CN115697419A - 多聚体抗dr5结合分子与癌症疗法组合治疗癌症的用途 - Google Patents

多聚体抗dr5结合分子与癌症疗法组合治疗癌症的用途 Download PDF

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Abstract

本公开提供了用于治疗癌症的治疗方法，其包括使用多聚体抗DR5抗体和癌症疗法的组合疗法，所述癌症疗法例如放射、蒽环类药物、叶酸类似物、铂基药剂、紫杉烷、拓扑异构酶II抑制剂、SMAC模拟物、长春花生物碱、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、磷酸肌醇3‑激酶δ(PI3Kδ)抑制剂、髓系细胞白血病‑1(Mcl‑1)抑制剂或它们的任何组合。

Description

多聚体抗DR5结合分子与癌症疗法组合治疗癌症的用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2020年5月12日提交的美国临时专利申请序列号63/023,635；2020年9月15日提交的63/078,747；2020年11月17日提交的63/114,990；2020年12月29日提交的63/131,698和2021年1月11日提交的63/136,156的权益，所述申请各自以引用的方式整体并入本文。
序列表
本申请含有已以ASCII格式电子提交并且特此以引用的方式整体并入的序列表。ASCII副本创建于2021年5月11日，命名为030WO1-Sequence-Listing，并且大小为139,726字节。
背景技术
可多聚化的抗体和抗体样分子，诸如IgA和IgM抗体，已成为例如免疫肿瘤学和传染病的领域中有前途的药物候选物，从而允许改善的特异性、改善的亲合力和结合多个结合靶标的能力。参见例如美国专利号9,951,134、9,938,347、10,351,631和10,400,038，美国专利申请公布号US 2019-0100597、US 2018-0009897、US 2019-0330374、US 2019-0330360、US 2019-0338040、US 2019-0338041、US 2019-0185570、US 2018-0265596、US2018-0118816、US 2018-0118814和US 2019-0002566，以及PCT公布号WO 2018/187702、WO2019/165340和WO 2019/169314，所述申请的内容以引用的方式整体并入本文。
多聚体IgA或IgM抗体提供了应用于特定生物系统的有用工具，在所述系统中，多个组分必须同时结合以传输生物信号。例如，真核细胞表面上的许多受体蛋白需要同时激活多个单体或亚基，以实现生物信号的激活并将其跨细胞膜传输到细胞的细胞质。
一种此受体是诱导细胞凋亡的肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族蛋白DR5(也称为TRAILR2)。DR5激活需要例如通过TRAIL配体或激动剂抗体，使至少三种非相互作用的受体单体交联以形成稳定的受体三聚体，从而导致跨细胞膜的信号转导。将DR5蛋白三聚体聚集成三聚体“筏”可导致更有效地激活信号级联。
对DR5的关注的增加是由于发现其在以下癌症中的表达：膀胱癌(Li等人,Urology,79(4):968.e7-15,(2012))、胃癌(Lim等人,Carcinogen.,32(5):723-732,(2011))、卵巢癌(Jiang等人,Mol.Med.Rep.,6(2):316-320,(2012))、胰腺导管腺癌(Rajeshkumar等人,Mol.Cancer Ther.,9(9):2583-92,(2010))、口腔鳞状细胞癌(Chen等人Oncotarget 4:206-217,(2013))和非小细胞肺癌(Reck等人,Lung Canc.,82(3):441-448,(2013))。这些癌症中某些癌症的当前护理标准包括例如通过阻断DNA合成、阻断细胞分裂或促进细胞凋亡来破坏细胞生长和代谢的放射或化学治疗剂。
虽然已发现，在即使不添加另外的交联剂的情况下，诸如替加珠单抗(Tigatuzumab)(CS-1008,Daiichi Sankyo Co.Ltd.,公开于美国专利号7,244,429中)的某些抗DR5单克隆抗体在体外和体内有效，但是这些抗体并不导致显著的临床功效。(参见，Reck等人,2013)。然而，最近，已经证明几种不同的抗DR5 IgM抗体在体外和体内均具有更高的功效。参见例如，美国专利申请公布号2018-0009897，所述申请以引用的方式整体并入本文。
对于难以治疗的肿瘤，需要更好的疗法和对现有疗法的增强，包括与抗DR5 IgM抗体的组合疗法。
发明内容
本文提供了一种用于抑制、延迟或减少患有癌症的受试者中恶性细胞生长的方法，所述方法包括向需要治疗的受试者施用组合疗法，所述组合疗法包括：(a)有效量的特异性和激动性结合DR5的二聚体IgA或IgA样抗体或六聚体或五聚体IgM或IgM样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物，其中IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三个或四个，或IgM或IgM样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三至十二个是DR5特异性和激动性的；和(b)有效量的癌症疗法，其中所述癌症疗法包括放射、叶酸类似物、铂基药剂、紫杉烷、拓扑异构酶II抑制剂、第二线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂(SMAC)模拟物、长春花生物碱、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、磷酸肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)抑制剂、髓系细胞白血病-1(Mcl-1)抑制剂、抗VEGF抗体或它们的任何组合。
本文提供了一种用于抑制、延迟或减少需要治疗的患有癌症的受试者中恶性细胞生长的方法，其包括施用有效量的特异性和激动性结合DR5的五聚体或六聚体IgM或IgM样抗体或二聚体IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物，其中IgM或IgM样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三至十二个，或IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三个或四个是DR5特异性和激动性的，其中五聚体或六聚体IgM或IgM样抗体或二聚体IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物与有效量的癌症疗法一起施用，其中所述癌症疗法包括第二线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂(SMAC)模拟物、放射、叶酸类似物、铂基药剂、紫杉烷、拓扑异构酶II抑制剂、长春花生物碱、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、磷酸肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)抑制剂、髓系细胞白血病-1(Mcl-1)抑制剂、抗VEGF抗体或它们的任何组合。
本文提供了一种用于抑制、延迟或减少需要治疗的患有癌症的受试者中恶性细胞生长的方法，其包括施用有效量的癌症疗法，其中所述癌症疗法包括第二线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂(SMAC)模拟物、放射、叶酸类似物、铂基药剂、紫杉烷、拓扑异构酶II抑制剂、长春花生物碱、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、磷酸肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)抑制剂、髓系细胞白血病-1(Mcl-1)抑制剂、抗VEGF抗体或它们的任何组合，其中所述癌症疗法与特异性和激动性结合DR5的五聚体或六聚体IgM或IgM样抗体或二聚体IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物一起施用，其中IgM或IgM样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三至十二个，或IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三个或四个是DR5特异性和激动性的。
本文提供了一种用于诱导需要治疗的患有癌症的受试者中癌细胞凋亡的方法，其包括向受试者施用组合疗法，所述组合疗法包括：(a)有效量的特异性和激动性结合DR5的五聚体或六聚体IgM或IgM样抗体或二聚体IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物，其中IgM或IgM样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三至十二个或IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三个或四个是DR5特异性和激动性的；和(b)有效量的癌症疗法，其中所述癌症疗法包括第二线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂(SMAC)模拟物、放射、叶酸类似物、铂基药剂、紫杉烷、拓扑异构酶II抑制剂、长春花生物碱、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、磷酸肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)抑制剂、髓系细胞白血病-1(Mcl-1)抑制剂、抗VEGF抗体或它们的任何组合。
本文提供了一种用于抑制、延迟或减少需要治疗的患有癌症的受试者中恶性细胞生长的方法，其包括施用有效量的特异性和激动性结合DR5的五聚体或六聚体IgM或IgM样抗体或二聚体IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物，其中IgM或IgM样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三至十二个，或IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三个或四个是DR5特异性和激动性的，其中五聚体或六聚体IgM或IgM样抗体或二聚体IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物与有效量的癌症疗法一起施用，其中所述癌症疗法包括第二线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂(SMAC)模拟物、放射、叶酸类似物、铂基药剂、紫杉烷、拓扑异构酶II抑制剂、长春花生物碱、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、磷酸肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)抑制剂、髓系细胞白血病-1(Mcl-1)抑制剂、抗VEGF抗体或它们的任何组合。
本文提供了一种用于诱导需要治疗的患有癌症的受试者中癌细胞凋亡的方法，其包括施用有效量的癌症疗法，其中所述癌症疗法包括第二线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂(SMAC)模拟物、放射、叶酸类似物、铂基药剂、紫杉烷、拓扑异构酶II抑制剂、长春花生物碱、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、磷酸肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)抑制剂、髓系细胞白血病-1(Mcl-1)抑制剂、抗VEGF抗体或它们的任何组合，其中所述癌症疗法与特异性和激动性结合DR5的五聚体或六聚体IgM或IgM样抗体或二聚体IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物一起施用，其中IgM或IgM样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三至十二个，或IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三个或四个是DR5特异性和激动性的。
在一些实施方案中，癌症疗法包括叶酸类似物。在一些实施方案中，叶酸类似物包括甲酰四氢叶酸。
在一些实施方案中，癌症疗法包括铂基药剂。在一些实施方案中，铂基药剂包括奥沙利铂、卡铂或它们的组合。在一些实施方案中，铂基药剂包括奥沙利铂。在一些实施方案中，铂基药剂包括卡铂。
在一些实施方案中，癌症疗法包括紫杉烷。在一些实施方案中，紫杉烷包括紫杉醇。在一些实施方案中，紫杉醇包括溶剂型紫杉醇、白蛋白纳米颗粒紫杉醇或它们的组合。在一些实施方案中，紫杉醇包括溶剂型紫杉醇。在一些实施方案中，紫杉醇包括白蛋白纳米颗粒紫杉醇。
在一些实施方案中，癌症疗法包括拓扑异构酶II抑制剂。在一些实施方案中，拓扑异构酶II抑制剂包括蒽环类药物。在一些实施方案中，蒽环类药物包括多柔比星。在一些实施方案中，拓扑异构酶II抑制剂包括依托泊苷。
在一些实施方案中，癌症疗法包括SMAC模拟物。在一些实施方案中，SMAC模拟物包括比瑞那帕(birinapant)、GDC-0152、HGS-1029/AEG40826、Debio1143、APG-1387、ASTX660或它们的组合。在一些实施方案中，SMAC模拟物包括二价SMAC模拟物。在一些实施方案中，SMAC模拟物包括比瑞那帕。在一些实施方案中，SMAC模拟物包括APG-1387。在一些实施方案中，SMAC模拟物包括GDC-0152。在一些实施方案中，SMAC模拟物包括HGS-1029/AEG40826。在一些实施方案中，SMAC模拟物包括Debio1143。在一些实施方案中，SMAC模拟物包括ASTX660。在一些实施方案中，SMAC模拟物包括单价SMAC模拟物。
在一些实施方案中，癌症疗法包括长春花生物碱。在一些实施方案中，长春花生物碱包括长春新碱。
在一些实施方案中，癌症疗法包括BTK抑制剂。在一些实施方案中，BTK抑制剂包括依鲁替尼(ibrutinib)。
在一些实施方案中，癌症疗法包括PI3Kδ抑制剂。在一些实施方案中，PI3Kδ抑制剂包括依达拉西布(idelalisib)。
在一些实施方案中，癌症疗法包括Mcl-1抑制剂。在一些实施方案中，Mcl-1抑制剂包括MIK665。
在一些实施方案中，癌症疗法包括抗VEGF抗体。在一些实施方案中，抗VEGF抗体是贝伐珠单抗。
在一些实施方案中，癌症疗法包括放射。
在一些实施方案中，所述方法还包括施用有效量的另外的癌症疗法。在一些实施方案中，另外的癌症疗法包括拓扑异构酶I抑制剂、核苷类似物、铂基药剂或它们的任何组合。在一些实施方案中，另外的癌症疗法包括拓扑异构酶I抑制剂。在一些实施方案中，拓扑异构酶I抑制剂包括伊立替康、拓扑替康或它们的组合。在一些实施方案中，拓扑异构酶I抑制剂包括伊立替康。在一些实施方案中，另外的癌症疗法包括核苷类似物。在一些实施方案中，核苷类似物包括氟尿嘧啶(5-FU)、吉西他滨或它们的任何组合。在一些实施方案中，核苷类似物包括氟尿嘧啶(5-FU)。在一些实施方案中，核苷类似物包括吉西他滨。
在一些实施方案中，癌症是血液癌症或实体瘤。在一些实施方案中，癌症是血液癌症。在一些实施方案中，血液癌症是白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、其任何转移瘤或它们的任何组合。在一些实施方案中，血液癌症是急性髓系白血病(AML)、慢性髓系白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma)、非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma)、多发性骨髓瘤、其任何转移瘤或它们的任何组合。在一些实施方案中，血液癌症是急性髓系白血病(AML)。在一些实施方案中，癌症疗法包括多柔比星。
在一些实施方案中，癌症是实体瘤。在一些实施方案中，癌症是膀胱癌、结肠直肠癌、肉瘤、胃癌、肺癌、胰腺癌、黑色素瘤、卵巢癌、头颈癌或乳腺癌。
在一些实施方案中，癌症是肉瘤。在一些实施方案中，肉瘤是纤维肉瘤、软骨肉瘤或骨肉瘤。在一些实施方案中，肉瘤是纤维肉瘤。在一些实施方案中，癌症疗法包括多柔比星。
在一些实施方案中，癌症是结肠直肠癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括奥沙利铂。在一些实施方案中，另外的疗法包括5-FU。在一些实施方案中，癌症疗法包括甲酰四氢叶酸。在一些实施方案中，另外的疗法包括奥沙利铂或伊立替康。
在一些实施方案中，癌症是胃癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括卡铂。在一些实施方案中，癌症疗法包括奥沙利铂。在一些实施方案中，癌症疗法包括紫杉醇。
在一些实施方案中，癌症是肺癌。在一些实施方案中，肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)。在一些实施方案中，癌症疗法包括卡铂。在一些实施方案中，癌症疗法包括紫杉醇。
在一些实施方案中，癌症是胰腺癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括紫杉醇。在一些实施方案中，另外的疗法包括吉西他滨。
在一些实施方案中，癌症是头颈癌。在一些实施方案中，头颈癌是头颈肉瘤。在一些实施方案中，癌症是乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌是三阴性乳腺癌(TNBC)。在一些实施方案中，癌症疗法包括SMAC模拟物。
在一些实施方案中，抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的三个或四个抗原结合结构域或三至十二个抗原结合结构域包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH和VL包含六个免疫球蛋白互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包含抗体的CDR，所述抗体分别包含VH和VL氨基酸序列SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4；SEQ ID NO:5或SEQ IDNO:90和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；SEQ IDNO:11和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16；SEQID NO:17和SEQ ID NO:18；SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20；SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22；SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26；SEQ ID NO:27和SEQ IDNO:28；SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30；SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32；SEQ ID NO:33和SEQID NO:34；SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36；SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38；SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40；SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42；SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:44；SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:46；SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48；SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50；SEQ IDNO:51和SEQ ID NO:52；SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54；SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56；SEQID NO:82和SEQ ID NO:83；SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:85；SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87；或SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89；或ScFv序列SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ IDNO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ IDNO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:73，或在一个或多个CDR中具有一个或两个氨基酸取代的六个CDR。
在一些实施方案中，抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的三个或四个抗原结合结构域或三至十二个抗原结合结构域包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH和VL包含六个免疫球蛋白互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包含抗体的CDR，所述抗体分别包含VH和VL氨基酸序列SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:6；或SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。
在一些实施方案中，抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的三个或四个抗原结合结构域或三至十二个抗原结合结构域包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH和VL包含六个免疫球蛋白互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包含抗体的CDR，所述抗体分别包含VH和VL氨基酸序列SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:6。在一些实施方案中，抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的三个或四个抗原结合结构域或三至十二个抗原结合结构域包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH和VL包含六个免疫球蛋白互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包含抗体的CDR，所述抗体分别包含VH和VL氨基酸序列SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。
在一些实施方案中，抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的三个或四个抗原结合结构域或三至十二个抗原结合结构域包含抗体VH和VL，其中VH和VL分别包含与以下至少90％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4；SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18；SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20；SEQ IDNO:21和SEQ ID NO:22；SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26；SEQID NO:27和SEQ ID NO:28；SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30；SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32；SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34；SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36；SEQ ID NO:37和SEQ IDNO:38；SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40；SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42；SEQ ID NO:43和SEQID NO:44；SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:46；SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48；SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50；SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:52；SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54；SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56；SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83；SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:85；SEQ IDNO:86和SEQ ID NO:87；或SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89，或其中VH和VL包含在具有分别与以下至少90％相同的氨基酸序列的ScFv中：SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ IDNO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:73。
在一些实施方案中，抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的三个或四个抗原结合结构域或三至十二个抗原结合结构域包含抗体VH和VL，其中VH和VL分别包含与以下至少90％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:6；或SEQ IDNO:7和SEQ ID NO:8。在一些实施方案中，抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的三个或四个抗原结合结构域或三至十二个抗原结合结构域包含抗体VH和VL，其中VH和VL分别包含与以下至少90％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:6。在一些实施方案中，抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的三个或四个抗原结合结构域或三至十二个抗原结合结构域包含抗体VH和VL，其中VH和VL分别包含与以下至少90％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。
在一些实施方案中，抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物是二聚体IgA或IgA样抗体，所述二聚体IgA或IgA样抗体包含两个二价IgA结合单元或其多聚化片段以及J链或其片段或变体，其中每个结合单元包含两个IgA重链恒定区或其多聚化片段，所述IgA重链恒定区或其多聚化片段各自与抗原结合结构域缔合。在一些实施方案中，IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物还包含分泌组分或其片段或变体。在一些实施方案中，IgA重链恒定区或其多聚化片段各自包含Cα3-tp结构域。在一些实施方案中，IgA重链恒定区或其多聚化片段各自包含Cα1结构域和/或Cα2结构域。在一些实施方案中，IgA重链恒定区是人IgA恒定区。在一些实施方案中，每个结合单元包含：两个IgA重链，所述IgA重链各自包含位于IgA恒定区或其多聚化片段的氨基末端的VH；以及两个免疫球蛋白轻链，所述免疫球蛋白轻链各自包含位于免疫球蛋白轻链恒定区的氨基末端的VL。
在一些实施方案中，抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物是五聚体或六聚体IgM抗体，所述五聚体或六聚体IgM抗体分别包含五个或六个二价IgM结合单元，其中每个结合单元包含两个IgM重链恒定区或其多聚化片段，所述IgM重链恒定区或其多聚化片段各自与抗原结合结构域缔合。在一些实施方案中，IgM重链恒定区或其多聚化片段各自包含Cμ4-tp结构域。在一些实施方案中，IgM重链恒定区或其多聚化片段各自包含Cμ1结构域、Cμ2结构域和/或Cμ3结构域。在一些实施方案中，抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物是五聚体，并且还包含J链或其功能片段或其变体。在一些实施方案中，IgM重链恒定区是人IgM恒定区。在一些实施方案中，每个结合单元包含两个IgM重链，所述IgM重链各自包含位于IgM恒定区或其多聚化片段的氨基末端的VH；以及两个免疫球蛋白轻链，所述免疫球蛋白轻链各自包含位于免疫球蛋白轻链恒定区的氨基末端的VL。
在一些实施方案中，J链或其功能片段或变体是可影响多聚体结合分子的血清半衰期的变体J链，其包含相对于野生型J链的一个或多个单一氨基酸取代、缺失或插入；并且其中相对于除了所述一个或多个单一氨基酸取代、缺失或插入之外相同的并且以相同的方式施用于同一动物物种的参考多聚体结合分子，所述多聚体结合分子在施用于动物时表现出增加的血清半衰期。
在一些实施方案中，J链或其功能片段包含在对应于野生型人J链(SEQ ID NO:97)的氨基酸Y102的氨基酸位置处的氨基酸取代。在一些实施方案中，对应于SEQ ID NO:97的Y102的氨基酸被丙氨酸(A)、丝氨酸(S)或精氨酸(R)取代。在一些实施方案中，对应于SEQID NO:97的Y102的氨基酸被丙氨酸(A)取代。在一些实施方案中，J链是变体人J链并且包含氨基酸序列SEQ ID NO:98。
在一些实施方案中，J链或其功能片段包含在对应于人J链(SEQ ID NO:97)的氨基酸N49、氨基酸S51或N49和S51两者的氨基酸位置处的氨基酸取代，其中对应于SEQ ID NO:97的位置S51的单一氨基酸取代不是苏氨酸(T)取代。在一些实施方案中，对应于SEQ IDNO:97的N49的位置被丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、苏氨酸(T)、丝氨酸(S)或天冬氨酸(D)取代。在一些实施方案中，对应于SEQ ID NO:97的N49的位置被丙氨酸(A)取代。在一些实施方案中，对应于SEQ ID NO:97的S51的位置被丙氨酸(A)或甘氨酸(G)取代。在一些实施方案中，对应于SEQ ID NO:97的S51的位置被丙氨酸(A)取代。
在一些实施方案中，J链或其功能片段或变体还包含异源多肽，其中异源多肽与J链或其功能片段或变体直接或间接融合。在一些实施方案中，异源多肽经由肽接头与J链或其功能片段融合。在一些实施方案中，肽接头包含至少5个氨基酸，但不超过25个氨基酸。在一些实施方案中，肽接头由以下组成：GGGGS(SEQ ID NO:99)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:100)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:101)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:102)或GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:103)。在一些实施方案中，异源多肽与J链或其功能片段或变体的N末端、J链或其功能片段或变体的C末端、或J链或其功能片段或变体的N末端和C末端两者融合。
在一些实施方案中，异源多肽可影响多聚体结合分子的吸收、分布、代谢和/或排泄(ADME)。在一些实施方案中，异源多肽包含抗原结合结构域。在一些实施方案中，异源多肽的抗原结合结构域是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗原结合片段包含Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fd片段、Fv片段、单链Fv(scFv)片段、二硫键连接的Fv(sdFv)片段，或它们的任何组合。在一些实施方案中，抗原结合片段是scFv片段。
在一些实施方案中，相对于单独施用抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物或癌症疗法，施用组合疗法导致增强的治疗功效。在一些实施方案中，增强的治疗功效包括降低的肿瘤生长速率、肿瘤消退或增加的存活率。在一些实施方案中，受试者是人。
附图简述
图1A至图1D示出了来自体外应用于MOLM13细胞(图1A)、MV411细胞(图1B)、HT1080细胞(图1C)或原代人肝细胞(图1D)的Mab A和多柔比星的连续剂量组合的协同作用得分的3D曲面图，其中谷反映拮抗作用，并且丘代表协同作用。
