CN108779175B - NKp46结合蛋白的可变区 - Google Patents

NKp46结合蛋白的可变区 Download PDF

Info

Publication number
CN108779175B
CN108779175B CN201680082632.4A CN201680082632A CN108779175B CN 108779175 B CN108779175 B CN 108779175B CN 201680082632 A CN201680082632 A CN 201680082632A CN 108779175 B CN108779175 B CN 108779175B
Authority
CN
China
Prior art keywords
protein
polypeptide
nkp46
domain
ser
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201680082632.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108779175A (zh
Inventor
劳伦特·戈捷
纳迪娅·安塞里斯
阿丽亚娜·莫雷尔
本杰明·罗西
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Innate Pharma SA
Original Assignee
Innate Pharma SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Innate Pharma SA filed Critical Innate Pharma SA
Priority to CN202210862118.XA priority Critical patent/CN115925933A/zh
Publication of CN108779175A publication Critical patent/CN108779175A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108779175B publication Critical patent/CN108779175B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/66—General methods for inserting a gene into a vector to form a recombinant vector using cleavage and ligation; Use of non-functional linkers or adaptors, e.g. linkers containing the sequence for a restriction endonuclease
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2511/00—Cells for large scale production
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2523/00—Culture process characterised by temperature

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

提供了结合NKp46的免疫球蛋白可变区，以及包含可变区的蛋白质如抗体和多特异性蛋白质。该蛋白质可以结合并特异性地重引导NK细胞裂解目标靶细胞。该蛋白质在治疗疾病尤其是癌症或感染性疾病中具有效用。

