KR20200128542A - 항-cd73 항체 및 이의 용도 - Google Patents
항-cd73 항체 및 이의 용도 Download PDFInfo
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Abstract
항-CD73 항체 및 이의 항원-결합 단편이 기재되어 있다. 또한, 항체를 인코딩하는 핵산, 항체를 포함하는 조성물, 및 항체를 생산하는 방법 및 항체를 이용하여 암과 같은 질환을 치료 또는 방지하는 방법이 기재되어 있다.
Description
[관련 출원에 대한 상호 참조]
본 출원은 2018년 3월 9일에 제출된 미국 가출원 제 62/640,955 호; 2018년 8월 22일에 제출된 미국 가출원 제 62/721,044 호; 및 2018년 12월 31일에 제출된 미국 가출원 제 62/786,598 호를 우선권으로 주장한다. 각 개시는 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
[기술분야]
본 발명은 단일클론 항-CD73 항체, 항체를 인코딩하는 핵산 및 발현 벡터, 벡터를 함유하는 재조합 세포, 및 항체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 항체를 제조하는 방법, 및 항체를 이용하여 암 및 염증성 질환과 같은 CD73과 연관된 질환 및/또는 연관 합병증을 치료하는 방법이 제공된다.
[전자 제출된 서열 목록에 대한 참조]
본 출원은 파일명이 "689204.10WO Sequence Listing"이고 생성일이 2019년 2월 24일이며 크기가 114 kb인 ASCII 포맷의 서열 목록으로서 EFS-Web을 통해 전자 제출된 서열 목록을 포함한다. EFS-Web을 통해 제출된 서열 목록은 본 명세서의 일부이고 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
CD73 - 또한, 엑토-5'-뉴클레오티데이스 (엑토-5'-NT 또는 EC 3.1.3.5) 로도 알려져 있음 - 은 세포 외 AMP의 탈인산화를 촉매하여 아데노신을 생산하는 세포 표면 포스파테이스이다. CD73이 글리코포스파티딜이노시톨 (GPI)-닻형 단백질임에도, 이는 또한 떨어져서 (shed) 촉매 활성형을 수득할 수 있다 (Arias et al., J Cell Biol. 1997; 136(2):421-31). 생리학적으로, CD73은 저산소증에 의해 유도되어 손상 부위에서 염증을 제어한다 (Bours et al., Pharmacol Ther 2006; 112:358-404). 병리학적으로, CD73은 흔히 조절 T 세포 (Treg) 및 종양 세포 상에서 과발현된 채로 발견된다 (Paul et al., Trends Immunol 2012; 33:231-237). 상승된 CD73 활성은 종양 미세환경 (TME: tumor microenvironment) 에서 아데노신의 축적을 초래한다.
축적되는 증거는 종양 부위의 CD73 활성이 종양 성장 및 생존에 중요한 친-종양 TME (pro-tumor TME) 를 형성하는 주요 요인들 중 하나임을 나타낸다 (Whiteside, Expert Rev. Anticancer Ther. 2017; 17(6):527-35). 세포 외 ATP-아데노신 항상성은, ATP를 AMP로 전환하는 CD39의 활성, 및 AMP를 이용해 아데노신을 생산하는 CD73의 활성에 의해 결정된다. 아데노신은 아데노신 수용체 A2a 및 A2b로의 결합을 통해, 대식세포 (Csoka et al., FASEB J 2012; 26:376-386), 수지상 세포 (Panther et al., Blood 2003; 101:3985-3990), 자연 살해 세포 (Hausler et al., Cancer Immunol Immunother 2011; 60:1405-1418), 및 T 이펙터 세포 (Hoskin et al., Int J Oncol 2008; 32:527-535) 와 같은 많은 면역 세포를 조절함으로써 선천 면역 및 적응 면역 모두를 억제한다. 그러므로, 아데노신에 의한 면역 억제는 TME에서 CD73의 효소 활성을 저해함으로써 완화될 수 있다는 가설이 세워졌다. 실로, 생체 내 동물 연구 (Jin et al., Cancer Res 2010; 70:2245-2255; Stagg et al., Cancer Res 2011; 71:2890-2900) 는 CD73의 효소 활성을 저해하는 것이 종양 형성 및 성장을 억제한다는 것을 나타내는데, 이는 CD73이 암 요법에 대한 유망한 표적이라는 것을 시사한다. CD73 효소 활성을 저해하고/하거나 세포 표면 상의 CD73 함량을 감소시키는 (즉, CD73 함입을 유도함으로써) 단일클론 항체가, 단일요법으로서 단독으로 암을 치료하거나 또는 다른 면역-항암 약물 및/또는 다른 유형의 항암 요법과 조합으로 암을 치료하는 데 있어서 효과적일 수 있다.
한 일반적 양태에서, 본 발명은 CD73에 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.
하기 폴리펩티드 서열을 갖는, 중쇄 상보성 결정 부위 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, 경쇄 상보성 결정 부위 1 (LCDR1), LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제공되며:
(1)
SEQ ID NO:89, 90, 91, 149, 150, 및 151, 각각;
(2)
SEQ ID NO:41, 42, 43, 101, 102, 및 103, 각각;
(3)
SEQ ID NO:44, 45, 46, 104, 105, 및 106, 각각;
(4)
SEQ ID NO:47, 48, 49, 107, 108, 및 109, 각각;
(5)
SEQ ID NO:50, 51, 52, 110, 111, 및 112, 각각;
(6)
SEQ ID NO:53, 54, 55, 113, 114, 및 115, 각각;
(7)
SEQ ID NO:56, 57, 58, 116, 117, 및 118, 각각;
(8)
SEQ ID NO:59, 60, 61, 119, 120, 및 121, 각각;
(9)
SEQ ID NO:62, 63, 64, 122, 123, 및 124, 각각;
(10)
SEQ ID NO:65, 66, 67, 125, 126, 및 127, 각각;
(11)
SEQ ID NO:68, 69, 70, 128, 129, 및 130, 각각;
(12)
SEQ ID NO:71, 72, 73, 131, 132, 및 133, 각각;
(13)
SEQ ID NO:74, 75, 76, 134, 135, 및 136, 각각;
(14)
SEQ ID NO:77, 78, 79, 137, 138, 및 139, 각각;
(15)
SEQ ID NO:80, 81, 82, 140, 141, 및 142, 각각;
(16)
SEQ ID NO:83, 84, 85, 143, 144, 및 145, 각각;
(17)
SEQ ID NO:86, 87, 88, 146, 147, 및 148, 각각;
(18)
SEQ ID NO:92, 93, 94, 152, 153, 및 154, 각각;
(19)
SEQ ID NO:95, 96, 97, 155, 156, 및 157, 각각; 또는
(20)
SEQ ID NO:98, 99, 100, 158, 159, 및 160, 각각;
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 CD73, 바람직하게는 인간 CD73에 특이적으로 결합한다.
하기 폴리펩티드 서열을 갖는, 중쇄 상보성 결정 부위 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, 경쇄 상보성 결정 부위 1 (LCDR1), LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제공되며:
(1)
SEQ ID NO:209, 210, 211, 269, 270, 및 271, 각각;
(2)
SEQ ID NO:161, 162, 163, 221, 222, 및 223, 각각;
(3)
SEQ ID NO:164, 165, 166, 224, 225, 및 226, 각각;
(4)
SEQ ID NO:167, 168, 169, 227, 228, 및 229, 각각;
(5)
SEQ ID NO:170, 171, 172, 230, 231, 및 232, 각각;
(6)
SEQ ID NO:173, 174, 175, 233, 234, 및 235, 각각;
(7)
SEQ ID NO:176, 177, 178, 236, 237, 및 238, 각각;
(8)
SEQ ID NO:179, 180, 181, 239, 240, 및 241, 각각;
(9)
SEQ ID NO:182, 183, 184, 242, 243, 및 244, 각각;
(10)
SEQ ID NO:185, 186, 187, 245, 246, 및 247, 각각;
(11)
SEQ ID NO:188, 189, 190, 248, 249, 및 250, 각각;
(12)
SEQ ID NO:191, 192, 193, 251, 252, 및 253, 각각;
(13)
SEQ ID NO:194, 195, 196, 254, 255, 및 256, 각각;
(14)
SEQ ID NO:197, 198, 199, 257, 258, 및 259, 각각;
(15)
SEQ ID NO:200, 201, 202, 260, 261, 및 262, 각각;
(16)
SEQ ID NO:203, 204, 205, 263, 264, 및 265, 각각;
(17)
SEQ ID NO:206, 207, 208, 266, 267, 및 268, 각각;
(18)
SEQ ID NO:212, 213, 214, 272, 273, 및 274, 각각;
(19)
SEQ ID NO:215, 216, 217, 275, 276, 및 277, 각각; 또는
(20)
SEQ ID NO:218, 219, 220, 278, 279, 및 280, 각각;
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 CD73, 바람직하게는 인간 CD73에 특이적으로 결합한다.
특정 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 SEQ ID NO: 33, 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 35, 37 또는 39에 대해서 적어도 95 %, 적어도 96 %, 적어도 97 %, 적어도 98 %, 또는 적어도 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 또는 SEQ ID NO: 34, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 36, 38 또는 40에 대해서 적어도 95 %, 적어도 96 %, 적어도 97 %, 적어도 98 %, 또는 적어도 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
특정 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다:
(a)
SEQ ID NO:33의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:34의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(b)
SEQ ID NO:1의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:2의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(c)
SEQ ID NO:3의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:4의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(d)
SEQ ID NO:5의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:6의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(e)
SEQ ID NO:7의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:8의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(f)
SEQ ID NO:9의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:10의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(g)
SEQ ID NO:11의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:12의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(h)
SEQ ID NO:13의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:14의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(i)
SEQ ID NO:15의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:16의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(j)
SEQ ID NO:17의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:18의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(k)
SEQ ID NO:19의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:20의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(l)
SEQ ID NO:21의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:22의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(m)
SEQ ID NO:23의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:24의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(n)
SEQ ID NO:25의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:26의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(o)
SEQ ID NO:27의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:28의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(p)
SEQ ID NO:29의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:30의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(q)
SEQ ID NO:31의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:32의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(r)
SEQ ID NO:35의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:36의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(s)
SEQ ID NO:37의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:38의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역; 또는
(t)
SEQ ID NO:39의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:40의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역.
특정 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가용성 및/또는 세포-표면 CD73의 효소 활성을 저해한다.
특정 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 CD73의 이합체화를 방지한다.
특정 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 CD73의 함입을 유도한다.
특정 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 키메라이다.
특정 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 또는 인간화된다.
특정 구체예에서, 인간화 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다:
(1)
SEQ ID NO:286의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:293의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(2)
SEQ ID NO:282의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:290의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(3)
SEQ ID NO:282의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:291의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(4)
SEQ ID NO:282의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:292의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(5)
SEQ ID NO:283의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:290의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(6)
SEQ ID NO:283의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:291의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(7)
SEQ ID NO:283의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:292의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(8)
SEQ ID NO:284의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:290의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(9)
SEQ ID NO:284의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:291의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(10)
SEQ ID NO:284의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:292의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(11)
SEQ ID NO:285의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:290의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(12)
SEQ ID NO:285의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:291의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(13)
SEQ ID NO:285의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:292의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(14)
SEQ ID NO:283의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:293의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(15)
SEQ ID NO:284의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:293의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(16)
SEQ ID NO:285의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:293의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(17)
SEQ ID NO:286의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:290의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(18)
SEQ ID NO:286의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:291의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(19)
SEQ ID NO:286의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:292의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(20)
SEQ ID NO:287의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:294의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(21)
SEQ ID NO:288의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:294의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(22)
SEQ ID NO:289의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:294의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(23)
SEQ ID NO:284의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:299의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(24)
SEQ ID NO:295의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:299의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(25)
SEQ ID NO:296의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:299의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(26)
SEQ ID NO:297의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:299의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역; 또는
(27)
SEQ ID NO:298의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:299의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역.
특정 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 T 세포를 활성화시킬 수 있다.
또한, 본원에 개시된 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산이 제공된다.
또한, 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산을 포함하는 벡터가 제공된다.
또한, 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포가 제공된다.
특정 구체예에서, 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물이 제공된다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, CD73의 뉴클레오티데이스 활성을 저해하는 것을 필요로 하는 대상체에서 CD73의 뉴클레오티데이스 활성을 저해하는 방법이 제공된다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, CD73의 이합체화를 방지하는 것을 필요로 하는 대상체에서 CD73의 이합체화를 방지하는 방법이 제공된다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, CD73의 함입을 유도하는 것을 필요로 하는 대상체에서 CD73의 함입을 유도하는 방법이 제공된다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 암은 임의의 액형 또는 고형암일 수 있으며, 이는 예를 들어 폐암, 위암, 결장암, 간세포 암종, 신세포 암종, 방광 요로 상피세포 암종, 전이성 흑색종, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 두경부암, 췌장암, 신경교종, 교모세포종, 및 기타 고형 종양, 및 비-호지킨 림프종 (NHL), 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 다발성 골수종 (MM), 급성 골수성 백혈병 (AML), 및 기타 액형 종양에서 선택될 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하는 방법으로서, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산을 포함하는 세포를, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하기 위한 조건 하에서 배양시키는 것, 및 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 세포 또는 배양물로부터 회수하는 것을 포함하는 방법이 제공된다.
또한, 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물을 생산하는 방법으로서, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 약학적으로 허용가능한 담체와 조합하여 약학적 조성물을 수득하는 것을 포함하는 방법이 제공된다.
또한, 대상체에서 CD73의 수준을 결정하는 방법이 제공된다. 방법은 (a) 대상체로부터 시료를 수득하는 것; (b) 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 시료를 접촉시키는 것; 및 (c) 대상체에서 CD73의 수준을 결정하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 시료는 조직 시료이다. 조직 시료는, 예를 들어, 암 조직 시료일 수 있다. 특정 구체예에서, 시료는 혈액 시료이다.
또한, 효소 활성은 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의해 완전히 저해될 수 있는, 대상체에서 CD73의 엑토-5'-뉴클레오티데이스 활성을 결정하는 방법이 제공된다. 방법은 (a) 대상체로부터 시료를 수득하는 것; (b) 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 시료를 접촉시키는 것; 및 (c) 대상체에서 CD73의 엑토-5'-뉴클레오티데이스 활성을 결정하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 시료는 조직 시료이다. 조직 시료는, 예를 들어, 암 조직 시료일 수 있다. 특정 구체예에서, 시료는 혈액 시료이다.
본 출원의 전술한 발명의 내용, 뿐만 아니라 하기 바람직한 구체예의 상세한 설명은 첨부된 도면과 함께 읽는 경우에 보다 잘 이해될 것이다. 그러나, 본 출원이 도면에 나타낸 정확한 구체예에 한정되지 않는다는 것을 이해해야 할 것이다.
도 1a 및 1b는 키메라 항-CD73 mAb에 의해 플레이트 상에 부동화된 인간 CD73의 뉴클레오티데이스 활성의 저해를 나타낸다. 무항체, 항체가 첨가되지 않은 효소 반응; AMPCP (아데노신 5'(α,β-메틸렌) 디포스페이트) 가 효소 활성의 저해에 대한 대조군으로서 이용되었다.
도 2a-2e는 ELISA 검정에서 키메라 항-CD73 mAb가 인간 CD73에 결합하는 것을 나타낸다.
도 3은 키메라 mAb 60A9A/IgG4 및 39G8A/IgG4에 의한 가용성 인간 CD73의 뉴클레오티데이스 활성의 저해를 나타낸다. 무 mAb, 항체가 첨가되지 않은 효소 반응; 무 CD73, 항체도 CD73도 첨가되지 않은 음성 대조군 반응.
