KR20230159823A - Cd112r에 대한 항체 및 이의 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 고도의 친화성 및 특이성을 갖는 인간 CD112R을 인식하고 넥틴-2에 대한 이의 결합을 억제하는 모노클로날 항체를 제공한다. 본 발명은 추가로 상기 항체를 포함하는 약제학적 조성물, 및 암 면역요법 및 진단에서 이들의 사용 방법을 제공한다.

Description

CD112R에 대한 항체 및 이의 용도
본 발명은 면역요법의 분야에 속하며, 인간 단백질 CD112R(PVRIG)에 결합하는 항체 및 이의 단편, 이러한 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 및 이들을 생산하는 세포에 관한 것이다. 이들 항체를 포함하는 약제학적 조성물 및 이들의 용도도 포함된다.
암 면역요법은, 예를 들면, 종양 세포 상의 항원에 특이적인 항체에 의한 치료, 키메라 항원 수용체 T 세포(CAR-T) 또는 항-종양 세포의 특정 활성화에 의해 항-종양 면역 반응을 생성하고 증강시키기 위해 이용된다. 환자의 종양 세포에 대해 면역 세포(예: T 세포 또는 NK 세포)를 동원하는 능력은 치료가 불가능하다고 여겨지던 종양 및 이들의 전이를 퇴치하는 치료 방식을 제공한다.
T 세포 매개 면역 반응은 공-자극 및 공-억제 신호에 의해 조절되는 복수의 연속 단계를 포함하여, 면역 반응의 크기와 이의 결과를 조절하는 순 효과(net effect)를 유도한다. 면역 체크포인트(immune checkpoint)라고 하는 억제 신호는 자가-내성의 유지 및 면역-매개 측부 조직 손상의 제한에 매우 중요하다.
면역 체크포인트 단백질의 발현은 종양에 의해 변경된다. 예를 들면, 암 세포의 표면에서 프로그램된 사멸-리간드 1(PD-L1)의 상향조절은 이들을 T 세포에서 발현되는 체크포인트 분자 PD-1에 결합할 수 있게 한다. 이는 T 세포의 억제를 유도하고, 이는 종양 세포를 공격할 수 있고, 따라서 암 세포가 숙주 면역계를 회피할 수 있도록 한다. 따라서, 면역 체크포인트는 암에 대한 기능적 세포 면역의 활성화에 대한 중요한 장벽을 나타낸다. 따라서, T 세포 상의 억제 리간드(예: PD-1)에 특이적인 길항 항체는 암 요법에 사용되는 면역 체크포인트 억제제(ICI)에 대한 표적 제제(agent)의 예이다(예: 니볼루맙, 펨브롤리주맙). 면역 체크포인트 분자(immune checkpoint molecule)의 또 다른 예는 Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T 세포 면역수용체(TIGIT)이다. TIGIT는 T 세포와 자연 킬러 세포(NK 세포)를 포함한 다양한 면역 세포에서 발현되는 공-억제 분자이다. TIGIT은 폴리오 바이러스 수용체(PVR, CD155)와 높은 친화성(affinity)으로 결합하고, 넥틴-2(Nectin-2)(CD112)와 낮은 친화성으로 결합하며, 이들 둘 다는 다양한 암 세포에서 발현된다.
PVRIG라고도 불리는 CD112R은 넥틴-2와 높은 친화성으로 결합한다. CD112R 및/또는 TIGIT와 상호작용하면, 넥틴-2는 T-세포 증식을 억제한다. 중요하게는, 넥틴-2는, CD226(DNAM-1)과 결합하면, T-세포 기능의 공-자극제로서 기능할 수 있다. 이러한 상호작용은 IL-2 및 IFNγ와 같은 T-세포 증식과 사이토카인 생산을 자극한다. 이러한 상반된 상호작용은 경쟁적이며, 이들의 순 효과는 수득되는 항암 면역 반응에 영향을 미친다.
WO2019232484는 항-PVRIG, 항-TIGIT 및 항-PVRIG/항-TIGIT 이중특이적 항체, 조성물 및 암 치료를 위한 항체의 사용 방법을 개시한다.
WO2018017864는 PVRIG에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 제제 및 이중특이적 제제를 개시한다. 또한, WO2018017864는 암과 같은 질환의 면역 반응 및/또는 치료를 증강시키기 위해 제제를 사용하는 방법도 개시한다.
WO2016134333은 항-PVRIG 항체 및 이의 사용 방법을 개시한다.
단독으로 또는 다른 제제와 조합하여, 면역계의 세포를 증강시켜 종양 또는 바이러스 감염 세포를 공격할 수 있는, 추가의 및 보다 효과적, 특이적, 안전한 및 안정한 제제에 대한 충족되지 않은 필요가 있다. 넥틴-2에 대한 CD112R 결합을 억제하는 모노클로날 항체(mAb)는 이러한 제제가 될 수 있다.
본 발명은, CD112R(PVRIG)을 인식하고, 이에 결합하고, 넥틴-2(CD112)에 대한 이의 결합을 방지하고, 자연 킬러(NK) 세포 및 T-세포와 같은 림프구 상의 생성되는 억제 활성을 억제하는 항체 및 이의 단편을 제공한다. 이들 항체 및 이의 단편은 CDR 서열의 고유한 세트, 인간 CD112R에 대한 높은 친화성 및 높은 특이성을 갖는 것을 특징으로 하며, 단독 요법 또는 다른 항암제와 조합하여, 종양 면역 회피에 대항하기 위한 암 면역요법에 유용하다. 본 명세서에 개시된 항체는 바이러스 감염의 치료에도 유용하고, 검출 검정 및 암 진단에 사용될 수 있다.
이제, 본 명세서에 기재된 고친화성 항-CD112R 모노클로날 항체(mAb)는 CD112R-넥틴-2 상호작용을 차단하고, 이후 T 세포 및 NK 세포 활성을 회복시킨다는 것이 개시되었다. 이러한 특성으로 인해, 본 발명의 mAb는 항암 면역요법에 사용하기 위한 가치있는 후보이고, 부작용이 적은 저용량의 투여를 가능하게 한다.
본 명세서에 기재된 항-CD112R mAb는 항-PD-1, 항-TIGIT 및 항-PVR mAb에 의해 유도된 것과 유사하게 T 세포 활성화를 유도하는 것으로 밝혀졌다. 또한, 본 명세서에 기재된 일부 항-CD112R mAb를, 항-PD-1, 항-TIGIT 또는 항-PVR mAb를 포함한 다른 면역-조절제와 조합하는 것은, 각각의 개별 mAb에 의해 유도되는 활성 수준을 초과하는 항암 활성의 현저한 증가를 초래했다. 본 명세서에 개시된 CD112R mAb는 표적 암 세포의 존재하에서 NK 세포 활성화를 유도할 수 있고, NK 세포의 활성화를 위해 항-TIGIT 및 항-PVR mAb와 상승작용할 수 있었다. 추가로, 본 명세서에 기재된 항체는 인간 및 사이노몰구스 CD112R에 매우 특이적이지만, 설치류 CD112R에는 특이적이지 않은 것으로 밝혀졌다는 것이 개시된다. 추가로, 일부 실시형태에 따르면, 항-CD112R mAb는 이의 리간드 넥틴-2와 CD112R과의 상호작용을 차단하고 면역 세포의 활성화를 증가시킨다는 것이 개시된다.
예상외로, 본 발명의 인간화된 형태의 항-CD112R mAb는 모체 뮤린 mAb과 비교하여 개선된 결합 및 생산성 특성을 갖는 것으로 밝혀졌다. 추가로, 인간화된 mAb 변이체는 사이노몰구스 CD112R과 교차-반응성을 갖고, 이는 원숭이에서의 추가 연구를 가능하게 한다. 본 명세서에 기재된 항체는 공지된 항-CD112R 항체보다 고유한 특성과 개선된 효능을 갖고 있다.
놀랍게도 및 유리하게도, 각각 탈아미드화 및 N-글리코실화 모티프(motif)를 제거하기 위해 도입된, 경쇄의 상보성 결정 영역 1(CDR1)과 중쇄의 CDR1 중의 특정 돌연변이는 인간 CD112R에 대한 친화성을 보존했다.
한 가지 측면에 따르면, 본 발명은 인간 CD112R에 특이적으로 결합하는 적어도 항원 결합 부분(antigen binding portion)을 포함하는 항체 또는 이의 항체 단편을 제공하고, 상기 항체 또는 이의 단편은 인간 CD112R에 대해 적어도 0.5×10-9 M의 친화성을 갖는다.
일부 실시형태에 따르면, 항체는 인간 CD112R에 특이적으로 결합하고 이의 리간드인 인간 넥틴-2(CD112)에 대한 결합을 억제한다.
일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은
i. 서열번호 17을 포함하는 중쇄(HC) 가변 영역의 3개 CDR 및 서열번호 19를 포함하는 경쇄(LC) 가변 영역의 3개 CDR, 또는 상기 항체 또는 단편 서열과 적어도 90%의 서열 동일성(sequence identity)을 갖는 이의 유사체 또는 유도체; 및
ii. 서열번호 21을 포함하는 중쇄 가변 영역의 3개 CDR 및 서열번호 23을 포함하는 경쇄 가변 영역의 3개 CDR, 또는 상기 항체 또는 단편 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체로 이루어진 그룹으로부터 선택된 6개 CDR 서열의 세트를 포함한다.
소정 항체 분자의 CDR 서열을 결정하기 위한 당해 기술분야에 몇몇 방법이 공지되어 있지만, 표준의 명확한 방법은 없다. 항체 중쇄 및 경쇄 가변 영역으로부터 CDR 서열의 결정은 당업자에게 공지된 임의의 방법에 따라 이루어질 수 있고, 여기에는 KABAT, 초티아(Chothia) 및 IMGT로 공지된 방법이 포함되지만 이들로 한정되지 않는다. 선택된 CDR 세트는 하나 이상의 방법으로 식별된 서열을 포함할 수 있고, 예를 들면, 일부 CDR 서열은 KABAT을 사용하여 결정될 수 있고, 일부는 IMGT를 사용하여 결정될 수 있다. 일부 실시형태에 따르면, mAb 가변 영역의 CDR 서열은 KABAT 및/또는 초티아(Chothia) 방법을 사용하여 결정된다.
일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 이의 단편은 클론 13으로 표시된 모노클로날 항체의 CDR 서열, 즉, 서열번호 17에 기재된 중쇄 가변 영역에 포함된 3개의 CDR 서열 및 서열번호 19에 기재된 경쇄 가변 영역에 포함된 3개의 CDR 서열, 또는 클론 15로 표시된 모노클로날 항체의 CDR 서열, 즉, 서열번호 21에 기재된 중쇄 가변 영역에 포함된 3개의 CDR 서열 및 서열번호 23에 기재된 경쇄 가변 영역에 포함된 3개의 CDR 서열을 포함한다.
본 발명은 클론 13으로 표시된 항체의 변이체 및 유사체를 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열번호 28을 포함하는 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 서열 및 서열번호 26을 포함하는 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR 또는 상기 항체 또는 단편 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이들의 유사체 또는 유도체의 세트를 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 GYX1FX2SY(서열번호 1)(여기서, X1은 N, D, A, Q, S 또는 T를 나타내고; X2는 T 또는 A를 나타낸다) 또는 서열 SYWIN(서열번호 7)을 포함하는 중쇄 CDR1을 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 YPGSYIP(서열번호 2)를 포함하는 중쇄 CDR2를 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 GYFDV(서열번호 3)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다.
특정 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 다음을 포함한다: (i) 서열 GYX1FX2SY(서열번호 1)(여기서, X1은 N, D, A, Q, S 또는 T를 나타내고; X2는 T 또는 A를 나타낸다) 또는 서열 SYWIN(서열번호 7)을 포함하는 중쇄 CDR1; (ii) 서열 YPGSYIP(서열번호 2)를 포함하는 중쇄 CDR2; 및 (iii) 서열 GYFDV(서열번호 3)를 포함하는 중쇄 CDR3.
일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 KSSQSLLXSGNQKNYLA(서열번호 4)를 포함하는 경쇄 CDR1을 포함하고, 여기서 X는 N 또는 S를 나타낸다. 일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 GASTRES(서열번호 5)를 포함하는 경쇄 CDR2를 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 QNDHSYPYT(서열번호 6)를 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 (i) 서열 KSSQSLLXSGNQKNYLA(서열번호 4)를 포함하는 경쇄 CDR1(여기서, X는 N 또는 S를 나타낸다); (ii) 서열 GASTRES(서열번호 5)를 포함하는 경쇄 CDR2; 및 (iii) 서열 QNDHSYPYT(서열번호 6)를 포함하는 중쇄 CDR3를 포함한다.
일부 특정 실시형태에 따르면, 항체 또는 단편은 서열 GYX1FX2SY(서열번호 1)(여기서, X1은 N, D, A, Q, S 또는 T를 나타내고; X2는 T 또는 A를 나타낸다) 또는 서열 SYWIN(서열번호 7)을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 YPGSYIP(서열번호 2)를 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 GYFDV(서열번호 3)를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 KSSQSLLXSGNQKNYLA(서열번호 4)를 포함하는 경쇄 CDR1(여기서, X는 N 또는 S를 나타낸다), 서열 GASTRES(서열번호 5)를 포함하는 경쇄 CDR2, 서열 QNDHSYPYT(서열번호 6)를 포함하는 경쇄 CDR3, 또는 6개 CDR을 포함하는 초가변 영역(HVR) 서열에서 5% 이하의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 포함하는 이의 유사체를 포함한다.
일부 특정 실시형태에 따르면, 항체 또는 단편은 하기로 이루어진 6개 CDR 서열의 세트를 포함한다:
i. 서열번호 1 또는 7에 기재된 서열을 갖는 중쇄 CDR1;
ii. 서열번호 2에 기재된 서열을 갖는 중쇄 CDR2;
iii. 서열번호 3에 기재된 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
iv. 서열번호 4에 기재된 서열을 갖는 경쇄 CDR1;
v. 서열번호 5에 기재된 서열을 갖는 경쇄 CDR2; 및
vi. 서열번호 6에 기재된 서열을 갖는 경쇄 CDR3.
일부 실시형태에 따르면, 중쇄 CDR1 서열은 서열 GYX1FX2SY(서열번호 1)을 포함하고, 여기서 X1은 N, D, A, Q, S 또는 T를 나타내고; X2는 T 또는 A이다. 일부 실시형태에 따르면, 중쇄 CDR1 서열은 서열 GYX1FX2SY(서열번호 1)를 포함하고, 여기서 X1은 N, D, A, Q, S 또는 T를 나타내고, X2는 T이다. 일부 실시형태에 따르면, 중쇄 CDR1 서열은 서열 GYTFTSY(서열번호 13)를 포함한다. 추가 실시형태에 따르면, 상기 중쇄 CDR1 서열은 서열 GYNFASY(서열번호 14)를 포함한다. 추가 실시형태에 따르면, 중쇄 CDR1 서열은 서열 SYWIN(서열번호 7)을 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 상기 중쇄 CDR2 서열은 서열 YPGSYIP(서열번호 2) 또는 서열 DIYPGSYIPNYNEKFKN(서열번호 8)을 포함한다. 특정 실시형태에 따르면, 상기 중쇄 CDR2 서열은 서열 DIYPGSYIPNYNEKFKN(서열번호 8)을 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 경쇄 CDR1 서열은 서열 KSSQSLLXSGNQKNYLA(서열번호 4)를 포함하고, 여기서 X는 N이다. 특정 실시형태에 따르면, 경쇄 CDR1 서열은 서열 KSSQSLLSSGNQKNYLA(서열번호 15)를 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 28에 기재된 중쇄 가변 영역 또는 중쇄 가변 영역 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 유사체 또는 유도체를 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 26에 기재된 경쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체를 포함한다.
특정 실시형태에 따르면, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 28에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 26에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역, 또는 경쇄 및/또는 중쇄 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이들의 유사체를 포함한다.
특정 실시형태에 따르면, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 17에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 19에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역, 또는 경쇄 및/또는 중쇄 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이들의 유사체를 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 단편은 클론 13으로 표시된 모노클로날 항체의 CDR 서열, 즉, 서열번호 17에 기재된 중쇄 가변 영역에 포함된 3개의 CDR 서열 및 서열번호 19에 기재된 경쇄 가변 영역에 포함된 3개의 CDR 서열을 포함한다.
추가 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 GYNFTSY(서열번호 9) 또는 SYWIN(서열번호 7)을 포함하는 중쇄 CDR1을 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 FPGSYS(서열번호 10)를 포함하는 중쇄 CDR2를 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 GYFDV(서열번호 3)를 포함하는 중쇄 CDR3를 포함한다.
특정 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 (i) 서열 GYNFTSY(서열번호 9) 또는 SYWIN(서열번호 7)을 포함하는 중쇄 CDR1; (ii) 서열 FPGSYS(서열번호 10)를 포함하는 중쇄 CDR2; 및 (iii) 서열 GYFDV(서열번호 3)를 포함하는 중쇄 CDR3를 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 KSSQSLLNSGSQKNYLA(서열번호 11)를 포함하는 경쇄 CDR1을 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 GASTRES(서열번호 5)를 포함하는 경쇄 CDR2를 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 QNDHSYPYT(서열번호 6)를 포함하는 경쇄 CDR3를 포함한다.
특정 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 (i) 서열 KSSQSLLNSGSQKNYLA(서열번호 11)를 포함하는 경쇄 CDR1; (ii) 서열 GASTRES(서열번호 5)를 포함하는 경쇄 CDR2; 및 (iii) 서열 QNDHSYPYT(서열번호 6)를 포함하는 중쇄 CDR3를 포함한다.
일부 특정 실시형태에 따르면, 항체 또는 단편은 서열 GYNFTSY(서열번호 9) 또는 SYWIN(서열번호 7)을 포함하는 중쇄 CDR1 서열, 서열 FPGSYS(서열번호 10)를 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 GYFDV(서열번호 3)를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 KSSQSLLNSGSQKNYLA(서열번호 11)를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 GASTRES(서열번호 5)를 포함하는 경쇄 CDR2, 서열 QNDHSYPYT(서열번호 6)를 포함하는 경쇄 CDR3, 또는 초가변 영역(HVR) 서열에서 5% 이하의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 포함하는 이들의 유사체를 포함한다.
일부 특정 실시형태에 따르면, 항체 또는 단편은 하기로 이루어진 6개 CDR 서열의 세트를 포함한다:
i. 서열번호 9 또는 7에 기재된 서열을 갖는 중쇄 CDR1;
ii. 서열번호 10에 기재된 서열을 갖는 중쇄 CDR2;
iii. 서열번호 3에 기재된 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
iv. 서열번호 11에 기재된 서열을 갖는 경쇄 CDR1;
v. 서열번호 5에 기재된 서열을 갖는 경쇄 CDR2; 및
vi. 서열번호 6에 기재된 서열을 갖는 경쇄 CDR3.
일부 실시형태에 따르면, 경쇄 CDR1 서열은 서열 GYNFTSY(서열번호 9)를 포함한다. 다른 실시형태에 따르면, 경쇄 CDR1 서열은 서열 SYWIN(서열번호 7)을 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 중쇄 CDR2 서열은 서열 DIFPGSYSPNYNKKFKR(서열번호 12)을 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, CDR은 KABAT에 의해 결정되고, 서열번호 7, 8, 3, 4, 5 및 6에 기재되어 있다. 일부 실시형태에 따르면, CDR은 KABAT에 의해 결정되고, 서열번호 7, 12, 3, 11, 5 및 6에 기재되어 있다.
일부 실시형태에 따르면, CDR은 초티아에 의해 결정되고, 서열번호 1, 2, 3, 4, 5 및 6에 기재되어 있다. 일부 실시형태에 따르면, CDR은 초티아에 의해 결정되고, 서열번호 9, 10, 3, 11, 5 및 6에 기재되어 있다.
일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 21에 기재된 중쇄 가변 영역, 또는 중쇄 가변 영역 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이들의 유사체 또는 유도체를 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 23에 기재된 경쇄 가변 영역, 또는 경쇄 가변 영역 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체를 포함한다.
특정 실시형태에 따르면, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 21에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 23에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역, 또는 경쇄 및/또는 중쇄 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이들의 유사체를 포함한다.
특정 실시형태에 따르면, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 21에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 23에 기재된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 이의 단편은 적어도 10-10M의 친화성을 갖는 인간 CD112R을 인식한다. 다른 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 5×10-11M 또는 그 이상의 친화성으로 인간 CD112R에 결합한다. 일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 0.5×10-9M 내지 10-11M 범위의 친화성으로 인간 CD112R에 결합한다. 일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 10-10M 내지 10-11M 범위의 친화성으로 인간 CD112R에 결합한다. 각 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
항체의 유사체 및 유도체 및 상술한 단편들도 본 발명의 범위 내에 있다.
일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편 유사체는 참조 항체 서열의 초가변 영역과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는다.
특정 실시형태에 따르면, 단리된 항체 또는 이의 단편의 유사체 또는 유도체는 참조 항체 서열의 가변 영역과 적어도 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%의 서열 동일성을 갖는다. 각 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에 따르면, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 서열번호 28 또는 서열번호 21에 기재된 중쇄 가변 영역, 또는 상기 서열과 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 유사체를 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열번호 26 또는 서열번호 23에 기재된 경쇄 가변 영역, 또는 상기 서열과 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 유사체를 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 여기서 (i) 중쇄는 서열번호 28을 포함하고 경쇄는 서열번호 26을 포함하거나; 또는 (ii) 중쇄는 서열번호 21을 포함하고 경쇄는 서열번호 23을 포함한다. 상기 중쇄 또는 경쇄와 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 항체 또는 단편의 유사체도 포함된다.