Description

NKp46结合蛋白的可变区
相关申请的交叉引用
本申请要求2015年12月28日提交的美国临时申请号62/271,474的权益，将其通过引用以其全部内容并入本文；包括任何附图和序列表。
序列表的引用
本申请是连同电子格式的序列表一起提交的。序列表被提供为题为“NKp46-7PCT_ST25txt”的文件，该文件创建于2016年12月19日，大小是376KB。将在电子格式的序列表中的信息通过引用以其全部内容并入本文。
技术领域
提供了免疫球蛋白可变区，以及包含这些可变区的蛋白质如抗体和多特异性蛋白。这些蛋白质可以结合并特异性地重引导NK细胞裂解目标靶细胞。这些蛋白质在治疗疾病尤其是癌症或感染性疾病中具有效用。
背景技术
结合两种不同表位的双特异性抗体提供了增加特异性、扩大效力和利用传统单克隆抗体无法实现的新颖作用机制的机会。已经报道了多种形式的同时结合两种靶标的双特异性抗体。使用双特异性抗体交联两种不同的受体以抑制信号传导途径已经在许多应用中显示出效用(参见例如，Jackman等人,(2010)J.Biol.Chem.[生物化学杂志]285:20850-20859)。双特异性抗体也已用于中和两种不同的受体。在其他方法中，双特异性抗体已用于募集免疫效应细胞，其中通过同时结合两种不同细胞类型上的受体的双特异性抗体在肿瘤细胞附近实现T细胞活化(参见Baeuerle,P.A.等人,(2009)Cancer Res[癌症研究]69(12):4941-4)。迄今为止开发的方法主要涉及将T细胞上的CD3复合物与肿瘤相关抗原连接的双特异性抗体。然而，在其他实例中，已经开发了具有一个结合CD16的臂(FcyRIIIa)和另一个与目标抗原如CD19结合的臂的双特异性抗体(参见Kellner等人(2011)Cancer Lett.[癌症快报]303(2):128-139)。
自然杀伤(NK)细胞是在非常规免疫中所涉及的淋巴细胞亚群。NK细胞提供有效的免疫监视机制，通过该机制可以消除不需要的细胞，如肿瘤或病毒感染的细胞。NK细胞的特征和生物学特性包括表面抗原(包括CD16、CD56和/或CD57)的表达；细胞表面上不存在α/β或γ/δTCR复合物；通过活化特定的细胞溶解酶结合并杀死不能表达“自身”MHC/HLA抗原的细胞的能力；杀死肿瘤细胞或表达NK活化受体配体的其他患病细胞的能力；以及释放称为细胞因子的刺激或抑制免疫应答的蛋白质分子的能力。
NK细胞的活性通过一种既包括活化信号又包括抑制信号的复杂机制来调节。已经鉴定了若干不同的NK细胞受体，这些受体在NK细胞介导的缺乏HLA I类的靶细胞的识别和杀灭中起着重要的作用。一种受体(虽然不是NK细胞特异性的)是FcγR3a(CD16)，它负责NK细胞介导的ADCC。另一种NK细胞受体是NKp46，它是Ig超家族的一员。它是NK细胞特异性的，并且其由特定mAb诱导的交联导致强烈的NK细胞活化，导致细胞内Ca++水平增加，引发细胞毒性和淋巴因子释放。国际专利公开号WO 2005/105858(先天制药公司(Innate Pharma))披露了结合Fcγ受体的单特异性全长IgG抗NKp46抗体用于治疗Fcγ阳性的血液恶性肿瘤的用途。提出肿瘤细胞(例如B细胞恶性肿瘤)上的Fcγ受体与结合NK细胞的抗NKp46抗体的Fc结构域相互作用，使得活化的NK细胞通过该抗体的两个反应性部分(例如抗原识别结构域和Fc结构域)与其靶细胞紧密接近，从而提高治疗功效。
迄今为止，尚未开发出NK细胞特异性双特异性抗体。募集NK细胞毒性的消耗剂如抗肿瘤抗体通常是通过CD16介导ADCC的全长IgG1。尽管存在多种形式的双特异性抗体，但本领域仍需要具有新的且明确定义的作用机制的蛋白质，这些蛋白质可以提供优于全长抗体的益处并且可以用于代替全长抗体。
发明内容
在一方面，本发明源于以下发现：与人NKp46多肽和非人灵长类动物(例如食蟹猴)NKp46多肽交叉反应的抗体高变区。在另一方面，本发明源于以下发现：在结合NK细胞上的NKp46的单链蛋白和多特异性蛋白(例如多肽、单链蛋白、多链蛋白，包括但不限于基于抗体的蛋白质形式)中保持功能的抗体高变区。
还提供了被抗原结合结构域结合的表位。抗原结构域结合NKp46上的表位，其提供高效抗原结合蛋白。此外，这些表位由人和非人灵长类动物共有，包括如在NK细胞表面表达的NKp46上的表位。
当掺入以单价方式结合NKp46的多肽(例如抗体、Fc蛋白、scFv等)中时，可变区允许结合分离的NK细胞上的NKp46而不触发NKp46活化(在不存在靶细胞的情况下)。可变区能够作为单链多肽(例如作为由肽接头分开的串联可变区)以及以F(ab)形式以高亲和力结合NKp46，并且能够作为单价结合物结合使得可以引导NK细胞裂解靶细胞的NKp46表位。此类特性使得它们在多种应用中具有优势，特别是在通过重链和轻链抗NKp46可变区结合NKp46和目标抗原，并且通过特异性地结合目标抗原的高变区(例如重链和轻链可变区)结合靶细胞上的目标抗原的多特异性(例如双特异性)蛋白中。这种多特异性蛋白能够重引导NK细胞裂解表达目标抗原的靶细胞，例如促成疾病的细胞。应当理解，尽管本文披露的高变区和人源化可变区保持单链形式的单价结合，并且可以有利地以将它们置于单多肽链上的构型使用，但它们也可以用于其他应用，如可变区在不同的链上的其他蛋白质，例如双特异性抗体和Fc蛋白，或者更一般地单特异性和/或常规抗NKp46抗体，例如以在体内或体外(例如在生物样品中)结合、调节和/或检测人和/或非人灵长类动物NKp46多肽。
在一方面，提供了(例如以相似的亲和力，如例如通过表面等离子体共振和/或通过NKp46表达细胞的流式细胞术评估的，通过本文的方法)结合人和非人灵长类动物NKp46多肽的抗原结合结构域(ABD)。在一个实施例中，ABD能够作为单链抗原结合结构域(例如scFv)结合NKp46多肽。在一个实施例中，ABD包含免疫球蛋白重链和轻链可变区，或包含在其中，例如其中重链和轻链可变结构域被置于单多肽链上。在另一个实施例中，重链和轻链可变结构域被置于多聚体蛋白内的不同多肽链上。重链可变区包含人源的重链框架区，并且轻链可变区包含人源的轻链框架区，任选地其中重链和/或轻链框架区包含一个或多个氨基酸修饰(例如一个或多个取代、一个或多个回复突变，其中残基被在该位置存在于亲本(例如鼠)框架中的残基取代)，任选地其中氨基酸修饰提供或增加与非人灵长类动物NKp46的结合。在一个实施例中，提供了包含这种ABD和/或可变区的蛋白质、Fc蛋白、抗体或抗体片段。在一方面，提供了编码这种抗原结合结构域(ABD)的分离的和/或重组的核酸。
此类蛋白质或多肽的实例包括例如单个多肽链NKp46结合结构域(一种结合人NKp46的置于单多肽链上的ABD，例如包含由(多)肽接头分开的VH和VL的多肽)。在一个实施例中，单链NKp46结合结构域包含本文披露的由肽接头分开的VH和VL结构域。单多肽链可以包含在包含一个或多个其他多肽链的多链多肽中，或者可以作为单多肽链分离。包含抗NKp46ABD的蛋白质或多肽的另一个实例是包含第一和第二多肽链的多聚体蛋白，其中一个链包含本文披露的抗NKp46ABD的VH结构域，并且另一个链包含本文披露的抗NKp46ABD的VL，其中链被配置成使得VH和VL形成结合NKp46的抗原结合结构域。
在一方面，提供了结合人NKp46多肽，任选地进一步结合非人灵长类动物NKp46多肽的蛋白质或多肽(例如单特异性、双特异性或多特异性抗体或蛋白，scFv，F(ab)或F(ab)2，多特异性Fc蛋白)，其中该蛋白质或多肽包含：(a)重链可变区，其包含衍生自人IGHV1-69基因的人重链框架区(FR1、FR2和FR3)和NKp46-1抗体的重链CDR1、2和3；以及(b)轻链可变区，其包含衍生自人IGKV1-33基因的人轻链框架区(FR1、FR2和FR3)和NKp46-1抗体的轻链CDR1、2和3。任选地，CDR是如通过Kabat、Chotia或IMGT编号所定义的。在一个实施例中，蛋白质或多肽结合野生型NKp46多肽，但和与野生型NKp46的结合相比，与在残基K41、E42、E119、Y121和/或Y194(参考SEQ ID NO:1)中的任何一个或多个处具有突变(例如丙氨酸取代)的突变型NKp46多肽的结合降低。在一个实施例中，重链可变区包含与SEQ ID NO:3的氨基酸序列具有至少70％、80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列，和/或轻链可变区包含与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少70％、80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列。在一个实施例中，重链可变区包含NKp46-1H1或H3可变结构域的氨基酸序列(或与其具有至少80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列)，并且轻链可变区包含NKp46-1L1可变结构域的氨基酸序列(或与其具有至少80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列)。
在一方面，提供了结合人NKp46多肽，任选地进一步结合非人灵长类动物NKp46多肽的蛋白质或多肽(例如单特异性、双特异性或多特异性抗体或蛋白，scFv，F(ab)或F(ab)2，多特异性Fc蛋白)，其中该蛋白质或多肽包含：(a)重链可变区，其包含衍生自IGHV4-30-4基因的人重链框架区(FR1、FR2和FR3)和NKp46-2抗体的重链CDR1、2和3；以及(b)轻链可变区，其包含衍生自IGKV1-39基因的人轻链框架区(FR1、FR2和FR3)和NKp46-2抗体的轻链CDR1、2和3。任选地，CDR是如通过Kabat、Chotia或IMGT编号所定义的。在一个实施例中，重链可变区包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少70％、80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列，和/或轻链可变区包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少70％、80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列。在一个实施例中，重链可变区包含NKp46-2H1、H2或H3可变结构域的氨基酸序列(或与其具有至少80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列)，并且轻链可变区包含NKp46-2L1可变结构域的氨基酸序列(或与其具有至少80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列)。
在一方面，提供了结合人NKp46多肽，任选地进一步结合非人灵长类动物NKp46多肽的蛋白质或多肽(例如单特异性、双特异性或多特异性抗体或蛋白，scFv，F(ab)或F(ab)2，多特异性Fc蛋白)，其中该蛋白质或多肽包含：(a)重链可变区，其包含衍生自IGHV1-69基因的人重链框架区(FR1、FR2和FR3)和NKp46-3抗体的重链CDR1、2和3；以及(b)轻链可变区，其包含衍生自IGKV3-11和/或IGKV3-15基因的人轻链框架区(FR1、FR2和FR3)(例如包含IGKV3-11和IGKV3-15序列或片段的镶嵌(mosaic)可变区)和NKp46-3抗体的轻链CDR1、2和3。任选地，CDR是如通过Kabat、Chotia或IMGT编号所定义的。在一个实施例中，蛋白质或多肽结合野生型NKp46多肽，但和与野生型NKp46的结合相比，与在残基P132、E133、I135和/或S136(参考SEQ ID NO:1)中的任何一个或多个处具有突变(例如丙氨酸取代)的突变型NKp46多肽的结合降低。在一个实施例中，重链可变区包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少70％、80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列，和/或轻链可变区包含与SEQ IDNO:8的氨基酸序列具有至少70％、80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列。在一个实施例中，重链可变区包含NKp46-3H1、H3或H4可变结构域的氨基酸序列(或与其具有至少80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列)，并且轻链可变区包含NKp46-3L1可变结构域的氨基酸序列(或与其具有至少80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列)。
在一方面，提供了结合人NKp46多肽，任选地进一步结合非人灵长类动物NKp46多肽的蛋白质或多肽(例如单特异性、双特异性或多特异性抗体或蛋白，scFv，F(ab)或F(ab)2，多特异性Fc蛋白)，其中该蛋白质或多肽包含：(a)重链可变区，其包含衍生自IGHV1-46和/或IGHV1-69基因的人重链框架区(FR1、FR2和FR3)(例如包含IGHV1-46和IGHV1-69序列或片段的镶嵌可变区)和NKp46-4抗体的重链CDR1、2和3；以及(b)轻链可变区，其包含衍生自IGKV1-NL1基因的人轻链框架区(FR1、FR2和FR3)和NKp46-4抗体的轻链CDR1、2和3。任选地，CDR是如通过Kabat、Chotia或IMGT编号所定义的。在一个实施例中，蛋白质或多肽结合野生型NKp46多肽，但和与野生型NKp46的结合相比，与在残基R101、V102、E104和/或L105(参考SEQ ID NO:1)中的任何一个或多个处具有突变(例如丙氨酸取代)的突变型NKp46多肽的结合降低。在一个实施例中，重链可变区包含与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少70％、80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列，和/或轻链可变区包含与SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少70％、80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列。在一个实施例中，重链可变区包含NKp46-4H1可变结构域的氨基酸序列(或与其具有至少80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列)，并且轻链可变区包含NKp46-4L2可变结构域的氨基酸序列(或与其具有至少80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列)。
在一方面，提供了结合人NKp46多肽，任选地进一步结合非人灵长类动物NKp46多肽的蛋白质或多肽(例如单特异性、双特异性或多特异性抗体或蛋白，scFv，F(ab)或F(ab)2，多特异性Fc蛋白)，其中该蛋白质或多肽包含：(a)重链可变区，其包含衍生自IGHV4-30-4基因的人重链框架区(FR1、FR2、FR3)和NKp46-9抗体的重链CDR1、2和3；以及(b)轻链可变区，其包含衍生自IGKV1-39基因的人轻链框架区(FR1、FR2、FR3)和NKp46-9抗体的轻链CDR1、2和3。任选地，CDR是如通过Kabat、Chotia或IMGT编号所定义的。在一个实施例中，重链可变区包含与SEQID NO:13的氨基酸序列具有至少70％、80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列，和/或轻链可变区包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有至少70％、80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列。在一个实施例中，重链可变区包含NKp46-9H2可变结构域的氨基酸序列(或与其具有至少80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列)，并且轻链可变区包含NKp46-9L1或L2可变结构域的氨基酸序列(或与其具有至少80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列)。在一个实施例中，重链可变区包含NKp46-9H3可变结构域的氨基酸序列(或与其具有至少80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列)，并且轻链可变区包含NKp46-9L1或L2可变结构域的氨基酸序列(或与其具有至少80％、90％、95％或98％同一性的氨基酸序列)。
在一方面，提供了包含各自含有人FR1、2和3框架区的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的抗原结合结构域，或者包含这种ABD的蛋白质或多肽(例如包含其的单克隆抗体、scFv、多特异性多肽、双特异性抗体、
Figure BDA0001770555070000071
或
Figure BDA0001770555070000072
或蛋白质等)，该ABD结合人和非人灵长类动物NKp46多肽，例如细胞表面NKp46多肽，其中该蛋白质或多肽包含选自下组的VH和VL组合，该组由以下组成：
(a)包含分别与SEQ ID NO:199或200中所示的NKp46-1H1或H3可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列的VH，和包含与SEQID NO:201中所示的NKp46-1L1可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％相同的氨基酸序列的VL；
(b)包含分别与SEQ ID NO:202、203或203中所示的NKp46-2H1、H2或H3可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列的VH，和包含与SEQ ID NO:205中所示的NKp46-2L1可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％相同的氨基酸序列的VL；
(c)包含分别与SEQ ID NO:206、207或208中所示的NKp46-3H1、H3或H4可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列的VH，和包含与SEQ ID NO:209中所示的NKp46-3L1可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％相同的氨基酸序列的VL；
(d)包含与SEQ ID NO:210、211或212中所示的NKp46-4H1、H2或H3可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列的VH，和包含与SEQ ID NO:213中所示的NKp46-4L2可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％相同的氨基酸序列的VL；
(e)包含与SEQ ID NO:215中所示的NKp46-9H2可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列的VH，和包含分别与SEQ ID NO:217或218中所示的NKp46-9L1或L2可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％相同的氨基酸序列的VL；或者
(f)包含与SEQ ID NO:215中所示的NKp46-9H3可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列的VH，和包含分别与SEQ ID NO:217或218中所示的NKp46-9L1或L2可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、
95％或98％相同的氨基酸序列的VL。
在一方面，提供了包含各自含有人FR1、2和3框架区的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的抗原结合结构域，或者包含这种ABD的蛋白质或多肽，该ABD结合人和非人灵长类动物NKp46多肽，其中该蛋白质或多肽包含选自下组的VH和VL组合，该组由以下组成：
(a)VH，其包含具有SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的VH结构域的CDR1、2和3和人IGHV1-69基因区段的FR1、2和3，和VL，其包含具有SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的VL结构域的CDR1、2和3和人IGKV1-33基因区段的FR1、2和3；
(b)VH，其包含具有SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的VH结构域的CDR1、2和3和人IGHV4-30-4基因区段的FR1、2和3，和VL，其包含具有SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列的VL结构域的CDR1、2和3和人IGKV1-39基因区段的FR1、2和3；
(c)VH，其包含具有SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列的VH结构域的CDR1、2和3和人IGHV1-69基因区段的FR1、2和3，和VL，其包含具有SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列的VL结构域的CDR1、2和3和人IGKV3-11和/或IGKV3-15基因区段的FR1、2和3；
(d)VH，其包含具有SEQ ID NO:9中所示的氨基酸序列的VH结构域的CDR1、2和3和人IGHV1-46和/或IGHV1-69基因区段的FR1、2和3，和VL，其包含具有SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列的VL结构域的CDR1、2和3和人IGKV1-NL1基因区段的FR1、2和3；
(e)VH，其包含具有SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列的VH结构域的CDR1、2和3和人IGHV4-30-4基因区段的FR1、2和3，和VL，其包含具有SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列的VL结构域的CDR1、2和3和人IGKV1-39基因区段的FR1、2和3。
在任何方面，抗原结合结构域可以包含含有与以下抗体中任一种的相应VH和VL至少80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列的VH和VL：NKp46-1H1L1、NKp46-1H3L1、NKp46-2H1L1、NKp46-2H2L1、NKp46-2H3L1、NKp46-3H1L1、NKp46-3H3L1、NKp46-3H4L1、NKp46-4H1L2、NKp46-4H2L2、NKp46-4H3L2、NKp46-9H2L1、NKp46-9H2L2、NKp46-9H3L1或NKp46-9H3L2。
在一方面，提供了包含各自含有人FR1、2和3框架区的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的抗原结合结构域，或者包含这种ABD的蛋白质或多肽(例如抗体、多特异性蛋白)，该ABD结合NKp46多肽，其中该蛋白质或多肽包含与以下抗体中任一种的相应VH和VL至少80％、90％、95％或98％(或100％)相同的氨基酸序列：NKp46-1H1L1、NKp46-1H3L1、NKp46-2H1L1、NKp46-2H2L1、NKp46-2H3L1、NKp46-3H1L1、NKp46-3H3L1、NKp46-3H4L1、NKp46-4H1L2、NKp46-4H2L2、NKp46-4H3L2、NKp46-9H2L1、NKp46-9H2L2、NKp46-9H3L1或NKp46-9H3L2。这些抗体的VH和VL序列列于表C和实例1部分B中。
在一个实施例中，NKp46-1VL可以在Kabat位置87处包含氨基酸取代，任选地其中位置87处的残基是苯丙氨酸。NKp46-1VH可以在Kabat残基27、66和/或67处包含氨基酸取代，任选地在Kabat残基37、48和/或91处进一步包含取代。任选地，存在于特定位置处的残基是在本文位置处取代的残基，例如如实例1中所示。
在一个实施例中，NKp46-2VL可以在Kabat位置48处包含氨基酸取代，任选地其中位置48处的残基是缬氨酸。NKp46-2VH可以在Kabat残基27和/或71处包含氨基酸取代，任选地在Kabat残基48和/或67处进一步包含取代，任选地在Kabat残基31处进一步包含取代。任选地，存在于特定位置处的残基是在本文位置处取代的残基，例如如实例1中所示。
在一个实施例中，NKp46-3VL可以在Kabat位置49处包含氨基酸取代，任选地其中位置49处的残基是赖氨酸。NKp46-3VH可以在Kabat残基27处包含氨基酸取代，任选地在Kabat残基48和/或67处进一步包含取代，任选地在Kabat残基69处进一步包含取代。任选地，存在于特定位置处的残基是在本文位置处取代的残基，例如如实例1中所示。
在一个实施例中，NKp46-4VL可以在Kabat位置36和/或48处包含氨基酸取代，任选地其中位置36处的残基是苯丙氨酸，任选地其中位置48处的残基是缬氨酸。NKp46-4VH可以在Kabat残基30、48和/或93处包含氨基酸取代，任选地在Kabat残基67处进一步包含取代，任选地在Kabat残基69处进一步包含取代。任选地，存在于特定位置处的残基是在本文位置处取代的残基，例如如实例1中所示。
在一个实施例中，NKp46-9VL可以在Kabat位置36处包含氨基酸取代，任选地其中位置36处的残基是半胱氨酸，任选地在Kabat残基48处进一步包含取代，任选地其中位置48处的残基是缬氨酸。NKp46-9VH可以在Kabat残基71处包含氨基酸取代，任选地在Kabat残基27处进一步包含取代，任选地在Kabat残基48和/或67处进一步包含取代。任选地，存在于特定位置处的残基是在本文位置处取代的残基，例如如实例1中所示。
在任何实施例的一方面，蛋白质或多肽以单价方式结合NKp46。在任何实施例的方面，蛋白质或多肽包含或含有不多于一个结合NKp46的抗原结合结构域。
在一个实施例中，蛋白质或多肽包含人Fc结构域或其部分，其中该Fc结构域或其部分能够结合人新生儿Fc受体(FcRn)和人CD16多肽。因为FcγRIIIa(CD16)并不存在于所有NK细胞上，所以设计为通过FcγRIIIa发挥抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的常规治疗性抗体(例如人同种型IgG1的)可能不动员所有NK细胞；另一方面，本发明的蛋白质能够通过NKp46使得所有NK细胞被募集，并且因此这些蛋白质可用于活化NKp46+CD16-NK细胞以及NKp46+CD16+NK细胞或增加其细胞溶解活性。
在一个实施例中，蛋白质或多肽包含人Fc结构域或其部分，其中该Fc结构域或其部分能够结合人新生儿Fc受体(FcRn)而缺乏与人CD16多肽的结合。
在一个实施例中，蛋白质或多肽是单链多肽。在一个实施例中，蛋白质或多肽是多聚体多肽，任选地是二聚体、三聚体或四聚体蛋白。
有利地，在一个实施例中，在存在NK细胞和靶细胞的情况下，多特异性蛋白可以结合(i)靶细胞上的目标抗原和(ii)NK细胞上的NKp46，并且当与靶细胞上的目标抗原和NKp46结合时，可以通过NKp46诱导NK细胞中的信号传导和/或NK细胞的活化(该蛋白质充当NKp46激动剂)，从而尤其是通过由NKp46传递的活化信号促进NK细胞的活化和/或靶细胞的裂解。在特定的有利实施例中，多特异性蛋白包含结合NKp46的单抗原结合结构域(该蛋白质以单价方式结合NKp46)。在一个实施例中，当与靶细胞上的目标抗原和NK细胞上的NKp46结合时，蛋白质能够通过NKp46诱导NK细胞中的信号传导。在一个实施例中，蛋白质包含第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域，其中第一或第二抗原结合结构域之一结合人NKp46多肽，并且第一或第二抗原结合结构域中的另一个结合靶细胞上表达的目标抗原。
在一个实施例中，多特异性蛋白是单体的。在一个实施例中，多特异性蛋白是二聚体(例如异二聚体)、三聚体或四聚体。在一个实施例中，蛋白质是异二聚体、异三聚体或四聚体，其包含第一多肽链，该第一多肽链包含结合NKp46的ABD的由接头肽分开的VH和VL结构域(本文披露的VH和VL)，和任选地Fc结构域；以及第二多肽链，其包含结合目标抗原的一个或多个可变区或抗原结合结构域，和任选地Fc结构域。在一个实施例中，第一和第二多肽链均包含Fc结构域，并且蛋白质包含二聚体Fc结构域，任选地其中该Fc结构域能够结合人CD16。在一个实施例中，单体或二聚体蛋白包含具有如下结构域结构的蛋白质，其中Fc结构域插入在结合NKp46的抗原结合结构域(ABD)与结合目标抗原的抗原结合结构域之间。在一个实施例中，Fc衍生的多特异性多肽是双特异性抗体。
在本文的任何蛋白质的一个实施例中，多特异性蛋白的结合目标抗原的抗原结合结构域结合由寻求被NK细胞裂解的靶细胞表达的抗原(例如多肽)。任选地，这种抗原由癌细胞、肿瘤相关免疫细胞(例如免疫抑制细胞或调节细胞)、病毒感染的细胞或促成自身免疫性或炎性疾病的细胞表达。任选地，目标抗原是已知在和与其特异性地结合的全长人IgG1抗体接触时能够进行细胞内内化的癌抗原。
在本文的任何实施例的一方面，提供了编码VH和/或VL、抗体重链和/或轻链、单链抗原结合结构域、本披露的任何蛋白质的第一、第二、第三或另外的多肽链的重组核酸。在本文的任何实施例的一方面，提供了包含本披露的核酸的重组宿主细胞。
任何方法可以进一步表征为包括本申请中描述的任何步骤，尤其是包括在“具体实施方式”中描述的任何步骤。本发明进一步涉及鉴定、测试和/或制备本文描述的蛋白质的方法。本发明进一步涉及可通过任何本发明的方法获得的多特异性蛋白。本披露进一步涉及本文披露的多特异性蛋白的药物配制品或诊断配制品。本披露进一步涉及在治疗或诊断方法中使用多特异性蛋白的方法。
可以在本文的其他地方进一步描述本发明的这些和另外的有利方面和特征。
附图说明
图1显示抗CD19-F1-抗CD3在存在B221(CD19)或JURKAT(CD3)细胞系(在分离时)的情况下不引起T/B细胞聚集，但在共培养B221和JURKAT细胞时它确实引起细胞聚集。
图2A至2F示出了产生的双特异性蛋白的不同结构域排列。
图3A和3B分别显示具有基于NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3或NKp46-4的NKp46结合区的双特异性F1和F2抗体能够引导静息NK细胞针对CD19阳性Daudi肿瘤靶细胞，而同种型对照抗体不导致消除Daudi细胞。利妥昔单抗(RTX)充当ADCC的阳性对照，其中用RTX(在该测定中以10μg/ml)获得的最大响应是21.6％特异性裂解。
图4A(上图CD107，下图CD69)显示具有F2形式蛋白的NKp46和CD19结合区的双特异性抗体在不存在靶细胞的情况下不活化静息NK细胞，然而全长抗NKp46抗体以及阳性对照阿仑单抗确实活化NK细胞。图4B显示在存在Daudi靶细胞的情况下，双特异性抗NKp46x抗CD19抗体(包括NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3或NKp46-4结合结构域中的每一个)活化静息NK细胞(上图CD107，下图CD69)，而全长抗CD19最多只显示非常低的NK细胞活化。全长抗NKp46抗体或阿仑单抗均未示出超过单独存在NK细胞情况下观察到的活化的显著增加。图4C(上图CD107，下图CD69)显示在存在CD19阴性HUT78细胞的情况下，双特异性抗NKp46x抗CD19抗体(包括NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3或NKp46-4可变区中的每一个)均不活化NK细胞。然而，全长抗NKp46抗体和阿仑单抗导致水平类似于单独存在NK细胞情况下观察到的可检测的NK细胞活化。同种型对照抗体不诱导活化。
图5A和5B显示在1:1的低效应物:靶标比率下，在存在Daudi细胞的情况下，每种双特异性抗NKp46x抗CD19抗体均活化NK细胞，并且作为ADCC诱导抗体，双特异性抗NKp46x抗CD19比作为全长人IgG1的抗CD19抗体有效力得多。上图是CD107(图5A)，并且下图示出了CD69(图5B)。
图6A和6B显示每种NKp46x CD19双特异性蛋白(单链形式F3和多聚体形式F5和F6)均通过人KHYG-1 CD16阴性hNKp46阳性NK细胞系诱导Daudi(图6A)或B221(图6B)细胞的特异性裂解，而利妥昔单抗和人IgG1同种型对照(IC)抗体则没有。
图7显示F5形式的其Fc结构域结合CD16的NKp46x CD19双特异性蛋白在介导Daudi靶细胞裂解方面比全长IgG1抗CD19抗体或F6形式双特异性蛋白有效力得多。F6形式的其Fc结构域不结合CD16的双特异性抗CD19在介导Daudi靶细胞的NK细胞裂解方面与全长IgG1抗CD19抗体一样有效力，考虑到对照IgG1抗CD19抗体二价地结合CD19，这是显著的。
具体实施方式
如在说明书中使用的，“一种/个(a或an)”可以意指一种/个或多种/个。如在权利要求中使用的，当与词“包含(comprising)”结合使用时，词“一种/个(a或an)”可以意指一种/个或多于一种/个。
当使用“包含”时，这可以任选地被“基本上由……组成”替换，更任选地被“由……组成”替换。
如本文所用的，术语“抗原结合结构域”是指包含能够免疫特异性地结合表位的三维结构的结构域。因此，在一个实施例中，所述结构域可以包含高变区，任选地抗体链的VH和/或VL结构域，任选地至少VH结构域。在另一个实施例中，结合结构域可以包含抗体链的至少一个互补决定区(CDR)。在另一个实施例中，结合结构域可以包含来自非免疫球蛋白支架的多肽结构域。
本文中的术语“抗体”以最广泛的含义使用，并且具体包括全长单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)以及抗体片段和衍生物，只要它们展现所需生物活性即可。例如，在Harlow等人,ANTIBODIES:A LABORATORY MANUAL[抗体：实验室手册],Cold Spring Harbor Laboratory Press[冷泉港实验室出版社],Cold Spring Harbor[冷泉港],纽约州,(1988)中提供了与生产抗体相关的各种技术。“抗体片段”包含全长抗体的一部分，例如其抗原结合区或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、F(ab)3、Fv(通常为抗体单臂的VL和VH结构域)、单链Fv(scFv)、dsFv、Fd片段(通常为VH和CH1结构域)和dAb(通常为VH结构域)片段；VH、VL、VhH和V-NAR结构域；迷你抗体、双抗体、三抗体、四抗体和κ体(参见例如，Ill等人,Protein Eng[蛋白质工程]1997；10:949-57)；骆驼IgG；IgNAR；以及由抗体片段形成的多特异性抗体片段和一个或多个分离的CDR或功能性互补位，其中分离的CDR或抗原结合残基或多肽可以关联或连接在一起以形成功能性抗体片段。已经在例如Holliger和Hudson,Nat Biotechnol[自然生物技术]2005；23,1126-1136；WO 2005040219以及公开的美国专利申请20050238646和20020161201中描述或综述了各种类型的抗体片段。
如本文所用的，术语“抗体衍生物”包含全长抗体或抗体片段，例如至少包含其抗原结合区或可变区，其中一个或多个氨基酸例如通过烷基化、PEG化、酰化、酯形成或酰胺形成等被化学修饰。这包括但不限于PEG化抗体、半胱氨酸-PEG化抗体及其变体。
当在本文中使用时，术语“高变区”是指抗体的负责抗原结合的氨基酸残基。高变区通常包含来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基(例如轻链可变域中的残基24-34(L1)、50-56(L2)和89-97(L3)以及重链可变域中的31-35(H1)、50-65(H2)和95-102(H3)；Kabat等人1991)和/或来自“高变环”的那些残基(例如轻链可变域中的残基26-32(L1)、50-52(L2)和91-96(L3)以及重链可变域中的26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)；Chothia和Lesk,J.Mol.Biol[分子生物学杂志]1987；196:901-917)。通常，此区域中的氨基酸残基的编号通过Kabat等人，同上中描述的方法进行。本文中的短语如“Kabat位置”、“如在Kabat中对可变结构域残基进行编号”和“根据Kabat”是指用于重链可变结构域或轻链可变结构域的这种编号系统。使用Kabat编号系统，肽的实际直链氨基酸序列可以含有对应于可变结构域的FR或CDR的缩短或插入的更少的或另外的氨基酸。例如，重链可变结构域可以包含在CDR H2的残基52之后的单个氨基酸插入(根据Kabat的残基52a)以及在重链FR残基82之后的插入残基(例如根据Kabat的残基82a、82b和82c等)。可以通过在抗体序列与“标准”Kabat编号序列的同源性区域进行比对来确定给定抗体的残基的Kabat编号。
如本文所用的，“框架”或“FR”残基意指排除定义为CDR的那些区域的抗体可变结构域的区域。每个抗体可变结构域框架可以进一步细分为由CDR分开的连续区域(FR1、FR2、FR3和FR4)。
如本文所定义的，“恒定区”意指由轻链或重链免疫球蛋白恒定区基因之一编码的抗体衍生的恒定区。如本文所用的，“恒定轻链”或“轻链恒定区”意指由κ(Cκ)或λ(Cλ)轻链编码的抗体区域。恒定轻链通常包含单个结构域，并且如本文所定义的，是指Cκ或Cλ的位置108-214，其中编号是根据EU索引(Kabat等人,1991,Sequences of Proteins ofImmunological Interest[免疫学上感兴趣的蛋白质序列],第5版,United States PublicHealth Service[美国公共卫生署],National Institutes of Health[国立卫生研究院]贝塞斯达)。如本文所用的，“恒定重链”或“重链恒定区”意指由μ、δ、γ、α或ε基因编码的抗体区域，以将抗体的同种型分别定义为IgM、IgD、IgG、IgA或IgE。对于全长IgG抗体，如本文所定义的，恒定重链是指CH1结构域的N末端到CH3结构域的C末端，因此包含位置118-447，其中编号是根据EU索引。
如本文所用的，“Fab”或“Fab区”意指包含VH、CH1、VL和CL免疫球蛋白结构域的多肽。Fab可以指分离情况下的此区域，或者在多肽、多特异性多肽或ABD或者如本文概述的任何其他实施例的背景下的此区域。
如本文所用的，“单链Fv”或“scFv”意指包含抗体的VH和VL结构域的抗体片段，其中这些结构域存在于单多肽链中。通常，Fv多肽进一步包含在VH与VL结构域之间的多肽接头，该多肽接头使得scFv能够形成用于抗原结合的所需结构。用于产生scFv的方法在本领域是众所周知的。关于用于产生scFv的方法的综述，参见Pluckthun的The Pharmacologyof Monoclonal Antibodies[单克隆抗体的药理学],第113卷,Rosenburg和Moore编辑Springer-Verlag[施普林格出版社],纽约,第269-315页(1994)。
如本文所用的，“Fv”或“Fv片段”或“Fv区”意指包含单个抗体的VL和VH结构域的多肽。
如本文所用的，“Fc”或“Fc区”意指包含除了第一恒定区免疫球蛋白结构域之外的抗体恒定区的多肽。因此，Fc是指IgA、IgD和IgG的最后两个恒定区免疫球蛋白结构域，以及IgE和IgM的最后三个恒定区免疫球蛋白结构域，以及在这些结构域的N末端的柔性铰链。对于IgA和IgM，Fc可以包含J链。对于IgG，Fc包含免疫球蛋白结构域Cγ2(CH2)和Cγ3(CH3)以及Cγ1与Cγ2之间的铰链。尽管Fc区的边界可以改变，但人IgG重链Fc区通常被定义为在其羧基末端至少包含残基C226、P230或A231，其中编号是根据EU索引。Fc可以指分离情况下的此区域，或者在如下所述的Fc多肽的背景下的此区域。如本文所用的，“Fc多肽”或“Fc衍生的多肽”意指包含全部或部分Fc区的多肽。Fc多肽包括但不限于抗体、Fc融合物和Fc片段。
如本文所用的，“可变区”意指包含一个或多个Ig结构域的抗体区域，其基本上由分别构成轻链(包括κ和λ)和重链免疫球蛋白遗传基因座的VL(包括Vκ(VK)和Vλ)和/或VH基因中的任一种所编码。轻链或重链可变区(VL或VH)由被称为“互补决定区”或“CDR”的三个高变区中断的“框架”或“FR”区组成。框架区和CDR的范围已经被精确定义，例如如在Kabat中(参见“Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫学上感兴趣的蛋白质序列],”E.Kabat等人,U.S.Department of Health and Human Services[美国健康与人类服务部],(1983))，以及如在Chothia中。抗体的框架区(即构成性轻链和重链的组合框架区)用于定位和比对主要负责结合抗原的CDR。
术语“特异性地结合”意指优选地在竞争性结合测定中抗体或多肽可以结合到结合配偶体(例如NKp46)上，如使用重组体形式的蛋白质、其中的表位、或存在于分离的靶细胞的表面上的天然蛋白所评估的。用于确定特异性结合的竞争性结合测定和其他方法在下面进一步描述，并且在本领域是众所周知的。
当抗体或多肽被说成与特定单克隆抗体(例如在抗NKp46单特异性或双特异性抗体的背景下的NKp46-1、-2、-4、-6或-9)“竞争”时，这意味着该抗体或多肽在使用重组靶(例如NKp46)分子或表面表达的靶(例如NKp46)分子的结合测定中与该单克隆抗体竞争。例如，如果在结合测定中，测试抗体降低NKp46-1、-2、-4、-6或-9与NKp46多肽或表达NKp46的细胞的结合，则该抗体被说成分别与NKp46-1、-2、-4、-6或-9“竞争”。
如本文所用的，术语“亲和力”意指抗体或多肽与表位结合的强度。抗体的亲和力通过解离常数KD给出，定义为[Ab]x[Ag]/[Ab-Ag]，其中[Ab-Ag]是抗体-抗原复合物的摩尔浓度，[Ab]是未结合的抗体的摩尔浓度，并且[Ag]是未结合的抗原的摩尔浓度。亲和力常数KA是由1/KD定义的。用于确定mAb的亲和力的优选方法可以在Harlow等人,Antibodies:ALaboratory Manual[抗体：实验室手册],Cold Spring Harbor Laboratory Press[冷泉港实验室出版社],Cold Spring Harbor[冷泉港],纽约州,1988；Coligan等人编辑,CurrentProtocols in Immunology[免疫学实验指南],Greene Publishing Assoc.and WileyInterscience[格林出版协会和威利国际科学出版公司],纽约州,(1992,1993)以及Muller,Meth.Enzymol.[酶学方法]92:589-601(1983)中找到，将这些参考文献通过引用全然地并入本文。本领域众所周知的用于确定mAb的亲和力的一种优选的标准方法是使用表面等离子体共振(SPR)筛选(如通过用BIAcoreTM SPR分析装置分析)。
在本发明的背景下，“决定簇”指明多肽上相互作用或结合的位点。
术语“表位”是指抗原决定簇，并且是在抗原上与抗体或多肽结合的区域(area或region)。蛋白质表位可以包含在结合中直接涉及的氨基酸残基以及被特异性抗原结合抗体或肽有效阻断的氨基酸残基，即抗体“足迹”内的氨基酸残基。它是可以与例如抗体或受体组合的复杂抗原分子上的最简单形式或最小结构区域。表位可以是直链的或构象性的/结构性的。术语“线性表位”被定义为由在氨基酸的线性序列(一级结构)上连续的氨基酸残基构成的表位。术语“构象性表位或结构性表位”被定义为由多个氨基酸残基构成的表位，这些氨基酸残基不全是连续性的，并且因此表示了通过分子折叠(二级、三级和/或四级结构)而彼此邻近的氨基酸线性序列的分离的部分。构象性表位取决于三维结构。因此，术语“构象性”通常与“结构性”可互换地使用。
本文中的“氨基酸修饰”意指多肽序列中的氨基酸取代、插入和/或缺失。本文中的氨基酸修饰的实例是取代。本文中的“氨基酸修饰”意指多肽序列中的氨基酸取代、插入和/或缺失。本文中的“氨基酸取代”或“取代”意指在蛋白质序列中的给定位置处的氨基酸被另一个氨基酸替换。例如，取代Y50W是指亲本多肽的变体，其中位置50处的酪氨酸被色氨酸替换。多肽的“变体”是指具有与参考多肽(通常为天然或“亲本”多肽)基本相同的氨基酸序列的多肽。多肽变体可以在天然氨基酸序列内的某些位置处具有一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入。
“保守”氨基酸取代是以下那些，其中用具有类似理化特性的侧链的氨基酸残基来替换氨基酸残基。具有类似侧链的氨基酸残基的家族在本领域是已知的，并且包括具有以下侧链的氨基酸：碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β分支侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)以及芳族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。
术语“同一性”或“相同的”当用于两种或更多种多肽的序列之间的关系时，是指多肽之间的序列关联程度，如通过两个或更多个氨基酸残基链之间匹配的数目来确定的。“同一性”使用由具体数学模型或计算机程序(即“算法”)解决的空位比对(如果有的话)测量两个或更多个序列中较短序列之间的一致匹配的百分比。相关多肽的同一性可以通过已知方法容易地计算出。此类方法包括但不限于在Computational Molecular Biology[计算分子生物学],Lesk,A.M.编辑,Oxford University Press[牛津大学出版社],纽约,1988；Biocomputing:Informatics and Genome Projects[生物计算：信息学与基因组计划],Smith,D.W.编辑,Academic Press[学术出版社],纽约,1993；Computer Analysis ofSequence Data[序列数据的计算机分析],第1部分,Griffin,A.M.和Griffin,H.G.编辑,Humana Press[胡马纳出版社],新泽西州,1994；Sequence Analysis in MolecularBiology[分子生物学中的序列分析],von Heinje,G.,Academic Press[学术出版社],1987；Sequence Analysis Primer[序列分析入门],Gribskov,M.和Devereux,J.编辑,M.Stockton Press[斯托克顿出版社],纽约,1991；以及Carillo等人,SIAM J.AppliedMath.[工业与应用数学学会应用数学杂志]48,1073(1988)中描述的那些。
用于确定同一性的优选方法被设计为给出所测试序列之间的最大匹配。确定同一性的方法描述于可公开获得的计算机程序中。用于确定两个序列之间的同一性的优选计算机程序方法包括GCG程序包，该程序包包括GAP(Devereux等人,Nucl.Acid.Res.[核酸研究]12,387(1984)；GeneticsComputer Group[[遗传学计算机组],University of Wisconsin[威斯康辛大学],麦迪逊,威斯康辛州)、BLASTP、BLASTN和FASTA(Altschul等人,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]215,403-410(1990))。BLASTX程序可公开地获自美国国家生物技术信息中心(NCBI)以及其他来源(BLAST Manual[BLAST手册],Altschul等人NCB/NLM/NIH贝塞斯达，马里兰州20894；Altschul等人，同上)。众所周知的Smith Waterman算法也可以用于确定同一性。
“分离的”分子是作为其中相对于其所属的分子类别发现的组合物中的主要种类的分子(即，它构成组合物中分子类型的至少约50％，并且通将构成组合物中分子种类例如肽的至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或更多)。通常，在组合物中所有存在的肽种类的背景下，或者至少相对于建议用途的背景下实质上有活性的肽种类，多肽的组合物将展现98％、98％或99％的多肽同质性。
在本文的背景下，“治疗(treatment或treating)”是指预防、减轻、管理、治愈或减少疾病或障碍的一种或多种症状或临床相关表现(除非与上下文矛盾)。例如，尚未鉴定出疾病或障碍的症状或临床相关表现的患者的“治疗”是预防性(preventive或prophylactic)治疗，而已鉴定出疾病或障碍的症状或临床相关表现的患者的“治疗”通常不构成预防性(preventive或prophylactic)治疗。
如本文所用的，“NK细胞”是指在非常规免疫中所涉及的淋巴细胞亚群。NK细胞可以凭借某些特点和生物学特性来鉴定，如人NK细胞的特异性表面抗原(包括CD56和/或NKp46)的表达、细胞表面上不存在α/β或γ/δTCR复合物、通过活化特定的细胞溶解机器结合并杀死不能表达“自身”MHC/HLA抗原的细胞的能力、杀死肿瘤细胞或表达NK活化受体配体的其他患病细胞的能力、以及释放称为细胞因子的刺激或抑制免疫应答的蛋白质分子的能力。使用本领域众所周知的方法，任何这些特点和活性均可用来鉴定NK细胞。术语NK细胞也将包括NK细胞的任何亚群。在本文的背景下，“活性”NK细胞表示具有生物活性的NK细胞，包括具有裂解靶细胞或增强其他细胞免疫功能的能力的NK细胞。NK细胞可以通过本领域已知的多种技术获得，如从血液样品中分离、细胞单采术、组织或细胞收集等。用于涉及NK细胞的测定的有用规程可以在Natural Killer Cells Protocols[自然杀伤细胞规程](由Campbell KS和Colonna M编辑.Human Press[人类出版社].第219-238页(2000))中找到。
术语“内化”，与“细胞内内化”可互换地使用，是指与将分子从细胞的细胞外表面转移到细胞的细胞内表面的过程相关的分子的、生物化学的和细胞的事件。负责分子的细胞内内化的过程是众所周知的，并且可以尤其涉及细胞外分子(如激素、抗体和小有机分子)的内化；膜相关分子(如细胞表面受体)的内化；和与细胞外分子结合的膜结合分子(例如与跨膜受体结合的配体或与膜相关分子结合的抗体)的复合物的内化。因此，“诱导和/或增加内化”包括其中开始细胞内内化和/或增加细胞内内化的速率和/或程度的事件。
如本文所用的，在Nkp46处具有“激动剂”活性的试剂是可以引起或增加“NKp46信号传导”的试剂。“Nkp46信号传导”是指NKp46多肽活化或转导细胞内信号传导途径的能力。NKp46信号传导活性的变化可以例如通过设计用于测量NKp46信号传导途径变化(例如通过监测信号转导组分的磷酸化)的测定、测量某些信号转导组分与其他蛋白质或细胞内结构的关联或诸如激酶等组分的生物化学活性的测定、或设计用于测量报告基因在NKp46敏感性启动子和增强子的控制下的表达或间接地通过由NKp46多肽介导的下游作用(例如NK细胞中特定细胞溶解机器的活化)的测定来测量。报告基因可以是天然存在的基因(例如监测细胞因子产生)，或者它们可以是人工引入细胞中的基因。其他基因可以被置于此类调节元件的控制之下，并且因此用于报告NKp46信号传导的水平。
“NKp46”是指由Ncr1基因或由从这种基因制备的cDNA编码的蛋白质或多肽。术语NKp46多肽包括任何天然存在的同种型、等位基因或变体(例如与SEQ ID NO 1 90％、95％、98％或99％相同的NKp46多肽，或者其至少20、30、50、100或200个氨基酸残基的连续序列)。人NKp46(同种型a)的304个氨基酸残基的序列如下所示：
Figure BDA0001770555070000191
Figure BDA0001770555070000201
SEQ ID NO:1对应于NCBI登录号NP_004820，将其披露通过引用并入本文。人NKp46mRNA序列描述于NCBI登录号NM_004829中，将其披露通过引用并入本文。食蟹猴(macaca fascicularis/cynomolgus)NKp46多肽的细胞外结构域的氨基酸残基序列如下所示：
MSSTLRALLCLGLCLSQRISAPKQTLPKPIIRAESTYMVPKEKQATLCCQGSYGAVEYQLHFEGSLFAVERPKPPERINGVKFHIPDMNSRKAGRYSCIYRVGELWSERSDLLDLVVTEMYDTPTLSVHPGPEVTSGEKVTFYCRLDTATSMFLLLKEGRSRDVQRSYGKVQAEFPMGPVTTAHRGSYRCFGSYNNYAWSFPSEPVKLLVTGDIENTSLAPTDPTFPDSWDTCLLTRETGLQKDLALWDHTAQN。
产生抗NKp46抗体
抗NKp46抗原结合结构域结合人NKp46多肽的细胞外部分。在一方面，包含本披露的VH和VL的蛋白质是人源化抗体或者包含其抗原结合片段。在一方面，抗体包含选自人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4恒定结构域的恒定结构域，任选地包含一个或多个氨基酸修饰。在一方面，抗NKp46抗体包含选自以下的抗体片段：Fab片段、Fab'片段、Fab'-SH片段、F(ab)2片段、F(ab')2片段、Fv片段、重链Ig(美洲驼或骆驼Ig)、VHH片段、单结构域FV以及单链抗体片段。在一方面，抗NKp46抗体包含选自以下的合成的或半合成的抗体衍生的分子：scFV、dsFV、迷你抗体、双抗体、三抗体、κ体、IgNAR、以及多特异性抗体。试剂可以任选地进一步包含Fc结构域。在一方面，抗体呈至少部分纯化的形式。在一方面，抗体呈基本上分离的形式。
抗体可以通过本领域已知的多种技术产生。可以使用其中可以评估抗体竞争的免疫筛选测定来选择将结合NKp46上的与本文的抗原结合结构域相同的表位的抗体，例如如在例如2016年6月23日提交的PCT申请号PCT/EP2016/064537(先天制药公司)中描述的，将其披露通过引用并入本文。
通常，本文提供的抗NKp46抗体或NKp46结合蛋白对NKp46多肽(例如如本文实例中产生的NKp46多肽)具有在约104至约1011M-1(例如约108至约1010M-1)范围内的亲和力。例如，在一个具体方面，本披露提供了相对于NKp46具有如通过例如表面等离子体共振(SPR)筛选(如通过用BIAcoreTM SPR分析装置分析)确定的小于1x 10-9M的平均解离常数(KD)的抗NKp46抗体或NKp46结合蛋白。在一个更具体的示例性方面，本披露提供了对人或食蟹猴NKp46蛋白具有约1x 10-8M至约1x10-10M、或约1x 10-9M至约1x 10-11M的KD的抗NKp46抗体或NKp46结合蛋白。在一个实施例中，NKp46抗体或NKp46结合蛋白对人和食蟹猴NKp46蛋白具有相差不大于1-log或2-log的解离常数(KD)。
抗体或NKp46结合蛋白可以例如通过不大于约(例如亲和力优于)100、60、10、5或1纳摩尔，优选地亚纳摩尔或任选地不大于约500、200、100或10皮摩尔的平均KD来表征。KD可以例如通过将重组产生的人NKp46蛋白固定在芯片表面上，接着施加溶液中待测试的抗体来确定。
将编码结合NKp46多肽上存在的表位的抗体或其他NKp46结合蛋白的DNA分离并置于适当的表达载体中，用于转染到适当的宿主中。然后宿主用于抗体或其他NKp46结合蛋白的重组产生。例如，DNA可以被置于表达载体中，然后将这些载体转染到不另外产生免疫球蛋白的宿主细胞(如大肠杆菌细胞、猿COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞)中，以便在重组宿主细胞中获得所需蛋白质的合成。
在一个实施例中，本文中的蛋白质和抗体结合NKp46的D1结构域、NKp46的D2结构域、或跨越SEQ ID NO:1的NKp46多肽的D1和D2结构域的区域(在D1和D2结构域的边界处，D1/D2接点)。在一个实施例中，蛋白质或抗体对人NKp46具有表征为小于10-8M、小于10-9M或小于10-10M的KD的亲和力。
在另一个实施例中，蛋白质或抗体在NKp46上与抗体NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3或NKp46-4基本上相同的表位处结合NKp46。在另一个实施例中，抗体在被NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3或NKp46-4结合的区段中至少部分地重叠，或者包含其中的至少一个残基。在一个实施例中，表位的所有关键残基均在对应于结构域D1或D2的区段中。在一个实施例中，抗体结合D1结构域中存在的残基以及D2结构域中存在的残基。在一个实施例中，抗体或蛋白质结合如下表位，该表位包含对应于SEQ IDNO:1的NKp46多肽的结构域D1或D2的区段中的1、2、3、4、5、6、7个或更多个残基。在一个实施例中，抗体或蛋白质结合结构域D1并结合如下表位，该表位包含残基R101、V102、E104和/或L105中的1、2、3或4个。在一个实施例中，抗体或蛋白质结合结构域D1/D2接点并结合如下表位，该表位包含残基K41、E42、E119、Y121和/或Y194中的1、2、3、4或5个。在一个实施例中，抗体结合结构域D2并结合如下表位，该表位包含残基P132、E133、I135和/或S136中的1、2、3或4个。
在本文的实例部分描述了一系列突变型人NKp46多肽的构建。测量抗NKp46抗体或蛋白与经NKp46突变体转染的细胞的结合，并将其与抗NKp46抗体或蛋白结合野生型NKp46多肽(SEQ ID NO:1)的能力进行比较。如本文所用的抗NKp46抗体或蛋白与突变型NKp46多肽之间的结合的降低意味着结合亲和力有所降低(例如如通过已知的方法测量的，如对表达特定突变体的细胞进行FACS测试、或通过对与突变型多肽的结合进行Biacore测试)，和/或抗NKp46抗体或蛋白的总结合能力有所降低(例如如通过在抗NKp46抗体浓度对比多肽浓度的曲线中Bmax的降低证实的)。结合的显著降低指示在抗NKp46抗体或蛋白与NKp46结合时突变的残基直接参与和抗NKp46抗体或蛋白的结合，或者紧密靠近结合蛋白。因此表位将优选地包含这种残基并且可以包含另外的邻近于这种残基的残基。
在一些实施例中，结合的显著降低意味着抗NKp46抗体或蛋白与突变型NKp46多肽之间的结合亲和力和/或能力相对于抗体或蛋白质与野生型NKp46多肽(例如SEQ ID NO:1中所示的多肽)之间的结合降低了大于40％、大于50％、大于55％、大于60％、大于65％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％。在某些实施例中，结合降至检测限以下。在一些实施例中，当抗NKp46抗体与突变型NKp46多肽的结合小于50％(例如小于45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％或10％)的在抗NKp46抗体与野生型NKp46多肽(例如SEQ ID NO:1中所示的多肽(或其胞外结构域))之间观察到的结合时，结合的显著降低被证实。此类结合测量可以使用本领域已知的多种结合测定来进行。一种这样的测定的具体实例描述于实例部分中。
在一些实施例中，提供了抗NKp46抗体或蛋白质，其对突变型NKp46多肽(其中野生型NKp46多肽(例如SEQ ID NO:1)中的残基被取代)展示显著更低的结合。在此处使用的简化符号中，格式为：野生型残基:多肽中的位置:突变型残基，其中残基的编号如SEQ ID NO:1中所指示。
在一些实施例中，抗NKp46抗体或蛋白结合野生型NKp46多肽，但和与野生型NKp46的结合相比，与在残基R101、V102、E104和/或L105(参考SEQ ID NO:1)中的任何一个或多个处具有突变(例如丙氨酸取代)的突变型NKp46多肽的结合降低。
在一些实施例中，抗NKp46抗体或蛋白结合野生型NKp46多肽，但和与野生型NKp46的结合相比，与在残基K41、E42、E119、Y121和/或Y194(参考SEQ ID NO:1)中的任何一个或多个处具有突变(例如丙氨酸取代)的突变型NKp46多肽的结合降低。
在一些实施例中，抗NKp46抗体或蛋白结合野生型NKp46多肽，但和与野生型NKp46的结合相比，与在残基P132、E133、I135和/或S136(参考SEQ ID NO:1)中的任何一个或多个处具有突变(例如丙氨酸取代)的突变型NKp46多肽的结合降低。
亲本抗体NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3和NKp46-4的重链和轻链可变区的氨基酸序列列于本文的表B中。对人和非人灵长类动物NKp46均显示出高结合亲和力的人源化抗体NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3、NKp46-4和NKp46-9的重链和轻链可变区的氨基酸序列列于本文的表C中。
对于相应的抗体，NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3、NKp-46-4、NKp46-6或NKp46-9抗体的重链可变区可以包含：人重链FR1框架区；HCDR1区，其包含如在表A中列出的氨基酸序列，或者其至少4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸的序列，其中一个或多个这些氨基酸可以被不同的氨基酸取代；人重链FR2框架区；HCDR2区，其包含如在表A中列出的氨基酸序列，或者其至少4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸的序列，其中一个或多个这些氨基酸可以被不同的氨基酸取代；人重链FR3框架区；以及HCDR3区，其包含如在表A中列出的氨基酸序列，或者其至少4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸的序列，其中一个或多个这些氨基酸可以被不同的氨基酸取代。任选地，可变区进一步包含人重链FR4框架区。
对于相应的抗体，NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3、NKp-46-4、NKp46-6或NKp46-9抗体的轻链可变区可以包含：人轻链FR1框架区；LCDR1区，其包含如在表A中列出的氨基酸序列，或者其至少4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸的序列，其中一个或多个这些氨基酸可以被不同的氨基酸取代；人轻链FR2框架区；LCDR2区，其包含如在表A中列出的氨基酸序列，或者其至少4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸的序列，其中一个或多个这些氨基酸可以被不同的氨基酸取代；人轻链FR3框架区；以及LCDR3区，其包含如在表A中列出的氨基酸序列，或者其至少4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸的序列，其中一个或多个这些氨基酸可以被缺失或被不同的氨基酸取代。任选地，可变区进一步包含人轻链FR4框架区。
VH和VL组合的实例包括：
(a)VH，其包含SEQ ID NO:3的CDR1、2和3和人IGHV1-69基因区段的FR1、2和3，和VL，其包含SEQ ID NO:4的CDR1、2和3和人IGKV1-33基因区段的FR1、2和3；
(b)VH，其包含SEQ ID NO:5的CDR1、2和3和人IGHV4-30-4基因区段的FR1、2和3，和VL，其包含SEQ ID NO:6的CDR1、2和3和人IGKV1-39基因区段的FR1、2和3；
(c)VH，其包含SEQ ID NO:7的CDR1、2和3和人IGHV1-69基因区段的FR1、2和3，和VL，其包含SEQ ID NO:8的CDR1、2和3和人IGKV3-11和/或IGKV3-15基因区段的FR1、2和3；
(d)VH，其包含SEQ ID NO:9的CDR1、2和3和人IGHV1-46和/或IGHV1-69基因区段的FR1、2和3，和VL，其包含SEQ ID NO:10的CDR1、2和3和人IGKV1-NL1基因区段的FR1、2和3；或者
(e)VH，其包含SEQ ID NO:13的CDR1、2和3和人IGHV4-30-4基因区段的FR1、2和3，和VL，其包含SEQ ID NO:14的CDR1、2和3和人IGKV1-39基因区段的FR1、2和3。
在另一方面，VH和VL组合的实例包括：
(a)包含与NKp46-1H1或H3可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％相同的氨基酸序列的VH，和包含与NKp46-1L1可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％相同的氨基酸序列的VL；
(b)包含与NKp46-2H1、H2或H3可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％相同的氨基酸序列的VH，和包含与NKp46-2L1可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％相同的氨基酸序列的VL；
(c)包含与NKp46-3H1、H3或H4可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％相同的氨基酸序列的VH，和包含与NKp46-3L1可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％相同的氨基酸序列的VL；
(d)包含与NKp46-4H1可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％相同的氨基酸序列的VH，和包含与NKp46-4L2可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％相同的氨基酸序列的VL；
(e)包含与NKp46-9H2可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％相同的氨基酸序列的VH，和包含与NKp46-9L1或L2可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％相同的氨基酸序列的VL；或者
(f)包含与NKp46-9H3可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％相同的氨基酸序列的VH，和包含与NKp46-9L1或L2可变结构域的氨基酸序列至少70％、80％、90％、95％或98％相同的氨基酸序列的VL。
在一个实施例中，上述CDR是根据Kabat，例如如在表A中所示。在一个实施例中，上述CDR是根据Chotia编号，例如如在表A中所示。在一个实施例中，上述CDR是根据IMGT编号，例如如在表A中所示。
在一个实施例中，特定VH或VL包含在实例1中所示的Kabat位置处的人框架中的氨基酸取代(例如回复突变)；任选地，在相应的Kabat位置处实例1中取代的氨基酸残基可以被指定为存在于特定位置处。
在本文的任何实施例的另一方面，重链和轻链的CDR 1、2和3中的任一个可以通过其至少4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸的序列来表征，和/或表征为具有与列于相应SEQ IDNO或表A中的具体CDR或CDR组具有至少50％、60％、70％、80％、85％、90％或95％序列同一性的氨基酸序列。
根据IMGT、Kabat和Chothia定义系统的CDR的序列已经概括于下表A中。根据本发明的抗体的可变链的序列列于下表B中。在本文的任何实施例中，VL或VH序列可以被指定或编号从而含有或缺少信号肽或其任何部分。
表A
Figure BDA0001770555070000251
Figure BDA0001770555070000261
Figure BDA0001770555070000271
Figure BDA0001770555070000281
表B
Figure BDA0001770555070000282
Figure BDA0001770555070000291
表C
Figure BDA0001770555070000292
多特异性抗体和多肽
结合NKp46的抗原结合结构域(ABD)可以衍生自本文提供的抗NKp46CDR、VH和VL序列(参见“抗NKp46可变结构域”部分)。抗原结合结构域可以排列在相同或分开的多肽上，使得它们形成能够结合NKp46(例如如在细胞表面表达的人NKp46)的抗原结合结构域。ABD可以例如作为scFv、串联scFv、Bite、DART、Fab、F(ab)2、抗体、双特异性抗体、或者单体或多聚体Fc蛋白产生。
对于构建多特异性蛋白(例如抗体、串联scFv、BiTe、DART、Fc蛋白)，结合目标抗原(除NKp46外)的抗原结合结构域可以容易地衍生自多种免疫球蛋白或非免疫球蛋白支架，例如基于葡萄球菌蛋白A的Z结构域的亲和体、工程化Kunitz结构域、基于人纤连蛋白III的第10个细胞外结构域的单体或adnectin、衍生自脂质运载蛋白的anticalin、DARPin(经设计的锚蛋白重复结构域)、多聚化LDLR-A模块、亲和多聚体(avimer)或富含半胱氨酸的打结素(knottin)肽。参见例如，Gebauer和Skerra(2009)Current Opinion in ChemicalBiology[化学生物学新见]13:245–255，将其披露通过引用并入本文。
结合目标抗原(除NKp46外)的可变结构域可以衍生自抗体，例如呈两个多肽链上存在的缔合的VL和VH结构域的形式，或单链抗原结合结构域，如scFv、VH结构域、VL结构域、dAb、V-NAR结构域或VHH结构域。抗原结合结构域(例如ABD1和ABD2)也可以容易地衍生自作为Fab的抗体。
通常，首先通过用包含多肽或其片段或衍生物(通常为免疫原性片段，对此希望的是获得抗体(例如人多肽))的免疫原免疫非人动物(例如小鼠)来获得抗体。用抗原免疫非人哺乳动物的步骤可以按本领域众所周知的用于刺激在小鼠体内产生抗体的任何方式进行(参见例如，E.Harlow和D.Lane,Antibodies:A Laboratory Manual.[抗体：实验室手册],Cold Spring Harbor Laboratory Press[冷泉港实验室出版社],Cold SpringHarbor[冷泉港],纽约州(1988)，将其全部披露通过引用并入本文)。
结合目标抗原(除NKp46外)的用于在多特异性多肽中使用的抗原结合结构域(ABD)可以基于所需细胞靶标来选择，并且可以包括例如癌抗原、细菌抗原或病毒抗原等。如本文所用的，术语“细菌抗原”包括但不限于完整的、减毒的或杀死的细菌，任何结构性或功能性细菌蛋白或碳水化合物，或细菌蛋白的具有足够长度(通常为约8个氨基酸或更长)以具抗原性的任何肽部分。实例包括革兰氏阳性细菌抗原和革兰氏阴性细菌抗原。在一些实施例中，细菌抗原来源于选自下组的细菌，该组由以下组成：螺杆菌属物种，特别是幽门螺杆菌；疏螺旋体属物种，特别是伯氏疏螺旋体(Borelia burgdorferi)；军团菌属物种，特别是嗜肺军团菌；分枝杆菌属物种，特别是结核分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌(M.kansasii)、戈氏分枝杆菌(M.gordonae)；葡萄球菌属物种，特别是金黄色葡萄球菌；奈瑟氏菌属物种，特别是淋病奈瑟氏菌、脑膜炎奈瑟氏菌；李斯特菌属物种，特别是单核细胞增生李斯特菌；链球菌属物种，特别是化脓性链球菌、无乳链球菌、粪链球菌、牛链球菌、肺炎链球菌；厌氧链球菌属物种；病原性弯曲杆菌属物种；肠球菌属物种；嗜血杆菌属物种，特别是流感嗜血杆菌；芽孢杆菌属物种，特别是炭疽芽孢杆菌；棒状杆菌属物种，特别是白喉棒状杆菌；丹毒丝菌属物种，特别是猪红斑丹毒丝菌；梭菌属物种，特别是产气荚膜梭菌、破伤风梭菌；肠杆菌属物种，特别是产气肠杆菌；克雷伯氏菌属物种，特别是1S肺炎克雷伯氏菌；巴氏杆菌属物种，特别是多杀性巴氏杆菌；拟杆菌属物种；梭杆菌属物种，特别是具核梭杆菌；链杆菌属物种，特别是念珠状链杆菌；密螺旋体属物种，特别是极细密螺旋体；钩端螺旋体属；病原性埃希氏菌属物种；以及放线菌属物种，特别是衣氏放线菌(Actinomyces israelli)。
如本文所用的，术语“病毒抗原”包括但不限于完整的、减毒的或杀死的全病毒，任何结构性或功能性病毒蛋白，或病毒蛋白的具有足够长度(通常为约8个氨基酸或更长)以具抗原性的任何肽部分。病毒抗原的来源包括但不限于来自以下科的病毒：逆转录病毒科(例如人类免疫缺陷病毒，如HIV-1(也称为HTLV-III、LAV或HTLV-III/LAV、或HIV-III)；以及其他分离株，如HIV-LP；小核糖核酸病毒科(例如脊髓灰质炎病毒、甲型肝炎病毒、肠道病毒、人类柯萨奇病毒、鼻病毒、埃可病毒)；杯状病毒科(例如导致肠胃炎的毒株)；披膜病毒科(例如马脑炎病毒、风疹病毒)；黄病毒科(例如登革热病毒、脑炎病毒、黄热病病毒)；冠状病毒科(例如冠状病毒)；弹状病毒科(例如水泡性口炎病毒、狂犬病病毒)；丝状病毒科(例如埃博拉病毒)；副粘病毒科(例如副流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞体病毒)；正粘病毒科(例如流感病毒)；布尼亚病毒科(例如汉坦病毒、布尼亚(bunga)病毒、白蛉热病毒(phlebovirus)和Nairo病毒)；沙粒病毒科(出血热病毒)；呼肠孤病毒科(例如呼肠孤病毒、环状病毒和轮状病毒)；波纳病毒科；噬肝病毒科(乙型肝炎病毒)；细小病毒科(细小病毒)；乳多空病毒科(乳头状瘤病毒、多瘤病毒)；腺病毒科(大多数腺病毒)；疱疹病毒科(单纯性疱疹病毒(HSV)1和2、水痘带状疱疹病毒、巨细胞病毒(CMV)、疱疹病毒)；痘病毒科(天花病毒、牛痘病毒、痘病毒)；和虹彩病毒科(例如非洲猪瘟病毒)；以及未分类的病毒(例如丁型肝炎(delta hepatitis)的媒介(被认为是乙型肝炎病毒的缺陷卫星)，丙型肝炎；诺瓦克病毒和相关病毒，和星状病毒)。可替代地，病毒抗原可以重组地产生。
如本文所用的，术语“癌抗原”和“肿瘤抗原”可互换地使用，并且是指由癌细胞差异表达或由具有促肿瘤作用(例如免疫抑制作用)的非肿瘤细胞(例如免疫细胞)表达，并且从而可以被利用以靶向癌细胞的抗原(除NKp46外)。癌抗原是可以潜在地刺激明显肿瘤特异性免疫应答的抗原。正常细胞编码这些抗原中的一些，虽然它们不一定被表达，或以较低的水平或较低的频率表达。这些抗原可以表征为在正常细胞中通常沉默(即不表达)的那些、仅在某些分化阶段表达的那些以及暂时表达的那些(如胚胎和胎儿抗原)。其他癌抗原由突变型细胞基因编码，如癌基因(例如活化的ras癌基因)、抑制基因(例如突变型p53)、由内部缺失或染色体易位引起的融合蛋白。仍其他的癌抗原可以由病毒基因(如RNA和DNA肿瘤病毒上携带的那些)编码。仍其他的癌抗原可以在能够介导促肿瘤作用的免疫细胞(例如单核细胞或巨噬细胞，任选地抑制性T细胞、调节性T细胞或髓源性抑制细胞)上表达。
癌抗原通常是过表达或在异常时间表达或者被靶向的细胞群体表达的正常细胞表面抗原。理想地，靶抗原仅在增殖细胞(例如肿瘤细胞)或促肿瘤细胞(例如具有免疫抑制作用的免疫细胞)上表达，然而这在实践中很少观察到。因此，靶抗原在许多情况下是基于增生/疾病组织与健康组织之间的差异表达来选择的。癌抗原的实例包括：受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、Cripto、CD4、CD20、CD30、CD19、CD38、CD47、糖蛋白NMB、CanAg、Her2(ErbB2/Neu)、Siglec家族成员例如CD22(Siglec2)或CD33(Siglec3)、CD79、CD138、CD171、PSCA、L1-CAM、PSMA(前列腺特异性膜抗原)、BCMA、CD52、CD56、CD80、CD70、E-选择素、EphB2、黑素转铁蛋白(Melanotransferin)、Mud 6和TMEFF2。癌抗原的实例还包括免疫球蛋白超家族(IgSF)如细胞因子受体、杀伤细胞Ig样受体、CD28家族蛋白例如杀伤细胞Ig样受体3DL2(KIR3DL2)、B7-H3、B7-H4、B7-H6、PD-L1、IL-6受体。实例还包括MAGE、MART-1/Melan-A、gp100、主要组织相容性复合物I类相关链A和B多肽(MICA和MICB)、腺苷脱氨酶结合蛋白(ADAbp)、亲环蛋白b、结肠直肠相关抗原(CRC)-C017-1A/GA733、蛋白酪氨酸激酶7(PTK7)、受体蛋白酪氨酸激酶3(TYRO-3)、连接素(例如连接素-4)、主要组织相容性复合物I类相关链A和B多肽(MICA和MICB)、UL16结合蛋白(ULBP)家族的蛋白、视黄酸早期转录物-1(RAET1)家族的蛋白、癌胚抗原(CEA)及其免疫原性表位CAP-1和CAP-2、etv6、aml1、前列腺特异性抗原(PSA)、T细胞受体/CD3-ζ链、肿瘤抗原MAGE-家族、肿瘤抗原GAGE-家族、抗穆勒(Mullerian)激素II型受体、δ样配体4(DLL4)、DR5、ROR1(也称为受体酪氨酸激酶样孤儿受体1或NTRKR1(EC 2.7.10.1)、BAGE、RAGE、LAGE-1、NAG、GnT-V、MUM-1、CDK4、MUC家族、VEGF、VEGF受体、血管生成素-2、PDGF、TGF-α、EGF、EGF受体、人EGF样受体家族的成员例如HER-2/neu、HER-3、HER-4或由至少一个HER亚基构成的异二聚体受体、胃泌素释放肽受体抗原、Muc-1、CA125、整联蛋白受体、αvβ3整联蛋白、α5β1整联蛋白、αIIbβ3-整联蛋白、PDGFβ受体、SVE-钙粘蛋白、IL-8受体、hCG、IL-6受体、CSF1R(肿瘤相关单核细胞和巨噬细胞)、甲胎蛋白、E-钙粘蛋白、α-连环蛋白、β-连环蛋白和γ-连环蛋白、p120ctn、PRAME、NY-ESO-1、cdc27、腺瘤性结肠息肉病蛋白(APC)、胞衬蛋白、连接蛋白37、Ig-独特型、p15、gp75、GM2和GD2神经节苷脂、病毒产物如人乳头瘤病毒蛋白、imp-1、P1A、EBV编码的核抗原(EBNA)-1、脑糖原磷酸化酶、SSX-1、SSX-2(HOM-MEL-40)、SSX-1、SSX-4、SSX-5、SCP-1和CT-7、以及c-erbB-2，尽管这不旨在是穷尽性的。在一方面，目标抗原是例如在被常规的人IgG1抗体结合时，在存在或不存在Fcγ受体细胞的情况下，能够经历细胞内内化的抗原(例如上文列出的抗原中任一种)。在一方面，目标抗原是CD19多肽；在一方面，多特异性蛋白包含结合CD19的scFv，其包含与本文实例的抗CD19scFv的序列至少60％、70％、80％、85％、90％或95％相同的氨基酸序列，或者包含本文所示的抗CD19重链和轻链可变区的重链和轻链CDR1、-2和-3。
在一个实施例中，结合目标抗原的ABD衍生自结合目标抗原的亲本抗体(例如鼠抗体、人抗体)，例如包含其高变区，或包含其CDR，该亲本抗体当与其抗原靶标(细胞上的目标抗原)结合时，增加或诱导目标抗原的下调或细胞内内化。在一个实施例中，目标抗原是癌抗原，例如上文列出的已知内化的癌抗原之一(例如免疫球蛋白超家族(IgSF)成员例如细胞因子受体α或β链、杀伤细胞Ig样受体、CD28家族蛋白、B7-H3、B7-H4、B7-H6、KIR3DL2、PTK7、ROR1、L1-CAM、Siglec家族成员、EGF受体和EGF样受体家族成员、EGFR、HER-2、整联蛋白、抗穆勒激素II型受体、CSF-1R等)。在一个实施例中，抗原靶标是存在于能够介导促肿瘤作用的免疫细胞(例如单核细胞或巨噬细胞，任选地抑制性T细胞、调节性T细胞或髓源性抑制细胞)上的多肽。
在一个实施例中，非NKp46ABD结合癌抗原、病毒抗原、微生物抗原或存在于感染细胞(例如病毒感染)或促炎免疫细胞上的抗原。
一旦鉴定出具有所需特异性和/或活性的适当的抗原结合结构域，编码或ABD中的每一个的DNA便能以合适的排列单独置于适当的表达载体中，连同编码任何元件如酶识别标签、CH1、Cκ、CH2和/或CH3结构域和任何其他任选的元件的DNA(例如编码铰链区的DNA)，用于转染到适当的宿主中。ABD将随要产生哪种类型的多肽而排列在表达载体中或排列在分开的载体中，以产生具有彼此有效地连接的所需结构域的Fc-多肽。然后宿主用于多特异性多肽的重组产生。
例如，多肽融合产物可以从载体产生，在该载体中两个ABD中的第一个有效地连接(例如直接地，通过重链或轻链CH1、CK或Cλ恒定区和/或铰链区)至CH2结构域的N末端，并且CH2结构域在其C末端有效地连接至CH3结构域的N末端。两个ABD中的第二个可以在任一末端与多肽连接，或者可以在形成二聚体(例如异二聚体)的第二多肽链上，其中多肽包含第一ABD。多肽可以包含全长Fc结构域。
然后可以在适当的宿主细胞中或通过任何合适的合成工艺产生多特异性多肽。选择用于表达多特异性多肽的宿主细胞是最终组合物的重要贡献者，包括但不限于在免疫球蛋白CH2结构域中装饰蛋白质的寡糖部分的组成变化。宿主细胞可以例如是哺乳动物来源的，或者可以选自COS-1、COS-7、HEK293、BHK21、CHO、BSC-1、Hep G2、653、SP2/0、293、HeLa、骨髓瘤、淋巴瘤、酵母、昆虫或植物细胞，或其任何衍生、永生化或转化细胞。
以使用本披露的结合NKp46的VH-VL对制备一系列不同的蛋白质形式，包括单体、异二聚体、异三聚体和四聚体多特异性蛋白。包括但不限于例如在2016年6月23日提交的PCT申请号PCT/EP2016/064537(先天制药公司)中描述的任何多种形式，将其披露通过引用并入本文。
单体蛋白
在一个实例中，多特异性蛋白在单多肽链中包含结合NKp46的第一抗原结合结构域(例如包含本文披露的由(多)肽接头分开的VH和VL的ABD)和结合除NKp46外的抗原的第二抗原结合结构域。在一个实施例中，蛋白质或多肽是或包含scFv(其包含本披露的抗NKp46VH和VL)或者串联scFv(其包含通过任选地与另一多肽或氨基酸序列融合的(多)肽接头连接的结合NKp46的scFv和结合NKp46或除NKp46外的目标抗原的第二scFv)。
此类单链抗原结合蛋白的实例包括BiTE和DART蛋白形式。称为
Figure BDA0001770555070000351
(Bispecific T-cell Engager)的基于scFv的双特异性抗体构建体利用含有两个抗原结合结构域的单一多肽，每个结构域由一对通过柔性接头串联连接的VH和VL贡献(参见例如，Nagorsen等人,2009,Leukemia&Lymphoma[白血病与淋巴瘤]50:886-91；Amann等人,2009,JImmunother[免疫疗法杂志]32:453-64；Baeuerle和Reinhardt,2009,Cancer Res[癌症研究]69:4941-44)。另一种称为
Figure BDA0001770555070000352
(Dual-Affinity Re-Targeting)的双特异性抗体利用二硫键稳定的双抗体设计(参见例如，Moore等人,2011,Blood[血液]117:4542-51；Veri等人,2010,Arthritis Rheum[关节炎与风湿病]62:1933-43)。
在一个实施例中，单多肽链进一步包含Fc结构域(例如全长Fc结构域或其部分)，任选地其中Fc结构域插入在第一与第二抗原结合结构域之间。
在任何实施例的一方面，第一抗原结合结构域和/或第二抗原结合结构域包含scFv，任选地其中scFv包含人框架氨基酸序列。在一个实施例中，提供了单体双特异性Fc衍生的多肽，其包含：(a)结合NKp46的第一scFv；(b)结合除NKp46外的抗原的第二scFv；以及任选地，(c)人Fc结构域的至少一部分。任选地，Fc结构域(i)不与另一种Fc衍生的多肽二聚化，并且(ii)能够结合人FcRn。任选地，Fc结构域插入在第一与第二scFv之间。
当包含两个ABD和Fc结构域的至少一部分的多肽融合产物是单体时，CH3结构域可以被排列和/或包含防止CH3-CH3二聚化的氨基酸修饰。在一个实施例中，CH3结构域在二聚体界面中包含防止链间CH3-CH3二聚化的突变。在另一个实施例中，CH3结构域是串联CH3结构域(或者Fc结构域包含串联CH3结构域)以防止链间CH3-CH3二聚化。此类单体将保留部分FcRn结合(例如与野生型全长人IgG1抗体相比)。任选地，单体多肽能够以中等亲和力结合人FcRn，例如与全长野生型人IgG1抗体相比，保留与FcRn的结合但与人FcRn受体的结合降低。Fc部分例如在CH2结构域中可以进一步包含进一步降低或基本上消除与一个或多个Fcγ受体的结合的一个或多个氨基酸修饰。
在一种构型中，具有人Fc结构域的至少一部分的Fc衍生的单体多肽可以有利地包含CH2结构域和CH3结构域，其中所述CH3结构域包含经修饰的CH3二聚体界面(例如CH3二聚体界面中的突变)以防止与另一种Fc衍生的多肽二聚化。参见例如图2A中的形式1和2。在本文的任何多肽或方法的一个实施例中，CH3结构域包含在位置L351、T366、L368、P395、F405、T407(或Y407)和/或K409(EU编号如在Kabat中)中的1、2、3、4、5、6或7个处的氨基酸取代。
可用于单体多特异性蛋白中的CH3结构域的另一种构型是串联CH3结构域(参见例如图2A中的形式3和4)。串联CH3结构域包含第一和第二CH3结构域，其中两个CH3结构域通过非共价相互作用彼此相缔合。在一个实施例中，两个CH3结构域通过每个CH3结构域的CH3二聚化界面彼此相缔合。在一个实施例中，多肽链不与包含Fc结构域的另一多肽链二聚化。包含串联CH3结构域的Fc结构域将与新生儿Fc受体(FcRn)相互作用，但与人Fcγ受体(尤其是CD16)具有低结合或无结合。
多聚体蛋白
包含结合NKp46的ABD(例如包含本文披露的VH和VL的ABD)的多聚体双特异性蛋白如异二聚体、异三聚体和四聚体(后者包括例如具有两个重链和两个轻链的抗体)可以根据多种形式来产生。
在一个实施例中，多聚体蛋白或多肽是由两个重链和两个轻链构成的四聚体抗体，所述重链包含衍生自两种不同亲本抗体的可变区(或其1、2或3个CDR)，并且所述轻链包含衍生自两种不同亲本抗体的可变区(或其1、2或3个CDR)。这种四聚体可以包含(a)两个重链，每个重链包含可变区、CH1结构域、铰链和Fc结构域，以及(b)两个抗体轻链，每个轻链包含轻链可变区和CK结构域，其中一个重链可变区与轻链可变区一起结合NKp46，并且另一个重链可变区与轻链可变区一起结合目标抗原。
制备多聚体蛋白的一种有利方式是通过组装不同的多肽链，每个多肽链包含与人CH1或Cκ恒定结构域融合的至少一个重链或轻链可变结构域(V-(CH1/Cκ)单元)，其中蛋白质链经历CH1-Cκ二聚化并且通过非共价键彼此结合，并且任选地进一步通过在相应的CH1与Cκ结构域之间形成的二硫键结合。在一个实施例中，提供了分离的或纯化的异二聚体或异三聚体蛋白，其结合第一和第二抗原，其中该蛋白质包含至少两个或三个多肽链，每个多肽链包含V-(CH1/Cκ)单元，其中链通过非共价键彼此结合，并且任选地进一步通过CH1与Cκ结构域之间的二硫键结合，任选地其中链进一步通过Fc部分的相应可变区与CH3结构域之间的非共价键结合。
可以选择和配置可变区和恒定区，使得每个链将优先地与其所需互补配偶体链相缔合。因此，使用重组宿主细胞使用常规生产方法可以简单地产生所得的多聚体蛋白。选择哪个VH、VL与单元中的CH1和Cκ相缔合是基于待配对的单元之间的亲和力，以便驱动所需多聚体的形成。所得的多聚体将通过互补的VH与VL结构域之间的非共价键、通过互补的CH1与Cκ结构域之间的非共价键、以及任选地通过互补的CH1与Cκ结构域之间的二硫键键合和/或任选地通过互补的铰链结构域之间的二硫键结合。VH-VL缔合强于VH-VH或VL-VL，因此，如本文所示，可以将VH或VL置于CH1或Cκ旁边，并且所得的V-C单元将优选地与其V-C对应物配对。例如，与VH-CH1相比，VH-Cκ将优先地与VL-CH1配对。另外，通过包含Fc结构域，优选的链配对被进一步改善，因为两个含Fc的链将通过Fc结构域的CH3结构域之间的非共价键结合。不同的V-C组合(任选地进一步与Fc配对组合)从而提供制备异多聚体蛋白的工具。
在一个实施例中，异多聚体多肽或蛋白包含单体Fc结构域(例如，第二多肽不包含Fc结构域)，任选地其中Fc结构域包含具有防止CH3-CH3二聚化的氨基酸突变的CH3结构域或串联CH3结构域。
在另一个实施例中，上文的异多聚体多肽或蛋白包含能够结合人CD16的二聚体Fc结构域，例如在氨基酸残基N297(Kabat EU编号)处包含N连接糖基化的人Fc结构域。
异二聚体可以例如具有如下构型(还参见显示为图2A和2C中所示的形式2、11和12的此类蛋白质的实例)：
Figure BDA0001770555070000371
其中第一多肽链的Va-1和第二多肽链的Vb-1之一是轻链可变结构域，并且另一个是重链可变结构域，并且其中Va-2和Vb-2之一是轻链可变结构域，并且另一个是重链可变结构域。
在另一个实例中，异二聚体可以具有如下构型(还参见显示为图2B中所示的形式10的此类蛋白质的实例)：
Figure BDA0001770555070000372
其中第一多肽链的Va-1和第二多肽链的Vb-1之一是轻链可变结构域，并且另一个是重链可变结构域，并且其中Va-2和Vb-2之一是轻链可变结构域，并且另一个是重链可变结构域。
在另一个实例中，所得的异二聚体可以具有如下构型(还参见显示为图2D和2E中所示的形式13和14的此类蛋白质的实例)：
Figure BDA0001770555070000381
其中第一多肽链的Va-1和第二多肽链的Vb-1之一是轻链可变结构域，并且另一个是重链可变结构域，并且其中Va-2和Vb-2之一是轻链可变结构域，并且另一个是重链可变结构域。
异三聚体蛋白可以例如通过使用中心(第一)多肽链形成，该中心(第一)多肽链包含与第一CH1或CK恒定区融合的第一可变结构域(V)、与第二CH1或CK恒定区融合的第二可变结构域(V)和插入在第一与第二可变结构域之间的Fc结构域或其部分(即Fc结构域插入在第一与第二(V-(CH1/CK)单元之间)。例如，用于在异三聚体蛋白中使用的中心多肽链可以具有如下结构域排列(N末端至C末端)：
Va-1–(CH1或CK)a–Fc结构域–Va-2–(CH1或CK)b。
然后第二多肽链可以包含如下结构域排列(N末端至C末端)：
Vb-1–(CH1或CK)c，
或者
Vb-1–(CH1或CK)c–Fc结构域
使得(CH1或CK)c与中心链上的(CH1或CK)a二聚化，并且Va-1和Vb-1形成抗原结合结构域。
然后第三多肽链可以包含如下结构域排列(N末端至C末端)：
Vb-2–(CH1或CK)d，
使得(CH1或CK)d与中心链上的(CH1或CK)b单元二聚化，并且Va-2和Vb-2形成抗原结合结构域。
具有二聚体Fc结构域的所得的异三聚体的构型(还在图2D和2E中显示为形式5、6、7和16)的实例具有如下结构域排列：
Figure BDA0001770555070000382
Figure BDA0001770555070000391
具有单体Fc结构域的所得的异三聚体的构型(还在图2B和2C中显示为形式8、9和17)的实例具有如下结构域排列：
Figure BDA0001770555070000392
因此，在三聚体多肽的构型中，第一多肽可以具有两个可变结构域，每个可变结构域与分开的多肽链上的可变结构域(即第二和第三链的可变结构域)形成抗原结合结构域，第二多肽链具有一个可变结构域，并且第三多肽具有一个可变结构域。
三聚体多肽可以包含：
(a)第一多肽链，其包含与第一CH1或CK恒定区融合的第一可变结构域(V)、与第二CH1或CK恒定区融合的第二可变结构域(V)和插入在第一与第二可变结构域之间的Fc结构域或其部分；
