CN109154611B - 人源化抗cd73抗体 - Google Patents

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Abstract

本文尤其提供能够结合CD73的人源化1E9抗体。所述人源化抗体可用于癌症的治疗。进一步提供编码人源化1E9抗体的核酸以及利用本文提供的人源化抗体抑制细胞增殖的方法。

Description

人源化抗CD73抗体
相关申请的交叉引用
本申请要求2015年12月9日提交的美国临时申请第62/265,357号、2016年2月1日提交的美国临时申请第62/289,694号和2016年6月6日提交的美国临时申请第62/346,327号的优先权，它们整体和为了所有目的援引加入本文。
作为ASCII TEXT文件提交的序列表、表格或计算机程序表附录的引用
2016年12月9日创建的50,442字节、机器格式IBM-PC、MS Windows操作系统的文件48517-508001WO_ST25.TXT中写入的序列表援引加入本文。
发明背景
据认为糖基-磷脂酰肌醇锚定的CD73抗原是胞外腺苷生成中的限速酶(Stagg J,Smyth MJ.Extracellular adenosine triphosphate and adenosine incancer.Oncogene.2010；29:5346–58.doi:10.1038/onc.2010.292)。可以发现CD73在多种类型的癌细胞上以高水平组成型表达。据认为CD73产生的腺苷抑制适应性抗肿瘤免疫应答，从而促进肿瘤生长和转移。本领域需要基于抗体的CD73癌症疗法，其抑制CD73的催化活性并防止循环肿瘤细胞外渗和定殖的能力，从而抑制转移。本发明解决本领域中的这些和其他需求。
发明概述
在一方面提供一种人源化1E9抗体，其包括人源化轻链可变区和人源化重链可变区，所述人源化轻链可变区包括小鼠CDR L1、小鼠CDR L2或小鼠CDR L3，所述人源化重链可变区包括小鼠CDR H1、小鼠CDR H2或小鼠CDR H3。
在一方面，提供一种抗体(例如人源化1E9抗体)。所述抗体包括轻链(例如人源化轻链)可变区和重链(例如人源化重链)可变区。所述轻链可变区包括：
(i)如SEQ ID NO:1所示的CDR L1(例如小鼠CDR L1)，如SEQ ID NO:2所示的CDRL2(例如小鼠CDR L2)，如SEQ ID NO:3所示的CDR L3(例如小鼠CDR L3)以及(ii)在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的天冬氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置18的位置处的赖氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置60的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置74的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置76的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置77的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置100的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置104的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置3的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置10的位置处的苯丙氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置13的位置处的丙氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置14的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置15的位置处的缬氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置16的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置17的位置处的谷氨酸或天冬氨酸，在对应于Kabat位置22的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置42的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置45的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置58的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的酪氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的苯丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的酪氨酸，或者在对应于Kabat位置87的位置处的苯丙氨酸。所述重链可变区包括：
(i)如SEQ ID NO:4所示的CDR H1(例如小鼠CDR H1)，如SEQ ID NO:5所示的CDRH2(例如小鼠CDR H2)，如SEQ ID NO:6所示的CDR H3(例如小鼠CDR H3)以及(ii)在对应于Kabat位置37的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的丙氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的异亮氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置82的位置处的色氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的精氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸或甲硫氨酸，在对应于Kabat位置5的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置7的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的谷氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的异亮氨酸或缬氨酸，在对应于Kabat位置38的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置66的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置69的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置71的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置87的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置24的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置44的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置48的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的亮氨酸，或者在对应于Kabat位置81的位置处的谷氨酸。
在一方面，提供一种人源化1E9抗体。所述1E9抗体包括人源化轻链可变区和人源化重链可变区。所述人源化轻链可变区包括：
(i)如SEQ ID NO:1所示的小鼠CDR L1，如SEQ ID NO:2所示的小鼠CDR L2，如SEQID NO:3所示的小鼠CDR L3以及
(ii)在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的天冬氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置18的位置处的赖氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置60的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置74的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置76的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置77的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置100的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置104的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置3的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置10的位置处的苯丙氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置13的位置处的丙氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置14的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置15的位置处的缬氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置16的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置17的位置处的谷氨酸或天冬氨酸，在对应于Kabat位置22的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置42的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置45的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置58的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的酪氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的苯丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的酪氨酸，或者在对应于Kabat位置87的位置处的苯丙氨酸。所述人源化重链可变区包括：
(i)如SEQ ID NO:4所示的小鼠CDR H1，如SEQ ID NO:5所示的小鼠CDR H2，如SEQID NO:6所示的小鼠CDR H3以及
(ii)在对应于Kabat位置37的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的丙氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的异亮氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置82的位置处的色氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的精氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸或甲硫氨酸，在对应于Kabat位置5的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置7的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的谷氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的异亮氨酸或缬氨酸，在对应于Kabat位置38的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置66的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置69的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置71的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置87的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置24的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置44的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置48的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的亮氨酸，或者在对应于Kabat位置81的位置处的谷氨酸。
在另一方面，提供一种抗体(例如人源化1E9抗体)，其包括轻链(例如人源化轻链)可变区和重链(例如人源化重链)可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:7的序列。
在另一方面，提供一种人源化1E9抗体，其包括人源化轻链可变区和人源化重链可变区，其中所述人源化重链可变区包含SEQ ID NO:7的序列。
在一方面，本文提供一种IgG1(例如人源化IgG1)抗体，其包括轻链(例如人源化轻链)可变区和重链(例如人源化重链)可变区，其中所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的CDR L1(例如小鼠CDR L1)，如SEQ ID NO:2所示的CDR L2(例如小鼠CDR L2)，如SEQ IDNO:3所示的CDR L3(例如小鼠CDR L3)，并且其中所述重链可变区包括如SEQ ID NO:4所示的CDR H1(例如小鼠CDR H1)，如SEQ ID NO:5所示的CDR H2(例如小鼠CDR H2)，如SEQ IDNO:6所示的CDR H3(例如小鼠CDR H3)。
在一方面，本文提供一种人源化IgG1抗体，其包括人源化轻链可变区和人源化重链可变区，其中所述人源化轻链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的小鼠CDR L1，如SEQ IDNO:2所示的小鼠CDR L2，如SEQ ID NO:3所示的小鼠CDR L3，并且其中所述人源化重链可变区包括如SEQ ID NO:4所示的小鼠CDR H1，如SEQ ID NO:5所示的小鼠CDR H2以及如SEQ IDNO:6所示的小鼠CDR H3。
在一方面，本文提供一种IgG4(例如人源化IgG4)抗体，其包括轻链(例如人源化轻链)可变区和重链(例如人源化重链)可变区，其中所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的CDR L1(例如小鼠CDR L1)，如SEQ ID NO:2所示的CDR L2(例如小鼠CDR L2)，如SEQ IDNO:3所示的CDR L3(例如小鼠CDR L3)，并且其中所述重链可变区包括如SEQ ID NO:4所示的CDR H1(例如小鼠CDR H1)，如SEQ ID NO:5所示的CDR H2(例如小鼠CDR H2)，如SEQ IDNO:6所示的CDR H3(例如小鼠CDR H3)。
在一方面，本文提供一种人源化IgG4抗体，其包括人源化轻链可变区和人源化重链可变区，其中所述人源化轻链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的小鼠CDR L1，如SEQ IDNO:2所示的小鼠CDR L2，如SEQ ID NO:3所示的小鼠CDR L3，并且其中所述人源化重链可变区包括如SEQ ID NO:4所示的小鼠CDR H1，如SEQ ID NO:5所示的小鼠CDR H2以及如SEQ IDNO:6所示的小鼠CDR H3。
在一方面，提供编码本文提供的1E9抗体(例如，人源化1E9抗体)(包括多种实施方案)的分离的核酸。
在一方面，提供编码本文提供的人源化1E9抗体(包括多种实施方案)的分离的核酸。
在另一方面，提供编码本文提供的IgG1抗体(例如，人源化IgG1抗体)(包括多种实施方案)的分离的核酸。
在另一方面，提供编码本文提供的人源化IgG1抗体(包括多种实施方案)的分离的核酸。
在另一方面，提供编码本文提供的IgG4抗体(例如，人源化IgG4抗体)(包括多种实施方案)的分离的核酸。
在另一方面，提供编码本文提供的人源化IgG4抗体(包括多种实施方案)的分离的核酸。
在另一方面，提供一种药物组合物，其包括治疗有效量的本文提供的1E9抗体(例如，人源化1E9抗体)(包括其多种实施方案)和药学可接受的赋形剂。
在另一方面，提供一种药物组合物，其包括治疗有效量的本文提供的人源化1E9抗体(包括其多种实施方案)和药学可接受的赋形剂。
在另一方面，提供一种药物组合物，其包括治疗有效量的本文提供的IgG1抗体(例如，人源化IgG1抗体)(包括其多种实施方案)和药学可接受的赋形剂。
在另一方面，提供一种药物组合物，其包括治疗有效量的本文提供的人源化IgG1抗体(包括其多种实施方案)和药学可接受的赋形剂。
在另一方面，提供一种药物组合物，其包括治疗有效量的本文提供的IgG4抗体(例如，人源化IgG4抗体)(包括其多种实施方案)和药学可接受的赋形剂。
在另一方面，提供一种药物组合物，其包括治疗有效量的本文提供的人源化IgG4抗体(包括其多种实施方案)和药学可接受的赋形剂。
在一方面，提供一种治疗有此需要的对象中的癌症的方法。所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的本文提供的1E9抗体(例如，人源化1E9抗体)(包括其多种实施方案)，从而治疗所述对象中的癌症。
在一方面，提供一种治疗有此需要的对象中的癌症的方法。所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的本文提供的人源化1E9抗体(包括其多种实施方案)，从而治疗所述对象中的癌症。
在一方面，提供一种治疗有此需要的对象中的癌症的方法。所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的本文提供的IgG1抗体(例如，人源化IgG1抗体)(包括其多种实施方案)，从而治疗所述对象中的癌症。
在一方面，提供一种治疗有此需要的对象中的癌症的方法。所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的本文提供的人源化IgG1抗体(包括其多种实施方案)，从而治疗所述对象中的癌症。
在一方面，提供一种治疗有此需要的对象中的癌症的方法。所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的本文提供的IgG4抗体(例如，人源化IgG4抗体)(包括其多种实施方案)，从而治疗所述对象中的癌症。
在一方面，提供一种治疗有此需要的对象中的癌症的方法。所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的本文提供的人源化IgG4抗体(包括其多种实施方案)，从而治疗所述对象中的癌症。
在一方面，提供一种抑制细胞增殖的方法。所述方法包括(i)使细胞与如本文提供的IgG1抗体(例如，人源化IgG1抗体)(包括其多种实施方案)接触，从而形成接触细胞(contacted cell)。(ii)允许所述IgG1抗体(例如，人源化IgG1抗体)结合所述接触细胞上的CD73抗原，从而抑制细胞增殖。
在一方面，提供一种抑制细胞增殖的方法。所述方法包括(i)使细胞与如本文提供的人源化IgG1抗体(包括其多种实施方案)接触，从而形成接触细胞。(ii)允许所述人源化IgG1抗体结合所述接触细胞上的CD73抗原，从而抑制细胞增殖。
在一方面，提供一种抑制细胞增殖的方法。所述方法包括(i)使细胞与如本文提供的IgG4抗体(例如，人源化IgG4抗体)(包括其多种实施方案)接触，从而形成接触细胞。(ii)允许所述IgG4抗体(例如，人源化IgG4抗体)结合所述接触细胞上的CD73抗原，从而抑制细胞增殖。
在一方面，提供一种抑制细胞增殖的方法。所述方法包括(i)使细胞与如本文提供的人源化IgG4抗体(包括其多种实施方案)接触从而形成接触细胞。(ii)允许所述人源化IgG4抗体结合所述接触细胞上的CD73抗原，从而抑制细胞增殖。
在另一方面提供一种抗CD73抗体。所述抗CD73与1E9抗体结合相同的表位，其中所述1E9抗体包括轻链可变区(例如，人源化轻链可变区)和重链可变区(例如，人源化重链可变区)，所述轻链可变区包括CDR L1(例如，小鼠CDR L1)、CDR L2(例如，小鼠CDR L2)或CDRL3(例如，小鼠CDR L3)，所述重链可变区包括CDR H1(例如，小鼠CDR H1)、CDR H2(例如，小鼠CDR H2)或CDR H3(例如，小鼠CDR H3)。
在另一方面提供一种抗CD73抗体。所述抗CD73与1E9抗体结合相同的表位，其中所述1E9抗体包括人源化轻链可变区和人源化重链可变区，所述人源化轻链可变区包括小鼠CDR L1、小鼠CDR L2或小鼠CDR L3，所述人源化重链可变区包括小鼠CDR H1、小鼠CDR H2或小鼠CDR H3。
在另一方面提供一种抗CD73抗体。所述抗CD73与1E9抗体结合相同的表位，其中所述1E9抗体包括轻链可变区(例如，人源化轻链可变区)和重链可变区(例如，人源化重链可变区)。所述轻链可变区包括：
(i)如SEQ ID NO:1所示的CDR L1(例如，小鼠CDR L1)，如SEQ ID NO:2所示的CDRL2(例如，小鼠CDR L2)，如SEQ ID NO:3所示的CDR L3(例如，小鼠CDR L3)以及
(ii)在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的天冬氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置18的位置处的赖氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置60的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置74的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置76的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置77的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置100的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置104的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置3的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置10的位置处的苯丙氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置13的位置处的丙氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置14的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置15的位置处的缬氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置16的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置17的位置处的谷氨酸或天冬氨酸，在对应于Kabat位置22的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置42的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置45的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置58的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的酪氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的苯丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的酪氨酸，或者在对应于Kabat位置87的位置处的苯丙氨酸。所述人源化重链可变区包括：
(i)如SEQ ID NO:4所示的CDR H1(例如，小鼠CDR H1)，如SEQ ID NO:5所示的CDRH2(例如，小鼠CDR H2)，如SEQ ID NO:6所示的CDR H3(例如，小鼠CDR H3)以及
(ii)在对应于Kabat位置37的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的丙氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的异亮氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置82的位置处的色氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的精氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸或甲硫氨酸，在对应于Kabat位置5的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置7的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的谷氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的异亮氨酸或缬氨酸，在对应于Kabat位置38的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置66的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置69的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置71的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置87的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置24的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置44的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置48的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的亮氨酸，或者在对应于Kabat位置81的位置处的谷氨酸。
在另一方面提供一种抗CD73抗体。所述抗CD73与1E9抗体结合相同的表位，其中所述1E9抗体包括人源化轻链可变区和人源化重链可变区。所述人源化轻链可变区包括：
(i)如SEQ ID NO:1所示的小鼠CDR L1，如SEQ ID NO:2所示的小鼠CDR L2，如SEQID NO:3所示的小鼠CDR L3以及
(ii)在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的天冬氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置18的位置处的赖氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置60的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置74的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置76的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置77的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置100的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置104的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置3的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置10的位置处的苯丙氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置13的位置处的丙氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置14的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置15的位置处的缬氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置16的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置17的位置处的谷氨酸或天冬氨酸，在对应于Kabat位置22的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置42的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置45的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置58的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的酪氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的苯丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的酪氨酸，或者在对应于Kabat位置87的位置处的苯丙氨酸。所述人源化重链可变区包括：
(i)如SEQ ID NO:4所示的小鼠CDR H1，如SEQ ID NO:5所示的小鼠CDR H2，如SEQID NO:6所示的小鼠CDR H3以及
(ii)在对应于Kabat位置37的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的丙氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的异亮氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置82的位置处的色氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的精氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸或甲硫氨酸，在对应于Kabat位置5的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置7的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的谷氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的异亮氨酸或缬氨酸，在对应于Kabat位置38的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置66的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置69的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置71的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置87的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置24的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置44的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置48的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的亮氨酸，或者在对应于Kabat位置81的位置处的谷氨酸。
附图说明
图1：用所示处理培养5天的通过负选择分离的人T细胞。通过细胞微量紫示踪染料的稀释分析细胞增殖。
图2：用所示处理培养5天的通过负选择分离的人T细胞。通过流式细胞术分析CD25表达。
图3A-3E：将表达CD73的人乳腺细胞系MDA-MB-231细胞用一定浓度范围内的所示人源化抗体(图3A中的CPX-002；图3B中的CPX-005；图3C中的CPX-006；图3D中的CPX-004；图3E中的CPX-003)在37℃下温育1小时。将细胞在不含磷酸盐的缓冲液中洗涤，随后用250μMAMP在37℃下温育20分钟。从每个孔收集条件培养基并利用基于孔雀石绿的检测试剂盒(Sensolyte MG phosphate kit,AnaSPEC)确定磷酸盐水平。通过标准曲线插值确定绝对磷酸盐值。在3种不同pH条件下进行测定：7.2、6.7或6.3。在添加抗体之前，将细胞通过洗涤在适当pH的缓冲液中平衡。测定的剩余部分在所示pH的缓冲液中进行。
图4A和图4B：图4A：重链可变结构域的比对。将前10个命中的可变结构域比对至亲本克隆BAP094-01(嵌合1E9LC(SEQ ID NO:28))。与亲本克隆相同的氨基酸残基通过点表示，仅示出氨基酸差异。在前10个命中内已鉴定4个独特的HC可变结构域。基于框架3、框架2和框架1的相同性列出序列(从上至下)。将CDR框出。为BAP094-hum01-HC列出的序列对应于SEQ ID NO:42；为BAP094-hum02-HC列出的序列对应于SEQ ID NO:43；为BAP094-hum06-HC列出的序列对应于SEQ ID NO:47；为BAP094-hum07-HC列出的序列对应于SEQ ID NO:48；为BAP094-hum08-HC列出的序列对应于SEQ ID NO:49；为BAP094-hum03-HC列出的序列对应于SEQ ID NO:44；为BAP094-hum09-HC列出的序列对应于SEQ ID NO:50；为BAP094-hum04-HC列出的序列对应于SEQ ID NO:45；为BAP094-hum05-HC列出的序列对应于SEQ ID NO:46；为BAP094-hum10-HC列出的序列对应于SEQ ID NO:51。图4B：轻链可变结构域的比对。将最高命中的可变结构域比对至亲本克隆BAP094-01(嵌合1E9LHC(SEQ ID NO:29))。与亲本克隆相同的氨基酸残基通过点表示，仅示出氨基酸差异。在前10个命中内已鉴定5个独特的LC可变结构域。基于框架3、框架2和框架1的相同性列出序列(从上至下)。将CDR框出。为BAP094-hum02-LC列出的序列对应于SEQ ID NO:32；为BAP094-hum03-LC列出的序列对应于SEQ IDNO:33；为BAP094-hum04-LC列出的序列对应于SEQ ID NO:34；为BAP094-hum01-LC列出的序列对应于SEQ ID NO:31；为BAP094-hum07-LC列出的序列对应于SEQ ID NO:37；为BAP094-hum08-LC列出的序列对应于SEQ ID NO:38；为BAP094-hum09-LC列出的序列对应于SEQ IDNO:39；为BAP094-hum10-LC列出的序列对应于SEQ ID NO:40；为BAP094-hum05-LC列出的序列对应于SEQ ID NO:35；为BAP094-hum06-LC列出的序列对应于SEQ ID NO:36。
图5：所选前10个人源化变体的基于细胞的ELISA。将CHO细胞接种于6孔板中，用BAP094-01(即包括SEQ ID NO:30的可变轻链和SEQ ID NO:41的可变重链的嵌合1E9抗体)、所选人源化变体或仅载体转染并在37℃下于具有10％胎牛血清的DMEM中培养。在转染后48小时收集上清液。通过定量ELISA方案确定上清液中的抗体浓度，其中将未知值插入标准曲线。将上清液在生长培养基(具有10％血清的DMEM)中稀释至50ng/ml。将100μl稀释的上清液添加至包含MDA-MB231细胞的96孔中(前一天接种3x 104个MDA-MB231细胞/孔)并在室温下温育1小时。用HRP缀合的抗人IgG(H+L)(Promega#W4031)用作二抗用于检测。将TMB添加至孔中之后6分钟终止反应并立即读数。
图6：CPX-006缓解IFN-γ的AMP依赖性抑制。将人外周血单核细胞用1ug/mL抗CD3和抗CD28温育以刺激T细胞增殖。将1mM AMP添加至培养物作为底物用于细胞CD73转化为免疫抑制性腺苷。还将培养物用一定浓度范围内的抗CD73(CPX-006)或同种型对照温育。培养4天之后，通过AlphaLISA在细胞培养物中测量干扰素-γ(IFN-γ)水平。荧光信号与存在的IFN-γ量成比例。如通过IFN-γ分泌测量的，CPX-006缓解T细胞活性的AMP依赖性抑制。
图7：CPX-006缓解T细胞增殖的AMP依赖性抑制。将人外周血单核细胞用细胞微量紫(Cell Trace Violet)染色标记并用1ug/mL抗CD3和抗CD28温育以刺激T细胞增殖。将1mMAMP添加至培养物作为底物用于细胞CD73转化为免疫抑制腺苷。还将培养物用一定浓度范围内的抗CD73(CPX-006)或同种型对照温育。培养4天之后，将细胞用荧光团标记的抗CD3抗体染色并通过流式细胞术分析。将CD3+T细胞的增殖选作已经历细胞微量紫染料稀释的事件。CPX-006缓解T细胞增殖的AMP依赖性抑制。
