CN113412124A - Baff-r双特异性t细胞衔接子抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种能够结合BAFF‑R的重组蛋白(例如，双特异性抗体)。本文提供的所述重组蛋白(例如，双特异性抗体)尤其可用于治疗癌症和自身免疫性疾病。

Description

BAFF-R双特异性T细胞衔接子抗体
相关申请的交叉引用
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背景技术
抗体疗法是临床上治疗血液恶性肿瘤最成功的一种免疫疗法。一个典型的例子是利妥昔单抗，其靶向CD20并诱导针对B细胞淋巴瘤的细胞毒作用。然而，关于利妥昔单抗的一个主要问题是利妥昔单抗产生耐药性被认为是CD20下调造成的，从而阻碍了抗体与靶细胞结合。因此，本领域需要针对恶性肿瘤细胞的替代性、特异性标靶的新治疗性抗体。本文提供了BAFF-R双特异性抗体的组合物和使用该组合物解决本领域的这些和其他问题的方法。
发明内容
一方面，提供了一种重组蛋白，其包括：(i)能结合效应细胞配体的第一抗体区；(ii)第二抗体区，其包括：(a)提供了轻链可变域和重链可变域。所述轻链可变域包括如SEQID NO:1所示的CDR L1、如SEQ ID NO:2所示的CDR L2和如SEQ ID NO:3所示的CDR L3。所述重链可变域包括如SEQ ID NO:4所示的CDR H1、如SEQ ID NO:5所示的CDR H2和如SEQ IDNO:6所示的CDR H3。
一方面，提供一种重组蛋白，其包括：(i)能结合效应细胞配体的第一抗体区；(ii)第二抗体区，其包括：(a)提供了轻链可变域和重链可变域。所述轻链可变域包括如SEQ IDNO:38所示的CDR L1、如SEQ ID NO:39所示的CDR L2和如SEQ ID NO:40所示的CDR L3。所述重链可变域包括如SEQ ID NO:41所示的CDR H1、如SEQ ID NO:42所示的CDR H2和如SEQ IDNO:43所示的CDR H3。
一方面，提供了一种药物组合物，其包括治疗有效量的本文提供的重组蛋白，所述重组蛋白包括其实施例和药学上可接受的赋形剂。
一方面，提供了一种治疗有此需要的受试者所患癌症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的如本文所述的包括其实施例在内的重组蛋白，从而治疗所述受试者所患癌症。
另一方面，提供了一种治疗有此需要的受试者所患癌症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的如本文所述的包括其实施例在内的重组蛋白，从而治疗所述受试者的自身免疫性疾病。
附图的简要说明
图1A-1B。通过杵臼结构技术产生BAFF-R双特异性抗体(BAFF-R BiTE，本文提供的包括其实施例在内的重组蛋白)。图1A。BAFF-R BiTE的示意图。图1B。BAFF-R BiTE(H90Bi)的还原和非还原胶条件。对照物包括对照/非相关BiTE(Cont.Bi，4-4Bi)和人源化BAFF-R抗体(例如，H90-Ab在本文中也称为“人源化C90”，并且根据框架序列也称为“人源化C90-1”、“人源化C90-2”、“人源化C90-3”、“C90”、“C90-1”、“C90-2”或“C90-3”)。
图2。双特异性抗体的结合特异性。结合野生型小鼠成纤维细胞L细胞、表达工程化BAFF-R的L细胞(B2D L细胞)和从健康供体分离出来的T细胞的BAFF-R/CD3双特异性抗体(H90 BiTE)的FACS直方图。
图3。针对表达BAFF-R的L细胞的双特异性抗体的特异性细胞毒性。图中显示了从铬释放试验计算得出的特定细胞毒性百分比。BAFF-R/CD3双特异性抗体(H90 BiTE)与铬标记的靶向野生型(左)或表达BAFF-R的L细胞(右)以及从单个健康供体分离的效应CD8T细胞一起培养。效应细胞与分离CD8 T细胞的比率为10:1。培育时间为4小时。
图4。抗恶性B细胞系双特异性抗体的细胞毒性。图中示出了从铬释放试验中计算得出的针对如图所示的各种恶性B细胞系的特定细胞毒性百分比。效应细胞与分离CD8 T细胞的比率为10:1。培育时间为4小时。
图5。双特异性抗体的剂量依赖性细胞毒性。图中示出了对JeKo-1套细胞淋巴瘤和正常分离B细胞的铬释放试验计算的特定细胞毒性百分比。效应细胞与分离CD8 T细胞的比率为10:1。培育时间为4小时。
图6。体内研究时间表。接种NSG小鼠患上肿瘤并采用BAFF-R BiTE进行治疗的治疗计划的时间线。示意图示出了Z-138MCL肿瘤模型的治疗方案，并在水平线上指示时间点。每周进行一次生物发光成像，并在接种肿瘤后90天内观察小鼠。
图7。利用BAFF-R BiTE对Z-138模型进行治疗。在第0天经Z-138MCL静脉(IV)接种肿瘤(5x104细胞/小鼠)后的NSG小鼠组(n＝5/组)的生物发光图像。实验组(300μg的BAFF-RBiTE)接受300μg的BAFF-R BiTE+5x106 T细胞。对照组接受同一供体或生理盐水(PBS)的5x106 T细胞。
如图8A-8C。与BAFF-R阳性L细胞(B2D)(图8B)或供体T细胞(图8C)相比，BAFF-RBiTE抗体染色的FACS图示出了与亲本L细胞的结合(图8A)。染色包括第二抗体和BAFF-R人源化抗体作为L细胞的对照物，而第二抗体和CD3抗体的组合作为T细胞的对照物。
具体实施方式
I.定义
虽然在本文中显示和描述了本发明的各种实施例和方面，但对于本领域的技术人员显而易见的是，仅借助于实例提供此类实施例和方面。在不脱离本发明的前提下，本领域技术人员能够进行无数次变更、更改和替换。应当理解，在实施本发明时可以采用本文所述的本发明实施例的各种替代方案。
本文中使用的章节标题仅用作组织的目的，不应以任何方式解释为限制所描述的主题。本申请中所引用的所有文献或文献的部分，包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍、手册以及论文，在此出于任何目的明确地以全文引用的方式并入本文中。
“核酸”是指核苷酸(例如，脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸)和其呈单链、双链或多链形式的聚合物或其互补序列；或核苷酸(例如，脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸)。在实施例中，“核酸”不包括核苷。术语“聚核苷酸”、“寡核苷酸”、“寡核”或其类似术语在通常和惯用意义上是指核苷酸的线性序列。术语“核苷”在通常和惯用意义上是指包括核碱基和戊糖(核糖或脱氧核糖)的糖胺。核苷的非限制性实例包括胞苷、尿苷、腺苷、鸟苷、胸苷和肌苷。术语“核苷酸”在通常和惯用意义上是指聚核苷酸的单一单元，即单体。核苷酸可以是核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或其修饰形式。本文所涵盖的聚核苷酸的实例包括单链和双链DNA、单链和双链RNA和具有单链和双链DNA和RNA的混合物的杂交分子。核酸的实例，例如，本文所涵盖的聚核苷酸包括任何类型的RNA(例如，mRNA、siRNA、miRNA和指导RNA)以及任何类型的DNA、基因组DNA、质体DNA和微环DNA和其任何片段。在聚核苷酸的情况下，术语“双链体”在通常和惯用意义上是指双链。核酸可以是直链，也可以是支链。举例来说，核酸可以是核苷酸的直链，或者核酸可以是支链，例如，使得核酸包括核苷酸的一个或多个臂或分支。任选地，支链核酸重复分支以形成更高级的结构，比如树枝状物等。
所述术语还包括含有已知核苷酸类似物或修饰主链残基或键的核酸，所述核酸是合成的、天然存在的和非天然存在的，具有与参考核酸类似的结合特性，并以类似于参考核苷酸的方式代谢。此类类似物的实例包括但不限于磷酸二酯衍生物，所述磷酸二酯衍生物包括，例如，氨基磷酸酯、二氨基磷酸酯、硫代磷酸酯(也称为具有取代磷酸酯中氧的双键硫的硫代磷酸酯)、二硫代磷酸酯、膦酰羧酸、膦酰羧酸酯、膦酰基乙酸、膦酰甲酸、甲基膦酸酯、硼膦酸酯或O-甲基亚磷酰胺键(参见Eckstein，《寡核苷酸以及类似物：实用方法》(Oligonucleotides and Analogues:A Practical Approach)，牛津大学出版社)，以及如在5-甲基胞苷或假尿苷中对核苷酸碱基的修饰；以及肽核酸主链和键。其它类似核酸包括具有阳性主链的核酸；非离子主链、经修饰的糖和非核糖主链(例如，本领域已知的二氨基磷酸吗啉代寡核苷酸或锁核酸(LNA))，包括美国专利第5,235,033号和第5,034,506号以及ASC研讨会丛刊580(ASC Symposium Series 580)，《反义研究中的碳水化合物修饰(Carbohydrate Modifications in Antisense Research)》(Sanghui和Cook)第6章和第7章中描述的内容。含有一个或多个碳环糖的核酸也包括在核酸的一个定义中。可以出于多种原因对核糖-磷酸主链进行修饰，例如，提高这些分子在生理环境中，或作为生物芯片上的探针的稳定性和半衰期。可以制备天然存在的核酸和类似物的混合物；可替代地，可以制备不同核酸类似物的混合物，以及天然存在的核酸和类似物的混合物。在实施例中，DNA中的核苷酸间连键是磷酸二酯、磷酸二酯衍生物或两者的组合。
术语“氨基酸”是指天然存在和合成氨基酸以及以与天然存在的氨基酸类似的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的氨基酸以及之后被修饰的氨基酸，例如，羟基脯氨酸、γ-羧基谷氨酸以及O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构的化合物，即与氢、羧基、氨基和R基团结合的α碳，例如，高丝氨酸、正亮氨酸、蛋氨酸亚砜、蛋氨酸甲基锍。此类类似物具有修饰的R基团(例如，正亮氨酸)或修饰的肽主链，但是保留了与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物是指具有与氨基酸的一般化学结构不同的结构，但以与天然存在的氨基酸相似的方式起作用的化合物。术语“非天然存在的氨基酸”和“非天然氨基酸”是指自然界中未发现的氨基酸类似物、合成氨基酸和氨基酸模拟物。
氨基酸在本文通过其通常已知的三字母符号或通过IUPAC-IUB生物化学命名委员会(IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commission)推荐的单字母符号来表示。同样，核苷酸可以通过其普遍接受的单字母代码来表示。
“经过保守修饰的变体”适用于氨基酸序列和核酸序列两者。关于特定核酸序列，“经过保守修饰的变体”是指编码相同或基本上相同的氨基酸序列的核酸。由于遗传密码具有简并性，因此多个核酸序列将对任何给定的蛋白质编码。例如，密码子GCA、GCC、GCG和GCU均对氨基酸丙氨酸进行编码。因此，在由密码子指定丙氨酸的每个位置处，所述密码子可以在不改变编码多肽的情况下被改变成所描述的任何对应密码子。此类核酸变异为“沉默变异”，其是保守修饰变异的其中一种。本文中编码多肽的每个核酸序列也描述了核酸的每种可能的沉默变异。技术人员将认识到，核酸中的每个密码子(除通常为甲硫氨酸的唯一密码子的AUG和通常为色氨酸的唯一密码子TGG外)均可以进行修饰以得到功能上相同的分子。因此，编码多肽的核酸的每种沉默变异均隐含在每个所述序列中。
关于氨基酸序列，技术人员将认识到改变、添加或删除编码序列中的单个氨基酸或小百分比的氨基酸的核酸、肽、多肽或蛋白质序列的单独取代、删除或添加是其中改变会引起氨基酸被化学上类似的氨基酸取代的“经过保守修饰的变体”。提供功能上类似的氨基酸的保守取代表在本领域中是众所周知的。此类保守修饰的变体是本发明的多态性变异提、种间同系物和等位基因的补充，并且不排除本发明的多态性变体、种间同源物和等位基因。
以下八个基团各自含有作为彼此的保守取代的氨基酸：
1)丙氨酸(A)、甘氨酸(G)；
2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；
3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；
4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；
5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)；
6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)；
7)丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；以及
8)半胱氨酸(C)、甲硫氨酸(M)
(参见，例如，Creighton，《蛋白质(Proteins)》(1984年))。
“序列同一性百分比”是通过在比较窗口之上比较两个最佳比对的序列确定的，其中，比较窗口中的聚核苷酸序列或多肽序列的部分可以包括如相比于用于两个序列的最佳比对的参考序列(其不包括添加或删除)的添加或删除(即，间隙)。百分比通过以下方式来计算：确定两个序列中出现相同核酸碱基或氨基酸残基的位置数以得到匹配的位置数，将匹配的位置数除以比较窗口中的总位置数并且将结果乘以100以得到序列同一性百分比。
术语“一致”或“一致性”百分比在两个或更多个核酸或多肽序列的情形下是指两个或更多个序列或子序列当在比较窗或指定区域上根据最大一致性比较且比对时，具有相同的氨基酸残基或核苷酸或具有指定百分比的相同氨基酸残基或核苷酸(即在例如本发明的整个多肽序列或本发明的多肽的单域的特定区域上，60％同一性，任选地65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性)的两个或更多个序列或子序列。此类序列随后被称为“基本上相同”。此定义还涉及或可以应用于测试序列的互补物。任选地，同一性存在于长度至少约50个核苷酸的区域上，或更优选地存在于长度为100-500个或1000个或更多个核苷酸的区域上。本发明包括与SEQ ID NO:7-12或SEQ ID NO:44-49中的任一个基本相同的多肽。
对于序列比较来说，通常一个序列充当测试序列所比较的参考序列。当使用序列比较算法时，将测试和参考序列输入计算机中，必要时指定子序列坐标，并指定序列算法程序参数。可以使用默认程序参数，或者可以指定可选参数。随后，序列比较算法根据程序参数计算测试序列相对于参考序列的序列同一性百分比。
如本文所用，“比较窗”包括提及多个连续位置中的任一种的区段，其选自由以下组成的群组：例如全长序列或20到600、约50到约200、或约100到约150个氨基酸或核苷酸，其中在两个序列最佳比对之后，可以将一种序列与具有相同数目个连续位置的参考序列进行比较。用于比较的序列比对方法在本领域是众所周知的。为比较可以进行序列的最佳对齐，例如，通过Smith和Waterman(1970年)《应用数学进展(Adv.Appl.Math.)》2:482c的局部同源性算法；通过Needleman和Wunsch(1970年)《分子生物学期刊(J.Mol.Biol.)48:443》的同源性比对算法，通过Pearson和Lipman(1988年)《美国科学院院刊(Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA)》85:2444的相似性搜索方法、通过这些算法的计算机实现(威斯康辛遗传学软件包(Wisconsin Genetics Software Package)中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，遗传学计算机组(Genetics Computer Group)，575科学(Science)，Madison博士、WI)，或者通过手动比对和目测观察(参见，例如，Ausubel等人，《分子生物学的当前进展(CurrentProtocols in Molecular Biology)》(1995年增刊)。
适用于确定序列同一性和序列相似性百分比的算法实例是BLAST和BLAST 2.0算法，Altschul等人(1977年)在《核酸研究(Nuc.Acids Res.)》25:3389-3402以及Altschul等人(1990年)在《分子生物学期刊(J.Mol.Biol.)》215:403-410中对这些算法分别进行了描述。用于进行BLAST分析的软件可通过美国国家生物技术信息中心(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)公开获得。此算法涉及通过识别查询序列中长度为W的短字来首先识别高评分序列对(HSP)，所述短字当与数据库序列中相同长度的字比对时匹配或满足某些正值阈值评分T。T称作临近字分数阈值(Altschul等人，同上)。这些初始邻近字命中点充当启动检索以找到含有其的更长HSP的种子。字命中点沿每一序列在两个方向上延伸，直到可以增加累积比对评分为止。对于核苷酸序列来说，累积评分使用参数M(一对匹配残基的奖励评分；始终>0)和N(失配残基的惩罚评分；始终<0)来计算。对于氨基酸序列，使用计分矩阵计算累积评分。当累积比对评分从其达到的最大值降低量X；累积评分因一次或多次负分残基比对的累积而变成零或低于零；或到达任一序列的末端时，中断字命中点在各方向上的延伸。BLAST算法参数W、T和X确定比对的灵敏度和速度。BLASTN程序(针对核苷酸序列)使用字长(W)为11、期望值(E)为10、M＝5、N＝-4、以及双链比较值作为默认参数。对于氨基酸序列来说，BLASTP程序使用以下默认参数：字长为3、期望值(E)为10、以及BLOSUM62计分矩阵(参见Henikoff和Henikoff(1989年)《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》89:10915比对值(B)为50、期望值(E)为10、M＝5、N＝-4和双链比较值。
BLAST算法还进行两个序列之间相似性的统计分析(参见，例如，Karlin和Altschul(1993年)《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》90:5873-5787。由BLAST算法提供的一种类似性度量是最小和概率(P(N))，其提供对两个核苷酸或氨基酸序列之间将偶然发生匹配的概率的指示。举例来说，如果测试核酸与参考核酸的比较中最小和概率约低于0.2，更优选地约低于0.01，并且最优选地约低于0.001，则认为核酸类似于参考序列。
两个核酸序列或多肽基本相同的指示是由第一核酸编码的多肽与针对由第二核酸编码的多肽产生的抗体具有免疫交叉反应性，如下文所述。因此，多肽通常与第二多肽基本上相同，例如，其中两种肽仅通过保守取代而不同。两个核酸序列基本上一致的另一个指示是，两个分子或其互补序列在严格条件下彼此杂交，如下文所述。两个核酸序列基本相同的又一个指示是，相同引物可以用于扩增序列。
抗体中的氨基酸残基在其占据抗体内与给定残基相同的基本结构位置时，"对应"于该给定残基。例如，当选定残基占据与如使用本领域的适用方法所评估的Kabat位置48相同的基本空间或结构关系时，比对抗体中的选定残基对应于本文提供的抗体中的位置48(根据本文所述的Kabat编号系统)。例如，比对抗体可与本文提供的抗体进行最大序列同源性比对，并且与Kabat位置48相匹配的对齐比较抗体中的位置可被确定为与之对应。或者，代替(或除了)如上所述的一级序列比对，还可以使用三维结构比对，例如，其中将比对抗体的结构与本文提供的抗体进行最大对应性比对，并且与整体结构进行比对。在这种情况下，在结构模型中占据与Kabat位置48相同的基本位置的氨基酸被称为对应于。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换地使用以指氨基酸残基聚合物，其中所述聚合物可以与不由氨基酸组成的部分缀合。所述术语适用于其中一个或多个氨基酸残基是对应天然存在的氨基酸的人造化学模拟物的氨基酸聚合物，以及适用于天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。“融合蛋白”是指编码重组表达为单个部分的两个或更多个单独的蛋白序列的嵌合蛋白。“重组蛋白”是指可以由重组DNA的表达产生的蛋白质。
术语“肽基”和“肽基部分”是指单价肽。
抗体是具有复杂内部结构的大而复杂的分子(分子量为～150,000Da或约1320个氨基酸)。天然抗体分子包括两对相同的多肽链，每对具有一条轻链和一条重链。每条轻链和重链依次由两个区域组成：与靶抗原结合的可变(“V”)区，和与免疫系统的其他组分相互作用的恒定(“C”)区。轻链和重链可变区在三维空间中结合在一起以形成结合抗原(例如，细胞表面上的受体)的可变区。在每个轻链或重链可变区内，有三个称之为互补性决定区(“CDR”)的短链段(平均长度为10个氨基酸)。抗体可变域中的六个CDR(三个来自轻链，三个来自重链)在三维空间中折叠在一起，以形成对接在靶抗原(抗原表位)上的实际抗体结合位点(互补位)。CDR的位置和长度已由Kabat等人在《具有免疫学意义的蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)》(美国卫生与公共服务部，1983年、1987年)中进行了精确定义。CDR中未包括的可变区部分称为框架(“FR”)，其形成了CDR的环境。
如本文所提供的“抗体变体”是指能够结合抗原并且包括抗体或其片段的一个或多个结构域(例如，轻链可变域、重链可变域)的多肽。抗体变体的非限制性实例包括单域抗体或纳米抗体、单特异性Fab2、双特异性Fab2、三特异性Fab3、单价IgG、scFv、双特异性双抗体、三特异性三抗体、scFv-Fc、小抗体、IgNAR、V-NAR、hcIgG、VhH或肽体。如本文提供的“肽体”是指(通过共价或非共价连接子)附接至抗体的Fc域的肽部分。本领域已知的抗体变体的其他非限制性实例包括由软骨鱼或骆驼科动物产生的抗体。骆驼科动物的抗体及其可变区及它们的产生、分离和使用方法的一般描述可在参考文献WO97/49805和WO 97/49805中找到，通过引用将其整体并入本文中，并用于所有目的。同样，软骨鱼的抗体及其可变区及它们的产生、分离和使用的方法可在WO2005/118629中找到，通过引用将其整体并入本文中，并用于所有目的。
术语“双特异性T细胞衔接子(BiTE)”、“BiTe”或“双特异性抗体”是根据其在本领域众所周知的常规含义来使用的，指的是能够结合两种不同抗原的双特异性重组蛋白。例如，同时。与传统的单克隆抗体不同，BiTE抗体由两个独立不同的抗体区(例如，两个单链可变片段(scFv))组成，每个抗体区结合的抗原均不同。一个抗体区可通过结合效应细胞特异性抗原(例如，CD3分子)来接合效应细胞(例如，T细胞)，并且第二抗体区可通过所述靶细胞表达的细胞表面抗原(例如，BAFF-R)来结合靶细胞(例如，癌细胞或自身免疫反应性细胞)。BiTE与两种抗原结合，将效应细胞(例如，T细胞)连接到靶细胞(例如，肿瘤细胞)并通过效应细胞特异性抗原信号(例如，CD3信号)来激活效应细胞(例如，T细胞)。激活的效应细胞(例如，T细胞)随后将对靶细胞(例如，肿瘤细胞)施加细胞毒性活性。
