KR20200129108A - 항-tip-1 항체 및 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
항-TIP-1 항체 및 이의 항원-결합 단편이 기재되어 있다. 또한, 항체를 인코딩하는 핵산, 항체를 포함하는 조성물, 항체를 생산하는 방법, 및 암과 같은 질환을 치료 또는 예방하기 위한 항체를 이용하는 방법이 기재되어 있다.
Description
[관련 출원에 대한 상호 참조]
본 출원은 2018년 3월 8일에 출원한 미국 가출원 제 62/640,123 호를 우선권으로 주장한다. 이의 개시는 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
[기술분야]
본 발명은 단일클론 항-TIP-1 항체, 항체를 인코딩하는 핵산 및 발현 벡터, 벡터를 함유하는 재조합 세포, 및 항체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 항체를 제조하는 방법, 및 항체를 이용하여 암을 포함하는 질환을 치료하는 방법이 제공된다.
[전자 제출된 서열 목록에 대한 참조]
본 출원은 파일명이 "689204-8WO Sequence Listing"이고 생성일이 2019년 3월 1일이며 크기가 4 kb인 ASCII 포맷의 서열 목록으로서 EFS-Web을 통해 전자 제출된 서열 목록을 포함한다. EFS-Web을 통해 제출된 서열 목록은 본 명세서의 일부이고 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
Tax-상호작용 단백질 1 (TIP-1: Tax-interacting protein 1, 또한 Tax1bp3 또는 글루타미네이스-상호작용 단백질 (GIP: glutaminase-interacting protein) 로도 알려져 있음) 은 PDZ (PSD-95/Discs large/ZO-1 상동성) 도메인-함유 세포 내 단백질 (인간 및 마우스에서 124 개의 아미노산) 이다. 124 개-아미노산 단백질의 잔기 13-112를 포함하는 단일 PDZ 도메인 (Olalla, et al., FEBS Lett. 2001; 488:116-122) 은 TIP-1에서 확인될 수 있는 유일한 기능적 및 구조적 유닛인데, 이는 TIP-1이 PDZ-함유 단백질 중에서 고유하며 단백질-단백질 상호작용을 통해 이의 기능을 단독으로 지닐 수 있다는 것을 시사한다.
TIP-1은 PDZ 도메인을 통해, 글루타미네이스 L, β-카테닌, FAS, HTLV Tax, HPV E6, 로테킨 (Rhotekin) 및 Kir 2.3을 포함한 많은 세포 내 단백질과 상호작용한다 (Zoetewey et al., Biochemistry 2011; 50:3528-3539). 그러나, TIP-1의 정확한 생물학적 기능은 불명확한 채로 남아있다. 상승된 TIP-1 발현은 인간 침습성 유방암 세포에서 검출되었고, 종양 세포 부착, 이동 및 폐 전이와 관련된 것으로 나타났다 (Han et al., Biochem Biophys Res Commun 2012; 422 : 139-145).
최근, TIP-1이 방사선 조사에 의한 유도 시, 암세포의 표면에 전위 (translocation) 된다는 것이 밝혀졌는데 (Yan et al., Oncotarget 2016; 7:43352-43362) 이는 TIP-1이 유도 시, 암 신생항원이 될 수 있음을 시사한다. 따라서, 항-TIP-1 단일클론 항체 (mAb) 가 선택성을 갖고 암세포를 표적하는데 이용될 수 있고, 잠재적인 치료제로서 작용할 수 있다.
한 일반적 양태에서, 본 발명은 TIP-1에 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.
각각 하기 폴리펩티드 서열을 갖는, 중쇄 상보성 결정 부위 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, 경쇄 상보성 결정 부위 1 (LCDR1), LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제공되며:
a. SEQ ID NO:3, 4, 5, 6, 7, 및 8;
항체 또는 이의 항원-결합 단편은 TIP-1, 바람직하게는 인간 TIP-1에 특이적으로 결합한다.
특정 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:1에 대해서 적어도 95 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 또는 SEQ ID NO:2에 대해서 적어도 95 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
특정 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다:
a. SEQ ID NO:1의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:2의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역.
특정 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 항체-의존성 세포독성 (ADCC: antibody-dependent cellular cytotoxicity) 및/또는 보체-의존성 세포독성 (CDC: complement-dependent cytotoxicity) 을 통해 세포 표면 상의 TIP-1에 결합하고/하거나, 컨쥬게이션된 약물 (conjugated drug) 의 점증 (recruitment) 을 매개하고/하거나, 암-사멸 효과를 지닌 또 다른 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 이중 특이성 항체를 형성함으로써 이펙터-매개 종양 세포 용해를 유도할 수 있다.
특정 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 키메라이다.
특정 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 또는 인간화된다.
또한, 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산이 제공된다.
또한, 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산을 포함하는 벡터가 제공된다.
또한, 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포가 제공된다.
특정 구체예에서, 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물이 제공된다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 암은 임의의 액상 암 또는 고형 암일 수 있고, 예를 들어, 다음으로부터 선택될 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다: 폐암, 위암, 결장암, 간세포 암종, 신장 세포 암종, 방광 요로 상피세포 암종, 전이성 흑색종, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 두경부암, 췌장암, 신경교종, 교모세포종, 및 기타 고형 종양, 및 비-호지킨 림프종 (NHL), 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 다발성 골수종 (MM), 급성 골수성 백혈병 (AML), 및 기타 액형 종양.
또한, 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하는 방법이 제공된다. 방법은 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산을 포함하는 세포를, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하기 위한 조건 하에서 배양시키는 것, 및 항체 또는 이의-항원 결합 단편을 세포 또는 배양물로부터 회수하는 것을 포함한다.
또한, 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물을 생산하는 방법이 제공된다. 방법은 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 약학적으로 허용가능한 담체와 조합하여 약학적 조성물을 수득하는 것을 포함한다.
또한, 대상체에서 TIP-1의 수준을 결정하는 방법이 제공된다. 방법은 (a) 대상체로부터 시료를 수득하는 것; (b) 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 시료와 접촉시키는 것; 및 (c) 대상체에서 TIP-1의 수준을 결정하는 것을 포함한다. 시료는, 예를 들어, 조직 시료 또는 혈액 시료일 수 있다. 조직 시료는, 예를 들어, 암조직 시료일 수 있다.
본 출원의 전술한 발명의 내용, 뿐만 아니라 하기 바람직한 구체예의 상세한 설명은 첨부된 도면과 함께 읽는 경우에 보다 잘 이해될 것이다. 그러나, 본 출원이 도면에 나타낸 정확한 구체예에 한정되지 않는다는 것을 이해해야 할 것이다.
도 1은 ELISA 검정에서 정제된 마우스 항-TIP-1 mAb T2가 TIP1-Myc-DDK에 결합하는 것을 나타낸다. 이용된 T2 mAb 농도는 다음과 같았고 (그래프의 좌측에서 우측으로): 각각 500 ng/ml, 20 ng/ml, 5 ng/ml 및 1 ng/ml; 2 차 Ab 단독, 이 군은 1 차 항체로 처리되지 않았으나, HRP-컨쥬게이션된 항-마우스 IgG 2 차 Ab로 처리되었으며; 무항체는, 1 차 Ab 또는 2 차 Ab 모두 첨가되지 않았다.
도 2는 ELISA 검정에서 항-TIP-1 키메라 mAb (인간 IgG1 및 카파 체인의 불변 영역에 각각 융합된 마우스 VH 및 VL) T2의 결합을 나타내고; 이용된 T2 키메라 mAb 농도는 다음과 같았으며 (그래프의 좌측에서 우측으로): 각각, 18 ng/ml, 4 ng/ml, 및 1 ng/ml; 2 차 Ab 단독, 이 군은 1 차 항체로 처리되지 않았으나, HRP-컨쥬게이션된 항-인간 IgG 2 차 Ab로 처리되었고; 무항체는, 1 차 Ab 또는 2 차 Ab 모두 첨가되지 않았다.
도 1은 ELISA 검정에서 정제된 마우스 항-TIP-1 mAb T2가 TIP1-Myc-DDK에 결합하는 것을 나타낸다. 이용된 T2 mAb 농도는 다음과 같았고 (그래프의 좌측에서 우측으로): 각각 500 ng/ml, 20 ng/ml, 5 ng/ml 및 1 ng/ml; 2 차 Ab 단독, 이 군은 1 차 항체로 처리되지 않았으나, HRP-컨쥬게이션된 항-마우스 IgG 2 차 Ab로 처리되었으며; 무항체는, 1 차 Ab 또는 2 차 Ab 모두 첨가되지 않았다.
도 2는 ELISA 검정에서 항-TIP-1 키메라 mAb (인간 IgG1 및 카파 체인의 불변 영역에 각각 융합된 마우스 VH 및 VL) T2의 결합을 나타내고; 이용된 T2 키메라 mAb 농도는 다음과 같았으며 (그래프의 좌측에서 우측으로): 각각, 18 ng/ml, 4 ng/ml, 및 1 ng/ml; 2 차 Ab 단독, 이 군은 1 차 항체로 처리되지 않았으나, HRP-컨쥬게이션된 항-인간 IgG 2 차 Ab로 처리되었고; 무항체는, 1 차 Ab 또는 2 차 Ab 모두 첨가되지 않았다.