图2A至图2I示出了来自体外应用于NCIH460细胞(图2A)、NCIH2228细胞(图2B)、NCIN87细胞(图2C)、PANC1细胞(图2D)、原代人肝细胞(图2E)、SNU5细胞(图2F)、NUCG4细胞(图2G)、ASPC1细胞(图2H)或BXPC3细胞(图2I)的Mab A和紫杉醇的连续剂量组合的协同作用得分的3D曲面图，其中谷反映拮抗作用，并且丘代表协同作用。
图3A至图3E示出了来自体外应用于NCIH460细胞(图3A)、NCIH2228细胞(图3B)、NCIN87细胞(图3C)、NUGC4细胞(图3D)或SNU5细胞(图3E)的Mab A和卡铂的连续剂量组合的协同作用得分的3D曲面图，其中谷反映拮抗作用，并且丘代表协同作用。
图4A至图4H示出了来自体外应用于NUGC4细胞(图4A)、NCIN87细胞(图4B)、SNU5细胞(图4C)、NCIH508细胞(图4D)、HCT15细胞(图4E)、HT55细胞(图4F)、NCI-H2228细胞(图4G)或原代人肝细胞(图4H)的Mab A和多柔比星的连续剂量组合的协同作用得分的3D曲面图，其中谷反映拮抗作用，并且丘代表协同作用。
图5A、图5C、图5E、图5G和图5I示出了用Mab A和/或放射(图5A)、奥沙利铂(图5C)、紫杉醇(图5E)、伊立替康(图5G)或ABT-199(图5I)治疗的小鼠的肿瘤体积随时间的变化。图5B、图5D、图5F、图5H和图5J示出了用Mab A和/或放射(图5B)、奥沙利铂(图5D)、紫杉醇(图5F)、伊立替康(图5H)或ABT-199(图5J)治疗的小鼠的存活率随时间的变化。
图6A至图6B示出了单剂Mab A(图6A)或SMAC模拟物(图6B)对MDA-MB-231肿瘤细胞的细胞活力曲线。
图7A至图7B示出了Mab A和比瑞那帕的组合对MDA-MB-231肿瘤细胞(图7A)或原代人肝细胞(图7B)的细胞活力曲线。
图8A至图8B示出了Mab A和GDC-0152的组合对MDA-MB-231肿瘤细胞(图8A)或原代人肝细胞(图8B)的细胞活力曲线。
图9A至图9B示出了来自应用于MDA-MB-231肿瘤细胞的Mab A和比瑞那帕(图9A)或GDC-0152(图9B)的连续剂量组合的协同作用得分的3D曲面图。
图10A至图10B示出了单剂比瑞那帕(图10A)或GDC-0152(图6B)对DR5激动剂抗性肿瘤细胞的细胞活力曲线。
图11A至图11B示出了Mab A和比瑞那帕(图11A)或GDC-0152(图11B)的组合对DR5激动剂抗性肿瘤细胞的细胞活力曲线。
图12A至图12C示出了用不同浓度的单独Mab A(图12A)、单独依鲁替尼(图12B)或Mab A和依鲁替尼(图12C)处理的U-937细胞的细胞活力曲线。图12D示出了来自Mab A和依鲁替尼的连续剂量组合对U-937细胞的协同作用得分的3D曲面图。
图13A至图13C示出了用不同浓度的单独Mab A(图13A)、单独依鲁替尼(图13B)或Mab A和依鲁替尼(图13C)处理的OCI-LY7细胞的细胞活力曲线。图13D示出了来自Mab A和依鲁替尼的连续剂量组合对OCI-LY7细胞的协同作用得分的3D曲面图。
图14A至图14C示出了用不同浓度的单独Mab A(图14A)、单独依达拉西布(图14B)或Mab A和依达拉西布(图14C)处理的DOHH-2细胞的细胞活力曲线。图14D示出了来自Mab A和依达拉西布的连续剂量组合对DOHH-2细胞的协同作用得分的3D曲面图。
图15A至图15C示出了用不同浓度的单独Mab A(图15A)、单独MIK665(图15B)或MabA和MIK665(图15C)处理的WSU-DLCL2细胞的细胞活力曲线。图15D示出了来自Mab A和MIK665的连续剂量组合对WSU-DLCL2细胞的协同作用得分的3D曲面图。
图16A至图16C示出了用不同浓度的单独Mab A(图16A)、单独MIK665(图16B)或MabA和MIK665(图16C)处理的U-937细胞的细胞活力曲线。图16D示出了来自Mab A和MIK665的连续剂量组合对U-937细胞的协同作用得分的3D曲面图。
图17A至图17C示出了用不同浓度的单独Mab A(图17A)、单独长春新碱(图17B)或Mab A和长春新碱(图17C)处理的U-937细胞的细胞活力曲线。图17D示出了来自Mab A和长春新碱的连续剂量组合对U-937细胞的协同作用得分的3D曲面图。
图18A至图18D示出了用不同浓度的Mab A和依鲁替尼(图18A)、Mab A和依达拉西布(图18B)、Mab A和MIK665(图18C)或Mab A和长春新碱(图18D)处理的人肝细胞的细胞活力曲线。
图19A、图19C、图19E、图19G、图19I、图19K、图19M、图19O、图19Q、图19S、图19U、图19W、图19Y、图19AA、图19AC和图19AE示出了用不同浓度的Mab A和比瑞那帕处理的A2058细胞(图19A)、BT-20细胞(图19C)、DV-90细胞(图19E)、ES-2细胞(图19G)、HCC15细胞(图19I)、HCT 116细胞(图19K)、HT 1080细胞(图19M)、KYSE 410细胞(图.19O)、MEWO细胞(图19Q)、OVCAR-5细胞(图19S)、SK-LU-1细胞(图19U)、SK-MEL-5细胞(图19W)、SNU-1细胞(图19Y)、SW780细胞(图19AA)、SW1353细胞(图19AC)和T24细胞(图19AE)的细胞活力曲线。图19B、图19D、图19F、图19H、图19J、图19L、图19N、图19P、图19R、图19T、图19V、图19X、图19Z、图19AB、图19AD和图19AF示出了来自Mab A和比瑞那帕的连续剂量组合对A2058细胞(图19B)、BT-20细胞(图19D)、DV-90细胞(图19F)、ES-2细胞(图19H)、HCC15细胞(图19J)、HCT 116细胞(图19L)、HT 1080细胞(图19N)、KYSE 410细胞(图19P)、MEWO细胞(图19R)、OVCAR-5细胞(图19T)、SK-LU-1(图19V)、SK-MEL-5细胞(图19X)、SNU-1细胞(图19Z)、SW780细胞(图19AB)、SW1353细胞(图19AD)和T24细胞(图19AF)的协同作用得分的3D曲面图。
图20A示出了用媒介物、Mab A IgM、比瑞那帕、Mab B IgG、Mab A IgM+比瑞那帕或Mab B IgG+比瑞那帕治疗的小鼠到第26天的MDA-MB-231TNBC肿瘤体积随时间的变化。图20B示出了用媒介物、Mab A IgM、比瑞那帕、Mab B IgG、Mab A IgM+比瑞那帕或Mab B IgG+比瑞那帕治疗的小鼠到第54天的肿瘤体积随时间的变化。图20C示出了用媒介物、Mab AIgM、比瑞那帕、Mab B IgG、Mab A IgM+比瑞那帕或Mab B IgG+比瑞那帕治疗的小鼠存活率随时间的变化。
图21A至图21D示出了在EBC-1NSCLC模型(图21A)、HT-1080纤维肉瘤模型(图21B)、HCT 116结肠直肠癌模型(图21C)或SA3840骨肉瘤PDX模型(图21D)中用媒介物、Mab A IgM、比瑞那帕或Mab A IgM+比瑞那帕治疗的小鼠肿瘤体积随时间的变化。
图22A和图22C示出了用不同浓度的Mab A和比瑞那帕处理的Detroit 562细胞(图22A)和KYSE270细胞(图22C)的细胞活力曲线。图22B和图22D示出了来自Mab A和比瑞那帕的连续剂量组合对Detroit 562细胞(图22B)和KYSE270细胞(图22D)的协同作用得分的3D曲面图。
图23A至图23D示出了用不同浓度的Mab A和APG-1387(图23A)、比瑞那帕(图23B)、ASTX660(图23C)或Debio1143(图23D)处理的EBC-1细胞的细胞活力曲线。
图24A示出了用媒介物、Mab A IgM、贝伐珠单抗或Mab A IgM+贝伐珠单抗治疗的小鼠Colo205肿瘤体积随时间的变化。图24B示出了用媒介物、Mab A IgM、贝伐珠单抗或MabA IgM+贝伐珠单抗治疗的小鼠存活率随时间的变化。
具体实施方式
定义
如本文所用，术语“一种/个(a)”或“一种/个(an)”实体是指所述实体中的一个或多个；例如，“结合分子”应理解为代表一个或多个结合分子。因此，术语“一种/个(a)”(或“一种/个(an)”)、“一个或多个”和“至少一个”在本文可互换使用。
此外，当在本文使用时，“和/或”应当视为具体公开两种特定特征或组分的每一者，并且公开或未公开另一者。因此，本文在诸如“A和/或B”的短语中使用的术语“和/或”意欲包括：“A和B二者”；“A或B”；“A”(单独)；和“B”(单独)。同样，在诸如“A、B和/或C”的短语中使用的术语“和/或”意图涵盖以下实施方案中的每一个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。
除非另有定义，否则本文使用的技术和科技术语具有与本公开相关领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。例如，Concise Dictionary of Biomedicine andMolecular Biology,Juo,Pei-Show,第2版,2002,CRC Press；Dictionary of Cell andMolecular Biology,第3版,1999,Academic Press；和Oxford Dictionary ofBiochemistry and Molecular Biology,修订版,2000,Oxford University Press，向技术人员提供本公开中使用的许多术语的通用字典。
单位、前缀和符号以其Système International de Unites(SI)可接受的形式表示。数值范围将限定范围的数量包括在内。除非另外指定，否则氨基酸序列以氨基到羧基的方向从左到右书写。本文提供的标题不限制多个实施方案或本公开的实施方案，其可通过整体参考本说明书而得。因此，如下直接定义的术语通过整体参考本说明书被更详细地定义。
如本文所用，术语“多肽”意图涵盖单数“多肽”以及复数“多肽”，并且是指由通过酰胺键(也称为肽键)线性连接的单体(氨基酸)组成的分子。术语“多肽”是指两个或更多个氨基酸的任何一条或多条链，并且不是指产物的特定长度。因此，肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白质”、“氨基酸链”或用来指两个或更多个氨基酸的一条或多条链的任何其他术语包括在“多肽”的定义内，并且术语“多肽”可代替任何这些术语。术语“多肽”还意图指多肽的表达后修饰产物，包括但不限于糖基化、乙酰化、磷酸化、酰胺化以及通过已知保护基团/封闭基团的衍生化、蛋白水解切割或通过非自然存在的氨基酸的修饰。多肽可衍生自生物源或通过重组技术产生，但不需要从指定的核酸序列翻译。其可以任何方式产生，包括通过化学合成。
本文所公开的多肽可具有的大小为约3个或更多个、5个或更多个、10个或更多个、20个或更多个、25个或更多个、50个或更多个、75个或更多个、100个或更多个、200个或更多个、500个或更多个、1000个或更多个、或2000个或更多个氨基酸。多肽可具有定义的三维结构，尽管其不一定具有此结构。具有定义的三维结构的多肽称为折叠的，并且不具有定义的三维结构但可采用许多不同构象的多肽称为未折叠的。如本文所用，术语糖蛋白是指与至少一个碳水化合物部分偶联的蛋白质，所述至少一个碳水化合物部分经由氨基酸(例如，丝氨酸或天冬酰胺)的含氧或含氮侧链连接到蛋白质。
“分离的”多肽或其片段、变体或衍生物意指不在其自然环境中的多肽。不需要特定的纯化水平。例如，分离的多肽可从其天然或自然环境中去除。与已经通过任何合适的技术来分离、分级或部分或基本上被纯化的天然或重组多肽一样，在宿主细胞中表达的重组产生的多肽和蛋白质被认为是如本文所公开分离的。合成产生的多肽被认为是分离的，其已经通过任何合适的技术来分离、分级或部分或基本上纯化。
如本文所用，术语“非自然存在的多肽”或其任何语法变体是附带条件的定义，所述附带条件的定义明确排除但仅排除由或可能由法官或行政或司法机构确定或解释为“自然存在”的那些形式的多肽。
本文所公开的其他多肽是上述多肽的片段、衍生物、类似物或变体，和它们的任何组合。本文所公开的术语“片段”、“变体”、“衍生物”和“类似物”包括保留对应的天然抗体或多肽的至少一些特性(例如，特异性结合抗原)的任何多肽。除了本文其他各处讨论的特异性抗体片段以外，多肽的片段包括例如蛋白水解片段以及缺失片段。例如，多肽的变体包括如上所述的片段，并且还包括由于氨基酸取代、缺失或插入而具有改变的氨基酸序列的多肽。在某些实施方案中，变体可以是非自然存在的。非自然存在的变体可通过使用本领域已知的诱变技术而产生。变体多肽可包含保守或非保守的氨基酸取代、缺失或添加。衍生物是已被改变以便表现出原始多肽上未发现的其他特征的多肽。实例包括融合蛋白。如本文所用，多肽的“衍生物”也可指具有通过功能性侧基反应化学衍生的一个或多个氨基酸的受试多肽。“衍生物”还包括含有20个标准氨基酸的一个或多个衍生物的那些多肽。例如，4-羟基脯氨酸可取代脯氨酸；5-羟基赖氨酸可取代赖氨酸；3-甲基组氨酸可取代组氨酸；高丝氨酸可取代丝氨酸；并且鸟氨酸可取代赖氨酸。
“保守的氨基酸取代”是一个氨基酸被具有类似侧链的另一个氨基酸替换。本领域中已定义了具有类似侧链的氨基酸家族，包括碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如，天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如，甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸)、β支链侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。例如，用苯丙氨酸取代酪氨酸是保守取代。在某些实施方案中，本公开的多肽、结合分子和抗体的序列中的保守取代并不取消含有氨基酸序列的多肽、结合分子或抗体与多肽、结合分子或抗体结合的抗原的结合。鉴定不消除抗原结合的核苷酸和氨基酸保守取代的方法在本领域中是众所周知的(参见例如，Brummell等人,Biochem.32:1180-1 187(1993)；Kobayashi等人,Protein Eng.12(10):879-884(1999)；和Burks等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94:.412-417(1997))。
术语“多核苷酸”意图涵盖单个核酸以及多个核酸，并且是指分离的核酸分子或构建体，例如，信使RNA(mRNA)、cDNA或质粒DNA(pDNA)。多核苷酸可包含常规的磷酸二酯键或非常规的键(例如，酰胺键，诸如在肽核酸(PNA)中发现的酰胺键)。术语“核酸”或“核酸序列”是指存在于多核苷酸中的任一个或多个核酸区段，例如，DNA或RNA片段。
“分离的”核酸或多核苷酸意指与其天然环境分离的任何形式的核酸或多核苷酸。例如，凝胶纯化的多核苷酸或包含在载体中的编码多肽的重组多核苷酸将被认为是“分离的”。此外，已被工程化以具有用于克隆的酶切位点的多核苷酸区段(例如，PCR产物)被认为是“分离的”。分离的多核苷酸的其他实例包括维持在异源宿主细胞中的重组多核苷酸或在非天然溶液(诸如缓冲液或盐水)中纯化(部分或基本上)的多核苷酸。分离的RNA分子包括多核苷酸的体内或体外RNA转录物，其中转录物不是可在自然界中发现的转录物。分离的多核苷酸或核酸还包括合成制备的此类分子。另外，多核苷酸或核酸可以是调控元件或可包括调控元件，诸如启动子、核糖体结合位点或转录终止子。合成产生的核酸或多核苷酸被认为是分离的，其已经通过任何合适的技术来分离、分级或部分或基本上纯化。
如本文所用，术语“非自然存在的多核苷酸”或其任何语法变体是条件定义，所述条件定义明确排除但仅排除是或可能是由法官或行政或司法机构确定或解释为“自然存在”的那些形式的核酸或多核苷酸。
如本文所用，“编码区”是由翻译成氨基酸的密码子组成的核酸的一部分。尽管“终止密码子”(TAG、TGA或TAA)未翻译成氨基酸，但其可被认为是编码区的一部分，但是任何侧接序列(例如启动子、核糖体结合位点、转录终止子、内含子等)不是编码区的一部分。两个或更多个编码区可存在于单个多核苷酸构建体中，例如，在单个载体上，或存在于单独的多核苷酸构建体中，例如，在单独的(不同的)载体上。此外，任何载体可含有单个编码区，或可包含两个或更多个编码区，例如，单个载体可分别编码免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区。另外，载体、多核苷酸或核酸可包括与另一编码区融合或未融合的异源编码区。异源编码区包括但不限于编码特殊元件或基序的那些区域，诸如分泌信号肽或异源功能结构域。
在某些实施方案中，多核苷酸或核酸是DNA。在DNA的情况下，包含编码多肽的核酸的多核苷酸通常可包括启动子和/或与一个或多个编码区可操作地缔合的其他转录或翻译控制元件。可操作的缔合是基因产物(例如，多肽)的编码区与一个或多个调控序列缔合，从而将基因产物的表达置于一个或多个调控序列的影响或控制之下。如果启动子功能的诱导导致编码期望基因产物的mRNA转录，并且如果两个DNA片段(诸如多肽编码区和与其缔合的启动子)之间的连接性质不干扰表达调控序列指导基因产物表达的能力或不干扰DNA模板被转录的能力，则这两个DNA片段是“可操作地缔合”。因此，如果启动子能够实现核酸的转录，则启动子区域将与编码多肽的所述核酸可操作地缔合。启动子可以是细胞特异性启动子，其指导DNA在预定细胞中的实质转录。除启动子外，其他转录控制元件，例如增强子、操纵子、阻遏子和转录终止信号，可与多核苷酸可操作地缔合以指导细胞特异性转录。
多种转录控制区是本领域技术人员已知的。这些包括但不限于在脊椎动物细胞中起作用的转录控制区，诸如但不限于来自巨细胞病毒的启动子和增强子区段(即刻早期启动子，与内含子-A结合)、猿猴病毒40(早期启动子)和逆转录病毒(诸如劳斯肉瘤病毒(Roussarcoma virus))。其他转录控制区包括衍生自脊椎动物基因的那些，诸如肌动蛋白、热休克蛋白、牛生长激素和兔β-珠蛋白、以及能够控制真核细胞中基因表达的其他序列。其他合适的转录控制区包括组织特异性启动子和增强子以及淋巴因子诱导的启动子(例如，可由干扰素或白介素诱导的启动子)。
类似地，多种翻译控制元件是本领域普通技术人员已知的。这些包括但不限于核糖体结合位点、翻译起始密码子和终止密码子、以及衍生自微小病毒的元件(特别是内部核糖体进入位点或IRES，也称为CITE序列)。
在其他实施方案中，多核苷酸可以是RNA，例如呈信使RNA(mRNA)、转移RNA或核糖体RNA的形式。
多核苷酸和核酸编码区可与编码分泌肽或信号肽的其他编码区缔合，所述分泌肽或信号肽指导由本文所公开的多核苷酸编码的多肽的分泌。根据信号假说，哺乳动物细胞分泌的蛋白具有信号肽或分泌前导序列，一旦生长中的蛋白链开始通过粗面内质网输出，所述信号肽或分泌前导序列就从成熟蛋白上被切割下来。本领域普通技术人员意识到，脊椎动物细胞分泌的多肽可具有与多肽的N末端融合的信号肽，所述信号肽可从完整或“全长”多肽上切割下来以产生分泌的或“成熟”形式的多肽。在某些实施方案中，使用天然信号肽，例如，免疫球蛋白重链或轻链信号肽，或所述序列的功能性衍生物，其保留指导与其可操作地缔合的多肽分泌的能力。可选地，可使用异源哺乳动物信号肽或其功能性衍生物。例如，野生型前导序列可被人组织纤溶酶原激活剂(TPA)或小鼠β-葡糖醛酸糖苷酶的前导序列取代。
如本文所用，术语“DR5”或“TRAILR2”是指在各种细胞和组织的表面上表达的肿瘤坏死因子跨膜受体蛋白家族的成员，其在激活后可诱导细胞的凋亡。
本文公开了与DR5结合从而引起细胞凋亡的某些结合分子或其抗原结合片段、变体或衍生物。除非特别提及全尺寸抗体，否则术语“结合分子”涵盖全尺寸抗体以及此类抗体的抗原结合亚基、片段、变体、类似物或衍生物，例如，以与抗体分子类似的方式结合抗原的工程化抗体分子或片段，但其使用不同的支架。在结合分子是聚合物结合分子(例如，五聚体或六聚体IgM抗体或二聚体IgA抗体)的情况下，当提及多聚体片段、变体或衍生物时，应当理解所述片段、变体或衍生物继续是多聚体。
如本文所用，术语“结合分子”在最广泛的意义上是指特异性结合受体或靶标(例如，表位或抗原决定簇)的分子。如本文进一步描述的，结合分子可包含一个或多个“结合结构域”，例如本文所述的“抗原结合结构域”。结合分子的非限制性实例是如本文详细描述的保留抗原特异性结合的抗体或抗体样分子。在某些实施方案中，“结合分子”包括如本文详细描述的抗体或抗体样分子或抗体衍生的分子。
如本文所用，术语“结合结构域”或“抗原结合结构域”(可互换使用)是指结合分子(例如抗体或抗体样分子或抗体衍生的分子)的区域，其对于特异性结合靶标(例如表位、多肽、细胞或器官)是必要且充分的。例如，“Fv”，例如，抗体的重链可变区和轻链可变区，作为两个单独的多肽亚基或作为单链，被认为是“结合结构域”。其他抗原结合结构域包括但不限于衍生自骆驼科物种的抗体的单一结构域重链可变区(VHH)、或在纤连蛋白支架中表达的六个免疫球蛋白互补决定区(CDR)。如本文所述的“结合分子”例如“抗体”可包括一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个或更多个“抗原结合结构域”。
术语“抗体”和“免疫球蛋白”在本文可互换使用。抗体(或如本文所公开的其片段、变体或衍生物，例如IgM样抗体)至少包括重链的可变结构域(例如，来自骆驼科物种)或至少包括重链和轻链的可变结构域。脊椎动物系统中的基本免疫球蛋白结构被相对较好地理解。参见例如，Harlow等人,Antibodies:A Laboratory Manual,(Cold Spring HarborLaboratory Press,第2版1988)。除非另有说明，否则术语“抗体”涵盖从抗体的小抗原结合片段到全尺寸抗体的任何事物，例如，包括两条完整重链和两条完整轻链的IgG抗体、包括四条完整重链和四条完整轻链并且包括J链和/或分泌组分的IgA抗体、或包括十条或十二条完整重链和十条或十二条完整轻链并且任选地包括J链或其功能片段或变体的IgM衍生的结合分子，例如IgM抗体或IgM样抗体。
术语“免疫球蛋白”包括可在生物化学上区分的各种广泛类别的多肽。本领域技术人员将理解，重链分类为伽马(gamma)、缪(mu)、阿尔法(alpha)、德尔塔(delta)或伊普西龙(epsilon)(γ、μ、α、δ、ε)，其中有一些亚类(例如，γ1-γ4或α1-α2))。此链的性质决定了抗体的“同种型”分别为IgG、IgM、IgA、IgD或IgE。免疫球蛋白亚类(亚型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2等已被很好地表征，并且已知具有功能专一性。鉴于本公开，这些免疫球蛋白中的每种的修饰形式对于本领域技术人员是容易辨别的并因此在本公开的范围内。
轻链分类为卡帕(kappa)或兰布达(lambda)(κ、λ)。每个重链类别可与卡帕(kappa)或兰布达(lambda)轻链结合。通常，轻链和重链彼此共价键合，并且当例如，通过杂交瘤、B细胞或基因工程化宿主细胞来表达免疫球蛋白时，两条重链的“尾”部分通过共价二硫键或非共价键彼此键合。在重链中，氨基酸序列从Y构型的叉端的N末端到每条链底部的C末端。某些抗体(例如，IgG抗体)的基本结构包括经由二硫键共价连接的两个重链亚基和两个轻链亚基，以形成“Y”结构(在本文中也称为“H2L2”结构)或“结合单元”。
在本文中使用术语“结合单元”是指结合分子(例如，抗体、抗体样分子或抗体衍生的分子、其抗原结合片段或其多聚化片段)的一部分，所述部分对应于标准的“H2L2”免疫球蛋白结构，即，两条重链或其片段和两条轻链或其片段。在某些实施方案中，例如，在结合分子是二价IgG抗体或其抗原结合片段的情况下，术语“结合分子”和“结合单元”是等同的。在其他实施方案中，例如，在结合分子是“多聚体结合分子”，例如二聚体IgA抗体、二聚体IgA样抗体、二聚体IgA衍生的结合分子、五聚体或六聚体IgM抗体、五聚体或六聚体IgM样抗体，或五聚体或六聚体IgM衍生的结合分子或其任何衍生物的情况下，所述结合分子包含两个或更多个“结合单元”。在IgA二聚体的情况下为两个结合单元，或在IgM五聚体或六聚体的情况下分别为五个或六个结合单元。结合单元不需要包括全长抗体重链和轻链，但通常将是二价的，即，将包括两个如上文所定义的“抗原结合结构域”。如本文所用，本公开中提供的某些结合分子是“二聚体”，并且包括两个包括IgA恒定区或其多聚化片段的二价结合单元。本公开中提供的某些结合分子是“五聚体”或“六聚体”，并且包括五个或六个包括IgM恒定区或其多聚化片段或变体的二价结合单元。包含两个或更多个，例如两个、五个或六个结合单元的结合分子，例如抗体或抗体样分子或抗体衍生的结合分子，在本文中称为“多聚体”。
如本文所用，术语“J链”是指任何动物物种的IgM或IgA抗体的J链、其任何功能片段、其衍生物和/或其变体，包括成熟人J链，其氨基酸序列表示为SEQ ID NO:97。本文公开了各种J链变体和经修饰的J链衍生物。如本领域普通技术人员将认识到的，“功能片段”或“功能变体”包括可与IgM重链恒定区缔合以形成五聚体IgM抗体的那些片段和变体。
在本文中使用术语“经修饰的J链”是指J链多肽的衍生物，其包含引入或连接至J链序列的异源部分，例如异源多肽，例如外来结合结构域或功能结构域。引入可通过任何方式实现，包括异源多肽或其他部分的直接或间接融合或通过肽或化学接头连接。术语“经修饰的人J链”涵盖但不限于通过引入异源部分例如异源多肽例如外来结合结构域来修饰的包含氨基酸序列SEQ ID NO:97的天然序列人J链或其功能片段，或其功能变体。在某些实施方案中，异源部分不干扰IgM有效聚合成五聚体或IgA高效聚合成二聚体，并且不干扰此类聚合物与靶标的结合。示例性经修饰的J链可在例如美国专利号9,951,134和10,400,038以及美国专利申请公布号US-2019-0185570和US-2018-0265596中找到，所述申请各自以引用的方式整体并入本文。
如本文所用，术语“IgM衍生的结合分子”统称为天然IgM抗体、IgM样抗体，以及包含非抗体结合结构域和/或功能结构域而不是抗体抗原结合结构域或其亚基的其他IgM衍生的结合分子，及其任何片段(例如，多聚化片段)、变体或衍生物。
如本文所用，术语“IgM样抗体”通常指仍保留形成六聚体或例如与J链缔合形成五聚体的能力的变体抗体或抗体衍生的结合分子。IgM样抗体或其他IgM衍生的结合分子通常至少包括IgM恒定区的Cμ4-tp结构域，但可包括来自源于同一物种或源于不同物种的其他抗体同种型(例如，IgG)的重链恒定区结构域。IgM样抗体或其他IgM衍生的结合分子同样可以是其中一个或多个恒定区缺失的抗体片段，只要IgM样抗体能够形成六聚体和/或五聚体。因此，IgM样抗体或其他IgM衍生的结合分子可以是例如杂交IgM/IgG抗体或可以是IgM抗体的“多聚化片段”。
如本文所用，术语“IgA衍生的结合分子”统称为天然IgA抗体、IgA样抗体，以及包含非抗体结合结构域和/或功能结构域而不是抗体抗原结合结构域或其亚基的其他IgA衍生的结合分子，及其任何片段(例如，多聚化片段)、变体或衍生物。
如本文所用，术语“IgA样抗体”通常指仍保留例如与J链缔合形成二聚体的能力的变体抗体或抗体衍生的结合分子。IgA样抗体或其他IgA衍生的结合分子通常至少包括IgA恒定区的Cα3-tp结构域，但可包括来自源于同一物种或源于不同物种的其他抗体同种型(例如，IgG)的重链恒定区结构域。IgA样抗体或其他IgA衍生的结合分子同样可以是其中一个或多个恒定区缺失的抗体片段，只要IgA样抗体能够形成二聚体。因此，IgA样抗体或其他IgA衍生的结合分子可以是例如杂交IgA/IgG抗体或可以是IgA抗体的“多聚化片段”。
术语“价”、“二价”、“多价”和语法等同物是指给定结合分子(例如，抗体、抗体衍生的分子或抗体样分子)或给定结合单元中的结合结构域例如抗原结合结构域的数目。因此，相对于给定结合分子，例如，IgM抗体、IgM样抗体、其他IgM衍生的结合分子或其多聚化片段，术语“二价”、“四价”和“六价”分别表示存在两个抗原结合结构域、四个抗原结合结构域和六个抗原结合结构域。在每个结合单元都是二价的情况下，典型的IgM抗体、IgM样抗体或其他IgM衍生的结合分子可具有10或12个价。二价或多价结合分子，例如，抗体或抗体衍生的分子可以是单特异性的，即，所有抗原结合结构域是相同的，或可以是双特异性或多特异性的，例如，其中两个或更多个抗原结合结构域是不同的，例如，结合同一抗原上的不同表位、或结合完全不同的抗原。
术语“表位”包括能够特异性结合抗体、抗体样分子或抗体衍生的分子的抗原结合结构域的任何分子决定簇。在某些实施方案中，表位可包括分子的化学活性表面基团，诸如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基，并且在某些实施方案中，可具有三维结构特征和或比电荷特征。表位是由抗体的抗原结合结构域结合的靶标区域。
术语“靶标”在最广泛的意义上用于包括可被结合分子(例如抗体、抗体样分子或抗体衍生的分子)结合的物质。靶标可以是例如，多肽、核酸、碳水化合物、脂质或其他分子，或此类分子上的最小表位。此外，“靶标”可以例如是细胞、器官或生物体，例如动物、植物、微生物或病毒，其包含可被结合分子(例如抗体、抗体样分子或抗体衍生的分子)结合的表位。
抗体、抗体样分子或抗体衍生的分子的轻链和重链均分为结构和功能同源性区域。术语“恒定”和“可变”在功能上使用。在这方面，应当理解，可变轻链(VL)和可变重链(VH)部分的可变结构域决定抗原识别和特异性。相反，轻链(CL)和重链的恒定区结构域(例如，CH1、CH2、CH3或CH4)赋予生物学特性，诸如分泌、经胎盘移动性、Fc受体结合、补体结合等。按照惯例，恒定区结构域的编号随其离抗体的抗原结合位点或氨基末端越来越远而增加。N末端部分是可变区，并且C末端部分是恒定区；CH3(或例如在IgM的情况下为CH4)和CL结构域实际上分别包含重链和轻链的羧基末端。
“全长IgM抗体重链”是多肽，所述多肽在N末端至C末端方向上包括抗体重链可变结构域(VH)、抗体重链恒定结构域1(CM1或Cμ1)、抗体重链恒定结构域2(CM2或Cμ2)、抗体重链恒定结构域3(CM3或Cμ3)和可包括尾部片段的抗体重链恒定结构域4(CM4或Cμ4)。
“全长IgA抗体重链”是多肽，所述多肽在N末端至C末端方向上包括抗体重链可变结构域(VH)、抗体恒定重链恒定结构域1(CA1或Cα1)、抗体重链恒定结构域2(CA2或Cα2)和可包括尾部片段的抗体重链恒定结构域3(CA3或Cα3)。
如上所指出的那样，可变区允许结合分子(例如，抗体、抗体样分子或抗体衍生的分子)选择性地识别并特异性结合抗原上的表位。即，结合分子(例如，抗体、抗体样分子或抗体衍生的分子)的VL结构域和VH结构域或互补决定区(CDR)的子集组合以形成抗原结合结构域。更具体地，抗原结合结构域可由每个VH和VL链上的三个CDR定义。某些抗体形成较大的结构。例如，IgA可形成分子，所述分子包括经由二硫键共价连接的两个H2L2结合单元和J链，所述分子还可与分泌组分缔合，并且IgM可形成五聚体或六聚体分子，所述五聚体或六聚体分子包括经由二硫键共价连接的五个或六个H2L2结合单元和任选的J链。
抗体抗原结合结构域中存在的六个“互补决定区”或“CDR”是短的非连续氨基酸序列，当抗体在水性环境中呈现其三维构型时，所述氨基酸序列被特异性定位以形成抗原结合结构域。抗原结合结构域中的其余氨基酸被称为“骨架”区，其示出较小的分子间变异性。骨架区主要采用β-片层构象，并且CDR形成环，所述环连接且在一些情形下形成β-片层结构的一部分。因此，骨架区起形成支架的作用，所述支架提供通过链间非共价相互作用将CDR定位在正确的方向上。由定位的CDR形成的抗原结合结构域限定与免疫反应性抗原上的表位互补的表面。此互补表面促进抗体与其同源表位的非共价结合。对于任何给定的重链或轻链可变区，本领域普通技术人员可容易地鉴定分别组成CDR和骨架区的氨基酸，因为它们是以各种不同的方式定义的(参见，“Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,”Kabat,E.,等人,U.S.Department of Health and Human Services,(1983)；以及Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.,196:901-917(1987)，所述文献以引用的方式整体并入本文)。
在本领域内使用和/或公认的术语存在两个或更多个定义的情况下，除非明确相反说明，否则本文所用的术语的定义意图包括所有此类含义。具体的实例是使用术语“互补决定区”(“CDR”)来描述在重链和轻链多肽的可变区内发现的非连续抗原结合位点。已例如由Kabat等人,U.S.Dept.of Health and Human Services,“Sequences of Proteins ofImmunological Interest”(1983)以及由Chothia等人,J.Mol.Biol.196:901-917(1987)描述了这些特定区域，其以引用的方式并入本文。Kabat和Chothia定义包括彼此比较时的氨基酸的重叠或子集。然而，除非另有指明，否则应用任一定义(或本领域普通技术人员已知的其他定义)来提及抗体或其变体的CDR意图落入本文定义和使用的术语的范围内。下表1中列出了涵盖由以上引用的参考文献中的每个所定义的CDR的适当氨基酸，作为比较。涵盖特定CDR的确切氨基酸数将根据CDR的序列和大小而变化。给定抗体的可变区氨基酸序列，本领域技术人员可常规地确定哪些氨基酸包含特定的CDR。
表1 CDR定义*
Kabat Chothia
VH CDR1 31-35 26-32
VH CDR2 50-65 52-58
VH CDR3 95-102 95-102
VL CDR1 24-34 26-32
VL CDR2 50-56 50-52
VL CDR3 89-97 91-96
*表1中所有CDR定义的编号是根据Kabat等人提出的编号约定(见下文)。
例如，也可使用IMGT信息系统(imgt dot cines dot fr/)
Figure BDA0003915187800000311
对抗体可变结构域进行分析，以鉴定可变区区段，包括CDR。(参见例如，Brochet等人,Nucl.Acids Res,36:W503-508,2008)。
Kabat等人还定义了适用于任何抗体的可变结构域序列的编号系统。本领域普通技术人员可明确地将此“Kabat编号”系统分配给任何可变结构域序列，而不依赖于序列本身以外的任何实验数据。如本文所用，“Kabat编号”是指由以下提出的编号系统：Kabat等人,U.S.Dept.of Health and Human Services,“Sequence of Proteins ofImmunological Interest”(1983)。然而，除非明确指出使用Kabat编号系统，否则本公开中所有氨基酸序列使用连续编号。