도 4a-4d는 인간화 mAb 60A9-H5L4/IgG4에 의한 인간 CD73에 결합하는 것 및 인간 CD73의 뉴클레오티데이스 활성의 저해를 나타낸다. 도 4a는 ELISA 검정에서 인간화 mAb 60A9-H5L4/IgG4가 인간 CD73에 결합하는 것을 나타내고; 키메라 mAb 60A9A/IgG4가 대조군으로 사용되었다. 도 4b는 인간화 mAb 60A9-H5L4/IgG4에 의한 가용성 인간 CD73의 뉴클레오티데이스 활성의 저해를 나타낸다. 무 mAb, 항체가 첨가되지 않은 효소 반응; 무 CD73, CD73이 첨가되지 않은 효소 반응. 도 4c는 인간화 mAb 60A9-H5L4/IgG4에 의해 A375 세포의 표면 상에서 발현된 인간 CD73의 뉴클레오티데이스 활성의 저해를 나타내고; 키메라 mAb 60A9A/IgG4가 대조군으로 이용되었다. 무 mAb, mAb가 첨가되지 않은 효소 반응; 무 AMP, AMP가 첨가되지 않은 효소 반응; 무세포, 세포가 첨가되지 않은 효소 반응. 도 4d는 인간화 mAb 60A9-H3L5/IgG4, 60A9-H5L5/IgG4, 60A9-H6L5/IgG4, 60A9-H7L5/IgG4, 60A9-H8L5/IgG4 및 60A9-H9L5/IgG4에 의한 A375 세포의 표면 상에서 발현된 인간 CD73의 뉴클레오티데이스 활성의 저해를 나타내고; 키메라 mAb 60A9A/IgG4가 대조군으로서 이용되었다. 무 mAb, mAb가 첨가되지 않은 효소 반응; 무 AMP, AMP가 첨가되지 않은 효소 반응; 무세포, 세포가 첨가되지 않은 효소 반응.
도 5는 인간화 항-CD73 mAb 60A9-H5L4/IgG4에 의한 환자 혈청 시료 중 CD73의 뉴클레오티데이스 활성의 저해를 나타낸다. 무 mAb, 항체가 첨가되지 않은 효소 반응; 검정 백그라운드, 100 μM의 AMP 및 100 μM의 ATP가 첨가된 효소 반응; 카운트/초 (cps: counts/second).
도 6은 인간화 항-CD73 mAb 60A9-H5L4/IgG4에 의한 T 세포 증식의 활성화를 나타낸다.
도 1a 및 1b는 키메라 항-CD73 mAb에 의해 플레이트 상에 부동화된 인간 CD73의 뉴클레오티데이스 활성의 저해를 나타낸다. 무항체, 항체가 첨가되지 않은 효소 반응; AMPCP (아데노신 5'(α,β-메틸렌) 디포스페이트) 가 효소 활성의 저해에 대한 대조군으로서 이용되었다.
도 2a-2e는 ELISA 검정에서 키메라 항-CD73 mAb가 인간 CD73에 결합하는 것을 나타낸다.
도 3은 키메라 mAb 60A9A/IgG4 및 39G8A/IgG4에 의한 가용성 인간 CD73의 뉴클레오티데이스 활성의 저해를 나타낸다. 무 mAb, 항체가 첨가되지 않은 효소 반응; 무 CD73, 항체도 CD73도 첨가되지 않은 음성 대조군 반응.
도 4a-4d는 인간화 mAb 60A9-H5L4/IgG4에 의한 인간 CD73에 결합하는 것 및 인간 CD73의 뉴클레오티데이스 활성의 저해를 나타낸다. 도 4a는 ELISA 검정에서 인간화 mAb 60A9-H5L4/IgG4가 인간 CD73에 결합하는 것을 나타내고; 키메라 mAb 60A9A/IgG4가 대조군으로 사용되었다. 도 4b는 인간화 mAb 60A9-H5L4/IgG4에 의한 가용성 인간 CD73의 뉴클레오티데이스 활성의 저해를 나타낸다. 무 mAb, 항체가 첨가되지 않은 효소 반응; 무 CD73, CD73이 첨가되지 않은 효소 반응. 도 4c는 인간화 mAb 60A9-H5L4/IgG4에 의해 A375 세포의 표면 상에서 발현된 인간 CD73의 뉴클레오티데이스 활성의 저해를 나타내고; 키메라 mAb 60A9A/IgG4가 대조군으로 이용되었다. 무 mAb, mAb가 첨가되지 않은 효소 반응; 무 AMP, AMP가 첨가되지 않은 효소 반응; 무세포, 세포가 첨가되지 않은 효소 반응. 도 4d는 인간화 mAb 60A9-H3L5/IgG4, 60A9-H5L5/IgG4, 60A9-H6L5/IgG4, 60A9-H7L5/IgG4, 60A9-H8L5/IgG4 및 60A9-H9L5/IgG4에 의한 A375 세포의 표면 상에서 발현된 인간 CD73의 뉴클레오티데이스 활성의 저해를 나타내고; 키메라 mAb 60A9A/IgG4가 대조군으로서 이용되었다. 무 mAb, mAb가 첨가되지 않은 효소 반응; 무 AMP, AMP가 첨가되지 않은 효소 반응; 무세포, 세포가 첨가되지 않은 효소 반응.
도 5는 인간화 항-CD73 mAb 60A9-H5L4/IgG4에 의한 환자 혈청 시료 중 CD73의 뉴클레오티데이스 활성의 저해를 나타낸다. 무 mAb, 항체가 첨가되지 않은 효소 반응; 검정 백그라운드, 100 μM의 AMP 및 100 μM의 ATP가 첨가된 효소 반응; 카운트/초 (cps: counts/second).
도 6은 인간화 항-CD73 mAb 60A9-H5L4/IgG4에 의한 T 세포 증식의 활성화를 나타낸다.
다양한 간행물, 논문 및 특허가 배경기술에서 및 본 명세서 전반에 걸쳐 인용되거나 또는 기재되어 있으며; 이들 참고문헌 각각은 그 전체가 본원에 참조로 포함된다. 본 명세서에 포함된 문헌, 행위, 재료, 장치, 물품 등의 논의는 본 발명의 맥락을 제공하는 목적을 위한 것이다. 이러한 논한 것이 이들 내용들 중 임의의 내용 또는 전부가, 개시되어 있거나 또는 청구된 임의의 발명에 대한 종래 기술의 일부를 형성한다는 인정은 아니다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 이용된 모든 기술적 용어 및 과학적 용어는, 본 발명이 적용되는 기술분야의 당업자가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 다르게는, 본원에서 이용된 특정 용어는 본 명세서에서 제시된 의미를 갖는다.
본원 및 첨부된 청구범위에서 이용된, 단수형 "부정 관사 (a, an)" 및 "정관사 (the)" 는, 문맥이 달리 명확하게 지시하지 않는 한, 복수의 대상을 포함한다는 것에 유의해야 한다.
달리 언급되지 않는 한, 본원에 기재된 농도 또는 농도 범위와 같은 임의의 수치는 모든 경우에서 "약"이라는 용어에 의해 변형되는 것으로서 이해될 것이다. 따라서, 수치는 통상적으로, 인용된 값의 ±10 %를 포함한다. 예를 들어, 1 mg/mL의 농도는 0.9 mg/mL 내지 1.1 mg/mL를 포함한다. 마찬가지로, 1 % 내지 10 % (w/v) 의 농도 범위는 0.9 % (w/v) 내지 11 % (w/v) 를 포함한다. 본원에서 이용된, 수치 범위의 이용은 문맥이 명백히 달리 나타내지 않는 한, 모든 가능한 하위범위, 그러한 범위 내의 정수 및 값의 분수를 포함하는 그 범위 내의 모든 개별 수치를 명시적으로 포함한다.
달리 나타내지 않는 한, 일련의 요소에 선행하는 "적어도"라는 용어는 일련의 모든 요소를 나타내는 것으로 이해될 것이다. 당업자는 본원에 기재된 본 발명의 특정 구체예에 대한 많은 등가물을, 단지 통상적인 실험을 이용하여 인식하거나 또는 확인 가능할 것이다. 이러한 등가물은 발명에 의해 포괄되는 것으로 의도된다.
본원에서 이용된, "포함하다 (comprise)", "포함하는 (comprising)", "포함하다 (include)", "포함하는 (including)", "갖다", "갖는", "함유하다" 또는 "함유하는"이라는 용어 또는 이의 임의의 다른 변형은, 언급된 정수 또는 정수의 군을 포함하나, 임의의 다른 정수 또는 정수의 군을 배제하지 않는 것을 시사하는 것으로 이해될 것이며, 비-배타적이거나 또는 개방형인 것으로 의도된다. 예를 들어, 요소의 목록을 포함하는 조성물, 혼합물, 공정, 방법, 물품 또는 장치가 반드시 이들 요소에만 한정되는 것이 아니라, 이러한 조성물, 혼합물, 공정, 방법, 물품 또는 장치에 고유하지 않거나 또는 명시적으로 열거되지 않은 다른 요소를 포함할 수 있다. 또한, 반대로 명시적으로 언급되지 않는 한, "또는"은 포괄적인 또는 (inclusive or) 을 나타내고, 배타적인 또는 (exclusive or) 을 나타내지 않는다. 예를 들어, 조건 A 또는 B는 다음 중 어느 하나에 의해 충족된다: A가 참 (또는 존재함) 이고 B가 거짓 (또는 존재하지 않음), A가 거짓 (또는 존재하지 않음) 이고 B가 참 (또는 존재함), 및 A와 B 둘 모두가 참 (또는 존재함).
본원에서 이용된, 복수의 인용된 요소 사이의 결합 용어 "및/또는"은 개별 및 조합된 옵션 둘 모두를 포함하는 것으로서 이해된다. 예를 들어, 두 요소가 "및/또는"으로 결합되는 경우, 제 1 옵션은 제 2 요소 없이 제 1 요소가 적용 가능한 것을 나타낸다. 제 2 옵션은 제 1 요소 없이 제 2 요소가 적용 가능한 것을 나타낸다. 제 3 옵션은 제 1 요소와 제 2 요소가 함께 적용 가능한 것을 나타낸다. 이들 옵션 중 임의의 한 옵션은 그 의미에 포함되는 것으로 이해되므로, 본원에서 이용된 "및/또는"이라는 용어의 요건을 충족시킨다. 또한, 옵션들 중 하나보다 많은 옵션이 동시에 적용 가능한 것이 그 의미에 속하는 것으로 이해되므로, "및/또는"이라는 용어의 요건을 충족시킨다.
본원에서 이용된, 명세서 및 청구범위 전반에 걸쳐 이용된 "-로 이루어지다 (단수 주어)"라는 용어, 또는 "-로 이루어지다 (복수 주어)" 또는 "-로 이루어지는" 과 같은 변형은 임의의 언급된 정수 또는 정수의 군을 포함하나, 추가의 정수 또는 정수의 군은 명시된 방법, 구조(체) 또는 조성(물)에 추가될 수 없다는 것을 나타낸다.
본원에서 이용된, 명세서 및 청구범위 전반에 걸쳐 이용된 "-로 본질적으로 이루어지다 (단수 주어)"라는 용어, 또는 "-로 본질적으로 이루어지다 (복수 주어)" 또는 "-로 본질적으로 이루어지는"과 같은 변형은 임의의 언급된 정수 또는 정수의 군을 포함하고, 명시된 방법, 구조(체) 또는 조성(물)의 기본적인 특성 또는 신규한 특성을 실질적으로 변화시키지 않는 임의의 언급된 정수 또는 정수의 군을 임의로 포함한다는 것을 나타낸다. M.P.E.P. § 2111.03을 참고한다.
본원에서 이용된, "대상체"는 임의의 동물, 바람직하게는 포유동물, 가장 바람직하게는 인간을 의미한다. 본원에서 이용된 "포유동물"이라는 용어는 임의의 포유동물을 포함한다. 포유동물의 예시는 소, 말, 양, 돼지, 고양이, 개, 마우스, 랫트, 토끼, 기니피그, 원숭이, 인간 등을, 보다 바람직하게는 인간을 포함하나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
"우", "좌", "하" 및 "상"이라는 단어는 참조되는 도면 내 방향을 지시한다.
바람직한 발명의 성분의 치수 또는 특징을 나타내는 경우에, 본원에서 이용된 "약", "대략", "일반적으로", "실질적으로"라는 용어 및 유사한 용어는, 기재된 치수/특징이 엄격한 경계 또는 파라미터가 아니며 당업자가 이해하는 바와 기능적으로 동일하거나 또는 유사한 근소한 변형을 이로부터 배제하지 않는다는 것을 나타낸다는 것이 또한 이해되어야 한다. 최소한, 수치 파라미터를 포함하는 이러한 참조는 당업계에서 허용되는 수학적 및 산업적 원리 (예, 반올림, 측정 또는 다른 계통 오차, 제작 공차 등) 를 이용하여 최하위 숫자를 변화시키지 않는 변형을 포함할 것이다.
둘 이상의 핵산 또는 폴리펩티드 서열 (예, 항-CD73 항체 및 이를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, CD73 폴리펩티드 및 이를 인코딩하는 CD73 폴리뉴클레오티드) 의 맥락에서, "동일한" 또는 백분율 "일치도"라는 용어는 동일하거나 또는 명시된 백분율의 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드를 갖는 둘 이상의 서열 또는 하위서열을 나타내며, 최대 일치를 위해 비교 및 정렬되는 경우에, 하기의 서열 비교 알고리즘 중 하나를 이용하거나 또는 육안 검사에 의해 측정된다.
서열 비교를 위해, 통상적으로 하나의 서열은 테스트 서열이 비교되는 참조 서열 역할을 한다. 서열 비교 알고리즘을 이용하는 경우, 테스트 서열 및 참조 서열이 컴퓨터에 입력되고, 하위서열 좌표가 지정되며, 필요한 경우에, 서열 알고리즘 프로그램 파라미터가 지정된다. 이어서, 서열 비교 알고리즘은 지정된 프로그램 파라미터에 기초하여, 참조 서열에 대한 테스트 서열(들) 의 백분율 서열 일치도를 계산한다.
비교를 위한 최적의 서열 정렬은 예를 들어 다음에 의해 수행될 수 있다: Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981) 의 로컬 상동성 알고리즘 (local homology algorithm), Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970) 의 상동성 정렬 알고리즘, Pearson & Lipman, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988) 의 유사성 검색 방법, 이들 알고리즘의 컴퓨터화된 실행 (computerized implementation) (Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI의 GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA), 또는 육안 검사 (일반적으로, Current Protocols in Molecular Biology, F.M. Ausubel et al., eds., Current Protocols, a joint venture between Greene Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., (1995 Supplement) (Ausubel) 을 참고).
백분율 서열 일치도 및 서열 유사성을 결정하는 데 적합한 알고리즘의 예시는 BLAST 및 BLAST 2.0 알고리즘으로, Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410 및 Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402에 각각 기재되어 있다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 National Center for Biotechnology Information을 통해 공개적으로 입수 가능하다. 이 알고리즘은 먼저, 쿼리 서열 내 길이가 W인 짧은 워드 (word) 를 식별함으로써, 데이터베이스 서열 내 동일한 길이의 워드와 정렬되는 경우에, 매칭되거나 또는 어떤 양수인 임계 스코어 (threshold score) T를 충족시키는 고 스코어 서열 쌍 (HSP: high scoring sequence pair) 을 식별하는 것을 수반한다. T는 네이버후드 워드 스코어 임계값 (neighborhood word score threshold) 이라고 한다 (상기 Altschul et al.). 이들 초기 네이버후드 워드 히트 (neighborhood word hit) 는 이들을 함유하는 보다 긴 HSP를 찾기 위한 검색을 개시하기 위한 시드 (seed) 역할을 한다. 이어서, 워드 히트는 누적 정렬 스코어가 증가될 수 있는 한, 각 서열을 따라 양 방향으로 확장된다.
누적 스코어는, 뉴클레오티드 서열의 경우, 파라미터 M (매칭 잔기의 쌍에 대한 리워드 스코어; 항상 > 0) 및 N (미스매칭 잔기에 대한 패널티 스코어; 항상 < 0) 을 이용하여 계산된다. 아미노산 서열의 경우, 스코어링 매트릭스 (scoring matrix) 가 누적 스코어를 계산하는 데 이용된다. 각 방향에서 워드 히트의 연장은 다음의 경우에서 중단된다: 누적 정렬 스코어가 이의 최대 달성 값으로부터 양 (quantity) X가 하락하는 경우; 하나 이상의 음수-스코어링 잔기 정렬의 축적으로 인해 누적 스코어가 0 이하가 되는 경우; 또는 어느 한 서열의 말단이 도달되는 경우. BLAST 알고리즘 파라미터 W, T 및 X는 정렬의 민감도와 속도를 결정한다. BLASTN 프로그램 (뉴클레오티드 서열용) 은 워드 길이 (W) 11, 기대값 (E) 10, M=5, N=-4, 및 두 가닥의 비교를 디폴트로 이용한다. 아미노산 서열을 위한, BLASTP 프로그램은 워드 길이 (W) 3, 기대값 (E) 10, 및 BLOSUM62 스코어링 매트릭스를 디폴트로 이용한다 (Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915 (1989) 를 참고).