일부 실시형태에 따르면, 유사체는 상술한 항체 경쇄 또는 중쇄 가변 영역과 적어도 96, 97, 98 또는 99%의 서열 유사성 또는 동일성을 갖는다. 일부 실시형태에 따르면, 유사체는 초가변 영역의 하나 이상의 CDR 서열, 즉, 서열번호 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 및 15에 기재된 CDR 서열 중 임의의 하나에 대해 하나 이하의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 포함한다. 각 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에 따르면, 아미노산 치환은 보존적 치환이다.
일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환, 결실 및/또는 부가된 상기 정의된 경쇄 및 중쇄 영역을 갖는 초가변 영역(HVR)을 포함한다. 각 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은, 하나의 아미노산이 치환된 상기 정의된 경쇄 및 중쇄 영역을 갖는 HVR을 포함한다. 특정 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은, 하나의 아미노산이 치환된 상기 정의된 CDR을 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 CDR 세트를 포함한다:
i. 중쇄 CDR1이 GYX1FX2SY(서열번호 1)(여기서, X1은 N, D, A, Q, S 또는 T를 나타내고, X2는 T 또는 A를 나타낸다)이고; 중쇄 CDR2이 YPGSYIP(서열번호 2)이고; 중쇄 CDR3이 GYFDV(서열번호 3)이고, 경쇄 CDR1이 KSSQSLLXSGNQKNYLA(서열번호 4)(여기서, X는 N 또는 S를 나타낸다)이고; 경쇄 CDR2가 GASTRES(서열번호 5)이고; 경쇄 CDR3이 QNDHSYPYT(서열번호 6)인, 6개 CDR의 세트;
ii. 중쇄 CDR1이 SYWIN(서열번호 7)이고; 중쇄 CDR2가 YPGSYIP(서열번호 2)이고; 중쇄 CDR3이 GYFDV(서열번호 3)이고; 경쇄 CDR1이 KSSQSLLXSGNQKNYLA(서열번호 4)(여기서, X는 N 또는 S를 나타낸다)이고; 경쇄 CDR2가 GASTRES(서열번호 5)이고; 경쇄 CDR3이 QNDHSYPYT(서열번호 6)인, 6개 CDR의 세트; 및
iii. 중쇄 CDR1 서열이 GYNFTSY(서열번호 9) 또는 SYWIN(서열번호 7)이고; 중쇄 CDR2가 FPGSYS(서열번호 10)이고; 중쇄 CDR3이 GYFDV(서열번호 3)이고; 경쇄 CDR1이 KSSQSLLNSGSQKNYLA(서열번호 11)이고; 경쇄 CDR2가 GASTRES(서열번호 5)이고; 경쇄 CDR3이 QNDHSYPYT(서열번호 6)인, 6개 CDR의 세트.
본 발명은 또한 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항체 및 이의 결합 단편을 제공하고, 여기서 상기 쇄는 중쇄 가변 영역 서열 및 경쇄 가변 영역 서열의 세트를 포함하고, 상기 세트는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된다:
i. 서열번호 17 및 19; 및
ii. 서열번호 21 및 23.
본 발명은 또한 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항체 및 이의 결합 단편을 제공하고, 여기서 상기 쇄는 서열번호 28에 기재된 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 26에 기재된 경쇄 가변 영역 서열의 세트를 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 항체는 단리된 모노클로날 항체이다.
특정 실시형태에 따르면, mAb는 키메라 mAb이다.
일부 실시형태에 따르면, mAb 또는 키메라 mAb는 마우스 IgG1, 마우스 IgG2a, 마우스 IgG2b, 마우스 IgG3, 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3 및 인간 IgG4로 이루어진 그룹으로부터 선택된 불변 영역을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
또 다른 실시형태에 따르면, 키메라 mAb는 인간-유래 불변 영역으로 구성된다.
일부 실시형태에 따르면, 키메라 mAb의 인간 불변 영역은 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3 및 인간 IgG4로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 실시형태에 따르면, 키메라 mAb의 인간 불변 영역은 인간 IgG1이다.
특정 실시형태에 따르면, 항체는 항체 단편이다. 특정 실시형태에 따르면, 항체 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fd', Fv, dAb, 단리된 CDR 영역, 일본쇄(single chain) 가변 단편(scFv), 일본쇄 항체(scab), "디아바디" 및 "선형 항체"로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
본 발명은 또한 본 명세서에 기재된 임의의 mAb의 6개 CDR의 세트를 포함하는 인간화 항체(humanized antibody)를 제공한다.
일부 실시형태에 따르면, 인간화 항체 또는 항체 단편은 6개 CDR의 세트를 포함하고, 여기서 중쇄 CDR1은 GYX1FX2SY(서열번호 1)(여기서, X1은 N, D, A, Q, S 또는 T를 나타내고; X2는 T 또는 A이다) 또는 SYWIN(서열번호 7)이고; 중쇄 CDR2는 YPGSYIP(서열번호 2)이고; 중쇄 CDR3은 GYFDV(서열번호 3)이고; 경쇄 CDR1은 KSSQSLLXSGNQKNYLA(서열번호 4)(여기서, X는 N 또는 S이다)이고; 경쇄 CDR2는 GASTRES(서열번호 5)이고; 경쇄 CDR3은 QNDHSYPYT(서열번호 6)이다.
일부 실시형태에 따르면, 인간화 항체는 중쇄 CDR1 GYTFTSY(서열번호 13)를 포함한다.
특정 실시형태에 따르면, 인간화 항체는 경쇄 CDR1 KSSQSLLSSGNQKNYLA(서열번호 15)를 포함한다.
특정 실시형태에 따르면, 인간화 항체 또는 항체 단편은 6개 CDR의 세트를 포함하고, 여기서 중쇄 CDR1은 GYTFTSY(서열번호 13)이고; 중쇄 CDR2는 YPGSYIP(서열번호 2)이고; 중쇄 CDR3은 GYFDV(서열번호 3)이고; 경쇄 CDR1은 KSSQSLLSSGNQKNYLA(서열번호 15)이고; 경쇄 CDR2는 GASTRES(서열번호 5)이고; 경쇄 CDR3은 QNDHSYPYT(서열번호 6)이다.
일부 실시형태에 따르면, 인간화 항체는 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 34, 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38 및 서열번호 39로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 가변 영역 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체를 포함한다. 각 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에 따르면, 인간화 항체는 서열번호 40, 서열번호 41 및 서열번호 42로 이루어진 그룹으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 가변 영역 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체를 포함한다. 각 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에 따르면, 인간화 항체는 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 34, 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38 및 서열번호 39로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 서열, 및 서열번호 40, 서열번호 41 및 서열번호 42로 이루어진 그룹으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 서열, 또는 상기 가변 영역 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체를 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 인간화 항체는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 여기서 상기 쇄는 중쇄 가변 영역 서열 및 경쇄 가변 영역 서열의 세트를 포함하며, 상기 세트는
i. 서열번호 39 및 40(항체 H11K1로 표시됨);
ii. 서열번호 39 및 41(항체 H11K2로 표시됨); 및
iii. 서열번호 39 및 42(항체 H11K3로 표시됨)로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 실시형태에 따르면, 본 명세서에 기재된 바와 같이 항체 또는 이의 단편을 포함하는 접합체가 제공된다.
본 발명의 일부 실시형태에 따른 접합체는, 방사성 모이어티, 표지 태그 및 세포독성 모이어티를 포함하지만 이들로 한정되지 않는 모이어티에 직접 또는 스페이서 또는 링커를 통해 부착된 상기 정의된 항체 또는 이의 단편을 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 인간 CD112R에 대한 높은 친화성 및 특이성을 갖는 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열, 게다가 이러한 폴리뉴클레오티드 서열을 운반하는 벡터 및 숙주 세포가 제공된다.
일부 실시형태에 따르면, 상술한 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열이 제공된다.
일부 실시형태에 따르면, 상기 폴리뉴클레오티드 서열은 (i) 서열번호 16 및 서열번호 18, (ii) 서열번호 20 및 서열번호 22, 및 (iii) 서열번호 24 및 서열번호 25로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열에 기재된 서열을 포함하는 항체 또는 항체 단편, 또는 가변 영역 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이들의 유사체 또는 유도체를 코딩한다. 각 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
또 다른 일부 실시형태에 따르면, 본 발명에 따른 폴리뉴클레오티드 서열은 항체 또는 항체 단편 또는 6개 CDR의 세트를 포함하는 쇄를 코딩하고, 여기서 중쇄 CDR1은 GYX1FX2SY(서열번호 1)(여기서, X1은 N, D, A, Q, S 또는 T를 나타내고; X2는 T 또는 A이다) 또는 SYWIN(서열번호 7)이고; 중쇄 CDR2는 YPGSYIP(서열번호 2)이고; 중쇄 CDR3은 GYFDV(서열번호 3)이고; 경쇄 CDR1은 KSSQSLLXSGNQKNYLA(서열번호 4)(여기서, X는 N 또는 S를 나타낸다)이고; 경쇄 CDR2는 GASTRES(서열번호 5)이고; 경쇄 CDR3은 QNDHSYPYT(서열번호 6)이다.
또 다른 일부 실시형태에 따르면, 본 발명에 따른 폴리뉴클레오티드 서열은 6개 CDR의 세트를 포함하는 항체 또는 항체 단편을 코딩하고, 여기서 중쇄 CDR1 서열은 서열 GYTFTSY(서열번호 13)를 포함하고, 중쇄 CDR2는 서열 YPGSYIP(서열번호 2)를 포함하고, 중쇄 CDR3은 서열 GYFDV(서열번호 3)을 포함하고, 경쇄 CDR1은 서열 KSSQSLLSSGNQKNYLA(서열번호 15)을 포함하고, 경쇄 CDR2는 서열 GASTRES(서열번호 5)를 포함하고, 경쇄 CDR3은 서열 QNDHSYPYT(서열번호 6)를 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 상기 정의된 폴리뉴클레오티드 서열은 항체, 적어도 항원 결합 부분을 포함하는 항체 단편, 항체 쇄 및 상기 항체 또는 항체 단편을 포함하는 항체 접합체로 이루어진 그룹으로부터 선택된 분자를 코딩한다. 각 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에 따르면, 폴리뉴클레오티드 서열은 서열번호 16에 기재된 서열을 포함하는 모노클로날 항체 중쇄 가변 영역 또는 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 코딩한다.
일부 실시형태에 따르면, 상기 폴리뉴클레오티드 서열은 서열번호 20에 기재된 서열을 포함하는 모노클로날 항체 중쇄 가변 영역 또는 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 코딩한다.
일부 실시형태에 따르면, 상기 폴리뉴클레오티드 서열은 서열번호 24에 기재된 서열을 포함하는 모노클로날 항체 중쇄 가변 영역 또는 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 코딩한다.
일부 실시형태에 따르면, 상기 폴리뉴클레오티드 서열은 서열번호 18에 기재된 서열을 포함하는 모노클로날 항체 경쇄 가변 영역 또는 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 코딩한다.
일부 실시형태에 따르면, 상기 폴리뉴클레오티드 서열은 서열번호 22에 기재된 서열을 포함하는 모노클로날 항체 경쇄 가변 영역 또는 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 코딩한다.
일부 실시형태에 따르면, 상기 폴리뉴클레오티드 서열은 서열번호 25에 기재된 서열을 포함하는 모노클로날 항체 경쇄 가변 영역 또는 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 코딩한다.
본 발명은, 일부 실시형태에 따르면, 상기 개시된 적어도 하나의 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 코딩된 적어도 하나의 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다.
추가의 측면에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 바와 같이 적어도 하나의 항체 쇄 또는 이의 단편을 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 핵산 작제물(construct)을 제공한다. 일부 실시형태에 따르면, 핵산 작제물은 플라스미드이다.
일부 실시형태에 따르면, 플라스미드는 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24 및 서열번호 25로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열에 기재된 적어도 하나의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 특정 CDR 서열 및/또는 특정 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 항체 단편을 생산할 수 있는 세포를 제공한다.
일부 실시형태에 따르면, 상기 개시된 적어도 하나의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 세포 또는 세포의 모집단이 제공된다.
일부 실시형태에 따르면, 모노클로날 항체를 생산하는 세포는 하이브리도마 세포이다.
본 발명은, 또 다른 측면에 따라, 본 명세서에 기재된 바와 같이, 활성 성분으로서, 적어도 하나의 항체, 항체 단편 또는 이의 접합체 및 임의로 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제(excipient), 희석제, 염 또는 담체(carrier)를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
일부 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 6개 CDR의 세트를 포함하는 적어도 하나의 항체를 포함하고, 여기서 중쇄 CDR1은 GYX1FX2SY(서열번호 1)(여기서, X1은 N, D, A, Q, S 또는 T를 나타내고; X2는 T 또는 A이다) 또는 SYWIN(서열번호 7)이고; 중쇄 CDR2는 YPGSYIP(서열번호 2)이고; 중쇄 CDR3은 GYFDV(서열번호 3)이고; 경쇄 CDR1은 KSSQSLLXSGNQKNYLA(서열번호 4)(여기서, X는 N 또는 S를 나타낸다)이고; 경쇄 CDR2는 GASTRES(서열번호 5)이고; 경쇄 CDR3은 QNDHSYPYT(서열번호 6)이다.
일부 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 중쇄 CDR1 서열 GYX1FX2SY(서열번호 1)를 포함하는 항체 또는 이의 단편을 포함하고, 여기서 X2는 T이다. 일부 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 중쇄 CDR1 서열 GYTFTSY(서열번호 13)를 포함하는 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 다른 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 중쇄 CDR1 서열 GYNFASY(서열번호 14)를 포함하는 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 특정 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 중쇄 CDR1 서열 SYWIN(서열번호 7)을 포함하는 항체 또는 이의 단편을 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 경쇄 CDR1 서열 KSSQSLLSSGNQKNYLA(서열번호 15)를 포함하는 항체 또는 이의 단편을 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 6개 CDR의 세트를 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함하고, 여기서 중쇄 CDR1 서열은 서열 GYTFTSY(서열번호 13)를 포함하고, 중쇄 CDR2는 서열 YPGSYIP(서열번호 2)를 포함하고, 중쇄 CDR3은 서열 GYFDV(서열번호 3)을 포함하고, 경쇄 CDR1은 서열 KSSQSLLSSGNQKNYLA(서열번호 15)를 포함하고, 경쇄 CDR2는 서열 GASTRES(서열번호 5)를 포함하고, 경쇄 CDR3은 서열 QNDHSYPYT(서열번호 6)를 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 서열번호 39에 기재된 중쇄를 포함하는 항체 또는 이의 단편을 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 서열번호 40, 서열번호 41 및 서열번호 42로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 각 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
특정 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 서열번호 39에 기재된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 40, 서열번호 41 및 서열번호 42로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 단편을 포함한다.
본 발명의 항체의 일본쇄 가변 단편(scFv) 분자도 제공된다. scFv 분자는 하나의 폴리펩티드 쇄에서 발현되는 항체의 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 본 발명은 항-CD112R 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 scFv 분자를 제공한다. 특정 실시형태에 따르면, scFv는 2개 가변 영역 사이에 힌지 영역을 포함한다. 특정 실시형태에 따르면, scFv는 본 명세서에 기재된 인간화 항체의 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, scFv는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 6개 CDR 서열을 포함하는 CD112R 결합 부위를 포함한다:
i. 서열번호 28을 포함하는 중쇄 가변 영역의 3개 상보성 결정 영역(CDR) 및 서열번호 26을 포함하는 경쇄 가변 영역의 3개 CDR, 또는 상기 항체 또는 단편 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체; 및
ii. 서열번호 17을 포함하는 중쇄 가변 영역의 3개 CDR 및 서열번호 19를 포함하는 경쇄 가변 영역의 3개 CDR 또는 상기 항체 또는 단편 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체.
일부 실시형태에 따르면, scFv는 6개 CDR의 세트를 포함하는 CD112R 결합 부위를 포함하고, 여기서 중쇄 CDR1은 GYX1FX2SY(서열번호 1)(여기서, X1은 N, D, A, Q, S 또는 T를 나타내고; X2는 T 또는 A이다) 또는 SYWIN(서열번호 7)이고; 중쇄 CDR2는 YPGSYIP(서열번호 2)이고; 중쇄 CDR3은 GYFDV(서열번호 3)이고; 경쇄 CDR1은 KSSQSLLXSGNQKNYLA(서열번호 4)(여기서, X는 N 또는 S를 나타낸다)이고; 경쇄 CDR2는 GASTRES(서열번호 5)이고; 경쇄 CDR3은 QNDHSYPYT(서열번호 6)이다.
일부 실시형태에 따르면, scFv는 중쇄 CDR1 서열 GYX1FX2SY(서열번호 1)를 포함하고, 여기서 X2는 T이다. 일부 실시형태에 따르면, scFv는 중쇄 CDR1 서열 GYTFTSY(서열번호 13)를 포함한다. 다른 실시형태에 따르면, scFv는 중쇄 CDR1 서열 GYNFASY(서열번호 14)를 포함한다. 특정 실시형태에 따르면, scFv는 중쇄 CDR1 서열 SYWIN(서열번호 7)을 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, scFv는 경쇄 CDR1 서열 KSSQSLLSSGNQKNYLA(서열번호 15)를 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, scFv는 6개 CDR의 세트를 포함하고, 여기서 중쇄 CDR1 서열은 GYTFTSY(서열번호 13)을 포함하고, 중쇄 CDR2는 YPGSYIP(서열번호 2)를 포함하고, 중쇄 CDR3은 GYFDV(서열번호 3)를 포함하고, 경쇄 CDR1은 서열 KSSQSLLSSGNQKNYLA(서열번호 15)를 포함하고, 경쇄 CDR2는 서열 GASTRES(서열번호 5)를 포함하고, 경쇄 CDR3은 서열 QNDHSYPYT(서열번호 6)를 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, scFv는 서열번호 29 내지 39로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, scFv는 서열번호 40 내지 42로 이루어진 그룹으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, scFv는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 연결하는 링커를 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 링커는 글리신-세린(GlySer) 링커이다. 일부 실시형태에 따르면, 링커는 (GS)n, (GSGGS)n, (GGGS)n 또는 (GGGGS)n를 포함하고, 여기서 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10으로부터 선택되는 정수이다. 일부 실시형태에 따르면, 링커는 서열 GGGS의 2 내지 6개 반복을 포함한다. 특정 예시적 실시형태에 따르면, 서열 GGGS의 3개 또는 4개 반복을 포함하는 링커는 scFv 내의 2개 가변 영역을 연결한다. 일부 실시형태에 따르면, 중쇄 가변 영역은 scFv의 N-말단 측에 있고, 링커(GGGS)3에 의해 경쇄 가변 영역에 연결된다. 일부 실시형태에 따르면, 경쇄 가변 영역은 scFv의 N-말단 측에 있고, 링커(GGGS)4에 의해 중쇄 가변 영역에 연결된다.
일부 실시형태에 따르면, scFv는 서열번호 43 내지 54로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열, 또는 상기 항체와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체를 포함한다. 각 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에 따르면, scFv는 서열번호 43 내지 54로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함한다. 특정 실시형태에 따르면, scFv는 서열번호 43 내지 54로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열로 이루어진다.
일부 실시형태에 따르면, scFv는 인간 Fc 영역에 연결되어 scFv-Fc를 형성한다. 일부 실시형태에 따르면, Fc는 인간 IgG1이다.
또한, NK 세포에서 발현되는 CD112R와 넥틴-2(CD112)의 결합을 억제함으로써 NK 세포독성의 회복에 사용하기 위한, 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체, 항체 단편 또는 항체 접합체를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
다른 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 T-세포에서 발현되는 인간 CD112R과 넥틴-2의 결합을 억제할 수 있다.
일부 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체, 항체 단편 또는 항체 접합체 및 PD-1에 대한 항체를 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체, 항체 단편, 또는 항체 접합체 및 TIGIT에 대한 항체를 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체, 항체 단편 또는 항체 접합체 및 PVR에 대한 항체를 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체, 항체 단편 또는 항체 접합체 및 CTLA-4에 대한 항체를 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 암 면역요법 또는 면역 반응의 증강에 사용하기 위한 것이다.
본 발명의 일부 실시형태에 따르면, 상기 암은 폐암(lung cancer), 유방암(breast cancer), 대장암(colorectal cancer), 흑색종(melanoma), 난소암(ovarian cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 결장암(colon cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 신장암(kidney cancer), 갑상선암(thyroid cancer), 전립선암(prostate cancer), 뇌암(brain cancer), 신장암(renal cancer), 인후암(throat cancer), 후두암(laryngeal carcinoma), 방광암(bladder cancer), 간암(hepatic cancer), 섬유육종(fibrosarcoma), 자궁내막 세포암(endometrial cells cancer), 교모세포종(glioblastoma), 육종(sarcoma), 골수종(myeloid), 백혈병(leukemia) 및 림프종(lymphoma)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에 따르면, 암은 고형암(solid cancer)이다. 일부 특정 실시형태에 따르면, 고형암은 유방암, 폐암, 방광암, 췌장암 및 난소암으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 실시형태에 따르면, 암은 폐 선암(lung adenocarcinoma)이다. 일부 실시형태에 따르면, 암은 유방 선암(breast adenocarcinoma)이다. 일부 실시형태에 따르면, 암은 대장암(colorectal cancer)이다.