发明详述
定义
虽然本文示出和描述了本发明的各种实施方案和方面，但是本领域技术人员会清楚这类实施方案和方面仅通过实例的方式提供。本领域技术人员现在会想到许多变化、改变和取代而不背离本发明。应当理解在实施本发明中可以采用本文描述的发明的实施方案的各种替代。
本文所用的段落标题仅用于组织目的，而不应当理解为限制所述主题。本申请中引用的所有文件或文件部分，包括但不限于专利、专利申请、文章、书、手册和论文，均为了任何目的明确地整体援引加入本文。
抗体是具有复杂内部结构的大的复杂分子(～150,000的分子量或约1320个氨基酸)。天然抗体分子包含两对相同的多肽链，每对具有一条轻链和一天重链。每条轻链和重链依次由两个区组成：参与结合靶抗原的可变(“V”)区，以及与免疫系统的其他组分相互作用的恒定(“C”)区。轻链和重链可变区在三维空间中聚在一起形成结合抗原(例如，细胞表面上的受体)的可变区。在每个轻链或重链可变区内，有三个称作互补决定区(“CDR”)的短片段(平均10个氨基酸的长度)。抗体可变结构域中的6个CDR(来自轻链的3个和来自重链的3个)在三维空间中折叠在一起形成靠在靶抗原上的实际抗体结合位点。CDR的位置和长度已由Kabat,E.et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,U.S.Department of Health and Human Services,1983,1987精确定义。不包含在CDR中的可变区部分称作框架("FR")，其形成CDR的环境。
如本文提供的术语“CDR L1”、“CDR L2”和“CDR L3”是指抗体的可变轻(L)链的互补决定区(CDR)1、2和3。同样地，如本文提供的术语“CDR H1”、“CDR H2”和“CDR H3”是指抗体的可变重(H)链的互补决定区(CDR)1、2和3。
术语“抗体”根据其在本领域中公知的含义使用。例如，抗体作为完整免疫球蛋白存在，或者作为通过用各种肽酶消化产生的许多良好表征的片段存在。因此，例如，胃蛋白酶在铰链区中的二硫键下消化抗体产生F(ab)'2，其本身是通过二硫键连接至VH-CH1的轻链的Fab二聚体。可以将F(ab)'2在温和条件下还原以破坏铰链区中的二硫键，从而将F(ab)'2二聚体转化为Fab'单体。Fab'单体基本上是具有部分铰链区的Fab(参见FundamentalImmunology(Paul ed.,3d ed.1993)。虽然根据完整抗体的消化定义各种抗体片段，但是技术人员会理解这类片段可以化学或利用重组DNA方法从头合成。因此，如本文所用，术语抗体还包括通过全抗体的修饰产生的抗体片段，或者利用重组DNA方法从头合成的那些抗体片段(例如，单链Fv)，或者利用噬菌体展示文库鉴定的那些抗体片段(参见，例如，McCafferty et al.,Nature 348:552-554(1990))。
对于单克隆或多克隆抗体的制备，可以使用本领域已知的任何技术(参见，例如，Kohler&Milstein,Nature 256:495-497(1975)；Kozbor et al.,Immunology Today 4:72(1983)；Cole et al.,pp.77-96in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy(1985))。“单克隆”抗体(mAb)是指源自单克隆的抗体。用于制备单链抗体的技术(U.S.Pat.No.4,946,778)可以适于制备本发明的多肽的抗体。而且，转基因小鼠或其他生物体如其他哺乳动物可以用来表达人源化抗体。或者，噬菌体展示技术可以用来鉴定特异性地结合至所选抗原的抗体和异聚(heteromeric)Fab片段(参见，例如，McCafferty etal.,Nature 348:552-554(1990)；Marks et al.,Biotechnology 10:779-783(1992))。
mAb的表位是mAb结合的其抗原的区域。如果每种竞争性地抑制(阻断)另一种结合至抗原，则两种抗体结合至相同或重叠的表位。即，如竞争性结合测定中测量的，1x、5x、10x、20x或100x过量的一种抗体抑制另一种的结合至少30％，但是优选50％、75％、90％或甚至99％(参见，例如，Junghans et al.,Cancer Res.50:1495,1990)。或者，如果基本上减少或消除一种抗体结合的抗原中的所有氨基酸突变均减少或消除另一种的结合，则两种抗体具有相同表位。如果减少或消除一种抗体结合的一些氨基酸突变减少或消除另一种的结合，则两种抗体具有重叠表位。
“配体”是指能够结合至受体的物质，例如，多肽或其他分子。
“标记”或“可检测部分”是通过光谱、光化学、生物化学、免疫化学、化学或其他物理方式可检测的组合物。例如，可用标记包括32P、荧光染料、电子致密试剂、酶(例如，常用于ELISA)、生物素、地高辛、或者半抗原和蛋白或者可以使其可检测的其他实体，例如，通过将放射性标记掺入特异性地与靶肽反应的肽或抗体。可以采用本领域已知的将抗体缀合至标记的任何适当方法，例如，利用Hermanson,Bioconjugate Techniques 1996,AcademicPress,Inc.,San Diego中描述的方法。
“接触”按照其普通含义使用，是指允许至少两种不同物质(例如包括生物分子的化学化合物或细胞)变得足够接近以反应、相互作用或物理触摸的过程。但是，应当理解所得的反应产物可以直接产生自添加的试剂之间的反应，或者产生自反应混合物中可以产生的中间体，所述中间体来自一种或多种添加的试剂。
术语“接触”可以包括允许两种物质反应、相互作用或物理接触，其中所述两种物质可以是例如如本文所述的生物素结构域和生物素结合结构域。在实施方案中，接触包括例如允许如本文所述的人源化抗体与CD73抗原相互作用。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白”在本文中可交换用来指氨基酸残基的聚合物，其中在实施方案中所述聚合物可以缀合至不由氨基酸组成的部分。该术语应用于其中一个或多个氨基酸残基是相应天然存在的氨基酸的人工化学模拟物的氨基酸聚合物，以及天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。“融合蛋白”是指编码作为单个部分重组表达的两个或更多个不同蛋白序列的嵌合蛋白。
术语“肽基”和“肽基部分”表示单价肽。
术语“氨基酸”是指天然存在和合成的氨基酸，以及以与天然存在的氨基酸相似的方式发挥功能的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是遗传密码编码的那些氨基酸，以及后来修饰的那些氨基酸，例如，羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构(即结合至氢的α碳、羧基、氨基和R基团)的化合物，例如，高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。这类类似物具有修饰的R基团(例如，正亮氨酸)或修饰的肽骨架，但是保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物是指这样的化学化合物，其具有与氨基酸的一般化学结构不同的结构，但是以与天然存在的氨基酸相似的方式发挥功能。术语“非天然存在的氨基酸”和“非天然氨基酸”是指在自然界中未发现的氨基酸类似物、合成氨基酸和氨基酸模拟物。
氨基酸在本文中可以通过它们公知的三字母符号或通过IUPAC-IUB生物化学命名委员会推荐的一字母符号提到。同样地，核苷酸可以通过它们通常接受的单字母密码提到。
“保守修饰的变体”用于氨基酸和核酸序列。关于特定核酸序列，“保守修饰的变体”是指编码相同或基本上相同氨基酸序列的那些核酸。因为遗传密码的简并性，大量核酸序列会编码任何给定蛋白。例如，密码子GCA、GCC、GCG和GCU全部编码氨基酸丙氨酸。因此，在通过密码子指定丙氨酸的每个位置，密码子可以改变为所述的任何相应的密码子而不改变编码的多肽。这类核酸变化为“沉默变异”，其为保守修饰的变异的一个种类。本文中编码多肽的每个核酸序列还描述核酸的每个可能的沉默变异。技术人员会认识到可以修饰核酸中的每个密码子(除了AUG，其通常是甲硫氨酸的唯一密码子，以及TGG，其通常是色氨酸的唯一密码子)以获得功能上相同的分子。因此，编码多肽的核酸的每个沉默变异隐含在每个所述序列中。
对于氨基酸序列，技术人员会认识到在编码的序列中改变、添加或缺失单一氨基酸或一小部分氨基酸的对核酸、肽、多肽或蛋白序列的单独取代、缺失或添加是“保守修饰的变体”，其中改变导致用化学上相似的氨基酸取代氨基酸。提供功能上相似的氨基酸的保守取代表是本领域公知的。这类保守修饰的变体除本发明的多态变体、种间同系物和等位基因之外，并且不排除本发明的多态性变体、物种间同系物和等位基因。
以下8组每个包含互相是保守取代的氨基酸：
1)丙氨酸(A)，甘氨酸(G)；
2)天冬氨酸(D)，谷氨酸(E)；
3)天冬酰胺(N)，谷氨酰胺(Q)；
4)精氨酸(R)，赖氨酸(K)；
5)异亮氨酸(I)，亮氨酸(L)，甲硫氨酸(M)，缬氨酸(V)；
6)苯丙氨酸(F)，酪氨酸(Y)，色氨酸(W)；
7)丝氨酸(S)，苏氨酸(T)；以及
8)半胱氨酸(C)，甲硫氨酸(M)
(参见，例如，Creighton,Proteins(1984))。
通过在比较窗口中比较两个最佳比对的序列确定“序列相同性的百分比”，其中比较窗口中的多核苷酸或多肽序列部分与两个序列的最佳比对的参考序列(其不含添加或缺失)相比可以包含添加或缺失(即，缺口)。百分比这样计算，确定在两个序列中均存在的相同核酸碱基或氨基酸残基的位置的数目以产生匹配位置的数目，匹配位置的数目除以比较窗口中的位置总数目并将结果乘以100以产生序列相同性的百分比。
在两个或更多个核酸或多肽序列的上下文中，术语“相同”或百分比“相同性”是指当如利用以下序列比较算法之一或者通过手动比对和肉眼观察测量的在比较窗口或指定区域中比较并比对最大对应性时，相同或者具有特定百分比的相同氨基酸残基或核苷酸的两个或更多个序列或子序列(即，在指定区域，例如，本发明的整个多肽序列或本发明的多肽的单独结构域中60％相同性，优选65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％相同性)。然后说这类序列“基本上相同”。这个定义还指测试序列的互补物。任选地，相同性存在于长度至少约50个核苷酸的区域中，或者更优选在长度100-500或1000或更多个核苷酸的区域中。本发明包括与SEQ ID NO:30-51中的任一个基本上相同的多肽。
对于序列比较，通常一个序列用作参考序列，测试序列与其进行比较。当利用序列比较算法时，将测试和参考序列输入计算机，如果必要，指定子序列坐标，并且指定序列算法程序参数。可以使用默认程序参数，或者可以指定可选参数。然后序列比较算法基于程序参数计算测试序列相对于参考序列的百分比序列相同性。
如本文所用，“比较窗口”包括引用选自例如全长序列或者20-600、约50-约200或约100-约150个氨基酸或核苷酸的连续位置数量的任一个的片段，其中可以在将两个序列优化比对之后，将序列与相同连续位置数量的参考序列进行比较。比对序列用于比较的方法是本领域公知的。用于比较的序列的最佳比对可以这样进行，例如通过Smith andWaterman(1970)Adv.Appl.Math.2:482c的局部同源性算法，通过Needleman and Wunsch(1970)J.Mol.Biol.48:443的同源性比对算法，通过Pearson and Lipman(1988)Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 85:2444的搜索相似性方法，通过这些算法的计算机化实施(WisconsinGenetics Software Package,Genetics Computer Group,575Science Dr.,Madison,WI中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)，或者通过手动比对和肉眼观察(参见，例如，Ausubel etal.,Current Protocols in Molecular Biology(1995supplement))。
适合确定百分比序列相同性和序列相似性的算法的实例为BLAST和BLAST 2.0算法，其分别描述于Altschul et al.(1977)Nuc.Acids Res.25:3389-3402和Altschul etal.(1990)J.Mol.Biol.215:403-410。进行BLAST分析的软件可通过美国国家生物技术信息中心(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)公开获得。这种算法包括首先通过鉴定查询序列中长度W的短词来鉴定高评分序列对(HSP)，当与数据库序列中相同长度的词比对时，其匹配或满足一些正值的阈值评分T。T称作邻近词评分阈值(上文Altschul et al.)。这些初始的邻近词命中用作开始搜索的种子以发现更长的包含它们的HSP。词命中沿每个序列的两个方向延伸，只要累积的比对评分可以增加。对于核苷酸序列，利用参数M(匹配残基对的奖励评分；通常>0)和N(错配残基的处罚评分；通常<0)计算累积评分。对于氨基酸序列，评分矩阵用来计算累积评分。在以下情况时每个方向的词命中延伸停止：累积的比对评分从其达到的最大值减少数量X；由于一个或多个负评分残基比对的积累，累积评分变为0或以下；或者到达任一序列的末端。BLAST算法参数W、T和X决定比对的灵敏度和速度。BLASTN程序(对于核苷酸序列)使用字长(W)11、期望值(E)10、M＝5、N＝-4和两条链的比较作为默认值。对于氨基酸序列，BLASTP程序使用字长3、和期望值(E)10、和BLOSUM62评分矩阵(参见Henikoff and Henikoff(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:10915)比对(B)50、预期值(E)10、M＝5、N＝-4、和两条链的比较作为默认值。
BLAST算法还进行两个序列之间相似性的统计分析(参见，例如，Karlin andAltschul(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5873-5787)。BLAST算法提供的相似性的一个度量是最小总概率(P(N))，其提供两个核苷酸或氨基酸序列之间会偶然发生匹配的概率的指示。例如，如果在测试核酸与参考核酸的比较中最小总概率小于约0.2，更优选小于约0.01，并且最优选小于约0.001，则认为核酸与参考序列相似。
如下文所述，两个核酸序列或多肽基本上相同的指示是第一核酸编码的多肽与针对第二核酸编码的多肽产生的抗体免疫交叉反应。因此，例如，当两个肽的不同之处仅为保守取代时，多肽通常与第二多肽基本上相同。如下文所述，两个核酸序列基本上相同的另一指示是两个分子或它们的互补物在严格条件下互相杂交。两个核酸序列基本上相同的另一指示是相同引物可以用来扩增所述序列。
当其占据与给定残基相同的抗体内的基本结构位置时，抗体中的氨基酸残基“对应”于给定残基。例如，当如利用本领域中的适用方法评价的，所选残基占据与Kabat位置48相同的基本空间或结构关系时，比较抗体中的所选残基对应于本文提供的抗体中的位置48(根据如本文所述的Kabat编号系统)。例如，比较抗体可以为了最大序列同源性与本文提供的抗体比对，并且可以确定所比对的比较抗体中与Kabat位置48对齐的位置对应于它。或者，代替(或除了)如上文所述的一级序列比对，还可以使用三维结构比对，例如，其中比较抗体的结构为了最大对应性与本文提供的抗体比对并比较整个结构。在这种情况下，可以说在结构模型中占据与Kabat位置48相同的基本位置的氨基酸对应。
当应用于蛋白时，术语“分离的”表示蛋白基本上不含其在天然状态中相关的其他细胞组分。其优选为均质状态，虽然其可以是干燥或水性溶液。通常利用分析化学技术如聚丙烯酰胺凝胶电泳或高效液相色谱确定纯度和同质性。是制品中存在的主要物质的蛋白是基本上纯化的。术语“纯化的”表示蛋白在电泳凝胶中基本上产生一条带。特别地，其表示蛋白是至少85％纯，更优选至少95％纯，并且最优选至少99％纯。
当提到蛋白或肽时，短语“特异性地(选择性地)结合”至抗体或者“特异性地(选择性地)免疫反应”是指结合反应，其是蛋白和其他生物制品的异质群体中存在蛋白的决定因素。因此，在指定的免疫测定条件下，指定抗体结合至特定蛋白至少两倍于背景，并且基本上不大量结合至样品中存在的其他蛋白。通常特异性或选择性反应会至少两倍于背景信号或噪音，并且更通常超过背景10-100倍。
如本文所用的“细胞”是指进行足以保存或复制其基因组DNA的代谢或其他功能的细胞。细胞可以通过本领域公知的方法鉴定，包括例如完整膜的存在，通过特定染料染色，产生子代的能力，或者在配子的情况下，与第二配子结合产生存活后代的能力。细胞可以包括原核和真核细胞。原核细胞包括但不限于细菌。真核细胞包括但不限于酵母细胞以及源自植物和动物的细胞，例如哺乳动物、昆虫(例如，灰翅夜蛾(spodoptera))和人细胞。
如本文所定义，关于蛋白-抑制剂(例如，人源化1E9抗体-CD73)相互作用的术语“抑制(inhibition)”、“抑制(inhibit)”、“抑制(inhibiting)”等表示相对于在抑制剂(例如，人源化1E9抗体)不存在下蛋白的活性或功能，负面影响(例如，减少)蛋白的活性或功能(例如，减少CD73的催化活性)。在一些实施方案中，抑制是指疾病或疾病症状的减少。因此，抑制至少部分包括部分或完全阻断刺激，减少、防止或延迟激活，或者灭活、钝化或下调信号转导或酶促反应或蛋白的量。相似地，“抑制剂”是抑制CD73活性的化合物或蛋白，例如，通过结合，部分或完全阻断、减少、防止、延迟、灭活、钝化或下调酶促活性(例如，CD73催化活性)。
本发明的物质常作为包含活性治疗剂和各种其他药学可接受的组分的药物组合物施用。参见Remington's Pharmaceutical Science(15th ed.,Mack PublishingCompany,Easton,Pennsylvania,1980)。优选形式取决于预期的施用模式和治疗应用。根据期望的制剂，组合物还可以包括药学可接受的、无毒的载体或稀释剂，其定义为通常用来配制药物组合物用于动物或人施用的媒介物。选择稀释剂以便不影响组合的生物活性。这类稀释剂的实例是蒸馏水、生理磷酸盐缓冲盐水、林格氏液、葡萄糖溶液和汉克斯溶液。此外，药物组合物或制剂还可以包括其他载体，佐剂或者无毒的、非治疗性的、非免疫原性的稳定剂等。
可以施用组合物用于治疗性或预防性治疗。在治疗性应用中，以“治疗有效剂量”向患有疾病(例如，癌症)的患者施用组合物。有效用于这种用途的量取决于疾病的严重程度和患者健康的一般状态。可以施用组合物的单次或多次施用，取决于患者需要和耐受的剂量和频率。为了本发明的目的，“患者”或“对象”包括人和其他动物，特别是哺乳动物。因此，所述方法可用于人类疗法和兽医应用。在优选实施方案中，患者是哺乳动物，优选灵长类，并且在最优选的实施方案中，患者是人。
适合口服施用的制剂可以由以下组成：(a)液体溶液，例如悬浮于稀释剂如水、盐水或PEG 400中的有效量的包装核酸；(b)胶囊、小药囊或片剂，各自包含预定量的活性成分，作为液体、固体、颗粒或明胶；(c)适当液体中的悬浮于；以及(d)合适的乳剂。片剂形式可以包括一种或多种乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、磷酸钙、玉米淀粉、马铃薯淀粉、微晶纤维素、明胶、胶体二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸，以及其他赋形剂、着色剂、填充剂、粘合剂、稀释剂、缓冲剂、湿润剂、防腐剂、增香剂、染料、崩解剂和药学相容的载体。含片(Lozenge)形式可以包含调味剂(例如，蔗糖)中的活性成分，以及锭剂(pastille)包含惰性基底中的活性成分，如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶乳剂，凝胶等，除了活性成分，包含本领域已知的载体。
药物组合物还可以包括大的、缓慢代谢的大分子如蛋白、多糖如壳聚糖、聚乳酸、聚乙醇酸和共聚物(如乳胶功能化琼脂糖(sepharose)(TM)、琼脂糖(agarose)、纤维素等)、聚合氨基酸、氨基酸共聚物以及脂质聚集体(如油滴或脂质体)。此外，这些载体可以具有免疫刺激剂的功能(即，佐剂)。
可以将本文提供的组合物单独或与其他合适的组分组合制备为通过吸入施用的气溶胶制剂(即，可以将它们“雾化”)。可以将气溶胶制剂置于加压可接受的抛射剂中，如二氯二氟甲烷、丙烷、氮气等。
直肠施用的合适制剂包括例如栓剂，其由栓剂基底的包装核酸组成。合适的栓剂基底包括天然或合成的甘油三酯或链烷烃。此外，还可能使用明胶直肠胶囊，其由选择的化合物与基底的组合组成，包括例如液体甘油三酯、聚乙二醇和链烷烃。
适合肠胃外施用，例如通过关节内(关节中)、静脉内、肌肉内、肿瘤内、皮内、腹腔内和皮下途径的制剂包括水性和非水性的、等渗无菌注射溶液，其可以包含抗氧化剂、缓冲剂、制菌剂和使得制剂与预期受者的血液等渗的溶质，以及水性和非水性无菌悬浮液，其可以包括悬浮剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂。在本发明的实施中，组合物可以例如通过静脉内输注、口服、体表、腹腔内、膀胱内或鞘内施用。肠胃外施用、口服施用和静脉内施用是施用的优选方法。化合物的制剂可以在单位剂量或多剂量密封的容器中提供，如安瓿和小瓶。
注射溶液和悬浮液可以制备自以前描述种类的无菌粉末、颗粒和片剂。用于离体疗法的通过核酸转导的细胞还可以如上文所述静脉内或肠胃外施用。
药物制品优选为单位剂型。在这样的形式中，可以将制品分为包含适当量的活性组分的单位剂量。单位剂型可以是包装制品，包含离散量的制品的包装，例如成包的片剂、胶囊剂以及小瓶或安瓿中的粉末。而且，单位剂型可以是胶囊剂、片剂、扁囊剂或锭剂本身，或者其可以是适当数量的包装形式的任何这些。如果期望，组合物还可以包含其他相容的治疗剂。
联合施用考虑共施用，利用不同制剂或单一药物制剂，以及任一顺序的连续施用，其中优选有两种(或所有)活性剂同时发挥它们的生物活性的时间。
本文提供的组合物的有效剂量会根据许多不同因素变化，包括施用方式、靶位点、患者的生理状态、患者是人或动物、施用的其他药物以及治疗是预防性的或治疗性的。但是，本领域技术人员查看指导治疗和预防癌症的批准组合物的剂量会立即认识到适当和/或相等剂量。
术语“疾病”或“病症(condition)”是指能够用本文提供的化合物、药物组合物或方法治疗的患者或对象的生存状态或健康状态。在实施方案中，疾病是癌症(例如肺癌、卵巢癌、骨肉瘤、膀胱癌、子宫颈癌、肝癌、肾癌、皮肤癌(例如，Merkel细胞癌)、睾丸癌、白血病、淋巴瘤、头颈癌、结肠直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、黑素瘤、乳腺癌、神经母细胞瘤)。疾病可以是自身免疫疾病、炎症疾病、癌症疾病、传染性疾病、代谢疾病、发育疾病、心血管疾病、肝病、肠病、内分泌疾病、神经疾病或其他疾病。
如本文所用，术语“癌症”是指在哺乳动物中发现的所有类型的癌症、赘生物或恶性肿瘤，包括白血病、淋巴瘤、黑素瘤、神经内分泌肿瘤、癌和肉瘤。可以用本文提供的化合物、药物组合物或方法治疗的示例性癌症包括淋巴瘤、肉瘤、膀胱癌、骨癌、脑瘤、子宫颈癌、结肠癌、食管癌、胃癌、头颈癌、肾癌、骨髓瘤、甲状腺癌、白血病、前列腺癌、乳腺癌(例如三阴性、ER阳性、ER阴性、化疗耐药、赫赛汀耐药、HER2阳性、多柔比星耐药、他莫昔芬耐药、导管癌、小叶癌、原发性、转移性)、卵巢癌、胰腺癌、肝癌(例如肝细胞癌)、肺癌(例如非小细胞肺癌、鳞状细胞肺癌、腺癌、大细胞肺癌、小细胞肺癌、类癌、肉瘤)、多形性胶质母细胞瘤、神经胶质瘤、黑素瘤、前列腺癌、去势抗性前列腺癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌、胶质母细胞瘤、卵巢癌、肺癌、鳞状细胞癌(例如，头、颈或食管)、结肠直肠癌、白血病、急性髓性白血病、淋巴瘤、B细胞淋巴瘤或多发性骨髓瘤。额外的实例包括甲状腺、内分泌系统、脑、乳房、宫颈、结肠、头和颈、食管、肝、肾、肺、非小细胞肺、黑素瘤、间皮瘤、卵巢、肉瘤、胃、子宫的癌症，或者成神经管细胞瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、卵巢癌、横纹肌肉瘤、原发性血小板增多症、原发性巨球蛋白血症、原发性脑瘤、癌症、恶性胰腺胰岛瘤、恶性类癌、尿膀胱癌、癌前皮肤病变、睾丸癌、淋巴瘤、甲状腺癌、神经母细胞瘤、食管癌、泌尿生殖道癌、恶性高钙血症、子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、内分泌或外分泌胰腺肿瘤、髓样甲状腺癌、髓样甲状腺癌、黑素瘤、结肠直肠癌、乳突甲状腺癌、肝细胞癌、乳头佩吉特病、叶状肿瘤、小叶癌、导管癌、胰腺星状细胞癌、肝星状细胞癌或前列腺癌。
术语“白血病”广泛地指血液形成器官的进行性、恶性疾病，并且一般特征在于血液和骨髓中白细胞和它们的前体的畸变增殖和发育。白血病一般临床上在以下基础上进行分类：(1)疾病的持续时间和特征-急性或慢性；(2)涉及细胞的类型；髓性(骨髓性的)、淋巴性(淋巴源的)或单核细胞；以及(3)血液中异常细胞的数量增加或不增加-白血病或白细胞缺乏(亚白血病)。可以用本文提供的化合物、药物组合物或方法治疗的示例性白血病包括例如急性非淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、成人T-细胞白血病、非白血性白血病、白细胞不增多性白血病、嗜碱性粒细胞白血病、母细胞白血病、牛白血病、慢性髓细胞白血病、皮肤白血病、干细胞性白血病、嗜酸性粒细胞白血病、Gross'白血病、毛细胞白血病、成血细胞性白血病(hemoblastic leukemia)、成血细胞性白血病(hemocytoblastic leukemia)、组织细胞性白血病、干细胞白血病、急性单核细胞白血病、白细胞减少性白血病、淋巴白血病、淋巴母细胞白血病、淋巴细胞白血病、淋巴源性白血病、淋巴性白血病、淋巴肉瘤细胞白血病、肥大细胞白血病、巨核细胞白血病、小成髓细胞白血病、单核细胞白血病、成髓细胞白血病、髓细胞白血病、髓性粒细胞白血病、髓性单核细胞白血病、Naegeli白血病、浆细胞白血病、多发性骨髓瘤、浆细胞性白血病、早幼粒细胞白血病、Rieder细胞白血病、Schilling's白血病、干细胞白血病、亚白血性白血病或未分化细胞白血病。
术语“肉瘤”一般是指由胚胎结缔组织样物质组成且一般由包埋在纤维状或均质物质中的紧密细胞构成的肿瘤。可以用本文提供的化合物、药物组合物或方法治疗的肉瘤包括软骨肉瘤、纤维肉瘤、淋巴肉瘤、黑素肉瘤、粘液肉瘤、骨肉瘤、Abemethy's肉瘤、脂肉瘤、脂肪肉瘤、腺泡状软组织肉瘤、成釉细胞肉瘤、葡萄样肉瘤、绿色瘤肉瘤、绒毛膜癌、胚胎肉瘤、维耳姆斯瘤肉瘤、子宫内膜肉瘤、基质肉瘤、尤文氏肉瘤、筋膜肉瘤、纤维母细胞性肉瘤、巨细胞肉瘤、粒细胞肉瘤、霍奇金肉瘤、特发性多发性色素沉着出血性肉瘤、B细胞的免疫母细胞肉瘤、淋巴瘤、T-细胞的免疫母细胞肉瘤、詹森肉瘤、卡波西肉瘤、库普弗细胞肉瘤、血管肉瘤、白血病性肉瘤、恶性间叶瘤肉瘤、骨膜外肉瘤、网状细胞肉瘤、劳氏肉瘤、浆液囊性肉瘤、滑膜肉瘤或毛细管扩张性肉瘤。
术语“黑素瘤”用来表示产生自皮肤和其他器官的黑色素细胞系统的肿瘤。可以用本文提供的化合物、药物组合物和方法治疗的黑素瘤包括例如肢端雀斑样痣黑素瘤、无黑色素性黑素瘤、良性幼年黑素瘤、Cloudman's黑素瘤、S91黑素瘤、Harding-Passey黑素瘤、幼年黑素瘤、恶性雀斑样痣黑素瘤、恶性黑素瘤、结节性黑素瘤、甲下黑色素瘤(subungalmelanoma)或浅表扩散性黑素瘤。
术语“癌”是指由倾向于浸润周围组织并产生转移的上皮细胞组成的恶性新生长。可以用本文提供的化合物、药物组合物或方法治疗的示例性癌包括例如髓样甲状腺癌、家族性髓样甲状腺癌、腺泡癌、腺泡状癌、囊性腺样癌、腺样囊性癌、腺癌(carcinomaadenomatosum)、肾上腺皮质癌、肺泡癌、肺泡细胞癌、基底细胞癌(basal cellcarcinoma)、基底细胞癌(carcinoma basocellulare)、肛管基底细胞样癌、基底鳞状细胞癌、细支气管肺泡癌、细支气管癌、支气管肺癌、髓样癌(cerebriform carcinoma)、肝小胆管癌、绒毛膜癌、胶样癌、粉刺癌、子宫体癌、筛状癌、铠甲状癌、癌疮、柱状细胞癌(cylindrical carcinoma)、柱状细胞癌(cylindrical cell carcinoma)、导管癌(ductcarcinoma)、导管癌(ductal carcinoma)、硬癌(carcinoma durum)、胚胎性癌、髓样癌(encephaloid carcinoma)、epiermoid癌、腺样上皮癌、外植癌、溃疡性癌、纤维癌、胶样癌、胶状癌、巨细胞癌(giant cell carcinoma)、巨细胞癌(carcinoma gigantocellulare)、腺癌(glandular carcinoma)、颗粒细胞癌、基底细胞癌(hair-matrix carcinoma)、多血癌、肝细胞癌、Hurthle细胞癌、透明癌、hypemephroid癌、幼稚性胚胎性癌、原位癌、表皮内癌、上皮内癌、Krompecher's癌、Kulchitzky-细胞癌、大细胞癌、豆状癌(lenticularcarcinoma)、豆状癌(carcinoma lenticulare)、脂瘤样癌、小叶癌、淋巴上皮癌、髓样癌(carcinoma medullare)、髓样癌(medullary carcinoma)、黑色素癌、软癌、粘液癌(mucinous carcinoma)、carcinoma muciparum、粘液细胞癌、粘液表皮样癌、粘液癌(carcinoma mucosum)、粘液癌(mucous carcinoma)、粘液瘤样癌、鼻咽癌、燕麦细胞癌、骨化性癌(carcinoma ossificans)、骨化性癌(osteoid carcinoma)、乳头状癌、门脉周癌、浸润前期癌、棘细胞癌、pultaceous carcinoma、肾的肾细胞癌、储备细胞癌、肉瘤样癌、schneiderian carcinoma、硬癌(scirrhous carcinoma)、阴囊癌、印戒细胞癌、单纯癌、小细胞癌、马铃薯状癌、球状细胞癌、梭形细胞癌、carcinoma spongiosum、鳞癌、鳞状细胞癌、绳捆癌、血管扩张性癌(carcinoma telangiectaticum)、血管扩张性癌(carcinomatelangiectodes)、移行细胞癌、结节性皮癌(carcinoma tuberosum)、小管癌、结节性皮癌(tuberous carcinoma)、疣状癌或绒毛状癌。
如本文所用，术语“转移”、“转移性的”和“转移性癌”可以交换使用并指增殖性疾病或病症如癌症从一个器官或者另一非相邻器官或身体部分扩散。癌症发生在起始部位，例如，乳房，该部位称作原发性肿瘤，例如，原发性乳腺癌。原发性肿瘤或起始部位中的一些癌细胞获得穿透和浸润局部区域中的周围正常组织的能力和/或穿透淋巴系统或血管系统的壁通过该系统循环至体内的其他部位和组织的能力。形成自原发性肿瘤癌细胞的第二临床上可检测的肿瘤称作转移性或继发性肿瘤。当癌细胞转移时，推测转移性肿瘤及其细胞与原始肿瘤相似。因此，如果肺癌转移至乳房，则乳房部位的继发性肿瘤由异常肺细胞而不是异常乳腺细胞组成。乳房中的继发性肿瘤称作转移性肺癌。因此，短语转移性癌是指其中对象患有原发性肿瘤且患有一种或多种继发性肿瘤的疾病。短语非转移性癌或患有未转移的癌症的对象是指其中对象患有原发性肿瘤但没有一种或多种继发性肿瘤的疾病。例如，转移性肺癌是指对象中的疾病，所述对象患有原发性肺肿瘤或有原发性肺肿瘤历史并且在第二部位或多个部位如乳房中有一种或多种继发性肿瘤。
在与疾病(例如，糖尿病，癌症(例如前列腺癌、肾癌、转移性癌、黑素瘤、去势抗性前列腺癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌、胶质母细胞瘤、卵巢癌、肺癌、鳞状细胞癌(例如，头、颈或食管)、结肠直肠癌、白血病、急性髓性白血病、淋巴瘤、B细胞淋巴瘤或多发性骨髓瘤))相关的物质或物质活性或功能的上下文中，术语“相关”或“与…相关”表示疾病(例如肺癌、卵巢癌、骨肉瘤、膀胱癌、子宫颈癌、肝癌、肾癌、皮肤癌(例如，Merkel细胞癌)、睾丸癌、白血病、淋巴瘤、头颈癌、结肠直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、黑素瘤、乳腺癌、神经母细胞瘤)是由物质或物质活性或功能引起的(整体或部分)，或者疾病的症状是由物质或物质活性或功能引起的(整体或部分)。
人源化抗体
人源化抗体是遗传工程化的抗体，其中将至少一个来自小鼠抗体(“供体抗体”，其还可以是大鼠、仓鼠或其他非人物种)的CDR(或其功能性片段)移植至人抗体(“受体抗体”)上。所述人抗体是非天然(例如非天然存在或不由人天然产生)抗体，其不引发人中的免疫应答，不引发人中的显著免疫应答，或者引发的免疫应答少于小鼠中引发的免疫应答。在实施方案中，移植一个以上小鼠CDR(例如移植全部6个小鼠CDR)。受体抗体的序列可以是例如成熟人抗体序列(或其片段)，人抗体序列的共有序列(或其片段)或种系区序列(或其片段)。因此，人源化抗体可以是具有一个或多个来自供体抗体的CDR以及可变区框架(FR)的抗体。FR可以形成人抗体内的恒定区和/或可变区的部分。此外，为了保留高结合亲和力，人受体序列中的氨基酸可以被来自供体序列的相应氨基酸代替，例如其中：(1)所述氨基酸在CDR中；(2)所述氨基酸在人框架区中(例如所述氨基酸与CDR之一紧密相邻)。参见，美国专利号5,530,101和5,585,089，援引加入本文，其提供构建人源化抗体的详细说明。虽然人源化抗体常并入来自小鼠抗体的全部6个CDR(例如Kabat定义的，但是还常包括如Chothia定义的高变环H1)，但是它们还可以用较少小鼠CDR和/或少于完整小鼠CDR序列(例如CDR的功能片段)制备(例如，Pascalis et al.,J.Immunol.169:3076,2002；Vajdos et al.,Journal of Molecular Biology,320:415-428,2002；Iwahashi et al.,Mol.Immunol.36:1079-1091,1999；Tamura et al,Journal of Immunology,164:1432-1441,2000)。
通常如本文提供的人源化抗体可以包括(i)包含至少一个来自小鼠抗体的CDR(通常3个CDR)(在本文中也称作小鼠CDR)和人可变区框架的轻链；以及(ii)包含至少一个来自小鼠抗体的CDR(通常3个CDR)和人可变区框架(FR)的重链。轻链和重链可变区框架(FR)可以各自为成熟人抗体可变区框架序列(或其片段)、种系可变区框架序列(与J区序列组合)(或其片段)或者人抗体可变区框架序列的共有序列(或其片段)。在实施方案中，人源化抗体包括如(i)中所述的轻链、如(ii)中所述的重链连同轻链人恒定区和重链恒定区。
嵌合抗体是其中小鼠(或其他啮齿动物)抗体的可变区与人抗体的恒定区组合的抗体；它们通过遗传工程化的构建是公知的。这类抗体保留小鼠抗体的结合特异性，同时约三分之二是人的。小鼠、嵌合和人源化抗体中存在的非人序列的比例表明嵌合抗体的免疫原性在小鼠和人源化抗体中间。可以具有相对于小鼠抗体减少的免疫原性的其他类型的遗传工程化抗体包括利用噬菌体展示方法(Dower et al.,WO91/17271；McCafferty et al.,WO92/001047；Winter,WO92/20791；和Winter,FEBS Lett.23:92,1998，各自援引加入本文)或利用转基因动物(Lonberg et al.,WO93/12227；Kucherlapati WO91/10741，各自援引加入本文)制备的人抗体。
设计人源化抗体的其他方法也可以用来达到与上文所述美国专利号5,530,101和5,585,089中方法相同的结果，例如，“superhumanization”(参见Tan etal.J.Immunol.169:1119,2002，和美国专利号6,881,557)，或者Studnicak et al.,Protein Eng.7:805,1994的方法。此外，制备遗传工程化、减少免疫原性的mAb的其他方法包括“重塑(reshaping)”、“超嵌合(hyperchimerization)”和镶饰/重建表面，例如，Vaswami et al.,Annals of Allergy,Asthma and Immunology 81:105,1998；Roguska etal.Protein Eng.9:895,1996；以及美国专利号6,072,035和5,639,641所述。
如本文提到的“CD73蛋白”或“CD73抗原”包括任何重组或天然存在形式的也称作5'-核苷酸酶(5'-NT)或外-5'-核苷酸酶的分化簇73(CD73)或者其保留CD73核苷酸酶活性(例如与CD73相比在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性内)的变体或同系物。在一些方面，所述变体或同系物与天然存在的CD73蛋白相比在整个序列或一部分序列(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列相同性。在实施方案中，CD73蛋白基本上与UniProt参考号21589鉴定的蛋白或者与其具有相当大相同性的变体或同系物相同。在实施方案中，CD73蛋白基本上与UniProt参考号Q61503鉴定的蛋白或者与其具有相当大相同性的变体或同系物相同。
人源化1E9抗体
本文提供包括人源化轻链可变区和人源化重链可变区的人源化1E9抗体。如本文提供的人源化1E9抗体能够结合CD73蛋白，并且包括至少一个小鼠单克隆抗体1E9的CDR或其功能片段(Thomson LF et al.Tissue Antigens 2008,Volume 35,Issue 1:Productionand characterization of monoclonal antibodies to the glycosylphosphatidylinositol-anchored lymphocyte differentiation antigen ecto-5′-nucleotidase(CD73))。CDR的功能片段是能够结合至抗原(例如，CD73)的完整CDR氨基酸序列的一部分。因此，CDR的功能片段通常包括CDR结合至抗原(例如，CD73)所需的氨基酸残基。“小鼠CDR”是源自能够结合CD73的小鼠抗体的完整CDR氨基酸序列或其功能片段。因此，小鼠CDR的功能片段通常包括CDR结合至CD73所需的氨基酸残基。当人源化1E9抗体包括至少一个小鼠CDR时，所述至少一个小鼠CDR或其功能片段源自供体抗体。在实施方案中，供体抗体是小鼠1E9抗体。本领域技术人员会立即认识到包括至少一个小鼠CDR的人源化1E9抗体是具有至少一个源自供体1E9抗体的小鼠CDR并且额外的CDR源自受体抗体的人源化抗体(例如其中轻链包括总计3个CDR并且重链包括总计3个CDR)。
