KR20180134837A - 인간화된 항-cd73 항체 - Google Patents

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KR20180134837A
KR20180134837A KR1020187019279A KR20187019279A KR20180134837A KR 20180134837 A KR20180134837 A KR 20180134837A KR 1020187019279 A KR1020187019279 A KR 1020187019279A KR 20187019279 A KR20187019279 A KR 20187019279A KR 20180134837 A KR20180134837 A KR 20180134837A
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에밀리 피쵸네 그리핀
리차드 에이 밀러
게하르트 요한 프레이
화이 원 창
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코버스 파마슈티칼스, 인크.
바이오아트라, 엘엘씨
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Abstract

본원에는 특히 CD73에 결합할 수 있는 인간화된 1E9 항체가 제공된다. 상기 인간화된 항체는 암 치료에 유용하다. 인간화된 1E9 항체를 코딩하는 핵산 및 본원에 제공된 인간화된 항체를 사용하여 세포 증식을 억제하는 방법이 추가로 제공된다.

Description

인간화된 항-CD73 항체
[관련 출원에 대한 상호 참조]
본 출원은 2015년 12월 9일자로 출원된 미국 가출원 번호 제62/265,357호, 2016년 2월 1일자로 출원된 미국 가출원 번호 제62/289,694호, 및 2016년 6월 6일자로 출원된 미국 가출원 번호 제62/346,327호에 대한 우선권을 주장하고 본원에서 이들은 이들의 전문이 참조로서 모든 목적을 위해 인용된다.
[아스키 텍스트 파일(ASCII TEXT FILE)로서 제출된 서열 목록, 표 또는 컴퓨터 프로그램 목록 첨부물에 대한 언급]
50,442 바이트이고, 머신 포맷 IBM-PC, MS 윈도우 운영 체제에서 2016년 12월 9일자로 생성된 48517-508001WO_ST25.TXT 파일로 작성된 서열 목록은 본원에 참조로 인용된다.
글리코실-포스파티딜이노시톨-부착된 CD73 항원은 세포외 아데노신의 생성에서 율속 효소로서 간주된다(문헌참조: Stagg J, Smyth MJ. Extracellular adenosine triphosphate and adenosine in cancer. Oncogene. 2010;29:5346-58. doi: 10.1038/onc.2010.292). CD73은 다양한 유형의 암 세포 상에서 항상성으로 고수준으로 발현됨을 알 수 있다. CD73-생성된 아데노신은 적응성 항-종양 면역 반응을 억제하여 종양 성장 및 전이를 촉진시키는 것으로 추정된다. 당업계에서는 CD73의 촉매 활성을 억제하고 순환하는 종양 세포가 분출되고 군집화하는 능력을 차단하여 전이를 억제하는 항체에 기초한 CD73 암 치료법이 요구되고 있다. 본 발명은 당업계에서 이들 요구 및 다른 요구 사항들을 해결한다.
한 양태에서, 마우스 CDR L1, 마우스 CDR L2, 또는 마우스 CDR L3을 포함하는 인간화된 경쇄 가변 영역 및 마우스 CDR H1, 마우스 CDR H2, 또는 마우스 CDR H3을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함하는 인간화된 1E9 항체가 제공된다.
한 양태에서, 항체(예를 들어, 인간화된 1E9 항체)가 제공된다. 항체는 경쇄(예를 들어, 인간화된 경쇄) 가변 영역 및 중쇄(예를 들어, 인간화된 중쇄) 가변 영역을 포함한다. 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(i) 서열번호 1에 제시된 CDR L1(예를 들어, 마우스 CDR L1), 서열번호 2에 제시된 CDR L2(예를 들어, 마우스 CDR L2), 서열번호 3에 제시된 CDR L3(예를 들어, 마우스 CDR L3) 및
(ii) 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 아스파르트산 또는 루신, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 라이신 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 74에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 76에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 77에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 100에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 104에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 알라닌, 카밧 위치 3에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 페닐알라닌 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 13에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 루신, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 15에 상응하는 위치에서 발린 또는 프롤린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 아스파르트산, 카밧 위치 22에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 45에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 58에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 티로신, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 페닐알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 티로신, 또는 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 페닐알라닌. 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(i) 서열번호 4에 제시된 CDR H1(예를 들어, 마우스 CDR H1), 서열번호 5에 제시된 CDR H2(예를 들어, 마우스 CDR H2), 서열번호 6에 제시된 CDR H3(예를 들어, 마우스 CDR H3) 및
(ii) 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 트레오닌, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 라이신, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린 또는 메티오닌, 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 라이신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 루신, 또는 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산.
한 양태에서, 인간화된 1E9 항체가 제공된다. 1E9 항체는 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함한다. 인간화된 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(i) 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1, 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2, 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3, 및
(ii) 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 아스파르트산 또는 루신, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 라이신 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 74에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 76에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 77에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 100에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 104에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 알라닌, 카밧 위치 3에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 페닐알라닌 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 13에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 루신, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 15에 상응하는 위치에서 발린 또는 프롤린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 아스파르트산, 카밧 위치 22에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 45에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 58에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 티로신, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 페닐알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 티로신, 또는 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 페닐알라닌. 인간화된 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(i) 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1, 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2, 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3, 및
(ii) 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 트레오닌, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 라이신, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린 또는 메티오닌, 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 라이신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 루신, 또는 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산.
또 다른 양태에서, 경쇄(예를 들어, 인간화된 경쇄) 가변 영역 및 중쇄(예를 들어, 인간화된 중쇄) 가변 영역을 포함하는 항체(예를 들어, 인간화된 1E9 항체)가 제공되고, 여기서, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 7의 서열을 포함한다.
또 다른 양태에서, 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함하는 인간화된 1E9 항체가 제공되고, 여기서, 상기 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 7의 서열을 포함한다.
한 양태에서, 본원에서 경쇄(예를 들어, 인간화된 경쇄) 가변 영역 및 중쇄(예를 들어, 인간화된 중쇄) 가변 영역을 포함하는 IgG1(예를 들어, 인간화된 IgG1) 항체가 제공되고, 여기서, 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 1에 제시된 CDR L1(예를 들어, 마우스 CDR L1), 서열번호 2에 제시된 CDR L2(예를 들어, 마우스 CDR L2), 서열번호 3에 제시된 CDR L3(예를 들어, 마우스 CDR L3)을 포함하고, 여기서, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 4에 제시된 CDR H1(예를 들어, 마우스 CDR H1), 서열번호 5에 제시된 CDR H2(예를 들어, 마우스 CDR H2), 서열번호 6에 제시된 CDR H3(예를 들어, 마우스 CDR H3)을 포함한다.
한 양태에서, 본원에서 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함하는 인간화된 IgG1 항체가 제공되고, 여기서, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역은 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1, 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2, 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3을 포함하고, 여기서, 상기 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1, 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2, 및 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3을 포함한다.
한 양태에서, 본원에서 경쇄(예를 들어, 인간화된 경쇄) 가변 영역 및 중쇄(예를 들어, 인간화된 중쇄) 가변 영역을 포함하는 IgG4(예를 들어, 인간화된 IgG4) 항체가 제공되고, 여기서, 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 1에 제시된 CDR L1(예를 들어, 마우스 CDR L1), 서열번호 2에 제시된 CDR L2(예를 들어, 마우스 CDR L2), 서열번호 3에 제시된 CDR L3(예를 들어, 마우스 CDR L3)을 포함하고, 여기서, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 4에 제시된 CDR H1(예를 들어, 마우스 CDR H1), 서열번호 5에 제시된 CDR H2(예를 들어, 마우스 CDR H2), 서열번호 6에 제시된 CDR H3(예를 들어, 마우스 CDR H3)을 포함한다.
한 양태에서, 본원에서 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함하는 인간화된 IgG4 항체가 제공되고, 여기서, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역은 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1, 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2, 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3을 포함하고, 여기서, 상기 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1, 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2, 및 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3을 포함한다.
한 양태에서, 구현예를 포함하는 본원에 제공된 1E9 항체(예를 들어, 인간화된 1E9 항체)를 코딩하는 분리된 핵산이 제공된다.
한 양태에서, 구현예를 포함하는 본원에 제공된 인간화된 1E9 항체를 코딩하는 분리된 핵산이 제공된다.
또 다른 양태에서, 구현예를 포함하는 본원에 제공된 IgG1 항체(예를 들어, 인간화된 IgG1 항체)를 코딩하는 분리된 핵산이 제공된다.
또 다른 양태에서, 구현예를 포함하는 본원에 제공된 인간화된 IgG1 항체를 코딩하는 분리된 핵산이 제공된다.
또 다른 양태에서, 구현예를 포함하는 본원에 제공된 IgG4 항체(예를 들어, 인간화된 IgG4 항체)를 코딩하는 분리된 핵산이 제공된다.
또 다른 양태에서, 구현예를 포함하는 본원에 제공된 인간화된 IgG4 항체를 코딩하는 분리된 핵산이 제공된다.
또 다른 양태에서, 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 치료적 유효량의 1E9 항체(예를 들어, 인간화된 1E9 항체) 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물이 제공된다.
또 다른 양태에서, 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 치료적 유효량의 인간화된 1E9 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물이 제공된다.
또 다른 양태에서, 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 치료적 유효량의 IgG1 항체(예를 들어, 인간화된 IgG1 항체) 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물이 제공된다.
또 다른 양태에서, 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 치료적 유효량의 인간화된 IgG1 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물이 제공된다.
또 다른 양태에서, 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 치료적 유효량의 IgG4 항체(예를 들어, 인간화된 IgG4 항체) 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물이 제공된다.
또 다른 양태에서, 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 치료적 유효량의 인간화된 IgG4 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물이 제공된다.
한 양태에서, 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 치료적 유효량의 1E9 항체(예를 들어, 인간화된 1E9 항체)를 대상체에게 투여함으로써 대상체에서 암을 치료하는 것을 포함한다.
한 양태에서, 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 치료적 유효량의 인간화된 1E9 항체를 대상체에게 투여함으로써 대상체에서 암을 치료하는 것을 포함한다.
한 양태에서, 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 치료적 유효량의 IgG1 항체(예를 들어, 인간화된 IgG1 항체)를 대상체에게 투여함으로써 대상체에서 암을 치료하는 것을 포함한다.
한 양태에서, 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 치료적 유효량의 인간화된 IgG1 항체를 대상체에게 투여함으로써 대상체에서 암을 치료하는 것을 포함한다.
한 양태에서, 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 치료적 유효량의 IgG4 항체(예를 들어, 인간화된 IgG4 항체)를 대상체에게 투여함으로써 대상체에서 암을 치료하는 것을 포함한다.
한 양태에서, 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 치료적 유효량의 인간화된 IgG4 항체를 대상체에게 투여함으로써 대상체에서 암을 치료하는 것을 포함한다.
한 양태에서, 세포의 증식을 억제하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 (i) 세포를, 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 바와 같은 IgG1 항체(예를 들어, 인간화된 IgG1 항체)와 접촉시킴으로써 접촉된 세포를 형성함을 포함한다. (ii) IgG1 항체(예를 들어, 인간화된 IgG1 항체)는 상기 접촉된 세포 상의 CD73 항원과 결합하도록 함으로써 세포의 증식을 억제한다.
한 양태에서, 세포의 증식을 억제하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 (i) 세포를, 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 바와 같은 인간화된 IgG1 항체와 접촉시킴으로써 접촉된 세포를 형성함을 포함한다. (ii) 인간화된 IgG1 항체는 상기 접촉된 세포 상의 CD73 항원과 결합하도록 함으로써 세포의 증식을 억제한다.
한 양태에서, 세포의 증식을 억제하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 (i) 세포를, 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 바와 같은 IgG4 항체(예를 들어, 인간화된 IgG4 항체)와 접촉시킴으로써 접촉된 세포를 형성함을 포함한다. (ii) IgG4 항체(예를 들어, 인간화된 IgG4 항체)는 상기 접촉된 세포 상의 CD73 항원과 결합하도록 함으로써 세포의 증식을 억제한다.
한 양태에서, 세포의 증식을 억제하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 (i) 세포를, 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 바와 같은 인간화된 IgG4 항체와 접촉시킴으로써 접촉된 세포를 형성함을 포함한다. (ii) 인간화된 IgG4 항체는 상기 접촉된 세포 상의 CD73 항원과 결합하도록 함으로써 세포의 증식을 억제한다.
또 다른 양태에서, 항-CD73 항체가 제공된다. 상기 항-CD73은 1E9 항체와 동일한 에피토프에 결합하고, 상기 1E9 항체는 CDR L1(예를 들어, 마우스 CDR L1), CDR L2(예를 들어, 마우스 CDR L2), 또는 CDR L3(예를 들어, 마우스 CDR L3)을 포함하는 경쇄 가변 영역(예를 들어, 인간화된 경쇄 가변 영역) 및 CDR H1(예를 들어, 마우스 CDR H1), CDR H2(예를 들어, 마우스 CDR H2), 또는 CDR H3(예를 들어, 마우스 CDR H3)을 포함하는 중쇄 가변 영역(예를 들어, 인간화된 중쇄 가변 영역)을 포함한다.
또 다른 양태에서, 항-CD73 항체가 제공된다. 상기 항-CD73은 1E9 항체와 동일한 에피토프에 결합하고, 상기 1E9 항체는 마우스 CDR L1, 마우스 CDR L2, 또는 마우스 CDR L3을 포함하는 인간화된 경쇄 가변 영역 및 마우스 CDR H1, 마우스 CDR H2, 또는 마우스 CDR H3을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함한다.
또 다른 양태에서, 항-CD73 항체가 제공된다. 상기 항-CD73은 1E9 항체와 동일한 에피토프에 결합하고, 상기 1E9 항체는 경쇄 가변 영역(예를 들어, 인간화된 경쇄 가변 영역) 및 중쇄 가변 영역(예를 들어, 인간화된 중쇄 가변 영역)을 포함한다. 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(i) 서열번호 1에 제시된 CDR L1(예를 들어, 마우스 CDR L1), 서열번호 2에 제시된 CDR L2(예를 들어, 마우스 CDR L2), 서열번호 3에 제시된 CDR L3(예를 들어, 마우스 CDR L3) 및
(ii) 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 아스파르트산 또는 루신, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 라이신 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 74에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 76에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 77에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 100에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 104에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 알라닌, 카밧 위치 3에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 페닐알라닌 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 13에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 루신, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 15에 상응하는 위치에서 발린 또는 프롤린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 아스파르트산, 카밧 위치 22에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 45에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 58에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 티로신, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 페닐알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 티로신, 또는 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 페닐알라닌. 인간화된 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(i) 서열번호 4에 제시된 CDR H1(예를 들어, 마우스 CDR H1), 서열번호 5에 제시된 CDR H2(예를 들어, 마우스 CDR H2), 서열번호 6에 제시된 CDR H3(예를 들어, 마우스 CDR H3) 및
(ii) 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 트레오닌, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 라이신, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린 또는 메티오닌, 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 라이신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 루신, 또는 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산.
또 다른 양태에서, 항-CD73 항체가 제공된다. 상기 항-CD73은 1E9 항체와 동일한 에피토프에 결합하고, 상기 1E9 항체는 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함한다. 인간화된 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(i) 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1, 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2, 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3, 및
(ii) 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 아스파르트산 또는 루신, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 라이신 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 74에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 76에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 77에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 100에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 104에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 알라닌, 카밧 위치 3에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 페닐알라닌 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 13에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 루신, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 15에 상응하는 위치에서 발린 또는 프롤린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 아스파르트산, 카밧 위치 22에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 45에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 58에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 티로신, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 페닐알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 티로신, 또는 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 페닐알라닌. 인간화된 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(i) 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1, 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2, 및 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3, 및
(ii) 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 트레오닌, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 라이신, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린 또는 메티오닌, 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 라이신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 루신, 또는 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산.
도 1: 음성 선별에 의해 단리된 인간 T 세포는 5일 동안 지정된 치료제와 함께 배양하였다. 세포 증식은 세포 추적 바이올렛 트랙커 염료의 희석에 의해 분석한다.
도 2: 음성 선별에 의해 단리된 인간 T 세포는 5일 동안 지정된 치료제와 함께 배양하였다. 유동 세포측정에 의해 분석된 CD25 발현.
도 3a 내지 도 3e: CD73을 발현하는 인간 유방 세포주인 MDA-MB-231 세포를 37℃에서 1시간 동안 특정 농도 범위에 대해 지정된 인간화된 항체(도 3a에서 CPX-002; 도 3b에서 CPX-005; 도 3c에서 CPX-006; 도 3d에서 CPX-004; 도 3e에서 CPX-003)로 인큐베이트하였다. 세포는 포스페이트 부재 완충액 중에서 세척하고 후속적으로 37℃에서 20분 동안 250 μM AMP로 인큐베이트하였다. 조건화된 배지를 각각의 웰로부터 수거하고 포스페이트 수준을 말라카이트 녹색 기반 검출 키트(Sensolyte MG phosphate kit, AnaSPEC)를 사용하여 결정하였다. 절대 포스페이트 값은 표준 곡선으로의 내삽법에 의해 결정하였다. 검정은 3개의 상이한 pH 조건: 7.2, 6.7, 또는 6.3에서 수행하였다. 세포는 항체 첨가 전 세척함에 의해 적당한 pH의 완충액 중에서 평형화시켰다. 검정의 나머지는 지정된 pH의 완충액에서 수행하였다.
도 4a 및 도 4b: 도 4a: 중쇄 가변 도메인의 정렬. 상위 10개 히트의 가변 도메인은 모체 클론 BAP094-01(키메라 1E9 LC(서열번호 28))에 정렬시켰다. 모체 클론과 동일한 아미노산 잔기들은 점으로 나타내어 아미노산 차이만을 나타낸다. 4개의 고유한 HC 가변 도메인이 상위 10개 히트 내에서 동정되었다. 서열은 프레임워크 3, 프레임워크 2 및 프레임워크 1의 정체성을 기준으로 열거(상부에서 하부로)한다. CDR은 박스로 나타낸다. BAP094-hum01-HC에 대해 열거된 서열은 서열번호 42에 상응하고; BAP094-hum02-HC에 대해 열거된 서열은 서열번호 43에 상응하고; BAP094-hum06-HC에 대해 열거된 서열은 서열번호 47에 상응하고; BAP094-hum07-HC에 대해 열거된 서열은 서열번호 48에 상응하고; BAP094-hum08-HC에 대해 열거된 서열은 서열번호 49에 상응하고; BAP094-hum03-HC에 대해 열거된 서열은 서열번호 44에 상응하고; BAP094-hum09-HC에 대해 열거된 서열은 서열번호 50에 상응하고; BAP094-hum04-HC에 대해 열거된 서열은 서열번호 45에 상응하고; BAP094-hum05-HC에 대해 열거된 서열은 서열번호 46에 상응하고; BAP094-hum10-HC에 대해 열거된 서열은 서열번호 51에 상응한다. 도 4b: 경쇄 가변 도메인의 정렬. 상위 히트의 가변 도메인은 모체 클론 BAP094-01(키메라 1E9 LHC(서열번호 29))에 정렬시켰다. 모체 클론과 동일한 아미노산 잔기들은 점으로 나타내어 아미노산 차이만을 나타낸다. 5개의 고유한 LC 가변 도메인이 상위 10개 히트 내에서 동정되었다. 서열은 프레임워크 3, 프레임워크 2 및 프레임워크 1의 정체성을 기준으로 열거(상부에서 하부로)한다. CDR은 박스로 나타낸다. BAP094-hum02-LC에 대해 열거된 서열은 서열번호 32에 상응하고; BAP094-hum03-LC에 대해 열거된 서열은 서열번호 33에 상응하고; BAP094-hum04-LC에 대해 열거된 서열은 서열번호 34에 상응하고; BAP094-hum01-LC에 대해 열거된 서열은 서열번호 31에 상응하고; BAP094-hum07-LC에 대해 열거된 서열은 서열번호 37에 상응하고; BAP094-hum08-LC에 대해 열거된 서열은 서열번호 38에 상응하고; BAP094-hum09-LC에 대해 열거된 서열은 서열번호 39에 상응하고; BAP094-hum10-LC에 대해 열거된 서열은 서열번호 40에 상응하고; BAP094-hum05-LC에 대해 열거된 서열은 서열번호 35에 상응하고; BAP094-hum06-LC에 대해 열거된 서열은 서열번호 36에 상응한다.