백분율 서열 일치도를 계산하는 것에 더하여, BLAST 알고리즘이 또한 두 서열 사이 유사성의 통계학적 분석을 수행한다 (예를 들어, Karlin & Altschul, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 90:5873-5787 (1993) 을 참고). BLAST 알고리즘에 의해 제공되는 유사성의 한 척도는 최소 확률 합 (P(N)) 이며, 이는 두 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 사이의 매치가 우연히 일어날 확률을 나타낸다. 예를 들어, 테스트 핵산을 참조 핵산에 비교하는 것에서 최소 확률 합이 약 0.1 미만, 보다 바람직하게는 약 0.01 미만, 가장 바람직하게는 약 0.001 미만인 경우에, 핵산이 참조 서열과 유사한 것으로 간주된다.
두 핵산 서열 또는 폴리펩티드가 실질적으로 동일하다는 것이 추가로 나타내는 것은, 제 1 핵산에 의해 인코딩된 폴리펩티드가 제 2 핵산에 의해 인코딩된 폴리펩티드와 면역학적 교차 반응성이라는 것이며, 이는 하기에 기재되어 있다. 따라서, 폴리펩티드는 통상적으로, 예를 들어 두 펩티드가 보존적 치환에 의해서만 상이한 제 2 폴리펩티드와 실질적으로 동일하다. 두 핵산 서열이 실질적으로 동일하다는 것이 또 달리 나타내는 것은, 두 분자가 엄격한 조건 하에서 서로 혼성화한다는 것이다.
본원에서 이용된, "저해하다", "저해하는" 및 "저해"라는 용어는 활성, 반응, 병상, 질환 또는 기타 생물학적 파라미터를 감소시키는 것을 의미한다. 이는 활성, 반응, 병상 또는 질환의 완전한 제거를 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 또한, 이는 예를 들어, 자연적인 수준 또는 대조군 수준에 비해서 활성, 반응, 병상 또는 질환의 10 %의 감소를 포함할 수 있다. 따라서, 감소는 자연적인 수준 또는 대조군 수준에 비해서 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 % 또는 그 사이의 임의의 양의 감소일 수 있다. 비-제한적인 예시로서, 본 발명의 항체는 CD73 단백질의 뉴클레오티데이스 활성을 저해할 수 있다. CD73 단백질의 활성은 자연적인 CD73 단백질 활성에 비해서 감소되거나 또는 제거될 수 있다. 또 다른 비-제한적인 예시로서, 본 발명의 항체는 대상체에서 CD73 단백질의 이합체화를 저해하거나 또는 방지할 수 있다. CD73의 이합체화는 자연적인 CD73 이합체화에 비해서 감소되거나 또는 제거될 수 있다.
항체
본 발명은 일반적으로, 단리된 항-CD73 항체, 항체를 인코딩하는 핵산 및 발현 벡터, 벡터를 함유하는 재조합 세포, 및 항체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 일반적으로 항체를 제조하는 방법 및 항체를 이용하여 암을 포함하는 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 항체는 다음을 포함하나, 이들에 한정되는 것은 아닌 하나 이상의 바람직한 기능적 특성을 보유한다: CD73에 결합하는 고-친화도, CD73에 대한 높은 특이성, CD73의 뉴클레오티데이스 활성을 저해하는 능력, CD73의 이합체화를 방지하는 능력, CD73의 세포 표면 함량을 감소시키는 CD73의 세포 내로의 함입을 유도하는 능력, 및 단독으로 또는 다른 항암 요법과 조합으로 투여되는 경우에 종양 성장의 저해를 필요로 하는 대상체 및 동물 모델에서 종양 성장을 저해하는 능력.
일반적 양태에서, 본 발명은 CD73에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.
본원에서 이용된, "항체"라는 용어는 넓은 의미로 이용되며, 단일클론 또는 다중클론인, 인간, 인간화, 복합 및 키메라 항체 및 항체 단편을 포함하는 면역글로불린 및 항체 분자를 포함한다. 대체로, 항체는 특이적인 항원에 대한 결합 특이성을 보이는 단백질 또는 펩티드 사슬이다. 항체 구조는 주지되어 있다. 면역글로불린은 중쇄 불변 도메인 아미노산 서열에 따라, 5 개의 주요 클래스 (즉, IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM) 로 지정될 수 있다. IgA 및 IgG는 동형 IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로 더 하위-분류된다. 따라서, 본 발명의 항체는 5 개의 주요 클래스 또는 상응하는 하위-클래스 중 임의의 클래스일 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 항체는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4이다. 척추동물 종의 항체 경쇄는, 이들의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 2 개의 명확히 구별되는 유형, 즉 카파 및 람다 중 하나로 지정될 수 있다. 따라서, 본 발명의 항체는 카파 또는 람다 경쇄 불변 도메인을 함유할 수 있다. 특정 구체예에 따르면, 본 발명의 항체는 랫트 또는 인간 항체로부터의 중쇄 및/또는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 및 경쇄 불변 도메인에 더하여, 항체는 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역으로 구성된 항원-결합 영역을 함유하며, 이의 각각은 세 도메인 (즉, 상보성 결정 부위 1-3; CDR1, CDR2 및 CDR3) 을 함유한다. 경쇄 가변 영역 도메인은 대안적으로는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3이라고 하며, 중쇄 가변 영역 도메인은 대안적으로는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3이라고 한다.
본원에서 이용된, "단리된 항체"라는 용어는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 나타낸다 (예를 들어, CD73에 특이적으로 결합하는 단리된 항체에는 CD73에 결합하지 않는 항체가 실질적으로 없음). 또한, 단리된 항체에는 다른 세포 물질 및/또는 화학 물질이 실질적으로 없다.
본원에서 이용된, "단일클론 항체"라는 용어는 실질적으로 균질한 항체의 집단으로부터 수득되는 항체를 나타내며, 즉, 집단을 포함하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는, 자연적으로 발생 가능한 돌연변이를 제외하고는, 동일하다. 본 발명의 단일클론 항체는 하이브리도마 방법, 파지 디스플레이 기술, 단일 림프구 유전자 클로닝 기술 또는 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 단일클론 항체는 인간 중쇄 전이유전자 및 경쇄 전이유전자를 포함하는 게놈을 갖는, 형질전환 마우스 또는 랫트와 같은 형질전환 비-인간 동물로부터 수득된 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생산될 수 있다.
본원에서 이용된, "항원-결합 단편"이라는 용어는 다음과 같은 항체 단편을 나타낸다: 예를 들어, 디아바디 (diabody), Fab, Fab', F(ab')2, Fv 단편, 다이설파이드 안정화 Fv 단편 (dsFv), (dsFv)2, 이중 특이성 dsFv (dsFv-dsFv'), 다이설파이드 안정화 디아바디 (ds 디아바디), 단일-사슬 항체 분자 (scFv), 단일 도메인 항체 (sdab), scFv 이합체 (2가 디아바디), 하나 이상의 CDR을 포함하는 항체의 부분으로부터 형성된 다중 특이성 항체, 낙타화 (camelized) 단일 도메인 항체, 나노바디 (nanobody), 도메인 항체, 2가 도메인 항체, 또는 항원에 결합하나 완전한 항체 구조를 포함하지 않는 임의의 다른 항체 단편. 항원-결합 단편은 모 항체 또는 모 항체 단편이 결합하는 동일한 항원에 결합할 수 있다. 특정 구체예에 따르면, 항원-결합 단편은 경쇄 가변 영역, 경쇄 불변 영역 및 중쇄의 Fd 세그먼트를 포함한다. 다른 특정 구체예에 따르면, 항원-결합 단편은 Fab 및 F(ab') 를 포함한다.
본원에서 이용된, "단일-사슬 항체"라는 용어는 약 15 내지 약 20 개 아미노산의 짧은 펩티드에 의해 연결된 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 당업계의 통상적인 단일-사슬 항체를 나타낸다. 본원에서 이용된, "단일 도메인 항체"라는 용어는 중쇄 가변 영역 및 중쇄 불변 영역을 포함하거나 또는 중쇄 가변 영역만 포함하는 당업계의 통상적인 단일 도메인 항체를 나타낸다.
본원에서 이용된, "인간 항체"라는 용어는 당업계에 공지된 임의의 기법을 이용하여 제조된 인간에 의해 생산된 항체에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 인간에 의해 생산된 항체를 나타낸다. 인간 항체의 이러한 정의는 온전한 또는 전장 항체, 이의 단편, 및/또는 적어도 하나의 인간 중쇄 및/또는 경쇄 폴리펩티드를 포함하는 항체를 포함한다.
본원에서 이용된, "인간화 항체"라는 용어는 항체의 항원-결합 특성이 유지되나, 인체 내에서 이의 항원성이 감소되도록, 인간 항체에 대한 서열 상동성을 증가시키기 위해 변형되는 비-인간 항체를 나타낸다.
본원에서 이용된, "키메라 항체"라는 용어는 면역글로불린 분자의 아미노산 서열이 둘 이상의 종으로부터 유래되는 항체를 나타낸다. 경쇄 및 중쇄 둘 모두의 가변 영역은 종종, 목적되는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 한 종의 포유동물 (예를 들어, 마우스, 랫트, 토끼 등) 로부터 유래된 항체의 가변 영역에 상응하는 한편, 불변 영역은 또 다른 종의 포유동물 (예를 들어, 인간) 로부터 유래된 항체의 서열에 상응하여, 그 종에서 면역 반응을 유발하는 것을 방지한다.
본원에서 이용된, "다중 특이성 항체"라는 용어는 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하는 항체를 나타내며, 여기서 복수의 제 1 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제 1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖고, 복수의 제 2 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제 2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는다. 구체예에서, 제 1 및 제 2 에피토프는 동일한 항원, 예를 들어, 동일한 단백질 (또는 다합체성 단백질의 하위단위) 상에 있다. 구체예에서, 제 1 및 제 2 에피토프는 중복되거나 실질적으로 중복된다. 구체예에서, 제 1 및 제 2 에피토프는 중복되지 않거나 실질적으로 중복되지 않는다. 구체예에서, 제 1 및 제 2 에피토프는 상이한 항원, 예를 들어, 상이한 단백질 (또는 다합체성 단백질의 상이한 하위단위) 상에 있다. 구체예에서, 다중 특이성 항체는 제 3, 제 4 또는 제 5 면역글로불린 가변 도메인을 포함한다. 구체예에서, 다중 특이성 항체는 이중 특이성 항체 분자, 삼중 특이성 항체 분자, 또는 사중 특이성 항체 분자이다.
본원에서 이용된, "이중 특이성 항체"라는 용어는 2 개 이하의 에피토프 또는 2 개의 항원에 결합하는 다중 특이성 항체를 나타낸다. 이중 특이성 항체는 제 1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 제 1 면역글로불린 가변 도메인 서열 및 제 2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 제 2 면역글로불린 가변 도메인 서열을 특징으로 한다. 구체예에서, 제 1 및 제 2 에피토프는 동일한 항원, 예를 들어, 동일한 단백질 (또는 다합체성 단백질의 하위단위) 상에 있다. 구체예에서, 제 1 및 제 2 에피토프는 중복되거나 또는 실질적으로 중복된다. 구체예에서, 제 1 및 제 2 에피토프는 상이한 항원, 예를 들어, 상이한 단백질 (또는 다합체성 단백질의 상이한 하위단위) 상에 있다. 구체예에서, 이중 특이성 항체는 제 1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 중쇄 가변 도메인 서열 및 경쇄 가변 도메인 서열, 및 제 2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 중쇄 가변 도메인 서열 및 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 구체예에서, 이중 특이성 항체는 제 1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 반-항체 (half antibody) 또는 이의 단편, 및 제 2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 반-항체 또는 이의 단편을 포함한다. 구체예에서, 이중 특이성 항체는 제 1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 scFv 또는 이의 단편, 및 제 2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 scFv 또는 이의 단편을 포함한다. 구체예에서, 제 1 에피토프는 CD73 상에 위치하며, 제 2 에피토프는 PD-1, PD-L1, TIM-3, LAG-3, CD47, CD3, 아펠린, 클라우딘 18.2, DLL3, 엽산 수용체 알파 (FRα), TIP-1, CTLA-4, EGFR, HER-2, CD19, CD20, CD33 및/또는 기타 종양 관련 면역 억제자 또는 표면 항원 상에 위치한다.
본원에서 이용된, "CD73"이라는 용어는 세포 외 AMP의 탈인산화를 촉매하여 아데노신을 생산하는 세포 표면 포스파테이스인, 엑토-5'-뉴클레오티데이스 (엑토-5'-NT 또는 EC 3.1.3.5) 를 나타낸다. 생리학적으로, CD73은 저산소증에 의해 유도되어 손상 부위에서 염증을 제어한다 (Bours et al., Pharmacol Ther 2006; 112:358-404). 병리학적으로, CD73은 흔히 조절 T 세포 (Treg) 및 종양 세포 상에서 과발현된 채로 발견된다 (Paul et al., Trends Immunol 2012; 33:231-237). 상승된 CD73 활성은 종양 미세환경 (TME) 에서 아데노신의 축적을 초래한다. 아데노신은 아데노신 수용체 A2a 및 A2b로의 결합을 통해, 대식세포 (Csoka et al., FASEB J 2012; 26:376-386), 수지상 세포 (Panther et al., Blood 2003; 101:3985-3990), 자연 살해 세포 (Hausler et al., Cancer Immunol Immunother 2011; 60:1405-1418), 및 T 이펙터 세포 (Hoskin et al., Int J Oncol 2008; 32:527-535) 와 같은 많은 면역 세포를 조절함으로써 선천 면역 및 적응 면역 모두를 억제한다. 그러므로, 아데노신에 의한 면역 억제는 TME에서 CD73의 활성을 저해함으로써 완화될 수 있다는 가설이 세워졌다. 실로, 생체 내 동물 연구 (Jin et al., Cancer Res 2010; 70:2245-2255; Stagg et al., Cancer Res 2011; 71:2890-2900) 는 CD73의 활성을 저해하는 것이 종양 형성 및 성장을 저해한다는 것을 나타내는데, 이는 CD73이 암 요법에 대한 유망한 표적이라는 것을 시사한다. "인간 CD73"이라는 용어는 인간으로부터 유래된 CD73를 나타낸다. 인간 CD73 의 예시적인 아미노산은 GenBank Accession No. P21589.1 (SEQ ID NO:281) 로 제시된다.
본원에서 이용된, "CD73에 특이적으로 결합하는" 항체는, CD73, 바람직하게는 인간 CD73에 1×10-7 M 이하, 바람직하게는 1×10-8 M 이하, 보다 바람직하게는 5×10-9 M 이하, 1×10-9 M 이하, 5×10-10 M 이하, 또는 1×10-10 M 이하의 KD로 결합하는 항체를 나타낸다. "KD"라는 용어는 해리 상수를 나타내고, 이는 Kd 대 Ka 의 비 (즉, Kd/Ka) 로부터 수득되며 몰 농도 (M) 로 표현된다. 항체에 대한 KD 값은 본 개시를 고려하여 당업계의 방법을 이용해 결정될 수 있다. 예를 들어, 항체의 KD는 표면 플라스몬 공명 (surface plasmon resonance) 을 이용함으로써, 예컨대 바이오센서 시스템, 예를 들어, Biacore® 시스템을 이용함으로써, 또는 생체-층 간섭계 기술 (bio-layer interferometry technology), 예컨대 Octet RED96 시스템을 이용함으로써 결정될 수 있다.
항체의 KD 값이 작을수록, 항체가 표적 항원에 결합하는 친화도가 높아진다.