用于人IgM恒定结构域的Kabat编号系统可在以下文献中找到：Kabat等人“Tabulation and Analysis of Amino acid and nucleic acid Sequences ofPrecursors,V-Regions,C-Regions,J-Chain,T-Cell Receptors for Antigen,T-CellSurface Antigens,β-2Microglobulins,Major Histocompatibility Antigens,Thy-1,Complement,C-Reactive Protein,Thymopoietin,Integrins,Post-gamma Globulin,α-2Macroglobulins,and Other Related Proteins,”U.S.Dept.of Health and HumanServices(1991)。IgM恒定区可依序编号(即氨基酸#1从恒定区的第一个氨基酸开始)，或通过使用Kabat编号方案来编号。下面列出了人IgM恒定区的两个等位基因依序编号(在本文中表示为SEQ ID NO:91(等位基因IGHM*03)和SEQ ID NO:92(等位基因IGHM*04))和通过Kabat系统编号的比较。加下划线的氨基酸残基未在Kabat系统中列入(
Figure BDA0003915187800000322
下面双下划线，可以是丝氨酸(S)(SEQ ID NO:91)或甘氨酸(G)(SEQ ID NO:92)):
IgM重链的依序(SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92)/KABAT编号索引
Figure BDA0003915187800000321
结合分子，例如，抗体、抗体样分子或抗体衍生的分子、其抗原结合片段、变体或衍生物、和/或其多聚化片段包括但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、人抗体、人源化抗体或嵌合抗体、单链抗体、表位结合片段，例如，Fab、Fab’和F(ab’)2、Fd、Fv、单链Fv(scFv)、单链抗体、二硫键连接的Fv(sdFv)、包含VL或VH结构域的片段、由Fab表达文库产生的片段。ScFv分子在本领域中已知并且描述于例如，美国专利5,892,019中。
“特异性结合”通常是指结合分子(例如，抗体或其片段、变体或衍生物)经由其抗原结合结构域结合表位，并且所述结合需要抗原结合结构域与表位之间的某种互补性。根据此定义，当与随机的无关表位结合相比，结合分子(例如，抗体、抗体样分子或抗体衍生的分子)经由其抗原结合结构域更容易地结合一个表位时，可将其判定为“特异性结合”所述表位。本文中使用术语“特异性”以限定某个结合分子与某个表位结合的相对亲和力。例如，可认为对于给定的表位，结合分子“A”比结合分子“B”具有更高的特异性，或可将结合分子“A”判定为与表位“C”结合的特异性比与相关表位“D”结合的特异性更高。
可将本文所公开的结合分子(例如，抗体或其片段、变体或衍生物)判定为以小于或等于5X10-2秒-1、10-2秒-1、5X10-3秒-1、10-3秒-1、5X10-4秒-1、10-4秒-1、5X10-5秒-1或10-5秒- 15X10-6秒-1、10-6秒-1、5X10-7秒-1或10-7秒-1的解离速率(k(off))与靶抗原结合。
可将本文所公开的结合分子(例如，抗体或抗原结合片段、变体或衍生物)判定为以大于或等于103M-1秒-1、5X103M-1秒-1、104M-1秒-1、5X104M-1秒-1、105M-1秒-1、5X105M-1秒-1、106M-1秒-1、或5X106M-1秒-1或107M-1秒-1的缔合速率(k(on))与靶抗原结合。
如果结合分子(例如，抗体或其片段、变体或衍生物)优先结合表位至其在一定程度上阻断参考抗体或抗原结合片段与给定表位的结合，则可将其判定为竞争性抑制参考抗体或抗原结合片段与所述表位的结合。竞争抑制可通过本领域已知的任何方法，例如竞争ELISA测定来确定。可将结合分子判定为竞争性地抑制参考抗体或抗原结合片段与给定表位的结合至少90％、至少80％、至少70％、至少60％或至少50％。
如本文所用，术语“亲和力”是指单个表位与例如免疫球蛋白分子的一个或多个抗原结合结构域结合强度的量度。参见例如，Harlow等人,Antibodies:A LaboratoryManual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,第2版1988)，第27-28页。如本文所用，术语“亲合力”是指抗原结合结构域群体与抗原之间的复合物的总体稳定性。参见例如，Harlow，第29-34页。亲合力不仅与群体中单个抗原结合结构域与特定表位的亲和力有关，并且还与免疫球蛋白和抗原的价有关。例如，二价单克隆抗体与诸如多聚体的具有高度重复的表位结构的抗原之间的相互作用将是高亲合力的相互作用。二价单克隆抗体与在细胞表面上以高密度存在的受体之间的相互作用也将具有高亲合力。
如本文所公开的结合分子(例如，抗体或其片段、变体或衍生物)也可根据其交叉反应性来描述或指定。如本文所用，术语“交叉反应性”是指对一种抗原具有特异性的结合分子(例如，抗体或其片段、变体或衍生物)与第二抗原反应的能力；两种不同抗原物质之间相关性的量度。因此，如果结合分子与诱导其形成的表位以外的表位结合，则其是交叉反应的。交叉反应性表位通常含有许多与诱导表位相同的互补结构特征，并且在一些情况下，可实际上比原始表位更适合。
结合分子(例如，抗体或其片段、变体或衍生物)也可根据其与抗原的结合亲和力来描述或指定。例如，结合分子可以不大于5x10-2M、10-2M、5x10-3M、10-3M、5x10-4M、10-4M、5x10-5M、10-5M、5x10-6M、10-6M、5x10-7M、10-7M、5x10-8M、10-8M、5x10-9M、10-9M、5x10-10M、10-10M、5x10-11M、10-11M、5x10-12M、10-12M、5x10-13M、10-13M、5x10-14M、10-14M、5x10-15M或10-15M的解离常数或KD与抗原结合。
包括单链抗体或其他抗原结合结构域的“抗原结合抗体片段”可单独存在或与以下中的一种或多种组合存在：铰链区、CH1、CH2、CH3或CH4结构域、J链或分泌组分。还包括抗原结合片段，所述抗原结合片段可包括可变区与以下中的一个或多个的任何组合：铰链区、CH1、CH2、CH3或CH4结构域、J链或分泌组分。结合分子，例如，抗体或其抗原结合片段，可来自任何动物来源，包括鸟类和哺乳动物。抗体可以是人、鼠科动物、驴、兔、山羊、豚鼠、骆驼、美洲驼、马或鸡抗体。在另一个实施方案中，可变区可以是软骨鱼(condricthoid)来源(例如，来自鲨鱼)。如本文所用，“人”抗体包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗体，并且包括从人免疫球蛋白文库或从针对一种或多种人免疫球蛋白转基因的动物分离的抗体，并且可在一些情况下表达内源性免疫球蛋白，而在一些情况下不表达，如描述于下文中，并且例如描述于Kucherlapati等人的美国专利号5,939,598中。根据本公开的实施方案，如本文所提供的IgM抗体、IgM样抗体或其他IgM衍生的结合分子可包括抗体的抗原结合片段，例如scFv片段，只要IgM抗体、IgM样抗体或其他IgM衍生的结合分子能够形成多聚体，例如六聚体或五聚体即可，并且如本文所提供的IgA抗体、IgA样抗体或其他IgA衍生的结合分子可包括抗体的抗原结合片段，例如scFv片段，只要IgA抗体、IgA样抗体或其他IgA衍生的结合分子能够形成多聚体，例如二聚体即可。如本文所用，此片段包括“多聚化片段”。
如本文所用，术语“重链亚基”包括衍生自免疫球蛋白重链的氨基酸序列，包含重链亚基的结合分子(例如，抗体、抗体样分子或抗体衍生的分子)可包括以下中的至少一个：VH结构域、CH1结构域、铰链(例如，上、中和/或下铰链区)结构域、CH2结构域、CH3结构域、CH4结构域或其变体或片段。例如，结合分子(例如，抗体、抗体样分子或抗体衍生的分子或其片段(例如多聚化片段)、变体或衍生物)除VH结构域之外，还可包括但不限于：CH1结构域；CH1结构域、铰链和CH2结构域；CH1结构域和CH3结构域；CH1结构域、铰链和CH3结构域；或CH1结构域、铰链结构域、CH2结构域和CH3结构域。在某些实施方案中，结合分子(例如，抗体、抗体样分子或抗体衍生的分子或其片段(例如多聚化片段)、变体或衍生物)除VH结构域之外，还可包括CH3结构域和CH4结构域；或CH3结构域、CH4结构域和J链。此外，用于本公开的结合分子，例如抗体、抗体样分子或抗体衍生的分子可缺少某些恒定区部分，例如CH2结构域的全部或部分。本领域普通技术人员将理解，可修饰这些结构域(例如，重链亚基)，使得其在氨基酸序列上与原始免疫球蛋白分子不同。根据本公开的实施方案，如本文所提供的IgM抗体、IgM样抗体或其他IgM衍生的结合分子包含IgM重链恒定区的足够部分，以允许IgM抗体、IgM样抗体或其他IgM衍生的结合分子形成多聚体，例如六聚体或五聚体。如本文所用，此片段包括“多聚化片段”。
如本文所用，术语“轻链亚基”包括衍生自免疫球蛋白轻链的氨基酸序列。轻链亚基至少包括VL，并且还可包括CL(例如，Cκ或Cλ)结构域。
结合分子，例如抗体、抗体样分子、抗体衍生的分子、其抗原结合片段、变体或衍生物，或其多聚化片段可根据靶标(例如，它们识别或特异性结合的靶抗原)的表位或部分来描述或指定。与抗体的抗原结合结构域特异性相互作用的靶抗原的部分是“表位”或“抗原决定簇”。靶抗原可包含单个表位或至少两个表位，并且可包括任意数目的表位，其取决于抗原的大小、构象和类型。
如本文所用，术语“二硫键”包括在例如，多肽的半胱氨酸残基中的两个硫原子之间形成的共价键。氨基酸半胱氨酸包含可与第二硫醇基形成二硫键或桥的硫醇基。二硫键可以是“链内”，即连接到单个多肽或多肽亚基中的半胱氨酸残基，或者可以是“链间”，即连接两个单独的多肽亚基，例如抗体重链和抗体轻链、两个抗体重链、或IgM或IgA抗体重链恒定区和J链。
如本文所用，术语“嵌合抗体”是指其中免疫反应性区域或位点获自或衍生自第一物种并且恒定区(其可以是完整、部分或修饰的)获自第二物种的抗体。在一些实施方案中，靶结合区或位点将来自非人来源(例如，小鼠或灵长类)，并且恒定区是人。
术语“多特异性抗体”或“双特异性抗体”是指在单个抗体分子内具有针对两个或更多个不同表位的抗原结合结构域的抗体、抗体样分子或抗体衍生的分子。除标准抗体结构外，其他结合分子可以两种结合特异性构建。由双特异性或多特异性抗体结合表位可以是同时的或依序的。三源杂交瘤(Triomas)和杂交杂交瘤是可分泌双特异性抗体的细胞系的两个实例。双特异性抗体还可通过重组方式构建。(
Figure BDA0003915187800000371
和Heiss,Future Oncol.6:1387-94(2010)；Mabry和Snavely,IDrugs.13:543-9(2010))。双特异性抗体还可以是双抗体。
如本文所用，术语“工程化抗体”是指其中可变结构域、恒定区和/或J链通过一个或多个氨基酸的至少部分替换而改变的抗体。在某些实施方案中，可将来自已知特异性的抗体的整个CDR移植到异源抗体的骨架区中。尽管替代的CDR可衍生自与衍生骨架区的抗体相同类别或甚至亚类的抗体，但CDR也可衍生自不同类别的抗体，例如，衍生自不同物种的抗体。其中将来自已知特异性的非人抗体的一个或多个“供体”CDR移植到人重链或轻链骨架区中的工程化抗体在本文中称为“人源化抗体”。在某些实施方案中，并不是所有的CDR被来自供体可变区的完整CDR替换，但供体的抗原结合能力仍然可转移到接受体可变结构域。鉴于在例如美国专利号5,585,089、5,693,761、5,693,762和6,180,370中阐述的解释，通过进行常规实验或通过反复试验来获得功能性工程化抗体或人源化抗体，这将完全在本领域技术人员的能力范围内。
如本文所用，术语“工程化”包括通过合成方式(例如，通过重组技术、体外肽合成、通过肽、核酸或聚糖的酶促或化学偶联或这些技术的某种组合)对核酸或多肽分子进行操纵。
如本文所用，术语“连接”、“融合”或其他语法等同物可互换使用。这些术语是指通过包括化学缀合或重组方式的任何方式将两个或更多个元件或组分接合在一起。“框内融合”是指将两个或更多个多核苷酸开放阅读框(ORF)接合以形成连续的更长的ORF，以保持原始ORF的翻译阅读框的方式进行。因此，重组融合蛋白是含有两个或更多个区段的单一蛋白质，所述两个或更多个区段对应于由原始ORF编码的多肽(其区段在自然界中通常不会如此接合)。尽管因此阅读框在整个融合区段中是连续的，但是区段可通过例如框内接头序列在物理上或空间上分离。例如，编码免疫球蛋白可变区的CDR的多核苷酸可在框内融合，但是可被编码至少一个免疫球蛋白骨架区或另外的CDR区的多核苷酸分离，只要“融合”CDR作为连续多肽的一部分共同翻译即可。
如本文所用，术语“交联”是指通过第三分子将两个或更多个分子接合在一起。例如，具有两个特异性结合相同抗原的结合结构域的二价抗体可“交联”所述抗原的两个拷贝，例如当其在细胞上表达时。许多TNF超家族受体蛋白，包括DR5，需要细胞表面上三个或更多个受体的交联才能激活。DR5蛋白的交联意指，例如，使本文所公开的结合分子与细胞表面上表达的DR5接触，使得至少三个DR5单体同时被一个或多个结合分子结合在一起，从而激活受体。
在多肽的上下文中，“线性序列”或“序列”是氨基酸在多肽中从氨基末端到羧基末端方向的顺序，其中序列中彼此紧邻的氨基酸在多肽的初级结构中是邻接的。在多肽另一部分“氨基末端”或“N末端”的多肽部分是在依序多肽链中出现较早的那部分。类似地，在多肽另一部分“羧基末端”或“C末端”的多肽部分是在依序多肽链中出现较迟的那部分。例如，在典型的抗体中，可变结构域在恒定区的“N末端”，并且恒定区在可变结构域的“C末端”。
如本文所用，术语“表达”是指基因产生生化物质例如多肽的过程。所述过程包括细胞内基因功能性存在的任何表现，包括但不限于基因敲减以及瞬时表达和稳定表达。所述过程包括但不限于将基因转录成RNA，例如，信使RNA(mRNA)，以及将此mRNA翻译成一个或多个多肽。如果最终期望的产物是生化物质，则表达包括产生所述生化物质和任何前体。基因的表达产生“基因产物”。如本文所用，基因产物可以是核酸，例如，通过基因转录产生的信使RNA，或可以是从转录物翻译的多肽。本文所述的基因产物还包括具有转录后修饰(例如，聚腺苷酸化)的核酸，或具有翻译后修饰(例如，甲基化、糖基化、脂质的添加、与其他蛋白质亚基的缔合、蛋白水解切割等)的多肽。
如本文所用，术语“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物的生理状况，其中细胞群体的特征在于细胞生长不受调控。癌症可分类为例如，实体瘤或恶性肿瘤、或血液癌症或恶性肿瘤。两种类型都可作为转移瘤迁移到远程部位。实体瘤可分类为例如，肉瘤、癌、黑色素瘤或其转移。
术语“增殖性病症”和“增殖性疾病”是指与异常细胞增殖相关的疾病，诸如癌症。如本文所用，“肿瘤”和“赘生物”是指由过度的细胞生长或增殖导致的任何组织块，无论良性(非癌性)或恶性(癌性)，包括癌前病变。
如本文所用，术语“转移(metastasis)”、“转移(metastases)”、“转移性”和其他语法等同物是指癌细胞从原发部位(例如，原发肿瘤)扩散或转移到人体其他区域，其中在新位置发展出类似的癌性病变。“转移性”或“转移(metastasizing)”细胞是失去与邻近细胞的粘附性接触并且通过血流或淋巴从疾病的原发部位迁移以侵入邻近人体结构的细胞。所述术语还指转移的过程，其包括但不限于癌细胞从原发肿瘤中脱离、肿瘤细胞向循环的内渗、其存活和迁移到远处部位、从循环中附着和外渗到新的部位、远处部位的微群落形成、以及远处部位的肿瘤生长和发育。
此类实体瘤的实例可包括例如，鳞状细胞癌、腺癌、基底细胞癌、肾细胞癌、乳腺导管癌、软组织肉瘤、骨肉瘤、黑色素瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、肺腺癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠道癌、胃癌、胰腺癌、神经内分泌癌、成胶质细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、脑癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、食管癌、唾液腺癌、肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、头颈癌、其任何转移瘤或它们的任何组合。
血液癌症或恶性肿瘤的实例包括但不限于白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、急性髓系白血病、慢性髓系白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、其任何转移瘤或它们的任何组合。
在某些实施方案中，适于通过本文提供的方法治疗的癌症包括但不限于肉瘤、乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、头颈癌、NSCLC、食管癌、胃癌、肾癌、肝癌、膀胱癌、结肠直肠癌和胰腺癌。
术语“治疗有效量”是指有效“治疗”或在一些情况下，“预防”受试者(例如，人)中疾病或病症的抗体、多肽、多核苷酸、有机小分子或其他药物的量。在癌症的情况下，药物的治疗有效量可减少癌细胞的数目；延缓或停止癌细胞分裂，减少或延缓肿瘤大小的增加；抑制例如压制、延缓、阻止、停止、延迟或逆转癌细胞向外周器官的浸润，包括例如癌症向软组织和骨的扩散；抑制例如压制、延缓、阻止、缩小、停止、延迟或逆转肿瘤转移；抑制例如压制、延缓、阻止、停止、延迟或逆转肿瘤生长；在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状，降低发病率和死亡率；改善生活质量；或此类效果的组合。至药物阻止生长和/或杀死现有癌细胞的程度，其可称为细胞抑制性的和/或细胞毒性的。
诸如“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”或“治疗(to treat)”或“减轻(alleviating)”或“减轻(to alleviate)”的术语是指治愈、减缓、缓和所诊断的病理状况或病症的症状和/或停止或减慢其进展的治疗措施。诸如“预防(prevent)”、“预防(prevention)”、“避免”、“威慑”的术语是指阻止未诊断的目标病理状况或病症发展的预防性(prophylactic)或预防性(preventative)措施。因此，“需要治疗的受试者”可包括已经患有病症的受试者和/或容易患有病症的受试者。
如果患者显示出以下一种或多种情况，则根据本公开的方法成功地“治疗”了受试者：癌细胞数量的减少或完全不存在；减小肿瘤大小；或延缓或逆转肿瘤生长，抑制，例如压制、阻止、延缓、缩小、延迟或逆转例如癌细胞浸润到外周器官的转移，包括例如癌症扩散到软组织和骨；抑制例如压制、延缓、阻止、缩小、逆转、延迟或不存在肿瘤转移；抑制例如压制、延缓、阻止、缩小、逆转、延迟或不存在肿瘤生长；缓解与特定癌症相关的一种或多种症状；降低发病率和死亡率；改善生活质量；或效果的某种组合。有益的或期望的临床结果包括但不限于，症状的减轻、疾病程度的减小、稳定的(即，不恶化)疾病状态、疾病进展的延迟或减慢、疾病状态的改善或减轻以及缓解(无论是部分还是全部)，无论是可检测的还是不可检测的。“治疗”还可意指相比于不接受治疗时的预期生存期，延长生存期。需要治疗的受试者包括已经患有疾患或病症的受试者，以及易患疾患或病症的受试者或要预防疾患或病症的受试者。
“受试者”或“个体”或“动物”或“患者”或“哺乳动物”意指任何受试者。在某些实施方案中，受试者是需要诊断、预后或治疗的哺乳动物受试者。哺乳动物受试者包括人、家畜、农场动物以及动物园、运动场或宠物动物，诸如狗、猫、豚鼠、兔子、大鼠、小鼠、马、猪、牛、熊等。
如本文所用，术语“将受益于治疗的受试者”是指来自所有预期受试者的受试者子集，所述受试者将受益于给定治疗剂(例如包含一个或多个抗原结合结构域的结合分子诸如抗体)的施用。此类结合分子，例如抗体，可例如用于诊断程序和/或用于治疗或预防疾病。
如本文所用，术语“血清半衰期”或“血浆半衰期”是指施用后使药物(例如，如本文所述的结合分子诸如抗体、抗体样分子或抗体衍生的分子或其片段，例如多聚化片段)的血清或血浆浓度降低50％所需的时间(例如，以分钟、小时或天计)。可描述两个半衰期：阿尔法半衰期、α半衰期或t1/2α，其是由于药物从中央隔室(例如，静脉内输送情况下的血液)到外周隔室(例如，组织或器官)的再分配过程而导致的血浆浓度下降速率，以及贝塔(beta)半衰期、β半衰期或t1/2β，其是由于排泄或新陈代谢的过程而导致的下降速率。
如本文所用，术语“血浆药物浓度-时间曲线下面积”或“AUC”反映了在施用一定剂量的药物后人体对药物的实际暴露并且以mg*h/L表示。此曲线下面积可例如，从时间0(t0)到无穷大(∞)进行测量，并且取决于药物从体内消除的速率和施用的剂量。
如本文所用，术语“平均滞留时间”或“MRT”是指药物在体内停留的平均时间长度。
如本文所用，“药学上可接受的”或“药理学上可接受的”意指不是生物学上或其他方面所不期望的材料，例如，所述材料可掺入施用于患者的药物组合物中而不引起任何显著的不期望的生物学效应或与包含它的组合物的任何其他组分以有害方式相互作用。药学上可接受的载剂或赋形剂优选满足毒理学和制造测试的所需标准和/或包含在美国食品和药物管理局制定的非活性成分指南中。
“药学上可接受的盐”是那些至少保留游离(非盐)化合物的一些生物活性并且可作为药物或药品施用于个体的盐。例如，此类盐包括：(1)与无机酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成；或与有机酸诸如乙酸、草酸、丙酸、琥珀酸、马来酸、酒石酸等形成的酸加成盐；(2)当存在于母体化合物中的酸质子被金属离子，例如碱金属离子、碱土离子或铝离子替换；或与有机碱配位时形成的盐。可接受的有机碱包括乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺等。可用于制备盐的可接受的无机碱包括氢氧化铝、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸钠、氢氧化钠等。药学上可接受的盐可在制造过程中原位制备，或通过使游离酸或碱形式的纯化的本发明化合物与合适的有机或无机碱或酸单独反应，并在随后的纯化过程中分离由此形成的盐来制备。
如本文所使用的术语“赋形剂”意指可用于生产药物或药品的惰性或非活性物质，诸如含有本发明化合物作为活性成分的片剂。术语赋形剂可包括各种物质，包括但不限于用作粘合剂、崩解剂、包衣、压缩/包壳助剂、霜剂或洗剂、润滑剂、胃肠外施用的溶液、咀嚼片剂的材料、甜味剂或调味剂、助悬剂/胶凝剂，或湿法制粒剂的任何物质。粘合剂包括例如卡波姆(carbomer)、聚维酮、黄原胶等；包衣包括例如邻苯二甲酸乙酸纤维素、乙基纤维素、结冷胶、麦芽糖糊精、肠溶包衣等；压缩/包壳助剂包括例如碳酸钙、右旋糖、果糖dc(dc＝“可直接压缩的”)、蜂蜜dc、乳糖(无水物或一水合物；任选地与阿斯巴甜、纤维素或微晶纤维素组合)、淀粉dc、蔗糖等；崩解剂包括例如交联羧甲基纤维素钠、结冷胶、羟基乙酸淀粉钠等；霜剂或洗剂包括例如麦芽糖糊精、角叉菜胶等；润滑剂包括例如硬脂酸镁、硬脂酸、硬脂富马酸钠等；咀嚼片剂的材料包括例如右旋糖、果糖dc、乳糖(一水合物，任选地与阿斯巴甜或纤维素组合)等；助悬剂/胶凝剂包括例如角叉菜胶、羟基乙酸淀粉钠、黄原胶等；甜味剂包括例如阿斯巴甜、葡萄糖、果糖dc、山梨糖醇、蔗糖dc等；并且湿法制粒剂包括例如碳酸钙、麦芽糖糊精、微晶纤维素等。
IgM抗体、IgM样抗体和其他IgM衍生的结合分子
IgM是B细胞响应于抗原刺激而产生的第一种免疫球蛋白。自然存在的IgM以约1.5mg/ml自然存在于血清中，其中半衰期为约5天。IgM是五聚体或六聚体分子，并且因此包括五个或六个结合单元。IgM结合单元通常包括两条轻链和两条重链。虽然IgG重链恒定区含有三个重链恒定结构域(CH1、CH2和CH3)，但IgM的重(μ)恒定区还含有第四恒定结构域(CH4)并包括C末端“尾部片段”。人IgM恒定区通常包含氨基酸序列SEQ ID NO:91(与例如GenBank登录号pir||S37768、CAA47708.1和.CAA47714.1，等位基因IGHM*03相同)或SEQ IDNO:92(与例如GenBank登录号sp|P01871.4，等位基因IGHM*04相同)。人Cμ1区的范围为SEQID NO:91或SEQ ID NO:92的约氨基酸5至约氨基酸102；人Cμ2区的范围为SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92的约氨基酸114至约氨基酸205，人Cμ3区的范围为SEQ ID NO:91或SEQ IDNO:92的约氨基酸224至约氨基酸319，Cμ4区的范围为SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92的约氨基酸329至约氨基酸430，并且尾部片段的范围为SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92的约氨基酸431至约氨基酸453。
存在具有微小序列变化的人IgM恒定区的其他形式和等位基因，包括但不限于GenBank登录号CAB37838.1和pir||MHHU。在对应于本公开其他各处描述和要求保护的SEQID NO:91或SEQ ID NO:92的位置处的氨基酸取代、插入和/或缺失同样可掺入替代的人IgM序列以及其他物种的IgM恒定区氨基酸序列中。
每个IgM重链恒定区可与结合结构域，例如抗原结合结构域，例如scFv或VHH，或抗原结合结构域的亚基，例如VH区缔合。示例性抗原结合结构域，例如特异性和激动性结合DR5的结合结构域描述于本文其他各处。在某些实施方案中，结合结构域可以是非抗体结合结构域，例如受体胞外结构域、配体或其受体结合片段、细胞因子或其受体结合片段、生长因子或其受体结合片段、神经递质或其受体结合片段、肽或蛋白质激素或其受体结合片段、免疫检查点调节剂配体或其受体结合片段，或胞外基质蛋白的受体结合片段。参见例如PCT申请号PCT US2019/057702，所述申请以引用的方式整体并入本文。
五个IgM结合单元可与另外的小多肽链(J链)或其功能片段、变体或衍生物形成复合物，从而形成五聚体IgM抗体或IgM样抗体，如本文其他各处所讨论的。人J链的前体形式表示为SEQ ID NO:96。信号肽从SEQ ID NO:96的氨基酸1延伸至约氨基酸22，并且成熟人J链从SEQ ID NO:96的约氨基酸23延伸至氨基酸159。成熟人J链包括氨基酸序列SEQ ID NO:97。
示例性变体和经修饰的J链在本文其他各处提供。在没有J链的情况下，IgM抗体或IgM样抗体通常会组装成六聚体，包含多达十二个抗原结合结构域。在有J链的情况下，IgM抗体或IgM样抗体通常会组装成五聚体，包含多达十个抗原结合结构域，或者如果J链是包含有包含另外的抗原结合结构域的异源多肽的经修饰的J链时，包含更多个抗原结合结构域。将五个或六个IgM结合单元组装成五聚体或六聚体IgM抗体或IgM样抗体被认为涉及Cμ4和尾部片段结构域。参见例如，Braathen,R.,等人,J.Biol.Chem.277:42755-42762(2002)。因此，本公开中提供的五聚体或六聚体IgM抗体通常至少包括Cμ4和尾部片段结构域(在本文中也统称为Cμ4-tp)。因此，IgM重链恒定区的“多聚化片段”至少包括Cμ4-tp结构域。IgM重链恒定区还可包括Cμ3结构域或其片段、Cμ2结构域或其片段、Cμ1结构域或其片段，和/或其他IgM重链结构域。在某些实施方案中，IgM衍生的结合分子(例如，如本文所提供的IgM抗体、IgM样抗体或其他IgM衍生的结合分子)可包括完整的IgM重(μ)链恒定结构域，例如，SEQID NO:91或SEQ ID NO:92，或其变体、衍生物或类似物，例如，如本文所提供的。
在某些实施方案中，本公开提供了五聚体或六聚体结合分子，其中所述结合分子包括十个或十二个IgM衍生的重链，并且其中IgM衍生的重链包含各自与特异性结合靶标(诸如DR5)的结合结构域缔合的IgM重链恒定区。在某些实施方案中，本公开提供了与由单个结合单元组成的结合分子(例如，二价IgG抗体)相比，如本文所提供的IgM抗体、IgM样抗体或IgM衍生的结合分子可具有改善的结合特征或生物活性。例如，五聚体或六聚体结合分子可更高效地交联细胞(例如，肿瘤细胞)表面上的三个或更多个DR5分子，从而促进细胞凋亡。与由合成或嵌合结构组成的多价结合分子相比，如本文所提供的结合分子同样可具有独特的特征。例如，相对于含有嵌合恒定区或合成结构的结合分子，使用人IgM恒定区可得到降低的免疫原性，并因此提高安全性。此外，基于IgM的结合分子可一致地形成六聚体或五聚体低聚物，从而产生更均匀的表达产物。优异的补体固定也可以是基于IgM的结合分子的有利效应子功能。
在某些实施方案中，本公开提供了包括五个或六个二价结合单元的IgM抗体、IgM样抗体或IgM衍生的结合分子，其中每个结合单元包括两个IgM或IgM样重链恒定区或其多聚化片段或变体，其各自与抗原结合结构域或其亚基缔合。在某些实施方案中，每个结合单元中包括的两个IgM重链恒定区是人重链恒定区。在一些实施方案中，重链是糖基化的。在一些实施方案中，可使重链突变以影响糖基化。
在本公开中提供的IgM抗体、IgM样抗体或其他IgM衍生的结合分子是五聚体的情况下，IgM抗体、IgM样抗体或其他IgM衍生的结合分子通常还包括J链或其功能片段或变体。在某些实施方案中，J链是经修饰的J链或其变体，其还包含一个或多个连接至J链的异源部分，如本文其他各处所述。在某些实施方案中，可使J链突变以影响，例如，增强本文所提供的IgM抗体、IgM样抗体或其他IgM衍生的结合分子的血清半衰期，如本公开其他各处所讨论的。在某些实施方案中，可使J链突变以影响糖基化，如本公开其他各处所讨论的。
IgM重链恒定区可包括Cμ1结构域或其片段或变体、Cμ2结构域或其片段或变体、Cμ3结构域或其片段或变体和/或Cμ4结构域或其片段或变体中的一个或多个，前提条件是恒定区可在IgM抗体、IgM样抗体或其他IgM衍生的结合分子中发挥期望功能，例如，与第二IgM恒定区缔合以形成具有一个、两个或更多个抗原结合结构域的结合单元，和/或与其他结合单元(并且在五聚体的情况下为J链)缔合以形成六聚体或五聚体。在某些实施方案中，在单个结合单元内的两个IgM重链恒定区或其片段或变体各自包含Cμ4结构域或其片段或变体、尾部片段(tp)或其片段或变体、或Cμ4结构域与TP或其片段或变体的组合。在某些实施方案中，在单个结合单元内的两个IgM重链恒定区或其片段或变体各自还包含Cμ3结构域或其片段或变体、Cμ2结构域或其片段或变体、Cμ1结构域或其片段或变体，或它们的任何组合。
在某些实施方案中，给定结合单元中的两个IgM重链恒定区的每个与抗原结合结构域缔合，例如抗体的Fv部分，例如，人或鼠抗体的VH和VL，其中VL可与轻链恒定区缔合。在如本文所提供的结合分子中，结合分子的至少三个抗原结合结构域是DR5结合结构域，即，可特异性结合DR5例如人DR5的结合结构域。
在一些实施方案中，IgM抗体、IgM样抗体或其他IgM衍生的结合分子的结合单元包含两条轻链。在一些实施方案中，IgM抗体、IgM样抗体或其他IgM衍生的结合分子的结合单元包含两条片段轻链。在一些实施方案中，轻链是κ轻链。在一些实施方案中，轻链是λ轻链。在一些实施方案中，每个结合单元包含两条免疫球蛋白轻链，其各自包含位于免疫球蛋白轻链恒定区氨基末端的VL。
IgA抗体、IgA样抗体、其他IgA衍生的结合分子
IgA在粘膜免疫中起关键作用，并且占产生的总免疫球蛋白的约15％。IgA是单体或二聚体分子。IgA结合单元包括两条轻链和两条重链。IgA含有三个重链恒定结构域(Cα1、Cα2和Cα3)，并且包括C末端“尾部片段”。人IgA具有两个亚型，IgA1和IgA2。人IgA1恒定区通常包括氨基酸序列SEQ ID NO:93。人Cα1结构域从SEQ ID NO:93的约氨基酸6延伸至约氨基酸98；人IgA1铰链区从SEQ ID NO:93的约氨基酸102延伸至约氨基酸124，人Cα3结构域从SEQ ID NO:93的约氨基酸228延伸至约氨基酸330，并且尾部片段从SEQ ID NO:93的约氨基酸331延伸至约氨基酸352。人IgA2恒定区通常包括氨基酸序列SEQ ID NO:94。人Cα1结构域从SEQ ID NO:94的约氨基酸6延伸至约氨基酸98；人IgA2铰链区从SEQ ID NO:94的约氨基酸102延伸至约氨基酸111，人Cα2结构域从SEQ ID NO:94的约氨基酸113延伸至约氨基酸206，人Cα3结构域从SEQ ID NO:94的约氨基酸215延伸至约氨基酸317，并且尾部片段从SEQID NO:94的约氨基酸318至约氨基酸340。
两个IgA结合单元可与两条另外的多肽链、J链(例如，SEQ ID NO:97或SEQ ID NO:98)和分泌组分(前体，SEQ ID NO:95，成熟：SEQ ID NO:95的氨基酸19至603)形成复合物，从而形成分泌型IgA(sIgA)抗体。IgA结合单元组装成二聚体sIgA抗体被认为涉及Cα3和尾部片段结构域(在本文中也统称为Cα3-tp结构域)。因此，本公开中提供的二聚体sIgA抗体通常包括至少包括Cα3和尾部片段结构域的IgA恒定区。
IgA重链恒定区还可包括Cα2结构域或其片段、IgA铰链区、Cα1结构域或其片段，和/或其他IgA重链结构域。在某些实施方案中，如本文所提供的IgA抗体或IgA样结合分子可包括完整的IgA重(α)链恒定结构域(例如，SEQ ID NO:93或SEQ ID NO:94)，或其变体、衍生物或类似物。在一些实施方案中，IgA重链恒定区或其多聚化片段是人IgA恒定区。
在一些实施方案中，IgA抗体、IgA样抗体或其他IgA衍生的结合分子的结合单元包含两条轻链。在一些实施方案中，IgA抗体、IgA样抗体或其他IgA衍生的结合分子的结合单元包含两条轻链。在一些实施方案中，轻链是κ轻链。在一些实施方案中，轻链是λ轻链。在一些实施方案中，每个结合单元包含两条免疫球蛋白轻链，其各自包含位于免疫球蛋白轻链恒定区氨基末端的VL。
在一些实施方案中，本公开提供了一种可特异性结合DR5的二聚体结合分子，例如，具有如本文所定义的两个IgA“结合单元”或其片段、变体或衍生物的结合分子。与由单个结合单元(例如，二价IgG抗体)组成的结合分子相比，如本文所提供的结合分子可具有改善的结合特征或生物学活性。例如，IgA结合分子可更高效地交联细胞(例如，肿瘤细胞)表面上的三个或更多个DR5单体，从而促进细胞凋亡。此外，IgA结合分子可到达粘膜位点，从而为本文提供的结合分子提供更大的组织分布。使用基于IgA的结合分子可允许例如本文提供的结合分子的更大的组织分布。粘膜分布对于某些癌症例如肺癌、胃癌、卵巢癌、结肠直肠癌或鳞状细胞癌可以是有益的。同样，如本文所提供的二聚体结合分子可具有可与包含五个或六个结合单元的结合分子(例如，六聚体或五聚体IgM抗体)区分的结合特征或生物学活性。例如，二聚体结合分子将更小，并且可例如在实体瘤中实现更好的组织渗透。
在某些实施方案中，本公开提供了一种包含两个二价结合单元的二聚体结合分子，其中每个结合单元包括两个IgA重链恒定区或其片段。在某些实施方案中，两个IgA重链恒定区是人重链恒定区。
如本文所提供的二聚体IgA结合分子还可包含J链，或其片段，或其变体。如本文所提供的二聚体IgA结合分子还可包含分泌组分，或其片段，或其变体。