도 5: 선택된 상위 10개의 인간화된 변이체의 세포 기반 ELISA. CHO 세포는 6웰 플레이트에 씨딩하고, BAP094-01(즉, 서열번호 30의 가변 경쇄 및 서열번호 41의 가변 중쇄를 포함하는 키메라 1E9 항체)로 형질감염시키고, 인간화된 변이체 또는 벡터 만을 선택하고 10% 태아 소 혈청을 갖는 DMEM에서 37℃에서 배양하였다. 상등액은 형질감염 후 48시간에 수거하였다. 상등액 중에 항체의 농도는 미지의 값이 표준 곡선으로 내삽되는 정량 ELISA 프로토콜에 의해 결정하였다. 상등액은 성장 배지(10% 혈청을 갖는 DMEM)에서 50 ng/ml로 희석하였다. 100 μl의 희석된 상등액을 MDA-MB231 세포를 함유하는 96웰에 첨가하고(3 x 104 MDA-MB231 세포/웰은 전날에 씨딩하였다) 1시간 동안 실온에서 인큐베이트하였다. HRP(Promega #W4031)와 접합된 항-인간 IgG(H+L)는 검출을 위한 2차 항체로서 사용하였다. 반응은 TMB를 웰에 첨가한 후 6분 째에 중지시키고 즉시 판독한다.
도 6: CPX-006은 IFN-감마의 AMP-의존성 억제를 완화한다. 인간 말초 혈액 단핵 세포를 1 ug/mL의 항-CD3 및 항-CD28와 함께 인큐베이트하여 T 세포 증식을 자극하였다. 1 mM AMP를 세포 CD73에 대한 기질로서 배양물에 첨가하여 면역억제 아데노신으로 전환시켰다. 배양물은 또한 다양한 범위의 농도로 항-CD73(CPX-006) 또는 이소타입 대조군과 함께 인큐베이트하였다. 배양 4일 후, 인터페론-감마(IFN-감마) 수준은 세포 배양 배지에서 알파LISA에 의해 측정하였다. 형광 신호는 존재하는 IFN-감마의 양에 비례한다. CPX-006은 IFN-감마 분비에 의한 측정시 T 세포 활성의 AMP-의존성 억제를 완화시켰다.
도 7: CPX-006은 T 세포 증식의 AMP-의존성 억제를 완화한다. 인간 말초 혈액 단핵 세포를 세포 추적 바이올렛 염색으로 표지시키고 1 ug/mL의 항-CD3 및 항-CD28과 함께 인큐베이트하여 T 세포 증식을 자극하였다. 1 mM AMP를 세포 CD73에 대한 기질로서 배양물에 첨가하여 면역억제 아데노신으로 전환시켰다. 배양물을 또한 다양한 범위의 농도로 항-CD73(CPX-006) 또는 이소타입 대조군과 함께 인큐베이트하였다. 배양 4일 후, 세포를 형광단 표지된 항-CD3 항체로 염색하고 유동 세포측정에 의해 분석하였다. CD3+ T 세포의 증식은 세포 추적 바이올렛 염료의 희석을 진행한 이벤트로서 게이팅하였다. CPX-006은 T 세포 증식의 AMP-의존성 억제를 완화시켰다.
정의
본 발명의 다양한 구현예 및 양태를 나타내고 본원에 기재하였지만 상기 구현예 및 양태는 단지 예시를 위해 제공되었음이 당업자에게 자명할 것이다. 많은 변형, 변화, 및 치환이 이제 본 발명으로부터 벗어나는 것 없이 당업자에게 고려될 것이다. 본원에 기재된 발명의 구현예에 대한 다양한 대안이 본 발명을 수행하는 데 사용될 수 있는 것으로 이해되어야만 한다.
본원에 사용된 섹션 표제는 단지 구성적 목적을 위한 것이고 기재된 주요 요지를 제한하는 것으로서 해석되지 말아야 한다. 제한 없이 특허, 특허 출원, 잡지, 책, 매뉴얼, 및 논문을 포함하는, 본원에 인용된 모든 문헌, 또는 문헌의 일부는 이로써 임의의 목적을 위해 이의 전문이 참조로 명확히 인용된다.
항체는 복잡한 내부 구조를 갖는 거대 복합 분자(분자량 ∼150,000 또는 약 1320 아미노산)이다. 천연 항체 분자는 2개의 동일한 쌍의 폴리펩티드 쇄를 함유하고 이의 각각의 쌍은 하나의 경쇄 및 하나의 중쇄를 갖고 있다. 각각의 경쇄 및 중쇄는 이어서 2개의 영역: 표적 항원에 결합하는 데 관여하는 가변("V") 영역 및 면역계의 다른 성분들과 상호작용하는 불변("C") 영역으로 이루어진다. 경쇄 및 중쇄 가변 영역은 3-차원 공간에서 함께 항원(예를 들어, 세포 표면 상의 수용체)에 결합하는 가변 영역을 형성한다. 각각의 경쇄 또는 중쇄 가변 영역 내에 상보성 결정 영역("CDR")으로 불리우는 3개의 짧은 분절(평균 길이 10개의 아미노산)이 있다. 항체 가변 도메인에서 6개의 CDR(경쇄로부터 3개 및 중쇄로부터 3개)은 3차원 공간에서 함께 폴딩되어 표적 항원 상으로 도킹하는 실제 항체 결합 부위를 형성한다. CDR의 위치 및 길이는 카밧, 이 등(Kabat, E. et al.)(Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, 1983, 1987)에 의해 정확하게 한정되었다. CDR에 함유되지 않는 가변 영역의 일부는 프레임워크("FR")로 불리우고, 이는 CDR에 대한 환경을 조성한다.
본원에 제공된 바와 같은 용어 "CDR L1", "CDR L2" 및 "CDR L3"은 항체의 가변 경(L) 쇄의 상보성 결정 영역(CDR) 1, 2, 및 3을 언급한다. 또한, 본원에 제공된 바와 같은 용어 "CDR H1", "CDR H2" 및 "CDR H3"은 항체의 가변 중(H) 쇄의 상보성 결정 영역(CDR) 1, 2, 및 3을 언급한다.
용어 "항체"는 당업계에서 통상적으로 공지된 의미에 따라 사용된다. 항체는 예를 들어, 온전한 면역글로불린으로서 또는 다양한 펩티다제를 사용한 분해에 의해 생성되는 다수의 잘 특징 분석된 단편으로서 존재한다. 따라서, 예를 들어, 펩신은 힌지 영역에서 디설파이드 연결체 아래에서 항체를 분해하여 그 자체가 디설파이드 결합에 의해 VH-CH1에 연결된 경쇄인 Fab 이량체로서 F(ab)'2를 생성한다. F(ab)'2은 약한 조건하에 환원되어 힌지 영역에서 디설파이드 연결체가 파괴됨으로써 F(ab)'2 이량체가 Fab' 단량체로 전환된다. Fab' 단량체는 필수적으로 힌지 영역의 일부를 갖는 Fab이다(문헌참조: Fundamental Immunology (Paul ed., 3d ed. 1993). 다양한 항체 단편이 온전한 항체의 분해물 측면에서 정의되어 있지만 당업자는 상기 단편들이 화학적으로 또는 재조합 DNA 방법을 사용함에 의해 드 노보(de novo)로 합성될 수 있음을 인지할 것이다. 따라서, 본원에 사용된 바와 같은 용어 항체는 또한 전체 항체의 변형에 의해 생성된 항체 단편들 또는 재조합 DNA 방법을 사용하여 드 노보로 합성된 것들(예를 들어, 단일쇄 Fv) 또는 파아지 디스플레이 라이브러리를 사용하여 동정된 것들을 포함한다(문헌참조: 예를 들어, McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990)).
모노클로날 또는 폴리클로날 항체의 제조를 위해 당업계에 공지된 임의의 기술이 사용될 수 있다(문헌참조: 예를 들어, Kohler & Milstein, Nature 256:495-497 (1975); Kozbor et al., Immunology Today 4:72(1983); Cole et al., pp. 77-96 in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy (1985)). "모노클로날" 항체(mAb)는 단일 클론으로부터 유래된 항체를 언급한다. 단일쇄 항체의 제조 기술(미국 특허 제4,946,778호)을 채택하여 본 발명의 폴리펩티드에 대한 항체를 제조할 수 있다. 또한, 유전자전이 마우스 또는 다른 포유동물과 같은 다른 유기체를 사용하여 인간화된 항체를 발현시킬 수 있다. 또한, 파아지 디스플레이 기술을 사용하여 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 항체 및 이종체 Fab 단편을 동정할 수 있다(문헌참조: 예를 들어, McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990); Marks et al., Biotechnology 10:779-783(1992)).
mAb의 에피토프는 mAb가 결합하는 이의 항원 영역이다. 2개의 항체는 각각이 경쟁적으로 다른 항체의 항원에의 결합을 억제(차단)하는 경우 동일한 또는 중첩된 에피토프에 결합한다. 즉, 1x, 5x, 10x, 20x 또는 100x 초과의 하나의 항체는 경쟁 결합 검정에 의한 측정시 다른 항체의 결합을 적어도 30%까지 그러나 바람직하게는 50%, 75%, 90% 또는 심지어 99%까지 억제한다(문헌참조: 예를 들어, Junghans et al., Cancer Res. 50:1495, 1990). 대안적으로, 2개의 항체는 하나의 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 항원 내에 필수적으로 모든 아미노산 돌연변이가 다른 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 경우 동일한 에피토프를 갖는다. 2개의 항체는 하나의 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 일부 아미노산 돌연변이가 다른 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 경우 중첩 에피토프를 갖는다.
"리간드"는 작용제(agent), 예를 들어, 수용체에 결합할 수 있는 폴리펩티드 또는 다른 분자를 언급한다.
"표지" 또는 "검출 가능한 모이어티"는 분광측정, 광화학적, 생화학적, 면역화학적, 화학적, 또는 다른 물리적 수단에 의해 검출될 수 있는 조성물이다. 예를 들어, 유용한 표지는 32P, 형광 염료, 전자-밀도 시약, 효소(예를 들어, ELISA에 통상적으로 사용된 바와 같은), 비오틴, 디곡시게닌, 또는 예를 들어, 방사능표지를 표적 펩티드에 특이적으로 반응하는 펩티드 또는 항체로 도입함에 의해 검출가능하게 될 수 있는 합텐 및 단백질 또는 다른 실체를 포함한다. 항체를 표지에 접합시키기 위한 당업계에 공지된 임의의 적당한 방법이 사용될 수 있고, 예를 들어, 문헌(참조: Hermanson, Bioconjugate Techniques 1996, Academic Press, Inc., San Diego)에 기재된 방법을 사용한다.
"접촉시키는"은 이의 분명한 통상의 의미에 따라 사용되고 적어도 2개의 별개의 종(예를 들어, 생분자를 포함하는 화학적 화합물 또는 세포)이 반응하거나, 상호작용하거나 물리적으로 닿을 수 있기에 충분히 인접하도록 하는 공정을 언급한다. 그러나, 수득한 반응 생성물은 첨가된 시약 간의 반응으로부터 직접적으로 제조되거나 반응 혼합물에서 생성될 수 있는 첨가된 시약의 하나 이상의 기원의 중간체로부터 생성될 수 있음을 인지해야 한다.
용어 "접촉시키는"은 2개의 종이 반응하거나, 상호작용하거나 물리적으로 닿을 수 있게 하는 것을 포함할 수 있고, 여기서, 상기 2개의 종은 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 비오틴 도메인 및 비오틴-결합 도메인일 수 있다. 구현예에서, "접촉시키는"은, 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 인간화된 항체가 CD73 항원과 상호작용하도록 하는 것을 포함한다.
용어 "폴리펩티드", "펩티드” 및 "단백질"은 본원에서 아미노산 잔기들의 중합체를 언급하기 위해 상호교환적으로 사용되고 여기서, 상기 중합체는 구현예에서 아미노산으로 이루어지지 않은 모이어티에 접합될 수 있다. 상기 용어는 하나 이상의 아미노산 잔기가 천연적으로 존재하는 아미노산 중합체 및 비-천연적으로 존재하는 아미노산 중합체뿐만 아니라 상응하는 천연적으로 존재하는 아미노산의 인공 화학적 모방체인 아미노산 중합체에 적용된다. "융합 단백질"은 단일 모이어티로서 재조합적으로 발현되는 2개 이상의 별도의 단백질 서열을 코딩하는 키메라 단백질을 언급한다.
용어 "펩티딜" 및 "펩티딜 모이어티"는 1가 펩티드를 의미한다.
용어 "아미노산"은 천연적으로 존재하는 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 아미노산 유사체 및 아미노산 모방체뿐만 아니라 천연적으로 존재하는 아미노산 및 합성 아미노산을 언급한다. 천연적으로 존재하는 아미노산은 이후 변형되는 아미노산, 예를 들어, 하이드록시프롤린, γ-카복시글루타메이트, 및 O-포스포세린뿐만 아니라 유전자 코드에 의해 코딩된 것들이다. 아미노산 유사체는 천연적으로 존재하는 아미노산과 동일한 기본 화학적 구조를 갖는, 즉 수소, 카복실기, 아미노기, 및 R 기에 결합된 α 탄소를 갖는 화합물, 예를 들어, 호모세린, 노르루신, 메티오닌 설폭사이드, 메티오닌 메틸 설포늄을 언급한다. 상기 유사체는 변형된 R 기(예를 들어, 노르루신) 또는 변형된 펩티드 골격을 갖지만 천연적으로 존재하는 아미노산과 동일한 기본 화학적 구조를 보유한다. 아미노산 모방체는 아미노산의 일반 화학 구조식과는 상이하지만 천연적으로 존재하는 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 구조를 갖는 화학적 화합물을 언급한다. 용어 "비천연적으로 존재하는 아미노산" 및 "비천연 아미노산"은 천연에서 발견되지 않는 아미노산 유사체, 합성 아미노산, 및 아미노산 모방체를 언급한다.
아미노산은 본원에서 이들의 통상적으로 공지된 3문자 기호에 의해 또는 위원회(IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commission)에 의해 추천되는 1문자 기호에 의해 언급될 수 있다. 또한 뉴클레오티드는 이들의 통상적으로 허용되는 단일문자 코드에 의해 언급될 수 있다.
"보존적으로 변형된 변이체"는 아미모산 및 핵산 서열 둘 다에 적용한다. 특정 핵산 서열과 관련하여, "보존적으로 변형된 변이체"는 동일하거나 필수적으로 동일한 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 언급한다. 유전자 코드의 축퇴성 때문에, 다수의 핵산 서열은 임의의 소정의 단백질을 코딩한다. 예를 들어, 코돈 GCA, GCC, GCG 및 GCU 모두는 아미노산 알라닌을 코딩한다. 따라서, 알라닌이 코돈에 의해 특정되는 모든 위치에서, 코돈은 코딩된 폴리펩티드를 변경하는 것 없이 기재된 상응하는 임의의 코돈으로 변경될 수 있다. 상기 핵산 변이는 보존적으로 변형된 변이의 한 종류인 "사일런트 변이"이다. 폴리펩티드를 코딩하는 본원의 모든 핵산 서열은 또한 핵산의 모든 가능한 사일런트 변이를 기재한다. 당업자는 핵산 내 각각의 코돈(통상적으로 메티오닌에 대해 유일한 코돈인 AUG와 통상적으로 트립토판에 대해 유일한 코돈인 TGG를 제외하고는)이 기능적으로 동일한 분자를 생성하기 위해 변형될 수 있음을 인지할 것이다. 따라서, 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 각각의 사일런트 변이는 각각의 기재된 서열에 포함된다.
아미노산 서열과 관련하여, 당업자는 코딩된 서열에서 단일 아미노산 또는 적은%의 아미노산을 변형시키거나, 부가하거나 결실시키는 개별 치환, 결실 또는 핵산, 펩티드, 폴리펩티드, 또는 단백질 서열로의 부가가 상기 변형이 화학적으로 유사한 아미노산으로의 아미노산 치환을 유도하는 경우 "보존적으로 변형된 변이체"임을 인지할 것이다. 기능적으로 유사한 아미노산을 제공하는 보존적 치환 표는 당업계에 널리 공지되어 있다. 상기 보존적으로 변형된 변이체는 추가적인 것이고 본 발명의 다형태 변이체, 종간 동족체 및 대립형질유전자를 배제하지 않는다.
하기의 8개 그룹은 각각 서로에 대해 보존성 치환인 아미노산을 함유한다:
1) 알라닌(A), 글라이신(G);
2) 아스파르트산(D), 글루탐산(E);
3) 아스파라긴(N), 글루타민(Q);
4) 아르기닌(R), 라이신(K);
5) 이소루신(I), 루신(L), 메티오닌(M), 발린(V);
6) 페닐알라닌(F), 타이로신(Y), 트립토판(W);
7) 세린(S), 트레오닌(T); 및
8) 시스테인(C), 메티오닌(M)
(문헌참조: 예를 들어, Creighton, Proteins (1984)).
"서열 동일성의 백분율"은 비교 윈도우 상에서 2개의 최적으로 정렬된 서열을 비교함에 의해 결정되고, 여기서, 비교 윈도우에서 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 서열의 부분은 2개의 서열의 최적의 정렬을 위해 참조 서열(이는 부가 또는 결실을 포함하지 않는다)과 비교하여 부가 또는 결실(즉, 갭)을 포함할 수 있다. 상기 백분율은 동일한 핵산 염기 또는 아미노산 잔기가 매칭된 위치의 수를 산출하기 위해 2개의 서열에 존재하는 위치의 수를 결정하고, 상기 매칭된 위치의 수를 비교 윈도우에서 위치의 총수로 나누고 서열 동일성의 백분율을 산출하기 위해 상기 결과에 100을 곱함에 의해 계산된다.
2개 이상의 핵산 또는 폴리펩티드 서열과 관련하여 용어 "동일한" 또는 백분율 "동일성"은 하기의 서열 비교 알고리즘 중 하나를 사용하여 또는 수동 정렬 및 육안 검사에 의해 측정된 바와 같이 비교 윈도우, 또는 지정된 영역 상에서 최대 상응성에 대해 비교되고 정렬되는 경우, 동일하거나 동일한(즉, 예를 들어, 본 발명의 전체 폴리펩티드 서열 또는 본 발명의 폴리펩티드의 개별 도메인의 특정 영역 상에서 60% 동일성, 임의로 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일성) 특정 백분율의 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드를 갖는 2개 이상의 서열 또는 서브서열을 언급한다. 상기 서열은 이어서 "실질적으로 동일한"으로 일컬어 진다. 상기 정의는 또한 시험 서열의 보완을 언급한다. 임의로, 동일성은 길이가 적어도 약 50개 뉴클레오티드인 영역, 또는 보다 바람직하게는 길이가 100 내지 500개 또는 1000개 이상의 뉴클레오티드인 영역 상에 존재한다. 본 발명은 서열번호 30-51 중 어느 하나와 실질적으로 동일한 폴리펩티드를 포함한다.
서열 비교를 위해, 전형적으로 하나의 서열은 시험 서열이 이와 비교되는 참조 서열로서 작용한다. 서열 비교 알고리즘을 사용하는 경우, 시험 및 참조 서열은 컴퓨터에 입력되고 필요한 경우 서브서열 좌표가 지정되고 서열 알고리즘 프로그램 파라미터가 지정된다. 디폴트 프로그램 파라미터가 사용될 수 있거나 또 다른 파라미터가 지정될 수 있다. 이어서 서열 비교 알고리즘은 프로그램 파라미터를 기준으로 참조 서열과 상대적으로 시험 서열에 대한 백분율 서열 동일성을 계산한다.
본원에 사용된 바와 같은 "비교 윈도우"는 예를 들어, 완전한 길이의 서열 또는 20 내지 600개, 약 50 내지 약 200개, 또는 약 100 내지 약 150개 아미노산 또는 뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 선태된 연속 위치의 수의 어느 하나의 분절에 대한 참조를 포함하고, 여기서, 서열은 2개의 서열이 최적으로 정렬된 후 연속 위치의 동일한 수의 참조 서열과 비교될 수 있다. 비교를 위한 서열의 정렬 방법은 당업계에 널리 공지되어 있다. 비교를 위한 서열의 최적 정렬은 예를 들어, 문헌(Smith and Waterman (1970) Adv. Appl. Math. 2:482c)의 국소 상동성 알고리즘에 의해, 문헌(Needleman and Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48:443)의 상동성 정렬 알고리즘에 의해, 문헌(Pearson and Lipman (1988) Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 85:2444)의 유사성 방법에 대한 검색에 의해, 이들 알고리즘(GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA(Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI)의 컴퓨터화된 수행, 또는 수동 정렬 및 육안 검사(문헌참조: 예를 들어 Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (1995 supplement))에 의해 수행될 수 있다.