(b)第二多肽链，其包含在其C末端与CH1或CK恒定区融合的可变结构域，该CH1或CK恒定区被选择为与第一多肽链的第一CH1或CK恒定区互补，使得第一和第二多肽形成CH1-CK异二聚体，和任选的Fc结构域；以及
(c)第三多肽链，其包含(例如在其C末端)与CH1或CK恒定区融合的可变结构域，其中可变结构域和恒定区被选择为与第一多肽链的第二可变结构域和第二CH1或CK恒定区互补，使得第一和第三多肽形成通过非共价键并且任选地进一步通过在第三多肽的CH1或CK恒定区与第一多肽的第二CH1或CK恒定区之间而非在第三多肽的CH1或CK恒定区与第一多肽的CH1或CK恒定区之间形成的一个或多个二硫键结合的CH1-CK异二聚体。
其中第一、第二和第三多肽形成CH1-CK异三聚体，并且其中第一多肽链的第一可变结构域和第二多肽链的可变结构域形成对第一目标抗原特异的抗原结合结构域，并且第一多肽链的第二可变结构域和第三多肽链上的可变结构域形成对第二目标抗原特异的抗原结合结构域。两种目标抗原之一是NKp46，并且结合NKp46的ABD包含本披露的VH-VL可变结构域对。
由其形成三聚体双特异性多肽的结构域排列的实例包括但不限于：
Figure BDA0001770555070000401
在任何结构域排列中，Fc结构域可以包含CH2-CH3单元(全长CH2和CH3结构域或其片段)。在包含两个具有Fc结构域的链(二聚体Fc结构域)的异二聚体或异三聚体中，CH3结构域将能够进行CH3-CH3二聚化(例如野生型CH3结构域)。在仅包含一个具有Fc结构域的链(单体Fc结构域)的异二聚体或异三聚体中，Fc结构域将不能进行CH3-CH3二聚化；例如，一个或多个CH3结构域将在CH3二聚体界面中具有一个或多个氨基酸修饰，或者Fc结构域将包含不能进行CH3-CH3二聚化的串联CH3结构域。
在一些示例性构型中，多特异性蛋白可以是四聚体，例如具有两个轻链和两个不同重链的异二聚体四聚体，其中重链被工程化为用于异二聚化。此类蛋白质可以如例如在2016年6月23日提交的PCT申请号PCT/EP2016/064537(先天制药公司)中描述的来制备，将其披露通过引用并入本文。
在本披露的任何蛋白质中，铰链区将通常存在于CH1结构域与CH2结构域之间的多肽链上，和/或可以存在于CK结构域与CH2结构域之间。铰链区可以任选地例如被合适的接头肽替换。
本披露中描述的蛋白质结构域可以任选地被指定为从N末端至C末端。用于说明目的，本披露的蛋白质排列是从N末端(左侧)至C末端显示。结构域可以被称为彼此融合(例如，结构域可以被说成融合至其左侧的结构域的C末端，和/或结构域可以被说成融合至其右侧的结构域的N末端)。
本披露中描述的蛋白质结构域可以直接或通过插入氨基酸序列彼此融合。例如，CH1或CK结构域将通过接头肽(任选地铰链区或其片段)与Fc结构域(或其CH2或CH3结构域)融合。在另一个实例中，VH或VK结构域将通过接头肽与CH3结构域融合。彼此串联连接的VH和VL结构域将通过接头肽融合(例如作为scFv)。与Fc结构域连接的VH和VL结构域将通过接头肽融合。两个多肽链将通过非共价键并且任选地进一步通过在互补的CH1和CK结构域内的半胱氨酸残基之间形成的链间二硫键彼此结合(由“|”表示)。
接头和Fc结构域更详细地描述于例如2016年6月23日提交的PCT申请号PCT/EP2016/064537(先天制药公司)中，将其披露通过引用并入本文。
一旦产生出多特异性蛋白，便可以评估其生物活性。
在本文的任何实施例的一方面，当蛋白质在表达NKp46的细胞(例如纯化的NK细胞)和表达目标抗原的靶细胞的存在下孵育时，多特异性蛋白能够诱导表达NKp46的细胞(例如NK细胞、报告细胞)的活化。
在本文的任何实施例的一方面，当蛋白质在表达NKp46的细胞(例如纯化的NK细胞)和表达目标抗原的靶细胞的存在下孵育时，多特异性蛋白能够在表达NKp46的细胞(例如NK细胞、报告细胞)中诱导NKp46信号传导。
任选地，NK细胞活化或信号传导通过活化的细胞表面标志物(例如CD107、CD69等)的增加的表达来表征。
可以例如通过在多特异性多肽的存在下使靶细胞与表达NKp46的细胞接触来测量活性。在一个实例中，测量靶细胞和NK细胞的聚集。在另一个实例中，可以例如评估多特异性蛋白分别引起本领域已知的与NK细胞的活性相关的任何特性或活性的可测量的增加的能力，如细胞毒性(CD107)或细胞因子产生(例如IFN-γ或TNF-α)的标志物、细胞内游离钙水平的增加、在重引导杀伤测定中裂解靶细胞的能力等。活性的测定更详细地进一步描述于例如2016年6月23日提交的PCT申请号PCT/EP2016/064537(先天制药公司)中，将其披露通过引用并入本文。化合物的用途
根据本披露的包含结合NKp46的抗原结合结构域的化合物可用于多种应用，包括例如结合、检测、消除、纯化或调节NKp46多肽和/或表达NKp46多肽的细胞(例如NK细胞)的活性。
在一方面，提供了本文定义的任何化合物用于制造用以治疗或诊断有需要的哺乳动物的药物制剂的用途。还提供了任何上文定义的化合物作为药物或药物中的活性成分或活性物质的用途。在另一个方面，提供了用于制备含有如上文定义的化合物的药物组合物的方法，以提供用于口服给药、局部给药或通过注射给药的固体或液体配制品。这种方法或工艺至少包括将化合物与药学上可接受的载体混合的步骤。
在一方面，提供了通过使用本文描述的多特异性蛋白或包含该多特异性蛋白的(药物)组合物来发挥某种作用以治疗、预防或更一般地影响预定病况，或检测某种病况的方法。
例如，在一方面，本发明提供了恢复或增强有需要的患者(例如患有癌症、或病毒或细菌感染的患者)的NKp46+NK细胞的活性的方法，该方法包括向所述患者给予本文描述的多特异性蛋白的步骤。在一个实施例中，该方法用于增加患有增加淋巴细胞(例如NK细胞)活性是有益的或由NK细胞活性不足引起或表征的疾病(如癌症、或病毒或微生物/细菌感染)的患者的NKp46+淋巴细胞的活性。
本文描述的多肽可用于预防或治疗可用抗体治疗的障碍，如癌症、实体瘤和非实体瘤、血液恶性肿瘤、感染(如病毒感染)和炎性或自身免疫性障碍。
在一个实施例中，目标抗原(非NKp46抗原)是在选自下组的癌症类型的恶性肿瘤细胞表面上表达的抗原，该组由以下组成：癌，包括膀胱、头颈、乳腺、结肠、肾、肝、肺、卵巢、前列腺、胰腺、胃、宫颈、甲状腺和皮肤的癌，包括鳞状细胞癌；淋巴谱系的造血系统肿瘤、包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、何杰金淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤和伯基特(Burketts)淋巴瘤；骨髓谱系的造血系统肿瘤，包括急性和慢性骨髓性白血病和早幼粒细胞性白血病；间质起源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；其他肿瘤，包括成神经细胞瘤和神经胶质瘤；中枢和周围神经系统肿瘤，包括星形细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；间质起源的肿瘤，包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和骨肉瘤；以及其他肿瘤，包括黑色素瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、精原细胞瘤、甲状腺滤泡状癌和畸胎癌；淋巴谱系的造血系统肿瘤，例如T细胞和B细胞肿瘤，包括但不限于T细胞障碍，如T-幼淋巴细胞白血病(T-PLL)，包括小细胞和脑形细胞类型；大颗粒淋巴细胞白血病(LGL)，优选T细胞类型；塞扎里综合征(SS)；成人T细胞白血病淋巴瘤(ATLL)；a/d T-NHL肝脾淋巴瘤；周围/胸腺后T细胞淋巴瘤(多形性和免疫母细胞亚型)；血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤；血管中心性(鼻)T细胞淋巴瘤；间变性(Ki 1+)大细胞淋巴瘤；肠T细胞淋巴瘤；以及T淋巴母细胞性淋巴瘤/白血病(T-Lbly/T-ALL)。
在一个实施例中，本文描述的多肽可用于预防或治疗选自下组的癌症，该组由以下组成：癌，包括膀胱、头颈、乳腺、结肠、肾、肝、肺、卵巢、前列腺、胰腺、胃、宫颈、甲状腺和皮肤的癌，包括鳞状细胞癌；淋巴谱系的造血系统肿瘤、包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、何杰金淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤；骨髓谱系的造血系统肿瘤，包括急性和慢性骨髓性白血病和早幼粒细胞性白血病；间质起源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；其他肿瘤，包括成神经细胞瘤和神经胶质瘤；中枢和周围神经系统肿瘤，包括星形细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；间质起源的肿瘤，包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和骨肉瘤；以及其他肿瘤，包括黑色素瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、精原细胞瘤、甲状腺滤泡状癌和畸胎癌。可根据本发明治疗的其他示例性障碍包括淋巴谱系的造血系统肿瘤，例如T细胞和B细胞肿瘤，包括但不限于T细胞障碍，如T-幼淋巴细胞白血病(T-PLL)，包括小细胞和脑形细胞类型；大颗粒淋巴细胞白血病(LGL)，优选T细胞类型；塞扎里综合征(SS)；成人T细胞白血病淋巴瘤(ATLL)；a/d T-NHL肝脾淋巴瘤；周围/胸腺后T细胞淋巴瘤(多形性和免疫母细胞亚型)；血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤；血管中心性(鼻)T细胞淋巴瘤；间变性(Ki 1+)大细胞淋巴瘤；肠T细胞淋巴瘤；以及T淋巴母细胞性淋巴瘤/白血病(T-Lbly/T-ALL)。
在一个实例中，肿瘤抗原是在淋巴瘤细胞或白血病细胞表面上表达的抗原，并且多特异性蛋白被给予患有淋巴瘤或白血病的个体和/或用于治疗患有淋巴瘤或白血病的个体。任选地，肿瘤抗原选自CD19、CD20、CD22、CD30或CD33。
在一方面，治疗方法包括以治疗有效量向个体给予本文描述的多特异性蛋白，例如用于治疗如本文披露的疾病，例如选自上文的组的癌症。治疗有效量可以是在患有疾病或障碍的患者体内具有治疗效果(或在至少相当大比例的患有该疾病或障碍并且具有与该患者基本上类似的特征的患者体内促进、增强、和/或诱导这种作用)的任何量。
在一个实施例中，本文描述的多特异性蛋白可以用作单一疗法(没有其他治疗剂)，或者用于与一种或多种其他治疗剂(包括通常用于给予抗体的特定治疗目的的试剂)的组合疗法。另外的治疗剂将通常按照在用于正治疗的具体疾病或病状的单一疗法中针对该药剂通常使用的量和治疗方案来给予。在用于癌症的治疗时，此类治疗剂包括但不限于抗癌剂和化疗剂；在用于感染性疾病的治疗时，此类治疗剂包括但不限于抗病毒剂和抗生素。
本文披露的蛋白质和/或多肽可以包括在试剂盒中。试剂盒可以任选地进一步含有任何数量的多肽和/或其他化合物，例如1、2、3、4种或任何其他数量的蛋白质和/或多肽和/或其他化合物。应当理解，试剂盒的内容物的描述不以任何形式进行限制。例如，试剂盒可以含有其他类型的治疗性化合物。任选地，试剂盒还包含使用蛋白质和/或多肽(例如详细说明本文描述的方法)的说明书。
还提供了包含如上文定义的化合物的药物组合物。化合物可以作为药物组合物与药物载体一起以纯化的形式给予。该形式取决于预期的给药方式和治疗或诊断应用。药物载体可以是适合于将化合物递送到患者的任何相容的无毒物质。药学上可接受的载体在本领域是众所周知的，并且包括例如水性溶液，如(无菌)水或生理缓冲盐水或者其他溶剂或运载体，如乙二醇、甘油、油类(如橄榄油)或可注射的有机酯、醇、脂肪、蜡和惰性固体。药学上可接受的载体可以进一步含有例如用于稳定或增加化合物的吸收的生理学上可接受的化合物。此类生理学上可接受的化合物包括例如碳水化合物(如葡萄糖、蔗糖或右旋糖酐)、抗氧化剂(如抗坏血酸或谷胱甘肽)、螯合剂、低分子量蛋白质或其他稳定剂或赋形剂。本领域技术人员应了解，药学上可接受的载体(包括生理学上可接受的化合物)的选择取决于例如组合物的给药途径。药学上可接受的佐剂、缓冲剂、分散剂等也可以掺入药物组合物中。
化合物可以肠胃外给予。用于肠胃外给药的化合物的制剂必须是无菌的。灭菌任选地在冷冻干燥和重构之前或之后，通过经无菌的滤过膜过滤来容易地完成。用于给予化合物的肠胃外途径符合已知方法，例如通过静脉内、腹膜内、肌内、动脉内或病灶内途径进行的注射或输注。可以将化合物通过输注或通过弹丸注射连续地给予。用于静脉内输注的典型组合物可以制成为含有100至500ml无菌0.9％NaCl或5％葡萄糖，任选地补充有20％白蛋白溶液和1mg至10g化合物，这取决于化合物的具体类型及其所需的给药方案。用于制备肠胃外可给予的组合物的方法在本领域是众所周知的。
实例
实例1：
抗huNKp46抗体的产生
部分A：抗huNKp46抗体的产生
用重组人NKp46细胞外结构域重组Fc蛋白免疫Balb/c小鼠。小鼠接受了用50μgNKp46蛋白和全弗氏佐剂的乳液进行的一次初次免疫(腹膜内注射)，用50μg NKp46蛋白和不完全弗氏佐剂的乳液进行的第二次免疫(腹膜内注射)，并且最后用10μg NKp46蛋白进行的加强(静脉内注射)。在加强后3天将免疫脾细胞与X63.Ag8.653永生化B细胞融合，并且在经辐照的脾细胞的存在下培养。
初级筛选：使用在细胞表面表达人NKp46构建体的细胞系，通过流式细胞术在初级筛选中测试正在生长的克隆的上清液(SN)。简言之，对于FACS筛选，通过用PE标记的山羊抗小鼠多克隆抗体(pAb)揭示出在上清液中的反应抗体的存在。
选择结合NKp46的抗体，作为全长人IgG抗体和双特异性抗体产生。在实例2-13的双特异性分子的背景下评价其活性的可变区是具有本文的表B中所示的相应可变区的抗体NKp46-1、-2、-3、-4、-6和-9。
部分B：人源化抗人/抗食蟹猴NKp46抗体的产生
通过具有下文所示氨基酸序列的重链和轻链的互补决定区(CDR)移植产生作为人源化抗体的具有本文的表B中所示的相应可变区的抗体NKp46-1、-2、-3和-4。使用CHO细胞产生抗体并测试其与人NKp46的结合。
每种CDR移植的抗体均与人NKp46以良好的亲和力结合。然而，CDR移植的抗体均不与食蟹猴NKp46结合。确定人NKp46上的表位(参见实例13)；鉴于影响抗体可变区构象或CDR定位的修饰可能允许识别食蟹猴NKp46上共有的表位，使用CHO细胞为NKp46-1、-2、-3、-4和-9的每种CDR移植的抗体制备并产生多个变体，并测试其与食蟹猴NKp46的结合。对于抗体NKp46-1、-2、-3、-4和-9中的每一种，鉴定了另外一种变体，其允许以良好的亲和力识别人和食蟹猴NKp46结合共有的表位。基于3D建模研究，设计了包含NKp46-1 CDR和人框架的不同重链和轻链可变区，其作为人IgG1抗体产生，并测试其与食蟹猴NKp46的结合。
抗体NKp46-1
基于3D建模研究，设计了包含NKp46-1 CDR和人框架的不同重链和轻链可变区，其作为人IgG1抗体产生，并测试其与食蟹猴NKp46的结合。重链和轻链的两个组合能够与人和食蟹猴NKp46结合：重链可变区“H1”和重链“H3”，在每种情况下均与轻链“L1”组合。对于重链可变区，这些交叉结合可变区包含：NKp46-1重链CDR(下文所示，加下划线)，人IGHV1-69*06基因框架1、2和3区以及人IGHJ6*01基因框架4区。轻链可变区：NKp46-1轻链CDR(下文所示，加下划线)，人IGKV1-33*01基因框架1、2和3区以及人IGKJ4*01基因框架4区。根据Kabat编号选择CDR。H1、H3和L1链具有特定的氨基酸取代(下文以粗体和下划线显示)。L1在Kabat轻链残基87处具有苯丙氨酸。H1在Kabat重链残基27处具有酪氨酸，并且在Kabat残基66和67处分别具有赖氨酸和丙氨酸。H3另外在Kabat残基37处具有甘氨酸，在Kabat残基48处具有异亮氨酸，并且在Kabat残基91处具有苯丙氨酸。
NKp46-1：“H1”重链可变区
Figure BDA0001770555070000461
(SEQ ID NO:199)
NKp46-1：“H3”重链可变区
Figure BDA0001770555070000471
(SEQ ID NO:200)
NKp46-1：“L1”轻链可变区
Figure BDA0001770555070000472
(SEQ ID NO:201)
抗体NKp46-2
基于3D建模研究，设计了包含NKp46-2CDR和人框架的不同重链和轻链可变区，其作为人IgG1抗体产生，并测试其与食蟹猴NKp46的结合。重链和轻链的三个组合能够与人和食蟹猴NKp46结合：重链可变区“H1”、“H2”和“H3”，在每种情况下均与轻链“L1”组合。有趣的是，与具有SEQ ID NO:5和6的VH和VL的亲本NKp46-2抗体相比，H1L1此外具有改善的结合亲和力。对于重链可变区，这些交叉结合可变区包含：NKp46-2重链CDR(下文所示，加下划线)，人IGHV4-30-4*01基因框架1、2和3区以及人IGHJ1*01基因框架4区。轻链可变区：NKp46-2轻链CDR(下文所示，加下划线)，人IGKV1-39*01基因框架1、2和3区以及人IGKJ4*01基因框架4区。根据Kabat编号选择CDR。L1、H1、H2和H3链具有特定的氨基酸取代(下文以粗体和下划线显示)。L1在Kabat轻链残基48处具有缬氨酸。H1在Kabat重链残基27处具有酪氨酸，并且在Kabat残基71处具有精氨酸。H2另外在Kabat残基48处具有甲硫氨酸，并且在Kabat残基67处具有异亮氨酸。H3另外在Kabat残基31处具有苏氨酸。
NKp46-2：“H1”重链可变区
Figure BDA0001770555070000473
(SEQ ID NO:202)
NKp46-2：“H2”重链可变区
Figure BDA0001770555070000481
(SEQ ID NO:203)
NKp46-2：“H3”重链可变区
Figure BDA0001770555070000482
(SEQ ID NO:204)
NKp46-2：“L1”轻链可变区
Figure BDA0001770555070000483
(SEQ ID NO:205)
抗体NKp46-3
基于3D建模研究，设计了包含NKp46-3CDR和人框架的不同重链和轻链可变区，其作为人IgG1抗体产生，并测试其与食蟹猴NKp46的结合。重链和轻链的三个组合能够与人和食蟹猴NKp46结合：重链可变区“H1”、“H3”和“H4”，在每种情况下均与轻链“L1”组合。有趣的是，与具有SEQ ID NO:7和8的VH和VL的亲本NKp46-3抗体相比，H3L1此外具有改善的结合亲和力。对于重链可变区，这些交叉结合可变区包含：NKp46-3重链CDR(下文所示，加下划线)，人IGHV1-69*02基因框架1、2和3区以及人IGHJ6*01基因框架4区。轻链可变区：NKp46-3轻链CDR(下文所示，加下划线)，使用来自IGKV3-15的FR1和FR2和来自IGKV3-11的FR3通过镶嵌方法产生的框架1、2和3区以及人IGKJ2*01基因框架4区。根据Kabat编号选择CDR。L1、H1、H3和H4链具有特定的氨基酸取代(下文以粗体和下划线显示)。L1在Kabat轻链残基49处具有赖氨酸。H1在Kabat重链残基27处具有酪氨酸。H3另外在Kabat残基48处具有异亮氨酸，并且在Kabat残基67处具有丙氨酸。H4另外在Kabat残基69处具有亮氨酸。
NKp46-3：“H1”重链可变区
Figure BDA0001770555070000491
(SEQ ID NO:206)
NKp46-3：“H3”重链可变区
Figure BDA0001770555070000492
(SEQ ID NO:207)
NKp46-3：“H4”重链可变区
Figure BDA0001770555070000493
(SEQ ID NO:208)
NKp46-3：“L1”轻链可变区
Figure BDA0001770555070000494
(SEQ ID NO:209)
抗体NKp46-4
基于3D建模研究，设计了包含NKp46-4CDR和人框架的不同重链和轻链可变区，其作为人IgG1抗体产生，并测试其与食蟹猴NKp46的结合。与轻链“L2”组合的重链可变区“H1”能够与人和食蟹猴NKp46以及亲本抗体结合。另外两个抗原结合区(一个由“L2”和“H2”组成，一个由“L2”和“H3”组成)能够以中等水平结合食蟹猴NKp46，尽管亲和力比对人NKp46的亲和力低10倍。对于重链可变区，这些交叉结合可变区包含：NKp46-4重链CDR(下文所示，加下划线)，使用来自IGHV1646的FR1、来自IGHV1-69的0FR3和共有的FR2(IGHV1-46和IGHV1-69具有相同的FR2)使用镶嵌方法设计的人框架1、2和3区以及人IGHJ6*01基因框架4区。轻链可变区：NKp46-4轻链CDR(下文所示，加下划线)，来自IGKV1-NL1的框架1、2和3区以及人IGKJ4*01基因框架4区。根据Kabat编号选择CDR。L2、H1、H2和H3链具有特定的氨基酸取代(下文以粗体和下划线显示)。L2在Kabat轻链残基36处具有苯丙氨酸，并且在Kabat残基48处具有缬氨酸。H1在Kabat重链残基30处具有苏氨酸，在Kabat残基48处具有异亮氨酸，并且在Kabat残基93处具有缬氨酸。H2另外在Kabat残基67处具有苏氨酸。H3另外在Kabat残基69处具有亮氨酸。
NKp46-4：“H1”重链可变区
Figure BDA0001770555070000501
(SEQ ID NO:210)
NKp46-4：“H2”重链可变区
Figure BDA0001770555070000502
(SEQ ID NO:211)
NKp46-4：“H3”重链可变区
Figure BDA0001770555070000503
(SEQ ID NO:212)
NKp46-4：“L2”轻链可变区
Figure BDA0001770555070000504
(SEQ ID NO:213)
抗体NKp46-9
基于3D建模研究，设计了包含NKp46-9CDR和人框架的不同重链和轻链可变区，其作为人IgG1抗体产生，并测试其与食蟹猴NKp46的结合。重链可变区“H2”(当与轻链可变区“L1”或“L2”组合时)和重链可变区“H3”(当与轻链可变区“L1”或“L2”组合时)能够以与亲本抗体(具有SEQ ID NO:13和14的VH和VL)更大的亲和力与人和食蟹猴NKp46结合。“H1”链不能结合具有测试的任何轻链的食蟹猴NKp46，但与人NKp46结合良好。对于重链可变区，这些交叉结合可变区包含：NKp46-9重链CDR(下文所示，加下划线)，来自IGHV4-30-4*01的人框架1、2和3区以及人IGHJ6*01基因框架4区。轻链可变区：NKp46-9轻链CDR(下文所示，加下划线)，来自IGKV1-39*01的框架1、2和3区以及人IGKJ2*01基因框架4区。根据Kabat编号选择CDR。L1、L2、H1、H2和H3链具有特定的氨基酸取代(下文以粗体和下划线显示)。L1在Kabat轻链残基36处具有半胱氨酸。L2另外在Kabat残基48处具有缬氨酸。H1在Kabat重链残基71处具有精氨酸。H2另外在Kabat残基27处具有酪氨酸。H3另外在Kabat残基48处具有甲硫氨酸，并且在Kabat残基67处具有异亮氨酸。
NKp46-9：“H1”重链可变区
Figure BDA0001770555070000511
(SEQ ID NO:214)
NKp46-9：“H2”重链可变区
Figure BDA0001770555070000512
(SEQ ID NO:215)
NKp46-9：“H3”重链可变区
Figure BDA0001770555070000513
(SEQ ID NO:216)
NKp46-9：“L1”轻链可变区
Figure BDA0001770555070000514
Figure BDA0001770555070000521
(SEQ ID NO:217)
NKp46-9：“L2”轻链可变区
Figure BDA0001770555070000522
(SEQ ID NO:218)
实例2：
结合FcRn而非FcγR用于靶向效应细胞受体的双特异性抗体形式的鉴定
此实验的目的是开发一种新的双特异性蛋白形式，其将Fc结构域与抗NKp46结合结构域和抗靶抗原结合结构域一起置于多肽上。双特异性蛋白通过其抗NKp46结合结构域单价地与NKp46结合。单体Fc结构域保留与人新生儿Fc受体(FcRn)的至少部分结合，但基本上不结合人CD16和/或其他人Fcγ受体。因此，双特异性蛋白不会诱导Fcγ介导的(例如CD16介导的)靶细胞裂解。
实施例2-1抗CD19-IgG1-Fcmono-抗CD3的构建和结合分析
由于尚未产生可以表明这种蛋白质是否有功能的抗NKp46双特异性抗体，使用CD3代替NKp46作为模型抗原，以便在通过NKp46靶向NK细胞之前研究新的单价双特异性蛋白的功能。
基于对肿瘤抗原CD19特异的scFv(抗CD19scFv)和对T细胞上的活化受体CD3特异的scFV(抗CD3scFv)的双特异性Fc用于评估新的单体双特异性多肽形式的FcRn结合和CD19结合功能。最终多肽的结构域排列称为“F1”形式(CH2结构域中的星号表示任选的N297S突变，不包含在此处测试的多肽中)。
基于对肿瘤抗原CD19特异的scFv(抗CD19scFv)和对T细胞上的活化受体CD3特异的scFV(抗CD3scFv)构建含Fc的双特异性单体多肽。CH3结构域掺入了突变(EU编号)L351K、T366S、P395V、F405R、T407A和K409Y。多肽具有如下排列的结构域：抗CD19-CH2-CH3-抗CD3。设计编码具有氨基酸序列STGS的CH3/VH接头肽的DNA序列，以便在CH3-VH接点处插入特定的SalI限制性位点。
CH3结构域掺入了突变(EU编号)L351K、T366S、P395V、F405R、T407A和K409Y。CH2结构域是野生型CH2。下文示出了单体CH2-CH3Fc部分和抗CD19的DNA和氨基酸序列。
对应于抗CD19scFv的轻链和重链DNA和氨基酸序列如下：
序列 SEQ ID NO
抗CD19-VK DNA 113
抗CD19-VK氨基酸 114
抗CD19-VH DNA 115
抗CD19-VH氨基酸 116
单体CH2-CH3Fc部分和最终双特异性IgG1-Fcmono多肽的DNA序列(在该构建体中除去了最后一个K)示于SEQ ID NO:117中。氨基酸序列示于SEQ ID NO:2中。抗CD19-F1-抗CD3完整序列(成熟蛋白)示于SEQ ID NO:118中。
重组蛋白的克隆和产生
通过直接合成和/或通过PCR产生编码序列。使用PrimeSTAR MAX DNA聚合酶(塔卡拉公司(Takara)，#R045A)进行PCR，并且使用NucleoSpin凝胶和PCR清除试剂盒(马歇雷-纳格尔公司(Macherey-Nagel)，#740609.250)从1％琼脂糖凝胶中纯化PCR产物。如制造商方案(克罗泰克公司(ClonTech)，#ST0345)中所述，一旦纯化，便在进行In-Fusion连接反应之前，对PCR产物进行定量。使用Nucleospin 96质粒试剂盒(马歇雷-纳格尔公司，#740625.4)，在EVO200(帝肯公司(Tecan))上运行微量制备之后获得的质粒。然后在转染CHO细胞系之前对质粒进行测序用于序列确认。
使CHO细胞在补充有酚红和6mM GlutaMax的CD-CHO培养基(英杰公司(Invitrogen))中生长。在转染前一天，对细胞进行计数并以175,000个细胞/ml接种。对于转染，如AMAXA SF细胞系试剂盒(AMAXA公司，#V4XC-2032)中所述的制备细胞(200,000个细胞/转染)，并用Nucleofector4D装置使用DS137方案进行核转染。所有转染均使用300ng经验证的质粒进行。转染后，将细胞接种到预温培养基中的24孔板中。24小时后，将潮霉素B加入培养基(200μg/ml)中。在培养1周后监测蛋白质表达。然后将表达蛋白质的细胞亚克隆以获得最佳生产者。使用96孔平底板进行亚克隆，其中细胞以每孔一个细胞接种到补充有200μg/ml潮霉素B的200μl培养基中。在测试克隆的生产力之前，将细胞放置三周。
使用Protein-A珠(-rProteinA Sepharose fast flow，通用电气医疗集团(GEHealthcare)，参考号：17-1279-03)纯化含有IgG1-Fc片段的重组蛋白。简言之，将细胞培养上清液浓缩，通过离心澄清并注射到Protein-A柱上以捕获含有Fc的重组蛋白。将蛋白质在酸性pH(柠檬酸0.1M pH 3)下洗脱，立即使用TRIS-HCL pH 8.5中和，并用1X PBS透析。使用钴树脂通过亲和层析来纯化含有“6his”标签的重组scFv。通过尺寸排阻层析(SEC)纯化其他重组scFv。
实例2-2：抗CD19-IgG1-Fcmono-抗CD3与B221、JURKAT、HUT78和CHO细胞系的结合分析
收获细胞并在4℃下在1小时内用产生抗CD19-F1-抗CD3的细胞的细胞上清液染色。在染色缓冲液(PBS1X/BSA 0.2％/EDTA 2mM)中洗涤两次后，将细胞在4℃下用山羊抗人(Fc)-PE抗体(IM0550Beckman Coulter-1/200)染色30分钟。两次洗涤后，染色物被采集在BD FACS Canto II上，并使用FlowJo软件分析。
还通过流式细胞术控制CD3和CD19表达：收获细胞并在PBS1X/BSA 0.2％/EDTA2mM缓冲液中在4℃下在30分钟内使用5μl抗CD3-APC和5μl抗CD19-FITC抗体染色。两次洗涤后，染色物被采集在BD FACS Canto II上，并使用FlowJo软件分析。
抗CD19-F1-抗CD3蛋白与CD3细胞系(HUT78和JURKAT细胞系)和CD19细胞系(B221细胞系)结合，但不与用作阴性对照的CHO细胞系结合。
实例2-3：
通过纯化的抗CD19-F1-抗CD3进行的T细胞和B细胞聚集
在T/B细胞聚集测定中测试纯化的抗CD19-F1-抗CD3，以评估抗体在使表达CD19和CD3的细胞聚集在一起方面是否有功能。
结果示于图1中。上图显示抗CD19-F1-抗CD3在存在B221(CD19)或JURKAT(CD3)细胞系的情况下不引起聚集，但在共培养B221和JURKAT细胞时它确实引起细胞聚集，说明双特异性抗体有功能。下图示出了没有抗体的对照。
实例2-4：
双特异性单体Fc多肽与FcRn的结合
通过表面等离子体共振(SPR)进行的亲和力研究
Biacore T100通用程序和试剂
在25℃下在Biacore T100仪器(Biacore通用电气医疗集团)上进行SPR测量。在所有Biacore实验中，乙酸盐缓冲液(50mM乙酸盐pH 5.6、150mM NaCl、0.1％表面活性剂p20)和HBS-EP+(Biacore通用电气医疗集团)分别充当运行缓冲液和再生缓冲液。使用BiacoreT100评估软件分析传感图。重组小鼠FcRn购自R&D系统公司(R&D Systems)。
FcRn的固定
将重组FcRn蛋白共价地固定在传感器芯片CM5上的右旋糖酐层中的羧基基团上。用EDC/NHS(N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺(Biacore通用电气医疗集团))活化芯片表面。将FcRn蛋白在偶联缓冲液(10mM乙酸盐，pH5.6)中稀释至10μg/ml，并且注射直到达到适当的固定水平(即2500RU)。使用100mM乙醇胺pH 8(Biacore通用电气医疗集团)使剩余的活化的基团失活。
亲和力研究
遵循单周期动力学(Single Cycle Kinetic，SCK)方案进行单价亲和力研究。在FcRn(无再生)上注射可溶性分析物(抗体和双特异性分子)的五个系列稀释液(范围从41.5至660nM)并允许在再生前解离10分钟。对于每种分析物，使用1:1SCK结合模型拟合整个传感图。
结果
评价其CH2-CH3结构域置于两个抗原结合结构域(此处是两个scFv)之间的抗CD19-F1-抗CD3，以评估这种双特异性单体Fc蛋白是否能够保留与FcRn的结合，从而与常规双特异性抗体相比具有改善的体内半衰期。结果显示保留了FcRn结合，该模型表明常规IgG的比例为1:1(每个单体Fc有1个FcRn)而非比例为2:1(每个抗体有2个FcRn)。
与具有人IgG1恒定区的嵌合全长抗体相比，使用SPR评价亲和力。单体Fc保留与FcRn的显著单体结合(单体Fc：亲和力为KD＝194nM；具有二价结合的全长抗体：亲合力为KD＝15.4nM)。
实例3：
抗CD19x抗NKp46双特异性单体Fc结构域多肽的构建
尚不清楚什么活化NK细胞上的受体促成靶细胞的裂解，此外由于抗NKp46抗体可能阻断NKp46，因此NKp46是否可介导细胞毒性也尚不清楚。因此，我们研究了双特异性蛋白形式是否可以诱导NKp46触发，以及它是否会在不存在靶细胞的情况下诱导NKp46激动，这可能导致NK远离靶标的不适当活化和/或对靶细胞的降低的总体活性。
开发了一种作为单链蛋白的新的双特异性蛋白形式，其与FcRn结合但不结合FcγR。另外，开发了包含两个或三个多肽链的多聚体蛋白(其中Fc结构域保持单体)，其与在转化为scFv形式时不保持与其靶标的结合的抗体可变区相容地使用。后面的形式可方便地用于抗体筛选；通过掺入至少一个结合区作为F(ab)结构，任何抗靶标(例如抗肿瘤)抗体可变区均可以在双特异性构建体中直接表达为双特异性蛋白内的F(ab)形式并对其进行测试，不管抗体是否会保留作为scFv的结合，从而简化筛选并增加可用抗体的数量。Fc结构域保持单体的这些形式具有保持最大构象灵活性的优点，并且如下文所示可以允许与NKp46或靶抗原的最佳结合。
制备用于在使用来自实例2-1中描述的对肿瘤抗原CD19特异的scFv的可变结构域和来自实例1中鉴定的对NKp46受体特异的抗体的不同可变区制备双特异性抗体中使用的不同构建体。还使用来自对NKp46受体特异的市售抗体Bab281(mIgG1，availablecommercially from可从贝克曼库尔特公司(Beckman Coulter,Inc.)(布雷亚，加利福尼亚州，美国)商购获得)(还参见Pessino等人,J.Exp.Med[实验医学杂志],1998,188(5):953-960和Sivori等人,Eur J Immunol[欧洲免疫学杂志],1999.29:1656-1666)的可变区作为抗NKp46制备构建体。
为了使Fc结构域在单链多肽中或在仅有一个链具有Fc结构域的多聚体中保持单体，通过两种不同的策略防止CH3-CH3二聚化：(1)通过使用掺入特定突变(EU编号)(即L351K、T366S、P395V、F405R、T407A和K409Y)的CH3结构域；或者(2)通过使用串联CH3结构域，其中串联CH3结构域由彼此相关联的柔性接头分开，这防止了链间CH3-CH3二聚化。含有上文鉴定的点突变的单体CH2-CH3Fc部分的DNA和氨基酸序列与实例2-1中的相同。具有串联CH3结构域的单体CH2-CH3-接头-CH3Fc部分的DNA和氨基酸序列示于图2A-2D中。
抗CD19scFv的轻链和重链DNA和氨基酸序列也与实例2-1中的相同。如实例2-1中的克隆、产生和纯化蛋白质。下文示出了不同抗NKp46scFv的轻链和重链DNA和氨基酸序列。
表1：不同抗NKp46scFv的氨基酸序列
Figure BDA0001770555070000561
Figure BDA0001770555070000571
表2A：对应于不同抗NKp46scFv的DNA序列
Figure BDA0001770555070000572
形式1(F1)(抗CD19-IgG1-Fcmono-抗NKp46(scFv))
形式1(F1)的结构域结构示于图2A中。基于对肿瘤抗原CD19特异的scFv(抗CD19scFv)和对NKp46受体特异的scFV构建含Fc的双特异性多肽。多肽是具有如下排列的结构域的单链多肽(N末端至C末端)：(Vκ-VH)抗CD19–CH2–CH3–(VH-Vκ)抗NKp46
设计编码具有氨基酸序列STGS的CH3/VH接头肽的DNA序列，以便在CH3-VH接点处插入特定的SalI限制性位点。最终多肽的结构域排列示于图2中(CH2结构域中的星号表示任选的N297S突变)，其中抗CD3scFv被抗NKp46scFv替换。(Vκ-VH)单元包含VH与Vκ结构域之间的接头。如实例2-1中的克隆、产生和纯化蛋白质。双特异性多肽的氨基酸序列(完整序列(成熟蛋白))示于下表2B中列出的相应SEQ ID NO中。
表2B
序列 SEQ ID NO
CD19-F1-NKp46-1 133
CD19-F1-NKp46-2 134
CD19-F1-NKp46-3 135
CD19-F1-NKp46-4 136
CD19-F1-NKp46-6 137
CD19-F1-NKp46-9 138
CD19-F1-Bab281 139
形式2(F2)：CD19-F2-NKp46-3
F2多肽的结构域结构示于图2A中。单体CH2-CH3Fc部分的DNA和氨基酸序列是如实例2-1中的，并且它类似地含有CH3结构域突变(突变(EU编号)L351K、T366S、P395V、F405R、T407A和K409Y)。异二聚体由以下构成：
(1)第一(中心)多肽链，其具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：
(Vκ–VH)抗CD19–CH2–CH3–VH 抗NKp46–CH1
以及
(2)第二多肽链，其具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：
VK抗NKp46–CK。
(Vκ-VH)单元由VH结构域、接头和Vκ单元(即scFv)构成。与本发明的双特异性多肽的其他形式一样，设计编码具有氨基酸序列STGS的CH3/VH接头肽的DNA序列，以便在CH3-VH接点处插入特定的SalI限制性位点。如实例2-1中的克隆、产生和纯化蛋白质。F2蛋白的第一和第二链的氨基酸序列示于SEQ ID NO:140和141中。
形式3(F3)：CD19-F3-NKp46-3
F3多肽的结构域结构示于图2A中。CH2-CH3Fc部分的DNA和氨基酸序列包含串联CH3结构域，其中同一多肽链上的两个CH3结构域彼此相关联，从而防止不同双特异性蛋白之间的二聚化。
单链多肽具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：
(Vκ–VH)抗CD19–CH2–CH3–CH3–(VH–Vκ)抗NKp46
(Vκ-VH)单元由VH结构域、接头和Vκ单元(scFv)构成。
如实例2-1中的克隆、产生和纯化蛋白质。使用prot-A珠通过亲和层析从细胞培养上清液中纯化双特异性蛋白，并通过SEC分析和纯化。蛋白质显示出3.4mg/L的高生产率，并且纯化的蛋白质展现出简单的SEC图。F3蛋白的氨基酸序列示于SEQ ID NO:142中。
形式4(F4)：CD19-F4-NKp46-3
F4多肽的结构域结构示于图2A中。CH2-CH3Fc部分的DNA和氨基酸序列包含如形式F3中的串联CH3结构域，并且另外包含防止N连接糖基化并消除FcγR结合的N297S突变。如实例2-1中的克隆、产生和纯化蛋白质。使用prot-A珠通过亲和层析从细胞培养上清液中纯化双特异性蛋白，并通过SEC分析和纯化。蛋白质显示出1mg/L的良好生产率，并且纯化的蛋白质展现出简单的SEC图。具有NKp46-3可变结构域的F4蛋白的氨基酸序列示于SEQ ID NO:143中。
形式8(F8)
F8多肽的结构域结构示于图2B中。单体CH2-CH3Fc部分的DNA和氨基酸序列是如形式F2中的，并且它类似地含有CH3结构域突变(突变(EU编号)L351K、T366S、P395V、F405R、T407A和K409Y)以及防止N连接糖基化并且此外消除FcγR结合的N297S突变。产生了F8蛋白的三种变体：(a)第一种，其中铰链区中的半胱氨酸残基保持完整(野生型，称为F8A)；(b)第二种，其中铰链区中的半胱氨酸残基被丝氨酸残基替换(F8B)；以及(c)第三种，其包含替换铰链中的残基DKTHTCPPCP的接头序列GGGSS(F8C)。变体F8B和F8C提供了生产优势，因为这些形式避免了中心链的同二聚体的形成。此异三聚体由以下构成：
(1)第一(中心)多肽链，其具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：
VH 抗CD19–CH1–CH2–CH3–VH抗NKp46–Cκ
以及
(2)第二多肽链，其具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：VK抗NKp46–CH1
以及
(3)第三多肽链，其具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：
Vκ抗CD19–Cκ
如实例2-1中的克隆、产生和纯化蛋白质。使用prot-A珠通过亲和层析从细胞培养上清液中纯化双特异性蛋白，并通过SEC分析和纯化。蛋白质显示出3.7mg/L的高生产率(F8C)，并且纯化的蛋白质再次展现出简单的SEC图。具有NKp46-3可变区的F8蛋白(C变体)的三个链的氨基酸序列示于SEQ ID NO:144、145和146中。
形式9(F9)：CD19-F9-NKp46-3
F9多肽是具有中心多肽链和各自通过CH1-Cκ二聚化与中心链相关联的两个多肽链的三聚体多肽。三聚体F9蛋白的结构域结构示于图2B中，其中CH1与Cκ结构域之间的键是链间二硫键。两个抗原结合结构域具有F(ab)结构，从而允许使用这些抗体，不管它们是否以scFv形式保留功能。CH2-CH3Fc部分的DNA和氨基酸序列包含如形式F4中的串联CH3结构域并且包含含有N297S取代的CH2结构域。产生了F9蛋白的三种变体：(a)第一种，其中铰链区中的半胱氨酸残基保持完整(野生型，称为F9A)；(b)第二种，其中铰链区中的半胱氨酸残基被丝氨酸残基替换(F9B)；以及(c)第三种，其含有替换铰链中的残基DKTHTCPPCP的接头序列GGGSS(F9C)。变体F9B和F9C通过避免中心链的同二聚体的形成而提供了生产优势。异三聚体由以下构成：
(1)第一(中心)多肽链，其具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：
VH 抗CD19–CH1–CH2–CH3–CH3–VH 抗NKp46–Cκ
以及
(2)第二多肽链，其具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：Vκ抗NKp46–CH1
以及
(3)第三多肽链，其具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：
Vκ抗CD19–Cκ。
如实例2-1中的克隆、产生和纯化蛋白质。使用prot-A珠通过亲和层析从细胞培养上清液中纯化双特异性蛋白，并通过SEC分析和纯化。蛋白质显示出8.7mg/L(F9A)和3.0mg/L(F9B)的高生产率，并且纯化的蛋白质再次展现出简单的SEC图。
F9蛋白变体F9A的三个链的氨基酸序列示于SEQ ID NO:147、148和149中。F9蛋白变体F9B的三个链的氨基酸序列示于SEQ ID NO:150、151和152中。F9蛋白变体F9C的三个链的氨基酸序列示于SEQ ID NO:153、154和155中。
形式10(F10)：CD19-F10-NKp46-3
F10多肽是具有中心多肽链和通过CH1-Cκ二聚化与中心链相关联的第二多肽链的二聚体蛋白。二聚体F10蛋白的结构域结构示于图2B中，其中CH1与Cκ结构域之间的键是链间二硫键。两个抗原结合结构域之一具有Fab结构，并且另一个是scFv。CH2-CH3Fc部分的DNA和氨基酸序列包含如形式F4中所示的串联CH3结构域并且包含含有N297S取代的CH2结构域。还产生了F10蛋白的三种变体：(a)第一种，其中铰链区中的半胱氨酸残基保持完整(野生型，称为F10A)；(b)第二种，其中铰链区中的半胱氨酸残基被丝氨酸残基替换(F10B)；以及(c)第三种，其含有替换铰链中的残基DKTHTCPPCP的接头序列GGGSS(F10C)。变体F10B和F10C提供了生产优势，因为它们避免了中心链的同二聚体的形成。(Vκ-VH)单元由VH结构域、接头和Vκ单元(scFv)构成。异二聚体由以下构成：
(1)第一(中心)多肽链，其具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：
VH 抗CD19–CH1–CH2–CH3–CH3–(VH–Vκ)抗NKp46
以及
(2)第二多肽链，其具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：
Vκ抗CD19–Cκ。
如实例2-1中的克隆、产生和纯化这些蛋白质。使用prot-A珠通过亲和层析从细胞培养上清液中纯化双特异性蛋白，并通过SEC分析和纯化。蛋白质显示出2mg/L的良好生产率(F10A)，并且纯化的蛋白质再次展现出简单的SEC图。F10A蛋白变体的两个链的氨基酸序列示于SEQ ID NO:156(第二链)和157(第一链)中。F10B蛋白变体的两个链的氨基酸序列示于SEQ ID NO:158(第二链)和159(第一链)中。F10C蛋白变体的两个链的氨基酸序列示于SEQ ID NO:160(第二链)和161(第一链)中。
形式11(F11)：CD19-F11-NKp46-3
F11多肽的结构域结构示于图2C中。异二聚体蛋白与F10相似，除了抗原结合结构域的结构是相反的。两个抗原结合结构域之一具有Fab样结构，并且另一个是scFv。异二聚体由以下构成：
(1)第一(中心)多肽链，其具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：
(Vκ–VH)抗CD19–CH2–CH3–CH3–VH抗NKp46–Cκ
以及
(2)第二多肽链，其具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：
Vκ抗NKp46–CH1。
如实例2-1中的克隆、产生和纯化蛋白质。使用prot-A珠通过亲和层析从细胞培养上清液中纯化双特异性蛋白，并通过SEC分析和纯化。蛋白质显示出2mg/L的良好生产率，并且纯化的蛋白质类似地展现出简单的SEC图。F11蛋白的两个链的氨基酸序列示于SEQ IDNO:162(链1)和SEQ ID NO:163(链2)中。
形式12(F12)：CD19-F12-NKp46-3
二聚体F12多肽的结构域结构示于图2C中，其中CH1与Cκ结构域之间的键是二硫键。异二聚体蛋白与F11相似，但F(ab)结构内的CH1和Cκ结构域颠倒。异二聚体由以下构成：
(1)第一(中心)多肽链，其具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：
(Vκ–VH)抗CD19–CH2–CH3–CH3–VH 抗NKp46–CH1
以及
(2)第二多肽链，其具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：
Vκ抗NKp46–Cκ。
如实例2-1中的克隆、产生和纯化蛋白质。使用prot-A珠通过亲和层析从细胞培养上清液中纯化双特异性蛋白，并通过SEC分析和纯化。蛋白质显示出2.8mg/L的良好生产率，并且纯化的蛋白质类似地展现出简单的SEC图。F12蛋白的两个链的氨基酸序列示于SEQ IDNO:164(链1)和SEQ ID NO:165(链2)中。
形式17(F17)：CD19-F17-NKp46-3
三聚体F17多肽的结构域结构示于图2C中，其中CH1与Cκ结构域之间的键是二硫键。异二聚体蛋白与F9相似，但C末端F(ab)结构内的VH和Vκ结构域以及CH1和Vκ结构域各自分别与其配偶体颠倒。异三聚体由以下构成：
(1)第一(中心)多肽链，其具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：
VH 抗CD19–CH1–CH2–CH3–CH3–Vκ抗NKp46–CH1
以及
(2)第二多肽链，其具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：VH 抗NKp46–Cκ
以及
(3)第三多肽链，其具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：
Vκ抗CD19–Cκ
另外，产生了F17蛋白的三种变体：(a)第一种，其中铰链区中的半胱氨酸残基保持完整(野生型，称为F17A)；(b)第二种，其中铰链区中的半胱氨酸残基被丝氨酸残基替换(F17B)；以及(c)第三种，其含有替换铰链中的残基DKTHTCPPCP的接头序列GGGSS(F17C)。如实例2-1中的克隆、产生和纯化蛋白质。F17B蛋白的三个链的氨基酸序列示于SEQID NO:166、167和168中。
实例4：
具有二聚体Fc结构域的双特异性NKp46抗体形式
开发了具有二聚体Fc结构域的新的蛋白质构建体，其具有实例3的单体Fc结构域蛋白质的许多优点，但以更大的亲和力结合FcRn。产生了不同的蛋白质形式，其与FcγR(包括CD16)具有低结合或基本上缺乏与其的结合，或者其具有与FcγRs(包括CD16)的结合，例如对人CD16的结合亲和力在野生型人IgG1抗体的结合亲和力的1-log内，如通过SPR评估的(例如参见实例16的方法)。测试和比较了不同的多肽形式，以研究包含具有(VH-(CH1/Cκ)-CH2-CH3-)单元或(Vκ-(CH1或Cκ)-CH2-CH3-)单元的中心链的异二聚体蛋白的功能。一个或两个CH3结构域任选地通过插入氨基酸序列或结构域融合至一个或多个可变结构域(与分开的多肽链上的可变结构域相缔合的单可变结构域、串联可变结构域(例如scF)、或能够结合作为单可变结构域的抗原的单可变结构域)。两个链通过CH1-Cκ二聚化相缔合以形成二硫键连接的二聚体，或者如果与第三链相缔合，则形成三聚体。
制备用于在使用衍生自实例2-1中描述的对肿瘤抗原CD19特异的scFv的可变结构域DNA和氨基酸序列以及来自实例1中鉴定的对NKp46特异的抗体的不同可变区制备双特异性抗体中使用的不同构建体。如实例2-1中的克隆、产生和纯化蛋白质。结构域结构示于图2A-6D中。
形式5(F5)：CD19-F5-NKp46-3
三聚体F5多肽的结构域结构示于图2D中，其中铰链结构域之间的链间键(在图中在链上的CH1/Cκ与CH2结构域之间指示)和CH1与Cκ结构域之间的链间键是链间二硫键。异三聚体由以下构成：
(1)第一(中心)多肽链，其具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：
VH 抗CD19–CH1–CH2–CH3–VH 抗NKp46–Cκ
以及
(2)第二多肽链，其具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：Vκ抗CD19–CK–CH2–CH3
以及
(3)第三多肽链，其具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：
Vκ抗NKp46–CH1
如实例2-1中的克隆、产生和纯化蛋白质。使用prot-A珠通过亲和层析从细胞培养上清液中纯化双特异性蛋白，并通过SEC分析和纯化。蛋白质显示出37mg/L的高生产率，并且纯化的蛋白质再次展现出简单的SEC图。三个多肽链的氨基酸序列示于SEQ ID NO 169(第二链)、170(第一链)和第171链(第三链)中。
形式6(F6)：CD19-F6-NKp46-3
异三聚体F6多肽的结构域结构示于图2D中。F6蛋白与F5相同，但含有避免N连接糖基化的N297S取代。如实例2-1中的克隆、产生和纯化蛋白质。使用prot-A珠通过亲和层析从细胞培养上清液中纯化双特异性蛋白，并通过SEC分析和纯化。蛋白质显示出12mg/L的高生产率，并且纯化的蛋白质展现出简单的SEC图。三个多肽链的氨基酸序列示于SEQID NO:172(第二链)、173(第一链)和第174链(第三链)中。
形式7(F7)：CD19-F7-NKp46-3
异三聚体F7多肽的结构域结构示于图2D中。F7蛋白与F6相同，除了CH1和Cκ结构域中的半胱氨酸至丝氨酸取代，所述结构域在C末端与Fc结构域连接，以防止中心链与Vκ抗NKp46–CH1链的二聚体种类的次要群体的形成。如实例2-1中的克隆、产生和纯化蛋白质。使用prot-A珠通过亲和层析从细胞培养上清液中纯化双特异性蛋白，并通过SEC分析和纯化。蛋白质显示出11mg/L的高生产率，并且纯化的蛋白质展现出简单的SEC图。三个多肽链的氨基酸序列示于SEQ ID NO:175(第二链)、176(第一链)和第177链(第三链)中。
形式13(F13)：CD19-F13-NKp46-3
二聚体F13多肽的结构域结构示于图2D中，其中铰链结构域之间的链间键(在链上的CH1/Cκ与CH2结构域之间指示)和CH1与Cκ结构域之间的链间键是链间二硫键。异二聚体由以下构成：
(1)第一(中心)多肽链，其具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：
VH 抗CD19–CH1–CH2–CH3–(VH-Vκ)抗NKp46
以及
(2)第二多肽链，其具有如下排列的结构域(N末端至C末端)：Vκ抗CD19–Cκ–CH2–CH3。
(VH-Vκ)单元由VH结构域、接头和Vκ单元(scFv)构成。
如实例2-1中的克隆、产生和纯化蛋白质。使用prot-A珠通过亲和层析从细胞培养上清液中纯化双特异性蛋白，并通过SEC分析和纯化。蛋白质显示出6.4mg/L的高生产率，并且纯化的蛋白质展现出简单的SEC图。两个多肽链的氨基酸序列示于SEQ ID NO:178(第二链)和179(第一链)中。
形式14(F14)：CD19-F14-NKp46-3
二聚体F14多肽的结构域结构示于图2E中。F14多肽是具有F13形式的结构的二聚体多肽，但代替野生型Fc结构域(CH2-CH3)，F14双特异性形式具有消除N连接糖基化的CH2结构域突变N297S。如实例2-1中的克隆、产生和纯化蛋白质。使用prot-A珠通过亲和层析从细胞培养上清液中纯化双特异性蛋白，并通过SEC分析和纯化。蛋白质显示出2.4mg/L的高生产率，并且纯化的蛋白质展现出简单的SEC图。两个多肽链的氨基酸序列示于SEQ ID NO:180(第二链)和181(第一链)中。
形式15(F15)：CD19-F15-NKp46-3
三聚体F15多肽的结构域结构示于图2E中。F15多肽是具有F6形式的结构的二聚体多肽，但不同之处在于中心链与第二链之间的N末端VH-CH1和Vκ-Cκ单元的倒置。如实例2-1中的克隆、产生和纯化蛋白质。使用prot-A珠通过亲和层析从细胞培养上清液中纯化双特异性蛋白，并通过SEC分析和纯化。蛋白质显示出0.9mg/L的良好生产率，并且纯化的蛋白质具有简单的SEC图。三个多肽链的氨基酸序列示于SEQ ID NO:182(第二链)、183(第一链)和第184链(第三链)中。
形式16(F16)：CD19-F16-NKp46-3
三聚体F16多肽的结构域结构示于图2E中。F16多肽是具有F6形式的结构的二聚体多肽，但不同之处在于中心链与第二链之间的C-末端VH-CK和Vκ-CH1单元的倒置。如实例2-1中的克隆、产生和纯化蛋白质。三个多肽链的氨基酸序列示于SEQ ID NO:185(第二链)、186(第一链)和第187链(第三链)中。
形式T5(T5)
三聚体T5多肽的结构域结构示于图2F中。T5多肽是具有F5形式的结构的三聚体多肽，但不同之处在于scFv单元融合在第三链(缺少Fc结构域的链)的C末端。因此，此蛋白质将具有两个针对目标抗原的抗原结合结构域和一个针对NKp46的抗原结合结构域，并且将通过其Fc结构域结合CD16。如实例2-1中的克隆、产生和纯化蛋白质。T5蛋白具有两个结合人CD20的源自不同抗体(并且结合CD20上的不同表位)的抗原结合结构域。第一抗CD20ABD含有亲本抗体GA101(
Figure BDA0001770555070000651
Figure BDA0001770555070000652
奥滨尤妥珠单抗(obinutuzumab)，罗氏制药公司(RochePharmaceuticals))的VH和VL。第二抗CD20ABD含有亲本抗体利妥昔单抗(
Figure BDA0001770555070000653
罗氏制药公司)的VH和VL。第三抗原结合结构域结合人NKp46。下文示出了T5蛋白的三个链的氨基酸序列(利妥昔单抗序列是粗体并加下划线，抗GA101序列加下划线，抗NKp46序列是斜体)。
GA101-T5-Ritux-NKp46
多肽1(SEQ ID NO:188)
Figure BDA0001770555070000661
多肽2(SEQ ID NO:189)
Figure BDA0001770555070000662
多肽3：(SEQ ID NO:190)
Figure BDA0001770555070000663
Figure BDA0001770555070000671
形式T6(T6)
三聚体T6多肽的结构域结构示于图2F中。T6多肽是具有F6形式的结构的三聚体多肽，但不同之处在于scFv单元融合在第三链(缺少Fc结构域的链)的C末端。此三聚体蛋白含有两个针对目标抗原的抗原结合结构域和一个针对NKp46的抗原结合结构域，并且由于N297取代不通过其Fc结构域结合CD16。如实例2-1中的克隆、产生和纯化蛋白质。T6蛋白含有两个结合人CD20的抗原结合结构域。第一抗CD20ABD包含亲本抗体GA101的VH和VL，并且第二抗CD20ABD包含利妥昔单抗的VH和VL。T6蛋白的三个链的氨基酸序列示于SEQ ID NO:191、192和193中。
形式T9B(T9B)
三聚体T9B多肽的结构域结构示于图2F中。T9B多肽是具有F9形式(F9B变体)的结构的三聚体多肽，但不同之处在于scFv单元融合在游离CH1结构域(在第三链上)的C末端。此蛋白质含有两个针对目标抗原的抗原结合结构域和一个针对NKp46的抗原结合结构域，但由于单体Fc结构域和/或N297取代不通过其Fc结构域结合CD16。如实例2-1中的克隆、产生和纯化如上所述的三聚体蛋白。T9B蛋白含有两个结合人CD20的抗原结合结构域。第一抗CD20ABD含有亲本抗体GA101的VH和VL，并且第二抗CD20ABD含有亲本抗体利妥昔单抗的VH和VL。下文示出了T9B蛋白的三个链的氨基酸序列。
GA101-T9B-Ritux-NKp46
多肽2：(SEQ ID NO:195)
DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLHSNGITYLYWYLQKPGQSPQLLIYQMSNLVSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCAQNLELPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC-
多肽1：(SEQ ID NO:194)
Figure BDA0001770555070000681
多肽3(SEQ ID NO:196)：
QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIKASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHGGSSSEVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGYTFTEYTMHWVKQSHGKSLEWIGGISPNIGGTSYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCARRGGSFDYWGQGTTLTVSSVEGGSGGSGGSGGSGGVDDIVMTQSPATLSVTPGDRVSLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGSDFTLSINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGAGTKLELK-
形式T11(T1)：CD19-T11-NKp46-3
二聚体T11多肽的结构域结构示于图2F中。T11多肽是具有F11形式的结构的三聚体多肽，但不同之处在于scFv单元融合在游离CH1结构域的C末端。此二聚体蛋白含有两个针对目标抗原的抗原结合结构域和一个针对NKp46的抗原结合结构域，并且由于单体Fc结构域和/或N297取代不通过其Fc结构域结合CD16。如实例2-1中的克隆、产生和纯化蛋白质。T11蛋白含有两个结合人CD20的抗原结合结构域。第一抗CD20ABD含有亲本抗体GA101的VH和VL，并且第二抗CD20ABD含有利妥昔单抗的VH和VL。下文示出了T11蛋白的两个链的氨基酸序列。
GA101-T11-Ritux-NKp46
多肽1(SEQ ID NO:197)：
DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLHSNGITYLYWYLQKPGQSPQLLIYQMSNLVSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCAQNLELPYTFGGGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYAFSYSWINWVRQAPGQGLEWMGRIFPGDGDTDYNGKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNVFDGYWLVYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTSPPSPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYSSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSTGSQVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSARTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC-
多肽2(SEQ ID NO:198)：
QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIKASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHGGSSSEVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGYTFTEYTMHWVKQSHGKSLEWIGGISPNIGGTSYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCARRGGSFDYWGQGTTLTVSSVEGGSGGSGGSGGSGGVDDIVMTQSPATLSVTPGDRVSLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGSDFTLSINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGAGTKLELK-
实例5：
通过表面等离子体共振(SPR)测得的双特异性蛋白对NKp46的结合亲和力
Biacore T100通用程序和试剂
在25℃下在Biacore T100仪器(Biacore通用电气医疗集团)上进行SPR测量。在所有Biacore实验中，HBS-EP+(Biacore通用电气医疗集团)和NaOH 10mM分别充当运行缓冲液和再生缓冲液。使用Biacore T100评估软件分析传感图。从(通用电气医疗集团)购买Protein-A。在先天制药公司克隆、产生和纯化人NKp46重组蛋白。
Protein-A的固定
将Protein-A蛋白共价地固定在传感器芯片CM5上的右旋糖酐层中的羧基基团上。用EDC/NHS(N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺(Biacore通用电气医疗集团))活化芯片表面。将Protein-A在偶联缓冲液(10mM乙酸盐，pH5.6)中稀释至10μg/ml，并且注射直到达到适当的固定水平(即2000RU)。使用100mM乙醇胺pH 8(Biacore通用电气医疗集团)使剩余的活化的基团失活。
结合研究
首先以实例2中描述的形式F1(具有来自NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3或NKp46-4抗体的不同抗NKp46可变区)测试了双特异性蛋白。接下来，作为不同形式F3、F4、F5、F6、F9、F10、F11、F13、F14(具有来自NKp46-3抗体的抗NKp46可变区)测试了抗体，并且将其与作为全长人IgG1的NKp46-3抗体进行比较。
将1μg/mL的双特异性蛋白捕获到Protein-A芯片上，并且在捕获的双特异性抗体上以5μg/mL注射重组人NKp46蛋白。对于空白减法，再次进行循环，用运行缓冲液替换NKp46蛋白。
通过SPR并且另外使用在细胞表面表达人NKp46构建体的细胞系通过流式细胞术分开地测试Bab281抗体与NKp46的结合。对于FACS筛选，通过用PE标记的山羊抗小鼠多克隆抗体(pAb)揭示出在上清液中的反应抗体的存在。SPR和FACS结果显示基于Bab281的抗体不结合NKp46细胞系或NKp46-Fc蛋白。当以双特异性形式呈现时，Bab281失去与其靶标的结合。
亲和力研究
遵循制造商推荐的常规捕获-动力学(Capture-Kinetic)方案(Biacore通用电气医疗集团动态术(kinetic wizard))进行单价亲和力研究。在捕获的双特异性抗体上依次注射人NKp46重组蛋白的七个系列稀释液(范围从6.25至400nM)并允许在再生前解离10分钟。使用1:1动态结合模型拟合整个传感图组。
结果
SPR显示具有NKp46-1、2、3和4scFv结合结构域的形式F1的双特异性多肽与NKp46结合，而具有其他抗NK46抗体的scFv的其他双特异性多肽不保留NKp46结合。不以单体双特异性形式保留结合的结合结构域最初与NKp46结合，但在转化为双特异性形式后失去结合。当使用NKp46-3可变区时，形式F1、F2、F3、F4、F5、F6、F9、F10、F11、F13、F14的所有双特异性多肽均保留与NKp46的结合。单价亲和力以及动态结合和解离速率常数示于下表3中。
表3
Figure BDA0001770555070000711
实例6：
对抗Daudi肿瘤靶标的NK细胞与含有Fc的NKp46x CD19双特异性蛋白的接合
测试具有根据实例3中描述的单链F1或二聚体F2形式的单体Fc结构域和结构域排列以及基于NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3或NKp46-4的NKp46结合区的双特异性抗体引导NK细胞裂解CD19阳性肿瘤靶细胞(Daudi，一种良好表征的B淋巴母细胞细胞系)的功能能力。F2蛋白另外包含NKp46-9可变区，其以scFv形式失去与NKp46的结合，但以F2的F(ab)样形式保留结合。
简言之，在U型底96孔板中在经典的4-h 51Cr-释放测定中评估(a)静息人NK细胞和(b)经人NKp46转染的人NK细胞系KHYG-1各自的细胞溶解活性。将Daudi细胞用51Cr(50μCi(1.85MBq)/1x 106个细胞)标记，然后在不同浓度的单体双特异性抗体的存在下以等于50(对于KHYG-1)和10(对于F1蛋白)或8.8(对于F2蛋白)的效应物/靶标比率与经hNKp46转染的KHYG-1混合。在37℃下进行短暂的离心和4小时的孵育后，取出样品的上清液并转移到LumaPlate(珀金埃尔默生命科学公司(Perkin Elmer Life Sciences)，波士顿，马萨诸塞州)中，并用TopCount NXTβ检测器(珀金埃尔默生命科学公司，波士顿，马萨诸塞州)测量51Cr释放。一式三份地分析所有实验条件，并且如下确定特异性裂解的百分比：100x(平均cpm实验释放-平均cpm自发释放)/(平均cpm总释放-平均cpm自发释放)。通过用2％TritonX100(西格玛公司(Sigma))裂解靶细胞获得总释放百分比，并且自发释放对应于培养基中的靶细胞(无效应物或Ab)。
结果
在KHYG-1hNKp46NK实验模型中，与阴性对照(人IgG1同种型对照(IC)和CD19/CD3双特异性抗体)相比，每种双特异性抗体NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3、NKp46-4或NKp46-9均通过人KHYG-1hNKp46NK细胞系诱导Daudi细胞的特异性裂解，从而显示这些抗体通过KHYG-1hNKp46经由CD19/NKp46交联诱导Daudi靶细胞裂解。
当静息NK细胞用作效应物时，与阴性对照(人IgG1同种型对照(IC)抗体)相比，每种双特异性抗体NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3、NKp46-4或NKp46-9均再次通过人NK细胞诱导Daudi细胞的特异性裂解，从而显示这些抗体通过人NK细胞经由CD19/NKp46交联诱导Daudi靶细胞裂解。利妥昔单抗(RTX，嵌合IgG1)用作通过静息人NK细胞进行的ADCC(抗体依赖性细胞毒性)的阳性对照。用RTX(在该测定中以10μg/ml)获得的最大响应是21.6％特异性裂解，说明双特异性抗体具有高靶细胞裂解活性。静息NK细胞的实验结果示于图3A(对于单链F1蛋白)和3B(对于二聚体F2蛋白)中。
实例7：
与全长抗NKp46mAb和消耗性抗肿瘤mAb的比较：只有NKp46x CD19双特异性蛋白阻止非特异性NK活化
这些研究旨在研究双特异性抗体是否可以在不触发非特异性NK细胞活化的情况下介导NKp46介导的针对癌症靶细胞的NK活化。
将具有根据实例3中描述的F2形式的排列的具有来自NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3、NKp46-4或NKp46-9的抗NKp46可变结构域的NKp46x CD19双特异性蛋白与以下进行比较：
(a)全长单特异性抗NKp46抗体(NKp46-3，作为人IgG1)，以及
(b)作为全长人IgG1的抗CD19抗体，作为ADCC诱导抗体对照比较物。
实验进一步包含以下作为对照：利妥昔单抗，具有高表达水平的靶抗原的一种抗CD20ADCC诱导抗体对照；抗CD52抗体阿仑单抗，人IgG1，其结合靶标和NK细胞上存在的CD52靶标；以及阴性对照同种型对照治疗性抗体(不结合靶细胞上存在的靶标的人IgG1(HUG1-IC))。
在CD19阳性肿瘤靶细胞(Daudi细胞)的存在下、在CD19阴性CD16阳性靶细胞(HUT78T淋巴瘤细胞)的存在下以及在不存在靶细胞的情况下测试不同蛋白质对NK细胞活化的功能影响。
简言之，通过流式细胞术评估NK细胞上的CD69和CD107表达来测试NK活化。该测定在96孔U型板中在完全RPMI中进行(150μL最终物质/孔)。效应细胞是从供体中纯化的新鲜NK细胞。靶细胞是Daudi(CD19阳性)、HUT78(CD19阴性)或K562(NK活化对照细胞系)。除K562阳性对照外，还测试了如下三种条件：
>单独的NK细胞
>NK细胞对Daudi(CD19+)
>NK细胞对HUT78(CD19-)
效应物:靶标(E:T)比率是2.5:1(50 000E:20 000T)，其中抗体稀释范围从10μg/mL开始以1/4稀释(n＝8个浓度)。将抗体、靶细胞和效应细胞混合；在300g下旋转1分钟；在37℃下孵育4小时；在500g下旋转3分钟；用染色缓冲液(SB)洗涤两次；加入50μL染色Ab混合物；在300g下孵育30分钟；用SB洗涤两次用CellFix重悬沉淀；在4℃下储存过夜；以及用Canto II(HTS公司)显示荧光。
结果
1.单独的NK细胞
结果示于图4A中。在不存在表达靶抗原的细胞的情况下，双特异性抗NKp46x抗CD19抗体(包含NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3、NKp46-4和NKp46-9可变区中的每一个)均不活化NK细胞，如通过CD69或CD107表达评估的。全长抗CD19也不活化NK细胞。然而，全长抗NKp46抗体引起NK细胞的可检测活化。阿仑单抗还以非常高的水平诱导了NK细胞活化。同种型对照抗体不诱导活化。
2.NK细胞对Daudi(CD19+)
结果示于图4B中。在存在表达靶抗原的细胞的情况下，每种双特异性抗NKp46x抗CD19抗体(包含NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3、NKp46-4和NKp46-9结合结构域中的每一个)活化NK细胞。全长抗CD19最多只显示出非常低的NK细胞活化。全长抗NKp46抗体或阿仑单抗均未示出超过单独存在NK细胞情况下观察到的活化的显著增加。图4显示全长抗NKp46抗体显示出在存在单独的NK细胞情况下观察到的相似水平的基线活化。阿仑单抗也以在存在单独的NK细胞情况下观察到的相似水平的活化诱导NK细胞活化，并且在此设定(ET 2.5:1)中在较高的抗体浓度下，该活化大于用双特异性抗NKp46x抗CD19抗体情况下的活化。同种型对照抗体不诱导活化。
3.NK细胞对HUT78(CD19-)
结果示于图4C中。在存在靶抗原阴性HUT78细胞的情况下，双特异性抗NKp46x抗CD19抗体(包含NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3、NKp46-4和NKp46-9可变区中的每一个)均不活化NK细胞。然而，全长抗NKp46抗体和阿仑单抗导致水平类似于单独存在NK细胞情况下观察到的可检测的NK细胞活化。同种型对照抗体不诱导活化。
总之，双特异性抗NKp46蛋白能够以靶细胞特异性方式活化NK细胞，不像全长单特异性抗NKp46抗体和消耗性IgG同种型的全长抗体在不存在靶细胞情况下也活化NK细胞。用抗NKp46双特异性蛋白实现的NK细胞活化高于用全长抗CD19IgG1抗体观察到的活化。
实例8：
与消耗性抗肿瘤mAb的比较功效：在低ET比率下的NKp46x CD19双特异性蛋白
这些研究旨在研究双特异性抗体是否能够以较低的效应物:比率介导NKp46介导的针对癌症靶细胞的NK细胞活化。在此实例中使用的ET比率是1:1，据信其比实例7中使用的2.5:1ET比率或实例6的10:1ET比率更接近于在体内将遇到的情况。
将具有根据实例3中描述的F2形式的排列的具有来自NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3、NKp46-4或NKp46-9的抗NKp46可变结构域的NKp46x CD19双特异性蛋白与以下进行比较：
(a)全长单特异性抗NKp46抗体(NKp46-3，作为人IgG1)，以及
(b)作为全长人IgG1的抗CD19抗体，作为ADCC诱导抗体对照比较物。
实验进一步包含以下作为对照：利妥昔单抗(具有高表达水平的靶抗原的抗CD20ADCC诱导抗体对照)；抗CD52抗体阿仑单抗(人IgG1，其结合靶标和NK细胞上存在的CD52靶标)；以及阴性对照同种型对照治疗性抗体(不结合靶细胞上存在的靶标的人IgG1(HUG1-IC))。测试不同蛋白质对NK细胞活化的功能影响，如通过在CD19阳性肿瘤靶细胞(Daudi细胞)的存在下、在CD19阴性CD16阳性靶细胞(HUT78T淋巴瘤细胞)的存在下以及在不存在靶细胞的情况下的CD69或CD107表达所评估的。如实例7中的进行实验，除了ET比率是1:1。
结果
结果示于图5(5A：CD107和5B：CD69)中。在存在表达靶抗原的细胞的情况下，每种双特异性抗NKp46x抗CD19抗体(包含NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3、NKp46-4和NKp46-9可变区中的每一个)在存在Daudi细胞的情况下均活化NK细胞。
在Daudi细胞的存在下由双特异性抗NKp46x抗CD19抗体诱导的活化比在此设定下具有低活性的作为ADCC诱导抗体的全长人IgG1抗CD19抗体有效力得多。此外，在这种低E:T比率设定下，由双特异性抗NKp46x抗CD19抗体诱导的活化与抗CD20抗体利妥昔单抗一样有效力，其中仅在比在2.5:1ET比率下观察到差异的浓度高10倍的最高浓度下观察到差异。
在不存在靶细胞或存在靶抗原阴性HUT78细胞的情况下，全长抗NKp46抗体和阿仑单抗显示出在存在Daudi细胞情况下观察到的相似水平的基线活化。在HUT78细胞的存在下，抗NKp46x抗CD19抗体不活化NK细胞。
总之，双特异性抗NKp46蛋白能够以靶细胞特异性方式活化NK细胞，并且在较低的效应物:靶标比率下在介导NK细胞活化方面比传统的人IgG1抗体更有效。
实例9：
NKp46作用机制
将具有根据实例3或4中描述的F2、F3、F5或F6形式的排列与来自NKp46-3的抗NKp46可变结构域的NKp46x CD19双特异性蛋白与利妥昔单抗(抗CD20ADCC诱导抗体)和人IgG1同种型对照抗体针对引导CD16-/NKp46+NK细胞系裂解CD19阳性肿瘤靶细胞的功能能力进行比较。
简言之，在U型底96孔板中在经典的4-h 51Cr-释放测定中评估CD16-/NKp46+人NK细胞系KHYG-1的细胞溶解活性。将Daudi或B221细胞用51Cr(50μCi(1.85MBq)/1x 106个细胞)标记，然后在从10-7mol/L开始以1/5稀释的稀释范围(n＝8个浓度)的测试抗体存在下以等于50:1的效应物/靶标比率与KHYG-1混合。
在37℃下进行短暂的离心和4小时的孵育后，取出50μL的上清液并转移到LumaPlate(珀金埃尔默生命科学公司，波士顿，马萨诸塞州)中，并用TopCount NXTβ检测器(珀金埃尔默生命科学公司，波士顿，马萨诸塞州)测量51Cr释放。一式三份地分析所有实验条件，并且如下确定特异性裂解的百分比：100x(平均cpm实验释放-平均cpm自发释放)/(平均cpm总释放-平均cpm自发释放)。通过用2％Triton X100(西格玛公司)裂解靶细胞获得总释放百分比，并且自发释放对应于培养基中的靶细胞(无效应物或Ab)。
结果
结果示于图6A(KHYG-1对Daudi)和图6B(KHYG-1对B221)中。在KHYG-1hNKp46NK实验模型中，每种NKp46x CD19双特异性蛋白(形式F2、F3、F5和F6)均通过人KHYG-1hNKp46NK细胞系诱导Daudi或B221细胞的特异性裂解，而利妥昔单抗和人IgG1同种型对照(IC)抗体则没有。
实例10：
使用新鲜人NK细胞的双特异性和常规IgG抗体的比较功效
将结合人CD16的具有根据F5形式的排列与来自NKp46-3的抗NKp46可变结构域的NKp46x CD19双特异性蛋白与作为F6形式(其缺乏CD16结合)的相同双特异性抗体和人IgG1同种型抗CD19抗体以及人IgG1同种型对照抗体针对引导纯化的NK细胞裂解CD19阳性Daudi肿瘤靶细胞的功能能力进行比较。
简言之，在U型底96孔板中在经典的4-h 51Cr-释放测定中评估来自EFS血沉棕黄层的纯化的新鲜人NK细胞的细胞溶解活性。将Daudi或HUT78细胞(不表达CD19的阴性对照细胞)用51Cr标记，并且然后在从10μg/ml开始以1/10稀释的稀释范围(n＝8个浓度)的测试抗体存在下以等于10:1的效应物/靶标比率与NK细胞混合。
在37℃下进行短暂的离心和4小时的孵育后，取出50μL的上清液并转移到LumaPlate(珀金埃尔默生命科学公司，波士顿，马萨诸塞州)中，并用TopCount NXTβ检测器(珀金埃尔默生命科学公司，波士顿，马萨诸塞州)测量51Cr释放。一式三份地分析所有实验条件，并且如下确定特异性裂解的百分比：100x(平均cpm实验释放-平均cpm自发释放)/(平均cpm总释放-平均cpm自发释放)。通过用2％Triton X100(西格玛公司)裂解靶细胞获得总释放百分比，并且自发释放对应于培养基中的靶细胞(无效应物或Ab)。
结果示于图7中。由于N297取代而其Fc结构域不结合CD16的CD19-F6-NKp46(F6形式的双特异性蛋白)在介导Daudi靶细胞的NK细胞裂解方面与全长IgG1抗CD19抗体一样有效力，考虑到对照IgG1抗CD19抗体二价地结合CD19和抗CD19被CD16结合，这是显著的。出人意料地，其Fc结构域另外结合CD16的CD19-F6-NKp46(F5形式蛋白)在介导Daudi靶细胞裂解方面比全长IgG1抗CD19抗体或F6形式双特异性蛋白有效力得多。在相当水平的靶细胞裂解下，CD19-F6-NKp46的效力比全长抗CD19IgG1高至少1000倍。
实例11：
不同双特异性形式与FcRn的结合
通过将重组FcRn蛋白共价地固定在传感器芯片CM5上的右旋糖酐层中的羧基基团上，通过表面等离子体共振(SPR)研究不同抗体形式对人FcRn的亲和力，如实例2-6中所述。
测试了具有人IgG1恒定区的嵌合全长抗CD19抗体和具有根据实例3或4中描述的F3、F4、F5、F6、F9、F10、F11、F13或F14形式的排列与来自NKp46-3(对于F2为NKp46-2)的抗NKp46可变结构域的NKp46x CD19双特异性蛋白；对于每种分析物，使用稳态或1:1SCK结合模型拟合整个传感图。
结果示于下表4中。具有二聚体Fc结构域的双特异性蛋白(形式F5、F6、F13、F14)以与全长IgG1抗体相似的亲和力与FcRn结合。具有单体Fc结构域的双特异性蛋白(F3、F4、F9、F10、F11)也显示出与FcRn的结合，然而亲和力比具有二聚体Fc结构域的双特异性蛋白低。
表4
抗体/双特异性 SPR方法 KD nM
人IgG1/K抗CD19 SCK/双态反应 7.8
CD19-F5-NKp46-3 SCK/双态反应 2.6
CD19-F6-NKp46-3 SCK/双态反应 6.0
CD19-F13-NKp46-3 SCK/双态反应 15.2
CD19-F14-NKp46-3 SCK/双态反应 14.0
CD19-F3-NKp46-3 稳态 474.4
CD19-F4-NKp46-3 稳态 711.7
CD19-F9A-NKp46-3 稳态 858.5
CD19-F10A-NKp46-3 稳态 432.8
CD19-F11-NKp46-3 稳态 595.5
实例12
与FcγR的结合
评价不同的多聚体Fc蛋白，以评估这种双特异性单体Fc蛋白是否可以保留与Fcγ受体的结合。
在25℃下在Biacore T100仪器(Biacore通用电气医疗集团)上进行SPR测量。在所有Biacore实验中，HBS-EP+(Biacore通用电气医疗集团)和10mM NaOH、500mM NaCl分别充当运行缓冲液和再生缓冲液。使用Biacore T100评估软件分析传感图。克隆、产生和纯化重组人FcR(CD64、CD32a、CD32b、CD16a和CD16b)。
将F5和F6双特异性抗体CD19-F5-NKp46-3或CD19-F6-NKp46-3共价地固定在传感器芯片CM5上的右旋糖酐层中的羧基基团上。用EDC/NHS(N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺(Biacore通用电气医疗集团))活化芯片表面。将双特异性抗体在偶联缓冲液(10mM乙酸盐，pH 5.6)中稀释至10μg/ml，并且注射直到达到适当的固定水平(即800至900RU)。使用100mM乙醇胺pH 8(Biacore通用电气医疗集团)使剩余的活化的基团失活。
根据经典动态术(如制造商所推荐)评估单价亲和力研究。在固定的双特异性抗体上注射可溶性分析物(FcR)的系列稀释液(对于CD64范围从0.7至60nM，对于所有其他FcR范围从60至5000nM)并允许在再生前解离10分钟。使用1:1动态结合模型(对于CD64)和稳态亲和力模型(对于所有其他FcR)拟合整个传感图集。
虽然全长野生型人IgG1与所有食蟹猴和人Fcγ受体均结合，但CD19-F6-NKp46-3双特异性抗体不与任何受体结合。另一方面，CD19-F5-NKp46-3与人受体CD64(KD＝0.7nM)、CD32a(KD＝846nM)、CD32b(KD＝1850nM)、CD16a(KD＝1098nM)和CD16b(KD＝2426nM)中的每一种均结合。常规人抗IgG1抗体与Fc受体具有相当的结合(KD示于下表中)。
Figure BDA0001770555070000781
实例13：
抗NKp46抗体的表位作图
A.竞争测定
竞争测定是根据下文描述的方法通过表面等离子体共振(SPR)进行的。
在25℃下在Biacore T100仪器(Biacore通用电气医疗集团)上进行SPR测量。在所有Biacore实验中，HBS-EP+(Biacore通用电气医疗集团)和NaOH 10mM NaCl 500mM分别充当运行缓冲液和再生缓冲液。使用Biacore T100评估软件分析传感图。抗6xHis标签抗体购自凯杰公司(QIAGEN)。在先天制药公司克隆、产生和纯化6xHis标记的人NKp46重组蛋白(NKp46-His)。
将抗His抗体共价地固定在传感器芯片CM5上的右旋糖酐层中的羧基基团上。用EDC/NHS(N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺(Biacore通用电气医疗集团))活化芯片表面。将Protein-A和抗His抗体在偶联缓冲液(10mM乙酸盐，pH 5.6)中稀释至10μg/ml，并且注射直到达到适当的固定水平(即2000至2500RU)。使用100mM乙醇胺pH 8(Biacore通用电气医疗集团)使剩余的活化的基团失活。
将具有对应于NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3或NKp46-4的NKp46结合区的亲本常规人IgG1嵌合抗体用于竞争研究，其已使用抗6xHis标签抗体芯片进行。
将1μg/mL的具有基于NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3或NKp46-4的NKp46结合区的双特异性抗体捕获到Protein-A芯片上，并且将重组人NKp46蛋白以5μg/mL与NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3或NKp46-4组的第二测试双特异性抗体一起注射。
NKp46-1、NKp46-2、NKp46-3或NKp46-4彼此均不竞争与NKp46的结合，这些抗体各自代表不同的表位。
B.与NKp46突变体的结合
为了定义抗NKp46抗体的表位，我们设计了通过在NKp46的2个结构域上的分子表面暴露的氨基酸的一个、两个或三个取代定义的NKp46突变体。此方法产生了在Hek-293T细胞中转染的42种突变体，如下表所示。在下表5中示出了使用SEQ ID NO:1的编号(也对应于Jaron-Mendelson等人(2012)J.Immunol.[免疫学杂志]88(12):6165-74中使用的编号)的靶向氨基酸突变。
表5
Figure BDA0001770555070000791
Figure BDA0001770555070000801
突变体的产生
通过PCR产生NKp46突变体。扩增的序列在琼脂糖凝胶上跑胶并使用MachereyNagel PCR清除凝胶提取试剂盒(参考740609)纯化。然后用ClonTech InFusion系统将每种突变体产生的两种或三种纯化的PCR产物连接到表达载体中。将含有突变序列的载体制备为微量制备品(Miniprep)并测序。测序后，使用Promega PureYieldTM质粒微量制备系统将含有突变序列的载体制备为微量制备品。在测试转基因表达之前，使HEK293T细胞在DMEM培养基(英杰公司)中生长，使用英杰公司的Lipofectamine2000用载体进行转染，并且在37℃下在CO2培养箱中孵育24小时。
抗NKp46与HEK293T转染细胞的结合的流式细胞术分析
通过流式细胞术测试抗NKp46抗体与每种突变体的结合。进行第一个实验以确定在一个浓度(10μg/ml)下失去其与一种或若干种突变体的结合的抗体。为了证实结合的丧失，对抗体进行抗体滴定，其结合似乎受NKp46突变(1–0,1–0,01–0,001μg/ml)的影响。
结果
与野生型NK46相比，抗体NKp46-1与突变体2(在残基K41、E42和E119(在NKp46野生型中编号)处具有突变)的结合降低。类似地，NKp46-1与补充突变体Supp7(在残基Y121和Y194处具有突变)的结合也降低。
抗体NKp46-3与突变体19(在残基I135和S136处具有突变)的结合降低。类似地，NKp46-1与补充突变体Supp8(在残基P132和E133处具有突变)的结合也降低。
抗体NKp46-4与突变体6(在残基R101和V102处具有突变)的结合降低。类似地，NKp46-1与补充突变体Supp6(在残基E104和L105处具有突变)的结合也降低。
在此研究中，我们鉴定了抗NKp46抗体(NKp46-1、NKp46-3和NKp46-4)的表位。NKp46-4、NKp46-3和NKp46-1的表位分别在NKp46D1结构域、D2结构域和D1/D2接点上。R101、V102、E104和L105是NKp46-4结合的必需残基，并且定义了NKp46-4表位的一部分。NKp46-1的表位包含K41、E42、E119、Y121和Y194残基。NKp46-3的表位包含P132、E133、I135和S136残基。
所有标题和小标题在本文仅为了方便而使用，并且不应被解释为以任何方式限制本发明。在所有可能的变体中上述元件的任何组合涵盖于本发明中，除非本文另外说明或另外与上下文明显矛盾。在本文引证数值的范围仅旨在用作单独地提及每个单独的数值落在该范围内的速记的方法，除非本文另外说明，并且每个单独的数值被结合到本说明书中就像它被单独地在本文引证一样。除非另外说明，在本文提供的所有确切数值是相应近似值的代表(例如，就特定因子或测量值所提供的所有确切的示例性数值可以被认为还提供了对应的近似测量值，当适当时通过“约”来修饰)。在本文描述的所有方法能够以任何适合顺序进行，除非本文另外说明或另外与上下文明显矛盾。
本文提供的任何和所有实例或示例性语言(例如“如”)的使用仅旨在更好地说明本发明，而不对本发明的范围做出限制，除非另外说明。在本说明书中没有语言可以被解释为指示任何元素对于本发明的实践是至关重要的，除非被如此清楚地说明。
除非另外陈述或与上下文明显矛盾，在本文对于使用了如涉及一种或多种要素的术语的本发明的任何方面或实施例的描述，旨在提供对“由那一种或多种特定要素组成”、“基本上由那一种或多种特定要素组成”或“基本上包含那一种或多种特定要素”的本发明的类似方面或实施例的支持(例如，除非另外陈述或与上下文明显矛盾，在本文描述为包含特定要素的组合物应理解为也描述由那个要素组成的组合物)。
本发明包括在本文提出的被可适用法律最大程度允许的多个方面或权利要求中引证的主题的所有变更和等效物。
所有在本说明书中引用的公开文件以及专利申请都通过引用以其全部内容并入本文，如同各个单独的公开文件或专利申请被确切地并且单独地指明为通过引用而并入。
尽管以上发明已经出于清楚理解的目的通过说明和举例的方式进行了一些详细的描述，对于本领域普通技术人员而言在本发明的传授内容的启发下应该容易清楚的是，在不偏离随附权利要求书的精神或范围下可以对其进行某些改变和变更。
序列表
<110> 依奈特制药公司（INNATE PHARMA）
<120> NKp46结合蛋白的可变区(VARIABLE REGIONS FOR NKp46 BINDINGPROTEINS)
<130> NKp46-7
<150> US 62/271,474
<151> 2015-12-28
<160> 218
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 304
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Met Ser Ser Thr Leu Pro Ala Leu Leu Cys Val Gly Leu Cys Leu Ser
1 5 10 15
Gln Arg Ile Ser Ala Gln Gln Gln Thr Leu Pro Lys Pro Phe Ile Trp
20 25 30
Ala Glu Pro His Phe Met Val Pro Lys Glu Lys Gln Val Thr Ile Cys
35 40 45
Cys Gln Gly Asn Tyr Gly Ala Val Glu Tyr Gln Leu His Phe Glu Gly
50 55 60
Ser Leu Phe Ala Val Asp Arg Pro Lys Pro Pro Glu Arg Ile Asn Lys
65 70 75 80
Val Lys Phe Tyr Ile Pro Asp Met Asn Ser Arg Met Ala Gly Gln Tyr
85 90 95
