KR20220164787A - 암 및 감염의 치료를 위한 NKp46에 대한 항체 및 이의 작제물 - Google Patents

암 및 감염의 치료를 위한 NKp46에 대한 항체 및 이의 작제물 Download PDF

Info

Publication number
KR20220164787A
KR20220164787A KR1020227038852A KR20227038852A KR20220164787A KR 20220164787 A KR20220164787 A KR 20220164787A KR 1020227038852 A KR1020227038852 A KR 1020227038852A KR 20227038852 A KR20227038852 A KR 20227038852A KR 20220164787 A KR20220164787 A KR 20220164787A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
antibody
seq
sequence
cancer
nkp46
Prior art date
Application number
KR1020227038852A
Other languages
English (en)
Inventor
스티판 존직
오페르 만델보임
오리트 베르하니
쉬라 카할론
Original Assignee
이슘 리서치 디벨롭먼트 컴퍼니 오브 더 히브루 유니버시티 오브 예루살렘 엘티디.
유니버시티 오브 리예카 패컬티 오브 메디신
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 이슘 리서치 디벨롭먼트 컴퍼니 오브 더 히브루 유니버시티 오브 예루살렘 엘티디., 유니버시티 오브 리예카 패컬티 오브 메디신 filed Critical 이슘 리서치 디벨롭먼트 컴퍼니 오브 더 히브루 유니버시티 오브 예루살렘 엘티디.
Publication of KR20220164787A publication Critical patent/KR20220164787A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/001111—Immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4613—Natural-killer cells [NK or NK-T]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment

Abstract

본 발명은 높은 친화성 및 특이성으로 인간 NKp46을 인식하고, 이의 천연 리간드에 대한 NKp46의 결합을 차단하지 않는 모노클로날 항체를 제공한다. 본 발명은 추가로, 다중특이적 항체, 키메라 항원 수용체(CAR), 및 질환, 특히 악성 종양 및 감염의 치료에서 이들의 용도를 제공한다.