IgA重链恒定区可包括Cα1结构域、Cα2结构域和/或Cα3结构域中的一个或多个，前提条件是恒定区可在结合分子中发挥期望功能，例如，与轻链恒定区缔合以促进抗原结合结构域的形成、或与另一IgA结合单元缔合以形成二聚体结合分子。在某些实施方案中，在单个结合单元内的两个IgA重链恒定区或其片段各自包含Cα3结构域或其片段、尾部片段(TP)或其片段、或Cα3结构域、TP或其片段的任何组合。在某些实施方案中，在单个结合单元内的两个IgA重链恒定区或其片段各自还包含Cα2结构域或其片段、Cα1结构域或其片段、或Cα1结构域或其片段和Cα2结构域或其片段。
在某些实施方案中，给定结合单元中的两个IgA重链恒定区的每个与抗原结合结构域缔合，例如抗体的Fv部分，例如，人或鼠抗体的VH和VL，其中VL可与轻链恒定区缔合。在如本文所提供的结合分子中，结合分子的至少三个抗原结合结构域是DR5结合结构域，即，可特异性结合DR5例如人DR5的结合结构域。
J链及其功能片段或变体
在某些实施方案中，本文提供的二聚体或五聚体结合分子包含J链或其功能片段或变体。在某些实施方案中，本文提供的多聚体结合分子是五聚体并且包含J链或其功能片段或变体。在某些实施方案中，本文提供的结合分子是二聚体并且包含J链或其功能片段或变体。在一些实施方案中，二聚体或五聚体结合分子可包含自然存在的J链序列，诸如成熟人J链序列(例如，SEQ ID NO:97)。可选地，在一些实施方案中，二聚体或五聚体结合分子可包含变体J链序列，诸如本文所述的变体序列，其具有降低的糖基化或降低的与聚合物Ig受体(例如，pIgR)的结合。在一些实施方案中，二聚体或五聚体结合分子可包含自然存在的或变体J链的功能片段。如本领域普通技术人员将认识到的，本文中的“功能片段”或“功能变体”包括可与结合单元(例如，IgM或IgA重链恒定区)缔合以形成五聚体IgM抗体、IgM样抗体或IgM衍生的结合分子，或二聚体IgA抗体、IgA样抗体或IgA衍生的结合分子，和/或可与某些免疫球蛋白受体(例如，pIgR)缔合的那些片段和变体。
在某些实施方案中，J链可例如，通过引入异源部分，或两个或更多个异源部分(例如多肽)来修饰，而不干扰结合分子组装和结合其结合靶标的能力。参见美国专利号9,951,134和10,400,038，以及美国专利申请公布号US-2019-0185570和US-2018-0265596，所述申请各自以引用的方式整体并入本文。
因此，本公开提供的结合分子，包括如本文其他各处所述的多特异性IgA、IgA样、IgM或IgM样抗体，可包含经修饰的J链或其功能片段或变体，其包含引入(例如，融合或化学缀合)至J链或其片段或变体中的异源部分，例如异源多肽。在某些实施方案中，异源多肽可与J链或其功能片段或变体的N末端、J链或其功能片段或变体的C末端、或J链或其功能片段或变体的N末端和C末端两者融合。在某些实施方案中，异源多肽可在J链或其功能片段或变体内部融合。在一些实施方案中，可将异源多肽在糖基化位点处或其附近引入J链。在一些实施方案中，可将异源多肽在距C末端约10个氨基酸残基内或距N末端约10个氨基酸内引入J链。在某些实施方案中，可将异源多肽在SEQ ID NO:97的半胱氨酸残基92与101之间引入SEQ ID NO:97的成熟人J链，或J链序列(例如，J链变体或J链的功能片段)中的等效位置。在另一实施方案中，可将异源多肽在糖基化位点处或其附近引入SEQ ID NO:97的成熟人J链。在另一实施方案中，可将异源多肽在距C末端约10个氨基酸残基内，或距N末端约10个氨基酸内引入SEQ ID NO:97的成熟人J链。
在某些实施方案中，异源部分可以是与J链框内融合或化学缀合至J链或其片段或变体的肽或多肽序列。在某些实施方案中，异源多肽经由肽接头与J链或其功能片段融合。可使用任何合适的接头，例如肽接头可包括至少5个氨基酸、至少十个氨基酸、以及至少20个氨基酸、至少30个氨基酸或更多等。在某些实施方案中，肽接头包括至少5个氨基酸，但不超过25个氨基酸。在某些实施方案中，肽接头可由5个氨基酸、10个氨基酸、15个氨基酸、20个氨基酸或25个氨基酸组成。在某些实施方案中，肽接头由以下组成：GGGGS(SEQ ID NO:99)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:100)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:101)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:102)或GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:103)。
在某些实施方案中，异源部分可以是缀合至J链的化学部分。要与J链连接的异源部分可包括但不限于结合部分，例如抗体或其抗原结合片段，例如单链Fv(scFv)分子，细胞因子，例如，IL-2或IL-15(参见例如，PCT申请号PCT US2019/057702，所述申请以引用的方式整体并入本文)、可增加结合分子(例如人血清白蛋白(HSA)或HSA结合分子)的半衰期的稳定肽、或异源化学部分，诸如聚合物或细胞毒素。
在一些实施方案中，经修饰的J链可包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域可包括但不限于能够特异性结合靶抗原的多肽。在某些实施方案中，与经修饰的J链缔合的抗原结合结构域可以是抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，抗原结合结构域可以是例如衍生自骆驼科或软骨鱼抗体的scFv抗原结合结构域或单链抗原结合结构域。在某些实施方案中，靶标是靶表位、靶抗原、靶细胞或靶器官。
抗原结合结构域可在允许抗原结合结构域与其结合靶标结合的任何位置处引入J链，而不干扰J链功能或缔合的多聚体结合分子(例如，五聚体IgM或二聚体IgA抗体)的功能。插入位置包括但不限于在C末端处或其附近、在N末端处或其附近、或基于J链的三维结构可接近的内部位置。
赋予增加的血清半衰期的变体J链
在某些实施方案中，J链是功能变体J链，其包括相对于除了一个或多个单一氨基酸取代、缺失或插入之外与变体J链相同的参考J链的所述一个或多个单一氨基酸取代、缺失或插入。例如，某些氨基酸取代、缺失或插入可导致相对于除了变体J链中的一个或多个单一氨基酸取代、缺失或插入之外相同的并且使用相同的方法施用于同一动物物种的参考IgM衍生的结合分子，IgM衍生的结合分子在施用于受试者动物后表现出增加的血清半衰期。在某些实施方案中，变体J链可包括相对于参考J链的一个、两个、三个或四个单一氨基酸取代、缺失或插入。
在某些实施方案中，J链，诸如经修饰的J链，包含在对应于成熟野生型人J链(SEQID NO:97)的氨基酸Y102的氨基酸位置处的氨基酸取代。“对应于成熟野生型人J链的氨基酸Y102的氨基酸”意指与人J链中的Y102同源的J链序列中的氨基酸。例如，参见PCT公布号WO 2019/169314，所述公布以引用的方式整体并入本文。对应于SEQ ID NO:97中Y102的位置在至少43个其他物种的J链氨基酸序列中是保守的。参见美国专利号9,951,134的图4，所述专利以引用的方式并入本文。在对应于SEQ ID NO:97的Y102的位置处的某些突变可抑制某些免疫球蛋白受体，例如人或鼠Fcαμ受体、鼠Fcμ受体和/或人或鼠聚合物Ig受体(pIgR)与包含变体J链的IgM五聚体的结合。
与除了取代之外相同的并且以相同的方式施用于同一物种的对应的多聚体结合分子相比，包含在对应于SEQ ID NO:97的Y102的氨基酸处的突变的多聚体结合分子在施用于动物时具有改善的血清半衰期。在某些实施方案中，对应于SEQ ID NO:97的Y102的氨基酸可被任何氨基酸取代。在某些实施方案中，对应于SEQ ID NO:97的Y102的氨基酸可被丙氨酸(A)、丝氨酸(S)或精氨酸(R)取代。在一个特定实施方案中，对应于SEQ ID NO:97的Y102的氨基酸可被丙氨酸取代。在一个特定实施方案中，J链或其功能片段或变体是本文称为“J*”的变体人J链，并且包含氨基酸序列SEQ ID NO:98。
野生型J链通常包括一个N连接的糖基化位点。在某些实施方案中，如本文所提供的多聚体结合分子的变体J链或其功能片段包括天冬酰胺(N)-连接的糖基化基序N-X1-S/T内的突变，例如，从对应于成熟人J链(SEQ ID NO:97或J*(SEQ ID NO:98)的氨基酸49(基序N6)的氨基酸位置开始，其中N是天冬酰胺，X1是除脯氨酸外的任何氨基酸，并且S/T是丝氨酸或苏氨酸，并且其中突变阻止了所述基序处的糖基化。如PCT公布号WO 2019/169314中所证明的，在这个位点阻止糖基化的突变可导致相对于除了变体J链中阻止糖基化的一个或多个突变之外相同的并且以相同的方式施用于同一动物物种的参考多聚体结合分子，如本文所提供的多聚体结合分子在施用于受试者动物时表现出增加的血清半衰期。
例如，在某些实施方案中，如本文所提供的五聚体IgM衍生的或二聚体IgA衍生的结合分子的变体J链或其功能片段可包括在对应于SEQ ID NO:97或SEQ ID NO:98的氨基酸N49或氨基酸S51的氨基酸位置处的氨基酸取代，前提条件是对应于S51的氨基酸未被苏氨酸(T)取代，或其中变体J链包含在对应于SEQ ID NO:97或SEQ ID NO:98的氨基酸N49和S51的氨基酸位置处的氨基酸取代。在某些实施方案中，对应于SEQ ID NO:97或SEQ ID NO:98的N49的位置被任何氨基酸，例如丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、苏氨酸(T)、丝氨酸(S)或天冬氨酸(D)取代。在一个特定实施方案中，对应于SEQ ID NO:97或SEQ ID NO:98的N49的位置可被丙氨酸(A)取代。在另一个特定实施方案中，对应于SEQ ID NO:97或SEQ ID NO:98的N49的位置可被天冬氨酸(D)取代。
变体IgM恒定区
如本文所提供的多聚体结合分子的IgM重链恒定区可被工程化以赋予本文提供的多聚体结合分子某些期望特性。例如，在某些实施方案中，IgM重链恒定区可被工程化以赋予如本文所提供的多聚体结合分子增加的血清半衰期。可延长IgM衍生的结合分子的血清半衰期的示例性IgM重链恒定区突变公开于PCT公布号WO 2019/169314中，所述公布以引用的方式整体并入本文。例如，如本文所提供的IgM抗体、IgM样抗体或IgM衍生的结合分子的变体IgM重链恒定区可包括在对应于野生型人IgM恒定区(例如，SEQ ID NO:91或SEQ IDNO:92)的氨基酸S401、E402、E403、R344和/或E345的位置处的氨基酸取代。“对应于野生型人IgM恒定区的氨基酸S401、E402、E403、R344和/或E345的氨基酸”意指任何物种的IgM恒定区序列中与人IgM恒定区中的S401、E402、E403、R344和/或E345同源的氨基酸。在某些实施方案中，对应于SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92的S401、E402、E403、R344和/或E345的氨基酸可被任何氨基酸，例如丙氨酸取代。
在某些实施方案中，在补体存在的情况下，相对于除了赋予降低的补体依赖性细胞毒性(CDC)活性的突变之外相同的具有对应参考人IgM恒定区的参考IgM抗体、IgM样抗体或其他IgM衍生的结合分子，如本文所提供的IgM抗体、IgM样抗体或其他IgM衍生的结合分子可被工程化以表现出对细胞的降低的CDC活性。这些CDC突变可与任何突变组合以赋予如本文所提供的增加的血清半衰期。“对应的参考人IgM恒定区”意指除恒定区中影响CDC活性的一个或多个修饰之外与变体IgM恒定区相同的人IgM恒定区。在某些实施方案中，相对于野生型人IgM恒定区，变体人IgM恒定区包括一个或多个氨基酸取代，例如，Cμ3结构域中的一个或多个氨基酸取代，如例如PCT公布号WO/2018/187702中所描述的，所述公布以引用的方式整体并入本文。用于测量CDC的测定法是本领域普通技术人员众所周知的，并且示例性测定法描述于例如PCT公布号WO/2018/187702中。
在某些实施方案中，赋予降低的CDC活性的变体人IgM恒定区包括对应于SEQ IDNO:91(人IgM恒定区等位基因IGHM*03)或SEQ ID NO:92(人IgM恒定区等位基因IGHM*04)的位置L310、P311、P313和/或K315处的野生型人IgM恒定区的氨基酸取代。在某些实施方案中，赋予降低的CDC活性的变体人IgM恒定区包括对应于在SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92的位置P311处的野生型人IgM恒定区的氨基酸取代。在其他实施方案中，如本文所提供的变体IgM恒定区含有对应于SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92的位置P313处的野生型人IgM恒定区的氨基酸取代。在其他实施方案中，如本文所提供的变体IgM恒定区含有对应于SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92的位置311处和SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92的位置P313处的野生型人IgM恒定区的取代组合。这些脯氨酸残基可独立地被任何氨基酸取代，例如被丙氨酸、丝氨酸或甘氨酸取代。
人和某些非人灵长类动物IgM恒定区通常包括五(5)个自然存在的天冬酰胺(N)连接的糖基化基序或位点。如本文所用，“N连接的糖基化基序”包含氨基酸序列N-X1-S/T或由所述氨基酸序列组成，其中N是天冬酰胺，X1是除脯氨酸(P)之外的任何氨基酸，并且S/T是丝氨酸(S)或苏氨酸(T)。聚糖与天冬酰胺残基的氮原子连接。参见例如，Drickamer K,Taylor ME(2006),Introduction to Glycobiology(第2版).Oxford University Press,USA。N连接的糖基化基序出现在SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92的人IgM重链恒定区中，从位置46(“N1”)、209(“N2”)、272(“N3”)、279(“N4”)和440(“N5”)开始。这五个基序在非人灵长类动物IgM重链恒定区中是保守的，并且五个基序中的四个在小鼠IgM重链恒定区中是保守的。因此，在一些实施方案中，如本文所提供的多聚体结合分子的IgM重链恒定区包含5个N连接的糖基化基序：N1、N2、N3、N4和N5。在一些实施方案中，每个IgM重链恒定区上的N连接的糖基化基序中的至少三个(例如N1、N2和N3)被复合聚糖占据。
在某些实施方案中，N-X1-S/T基序中的至少一个、至少两个、至少三个或至少四个可包括阻止所述基序处糖基化的氨基酸插入、缺失或取代。在某些实施方案中，IgM衍生的多聚体结合分子可包括在基序N1、基序N2、基序N3、基序N5或者基序N1、N2、N3或N5中的两个或更多个、三个或更多个或所有四个的任何组合处的氨基酸插入、缺失或取代，其中所述氨基酸插入、缺失或取代阻止了所述基序处的糖基化。在一些实施方案中，IgM恒定区包含相对于SEQ ID NO:91(人IgM恒定区等位基因IGHM*03)或SEQ ID NO:92(人IgM恒定区等位基因IGHM*04)的位置46、209、272或440处的野生型人IgM恒定区的两个或更多个取代。参见例如，美国临时申请号62/891,263，所述申请以引用的方式整体并入本文。
DR5结合结构域
如本文所提供的DR5结合分子，例如，抗DR5抗体或其片段、变体或衍生物可以是分别包含两个、五个或六个二价结合单元的二聚体、五聚体或六聚体。结合单元可以是全长或其保留结合功能的变体或片段。
每个结合单元包含两个IgA或IgM重链恒定区或其片段，其各自与抗原结合结构域缔合。如上面所提到的，抗原结合结构域是对于特异性结合表位是必要且充分的结合分子的区域。如本文所述的“结合分子”可包括一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个或更多个“抗原结合结构域”。
如本文所提供的二聚体、五聚体或六聚体结合分子可包括至少三个与DR5特异性和激动性结合的抗原结合结构域。如上面所提到的，DR5在激活后可诱导表达所结合的DR5蛋白的细胞凋亡。如目前所理解的，当多个受体蛋白结合在一起时，致使受体分子交联，使得信号穿过细胞膜传递到表达DR5的细胞的细胞溶胶中，从而发生凋亡。
如本文所提供的二聚体、五聚体或六聚体结合分子可交联细胞表面上表达的至少三个DR5单体。由于如本文所提供的DR5结合分子的二聚体、五聚体或六聚体性质，分子可在细胞上交联多达三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个或十二个DR5单体。然后使受体蛋白在空间上彼此接近，从而有助于其交联和激活。当如本文所提供的所有五个或所有六个二价结合单元DR5结合分子与受体结合，分别在单个细胞上结合多达十个或十二个DR5单体时，可发生受体的交联和激活。
因为每个结合单元是二价的，所以每个结合分子可结合多达4个(对于二聚体结合分子)、10个(对于五聚体结合分子)或12个(对于六聚体结合分子)DR5单体。
当通过如本文所提供的二聚体、五聚体或六聚体结合分子的结合激活受体时，细胞可如上所述经历凋亡。
在某些实施方案中，如目前公开的二聚体、五聚体或六聚体结合分子可以比等效量的二价IgG抗体或其片段更高的效力诱导DR5表达细胞中DR5介导的凋亡，所述二价IgG抗体或其片段也特异性结合DR5并使其激动。不希望受到理论的约束，因为所提供的结合分子是二聚体、五聚体或六聚体，并且因为每个结合单元是二价的，所以此结合分子可以比单独的任何单个结合单元(诸如等效的IgG结合单元)更高的效力诱导先前表征为DR5的受体介导的功能。IgG结合单元是二价的，其含有两个结合位点，但是如先前的临床研究所证明的，在不添加其他组分(诸如交联剂等)的情况下，两个DR5受体与单个IgG分子的结合可能无效。
“效力”或“改善的结合特征”意指实现给定生物学结果(例如，在给定测定(例如，ELISA或基于蛋白质印迹的胱天蛋白酶测定、由FACS分析所见的膜联蛋白-v染色或其他测定)中激活20％、50％或90％的DR5单体)所需的给定结合分子的最小量。或在体内肿瘤测定中降低的肿瘤生长速率或增加的存活率。
因为如本文所提供的结合分子为二聚体、五聚体或六聚体，所以其可分别含有多达4个、10个或12个抗原结合结构域。抗原结合结构域中的每个可特异性结合DR5并使其激动。此外，每个抗原结合结构域可对DR5的一个特定表位具有特异性。
因此，单个二聚体、五聚体或六聚体结合分子可：a)同时结合DR5上的单个表位，或b)结合DR5上的许多不同表位。
如本文所提供的二聚体、五聚体或六聚体结合分子的结合单元可以是人、人源化或嵌合免疫球蛋白结合单元。使免疫球蛋白序列人源化的方法在本领域中众所周知。因此，编码二聚体五聚体或六聚体结合分子多肽的核苷酸序列可直接来自人序列、或可以是人源化或嵌合的，即，由来自多个不同物种的序列编码。
表达DR5的细胞可以是任何动物细胞。例如，在一个实施方案中，细胞是人细胞。例如，细胞可以是灵长类、啮齿动物、犬、马等中的任一种或多种的细胞。此外，表达DR5的细胞可以是癌细胞。即，细胞可以是恶性或良性的肿瘤细胞。
可对如本文所提供的二聚体、五聚体或六聚体结合分子进行基因工程化，使得其抗原结合结构域由已知特异性结合DR5的序列编码。许多组已发表了单克隆抗体可变区的序列，大多数抗体为被表征并且已知特异性结合DR5的IgG同种型。表2和表3提供了已知特异性结合DR5的非限制性免疫球蛋白可变结构域序列。本领域技术人员能够将这些公开的序列工程化为免疫球蛋白结构，诸如IgG、IgA、IgM结构，或生物活性或功能性多聚体片段变体或其衍生物。公开了用于将克隆的可变区基因工程化为免疫球蛋白结构域，并表达和纯化此类构建体的方法，并且所述方法在本领域技术人员的能力范围内。
因此，在某些实施方案中，如本文所提供的DR5结合结构域包含六个免疫球蛋白互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，或在抗DR5 mAb的一个或多个CDR中具有一个、两个、三个、四个或五个单一氨基酸取代的六个免疫球蛋白互补决定区，所述抗DR5mAb分别包含VH和VL氨基酸序列SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4；SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18；SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20；SEQ IDNO:21和SEQ ID NO:22；SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26；SEQID NO:27和SEQ ID NO:28；SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30；SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32；SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34；SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36；SEQ ID NO:37和SEQ IDNO:38；SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40；SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42；SEQ ID NO:43和SEQID NO:44；SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:46；SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48；SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50；SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:52；SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54；SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56；SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83；SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:85；SEQ IDNO:86和SEQ ID NO:87；或SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89；或ScFv序列SEQ ID NO:57、SEQID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:73。
在一些实施方案中，如本文所提供的DR5结合结构域包含六个免疫球蛋白互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，或在抗DR5 mAb的一个或多个CDR中具有一个、两个、三个、四个或五个单一氨基酸取代的六个免疫球蛋白互补决定区，所述抗DR5 mAb分别包含VH和VL氨基酸序列SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:6；或SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。在一些实施方案中，如本文所提供的DR5结合结构域包含六个免疫球蛋白互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，或在抗DR5 mAb的一个或多个CDR中具有一个、两个、三个、四个或五个单一氨基酸取代的六个免疫球蛋白互补决定区，所述抗DR5 mAb分别包含VH和VL氨基酸序列SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6。在一些实施方案中，如本文所提供的DR5结合结构域包含六个免疫球蛋白互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，或在抗DR5 mAb的一个或多个CDR中具有一个、两个、三个、四个或五个单一氨基酸取代的六个免疫球蛋白互补决定区，所述抗DR5 mAb分别包含VH和VL氨基酸序列SEQID NO:90和SEQ ID NO:6；或SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。在一些实施方案中，如本文所提供的DR5结合结构域包含六个免疫球蛋白互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，或在抗DR5 mAb的一个或多个CDR中具有一个、两个、三个、四个或五个单一氨基酸取代的六个免疫球蛋白互补决定区，所述抗DR5mAb分别包含VH和VL氨基酸序列SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。
Figure BDA0003915187800000611
Figure BDA0003915187800000621
Figure BDA0003915187800000631
Figure BDA0003915187800000641
Figure BDA0003915187800000651
Figure BDA0003915187800000661
表3：抗DR5 ScFv序列
Figure BDA0003915187800000671
Figure BDA0003915187800000681
Figure BDA0003915187800000691
在某些实施方案中，DR5结合结构域包含VH和VL，其中VH和VL分别包含与以下至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4；SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15和SEQ IDNO:16；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18；SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20；SEQ ID NO:21和SEQID NO:22；SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26；SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28；SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30；SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32；SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34；SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36；SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38；SEQ IDNO:39和SEQ ID NO:40；SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42；SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:44；SEQID NO:45和SEQ ID NO:46；SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48；SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50；SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:52；SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54；SEQ ID NO:55和SEQ IDNO:56；SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83；SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:85；SEQ ID NO:86和SEQID NO:87；或SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89，或其中VH和VL包含在具有与以下至少90％相同的氨基酸序列的ScFv中：SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ IDNO:72或SEQ ID NO:73。
在某些实施方案中，DR5结合结构域包含VH和VL，其中VH和VL分别包含与以下至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:6；或SEQ ID NO:7和SEQ IDNO:8。在某些实施方案中，DR5结合结构域包含VH和VL，其中VH和VL分别包含与以下至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6。在某些实施方案中，DR5结合结构域包含VH和VL，其中VH和VL包含与以下至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:6。在某些实施方案中，DR5结合结构域包含VH和VL，其中VH和VL分别包含与以下至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。
虽然本领域普通技术人员可基于本公开设想多种不同的二聚体、五聚体和六聚体结合分子，并且因此包括在本公开中，但是在某些实施方案中，提供了如上所述的结合分子，其中每个结合单元包含两条IgA或IgM重链，所述IgA或IgM重链各自包含位于IgA或IgM恒定区或其片段的氨基末端的VH，以及两条免疫球蛋白轻链，所述免疫球蛋白轻链各自包含位于免疫球蛋白轻链恒定区的氨基末端的VL。
此外，在某些实施方案中，结合分子的至少一个结合单元、或结合分子的至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个结合单元，包含两个如上所述的DR5结合结构域。在某些实施方案中，结合分子的至少一个结合单元、或结合分子的至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个结合单元中的两个DR5结合结构域可彼此不同，或其可以是相同的。
在某些实施方案中，结合分子的至少一个结合单元、或结合分子的至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个结合单元内的两条IgA或IgM重链是相同的。在某些实施方案中，在结合分子的至少一个结合单元内、或至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个结合单元内的两条相同的IgA或IgM重链包含如表2和表3中所公开的重链可变结构域氨基酸序列。
在某些实施方案中，结合分子的至少一个结合单元、或结合分子的至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个结合单元内的两条轻链是相同的。在某些实施方案中，结合分子的至少一个结合单元内、或至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个结合单元内的两条相同的轻链是κ轻链，例如人κ轻链，或λ轻链，例如人λ轻链。在某些实施方案中，结合分子的至少一个结合单元内、或至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个结合单元内的两条相同的轻链各自包含如表2和表3中所公开的轻链可变结构域氨基酸序列。
在某些实施方案中，本公开提供的二聚体、五聚体或六聚体结合分子的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个结合单元包含或各自包含两条相同的IgA或IgM重链恒定区，所述IgA或IgM重链恒定区各自包含如表2和表3中所公开的相同的重链可变结构域氨基酸序列；以及两条相同的轻链，所述轻链各自包含如表2和表3中所公开的相同的重链可变结构域氨基酸序列。根据此实施方案，结合分子的至少一个结合单元、或结合分子的至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个结合单元中的DR5结合结构域可以是相同的。进一步根据此实施方案，如本文所提供的二聚体、五聚体或六聚体结合分子可包含如上所述的DR5结合域的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个、至少十个、至少十一个或至少十二个拷贝。在某些实施方案中，至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个结合单元可以是相同的，并且在某些实施方案中，结合单元可包含相同的结合结构域，例如，至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个、至少十个、至少十一个或至少十二个DR5结合结构域可以是相同的。
在某些实施方案中，与其他结合分子相比，如本文所提供的二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子可具有有利的结构或功能特性。例如，相对于具有相同抗原结合结构域的对应二价结合分子的二聚体、五聚体或六聚体DR5结合。生物学测定包括但不限于ELISA和蛋白质印迹胱天蛋白酶测定，以及使用指示凋亡细胞死亡的染色剂诸如膜联蛋白-v的FACS分析。在某些实施方案中，如本文所提供的二聚体、五聚体或六聚体结合分子可以比等效量的单特异性二价IgG1抗体或其片段更高的效力触发DR5表达细胞的凋亡，所述二价IgG1抗体或其片段特异性地结合与DR5结合结构域相同的DR5表位。在某些实施方案中，如本文所提供的二聚体、五聚体或六聚体结合分子可以比等效量的单特异性二价抗DR5单克隆抗体或其片段更高的效力触发DR5表达细胞的凋亡，其中所述抗体是或包含与表2和表3中提供的抗体相同的VH和VL区。
使用方法
本公开提供了一种用于通过向患有癌症的受试者施用组合疗法来抑制、延迟或减少所述受试者中恶性细胞生长的方法，所述组合疗法包括有效量的特异性和激动性结合DR5的二聚体IgA或IgA样抗体或六聚体或五聚体IgM或IgM抗体或其多聚化抗原结合片段，其中IgA或IgA样抗体或IgM或IgM样抗体或其片段的三至十二个抗原结合结构域是DR5特异性和激动性的；与有效量的癌症疗法组合，所述癌症疗法例如，放射、蒽环类药物、叶酸类似物、铂基药剂、紫杉烷、拓扑异构酶II抑制剂或它们的任何组合。示例性抗DR5 IgA或IgA样抗体和IgM或IgM样抗体以及示例性癌症疗法详细描述于本文其他各处。另外的组合疗法在例如PCT公布号WO 2019/165340中提供，所述公布以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，施用本文提供的组合疗法可部分或完全抑制肿瘤或恶性细胞的生长、可延迟受试者中肿瘤和恶性细胞生长的进展、可阻止转移在受试者中扩散、可减小受试者的肿瘤大小，以例如允许更成功的手术切除，和/或可导致受试者中积极治疗反应的任何组合。本文描述了可实现的示例性治疗反应。