Ser Cys Ile Tyr Arg Val Gly Glu Leu Trp Ser Glu Pro Ser Asn Leu
100 105 110
Leu Asp Leu Val Val Thr Glu Met Tyr Asp Thr Pro Thr Leu Ser Val
115 120 125
His Pro Gly Pro Glu Val Ile Ser Gly Glu Lys Val Thr Phe Tyr Cys
130 135 140
Arg Leu Asp Thr Ala Thr Ser Met Phe Leu Leu Leu Lys Glu Gly Arg
145 150 155 160
Ser Ser His Val Gln Arg Gly Tyr Gly Lys Val Gln Ala Glu Phe Pro
165 170 175
Leu Gly Pro Val Thr Thr Ala His Arg Gly Thr Tyr Arg Cys Phe Gly
180 185 190
Ser Tyr Asn Asn His Ala Trp Ser Phe Pro Ser Glu Pro Val Lys Leu
195 200 205
Leu Val Thr Gly Asp Ile Glu Asn Thr Ser Leu Ala Pro Glu Asp Pro
210 215 220
Thr Phe Pro Ala Asp Thr Trp Gly Thr Tyr Leu Leu Thr Thr Glu Thr
225 230 235 240
Gly Leu Gln Lys Asp His Ala Leu Trp Asp His Thr Ala Gln Asn Leu
245 250 255
Leu Arg Met Gly Leu Ala Phe Leu Val Leu Val Ala Leu Val Trp Phe
260 265 270
Leu Val Glu Asp Trp Leu Ser Arg Lys Arg Thr Arg Glu Arg Ala Ser
275 280 285
Arg Ala Ser Thr Trp Glu Gly Arg Arg Arg Leu Asn Thr Gln Thr Leu
290 295 300
<210> 2
<211> 216
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Thr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
210 215
<210> 3
<211> 120
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 3
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Val Ile Asn Trp Gly Lys Gln Arg Ser Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Thr Asn Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Ile Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Arg Tyr Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 4
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 4
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Asn Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Arg Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 5
<211> 122
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 5
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Glu Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Thr Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Gly Ser Ser Trp Gly Val Phe Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 6
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 6
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Val Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 7
<211> 116
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 7
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ile Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 8
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 8
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 9
<211> 117
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 9
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Ala Val Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Phe
20 25 30
Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Thr Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asp Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Ser Ser Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 10
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 10
Asp Ile Gln Met Ile Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ile Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 11
<211> 115
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 11
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ser Val Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Trp Met His Trp Ala Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly His Ile His Pro Asn Ser Gly Ile Ser Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Val Asp Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Arg Phe Asp Asp Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 12
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 12
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Gly Ser Ser
20 25 30
Leu Asn Trp Leu Gln Gln Glu Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Thr Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Ser Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 13
<211> 120
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 13
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Cys Trp Asp Tyr Ala Leu Tyr Ala Met Asp Cys Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 14
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 14
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Cys Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr His Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ile Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Asp Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 15
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 15
Asp Tyr Val Ile Asn
1 5
<210> 16
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 16
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
1 5
<210> 17
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 17
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Val
1 5
<210> 18
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 18
Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Thr Asn Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Ala
<210> 19
<211> 4
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 19
Pro Gly Ser Gly
1
<210> 20
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 20
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Val Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Thr Asn
1 5 10 15
<210> 21
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 21
Arg Gly Arg Tyr Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 22
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 22
Gly Arg Tyr Gly Leu Tyr Ala Met Asp
1 5
<210> 23
<211> 13
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 23
Ala Arg Arg Gly Arg Tyr Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 24
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 24
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 25
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 25
Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
1 5
<210> 26
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 26
Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
1 5
<210> 27
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 27
Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser
1 5
<210> 28
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 28
Gln Gln Gly Asn Thr Arg Pro Trp Thr
1 5
<210> 29
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 29
Tyr Thr Ser Gly Asn Thr Arg Pro Trp
1 5
<210> 30
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 30
Tyr Thr Ser Gln Gln Gly Asn Thr Arg Pro Trp Thr
1 5 10
<210> 31
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 31
Ser Asp Tyr Ala Trp Asn
1 5
<210> 32
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 32
Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr
1 5
<210> 33
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 33
Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala
1 5
<210> 34
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 34
Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Glu Ser
1 5 10 15
<210> 35
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 35
Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 36
<211> 13
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 36
Gly Gly Tyr Tyr Gly Ser Ser Trp Gly Val Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 37
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 37
Gly Tyr Tyr Gly Ser Ser Trp Gly Val Phe Ala
1 5 10
<210> 38
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 38
Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Gly Ser Ser Trp Gly Val Phe Ala Tyr
1 5 10 15
<210> 39
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 39
Arg Val Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 40
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 40
Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
1 5
<210> 41
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 41
Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
1 5
<210> 42
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 42
Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu
1 5
<210> 43
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 43
Gln His His Tyr Gly Thr Pro Trp Thr
1 5
<210> 44
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 44
His Tyr Gly Thr Pro Trp
1 5
<210> 45
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 45
Gln His His Tyr Gly Thr Pro Trp Thr
1 5
<210> 46
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 46
Glu Tyr Thr Met His
1 5
<210> 47
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 47
Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
1 5
<210> 48
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 48
Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Thr
1 5
<210> 49
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 49
Gly Ile Ser Pro Asn Ile Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 50
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 50
Ile Ser Pro Asn Ile Gly Gly Thr
1 5
<210> 51
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 51
Arg Gly Gly Ser Phe Asp Tyr
1 5
<210> 52
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 52
Gly Gly Ser Phe Asp
1 5
<210> 53
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 53
Ala Arg Arg Gly Gly Ser Phe Asp Tyr
1 5
<210> 54
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 54
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu His
1 5 10
<210> 55
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 55
Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
1 5
<210> 56
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 56
Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
1 5
<210> 57
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 57
Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser
1 5
<210> 58
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 58
Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr
1 5
<210> 59
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 59
Gly His Ser Phe Pro Leu
1 5
<210> 60
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 60
Ser Phe Thr Met His
1 5
<210> 61
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 61
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Phe
1 5
<210> 62
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 62
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Phe Thr
1 5
<210> 63
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 63
Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 64
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 64
Ile Asn Pro Ser Ser Gly Tyr Thr
1 5
<210> 65
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 65
Gly Ser Ser Arg Gly Phe Asp Tyr
1 5
<210> 66
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 66
Ser Ser Arg Gly Phe Asp
1 5
<210> 67
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 67
Val Arg Gly Ser Ser Arg Gly Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 68
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 68
Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 69
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 69
Glu Asn Ile Tyr Ser Asn
1 5
<210> 70
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 70
Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp
1 5
<210> 71
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 71
Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Arg Thr
1 5
<210> 72
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 72
Phe Trp Gly Thr Pro Arg
1 5
<210> 73
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 73
Ser Ser Trp Met His
1 5
<210> 74
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 74
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser
1 5
<210> 75
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 75
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser Trp
1 5
<210> 76
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 76
His Ile His Pro Asn Ser Gly Ile Ser Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 77
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 77
Ile His Pro Asn Ser Gly Ile Ser
1 5
<210> 78
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 78
Gly Gly Arg Phe Asp Asp
1 5
<210> 79
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 79
Ala Arg Gly Gly Arg Phe Asp Asp
1 5
<210> 80
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 80
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu His
1 5 10
<210> 81
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 81
Gly Arg Phe Asp Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
1 5 10
<210> 82
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 82
Gln Asn Gly His Ser Phe Leu Met Tyr Thr
1 5 10
<210> 83
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 83
Gly His Ser Phe Leu Met Tyr
1 5
<210> 84
<211> 13
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 84
Tyr Ala Ser Gln Asn Gly His Ser Phe Leu Met Tyr Thr
1 5 10
<210> 85
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 85
Ser Asp Tyr Ala Trp Asn
1 5
<210> 86
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 86
Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr
1 5
<210> 87
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 87
Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala
1 5
<210> 88
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 88
Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 89
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 89
Cys Trp Asp Tyr Ala Leu Tyr Ala Met Asp Cys
1 5 10
<210> 90
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 90
Trp Asp Tyr Ala Leu Tyr Ala Met Asp
1 5
<210> 91
<211> 13
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 91
Ala Arg Cys Trp Asp Tyr Ala Leu Tyr Ala Met Asp Cys
1 5 10
<210> 92
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 92
Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 93
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 93
Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu
1 5
<210> 94
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 94
Gln His His Tyr Asp Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 95
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 95
Asn Ala Lys His Tyr Asp Thr Pro Leu
1 5
<210> 96
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 96
Gln His His Tyr Asp Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 97
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 97
Asn Tyr Gly Met Asn
1 5
<210> 98
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 98
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
1 5
<210> 99
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 99
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly
1 5
<210> 100
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 100
Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Glu Glu Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 101
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 101
Ile Asn Thr Asn Thr Gly Glu Pro
1 5
<210> 102
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 102
Asp Tyr Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 103
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 103
Tyr Leu Tyr Tyr Phe Asp
1 5
<210> 104
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 104
Ala Arg Asp Tyr Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 105
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 105
Lys Ala Ser Glu Asn Val Val Thr Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 106
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 106
Ser Glu Asn Val Val Thr Tyr
1 5
<210> 107
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 107
Glu Asn Val Val Thr Tyr
1 5
<210> 108
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 108
Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr
1 5
<210> 109
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 109
Gly Gln Gly Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 110
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 110
Gly Tyr Ser Tyr Pro Tyr
1 5
<210> 111
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 111
Gly Gln Gly Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 112
<211> 227
<212> PRT
<213> 智人
<400> 112
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
115 120 125
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
130 135 140
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
145 150 155 160
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
165 170 175
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
180 185 190
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
195 200 205
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
210 215 220
Ser Pro Gly
225
<210> 113
<211> 333
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 113
gacattcagc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 60
atctcctgca aggccagcca aagtgttgat tatgatggtg atagttattt gaactggtac 120
caacagatac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg atgcatccaa tctagtatct 180
gggattccac ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240
cctgtggaga aggtggatgc tgcaacctat cactgtcagc aaagtactga ggacccttgg 300
acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaa 333
<210> 114
<211> 111
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 114
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 115
<211> 372
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 115
caggttcagc tgcagcagtc tggggctgag ctggtgcggc ctgggtcctc agtgaagatt 60
tcctgcaaag catctggcta cgcattcagt agctactgga tgaactgggt gaagcagagg 120
cctggacagg gtcttgagtg gattggacag atttggcctg gagatggtga tactaactac 180
aacggaaagt tcaagggcaa ggccacactg actgcagacg aatcctccag cacagcctac 240
atgcagctca gcagcctggc ctctgaggac tctgcggtct atttctgtgc aagacgagaa 300
acgaccactg tcgggcgtta ttactatgct atggactact ggggtcaagg aaccacagtc 360
accgtctcct ca 372
<210> 116
<211> 124
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 116
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 117
<211> 648
<212> DNA
<213> 智人
<400> 117
gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc 60
ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac 120
cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag 180
ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac 240
caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc 300
cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc 360
aagcccccat cccgggagga gatgaccaag aaccaggtca gcctgtcctg cctggtcaaa 420
ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac 480
tacaagacca cggttcccgt gctggactcc gacggctcct tccgcctcgc tagctacctc 540
accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag 600
gctctgcaca accactacac gcagaagagc ctctccctgt ccccgggg 648
<210> 118
<211> 718
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 118
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
115 120 125
Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser Ser Val
130 135 140
Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr Trp Met
145 150 155 160
Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Gln
165 170 175
Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln
195 200 205
Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
210 215 220
Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Ala
245 250 255
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
260 265 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
275 280 285
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
290 295 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305 310 315 320
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
325 330 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
340 345 350
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
355 360 365
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Lys Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
370 375 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385 390 395 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
405 410 415
Lys Thr Thr Val Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Arg Leu Ala
420 425 430
Ser Tyr Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
435 440 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
450 455 460
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr Gly Ser Asp Ile Lys Leu Gln
465 470 475 480
Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser
485 490 495
Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val
500 505 510
Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro
515 520 525
Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr
530 535 540
Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser
545 550 555 560
Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp
565 570 575
Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val
580 585 590
Ser Ser Val Glu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
595 600 605
Gly Gly Val Asp Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser
610 615 620
Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser
625 630 635 640
Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys
645 650 655
Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Val Ala Ser Gly Val Pro Tyr Arg
660 665 670
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser
675 680 685
Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser
690 695 700
Asn Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
705 710 715
<210> 119
<211> 249
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 119
Ser Thr Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val
1 5 10 15
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
20 25 30
Phe Thr Asp Tyr Val Ile Asn Trp Gly Lys Gln Arg Ser Gly Gln Gly
35 40 45
Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Thr Asn Tyr Tyr
50 55 60
Asn Glu Lys Phe Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser
65 70 75 80
Asn Ile Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala
85 90 95
Val Tyr Phe Cys Ala Arg Arg Gly Arg Tyr Gly Leu Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Val Glu Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val Asp Asp Ile
130 135 140
Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg
145 150 155 160
Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
165 170 175
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr
180 185 190
Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly
195 200 205
Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Asn Asn Leu Glu Gln Glu Asp
210 215 220
Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Arg Pro Trp Thr Phe
225 230 235 240
Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
245
<210> 120
<211> 251
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 120
Ser Thr Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val
1 5 10 15
Lys Pro Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser
20 25 30
Ile Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn
35 40 45
Lys Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr
50 55 60
Asn Pro Ser Leu Glu Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Thr
65 70 75 80
Asn Gln Phe Phe Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala
85 90 95
Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Gly Ser Ser Trp Gly Val
100 105 110
Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Val Glu
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val Asp
130 135 140
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
145 150 155 160
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Val Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
165 170 175
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
180 185 190
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
195 200 205
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
210 215 220
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Trp
225 230 235 240
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
245 250
<210> 121
<211> 245
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 121
Ser Thr Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val
1 5 10 15
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr
20 25 30
Phe Thr Glu Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser
35 40 45
Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ile Gly Gly Thr Ser Tyr
50 55 60
Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser
65 70 75 80
Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala
85 90 95
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Val Glu Gly Gly Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val Asp Asp Ile Val Met Thr Gln
130 135 140
Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly Asp Arg Val Ser Leu Ser
145 150 155 160
Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln
165 170 175
Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser
180 185 190
Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp
195 200 205
Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro Glu Asp Val Gly Val Tyr
210 215 220
Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr
225 230 235 240
Lys Leu Glu Leu Lys
245
<210> 122
<211> 246
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 122
Ser Thr Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Ala Val Glu Leu Ala
1 5 10 15
Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
20 25 30
Phe Thr Ser Phe Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly
35 40 45
Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Gly Tyr Thr Glu Tyr
50 55 60
Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Thr Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser
65 70 75 80
Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Asp Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala
85 90 95
Val Tyr Tyr Cys Val Arg Gly Ser Ser Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Val Glu Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val Asp Asp Ile Gln Met Ile
130 135 140
Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly Glu Thr Val Thr Ile
145 150 155 160
Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn Leu Ala Trp Phe Gln
165 170 175
Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val Tyr Ala Ala Thr Asn
180 185 190
Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
195 200 205
Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Gly Ile
210 215 220
Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly
225 230 235 240
Thr Lys Leu Glu Ile Lys
245
<210> 123
<211> 245
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 123
Ser Thr Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ser Val Leu Val
1 5 10 15
Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
20 25 30
Phe Thr Ser Ser Trp Met His Trp Ala Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly
35 40 45
Leu Glu Trp Ile Gly His Ile His Pro Asn Ser Gly Ile Ser Asn Tyr
50 55 60
Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser
65 70 75 80
Ser Thr Ala Tyr Val Asp Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala
85 90 95
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Arg Phe Asp Asp Trp Gly Ala Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Val Glu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val Asp Asp Ile Val Met Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys
145 150 155 160
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile
180 185 190
Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe
195 200 205
Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr
210 215 220
Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Leu Met Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr
225 230 235 240
Lys Leu Glu Ile Lys
245
<210> 124
<211> 249
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 124
Ser Thr Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val
1 5 10 15
Lys Pro Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser
20 25 30
Ile Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn
35 40 45
Lys Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr
50 55 60
Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys
65 70 75 80
Asn Gln Phe Phe Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala
85 90 95
Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Cys Trp Asp Tyr Ala Leu Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Cys Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Val Glu Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val Asp Asp Ile
130 135 140
Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Glu Thr
145 150 155 160
Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala
165 170 175
Trp Cys Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val Tyr Asn
180 185 190
Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly
195 200 205
Ser Gly Thr His Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp
210 215 220
Phe Gly Ile Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Asp Thr Pro Leu Thr Phe
225 230 235 240
Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
245
<210> 125
<211> 246
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 125
Ser Thr Gly Ser Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Gln
1 5 10 15
Lys Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
20 25 30
Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly
35 40 45
Leu Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Glu Pro Thr Tyr
50 55 60
Ala Glu Glu Phe Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala
65 70 75 80
Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala
85 90 95
Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp Tyr Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Val Glu Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val Asp Asn Ile Val Met Thr
130 135 140
Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser Met Ser Val Gly Glu Arg Val Thr Leu
145 150 155 160
Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asn Val Val Thr Tyr Val Ser Trp Tyr Gln
165 170 175
Gln Lys Pro Glu Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asn
180 185 190
Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Ala Thr
195 200 205
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp
210 215 220
Tyr His Cys Gly Gln Gly Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly
225 230 235 240
Thr Lys Leu Glu Ile Lys
245
<210> 126
<211> 751
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 126
gtcgactgga agccaggtac agctgcagca gtctggccct gaactcgtca aaccaggagc 60
ttccgtgaag atgtcctgca aggcttcagg gtacacgttt accgactatg tgatcaattg 120
gggtaagcag cgctctgggc aaggcttgga gtggattggc gagatctatc ctgggagtgg 180
gaccaactat tacaacgaga agttcaaggc caaagccact ttgactgcag acaagagctc 240
aaacattgcc tacatgcaac tgagctccct gacatcagag gattctgctg tgtacttctg 300
tgcacgtaga ggtcggtacg gtctgtatgc catggactat tggggccaag gcacttccgt 360
gacagtcagc tctgtggaag gaggaagtgg cggttcagga ggtagcggag ggtccggagg 420
agtggatgac attcagatga cacagaccac ttctagcctc tccgcatccc ttggggatag 480
ggtcaccatc agttgtaggg ctagccagga catttccaat tacctgaact ggtatcagca 540
gaaacccgat ggcacagtta agcttctgat ctactacaca agcagactgc actcaggggt 600
tccatctcgg tttagtggaa gtggctctgg taccgactat tccctgacca tcaacaatct 660
ggaacaggaa gatatcgcca cctacttctg ccaacagggc aatactcgac cctggacatt 720
tggtggcggc acgaaactcg agataaaata a 751
<210> 127
<211> 757
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 127
gtcgactgga tccgaggtac agttgcagga gagtgggcct ggactggtca aaccctccca 60
atctctgagc ttgacatgca cagtcacagg ctacagcatc acctccgact acgcttggaa 120
ttggattcga cagtttcccg gcaacaagct ggaatggatg ggctacatca cctatagtgg 180
tagcacttcc tataatccct cacttgagag ccggatttcc atcactaggg atacgagcac 240
caaccagttc ttcctgcagc tgaatagcgt caccaccgaa gatactgcca cctattactg 300
cgcaagaggc ggttactatg gcagttcatg gggtgtattc gcctattggg gacaggggac 360
acttgtgaca gtgtctgctg ttgaaggtgg atccggcgga tcaggaggga gtggtggcag 420
tggaggtgtt gacgacattc agatgaccca atcccctgct tctctctcag cctctgtggg 480
agagactgtg accataacct gtcgtgttag cgagaacatc tactcctatc tcgcctggta 540
tcagcagaaa caggggaaat ccccacaact gctcgtgtac aatgccaaga ctctggcaga 600
aggagtgcca agccgctttt ccgggtctgg gtctgggaca cagttctcac tgaagatcaa 660
ctctttgcaa cctgaggatt ttggctctta ctactgtcag catcactatg gcacaccatg 720
gacgtttggt ggcggcacta agctggagat taagtaa 757
<210> 128
<211> 739
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 128
gtcgactggg tccgaagtgc aactgcaaca gtctggccct gagctggtca aacccggtgc 60
ttcagtgaag atctcctgca agacatccgg ctacaccttc actgagtaca ccatgcactg 120
ggtcaaacag tctcacggta agagcctgga gtggataggc ggaatttcac ccaacattgg 180
agggacctcc tataaccaga agttcaaggg caaagccacc cttacagttg acaagagcag 240
ttcaactgcc tacatggaac tgcgctcatt gacctccgag gattcagccg tgtattactg 300
cgctagaagg ggaggatcct tcgattattg gggccaaggc actacgctta ccgtgagcag 360
cgttgaaggt ggttctggcg gctctggtgg aagtggaggg agtggcgggg tagacgacat 420
cgtgatgact cagagtccag caactctgtc cgttacacct ggagatcgag tgtctctgag 480
ttgtcgtgca agccagtcta tctctgacta tctgcactgg tatcagcaga agagccatga 540
gtcacctagg ctgttgatca agtacgcctc tcagtccatt agcgggattc catcccggtt 600
tagtggctct ggctccggta gtgacttcac actcagcatc aatagcgtcg aaccagagga 660
tgtaggggtg tactactgtc agaatgggca ttcctttccc ctcacatttg gagctggtac 720
caaactcgag ctgaaataa 739
<210> 129
<211> 742
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 129
gtcgactggc tcccaagtac agcttcagca gtctgccgtc gaacttgctc gaccaggagc 60
ttcagtgaag atgagctgca aagcctctgg ttacaccttc acgtccttta ccatgcattg 120
ggtgaagcag cgtcctggcc aaggcctgga gtggattggc tacatcaatc cctccagcgg 180
gtataccgag tacaaccaga agttcaagga caaaacaacc ctgactgccg ataagtcaag 240
tagcacagcc tatatgcagc tggattccct gacatcagac gatagcgctg tgtattactg 300
cgttaggggc tctagcagag ggttcgacta ttggggtcaa ggcacactgg tcacggttag 360
tgccgttgaa ggaggctctg gaggcagtgg aggttctgga gggtcaggcg gtgtggatga 420
cattcagatg attcagagtc ccgctagctt gagtgtaagc gtcggtgaga cagtgaccat 480
cacttgtcgc gcatccgaaa acatctactc caatctcgca tggttccagc agaaacaggg 540
caaatcaccc caattgctcg tgtatgccgc aactaatctg gctgatggtg tgccttccag 600
gtttagcggg tctggatctg ggactcagta ctccctgaag atcaactccc tccagtctga 660
ggacttcggg atctattact gtcagcactt ttggggaact ccacggacct ttggaggcgg 720
gaccaaactg gagataaagt aa 742
<210> 130
<211> 696
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 130
ctggtgaggc caggtgcatc tgtgaagctg tcatgcaaag catccgggta cacgttcacc 60
tcttcatgga tgcattgggc caaacagcgt ccaggccagg gccttgagtg gattggacac 120
attcacccca atagcggcat atccaactac aacgagaagt tcaagggcaa agccacactg 180
acagtggata cttccagctc tacagcctat gtggacctta gtagcttgac cagtgaggat 240
tctgccgtat actactgtgc tagaggtggg cggtttgacg attggggtgc tgggaccaca 300
gtcaccgtga gcagtgtcga aggtggatca ggtggatctg gaggctcagg cggttctggc 360
ggtgttgacg acatcgtgat gactcaaagc cctgctactc tctctgtcac acccggagat 420
agggtaagcc tcagttgtcg agcaagccag tcaatcagcg actatctgca ctggtatcag 480
cagaagtccc atgaatcccc acgcttgctc atcaagtacg ccagtcagtc catcagtggc 540
attccttccc ggttttctgg gtctggatcc gggtcagact tcactctgag cattaactcc 600
gtcgaacccg aggatgttgg cgtgtattat tgccagaatg gacattcctt cctgatgtac 660
acctttggcg gagggaccaa actggagatc aagtaa 696
<210> 131
<211> 751
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 131
gtcgactggg tctgatgtgc agttgcagga gtcaggacct gggcttgtca agccaagcca 60
gagcctcagt ctcacttgca ctgtcacagg ctatagcatc acatccgact atgcttggaa 120
ttggattagg cagtttcctg gcaataagct ggaatggatg gggtacatca cctattccgg 180
cagtaccaac tacaatccca gcttgaaatc tcggatttcc ataacacgcg atactagcaa 240
gaaccagttc ttccttcagc tgaactctgt gacaacagag gataccgcta cgtactattg 300
cgccagatgc tgggattacg ccctgtatgc catggactgt tggggtcaag gtaccagcgt 360
tactgtgtct agcgtcgaag gcggaagtgg cggctcagga gggtcaggag gctcaggcgg 420
agtggatgac attcagatga cccaatctcc cgcatccctg tccgcatcag taggggagac 480
agtgaccatt acctgtcgta cttccgagaa catctactcc tatcttgcct ggtgtcaaca 540
gaaacagggg aaaagtccac agctgctggt gtataacgcc aagaccttgg cagaaggtgt 600
tcccagtcga ttctctggtt ccggatccgg tacacacttc agcctgaaga tcaattctct 660
gcaaccagag gactttggaa tctactactg ccagcatcac tacgacactc ctctgacgtt 720
tggcgctggt accaagctcg aactgaaata a 751
<210> 132
<211> 742
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 132
gtcgactggt agccagatac agctggtaca gtcaggacca gagctgcaga aacctggaga 60
gacagtgaag atcagctgca aggctagcgg gtacaccttc acgaattacg ggatgaactg 120
ggtcaagcag gctccaggca aagggctgaa gtggatgggc tggattaaca ccaatactgg 180
ggaaccaacc tatgccgagg aattcaaggg gagatttgcc ttttccctcg aaaccagcgc 240
ctcaaccgcc tatctccaga tcaacaacct gaagaatgag gataccgcta cctacttctg 300
tgcaagggac tacctctact acttcgacta ttggggccaa ggtacgactc ttacagtctc 360
tagtgttgag ggagggagtg gaggttctgg aggctctggt ggctctggag gcgttgacaa 420
catcgtgatg actcagtctc ccaaaagcat gagtatgagt gtgggtgaac gagttacctt 480
gacatgcaaa gcctccgaga atgtcgtgac atacgtgtcc tggtatcagc agaaacccga 540
gcaatcccct aagctgctga tctatggcgc tagcaatcgc tatactggcg tacctgatcg 600
gttcacagga tcaggctcag ccactgactt tactcttacc atttcctccg tgcaggcaga 660
agatttggca gattaccact gtgggcaagg ttactcttat ccctatacat ttggaggcgg 720
cacaaagctg gagattaagt aa 742
<210> 133
<211> 720
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 133
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
115 120 125
Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser Ser Val
130 135 140
Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr Trp Met
145 150 155 160
Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Gln
165 170 175
Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln
195 200 205
Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
210 215 220
Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Ala
245 250 255
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
260 265 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
275 280 285
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
290 295 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305 310 315 320
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
325 330 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
340 345 350
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
355 360 365
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Lys Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
370 375 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385 390 395 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
405 410 415
Lys Thr Thr Val Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Arg Leu Ala
420 425 430
Ser Tyr Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
435 440 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
450 455 460
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln
465 470 475 480
Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser
485 490 495
Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Val Ile Asn Trp Gly
500 505 510
Lys Gln Arg Ser Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr Pro
515 520 525
Gly Ser Gly Thr Asn Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Ala Lys Ala Thr
530 535 540
Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Ile Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser
545 550 555 560
Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Arg Gly Arg
565 570 575
Tyr Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr
580 585 590
Val Ser Ser Val Glu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
595 600 605
Ser Gly Gly Val Asp Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu
610 615 620
Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln
625 630 635 640
Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr
645 650 655
Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro
660 665 670
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile
675 680 685
Asn Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly
690 695 700
Asn Thr Arg Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
705 710 715 720
<210> 134
<211> 722
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 134
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
115 120 125
Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser Ser Val
130 135 140
Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr Trp Met
145 150 155 160
Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Gln
165 170 175
Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln
195 200 205
Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
210 215 220
Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Ala
245 250 255
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
260 265 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
275 280 285
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
290 295 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305 310 315 320
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
325 330 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
340 345 350
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
355 360 365
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Lys Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