Description

암 및 감염의 치료를 위한 NKp46에 대한 항체 및 이의 작제물
본 발명은, 면역치료 분야에 있어서, 인간 자연 킬러 수용체 NKp46에 결합하는 항체 및 이의 단편, 이들 항체 및 단편을 코딩하는(encoding) 폴리뉴클레오티드 서열, 및 이들을 생산하는 세포에 관한 것이다. 본 발명은 추가로, 이들 항체의 다중특이성 및 키메라 항원 수용체 작제물, 및 질환, 특히 암 및 급성 감염의 치료에서 항체, 이들의 단편 및 작제물의 용도에 관한 것이다.
암 면역요법은, 예를 들면, 종양 세포 상의 항원에 특이적인 항체에 의한 치료, 항원 제시 세포와 종양 세포의 융합에 의한 치료, 또는 항종양 NK 세포 또는 T 세포의 특이적 활성화에 의해, 항종양 면역 반응을 생성 및 증강하기 위해 사용된다. 환자에서 종양 세포에 대해 면역 세포를 동원하는 능력은 지금까지 불치로 여겨졌던 암의 종류 및 전이와 싸우는 치료법을 제공한다.
자연 킬러(NK) 세포는 선천적 이펙터 림프구이며, 사전 자극없이 종양 세포 및 감염된 세포를 사멸시킬 수 있다. 현재까지, 자연 킬러(NK) 세포는 종양의 형질전환 및 바이러스, 세균 또는 진균 감염에 대한 가장 중요한 제1 반응자 중 하나로서 부상하고 있다. 또한, I형 당뇨병이나 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis; RA) 등의 자가면역 질환에도 관여하고 있다. NK 세포는 다수의 생식세포계 코딩된 활성화 수용체와 억제성 수용체에 의해 다수의 다양한 표적을 인식하는 명확한 능력을 갖고 있다. 이러한 수용체에 의해 수신된 신호의 밸런스는, NK 세포가 특정 표적 세포에 대해 작용할지, 아니면 중립으로 잔류할지를 최종적으로 결정한다.
NK 세포에서 발견되는 3개의 활성화 수용체, NKp30, NKp44 및 NKp46은, 함께 천연 세포독성 수용체(NCR)로서 공지되어 있다. 이들 수용체는 NK 세포의 항종양 및 항바이러스 방어에 중요하다. NKp46은 거의 독점적으로 NK 세포에 의해 발현되기 때문에, 중요한 활성화 수용체로서 확립되었다. 이의 리간드 레퍼토리는 인플루엔자 바이러스, 센다이 바이러스, 뉴캐슬병 바이러스 및 폭스바이러스(poxvirus)의 헤마글루티닌(HA) 및 헤마글루티닌-뉴라미니다제(HN) 등의 바이러스 리간드로부터, 세균(푸소박테리움 뉴클레아툼(Fusobacterium nucleatum) 등), 종양, 지방 세포 및 인간 췌장 베타 세포에서 발견되는 미지의 리간드에까지 미친다. 미지의 리간드, 특히 NKp46 종양 리간드의 동정은 10년 이상에 걸쳐 집중적으로 조사되었다.
미국 출원번호 제20180207290호는 항-NKp46 항체, 독소 접합체 및 이의 치료적 용도를 개시한다.
단독으로, 면역학적 작제물의 일부로서, 또는 기타 약제와 조합하여, 면역계의 세포를 증강시켜 종양 세포 및/또는 감염성 미생물을 공격할 수 있는, 추가의, 보다 효과적, 특이적, 안전한 및/또는 안정한 약제를 제공하는 충족되지 않은 필요성이 있다.
본 발명은, 일부 실시양태에서, 인간 NKp46 수용체를 인식하고, 암 및 바이러스성 질환의 치료에 사용하기에 적합한 항체 및 이의 단편을 제공한다. 본 발명은 추가로, 일부 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항-NKp46 항체의 결합 부위를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR) 분자, 및 입양 요법을 위한 이들의 용도를 제공한다. 본 발명은 추가로, 일부 실시양태에서, NKp46 및 종양 세포 또는 감염성 미생물 상에 존재하는 적어도 하나의 추가 수용체 또는 항원에 대해 특이성을 갖는 이중특이적 및 삼중특이적 항체를 제공한다.
유리하게는, 본 명세서에 개시된 항-NKp46 항체는 NKp46 막-근위 도메인(D2 도메인, 서열번호 13)에 특이적이고, 이의 리간드와의 NKp46 상호작용을 차단하지 않는다. 이러한 항체는 NKp46 수용체를 내재화 또는 분해하지 않기 때문에, 다양한 치료법으로 NK 세포를 동원하기 위해 사용할 수 있다. 이들 항체 및 이의 단편 및 작제물은 인간 NKp46에 대해 높은 특이성 및 매우 높은 친화성(affinity)을 갖는 독특한 CDR 서열 세트를 갖는 것을 특징으로 한다. 이 항체는 암의 면역요법에 유용하고, 암 진단에도 사용할 수 있다. 이러한 독특한 CDR 서열의 세트, 즉 이들 항체의 결합 부위를 포함하는 이중특이적 및 다중특이적 항체(multi-specific antibody) 등의 작제물도 바이러스 장애의 치료에 유용하다.
일 측면에 따르면, 본 발명은, 인간 NKp46 D2 도메인 내의 서열에 특이적으로 결합하고, NKp46과 이의 리간드와의 상호작용을 차단하지 않는 항체, 또는 적어도 항원 결합 부분을 포함하는 이의 항체 단편을 제공하고, 상기 항체는 인간 NKp46에 대해 적어도 5×10-9M의 친화도(affinity)를 갖는다. 일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 적어도 10-10M의 친화도를 갖는다.
일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 6개 CDR 서열의 세트, 즉 서열번호 7을 포함하는 중쇄(HC) 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열번호 8 및 서열번호 12로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄(LC) 가변 영역의 3개의 CDR, 또는 상기 가변 영역 서열과 적어도 90%의 서열 동일성(sequence identity)을 갖는 이의 유사체 또는 유도체를 포함한다.
소정 항체 분자의 CDR 서열을 결정하기 위한 당해 기술분야에 공지된 몇몇 방법이 있지만, 명확한 표준적 방법은 없다. 항체 중쇄 및 경쇄 가변 영역으로부터의 CDR 서열의 결정은, KABAT, Chotia 및 IMGT로서 공지된 방법을 포함하지만 이들로 한정되지 않는, 당해 기술분야에 공지된 임의의 방법에 따라 수행될 수 있다. CDR의 선택된 세트는 복수의 방법에 의해 동정된 서열을 포함할 수 있고, 즉, 예를 들면, 일부 CDR 서열은 KABAT를 사용하여 결정될 수 있고, 일부는 IMGT를 사용하여 결정될 수 있다. 일부 실시양태에 따르면, mAb 가변 영역의 CDR 서열은 IMGT 방법을 사용하여 결정된다.
일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 단편은, 클론 K3로 지칭되는 모노클로날 항체의 CDR 서열, 즉 서열번호 7에 제시된 중쇄 가변 영역에 포함된 3개의 CDR 서열 및 서열번호 12에 제시된 경쇄 가변 영역에 포함된 3개의 CDR 서열, 또는 클론 P4로 지칭되는 모노클로날 항체의 CDR 서열, 즉 서열번호 7에 제시된 중쇄 가변 영역에 포함되는 3개의 CDR 서열 및 서열번호 8에 제시된 경쇄 가변 영역에 포함된 3개의 CDR 서열을 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 EYSMH(서열번호 1)를 포함하는 중쇄 CDR1을 포함한다. 일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 GISPNSGSGTSSYNQKFKG(서열번호 2)를 포함하는 중쇄 CDR2를 포함한다. 일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 RDFHSSFDY(서열번호 3)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다.
특정 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함한다: (i) 서열 EYSMH(서열번호 1)를 포함하는 HC CDR1; (ii) 서열 GISPNSGGTSYNQKFKG(서열번호 2)를 포함하는 HC CDR2; 및 서열 RDFHSSFDY(서열번호 3)를 포함하는 HC CDR3.
일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 RASQSISDYLH(서열번호 4)를 포함하는 경쇄 CDR1을 포함한다. 일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 YASQSIS(서열번호 5)를 포함하는 경쇄 CDR2를 포함한다. 일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 QNGHSFPLT(서열번호 6)를 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함한다: (i) 서열 RASQSISDYLH(서열번호 4)를 포함하는 LC CDR1; (ii) 서열 YASQSIS (서열번호 5)를 포함하는 LC CDR2; 및 (iii) 서열 QNGHSFPLT(서열번호 6)를 포함하는 HC CDR3.
일부 특정 실시양태에 따르면, 항체 또는 단편은 서열 EYSMH(서열번호 1)를 포함하는 중쇄 CDR1 서열, 서열 GISPNSGGTSYNQKFKG(서열번호 2)를 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 RDFHSSFDY(서열번호 3)을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 RASQSISDYLH(서열번호 4)를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 YASQSIS(서열번호 5)를 포함하는 경쇄 CDR2 및 서열 QNGHSFPLT(서열번호 6)를 포함하는 경쇄 CDR3, 또는 초가변 영역(HVR) 서열에서 5% 이하의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 포함하는 이의 유사체를 포함한다.
일부 특정 실시양태에 따르면, 항체 또는 단편은 하기로 이루어진 6개의 CDR 서열의 세트를 포함한다:
i. 서열번호 1에 제시된 서열을 갖는 중쇄 CDR1;
ii. 서열번호 2에 제시된 서열을 갖는 중쇄 CDR2;
iii. 서열번호 3에 제시된 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
iv. 서열번호 4에 제시된 서열을 갖는 경쇄 CDR1;
v. 서열번호 5에 제시된 서열을 갖는 경쇄 CDR2; 및
vi. 서열번호 6에 제시된 서열을 갖는 경쇄 CDR3.
일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 7에 제시된 중쇄 가변 영역, 또는 중쇄 가변 영역 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체를 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 8에 제시된 경쇄 가변 영역, 또는 경쇄 가변 영역 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체를 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 12에 제시된 경쇄 가변 영역, 또는 경쇄 가변 영역 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체를 포함한다.
특정 실시양태에 따르면, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 7에 제시된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 8에 제시된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역, 또는 경쇄 및/또는 중쇄 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체를 포함한다.
특정 실시양태에 따르면, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 7에 제시된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 12에 제시된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역, 또는 경쇄 및/또는 중쇄 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체를 포함한다.
특정 실시양태에 따르면, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 7에 제시된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 및 서열번호 12에 제시된 서열을 갖는 2개의 상이한 경쇄 가변 영역 또는 경쇄 및/또는 중쇄 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체를 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 항체는 단리된 모노클로날 항체이다.
일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 이의 단편은 적어도 5×10-9M의 친화도로 인간 NKp46을 인식한다. 다른 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 적어도 10-9M, 5×10-10M, 10-10M, 5×10-11M, 10-11M, 10-12M, 10-13M 이상의 친화도로 인간 NKp46에 결합한다. 일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 10-9M 내지 10-14M 범위의 친화도로 인간 NKp46에 결합한다. 일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 10-9M 내지 10-10M 범위의 친화도로 인간 NKp46에 결합한다. 일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 10-10M 내지 10-11M 범위의 친화도로 인간 NKp46에 결합한다. 일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 10-11M 내지 10-16M 범위의 친화도로 인간 NKp46에 결합한다. 일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 10-11M보다 높은 친화도로 인간 NKp46에 결합한다. 일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 10-12M보다 높은 친화도로 인간 NKp46에 결합한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다.
일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 이의 단편은 적어도 5×10-11M의 친화도로 인간 NKp46(서열번호 13)의 D2 도메인을 인식한다. 일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 이의 단편은 적어도 5×10-13M의 친화도로 인간 NKp46의 D2 도메인을 인식한다. 일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 이의 단편은 적어도 5×10-14M의 친화도로 인간 NKp46의 D2 도메인을 인식한다. 일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 이의 단편은 적어도 5×10-15M의 친화도로 인간 NKp46의 D2 도메인을 인식한다. 일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 10-13M 내지 10-16M 범위의 친화도로 인간 NKp46의 D2 도메인을 인식한다.
상기 단리된 항체 및 단편의 유사체 및 유도체도 본 발명의 범위 내에 있다.
일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편 유사체는 참조 항체 서열의 초가변 영역과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는다.
특정 실시양태에 따르면, 단리된 항체 또는 이의 단편의 유사체 또는 유도체는 참조 항체 서열의 가변 영역과 적어도 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%의 서열 동일성을 갖는다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다.
일부 실시양태에 따르면, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 서열번호 7에 제시된 중쇄 가변 영역, 또는 상기 서열과 적어도 95%의 서열 유사성(sequence similarity)을 갖는 유사체를 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열번호 8 및/또는 서열번호 12에 제시된 경쇄 가변 영역, 또는 상기 서열과 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 유사체를 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 중쇄는 서열번호 7을 포함하고, 경쇄는 서열번호 8 또는 서열번호 12를 포함한다. 상기 중쇄 또는 경쇄와 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 단편도 포함된다.
일부 실시양태에 따르면, 유사체는 상기 기재된 항체 경쇄 또는 중쇄 가변 영역과 적어도 96, 97, 98 또는 99%의 서열 유사성 또는 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에 따르면, 유사체는 초가변 영역의 하나 이상의 CDR 서열, 즉 서열번호 1, 2, 3, 4, 5 및 6에 제시된 CDR 서열 중 어느 하나에 대해, 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다. 일부 실시양태에 따르면, 아미노산 치환은 보존적 치환이다.
일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 상기 정의된 경쇄 및 중쇄 영역을 갖는 초가변 영역(HVR)을 포함하고, 여기서 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환, 결실 및/또는 부가된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다.
일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 상기 정의된 경쇄 및 중쇄 영역을 갖는 HVR을 포함하고, 여기서 하나의 아미노산이 치환된다. 특정 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 하나의 아미노산이 치환된 상기 정의된 CDR을 포함한다.
특정 실시양태에 따르면, 항체는 키메라 항체 및 항체의 적어도 항원-결합 부분을 포함하는 항체 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 특정 실시양태에 따르면, 항체는 키메라 항체이다. 또 다른 실시양태에 따르면, 키메라 항체는 인간 불변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에 따르면, 항체 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fd', Fv, dAb, 단리된 CDR 영역, 일본쇄(single chain) 가변 영역(scFv), 일본쇄 항체(scab), "디아바디" 및 "선형 항체"로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다.
일부 실시양태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 마우스 IgG1, 마우스 IgG2a, 마우스 IgG2b, 마우스 IgG3, 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3 및 인간 IgG4로 이루어진 그룹으로부터 선택된 불변 영역을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다.
일부 특정 실시양태에 따르면, 모노클로날 항체는 키메라 모노클로날 항체이다.
일부 실시양태에 따르면, 키메라 항체는 인간 유래의 불변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 키메라 항체의 인간 불변 영역은 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3, 및 인간 IgG4로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 실시양태에 따르면, 키메라 항체의 인간 불변 영역은 인간 IgG1 및 인간 IgG2로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본 발명은 또한, 본 명세서에 기재된 mAb 중 임의의 6개의 CDR의 세트를 포함하는 인간화 mAb를 제공한다.
일부 실시양태에 따르면, 인간화 항체 또는 항체 단편은, 6개 CDR의 세트, 서열 EYSMH(서열번호 1)를 포함하는 중쇄 CDR1 서열, 서열 GISPNSGSGTSSYNQKFKG(서열번호 2)를 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 RDFHSSFDY(서열번호 3)를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 RASQSISDYLH(서열번호 4)를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 YASQSIS(서열번호 5)를 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 QNGHSFPLT(서열번호 6)를 포함하는 경쇄 CDR3, 또는 초가변 영역(HVR) 서열에서 5% 이하의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 포함하는 이의 유사체를 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 인간화 항체 또는 항체 단편은 하기로 이루어진 6개의 CDR 서열의 세트를 포함한다:
i. 서열번호 1에 제시된 서열을 갖는 중쇄 CDR1;
ii. 서열번호 2에 제시된 서열을 갖는 중쇄 CDR2;
iii. 서열번호 3에 제시된 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
iv. 서열번호 4에 제시된 서열을 갖는 경쇄 CDR1;
v. 서열번호 5에 제시된 서열을 갖는 경쇄 CDR2; 및
vi. 서열번호 6에 제시된 서열을 갖는 경쇄 CDR3.
일부 실시양태에 따르면, 인간화 항체는 서열번호 14의 중쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 가변 영역 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체를 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 인간화 항체는 서열번호 15 및 서열번호 16으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 가변 영역 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체를 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 인간화 항체는 중쇄 및 경쇄의 세트를 포함하고, 여기서 상기 세트는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된다:
i. 서열번호 14 및 15; 및
ii. 서열번호 14 및 16.
일부 실시양태에 따르면, 이의 6개의 CDR 서열에 의해 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항체 단편을 포함하는 접합체가 제공된다.
본 발명에 따른 항체 또는 이의 단편은 방사성 모이어티 또는 동정가능한 모이어티에 결합할 수 있다.
인간 NKp46에 대해 높은 친화성 및 특이성을 갖는 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열, 및 이들 폴리뉴클레오티드 서열을 갖는 벡터 및 숙주 세포가 본 발명의 다른 측면에 따라 제공된다.
일부 실시양태에 따르면, 상기 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열이 제공된다.
일부 실시양태에 따르면, 폴리뉴클레오티드 서열은 하기가 결합하는 인간 NKp46 단백질 내의 에피토프에 결합할 수 있는 항체 또는 항체 단편 또는 쇄를 코딩한다: (i) 서열번호 7의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8의 경쇄 가변 영역을 갖는 항체(본 명세서에서 클론 K4로서 동정됨); 또는 (ii) 서열번호 7의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 및/또는 서열번호 12의 경쇄 가변 영역을 갖는 항체(본 명세서에서 클론 K3으로 동정됨).
일부 실시양태에 따르면, 폴리뉴클레오티드 서열은 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열에 제시된 서열을 포함하는 항체 또는 항체 단편 또는 쇄를 코딩한다: (i) 서열번호 7 및 서열번호 8; 및 (ii) 서열번호 7 및 서열번호 12. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다.
추가의 일부 실시양태에 따르면, 본 발명에 따른 폴리뉴클레오티드 서열은 6개의 CDR의 세트를 포함하는 항체 또는 항체 단편 또는 이의 쇄를 코딩하고, 여기서 HC CDR1은 EYSMH(서열번호 1)이고; HC CDR2는 GISPNSGSGTSSYNQKFKG(서열번호 2)이고; HC CDR3은 RDFHSSFDY(서열번호 3)이고; LC CDR1은 RASQSISDYLH(서열번호 4)이고; LC CDR2는 YASQSIS(서열번호 5)이고; LC CDR3은 QNGHSFPLT(서열번호 6)이다.
일부 실시양태에 따르면, 상기 정의된 폴리뉴클레오티드 서열은 적어도 항원-결합 부분을 포함하는 적어도 하나의 항체 쇄 또는 항체 단편을 코딩한다.
일부 실시양태에 따르면, 폴리뉴클레오티드 서열은 서열번호 7에 제시된 서열을 포함하는 모노클로날 항체 중쇄 가변 영역 또는 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 코딩한다.
일부 실시양태에 따르면, 폴리뉴클레오티드 서열은 서열번호 8에 제시된 서열을 포함하는 모노클로날 항체 경쇄 가변 영역 또는 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 코딩한다.
일부 실시양태에 따르면, 폴리뉴클레오티드 서열은 서열번호 12에 제시된 서열을 포함하는 모노클로날 항체 경쇄 가변 영역 또는 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 코딩한다.
특정 실시양태에 따르면, 항체는 2개의 상이한 경쇄를 갖는 모노클로날 항체이다. 특정 실시양태에 따르면, 항체는 서열번호 8 및 서열번호 12에 제시된 경쇄를 갖는 모노클로날 항체이다.