다양한 간행물, 논문 및 특허가 배경기술에서 및 본 명세서 전반에 걸쳐 인용되거나 또는 기재되어 있으며; 이들 참고문헌 각각은 그 전체가 본원에 참조로 포함된다. 본 명세서에 포함된 문헌, 행위, 재료, 장치, 물품 등의 논의는 본 발명의 맥락을 제공하는 목적을 위한 것이다. 이러한 논한 것이 이들 내용들 중 임의의 내용 또는 전부가, 개시되어 있거나 또는 청구된 임의의 발명에 대한 종래 기술의 일부를 형성한다는 인정은 아니다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 이용된 모든 기술적 용어 및 과학적 용어는, 본 발명이 적용되는 기술분야의 당업자가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 다르게는, 본원에서 이용된 특정 용어는 본 명세서에서 제시된 의미를 갖는다.
본원 및 첨부된 청구범위에서 이용된, 단수형 "부정 관사 (a, an)" 및 "정관사 (the)"는, 문맥이 달리 명확하게 지시하지 않는 한, 복수의 대상을 포함한다는 것에 유의해야 한다.
달리 언급되지 않는 한, 본원에 기재된 농도 또는 농도 범위와 같은 임의의 수치는 모든 경우에서 "약"이라는 용어에 의해 변형되는 것으로서 이해되어야 한다. 따라서, 수치는 통상적으로, 인용된 값의 ±10 %를 포함한다. 예를 들어, 1 mg/mL의 농도는 0.9 mg/mL 내지 1.1 mg/mL를 포함한다. 마찬가지로, 1 % 내지 10 % (w/v) 의 농도 범위는 0.9 % (w/v) 내지 11 % (w/v) 를 포함한다. 본원에서 이용된, 수치 범위의 이용은 문맥이 명백히 달리 나타내지 않는 한, 모든 가능한 하위범위, 그러한 범위 내의 정수 및 값의 분수를 포함하는 그 범위 내의 모든 개별 수치를 명시적으로 포함한다.
달리 나타내지 않는 한, 일련의 요소에 선행하는 "적어도"라는 용어는 일련의 모든 요소를 나타내는 것으로 이해될 것이다. 당업자는 본원에 기재된 본 발명의 특정 구체예에 대한 많은 등가물을, 단지 통상적인 실험을 이용하여 인식하거나 또는 확인 가능할 것이다. 이러한 등가물은 발명에 의해 포괄되는 것으로 의도된다.
본원에서 이용된, "포함하다 (comprise)", "포함하는 (comprising)", "포함하다 (include)", "포함하는 (including)", "갖다", "갖는", "함유하다" 또는 "함유하는"이라는 용어 또는 이의 임의의 다른 변형은, 언급된 정수 또는 정수의 군을 포함하나, 임의의 다른 정수 또는 정수의 군을 배제하지 않는 것으로 이해될 것이며, 비-배타적이거나 또는 개방형인 것으로 의도된다. 예를 들어, 요소의 목록을 포함하는 조성물, 혼합물, 공정, 방법, 물품 또는 장치가 반드시 이들 요소에만 한정되는 것이 아니라, 이러한 조성물, 혼합물, 공정, 방법, 물품 또는 장치에 고유하지 않거나 명시적으로 열거되지 않은 다른 요소를 포함할 수 있다. 또한, 반대로 명시적으로 언급되지 않는 한, "또는"은 포괄적인 또는 (inclusive or) 을 나타내고, 배타적인 또는 (exclusive or) 을 나타내지 않는다. 예를 들어, 조건 A 또는 B는 다음 중 어느 하나에 의해 충족된다: A가 참 (또는 존재함) 이고 B가 거짓 (또는 존재하지 않음), A가 거짓 (또는 존재하지 않음) 이고 B가 참 (또는 존재함), 및 A 와 B 둘 모두가 참 (또는 존재함).
본원에서 이용된, 복수의 인용된 요소 사이의 결합 용어 "및/또는"은 개별 및 조합된 옵션 둘 모두를 포함하는 것으로서 이해된다. 예를 들어, 두 요소가 "및/또는"으로 결합되는 경우, 제 1 옵션은 제 2 요소 없이 제 1 요소가 적용 가능한 것을 나타낸다. 제 2 옵션은 제 1 요소 없이 제 2 요소가 적용 가능한 것을 나타낸다. 제 3 옵션은 제 1 요소와 제 2 요소가 함께 적용 가능한 것을 나타낸다. 이들 옵션 중 임의의 한 옵션은 그 의미에 포함되는 것으로 이해되므로, 본원에서 이용된 "및/또는"이라는 용어의 요건을 충족시킨다. 또한, 옵션들 중 하나보다 많은 옵션이 동시에 적용 가능한 것이 그 의미에 속하는 것으로 이해되므로, "및/또는"이라는 용어의 요건을 충족시킨다.
본원에서 이용된, 명세서 및 청구범위 전반에 걸쳐 이용된 "-로 이루어지다 (단수 주어)"라는 용어, 또는 "-로 이루어지다 (복수 주어)" 또는 "-로 이루어지는" 과 같은 변형은 임의의 언급된 정수 또는 정수의 군을 포함하나, 추가의 정수 또는 정수의 군은 명시된 방법, 구조(체) 또는 조성(물)에 추가될 수 없다는 것을 나타낸다.
본원에서 이용된, 명세서 및 청구범위 전반에 걸쳐 이용된 "-로 본질적으로 이루어지다 (단수 주어)"라는 용어, 또는 "-로 본질적으로 이루어지다 (복수 주어)" 또는 "-로 본질적으로 이루어지는"과 같은 변형은 임의의 언급된 정수 또는 정수의 군을 포함하고, 명시된 방법, 구조(체) 또는 조성(물)의 기본적인 특성 또는 신규한 특성을 실질적으로 변화시키지 않는 임의의 언급된 정수 또는 정수의 군을 임의로 포함한다는 것을 나타낸다. M.P.E.P. § 2111.03을 참고한다.
본원에서 이용된, "대상체"는 임의의 동물, 바람직하게는 포유동물, 가장 바람직하게는 인간을 의미한다. 본원에서 이용된 "포유동물"이라는 용어는 임의의 포유동물을 포함한다. 포유동물의 예시는 소, 말, 양, 돼지, 고양이, 개, 마우스, 랫트, 토끼, 기니피그, 원숭이, 인간 등을, 보다 바람직하게는 인간을 포함하나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
바람직한 발명의 성분의 치수 또는 특징을 나타내는 경우에, 본원에서 이용된 "약", "대략", "일반적으로", "실질적으로"라는 용어 및 유사한 용어는, 기재된 치수/특징이 엄격한 경계 또는 파라미터가 아니며 당업자가 이해하는 바와 기능적으로 동일하거나 또는 유사한 근소한 변형을 이로부터 배제하지 않는다는 것을 나타낸다는 것이 이해되어야 한다. 최소한, 수치 파라미터를 포함하는 이러한 참조는 당업계에서 허용되는 수학적 및 산업적 원리 (예, 반올림, 측정 또는 다른 계통 오차, 제작 공차 등) 를 이용하여 최하위 숫자를 변화시키지 않는 변형을 포함할 것이다.
둘 이상의 핵산 또는 폴리펩티드 서열 (예, 항-TIP-1 항체 및 이를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, TIP-1 폴리펩티드 및 이를 인코딩하는 TIP-1 폴리뉴클레오티드) 의 맥락에서, "동일한" 또는 백분율 "일치도"라는 용어는 동일하거나 또는 명시된 백분율의 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드를 갖는 둘 이상의 서열 또는 하위서열을 나타내며, 최대 일치를 위해 비교 및 정렬되는 경우에, 하기의 서열 비교 알고리즘 중 하나를 이용하거나 또는 육안 검사에 의해 측정된다.
서열 비교를 위해, 통상적으로 하나의 서열은 테스트 서열이 비교되는 참조 서열 역할을 한다. 서열 비교 알고리즘을 이용하는 경우, 테스트 서열 및 참조 서열이 컴퓨터에 입력되고, 하위서열 좌표가 지정되며, 필요한 경우에, 서열 알고리즘 프로그램 파라미터가 지정된다. 이어서, 서열 비교 알고리즘은 지정된 프로그램 파라미터에 기초하여, 참조 서열에 대한 테스트 서열(들) 의 백분율 서열 일치도를 계산한다.
비교를 위한 최적의 서열 정렬은 예를 들어 다음에 의해 수행될 수 있다: Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981) 의 로컬 상동성 알고리즘 (local homology algorithm), Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970) 의 상동성 정렬 알고리즘, Pearson & Lipman, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988) 의 유사성 검색 방법, 이들 알고리즘의 컴퓨터화된 실행 (computerized implementation) (Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI의 GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA), 또는 육안 검사 (일반적으로, Current Protocols in Molecular Biology, F.M. Ausubel et al., eds., Current Protocols, a joint venture between Greene Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., (1995 Supplement) (Ausubel) 을 참고).