백분율 서열 동일성 및 서열 유사성을 결정하기 위해 적합한 알고리즘의 예는 BLAST 및 BLAST 2.0 알고리즘이고, 이들은 각각 문헌(Altschul et al. (1977) Nuc. Acids Res. 25:3389-3402) 및 문헌(Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410)에 기재되어 있다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 기관(National Center for Biotechnology Information(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/))을 통해 공개적으로 가용하다. 상기 알고리즘은 먼저 데이터베이스 서열에서 동일한 길이의 문자와 정렬되는 경우 일부 양성-값 역치 스코어 T와 매칭하거나 만족하는, 탐구 서열에서 길이 W의 짧은 문자를 동정함에 의해 높은 스코어링 서열 쌍(HSP)을 동정함을 포함한다. T는 이웃하는 문자 스코어 역치로서 언급된다(Altschul et al., supra). 이들 초기 이웃하는 문자 히트는 이들을 함유하는 보다 긴 HSP를 발견하는 연구를 개시하기 위한 씨드로서 작용한다. 상기 문자 히트는 누적 정렬 스코어가 증가될 수 있는 한, 이에 대한 각각의 서열을 따라 양 방향으로 연장된다. 누적 스코어는 뉴클레오티드 서열에 대해 파라미터 M(매칭 잔기 쌍에 대한 보상 스코어; 항상 > 0) 및 N(미스매칭 잔기에 대한 페널티 스코어; 항상 < 0)을 사용하여 계산한다. 아미노산 서열에 대해, 스코어링 매트릭스를 사용하여 누적 스코어를 계산한다. 각각의 방향에서 문자 히트의 연장은 누적 정렬 스코어가 이의 최대 성취된 값으로부터 정량 X에 의해 뒤처지는 경우; 누적 스코어가 하나 이상의 음성-스코어 잔기 정렬의 누적으로 인해 제로 이하로 떨어지는 경우; 또는 어느 서열의 말단에 도달되는 경우 중단된다. BLAST 알고리즘 파라미터 W, T, 및 X가 정렬의 민감성 및 속도를 결정한다. BLASTN 프로그램(뉴클레오티드 서열에 대해) 은 디폴트로서 11의 문자 길이(W), 10의 예측(E), M = 5, N = -4 및 양 가닥의 비교를 사용한다. 아미노산 서열에 대해, BLASTP 프로그램은 디폴트로서 3의 문자 길이, 및 10의 예측(E) 및 50의 BLOSUM62 스코어링 매트릭스(문헌참조: Henikoff and Henikoff (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915) 정렬(B), 10의 예측(E), M = 5, N = -4, 및 양 가닥의 비교를 사용한다.
BLAST 알고리즘은 또한 2개 서열 간의 유사성의 통계학적 분석을 수행한다(문헌참조: 예를 들어, Karlin and Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5787). BLAST 알고리즘에 의해 제공된 유사성의 한가지 측정은 최소 합 확률(P(N))이고, 이는 2개의 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 간의 매칭이 우연히 일어날 확률의 지표를 제공한다. 예를 들어, 핵산은 시험 핵산과 참조 핵산의 비교에서 최소 합 확률이 약 0.2 미만, 보다 바람직하게는 약 0.01 미만, 및 가장 바람직하게는 약 0.001 미만인 경우 참조 서열과 유사한 것으로 고려된다.
2개의 핵산 서열 또는 폴리펩티드가 실질적으로 동일한지의 지표는 제1 핵산에 의해 코딩된 폴리펩티드가 하기된 바와 같이 제2 핵산에 의해 코딩된 폴리펩티드에 대해 생성된 항체와 면역학적으로 교차 반응한다는 것이다. 따라서, 폴리펩티드는 전형적으로 예를 들어, 2개의 펩티드가 단지 보존성 치환 정도로 상이한 경우 제2 폴리펩티드와 실질적으로 동일하다. 2개의 핵산 서열이 실질적으로 동일하다는 또 다른 지표는 2개의 분자 또는 이의 상보체가 하기된 바와 같이 엄중 조건하에서 서로 하이브리드화한다는 것이다. 2개의 핵산 서열이 실질적으로 동일하다는 또 다른 지표는 동일한 프라이머가 서열을 증폭시키기 위해 사용될 수 있다는 것이다.
항체내 아미노산 잔기는 이것이 소정의 잔기와 같이 항체 내에서 동일한 필수 구조적 위치를 차지하는 경우 소정의 잔기에 "상응한다". 예를 들어, 비교 항체에서 선택된 잔기는 선택된 잔기가 당업계의 적용가능한 방법을 사용한 평가시 카밧 위치 48과 동일한 필수 공간적 또는 구조적 관계를 갖는 경우, 본원에 제공된 항체 내 위치 48(본원에 기재된 바와 같은 카밧 넘버링 시스템에 따라)에 상응한다. 예를 들어, 비교 항체는 최대 서열 상동성을 위해 본원에 제공된 항체와 정렬될 수 있고 카밧 위치 48과 정렬하는 정렬된 비교 항체에서 위치는 이에 상응하는 것으로 결정될 수 있다. 대안적으로, 상기된 바와 같은 1차 서열 정렬 대신(또는 이에 추가로), 3차원 구조적 정렬은 또한 예를 들어, 비교 항체의 구조가 본원에 제공된 항체 및 비교되는 전체 구조와 최대 상응성을 위해 정렬되는 경우, 사용될 수 있다. 이 경우에, 구조적 모델에서 카밧 위치 48과 동일한 필수 위치를 차지하는 아미노산은 상응하는 것으로 일컬어 질 수 있다.
단백질에 적용되는 경우, 용어 "단리된"은 단백질이 이것이 천연 상태에서 연합된 다른 세포 성분이 필수적으로 부재인 것을 지칭한다. 바람직하게는, 이것이 건조 또는 수용액으로 존재할 수 있지만 균질의 상태에 있다. 순도 및 균질성은 전형적으로 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 또는 고성능 액체 크로마토그래피와 같은 분석적 화학 기술을 사용하여 결정된다. 제제 중에 존재하는 주요 종인 단백질은 실질적으로 정제된다. 용어 "정제된"은 단백질이 전기영동 겔에서 필수적으로 하나의 밴드를 생성함을 지칭한다. 특히, 이것은 단백질이 적어도 85% 순수하고, 보다 바람직하게는 적어도 95% 순수하고, 가장 바람직하게는 적어도 99% 순수함을 의미한다.
항체에 "특이적으로 (또는 선택적으로) 결합한다" 또는 "와 특이적으로 (또는 선택적으로) 면역반응성"이라는 어구는 단백질 또는 펩티드를 언급하는 경우, 단백질 및 다른 생물학적 물질의 이종성 집단 중 단백질의 존재에 결정적인 결합 반응을 언급한다. 따라서, 지정된 면역검정 조건하에서, 특정 항체는 배경 보다 적어도 2배로 특정 단백질에 결합하고 샘플에 존재하는 상당량의 다른 단백질에 실질적으로 결합하지 않는다. 전형적으로, 특이적 또는 선택적 반응은 배경 신호 또는 노이즈 보다 적어도 2배이고 보다 전형적으로 배경 보다 10 내지 100배 초과일 것이다.
본원에 사용된 바와 같은 "세포"는 이의 게놈 DNA를 보존하거나 복제하기에 충분한 대사 또는 다른 기능을 수행하는 세포를 언급한다. 세포는 예를 들어, 온전한 막의 존재, 특정 염료에 의한 염색, 후손을 생성하는 능력 또는 생식 세포의 경우, 제2 생식 세포와 조합하여 생존 가능한 후손을 생성하는 능력을 포함하는 당업계에 널리 공지된 방법에 의해 확인될 수 있다. 세포는 원핵 세포 및 진핵 세포를 포함할 수 있다. 원핵 세포는 세균을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 진핵 세포는 효모 세포, 및 식물 및 동물, 예를 들어, 포유동물, 곤충(예를 들어, 스포도프테라) 및 인간 세포에 의해 유도된 세포를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본원에 정의된 바와 같은 용어 "억제", "억제한다", "억제하는" 등은 단백질-억제제(예를 들어, 인간화된 1E9 항체-CD70) 상호작용과 관련하여 억제제(예를 들어, 인간화된 1E9 항체)의 부재하의 단백질의 활성 또는 기능에 상대적으로 단백질의 활성 또는 기능(예를 들어, CD73의 촉매활성을 감소시키는)에 음성적으로 영향을 줌(예를 들어, 감소)을 의미한다. 일부 구현예에서 억제는 질환 또는 질환 증상의 감소를 언급한다. 따라서, 억제는 적어도 일부, 부분적으로 또는 전반적으로 자극을 차단하거나, 신호전달 또는 효소 활성 또는 단백질의 양을 감소시키거나, 방지하거나 활성화를 지연시키거나, 불활성화시키거나, 탈감작시키거나 하향조절함을 포함한다. 유사하게 "억제제"는 예를 들어, 효소 활성(예를 들어, CD73 촉매 활성)을 결합하거나, 부분적으로 또는 전반적으로 차단하거나, 감소시키거나, 방지하거나, 지연시키거나, 불활성화시키거나, 탈감작시키거나 하향조절함에 의해 CD73 활성을 억제하는 화합물 또는 단백질이다.
본 발명의 작용제는 흔히 즉, 활성 치료제 및 다양한 다른 약학적으로 허용되는 성분을 포함하는 약학 조성물로서 투여된다. 문헌(Remington's Pharmaceutical Science (15th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 1980))을 참조한다. 바람직한 형태는 의도된 투여 방식 및 치료적 적용에 의존한다. 조성물은 또한 목적하는 제제에 따라, 동물 또는 인간 투여를 위해 약학 조성물을 제제화하기 위해 통상적으로 사용되는 비히클로서 정의되는, 약학적으로 허용되는 비독성 담체 또는 희석제를 포함할 수 있다. 희석제는 조합물의 생물학적 활성에 영향을 미치지 않도록 선택된다. 상기 희석제의 예는 증류수, 생리학적 포스페이트 완충 식염수, 링거액, 덱스트로스 용액 및 행크 용액이다. 추가로, 약학 조성물 또는 제제는 또한 다른 담체, 보조제, 또는 비독성, 비치료적, 비면역원성 안정화제 등을 포함할 수 있다.
조성물은 치료적 또는 예방적 치료를 위해 투여될 수 있다. 치료적 적용에서, 조성물은 "치료적 유효량"으로 질환(예를 들어, 암)을 앓는 환자에게 투여된다. 상기 사용을 위해 효과적인 양은 질환의 중증도 및 일반 환자의 건강 상태에 의존할 것이다. 상기 조성물의 단일 또는 다중 투여는 환자에게 요구되고 관용성인 투여 용량 및 빈도에 의존하여 투여될 수 있다. 본 발명의 목적을 위한 "환자" 또는 "대상체"는 인간 및 다른 동물 둘 다, 특히 포유동물을 포함한다. 따라서, 상기 방법은 인간 치료법 및 수의과 적용 둘 다에 적용될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 환자는 포유동물, 바람직하게는 영장류이고 가장 바람직한 구현예에서 환자는 인간이다.
경구 투여용으로 적합한 제제는 (a) 물, 식염수 또는 PEG 400과 같은 희석제에 현탁된 유효량의 패키징된 핵산과 같은 액체 용액; (b) 각각 액체, 고체, 과립 또는 젤라틴으로서 소정량의 활성 성분을 함유하는 캡슐제, 사쉐제 또는 정제; (c) 적당한 액체 중 현탁제; 및 (d) 적합한 에멀젼으로 이루어질 수 있다. 정제 형태는 락토스, 슈크로스, 만니톨, 소르비톨, 인산칼슘, 옥수수 전분, 감자 전분, 미세결정 셀룰로스, 젤라틴, 콜로이드 이산화규소, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산, 및 다른 부형제, 착색제, 충전제, 결합제, 희석제, 완충제, 습윤화제, 보존제, 향제, 염료, 붕해제, 및 약학적으로 허용되는 담체 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 로젠지 형태는 향제, 예를 들어 슈크로스 중 활성 성분, 및 젤라틴 및 글리세린 또는 슈크로스, 및 아카시아 에멀젼, 겔 등과 같은 불활성 기재 중 활성 성분을 포함하는 캔디를 포함할 수 있고 상기 활성 성분에 추가로 당업계에 공지된 담체를 함유한다.
약학 조성물은 또한 대형의 느리게 대사되는 거대 분자, 예를 들어, 단백질, 폴리사카라이드, 예를 들어, 키토산, 폴리락트산, 폴리글리콜산 및 공중합체(예를 들어, 라텍스 기능성화된 세파로스(TM), 아가로스, 셀룰로스 등), 중합체 아미노산, 아미노산 공중합체, 및 지질 응집체(예를 들어, 오일 액적 또는 리포좀)을 포함할 수 있다. 추가로, 이들 담체는 면역자극제(즉, 보조제)로서 기능할 수 있다.
단독으로 또는 다른 적합한 성분과 조합되어 본원에 제공된 조성물은 흡입을 통해 투여될 에어로졸 제제(즉, 이들은 "분무될" 수 있다)로 만들어질 수 있다. 에어로졸 제제는 디클로로디플루오로메탄, 프로판, 질소 등과 같은 압축 가능한 추진체에 위치할 수 있다.
직장 투여를 위해 적합한 제제는, 예를 들어, 좌제 기제와 함께 패키징된 핵산으로 이루어진, 좌제를 포함한다. 적합한 좌제 기제는 천연 또는 합성 트리글리세리드 또는 파라핀 탄화수소를 포함한다. 추가로, 예를 들어, 액체 트리글리세리드, 폴리에틸렌 글리콜 및 파라핀 탄화수소를 포함하는, 기제와 선택된 화합물의 조합으로 이루어진 젤라틴 직장 캡슐제를 또한 사용할 수 있다.
예를 들어, 관절내(intraarticular)(관절내: in the joints), 정맥내, 근육내, 종양내, 피내, 복강내, 및 피하 경로에 의한 것과 같은 비경구 투여용으로 적합한 제제는 수성 및 비수성, 등장성 멸균 주사 용액을 포함하고 상기 주사 용액은 항산화제, 완충제, 박테리오스타트, 및 제제가 의도된 수용자의 혈액과 등장성이 되도록 하는 용질, 및 현탁 제제, 가용화제, 증점제, 안정화제 및 보존제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁제를 함유할 수 있다. 본 발명의 수행에서, 조성물은 예를 들어, 정맥내 주입, 경구, 국소, 복강내, 소포내 또는 외피내에 의해 투여될 수 있다. 비경구 투여, 경구 투여 및 정맥내 투여는 바람직한 투여 방법이다. 화합물의 제제는 앰푸울 및 바이알과 같은 단위-용량 또는 다중-용량의 밀봉된 용기로 제공될 수 있다.
주사 용액 및 현탁액은 이전에 기재된 종류의 멸균 산제, 과립 및 정제로부터 제조될 수 있다. 생체외 치료법을 위한 핵산이 형질도입된 세포는 또한 상기된 바와 같이 정맥내 또는 비경구로 투여될 수 있다.
약학적 제제는 바람직하게는 단위 투여 형태이다. 상기 형태에서, 제제는 적당량의 활성 성분을 함유하는 단위 용량으로 세분된다. 단위 투여 형태는 패키징된 제제일 수 있고, 상기 패키지는 바이알 또는 앰푸울에서 패키킹된 정제, 캡슐제, 및 산제와 같은 별개의 양의 제제를 함유한다. 또한, 단위 투여 형태는 캡슐, 정제, 샤세이, 또는 로젠지 자체일 수 있거나, 이것은 패키징된 형태의 임의의 적당 수의 형태일 수 있다. 조성물은 경우에 따라 또한 다른 상용성 치료제를 함유할 수 있다.
조합 투여는 별도의 제제 또는 단일의 약학적 제제를 사용한 동시 투여 및 어느 한 순서로의 연속 투여를 고려하고, 여기서 바람직하게 둘 다(또는 모든) 활성제가 동시에 이들의 생물학적 활성을 나타내는 시기가 있다.
본원에 제공된 조성물의 유효량은 투여 수단, 표적 부위, 환자의 생리학적 상태, 환자가 인간 또는 동물 인지의 여부, 투여되는 다른 약물 처리 및 처리가 예방을 위한 것인지 치료를 위한 것인지의 여부를 포함하는 많은 상이한 인자에 의존하여 다양하다. 그러나, 당업자는 즉각적으로 가이드를 위해 암을 치료하고 예방하기 위한 승인된 조성물의 용량을 주시하면서 적당하고/하거나 동등한 용량을 인지할 것이다.
용어 "질환" 또는 "병태"는 본원에 제공된 화합물, 약학 조성물, 또는 방법으로 치료될 수 있는 환자 또는 대상체의 상태 또는 건강 상태를 언급한다. 구현예에서, 질환은 암(예를 들어, 폐암, 난소암, 골육종, 방광암, 경부암, 간암, 신장암, 피부암(예를 들어, 메르켈 세포 암종), 고환암, 백혈병, 림프종, 두경부암, 결장직장암, 전립선암, 췌장암, 흑색종, 유방암, 신경아세포종)이다. 질환은 자가면역, 염증, 암, 감염, 대사, 발육, 심혈관, 간, 장, 내분비, 신경학적, 또는 다른 질환일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "암"은 백혈병, 림프종, 흑색종, 신경내분비 종양, 암종 및 육종을 포함하는, 포유동물에서 발견되는 모든 유형의 암, 신생물 또는 악성 종양을 언급한다. 본원에 제공된 화합물, 약학 조성물, 또는 방법으로 치료될 수 있는 예시적 암은 림프종, 육종, 방광암, 골암, 뇌 종양, 경부암, 결장암, 식도암, 위암, 두경부암, 신장암, 골수종, 갑상선암, 백혈병, 전립선암, 유방암(예를 들어, 3중 음성, ER 양성, ER 음성, 화학치료법 내성, 헤르셉틴 내성, HER2 양성, 독소루비신 내성, 타목시펜 내성, 관 암종, 소엽 암종, 1차, 전이성), 난소암, 췌장암, 간암(예를 들어, 간세포 암종), 폐암(예를 들어, 비-소 세포 폐 암종, 편평 세포 폐 암종, 선암종, 대형 세포 폐 암종, 소세포 폐 암종, 카르시노이드, 육종), 교모세포종 다형성, 신경교종, 흑색종, 전립선암, 거세-내성 전립선암, 유방암, 3중 음성 유방암, 교모세포종, 난소암, 폐암, 편평 세포 암종(예를 들어, 머리, 목, 또는 식도), 결장직장암, 백혈병, 급성 골수 백혈병, 림프종, B 세포 림프종, 또는 다발성 골수종을 포함한다. 추가의 예는 갑상선암, 내분비계암, 뇌암, 유방암, 자궁경관암, 결장암, 두경부암, 식도암, 간암, 신장암, 폐암, 비-소 세포 폐암, 흑색종, 중피종, 난소암, 육종, 위암, 자궁암 또는 수모세포종, 호지킨 질환, 비-호지킨 림프종, 다발성 골수종, 신경모세포종, 신경교종, 교모세포종 다형태, 난소암, 횡문근육종, 1차 혈소판증가증, 1차 마크로글로불린혈증, 1차 뇌 종양, 암, 악성 췌장 인슐린종, 악성 카시노이드, 뇨 방광암, 악성전 피부 병변, 고환암, 림프종, 갑상선암, 신경모세포종, 식도암, 비뇨생식기암, 악성 고칼슘혈증, 자궁내막암, 부신피질암, 내분비 또는 외분비 췌장의 신생물, 수질 갑상선암, 수질 갑상선 암종, 흑색종, 결장직장암, 유두상 갑상선암, 간세포 암종, 니플의 파제트 질환, 필로데스 종양, 소엽 암종, 관 암종, 췌장 별모양 세포의 암, 간 별모양 세포의 암, 또는 전립선암을 포함한다.
용어 "백혈병"은 광범위하게 혈액 형성 기관의 진행성 악성 질환을 언급하고 일반적으로 혈액 및 골수에서 백혈구 및 이의 전구체의 기형 증식 및 발육을 특징으로 한다. 백혈병은 일반적으로 임상적으로 (1) 질환 급성 또는 만성의 지속성 및 특징; (2) 관여한 세포의 유형; 골수(골수성), 림프성(림프형성), 또는 단핵구; 및 (3) 혈액-백혈병 또는 무백혈병(준백혈병)에서 비정상 세포의 수의 증가 또는 비증가 기준으로 분류된다. 본원에 제공된 화합물, 약학 조성물, 또는 방법으로 치료될 수 있는 예시적 백혈병은 예를 들어, 급성 비림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 급성 과립구 백혈병, 만성 과립구 백혈병, 급성 전골수구 백혈병, 성인 T-세포 백혈병, 무백혈병성 백혈병, 백혈구성 백혈병, 호염기성 백혈병, 유방 세포 백혈병, 소 백혈병, 만성 골수구 백혈병, 피부백혈병, 배아 백혈병, 호산성 백혈병, 그로스 백혈병, 모발-세포 백혈병, 조혈세포 백혈병, 혈구모세포 백혈병, 조직구 백혈병, 줄기 세포 백혈병, 급성 단핵구 백혈병, 백혈구감소 백혈병, 림프구성 백혈병, 림프아구 백혈병, 림프구성 백혈병, 림프형성 백혈병, 림프구 백혈병, 림프육종 세포 백혈병, 비만 세포 백혈병, 거핵세포 백혈병, 소골수아구성 백혈병, 단핵구성 백혈병, 골수아구성 백혈병, 골수세포 백혈병, 골수 과립구 백혈병, 골수단핵구 백혈병, 나에렐리 백혈병, 혈장 세포 백혈병, 다발성 골수종, 혈질세포 백혈병, 전골수구 백혈병, 라이더 세포 백혈병, 쉴링 백혈병, 줄기 세포 백혈병, 준백혈구 백혈병, 또는 미분화된 세포 백혈병을 포함한다.