본 발명은, 일부 실시양태에 따라, 상기 개시된 적어도 하나의 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 적어도 하나의 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다.
추가의 측면에서, 본 발명은, 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 쇄 또는 이의 단편을 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 핵산 작제물을 제공한다. 일부 실시양태에 따르면, 핵산 작제물은 플라스미드이다.
일부 실시양태에 따르면, 플라스미드는 서열번호 9, 서열번호 10 및 서열번호 11로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열에 제시된 적어도 하나의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 정의된 특정 CDR 서열 및/또는 특정 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 항체 단편을 생산할 수 있는 세포를 제공한다.
일부 실시양태에 따르면, 상기 개시된 적어도 하나의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 세포가 제공된다.
일부 실시양태에 따르면, 모노클로날 항체를 생산하는 세포는 하이브리도마 세포이다.
일 측면에 따르면, 본 발명은 본 명세서에 기재된 항체 또는 항체 단편의 결합 부위를 포함하는 다중특이적 결합 분자를 제공한다.
일부 실시양태에 따르면, 다중특이적 분자는 6개의 CDR의 세트를 포함하는 결합 부위를 포함하고, 여기서 HC CDR1은 EYSMH(서열번호 1)이고; HC CDR2는 GISPNSGSGTSSYNQKFKG(서열번호 2)이고; HC CDR3은 RDFHSSFDY(서열번호 3)이고; LC CDR1은 RASQSISDYLH(서열번호 4)이고; LC CDR2는 YASQSIS(서열번호 5)이고; LC CDR3은 QNGHSFPLT(서열번호 6)이다.
일부 실시양태에 따르면, 다중특이적 분자는 NKp46-관여 분자에 대한 상이한 결합 부위를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에 따르면, 다중특이적 분자는 NK 세포 관여 분자에 대한 결합 부위를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에 따르면, 다중특이적 결합 분자는 다른 NK 인게이저, CD160 또는 CD16에 특이적인 결합 부위를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 다중특이적 결합 분자는 종양 항원, 바이러스 항원, 세균 항원 또는 진균 항원에 특이적인 결합 부위를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 다중특이적 결합 분자는 종양 항원에 특이적인 결합 부위를 추가로 포함한다. 특정 실시양태에 따르면, 다중특이적 결합 분자는 추가로, PDL-1, CD38, BCMA 또는 GPC3을 포함하지만 이들로 한정되지 않는, 혈액 또는 고형 종양에 특이적인 결합 부위를 포함한다.
추가의 실시양태에 따르면, 다중특이적 결합 분자는 바이러스 항원에 특이적인 결합 부위를 추가로 포함한다. 특정 실시양태에 따르면, 다중특이적 결합 분자는 스파이크 단백질 1에 특이적인 결합 부위를 추가로 포함한다. 특정 실시양태에 따르면, 다중특이적 결합 분자는 ACE2에 특이적인 결합 부위를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 진균 항원은 Epa1, Epa6 및 Epa7로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 실시양태에 따르면, 다중특이적 결합 분자는 사이토카인에 융합 또는 접합된다. 특정 실시양태에 따르면, 다중특이적 결합 분자는 IL-2, IL-8, IL-10, IL-12, IL-15, IL-21, IFN-α, TNF-α, GM-CSF, TGF-β 및 VEGF로 이루어진 그룹으로부터 선택된 사이토카인에 융합 또는 접합된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다.
일부 실시양태에 따르면, 다중특이적 분자는 6개의 CDR의 세트를 포함하는 결합 부위를 포함하는 이중특이적 항체이고, 여기서 HC CDR1은 EYSMH(서열번호 1)이고; HC CDR2는 GISPNSGGTSYNQKFKG(서열번호 2)이고; HC CDR3은 RDFHSSFDY(서열번호 3)이고; LC CDR1은 RASQSISDYLH(서열번호 4)이고; LC CDR2는 YASQSIS(서열번호 5)이고; LC CDR3은 QNGHSFPLT(서열번호 6)이다.
일부 실시양태에 따르면, 이중특이적 항체는 종양 항원, 바이러스 항원, 세균 항원 또는 진균 항원에 특이적인 결합 부위를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 이중특이적 항체는 바이러스 항원에 특이적인 결합 부위를 추가로 포함한다. 특정 실시양태에 따르면, 바이러스 항원은 코로나바이러스, 인플루엔자 바이러스, 인간 메타뉴모바이러스(HMPV), 인간 사이토메갈로바이러스(HCMV), 센다이 바이러스, 뉴캐슬병 바이러스 및 폭스바이러스로 이루어진 그룹으로부터 선택된 바이러스의 것이다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다.
일부 실시양태에 따르면, 바이러스는 포유동물 또는 조류 바이러스이다.
일부 특정 실시양태에 따르면, 포유동물 바이러스는 인간 바이러스이다.
일부 실시양태에 따르면, 코로나바이러스는 SARS 및 MERS 바이러스로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 특정 실시양태에 따르면, 코로나바이러스는 SARS-CoV-2(COVID-19)이다.
일부 특정 실시양태에 따르면, 포유동물 인플루엔자 바이러스는 인간 인플루엔자 바이러스 및 돼지 인플루엔자 바이러스로부터 선택된다.
일부 실시양태에 따르면, 다중특이적 분자는 NKp46 관여 분자에 대한 결합 부위를 추가로 포함하는 삼중특이적 항체이다. 일부 실시양태에 따르면, 다중특이적 분자는 NK 인게이저에 대한 결합 부위를 추가로 포함하는 삼중특이적 항체이다. 일부 실시양태에 따르면, 다중특이적 분자는 CD160 또는 CD16에 대한 결합 부위를 추가로 포함하는 삼중특이적 항체이다.
일부 실시양태에 따르면, 다중특이적 분자는 종양, 바이러스 항원, 세균 항원 또는 진균 항원에 대한 결합 부위를 추가로 포함하는 삼중특이적 항체이다.
일부 실시양태에 따르면, 삼중특이적 항체는 사이토카인에 융합된다. 특정 실시양태에 따르면, 삼중특이적 항체는 IL15에 융합된다.
특정 실시양태에 따르면, 삼중특이적 결합 분자는 (i) 본 명세서에 기재된 항체 또는 항체 단편; (ii) CD160 또는 CD16에 특이적인 항체 또는 이의 단편; (iii) 종양 항원에 특이적인 항체 또는 이의 단편의 결합 부위를 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 다중특이적 결합 분자는 폴리펩티드 또는 폴리펩티드의 다량체이다. 일부 실시양태에 따르면, 각각의 폴리펩티드는 단일특이적, 이중특이적, 및 삼중특이적 폴리펩티드로부터 독립적으로 선택된다.
일부 실시양태에 따르면, 삼중특이적 결합 분자는 하나 이상의 scFv 분자로 이루어지거나, 또는 이를 포함한다.
또 다른 측면에 따르면, 본 발명은, 활성 성분으로서, 높은 친화성 및 특이성으로 인간 NKp46 D2 도메인을 인식하는 적어도 하나의 항체 또는 이의 항체 단편, 및 임의로 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제(excipient), 희석제, 염 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공하고, 상기 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편은 NKp46과 이의 리간드의 상호작용을 차단하지 않는다.
일부 실시양태에 따르면, 약제학적 조성물은 6개의 CDR의 세트를 포함하는 적어도 하나의 모노클로날 항체를 포함하고, 여기서 HC CDR1은 EYSMH(서열번호 1)이고; HC CDR2는 GISPNSGGTSYNQKFKG(서열번호 2)이고; HC CDR3은 RDFHSSFDY(서열번호 3)이고; LC CDR1은 RASQSISDYLH(서열번호 4)이고; LC CDR2는 YASQSIS(서열번호 5)이고; LC CDR3은 QNGHSFPLT(서열번호 6)이다.
일부 실시양태에 따르면, 약제학적 조성물은 서열번호 7에 제시된 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 단편을 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 약제학적 조성물은 서열번호 8, 서열번호 12 및 둘 모두로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다.
특정 실시양태에 따르면, 약제학적 조성물은 서열번호 7에 제시된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 또는 서열번호 12에 제시된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 단편을 포함한다.
본 발명의 항체의 일본쇄 가변 영역(scFv) 분자도 제공된다. scFv 분자는 하나의 폴리펩티드 쇄에서 발현되는 항체의 항원-결합 부위를 포함한다. 일부 실시양태에 따르면, 본 발명은 항-NKp46 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 scFv 분자를 제공한다. 특정 실시양태에 따르면, scFv는 2개의 가변 영역 사이에 힌지 영역을 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, scFv는 6개의 CDR의 세트를 포함하는 NKp46 결합 부위를 포함하고, 여기서 HC CDR1은 EYSMH(서열번호 1)이고; HC CDR2는 GISPNSGGTSYNQKFKG(서열번호 2)이고; HC CDR3은 RDFHSSFDY(서열번호 3)이고; LC CDR1은 RASQSISDYLH(서열번호 4)이고; LC CDR2는 YASQSIS(서열번호 5)이고; LC CDR3은 QNGHSFPLT(서열번호 6)이다.
일부 실시양태에 따르면, scFv는 서열번호 14에 제시된 서열, 또는 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, scFv는 서열번호 15에 제시된 서열, 또는 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, scFv는 서열번호 16에 제시된 서열, 또는 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, scFv는 서열번호 14 및 서열번호 15에 제시된 서열을 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, scFv는 서열번호 14 및 서열번호 16에 제시된 서열을 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면에 따르면, NKp46에 결합할 수 있는 세포외 부분(결합 도메인)을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)가 제공되고, CAR은 본 명세서에 기재된 제공된 항체 또는 이의 단편 중에서 임의로 포함하는 세포외 부분을 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, CAR은 6개의 CDR의 세트를 포함하는 NKp46 결합 부위를 포함하고, 여기서 HC CDR1은 EYSMH(서열번호 1)이고; HC CDR2는 GISPNSGGTSYNQKFKG(서열번호 2)이고; HC CDR3은 RDFHSSFDY(서열번호 3)이고; LC CDR1은 RASQSISDYLH(서열번호 4)이고; LC CDR2는 YASQSIS(서열번호 5)이고; LC CDR3은 QNGHSFPLT(서열번호 6)이다.
일부 실시양태에 따르면, CAR은 6개의 CDR의 세트; 및 막관통 도메인, 및 세포내 T 세포 신호전달 도메인을 포함하고, 여기서 HC CDR1은 EYSMH(서열번호 1)이고; HC CDR2는 GISPNSGGTSYNQKFKG(서열번호 2)이고; HC CDR3은 RDFHSSFDY(서열번호 3)이고; LC CDR1은 RASQSISDYLH(서열번호 4)이고; LC CDR2는 YASQSIS(서열번호 5)이고; LC CDR3은 QNGHSFPLT(서열번호 6)이다.
일부 실시양태에 따르면, 본 명세서에 기재된 CAR을 발현하도록 조작된 림프구가 제공된다.
일부 실시양태에 따르면, 본 명세서에 기재된 CAR을 발현하도록 조작된 T 세포가 제공되고, CAR-T로 표시된다. 특정 실시양태에 따르면, 본 명세서에 기재된 CAR을 발현하도록 조작된 NK 세포가 제공되고, CAR-NK로 표시된다.
일부 실시양태에 따르면, 본 명세서에 기재된 CAR을 발현하도록 조작된 림프구 집단(population)이 제공된다. 특정 실시양태에 따르면, 본 명세서에 기재된 CAR을 발현하도록 조작된 T 세포 또는 NK 세포의 집단이 제공된다.
일부 실시양태에 따르면, CAR은 본 명세서에 기재된 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 일본쇄 가변 영역(scFv)을 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, CAR은 scFv 서열, CD8 Stalk 도메인, CD28 TM 도메인, 41BB 도메인, 및 CD3ζ(CD3Z, 제타) 도메인으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 단백질 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에 따르면, CAR은 scFv 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, CAR은 본 명세서에 개시된 항체의 NKp46 결합 부위, 및 CD8 Stalk 도메인, CD28 TM 도메인, 41BB 도메인, 및 CD3Z 도메인으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 도메인을 포함하는 scFv 서열을 포함한다.
일 측면에 따르면, 본 발명은 본 명세서에 기재된 CAR을 포함하는 적어도 하나의 림프구의 치료 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 암을 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에 따르면, 약제학적 조성물은 본 명세서에 기재된 적어도 하나의 항체 또는 이의 항체 단편, CAR, 또는 다중특이적 항체를 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 암 면역요법 또는 바이러스 감염에 대한 면역 반응의 증강에 사용하기 위한 것이다.
본 발명의 일부 실시양태에 따르면, 암은 전이성 암이다. 일부 실시양태에 따르면, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 대상체에서 전이의 형성 또는 분포를 억제하거나, 또는 전이의 총 수를 감소시키기 위해 사용하기 위한 것이다.
본 발명의 일부 실시양태에 따르면, 암은 백혈병(leukemia), 림프종(lymphoma), 흑색종(melanoma), 유방암(breast cancer), 난소암(ovarian cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 결장직장암(colorectal cancer), 결장암(colon cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 신장암(kidney cancer), 폐암(lung cancer), 갑상선암(thyroid cancer), 전립선암(prostate cancer), 뇌암(brain cancer), 신장암(renal cancer), 후두암(throat cancer), 후두암(laryngeal carcinoma), 방광암(bladder cancer), 간암(hepatic cancer), 섬유육종(fibrosarcoma), 자궁내막세포암(endometrial cells cancer), 교아종(glioblastoma), 육종(sarcoma) 및 골수종(myeloid)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다.
일부 실시양태에 따르면, 고형 종양은 CAR-T 또는 CAR-NK에 의해 치료된다. 특정 실시양태에 따르면, 고형 종양은 CAR-T에 의해 치료된다. 또 다른 실시양태에 따르면, 혈액암은 CAR-NK 또는 CAR-T 세포로 치료된다. 특정 실시양태에 따르면, 혈액암은 CAR-NK 세포로 치료된다.
특정 실시양태에 따르면, 암은 흑색종, 유방암, 결장직장암, 신장암, 폐암, 전립선암 및 뇌암으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다.
다른 실시양태에 따르면, 암은 혈액암이다. 일부 실시양태에 따르면, 약제학적 조성물은 인간 림프구와 함께 암을 치료하는데 사용하기 위한 것이다.
일부 실시양태에 따르면, 인간 림프구는 T 세포, NK 세포 및 NKT 세포로 이루어진 그룹으로부터 선택된 킬러 세포이다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다.
일부 실시양태에 따르면, 킬러 세포는 자가유래 또는 동종이계이다.
또 다른 측면에 따르면, 본 발명은, 본 명세서에 기재된 적어도 하나의 항체 또는 이의 항체 단편, CAR, 또는 다중특이적 항체를 포함하는 치료 유효량의 약제학적 조성물을, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암을 치료하는 방법을 제공한다.
암은 상기 기재한 바와 같다.
본 발명의 일부 실시양태에 따르면, 치료 유효량은 대상체에서 종양 크기 또는 전이 수를 감소시킨다.
일부 실시양태에 따르면, 암을 치료하는 방법은 적어도 하나의 추가의 항암 요법을 투여 또는 실시하는 단계를 포함한다. 특정 실시양태에 따르면, 추가의 항암 요법은 수술, 화학요법, 방사선 요법, 또는 면역요법이다.
일부 실시양태에 따르면, 암을 치료하는 방법은 본 명세서에 기재된 적어도 하나의 항체, 이의 항체 단편, 삼중특이적 결합 분자, CAR 또는 이중특이적 항체, 및 추가의 항암제의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에 따르면, 추가의 항암제는 면역조절제, 활성화된 림프구 세포, 키나제 억제제 및 화학요법제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
다른 실시양태에 따르면, 면역 조절제는 인간 NKp46 이외의 항원에 결합하는 항체, 항체 단편 또는 항체 접합체이다.
일부 실시양태에 따르면, 면역 조절제는 면역 체크포인트 분자(immune checkpoint molecule)에 대한 항체이다. 일부 실시양태에 따르면, 추가의 면역 조절제는 인간 프로그램된 세포 사멸 단백질 1(PD-1), PD-L1 및 PD-L2, 암태아성 항원-관련 세포 부착 분자 1(CEACAM1), 림프구 활성화 유전자 3(LAG3), CD137, OX40(CD134라고도 함), 킬러 세포 면역글로불린-유사 수용체(KIR), TIGIT, PVR, CTLA-4, NKG2A, GITR 및 기타 체크포인트 분자 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 면역 체크포인트 분자에 대한 항체이다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다. 특정 실시양태에 따르면, 추가의 면역 조절제는 PD-1에 대한 항체이다. 일부 실시양태에 따르면, 추가의 면역 조절제는 CTLA-4에 대한 항체이다.
일부 실시양태에 따르면, 항암제는 에르비탁스, 시타라빈, 플루다라빈, 플루오로우라실, 메르캅토푸린, 메토트렉세이트, 티오구아닌, 겜시타빈, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 카르무스틴, 로무스틴, 클로람부실, 클로람부실, 사이클로포스파미드, 시스플라틴, 카보플라틴, 이포스파미드, 메클로르에타민, 멜팔란, 티오테파, 다카르바진, 블레오마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 이다루비신, 마이토마이신, 미톡산트론, 플리카마이신, 에토포사이드, 테니포사이드, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다.
일부 실시양태에 따르면, 항암제는 상피 성장 인자 수용체(EGFR) 억제제이다. 일부 실시양태에 따르면, EGFR 억제제는 세툭시맙(Erbitux®), 파니투무맙(Vectibix®) 및 네시투무맙(Portrazza®)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다
본 발명의 일부 실시양태에 따르면, 대상체는 인간 대상체이다.
본 발명의 일부 실시양태에 따르면, 이의 사용은 면역 공-억제 수용체의 활성 또는 발현을 하향조절하는 약제의 용도를 추가로 포함한다.
본 발명의 일부 실시양태에 따르면, 면역 공-억제 수용체는 PD-1, TIGIT, PVR, CTLA-4, LAG3, TIM3, BTLA, VISTA, B7H4, CD96, BY55(CD 160), LAIR1, SIGLEC10 및 2B4로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다.
일부 실시양태에 따르면, 암을 치료하는 방법은 대상체에서 전이의 형성, 성장 또는 확산을 예방 또는 감소시키는 단계를 수반한다.
추가의 측면에 따르면, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 감염을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 본 명세서에 기재된 적어도 하나의 항체, 이의 항체 단편, 다중특이적 결합 분자, 또는 CAR을 포함하는 치료 유효량의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다.
일부 실시양태에 따르면, 감염은 바이러스 감염, 세균 감염 및 진균 감염으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
특정 실시양태에 따르면, 바이러스 감염은 코로나바이러스, 인플루엔자 바이러스, 인간 메타뉴모바이러스(HMPV), 인간 사이토메갈로바이러스(HCMV), 센다이 바이러스, 뉴캐슬병 바이러스 및 폭스바이러스로 이루어진 그룹으로부터 선택된 바이러스에 의한 것이다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다.
일부 실시양태에 따르면, 바이러스 감염은 포유동물 또는 조류 바이러스에 의해 유발된다.
일부 특정 실시양태에 따르면, 포유동물 바이러스는 인간 바이러스이다.
일부 실시양태에 따르면, 코로나바이러스는 SARS, MERS 및 COVID-19로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 특정 실시양태에 따르면, 포유동물 인플루엔자 바이러스는 인간 인플루엔자 바이러스 및 돼지 인플루엔자 바이러스로부터 선택된다.
일 측면에 따르면, 본 발명은 대상체에서 암을 진단 또는 예후 진단하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 본 명세서에 기재된 적어도 하나의 항체를 사용하여 상기 대상체의 생물학적 샘플 중의 NKp46의 발현 수준을 결정하는 단계를 포함한다.
본 발명은, 또 다른 측면에 따르면, 샘플 중의 NKp46을 결정 또는 정량하는 방법을 추가로 포함하고, 상기 방법은 생물학적 샘플을 항체 또는 항체 단편과 접촉시키는 단계 및 복합체 형성의 수준을 측정하는 단계를 포함하고, 항체 또는 항체 단편은 6개의 CDR의 세트를 포함하고, 여기서 HC CDR1은 EYSMH(서열번호 1)이고; HC CDR2는 GISPNSGGTSYNQKFKG(서열번호 2)이고; HC CDR3은 RDFHSSFDY(서열번호 3)이고; LC CDR1은 RASQSISDYLH(서열번호 4)이고; LC CDR2는 YASQSIS(서열번호 5)이고; LC CDR3은 QNGHSFPLT(서열번호 6)이다.
일부 실시양태에 따르면, 항체는 중쇄 및 경쇄의 세트를 포함하고, 여기서 상기 세트는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된다:
i. 서열번호 14 및 15; 및
ii. 서열번호 14 및 16.
결정 및 정량화 방법은, 일부 실시양태에 따라, 시험관내 또는 생체외에서 수행될 수 있거나, 또는 NKp46의 발현과 관련된 상태를 진단하는데 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 항체는 또한 스크리닝 방법을 구성하는데 사용될 수 있다. 예를 들면, 효소-결합 면역흡착 검정법(ELISA), 또는 방사선 면역검정(RIA), 및 IHC 또는 FACS 등의 방법을, 당해 기술분야에 공지된 항체 또는 방법을 사용하여 분비된 또는 세포-결합된 폴리펩티드의 수준을 측정하기 위해 구축할 수 있다.
일부 실시양태에 따르면, 세포 상에서 발현되거나, 또는 생물학적 매질로 분비된 NKp46의 존재를 검출 또는 정량화하는 방법은 하기 단계를 포함한다:
i. 본 명세서에 기재된 항원 결합 부분을 적어도 포함하는, 인간 NKp46에 특이적인 항체 또는 이의 항체 단편과 함께 샘플을 인큐베이팅하는 단계; 및
ii. 검출가능한 프로브를 사용하여 결합된 NKp46을 검출하는 단계.
일부 실시양태에 따르면, 상기 방법은 하기 단계를 추가로 포함한다:
iii. (ii)의 양을, 공지된 양의 NKp46을 포함하는 참조 샘플로부터 수득된 표준 곡선과 비교하는 단계; 및
iv. 표준 곡선으로부터 샘플 중의 NKp46 양을 계산하는 단계.
일부 특정 실시양태에 따르면, 샘플은 체액이다.
일부 실시양태에 따르면, 상기 방법은 시험관내 또는 생체외에서 수행된다.
일부 실시양태에 따르면, 검출 또는 진단에 사용되는 항체 또는 항체 단편은 6개의 CDR의 세트, 서열 EYSMH(서열번호 1)를 포함하는 중쇄 CDR1 서열, 서열 GISPNSGSGTSSYNQKFKG(서열번호 2)을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 RDFHSSFDY(서열번호 3)를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 RASQSISDYLH(서열번호 4)를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 YASQSIS(서열번호 5)를 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 QNGHSFPLT(서열번호 6) 를 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다.