370 375 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385 390 395 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
405 410 415
Lys Thr Thr Val Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Arg Leu Ala
420 425 430
Ser Tyr Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
435 440 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
450 455 460
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln
465 470 475 480
Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr
485 490 495
Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp
500 505 510
Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Thr
515 520 525
Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Glu Ser Arg Ile Ser
530 535 540
Ile Thr Arg Asp Thr Ser Thr Asn Gln Phe Phe Leu Gln Leu Asn Ser
545 550 555 560
Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Tyr
565 570 575
Tyr Gly Ser Ser Trp Gly Val Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
580 585 590
Val Thr Val Ser Ala Val Glu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
595 600 605
Gly Gly Ser Gly Gly Val Asp Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala
610 615 620
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Val
625 630 635 640
Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly
645 650 655
Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly
660 665 670
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu
675 680 685
Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln
690 695 700
His His Tyr Gly Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu
705 710 715 720
Ile Lys
<210> 135
<211> 716
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 135
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
115 120 125
Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser Ser Val
130 135 140
Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr Trp Met
145 150 155 160
Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Gln
165 170 175
Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln
195 200 205
Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
210 215 220
Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Ala
245 250 255
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
260 265 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
275 280 285
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
290 295 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305 310 315 320
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
325 330 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
340 345 350
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
355 360 365
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Lys Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
370 375 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385 390 395 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
405 410 415
Lys Thr Thr Val Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Arg Leu Ala
420 425 430
Ser Tyr Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
435 440 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
450 455 460
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln
465 470 475 480
Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser
485 490 495
Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Thr Met His Trp Val
500 505 510
Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile Ser Pro
515 520 525
Asn Ile Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr
530 535 540
Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser
545 550 555 560
Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly
565 570 575
Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Val
580 585 590
Glu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val
595 600 605
Asp Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro
610 615 620
Gly Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp
625 630 635 640
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu
645 650 655
Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser
660 665 670
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu
675 680 685
Pro Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro
690 695 700
Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
705 710 715
<210> 136
<211> 717
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 136
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
115 120 125
Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser Ser Val
130 135 140
Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr Trp Met
145 150 155 160
Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Gln
165 170 175
Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln
195 200 205
Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
210 215 220
Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Ala
245 250 255
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
260 265 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
275 280 285
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
290 295 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305 310 315 320
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
325 330 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
340 345 350
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
355 360 365
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Lys Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
370 375 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385 390 395 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
405 410 415
Lys Thr Thr Val Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Arg Leu Ala
420 425 430
Ser Tyr Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
435 440 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
450 455 460
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln
465 470 475 480
Gln Ser Ala Val Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser
485 490 495
Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Phe Thr Met His Trp Val
500 505 510
Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro
515 520 525
Ser Ser Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Thr Thr
530 535 540
Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Asp Ser
545 550 555 560
Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Gly Ser Ser
565 570 575
Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
580 585 590
Val Glu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
595 600 605
Val Asp Asp Ile Gln Met Ile Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser
610 615 620
Val Gly Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr
625 630 635 640
Ser Asn Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu
645 650 655
Leu Val Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe
660 665 670
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu
675 680 685
Gln Ser Glu Asp Phe Gly Ile Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr
690 695 700
Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
705 710 715
<210> 137
<211> 716
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 137
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
115 120 125
Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser Ser Val
130 135 140
Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr Trp Met
145 150 155 160
Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Gln
165 170 175
Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln
195 200 205
Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
210 215 220
Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Ala
245 250 255
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
260 265 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
275 280 285
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
290 295 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305 310 315 320
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
325 330 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
340 345 350
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
355 360 365
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Lys Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
370 375 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385 390 395 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
405 410 415
Lys Thr Thr Val Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Arg Leu Ala
420 425 430
Ser Tyr Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
435 440 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
450 455 460
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln
465 470 475 480
Gln Pro Gly Ser Val Leu Val Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser
485 490 495
Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser Trp Met His Trp Ala
500 505 510
Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly His Ile His Pro
515 520 525
Asn Ser Gly Ile Ser Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr
530 535 540
Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Val Asp Leu Ser Ser
545 550 555 560
Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Arg
565 570 575
Phe Asp Asp Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Val Glu
580 585 590
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val Asp
595 600 605
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
610 615 620
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
625 630 635 640
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
645 650 655
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
660 665 670
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
675 680 685
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Leu Met
690 695 700
Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
705 710 715
<210> 138
<211> 720
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 138
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
115 120 125
Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser Ser Val
130 135 140
Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr Trp Met
145 150 155 160
Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Gln
165 170 175
Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln
195 200 205
Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
210 215 220
Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Ala
245 250 255
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
260 265 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
275 280 285
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
290 295 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305 310 315 320
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
325 330 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
340 345 350
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
355 360 365
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Lys Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
370 375 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385 390 395 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
405 410 415
Lys Thr Thr Val Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Arg Leu Ala
420 425 430
Ser Tyr Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
435 440 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
450 455 460
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln
465 470 475 480
Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr
485 490 495
Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp
500 505 510
Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Thr
515 520 525
Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ser
530 535 540
Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe Leu Gln Leu Asn Ser
545 550 555 560
Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Cys Trp Asp
565 570 575
Tyr Ala Leu Tyr Ala Met Asp Cys Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr
580 585 590
Val Ser Ser Val Glu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
595 600 605
Ser Gly Gly Val Asp Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu
610 615 620
Ser Ala Ser Val Gly Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu
625 630 635 640
Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala Trp Cys Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser
645 650 655
Pro Gln Leu Leu Val Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro
660 665 670
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr His Phe Ser Leu Lys Ile
675 680 685
Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Gly Ile Tyr Tyr Cys Gln His His
690 695 700
Tyr Asp Thr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
705 710 715 720
<210> 139
<211> 717
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 139
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
115 120 125
Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser Ser Val
130 135 140
Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr Trp Met
145 150 155 160
Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Gln
165 170 175
Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln
195 200 205
Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
210 215 220
Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Ala
245 250 255
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
260 265 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
275 280 285
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
290 295 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305 310 315 320
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
325 330 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
340 345 350
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
355 360 365
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Lys Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
370 375 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385 390 395 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
405 410 415
Lys Thr Thr Val Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Arg Leu Ala
420 425 430
Ser Tyr Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
435 440 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
450 455 460
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr Gly Ser Gln Ile Gln Leu Val
465 470 475 480
Gln Ser Gly Pro Glu Leu Gln Lys Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile Ser
485 490 495
Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn Trp Val
500 505 510
Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr
515 520 525
Asn Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Glu Glu Phe Lys Gly Arg Phe Ala
530 535 540
Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Asn
545 550 555 560
Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp Tyr Leu
565 570 575
Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
580 585 590
Val Glu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
595 600 605
Val Asp Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser Met Ser
610 615 620
Val Gly Glu Arg Val Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asn Val Val
625 630 635 640
Thr Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Gln Ser Pro Lys Leu
645 650 655
Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe
660 665 670
Thr Gly Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val
675 680 685
Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Gly Tyr Ser Tyr
690 695 700
Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
705 710 715
<210> 140
<211> 698
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 140
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
115 120 125
Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser Ser Val
130 135 140
Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr Trp Met
145 150 155 160
Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Gln
165 170 175
Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln
195 200 205
Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
210 215 220
Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Ala
245 250 255
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
260 265 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
275 280 285
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
290 295 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305 310 315 320
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
325 330 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
340 345 350
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
355 360 365
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Lys Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
370 375 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385 390 395 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
405 410 415
Lys Thr Thr Val Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Arg Leu Ala
420 425 430
Ser Tyr Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
435 440 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
450 455 460
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln
465 470 475 480
Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser
485 490 495
Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Thr Met His Trp Val
500 505 510
Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile Ser Pro
515 520 525
Asn Ile Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr
530 535 540
Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser
545 550 555 560
Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly
565 570 575
Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala
580 585 590
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
595 600 605
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
610 615 620
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
625 630 635 640
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
645 650 655
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
660 665 670
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
675 680 685
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
690 695
<210> 141
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 141
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 142
<211> 837
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 142
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
115 120 125
Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser Ser Val
130 135 140
Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr Trp Met
145 150 155 160
Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Gln
165 170 175
Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln
195 200 205
Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
210 215 220
Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Ala
245 250 255
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
260 265 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
275 280 285
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
290 295 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305 310 315 320
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
325 330 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
340 345 350
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
355 360 365
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
370 375 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385 390 395 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
405 410 415
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
420 425 430
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
435 440 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
450 455 460
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
465 470 475 480
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
485 490 495
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
500 505 510
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
515 520 525
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
530 535 540
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
545 550 555 560
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
565 570 575
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
580 585 590
Ser Thr Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val
595 600 605
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr
610 615 620
Phe Thr Glu Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser
625 630 635 640
Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ile Gly Gly Thr Ser Tyr
645 650 655
Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser
660 665 670
Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala
675 680 685
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
690 695 700
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Val Glu Gly Gly Ser Gly Gly Ser
705 710 715 720
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val Asp Asp Ile Val Met Thr Gln
725 730 735
Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly Asp Arg Val Ser Leu Ser
740 745 750
Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln
755 760 765
Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser
770 775 780
Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp
785 790 795 800
Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro Glu Asp Val Gly Val Tyr
805 810 815
Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr
820 825 830
Lys Leu Glu Leu Lys
835
<210> 143
<211> 837
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 143
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
115 120 125
Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser Ser Val
130 135 140
Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr Trp Met
145 150 155 160
Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Gln
165 170 175
Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln
195 200 205
Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
210 215 220
Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Ala
245 250 255
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
260 265 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
275 280 285
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
290 295 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305 310 315 320
Tyr Ser Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
325 330 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
340 345 350
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
355 360 365
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
370 375 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385 390 395 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
405 410 415
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
420 425 430
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
435 440 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
450 455 460
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
465 470 475 480
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
485 490 495
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
500 505 510
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
515 520 525
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
530 535 540
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
545 550 555 560
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
565 570 575
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
580 585 590
Ser Thr Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val
595 600 605
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr
610 615 620
Phe Thr Glu Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser
625 630 635 640
Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ile Gly Gly Thr Ser Tyr
645 650 655
Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser
660 665 670
Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala
675 680 685
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
690 695 700
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Val Glu Gly Gly Ser Gly Gly Ser
705 710 715 720
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val Asp Asp Ile Val Met Thr Gln
725 730 735
Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly Asp Arg Val Ser Leu Ser
740 745 750
Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln
755 760 765
Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser
770 775 780
Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp
785 790 795 800
Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro Glu Asp Val Gly Val Tyr
805 810 815
Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr
820 825 830
Lys Leu Glu Leu Lys
835
<210> 144
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 144
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 145
<211> 675
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 145
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Gly Gly Gly Ser Ser Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ser Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Lys Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Val Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Arg Leu Ala Ser Tyr Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Ser Thr Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val
450 455 460
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr
465 470 475 480
Phe Thr Glu Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser
485 490 495
Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ile Gly Gly Thr Ser Tyr
500 505 510
Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser
515 520 525
Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala
530 535 540
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
545 550 555 560
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val
565 570 575
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
580 585 590
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
595 600 605
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
610 615 620
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
625 630 635 640
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
645 650 655
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
660 665 670
Gly Glu Cys
675
<210> 146
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 146
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Ala Ser Thr Lys Gly
100 105 110
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
115 120 125
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
130 135 140
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
145 150 155 160
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
165 170 175
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
180 185 190
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys
195 200 205
Ser Cys Asp Lys Thr His
210
<210> 147
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 147
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 148
<211> 801
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 148
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ser
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
450 455 460
Gly Gly Gly Ser Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
465 470 475 480
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
485 490 495
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
500 505 510
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
515 520 525
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
530 535 540
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
545 550 555 560
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr
565 570 575
Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro
580 585 590
Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
595 600 605
Glu Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu
610 615 620
Trp Ile Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ile Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln
625 630 635 640
Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr
645 650 655
Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr
660 665 670
Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
675 680 685
Thr Leu Thr Val Ser Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile
690 695 700
Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val
705 710 715 720
Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys
725 730 735
Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu
740 745 750
Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu
755 760 765
Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr
770 775 780
His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu
785 790 795 800
Cys
<210> 149
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 149
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Ala Ser Thr Lys Gly
100 105 110
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
115 120 125
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
130 135 140
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
145 150 155 160
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
165 170 175
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
180 185 190
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys
195 200 205
Ser Cys Asp Lys Thr His
210
<210> 150
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 150
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 151
<211> 801
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 151
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ser
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
450 455 460
Gly Gly Gly Ser Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
465 470 475 480
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
485 490 495
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
500 505 510
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
515 520 525
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
530 535 540
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
545 550 555 560
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr
565 570 575
Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro
580 585 590
Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
595 600 605
Glu Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu
610 615 620
Trp Ile Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ile Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln
625 630 635 640
Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr
645 650 655
Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr
660 665 670
Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
675 680 685
Thr Leu Thr Val Ser Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile
690 695 700
Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val
705 710 715 720
Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys
725 730 735
Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu
740 745 750
Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu
755 760 765
Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr
770 775 780
His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu
785 790 795 800
Cys
<210> 152
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 152
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Ala Ser Thr Lys Gly
100 105 110
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
115 120 125
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
130 135 140
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
145 150 155 160
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
165 170 175
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
180 185 190
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys
195 200 205
Ser Cys Asp Lys Thr His
210
<210> 153
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 153
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 154
<211> 796
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 154
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Gly Gly Gly Ser Ser Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ser Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
450 455 460
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
465 470 475 480
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
485 490 495
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
500 505 510
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
515 520 525
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
530 535 540
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
545 550 555 560
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr Gly Ser Glu Val Gln
565 570 575
Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys
580 585 590
Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Thr Met His
595 600 605
Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile
610 615 620
Ser Pro Asn Ile Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys
625 630 635 640
Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu
645 650 655
Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg
660 665 670
Gly Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser
675 680 685
Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
690 695 700
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
705 710 715 720
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
725 730 735
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
740 745 750
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
755 760 765
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
770 775 780
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
785 790 795
<210> 155
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 155
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Ala Ser Thr Lys Gly
100 105 110
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
115 120 125
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
130 135 140
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
145 150 155 160
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
165 170 175
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
180 185 190
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys
195 200 205
Ser Cys Asp Lys Thr His
210
<210> 156
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 156
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 157
<211> 819
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 157
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ser
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
450 455 460
Gly Gly Gly Ser Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
465 470 475 480
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
485 490 495
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
500 505 510
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
515 520 525
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
530 535 540
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
545 550 555 560
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr
565 570 575
Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro
580 585 590
Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
595 600 605
Glu Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu
610 615 620
Trp Ile Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ile Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln
625 630 635 640
Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr
645 650 655
Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr
660 665 670
Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
675 680 685
Thr Leu Thr Val Ser Ser Val Glu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
690 695 700
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val Asp Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro
705 710 715 720
Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg
725 730 735
Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser
740 745 750
His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser
755 760 765
Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr
770 775 780
Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys
785 790 795 800
Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu
805 810 815
Glu Leu Lys
<210> 158
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 158
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 159
<211> 819
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 159
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ser
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
450 455 460
Gly Gly Gly Ser Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
465 470 475 480
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
485 490 495
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
500 505 510
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
515 520 525
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
530 535 540
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
545 550 555 560
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr
565 570 575
Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro
580 585 590
Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
595 600 605
Glu Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu
610 615 620
Trp Ile Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ile Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln
625 630 635 640
Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr
645 650 655
Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr
660 665 670
Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
675 680 685
Thr Leu Thr Val Ser Ser Val Glu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
690 695 700
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val Asp Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro
705 710 715 720
Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg
725 730 735
Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser
740 745 750
His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser
755 760 765
Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr
770 775 780
Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys
785 790 795 800
Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu
805 810 815
Glu Leu Lys
<210> 160
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 160
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 161
<211> 815
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 161
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Gly Gly Gly Ser Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ser Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
450 455 460
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
465 470 475 480
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
485 490 495
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
500 505 510
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
515 520 525
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
530 535 540
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
545 550 555 560
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr Gly Ser Glu Val
565 570 575
Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val
580 585 590
Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Thr Met
595 600 605
His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Gly
610 615 620
Ile Ser Pro Asn Ile Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly
625 630 635 640
Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu
645 650 655
Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
660 665 670
Arg Gly Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val
675 680 685
Ser Ser Val Glu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
690 695 700
Gly Gly Val Asp Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
705 710 715 720
Val Thr Pro Gly Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser
725 730 735
Ile Ser Asp Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro
740 745 750
Arg Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser
755 760 765
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn
770 775 780
Ser Val Glu Pro Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His
785 790 795 800
Ser Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
805 810 815
<210> 162
<211> 819
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 162
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
115 120 125
Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser Ser Val
130 135 140
Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr Trp Met
145 150 155 160
Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Gln
165 170 175
Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln
195 200 205
Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
210 215 220
Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Ala
245 250 255
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
260 265 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
275 280 285
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
290 295 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305 310 315 320