本文提供的术语“CDR L1”、“CDR L2”和“CDR L3”是指抗体可变轻链(L)的互补性决定区(CDR)1、2和3。在实施例中，本文提供的可变轻链在N端至C端的方向上包括CDR L1、CDR L2和CDR L3。本文提供的术语“CDR H1”、“CDR H2”和“CDR H3”是指抗体可变重链(H)的互补性决定区(CDR)1、2和3。在实施例中，本文提供的可变重链在N端至C端的方向上包括CDR H1、CDR H2和CDR H3。
如本文提供的术语“FR L1”、“FR L2”、“FR L3”和“FR L4”根据其在本领域中的共同含义使用，并指抗体的可变轻(L)链的框架区(FR)1、2、3和4。在实施例中，本文提供的可变轻链在N端到C端的方向上包括FR L1、FR L2、FR L3和FR L4。同样，本文所提供的术语“FRH1”、“FR H2”、“FR H3”和“FR H4”是根据其在本领域中的共同含义使用的，并是指抗体的可变重(H)链的框架区(FR)1、2、3和4。在实施例中，本文提供的可变重链在N端到C端的方向上包括FR H1、FR H2、FR H3和FR H4。
根据其在通常已知的含义使用术语“抗体”。抗体，例如，以完整的免疫球蛋白形式存在或以各种肽酶消化产生的许多充分表征的片段形式存在。因此，例如，胃蛋白酶消化铰链区中二硫键下方的抗体以产生F(ab)'2，其为Fab的二聚体，本身为通过二硫键与VH-CH1连接的轻链。F(ab)'2可以在温和的条件下还原以破坏铰链区中的二硫键，从而将F(ab)'2二聚体转化为Fab'单体。Fab'单体基本上为具有铰链区的一部分的Fab(参见《基础免疫学(Fundamental Immunology)》(Paul编辑，第3版，1993年)。尽管就完整抗体的消化而言定义了各种抗体片段，但是本领域技术人员将理解，可以化学方式或通过使用重组DNA方法从头合成此类片段。因此，如本文所使用的术语抗体还包括通过修饰完整抗体产生的抗体片段，或使用重组DNA方法从头合成的抗体片段(例如，单链Fv)或使用噬菌体展示文库识别的抗体片段(参见，例如，McCafferty等人，《自然(Nature)》348:552-554(1990年))。
示例性免疫球蛋白(抗体)结构单元包括四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链组成，每对多肽链有一个“轻”(约25kd)链和一个“重”链(约50-70kd)。每条链的N端定义了约100-110个或更多个氨基酸的可变区，其主要负责抗原识别。术语可变轻链(VL)或轻链可变区和可变重链(VH)或重链可变区分别指轻链和重链区。本文提及的术语可变轻链(VL)和轻链可变区可以互换使用。本文所提及的术语可变重链(VH)和重链可变区可以互换使用。Fc(即，可结晶片段区)是免疫球蛋白的“基部”或“尾部”，且通常由两条重链组成，所述两条重链根据抗体的种类提供两个或三个恒定域。通过与特定蛋白质结合，Fc区域可确保每种抗体针对给定的抗原产生适当的免疫应答。Fc区域还与各种细胞受体(比如Fc受体)和其他免疫分子(比如补体蛋白)结合。
单链可变片段(scFv)通常是利用10至约25个氨基酸的短连接肽连接的免疫球蛋白的重链(VH)和轻链(VL)可变区的融合蛋白。连接子通常可富含甘氨酸以提高柔韧性，以及丝氨酸或苏氨酸以提高溶解度。连接子可以将VH的N端与VL的C端相连，反之亦然。
如本文提供的术语“抗原”是指能够结合本文提供的抗体结合域的分子。如本文提供的“抗原结合域”是与抗原(表位)结合的抗体区。如上所述，抗原结合域通常由每条重链和轻链的一个恒定域和一个可变域(分别为CH、CL、VH以及VL)组成。互补位或抗原结合位点形成于抗原结合域的N端。抗原结合域的两个可变域通常与抗原上的表位结合。
为了制备单克隆或多克隆抗体，可以使用本领域已知的任何技术(参见，例如，Kohler和Milstein，《自然(Nature)》256:495-497(1975年)；Kozbor等人，《今日免疫学(Immunology Today)》4:72(1983年)；Cole等人，《单克隆抗体和癌症治疗(MonoclonalAntibodies and Cancer Therapy)》第77-96页(1985年)。“单克隆”抗体(mAb)是指来源于单个克隆的抗体。产生单链抗体的技术(美国专利第4,946,778号)可适于产生针对本发明多肽的抗体。同样，转基因小鼠或其他生物(比如其他哺乳动物)也可用于表达人源化抗体。可选地，噬菌体展示技术可以用于鉴定特异性结合所选抗原的抗体和异源Fab片段(参见，例如，McCafferty等人，《自然(Nature)》348:552-554(1990年)；Marks等人，《生物技术(Biotechnology)》10:779-783(1992年)。
mAb的表位是mAb与抗原结合的区域。如果两种抗体中的每种竞争性地抑制(阻断)另一种抗体与抗原的结合，则两种抗体会结合到相同或重叠的表位上。也就是说，如在竞争性结合测定中测定的，1x、5x、10x、20x或100x过量的一种抗体将另一种抗体的结合抑制至少30％，但优选为50％、75％、90％或甚至99％(参见，例如，Junghans等人，《癌症研究(Cancer Res.)》50:1495，1990年)。或者，如果抗原中基本上所有减少或消除一种抗体的结合的氨基酸突变均减少或消除了另一种抗体的结合，则两种抗体具有相同的表位。如果减少或消除一种抗体的结合的一些氨基酸突变减少或消除了另一种抗体的结合，则两种抗体具有重叠的表位。
如本文提供的包括其实施例在内的“抗体区”是指形成本文提供的蛋白质的一部分并且能够结合抗原(表位)的单价或多价蛋白质部分。本文提供的抗体区可包括抗体域或其片段域(例如，Fab)。因此，抗体区可以包括轻链可变域(VL)和/或重链可变域(VH)。在实施例中，本文提供的抗体区包括轻链可变(VL)域。在实施例中，抗体区是轻链可变(VL)域。
如本文提供的“轻链可变(VL)域”是指抗体、抗体变体或其片段的轻链可变区。同样地，如本文提供的“重链可变(VH)域”是指抗体、抗体变体或其片段的重链可变区。轻链可变域和重链可变域一起形成结合抗原(表位)的互补位。互补位或抗原结合位点形成于抗体、抗体变体或其片段的N端。在实施例中，轻链可变(VL)域包括抗体轻链的CDR L1、CDRL2、CDR L3和FR L1、FR L2、FR L3和FR L4(框架区)。在实施例中，重链可变(VH)域包括抗体重链的CDR H1、CDR H2、CDR H3和FR H1、FR H2、FR H3和FR H4(框架区)。在实施例中，轻链可变(VL)域和轻链恒定(CL)域形成抗体轻链的一部分。在实施例中，重链可变(VH)域和重链恒定(CH1)域形成抗体重链的一部分。在实施例中，重链可变(VH)域和一个或多个重链恒定(CH1、CH2或CH3)域形成抗体重链的一部分。因此，在实施例中，轻链可变(VL)域形成抗体的一部分。在实施例中，重链可变(VH)域形成抗体的一部分。在实施例中，轻链可变(VL)域形成治疗性抗体的一部分。在实施例中，重链可变(VH)域形成治疗性抗体的一部分。在实施例中，轻链可变(VL)域形成人源性抗体的一部分。在实施例中，重链可变(VH)域形成人源性抗体的一部分。在实施例中，轻链可变(VL)域形成人源化抗体的一部分。在实施例中，重链可变(VH)域形成人源化抗体的一部分。在实施例中，轻链可变(VL)域形成嵌合抗体的一部分。在实施例中，重链可变(VH)域形成嵌合抗体的一部分。在实施例中，轻链可变(VL)域形成抗体片段的一部分。在实施例中，重链可变(VH)域形成抗体片段的一部分。在实施例中，轻链可变(VL)域形成抗体变体的一部分。在实施例中，重链可变(VH)域形成抗体变体的一部分。在实施例中，轻链可变(VL)域形成Fab的一部分。在实施例中，重链可变(VH)域形成Fab的一部分。在实施例中，轻链可变(VL)域形成scFv的一部分。在实施例中，重链可变(VH)域形成scFv的一部分。在实施例中，轻链可变(VL)域形成双特异性抗体的一部分。在实施例中，重链可变(VH)域形成双特异性抗体的一部分。
当将术语“分离”用于核酸或蛋白质时，是指该核酸或蛋白质基本上不含在自然状态下与其缔合的其他细胞组分。尽管它可以处于干溶液中，也可以处于水溶液中，但最好是处于均质状态。纯度和均质性通常使用分析化学技术(比如，聚丙烯酰胺凝胶电泳或高效液相色谱法)来确定。制剂中存在的主要蛋白质基本上得以纯化。术语“纯化”表示蛋白质在电泳凝胶中基本上只产生一条带。特别地，这意味着蛋白质的纯度至少为85％，更优选地至少为95％，且最优选至少为99％。
当涉及蛋白质或肽时，短语“特异性(或选择性地)结合”抗体或“与...特异性(或选择性地)起免疫反应”是指在蛋白质和其他生物制剂的异质群体中确定蛋白质存在的结合反应。因此，在指定的免疫分析条件下，特定抗体结合至少是背景两倍的特定蛋白质，并且基本上不与样品中存在的其他蛋白质结合。典型地，特定或选择性反应至少是背景信号或噪声的两倍，更典型地是超过背景信号或噪声的10到100倍。
“人源化抗体”是将小鼠抗体(“供体抗体”，其也可以是大鼠、仓鼠或其他非人类物种)的至少一个CDR(或其功能片段)接枝到人源性抗体(“受体抗体”)上的基因工程抗体。在实施例中，移植了不止一个小鼠CDR(例如，共移植了六个小鼠CDR)。受体抗体的序列可以是，例如，成熟的人源性抗体(或其片段)、人源性抗体序列(或其片段)的共有序列或种系区序列(或其片段)。因此，人源化抗体可以是具有供体抗体的一个或多个CDR和可变区框架(FR)的抗体。FR可以形成人源性抗体内的恒定区和/或可变区的一部分。此外，为了保持结合亲和力高，人类受体序列中的氨基酸可由供体序列的相应氨基酸替换，例如，其中：(1)氨基酸在CDR中或(2)氨基酸在人类框架区中(例如，氨基酸紧邻其中一个CDR)。参见通过引用并入本文的美国专利第5,530,101号和第5,585,089号，其详细说明了如何构建人源化抗体。尽管人源化抗体通常包括小鼠抗体的共六个CDR(例如，如由Kabat定义，但通常也包括如Chothia定义的高变环H1)，但是它们也可以用较少小鼠CDR和/或少于完整的小鼠CDR序列(例如，CDR的功能片段)来制备(例如，Pascalis等人，《免疫学杂志(J.Immunol.)》169:3076，2002年；Vajdos等人，《分子生物学杂志(Journal of Molecular Biology)》320:415-428，2002年；Iwahashi等人，《分子免疫学(Mol.Immunol.)》36:1079-1091，1999年；Tamura等人，《免疫学杂志(Journal of Immunology)》164:1432-1441，2000年)。
通常，如本文提供的人源化抗体可包括(i)轻链可变区，其包括小鼠抗体(在本文中也称为小鼠CDR)的至少一个CDR(通常为三个CDR)和人类可变区框架；以及(ii)重链可变区，其包括小鼠抗体的至少一个CDR(通常是三个CDR)和人类可变区框架(FR)。轻链和重链可变区框架(FR)可以分别是成熟的人源性抗体可变区框架序列(或其片段)、种系可变区框架序列(与J区序列组合)(或其片段)，或人源性抗体可变区框架序列(或其片段)的共有序列。在实施例中，人源化抗体包括如(i)所述的轻链可变区、如(ii)所述的重链可变区以及轻链人源化恒定区和重链人源化恒定区。
设计人源化抗体的其他方法也可用于实现与上述美国专利第5,530,101号和第5,585,089号中的方法相同的结果，例如，“超人源化”(参见，Tan等人，《免疫学杂志(J.Immunol.)》169:1119，2002年，以及美国专利第6,881,557号)或Studnicak等人所著的《蛋白质工程》7:805(1994年)中的方法。此外，制备基因工程的、免疫原性降低的mAb的其他方法包括“重塑”、“超嵌合”和贴面/表面再塑，例如，Vaswami等人，《过敏、哮喘和免疫学年刊(Annals of Allergy,Asthma and Immunology)》81:105(1998年)；Roguska等人，《蛋白质工程(Protein Eng.)》，9:895(1996年)；以及美国专利第6,072,035号和第5,639,641号所述。
“配体”指的是一种能够与受体分子(例如，抗体)结合的物质，如多肽或其他分子。
“接触”是根据其普通常规含义使用，并且是指使至少两个不同物种(例如，包括生物分子或细胞的化学化合物)能够足够近地发生反应、相互作用或物理触摸的过程。然而，应当理解，所得反应产物可以直接由添加试剂之间的反应产生，或者由可以在反应混合物中产生的一种或多种添加试剂的中间体产生。
术语“接触”可包括允许两种物种发生反应、相互作用或物理接触，其中所述两种物种可为例如本文所述的抗体和BAFF-R蛋白。在实施例中，所述接触包括，例如，允许本文所述的人源化抗体与BAFF-R相互作用。
如本文所用的“细胞”是指执行足以保持或复制其基因组DNA的代谢或其他功能的细胞。细胞可以通过本领域的公知方法来识别，所述方法包括：例如，存在完整膜、利用特定染料染色、繁殖后代的能力，或者如有配子，与第二配子结合产生可存活子代的能力。细胞可以包括原核细胞和真核细胞。原核细胞包括但不限于细菌。真核细胞包括但不限于酵母细胞和来源于动植物的细胞，例如哺乳动物、昆虫(例如，斜纹夜蛾)和人体细胞。
如本文所定义的，关于蛋白质-抑制剂相互作用的术语“抑制(inhibition/inhibit/inhibiting等)”意指，相对于在不存在抑制剂的情况下蛋白质的活性或功能，对蛋白质的活性或功能产生负面影响(例如，降低)。在实施例中，抑制是指减轻疾病(例如，癌症或自身免疫性疾病)症状。因此，抑制至少部分地包括部分或完全阻断刺激、降低、预防或延迟活化、或失活、脱敏或下调信号转导或酶活性或蛋白质的量。类似地，“抑制剂”是抑制活性的化合物或蛋白质，例如通过结合、部分或全部阻断、减少、阻止、延迟、失活、脱敏或下调活性)。
术语“疾病”或“病状”是指能够用本文提供的化合物、药物组合物或方法治疗的患者或受试者的状态或健康状况。在实施例中，该疾病为癌症(例如，肺癌、卵巢癌、骨肉瘤、膀胱癌、宫颈癌、肝癌、肾癌、皮肤癌(例如，默克尔细胞癌)、睾丸癌、白血病、淋巴瘤、头颈癌、结直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、黑素瘤、乳腺癌、神经母细胞瘤)。该病可能为自身免疫性疾病、炎症、癌症、传染病、代谢病、发育异常病、心血管病、肝病、肠病、内分泌疾病、神经系统疾病或其他疾病。
如本文所用，术语“癌症”是指在哺乳动物中发现的所有癌症、肿瘤或恶性肿瘤，包括白血病、淋巴瘤、黑素瘤、神经内分泌肿瘤、癌瘤和肉瘤。可以用本文提供的化合物、药物组合物或方法治疗的示例性癌症包括：淋巴瘤、肉瘤、膀胱癌、骨癌、脑瘤、宫颈癌、结肠癌、食道癌、胃癌、头颈癌、肾癌、骨髓瘤、甲状腺癌、白血病、前列腺癌、乳腺癌(例如，三阴性、ER阳性、ER阴性、化疗抗性、赫赛汀抗性、HER2阳性、阿霉素抗性、他莫苷芬抗性、导管癌、小叶癌、原发性、转移性)、卵巢癌、胰腺癌、肝癌(例如，肝细胞癌)、肺癌(例如，非小细胞肺癌、鳞状细胞肺癌、腺癌、大细胞肺癌、小细胞肺癌、类癌、肉瘤)、多形性胶质母细胞瘤、神经胶质瘤、黑色素瘤、前列腺癌、去势抵抗性前列腺癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌、胶质母细胞瘤、卵巢癌、肺癌、鳞状细胞癌(例如，头、颈或食管)、结肠直肠癌、白血病、急性髓性白血病、淋巴瘤、B细胞淋巴瘤或多发性骨髓瘤。其他实例包括甲状腺癌、内分泌系统癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、头颈癌、食道癌、肝癌、肾癌、肺癌、非小细胞肺癌、黑色素瘤、间皮瘤、卵巢癌、肉瘤、胃癌、子宫癌或髓母细胞瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、卵巢癌、横纹肌肉瘤、原发性血小板增多症、原发性巨球蛋白血症、原发性脑肿瘤、癌症、恶性胰岛细胞瘤、恶性类癌、膀胱癌、癌前皮肤病变、睾丸癌、淋巴瘤、甲状腺癌、神经母细胞瘤、食道癌、泌尿生殖道癌、恶性高钙血症、子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、内分泌或外分泌胰腺肿瘤、甲状腺髓样癌、甲状腺髓质癌、黑色素瘤、结肠直肠癌、甲状腺乳头状癌、肝细胞癌、乳头佩吉特病、叶状肿瘤、小叶癌、导管癌、胰腺星状细胞癌、肝星状细胞癌或前列腺癌。
术语“白血病”泛指造血器官的渐进性、恶性疾病，一般来说其特征是血液和骨髓中的白细胞及其前体的增殖和发育畸变。白血病的临床分类一般是依据以下内容：(1)疾病的持续时间和特征——急性的或慢性的；(2)涉及细胞的类型；髓系(骨髓性的)、淋巴系(淋巴性的)或单核细胞系；以及(3)白血病或白细胞缺乏症(亚白血性)的血液中异常细胞数量的增长或不增长。可以用本文所提供的化合物、药物组合物或方法治疗的示例性白血病包括，例如，急性非淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、成人T细胞白血病、非白血性白血病、白血性白血病、嗜碱细胞性白血病、母细胞白血病、牛白血病、慢性髓细胞性白血病、皮肤白血病、胚胎性白血病、嗜酸性粒细胞白血病、格罗氏白血病、毛细胞白血病、成血细胞性白血病、成血细胞性白血病、组织细胞性白血病、干细胞白血病、急性单核细胞白血病、白细胞减少性白血病、淋巴性白血病、成淋巴细胞性白血病、淋巴细胞性白血病、淋巴球性白血病、淋巴样白血病、淋巴肉瘤细胞白血病、肥大细胞白血病、巨核细胞性白血病、微成髓细胞性白血病、单核细胞性白血病、成髓细胞性白血病、髓细胞性白血病、髓样粒细胞性白血病、髓单核细胞白血病、内格利氏白血病、浆细胞白血病、多发性骨髓瘤、浆细胞性白血病、早幼粒细胞白血病、里德尔氏细胞白血病、希林氏白血病、干细胞白血病、亚白血病性白血病和未分化细胞白血病。
如本文所使用，术语“转移”、“转移性”和“转移性癌症”可互换使用，并且是指代增殖性疾病或病症(例如，癌症)从一个器官向另一个不相邻的器官或身体部分扩散。癌症发生在原发部位，例如，乳腺部位被称为原发性肿瘤，例如原发性乳腺癌。原发性肿瘤或原发部位中的一些癌细胞具有穿透和浸润局部区域周围正常组织的能力，和/或穿透淋巴系统或通过系统循环的血管系统的壁至身体内的其他部位和组织的能力。由原发性肿瘤的癌细胞形成的第二种临床上可检测的肿瘤被称为转移性或继发性肿瘤。当癌细胞转移时，推测转移性肿瘤及其细胞与原发性肿瘤相似。因此，如果肺癌转移到乳腺，则乳腺部位的继发性肿瘤由异常的肺细胞而非异常的乳腺细胞组成。乳房中的继发性肿瘤是指转移性肺癌。因此，短语转移性癌症是指其中受试者患有或曾经患有原发性肿瘤并患有一种或多种继发性肿瘤的疾病。短语非转移性癌症或患有非转移性癌症的受试者是指对象患有原发性肿瘤但未患有一种或多种继发性肿瘤的疾病。举例来说，转移性肺癌是指受试者患有原发性肺肿瘤或具有原发性肺肿瘤的病史，且在例如乳房中第二位置或多个位置处具有一种或多种继发性肿瘤的疾病。
术语“相关”或“与......相关”在与疾病(例如，癌症(例如，白血病、淋巴瘤、B细胞淋巴瘤或多发性骨髓瘤))相关的物质或物质活性或功能的情形下，是指疾病(例如，癌症，(例如，白血病、淋巴瘤、B细胞淋巴瘤)，或多发性骨髓瘤)是由(全部或部分)物质或物质活性或功能引起的，或疾病的症状是由(全部或部分)物质或物质活性或功能引起的。
如本文所用，术语“自身免疫性疾病”是指受试者的免疫系统对通常不会在健康受试者中引发免疫应答的物质具有异常免疫应答的疾病或病症。可使用本文所述的化合物、药物组合物或方法治疗的自身免疫性疾病的实例包括急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、急性坏死出血性脑白质炎、爱迪生氏病、无丙种球蛋白血症、斑秃、淀粉样变病、强直性脊柱炎、抗GBM/抗TBM肾炎，抗磷脂综合征(APS)、自身免疫性血管水肿、自身免疫性再生障碍性贫血、自身免疫性自主失调、自身免疫性肝炎、自身免疫性高脂血症、自身免疫性免疫缺陷、自身免疫性内耳病(AIED)、自身免疫性心肌炎、自身免疫性卵巢炎、自身免疫性胰腺炎、自身免疫性视网膜病变，自身免疫性血小板减少性紫癜(ATP)、自身免疫性甲状腺疾病、自身免疫性荨麻疹、轴突或神经病变、巴洛病、白塞病、大疱性类天疱疮、心肌病、卡斯特曼病、腹腔疾病、恰加斯病、慢性疲劳综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)，慢性复发性多灶性骨髓炎(CRMO)、变应性肉芽肿性血管炎、瘢痕性类天疱疮/良性粘膜类天疱疮、克罗恩病、柯根综合症、冷凝集素病、先天性心脏传导阻滞、柯萨奇心肌炎、克雷斯特病、原发性混合冷球蛋白血症、脱髓鞘神经病变、疱疹样皮炎、皮肌炎、德维克病(视神经脊髓炎)、盘状狼疮、德勒斯勒综合症、子宫内膜异位症、嗜酸性食管炎、嗜酸性筋膜炎、结节性红斑、实验性变态反应性脑脊髓炎、伊文氏综合征、纤维肌痛、纤维性肺泡炎、巨细胞动脉炎(颞动脉炎)、巨细胞心肌炎，肾小球肾炎、肺出血肾炎综合征、肉芽肿并多发性血管炎(GPA)(以前称为韦格纳肉芽肿)、格里夫氏症、格林-巴利综合征、桥本脑炎、桥本甲状腺炎、溶血性贫血、过敏性紫癜、疱疹妊娠、低丙种球蛋白血症、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、IgA肾病、IgG4相关硬化性疾病、免疫调节性脂蛋白、包涵体肌炎、间质性膀胱炎、青少年关节炎、青少年糖尿病(1型糖尿病)、青少年肌炎、川崎综合征、肌无力综合征、白细胞破坏性血管炎、扁平苔藓，硬化性苔藓、木质结膜炎、线性IgA病(LAD)、狼疮(SLE)、莱姆病、慢性梅尼埃病、显微镜下多发性血管炎、混合性结缔组织病(MCTD)、莫伦氏溃疡、穆-哈二氏病、多发性硬化、重症肌无力、肌炎、嗜睡症、视神经脊髓炎(Devic's)、中性粒细胞减少症，眼部瘢痕性类天疱疮、视神经炎、复发性风湿病、熊猫(与链球菌相关的儿童自身免疫性神经精神疾病)、副肿瘤性小脑变性、阵发性夜间血红蛋白尿(PNH)、帕里-隆伯格综合征、帕森纳格-特纳综合征、扁平部(周围性葡萄膜炎)、天疱疮，周围神经病、静脉周围脑脊髓炎、恶性贫血、POEMS综合征、结节性多动脉炎、I型、II型和III型自身免疫性多发性腺体综合征、风湿性多肌痛、多发性肌炎、心肌梗死后综合征、心包切开后综合征、孕酮皮炎、原发性胆汁性肝硬化，原发性硬化性胆管炎、银屑病、银屑病性关节炎、特发性肺纤维化、坏疽性脓皮病、纯红细胞再生障碍、雷诺现象、反应性关节炎、反射性交感神经营养不良、雷特综合征、复发性多软骨炎、不宁腿综合征、腹膜后纤维化、风湿热、类风湿关节炎、，结节病、施密特综合征、巩膜炎、硬皮病、干燥综合征、精子和睾丸自身免疫、僵人综合征、亚急性细菌性心内膜炎(SBE)、苏萨克氏症候群、交感性眼炎、大动脉炎、颞动脉炎/巨细胞动脉炎、血小板减少性紫癜(TTP)、托洛萨—亨特综合征、横纹肌炎、1型糖尿病、溃疡性结肠炎、未分化结缔组织病(UCTD)、葡萄膜炎、血管炎、水泡性大疱性皮肤病、白癜风或韦格纳肉芽肿(即肉芽肿伴多血管炎(GPA))。