본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 포함하는, 생물학적 샘플 중의 NKp46의 발현 또는 존재를 측정하기 위한 키트(kit)가 또한 제공된다. 일부 실시양태에 따르면, 키트는 6개의 CDR의 세트를 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함하고, 여기서 HC CDR1은 EYSMH(서열번호 1)이고; HC CDR2는 GISPNSGGTSYNQKFKG(서열번호 2)이고; HC CDR3은 RDFHSSFDY(서열번호 3)이고; LC CDR1은 RASQSISDYLH(서열번호 4)이고; LC CDR2는 YASQSIS(서열번호 5)이고; LC CDR3은 QNGHSFPLT(서열번호 6)이다.
일 측면에 따르면, 본 발명은 암을 진단 또는 병기 분류하기 위한 키트를 제공하고, 진단 키트는 본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 항체 단편을 포함한다.
본 발명의 추가 실시양태 및 적용가능성의 전체 범위는 하기 상세한 설명으로부터 명백해질 것이다. 그러나, 상세한 설명 및 특정 예는, 본 발명의 바람직한 실시양태를 도시하지만, 본 발명의 정신 및 범위 내의 다양한 변경 및 수정이 이러한 상세한 설명으로부터 당업자에게 명백해질 것이기 때문에, 단지 예시로서 제공되는 것으로 이해되어야 한다.
도 1. 항-NKp46 mAb 결합 부위의 동정. 이 도는 NKp46 D1 도메인(D1-Ig), NKp46 D2 도메인(D2-Ig) 또는 완전한 NKp46 단백질-Ig(46-Ig)에 대한 항-NKp46 mAb(시판되는 항-NKp46(9E2), 461-G1, 02, K3 및 P4)의 결합을 나타낸다.
도 2. NK 세포의 표면으로부터 NKp46의 하향조절. 활성화된 벌크 NK 세포 배양물을 표시된 항-NKp46 mAb(9E2, 461-G1, 02, K3, P4)와 함께 4℃(흑색 히스토그램) 또는 37℃(적색 히스토그램)에서 8시간 동안 인큐베이팅하고, 이어서 2차 항체(항-m647)로 FACS 염색한다. 채워진 회색 히스토그램은 4℃에서 처리된 세포 단독의 2차 항체에 의한 염색을 나타낸다. 37℃에서 처리된 세포의 배경은 유사했다(데이터는 도시되지 않음). 도는 수행된 5개의 대표적 실험 중 하나를 나타낸다.
도 3. 항체의 용량 반응. 2명의 공여자, NK1 및 NK2로부터 1차 활성화된 벌크 인간 NK 세포(컬러 히스토그램)의 항-NKp46 mAb(9E2, 461-G1, K3, P4)를 사용한 FACS 염색. 채워진 회색 히스토그램은 2차 항체 단독에 의한 NK 세포의 염색을 나타낸다. 완전한 회색 컬럼 = 2차 ab 단독(m-647). 상이한 농도의 항체(0.5μg, 0.1μg, 0.05μg, 0.01μg, 0.005μg, 0.001μg, 0.005μg 또는 0.0001μg/웰)의 결과가 표시된다(고농도-강력한 염색).
도 4A-4B. NKp46에 대한, 돌연변이된 IgG4를 갖는 인간화 P4(도 4A) 및 K3(도 4B) 항체의 친화도(nM).
도 5A-5D. NKp46 D2 도메인에 대한 NKp46 항체 P4 및 K3, 및 인간화 NKp46 항체의 결합 친화도를 나타낸다. NKp46, D1 도메인 및 D2 도메인의 구조는 각각 도 5A-5C에 제시되어 있다. D2 도메인에 대한 친화도 값(Kd(M))은 도 5D에 제시되어 있다.
본 발명은 인간 NKp46에 대해 높은 친화성 및 특이성을 갖는 항체를 제공한다. 본 발명은 또한, 본 명세서에 기재된 항체의 결합 부위를 포함하는 다중특이적 결합 분자, 및 신규 항체의 결합 부위를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 제공한다. 항체 자체는 NKp46-보유 면역 세포에 영향을 미치지 않기 때문에, 작제물 또는 다중특이적 분자의 일부로서, 종양 세포 또는 바이러스 감염 세포 등의 특정 표적에 상기 면역 세포를 동원할 때에 사용될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "NKp46"은 자연 세포독성 유발 수용체 1(NCR1) 또는 CD335로도 공지된 자연 킬러 단백질 46을 지칭한다. NKp46에는 2개의 Ig-유사 세포외 도메인(D1 및 D2), 이어서 약 40개 잔기의 줄기 영역, I형 막관통 도메인 및 짧은 세포질 테일이 있다. NKp46은, HCV 및 기타 바이러스 감염 세포의 제거에 관여하는 주요 NK 세포 활성화 수용체이고, NK 세포와 T 세포 및 수지상 세포(DC) 등의 다른 면역 세포와의 상호작용을 조절하는 것으로 밝혀져 있다. 본 발명에 따른 예시적 NKp46은 UniPort 및 GenBank 심볼 또는 수탁 번호: UniProtKB-O76036(NCTR1_HUMAN) 및 유전자 ID: 9437로 제시된다. NKp46에는 2개의 Ig-유사 세포외 도메인(D1 및 D2), 이어서 약 40-잔기의 줄기 영역, I형 막관통 도메인, 및 짧은 세포질 테일이 있다. 134 아미노산 잔기(이소형 a의 전장 단백질의 잔기 121-254에 상응)를 포함하는 D2 도메인(또는 NKp46D2). 인간 D2 도메인 서열의 예는 서열번호 13에서 발견할 수 있다.
본 발명에 따른 항체 또는 이의 단편은 NKp46의 에피토프에 결합한다. 구체적으로, 항체는 NKp46 단백질의 D2 도메인 내의 에피토프에 결합한다.
용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 모노클로날 항체(전장 또는 무손상 모노클로날 항체를 포함), 폴리클로날 항체, 다가 항체, 및 목적하는 생물학적 활성, 즉 인간 NKp46에 대한 결합을 나타내기에 충분한 길이의 항체 단편을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "에피토프" 또는 "항원 결정기"는 특정 항체와 특이적으로 반응하는 항원 분자의 영역을 지칭한다. 에피토프로부터 유래하는 펩티드 서열은, 동물을 면역화하고, 추가의 폴리클로날 또는 모노클로날 항체를 생산하기 위해, 당해 기술분야에 공지된 방법을 적용하여, 단독으로 또는 담체 모이어티와 조합하여 사용할 수 있다. 에피토프로부터 유래하는 단리된 펩티드는 항체를 검출하기 위한 진단 방법에 사용될 수 있다.
항체의 친화도는 표면 플라즈몬 공명(SPR) 등의 공지된 방법을 사용하여 정량할 수 있고(문헌[참조: Scarano S, Mascini M, Turner AP, Minunni M. Surface plasmon resonance imaging for affinity-based biosensors. Biosens Bioelectron. 2010, 25: 957-66]에 기재됨), 보다 낮은 Kd가 보다 높은 친화도를 반영하는 바와 같이, 예를 들면, 해리 상수 Kd를 사용하여 계산할 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 본 개시에서 "친화도"의 수치는 모두 해리 상수이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "항체"는 하나 이상의 면역글로불린-유사 항원-결합 도메인을 포함하는 임의의 폴리펩티드 또는 폴리펩티드 복합체를 지칭할 수 있다. 용어 "항체"는 폴리클로날 또는 모노클로날 항체(mAb) 등의 무손상 항체, 다중특이적 항체, 게다가 Fab 또는 F(ab')2 단편 등의 이의 단백질분해 단편, 일본쇄 항체 및 이의 복합체를 포함할 수 있다.
면역글로불린은 디설파이드 결합에 의해 서로 연결된 2개의 중쇄와 2개의 경쇄를 포함하고, 각 경쇄는 디설파이드 결합에 의해 각각의 중쇄에 "Y"자형의 배치로 연결된다. 항체의 단백질분해 소화는 Fv(가변 단편) 및 Fc(결정화 가능한 단편) 도메인을 형성한다. 항원 결합 도메인, Fab는 폴리펩티드 서열이 변화하는 영역을 포함한다. F(ab')2라는 용어는 디설파이드 결합에 의해 결합된 2개의 Fab' 아암(arm)을 나타낸다. 각 중쇄는 한쪽 말단에 가변 도메인(VH)이 있고, 이어서 다수의 불변 도메인(CH)이 계속된다. 각 경쇄는 한쪽 말단에 가변 도메인(VL)을, 다른 쪽 말단에 불변 도메인(CL)을 갖고, 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 정렬되고, 경쇄 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)과 정렬된다. 경쇄와 중쇄의 각 쌍의 가변 도메인은 항원-결합 부위를 형성한다. 경쇄 및 중쇄 도메인은 동일한 일반 구조를 갖고, 각 도메인은 4개의 프레임워크 영역으로 구성되며, 그 서열은 비교적 보존되고, 상보성 결정 영역(complementarity determining region)(CDR 1-3)으로 공지되어 있는 3개의 초가변 도메인에 의해 결합된다. 이 도메인은 항원-결합 부위의 특이성과 친화성에 기여한다.
소정 중쇄 또는 경쇄 가변 서열로부터의 CDR의 동정 또는 결정은 전형적으로 당해 기술분야에 공지된 몇몇 방법 중 하나를 사용하여 수행된다. 예를 들면, 이러한 결정은 Kabat[참조: Wu T.T and Kabat E.A., J Exp Med, 1970; 132:211-50] 및 IMGT[참조: Lefranc M-P, et al., Dev Comp Immunol, 2003, 27:55-77]에 따라 수행된다.
"서열을 갖는 CDR"이라는 용어 또는 유사한 용어가 사용되는 경우, CDR이 특정 서열을 포함하는 옵션, 및 CDR이 특정 서열로 이루어진 옵션도 포함한다.
항체의 항원 특이성은 초가변 영역(HVR), 즉 함께 항원-결합 부위를 형성하는 경쇄와 중쇄 둘 다의 고유한 CDR 서열을 기반으로 한다.
중쇄 이소형(감마, 알파, 델타, 엡실론 또는 뮤)에 의해, 면역글로불린의 클래스(각각 IgG, IgA, IgD, IgE 또는 IgM)가 결정된다. 경쇄는 2개의 이소형(카파, κ 또는 람다, λ) 중 어느 하나이다. 양쪽 동위체는 모든 항체 클래스에 포함되어 있다.
본 발명은 추가로, 인간 유래의 불변 영역을 포함하는 키메라 항체, 및 인간 NKp46에 특이적인 인간화 항체를 제공한다. 유리하게는, 인간화 항체는 항체에 대한 유해한 면역 반응의 위험을 회피하고, 따라서 인간에서 생체내 사용에 대해 안전하다.
항체 단편
"항체 단편"은, 일반적으로 무손상 항체의 항원-결합 부위를 포함하고, 따라서 항원에 결합하는 능력을 보유하는, 무손상 항체의 일부만을 포함한다. 본 정의에 포함되는 항체 단편의 예는 하기를 포함한다: (i) VL, CL, VH 및 CH1 도메인을 갖는 Fab 단편; (ii) CH1 도메인의 C-말단에 하나 이상의 시스테인 잔기를 갖는 Fab 단편인 Fab' 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인을 갖는 Fd 단편; (iv) VH 및 CH1 도메인 및 CH1 도메인의 C 말단에 하나 이상의 시스테인 잔기를 갖는 Fd' 단편; (v) 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인을 갖는 Fv 단편; (vi) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편[참조: Ward et al., Nature 1989, 341, 544-546]; (vii) 단리된 CDR 영역; (viii) F(ab')2 단편, 힌지 영역에서 디설파이드 가교에 의해 연결된 2개의 Fab' 단편을 포함하는 2가 단편; (ix) 일본쇄 항체 분자(예를 들면, 일본쇄 Fv; scFv)[참조: Bird et al., Science 1988, 242, 423-426; and Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 1988, 85,5879-5883]; (x) 동일한 폴리펩티드 쇄의 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하는, 2개의 항원-결합 부위를 갖는 "디아바디"(예를 들면, EP 404,097; WO 93/11161; 및 문헌[참조: Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, 90, 6444-6448]); (xi) 상보적 경쇄 폴리펩티드와 함께, 한 쌍의 항원 결합 영역을 형성하는 한 쌍의 탠덤 Fd 세그먼트(VH-CH1-VH-CH1)를 포함하는 "선형 항체"[참조: Zapata et al. Protein Eng., 1995, 8, 1057-1062; 및 미국 특허 제5,641,870호].
항체 단편의 생산을 위해 다양한 기술이 개발되어 왔다. 종래, 이들 단편은 무손상 항체의 단백질분해 소화에 의해 수득되었다[참조: 예를 들면, Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992) and Brennan et al., Science, 229:81 (1985)]. 그러나, 이러한 단편은 현재, 재조합 숙주 세포에 의해 직접 생산될 수 있다. 예를 들면, 항체 단편은 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 또는, Fab'-SH 단편을 이. 콜라이(E. coli)로부터 직접 회수하고, 화학적으로 결합시켜 F(ab')2 단편을 형성할 수 있다[참조: Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992)]. 또 다른 접근법에 따르면, F(ab')2 단편은 재조합 숙주 세포 배양으로부터 직접 단리할 수 있다. 항체 단편의 생산을 위한 다른 기술은 당업자에게 명백할 것이다. 다른 실시양태에서, 최적의 항체는 일본쇄 Fv 단편(scFv)이다.
일본쇄 항체는, 항원 결합 능력을 갖고, 면역글로불린의 경쇄 및 중쇄의 가변 영역, 즉 연결 VH-VL 또는 일본쇄 Fv(scFv)와 상동 또는 유사한 아미노산 서열을 포함하는 일본쇄 복합 폴리펩티드일 수 있다. 일본쇄 항체의 생산 기술(미국 특허 제4,946,778호)을 적용하여, NKp46에 대한 일본쇄 항체를 생산할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "모노클로날 항체"(mAb)는, 실질적으로 균질한 항체의 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하고, 즉, 집단을 구성하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 천연에 존재할 수 있는 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 모노클로날 항체는 특이성이 높고, 단일 항원에 대해 지시된다. 추가로, 상이한 결정기(에피토프)에 대한 상이한 항체를 전형적으로 포함하는 폴리클로날 항체 제제와는 대조적으로, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정기에 대한 것이다. 수식어 "모노클로날"은 특정 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되어서는 안 된다. mAb는 당업자에게 공지된 방법에 의해 수득할 수 있다. 예를 들면, 본 발명에 따라 사용되는 모노클로날 항체는 문헌[참조: Kohler et al., Nature 1975, 256, 495]에 의해 최초로 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다(예를 들면, 미국 특허 제4,816,567호). 모노클로날 항체는 또한, 예를 들면, 문헌[참조: Clackson et al., Nature 1991, 352, 624-628 or Marks et al., J. Mol. Biol., 1991, 222:581-597]에 기재된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리할 수 있다.
기능적 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 유전자의 신속한 동정 및 클로닝, 및 재조합 세균에서의 발현에 최적화된 합성 DNA 서열의 설계 및 클로닝에 의한, 모노클로날 항체로부터 유래하는 재조합 1가 항원-결합 분자의 설계 및 개발은 문헌[참조: Fields et at. 2013, 8(6):1125-48]에 기재되어 있다.
본 발명의 mAb는 IgG, IgM, IgE, IgA 및 IgD를 포함하는 임의의 면역글로불린 클래스의 것일 수 있다. mAb를 생산하는 하이브리도마는 시험관내 또는 생체내에서 배양될 수 있다. 높은 역가의 mAb는, 개별 하이브리도마로부터의 세포를 초기 프라이밍의 Balb/c 마우스에 복강내 주사하여, 고농도의 목적하는 mAb를 함유하는 복수액을 생성하는 생체내 생산에 의해 수득할 수 있다. mAb는 당업자에게 공지된 방법을 사용하여, 이러한 복수로부터 또는 배양 상청액으로부터 정제할 수 있다.
본 발명의 항체의 초가변 영역과 특이적으로 면역반응하는 항-이디오타입 항체도 포함된다.
본 발명은, 경쇄의 3개의 CDR 및 중쇄의 3개의 CDR을 포함하는 항원 결합 도메인(ABD)을 포함하는 모노클로날 항체 또는 항체 단편을 제공하고, 상기 ABD는, (i) 서열번호 7의 아미노산을 포함하는 가변 중쇄 및 서열번호 8 및/또는 서열번호 12의 아미노산을 포함하는 가변 경쇄를 포함하는 모노클로날 마우스 항체의 ABD와 적어도 90%의 서열 동일성 또는 유사성을 갖는다. 이러한 항체는, 항체 클론 K3 또는 클론 P4의 상응하는 ABD와 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 서열 동일성 또는 유사성, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 ABD 도메인을 가질 수 있다.
서열 동일성은 2개의 서로 상이한 서열 사이에서 정확히 정합하는 아미노산 또는 뉴클레오티드의 양이다. 서열 유사성은 아미노산의 보존적 치환을 동일한 아미노산으로서 결정할 수 있게 한다. 본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오티드 서열은 인간 세포 등의 특정 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화될 수 있다. 코돈 최적화는 항체 쇄의 코딩된 아미노산 서열을 변경하지 않지만, 예를 들면, 세포 내에서의 발현을 증가시킬 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명에 따른 항체 분자의 보존적 아미노산 변이체를 제공한다. 코딩된 단백질의 전체 분자 구조를 보존하는, 본 발명에 따른 변이체를 제조할 수도 있다. 개시된 단백질 생성물을 구성하는 개별 아미노산의 특성이 제공되면, 당업자는 일부 합리적 치환을 인식할 것이다. 아미노산 치환, 즉 "보존적 치환"은, 예를 들면, 관여하는 잔기의 극성, 전하, 용해도, 소수성, 친수성 및/또는 양친매성에서의 유사성에 기초하여 수행될 수 있다. 본 명세서에 사용된 용어 "항체 유사체"는 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해 또 다른 항체로부터 유래하는 항체를 지칭한다.
본 명세서에 사용된 용어 "항체 변이체"는 본 발명의 항체를 포함하는 임의의 분자를 지칭한다. 예를 들면, 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 또 다른 화학물질에 결합하는 융합 단백질은 항체 변이체로 간주된다.
항체 서열의 유사체 및 변이체도 본 출원의 범위 내에 있다. 이들에는 서열 내의 아미노산의 보존적 및 비보존적 치환, 삽입 및 결실이 포함되지만, 이들로 한정되지 않는다. 이러한 변형 및 수득되는 항체 유사체 또는 변이체는, 이들이 인간 NKp46에 대한 항체의 결합을 부여하거나 심지어 개선하는 한, 본 발명의 범위 내에 있다.
당업자에게 공지된 아미노산의 보존적 치환은 본 발명의 범위 내에 있다. 보존적 아미노산 치환에는, 하나의 아미노산을 동일한 유형의 관능기 또는 측쇄, 예를 들면, 지방족, 방향족, 양전하, 부하전을 갖는 또 다른 아미노산으로 치환하는 것이 포함된다. 이러한 치환은 경구 생체이용률, 침투 및 특정 세포 집단에 대한 표적화, 면역원성 등을 증강시킬 수 있다. 당업자는, 코딩된 서열 중의 단일 아미노산 또는 작은 퍼센트의 아미노산을 변경, 추가, 또는 제거하는, 펩티드, 폴리펩티드, 또는 단백질 서열로의 개별적 치환, 결실 또는 부가가, 이 변화에 의해 아미노산이 화학적으로 유사한 아미노산으로 치환되는, "보존적으로 변형된 변이체"인 것을 인식할 것이다. 기능적으로 유사한 아미노산을 제공하는 보존적 치환 표는 당해 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들면, 당해 기술분야에 공지된 하나의 표에 따르면, 하기 6개의 그룹은 각각 서로 보존적 치환인 아미노산을 포함한다:
1) 알라닌(A), 세린(S), 트레오닌(T);
2) 아스파르트산(D), 글루탐산(E);
3) 아스파라긴(N), 글루타민(Q);
4) 아르기닌(R), 리신(K);
5) 이소류신(I), 류신(L), 메티오닌(M), 발린(V); 및
6) 페닐알라닌(F), 티로신(Y), 트립토판(W).
변이체 쇄 서열은 특정 프라이머를 이용한 서열분석 방법에 의해 결정되는 것을 강조해야 한다. 동일한 서열에서 사용되는 상이한 서열분석 방법은, 기술적 문제 또는 상이한 프라이머에 의해, 특히 서열 말단에서 약간 상이한 서열이 될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "항체의 항원-결합 부분을 갖는 분자" 및 "항원-결합 단편"은, 임의의 동물 세포주 또는 미생물에 의해서만 생성되는 임의의 이소형의 무손상 면역글로불린 분자뿐만 아니라, Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, 이의 중쇄 및/또는 경쇄의 가변 부분, Fab 미니-항체(예를 들면, WO 93/15210, 미국 특허 출원 제08/256,790호, WO 제96/13583호; 미국 특허 출원 제08/817,788호, WO 제96/37621호, 미국 특허 출원 제08/999,554호), 및 이러한 반응성 분획에 도입되는 일본쇄 항체를 포함하지만 이들로 한정되지 않는 이의 항원-결합 반응성 분획, 게다가 이러한 항체 반응성 분획이 물리적으로 삽입된 임의의 기타 유형의 분자를 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 분자는 효소적 절단, 펩티드 합성, 또는 재조합 기술을 포함하지만 이들로 한정되지 않는 임의의 공지된 기술에 의해 제공될 수 있다.
본 명세서의 항체는 구체적으로, 이들이 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래되거나, 또는 특정 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일 또는 상동성이고, 쇄의 나머지 부분은 또 다른 종으로부터 유래되거나, 또는 또 다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체, 및 이러한 항체의 단편의 상응하는 서열과 동일 또는 상동성인, "키메라" 항체를 포함한다(미국 특허 제4,816,567호; 및 문헌[참조: Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855 (1984)]). 추가로, 친화성 또는 특이성을 포함하는 항체 분자의 특정 특성을 변경하기 위해, 상보성 결정 영역(CDR) 이식을 수행할 수 있다. CDR 이식의 비제한적 예는 미국 특허 제5,225,539호에 개시되어 있다.
키메라 항체는, 뮤린 mAb 유래의 가변 영역 및 인간 면역글로불린 불변 영역을 갖는 것과 같은, 상이한 부분이 상이한 동물 종으로부터 유래하는 분자이다. 실질적으로 인간 항체로부터 유래하는 가변 영역 프레임워크 잔기(수용체 항체로 지칭됨) 및 실질적으로 마우스 항체로부터 유래하는 CDR(공여자 항체로 지칭됨)을 갖는 항체는 또한 인간화 항체로도 지칭된다. 키메라 항체는 주로, 적용시에 면역원성을 저하시키고, 생산 수율을 증가시키는 데 사용되고, 예를 들면, 마우스 mAb는 하이브리도마로부터의 수율이 높지만, 인간에서는 면역원성이 높은 경우, 인간/뮤린 키메라 mAb가 사용된다. 키메라 항체 및 이의 생산 방법은 당해 기술분야에 공지되어 있다(예를 들면, PCT 특허 출원 WO 86/01533, WO 97/02671, WO 90/07861, WO 92/22653 및 미국 특허 제5,693,762호, 제5,693,761호, 제5,585,089호, 제5,530,101호 및 제5,225,539호).
일부 실시양태에 따르면, 항체는 모노클로날 항체이다.
일부 특정 실시양태에 따르면, 모노클로날 항체는 키메라 모노클로날 항체이다.
일부 실시양태에 따르면, 키메라 항체는 인간-유래의 불변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 키메라 항체의 인간 불변 영역은 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3, 및 인간 IgG4로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 실시양태에 따르면, 키메라 항체의 인간 불변 영역은 인간 IgG1 및 인간 IgG2로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
특정 실시양태에 따르면, 6개의 CDR의 세트를 포함하는, 인간 NKp46을 인식하는 키메라 모노클로날 항체가 제공되고, 여기서 HC CDR1은 EYSMH(서열번호 1)이고; HC CDR2는 GISPNSGGTSYNQKFKG(서열번호 2)이고; HC CDR3은 RDFHSSFDY(서열번호 3)이고; LC CDR1은 RASQSISDYLH(서열번호 4)이고; LC CDR2는 YASQSIS(서열번호 5)이고; LC CDR3은 QNGHSFPLT(서열번호 6)이다.
일부 실시양태에 따르면, 항체는 인간화 항체이다.
"인간화" 항체는 전부 또는 실질적으로 모든 CDR 아미노산 잔기가 비인간 CDR로부터 유래되고, 전부 또는 실질적으로 모든 FR 아미노산 잔기가 인간 FR로부터 유래되는 항체이다. 인간화 항체는 임의로 인간 항체로부터 유래하는 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 비인간 항체의 "인간화된 형태"는, 모 비인간 항체의 특이성 및 친화성을 유지하면서, 전형적으로 인간에 대한 면역원성을 저하시키기 위해 인간화를 받은 비인간 항체의 돌연변이체를 지칭한다. 일부 실시양태에 따르면, 인간화 항체의 일부 FR 잔기는, 예를 들면, 항체의 특이성 또는 친화성을 회복 또는 개선하기 위해, 비-인간 항체(예를 들면, CDR 잔기가 유래하는 항체)로부터의 상응하는 잔기로 치환된다.
"인간 항체"는 인간 또는 인간 세포, 또는 인간 항체 레퍼토리 또는 인간 항체 라이브러리를 포함하는 기타 인간 항체-코딩 서열을 이용하는 비인간 공급원에 의해 생성된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 항체이다. 이 용어는, 모든 인간 또는 실질적으로 모든 CDR이 비인간인 것과 같은, 비인간 항원-결합 영역을 포함하는 비인간 항체의 인간화 형태를 제외한다.
약리학