在某些实施方案中，相对于单独施用抗DR5 IgA或IgA样抗体或IgM或IgM样抗体或癌症疗法，例如放射、蒽环类药物、叶酸类似物、铂基药剂、紫杉烷、拓扑异构酶II抑制剂或它们的任意组合，施用组合疗法可导致增强的治疗功效。在某些实施方案中，改善的疗效可大于每种单独疗法的累加功效。在某些实施方案中，相对于单独施用的任一种疗法，例如，以增加的肿瘤生长延迟(TGD)、增加的肿瘤消退频率(例如，完全肿瘤消退)或增加的存活率进行测量的改善的疗效为至少5％、至少10％、至少20％、至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％、至少150％、至少200％、至少250％、至少300％、至少350％、至少400％、至少450％、至少500％、至少550％、至少600％、至少650％、至少700％、至少750％、至少800％、至少850％、至少900％、至少950％或至少1000％。在某些实施方案中，相对于分别施用的两种疗法的累加功效，例如，以增加的肿瘤生长延迟(TGD)、增加的肿瘤消退频率(例如，完全肿瘤消退)或增加的存活率进行测量的改善的疗效为至少5％、至少10％、至少20％、至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％、至少150％、至少200％、至少250％、至少300％、至少350％、至少400％、至少450％、至少500％、至少550％、至少600％、至少650％、至少700％、至少750％、至少800％、至少850％、至少900％、至少950％或至少1000％。在某些实施方案中，改善可以是完全肿瘤消退和/或完全存活率。例如，改善的活性可允许使用降低的剂量，或者可导致更有效地杀死对通过标准治疗杀死具有抗性的细胞。“抗性”意指对于给定肿瘤或癌症类型的“护理标准”的任何程度的降低的活性。
在某些实施方案中，当以有效剂量施用于需要癌症治疗的受试者时，本文提供的组合治疗方法可例如通过减慢肿瘤生长、停止肿瘤生长或减小现有肿瘤的大小来促进癌症治疗。
在某些实施方案中，DR5表达细胞是永生化细胞系，例如，癌细胞。术语“癌症”、“肿瘤”、“癌性”和“恶性”是指或描述哺乳动物的特征通常在于细胞生长不受调控的生理状况。癌症的实例包括但不限于癌，包括腺癌、淋巴瘤、母细胞瘤、黑色素瘤、肉瘤和白血病。此类癌症的更具体实例包括骨肉瘤、软骨肉瘤、纤维肉瘤、鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胃肠道癌、霍奇金氏和非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、成胶质细胞瘤、神经胶质瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌(liver cancer)诸如肝癌(hepatic carcinoma)和肝细胞瘤、膀胱癌、乳腺癌(包括激素介导的乳腺癌，参见例如，Innes等人(2006)Br.J.Cancer 94:1057-1065)和三阴性乳腺癌(TNBC)、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、骨髓瘤(诸如多发性骨髓瘤)、唾液腺癌、肾癌诸如肾细胞癌和Wilms瘤、基底细胞癌、黑色素瘤、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、睾丸癌、食管癌、各种类型的头颈癌，包括但不限于鳞状细胞癌和粘液起源的癌症，诸如粘液性卵巢癌、胆管癌(肝)和肾乳头状癌。例如由如本文所提供的基于IgA的结合分子所提供的粘膜分布对于某些癌症例如肺癌、卵巢癌、结肠直肠癌或鳞状细胞癌可以是有益的。
用于治疗癌症的组合物的有效剂量根据许多不同的因素而变化，所述许多不同因素包括施用方式、目标部位、患者的生理状态、患者是人还是动物、所施用的其他药物以及治疗是预防性还是治疗性的。在某些实施方案中，本文提供的治疗方法可提供增加的安全性，因为组合物对癌细胞比对非癌细胞(例如，正常人肝细胞)表现出更大的细胞毒性(例如，更大程度地诱导凋亡)。通常，患者是人，但也可治疗非人哺乳动物，包括转基因哺乳动物。可使用本领域技术人员已知的常规方法滴定治疗剂量，以优化安全性和功效。
本公开的组合物可通过任何合适的方法施用，例如，经胃肠外、脑室内、经口、通过雾化吸入、局部地、直肠、经鼻、经颊、阴道或经由植入的贮库施用。如本文中所用的术语“胃肠外”包括皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内以及颅内注射或输注技术。
要治疗的受试者可以是需要治疗的任何动物，例如，哺乳动物，在某些实施方案中，受试者是人受试者。
以其最简单的形式，要向受试者施用的制剂是以常规剂型与癌症疗法组合施用的如本文所提供的二聚体、五聚体或六聚体抗DR5抗体，或其抗原结合的多聚化片段、变体或衍生物。在一些实施方案中，癌症疗法是化学治疗剂。因此，在一些实施方案中，抗DR5抗体和化学治疗剂可与如本文其他各处所述的药物赋形剂、载剂或稀释剂组合。在一些实施方案中，抗DR5抗体和化学治疗剂可以单独的药物组合物的形式施用。
如本文所提供的DR5结合分子或其抗原结合的多聚化片段、变体或衍生物可通过本文其他各处所述的任何合适的方法来施用，例如通过IV输注来施用。在某些实施方案中，可将如本文所提供的DR5结合分子或其抗原结合的多聚化片段、变体或衍生物引入肿瘤或肿瘤细胞附近。
所有类型的肿瘤可能适合通过这种途径进行治疗，所述肿瘤包括但不限于乳腺癌、肺癌、胰腺癌、卵巢癌、肾癌、结肠癌和膀胱癌、以及黑色素瘤、肉瘤和淋巴瘤。粘膜分布对于某些癌症，例如肺癌、卵巢癌、结肠直肠癌或鳞状细胞癌可以是有益的。
因此，在一些实施方案中，本文提供的方法是用于抑制、延迟或减少患有癌症的受试者中恶性细胞生长的方法，其中癌症是血液癌症或实体瘤。在一些实施方案中，癌症是血液癌症，诸如急性髓系白血病(AML)、慢性髓系白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、其任何转移瘤或它们的任何组合。实体瘤。在一些实施方案中，癌症是实体瘤，诸如膀胱癌、结肠直肠癌、肉瘤(例如，纤维肉瘤)、胃癌、肺癌(例如，非小细胞肺癌(NSCLC))或胰腺癌。
放射
放射疗法是将电离放射局部应用于癌性肿瘤。放射疗法的目标是破坏导致细胞死亡的癌细胞的DNA。放射疗法广泛用于治疗多种癌症，包括膀胱癌、结肠直肠癌、肉瘤、胃癌、肺癌和胰腺癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括放射疗法，所述癌症是非转移性癌症，诸如非转移性膀胱癌、结肠直肠癌、肉瘤、胃癌、肺癌和胰腺癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括放射疗法，所述方法还包括施用有效量的一种或多种化学治疗剂，诸如本文所公开的化学治疗剂。在一些实施方案中，化学治疗剂是拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、核苷类似物、叶酸类似物、铂基药剂、紫杉烷、b细胞淋巴瘤-2(BCL-2)抑制剂，或它们的任何组合。示例性化学治疗剂和化学治疗剂的组合在本文其他各处和PCT公布号WO 2019/165340中更详细地讨论。
拓扑异构酶II抑制剂
拓扑异构酶II已成为化学治疗药物的重要靶标，因为抑制这种酶会导致DNA断裂和癌细胞凋亡。拓扑异构酶II抑制剂的实例是依托泊苷和蒽环类药物，诸如柔红霉素和多柔比星。多柔比星用于治疗多种癌症，包括乳腺癌、肉瘤、卵巢癌、膀胱癌、肺癌和多发性骨髓瘤。
柔红霉素(CAS登记号20830-81-3)具有下式：
Figure BDA0003915187800000771
多柔比星(CAS登记号23214-92-8)具有下式：
Figure BDA0003915187800000772
依托泊苷(CAS登记号33419-42-0)具有下式：
Figure BDA0003915187800000781
在一些实施方案中，癌症疗法包括拓扑异构酶II抑制剂。在一些实施方案中，静脉内施用拓扑异构酶II抑制剂。在一些实施方案中，癌症疗法包括拓扑异构酶II抑制剂，并且癌症是本文所公开的癌症。在一些实施方案中，癌症疗法包括拓扑异构酶II抑制剂并且癌症是肺癌、肉瘤或血液癌症，诸如本文所公开的血液癌症，例如急性髓系白血病(AML)。在一些实施方案中，癌症疗法拓扑异构酶II抑制剂，并且所述方法还包括施用有效量的一种或多种本文所公开的另外的癌症疗法。在一些实施方案中，癌症疗法包括拓扑异构酶抑制剂，并且所述方法还包括施用有效量的放射疗法。
在一些实施方案中，癌症疗法包括依托泊苷，并且癌症是肺癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括依托泊苷，并且癌症是血液癌症。在一些实施方案中，癌症疗法包括依托泊苷，并且癌症是急性髓系白血病(AML)。在一些实施方案中，癌症疗法包括依托泊苷，并且所述方法还包括施用有效量的一种或多种本文所公开的另外的癌症疗法。在一些实施方案中，癌症疗法包括依托泊苷，并且所述方法还包括施用有效量的放射疗法。在一些实施方案中，癌症疗法包括依托泊苷，所述方法还包括施用有效量的放射疗法，并且癌症是肉瘤或血液癌症，诸如本文所公开的血液癌症，例如急性髓系白血病(AML)。
在一些实施方案中，癌症疗法包括蒽环类药物，诸如多柔比星，并且癌症是本文所公开的癌症。在一些实施方案中，癌症疗法包括蒽环类药物，诸如多柔比星，并且癌症是肉瘤或血液癌症，诸如本文所公开的血液癌症，例如急性髓系白血病(AML)。在一些实施方案中，癌症疗法包括多柔比星，并且癌症是肉瘤。在一些实施方案中，癌症疗法包括多柔比星，并且癌症是血液癌症。在一些实施方案中，癌症疗法包括多柔比星，并且癌症是急性髓系白血病(AML)。在一些实施方案中，癌症疗法包括蒽环类药物，诸如多柔比星，并且所述方法还包括施用有效量的一种或多种本文所公开的另外的癌症疗法。在一些实施方案中，癌症疗法包括蒽环类药物，诸如多柔比星，并且所述方法还包括施用有效量的放射疗法。在一些实施方案中，癌症疗法包括蒽环类药物，诸如多柔比星，所述方法还包括施用有效量的放射疗法，并且癌症是肉瘤或血液癌症，诸如本文所公开的血液癌症，例如急性髓系白血病(AML)。
叶酸类似物
叶酸类似物，诸如甲酰四氢叶酸，已被用于降低某些化疗的毒性作用。甲酰四氢叶酸，例如甲酰四氢叶酸钙(亚叶酸钙)是“FOLFOX”和“FOLFIRI”化学治疗方案的组分。“FOLFOX”包含甲酰四氢叶酸钙(亚叶酸钙)、氟尿嘧啶和奥沙利铂。“FOLFIRI”方案包括甲酰四氢叶酸钙(亚叶酸钙)、氟尿嘧啶和伊立替康。FOLFIRI和FOLFOX广泛用于治疗晚期和转移性结肠直肠癌。
甲酰四氢叶酸(CAS登记号1492-18-8)具有下式：
Figure BDA0003915187800000791
在一些实施方案中，癌症疗法包括叶酸类似物，诸如甲酰四氢叶酸，并且癌症是本文所公开的癌症。在一些实施方案中，静脉内施用叶酸类似物。在一些实施方案中，癌症疗法包括叶酸类似物，诸如甲酰四氢叶酸，癌症是结肠直肠癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括叶酸类似物，诸如甲酰四氢叶酸，所述方法还包括施用有效量的一种或多种本文所公开的另外的癌症疗法。在一些实施方案中，癌症疗法包括叶酸类似物，诸如甲酰四氢叶酸，所述方法还包括施用有效量的氟尿嘧啶。在一些实施方案中，癌症疗法包括叶酸类似物，诸如甲酰四氢叶酸，所述方法还包括施用有效量的伊立替康。在一些实施方案中，癌症疗法包括叶酸类似物，诸如甲酰四氢叶酸，所述方法还包括施用有效量的奥沙利铂。在一些实施方案中，癌症疗法包括叶酸类似物，诸如甲酰四氢叶酸，所述方法还包括施用有效量的氟尿嘧啶和伊立替康。在一些实施方案中，癌症疗法包括叶酸类似物，诸如甲酰四氢叶酸，所述方法还包括施用有效量的氟尿嘧啶和奥沙利铂。在一些实施方案中，癌症疗法包括叶酸类似物，诸如甲酰四氢叶酸，并且所述方法还包括施用有效量的放射疗法，任选地与FOLFOX或FOLFIRI的一种或多种其他组分组合。在一些实施方案中，癌症疗法包括叶酸类似物，诸如甲酰四氢叶酸，并且所述方法还包括施用有效量的贝伐珠单抗，任选地与FOLFOX或FOLFIRI的一种或多种其他组分组合。
在一些实施方案中，癌症疗法包括叶酸类似物，诸如甲酰四氢叶酸，所述方法还包括施用有效量的氟尿嘧啶，并且癌症是结肠直肠癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括叶酸类似物，诸如甲酰四氢叶酸，所述方法还包括施用有效量的伊立替康，并且癌症是结肠直肠癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括叶酸类似物，诸如甲酰四氢叶酸，所述方法还包括施用有效量的奥沙利铂，并且癌症是结肠直肠癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括叶酸类似物，诸如甲酰四氢叶酸，所述方法还包括施用有效量的氟尿嘧啶和伊立替康，并且癌症是结肠直肠癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括叶酸类似物，诸如甲酰四氢叶酸，所述方法还包括施用有效量的氟尿嘧啶和奥沙利铂，并且癌症是结肠直肠癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括叶酸类似物，诸如甲酰四氢叶酸，并且所述方法还包括施用有效量的放射疗法，任选地与FOLFOX或FOLFIRI的一种或多种其他组分组合，并且癌症是结肠直肠癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括叶酸类似物，诸如甲酰四氢叶酸，并且所述方法还包括施用有效量的贝伐珠单抗，任选地与FOLFOX或FOLFIRI的一种或多种其他组分组合，并且癌症是结肠直肠癌。
铂基药剂
铂基药剂通常用于治疗各种癌症。铂基药剂被认为会引起DNA交联，从而导致癌细胞死亡。铂基药剂的实例包括顺铂、卡铂和奥沙利铂。
顺铂(CAS登记号15663-27-1)具有下式：
Figure BDA0003915187800000811
卡铂(CAS登记号41575-94-4)具有下式：
Figure BDA0003915187800000812
奥沙利铂(CAS登记号63121-00-6)具有下式：
Figure BDA0003915187800000813
在一些实施方案中，癌症疗法包括铂基药剂，诸如顺铂、卡铂或奥沙利铂，并且癌症是本文所公开的癌症。在一些实施方案中，癌症疗法包括铂基药剂，诸如顺铂、卡铂或奥沙利铂，并且静脉内施用癌症疗法。在一些实施方案中，癌症疗法包括铂基药剂，诸如顺铂、卡铂或奥沙利铂，癌症是胃癌、肺癌(诸如非小细胞肺癌(NSCLC))或结肠直肠癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括铂基药剂，诸如顺铂、卡铂或奥沙利铂，所述方法还包括施用有效量的放射疗法。
在一些实施方案中，癌症疗法包括奥沙利铂，癌症是胃癌或结肠直肠癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括奥沙利铂，癌症是胃癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括奥沙利铂，所述方法还包括施用有效量的放射疗法。在一些实施方案中，癌症疗法包括奥沙利铂，所述方法还包括施用有效量的放射疗法，并且癌症是胃癌。
在一些实施方案中，癌症疗法包括奥沙利铂，所述方法还包括施用有效量的甲酰四氢叶酸和/或氟尿嘧啶。在一些实施方案中，癌症疗法包括奥沙利铂，所述方法还包括施用有效量的甲酰四氢叶酸和/或氟尿嘧啶，并且癌症是结肠直肠癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括奥沙利铂，所述方法还包括施用有效量的1)甲酰四氢叶酸和/或氟尿嘧啶和2)放射疗法。在一些实施方案中，癌症疗法包括奥沙利铂，所述方法还包括施用有效量的1)甲酰四氢叶酸和/或氟尿嘧啶和2)放射疗法，并且癌症是结肠直肠癌。
在一些实施方案中，癌症疗法包括卡铂，癌症是胃癌或肺癌，诸如NSCLC。在一些实施方案中，癌症疗法包括卡铂，癌症是胃癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括卡铂，所述方法还包括施用有效量的放射疗法。在一些实施方案中，癌症疗法包括卡铂，所述方法还包括施用有效量的放射疗法，并且癌症是胃癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括卡铂，癌症是肺癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括卡铂，癌症是NSCLC。在一些实施方案中，癌症疗法包括卡铂，所述方法还包括施用有效量的放射疗法，并且癌症是肺癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括卡铂，所述方法还包括施用有效量的放射疗法，并且癌症是NSCLC。
紫杉烷
紫杉烷是广泛使用的化学治疗剂。紫杉烷被认为通过破坏微管功能来阻止癌细胞分裂。紫杉烷的实例括紫杉醇和多西他赛(docetaxel)。紫杉烷难溶于水。通常，紫杉烷是用诸如CREMOPHOR
Figure BDA0003915187800000821
(聚氧乙烯35氢化蓖麻油)的溶剂配制而成。还开发了替代制剂，诸如白蛋白纳米颗粒(nab)，例如
Figure BDA0003915187800000831
(白蛋白纳米颗粒紫杉醇)。
紫杉醇(CAS登记号33069-62-4)具有下式：
Figure BDA0003915187800000832
多西他赛(CAS登记号114977-28-5)具有下式：
Figure BDA0003915187800000833
在一些实施方案中，癌症疗法包括紫杉烷，诸如紫杉醇或多西他赛。在一些实施方案中，静脉内施用紫杉烷。在一些实施方案中，癌症疗法包括紫杉醇，诸如溶剂型紫杉醇或白蛋白纳米颗粒(nab)紫杉醇。在一些实施方案中，癌症疗法包括紫杉烷，诸如紫杉醇或多西他赛，并且癌症是本文所公开的癌症。在一些实施方案中，癌症疗法包括紫杉烷，诸如紫杉醇或多西他赛，并且癌症是肺癌，诸如非小细胞肺癌(NSCLC)或胰腺癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括紫杉醇，并且癌症是肺癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括紫杉醇，并且癌症是NSCLC。在一些实施方案中，癌症疗法包括紫杉醇，并且癌症是胰腺癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括紫杉醇，并且所述方法还包括施用放射疗法。在一些实施方案中，癌症疗法包括紫杉醇，所述方法还包括施用放射疗法，并且癌症是NSCLC。在一些实施方案中，癌症疗法包括紫杉醇，所述方法还包括施用放射疗法，并且癌症是胰腺癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括紫杉醇，所述方法还包括施用吉西他滨。在一些实施方案中，癌症疗法包括紫杉醇，所述方法还包括施用吉西他滨和放射疗法。在一些实施方案中，癌症疗法包括紫杉醇，所述方法还包括施用吉西他滨，并且癌症是胰腺癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括紫杉醇，所述方法还包括施用吉西他滨和放射疗法，并且癌症是胰腺癌。
拓扑异构酶I抑制剂
拓扑异构酶是癌症化疗的流行靶标，并且已经或正在开发各种抑制剂。抑制I型拓扑异构酶的化合物目前正在使用或正在被开发为癌症化学治疗剂。具体地说，自然I型拓扑异构酶抑制剂喜树碱的两种衍生物伊立替康(7-乙基-10-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰氧基喜树碱，也称为CPT-11)和拓扑替康(9-[(二甲胺基)甲基]-10-羟基-(4S)-喜树碱)目前在市场上可购得用于治疗各种癌症。伊立替康是广泛用于治疗晚期和转移性结肠直肠癌的甲酰四氢叶酸钙(亚叶酸钙)、氟尿嘧啶和伊立替康的“FOLFIRI”方案的一部分。在一些实施方案中，静脉内施用拓扑异构酶I抑制剂。
伊立替康(CAS登记号100286-90-6)具有下式：
Figure BDA0003915187800000841
拓扑替康(CAS登记号123948-87-8)具有下式：
Figure BDA0003915187800000851
化学治疗的核苷类似物
吉西他滨(2',2'-二氟2'脱氧胞苷或dFdC)(CAS登记号95058-81-4)是一种用作化疗的核苷类似物。其被FDA批准用于治疗例如，乳腺癌、胰腺癌、肺癌和卵巢癌。吉西他滨具有下式：
Figure BDA0003915187800000852
作为嘧啶类似物，药物在DNA复制期间取代快速生长的肿瘤细胞中核酸的组成部分中的一种(在此情况下为胞苷)。过程阻止了肿瘤的生长，因为新的核苷不能连接到“有缺陷的”核苷，从而导致凋亡(细胞“自杀”)。吉西他滨用于各种癌症：非小细胞肺癌、胰腺癌、膀胱癌和乳腺癌。吉西他滨是许多胰腺癌的护理标准。
其他FDA批准的用于癌症治疗的核苷类似物包括胞嘧啶阿拉伯糖苷(ara-C或阿糖胞苷)，用于治疗急性髓系白血病(AML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性粒细胞性白血病(CML)和非霍奇金氏淋巴瘤(www_dot_drugs_dot_com/monograph/cytarabine.html(访问于2018年11月14日)；以及氟尿嘧啶(5-FU)，用于治疗结肠癌、食管癌、胃癌、胰腺癌、乳腺癌、基底细胞癌和子宫颈癌(www_dot_drugs_dot_com/monograph/fluorouracil.html(访问于2018年11月14日)。Ara-C(CAS登记号147-94-4)具有下式：
Figure BDA0003915187800000861
5-FU(CAS登记号51-21-8)具有下式：
Figure BDA0003915187800000862
在一些实施方案中，化学治疗的核苷类似物是静脉内、鞘内或皮下施用的。在一些实施方案中，静脉内施用化学治疗的核苷类似物。
SMAC模拟物
第二线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂(SMAC)是一种线粒体蛋白，其结合凋亡蛋白抑制剂(IAP)，从而抑制IAP结合胱天蛋白酶(一类促凋亡蛋白)的能力。IAP拮抗地结合胱天蛋白酶，因此，IAP的SMAC结合是促凋亡的。已开发了各种SMAC模拟物，例如比瑞那帕、APG-1387、Debio 1143、ASTX660、GDC-0152和HGS-1029/AEG40826来模拟SMAC的活性。内源性SMAC是二价的，并且类似地，一些SMAC模拟物也是二价的，例如比瑞那帕、APG-1387和HGS-1029/AEG40826。可选地，一些SMAC模拟物是单价的，例如Debio 1143、ASTX660和GDC-0152。
比瑞那帕(美国专利号8,283,372，CAS登记号1260251-31-7)具有下式：
Figure BDA0003915187800000871
APG-1387(Li,N,等人,Cancer Letters,2016,381:14-22)具有下式：
Figure BDA0003915187800000872
Debio 1143(AT-406/SM-406；Cai等人,J Med Chem.2011；54(8):2714–2726)具有下式：
Figure BDA0003915187800000881
ASTX660(Ward,GA,等人,Mol Cancer Ther.2018年7月；17(7):1381-1391)具有下式：
Figure BDA0003915187800000882
GDC-0152/RG-7419(Flygare,JA,等人,J.Med.Chem.55:4101-4113(2012)，CAS登记号873652-48-3)具有下式：
Figure BDA0003915187800000883
HGS-1029/AEG40826(CAS登记号1107664-44-7)描述于美国专利号7,579,320中。
在一些实施方案中，癌症疗法包括SMAC模拟物。在一些实施方案中，SMAC模拟物是二价SMAC模拟物，诸如比瑞那帕、APG-1387或HGS-1029/AEG40826。在一些实施方案中，SMAC模拟物是单价SMAC模拟物，诸如Debio 1143、ASTX660和GDC-0152。在一些实施方案中，经口或静脉内施用SMAC模拟物。在一些实施方案中，SMAC模拟物是二价SMAC模拟物，并且静脉内施用SMAC模拟物。在一些实施方案中，SMAC模拟物是单价SMAC模拟物，并且经口施用SMAC模拟物。在一些实施方案中，癌症疗法包括SMAC模拟物，诸如比瑞那帕、APG-1387、Debio1143、ASTX660、GDC-0152或HGS-1029/AEG40826，并且癌症是本文所公开的癌症。
在一些实施方案中，癌症疗法包括SMAC模拟物，诸如单价或二价SMAC模拟物，诸如比瑞那帕、APG-1387或HGS-1029/AEG40826，并且癌症是头颈癌，诸如头颈肉瘤。在一些实施方案中，癌症疗法包括二价SMAC模拟物，诸如比瑞那帕，并且癌症是头颈癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括二价SMAC模拟物，诸如比瑞那帕，并且癌症是头颈肉瘤。
在一些实施方案中，癌症疗法包括SMAC模拟物，诸如单价或二价SMAC模拟物，诸如比瑞那帕、APG-1387或HGS-1029/AEG40826，并且癌症是结肠直肠癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括二价SMAC模拟物，诸如比瑞那帕，并且癌症是结肠直肠癌。
在一些实施方案中，癌症疗法包括SMAC模拟物，诸如单价或二价SMAC模拟物，诸如比瑞那帕、APG-1387或HGS-1029/AEG40826，并且癌症是乳腺癌，诸如三阴性乳腺癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括二价SMAC模拟物，诸如比瑞那帕，并且癌症是乳腺癌，诸如三阴性乳腺癌。
在一些实施方案中，癌症疗法包括SMAC模拟物，诸如单价或二价SMAC模拟物，诸如比瑞那帕、APG-1387或HGS-1029/AEG40826，并且所述方法还包括施用放射疗法。在一些实施方案中，癌症疗法包括SMAC模拟物，诸如单价或二价SMAC模拟物，诸如比瑞那帕、APG-1387或HGS-1029/AEG40826，所述方法还包括施用放射疗法，并且癌症是头颈癌，诸如头颈肉瘤。在一些实施方案中，癌症疗法包括SMAC模拟物，诸如单价或二价SMAC模拟物，诸如比瑞那帕、APG-1387或HGS-1029/AEG40826，所述方法还包括施用放射疗法，并且癌症是结肠直肠癌。在一些实施方案中，癌症疗法包括SMAC模拟物，诸如单价或二价SMAC模拟物，诸如比瑞那帕、APG-1387或HGS-1029/AEG40826，所述方法还包括施用放射，并且癌症是乳腺癌，诸如三阴性乳腺癌。
长春花生物碱
长春花生物碱是一类抗微管和抗有丝分裂剂，可阻止微管聚合并因此阻止细胞分裂。出于这个原因，长春花生物碱被用作癌症化疗。已开发了各种长春花生物碱，例如长春新碱。长春新碱(CAS登记号57-22-7)具有下式：
Figure BDA0003915187800000901
在一些实施方案中，癌症疗法是长春花生物碱，诸如长春新碱，并且癌症是本文所公开的癌症。在一些实施方案中，静脉内施用长春花生物碱。
BTK抑制剂
布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)是一种对B细胞发育很重要的蛋白质。因此，已开发了各种BTK抑制剂，例如依鲁替尼来治疗B细胞相关癌症。依鲁替尼(CAS登记号936563-96-1)具有下式：
Figure BDA0003915187800000911
在一些实施方案中，癌症疗法是BTK抑制剂，诸如依鲁替尼，并且癌症是本文所公开的癌症。在一些实施方案中，经口施用BTK抑制剂。
PI3Kδ抑制剂
抑制磷酸肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)可阻止B细胞增殖并诱导其凋亡。因此，已开发了各种PI3Kδ抑制剂，例如依达拉西布来治疗B细胞相关癌症。依达拉西布(CAS登记号870281-82-6)具有下式：
Figure BDA0003915187800000921
在一些实施方案中，癌症疗法是PI3Kδ抑制剂，诸如依达拉西布，并且癌症是本文所公开的癌症。在一些实施方案中，经口施用PI3Kδ抑制剂。
Mcl-1抑制剂
髓系细胞白血病-1(Mcl-1)是一种抗凋亡抗增殖蛋白。因此，已开发了各种Mcl-1抑制剂，例如MIK665/S-64315来治疗癌症。MIK665/S-64315(CAS登记号1799631-75-6)具有下式：
Figure BDA0003915187800000922
在一些实施方案中，癌症疗法是Mcl-1抑制剂，诸如MIK665/S-64315，并且癌症是本文所公开的癌症。在一些实施方案中，静脉内施用Mcl-1抑制剂。
抗VEGF抗体
血管内皮生长因子(VEGF)是一种已知可促进血管生成的蛋白质。贝伐珠单抗(CAS登记号：216974-75-3)，一种抑制VEGF的抗体，已被批准用于治疗结肠直肠癌、非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、肾细胞癌、宫颈癌、上皮性卵巢癌、输卵管癌、原发性腹膜癌或肝细胞癌。如本文所用，术语“贝伐珠单抗”包括贝伐珠单抗和贝伐珠单抗生物类似物，例如贝伐珠单抗-awwb和贝伐珠单抗-bvzr。
在一些实施方案中，癌症疗法是抗VEGF抗体，诸如贝伐珠单抗，并且癌症是本文所公开的癌症。在一些实施方案中，静脉内施用抗VEGF抗体。
药物组合物和施用方法
制备如本文所提供的二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子并将其施用于有需要的受试者的方法是已知的或鉴于本公开而容易确定。DR5结合分子的施用途径可以是例如经口、胃肠外、通过吸入或局部施用。如本文所使用的术语胃肠外施用包括例如静脉内、动脉内、腹膜内、肌肉内、皮下、直肠或阴道施用。尽管这些施用形式被认为是合适的形式，但是施用形式的另一个实例是注射用溶液，特别是用于静脉内或动脉内注射或滴注的溶液。合适的药物组合物可包含缓冲液(例如，乙酸盐、磷酸盐或柠檬酸盐缓冲液)、表面活性剂(例如，聚山梨酯)、任选的稳定剂(例如，人白蛋白)等。
如本文所讨论的，如本文所提供的二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子可以体内治疗表达DR5的癌症的药学上有效量施用。就这一点而言，应当理解，可配制所公开的结合分子和化合物，以便有助于施用和促进活性剂的稳定性。因此，药物组合物可包含药学上可接受的无毒无菌载剂，诸如生理盐水、无毒缓冲液、防腐剂等。如本文所提供的二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子的药学上有效量是指足以实现与靶标的有效结合并获得治疗益处的量。如本文所提供的癌症疗法的药学上有效量是指足以获得治疗益处的量。合适的制剂描述于Remington’s Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Co.)第16版,(1980)。
本文所提供的某些药物组合物可以可接受的剂型经口施用，所述剂型包括例如，胶囊、片剂、水性混悬液或溶液。某些药物组合物也可通过鼻喷雾或吸入施用。采用苯甲醇或其他合适的防腐剂、增强生物利用率的吸收促进剂和/或其他常规增溶或分散剂将此类组合物制备成在盐水中的溶液。
可与载剂材料组合以产生单剂型的二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子或癌症疗法的量将根据例如所治疗的受试者和特定施用方式而变化。组合物可以单剂量、多剂量或在输注的确定时间段内施用。也可调整剂量方案，以提供最佳的期望反应(例如，治疗性或预防性反应)。
本文所述的化合物可以任何药学上可接受的形式施用，诸如以药学上可接受的盐的形式，或者如果所述形式是药学上可接受的形式，则以游离碱或游离酸形式施用。本文所述的化合物或其药学上可接受的盐可在药学上可接受的载剂或赋形剂中施用。
在本公开的范围内，如本文所提供的二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子可以足以产生治疗效果的量施用于需要疗法的受试者。如本文所提供的二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子可以常规剂型施用于受试者，所述常规剂型通过根据已知的技术将本公开的抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物与常规药学上可接受的载剂或稀释剂组合来制备。药学上可接受的载剂或稀释剂的形式和特征可由与其组合的活性成分的量、施用途径和其他众所周知的变量来决定。
“治疗有效剂量或量”或“有效量”意指二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子的量，在施用时，所述量相对于患有表达DR5的癌症的受试者的治疗产生积极治疗反应。
用于治疗癌症的本文所公开的组合物的治疗有效剂量可根据许多不同的因素而变化，所述许多不同因素包括施用方式、目标部位、患者的生理状态、患者是人还是动物、所施用的其他药物以及治疗是预防性还是治疗性的。在某些实施方案中，受试者或患者是人，但也可治疗非人哺乳动物，包括转基因哺乳动物。可使用本领域技术人员已知的常规方法滴定治疗剂量，以优化安全性和功效。在某些实施方案中，DR5结合分子或癌症疗法的有效量是低于作为单剂的DR5结合分子或癌症疗法的有效量的量。
在给出本公开的情况下，无需过度实验，本领域普通技术人员可容易地确定要施用的二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子的量。影响施用方式和二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子的相应量的因素包括但不限于疾病的严重程度、疾病的病史、以及接受疗法的个体的年龄、身高、体重、健康和身体状况。类似地，要施用的二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子的量将取决于施用方式以及受试者将接受单剂量还是多剂量的这种剂。