“B细胞”或“B淋巴细胞”是指它们在本领域中的标准用途。B细胞是淋巴细胞，一种发育成产生抗体的浆细胞(成熟的B细胞)的白血细胞(白血球)。“未成熟B细胞”是可以发育成成熟B细胞的细胞。通常，一般情况下，祖B细胞经过免疫球蛋白重链重排成为祖B前B细胞，再经过免疫球蛋白轻链重排成为未成熟B细胞。未成熟B细胞包括T1和T2 B细胞。
如本文所用的“T细胞”或“T淋巴细胞”是在细胞介导免疫中起中心作用的一种淋 巴细胞(亚型白血球)。通过细胞表面存在T细胞受体，可以将其与其他淋巴细胞(比如，B细胞和自然杀伤细胞)区分开来。T细胞包括，例如，自然杀伤T(NKT)细胞、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、调节性T细胞(Treg)和辅助性T细胞。不同类型的T细胞可以通过使用T细胞检测试剂来区分。
“记忆性T细胞”是指在先前感染、患癌或先前接种疫苗期间曾经遇到并对其同源抗原起反应的T细胞。在第二次遇到其同源抗原记忆T细胞时，其可以进行再生(分裂)以发起与第一次免疫系统对病原体的反应相比更快且更强的免疫反应。
“调节T细胞”或“抑制T细胞”是调节免疫系统、维持对自身抗原的耐受性并且预防自身免疫性疾病的淋巴细胞。
如本文所提供的术语“效应细胞配体”是指在免疫系统的效应细胞(例如，细胞毒性T细胞、辅助性T细胞、B细胞、自然杀伤细胞)上表达的细胞表面分子。当第一抗体区与在效应细胞上表达的效应细胞配体结合时，效应细胞被激活并且能够发挥其功能(例如，选择性地杀死或根除恶性的、受感染的或不健康的细胞)。在实施例中，效应细胞配体是CD3蛋白。在实施例中，效应细胞配体是CD16蛋白。在实施例中，效应细胞配体是CD32蛋白。在实施例中，效应细胞配体是NKp46蛋白。如本文提供的第一抗体区可以是抗体、抗体变体、抗体片段或抗体变体片段。
本文所提及的“CD3蛋白”包括重组或天然存在的分化簇3(CD3)蛋白质其变体或同源物中的任何一种，其包括介导信号转导并维持CD3复合物活性的CD3复合物(例如，与CD3复合物相比，至少具有50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性)。在一些方面，与CD3复合物中天然存在的CD3蛋白相比，变体或同源物在整个序列或一部分序列(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列一致性。
如本文所提及的“CD16蛋白”包括重组或天然存在的分化簇16(CD16)蛋白的任何形式，也称为低亲和力免疫球蛋白γFc区受体III-A，或维持CD16活性的其变体或同源物(例如，与CD16相比，至少具有50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性)。在一些方面，与天然存在的CD16蛋白相比，变体或同源物在整个序列或一部分序列(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列一致性。在实施例中，CD16蛋白与由UniProt参考编号P08637识别的蛋白质或与其基本一致的变体或同源物基本上一致。
如本文所提及的“CD32蛋白”包括重组或天然存在的分化簇32(CD32)蛋白的任何形式，也称为低亲和力免疫球蛋白γFc区受体II-A，或维持CD32活性的其变体或同源物(例如，与CD32相比，至少具有50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性)。在一些方面，与天然存在的CD32蛋白相比，变体或同源物在整个序列或一部分序列(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列一致性。在实施例中，CD32蛋白与由UniProt参考编号P12318识别的蛋白质或与其基本一致的变体或同源物基本上一致。
如本文所提及的“NKp46蛋白”包括NKp46蛋白的任何重组或天然存在形式，也称为天然细胞毒性触发受体1，或维持NKp46活性的其变体或同源物(例如，与NKp46相比，至少具有50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性)。在一些方面，与天然存在的NKp46蛋白相比，变体或同源物在整个序列或一部分序列(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列一致性。在实施例中，NKp46蛋白与由UniProt参考编号O76036识别的蛋白质或与其基本一致的变体或同源物基本上一致。
如本文所提及的“BAFF-R”、“BAFF受体”或“BAFF-R蛋白”包括B细胞活化因子受体(BAFF-R)的任何重组或天然存在形式，也称为肿瘤坏死因子受体超家族成员13C(TNFRSF13C)或其保持BAFF-R活性的变体或同源物(例如，与BAFF-R相比，至少具有50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性)。在一些方面，与天然存在的BAFF-R相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如，50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施例中，BAFF-R与由UniProt参考编号Q96RJ3识别的蛋白质或与其基本一致的变体或同源物基本上一致。在实施例中，BAFF-R与由UniProt参考编号Q9D8D0识别的蛋白质或与其基本一致的变体或同源物基本上一致。在实施例中，BAFF-R与由NCBI参考编号GI:16445027识别的蛋白质或与其基本一致的变体或同源物基本上一致。在实施例中，BAFF-R与由NCBI参考编号GI:16306481识别的蛋白质或与其基本一致的变体或同源物基本上一致。
II.重组蛋白组合物
本文特别提供了一种重组蛋白(例如，双特异性抗体)，其能够通过结合效应细胞表达的抗原(例如，CD3)来结合BAFF-R和效应细胞。所述重组蛋白(例如，双特异性抗体)包括：(i)能够结合效应细胞配体(例如，CD3)的第一抗体区；以及(ii)能够结合第二抗体抗原(例如，人BAFF-R蛋白)并以高亲和力和特异性结合人BAFF-R蛋白的第二抗体区。本文提供的重组蛋白(例如，双特异性抗体)同时结合效应细胞(例如，效应T细胞上的CD3)上的抗原和B细胞上的BAFF-R，导致效应细胞(例如，T细胞)分离并杀死恶性或自身反应性B细胞。因此，本文提供的组合物和方法尤其可用于治疗癌症(例如，B细胞恶性肿瘤)或自身免疫性疾病。出于本发明的目的，本文提供的包括其实施例在内的第二抗体区包括公开的国际申请PCT/US2017/036178中描述的任一BAFF-R特异性抗体，且该申请特此通过引用并入本文并用于所有目的。例如，第二抗体区可包括本文中称为“H90 Ab”、“人源化C90”、“人源化C90-1”、“人源化C90-2”、“人源化C90-3”、“C90”、“C90-1”、“C90-2”或“C90-3”的任何人源化BAFF-R抗体。
一方面，一种重组蛋白，其包括：(i)能够结合效应细胞配体(例如，CD3)的第一抗体区；以及(ii)第二抗体区，其包括：(a)提供了轻链可变域和重链可变域。所述轻链可变域包括如SEQ ID NO:1所示的CDR L1、如SEQ ID NO:2所示的CDR L2和如SEQ ID NO:3所示的CDR L3。重链可变域包括如SEQ ID NO:4所示的CDR H1、如SEQ ID NO:5所示的CDR H2和如SEQ ID NO:6所示的CDR H3。在实施例中，第二抗体区结合BAFF-R蛋白或其片段。其中，如本文证明的CDR是由SEQ ID NO(例如，序列ID号1、2、3、4、5、6、38、38、40、41、42、43)所示，而且CDR具有该SEQ ID NO所指的序列。通常，如果序列是以特定SEQ ID NO的序列来阐述的，则所述序列具有所述SEQ ID NO所指序列的序列。
本文提供的重组蛋白可包括来源于不同抗体克隆(例如，C90-1、C90-2、C90-3、C55-1、C55-2、C55-3)的轻链和重链可变区，其包括相同的CDR和不同的FR(例如，C90-1、C90-2和C90-3)或不同的CDR(例如，C90克隆的CDR和C55克隆的CDR)。本文提供的包括其实施例在内的重组蛋白的第二抗体区可以是scFv。当第二抗体区为scFv时，第二抗体区可称为H90、C90-1、C90-2或C90-3，并包括如SEQ ID NO:1所示的CDR L1、如SEQ ID NO:2所示的CDR L2、如SEQ ID NO:3所示的CDR L3、如SEQ ID NO:4所示的CDR H1、如SEQ ID NO:5所示的CDR H2，以及SEQ ID NO:6所示的CDR H3。在实施例中，第二抗体区为scFv，被称为C55-1、C55-2或C55-3并包括如SEQ ID NO:38所示的CDR L1、如SEQ ID NO:39所示的CDR L2、如SEQID NO:40所示的CDR L3、如SEQ ID NO:41所示的CDR H1、如SEQ ID NO:42所示的CDR H2和如SEQ ID NO:43所示的CDR H3。
在实施例中，轻链可变域包括SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9的序列。在实施例中，轻链可变域包括SEQ ID NO:7的序列。在实施例中，轻链可变域包括SEQ IDNO:8的序列。在实施例中，轻链可变域包括SEQ ID NO:9的序列。在实施例中，轻链可变域是SEQ ID NO:7的序列。在实施例中，轻链可变域是SEQ ID NO:8的序列。在实施例中，轻链可变域是SEQ ID NO:9的序列。
在实施例中，重链可变域包括SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的序列。在实施例中，重链可变域包括SEQ ID NO:10的序列。在实施例中，重链可变域包括SEQID NO:11的序列。在实施例中，重链可变域包括SEQ ID NO:12的序列。在实施例中，重链可变域是SEQ ID NO:10的序列。在实施例中，重链可变域是SEQ ID NO:11的序列。在实施例中，重链可变域是SEQ ID NO:12的序列。
在实施例中，轻链可变域包括如SEQ ID NO:13所示的FR L1、如SEQ ID NO:14所示的FR L2、如SEQ ID NO:15所示的FR L3和如SEQ ID NO:16所示的FR L4。在实施例中，重链可变域包括如SEQ ID NO:25所示的FR H1、如SEQ ID NO:26所示的FR H2、如SEQ ID NO:27所示的FR H3和如SEQ ID NO:28所示的FR H4。
在实施例中，轻链可变域包括如SEQ ID NO:17所示的FR L1、如SEQ ID NO:18所示的FR L2、如SEQ ID NO:19所示的FR L3和如SEQ ID NO:20所示的FR L4。在实施例中，重链可变域包括如SEQ ID NO:29所示的FR H1、如SEQ ID NO:30所示的FR H2、如SEQ ID NO:31所示的FR H3和如SEQ ID NO:32所示的FR H4。
在实施例中，轻链可变域包括如SEQ ID NO:21所示的FR L1、如SEQ ID NO:22所示的FR L2、如SEQ ID NO:23所示的FR L3和如SEQ ID NO:24所示的FR L4。在实施例中，重链可变域包括如SEQ ID NO:33所示的FR H1、如SEQ ID NO:34所示的FR H2、如SEQ ID NO:35所示的FR H3和如SEQ ID NO:36所示的FR H4。
在实施例中，第二抗体区包括SEQ ID NO:7的轻链可变域和SEQ ID NO:10的重链可变区。在实施例中，第二抗体区是C90-1。在其它实施例中，第二抗体区包括SEQ ID NO:7的轻链可变域和SEQ ID NO:10的重链可变区。
在实施例中，第二抗体区包括SEQ ID NO:8的轻链可变域和SEQ ID NO:11的重链可变区。在实施例中，第二抗体区是C90-2。在其它实施例中，第二抗体区包括SEQ ID NO:8的轻链可变域和SEQ ID NO:11的重链可变区。
在实施例中，第二抗体区包括SEQ ID NO:9的轻链可变域和SEQ ID NO:12的重链可变区。在其它实施例中，第二抗体区是C90-3。在其它实施例中，第二抗体区包括SEQ IDNO:9的轻链可变域和SEQ ID NO:12的重链可变区。
一方面，一种重组蛋白，其包括：(i)能够结合效应细胞配体的第一抗体区；(ii)第二抗体区，其包括：(a)提供了轻链可变域和重链可变域。轻链可变域包括如SEQ ID NO:38所示的CDR L1、如SEQ ID NO:39所示的CDR L2和如SEQ ID NO:40所示的CDR L3。所述重链可变域包括如SEQ ID NO:41所示的CDR H1、如SEQ ID NO:42所示的CDR H2和如SEQ ID NO:43所示的CDR H3。
在实施例中，轻链可变域包括SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45或SEQ ID NO:46的序列。在实施例中，轻链可变域包括SEQ ID NO:44的序列。在实施例中，轻链可变域包括SEQID NO:45的序列。在实施例中，轻链可变域包括SEQ ID NO:46的序列。在实施例中，轻链可变域是SEQ ID NO:44的序列。在实施例中，轻链可变域是SEQ ID NO:45的序列。在实施例中，轻链可变域是SEQ ID NO:46的序列。
在实施例中，重链可变域包括SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48或SEQ ID NO:49的序列。在实施例中，重链可变域包括SEQ ID NO:47的序列。在实施例中，重链可变域包括SEQID NO:48的序列。在实施例中，重链可变域包括SEQ ID NO:49的序列。在实施例中，重链可变域是SEQ ID NO:47的序列。在实施例中，重链可变域是SEQ ID NO:48的序列。在实施例中，重链可变域是SEQ ID NO:49的序列。
在实施例中，轻链可变域包括如SEQ ID NO:50所示的FR L1、如SEQ ID NO:51所示的FR L2、如SEQ ID NO:52所示的FR L3和如SEQ ID NO:53所示的FR L4。在实施例中，重链可变域包括如SEQ ID NO:62所示的FR H1、如SEQ ID NO:63所示的FR H2、如SEQ ID NO:64所示的FR H3和如SEQ ID NO:65所示的FR H4。
在实施例中，轻链可变域包括如SEQ ID NO:54所示的FR L1、如SEQ ID NO:55所示的FR L2、如SEQ ID NO:56所示的FR L3和如SEQ ID NO:57所示的FR L4。在实施例中，重链可变域包括如SEQ ID NO:66所示的FR H1、如SEQ ID NO:67所示的FR H2、如SEQ ID NO:68所示的FR H3和如SEQ ID NO:69所示的FR H4。
在实施例中，轻链可变域包括如SEQ ID NO:58所示的FR L1、如SEQ ID NO:59所示的FR L2、如SEQ ID NO:60所示的FR L3和如SEQ ID NO:61所示的FR L4。在实施例中，重链可变域包括如SEQ ID NO:70所示的FR H1、如SEQ ID NO:71所示的FR H2、如SEQ ID NO:72所示的FR H3和如SEQ ID NO:73所示的FR H4。
在实施例中，第二抗体区包括SEQ ID NO:44的轻链可变域和SEQ ID NO:47的重链可变区。在实施例中，第二抗体区是C55-1。在其他实施例中，第二抗体区包括SEQ ID NO:44的轻链可变域和SEQ ID NO:47的重链可变区。
在实施例中，第二抗体区包括SEQ ID NO:45的轻链可变域和SEQ ID NO:48的重链可变区。在实施例中，第二抗体区是C55-2。在其他实施例中，第二抗体区包括SEQ ID NO:45的轻链可变域和SEQ ID NO:48的重链可变区。
在其他实施例中，第二抗体区包括SEQ ID NO:46的轻链可变域和SEQ ID NO:49的重链可变区。在实施例中，第二抗体区是C55-3。在其他实施例中，第二抗体区包括SEQ IDNO:46的轻链可变域和SEQ ID NO:49的重链可变区。
CDR和FR的位置可由Kabat编号系统定义(Kabat等人，《具有免疫学重要性的蛋白序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)》，第五版，美国卫生和公众服务部，美国政府印刷局(1991年))。同样，可由Kabat编号系统对人源化抗体的轻链和重链结合所需残基的位置进行定义。因此，结合在人源化抗体的轻链和重链内所需残基的位置，可以根据本领域公知的Kabat编号系统由残基位置来定义。如上所述，人源化抗体可以是具有供体抗体(例如，小鼠)的CDR和人源性抗体的可变区框架(FR)的抗体。框架区(FR)被认为在人源化抗体中保持了CDR的位置。从氨基末端开始，这些区域分别被指定为轻链的FR L1、FR L2、FR L3和FR L4以及重链的FR H1、FR H2、FR H3和FR H4。令人惊讶的是，本发明提供了重组蛋白(例如，双特异性抗体)，所述重组蛋白包括对第二抗体区表位结合很重要的框架区内的一个或多个残基。涉及(或对)表位结合(例如，BAFF-R结合)很重要的框架区残基在本文中被称为结合框架区残基。结合框架区残基可位于轻链可变域(即FR L1、FR L2、FRL3、FR L4)的框架区中，或者它们可位于重链可变域(即FR H1、FR H2、FR H3、FR H4)的框架中。位于轻链的FR L3区域中的结合框架残基在本文中被称为FR L3结合框架区残基。因此，位于重链的FR H3区域中的结合框架区残基在本文中称为FR H3结合框架区残基。
在实施例中，第二抗体区包括至少一个结合框架区残基。在实施例中，轻链可变域包括至少一个结合框架区残基。在实施例中，轻链可变域包括一个或多个FR L1、FR L2、FRL3或FR L4结合框架区残基。在实施例中，轻链可变域包括一个或多个FR L1结合框架区残基。在实施例中，轻链可变域包括一个或多个FR L2结合框架区残基。在实施例中，轻链可变域包括一个或多个FR L3结合框架区残基。在实施例中，轻链可变域包括一个或多个FR L4结合框架区残基。在实施例中，重链可变域包括一个或多个FR H1、FR H2、FR H3或FR H4结合框架区残基。在实施例中，重链可变域包括一个或多个FR H1结合框架区残基。在实施例中，重链可变域包括一个或多个FR H2结合框架区残基。在实施例中，重链可变域包括一个或多个FR H3结合框架区残基。在实施例中，重链可变域包括一个或多个FR H4结合框架区残基。
在实施例中，轻链可变域包括至少一个结合框架区残基(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50个或更多个残基)，并且重链可变域包括至少一个结合框架区残基(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36 37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50个或更多个残基)。抗体或抗体区内结合框架区残基的位置可由与CDR残基位置类似的Kabat编号系统来定义。
在实施例中，轻链可变域包括位于与Kabat位置7相对应的位置处的丝氨酸。在实施例中，轻链可变域包括位于与Kabat位置8相对应的位置处的脯氨酸。在实施例中，轻链可变域包括位于与Kabat位置15相对应的位置处的缬氨酸。在实施例中，轻链可变域包括位于与Kabat位置22相对应的位置处的苏氨酸。在实施例中，轻链可变域包括位于与Kabat位置24相对应的位置处的谷氨酰胺。在实施例中，轻链可变域包括位于与Kabat位置41相对应的位置处的甘氨酸。在实施例中，轻链可变域包括位于与Kabat位置42相对应的位置处的赖氨酸。在实施例中，轻链可变域包括位于与Kabat位置43相对应的位置处的丙氨酸。在实施例中，轻链可变域包括位于与Kabat位置44相对应的位置处的脯氨酸。在实施例中，轻链可变域包括位于与Kabat位置56相对应的位置处的苏氨酸。在实施例中，轻链可变域包括位于与Kabat位置72相对应的位置处的苏氨酸。在实施例中，轻链可变域包括位于与Kabat位置73相对应的位置处的苯丙氨酸。在实施例中，轻链可变域包括位于与Kabat位置79相对应的位置处的谷氨酰胺。在实施例中，轻链可变域包括位于与Kabat位置104相对应的位置处的缬氨酸。
在实施例中，轻链可变域包括位于与Kabat位置7相对应的位置处的丝氨酸、位于与Kabat位置8相对应的位置处的脯氨酸、位于与Kabat位置15相对应的位置处的缬氨酸、位于与Kabat位置22相对应的位置处的苏氨酸，位于与Kabat位置24相对应的位置处的谷氨酰胺或丝氨酸、位于与Kabat位置41相对应的位置处的甘氨酸、位于与Kabat位置42相对应的位置处的赖氨酸、位于与Kabat位置43相对应的位置处的丙氨酸或苏氨酸、位于与Kabat位置44相对应的位置处的脯氨酸，位于与Kabat位置56相对应的位置处的苏氨酸、位于与Kabat位置72相对应的位置处的苏氨酸、位于与Kabat位置73相对应的位置处的苯丙氨酸或赖氨酸、位于与Kabat位置79相对应的位置处的谷氨酰胺或位于与Kabat位置104相对应的位置处的缬氨酸。
在实施例中，轻链可变域包括位于与Kabat位置7相对应的位置处的丝氨酸、位于与Kabat位置8相对应的位置处的脯氨酸、位于与Kabat位置15相对应的位置处的缬氨酸、位于与Kabat位置22相对应的位置处的苏氨酸，位于与Kabat位置24相对应的位置处的谷氨酰胺或丝氨酸、位于与Kabat位置41相对应的位置处的甘氨酸、位于与Kabat位置42相对应的位置处的赖氨酸、位于与Kabat位置43相对应的位置处的丙氨酸或苏氨酸、位于与Kabat位置44相对应的位置处的脯氨酸，位于与Kabat位置56相对应的位置处的苏氨酸、位于与Kabat位置72相对应的位置处的苏氨酸、位于与Kabat位置73相对应的位置处的苯丙氨酸或赖氨酸、位于与Kabat位置79相对应的位置处的谷氨酰胺或位于与Kabat位置104相对应的位置处的缬氨酸。
在实施例中，轻链可变域包括结合框架区残基，其是位于与Kabat位置7相对应的位置处的丝氨酸、位于与Kabat位置8相对应的位置处的脯氨酸、位于与Kabat位置15相对应的位置处的缬氨酸、位于与Kabat位置22相对应的位置处的苏氨酸，位于与Kabat位置24相对应的位置处的谷氨酰胺或丝氨酸、位于与Kabat位置41相对应的位置处的甘氨酸、位于与Kabat位置42相对应的位置处的赖氨酸、位于与Kabat位置43相对应的位置处的丙氨酸或苏氨酸、位于与Kabat位置44相对应的位置处的脯氨酸，位于与Kabat位置56相对应的位置处的苏氨酸、位于与Kabat位置72相对应的位置处的苏氨酸、位于与Kabat位置73相对应的位置处的苯丙氨酸或赖氨酸、位于与Kabat位置79相对应的位置处的谷氨酰胺或位于与Kabat位置104相对应的位置处的缬氨酸。