백분율 서열 일치도 및 서열 유사성을 결정하는 데 적합한 알고리즘의 예시는 BLAST 및 BLAST 2.0 알고리즘으로, Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410 및 Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402에 각각 기재되어 있다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 National Center for Biotechnology Information을 통해 공개적으로 입수 가능하다. 이 알고리즘은 먼저, 쿼리 서열 내 길이가 W인 짧은 워드 (word) 를 식별함으로써, 데이터베이스 서열 내 동일한 길이의 워드와 정렬되는 경우에, 매칭되거나 또는 어떤 양수인 임계 스코어 (threshold score) T를 충족시키는 고 스코어 서열 쌍 (HSP: high scoring sequence pair) 을 식별하는 것을 수반한다. T 는 네이버후드 워드 스코어 임계값 (neighborhood word score threshold) 이라고 한다 (상기 Altschul et al.). 이들 초기 네이버후드 워드 히트 (neighborhood word hit) 는 이들을 함유하는 보다 긴 HSP를 찾기 위한 검색을 개시하기 위한 시드 (seed) 역할을 한다. 이어서, 워드 히트는 누적 정렬 스코어가 증가될 수 있는 한, 각 서열을 따라 양 방향으로 확장된다.
누적 스코어는, 뉴클레오티드 서열의 경우, 파라미터 M (매칭 잔기의 쌍에 대한 리워드 스코어; 항상 > 0) 및 N (미스매칭 잔기에 대한 패널티 스코어; 항상 < 0) 을 이용하여 계산된다. 아미노산 서열의 경우, 스코어링 매트릭스 (scoring matrix) 가 누적 스코어를 계산하는 데 이용된다. 각 방향에서 워드 히트의 연장은 다음의 경우에서 중단된다: 누적 정렬 스코어가 이의 최대 달성 값으로부터 양 (quantity) X 가 하락하는 경우; 하나 이상의 음수-스코어링 잔기 정렬의 축적으로 인해 누적 스코어가 0 이하가 되는 경우; 또는 어느 한 서열의 말단이 도달되는 경우. BLAST 알고리즘 파라미터 W, T 및 X는 정렬의 민감도와 속도를 결정한다. BLASTN 프로그램 (뉴클레오티드 서열용) 은 워드 길이 (W) 11, 기대값 (E) 10, M=5, N=-4, 및 두 가닥의 비교를 디폴트로 이용한다. 아미노산 서열 비교를 위한, BLASTP 프로그램은 워드 길이 (W) 3, 기대값 (E) 10, 및 BLOSUM62 스코어링 매트릭스를 디폴트로 이용한다 (Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915 (1989) 를 참고).
백분율 서열 일치도를 계산하는 것에 더하여, BLAST 알고리즘이 또한 두 서열 사이 유사성의 통계학적 분석을 수행한다 (예를 들어, Karlin & Altschul, Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 90:5873-5787 (1993) 을 참고). BLAST 알고리즘에 의해 제공되는 유사성의 한 척도는 최소 확률 합 (P(N)) 이며, 이는 두 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 사이의 매치가 우연히 일어날 확률을 나타낸다. 예를 들어, 테스트 핵산을 참조 핵산에 비교하는 것에서 최소 확률 합이 약 0.1 미만, 보다 바람직하게는 약 0.01 미만, 가장 바람직하게는 약 0.001 미만인 경우에, 핵산이 참조 서열과 유사한 것으로 간주된다.
두 핵산 서열 또는 폴리펩티드가 실질적으로 동일하다는 것이 추가로 나타내는 것은 제 1 핵산에 의해 인코딩된 폴리펩티드가 제 2 핵산에 의해 인코딩된 폴리펩티드와 면역학적 교차 반응성이라는 것이며, 이는 하기에 기재되어 있다. 따라서, 폴리펩티드는 통상적으로, 예를 들어 두 펩티드가 보존적 치환에 의해서만 상이한 제 2 폴리펩티드와 실질적으로 동일하다. 두 핵산 서열이 실질적으로 동일하다는 것이 또 달리 나타내는 것은, 두 분자가 엄격한 조건 하에서 서로 혼성화한다는 것이다.
항체
본 발명은 일반적으로, 단리된 항-TIP-1 항체, 항체를 인코딩하는 핵산 및 발현 벡터, 벡터를 함유하는 재조합 세포, 및 항체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 항체를 제조하는 방법, 및 항체를 이용하여 암을 포함하는 질환을 치료하는 방법이 제공된다. 본 발명의 항체는 다음을 포함하나, 이들에 한정되는 것은 아닌 바람직한 기능적 특성을 하나 이상 보유한다: TIP-1에 결합하는 고-친화도, TIP-1에 대한 높은 특이성, 및 단독으로 또는 다른 항암 요법과 함께 투여되는 경우에 동물 모델에서 종양 성장을 억제하는 능력.
일반적 양태에서, 본 발명은 TIP-1에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.
본원에서 이용된, "항체"라는 용어는 넓은 의미로 이용되며, 단일클론 또는 다중클론인, 인간, 인간화, 복합 및 키메라 항체, 및 항체 단편을 포함하는 면역글로불린 및 항체 분자를 포함한다. 대체로, 항체는 특이적인 항원에 대한 결합 특이성을 보이는 단백질 또는 펩티드 사슬이다. 항체 구조는 주지되어 있다. 면역글로불린은 중쇄 불변 도메인 아미노산 서열에 따라, 5 개의 주요 클래스 (즉, IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM) 로 지정될 수 있다. IgA 및 IgG는 동형 IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로 더 하위-분류된다. 따라서, 본 발명의 항체는 5 개의 주요 클래스 또는 상응하는 하위-클래스 중 임의의 클래스일 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 항체는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4이다. 척추동물 종의 항체 경쇄는, 이들의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 2 개의 명확히 구별되는 유형, 즉, 카파 및 람다 중 하나로 지정될 수 있다. 따라서, 본 발명의 항체는 카파 또는 람다 경쇄 불변 도메인을 함유할 수 있다. 특정 구체예에 따르면, 본 발명의 항체는 랫트 또는 인간 항체로부터의 중쇄 및/또는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 및 경쇄 불변 도메인에 더하여, 항체는 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역으로 구성된 항원-결합 영역을 함유하며, 이의 각각은 3 개의 도메인 (즉, 상보성 결정 부위 1-3; CDR1, CDR2 및 CDR3) 을 함유한다. 경쇄 가변 영역 도메인은 대안적으로는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3이라고 하며, 중쇄 가변 영역 도메인은 대안적으로는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3이라고 한다.
본원에서 이용된, "단리된 항체"라는 용어는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 나타낸다 (예를 들어, TIP-1에 특이적으로 결합하는 단리된 항체에는 TIP-1에 결합하지 않는 항체가 실질적으로 없음). 또한, 단리된 항체에는 다른 세포 물질 및/또는 화학 물질이 실질적으로 없다.
본원에서 이용된, "단일클론 항체"라는 용어는 실질적으로 균질한 항체의 집단으로부터 수득되는 항체를 나타내며, 즉, 집단을 포함하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는, 자연적으로 발생 가능한 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 본 발명의 단일클론 항체는 하이브리도마 방법, 파지 디스플레이 기술, 단일 림프구 유전자 클로닝 기술 또는 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 단일클론 항체는 인간 중쇄 전이유전자 및 경쇄 전이유전자를 포함하는 게놈을 갖는, 형질전환 마우스 또는 랫트와 같은 형질전환 비-인간 동물로부터 수득된 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생산될 수 있다.
본원에서 이용된, "항원-결합 단편"이라는 용어는 다음과 같은 항체 단편을 나타낸다: 예를 들어, 디아바디 (diabody), Fab, Fab', F(ab')2, Fv 단편, 다이설파이드 안정화 Fv 단편 (dsFv), (dsFv)2, 이중 특이성 dsFv (dsFv-dsFv'), 다이설파이드 안정화 디아바디 (ds 디아바디), 단일-사슬 항체 분자 (scFv), 단일 도메인 항체 (sdab), scFv 이합체 (2가 디아바디), 하나 이상의 CDR을 포함하는 항체의 부분으로부터 형성된 다중 특이성 항체, 낙타화 (camelized) 단일 도메인 항체, 나노바디 (nanobody), 도메인 항체, 2가 도메인 항체, 또는 항원에 결합하나 완전한 항체 구조를 포함하지 않는 임의의 다른 항체 단편. 항원-결합 단편은 모 항체 또는 모 항체 단편이 결합하는 동일한 항원에 결합할 수 있다. 특정 구체예에 따르면, 항원-결합 단편은 경쇄 가변 영역, 경쇄 불변 영역 및 중쇄의 Fd 세그먼트를 포함한다. 다른 특정 구체예에 따르면, 항원-결합 단편은 Fab 및 F(ab') 를 포함한다.