약제학적 및 약물 제형에서, 활성제는 바람직하게는 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체 및 경우에 따라 임의의 기타 치료 성분과 함께 이용된다. 담체는 제형의 다른 성분과 적합성이 있고, 이의 수용자에게 과도하게 유해하지 않다는 의미에서 약제학적으로 허용될 수 있어야 한다. 활성제는, 상기 기재한 바와 같이, 목적하는 약리학적 효과를 달성하기에 유효한 양으로, 및 목적하는 노출을 달성하기에 적합한 양으로 제공된다.
전형적으로, 항체의 항원 결합 부분을 포함하거나, 또는 펩티드-모방체를 포함하는 또 다른 폴리펩티드를 포함하는 본 발명의 항체 및 단편은 치료 용도를 위해 무균 생리식염수에 현탁시킨다. 또는, 약제학적 조성물은 활성 성분(항체의 항원 결합 부분을 포함하는 분자)의 방출을 제어하기 위해, 또는 환자 시스템에서 이의 존재를 연장시키기 위해 제형화될 수 있다. 다수의 적합한 약물 전달 시스템이 공지되어 있으며, 예를 들면, 이식가능한 약물 방출 시스템, 하이드로겔, 하이드록시메틸셀룰로오스, 마이크로캡슐, 리포좀, 마이크로에멀젼, 마이크로스피어 등을 포함한다. 제어 방출 제제는, 중합체를 사용하여, 본 발명에 따른 분자를 복합체화 또는 흡착함으로써 제조될 수 있다. 예를 들면, 생체적합성 중합체에는 폴리(에틸렌-코-비닐 아세테이트)의 매트릭스 및 스테아르산 이량체 및 세바린산의 폴리무수물 공중합체의 매트릭스가 포함된다. 이러한 매트릭스로부터의 본 발명에 따른 분자, 즉 항체 또는 항체 단편의 방출 속도는 분자의 분자량, 매트릭스 내의 분자의 양 및 분산 입자의 크기에 의존한다.
본 발명의 약제학적 조성물은 정맥내, 종양내, 경구, 비강내, 피하, 근육내, 동맥내, 관절내, 병변내 또는 비경구 등의 임의의 적절한 수단에 의해 투여될 수 있다. 통상, 항체의 전달에는 정맥내(i.v.) 투여가 사용된다.
당업자에게는, 본 발명에 따른 분자의 치료 유효량이, 특히 투여 스케줄, 투여되는 분자의 단위 용량, 분자가 다른 치료제와 조합하여 투여되는지 여부, 환자의 면역 상태 및 건강, 투여된 분자의 치료 활성, 혈액 순환에서의 이의 지속성 및 주치의의 판단에 의존한다는 것이 명백할 것이다.
본 명세서에 사용된 용어 "치료 유효량"은, 포유동물의 질환 또는 장애를 치료하는데 효과적인 약물의 양을 지칭한다. 암의 경우, 약물의 치료상 유효한 양은 암 세포의 수를 감소시키고; 종양의 크기를 감소시키고; 말초 기관으로의 암 세포의 침윤을 억제하고(즉, 어느 정도 지연시키고, 가능한 경우 정지시키고); 종양 전이를 억제하고(즉, 어느 정도 지연시키고, 가능한 경우 정지시키고); 종양의 성장을 어느 정도 억제하고/하거나; 장애와 관련된 증상 중 하나 이상을 어느 정도 완화시킬 수 있다. 약물이 증식을 예방하거나, 기존 암 세포를 사멸시킬 정도까지, 이는 세포 증식 억제성 및/또는 세포독성일 수 있다. 암 치료의 경우, 생체내 효능은, 예를 들면, 생존 기간, 질환 진행까지의 시간(TTP), 반응률(RR), 반응 기간 및/또는 삶의 질을 평가하는 것에 의해 측정할 수 있다.
본 발명에 따른 치료를 위해 수정가능한 암에는 백혈병(leukemia) 또는 림프성 악성종양(lymphoid malignancies), 암종(carcinoma), 림프종(lymphoma), 모세포종(blastoma) 및 육종(sarcoma)이 포함되지만, 이들로 한정되지 않는다. 이러한 암의 보다 구체적인 예에는 편평 상피암(squamous cell cancer), 폐암(lung cancer)(소세포 폐암(small-cell lung cancer), 비소세포 폐암(non-small cell lung cancer), 폐의 선암(adenocarcinoma of the lung) 및 폐의 편평 상피암(squamous carcinoma of the lung) 포함), 복막암(cancer of the peritoneum), 간세포암(hepatocellular), 위암(gastric) 또는 위장암(stomach cancer)(소화기암(gastrointestinal cancer) 포함), 췌장암(pancreatic cancer)), 신경교아종(glioblastoma), 자궁경부암(cervical cancer), 난소암(ovarian cancer), 간암(liver cancer), 방광암(bladder cancer), 간암(hepatoma), 유방암(breast cancer), 결장암(colon cancer), 결장직장암(colorectal cancer), 자궁내막암(endometrial) 또는 자궁암(uterine carcinoma), 타액선암(salivary gland carcinoma), 신장 또는 신장암(kidney or renal cancer), 간암(liver cancer), 전립선암(prostate cancer), 외음부암(vulval cancer), 갑상선암(thyroid cancer), 간암(hepatic carcinoma) 및 다양한 종류의 두경부암(head and neck cancer), B 세포 림프종(B-cell lymphoma)(저악성도/여포성 비호지킨 림프종(low grade/follicular non-Hodgkin's lymphoma; NHL), 작은 림프구(small lymphocytic; SL) NHL; 중등도/여포성(intermediate grade/follicular) NHL; 중등도 확산성(intermediate grade diffuse) NHL; 고악성 면역아세포성(high-grade immunoblastic) NHL; 고악성 림프아구성(high-grade lymphoblastic) NHL; 고악성도의 작은 비절단 세포(high-grade small non-cleaved cell) NHL; 벌크 질환(bulky disease) NHL; 맨틀 세포성 림프종(mantle cell lymphoma); 에이즈 관련 림프종(AIDS-related lymphoma); 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(Waldenstrom's Macroglobulinemia) 포함); 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia; CLL); 급성 림프모구성 백혈병(acute lymphoblastic leukemia; ALL); 유모 세포 백혈병(Hairy cell leukemia); 만성 골수아구성 백혈병(chronic myeloblastic leukemia); 및 이식후 림프구 증식성 질환(post-transplant lymphoproliferative disorder; PTLD), 게다가 파코마토스와 관련된 비정상적 혈관 증식(abnormal vascular proliferation associated with phakomatoses), 부종(edema)(뇌 종양(brain tumor)과 관련된 것 등) 및 메이그스 증후군(Meigs' syndrome)이 포함된다. 일부 실시양태에 따르면, 암은 유방암(breast cancer), 결장직장암(colorectal cancer), 직장암(rectal cancer), 비소세포 폐암(non-small cell lung cancer), 비호지킨 림프종(non-Hodgkins lymphoma; NHL), 신세포암(renal cell cancer), 전립선암(prostate cancer), 간암(liver cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 연부 육종(soft-tissue sarcoma), 카포시 육종(Kaposi's sarcoma), 카르티노이드 암(carcinoid carcinoma), 두경부암, 흑색종, 난소암(ovarian cancer), 중피종(mesothelioma) 및 다발성 골수종(multiple myeloma)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 본 발명의 치료를 위해 수정가능한 암 상태에는 전이성 암이 포함된다.
특정 실시양태에 따르면, 암은 NK 세포 백혈병(leukemia) 및 대과립 림프구(large granular lymphocyte; LGL) 백혈병으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
다른 실시양태에 따르면, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 NKp46의 과발현을 특징으로 하는 암의 치료에 사용하기 위한 것이다.
추가 실시양태에 따르면, "치료 유효량"은 포유동물에서 바이러스성 질환 또는 장애를 치료하는데 효과적인 약물의 양을 지칭한다.
활성 성분으로서의 본 발명의 분자는, 공지된 바와 같이, 약제학적으로 허용가능하고 활성 성분과 적합하는 부형제에 용해, 분산 또는 혼합된다. 적합한 부형제는, 예를 들면, 물, 생리식염수, 인산염 완충 생리식염수(PBS), 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등 및 이들의 조합이다. 다른 적합한 담체는 당업자에게 공지되어 있다. 또한, 필요에 따라, 조성물은 습윤제 또는 유화제, pH 완충제 등의 보조 물질을 소량 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 약제학적 조성물은 항신생물 조성물과 함께 투여될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "치료"는 치료적 치료 및 방지 또는 예방 수단 모두를 지칭한다. 치료가 필요한 사람에는, 장애를 예방하고자 하는 사람뿐만 아니라, 이미 장애를 갖는 사람도 포함된다.
용어 "암"은, 통상, 무질서한 세포 증식을 특징으로 하는 포유류의 생리학적 상태를 지칭하거나, 또는 설명한다. 암의 예에는 백혈병(leukemia), 암종(carcinoma), 림프종(lymphoma), 모세포종(blastoma), 육종(sarcoma)가 포함되지만, 이들로 한정되지 않는다. 이러한 암의 보다 구체적인 예에는 백혈병, 림프종, 흑색종, 폐, 갑상선, 유방, 결장, 전립선, 간, 방광, 신장, 자궁경부, 췌장, 골수, 난소, 자궁, 육종, 담도, 또는 자궁내막암이 포함된다.
일부 실시양태에 따르면, 암을 치료하는 방법은 적어도 하나의 추가의 항암제의 투여를 포함하는 치료 섭생의 일부로서 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 항암제는 대사길항제, 유사분열 억제제, 탁산, 토포이소머라제 억제제, 토포이소머라제 II 억제제, 아스파라기나제, 알킬화제, 항종양 항생물질 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다.
일부 실시양태에 따르면, 대사길항제는 시타라빈, 플루다라빈, 플루오로우라실, 메르캅토퓨린, 메토트렉세이트, 티오구아닌, 겜시타빈, 및 하이드록시우레아로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시양태에 따르면, 유사분열 억제제는 빈크리스틴, 빈블라스틴 및 비노렐빈으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시양태에 따르면, 토포이소머라제 억제제는 토포테칸 및 이리노테칸으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시양태에 따르면, 알킬화제는 부설판, 카무스틴, 로무스틴, 클로람부실, 사이클로포스파미드, 시스플라틴, 카보플라틴, 이포스파미드, 메클로르에타민, 멜팔란, 티오테파, 다카르바진 및 프로카르바진으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시양태에 따르면, 항종양 항생물질은 블레오마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 이다루비신, 마이토마이신, 미토크산트론 및 플리카마이신으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시양태에 따르면, 토포이소머라제 II는 에토포사이드 및 테니포사이드로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다.
일부 특정 실시양태에 따르면, 추가의 항암제는 베바시주맙, 카보플라틴, 사이클로포스파미드, 독소루비신 하이드로클로라이드, 젬시타빈 하이드로클로라이드, 토포테칸 하이드로클로라이드, 티오테파, 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다.
본 발명에 따른 모노클로날 항체는 적어도 하나의 항암제와의 병용 요법의 일부로서 사용될 수 있다. 일부 실시양태에 따르면, 추가의 항암제는 면역조절제, 활성화된 림프구 세포, 키나제 억제제 또는 화학요법제이다.
일부 실시양태에 따르면, 항암제는 면역 체크포인트 분자에 대한 항체와 같은, 작용제이든 길항제이든, 면역조절제이다.
체크포인트 면역요법의 차단은 암 치료의 흥미로운 새로운 장소인 것이 증명되었다. 면역 체크포인트 경로는, 생리학적 조건하에서 자기 관용을 유지하고, 면역계에 의한 손상으로부터 조직을 보호하기 위해 협력하여 기능하는 일련의 공-자극 분자 및 억제 분자로 구성된다. 종양은, 면역계를 회피하기 위해 특정 체크포인트 경로를 이용한다. 따라서, 이러한 경로의 억제는 유망한 항암 치료 전략으로서 부상하고 있다.
항-세포독성 T 림프구 4(CTLA-4) 항체 이필리무맙(2011년 승인)은 암 환자의 치료에 유익성을 나타내는 최초의 면역요법제였다. 항체는 T 세포에 항원 제시 동안 억제 신호를 방해한다. 항-프로그램된 세포 사멸 1(PD-1) 항체 펩브롤리주맙(2014년에 승인)은 T 세포에 의해 발현된 PD-1 수용체의 음의 면역 조절 신호전달을 차단한다. 추가 항-PD-1제는 비-소세포 폐암(NSCLC)의 치료제로서 2014년에 규제 당국의 승인을 획득하기 위해 신청되었다. 현재, 활발한 연구에 의해, 기타 다수의 면역 체크포인트, 그 중에서, CEACAM1, NKG2A, B7-H3, B7-H4, VISTA, CD112R, 림프구 활성화 유전자 3(LAG3), CD137, OX40(CD134라고도 함) 및 킬러 세포 면역글로불린-유사 수용체(KIR)가 조사되고 있다.
일부 특정 실시양태에 따르면, 면역조절제는 CTLA-4를 억제하는 항체, 항-인간 프로그램된 세포 사멸 단백질 1(PD-1), PD-L1 및 PD-L2 항체, 활성화 세포독성 림프구 세포, 림프구 활성화제, CEACAM에 대한 항체, TIGIT에 대한 항체 및 RAF/MEK 경로 억제제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 실시양태를 나타낸다. 일부 특정 실시양태에 따르면, 추가의 면역조절제는 mAb 내지 PD-1, mAb 내지 PD-L1, mAb 내지 PD-L2, mAb 내지 CEACAM1, mAb 내지 CTLA-4, mAB 내지 TIGIT, PVR, 인터류킨 2(IL-2) 또는 림포카인-활성화 킬러(LAK) 세포로부터 선택된다.
다른 실시양태에 따르면, 추가의 항암제는 화학요법제이다. 본 발명에 따른 항체와 함께 또는 별도로 투여될 수 있는 화학요법제는, 미토크산트론, 토포이소머라제 억제제, 빈카로부터의 방추독: 빈블라스틴, 빈크리스틴, 비노렐빈(탁솔), 파클리탁셀, 도세탁셀; 알킬화제: 메클로에타민, 클로람부실, 사이클로포스파미드, 멜팔란, 이포스파미드; 메토트렉세이트; 6-메르캅토퓨린; 5-플루오로우라실, 사이타라빈, 젬시타빈; 포도필로톡신: 에토포사이드, 이리노테칸, 토포테칸, 다카르바진; 항생물질: 독소루비신(아드리아마이신), 블레오마이신, 마이토마이신; 니트로소우레아: 칼무스틴(BCNU), 롬스틴, 에피루비신, 이다루비신, 다우노루비신; 무기 이온: 시스플라틴, 카보플라틴; 인터페론, 아스파라기나제; 호르몬; 타목시펜, 류프롤리드, 플루타미드, 및 메게스트롤 아세테이트를 포함하지만 이들로 한정되지 않는, 항암 활성을 나타내는 당해 기술분야에 공지된 임의의 이러한 약제를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에 따르면, 화학요법제는 알킬화제, 대사길항제, 엽산 유사체, 피리미딘 유사체, 퓨린 유사체 및 관련 억제제, 빈카 알칼로이드, 에피포도필로톡신, 항생물질, L-아스파라기나제, 토포이소머라제 억제제, 인터페론, 백금 배위 착체, 안트라센디온 치환 우레아, 메틸하이드라진 유도체, 부신피질 억제제, 부신피질 스테로이드, 프로게스틴, 에스트로겐, 항에스트로겐, 안드로겐, 항안드로겐, 고나도트로핀-방출 호르몬 유사체로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에 따르면, 화학요법제는 5-플루오로우라실(5-FU), 류코보린(LV), 이리노테칸, 옥살리플라틴, 카페시타빈, 파클리탁셀 및 도세탁셀로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 하나 이상의 화학요법제를 사용할 수 있다.
일부 실시양태에 따르면, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 암의 치료에 사용하기 위한, 또는 감염의 치료에 사용하기 위한 것이다. 특정 실시양태에 따르면, 감염은 바이러스 감염, 세균 감염 또는 진균 감염이다.
일부 실시양태에 따르면, 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 이의 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 및 면역조절제 또는 키나제 억제제를 포함하는 약제학적 조성물은 별개의 투여에 의한 암의 치료에 사용된다.
또 다른 측면에 따르면, 본 발명은, 본 발명에 따른 치료 유효량의 모노클로날 항체 또는 항체 단편, CAR 분자, 또는 다중특이적 결합 분자를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 명세서에 사용된 용어 "유효량"은, 대상체에게 투여된 경우에 의도된 치료 효과를 갖는, 항체 단편의 모노클로날 항체의 충분한 양을 지칭한다. 치료의 최종 결과를 달성하는데 필요한 유효량은, 예를 들면, 종양의 특정 유형 및 환자 상태의 중증도, 및 조합이 추가로 방사선과 함께 투여되는지 여부를 포함하는 다수의 요인에 의존할 수 있다. 본 발명의 문맥에서 활성제의 유효량(용량)은, 종양 성장의 억제, 종양 성장 속도의 저하, 종양 및 전이 성장의 예방 및 생존율 향상을 포함하지만 이들로 한정되지 않는, 대상체에서 유익한 치료 반응에 경시적으로 영향을 미치기에 충분해야 한다.
본 명세서에 기재된 조성물의 독성 및 치료 효과는, 세포 배양 또는 실험 동물에서의 표준 약학적 절차에 의해, 예를 들면, 대상체 화합물의 IC50(50% 억제를 제공하는 농도) 및 최대 내용량을 결정함으로써 결정될 수 있다. 이러한 세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 수득된 데이터는 인간에서 사용하기 위해 투여량 범위의 책정에 사용할 수 있다. 투여량은, 특히, 기타 관련 요인 중에서, 사용되는 투여 형태, 선택된 투여 섭생, 치료에 사용되는 약제의 조성, 및 이용되는 투여 경로 등에 따라 달라질 수 있다. 정확한 제형화, 투여 경로 및 투여량은 환자의 상태를 고려하여 개별 의사가 선택할 수 있다. 치료되는 상태의 중증도 및 반응성에 따라, 투여는 서방성 조성물의 단일 투여일 수 있고, 일련의 치료는 수일 내지 수주 동안 지속되거나, 또는 치유가 달성될 때까지, 또는 질환 상태의 감소가 달성될 때까지 지속된다. 투여되는 조성물의 양은, 물론, 치료되는 대상체, 고통의 중증도, 투여 방법, 처방 의사의 판단 및 기타 모든 관련 인자에 의존한다.
대상체에 대한 물질, 화합물 또는 약제의 "투여하는" 또는 "투여"라는 용어는 당업자에게 공지된 다양한 방법 중 하나를 사용하여 수행될 수 있다. 예를 들면, 화합물 또는 약제는 경장적 또는 비경구적으로 투여될 수 있다. 경장적은 경구, 설하 또는 직장을 포함하는 위장관을 통한 투여를 지칭한다. 비경구 투여에는 정맥내, 피내, 근육내, 복강내, 피하, 안구내, 설하, 비강내, 흡입에 의한, 척수내, 뇌내 및 경피적(예를 들면, 피부 튜브를 통한 흡수에 의한)의 투여가 포함된다. 화합물 또는 약제는 재충전가능 또는 생분해성 중합체 장치 또는 다른 장치, 예를 들면, 패치 및 펌프, 또는 화합물 또는 약제의 지속 방출, 지연 방출 또는 제어 방출을 제공하는 제형에 의해 적절히 도입할 수도 있다. 투여는 또한, 예를 들면, 1회, 복수회, 및/또는 1회 이상의 장기간에 걸쳐 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 투여는 자가 투여를 포함하는 직접 투여, 및 약물을 처방하는 행위를 포함하는 간접 투여 둘 다를 포함한다. 예를 들면, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 환자에게 약물을 자가 투여하도록 또는 다른 사람에게 약물을 투여하도록 지시하는 의사 및/또는 약물의 처방전을 환자에게 제공하는 의사는 환자에게 약물을 투여하는 것이다.
항체는 일반적으로, 환자의 체중 1kg당 약 0.1 내지 약 20mg, 통상은 약 0.5 내지 약 10mg/kg, 종종 약 1 내지 약 5mg/kg의 범위로 투여된다. 이와 관련하여, 적어도 12시간, 바람직하게는 적어도 4일, 보다 바람직하게는 21일까지의 순환 반감기를 갖는 항체를 사용하는 것이 바람직하다. 키메라 항체의 순환 반감기는 최대 14 내지 21일 것으로 예상된다. 일부 경우에, 대량의 부하 용량을 투여한 후, 치료 기간에 걸쳐 정기적(예를 들면, 매주)으로 유지 용량을 투여하는 것이 유리할 수 있다. 항체는 또한, 지속 주입을 위한 서방성 전달 시스템, 펌프 및 기타 공지된 전달 시스템에 의해 전달될 수 있다.
본 발명의 항체는 암을 치료하기 위해 CAR을 포함하는 조작된 림프구를 이용하는 CAR-기반 입양 면역요법에서 사용될 수 있다. CAR-T 시스템은 비제한적 예로서 본 명세서에 기재되어 있다.
T 세포 요법은 암 또는 종양의 치료에서 키메라 항원 수용체(CAR)를 이용한다(즉, CAR-T 세포 요법). CAR-T 세포 요법은 종양 세포에 작용하여 종양 세포의 아폽토시스를 유발하는 유전자 조작된 T 세포를 암 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 세포 면역요법이다. 유전자 변형 T 세포는, 유전자 도입 기술을 사용하여, CD3ζ 쇄 서열의 단편 등의 세포내 도메인에 결합된 항체의 가변 영역(VL 및 VH)을 갖는 CAR을 T 세포 상에서 발현시킴으로써 제조된다. CAR은, 종양 항원에 특이적인 모노클로날 항체의 가변 영역의 경쇄와 중쇄가 서로 결합하고, 이어서 C-말단 측에 T 세포 수용체(TCR) 쇄에 결합한 키메라 단백질의 총칭이다.
일부 실시양태에 따르면, CAR은 CD8 Stalk 도메인, CD28 TM 도메인, 41BB 도메인, 및 CD3ζ 도메인으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 단백질 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, CAR은 4-1BB(또는 41BB 또는 CD137), ICOS, OX40, CD27, KIR2DS2, MYD88-CD40, 또는 CD28로부터 유래하는 공자극 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, CAR은 CD3ζ, 41BB 및 CD28의 신호전달 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, CAR은 CD28 TM, DAP12 TM, CD8 TM, CD3ζ TM, DAP10 TM, 및 ICOS TM으로부터 선택된 막관통 도메인(TM)을 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, CAR은 힌지 영역 서열을 포함한다. 일부 실시양태에 따르면, 힌지 영역 서열은 CD8, CD28 또는 IgG4 힌지로부터 유래한다.
일부 실시양태에 따르면, 본 발명에 따른 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)가 제공된다. 특정 실시양태에 따르면, CAR이 이의 표면에서 발현되는 유전자 변형 림프구가 제공된다. 일부 특정 실시양태에 따르면, CAR이 이의 표면에서 발현되는 유전자 변형 T 세포(CAR-T 세포)가 제공된다.
일부 실시양태에 따르면, CAR은 6개의 CDR의 세트를 포함하는 NKp46 결합 부위를 포함하고, 여기서 HC CDR1은 EYSMH(서열번호 1)이고; HC CDR2는 GISPNSGGTSYNQKFKG(서열번호 2)이고; HC CDR3은 RDFHSSFDY(서열번호 3)이고; LC CDR1은 RASQSISDYLH(서열번호 4)이고; LC CDR2는 YASQSIS(서열번호 5)이고; LC CDR3은 QNGHSFPLT(서열번호 6), 또는 상기 항체 또는 단편과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체이다.
일부 실시양태에 따르면, 유사체 또는 유도체는 상기 항체 또는 단편 서열과 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에 따르면, CAR은 서열번호 7을 포함하는 중쇄(HC) 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역(CDR) 및 서열번호 8 또는 서열번호 12를 포함하는 경쇄(LC) 가변 영역의 3개의 CDR을 포함하는 NKp46 결합 부위를 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, CAR은 6개의 CDR의 세트를 포함하는 NKp46 결합 부위를 포함하고, 여기서 HC CDR1은 EYSMH(서열번호 1)이고; HC CDR2는 GISPNSGGTSYNQKFKG(서열번호 2)이고; HC CDR3은 RDFHSSFDY(서열번호 3)이고; LC CDR1은 RASQSISDYLH(서열번호 4)이고; LC CDR2는 YASQSIS(서열번호 5)이고; LC CDR3은 QNGHSFPLT(서열번호 6)이다.
특정 측면에 따르면, 본 발명은 본 명세서에 기재된 CAR을 포함하는 세포를 제공한다. 일부 실시양태에 따르면, 세포는 본 발명의 CAR을 발현하거나, 또는 발현할 수 있다. 일부 실시양태에 따르면, 세포는 림프구이다. 일부 실시양태에 따르면, 세포는 T 세포 및 자연 킬러(NK) 세포로부터 선택된다.
일부 실시양태에 따르면, T 세포 등의 세포는 본 발명의 CAR을 코딩하는 핵산 분자를 포함한다. 다른 실시양태에 따르면, T 세포 등의 세포는 본 발명의 CAR을 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 핵산 작제물을 포함한다. 추가의 실시양태에 따르면, 본 발명은 본 발명의 CAR을 코딩하는 핵산 작제물 또는 분자를 포함하는 벡터를 제공한다. 이러한 실시양태에 따르면, T 세포는 본 발명의 CAR을 발현할 수 있거나, 또는 발현한다.
일부 실시양태에 따르면, 본 명세서에 기재된 CAR을 발현하도록 조작된 림프구가 제공된다. 일부 실시양태에 따르면, 본 명세서에 기재된 CAR을 발현하도록 조작된 T 세포가 제공된다.
추가 실시양태에 따르면, 본 명세서에 기재된 CAR을 발현하도록 조작된 NK 세포가 제공된다.