특정 실시형태에 따르면, 암은 유방암, 대장암, 폐암, 신장암, 흑색종, 전립선암 및 뇌암으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
다른 실시형태에 따르면, 암은 혈액암(hematologic cancer)이다. 일부 실시형태에 따르면, 혈액암은 백혈병(leukemia), 림프종(lymphoma) 및 다발성 골수종(multiple myeloma)으로부터 선택된다. 각 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 인간 림프구와 함께 암의 치료에 사용하기 위한 것이다.
일부 실시형태에 따르면, 인간 림프구는 T 세포, NK 세포 및 NKT 세포로 이루어진 그룹으로부터 선택된 킬러 세포이다. 각 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에 따르면, 킬러 세포는 자가 또는 동종성이다.
일부 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 바이러스 감염의 치료에 사용하기 위한 것이다.
특정 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 만성 감염의 치료에 사용하기 위한 것이다. 예시적 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 C형 간염 바이러스 감염(HCV), 폴리오마바이러스(polyomavirus; JCV) 감염 및 BK-바이러스(BKV) 감염으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 바이러스 감염의 치료에 사용하기 위한 것이다.
또 다른 측면에 따르면, 본 발명은 본 명세서에 정의된 모노클로날 항체 또는 항체 단편을 사용하여 넥틴-2에 대한 인간 CD112R의 결합을 억제하는 방법을 제공한다.
추가 측면에 따르면, 본 발명은, 본 명세서에 기재된 치료학적 유효량의 항체 또는 항체 단편을 대상체(subject)에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 증강시키는 방법을 제공한다.
또 다른 측면에 따르면, 본 발명은, 본 명세서에 기재된 치료학적 유효량의 항체 또는 항체 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 암을 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 측면에 따르면, 본 발명은, 본 명세서에 기재된 치료학적 유효량의 CD112R에 대한 항체 또는 이의 항체 단편; 및 치료학적 유효량의 PD-1, TIGIT 또는 PVR에 대한 항체를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 암을 치료하는 방법을 제공한다. 각 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다. 항-CD112R 항체 및 항 PD-1, TIGIT 또는 PVR의 투여는 임의의 투여 순서로 병용 투여 또는 순차적 투여일 수 있다.
본 발명의 일부 실시형태에 따르면, 치료학적 유효량은 대상체에서 종양 크기 또는 전이 수의 감소를 초래한다.
일부 실시형태에 따르면, 암 치료 방법은 적어도 하나의 추가 항암 요법의 투여 또는 수행을 포함한다. 특정 실시형태에 따르면, 추가 항암 요법은 수술, 화학요법, 방사선요법 또는 면역요법이다.
일부 실시형태에 따르면, 암을 치료하는 방법은 항체 및 추가 항암제의 투여를 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 추가 항암제는 면역-조절제, 면역 공-억제 수용체를 억제하는 제제, 활성화된 림프구 세포, 키나제 억제제 및 화학요법제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
다른 실시형태에 따르면, 추가 면역-조절제는 인간 넥틴-2에 결합하는 항체, 항체 단편 또는 항체 접합체이다.
일부 실시형태에 따르면, 추가 면역-조절제는 면역 체크포인트 분자에 대한 항체이다. 일부 실시형태에 따르면, 추가 면역 조절제는 인간 프로그램 세포 사멸 단백질 1(PD-1), PD-L1 및 PD-L2, 암배아 항원-관련 세포 부착 분자 1(CEACAM1), 림프구 활성화 유전자 3(LAG3), CD137, OX40(CD134라고도 함), 킬러 세포 면역글로불린-유사 수용체(KIR), TIGIT, PVR, CTLA-4, NKG2A, GITR, 및 임의의 기타 체크포인트 분자 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 면역 체크포인트 분자에 대한 항체이다. 각 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
특정 실시형태에 따르면, 추가 면역 조절제는 PD-1에 대한 항체이다. 특정 실시형태에 따르면, 추가 면역 조절제는 TIGIT에 대한 항체이다. 특정 실시형태에 따르면, 추가 면역 조절제는 PVR에 대한 항체이다. 일부 실시형태에 따르면, 추가 면역 조절제는 CTLA-4에 대한 항체이다.
본 발명의 일부 실시형태에 따르면, 면역 공-억제 수용체는 PD-1, TIGIT, PVR, CTLA-4, LAG3, TIM3, BTLA, VISTA, B7H4, CD96, BY55(CD 160), LAIR1, SIGLEC10 및 2B4로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에 따르면, 항암제는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된다: 에르비툭스(erbitux), 시타라빈, 플루다라빈, 플루오로우라실, 메르캅토퓨린, 메토트렉세이트, 티오구아닌, 젬시타빈, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 카무스틴, 로무스틴, 클로람부실, 사이클로포스파미드, 시스플라틴, 카보플라틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 멜팔란, 티오테파, 다카바진, 블레오마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 이다루비신, 미토마이신, 미톡산트론, 플리카마이신, 에토포사이드, 테니포사이드 및 이들의 임의의 조합. 각 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에 따르면, 항암제는 표피 성장 인자 수용체(EGFR) 억제제이다. 일부 실시형태에 따르면, EGFR 억제제는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된다: 세툭시맙(Erbitux®), 파니투무맙(Vectibix®) 및 네시투무맙(Portrazza®). 각 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
본 발명의 일부 실시형태에 따르면, 대상체는 인간 대상체이다.
본 발명의 일부 실시형태에 따르면, 면역 세포는 T 세포이다.
한 가지 측면에 따르면, 본 발명은, 본 발명에 따른 항체를 사용하여 넥틴-2에 대한 CD112R의 결합을 조절하는 것을 포함하는 면역계 기능 및/또는 활성을 조절하는 방법을 제공한다.
일부 실시형태에 따르면, 암을 치료하는 방법은 대상체에서 전이의 형성, 성장 또는 확산을 방지 또는 감소시키는 것을 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 암을 치료하는 방법은 인간 넥틴-2에 대한 인간 CD112R의 결합을 억제할 수 있는 항체 또는 이의 항체 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하고, 상기 대상체에게 인간 림프구를 추가로 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 인간 림프구는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 킬러 세포이다: T 세포, NK 세포 및 NKT 세포.
일부 실시형태에 따르면, 킬러 세포는 자가 또는 동종성이다.
본 발명은 또한, 본 명세서에 기재된 적어도 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 또는 이의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 바이러스 감염을 예방 또는 치료하는 방법을 제공하고, 여기서 상기 mAb 또는 이의 단편은 넥틴-2에 대한 CD112R의 결합을 억제할 수 있다.
본 발명은, 또 다른 측면에 따르면, 샘플 중의 CD112R을 측정 또는 정량화하는 방법을 추가로 포함하고, 이 방법은 생물학적 샘플을 항체 또는 항체 단편과 접촉시키고, 복합체 형성(complex formation)의 수준을 측정하는 단계를 포함하고, 상기 항체 또는 항체 단편은
i. 중쇄 CDR1이 GYX1FX2SY(서열번호 1)(여기서, X1은 N, D, A, Q, S 또는 T를 나타내고, X2는 T 또는 A이다) 또는 SYWIN(서열번호 7)이고; 중쇄 CDR2가 YPGSYIP(서열번호 2)이고; 중쇄 CDR3이 GYFDV(서열번호 3)이고; 경쇄 CDR1이 KSSQSLLXSGNQKNYLA(서열번호 4)(여기서, X는 N 또는 S를 나타낸다)이고; 경쇄 CDR2가 GASTRES(서열번호 5)이고; 경쇄 CDR3이 QNDHSYPYT(서열번호 6)인 6개 CDR의 세트; 또는
ii. 중쇄 CDR1 서열이 GYNFTSY(서열번호 9) 또는 SYWIN(서열번호 7)이고; 중쇄 CDR2가 FPGSYS(서열번호 10)이고; 중쇄 CDR3이 GYFDV(서열번호 3)이고; 경쇄 CDR1이 KSSQSLLNSGSQKNYLA(서열번호 11)이고; 경쇄 CDR2가 GASTRES(서열번호 5)이고; 경쇄 CDR3이 QNDHSYPYT(서열번호 6)인 6개 CDR의 세트
를 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 상기 방법은 6개 CDR의 세트를 포함하는 항체 또는 항체 단편과 생물학적 샘플을 접촉시키는 것을 포함하고, 여기서 중쇄 CDR1 서열은 서열 GYTFTSY(서열번호 13)를 포함하고, 중쇄 CDR2는 서열 YPGSYIP(서열번호 2)를 포함하고, 중쇄 CDR3은 서열 GYFDV(서열번호 3)를 포함하고, 경쇄 CDR1은 서열 KSSQSLLSSGNQKNYLA(서열번호 15)를 포함하고, 경쇄 CDR2는 서열 GASTRES(서열번호 5)를 포함하고, 경쇄 CDR3은 서열 QNDHSYPYT(서열번호 6)를 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, CD112R의 발현을 검출 또는 정량화하는 방법은
i. CD112R에 특이적인 항체 또는 적어도 항원-결합 부분을 포함하는 항체 단편과 함께 샘플을 인큐베이팅하는 단계; 및
ii. 검출가능한 프로브를 사용하여 결합된 CD112R을 검출하는 단계
를 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 이 방법은
iii. 단계(ii)의 양을 공지된 양의 CD112R을 포함하는 참조 샘플로부터 수득된 표준 곡선과 비교하는 단계; 및
iv. 표준 곡선으로부터 샘플 중의 CD112R의 양을 계산하는 단계
를 추가로 포함한다.
본 발명에 따른 항체는 또한 스크리닝 방법을 구성하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들면, 당해 기술분야에 공지된 항체 및 방법을 사용하여, 면역조직화학(IHC) 또는 형광-활성화 세포 선별(FACS)와 같은 방법뿐만 아니라 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA) 또는 방사선면역검정(RIA)을 구성하여 생물학적 샘플에서 분비된 또는 세포-관련된 CD112R의 수준을 측정할 수 있다.
일부 실시형태에 따르면, 생물학적 샘플은 체액 또는 조직이다. 추가 실시형태에 따르면, 샘플은 신체 조직 샘플이다.
일부 실시형태에 따르면, 이 방법은 시험관내 또는 생체외에서 수행된다.
한 가지 측면에 따르면, 본 발명은 대상체의 암을 진단 또는 예측하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 본 명세서에 기재된 적어도 하나의 항체를 사용하여 상기 대상체의 생물학적 샘플에서 CD112R의 발현 수준을 결정하는 것을 포함한다.
본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 포함하는, 생물학적 샘플에서 CD112R의 발현 또는 존재를 측정하기 위한 키트(kit)도 제공된다. 일부 실시형태에 따르면, 키트는 하기를 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다:
i. 중쇄 CDR1이 GYX1FX2SY(서열번호 1)(여기서, X1은 N, D, A, Q, S 또는 T를 나타내고, X2는 T 또는 A이다) 또는 SYWIN(서열번호 7)이고; 중쇄 CDR2가 YPGSYIP(서열번호 2)이고; 중쇄 CDR3이 GYFDV(서열번호 3)이고; 경쇄 CDR1이 KSSQSLLXSGNQKNYLA(서열번호 4)(여기서, X는 N 또는 S를 나타낸다)이고; 경쇄 CDR2가 GASTRES(서열번호 5)이고; 경쇄 CDR3이 QNDHSYPYT(서열번호 6)인 6개 CDR의 세트; 또는
ii. 중쇄 CDR1 서열이 GYNFTSY(서열번호 9) 또는 SYWIN(서열번호 7)이고; 중쇄 CDR2가 FPGSYS(서열번호 10)이고; 중쇄 CDR3이 GYFDV(서열번호 3)이고; 경쇄 CDR1이 KSSQSLLNSGSQKNYLA(서열번호 11)이고; 경쇄 CDR2가 GASTRES(서열번호 5)이고; 경쇄 CDR3이 QNDHSYPYT(서열번호 6)인 6개 CDR의 세트.
일부 실시형태에 따르면, 키트는 6개 CDR의 세트를 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함하고, 여기서 중쇄 CDR1 서열은 서열 GYTFTSY(서열번호 13)를 포함하고, 중쇄 CDR2는 서열 YPGSYIP(서열번호 2)를 포함하고, 중쇄 CDR3은 서열 GYFDV(서열번호 3)을 포함하고, 경쇄 CDR1은 서열 KSSQSLLSSGNQKNYLA(서열번호 15)를 포함하고, 경쇄 CDR2는 서열 GASTRES(서열번호 5)를 포함하고, 경쇄 CDR3은 서열 QNDHSYPYT(서열번호 6)를 포함한다.
상기 본 명세서에 개시된 임의의 실시형태는 임의로 본 명세서에 개시된 또 다른 실시형태의 하나 또는 임의의 조합의 주제와 조합될 수 있다. 본 발명의 추가 실시형태 및 완전한 적용 범위는 하기 제공되는 상세한 설명으로부터 명백해질 것이다. 그러나, 상세한 설명 및 구체적 실시예는, 본 발명의 바람직한 실시형태를 나타내는 것이지만, 본 발명의 정신 및 범위 내에서 다양한 변경 및 변형이 이러한 상세한 설명으로부터 당업자에게 명백해질 것이기 때문에, 단지 예시로서만 제공되는 것임을 이해해야 한다.
도 1A-1D는 다양한 면역 세포에서 CD112R의 발현 수준을 나타낸다. 도 1A - 면역 세포 발현 데이터베이스(DICE)로부터의 PVRIG 전사체 수준. 도 1B-1D는 본 발명의 항-CD112R mAb(하이브리도마 상청액)에 의한 다양한 면역 세포의 염색의 FACS 분석을 나타낸다. 도 1B - 휴지 PBMC는 검출가능한 수준의 CD112R을 갖지 않았고; 도 1C - PBMC의 96시간 활성화 후에, CD112R의 강력한 발현은 T 세포에서 관찰되었으며; 도 1D - 활성화된 NK 세포에 의한 CD112R의 강력한 발현. 충전된 히스토그램은 배경 염색을 나타낸다. 각 그래프에서 2개의 중공 히스토그램은 2개의 항-CD112R mAb 클론(#13 및 #15)에 의한 염색을 나타낸다. 도시된 것은 2명의 독립한 건강한 공여자로부터 수득된 결과이다.
도 2는 NK/CD8 T 세포 상에 발현되는 수용체(TIGIT, DNAM-1, CD112R)의 개략도 및 종양 또는 항원 제시 세포(APC)에 의해 발현되는 넥틴-2에 대한 각각의 친화성이다.
도 3A-3C는 본 발명의 일부 항 CD112R mAb의 결합 및 차단에 대한 분석을 제공한다. 도 3A는 모 세포가 아닌 CD112R을 과발현하는 293T 세포에 대한 항-CD112R mAb 클론의, FACS 분석에 의해 결정된 특이적 결합을 나타낸다. 도 3B - 계산된 EC-50 값: CD112R 키메라 mAb는 일련의 3배 희석으로 99-0.4nM의 농도로 사용되고, CD112R을 과발현하는 HEK 293T 세포(인간 배아 신장 293 세포)와 함께 인큐베이팅했다. 검출을 위해, 항-인간-APC 항체(Ab)를 1:200 희석으로 사용하고, 세포 결합은 FACS에 의해 분석했다. 도 3C - 인간 넥틴-2를 과발현하는 8866 세포(만성 골수성 백혈병 세포)를 아이소타입 대조군 Ab의 존재하에 10㎍/ml의 CD112R-Fc 또는 4㎍/ml의 지시된 클론과 함께 인큐베이팅했다. 결합된 CD112R-Fc는 항-마우스-Dy-647 1:250 희석에 의해 검출하고, FACS에 의해 분석했다. CD112R 결합의 차단은 모든 변이체에 의해 95%를 초과했다.
도 4A-4C는 항-CD112R mAb에 의한 CD112R의 차단 및 NK 세포 활성화에 대한 이의 효과를 나타낸다. NK 활성화는 CD107a의 표면 발현의 유도에 의해 측정되었고, 이는 대조군 IgG(Y 축)에 대한 배율 변화로서 표현된다. 결과는 인간 암 세포주 A549(폐 선암; 도 4A 및 4B) 및 MDA-MB-231(유방 선암; 도 4C)에 대해 제시되어 있다. 도 4A - 뮤린 IgG1 Fc(MIgG1, 인간 CD16에 대한 검출가능한 결합을 갖지 않는 불활성 Fc)를 사용한 항-CD112R의 활성은 동일한 Fab을 갖는 키메라 클론, 및 인간 N31S를 포함하는 키메라 클론 VH0K0(또한 카바트 넘버링에 따라 본 명세서에서 N27dS로 기재됨)과 비교했고, 둘 다는 인간 IgG1 Fc(hIgG1, 인간 CD16을 활성화할 수 있는 이펙터 Fc)를 갖는다. 도 4B-4C - 항-CD112R mAb 활성은, 지시된 바와 같이, 항체와 항-면역 체크포인트 억제제(ICI) 항체, 즉 항-TIGIT(VSIG#9, WO2017037707에 기재됨) 및 항-PVR(NTX-1088로 명명됨) mAb와의 조합 활성과 비교했다. * p < 0.03, ** p < 0.001, *** p < 0.0001, 양측 스튜던트 t-검정. 공여자 5명 중 2명에 대한 대표적 데이터가 제시된다.
도 5A-5B는 T 세포-매개 표적 세포 사멸에 대한 항-CD112R mAb(클론 13 N31S)에 의한 CD112R의 차단의 효과를 나타낸다. CD112R 차단의 효과는 TIGIT 및 PD-1과 같은 추가 ICI의 존재하에 추가로 조사되었다. 표적 세포 사멸은 Ab를 추가하지 않았을 때에 관찰된 것에 대해 정규화되었다(Y 축). 결과는 인간 암 세포주 A549(폐 선암, 도 5A) 및 RKO(대장암, 도 5B)에 대해 제시되어 있다. * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.0005 양측 스튜던트 t-검정.
도 6은 NK 세포에 대한 인간화 항 CD112R 항체의 활성화 효과를 나타낸다. NK 세포 활성화는 FACS 분석으로 측정된 CD107a의 표면 발현 유도에 의해 평가되었고, 대조군 IgG(Y 축)에 대한 배율 변화로서 표현되었다. 건강한 인간 지원자로부터 단리한 NK 세포에 대한 결과가 제시되어 있고, 이는 인간 암 세포주 A549(폐 선암)와 공-인큐베이팅했다. 인큐베이션은 다양한 항-CD112R 인간화 클론의 존재하에, 또는 추가 항-TIGIT mAb의 존재 또는 부재하에, X 축에 도시된 아이소타입 IgG 대조군으로 수행되었다. 모든 Ab는 3mg/ml로 첨가되었다.
도 7A-7B는 NK 세포 활성화에 대한, 단독으로 및 항-PVR과 병용하여, 선택된 인간화 항-CD112R의 효과를 나타낸다. NK 세포 활성화는 표면 CD107a의 유도에 의해 측정되었고, Ab 부재(Y 축)에 대한 배율 변화로서 표현되었다. 도 7A - 선택된 인간화 항-CD112R 항체를 갖는 MDA-MB-231(유방 선암) 세포와 함께 배양한 NK 세포의 처리. 도 7B - 단독으로 또는 조합하여 다양한 인간화 항-CD112R mAb 및 항-PVR mAb(NTX-1088)를 사용한 상기 세포 배양물의 처리의 비교(p<0.03; 흑색 바).
도 8A-8B는 T 세포의 활성화(IL-2 분비)에 대한 선택된 인간화 항-CD112R 항체의 효과를 나타낸다. 인간 CD112R을 과발현하는 주르카트 세포는 표시된 항-CD112R mAb의 존재 또는 부재하에 항-CD3의 존재하에 A549 세포와 함께 인큐베이팅했다. 24시간 후 상청액을 수집하고, IL-2 함량은 바이오레전드(Biolegend)에 의해 인간 IL-2 ELISA MAX™ 디럭스(Deluxe)를 사용하여 정량화했다. 도 8A - 4-0.0625㎍/ml로부터의 모든 인간화 변이체 및 참조 항-CD112R Ab(참조)의 선량 반응 검정. 도 8B - 선택된 인간화 변이체는 26.4-0.1nM의 농도 범위에서 시험되었고, 참조 항-CD112R Ab는 최고 24.6nM 농도에서만 추가되었다. 비교는 최고 농도의 hIgG1과 비교했다.
도 9A-9B는 T 세포 활성화에 대한 인간화 항-CD112R mAb 변이체 H11K2(서열번호 39에 기재된 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 41에 기재된 LC 가변 영역 서열을 가짐)의 효과를 나타낸다. CD112R 효과의 차단은 표시된 바와 같이 PVR(NTX-1088) 및 PD-1(Keytruda)과 같은 추가 ICI의 차단으로 측정했다. CD69(도 9A) 또는 CD137(4-1BB)(도 9B)의 표면 발현(MFI)은 Ab가 첨가되지 않았을 때에 관찰된 것에 대해 정규화했다(Y 축). 결과는 인간 암 세포주 A549(폐 선암)에 대해 제시되어 있다. 모든 변화는 통계적으로 유의하다(p<0.05).