본원에서 이용된, "단일-사슬 항체"라는 용어는 약 15 내지 약 20 개 아미노산의 짧은 펩티드에 의해 연결된 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 당업계의 통상적인 단일-사슬 항체를 나타낸다. 본원에서 이용된, "단일 도메인 항체"라는 용어는 중쇄 가변 영역 및 중쇄 불변 영역을 포함하거나 또는 중쇄 가변 영역만 포함하는 당업계의 통상적인 단일 도메인 항체를 나타낸다.
본원에서 이용된, "인간 항체"라는 용어는 당업계에 공지된 임의의 기법을 이용하여 제조된 인간에 의해 생산된 항체에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 인간에 의해 생산된 항체를 나타낸다. 인간 항체의 이러한 정의는 온전한 또는 전장 항체, 이의 단편, 및/또는 적어도 하나의 인간 중쇄 및/또는 경쇄 폴리펩티드를 포함하는 항체를 포함한다.
본원에서 이용된, "인간화 항체"라는 용어는 항체의 항원-결합 특성이 유지되나, 인체 내에서 이의 항원성이 감소되도록, 인간 항체에 대한 서열 상동성을 증가시키기 위해 변형되는 비-인간 항체를 나타낸다.
본원에서 이용된, "키메라 항체"라는 용어는 면역글로불린 분자의 아미노산 서열이 둘 이상의 종으로부터 유래되는 항체를 나타낸다. 경쇄 및 중쇄 둘 모두의 가변 영역은 종종, 목적되는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 한 종의 포유동물 (예를 들어, 마우스, 랫트, 토끼 등) 로부터 유래된 항체의 가변 영역에 상응하는 한편, 불변 영역은 또 다른 종의 포유동물 (예를 들어, 인간) 로부터 유래된 항체의 서열에 상응하여, 그 종에서 면역 반응을 유발하는 것을 방지한다.
본원에서 이용된, "다중 특이성 항체"라는 용어는 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하는 항체를 나타내며, 여기서 복수의 제 1 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제 1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖고, 복수의 제 2 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제 2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는다. 한 구체예에서, 제 1 및 제 2 에피토프는 동일한 항원, 예를 들어, 동일한 단백질 (또는 다합체성 단백질의 하위단위) 상에 있다. 구체예에서, 제 1 및 제 2 에피토프는 중복되거나 또는 실질적으로 중복된다. 구체예에서, 제 1 및 제 2 에피토프는 중복되지 않거나 또는 실질적으로 중복되지 않는다. 구체예에서, 제 1 및 제 2 에피토프는 상이한 항원, 예를 들어, 상이한 단백질 (또는 다합체성 단백질의 상이한 하위단위) 상에 있다. 구체예에서, 다중 특이성 항체는 제 3, 제 4 또는 제 5 면역글로불린 가변 도메인을 포함한다. 구체예에서, 다중 특이성 항체는 이중 특이성 항체 분자, 삼중 특이성 항체 분자, 또는 사중 특이성 항체 분자이다.
본원에서 이용된, "이중 특이성 항체"라는 용어는 2 개 이하의 에피토프 또는 2 개의 항원에 결합하는 다중 특이성 항체를 나타낸다. 이중 특이성 항체는 제 1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 제 1 면역글로불린 가변 도메인 서열 및 제 2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 제 2 면역글로불린 가변 도메인 서열을 특징으로 한다. 구체예에서, 제 1 및 제 2 에피토프는 동일한 항원, 예를 들어, 동일한 단백질 (또는 다합체성 단백질의 하위단위) 상에 있다. 구체예에서, 제 1 및 제 2 에피토프는 중복되거나 또는 실질적으로 중복된다. 구체예에서, 제 1 및 제 2 에피토프는 상이한 항원, 예를 들어, 상이한 단백질 (또는 다합체성 단백질의 상이한 하위단위) 상에 있다. 구체예에서, 이중 특이성 항체는 제 1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 중쇄 가변 도메인 서열 및 경쇄 가변 도메인 서열, 및 제 2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 중쇄 가변 도메인 서열 및 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 구체예에서, 이중 특이성 항체는 제 1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 반-항체 (half antibody) 또는 이의 단편, 및 제 2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 반-항체 또는 이의 단편을 포함한다. 구체예에서, 이중 특이성 항체는 제 1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 scFv 또는 이의 단편, 및 제 2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 scFv 또는 이의 단편을 포함한다. 구체예에서, 제 1 에피토프는 TIP-1 상에 위치하며, 제 2 에피토프는 PD-1, PD-L1, LAG-3, TIM-3, CTLA-4, EGFR, HER-2, CD19, CD20, CD33, CD47, CD73, 아펠린, DLL3, 클라우딘 18.2 (CLDN18.2), FRα (엽산 수용체 알파), CD3 및/또는 기타 종양 관련 면역 억제제 또는 표면 항원 상에 위치한다.
본원에서 이용된, "TIP-1"이라는 용어는 tax-상호작용 단백질 1 (TIP-1, 또한 Tax1bp3 또는 글루타미네이스-상호작용 단백질, GIP로도 알려져 있음) 을 나타내고, PDZ (PSD-95/Discs large/ZO-1 상동성) 도메인-함유 세포 내 단백질 (인간 및 마우스에서 124 개의 아미노산) 이다 (Besser et al., Dev Growth Differ 49:205-214(2007)). PDZ 도메인은 파트너 단백질의 C-말단에 통상적으로 결합하는 소형 (80-100 개의 잔기) 단백질-단백질 상호작용 모티프이다 (Lee and Zheng, Cell Commun Signal 8:8 (2010)). 124 개-아미노산 단백질의 잔기 13-112를 포함하는 단일 PDZ 도메인 (Olalla, et al., FEBS Lett. 488:116-122 (2001)) 은 TIP-1에서 확인될 수 있는 유일한 기능적 및 구조적 단위이다. TIP-1은 인간 조직에서 유비쿼터스 발현된다 (ubiquitously expressed) (Alewine et al., Mol Biol Cell 17:4200-4211 (2006)). TIP-1은 PDZ 도메인을 통해, 글루타미네이스 L, β-카테닌, FAS, HTLV Tax, HPV E6, 로테킨 및 Kir 2.3을 포함한 많은 세포 내 단백질과 상호작용하고 (Zoetewey et al., Biochemistry 50:3528-3539 (2011)), 다양한 생물학적 기능을 발휘할 수 있다. 예를 들어, 포타슘 채널 Kir 2.3과의 상호작용을 위해 기저측면 막 (basolateral membrane) mLin-7/CASK 복합체와 경쟁함으로써, TIP-1은 Kir 2.3이 분극화된 원형질막을 표적하는 것을 억제한다 (Alewine et al., Mol Biol Cell 17:4200-4211(2006)). 상승된 TIP-1 발현은 인간 침습성 유방암 세포에서 검출되었고, 종양 세포 부착, 이동 및 폐 전이와 관련된 것으로 나타났다 (Han et al., Biochem Biophys Res Commun 422:139-145 (2012)). TIP-1이 방사선 조사에 의한 유도 시, 암세포의 표면에 전위되는데 (Yan et al., Oncotarget 7:43352-43362 (2016)), 이는 TIP-1이 유도 시, 암 신생항원이 될 수 있음을 시사한다. 인간 TIP-1의 예시적인 아미노산 서열은 GenBank Accession No. O14907.2 (SEQ ID NO:9) 로 대표된다.
본원에서 이용된, "TIP-1에 특이적으로 결합하는" 항체는, TIP-1, 바람직하게는 인간 TIP-1에 1×10-7 M 이하, 바람직하게는 1×10-8 M 이하, 보다 바람직하게는 5×10-9 M 이하, 1×10-9 M 이하, 5×10-10 M 이하, 또는 1×10-10 M 이하의 KD로 결합하는 항체를 나타낸다. "KD"라는 용어는 해리 상수를 나타내고, 이는 Kd 대 Ka 의 비 (즉, Kd/Ka) 로부터 수득되며 몰 농도 (M) 로 표현된다. 항체에 대한 KD 값은 본 개시를 고려하여 당업계의 방법을 이용해 결정될 수 있다. 예를 들어, 항체의 KD는 표면 플라스몬 공명 (surface plasmon resonance) 을 이용함으로써, 예컨대 바이오센서 시스템, 예를 들어, Biacore® 시스템을 이용함으로써, 또는 생체-층 간섭계 기술 (bio-layer interferometry technology), 예컨대 Octet RED96 시스템을 이용함으로써 결정될 수 있다.
항체의 KD 값이 작을수록, 항체가 표적 항원에 결합하는 친화도가 높아진다.
특정 양태에 따르면, 본 발명은 각각 하기의 폴리펩티드 서열을 갖는, 중쇄 상보성 결정 부위 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, 경쇄 상보성 결정 부위 1 (LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이고:
a. SEQ ID NO:3, 4, 5, 6, 7, 및 8;
항체 또는 이의 항원-결합 단편은 TIP-1, 바람직하게는 인간 TIP-1에 특이적으로 결합한다.