용어 "육종"은 일반적으로 배아 연결 조직형 물질로 구성되고 일반적으로 미소섬유 또는 균일한 물질에 매립된 미세하게 패킹된 세포로 구성된 종양을 언급한다. 본원에 제공된 화합물, 약학 조성물, 또는 방법으로 치료될 수 있는 육종은 연골 육종, 섬유 육종, 림프 육종, 흑색 육종, 점액육종, 골육종, 아베메티(Abemethy's) 육종, 지방 육종, 지질육종, 치경음 연질부 육종, 에나멜아세포 육종, 포도송이 모양의 육종, 녹색종 육종, 융모 암종, 배아 육종, 빌름 종양 육종, 자궁내막 육종, 기질 육종, 어윙 육종, 근막 육종, 섬유모세포 육종, 거대세포 육종, 과립구 육종, 호지킨 육종, 특발성 다중 색소 출혈 육종, B 세포의 면역모세포 육종, 림프종, T 세포의 면역모세포 육종, 얀센 유종, 카포시 육종, 쿠프퍼 세포 육종, 혈관육종, 백혈육종, 악성 중간엽종 육종, 골막주위 육종, 망상내피 육종, 라우스 육종, 혈청낭성 육종, 활막 육종, 또는 기공확장 육종을 포함한다.
용어 "흑색종"은 피부 및 다른 기관의 멜라닌 세포 시스템으로부터 발생하는 종양을 의미하기 위해 취해진다. 본원에 제공된 화합물, 약학 조성물, 또는 방법으로 치료될 수 있는 흑색종은 예를 들어, 말단-흑색점 흑색종, 무멜라닌 흑색종, 양성 유소년 흑색종, 클라우드만 흑색종, S91 흑색종, 하딩-패세이 흑색종, 유소년 흑색종, 악성흑색점 흑색종, 악성 흑색종, 결절 흑색종, 조갑하 흑색종, 또는 표면 스프레딩 흑색종을 포함한다.
용어 "암종"은 주변 조직을 침투하여 전이를 유발하는 경향이 있는 상피 세포로 이루어진 악성의 새로운 성장을 언급한다. 본원에 제공된 화합물, 약학 조성물, 또는 방법으로 치료될 수 있는 예시적 암종은 예를 들어, 수질 갑상선 암종, 가계 수질 갑상선 암종, 소포 암종, 소포성 암종, 선낭성 암종, 선양낭 암종, 선암종, 부신 피질의 암종, 폐포 암종, 폐포 세포 암종, 기저 세포 암종, 바닥세포암종(carcinoma basocellulare), 기저 세포 암종(basaloid carcinoma), 기저편평 세포 암종, 세기관지폐포 암종, 세기관지 암종, 기관지 암종, 대뇌모양 암종, 담관세포 암종, 융모 암종, 콜로이드 암종, 면포 암종, 자궁체부암종, 체모양 암종, 앙 쿠이라세 암종(carcinoma en cuirasse), 쿠타늄 암종(carcinoma cutaneum), 원주 암종, 원주세포 암종, 관 암종, 도관 암종, 두럼 암종(carcinoma durum), 배아 암종, 뇌질모양 암종, 표피 암종(epiermoid carcinoma), 상피 세포 아데노이드 암종(carcinoma epitheliale adenoides), 외발성 암종, 익스 울세레 암종(carcinoma ex ulcere), 섬유증 암종, 젤라틴모양 암종(gelatiniforni carcinoma), 젤라틴성 암종, 거대 세포 암종, 거대세포암종(carcinoma gigantocellulare), 선암종(glandular carcinoma), 과립막 세포 암종, 모발-매트릭스 암종, 혈액형 암종, 간세포 암종, 허틀 세포 암종(Hurthle cell carcinoma), 유리질 암종(hyaline carcinoma), 상안염 암종(hypernephroid carcinoma), 소아 배아 암종, 동일계 암종, 표피내 암종, 상피내 암종, 크롬페허 암종(Krompecher's carcinoma), 쿨키트키-세포 암종(Kulchitzky-cell carcinoma), 대형-세포 암종(large-cell carcinoma), 렌즈모양 암종, 렌즈형 암종(carcinoma lenticulare), 지방종성 암종, 소엽 암종, 림프구상피 암종, 수질 암종(carcinoma medullare), 수질 암종(medullary carcinoma), 흑색증 암종(melanotic carcinoma), 몰레 암종(carcinoma molle), 점액 암종, 점액낭 암종, 점막세포 암종, 점막표피모양 암종, 점액성 암종(carcinoma mucosum), 점액 암종, 믹소마토드 암종(carcinoma myxomatodes), 비인두 암종, 귀리 세포 암종, 골화성 암종, 유골 암종, 유두 암종, 문맥주위 암종, 전이전 암종, 가시 세포 암종, 수상 암종(pultaceous carcinoma), 콩팥의 신장 세포 암종, 저장 세포 암종, 사코마토드 암종(carcinoma sarcomatodes), 슈나이더 암종, 섬유질 암종, 음낭 암종(carcinoma scroti), 반지 세포 암종(signet-ring cell carcinoma), 심플렉스 암종, 소-세포 암종, 솔라노이드 암종, 구상 세포 암종(spheroidal cell carcinoma), 스핀들 세포 암종(spindle cell carcinoma), 해면 암종, 편평 암종, 편평 세포 암종, 스트링 암종(string carcinoma), 혈관주위 암종(carcinoma telangiectaticum), 텔란지엑토드 암종(carcinoma telangiectodes), 전이 세포 암종, 결절성 암종(carcinoma tuberosum), 관상 암종, 결절성 암종(tuberous carcinoma), 사마귀 암종, 또는 빌로섬 암종을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "전이", "전이성" 및 "전이성 암"은 상호교환적으로 사용될 수 있고 증식성 질환 또는 장애, 예를 들어, 하나의 기관 또는 또 다른 비-인접 기관 또는 신체 부분 기원의 암의 퍼짐을 언급한다. 암은 발원 부위에 존재하고, 예를 들어, 유방의 경우 이 부위는 1차 종양, 예를 들어, 1차 유방암으로서 언급된다. 1차 종양 또는 발원 부위 내 일부 암 세포는 국소 영역에서 주변 정상 조직을 침투하고 침윤하는 능력 및/또는 림프계 또는 혈관계의 벽을 침투하여 상기 순환계를 통해 신체 내 다른 부위 및 조직으로 순환하는 능력을 획득한다. 1차 종양의 암 세포로부터 형성된 제2의 임상적으로 검출 가능한 종양은 전이성 또는 2차 종양으로서 언급된다. 암 세포가 전이하는 경우, 전이성 종양 및 이의 세포는 발원 종양의 것들과 유사한 것으로 추정된다. 따라서, 폐암이 유방으로 전이하는 경우, 유방 부위에서의 2차 종양은 비정상적 폐 세포로 이루어져 있고 비정상적 유방 세포로 이루어져 있지 않다. 유방에서 2차 종양은 전이성 폐암으로 언급된다. 따라서, 어구 "전이성 암"은 대상체가 1차 종양을 갖거나 갖고 있었고 하나 이상의 2차 종양을 갖는 질환을 언급한다. 어구 "전이성이 아닌 암을 갖는 대상체의 비-전이성 암"은 대상체가 1차 종양을 갖지만 하나 이상의 2차 종양을 갖지 않는 질환을 언급한다. 예를 들어, 전이성 폐암은 1차 폐 종양 병력을 갖고, 예를 들어, 유방에서 2차 위치 또는 다중 위치에서 하나 이상의 2차 종양을 갖는 대상체에서의 질환을 언급한다.
질환(예를 들어, 당뇨병, 암(예를 들어, 전립선암, 신장암, 전이성 암, 흑색종, 거세-내성 전립선암, 유방암, 3중 음성 유방암, 교모세포종, 난소암, 폐암, 편평 세포 암종(예를 들어, 머리, 목, 또는 식도), 결장직장암, 백혈병, 급성 골수 백혈병, 림프종, B 세포 림프종, 또는 다중 골수종))과 연관된 물질 또는 물질 활성 또는 기능과 관련된 용어 "연관된" 또는 "와 연관된"은 질환(예를 들어, 폐암, 난소암, 골육종, 방광암, 경부암, 간암, 신장암, 피부암(예를 들어, 메르켈 세포 암종), 고환암, 백혈병, 림프종, 두경부암, 결장직장암, 전립선암, 췌장암, 흑색종, 유방암, 신경모세포종)이 (전체적으로 또는 부분적으로) 물질 또는 물질 활성 또는 기능에 의해 유발되거나 질환의 증상이 (전체적으로 또는 부분적으로) 물질 또는 물질 활성 또는 기능에 의해 유발됨을 의미한다.
인간화된 항체
인간화된 항체는 유전학적으로 조작된 항체이고, 여기서 마우스 항체("공여자 항체", 이는 또한 래트, 햄스터 또는 다른 비-인간 종일 수 있다)로부터 기원하는 적어도 하나의 CDR(또는 이의 기능성 단편)이 인간 항체("수용자 항체") 상으로 이식되어 있다. 인간 항체는 비-천연(예를 들어, 천연적으로 존재하지 않거나 인간에 의해 천연적으로 생성되지 않는) 항체이고 이는 인간에서 면역 반응을 유발하지 않거나, 인간에서 유의적 면역 반응을 유발하지 않거나 마우스에서 유발되는 면역 반응 보다 덜한 면역 반응을 유발한다. 구현예에서, 하나 이상의 마우스 CDR은 이식된다(예를 들어, 모든 6개의 마우스 CDR이 이식된다). 수용자 항체의 서열은 예를 들어, 성숙한 인간 항체 서열(또는 이의 단편), 인간 항체 서열(또는 이의 단편)의 컨센서스 서열, 또는 생식선 영역 서열(또는 이의 단편)일 수 있다. 따라서, 인간화된 항체는 공여자 항체 유래의 하나 이상의 CDR들 및 가변영역 프레임워크(FR)를 갖는 항체일 수 있다. FR은 인간 항체 내 불변 영역 및/또는 가변 영역의 일부를 형성할 수 있다. 추가로, 높은 결합 친화성을 유지하기 위해, 인간 수용자 서열 내 아미노산은 공여자 서열 유래의 상응하는 아미노산으로 대체될 수 있고, 예를 들어 상기 공여자 서열에서: (1) 아미노산은 CDR에 있고; (2) 아미노산은 인간 프레임워크 영역에 있다(예를 들어, 아미노산은 CDR 중 하나에 바로 인접해 있다). 본원에 참조로서 인용된 문헌(미국 특허 제5,530,101호 및 제5,585,089호)을 참조하고, 인간화된 항체의 제조를 위한 상세한 지침을 제공한다. 인간화된 항체에는 흔히 마우스 항체로부터의 모든 6개의 CDR(예를 들어, 카밧에 의해 정된 바와 같이 그러나 흔히 또한 초티아에 의해 정의된 바와 같은 초가변 루프 H1을 포함하는)이 혼입되어 있지만, 이들은 또한 보다 적은 마우스 CDR 및/또는 완전한 마우스 CDR 서열 보다 적은 CDR(예를 들어, CDR의 기능성 단편)로 제조될 수 있다(예를 들어, Pascalis et al., J. Immunol. 169:3076, 2002; Vajdos et al., Journal of Molecular Biology, 320: 415-428, 2002; Iwahashi et al., Mol. Immunol. 36:1079-1091, 1999; Tamura et al, Journal of Immunology, 164:1432-1441, 2000).
전형적으로, 본원에 제공된 바와 같은 인간화된 항체는 (i) 마우스 항체(또한 본원에서 마우스 CDR로서 언급됨)로부터의 적어도 하나의 CDR(흔히 3개의 CDR) 및 인간 가변 영역 프레임워크를 포함하는 경쇄; 및 (ii) 마우스 항체로부터의 적어도 하나의 CDR(흔히 3개의 CDR) 및 인간 가변 영역 프레임워크(FR)를 포함하는 중쇄를 포함할 수 있다. 경쇄 및 중쇄 가변 영역 프레임워크(FR)는 각각 성숙한 인간 항체 가변 영역 프레임워크 서열(또는 이의 단편), 생식선 가변 영역 프레임워크 서열(J 영역 서열과 조합된)(또는 이의 단편) 또는 인간 항체 가변 영역 프레임워크 서열(또는 이의 단편)의 컨센서스 서열일 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 경쇄 인간 불변 영역 및 중쇄 불변 영역과 함께 (i)에 기재된 바와 같은 경쇄, 및 (ii)에 기재된 중쇄를 포함한다.
키메라 항체는 마우스(또는 다른 설치류) 항체의 가변 영역이 인간 항체의 불변영역과 조합되어 있는 항체이고 유전학적 조작에 의한 이들의 제조는 널리 공지되어 있다. 상기 항체는 마우스 항체의 결합 특이성을 유지하고 약 3분의 2는 인간이다. 마우스, 키메라 및 인간화된 항체에 존재하는 비인간 서열 부분은 키메라 항체의 면역원성이 마우스와 인간화된 항체 사이의 중간임을 시사한다. 마우스 항체에 비해 감소된 면역원성을 가질 수 있는 다른 유형의 유전학적으로 가공된 항체는 파아지 디스플레이 방법을 사용하거나(Dower et al., WO91/17271; McCafferty et al., WO92/001047; Winter, WO92/20791; 및 Winter, FEBS Lett. 23:92, 1998, 이의 각각은 본원에 참조로 인용된다) 유전자전이 동물을 사용하여(Lonberg et al., WO93/12227; Kucherlapati WO91/10741, 이의 각각은 본원에 참조로 인용된다)제조된 인간 항체를 포함한다.
인간화된 항체를 디자인하기 위한 다른 접근법을 또한 사용하여 예를 들어, "슈퍼인간화"로서 상기된 미국 특허 제5,530,101호 및 제5,585,089호의 방법(문헌참조: Tan et al. J. Immunol. 169: 1119, 2002, 및 미국 특허 제6,881,557호) 또는 문헌(Studnicak et al., Protein Eng. 7:805, 1994)의 방법과 동일한 결과를 성취할 수 있다. 더욱이, 유전학적으로 가공된 감소된-면역원성 mAb를 제조하기 위한 다른 접근법은 예를 들어, 문헌(Vaswami et al., Annals of Allergy, Asthma and Immunology 81:105, 1998; Roguska et al. Protein Eng. 9:895, 1996; 및 미국 특허 제6,072,035호 및 제5,639,641호)에 기재된 바와 같은 "재형성", "초키메라화" 및 베니어링/리서피싱을 포함한다.
본원에 언급된 바와 같은 "CD73 단백질" 또는 "CD73 항원"은 5'-뉴클레오타이다제(5'-NT) 또는 엑토-5'-뉴클레오타이다제 또는 CD73 뉴클레오타이다제 활성을 유지하는 이의 변이체 또는 동족체(예를 들어, CD73과 비교하여 적어도 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 활성 내)로서도 공지된 분화 73(CD73)의 클러스터의 임의의 재조합 또는 천연적으로 존재하는 형태를 포함한다. 일부 양태에서, 변이체 또는 동족체는 천연적으로 존재하는 CD73 단백질과 비교하여 전체 서열 또는 서열의 일부(예를 들어, 50, 100, 150 또는 200 연속 아미노산 부분)에 걸쳐 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 구현예에서, CD73 단백질은 UniProt 참조 번호 21589에 의해 확인된 단백질 또는 이와 상당한 동일성을 갖는 변이체 또는 동족체와 실질적으로 동일하다. 구현예에서, CD73 단백질은 UniProt 참조 번호 Q61503에 의해 확인된 단백질 또는 이와 상당한 동일성을 갖는 변이체 또는 동족체와 실질적으로 동일하다.
인간화된 1E9 항체
특히, 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함하는 인간화된 1E9 항체가 본원에 제공된다. 본원에 제공된 바와 같은 인간화된 1E9 항체는 CD73 단백질에 결합할 수 있고 마우스 모노클로날 항체 1E9의 적어도 하나의 CDR 또는 이의 기능성 단편을 포함한다(Thomson LF et al. Tissue Antigens 2008, Volume 35, Issue 1: Production and characterization of monoclonal antibodies to the glycosyl phosphatidylinositol-anchored lymphocyte differentiation antigen ecto-5′-nucleotidase(CD73)). CDR의 기능성 단편은 항원(예를 들어, CD73)에 결합할 수 있는 완전한 CDR 아미노산 서열 부분이다. 따라서, CDR의 기능성 단편은 전형적으로 항원(예를 들어, CD73)에 결합하는 CDR을 위해 요구되는 아미노산 잔기를 포함한다. "마우스 CDR"은 CD73에 결합할 수 있는 마우스 항체로부터 유래된 완전한 CDR 아미노산 서열 또는 이의 기능성 단편이다. 따라서, 마우스 CDR의 기능성 단편은 전형적으로 CD73에 결합하는 CDR을 위해 요구되는 아미노산 잔기를 포함한다. 인간화된 1E9 항체가 적어도 하나의 마우스 CDR을 포함하는 경우, 적어도 하나의 마우스 CDR 또는 이의 기능성 단편은 공여자 항체로부터 유래한다. 구현예에서, 공여자 항체는 마우스 1E9 항체이다. 당업자는 적어도 하나의 마우스 CDR을 포함하는 인간화된 1E9 항체가 공여자 1E9 항체로부터 유래된 적어도 하나의 마우스 CDR을 갖는 인간화된 항체이고 추가의 CDR이 수용자 항체(예를 들어, 여기서, 경쇄는 총 3개의 CDR을 포함하고 중쇄는 총 3개의 CDR을 포함한다)로부터 유래함을 즉시 인지할 것이다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역은 마우스 CDR의 조합된 하나의 마우스 CDR 또는 기능성 단편을 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역은 조합된 6개의 CDR을 포함하고 여기서, 상기 6개의 CDR 중 적어도 하나는 마우스 CDR이다. 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역이 조합된 하나의 마우스 CDR을 포함하는 경우, 인간화된 경쇄 가변 영역 또는 인간화된 중쇄 가변 영역은 하나의 마우스 CDR을 포함한다. 예를 들어, 인간화된 항체는 공여자 항체로부터 유래된 CDR L3(예를 들어, 마우스, 또한 본원에서 마우스 CDR L3으로서 언급됨), 및 수용자 항체(즉, 인간)로부터 유래된 CDR L1, CDR L2, CDR H1, CDR H2, 및 CDR H3을 포함할 수 있다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역은 조합된 2개의 마우스 CDR을 포함한다. 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역이 조합된 2개의 마우스 CDR을 포함하는 경우, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역 및 상기 인간화된 중쇄 가변 영역은 각각 하나의 마우스 CDR (i)를 포함하거나, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역은 2개의 마우스 CDR (ii)을 포함하거나, 상기 인간화된 중쇄 가변 영역은 2개의 마우스 CDR (iii)을 포함한다. 예를 들어, 인간화된 항체는 공여자 항체로부터 유래된 CDR L3, 및 CDR H3(또한, 본원에서 각각 마우스 CDR L3, 및 마우스 CDR H3으로서 언급됨), 및 수용자 항체(즉, 인간)으로부터 유래된 CDR L1, CDR L2, CDR H1, 및 CDR H2를 포함할 수 있다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역은 조합된 3개의 마우스 CDR을 포함한다. 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역이 조합된 3개의 마우스 CDR을 포함하는 경우, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역은 하나의 마우스 CDR을 포함하고 상기 인간화된 중쇄 가변 영역은 2개의 마우스 CDR(i)을 포함하거나, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역은 2개의 마우스 CDR을 포함하고 상기 인간화된 중쇄 가변 영역은 하나의 마우스 CDR(ii)을 포함하거나, 상기 인간화된 중쇄 가변 영역은 3개의 마우스 CDR(iii)을 포함하거나 상기 인간화된 중쇄 가변 영역은 3개의 마우스 CDR(iv)을 포함한다. 예를 들어, 인간화된 항체는 공여자 항체로부터 유래된 CDR L3, CDR H3, 및 CDR L2(예를 들어, 마우스에서는 또한 본원에서 각각 CDR L3, 마우스 CDR H3, 및 마우스 CDR L2로서 언급됨), 및 수용자 항체(즉, 인간)로부터 유래된 CDR L1, CDR H1, 및 CDR H2를 포함할 수 있다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역은 조합된 4개의 마우스 CDR을 포함한다. 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역이 조합된 4개의 마우스 CDR을 포함하는 경우, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역은 하나의 마우스 CDR을 포함하고 상기 인간화된 중쇄 가변 영역은 3개의 마우스 CDR(i)을 포함하거나, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역은 3개의 마우스 CDR을 포함하고 상기 인간화된 중쇄 가변 영역은 하나의 마우스 CDR(ii)을 포함하거나, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역은 2개의 마우스 CDR을 포함하고 상기 인간화된 중쇄 가변 영역은 2개의 마우스 CDR(iii)을 포함한다. 예를 들어, 인간화된 항체는 공여자 항체로부터 유래된 CDR L3, CDR H3, CDR L2 및 CDR L1(예를 들어, 마우스에서, 또한 본원에서 각각 마우스 CDR L3, 마우스 CDR H3, 마우스 CDR L2 및 마우스 CDR L1으로서 언급됨), 및 수용자 항체(즉, 인간)로부터 유래된 CDR H1, 및 CDR H2를 포함할 수 있다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역은 각각 적어도 하나의 마우스 CDR을 포함한다. 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역이 각각 적어도 하나의 마우스 CDR을 포함하는 경우, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역은 적어도 하나의 마우스 CDR을 포함하고, 인간화된 중쇄 가변 영역은 적어도 하나의 마우스 CDR을 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 마우스 CDR L1을 포함하고 인간화된 중쇄는 마우스 CDR H1을 포함한다. 구현예에서, 마우스 CDR L1은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하고 마우스 CDR H1은 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 마우스 CDR L1은 서열번호 1의 아미노산 서열이고 마우스 CDR H1은 서열번호 4의 아미노산 서열이다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 마우스 CDR L2를 포함하고 인간화된 중쇄 가변 영역은 마우스 CDR H2를 포함한다. 구현예에서, 마우스 CDR L2는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하고 마우스 CDR H2는 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, 마우스 CDR L2는 서열번호 2의 아미노산 서열이고 마우스 CDR H2는 서열번호 5의 아미노산 서열이다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 마우스 CDR L3을 포함하고 인간화된 중쇄 가변 영역은 마우스 CDR H3을 포함한다. 구현예에서, 마우스 CDR L3은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고 마우스 CDR H3은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함한다. 구현예에서, CDR L3은 서열번호 3의 아미노산 서열이고 마우스 CDR H3은 서열번호 6의 아미노산 서열이다.