도 10A-10B는 표적 세포가 넥틴-2를 발현하지만 PVR을 발현하지 않을 때에 NK 세포 활성화에 대한 CD112R 차단의 효과, 및 표적 세포가 넥틴-2 및 PVR을 공-발현할 때에 NK 활성화에 대한 항-CD112R과 항-PVR(NTX-1088) 조합의 효과를 나타낸다. NK 세포 활성화는 CD137의 표면 발현에 의해 측정되었고, 이는 항체를 처리하지 않은 경우(Ab 비함유. Y 축)에 대한 배율 유도로서 표현된다. 결과는, PVR 음성인 인간 암 세포주 JEG-3(융모암)(도 10A), 및 인간 PVR을 발현하는 JEG-3-hPVR(도 10B)에 대해 제시되어 있다. hIgG1 Fc를 갖는 항-CD112R Ab는 항-PVR Ab NTX-1088 또는 항-TIGIT Ab-티라골루맙(KEGG DRUG 등록 D11482)과 비교했다. 추가로, CD112R과 2개 mAb의 조합을 시험했다. * p < 0.005, ** p < 0.001, *** p < 0.0001, 양측 스튜던트 t-검정. 5명의 NK 세포 공여자 중 2명의 대표적 데이터가 제시되어 있다. Tira = 티라골루맙.
도 11A-11C는 표적 세포가 넥틴-2 및 PVR을 모두 발현할 때에 NK 세포 활성화에 대한 CD112R 및 기타 ICI 차단 조합의 효과를 입증한다. 결과는 인간 비소세포 폐암 세포주 H1299(도 11A), 폐 선암 A549 세포주(도 11B), 유방 선암 세포주 MDA-MB-231(도 11C)에 대해 제시되어 있다. 표시된 바와 같이, 항-CD112R mAb 활성은 단독으로 또는 다른 ICI 항체와 조합하여 평가되었다. * p < 0.005, ** p < 0.001, *** p < 0.0001, 양측 스튜던트 t-검정. NK 세포 공여자 4명 중 2명의 대표적 데이터가 제시되어 있다. Tira = 티라골루맙.
도 12는 마우스 모델에서 종양 성장에 대한 생체내 항-CD112R mAb 치료의 효과를 나타낸다. A549 세포를 NSG-HLA-A2/HHD 마우스에 대해 1:5 E:T 비율로 신선한 인간 PBMC와 피하 공-이식했다. 치료는 이식 후 3일차에 개시되었다. 마우스는 대조군 IgG1, 또는 항-CD112R mAb, 또는 항 PD-1 mAb(펨브롤리주맙) 중 어느 하나로 매주 1회 치료하고, 모두 10mg/kg으로 합계 5회 용량으로 치료했다. p=0.001, 쌍방향 ANOVA.
본 발명은 인간 단백질 CD112R에 특이적인 키메라 및 인간화 mAb 및 이의 단편을 포함하는 효과적 항체를 제공한다. 본 발명은 또한 치료제로서 항체의 생산 및 용도를 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 발명은 넥틴-2를 과발현하는 암 세포에 대한 면역 활성의 효율적 회복을 위한, 및 단독 치료제로서 또는 다른 치료, 예를 들면, 추가의 면역 체크포인트 억제제와 조합하여 암의 치료를 위한 CD112R에 특이적인 항체를 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 바이러스 감염의 치료에 사용하기 위한 것이다.
본 발명은 또한 인간 CD112R에 특이적인 인간화 항체를 제공한다. 유리하게는, 본 발명의 항체는 인간화되어 있고, 따라서 항체에 대한 유해한 면역 반응의 위험을 회피할 수 있고, 따라서 인간에서의 생체내 사용에 안전하다.
하기의 설명에서, 다양한 실시형태들에 대한 완전한 이해를 제공하기 위해 특정의 특이적 상세가 기재되어 있다. 그러나, 당업자는 제공된 실시형태들이 이러한 상세 없이도 실시될 수 있음을 이해할 것이다. 문맥에서 달리 요구하지 않는 한, 본 명세서 및 후속하는 청구범위 전체에서, "포함하다"라는 단어 및 "포함한다" 및 "포함하는"과 같은 이의 변형은 개방적이고 포괄적인 의미, 즉 "포함하지만 이들로 한정되지 않는"으로 해석되어야 한다. 본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 바와 같이, 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는, 내용이 명확하게 달리 지시하지 않는 한, 복수의 지시 대상을 포함한다. 또한, "또는"이라는 용어는, 내용이 명확하게 달리 지시하지 않는 한, 일반적으로 "및/또는"을 포함하는 의미로 사용된다는 것에 유의해야 한다. 추가로, 본 명세서에 제공된 제목은 편의를 위한 것이며, 청구된 실시형태의 범위 또는 의미를 해석하지 않는다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "약"이라는 용어는 명시된 양의 10% 이하로 근접하는 양을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 "CD112R" 또는 "PVRIG"라는 용어는 C7orf15라고도 공지된 넥틴-2의 인간 세포 표면 수용체를 지칭한다. PVRIG는 폴리오바이러스 수용체-관련 면역글로불린 도메인-함유 단백질의 약자이다. 이 단백질은, 넥틴-2와 상호작용한 후, T-세포 증식을 억제한다. 본 발명에 따른 단백질을 코딩하는 예시적 CD112R 단백질 또는 유전자는 SwissPort, UniPort 및 GenBank 기호 또는 수탁 번호에 기재되어 있다: 유전자 ID: 79037, Q6DKI7, D6W5U9, Q9BVK3.
본 발명에 따른 항체 또는 이의 단편은 CD112R의 에피토프에 결합한다. 구체적으로, 항체는 CD112R 단백질의 엑토도메인(세포외 부분) 내의 에피토프에 결합한다.
본 발명의 모체 mAb를 생성하기 위해, 인간 CD112R의 세포외 부분과 IgG 단백질의 뮤린 Fc 영역을 담체로서 포함하는 재조합 융합 단백질을 생산하고 정제했다. 수득된 융합 단백질 hCD112R-Fc를 면역원으로서 사용했다. BALB/c 마우스에 완전 프로인트 보조제 중의 면역원 50㎍을 주사하고, 2주 후 불완전 프로인트 보조제를 사용하여 부스트 주사를 제공했다. 2주 후, ELISA를 사용하여 마우스 혈청을 항체 역가에 대해 스크리닝했다. 최고의 반응자는 PBS 중의 면역원으로 추가 부스팅했다. 3일 후, 비장 세포를 수집하고, 적혈구를 용해한 후, SP2/0 골수종 세포와 융합시켰다. 세포를 하이브리도마 선택을 위해 하이포크산틴, 아미노프테린 및 티미딘을 함유한 20% RPMI 1640 배지에 파종하고, ELISA를 사용하여 mAb 분비에 대해 스크리닝했다. 양성 세포주, 즉 hCD112R-Fc를 인식하는 mAb를 분비하는 세포를 추가로 선택하여, 하기 차별적 특성을 갖는 생성물을 개발했다: a) 관련 면역 세포 수용체의 다른 리간드(예: DNAM1 및 TIGIT)에 대한 교차 반응성의 결여; b) 살아있는 세포의 표면에서 발현되는 천연 성숙 인간 CD112R 분자에 대한 강력한 결합.
선택된 Ab 클론의 인간화를 위해, IGHV1-69*10 생식세포 프레임워크가 중쇄용으로 선택되었고, IGKV4-1*01이 경쇄 프레임워크용으로 선택되었다. 둘 다는 인간 생식세포에서 매우 잘 표현되고, 이는 수득되는 인간화 변이체의 높은 발현 역가에 의해 추가로 서포트된다.
CD112R은 본 명세서에 기재된 항체에 대한 항원으로서 기능한다. 본 명세서에서 사용되는 "항원"이라는 용어는 항체 형성을 유도할 수 있고 항체에 특이적으로 결합할 수 있는 분자 또는 분자의 일부를 지칭한다. 항원은 하나 이상의 에피토프를 가질 수 있다. 상기 언급된 특이적 결합은 항원이 매우 선택적 방법으로 이의 상응하는 항체와 반응하고 다른 항원에 의해 유발될 수 있는 복수의 다른 항체와는 반응하지 않는 것을 나타내기 위한 것이다. 본 발명의 일부 실시형태에 따른 항원은 CD112R 단백질 또는 이의 면역원성 부분이다.
결합 친화성은 표면 플라즈몬 공명(SPR)과 같은 공지된 방법을 사용하여 정량화할 수 있고(문헌[참조: Scarano S, Mascini M, Turner AP, Minunni M. Surface plasmon resonance imaging for affinity-based biosensors. Biosens Bioelectron. 2010, 25: 957-66]에 기재됨), 예를 들면, 보다 낮은 Kd가 더 높은 친화성을 반영하도록 해리 상수 Kd를 사용하여 계산할 수 있다.
항체 또는 면역글로불린은 디설파이드 결합에 의해 함께 연결된 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하고, 각 경쇄는 "Y" 형상 구성의 디설파이드 결합에 의해 각각의 중쇄에 연결된다. 항체의 단백질 소화는 Fv(단편 가변) 및 Fc(단편 결정화가능) 도메인을 생성한다. 항원 결합 도메인 Fab에는 폴리펩티드 서열이 변화하는 영역이 포함된다. F(ab')2라는 용어는 디설파이드 결합에 의해 함께 연결된 2개의 Fab 암(arm)을 나타낸다. 각 중쇄는 한쪽 말단에 가변 도메인(VH)을 갖고, 이어서 다수의 불변 도메인(CH)이 있다. 각 경쇄는 한쪽 말단에 가변 도메인(VL)을 갖고 다른 쪽 말단에 불변 도메인(CL)이 있으며, 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 정렬되고 경쇄 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)과 정렬된다. 경쇄 및 중쇄 각 쌍의 가변 도메인은 항원 결합 부위를 형성한다. 경쇄 및 중쇄의 도메인은 동일한 일반 구조를 갖고, 각 도메인은 4개의 프레임워크 영역을 포함하고, 이의 서열은 상대적으로 보존되어 있고, 상보성 결정 영역(CDR 1-3)으로 공지된 3개의 초가변 도메인에 의해 결합된다. 이러한 도메인은 항원-결합 부위의 특이성 및 친화성에 기여한다.
중쇄의 아이소타입(감마, 알파, 델타, 엡실론 또는 뮤)는 면역글로불린 클래스(각각 IgG, IgA, IgD, IgE 또는 IgM)를 결정한다. 경쇄는 2개 아이소타입(카파, κ 또는 람다, λ) 중 하나이다. 양쪽 아이소타입은 모든 항체 클래스에서 발견된다.
"항체"라는 용어는 가장 넓은 의미로 사용되며, 모노클로날 항체(전장 또는 무손상 모노클로날 항체를 포함), 폴리클로날 항체, 다가 항체, 키메라 항체, 인간화 항체 및 원하는 생물학적 활성, 즉 인간 CD112R에 대한 결합을 나타내기에 충분한 길이의 항체 단편을 포함한다.
본 발명에 따른 항체 또는 항체들은 폴리클로날 항체 또는 모노클로날 항체(mAb)와 같은 무손상 항체뿐만 아니라 Fab 또는 F(ab')2 단편과 같은 이들의 단백질분해 단편을 포함한다. 일본쇄 항체(예: scFv)도 본 발명의 범위에 속한다.
항체 단편
"항체 단편"은 일반적으로 무손상 항체의 항원 결합 부위를 포함하여 항원과 결합할 수 있는 능력을 유지하는 무손상 항체의 일부만을 포함한다. 본 정의에 포함되는 항체 단편의 예는 다음을 포함한다: (i) VL, CL, VH 및 CH1 도메인을 갖는 Fab 단편; (ii) CH1 도메인의 C-말단에 하나 이상의 시스테인 잔기를 갖는 Fab 단편인 Fab' 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인을 갖는 Fd 단편; (iv) VH 및 CH1 도메인과 CH1 도메인의 C-말단에 하나 이상의 시스테인 잔기를 갖는 Fd' 단편; (v) 항체의 단일 암의 VL 및 VH 도메인을 갖는 Fv 단편; (vi) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편[참조: Ward et al., Nature 1989, 341, 544-546]; (vii) 단리된 CDR 영역; (viii) 힌지 영역에서 디설파이드 브릿지에 의해 연결된 2개의 Fab' 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (ix) 일본쇄 항체 분자(예: 일본쇄 Fv; scFv)[참조: Bird et al., Science 1988, 242, 423-426; and Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 1988, 85,5879-5883]; (x) 동일한 폴리펩티드 쇄에서 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하는 2개의 항원 결합 부위를 갖는 "디아바디"(예를 들면, EP 404,097; WO 93/11161; 및 문헌[참조: Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, 90, 6444-6448]); (xi) 상보적 경쇄 폴리펩티드와 함께 한 쌍의 항원 결합 영역을 형성하는 한 쌍의 탠덤 Fd 세그먼트(VH-CH1-VH-CH1)를 포함하는 "선형 항체"[참조: Zapata et al. Protein Eng., 1995, 8, 1057-1062; and U.S. Pat. No. 5,641,870].
항체 단편을 생산하기 위한 다양한 기술이 개발되었다. 전통적으로, 이러한 단편은 무손상 항체의 단백질분해 소화에 의해 유도되었다[참조: 예를 들면, Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992) and Brennan et al., Science, 229:81 (1985)]. 그러나, 이러한 단편은 이제 재조합 숙주 세포에 의해 직접 생산할 수 있다. 예를 들면, 항체 파지 라이브러리로부터 항체 단편을 단리할 수 있다. 또는, Fab'-SH 단편은 이. 콜라이(E. coli)로부터 직접 회수하고, 화학적으로 커플링시켜 F(ab')2 단편을 형성할 수 있다[참조: Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992)]. 또 다른 접근법에 따르면, F(ab')2 단편은 재조합 숙주 세포 배양으로부터 직접 단리할 수 있다. 항체 단편의 생산을 위한 다른 기술들은 숙련된 당업자에게 명백할 것이다. 다른 실시형태에서, 선택되는 항체는 일본쇄 Fv 단편(scFv)이다.
일본쇄 항체는, 항원 결합 능력을 갖고 면역글로불린 경쇄 및 중쇄의 가변 영역(예: 연결된 VH-VL 또는 일본쇄 Fv(scFv))과 상동성 또는 유사한 아미노산 서열을 포함하는 일본쇄 복합 폴리펩티드일 수 있다. 일본쇄 항체의 생산 기술(미국 특허 제4,946,778호)을 적용하여 CD112R에 대한 일본쇄 항체를 생산할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 "모노클로날 항체"(mAb)라는 용어는 실질적으로 균일한 항체의 모집단으로부터 수득된 항체를 지칭하고, 즉 모집단을 구성하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 모노클로날 항체는 고도로 특이적이고, 단일 항원에 대해 지시되어 있다. 추가로, 통상 상이한 결정인자(에피토프)에 대해 지시된 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와 대조적으로, 각 모노클로날 항체는 항원의 단일 결정인자에 대해 지시되어 있다. "모노클로날"이라는 수식어는 임의의 특정 방법으로 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되어서는 안 된다. mAb는 당업자에게 공지된 방법으로 수득될 수 있다. 예를 들면, 본 발명에 따라 사용되는 모노클로날 항체는 콜러[참조: Kohler et al., Nature 1975, 256, 495]에 의해 최초로 기술된 하이브리도마 방법에 의해 제조되거나, 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다(예를 들면, 미국 특허 제4,816,567호 참조). 모노클로날 항체는 또한, 예를 들면, 문헌[참조: Clackson et al., Nature 1991, 352, 624-628 or Marks et al., J. Mol. Biol., 1991, 222:581-597]에 기재된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리할 수 있다.
본 발명의 mAb는 IgG, IgM, IgE, IgA 및 IgD를 포함하는 임의의 면역글로불린 클래스일 수 있다.
본 발명의 항체의 초가변 영역과 특이적으로 면역반응하는 항-이디오타입 항체도 이해되어 있다.
한 가지 측면에 따르면, 본 발명은 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 6개 CDR 서열의 세트를 포함하는 항체 또는 이의 항체 단편을 제공한다:
i. 서열번호 28을 포함하는 중쇄 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역(CDR) 및 서열번호 26을 포함하는 경쇄 가변 영역의 3개 CDR, 또는 상기 항체 또는 단편 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체; 및
ii. 서열번호 21을 포함하는 중쇄 가변 영역의 3개 CDR 및 서열번호 23을 포함하는 경쇄 가변 영역의 3개 CDR, 또는 상기 항체 또는 단편 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이들의 유사체 또는 유도체.
서열 동일성은 2개의 상이한 서열 사이에서 정확히 일치하는 아미노산 또는 뉴클레오티드의 비율이다. 서열 유사성은 아미노산의 보존적 치환이 동일한 아미노산으로 결정되도록 한다. 본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오티드 서열은 인간 세포와 같은 특정 세포에서의 발현을 위해 코돈-최적화될 수 있다. 코돈 최적화는 항체 쇄의 코딩된 아미노산 서열을 변화시키지 않지만, 예를 들면, 세포에서의 발현을 증가시킬 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명에 따른 항체 분자의 보존적 아미노산 변이체를 제공한다. 본 발명에 따른 변이체는 또한 코딩된 단백질의 전체 분자 구조를 보존하는 것으로 제조될 수 있다. 개시된 단백질 생성물을 포함하는 개별 아미노산의 특성을 고려할 때, 일부 합리적 치환은 당업자에 의해 인식될 것이다. 아미노산 치환, 즉 "보존적 치환"은, 예를 들면, 극성, 전하, 용해도, 소수성, 친수성 및/또는 관련된 잔기의 양친매성 특성의 유사성에 기초하여 이루어질 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 "항체 유사체"라는 용어는 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해 또 다른 항체로부터 유래된 항체를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 "항체 변이체"라는 용어는 본 발명의 항체를 포함하는 임의의 분자를 지칭한다. 예를 들면, 항체 또는 이의 항원-결합-단편이 또 다른 화학적 물질과 연결된 융합 단백질은 항체 변이체로 간주된다.
항체 서열의 유사체 및 변이체도 본 출원의 범위 내에 있다. 이들에는 서열 내의 아미노산의 보존적 및 비보존적 치환, 삽입 및 결실이 포함되지만 이들로 한정되지 않는다. 이러한 변형 및 수득되는 항체 유사체 또는 변이체는, 인간 CD112R에 대한 항체의 결합을 부여하거나 심지어 개선하는 한, 본 발명의 범위 내에 있다.
당업자에게 공지된 아미노산의 보존적 치환은 본 발명의 범위 내에 있다. 보존적 아미노산 치환은 한 아미노산을 동일한 유형의 작용기 또는 측쇄(예: 지방족, 방향족, 양전하, 음전하)를 갖는 또 다른 아미노산으로 치환하는 것을 포함한다. 이러한 치환은 경구 생체이용률, 침투력, 특정 세포 모집단에 대한 표적화, 면역원성 등을 증강시킬 수 있다. 당업자는 코딩된 서열에서 단일 아미노산 또는 작은 비율의 아미노산을 변경, 부가 또는 결실하는 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질 서열에 대한 개개 치환, 결실 또는 부가가, 이러한 변경이 화학적으로 유사한 아미노산으로 아미노산의 치환을 초래하는 "보존적 변형된 변이체"인 것을 인지할 것이다. 기능적으로 유사한 아미노산을 제공하는 보존적 치환 표는 당업자에게 널리 공지되어 있다. 예를 들면, 당해 기술분야에 공지된 하나의 표에 따르면, 하기 6개 그룹은 각각 서로에 대한 보존적 치환인 아미노산을 포함한다:
1) 알라닌(A), 세린(S), 트레오닌(T);
2) 아스파르트산(D), 글루탐산(E);
3) 아스파라긴(N), 글루타민(Q);
4) 아르기닌(R), 라이신(K);
5) 이소류신(I), 류신(L), 메티오닌(M), 발린(V); 및
6) 페닐알라닌(F), 티로신(Y), 트립토판(W).
변이체 쇄 서열은 특정 프라이머를 사용하는 서열분석 방법에 의해 결정된다는 것을 강조해야 한다. 동일한 서열에 대해 사용된 상이한 서열분석 방법은 기술적 문제, 및 특히 서열 말단의 상이한 프라이머로 인해 약간 상이한 서열을 초래할 수 있다.
소정 중쇄 또는 경쇄 가변 서열로부터의 CDR 식별 또는 결정은 통상 당해 기술분야에 공지된 소수의 방법 중 하나를 사용하여 수행된다. 예를 들면, 이러한 결정은 카바트[참조: Wu T.T and Kabat E.A., J Exp Med, 1970; 132:211-50], 초티아 IMGT[참조: Lefranc M-P, et al., Dev Comp Immunol, 2003, 27:55-77]에 따라 수행된다.
"서열을 갖는 CDR" 또는 이와 유사한 용어가 사용되는 경우, 이는 CDR이 지정된 서열을 포함하는 옵션 및 또한 CDR이 지정된 서열로 이루어진 옵션을 포함한다.
항체의 항원 특이성은 항원-결합 부위를 함께 형성하는 경쇄 및 중쇄 둘 다의 고유한 CDR 서열, 즉 초가변 영역(HVR)을 기반으로 한다.