특정 양태에 따르면, 본 발명은 하기의 폴리펩티드 서열을 갖는, 중쇄 상보성 결정 부위 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, 경쇄 상보성 결정 부위 1 (LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이고:
(1)
SEQ ID NO:89, 90, 91, 149, 150, 및 151, 각각;
(2)
SEQ ID NO:41, 42, 43, 101, 102, 및 103, 각각;
(3)
SEQ ID NO:44, 45, 46, 104, 105, 및 106, 각각;
(4)
SEQ ID NO:47, 48, 49, 107, 108, 및 109, 각각;
(5)
SEQ ID NO:50, 51, 52, 110, 111, 및 112, 각각;
(6)
SEQ ID NO:53, 54, 55, 113, 114, 및 115, 각각;
(7)
SEQ ID NO:56, 57, 58, 116, 117, 및 118, 각각;
(8)
SEQ ID NO:59, 60, 61, 119, 120, 및 121, 각각;
(9)
SEQ ID NO:62, 63, 64, 122, 123, 및 124, 각각;
(10)
SEQ ID NO:65, 66, 67, 125, 126, 및 127, 각각;
(11)
SEQ ID NO:68, 69, 70, 128, 129, 및 130, 각각;
(12)
SEQ ID NO:71, 72, 73, 131, 132, 및 133, 각각;
(13)
SEQ ID NO:74, 75, 76, 134, 135, 및 136, 각각;
(14)
SEQ ID NO:77, 78, 79, 137, 138, 및 139, 각각;
(15)
SEQ ID NO:80, 81, 82, 140, 141, 및 142, 각각;
(16)
SEQ ID NO:83, 84, 85, 143, 144, 및 145, 각각;
(17)
SEQ ID NO:86, 87, 88, 146, 147, 및 148, 각각;
(18)
SEQ ID NO:92, 93, 94, 152, 153, 및 154, 각각;
(19)
SEQ ID NO:95, 96, 97, 155, 156, 및 157, 각각; 또는
(20)
SEQ ID NO:98, 99, 100, 158, 159, 및 160, 각각;
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 CD73, 바람직하게는 인간 CD73에 특이적으로 결합한다.
특정 양태에 따르면, 본 발명은 하기의 폴리펩티드 서열을 갖는, 중쇄 상보성 결정 부위 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, 경쇄 상보성 결정 부위 1 (LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이고:
(1)
SEQ ID NO:209, 210, 211, 269, 270, 및 271, 각각;
(2)
SEQ ID NO:161, 162, 163, 221, 222, 및 223, 각각;
(3)
SEQ ID NO:164, 165, 166, 224, 225, 및 226, 각각;
(4)
SEQ ID NO:167, 168, 169, 227, 228, 및 229, 각각;
(5)
SEQ ID NO:170, 171, 172, 230, 231, 및 232, 각각;
(6)
SEQ ID NO:173, 174, 175, 233, 234, 및 235, 각각;
(7)
SEQ ID NO:176, 177, 178, 236, 237, 및 238, 각각;
(8)
SEQ ID NO:179, 180, 181, 239, 240, 및 241, 각각;
(9)
SEQ ID NO:182, 183, 184, 242, 243, 및 244, 각각;
(10)
SEQ ID NO:185, 186, 187, 245, 246, 및 247, 각각;
(11)
SEQ ID NO:188, 189, 190, 248, 249, 및 250, 각각;
(12)
SEQ ID NO:191, 192, 193, 251, 252, 및 253, 각각;
(13)
SEQ ID NO:194, 195, 196, 254, 255, 및 256, 각각;
(14)
SEQ ID NO:197, 198, 199, 257, 258, 및 259, 각각;
(15)
SEQ ID NO:200, 201, 202, 260, 261, 및 262, 각각;
(16)
SEQ ID NO:203, 204, 205, 263, 264, 및 265, 각각;
(17)
SEQ ID NO:206, 207, 208, 266, 267, 및 268, 각각;
(18)
SEQ ID NO:212, 213, 214, 272, 273, 및 274, 각각;
(19)
SEQ ID NO:215, 216, 217, 275, 276, 및 277, 각각; 또는
(20)
SEQ ID NO:218, 219, 220, 278, 279, 및 280, 각각;
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 CD73, 바람직하게는 인간 CD73에 특이적으로 결합한다.
또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 SEQ ID NO: 33, 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 35, 37 또는 39 중 하나에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 또는 SEQ ID NO: 34, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 36, 38 또는 40 중 하나에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 한 바람직한 구체예에 따르면, 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 33, 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 35, 37 또는 39에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 34, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 36, 또는 40에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 각각 포함한다.
또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 하기를 포함하는, 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다:
(1)
SEQ ID NO:33의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:34의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(2)
SEQ ID NO:1의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:2의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(3)
SEQ ID NO:3의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:4의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(4)
SEQ ID NO:5의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:6의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(5)
SEQ ID NO:7의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:8의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(6)
SEQ ID NO:9의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:10의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(7)
SEQ ID NO:11의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:12의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(8)
SEQ ID NO:13의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:14의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(9)
SEQ ID NO:15의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:16의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(10)
SEQ ID NO:17의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:18의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(11)
SEQ ID NO:19의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:20의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(12)
SEQ ID NO:21의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:22의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(13)
SEQ ID NO:23의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:24의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(14)
SEQ ID NO:25의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:26의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(15)
SEQ ID NO:27의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:28의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(16)
SEQ ID NO:29의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:30의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(17)
SEQ ID NO:31의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:32의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(18)
SEQ ID NO:35의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:36의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(19)
SEQ ID NO:37의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:38의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역; 또는
(20)
SEQ ID NO:39의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:40의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:41, 42, 43, 101, 102 및 103의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:1에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:2에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:1의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:2의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:44, 45, 46, 104, 105 및 106의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:3에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:4에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:3의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:4의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:47, 48, 49, 107, 108 및 109의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:5에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:6에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:5의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:6의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:50, 51, 52, 110, 111 및 112의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:7에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:8에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:7의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:8의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO: 53, 54, 55, 113, 114 및 115의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:9에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:10에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:9의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:10의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO: 56, 57, 58, 116, 117 및 118의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:11에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:12에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:11의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:12의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO: 59, 60, 61, 119, 120 및 121의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:13에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:14에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:13의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:14의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:62, 63, 64, 122, 123 및 124의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:15에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:16에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:15의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:16의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO: 65, 66, 67, 125, 126 및 127의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:17에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:18에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:17의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:18의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:68, 69, 70, 128, 129 및 130의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:19에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:20에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:19의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:20의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO: 71, 72, 73, 131, 132 및 133의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:21에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:22에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:21의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:22의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:74, 75, 76, 134, 135 및 136의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:23에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:24에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:23의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:24의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:77, 78, 79, 137, 138 및 139의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:25에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:26에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:25의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:26의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:80, 81, 82, 140, 141 및 142의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:27에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:28에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:27의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:28의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:83, 84, 85, 143, 144 및 145의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:29에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:30에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:29의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:30의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:86, 87, 88, 146, 147 및 148의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:31에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:32에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:31의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:32의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:89, 90, 91, 149, 150 및 151의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:33에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:34에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:33의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:34의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:92, 93, 94, 152, 153 및 154의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:35에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:36에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:35의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:36의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:95, 96, 97, 155, 156 및 157의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:37에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:38에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:37의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:38의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:98, 99, 100, 158, 159 및 160의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:39에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:40에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:39의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:40의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:161, 162, 163, 221, 222 및 223의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:1에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:2에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:1의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:2의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:164, 165, 166, 224, 225 및 226의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:3에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:4에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:3의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:4의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:167, 168, 169, 227, 228 및 229의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:5에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:6에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:5의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:6의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:170, 171, 172, 230, 231 및 232의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:7에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:8에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:7의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:8의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:173, 174, 175, 233, 234 및 235의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:9에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:10에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:9의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:10의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:176, 177, 178, 236, 237 및 238의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:11에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:12에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:11의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:12의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:179, 180, 181, 239, 240 및 241의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:13에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:14에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:13의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:14의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:182, 183, 184, 242, 243 및 244의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:15에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:16에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:15의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:16의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:185, 186, 187, 245, 246 및 247의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:17에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:18에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:17의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:18의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:188, 189, 190, 248, 249 및 250의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:19에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:20에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:19의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:20의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:191, 192, 193, 251, 252 및 253의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:21에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:22에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:21의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:22의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:194, 195, 196, 254, 255 및 256의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:23에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:24에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:23의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:24의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:197, 198, 199, 257, 258 및 259의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:25에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:26에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:25의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:26의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:200, 201, 202, 260, 261 및 262의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:27에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:28에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:27의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:28의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:203, 204, 205, 263, 264 및 265의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:29에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:30에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:29의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:30의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:206, 207, 208, 266, 267 및 268의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:31에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:32에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:31의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:32의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:209, 210, 211, 269, 270 및 271의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:33에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:34에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:33의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:34의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:212, 213, 214, 272, 273 및 274의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:35에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:36에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:35의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:36의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:215, 216, 217, 275, 276 및 277의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:37에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:38에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:37의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:38의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:218, 219, 220, 278, 279 및 280의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:39에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:40에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:39의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:40의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것으로서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 가용성 및/또는 세포 표면 CD73의 효소 활성을 저해한다. CD73은 세포 표면 상의 글리코포스파티딜이노시톨 (GPI)-닻형 단백질이고; 또한 이는 떨어져서 용액 중의 촉매 활성형을 수득할 수 있다 (Arias et al., J Cell Biol. 1997; 136(2):421-31). 여기서, 세포 표면 CD73은 GPI에 의해 고정된 (anchored) 세포 표면 상의 CD73을 나타내고; 가용성 CD73은 세포 표면으로부터 떨어져서 용액 중의 촉매 활성인 것을 나타낸다.
또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 본 발명의 단리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것으로서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 CD73의 이합체화를 방지한다. 본원에서 이용된, "이합체화"는 2 개의 하위단위에 의한 CD73 이합체의 형성을 나타낸다. CD73의 이합체화를 방지하는 것은 CD73 이합체의 형성을 블로킹하거나 또는 저해하는 것을 나타낸다.
또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것으로서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 CD73의 함입을 유도한다. 본원에 이용된, "CD73의 함입"은 CD73 단백질이 세포의 표면으로부터 세포의 내부 영역으로 이동하는 것을 나타낸다.
또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것으로서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 CD73의 뉴클레오티데이스 활성을 저해시킴으로써 아데노신 수준을 감소시키므로 T 세포를 활성화시킬 수 있다.
또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 키메라인, 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.
또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 인간 또는 인간화된, 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.
또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 하기를 포함하는, 단리된 인간화 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다:
(1)
SEQ ID NO:286의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:293의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(2)
SEQ ID NO:282의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:290의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(3)
SEQ ID NO:282의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:291의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(4)
SEQ ID NO:282의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:292의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(5)
SEQ ID NO:283의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:290의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(6)
SEQ ID NO:283의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:291의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(7)
SEQ ID NO:283의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:292의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(8)
SEQ ID NO:284의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:290의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(9)
SEQ ID NO:284의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:291의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(10)
SEQ ID NO:284의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:292의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(11)
SEQ ID NO:285의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:290의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(12)
SEQ ID NO:285의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:291의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(13)
SEQ ID NO:285의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:292의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(14)
SEQ ID NO:283의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:293의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(15)
SEQ ID NO:284의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:293의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(16)
SEQ ID NO:285의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:293의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(17)
SEQ ID NO:286의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:290의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(18)
SEQ ID NO:286의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:291의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(19)
SEQ ID NO:286의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:292의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(20)
SEQ ID NO:287의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:294의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(21)
SEQ ID NO:288의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:294의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(22)
SEQ ID NO:289의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:294의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(23)
SEQ ID NO:284의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:299의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(24)
SEQ ID NO:295의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:299의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(25)
SEQ ID NO:296의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:299의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(26)
SEQ ID NO:297의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:299의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역; 또는
(27)
SEQ ID NO:298의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:299의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역.
또 다른 일반적 양태에서, 본 발명은 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산에 관한 것이다. 당업자는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않으면서 단백질의 코딩 서열이 변화 (예를 들어, 치환, 결실, 삽입 등) 될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 따라서, 당업자는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않으면서 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산 서열이 변경될 수 있다는 것을 이해할 것이다.
또 다른 일반적 양태에서, 본 발명은 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산을 포함하는 벡터에 관한 것이다. 본 개시에 비추어, 당업자에게 공지된 임의의 벡터, 예컨대 플라스미드, 코스미드, 파지 벡터 또는 바이러스 벡터가 이용될 수 있다. 일부 구체예에서, 벡터는 플라스미드와 같은 재조합 발현 벡터이다. 벡터는 발현 벡터의 통상적인 기능을 확립하기 위한 임의의 요소, 예를 들어 프로모터, 리보솜 결합 엘리먼트, 터미네이터, 인핸서, 선별 마커 및 복제 원점을 포함할 수 있다. 프로모터는 항시성, 유도성 또는 억제성 프로모터일 수 있다. 핵산을 세포에 전달할 수 있는 다수의 발현 벡터는 당업계에 공지되어 있으며, 세포에서 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하기 위해 본원에서 이용될 수 있다. 통상적인 클로닝 기법 또는 인공 유전자 합성을 이용해, 본 발명의 구체예에 따른 재조합 발현 벡터를 생성할 수 있다.
또 다른 일반적 양태에서, 본 발명은 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산을 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 본 개시에 비추어, 당업자에게 공지된 임의의 숙주 세포가 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 재조합 발현에 이용될 수 있다. 일부 구체예에서, 숙주 세포는 E. 콜라이 TG1 또는 BL21 세포 (예를 들어, scFv 또는 Fab 항체의 발현의 경우), CHO-DG44 또는 CHO-K1 세포 또는 HEK293 세포 (예를 들어, 전장 IgG 항체의 발현의 경우) 이다. 특정 구체예에 따르면, 재조합 발현 벡터는 화학적 형질주입, 열 충격 또는 전기천공과 같은 통상적인 방법에 의해 숙주 세포에 형질전환되는데, 재조합 핵산이 효과적으로 발현되도록 발현 벡터가 숙주 세포 게놈에 안정적으로 통합된다.
또 다른 일반적 양태에서, 본 발명은 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하는 방법으로서, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산을 포함하는 세포를, 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하기 위한 조건 하에서 배양시키는 것, 및 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 세포 또는 배양물로부터 (예를 들어, 상청액으로부터) 회수하는 것을 포함하는 방법에 관한 것이다. 발현된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 당업계에 공지되어 있고 본원에 기재된 통상적인 기법에 따라 세포로부터 수확되고 정제될 수 있다.
약학적 조성물
또 다른 일반적 양태에서, 본 발명은 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 본원에서 이용된 "약학적 조성물"이라는 용어는 본 발명의 항체를 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 포함하는 생성물을 의미한다. 본 발명의 항체 및 이를 포함하는 조성물은 본원에서 언급된 치료학적 적용을 위한 약제의 제조에서 또한 유용하다.
본원에서 이용된, "담체"라는 용어는 임의의 부형제, 희석제, 충전제, 염, 완충제, 안정화제, 가용화제, 오일, 지질, 지질 함유 소포, 미소구체, 리포솜 캡슐화, 또는 약학적 제형화에서 이용하기 위한 당업계에 주지된 기타 물질을 나타낸다. 담체, 부형제 또는 희석제의 특징이 특정 적용을 위한 투여 경로에 의존적이라는 것이 이해될 것이다. 본원에서 이용된, "약학적으로 허용가능한 담체"라는 용어는 본 발명에 따른 조성물의 효능 또는 본 발명에 따른 조성물의 생물학적 활성을 간섭하지 않는 비-독성 물질을 나타낸다. 특정 구체예에 따르면, 본 개시에 비추어, 항체 약학적 조성물에서 이용하기에 적합한 임의의 약학적으로 허용가능한 담체가 본 발명에서 이용될 수 있다.
약학적으로 허용가능한 담체와의 약학적 활성 성분의 제형화는 당업계에, 예를 들어, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (예, 21 판 (2005), 및 임의의 이후 판) 에 공지되어 있다. 추가의 성분의 비-제한적 예시는 완충제, 희석제, 용매, 등장성 조절제, 보존제, 안정화제 및 킬레이트제를 포함한다. 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체가 본 발명의 약학적 조성물을 제형화하는 데 이용될 수 있다.