구현예에서, 마우스 CDR L3, 및 마우스 CDR H3의 존재는 인간화된 항체의 CD73에의 결합을 위해 충분할 수 있다. 따라서, 구현예에서, 인간화된 항체는 마우스 CDR L1, 마우스 CDR L2, CDR H1 또는 마우스 CDR H2를 포함하지 않는다. 인간화된 항체가 마우스 CDR L1, 마우스 CDR L2, 마우스 CDR H1 또는 마우스 CDR H2를 포함하지 않는 경우, 인간화된 항체는 수용자 항체(즉, 인간)로부터 유래된 CDR L1, CDR L2, CDR H1 또는 CDR H2를 포함한다. 따라서, 마우스 CDR L1, 마우스 CDR L2, 마우스 CDR H1 또는 마우스 CDR H2를 포함하지 않는 인간화된 항체는 공여자 항체(예를 들어, 마우스, 래트, 토끼) 유래의 CDR L1, CDR L2, CDR H1 또는 CDR H2를 포함하지 않지만 수용자 항체(즉, 인간)로부터의 CDR L1, CDR L2, CDR H1 또는 CDR H2를 포함한다. 따라서, 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 마우스 CDR L1 또는 마우스 CDR L2를 포함하지 않고 인간화된 중쇄 가변 영역은 마우스 CDR H1 또는 마우스 CDR H2를 포함하지 않는다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 마우스 CDR L1 및 마우스 CDR L2를 포함하지 않고 인간화된 중쇄 가변 영역은 마우스 CDR H1 및 마우스 CDR H2를 포함하지 않는다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 마우스 CDR L2 및 마우스 CDR L3을 포함하고 인간화된 중쇄 가변 영역은 마우스 CDR H2 및 마우스 CDR H3을 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 마우스 CDR L1, 마우스 CDR L2 및 마우스 CDR L3을 포함하고 인간화된 중쇄 가변 영역은 마우스 CDR H1, 마우스 CDR H2 및 마우스 CDR H3을 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1, 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2 및 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3을 포함하고, 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1, 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2, 및 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3을 포함한다.
CDR 및 FR의 위치는 카밧 넘버링 시스템에 의해 한정될 수 있다(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office (1991)). 또한, 항체의 경쇄 또는 중쇄 내 개별 잔기들이 차지하는 위치는 카밧 넘버링 시스템에 의해 한정될 수 있다. 따라서, 인간화된 항체의 인간화된 경쇄 및 인간화된 중쇄 내 결합을 위해 요구되는 잔기들의 위치는 당업계에 널리 공지된 바와 같이 카밧 넘버링 시스템에 따른 잔기의 위치에 의해 정의될 수 있다. 상기된 바와 같이, 인간화된 항체는 공여자 항체(예를 들어, 마우스) 유래의 CDR 및 인간 항체 유래의 가변 영역 프레임워크(FR)를 갖는 항체일 수 있다. 프레임워크 영역(FR)은 인간화된 항체에서 CDR을 제위치에 유지시키는 것으로 알려져 있다. 아미노-말단으로부터 진행하여 이들 영역은 각각 경쇄에 대해 FR L1, FR L2, FR L3, 및 FR L4로 지정되고 중쇄에 대해 FR H1, FR H2, FR H3, 및 FR H4로 지정된다. 놀랍게도, 본 발명은 인간화된 항체의 에피토프 결합을 위해 중요한 프레임워크 영역 내 하나 이상의 잔기들을 포함하는 인간화된 항체를 제공한다. 에피토프 결합(예를 들어, CD73 결합)에 관여하는(또는 이에 대해 중요한) 프레임워크 영역 잔기는 본원에서 결합 프레임워크 영역 잔기로서 언급된다. 결합 프레임워크 영역 잔기는 인간화된 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역(즉, FR L1, FR L2, FR L3, FR L4)에 존재할 수 있거나 이들은 인간화된 중쇄 가변 영역의 프레임워크(즉, FR H1, FR H2, FR H3, FR H4)에 존재할 수 있다. 인간화된 경쇄의 FR L3 영역에 존재하는 결합 프레임워크 잔기는 본원에서 FR L3 결합 프레임워크 영역 잔기로서 언급된다. 따라서, 인간화된 중쇄의 FR H3 영역에 존재하는 결합 프레임워크 영역 잔기는 본원에서 FR H3 결합 프레임워크 영역 잔기로서 언급된다.
구현예에서, 인간화된 항체는 적어도 하나의 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 적어도 하나의 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 하나 이상의 FR L1, FR L2, FR L3 또는 FR L4 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 하나 이상의 FR L1 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 하나 이상의 FR L2 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 하나 이상의 FR L3 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 하나 이상의 FR L4 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 하나 이상의 FR H1, FR H2, FR H3 또는 FR H4 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 하나 이상의 FR H1 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 하나 이상의 FR H2 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 하나 이상의 FR H3 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 하나 이상의 FR H4 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 적어도 하나의 결합 프레임워크 영역 잔기(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 37, 38, 39, 40, 41, 42 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50개 이상의 잔기)를 포함하고 인간화된 중쇄 가변 영역은 적어도 하나의 결합 프레임워크 영역 잔기(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 37, 38, 39, 40, 41, 42 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50개 이상의 잔기)를 포함한다. 인간화된 항체 내 결합 프레임워크 영역 잔기의 위치는 위치 CDR 잔기와 유사한 카밧 넘버링 시스템에 의해 한정될 수 있다.
한 양태에서 마우스 CDR L1, 마우스 CDR L2, 또는 마우스 CDR L3을 포함하는 인간화된 경쇄 가변 영역 및 마우스 CDR H1, 마우스 CDR H2, 또는 마우스 CDR H3을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함하는 인간화된 1E9 항체가 제공된다. 인간화된 경쇄 가변 영역은 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1, 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2, 또는 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3을 포함할 수 있다. 인간화된 경쇄 가변 영역은 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1, 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2, 및 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3을 포함할 수 있다. 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1, 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2, 또는 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3을 포함할 수 있다. 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1, 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2, 및 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3을 포함할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1을 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3을 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1을 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3을 포함한다. 추가의 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 적어도 하나의 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 다른 추가의 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 적어도 하나의 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다.
한 양태에서, 인간화된 1E9 항체가 제공된다. 1E9 항체는 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함한다. 인간화된 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(i) 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1, 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2, 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3, 및
(ii) 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 아스파르트산 또는 루신, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 라이신 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 74에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 76에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 77에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 100에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 104에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 알라닌, 카밧 위치 3에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 페닐알라닌 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 13에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 루신, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 15에 상응하는 위치에서 발린 또는 프롤린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 아스파르트산, 카밧 위치 22에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 45에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 58에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 티로신, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 페닐알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 티로신, 또는 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 페닐알라닌. 인간화된 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(i) 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1, 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2, 및 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3, 및
(ii) 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 트레오닌, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 라이신, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린 또는 메티오닌, 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 라이신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 루신, 또는 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산.
구현예에서, 본원에 제공된 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 아스파르트산 또는 루신, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 라이신 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 74에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 76에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 77에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 100에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 104에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 알라닌, 카밧 위치 3에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 페닐알라닌 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 13에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 루신, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 15에 상응하는 위치에서 발린 또는 프롤린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 아스파르트산, 카밧 위치 22에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 45에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 58에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 티로신, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 페닐알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 티로신, 또는 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 페닐알라닌인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 아스파르트산 또는 루신인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 라이신 또는 프롤린인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 알라닌인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 74에 상응하는 위치에서 트레오닌인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 76에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 77에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 루신인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 100에 상응하는 위치에서 글루타민인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 104에 상응하는 위치에서 발린인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 알라닌인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 3에 상응하는 위치에서 글루타민인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 페닐알라닌 또는 트레오닌인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 글루타민인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 13에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 루신인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 트레오닌인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 15에 상응하는 위치에서 발린 또는 프롤린인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 라이신인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 아스파르트산인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 22에 상응하는 위치에서 트레오닌인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 라이신인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 45에 상응하는 위치에서 알라닌인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 58에 상응하는 위치에서 이소루신인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 타이로신인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 페닐알라닌인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 타이로신인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 페닐알라닌인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다.
본원에 제공된 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 트레오닌, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 라이신, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린 또는 메티오닌, 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 라이신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 루신, 또는 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함할 수 있다.
구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 프롤린인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 트레오닌인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 라이신인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다.
구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린 또는 메티오닌인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 라이신인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 발린인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다.
구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 발린인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 아르기닌인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 루신인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산인 결합 프레임워크 영역 잔기를 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린, 또는 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 프롤린을 포함하고; 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린, 또는 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 메티오닌을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린, 및 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 프롤린을 포함하고; 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린, 또는 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 메티오닌을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린, 또는 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 프롤린을 포함하고; 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린, 및 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 메티오닌을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린, 및 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 프롤린을 포함하고; 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린, 및 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 메티오닌을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 74에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 76에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 77에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 100에 상응하는 위치에서 글루타민 또는 카밧 위치 104에 상응하는 위치에서 발린을 포함하고, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 라이신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 프롤린, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 트레오닌, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 라이신, 또는 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 74에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 76에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 77에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 100에 상응하는 위치에서 글루타민 및 카밧 위치 104에 상응하는 위치에서 발린을 포함하고, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 라이신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 프롤린, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 트레오닌, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 라이신, 또는 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 74에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 76에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 77에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 100에 상응하는 위치에서 글루타민, 또는 카밧 위치 104에 상응하는 위치에서 발린을 포함하고, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 라이신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 프롤린, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 트레오닌, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 라이신, 및 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 74에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 76에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 77에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 100에 상응하는 위치에서 글루타민, 및 카밧 위치 104에 상응하는 위치에서 발린을 포함하고, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 라이신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 프롤린, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 트레오닌, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 라이신, 및 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 알라닌, 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 3에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 아스파르트산 또는 루신, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 페닐알라닌 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 세린 또는 프롤린, 카밧 위치 13에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 루신, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 15에 상응하는 위치에서 발린 또는 프롤린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 아스파르트산, 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 라이신 또는 프롤린, 카밧 위치 22에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 45에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 58에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 타이로신, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 페닐알라닌, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 타이로신, 또는 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 페닐알라닌을 포함하고, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린 또는 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린 또는 메티오닌을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 알라닌, 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 3에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 아스파르트산 또는 루신, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 페닐알라닌 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 세린 또는 프롤린, 카밧 위치 13에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 루신, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 15에 상응하는 위치에서 발린 또는 프롤린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 아스파르트산, 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 라이신 또는 프롤린, 카밧 위치 22에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 45에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 58에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 타이로신, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 페닐알라닌, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 타이로신, 및 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 페닐알라닌을 포함하고, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린 또는 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린 또는 메티오닌을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 알라닌, 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 3에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 아스파르트산 또는 루신, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 페닐알라닌 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 세린 또는 프롤린, 카밧 위치 13에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 루신, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 15에 상응하는 위치에서 발린 또는 프롤린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 아스파르트산, 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 라이신 또는 프롤린, 카밧 위치 22에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 45에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 58에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 타이로신, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 페닐알라닌, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 타이로신, 또는 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 페닐알라닌을 포함하고, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린 및 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린 또는 메티오닌을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 알라닌, 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 3에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 아스파르트산 또는 루신, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 페닐알라닌 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 세린 또는 프롤린, 카밧 위치 13에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 루신, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 15에 상응하는 위치에서 발린 또는 프롤린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 아스파르트산, 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 라이신 또는 프롤린, 카밧 위치 22에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 45에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 58에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 타이로신, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 페닐알라닌, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 타이로신, 및 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 페닐알라닌을 포함하고, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린 및 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린 또는 메티오닌을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌, 또는 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌, 및 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 7의 서열을 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 7이다.
구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 53의 서열을 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 53이다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 서열번호 55의 서열을 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 서열번호 55이다. 따라서, 또 다른 양태에서, 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함하는 인간화된 1E9 항체가 제공되고 여기서, 상기 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 53의 서열을 포함하고 인간화된 경쇄 가변 영역은 서열번호 55의 서열을 포함한다.
본원에서 CD73에 결합할 수 있고 서열번호 7의 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함하는 인간화된 1E9 항체가 추가로 제공된다. 따라서, 또 다른 양태에서, 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함하는 인간화된 1E9 항체가 제공되고, 여기서, 상기 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 7의 서열을 포함한다.
본원에 제공된 바와 같은 인간화된 1E9 항체는 Fab' 단편일 수 있다. 인간화된 1E9 항체가 Fab' 단편인 경우, 상기 인간화된 1E9 항체는 인간화된 중쇄(예를 들어, 불변 및 가변 영역을 포함하는) 및 인간화된 경쇄(예를 들어, 불변 및 가변 영역을 포함하는)를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 1E9 항체는 Fab' 단편이다. 구현예에서, 인간화된 1E9 항체는 인간 불변 영역을 포함한다. 구현예에서, 인간화된 1E9 항체는 IgG이다. 구현예에서, 인간화된 1E9 항체는 IgG1이다. 구현예에서, 인간화된 1E9 항체는 IgG4이다. 구현예에서, 인간화된 1E9 항체는 IgA이다. 다른 구현예에서, 인간화된 항체는 IgM이다.
구현예에서, 인간화된 1E9 항체는 단일쇄 항체이다. 단일쇄 항체는 가변 경쇄 및 가변 중쇄를 포함한다. 당업자는 단일쇄 항체가, 2개의 동일한 쌍의 폴리펩티드 쇄를 포함하고, 각각의 쌍이 하나의 경쇄 및 하나의 중쇄를 갖는 면역글로불린 항체와 대조적으로 단일 경쇄 및 단일 중쇄를 포함함을 즉각적으로 인지할 것이다. 각각의 경쇄 및 중쇄는 이어서 2개의 영역: 표적 항원에 결합하는 데 관여하는 가변("V") 영역(즉, 가변 경쇄 및 가변 중쇄) 및 면역계의 다른 성분들과 상호작용하는 불변("C") 영역으로 이루어진다. 단일 쇄 항체에서 가변 경쇄 및 가변 중쇄는 링커 펩티드를 통해 연결될 수 있다. 단일 쇄 항체의 링커 펩티드에 대한 예는 문헌(Bird, R. E., Hardman, K. D., Jacobson, J. W., Johnson, S., Kaufman, B. M., Lee, S. M., Lee, T., Pope, S. H., Riordan, G. S. and Whitlow, M. (1988))에 기재되어 있다. scFv 항체를 제조하는 방법이 기재되어 있다. 문헌 (Huse et al., Science 246:1275-1281(1989); Ward et al., Nature 341:544-546 (1989); and Vaughan et al., Nature Biotech. 14:309-314 (1996))을 참조한다. 간략하게, 면역화된 동물 유래의 B 세포로부터의 mRNA를 단리하고 cDNA를 제조한다. cDNA는 면역글로불린의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역에 특이적인 프라이머를 사용하여 증폭시킨다. PCR 생성물을 정제하고 핵산 서열을 연결한다. 링커 펩티드가 요구되는 경우, 펩티드를 코딩하는 핵산 서열은 중쇄 및 경쇄 핵산 서열 사이에 삽입한다. scFv를 코딩하는 핵산은 벡터에 삽입하고 적당한 숙주 세포에서 발현한다.
특정 에피토프(예를 들어, CD73)에 결합하는 항체의 능력은 평형 해리 상수(KD)로 나타낼 수 있다. 본원에 정의된 바와 같은 평형 해리 상수(KD)는 인간화된 1E9 항체의 CD73 단백질에의 해리 속도(K-off)와 결합 속도(K-on)의 비이다. 이것은 하기의 식으로 표현된다: KD = K-off/K-on. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 0.5 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 1 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 1.5 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 2 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 2.5 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 3 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 3.5 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 4 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 7.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 7.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체 약 7.0 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.0 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 5.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 4.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.0 내지 약 7.0의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.0의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.1의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.2의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.3의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.4의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.5의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.6의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.7의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.8의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.9의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 7.0의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다.
구현예에서, 인간화된 항체는 약 4.5 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 5 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 5.5 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.5 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 7 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 7.5 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 8 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 7.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 7.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 7.0 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.0 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 5.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 4.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.0 내지 약 7.0의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.0의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.1의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.2의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.3의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.4의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.5의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.6의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.7의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.8의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.9의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 7.0의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다.
구현예에서, 인간화된 항체는 약 8.5 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 9 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 9.5 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 10 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 11 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 12 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 13 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 14 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 15 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 16 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 7.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 7.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 7.0 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.0 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 5.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 4.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.0 내지 약 7.0의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.0의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.1의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.2의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.3의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.4의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.5의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.6의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.7의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.8의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.9의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 7.0의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다.
구현예에서, 인간화된 항체는 약 17 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 18 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 19 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 20 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 21 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 22 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 23 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 24 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 7.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 7.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 7.0 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.0 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 5.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 4.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.0 내지 약 7.0의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.0의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.1의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.2의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.3의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.4의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.5의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.6의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.7의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.8의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.9의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 7.0의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다.
구현예에서, 인간화된 항체는 약 7.1 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.9 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 9.4 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 19.5 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 17.8 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 15.9 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 7.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 7.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 7.0 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.0 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 5.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 4.5 미만의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.0 내지 약 7.0의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.0의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.1의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.2의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.3의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.4의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.5의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.6의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.7의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.8의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.9의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 7.0의 pH에서 이 단락의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있다.
한 양태에서, 약 7.5 미만의 pH에서 CD73에 결합할 수 있는 항체가 제공된다. 구현예에서, 항체는 약 7.0 미만의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.5 미만의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.0 미만의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 5.5 미만의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 5 미만의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 4.5 미만의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.0 내지 약 7.0의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.0의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.1의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.2의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.3의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.4의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.5의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.6의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.7의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.8의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.9의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 7.0의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 본원에 제시된 항체는 인간화된 항체이다. 구현예에서, 항체는 경쇄(예를 들어, 인간화된 경쇄) 가변 영역 및 중쇄(예를 들어, 인간화된 중쇄) 가변 영역을 포함한다. 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(i) 서열번호 1에 제시된 CDR L1(예를 들어, 마우스 CDR L1), 서열번호 2에 제시된 CDR L2(예를 들어, 마우스 CDR L2), 서열번호 3에 제시된 CDR L3(예를 들어, 마우스 CDR L3) 및
(ii) 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 아스파르트산 또는 루신, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 라이신 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 74에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 76에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 77에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 100에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 104에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 알라닌, 카밧 위치 3에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 페닐알라닌 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 13에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 루신, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 15에 상응하는 위치에서 발린 또는 프롤린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 아스파르트산, 카밧 위치 22에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 45에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 58에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 타이로신, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 페닐알라닌, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 타이로신, 또는 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 페닐알라닌. 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(i) 서열번호 4에 제시된 CDR H1(예를 들어, 마우스 CDR H1), 서열번호 5에 제시된 CDR H2(예를 들어, 마우스 CDR H2), 서열번호 6에 제시된 CDR H3(예를 들어, 마우스 CDR H3) 및
(ii) 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 트레오닌, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 라이신, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린 또는 메티오닌, 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 라이신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 루신, 또는 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산.