"상보성 결정 영역" 및 "CDR"이라는 용어는 "초가변 영역" 또는 "HVR"과 동의어이고, 항원 특이성 및/또는 결합 친화성을 부여하는 항체 가변 영역 내의 비-연속적 아미노산 서열을 지칭하는 것으로 당해 기술분야에 공지되어 있다. 일반적으로, 각 중쇄 가변 영역에는 3개의 CDR(CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3)이 있고, 각 경쇄 가변 영역에는 3개의 CDR(CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3)이 있다. "프레임워크 영역" 및 "FR"은 중쇄 및 경쇄의 가변 영역의 비-CDR 부분을 지칭하는 것으로 당해 기술분야에 공지되어 있다. 일반적으로, 각 전장 중쇄 가변 영역에는 4개의 FR(FR-H1, FR-H2, FR-H3 및 FR-H4)이 있고, 각 전장 경쇄 가변 영역에는 4개의 FR(FR-L1, FR-L2, FR-L3 및 FR-L4)이 있다. 소정 CDR 또는 FR의 정확한 아미노산 서열 경계는 문헌[참조: Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest," 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD ("Kabat" numbering scheme), Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948 ("Chothia" numbering scheme); MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), "Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography," J. Mol. Biol. 262, 732-745." ("Contact" numbering scheme); Lefranc MP et al., "IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains," Dev Comp Immunol, 2003 Jan;27(1):55-77 ("IMGT" numbering scheme); Honegger A and Pluckthun A, "Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool," J Mol Biol, 2001 Jun 8;309(3):657-70, ("Aho" numbering scheme); and Whitelegg NR and Rees AR, "WAM: an improved algorithm for modelling antibodies on the WEB," Protein Eng. 2000 Dec;13(12):819-24 ("AbM" numbering scheme)]에 기재된 것들을 포함하여 다수의 임의의 공지된 방식을 사용하여 용이하게 결정될 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체의 CDR은 카바트, 초티아, IMGT, Aho, AbM 또는 이들의 조합으로부터 선택된 방법에 의해 정의될 수 있다.
소정 CDR 또는 FR의 경계는 식별에 사용되는 방식에 따라 상이할 수 있다. 예를 들면, 카바트 방식은 구조적 정렬을 기반으로 하고, 초티아 방식은 구조적 정보를 기반으로 한다. 카바트 방식과 초티아 방식 모두의 넘버링은 가장 일반적 항체 영역 서열 길이를 기반으로 하고, 삽입은 삽입 문자(예: "30a")로 표시되고, 일부 항체에서 결실이 표시된다. 2개 방식은 특정 삽입과 결실("인델")을 상이한 위치에 배치하여 상이한 넘버링을 초래한다. 접촉 방식은 복잡한 결정 구조의 분석을 기반으로 하며, 다수의 측면에서 초티아 넘버링 방식과 유사하다.
예를 들면, 항체 친화성을 개선하기 위해, CDR에 변경(예: 치환)이 이루어질 수 있다. 이러한 변경은 체세포 성숙 동안 높은 돌연변이율을 갖는 CDR 코딩 코돈에서 이루어질 수 있고[참조: 예를 들면, Chowdhury, Methods Mol. 207:179-196 (2008)], 수득되는 변이체는 결합 친화성에 대해 시험할 수 있다. 친화성 성숙(예: 에러가 발생하기 쉬운 PCR, 쇄 셔플링, CDR의 랜덤화 또는 올리고뉴클레오티드-지시된 돌연변이유발)을 사용하여 항체 친화성을 개선할 수 있다[참조: 예를 들면, Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (2001)]. 항원 결합에 관여하는 CDR 잔기는, 예를 들면, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 또는 모델링을 사용하여 특이적으로 동정할 수 있다[참조: 예를 들면, Cunningham and Wells Science, 244:1081-1085 (1989)]. 특히, CDR-H3 및 CDR-L3가 종종 표적화된다. 대안적으로 또는 추가로, 항원-항체 복합체의 결정 구조를 사용하여 항체와 항원 사이의 접촉점을 동정할 수 있다. 이러한 접촉 잔기 및 인접 잔기는 치환 후보로서 표적화되거나 제거될 수 있다. 변이체를 스크리닝하여, 목적하는 특성을 포함하고 있는지 여부를 결정할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 "항체의 항원 결합 부분을 갖는 분자" 및 "항원-결합-단편"이라는 용어는 임의의 아이소타입 및 임의의 동물 세포주 또는 미생물에 의해 생성된 무손상 면역글로불린 분자뿐만 아니라, 이의 항원-결합 반응성 분획, 예를 들면, 비제한적으로 Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, 이의 중쇄 및/또는 경쇄의 가변 부분, Fab 미니-항체[참조: 예를 들면, WO 제93/15210호, 미국 특허 출원 제08/256,790호, WO 제96/13583호, 미국 특허 출원 제08/817,788호, WO 제96/37621호, 미국 특허 출원 제08/999,554호], 및 이러한 반응 분획을 포함하는 일본쇄 항체, 게다가 이러한 항체 반응 분획이 물리적으로 삽입된 다른 유형의 분자를 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 분자는 효소 절단, 펩티드 합성 또는 재조합 기술을 포함하지만 이들로 한정되지 않는 공지된 기술에 의해 제공될 수 있다.
본 명세서에서의 항체는, 이들이 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 특히 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래하거나 특정 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성이고, 나머지 쇄는 또 다른 종으로부터 유래하거나 또 다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 "키메라" 항체 및 이러한 항체의 단편을 포함한다(미국 특허 제4,816,567호; 및 문헌[참조: Morrison et al. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855 (1984)]). 또한, 상보성 결정 영역(CDR) 그래프팅은 친화성 또는 특이성을 포함한 항체 분자의 특정 특성을 변경하기 위해 수행될 수 있다. 인간 항체(수용체 항체라고 함)로부터 실질적으로 가변 영역 프레임워크 잔기 및 마우스 항체(공여체 항체라고 함)로부터 실질적으로 CDR을 갖는 항체는 인간화 항체라고도 한다. 키메라 항체는 주로 적용시 면역원성을 감소시키고 생산 수율을 증가시키기 위해 사용되며, 예를 들면, 뮤린 mAb는 인간/마우스 키메라 mAb가 사용되도록 하이브리도마에서 높은 수율을 갖지만 인간에서 높은 면역원성을 갖는다. 키메라 항체 및 이들의 생산 방법은 당해 기술분야에 공지되어 있다(예: PCT 특허 출원 WO 제86/01533호, WO 제90/07861호, WO 제92/22653호 및 미국 특허 제5,693,762호, 제5,693,761호, 제5,585,089호, 제5,530,101호 및 제5,225,539호).
일부 실시형태에 따르면, 항체는 모노클로날 항체이다.
일부 특정 실시형태에 따르면, 모노클로날 항체는 키메라 모노클로날 항체이다.
일부 실시형태에 따르면, 키메라 항체는 인간-유래 불변 영역을 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 키메라 항체의 인간 불변 영역은 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3 및 인간 IgG4로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 실시형태에 따르면, 키메라 항체의 인간 불변 영역은 인간 IgG1으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
특정 실시형태에 따르면, 하기를 포함하는, 인간 CD112R을 인식하는 키메라 모노클로날 항체가 제공된다:
i. 중쇄 CDR1 서열이 서열번호 1 또는 서열번호 7이고; 중쇄 CDR2 서열이 서열번호 2 또는 서열번호 8이고; 중쇄 CDR3 서열이 서열번호 3이고; 경쇄 CDR1 서열이 서열번호 4이고; 경쇄 CDR2 서열이 서열번호 5이고; 경쇄 CDR3 서열이 서열번호 6인 6개 CDR의 세트 또는
ii. 중쇄 CDR1 서열이 서열번호 9 또는 서열번호 7이고; 중쇄 CDR2 서열이 서열번호 10 또는 서열번호 12이고; 중쇄 CDR3 서열이 서열번호 3이고; 경쇄 CDR1 서열이 서열번호 11이고; 경쇄 CDR2 서열이 서열번호 5이고; 경쇄 CDR3 서열이 서열번호 6인 6개 CDR의 세트.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 공지되고 이용가능한 추가의 비단백질성 모이어티를 포함하도록 추가로 변형시킬 수 있다. 항체의 유도체화에 적합한 모이어티는 수용성 중합체를 포함하지만 이들로 한정되지 않는다. 수용성 중합체의 비제한적 예로는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산(호모폴리머 또는 랜덤 공중합체), 덱스트란 또는 폴리(n 비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜 호모폴리머, 폴리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올(예: 글리세롤), 폴리비닐 알코올 및 이들의 혼합물이 포함되지만 이들로 한정되지 않는다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드는 물에서의 이의 안정성으로 인해 제조에 이점을 가질 수 있다. 중합체는 임의의 분자량을 가질 수 있고, 분지형 또는 비분지형일 수 있다. 항체에 부착되는 중합체의 수는 상이할 수 있으며, 2개 이상의 중합체가 부착되는 경우, 동일하거나 상이한 분자일 수 있다.
본 명세서에 기재된 항체는 핵산에 의해 코딩될 수 있다. 핵산은 2개 이상의 뉴클레오티드 염기를 포함하는 폴리뉴클레오티드의 일종이다. 특정 실시형태에서, 핵산은 폴리뉴클레오티드를 코딩하는 폴리펩티드를 세포 내로 전달하기 위해 사용될 수 있는 벡터의 성분이다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "벡터"라는 용어는 그것이 연결된 또 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 벡터의 한 가지 유형은 게놈 통합 벡터 또는 "통합 벡터"이고, 이는 숙주 세포의 염색체 DNA에 통합될 수 있다. 또 다른 유형의 벡터는 염색체외 복제가 가능한 핵산과 같은 "에피솜" 벡터이다. 작동적으로 연결된 유전자의 발현을 지시할 수 있는 벡터는 본 명세서에서 "발현 벡터"라고 한다. 적합한 벡터는 플라스미드, 박테리아 인공 염색체, 효모 인공 염색체, 바이러스 벡터 등을 포함한다. 발현 벡터에서, 프로모터, 인핸서, 전사의 조절에 사용하기 위한 폴리아데닐화 신호와 같은 조절 요소는 포유동물, 미생물, 바이러스 또는 곤충 유전자로부터 유래할 수 있다. 통상, 복제 기원에 의해 부여되는 숙주에서의 복제 능력 및 형질전환체의 인식을 용이하게 하는 선택 유전자가 추가로 도입될 수 있다. 렌티바이러스, 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스 등과 같은 바이러스로부터 유래한 벡터가 사용될 수 있다. 플라스미드 벡터는 염색체 위치에 통합하기 위해 선형화할 수 있다. 벡터는 정의된 위치 또는 게놈의 제한된 부위의 세트 내로 부위-특이적 통합을 지시하는 서열을 포함할 수 있다(예: AttP-AttB 재조합). 추가로, 벡터는 전위 요소로부터 유래된 서열을 포함할 수 있다.
본 명세서에 기재된 항체를 코딩하는 핵산은 감염, 형질감염, 형질전환 또는 달리는 핵산에 대해 적합한 세포 도입유전자로 되도록 사용될 수 있고, 따라서 상업적 또는 치료적 용도의 항체 생산을 가능하게 할 수 있다. 대규모 세포 배양으로부터 항체를 생산하기 위한 표준 세포주 및 방법은 당해 기술분야에 공지되어 있다. 특정 실시형태에서, 세포는 진핵 세포이다. 특정 실시형태에서, 진핵 세포는 포유동물 세포이다. 특정 실시형태에서, 포유동물 세포는 항체 생산에 유용한 세포주이고, 중국 햄스터 난소 세포(CHO) 세포, NS0 뮤린 골수종 세포, 또는 PER.C6® 세포이다. 특정 실시형태에서, 항체를 코딩하는 핵산은 항체 생산에 유용한 세포의 게놈 유전자좌에 통합된다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 것은 상기 항체의 생산 및 분비를 가능하게 하기에 충분한 시험관내 조건하에서 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 세포를 배양하는 것을 포함하는 항체의 제조 방법이다.
또한, 본 명세서에 기재된 것은 본 발명의 CD112R에 특이적인 mAb 및 단편들을 제조하는 방법이다. 이러한 방법은 항체의 발현 및 분비를 가능하게 하기에 충분한 조건하에서 세포 배양 배지에서 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 세포 또는 세포주를 인큐베이팅하고, 추가로 세포 배양 배지로부터 항체를 수확하는 단계를 포함한다. 수확은 살아있는 세포, 세포 파편, 비-항체 단백질 또는 폴리펩티드, 원하지 않는 염, 완충액 및 배지 성분을 제거하기 위한 하나 이상의 정제 단계를 추가로 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 추가 정제 단계(들)는 원심분리, 초원심분리, 단백질 A, 단백질 G, 단백질 A/G 또는 단백질 L 정제 및/또는 이온 교환 크로마토그래피를 포함한다.
한 가지 측면에 따르면, 본 발명은 인간 CD112R에 특이적으로 결합하는 적어도 항원 결합 부분을 포함하는 mAb 또는 이의 단편을 제공하고, 상기 항체 또는 이의 단편은 인간 CD112R에 대해 적어도 0.5×10-9 M의 친화성을 갖는다.
특정 실시형태에서, 인간 CD112R에 결합하기 위한 인간화 mAb 또는 이의 항원 결합 단편의 EC50은 약 0.5nM, 0.1nM, 0.05nM 또는 0.01nM 미만이다.
절반 최대 유효 농도(EC50)는 지정된 노출 시간 후의 기준선과 최대치 사이의 중간 반응을 유도하는 항체의 농도를 지칭한다.
일부 실시형태에 따르면, mAb 또는 mAb 단편은 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 6개 CDR 서열의 세트를 포함한다:
i. 서열번호 28을 포함하는 중쇄 가변 영역의 3개 상보성 결정 영역(CDR) 및 서열번호 26을 포함하는 경쇄 가변 영역의 3개 CDR, 또는 상기 항체 또는 단편 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체; 및
ii. 서열번호 21을 포함하는 중쇄 가변 영역의 3개 CDR 및 서열번호 23을 포함하는 경쇄 가변 영역의 3개 CDR, 또는 상기 항체 또는 단편 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체.
일부 특정 실시형태에 따르면, mAb 또는 단편은 아미노산 서열 SY를 포함하는 중쇄 CDR1 서열, 서열 YPGSYIP(서열번호 2)를 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 GYFDV(서열번호 3)을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 KSSQSLLXSGNQKNYLA(서열번호 4)(여기서, X는 N 또는 S를 나타낸다)를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 GASTRES(서열번호 5)를 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 QNDHSYPYT(서열번호 6)를 포함하는 경쇄 CDR3, 또는 초가변 영역(HVR) 서열에서 5% 이하의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 포함하는 이들의 유사체를 포함한다.
일부 특정 실시형태에 따르면, mAb 또는 단편은 서열 GYX1FX2SY(서열번호 1)(여기서, X1은 N, D, A, Q, S 또는 T를 나타내고; X2는 T 또는 A이다) 또는 SYWIN (서열번호 7)로 이루어진 중쇄 CDR1, 서열 YPGSYIP(서열번호 2)로 이루어진 중쇄 CDR2, 서열 GYFDV(서열번호 3)로 이루어진 중쇄 CDR3, 서열 KSSQSLLXSGNQKNYLA(서열번호 4)(여기서, X는 N 또는 S를 나타낸다)로 이루어진 경쇄 CDR1, 서열 GASTRES(서열번호 5)로 이루어진 경쇄 CDR2, 및 서열 QNDHSYPYT(서열번호 6)로 이루어진 경쇄 CDR3을 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 항체는 인간화 항체이다.
"인간화" 항체는 CDR 아미노산 잔기의 전부 또는 실질적으로 전부가 비-인간 CDR로부터 유래하고 FR 아미노산 잔기의 전부 또는 실질적으로 전부가 인간 FR로부터 유래하는 항체이다. 인간화 항체는 임의로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 비인간 항체의 "인간화 형태"는, 모체 비-인간 항체의 특이성 및 친화성을 유지하면서, 통상 인간에 대한 면역원성을 감소시키기 위해 인간화를 거친 비인간 항체의 변이체를 지칭한다. 일부 실시형태에 따르면, 인간화 항체의 일부 FR 잔기는, 예를 들면, 항체 특이성 또는 친화성을 수복 또는 개선하기 위해, 비인간 항체(예를 들면, CDR 잔기가 유래되는 항체)로부터의 상응하는 잔기로 치환될 수 있다.
"인간 항체"는 인간 또는 인간 세포, 또는 인간 항체 라이브러리를 포함한 인간 항체 레퍼토리 또는 기타 인간 항체-코딩 서열을 이용하는 비인간 공급원에 의해 생산된 항체의 것에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 항체이다. 이 용어에는 비인간 항원-결합 영역을 포함하는 인간화 형태의 비인간 항체, 예컨대, 모든 또는 실질적으로 모든 CDR이 비인간인 것들이 제외된다.
약리학 및 치료 방법
약제 및 의약 제형에서, 활성제는 바람직하게는 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체(들) 및 임의로 임의의 기타 치료 성분과 함께 사용된다. 담체(들)은 제형의 다른 성분과 상용성이 있고 이의 수용자에게 과도하게 유해하지 않다는 의미에서 약제학적으로 허용 가능해야 한다. 활성제는 상기 기재된 바와 같이 원하는 약리 효과를 달성하는 데 효과적인 양으로, 및 원하는 노출을 달성하는 데 적절한 양으로 제공되어야 한다.
통상, 항체의 항원 결합 부분을 포함하거나 펩티드-모방체를 포함하는 또 다른 폴리펩티드를 포함하는 본 발명의 항체 및 이들의 단편 및 접합체는 치료 용도의 멸균 생리식염수 용액에 현탁될 것이다. 약제학적 조성물은 활성 성분(항체의 항원 결합 부분을 포함하는 분자)의 방출을 제어하거나 환자의 시스템에서 이의 존재를 연장하도록 제형화될 수 있다. 다수의 적합한 약물 전달 시스템이 공지되어 있으며, 예를 들면, 이식가능한 약물 방출 시스템, 하이드로겔, 하이드록시메틸셀룰로오스, 마이크로캡슐, 리포좀, 마이크로에멀젼, 마이크로스피어 등이 포함된다. 제어 방출 제제는 본 발명에 따라 분자를 복합체화하거나 흡착하기 위해 중합체를 사용하여 제조할 수 있다. 예를 들면, 생체적합성 중합체는 폴리(에틸렌-코-비닐 아세테이트) 매트릭스 및 스테아르산 이량체와 세바산의 폴리안하이드라이드 공중합체의 매트릭스를 포함한다. 이러한 매트릭스로부터 본 발명에 따른 분자, 즉 항체 또는 항체 단편의 방출 속도는 분자의 분자량, 매트릭스 중의 분자의 양 및 분산 입자의 크기에 의존한다.
본 발명의 약제학적 조성물은 정맥내, 경구, 국소, 비강내, 피하, 근육내, 동맥내, 관절내, 관절강내, 종양내 또는 비경구 투여와 같은 임의의 적절한 수단으로 투여할 수 있다. 통상, 정맥(정맥) 투여는 항체 전달에 사용된다.
한 가지 측면에 따르면, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에게 본 명세서에 기재된 항체 또는 항체 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 치료 유효량으로 투여하는 것을 포함하는 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "대상체", "개인" 또는 "환자"라는 용어는 기재된 조성물 및 방법이 치료에 유용한 적어도 하나의 질환으로 진단받거나, 질환에 걸린 것으로 의심되거나, 발병 위험이 있는 개체를 지칭한다. 일부 실시형태에 따르면, 개체는 포유동물이다. 일부 실시형태에 따르면, 포유동물은 마우스, 랫트, 래빗, 개, 고양이, 말, 소, 양, 돼지, 염소, 라마, 알파카 또는 야크이다. 일부 실시형태에 따르면, 개체는 인간이다.
본 발명에 따른 분자의 치료 유효량은 특히 투여 스케줄, 투여되는 분자의 단위 용량, 분자가 다른 치료제와 병용 투여되는지 여부, 환자의 면역 상태 및 건강, 투여되는 분자의 치료 활성, 혈액 순환에서 이의 지속성 및 치료 의사의 판단에 의존한다는 것은 당업자에게 명백할 것이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "치료 유효량"이라는 용어는 포유동물의 질환 또는 장애의 치료에 효과적인 약물의 양을 지칭한다. 암의 경우에, 약물의 치료 유효량은 암 세포의 수를 감소시키고; 종양의 크기를 감소시키고; 말초 기관으로의 암 세포 침윤을 억제하고(즉, 어느 정도 지연시키고 바람직하게는 중단시키고); 종양 전이를 억제하고(즉, 어느 정도 지연시키고 바람직하게는 중단시키고); 종양 성장을 어느 정도 억제하고/하거나; 장애와 관련된 증상 중 하나 이상을 어느 정도 완화시킬 수 있다. 약물이 기존 암 세포의 성장을 방지하고/하거나 사멸시킬 수 있는 한, 상기 약물은 세포 증식억제성 및/또는 세포독성일 수 있다. 암 치료의 경우, 생체내 효능은, 예를 들면, 생존 기간, 질환 진행까지의 시간(TTP), 반응율(RR), 반응 기간 및/또는 삶의 질을 평가함으로써 측정할 수 있다.