在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置10相对应的位置处的苏氨酸或丙氨酸。在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置11相对应的位置处的赖氨酸。在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置12相对应的位置处的缬氨酸。在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置15相对应的位置处的苏氨酸。在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置19相对应的位置处的苏氨酸。在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置23相对应的位置处的苏氨酸。在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置41相对应的位置处的脯氨酸。在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置44相对应的位置处的丙氨酸。在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置61相对应的位置处的脯氨酸或苏氨酸。在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置66相对应的位置处的精氨酸。在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置70相对应的位置处的苏氨酸。在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置75相对应的位置处的赖氨酸。在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置79相对应的位置处的缬氨酸。在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置81相对应的位置处的苏氨酸。在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置82相对应的位置处的甲硫氨酸。在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置82B相对应的位置处的天冬酰胺。在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置82C相对应的位置处的甲硫氨酸。在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置84相对应的位置处的脯氨酸。在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置85相对应的位置处的缬氨酸。在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置108相对应的位置处的赖氨酸。在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置109相对应的位置处的缬氨酸。
在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置10相对应的位置处的苏氨酸或丙氨酸、位于与Kabat位置11相对应的位置处的赖氨酸、位于与Kabat位置12相对应的位置处的缬氨酸、位于与Kabat位置15相对应的位置处的苏氨酸、位于与Kabat位置19相对应的位置处的苏氨酸、位于与Kabat位置23相对应的位置处的苏氨酸、位于与Kabat位置41相对应的位置处的脯氨酸、位于与Kabat位置44相对应的位置处的丙氨酸，位于与Kabat位置61相对应的位置处的脯氨酸、丝氨酸或苏氨酸，位于与Kabat位置66相对应的位置处的精氨酸，位于与Kabat位置70相对应的位置处的苏氨酸，位于与Kabat位置75相对应的位置处的赖氨酸，位于与Kabat位置79相对应的位置处的缬氨酸，位于与Kabat位置81相对应的位置处的苏氨酸或赖氨酸，位于与Kabat位置82相对应的位置处的甲硫氨酸，位于与Kabat位置82B相对应的位置处的天冬酰胺，位于与Kabat位置82C相对应的位置处的甲硫氨酸，位于与Kabat位置84相对应的位置处的脯氨酸，位于与Kabat位置85相对应的位置处的缬氨酸，位于与Kabat位置108相对应的位置处的赖氨酸或位于与Kabat位置109相对应的位置处的缬氨酸。
在实施例中，重链可变域包括位于与Kabat位置10相对应的位置处的苏氨酸或丙氨酸、位于与Kabat位置11相对应的位置处的赖氨酸、位于与Kabat位置12相对应的位置处的缬氨酸、位于与Kabat位置15相对应的位置处的苏氨酸、位于与Kabat位置19相对应的位置处的苏氨酸、位于与Kabat位置23相对应的位置处的苏氨酸、位于与Kabat位置41相对应的位置处的脯氨酸、位于与Kabat位置44相对应的位置处的丙氨酸，位于与Kabat位置61相对应的位置处的脯氨酸、丝氨酸或苏氨酸，位于与Kabat位置66相对应的位置处的精氨酸，位于与Kabat位置70相对应的位置处的苏氨酸，位于与Kabat位置75相对应的位置处的赖氨酸，位于与Kabat位置79相对应的位置处的缬氨酸，位于与Kabat位置81相对应的位置处的苏氨酸或赖氨酸，位于与Kabat位置82相对应的位置处的甲硫氨酸，位于与Kabat位置82B相对应的位置处的天冬酰胺，位于与Kabat位置82C相对应的位置处的甲硫氨酸，位于与Kabat位置84相对应的位置处的脯氨酸，位于与Kabat位置85相对应的位置处的缬氨酸，位于与Kabat位置108相对应的位置处的赖氨酸或位于与Kabat位置109相对应的位置处的缬氨酸。
在实施例中，重链可变域包括结合框架区残基，其是位于与Kabat位置10相对应的位置处的苏氨酸或丙氨酸，位于与Kabat位置11相对应的位置处的赖氨酸，位于与Kabat位置12相对应的位置处的缬氨酸，位于与Kabat位置15相对应的位置处的苏氨酸、位于与Kabat位置19相对应的位置处的苏氨酸、位于与Kabat位置23相对应的位置处的苏氨酸、位于与Kabat位置41相对应的位置处的脯氨酸、位于与Kabat位置44相对应的位置处的丙氨酸、脯氨酸，位于与Kabat位置61相对应的位置处的丝氨酸或苏氨酸、位于与Kabat位置66相对应的位置处的精氨酸、位于与Kabat位置70相对应的位置处的苏氨酸、位于与Kabat位置75相对应的位置处的赖氨酸、位于与Kabat位置79相对应的位置处的缬氨酸，位于与Kabat位置81相对应的位置处的苏氨酸或赖氨酸，位于与Kabat位置82相对应的位置处的蛋氨酸，位于与Kabat位置82B相对应的位置处的天冬酰胺，位于与Kabat位置82C位置相对应的位置处的蛋氨酸，位于与Kabat位置84相对应的位置处的脯氨酸，位于与Kabat位置85相对应的位置处的缬氨酸、位于与Kabat位置108位置相对应的位置处的赖氨酸或位于与Kabat位置109相对应的位置处的缬氨酸。
本文提供的包括其实施例在内的重组蛋白(例如，双特异性抗体)可以包括一个或多个Fab'片段。本文提供的包括实施例在内的重组蛋白(例如，双特异性抗体)包括第一抗体区和第二抗体区，其中第一抗体区可以是第一Fab'片段，或者第二抗体区可以是第二Fab'片段。如本文提供的重组蛋白(例如，双特异性抗体)包括Fab'片段，则重组蛋白可以包括第一抗体结合区和第二抗体结合区，每个结合区独立地包括重链(例如，包括恒定区和可变区)以及轻链(例如，包括恒定区和可变区)。在实施例中，Fab'片段包括人源化重链(例如，包括恒定和可变区)和人源化轻链(例如，包括恒定和可变区)。因此，在实施例中，第一抗体区是第一Fab'片段，或者第二抗体区是第二Fab'片段。在实施例中，第一抗体区是第一Fab'片段。在实施例中，第二抗体区是第二Fab'片段。在实施例中，第一抗体区是第一Fab'片段并且第二抗体区是第二Fab'片段。
第一或第二抗体区可以分别是第一scFv或第二scFv。单链抗体包括可变轻链和可变重链。本领域技术人员将立即认识到单链抗体包括单个轻链和单个重链，与包括两对相同多肽链的免疫球蛋白抗体对比，每对多肽链具有一条轻链和一条重链。每条轻链和重链依次由两个区域组成：涉及结合所述靶抗原的可变(“V”)区(即可变轻链和可变重链)和与免疫系统其他成分相互作用的恒定(“C”)区。单链抗体中的可变轻链和可变重链可通过连接肽连接。在实施例中，连接肽包括如SEQ ID NO:37所示的序列。在实施例中，连接肽是如SEQ ID NO:37所示的序列。单链抗体的连接肽实例由Bird,R.E.、Hardman,K.D.、Jacobson,J.W.、Johnson,S.、Kaufman,B.M.、Lee,S.M.、Lee,T.、Pope,S.H.、Riordan,G.S.以及Whitlow,M.(1988年)进行了描述。已经对制备scFv抗体的方法进行了描述。参见Huse等人，《科学(Science)》246:1275-1281(1989年)；Ward等人，《自然(Nature)》341:544-546(1989年)；Vaughan等人，《自然生物技术(Nature Biotech.)》14:309-314(1996年)。简而言之，从免疫动物的B细胞中分离mRNA并制备cDNA。cDNA用免疫球蛋白的重链和轻链可变域的特异引物进行扩增。纯化PCR产物，并连接核酸序列。如需连接肽，则将对肽进行编码的核酸序列插入重链与轻链核酸序列之间。将对scFv进行编码的核酸插入载体并在适当的宿主细胞中进行表达。
在实施例中，第一抗体区是第一单链可变片段，或者第二抗体区是第二单链可变片段。在实施例中，第一抗体区是第一单链可变片段。在实施例中，第二抗体区是第二单链可变片段。在实施例中，第一抗体区是第一单链可变片段并且第二抗体区是第二单链可变片段。
抗体结合特定表位(例如，BAFF-R)的能力可采用平衡解离常数(KD)来描述。如本文定义的平衡解离常数(KD)是能够结合BAFF-R蛋白的第二抗体区的解离速率(K-off)和缔合速率(K-on)之间的比率。它由以下公式来描述：KD＝K-off/K-on。因此，在实施例中，第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约小于5nM的BAFF-R蛋白。在实施例中，第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约小于4.5nM的BAFF-R蛋白。在实施例中，第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约小于4nM的BAFF-R蛋白。在实施例中，第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约小于3.5nM的BAFF-R蛋白。在实施例中，第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约小于3nM的BAFF-R蛋白。在实施例中，第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约小于2.5nM的BAFF-R蛋白。在实施例中，第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约小于2nM的BAFF-R蛋白。在实施例中，第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约小于1.5nM的BAFF-R蛋白。在实施例中，第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约小于1nM的BAFF-R蛋白。在实施例中，第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约小于0.5nM的BAFF-R蛋白。
在实施例中，第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约为0.5nM的BAFF-R蛋白。在实施例中，第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约为1nM的BAFF-R蛋白。在实施例中，第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约为1.5nM的BAFF-R蛋白。在实施例中，第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约为2nM的BAFF-R蛋白。在实施例中，第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约为2.5nM的BAFF-R蛋白。在实施例中，第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约为3nM的BAFF-R蛋白。在实施例中，第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约为3.5nM的BAFF-R蛋白。在实施例中，第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约为4nM的BAFF-R蛋白。在实施例中，第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约为4.5nM的BAFF-R蛋白。在实施例中，第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约为5nM的BAFF-R蛋白。在实施例中，第二抗体区能够以结合平衡解离常数(KD)约为0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5或5nM的BAFF-R蛋白。
一方面，提供了一种能够结合KD约小于4nm的BAFF-R的重组蛋白。另一方面，提提供了一种以约小于4nM的KD结合BAFF-R的重组蛋白。在实施例中，抗体不诱导BAFF-R活性。
本文提供的重组蛋白包括能够结合效应细胞配体的第一抗体区。在实施例中，效应细胞配体是CD3蛋白。在实施例中，第一抗体区包括：(a)轻链可变域，其包括如SEQ IDNO:74所示的CDR L1、如SEQ ID NO:75所示的CDR L2和如SEQ ID NO:76所示的CDR L3；以及(b)重链可变域，其包括如SEQ ID NO:77所示的CDR H1、如SEQ ID NO:78所示的CDR H2和如SEQ ID NO:79所示的CDR H3。
在实施例中，第一抗体区包括：(a)轻链可变域，其包括如SEQ ID NO:81所示的CDRL1、如SEQ ID NO:82所示的CDR L2和如SEQ ID NO:83所示的CDR L3；以及(b)重链可变域，其包括如SEQ ID NO:84所示的CDR H1、如SEQ ID NO:85所示的CDR H2和如SEQ ID NO:86所示的CDR H3。
在实施例中，第一抗体区是第一单链可变片段(scFv)。在实施例中，第一scFv包括SEQ ID NO:80或SEQ ID NO:87的序列。在实施例中，第一scFv包括SEQ ID NO:80的序列。在实施例中，第一scFv包括SEQ ID NO:87的序列。在实施例中，第一scFv是SEQ ID NO:80或SEQ ID NO:87的序列。在实施例中，第一scFv是SEQ ID NO:80的序列。在实施例中，第一scFv是SEQ ID NO:87的序列。
在实施例中，第二抗体区与BAFF-R蛋白结合。在实施例中，BAFF-R蛋白是人BAFF-R蛋白。在实施例中，BAFF-R蛋白由NCBI基因ID号115650识别的核酸序列来编码。在实施例中，BAFF-R蛋白形成细胞的一部分。在实施例中，BAFF-R蛋白在细胞表面上表达。在实施例中，细胞是淋巴细胞。在实施例中，细胞是B细胞。在实施例中，细胞是癌细胞。在实施例中，癌细胞是淋巴瘤细胞。
在一个实施例中，重组蛋白包括第一抗体区，所述第一抗体区包括(a)轻链可变域，其包括如SEQ ID NO:74所示的CDR L1、如SEQ ID NO:75所示的CDR L2和如SEQ ID NO:76所示的CDR L3；和(b)重链可变域，其包括如SEQ ID NO:77所示的CDR H1、如SEQ ID NO:78所示的CDR H2和如SEQ ID NO:79所示的CDR H3；以及第二抗体区，其包括具有SEQ IDNO:7的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:10的序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括第一抗体区，所述第一抗体区包括(a)轻链可变域，其包括如SEQ ID NO:74所示的CDR L1、如SEQ ID NO:75所示的CDR L2和如SEQ ID NO:76所示的CDR L3和(b)重链可变域，其包括如SEQ ID NO:77所示的CDR H1、如SEQ ID NO:78所示的CDR H2和如SEQ ID NO:79所示的CDR H3；以及第二抗体区，其包括具有SEQ ID NO:8的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:11的序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括第一抗体区，所述第一抗体区包括(a)轻链可变域，其包括如SEQ ID NO:74所示的CDR L1、如SEQ ID NO:75所示的CDR L2和如SEQ ID NO:76所示的CDR L3；以及(b)重链可变域，其包括如SEQ ID NO:77所示的CDR H1、如SEQ IDNO:78所示的CDR H2和如SEQ ID NO:79所示的CDR H3；以及第二抗体区，其包括具有SEQ IDNO:9的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:12的序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括第一抗体区，所述第一抗体区包括(a)轻链可变域，其包括如SEQ ID NO:81所示的CDR L1、如SEQ ID NO:82所示的CDR L2和如SEQ ID NO:83所示的CDR L3；以及(b)重链可变域，其包括如SEQ ID NO:84所示的CDR H1、如SEQ IDNO:85所示的CDR H2和如SEQ ID NO:86所示的CDR H3；以及第二抗体区，其包括具有SEQ IDNO:7的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:10的序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括第一抗体区，所述第一抗体区包括(a)轻链可变域，其包括如SEQ ID NO:81所示的CDR L1、如SEQ ID NO:82所示的CDR L2和如SEQ ID NO:83所示的CDR L3；以及(b)重链可变域，其包括如SEQ ID NO:84所示的CDR H1、如SEQ IDNO:85所示的CDR H2和如SEQ ID NO:86所示的CDR H3；以及第二抗体区，其包括具有SEQ IDNO:8的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:11的序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括第一抗体区，所述第一抗体区包括(a)轻链可变域，其包括如SEQ ID NO:81所示的CDR L1、如SEQ ID NO:82所示的CDR L2和如SEQ ID NO:83所示的CDR L3；以及(b)重链可变域，其包括如SEQ ID NO:84所示的CDR H1、如SEQ IDNO:85所示的CDR H2和如SEQ ID NO:86所示的CDR H3；以及第二抗体区，其包括具有SEQ IDNO:9的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:12的序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括第一抗体区，所述第一抗体区包括(a)轻链可变域，其包括如SEQ ID NO:74所示的CDR L1、如SEQ ID NO:75所示的CDR L2和如SEQ ID NO:76所示的CDR L3；以及(b)重链可变域，其包括如SEQ ID NO:77所示的CDR H1、如SEQ IDNO:78所示的CDR H2和如SEQ ID NO:79所示的CDR H3；以及第二抗体区，其包括具有SEQ IDNO:44的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:47的序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括第一抗体区，所述第一抗体区包括(a)轻链可变域，其包括如SEQ ID NO:74所示的CDR L1、如SEQ ID NO:75所示的CDR L2和如SEQ ID NO:76所示的CDR L3；以及(b)重链可变域，其包括如SEQ ID NO:77所示的CDR H1、如SEQ IDNO:78所示的CDR H2和如SEQ ID NO:79所示的CDR H3；以及第二抗体区，其包括具有SEQ IDNO:45的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:48的序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括第一抗体区，所述第一抗体区包括(a)轻链可变域，其包括如SEQ ID NO:74所示的CDR L1、如SEQ ID NO:75所示的CDR L2和如SEQ ID NO:76所示的CDR L3；以及(b)重链可变域，其包括如SEQ ID NO:77所示的CDR H1、如SEQ IDNO:78所示的CDR H2和如SEQ ID NO:79所示的CDR H3；以及第二抗体区，其包括具有SEQ IDNO:46的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:49的序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括第一抗体区，所述第一抗体区包括(a)轻链可变域，其包括如SEQ ID NO:81所示的CDR L1、如SEQ ID NO:82所示的CDR L2和如SEQ ID NO:83所示的CDR L3；以及(b)重链可变域，其包括如SEQ ID NO:84所示的CDR H1、如SEQ IDNO:85所示的CDR H2和如SEQ ID NO:86所示的CDR H3；以及第二抗体区，其包括具有SEQ IDNO:44的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:47的序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括第一抗体区，所述第一抗体区包括(a)轻链可变域，其包括如SEQ ID NO:81所示的CDR L1、如SEQ ID NO:82所示的CDR L2和如SEQ ID NO:83所示的CDR L3；以及(b)重链可变域，其包括如SEQ ID NO:84所示的CDR H1、如SEQ IDNO:85所示的CDR H2和如SEQ ID NO:86所示的CDR H3；以及第二抗体区，其包括具有SEQ IDNO:45的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:48的序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括第一抗体区，所述第一抗体区包括(a)轻链可变域，其包括如SEQ ID NO:81所示的CDR L1、如SEQ ID NO:82所示的CDR L2和如SEQ ID NO:83所示的CDR L3；以及(b)重链可变域，其包括如SEQ ID NO:84所示的CDR H1、如SEQ IDNO:85所示的CDR H2和如SEQ ID NO:86所示的CDR H3；以及第二抗体区，其包括具有SEQ IDNO:46的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:49的序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括具有SEQ ID NO:80的序列的第一抗体区和第二抗体区，其中所述第二抗体区包括具有SEQ ID NO:7的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:10序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括具有SEQ ID NO:80的序列的第一抗体区和第二抗体区，其中所述第二抗体区包括具有SEQ ID NO:8的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:11序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括具有SEQ ID NO:80的序列的第一抗体区和第二抗体区，其中所述第二抗体区包括具有SEQ ID NO:9的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:12序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括具有SEQ ID NO:87的序列的第一抗体区和第二抗体区，其中第二抗体区包括具有SEQ ID NO:7的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:10序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括具有SEQ ID NO:87的序列的第一抗体区和第二抗体区，其中所述第二抗体区包括具有SEQ ID NO:8的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:11序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括具有SEQ ID NO:87的序列的第一抗体区和第二抗体区，其中所述第二抗体区包括具有SEQ ID NO:9的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:12序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括具有SEQ ID NO:80的序列的第一抗体区和第二抗体区，其中所述第二抗体区包括具有SEQ ID NO:44的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:47序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括具有SEQ ID NO:80的序列的第一抗体区和第二抗体区，其中所述第二抗体区包括具有SEQ ID NO:45的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:48序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括具有SEQ ID NO:80的序列的第一抗体区和第二抗体区，其中所述第二抗体区包括具有SEQ ID NO:46的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:49序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括具有SEQ ID NO:87的序列的第一抗体区和第二抗体区，其中所述第二抗体区包括具有SEQ ID NO:44的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:47序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括具有SEQ ID NO:87的序列的第一抗体区和第二抗体区，其中所述第二抗体区包括具有SEQ ID NO:45的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:48序列的重链可变域。
在一个实施例中，重组蛋白包括具有SEQ ID NO:87的序列的第一抗体区和第二抗体区，其中所述第二抗体区包括具有SEQ ID NO:46的序列的轻链可变域和具有SEQ ID NO:49序列的重链可变域。
III.药物组合物
本发明的药剂(例如，本文提供的重组蛋白)通常作为包括活性治疗剂，例如，和多种其它药学上可接受的组分的药物组合物来施用。参见《雷明顿药物科学(Remington'sPharmaceutical Science)》(第15版，位于宾夕法尼亚州伊斯顿的马克出版公司，1980年)。首选形式取决于预期的给药方式和治疗应用。根据所需制剂，所述组合物还可包括医药上可接受的、无毒的载体或稀释剂，所述载体或稀释剂定义为通常用于配制供动物或人类使用的药物组合物的载体。选择稀释剂是为了不影响混合物的生物活性。此类稀释剂的实例为蒸馏水、生理磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液、葡萄糖溶液和汉克斯氏溶液。此外，药物组合物或制剂还可包括其它载体、辅助剂或无毒的、非治疗性的、非免疫原性的稳定剂等。
所述组合物可用于治疗性或预防性治疗。在治疗性应用中，以“治疗有效剂量”向患有疾病(例如，癌症)的患者施用组合物。用于这一用途的有效剂量取决于疾病的严重程度和患者的一般健康状况。根据患者所需及耐受剂量和频率，可单次或多次施用所述组合物。就本发明而言，“患者”或“受试者”包括人类和其他动物，特别是哺乳动物。因此，所述方法既适用于人类治疗，也适用于兽医学上的应用。在优选实施例中，患者是哺乳动物，优选为灵长类动物，而在最优选实施例中，患者是人类。
适于经口给药的制剂可以由以下物质组成：(a)液体溶液，比如悬浮在如水、盐水或PEG400等稀释剂中的本文提供的有效量的抗体；(b)分别含有作为液体、固体、颗粒或明胶的预定量的活性成分的胶囊、小袋或片剂；(c)适当液体中的悬浮液；和(d)合适乳液。片剂形式可以包括以下一种或多种形式：乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、磷酸钙、玉米淀粉、马铃薯淀粉、微晶纤维素、明胶、胶体二氧化硅、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸，以及其他赋形剂、着色剂、填充剂、粘合剂、稀释剂、缓冲剂、润湿剂、防腐剂、调味剂、染料、崩解剂和药学上相容的载体。锭剂形式可包括调味剂，例如蔗糖中的活性成分，以及包括惰性基质，比如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶乳剂、凝胶等中的活性成分的锭剂，所述惰性基质除活性成分外，还包括本领域已知的载体。
药物组合物还可包括如蛋白质等大的、缓慢代谢的大分子、如壳聚糖、聚乳酸、聚乙醇酸和共聚物(比如，乳胶功能化琼脂糖(TM)、琼胶糖、纤维素等)等多糖、聚合氨基酸、氨基酸共聚物和脂质聚集体(比如，油滴或脂质体)。另外，这些载体可以用作免疫增强剂(即辅助剂)。
用于直肠给药的合适制剂包括，例如，由具有栓剂基质的、包装好的核酸组成的栓剂。合适栓剂基质包括天然或合成的甘油三酯或石蜡烃。另外，也可能使用明胶直肠胶囊，其由选定化合物与基质的组合组成，所述基质包括，例如，液体甘油三酯、聚乙二醇和石蜡烃。
适于肠胃外给药的制剂，比如，通过关节内(在关节内)、静脉内、肌肉内、瘤内、真皮内、腹膜内和皮下途径给药的制剂，包括水性和非水性等渗无菌注射溶液，其可以含有抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂和使制剂与预期受体的血液等渗的溶质，以及水性和非水性无菌混悬液，其可以包括悬浮剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂。在本发明的实践中，组合物可以，例如，通过静脉输液、经口、局部、腹膜内、膀胱内或鞘内形式给药。肠胃外给药、经口给药和静脉内给药均为优选的给药方法。化合物制剂可以单位剂量或多剂量密封容器(比如，安瓿和小瓶)形式提供。
注射溶液和悬浮液可以由上述无菌粉剂、颗粒剂和片剂制备。如上所述，经核酸转导以用于体外疗法的细胞也可以经静脉内或肠胃外形式给药。
所述药物制剂优选地呈单位剂型的形式。制剂以这种形式细分为包括适当量的活性成分的单位剂量。单位剂型可以是包装制剂，所述包装件含有离散量的制剂，比如，小瓶或安瓿中的包装片剂、胶囊和粉末。而且，所述单位剂型可以是胶囊、片剂、扁囊剂、或锭剂本身，也可以是适当数量的这些包装形式的任一种。如果需要，所述组合物还可以含有其它相容的治疗剂。
联合给药涵盖使用单独制剂或单一药物制剂的联合给药形式以及以任一顺序的连续给药形式，其中优选地在一段时间内，两种(或所有)活性剂同时发挥其生物活性。
本文提供的组合物的有效剂量取决于各种不同因素，包括给药方式、靶位点、患者的生理状态、患者是人类还是动物、施用的其他药物以及治疗是预防性还是治疗性的。然而，本领域普通技术人员在了解供指导的用于治疗和预防癌症的批准组合物的剂量后，将立即认识到适当和/或等效剂量。
一方面，提供了一种药物组合物，其包括治疗有效量的如本文提供的重组蛋白，所述重组蛋白包括其实施例和药学上可接受的赋形剂。
如本文提供的治疗有效量是指能达到预期目的的有效量。针对特定应用有效的实际量尤其取决于所治疗的病状。当以治疗疾病的方法给药时，本文所述的药物组合物将包括大量有效达到预期结果的活性重组蛋白(例如，双特异性抗体)，例如，调节靶分子(例如，BAFF-R)的活性、激活效应细胞(例如，T细胞)和/或还原，消除或减缓疾病症状(例如，癌症、自身免疫性疾病)。测定治疗有效量的本文提供的重组蛋白(例如，双特异性抗体)完全是在本领域技术人员的能力范围内进行的，尤其是根据本文中的详细描述。
IV.治疗方法
一方面，提供了一种治疗有此需要的受试者所患癌症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的如本文所述的包括其实施例在内的重组蛋白(例如，双特异性抗体)，从而治疗受试者所患癌症。在实施例中，癌症为淋巴瘤、白血病或骨髓瘤。在实施例中，癌症为淋巴瘤。在实施例中，淋巴瘤为套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、边缘带淋巴瘤或伯基特淋巴瘤。在实施例中，癌症为套细胞淋巴瘤。在实施例中，淋巴瘤为滤泡性淋巴瘤。在实施例中，淋巴瘤为弥漫性大B细胞淋巴瘤。在实施例中，淋巴瘤为边缘带淋巴瘤。在实施例中，淋巴瘤为伯基特淋巴瘤。
在实施例中，癌症为白血病。在实施例中，白血病为淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病或毛细胞白血病。在实施例中，白血病为淋巴细胞白血病。在实施例中，白血病为慢性淋巴细胞白血病。在实施例中，白血病为毛细胞白血病。
在实施例中，癌症为骨髓瘤。在实施例中，骨髓瘤为多发性骨髓瘤。
在实施例中，所述方法进一步包括向受试者施用第二治疗剂。在实施例中，治疗剂为能够结合CD20抗原的嵌合单克隆抗体。在实施例中，治疗剂为利妥昔单抗。术语“利妥昔单抗”在通常意义上是指抗由ATC编码L01XC02识别的蛋白CD20的单克隆抗体。
在另一方面，提供了一种治疗有此需要的受试者所患自身免疫性疾病的方法。该方法包括向受试者施用治疗有效量的如本文提供的包括其实施例在内的重组蛋白(例如，双特异性抗体)，从而治疗受试者中的自身免疫性疾病。在实施例中，自身免疫性疾病为类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、肾小球肾炎、干燥综合征或自身免疫性溶血性贫血。在实施例中，所述自身免疫性疾病为类风湿性关节炎。在实施例中，所述自身免疫性疾病为系统性红斑狼疮。在实施例中，所述自身免疫性疾病为多发性硬化症。在实施例中，所述自身免疫性疾病为肾小球肾炎。在实施例中，所述自身免疫性疾病为干燥综合征。在实施例中，所述自身免疫性疾病为自身免疫性溶血性贫血。在实施例中，所述方法进一步包括向受试者施用第二治疗剂。
如本文提供的治疗有效量是指有效实现其预期目的的量。针对特定应用有效的实际量将尤其视所治疗的病状而定。当以治疗疾病的方法给药时，本文所述的药物组合物将包含大量有效达到所需结果的本文提供的包括其实施例在内的活性重组蛋白(BAFF-R双特异性抗体)，例如，调节靶分子(例如，BAFF-R)的活性、激活效应细胞(例如，T细胞)和/或还原，消除或减缓疾病症状(例如，癌症、自身免疫性疾病)。测定治疗有效量的本文提供的重组蛋白(BAFF-R双特异性抗体)完全是在本领域技术人员的能力范围内进行的，尤其是根据本文中的详细描述。
可接受载体、赋形剂或稳定剂在使用剂量和浓度下对受体来说是无毒的，并且包括缓冲液，例如，磷酸盐、柠檬酸盐或醋酸盐，其pH通常为5.0至8.0，任选为6.0至7.0；氯化钠、氯化钾等使之等渗的盐；抗氧化剂；防腐剂；低分子量多肽；蛋白质；聚山梨酯80等亲水性聚合物；甘氨酸等氨基酸；碳水化合物；螯合剂；糖；以及本领域技术人员已知的其他标准成分(《雷明顿：药学技术与实践(Sustained and Controlled Release Drug DeliverySystems)》，第22版，Loyd V.Allen等人，编辑人，英国医药出版社(2012年))。mAb的浓度可为0.1-100mg/ml，例如，1-10mg/ml或10-50mg/ml，例如，5、10、20、30、40、50或60mg/ml。
本文提供的包括其实施例在内的重组蛋白(BAFF-R双特异性抗体)的药物组合物可通过本领域已知的多种方法施用。给药途径和/或给药方式依据所需结果的不同而不同。任选地，给药方式为静脉内、肌肉内、腹腔内或皮下注射方式，或在靶点附近给药的方式。药学上可接受的赋形剂可适用于静脉内、肌肉内、皮下、肠胃外、脊髓或表皮方式施用(例如，通过注射或输液)。
本文提供的包括其实施例在内的重组蛋白(BAFF-R双特异性抗体)的药物组合物可根据本领域公知和常规实施的方法制备。参见，例如，《雷明顿：药学技术与实践(Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems)》，第22版，Loyd V.Allen等人，编辑人，英国医药出版社(2012年)；和《缓控释给药系统》，JR.Robinson编辑，MarcelDekker,Inc.，纽约，1978年。药物组合物优选地在GMP条件下制造。通常，在药物组合物中使用本文提供的包括其实施例在内的重组蛋白(BAFF-R双特异性抗体)的治疗有效剂量或有效剂量。本文提供的包括其实施例在内的重组蛋白(BAFF-R双特异性抗体)可通过本领域技术人员已知的常规方法配制成药学上可接受的剂型。调整剂量方案以提供所需的最佳反应(例如，治疗反应)。例如，可以进行单次用药，可以随着时间的推移施用若干分次剂量，或者可以根据治疗情况的紧急成都按比例减少或增加剂量。比较有利的做法是，结合其他疗法或药剂制备本文提供的包括其实施例在内的重组蛋白(BAFF-R双特异性抗体)。以剂量单位制备肠胃外组合物有利于实现给药方便和剂量均匀。本文所用的剂量单位形式是指适合作为需治疗受试者的单一剂量的有形分离单位；每个单元包含本文提供的包括其实施例在内的预定量的重组蛋白(BAFF-R双特异性抗体)，经计算后与所需药用赋形剂一起产生期望的治疗效果。
药物组合物中活性成分的实际剂量水平可以变化多样，以获得有效的活性成分数量，使其对特定的病人、成分和给药方式达到所需的治疗反应，且对患者无毒。所选剂量水平取决于多种药代动力学因素，包括所用特定成分的活性、给药途径、给药时间、所用特定抗体的排泄率、治疗持续时间、其他药物、与所采用的特定组合物组合使用的化合物和/或材料、被治疗患者的年龄、性别、体重、状况、一般健康状况和既往病史等因素。
医生或兽医可以在药物组合物中使用的低于达到期望治疗效果所需水平的水平开始施用本文提供的包括其实施例在内的重组蛋白(BAFF-R双特异性抗体)，并逐渐增加剂量直到达到所需效果。一般而言，所述组合物的有效剂量可根据许多不同因素而变化，所述因素包括需治疗的特定疾病或病症、给药方式、靶位点、患者的生理状态、患者是人类还是动物、施用的其他药物，以及治疗是预防性的还是治疗性的。治疗剂量需要进行滴定以优化安全性和有效性。对于双特异性抗体的给药，剂量范围约为宿主体重的0.0001至100mg/kg，更通常地为0.01至5mg/kg。例如，剂量可为1mg/kg体重或10mg/kg体重或在1-10mg/kg范围内。示范性治疗方案要求每两周或每三周给药一次，或每月给药一次，或每3至6个月给药一次。
本文提供的包括其实施例在内的重组蛋白(BAFF-R双特异性抗体)可在多种场合施用。单次给药间隔可以是每周、每月或每年。通过测定患者的双特异性抗体的血液水平表明，间隔也可以是无规律的。在一些方法中，调整剂量以达到1-1,000μg/m的血浆抗体浓度；而在另一些方法中，则为25-300μg/ml。
或者，本文提供的包括其实施例在内的重组蛋白(BAFF-R双特异性抗体)可以作为缓释制剂施用，在这种情况下，所需施用频率较低。剂量和频率依据本文提供的包括其在患者中的实施例在内的重组蛋白(BAFF-R双特异性抗体)的半衰期变化。给药剂量和频率根据治疗是预防性的还是治疗性的会有所不同。预防性应用中，在相当长的一段时间内都以相对较短的间隔施用相对较低的剂量。一些患者在余生中继续接受治疗。在治疗应用中，在疾病缓解或治好前，并且最好是患者的疾病症状部分或完全改善前，有时需要以相对较短的间隔施用相对较高的剂量。此后，患者可以服用预防性药物。
实例
双特异性T细胞衔接子(BiTE)是一种双特异性单克隆抗体，可作为靶向免疫治疗剂。与传统的单克隆抗体不同，BiTE抗体是由两个独特的可变片段组成的单链可变片段(scFv)。一种scFv通过CD3分子靶向T细胞并与其结合，第二种scFv将靶向肿瘤细胞上的细胞表面抗原。靶向这两种分子不仅可以将T细胞与肿瘤细胞连接起来，还可以通过CD3信号激活T细胞。活化T细胞随后将对肿瘤细胞发挥细胞毒性作用。
BAFF-R BiTE(双特异性抗体)是用如PCT/US2017/036178公开的来源于先前研发的人源化抗BAFF-R单克隆抗体的重链和轻链的scFv构建的，同上。对BAFF-R BiTE的初步测试表明，它与BAFF-R和人类T细胞可进行很强的特异性结合。BAFF-R BiTE能够在体外诱导T细胞对BAFF-R表达的淋巴瘤和白血病细胞产生强烈的反应。由于其BAFF-R表达正常，因此健康供体B细胞在存在BAFF-R BiTE和T细胞效应子的情况下也受到细胞毒性的影响。
采用杵臼结构技术制备BAFF-R BiTE双特异性抗体。为了促进异质二聚体的形成，对双特异性抗体上采用杵臼结构。凝胶在还原和非还原条件下用于BAFF-R BiTE(H90Bi)。对照物包括对照/非相关BiTE(Cont.Bi，4-4Bi)和原人源化BAFF-R抗体(H90-Ab在本文中也称为C90)。
使用结合野生型小鼠成纤维细胞L细胞、工程化表达BAFF-R的L细胞(B2D L细胞)和从健康供体分离的T细胞的BAFF-R/CD3双特异性抗体(H90 BiTE)的FACS直方图来测定双特异性抗体的结合特异性，如图2所示。抗体浓度范围为0.05μg至5μg。非相关BiTE作为对照物。抗人IgG抗体用作第二抗体。使用FACS图对BAFF-R BiTE结合进行进一步评估，并确认其独立地结合BAFF-R和T细胞，如图8A-8C所示。
检测双特异性抗体对表达BAFF-R的L细胞的特异性细胞毒性。图中示出了从铬释放试验中计算得出的特定细胞毒性百分比(图3)。将BAFF-R/CD3双特异性抗体(H90 BiTE)与铬标记的靶向野生型或表达BAFF-R的L细胞和单个健康供体的分离型效应子CD8 T细胞，按效应子与靶(E:T)的比例为10:1来培养4小时。对照物包括对照/非相关BiTE(Cont.Bi，4-4Bi)、原人源化BAFF-R抗体(H90-Ab)或仅CD8 T细胞(无抗体)。
测定双特异性抗体对恶性B细胞系的细胞毒性。图中示出了根据铬释放试验计算的针对各种恶性B细胞系的特定细胞毒性百分比，如图4所示。将BAFF-R/CD3双特异性抗体(H90BiTE)与如图所示的铬标记的靶细胞系和单个健康供体的分离型效应子CD8 T细胞，按效应子与靶(E:T)的比例为10:1来培养4小时。对照物包括对照/非相关BiTE(Cont.Bi，4-4Bi)、原人源化BAFF-R抗体(H90-Ab)或仅CD8 T细胞(无抗体)。
测定出了双特异性抗体的剂量依赖性细胞毒性。图中示出了对JeKo-1套细胞淋巴瘤和正常分离B细胞的铬释放试验计算得出的特定细胞毒性百分比(图5)。将不同抗体浓度的BAFF-R/CD3双特异性抗体(H90 BiTE)与铬标记的靶JeKo-1或正常B细胞和单个健康供体的分离型效应子CD8 T细胞，按效应子与靶(E:T)的比例为10:1来培养4小时。对照物包括对照/非相关BiTE(Cont.Bi，4-4Bi)、原人源化BAFF-R抗体(H90-Ab)或仅CD8 T细胞(无抗体)。
在图6的示意图中描述了使用Z-138MCL肿瘤小鼠模型的示范性治疗时间表，其中小鼠采用BAFF-R BiTE治疗。对小鼠进行治疗，以评估BiTE对抑制肿瘤生长的效果。施用BAFF-RBiTE、对照T细胞和PBS对这些动物的肿瘤生长产生的影响如图7所示。
非正式序列表