또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 SEQ ID NO:1에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 또는 SEQ ID NO:2에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 한 바람직한 구체예에 따르면, 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:1에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:2에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 각각 포함한다.
또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 하기를 포함하는 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다:
a. SEQ ID NO:1의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:2의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역.
한 구체예에서, 본 발명은, 각각 SEQ ID NO:3, 4, 5, 6, 7, 및 8의 폴리펩티드 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:1에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96%, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:2에 대해서 적어도 85 %, 바람직하게는 90 %, 보다 바람직하게는 95 % 이상, 예컨대 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:1의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO:2의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 키메라인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.
또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 인간 또는 인간화된, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.
또 다른 일반적 양태에서, 본 발명은 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산에 관한 것이다. 당업자는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않으면서 단백질의 코딩 서열이 변화 (예를 들어, 치환, 결실, 삽입 등) 될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 따라서, 당업자는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않으면서 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산 서열이 변경될 수 있다는 것을 이해할 것이다.
또 다른 일반적 양태에서, 본 발명은 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산을 포함하는 벡터에 관한 것이다. 본 개시에 비추어, 당업자에게 공지된 임의의 벡터, 예컨대 플라스미드, 코스미드, 파지 벡터 또는 바이러스 벡터가 이용될 수 있다. 일부 구체예에서, 벡터는 플라스미드와 같은 재조합 발현 벡터이다. 벡터는 발현 벡터의 통상적인 기능을 확립하기 위한 임의의 요소, 예를 들어 프로모터, 리보솜 결합 엘리먼트, 터미네이터, 인핸서, 선별 마커 및 복제 원점을 포함할 수 있다. 프로모터는 항시성, 유도성 또는 억제성 프로모터일 수 있다. 핵산을 세포에 전달할 수 있는 다수의 발현 벡터는 당업계에 공지되어 있으며, 세포에서 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하기 위해 본원에서 이용될 수 있다. 통상적인 클로닝 기법 또는 인공 유전자 합성을 이용해, 본 발명의 구체예에 따른 재조합 발현 벡터를 생성할 수 있다.
또 다른 일반적 양태에서, 본 발명은 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산을 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 본 개시에 비추어, 당업자에게 공지된 임의의 숙주 세포가 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 재조합 발현에 이용될 수 있다. 일부 구체예에서, 숙주 세포는 E. 콜라이 TG1 또는 BL21 세포 (예를 들어, scFv 또는 Fab 항체의 발현의 경우), CHO-DG44 또는 CHO-K1 세포 또는 HEK293 세포 (예를 들어, 전장 IgG 항체의 발현의 경우) 이다. 특정 구체예에 따르면, 재조합 발현 벡터는 화학적 형질주입, 열 충격 또는 전기천공과 같은 통상적인 방법에 의해 숙주 세포에 형질전환되는데, 재조합 핵산이 효과적으로 발현되도록 발현 벡터가 숙주 세포 게놈에 안정적으로 통합된다.
또 다른 일반적 양태에서, 본 발명은 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하는 방법으로서, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산을 포함하는 세포를, 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하는 조건 하에서 배양시키는 것, 및 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 세포 또는 배양물로부터 (예를 들어, 상청액으로부터) 회수하는 것을 포함하는 방법에 관한 것이다. 발현된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 당업계에 공지되어 있고 본원에 기재된 통상적인 기법에 따라 세포로부터 수확되고 정제될 수 있다.
약학적 조성물
또 다른 일반적 양태에서, 본 발명은 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 본원에서 이용된 "약학적 조성물"이라는 용어는 본 발명의 항체를 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 포함하는 생성물을 의미한다. 본 발명의 항체 및 이를 포함하는 조성물은 본원에서 언급된 치료학적 적용을 위한 약제의 제조에서 또한 유용하다.
본원에서 이용된, "담체"라는 용어는 임의의 부형제, 희석제, 충전제, 염, 완충제, 안정화제, 가용화제, 오일, 지질, 지질 함유 소포, 미소구체, 리포솜 캡슐화, 또는 약학적 제형화에서 이용하기 위한 당업계에 주지된 기타 물질을 나타낸다. 담체, 부형제 또는 희석제의 특징이 특정 적용을 위한 투여 경로에 의존적이라는 것이 이해될 것이다. 본원에서 이용된, "약학적으로 허용가능한 담체"라는 용어는 본 발명에 따른 조성물의 효능 또는 본 발명에 따른 조성물의 생물학적 활성을 간섭하지 않는 비-독성 물질을 나타낸다. 특정 구체예에 따르면, 본 개시에 비추어, 항체 약학적 조성물에서 이용하기에 적합한 임의의 약학적으로 허용가능한 담체가 본 발명에서 이용될 수 있다.
약학적으로 허용가능한 담체와의 약학적 활성 성분의 제형화는 당업계에, 예를 들어, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (예, 21 판 (2005), 및 임의의 이후 판) 에 공지되어 있다. 추가의 성분의 비-제한적 예시는 완충제, 희석제, 용매, 등장성 조절제, 보존제, 안정화제 및 킬레이트제를 포함한다. 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체가 본 발명의 약학적 조성물을 제형화하는 데 이용될 수 있다.
본 발명의 한 구체예에서, 약학적 조성물은 액체 제형이다. 액체 제형의 바람직한 예시는 수성 제형, 즉 물을 포함하는 제형이다. 액체 제형은 용액, 현탁액, 에멀젼, 마이크로에멀젼, 겔 등을 포함할 수 있다. 수성 제형은 통상적으로 적어도 50 % w/w의 물, 또는 적어도 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % w/w 또는 적어도 95 % w/w의 물을 포함한다.
한 구체예에서, 약학적 조성물은 예를 들어, 주사 장치 (예를 들어, 주사기 또는 주입 펌프) 를 통해 주사될 수 있는, 주사가능한 것으로 제형화될 수 있다. 주사는 예를 들어, 피하, 근육내, 복강내, 유리체강내 또는 정맥내로 전달될 수 있다.
또 다른 구체예에서, 약학적 조성물은 고체 제형, 예를 들어, 동결-건조 또는 분무-건조된 조성물이고, 이는 그대로 사용될 수 있거나, 또는 의사 또는 환자가 사용 전에 이에 용매 및/또는 희석제를 첨가하여 사용될 수 있다. 고체 투약 형태는 정제, 예컨대 압축 정제 및/또는 코팅 정제, 및 캡슐 (예를 들어, 경질 또는 연질 젤라틴 캡슐) 을 포함할 수 있다. 또한, 약학적 조성물은 예를 들어 향낭 (sachet), 드라제, 분말, 과립, 로젠지, 또는 재구성을 위한 분말의 형태일 수 있다.
투약 형태는, 이들이 수용성 또는 수분산성 담체를 포함할 수 있는 경우인 즉방형일 수 있거나, 또는 이들이 위장관 또는 피하에서 투약 형태의 용해 속도를 조절하는 수불용성 중합체를 포함할 수 있는 경우인 지연 방출형, 서방형 또는 변형 방출형일 수 있다.
다른 구체예에서, 약학적 조성물은 비강내, 협내 또는 설하로 전달될 수 있다.