본 발명의 한 구체예에서, 약학적 조성물은 액체 제형이다. 액체 제형의 바람직한 예시는 수성 제형, 즉 물을 포함하는 제형이다. 액체 제형은 용액, 현탁액, 에멀젼, 마이크로에멀젼, 겔 등을 포함할 수 있다. 수성 제형은 통상적으로 적어도 50 % w/w의 물, 또는 적어도 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % w/w 또는 적어도 95 % w/w의 물을 포함한다.
한 구체예에서, 약학적 조성물은 예를 들어, 주사 장치 (예를 들어, 주사기 또는 주입 펌프) 를 통해 주사될 수 있는, 주사가능한 것으로 제형화될 수 있다. 주사는 예를 들어, 피하, 근육내, 복강내, 유리체강내 또는 정맥내로 전달될 수 있다.
또 다른 구체예에서, 약학적 조성물은 고체 제형, 예를 들어, 동결-건조 또는 분무-건조된 조성물이고, 이는 그대로 사용될 수 있거나, 또는 의사 또는 환자가 사용 전에 이에 용매 및/또는 희석제를 첨가하여 사용될 수 있다. 고체 투약 형태는 정제, 예컨대 압축 정제 및/또는 코팅 정제, 및 캡슐 (예를 들어, 경질 또는 연질 젤라틴 캡슐) 을 포함할 수 있다. 또한, 약학적 조성물은 예를 들어 향낭 (sachet), 드라제, 분말, 과립, 로젠지, 또는 재구성을 위한 분말의 형태일 수 있다.
투약 형태는, 이들이 수용성 또는 수분산성 담체를 포함할 수 있는 경우인 즉방형일 수 있거나, 또는 이들이 위장관 또는 피하에서 투약 형태의 용해 속도를 조절하는 수불용성 중합체를 포함할 수 있는 경우인 지연 방출형, 서방형 또는 변형 방출형일 수 있다.
다른 구체예에서, 약학적 조성물은 비강내, 협내 또는 설하로 전달될 수 있다.
수성 제형에서 pH 는 pH 3 내지 pH 10일 수 있다. 본 발명의 한 구체예에서, 제형의 pH는 약 7.0 내지 약 9.5이다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 제형의 pH는 약 3.0 내지 약 7.0이다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 약학적 조성물은 완충제를 포함한다. 완충제의 비-제한적 예시는 아르기닌, 아스파르트산, 비신, 시트레이트, 디소듐 하이드로젠 포스페이트, 푸마르산, 글리신, 글리실글리신, 히스티딘, 리신, 말레산, 말산, 소듐 아세테이트, 소듐 카보네이트, 소듐 디하이드로젠 포스페이트, 소듐 포스페이트, 숙시네이트, 타르타르산, 트리신 및 트리스(히드록시메틸)-아미노메탄, 및 이들의 혼합물을 포함한다. 완충제는 개별적으로 또는 합하여, 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어, 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 존재할 수 있다. 이러한 특정 완충제 중 각각을 포함하는 약학적 조성물은 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 약학적 조성물은 보존제를 포함한다. 보존제의 비-제한적 예시는 벤즈에토늄 클로라이드, 벤조산, 벤질 알코올, 브로노폴, 부틸 4-히드록시벤조에이트, 클로로부탄올, 클로로크레졸, 클로로헥시딘, 클로르페네신, o-크레졸, m-크레졸, p-크레졸, 에틸 4-히드록시벤조에이트, 이미드우레아, 메틸 4-히드록시벤조에이트, 페놀, 2-페녹시에탄올, 2-페닐에탄올, 프로필 4-히드록시벤조에이트, 소듐 데하이드로아세테이트, 티오메로살, 및 이들의 혼합물을 포함한다. 보존제는 개별적으로 또는 합하여, 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 존재할 수 있다. 이러한 특정 보존제 중 각각을 포함하는 약학적 조성물은 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 약학적 조성물은 등장화제를 포함한다. 등장화제의 비-제한적 예시는 염 (예컨대 소듐 클로라이드), 아미노산 (예컨대 글리신, 히스티딘, 아르기닌, 리신, 이소류신, 아스파르트산, 트립토판 및 트레오닌), 알디톨 (예컨대 글리세롤, 1,2-프로판디올 프로필렌글리콜), 1,3-프로판디올 및 1,3-부탄디올, 폴리에틸렌글리콜 (예를 들어 PEG400), 및 이들의 혼합물을 포함한다. 등장화제의 또 다른 예시는 당을 포함한다. 당의 비-제한적 예시는 단당류, 이당류 또는 다당류, 또는 수용성 글루칸일 수 있고, 예를 들어 다음을 포함한다: 프럭토오스, 글루코오스, 만노오스, 소르보오스, 자일로오스, 말토오스, 락토오스, 수크로오스, 트레할로오스, 덱스트란, 풀루란, 덱스트린, 사이클로덱스트린, 알파 및 베타-HPCD, 가용성 전분, 히드록시에틸 전분 및 소듐 카르복시메틸셀룰로오스. 등장화제의 또 다른 예시는 당 알코올이며, 여기서 "당 알코올"이라는 용어는 적어도 하나의 -OH 기를 갖는 C(4-8) 탄화수소로서 정의된다. 당 알코올의 비-제한적 예시는 만니톨, 소르비톨, 이노시톨, 갈락티톨, 둘시톨, 자일리톨 및 아라비톨을 포함한다. 등장화제는 개별적으로 또는 합하여, 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 존재할 수 있다. 이러한 특정 등장화제 중 각각을 포함하는 약학적 조성물은 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 약학적 조성물은 킬레이트제를 포함한다. 킬레이트제의 비-제한적 예시는 시트르산, 아스파르트산, 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA) 의 염, 및 이들의 혼합물을 포함한다. 킬레이트제는 개별적으로 또는 합하여, 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 존재할 수 있다. 이러한 특정 킬레이트제 중 각각을 포함하는 약학적 조성물은 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 약학적 조성물은 안정화제를 포함한다. 안정화제의 비-제한적 예시는 하나 이상의 응집 억제제, 하나 이상의 산화 억제제, 하나 이상의 계면활성제 및/또는 하나 이상의 프로테이스 억제제를 포함한다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 약학적 조성물은 안정화제를 포함하는데, 여기서 상기 안정화제는 카르복시-/히드록시셀룰로오스 및 이의 유도체 (예컨대 HPC, HPC-SL, HPC-L 및 HPMC), 사이클로덱스트린, 2-메틸티오에탄올, 폴리에틸렌 글리콜 (예컨대 PEG 3350), 폴리비닐 알코올 (PVA), 폴리비닐 피롤리돈, 염 (예컨대 소듐 클로라이드), 황-함유 물질 예컨대 모노티오글리세롤, 또는 티오글리콜산이다. 안정화제는 개별적으로 또는 합하여, 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 존재할 수 있다. 이러한 특정 안정화제 중 각각을 포함하는 약학적 조성물은 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다.
본 발명의 추가 구체예에서, 약학적 조성물은 하나 이상의 계면활성제, 바람직하게는 계면활성제, 적어도 하나의 계면활성제, 또는 2 개의 상이한 계면활성제를 포함한다. "계면활성제"라는 용어는 수용성 (친수성) 부분 및 지용성 (친유성) 부분으로 구성된 임의의 분자 또는 이온을 나타낸다. 계면활성제는 예를 들어, 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 비-이온성 계면활성제 및/또는 양쪽이온성 계면활성제로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 계면활성제는 개별적으로 또는 합하여, 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 존재할 수 있다. 이러한 특정 계면활성제 중 각각을 포함하는 약학적 조성물은 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다.
본 발명의 추가의 구체예에서, 약학적 조성물은 하나 이상의 프로테이스 억제제, 예를 들어, EDTA, 및/또는 벤자미딘 염산 (HCl) 을 포함한다. 프로테이스 억제제는 개별적으로 또는 합하여, 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 존재할 수 있다. 이러한 특정 프로테이스 억제제 중 각각을 포함하는 약학적 조성물은 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다.
또 다른 일반적 양태에서, 본 발명은 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물을 생산하는 방법으로서, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 약학적으로 허용가능한 담체와 조합하여 약학적 조성물을 수득하는 것을 포함하는 방법에 관한 것이다.
이용 방법
또 다른 일반적 양태에서, 본 발명은 CD73의 뉴클레오티데이스 활성의 저해를 필요로 하는 대상체에서 CD73의 뉴클레오티데이스 활성을 저해하는 방법에 관한 것으로, 방법은 CD73에 특이적으로 결합하는 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함한다.
또 다른 일반적인 양태에서, 본 발명은 CD73의 이합체화를 방지하는 것을 필요로 하는 대상체에서 CD73의 이합체화를 방지하는 방법에 관한 것으로, 방법은 CD73에 특이적으로 결합하는 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함한다.
또 다른 일반적 양태에서, 본 발명은 CD73의 함입을 유도하는 것을 필요로 하는 대상체에서 CD73의 함입을 유도하는 방법에 관한 것으로, 방법은 CD73에 특이적으로 결합하는 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함한다. 세포 내로 CD73이 함입하는 것은 CD73의 세포 표면 함량을 감소시킨다. 세포 표면 상의 CD73의 수준은 당업계에 공지된 방법, 예를 들어, 면역조직화학 방법에 의해 측정될 수 있다.
CD73에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편의 기능적 활성은 당업계에 공지된 방법에 의해서 그리고 본원에 기재된 대로 특성화될 수 있다. CD73을 발현하는 세포를 항체와 함께 전-배양시킨 후, 항체의 존재 하에 세포 표면 상의 CD73 뉴클레오티데이스 활성을 측정할 수 있다. CD73에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 특성화하는 방법은 Biacore, ELISA, 및 OctetRed 분석을 포함하는 친화도 및 특이성 검정을 포함하나, 이들에 한정되지 않고; 또한, 항-CD73 mAb의 기능적 활성이 뉴클레오티데이스 활성 검정에서 평가될 수 있다. 특정 구체예에 따르면, CD73에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 특성화하는 방법은 하기 기재된 것들을 포함한다.
또 다른 일반적 양태에서, 본 발명은 본 발명의, CD73에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 암은, 예를 들어, 폐암, 위암, 결장암, 간세포 암종, 신세포 암종, 방광 요로 상피세포 암종, 전이성 흑색종, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 두경부암, 췌장암, 신경교종, 교모세포종, 및 기타 고형 종양, 및 비-호지킨 림프종 (NHL), 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 다발성 골수종 (MM), 급성 골수성 백혈병 (AML), 및 기타 액형 종양으로부터 선택될 수 있으나, 이들에 한정되지 않는다.
또 다른 일반적인 양태에서, 본 발명은 대상체에 본 발명의, CD73에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 염증성 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 염증성 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 구체예에 따르면, 약학적 조성물은 치료학적 유효량의 항-CD73 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 본원에서 이용된, "치료학적 유효량"이라는 용어는 대상체에서 목적되는 생물학적 또는 의학적 반응을 이끌어내는 활성 성분 또는 성분의 양을 나타낸다. 언급된 목적과 관련하여, 치료학적 유효량은 경험적으로 그리고 통상적 방식으로 결정될 수 있다.
항-CD73 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 관련하여 본원에서 이용된, 치료학적 유효량은 종양 감소 반응을, 이를 필요로 하는 대상체에서 조절하는 항-CD73 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 양을 의미한다. 또한, 항-CD73 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 관련하여 본원에서 이용된 치료학적 유효량은 질환, 장애, 또는 병상의 치료를 야기하는 항-CD73 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 양을 의미하고; 질환, 장애 또는 병상의 진행을 방지 또는 지연시키며; 또는 질환, 장애, 또는 병상과 연관된 증상을 감소시키거나 또는 완전히 완화한다.
특정 구체예에 따르면, 치료될 질환, 장애 또는 병상은 암, 바람직하게는 폐암, 위암, 결장암, 간세포 암종, 신세포 암종, 방광 요로 상피세포 암종, 전이성 흑색종, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 두경부암, 췌장암, 신경교종, 교모세포종, 및 기타 고형 종양, 및 비-호지킨 림프종 (NHL), 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 다발성 골수종 (MM), 급성 골수성 백혈병 (AML), 및 기타 액형 종양으로 이루어지는 군에서 선택되는 암이다. 다른 특정 구체예에 따르면, 치료될 질환, 장애 또는 병상은 염증성 질환이다.
특정 구체예에 따르면, 치료학적 유효량은 다음 효과들 중 하나, 둘, 셋, 넷 이상을 달성하기에 충분한, 요법의 양을 나타낸다: (i) 치료될 질환, 장애 또는 병상, 또는 그와 연관된 증상의 중증도를 감소시키거나 완화시킴; (ii) 치료될 질환, 장애 또는 병상, 또는 그와 연관된 증상의 지속기간을 감소시킴; (iii) 치료될 질환, 장애 또는 병상, 또는 그와 연관된 증상의 진행을 방지함; (iv) 치료될 질환, 장애 또는 병상, 또는 그와 연관된 증상의 퇴행을 유발함; (v) 치료될 질환, 장애 또는 병상, 또는 그와 연관된 증상의 발달 또는 발병을 방지함; (vi) 치료될 질환, 장애 또는 병상, 또는 그와 연관된 증상의 재발을 방지함; (vii) 치료될 질환, 장애 또는 병상, 또는 그와 연관된 증상을 갖는 대상체의 입원을 감소시킴; (viii) 치료될 질환, 장애 또는 병상, 또는 그와 연관된 증상을 갖는 대상체의 입원 길이를 감소시킴; (ix) 치료될 질환, 장애 또는 병상, 또는 그와 연관된 증상을 갖는 대상체의 생존을 증가시킴; (xi) 치료될 질환, 장애 또는 병상, 또는 그와 연관된 증상을 대상체에서 저해 또는 감소시킴; 및/또는 (xii) 또 다른 요법의 예방적 또는 치료학적 효과(들) 를 향상 또는 개선시킴.
치료학적 유효량 또는 투약량은 치료될 질환, 장애 또는 병상, 투여 수단, 표적 부위, 대상체의 생리학적 상태 (예를 들어, 연령, 체중, 건강을 포함), 대상체가 인간 또는 동물인지 여부, 투여되는 다른 약제, 및 치료가 예방적인지 또는 치료학적인지 여부와 같은 다양한 인자에 따라 가변적일 수 있다. 안전성 및 효능을 최적화하기 위해 치료 투약량이 최적으로 적정된다.
특정 구체예에 따르면, 본원에 기재된 조성물은 대상체에 대한 의도된 투여 경로에 적합하도록 제형화된다. 예를 들어, 본원에 기재된 조성물은 정맥내, 피하 또는 근육내 투여에 적합하도록 제형화될 수 있다.
본원에서 이용된, "치료하다", "치료하는" 및 "치료"라는 용어는 모두, 암 및/또는 염증성 질환, 장애 또는 병상과 관련된 적어도 하나의 측정 가능한 물리적 파라미터의 개선 또는 반전을 나타내는 것으로 의도되며, 이는 대상체에서 반드시 인식할 수 있는 것은 아니나, 대상체에서 인식될 수 있다. "치료하다", "치료하는" 및 "치료"라는 용어는 또한, 퇴행을 일으키거나, 진행을 방지하거나, 또는 질환, 장애 또는 병상의 진행을 적어도 지연시키는 것을 나타낼 수 있다. 특정 구체예에서, "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 종양 또는 보다 바람직하게는 암과 같은 질환, 장애 또는 병상과 연관된 하나 이상의 증상의 경감, 발달 또는 발병의 방지, 또는 지속기간의 감소를 나타낸다. 특정 구체예에서, "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 질환, 장애 또는 병상의 재발의 방지를 나타낸다. 특정 구체예에서, "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 질환, 장애 또는 병상을 갖는 대상체의 생존의 증가를 나타낸다. 특정 구체예에서, "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 대상체에서의 질환, 장애 또는 병상의 제거를 나타낸다.