본원에 제공된 인간화된 1E9 항체는 7.5 미만의 pH에서 CD73에 결합할 수 있다. 따라서, 구현예에서, 인간화된 항체는 약 7.5 미만의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 7.0 미만의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.5 미만의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 6.0 미만의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 5.5 미만의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 5 미만의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 항체는 약 4.5 미만의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.0 내지 약 7.0의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.0의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.1의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.2의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.3의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.4의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.5의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.6의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.7의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.8의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 6.9의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다. 구현예에서, 항체는 약 7.0의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있다.
그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 인간화된 1E9 항체는 카밧 위치 297에 상응하는 위치에서 글루타민을 포함할 수 있다.
구현예에서, 인간화된 1E9 항체는 CD73 항원에 결합된다. 구현예에서, CD73 항원은 세포의 일부를 형성한다. 구현예에서, 세포는 림프계 세포이다. 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 구현예에서, 세포는 암 세포이다.
한 양태에서, 약 7.5 미만의 pH에서 CD73에 결합하는 인간화된 1E9 항체가 제공된다. 구현예에서, 인간화된 1E9 항체는 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 세린 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 글라이신, 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 트레오닌, 또는 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 글루타민을 포함하고, 상기 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 발린 또는 글루탐산, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 메티오닌 또는 발린, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 알라닌, 카밧 위치 41에 상응하는 위치에서 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 글라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 트레오닌 또는 아르기닌, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 글루탐산, 또는 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 세린 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 트레오닌, 및 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 글루타민을 포함하고, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 메티오닌 또는 발린, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 알라닌, 카밧 위치 41에 상응하는 위치에서 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 글라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 트레오닌 또는 아르기닌, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 글루탐산, 및 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 세린 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 트레오닌, 또는 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 글루타민을 포함하고, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 메티오닌 또는 발린, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 알라닌, 카밧 위치 41에 상응하는 위치에서 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 글라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 트레오닌 또는 아르기닌, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 세린 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 트레오닌 및 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 글루타민을 포함하고, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 메티오닌 또는 발린, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 알라닌, 카밧 위치 41에 상응하는 위치에서 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 글라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 트레오닌 또는 아르기닌, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 세린 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 트레오닌, 또는 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 글루타민을 포함하고, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 메티오닌 또는 발린, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 알라닌, 카밧 위치 41에 상응하는 위치에서 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 글라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 트레오닌 또는 아르기닌, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 글루탐산 및 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 글라이신 및 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 아르기닌을 포함하고, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 발린 또는 글루탐산을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 글라이신 또는 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 아르기닌을 포함하고, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 발린 또는 글루탐산을 포함한다.
구현예에서, pH는 약 6.0 내지 약 7.0이다. 구현예에서, pH는 약 6.7이다. 구현예에서, pH는 약 6.3이다. 구현예에서, 항체는 상기 CD73 항원의 촉매 활성을 억제한다. 구현예에서, 항체는 서열번호 36 또는 서열번호 37의 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 가변 영역을 포함한다. 구현예에서, 항체는 서열번호 7의 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함한다. 구현예에서, CD73 항원은 세포의 일부를 형성한다. 구현예에서, CD73 항원은 고체 지지체에 결합된다.
또 다른 양태에서, 항-CD73 항체가 제공된다. 상기 항-CD73은 1E9 항체와 동일한 에피토프에 결합하고, 상기 1E9 항체는 마우스 CDR L1, 마우스 CDR L2, 또는 마우스 CDR L3을 포함하는 인간화된 경쇄 가변 영역, 및 마우스 CDR H1, 마우스 CDR H2, 또는 마우스 CDR H3을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함한다.
또 다른 양태에서, 항-CD73 항체가 제공된다. 상기 항-CD73은 1E9 항체와 동일한 에피토프에 결합하고, 상기 1E9 항체는 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함한다. 인간화된 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(i) 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1, 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2, 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3, 및
(ii) 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 아스파르트산 또는 루신, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 라이신 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 74에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 76에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 77에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 100에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 104에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 알라닌, 카밧 위치 3에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 페닐알라닌 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 13에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 루신, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 15에 상응하는 위치에서 발린 또는 프롤린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 아스파르트산, 카밧 위치 22에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 45에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 58에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 타이로신, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 페닐알라닌, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 타이로신, 또는 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 페닐알라닌. 인간화된 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(i) 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1, 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2, 및 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3, 및
(ii) 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 트레오닌, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 라이신, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린 또는 메티오닌, 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 라이신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 루신, 또는 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산.
인간화된 IgG1 항체
한 양태에서, 본원에서 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함하는 인간화된 IgG1 항체가 제공되고, 여기서, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역은 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1, 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2, 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3을 포함하고, 상기 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1, 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2, 및 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3을 포함한다.
한 양태에서, 본원에서 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함하는 인간화된 IgG4 항체가 제공되고, 여기서, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역은 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1, 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2, 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3을 포함하고, 상기 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1, 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2, 및 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3을 포함한다.
인간화된 경쇄 가변 영역은 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1, 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2, 또는 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3을 포함할 수 있다. 인간화된 경쇄 가변 영역은 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1, 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2, 및 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3을 포함할 수 있다. 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1, 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2, 또는 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3을 포함할 수 있다. 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1, 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2, 및 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3을 포함할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1을 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3을 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1을 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2를 포함한다. 구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 아스파르트산 또는 루신, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 라이신 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 74에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 76에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 77에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 100에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 104에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 알라닌, 카밧 위치 3에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 페닐알라닌 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 13에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 루신, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 15에 상응하는 위치에서 발린 또는 프롤린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 아스파르트산, 카밧 위치 22에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 45에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 58에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 타이로신, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 페닐알라닌, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 타이로신 또는 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 페닐알라닌을 추가로 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 아스파르트산 또는 루신, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 라이신 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 74에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 76에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 77에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 100에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 104에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 알라닌, 카밧 위치 3에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 페닐알라닌 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 13에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 루신, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 15에 상응하는 위치에서 발린 또는 프롤린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 아스파르트산, 카밧 위치 22에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 45에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 58에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 타이로신, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 페닐알라닌, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 타이로신 및 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 페닐알라닌을 추가로 포함한다.
구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 트레오닌, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 라이신, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린 또는 메티오닌, 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 라이신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 루신 또는 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산을 추가로 포함한다.
구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 트레오닌, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 라이신, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린 또는 메티오닌, 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 라이신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 루신 및 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산을 추가로 포함한다.
구현예에서, 인간화된 경쇄 가변 영역은 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 및 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 프롤린을 추가로 포함한다.
구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린 및 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 메티오닌을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌, 또는 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌, 및 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린을 포함한다.
구현예에서, 인간화된 IgG1 항체는 카밧 위치 297에 상응하는 위치에서 글루타민을 추가로 포함한다. 구현예에서, 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 인간화된 IgG1 항체는 CD73 항원에 결합된다. 구현예에서, CD73 항원은 세포의 일부를 형성한다. 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 구현예에서, 세포는 암 세포이다.
핵산 조성물
한 양태에서, 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 인간화된 1E9 항체를 코딩하는 단리된 핵산이 제공된다. 단리된 핵산에 의해 코딩된 인간화된 1E9 항체는 본원(상기 기재 사항을 포함하고 실시예 섹션에서) 전반에 걸쳐 상세히 기재되어 있다. 따라서, 단리된 핵산에 의해 코딩된 인간화된 항체는 본원에 기재된 모든 구현예를 포함한다. 예를 들어, 핵산은 에피토프에 결합하거나 프레임워크 잔기에 결합하는 데 관여하는 특정 잔기인 적어도 하나의 CDR을 코딩할 수 있다. 예를 들어, 핵산은 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린을 포함하는 인간화된 경쇄를 코딩할 수 있다.
구현예에서, 단리된 핵산은 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16 또는 서열번호 17의 서열을 포함한다. 구현예에서, 단리된 핵산은 서열번호 18, 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 26 또는 서열번호 27의 서열을 포함한다. 구현예에서, 단리된 핵산은 서열번호 8의 서열 및 서열번호 18의 서열을 포함한다. 구현예에서, 단리된 핵산은 서열번호 9의 서열 및 서열번호 19의 서열을 포함한다. 구현예에서, 단리된 핵산은 서열번호 10의 서열 및 서열번호 20의 서열을 포함한다. 구현예에서, 단리된 핵산은 서열번호 11의 서열 및 서열번호 21의 서열을 포함한다. 구현예에서, 단리된 핵산은 서열번호 12의 서열 및 서열번호 22의 서열을 포함한다. 구현예에서, 단리된 핵산은 서열번호 13의 서열 및 서열번호 23의 서열을 포함한다. 구현예에서, 단리된 핵산은 서열번호 14의 서열 및 서열번호 24의 서열을 포함한다. 구현예에서, 단리된 핵산은 서열번호 15의 서열 및 서열번호 25의 서열을 포함한다. 구현예에서, 단리된 핵산은 서열번호 16의 서열 및 서열번호 26의 서열을 포함한다. 구현예에서, 단리된 핵산은 서열번호 17의 서열 및 서열번호 27의 서열을 포함한다.
구현예에서, 단리된 핵산은 코돈-최적화된 서열을 포함한다. 구현예에서, 단리된 핵산은 서열번호 52 또는 서열번호 54를 포함한다. 구현예에서, 단리된 핵산은 서열번호 52를 포함한다. 구현예에서, 단리된 핵산은 서열번호 54를 포함한다. 구현예에서, 단리된 핵산은 서열번호 52 또는 서열번호 54이다. 구현예에서, 단리된 핵산은 서열번호 52이다. 구현예에서, 단리된 핵산은 서열번호 54이다.
또 다른 양태에서, 구현예를 포함하는 본원에 제공된 인간화된 IgG1 항체를 코딩하는 단리된 핵산이 제공된다. 단리된 핵산에 의해 코딩된 인간화된 IgG1 항체는 본원(상기 기재 사항을 포함하고 실시예 섹션에서) 전반에 걸쳐 상세히 기재되어 있다. 따라서, 단리된 핵산에 의해 코딩된 인간화된 항체는 본원에 기재된 모든 구현예를 포함한다. 예를 들어, 핵산은 에피토프에 결합하거나 프레임워크 잔기에 결합하는 데 관여하는 특정 잔기인 적어도 하나의 CDR을 코딩할 수 있다. 따라서, 구현예에서, 핵산은 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1, 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2, 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3을 코딩한다. 구현예에서, 핵산은 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1, 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2, 및 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3을 코딩한다. 구현예에서, 핵산은 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1, 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2, 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3, 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1, 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2 또는 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3을 코딩한다. 구현예에서, 핵산은 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1, 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2, 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3, 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1, 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2, 및 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3을 코딩한다.
또 다른 양태에서, 구현예를 포함하는 본원에 제공된 인간화된 IgG4 항체를 코딩하는 단리된 핵산이 제공된다. 단리된 핵산에 의해 코딩된 인간화된 IgG4 항체는 본원(상기 기재 사항을 포함하고 실시예 섹션에서) 전반에 걸쳐 상세히 기재되어 있다. 따라서, 단리된 핵산에 의해 코딩된 인간화된 항체는 본원에 기재된 모든 구현예를 포함한다. 예를 들어, 핵산은 에피토프에 결합하거나 프레임워크 잔기에 결합하는 데 관여하는 특정 잔기인 적어도 하나의 CDR을 코딩할 수 있다. 따라서, 구현예에서, 핵산은 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1, 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2, 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3을 코딩한다. 구현예에서, 핵산은 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1, 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2, 및 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3을 코딩한다. 구현예에서, 핵산은 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1, 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2, 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3, 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1, 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2 또는 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3을 코딩한다. 구현예에서, 핵산은 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1, 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2, 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3, 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1, 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2, 및 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3을 코딩한다.
약학 조성물
또 다른 양태에서, 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 치료적 유효량의 인간화된 1E9 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물이 제공된다.
또 다른 양태에서, 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 치료적 유효량의 인간화된 IgG1 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물이 제공된다.
또 다른 양태에서, 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 치료적 유효량의 인간화된 IgG4 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물이 제공된다.
본원에 제공된 바와 같은 치료적 유효량은 이의 의도된 목적을 달성하기 위해 효과적인 양을 언급한다. 특정 적용을 위해 효과적인 실제 양은 특히 치료받는 조건에 의존할 것이다. 질환을 치료하기 위한 방법에서 투여되는 경우, 본원에 기재된 약학 조성물은 예를 들어, 표적 분자(예를 들어, CD73)의 활성을 조절하고/하거나 질환 증상(예를 들어, 암)의 진행을 감소시키거나, 제거하거나, 느리게 하면서, 목적하는 결과를 달성하기에 효과적인 활성 인간화된 항체의 양을 함유한다. 본원에 제공된 치료적 유효량의 인간화된 항체의 결정은 특히 본원의 상세한 설명의 관점에서 당업자의 능력 범위 내에 있다.
허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용되는 투여 용량 및 농도에서 수용자에게 비독성이고 전형적으로 5.0 내지 8.0, 대부분 흔히 6.0 내지 7.0의 pH에서 포스페이트, 시트레이트 또는 아세테이트와 같은 완충제; 등장성이 되도록 하기 위한 염화나트륨, 염화칼륨 등과 같은 염; 항산화제, 방부제, 저분자량의 폴리펩티드, 단백질, 친수성 중합체, 예를 들어, 폴리소르베이트 80, 아미노산, 예를 들어, 글라이신, 탄수화물, 킬레이트화제, 당, 및 당업자에게 공지된 다른 표준 성분(Remington's Pharmaceutical Science 16th edition, Osol, A. Ed. 1980)을 포함한다. mAb는 전형적으로 0.1 - 100 mg/ml, 예를 들어, 1 - 10 mg/ml 또는 10 - 50 mg/ml, 예를 들어, 5, 10, 20, 30, 40, 50 또는 60 mg/ml의 농도로 존재한다.
본원에 기재된 바와 같은 인간화된 항체를 포함하는 약학 조성물은 당업자에게 공지된 다양한 방법에 의해 투여될 수 있다. 투여 경로 및/또는 투여 방식은 목적하는 결과에 따라 다양하다. 구현예에서, 투여는 정맥내, 근육내, 복강내 또는 피하이거나, 표적 부위에 인접하게 투여된다. 약학적 허용되는 부형제는 정맥내, 근육내, 피하, 비경구, 척추 또는 상피 투여(예를 들어, 주사 또는 주입에 의해)에 적합할 수 있다.
인간화된 항체의 약학 조성물은 당업계에 널리 공지되고 통상적으로 수행되는 방법에 따라 제조될 수 있다. 예를 들어, 문헌(Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Mack Publishing Co., 20th ed., 2000; and Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978)을 참조한다. 약학 조성물은 바람직하게는 GMP 조건하에서 제조된다. 전형적으로, 치료적 유효량 또는 효과적인 용량의 인간화된 항체는 본 발명의 약학 조성물에 사용된다. 제공된 인간화된 항체는 당업자에게 공지된 통상의 방법에 의해 약학적으로 허용되는 투여 형태로 제제화될 수 있다. 투여 용법은 최적의 목적하는 반응(예를 들어, 치료 반응)을 제공하도록 조정된다. 예를 들어, 단일 볼러스가 투여될 수 있고 여러 분할된 용량이 시간 경과에 따라 투여될 수 있거나, 상기 용량은 치료적 상황의 경험에 의해 지적된 바와 같이 비례적으로 감소되거나 증가될 수 있다. 다른 치료제 또는 작용제와 조합하여 인간화된 항체를 제제화하는 것이 유리할 수 있다. 투여의 용이함 및 투여의 균일성을 위해 투여 단위 형태로 비경구 조성물을 제제화하는 것이 유리할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 투여 단위 형태는 치료될 대상체에 대한 통합 투여로서 적합한 물리적으로 별개의 단위를 언급하고; 각각의 단위는 요구되는 약학적 부형제와 연합된 목적하는 치료적 효과를 생성하도록 계산된 소정량의 인간화된 항체를 함유한다.
본 발명의 약학 조성물 중에 활성 성분의 실제 투여 수준은 환자에게 독성 없이 특정 환자에 대한 목적하는 치료적 반응, 조성물 및 투여 방식을 달성하기에 효과적인 활성 성분의 양을 수득하기 위해 다양할 수 있다. 선택된 용량 수준은 다양한 약동학적 인자에 의존하고 이는 사용되는 본 발명의 특정 조성물의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 사용되는 특정 항체의 분비율, 치료 지속 기간, 다른 약물, 사용되는 특정 조성물과 배합하여 사용되는 화합물 및/또는 물질, 치료받는 환자의 연령, 성별, 체중, 병태, 일반 건강 및 사전 약물 치료 병력 등의 인자를 포함한다.
의사 또는 수의사는 목적하는 치료적 효과를 달성하기 위해 요구되는 것 보다 낮은 수준에서 약학 조성물에 사용되는 본 발명의 인간화된 항체의 용량으로 개시할 수 있고 목적하는 효과가 성취될 때까지 용량을 점진적으로 증가시킬 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 조성물의 유효량은 치료될 특정 질환 또는 병태, 투여 수단, 표적 부위, 환자의 생리학적 상태, 환자가 인간 또는 동물 인지의 여부, 투여되는 다른 약물 처리 및 처리가 예방을 위한 것인지 치료를 위한 것인지의 여부를 포함하는 많은 상이한 인자에 따라 다양하다. 치료 용량은 안전성 및 효능을 최적화하기 위해 적정될 필요가 있다. 항체를 사용한 투여의 경우, 용량은 숙주 체중의 약 0.0001 내지 100 mg/kg, 및 보다 일반적으로 0.01 내지 5 mg/kg의 범위이다. 예를 들어, 용량은 1 mg/kg 체중 또는 10 mg/kg 체중일 수 있거나, 1-10 mg/kg의 범위 내 일 수 있다. 예시적 치료 용법은 2주 마다 1회 또는 1개월 마다 1회 또는 3 내지 6개월 마다 1회의 투여를 가능하게 한다.
본원에 제공된 인간화된 항체는 다중 횟수로 투여될 수 있다. 단일 투여 간의 간격은 매주, 매월 또는 매년일 수 있다. 간격은 또한 환자에서 인간화된 항체의 혈액 수준을 측정함에 의해 지적된 바와 같이 불규칙할 수 있다. 일부 방법에서, 용량은 1-1000　㎍/ml의 혈장 항체 농도를 달성하기 위해 조정되고 일부 방법에서는 25-300　㎍/ml이다. 대안적으로, 항체는 지속 방출 제제으로서 투여될 수 있고, 이 경우에 덜 빈번한 투여가 요구된다. 용량 및 빈도는 환자에서 항체의 반감기에 따라 다양하다. 일반적으로, 인간화된 항체는 키메라 항체 및 비인간 항체의 것 보다 더 긴 반감기를 보여준다. 투여 용량 및 빈도는 치료가 예방학적인지 또는 치료적인지에 따라 다양할 수 있다. 예방학적 적용에서, 상대적으로 낮은 용량이 보다 긴 기간 동안 비교적 드문 간격으로 투여된다. 일부 환자는 이들의 여생 동안 치료를 계속 받는다. 치료적 적용에서, 비교적 짧은 간격에서 비교적 높은 용량은 때로는 질환의 진행이 감소되거나 종결될 때까지, 그리고 바람직하게는 환자가 질환 증상의 부분적 또는 완전한 완화를 보여줄 때까지 요구된다. 이후, 환자에게 예방적 용법이 투여될 수 있다.
방법
한 양태에서, 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 치료적 유효량의 인간화된 1E9 항체를 대상체에게 투여함으로써 대상체에서 암을 치료하는 것을 포함한다. 구현예에서, 암은 림프계 암이다.
한 양태에서, 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 치료적 유효량의 인간화된 IgG1 항체를 대상체에게 투여함으로써 대상체에서 암을 치료하는 것을 포함한다. 구현예에서, 암은 림프계 암이다.
억제 방법
한 양태에서, 세포의 증식을 억제하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 (i) 세포를, 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 바와 같은 인간화된 IgG1 항체와 접촉시킴으로써 접촉된 세포를 형성함을 포함한다. (ii) 인간화된 IgG1 항체는 상기 접촉된 세포 상의 CD73 항원과 결합하도록 함으로써 세포의 증식을 억제한다. 구현예에서, 세포는 림프계 세포이다. 구현예에서, 림프계 세포는 T 세포이다.
한 양태에서, 세포의 증식을 억제하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 (i) 세포를, 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 바와 같은 인간화된 IgG4 항체와 접촉시킴으로써 접촉된 세포를 형성함을 포함한다. (ii) 인간화된 IgG4 항체는 상기 접촉된 세포 상의 CD73 항원과 결합하도록 함으로써 세포의 증식을 억제한다. 구현예에서, 세포는 림프계 세포이다. 구현예에서, 림프계 세포는 T 세포이다.