在实施方案中，人源化轻链可变区和人源化重链可变区包括组合的一个小鼠CDR或小鼠CDR的功能片段。因此，在一些实施方案中，人源化轻链可变区和人源化重链可变区包括组合的6个CDR，其中6个CDR中至少一个是小鼠CDR。当人源化轻链可变区和人源化重链可变区包括组合的一个小鼠CDR时，人源化轻链可变区或人源化重链可变区包括一个小鼠CDR。例如，人源化抗体可以包括源自供体抗体的CDR L3(例如小鼠，在本文中也称作小鼠CDR L3)以及源自受体抗体(即人)的CDR L1、CDR L2、CDR H1、CDR H2和CDR H3。
在实施方案中，人源化轻链可变区和人源化重链可变区包括组合的2个小鼠CDR。当人源化轻链可变区和人源化重链可变区包括组合的2个小鼠CDR时，人源化轻链可变区和人源化重链可变区各自包括一个小鼠CDR(i)，人源化轻链可变区包括2个小鼠CDR(ii)，或者人源化重链可变区包括2个小鼠CDR(iii)。例如，人源化抗体可以包括源自供体抗体的CDR L3和CDR H3(在本文中分别称作小鼠CDR L3和小鼠CDR H3)，以及源自受体抗体(即人)的CDR L1、CDR L2、CDR H1和CDR H2。
在实施方案中，人源化轻链可变区和人源化重链可变区包括组合的3个小鼠CDR。当人源化轻链可变区和人源化重链可变区包括组合的3个小鼠CDR时，人源化轻链可变区可以包括一个小鼠CDR且人源化重链可变区可以包括2个小鼠CDR(i)，人源化轻链可变区包括2个小鼠CDR且人源化重链可变区包括一个小鼠CDR(ii)，人源化轻链可变区包括3个小鼠CDR(iii)，或者人源化重链可变区包括3个小鼠CDR(iv)。例如，人源化抗体可以包括源自供体抗体的CDR L3、CDR H3和CDR L2(例如小鼠，在本文中也分别称作CDR L3、小鼠CDR H3和小鼠CDR L2)以及源自受体抗体(即人)的CDR L1、CDR H1和CDR H2。
在实施方案中，人源化轻链可变区和人源化重链可变区包括组合的4个小鼠CDR。当人源化轻链可变区和人源化重链可变区包括组合的4个小鼠CDR时，人源化轻链可变区可以包括一个小鼠CDR且人源化重链可变区可以包括3个小鼠CDR(i)，人源化轻链可变区包括3个小鼠CDR且人源化重链可变区包括一个小鼠CDR(ii)，或者人源化轻链可变区包括2个小鼠CDR且人源化重链可变区包括2个小鼠CDR(iii)。例如，人源化抗体可以包括源自供体抗体的CDR L3、CDR H3、CDR L2和CDR L1(例如小鼠，在本文中也分别称作小鼠CDR L3、小鼠CDR H3、小鼠CDR L2和小鼠CDR L1)以及源自受体抗体(即人)的CDR H1和CDR H2。
在实施方案中，人源化轻链可变区和人源化重链可变区各自包括至少一个小鼠CDR。当人源化轻链可变区和人源化重链可变区各自包括至少一个小鼠CDR时，人源化轻链可变区包括至少一个小鼠CDR且人源化重链可变区包括至少一个小鼠CDR。因此，在一些实施方案中，人源化轻链可变区包括小鼠CDR L1且人源化重链包括小鼠CDR H1。在实施方案中，小鼠CDR L1包括SEQ ID NO:1的氨基酸序列且小鼠CDR H1包括SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在实施方案中，小鼠CDR L1是SEQ ID NO:1的氨基酸序列且小鼠CDR H1是SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在实施方案中，人源化轻链可变区包括小鼠CDR L2且人源化重链可变区包括小鼠CDR H2。在实施方案中，小鼠CDR L2包括SEQ ID NO:2的氨基酸序列且小鼠CDR H2包括SEQ ID NO:5的氨基酸序列。在实施方案中，小鼠CDR L2是SEQ ID NO:2的氨基酸序列且小鼠CDR H2是SEQ ID NO:5的氨基酸序列。在实施方案中，人源化轻链可变区包括小鼠CDRL3且人源化重链可变区包括小鼠CDR H3。在实施方案中，小鼠CDR L3包括SEQ ID NO:3的氨基酸序列且小鼠CDR H3包括SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在实施方案中，CDR L3是SEQ IDNO:3的氨基酸序列且小鼠CDR H3是SEQ ID NO:6的氨基酸序列。
在实施方案中，小鼠CDR L3和小鼠CDR H3的存在可能对于人源化抗体结合至CD73是足够的。因此，在实施方案中，人源化抗体不包括小鼠CDR L1、小鼠CDR L2、CDR H1或小鼠CDR H2。当人源化抗体不包括小鼠CDR L1、小鼠CDR L2、小鼠CDR H1或小鼠CDR H2时，人源化抗体包括源自受体抗体(即人)的CDR L1、CDR L2、CDR H1或CDR H2。因此，不包括小鼠CDRL1、小鼠CDR L2、小鼠CDR H1或小鼠CDR H2的人源化抗体不包括来自供体抗体(例如小鼠、大鼠、兔)的CDR L1、CDR L2、CDR H1或CDR H2，但是包括来自受体抗体(即人)的CDR L1、CDRL2、CDR H1或CDR H2。因此，在实施方案中，人源化轻链可变区不包括小鼠CDR L1或小鼠CDRL2，并且人源化重链可变区不包括小鼠CDR H1或小鼠CDR H2。在实施方案中，人源化轻链可变区不包括小鼠CDR L1和小鼠CDR L2，并且人源化重链可变区不包括小鼠CDR H1和小鼠CDR H2。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括小鼠CDR L2和小鼠CDR L3且人源化重链可变区包括小鼠CDR H2和小鼠CDR H3。在实施方案中，人源化轻链可变区包括小鼠CDR L1、小鼠CDR L2和小鼠CDR L3且人源化重链可变区包括小鼠CDR H1、小鼠CDR H2和小鼠CDR H3。在实施方案中，人源化轻链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的小鼠CDR L1、如SEQ ID NO:2所示的小鼠CDR L2和如SEQ ID NO:3所示的小鼠CDR L3，并且人源化重链可变区包括如SEQID NO:4所示的小鼠CDR H1、如SEQ ID NO:5所示的小鼠CDR H2和如SEQ ID NO:6所示的小鼠CDR H3。
CDR和FR的位置可以通过Kabat编号系统定义(Kabat et al.,Sequences ofProteins of Immunological Interest,Fifth Edition,U.S.Department of Health andHuman Services,U.S.Government Printing Office(1991))。同样地，抗体轻链或重链内的单独残基占据的位置可以通过Kabat编号系统定义。因此，人源化抗体的人源化轻链和人源化重链内结合需要的残基的位置可以根据本领域公知的Kabat编号系统通过残基的位置定义。如上文所述，人源化抗体可以是具有来自供体抗体(例如小鼠)的CDR和来自人抗体的可变区框架(FR)的抗体。据说框架区(FR)保持CDR在人源化抗体中的适当位置。从氨基末端开始，这些区域分别命名为轻链的FR L1、FR L2、FR L3和FR L4以及重链的FR H1、FR H2、FRH3和FR H4。令人惊讶的是，本发明提供人源化抗体，其包括对于人源化抗体的表位结合非常重要的框架区内的一个或多个残基。参与(或非常重要的)表位结合(例如CD73结合)的框架区残基在本文中称作结合框架区残基。结合框架区残基可以位于人源化轻链可变区的框架区中(即FR L1、FR L2、FR L3、FR L4)，或者它们可以位于人源化重链可变区的框架中(即FR H1、FR H2、FR H3、FR H4)。位于人源化轻链的FR L3区中的结合框架残基在本文中称作FR L3结合框架区残基。因此，位于人源化重链的FR H3区中的结合框架区残基在本文中称作FR H3结合框架区残基。
在实施方案中，人源化抗体包括至少一个结合框架区残基。在实施方案中，人源化轻链可变区包括至少一个结合框架区残基。在实施方案中，人源化轻链可变区包括一个或多个FR L1、FR L2、FR L3或FR L4结合框架区残基。在实施方案中，人源化轻链可变区包括一个或多个FR L1结合框架区残基。在实施方案中，人源化轻链可变区包括一个或多个FRL2结合框架区残基。在实施方案中，人源化轻链可变区包括一个或多个FR L3结合框架区残基。在实施方案中，人源化轻链可变区包括一个或多个FR L4结合框架区残基。在实施方案中，人源化重链可变区包括一个或多个FR H1、FR H2、FR H3或FR H4结合框架区残基。在实施方案中，人源化重链可变区包括一个或多个FR H1结合框架区残基。在实施方案中，人源化重链可变区包括一个或多个FR H2结合框架区残基。在实施方案中，人源化重链可变区包括一个或多个FR H3结合框架区残基。在实施方案中，人源化重链可变区包括一个或多个FRH4结合框架区残基。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括至少一个结合框架区残基(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36 37、38、39、40、41、42 43、44、45、46、47、48、49、50或更多个残基)，并且人源化重链可变区包括至少一个结合框架区残基(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36 37、38、39、40、41、42 43、44、45、46、47、48、49、50或更多个残基)。人源化抗体内结合框架区残基的位置可以与CDR残基位置相似地通过Kabat编号系统定义。
在一方面提供一种人源化1E9抗体，其包括人源化轻链可变区和人源化重链可变区，所述人源化轻链可变区包括小鼠CDR L1、小鼠CDR L2或小鼠CDR L3，所述人源化重链可变区包括小鼠CDR H1、小鼠CDR H2或小鼠CDR H3。人源化轻链可变区可以包括如SEQ IDNO:1所示的小鼠CDR L1、如SEQ ID NO:2所示的小鼠CDR L2或如SEQ ID NO:3所示的小鼠CDR L3。人源化轻链可变区可以包括如SEQ ID NO:1所示的小鼠CDR L1、如SEQ ID NO:2所示的小鼠CDR L2和如SEQ ID NO:3所示的小鼠CDR L3。人源化重链可变区可以包括如SEQID NO:4所示的小鼠CDR H1、如SEQ ID NO:5所示的小鼠CDR H2或如SEQ ID NO:6所示的小鼠CDR H3。人源化重链可变区可以包括如SEQ ID NO:4所示的小鼠CDR H1、如SEQ ID NO:5所示的小鼠CDR H2和如SEQ ID NO:6所示的小鼠CDR H3。在实施方案中，人源化轻链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的小鼠CDR L1。在实施方案中，人源化轻链可变区包括如SEQ IDNO:2所示的小鼠CDR L2。在实施方案中，人源化轻链可变区包括如SEQ ID NO:3所示的小鼠CDR L3。在实施方案中，人源化重链可变区包括如SEQ ID NO:4所示的小鼠CDR H1。在实施方案中，人源化重链可变区包括如SEQ ID NO:5所示的小鼠CDR H2。在实施方案中，人源化轻链可变区包括如SEQ ID NO:6所示的小鼠CDR H3。在进一步的实施方案中，人源化轻链可变区包括至少一个结合框架区残基。在其他进一步的实施方案中，人源化重链可变区包括至少一个结合框架区残基。
在一方面，提供一种人源化1E9抗体。所述1E9抗体包括人源化轻链可变区和人源化重链可变区。所述人源化轻链可变区包括：
(i)如SEQ ID NO:1所示的小鼠CDR L1，如SEQ ID NO:2所示的小鼠CDR L2，如SEQID NO:3所示的小鼠CDR L3以及
(ii)在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的天冬氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置18的位置处的赖氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置60的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置74的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置76的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置77的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置100的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置104的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置3的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置10的位置处的苯丙氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置13的位置处的丙氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置14的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置15的位置处的缬氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置16的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置17的位置处的谷氨酸或天冬氨酸，在对应于Kabat位置22的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置42的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置45的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置58的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的酪氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的苯丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的酪氨酸，或者在对应于Kabat位置87的位置处的苯丙氨酸。所述人源化重链可变区包括：
(i)如SEQ ID NO:4所示的小鼠CDR H1，如SEQ ID NO:5所示的小鼠CDR H2，如SEQID NO:6所示的小鼠CDR H3以及
(ii)在对应于Kabat位置37的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的丙氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的异亮氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置82的位置处的色氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的精氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸或甲硫氨酸，在对应于Kabat位置5的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置7的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的谷氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的异亮氨酸或缬氨酸，在对应于Kabat位置38的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置66的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置69的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置71的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置87的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置24的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置44的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置48的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的亮氨酸，或者在对应于Kabat位置81的位置处的谷氨酸。
在实施方案中，本文提供的人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的天冬氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置18的位置处的赖氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置60的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置74的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置76的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置77的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置100的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置104的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置3的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置10的位置处的苯丙氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置13的位置处的丙氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置14的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置15的位置处的缬氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置16的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置17的位置处的谷氨酸或天冬氨酸，在对应于Kabat位置22的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置42的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置45的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置58的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的酪氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的苯丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的酪氨酸，或者在对应于Kabat位置87的位置处的苯丙氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，即在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置9的位置处的天冬氨酸或亮氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸或丝氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置18的位置处的赖氨酸或脯氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置43的位置处的丙氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置60的位置处的脯氨酸或丝氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置74的位置处的苏氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置76的位置处的天冬酰胺或丝氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置77的位置处的天冬酰胺或丝氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸或亮氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置80的位置处的丝氨酸或丙氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置100的位置处的谷氨酰胺。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置104的位置处的缬氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸或丙氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置3的位置处的谷氨酰胺。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置10的位置处的苯丙氨酸或苏氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置11的位置处的谷氨酰胺。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置13的位置处的丙氨酸或亮氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置14的位置处的苏氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置15的位置处的缬氨酸或脯氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置16的位置处的赖氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置17的位置处的谷氨酸或天冬氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置22的位置处的苏氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置42的位置处的赖氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置45的位置处的精氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置58的位置处的异亮氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置67的位置处的酪氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置73的位置处的苯丙氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置85的位置处的酪氨酸。在实施方案中，人源化轻链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置87的位置处的苯丙氨酸。
本文提供的人源化重链可变区可以包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置37的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的丙氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的异亮氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置82的位置处的色氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的精氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸或甲硫氨酸，在对应于Kabat位置5的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置7的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的谷氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的异亮氨酸或缬氨酸，在对应于Kabat位置38的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置66的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置69的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置71的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置87的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置24的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置44的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置48的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的亮氨酸，或者在对应于Kabat位置81的位置处的谷氨酸。
在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置37的位置处的异亮氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置40的位置处的丙氨酸或脯氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置43的位置处的赖氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置70的位置处的丝氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置75的位置处的异亮氨酸或苏氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置82的位置处的色氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置83的位置处的精氨酸或赖氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置84的位置处的丙氨酸。
在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置85的位置处的丝氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸或甲硫氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置5的位置处的缬氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置7的位置处的丝氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置11的位置处的缬氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置12的位置处的谷氨酸或赖氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置20的位置处的异亮氨酸或缬氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置38的位置处的精氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置66的位置处的精氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置67的位置处的缬氨酸。
在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置69的位置处的异亮氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置71的位置处的丙氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置73的位置处的赖氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置87的位置处的苏氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置24的位置处的缬氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置44的位置处的精氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置48的位置处的甲硫氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置80的位置处的亮氨酸。在实施方案中，人源化重链可变区包括结合框架区残基，其是在对应于Kabat位置81的位置处的谷氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的亮氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸，或者在对应于Kabat位置18的位置处的脯氨酸；并且人源化重链可变区包括在对应于Kabat位置37的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置82的位置处的色氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的丝氨酸，或者在对应于Kabat位置89的位置处的甲硫氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的亮氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸，以及在对应于Kabat位置18的位置处的脯氨酸；并且人源化重链可变区包括在对应于Kabat位置37的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置82的位置处的色氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的丝氨酸，或者在对应于Kabat位置89的位置处的甲硫氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的亮氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸，或者在对应于Kabat位置18的位置处的脯氨酸；并且人源化重链可变区包括在对应于Kabat位置37的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置82的位置处的色氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的丝氨酸，以及在对应于Kabat位置89的位置处的甲硫氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的亮氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸，以及在对应于Kabat位置18的位置处的脯氨酸；并且人源化重链可变区包括在对应于Kabat位置37的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置82的位置处的色氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的丝氨酸，以及在对应于Kabat位置89的位置处的甲硫氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置60的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置74的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置76的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置77的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置100的位置处的谷氨酰胺或者在对应于Kabat位置104的位置处的缬氨酸；并且人源化重链可变区包括在对应于Kabat位置5的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置7的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的谷氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的异亮氨酸或缬氨酸，在对应于Kabat位置38的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的丙氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置66的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置69的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置71的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的异亮氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的精氨酸或赖氨酸或者在对应于Kabat位置87的位置处的苏氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置60的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置74的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置76的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置77的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置100的位置处的谷氨酰胺以及在对应于Kabat位置104的位置处的缬氨酸；并且人源化重链可变区包括在对应于Kabat位置5的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置7的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的谷氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的异亮氨酸或缬氨酸，在对应于Kabat位置38的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的丙氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置66的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置69的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置71的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的异亮氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的精氨酸或赖氨酸或者在对应于Kabat位置87的位置处的苏氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置60的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置74的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置76的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