특정 구체예에 따르면, 본 발명의 조성물은 암 및/또는 염증성 질환, 장애 또는 병상의 치료에 이용된다. 암 요법을 위해, 이는 다음을 포함하나, 이들에 한정되는 것은 아닌 또 다른 치료와 조합으로 사용될 수 있다: 화학요법, 항-CD20 mAb, 항-TIM-3 mAb, 항-LAG-3 mAb, 항-CD47 mAb, 항-아펠린 mAb, 항-클라우딘18.2 mAb, 항-DLL3 mAb, 항-FRα (엽산 수용체 알파) mAb, 항-TIP-1 mAb, 항-CTLA-4 항체, 항-PD-L1 항체, 항-PD-1 항체, PD-1/PD-L1 요법, 기타 면역-항암 약물, 항-혈관형성제, 방사능 요법, 항체-약물 컨쥬게이트 (ADC: antibody-drug conjugate), 표적화 요법, 또는 기타 항암 약물. 항-CD73 항체가 CD73과 특정한 종양 연관 항원 모두를 발현하는 암/종양을 치료하기 위한, PD-1, PD-L1, LAG3, TIM-3, CTLA-4, EGFR, HER-2, CD19, CD20, CD33, CD47, CD3, 아펠린, 클라우딘18.2, DLL3, TIP-1, 엽산 수용체 알파 (FRα), 및/또는 기타 종양 표면 항원에 대한 파트너 mAb와의 이중 특이성 항체를 제작하는 데 이용될 수 있다.
본원에서 이용된, 대상체에 둘 이상의 요법을 투여하는 맥락에서의 "조합으로"라는 용어는 하나보다 많은 요법의 이용을 나타낸다. "조합으로"라는 용어의 이용은 요법이 대상체에 투여되는 순서를 제한하지 않는다. 예를 들어, 제 1 요법 (예를 들어, 본원에 기재된 조성물) 은 제 2 요법을 대상체에 투여하기 전 (예를 들어, 5 분, 15 분, 30 분, 45 분, 1 시간, 2 시간, 4 시간, 6 시간, 12 시간, 16 시간, 24 시간, 48 시간, 72 시간, 96 시간, 1 주, 2 주, 3 주, 4 주, 5 주, 6 주, 8 주, 또는 12 주 전), 제 2 요법을 대상체에 투여하는 것과 동시에, 또는 제 2 요법을 대상체에 투여한 후 (예를 들어, 5 분, 15 분, 30 분, 45 분, 1 시간, 2 시간, 4 시간, 6 시간, 12 시간, 16 시간, 24 시간, 48 시간, 72 시간, 96 시간, 1 주, 2 주, 3 주, 4 주, 5 주, 6 주, 8 주, 또는 12 주 후) 에 투여될 수 있다.
또 다른 일반적 양태에서, 본 발명은 대상체에서 CD73의 수준을 결정하는 방법에 관한 것이다. 방법은 (a) 대상체로부터 시료를 수득하는 것; (b) 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 시료를 접촉시키는 것; 및 (c) 대상체에서 CD73의 수준을 결정하는 것을 포함한다.
또 다른 일반적 양태에서, 본 발명은 대상체에서 CD73의 엑토-5'-뉴클레오티데이스 활성을 결정하는 방법에 관한 것으로, 효소 활성은 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의해 완전히 저해될 수 있다. 방법은 (a) 대상체로부터 시료를 수득하는 것; (b) 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 시료를 접촉시키는 것; 및 (c) 대상체에서 CD73의 엑토-5'-뉴클레오티데이스 활성을 결정하는 것을 포함한다.
본원에서 이용된, "시료"는 대상체로부터 단리된 생물학적 시료를 나타내며, 전혈, 혈청, 혈장, 혈구, 내피 세포, 조직 생검 (예를 들어, 암 조직), 림프액, 복수액, 간질액, 골수, 뇌척수액, 타액, 점액, 객담, 땀, 소변, 또는 임의의 기타 분비물, 배설물, 또는 기타 체액을 포함할 수 있으나 이들에 한정되지 않는다. "혈액 시료"는 혈구, 혈청 및 혈장을 포함하는, 전혈 또는 이의 임의의 분획물을 나타낸다.
특정 구체예에서, 대상체에서의 CD73의 수준은 웨스턴 블롯 검정, ELISA 검정, 및/또는 면역조직화학 (IHC) 으로부터 선택되나, 이들에 한정되지 않는 검정을 활용하여 결정될 수 있다. 상대 단백질 수준은 웨스턴 블롯 분석 및 IHC를 활용하여 결정될 수 있고, 절대 단백질 수준은 ELISA 검정을 활용함으로써 결정될 수 있다. CD73의 상대 수준을 결정하는 경우에, CD73의 수준이 적어도 2 개의 시료 사이, 예를 들어, 상이한 시점에서 동일한 대상체로부터의 시료 사이, 동일한 대상체 내 상이한 조직으로부터의 시료 사이, 및/또는 상이한 대상체로부터의 시료 사이에서 결정될 수 있다. 대안적으로는, 예컨대 ELISA 검정에 의해 CD73의 절대 수준을 결정하는 경우에, 시료 중 CD73의 절대 수준이 시료를 테스트하기 전에 ELISA 검정에 대한 표준을 생성시킴으로써 결정될 수 있다. 당업자는 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 활용하여 대상체로부터의 시료 중 CD73의 수준을 결정하기 위해 어떤 분석 기법을 활용할지를 이해할 것이다.
특정 구체예에서, 대상체에서 CD73의 엑토-5'-뉴클레오티데이스 활성이 당업계에 공지된 검정을 이용하여 결정될 수 있으며, 예를 들어 Geoghegan et al., MAbs 8:454-67 (2016) 및 Hay et al., Oncoimmunology Aug. 5(8):e1208875 (2016) 을 참고한다. 당업자는 어떤 분석 기법을 활용하여 대상체로부터의 시료 중 CD73의 엑토-5'-뉴클레오티데이스 활성을 결정할 것인지를 이해할 것이다.
대상체로부터의 시료 중 CD73의 수준 또는 CD73의 엑토-5'-뉴클레오티데이스 활성의 수준을 결정하는 방법을 활용하는 것은, 질환에서 비정상적 (상승된, 감소된, 또는 불충분한) CD73 수준 및/또는 활성의 진단으로 이어져, 적절한 치료학적 결정을 내리게 할 수 있다. 이러한 질환은 암 및/또는 염증성 질환으로부터 선택될 수 있으나, 이들에 한정되지 않는다. 또한, 대상체에서 CD73의 수준 및/또는 활성을 모니터링함으로써, 상기 나타낸 질환을 발달시킬 위험이 특정 질환에서 및/또는 특정 질환의 진행 동안의 CD73의 수준 및/또는 활성의 인식에 기초하여 결정될 수 있다.
구체예
본 발명은 하기 비-제한적 구체예를 또한 제공한다.
구체예 1은 하기의 폴리펩티드 서열을 갖는, 중쇄 상보성 결정 부위 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, 경쇄 상보성 결정 부위 1 (LCDR1), LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며:
a.
SEQ ID NO:89, 90, 91, 149, 150, 및 151, 각각;
b.
SEQ ID NO:41, 42, 43, 101, 102, 및 103, 각각;
c.
SEQ ID NO:44, 45, 46, 104, 105, 및 106, 각각;
d.
SEQ ID NO:47, 48, 49, 107, 108, 및 109, 각각;
e.
SEQ ID NO:50, 51, 52, 110, 111, 및 112, 각각;
f.
SEQ ID NO:53, 54, 55, 113, 114, 및 115, 각각;
g.
SEQ ID NO:56, 57, 58, 116, 117, 및 118, 각각;
h.
SEQ ID NO:59, 60, 61, 119, 120, 및 121, 각각;
i.
SEQ ID NO:62, 63, 64, 122, 123, 및 124, 각각;
j.
SEQ ID NO:65, 66, 67, 125, 126, 및 127, 각각;
k.
SEQ ID NO:68, 69, 70, 128, 129, 및 130, 각각;
l.
SEQ ID NO:71, 72, 73, 131, 132, 및 133, 각각;
m.
SEQ ID NO:74, 75, 76, 134, 135, 및 136, 각각;
n.
SEQ ID NO:77, 78, 79, 137, 138, 및 139, 각각;
o.
SEQ ID NO:80, 81, 82, 140, 141, 및 142, 각각;
p.
SEQ ID NO:83, 84, 85, 143, 144, 및 145, 각각;
q.
SEQ ID NO:86, 87, 88, 146, 147, 및 148, 각각;
r.
SEQ ID NO:92, 93, 94, 152, 153, 및 154, 각각;
s.
SEQ ID NO:95, 96, 97, 155, 156, 및 157, 각각; 또는
t.
SEQ ID NO:98, 99, 100, 158, 159, 및 160, 각각;
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 CD73, 바람직하게는 인간 CD73에 특이적으로 결합한다.
구체예 2는 하기 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 부위 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, 경쇄 상보성 결정 부위 1 (LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이고:
a.
SEQ ID NO:209, 210, 211, 269, 270, 및 271, 각각;
b.
SEQ ID NO:161, 162, 163, 221, 222, 및 223, 각각;
c.
SEQ ID NO:164, 165, 166, 224, 225, 및 226, 각각;
d.
SEQ ID NO:167, 168, 169, 227, 228, 및 229, 각각;
e.
SEQ ID NO:170, 171, 172, 230, 231, 및 232, 각각;
f.
SEQ ID NO:173, 174, 175, 233, 234, 및 235, 각각;
g.
SEQ ID NO:176, 177, 178, 236, 237, 및 238, 각각;
h.
SEQ ID NO:179, 180, 181, 239, 240, 및 241, 각각;
i.
SEQ ID NO:182, 183, 184, 242, 243, 및 244, 각각;
j.
SEQ ID NO:185, 186, 187, 245, 246, 및 247, 각각;
k.
SEQ ID NO:188, 189, 190, 248, 249, 및 250, 각각;
l.
SEQ ID NO:191, 192, 193, 251, 252, 및 253, 각각;
m.
SEQ ID NO:194, 195, 196, 254, 255, 및 256, 각각;
n.
SEQ ID NO:197, 198, 199, 257, 258, 및 259, 각각;
o.
SEQ ID NO:200, 201, 202, 260, 261, 및 262, 각각;
p.
SEQ ID NO:203, 204, 205, 263, 264, 및 265, 각각;
q.
SEQ ID NO:206, 207, 208, 266, 267, 및 268, 각각;
r.
SEQ ID NO:212, 213, 214, 272, 273, 및 274, 각각;
s.
SEQ ID NO:215, 216, 217, 275, 276, 및 277, 각각; 또는
t.
SEQ ID NO:218, 219, 220, 278, 279, 및 280, 각각;
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 CD73, 바람직하게는 인간 CD73에 특이적으로 결합한다.
구체예 3은 SEQ ID NO:33, 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 35, 37 또는 39에 대해서 적어도 95 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 또는 SEQ ID NO:34, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 36, 38 또는 40에 대해서 적어도 95 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 구체예 1 또는 2의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
구체예 4는 하기를 포함하는 구체예 1-3 중 어느 한 구체예의 단리된 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편이다:
(a)
SEQ ID NO:33의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:34의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(b)
SEQ ID NO:1의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:2의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(c)
SEQ ID NO:3의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:4의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(d)
SEQ ID NO:5의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:6의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(e)
SEQ ID NO:7의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:8의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(f)
SEQ ID NO:9의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:10의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(g)
SEQ ID NO:11의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:12의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(h)
SEQ ID NO:13의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:14의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(i)
SEQ ID NO:15의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:16의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(j)
SEQ ID NO:17의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:18의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(k)
SEQ ID NO:19의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:20의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(l)
SEQ ID NO:21의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:22의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(m)
SEQ ID NO:23의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:24의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(n)
SEQ ID NO:25의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:26의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(o)
SEQ ID NO:27의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:28의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(p)
SEQ ID NO:29의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:30의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(q)
SEQ ID NO:31의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:32의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(r)
SEQ ID NO:35의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:36의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(s)
SEQ ID NO:37의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:38의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역; 또는
(t)
SEQ ID NO:39의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:40의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역.
구체예 5는 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가용성 및/또는 세포-표면 CD73의 효소 활성을 저해하는, 구체예 1-4 중 어느 한 구체예의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
구체예 6은 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 CD73의 이합체화를 방지하는, 구체예 1-4 중 어느 한 구체예의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
구체예 7은 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 CD73의 함입을 유도하는, 구체예 1-4 중 어느 한 구체예의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
구체예 8은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 키메라인, 구체예 1-7 중 어느 한 구체예의 단리된 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편이다.
구체예 9는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 인간 또는 인간화되는 것인, 구체예 1-8 중 어느 한 구체예의 단리된 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편이다.
구체예 10은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 하기를 포함하는, 구체예 1-9 중 어느 한 구체예의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다:
(1)
SEQ ID NO:286의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:293의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(2)
SEQ ID NO:282의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:290의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(3)
SEQ ID NO:282의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:291의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(4)
SEQ ID NO:282의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:292의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(5)
SEQ ID NO:283의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:290의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(6)
SEQ ID NO:283의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:291의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(7)
SEQ ID NO:283의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:292의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(8)
SEQ ID NO:284의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:290의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(9)
SEQ ID NO:284의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:291의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(10)
SEQ ID NO:284의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:292의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(11)
SEQ ID NO:285의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:290의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(12)
SEQ ID NO:285의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:291의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(13)
SEQ ID NO:285의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:292의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(14)
SEQ ID NO:283의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:293의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(15)
SEQ ID NO:284의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:293의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(16)
SEQ ID NO:285의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:293의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(17)
SEQ ID NO:286의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:290의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(18)
SEQ ID NO:286의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:291의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(19)
SEQ ID NO:286의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:292의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(20)
SEQ ID NO:287의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:294의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(21)
SEQ ID NO:288의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:294의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(22)
SEQ ID NO:289의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:294의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(23)
SEQ ID NO:284의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:299의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(24)
SEQ ID NO:295의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:299의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(25)
SEQ ID NO:296의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:299의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(26)
SEQ ID NO:297의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:299의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역; 또는
(27)
SEQ ID NO:298의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:299의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역.
구체예 11은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 T 세포를 활성화시킬 수 있는, 구체예 1-10 중 어느 한 구체예의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
구체예 12는 구체예 1-11 중 어느 한 구체예의 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산이다.
구체예 13은 구체예 12의 단리된 핵산을 포함하는 벡터이다.
구체예 14는 구체예 13의 벡터를 포함하는 숙주 세포이다.
구체예 15는 구체예 1-11 중 어느 한 구체예의 단리된 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물이다.
구체예 16은 구체예 15의 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, CD73의 뉴클레오티데이스 활성을 저해하는 것을 필요로 하는 대상체에서 CD73의 뉴클레오티데이스 활성을 저해하는 방법이다.
구체예 17은 구체예 15의 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, CD73의 이합체화를 방지하는 것을 필요로 하는 대상체에서 CD73의 이합체화를 방지하는 방법이다.
구체예 18은 구체예 15의 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, CD73의 함입을 유도하는 것을 필요로 하는 대상체에서 CD73의 함입을 유도하는 방법이다.
구체예 19는 구체예 15의 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이다.
구체예 20은 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산을 포함하는 세포를, 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편을 생산하기 위한 조건 하에서 배양시키는 것, 및 세포 또는 배양물로부터 항체 또는 항원-결합 단편을 회수하는 것을 포함하는, 구체예 1-11 중 어느 한 구체예의 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편을 생산하는 방법이다.
구체예 21은 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편과 약학적으로 허용가능한 담체를 조합하여 약학 조성물을 수득하는 것을 포함하는, 구체예 1-11 중 어느 한 구체예의 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하는 약학 조성물을 생산하는 방법이다.
구체예 22는 하기를 포함하는, 대상체에서 CD73의 수준을 결정하는 방법이다:
a.
대상체로부터 시료를 수득하는 것;
b.
구체예 1-11 중 어느 한 구체예의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 시료를 접촉시키는 것; 및
c.
대상체에서 CD73의 수준을 결정하는 것.
구체예 23은 시료가 조직 시료인, 구체예 22의 방법이다.
구체예 24는 조직 시료가 암 조직 시료인, 구체예 23의 방법이다.
구체예 25는 시료가 혈액 시료인, 구체예 22의 방법이다.
구체예 26은 하기를 포함하는, 대상체에서 CD73의 엑토-5'-뉴클레오티데이스 활성을 결정하는 방법이다:
a.