본 발명에 의한 치료가 가능한 암은 암종(carcinoma), 림프종(lymphoma), 모세포종(blastoma), 육종(sarcoma) 및 백혈병(leukemia) 또는 림프성 악성종양(lymphoid malignancies)을 포함하지만 이들로 한정되지 않는다. 이러한 암의 보다 특정한 예는 편평세포암(squamous cell cancer), 폐암(lung cancer)(소세포 폐암(small-cell lung cancer), 비-소세포 폐암(non-small cell lung cancer), 폐의 선암종(adenocarcinoma), 및 폐의 편평세포암종 포함), 복막의 암, 간세포암(hepatocellular cancer), 위장암 또는 위암(gastric or stomach cancer)(위장암(gastrointestinal cancer) 포함), 췌장암(pancreatic cancer), 교모세포종(glioblastoma), 자궁경부암(cervical cancer), 난소암(ovarian cancer), 간암(liver cancer), 방광암(bladder cancer), 간종양(epatoma), 유방암(breast cancer), 결장암(colon cancer), 결장직장암(colorectal cancer), 자궁내막암 또는 자궁암종(endometrial or uterine carcinoma), 침샘암종(salivary gland carcinoma), 신장암(kidney or renal cancer), 간암(liver cancer), 전립선암(prostate cancer), 음문암(vulval cancer), 갑상선암(thyroid cancer), 간암종(hepatic carcinoma) 및 다양한 유형의 두경부암(head and neck cancer)뿐만 아니라 B-세포 림프종(B-cell lymphoma)(낮은 등급/여포성 비-호지킨 림프종(low grade/follicular non-Hodgkin's lymphoma; NHL); 작은 림프구성(small lymphocytic; SL) NHL; 중간 등급/여포성 NHL; 중간 등급 미만성 NHL; 높은-등급 면역모세포성 NHL; 높은-등급 림프모구성 NHL; 높은-등급의 작은 비-분할 세포(high-grade small non-cleaved cell) NHL; 벌키한 질환(bulky disease) NHL; 외투 세포 림프종(mantle cell lymphoma); AIDS-관련 림프종; 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(Waldenstrom's Macroglobulinemia) 포함); 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia; CLL); 급성 림프모구성 백혈병(acute lymphoblastic leukemia; ALL); 털 세포 백혈병(Hairy cell leukemia); 만성 골수모구성 백혈병(chronic myeloblastic leukemia); 및 이식-후 림프증식성 질환(post-transplant lymphoproliferative disorder; PTLD)뿐만 아니라 모반증(phakomatosis)과 관련된 비정상적 혈관 증식, 부종(edema)(예를 들면, 뇌 종양과 관련된 것), 및 메이그 증후군(Meigs' syndrome)을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다. 바람직하게는, 상기 암은 유방암, 결장직장암, 직장암, 비-소세포 폐암, 비-호지킨 림프종(NHL), 신세포암, 전립선암, 간암, 췌장암, 연조직 육종(soft-tissue sarcoma), 카포시 육종(Kaposi's sarcoma), 유암성 암종(carcinoid carcinoma), 두경부암, 흑색종(melanoma), 난소암(ovarian cancer), 중피종(mesothelioma), 및 다발성 골수종(multiple myeloma)으로 이루어지는 그룹으로부터 선택된다. 본 발명의 치료로 개선가능한 암성 상태는 전이성 암을 포함한다.
활성 성분으로서 본 발명의 분자는 널리 공지된 바와 같이 약제학적으로 허용되고 활성 성분과 상용성이 있는 부형제에 용해, 분산 또는 혼합된다. 적합한 부형제는, 예를 들면, 물, 생리식염수, 인산 완충 생리식염수(PBS), 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등 및 이들의 조합이다. 다른 적합한 담체는 당업자에게 널리 공지되어 있다. 또한, 원하는 경우, 조성물은 습윤제 또는 유화제, pH 완충제와 같은 소량의 보조 물질을 함유할 수 있다.
본 발명에 따른 약제학적 조성물은 항-신생물 조성물과 함께 또는 병용하여 투여될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "조합" 또는 "병용 치료"라는 용어는 조합되는 물품의 동시 투여 또는 조합되는 물품의 연속 투여를 지칭할 수 있다. 본 명세서에 기재된 바와 같이, 조합이 물품의 연속 투여를 지칭하는 경우, 물품은 임의의 일시적 순서로 투여될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 "치료"라는 용어는 치료적 치료와 예방학적 또는 예방적 조치를 모두 지칭한다. 치료가 필요한 경우에는 이미 장애를 앓고 있는 경우뿐만 아니라 장애가 예방되어야 하는 경우도 포함된다.
"암"이라는 용어는 통상 조절되지 않은 세포 성장을 특징으로 하는 포유동물의 생리학적 상태를 지칭하거나 이를 설명한다. 암의 예로는 암종, 림프종, 모세포종, 육종 및 백혈병 등이 포함되지만 이들로 한정되지 않는다. 이러한 암의 특정 예로는 흑색종, 폐암, 갑상선암, 유방암, 결장암, 전립선암, 간암, 방광암, 신장암, 자궁경부암, 췌장암, 백혈병, 림프종, 골수종, 난소암, 자궁암, 육종, 담도암 또는 자궁내막암 등이 포함된다.
일부 실시형태에 따르면, 암 치료 방법은 적어도 하나의 추가 항암제의 투여를 포함하는 치료 섭생의 일부로서 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에 따르면, 항암제는 항대사제, 유사분열 억제제, 탁산, 토포이소머라제 억제제, 토포이소머라제 II 억제제, 아스파라기나제, 알킬화제, 항종양 항생제 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에 따르면, 항대사제는 시타라빈, 플루다라빈, 플루오로우라실, 메르캅토퓨린, 메토트렉세이트, 티오구아닌, 젬시타빈 및 하이드록시우레아로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시형태에 따르면, 유사분열 억제제는 빈크리스틴, 빈블라스틴 및 비노렐빈으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시형태에 따르면, 토포이소머라제 억제제는 토포테칸 및 이리노테칸으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시형태에 따르면, 알킬화제는 부설판, 카무스틴, 로무스틴, 클로람부실, 사이클로포스파미드, 시스플라틴, 카보플라틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 멜팔란, 티오테파, 다카바진 및 프로카바진으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시형태에 따르면, 항종양 항생제는 블레오마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 이다루비신, 미토마이신, 미톡산트론 및 플리카마이신으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시형태에 따르면, 토포이소머라제 II는 에토포시드 및 테니포시드로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
일부 특정 실시형태에 따르면, 추가 항암제는 베바시주맙, 카보플라틴, 사이클로포스파미드, 독소루비신 하이드로클로라이드, 젬시타빈 하이드로클로라이드, 토포테칸 하이드로클로라이드, 티오테파 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
본 발명에 따른 모노클로날 항체는 적어도 하나의 항암제와의 병용 요법의 일부로서 사용될 수 있다. 일부 실시형태에 따르면, 추가 항암제는 면역-조절제, 활성화된 림프구 세포, 키나제 억제제 또는 화학요법제이다.
일부 실시형태에 따르면, 항암제는 작용제 또는 길항제이든지 면역 체크포인트 분자에 대한 항체와 같은 면역-조절제이다.
체크포인트 면역요법 차단은 암 치료의 새로운 장으로 기대되고 있다. 면역 체크포인트 경로는 생리적 조건하에서 자가-내성을 유지하고 면역계에 의한 손상으로부터 조직을 보호하기 위해 함께 기능하는 다양한 공-자극 및 억제 분자로 이루어져 있다. 종양은 면역계를 회피하기 위해 특정 체크포인트 경로를 이용한다. 따라서, 이러한 경로의 억제는 유망한 항암 치료 전략으로 부상하고 있다.
항-세포독성 T 림프구 4(CTLA-4) 항체 이필리무맙(2011년 승인)은 암 환자의 치료에 효과를 나타낸 최초의 면역요법제이다. 이 항체는 T 세포에 대한 항원 제시 동안 억제 신호를 방해한다. 항-프로그램 세포 사멸 1(PD-1) 항체 펨브롤리주맙(2014년 승인)은 T 세포에 의해 발현되는 PD-1 수용체의 부정적 면역 조절 신호전달을 차단한다. 비-소세포 폐암(NSCLC)의 치료를 위해, 2014년에 항-PD-1 제제가 추가로 규제 당국의 승인을 신청했다. 현재, 다수의 기타 면역 체크포인트, 그 중에서, CEACAM1, NKG2A, B7-H3, B7-H4, VISTA, 림프구 활성화 유전자 3(LAG3), CD137, OX40(CD134라고도 함), 킬러 세포 면역글로불린-유사 수용체(KIR)에 대한 활발한 연구가 진행되고 있다.
일부 특정 실시형태에 따르면, 면역 조절제는 CTLA-4를 억제하는 항체, 항-인간 프로그램 세포 사멸 단백질 1(PD-1), PD-L1 및 PD-L2 항체, 활성화된 세포독성 림프구 세포, 림프구 활성화제, CEACAM에 대한 항체, TIGIT에 대한 항체 및 RAF/MEK 경로 억제제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다. 일부 특정 실시형태에 따르면, 추가 면역-조절제는 PD-1에 대한 mAb, PD-L1에 대한 mAb, PD-L2에 대한 mAb, CEACAM1에 대한 mAb, CTLA-4에 대한 mAb, TIGIT에 대한 mAb, PVR에 대한 mAb, 인터루킨 2(IL-2) 또는 림포카인-활성화 킬러(LAK) 세포로부터 선택된다.
특정 실시형태에서, PD-1 신호전달의 억제제는 PD-1에 결합하는 항체 또는 이의 단편이다. 특정 실시형태에서, PD-1에 결합하는 항체 또는 이의 단편은 펨브롤리주맙, 니볼루맙, AMP-514, 티셀리주맙, 스파르탈리주맙 또는 이의 PD-1 결합 단편이다. 특정 실시형태에서, PD-1 신호전달의 억제제는 PD-L-1 또는 PD-L-2에 특이적으로 결합하는 항체이다. 특정 실시형태에서, PD-L1 또는 PD-L2에 특이적으로 결합하는 항체는 더발루맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, BMS-936559 또는 FAZ053, 또는 이들의 PD-L1 또는 PD-L2 결합 단편을 포함한다. 특정 실시형태에서, PD-1 신호전달의 억제제는 PD-1, PD-L1 또는 PD-L2에 결합하는 Fc-융합 단백질을 포함한다. 특정 실시형태에서, Fc-융합 단백질은 AMP-224 또는 이의 PD-1 결합 단편을 포함한다. 특정 실시형태에서, PD-1 신호전달의 억제제는 PD-1, PD-L1 또는 PD-L2의 소분자 억제제를 포함한다. 특정 실시형태에서, PD-1, PD-L1, 또는 PD-L2 신호전달의 소분자 억제제는 하기 중 하나 이상을 포함한다: N-{2-[({2-메톡시-6-[(2-메틸[1,1'-비페닐]-3-일)메톡시]피리딘-3-일}메틸)아미노]에틸}아세테이트(BMS 202); (2-((3-시아노벤질)옥시)-4-((3-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]다이옥신-6-일)-2-메틸벤질)옥시)-5-메틸벤질)-D-세린 하이드로클로라이드; (2R,4R)-1-(5-클로로-2-((3-시아노벤질)옥시)-4-((3-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]다이옥신-6-일)-2-메틸벤질)옥시)벤질)-4-하이드록시피롤리딘-2-카복실산; 3-(4,6-디클로로-1,3,5-트리아진-2-일)-1-페닐인돌; 3-(4,6-디클로로-1,3,5-트리아진-2-일)-1-페닐-1h-인돌; L-α- 글루타민, N2,N6-비스(L-세릴-L-아스파라기닐-L-트레오닐-L-세릴-L-α-글루타밀-L-세릴-L-페닐알라닐)-L-리실-L-페닐알라닐-L-아르기닐-L-발릴-L-트레오닐-L-글루타미닐-L-루실-L-알라닐-L-프롤릴-L-리실-L-알라닐-L-글루타미닐-L-이소류실-L-리실; (2S)-1-[[2,6-디메톡시-4-[(2-메틸[1,1'-바이페닐]-3-일)메톡시]페닐]메틸]-2-피페리딘카복실산; 글리신아미드, N-(2-메르캅토아세틸)-L-페닐알라닐-N-메틸-L-알라닐-L-아스파라기닐-L-프롤릴-L-히스티딜-L-류실-N-메틸글리실-L-트립토필-L-세릴-L-트립토필-N-메틸-L-노르류실-N-메틸-L-노르류실-L-아르기닐-L-시스테이닐-, 사이클릭(1→14)-티오에테르; 또는 이의 유도체 또는 유사체.
다른 실시형태에 따르면, 추가 항암제는 화학요법제이다. 본 발명에 따른 항체와 함께 또는 별도로 투여될 수 있는 화학요법제는 항암 활성을 나타내는 당해 기술분야에 공지된 임의의 약제를 포함할 수 있고, 여기에는 미톡산트론, 토포이소머라제 억제제, 빈카로부터의 스핀들 독: 빈블라스틴, 빈크리스틴, 비노렐빈(탁솔), 파클리탁셀, 도세탁셀; 알킬화제: 메클로레타민, 클로람부실, 사이클로포스파미드, 멜팔란, 이포스파미드; 메토트렉세이트; 6-메르캅토퓨린; 5-플루오로우라실, 시타라빈, 젬시타빈; 포도필로톡신: 에토포사이드, 이리노테칸, 토포테칸, 다카바진; 항생제: 독소루비신(아드리아마이신), 블레오마이신, 미토마이신; 니트로소우레아: 카무스틴(BCNU), 로무스틴, 에피루비신, 이다루비신, 다우노루비신; 무기 이온: 시스플라틴, 카보플라틴; 인터페론, 아스파라기나제; 호르몬: 타목시펜, 루프롤리드, 플루타마이드 및 메게스트롤 아세테이트가 포함되지만 이들로 한정되지 않는다.
일부 실시형태에 따르면, 화학요법제는 알킬화제, 항대사제, 엽산 유사체, 피리미딘 유사체, 퓨린 유사체 및 관련 억제제, 빈카 알칼로이드, 에피포도필로톡신, 항생제, L-아스파라기나제, 토포이소머라제 억제제, 인터페론, 백금 배위 착물, 안트라센디온 치환 우레아, 메틸 하이드라진 유도체, 부신피질 억제제, 부신피질 스테로이드, 프로게스틴, 에스트로겐, 항에스트로겐, 안드로겐, 항안드로겐 및 고나도트로핀-방출 호르몬 유사체로부터 선택된다. 다른 실시형태에 따르면, 화학요법제는 5-플루오로우라실(5-FU), 류코보린(LV), 이리노테칸, 옥살리플라틴, 카페시타빈, 파클리탁셀 및 도세탁셀로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 하나 이상의 화학요법제를 사용할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 암의 치료에 사용하거나 면역 반응의 증강에 사용하기 위한 것이다.
"면역 반응의 증강"이라는 용어는 면역계의 반응성을 증가시키고 면역계의 기억을 유도 또는 연장하는 것을 지칭한다. 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 백신접종시 면역계를 자극하는 데 사용될 수 있다. 따라서, 일 실시형태에서, 약제학적 조성물은 백신접종을 개선하기 위해 사용될 수 있다.
특정 실시형태에서, 암은 폐, 갑상선, 유방, 결장, 흑색종, 전립선, 간, 방광, 신장, 자궁경부, 췌장, 백혈병, 림프종, 골수, 난소, 자궁, 육종, 담도 및 자궁내막 세포 암으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.
일부 실시형태에 따르면, 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 또는 이의 단편으로 이루어진 약제학적 조성물 및 추가의 면역-조절제 또는 키나제 억제제를 포함하는 약제학적 조성물은 개별 투여에 의해 암 치료에 사용된다.
또 다른 측면에 따르면, 본 발명은, 본 발명에 따른 치료학적 유효량의 항체 또는 항체 단편을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 명세서에 기재된 조성물의 독성 및 치료 효능은 세포 배양 또는 실험 동물의 표준 약제학적 절차에 의해, 예를 들면, 대상 화합물에 대한 IC50(50% 억제를 제공하는 농도) 및 최대 허용 용량을 결정함으로써 결정될 수 있다. 이러한 세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 수득된 데이터는 인간에게 사용하기 위한 다양한 용량의 책정에 사용할 수 있다. 용량은 특히 기타 관련 요인 중에서 사용되는 용량 형태, 선택한 투여 섭생, 치료에 사용되는 제제의 조성 및 사용된 투여 경로 등에 따라 달라질 수 있다. 정확한 제형, 투여 경로 및 용량은 환자의 상태를 고려하여 개별 의사가 선택할 수 있다. 치료하고자 하는 상태의 중증도 및 반응성에 따라, 투여는 서방형 조성물의 단일 투여일 수 있고, 치료 과정은 수일 내지 수주까지 또는 치유가 영향을 받거나 질환 상태의 감소에 도달할 때까지 지속될 수 있다. 물론, 투여되는 조성물의 양은 치료 대상체, 고통의 중증도, 투여 방식, 처방 의사의 판단 및 기타 모든 관련 요인에 따라 달라진다.
대상체에게 물질, 화합물 또는 제제의 "투여하는" 또는 "투여"라는 용어는 당업자에게 공지된 다양한 방법 중 하나를 사용하여 수행될 수 있다. 예를 들면, 화합물 또는 제제는 장내 또는 비경구 투여될 수 있다. 장내 투여는 구강내, 설하 또는 직장을 포함한 위장관을 통한 투여를 지칭한다. 비경구 투여에는 정맥내, 피내, 근육내, 복강내, 피하, 안구내, 설하, 비강내, 흡입, 척수강내, 뇌내, 경피(피부 관을 통한 흡수 등)에 의한 투여가 포함된다. 또한, 화합물 또는 제제는 충전식 또는 생분해성 고분자 장치 또는 기타 장치(예: 패치 및 펌프) 또는 제형에 의해 적절히 도입될 수 있고, 이는 화합물 또는 제제의 연장된, 지연 또는 조절 방출을 제공한다. 투여는, 예를 들면, 1회, 복수회 및/또는 하나 이상의 연장된 기간에 걸쳐 수행될 수도 있다. 일부 실시형태에서, 투여는 자가 투여를 포함하는 직접 투여, 및 약물을 처방하는 행위를 포함하는 간접 투여를 모두 포함한다. 예를 들면, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 환자에게 약물을 자가 투여하거나 또 다른 사람에 의해 약물이 투여되도록 지시하고/하거나 환자에게 약물의 처방을 제공하는 의사는 환자에게 약물을 투여하는 것이다.
항체는 일반적으로 환자 체중의 약 0.1 내지 약 20mg/kg, 일반적으로 약 0.5 내지 약 10mg/kg, 종종 약 1 내지 약 5mg/kg의 범위에서 투여된다. 이와 관련하여, 적어도 12시간의 순환 반감기, 바람직하게는 적어도 4일, 더 바람직하게는 최대 21일의 순환 반감기를 갖는 항체를 사용하는 것이 바람직하다. 키메라 항체는 최대 14 내지 21일의 순환 반감기를 갖는 것으로 예상된다. 경우에 따라, 대량의 로딩 용량을 투여하고, 이어서 치료 기간에 걸쳐 정기적(예: 매주)으로 유지 용량을 투여하는 것이 유리할 수 있다. 항체는 연속 주입을 위해 서방형 전달 시스템, 펌프 및 기타 공지된 전달 시스템에 의해 전달될 수도 있다.
"약"이라는 용어는 특정 값에 대해 허용가능한 에러 범위(예: 최대 5% 또는 10%)를 상정해야 함을 의미한다.
본 발명은, 또 다른 측면에 따르면, 샘플에서 CD112R을 측정 또는 정량화하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편과 생물학적 샘플을 접촉시키고, 복합체 형성의 수준을 측정하는 단계를 포함한다.
본 발명은 암을 진단 및 예측하는 방법을 추가로 개시한다.
한 가지 측면에 따르면, 본 발명은 대상체에서 암 또는 감염성 질환의 진단 및/또는 예측 방법을 제공하고, 이 방법은 본 명세서에 기재된 적어도 하나의 항체를 사용하여 상기 대상체의 생물학적 샘플에서 CD112R의 발현 수준을 결정하는 단계를 포함한다.
"생물학적 샘플"이라는 용어는 진단 또는 모니터링 검정에 사용될 수 있는 생물로부터 수득된 다양한 샘플 유형을 포함한다. 이 용어는 혈액 및 기타 생물학적 기원의 액체 샘플, 생검 표본과 같은 고체 조직 샘플, 조직 배양물 또는 이로부터 유래된 세포 및 이의 자손을 포함한다. 추가로, 이 용어는 순환 종양 또는 기타 세포를 포함할 수 있다. 이 용어는 구체적으로 임상 샘플을 포함하고, 세포 배양액, 세포 상청액, 세포 용해물, 혈청, 혈장, 소변, 양수, 안구 샘플의 수액 및 유리체를 포함한 생물학적 유체, 및 조직 샘플도 포함한다. 이 용어에는 시약에 의한 처리, 가용화, 또는 특정 성분의 농축과 같은 조달 후에 임의의 방식으로 조작된 샘플도 포함된다.
CD112R의 발현 수준을 결정하는 것은 본 명세서에 기재된 바와 같이 표지된 항-CD112R 항체에 의해 수행될 수 있다. 발현의 결정은, 예를 들면, ELISA에 의해 수행될 수 있다.