Tyr Ser Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
325 330 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
340 345 350
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
355 360 365
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
370 375 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385 390 395 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
405 410 415
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
420 425 430
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
435 440 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
450 455 460
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
465 470 475 480
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
485 490 495
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
500 505 510
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
515 520 525
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
530 535 540
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
545 550 555 560
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
565 570 575
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
580 585 590
Ser Thr Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val
595 600 605
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr
610 615 620
Phe Thr Glu Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser
625 630 635 640
Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ile Gly Gly Thr Ser Tyr
645 650 655
Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser
660 665 670
Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala
675 680 685
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
690 695 700
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val
705 710 715 720
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
725 730 735
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
740 745 750
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
755 760 765
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
770 775 780
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
785 790 795 800
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
805 810 815
Gly Glu Cys
<210> 163
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 163
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Ala Ser Thr Lys Gly
100 105 110
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
115 120 125
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
130 135 140
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
145 150 155 160
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
165 170 175
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
180 185 190
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys
195 200 205
Ser Cys Asp Lys Thr His
210
<210> 164
<211> 819
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 164
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
115 120 125
Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser Ser Val
130 135 140
Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr Trp Met
145 150 155 160
Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Gln
165 170 175
Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln
195 200 205
Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
210 215 220
Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Ala
245 250 255
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
260 265 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
275 280 285
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
290 295 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305 310 315 320
Tyr Ser Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
325 330 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
340 345 350
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
355 360 365
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
370 375 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385 390 395 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
405 410 415
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
420 425 430
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
435 440 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
450 455 460
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
465 470 475 480
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
485 490 495
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
500 505 510
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
515 520 525
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
530 535 540
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
545 550 555 560
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
565 570 575
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
580 585 590
Ser Thr Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val
595 600 605
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr
610 615 620
Phe Thr Glu Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser
625 630 635 640
Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ile Gly Gly Thr Ser Tyr
645 650 655
Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser
660 665 670
Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala
675 680 685
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
690 695 700
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
705 710 715 720
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
725 730 735
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
740 745 750
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
755 760 765
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
770 775 780
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
785 790 795 800
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
805 810 815
Lys Thr His
<210> 165
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 165
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 166
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 166
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 167
<211> 792
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 167
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ser
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
450 455 460
Gly Gly Gly Ser Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
465 470 475 480
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
485 490 495
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
500 505 510
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
515 520 525
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
530 535 540
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
545 550 555 560
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr
565 570 575
Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr
580 585 590
Pro Gly Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser
595 600 605
Asp Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu
610 615 620
Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe
625 630 635 640
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val
645 650 655
Glu Pro Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe
660 665 670
Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Ala Ser Thr
675 680 685
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
690 695 700
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
705 710 715 720
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
725 730 735
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
740 745 750
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
755 760 765
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
770 775 780
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
785 790
<210> 168
<211> 223
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 168
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ile Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
115 120 125
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
130 135 140
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
145 150 155 160
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
165 170 175
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
180 185 190
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
195 200 205
Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 169
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 169
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 170
<211> 680
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 170
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser
450 455 460
Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys
465 470 475 480
Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln
485 490 495
Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ile
500 505 510
Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr
515 520 525
Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr
530 535 540
Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly Ser Phe
545 550 555 560
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Arg Thr Val
565 570 575
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
580 585 590
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
595 600 605
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
610 615 620
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
625 630 635 640
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
645 650 655
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
660 665 670
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
675 680
<210> 171
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 171
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Ala Ser Thr Lys Gly
100 105 110
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
115 120 125
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
130 135 140
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
145 150 155 160
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
165 170 175
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
180 185 190
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys
195 200 205
Ser Cys Asp Lys Thr His
210
<210> 172
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 172
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ser Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 173
<211> 680
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 173
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ser
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser
450 455 460
Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys
465 470 475 480
Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln
485 490 495
Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ile
500 505 510
Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr
515 520 525
Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr
530 535 540
Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly Ser Phe
545 550 555 560
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Arg Thr Val
565 570 575
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
580 585 590
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
595 600 605
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
610 615 620
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
625 630 635 640
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
645 650 655
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
660 665 670
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
675 680
<210> 174
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 174
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Ala Ser Thr Lys Gly
100 105 110
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
115 120 125
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
130 135 140
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
145 150 155 160
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
165 170 175
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
180 185 190
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys
195 200 205
Ser Cys Asp Lys Thr His
210
<210> 175
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 175
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ser Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 176
<211> 680
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 176
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ser
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser
450 455 460
Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys
465 470 475 480
Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln
485 490 495
Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ile
500 505 510
Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr
515 520 525
Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr
530 535 540
Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly Ser Phe
545 550 555 560
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Arg Thr Val
565 570 575
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
580 585 590
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
595 600 605
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
610 615 620
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
625 630 635 640
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
645 650 655
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
660 665 670
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
675 680
<210> 177
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 177
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Ala Ser Thr Lys Gly
100 105 110
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
115 120 125
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
130 135 140
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
145 150 155 160
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
165 170 175
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
180 185 190
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys
195 200 205
Ser Cys Asp Lys Thr His
210
<210> 178
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 178
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 179
<211> 698
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 179
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser
450 455 460
Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys
465 470 475 480
Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln
485 490 495
Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ile
500 505 510
Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr
515 520 525
Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr
530 535 540
Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly Ser Phe
545 550 555 560
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Val Glu Gly
565 570 575
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val Asp Asp
580 585 590
Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly Asp
595 600 605
Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu
610 615 620
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile Lys
625 630 635 640
Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
645 650 655
Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro Glu
660 665 670
Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr
675 680 685
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
690 695
<210> 180
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 180
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ser Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 181
<211> 698
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 181
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ser
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser
450 455 460
Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys
465 470 475 480
Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln
485 490 495
Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ile
500 505 510
Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr
515 520 525
Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr
530 535 540
Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly Ser Phe
545 550 555 560
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Val Glu Gly
565 570 575
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val Asp Asp
580 585 590
Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly Asp
595 600 605
Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu
610 615 620
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile Lys
625 630 635 640
Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
645 650 655
Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro Glu
660 665 670
Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr
675 680 685
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
690 695
<210> 182
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 182
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ser
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 183
<211> 670
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 183
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Ser Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
340 345 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr Gly Ser Glu
435 440 445
Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser
450 455 460
Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Thr
465 470 475 480
Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly
485 490 495
Gly Ile Ser Pro Asn Ile Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
500 505 510
Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met
515 520 525
Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
530 535 540
Arg Arg Gly Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
545 550 555 560
Val Ser Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
565 570 575
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
580 585 590
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
595 600 605
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
610 615 620
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
625 630 635 640
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
645 650 655
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
660 665 670
<210> 184
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 184
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Ala Ser Thr Lys Gly
100 105 110
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
115 120 125
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
130 135 140
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
145 150 155 160
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
165 170 175
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
180 185 190
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys
195 200 205
Ser Cys Asp Lys Thr His
210
<210> 185
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 185
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ser Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 186
<211> 671
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 186
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ser
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser
450 455 460
Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys
465 470 475 480
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys
485 490 495
Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile
500 505 510
Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe
515 520 525
Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr
530 535 540
Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys
545 550 555 560
Leu Glu Leu Lys Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
565 570 575
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
580 585 590
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
595 600 605
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
610 615 620
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
625 630 635 640
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
645 650 655
Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
660 665 670
<210> 187
<211> 223
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合智人小家鼠
<400> 187
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ile Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
115 120 125
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
130 135 140
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
145 150 155 160
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
165 170 175
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
180 185 190
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
195 200 205
Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 188
<211> 680
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人-小鼠嵌合
<400> 188
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Ser Thr Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val
450 455 460
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
465 470 475 480
Phe Thr Ser Tyr Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Arg Gly
485 490 495
Leu Glu Trp Ile Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr
500 505 510
Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser
515 520 525
Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala
530 535 540
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe
545 550 555 560
Asn Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ala Arg Thr Val
565 570 575
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
580 585 590
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
595 600 605
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
610 615 620
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
625 630 635 640
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
645 650 655
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
660 665 670
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
675 680
<210> 189
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人-小鼠嵌合
<400> 189
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 190
<211> 459
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人-小鼠嵌合
<400> 190
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ala Ser Thr Lys Gly Pro
100 105 110
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
115 120 125
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
130 135 140
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
145 150 155 160
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
165 170 175
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
180 185 190
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
195 200 205
Cys Asp Lys Thr His Gly Gly Ser Ser Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln
210 215 220
Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys
225 230 235 240
Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Thr Met His Trp Val Lys
245 250 255
Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile Ser Pro Asn
260 265 270
Ile Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu
275 280 285
Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu
290 295 300
Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly Ser
305 310 315 320
Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Val Glu
325 330 335
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val Asp
340 345 350
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
355 360 365
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
370 375 380
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
385 390 395 400
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
405 410 415
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
420 425 430
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu
435 440 445
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
450 455
<210> 191
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人-小鼠嵌合
<400> 191
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ser Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 192
<211> 680
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人小鼠嵌合
<400> 192
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ser Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Ser Thr Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val
450 455 460
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
465 470 475 480
Phe Thr Ser Tyr Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Arg Gly
485 490 495
Leu Glu Trp Ile Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr
500 505 510
Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser
515 520 525
Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala
530 535 540
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe
545 550 555 560
Asn Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ala Arg Thr Val
565 570 575
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
580 585 590
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
595 600 605
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
610 615 620
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
625 630 635 640
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
645 650 655
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
660 665 670
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
675 680
<210> 193
<211> 459
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人小鼠嵌合
<400> 193
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ala Ser Thr Lys Gly Pro
100 105 110
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
115 120 125
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
130 135 140
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
145 150 155 160
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
165 170 175
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
180 185 190
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
195 200 205
Cys Asp Lys Thr His Gly Gly Ser Ser Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln
210 215 220
Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys
225 230 235 240
Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Thr Met His Trp Val Lys
245 250 255
Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile Ser Pro Asn
260 265 270
Ile Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu
275 280 285
Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu
290 295 300
Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly Ser
305 310 315 320
Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Val Glu
325 330 335
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val Asp
340 345 350
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
355 360 365
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
370 375 380
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
385 390 395 400
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
405 410 415
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
420 425 430
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu
435 440 445
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
450 455
<210> 194
<211> 801
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人-小鼠嵌合
<400> 194
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ser Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
450 455 460
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
465 470 475 480
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
485 490 495
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
500 505 510
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
515 520 525
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
530 535 540
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
545 550 555 560
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr Gly Ser Gln Val Gln
565 570 575
Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys
580 585 590
Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Asn Met His
595 600 605
Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ala Ile
610 615 620
Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys
625 630 635 640
Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu
645 650 655
Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser
660 665 670
Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asn Val Trp Gly Ala Gly Thr
675 680 685
Thr Val Thr Val Ser Ala Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile
690 695 700
Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val
705 710 715 720
Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys
725 730 735
Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu
740 745 750
Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu
755 760 765
Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr
770 775 780
His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu
785 790 795 800
Cys
<210> 195
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人-小鼠嵌合
<400> 195
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 196
<211> 459
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人-小鼠嵌合
<400> 196
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ala Ser Thr Lys Gly Pro
100 105 110
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
115 120 125
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
130 135 140
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
145 150 155 160
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
165 170 175
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
180 185 190
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
195 200 205
Cys Asp Lys Thr His Gly Gly Ser Ser Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln
210 215 220
Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys
225 230 235 240
Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Thr Met His Trp Val Lys
245 250 255
Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile Ser Pro Asn
260 265 270
Ile Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu
275 280 285
Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu
290 295 300
Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly Ser
305 310 315 320
Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Val Glu
325 330 335
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val Asp
340 345 350
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
355 360 365
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
370 375 380
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
385 390 395 400
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
405 410 415
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
420 425 430
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu
435 440 445
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
450 455
<210> 197
<211> 928
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人-小鼠嵌合
<400> 197
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln
115 120 125
Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser Ser
130 135 140
Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser Trp
145 150 155 160
Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
165 170 175
Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe Lys
180 185 190
Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met
195 200 205
Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
210 215 220
Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
225 230 235 240
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
245 250 255
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
260 265 270
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
275 280 285
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
290 295 300
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
305 310 315 320
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
325 330 335
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
340 345 350
His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
355 360 365
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
370 375 380
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
385 390 395 400
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
405 410 415
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ser Ser Thr Tyr Arg Val Val
420 425 430
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
435 440 445
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
450 455 460
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
465 470 475 480
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
485 490 495
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
500 505 510
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
515 520 525
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
530 535 540
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
545 550 555 560
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly
565 570 575
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gln
580 585 590
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
595 600 605
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
610 615 620
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
625 630 635 640
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
645 650 655
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
660 665 670
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
675 680 685
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Thr Gly Ser Gln Val Gln Leu
690 695 700
Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met
705 710 715 720
Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Asn Met His Trp
725 730 735
Val Lys Gln Thr Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ala Ile Tyr
740 745 750
Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala
755 760 765
Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser
770 775 780
Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Thr
785 790 795 800
Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asn Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr
805 810 815
Val Thr Val Ser Ala Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe
820 825 830
Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys
835 840 845
Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val
850 855 860
Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln
865 870 875 880
Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser
885 890 895
Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His
900 905 910
Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
915 920 925
<210> 198
<211> 459
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人-小鼠嵌合
<400> 198
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ala Ser Thr Lys Gly Pro
100 105 110
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
115 120 125
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
130 135 140
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
145 150 155 160
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
165 170 175
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
180 185 190
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
195 200 205
Cys Asp Lys Thr His Gly Gly Ser Ser Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln
210 215 220
Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys
225 230 235 240
Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Thr Met His Trp Val Lys
245 250 255
Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile Ser Pro Asn
260 265 270
Ile Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu
275 280 285
Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu
290 295 300
Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly Ser
305 310 315 320
Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Val Glu
325 330 335
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val Asp
340 345 350
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
355 360 365
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
370 375 380
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
385 390 395 400
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
405 410 415
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
420 425 430
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu
435 440 445
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
450 455
<210> 199
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合
<400> 199
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Val Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Thr Asn Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ala Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Arg Tyr Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 200
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合
<400> 200
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Val Ile Asn Trp Gly Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Thr Asn Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ala Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Arg Tyr Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 201
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合
<400> 201
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Arg Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 202
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合
<400> 202
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Glu Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Gly Ser Ser Trp Gly Val Phe Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 203
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合
<400> 203
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Glu Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Gly Ser Ser Trp Gly Val Phe Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 204
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合
<400> 204
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Glu Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Gly Ser Ser Trp Gly Val Phe Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 205
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合
<400> 205
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Val Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 206
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合
<400> 206
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Glu Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ile Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 207
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合
<400> 207
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Glu Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ile Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 208
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合
<400> 208
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Glu Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Pro Asn Ile Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 209
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合
<400> 209
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 210
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合
<400> 210
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Phe
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Ser Ser Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 211
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合
<400> 211
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Phe
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Thr Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Ser Ser Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 212
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合
<400> 212
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Phe
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Thr Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Ser Ser Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 213
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合
<400> 213
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 214
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合
<400> 214
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Cys Trp Asp Tyr Ala Leu Tyr Ala Met Asp Cys Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 215
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合
<400> 215
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Cys Trp Asp Tyr Ala Leu Tyr Ala Met Asp Cys Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 216
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合
<400> 216
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Cys Trp Asp Tyr Ala Leu Tyr Ala Met Asp Cys Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 217
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合
<400> 217
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Cys Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Asp Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 218
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 嵌合
<400> 218
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Cys Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Asp Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105

