JP2021514662A - 抗tip−1抗体及びその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
この出願は、2018年3月8日に出願された米国仮出願第62/640,123号に対する優先権を主張する。その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
この出願は、ファイル名が「689204-8WO Sequence Listing」、作成日が2019年3月1日の、4kbのサイズを有するASCIIフォーマットの配列表として、EFS-Webにより電子的に提出される配列表を含む。EFS-Webにより提出される配列表は本明細書の一部であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、軽鎖相補性決定領域1(LCDR1)、LCDR2、及びLCDR3を含み、TIP-1、好ましくはヒトTIP-1に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片が提供される。
a.配列番号1のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号2のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域
を含む。
本発明は、全般的に、単離された抗TIP-1抗体、これらの抗体をコードする核酸及び発現ベクター、このベクターを含有する組換え細胞、並びにこれらの抗体を含む組成物に関する。これらの抗体を作製する方法、並びにがんを含む疾患を処置するためにこれらの抗体を使用する方法も提供される。本発明の抗体は、以下に限定されないが、TIP-1への高親和性結合、TIP-1への高い特異性、並びに単独又は他の抗がん治療と組み合わせて投与した場合に動物モデルにおける腫瘍成長を阻害する能力を含む、1つ以上の望ましい機能的特性を有する。
a.それぞれ、配列番号3、4、5、6、7、及び8;
のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、軽鎖相補性決定領域1(LCDR1)、LCDR2、及びLCDR3を含み、TIP-1、好ましくはヒトTIP-1に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
a. 配列番号1のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号2のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
を含む、本発明の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
別の一般的態様では、本発明は、本発明の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。用語「医薬組成物」は、本明細書で使用する場合、本発明の抗体を、薬学的に許容される担体と一緒に含む生産物を意味する。本発明の抗体及びこれらを含む組成物は、本明細書で言及した治療適用のための医薬の製造においても有用である。
別の一般的態様では、本発明は、対象において、がん細胞表面上のTIP-1を標的とする方法であって、TIP-1に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片又は本発明の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法に関する。TIP-1モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、対象において、がん細胞表面上のTIP-1に結合することが可能である。抗TIP-1モノクローナル抗体又はその抗原結合断片の、細胞表面に移動したTIP-1への結合は、免疫系のエフェクター細胞、補体系、及び/又はコンジュゲート薬物を動員し、対象においてがん死滅活性を媒介することを可能にすることができる。抗TIP-1モノクローナル抗体は、例えば、対象において同様にがん死滅活性を媒介することができる別のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片との二重特異性抗体を形成することができる。
本発明は、以下の非限定的実施形態を提供する。
a.それぞれ、配列番号3、4、5、6、7、及び8;
のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、軽鎖相補性決定領域1(LCDR1)、LCDR2、及びLCDR3を含み、TIP-1、好ましくはヒトTIP-1に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
a.配列番号1のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号2のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域
を含む、実施形態1又は2の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片である。
a.対象から試料を得るステップ;
b.試料を請求項1〜6のいずれか1つの単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片と接触させるステップ;及び
c.対象におけるTIP-1のレベルを決定するステップ
を含む方法である。
抗TIP-1モノクローナル抗体の同定
マウスを、グルタチオンS-トランスフェラーゼ(GST)及びTIP-1を含む融合タンパク質(GST-TIP-1)で免疫化し、HISタグ、ジフテリア毒素A断片(DTA)、及びTIP-1を含む別の融合タンパク質(HisDTA-TIP-1)でブースト(追加免疫)した。血漿力価をELISAによって決定した。安楽死させた後、リンパ節を回収し、ハイブリドーマを作製した。ハイブリドーマを96ウェル組織培養プレート中で増殖させ、個々のウェルに由来する上清を、正のシグナルに対してはGST-TIP-1、カウンタースクリーニングに対してはGSTを使用するELISAによってスクリーニングした。Myc-DDKでタグ付けしたTIP-1(TIP1-Myc-DDK)を用いるELISAによって、正のヒットを確認した。上位の陽性クローンを単離し、シークエンシングした。
ハイブリドーマ上清及びトランスフェクトした293E細胞由来の培養培地からのmAb T2の生産及び精製