置77的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置100的位置处的谷氨酰胺或者在对应于Kabat位置104的位置处的缬氨酸；并且人源化重链可变区包括在对应于Kabat位置5的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置7的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的谷氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的异亮氨酸或缬氨酸，在对应于Kabat位置38的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的丙氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置66的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置69的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置71的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的异亮氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的精氨酸或赖氨酸以及在对应于Kabat位置87的位置处的苏氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置60的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置74的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置76的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置77的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置100的位置处的谷氨酰胺以及在对应于Kabat位置104的位置处的缬氨酸；并且人源化重链可变区包括在对应于Kabat位置5的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置7的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的谷氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的异亮氨酸或缬氨酸，在对应于Kabat位置38的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的丙氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置66的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置69的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置71的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的异亮氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的精氨酸或赖氨酸以及在对应于Kabat位置87的位置处的苏氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置3的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的天冬氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置10的位置处的苯丙氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置12的位置处的丝氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置13的位置处的丙氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置14的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置15的位置处的缬氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置16的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置17的位置处的谷氨酸或天冬氨酸，在对应于Kabat位置18的位置处的赖氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置22的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置42的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置45的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置58的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置60的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的酪氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的苯丙氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的酪氨酸或者在对应于Kabat位置87的位置处的苯丙氨酸；并且人源化重链可变区包括在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置24的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置37的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置44的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置48的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的亮氨酸，在对应于Kabat位置81的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置82的位置处的色氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的丝氨酸或者在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸或甲硫氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置3的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的天冬氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置10的位置处的苯丙氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置12的位置处的丝氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置13的位置处的丙氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置14的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置15的位置处的缬氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置16的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置17的位置处的谷氨酸或天冬氨酸，在对应于Kabat位置18的位置处的赖氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置22的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置42的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置45的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置58的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置60的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的酪氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的苯丙氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的酪氨酸以及在对应于Kabat位置87的位置处的苯丙氨酸；并且人源化重链可变区包括在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置24的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置37的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置44的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置48的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的亮氨酸，在对应于Kabat位置81的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置82的位置处的色氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的丝氨酸或者在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸或甲硫氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置3的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的天冬氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置10的位置处的苯丙氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置12的位置处的丝氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置13的位置处的丙氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置14的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置15的位置处的缬氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置16的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置17的位置处的谷氨酸或天冬氨酸，在对应于Kabat位置18的位置处的赖氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置22的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置42的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置45的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置58的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置60的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的酪氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的苯丙氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的酪氨酸或者在对应于Kabat位置87的位置处的苯丙氨酸；并且人源化重链可变区包括在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置24的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置37的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置44的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置48的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的亮氨酸，在对应于Kabat位置81的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置82的位置处的色氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的丝氨酸以及在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸或甲硫氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置3的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的天冬氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置10的位置处的苯丙氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置12的位置处的丝氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置13的位置处的丙氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置14的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置15的位置处的缬氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置16的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置17的位置处的谷氨酸或天冬氨酸，在对应于Kabat位置18的位置处的赖氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置22的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置42的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置45的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置58的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置60的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的酪氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的苯丙氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的酪氨酸以及在对应于Kabat位置87的位置处的苯丙氨酸；并且人源化重链可变区包括在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置24的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置37的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置44的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置48的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的亮氨酸，在对应于Kabat位置81的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置82的位置处的色氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的丝氨酸以及在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸或甲硫氨酸。
在实施方案中，人源化重链可变区包括在对应于Kabat位置5的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置7的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置38的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置48的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置66的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置69的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置71的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置81的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置87的位置处的苏氨酸，或者在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸。
在实施方案中，人源化重链可变区包括在对应于Kabat位置5的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置7的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置38的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置48的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置66的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置69的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置71的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置81的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置87的位置处的苏氨酸，以及在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸。
在实施方案中，人源化重链可变区包括SEQ ID NO:7的序列。在实施方案中，人源化重链可变区是SEQ ID NO:7。
在实施方案中，人源化重链可变区包括SEQ ID NO:53的序列。在实施方案中，人源化重链可变区是SEQ ID NO:53。在实施方案中，人源化轻链可变区包括SEQ ID NO:55的序列。在实施方案中，人源化轻链可变区是SEQ ID NO:55。因此，在另一方面，提供一种人源化1E9抗体，其包括人源化轻链可变区和人源化重链可变区，其中所述人源化重链可变区包括SEQ ID NO:53的序列，并且所述人源化轻链可变区包括SEQ ID NO:55的序列。
本文进一步提供人源化1E9抗体，其能够结合CD73并且包括人源化轻链可变区和人源化重链可变区，所述人源化重链可变区包括SEQ ID NO:7的序列。因此，在另一方面，提供一种人源化1E9抗体，其包括人源化轻链可变区和人源化重链可变区，其中所述人源化重链可变区包括SEQ ID NO:7的序列。
如本文提供的人源化1E9抗体可以是Fab'片段。当人源化1E9抗体是Fab'片段时，人源化1E9抗体包括人源化重链(例如包括恒定区和可变区)和人源化轻链(例如包括恒定区和可变区)。在实施方案中，人源化1E9抗体是Fab'片段。在实施方案中，人源化1E9抗体包括人恒定区。在实施方案中，人源化1E9抗体是IgG。在实施方案中，人源化1E9抗体是IgG1。在实施方案中，人源化1E9抗体是IgG4。在实施方案中，人源化1E9抗体是IgA。在其他实施方案中，人源化抗体是IgM。
在实施方案中，人源化1E9抗体是单链抗体。单链抗体包括可变轻链和可变重链。本领域技术人员会立即认识到单链抗体包括单一轻链和单一重链，与免疫球蛋白抗体相反，免疫球蛋白抗体包括两个相同的多肽链对，每对具有一条轻链和一条重链。每条轻链和重链依次由两个区组成：参与结合靶抗原的可变(“V”)区(即可变轻链和可变重链)，以及与免疫系统的其他组分相互作用的恒定(“C”)区。单链抗体中的可变轻链和可变重链可以通过接头肽相连。单链抗体的接头肽的实例在Bird,R.E.,Hardman,K.D.,Jacobson,J.W.,Johnson,S.,Kaufman,B.M.,Lee,S.M.,Lee,T.,Pope,S.H.,Riordan,G.S.and Whitlow,M.(1988)中描述。已描述制备scFv抗体的方法。参见，Huse et al.,Science246:1275-1281(1989)；Ward et al.,Nature 341:544-546(1989)；和Vaughan et al.,NatureBiotech.14:309-314(1996)。简单地说，分离来自免疫动物的B-细胞的mRNA并制备cDNA。利用免疫球蛋白重链和轻链可变区特异性的引物扩增cDNA。纯化PCR产物并连接核酸序列。如果需要接头肽，将编码该肽的核酸序列插入重链和轻链核酸序列之间。将编码scFv的核酸插入载体并在适当的宿主细胞中表达。
抗体结合特异性表位(例如，CD73)的能力可以通过平衡解离常数(KD)描述。如本文定义的平衡解离常数(KD)是人源化1E9抗体对CD73蛋白的解离速率(K-off)和结合速率(K-on)的比例。其通过下式描述：KD＝K-off/K-on。在实施方案中，人源化抗体能够以约0.5-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约1-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约1.5-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约2-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约2.5-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约3-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约3.5-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约4-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在低于7.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约7.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约7.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约6.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约6.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约5.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约4.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.0-约7.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.1的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.2的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.3的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.4的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.6的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.7的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.8的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.9的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约7.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。
在实施方案中，人源化抗体能够以约4.5-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约5-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约5.5-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约6-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约6.5-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约7-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约7.5-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约8-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在低于7.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约7.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约7.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约6.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约6.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约5.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约4.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.0-约7.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.1的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.2的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.3的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.4的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.6的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.7的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.8的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.9的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约7.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。
在实施方案中，人源化抗体能够以约8.5-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约9-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约9.5-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约10-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约11-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约12-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约13-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约14-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约15-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约16-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在低于7.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约7.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约7.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约6.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约6.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约5.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约4.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.0-约7.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.1的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.2的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.3的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.4的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.6的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.7的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.8的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.9的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约7.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。
在实施方案中，人源化抗体能够以约17-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约18-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约19-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约20-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约21-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约22-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约23-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约24-约25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约0.5、12、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在低于7.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约7.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约7.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约6.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约6.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约5.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约4.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.0-约7.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.1的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.2的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.3的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.4的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.6的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.7的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.8的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.9的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约7.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。
在实施方案中，人源化抗体能够以约7.1nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约6.9nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约9.4nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约19.5nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约17.8nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够以约15.9nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在低于7.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约7.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约7.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约6.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约6.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约5.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在小于约4.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.0-约7.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.1的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.2的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.3的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.4的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.5的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.6的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.7的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.8的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约6.9的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。在实施方案中，人源化抗体能够在约7.0的pH下以本段中的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。