대상체로부터 시료를 수득하는 것;
b.
구체예 1-11 중 어느 한 구체예의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 시료를 접촉시키는 것; 및
c.
대상체에서 CD73의 엑토-5'-뉴클레오티데이스 활성을 결정하는 것.
구체예 27은 시료가 조직 시료인, 구체예 26의 방법이다.
구체예 28는 조직 시료가 암 조직 시료인, 구체예 27의 방법이다.
구체예 29는 시료가 혈액 시료인, 구체예 26의 방법이다.
실시예
실시예
1: 항-CD73 단일클론 항체의 동정
마우스를 인간 CD73 (huCD73-HIS; 잔기 27-547을 함유함) 및 마우스 CD73 (mCD73-HIS; 잔기 29-549를 함유함) 융합 단백질 - 이들 모두 C-말단에서 HIS 태그를 지님 - 의 혼합물로 면역화시켰다. 혈장 역가를 ELISA에 의해 결정했다. 안락사 후, 비장 및 림프절을 수집하여 하이브리도마를 생산했다. 하이브리도마를 384-웰 조직 배양 플레이트에서 성장시키고, 개별 웰로부터의 상청액을 huCD73-HIS를 이용한 ELISA 및 MDA-MB-231 세포를 이용한 형광 활성화 세포 분류 (FACS: fluorescence activated cell sorting) 에 의해 스크리닝했다. 양성 클론을 플레이트상에 부동화된 CD73으로, 뉴클레오티데이스 활성 검정에 의해 추가로 분석했다. 뉴클레오티데이스 활성의 저해를 나타낸 상위 양성 클론을 단리 및 시퀀싱했다.
항-CD73 단일클론 항체에 대한 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 서열이 표 1 및 2에 제공되고, 항-CD73 단일클론 항체에 대한 CDR 부위가 표 3-6에 제공된다.
표 1: 항-CD73 mAb에 대한 중쇄 가변 영역의 서열
VH: 중쇄 가변 영역
표 2: 항-CD73 mAb에 대한 경쇄 가변 영역의 서열
VL: 경쇄 가변 영역
표 3: 항-CD73 mAb에 대한 중쇄의 CDR 부위 1-3
HC: 중쇄; CDR: 상보성 결정 부위; ID: SEQ ID NO
항-CD73 mAb에 대한 HC CDR을 IMGT 방법 (Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212) 을 활용하여 결정했다.
표 4: 항-CD73 mAb에 대한 경쇄의 CDR 부위 1-3
LC: 경쇄; CDR: 상보성 결정 부위
항-CD73 mAb에 대한 LC CDR을 IMGT 방법 (Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212) 을 활용하여 결정했다.
표 5: 항-CD73 mAb에 대한 중쇄의 CDR 부위 1-3
HC: 중쇄; CDR: 상보성 결정 부위
항-CD73 mAb에 대한 HC CDR을 IMGT (Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212) 및 Kabat (Elvin A. Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest 5th ed. (1991)) 방법의 조합을 활용하여 결정??다.
표 6: 항-CD73 mAb에 대한 경쇄의 CDR 부위 1-3
LC: 경쇄; CDR: 상보성 결정 부위
항-CD73 mAb에 대한 LC CDR을 IMGT (Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212) 및 Kabat (Elvin A. Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest 5th ed. (1991)) 방법의 조합을 활용하여 결정했다.
실시예
2: 형질주입된 293E 세포의 배양 배지로부터
mAb의
생산 및 정제
재조합 항-CD73 키메라 mAb를 수득하기 위해, LALA 돌연변이 (L234A/L235A) 를 지닌 인간 IgG1 중쇄 및 카파 경쇄의 불변 영역에 각각 융합된 마우스 가변 영역 (VH 및 VL) 을 함유하는 발현 벡터를 293E 세포에 일시적으로 형질주입시켰다. 293E 세포의 현탁액에서 생산된 재조합 항체를 단백질 A 친화도 크로마토그래피를 이용하여 정제하였다.
실시예
3: 정제된 항-CD73
키메라
mAb에
의한,
부동화
CD73의
뉴클레오티데이스
활성의 저해
검정 완충액 (25 mM Tris-HCl, pH7.5, 및 5 mM MgCl2) 중 HIS-태깅된 인간 CD73 (huCD73-HIS, 0.15 μg/mL로 60 μL/웰) 을 니켈 코팅된 플레이트 (ThermoFisher Scientific, Cat#: 15242) 상에 4℃에서 밤새 코팅시켰다. 세척 후, 항-CD73 키메라 mAb를 첨가하고 실온에서 1 시간 동안 배양시켰다. 100 μM AMP를 플레이트에 첨가함으로써 CD73의 뉴클레오티데이스 활성을 측정하는 효소 반응을 개시했다. 반응을 37℃에서 20분 동안 진행시켰다. 유리 포스페이트를 말라카이트 그린 포스페이트 검출 키트 (R&D Systems, Cat#: DY996) 에 의해 검출 및 정량했다. 항-CD73 키메라 mAb에 의한, 부동화 CD73의 뉴클레오티데이스 활성의 저해는 도 1a 및 1b에 제시된다. 무항체, 억제제가 첨가되지 않은 효소 반응; AMPCP (아데노신 5'(α,β-메틸렌)디포스페이트) 를 효소 활성의 저해에 대한 대조군으로 이용했다.
실시예
4:
키메라
mAb를
이용한 ELISA 결합 검정
카보네이트 코팅 완충액 중 HIS-태깅된 인간 CD73 (huCD73-HIS, 5 μg/mL로 50 μL/웰 (85 nM)) (BPS Bioscience, Cat#: 71184) 을 ELISA 플레이트 상에 4℃에서 밤새 코팅시켰다. ELISA 플레이트를 TBST 완충액 (0.05 % Tween 20을 지닌 TBS 완충액) 에 의해 세척한 후, TBST 중 5% BSA에 의해 실온에서 1 시간 동안 블로킹하고 재차 세척했다. 키메라 항-CD73 항체를 첨가하고, 혼합하여 실온에서 1 시간 동안 배양시켰다. 플레이트를 세척하고, 항-CD73 항체가 부동화 huCD73-HIS에 결합하는 것을 겨자무 과산화효소에 컨쥬게이션된 항-인간 IgG (항-hIgG-HRP) (ThermoFisher Scientific, Cat#: H10007) 를 첨가하고 1 시간 동안 배양시킴으로써 검출했다. 플레이트를 세척하고, ELISA를 One-step 검출 용액 (ThermoFisher Scientific, Cat#: 34029) 을 이용하여 전개시키고 450 nm에서의 흡광도로서 측정했다. CD73에 항-CD73 mAb을 결합시키는 것에 대한 결과가 도 2a-2e에 제시된다.
실시예
5: 항-CD73
mAb에
의한, 가용성 CD73의
뉴클레오티데이스
활성의 저해
이 검정은, 플레이트 상에 부동화된 것보다는, 용액 중 재조합 인간 CD73을 이용하여 수행했다. 최종 농도가 0.5 nM인 HIS-태깅된 인간 CD73 (huCD73-HIS) (BPS Bioscience, Cat#: 71184) 및 다양한 농도의 항-CD73 항체를 검정 완충액 (25 mM Tris-HCl, pH7.5, 5 mM MgCl2, 140 mM NaCl, 및 0.1 % BSA) 중에 37℃에서 20 분 동안 배양시켰다. 효소 반응을, AMP (Sigma Aldrich, Cat#: A2252) 를 최종 농도 400 μM로 추가함으로써 개시했다. 플레이트를 37℃에서 20 분 동안 배양시킨 후, 무기 포스페이트의 농도를 말라카이트 그린 포스페이트 검출 키트 (R&D Systems, Cat#: DY996) 에 의해 결정했다. 두 키메라 항-CD73 mAb 60A9A/IgG4 및 39G8A/IgG4를, 마우스 mAbs 60A9A 및 39G8A의 VH 및 VL 영역을 인간 IgG4 중쇄 및 카파 경쇄의 불변 영역에 각각 융합함으로써 제조했다. 키메라 항체를 CHO 세포에서 발현시키고 단백질 A 친화도 크로마토그래피를 이용하여 정제하여 이 검정에서 테스트했다. 60A9A/IgG4 및 39G8A/IgG4에 의한 가용성 CD73의 뉴클레오티데이스 활성의 저해에 대한 결과가 도 3에 제시된다.
실시예
6: 항-CD73
mAb의
인간화
마우스 항-CD73 mAb 60A9A 및 39G8A를 인간화하여, 인간 환자에서 사용 시 면역원성의 가능성을 감소시켰다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역 (VH 및 VL) 의 서열을 Protein Data Bank (PDB) 데이터베이스 내 인간 항체 서열과 비교하고, 상동성 모델 (homology model) 을 구축했다. 마우스 mAb의 중쇄 및 경쇄 모두의 CDR을 항원 결합에 필요한 적절한 구조를 유지할 가능성이 가장 높은 인간 프레임 워크에 이식했다. 인간화 VH 및 VL 영역의 서열이 표 7 및 8에 제시된다.
인간화 VH 및 VL 영역을 LALA 돌연변이 (L234A/L235A) 를 지닌 인간 IgG1 중쇄 및 카파 경쇄의 불변 영역에 각각 융합시켰다. mAb 서열에 상응하는 제작물을 293E 세포에서의 일시적 형질주입에 이용했고, 인간화 mAb를 단백질 A 친화도 크로마토그래피를 이용하여 정제했다. 인간화 mAb를 가용성 인간 CD73을 이용한 효소 활성 검정에서 테스트했다. 이 검정에서, AMP를 최종 농도 100 μM로 첨가함으로써 효소 반응을 개시하기 전에, 0.4 nM huCD73을 mAb와 함께 얼음 위에서 1 시간 동안 배양했다. 인간화 mAb에 대한 IC50 값이 표 9에 제시된다.
인간 IgG4/카파 골격 상의 인간화 mAb 60A9-H5L4 (60A9-H5L4/IgG4) 를 ELISA 결합 검정에서 분석했고; IgG4 키메라 버전의 60A9A (60A9A/IgG4) 를 대조군으로서 이용했다. ELISA 결합 결과는 도 4a에 제시된다. 또한, 실시예 5에서의 조건 하에서, 60A9-H5L4/IgG4를 가용성 CD73의 뉴클레오티데이스 활성을 저해하는 이의 능력에 대해서 분석했다. 결과는 도 4b에 제시된다.
표 7: 항-CD73 mAb에 대한 인간화 중쇄 가변 영역의 서열
표 8: 항-CD73 mAb에 대한 인간화 경쇄 가변 영역의 서열
표 9: 용액 중 huCD73 효소 검정에서 인간화 mAb에 대한 IC50 값
60A9-H1L1이라는 명칭은 VH 60A9-H1 및 VL 60A9-L1을 이용하여 제작된 mAb를 나타낸다. 모든 다른 인간화 mAb는 동일한 명명 규칙을 채택한다.
실시예
7: 항-CD73
mAb에
의한, 세포 표면 CD73의
뉴클레오티데이스
활성의 저해
A375 세포를 PBS-EDTA (PBS 중 2 mM EDTA) 로 수집하고 0.1 % BSA로 보충된 PBS 완충액 중에서 2회 세척하였다. 100,000 개의 세포를 다양한 농도의 항-CD73 항체의 존재 하에 플레이팅하고 37℃에서 20 분 동안 배양시켰다. 이어서, AMP (Sigma Aldrich, Cat#: A2252) 를 최종 부피 60 μL로, 125 μM의 최종 농도까지 첨가했고, 반응을 37℃에서 60 분 동안 유지했다. 이어서, 플레이트를 원심분리했고, 40 μL의 상청액을 새로운 플레이트에 옮겼다. ATP (Sigma Aldrich, Cat#: A9187) 를 최종 부피 50 μL로, 최종 농도가 100 μM 이 되도록 첨가했고, 혼합물을 37℃에서 15 분 동안 배양시켰다. CellTiter-Glo® 2.0 시약 (Promega, Cat#: G9242) 을 1:1 비로 첨가하여 혼합물 중 AMP를 결정했고, 주어진 반응에서의 효소 활성을 반응의 말에서의 AMP 농도에 기초하여 계산했다. 세포-기반 검정에서의 인간화 항-CD73 mAb (인간 IgG1 LALA/카파 골격 상의) 에 의한 CD73 활성의 저해에 대한 결과가 표 10에 제시된다.
또한, 인간화 항-CD73 mAb 60A9-H5L4/IgG4, 60A9-H3L5/IgG4, 60A9-H5L5/IgG4, 60A9-H6L5/IgG4, 60A9-H7L5/IgG4, 60A9-H8L5/IgG4 및 60A9-H9L5/IgG4를 포스페이트 검출 방법을 이용하여 세포-기반 검정에서 테스트했다. 이 검정에서, 50,000 개의 A375 세포를 세척하여 검정 완충액 (25 mM Tris-HCl, pH7.5, 5 mM MgCl2, 140 mM NaCl, 및 0.1 % BSA) 중에 플레이팅했고, 최종 AMP 농도 400 μM의 효소 반응을 37℃에서 20 분 동안 지속시켰다. AMP의 가수분해에 의해 생산된 유리 포스페이트를 말라카이트 그린 포스페이트 검출 키트 (R&D Systems, Cat#: DY996) 를 이용해 정량했다. 검정 결과는 도 4c 및 4d에 제시된다.
표 10: 세포-기반 CD73 활성 검정에서 인간화 mAb에 대한 IC50 값
실시예
8: 항-CD73
mAb에
의한, 환자 혈청 시료 중 CD73의
뉴클레오티데이스
활성의 저해
대장암을 앓고 있는 환자로부터의 혈청 시료를 인간화 항-CD73 mAb 60A9-H5L4/IgG4의 저해 활성을 평가하는 데 이용했다. 20 μL의 혈청 및 0.1 % BSA로 보충된 PBS 완충액 중 10 μL의 항-CD73 mAb를 37℃에서 30 분 동안 배양시켰다. 10 μL의 500 μM AMP (Sigma Aldrich, Cat#: A2252) 를 첨가했고, 반응 혼합물을 37℃에서 30 분 동안 배양시켰다. 이어서, ATP (Sigma Aldrich, Cat #: A9187) 를 최종 농도 100 μM로 첨가했다. 25 μL의 반응 혼합물을 흰색 하프-에어리어 96-웰 플레이트에 옮겼다. CellTiter-Glo® 2.0 시약 (Promega, Cat #: G9242) 을 혼합물에 1:1 비로 첨가했고, 잔류 AMP 수준을 ATP 검출에 대한 이의 저해 효과를 측정함으로써 결정했다. 100 μM AMP 및 100 μM ATP를 함유한 시료를 검정 백그라운드를 확립하는 데 이용했고, 100 μM ATP만 함유한 시료를 양성 대조군으로 이용했다.
인간화 항-CD73 mAb 60A9-H5L4/IgG4에 의한 환자 혈청 시료 중 CD73의 뉴클레오티데이스 활성의 저해를 1000 nM에서 분석했다. 결과는 도 5에 제시된다.