プロテインAアフィニティークロマトグラフィーを使用して、ハイブリドーマ培地/上清からマウス抗TIP-1 mAb T2を精製した。組換え抗TIP-1キメラmAbを得るために、ヒトIgG1重鎖及びカッパ軽鎖の定常領域とそれぞれ融合したマウスVH及びVLを含有する発現ベクターを、293E細胞へと一過性トランスフェクトした。293E細胞の懸濁液中に産生された組換え抗体を、プロテインAアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製した。
精製抗体のELISA結合分析
カーボネートコーティング緩衝液中のTIP1-Myc-DDKを、室温で1時間、ELISAプレート上にコーティングした(1μg/mLで50μL/ウェル)。洗浄後、ELISAプレートをPBS中5%のBSAにおいて1時間ブロックし、再度洗浄した。抗TIP-1 mAbを添加し、混合し、室温で60分間インキュベートした。プレートを洗浄し、抗TIP-1 mAbの固定されたTIP1-Myc-DDKへの結合を、PBS中で、二次抗体である、セイヨウワサビペルオキシダーゼにコンジュゲートした抗マウスIgG(ThermoFisher Scientific、番号A16084)又はセイヨウワサビペルオキシダーゼにコンジュゲートした抗ヒトIgG(hIgG-HRP)(ThermoFisher Scientific、番号31410)を添加し、1時間インキュベートすることによって検出し、次いで、洗浄した。One-step Detection Solution(ThermoFisher Scientific、カタログ番号34028)を使用してELISAを発色させ、450nmでの吸光度として測定した。マウス抗TIP-1 mAb T2の結合についての結果を図1に提供する。使用したT2 mAb濃度は、グラフの左から右へ向かって、それぞれ、500ng/ml、20ng/ml、5ng/ml、及び1ng/mlであった。「二次抗体のみ」について、この群は一次抗体で処理されなかったが、HRPコンジュゲート抗マウスIgG二次抗体(Ab)で処理された。「抗体なし」は、一次抗体(Ab)も二次抗体(Ab)も添加されなかった。抗TIP-1 mAb T2のキメラバージョンの結合についての結果を図2に提供する。使用したT2 mAb濃度は、グラフの左から右へ向かって、それぞれ、18ng/ml、4ng/ml、及び1ng/mlであった。「二次抗体のみ」について、この群は一次抗体で処理されなかったが、HRPコンジュゲート抗マウスIgG二次抗体(Ab)で処理された。「抗体なし」は、一次抗体(Ab)も二次抗体(Ab)も添加されなかった。
Claims (18)
- a.それぞれ、配列番号3、4、5、6、7、及び8;
のポリペプチド配列を有する重鎖相補性決定領域1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、軽鎖相補性決定領域1(LCDR1)、LCDR2、及びLCDR3を含み、TIP-1、好ましくはヒトTIP-1に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号1と少なくとも95%同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号2と少なくとも95%同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項1に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
- a.配列番号1のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号2のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域;
を含む、請求項1又は2に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。 - エフェクター媒介腫瘍細胞溶解を誘導することが可能である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
- キメラである、請求項1〜4のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
- ヒトの又はヒト化されたものである、請求項1〜5のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
- 請求項1〜6のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする単離された核酸。
- 請求項7に記載の単離された核酸を含むベクター。
- 請求項8に記載のベクターを含む宿主細胞。
- 請求項1〜6のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
- それを必要とする対象において、がんを処置する方法であって、請求項10に記載の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法。
- それを必要とする対象において、がん細胞表面上のTIP-1を標的とする方法であって、請求項10に記載の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法。
- 請求項1〜6のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を生産する方法であって、前記モノクローナル抗体又はその抗原結合断片を産生する条件下で、前記モノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸を含む細胞を培養するステップ、及び細胞又は培養物から前記抗体又はその抗原結合断片を回収するステップを含む、方法。
- 請求項1〜6のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又は抗原結合断片を含む医薬組成物を生産する方法であって、前記モノクローナル抗体又はその抗原結合断片を、薬学的に許容される担体と配合して、医薬組成物を得るステップを含む、方法。
- 対象におけるTIP-1のレベルを決定する方法であって、
a.対象から試料を得るステップ;
b.試料を請求項1〜6のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片と接触させるステップ;及び
c.対象におけるTIP-1のレベルを決定するステップ
を含む方法。 - 試料が、組織試料である、請求項15に記載の方法。
- 組織試料が、がん組織試料である、請求項16に記載の方法。
- 試料が、血液試料である、請求項15に記載の方法。
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