본 발명의 방법은 상기 발현 수준을 대조군 수준과 비교하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
하기 실시예는 본 발명의 일부 실시형태를 보다 완전하게 설명하기 위해 제시된 것이다. 이들은 어떠한 방식으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
실시예
이제, 상기 설명과 함께 본 발명을 비제한적 방식으로 설명하는 하기 실시예들을 참조한다.
일반적으로, 본 명세서에서 사용되는 명명법 및 본 발명에 활용된 실험실 절차는 분자, 생화학, 미생물학, 면역학 및 재조합 DNA 기술을 포함한다. 이러한 기술들은 당해 기술분야에 널리 공지되어 있다. 독자의 편의를 위해, 본 문서 전체에 걸쳐 널리 공지된 절차를 참조하는 기타 일반적 참조문헌이 제공된다.
실시예 1. CD112R의 발현은 면역 세포 활성화 후에 증가한다.
면역 세포 발현의 데이터베이스(DICE, https://dice-database.org/)로부터 발견되는 인간 면역 세포에서 CD112R mRNA 발현은 도 1A에 도시되어 있다. CD112R은 주로 NK 세포, B 세포 및 T 세포에서 발현되는 것으로 밝혀졌다. 인간 면역 세포에서 CD112R 검출의 경우(도 1B-1D), 클론 13과 15의 하이브리도마로부터 상청액 30ml/웰을 사용하여 50K 세포를 염색했다. 검출을 위해, 염소 항-마우스-647 Ab(잭슨(Jackson) 면역연구 카탈로그 315-605-006)를 1:250 희석으로 사용했다. 2명의 건강한 공여자로부터의 말초혈 단핵구(PBMC)가 사용되었다. 휴지 PBMC의 표면에서 검출가능한 염색이 나타나지 않았지만(도 1B), 2mg/ml PHA-L 활성화를 수반하는 NK 배지(400u/ml hIL-2)에서 96시간 후, CD112R의 유의한 및 균일한 발현이 관찰되었다(도 1C). 시험된 양쪽 NK 세포 모집단 모두는 활성화 상태에 관계없이 CD112R을 발현했다(도 1D).
실시예 2. CD112R은 넥틴 -2 결합에 의해 주로 관여하는 억제성 수용체이다.
면역 세포에서 발현되는 수용체, 및 종양 또는 항원 제시 세포(APC)에서 발현되는 면역 세포의 억제 리간드인 넥틴-2(CD112)에 대한 각각의 친화성의 개략도가 도 2에 제시되어 있다. TIGIT는 T 세포 및 NK 세포와 같은 면역 세포의 공-억제 수용체이고; DNAM-1(CD226이라고도 함)은 면역 세포(예: T 세포)의 활성화 수용체이며; CD112R(PVRIG라고도 함)은 세포독성 면역 세포(예: CD8+ T 세포 및 NK 세포)의 공-억제 수용체이고; 본 발명의 일부 실시형태에 따르면, 항-CD112R mAb는 DNAM-1 신호전달을 방해하지 않으면서 이의 리간드와의 CD112R 상호작용을 차단하고 면역 세포의 활성화를 증가시킨다.
실시예 3. 항- CD112R mAb의 결합 및 차단 특성의 분석
도 3A는 CD112R을 과발현하도록 조작된 293T 세포(인간 배아 신장 293 세포의 고도로 형질감염 가능한 유도체)에 대한 항-CD112R 클론의 특이적 결합을 나타낸다. CD112R mAb는 모체 또는 CD112R 과발현 293T 세포에 포화 용량(66nM)으로 사용했다. 과발현 세포만이 양성 염색 신호를 나타냈고(시험된 클론 사이에 유의한 차이 없음), 이는 CD112R에 대한 mAb의 높은 특이성을 나타낸다. EC-50 값은 도 3B에 요약되어 있다. N31S 치환을 갖거나 갖지 않는 인간 IgG1을 포함하는 CD112R 키메라 mAb를 일련의 3배 희석으로 0.4 내지 99nM 농도로 사용하고, CD112R을 과발현하는 293T 세포와 함께 인큐베이팅했다. 검출을 위해, 알로피코시아닌(APC)으로 표지된 염소 항-인간 Ab(잭슨 면역연구 109-136-170)를 1:200 희석으로 사용했다. 결합은 FACS에 의해 분석하고, EC-50 값의 계산에 사용했다. 이러한 결과는 시험된 모든 mAb가 세포 표면 발현된 CD112R에 nM 미만 또는 nM 친화성으로 결합한다는 것을 시사한다. 중쇄의 CDR1에서 N-연결 글리코실화 모티프를 제거하도록 조작된 N31S 변이체는 이 세포 기반 검정에서 인간 CD112R에 대한 결합을 개선시켰다(nM 미만). 또한, 인간 넥틴-2를 과발현하는 8866 세포(만성 골수성 백혈병 세포)를 10㎍/ml(156nM)의 CD112R-Fc와 함께 아이소타입 대조군 또는 4mg/ml(26.4nM, CD112R-Fc의 6배 초과를 의미)의 지시된 mAb의 존재하에 인큐베이팅했다. 도 3C에서 볼 수 있는 바와 같이, CD112R-Fc 결합의 차단은 시험된 모든 변이체에 의해 95%를 초과했다.
실시예 4. hIgG1 항- CD112R mAb에 의한 CD112R의 차단은 NK 세포 활성화를 증강시킨다.
건강한 공여자로부터 수득된 NK 세포를 37℃에서 2시간 동안 2:1 E:T 비율로 상이한 mAb 및 표적 세포주의 존재하에 인큐베이팅했다. NK 세포 활성화는 CD107a의 표면 발현 유도에 의해 측정되었고, 도 4에 대조군 IgG(Y 축)에 대한 배율 변화로서 도시되어 있다. Fc 유형이 CD112R mAb의 기능에 영향을 미치는지를 평가하기 위해, 마우스 IgG1(hCD16에 대한 검출가능한 결합을 갖지 않는 불활성 Fc)를 포함하는 항-CD112R mAb(클론 13)의 활성을 다른 2개 항-CD112R mAb: 키메라 클론-13-hIgG1 및 키메라 클론-13(N31S)-hIgG1(VH0K0)과 비교했고, 이들 둘 모두는 hIgG1 Fc(hCD16을 활성화시킬 수 있는 이펙터 Fc)를 갖는다. 모든 Ab 변이체는 2nM(0.3㎍/ml)에서 시험되었다. 도 4A에서 볼 수 있는 바와 같이, 양쪽 hIgG-Fc mAb 모두는 불활성 Fc Ab에 비해 현저한 우수성을 나타냈다. 따라서, 추가 개발은 인간 IgG1과 함께 항-CD112R mAb를 사용하여 수행되었다. 상가적 및 상승적 효과를 평가하기 위해, CD112R 차단을 추가 ICI와 조합하고, 그 결과는 도 4B 및 4C에 제시되어 있다. 시험된 2개 mAb 클론에 의한 CD112R의 차단은 NK 활성화(CD107a 세포 표면 발현)를 유도했고, 또한 TIGIT 및 PVR(NTX-1088) 차단을 포함한 기타 면역 체크포인트 차단과도 상승적이었다. 모두는 대조군 IgG에 비해 통계적으로 유의했다(p<0.05). 이 데이터는 특이적 mAb에 의한 CD112R의 차단이 암 표적에 대한 NK 세포 활성을 증가시킬 수 있고 다른 면역 체크포인트 억제제(ICI) mAb와 조합한 경우에 NK 활성화에 대한 상승적 효과를 가질 수 있음을 시사한다. 모든 mAb는 3mg/ml(조합의 경우 3+3mg/ml)로 사용되었다. 결과는 인간 암 세포주 A549(도 4A, 4B 폐 선암) 및 MDA-MB-231(도 4C, 유방 선암)에 대해 제시되어 있다.
실시예 5. 항- CD112R mAb에 의한 CD112R의 차단은 T 세포 매개 종양 세포 사멸을 증강시킨다.
건강한 공여자로부터의 PBMC는 인간 암 세포주 A549(폐 선암, 도 5A) 및 RKO(결장직장암, 도 5B)를 사용한 T 세포 사멸 검정에 사용했다. 모든 mAb는 3㎍/ml로 사용되었다(3+3mg/ml를 조합에 사용하고, 3+3+3㎍/ml를 트리플에 사용함). 항-CD112R 클론 13이 검정에 사용되었다. 표적 세포 사멸은 이펙터 세포 단독에 대해 정규화되었다(Y 축). 표적 세포 사멸은 제조업체 프로토콜에 따라 프로메가(Promega)에 의한 CellTiter-Glo® 2.0 세포 생존율 검정 키트(Cat G9242)에 의해 평가했다. 그 결과는 CD112R mAb가 유의한 표적 세포 사멸, 즉 항-TIGIT 및 항-PD-1 mAb와의 상승적 효과를 유도하는 것으로 밝혀졌다. 더욱이, 3개 수용체를 모두 차단하면, 개별 mAb 및 이중 mAb 조합의 효과에 비해 표적 세포 사멸이 현저히 증가했다.
실시예 6. CD112R 항체의 인간화는 mAb의 결합 및 발달능 특성을 개선시켰다 .
항-CD112R 클론 13의 중쇄 가변 영역 서열에는 몇몇 제한이 포함되어 있고, 이는 인간화 프로세스에서 해결되었다.
경쇄의 CDR1 중의 탈아미드화 모티프는 Asn(N)을 Ser(S)로 치환함으로써 해결되었다(N31S로 명명).
클론-13-hIgG1 및 N31S(탈아미드화 부위 제거) 키메라 변이체(hIgG1)는 모두 예외적으로 높은 친화성을 나타냈고, 동일한 항원에 결합하는 참조(대조군) Ab(WO2016134333에 개시된 Ab)보다 CD112R(PVRIG)의 결합에서 현저히 더 강력했다(3 내지 30배)(표 1).
[표 1]
키메라 클론(클론 13) 및 클론 N31S(아미노산 번호 31에서 탈아미드화 모티프가 결실됨)의 친화성, 및 인간 CD112R(PVRIG)의 결합을 위한 WO2016134333로부터의 서열을 기반으로 하는 참조 Ab.
* 비아코어(Biacore) 장치의 한계
이어서, 변이체는 중쇄의 CDR1에서 발견되는 N-연결 글리코실화 모티프를 제거하기 위해 이루어졌다(초티아 CDR 정의). 이 변이체는 위치 28의 아미노산 잔기 아스파라긴(N)을 아스파르트산(D), 알라닌(A), 글루타민(Q), 세린(S) 및 트레오닌(T)으로부터 선택된 잔기로 치환하고, 위치 30의 아미노산 잔기 트레오닌(T)을 알라닌(A)으로 치환하는 것을 포함했다. 모든 변이체는 표 2에 요약된 바와 같이 생산성(역가 농도 기준) 및 친화성에 대해 시험했다.
[표 2]
N-연결 글리코실화 모티프가 제거된 변이체의 생산성 및 친화성
상대적 친화성 결과에 기반하여, 변이체 N28T를 선택했다. N-연결 글리코실화의 제거는 친화성에 영향을 미치지 않았지만, 생산성을 현저히 감소시켰다. 이를 해결하기 위해, N-연결 글리코실화 모티프를 결실시킨 인간화 중쇄의 11개 변이체를 인간 IgG1 Fc에서 scFv 분자로서 설계하고, 생산성에 대해 시험했다(표 3). 상위 3개 생산적 인간화 scFv 변이체(#9-11)는 인간 CD112R에 대한 결합에 대해 시험했다(표 4). 대부분의 인간화 scFv 변이체는 VH0K0(클론 13 N31S)의 scFv와 비교하여 결합을 현저히 개선시켰다.
표 3은 N28T 돌연변이를 기반으로 설계되고 scFv로서 비변형 경쇄와 공-발현되는 10개 인간화 변이체의 293EBNA 세포에서 생산성을 나타낸다.
[표 3]
scFv 분자는 변이체의 신속한 생산 및 스크리닝을 위한 기술적 해결책으로서 Fc에 연결되었다.
[표 4]
비변형 경쇄(VK0) 및 표시된 경쇄의 3개 인간화 변이체와 공-발현된, 중쇄 변이체(#9-11) 및 비인간화 버전(VH0)의 인간 CD112R에 대한 결합 친화성
인간 생식세포 Ab와의 근접성 및 잠재적 MHC-2 결합 모티프의 결여(iTopeTM에 의해 예측됨)에 근거하여, 5개 변이체가 추가 분석을 위해 선택되었다. 선택된 변이체의 친화성은 표 5에 제시되어 있다. 모든 변이체는 키메라(클론 N31S) Ab와 비교하여 인간 CD112R에 대한 결합을 개선시켰다.
[표 5]
정제 후 선택된 완전 항체 변이체의 특성
* 비아코어 장치 감도의 한계
실시예 7. 인간과 사이노몰구스 원숭이의 CD112R에 대한 항-CD112R mAb의 유사한 결합
인간화 mAb는 내인성 및 과발현된 인간 및 사이노몰구스 CD112R의 결합에 대해 시험했다. 그 결과는 인간 및 원숭이 CD112R에 대한 인간화 mAb의 친화성이 유사하다는 것을 나타낸다. 표 6은 선택된 인간화 (Hu) mAb의 결합 곡선에 기반하여 계산된 EC50을 요약한 것이고, 이는 인간(단백질 id NP_076975.2) 또는 사이노몰구스(Cyno) 원숭이(마카카 파시큘라리스(Macaca fascicularis)) CD112R(단백질 id: XP_005549281.1)을 발현하는 293T 세포에 대해 일련의 3배 희석으로 99 내지 0.05nM의 농도로 사용되었다. 검출을 위해, 당나귀 항-인간-647(잭슨 면역연구 cat-109-605-006) Ab를 1:250 희석으로 사용했다.
표 7은 사이노몰구스 CD8 T 세포 및 인간 NK 세포에 대한 선택된 인간화 mAb의 결합 곡선을 기반으로 계산된 EC50 값을 요약한 것이고, 세포 둘 다는 관련 종의 내인성 CD112R을 발현한다. 분석은 표 6과 같이 수행되었다. WO2016134333에 개시된 항-CD112R mAb를 비교에 사용했다. 상대적 EC-50 값도 또한 표 6 및 7에 요약되어 있다. 최대 결합도 또한 평가되었고(인간 최대 결합 - 배경/cyno 최대 결합 - 배경), 표 8에 요약되어 있다. 모든 인간화 변이체는 인간과 사이노몰구스 표적 사이에 완전한 교차-반응성을 갖는다. 추가로, 대조군 Ab와 비교하여, 항원에 대한 모든 인간화 변이체의 우수한 결합이 나타났고, 5개 인간화 변이체 중 3개는 참조 Ab와 비교하여 2배 이상 개선된 결합을 갖고, 나머지 2개 변이체는 약 50% 개선을 나타냈다.
[표 6]
세포 표면 CD112R에 대한 선택된 인간화 항-CD112R mAb의 결합 특성(EC50 및 최대 결합)의 평가
[표 7]
관련 종의 내인성 CD112R을 발현하는 사이노몰구스 CD8 T 세포 및 인간 NK 세포에 대한 선택된 인간화 항-CD112R mAb의 결합의 평가.
[표 8]
절대 및 상대 최대 결합 평가 요약. 관련 종의 내인성 CD112R을 발현하는 사이노몰구스 CD8 T 세포 및 인간 NK 세포에 대한 선택된 인간화 항-CD112R mAb의 절대 및 상대 최대 결합 평가의 요약. 상대적 결합(비율)은 (인간 최대 결합 - 배경)/(cyno 최대 결합 - 배경)으로 계산했다.
실시예 8. 인간화 CD112R mAb는 CD112에 대한 CD112R의 결합을 효과적으로 차단한다.
인간화 항-CD112R 항체는 CD112R - 넥틴-2 상호작용의 강력한 차단제이다. CD112R을 과발현하는 293T 세포를 인간화 CD112R mAb의 존재 또는 부재하에 설정된 용량(125nM)의 융합 단백질 hNectin-2-mIgG2a와 함께 아이스 상에서 30분 동안 인큐베이팅(75k/웰)했다. 항체를 40 내지 0.018nM의 농도 범위에서 일련의 3배 희석으로 첨가했다. 결합된 hNectin-2-mIgG2a의 양은 Dy-light 647(115-606-071 잭슨 면역연구)로 형광 표지된 항-마우스 항체에 의해 검출하고, FACS로 분석했다. EC-50 및 EC-90 값은 수득된 적정 곡선으로부터 계산하고, 하기 표 9에 요약되어 있다. 결과는 인간화 CD112R 항체가 nM 미만의 농도에서 CD112R-CD112 상호작용을 차단할 수 있음을 나타낸다.
[표 9]
인간화 항-CD112R 항체에 의한 CD112R-넥틴-2 상호작용의 차단
실시예 9. 인간화 항-CD112R mAb에 의한 CD112R의 차단은 모체 mAb에 비해 NK 세포 활성화를 증강시키고 TIGIT의 차단과 상승작용한다.
인간화 항-CD112R mAb의 차단 효과를 조사하기 위해, 건강한 공여자로부터의 NK 세포를 37℃에서 2시간 동안 2:1 E:T 비율로 A549 세포(폐 선암)와 함께 상이한 mAb의 존재하에서 인큐베이팅했다. NK 세포 활성화는 CD107a의 표면 발현의 유도에 의해 측정되었고, 도 6에 대조군 IgG(Y 축)에 대한 배율 변화로서 도시되어 있다. 모든 항체는 3mg/ml(조합의 경우 3+3)로 사용되었다. 모든 항-CD112R mAb(회색 바)는 NK 세포 활성화를 유의적으로 증가시켰다(p<0.0005). 더욱이, 인간화된 항-CD112R 항체는 모체 비-인간화(H0K0) 키메라 변이체보다 우수했다(p <0.05). 추가로, 모든 인간화 변이체는 항-TIGIT mAb(흑색 바)와 상승작용하고, 이는 각 개별 치료에 비해 활성의 유의한 증가를 유도했다(p <0.015).
전반적으로, 데이터는 인간화 항-CD112R mAb가, 모체 항-CD112R보다 우수한, NK 세포 활성화의 강력한 유도인자이고, 항-TIGIT mAb와 조합할 때에 상승작용 효과를 유지한다는 것을 시사한다.
실시예 10. 인간화 항-CD112R mAb에 의한 CD112R의 차단은 용량 의존적 방식으로 NK 세포 활성화를 증강시키고 PVR의 차단과 상승작용한다.
건강한 공여자로부터의 NK 세포를 37℃에서 1.5시간 동안 2:1 E:T 비율로 MDA-MB-231 세포(유방 선암)와 함께 상이한 mAb의 존재하에서 인큐베이팅했다. NK 세포 활성화는 FACS에 의해 분석된 CD107a의 표면 발현의 유도에 의해 측정되었고, 대조군 IgG(Y 축)에 대한 배율 변화로서 도시된다. 인간화 mAb(H11K1, H11K2 및 H11K3, 각각 서열번호 39에 기재된 HC 가변 영역 서열, 및 서열번호 40, 서열번호 41, 서열번호 42에 기재된 LC 가변 영역 서열을 가짐)를 4배 희석으로 53 내지 0.05nM의 농도 범위에서 사용했다(도 7A). 추가로(도 7B), 각 mAb의 13nM의 세트 용량을 13nM의 항-PVR Ab(NTX-1088)와 조합하여 시험했다. 도 7A는 주요 인간화 항-CD112R mAb가 NK 활성화의 강력한 유도인자인 것을 나타낸다. 시험된 모든 항-CD112R mAb는 EC-50보다 약 10배 낮은 0.05nM의 농도까지 NK 세포 활성화를 유의적으로(p<0.0172) 증가시켰다. 모든 주요 인간화 변이체(회색 바)는 항-PVR NTX-1088 Ab(흑색 바)와 상승작용하고, 이는 각 개별 치료에 비해 활성의 유의한(p<0.03) 증가를 유도했다. 전반적으로, 데이터는 인간화 항-CD112R mAb가 NK 세포의 강력한 활성화제이고, 선택된 변이체가 NK 세포 활성화에서 항-PVR mAb와 상승작용한다는 것을 시사한다.
실시예 11. 인간화 항-CD112R mAb는 비인간화 항-CD112R mAb 및 참조 CD112R mAb보다 T 세포 활성화에서 우수하다.
T 세포 활성화에 대한 인간화 항-hCD112R 항체의 효과를 시험하기 위해, 인간 CD112R을 과발현하는 주르카트 세포(주르카트 hCD112R)를 항-CD3의 존재하에 항-CD112R mAb의 존재 또는 부재하에 A549 세포(높은 넥틴-2 발현)와 인큐베이팅했다. 24시간 후, 플레이트를 원심분리하고, 상청액을 수집했다. IL-2 정량화는 제조업체의 프로토콜에 따라 인간 IL-2 ELISA(Biolegend에 의한 MAX™ Deluxe)를 사용하여 수행했다. 도 8A는 4 내지 0.0625mg/ml의 농도 범위에서 모든 인간화 변이체 및 참조 항-CD112R 항체(WO2016134333에 개시됨)의 용량 반응 검정을 나타낸다. 대부분의 인간화 클론은 모체 비-인간화 클론(H0K0)보다 우수했고, 모든 항-CD112R 변이체는 IL-2 분비의 유도에 있어서 시험된 모든 농도에서 참조 항체(Ab)보다 우수했다. 도 8B는 도 7A에서와 같이 26.4 내지 0.1nM의 농도 범위에서 시험된 선택된 인간화 변이체를 예시한다. 참조 Ab는 24.6nM의 최고 농도에서만 첨가되었다. 선택된 모든 변이체는 IL-2 분비의 유의한 유도(p<0.0003)를 초래했다. 비교는 최고 농도의 hIgG1에 대해 수행했다. 더욱이, 항체 H11K2 및 H11K3는 시험된 최저 농도에서도 참조보다 유의적으로(p<0.004) 더 강력했으며, H11K1은 0.41nM부터 개시하는 참조보다 유의적으로 우수했다(p<0.02).