본 발명의 CAR은 막관통 도메인(TM 도메인), 공자극 도메인 및 활성화 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에 따르면, TM 도메인은 CD4, CD3ζ, CD28 및 CD8로부터 선택되는 수용체의 TM 도메인, 또는 원래의 서열에 대해 적어도 85%의 아미노산 동일성을 갖는 이의 유사체이고/이거나, 공자극 도메인은 CD28, 4-1BB, OX40, iCOS, CD27, CD80 및 CD70, 원래 서열과 적어도 85%의 아미노산 동일성을 갖는 이의 유사체 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 단백질의 공자극 도메인이고/이거나, 활성화 도메인은 FcRγ 및 CD3-ζ 활성화 도메인으로부터 선택된다. 일부 실시양태에 따르면, CAR은 리딩 펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 본 발명은 본 발명의 복수의 세포, 예를 들면, CAR 표시 세포를 포함하는 세포 조성물을 제공한다.
추가의 측면에 따르면, 본 발명은 본 명세서에 기재된 항체 또는 항체 단편의 결합 부위를 포함하는 다중특이적 결합 분자를 제공한다.
일부 실시양태에 따르면, 결합 부위는 6개의 CDR의 세트를 포함하고, 여기서 HC CDR1은 EYSMH(서열번호 1)이고; HC CDR2는 GISPNSGGTSYNQKFKG(서열번호 2)이고; HC CDR3은 RDFHSSFDY(서열번호 3)이고; LC CDR1은 RASQSISDYLH(서열번호 4)이고; LC CDR2는 YASQSIS(서열번호 5)이고; LC CDR3은 QNGHSFPLT(서열번호 6)이다.
일부 실시양태에 따르면, 다중특이적 항체는 이중특이적 항체이다.
특정 실시양태에 따르면, 다중특이적 항체는 삼중특이적 항체이다.
일부 실시양태에 따르면, 다중특이적 항체는 NK 세포 인게이저 분자에 대한 결합 부위를 추가로 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "인게이저"는 면역 세포의 활성을 활성화 또는 증강시킬 수 있는 분자를 지칭한다. 일부 실시양태에 따르면, 다중특이적 항체는 CD160에 특이적인 결합 부위를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에 따르면, 다중특이적 항체는 CD16에 특이적인 결합 부위를 추가로 포함한다.
CD160은 자연 킬러 세포 수용체이며, 면역글로불린 상과의 멤버이다. 이것은 27kDa 당단백질이며, 이의 발현이 세포용해성 이펙터 활성을 갖는 말초 혈액 NK 세포 및 CD8 T 림프구와 밀접하게 관련되어 있다. CD160의 별칭 명칭에는 특히 BY55, NK1, NK28이 포함된다. CD160의 예시적 서열은 UniProt 수탁 번호 O95971에서 발견할 수 있다.
추가의 실시양태에 따르면, 다중특이적 항체는 사이토카인에 융합 또는 접합된다.
일부 실시양태에 따르면, 다중특이적 항체는 암 부위에 위치하는 항원에 특이적인 결합 부위를 추가로 포함한다.
추가의 실시양태에 따르면, 다중특이적 항체는 바이러스 항원에 특이적인 결합 부위를 추가로 포함한다. 추가의 실시양태에 따르면, 다중특이적 항체는 진균 항원에 특이적인 결합 부위를 추가로 포함한다. 추가의 실시양태에 따르면, 다중특이적 항체는 세균 항원에 특이적인 결합 부위를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 다중특이적 결합 분자는 폴리펩티드 또는 폴리펩티드의 다량체이다. 일부 실시양태에 따르면, 각각의 폴리펩티드는 단일특이적, 이중특이적, 및 삼중특이적 폴리펩티드로부터 독립적으로 선택된다.
일부 실시양태에 따르면, 다중특이적 결합 분자는 하나 이상의 scFv 분자로 이루어지거나, 또는 이를 포함한다.
결합 분자가 적어도 삼중특이적이기 위해서는, 각각의 결합 특이성이 정확히 하나의 결합 부위에 의해 표현되는 것으로 충분하다. 따라서, 본 발명에 따른 삼중특이적 결합 분자는 3가 분자일 수 있다. 3개의 결합 특이성이 각각 상이한 수의 결합 부위에 의해 실현될 수 있다. 1개의 결합 특이성은 다른 2개보다 많은 결합 부위에 의해 표현되거나, 또는 2개의 결합 특이성이 제3 결합 부위보다 많은 결합 부위에 의해 표현되는 것이 바람직할 수 있다.
일부 실시양태에 따르면, 6개의 CDR의 세트는 소정 결합 부위의 바람직한 실시이다. 당해 기술분야에 공지된 바와 같이, 6개의 CDR의 세트는 각각 3개의 CDR로 이루어진 제1 및 제2 세트를 포함한다. 3개의 CDR의 이들 2개의 세트는 동일한 폴리펩티드 쇄 또는 상이한 폴리펩티드 쇄에 위치하고, 이에 의해 상이한 분자 구조를 생성한다. 또한, 본 발명에 따른 소정 결합 분자 내에서, 결합 부위의 일부는, 소정 결합 부위를 구성하는 6개의 CDR 모두가 단일 폴리펩티드 쇄 상에 위치하도록 하는 것이고, 다른 결합 부위는, 소정 결합 부위를 구성하는 3개의 CDR의 제1 및 제2 세트가 별개의 폴리펩티드 상에 위치하도록 하는 것으로 상정된다. 상이한 폴리펩티드는, 특히 아미노산 서열과 관련하여, 단순히 형식적으로 상이하고, 그렇지 않으면 동일할 수 있다. 또는, 상이한 폴리펩티드는 이들의 아미노산 서열과 관련하여 서로 상이할 수 있다.
용어 "약"은 특정 값에 대해 허용가능한 오류 범위(예: 최대 5% 또는 10%)를 가정해야 하는 것을 의미한다.
진단
본 발명은 추가로, 암을 진단 및 예측하는 방법을 개시한다.
일 측면에 따르면, 본 발명은 대상체에서 암 또는 감염병(infectious disease)의 진단 및/또는 예후진단 방법을 제공하고, 이 방법은 본 명세서에 기재된 적어도 하나의 항체를 사용하여 상기 대상체의 생물학적 샘풀에서 NKp46의 발현 수준을 결정하는 단계를 포함한다.
용어 "생물학적 샘플"은, 진단 또는 모니터링 분석에 사용될 수 있는, 생물로부터 수득된 다양한 유형의 샘플을 포함한다. 이 용어는 생물학적 기원의 혈액 및 기타 액체 샘플, 생검 표본 등의 고체 조직 샘플, 또는 조직 배양물 또는 이로부터 유래하는 세포 및 이의 자손을 포함한다. 또한, 이 용어는 순환 종양 또는 기타 세포를 포함할 수 있다. 이 용어는 구체적으로 임상 샘플을 포함하고, 세포 배양 중의 세포, 세포 상청액, 세포 용해물, 혈청, 혈장, 소변, 양수, 방수 및 눈 샘플의 유리체를 포함하는 생물학적 유체 및 조직 샘플을 추가로 포함한다. 이 용어에는 시약에 의한 처리, 가용화, 특정 성분의 농축 등 조달 후에 임의의 방식으로 조작된 샘플도 포함된다.
NKp46의 발현 수준의 결정은 본 명세서에 기재된 표지된 항-NKp46 항체에 의해 수행될 수 있다. 발현의 결정은, 예를 들면, ELISA에 의해 수행될 수 있다.
본 발명의 방법은 상기 발현 수준을 대조군 수준과 비교하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
하기 실시예는 본 발명의 일부 실시양태를 보다 충분히 설명하기 위해 제공된다. 이들은 결코 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 해석되어서는 안된다.
실시예
여기서, 상기 설명과 함께, 본 발명을 비한정적으로 설명하는 이하의 실시예를 참조한다.
일반적으로, 본 명세서에서 사용되는 명명법 및 본 발명에서 이용되는 실험 절차는 분자, 생화학, 미생물학, 면역학 및 재조합 DNA 기술을 포함한다. 이러한 기술은 당해 기술분야에 공지되어 있다. 독자의 편의를 위해, 공지된 절차를 참조하는 기타 일반적 참고문헌이 이 문서 전체에 제공된다.
실시예 1. Nkp46 항체 생성 및 선택
면역원(Nkp46-Fc)의 발현은 포유동물 HEK 293T 세포에서 수행된다. 표적(NKp46) 단백질의 세포외 도메인과 인간 IgG1 Fc 단편으로 구성된 NKp46-Fc 융합 단백질이 생성 및 정제되었다.
면역화를 위해, BALB/c 마우스에 완전 프로인트 애쥬번트(CFA) 중의 면역원 50μg, 이어서 최초 면역화 후 14일차에 불완전 프로인트 애주번트(IFA) 중의 면역원 50μg을 주사했다. 이어서, 혈청을 ELISA에 의해 항-NKp46-Fc 항체 역가에 대해 분석했다. 최고 역가를 갖는 마우스를 PBS 중의 50㎍의 면역원으로 부스트시켰다. 3일 후, 면역 마우스의 비장을 채취하고, 적혈구를 용해시킨 후, 비장세포를 SP2/0 세포주와 융합시켰다. 잠재적 하이브리도마 세포를, 안정한 하이브리도마 세포주의 선택을 위해, 하이포크산틴, 아미노프테린 및 티미딘(HAT)을 함유하는 20% RPMI 1640 배지에 파종했다. 상기 절차를 5회 반복하고, 합계 4600 웰을 ELISA에 의해 항-NKp46-Fc 항체의 분비에 대해 스크리닝했다. 이어서, 상청액이 Nkp46-Fc-코팅된 ELISA 플레이트 상에서 결합 검정에 대해 양성이었던 웰로부터 84개의 세포주를 이들의 양성에 대해 재시험했다. 병행하여, 무관한 Fc 융합 단백질에 대해 교차 반응성 시험을 수행했다. 이에 의해, NKp46 외부 도메인을 특이적으로 인식하는 항체를 분비하는 5개의 하이브리도마 세포주가 수득되었다. 이러한 항체 중, 추가로 4개가 IgG 이소형(IgM 이소형이 아님)에서 선택되었다. 이어서, ELISA에서 특이적인 신호를 나타내는 이들 모든 후보를 서브클로닝하고, 하기에 설명된 바와 같이, 형질감염 세포주에서 천연 인간 NKp46 단백질을 인식하는 능력을 시험했다.
결합은, NKp46을 발현하는 마우스 흉선종 BW 형질감염 세포(BW NKp46)에서 먼저 조사했다. 대조군으로서, 시판되는 항-NKp46 mAb(9E2로 표시) 및 이전에 실험실에서 개발된 항-NKp46 mAb, 461-G1[참조: Arnon et al., 2004; Mandelboim et al., 2001]을 사용했다. 시험한 모든 항체는 BW NKp46과 특이적으로 상호작용했지만, 모 BW 세포와는 상호작용하지 않았다(데이터는 제시되지 않음). 항체가 인간 NK 세포에 의해 자연적으로 발현된 NKp46을 인식하는 것을 입증하기 위해, IL-2 활성화 1차 벌크 인간 NK 세포(활성화 NK 세포)를 염색했다. 실험을 통해 사용된 활성화 NK 세포는 PBMC로부터 단리했다. 당사의 정제 프로토콜은 약 97%의 순도에 도달하고, CD56+CD3- 세포로서의 이들의 속성을 확인했다(데이터는 제시되지 않음). 실제, 모든 항체 활성화 NK 세포를 양성으로 염색했다. 몇몇 공여자로부터 유래하는 PBMC에서 유사한 결과가 수득되었다(데이터는 제시되지 않음).
이 시점에서, 대규모 생산 및 정제를 위해 4개의 상이한 안정한 클론 세포주가 선택되었다. 이어서, 대규모 Ab 생산을 수행하고, GE AKTA 프라임 액체 크로마토그래피 시스템(Prime Plus Liquid Chromatography System) 및 HiTrap 단백질 G 컬럼을 사용하여, 모든 모노클로날 항체를 무혈청 배지로부터 수 밀리그램의 양으로 정제했다.
항-NKp46 mAb의 결합 부위를 확인하기 위해, Ig-D1, Ig-D2 및 Ig-NKp46을 0.1㎍/웰로 플레이팅했다. 플레이트를 4℃에서 밤새 정치했다. 다음날 차단을 수행하고(차단 완충액은 PBSx1, 0.05% 트윈-20 및 5% BSA임), 이어서 0.1㎍/웰 mAb 및 10㎕/웰 SN 항체를 첨가했다(둘 다 최종 차단 완충액으로 100μl의 최종 용적까지 희석했다). 플레이트를 4℃에서 밤새 정치했다. 다음날, 비오틴 항-마우스를 첨가하고(차단 완충액으로 희석), 이어서 스트렙트아비딘-POD(차단 완충액으로 희석)를 첨가하고, OD650nm에서 샘플을 검출하기 위해 TMB를 첨가했다. 도 1에 도시된 바와 같이, 클론 K3 및 P4 항체는 NKp46 D2 도메인에 결합하고, 클론 02, 시판되는 항-NKp46 및 461-G1(공개된 NKp46 항체)은 NKp46 D1 도메인에 결합한다.
이어서, 항-NKp46 mAb의 어느 것이 NKp46과 이의 리간드의 상호작용을 차단할 수 있는지를 확인했다. 이를 위해, NKp46의 미지의 리간드를 발현하는 BJAB, MCF7 및 C1R 종양 세포를 사용했다. NKp46-Ig를 단독으로 또는 아이스 상에서 다양한 항-NKp46 mAb와 함께 인큐베이팅했다. 이어서, 인큐베이팅된 NKp46-Ig 융합 단백질을 사용하여, 종양 세포를 FACS 염색했다. 항-NKp46 mAb 중 어느 것도, 세포에 대한 NKp46-Ig의 결합을 차단할 수 없었다.
실시예 2. NK 세포의 표면으로부터의 NKp46 하향조절의 검사
NK 세포 표면 상의 NKp46 발현의 감소에 대한 항-NKp46 mAb의 효과를 시험했다. 항-NKp46 mAb를 활성화 NK 세포와 함께 4℃ 또는 37℃에서 8시간 동안 인큐베이팅했다. 이어서, 세포를 접합된 2차 항-마우스 항체로 FACS 염색했다. 1개의 mAb, 02만이 NKp46 수준을 저하시켰다(도 2). 다른 항체는 NK 세포의 표면으로부터 NKp46의 하향조절을 유도하지 않았다. 이 항체는 NKp46에 특이적으로 결합하고, 동족 리간드에 대한 NKp46의 결합을 방해하지 않는다. 조사 결과를 확인하기 위해, 이러한 항체를 사용한 용량 반응 FACS 염색을 2개의 활성화된 1차 NK 세포에서 수행했다(도 3). 이해할 수 있는 바와 같이, K3 및 P4 항체의 농도의 감소는 세포 표면 상의 형광 신호의 강도의 감소와 일치한다. 따라서, K3 및 P4 항체는 강력한 용량 반응을 나타내며, NK 세포와 종양 세포 사이를 가교하는 이중특이성 또는 삼중특이성 항체의 생성에 적합하다.
실시예 3. 인간화 항-NKp46 항체, 활성 및 친화성
항-NKp46, 클론 P4 및 K3의 모 중쇄 및 경쇄 서열은 마크로몰텍(Macromoltek) 소프트웨어 설계를 사용하여 인간화되었다. 서열은 구조 생물학 및 분자 모델링 전문가에 의해 확인되었다. 수득된 인간화 서열은 서열번호 14(K3 및 P4의 중쇄의 인간화), 서열번호 15(P4의 경쇄의 인간화) 및 서열번호 16(K3의 경쇄의 인간화)에 제시된다. 4개의 인간화 클론을 제조했다: B341001, B341002, B341003 및 B341004.
NKp46을 발현하는 세포에 대한, 돌연변이 IgG4를 갖는 인간화 항체의 결합을 조사했다. 실험은 다음과 같이 수행되었다:
1. 코팅을 3개 농축물 대 3개 완충액의 매트릭스에서 시험하여 최적의 신호를 발견한다.
2. 표준 차단 및 세척 단계를 사용하여, 최적의 신호 조건을 사용하여 ELISA 트레이를 코팅했다.
3. 1차 항체는 10배 희석의 농도 범위에서 적용된다(인간화 변수 + 돌연변이 IgG4를 포함하는 MAb).
4. 결합을 검출하는데 사용된 2차 항체는 HRP(TMB 기질)를 포함하는 항-Hu Kappa였다.
5. 흡광도는 450nm에서 측정했다.
항원은 HEK293 세포에서 발현된 아크로 바이오시스템스 휴먼(Acro Biosystems Human) NKp46였다. 도 4A 내지 4B에 도시된 바와 같이, 양쪽 인간화 클론 모두는 NKp46에 대해 강력한 친화도를 가졌다(20.5pM 및 27pM).
인간화 항체를, NKp46 D2 도메인에 대한 친화도에 대해 추가로 조사했다. 도 5D에 도시된 바와 같이, 인간화 항체는 NKp46의 D2 도메인에 대해 매우 높은 친화도를 나타낸다.
실시예 4. 이중 및 삼중 특이적 항체
2개 또는 3개의 특이성을 갖는 결합 분자가 제조된다. 이중특이적 결합 분자는 본 명세서에 개시된 항체의 결합 부위 및 종양 리간드에 특이적인 결합 부위를 포함한다. 삼중특이적 결합 분자는 본 명세서에 기재된 항체의 결합 부위; CD160에 대한 결합 부위; 및 종양 리간드에 대한 결합 부위를 포함한다. 첫째, 삼중특이적 항체의 경우, NKp46 및 CD160에 대한 차단 검정을 수행하여, 항체가 수용체의 천연 리간드에 대한 결합을 차단하지 않는지를 확인한다. 항체 클론 K3 및 P4 및 항-CD160에 의한 재지시된 검정을 사용하여, 항체의 결합이 NK 세포 기능을 손상시키지 않는 것을 나타낸다.
생체내 검정은, 시험 종양이 인간 유래이기 때문에, T 세포, B 세포 또는 NK 세포를 발현하지 않는 SCID/베이지 마우스를 사용하여 수행된다. 선택된 종양의 항원을 발현하는 마우스에서 종양을 확립하는 것은 증가하는 양의 암 세포(2×105, 5×105, 1×106, 5×106)를 피하 주사함으로써 수행된다. 마우스는 촉지가능한 종양의 출현에 대해 2일마다 평가되고, 일단 관찰되면, 디지털 캘리퍼스로 매일 측정되고, 종양의 용적이 정의된다. 종양은 통상 종양 유형과 주입량에 따라 10 내지 14일 이내에 출현한다. 촉지가능한 종양이 관찰되면, 마우스를 2주 동안 모니터링한다(종양 용적, 마우스 체중 및 일반적 외관). 인도적 종점은 1cm3 종양 용적 또는 최초 체중으로부터 20%의 체중 감소로 설정된다. 2주 후, 마우스를 희생시키고, 종양을 적출하고, 체중을 측정한다. 세포의 이상적 작업 수는 다음과 같이 정의된다: 상기 언급된 조사 기간에 걸쳐 촉지가능한 종양을 유지하는 세포의 최소량. 각 세포주에 대해, 그룹당 6마리의 마우스를 시험한다.
종양 크기를 감소시키기 위해 필요한 이중특이적 또는 삼중특이적 항체의 안전한 양을 결정하기 위한 용량 반응 실험. 세포의 이상적 작업 수가 상기 기준에 따라 결정되면, 항체 및 특이적 항체(K3, P4, 항-CD160 및 항-종양 항원)의 농도가 증가하고, 종양을 갖는 SCID/베이지 마우스에 주입된다.
이전 섹션에서 평가한 바와 같이, SCID/베이지 마우스에, 결정된 수의 암 세포를 먼저 주사한다. 촉지가능한 종양이 출현하면, 디지털 캘리퍼스로 측정하여 종양의 용적을 정의한다. 이어서, 이중특이성 또는 삼중특이성 및 단일 항체는 용량을 증가시켜 복강내 주사한다(30μg 및 60μg). 이어서, PBS 주사 그룹을 제외한 모든 마우스 그룹에 인간 NK 세포도 주사한다.
특정 실시양태의 전술한 설명은, 본 발명의 일반적 성질을 완전히 나타내기 때문에, 타인은 현재의 지식을 적용함으로써, 과도한 실험을 수행하지 않고 또한 일반적 개념으로부터 벗어나지 않고서, 특정 실시양태 등의 다양한 용도에 용이하게 변경 및/또는 적응할 수 있고, 따라서 이러한 적응 및 변경은 개시된 실시양태의 등가물의 의미 및 범위 내에서 이해되어야 하고, 이해되도록 의도된다. 본 명세서에서 사용되는 표현 또는 전문용어는 설명을 목적으로 하는 것이고, 제한하는 것은 아닌 것을 이해해야 한다.
SEQUENCE LISTING <110> Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. University of Rijeka Faculty of Medicine <120> ANTIBODIES TO NKp46 AND CONSTRUCTS THEREOF FOR TREATMENT OF CANCERS AND INFECTIONS <130> Yissum/0168 PCT <150> US 63/005457 <151> 2020-04-06 <160> 16 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 1 Glu Tyr Ser Met His 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Gly Ile Ser Pro Asn Ser Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 3 Arg Asp Phe His Ser Ser Phe Asp Tyr 1 5 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 4 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu His 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 5 Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 6 Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr 1 5 <210> 7 <211> 118 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 7 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr 20 25 30 Ser Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Phe 35 40 45 Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ser Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Asp Phe His Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 8 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 8 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr 20 25 30 Leu His Trp Phe Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 9 <211> 354 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 9 gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgaa ctggtgaagc ctgggacttc agtgaagata 60 tcctgcaaga cttctggata cacattcact gaatacagca tgcactgggt gaagcagagc 120 catggaaaga gccttgagtg gtttggaggt attagtccta acagtggtgg taccagctac 180 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccag cacagcctac 240 atggagctcc gcagcctgac atctgaggat tctgcagtct attactgtgc acgaagggac 300 ttccatagta gctttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctca 354 <210> 10 <211> 321 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 10 gacattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tagagtctct 60 ctctcctgca gggccagcca gagtattagc gactacttac attggtttca acaaaaatca 120 catgagtctc caaggcttct catcaaatat gcttcccaat ccatctctgg gatcccctcc 180 aggttcagtg gcagtggatc agggtcagat ttcactctca gtatcaacag tgtggaacct 240 gaagatgttg gagtgtatta ctgtcaaaat ggtcacagct ttccgctcac gttcggtcct 300 gggaccaagc tggagctgaa a 321 <210> 11 <211> 321 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 11 gatattgtcc taactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaaa tagcgtcagt 60 ctttcctgca gggccagcca aagtattagc gactacttac attggtttca acaaaaatca 120 catgagtctc caaggcttct catcaaatat gcttcccaat ccatctctgg gatcccctcc 180 aggttcagtg gcagtggatc agggtcagat ttcactctca gtatcaacag tgtggaacct 240 gaagatgttg gagtgtatta ctgtcaaaat ggtcacagct ttccgctcac gttcggtcct 300 gggaccaagc tggagctgaa a 321 <210> 12 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 12 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Asn Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr 20 25 30 Leu His Trp Phe Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 13 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Tyr Asp Thr Pro Thr Leu Ser Val His Pro Gly Pro Glu Val Ile Ser 1 5 10 15 Gly Glu Lys Val Thr Phe Tyr Cys Arg Leu Asp Thr Ala Thr Ser Met 20 25 30 Phe Leu Leu Leu Lys Glu Gly Arg Ser Ser His Val Gln Arg Gly Tyr 35 40 45 Gly Lys Val Gln Ala Glu Phe Pro Leu Gly Pro Val Thr Thr Ala His 50 55 60 Arg Gly Thr Tyr Arg Cys Phe Gly Ser Tyr Asn Asn His Ala Trp Ser 65 70 75 80 Phe Pro Ser Glu Pro Val Lys Leu Leu Val Thr Gly Asp Ile Glu Asn 85 90 95 Thr Ser Leu Ala Pro Glu Asp Pro Thr Phe Pro Ala Asp Thr Trp Gly 100 105 110 Thr Tyr Leu Leu Thr Thr Glu Thr Gly Leu Gln Lys Asp His Ala Leu 115 120 125 Trp Asp His Thr Ala Gln 130 <210> 14 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Humanized antibody <400> 14 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr 20 25 30 Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Phe 35 40 45 Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ser Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Asp Phe His Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 15 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Humanized antibody <400> 15 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr 20 25 30 Leu His Trp Phe Gln Gln Lys Pro His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 16 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Humanized antibody <400> 16 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr 20 25 30 Leu His Trp Phe Gln Gln Lys Pro His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe 115