수성 제형에서 pH 는 pH 3 내지 pH 10일 수 있다. 본 발명의 한 구체예에서, 제형의 pH는 약 7.0 내지 약 9.5이다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 제형의 pH는 약 3.0 내지 약 7.0이다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 약학적 조성물은 완충제를 포함한다. 완충제의 비-제한적 예시는 아르기닌, 아스파르트산, 비신, 시트레이트, 디소듐 하이드로젠 포스페이트, 푸마르산, 글리신, 글리실글리신, 히스티딘, 리신, 말레산, 말산, 소듐 아세테이트, 소듐 카보네이트, 소듐 디하이드로젠 포스페이트, 소듐 포스페이트, 숙시네이트, 타르타르산, 트리신 및 트리스(히드록시메틸)-아미노메탄, 및 이들의 혼합물을 포함한다. 완충제는 개별적으로 또는 합하여, 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어, 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 존재할 수 있다. 이러한 특정 완충제 중 각각을 포함하는 약학적 조성물은 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 약학적 조성물은 보존제를 포함한다. 보존제의 비-제한적 예시는 벤즈에토늄 클로라이드, 벤조산, 벤질 알코올, 브로노폴, 부틸 4-히드록시벤조에이트, 클로로부탄올, 클로로크레졸, 클로로헥시딘, 클로르페네신, o-크레졸, m-크레졸, p-크레졸, 에틸 4-히드록시벤조에이트, 이미드우레아, 메틸 4-히드록시벤조에이트, 페놀, 2-페녹시에탄올, 2-페닐에탄올, 프로필 4-히드록시벤조에이트, 소듐 데하이드로아세테이트, 티오메로살, 및 이들의 혼합물을 포함한다. 보존제는 개별적으로 또는 합하여, 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 존재할 수 있다. 이러한 특정 보존제 중 각각을 포함하는 약학적 조성물은 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 약학적 조성물은 등장화제를 포함한다. 구체예의 비-제한적 예시는 염 (예컨대 소듐 클로라이드), 아미노산 (예컨대 글리신, 히스티딘, 아르기닌, 리신, 이소류신, 아스파르트산, 트립토판 및 트레오닌), 알디톨 (예컨대 글리세롤, 1,2-프로판디올 프로필렌글리콜), 1,3-프로판디올 및 1,3-부탄디올, 폴리에틸렌글리콜 (예를 들어 PEG400), 및 이들의 혼합물을 포함한다. 등장화제의 또 다른 예시는 당을 포함한다. 당의 비-제한적 예시는 단당류, 이당류 또는 다당류, 또는 수용성 글루칸일 수 있고, 예를 들어 다음을 포함한다: 프럭토오스, 글루코오스, 만노오스, 소르보오스, 자일로오스, 말토오스, 락토오스, 수크로오스, 트레할로오스, 덱스트란, 풀루란, 덱스트린, 사이클로덱스트린, 알파 및 베타-HPCD, 가용성 전분, 히드록시에틸 전분 및 소듐 카르복시메틸셀룰로오스. 등장화제의 또 다른 예시는 당 알코올이며, 여기서 "당 알코올"이라는 용어는 적어도 하나의 -OH 기를 갖는 C(4-8) 탄화수소로서 정의된다. 당 알코올의 비-제한적 예시는 만니톨, 소르비톨, 이노시톨, 갈락티톨, 둘시톨, 자일리톨 및 아라비톨을 포함한다. 등장화제는 개별적으로 또는 합하여, 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 존재할 수 있다. 이러한 특정 등장화제 중 각각을 포함하는 약학적 조성물은 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 약학적 조성물은 킬레이트제를 포함한다. 킬레이트제의 비-제한적 예시는 시트르산, 아스파르트산, 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA) 의 염, 및 이들의 혼합물을 포함한다. 킬레이트제는 개별적으로 또는 합하여, 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 존재할 수 있다. 이러한 특정 킬레이트제 중 각각을 포함하는 약학적 조성물은 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 약학적 조성물은 안정화제를 포함한다. 안정화제의 비-제한적 예시는 하나 이상의 응집 억제제, 하나 이상의 산화 억제제, 하나 이상의 계면활성제 및/또는 하나 이상의 프로테이스 억제제를 포함한다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 약학적 조성물은 안정화제를 포함하는데, 여기서 상기 안정화제는 카르복시-/히드록시셀룰로오스 및 이의 유도체 (예컨대 HPC, HPC-SL, HPC-L 및 HPMC), 사이클로덱스트린, 2-메틸티오에탄올, 폴리에틸렌 글리콜 (예컨대 PEG 3350), 폴리비닐 알코올 (PVA), 폴리비닐 피롤리돈, 염 (예컨대 소듐 클로라이드), 황-함유 물질 예컨대 모노티오글리세롤, 또는 티오글리콜산이다. 안정화제는 개별적으로 또는 합하여, 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 존재할 수 있다. 이러한 특정 안정화제 중 각각을 포함하는 약학적 조성물은 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다.
본 발명의 추가 구체예에서, 약학적 조성물은 하나 이상의 계면활성제, 바람직하게는 계면활성제, 적어도 하나의 계면활성제, 또는 2 개의 상이한 계면활성제를 포함한다. "계면활성제"라는 용어는 수용성 (친수성) 부분 및 지용성 (친유성) 부분으로 구성된 임의의 분자 또는 이온을 나타낸다. 계면활성제는 예를 들어, 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 비-이온성 계면활성제 및/또는 양쪽이온성 계면활성제로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 계면활성제는 개별적으로 또는 합하여, 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 존재할 수 있다. 이러한 특정 계면활성제 중 각각을 포함하는 약학적 조성물은 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다.
본 발명의 추가의 구체예에서, 약학적 조성물은 하나 이상의 프로테이스 억제제, 예를 들어, EDTA, 및/또는 벤자미딘 염산 (HCl) 을 포함한다. 프로테이스 억제제는 개별적으로 또는 합하여, 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 농도로 존재할 수 있다. 이러한 특정 프로테이스 억제제 중 각각을 포함하는 약학적 조성물은 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다.
또 다른 일반적 양태에서, 본 발명은 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물을 생산하는 방법으로서, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 약학적으로 허용가능한 담체와 조합하여 약학적 조성물을 수득하는 것을 포함하는 방법에 관한 것이다.
이용 방법
또 다른 일반적 양태에서, 본 발명은 TIP-1에 특이적으로 결합하는 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 암세포 표면 상의 TIP-1을 표적하는 것을 필요로 하는 대상체에서 암세포 표면 상의 TIP-1을 표적하는 방법에 관한 것이다. TIP-1 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 대상체에서 암세포 표면 상의 TIP-1에 결합할 수 있다. 항-TIP-1 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 세포 표면 상에 전위된 TIP-1에 결합시키는 것은 면역계, 보체계 및/또는 컨쥬게이션된 약물의 이펙터 세포의 점증을 허용해, 대상체에서 암-사멸 활성을 매개할 수 있다. 항-TIP-1 단일클론 항체는, 예를 들어, 대상체에서 암-사멸 활성을 또한 매개할 수 있는 또 다른 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편과 이중 특이성 항체를 형성할 수 있다.
TIP-1에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편의 기능적 활성은 당업계에 공지된 방법에 의해서 그리고 본원에 기재된 대로 특성화될 수 있다. TIP-1에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 특성화하는 방법은 Biacore, ELISA, 및 OctetRed 분석을 포함하는 친화도 및 특이성 검정; FACS에 의한, 항체가 암세포 상의 TIP-1에 결합하는 것을 검출하기 위한 결합 검정을 포함하나 이들에 한정되지 않는다. 특정 구체예에 따르면, TIP-1 에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 특성화하는 방법은 하기 기재된 것들을 포함한다.
또 다른 일반적 양태에서, 본 발명은 TIP-1에 특이적으로 결합하는 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 암은, 예를 들어, 폐암, 위암, 결장암, 간세포 암종, 신장 세포 암종, 방광 요로 상피세포 암종, 전이성 흑색종, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 두경부암, 췌장암, 신경교종, 교모세포종, 및 기타 고형 종양, 및 비-호지킨 림프종 (NHL), 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 다발성 골수종 (MM), 급성 골수성 백혈병 (AML), 및 기타 액형 종양으로부터 선택될 수 있으나, 이들에 한정되지 않는다.
본 발명의 구체예에 따르면, 약학적 조성물은 치료학적 유효량의 항-TIP-1 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 본원에서 이용된, "치료학적 유효량"이라는 용어는 대상체에서 목적되는 생물학적 또는 의학적 반응을 이끌어내는 활성 성분 또는 성분의 양을 나타낸다. 언급된 목적과 관련하여, 치료학적 유효량은 경험적으로 그리고 통상적 방식으로 결정될 수 있다.
항-TIP-1 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 관련하여 본원에서 이용된, 치료학적 유효량은 면역 반응을, 이를 필요로 하는 대상체에서 조절하는 항-TIP-1 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 양을 의미한다.
특정 구체예에 따르면, 치료학적 유효량은 다음 효과들 중 하나, 둘, 셋, 넷 이상을 달성하기에 충분한, 요법의 양을 나타낸다: (i) 치료될 질환, 장애 또는 병상, 또는 그와 연관된 증상의 중증도를 감소시키거나 완화시킴; (ii) 치료될 질환, 장애 또는 병상, 또는 그와 연관된 증상의 지속기간을 감소시킴; (iii) 치료될 질환, 장애 또는 병상, 또는 그와 연관된 증상의 진행을 방지함; (iv) 치료될 질환, 장애 또는 병상, 또는 그와 연관된 증상의 퇴행을 유발함; (v) 치료될 질환, 장애 또는 병상, 또는 그와 연관된 증상의 발달 또는 발병을 방지함; (vi) 치료될 질환, 장애 또는 병상, 또는 그와 연관된 증상의 재발을 방지함; (vii) 치료될 질환, 장애 또는 병상, 또는 그와 연관된 증상을 갖는 대상체의 입원을 감소시킴; (viii) 치료될 질환, 장애 또는 병상, 또는 그와 연관된 증상을 갖는 대상체의 입원 길이를 감소시킴; (ix) 치료될 질환, 장애 또는 병상, 또는 그와 연관된 증상을 갖는 대상체의 생존을 증가시킴; (xi) 치료될 질환, 장애 또는 병상, 또는 그와 연관된 증상을 대상체에서 억제 또는 감소시킴; 및/또는 (xii) 또 다른 요법의 예방적 또는 치료학적 효과(들) 를 향상 또는 개선시킴.
치료학적 유효량 또는 투약량은 치료될 질환, 장애 또는 병상, 투여 수단, 표적 부위, 대상체의 생리학적 상태 (예를 들어, 연령, 체중, 건강을 포함), 대상체가 인간 또는 동물인지 여부, 투여되는 다른 약제, 및 치료가 예방적인지 또는 치료학적인지 여부와 같은 다양한 인자에 따라 가변적일 수 있다. 안전성 및 효능을 최적화하기 위해 치료 투약량이 최적으로 적정된다.
특정 구체예에 따르면, 본원에 기재된 조성물은 대상체에 대한 의도된 투여 경로에 적합하도록 제형화된다. 예를 들어, 본원에 기재된 조성물은 정맥내, 피하 또는 근육내 투여에 적합하도록 제형화될 수 있다.
본원에서 이용된, "치료하다", "치료하는" 및 "치료"라는 용어는 모두, 암과 관련된 적어도 하나의 측정 가능한 물리적 파라미터의 개선 또는 반전을 나타내는 것으로 의도되며, 이는 대상체에서 반드시 인식할 수 있는 것은 아니나, 대상체에서 인식될 수 있다. "치료하다", "치료하는" 및 "치료"라는 용어는 또한, 퇴행을 일으키거나, 진행을 예방하거나, 또는 질환, 장애 또는 병상의 진행을 적어도 지연시키는 것을 나타낼 수 있다. 특정 구체예에서, "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 종양 또는 보다 바람직하게는 암과 같은 질환, 장애 또는 병상과 연관된 하나 이상의 증상의 경감, 발달 또는 발병의 방지, 또는 지속기간의 감소를 나타낸다. 특정 구체예에서, "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 질환, 장애 또는 병상의 재발의 방지를 나타낸다. 특정 구체예에서, "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 질환, 장애 또는 병상을 갖는 대상체의 생존의 증가를 나타낸다. 특정 구체예에서, "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 대상체에서의 질환, 장애 또는 병상의 제거를 나타낸다.
특정 구체예에 따르면, 암 치료에 이용되는 조성물이 제공된다. 암 요법을 위해, 조성물은 다음을 포함하나, 이들에 한정되는 것은 아닌 또 다른 치료와 조합으로 사용될 수 있다: 화학요법, 항-CD20 mAb, 항-TIM-3 mAb, 항-LAG-3 mAb, 항-CD73 mAb, 항-CD47 mAb, 항-아펠린 mAb, 항-클라우딘18.2 mAb, 항-DLL3 mAb, 항-FRα mAb, 항-CTLA-4 항체, 항-PD-L1 항체, 항-PD-1 항체, PD-1/PD-L1 요법, 기타 면역-항암 약물, 항-혈관형성제, 방사능 요법, 항체-약물 컨쥬게이트 (ADC: antibody-drug conjugate), 표적화 요법, 또는 기타 항암 약물. 항-TIP-1 항체가 CLDN18.2와 특정한 종양 연관 항원 모두를 발현하는 암/종양을 치료하기 위한, PD-1, PD-L1, LAG3, TIM-3, CTLA-4, EGFR, HER-2, CD19, CD20, CD33, CD73, CD47, CD3, 아펠린, DLL-3, CLDN18.2, 엽산 수용체 알파 (FOLR1), 및/또는 기타 종양 표면 항원에 대한 파트너 mAb와의 이중 특이성 항체를 제작하는 데 이용될 수 있다.
본원에서 이용된, 대상체에 둘 이상의 요법을 투여하는 맥락에서의 "조합으로"라는 용어는 하나보다 많은 요법의 이용을 나타낸다. "조합으로"라는 용어의 이용은 요법이 대상체에 투여되는 순서를 제한하지 않는다. 예를 들어, 제 1 요법 (예를 들어, 본원에 기재된 조성물) 은 제 2 요법을 대상체에 투여하기 전 (예를 들어, 5 분, 15 분, 30 분, 45 분, 1 시간, 2 시간, 4 시간, 6 시간, 12 시간, 16 시간, 24 시간, 48 시간, 72 시간, 96 시간, 1 주, 2 주, 3 주, 4 주, 5 주, 6 주, 8 주, 또는 12 주 전), 제 2 요법을 대상체에 투여하는 것과 동시에, 또는 제 2 요법을 대상체에 투여한 후 (예를 들어, 5 분, 15 분, 30 분, 45 분, 1 시간, 2 시간, 4 시간, 6 시간, 12 시간, 16 시간, 24 시간, 48 시간, 72 시간, 96 시간, 1 주, 2 주, 3 주, 4 주, 5 주, 6 주, 8 주, 또는 12 주 후) 에 투여될 수 있다.
또 다른 일반적 양태에서, 본 발명은 대상체에서 TIP-1의 수준을 결정하는 방법에 관한 것이다. 방법은 (a) 대상체로부터 시료를 수득하는 것; (b) 시료를 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 것; 및 (c) 대상체에서 TIP-1의 수준을 결정하는 것을 포함한다.
본원에서 이용된, "시료"는 대상체로부터 단리된 생물학적 시료를 나타내며, 전혈, 혈청, 혈장, 혈구, 내피 세포, 조직 생검 (예를 들어, 암 조직), 림프액, 복수액, 간질액, 골수, 뇌척수액, 타액, 점액, 객담, 땀, 소변, 또는 임의의 기타 분비물, 배설물, 또는 기타 체액을 포함할 수 있으나 이들에 한정되지 않는다. "혈액 시료"는 혈구, 혈청 및 혈장을 포함하는, 전혈 또는 이의 임의의 분획물을 나타낸다.
특정 구체예에서, 대상체에서의 TIP-1의 수준은 웨스턴 블롯 검정, ELISA 검정, 및/또는 면역조직화학 (IHC: immunohistochemistry) 으로부터 선택되나, 이들에 한정되지 않는 검정을 활용하여 결정될 수 있다. 상대 단백질 수준은 웨스턴 블롯 분석 및 면역조직화학 (IHC) 을 활용하여 결정될 수 있고, 절대 단백질 수준은 ELISA 검정을 활용함으로써 결정될 수 있다. TIP-1의 상대 수준을 결정하는 경우에, TIP-1의 수준이 적어도 2 개의 시료 사이, 예를 들어, 상이한 시점에서 동일한 대상체로부터의 시료 사이, 동일한 대상체 내 상이한 조직으로부터의 시료 사이, 및/또는 상이한 대상체로부터의 시료 사이에서 결정될 수 있다. 대안적으로는, 예컨대 ELISA 검정에 의해 TIP-1의 절대 수준을 결정하는 경우에, 시료 중 TIP-1의 절대 수준이 시료를 테스트하기 전에 ELISA 검정에 대한 표준을 생성시킴으로써 결정될 수 있다. 당업자는 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 활용하여 대상체로부터의 시료 중 TIP-1의 수준을 결정하기 위해 어떤 분석 기법을 활용할지를 이해할 것이다.
대상체로부터의 시료 중 TIP-1의 수준을 결정하는 방법을 활용하는 것은, 질환에서 비정상적 (상승된, 감소된, 또는 불충분한) TIP-1 수준의 진단으로 이어져, 적절한 치료학적 결정을 내리게 할 수 있다. 이러한 질환은, 예를 들어, 암을 포함할 수 있다. 또한, 대상체에서 TIP-1의 수준을 모니터링함으로써, 상기 나타낸 질환을 발달시킬 위험이 특정 질환에서 및/또는 특정 질환의 진행 동안의 TIP-1의 수준의 인식에 기초하여 결정될 수 있다.
구체예
본 발명은 하기 비-제한적 구체예를 제공한다.
구체예 1은 각각 하기 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 부위 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, 경쇄 상보성 결정 부위 1 (LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이고:
a. SEQ ID NO:3, 4, 5, 6, 7, 및 8;
항체 또는 이의 항원-결합 단편은 TIP-1, 바람직하게는 인간 TIP-1에 특이적으로 결합한다.
구체예 2는 SEQ ID NO:1에 대해서 적어도 95 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 또는 SEQ ID NO:2에 대해서 적어도 95 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 구체예 1의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
구체예 3은 하기를 포함하는 구체예 1 또는 2의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다:
a. SEQ ID NO:1의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:2의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역.
구체예 4는 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 이펙터-매개 종양 세포 용해를 유도할 수 있는, 구체예 1-3 중 어느 한 구체예의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
구체예 5는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 키메라인, 구체예 1-4 중 어느 한 구체예의 단리된 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편이다.
구체예 6은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 인간 또는 인간화되는 것인, 구체예 1-5 중 어느 한 구체예의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
구체예 7은 구체예 1-6 중 어느 한 구체예의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산이다.
구체예 8은 구체예 7의 단리된 핵산을 포함하는 벡터이다.
구체예 9는 구체예 8의 벡터를 포함하는 숙주 세포이다.
구체예 10은 구체예 1-6 중 어느 한 구체예의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물이다.
구체예 11은 구체예 10의 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이다.
구체예 12는 구체예 10의 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 암세포 표면 상의 TIP-1을 표적하는 것을 필요로 하는 대상체에서 암세포 표면 상의 TIP-1을 표적하는 방법이다.