Claims (28)

1.一种抗原结合结构域，其结合人NKp46多肽，其中该结构域包含选自下组的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)组合，该组由以下组成：
包含SEQ ID NO:199或200的氨基酸序列的VH，和包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的VL。
2.根据权利要求1所述的抗原结合结构域，其中该VH和VL结构域存在于同一多肽链上。
3.根据权利要求1所述的抗原结合结构域，其中该VH和VL结构域由肽接头分开。
4.一种蛋白质或多肽，其包含如权利要求1所述的抗原结合结构域。
5.如权利要求4所述的蛋白质或多肽，其中该蛋白质是抗体。
6.如权利要求4所述的蛋白质或多肽，其中该蛋白质是多特异性抗原结合蛋白。
7.如权利要求4-6中任一项所述的蛋白质或多肽，其中该VH和该VL被置于单多肽链上并通过肽接头彼此融合。
8.如权利要求4-6中任一项所述的蛋白质或多肽，其中该VH位于该蛋白质内的第一多肽链上，并且该VL位于该蛋白质内的第二多肽链上。
9.如权利要求5所述的蛋白质或多肽，其中该蛋白质是全长IgG抗体或其保留与NKp46多肽的结合的片段。
10.如权利要求4-6中任一项所述的蛋白质或多肽，其中该蛋白质是多特异性蛋白，其进一步包含结合目标抗原的第二抗原结合结构域，其中该多特异性蛋白能够引导表达NKp46的NK细胞裂解表达该目标抗原的靶细胞。
11.如权利要求10所述的蛋白质或多肽，其中该蛋白质由单多肽链组成。
12.如权利要求10所述的蛋白质或多肽，其中结合NKp46多肽的该抗原结合结构域和结合目标抗原的该抗原结合结构域各自包含通过接头与VL融合的VH。
13.如权利要求10所述的蛋白质或多肽，其中该蛋白质是选自二聚体、三聚体或四聚体的多聚体多肽。
14.如权利要求4-6中任一项所述的蛋白质或多肽，其中该蛋白质是包含至少两个不同多肽链的异多聚体蛋白，每个多肽链包含至少一个与人CH1或Cκ恒定结构域融合的重链或轻链可变结构域V-(CH1/Cκ)单元、和Fc结构域，其中这些蛋白质链经历CH1-Cκ二聚化并且通过非共价键彼此结合，并且任选地进一步通过在相应的CH1与一个或多个Cκ结构域之间形成的二硫键结合，并且通过相应的Fc部分的CH3结构域之间的非共价键彼此结合。
15.如权利要求14所述的蛋白质或多肽，其中第一和第二多肽链均包含在CH1和/或Cκ结构域与Fc结构域的接点处的铰链结构域。
16.如权利要求4-6中任一项所述的蛋白质或多肽，其中该抗原结合结构域、多肽或蛋白质单价地结合该NKp46多肽。
17.如权利要求4所述的蛋白质或多肽，其中该蛋白质是异二聚体并且包含：
(a)具有如下结构域排列的第一多肽：
Va-1–(CH1或CK)a–Fc结构域–Va-2–Vb-2，
以及
(b)具有如下结构域排列的第二多肽链：
Vb-1–(CH1或CK)b–Fc结构域
其中Va-1和Vb-1之一是轻链可变结构域并且另一个是重链可变结构域，Va-2和Vb-2之一是轻链可变结构域并且另一个是重链可变结构域；
其中(CH1或CK)b与中心链上的(CH1或CK)a二聚化，并且该Vb-1与中心链的Va-1一起形成抗原结合结构域，并且其中Va-2和Vb-2一起形成抗原结合结构域。
18.如权利要求4所述的蛋白质或多肽，其中该蛋白质是异三聚体并且包含：
(a)具有如下结构域排列的第一多肽链：
Va-1–(CH1或CK)a–Fc结构域–Va-2–(CH1或CK)b，
(b)具有如下结构域排列的第二多肽链：
Vb-1–(CH1或CK)c–Fc结构域，
以及
(c)具有如下结构域排列的第三多肽链：
Vb-2–(CH1或CK)d，
其中Va-1和Vb-1之一是轻链可变结构域并且另一个是重链可变结构域，Va-2和Vb-2之一是轻链可变结构域并且另一个是重链可变结构域；
其中(CH1或CK)c与中心链上的(CH1或CK)a二聚化，并且该Va-1和Vb-1形成抗原结合结构域；并且
其中(CH1或CK)d与中心链上的(CH1或CK)b单元二聚化，并且该Va-2和Vb-2形成抗原结合结构域。
19.如权利要求17或18所述的蛋白质或多肽，其中Va-2和Vb-2一起形成结合NKp46的抗原结合结构域。
20.如权利要求17或18所述的蛋白质或多肽，其具有如下结构域排列：
Figure FDA0003614320070000051
21.如权利要求17或18所述的蛋白质或多肽，其具有如下结构域排列：
Figure FDA0003614320070000052
22.如权利要求17或18所述的蛋白质或多肽，其具有如下结构域排列：
Figure FDA0003614320070000053
23.一种药物组合物，其包含如权利要求4-22中任一项所述的蛋白质或多肽以及药学上可接受的载体。
24.一种分离的核酸，其编码根据权利要求4-22中任一项所述的蛋白质或其多肽链。
25.一种重组细胞，其产生如权利要求4-22中任一项所述的蛋白质或多肽。
26.一种产生蛋白质的方法，其包括在适于表达如权利要求4-22中任一项所述的蛋白质的条件下培养如权利要求25所述的细胞，并回收该蛋白质。
27.权利要求4-22中任一项所述的蛋白质或多肽或权利要求23所述的药物组合物在制备用于治疗受试者的疾病的药物中的用途，所述治疗包括向该受试者给予所述蛋白质或多肽或所述药物组合物，其中所述蛋白质或多肽或所述药物组合物通过结合和引导表达NKp46的NK细胞裂解疾病靶细胞实现疾病的治疗。
28.如权利要求27所述的用途，其中该疾病是癌症、感染性疾病或者炎性或自身免疫性疾病。
CN201680082632.4A 2015-12-28 2016-12-20 NKp46结合蛋白的可变区 Active CN108779175B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210862118.XA CN115925933A (zh) 2015-12-28 2016-12-20 NKp46结合蛋白的可变区