在一方面，提供能够在小于约7.5的pH下结合CD73的抗体。在实施方案中，所述抗体能够在小于约7.0的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在小于约6.5的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在小于约6.0的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在小于约5.5的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在小于约5的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在小于约4.5的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约6.0-约7.0的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约6.0的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约6.1的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约6.2的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约6.3的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约6.4的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约6.5的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约6.6的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约6.7的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约6.8的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约6.9的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约7.0的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，如本段所示的抗体是人源化抗体。在实施方案中，所述抗体包括轻链(例如人源化轻链)可变区和重链(例如人源化重链)可变区。轻链可变区包括：
(i)如SEQ ID NO:1所示的CDR L1(例如小鼠CDR L1)，如SEQ ID NO:2所示的CDRL2(例如小鼠CDR L2)，如SEQ ID NO:3所示的CDR L3(例如小鼠CDR L3)以及(ii)在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的天冬氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置18的位置处的赖氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置60的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置74的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置76的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置77的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置100的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置104的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置3的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置10的位置处的苯丙氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置13的位置处的丙氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置14的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置15的位置处的缬氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置16的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置17的位置处的谷氨酸或天冬氨酸，在对应于Kabat位置22的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置42的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置45的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置58的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的酪氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的苯丙氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的酪氨酸，或者在对应于Kabat位置87的位置处的苯丙氨酸。重链可变区包括：
(i)如SEQ ID NO:4所示的CDR H1(例如小鼠CDR H1)，如SEQ ID NO:5所示的CDRH2(例如小鼠CDR H2)，如SEQ ID NO:6所示的CDR H3(例如小鼠CDR H3)以及(ii)在对应于Kabat位置37的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的丙氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的异亮氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置82的位置处的色氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的精氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸或甲硫氨酸，在对应于Kabat位置5的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置7的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的谷氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的异亮氨酸或缬氨酸，在对应于Kabat位置38的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置66的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置69的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置71的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置87的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置24的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置44的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置48的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的亮氨酸，或者在对应于Kabat位置81的位置处的谷氨酸。
本文提供的人源化1E9抗体能够在低于7.5的pH下结合CD73。因此，在实施方案中，所述人源化抗体能够在小于约7.5的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述人源化抗体能够在小于约7.0的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述人源化抗体能够在小于约6.5的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述人源化抗体能够在小于约6.0的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述人源化抗体能够在小于约5.5的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述人源化抗体能够在小于约5的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述人源化抗体能够在小于约4.5的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约6.0-约7.0的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约6.0的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约6.1的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约6.2的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约6.3的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约6.4的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约6.5的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约6.6的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约6.7的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约6.8的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约6.9的pH下结合CD73抗原。在实施方案中，所述抗体能够在约7.0的pH下结合CD73抗原。
包括其实施方案的本文提供的人源化1E9抗体可以在对应于Kabat位置297的位置处包括谷氨酰胺。
在实施方案中，人源化1E9抗体结合至CD73抗原。在实施方案中，CD73抗原形成细胞的部分。在实施方案中，所述细胞是淋巴样细胞。在实施方案中，所述细胞是T细胞。在实施方案中，所述细胞是癌细胞。
在一方面，提供在小于约7.5的pH下结合至CD73抗原的人源化1E9抗体。在实施方案中，人源化1E9抗体包括人源化轻链可变区和人源化重链可变区，其中所述人源化轻链可变区包括在对应于Kabat位置2的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置4的位置处的亮氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置10的位置处的丝氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的亮氨酸，在对应于Kabat位置14的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置16的位置处的甘氨酸，在对应于Kabat位置18的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的苏氨酸或者在对应于Kabat位置42的位置处的谷氨酰胺；并且其中所述人源化重链可变区包括在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置12的位置处的缬氨酸或谷氨酸，在对应于Kabat位置17的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的甲硫氨酸或缬氨酸，在对应于Kabat位置24的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置37的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的精氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置41的位置处的脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置44的位置处的甘氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的苏氨酸或精氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的谷氨酸，或者在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括在对应于Kabat位置2的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置4的位置处的亮氨酸，在对应于Kabat位置10的位置处的丝氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的亮氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的苏氨酸以及在对应于Kabat位置42的位置处的谷氨酰胺；并且人源化重链可变区包括在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置17的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的甲硫氨酸或缬氨酸，在对应于Kabat位置24的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置37的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的精氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置41的位置处的脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置44的位置处的甘氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的苏氨酸或精氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的谷氨酸，以及在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括在对应于Kabat位置2的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置4的位置处的亮氨酸，在对应于Kabat位置10的位置处的丝氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的亮氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的苏氨酸或者在对应于Kabat位置42的位置处的谷氨酰胺；并且人源化重链可变区包括在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置17的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的甲硫氨酸或缬氨酸，在对应于Kabat位置24的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置37的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的精氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置41的位置处的脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置44的位置处的甘氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的苏氨酸或精氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的谷氨酸或者在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括在对应于Kabat位置2的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置4的位置处的亮氨酸，在对应于Kabat位置10的位置处的丝氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的亮氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的苏氨酸以及在对应于Kabat位置42的位置处的谷氨酰胺；并且人源化重链可变区包括在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置17的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的甲硫氨酸或缬氨酸，在对应于Kabat位置24的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置37的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的精氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置41的位置处的脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置44的位置处的甘氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的苏氨酸或精氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的谷氨酸或者在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括在对应于Kabat位置2的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置4的位置处的亮氨酸，在对应于Kabat位置10的位置处的丝氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的亮氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的苏氨酸或者在对应于Kabat位置42的位置处的谷氨酰胺；并且人源化重链可变区包括在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置17的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的甲硫氨酸或缬氨酸，在对应于Kabat位置24的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置37的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的精氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置41的位置处的脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置44的位置处的甘氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的苏氨酸或精氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的谷氨酸以及在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括在对应于Kabat位置9的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置14的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置16的位置处的甘氨酸以及在对应于Kabat位置18的位置处的精氨酸；并且人源化重链可变区包括在对应于Kabat位置12的位置处的缬氨酸或谷氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区包括在对应于Kabat位置9的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置14的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置16的位置处的甘氨酸或者在对应于Kabat位置18的位置处的精氨酸；并且人源化重链可变区包括在对应于Kabat位置12的位置处的缬氨酸或谷氨酸。
在实施方案中，pH为约6.0-约7.0。在实施方案中，pH为约6.7。在实施方案中，pH为约6.3。在实施方案中，所述抗体抑制所述CD73抗原的催化活性。在实施方案中，所述抗体包括人源化轻链可变区，所述人源化轻链可变区包括SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:37的序列。在实施方案中，所述抗体包括人源化重链可变区，所述人源化重链可变区包括SEQ ID NO:7的序列。在实施方案中，CD73抗原形成细胞的部分。在实施方案中，CD73抗原结合至固体支持物。
在另一方面提供一种抗CD73抗体。所述抗CD73与1E9抗体结合相同的表位，其中所述1E9抗体包括人源化轻链可变区和人源化重链可变区，所述人源化轻链可变区包括小鼠CDR L1、小鼠CDR L2或小鼠CDR L3，所述人源化重链可变区包括小鼠CDR H1、小鼠CDR H2或小鼠CDR H3。
在另一方面提供一种抗CD73抗体。所述抗CD73与1E9抗体结合相同的表位，其中所述1E9抗体包括人源化轻链可变区和人源化重链可变区。所述人源化轻链可变区包括：
(i)如SEQ ID NO:1所示的小鼠CDR L1，如SEQ ID NO:2所示的小鼠CDR L2，如SEQID NO:3所示的小鼠CDR L3以及
(ii)在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的天冬氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置18的位置处的赖氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置60的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置74的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置76的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置77的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置100的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置104的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置3的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置10的位置处的苯丙氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置13的位置处的丙氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置14的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置15的位置处的缬氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置16的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置17的位置处的谷氨酸或天冬氨酸，在对应于Kabat位置22的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置42的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置45的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置58的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的酪氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的苯丙氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的酪氨酸，或者在对应于Kabat位置87的位置处的苯丙氨酸。所述人源化重链可变区包括：
(i)如SEQ ID NO:4所示的小鼠CDR H1，如SEQ ID NO:5所示的小鼠CDR H2，如SEQID NO:6所示的小鼠CDR H3以及
(ii)在对应于Kabat位置37的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的丙氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的异亮氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置82的位置处的色氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的精氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸或甲硫氨酸，在对应于Kabat位置5的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置7的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的谷氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的异亮氨酸或缬氨酸，在对应于Kabat位置38的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置66的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置69的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置71的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置87的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置24的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置44的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置48的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的亮氨酸，或者在对应于Kabat位置81的位置处的谷氨酸。
人源化IgG1抗体
在一方面，本文提供一种人源化IgG1抗体，其包括人源化轻链可变区和人源化重链可变区，其中所述人源化轻链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的小鼠CDR L1，如SEQ IDNO:2所示的小鼠CDR L2，如SEQ ID NO:3所示的小鼠CDR L3，并且其中所述人源化重链可变区包括如SEQ ID NO:4所示的小鼠CDR H1，如SEQ ID NO:5所示的小鼠CDR H2以及如SEQ IDNO:6所示的小鼠CDR H3。
在一方面，本文提供一种人源化IgG4抗体，其包括人源化轻链可变区和人源化重链可变区，其中所述人源化轻链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的小鼠CDR L1，如SEQ IDNO:2所示的小鼠CDR L2，如SEQ ID NO:3所示的小鼠CDR L3，并且其中所述人源化重链可变区包括如SEQ ID NO:4所示的小鼠CDR H1，如SEQ ID NO:5所示的小鼠CDR H2以及如SEQ IDNO:6所示的小鼠CDR H3。
人源化轻链可变区可以包括如SEQ ID NO:1所示的小鼠CDR L1、如SEQ ID NO:2所示的小鼠CDR L2或如SEQ ID NO:3所示的小鼠CDR L3。人源化轻链可变区可以包括如SEQID NO:1所示的小鼠CDR L1、如SEQ ID NO:2所示的小鼠CDR L2和如SEQ ID NO:3所示的小鼠CDR L3。人源化重链可变区可以包括如SEQ ID NO:4所示的小鼠CDR H1、如SEQ ID NO:5所示的小鼠CDR H2或如SEQ ID NO:6所示的小鼠CDR H3。人源化重链可变区可以包括如SEQID NO:4所示的小鼠CDR H1、如SEQ ID NO:5所示的小鼠CDR H2和如SEQ ID NO:6所示的小鼠CDR H3。在实施方案中，人源化轻链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的小鼠CDR L1。在实施方案中，人源化轻链可变区包括如SEQ ID NO:2所示的小鼠CDR L2。在实施方案中，人源化轻链可变区包括如SEQ ID NO:3所示的小鼠CDR L3。在实施方案中，人源化重链可变区包括如SEQ ID NO:4所示的小鼠CDR H1。在实施方案中，人源化重链可变区包括如SEQ ID NO:5所示的小鼠CDR H2。在实施方案中，人源化轻链可变区包括如SEQ ID NO:6所示的小鼠CDRH3。
在实施方案中，人源化轻链可变区进一步包括在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的天冬氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置18的位置处的赖氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置60的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置74的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置76的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置77的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置100的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置104的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置3的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置10的位置处的苯丙氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置13的位置处的丙氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置14的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置15的位置处的缬氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置16的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置17的位置处的谷氨酸或天冬氨酸，在对应于Kabat位置22的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置42的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置45的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置58的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的酪氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的苯丙氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的酪氨酸或者在对应于Kabat位置87的位置处的苯丙氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区进一步包括在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的天冬氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置18的位置处的赖氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置60的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置74的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置76的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置77的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置100的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置104的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置3的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置10的位置处的苯丙氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置13的位置处的丙氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置14的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置15的位置处的缬氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置16的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置17的位置处的谷氨酸或天冬氨酸，在对应于Kabat位置22的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置42的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置45的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置58的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的酪氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的苯丙氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的酪氨酸以及在对应于Kabat位置87的位置处的苯丙氨酸。