在一些实施方案中，本文所公开的二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子和本文所公开的癌症疗法同时施用。在一些实施方案中，本文所公开的二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子和癌症疗法依序施用。在一些实施方案中，所述方法包括在施用癌症疗法之前施用二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子。在一些实施方案中，在施用癌症疗法之前至少1分钟、5分钟、10分钟、15分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、1天、2天、3天、1周或2周施用二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子。在一些实施方案中，在施用癌症疗法之前1分钟至1个月，诸如在施用癌症疗法之前1分钟至2周、1分钟至3天、1分钟至1天、15分钟至2周、15分钟至3天、15分钟至1天、1小时至2周、1小时至3天、1小时至1天、6小时至2周、6小时至3天、6小时至1天、1天至2周或1天至3天施用二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子。
在一些实施方案中，所述方法包括在施用二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子之前施用癌症疗法。在一些实施方案中，在施用二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子之前至少1分钟、5分钟、10分钟、15分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、1天、2天、3天、1周或2周施用癌症疗法。在一些实施方案中，在施用癌症疗法之前1分钟至1个月，诸如在施用二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子之前1分钟至2周、1分钟至3天、1分钟至1天、15分钟至2周、15分钟至3天、15分钟至1天、1小时至2周、1小时至3天、1小时至1天、6小时至2周、6小时至3天、6小时至1天、1天至2周或1天至3天施用癌症疗法。
本公开还提供了二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子在制造用于治疗、预防或防治癌症的药物中的用途，其中癌症表达DR5。
药盒和制品
本文还提供了一种药盒，其包含本文所公开的二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子和根据本文所述的任何方法的使用说明。
本文还提供了一种药盒，其包含本文所公开的二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子和用于本文所述任何方法的癌症疗法。
本文还提供了一种药盒，其包含本文所公开的二聚体、五聚体或六聚体DR5结合分子和/或癌症疗法，以及根据本文所述的任何方法的使用说明，其中癌症疗法是第二线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂(SMAC)模拟物、叶酸类似物、铂基药剂、紫杉烷、拓扑异构酶II抑制剂、长春花生物碱、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、磷酸肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)抑制剂、髓系细胞白血病-1(Mcl-1)抑制剂，或它们的任何组合。
药盒中提供的说明通常是标签或包装插页(例如，药盒中包含的纸张)上的书面说明，但机器可读说明(例如，磁或光存储盘上的说明)也是可接受的，提供对电子存储说明的引用的标签或包装插页(诸如引导至网站的超链接或条形码)也是可接受的。
除非另外指定，否则本公开采用本领域技术范围内的细胞生物学、细胞培养、分子生物学、转基因生物学、微生物学、重组DNA和免疫学的常规技术。此类技术在文献中有充分的解释。参见例如，Green和Sambrook,编(2012)Molecular Cloning A Laboratory Manual(第4版；Cold Spring Harbor Laboratory Press)；Sambrook等人,编(1992)MolecularCloning:A Laboratory Manual,(Cold Springs Harbor Laboratory,NY)；D.N.Glover和B.D.Hames,编,(1995)DNA Cloning第2版(IRL Press),第1-4卷；Gait,编(1990)Oligonucleotide Synthesis(IRL Press)；Mullis等人美国专利号4,683,195；Hames和Higgins,编(1985)Nucleic Acid Hybridization(IRL Press)；Hames和Higgins,编(1984)Transcription And Translation(IRL Press)；Freshney(2016)Culture Of AnimalCells,第7版(Wiley-Blackwell)；Woodward,J.,Immobilized Cells And Enzymes(IRLPress)(1985)；Perbal(1988)A Practical Guide To Molecular Cloning；第2版(Wiley-Interscience)；Miller和Calos编(1987)Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells,(Cold Spring Harbor Laboratory)；S.C.Makrides(2003)Gene Transfer andExpression in Mammalian Cells(Elsevier Science)；Methods in Enzymology,第151-155卷(Academic Press,Inc.,N.Y.)；Mayer和Walker,编(1987)Immunochemical Methodsin Cell and Molecular Biology(Academic Press,London)；Weir和Blackwell,编；以及Ausubel等人(1995)Current Protocols in Molecular Biology(John Wiley and Sons)。
抗体工程化的一般原理阐述于，例如Strohl,W.R.,和L.M.Strohl(2012),Therapeutic Antibody Engineering(Woodhead Publishing)中。蛋白质工程化的一般原理阐述于，例如Park和Cochran,编(2009),Protein Engineering and Design(CDC Press)中。免疫学的一般原理阐述于，例如以下文献中：Abbas和Lichtman(2017)Cellular andMolecular Immunology第9版(Elsevier)。另外，可遵循本领域已知的免疫学标准方法，例如，Current Protocols in Immunology(Wiley Online Library)；Wild,D.(2013),TheImmunoassay Handbook第4版(Elsevier Science)；Greenfield,编(2013),Antibodies,aLaboratory Manual,第2版(Cold Spring Harbor Press)；以及Ossipow和Fischer,编(2014),Monoclonal Antibodies:Methods and Protocols(Humana Press)中的方法。
示例性实施方案
所提供的实施方案包括：
实施方案1.一种用于抑制、延迟或减少需要治疗的患有癌症的受试者中恶性细胞生长的方法，其包括向所述受试者施用组合疗法，所述组合疗法包括：
(a)有效量的特异性和激动性结合DR5的五聚体或六聚体IgM或IgM样抗体或二聚体IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物，其中所述IgM或IgM样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三至十二个或所述IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三个或四个是DR5特异性和激动性的；和
(b)有效量的癌症疗法，其中所述癌症疗法包括第二线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂(SMAC)模拟物、放射、叶酸类似物、铂基药剂、紫杉烷、拓扑异构酶II抑制剂、长春花生物碱、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、磷酸肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)抑制剂、髓系细胞白血病-1(Mcl-1)抑制剂、抗VEGF抗体或它们的任何组合。
实施方案2.一种用于抑制、延迟或减少需要治疗的患有癌症的受试者中恶性细胞生长的方法，其包括施用有效量的特异性和激动性结合DR5的五聚体或六聚体IgM或IgM样抗体或二聚体IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物，其中所述IgM或IgM样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三至十二个或所述IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三个或四个是DR5特异性和激动性的，
其中所述五聚体或六聚体IgM或IgM样抗体或所述二聚体IgA或IgA样抗体或所述其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物与有效量的癌症疗法一起施用，其中所述癌症疗法包括第二线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂(SMAC)模拟物、放射、叶酸类似物、铂基药剂、紫杉烷、拓扑异构酶II抑制剂、长春花生物碱、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、磷酸肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)抑制剂、髓系细胞白血病-1(Mcl-1)抑制剂、抗VEGF抗体或它们的任何组合。
实施方案3.一种用于抑制、延迟或减少需要治疗的患有癌症的受试者中恶性细胞生长的方法，其包括施用有效量的癌症疗法，其中所述癌症疗法包括第二线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂(SMAC)模拟物、放射、叶酸类似物、铂基药剂、紫杉烷、拓扑异构酶II抑制剂、长春花生物碱、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、磷酸肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)抑制剂、髓系细胞白血病-1(Mcl-1)抑制剂、抗VEGF抗体或它们的任何组合，
其中所述癌症疗法与特异性和激动性结合DR5的五聚体或六聚体IgM或IgM样抗体或二聚体IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物，其中所述IgM或IgM样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三至十二个或所述IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三个或四个是DR5特异性和激动性的。
实施方案4.一种用于诱导需要治疗的患有癌症的受试者中癌细胞凋亡的方法，其包括向受试者施用组合疗法，所述组合疗法包括：
(a)有效量的特异性和激动性结合DR5的五聚体或六聚体IgM或IgM样抗体或二聚体IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物，其中所述IgM或IgM样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三至十二个或所述IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三个或四个是DR5特异性和激动性的；和
(b)有效量的癌症疗法，其中所述癌症疗法包括第二线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂(SMAC)模拟物、放射、叶酸类似物、铂基药剂、紫杉烷、拓扑异构酶II抑制剂、长春花生物碱、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、磷酸肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)抑制剂、髓系细胞白血病-1(Mcl-1)抑制剂、抗VEGF抗体或它们的任何组合。
实施方案5.一种用于抑制、延迟或减少需要治疗的患有癌症的受试者中恶性细胞生长的方法，其包括施用有效量的特异性和激动性结合DR5的五聚体或六聚体IgM或IgM样抗体或二聚体IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物，其中所述IgM或IgM样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三至十二个或所述IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三个或四个是DR5特异性和激动性的，
其中所述五聚体或六聚体IgM或IgM样抗体或所述二聚体IgA或IgA样抗体或所述其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物与有效量的癌症疗法一起施用，其中所述癌症疗法包括第二线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂(SMAC)模拟物、放射、叶酸类似物、铂基药剂、紫杉烷、拓扑异构酶II抑制剂、长春花生物碱、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、磷酸肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)抑制剂、髓系细胞白血病-1(Mcl-1)抑制剂、抗VEGF抗体或它们的任何组合。
实施方案6.一种用于诱导需要治疗的患有癌症的受试者中细胞凋亡的方法，其包括施用有效量的癌症疗法，其中所述癌症疗法包括第二线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂(SMAC)模拟物、放射、叶酸类似物、铂基药剂、紫杉烷、拓扑异构酶II抑制剂、长春花生物碱、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、磷酸肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)抑制剂、髓系细胞白血病-1(Mcl-1)抑制剂、抗VEGF抗体或它们的任何组合，
其中所述癌症疗法与特异性和激动性结合DR5的五聚体或六聚体IgM或IgM样抗体或二聚体IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物，其中所述IgM或IgM样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三至十二个或所述IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三个或四个是DR5特异性和激动性的。
实施方案7.如实施方案1至6中任一项所述的方法，其中所述癌症疗法包括叶酸类似物。
实施方案8.如实施方案7所述的方法，其中所述叶酸类似物包括甲酰四氢叶酸。
实施方案9.如实施方案1至6中任一项所述的方法，其中所述癌症疗法包括铂基药剂。
实施方案10.如实施方案9所述的方法，其中所述铂基药剂包括奥沙利铂、卡铂或它们的组合。
实施方案11.如实施方案9或实施方案10所述的方法，其中所述铂基药剂包括奥沙利铂。
实施方案12.如实施方案9至11中任一项所述的方法，其中所述铂基药剂包括卡铂。
实施方案13.如实施方案1至6中任一项所述的方法，其中所述癌症疗法包括紫杉烷。
实施方案14.如实施方案13所述的方法，其中所述紫杉烷包括紫杉醇。
实施方案15.如实施方案14所述的方法，其中所述紫杉醇包括溶剂型紫杉醇、白蛋白纳米颗粒紫杉醇或它们的组合。
实施方案16.如实施方案14或实施方案15所述的方法，其中所述紫杉醇包括溶剂型紫杉醇。
实施方案17.如实施方案14或实施方案15所述的方法，其中所述紫杉醇包括白蛋白纳米颗粒紫杉醇。
实施方案18.如实施方案1至6中任一项所述的方法，其中所述癌症疗法包括拓扑异构酶II抑制剂。
实施方案19.如实施方案18所述的方法，其中所述拓扑异构酶II抑制剂包括蒽环类药物。
实施方案20.如实施方案19所述的方法，其中所述蒽环类药物包括多柔比星。
实施方案21.如实施方案18所述的方法，其中所述拓扑异构酶II抑制剂包括依托泊苷。
实施方案22.如实施方案1至6中任一项所述的方法，其中所述癌症疗法包括放射。
实施方案23.如实施方案1至6中任一项所述的方法，其中所述癌症疗法包括SMAC模拟物。
实施方案24.如实施方案23所述的方法，其中所述SMAC模拟物包括比瑞那帕、GDC-0152、HGS-1029/AEG40826、Debio1143、APG-1387、ASTX660或它们的组合。
实施方案25.如实施方案23或实施方案24所述的方法，其中所述SMAC模拟物包括二价SMAC模拟物。
实施方案26.如实施方案23至25中任一项所述的方法，其中所述SMAC模拟物包括比瑞那帕。
实施方案27.如实施方案23至25中任一项所述的方法，其中所述SMAC模拟物包括APG-1387。
实施方案28.如实施方案23至25中任一项所述的方法，其中所述SMAC模拟物包括HGS-1029/AEG40826。
实施方案29.如实施方案23或实施方案24所述的方法，其中所述SMAC模拟物包括单价SMAC模拟物。
实施方案30.如实施方案23、24或29中任一项所述的方法，其中所述SMAC模拟物包括GDC-0152。
实施方案31.如实施方案23、24或29中任一项所述的方法，其中所述SMAC模拟物包括Debio1143。
实施方案32.如实施方案23、24或29中任一项所述的方法，其中所述SMAC模拟物包括ASTX660。
实施方案33.如实施方案1至6中任一项所述的方法，其中所述癌症疗法包括长春花生物碱。
实施方案34.如实施方案33的方法，其中所述长春花生物碱包括长春新碱。
实施方案35.如实施方案1至6中任一项所述的方法，其中所述癌症疗法包括BTK抑制剂。
实施方案36.如实施方案35所述的方法，其中所述BTK抑制剂包括依鲁替尼。
实施方案37.如实施方案1至6中任一项所述的方法，其中所述癌症疗法包括PI3Kδ抑制剂。
实施方案38.如实施方案37所述的方法，其中所述PI3Kδ抑制剂包括依达拉西布。
实施方案39.如实施方案1至6中任一项所述的方法，其中所述癌症疗法包括Mcl-1抑制剂。
实施方案40.如实施方案39所述的方法，其中所述Mcl-1抑制剂包括MIK665。
实施方案41.如实施方案1至6中任一项所述的方法，其中所述癌症疗法包括抗VEGF抗体。
实施方案42.如实施方案41所述的方法，其中所述抗VEGF抗体是贝伐珠单抗。
实施方案43.如实施方案1至42中任一项所述的方法，其还包括施用有效量的另外的癌症疗法。
实施方案44.如实施方案43所述的方法，其中所述另外的癌症疗法包括拓扑异构酶I抑制剂、核苷类似物、铂基药剂或它们的任何组合。
实施方案45.如实施方案43或实施方案44所述的方法，其中所述另外的癌症疗法包括拓扑异构酶I抑制剂。
实施方案46.如实施方案45所述的方法，其中所述拓扑异构酶I抑制剂包括伊立替康、拓扑替康或它们的组合。
实施方案47.如实施方案45或实施方案46所述的方法，其中所述拓扑异构酶I抑制剂包括伊立替康。
实施方案48.如实施方案43至47中任一项所述的方法，其中所述另外的癌症疗法包括核苷类似物。
实施方案49.如实施方案48所述的方法，其中所述核苷类似物包括氟尿嘧啶(5-FU)、吉西他滨或它们的任何组合。
实施方案50.如实施方案49所述的方法，其中所述核苷类似物包括氟尿嘧啶(5-FU)。
实施方案51.如实施方案49所述的方法，其中所述核苷类似物包括吉西他滨。
实施方案52.如实施方案1至51中任一项所述的方法，其中所述癌症是血液癌症或实体瘤。
实施方案53.如实施方案52所述的方法，其中所述癌症是血液癌症。
实施方案54.如实施方案52或53所述的方法，其中所述血液癌症是白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、其任何转移瘤或它们的任何组合。
实施方案55.如实施方案52至54中任一项所述的方法，其中所述血液癌症是急性髓系白血病(AML)、慢性髓系白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、其任何转移瘤或它们的任何组合。
实施方案56.如实施方案52至55中任一项所述的方法，其中所述血液癌症是急性髓系白血病(AML)。
实施方案57.如实施方案53至56中任一项所述的方法，其中所述癌症疗法包括多柔比星。
实施方案58.如实施方案52所述的方法，其中所述癌症是实体瘤。
实施方案59.如实施方案52或58所述的方法，其中所述癌症是膀胱癌、结肠直肠癌、肉瘤、胃癌、肺癌、胰腺癌、黑色素瘤、卵巢癌、头颈癌或乳腺癌。
实施方案60.如实施方案52、58或59中任一项所述的方法，其中所述癌症是肉瘤。
实施方案61.如实施方案60所述的方法，其中所述肉瘤是纤维肉瘤、软骨肉瘤或骨肉瘤。
实施方案62.如实施方案60所述的方法，其中所述肉瘤是纤维肉瘤。
实施方案63.如实施方案60至62中任一项所述的方法，其中所述癌症疗法包括多柔比星。
实施方案64.如实施方案52、58或59中任一项所述的方法，其中所述癌症是结肠直肠癌。
实施方案65.如实施方案64所述的方法，其中所述癌症疗法包括奥沙利铂。
实施方案66.如实施方案65所述的方法，其中所述另外的疗法包括5-FU。
实施方案67.如实施方案64所述的方法，其中所述癌症疗法包括甲酰四氢叶酸。
实施方案68.如实施方案67所述的方法，其中所述另外的疗法包括奥沙利铂或伊立替康。
实施方案69.如实施方案52、58或59中任一项所述的方法，其中所述癌症是胃癌。
实施方案70.如实施方案69所述的方法，其中所述癌症疗法包括卡铂。
实施方案71.如实施方案69所述的方法，其中所述癌症疗法包括奥沙利铂。
实施方案72.如实施方案69所述的方法，其中所述癌症疗法包括紫杉醇。
实施方案73.如实施方案52、58或59中任一项所述的方法，其中所述癌症是肺癌。
实施方案74.如实施方案73所述的方法，其中所述肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)。
实施方案75.如实施方案73或实施方案74所述的方法，其中所述癌症疗法包括卡铂。
实施方案76.如实施方案73或实施方案74所述的方法，其中所述癌症疗法包括紫杉醇。
实施方案77.如实施方案52、58或59中任一项所述的方法，其中所述癌症是胰腺癌。
实施方案78.如实施方案77所述的方法，其中所述癌症疗法包括紫杉醇。
实施方案79.如实施方案78所述的方法，其中所述另外的疗法包括吉西他滨。
实施方案80.如实施方案52、58或59中任一项所述的方法，其中所述癌症是头颈癌。
实施方案81.如实施方案80所述的方法，其中所述头颈癌是头颈肉瘤。
实施方案82.如实施方案52、58或59中任一项所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌。
实施方案83.如实施方案82所述的方法，其中所述乳腺癌是三阴性乳腺癌(TNBC)。
实施方案84.如实施方案1至83中任一项所述的方法，其中所述抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的所述三个或四个抗原结合结构域或所述三至十二个抗原结合结构域包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH和VL包含六个免疫球蛋白互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包含抗体的所述CDR，所述抗体分别包含VH和VL氨基酸序列SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4；SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:17和SEQ IDNO:18；SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20；SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22；SEQ ID NO:23和SEQID NO:24；SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26；SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28；SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30；SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32；SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34；SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36；SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38；SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40；SEQ IDNO:41和SEQ ID NO:42；SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:44；SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:46；SEQID NO:47和SEQ ID NO:48；SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50；SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:52；SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54；SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56；SEQ ID NO:82和SEQ IDNO:83；SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:85；SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87；或SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89；或ScFv序列SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ IDNO:72或SEQ ID NO:73，或在一个或多个所述CDR中具有一个或两个氨基酸取代的所述六个CDR。
实施方案85.如实施方案84所述的方法，其中所述抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的所述三个或四个抗原结合结构域或所述三至十二个抗原结合结构域包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH和VL包含六个免疫球蛋白互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包含抗体的所述CDR，所述抗体分别包含VH和VL氨基酸序列SEQ ID NO:5或SEQ IDNO:90和SEQ ID NO:6；或SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。
实施方案86.如实施方案85所述的方法，其中所述抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的所述三个或四个抗原结合结构域或所述三至十二个抗原结合结构域包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH和VL包含六个免疫球蛋白互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包含抗体的所述CDR，所述抗体分别包含VH和VL氨基酸序列SEQ ID NO:5或SEQ IDNO:90和SEQ ID NO:6。
实施方案87.如实施方案85所述的方法，其中所述抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的所述三个或四个抗原结合结构域或所述三至十二个抗原结合结构域包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH和VL包含六个免疫球蛋白互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包含抗体的所述CDR，所述抗体分别包含VH和VL氨基酸序列SEQ ID NO:7和SEQ IDNO:8。
实施方案88.如实施方案1至84中任一项所述的方法，其中所述抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的所述三个或四个抗原结合结构域或所述三至十二个抗原结合结构域包含抗体VH和VL，其中所述VH和VL分别包含与以下至少90％相同的氨基酸序列：SEQID NO:1和SEQ ID NO:2；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4；SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:90和SEQID NO:6；SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:11和SEQID NO:12；SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18；SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20；SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22；SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26；SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28；SEQ IDNO:29和SEQ ID NO:30；SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32；SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34；SEQID NO:35和SEQ ID NO:36；SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38；SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40；SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42；SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:44；SEQ ID NO:45和SEQ IDNO:46；SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48；SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50；SEQ ID NO:51和SEQID NO:52；SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54；SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56；SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83；SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:85；SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87；或SEQ IDNO:88和SEQ ID NO:89，或其中所述VH和VL包含在具有分别与以下至少90％相同的氨基酸序列的ScFv中：SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ IDNO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQID NO:73。
实施方案89.如实施方案88所述的方法，其中所述抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的所述三个或四个抗原结合结构域或所述三至十二个抗原结合结构域包含抗体VH和VL，其中所述VH和VL分别包含与以下至少90％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:6；或SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。
实施方案90.如实施方案89所述的方法，其中所述抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的所述三个或四个抗原结合结构域或所述三至十二个抗原结合结构域包含抗体VH和VL，其中所述VH和VL分别包含与以下至少90％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:6。