실시예
9: 인간화 항-CD73
mAb
60A9-
H5L4
/
IgG4에
의한 T 세포 증식의 활성화
일차 인간 CD4+ T 세포를 동결된 말초 혈액 단핵 세포로부터 CD4+ T 세포 단리 키트 (Miltenyi Biotec, Cat#: 130-096-533) 를 이용해 단리했다. 밀도가 DPBS 중 1 mL 당 1,000,000 개의 세포인, 단리된 CD4+ T 세포를 CellTrace™ CFSE 세포 증식 키트 (Invitrogen, Cat#: C34554) 를 이용해 37℃에서 30 분 동안 표지시켰다. 세포를 차가운 DPBS로 3 회 세척하고 AIM V 배지 (Gibco, Cat#: 12055083) 에 재-현탁시켰다. 웰 당 100,000 개의 세포를 다양한 농도의 60A9-H5L4/IgG4와 함께 1 시간 동안 37℃에서 전-배양시켰다. 비드-대-세포 비가 1:1 인 Dynabeads human T-activator CD3/CD28 (Gibco, Cat#: 11131D) 및 인간 IL-2의 조합물인, T 세포 활성화 시약을 최종 농도 60 IU/mL로 첨가하여, T 세포를 활성화시켰다. 이후, AMP (Sigma Aldrich, Cat #: A2252) 를 최종 농도 100 μM로 첨가했다. 37℃에서 72 시간 동안 배양시킨 후, 세포를 PE/Cy7 항-인간 CD4 항체 (BioLegend, Cat#: 357409) 로 염색했다. PE/Cy7 및 CFSE 신호 모두 Attune NxT 유세포 분석기 상에서 분석했다. 검정 창 (assay window) 에 대해서, T 세포 활성화 시약 없이 CFSE CD4+ 세포는 세포 분열을 겪지 않았으므로 기초선의 정의에 이용했고, 반면 AMP 없이 활성화된 CFSE CD4+ 세포 (T 세포 활성화 시약으로 처리됨) 는 저해되지 않은 세포 분열을 겪었으므로 최대 증식의 정의에 이용했다. T 세포 증식의 활성화에 대한 60A9-H5L4/IgG4의 효과는 도 6에 제시된다. AMP로 처리된 세포는 짐작하건대, 세포 표면 CD73에 의한 아데노신의 생산으로 인해 예상한 대로 억제되었고, 항-CD73 mAb 60A9-H5L4/IgG4를 75 nM로 첨가하는 것은 세포를 활성화시켰는데, 이는 mAb가 T 세포 활성화에서 기능적 활성을 갖는다는 것을 시사한다.
당업자는 상기 기재된 구체예를, 이의 넓은 발명 개념으로부터 벗어나지 않고 변화시킬 수 있다는 것을 이해할 것이다. 그러므로, 개시된 특정한 구체예에 본 발명이 한정되지 않으나, 이것이 본 기재에 의해 정의된 본 발명의 사상 및 범위 내 변형을 다루도록 의도되었음이 이해된다.
<110> Phanes Therapeutics, Inc.
<120> Anti-CD73 Antibodies and Uses Thereof
<130> 689204.10WO
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<150> US62/786,598
<151> 2018-12-31
<160> 299
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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65 70 75 80
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1 5 10 15
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20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
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85 90 95
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Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
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Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
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35 40 45
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
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Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
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Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Glu Ile Asp Pro Ser Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ser Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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Gln Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
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65 70 75 80
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Lys
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20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Glu Ile Leu Pro Gly Asn Val Ile Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Asp Asp Gly Tyr Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
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Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
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Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His
65 70 75 80
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100 105 110
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Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
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Met Leu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Trp Asp Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Gly Tyr Phe Asp Val
100 105 110
Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
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Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Tyr Leu Ala Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Thr Ile Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Asn Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Ile Pro Gly Lys Thr Tyr Asn Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
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Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
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Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asn Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Phe Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Val Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
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Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Ile
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Ala Asn Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Ser Gln Tyr Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Thr
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<220>
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Gly Ser Arg
20 25 30
Leu Thr Trp Leu Gln Gln Glu Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Thr Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Asp Tyr Phe Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Ser Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
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Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Thr Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Lys Ser Asn Tyr Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211> 107
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<220>
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Ser Ser Tyr Leu Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gly Arg Val Thr Ile Thr Cys Glu Ala Ser Asp His Ile Asp Asn Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Lys Asp Tyr Thr Leu Ser Ile Thr Ser Leu Gln Thr
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Ser Ser Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
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Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Glu Gly Arg Val Tyr Tyr Asp Tyr Phe Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211> 107
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
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Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Leu Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Asn Pro Gly Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
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<213> Artificial Sequence
<220>
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Pro Pro Lys Val Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
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100 105 110
Lys
<210> 21
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<213> Artificial Sequence
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Glu Leu Ala Arg Pro Trp Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Gln Ala Phe
1 5 10 15
Tyr Thr Phe Ser Arg Arg Met His Phe Ala Ile Arg Asp Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Tyr Tyr Ser Asn Tyr Gly Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 50E16A Light Chain Variable Region
<400> 22
Asp Ile Val Met Thr Gln Phe His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
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<211> 117
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 50F1A Heavy Chain Variable Region
<400> 23
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
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Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
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65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ile Phe Trp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
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20 25 30
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35 40 45
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
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100 105 110
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<213> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
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Gly
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<213> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
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<213> Homo sapiens
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1 5 10 15
Gly Ala Val Leu Trp Pro Ala Ala Gly Ala Trp Glu Leu Thr Ile Leu
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50 55 60
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65 70 75 80
Leu Asp Ala Gly Asp Gln Tyr Gln Gly Thr Ile Trp Phe Thr Val Tyr
85 90 95
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100 105 110
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130 135 140
Lys Ala Lys Gly Pro Leu Ala Ser Gln Ile Ser Gly Leu Tyr Leu Pro
145 150 155 160
Tyr Lys Val Leu Pro Val Gly Asp Glu Val Val Gly Ile Val Gly Tyr
165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
Thr Leu Asn Val Asn Lys Ile Ile Ala Leu Gly His Ser Gly Phe Glu
210 215 220
Met Asp Lys Leu Ile Ala Gln Lys Val Arg Gly Val Asp Val Val Val
225 230 235 240
Gly Gly His Ser Asn Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Asn Pro Pro Ser Lys
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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340 345 350
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355 360 365
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Ser Met Cys Ile Leu Asn Gly Gly Gly Ile Arg Ser Pro Ile Asp Glu
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435 440 445
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450 455 460
Pro Gly Asp Arg Val Val Lys Leu Asp Val Leu Cys Thr Lys Cys Arg
465 470 475 480
Val Pro Ser Tyr Asp Pro Leu Lys Met Asp Glu Val Tyr Lys Val Ile
485 490 495
Leu Pro Asn Phe Leu Ala Asn Gly Gly Asp Gly Phe Gln Met Ile Lys
500 505 510
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515 520 525
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530 535 540
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Ser Leu Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
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Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
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65 70 75 80
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1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
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65 70 75 80
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Ser Leu Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
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Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Gly Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Ser Ala Asp Lys Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ala Ile Tyr Tyr Gly Asn Tyr Val Phe Thr Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<400> 287
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asp Pro Ser Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ser Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<400> 288
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asp Pro Ser Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ser Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<211> 121
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<220>
<223> 39G8-H3 Heavy Chain Variable Region
<400> 289
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asp Pro Ser Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ser Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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50 55 60
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65 70 75 80
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<211> 113
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
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Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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50 55 60
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Lys
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<211> 113
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 60A9-L3 Light Chain Variable Region
<400> 292
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Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val
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Lys
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Lys
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 39G8-L3 Light Chain Variable Region
<400> 294
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Glu Arg Ala Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
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Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Pro Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
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Lys
<210> 295
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 60A9-H6 Heavy Chain Variable Region
<400> 295
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
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Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
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115 120
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 60A9-H8 Heavy Chain Variable Region
<400> 297
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
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Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Gly Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ala Ile Tyr Tyr Gly Asn Tyr Val Phe Thr Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 298
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 60A9-H9 Heavy Chain Variable Region
<400> 298
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Ser Ala Asp Lys Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ala Ile Tyr Tyr Gly Asn Tyr Val Phe Thr Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 299
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 60A9-L5 Light Chain Variable Region
<400> 299
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Gln Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln
35 40 45
Ala Pro Arg Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Ala Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln
85 90 95
His Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Val
100 105 110
Lys
Claims (29)
- 하기 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 부위 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, 경쇄 상보성 결정 부위 1 (LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서:
a. SEQ ID NO:89, 90, 91, 149, 150 및 151, 각각;
b. SEQ ID NO:41, 42, 43, 101, 102 및 103, 각각;
c. SEQ ID NO:44, 45, 46, 104, 105 및 106, 각각;
d. SEQ ID NO:47, 48, 49, 107, 108 및 109, 각각;
e. SEQ ID NO:50, 51, 52, 110, 111 및 112, 각각;
f. SEQ ID NO:53, 54, 55, 113, 114 및 115, 각각;
g. SEQ ID NO:56, 57, 58, 116, 117 및 118, 각각;
h. SEQ ID NO:59, 60, 61, 119, 120 및 121, 각각;
i. SEQ ID NO:62, 63, 64, 122, 123 및 124, 각각;
j. SEQ ID NO:65, 66, 67, 125, 126 및 127, 각각;
k. SEQ ID NO:68, 69, 70, 128, 129 및 130, 각각;
l. SEQ ID NO:71, 72, 73, 131, 132 및 133, 각각;
m. SEQ ID NO:74, 75, 76, 134, 135 및 136, 각각;
n. SEQ ID NO:77, 78, 79, 137, 138 및 139, 각각;
o. SEQ ID NO:80, 81, 82, 140, 141 및 142, 각각;
p. SEQ ID NO:83, 84, 85, 143, 144 및 145, 각각;
q. SEQ ID NO:86, 87, 88, 146, 147 및 148, 각각;
r. SEQ ID NO:92, 93, 94, 152, 153 및 154, 각각;
s. SEQ ID NO:95, 96, 97, 155, 156 및 157, 각각; 또는
t. SEQ ID NO:98, 99, 100, 158, 159 및 160, 각각;
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 CD73, 바람직하게는 인간 CD73에 특이적으로 결합하는 것인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 하기 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 부위 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, 경쇄 상보성 결정 부위 1 (LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서:
a. SEQ ID NO:209, 210, 211, 269, 270 및 271, 각각;
b. SEQ ID NO:161, 162, 163, 221, 222 및 223, 각각;
c. SEQ ID NO:164, 165, 166, 224, 225 및 226, 각각;
d. SEQ ID NO:167, 168, 169, 227, 228 및 229, 각각;
e. SEQ ID NO:170, 171, 172, 230, 231 및 232, 각각;
f. SEQ ID NO:173, 174, 175, 233, 234 및 235, 각각;
g. SEQ ID NO:176, 177, 178, 236, 237 및 238, 각각;
h. SEQ ID NO:179, 180, 181, 239, 240 및 241, 각각;
i. SEQ ID NO:182, 183, 184, 242, 243 및 244, 각각;
j. SEQ ID NO:185, 186, 187, 245, 246 및 247, 각각;
k. SEQ ID NO:188, 189, 190, 248, 249 및 250, 각각;
l. SEQ ID NO:191, 192, 193, 251, 252 및 253, 각각;
m. SEQ ID NO:194, 195, 196, 254, 255 및 256, 각각;
n. SEQ ID NO:197, 198, 199, 257, 258 및 259, 각각;
o. SEQ ID NO:200, 201, 202, 260, 261 및 262, 각각;
p. SEQ ID NO:203, 204, 205, 263, 264 및 265, 각각;
q. SEQ ID NO:206, 207, 208, 266, 267 및 268, 각각;
r. SEQ ID NO:212, 213, 214, 272, 273 및 274, 각각;
s. SEQ ID NO:215, 216, 217, 275, 276 및 277, 각각; 또는
t. SEQ ID NO:218, 219, 220, 278, 279 및 280, 각각;
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 CD73, 바람직하게는 인간 CD73에 특이적으로 결합하는 것인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, SEQ ID NO:33, 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 35, 37 또는 39에 대해서 적어도 95 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 또는 SEQ ID NO:34, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 36, 38 또는 40에 대해서 적어도 95 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 하기를 포함하는 것인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
a. SEQ ID NO:33의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:34의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
b. SEQ ID NO:1의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:2의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
c. SEQ ID NO:3의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:4의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
d. SEQ ID NO:5의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:6의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
e. SEQ ID NO:7의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:8의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
f. SEQ ID NO:9의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:10의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
g. SEQ ID NO:11의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:12의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
h. SEQ ID NO:13의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:14의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
i. SEQ ID NO:15의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:16의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
j. SEQ ID NO:17의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:18의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
k. SEQ ID NO:19의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:20의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
l. SEQ ID NO:21의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:22의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
m. SEQ ID NO:23의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:24의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
n. SEQ ID NO:25의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:26의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
o. SEQ ID NO:27의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:28의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
p. SEQ ID NO:29의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:30의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
q. SEQ ID NO:31의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:32의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
r. SEQ ID NO:35의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:36의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
s. SEQ ID NO:37의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:38의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역; 또는
t. SEQ ID NO:39의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:40의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역. - 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 가용성 및/또는 세포-표면 CD73의 효소 활성을 저해하는 것인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 CD73의 이합체화를 방지하는 것인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 CD73의 함입 (internalization) 을 유도하는 것인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 키메라인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 인간 또는 인간화된 것인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 하기를 포함하는 것인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
(1) SEQ ID NO:286의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:293의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(2) SEQ ID NO:282의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:290의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(3) SEQ ID NO:282의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:291의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(4) SEQ ID NO:282의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:292의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(5) SEQ ID NO:283의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:290의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(6) SEQ ID NO:283의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:291의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(7) SEQ ID NO:283의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:292의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(8) SEQ ID NO:284의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:290의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(9) SEQ ID NO:284의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:291의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(10) SEQ ID NO:284의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:292의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(11) SEQ ID NO:285의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:290의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(12) SEQ ID NO:285의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:291의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(13) SEQ ID NO:285의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:292의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(14) SEQ ID NO:283의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:293의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(15) SEQ ID NO:284의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:293의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(16) SEQ ID NO:285의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:293의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(17) SEQ ID NO:286의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:290의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(18) SEQ ID NO:286의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:291의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(19) SEQ ID NO:286의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:292의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(20) SEQ ID NO:287의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:294의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(21) SEQ ID NO:288의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:294의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(22) SEQ ID NO:289의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:294의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(23) SEQ ID NO:284의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:299의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(24) SEQ ID NO:295의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:299의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(25) SEQ ID NO:296의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:299의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(26) SEQ ID NO:297의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:299의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역; 또는
(27) SEQ ID NO:298의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:299의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역. - 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 T 세포를 활성화시킬 수 있는 것인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 따른 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산.
- 제 12 항에 따른 단리된 핵산을 포함하는 벡터.
- 제 13 항에 따른 벡터를 포함하는 숙주 세포.
- 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 따른 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물.
- 제 15 항에 따른 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, CD73의 뉴클레오티데이스 활성을 저해하는 것을 필요로 하는 대상체에서 CD73의 뉴클레오티데이스 활성을 저해하는 방법.
- 제 15 항에 따른 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, CD73의 이합체화를 방지하는 것을 필요로 하는 대상체에서 CD73의 이합체화를 방지하는 방법.
- 제 15 항에 따른 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, CD73의 함입을 유도하는 것을 필요로 하는 대상체에서 CD73의 함입을 유도하는 방법.
- 제 15 항에 따른 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법.
- 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 따른 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하는 방법으로서, 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산을 포함하는 세포를, 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편을 생산하기 위한 조건 하에서 배양시키는 것, 및 세포 또는 배양물로부터 항체 또는 항원-결합 단편을 회수하는 것을 포함하는 것인, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하는 방법.
- 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편을 약학적으로 허용가능한 담체와 조합하여 약학적 조성물을 수득하는 것을 포함하는, 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 따른 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물을 생산하는 방법.
- 하기를 포함하는, 대상체에서 CD73의 수준을 결정하는 방법:
a. 대상체로부터 시료를 수득하는 것;
b. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 따른 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 시료를 접촉시키는 것; 및
c. 대상체에서 CD73의 수준을 결정하는 것. - 제 22 항에 있어서, 시료가 조직 시료인, 대상체에서 CD73의 수준을 결정하는 방법.
- 제 23 항에 있어서, 조직 시료가 암 조직 시료인, 대상체에서 CD73의 수준을 결정하는 방법.
- 제 22 항에 있어서, 시료가 혈액 시료인, 대상체에서 CD73의 수준을 결정하는 방법.
- 하기를 포함하는, 대상체에서 CD73의 엑토-5'-뉴클레오티데이스 활성을 결정하는 방법:
a. 대상체로부터 시료를 수득하는 것;
b. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 따른 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 시료를 접촉시키는 것; 및
c. 대상체에서 CD73의 엑토-5'-뉴클레오티데이스 활성을 결정하는 것. - 제 26 항에 있어서, 시료가 조직 시료인, 대상체에서 CD73의 엑토-5'-뉴클레오티데이스 활성을 결정하는 방법.
- 제 27 항에 있어서, 조직 시료가 암 조직 시료인, 대상체에서 CD73의 엑토-5'-뉴클레오티데이스 활성을 결정하는 방법.
- 제 26 항에 있어서, 시료가 혈액 시료인, 대상체에서 CD73의 엑토-5'-뉴클레오티데이스 활성을 결정하는 방법.
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