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人源化C55-1轻链可变域蛋白质序列METDTLLLWVLLLWVPGSTGDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSSLHTGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCHQFSELPWTFGGGTKVEIKRTV(SEQ ID NO:44)
人源化C55-2轻链可变域蛋白质序列METDTLLLWVLLLWVPGSTGDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSSLHTGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDIATYYCHQFSELPWTFGGGTKVEIKRTV(SEQ ID NO:45)
人源化C55-3轻链可变域蛋白质序列METDTLLLWVLLLWVPGSTGDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKTPKLLIYYTSSLHTGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDIATYYCHQFSELPWTFGGGTKVEIKRTV(SEQ ID NO:46)
人源化C55-1重链可变域蛋白质序列MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGQVTLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVGWIRQPPGKALEWLAHIWWDDDKYYNPSLKSRLTITKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARSFGYGLDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:47)
人源化C55-2重链可变域蛋白质序列MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGQVTLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVGWIRQPPGKALEWLAHIWWDDDKYYNSSLKSRLTITKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARSFGYGLDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:48)
人源化C55-3重链可变域蛋白质序列MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGQVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVGWIRQPPGKALEWLAHIWWDDDKYYNTSLKSRLTITKDTSKNQVVLKMTNMDPVDTATYYCARSFGYGLDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:49)
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抗CD3 scFv 1CDR L1:TGAVTSGNY(SEQ ID NO:74)
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抗CD3 scFv 1蛋白质序列EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL(SEQ ID NO:80)
抗CD3 scFv 2CDR L1:SSVSY(SEQ ID NO:81)
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抗CD3 scFv 2CDR H2:INPSRGYT(SEQ ID NO:85)
抗CD3 scFv 2CDR H3:ARYYDDHYCLDY(SEQ ID NO:86)
抗CD3 scFv 2蛋白序列QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKVKDRFTISRDNSKNTAFLQMDSLRPEDTGVYFCARYYDDHYCLDYWGQGTPVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQTPGKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQITR(SEQ ID NO:87)
实施例
实施例1。一种重组蛋白，其包括：
(i)能够结合效应细胞配体的第一抗体区；和
(ii)第二抗体区，其包括：
(a)轻链可变域，其包括如SEQ ID NO:1所示的CDR L1、如SEQ ID NO:2所示的CDRL2和如SEQ ID NO:3所示的CDR L3；以及
(b)重链可变域，包括如SEQ ID NO:4所示的CDR H1、如SEQ ID NO:5所示的CDR H2和如SEQ ID NO:6所示的CDR H3。
实施例2。根据实施例1所述的重组蛋白，其中所述轻链可变域包括SEQ ID NO:7的序列。
实施例3。根据实施例1或2所述的重组蛋白，其中所述重链可变域包括SEQ ID NO:10的序列。
实施例4。根据实施例1-3中任一项所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括如SEQ ID NO:13所示的FR L1、如SEQ ID NO:14所示的FR L2、如SEQ ID NO:15所示的FR L3和如SEQ ID NO:16所示的FR L4。
实施例5。根据实施例1-4中任一项所述的重组蛋白，其中，所述重链可变域包括如SEQ ID NO:25所示的FR H1、如SEQ ID NO:26所示的FR H2、如SEQ ID NO:27所示的FR H3和如SEQ ID NO:28所示的FR H4。
实施例6。根据实施例1所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括SEQ ID NO:8的序列。
实施例7。根据实施例1或6所述的重组蛋白，其中所述重链可变域包括SEQ ID NO:11的序列。
实施例8。根据实施例1、6或7中任一项所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括如SEQ ID NO:17所示的FR L1、如SEQ ID NO:18所示的FR L2、如SEQ ID NO:19所示的FRL3和如SEQ ID NO:20所示的FR L4。
实施例9。根据实施例1或6-8中任一项所述的重组蛋白，其中，所述重链可变域包括如SEQ ID NO:29所示的FR H1、如SEQ ID NO:30所示的FR H2、如SEQ ID NO:31所示的FRH3和如SEQ ID NO:32所示的FR H4。
实施例10。根据实施例1所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括SEQ ID NO:9的序列。
实施例11。根据实施例1或10所述的重组蛋白，其中，所述重链可变域包括SEQ IDNO:12的序列。
实施例12。根据实施例1、10或11所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括如SEQ ID NO:21所示的FR L1、如SEQ ID NO:22所示的FR L2、如SEQ ID NO:23所示的FR L3和如SEQ ID NO:24所示的FR L4。
实施例13。根据实施例1或10-12所述的重组蛋白，其中，所述重链可变域包括如SEQ ID NO:33所示的FR H1、如SEQ ID NO:34所示的FR H2、如SEQ ID NO:35所示的FR H3和如SEQ ID NO:36所示的FR H4。
实施例14。一种重组蛋白，其包括：
(i)能够结合效应细胞配体的第一抗体区；和
(ii)第二抗体区，其包括：
(a)轻链可变域，其包括如SEQ ID NO:38所示的CDR L1、如SEQ ID NO:39所示的CDR L2和如SEQ ID NO:40所示的CDR L3。
(b)重链可变域，其包括如SEQ ID NO:41所示的CDR H1、如SEQ ID NO:42所示的CDR H2和如SEQ ID NO:44所示的CDR H3。
实施例15。根据实施例14所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括SEQ ID NO:44的序列。
实施例16。根据实施例14或15所述的重组蛋白，其中，所述重链可变域包括SEQ IDNO:47的序列。
实施例17。根据实施例14-16中任一项所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括如SEQ ID NO:50所示的FR L1、如SEQ ID NO:51所示的FR L2、如SEQ ID NO:52所示的FRL3和如SEQ ID NO:53所示的FR L4。
实施例18。根据实施例14-17中任一项所述的重组蛋白，其中，所述重链可变域包括如SEQ ID NO:62所示的FR H1、如SEQ ID NO:63所示的FR H2、如SEQ ID NO:64所示的FRH3和如SEQ ID NO:65所示的FR H4。
实施例19。根据实施例14所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括SEQ ID NO:45的序列。
实施例20。根据实施例14或19所述的重组蛋白，其中，所述重链可变域包括SEQ IDNO:48的序列。
实施例21。根据实施例14、19或20中任一项所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括如SEQ ID NO:54所示的FR L1、如SEQ ID NO:55所示的FR L2、如SEQ ID NO:56所示的FR L3和如SEQ ID NO:57所示的FR L4。
实施例22。根据实施例14或19-21中任一项所述的重组蛋白，其中，所述重链可变域包括如SEQ ID NO:66所示的FR H1、如SEQ ID NO:67所示的FR H2、如SEQ ID NO:68所示的FR H3和如SEQ ID NO:69所示的FR H4。
实施例23。根据实施例14所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括SEQ ID NO:46的序列。
实施例24。根据实施例14或23所述的重组蛋白，其中，所述重链可变域包括SEQ IDNO:49的序列。
实施例25。根据实施例14、23或24所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括如SEQ ID NO:58所示的FR L1、如SEQ ID NO:59所示的FR L2、如SEQ ID NO:60所示的FR L3和如SEQ ID NO:61所示的FR L4。
实施例26。根据实施例14或23-25所述的重组蛋白，其中，所述重链可变域包括如SEQ ID NO:70所示的FR H1、如SEQ ID NO:71所示的FR H2、如SEQ ID NO:72所示的FR H3和如SEQ ID NO:73所示的FR H4。
实施例27。根据实施例1-26所述的重组蛋白，其中，所述第一抗体区是第一Fab'片段，或者所述第二抗体区是第二Fab'片段。
实施例28。根据实施例1-26所述的重组蛋白，其中，所述第一抗体区是第一单链可变片段(scFv)，或者所述第二抗体区是第二单链可变片段(scFv)。
实施例29。根据实施例1-28所述的重组蛋白，其中，所述第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约小于5nM的BAFF-R蛋白。
实施例30。根据实施例1-29所述的重组蛋白，其中，所述第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约小于4nM的BAFF-R蛋白。
实施例31。如实施例1-30中任一项所述的重组蛋白，其中，所述第一抗体区包括：
(a)轻链可变域，其包括如SEQ ID NO:74所示的CDR L1、如SEQ ID NO:75所示的CDR L2和如SEQ ID NO:76所示的CDR L3；和
(b)重链可变域，其包括如SEQ ID NO:77所示的CDR H1、如SEQ ID NO:78所示的CDR H2和如SEQ ID NO:79所示的CDR H3。
实施例32。如实施例1-30中任一项所述的重组蛋白，其中，所述第一抗体区包括：
(a)轻链可变域，其包括如SEQ ID NO:81所示的CDR L1、如SEQ ID NO:82所示的CDR L2和如SEQ ID NO:83所示的CDR L3；和
(b)重链可变域，其包括如SEQ ID NO:84所示的CDR H1、如SEQ ID NO:85所示的CDR H2和如SEQ ID NO:86所示的CDR H3。
实施例33。根据实施例1-32所述的重组蛋白，其中，所述第一抗体区是第一单链可变片段(scFv)。
实施例34。根据实施例33所述的重组蛋白，其中，所述第一scFv包括SEQ ID NO:80或SEQ ID NO:87的序列。
实施例35。根据实施例1-34中任一项所述的重组蛋白，其中，所述效应细胞配体是CD3蛋白。
实施例36。根据实施例1-35中任一项所述的重组蛋白，其中，所述第二抗体区与BAFF-R蛋白结合。
实施例37。根据实施例36所述的重组蛋白，其中，所述BAFF-R蛋白是人BAFF-R蛋白。
实施例38。根据实施例36所述的重组蛋白，其中，所述BAFF-R蛋白形成细胞的一部分。
实施例39。根据实施例38所述的重组蛋白，其中，所述BAFF-R蛋白在所述细胞表面上表达。
实施例40。根据实施例39所述的重组蛋白，其中，所述细胞是淋巴细胞。
实施例41。根据实施例39所述的重组蛋白，其中，所述细胞是B细胞。
实施例42。根据实施例39所述的重组蛋白，其中，所述细胞是癌细胞。
实施例43。根据实施例42所述的重组蛋白，其中，所述癌细胞是淋巴瘤细胞。
实施例44。一种药物组合物，其包括治疗有效量的根据实施例1-43中任一项所述的重组蛋白及药学上可接受的赋形剂。
实施例45。一种治疗有此需要的受试者所患癌症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的根据实施例1-43中任一项所述的重组蛋白来治疗所述受试者所患癌症。
实施例46。根据实施例45所述的方法，其中，所述癌症是淋巴瘤、白血病或骨髓瘤。
实施例47。一种治疗有此需要的受试者所患自身免疫性疾病的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的根据实施例1-43中任一项所述的重组蛋白，从而治疗所述受试者的自身免疫性疾病。
序列表
<110> 希望之城
<120> BAFF-R双特异性T细胞衔接子抗体
<130> 048440-715001WO
<150> US 62/782,317
<151> 2018-12-19
<160> 87
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 1
Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Ile Ser
1 5
<210> 2
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 2
Ala Ala Ser
1
<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 3
Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr
1 5
<210> 4
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 4
Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly Tyr
1 5
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 5
Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 6
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 6
Ala Ser Pro Asn Tyr Pro Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 7
<211> 134
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 7
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
20 25 30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser
35 40 45
Val Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro
50 55 60
Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Arg Ala Thr
65 70 75 80
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
100 105 110
Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val
115 120 125
Glu Ile Lys Arg Thr Val
130
<210> 8
<211> 134
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 8
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
20 25 30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser
35 40 45
Val Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro
50 55 60
Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Arg Ala Thr
65 70 75 80
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
100 105 110
Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val
115 120 125
Glu Ile Lys Arg Thr Val
130
<210> 9
<211> 134
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 9
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser
35 40 45
Val Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro
50 55 60
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gly Ser
65 70 75 80
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
100 105 110
Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
115 120 125
Glu Ile Lys Arg Thr Val
130
<210> 10
<211> 142
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 10
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1 5 10 15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly
20 25 30
Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val
35 40 45
Ser Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln His
50 55 60
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp
85 90 95
Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala
100 105 110
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser Pro Asn Tyr Pro Phe Tyr Ala
115 120 125
Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
<210> 11
<211> 142
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 11
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1 5 10 15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly
20 25 30
Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val
35 40 45
Ser Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln His
50 55 60
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp
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Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala
100 105 110
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser Pro Asn Tyr Pro Phe Tyr Ala
115 120 125
Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
<210> 12
<211> 142
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 12
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1 5 10 15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly
20 25 30
Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val
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Ser Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro
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Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp
85 90 95
Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala
100 105 110
Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Ser Pro Asn Tyr Pro Phe Tyr Ala
115 120 125
Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
<210> 13
<211> 46
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 13
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
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Gly Ser Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
20 25 30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser
35 40 45
<210> 14
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 14
Phe Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
1 5 10 15
Ile Tyr
<210> 15
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 15
Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala
20 25 30
Val Tyr Tyr Cys
35
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 16
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
1 5 10
<210> 17
<211> 46
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 17
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
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Gly Ser Thr Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
20 25 30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 18
Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
1 5 10 15
Ile Tyr
<210> 19
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 19
Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala
20 25 30
Val Tyr Tyr Cys
35
<210> 20
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 20
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
1 5 10
<210> 21
<211> 46
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 21
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser
35 40 45
<210> 22
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 22
Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
1 5 10 15
Ile Tyr
<210> 23
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 23
Asn Leu Gly Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
20 25 30
Thr Tyr Tyr Cys
35
<210> 24
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 24
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
1 5 10
<210> 25
<211> 49
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 25
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1 5 10 15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly
20 25 30
Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val
35 40 45
Ser
<210> 26
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 26
Trp Asn Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
1 5 10 15
Tyr
<210> 27
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 27
Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr
1 5 10 15
Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp
20 25 30
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
35
<210> 28
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 28
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 29
<211> 49
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 29
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1 5 10 15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly
20 25 30
Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val
35 40 45
Ser
<210> 30
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 30
Trp Asn Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
1 5 10 15
Tyr
<210> 31
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 31
Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr
1 5 10 15
Ser Lys Asn Gln Tyr Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp
20 25 30
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
35
<210> 32
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 32
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 33
<211> 49
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 33
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1 5 10 15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly
20 25 30
Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val
35 40 45
Ser
<210> 34
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 34
Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
1 5 10 15
Tyr
<210> 35
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 35
Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr
1 5 10 15
Ser Lys Asn Gln Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp
20 25 30
Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
35
<210> 36
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 36
Trp Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 37
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 37
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 38
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 38
Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
1 5
<210> 39
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 39
Tyr Thr Ser
1
<210> 40
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 40
His Gln Phe Ser Glu Leu Pro Trp Thr
1 5
<210> 41
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 41
Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly
1 5 10
<210> 42
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 42
Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys
1 5
<210> 43
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 43
Ala Arg Ser Phe Gly Tyr Gly Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 44
<211> 130
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 44
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp
35 40 45
Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Thr Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Phe Ser
100 105 110
Glu Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
115 120 125
Thr Val
130
<210> 45
<211> 130
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 45
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp
35 40 45
Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Thr Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Phe Ser
100 105 110
Glu Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
115 120 125
Thr Val
130
<210> 46
<211> 130
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 46
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp
35 40 45
Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Thr Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Thr Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Phe Ser
100 105 110
Glu Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
115 120 125
Thr Val
130
<210> 47
<211> 142
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 47
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1 5 10 15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly
20 25 30
Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe
35 40 45
Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg
50 55 60
Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp
65 70 75 80
Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr
85 90 95
Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp
100 105 110
Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Phe Gly Tyr Gly
115 120 125
Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
<210> 48
<211> 142
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 48
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1 5 10 15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly
20 25 30
Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe
35 40 45
Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg
50 55 60
Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp
65 70 75 80
Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Ser Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr
85 90 95
Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp
100 105 110
Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Phe Gly Tyr Gly
115 120 125
Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
<210> 49
<211> 142
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 49
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1 5 10 15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly
20 25 30
Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe
35 40 45
Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg
50 55 60
Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp
65 70 75 80
Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Thr Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr
85 90 95
Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu Lys Met Thr Asn Met Asp
100 105 110
Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Phe Gly Tyr Gly
115 120 125
Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
<210> 50
<211> 46
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 50
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser
35 40 45
<210> 51
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 51
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
1 5 10 15
Tyr
<210> 52
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 52
Ser Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala
20 25 30
Thr Tyr Tyr Cys
35
<210> 53
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 53
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
1 5 10
<210> 54
<211> 46
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 54
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser
35 40 45
<210> 55
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 55
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
1 5 10 15
Tyr
<210> 56
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 56
Ser Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala
20 25 30
Thr Tyr Tyr Cys
35
<210> 57
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 57
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
1 5 10
<210> 58
<211> 46
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 58
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser
35 40 45
<210> 59
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 59
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Thr Pro Lys Leu Leu Ile
1 5 10 15
Tyr
<210> 60
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 60
Ser Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala
20 25 30
Thr Tyr Tyr Cys
35
<210> 61
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 61
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
1 5 10
<210> 62
<211> 49
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 62
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1 5 10 15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly
20 25 30
Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe
35 40 45
Ser
<210> 63
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 63
Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10 15
His
<210> 64
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 64
Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr
1 5 10 15
Ser Lys Asn Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp
20 25 30
Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
35
<210> 65
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 65
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 66
<211> 49
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 66
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1 5 10 15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly
20 25 30
Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe
35 40 45
Ser
<210> 67
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 67
Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10 15
His
<210> 68
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 68
Tyr Tyr Asn Ser Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr
1 5 10 15
Ser Lys Asn Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp
20 25 30
Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
35
<210> 69
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 69
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 70
<211> 49
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 70
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1 5 10 15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly
20 25 30
Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe
35 40 45
Ser
<210> 71
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 71
Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10 15
His
<210> 72
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 72
Tyr Tyr Asn Thr Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr
1 5 10 15
Ser Lys Asn Gln Val Val Leu Lys Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp
20 25 30
Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
35
<210> 73
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 73
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 74
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 74
Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr
1 5
<210> 75
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 75
Gly Thr Lys
1
<210> 76
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 76
Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val
1 5
<210> 77
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 77
Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala
1 5
<210> 78
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 78
Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr
1 5 10
<210> 79
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 79
Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr
1 5 10 15
<210> 80
<211> 249
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 80
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val
130 135 140
Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu
145 150 155 160
Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn
165 170 175
Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly
180 185 190
Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu
195 200 205
Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp
210 215 220
Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe
225 230 235 240
Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 81
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 81
Ser Ser Val Ser Tyr
1 5
<210> 82
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 82
Asp Thr Ser
1
<210> 83
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 83
Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr
1 5
<210> 84
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 84
Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr
1 5
<210> 85
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 85
Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr
1 5
<210> 86
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构
<400> 86
Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 87
<211> 241
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合称结构
<400> 87
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Ala Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
130 135 140
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser
145 150 155 160
Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala
165 170 175
Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro
180 185 190
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile
195 200 205
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp
210 215 220
Ser Ser Asn Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr
225 230 235 240
Arg

Claims (47)

1.一种重组蛋白，包括：
(i)能够结合效应细胞配体的第一抗体区；和
(ii)第二抗体区，其包括：
(a)轻链可变域，其包括如SEQ ID NO:1所示的CDR L1、如SEQ ID NO:2所示的CDR L2和如SEQ ID NO:3所示的CDR L3；以及
(b)重链可变域，包括如SEQ ID NO:4所示的CDR H1、如SEQ ID NO:5所示的CDR H2和如SEQ ID NO:6所示的CDR H3。
2.根据权利要求1所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括SEQ ID NO:7的序列。
3.根据权利要求1或2所述的重组蛋白，其中，所述重链可变域包括SEQ ID NO:10的序列。
4.根据权利要求1所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括如SEQ ID NO:13所示的FR L1、如SEQ ID NO:14所示的FR L2、如SEQ ID NO:15所示的FR L3和如SEQ ID NO:16所示的FR L4。
5.根据权利要求1所述的重组蛋白，其中，所述重链可变域包括如SEQ ID NO:25所示的FR H1、如SEQ ID NO:26所示的FR H2、如SEQ ID NO:27所示的FR H3和如SEQ ID NO:28所示的FR H4。
6.根据权利要求1所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括SEQ ID NO:8的序列。
7.根据权利要求1或6所述的重组蛋白，其中，所述重链可变域包括SEQ ID NO:11的序列。
8.根据权利要求1所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括如SEQ ID NO:17所示的FR L1、如SEQ ID NO:18所示的FR L2、如SEQ ID NO:19所示的FR L3和如SEQ ID NO:20所示的FR L4。
9.根据权利要求1所述的重组蛋白，其中，所述重链可变域包括如SEQ ID NO:29所示的FR H1、如SEQ ID NO:30所示的FR H2、如SEQ ID NO:31所示的FR H3和如SEQ ID NO:32所示的FR H4。
10.根据权利要求1所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括SEQ ID NO:9的序列。
11.根据权利要求1或10所述的重组蛋白，其中，所述重链可变域包括SEQ ID NO:12的序列。
12.根据权利要求1所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括如SEQ ID NO:21所示的FR L1、如SEQ ID NO:22所示的FR L2、如SEQ ID NO:23所示的FR L3和如SEQ ID NO:24所示的FR L4。
13.根据权利要求1所述的重组蛋白，其中，所述重链可变域包括如SEQ ID NO:33所示的FR H1、如SEQ ID NO:34所示的FR H2、如SEQ ID NO:35所示的FR H3和如SEQ ID NO:36所示的FR H4。
14.一种重组蛋白，包括：
(i)能够结合效应细胞配体的第一抗体区；和
(ii)第二抗体区，其包括：
(a)轻链可变域，其包括如SEQ ID NO:38所示的CDR L1、如SEQ ID NO:39所示的CDR L2和如SEQ ID NO:40所示的CDR L3。
(b)重链可变域，其包括如SEQ ID NO:41所示的CDR H1、如SEQ ID NO:42所示的CDR H2和如SEQ ID NO:43所示的CDR H3。
15.根据权利要求14所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括SEQ ID NO:44的序列。
16.根据权利要求14或15所述的重组蛋白，其中，所述重链可变域包括SEQ ID NO:47的序列。
17.根据权利要求14所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括如SEQ ID NO:50所示的FR L1、如SEQ ID NO:51所示的FR L2、如SEQ ID NO:52所示的FR L3和如SEQ ID NO:53所示的FR L4。
18.根据权利要求14所述的重组蛋白，其中，所述重链可变域包括如SEQ ID NO:62所示的FR H1、如SEQ ID NO:63所示的FR H2、如SEQ ID NO:64所示的FR H3和如SEQ ID NO:65所示的FR H4。
19.根据权利要求14所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括SEQ ID NO:45的序列。
20.根据权利要求14或19所述的重组蛋白，其中，所述重链可变域包括SEQ ID NO:48的序列。
21.根据权利要求14所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括如SEQ ID NO:54所示的FR L1、如SEQ ID NO:55所示的FR L2、如SEQ ID NO:56所示的FR L3和如SEQ ID NO:57所示的FR L4。
22.根据权利要求14所述的重组蛋白，其中，所述重链可变域包括如SEQ ID NO:66所示的FR H1、如SEQ ID NO:67所示的FR H2、如SEQ ID NO:68所示的FR H3和如SEQ ID NO:69所示的FR H4。
23.根据权利要求14所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括SEQ ID NO:46的序列。
24.根据权利要求14或23所述的重组蛋白，其中，所述重链可变域包括SEQ ID NO:49的序列。
25.根据权利要求14所述的重组蛋白，其中，所述轻链可变域包括如SEQ ID NO:58所示的FR L1、如SEQ ID NO:59所示的FR L2、如SEQ ID NO:60所示的FR L3和如SEQ ID NO:61所示的FR L4。
26.根据权利要求14任一项所述的重组蛋白，其中，所述重链可变域包括如SEQ ID NO:70所示的FR H1、如SEQ ID NO:71所示的FR H2、如SEQ ID NO:72所示的FR H3和如SEQ IDNO:73所示的FR H4。
27.根据权利要求1所述的重组蛋白，其中，所述第一抗体区是第一Fab'片段，或者所述第二抗体区是第二Fab'片段。
28.根据权利要求1所述的重组蛋白，其中，所述第一抗体区是第一单链可变片段(scFv)或所述第二抗体区是第二单链可变片段(scFv)。
29.根据权利要求1所述的重组蛋白，其中，所述第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约小于5nM的BAFF-R蛋白。
30.根据权利要求1所述的重组蛋白，其中，所述第二抗体区能够结合平衡解离常数(KD)约小于4nM的BAFF-R蛋白。
31.根据权利要求1所述的重组蛋白，其中，所述第一抗体区包括：
(a)轻链可变域，其包括如SEQ ID NO:74所示的CDR L1、如SEQ ID NO:75所示的CDR L2和如SEQ ID NO:76所示的CDR L3；和
(b)重链可变域，其包括如SEQ ID NO:77所示的CDR H1、如SEQ ID NO:78所示的CDR H2和如SEQ ID NO:79所示的CDR H3。
32.根据权利要求1所述的重组蛋白，其中，所述第一抗体区包括：
(a)轻链可变域，其包括如SEQ ID NO:81所示的CDR L1、如SEQ ID NO:82所示的CDR L2和如SEQ ID NO:83所示的CDR L3；和
(b)重链可变域，其包括如SEQ ID NO:84所示的CDR H1、如SEQ ID NO:85所示的CDR H2和如SEQ ID NO:86所示的CDR H3。
33.根据权利要求1或32所述的重组蛋白，其中，所述第一抗体区是第一单链可变片段(scFv)。
34.根据权利要求33所述的重组蛋白，其中，所述第一scFv包括SEQ ID NO:80或SEQ IDNO:87的序列。
35.根据权利要求1所述的重组蛋白，其中，所述效应细胞配体是CD3蛋白。
36.根据权利要求1所述的重组蛋白，其中，所述第二抗体区与BAFF-R蛋白结合。
37.根据权利要求36所述的重组蛋白，其中，所述BAFF-R蛋白是人BAFF-R蛋白。
38.根据权利要求36所述的重组蛋白，其中，所述BAFF-R蛋白形成细胞的一部分。
39.根据权利要求38所述的重组蛋白，其中，所述BAFF-R蛋白在所述细胞表面上表达。
40.根据权利要求39所述的重组蛋白，其中，所述细胞是淋巴细胞。
41.根据权利要求39所述的重组蛋白，其中，所述细胞是B细胞。
42.根据权利要求39所述的重组蛋白，其中，所述细胞是癌细胞。
43.根据权利要求42所述的重组蛋白，其中，所述癌细胞是淋巴瘤细胞。
44.一种药物组合物，其包括治疗有效量的根据权利要求1所述的重组蛋白及药学上可接受的赋形剂。
45.一种治疗有此需要的受试者所患癌症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的根据权利要求1所述的重组蛋白来治疗所述受试者所患癌症。
46.根据权利要求45所述的方法，其中，所述癌症是淋巴瘤、白血病或骨髓瘤。
47.一种治疗有此需要的受试者所患自身免疫性疾病的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的根据权利要求1所述的重组蛋白来治疗所述受试者的自身免疫性疾病。
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