实施方案91.如实施方案89所述的方法，其中所述抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的所述三个或四个抗原结合结构域或所述三至十二个抗原结合结构域包含抗体VH和VL，其中所述VH和VL分别包含与以下至少90％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。
实施方案92.如实施方案1至91中任一项所述的方法，其中所述抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物是二聚体IgA或IgA样抗体，所述二聚体IgA或IgA样抗体包含两个二价IgA结合单元或其多聚化片段以及J链或其片段或变体，其中每个结合单元包含两个IgA重链恒定区或其多聚化片段，所述IgA重链恒定区或其多聚化片段各自与抗原结合结构域缔合。
实施方案93.如实施方案92所述的方法，其中所述IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物还包含分泌组分或其片段或变体。
实施方案94.如实施方案92或实施方案93所述的方法，其中所述IgA重链恒定区或其多聚化片段各自包含Cα3-tp结构域。
实施方案95.如实施方案94所述的方法，其中所述IgA重链恒定区或其多聚化片段各自包含Cα1结构域和/或Cα2结构域。
实施方案96.如实施方案92至95中任一项所述的方法，其中所述IgA重链恒定区是人IgA恒定区。
实施方案97.如实施方案92至96中任一项所述的方法，其中每个结合单元包含：两个IgA重链，所述IgA重链各自包含位于所述IgA恒定区或其多聚化片段的氨基末端的VH；以及两个免疫球蛋白轻链，所述免疫球蛋白轻链各自包含位于免疫球蛋白轻链恒定区的氨基末端的VL。
实施方案98.如实施方案1至91中任一项所述的方法，其中所述抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物是五聚体或六聚体IgM抗体，所述五聚体或六聚体IgM抗体分别包含五个或六个二价IgM结合单元，其中每个结合单元包含两个IgM重链恒定区或其多聚化片段，所述IgM重链恒定区或其多聚化片段各自与抗原结合结构域缔合。
实施方案99.如实施方案98所述的方法，其中所述IgM重链恒定区或其多聚化片段各自包含Cμ4-tp结构域。
实施方案100.如实施方案99所述的方法，其中所述IgM重链恒定区或其多聚化片段各自包含Cμ1结构域、Cμ2结构域和/或Cμ3结构域。
实施方案101.如实施方案98至100中任一项所述的方法，其中所述抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物是五聚体，并且还包含J链或其功能片段或其变体。
实施方案102.如实施方案98至101中任一项所述的方法，其中所述IgM重链恒定区是人IgM恒定区。
实施方案103.如实施方案98至102中任一项所述的方法，其中每个结合单元包含：两个IgM重链，所述IgM重链各自包含位于所述IgM恒定区或其多聚化片段的氨基末端的VH；以及两个免疫球蛋白轻链，所述免疫球蛋白轻链各自包含位于免疫球蛋白轻链恒定区的氨基末端的VL。
实施方案104.如实施方案101至103中任一项所述的方法，其中所述J链或其功能片段或变体是可影响多聚体结合分子的血清半衰期的变体J链，其包含相对于野生型J链的一个或多个单一氨基酸取代、缺失或插入；并且其中相对于除了所述一个或多个单一氨基酸取代、缺失或插入之外相同的并且以相同的方式施用于同一动物物种的参考多聚体结合分子，所述多聚体结合分子在施用于动物时表现出增加的血清半衰期。
实施方案105.如实施方案104所述的方法，其中所述J链或其功能片段包含在对应于野生型人J链(SEQ ID NO:97)的氨基酸Y102的氨基酸位置处的氨基酸取代。
实施方案106.如实施方案105所述的方法，其中对应于SEQ ID NO:97的Y102的所述氨基酸被丙氨酸(A)、丝氨酸(S)或精氨酸(R)取代。
实施方案107.如实施方案106所述的方法，其中对应于SEQ ID NO:97的Y102的所述氨基酸被丙氨酸(A)取代。
实施方案108.如实施方案107所述的方法，其中所述J链是变体人J链并且包含氨基酸序列SEQ ID NO:98。
实施方案109.如实施方案104所述的方法，其中所述J链或其功能片段包含在对应于所述人J链(SEQ ID NO:97)的氨基酸N49、氨基酸S51或N49和S51两者的氨基酸位置处的氨基酸取代，其中对应于SEQ ID NO:97的位置S51的单一氨基酸取代不是苏氨酸(T)取代。
实施方案110.如实施方案109所述的方法，其中对应于SEQ ID NO:97的N49的所述位置被丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、苏氨酸(T)、丝氨酸(S)或天冬氨酸(D)取代。
实施方案111.如实施方案110所述的方法，其中对应于SEQ ID NO:97的N49的所述位置被丙氨酸(A)取代。
实施方案112.如实施方案109至111中任一项所述的方法，其中对应于SEQ ID NO:97的S51的所述位置被丙氨酸(A)或甘氨酸(G)取代。
实施方案113.如实施方案112所述的方法，其中对应于SEQ ID NO:97的S51的所述位置被丙氨酸(A)取代。
实施方案114.如实施方案92至97或101至113中任一项所述的方法，其中所述J链或其功能片段或变体还包含异源多肽，其中所述异源多肽与所述J链或其功能片段或变体直接或间接融合。
实施方案115.如实施方案114所述的方法，其中所述异源多肽经由肽接头与所述J链或其功能片段融合。
实施方案116.如实施方案115所述的方法，其中所述肽接头包含至少5个氨基酸，但不超过25个氨基酸。
实施方案117.如实施方案115或116所述的方法，其中所述肽接头由以下组成：GGGGS(SEQ ID NO:99)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:100)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:101)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:102)或GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:103)。
实施方案118.如实施方案114至117中任一项所述的方法，其中所述异源多肽与所述J链或其功能片段或变体的N末端、所述J链或其功能片段或变体的C末端、或所述J链或其功能片段或变体的N末端和C末端两者融合。
实施方案119.如实施方案114至118中任一项所述的方法，其中所述异源多肽可影响所述多聚体结合分子的吸收、分布、代谢和/或排泄(ADME)。
实施方案120.如实施方案114至118中任一项所述的方法，其中所述异源多肽包含抗原结合结构域。
实施方案121.如实施方案120所述的方法，其中所述异源多肽的所述抗原结合结构域是抗体或其抗原结合片段。
实施方案122.如实施方案121所述的方法，其中所述抗原结合片段包含Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fd片段、Fv片段、单链Fv(scFv)片段、二硫键连接的Fv(sdFv)片段，或它们的任何组合。
实施方案123.如实施方案121或实施方案122所述的方法，其中所述抗原结合片段是scFv片段。
实施方案124.如实施方案1至123中任一项所述的方法，其中相对于单独施用所述抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物或所述癌症疗法，施用所述组合疗法导致增强的治疗功效。
实施方案125.如实施方案124所述的方法，其中所述增强的治疗功效包括降低的肿瘤生长速率、肿瘤消退或增加的存活率。
实施方案126.如实施方案1至125中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
以上引用的所有参考文献以及本文引用的所有参考文献均以引用的方式整体并入本文。
提供以下实施例以作说明而非限制。
实施例
在以下实施例中，使用了抗DR5 IgM Mab A和抗DR5 IgM Mab B。如美国专利申请公布号2018-0009897中所述构建抗DR5 IgM Mab A和抗DR5 IgM Mab B。抗DR5 IgM Mab A包含如表2中所提供的VH和VL氨基酸SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:6，以及包含SEQ ID NO:98的J链，并且抗DR5 IgM Mab B包含如表2中所提供的VH和VL氨基酸SEQ ID NO:7和SEQ IDNO:8并且不包含J链。
实施例1：体外化学治疗组合
如下评估抗DR5 IgM Mab A与化学治疗剂组合对肿瘤细胞系和原代人肝细胞的体外效力。接种肿瘤细胞(如表4所示)或原代人肝细胞(BioIVT X008001)，并在第二天用连续稀释的抗DR5 IgM Mab A和化学治疗剂(如表4所示)组合处理细胞。在37℃下72小时后，添加Cell Titer Glo试剂(Promega)，并在光度计上读取细胞活力。
将每种测试细胞系与所测试的化学治疗剂和抗DR5 IgM Mab A的每种组合的协同作用汇总到表格数据框中。这个数据框被用作统计计算语言R的输入，其中S形剂量反应适合每种单一化合物。协同作用，定义为两种化合物的组合效应大于它们单独的相加效应，也以R来计算。选择用于协同作用得分的参考模型是Bliss Independence(BI)，以对药物A和B的效应E来表示：
EA+EB-EAEB＝EAB
BI假设每种药物的效应相互独立。与抗DR5 IgM Mab A相比，使用BI的选择基于每种化学治疗剂的单独和不同的作用机制。BI的协同作用得分是在连续剂量组合上产生的，其中负分反映拮抗作用，并且正分代表协同作用。这些得分在3D曲面图中可视化，在2D维度上具有拮抗作用的谷和协同作用的丘，代表剂量组合的连续统一体。平均Bliss得分示于表4中。对于用多柔比星、紫杉醇、卡铂和奥沙利铂以及Mab A处理的示例性癌细胞系或健康肝细胞，总体最大Bliss得分、最大Bliss时的Mab A和化合物浓度，以及最大Bliss时化合物、Mab A和组合的细胞毒性百分比示于表5中。多柔比星、紫杉醇、卡铂和奥沙利铂的示例性3D曲面图分别示于图1A至图1D、图2A至图2I、图3A至图3E和图4A至图4H中。
表4：化学治疗组合
Figure BDA0003915187800001171
Figure BDA0003915187800001181
Figure BDA0003915187800001191
表5：最大Bliss比较
Figure BDA0003915187800001192
Figure BDA0003915187800001201
实施例2：体内放射组合
将2x106个Colo205肿瘤细胞(最初从结肠腺癌肿瘤中分离出来的结肠直肠癌细胞)皮下植入雌性NCr裸鼠的侧腹。当平均肿瘤体积达到100-150mm3时，向小鼠每隔一天静脉内给药媒介物，总共7剂；每隔一天静脉内给药5mg/kg抗DR5 IgM Mab A，总共7剂；给予2Gy/动物的靶向放射，持续5天，接着休息2天，接着持续5天；或者给予抗DR5 IgM Mab A和放射治疗方案的组合。肿瘤体积(n＝10只动物/组)示于图5A中，并且总存活率示于图5B中。在第15天(所有对照动物都处于研究中的最后一天)，与单独的靶向放射相比，使用抗DR5IgM Mab A和靶向放射的组合疗法显著减少了肿瘤体积。与单独放射相比，组合治疗并未显著延长总生存期。
实施例3：体内奥沙利铂组合
将2x106个Colo205肿瘤细胞皮下植入雌性NCr裸鼠的侧腹。当平均肿瘤体积达到100-150mm3时，向小鼠每隔一天静脉内给药媒介物，总共7剂；每隔一天静脉内给药5mg/kg抗DR5 IgM Mab A，总共7剂；每周一次腹膜内给药8mg/kg奥沙利铂，持续3周；或者给予抗DR5 IgM Mab A和奥沙利铂治疗方案的组合。肿瘤体积(n＝10只动物/组)示于图5C中，并且总存活率示于图5D中。在第15天(所有对照动物都处于研究中的最后一天)，与单独奥沙利铂相比，使用抗DR5 IgM Mab A和奥沙利铂的组合疗法显著减少了肿瘤体积。与单独奥沙利铂相比，组合治疗还显著延长了总生存期。
实施例4：体内紫杉醇组合
将2x106个Colo205肿瘤细胞皮下植入雌性NCr裸鼠的侧腹。当平均肿瘤体积达到100-150mm3时，向小鼠每隔一天静脉内给药媒介物，总共7剂；每隔一天静脉内给药5mg/kg抗DR5 IgM Mab A，总共7剂；每隔一天静脉内给药25mg/kg紫杉醇，总共5剂；或者给予抗DR5IgM Mab A和紫杉醇治疗方案的组合。肿瘤体积(n＝10只动物/组)示于图5E中，并且总存活率示于图5F中。在第15天(所有对照动物都处于研究中的最后一天)，相对于单剂紫杉醇治疗组，使用抗DR5 IgM Mab A和紫杉醇的组合疗法没有显著减少肿瘤体积。与单独紫杉醇相比，组合治疗也没有显著延长总生存期。然而，当研究在第100天终止时，紫杉醇治疗组的10只动物中有2只没有可见的肿瘤，而组合组的10只动物中有8只没有肿瘤。
实施例5：体内伊立替康组合
将2x106个Colo205肿瘤细胞皮下植入雌性NCr裸鼠的侧腹。当平均肿瘤体积达到100-150mm3时，向小鼠每隔一天静脉内给药媒介物，总共7剂；每隔一天静脉内给药5mg/kg抗DR5 IgM Mab A，总共7剂；每周一次腹膜内给药100mg/kg伊立替康，持续3周；或者给予抗DR5 IgM Mab A和伊立替康治疗方案的组合。肿瘤体积(n＝10只动物/组)示于图5G中，并且总存活率示于图5H中。在第15天(所有对照动物都处于研究中的最后一天)，与单独伊立替康相比，使用抗DR5 IgM Mab A和伊立替康的组合疗法显著减少了肿瘤体积。与单独伊立替康相比，组合治疗还显著延长了总生存期。
实施例6：体内ABT-199组合
将1x107个DOHH-2肿瘤细胞皮下植入雌性CB.17SCID小鼠的侧腹。当平均肿瘤体积达到100-150mm3时，向小鼠每隔一天静脉内给药媒介物，总共11剂；每隔一天静脉内给药5mg/kg抗DR5 IgM Mab A，总共11剂；每天一次经口给药100mg/kg ABT-199(Venetoclax)，持续21天；或者给予抗DR5 IgM Mab A和ABT-199治疗方案的组合。肿瘤体积(n＝10只动物/组)示于图5I中，并且总存活率示于图5J中。在第16天(所有对照动物都处于研究中的最后一天)，相对于任何单独的治疗，使用抗DR5 IgM Mab A和ABT-199的组合疗法导致减少的肿瘤体积，尽管组合治疗与单独ABT-199之间的差异没有达到统计学显著性。与任何单独治疗相比，组合治疗显著延长了总生存期。
实施例7：体外SMAC模拟物组合
如下评估抗DR5 IgM Mab A与SMAC模拟物比瑞那帕或GDC-0152组合对MDA-MB-231肿瘤细胞和原代人肝细胞的体外效力。接种肿瘤细胞或原代人肝细胞(BioIVT X008001)，并在第二天用连续稀释的抗DR5 IgM Mab A和促凋亡剂/SMAC模拟物单独或组合处理细胞。在37℃下72小时后，添加Cell Titer Glo试剂(Promega)，并在光度计上读取细胞活力。
单剂Mab A或SMAC模拟物的细胞活力曲线分别示于图6A和图6B中。单剂Mab A对MDA-MB-231细胞显示出部分细胞毒性，而单剂比瑞那帕或GDC-0152几乎不显示出细胞毒性。Mab A和比瑞那帕组合对MDA-MB-231肿瘤细胞或原代人肝细胞的细胞活力曲线分别示于图7A和图7B中。Mab A和GDC-0152的组合对MDA-MB-231肿瘤细胞或原代人肝细胞的细胞活力曲线分别示于图8A和图8B中。比瑞那帕和GDC-0152的IC50值分别示于表6和表7中。
表6：比瑞那帕的IC50值
比瑞那帕浓度(μM) IC<sub>50</sub>
0 2.9
0.0012 0.98
0.0037 0.23
0.011 0.082
0.033 0.054
0.1 0.044
表7：GDC-0152的IC50值
GDC-0152浓度(μM) IC<sub>50</sub>
0 2.5
0.0016 0.42
0.08 0.20
0.4 0.13
2 0.081
10 0.065
将每种测试细胞系与所测试的SMAC模拟物和抗DR5 IgM Mab A的每种组合的协同作用汇总到表格数据框中。这个数据框被用作统计计算语言R的输入，其中S形剂量反应适合每种单一化合物。协同作用，定义为两种化合物的组合效应大于它们单独的相加效应，也以R来计算。选择用于协同作用得分的参考模型是Bliss Independence(BI)，以对药物A和B的效应E来表示：
EA+EB-EAEB＝EAB
BI假设每种药物的效应相互独立。与抗DR5 IgM Mab A相比，使用BI的选择基于每种化学治疗剂的单独和不同的作用机制。BI的协同作用得分是在连续剂量组合上产生的，其中负分反映拮抗作用，并且正分代表协同作用。这些得分在3D曲面图中可视化，在2D维度上具有拮抗作用的谷和协同作用的丘，代表剂量组合的连续统一体。比瑞那帕和GDC-0152对MDA-MB-231细胞的3D曲面图分别示于图9A和图9B中。协同作用得分也使用Loewe模型完成。发现了类似水平的协同作用(数据未示出)。
Mab A和GDC-0152或比瑞那帕组合对MDA-MB-231细胞产生强协同细胞毒性。这些组合不会在原代人肝细胞中产生实质性的细胞毒性。
实施例8：在DR5激动剂抗性肿瘤细胞上的体外SMAC模拟物组合
通过在0.1μg/mL抗DR5 IgM Mab B存在下培养MDA-MB-231细胞以消除敏感细胞并富集DR5激动剂抗性细胞群体来产生获得性DR5激动剂抗性MDA-MB-231细胞。根据实施例8中描述的方法，评估抗DR5 IgM Mab A与SMAC模拟物比瑞那帕或GDC-0152组合对DR5激动剂抗性肿瘤细胞的体外效力。单剂比瑞那帕或GDC-0152的细胞活力曲线分别示于图10A和图10B中。单剂比瑞那帕或GDC-0152几乎不显示出细胞毒性。Mab A和比瑞那帕或GDC-0152的组合的细胞活力曲线分别示于图11A和图11B中。比瑞那帕和GDC-0152的IC50值分别示于表8和表9中。Mab A和SMAC模拟物组合对MDA-MB-231细胞产生强协同细胞毒性，对DR5激动剂具有获得性抗性。
表8：比瑞那帕的IC50值
比瑞那帕浓度(μM) IC<sub>50</sub>
0
0.0012 3.5
0.0037 0.70
0.011 0.23
0.033 0.086
0.1 0.081
表9：GDC-0152的IC50值
GDC-0152浓度(μM) IC<sub>50</sub>
0 约45
0.0016 5.3
0.08 1.1
0.4 0.70
2 0.24
10 0.13
实施例9：体外化学治疗组合
如下评估抗DR5 IgM Mab A与BTK抑制剂依鲁替尼、PI3Kδ抑制剂依达拉西布、Mcl-1抑制剂MIK665或长春新碱组合对肿瘤细胞系和原代人肝细胞的体外效力。接种肿瘤细胞或原代人肝细胞(BioIVT X008001)，并在第二天用连续稀释的抗DR5 IgM Mab A和化学治疗/靶向剂单独或组合处理细胞。在37℃下72小时后，添加Cell Titer Glo试剂(Promega)，并在光度计上读取细胞活力。
将每种测试细胞系与所测试的化学治疗/靶向剂和抗DR5 IgM Mab A的每种组合的协同作用汇总到表格数据框中。这个数据框被用作统计计算语言R的输入，其中S形剂量反应适合每种单一化合物。协同作用，定义为两种化合物的组合效应大于它们单独的相加效应，也以R来计算。选择用于协同作用得分的参考模型是Bliss Independence(BI)，以对药物A和B的效应E来表示：
EA+EB-EAEB＝EAB
BI假设每种药物的效应相互独立。与抗DR5 IgM Mab A相比，使用BI的选择基于每种化学治疗剂的单独和不同的作用机制。BI的协同作用得分是在连续剂量组合上产生的，其中负分反映拮抗作用，并且正分代表协同作用。这些得分在3D曲面图中可视化，在2D维度上具有拮抗作用的谷和协同作用的丘，代表剂量组合的连续统一体。协同作用得分也使用Loewe模型完成。发现了类似水平的协同作用(数据未示出)。
单剂Mab A或依鲁替尼对U-937细胞的细胞活力曲线分别示于图12A和图12B中。单剂Mab A对U-937细胞显示出部分细胞毒性，而单剂伊鲁替尼几乎不显示出细胞毒性。Mab A和依鲁替尼的组合对U-937肿瘤细胞的细胞活力曲线示于图12C中。Mab A和依鲁替尼对U-937细胞的协同作用得分3D曲面图示于图12D中。Mab A和依鲁替尼组合对U-937细胞产生弱协同细胞毒性。
单剂Mab A或依鲁替尼对OCI-LY7细胞的细胞活力曲线分别示于图13A和13B中。单剂Mab A对OCI-LY7细胞显示出部分细胞毒性，而单剂依鲁替尼仅在所测试的最高浓度下显示出细胞毒性。Mab A和依鲁替尼的组合对OCI-LY7肿瘤细胞的细胞活力曲线示于图13C中。Mab A和依鲁替尼对OCI-LY7细胞的协同作用得分3D曲面图示于图13D中。Mab A和依鲁替尼组合对OCI-LY7细胞既不产生协同细胞毒性也不产生拮抗细胞毒性。
单剂Mab A或依达拉西布对DOHH-2细胞的细胞活力曲线分别示于图14A和图14B中。单剂Mab A对DOHH-2细胞显示出完全细胞毒性，而单剂依达拉西布仅在所测试的最高浓度下显示出细胞毒性。Mab A和依达拉西布的组合对DOHH-2肿瘤细胞的细胞活力曲线示于图14C中。Mab A和依达拉西布对DOHH-2细胞的协同作用得分3D曲面图示于图14D中。Mab A和依达拉西布组合对DOHH-2细胞既不产生协同细胞毒性也不产生拮抗细胞毒性。
单剂Mab A或MIK665对WSU-DLCL2细胞的细胞活力曲线分别示于图15A和图15B中。单剂Mab A对WSU-DLCL2细胞显示出部分细胞毒性，而单剂MIK665显示出完全细胞毒性。MabA和MIK665的组合对WSU-DLCL2肿瘤细胞的细胞活力曲线示于图15C中。Mab A和MIK665对WSU-DLCL2细胞的协同作用得分3D曲面图示于图15D中。Mab A和MIK665组合对WSU-DLCL2细胞产生协同细胞毒性。
单剂Mab A或MIK665对U-937细胞的细胞活力曲线分别示于图16A和图16B中。单剂Mab A对U-937细胞显示出部分细胞毒性，而单剂MIK665显示出完全细胞毒性。Mab A和MIK665的组合对U-937肿瘤细胞的细胞活力曲线示于图16C中。Mab A和MIK665对U-937细胞的协同作用得分3D曲面图示于图16D中。Mab A和MIK665组合对U-937细胞产生弱协同细胞毒性。
单剂Mab A或长春新碱对U-937细胞的细胞活力曲线分别示于图17A和图17B中。单剂Mab A对U-937细胞显示出部分细胞毒性，而单剂长春新碱显示出强细胞毒性。Mab A和长春新碱的组合对U-937肿瘤细胞的细胞活力曲线示于图17C中。Mab A和长春新碱对U-937细胞的协同作用得分3D曲面图示于图17D中。Mab A和长春新碱组合对U-937细胞产生弱协同细胞毒性。
Mab A和化学治疗/靶向剂的组合对非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)肿瘤细胞系的协同作用得分示于表10中。
表10：在NHL中使用化学治疗和靶向剂的组合
化学治疗/靶向剂 细胞系 平均Bliss得分
依鲁替尼 DOHH-2 -0.22
依鲁替尼 OCI-LY7 2.3
依鲁替尼 Toledo -0.60
依鲁替尼 U-937 6.2
依鲁替尼 WSU-DLCL2 -3.2
依达拉西布 DOHH-2 -0.89
依达拉西布 Karpas-422 -3.2
依达拉西布 OCI-LY7 -1.8
依达拉西布 Toledo -1.6
依达拉西布 U-937 2.7
依达拉西布 WSU-DLCL2 -7.4
MIK665 DOHH-2 3.1
MIK665 Karpas-422 3.7
MIK665 OCI-LY7 3.5
MIK665 Toledo 6.7
MIK665 U-937 4.8
MIK665 WSU-DLCL2 16
长春新碱 DOHH-2 -3.7
长春新碱 Karpas-422 -12
长春新碱 OCI-LY7 -1.0
长春新碱 Toledo 3.0
长春新碱 U-937 5.2
长春新碱 WSU-DLCL2 -0.73
抗DR5 IgM Mab A与依鲁替尼、依达拉西布、MIK665或长春新碱的组合对原代人肝细胞的细胞活力曲线分别示于图18A、图18B、图18C和图18D中。Mab A与依鲁替尼、依达拉西布和长春新碱的组合不会对原代人肝细胞产生实质性的细胞毒性。单剂MIK665在原代人肝细胞中引起细胞毒性，但与Mab A组合并没有得到实质性增强。
实施例10：体外比瑞那帕组合
如下评估抗DR5 IgM Mab A与比瑞那帕组合对各种肿瘤细胞系的体外效力。接种肿瘤细胞或原代人肝细胞(BioIVT X008001)，并在第二天用连续稀释的抗DR5 IgM Mab A和比瑞那帕单独或组合处理细胞。在37℃下72小时后，添加Cell Titer Glo试剂(Promega)，并在光度计上读取细胞活力。抗DR5 IgM Mab A与比瑞那帕的组合对A2058、BT-20、DV-90、ES-2、HCC15、HCT 116、HT 1080、KYSE410、MEWO、OVCAR-5、SK-LU-1、SK-MEL-5、SNU-1、SW780、SW1353和T24的细胞活力曲线分别示于图19A、图19C、图19E、图19G、图19I、图19K、图19M、图19O、图19Q、图19S、图19U、图19W、图19Y、图19AA、图19AC和图19AE中。如前面实施例中所述确定协同作用。A2058、BT-20、DV-90、ES-2、HCC15、HCT116、HT 1080、KYSE410、MEWO、OVCAR-5、SK-LU-1、SK-MEL-5、SNU-1、SW780、SW1353和T24细胞的协同作用得分3D曲面图分别示于图19B、图19D、图19F、图19H、图19J、图19L、图19N、图19P、图19R、图19T、图19V、图19X、图19Z、图19AB、图19AD和图19AF中。Mab A和比瑞那帕的组合对各种肿瘤细胞系的平均Bliss协同作用得分，以及在不同浓度的比瑞那帕下确定的IC50值示于表11至表13中。
表11：比瑞那帕的平均Bliss得分和IC50值
Figure BDA0003915187800001281
Figure BDA0003915187800001291
表12：比瑞那帕的平均Bliss得分和IC50值
Figure BDA0003915187800001292
表13：比瑞那帕的平均Bliss得分和IC50值
Figure BDA0003915187800001293
实施例11：体内比瑞那帕组合
MDA-MB-231-三阴性乳腺癌(TNBC)模型
将5x106个MDA-MB-231肿瘤细胞皮下植入雌性NCr nu/nu小鼠的侧腹。当平均肿瘤体积达到100-150mm3时，向小鼠每隔一天静脉内给药媒介物，总共11剂；每隔一天静脉内给药5mg/kg抗DR5 IgM Mab A，共11剂；每3天腹膜内给药2.5mg/kg比瑞那帕，共7剂；每周一次静脉内给药5mg/kg抗DR5 IgG Mab B，共3剂；给予抗DR5 IgM Mab A和比瑞那帕治疗方案的组合；或给予抗DR5 IgG Mab B和比瑞那帕治疗方案的组合(n＝10只动物/组)。到第26天的肿瘤体积随时间的变化示于图20A中。到第54天的肿瘤体积示于图20B中并且总体存活率示于图20C中。在第22天(所有对照动物都处于研究中的最后一天)，与单独比瑞那帕相比，使用抗DR5 IgM Mab A和比瑞那帕的组合疗法显著减少了肿瘤体积。与单独比瑞那帕相比，抗DR5 IgG Mab B与比瑞那帕的组合还显著减少了肿瘤体积，尽管肿瘤生长抑制远低于使用抗DR5 IgM Mab A。与单独比瑞那帕相比，抗DR5 IgM Mab A和比瑞那帕组合还显著延长总生存期。抗DR5 IgM Mab A和比瑞那帕组合治疗组中的所有动物均达到至少部分反应，并且4/10的动物在100天时无肿瘤。
EBC-1-非小细胞肺癌(NSCLC)模型
将3x106个EBC-1肿瘤细胞皮下植入雌性BALB/c裸鼠的侧腹。当平均肿瘤体积达到100-200mm3时，向小鼠每隔一天静脉内给药媒介物，总共11剂；每隔一天静脉内给药5mg/kg抗DR5 IgM Mab A，共11剂；每3天腹膜内给药30mg/kg比瑞那帕，共7剂；或者给予抗DR5 IgMMab A和比瑞那帕治疗方案的组合(n＝10只动物/组)。如果个体动物体重减轻超过15％，则给予停药期，并且当体重减轻恢复到低于10％时重新开始给药。
肿瘤体积随时间的变化示于图21A中。尽管比瑞那帕组中的3只小鼠和组合治疗组中的6只小鼠由于体重减轻而错过了给药，但与单独抗DR5 IgM Mab A相比，使用抗DR5 IgMMab A和比瑞那帕的组合疗法显著减少了肿瘤体积，并且截至研究第31天，9/10小鼠无肿瘤。
HT-1080-纤维肉瘤模型
将1x107个HT-1080肿瘤细胞皮下植入雌性NCr nu/nu小鼠的侧腹。当平均肿瘤体积达到100-150mm3时，向小鼠每隔一天静脉内给药媒介物，总共11剂；每隔一天静脉内给药5mg/kg抗DR5 IgM Mab A，共11剂；每3天腹膜内给药30mg/kg比瑞那帕，共2剂，接着每3天腹膜内给药15mg/kg比瑞那帕，共5剂；或者给予抗DR5 IgM Mab A和比瑞那帕治疗方案的组合(n＝10只动物/组)。
肿瘤体积随时间的变化示于图21B中。与单独任一单剂相比，使用抗DR5 IgM MabA和比瑞那帕的组合疗法显著减少了肿瘤体积，并且截至研究第27天，组合治疗组中的所有小鼠均无肿瘤。
HCT 116-结肠直肠癌模型
将5x106个HCT 116肿瘤细胞皮下植入雌性nu/nu小鼠的侧腹。当平均肿瘤体积达到75-150mm3时，向小鼠每隔一天静脉内给药媒介物，总共11剂；每隔一天静脉内给药5mg/kg抗DR5 IgM Mab A，共11剂；每3天腹膜内给药15mg/kg比瑞那帕，共7剂；或者给予抗DR5IgM Mab A和比瑞那帕治疗方案的组合(n＝10只动物/组)。
肿瘤体积随时间的变化示于图21C中。使用抗DR5 IgM Mab A和比瑞那帕的组合疗法部分减少了肿瘤体积，尽管这在研究第19天没有达到统计学显著性。
SA3840-骨肉瘤PDX模型
将直径为2-3mm的SA3840肿瘤碎片皮下植入雌性NOD/SCID小鼠的侧腹。当平均肿瘤体积达到100-200mm3时，向小鼠每隔一天静脉内给药媒介物，总共11剂；每隔一天静脉内给药5mg/kg抗DR5IgM Mab A，共11剂；每3天腹膜内给药30mg/kg比瑞那帕，共7剂；或者给予抗DR5 IgM Mab A和比瑞那帕治疗方案的组合(n＝5只动物/组)。如果个体动物体重减轻超过15％，则给予停药期，并且当体重减轻恢复到低于10％时重新开始给药。
肿瘤体积随时间的变化示于图21D中。尽管比瑞那帕组和组合治疗组各有1只动物因体重减轻而错过给药，但与媒介物对照组相比，使用抗DR5 IgM Mab A和比瑞那帕的组合疗法显著减少了肿瘤体积。
OV15631和OV15841卵巢PDX模型
将直径为2-3mm的OV15631和OV15841肿瘤碎片皮下植入雌性NOD/SCID小鼠的侧腹。当平均肿瘤体积达到100-200mm3时，向小鼠每隔一天静脉内给药媒介物，总共11剂；每隔一天静脉内给药5mg/kg抗DR5 IgM Mab A，共11剂；每3天腹膜内给药30mg/kg比瑞那帕，共7剂；或者给予抗DR5 IgM Mab A和比瑞那帕治疗方案的组合(n＝5只动物/组)。在这些模型中没有看到组合的协同作用。
实施例12：头颈癌的体外比瑞那帕组合
如下评估抗DR5 IgM Mab A与比瑞那帕组合对各种头颈肿瘤细胞系的体外效力。接种肿瘤细胞，并在第二天用连续稀释的抗DR5IgM Mab A和比瑞那帕单独或组合处理细胞。在37℃下72小时后，添加Cell Titer Glo试剂(Promega)，并在光度计上读取细胞活力。抗DR5 IgM Mab A与比瑞那帕的组合对Detroit 562和KYSE270的示例性细胞活力曲线分别示于图22A和图22C中。如前面实施例中所述确定协同作用。Detroit 562和KYSE270细胞的协同作用得分3D曲面图分别示于图22B和图22D中。Mab A和比瑞那帕的组合对各种头颈肿瘤细胞系的平均Bliss协同作用得分示于表14中。
表14：在头颈癌细胞系中使用比瑞那帕的组合
细胞系 平均Bliss得分
Detroit 562 36
KYSE410 35
TE-1 29
8305C 27
A253 26
KYSE-70 25
OE19 17
FaDu 16
细胞系 平均Bliss得分
KYSE270 15
8505C 10
KYSE150 0.2
实施例13：体外SMAC模拟物组合
如下评估抗DR5 IgM Mab A与各种SMAC模拟物组合对各种肿瘤细胞系的体外效力。接种肿瘤细胞或原代人肝细胞(BioIVT X008001)，并在第二天用连续稀释的抗DR5 IgMMab A和SMAC模拟物单独或组合处理细胞。在37℃下72小时后，添加Cell Titer Glo试剂(Promega)，并在光度计上读取细胞活力。抗DR5 IgM Mab A与APG-1387、比瑞那帕、ASTX660和Debio1143的组合对EBC-1细胞的示例性细胞活力曲线分别示于图23A至图23D中。如前面实施例中所述确定协同作用。Mab A和SMAC模拟物的组合对各种肿瘤细胞系的平均Bliss协同作用得分示于表15中。平均而言，二价SMAC模拟物比瑞那帕和APG-1387的平均Bliss得分高于单价SMAC模拟物Debio 1143和ASTX660。
表15：在实体瘤细胞系中使用SMAC模拟物的组合的平均Bliss得分
细胞系 比瑞那帕 APG-1387 Debio 1143 ASTX660
EBC-1 39 47 23 17
HCT 116 31 34 19 29
HT 1080 30 38 12 20
OVCAR-4 14 10 3 9
SK-MEL-5 14 7 4 11
SW1353 -0.6 -3 -1 -2
实施例14：体内贝伐珠单抗组合
将2x106个Colo205肿瘤细胞皮下植入雌性NCr裸鼠的侧腹。当平均肿瘤体积达到100-150mm3时，向小鼠每隔一天静脉内给药媒介物，总共7剂；每隔一天静脉内给药5mg/kg抗DR5 IgM Mab A，总共7剂；每两周一次腹膜内给药5mg/kg贝伐珠单抗，持续5周；或者给予抗DR5 IgM Mab A和贝伐珠单抗治疗方案的组合。肿瘤体积(n＝10只动物/组)示于图24A中，并且总存活率示于图24B中。在第19天(所有对照动物都处于研究中的最后一天)，与单独贝伐珠单抗相比，使用抗DR5 IgM Mab A和贝伐珠单抗的组合疗法显著减少了肿瘤体积。与单独任一单剂相比，组合治疗还显著延长了总生存期。
表16：本公开中的其他序列
Figure BDA0003915187800001341
Figure BDA0003915187800001351
Figure BDA0003915187800001361
序列表
<110> IGM生物科学股份有限公司(IGM BIOSCIENCES, INC.)
<120> 多聚体抗DR5结合分子与癌症疗法组合治疗癌症的用途
<130> 003-030WO1
<140>
<141>
<150> 63/136,156
<151> 2021-01-11
<150> 63/131,698
<151> 2020-12-29
<150> 63/114,990
<151> 2020-11-17
<150> 63/078,747
<151> 2020-09-15
<150> 63/023,635
<151> 2020-05-12
<160> 103
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 1
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Glu Arg Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ile Leu Gly Ala Gly Arg Gly Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 2
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 2
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 3
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 3
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Glu Arg Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Asn Trp Gln Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ile Leu Gly Ala Gly Arg Gly Trp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 4
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 4
Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr
1 5 10 15
Val Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser
20 25 30
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly
35 40 45
Ala Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser
50 55 60
Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp
65 70 75 80
Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Ala Asp Ser Ser Gly Asn His Val
85 90 95
Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 5
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 5
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Asp Tyr Phe Trp Ser Trp Ile Arg Gln Leu Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Cys Ile Gly His Ile His Asn Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Lys Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Arg Gly Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 6
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 6
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Ser Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 7
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 7
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Val Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Asp Ser Met Ile Thr Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 8
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 8
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Arg Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 9
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 9
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Phe
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Leu Ser Met Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Val Arg Ile Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 10
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 10
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro His Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 11
<211> 145
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 11
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Ser
1 5 10 15
Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Asn Tyr Lys Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Met Gly Trp Met Asn Pro Asp Thr Asp Ser Thr Gly Tyr Pro
65 70 75 80
Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Arg Asp Tyr
115 120 125
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
130 135 140
Ser
145
<210> 12
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 12
Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
20 25 30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser
35 40 45
Val Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
50 55 60
Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser
100 105 110
Asn Trp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
115 120 125
<210> 13
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 13
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ile Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Met Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Phe Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala His
65 70 75 80
Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Gly Arg Ser Ala Tyr Tyr Phe Asp Ser Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 14
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 14
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 15
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 15
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Phe
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 16
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 16
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 17
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 17
Gly Val Gln Cys Glu Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
1 5 10 15
Arg Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala
20 25 30
Phe Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg
35 40 45
Leu Glu Trp Val Ala Tyr Ile Ser Asp Gly Gly Gly Ile Thr Tyr Tyr
50 55 60
Pro Asp Thr Met Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys
65 70 75 80
Asn Thr Leu Ser Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala
85 90 95
Met Tyr Tyr Cys Ala Arg His Ile Thr Met Val Val Gly Pro Phe Ala
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 18
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 18
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Ser Ser Ser Phe Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn Arg
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Lys Asp Tyr Thr Leu Ser Ile Thr Ser Leu Gln Thr
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg
100 105
<210> 19
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 19
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Arg Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Phe Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Val Asn Thr Lys Tyr Ser Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Glu Ala Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 20
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 20
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Gln Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Arg Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 21
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 21
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Asp Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Asn His Tyr Gly Ser Gly Ser His Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 22
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 22
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ile Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Leu Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Lys Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 23
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 23
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Gly His Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Asp Ser Ser Gly Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 24
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 24
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Leu Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Thr Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Tyr Ser Phe Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 25
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 25
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Gly His Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Asp Ser Ser Gly Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 26
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 26
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Leu Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Thr Thr Tyr Phe Cys Leu Gln His Asn Ser Phe Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 27
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 27
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Gly His Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Asp Ser Ser Gly Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 28
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 28
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Leu Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Thr Thr Tyr Phe Cys Leu Gln His Asn Ser Phe Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 29
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 29
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser His Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ile Leu Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Ala Ala Ala Gly Thr Asp Ala Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 30
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 30
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Ile Asn Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile
35 40 45
His Asp Val Ser Ser Phe Gln Ser Ala Val Pro Ser Arg Phe Ser Arg
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Val Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Tyr Ile Thr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 31
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 31
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr
20 25 30
Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Arg Tyr Ser Ser Ser Ser Trp Trp Tyr Phe Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 32
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 32
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 33
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 33
Gln Val Gln Ala Glu Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Thr Ser Val Thr Thr Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Ser Pro Arg Gly Phe Ser Gly Tyr Glu Ala Phe Asp Ser Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 34
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 34
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Arg
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Ile Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Leu Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile
100 105 110
Lys
<210> 35
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 35
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asp
20 25 30
Asn Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gly Val Asn Trp Asn Phe Leu Phe Asp Ile Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 36
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 36
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Arg
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 37
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 37
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Arg Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Leu Gly Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 38
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 38
Asp Ile Val Met Thr Gln Phe Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu His Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Leu Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Ser Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 39
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 39
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Thr Val Tyr Ser Asn Ser Ser Pro Phe Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser
<210> 40
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 40
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Ser Ile Ser Thr Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Ala Thr Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 41
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 41
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Thr Val Tyr Ser Ser Ser Ser Pro Phe Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser
<210> 42
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 42
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Ala Thr Ser Ser Phe Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Ala Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 43
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 43
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Arg Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
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Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Gly Ser Ser Gly Tyr Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 44
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 44
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu His Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 45
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 45
Glu Val Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Gly Asp Trp Phe Asp Pro Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 46
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 46
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 47
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 47
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu
1 5 10 15
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met
20 25 30
His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val
35 40 45
Ile Trp Tyr Asp Gly Arg Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
50 55 60
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85 90 95
Glu Val Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val Cys Ser Tyr Tyr Tyr Tyr Gly
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 48
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 48
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 49
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 49
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Cys Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Asn Gly Ser Gly Ser Tyr Asp Trp Phe Asp Pro Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 50
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 50
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Phe Val Ala Ser Ser Phe Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 51
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 51
Gln Val Gln Met Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Asp Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Asn Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Asn Gly Ser Gly Ser Tyr Asp Trp Phe Asp Pro Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 52
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 52
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Phe Val Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 53
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 53
Lys Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Ser Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Phe Tyr Pro Gly Gly Gly Tyr Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Thr Ser Glu Gly Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Glu Gly Ile Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 54
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 54
Asp Ile Ala Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Leu Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala
65 70 75 80
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85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala
100 105
<210> 55
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 55
Lys Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Ser Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Phe Tyr Pro Gly Gly Gly Tyr Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Glu Gly Ile Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 56
<211> 104
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 56
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu
100
<210> 57
<211> 244
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 57
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Glu Arg Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ile Leu Gly Ala Gly Arg Gly Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala
130 135 140
Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp
145 150 155 160
Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
165 170 175
Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile
180 185 190
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr
195 200 205
Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser
210 215 220
Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Thr Val Leu Gly
<210> 58
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 58
Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr His Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Ser Ser Ser Arg Ser Ala Ala Tyr Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro
130 135 140
Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly
145 150 155 160
Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
165 170 175
Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly
180 185 190
Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu
195 200 205
Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn
210 215 220
Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Leu Gly
245
<210> 59
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 59
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Glu Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Ser Tyr
20 25 30
Thr Leu His Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Ala Gly Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ser Gln Asn Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Leu Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Phe Thr Tyr Ser Phe Gly Met Asp Val Trp Gly Arg Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser
130 135 140
Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly
145 150 155 160
Gly Ser Asn Ile Gly Arg Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro
165 170 175
Gly Thr Ala Pro Lys Leu Ile Leu Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser
180 185 190
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser
195 200 205
Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Leu Tyr Tyr Cys
210 215 220
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr
225 230 235 240
Lys Leu Thr Val Leu Gly
245
<210> 60
<211> 244
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 60
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val His Arg Pro Gly Arg Ser Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala
130 135 140
Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp
145 150 155 160
Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
165 170 175
Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile
180 185 190
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr
195 200 205
Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser
210 215 220
Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Thr Val Leu Gly
<210> 61
<211> 235
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 61
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Arg Val Ser Cys Gln Ala Ser Gly Tyr Ser Leu Ser Glu Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Leu Asn Pro Asn Ser Gly Val Thr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Ser Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Phe Asn Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asn Gly Asp Tyr Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
130 135 140
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Thr
145 150 155 160
Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Leu Leu Val Val Tyr
165 170 175
Ala Lys Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
180 185 190
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
195 200 205
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys His Ser Arg Asp Ser Ser Gly Trp Val
210 215 220
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
225 230 235
<210> 62
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 62
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Pro Asp
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Ser Phe Asp Gly Ser Gln Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Gln Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Pro Ala Arg Phe Phe Pro Leu His Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gln
130 135 140
Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys
145 150 155 160
Gln Gly Asp Ser Leu Arg Thr His Tyr Ala Ser Trp Tyr His Gln Arg
165 170 175
Pro Gly Arg Ala Pro Val Leu Val Asn Tyr Pro Lys Asp Ser Arg Pro
180 185 190
Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala
195 200 205
Ser Leu Thr Ile Ile Gly Ala Gln Ala Ala Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr
210 215 220
Cys Gln Ser Arg Asp Ser Ser Gly Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys
225 230 235 240
Val Thr Val Leu Gly
245
<210> 63
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 63
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Gly Tyr Gly Asp Tyr Leu Asp Tyr Trp Gly Lys
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro
130 135 140
Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly
145 150 155 160
Thr Ser Ser Asp Ile Gly Asn Tyr Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln
165 170 175
His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Val Asn Glu Arg
180 185 190
Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr
195 200 205
Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu Arg Pro Glu Asp Glu Ala Asp Tyr
210 215 220
Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Asn Asn Ala Val Ile Phe Gly Gly Gly
225 230 235 240
Thr Gln Leu Thr Val Leu Gly
245
<210> 64
<211> 255
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 64
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr His
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Gly Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ser Gln Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Ser Arg Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Tyr Val Pro Pro Gly
100 105 110
Asp Phe Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
130 135 140
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
145 150 155 160
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Arg Ser Asp Ile Gly Gly Tyr
165 170 175
Asn Phe Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
180 185 190
Leu Ile Tyr Asp Val Tyr Asn Arg Pro Ser Gly Ile Ser Asp His Phe
195 200 205
Ser Gly Ser Lys Ser Asp Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
210 215 220
Gln Ser Glu Asp Asp Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Tyr
225 230 235 240
His Thr Trp Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
245 250 255
<210> 65
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 65
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Val Asn Tyr
20 25 30
Phe Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Pro Glu Trp Met
35 40 45
Gly Met Ile Asn Pro Ser Gly Gly Thr Thr Lys Asn Arg Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Arg Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Asp Phe Lys Gly Thr Asp Ile Leu Phe Arg Asp Trp Gly Arg
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro
130 135 140
Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Ser Ile Ser Cys Ser Gly
145 150 155 160
Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Ile Trp Tyr Gln Gln Leu
165 170 175
Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Met Tyr Ser Asn Asp Arg Arg Pro
180 185 190
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala
195 200 205
Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
210 215 220
Cys Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly His Tyr Val Phe Gly Thr
225 230 235 240
Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
245
<210> 66
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 66
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Thr Phe Asp Ile Trp Gly Arg Gly Thr Met Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Ala Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly
130 135 140
Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Asn Ser Asn
145 150 155 160
Ile Gly Ser Arg Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala
165 170 175
Pro Lys Leu Leu Ile Gln Gly Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro
180 185 190
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile
195 200 205
Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp
210 215 220
Asp Asp Ser Leu Thr Gly Tyr Val Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Thr
225 230 235 240
Val Leu Gly
<210> 67
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 67
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Ala Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Ile Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Arg Leu Arg Gly Leu Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Met
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala
130 135 140
Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser
145 150 155 160
Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu
165 170 175
Val Ile Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe
180 185 190
Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala
195 200 205
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser
210 215 220
Gly Asn His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
225 230 235 240
<210> 68
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 68
Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Pro Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Ser Gly Pro Asp Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Met Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Ala Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala
130 135 140
Ala Pro Gly Gln Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn
145 150 155 160
Ile Gly Asn Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Val Pro Gly Thr Ala
165 170 175
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro
180 185 190
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile
195 200 205
Thr Gly Leu Gln Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp
210 215 220
Asp Ser Ser Leu Ser Ala Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr
225 230 235 240
Val Leu Gly
<210> 69
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 69
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Thr Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Arg Asn Asn
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Phe Ile Pro Lys Phe Gly Thr Thr Asn His Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Asp Ser Thr Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ala Tyr Cys Gly Gly Gly Arg Cys Tyr Leu Tyr Gly
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Gln Ala
130 135 140
Val Val Ile Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val
145 150 155 160
Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly His Tyr
165 170 175
Pro Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Thr Leu Ile
180 185 190
Tyr Asp Thr Ser Asn Lys Arg Ser Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly
195 200 205
Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala Gln Pro
210 215 220
Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Leu Val Ser Tyr Ser Gly Ser Leu
225 230 235 240
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
245 250
<210> 70
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 70
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Lys Gly Ala Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Met Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Ala Leu Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu
130 135 140
Ser Pro Gly Lys Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Gly Ser
145 150 155 160
Val Ala Arg Asn Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala
165 170 175
Pro Thr Ile Val Ile Tyr Glu Asp Asn Arg Arg Pro Ser Gly Val Pro
180 185 190
Gly Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Arg Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu
195 200 205
Thr Ile Ser Gly Leu Gln Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln
210 215 220
Ser Tyr Asn Tyr Asn Thr Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
225 230 235 240
Val Leu Gly
<210> 71
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 71
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Lys Thr Asn Tyr Val Gln Glu Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Thr Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Asn Asn Tyr Arg Phe Gly Tyr Phe Asp Phe Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Glu Thr Thr Leu Thr Gln
130 135 140
Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser
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Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln
165 170 175
Gln Lys Pro Gly Arg Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser
180 185 190
Arg Ala Ile Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
195 200 205
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Ala Glu Asp Phe Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly
225 230 235 240
Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg
245
<210> 72
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 72
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Thr
20 25 30
Thr Val Ala Trp Asp Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Glu Tyr Ala
50 55 60
Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Val Asp Thr Ser Lys Asn
65 70 75 80
Gln Ile Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Asp Ala Gly Arg Gly Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Ser Pro Leu Arg Trp Gly Arg Phe
115 120 125
Gly Trp Arg Gly Leu Gly Arg Gly Trp Leu Arg Ser Pro Val Thr Gln
130 135 140
Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser
145 150 155 160
Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser His Leu Ala Trp Tyr Gln
165 170 175
Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser
180 185 190
Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
195 200 205
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Arg Ala Val Phe Gly
225 230 235 240
Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
245
<210> 73
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 73
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Arg Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Asn Asn
20 25 30
Asn Ala Ala Trp Tyr Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala
50 55 60
Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Ser Pro Asp Thr Ser Lys Asn
65 70 75 80
Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Asp Gly Asn Ser Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ile Leu Arg Trp Gly
115 120 125
Arg Phe Gly Trp Arg Gly Leu Gly Arg Gly Trp Leu Glu Ile Val Leu
130 135 140
Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr
145 150 155 160
Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Gly Tyr Val Ser Trp
165 170 175
Tyr Arg Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala
180 185 190
Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
195 200 205
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe
210 215 220
Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Asn Thr Tyr Gly
225 230 235 240
Gln Gly Thr Lys Val Gly Ile Lys
245
<210> 74
<400> 74
000
<210> 75
<400> 75
000
<210> 76
<400> 76
000
<210> 77
<400> 77
000
<210> 78
<400> 78
000
<210> 79
<400> 79
000
<210> 80
<400> 80
000
<210> 81
<400> 81
000
<210> 82
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 82
Met Asp Leu Met Cys Lys Lys Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu
1 5 10 15
Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp Val Leu Ser Gln Leu Gln Leu Gln Glu
20 25 30
Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys
35 40 45
Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ile Ser Lys Ser Ser Tyr Trp Gly Trp
50 55 60
Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser Ile Tyr
65 70 75 80
Tyr Ser Gly Ser Thr Phe Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr
85 90 95
Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser
100 105 110
Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Leu Thr Val
115 120 125
Ala Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
Ala Ser
145
<210> 83
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 83
Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
20 25 30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser
35 40 45
Val Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
50 55 60
Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser
100 105 110
Asn Trp Pro Leu Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg
115 120 125
Thr
<210> 84
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 84
Met Asp Leu Met Cys Lys Lys Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu
1 5 10 15
Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp Val Leu Ser Gln Leu Gln Leu Gln Glu
20 25 30
Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys
35 40 45
Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Arg Ser Asn Tyr Trp Gly Trp
50 55 60
Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Asn Val Tyr
65 70 75 80
Tyr Arg Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Ser Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr
85 90 95
Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser
100 105 110
Val Thr Val Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Leu Ser Val
115 120 125
Ala Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
Ala Ser
145
<210> 85
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 85
Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
20 25 30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser
35 40 45
Val Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
50 55 60
Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ser Pro Ala
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser
100 105 110
Asp Trp Pro Leu Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg
115 120 125
Thr
<210> 86
<211> 154
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 86
Met Asp Leu Met Cys Lys Lys Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu
1 5 10 15
Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp Val Leu Ser Gln Leu Gln Leu Gln Glu
20 25 30
Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys
35 40 45
Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp
50 55 60
Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser Ile His
65 70 75 80
Tyr Ser Gly Ser Thr Phe Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr
85 90 95
Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser
100 105 110
Val Thr Ala Ala Asp Thr Thr Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Gly Ser
115 120 125
Thr Val Val Arg Gly Val Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln
130 135 140
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
145 150
<210> 87
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 87
Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser
20 25 30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser
35 40 45
Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
50 55 60
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro
65 70 75 80
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
85 90 95
Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
100 105 110
Gly Ser Ser Pro Leu Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
115 120 125
Lys Arg Thr
130
<210> 88
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 88
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Glu Ser Ser Gly Trp Phe Gly Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 89
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 89
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Ser
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Ser Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 90
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 90
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Asp Tyr Phe Trp Ser Trp Ile Arg Gln Leu Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Gly His Ile His Asn Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Lys Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 91
<211> 453
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 91
Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn
1 5 10 15
Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp
20 25 30
Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser
35 40 45
Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys
50 55 60
Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln
65 70 75 80
Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn
85 90 95
Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys
100 105 110
Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg
115 120 125
Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile
130 135 140
Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr
145 150 155 160
Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr
165 170 175
Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Ser Gln
180 185 190
Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln
195 200 205
Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val
210 215 220
Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr
225 230 235 240
Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr
245 250 255
Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn
260 265 270
Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala
275 280 285
Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr
290 295 300
Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg
305 310 315 320
Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro
325 330 335
Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu
340 345 350
Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg
355 360 365
Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro
370 375 380
Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val
385 390 395 400
Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala
405 410 415
His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser
420 425 430
Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr
435 440 445
Ala Gly Thr Cys Tyr
450
<210> 92
<211> 453
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 92
Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn
1 5 10 15
Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp
20 25 30
Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser
35 40 45
Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys
50 55 60
Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln
65 70 75 80
Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn
85 90 95
Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys
100 105 110
Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg
115 120 125
Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile
130 135 140
Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr
145 150 155 160
Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr
165 170 175
Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Gly Gln
180 185 190
Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln
195 200 205
Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val
210 215 220
Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr
225 230 235 240
Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr
245 250 255
Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn
260 265 270
Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala
275 280 285
Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr
290 295 300
Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg
305 310 315 320
Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro
325 330 335
Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu
340 345 350
Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg
355 360 365
Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro
370 375 380
Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val
385 390 395 400
Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala
405 410 415
His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser
420 425 430
Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr
435 440 445
Ala Gly Thr Cys Tyr
450
<210> 93
<211> 353
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 93
Ala Ser Pro Thr Ser Pro Lys Val Phe Pro Leu Ser Leu Cys Ser Thr
1 5 10 15
Gln Pro Asp Gly Asn Val Val Ile Ala Cys Leu Val Gln Gly Phe Phe
20 25 30
Pro Gln Glu Pro Leu Ser Val Thr Trp Ser Glu Ser Gly Gln Gly Val
35 40 45
Thr Ala Arg Asn Phe Pro Pro Ser Gln Asp Ala Ser Gly Asp Leu Tyr
50 55 60
Thr Thr Ser Ser Gln Leu Thr Leu Pro Ala Thr Gln Cys Leu Ala Gly
65 70 75 80
Lys Ser Val Thr Cys His Val Lys His Tyr Thr Asn Pro Ser Gln Asp
85 90 95
Val Thr Val Pro Cys Pro Val Pro Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro
100 105 110
Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro Ser Cys Cys His Pro Arg Leu Ser
115 120 125
Leu His Arg Pro Ala Leu Glu Asp Leu Leu Leu Gly Ser Glu Ala Asn
130 135 140
Leu Thr Cys Thr Leu Thr Gly Leu Arg Asp Ala Ser Gly Val Thr Phe
145 150 155 160
Thr Trp Thr Pro Ser Ser Gly Lys Ser Ala Val Gln Gly Pro Pro Glu
165 170 175
Arg Asp Leu Cys Gly Cys Tyr Ser Val Ser Ser Val Leu Pro Gly Cys
180 185 190
Ala Glu Pro Trp Asn His Gly Lys Thr Phe Thr Cys Thr Ala Ala Tyr
195 200 205
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210 215 220
Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser Glu Glu Leu
225 230 235 240
Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Arg Gly Phe Ser
245 250 255
Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu Gln Gly Ser Gln Glu Leu Pro
260 265 270
Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala Ser Arg Gln Glu Pro Ser Gln Gly
275 280 285
Thr Thr Thr Phe Ala Val Thr Ser Ile Leu Arg Val Ala Ala Glu Asp
290 295 300
Trp Lys Lys Gly Asp Thr Phe Ser Cys Met Val Gly His Glu Ala Leu
305 310 315 320
Pro Leu Ala Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp Arg Leu Ala Gly Lys Pro
325 330 335
Thr His Val Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Val Asp Gly Thr Cys
340 345 350
Tyr
<210> 94
<211> 340
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 94
Ala Ser Pro Thr Ser Pro Lys Val Phe Pro Leu Ser Leu Asp Ser Thr
1 5 10 15
Pro Gln Asp Gly Asn Val Val Val Ala Cys Leu Val Gln Gly Phe Phe
20 25 30
Pro Gln Glu Pro Leu Ser Val Thr Trp Ser Glu Ser Gly Gln Asn Val
35 40 45
Thr Ala Arg Asn Phe Pro Pro Ser Gln Asp Ala Ser Gly Asp Leu Tyr
50 55 60
Thr Thr Ser Ser Gln Leu Thr Leu Pro Ala Thr Gln Cys Pro Asp Gly
65 70 75 80
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Val Thr Val Pro Cys Arg Val Pro Pro Pro Pro Pro Cys Cys His Pro
100 105 110
Arg Leu Ser Leu His Arg Pro Ala Leu Glu Asp Leu Leu Leu Gly Ser
115 120 125
Glu Ala Asn Leu Thr Cys Thr Leu Thr Gly Leu Arg Asp Ala Ser Gly
130 135 140
Ala Thr Phe Thr Trp Thr Pro Ser Ser Gly Lys Ser Ala Val Gln Gly
145 150 155 160
Pro Pro Glu Arg Asp Leu Cys Gly Cys Tyr Ser Val Ser Ser Val Leu
165 170 175
Pro Gly Cys Ala Gln Pro Trp Asn His Gly Glu Thr Phe Thr Cys Thr
180 185 190
Ala Ala His Pro Glu Leu Lys Thr Pro Leu Thr Ala Asn Ile Thr Lys
195 200 205
Ser Gly Asn Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser
210 215 220
Glu Glu Leu Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Arg
225 230 235 240
Gly Phe Ser Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu Gln Gly Ser Gln
245 250 255
Glu Leu Pro Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala Ser Arg Gln Glu Pro
260 265 270
Ser Gln Gly Thr Thr Thr Tyr Ala Val Thr Ser Ile Leu Arg Val Ala
275 280 285
Ala Glu Asp Trp Lys Lys Gly Glu Thr Phe Ser Cys Met Val Gly His
290 295 300
Glu Ala Leu Pro Leu Ala Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp Arg Met Ala
305 310 315 320
Gly Lys Pro Thr His Ile Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Ala Asp
325 330 335
Gly Thr Cys Tyr
340
<210> 95
<211> 764
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 95
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1 5 10 15
Ser Thr Lys Ser Pro Ile Phe Gly Pro Glu Glu Val Asn Ser Val Glu
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65 70 75 80
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85 90 95
Ile Ala Gln Leu Ser Gln Asp Asp Ser Gly Arg Tyr Lys Cys Gly Leu
100 105 110
Gly Ile Asn Ser Arg Gly Leu Ser Phe Asp Val Ser Leu Glu Val Ser
115 120 125
Gln Gly Pro Gly Leu Leu Asn Asp Thr Lys Val Tyr Thr Val Asp Leu
130 135 140
Gly Arg Thr Val Thr Ile Asn Cys Pro Phe Lys Thr Glu Asn Ala Gln
145 150 155 160
Lys Arg Lys Ser Leu Tyr Lys Gln Ile Gly Leu Tyr Pro Val Leu Val
165 170 175
Ile Asp Ser Ser Gly Tyr Val Asn Pro Asn Tyr Thr Gly Arg Ile Arg
180 185 190
Leu Asp Ile Gln Gly Thr Gly Gln Leu Leu Phe Ser Val Val Ile Asn
195 200 205
Gln Leu Arg Leu Ser Asp Ala Gly Gln Tyr Leu Cys Gln Ala Gly Asp
210 215 220
Asp Ser Asn Ser Asn Lys Lys Asn Ala Asp Leu Gln Val Leu Lys Pro
225 230 235 240
Glu Pro Glu Leu Val Tyr Glu Asp Leu Arg Gly Ser Val Thr Phe His
245 250 255
Cys Ala Leu Gly Pro Glu Val Ala Asn Val Ala Lys Phe Leu Cys Arg
260 265 270
Gln Ser Ser Gly Glu Asn Cys Asp Val Val Val Asn Thr Leu Gly Lys
275 280 285
Arg Ala Pro Ala Phe Glu Gly Arg Ile Leu Leu Asn Pro Gln Asp Lys
290 295 300
Asp Gly Ser Phe Ser Val Val Ile Thr Gly Leu Arg Lys Glu Asp Ala
305 310 315 320
Gly Arg Tyr Leu Cys Gly Ala His Ser Asp Gly Gln Leu Gln Glu Gly
325 330 335
Ser Pro Ile Gln Ala Trp Gln Leu Phe Val Asn Glu Glu Ser Thr Ile
340 345 350
Pro Arg Ser Pro Thr Val Val Lys Gly Val Ala Gly Gly Ser Val Ala
355 360 365
Val Leu Cys Pro Tyr Asn Arg Lys Glu Ser Lys Ser Ile Lys Tyr Trp
370 375 380
Cys Leu Trp Glu Gly Ala Gln Asn Gly Arg Cys Pro Leu Leu Val Asp
385 390 395 400
Ser Glu Gly Trp Val Lys Ala Gln Tyr Glu Gly Arg Leu Ser Leu Leu
405 410 415
Glu Glu Pro Gly Asn Gly Thr Phe Thr Val Ile Leu Asn Gln Leu Thr
420 425 430
Ser Arg Asp Ala Gly Phe Tyr Trp Cys Leu Thr Asn Gly Asp Thr Leu
435 440 445
Trp Arg Thr Thr Val Glu Ile Lys Ile Ile Glu Gly Glu Pro Asn Leu
450 455 460
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485 490 495
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Gly Val Lys Gln Gly His Phe Tyr Gly Glu Thr Ala Ala Val Tyr Val
545 550 555 560
Ala Val Glu Glu Arg Lys Ala Ala Gly Ser Arg Asp Val Ser Leu Ala
565 570 575
Lys Ala Asp Ala Ala Pro Asp Glu Lys Val Leu Asp Ser Gly Phe Arg
580 585 590
Glu Ile Glu Asn Lys Ala Ile Gln Asp Pro Arg Leu Phe Ala Glu Glu
595 600 605
Lys Ala Val Ala Asp Thr Arg Asp Gln Ala Asp Gly Ser Arg Ala Ser
610 615 620
Val Asp Ser Gly Ser Ser Glu Glu Gln Gly Gly Ser Ser Arg Ala Leu
625 630 635 640
Val Ser Thr Leu Val Pro Leu Gly Leu Val Leu Ala Val Gly Ala Val
645 650 655
Ala Val Gly Val Ala Arg Ala Arg His Arg Lys Asn Val Asp Arg Val
660 665 670
Ser Ile Arg Ser Tyr Arg Thr Asp Ile Ser Met Ser Asp Phe Glu Asn
675 680 685
Ser Arg Glu Phe Gly Ala Asn Asp Asn Met Gly Ala Ser Ser Ile Thr
690 695 700
Gln Glu Thr Ser Leu Gly Gly Lys Glu Glu Phe Val Ala Thr Thr Glu
705 710 715 720
Ser Thr Thr Glu Thr Lys Glu Pro Lys Lys Ala Lys Arg Ser Ser Lys
725 730 735
Glu Glu Ala Glu Met Ala Tyr Lys Asp Phe Leu Leu Gln Ser Ser Thr
740 745 750
Val Ala Ala Glu Ala Gln Asp Gly Pro Gln Glu Ala
755 760
<210> 96
<211> 159
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 96
Met Lys Asn His Leu Leu Phe Trp Gly Val Leu Ala Val Phe Ile Lys
1 5 10 15
Ala Val His Val Lys Ala Gln Glu Asp Glu Arg Ile Val Leu Val Asp
20 25 30
Asn Lys Cys Lys Cys Ala Arg Ile Thr Ser Arg Ile Ile Arg Ser Ser
35 40 45
Glu Asp Pro Asn Glu Asp Ile Val Glu Arg Asn Ile Arg Ile Ile Val
50 55 60
Pro Leu Asn Asn Arg Glu Asn Ile Ser Asp Pro Thr Ser Pro Leu Arg
65 70 75 80
Thr Arg Phe Val Tyr His Leu Ser Asp Leu Cys Lys Lys Cys Asp Pro
85 90 95
Thr Glu Val Glu Leu Asp Asn Gln Ile Val Thr Ala Thr Gln Ser Asn
100 105 110
Ile Cys Asp Glu Asp Ser Ala Thr Glu Thr Cys Tyr Thr Tyr Asp Arg
115 120 125
Asn Lys Cys Tyr Thr Ala Val Val Pro Leu Val Tyr Gly Gly Glu Thr
130 135 140
Lys Met Val Glu Thr Ala Leu Thr Pro Asp Ala Cys Tyr Pro Asp
145 150 155
<210> 97
<211> 137
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 97
Gln Glu Asp Glu Arg Ile Val Leu Val Asp Asn Lys Cys Lys Cys Ala
1 5 10 15
Arg Ile Thr Ser Arg Ile Ile Arg Ser Ser Glu Asp Pro Asn Glu Asp
20 25 30
Ile Val Glu Arg Asn Ile Arg Ile Ile Val Pro Leu Asn Asn Arg Glu
35 40 45
Asn Ile Ser Asp Pro Thr Ser Pro Leu Arg Thr Arg Phe Val Tyr His
50 55 60
Leu Ser Asp Leu Cys Lys Lys Cys Asp Pro Thr Glu Val Glu Leu Asp
65 70 75 80
Asn Gln Ile Val Thr Ala Thr Gln Ser Asn Ile Cys Asp Glu Asp Ser
85 90 95
Ala Thr Glu Thr Cys Tyr Thr Tyr Asp Arg Asn Lys Cys Tyr Thr Ala
100 105 110
Val Val Pro Leu Val Tyr Gly Gly Glu Thr Lys Met Val Glu Thr Ala
115 120 125
Leu Thr Pro Asp Ala Cys Tyr Pro Asp
130 135
<210> 98
<211> 137
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 98
Gln Glu Asp Glu Arg Ile Val Leu Val Asp Asn Lys Cys Lys Cys Ala
1 5 10 15
Arg Ile Thr Ser Arg Ile Ile Arg Ser Ser Glu Asp Pro Asn Glu Asp
20 25 30
Ile Val Glu Arg Asn Ile Arg Ile Ile Val Pro Leu Asn Asn Arg Glu
35 40 45
Asn Ile Ser Asp Pro Thr Ser Pro Leu Arg Thr Arg Phe Val Tyr His
50 55 60
Leu Ser Asp Leu Cys Lys Lys Cys Asp Pro Thr Glu Val Glu Leu Asp
65 70 75 80
Asn Gln Ile Val Thr Ala Thr Gln Ser Asn Ile Cys Asp Glu Asp Ser
85 90 95
Ala Thr Glu Thr Cys Ala Thr Tyr Asp Arg Asn Lys Cys Tyr Thr Ala
100 105 110
Val Val Pro Leu Val Tyr Gly Gly Glu Thr Lys Met Val Glu Thr Ala
115 120 125
Leu Thr Pro Asp Ala Cys Tyr Pro Asp
130 135
<210> 99
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 99
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 100
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 100
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 101
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 101
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 102
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 102
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 103
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 103
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25

Claims (31)

1.一种用于抑制、延迟或减少需要治疗的患有癌症的受试者中恶性细胞生长的方法，其包括向所述受试者施用组合疗法，所述组合疗法包括：
(a)有效量的特异性和激动性结合DR5的五聚体或六聚体IgM或IgM样抗体或二聚体IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物，其中所述IgM或IgM样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三至十二个或所述IgA或IgA样抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的抗原结合结构域中的三个或四个是DR5特异性和激动性的；和
(b)有效量的癌症疗法，其中所述癌症疗法包括第二线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂(SMAC)模拟物、放射、叶酸类似物、铂基药剂、紫杉烷、拓扑异构酶II抑制剂、长春花生物碱、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、磷酸肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)抑制剂、髓系细胞白血病-1(Mcl-1)抑制剂、抗VEGF抗体或它们的任何组合。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述癌症疗法包括SMAC模拟物，并且其中所述SMAC模拟物包括二价SMAC模拟物。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述SMAC模拟物包括比瑞那帕。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述癌症疗法包括甲酰四氢叶酸、奥沙利铂、卡铂、紫杉醇、蒽环类药物、依托泊苷、长春新碱、依鲁替尼、依达拉西布、MIK665、贝伐珠单抗、比瑞那帕、GDC-0152、HGS-1029/AEG40826、Debio1143、APG-1387、ASTX660或它们的任何组合。
5.如权利要求1所述的方法，其还包括施用有效量的另外的癌症疗法。
6.如权利要求5所述的方法，其中所述另外的癌症疗法包括拓扑异构酶I抑制剂、核苷类似物、铂基药剂或它们的任何组合。
7.如权利要求6所述的方法，其中所述另外的癌症疗法包括伊立替康、拓扑替康、氟尿嘧啶(5-FU)、吉西他滨或它们的任何组合。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述癌症是血液癌症。
9.如权利要求8所述的方法，其中所述血液癌症是白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、其任何转移瘤或它们的任何组合。
10.如权利要求8所述的方法，其中所述血液癌症是急性髓系白血病(AML)、慢性髓系白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、其任何转移瘤或它们的任何组合。
11.如权利要求1所述的方法，其中所述癌症是实体瘤。
12.如权利要求11所述的方法，其中所述癌症是膀胱癌、结肠直肠癌、肉瘤、胃癌、肺癌、胰腺癌、头颈癌、黑色素瘤、卵巢癌或乳腺癌。
13.如权利要求12所述的方法，其中所述癌症是纤维肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、头颈肉瘤或三阴性乳腺癌(TNBC)。
14.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的所述三个或四个抗原结合结构域或所述三至十二个抗原结合结构域包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH和VL包含：
(a)六个免疫球蛋白互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包含抗体的所述CDR，所述抗体分别包含VH和VL氨基酸序列SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4；SEQ ID NO:5或SEQID NO:90和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；SEQID NO:11和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18；SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20；SEQ ID NO:21和SEQ IDNO:22；SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26；SEQ ID NO:27和SEQID NO:28；SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30；SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32；SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34；SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36；SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38；SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40；SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42；SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:44；SEQ IDNO:45和SEQ ID NO:46；SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48；SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50；SEQID NO:51和SEQ ID NO:52；SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54；SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56；SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83；SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:85；SEQ ID NO:86和SEQ IDNO:87；或SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89；或ScFv序列SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ IDNO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ IDNO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ IDNO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:73，或在一个或多个所述CDR中具有一个或两个氨基酸取代的所述六个CDR；和/或
(b)分别包含与以下至少90％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；SEQ IDNO:3和SEQ ID NO:4；SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:7和SEQ IDNO:8；SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13和SEQID NO:14；SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18；SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20；SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22；SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26；SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28；SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30；SEQ IDNO:31和SEQ ID NO:32；SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34；SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36；SEQID NO:37和SEQ ID NO:38；SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40；SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42；SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:44；SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:46；SEQ ID NO:47和SEQ IDNO:48；SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50；SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:52；SEQ ID NO:53和SEQID NO:54；SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56；SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83；SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:85；SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87；或SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89，或其中所述VH和VL包含在具有分别与以下至少90％相同的氨基酸序列的ScFv中：SEQ ID NO:57、SEQID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:73。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的所述三个或四个抗原结合结构域或所述三至十二个抗原结合结构域包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH和VL包含：
(a)六个免疫球蛋白互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包含抗体的所述CDR，所述抗体分别包含VH和VL氨基酸序列SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:90和SEQ IDNO:6；或SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；和/或
(b)分别包含与以下至少90％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:90和SEQID NO:6；或SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物的所述三个或四个抗原结合结构域或所述三至十二个抗原结合结构域包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH和VL包含：
(a)六个免疫球蛋白互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包含抗体的所述CDR，所述抗体分别包含VH和VL氨基酸序列SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；和/或
(b)分别包含与以下至少90％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。
17.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物是二聚体IgA或IgA样抗体，所述二聚体IgA或IgA样抗体包含两个二价IgA结合单元或其多聚化片段以及J链或其片段或变体，其中每个结合单元包含两个IgA重链恒定区或其多聚化片段，所述IgA重链恒定区或其多聚化片段各自与抗原结合结构域缔合，并且其中所述IgA重链恒定区或其多聚化片段各自包含Cα3-tp结构域。
18.如权利要求17所述的方法，其中所述IgA重链恒定区或其多聚化片段各自包含Cα1结构域和/或Cα2结构域。
19.如权利要求17所述的方法，其中所述IgA重链恒定区是人IgA恒定区。
20.如权利要求17所述的方法，其中每个结合单元包含：两个IgA重链，所述IgA重链各自包含位于所述IgA恒定区或其多聚化片段的氨基末端的VH；以及两个免疫球蛋白轻链，所述免疫球蛋白轻链各自包含位于免疫球蛋白轻链恒定区的氨基末端的VL。
21.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物是五聚体或六聚体IgM抗体，所述五聚体或六聚体IgM抗体分别包含五个或六个二价IgM结合单元，其中每个结合单元包含两个IgM重链恒定区或其多聚化片段，所述IgM重链恒定区或其多聚化片段各自与抗原结合结构域缔合，并且其中所述IgM重链恒定区或其多聚化片段各自包含Cμ4-tp结构域。
22.如权利要求21所述的方法，其中所述IgM重链恒定区或其多聚化片段各自包含Cμ1结构域、Cμ2结构域和/或Cμ3结构域。
23.如权利要求21所述的方法，其中所述抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物是五聚体，并且还包含J链或其功能片段或其变体。
24.如权利要求21所述的方法，其中所述IgM重链恒定区是人IgM恒定区。
25.如权利要求21所述的方法，其中每个结合单元包含：两个IgM重链，所述IgM重链各自包含位于所述IgM恒定区或其多聚化片段的氨基末端的VH；以及两个免疫球蛋白轻链，所述免疫球蛋白轻链各自包含位于免疫球蛋白轻链恒定区的氨基末端的VL。
26.如权利要求23所述的方法，其中所述J链或其功能片段或变体是可影响多聚体结合分子的血清半衰期的变体J链，其包含相对于野生型J链的一个或多个单一氨基酸取代、缺失或插入；并且其中相对于除了所述一个或多个单一氨基酸取代、缺失或插入之外相同的并且以相同的方式施用于同一动物物种的参考多聚体结合分子，所述多聚体结合分子在施用于动物时表现出增加的血清半衰期。
27.如权利要求26所述的方法，其中所述J链或其功能片段包含：
(a)在对应于野生型人J链(SEQ ID NO:97)的氨基酸Y102的氨基酸位置处的氨基酸取代，
(b)在对应于野生型人J链(SEQ ID NO:97)的氨基酸Y102的氨基酸位置处的丙氨酸(a)取代或
(c)氨基酸序列SEQ ID NO:98。
28.如权利要求26所述的方法，其中所述J链或其功能片段或变体还包含异源多肽，其中所述异源多肽与所述J链或其功能片段或变体直接或间接融合。
29.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中相对于单独施用所述抗体或其多聚化抗原结合片段、变体或衍生物或所述癌症疗法，施用所述组合疗法导致增强的治疗功效。
30.如权利要求29所述的方法，其中所述增强的治疗功效包括降低的肿瘤生长速率、肿瘤消退或增加的存活率。
31.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
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