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562271474P 2015-12-28 2015-12-28
US62/271,474 2015-12-28
PCT/EP2016/081953 WO2017114694A1 (en) 2015-12-28 2016-12-20 VARIABLE REGIONS FOR NKp46 BINDING PROTEINS

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210862118.XA Division CN115925933A (zh) 2015-12-28 2016-12-20 NKp46结合蛋白的可变区

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108779175A CN108779175A (zh) 2018-11-09
CN108779175B true CN108779175B (zh) 2022-07-08

Family

ID=57796296

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680082632.4A Active CN108779175B (zh) 2015-12-28 2016-12-20 NKp46结合蛋白的可变区
CN202210862118.XA Pending CN115925933A (zh) 2015-12-28 2016-12-20 NKp46结合蛋白的可变区

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210862118.XA Pending CN115925933A (zh) 2015-12-28 2016-12-20 NKp46结合蛋白的可变区

Country Status (7)

Country Link
US (3) US11001629B2 (zh)
EP (1) EP3397645A1 (zh)
JP (2) JP7091250B2 (zh)
CN (2) CN108779175B (zh)
AU (1) AU2016383475B2 (zh)
CA (1) CA3007898A1 (zh)
WO (1) WO2017114694A1 (zh)

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3161002A1 (en) 2014-06-27 2017-05-03 Innate Pharma MULTISPECIFIC NKp46 BINDING PROTEINS
US9767555B2 (en) * 2015-01-05 2017-09-19 Case Western Reserve University Disease characterization from fused pathology and radiology data
CA2990518A1 (en) * 2015-06-23 2016-12-29 Innate Pharma Multispecific nk engager proteins
US10736963B2 (en) 2015-07-24 2020-08-11 Innate Pharma Methods for detecting tissue infiltrating NK cells
US11001629B2 (en) 2015-12-28 2021-05-11 Innate Pharma Variable regions for NKp46 binding proteins
FR3061716B1 (fr) * 2017-01-06 2019-05-17 Elsalys Biotech Nouveaux composes ciblant le cd160 humain
EP3574016A2 (en) 2017-01-24 2019-12-04 Innate Pharma NKp46 BINDING AGENTS
AU2018219887A1 (en) 2017-02-08 2019-08-22 Dragonfly Therapeutics, Inc. Multi-specific binding proteins for activation of natural killer cells and therapeutic uses thereof to treat cancer
AU2018220736A1 (en) 2017-02-20 2019-09-05 Dragonfly Therapeutics, Inc. Proteins binding HER2, NKG2D and CD16
AU2018371114A1 (en) 2017-11-21 2020-05-07 Innate Pharma Multispecific antigen binding proteins
MX2020008336A (es) 2018-02-08 2020-09-21 Dragonfly Therapeutics Inc Dominios variables de anticuerpos que se dirigen al receptor nkg2d.
CA3099308A1 (en) 2018-05-21 2019-11-28 Compass Therapeutics Llc Compositions and methods for enhancing the killing of target cells by nk cells
CN110540590B (zh) 2018-05-29 2023-08-18 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种自免疫抑制物的开发和应用
WO2020191293A1 (en) * 2019-03-20 2020-09-24 Javelin Oncology, Inc. Anti-adam12 antibodies and chimeric antigen receptors, and compositions and methods comprising
JP2023517889A (ja) 2020-03-10 2023-04-27 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー ＮＰＭ１ｃ陽性がんの免疫療法のための組成物および方法
AU2021253899A1 (en) * 2020-04-06 2022-11-17 University Of Rijeka Faculty Of Medicine Antibodies to NKp46 and constructs thereof for treatment of cancers and infections
JPWO2022004805A1 (zh) 2020-06-30 2022-01-06
CN116063550A (zh) * 2020-09-02 2023-05-05 南京北恒生物科技有限公司 靶向nk激活性受体的嵌合抗原受体
MX2023007901A (es) 2020-12-31 2023-07-11 Sanofi Sa Acopladores de celulas asesinas naturales (nk) multifuncionales que se unen a nkp46 y a cd123.
AU2022246048A1 (en) 2021-03-26 2023-08-31 Innate Pharma Multispecific proteins comprising an nkp46-binding site, a cancer antgienge binding site fused to a cytokine for nk cell engaging
KR20240019297A (ko) 2021-06-09 2024-02-14 이나뜨 파르마 에스.에이. Nkp46, 사이토카인 수용체, 종양 항원 및 cd16a 에 결합하는 다중특이적 단백질
BR112023025476A2 (pt) 2021-06-09 2024-02-27 Innate Pharma Proteína de ligação multimérica e seu método de produção, composição farmacêutica, molécula de ácido nucleico isolada, vetor de expressão, célula isolada e proteína de ligação para uso
WO2023274352A1 (en) * 2021-07-02 2023-01-05 Laekna Therapeutics Shanghai Co., Ltd. Depletion of activated hepatic stellate cells (hscs) and uses thereof
WO2023076883A1 (en) * 2021-10-27 2023-05-04 Samyang Biopharm Usa Inc. Anti-mic antibodies with variant fc domains
WO2023110937A1 (en) 2021-12-14 2023-06-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Depletion of nk cells for the treatment of adverse post-ischemic cardiac remodeling
CN116003595B (zh) * 2022-07-11 2024-02-02 南方医科大学第三附属医院（广东省骨科研究院） 靶向nk细胞nkp46受体的纳米抗体及其制备方法和应用
WO2024037627A1 (zh) * 2022-08-19 2024-02-22 盛禾(中国)生物制药有限公司 一种双特异性抗体及其应用
CN116003627A (zh) * 2022-09-16 2023-04-25 四川大学华西医院 NKG2D-NKp46细胞接合器分子及其用途
CN117442721B (zh) * 2023-12-20 2024-03-15 苏州艾凯利元生物科技有限公司 一种包括nk细胞和nk细胞接合器分子的组合物

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005000086A2 (en) * 2003-06-30 2005-01-06 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem FRAGMENTS OF NKp44 AND NKp46 FOR TARGETING VIRAL-INFECTED AND TUMOR CELLS
WO2005105848A1 (en) * 2004-04-30 2005-11-10 Innate Pharma Compositions and methods for enhancing nk cell activity
CN101970491A (zh) * 2007-08-30 2011-02-09 沃尔特及伊莱萨霍尔医学研究院 树突状细胞标记物及其用途
CN102946902A (zh) * 2010-03-26 2013-02-27 罗切格利卡特公司 双特异性抗体
WO2014125041A1 (en) * 2013-02-14 2014-08-21 Innate Pharma Treatment of peripheral t cell lymphoma
WO2015015489A1 (en) * 2013-07-30 2015-02-05 Biolinerx Ltd. Antibody for treating diabetes and autoimmune diseases
WO2015197593A1 (en) * 2014-06-27 2015-12-30 Innate Pharma MULTISPECIFIC NKp46 BINDING PROTEINS
WO2016207278A1 (en) * 2015-06-23 2016-12-29 Innate Pharma Multispecific nk engager proteins

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10584181B2 (en) 2009-12-04 2020-03-10 Genentech, Inc. Methods of making and using multispecific antibody panels and antibody analog panels
WO2012175613A1 (en) * 2011-06-21 2012-12-27 Innate Pharma NKp46-MEDIATED NK CELL TUNING
US10081680B2 (en) 2014-03-11 2018-09-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Anti-SIRP-alpha antibodies and bispecific macrophage enhancing antibodies
US11001629B2 (en) 2015-12-28 2021-05-11 Innate Pharma Variable regions for NKp46 binding proteins
EP3574016A2 (en) 2017-01-24 2019-12-04 Innate Pharma NKp46 BINDING AGENTS

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005000086A2 (en) * 2003-06-30 2005-01-06 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem FRAGMENTS OF NKp44 AND NKp46 FOR TARGETING VIRAL-INFECTED AND TUMOR CELLS
WO2005105848A1 (en) * 2004-04-30 2005-11-10 Innate Pharma Compositions and methods for enhancing nk cell activity
CN101970491A (zh) * 2007-08-30 2011-02-09 沃尔特及伊莱萨霍尔医学研究院 树突状细胞标记物及其用途
CN102946902A (zh) * 2010-03-26 2013-02-27 罗切格利卡特公司 双特异性抗体
WO2014125041A1 (en) * 2013-02-14 2014-08-21 Innate Pharma Treatment of peripheral t cell lymphoma
WO2015015489A1 (en) * 2013-07-30 2015-02-05 Biolinerx Ltd. Antibody for treating diabetes and autoimmune diseases
WO2015197593A1 (en) * 2014-06-27 2015-12-30 Innate Pharma MULTISPECIFIC NKp46 BINDING PROTEINS
WO2016207278A1 (en) * 2015-06-23 2016-12-29 Innate Pharma Multispecific nk engager proteins

Non-Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Chain H, Fab NKp46-1 heavy chain";Gauthier,L.等;《genbank》;20201201;ACCESSION NO.6IAP_H *
"immunoglobulin variable region, partial [Mus musculus domesticus]";Tillman,D.M 等;《genbank》;19941105;ACCESSION NO.CAA80091 *
"Recent advances in the generation of bispecific antibodies for tumor immunotherapy ";Sergey M Kipriyanov 等;《Curr Opin Drug Discov Devel》;20040331;第7卷(第2期);第233-242页 *
"Rescue of Impaired NK Cell Activity in Hodgkin Lymphoma With Bispecific Antibodies In Vitro and in Patients";Katrin S.Reiners 等;《molecular therapy》;20130430;第21卷(第4期);第895-903页 *
"Targeting natural killer cell reactivity by employing antibody to NKp46: implications for type 1 diabetes";Rami Yossef 等;《plos one》;20150226;第10卷(第2期);第1-15页 *
"双特异性抗体及其在肿瘤治疗中的应用";张欣 等;《生命的化学》;20070430;第27卷(第2期);第166-169页 *
"双特异性抗体的制备和应用";徐晨 等;《国外医学(免疫学分册)》;19990430;第22卷(第4期);第184-188页 *
"双特异性抗体的结构设计及其装配工艺研究进展";黎晓维 等;《中国新药杂志》;20141031;第23卷(第20期);第2430-2436页 *
《Multifunctional Natural Killer Cell Engagers Targeting NKp46 Trigger Protective Tumor Immunity》;Laurent Gauthier 等;《cell》;20190530;第177卷(第7期);第1701-1713页 *

Also Published As

Publication number Publication date
AU2016383475B2 (en) 2024-02-22
EP3397645A1 (en) 2018-11-07
US20180355036A1 (en) 2018-12-13
JP7091250B2 (ja) 2022-06-27
CN115925933A (zh) 2023-04-07
CA3007898A1 (en) 2017-07-06
AU2016383475A1 (en) 2018-06-28
US20210269523A1 (en) 2021-09-02
JP2019503713A (ja) 2019-02-14
US11891444B2 (en) 2024-02-06
US11001629B2 (en) 2021-05-11
CN108779175A (zh) 2018-11-09
JP2022137054A (ja) 2022-09-21
US20240174748A1 (en) 2024-05-30
WO2017114694A1 (en) 2017-07-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108779175B (zh) NKp46结合蛋白的可变区
AU2021200972B2 (en) MULTISPECIFIC NKp46 BINDING PROTEINS
US11267897B2 (en) Multispecific NK engager protein
JP6702893B2 (ja) 多重特異的抗原結合タンパク質
AU2016284866A1 (en) Multispecific antigen binding proteins
US20190322767A1 (en) Heterodimeric antigen binding proteins

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant