例如作用T細胞或Th細胞，例如CD4+或CD8+T細胞)或抑制Treg細胞。
「免疫調節劑」或「免疫調控劑」指可參與調節、調控或改變免疫反應的藥劑，例如訊號傳導路徑的組分。「調節」、「調控」或「改變」免疫反應指免疫系統細胞或該細胞(例如作用T細胞)活性的任何變化。該調節包括免疫系統的刺激或阻抑，可表現為不同細胞類型數量的增加或減 少、這些細胞活性的增加或降低或可發生在免疫系統內的任何其他變化。抑制性及刺激性免疫調節劑二者均已有發現，其中的一些可能在腫瘤微環境中具有增強的功能。免疫調節劑可位於T細胞的表面上。「免疫調節靶」或「免疫調控靶」是這樣的免疫調節劑，某種物質、藥劑、部分、化合物或分子以它為結合目標，並且它的活性因該物質、藥劑、部分、化合物或分子的結合而改變。免疫調節靶包括例如細胞表面上的受體(「免疫調節受體」)及受體配體(「免疫調節配體」)。
增加的刺激免疫反應或免疫系統的能力可源自T細胞共刺激受體的增強的激動劑活性和/或抑制性受體的增強的拮抗劑活性。增加的刺激免疫反應或免疫系統的能力可通過在測量免疫反應的測定(例如測量細胞因子或趨化因子釋放、細胞溶解活性(直接在靶細胞上測定或經由檢測CD107a或顆粒酶間接測定)及增殖的變化的測定)中EC50或最大活性程度的增加倍數來反映。刺激免疫反應或免疫系統活性的能力可增強至少10%、30%、50%、75%、2倍、3倍、5倍或更大。
「免疫療法」指通過包含誘導、增強、阻抑或以其他方式改變免疫反應的方法治療患有疾病或具有感染疾病或遭受疾病復發的風險的受試者。
「免疫刺激療法」或「免疫刺激性療法」指可增加(誘導或增強)受試者的免疫反應來例如治療癌症的療法。
「強化內源免疫反應」意指增加受試者的現有免疫反應的有效性或效能。此有效性及效能的增加可例如通過克服阻抑內源宿主免疫反應的機制、或通過刺激增強內源宿主免疫反應的機制來達成。
「T效應物」(「Teff」)細胞指具有細胞溶解活性的T細胞(例如CD4+及CD8+T細胞)以及T輔助(Th)細胞，其分泌細胞因子並活化且引導其他免疫細胞，但不包括調控T細胞(Treg細胞)。
如本文所使用，術語「連接」指兩個或更多個分子的締合。連接可為共價或非共價。連接亦可為基因連接(即以重組方式融合)。這些連接可使用眾多種本領域公認技術(例如化學偶聯及重組蛋白產生)來達成。
如本文所使用，「施用」指使用本發明所述技術領域中具通常知識者已知的多種方法及遞送系統中的任一者將包含治療劑的組合物物理引入至受試者。本文所述抗體的優選施用途徑包括靜脈內、腹膜內、肌內、皮下、脊柱或其他胃腸外施用途徑，例如通過注射或輸注。如本文所使用的片語「胃腸外施用」意指除經腸及局部施用外的施用模式，通常通過注射，且包括(但不限於)靜脈內、腹膜內、肌內、動脈內、鞘內、淋巴內、病灶內、囊內、眶內、心內、皮內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蛛網膜下、脊柱內、硬膜外及胸骨內注射及輸注，以及體內電穿孔。作為另一選擇，本文所述抗體可經由非胃腸外途徑來施用，例如局部、表皮或粘膜施用途徑，例如經鼻內、經口、經陰道、經直腸、經舌下或經局部。亦可例如一次、複數次施用，和/或經一個或多個延長時段進行施用。
如本文所使用，術語「T細胞介導的反應」指由T細胞、包括作用T細胞(例如CD8+細胞)及輔助T細胞(例如CD4+細胞)介導的反應。T細胞介導的反應包括例如T細胞毒性及增殖。
如本文所使用，術語「細胞毒性T淋巴球(CTL)反應」指由細胞毒性T細胞誘導的免疫反應。CTL反應主要由CD8+T細胞介導。
如本文所使用，術語「抑制」或「阻斷」(例如，提及CD73結合或活性的抑制/阻斷)可互換使用，且涵蓋部分及完全抑制/阻斷二者。
如本文所使用，「癌症」指以身體中的不受控異常細胞生長為特徵的一大類疾病。由於失調的細胞分裂可形成惡性的腫瘤或細胞，它們侵襲鄰近組織且可經由淋巴系統或血流轉移至身體遠端。
如本文所使用，術語「治療」或「處理」指對受試者實施任何類型的干預或過程，或向受試者施用活性劑，以逆轉、緩和、改善、抑制或減緩或預防與疾病相關的症狀、併發症、病況或生物化學標記的進展、發展、嚴重程度或復發。預防指對未患疾病的受試者施用來預防疾病發生，或者若疾病發生，最小化其影響。
「血液惡性疾病」包括淋巴瘤、白血病、骨髓瘤或淋巴樣惡性疾病以及脾及淋巴結癌症。示例性淋巴瘤包括B細胞淋巴瘤及T細胞淋巴瘤二者。B細胞淋巴瘤包括霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphomas)及大多數非霍奇金氏淋巴瘤二者。B細胞淋巴瘤的非限制性實施例包括彌漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、粘膜相關淋巴組織淋巴瘤、小細胞淋巴球性淋巴瘤(與慢性淋巴球性白血病重疊)、外套細胞淋巴瘤(MCL)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、縱膈大B細胞淋巴瘤、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症(Waldenstrom macroglobulinemia)、結節性邊緣帶B細胞淋巴瘤、脾邊緣帶淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、原發性積液淋巴瘤、淋巴瘤樣肉芽腫病。T細胞淋巴瘤的非限制性實施例包括結節外T細胞淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、退行性大細胞淋巴瘤及血管免疫母細胞性T細胞淋巴瘤。血液惡性疾病亦包括白血病，例如(但不限於)繼發性白血病、慢性淋巴球性白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病及急性淋巴母細胞性白血病。血液惡性疾病進一步包括骨髓瘤，例如(但不限於)多發性骨髓瘤及鬱積型多發性骨髓瘤。術語「血液惡性疾病」涵蓋其他血液和/或B細胞或T細胞相關的癌症。
術語「有效劑量(effective dose或effective dosage)」定義為足以達成或至少部分達成期望效應的量。藥物或治療劑的「治療有效量」或「治療有效劑量」是該藥物在單獨使用或與另一治療劑組合使用時可促進疾病消退的任何量，該疾病消退由疾病症狀的嚴重程度的減輕、無疾病症狀期的頻率及持續時間的增加、或因患病所致的損害或失能的防止所證實。藥物的「預防有效量」或「預防有效劑量」是該藥物在單獨施用或與另一治療劑組合施用於具有罹患疾病或遭受疾病復發的風險的受試者時，抑制該疾病的發展或復發的量。治療劑或預防劑促進疾病消退或抑制疾病的發展或復發的能力可使用本發明所述技術領域中具通常知識者已知的多種方法來評估，例如在臨床試驗期間在人受試者中評估，在可預測在人中的功效的動物模型系統中評估，或通過在體外測定中測定藥劑的活性來評估。
舉例而言，抗癌劑是在受試者中減緩癌症進展或促進癌症消退的藥物。在優選實施方案中，治療有效量的藥物促進癌症消退至消除癌症的程度。「促進癌症消退」意指在患者中施用有效量的單獨藥物或藥物與抗癌劑的組合可降低腫瘤生長或大小、腫瘤壞死，降低至少一種疾病症狀的嚴重程度，增加無疾病症狀期的頻率及持續時間，預防因患病所致的損害或失能，或以其他方式改善疾病症狀。藥理學有效性指藥物促進患者中的癌症消退的能力。生理學安全性指由於藥物施用所致的毒性或在細胞、器官和/或生物體層面上的其他不良生理學效應(不良效應)的可接受的低水平。
舉例而言，對於腫瘤的治療，相對於未經治療的受試者，治療有效量或劑量的藥物優選抑制至少約20%、更優選至少約40%、甚至更優選至少約60%、且仍更優選至少約80%的細胞生長或腫瘤生長。在最佳實施方案中，治療有效量或劑量的藥物完全抑制細胞生長或腫瘤生長，即優選 抑制100%的細胞生長或腫瘤生長。可使用下文所述的測定評估化合物抑制腫瘤生長的能力。作為另一選擇，組合物的此特性可通過檢查化合物抑制細胞生長的能力來評估，該抑制可在體外通過本發明所述技術領域中具通常知識者已知的測定來測量。在本文所述的其他優選實施方案中，可觀察到腫瘤消退且可持續至少約20天、更優選至少約40天或甚至更優選至少約60天的時段。
術語「患者」及「受試者」指接受預防或治療性治療的任何人或非人動物。例如，可使用本文所述的方法及組合物來治療患有癌症的受試者。術語「非人動物」包括所有脊椎動物，例如哺乳動物及非哺乳動物，例如非人靈長類動物、綿羊、狗、牛、雞、兩棲動物、爬行動物等。
「藥學上可接受的」意指物質或組合物必須在化學和/或毒理學上與包含配製品的其他成分和/或正用其治療的哺乳動物相容。
「藥學上可接受的載體」涵蓋藥學上可接受的載體、賦形劑、和稀釋劑，並且意指涉及從一個器官或受試者的身體部分向另一個器官或受試者的身體部分攜帶或運輸藥物藥劑的材料、組合物或媒介物，如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或包封材料。
實施例
實例1：CD73抗體的篩選與鑑定
用人CD73胞外結構域重組蛋白(huCD73,SEQ ID NO：1)免疫C57/BL6小鼠。用50μg huCD73蛋白和完全弗氏佐劑的乳液進行第一次免疫(腹膜腔內注射)，用25μg huCD73蛋白和不完全弗氏佐劑的乳液進行第二次免疫(皮下注射)，用25μg huCD73蛋白和不完全弗氏佐劑的乳液進行的第三次免疫(腹膜腔內注射)，用由25μg huCD73蛋白和不完全弗氏佐劑的乳液進行第四次免疫(皮下注射)，最後用50μg huCD73蛋白進行最後加強 免疫(腹膜腔內注射)。在該加強後4天採用電融合的方法將免疫脾細胞與SP2/0細胞進行融合，以製備雜交瘤細胞。相同方法免疫小鼠並製備噬菌體庫抗體。用ELISA和流式細胞術進行初級篩選，得到32個雜交瘤抗體和2個噬菌體抗體結合人和食蟹猴CD73。之後用表現huCD73的293T/17細胞系(293T/17-huCD73)進行進一步酶活性阻斷活性篩選，最終得到5個具有CD73酶活性阻斷功能的複製。
實例2：間接ELISA測定抗體與CD73的結合
應用間接ELISA方法測定各陽性複製與可溶性huCD73蛋白的結合能力。包被可溶性huCD73，將樣品倍比稀釋後與蛋白孵育，之後加入HPR標記的二抗孵育，最後加入TMB顯色，終止後讀取OD450。如圖1所示，分別來自3個複製的抗體66F2A8D6(SEQ ID NOs：118及119)、94A12G11F2(SEQ ID NOs：120及121)、191C3A8B9(SEQ ID NOs：122及123)以及2個噬菌體嵌合抗體S1B5(SEQ ID NOs：13及14)、JB24Chi(SEQ ID NOs：26及28)都以次奈米莫耳級的親和力與可溶性重組CD73結合。
Figure 109118879-A0305-02-0087-36
實例3：流式細胞術測定抗體與細胞表面天然CD73的結合
該方法利用293T/17-huCD73細胞系測定了5個抗體與表現在細胞表面的天然CD73的結合能力。將倍比稀釋的抗體與293T/17-huCD73細胞孵育 後，加入螢光標記的檢測抗體，讀取螢光強度值，計算EC50。如圖2所示，所有抗體均與細胞表面的CD73以奈米莫耳或次奈米莫耳級親和力結合。
Figure 109118879-A0305-02-0088-37
實例4：CD73抗體對可溶性CD73重組蛋白酶活性阻斷的評價
該測試評估CD73抗體阻斷可溶性huCD73重組蛋白5’外核苷酸酶活性的能力。抗體的結合阻斷了huCD73重組蛋白將AMP分解為腺苷和無機磷酸鹽的活性，而AMP與ATP競爭，抑制了螢光素酶激發光的能力。因此，阻斷型抗體減弱光發射，阻斷結果表示為RLU值降低。如圖3所示，66F2A8D6、94A12G11F2、191C3A8B9、抗體S1B5以及JB24Chi都對可溶性CD73重組蛋白酶活性有抑制作用，IC50均在奈米莫耳級或次奈米莫耳級。
Figure 109118879-A0305-02-0088-38
實例5：CD73抗體對細胞表面5’外核苷酸酶活性的阻斷
該方法基於293T/17-huCD73和293T/17-cynoCD73細胞系測定CD73抗體對細胞表面5’外核苷酸酶活性的阻斷能力，進一步確認5個抗體的生化活性。如圖4所示，所有抗體均能抑制細胞表面CD73的5’外核苷酸酶活性。其中191C3A8B9抗體對huCD73的抑制活性弱於對猴CD73的抑制活性，其餘抗體對人/猴CD73抑制活性接近。所有抗體的IC50均處於10-11~10-12M級別(表4)。
Figure 109118879-A0305-02-0089-39
實例6：CD73抗體對AMP介導的人CD4+T細胞增殖抑制的逆轉作用
抗體阻斷CD73酶活性，腺苷的產生受到抑制，從而解除腺苷對人CD4+T細胞增殖抑制。該方法確認了CD73抗體在體外解除AMP介導的CD4+T細胞增殖抑制的能力；同時採用CellTiter-Glo(普洛麥格公司，Promega)試劑，檢測抗體阻斷人CD4+T細胞CD73酶活性的能力；以及用ELISA方法檢測細胞培養上清中的IFN-γ水平。
結果顯示66F2A8D6、94A12G11F2、S1B5以及JB24Chi能夠逆轉AMP介導的CD4+T細胞增殖抑制作用(圖5)，且EC50值較接近，均在10-11~10-12M級別(表5)。
Figure 109118879-A0305-02-0090-40
與CD4+ T細胞增殖實驗結果類似，66F2A8D6、94A12G11F2、S1B5以及JB24Chi均有較好的酶活性抑制作用(圖6)，且各抗體的抑制能力均在10-11~10-12M級別(表6)。
Figure 109118879-A0305-02-0090-41
利用ELISA檢測試劑盒(達科為，Dakewe)檢測細胞上清中IFN-γ的水平，如圖7所示，66F2A8D6、94A12G11F2、S1B5、JB24Chi能刺激CD4+ T細胞釋放IFN-γ，各抗體刺激T細胞分泌IFN-γ的EC50均在10-11~10-12M級別(表7)。
Figure 109118879-A0305-02-0090-42
Figure 109118879-A0305-02-0091-46
實例7：CD73抗體介導的CD73內吞實驗
採用Fab-ZAP saporin試劑(高級靶向系統公司(Advanced Targeting Systems))檢測66-hIgG2(SEQ ID NOs：39及40)、94-hIgG2(SEQ ID NOs：51及53)、S1B5、JB24Chi抗體在MDA-MB-231細胞上介導的內吞作用。如圖8所示，4個嵌合抗體均以劑量依賴方式介導了CD73內吞作用，各抗體的IC50均在10-11M水平。
Figure 109118879-A0305-02-0091-45
實例8：抗體人源化
根據Kabat系統對CDR和框架區編號對各抗體CDR區和框架區胺基酸編號(見表I)。應用CDR移植法對94A12G11F和JB24Chi兩個抗體進行人源化改造。分別將兩個鼠源抗體與人源抗體的序列同源性和結構相似性進行分析，在此基礎上分別將鼠源抗體的CDR移植到一系列人源抗體框架區。經ELISA初步篩選得到3個JB24Chi人源化抗體和3個94A12G11F人源化抗體，分別命名為JB24H2L1(SEQ ID NOs：71及73)、JB24H3L2(SEQ ID NOs：72及74)、JB24H3L3(SEQ ID NOs：72及75)、JB94H1L3(SEQ ID NOs：81及85)、JB94H2L1(SEQ ID NOs：82及84)、JB94H3L3(SEQ ID NOs：83 及85)，94A12G11F鼠源抗體Fv與人IgG1和人kappa恆定區構成的嵌合抗體命名為JB94Chi(SEQ ID NOS：52及53)。
實例9：人源化抗體、嵌合抗體親和力測定
間接ELISA測定人源化抗體的親和力：用1ug/ml huCD73重組蛋白包被96孔ELISA板，50ul/孔，每孔200ul PBST洗板3次，室溫下用1% BSA封閉1小時，每孔200ul PBST洗板3次。加入100ul/孔倍比稀釋的抗體室溫孵育1小時。每孔200ul PBST洗板3次，每孔加入100ul 1：5000稀釋的HRP標記二抗，室溫孵育1小時。每孔200ul PBST洗板3次，在黑暗中每孔加入100ul的顯影緩衝液室溫反應5分鐘。530nm激發，590nm發射，570nm截止讀取OD值。結果如圖9所示，人源化抗體與親本抗體同抗原的親和力相近(表9)。
Figure 109118879-A0305-02-0092-47
流式細胞術測定：用表現huCD73和cynoCD73的293T/17細胞評價人源化抗體的結合能力。將重組細胞重懸於PBS緩衝液中，加入2x106個細胞於96孔U型板中，將倍比稀釋的人源化抗體在4℃冰箱或冰上孵育1h，然後4℃ 1500rpm離心3min，PBS緩衝液洗滌三次，再用稀釋好的APC標記的 山羊抗人多複製抗體APC Goat anti-human IgG(Biolegend)於4℃冰箱或冰上孵育30min，最後如上所述將細胞用PBS洗滌三次，置於MACSQuant流式細胞儀檢測分析。用GraphPad Prism軟體生成數據圖並統計親和力數據。結果如圖10所示，JB24Chi和94A12G11F的人源化抗體與親本抗體EC50值接近，均在10-11M至10-12M級別(表10)。
Figure 109118879-A0305-02-0093-48
實例10：人源化抗體對細胞表面5’外核苷酸酶活性的阻斷
該方法利用293T/17-huCD73細胞系測定CD73抑制的AMP水解，進一步確認人源化抗體的生化活性。結果如圖11所示，JB24H3L3、JB94H1L3、94H1L3hIgG2(SEQ ID NOs：85及124)等人源化抗體酶阻斷活性均處於10-11~10-12M級別(表11)。
Figure 109118879-A0305-02-0093-49
Figure 109118879-A0305-02-0094-50
另外，用U87-MG細胞測定CD73催化的AMP水解，進一步確認人源化抗體的生化活性。將U87-MG細胞用胰酶消化後用MEM培養基調整細胞密度至4×105個/ml，向96孔板中加入50μl/孔。用MEM培養基將人源化抗體倍比稀釋，50μl/孔加入細胞孔中，37℃孵育1h。向每孔中加入100μl濃度為360μM的AMP，37℃孵育1h。1500rpm離心3min，轉移一定體積的培養上清至不透明的96孔平底板(Costar,3912)中，再添加2X ATP溶液，使其反應終濃度為25uM。最後根據Promega說明書1：1加入相應體積的CellTiter Glo試劑，室溫平衡5分鐘後，在Perkin-Elmer Envision酶標儀上讀取luminescence值，通過測量ATP水平來確定細胞CD73酶活性。用GraphPad Prism軟體生成數據圖並統計酶動力學數據。JB24Chi人源化抗體和JB94Chi的人源化抗體的阻斷活性如圖12所示，IC50均在次奈米莫耳級(表12)。
Figure 109118879-A0305-02-0094-51
實例11：人源化抗體對AMP介導的人CD4+T細胞增殖抑制的逆轉作用
該方法確定了人源化CD73抗體在體外解除AMP介導的CD4+T細胞增殖抑制的能力；同時採用CellTiter-Glo(普洛麥格公司，Promega)試劑，檢測抗體阻斷人CD4+T細胞CD73酶活性的能力；以及用ELISA方法檢測細胞培養上清中的IFN-γ水平。
JB24Chi的人源化抗體活力和JB94Chi的人源化抗體活性結果如圖13所示，其中，JB94H1L3、94H1L3hIgG2和JB94H3L3抗體活力均在10-11~10-12M級別(表13)。
Figure 109118879-A0305-02-0095-52
利用ELISA檢測試劑盒(達科為，Dakewe)檢測細胞上清中IFN-γ的水平，如圖14所示，除JB24H3L3外，各人源化抗體刺激T細胞分泌IFN-γ的EC50均在10-11~10-12M級別(表14)。
Figure 109118879-A0305-02-0095-53
Figure 109118879-A0305-02-0096-54
利用ELISA檢測試劑盒(達科為，Dakewe)檢測細胞上清中IFN-γ的水平，如表14所示，除JB24H3L3外，各人源化抗體刺激T細胞分泌IFN-γ的EC50均在10-11~10-12M級別。
實施例12：人源化抗體對A375異種移植模型腫瘤的5’外核苷酸酶活性的抑制
B-NDG鼠(購自百奧賽圖)皮下接種A375細胞，3d後以10mg/kg劑量腹腔注射(ip)抗體JB94H1L3、94H3L3 hIgG1(SEQ ID NOS：91 and 85)或PBS，2次/周，給藥2周，分別在給藥後的1d、2d、3d和7d收穫腫瘤。將新鮮組織放於盛有液氮的小杯中，使組織迅速結冰，用OCT包埋，切成5-6μm厚度室溫晾乾，腫瘤切片用4℃預冷的丙酮固定20min，晾乾後-80℃貯存。將腫瘤切片從-80℃冰箱中取出，室溫平衡5-10min，放入50mM的Tris-馬來酸緩衝液(pH7.4，含2mM CaCl2和0.25M蔗糖)中室溫預孵育1h，1h後棄掉預孵育緩衝液，再次放入50mM的Tris-馬來酸緩衝液(pH7.4，含5mM MnCl2、2mM硝酸鉛、2.5%葡聚糖T200、2.5mM左旋咪唑和400μM AMP)，37℃孵育1.5h；用自來水漂洗三次，切片用1%(NH4)2S室溫孵育1min，隨後用自來水迅速漂洗三次；切片用蘇木精和伊紅複染，脫水，二甲苯透明， 顯微鏡下觀察拍照。棕色表明存在活化的CD73，棕色缺失表明抗體阻斷了CD73的酶活性。結果見圖15A及圖15B所示。
以上結果可知：JB94H1L3和94H3L3 hIgG1均能顯著降低異種移植動物模型腫瘤的5’外核苷酸酶活性，且與給藥時間相關。停藥後第3天，JB94H1L3處理組CD73酶活性降至最低點，之後到第7天稍稍回升，94H3L3 hIgG1處理組從給藥後第一天開始CD73酶活性緩慢回升。綜上所述，兩個抗體均表現出了良好的抑制CD73活性的作用。
實施例13：人源化抗體在A375人黑色素瘤異種移植模型上的抑瘤效果
將A375人黑色素瘤細胞接種於NCG小鼠的右側肋部皮下，將PBMC用PBS重懸後接種於小鼠體內。腫瘤生長至50-100mm3時給藥，共2組，給予JB94H1L3(10mg/kg)或溶媒對照。每週使用遊標卡尺對腫瘤體積進行2次的測量，測量腫瘤的長徑和短徑，其體積計算公式為：體積=0.5×長徑×短徑2。結果如圖16所示，JB94H1L3表現出顯著的腫瘤生長抑制作用。
使用以下材料和方法得到上述結果：
抗體製備：
雜交瘤抗體製備：復甦雜交瘤細胞株用含10% FBS的DMEM培養基培養7-10d，收集細胞培養上清，1000r/min離心10min，上清液用Protein G HP Spin Trap(通用電氣醫療集團，GE Healthcare)純化。使用UV5nano(密理博，millipore)微量分光光度計定量。
重組抗體表現製備：將活性為99%的ExpiCHO(賽默飛世爾，Thermo Fisher Scientific)細胞至密度為6×106個/ml，將細胞於1500rpm/min，5min離心後重懸細胞。按說明書製備表現載體的DNA稀釋液、ExpiFectamine CHO reagent稀釋液和DNA-ExpiFectamine CHO複合物，將 DNA-ExpiFectamine複合物移至細胞培養液中。於37℃，8% CO2搖床中培養8天。11000rpm，離心10min收取細胞上清。用NGC chromatography system(伯樂，Bio-Rad)蛋白純化儀和rProtein G Beads 4FF預裝柱純化抗體。使用UV5nano(密理博，millipore)微量分光光度計定量。
測定1：間接ELISA
將1ug/ml重組CD73蛋白包被在ELISA板(康寧公司，Coning)上，4℃孵育過夜。第二天用PBS緩衝液洗板5次，加入200ul/孔的2%脫脂奶粉封閉；將一定劑量範圍的CD73抗體在室溫下孵育1h；然後用PBST洗滌緩衝液(PBS，0.05%吐溫20)洗滌5次，加入HRP偶聯的山羊抗小鼠IgG(H+L)(普洛麥格，Promega)室溫孵育1h以檢測結合的抗CD73抗體；再洗板5次，加入TMB(生命技術公司，Life Technologies)顯色5至10min；最後添加1N HCl終止反應，並且在450nm處測量OD值。用GraphPad Prism軟體生成數據圖並統計親和力數據。
測定2：流式細胞術
在96孔U型細胞培養板中分別加入100μL 2×105個/孔的表現huCD73(293T/17-huCD73)、cynoCD73(293T/17-cynoCD73)或moCD73(293T/17-moCD73)的細胞，將待檢樣品梯度稀釋後4℃孵育1h，洗滌後每孔加入100μL APC標記二抗孵育30min，洗滌後上機檢測，讀取螢光值。用GraphPad Prism軟體生成數據圖並統計親和力數據。
重組宿主細胞系293T/17-huCD73，293T/17-cynoD73，293T/17-moD73的構建：利用帶有huCD73、cynoCD73和moCD73基因且具有嘌呤黴素抗性的PLVX-EF1a病毒載體，用TransIT®-293轉染試劑轉染293T/17細胞，約2天後替換含有嘌呤黴素的完全培養基培養，待細胞擴大培養後，採用有限梯度稀釋方法挑選單個複製細胞，並用PE標記的抗 huCD73、cynoCD73和moCD73抗體檢測轉染後細胞表面抗原。然後將該細胞擴大培養，用於酶活性測定及流式細胞術。
測定3：可溶CD73酶活性阻斷試驗
基於可溶CD73重組蛋白測定抗體的酶活性阻斷功能。在500ng/ml CD73重組蛋白存在下，將一定劑量範圍的CD73抗體加入96孔平底板中37℃孵育1小時；然後向每個孔中加入終濃度為180uM的AMP和25uM的ATP，37℃下孵育30min；轉出一定體積的細胞上清於空白板中，將含螢光素酶的CellTiterr-Glo(普洛麥格，Promega)按1：1的比例加入上述孔中，並在室溫下避光平衡5分鐘，最後用Enspire酶標儀(珀金埃爾默公司，Perkin Elmer)測量發光值，用GraphPad Prism軟體生成數據圖並統計酶動力學數據。
如下所述評估酶抑制的百分比：
○ATP+AMP：最大螢光素酶抑制(100%)
○ATP+AMP+CD73：無螢光素酶抑制(0%)
按如下公式計算殘留的CD73活性：
Figure 109118879-A0305-02-0099-55
測定4：基於細胞的CD73酶活性阻斷試驗
將293T/17-huCD73細胞消化處理，1500rpm離心3分鐘後棄上清，用無血清DMEM培養基重懸細胞，並用Biorad TC20細胞計數儀計數。調整細胞密度，將細胞以8,000個細胞，50uL/孔鋪到96孔板中；加入50uL倍比稀釋的抗體溶液於相應孔中，置於37℃、5% CO2培養箱中孵育1個小時；再加入100uL終濃度為180uM的AMP溶液，置於37℃、5% CO2下孵育1小時；然後將細胞板1500rpm離心3分鐘，轉移一定體積的培養上清至不透明 的96孔平底板(Costar,3912)中，再添加2X ATP溶液，使其反應終濃度為25uM。最後根據Promega說明書1：1加入相應體積的CellTiter Glo試劑，室溫平衡5分鐘後，在Perkin-Elmer Envision酶標儀上讀取luminescence值，通過測量ATP水平來確定細胞CD73酶活性。用GraphPad Prism軟體生成數據圖並統計酶動力學數據。
測定5：Fab ZAP內吞試驗
第一天將2000cells/孔的MDA-MB-231細胞，以50ul/孔鋪於96孔平底板中，37℃，5% CO2孵育過夜；第二天用80nM Fab-ZAP human試劑(高級靶向系統公司，Advanced Targeting Systems)將抗體倍比稀釋至一定劑量範圍，室溫孵育30min，使Fab-ZAP與待檢抗體結合，之後抗體預混液，以50ul/孔加入MDA-MB-231細胞孔中，37℃，5% CO2孵育3天後，取細胞板加入CTG試劑(普洛麥格公司，Promega)裂解細胞2min，再室溫平衡5min，用Enspire酶標儀(珀金埃爾默公司，Perkin Elmer)測量發光值，GraphPad Prism軟體統計細胞生長曲線。
<110> 北京加科思新藥研發有限公司(JACOBIO PHARMACEUTICALS CO.,LTD.)
<120> 對CD73具有特異性的結合分子及其用途
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<211> 532
<212> PRT
<213> Homo sapiens
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Figure 109118879-A0305-02-0101-56
Figure 109118879-A0305-02-0102-57
Figure 109118879-A0305-02-0103-58
Figure 109118879-A0305-02-0104-59
Figure 109118879-A0305-02-0105-60
Figure 109118879-A0305-02-0106-61
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<211> 532
<212> PRT
<213> Macaca fascicularis
<400> 2
Figure 109118879-A0305-02-0106-62
Figure 109118879-A0305-02-0107-63
Figure 109118879-A0305-02-0108-64
Figure 109118879-A0305-02-0109-65
Figure 109118879-A0305-02-0110-66
Figure 109118879-A0305-02-0111-67
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Figure 109118879-A0305-02-0111-68
Figure 109118879-A0305-02-0112-69
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Figure 109118879-A0305-02-0113-72
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<211> 17
<212> PRT
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<400> 6
Figure 109118879-A0305-02-0114-73
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<212> PRT
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Figure 109118879-A0305-02-0114-74
Figure 109118879-A0305-02-0115-75
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Figure 109118879-A0305-02-0115-76
Figure 109118879-A0305-02-0116-77
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Figure 109118879-A0305-02-0116-78
Figure 109118879-A0305-02-0117-79
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Figure 109118879-A0305-02-0117-80
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Figure 109118879-A0305-02-0118-81
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Figure 109118879-A0305-02-0118-82
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<223> synthetic polypeptide
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Figure 109118879-A0305-02-0118-83
Figure 109118879-A0305-02-0119-84
Figure 109118879-A0305-02-0120-85
Figure 109118879-A0305-02-0121-86
Figure 109118879-A0305-02-0122-87
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Figure 109118879-A0305-02-0125-90
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Figure 109118879-A0305-02-0125-91
Figure 109118879-A0305-02-0126-92
Figure 109118879-A0305-02-0127-93
Figure 109118879-A0305-02-0128-94
Figure 109118879-A0305-02-0129-95
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Figure 109118879-A0305-02-0129-96
Figure 109118879-A0305-02-0130-97
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Figure 109118879-A0305-02-0131-99
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Figure 109118879-A0305-02-0132-101
Figure 109118879-A0305-02-0133-102
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<212> PRT
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Figure 109118879-A0305-02-0133-103
Figure 109118879-A0305-02-0134-104
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Figure 109118879-A0305-02-0134-105
Figure 109118879-A0305-02-0135-106
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Figure 109118879-A0305-02-0135-107
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Figure 109118879-A0305-02-0136-109
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<212> PRT
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<223> synthetic polypeptide
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Figure 109118879-A0305-02-0136-111
Figure 109118879-A0305-02-0137-112
Figure 109118879-A0305-02-0138-113
Figure 109118879-A0305-02-0139-114
Figure 109118879-A0305-02-0140-115
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Figure 109118879-A0305-02-0142-117
Figure 109118879-A0305-02-0143-118
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Figure 109118879-A0305-02-0146-121
Figure 109118879-A0305-02-0147-122
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Figure 109118879-A0305-02-0151-129
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Figure 109118879-A0305-02-0152-131
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Figure 109118879-A0305-02-0153-133
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Figure 109118879-A0305-02-0162-146
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Figure 109118879-A0305-02-0163-148
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Figure 109118879-A0305-02-0170-160
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Figure 109118879-A0305-02-0176-167
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Figure 109118879-A0305-02-0178-170
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Figure 109118879-A0305-02-0182-177
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Figure 109118879-A0305-02-0186-185
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Figure 109118879-A0305-02-0187-187
Figure 109118879-A0305-02-0188-188
Figure 109118879-A0305-02-0189-189
Figure 109118879-A0305-02-0190-190
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Figure 109118879-A0305-02-0191-192
Figure 109118879-A0305-02-0192-193
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Figure 109118879-A0305-02-0197-201
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Figure 109118879-A0305-02-0199-203
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Figure 109118879-A0305-02-0200-205
Figure 109118879-A0305-02-0201-206
Figure 109118879-A0305-02-0202-207
Figure 109118879-A0305-02-0203-208
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Figure 109118879-A0305-02-0205-211
Figure 109118879-A0305-02-0206-212
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Figure 109118879-A0305-02-0223-235
Figure 109118879-A0305-02-0224-236
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Figure 109118879-A0305-02-0227-240
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Figure 109118879-A0305-02-0231-245
Figure 109118879-A0305-02-0232-246
Figure 109118879-A0305-02-0233-247
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Figure 109118879-A0305-02-0239-254
Figure 109118879-A0305-02-0240-255
Figure 109118879-A0305-02-0241-256
Figure 109118879-A0305-02-0242-257
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Figure 109118879-A0305-02-0243-259
Figure 109118879-A0305-02-0244-260
Figure 109118879-A0305-02-0245-261
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Figure 109118879-A0305-02-0248-265
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Figure 109118879-A0305-02-0249-267
Figure 109118879-A0305-02-0250-268
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<213> Artificial Sequence
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Figure 109118879-A0305-02-0252-270
Figure 109118879-A0305-02-0253-271
Figure 109118879-A0305-02-0254-272
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<213> Artificial Sequence
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Figure 109118879-A0305-02-0256-274
Figure 109118879-A0305-02-0257-275
Figure 109118879-A0305-02-0258-276
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<211> 324
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Figure 109118879-A0305-02-0262-281
Figure 109118879-A0305-02-0263-282
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Figure 109118879-A0305-02-0264-284
Figure 109118879-A0305-02-0265-285
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<211> 1347
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Figure 109118879-A0305-02-0266-286
Figure 109118879-A0305-02-0267-287
Figure 109118879-A0305-02-0268-288
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<213> Artificial Sequence
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<400> 99
Figure 109118879-A0305-02-0268-289
Figure 109118879-A0305-02-0269-290
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<211> 645
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<400> 100
Figure 109118879-A0305-02-0270-291
Figure 109118879-A0305-02-0271-292
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<211> 645
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<213> Artificial Sequence
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<400> 101
Figure 109118879-A0305-02-0271-293
Figure 109118879-A0305-02-0272-294
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<211> 354
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Figure 109118879-A0305-02-0272-295
Figure 109118879-A0305-02-0273-296
<210> 103
<211> 354
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<213> Artificial Sequence
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Figure 109118879-A0305-02-0273-297
Figure 109118879-A0305-02-0274-298
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<400> 104
Figure 109118879-A0305-02-0274-299
Figure 109118879-A0305-02-0275-300
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Figure 109118879-A0305-02-0276-302
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Figure 109118879-A0305-02-0277-304
Figure 109118879-A0305-02-0278-305
Figure 109118879-A0305-02-0279-306
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Figure 109118879-A0305-02-0279-307
Figure 109118879-A0305-02-0280-308
Figure 109118879-A0305-02-0281-309
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Figure 109118879-A0305-02-0282-310
Figure 109118879-A0305-02-0283-311
Figure 109118879-A0305-02-0284-312
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Figure 109118879-A0305-02-0284-313
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Figure 109118879-A0305-02-0286-315
Figure 109118879-A0305-02-0287-316
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Figure 109118879-A0305-02-0287-317
Figure 109118879-A0305-02-0288-318
Figure 109118879-A0305-02-0289-319
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Figure 109118879-A0305-02-0289-320
Figure 109118879-A0305-02-0290-321
Figure 109118879-A0305-02-0291-322
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Figure 109118879-A0305-02-0292-323
Figure 109118879-A0305-02-0293-324
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Figure 109118879-A0305-02-0293-325
Figure 109118879-A0305-02-0294-326
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Figure 109118879-A0305-02-0295-327
Figure 109118879-A0305-02-0296-328
Figure 109118879-A0305-02-0297-329
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Figure 109118879-A0305-02-0297-330
Figure 109118879-A0305-02-0298-331
Figure 109118879-A0305-02-0299-332
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Figure 109118879-A0305-02-0302-335
Figure 109118879-A0305-02-0303-336
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Figure 109118879-A0305-02-0304-337
Figure 109118879-A0305-02-0305-338
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Figure 109118879-A0305-02-0306-339
Figure 109118879-A0305-02-0307-340
Figure 109118879-A0305-02-0308-341
Figure 109118879-A0305-02-0309-342
Figure 109118879-A0305-02-0310-343
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Figure 109118879-A0305-02-0310-345
Figure 109118879-A0305-02-0311-346
Figure 109118879-A0305-02-0312-347
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Figure 109118879-A0305-02-0312-348
Figure 109118879-A0305-02-0313-349
Figure 109118879-A0305-02-0314-350
Figure 109118879-A0305-02-0315-351
Figure 109118879-A0305-02-0316-352
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<212> PRT
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Figure 109118879-A0305-02-0316-353
Figure 109118879-A0305-02-0317-354
Figure 109118879-A0305-02-0318-355
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Figure 109118879-A0305-02-0319-356
Figure 109118879-A0305-02-0320-357
Figure 109118879-A0305-02-0321-358
Figure 109118879-A0305-02-0322-360
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Figure 109118879-A0305-02-0323-361
Figure 109118879-A0305-02-0324-362
Figure 109118879-A0305-02-0325-363
Figure 109118879-A0305-02-0326-364
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Figure 109118879-A0305-02-0327-365
Figure 109118879-A0305-02-0328-366
Figure 109118879-A0305-02-0329-367
Figure 109118879-A0305-02-0330-368
Figure 109118879-A0305-02-0331-369
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Figure 109118879-A0305-02-0331-370
Figure 109118879-A0305-02-0332-371
Figure 109118879-A0305-02-0333-372
Figure 109118879-A0305-02-0334-373
Figure 109118879-A0305-02-0335-374

Claims (39)

  1. 一種與CD73結合且抑制CD73活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含含有HCDR1、HCDR2、HCDR3序列的重鏈可變區；以及含有LCDR1、LCDR2、LCDR3序列的輕鏈可變區，其中：(a)所述HCDR1包含SEQ ID NO：43所示的胺基酸序列；(b)所述HCDR2包含SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列；(c)所述HCDR3包含SEQ ID NO：45所示的胺基酸序列；(d)所述LCDR1包含SEQ ID NO：48所示的胺基酸序列；(e)所述LCDR2包含SEQ ID NO：49所示的胺基酸序列；以及(f)所述LCDR3包含SEQ ID NO：50所示的胺基酸序列。
  2. 如請求項1所述的與CD73結合且抑制CD73活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含：(i)重鏈可變區(VH)，所述重鏈可變區包含與選自以下組的胺基酸序列之一具有至少85%同源性的胺基酸序列：SEQ ID NO：41、76、77和78所示的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3；以及(ii)輕鏈可變區(VL)，所述輕鏈可變區包含與選自以下組的胺基酸序列之一具有至少85%同源性的胺基酸序列：SEQ ID NO：46、79和80所示的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3。
  3. 如請求項1所述的與CD73結合且抑制CD73活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含：1)重鏈可變區(VH)，所述重鏈可變區包含與SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及輕鏈可變區(VL)，所述輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：46所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；2)重鏈可變區(VH)，所述重鏈可變區包含與SEQ ID NO：76所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及輕鏈可變區(VL)，所述輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：79所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；3)重鏈可變區(VH)，所述重鏈可變區包含與SEQ ID NO：76所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及輕鏈可變區(VL)，所述輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：80所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3； 4)重鏈可變區(VH)，所述重鏈可變區包含與SEQ ID NO：77所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及輕鏈可變區(VL)，所述輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：79所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈保護區包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；5)重鏈可變區(VH)，所述重鏈可變區包含與SEQ ID NO：77所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及輕鏈可變區(VL)，所述輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：80所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；6)重鏈可變區(VH)，所述重鏈可變區包含與SEQ ID NO：78所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及輕鏈可變區(VL)，所述輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：79所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈保護區包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；7)重鏈可變區(VH)，所述重鏈可變區包含與SEQ ID NO：78所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及輕鏈可變區(VL)，所述輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：80所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3。
  4. 根據請求項3所述的與CD73結合且抑制CD73活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區(VH)，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO：76所示的胺基酸序列，以及輕鏈可變區(VL)，所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO：80所示的胺基酸序列。
  5. 如請求項1所述的與CD73結合且抑制CD73活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述的分離的抗體是IgG。
  6. 如請求項1所述的與CD73結合且抑制CD73活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述的分離的抗體是IgG1、IgG2或IgG4。
  7. 如請求項1所述的與CD73結合且抑制CD73活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述的分離的抗體是單株抗體、嵌合抗體、人源化抗體、人改造抗體、人抗體、Fv、單鏈抗體(scFv)、Fab、Fab’，Fab’-SH或者F(ab’)2。
  8. 如請求項1所述的與CD73結合且抑制CD73活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含重鏈和輕鏈，其中：(I)所述重鏈包含與選自以下組的胺基酸序列之一具有至少85%同源性的胺基酸序列：SEQ ID NO：51、52、81、82、83、86、87、90、91、120、124、125、126和127所示的胺基酸序列，並且所述重鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3；以及(II)所述輕鏈包含與選自以下組的胺基酸序列之一具有至少85%同源性的胺基酸序列：SEQ ID NO：53、84、85、88、89和121所示的胺基酸序列，並且所述輕鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3。
  9. 如請求項1所述的與CD73結合且抑制CD73活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分包含：1)重鏈，其包含與SEQ ID NO：51所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：53所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；2)重鏈，其包含與SEQ ID NO：52所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：53所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；3)重鏈，其包含與SEQ ID NO：81所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及 輕鏈，其包含與SEQ ID NO：84所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；4)重鏈，其包含與SEQ ID NO：81所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：85所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；5)重鏈，其包含與SEQ ID NO：82所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：84所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；6)重鏈，其包含與SEQ ID NO：82所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：85所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；7)重鏈，其包含與SEQ ID NO：83所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及 輕鏈，其包含與SEQ ID NO：84所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；8)重鏈，其包含與SEQ ID NO：83所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：85所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；9)重鏈，其包含與SEQ ID NO：90所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：84所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；10)重鏈，其包含與SEQ ID NO：90所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：85所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；11)重鏈，其包含與SEQ ID NO：91所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及 輕鏈，其包含與SEQ ID NO：84所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；12)重鏈，其包含與SEQ ID NO：91所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：85所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；13)重鏈，其包含與SEQ ID NO：86所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：88所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；14)重鏈，其包含與SEQ ID NO：86所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：89所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；15)重鏈，其包含與SEQ ID NO：87所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及 輕鏈，其包含與SEQ ID NO：88所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；16)重鏈，其包含與SEQ ID NO：87所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：89所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；17)重鏈，其包含與SEQ ID NO：124所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：84所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；18)重鏈，其包含與SEQ ID NO：124所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：85所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；19)重鏈，其包含與SEQ ID NO：125所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及 輕鏈，其包含與SEQ ID NO：84所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3；20)重鏈，其包含與SEQ ID NO：125所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述重鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：43的HCDR1，包含SEQ ID NO：44的HCDR2，包含SEQ ID NO：45的HCDR3，以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：85所示的胺基酸序列具有至少85%同源性的胺基酸序列，並且所述輕鏈包含以下胺基酸序列：包含SEQ ID NO：48的LCDR1，包含SEQ ID NO：49的LCDR2，包含SEQ ID NO：50的LCDR3。
  10. 一種與CD73結合且抑制CD73活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其含有由SEQ ID NO：81組成的重鏈，以及含有由SEQ ID NO：85組成的輕鏈。
  11. 一種與CD73結合且抑制CD73活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其含有由SEQ ID NO：82組成的重鏈，以及含有由SEQ ID NO：84組成的輕鏈。
  12. 一種與CD73結合且抑制CD73活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其含有由SEQ ID NO：83組成的重鏈，以及含有由SEQ ID NO：85組成的輕鏈。
  13. 一種與CD73結合且抑制CD73活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其含有由SEQ ID NO：124組成的重鏈，以及含有由SEQ ID NO：85組成的輕鏈。
  14. 一種與CD73結合且抑制CD73活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其含有由SEQ ID NO：125組成的重鏈，以及含有由SEQ ID NO：85組成的輕鏈。
  15. 如請求項1所述的與CD73結合且抑制CD73活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述的分離的抗體或其抗原結合部分為CD73拮抗劑或CD73的5’核苷酶拮抗劑。
  16. 如請求項15所述的與CD73結合且抑制CD73活性的分離的抗體或其抗原結合部分，其中，所述CD73是人CD73。
  17. 一種如請求項1至16中任一項所述的與CD73結合且抑制CD73活性的分離的抗體或其抗原結合部分在製備用於降低受試者中的腺苷水準的藥物中的用途。
  18. 如請求項17所述的用途，其中，所述受試者是患有腫瘤的受試者。
  19. 如請求項18所述的用途，其中，所述受試者具有表現CD73的腫瘤細胞和/或含有CD73的腫瘤微環境。
  20. 一種分離的核酸組合物，其包含：(I)第一核酸，所述第一核酸包含選自SEQ ID NO：42、102、103和104所示的核苷酸序列之一；以及(II)第二核酸，所述第二核酸包含選自SEQ ID NO：47、105和106所示的核苷酸序列之一。
  21. 如請求項20所述的分離的核酸組合物，其包含： 1)含有SEQ ID NO：42所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：47所示的所述第二核酸；2)含有SEQ ID NO：102所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：105所示的所述第二核酸；3)含有SEQ ID NO：102所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：106所示的所述第二核酸；4)含有SEQ ID NO：103所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：105所示的所述第二核酸；5)含有SEQ ID NO：103所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：106所示的所述第二核酸；6)含有SEQ ID NO：104所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：105所示的所述第二核酸；7)含有SEQ ID NO：104所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：106所示的所述第二核酸。
  22. 一種表現載體組合物，其包含：(I)第一表現載體，其中，所述的第一表現載體含有選自SEQ ID NO：42、102、103和104所示的核苷酸序列之一；以及(II)第二表現載體，其中，所述的第二表現載體含有選自SEQ ID NO：47、105和106所示的核苷酸序列之一。
  23. 如請求項22所述的表現載體組合物，其包含：1)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：42所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：47所示的核苷酸序列； 2)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：102所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：105所示的核苷酸序列；3)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：102所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：106所示的核苷酸序列；4)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：103所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：105所示的核苷酸序列；5)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：103所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：106所示的核苷酸序列；6)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：104所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：105所示的核苷酸序列；或者7)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：104所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：106所示的核苷酸序列。
  24. 一種表現載體，其包含：(I)第一核酸序列，其中，所述的第一核酸序列含有選自SEQ ID NO：42、102、103和104所示的核苷酸序列之一；以及(II)第二核酸序列，其中，所述的第二核酸序列含有選自SEQ ID NO：47、105和106所示的核苷酸序列之一。
  25. 如請求項24所述的表現載體，其包含： 1)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：42所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：47所示的核苷酸序列；2)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：102所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：105所示的核苷酸序列；3)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：102所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：106所示的核苷酸序列；4)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：103所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：105所示的核苷酸序列；5)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：103所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：106所示的核苷酸序列；6)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：104所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：105所示的核苷酸序列；或者7)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：104所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：106所示的核苷酸序列。
  26. 一種分離的核酸組合物，其包含： (I)第一核酸，所述第一核酸包含選自SEQ ID NO：107、108、109、112、113、116和117所示的核苷酸序列之一；以及(II)第二核酸，所述第二核酸包含選自SEQ ID NO：110、111、114和115所示的核苷酸序列之一。
  27. 如請求項26所述的分離的核酸組合物，其包含：1)含有SEQ ID NO：107所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：110所示的所述第二核酸；2)含有SEQ ID NO：107所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：111所示的所述第二核酸；3)含有SEQ ID NO：108所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：110所示的所述第二核酸；4)含有SEQ ID NO：108所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：111所示的所述第二核酸；5)含有SEQ ID NO：109所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：110所示的所述第二核酸；6)含有SEQ ID NO：109所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：111所示的所述第二核酸；7)含有SEQ ID NO：116所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：110所示的所述第二核酸；8)含有SEQ ID NO：116所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：111所示的所述第二核酸；9)含有SEQ ID NO：117所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：110所示的所述第二核酸； 10)含有SEQ ID NO：117所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：111所示的所述第二核酸；11)含有SEQ ID NO：112所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：114所示的所述第二核酸；12)含有SEQ ID NO：112所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：115所示的所述第二核酸；13)含有SEQ ID NO：113所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：114所示的所述第二核酸；14)含有SEQ ID NO：113所示的所述第一核酸，以及含有SEQ ID NO：115所示的所述第二核酸。
  28. 一種表現載體組合物，其包含：(I)第一表現載體，其中，所述的第一表現載體含有選自SEQ ID NO：107、108、109、112、113、116和117所示的核苷酸序列之一；以及(II)第二表現載體，其中，所述的第二表現載體含有選自SEQ ID NO：110、111、114和115所示的核苷酸序列之一。
  29. 如請求項28所述的表現載體組合物，其包含：1)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：107所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：110所示的核苷酸序列；2)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：107所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：111所示的核苷酸序列； 3)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：108所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：110所示的核苷酸序列；4)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：108所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：111所示的核苷酸序列；5)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：109所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：110所示的核苷酸序列；6)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：109所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：111所示的核苷酸序列；7)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：116所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：110所示的核苷酸序列；8)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：116所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：111所示的核苷酸序列；9)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：117所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：110所示的核苷酸序列；10)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：117所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：111所示的核苷酸序列； 11)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：112所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：114所示的核苷酸序列；12)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：112所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：115所示的核苷酸序列；13)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：113所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：114所示的核苷酸序列；或者14)第一表現載體，其中，所述第一表現載體含有SEQ ID NO：113所示的核苷酸序列；以及第二表現載體，其中，所述第二表現載體含有SEQ ID NO：115所示的核苷酸序列。
  30. 一種表現載體，其包含：(1)第一核酸序列，所述第一核酸序列含有選自SEQ ID NO：107、108、109、112、113、116和117所示的核苷酸序列之一；以及(II)第二核酸序列，所述第二核酸序列含有選自SEQ ID NO：110、111、114和115所示的核苷酸序列之一。
  31. 如請求項30所述的表現載體，其包含：1)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：107所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：110所示的核苷酸序列； 2)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：107所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：111所示的核苷酸序列；3)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：108所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：110所示的核苷酸序列；4)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：108所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：111所示的核苷酸序列；5)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：109所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：110所示的核苷酸序列；6)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：109所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：111所示的核苷酸序列；7)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：116所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：110所示的核苷酸序列；8)第一核酸序列載體，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：116所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：111所示的核苷酸序列；9)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：117所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：110所示的核苷酸序列； 10)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：117所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：111所示的核苷酸序列；11第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：112所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：114所示的核苷酸序列；12)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：112所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：115所示的核苷酸序列；13)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：113所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：114所示的核苷酸序列；或者14)第一核酸序列，其中，所述第一核酸序列含有SEQ ID NO：113所示的核苷酸序列；以及第二核酸序列體，其中，所述第二核酸序列含有SEQ ID NO：115所示的核苷酸序列。
  32. 一種細胞，含有如請求項22、23、28和29中任一項所述的表現載體組合物；或含有如請求項24、25、30和31中任一項所述的表現載體。
  33. 一種製備與CD73結合且抑制CD73活性的分離的抗體或其抗原結合部分的方法，包括：在請求項32所述的細胞中表現所述與CD73結合且抑制CD73活性的分離的抗體或其抗原結合部分，並且從所述細胞中分離出所述與CD73結合且抑制CD73活性的抗分離的抗體或其抗原結合部分。
  34. 一種藥物組合物，其包含如請求項1至16中任一項所述的與CD73結合且抑制CD73活性的分離的抗體或其抗原結合部分，及藥學上可接受載體。
  35. 一種試劑盒，其包含如請求項1至16中任一項所述的與CD73結合且抑制CD73活性的分離的抗體或其抗原結合部分。
  36. 一種如請求項1至16中任一項所述的與CD73結合且抑制CD73活性的抗體或其抗原結合片段，或如請求項34所述的藥物組合物在製備用於治療腫瘤的藥物中的用途。
  37. 如請求項36所述的用途，其中，所述的腫瘤選自實體瘤或血液瘤。
  38. 如請求項51所述的應用，其中所述的腫瘤選自膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、卵巢癌、前列腺癌、睪丸癌、食道癌、胃腸道癌、胰腺癌、結腸直腸癌、結腸癌、腎癌、頭頸癌、肺癌、胃癌、骨癌、肝癌、甲狀腺癌、皮膚癌、中樞神經系統腫瘤、淋巴瘤、白血病、骨髓瘤、肉瘤和病毒相關癌。
  39. 根據請求項38所述的用途，其中所述肺癌為小細胞肺癌或非小細胞肺癌。
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