이러한 결과는 항-CD112R mAb가 T 세포 활성화의 강력한 유도인자이고, 기존의 참조보다 현저한 이점을 갖는 것을 나타낸다.
실시예 12. 항-CD112R mAb에 의한 CD112R의 차단은 T 세포 활성화를 증강시킨다
건강한 공여자로부터의 PBMC는 인간 암 세포주 A549(폐 선암)를 사용하여 T 세포 활성화 검정에 사용했다. PBMC는 1㎍/ml의 항 CD3 mAb(OKT3)의 존재하에 2:1 E:T 비율로 표적 세포와 함께 48시간 동안 인큐베이팅했다.
이펙터 세포를 채취하고, (도 9A) CD69(BLG-310906) 및 (도 9B) CD137(BLG-309804, 모두 Biolegend 제품)의 표면 발현을 위해 염색했다. 마커의 표면 발현(MFI)은 mAb 비함유 그룹에 대해 정규화되었다.
도 9에 제시된 바와 같이, 인간화 항-CD112R mAb H11K2에 의한 CD112R의 차단은 T 세포 활성화를 증강시켰다. CD112R의 차단은 PVR(NTX-1088) 및 PD-1(Keytruda)과 같은 추가 ICI의 차단과 함께 부가 효과를 가졌다. 모든 변화는 통계적으로 유의했다(p<0.05).
실시예 13. 넥틴-2를 발현하고 PVR를 결여하는 표적 세포의 존재하에 NK 세포 활성화에 대한 항-CD112R의 효과 및 활성에 대한 PVR 발현의 영향
건강한 공여자로부터의 NK 세포를 37℃에서 20시간 동안 1:1 E:T 비율로 상이한 mAb 및 표적 세포주의 존재하에 인큐베이팅했다. NK 세포 활성화는 CD137의 표면 발현의 유도에 의해 측정되었으며, 도 10에 항체 비함유(Y 축)에 대한 배율 유도로서 도시되어 있다. 인간화 항-CD112R mAb(hIgG1 Fc를 포함하는 H11K3)를 NTX-1088(항-PVR) 또는 항-TIGIT mAb 티라골루맙(KEGG 약물 등록 D11482)과 단독 및 조합하여 비교했다. 주요 인간화 변이체에 의한 CD112R 차단은 표적 세포가 막 PVR을 발현하지 않은 경우에 모든 치료 중에서 가장 강력했다(도 10A). PVR이 발현된 경우, CD112R은 TIGIT의 차단 및 PVR의 차단을 포함한 다른 면역 체크포인트 차단과 상승작용했다. NTX-1088과 항-CD112R의 조합은 다른 모든 개입보다 유의적으로 우수했다. 모든 항체는 3㎍/ml(조합의 경우 3+3㎍/ml)로 사용되었다. 결과는 내인성 PVR(도 10A) 및 JEG3-hPVR(인간 PVR 과발현, 도 10B)를 결여하는 인간 암 세포주 JEG3 융모막암에 대해 제시되어 있다. * p <0.005, ** p <0.001, *** p <0.0001, 양측 스튜던트 t-검정. 5명의 공여자 중 2명의 대표적 데이터가 도시된다.
실시예 14. 암 표적 세포의 존재하에 NK 세포 활성화에 대한 항-CD112R의 효과
건강한 공여자로부터의 NK 세포는 상이한 mAb 및 표적 세포주: H1299(NSCLC, 도 11A), A549(폐 선암, 도 11B) 또는 MDA-MB-231(삼중 음성 유방암, 도 11C)의 존재하에 1:1 E:T 비율로 37℃에서 48시간 동안 인큐베이팅했다. NK 세포 활성화는 CD137의 표면 발현의 유도에 의해 측정되었으며, 도 11에 항체 비함유(Y 축)에 대한 배율 유도로서 도시되어 있다. hIgG1 Fc(H11K3)를 사용한 인간화 항-CD112R mAb는 단독으로 또는 실시예 1에서와 같이 조합하여 평가했다. 모든 설정에서, 단독으로서 CD112R 차단은 NK 세포의 활성화에 현저한 영향을 가졌다. 추가로, CD112R은 TIGIT의 차단(티르가올루맙 KEGG 약물 등록 D11482) 및 PVR의 차단(NTX-1088)을 포함한 다른 면역 체크포인트 차단과 상승작용했다. 주목할 만한 것으로, NTX-1088 및 항-CD112R mAb의 조합은 시험된 모든 세포주에서 다른 모든 개입보다 유의적으로 우수했다. 모든 mAb는 3㎍/ml(조합의 경우 3+3㎍/ml)로 사용되었다. * p < 0.005, ** p < 0.001, *** p < 0.0001, 양측 스튜던트 t-검정. NK 공여자 4명 중 2명의 대표적 데이터가 제시되어 있다.
실시예 15. CD112R mAb는 생체내에서 종양 성장을 억제한다.
mAb의 효능은 동물 모델을 사용하여 생체내에서 입증된다. 면역 손상된 마우스(NSG, NOG 또는 이와 동등)가 모델로서 사용된다. 넥틴-2(예: A549, MDA-MB-231, RKO)를 자연적으로 발현하는 표적 세포주를, 강력한 종양 성장을 가능하게 하기에 충분한 양(예: 마우스당 5*106 세포)으로 마우스에 피하(sc) 주사한다. 면역 세포를 제공하기 위해, 종양 세포를 관련 인간 면역 세포(예: 전체 PBMC, 정제된 T 세포, 정제된 CD8+ T 세포 또는 NK 세포)와 혼합하여 주입한다.
이어서, 마우스는 촉지가능한 종양이 형성될 때까지 종양 성장을 모니터링한다. 이 시점에서, 마우스는 대조군 IgG, 항-CD112R mAb, 항 PD-1 mAb 또는 이들의 조합을 제공받은 상이한 치료 그룹에 대해 랜덤화시킨다. 종양 성장 억제에 대한 개별 및 조합 ICI 치료의 효과는 대조군 IgG 그룹에 대하여 시간 경과에 따라 평가된다.
추가 접근법은 종양이 확립된 후의 면역 세포의 재구성을 기반으로 한다. 여기에는 상기와 동일한 마우스와 종양 세포가 사용된다. 그러나, 상기 언급한 인간 면역 세포는 촉지가능한 종양이 확립된 후에만 정맥내(iv) 주사된다. 1일 후, 마우스는 상이한 치료 그룹으로 랜덤화하고, 상기와 같이 종양 성장 억제를 평가한다.
제3 전략은 성숙한 백혈구가 아닌 인간 조혈 줄기 세포를 사용하여 면역-결핍 마우스에서 누락 면역 세포를 재구성하는 경우에 수행된다. 조혈 세포가 말초에서 성숙 인간 면역 세포를 생성하면, 수득되는 "인간화된" 마우스는 종양의 이식, 및 iv-재구성 접근법에 대해 상기 기재된 바와 같이 상이한 ICI mAb의 효과의 시험에 사용한다.
실시예 16. 마우스에서 종양 성장에 대한 항-CD112R의 효과
마우스에서 항-CD112R mAb 치료의 생체내 효능을 평가했다. A549 세포를 건강한 수컷 공여자로부터의 PBMC와 1:5 E:T 비율로 공-이식했다(5*106 A549 세포와 혼합된 1*106 PBMC). 세포 혼합물을 NSG-HLA-A2/HHD 수컷 마우스의 후방 협측에 1:1 용적 비율의 세포-인-PBS:매트리젤(Matrigel® 매트릭스, Corning REF 356234)로 최종 용적 100ml/동물로 피하 이식했다. 이식 후 3일차에, 대조군 IgG1 mAb(InVivoMAb 인간 IgG1 아이소타입 대조군 BE0297 Bioxcell) 또는 항-CD112R mAb 또는 항-PD-1 mAb(펨브롤리주맙)를 사용하여 매주 1회 10mg/kg으로 총 5회 용량으로 치료했다. 종양 용적은 매주 1회 캘리퍼에 의해 측정했다. 35일차에, 대조군 IgG 치료 그룹의 평균 종양 용적은 641mm3였고, 항 PD-1 치료 그룹의 종양 용적은 840mm3였다(도 12). 이러한 결과는 쌍방향 ANOVA(two-way-ANOVA)에 의해 유의차가 없었다. 반면, 항 CD112R 치료 종양의 평균 용적은 200mm3이고, 이는 IgG 치료 동물과 비교하여 68%의 종양 성장 억제 및 유의한 종양 감소를 나타냈다(***p=0.001, 쌍방향 ANOVA).
실시예 17. 항체 서열
[표 10]
CDR 서열, 상이한 클론 및 이의 변이체의 가변 영역 서열, scFv 서열의 상세.
특정 실시형태에 대한 전술한 설명은 본 발명의 일반적 성격을 충분히 나타내고, 다른 사람들은 현재의 지식을 적용함으로써 과도한 실험 없이 및 일반적 개념에서 벗어나지 않고도 다양한 용도에 맞게 이러한 특정 실시형태를 용이하게 변형 및/또는 적용시킬 수 있으며, 따라서 이러한 적응 및 변형은 개시된 실시형태의 균등물의 의미 및 범위 내에서 이해되어야 하고 이해되도록 의도된다. 본 명세서에 사용된 문구 또는 용어는 설명을 위한 것이며 제한을 위한 것이 아님을 이해해야 한다.
SEQUENCE LISTING <110> Nectin Therapeutics Ltd. Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. University of Rijeka Faculty of Medicine <120> ANTIBODIES AGAINST CD112R AND USES THEREOF <130> Nectin/002 PCT <150> US 63/148149 <151> 2021-02-11 <160> 54 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acids <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X=N, D, A, Q, S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X=T or A <400> 1 Gly Tyr Xaa Phe Xaa Ser Tyr 1 5 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Tyr Pro Gly Ser Tyr Ile Pro 1 5 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 3 Gly Tyr Phe Asp Val 1 5 <210> 4 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acids <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X=N or S <400> 4 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Xaa Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 5 Gly Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 6 Gln Asn Asp His Ser Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 7 <211> 5 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Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 210 215 220 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Gln Asn Asp His Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr 245 250 255 Lys Leu Glu Ile Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 260 265 270 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 275 280 285 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 290 295 300 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 305 310 315 320 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 325 330 335 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 340 345 350 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 355 360 365 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 370 375 380 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 385 390 395 400 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 405 410 415 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 420 425 430 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 435 440 445 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 450 455 460 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 465 470 475 480 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 485 <210> 51 <211> 488 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acids <400> 51 Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Leu Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Tyr Ile Pro Asn Tyr Asn 65 70 75 80 Glu Lys Phe Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Thr Ala Leu 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr 115 120 125 Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 145 150 155 160 Val Ser Ala Gly Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser 165 170 175 Leu Leu Ser Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln 180 185 190 Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg 195 200 205 Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 210 215 220 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Gln Asn Asp His Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr 245 250 255 Lys Leu Glu Ile Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 260 265 270 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 275 280 285 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 290 295 300 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 305 310 315 320 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 325 330 335 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Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Leu Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Tyr Ile Pro Asn Tyr Asn 65 70 75 80 Glu Lys Phe Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr 115 120 125 Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 145 150 155 160 Val Ser Ala Gly Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser 165 170 175 Leu Leu Ser Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln 180 185 190 Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg 195 200 205 Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 210 215 220 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Gln Asn Asp His Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr 245 250 255 Lys Leu Glu Ile Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 260 265 270 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 275 280 285 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 290 295 300 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 305 310 315 320 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 325 330 335 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 340 345 350 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 355 360 365 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 370 375 380 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 385 390 395 400 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 405 410 415 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 420 425 430 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 435 440 445 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 450 455 460 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 465 470 475 480 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 485 <210> 53 <211> 488 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acids <400> 53 Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Tyr Ile Pro Asn Tyr Asn 65 70 75 80 Glu Lys Phe Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Thr Ala Leu 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr 115 120 125 Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 145 150 155 160 Val Ser Ala Gly Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser 165 170 175 Leu Leu Ser Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln 180 185 190 Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg 195 200 205 Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 210 215 220 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Gln Asn Asp His Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr 245 250 255 Lys Leu Glu Ile Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 260 265 270 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 275 280 285 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 290 295 300 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 305 310 315 320 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 325 330 335 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 340 345 350 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 355 360 365 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 370 375 380 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 385 390 395 400 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 405 410 415 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 420 425 430 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 435 440 445 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 450 455 460 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 465 470 475 480 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 485 <210> 54 <211> 488 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acids <400> 54 Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Tyr Ile Pro Asn Tyr Asn 65 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285 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 290 295 300 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 305 310 315 320 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 325 330 335 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 340 345 350 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 355 360 365 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 370 375 380 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 385 390 395 400 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 405 410 415 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 420 425 430 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 435 440 445 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 450 455 460 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 465 470 475 480 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 485

Claims (40)

  1. 적어도 항원 결합 부분(antigen binding portion)을 포함하는, CD112R에 결합하는 항체, 또는 이의 항체 단편으로서, 상기 항체 또는 항체 단편은
    (i) 서열번호 16을 포함하는 중쇄(HC) 가변 영역의 3개 상보성 결정 영역(CDR) 및 서열번호 18를 포함하는 경쇄(LC) 가변 영역의 3개 CDR, 또는 상기 항체 또는 단편 서열과 적어도 90%의 서열 동일성(sequence identity)을 갖는 이의 유사체 또는 유도체; 또는
    (ii) 서열번호 21을 포함하는 중쇄 가변 영역의 3개 CDR 및 서열번호 23을 포함하는 경쇄 가변 영역의 3개 CDR, 또는 상기 항체 또는 단편 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체
    를 포함하는, 항체 또는 항체 단편.
  2. 제1항에 있어서, 6개 CDR의 세트: 서열 GYX1FX2SY(서열번호 1)(여기서, X1은 N, D, A, Q, S 또는 T를 나타내고, X2는 T 또는 A이다) 또는 서열 SYWIN(서열번호 7)을 포함하는 중쇄 CDR1 서열, 서열 YPGSYIP(서열번호 2)를 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 GYFDV(서열번호 3)를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 KSSQSLLXSGNQKNYLA(서열번호 4)(여기서, X는 N 또는 S를 나타낸다)를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 GASTRES(서열번호 5)를 포함하는 경쇄 CDR2 및 서열 QNDHSYPYT(서열번호 6)을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는, 항체 또는 항체 단편.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 서열번호 28 및 서열번호 21로부터 선택된 중쇄 가변 영역, 또는 상기 중쇄 가변 영역 서열과 적어도 95%의 서열 유사성(sequence similarity)을 갖는 유사체를 포함하는, 항체 또는 항체 단편.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 26 및 서열번호 23으로부터 선택된 경쇄 가변 서열, 또는 상기 경쇄 가변 서열과 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 유사체를 포함하는, 항체 또는 항체 단편.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 상기 중쇄는 서열번호 28을 포함하고, 상기 경쇄는 서열번호 26을 포함하는, 항체 또는 항체 단편.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 상기 중쇄는 서열번호 21을 포함하고, 상기 경쇄는 서열번호 23을 포함하는, 항체 또는 항체 단편.
  7. 제5항 또는 제6항에 따른 항체 또는 항체 단편의 변이체로서, 상기 항체 경쇄 또는 중쇄와 적어도 95%의 동일성을 갖는, 항체 또는 항체 단편의 변이체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 단편이 일본쇄(single chain) Fv(scFv)인, 항체 단편.
  9. 제8항에 따른 scFv 및 인간 IgG1 Fc 영역을 포함하는 폴리펩티드로서, 상기 폴리펩티드 서열이 서열번호 43 내지 54로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열, 또는 상기 항체와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체를 포함하는, 폴리펩티드.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 0.5×10-9 M 내지 10-11 M의 친화성(affinity)으로 인간 CD112R에 결합하는, 항체 또는 항체 단편.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 hIgG1의 Fc를 포함하는, 항체 또는 항체 단편.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 인간화 항체(humanized anitibody)인, 항체 또는 항체 단편.
  13. 제12항에 있어서, 중쇄 CDR1이 GYTFTSY(서열번호 13) 또는 SYWIN(서열번호 7)인, 항체 또는 항체 단편.
  14. 제12항 또는 제13항에 있어서, 상기 경쇄 CDR1이 KSSQSLLSSGNQKNYLA(서열번호 15)인, 항체 또는 항체 단편.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 6개 CDR의 세트: 서열 GYTFTSY(서열번호 13)를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 YPGSYIP(서열번호 2)를 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 GYFDV(서열번호 3)을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 KSSQSLLSSGNQKNYLA(서열번호 15)를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 GASTRES(서열번호 5)을 포함하는 경쇄 CDR2 및 서열 QNDHSYPYT(서열번호 6)를 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는, 항체 또는 항체 단편.
  16. 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간화 항체가 서열번호 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38 및 39로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄; 또는 상기 중쇄 가변 영역 서열과 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 유사체를 포함하는, 항체 또는 항체 단편.
  17. 제12항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간화 항체가 서열번호 40, 41 및 42로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄, 또는 상기 중쇄 가변 영역 서열과 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 유사체를 포함하는, 항체 또는 항체 단편.
  18. 제12항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간화 항체가 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄를 포함하는, 항체 또는 항체 단편:
    (i) 서열번호 39를 포함하는 중쇄 및 서열번호 40을 포함하는 경쇄;
    (ii) 서열번호 39를 포함하는 중쇄 및 서열번호 41을 포함하는 경쇄; 및
    (iii) 서열번호 39를 포함하는 중쇄 및 서열번호 42를 포함하는 경쇄.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항체 단편의 중쇄 또는 경쇄 영역의 적어도 하나의 서열을 코딩하는(encoding) 폴리뉴클레오티드 서열.
  20. 제18항에 있어서, 항체 중쇄 가변 영역을 코딩하고, 상기 폴리뉴클레오티드 서열이 서열번호 16, 서열번호 20 및 서열번호 24로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열, 또는 상기 서열에 대해 적어도 85%의 동일성을 갖는 이들의 변이체를 포함하는, 폴리뉴클레오티드 서열.
  21. 제19항에 있어서, 항체 경쇄 가변 영역을 코딩하고, 상기 폴리뉴클레오티드 서열이 서열번호 18, 서열번호 22 및 서열번호 25, 또는 상기 서열에 대해 적어도 85%의 동일성을 갖는 이들의 변이체로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 폴리뉴클레오티드 서열.
  22. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 플라스미드.
  23. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 세포.
  24. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 항체를 생산할 수 있는 세포.
  25. 활성 성분으로서 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 항체 또는 이의 단편, 및 약제학적으로 허용되는 부형제(excipient), 희석제, 염 또는 담체(carrier)를 포함하는 약제학적 조성물.
  26. 제25항에 있어서, 넥틴-2 (Nectin-2)에 대한 CD112R의 결합을 억제함으로써 면역계의 조절에 사용하기 위한 약제학적 조성물.
  27. 제25항에 있어서, 대상체(subject)의 암의 치료에 사용하기 위한 약제학적 조성물.
  28. 제25항에 있어서, 대상체에서 바이러스 감염의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 약제학적 조성물.
  29. 이를 필요로 하는 대상체에게 치료학적 유효량의 제25항에 따른 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 암을 치료하는 방법.
  30. 제29항에 있어서, 수술, 화학요법, 방사선요법 및 면역요법으로부터 선택된 추가 항암 요법을 추가로 포함하는, 방법.
  31. 제29항에 있어서, 상기 대상체에게 추가의 면역조절제, 활성화 림프구 세포, 키나제 억제제, 화학요법제 또는 임의의 기타 항암제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  32. 제31항에 있어서, 상기 추가의 면역조절제가 면역 체크포인트 분자(immune checkpoint molecule)에 대한 항체인, 방법.
  33. 제32항에 있어서, 상기 추가의 면역조절제가 항-PD-1, 항-TIGIT, 항-PVR 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 항체인, 방법.
  34. 제29항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 고형암(solid cancer)인, 방법.
  35. 제29항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 혈액암(hematologic cancer)인, 방법.
  36. 제29항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 폐 선암(lung adenocarcinoma), 유방 선암(breast adenocarcinoma) 및 대장암(colorectal cancer)으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
  37. 제29항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료가 대상체에서 전이 형성, 성장 또는 확산의 방지 또는 감소를 초래하는, 방법.
  38. 샘플에서 CD112R을 측정 또는 정량화하는 방법으로서, 상기 방법은 생물학적 샘플을 항체 또는 항체 단편과 접촉시키고 복합체 형성(complex formation)의 수준을 측정하는 단계를 포함하고, 상기 항체 또는 항체 단편은 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따르는 것인, 방법.
  39. 대상체에서 암을 진단 또는 예측하는 방법으로서, 상기 방법은 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 사용하여 상기 대상체의 생물학적 샘플에서 CD112R의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 방법.
  40. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 포함하는, 생물학적 샘플에서 CD112R의 발현 또는 존재를 측정하기 위한 키트(kit)
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