Claims (43)

  1. NKp46에 결합하는 항체, 또는 적어도 항원 결합 부분을 포함하는 이의 항체 단편으로서,
    상기 항체 또는 항체 단편은, 서열번호 7을 포함하는 중쇄(HC) 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역(complementarity determining region; CDR) 및 서열번호 8을 포함하는 경쇄(LC) 가변 영역의 3개의 CDR, 또는 상기 항체 또는 단편 서열과 적어도 90%의 서열 동일성(sequence identity)을 갖는 이의 유사체 또는 유도체를 포함하는, 상기 항체 또는 항체 단편.
  2. 제1항에 있어서, 6개의 CDR의 세트를 포함하고, 여기서 HC CDR1은 EYSMH(서열번호 1)이고; HC CDR2는 GISPNSGSGTSSYNQKFKG(서열번호 2)이고; HC CDR3은 RDFHSSFDY(서열번호 3)이고; LC CDR1은 RASQSISDYLH(서열번호 4)이고; LC CDR2는 YASQSIS(서열번호 5)이고; LC CDR3은 QNGHSFPLT(서열번호 6)인, 항체 또는 항체 단편.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 서열번호 7에 제시된 중쇄 가변 영역, 또는 상기 중쇄 가변 영역 서열과 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 유사체를 포함하는, 항체 또는 항체 단편.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 8에 제시된 경쇄 가변 서열, 또는 상기 경쇄 가변 영역 서열과 적어도 95%의 서열 유사성(sequence similarity)을 갖는 유사체를 포함하는, 항체 또는 항체 단편.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 여기서 중쇄는 서열번호 7을 포함하고, 경쇄는 서열번호 8을 포함하는, 항체 또는 항체 단편.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 단편이 일본쇄(single chain) Fv(scFv)인, 항체 단편.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 인간 NKp46에 10-11M 내지 10-16M의 친화도(affinity)로 결합하는, 항체 또는 항체 단편.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 인간화 항체인, 항체 또는 항체 단편.
  9. 제8항에 있어서, 상기 인간화 항체가 서열번호 14를 포함하는 중쇄, 및 서열번호 15 및 16으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 경쇄를 포함하는, 항체 또는 항체 단편.
  10. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항체 단편의 중쇄 또는 경쇄 영역의 적어도 하나의 서열을 코딩하는(encoding), 폴리뉴클레오티드 서열.
  11. 제10항에 있어서, 항체 중쇄 가변 영역을 코딩하고, 여기서 상기 폴리뉴클레오티드 서열은 서열번호 9, 또는 상기 서열에 대해 적어도 85%의 동일성을 갖는 변이체를 포함하는, 폴리뉴클레오티드 서열.
  12. 제11항에 있어서, 항체 경쇄 가변 영역을 코딩하고, 여기서 상기 폴리뉴클레오티드 서열은 서열번호 10, 또는 상기 서열에 대해 적어도 85%의 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하는, 폴리뉴클레오티드 서열.
  13. 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는, 플라스미드.
  14. 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는, 세포.
  15. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 항체를 생산할 수 있는, 세포.
  16. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 항체의 결합 부위를 포함하는, 다중특이적 항체(multi-specific antibody).
  17. 제16항에 있어서, 상기 다중특이적 항체가, 종양 항원에 대한 특이성을 갖는 결합 부위를 추가로 포함하는 이중특이적 항체인, 다중특이적 항체.
  18. 제16항에 있어서, 상기 다중특이적 항체가 바이러스, 세균 또는 진균 항원에 대한 특이성을 갖는 결합 부위를 추가로 포함하는 이중특이적 항체인, 다중특이적 항체.
  19. 제16항에 있어서, 상기 다중특이적 항체가 CD160 또는 CD16에 특이적인 결합 부위를 추가로 포함하는 삼중특이적 항체인, 다중특이적 항체.
  20. 제19항에 있어서, 종양 항원에 특이적인 결합 부위를 추가로 포함하는, 다중특이적 항체.
  21. 제16항에 있어서, 상기 다중특이적 항체가 사이토카인에 융합 또는 접합되어 있는, 다중특이적 항체.
  22. 활성 성분으로서, 제1항 내지 제7항 및 제16항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 항체 또는 이의 단편, 또는 다중특이적 결합 분자, 및 약제학적으로 허용되는 부형제(excipient), 희석제, 염 또는 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
  23. 제22항에 있어서, 대상체에서 암(cancer)의 치료에 사용하기 위한, 약제학적 조성물.
  24. 제22항에 있어서, 감염(infection)의 치료에 사용하기 위한, 약제학적 조성물.
  25. 제22항에 있어서, 바이러스 감염, 세균 감염 또는 진균 감염의 치료에 사용하기 위한, 약제학적 조성물.
  26. 제22항의 약제학적 조성물을, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암을 치료하는 방법.
  27. 제26항에 있어서, 수술, 화학요법, 방사선 요법 및 면역요법으로부터 선택되는 추가의 항암 요법을 추가로 포함하는, 방법.
  28. 제26항에 있어서, 면역 조절제, 활성화된 림프구 세포, 키나제 억제제, 화학요법제 또는 임의의 기타 항암제를 상기 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  29. 제26항에 있어서, 상기 면역 조절제가 면역 체크포인트 분자(immune checkpoint molecule)에 대한 항체인, 방법.
  30. 제26항에 있어서, 상기 면역 조절제가 PD-1에 대한 항체인, 방법.
  31. 제26항에 있어서, 상기 암이 고형암(solid cancer)인, 방법.
  32. 제26항에 있어서, 치료가, 대상체에서 전이의 형성, 성장 또는 확산을 예방 또는 감소시키는, 방법.
  33. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항체 단편을 생물학적 샘플과 접촉시키는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 진단하는 방법.
  34. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 포함하는, 대상체에서 암을 진단하기 위한 키트(kit).
  35. 제23항에 따른 약제학적 조성물을, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 감염을 치료하는 방법.
  36. 제35항에 있어서, 상기 감염이 코로나바이러스, 인플루엔자 바이러스, 인간 메타뉴모바이러스(HMPV), 인간 사이토메갈로바이러스(HCMV), 센다이 바이러스, 뉴캐슬병(Newcastle disease) 바이러스 및 폭스바이러스(poxvirus)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 바이러스의 바이러스 감염인, 방법.
  37. 제36항에 있어서, 상기 코로나바이러스가 SARS 및 MERS로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
  38. 제37항에 있어서, 상기 코로나바이러스가 COVID-19인, 방법.
  39. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 포함하는, 키메라 항원 수용체(CAR).
  40. 제39항에 있어서, CD8 Stalk 도메인, CD28 TM 도메인, 4a 1BB 도메인, 및 CD3ζ 도메인으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 수용체 도메인을 포함하는, CAR.
  41. 제40항에 따른 CAR을 발현하도록 조작된 림프구의 집단(population).
  42. 제39항 내지 제40항 중 어느 한 항에 따른 CAR을 발현하도록 조작된 T 세포 또는 NK 세포의 집단.
  43. 제39항 또는 제40항에 따른 CAR을 발현하는 적어도 하나의 세포, 또는 제41항 또는 제42항에 따른 세포의 집단을, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암을 치료하는 방법.
KR1020227038852A 2020-04-06 2021-04-05 암 및 감염의 치료를 위한 NKp46에 대한 항체 및 이의 작제물 KR20220164787A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063005457P 2020-04-06 2020-04-06
US63/005,457 2020-04-06
PCT/IL2021/050381 WO2021205438A1 (en) 2020-04-06 2021-04-05 Antibodies to nkp46 and constructs thereof for treatment of cancers and infections