검출 방법
한 양태에서, CD73 항원에 결합된 인간화된 1E9 항체를 검출하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 (i) 인간화된 1E9 항체를 약 7.5 미만의 pH에서 CD73 항원과 접촉시키고 (ii) 인간화된 1E9 항체의 CD73 항원에의 결합을 검출함을 포함한다. 구현예에서, pH는 약 6.0 내지 약 7.0이다. 구현예에서, pH는 약 6.7이다. 구현예에서, pH는 약 6.3이다. 구현예에서, 단계 (ii)의 결합 검출은 CD73 촉매 활성의 억제를 검출함을 포함한다. 구현예에서, CD73 항원은 세포의 일부를 형성한다. 구현예에서, CD73 항원은 고체 지지체에 결합된다. 구현예에서, 인간화된 1E9 항체는 검출 가능한 모이어티를 포함한다.
T-세포 활성화의 방법
암 환경에서 면역억제된(비활성화된, 비증식) T 세포를 활성화시키는 방법이 본원에 제공된다. 따라서, 한 양태에서, 면역억제된 T 세포를 활성화시키는 방법이 제공된다. 상기 방법은 (i) T 세포를, 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 바와 같은 인간화된 1E9 항체와 접촉시킴으로써 접촉된 T 세포를 형성함을 포함한다. (ii) 인간화된 1E9 항체는 상기 접촉된 T 세포 상의 CD73 항원과 결합하도록 함으로써 면역억제된 T 세포를 활성화시킨다. 구현예에서, T 세포는 암 환경 내에 있다. 구현예에서, 접촉된 T 세포의 IFN-감마 분비는 항체의 부재에 상대적으로 증가된다. 구현예에서, 접촉된 T 세포의 증식은 항체의 부재에 상대적으로 증가된다. 본원에 제공된 바와 같은 "면역억제된 T 세포"는 증식하지 않거나 검출 가능한 양의 사이토킨을 분비하지 않거나 활성화된 T 세포를 특징화하는 세포 표면 마커(예를 들어, IFN-감마, CD25, CD38)를 발현하지 않는 암 환경(암 세포 또는 고체 종양에 근접해 있고/있거나 이와의 생리학적 접촉)에 존재하는 T 세포이다.
조합 치료 방법
그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 치료 방법은 제2 치료제의 투여를 포함할 수 있다. 따라서, 본원에 제공된 치료 방법은 본원에 제공된 바와 같은 인간화된 1E9 항체, 또는 제2 치료제와 조합된, 본원에 제공된 바와 같은 인간화된 IgG1 또는 IgG4 항체를 투여함을 포함한다. 제2 치료제는 암을 치료하거나 예방하는 데 유용한 임의의 조성물일 수 있다.
한 양태에서, 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 치료적 유효량의 인간화된 1E9 항체 및 유효량의 제2 치료제를 대상체에게 투여함으로써 대상체에서 암을 치료하는 것을 포함한다.
또 다른 양태에서, 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 치료적 유효량의 인간화된 IgG1 항체 및 유효량의 제2 치료제를 대상체에게 투여함으로써 대상체에서 암을 치료하는 것을 포함한다.
또 다른 양태에서, 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 그 구현예를 포함하는 본원에 제공된 치료적 유효량의 인간화된 IgG4 항체 및 유효량의 제2 치료제를 대상체에게 투여함으로써 대상체에서 암을 치료하는 것을 포함한다.
본원에 제공된 방법에 유용한 제2 치료제는 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 항신생물 성질 또는 능력을 갖는 화합물, 약물, 길항제, 억제제 또는 조절제일 수 있다. 구현예에서, 제2 치료제는 화학요법제이다. "화학요법" 또는 "화학요법제"는 이의 분명한 통상의 의미에 따라 사용되고 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 항신생물 성질 또는 능력을 갖는 화학적 조성물 또는 화합물을 언급한다. 구현예에서, 제2 치료제는 방사선 치료법이다. 구현예에서, 제2 치료제는 암을 치료하기 위한, FDA 또는 미국 이외의 나라의 유사 규제 기관에 의해 승인된 제제이다.
구현예에서, 제2 치료제는 화합물이다. 구현예에서, 화합물은 퓨린 수용체 길항제이다. 구현예에서, 화합물은 A2A 아데노신 수용체 길항제 또는 A2B 아데노신 수용체 길항제이다. 구현예에서, 화합물은 A2A 아데노신 수용체 길항제이다. 구현예에서, 화합물은 A2B 아데노신 수용체 길항제이다. 구현예에서, 화합물은 모든 목적을 위해 본원에 참조로 인용된 미국 특허 제9,120,807호, 제8,450,328호 또는 제8,354,415호에 개시된 화합물들 중 임의의 하나이다. 구현예에서, 화합물은 티에노피리미딘 화합물이다. 구현예에서, 화합물은 하기 화학의 구조를 갖는다:
Figure pct00001
본원에 제공된 바와 같은 용어 "A2A 아데노신 수용체"는 A2A 아데노신 수용체(ADORA2A)의 임의의 재조합 또는 천연적으로 존재하는 형태, 또는 ADORA2A 단백질 활성(예를 들어, ADORA2A와 비교하여 적어도 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 활성 내)을 유지하는 이의 변이체 또는 동족체를 포함한다. 일부 양태에서, 변이체 또는 동족체는 천연적으로 존재하는 ADORA2A 폴리펩티드와 비교하여 전체 서열 또는 서열의 일부(예를 들어, 50, 100, 150 또는 200 연속 아미노산 부분)에 걸쳐 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 구현예에서, ADORA2A는 NCBI 서열 표준 GI:5921992, 이의 동족체 또는 기능성 단편에 의해 동정된 바와 같은 단백질이다.
본원에 제공된 바와 같은 용어 "A2B 아데노신 수용체"는 A2B 아데노신 수용체(ADORA2B)의 임의의 재조합 또는 천연적으로 존재하는 형태, 또는 ADORA2B 단백질 활성(예를 들어, ADORA2B와 비교하여 적어도 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 활성 내)을 유지하는 이의 변이체 또는 동족체를 포함한다. 일부 양태에서, 변이체 또는 동족체는 천연적으로 존재하는 ADORA2B 폴리펩티드와 비교하여 전체 서열 또는 서열의 일부(예를 들어, 50, 100, 150 또는 200 연속 아미노산 부분)에 걸쳐 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 구현예에서, ADORA2B는 NCBI 서열 표준 GI:4501951, 이의 동족체 또는 기능성 단편에 의해 동정된 바와 같은 단백질이다.
구현예에서, 치료제는 제2 인간화된 항체이다. 구현예에서, 제2 인간화된 항체는 단백질 프로그램화된 세포사 리간드 1(PD-L1)에 결합할 수 있는 항체이다. 구현예에서, 제2 인간화된 항체는 아테졸리주맙이다. 구현예에서, 제2 인간화된 항체는 단백질 프로그램화된 세포사 단백질 1(PD-1)에 결합할 수 있는 항체이다. 구현예에서, 제2 인간화된 항체는 CTLA-4에 결합할 수 있는 항체이다.
용어 "아테졸리주맙" 또는 "MPDL3280A"는 단백질 프로그램화된 세포사 리간드 1(PD-L1)에 대한 IgG1 이소타입의 완전히 인간화된 가공된 모노클로날 항체를 언급한다. 통상적인 의미에서, 아테졸리주맙은 CAS 등록 번호 1380723-44-3을 언급한다.
본원에 제공된 바와 같은 용어 "PDL-1"은 단백질 프로그램화된 세포사 리간드 1(PD-L1)의 임의의 재조합 또는 천연적으로 존재하는 형태, 또는 PDL-1 단백질 활성(예를 들어, PDL-1과 비교하여 적어도 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 활성 내)을 유지하는 이의 변이체 또는 동족체를 포함한다. 일부 양태에서, 변이체 또는 동족체는 천연적으로 존재하는 PDL-1 폴리펩티드와 비교하여 전체 서열 또는 서열의 일부(예를 들어, 50, 100, 150 또는 200 연속 아미노산 부분)에 걸쳐 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 구현예에서, PDL-1은 NCBI 서열 표준 GI:390979639, 이의 동족체 또는 기능성 단편에 의해 동정된 바와 같은 단백질이다.
본원에 제공된 바와 같은 용어 "PD-1"은 단백질 프로그램화된 세포사 단백질 1(PD-1)의 임의의 재조합 또는 천연적으로 존재하는 형태, 또는 PD-1 단백질 활성(예를 들어, PD-1과 비교하여 적어도 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 활성 내)을 유지하는 이의 변이체 또는 동족체를 포함한다. 일부 양태에서, 변이체 또는 동족체는 천연적으로 존재하는 PD-1 폴리펩티드와 비교하여 전체 서열 또는 서열의 일부(예를 들어, 50, 100, 150 또는 200 연속 아미노산 부분)에 걸쳐 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 구현예에서, PD-1은 NCBI 서열 표준 GI:167857792, 이의 동족체 또는 기능성 단편에 의해 동정된 바와 같은 단백질이다.
본원에 제공된 바와 같은 용어 "CTLA-4" 또는 "CTLA-4 단백질"은 세포독성 T-림프구-연합 단백질 4(CTLA-4)의 임의의 재조합 또는 천연적으로 존재하는 형태, 또는 CTLA-4 단백질 활성(예를 들어, CTLA-4와 비교하여 적어도 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 활성 내)을 유지하는 이의 변이체 또는 동족체를 포함한다. 일부 양태에서, 변이체 또는 동족체는 천연적으로 존재하는 CTLA-4 폴리펩티드와 비교하여 전체 서열 또는 서열의 일부(예를 들어, 50, 100, 150 또는 200 연속 아미노산 부분)에 걸쳐 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 구현예에서, CTLA-4는 NCBI 서열 표준 GI:83700231, 이의 동족체 또는 기능성 단편에 의해 동정된 바와 같은 단백질이다.
제공된 치료 방법에서, 치료될 질환(예를 들어, 암)에 적합한 추가의 치료제가 사용될 수 있다. 따라서, 일부 구현에에서, 제공된 치료 방법은 제2 치료제를 대상체에게 투여함을 추가로 포함한다. 적합한 추가의 치료제는 진통제, 마취제, 강장제, 코르티코스테로이드, 항콜린제, 항콜린에스테라제, 항경련제, 항신생물제, 알로스테릭 억제제, 동화스테로이드, 항관절염 제제, 정신치료제, 신경 차단제, 항-염증 제제, 구충제, 항생제, 항응집제, 항진균제, 항히스타민, 항무스카린제, 항마이코박테리아제, 항원충제, 항바이러스제, 도파민작용제, 혈액학적 제제, 면역학적 제제, 무스카린제, 프로테아제 억제제, 비타민, 성장 인자 및 호르몬을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 제제 및 용량의 선택은 치료받은 소정의 질환을 기반으로 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
작용제 또는 조성물의 조합은 부수적으로(예를 들어, 혼합물로서), 별도로 그러나 동시에(예를 들어, 별도의 정맥내 라인을 통해) 또는 연속적으로(예를 들어, 하나의 작용제가 먼저 투여되고 이어서 제2 작용제가 투여된다) 투여될 수 있다. 따라서, 조합이라는 용어는 2개 이상의 작용제 또는 조성물의 부수적, 동시적 또는 연속적 투여를 언급하기 위해 사용된다. 치료 과정은 대상체 및 선택된 치료 유형의 특정 특징에 의존하여 개별 기준으로 최상으로 결정된다. 본원에 개시된 것들과 같은 치료제는 치료적으로 효과적인 매일, 하루 2회, 2주마다, 매월 또는 임의의 적용 가능한 기준으로 대상체에게 투여될 수 있다. 치료제는 단독으로 또는 본원에 개시되거나 당업계에 공지된 임의의 다른 치료제와 조합하여 투여될 수 있다. 추가의 치료제는 제1 치료제와 동시에, 상이한 시점에서 또는 전체 상이한 치료적 스케줄(예를 들어, 추가의 치료제를 매주 투여하면서 제1 치료제는 매일 투여한다)상에서 투여될 수 있다.
본원에 기재된 방법에 따라, 대상체는 본원에 제공된 치료제(즉, 인간화된 1E9 항체, 또는 예를 들어, 화합물 또는 제2 인간화된 항체와 조합된 인간화된 IgG1 또는 IgG4 항체) 중 하나 이상의 유효량을 투여 받는다. 용어 유효량 및 효과적인 용량은 상호교환적으로 사용된다. 용어 유효량은 목적하는 생리학적 반응(예를 들어, 염증 감소)을 생성하기 위해 필요한 임의의 양으로서 정의된다. 유효량 및 작용제를 투여하기 위한 스케줄은 당업자에 의해 경험적으로 결정될 수 있다. 투여 용량 범위는 목적하는 효과를 생성하기 위해 충분히 큰 범위이고 여기서, 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상은 영향을 받는다(예를 들어, 감소되거나 지연됨). 용량은 원치않는 교차 반응, 과민 반응 등과 같은 상당한 부작용을 유발할 정도로 크지 않아야 한다. 일반적으로, 용량은 연령, 병태, 성별, 질환 유형, 질환 또는 장애의 정도, 투여 경로 또는 다른 약물이 용법에 포함되는지의 여부에 따라 다양하고 당업자에 의해 결정될 수 있다. 용량은 임의의 사용 금지 사유(contraindication)가 발생하는 경우 개별 담당의에 의해 조정될 수 있다. 용량은 다양할 수 있고 1일 또는 수일 동안, 1회 이상의 용량 투여로 매일 투여될 수 있다. 소정의 부류의 약품에 대한 적당한 용량에 대한 가이드는 문헌에서 찾을 수 있다. 예를 들어, 소정의 파라미터에 대해, 유효량은 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 40%, 50%, 60%, 75%, 80%, 90%, 또는 적어도 100%의 증가 또는 감소를 보여준다. 효능은 또한 "-배수" 증가 또는 감소로서 표현될 수 있다. 예를 들어, 치료적 유효량은 대조군에 대해 적어도 1.2-배, 1.5-배, 2-배, 5-배 이상의 효과를 가질 수 있다. 정확한 용량 및 제제는 치료 목적에 의존하고 공지된 기술을 사용하여 당업자에게 확인될 수 있다(문헌참조: 예를 들어, Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (vols. 1-3, 1992); Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999); Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, Gennaro, Editor (2003), and Pickar, Dosage Calculations (1999)).
실시예
실시예 1
항-CD73(1E9)의, 인간 IgG1 이소타입으로의 스위칭은 마우스 IgG3 이소타입에 의해 관찰되는 T 세포 활성화에 대한 직접적인 효과를 없앤다.
1E9 하이브리도마 세포주로부터 제조된 항체는 mIgG3 이소타입이다. 이 항체는 PMA와 상승작용하여 T 세포 증식, IL-2 분비, 및 IL-2 수용체 발현의 상향조절을 활성화시키는 것으로 확인되었다(PMID: 2550543). 이 효과는, 1E9가 내인적으로 이용되는 GPI-앵커링 메커니즘과는 달리 막관통 영역을 통해 세포막에 부착되는 촉매적 불활성 CD73 또는 CD73을 발현하는 세포 상에서 이들 효과를 매개하기 때문에, 직접적인 신호전달 메커니즘을 통해 이루어지는 것으로 생각된다(PMID: 9113412, 7697732, 8027539). 본 출원인들은 1E9 유래의 가변 영역을 인간 IgG1 프레임워크에 스와핑하여 키메라 1E9 항체를 생성하였다. 키메라 1E9는 T 세포 증식 또는 IL-2 수용체(CD25 발현)의 활성화를 매개하지 않는다. 따라서, 본 출원인들은 이소타입의 스위칭이 CD73 신호전달에 대한 항체 매개 효과를 변경할 수 있음을 발견하였다.
CD73의 촉매 활성을 평가하기 위한 세포 검정
CD73은 세포 표면 상에 발현되고 AMP를 아데노신 및 포스페이트로 가수분해하는 엑토뉴클레오티다제이다. CD73의 촉매 활성 및 출원인의 항-CD73 항체가 상기 활성을 억제하는 능력을 평가하기 위해, 본 출원인들은 세포 검정을 이용하였다. CD73을 내인적으로 발현하는 세포를 AMP 첨가 전 37℃에서 다양한 농도 범위에 걸쳐 항-CD73 항체 또는 이소타입 대조군과 함께 인큐베이트하였다. 세포를 20분 동안 37℃에서 AMP와 함께 인큐베이트하였다. 배지 내 포스페이트 수준은 시판되는 시약(센소라이트 MG 포스페이트 검정 키트(Sensolyte MG phosphate assay kit), AnaSpec)으로 측정하고 CD73 활성에 직접적으로 비례한다. 상기 검정은 문헌으로부터 채택하였고 CD73 활성을 측정하는 데 사용하기 위한 것으로 이전에 보고되었다(PMID: 21506751). 출원인의 지식에 따라, 상기 검정은 항상 대략 7.2의 생리학적 pH에서 수행한다. 놀랍게도, 본 출원인들은 검정이 항-CD73 활성을 스크리닝하기 위해 보다 낮은 pH에서 수행되는 경우, 보다 낮은 pH에서 CD73 활성을 차단하는 능력을 유지함을 보여줄 수 있었다. 약산성 pH에서 견실한 활성은, 고형 종양 미세환경이 약산성인 것으로 알려져 있기 때문에, 고형 종양 적응증에 사용하기 위한 치료적 항체의 원하는 특성일 것이다. 본 출원인들은 일부 항체(CPX-002, CPX-005, CPX-006)가 보다 낮은 pH(6.3 또는 6.7)에서 CD73 활성을 차단하는 데 있어서의 효능을 보유하고, 다른 항체(CPX-003, CPX-004)는 보다 낮은 pH에서 효능을 상실함을 확인하였다.
친화성 측정
본 출원인들은, 하기 항체들의 CD73에의 결합을 측정하기 위해, 5종의 인간화된 항-CD73 후보물(CPX-003, CPX-004, CPX-005, CPX-006, CPX-007) 및 키메라 항체(CPX-002)에 대한 친화성 측정을 얻었다. 이들 친화성 측정의 결과는 표 1에 요약한다.
Figure pct00002
낮은 pH에서의 최고 CD73 친화성 및 최상의 효능과 연관된 특정 쇄
2종의 인간화된 항체(CPX-005, CPX-006)는 다른 후보물과 비교하여 CD73에 대해 보다 높은 친화성을 갖고 CD73 활성의 억제에 대한 효능을 개선시켰다. 이들 2종의 항체는 동일한 중쇄를 사용하고 단지 경쇄에서만 상이하다. 따라서, 상기 특정 중쇄는 높은 친화성 및 CD73 활성의 강력한 억제를 달성하기 위해 중요할 수 있다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 7의 서열을 포함한다. 구현예에서, 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 7의 서열이다.
실시예 2
클론 BAP094-01의 인간화
본 출원인들은 클론 BAP094-01(키메라 1E9)의 인간화 라이브러리의 작제를 완료하였다. BAP094-01의 경쇄 및 중쇄 CDR 서열(각각 서열번호 28 및 서열번호 29)을 코딩하는 이중 가닥 DNA 단편을 인간 프레임워크 풀과 조합하였다. 그 후, 전장 가변 도메인을 포유동물 발현 벡터에 클로닝하였다. 경쇄 가변 도메인은 분비 신호 및 인간 카파 불변 도메인과 인 프레임으로 클로닝하였다. 중쇄 가변 도메인은 리더 서열 및 인간 IgG1 불변 도메인과 인 프레임으로 클로닝하였다. 라이브러리의 품질(합성된 가변 도메인의 다양성)은 서열 분석에 의해 확인하였다(데이터는 나타내지 않음).
인간화된 변이체의 스크리닝
인간화된 클론은 96웰 플레이트에 어레이하였다. 각각의 플레이트는 또한 양성 대조군(BAP094-01, 즉, 키메라 1E9) 및 음성 대조군(단지 벡터만)의 2개의 웰을 포함한다. 각각의 플레이트에 대해 플라스미드 DNA를 준비하고 96웰 포맷에서 CHO-S 세포로 형질감염시켰다. 상등액은 형질감염 후 48시간에 수거하였다. IgG 농도는 인간 IgG의 정량을 위해 ELISA 프로토콜을 이용하여 결정하였다. MDA-MB-231 세포의 표면 상에 발현된 CD73으로의 인간화된 클론의 결합은 세포 기반 ELISA를 사용하여 결정하였다. 1차 스크리닝으로부터의 상위 히트(top hit)를 다시 어레이하고 재형질감염시키고, 다시 세포 기반 ELISA에 의해 스크리닝하였다(도 5).
상위 인간화된 변이체 히트의 서열 분석
선택된 상위 인간화된 변이체 클론의 경쇄 및 중쇄 가변 도메인을 시퀀싱하고, 클론 BAP094-01(1E9)의 모체 뮤린 서열과 정렬하였다. 서열 분석은 상위 10개 클론 내에 4종의 상이한 중쇄와 5종의 상이한 경쇄가 있음을 보여준다(도 4a 및 도 4b). 각각의 상위 히트는 인간화된 경쇄와 중쇄의 특유의 조합을 갖는다.