구체예 13은 구체예 1-6 중 어느 한 구체예의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하는 방법으로서, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산을 포함하는 세포를, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하기 위한 조건 하에서 배양시키는 것, 및 항체 또는 이의-항원 결합 단편을 세포 또는 배양물로부터 회수하는 것을 포함한다.
구체예 14는 구체예 1-6 중 어느 한 구체예의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물을 생산하는 방법으로서, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 약학적으로 허용가능한 담체와 조합하여 약학적 조성물을 수득하는 것을 포함한다.
구체예 15는 하기를 포함하는, 대상체에서 TIP-1의 수준을 결정하는 방법이다:
a. 대상체로부터 시료를 수득하는 것;
b. 구체예 1-6 중 어느 한 구체예의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 시료와 접촉시키는 것; 및
c. 대상체에서 TIP-1의 수준을 결정하는 것.
구체예 16은 시료가 조직 시료인, 구체예 15의 방법이다.
구체예 17은 조직 시료가 암 조직 시료인, 구체예 16의 방법이다.
구체예 18은 시료가 혈액 시료인, 구체예 15의 방법이다.
실시예
실시예
1: 항-TIP-1 단일클론 항체의 동정
마우스를 글루타티온 S-전이효소 (GST) 및 TIP-1 (GST-TIP-1) 을 함유하는 융합 단백질로 면역화하고, HIS 태그, 디프테리아 독소 A 단편 (DTA), 및 TIP-1을 함유하는 또 다른 융합 단백질 (HisDTA-TIP-1) 로 증진시켰다 (boosting). 혈장 역가를 ELISA에 의해 결정했다. 안락사 후, 림프절을 수집하여 하이브리도마를 생산했다. 하이브리도마를 96-웰 조직 배양 플레이트에서 성장시키고, 개별 웰로부터의 상청액을 ELISA에 의해 양성 신호에 대해서 GST-TIP-1을 이용하고 카운터-스크리닝에 대해서 GST를 이용하여 스크리닝했다. 양성 히트를 ELISA에 의해 Myc-DDK 태그된 TIP-1 (TIP1-Myc-DDK) 으로 확인했다. 상위 양성 클론을 단리하고 시퀀싱했다.
항-TIP-1 단일클론 항체 T2에 대한 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 서열이 표 1 및 2에 제공되고, 항-TIP-1 단일클론 항체 T2에 대한 CDR 부위가 표 3 및 4에 제공된다.
표 1: 항 TIP-1 mAb에 대한 중쇄 가변 영역의 서열
표 2: 항-TIP-1 mAb에 대한 경쇄 가변 영역의 서열
표 3: 항-TIP-1 mAb에 대한 중쇄의 CDR 부위 1-3
항-TIP mAb에 대한 HC CDR을 IMGT 방법 (Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212) 을 활용하여 결정했다.
표 4: 항-TIP-1 mAb에 대한 경쇄의 CDR 부위 1-3
항-TIP-1 mAb에 대한 LC CDR을 IMGT 방법 (Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212) 을 활용하여 결정했다.
실시예
2: 형질주입된 293E 세포로부터의
하이브리도마
상청액
및 배양 배지로부터 mAb T2의 생산 및 정제
마우스 항-TIP-1 mAb T2를 단백질 A 친화도 크로마토그래피를 이용하여 하이브리도마 배지/상청액으로부터 정제하였다. 재조합 항-TIP-1 키메라 mAb를 수득하기 위해, 각각, 인간 IgG1 중쇄 및 카파 경쇄의 불변 영역에 융합된 마우스 VH 및 VL을 함유하는 발현 벡터를 293E 세포에 일시적으로 형질주입했다. 293E 세포의 현탁액에서 생산된 재조합 항체를 단백질 A 친화도 크로마토그래피를 이용하여 정제하였다.
실시예
3: 정제된 항체의 ELISA 결합 분석
카보네이트 코팅 완충액 중의 TIP1-Myc-DDK를 실온에서 ELISA 플레이트 상에 (1 g/mL로 50 μL/웰) 1시간 동안 코팅시켰다. 세척 후, ELISA 플레이트를 PBS 중의 5 % BSA에서 1 시간 동안 블로킹시키고, 재차 세척했다. 항-TIP-1 mAb를 첨가하고, 혼합하여 실온에서 60 분 동안 배양시켰다. 플레이트를 세척하고, 부동화된 TIP1-Myc-DDK로의 항-TIP-1 mAb의 결합을 PBS 중 2 차 항체 - 겨자무 과산화효소에 컨쥬게이트된 항-마우스 IgG (ThermoFisher Scientific, #A16084) 또는 겨자무 과산화효소에 컨쥬게이트된 항-인간 IgG (hIgG-HRP) (ThermoFisher Scientific, #31410) - 를 첨가하고 1시간 동안 배양시킨 후 세척함으로써 검출했다. ELISA를 One-step Detection Solution (ThermoFisher Scientific, Cat#: 34028) 을 이용하여 전개시키고 450 nm에서의 흡광도로서 측정했다. 마우스 항-TIP-1 mAb T2의 결합 결과는 도 1에 제공된다; 이용된 T2 mAb 농도는 다음과 같았고 (그래프의 좌측에서 우측으로): 각각, 500 ng/ml, 20 ng/ml, 5 ng/ml, 및 1 ng/ml; 2 차 Ab 단독, 이 군은 1 차 항체로 처리되지 않았으나, HRP-컨쥬게이션된 항-마우스 IgG 2 차 Ab로 처리되었으며; 무항체는, 1 차 Ab 또는 2 차 Ab 모두 첨가되지 않았다. 키메라 버전의 항-TIP-1 mAb T2의 결합 결과는 도 2에 제공된다; 이용된 T2 mAb 농도는 다음과 같았고 (그래프의 좌측에서 우측으로): 각각, 18 ng/ml, 4 ng/ml, 및 1 ng/ml; 2 차 Ab 단독, 이 군은 1 차 항체로 처리되지 않았으나, HRP-컨쥬게이션된 항-마우스 IgG 2 차 Ab로 처리되었으며; 무항체는, 1 차 Ab 또는 2 차 Ab 모두 첨가되지 않았다.
당업자는 상기 기재된 구체예를, 이의 넓은 발명 개념으로부터 벗어나지 않고 변화시킬 수 있다는 것을 이해할 것이다. 그러므로, 개시된 특정한 구체예에 본 발명이 한정되지 않으나, 이것이 본 기재에 의해 정의된 본 발명의 사상 및 범위 내 변형을 다루도록 의도되었음이 이해된다.
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Ser Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Arg Lys Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Arg Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
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Ala Pro Thr Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val
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Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
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Glu Ile His Lys Leu Arg Gln Gly Glu Asn Leu Ile Leu Gly Phe Ser
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100 105 110
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115 120
Claims (18)
- 각각 하기 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 부위 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, 경쇄 상보성 결정 부위 1 (LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서:
a. SEQ ID NO:3, 4, 5, 6, 7, 및 8,
항체 또는 이의 항원-결합 단편이 TIP-1, 바람직하게는 인간 TIP-1에 특이적으로 결합하는 것인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제 1 항에 있어서, SEQ ID NO:1에 대해서 적어도 95 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 또는 SEQ ID NO:2에 대해서 적어도 95 % 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 하기를 포함하는 것인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
a. SEQ ID NO:1의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:2의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역. - 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 이펙터-매개 종양 세포 용해를 유도할 수 있는 것인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 키메라인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 인간 또는 인간화된 것인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 따른 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산.
- 제 7 항에 따른 단리된 핵산을 포함하는 벡터.
- 제 8 항에 따른 벡터를 포함하는 숙주 세포.
- 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 따른 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물.
- 제 10 항에 따른 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법.
- 제 10 항에 따른 약학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 암세포 표면 상의 TIP-1을 표적하는 것을 필요로 하는 대상체에서 암세포 표면 상의 TIP-1을 표적하는 방법.
- 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 따른 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하는 방법으로서, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산을 포함하는 세포를, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하기 위한 조건 하에서 배양시키는 것, 및 항체 또는 이의-항원 결합 단편을 세포 또는 배양물로부터 회수하는 것을 포함하는 것인, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하는 방법.
- 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 따른 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물을 생산하는 방법으로서, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 약학적으로 허용가능한 담체와 조합하여 약학적 조성물을 수득하는 것을 포함하는 것인, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물을 생산하는 방법.
- 하기를 포함하는, 대상체에서 TIP-1의 수준을 결정하는 방법:
a. 대상체로부터 시료를 수득하는 것;
b. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 따른 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 시료와 접촉시키는 것; 및
c. 대상체에서 TIP-1의 수준을 결정하는 것. - 제 15 항에 있어서, 시료가 조직 시료인, 대상체에서 TIP-1의 수준을 결정하는 방법.
- 제 16 항에 있어서, 조직 시료가 암 조직 시료인, 대상체에서 TIP-1의 수준을 결정하는 방법.
- 제 15 항에 있어서, 시료가 혈액 시료인, 대상체에서 TIP-1의 수준을 결정하는 방법.
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