在实施方案中，人源化重链可变区进一步包括在对应于Kabat位置37的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的丙氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的异亮氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置82的位置处的色氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的精氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸或甲硫氨酸，在对应于Kabat位置5的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置7的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的谷氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的异亮氨酸或缬氨酸，在对应于Kabat位置38的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置66的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置69的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置71的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置87的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置24的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置44的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置48的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的亮氨酸或者在对应于Kabat位置81的位置处的谷氨酸。
在实施方案中，人源化重链可变区进一步包括在对应于Kabat位置37的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的丙氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的异亮氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置82的位置处的色氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的精氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸或甲硫氨酸，在对应于Kabat位置5的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置7的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的谷氨酸或赖氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的异亮氨酸或缬氨酸，在对应于Kabat位置38的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置66的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置69的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置71的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置87的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置24的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置44的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置48的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的亮氨酸以及在对应于Kabat位置81的位置处的谷氨酸。
在实施方案中，人源化轻链可变区进一步包括在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的亮氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸，以及在对应于Kabat位置18的位置处的脯氨酸。
在实施方案中，人源化重链可变区进一步包含在对应于Kabat位置37的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置70的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置82的位置处的色氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置84的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的丝氨酸，以及在对应于Kabat位置89的位置处的甲硫氨酸。
在实施方案中，人源化重链可变区包含在对应于Kabat位置5的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置7的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置38的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置48的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置66的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置69的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置71的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置81的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置87的位置处的苏氨酸，或者在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸。
在实施方案中，人源化重链可变区包含在对应于Kabat位置5的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置7的位置处的丝氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置20的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置38的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置40的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置48的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置66的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置69的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置71的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置75的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置81的位置处的谷氨酸，在对应于Kabat位置83的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置87的位置处的苏氨酸，以及在对应于Kabat位置89的位置处的缬氨酸。
在实施方案中，人源化IgG1抗体进一步包括在对应于Kabat位置297的位置处的谷氨酰胺。在实施方案中，本文提供的人源化IgG1抗体(包括其实施方案)结合至CD73抗原。在实施方案中，CD73抗原形成细胞的部分。在实施方案中，所述细胞是T细胞。在实施方案中，所述细胞是癌细胞。
核酸组合物
在一方面，提供编码本文提供的人源化1E9抗体(包括其实施方案)的分离的核酸。分离的核酸编码的人源化1E9抗体在本申请中详细描述(包括以上描述和实施例部分)。因此，分离的核酸编码的人源化抗体包括本文描述的所有实施方案。例如，所述核酸可以编码至少一个CDR，参与结合表位的特定残基，或者结合框架残基。例如，所述核酸可以编码人源化轻链，所述人源化轻链包括在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸。
在实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:17的序列。在实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQID NO:26或SEQ ID NO:27的序列。在实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:8的序列和SEQ ID NO:18的序列。在实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:9的序列和SEQ ID NO:19的序列。在实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:10的序列和SEQ ID NO:20的序列。在实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:11的序列和SEQ ID NO:21的序列。在实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:12的序列和SEQ ID NO:22的序列。在实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:13的序列和SEQ ID NO:23的序列。在实施方案中，分离的核酸包括SEQ IDNO:14的序列和SEQ ID NO:24的序列。在实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:15的序列和SEQ ID NO:25的序列。在实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:16的序列和SEQ IDNO:26的序列。在实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:17的序列和SEQ ID NO:27的序列。
在实施方案中，分离的核酸包括密码子优化的序列。在实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:52或SEQ ID NO:54。在实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:52。在实施方案中，分离的核酸包括SEQ ID NO:54。在实施方案中，分离的核酸是SEQ ID NO:52或SEQ IDNO:54。在实施方案中，分离的核酸是SEQ ID NO:52。在实施方案中，分离的核酸是SEQ IDNO:54。
在另一方面，提供编码本文提供的人源化IgG1抗体(包括实施方案)的分离的核酸。分离的核酸编码的人源化IgG1抗体在本申请中详细描述(包括以上描述和实施例部分)。因此，分离的核酸编码的人源化抗体包括本文描述的所有实施方案。例如，所述核酸可以编码至少一个CDR，参与结合表位的特定残基，或者结合框架残基。因此，在实施方案中，所述核酸编码如SEQ ID NO:1所示的小鼠CDR L1，如SEQ ID NO:2所示的小鼠CDR L2，如SEQID NO:3所示的小鼠CDR L3。在实施方案中，所述核酸编码如SEQ ID NO:4所示的小鼠CDRH1，如SEQ ID NO:5所示的小鼠CDR H2，以及如SEQ ID NO:6所示的小鼠CDR H3。在实施方案中，所述核酸编码如SEQ ID NO:1所示的小鼠CDR L1，如SEQ ID NO:2所示的小鼠CDR L2，如SEQ ID NO:3所示的小鼠CDR L3，如SEQ ID NO:4所示的小鼠CDR H1，如SEQ ID NO:5所示的小鼠CDR H2，或者如SEQ ID NO:6所示的小鼠CDR H3。在实施方案中，所述核酸编码如SEQID NO:1所示的小鼠CDR L1，如SEQ ID NO:2所示的小鼠CDR L2，如SEQ ID NO:3所示的小鼠CDR L3，如SEQ ID NO:4所示的小鼠CDR H1，如SEQ ID NO:5所示的小鼠CDR H2，以及如SEQID NO:6所示的小鼠CDR H3。
在另一方面，提供编码本文提供的人源化IgG4抗体(包括实施方案)的分离的核酸。分离的核酸编码的人源化IgG4抗体在本申请中详细描述(包括以上描述和实施例部分)。因此，分离的核酸编码的人源化抗体包括本文描述的所有实施方案。例如，所述核酸可以编码至少一个CDR，参与结合表位的特定残基，或者结合框架残基。因此，在实施方案中，所述核酸编码如SEQ ID NO:1所示的小鼠CDR L1，如SEQ ID NO:2所示的小鼠CDR L2，如SEQID NO:3所示的小鼠CDR L3。在实施方案中，所述核酸编码如SEQ ID NO:4所示的小鼠CDRH1，如SEQ ID NO:5所示的小鼠CDR H2，以及如SEQ ID NO:6所示的小鼠CDR H3。在实施方案中，所述核酸编码如SEQ ID NO:1所示的小鼠CDR L1，如SEQ ID NO:2所示的小鼠CDR L2，如SEQ ID NO:3所示的小鼠CDR L3，如SEQ ID NO:4所示的小鼠CDR H1，如SEQ ID NO:5所示的小鼠CDR H2，或者如SEQ ID NO:6所示的小鼠CDR H3。在实施方案中，所述核酸编码如SEQID NO:1所示的小鼠CDR L1，如SEQ ID NO:2所示的小鼠CDR L2，如SEQ ID NO:3所示的小鼠CDR L3，如SEQ ID NO:4所示的小鼠CDR H1，如SEQ ID NO:5所示的小鼠CDR H2，以及如SEQID NO:6所示的小鼠CDR H3。
药物组合物
在另一方面，提供一种药物组合物，其包括治疗有效量的本文提供的人源化1E9抗体(包括其实施方案)和药学可接受的赋形剂。
在另一方面，提供一种药物组合物，其包括治疗有效量的本文提供的人源化IgG1抗体(包括其实施方案)和药学可接受的赋形剂。
在另一方面，提供一种药物组合物，其包括治疗有效量的本文提供的人源化IgG4抗体(包括其实施方案)和药学可接受的赋形剂。
如本文提供的治疗有效量是指有效实现其预期目的的量。对特定应用有效的实际量取决于治疗的病症。当在治疗疾病的方法中施用时，本文描述的药物组合物包含有效获得期望结果的量的活性人源化抗体，例如，调节靶分子(例如，CD73)活性，和/或减少、消除或减缓疾病症状的发展(例如，癌症)。确定治疗有效量的本文提供的人源化抗体在本领域技术人员的能力之内，特别是根据本文的详细公开。
可接受的载体、赋形剂或稳定剂在采用的剂量和浓度下对受体是无毒的，并且包括缓冲液如磷酸盐、柠檬酸盐或乙酸盐，在通常5.0-8.0的pH下，最常6.0-7.0；盐如氯化钠、氯化钾等以使得等渗；抗氧化剂、防腐剂、低分子量多肽、蛋白、亲水聚合物如聚山梨酯80、氨基酸如甘氨酸、碳水化合物、螯合剂、糖以及本领域技术人员已知的其他标准成分(Remington’s Pharmaceutical Science 16th edition,Osol,A.Ed.1980)。mAb通常以0.1-100mg/ml的浓度存在，例如，1-10mg/ml或10-50mg/ml，例如5、10、20、30、40、50或60mg/ml。
包括如本文所述的人源化抗体的药物组合物可以通过本领域已知的各种方法施用。施用途径和/或模式根据期望结果变化。在实施方案中，施用是静脉内的、肌肉内的、腹腔内的或皮下的，或者在靶部位近端施用。药学可接受的赋形剂可以适合静脉内、肌肉内、皮下、肠胃外、脊髓或表皮施用(例如，通过注射或输注)。
人源化抗体的药物组合物可以按照本领域公知和常规实施的方法制备。参见，例如，Remington:The Science and Practice of Pharmacy,Mack Publishing Co.,20thed.,2000；和Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems,J.R.Robinson,ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York,1978。药物组合物优选在GMP条件下制备。通常，在本发明的药物组合物中采用治疗有效剂量或有效剂量的人源化抗体。提供的人源化抗体可以通过本领域技术人员已知的常规方法配制于药学可接受的剂型中。调整剂量方案以提供最佳期望反应(例如，治疗反应)。例如，可以施用单一团注，可以随时间施用几个分剂量，或者剂量可以如治疗情况的迫切需要所示成比例减少或增加。与其他疗法或药剂组合配制人源化抗体可以是有利的。对于易于施用和剂量的均匀性，配制剂量单位形式的肠胃外组合物可以是有利的。如本文所用的剂量单位形式是指适合作为单位剂量用于待治疗的对象的物理上分离的单位；每个单位包含计算产生期望疗效的预定量的人源化抗体联合所需的药物赋形剂。
本发明的药物组合物中的活性成分的实际剂量水平可以变化以获得有效实现特定患者的期望治疗反应的活性成分量、组合物和施用模式，并且对患者无毒。所选剂量水平取决于各种药物动力学因素，包括本发明采用的特定组合物的活性，施用途径，施用时间，采用的特定抗体的排泄速率，治疗的持续时间，与采用的特定组合物联用的其他药物、化合物和/或物质，治疗的患者的年龄、性别、体重、疾病状况、一般健康和既往病史等因素。
医生或兽医可以以低于需要的水平开始药物组合物中采用的本发明的人源化抗体的剂量以获得期望的疗效并逐步增加剂量直至获得期望的效果。一般来说，本发明的组合物的有效剂量会根据许多不同因素变化，包括待治疗的疾病或疾病状况、施用方式、靶位点、患者的生理状态、患者是人或动物、施用的其他药物以及治疗是预防性的或治疗性的。治疗剂量需要滴定以优化安全性和效力。对于用抗体施用，剂量范围为约0.0001-100mg/kg宿主体重，并且更通常为0.01-5mg/kg宿主体重。例如，剂量可以是1mg/kg体重或10mg/kg体重或在1-10mg/kg的范围内。示例性治疗方案需要每两周施用一次或每月一次或每3-6个月一次。
本文提供的人源化抗体可以在多个场合施用。单一剂量之间的间隔可以是每周、每月或每年。如通过测量患者中的人源化抗体血液水平所示，间隔还可以是不规则的。在一些方法中，调整剂量以达到1-1000μg/ml的血浆抗体浓度，并且在一些方法中25-300μg/ml。或者，抗体可以作为缓释制剂施用，在这种情况下需要较少频率施用。剂量和频率根据抗体在患者中的半衰期变化。一般来说，人源化抗体表现出比嵌合抗体和非人抗体长的半衰期。施用的剂量和频率可以根据治疗是预防性的或治疗性的变化。在预防性应用中，在长时间中以相对低频率的间隔施用相对低的剂量。一些患者在他们的余生中继续接受治疗。在治疗性应用中，有时需要相对短间隔的相对高剂量直至疾病的发展减少或终止，并且优选直至患者表现出疾病症状部分或完全改善。此后，患者可以施用预防方案。
方法
在一方面，提供一种治疗有此需要的对象中的癌症的方法。所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的本文提供的人源化1E9抗体，包括其实施方案，从而治疗所述对象中的癌症。在实施方案中，所述癌症是淋巴样癌。
在一方面，提供一种治疗有此需要的对象中的癌症的方法。所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的本文提供的人源化IgG1抗体，包括其实施方案，从而治疗所述对象中的癌症。在实施方案中，所述癌症是淋巴样癌。
抑制方法
在一方面，提供一种抑制细胞增殖的方法。所述方法包括(i)使细胞与如本文提供的人源化IgG1抗体(包括其实施方案)接触，从而形成接触细胞。(ii)允许所述人源化IgG1抗体结合所述接触细胞上的CD73抗原，从而抑制细胞增殖。在实施方案中，所述细胞是淋巴样细胞。在实施方案中，所述淋巴样细胞是T细胞。
在一方面，提供一种抑制细胞增殖的方法。所述方法包括(i)使细胞与如本文提供的人源化IgG4抗体(包括其实施方案)接触，从而形成接触细胞。(ii)允许所述人源化IgG4抗体结合所述接触细胞上的CD73抗原，从而抑制细胞增殖。在实施方案中，所述细胞是淋巴样细胞。在实施方案中，所述淋巴样细胞是T细胞。
检测方法
在一方面，提供一种检测结合至CD73抗原的人源化1E9抗体的方法。所述方法包括，(i)使人源化1E9抗体与CD73抗原在小于约7.5的pH下接触，以及(ii)检测人源化1E9抗体与CD73抗原的结合。在实施方案中，pH为约6.0-约7.0。在实施方案中，pH为约6.7。在实施方案中，pH为约6.3。在实施方案中，步骤(ii)的检测结合包括检测CD73催化活性的抑制。在实施方案中，CD73抗原形成细胞的部分。在实施方案中，CD73抗原结合至固体支持物。在实施方案中，人源化1E9抗体包括可检测部分。
T-细胞激活的方法
本文提供在癌症环境中激活免疫抑制的(非激活的、非增殖的)T细胞的方法。因此，在一方面提供一种激活免疫抑制的T细胞的方法。所述方法包括，(i)使T细胞与如本文提供的人源化1E9抗体(包括其实施方案)接触，从而形成接触的T细胞。(ii)允许所述人源化1E9抗体结合所述接触的T细胞上的CD73抗原，从而激活免疫抑制的T细胞。在实施方案中，所述T细胞在癌症环境中。在实施方案中，所述接触的T细胞的IFN-γ分泌相对于抗体不存在下增加。在实施方案中，所述接触的T细胞的增殖相对于抗体不存在下增加。如本文提供的“免疫抑制的T细胞”是处于癌症环境中(在癌细胞或实体瘤附近和/或与癌细胞或实体瘤生理接触)的T细胞，其不增殖或不分泌可检测量的细胞因子或不表达活化T细胞的细胞表面标记特征(例如，IFN-γ、CD25、CD38)。
联合治疗方法
本文提供的治疗方法(包括其实施方案)可以包括施用第二治疗剂。因此，如本文提供的治疗方法包括施用如本文提供的人源化1E9抗体或者如本文提供的人源化IgG1或IgG4抗体联合第二治疗剂。所述第二治疗剂可以是可用于治疗或预防癌症的任何组合物。
在一方面，提供一种治疗有此需要的对象中的癌症的方法。所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的本文提供的人源化1E9抗体(包括其实施方案)和有效量的第二治疗剂，从而治疗所述对象中的癌症。
在另一方面，提供一种治疗有此需要的对象中的癌症的方法。所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的本文提供的人源化IgG1抗体(包括其实施方案)和有效量的第二治疗剂，从而治疗所述对象中的癌症。
在另一方面，提供一种治疗有此需要的对象中的癌症的方法。所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的本文提供的人源化IgG4抗体(包括其实施方案)和有效量的第二治疗剂，从而治疗所述对象中的癌症。
可用于本文提供的方法的第二治疗剂可以是化合物、药物、拮抗剂、抑制剂或调节剂，具有抗肿瘤特性或者抑制细胞生长或增殖的能力。在实施方案中，第二治疗剂是化疗剂。“化疗剂”或“化疗药剂”按照其普通含义使用，是指具有抗肿瘤特性或者抑制细胞生长或增殖能力的化学组合物或化合物。在实施方案中，第二治疗剂是辐射疗法。在实施方案中，第二治疗剂是FDA或除USA以外国家的相似监管机构批准用于治疗癌症的药剂。
在实施方案中，第二治疗剂是化合物。在实施方案中，所述化合物是嘌呤受体拮抗剂。在实施方案中，所述化合物是A2A腺苷受体拮抗剂或A2B腺苷受体拮抗剂。在实施方案中，所述化合物是A2A腺苷受体拮抗剂。在实施方案中，所述化合物是A2B腺苷受体拮抗剂。在实施方案中，所述化合物是美国专利9,120,807、8,450,328或8,354,415中公开的化合物中的任一种，所述专利援引加入本文并用于所有目的。在实施方案中，所述化合物是噻吩并嘧啶(thienopyrimidine)化合物。在实施方案中，所述化合物如下式的结构：
Figure BDA0001758109680000541
如本文提供的术语“A2A腺苷受体”包括A2A腺苷受体(ADORA2A)的任何重组或天然存在的形式或者其保持ADORA2A蛋白活性(例如与ADORA2A相比在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性内)的变体或同系物。在一些方面，所述变体或同系物与天然存在的ADORA2A多肽相比在整个序列或一部分序列(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列相同性。在实施方案中，ADORA2A是如NCBI序列参考GI:5921992鉴定的蛋白，其同系物或功能片段。
如本文提供的术语“A2B腺苷受体”包括A2B腺苷受体(ADORA2B)的任何重组或天然存在的形式或者其保持ADORA2B蛋白活性(例如与ADORA2B相比在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性内)的变体或同系物。在一些方面，所述变体或同系物与天然存在的ADORA2B多肽相比在整个序列或一部分序列(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列相同性。在实施方案中，ADORA2B是如NCBI序列参考GI:4501951鉴定的蛋白，其同系物或功能片段。
在实施方案中，治疗剂是第二人源化抗体。在实施方案中，所述第二人源化抗体是能够结合蛋白程序细胞死亡配体1(PD-L1)的抗体。在实施方案中，所述第二人源化抗体是阿特珠单抗(atezolizumab)。在实施方案中，所述第二人源化抗体是能够结合蛋白程序细胞死亡蛋白1(PD-1)的抗体。在实施方案中，所述第二人源化抗体是能够结合CTLA-4的抗体。
术语“阿特珠单抗”或“MPDL3280A”是指完全人源化的、IgG1同种型的针对蛋白程序细胞死亡配体1(PD-L1)的工程化的单克隆抗体。在传统意义上，阿特珠单抗是指CAS注册号1380723-44-3。
如本文提供的术语“PDL-1”包括蛋白程序细胞死亡配体1(PD-L1)的任何重组或天然存在的形式或者其保持PDL-1蛋白活性(例如与PDL-1相比在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性内)的变体或同系物。在一些方面，所述变体或同系物与天然存在的PDL-1多肽相比在整个序列或一部分序列(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列相同性。在实施方案中，PDL-1是如NCBI序列参考GI:390979639鉴定的蛋白，其同系物或功能片段。
如本文提供的术语“PD-1”包括蛋白程序细胞死亡蛋白1(PD-1)的任何重组或天然存在的形式或者其保持PD-1蛋白活性(例如与PD-1相比在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性内)的变体或同系物。在一些方面，所述变体或同系物与天然存在的PD-1多肽相比在整个序列或一部分序列(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列相同性。在实施方案中，PD-1是如NCBI序列参考GI:167857792鉴定的蛋白，其同系物或功能片段。
如本文提供的术语“CTLA-4”或“CTLA-4蛋白”包括细胞毒性T-淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)的任何重组或天然存在的形式或者其保持CTLA-4蛋白活性(例如与CTLA-4相比在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性内)的变体或同系物。在一些方面，所述变体或同系物与天然存在的CTLA-4多肽相比在整个序列或一部分序列(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列相同性。在实施方案中，CTLA-4是如NCBI序列参考GI:83700231鉴定的蛋白，其同系物或功能片段。
在提供的治疗方法中，可以使用适合治疗的疾病(例如，癌症)的额外治疗剂。因此，在一些实施方案中，提供的治疗方法进一步包括向对象施用第二治疗剂。合适的额外治疗剂包括但不限于镇痛剂、麻醉剂、兴奋剂、皮质类固醇、抗胆碱能剂、抗胆碱酯酶、抗惊厥药、抗肿瘤剂、变构抑制剂、合成代谢类固醇、抗风湿剂、精神治疗剂、神经阻断剂、抗炎剂、抗蠕虫药、抗生素、抗凝剂、抗真菌剂、抗组胺剂、抗毒覃碱剂、抗分枝杆菌剂、抗原虫剂、抗病毒剂、多巴胺类、血液药剂、免疫药剂、毒覃碱、蛋白酶抑制剂、维生素、生长因子以及激素。药剂和剂量的选择可以由本领域技术人员基于治疗的给定疾病容易地确定。
药剂或组合物的组合可以相伴(例如，作为混合物)、分开但同时(例如，通过分开的静脉内线)或顺序(例如，首先施用一种药剂，随后施用第二药剂)施用。因此，术语组合用来指相伴、同时或顺序施用两种或更多种药剂或组合物。治疗过程最好在对象基础上根据对象的特定特征和所选的治疗类型确定。治疗，如本文公开的那些治疗，可以每天、每天两次、每两周、每月或在治疗有效的任何适用基础上向对象施用。治疗可以单独或者与本文公开或本领域已知的任何其他治疗组合施用。额外的治疗可以与第一治疗同时、在不同时间或者在整个不同的治疗方案上(例如，第一治疗可以每天，而额外的治疗可以每周)施用。
根据本文提供的方法，向对象施用有效量的本文提供的一种或多种治疗剂(即人源化1E9抗体或者人源化IgG1或IgG4抗体组合例如化合物或第二人源化抗体)。术语有效量和有效剂量可交换使用。术语有效量定义为产生期望的生理反应(例如，炎症减少)必需的任何量。施用药剂的有效量和计划可以由本领域技术人员根据经验确定。施用的剂量范围是大到足以产生期望效果的那些范围，其中疾病或病症的一种或多种症状受到影响(例如，减少或延迟)。剂量不应当大到引起大量不良副作用，如不需要的交叉反应、过敏反应等。一般来说，剂量会随年龄、疾病状况、性别、疾病类型、疾病或病症的程度、施用途径或方案中是否包括其他药物变化，并且可以有本领域技术人员确定。在任何禁忌事件中可以由单独的医生调整剂量。剂量可以变化，并且可以每天以一个或多个剂量施用来施用一天或几天。在文献中可以找到给定类别的药物产物的适当剂量的指导。例如，对于给定参数，有效量会表现出至少5％、10％、15％、20％、25％、40％、50％、60％、75％、80％、90％或至少100％的增加或减少。效力还可以表示为“倍数”增加或减少。例如，治疗有效量可以具有超过对照至少1.2-倍、1.5-倍、2-倍、5-倍或更多的效果。确切剂量和制剂取决于治疗目的，并且可由本领域技术人员利用已知技术确定(参见，例如，Lieberman,Pharmaceutical Dosage Forms(vols.1-3,1992)；Lloyd,The Art,Science and Technology of PharmaceuticalCompounding(1999)；Remington:The Science and Practice of Pharmacy,20thEdition,Gennaro,Editor(2003),and Pickar,Dosage Calculations(1999))。
实施例
实施例1
将抗CD73(1E9)转变为人IgG1同种型消除用小鼠IgG3同种型观察到的对T细胞激活的直接影响
制备自1E9杂交瘤细胞系的抗体是mIgG3同种型。已显示这种抗体与PMA协同激活T细胞增殖、IL-2分泌和IL-2受体表达上调(PMID:2550543)。据认为这种效应是通过直接信号传导机制，因为1E9在表达催化失活的CD73或CD73的细胞上介导这些效应，与内源使用的GPI-锚定机制相反，所述催化失活的CD73或CD73通过跨膜区连接至细胞膜(PMID:9113412,7697732,8027539)。申请人将来自1E9的可变区交换至人IgG1框架，产生嵌合1E9抗体。嵌合1E9不介导T细胞增殖或IL-2受体的激活(CD25表达)。因此，申请人已发现同种型转变可以改变抗体介导的对CD73信号传导的影响。
评价CD73的催化活性的细胞测定
CD73在细胞表面上表达，并且是水解AMP至腺苷和磷酸盐的外核苷酸酶。为了评价CD73的催化活性以及申请人的抗CD73抗体抑制这种活性的能力，申请人使用细胞测定。在添加AMP之前将内源表达CD73的细胞用一定浓度范围的抗CD73抗体或同种型对照在37℃下温育。将细胞用AMP在37℃下温育20分钟。用可商购的试剂(Sensolyte MG磷酸盐测定试剂盒，AnaSpec)测量培养基中的磷酸盐水平，并且与CD73活性直接成比例。这个测定改编自文献，并且以前已描述用于测量CD73活性(PMID:21506751)。根据申请人的知识，这个测定通常在约7.2的生理pH下进行。令人惊讶的是，申请人能够显示如果在较低pH下进行测定筛选抗CD73活性，则保留在较低pH下阻断CD73活性的能力。在略微酸性pH下的强活性是用于实体瘤适应症的治疗性抗体的期望特性，因为已知实体瘤微环境是略微酸性的。申请人发现一些抗体(CPX-002、CPX-005、CPX-006)保留在较低pH(6.3或6.7)下阻断CD73的效力，而其他抗体(CPX-003、CPX-004)在较低pH下丧失效力。
亲和力测量
申请人获得了5种人源化抗CD73候选物(CPX-003、CPX-004、CPX-005、CPX-006、CPX-007)以及嵌合抗体(CPX-002)的亲和力测量以测量这些抗体与CD73的结合。这些亲和力测量的结果在表1中总结。
表1：人源化和嵌合抗CD73抗体的亲和力测量。
抗体 kD
CPX-002 9.4nM
CPX-003 19.5nM
CPX-004 17.8nM
CPX-005 6.9nM
CPX-006 7.1nM
CPX-007 15.9nM
与低pH下的最高CD73亲和力和最佳效力相关的特异性链
两种人源化抗体(CPX-005、CPX-006)具有与其他候选物相比较高的对CD73的亲和力以及提高的抑制CD73活性的效力。这两种抗体使用相同的重链并且仅在轻链中不同。因此，这条特定重链可能对于获得高亲和力和有效抑制CD73活性很重要。在实施方案中，人源化重链可变区包括SEQ ID NO:7的序列。在实施方案中，人源化重链可变区是SEQ ID NO:7的序列。
实施例2
克隆BAP094-01的人源化
申请人已完成克隆BAP094-01的人源化文库的构建(嵌合1E9)。将编码BAP094-01的轻链和重链CDR序列的双链DNA片段(分别为SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:29)与人框架的池组合。然后将全长可变结构域克隆至哺乳动物表达载体中。将轻链可变结构域与分泌信号和人κ恒定结构域符合读框克隆。将重链可变结构域与前导序列和人IgG1恒定结构域符合读框克隆。通过测序证实文库的质量(合成的可变结构域的多样性)(数据未示出)。
人源化变体的筛选
将人源化克隆排列至96孔板中。每个板还包含两个孔的阳性对照(BAP094-01，即，嵌合1E9)和阴性对照(仅载体)。为每个板准备质粒DNA并转染至96孔形式的CHO-S细胞中。在转染后48小时收集上清液。利用人IgG定量的ELISA方案确定IgG浓度。利用基于细胞的ELISA确定人源化克隆与MDA-MB-231细胞表面上表达的CD73的结合。将来自初步筛选的最高命中重新排列、重新转染并通过基于细胞的ELISA再次筛选(图5)。
最高人源化变体命中的序列分析
将所选最高人源化变体克隆的轻链和重链可变结构域测序并与克隆BAP094-01(1E9)的亲本小鼠序列比对。序列分析显示在前10个克隆内有4条不同的重链和5条不同的轻链(图4A和图4B)。每个最高命中具有独特的人源化轻链和重链组合。
正式序列表
SEQ ID NO:1:RASKNVSTSGYSYMH
SEQ ID NO:2:LASNLES
SEQ ID NO:3:QHSRELPFT
SEQ ID NO:4:GYTFTSYWIT
SEQ ID NO:5:PGSGNTNYNEKFKT
SEQ ID NO:6:EGGLTTEDYALDY
SEQ ID NO:7:
QVQLVQSGAEVEKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIYPGSGNTNYNEKFKTRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKEGGLTTEDYALDYWGQGTLVTV
BAP094-hum01-LC SEQ ID NO:8:
GCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAGGGCCAGCAAAAATGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATCTTGCATCCAACCTAGAATCTGGGATCCCACCTCGGTTCAGTGGCAGCGGGTATGGAACAGATTTTACCCTCACAATTAATAACATAGAATCTGAGGATGCTGCATATTACTTCTGTCAGCACAGTAGGGAGCTTCCATTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
BAP094-hum02-LC SEQ ID NO:9:
GAAATTGTGCTGACTCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAGAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGCAAAAATGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATCTTGCATCCAACCTAGAATCTGGGATCCCACCTCGATTCAGTGGCAGCGGGTATGGAACAGATTTTACCCTCACAATTAATAACATAGAATCTGAGGATGCTGCATATTACTTCTGTCAGCACAGTAGGGAGCTTCCATTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
BAP094-hum03-LC,CPX-003 SEQ ID NO:10:
GAAATTGTGCTGACTCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAGAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGCAAAAATGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATCTTGCATCCAACCTAGAATCTGGGATCCCACCTCGATTCAGTGGCAGCGGGTATGGAACAGATTTTACCCTCACAATTAATAACATAGAATCTGAGGATGCTGCATATTACTTCTGTCAGCACAGTAGGGAGCTTCCATTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
BAP094-hum04-LC SEQ ID NO:11:
GAAATTGTGCTGACTCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAGAAAGTCACCATCACCTGCAGGGCCAGCAAAAATGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATCTTGCATCCAACCTAGAATCTGGGATCCCACCTCGATTCAGTGGCAGCGGGTATGGAACAGATTTTACCCTCACAATTAATAACATAGAATCTGAGGATGCTGCATATTACTTCTGTCAGCACAGTAGGGAGCTTCCATTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
BAP094-hum05-LC,CPX-004 SEQ ID NO:12:
GATGTTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCTTGGACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGGCCAGCAAAAATGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATCTTGCATCCAACCTAGAATCTGGGATCCCACCTCGATTCAGTGGCAGCGGGTATGGAACAGATTTTACCCTCACAATTAATAACATAGAATCTGAGGATGCTGCATATTACTTCTGTCAGCACAGTAGGGAGCTTCCATTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
BAP094-hum06-LC,CPX-005 SEQ ID NO:13:
GCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAGGGCCAGCAAAAATGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATCTTGCATCCAACCTAGAATCTGGGGTCCCCTCGAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACCTTTACCATCAGTAGCCTGGAAGCTGAAGATGCTGCAACATATTACTGTCAGCACAGTAGGGAGCTTCCATTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
BAP094-hum07-LC,CPX-006,CPX-007 SEQ ID NO:14:
GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGCAAAAATGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATCTTGCATCCAACCTAGAATCTGGGATCCCACCTCGATTCAGTGGCAGCGGGTATGGAACAGATTTTACCCTCACAATTAATAACATAGAATCTGAGGATGCTGCATATTACTTCTGTCAGCACAGTAGGGAGCTTCCATTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
BAP094-hum08-LC SEQ ID NO:15:
GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGCAAAAATGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATCTTGCATCCAACCTAGAATCTGGGATCCCACCTCGATTCAGTGGCAGCGGGTATGGAACAGATTTTACCCTCACAATTAATAACATAGAATCTGAGGATGCTGCATATTACTTCTGTCAGCACAGTAGGGAGCTTCCATTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
BAP094-hum09-LC SEQ ID NO:16:
GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGCAAAAATGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATCTTGCATCCAACCTAGAATCTGGGATCCCACCTCGATTCAGTGGCAGCGGGTATGGAACAGATTTTACCCTCACAATTAATAACATAGAATCTGAGGATGCTGCATATTACTTCTGTCAGCACAGTAGGGAGCTTCCATTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
BAP094-hum10-LC SEQ ID NO:17:
GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGCAAAAATGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATCTTGCATCCAACCTAGAATCTGGGATCCCACCTCGATTCAGTGGCAGCGGGTATGGAACAGATTTTACCCTCACAATTAATAACATAGAATCTGAGGATGCTGCATATTACTTCTGTCAGCACAGTAGGGAGCTTCCATTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
BAP094-hum01-HC SEQ ID NO:18:
CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGGAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATAACCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGTGATATTTATCCTGGTAGTGGTAATACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGACCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCAAAAGAGGGAGGTCTTACTACGGAGGATTATGCTTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACGCTGGTCACCGTCAGCTCA
BAP094-hum02-HC SEQ ID NO:19:
CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGGAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATAACCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGTGATATTTATCCTGGTAGTGGTAATACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGACCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCAAAAGAGGGAGGTCTTACTACGGAGGATTATGCTTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACGCTGGTCACCGTCAGCTCA
BAP094-hum03-HC,CPX-003,CPX-007 SEQ ID NO:20:
CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATAACCTGGGTGCGACAGGCTCGTGGACAACGCCTTGAGTGGATAGGTGATATTTATCCTGGTAGTGGTAATACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGACCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCAAAAGAGGGAGGTCTTACTACGGAGGATTATGCTTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACGCTGGTCACCGTCAGCTCA
BAP094-hum04-HC SEQ ID NO:21:
GAGGTCCAGCTGGTACAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCTACAGTGAAAATCTCCTGCAAGGTTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATAACCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGTGATATTTATCCTGGTAGTGGTAATACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGACCAGAGTCACCATCTCAGCCGACAAGTCCATCAGCACCGCCTACCTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCATGTATTACTGTGCAAAAGAGGGAGGTCTTACTACGGAGGATTATGCTTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACGCTGGTCACCGTCAGCTCA
BAP094-hum05-HC,CPX-004 SEQ ID NO:22:
GAGGTCCAGCTGGTACAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCTACAGTGAAAATCTCCTGCAAGGTTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATAACCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGTGATATTTATCCTGGTAGTGGTAATACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGACCAGAGTCACCATCTCAGCCGACAAGTCCATCAGCACCGCCTACCTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCATGTATTACTGTGCAAAAGAGGGAGGTCTTACTACGGAGGATTATGCTTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACGCTGGTCACCGTCAGCTCA
BAP094-hum06-HC,CPX-005,CPX-006 SEQ ID NO:23:
CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGGAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATAACCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGTGATATTTATCCTGGTAGTGGTAATACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGACCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCAAAAGAGGGAGGTCTTACTACGGAGGATTATGCTTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACGCTGGTCACCGTCAGCTCA
BAP094-hum07-HC SEQ ID NO:24:
CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGGAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATAACCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGTGATATTTATCCTGGTAGTGGTAATACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGACCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCAAAAGAGGGAGGTCTTACTACGGAGGATTATGCTTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACGCTGGTCACCGTCAGCTCA
BAP094-hum08-HC SEQ ID NO:25:
GAGGTCCAGCTGGTACAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCTACAGTGAAAATCTCCTGCAAGGTTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATAACCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGTGATATTTATCCTGGTAGTGGTAATACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGACCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCAAAAGAGGGAGGTCTTACTACGGAGGATTATGCTTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACGCTGGTCACCGTCAGCTCA
BAP094-hum09-HC SEQ ID NO:26:
CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATAACCTGGGTGCGACAGGCTCGTGGACAACGCCTTGAGTGGATAGGTGATATTTATCCTGGTAGTGGTAATACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGACCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCAAAAGAGGGAGGTCTTACTACGGAGGATTATGCTTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACGCTGGTCACCGTCAGCTCA
BAP094-hum10-HC SEQ ID NO:27:
GAGGTCCAGCTGGTACAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCTACAGTGAAAATCTCCTGCAAGGTTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATAACCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGTGATATTTATCCTGGTAGTGGTAATACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGACCAGAGTCACCATCTCAGCCGACAAGTCCATCAGCACCGCCTACCTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCATGTATTACTGTGCAAAAGAGGGAGGTCTTACTACGGAGGATTATGCTTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACGCTGGTCACCGTCAGCTCA
BAP094-01-LC CPX-002(嵌合)SEQ ID NO:28:
GACATTGTGCTGACACAGTCTCCTGCTTCCTTAGCTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTCATGCAGGGCCAGCAAAAATGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATCTATCTTGCATCCAACCTAGAATCTGGGGTCCCTACCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGATGCTGCAACCTATTACTGTCAGCACAGTAGGGAGCTTCCATTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAAA
BAP094-01-HC CPX-002(嵌合)SEQ ID NO:29:
CAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAGCTTGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATAACCTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTTATCCTGGTAGTGGTAATACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGACCAAGGCCACACTGACTGTAGACACATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAAAGAGGGAGGTCTTACTACGGAGGATTATGCTTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACGCTGGTCACCGTCAGCTCA
BAP094-01-LC SEQ ID NO:30:
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKNVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPTRFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPFTFGSGTKLEIK
BAP094-hum01-LC SEQ ID NO:31:
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASKNVSTSGYSYMHWYQQKPGKAPKLLIYLASNLESGIPPRFSGSGYGTDFTLTINNIESEDAAYYFCQHSRELPFTFGQGTKVEIK
BAP094-hum02-LC SEQ ID NO:32:
EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASKNVSTSGYSYMHWYQQKPGKAPKLLIYLASNLESGIPPRFSGSGYGTDFTLTINNIESEDAAYYFCQHSRELPFTFGQGTKVEIK
BAP094-hum03-LC SEQ ID NO:33:
EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASKNVSTSGYSYMHWYQQKPGKAPKLLIYLASNLESGIPPRFSGSGYGTDFTLTINNIESEDAAYYFCQHSRELPFTFGQGTKVEI
BAP094-hum04-LC SEQ ID NO:34:
EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASKNVSTSGYSYMHWYQQKPGKAPKLLIYLASNLESGIPPRFSGSGYGTDFTLTINNIESEDAAYYFCQHSRELPFTFGQGTKVEIK
BAP094-hum05-LC SEQ ID NO:35:
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRASKNVSTSGYSYMHWYQQKPGQAPRLLIYLASNLESGIPPRFSGSGYGTDFTLTINNIESEDAAYYFCQHSRELPFTFGQGTKVEIK
BAP094-hum06-LC SEQ ID NO:36:
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASKNVSTSGYSYMHWYQQKPGQAPRLLIYLASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQHSRELPFTFGQGTKVEIK
BAP094-hum07-LC SEQ ID NO:37:
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKNVSTSGYSYMHWYQQKPGQAPRLLIYLASNLESGIPPRFSGSGYGTDFTLTINNIESEDAAYYFCQHSRELPFTFGQGTKVEIK
BAP094-hum08-LC SEQ ID NO:38:
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKNVSTSGYSYMHWYQQKPGQAPRLLIYLASNLESGIPPRFSGSGYGTDFTLTINNIESEDAAYYFCQHSRELPFTFGQGTKVEIK
BAP094-hum09-LC SEQ ID NO:39:
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKNVSTSGYSYMHWYQQKPGQAPRLLIYLASNLESGIPPRFSGSGYGTDFTLTINNIESEDAAYYFCQHSRELPFTFGQGTKVEIK
BAP094-hum10-LC SEQ ID NO:40:
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKNVSTSGYSYMHWYQQKPGQAPRLLIYLASNLESGIPPRFSGSGYGTDFTLTINNIESEDAAYYFCQHSRELPFTFGQGTKVEIK
BAP094-01-HC SEQ ID NO:41:
QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYWITWVKQRPGQGLEWIGDIYPGSGNTNYNEKFKTKATLTVDTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAKEGGLTTEDYALDYWGQGTLVTVSS
BAP094-hum01-HC SEQ ID NO:42:
QVQLVQSGAEVEKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIYPGSGNTNYNEKFKTRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKEGGLTTEDYALDYWGQGTLVTVSS
BAP094-hum02-HC SEQ ID NO:43:
QVQLVQSGAEVEKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIYPGSGNTNYNEKFKTRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKEGGLTTEDYALDYWGQGTLVTVSS
BAP094-hum03-HC SEQ ID NO:44:
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQARGQRLEWIGDIYPGSGNTNYNEKFKTRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKEGGLTTEDYALDYWGQGTLVTVSS
BAP094-hum04-HC SEQ ID NO:45:
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVSGYTFTSYWITWIRQPPGKGLEWIGDIYPGSGNTNYNEKFKTRVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAKEGGLTTEDYALDYWGQGTLVTVSS
BAP094-hum05-HC SEQ ID NO:46:
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVSGYTFTSYWITWIRQPPGKGLEWIGDIYPGSGNTNYNEKFKTRVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAKEGGLTTEDYALDYWGQGTLVTVSS
BAP094-hum06-HC SEQ ID NO:47:
QVQLVQSGAEVEKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIYPGSGNTNYNEKFKTRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKEGGLTTEDYALDYWGQGTLVTVSS
BAP094-hum07-HC SEQ ID NO:48:
QVQLVQSGAEVEKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIYPGSGNTNYNEKFKTRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKEGGLTTEDYALDYWGQGTLVTVSS
BAP094-hum08-HC SEQ ID NO:49:
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVSGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIYPGSGNTNYNEKFKTRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKEGGLTTEDYALDYWGQGTLVTVSS
BAP094-hum09-HC SEQ ID NO:50:
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQARGQRLEWIGDIYPGSGNTNYNEKFKTRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKEGGLTTEDYALDYWGQGTLVTVSS
BAP094-hum10-HC SEQ ID NO:51:
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVSGYTFTSYWITWIRQPPGKGLEWIGDIYPGSGNTNYNEKFKTRVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAKEGGLTTEDYALDYWGQGTLVTVSS
CPX-006_HC(密码子优化的)SEQ ID NO:52:
AAGCTTGCCGCCACCATGGAATGGTCCTGGGTGTTCCTGTTCTTCCTGTCCGTGACCACCGGCGTGCACTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAGGTGGAAAAGCCTGGCGCCTCTGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACACCTTTACCAGCTACTGGATCACCTGGGTGCGACAGGCTCCTGGACAGGGCCTGGAATGGATGGGCGACATCTACCCTGGCTCCGGCAACACCAACTACAACGAGAAGTTCAAGACCCGCGTGACCATCACCGCCGACAAGTCCACCTCCACCGCCTACATGGAACTGTCCTCCCTGCGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCTAAAGAGGGCGGCCTGACCACCGAGGACTACGCCCTGGATTATTGGGGCCAGGGCACCCTCGTGACCGTGTCCTCTGCTTCTACCAAGGGCCCCTCCGTGTTCCCTCTGGCCCCTTCCAGCAAGTCTACCTCTGGCGGCACAGCCGCTCTGGGCTGCCTCGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACAGTGTCTTGGAACTCTGGCGCCCTGACCAGCGGAGTGCACACCTTCCCTGCTGTGCTGCAGTCCTCCGGCCTGTACTCCCTGTCCTCCGTCGTGACTGTGCCCTCCAGCTCTCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAACCCAAGTCCTGCGACAAGACCCACACCTGTCCCCCTTGTCCTGCCCCTGAACTGCTGGGCGGACCCTCTGTGTTTCTGTTCCCCCCAAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCTCCCGGACCCCCGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTAGAGAGGAACAGTACCAGTCCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGCTCTGCCTGCCCCCATCGAAAAGACCATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCCCGGGAACCCCAGGTGTACACACTGCCCCCTAGCAGGGACGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTCGTGAAAGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACTCCGACGGCTCATTCTTTCTGTACTCCAAGCTGACAGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTGTCCCTGAGCCCCGGCAAGTGATGAATTC
CPX-006_HC(密码子优化的)SEQ ID NO:53:
MEWSWVFLFFLSVTTGVHS
QVQLVQSGAEVEKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIYPGSGNTNYNEKFKTRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKEGGLTTEDYALDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
CPX-006_LC(密码子优化的)SEQ ID NO:54:
AAGCTTGCCGCCACCATGTCCGTGCCTACCCAGGTGCTGGGACTGCTGCTGCTGTGGCTGACCGATGCCAGATGCGAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCTGCCACCCTGTCACTGTCTCCAGGCGAGAGAGCCACCCTGAGCTGCCGGGCCTCCAAGAACGTGTCCACCTCCGGCTACTCCTACATGCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCCAGACTGCTGATCTACCTGGCCTCCAACCTGGAATCCGGCATCCCCCCTAGATTCTCCGGCTCTGGCTACGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAACAACATCGAGTCCGAGGACGCCGCCTACTACTTCTGCCAGCACTCCAGAGAGCTGCCCTTCACCTTTGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAGCGGACCGTGGCCGCTCCCTCCGTGTTCATCTTCCCACCTTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACCGCTTCTGTCGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAGGAATCCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACTCCCTGTCCTCTACCCTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAAGTGACCCACCAGGGCCTGTCTAGCCCCGTGACCAAGTCTTTCAACCGGGGCGAGTGCTGATGAATTC
CPX-006_LC(密码子优化的)SEQ ID NO:55:
MSVPTQVLGLLLLWLTDARC
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKNVSTSGYSYMHWYQQKPGQAPRLLIYLASNLESGIPPRFSGSGYGTDFTLTINNIESEDAAYYFCQHSRELPFTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
序列表
<110> 科尔沃斯制药股份有限公司
拜奥阿特拉有限责任公司
E·P·格里芬
R·A·米勒
G·J·弗雷
H·W·张
<120> 人源化抗CD73抗体
<130> 48517-508001WO
<150> US 62/265,357
<151> 2015-12-09
<150> US 62/289,694
<151> 2016-02-01
<150> US 62/346,327
<151> 2016-06-06
<160> 55
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 1
Arg Ala Ser Lys Asn Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His
1 5 10 15
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 2
Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 3
Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Phe Thr
1 5
<210> 4
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 4
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Thr
1 5 10
<210> 5
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 5
Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Thr
1 5 10
<210> 6
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 6
Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 7
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 7
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Glu Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
115 120
<210> 8
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 8
gccatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgca gggccagcaa aaatgtcagt acatctggct atagttatat gcactggtat 120
cagcagaaac cagggaaagc tcctaagctc ctgatctatc ttgcatccaa cctagaatct 180
gggatcccac ctcggttcag tggcagcggg tatggaacag attttaccct cacaattaat 240
aacatagaat ctgaggatgc tgcatattac ttctgtcagc acagtaggga gcttccattc 300
acgttcggcc aagggaccaa ggtggaaatc aaa 333
<210> 9
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 9
gaaattgtgc tgactcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga gaaagtcacc 60
atcacctgca gggccagcaa aaatgtcagt acatctggct atagttatat gcactggtat 120
cagcagaaac cagggaaagc tcctaagctc ctgatctatc ttgcatccaa cctagaatct 180
gggatcccac ctcgattcag tggcagcggg tatggaacag attttaccct cacaattaat 240
aacatagaat ctgaggatgc tgcatattac ttctgtcagc acagtaggga gcttccattc 300
acgttcggcc aagggaccaa ggtggaaatc aaa 333
<210> 10
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 10
gaaattgtgc tgactcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga gaaagtcacc 60
atcacctgca gggccagcaa aaatgtcagt acatctggct atagttatat gcactggtat 120
cagcagaaac cagggaaagc tcctaagctc ctgatctatc ttgcatccaa cctagaatct 180
gggatcccac ctcgattcag tggcagcggg tatggaacag attttaccct cacaattaat 240
aacatagaat ctgaggatgc tgcatattac ttctgtcagc acagtaggga gcttccattc 300
acgttcggcc aagggaccaa ggtggaaatc aaa 333
<210> 11
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 11
gaaattgtgc tgactcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga gaaagtcacc 60
atcacctgca gggccagcaa aaatgtcagt acatctggct atagttatat gcactggtat 120
cagcagaaac cagggaaagc tcctaagctc ctgatctatc ttgcatccaa cctagaatct 180
gggatcccac ctcgattcag tggcagcggg tatggaacag attttaccct cacaattaat 240
aacatagaat ctgaggatgc tgcatattac ttctgtcagc acagtaggga gcttccattc 300
acgttcggcc aagggaccaa ggtggaaatc aaa 333
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<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 12
gatgttgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccttggaca gccggcctcc 60
atctcctgca gggccagcaa aaatgtcagt acatctggct atagttatat gcactggtac 120
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aacatagaat ctgaggatgc tgcatattac ttctgtcagc acagtaggga gcttccattc 300
acgttcggcc aagggaccaa ggtggaaatc aaa 333
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<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
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gccatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
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<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
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gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
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<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
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<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
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<220>
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gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
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aacatagaat ctgaggatgc tgcatattac ttctgtcagc acagtaggga gcttccattc 300
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 18
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agctca 366
<210> 19
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 19
caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtggagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
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agctca 366
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<212> DNA
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<220>
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<212> DNA
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agctca 366
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成多核苷酸
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agctca 366
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 23
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<212> DNA
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<212> DNA
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<400> 29
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<220>
<223> 合成多肽
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Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 31
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 32
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 33
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<223> 合成多肽
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<220>
<223> 合成多肽
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
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<220>
<223> 合成多肽
<400> 37
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<220>
<223> 合成多肽
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成多肽
<400> 39
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成多肽
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1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Asn Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Asn Ile Glu Ser Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 41
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 41
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Thr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 42
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 42
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Glu Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 43
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 43
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Glu Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 44
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 44
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 45
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 45
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 46
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 46
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 47
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 47
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Glu Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 48
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 48
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Glu Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 49
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 49
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 50
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 50
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 51
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 51
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 52
<211> 1438
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 52
aagcttgccg ccaccatgga atggtcctgg gtgttcctgt tcttcctgtc cgtgaccacc 60
ggcgtgcact cccaggtgca gctggtgcag tctggcgccg aggtggaaaa gcctggcgcc 120
tctgtgaagg tgtcctgcaa ggcctccggc tacaccttta ccagctactg gatcacctgg 180
gtgcgacagg ctcctggaca gggcctggaa tggatgggcg acatctaccc tggctccggc 240
aacaccaact acaacgagaa gttcaagacc cgcgtgacca tcaccgccga caagtccacc 300
tccaccgcct acatggaact gtcctccctg cggagcgagg acaccgccgt gtactactgt 360
gctaaagagg gcggcctgac caccgaggac tacgccctgg attattgggg ccagggcacc 420
ctcgtgaccg tgtcctctgc ttctaccaag ggcccctccg tgttccctct ggccccttcc 480
agcaagtcta cctctggcgg cacagccgct ctgggctgcc tcgtgaagga ctacttcccc 540
gagcccgtga cagtgtcttg gaactctggc gccctgacca gcggagtgca caccttccct 600
gctgtgctgc agtcctccgg cctgtactcc ctgtcctccg tcgtgactgt gccctccagc 660
tctctgggca cccagaccta catctgcaac gtgaaccaca agccctccaa caccaaggtg 720
gacaagaagg tggaacccaa gtcctgcgac aagacccaca cctgtccccc ttgtcctgcc 780
cctgaactgc tgggcggacc ctctgtgttt ctgttccccc caaagcccaa ggacaccctg 840
atgatctccc ggacccccga agtgacctgc gtggtggtgg atgtgtccca cgaggaccct 900
gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct 960
agagaggaac agtaccagtc cacctaccgg gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag 1020
gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc aaggtgtcca acaaggctct gcctgccccc 1080
atcgaaaaga ccatctccaa ggccaagggc cagccccggg aaccccaggt gtacacactg 1140
ccccctagca gggacgagct gaccaagaac caggtgtccc tgacctgtct cgtgaaaggc 1200
ttctacccct ccgatatcgc cgtggaatgg gagtccaacg gccagcctga gaacaactac 1260
aagaccaccc cccctgtgct ggactccgac ggctcattct ttctgtactc caagctgaca 1320
gtggacaagt cccggtggca gcagggcaac gtgttctcct gcagcgtgat gcacgaggcc 1380
ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg tccctgagcc ccggcaagtg atgaattc 1438
<210> 53
<211> 471
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 53
Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Glu Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Ser Tyr Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Met Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn
65 70 75 80
Glu Lys Phe Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Lys Glu Gly Gly Leu Thr Thr Glu Asp Tyr Ala Leu
115 120 125
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
130 135 140
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
145 150 155 160
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
165 170 175
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
180 185 190
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
195 200 205
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
210 215 220
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
225 230 235 240
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
245 250 255
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
260 265 270
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
275 280 285
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
290 295 300
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
305 310 315 320
Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
325 330 335
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
340 345 350
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
355 360 365
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
370 375 380
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
385 390 395 400
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
405 410 415
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
420 425 430
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
435 440 445
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
450 455 460
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 54
<211> 739
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 54
aagcttgccg ccaccatgtc cgtgcctacc caggtgctgg gactgctgct gctgtggctg 60
accgatgcca gatgcgagat cgtgctgacc cagtcccctg ccaccctgtc actgtctcca 120
ggcgagagag ccaccctgag ctgccgggcc tccaagaacg tgtccacctc cggctactcc 180
tacatgcact ggtatcagca gaagcccggc caggccccca gactgctgat ctacctggcc 240
tccaacctgg aatccggcat cccccctaga ttctccggct ctggctacgg caccgacttc 300
accctgacca tcaacaacat cgagtccgag gacgccgcct actacttctg ccagcactcc 360
agagagctgc ccttcacctt tggccagggc accaaggtgg aaatcaagcg gaccgtggcc 420
gctccctccg tgttcatctt cccaccttcc gacgagcagc tgaagtccgg caccgcttct 480
gtcgtgtgcc tgctgaacaa cttctacccc cgcgaggcca aggtgcagtg gaaggtggac 540
aacgccctgc agtccggcaa ctcccaggaa tccgtgaccg agcaggactc caaggacagc 600
acctactccc tgtcctctac cctgaccctg tccaaggccg actacgagaa gcacaaggtg 660
tacgcctgcg aagtgaccca ccagggcctg tctagccccg tgaccaagtc tttcaaccgg 720
ggcgagtgct gatgaattc 739
<210> 55
<211> 238
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 55
Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr
1 5 10 15
Asp Ala Arg Cys Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
20 25 30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Asn
35 40 45
Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
50 55 60
Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser
65 70 75 80
Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys
100 105 110
Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
115 120 125
Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
130 135 140
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
145 150 155 160
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
165 170 175
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
180 185 190
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
195 200 205
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
210 215 220
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235

Claims (37)

1.一种人源化的抗CD73抗体，其包含人源化轻链可变区以及人源化重链可变区，
其中所述人源化轻链可变区包含如SEQ ID NO:1所示的小鼠CDR L1，如SEQ ID NO:2所示的小鼠CDR L2，以及如SEQ ID NO:3所示的小鼠CDR L3；
其中所述人源化重链可变区包含如SEQ ID NO:4所示的小鼠CDR H1，如SEQ ID NO:5所示的小鼠CDR H2，以及如SEQ ID NO:6所示的小鼠CDR H3；
其中所述人源化重链可变区包含SEQ ID NO:7的序列。
2.权利要求1的人源化抗CD73抗体，
其中所述人源化轻链可变区包含：
在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的天冬氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置18的位置处的赖氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置60的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置74的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置76的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置77的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置100的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置104的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置3的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置10的位置处的苯丙氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置13的位置处的丙氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置14的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置15的位置处的缬氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置16的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置17的位置处的谷氨酸或天冬氨酸，在对应于Kabat位置22的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置42的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置45的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置58的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的酪氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的苯丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的酪氨酸，或者在对应于Kabat位置87的位置处的苯丙氨酸。
3.权利要求1的人源化抗CD73抗体，其中所述人源化轻链可变区包含在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的亮氨酸，在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸，以及在对应于Kabat位置18的位置处的脯氨酸。
4.权利要求1的人源化抗CD73抗体，其中所述人源化轻链可变区包含在对应于Kabat位置12的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置43的位置处的丙氨酸，在对应于Kabat位置60的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置74的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置76的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置77的位置处的天冬酰胺或丝氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置100的位置处的谷氨酰胺以及在对应于Kabat位置104的位置处的缬氨酸。
5.权利要求1的人源化抗CD73抗体，其中所述人源化轻链可变区包含在对应于Kabat位置1的位置处的谷氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置2的位置处的缬氨酸，在对应于Kabat位置3的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置4的位置处的甲硫氨酸，在对应于Kabat位置9的位置处的天冬氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置10的位置处的苯丙氨酸或苏氨酸，在对应于Kabat位置11的位置处的谷氨酰胺，在对应于Kabat位置12的位置处的丝氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置13的位置处的丙氨酸或亮氨酸，在对应于Kabat位置14的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置15的位置处的缬氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置16的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置17的位置处的谷氨酸或天冬氨酸，在对应于Kabat位置18的位置处的赖氨酸或脯氨酸，在对应于Kabat位置22的位置处的苏氨酸，在对应于Kabat位置42的位置处的赖氨酸，在对应于Kabat位置45的位置处的精氨酸，在对应于Kabat位置58的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置60的位置处的脯氨酸或丝氨酸，在对应于Kabat位置67的位置处的酪氨酸，在对应于Kabat位置73的位置处的苯丙氨酸，在对应于Kabat位置78的位置处的异亮氨酸，在对应于Kabat位置80的位置处的丝氨酸或丙氨酸，在对应于Kabat位置85的位置处的酪氨酸以及在对应于Kabat位置87的位置处的苯丙氨酸。
6.权利要求1-5之一的人源化抗CD73抗体，其中所述抗体是IgG。
7.权利要求1-5之一的人源化抗CD73抗体，其中所述抗体是IgG1。
8.权利要求1-5之一的人源化抗CD73抗体，其中所述抗体是IgG4。
9.权利要求1-5之一的人源化抗CD73抗体，其中所述抗体是Fab'片段。
10.权利要求1-5之一的人源化抗CD73抗体，其中所述抗体是单链抗体(scFv)。
11.权利要求1-5之一的人源化抗CD73抗体，其中所述抗体能够以0.5-25nM的平衡解离常数(KD)结合CD73抗原。
12.权利要求1-5之一的人源化抗CD73抗体，其中所述抗体能够在小于7.5的pH下结合CD73抗原。
13.权利要求1-5之一的人源化抗CD73抗体，其中所述抗体能够在6.0-7.0的pH下结合CD73抗原。
14.权利要求1-5之一的人源化抗CD73抗体，其中所述抗体能够在6.3的pH下结合CD73抗原。
15.权利要求1-5之一的人源化抗CD73抗体，其进一步包含在对应于Kabat位置297的位置处的谷氨酰胺。
16.权利要求1-5之一的人源化抗CD73抗体，其结合至CD73抗原。
17.权利要求16的人源化抗CD73抗体，其中所述CD73抗原形成细胞的部分。
18.权利要求17的人源化抗CD73抗体，其中所述细胞是淋巴样细胞。
19.权利要求17的人源化抗CD73抗体，其中所述细胞是T细胞。
20.权利要求17的人源化抗CD73抗体，其中所述细胞是癌细胞。
21.一种编码权利要求1-5之一的人源化抗CD73抗体的分离的核酸。
22.权利要求21的分离的核酸，其中所述分离的核酸包含SEQ ID NO:52或SEQ ID NO:54。
23.一种药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1-5之一的人源化抗CD73抗体和药学可接受的赋形剂。
24.权利要求1-5之一的人源化抗CD73抗体在制备用于治疗有需要的对象中的癌症的药物中的用途。
25.一种在小于7.5的pH下结合至CD73抗原的人源化抗CD73抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:7的序列的人源化重链可变区，并且其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:37的序列的人源化轻链可变区。
26.权利要求25的人源化抗CD73抗体，其中所述pH是6.0-7.0。
27.权利要求25的人源化抗CD73抗体，其中所述pH是6.7。
28.权利要求25的人源化抗CD73抗体，其中所述pH是6.3。
29.权利要求25的人源化抗CD73抗体，其中所述抗体抑制所述CD73抗原的催化活性。
30.一种检测结合至CD73抗原的人源化抗CD73抗体的方法，所述方法包括：
(i)使权利要求1或25的人源化抗CD73抗体与CD73抗原在小于7.5的pH下接触；以及
(ii)检测所述人源化抗CD73抗体与所述CD73抗原的结合。
31.权利要求30的方法，其中所述pH是6.0-7.0。
32.权利要求30的方法，其中所述pH是6.7。
33.权利要求30的方法，其中所述pH是6.3。
34.权利要求30的方法，其中所述步骤(ii)的检测结合包括检测CD73催化活性的抑制。
35.权利要求30的方法，其中所述CD73抗原形成细胞的部分。
36.权利要求30的方法，其中所述CD73抗原结合至固体支持物。
37.权利要求30的方法，其中所述人源化抗CD73抗体包含可检测部分。
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