공식 서열 목록
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
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Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
SEQUENCE LISTING <110> Corvus Pharmaceuticals, Inc. BioAtla, LLC Griffin, Emily Piccione Miller, Richard A. Frey, Gerhard J. Chang, Hwai W. <120> HUMANIZED ANTI-CD73 ANTIBODIES <130> 48517-508001WO <150> US 62/265,357 <151> 2015-12-09 <150> US 62/289,694 <151> 2016-02-01 <150> US 62/346,327 <151> 2016-06-06 <160> 55 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 1 Arg Ala Ser Lys Asn Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His 1 5 10 15 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 2 Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 3 Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Phe Thr 1 5 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 4 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Thr 1 5 10 <210> 5 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 5 Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Thr 1 5 10 <210> 6 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence 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Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 45 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 45 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 46 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 46 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 47 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 47 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Glu Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 48 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 48 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Glu Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 49 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 49 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 50 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 50 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 51 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 51 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 52 <211> 1438 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polynucleotide <400> 52 aagcttgccg ccaccatgga atggtcctgg gtgttcctgt tcttcctgtc cgtgaccacc 60 ggcgtgcact cccaggtgca gctggtgcag tctggcgccg aggtggaaaa gcctggcgcc 120 tctgtgaagg tgtcctgcaa ggcctccggc tacaccttta ccagctactg gatcacctgg 180 gtgcgacagg ctcctggaca gggcctggaa tggatgggcg acatctaccc tggctccggc 240 aacaccaact acaacgagaa gttcaagacc cgcgtgacca tcaccgccga caagtccacc 300 tccaccgcct acatggaact gtcctccctg cggagcgagg acaccgccgt gtactactgt 360 gctaaagagg gcggcctgac caccgaggac tacgccctgg attattgggg ccagggcacc 420 ctcgtgaccg tgtcctctgc ttctaccaag ggcccctccg tgttccctct ggccccttcc 480 agcaagtcta cctctggcgg cacagccgct ctgggctgcc tcgtgaagga ctacttcccc 540 gagcccgtga cagtgtcttg gaactctggc gccctgacca gcggagtgca caccttccct 600 gctgtgctgc agtcctccgg cctgtactcc ctgtcctccg tcgtgactgt gccctccagc 660 tctctgggca cccagaccta catctgcaac gtgaaccaca agccctccaa caccaaggtg 720 gacaagaagg tggaacccaa gtcctgcgac aagacccaca cctgtccccc ttgtcctgcc 780 cctgaactgc tgggcggacc ctctgtgttt ctgttccccc caaagcccaa ggacaccctg 840 atgatctccc ggacccccga agtgacctgc gtggtggtgg atgtgtccca cgaggaccct 900 gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct 960 agagaggaac agtaccagtc cacctaccgg gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag 1020 gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc aaggtgtcca acaaggctct gcctgccccc 1080 atcgaaaaga ccatctccaa ggccaagggc cagccccggg aaccccaggt gtacacactg 1140 ccccctagca gggacgagct gaccaagaac caggtgtccc tgacctgtct cgtgaaaggc 1200 ttctacccct ccgatatcgc cgtggaatgg gagtccaacg gccagcctga gaacaactac 1260 aagaccaccc cccctgtgct ggactccgac ggctcattct ttctgtactc caagctgaca 1320 gtggacaagt cccggtggca gcagggcaac gtgttctcct gcagcgtgat gcacgaggcc 1380 ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg tccctgagcc ccggcaagtg atgaattc 1438 <210> 53 <211> 471 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 53 Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Glu Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Ser Tyr Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Met Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn 65 70 75 80 Glu Lys Phe Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Lys Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 130 135 140 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 145 150 155 160 Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 165 170 175 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 180 185 190 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 195 200 205 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 210 215 220 Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 225 230 235 240 Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 245 250 255 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 260 265 270 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 275 280 285 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 290 295 300 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 305 310 315 320 Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 325 330 335 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 340 345 350 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 355 360 365 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 370 375 380 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 385 390 395 400 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 405 410 415 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 420 425 430 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 435 440 445 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 450 455 460 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 465 470 <210> 54 <211> 739 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polynucleotide <400> 54 aagcttgccg ccaccatgtc cgtgcctacc caggtgctgg gactgctgct gctgtggctg 60 accgatgcca gatgcgagat cgtgctgacc cagtcccctg ccaccctgtc actgtctcca 120 ggcgagagag ccaccctgag ctgccgggcc tccaagaacg tgtccacctc cggctactcc 180 tacatgcact ggtatcagca gaagcccggc caggccccca gactgctgat ctacctggcc 240 tccaacctgg aatccggcat cccccctaga ttctccggct ctggctacgg caccgacttc 300 accctgacca tcaacaacat cgagtccgag gacgccgcct actacttctg ccagcactcc 360 agagagctgc ccttcacctt tggccagggc accaaggtgg aaatcaagcg gaccgtggcc 420 gctccctccg tgttcatctt cccaccttcc gacgagcagc tgaagtccgg caccgcttct 480 gtcgtgtgcc tgctgaacaa cttctacccc cgcgaggcca aggtgcagtg gaaggtggac 540 aacgccctgc agtccggcaa ctcccaggaa tccgtgaccg agcaggactc caaggacagc 600 acctactccc tgtcctctac cctgaccctg tccaaggccg actacgagaa gcacaaggtg 660 tacgcctgcg aagtgaccca ccagggcctg tctagccccg tgaccaagtc tttcaaccgg 720 ggcgagtgct gatgaattc 739 <210> 55 <211> 238 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 55 Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr 1 5 10 15 Asp Ala Arg Cys Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser 20 25 30 Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Asn 35 40 45 Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro 50 55 60 Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser 65 70 75 80 Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys 100 105 110 Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val 115 120 125 Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro 130 135 140 Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu 145 150 155 160 Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn 165 170 175 Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser 180 185 190 Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala 195 200 205 Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly 210 215 220 Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235

Claims (66)

  1. 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함하는 인간화된 1E9 항체로서,
    상기 인간화된 경쇄 가변 영역은
    (i) 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1, 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2, 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3, 및
    (ii) 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 아스파르트산 또는 루신, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 라이신 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 74에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 76에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 77에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 100에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 104에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 알라닌, 카밧 위치 3에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 페닐알라닌 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 13에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 루신, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 15에 상응하는 위치에서 발린 또는 프롤린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 아스파르트산, 카밧 위치 22에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 45에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 58에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 타이로신, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 페닐알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 타이로신, 또는 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 페닐알라닌을 포함하고;
    상기 인간화된 중쇄 가변 영역은
    (i) 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1, 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2, 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3, 및
    (ii) 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 트레오닌, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 라이신, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린 또는 메티오닌, 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 라이신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 루신, 또는 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산을 포함하는 것인 인간화된 1E9 항체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역이 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 프롤린을 포함하고;
    상기 인간화된 중쇄 가변 영역이 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린, 또는 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 메티오닌을 포함하는 것인 인간화된 1E9 항체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역이 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 및 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 프롤린을 포함하고;
    상기 인간화된 중쇄 가변 영역이 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린 및 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 메티오닌을 포함하는 것인 인간화된 1E9 항체.
  4. 제1항에 있어서, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역이 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 74에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 76에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 77에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 100에 상응하는 위치에서 글루타민 또는 카밧 위치 104에 상응하는 위치에서 발린을 포함하고;
    상기 인간화된 중쇄 가변 영역이 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 라이신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 프롤린, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 트레오닌, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 라이신, 또는 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌을 포함하는 것인 인간화된 1E9 항체.
  5. 제1항 또는 제4항에 있어서, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역이 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 74에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 76에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 세린, 카밧 위치 77에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 100에 상응하는 위치에서 글루타민 및 카밧 위치 104에 상응하는 위치에서 발린을 포함하고;
    상기 인간화된 중쇄 가변 영역이 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 라이신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 프롤린, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 트레오닌, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 라이신 및 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌을 포함하는 것인 인간화된 1E9 항체.
  6. 제1항에 있어서, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역이 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 알라닌, 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 3에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 아스파르트산 또는 루신, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 페닐알라닌 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 세린 또는 프롤린, 카밧 위치 13에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 루신, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 15에 상응하는 위치에서 발린 또는 프롤린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 아스파르트산, 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 라이신 또는 프롤린, 카밧 위치 22에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 45에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 58에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 타이로신, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 페닐알라닌, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 타이로신 또는 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 페닐알라닌을 포함하고;
    상기 인간화된 중쇄 가변 영역이 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린, 또는 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린 또는 메티오닌을 포함하는 것인 인간화된 1E9 항체.
  7. 제1항 또는 제6항에 있어서, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역이 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 알라닌, 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 3에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 아스파르트산 또는 루신, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 페닐알라닌 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 세린 또는 프롤린, 카밧 위치 13에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 루신, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 15에 상응하는 위치에서 발린 또는 프롤린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 아스파르트산, 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 라이신 또는 프롤린, 카밧 위치 22에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 45에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 58에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 타이로신, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 페닐알라닌, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 타이로신 및 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 페닐알라닌을 포함하고;
    상기 인간화된 중쇄 가변 영역이 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린 및 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린 또는 메티오닌을 포함하는 것인 인간화된 1E9 항체.
  8. 제1항에 있어서, 상기 인간화된 중쇄 가변 영역이 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌, 또는 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린을 포함하는 것인 인간화된 1E9 항체.
  9. 제1항 또는 제8항에 있어서, 상기 인간화된 중쇄 가변 영역이 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌, 및 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린을 포함하는 것인 인간화된 1E9 항체.
  10. 제1항, 제8항 및 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간화된 중쇄 가변 영역이 서열번호 7의 서열을 포함하는 것인 인간화된 1E9 항체.
  11. 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함하는 인간화된 1E9 항체로서, 상기 인간화된 중쇄 가변 영역이 서열번호 7의 서열을 포함하는 것인 인간화된 1E9 항체.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, IgG인 인간화된 1E9 항체.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, IgG1인 인간화된 1E9 항체.
  14. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, IgG4인 인간화된 1E9 항체.
  15. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, Fab' 단편인 인간화된 1E9 항체.
  16. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 단일쇄 항체(scFv)인 인간화된 1E9 항체.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 약 0.5 내지 약 25 nM의 평형 해리 상수(KD)로 CD73 항원에 결합할 수 있는 인간화된 1E9 항체.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 약 7.5 미만의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있는 인간화된 1E9 항체.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 약 6.0 내지 약 7.0의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있는 인간화된 1E9 항체.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 약 6.3의 pH에서 CD73 항원에 결합할 수 있는 인간화된 1E9 항체.
  21. 제1항 내지 제13항 및 제17항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 카밧 위치 297에 상응하는 위치에서 글루타민을 추가로 포함하는 인간화된 1E9 항체.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, CD73 항원에 결합된, 인간화된 1E9 항체.
  23. 제22항에 있어서, 상기 CD73 항원이 세포의 일부를 형성하는 것인 인간화된 1E9 항체.
  24. 제23항에 있어서, 상기 세포가 림프계 세포인 인간화된 1E9 항체.
  25. 제23항에 있어서, 상기 세포가 T 세포인 인간화된 1E9 항체.
  26. 제23항에 있어서, 상기 세포가 암 세포인 인간화된 1E9 항체.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항의 인간화된 1E9 항체를 코딩하는 단리된 핵산.
  28. 제27항에 있어서, 서열번호 52 또는 서열번호 54를 포함하는 단리된 핵산.
  29. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항의 치료적 유효량의 인간화된 1E9 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물.
  30. 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항의 치료적 유효량의 인간화된 1E9 항체를 상기 대상체에게 투여함으로써 상기 대상체에서 암을 치료하는 것을 포함하는 방법.
  31. 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함하는 인간화된 IgG1 항체로서,
    상기 인간화된 경쇄 가변 영역은 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1, 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2, 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3을 포함하고;
    상기 인간화된 중쇄 가변 영역은 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1, 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2, 및 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3을 포함하는 것인 인간화된 IgG1 항체.
  32. 제31항에 있어서, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역이 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 아스파르트산 또는 루신, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 라이신 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 74에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 76에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 77에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 100에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 104에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 알라닌, 카밧 위치 3에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 페닐알라닌 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 13에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 루신, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 15에 상응하는 위치에서 발린 또는 프롤린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 아스파르트산, 카밧 위치 22에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 45에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 58에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 타이로신, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 페닐알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 타이로신 또는 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 페닐알라닌을 추가로 포함하는 것인 인간화된 IgG1 항체.
  33. 제31항 또는 제32항에 있어서, 상기 인간화된 중쇄 가변 영역이 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 트레오닌, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 라이신, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린 또는 메티오닌, 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 라이신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 루신 또는 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산을 추가로 포함하는 것인 인간화된 IgG1 항체.
  34. 제31항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역이 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린, 및 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 프롤린을 추가로 포함하는 것인 인간화된 IgG1 항체.
  35. 제31항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간화된 중쇄 가변 영역이 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린 및 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 메티오닌을 추가로 포함하는 것인 인간화된 IgG1 항체.
  36. 제31항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 카밧 위치 297에 상응하는 위치에서 글루타민을 추가로 포함하는 인간화된 IgG1 항체.
  37. 제31항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, CD73 항원에 결합된, 인간화된 IgG1 항체.
  38. 제37항에 있어서, 상기 CD73 항원이 세포의 일부를 형성하는 것인 인간화된 IgG1 항체.
  39. 제38항에 있어서, 상기 세포가 T 세포인 인간화된 IgG1 항체.
  40. 제38항에 있어서, 상기 세포가 암 세포인 인간화된 IgG1 항체.
  41. 제31항 내지 제40항 중 어느 한 항의 인간화된 IgG1 항체를 코딩하는 단리된 핵산.
  42. 제31항 내지 제40항 중 어느 한 항의 치료적 유효량의 인간화된 IgG1 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물.
  43. 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 제31항 내지 제40항 중 어느 한 항의 치료적 유효량의 인간화된 IgG1 항체를 상기 대상체에게 투여함으로써 상기 대상체에서 암을 치료하는 것을 포함하는 방법.
  44. 세포의 증식을 억제하는 방법으로서,
    (i) 세포를 제31항 내지 제40항 중 어느 한 항의 인간화된 IgG1 항체와 접촉시킴으로써 접촉된 세포를 형성하는 단계; 및
    (ii) 상기 인간화된 IgG1 항체가 상기 접촉된 세포 상의 CD73 항원에 결합되도록 함으로써 상기 세포의 증식을 억제하는 단계
    를 포함하는 방법.
  45. 제44항에 있어서, 상기 세포가 림프계 세포인 방법.
  46. 제45항에 있어서, 상기 림프계 세포가 T 세포인 방법.
  47. 약 7.5 미만의 pH에서 CD73 항원에 결합된, 인간화된 1E9 항체.
  48. 제47항에 있어서, 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역이 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 세린 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 글라이신, 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 트레오닌 또는 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 글루타민을 포함하고;
    상기 인간화된 중쇄 가변 영역이 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 발린 또는 글루탐산, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 메티오닌 또는 발린, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 알라닌, 카밧 위치 41에 상응하는 위치에서 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 글라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 트레오닌 또는 아르기닌, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 글루탐산, 또는 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린을 포함하는 것인 인간화된 IE9 항체.
  49. 제48항에 있어서, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역이 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 세린 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 루신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 트레오닌 및 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 글루타민을 포함하고;
    상기 인간화된 중쇄 가변 영역이 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 메티오닌 또는 발린, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 알라닌, 카밧 위치 41에 상응하는 위치에서 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 글라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 트레오닌 또는 아르기닌, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 글루탐산, 및 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린을 포함하는 것인 인간화된 IE9 항체.
  50. 제48항에 있어서, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역이 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 글라이신 및 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 아르기닌을 포함하고;
    상기 인간화된 중쇄 가변 영역이 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 발린 또는 글루탐산을 포함하는 것인 인간화된 IE9 항체.
  51. 제47항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 pH가 약 6.0 내지 약 7.0인 인간화된 IE9 항체.
  52. 제47항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 pH가 약 6.7인 인간화된 1E9 항체.
  53. 제47항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 pH가 약 6.3인 인간화된 1E9 항체.
  54. 제47항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD73 항원의 촉매 활성을 억제하는 인간화된 1E9 항체.
  55. 제47항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 36 또는 서열번호 37의 서열을 포함하는 인간화된 경쇄 가변 영역을 포함하는 인간화된 1E9 항체.
  56. 제47항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 7의 서열을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함하는 인간화된 1E9 항체.
  57. CD73 항원에 결합된 인간화된 1E9 항체를 검출하는 방법으로서,
    (i) 약 7.5 미만의 pH에서 인간화된 1E9 항체를 CD73 항원과 접촉시키는 단계, 및
    (ii) 상기 인간화된 1E9 항체의 상기 CD73 항원에의 결합을 검출하는 단계
    를 포함하는 방법.
  58. 제57항에 있어서, 상기 pH가 약 6.0 내지 약 7.0인 방법.
  59. 제57항 또는 제58항에 있어서, 상기 pH가 약 6.7인 방법.
  60. 제57항 또는 제58항에 있어서, 상기 pH가 약 6.3인 방법.
  61. 제57항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단계 (ii)의 결합 검출이 CD73 촉매 활성의 억제를 검출하는 것을 포함하는 방법.
  62. 제57항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD73 항원이 세포의 일부를 형성하는 것인 방법.
  63. 제57항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD73 항원이 고형 지지체에 결합된 것인 방법.
  64. 제57항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간화된 1E9 항체가 검출 가능한 모이어티를 포함하는 것인 방법.
  65. 항-CD73 항체로서, 상기 항-CD73은 1E9 항체와 동일한 에피토프에 결합하고, 상기 1E9 항체는 마우스 CDR L1, 마우스 CDR L2, 또는 마우스 CDR L3을 포함하는 인간화된 경쇄 가변 영역 및 마우스 CDR H1, 마우스 CDR H2, 또는 마우스 CDR H3을 포함하는 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항-CD73 항체.
  66. 항-CD73 항체로서, 상기 항-CD73은 1E9 항체와 동일한 에피토프에 결합하고, 상기 1E9 항체는 인간화된 경쇄 가변 영역 및 인간화된 중쇄 가변 영역을 포함하며, 상기 인간화된 경쇄 가변 영역은
    (i) 서열번호 1에 제시된 마우스 CDR L1, 서열번호 2에 제시된 마우스 CDR L2, 서열번호 3에 제시된 마우스 CDR L3, 및
    (ii) 카밧 위치 2에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 4에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 9에 상응하는 위치에서 아스파르트산 또는 루신, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 18에 상응하는 위치에서 라이신 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 60에 상응하는 위치에서 프롤린 또는 세린, 카밧 위치 74에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 76에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 77에 상응하는 위치에서 아스파라긴 또는 세린, 카밧 위치 78에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 루신, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 세린 또는 알라닌, 카밧 위치 100에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 104에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 알라닌, 카밧 위치 3에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 10에 상응하는 위치에서 페닐알라닌 또는 트레오닌, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 글루타민, 카밧 위치 13에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 루신, 카밧 위치 14에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 15에 상응하는 위치에서 발린 또는 프롤린, 카밧 위치 16에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 17에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 아스파르트산, 카밧 위치 22에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 42에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 45에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 58에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 타이로신, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 페닐알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 타이로신, 또는 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 페닐알라닌을 포함하고;
    상기 인간화된 중쇄 가변 영역은
    (i) 서열번호 4에 제시된 마우스 CDR H1, 서열번호 5에 제시된 마우스 CDR H2, 및 서열번호 6에 제시된 마우스 CDR H3, 및
    (ii) 카밧 위치 37에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 40에 상응하는 위치에서 알라닌 또는 프롤린, 카밧 위치 43에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 70에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 75에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 트레오닌, 카밧 위치 82에 상응하는 위치에서 트립토판, 카밧 위치 83에 상응하는 위치에서 아르기닌 또는 라이신, 카밧 위치 84에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 85에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 89에 상응하는 위치에서 발린 또는 메티오닌, 카밧 위치 5에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 7에 상응하는 위치에서 세린, 카밧 위치 11에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 12에 상응하는 위치에서 글루탐산 또는 라이신, 카밧 위치 20에 상응하는 위치에서 이소루신 또는 발린, 카밧 위치 38에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 66에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 67에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 69에 상응하는 위치에서 이소루신, 카밧 위치 71에 상응하는 위치에서 알라닌, 카밧 위치 73에 상응하는 위치에서 라이신, 카밧 위치 87에 상응하는 위치에서 트레오닌, 카밧 위치 1에 상응하는 위치에서 글루탐산, 카밧 위치 24에 상응하는 위치에서 발린, 카밧 위치 44에 상응하는 위치에서 아르기닌, 카밧 위치 48에 상응하는 위치에서 메티오닌, 카밧 위치 80에 상응하는 위치에서 루신, 또는 카밧 위치 81에 상응하는 위치에서 글루탐산을 포함하는 것인 항-CD73 항체.
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