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20220164787A true KR20220164787A (ko) 2022-12-13

Family

ID=75746987

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227038852A KR20220164787A (ko) 2020-04-06 2021-04-05 암 및 감염의 치료를 위한 NKp46에 대한 항체 및 이의 작제물

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20230183342A1 (ko)
EP (1) EP4132568A1 (ko)
JP (1) JP2023520587A (ko)
KR (1) KR20220164787A (ko)
CN (1) CN115768467A (ko)
AU (1) AU2021253899A1 (ko)
BR (1) BR112022020232A2 (ko)
CA (1) CA3179348A1 (ko)
WO (1) WO2021205438A1 (ko)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL305847A (en) * 2021-03-26 2023-11-01 Innate Pharma Multispecific proteins that contain a binding site for NKP46, a binding site for a cancer antigen that is fused to a cytokine to attract NK cells
KR20240019297A (ko) * 2021-06-09 2024-02-14 이나뜨 파르마 에스.에이. Nkp46, 사이토카인 수용체, 종양 항원 및 cd16a 에 결합하는 다중특이적 단백질
CN116003595B (zh) * 2022-07-11 2024-02-02 南方医科大学第三附属医院（广东省骨科研究院） 靶向nk细胞nkp46受体的纳米抗体及其制备方法和应用

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
LU91067I2 (fr) 1991-06-14 2004-04-02 Genentech Inc Trastuzumab et ses variantes et dérivés immuno chimiques y compris les immotoxines
DE69233528T2 (de) 1991-11-25 2006-03-16 Enzon, Inc. Verfahren zur Herstellung von multivalenten antigenbindenden Proteinen
JP3490437B2 (ja) 1992-01-23 2004-01-26 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング 単量体および二量体抗体フラグメント融合タンパク質
WO1996013583A2 (en) 1994-10-20 1996-05-09 Morphosys Gesellschaft Für Proteinoptimierung Mbh Targeted hetero-association of recombinant proteins to multi-functional complexes
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
ATE274064T1 (de) 1995-05-23 2004-09-15 Morphosys Ag Multimere proteine
US5719867A (en) 1995-06-30 1998-02-17 Scientific-Atlanta, Inc. Plural telephony channel baseband signal demodulator for a broadband communications system
PL2800196T3 (pl) 2011-12-27 2019-05-31 Lg Chemical Ltd Litowa bateria akumulatorowa i sposób jej wytwarzania
AU2015279316B2 (en) * 2014-06-27 2021-03-04 Innate Pharma Multispecific NKp46 binding proteins
CN108779175B (zh) * 2015-12-28 2022-07-08 依奈特制药公司 NKp46结合蛋白的可变区
EP3510047A1 (en) 2016-09-07 2019-07-17 Yissum Research and Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. Anti-nkp46 antibodies and therapeutic use of same

Also Published As

Publication number Publication date
BR112022020232A2 (pt) 2022-12-13
US20230183342A1 (en) 2023-06-15
EP4132568A1 (en) 2023-02-15
JP2023520587A (ja) 2023-05-17
CN115768467A (zh) 2023-03-07
WO2021205438A1 (en) 2021-10-14
AU2021253899A1 (en) 2022-11-17
CA3179348A1 (en) 2021-10-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20240018257A1 (en) Antibodies specific to human poliovirus receptor (pvr)
EP3344658B1 (en) Antibodies specific to human t-cell immunoglobulin and itim domain (tigit)
US20210130459A1 (en) Antibodies specific to human nectin4
US20230183342A1 (en) Antibodies to nkp46 and constructs thereof for treatment of cancers and infections
US20220112283A1 (en) Antibodies specific to human nectin-2
KR20230159823A (ko) Cd112r에 대한 항체 및 이의 용도

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination