JP2023503163A

JP2023503163A - キメラ抗原受容体及びその使用

Info

Publication number: JP2023503163A
Application number: JP2022530723A
Authority: JP
Inventors: アブジュブ，アイーダ; ブランケンシップ，ジョン; ボンダンザ，アッティリオ; ブログドン，ジェニファー; ブー，デシウ; ヴィータ，セレーナデ; ドラノフ，グレン; エンヘルス，ボリス; フレミング，トニー; アールグリーン，マイケル; ハック，アニーシャ; ホルムバーグ，ブライアン; ホン，コニー; ホアン，ルゥ; コドラジ，オージャ; イム，ヒョンウ; ドロシープラティコ，エリザベス; プライス，アンドリュー; ソホニ，アカシュ; マークスタイン，アンドリュー
Original assignee: ノバルティスアーゲー
Priority date: 2019-11-26
Filing date: 2020-11-25
Publication date: 2023-01-26
Also published as: AU2020393912A1; CA3163104A1; WO2021108661A2; EP4065158A2; BR112022010206A2; KR20220105664A; WO2021108661A3; CL2022001374A1; IL293215A; MX2022006391A; US20210220404A1; CN114761037A; TW202134264A; AR120566A1

Abstract

本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）並びにその組成物及び方法を提供する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年１１月２６日に提出された米国特許出願第６２／９４０５０９号明細書（この内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）に対する優先権を主張する。

配列表
本願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子出願されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる配列表を含む。前記ＡＳＣＩＩコピーは、２０２０年１１月２４日に作成され、名称がＮ２０６７－７１６６ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔであり、サイズが５９８，１９４バイトである。

本発明は、概して、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）並びにその組成物及び使用に関する。

Ｔ細胞、特にキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を形質導入したＴ細胞での養子細胞移入（ＡＣＴ）療法は、いくつかの血液癌の試験で有望性が示されている。ＣＡＲ発現細胞療法製品の生産を改善し、製品の品質を高めると共に製品の治療効果を最大化する方法及びプロセスが必要とされている。

一態様では、本発明は、第１抗原結合ドメインと第２抗原結合ドメインとを含む細胞、例えば免疫細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞を特徴とする。一部の実施形態では、第１抗原結合ドメインは、抗ＢＣＭＡ結合ドメインである。一部の実施形態では、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、本明細書に開示される抗ＢＣＭＡ結合配列、例えば、ＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ又は表３～１５、１９、２０、２６及び３１に開示されるｓｃＦｖ配列を含む。一部の実施形態では、第２抗原結合ドメインは、抗ＣＤ１９結合ドメインである。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に開示される抗ＣＤ１９結合配列、例えば、ＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ又は表２、１９、２２及び３１に開示されるｓｃＦｖ配列を含む。

一部の実施形態では、本発明は、（ａ）抗ＢＣＭＡ結合ドメインである第１抗原結合ドメインであって、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、（ｉ）それぞれ配列番号８６、１３０、８８、９５、１３１及び１３２：（ｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５、８４、５４、５５及び５６；又は（ｉｉｉ）それぞれ配列番号１７９、１８０、１８１、１４７、１８２及び１８３のアミノ酸配列を含む、第１抗原結合ドメインと；（ｂ）第２抗原結合ドメインとを含む細胞を提供する。一部の実施形態では、第１抗原結合ドメインと第２抗原結合ドメインとは、２つのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に配置される。一部の実施形態では、第１抗原結合ドメインと第２抗原結合ドメインとは、１つのＣＡＲに配置される。

一部の実施形態では、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号８６、１３０、８８、９５、１３１及び１３２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号８６、８７、８８、９５、９６及び９７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号８６、１０９、８８、９５、１１４及び１１５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号８６、１０９、８８、９５、１１４及び９７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号９３若しくは１１２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号２６０、９４若しくは１１３の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号１０２、１１８若しくは１２４のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号２６１、１０３、１１９若しくは１２５の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、ＶＨ及びＶＬは、それぞれ配列番号９３及び１０２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ及びＶＬは、それぞれ配列番号１１２及び１１８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ及びＶＬは、それぞれ配列番号１１２及び１２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１抗原結合ドメインは、配列番号１０５、１２０若しくは１２６のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。一部の実施形態では、第１抗原結合ドメインは、配列番号２５３、１０６、１２１若しくは１２７の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、第１抗原結合ドメインは、第１ＣＡＲに配置される。一部の実施形態では、第１ＣＡＲは、配列番号１０７、２２６、１２２若しくは１２８のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１ＣＡＲは、配列番号２５９、２５８、１０８、１２３若しくは１２９の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。

一部の実施形態では、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４４、４５、８４、５４、５５及び５６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４４、４５、７６、５４、５５及び５６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４４、４５、４６、５４、５５及び５６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４４、４５、６８、５４、５５及び５６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号７８、５２若しくは７０のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号７９、５３若しくは７１の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号６１のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号６２の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、ＶＨ及びＶＬは、それぞれ配列番号７８及び６１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ及びＶＬは、それぞれ配列番号５２及び６１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ及びＶＬは、それぞれ配列番号７０及び６１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１抗原結合ドメインは、配列番号８０、６４若しくは７２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。一部の実施形態では、第１抗原結合ドメインは、配列番号８１、６５若しくは７３の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、第１抗原結合ドメインは、第１ＣＡＲに配置される。一部の実施形態では、第１ＣＡＲは、配列番号２２４、８２、６６若しくは７４のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１ＣＡＲは、配列番号８３、６７若しくは７５の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。

一部の実施形態では、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１７９、１８０、１８１、１４７、１８２及び１８３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１３７、１３８、１３９、１４７、１４８及び１４９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１６０、１６１、１６２、１４７、１７０及び１７１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１４５若しくは１６８のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１４６若しくは１６９の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号１５４若しくは１７３のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号１５５若しくは１７４の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、ＶＨ及びＶＬは、それぞれ配列番号１４５及び１５４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ及びＶＬは、それぞれ配列番号１６８及び１７３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１抗原結合ドメインは、配列番号１５６若しくは１７５のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。一部の実施形態では、第１抗原結合ドメインは、配列番号１５７若しくは１７６の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、第１抗原結合ドメインは、第１ＣＡＲに配置される。一部の実施形態では、第１ＣＡＲは、配列番号１５８若しくは１７７のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１ＣＡＲは、配列番号１５９若しくは１７８の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。

一部の実施形態では、本発明は、（ａ）抗ＢＣＭＡ結合ドメインである第１抗原結合ドメインであって、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、（ｉ）表２０又は２６に列挙される抗ＢＣＭＡ配列のＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２及びＨＣＣＤＲ３を含むＶＨと、表２０又は２６に列挙される抗ＢＣＭＡ配列のＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３を含むＶＬとであって、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される、ＶＨ及びＶＬ；（ｉｉ）それぞれ配列番号２３９及び２４２のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬであって、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される、ＶＨ及びＶＬ；又は（ｉｉｉ）配列番号２００のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、第１抗原結合ドメインと；（ｂ）第２抗原結合ドメインとを含む細胞を提供する。一部の実施形態では、第１抗原結合ドメインと第２抗原結合ドメインとは、２つのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に配置される。一部の実施形態では、一部の実施形態では、第１抗原結合ドメインと第２抗原結合ドメインとは、１つのＣＡＲに配置される。一部の実施形態では、第２抗原結合ドメインは、ＣＤ１９、ＣＤ５、ＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ５３、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７７、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ１２３、ＣＤ１３５、ＣＤ１３８、ＣＤ１７９、ＣＤ２６９、Ｆｌｔ３、ＲＯＲ１、ＦｃＲｎ５、ＦｃＲｎ２、ＣＳ－１、ＣＸＣＲ４、５、７、ＩＬ－７／３Ｒ、ＩＬ７／４／３Ｒ又はＩＬ４Ｒから選択される抗原に結合し、任意選択で、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＦｃＲｎ５、ＦｃＲｎ２、ＣＳ－１、ＣＤ１３８、ＣＤ１２３、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＬＬ－１、葉酸受容体β又はＦＬＴ３から選択される。一部の実施形態では、第２抗原結合ドメインは、ＣＤ１９に結合する。一部の実施形態では、第２抗原結合ドメインは、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、メソテリン、ＧＤ２、Ｔｎ抗原、ｓＴｎ抗原、Ｔｎ－Ｏ－糖ペプチド、ｓＴｎ－Ｏ－糖ペプチド、ＰＳＭＡ、ＣＤ９７、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、レグマン、ＧＤ３、ＣＤ１７１、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－β、ＳＳＥＡ－４、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ（例えば、ＥＲＢＢ２）、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、エフリンＢ２、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｓＬｅ、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体β、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＦＡＰ、レグマイン、ＨＰＶＥ６若しくはＥ７、ＭＬ－ＩＡＰ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、Ｆｏｓ関連抗原、好中球エラスターゼ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、精子タンパク質１７、βヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＡＦＰ、チログロブリン、ＰＬＡＣ１、グロボＨ、ＲＡＧＥ１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔｈｓｐ７０－２、ＮＡ－１７、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＧＰＲ２０、Ｌｙ６ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＧＦＲα４又はＭＨＣに提示されるこれらの抗原のいずれかのペプチドから選択される抗原に結合する。

一部の実施形態では、第２抗原結合ドメインは、ＣＤ１９に結合する。一部の実施形態では、第２抗原結合ドメインは、表１９又は表２２に列挙される抗ＣＤ１９配列のＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及び／又はＬＣＣＤＲ３、例えばそれぞれ配列番号２９５及び２４５～２４９の配列を含むＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、第２抗原結合ドメインは、表１９又は表２２に列挙される抗ＣＤ１９配列のＶＨ及び／又はＶＬ、例えばそれぞれ配列番号２５０及び２５１のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを含む。一部の実施形態では、第２抗原結合ドメインは、表１９又は表２２に列挙される抗ＣＤ１９配列のｓｃＦｖ、例えば配列番号２１１のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、第２抗原結合ドメインは、第２ＣＡＲに配置され、ＣＡＲは、表１９又は表２２に列挙される抗ＣＤ１９配列のＣＡＲ、例えば配列番号２２５若しくは２２９のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＡＲを含む。

一部の実施形態では、第１抗原結合ドメインは、（ａ）それぞれ配列番号８６、８７、８８、９５、９６及び９７；（ｂ）それぞれ配列番号４４、４５、７６、５４、５５及び５６；又は（ｃ）それぞれ配列番号４４、４５、４６、５４、５５及び５６のアミノ酸配列を含むＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、第２抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２９５及び２４５～２４９のアミノ酸配列を含むＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、第１抗原結合ドメインは、（ａ）それぞれ配列番号９３及び１０２；（ｂ）それぞれ配列番号７８及び６１；又は（ｃ）それぞれ配列番号５２及び６１のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを含む。一部の実施形態では、第２抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２５０及び２５１のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを含む。一部の実施形態では、第１抗原結合ドメインは、配列番号１０５、８０又は６４のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、第２抗原結合ドメインは、配列番号２１１のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、第１抗原結合ドメインは、配列番号２５３、１０６、８１又は６５の核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、第２抗原結合ドメインは、配列番号２１２の核酸配列によってコードされる。

一部の実施形態では、第１抗原結合ドメインは、第１ＣＡＲに配置され、及び第２抗原結合ドメインは、第２ＣＡＲに配置される。一部の実施形態では、第１ＣＡＲは、第１膜貫通ドメインと、第１細胞内シグナル伝達ドメインとをさらに含む。一部の実施形態では、第２ＣＡＲは、第２膜貫通ドメインと、第２細胞内シグナル伝達ドメインとをさらに含む。

一部の実施形態では、第１ＣＡＲは、第１核酸配列によってコードされ、及び第２ＣＡＲは、第２核酸配列によってコードされ、第１及び第２核酸配列は、個別の核酸分子上に配置される。

一部の実施形態では、第１ＣＡＲは、第１核酸配列によってコードされ、及び第２ＣＡＲは、第２核酸配列によってコードされ、第１及び第２核酸配列は、単一の核酸分子上に配置される。一部の実施形態では、単一の核酸分子は、５’から３’の方向に、以下の構成を含む：第１抗原結合ドメインをコードする核酸配列－第１膜貫通ドメインをコードする核酸配列－第１細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列－リンカーをコードする核酸配列－第２抗原結合ドメインをコードする核酸配列－第２膜貫通ドメインをコードする核酸配列－第２細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列。一部の実施形態では、単一の核酸分子は、５’から３’の方向に、以下の構成を含む：第２抗原結合ドメインをコードする核酸配列－第２膜貫通ドメインをコードする核酸配列－第２細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列－リンカーをコードする核酸配列－第１抗原結合ドメインをコードする核酸配列－第１膜貫通ドメインをコードする核酸配列－第１細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列。一部の実施形態では、リンカーは、自己切断部位を含む。一部の実施形態では、リンカーは、Ｐ２Ａ部位、Ｔ２Ａ部位、Ｅ２Ａ部位又はＦ２Ａ部位を含む。一部の実施形態では、リンカーは、Ｐ２Ａ部位を含む。一部の実施形態では、リンカーは、配列番号２０９の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、リンカーは、配列番号２０８のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、単一の核酸分子は、配列番号２１５、２１７、２１９、２２１若しくは２２３の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。一部の実施形態では、単一の核酸分子は、配列番号２１４、２１６、２１８、２２０若しくは２２２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする。

一部の実施形態では、第１抗原結合ドメイン及び第２抗原結合ドメインは、１つのＣＡＲに配置され、ＣＡＲは、膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとをさらに含む。一部の実施形態では、第１抗原結合ドメインは、第１ＶＨ（ＶＨ１）と第１ＶＬ（ＶＬ１）とを含み、及び第２抗原結合ドメインは、第２ＶＨ（ＶＨ２）と第２ＶＬ（ＶＬ２）とを含む。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成で配列される：ＶＨ２－任意選択でリンカー１（「Ｌ１」）－ＶＬ１－任意選択でリンカー２（「Ｌ２」）－ＶＨ１－任意選択でリンカー３（「Ｌ３」）－ＶＬ２。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成で配列される：ＶＨ１－任意選択でＬ１－ＶＨ２－任意選択でＬ２－ＶＬ２－任意選択でＬ３－ＶＬ１。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成で配列される：ＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成で配列される：ＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成で配列される：ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成で配列される：ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＨ２－任意選択でＬ２－ＶＬ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成で配列される：ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成で配列される：ＶＨ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＬ１。一部の実施形態では、ＶＨ１及びＶＬ１は、それぞれ配列番号９３及び１０２のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む。一部の実施形態では、ＶＨ１及びＶＬ１は、それぞれ配列番号３３３及び３３４のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む。一部の実施形態では、ＶＨ１及びＶＬ１は、それぞれ配列番号７８及び６１のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む。一部の実施形態では、ＶＨ１及びＶＬ１は、それぞれ配列番号３３５及び３３６のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む。一部の実施形態では、ＶＨ２及びＶＬ２は、それぞれ配列番号２５０及び２５１のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む。一部の実施形態では、ＶＨ２及びＶＬ２は、それぞれ配列番号３３１及び３３２のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む。一部の実施形態では、Ｌ１又はＬ３は、配列番号５のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む。一部の実施形態では、Ｌ２は、配列番号６３のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号３２１～３３０からなる群から選択されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも８０、８５、９０、９５若しくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号３３９～３４８からなる群から選択されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも８０、８５、９０、９５若しくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、ＣＡＲは、５’から３’の方向に、以下の構成：第１抗原結合ドメインをコードする核酸配列－任意選択でリンカーをコードする核酸配列－第２抗原結合ドメインをコードする核酸配列－膜貫通ドメインをコードする核酸配列－細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含む核酸分子によってコードされる。一部の実施形態では、ＣＡＲは、５’から３’の方向に、以下の構成：第２抗原結合ドメインをコードする核酸配列－任意選択でリンカーをコードする核酸配列－第１抗原結合ドメインをコードする核酸配列－膜貫通ドメインをコードする核酸配列－細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含む核酸分子によってコードされる。

一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＮからＣの方向に、以下の構成：第１抗原結合ドメイン－任意選択でリンカー－第２抗原結合ドメイン－膜貫通ドメイン－細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＮからＣの方向に、以下の構成：第２抗原結合ドメイン－任意選択でリンカー－第１抗原結合ドメイン－膜貫通ドメイン－細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

一部の実施形態では、第１抗原結合ドメイン又は第２抗原結合ドメインは、ＶＨ及びＶＬを含む。一部の実施形態では、ＶＨ及びＶＬは、リンカーによって連結される。一部の実施形態では、リンカーは、配列番号５、６３、１０４若しくは２４３のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、膜貫通ドメイン、第１膜貫通ドメイン又は第２膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のα、β若しくはζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７又はＣＤ１５４から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメイン、第１膜貫通ドメイン又は第２膜貫通ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメイン、第１膜貫通ドメイン又は第２膜貫通ドメインは、配列番号１７の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。

一部の実施形態では、第１抗原結合ドメイン又は第２抗原結合ドメインは、ヒンジ領域（例えば、第１又は第２ヒンジ領域）により、膜貫通ドメイン、第１膜貫通ドメイン又は第２膜貫通ドメインに連結される。一部の実施形態では、ヒンジ領域は、配列番号２、３若しくは４のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒンジ領域は、配列番号１３、１４若しくは１５の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、ヒンジ領域及び膜貫通ドメインは、配列番号２０２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒンジ領域及び膜貫通ドメインは、配列番号２０３若しくは２１３の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。

一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメイン、第１細胞内シグナル伝達ドメイン又は第２細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン（例えば、第１又は第２一次シグナル伝達ドメイン）を含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＦｃεＲＩ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２又はＣＤ６６ｄに由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、配列番号９若しくは１０のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、配列番号２０、２１若しくは２０５の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメイン、第１細胞内シグナル伝達ドメイン又は第２細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、第１又は第２共刺激シグナル伝達ドメイン）を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、以下に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む：ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７－Ｈ３、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２８－ＯＸ４０、ＣＤ２８－４－１ＢＢ又はＣＤ８３と特異的に結合するリガンド。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１８若しくは２０４の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメイン、第１細胞内シグナル伝達ドメイン又は第２細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢに由来する機能性シグナル伝達ドメインと、ＣＤ３ζに由来する機能性シグナル伝達ドメインとを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメイン、第１細胞内シグナル伝達ドメイン又は第２細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）と、配列番号９若しくは１０のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）とを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメイン、第１細胞内シグナル伝達ドメイン又は第２細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列と、配列番号９又は１０のアミノ酸配列とを含む。

一部の実施形態では、ＣＡＲ、第１ＣＡＲ又は第２ＣＡＲは、リーダー配列（例えば、第１又は第２リーダ配列）をさらに含む。一部の実施形態では、リーダー配列は、配列番号１のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リーダー配列は、配列番号１９９若しくは２１０の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。

一部の実施形態では、第１リーダー配列及び第２リーダー配列は、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、第１ヒンジ領域及び第２ヒンジ領域は、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、第１膜貫通ドメイン及び第２膜貫通ドメインは、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、第１細胞内シグナル伝達ドメイン及び第２細胞内シグナル伝達ドメインは、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、第１一次シグナル伝達ドメイン及び第２一次シグナル伝達ドメインは、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、第１共刺激シグナル伝達ドメイン及び第２共刺激シグナル伝達ドメインは、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、第１リーダー配列及び第２リーダー配列は、同じアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む。一部の実施形態では、第１リーダー配列及び第２リーダー配列は、異なるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１ヒンジ領域及び第２ヒンジ領域は、同じアミノ酸配列を含む（例えば、第１ヒンジ領域及び第２ヒンジ領域は、配列番号２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む）。一部の実施形態では、第１ヒンジ領域及び第２ヒンジ領域配列は、異なるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１膜貫通ドメイン及び第２膜貫通ドメインは、同じアミノ酸配列を含む（例えば、第１膜貫通ドメイン及び第２膜貫通ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む）。一部の実施形態では、第１膜貫通ドメイン及び第２膜貫通ドメインは、異なるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１細胞内シグナル伝達ドメイン及び第２細胞内シグナル伝達ドメインは、同じアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１細胞内シグナル伝達ドメイン及び第２細胞内シグナル伝達ドメインは、異なるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１一次シグナル伝達ドメイン及び第２一次シグナル伝達ドメインは、同じアミノ酸配列を含む（例えば、第１一次シグナル伝達ドメイン及び第２一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む）。一部の実施形態では、第１一次シグナル伝達ドメイン及び第２一次シグナル伝達ドメインは、異なるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１共刺激シグナル伝達ドメイン及び第２共刺激シグナル伝達ドメインは、同じアミノ酸配列を含む（例えば、第１共刺激シグナル伝達ドメイン及び第２共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む）。一部の実施形態では、第１共刺激シグナル伝達ドメイン及び第２共刺激シグナル伝達ドメインは、異なるアミノ酸配列を含む（例えば、第１及び第２共刺激シグナル伝達ドメインは、それぞれ４－１ＢＢ共刺激ドメイン配列及びＣＤ２８共刺激ドメイン配列を含むか；又はそれぞれＣＤ２８共刺激ドメイン配列及び４－１ＢＢ共刺激ドメイン配列を含む）。一部の実施形態では、第１リーダー配列及び第２リーダー配列は、配列番号１９９及び２１０を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によりそれぞれコードされる。一部の実施形態では、第１リーダー配列及び第２リーダー配列は、配列番号２１０及び１９９を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によりそれぞれコードされる。一部の実施形態では、第１ヒンジ領域及び第２ヒンジ領域は、配列番号３３７及び１３を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によりそれぞれコードされる。一部の実施形態では、第１ヒンジ領域及び第２ヒンジ領域配列は、配列番号１３及び３３７を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によりそれぞれコードされる。一部の実施形態では、第１膜貫通ドメイン及び第２膜貫通ドメインは、配列番号３３８及び１７を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によりそれぞれコードされる。一部の実施形態では、第１膜貫通ドメイン及び第２膜貫通配列は、配列番号１７及び３３８を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によりそれぞれコードされる。一部の実施形態では、第１共刺激シグナル伝達ドメイン及び第２共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号２０４及び１８を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によりそれぞれコードされる。一部の実施形態では、第１共刺激シグナル伝達ドメイン及び第２共刺激配列は、配列番号１８及び２０４を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によりそれぞれコードされる。一部の実施形態では、第１一次シグナル伝達ドメイン及び第２一次シグナル伝達ドメインは、配列番号２０５及び２１を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によりそれぞれコードされる。一部の実施形態では、第１共刺激シグナル伝達ドメイン及び第２共刺激配列は、配列番号２１及び２０５を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によりそれぞれコードされる。

一部の実施形態では、ＣＡＲ、第１ＣＡＲ又は第２ＣＡＲは、ウッドチャック肝炎転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）を含む核酸配列によってコードされる。

一部の実施形態では、核酸分子であって、（ａ）抗ＢＣＭＡ結合ドメインである第１抗原結合ドメインをコードする第１核酸配列であって、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、（ｉ）それぞれ配列番号８６、１３０、８８、９５、１３１及び１３２：（ｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５、８４、５４、５５及び５６；又は（ｉｉｉ）それぞれ配列番号１７９、１８０、１８１、１４７、１８２及び１８３のアミノ酸配列を含む、第１核酸配列と；（ｂ）第２抗原結合ドメインをコードする第２核酸配列とを含む核酸分子が本明細書に提供される。

一部の実施形態では、単離核酸分子は、個別の核酸分子である第１核酸分子及び第２核酸分子を含み、第１核酸配列は、第１核酸分子上に配置され、第２核酸配列は、第２核酸分子上に配置される。

一部の実施形態では、核酸分子であって、（ａ）抗ＢＣＭＡ結合ドメインである第１抗原結合ドメインをコードする第１核酸配列であって、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、（ｉ）表２０又は２６に列挙される抗ＢＣＭＡ配列のＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２及びＨＣＣＤＲ３を含むＶＨと、表２０又は２６に列挙される抗ＢＣＭＡ配列のＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３を含むＶＬとであって、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される、ＶＨ及びＶＬ；（ｉｉ）それぞれ配列番号２３９及び２４２のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬであって、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される、ＶＨ及びＶＬ；又は（ｉｉｉ）配列番号２００のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、第１核酸配列と；（ｂ）第２抗原結合ドメインをコードする第２核酸配列とを含む核酸分子が本明細書に提供される。

一部の実施形態では、第１ＣＡＲをコードする第１核酸配列と、第２ＣＡＲをコードする第２核酸配列とを含む核酸分子が本明細書に提供され、第１ＣＡＲは、抗ＢＣＭＡ結合ドメインである第１抗原結合ドメイン、第１膜貫通ドメイン及び第１細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第２ＣＡＲは、抗ＣＤ１９結合ドメインである第２抗原結合ドメイン、第２膜貫通ドメイン及び第２細胞内シグナル伝達ドメインを含み、（ｉ）第１抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号８６、８７、８８、９５、９６及び９７のアミノ酸配列を含むＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲを含み、及び第２抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２９５及び２４５～２４９のアミノ酸配列を含むＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲを含むか；（ｉｉ）第１抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号９３及び１０２のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを含み、及び第２抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２５０及び２５１のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを含むか；（ｉｉｉ）第１抗原結合ドメインは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含み、及び第２抗原結合ドメインは、配列番号２１１のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含むか；（ｉｖ）第１ＣＡＲは、配列番号１０７又は２２６のアミノ酸配列を含み、及び第２ＣＡＲは、配列番号２２５又は２２９のアミノ酸配列を含むか；又は（ｖ）単離核酸分子は、配列番号２７１の核酸配列を含む。

一部の実施形態では、第１ＣＡＲをコードする第１核酸配列と、第２ＣＡＲをコードする第２核酸配列とを含む核酸分子が本明細書に提供され、第１ＣＡＲは、抗ＢＣＭＡ結合ドメインである第１抗原結合ドメイン、第１膜貫通ドメイン及び第１細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第２ＣＡＲは、抗ＣＤ１９結合ドメインである第２抗原結合ドメイン、第２膜貫通ドメイン及び第２細胞内シグナル伝達ドメインを含み、（ｉ）第１抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号４４、４５、７６、５４、５５及び５６のアミノ酸配列を含むＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲを含み、第２抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２９５及び２４５～２４９のアミノ酸配列を含むＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３を含むか；（ｉｉ）第１抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号７８及び６１のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを含み、及び第２抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２５０及び２５１のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを含むか；（ｉｉｉ）第１抗原結合ドメインは、配列番号８０のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含み、及び第２抗原結合ドメインは、配列番号２１１のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含むか；（ｉｖ）第１ＣＡＲは、配列番号８２又は２２４のアミノ酸配列を含み、及び第２ＣＡＲは、配列番号２２５又は２２９のアミノ酸配列を含むか；又は（ｖ）単離核酸分子は、配列番号２１５の核酸配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書に開示される核酸分子によってコードされるポリペプチド分子が本明細書に提供される。

一部の実施形態では、ＣＡＲが本明細書に提供され、ＣＡＲは、（ａ）抗ＢＣＭＡ結合ドメインである第１抗原結合ドメインであって、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、（ｉ）それぞれ配列番号８６、１３０、８８、９５、１３１及び１３２；（ｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５、８４、５４、５５及び５６；又は（ｉｉｉ）それぞれ配列番号１７９、１８０、１８１、１４７、１８２及び１８３のアミノ酸配列を含む、第１抗原結合ドメインと；（ｂ）第２抗原結合ドメインとを含む。

一部の実施形態では、ＣＡＲが本明細書に提供され、ＣＡＲは、（ａ）抗ＢＣＭＡ結合ドメインである第１抗原結合ドメインであって、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、（ｉ）表２０又は２６に列挙される抗ＢＣＭＡ配列のＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２及びＨＣＣＤＲ３を含むＶＨと、表２０又は２６に列挙される抗ＢＣＭＡ配列のＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３を含むＶＬとであって、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される、ＶＨ及びＶＬ；（ｉｉ）それぞれ配列番号２３９及び２４２のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬであって、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される、ＶＨ及びＶＬ；又は（ｉｉｉ）配列番号２００のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、第１抗原結合ドメインと；（ｂ）第２抗原結合ドメインとを含む。

一部の実施形態では、本明細書に開示される核酸分子又は本明細書に開示されるＣＡＲをコードする核酸分子を含むベクターが本明細書に提供される。一部の実施形態では、ベクターは、ＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター又はレトロウイルスベクターから選択される。一部の実施形態では、ベクターは、配列番号１１の核酸配列を含むＥＦ－１プロモーターを含む。

一部の実施形態では、本明細書に開示される核酸分子、本明細書に開示されるＣＡＲをコードする核酸分子、本明細書に開示されるポリペプチド、本明細書に開示されるＣＡＲ又は本明細書に開示されるベクターを含む細胞が本明細書に提供される。一部の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞又はＮＫ細胞である。

一部の実施形態では、細胞を作製する方法であって、本明細書に開示されるベクターで細胞を形質導入するステップを含む方法が本明細書に提供され、任意選択で、細胞は、Ｔ細胞又はＮＫ細胞である。一部の実施形態では、ＲＮＡ操作細胞を作製する方法であって、インビトロで転写されたＲＮＡ又は合成ＲＮＡを細胞に導入するステップを含む方法が本明細書に提供され、ここで、ＲＮＡは、本明細書に開示の核酸分子、本明細書に開示のＣＡＲをコードする核酸分子を含む。一部の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞又はＮＫ細胞である。

一部の実施形態では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を作製する方法が本明細書に提供され、この方法は、（ｉ）細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば凍結された又は新鮮な白血球アフェレーシス産物から単離されたＴ細胞）の集団を、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と接触させる（例えば、結合させる）ステップ；（ｉｉ）上記細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を、本明細書に開示の核酸分子又は本明細書に開示のＣＡＲをコードする核酸分子と接触させ、それにより上記核酸分子を含む細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を提供するステップ、並びに（ｉｉｉ）保存（例えば、凍結保存培地中の細胞の集団の再製剤化）又は投与のために、上記細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を採取するステップを含み、
（ａ）ステップ（ｉｉ）は、ステップ（ｉ）と一緒に、又はステップ（ｉ）の開始後の２０時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の１２、１３、１４、１５、１６、１７若しくは１８時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の１８時間以内に実施され、及び
ステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｉ）の開始後の３０（例えば、２６）時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の２４時間以内に実施され、
（ｂ）ステップ（ｉｉ）は、ステップ（ｉ）と一緒に、又はステップ（ｉ）の開始後の２０時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の１２、１３、１４、１５、１６、１７若しくは１８時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の１８時間以内に実施され、及び
ステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｉｉ）の開始後の３０時間以内、例えばステップ（ｉｉ）の開始後の２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０時間以内に実施されるか、又は
（ｃ）ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団は、増殖されないか、又は例えばステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて５、１０、１５、２０、２５、３０、３５若しくは４０％以下、例えば１０％以下だけ増殖され、
任意選択で、ステップ（ｉｉ）の核酸分子は、ウイルスベクター上にあり、任意選択で、ステップ（ｉｉ）の核酸分子は、ウイルスベクター上のＲＮＡ分子であり、任意選択で、ステップ（ｉｉ）は、ＣＡＲをコードする核酸分子を含むウイルスベクターで細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を形質導入することを含む。

一部の実施形態では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を作製する方法が本明細書に提供され、この方法は、（１）細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば凍結された又は新鮮な白血球アフェレーシス産物から単離されたＴ細胞）の集団を、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ－１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））、ＩＬ－２１、ＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ）又はそれらの組み合わせから選択されるサイトカインと接触させるステップ、（２）細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を、本明細書に開示される核酸分子又は本明細書に開示されるＣＡＲをコードする核酸分子と接触させ、それにより核酸分子を含む細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を提供するステップ、並びに（３）保存（例えば、凍結保存培地中の細胞の集団の再製剤化）又は投与のために、上記細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を採取するステップを含み、
（ａ）ステップ（２）は、ステップ（１）と一緒に、又はステップ（１）の開始後の５時間以内、例えばステップ（１）の開始後の１、２、３、４若しくは５時間以内に実施され、及び
ステップ（３）は、ステップ（１）の開始後の２６時間以内、例えばステップ（１）の開始後の２２、２３若しくは２４時間以内、例えばステップ（１）の開始後の２４時間以内に実施されるか、又は
（ｂ）ステップ（３）からの細胞の集団は、増殖されないか、又は例えばステップ（１）の開始時の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて５、１０、１５、２０、２５、３０、３５若しくは４０％以下、例えば１０％以下だけ増殖され、
任意選択で、ステップ（２）の核酸分子は、ウイルスベクター上にあり、任意選択で、ステップ（ｉｉ）の核酸分子は、ウイルスベクター上のＲＮＡ分子であり、任意選択で、ステップ（ｉｉ）は、ＣＡＲをコードする核酸分子を含むウイルスベクターで細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を形質導入することを含む。

一部の実施形態では、ＣＡＲを発現するように操作された細胞の集団（「ＣＡＲ発現細胞の集団」）が本明細書に開示され、前記集団は、以下を含む：（ａ）ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、ほぼ同じパーセンテージのナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞；（ｂ）ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、ナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞の約５％～約１０％以内の変化；（ｃ）ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、増加したパーセンテージの、例えば少なくとも１．２、１．４、１．６、１．８、２．０、２．２、２．４、２．６、２．８又は３倍増加したナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞；（ｄ）ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、ほぼ同じパーセンテージのセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞；（ｅ）ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、セントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞の約５％～約１０％以内の変化；（ｆ）ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、減少したパーセンテージの、例えば少なくとも２０、２５、３０、３５、４０、４５又は５０％減少したセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞；（ｇ）ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中の幹メモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、ほぼ同じパーセンテージの幹メモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞；（ｈ）ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中の幹メモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、幹メモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の約５％～約１０％以内の変化；又は（ｉ）ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中の幹メモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、増加したパーセンテージの幹メモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞。一部の実施形態では、集団は、本明細書に開示される細胞を含む。一部の実施形態では、集団は、本明細書に開示される二重ＣＡＲ又はダイアボディＣＡＲを含む細胞を含む。一部の実施形態では、集団は、（ａ）抗ＢＣＭＡ結合ドメインである第１抗原結合ドメインであって、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、（ｉ）それぞれ配列番号８６、１３０、８８、９５、１３１及び１３２：（ｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５、８４、５４、５５及び５６；又は（ｉｉｉ）それぞれ配列番号１７９、１８０、１８１、１４７、１８２及び１８３のアミノ酸配列を含む、第１抗原結合ドメインと；（ｂ）第２抗原結合ドメインとを含む細胞を含む。

一部の実施形態では、本明細書に開示される細胞又は本明細書に開示される細胞の集団と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物が本明細書に提供される。

一部の実施形態では、細胞の集団は、本明細書に開示される方法によって作製される。一部の実施形態では、集団は、
（ａ）抗ＢＣＭＡＣＡＲを含むが、抗ＣＤ１９ＣＡＲを含まない第１細胞集団；
（ｂ）抗ＣＤ１９ＣＡＲを含むが、抗ＢＣＭＡＣＡＲを含まない第２細胞集団；及び
（ｃ）抗ＢＣＭＡＣＡＲと抗ＣＤ１９ＣＡＲとの両方を含む第３細胞集団
を含む。

一部の実施形態では、
（ｉ）第２及び第３集団を合わせた生存細胞の総数は、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約１１０％以下（例えば、約１０５％、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％又はそれ未満以下）であり；
（ｉｉ）第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数は、第２及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約９０％以上（例えば、約１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％、５００％、７５０％、１０００％、２０００％、５０００、１００００％又はそれを超えるもの以上）であり；
（ｉｉｉ）第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数は、生存細胞の総数の約５％以上（例えば、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％以上）である。

一部の実施形態では、集団は、ＣＡＲを含まない第４細胞集団をさらに含む。

一部の実施形態では、
（ｉ）第２集団の生存細胞の総数は、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約１１０％以下（例えば、約１０５％、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％又はそれ未満以下）であり；
（ｉｉ）第２集団の生存細胞の総数は、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約４５％～約５０％（例えば、約４７％）以下；約５０～約５５％（例えば、約５３％）以下；約６０％～約６５％（例えば、約６３％）以下；又は約８０～約８５％（例えば、約８２％）以下である。

一部の実施形態では、対象において抗腫瘍免疫を提供する方法が本明細書に開示され、これは、有効量の、本明細書に開示される細胞、本明細書に開示される細胞の集団又は本明細書に開示される医薬組成物を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法が本明細書に開示され、これは、有効量の、本明細書に開示される細胞、本明細書に開示される細胞の集団又は本明細書に開示される医薬組成物を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患は、（ｉ）骨髄形成異常、骨髄異形成症候群若しくは前白血病の１つ以上から選択される癌若しくは悪性疾患又は前癌状態、或いは（ｉｉ）ＢＣＭＡの発現に関連する非癌関連適応症である。一部の実施形態では、癌は、血液癌又は固形癌である。一部の実施形態では、疾患は、急性白血病、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型若しくは大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、前立腺癌（例えば、去勢抵抗性若しくは治療抵抗性前立腺癌又は転移性前立腺癌）、膵臓癌、肺癌、形質細胞増殖異常症（例えば、無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無症候性骨髄腫）、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス若しくはＰＯＥＭＳ症候群（クロウ・深瀬症候群、高月病及びＰＥＰ症候群としても知られる））又はそれらの組み合わせである。一部の実施形態では、疾患は、多発性骨髄腫である。

一部の実施形態では、細胞の集団又は医薬組成物を約１×１０^６～約１×１０^８（例えば、約２×１０^６～約５×１０^７、約５×１０^６～約２×１０^７、約１×１０^６～約１×１０^７、約１×１０^７～約１×１０^８、約１×１０^６～約３×１０^６、約２×１０^６～約４×１０^６、約３×１０^６～約５×１０^６、約４×１０^６～約６×１０^６、約５×１０^６～約７×１０^６、約６×１０^６～約８×１０^６、約７×１０^６～約９×１０^６、約８×１０^６～約１×１０^７、約９×１０^６～約２×１０^７、約１×１０^７～約３×１０^７、約２×１０^７～約４×１０^７、約３×１０^７～約５×１０^７、約４×１０^７～約６×１０^７、約５×１０^７～約７×１０^７、約６×１０^７～約８×１０^７、約７×１０^７～約９×１０^７、約８×１０^７～約１×１０^８、約１×１０^６、約２×１０^６、約３×１０^６、約４×１０^６、約５×１０^６、約６×１０^６、約７×１０^６、約８×１０^６、約９×１０^６、約１×１０^７、約２×１０^７、約３×１０^７、約４×１０^７、約５×１０^７、約６×１０^７、約７×１０^７、約８×１０^７、約９×１０^７又は約１×１０^８）個のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）の用量で対象に投与する。一部の実施形態では、細胞の集団又は医薬組成物を約５×１０^６～約２×１０^７個のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）の用量で対象に投与する。

一部の実施形態では、細胞の集団又は医薬組成物を１又は複数回（例えば、２、３、４若しくはそれを超える）用量で対象に投与する。一部の実施形態では、細胞の集団又は医薬組成物を２回用量で対象に投与する。一部の実施形態では、１又は複数回用量は、１回目用量及び２回目用量を含み、１回目用量中のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）の数は、２回目用量中のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）の数より多いか、等しいか又はそれより少ない。

一部の実施形態において、１又は複数回用量は、１回目用量と２回目用量を含み、
（ａ）１回目用量は、約１×１０^６～約１×１０^７（例えば、約２×１０^６～約８×１０^６、約４×１０^６～約６×１０^６、約１×１０^６～約５×１０^６、約５×１０^６～約１×１０^７、約１×１０^６～約３×１０^６、約２×１０^６～約４×１０^６、約３×１０^６～約５×１０^６、約４×１０^６～約６×１０^６、約５×１０^６～約７×１０^６、約６×１０^６～約８×１０^６、約７×１０^６～約９×１０^６、約８×１０^６～約１×１０^７、約１×１０^６、約２×１０^６、約３×１０^６、約４×１０^６、約５×１０^６、約６×１０^６、約７×１０^６、約８×１０^６、約９×１０^６若しくは約１×１０^７）個のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）を含み；
（ｂ）２回目用量は、約１×１０^７～約１×１０^８（例えば、約２×１０^７～約８×１０^７、約４×１０^７～約６×１０^７、約１×１０^７～約５×１０^７、約５×１０^７～約１×１０^８、約１×１０^７～約３×１０^７、約２×１０^７～約４×１０^７、約３×１０^７～約５×１０^７、約４×１０^７～約６×１０^７、約５×１０^７～約７×１０^７、約６×１０^７～約８×１０^７、約７×１０^７～約９×１０^７、約８×１０^７～約１×１０^８、約１×１０^７、約２×１０^７、約３×１０^７、約４×１０^７、約５×１０^７、約６×１０^７、約７×１０^７、約８×１０^７、約９×１０^７若しくは約１×１０^８）個のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）を含み；
（ｃ）１回目用量中のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）の数は、２回目用量中のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）の数の１／Ｘ（ここで、Ｘは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０又は１００である）以下であり；及び／又は
（ｄ）１回目用量中のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）の数は、２回目用量中のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）の数の約１％～約１００％（例えば、約１０％～約９０％、約２０％～約８０％、約３０％～約７０％、約４０％～約６０％、約１０％～約５０％、約５０％～約９０％、約１０％～約３０％、約２０％～約４０％、約３０％～約５０％、約５０％～約７０％、約６０％～約８０％若しくは約７０％～約９０％）である。

一部の実施形態において、１回目用量は、約５×１０^６個のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）を含む。一部の実施形態において、２回目用量は、約１×１０^７～約２×１０^７個のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）を含む。

一部の実施形態において、本方法は、第２治療薬を対象に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、第２治療薬は、以下から選択される：（ｉ）ＰＤ－１阻害剤であって、任意選択で、ＰＤＲ００１、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ－０４２、ＰＦ－０６８０１５９１及びＡＭＰ－２２４からなる群から選択されるＰＤ－１阻害剤；（ｉｉ）ＰＤ－Ｌ１阻害剤であって、任意選択で、ＦＡＺ０５３、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ及びＢＭＳ－９３６５５９からなる群から選択されるＰＤ－Ｌ１阻害剤；（ｉｉｉ）ＬＡＧ－３阻害剤であって、任意選択で、ＬＡＧ５２５、ＢＭＳ－９８６０１６、ＴＳＲ－０３３、ＭＫ－４２８０及びＲＥＧＮ３７６７からなる群から選択されるＬＡＧ－３阻害剤；（ｉｖ）ＴＩＭ－３阻害剤であって、任意選択で、ＭＢＧ４５３、ＴＳＲ－０２２及びＬＹ３３２１３６７からなる群から選択されるＴＩＭ－３阻害剤；（ｖ）ＣＴＬＡ－４阻害剤であって、任意選択で、イピリムマブ又はトレメリムマブであるＣＴＬＡ－４阻害剤；（ｖｉ）インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）ポリペプチド、インターロイキン－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒａ）ポリペプチド又はＩＬ－１５ポリペプチドとＩＬ－１５Ｒａポリペプチドとの両方の組み合わせ、例えばｈｅｔＩＬ－１５；（ｖｉｉ）インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）ポリペプチド；又は（ｖｉｉｉ）ｍＴＯＲ阻害剤であって、任意選択で、ＲＡＤ００１又はラパマイシンであるｍＴＯＲ阻害剤。

一部の実施形態では、細胞であって、（ａ）第１抗原に結合する第１抗原結合ドメイン、第１膜貫通ドメイン及び第１細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、第１一次シグナル伝達ドメイン及び／又は第１共刺激シグナル伝達ドメイン）を含む第１ＣＡＲであって、任意選択で、第１リーダー配列及び／又は第１ヒンジ領域を含む第１ＣＡＲと；（ｂ）第２抗原に結合する第２抗原結合ドメイン、第２膜貫通ドメイン及び第２細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、第２一次シグナル伝達ドメイン及び／又は第２共刺激シグナル伝達ドメイン）を含む第２ＣＡＲであって、任意選択で、第２リーダー配列及び／又は第２ヒンジ領域を含む第２ＣＡＲとを含む細胞が本明細書に提供され、ここで、（ｉ）第１リーダー配列及び第２リーダー配列は、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ、任意選択で、第１及び第２リーダー配列は、同じアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）第１ヒンジ領域及び第２ヒンジ領域は、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ、任意選択で、第１及び第２ヒンジ領域は、同じアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）第１膜貫通ドメイン及び第２膜貫通ドメインは、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ、任意選択で、第１及び第２膜貫通ドメインは、同じアミノ酸配列を含み；及び／又は（ｉｖ）第１細胞内シグナル伝達ドメイン及び第２細胞内シグナル伝達ドメインは、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ、任意選択で、第１一次シグナル伝達ドメイン及び第２一次シグナル伝達ドメインは、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ、及び／又は第１共刺激シグナル伝達ドメイン及び第２共刺激シグナル伝達ドメインは、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされる。

一部の実施形態では、核酸分子であって、（ａ）第１ＣＡＲをコードする第１核酸配列であって、第１ＣＡＲが、第１抗原に結合する第１抗原結合ドメイン、第１膜貫通ドメイン及び第１細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、第１一次シグナル伝達ドメイン及び／又は第１共刺激シグナル伝達ドメイン）を含み、任意選択で、第１ＣＡＲは、第１リーダー配列及び／又は第１ヒンジ領域を含む、第１核酸配列と；（ｂ）第２ＣＡＲをコードする第２核酸配列であって、第２ＣＡＲが、第２抗原に結合する第２抗原結合ドメイン、第２膜貫通ドメイン及び第２細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、第２一次シグナル伝達ドメイン及び／又は第２共刺激シグナル伝達ドメイン）を含み、任意選択で、第２ＣＡＲは、第２リーダー配列及び／又は第２ヒンジ領域を含む、第２核酸配列とを含む核酸分子が本明細書に提供され、ここで、（ｉ）第１リーダー配列及び第２リーダー配列は、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ、任意選択で、第１及び第２リーダー配列は、同じアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）第１ヒンジ領域及び第２ヒンジ領域は、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ、任意選択で、第１及び第２ヒンジ領域は、同じアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）第１膜貫通ドメイン及び第２膜貫通ドメインは、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ、任意選択で、第１及び第２膜貫通ドメインは、同じアミノ酸配列を含み；及び／又は（ｉｖ）第１細胞内シグナル伝達ドメイン及び第２細胞内シグナル伝達ドメインは、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ、任意選択で、第１細胞内シグナル伝達ドメイン及び第２細胞内シグナル伝達ドメインは、同じアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態において、第１及び第２リーダー配列は、同じアミノ酸配列を含む。理論に縛られることは意図しないが、こうした核酸分子は、第１リーダー配列及び第２リーダー配列が同じ核酸配列によってコードされる以外は同様の核酸分子よりも低い組換えを呈示する。

一部の実施形態において、第１及び第２ヒンジ領域は、同じアミノ酸配列を含む。理論に縛られることは意図しないが、こうした核酸分子は、第１ヒンジ領域及び第２ヒンジ領域が同じ核酸配列によってコードされる以外は同様の核酸分子よりも低い組換えを呈示する。

一部の実施形態において、第１及び第２膜貫通ドメインは、同じアミノ酸配列を含む。理論に縛られることは意図しないが、こうした核酸分子は、第１膜貫通ドメイン及び第２膜貫通ドメインが同じ核酸配列によってコードされる以外は同様の核酸分子よりも低い組換えを呈示する。

一部の実施形態において、第１細胞内シグナル伝達ドメイン及び第２細胞内シグナル伝達ドメインは、同じアミノ酸配列を含む。理論に縛られることは意図しないが、こうした核酸分子は、第１細胞内シグナル伝達ドメイン及び第２細胞内シグナル伝達ドメインが同じ核酸配列によってコードされる以外は同様の核酸分子よりも低い組換えを呈示する。

一部の実施形態において、第１一次シグナル伝達ドメイン及び第２一次シグナル伝達ドメインは、同じアミノ酸配列を含む。理論に縛られることは意図しないが、こうした核酸分子は、第１一次シグナル伝達ドメイン及び第２一次シグナル伝達ドメインが同じ核酸配列によってコードされる以外は同様の核酸分子よりも低い組換えを呈示する。

一部の実施形態において、第１一次シグナル伝達ドメイン及び第２一次シグナル伝達ドメインは、異なるアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態において、第１共刺激シグナル伝達ドメイン及び第２共刺激シグナル伝達ドメインは、同じアミノ酸配列を含む。理論に縛られることは意図しないが、こうした核酸分子は、第１共刺激シグナル伝達ドメイン及び第２共刺激シグナル伝達ドメインが同じ核酸配列によってコードされる以外は同様の核酸分子よりも低い組換えを呈示する。

一部の実施形態において、第１共刺激シグナル伝達ドメイン及び第２共刺激シグナル伝達ドメインは、異なるアミノ酸配列を含む（例えば、第１及び第２共刺激シグナル伝達ドメインは、それぞれ４－１ＢＢ共刺激ドメイン配列及びＣＤ２８共刺激ドメイン配列を含むか；又はそれぞれＣＤ２８共刺激ドメイン配列及び４－１ＢＢ共刺激ドメイン配列を含む）。

一部の実施形態において、第１リーダー配列及び第２リーダー配列は、配列番号１のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１リーダー配列及び第２リーダー配列は、それぞれ配列番号１９９及び２１０を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）或いはそれぞれ配列番号２１０及び１９９を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によってコードされる。

一部の実施形態において、第１ヒンジ領域及び第２ヒンジ領域は、配列番号２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１ヒンジ領域及び第２ヒンジ領域は、それぞれ配列番号３３７及び１３を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）；或いはそれぞれ配列番号１３及び３３７を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によってコードされる。

一部の実施形態において、第１膜貫通ドメイン及び第２膜貫通ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１膜貫通ドメイン及び第２膜貫通ドメインは、それぞれ配列番号３３８及び１７を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）；或いはそれぞれ配列番号１７及び３３８を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によってコードされる。

一部の実施形態において、第１共刺激シグナル伝達ドメイン及び第２共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１共刺激シグナル伝達ドメイン及び第２共刺激シグナル伝達ドメインは、それぞれ配列番号２０４及び１８を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）；或いはそれぞれ配列番号１８及び２０４を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によってコードされる。

一部の実施形態において、第１一次シグナル伝達ドメイン及び第２一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１一次シグナル伝達ドメイン及び第２一次シグナル伝達ドメインは、それぞれ配列番号２０５及び２１を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）；或いはそれぞれ配列番号２１及び２０５を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によってコードされる。

一部の実施形態において、第１及び第２抗原は異なる。第１又は第２抗原は、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ５、ＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ５３、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７７、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ１２３、ＣＤ１３５、ＣＤ１３８、ＣＤ１７９、ＣＤ２６９、Ｆｌｔ３、ＲＯＲ１、ＦｃＲｎ５、ＦｃＲｎ２、ＣＳ－１、ＣＸＣＲ４、５、７、ＩＬ－７／３Ｒ、ＩＬ７／４／３Ｒ又はＩＬ４Ｒから選択され、任意選択で、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＦｃＲｎ５、ＦｃＲｎ２、ＣＳ－１、ＣＤ１３８、ＣＤ１２３、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＬＬ－１、葉酸受容体β、ＦＬＴ３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、メソテリン、ＧＤ２、Ｔｎ抗原、ｓＴｎ抗原、Ｔｎ－Ｏ－糖ペプチド、ｓＴｎ－Ｏ－糖ペプチド、ＰＳＭＡ、ＣＤ９７、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、レグマン、ＧＤ３、ＣＤ１７１、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－β、ＳＳＥＡ－４、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ（例えば、ＥＲＢＢ２）、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、エフリンＢ２、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｓＬｅ、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体β、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＦＡＰ、レグマイン、ＨＰＶＥ６若しくはＥ７、ＭＬ－ＩＡＰ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、Ｆｏｓ関連抗原、好中球エラスターゼ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、精子タンパク質１７、βヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＡＦＰ、チログロブリン、ＰＬＡＣ１、グロボＨ、ＲＡＧＥ１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔｈｓｐ７０－２、ＮＡ－１７、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＧＰＲ２０、Ｌｙ６ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＧＦＲα４又はＭＨＣに提示されるこれらの抗原のいずれかのペプチドから選択される。一部の実施形態では、第１又は第２抗原結合ドメインは、本明細書に開示されるＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ若しくはｓｃＦｖ又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、第１ＶＨ（ＶＨ１）、第１ＶＬ（ＶＬ１）、第２ＶＨ（ＶＨ２）、第２ＶＬ（ＶＬ２）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲが本明細書に提供され、ここで、ＶＨ１及びＶＬ１は、第１抗原に結合し、且つＶＨ２及びＶＬ２は、第２抗原に結合する。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＨ１－任意選択でリンカー１（「Ｌ１」）－ＶＨ２－任意選択でリンカー２（「Ｌ２」）－ＶＬ２－任意選択でリンカー３（「Ｌ３」）－ＶＬ１で配列される。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＨ１－リンカー１－ＶＬ２－リンカー２－ＶＨ２－リンカー３－ＶＬ１で配列される。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＬ１－リンカー１－ＶＨ２－リンカー２－ＶＬ２－リンカー３－ＶＨ１で配列される。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＬ１－リンカー１－ＶＬ２－リンカー２－ＶＨ２－リンカー３－ＶＨ１で配列される。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２で配列される。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２で配列される。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＬ２－リンカー１－ＶＨ１－リンカー２－ＶＬ１－リンカー３－ＶＨ２で配列される。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＬ２－リンカー１－ＶＬ１－リンカー２－ＶＨ１－リンカー３－ＶＨ２で配列される。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＨ１－リンカー１（「Ｌ１」）－ＶＨ２－リンカー２（「Ｌ２」）－ＶＬ２－リンカー３（「Ｌ３」）－ＶＬ１で配列される。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＨ１－Ｌ１－ＶＬ２－Ｌ２－ＶＨ２－Ｌ３－ＶＬ１で配列される。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＬ１－Ｌ１－ＶＨ２－Ｌ２－ＶＬ２－Ｌ３－ＶＨ１で配列される。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＬ１－Ｌ１－ＶＬ２－Ｌ２－ＶＨ２－Ｌ３－ＶＨ１で配列される。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＨ２－Ｌ１－ＶＨ１－Ｌ２－ＶＬ１－Ｌ３－ＶＬ２で配列される。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＨ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＶＨ１－Ｌ３－ＶＬ２で配列される。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＬ２－Ｌ１－ＶＨ１－Ｌ２－ＶＬ１－Ｌ３－ＶＨ２で配列される。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＬ２－Ｌ１－ＶＨ１－Ｌ２－ＶＬ１－Ｌ３－ＶＨ２で配列される。一部の実施形態では、Ｌ１又はＬ３は、配列番号５のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｌ２は、配列番号６３のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成を含む：（ｉ）ＶＨ１－任意選択でリンカー１（「Ｌ１」）－ＶＨ２－任意選択でリンカー２（「Ｌ２」）－ＶＬ２－任意選択でリンカー３（「Ｌ３」）－ＶＬ１－任意選択でヒンジ領域－膜貫通ドメイン－細胞内シグナル伝達ドメイン；（ｉｉ）ＶＨ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＬ１－任意選択でヒンジ領域－膜貫通ドメイン－細胞内シグナル伝達ドメイン；（ｉｉｉ）ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＨ２－任意選択でＬ２－ＶＬ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１－任意選択でヒンジ領域－膜貫通ドメイン－細胞内シグナル伝達ドメイン；（ｉｖ）ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１－任意選択でヒンジ領域－膜貫通ドメイン－細胞内シグナル伝達ドメイン；（ｖ）ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２－任意選択でヒンジ領域－膜貫通ドメイン－細胞内シグナル伝達ドメイン；（ｖｉ）ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２－任意選択でヒンジ領域－膜貫通ドメイン－細胞内シグナル伝達ドメイン；（ｖｉｉ）ＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２－任意選択でヒンジ領域－膜貫通ドメイン－細胞内シグナル伝達ドメイン；又は（ｖｉｉｉ）ＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２－任意選択でヒンジ領域－膜貫通ドメイン－細胞内シグナル伝達ドメイン。一部の実施形態では、第１及び第２抗原は異なる。一部の実施形態では、第１又は第２抗原は、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ５、ＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ５３、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７７、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ１２３、ＣＤ１３５、ＣＤ１３８、ＣＤ１７９、ＣＤ２６９、Ｆｌｔ３、ＲＯＲ１、ＦｃＲｎ５、ＦｃＲｎ２、ＣＳ－１、ＣＸＣＲ４、５、７、ＩＬ－７／３Ｒ、ＩＬ７／４／３Ｒ又はＩＬ４Ｒから選択され、任意選択で、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＦｃＲｎ５、ＦｃＲｎ２、ＣＳ－１、ＣＤ１３８、ＣＤ１２３、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＬＬ－１、葉酸受容体β、ＦＬＴ３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、メソテリン、ＧＤ２、Ｔｎ抗原、ｓＴｎ抗原、Ｔｎ－Ｏ－糖ペプチド、ｓＴｎ－Ｏ－糖ペプチド、ＰＳＭＡ、ＣＤ９７、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、レグマン、ＧＤ３、ＣＤ１７１、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－β、ＳＳＥＡ－４、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ（例えば、ＥＲＢＢ２）、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、エフリンＢ２、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｓＬｅ、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体β、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＦＡＰ、レグマイン、ＨＰＶＥ６若しくはＥ７、ＭＬ－ＩＡＰ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、Ｆｏｓ関連抗原、好中球エラスターゼ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、精子タンパク質１７、βヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＡＦＰ、チログロブリン、ＰＬＡＣ１、グロボＨ、ＲＡＧＥ１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔｈｓｐ７０－２、ＮＡ－１７、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＧＰＲ２０、Ｌｙ６ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＧＦＲα４又はＭＨＣに提示されるこれらの抗原のいずれかのペプチドから選択される。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２又はＶＬ２は、本明細書に開示されるＣＤＲ、ＶＨ若しくはＶＬ配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン又は細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、一次シグナル伝達ドメイン及び／又は共刺激シグナル伝達ドメイン）は、本明細書に開示されるヒンジ領域配列、膜貫通ドメイン配列若しくは細胞内シグナル伝達ドメイン配列（例えば、一次シグナル伝達ドメイン配列及び／若しくは共刺激シグナル伝達ドメイン配列）又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書に開示されるダイアボディＣＡＲをコードする核酸分子が本明細書に提供される。一部の実施形態では、本明細書に開示されるダイアボディＣＡＲをコードする核酸分子を含むベクターが本明細書に提供される。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲ、本明細書に開示されるダイアボディＣＡＲ又は本明細書に開示されるダイアボディＣＡＲをコードする核酸分子を含むベクターを含む細胞が本明細書に提供される。一部の実施形態では、本明細書に開示されるダイアボディＣＡＲと、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が本明細書に提供される。一部の実施形態では、本明細書に開示されるダイアボディＣＡＲを含む細胞を作製する方法が本明細書に開示される。一部の実施形態では、本明細書に開示されるダイアボディＣＡＲを含む細胞を用いて、対象、例えば、癌を有する対象を処置する方法が本明細書に開示される。

一部の実施形態では、本開示は、ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を作製する方法及びそうした方法を用いて作製された組成物に関する。本明細書に開示される方法（例えば、本明細書に開示されるＡＲＭプロセス又はサイトカインプロセス）を使用して、本明細書に開示される二重ＣＡＲ若しくはダイアボディＣＡＲを発現する細胞を作製することができる。また、対象の疾患、例えば、癌を処置するためにそうした組成物を使用する方法も開示される。

一部の実施形態では、本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を作製する方法を特徴とし、本方法は、（ｉ）細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば凍結された又は新鮮な白血球アフェレーシス産物から単離されたＴ細胞）の集団を、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と接触（例えば、結合）させるステップ；（ｉｉ）細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を、ＣＡＲをコードする核酸分子（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子）と接触させ、それにより核酸分子を含む細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を提供するステップ、及び（ｉｉｉ）保存（例えば、凍結保存培地中の細胞の集団の再製剤化）又は投与のために細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を採取するステップを含み、（ａ）ステップ（ｉｉ）は、ステップ（ｉ）と一緒に、又はステップ（ｉ）の開始後の２０時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の１２、１３、１４、１５、１６、１７若しくは１８時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の１８時間以内に実施され、及びステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｉ）の開始後の２６時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の２２、２３、２４又は２５時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の２４時間以内に実施されるか；（ｂ）ステップ（ｉｉ）は、ステップ（ｉ）と一緒に、又はステップ（ｉ）の開始後の２０時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の１２、１３、１４、１５、１６、１７若しくは１８時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の１８時間以内に実施され、及びステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｉｉ）の開始後の３０時間以内、例えばステップ（ｉｉ）の開始後の２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０時間以内に実施されるか；又は（ｃ）ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団は、例えば、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて、増殖されないか、又は５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５若しくは４０％以下、例えば１０％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）における核酸分子は、ＤＮＡ分子である。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）における核酸分子は、ＲＮＡ分子である。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）における核酸分子は、ウイルスベクター、例えばレンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター又はレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクター上にある。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）における核酸分子は、非ウイルスベクター上にある。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）における核酸分子は、プラスミド上にある。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）における核酸分子は、いずれのベクター上にもない。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）は、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を、ＣＡＲをコードする核酸分子を含むウイルスベクターで形質導入することを含む。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）は、ステップ（ｉ）と一緒に実施される。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）は、ステップ（ｉ）の開始後の２０時間以内に実施される。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）は、ステップ（ｉ）の開始後の１２、１３、１４、１５、１６、１７又は１８時間以内に実施される。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）は、ステップ（ｉ）の開始後の１８時間以内に実施される。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｉ）の開始後の２６時間以内に実施される。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｉ）の開始後の２２、２３、２４又は２５時間以内に実施される。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｉ）の開始後の２４時間以内に実施される。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｉｉ）の開始後の３０時間以内に実施される。一部の実施形態において、ステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｉｉ）の開始後の２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子は、本明細書に開示される核酸分子である。一部の実施形態では、核酸分子は、第１ＣＡＲをコードする第１核酸配列と、第２ＣＡＲをコードする第２核酸配列とを含む。一部の実施形態では、第１及び第２核酸配列は、単一の核酸分子上に配置され、例えば、第１核酸配列及び第２核酸配列は、自己切断部位（例えば、Ｐ２Ａ部位、Ｔ２Ａ部位、Ｅ２Ａ部位又はＦ２Ａ部位）をコードする第３核酸配列によって隔てられる。一部の実施形態では、第１及び第２核酸配列は、個別の核酸分子上に配置される。一部の実施形態では、核酸分子は、ＣＡＲをコードする核酸配列を含み、ＣＡＲは、第１ＶＨ（ＶＨ１）、第１ＶＬ（ＶＬ１）、第２ＶＨ（ＶＨ２）、第２ＶＬ（ＶＬ２）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＶＨ１及びＶＬ１は、第１抗原に結合し、且つＶＨ２及びＶＬ２は、第２抗原に結合し、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＨ１－任意選択でリンカー１（「Ｌ１」）－ＶＨ２－任意選択でリンカー２（「Ｌ２」）－ＶＬ２－任意選択でリンカー３（「Ｌ３」）－ＶＬ１、ＶＨ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＬ１、ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＨ２－任意選択でＬ２－ＶＬ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１、ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１、ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２、ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２、ＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２；又はＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２で配列される。

一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団は、増殖されない。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団は、例えば、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５又は４０％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団は、例えば、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて１０％以下だけ増殖される。

一部の実施形態では、核酸分子は、第１ＣＡＲをコードする第１核酸配列と、第２ＣＡＲをコードする第２核酸配列とを含み、第１及び第２核酸配列は、個別の核酸分子上に配置される。

一部の実施形態では、第１及び第２核酸分子は、個別のウイルスベクター上にあり、ステップ（ｉｉ）は、第１ＣＡＲをコードする核酸分子を含む第１ウイルスベクターと、第２ＣＡＲをコードする第２核酸分子を含む第２ウイルスベクターとで細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を形質導入することを含む。

一部の実施形態では、第１ＣＡＲは、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン（例えば、抗ＢＣＭＡＣＡＲ）を含み、及び第２ＣＡＲは、抗ＣＤ１９結合ドメイン（例えば、抗ＣＤ１９ＣＡＲ）を含む。

一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）において、第２ウイルスベクターと細胞集団を接触させる場合のＭＯＩより高いか、それと等しいか又はそれより低い感染多重度（ＭＯＩ）で第１ウイルスベクターと細胞集団を接触させる。一部の実施形態において、ステップ（ｉｉ）では、第２ウイルスベクターと細胞集団を接触させる場合のＭＯＩより高い感染多重度（ＭＯＩ）で第１ウイルスベクターと細胞集団を接触させる。

一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）において、得られる細胞集団が、抗ＢＣＭＡＣＡＲを含むが、抗ＣＤ１９ＣＡＲを含まない第１細胞集団、抗ＣＤ１９ＣＡＲを含むが、抗ＢＣＭＡＣＡＲを含まない第２細胞集団、抗ＢＣＭＡＣＡＲと抗ＣＤ１９ＣＡＲとの両方を含む第３細胞集団を含むように、第１ＭＯＩで第１ウイルスベクターと、且つ第２ＭＯＩで第２ウイルスベクターと細胞集団を接触させ、
（ａ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第２及び第３集団を合わせた生存細胞の総数は、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約１１０％以下（例えば、約１０５％、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％又はそれ未満以下）であり；
（ｂ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数は、第２及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約９０％以上（例えば、約１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％、５００％、７５０％、１０００％、２０００％、５０００、１００００％又はそれを超えるもの以上）であり；
（ｃ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数は、得られる集団の生存細胞の総数の約５％以上（例えば、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％以上）であり；
（ｄ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第２集団の生存細胞の総数は、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約１１０％以下（例えば、約１０５％、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％又はそれ未満以下）であるか；又は
（ｅ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数は、第２集団の生存細胞の総数の約９０％以上（例えば、約１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％、５００％、７５０％、１０００％、２０００％、５０００、１００００％又はそれを超えるもの以上）である。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）において、第２ウイルスベクターと細胞の集団を特定のＭＯＩで接触させる（例えば、第１ウイルスベクターと細胞集団を接触させる際のＭＯＩより十分に低いＭＯＩで、それにより、得られる細胞集団中で、以下が達成されるＭＯＩ：
（ａ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第２及び第３集団を合わせた生存細胞の総数が、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約１１０％以下（例えば、約１０５％、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％又はそれ未満以下）であり；
（ｂ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数が、第２及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約９０％以上（例えば、約１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％、５００％、７５０％、１０００％、２０００％、５０００、１００００％又はそれを超えるもの以上）であり；
（ｃ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数が、得られる集団の生存細胞の総数の約５％以上（例えば、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％以上）であり；
（ｄ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第２集団の生存細胞の総数が、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約１１０％以下（例えば、約１０５％、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％又はそれ未満以下）であるか；又は
（ｅ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数が、第２集団の生存細胞の総数の約９０％以上（例えば、約１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％、５００％、７５０％、１０００％、２０００％、５０００、１００００％又はそれを超えるもの以上）である。

一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）において、第１ウイルスベクターと第１ＭＯＩで、細胞集団を接触させ、第２ウイルスベクターと第２ＭＯＩで、細胞集団を接触させ、それにより、得られる細胞集団が、以下を含むようにする：
（ａ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第２及び第３集団を合わせた生存細胞の総数が、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約１１０％以下（例えば、約１０５％、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％又はそれ未満以下）であり；
（ｂ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数が、第２及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約９０％以上（例えば、約１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％、５００％、７５０％、１０００％、２０００％、５０００、１００００％又はそれを超えるもの以上）であり；
（ｃ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数が、得られる集団の生存細胞の総数の約５％以上（例えば、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％以上）であり；
（ｄ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第２集団の生存細胞の総数は、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約１１０％以下（例えば、約１０５％、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％又はそれ未満以下）であるか；又は
（ｅ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数は、第２集団の生存細胞の総数の約９０％以上（例えば、約１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％、５００％、７５０％、１０００％、２０００％、５０００、１００００％又はそれを超えるもの以上）である。

一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）において、細胞集団を、
（ａ）約１～約１０（例えば、約２～約９、約３～約８、約４～約７、約５～約６、約１～約８、約１～約６、約１～約４、約８～約１０、約６～約１０、約４～約１０、約１～３、約２～約４、約３～約５、約４～約６、約５～約７、約６～約８、約７～約９、約８～約１０、約２．５～約５、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９又は約１０）のＭＯＩで第１ウイルスベクター；
（ｂ）約０．１～約５（例えば、約０．２～約４、約０．３～約３、約０．４～約２、約０．５～約１、約０．６～約０．９、約０．７～約０．８、約０．１～約４、約０．１～約３、約０．１～約２、約０．１～約１、約０．１～約０．５、約４～約５、約３～約５、約２～約５、約１～約５、約０．５～約５、約０．２～約５、約０．１～約０．５、約０．２～約１、約０．５～約２、約１～約３、約２～約４、約３～約５、約０．５～約１、約０．１、約０．２、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１、約２、約３、約４又は約５）のＭＯＩで第２ウイルスベクター；
（ｃ）第２ウイルスベクターと細胞集団を接触させる際のＭＯＩより少なくとも１０％（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％若しくは９０％）高いか、又は少なくとも約１倍（例えば、少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０若しくは１００倍、例えば約２～約５０倍、約３～２０倍、約５～約１５倍若しくは約８～約１０倍）のＭＯＩで第１ウイルスベクター；及び／又は
（ｄ）第１ウイルスベクターと細胞集団を接触させる際のＭＯＩの１／Ｘ（ここで、Ｘは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０又は１００である）以下のＭＯＩで第２ウイルスベクター
と接触させる。

一部の実施形態では、約２．５～約５のＭＯＩで第１ウイルスベクターと細胞集団を接触させる。一部の実施形態では、約０．５～約１．０のＭＯＩで第２ウイルスベクターと細胞集団を接触させる。一部の実施形態では、第２ウイルスベクターと細胞集団を接触させる際のＭＯＩより約８倍～約１０倍高いＭＯＩの第１ウイルスベクターである。一部の実施形態では、第１ウイルスベクターと細胞集団を接触させる際のＭＯＩの１／Ｘ（ここで、Ｘは、６、８、１０又は１２）以下のＭＯＩの第２ウイルスベクターである。

一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）において、細胞集団を、
（ａ）約４～約５（例えば、約４．７５）のＭＯＩで第１ウイルスベクター；及び／又は
（ｂ）約０．２～約１（例えば、約０．５）のＭＯＩで第２ウイルスベクター
と接触させる。

一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）において、細胞集団は、約１×１０^８～約５×１０^９（例えば、約２×１０^８～約２×１０^９又は約４×１０^８～約１×１０^９個の総生存細胞を含む。一部の実施形態では、細胞を、約１×１０^６～約１×１０^７（例えば、約２×１０^６～約５×１０^６又は約３×１０^６～約４×１０^６）個の生存細胞／ｍＬの濃度で培養物中に懸濁させる。

一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤は、ＣＤ３を刺激する薬剤である。一部の実施形態では、共刺激分子を刺激する薬剤は、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＴＩＭ１、ＣＤ２、ＣＤ２２６又はそれらの任意の組み合わせを刺激する薬剤である。一部の実施形態では、共刺激分子を刺激する薬剤は、ＣＤ２８を刺激する薬剤である。一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤は、抗体（例えば、単一ドメイン抗体（例えば、重鎖可変ドメイン抗体）、ペプチボディ、Ｆａｂフラグメント若しくはｓｃＦｖ）、小分子又はリガンド（例えば、天然に存在するリガンド、組換えリガンド若しくはキメラリガンド）から選択される。一部の実施形態では、共刺激分子を刺激する薬剤は、抗体（例えば、単一ドメイン抗体（例えば、重鎖可変ドメイン抗体）、ペプチボディ、Ｆａｂフラグメント若しくはｓｃＦｖ）、小分子又はリガンド（例えば、天然に存在するリガンド、組換えリガンド若しくはキメラリガンド）から選択される。一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤は、ビーズを含まない。一部の実施形態では、共刺激分子を刺激する薬剤は、ビーズを含まない。一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤は、抗ＣＤ３抗体を含む。一部の実施形態では、共刺激分子を刺激する薬剤は、抗ＣＤ２８抗体を含む。一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤は、コロイドポリマーナノマトリックスに共有結合された抗ＣＤ３抗体を含む。一部の実施形態では、共刺激分子を刺激する薬剤は、コロイドポリマーナノマトリックスに共有結合された抗ＣＤ２８抗体を含む。一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び共刺激分子を刺激する薬剤は、ＴＣｅｌｌＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）を含む。

一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤は、ハイドロゲルを含まない。一部の実施形態では、共刺激分子を刺激する薬剤は、ハイドロゲルを含まない。一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤は、アルギン酸塩を含まない。一部の実施形態では、共刺激分子を刺激する薬剤は、アルギン酸塩を含まない。

一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤は、ハイドロゲルを含む。一部の実施形態では、共刺激分子を刺激する薬剤は、ハイドロゲルを含む。一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤は、アルギン酸塩を含む。一部の実施形態では、共刺激分子を刺激する薬剤は、アルギン酸塩を含む。一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤又は共刺激分子を刺激する薬剤は、ＱｕａｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製のＭａｇＣｌｏｕｄｚ（商標）を含む。

一部の実施形態では、ステップ（ｉ）は、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団中のＣＡＲ発現細胞のパーセンテージを増加させ、例えば、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団は、ステップ（ｉ）なしである以外には同様の方法によって作製された細胞と比べて、ＣＡＲ発現細胞のより高いパーセンテージ（例えば、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０又は６０％高い）を示す。

一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のパーセンテージは、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋細胞のパーセンテージと同じである。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のパーセンテージは、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋細胞のパーセンテージと３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２％以下だけ異なる。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のパーセンテージは、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋細胞のパーセンテージと５又は１０％以下だけ異なる。

一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団は、ステップ（ｉｉｉ）が、ステップ（ｉ）の開始後、２６時間を超えて、例えばステップ（ｉ）の開始後、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２日を超えてから実施される以外には同様の方法によって作製された細胞と比べて、ナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のより高いパーセンテージ（例えば、少なくとも１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５又は４０％高い）を示す。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団は、ステップ（ｉｉ）後且つステップ（ｉｉｉ）前に細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をインビトロで３日超、例えば５、６、７、８又は９日にわたって増殖させるステップをさらに含む以外には同様の方法によって作製された細胞と比べて、ナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のより高いパーセンテージ（例えば、少なくとも１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５又は４０％高い）を示す。

一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージは、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージと同じである。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージは、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージと３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２％以下だけ異なる。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージは、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージと５又は１０％以下だけ異なる。

一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団は、ステップ（ｉｉｉ）が、ステップ（ｉ）の開始後、２６時間を超えて、例えばステップ（ｉ）の開始後、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２日を超えてから実施される以外には同様の方法によって作製された細胞と比べて、セントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のより低いパーセンテージ（例えば、少なくとも１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５又は４０％低い）を示す。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団は、ステップ（ｉｉ）後且つステップ（ｉｉｉ）前に細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をインビトロで３日超、例えば５、６、７、８又は９日にわたって増殖させるステップをさらに含む以外には同様の方法によって作製された細胞と比べて、セントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のより低いパーセンテージ（例えば、少なくとも１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５又は４０％低い）を示す。

一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団中のステムメモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージは、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団中のステムメモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて増加される。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団中のＣＡＲ発現ステムメモリーＴ細胞、例えばＣＡＲ発現ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージは、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団中のＣＡＲ発現ステムメモリーＴ細胞、例えばＣＡＲ発現ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて増加される。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団中のステムメモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージは、ステップ（ｉｉｉ）が、ステップ（ｉ）の開始後、２６時間を超えて、例えばステップ（ｉ）の開始後、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２日を超えてから実施される以外には同様の方法によって作製された細胞の集団中のステムメモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージより高い。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団中のＣＡＲ発現ステムメモリーＴ細胞、例えばＣＡＲ発現ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージは、ステップ（ｉｉｉ）が、ステップ（ｉ）の開始後、２６時間を超えて、例えばステップ（ｉ）の開始後、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２日を超えてから実施される以外には同様の方法によって作製された細胞中のＣＡＲ発現ステムメモリーＴ細胞、例えばＣＡＲ発現ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージより高い。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団中のステムメモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージは、ステップ（ｉｉ）後且つステップ（ｉｉｉ）前に細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をインビトロで３日超、例えば５、６、７、８又は９日にわたって増殖させるステップをさらに含む以外には同様の方法によって作製された細胞の集団中のステムメモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージより高い。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団中のＣＡＲ発現ステムメモリーＴ細胞、例えばＣＡＲ発現ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージは、ステップ（ｉｉ）後且つステップ（ｉｉｉ）前に細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をインビトロで３日超、例えば５、６、７、８又は９日にわたって増殖させるステップをさらに含む以外には同様の方法によって作製された細胞の集団中のＣＡＲ発現ステムメモリーＴ細胞、例えばＣＡＲ発現ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージより高い。

一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＳＣＭ）は、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＳＣＭ）とほぼ同じであるか又は約２５、５０、７５、１００若しくは１２５％以下だけ異なる（例えば、それ以下だけ増加される）。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＳＣＭ）は、ステップ（ｉｉｉ）が、ステップ（ｉ）の開始後、２６時間を超えて、例えばステップ（ｉ）の開始後、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２日を超えてから実施される以外には同様の方法によって作製された細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＳＣＭ）より低い（例えば、少なくとも約１００、１５０、２００、２５０又は３００％低い）。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＳＣＭ）は、ステップ（ｉｉ）後且つステップ（ｉｉｉ）前に細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をインビトロで３日超、例えば５、６、７、８又は９日にわたって増殖させるステップをさらに含む以外には同様の方法によって作製された細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＳＣＭ）より低い（例えば、少なくとも約１００、１５０、２００、２５０又は３００％低い）。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（ＵｐＴｒｅｇｖｓ．ＤｏｗｎＴｅｆｆ）は、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（ＵｐＴｒｅｇｖｓ．ＤｏｗｎＴｅｆｆ）とほぼ同じであるか又は約２５、５０、１００、１５０若しくは２００％以下だけ異なる（例えば、それ以下だけ増加される）。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（ＵｐＴｒｅｇｖｓ．ＤｏｗｎＴｅｆｆ）は、ステップ（ｉｉｉ）が、ステップ（ｉ）の開始後、２６時間を超えて、例えばステップ（ｉ）の開始後、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２日を超えてから実施される以外には同様の方法によって作製された細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（ＵｐＴｒｅｇｖｓ．ＤｏｗｎＴｅｆｆ）より低い（例えば、少なくとも約５０、１００、１２５、１５０又は１７５％低い）。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（ＵｐＴｒｅｇｖｓ．ＤｏｗｎＴｅｆｆ）は、ステップ（ｉｉ）後且つステップ（ｉｉｉ）前に細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をインビトロで３日超、例えば５、６、７、８又は９日にわたって増殖させるステップをさらに含む以外には同様の方法によって作製された細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（ＵｐＴｒｅｇｖｓ．ＤｏｗｎＴｅｆｆ）より低い（例えば、少なくとも約５０、１００、１５０又は１７５％低い）。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｄｏｗｎｓｔｅｍｎｅｓｓ）は、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｄｏｗｎｓｔｅｍｎｅｓｓ）とほぼ同じであるか又は約２５、５０、１００、１５０、２００若しくは２５０％以下だけ異なる（例えば、それ以下だけ増加される）。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｄｏｗｎｓｔｅｍｎｅｓｓ）は、ステップ（ｉｉｉ）が、ステップ（ｉ）の開始後、２６時間を超えて、例えばステップ（ｉ）の開始後、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２日を超えてから実施される以外には同様の方法によって作製された細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｄｏｗｎｓｔｅｍｎｅｓｓ）より低い（例えば、少なくとも約５０、１００又は１２５％低い）。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｄｏｗｎｓｔｅｍｎｅｓｓ）は、ステップ（ｉｉ）後且つステップ（ｉｉｉ）前に細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をインビトロで３日超、例えば５、６、７、８又は９日にわたって増殖させるステップをさらに含む以外には同様の方法によって作製された細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｄｏｗｎｓｔｅｍｎｅｓｓ）より低い（例えば、少なくとも約５０、１００又は１２５％低い）。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｕｐｈｙｐｏｘｉａ）は、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｕｐｈｙｐｏｘｉａ）とほぼ同じであるか又は約１２５、１５０、１７５若しくは２００％以下だけ異なる（例えば、それ以下だけ増加される）。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｕｐｈｙｐｏｘｉａ）は、ステップ（ｉｉｉ）が、ステップ（ｉ）の開始後、２６時間を超えて、例えばステップ（ｉ）の開始後、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２日を超えてから実施される以外には同様の方法によって作製された細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｕｐｈｙｐｏｘｉａ）より低い（例えば、少なくとも約４０、５０、６０、７０又は８０％低い）。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｕｐｈｙｐｏｘｉａ）は、ステップ（ｉｉ）後且つステップ（ｉｉｉ）前に細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をインビトロで３日超、例えば５、６、７、８又は９日にわたって増殖させるステップをさらに含む以外には同様の方法によって作製された細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｕｐｈｙｐｏｘｉａ）より低い（例えば、少なくとも約４０、５０、６０、７０又は８０％低い）。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｕｐａｕｔｏｐｈａｇｙ）は、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｕｐａｕｔｏｐｈａｇｙ）とほぼ同じであるか又は約１８０、１９０、２００若しくは２１０％以下だけ異なる（例えば、それ以下だけ増加される）。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｕｐａｕｔｏｐｈａｇｙ）は、ステップ（ｉｉｉ）が、ステップ（ｉ）の開始後、２６時間を超えて、例えばステップ（ｉ）の開始後、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２日を超えてから実施される以外には同様の方法によって作製された細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｕｐａｕｔｏｐｈａｇｙ）より低い（例えば、少なくとも約２０、３０又は４０％低い）。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｕｐａｕｔｏｐｈａｇｙ）は、ステップ（ｉｉ）後且つステップ（ｉｉｉ）前に細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をインビトロで３日超、例えば５、６、７、８又は９日にわたって増殖させるステップをさらに含む以外には同様の方法によって作製された細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｕｐａｕｔｏｐｈａｇｙ）より低い（例えば、少なくとも約２０、３０又は４０％低い）。

一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団は、ＣＡＲによって認識される抗原を発現する細胞と一緒にインキュベートされた後、ステップ（ｉｉｉ）が、ステップ（ｉ）の開始後、２６時間を超えて、例えばステップ（ｉ）の開始後、５、６、７、８、９、１０、１１若しくは１２日を超えてから実施される以外には同様の方法によって作製された細胞又はステップ（ｉｉ）後且つステップ（ｉｉｉ）前に細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をインビトロで３日超、例えば５、６、７、８若しくは９日にわたって増殖させるステップをさらに含む以外には同様の方法によって作製された細胞よりも高いレベル（例えば、少なくとも２、４、６、８、１０、１２又は１４倍高い）でＩＬ－２を分泌する。

一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団は、インビボで投与された後、ステップ（ｉｉｉ）が、ステップ（ｉ）の開始後、２６時間を超えて、例えばステップ（ｉ）の開始後、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２日を超えてから実施される以外には同様の方法によって作製された細胞と比べてより長く持続するか又はより高い（例えば、少なくとも２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５若しくは９０％高い）レベルで増殖する。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団は、インビボで投与された後、ステップ（ｉｉ）後且つステップ（ｉｉｉ）前に細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をインビトロで３日超、例えば５、６、７、８又は９日にわたって増殖させるステップをさらに含む以外には同様の方法によって作製された細胞と比べてより長く持続するか又はより高い（例えば、少なくとも２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５若しくは９０％高い）レベルで増殖する。

一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団は、インビボで投与された後、ステップ（ｉｉｉ）が、ステップ（ｉ）の開始後、２６時間を超えて、例えばステップ（ｉ）の開始後、５、６、７、８、９、１０、１１若しくは１２日を超えてから実施される以外には同様の方法によって作製された細胞又はステップ（ｉｉ）後且つステップ（ｉｉｉ）前に細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をインビトロで３日超、例えば５、６、７、８若しくは９日にわたって増殖させるステップをさらに含む以外には同様の方法によって作製された細胞よりも強力な抗腫瘍活性（例えば、低用量、例えば０．１５×１０^６、０．２×１０^６、０．２５×１０^６又は０．３×１０^６個の生存ＣＡＲ発現細胞でより強力な抗腫瘍活性）を示す。

一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団は、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団と比べて、例えば生存細胞の数によって評価されて増殖されない。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団は、例えば、生存細胞の数によって評価されて、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団中の生存細胞の数から減少する。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団は、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団と比べて、例えば生存細胞の数によって評価されて５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５又は４０％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団は、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団と比べて増殖されないか又は０．５、１、１．５若しくは２時間未満、例えば１若しくは１．５時間未満だけ増殖される。

一部の実施形態では、ステップ（ｉ）及び（ｉｉ）は、ＩＬ－２、ＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））、ＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ））、ＬＳＤ１阻害剤又はＭＡＬＴ１阻害剤を含む細胞培地中で実施される。一部の実施形態では、ステップ（ｉ）及び（ｉｉ）は、ＩＬ－７、ＩＬ－２１又はそれらの組み合わせを含む細胞培地（例えば、無血清培地）中で実施される。一部の実施形態では、ステップ（ｉ）及び（ｉｉ）は、ＩＬ－２、ＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））、ＩＬ－２１、ＩＬ－７、ＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ）、ＬＳＤ１阻害剤、ＭＡＬＴ１阻害剤又はそれらの組み合わせを含む細胞培地中で実施される。一部の実施形態では、ステップ（ｉ）は、ＩＬ－２、ＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））、ＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ）、ＬＳＤ１阻害剤又はＭＡＬＴ１阻害剤を含む細胞培地中で実施される。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）は、ＩＬ－２、ＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））、ＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ）、ＬＳＤ１阻害剤又はＭＡＬＴ１阻害剤を含む細胞培地中で実施される。一部の実施形態では、ステップ（ｉ）は、ＩＬ－７、ＩＬ－２１又はそれらの組み合わせを含む細胞培地（例えば、無血清培地）中で実施される。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）は、ＩＬ－７、ＩＬ－２１又はそれらの組み合わせを含む細胞培地（例えば、無血清培地）中で実施される。一部の実施形態では、ステップ（ｉ）は、ＩＬ－２、ＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））、ＩＬ－２１、ＩＬ－７、ＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ）、ＬＳＤ１阻害剤、ＭＡＬＴ１阻害剤又はそれらの組み合わせを含む細胞培地中で実施される。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）は、ＩＬ－２、ＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））、ＩＬ－２１、ＩＬ－７、ＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ）、ＬＳＤ１阻害剤、ＭＡＬＴ１阻害剤又はそれらの組み合わせを含む細胞培地中で実施される。一部の実施形態では、細胞培地は、血清代替品を含む無血清培地である。一部の実施形態では、血清代替品は、ＣＴＳ（商標）ＩｍｍｕｎｅＣｅｌｌＳｅｒｕｍＲｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＩＣＳＲ）である。

一部の実施形態では、前述の方法は、ステップ（ｉ）前に、（ｉｖ）実体、例えば研究室、病院又は医療提供者から、新鮮な白血球アフェレーシス産物（或いは新鮮な全血液産物、新鮮な骨髄産物又は新鮮な腫瘍若しくは臓器生検若しくは切除（例えば、胸腺除去からの新鮮な産物）などの造血組織の代替供給源）を受け取るステップをさらに含む。

一部の実施形態では、前述の方法は、ステップ（ｉ）前に、（ｖ）新鮮な白血球アフェレーシス産物（或いは新鮮な全血液産物、新鮮な骨髄産物又は新鮮な腫瘍若しくは臓器生検若しくは切除（例えば、胸腺除去からの新鮮な産物）などの代替供給源）から、ステップ（ｉ）で接触される細胞（例えば、Ｔ細胞、例えばＣＤ８＋及び／又はＣＤ４＋Ｔ細胞）の集団を単離するステップをさらに含む。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｖ）の開始後の３５時間以内、例えばステップ（ｖ）の開始後の２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４又は３５時間以内、例えばステップ（ｖ）の開始後の３０時間以内に実施される。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団は、ステップ（ｖ）の終了時の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて、増殖されないか、又は５、１０、１５、２０、２５、３０、３５若しくは４０％以下、例えば１０％以下だけ増殖される。

一部の実施形態では、前述の方法は、ステップ（ｉ）前に、実体、例えば研究室、病院又は医療提供者から、白血球アフェレーシス産物（或いは全血液、骨髄又は腫瘍若しくは臓器生検若しくは切除（例えば、胸腺除去）から単離された凍結保存Ｔ細胞などの造血組織の代替供給源）から単離された凍結保存Ｔ細胞を受け取るステップをさらに含む。

一部の実施形態では、前述の方法は、ステップ（ｉ）前に、（ｉｖ）実体、例えば研究室、病院又は医療提供者から、凍結保存白血球アフェレーシス産物（或いは凍結保存全血液産物、凍結保存骨髄産物又は凍結保存腫瘍若しくは臓器生検若しくは切除（例えば、胸腺除去からの凍結保存産物）などの造血組織の代替供給源）を受け取るステップをさらに含む。

一部の実施形態では、前述の方法は、ステップ（ｉ）前に、（ｖ）凍結保存白血球アフェレーシス産物（或いは凍結保存全血液産物、凍結保存骨髄産物又は凍結保存腫瘍若しくは臓器生検若しくは切除（例えば、胸腺除去からの凍結保存産物）などの造血組織の代替供給源）から、ステップ（ｉ）で接触される細胞（例えば、Ｔ細胞、例えばＣＤ８＋及び／又はＣＤ４＋Ｔ細胞）の集団を単離するステップをさらに含む。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｖ）の開始後の３５時間以内、例えばステップ（ｖ）の開始後の２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４又は３５時間以内、例えばステップ（ｖ）の開始後の３０時間以内に実施される。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団は、ステップ（ｖ）の終了時の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて、増殖されないか、又は５、１０、１５、２０、２５、３０、３５若しくは４０％以下、例えば１０％以下だけ増殖される。

一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞は、その一部中のＣＡＲ発現レベルを測定する（例えば、その一部中の生存ＣＡＲ発現細胞のパーセンテージを測定する、例えばその一部中の生存抗ＢＣＭＡＣＡＲ発現細胞のパーセンテージを測定する）前に、約２～約４日、例えば約３日（例えば、採取後約７２時間）にわたって培養される。一部の実施形態では、ＣＡＲ発現の測定は、ステップ（ｉｉ）から約４日（例えば、９６時間）後に行われる。一部の実施形態では、ＣＡＲ発現レベルは、フローサイトメトリーによって測定される。

一部の実施形態では、本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を作製する方法を特徴とし、本方法は、（１）細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば凍結白血球アフェレーシス産物から単離されたＴ細胞）の集団を、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＬ－６又はそれらの組み合わせから選択されるサイトカインと接触させるステップ、（２）細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を、ＣＡＲをコードする核酸分子（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子）と接触させ、それにより核酸分子を含む細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を提供するステップ、及び（３）保存（例えば、凍結保存培地中の細胞の集団の再製剤化）又は投与のために細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を採取するステップを含み、（ａ）ステップ（２）は、ステップ（１）と一緒に、又はステップ（１）の開始後の５時間以内、例えばステップ（１）の開始後の１、２、３、４又は５時間以内に実施され；及びステップ（３）は、ステップ（１）の開始後の２６時間以内、例えばステップ（１）の開始後の２２、２３、２４又は２５時間以内、例えばステップ（１）の開始後の２４時間以内に実施されるか；又は（ｂ）ステップ（３）からの細胞の集団は、例えば、ステップ（１）の開始時の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて、増殖されないか、又は５、１０、１５、２０、２５、３０、３５若しくは４０％以下、例えば１０％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、ステップ（２）における核酸分子は、ＤＮＡ分子である。一部の実施形態では、ステップ（２）における核酸分子は、ＲＮＡ分子である。一部の実施形態では、ステップ（２）における核酸分子は、ウイルスベクター、例えばレンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター又はレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクター上にある。一部の実施形態では、ステップ（２）における核酸分子は、非ウイルスベクター上にある。一部の実施形態では、ステップ（２）における核酸分子は、プラスミド上にある。一部の実施形態では、ステップ（２）における核酸分子は、いずれのベクター上にもない。一部の実施形態では、ステップ（２）は、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を、ＣＡＲをコードする核酸分子を含むウイルスベクターで形質導入することを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子は、本明細書に開示される核酸分子である。一部の実施形態では、核酸分子は、第１ＣＡＲをコードする第１核酸配列と、第２ＣＡＲをコードする第２核酸配列とを含む。一部の実施形態では、第１及び第２核酸配列は、単一の核酸分子上に配置され、例えば、第１核酸配列及び第２核酸配列は、自己切断部位（例えば、Ｐ２Ａ部位、Ｔ２Ａ部位、Ｅ２Ａ部位又はＦ２Ａ部位）をコードする第３核酸配列によって隔てられる。一部の実施形態では、第１及び第２核酸配列は、個別の核酸分子上に配置される。一部の実施形態では、核酸分子は、ＣＡＲをコードする核酸配列を含み、ＣＡＲは、第１ＶＨ（ＶＨ１）、第１ＶＬ（ＶＬ１）、第２ＶＨ（ＶＨ２）、第２ＶＬ（ＶＬ２）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＶＨ１及びＶＬ１は、第１抗原に結合し、且つＶＨ２及びＶＬ２は、第２抗原に結合し、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＨ１－任意選択でリンカー１（「Ｌ１」）－ＶＨ２－任意選択でリンカー２（「Ｌ２」）－ＶＬ２－任意選択でリンカー３（「Ｌ３」）－ＶＬ１、ＶＨ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＬ１、ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＨ２－任意選択でＬ２－ＶＬ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１、ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１、ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２、ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２、ＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２；又はＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２で配列される。

一部の実施形態では、ステップ（２）は、ステップ（１）と一緒に実施される。一部の実施形態では、ステップ（２）は、ステップ（１）の開始後の５時間以内に実施される。一部の実施形態では、ステップ（２）は、ステップ（１）の開始後の１、２、３、４又は５時間以内に実施される。一部の実施形態では、ステップ（３）は、ステップ（１）の開始後の２６時間以内に実施される。一部の実施形態では、ステップ（３）は、ステップ（１）の開始後の２２、２３、２４又は２５時間以内に実施される。一部の実施形態では、ステップ（３）は、ステップ（１）の開始後の２４時間以内に実施される。

一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団は、例えば、ステップ（１）の開始時の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて増殖されない。一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団は、例えば、ステップ（１）の開始時の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５又は４０％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団は、例えば、ステップ（１）の開始時の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて１０％以下だけ増殖される。

一部の実施形態では、ステップ（１）は、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をＩＬ－２と接触させることを含む。一部の実施形態では、ステップ（１）は、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をＩＬ－７と接触させることを含む。一部の実施形態では、ステップ（１）は、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））と接触させることを含む。一部の実施形態では、ステップ（１）は、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をＩＬ－２１と接触させることを含む。一部の実施形態では、ステップ（１）は、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ）と接触させることを含む。一部の実施形態では、ステップ（１）は、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をＩＬ－２及びＩＬ－７と接触させることを含む。一部の実施形態では、ステップ（１）は、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をＩＬ－２及びＩＬ１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））と接触させることを含む。一部の実施形態では、ステップ（１）は、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をＩＬ－２及びＩＬ－２１と接触させることを含む。一部の実施形態では、ステップ（１）は、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をＩＬ－２及びＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ）と接触させることを含む。一部の実施形態では、ステップ（１）は、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をＩＬ－７及びＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））と接触させることを含む。一部の実施形態では、ステップ（１）は、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をＩＬ－７及びＩＬ－２１と接触させることを含む。一部の実施形態では、ステップ（１）は、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をＩＬ－７及びＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ）と接触させることを含む。一部の実施形態では、ステップ（１）は、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））及びＩＬ－２１と接触させることを含む。一部の実施形態では、ステップ（１）は、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））及びＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ）と接触させることを含む。一部の実施形態では、ステップ（１）は、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をＩＬ－２１及びＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ）と接触させることを含む。一部の実施形態では、ステップ（１）は、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をＩＬ－７、ＩＬ１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））及びＩＬ－２１と接触させることを含む。

一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団は、細胞の集団を例えば抗ＣＤ３抗体と接触させるステップをさらに含む以外には同様の方法によって作製された細胞と比べて、ＣＡＲ発現細胞の中でナイーブ細胞のより高いパーセンテージ（例えば、少なくとも１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５又は４０％高い）を示す。

一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のパーセンテージは、ステップ（１）の開始時の細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋細胞のパーセンテージと同じである。一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のパーセンテージは、ステップ（１）の開始時の細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋細胞のパーセンテージと３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２％以下だけ異なる。一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のパーセンテージは、ステップ（１）の開始時の細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋細胞のパーセンテージと５又は１０％以下だけ異なる。一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のパーセンテージは、ステップ（１）の開始時の細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋細胞のパーセンテージと比べて増加される。一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のパーセンテージは、ステップ（１）の開始時の細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋細胞のパーセンテージと比べて少なくとも１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０％だけ増加される。一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のパーセンテージは、ステップ（１）の開始時の細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋細胞のパーセンテージと比べて少なくとも１０又は２０％だけ増加される。

一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団は、ステップ（３）が、ステップ（１）の開始後、２６時間を超えて、例えばステップ（１）の開始後、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２日を超えてから実施される以外には同様の方法によって作製された細胞と比べて、ナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のより高いパーセンテージ（例えば、少なくとも１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５又は４０％高い）を示す。一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団は、ステップ（２）後且つステップ（３）前に細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をインビトロで３日超、例えば５、６、７、８又は９日にわたって増殖させるステップをさらに含む以外には同様の方法によって作製された細胞と比べて、ナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のより高いパーセンテージ（例えば、少なくとも１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５又は４０％高い）を示す。

一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージは、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージと同じである。一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージは、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージと３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２％以下だけ異なる。一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージは、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージと５又は１０％以下だけ異なる。一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージは、ステップ（１）の開始時の細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージと比べて減少される。一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージは、ステップ（１）の開始時の細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージと比べて少なくとも１０又は２０％だけ減少される。一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージは、ステップ（１）の開始時の細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージと比べて少なくとも１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０％だけ減少される。

一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団は、ステップ（３）が、ステップ（１）の開始後、２６時間を超えて、例えばステップ（１）の開始後、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２日を超えてから実施される以外には同様の方法によって作製された細胞と比べて、セントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のより低いパーセンテージ（例えば、少なくとも１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５又は４０％低い）を示す。一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団は、ステップ（２）後且つステップ（３）前に細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をインビトロで３日超、例えば５、６、７、８又は９日にわたって増殖させるステップをさらに含む以外には同様の方法によって作製された細胞と比べて、セントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のより低いパーセンテージ（例えば、少なくとも１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５又は４０％低い）を示す。

一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団は、インビボで投与された後、ステップ（３）が、ステップ（１）の開始後、２６時間を超えて、例えばステップ（１）の開始後、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２日を超えてから実施される以外には同様の方法によって作製された細胞と比べて、より長く持続するか又はより高い（例えば、少なくとも２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５若しくは９０％高い）レベルで増殖する。一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団は、インビボで投与された後、ステップ（２）後且つステップ（３）前に細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をインビトロで３日超、例えば５、６、７、８又は９日にわたって増殖させるステップをさらに含む以外には同様の方法によって作製された細胞と比べて、より長く持続するか又はより高い（例えば、少なくとも２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５若しくは９０％高い）レベルで増殖する。

一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団は、ステップ（１）の開始時の細胞の集団と比べて、例えば生存細胞の数によって評価されて増殖されない。一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団は、ステップ（１）の開始時の細胞の集団と比べて、例えば生存細胞の数によって評価されて５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５又は４０％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団は、ステップ（１）の開始時の細胞の集団と比べて、例えば生存細胞の数によって評価されて１０％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団中の生存細胞の数は、例えば、生存細胞の数によって評価されて、ステップ（１）の開始時の細胞中の生存細胞の数から減少する。

一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団は、ステップ（１）の開始時の細胞の集団と比べて、例えば生存細胞の数によって評価されて増殖されない。一部の実施形態では、ステップ（３）からの細胞の集団は、ステップ（１）の開始時の細胞の集団と比べて、０．５、１、１．５又は２時間未満、例えば１又は１．５時間未満だけ増殖される。

一部の実施形態では、細胞の集団は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又はそれらの細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤とインビトロで接触されないか、又は接触される場合、接触させるステップは、２時間未満、例えば１若しくは１．５時間以下である。一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤は、ＣＤ３（例えば、抗ＣＤ３抗体）を刺激する薬剤である。一部の実施形態では、共刺激分子を刺激する薬剤は、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＴＩＭ１、ＣＤ２、ＣＤ２２６又はそれらの任意の組み合わせを刺激する薬剤である。一部の実施形態では、共刺激分子を刺激する薬剤は、ＣＤ２８を刺激する薬剤である。一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤は、抗体（例えば、単一ドメイン抗体（例えば、重鎖可変ドメイン抗体）、ペプチボディ、Ｆａｂフラグメント若しくはｓｃＦｖ）、小分子又はリガンド（例えば、天然に存在するリガンド、組換えリガンド若しくはキメラリガンド）から選択される。

一部の実施形態では、ステップ（１）及び／又は（２）は、５、４、３、２、１又は０％以下の血清を含む細胞培地中で実施される。一部の実施形態では、ステップ（１）及び／又は（２）は、２％以下の血清を含む細胞培地中で実施される。一部の実施形態では、ステップ（１）及び／又は（２）は、約２％の血清を含む細胞培地中で実施される。一部の実施形態では、ステップ（１）及び／又は（２）は、ＬＳＤ１阻害剤又はＭＡＬＴ１阻害剤を含む細胞培地中で実施される。一部の実施形態では、ステップ（１）は、５、４、３、２、１又は０％以下の血清を含む細胞培地中で実施される。一部の実施形態では、ステップ（１）は、２％以下の血清を含む細胞培地中で実施される。一部の実施形態では、ステップ（１）は、約２％の血清を含む細胞培地中で実施される。一部の実施形態では、ステップ（２）は、５、４、３、２、１又は０％以下の血清を含む細胞培地中で実施される。一部の実施形態では、ステップ（２）は、２％以下の血清を含む細胞培地中で実施される。一部の実施形態では、ステップ（２）は、約２％の血清を含む細胞培地中で実施される。一部の実施形態では、ステップ（１）は、ＬＳＤ１阻害剤又はＭＡＬＴ１阻害剤を含む細胞培地中で実施される。一部の実施形態では、ステップ（２）は、ＬＳＤ１阻害剤又はＭＡＬＴ１阻害剤を含む細胞培地中で実施される。

一部の実施形態では、前述の方法は、ステップ（ｉ）前に、（ｖ）新鮮な白血球アフェレーシス産物（或いは新鮮な全血液産物、新鮮な骨髄産物又は新鮮な腫瘍若しくは臓器生検若しくは切除（例えば、胸腺除去からの新鮮な産物）などの造血組織の代替供給源）から、ステップ（ｉ）で接触される細胞（例えば、Ｔ細胞、例えばＣＤ８＋及び／又はＣＤ４＋Ｔ細胞）の集団を単離するステップをさらに含む。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｖ）の開始後の３５時間以内、例えばステップ（ｖ）の開始後の２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４又は３５時間以内、例えばステップ（ｖ）の開始後の３０時間以内に実施される。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団は、ステップ（ｖ）の終了時の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて、増殖されないか、又は５、１０、１５、２０、２５、３０、３５若しくは４０％以下、例えば１０％以下だけ増殖される。

一部の実施形態では、前述の方法は、ステップ（ｉ）前に、実体、例えば研究室、病院又は医療提供者から、白血球アフェレーシス産物（或いは全血液、骨髄又は腫瘍若しくは臓器生検若しくは切除（例えば、胸腺除去）から単離された凍結保存Ｔ細胞などの代替供給源）から単離された凍結保存Ｔ細胞を受け取るステップをさらに含む。

一部の実施形態では、ステップ（ｉ）又はステップ（１）の開始時の細胞の集団は、ＩＬ６Ｒ発現細胞（例えば、ＩＬ６Ｒα及び／又はＩＬ６Ｒβについて陽性の細胞）について濃縮されている。一部の実施形態では、ステップ（ｉ）又はステップ（１）の開始時の細胞の集団は、４０、４５、５０、５５、６０、６５若しくは７０％以上のＩＬ６Ｒ発現細胞（例えば、ＩＬ６Ｒα及び／又はＩＬ６Ｒβについて陽性の細胞）を含む。

一部の実施形態では、ステップ（ｉ）及び（ｉｉ）又はステップ（１）及び（２）は、ＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））を含む細胞培地中で実施される。一部の実施形態では、ＩＬ－１５は、細胞の集団が例えば１０、１５、２０又は２５日後に増殖する能力を増加させる。一部の実施形態では、ＩＬ－１５は、細胞の集団中のＩＬ６Ｒβ発現細胞のパーセンテージを増加させる。

前述した方法の一部の実施形態では、本方法は、閉鎖系において実施される。一部の実施形態では、Ｔ細胞分離、活性化、形質導入、インキュベーション及び洗浄は、全て閉鎖系において実施される。前述した方法の一部の実施形態では、本方法は、個別の装置内で実施される。一部の実施形態では、Ｔ細胞分離、活性化及び形質導入、インキュベーション及び洗浄は、個別の装置内で実施される。

前述した方法の一部の実施形態では、本方法は、形質導入効率を高めるためにアジュバント又は形質導入促進試薬を細胞培地に添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバント又は形質導入試薬は、カチオン性ポリマーを含む。一部の実施形態では、アジュバント又は形質導入促進試薬は、ＬｅｎｔｉＢＯＯＳＴ（商標）（ＳｉｒｉｏｎＢｉｏｔｅｃｈ）、ベクトフシン（ｖｅｃｔｏｆｕｓｉｎ）－１、Ｆ１０８、臭化ヘキサジメトリン（Ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ）、ＰＥＡ、ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ６８、ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ１２７、Ｓｙｎｐｅｒｏｎｉｃ又はＬｅｎｔｉＴｒａｎｓ（商標）から選択される。一部の実施形態では、アジュバントは、ＬｅｎｔｉＢＯＯＳＴ（商標）（ＳｉｒｉｏｎＢｉｏｔｅｃｈ）である。

前述した方法の一部の実施形態では、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団をウイルスベクターで形質導入するステップは、形質導入効率が高められるような条件下で細胞の集団及びウイルスベクターを遠心力に付すことを含む。一実施形態では、細胞は、スピノキュレーションによって形質導入される。

前述した方法の一部の実施形態では、細胞（例えば、Ｔ細胞）は、底部にガス透過膜を含む細胞培養フラスコ内で活性化され、形質導入され、このガス透過膜は、ガス交換を実質的に損なうことなく大きい培地量を支持する。一部の実施形態では、細胞増殖は、対流による栄養素へのアクセス、例えば中断しないアクセスによって達成される。

前述した方法の一部の実施形態では、ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＢＣＭＡ、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、Ｔｎ抗原、ｓＴｎ抗原、Ｔｎ－Ｏ－グリコペプチド、ｓＴｎ－Ｏ－グリコペプチド、ＰＳＭＡ、ＣＤ９７、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、レグマン、ＧＤ３、ＣＤ１７１、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－β、ＳＳＥＡ－４、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ（例えば、ＥＲＢＢ２）、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、エフリンＢ２、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｓＬｅ、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体β、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＦＡＰ、レグマイン、ＨＰＶＥ６若しくはＥ７、ＭＬ－ＩＡＰ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、Ｆｏｓ関連抗原、好中球エラスターゼ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、精子タンパク質１７、βヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＡＦＰ、チログロブリン、ＰＬＡＣ１、グロボＨ、ＲＡＧＥ１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、腸カルボキシエステラーゼ、ｍｕｔｈｓｐ７０－２、ＮＡ－１７、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＧＰＲ２０、Ｌｙ６ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＧＦＲα４又はＭＨＣに提示されるこれらの抗原のいずれかのペプチドから選択される抗原に結合する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、本明細書に開示されるＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、ｓｃＦｖ又はＣＡＲ配列を含む。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、ＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨ及びＶＬは、リンカーによって連結され、任意選択で、リンカーは、配列番号６３又は１０４のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のα、β又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７及びＣＤ１５４から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８の膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、核酸分子は、膜貫通ドメインをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号１７の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。

一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、ヒンジ領域によって膜貫通ドメインに連結される。一部の実施形態では、ヒンジ領域は、配列番号２、３若しくは４のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、核酸分子は、ヒンジ領域をコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号１３、１４若しくは１５の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。

一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＦｃεＲＩ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２又はＣＤ６６ｄに由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζに由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、配列番号９又は１０のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、核酸分子は、一次シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号２０若しくは２１の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。

一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７－Ｈ３、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２８－ＯＸ４０、ＣＤ２８－４－１ＢＢ又はＣＤ８３と特異的に結合するリガンドを含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢに由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、核酸分子は、共刺激シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号１８の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。

一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢに由来する機能性シグナル伝達ドメインと、ＣＤ３ζに由来する機能性シグナル伝達ドメインとを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）と、配列番号９若しくは１０のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）とを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列と、配列番号９又は１０のアミノ酸配列とを含む。

一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１のアミノ酸配列を含むリーダー配列をさらに含む。

一部の実施形態では、本発明は、前述した方法のいずれか又は本明細書に開示されるいずれか他の方法によって作製されるＣＡＲ発現細胞（例えば、自家又は同種異系ＣＡＲ発現Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の集団を特徴とする。一部の実施形態では、本明細書に開示のＣＡＲ発現細胞の集団と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物が本明細書において提供される。

一部の実施形態では、集団は、
（ａ）抗ＢＣＭＡＣＡＲを含むが、抗ＣＤ１９ＣＡＲを含まない第１細胞集団；
（ｂ）抗ＣＤ１９ＣＡＲを含むが、抗ＢＣＭＡＣＡＲを含まない第２細胞集団；及び
（ｃ）抗ＢＣＭＡＣＡＲと抗ＣＤ１９ＣＡＲとの両方を含む第３細胞集団
を含む。

一部の実施形態では、
（ｉ）第２及び第３集団を合わせた生存細胞の総数は、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約１１０％以下（例えば、約１０５％、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％又はそれ未満以下）であり；
（ｉｉ）第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数は、第２及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約９０％以上（例えば、約１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％、５００％、７５０％、１０００％、２０００％、５０００、１００００％又はそれを超えるもの以上）であり；及び／又は
（ｉｉｉ）第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数は、集団中の生存細胞の総数の約５％以上（例えば、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％以上）である。

一部の実施形態では、集団は、ＣＡＲを含まない細胞の第４集団をさらに含む。

一部の実施形態では、
（ｉ）第２集団の生存細胞の総数は、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約１１０％以下（例えば、約１０５％、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％又はそれ未満以下）であり；
（ｉｉ）第２集団の生存細胞の総数は、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約４５％～約５０％（例えば、約４７％）以下；約５０％～約５５％（例えば、約５３％）以下；約６０％～約６５％（例えば、約６３％）以下；又は約８０％～約８５％（例えば、約８２％）以下である。

一部の実施形態では、本明細書記載の方法を用いて製造される最終ＣＡＲ細胞産物において、ビーズ（例えば、ＣＤ４ビーズ、ＣＤ８ビーズ及び／又はＴｒａｎｓＡＣＴビーズ）の総量は、製造プロセス中に添加されるビーズの総量の０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４又は０．５％以下である。

一部の実施形態では、本発明は、以下の特徴の１つ以上を含むＣＡＲ発現細胞（例えば、自家又は同種異系ＣＡＲ発現Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の集団を特徴とする：（ａ）ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋細胞のパーセンテージと比べて、ほぼ同じパーセンテージのナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋細胞；（ｂ）ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋細胞のパーセンテージと比べて、ナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋細胞の約５％～約１０％以内の変化；（ｃ）ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋細胞のパーセンテージと比べて、増加された、例えば少なくとも１．２、１．４、１．６、１．８、２．０、２．２、２．４、２．６、２．８又は３倍増加されたパーセンテージのナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋細胞；（ｄ）ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、ほぼ同じパーセンテージのセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞；（ｅ）ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、セントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞の約５％～約１０％以内の変化；（ｆ）ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、減少された、例えば少なくとも２０、２５、３０、３５、４０、４５又は５０％減少されたパーセンテージのセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞；（ｇ）ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のステムメモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、ほぼ同じパーセンテージのステムメモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞；（ｈ）ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のステムメモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、ステムメモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の約５％～約１０％以内の変化；又は（ｉ）ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のステムメモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、増加されたパーセンテージのステムメモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞。

一部の実施形態では、本発明は、ＣＡＲ発現細胞（例えば、自家又は同種異系ＣＡＲ発現Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の集団を特徴とし、ここで、（ａ）細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＳＣＭ）は、ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＳＣＭ）とほぼ同じであるか又は約２５、５０、７５、１００若しくは１２５％以下だけ異なる（例えば、それ以下だけ増加される）か；（ｂ）細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（ＵｐＴｒｅｇｖｓ．ＤｏｗｎＴｅｆｆ）は、ＣＡＲを発現するように操作される前の細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（ＵｐＴｒｅｇｖｓ．ＤｏｗｎＴｅｆｆ）とほぼ同じであるか又は約２５、５０、１００、１５０若しくは２００％以下だけ異なる（例えば、それ以下だけ増加される）か；（ｃ）細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｄｏｗｎｓｔｅｍｎｅｓｓ）は、ＣＡＲを発現するように操作される前の細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｄｏｗｎｓｔｅｍｎｅｓｓ）とほぼ同じであるか又は約２５、５０、１００、１５０、２００若しくは２５０％以下だけ異なる（例えば、それ以下だけ増加される）か；（ｄ）細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｕｐｈｙｐｏｘｉａ）は、ＣＡＲを発現するように操作される前の細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｕｐｈｙｐｏｘｉａ）とほぼ同じであるか又は約１２５、１５０、１７５若しくは２００％以下だけ異なる（例えば、それ以下だけ増加される）か；又は（ｅ）細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｕｐａｕｔｏｐｈａｇｙ）は、ＣＡＲを発現するように操作される前の細胞の集団のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値（Ｕｐａｕｔｏｐｈａｇｙ）とほぼ同じであるか又は約１８０、１９０、２００若しくは２１０％以下だけ異なる（例えば、それ以下だけ増加される）。

一部の実施形態では、本発明は、対象の免疫応答を増加させる方法を特徴とし、これは、本明細書に開示されるＣＡＲ発現細胞の集団又は本明細書に開示される医薬組成物を対象に投与し、それにより対象の免疫応答を増加させるステップを含む。

一部の実施形態では、対象の癌を処置する方法が開示され、これは、本明細書に開示されるＣＡＲ発現細胞の集団又は本明細書に開示される医薬組成物を対象に投与し、それにより対象の癌を処置するステップを含む。一部の実施形態では、癌は、例えば、中皮腫、悪性胸膜中皮腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、扁平上皮癌、大細胞肺癌、膵臓癌、膵管腺癌、食道腺癌、乳癌、膠芽腫、卵巣癌、大腸癌、前立腺癌、子宮頸癌、皮膚癌、黒色腫、腎癌、肝臓癌、脳腫瘍、胸腺腫、肉腫、癌腫、子宮癌、腎臓癌、消化管癌、尿路上皮癌、咽頭癌、頭部及び頸部癌、直腸癌、食道癌若しくは膀胱癌の１つ以上から選択される固形癌又はその転移である。一部の実施形態では、癌は、例えば、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、多発性骨髄腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（ＢＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（ＴＡＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性炎症を伴うＤＬＢＣＬ、慢性骨髄性白血病、骨髄増殖性腫瘍、濾胞性リンパ腫、小児性濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型若しくは大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫（粘膜関連リンパ組織型節外性濾胞辺縁帯リンパ腫）、辺縁帯リンパ腫、骨髄形成異常、骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、脾辺縁帯リンパ腫、脾リンパ腫／白血病、脾臓びまん性赤脾髄小細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ヘアリー細胞白血病－変異型、リンパ形質細胞性リンパ腫、Ｈ鎖病、プラズマ細胞骨髄腫、孤立性骨形質細胞腫、骨外性形質細胞腫、節性辺縁帯リンパ腫、小児性節性辺縁帯リンパ腫、原発性皮膚濾胞中心リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、原発性縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ＋大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性キャッスルマン病に発生する大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）又は分類不能なリンパ腫から選択される液性癌である。

一部の実施形態では、本方法は、第２の治療薬を対象に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、第２の治療薬は、抗癌治療薬、例えば化学療法薬、放射線療法又は免疫調節療法である。一部の実施形態では、第２の治療薬は、ＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））である。

一部の実施形態では、本明細書に開示される方法によって作製される単離細胞又は細胞の集団であって、
（ａ）抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、第１膜貫通ドメイン及び第１細胞内シグナル伝達ドメインを含む第１ＣＡＲをコードする第１核酸分子であって、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号８６、８７、８８、９５、９６及び９７のアミノ酸配列を含む、第１核酸分子と；
（ｂ）抗ＣＤ１９結合ドメイン、第２膜貫通ドメイン及び第２細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２ＣＡＲをコードする第２核酸分子であって、抗ＣＤ１９結合ドメインは、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２及びＨＣＣＤＲ３を含むＶＨと、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３を含むＶＬとを含み、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２９５、３０４及び２９７～３００のアミノ酸配列を含む、第２核酸分子と
を含む単離細胞又は細胞の集団が本明細書に提供される。

一部の実施形態では、単離細胞であって、
（ａ）抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、第１膜貫通ドメイン及び第１細胞内シグナル伝達ドメインを含む第１ＣＡＲをコードする第１核酸分子であって、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号８６、８７、８８、９５、９６及び９７のアミノ酸配列を含む、第１核酸分子と；
（ｂ）抗ＣＤ１９結合ドメイン、第２膜貫通ドメイン及び第２細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２ＣＡＲをコードする第２核酸分子であって、抗ＣＤ１９結合ドメインは、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２及びＨＣＣＤＲ３を含むＶＨと、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３を含むＶＬとを含み、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２９５、３０４及び２９７～３００のアミノ酸配列を含む、第２核酸分子と
を含む単離細胞が本明細書に提供される。

一部の実施形態では、抗ＢＣＭＡ結合ドメインのＶＨ及びＶＬは、それぞれ配列番号９３及び１０２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９結合ドメインのＶＨ及びＶＬは、それぞれ配列番号２５０及び２５１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＢＣＭＡ結合ドメインのＶＨ及びＶＬは、それぞれ配列番号９３及び１０２のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ１９結合ドメインのＶＨ及びＶＬは、それぞれ配列番号２５０及び２５１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号２９３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号２９３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１ＣＡＲは、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第２ＣＡＲは、配列番号２２５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１ＣＡＲは、配列番号１０７のアミノ酸配列を含み；第２ＣＡＲは、配列番号２２５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１ＣＡＲは、配列番号２５９、２５８又は４１６の核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、第２ＣＡＲは、配列番号４１７、３５５、３５６又は３５４の核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、第１ＣＡＲは、配列番号２５９、２５８又は４１６の核酸配列によってコードされ、及び第２ＣＡＲは、配列番号４１７、３５５、３５６又は３５４の核酸配列によってコードされる。

一部の実施形態では、本明細書に記載される細胞又は細胞の集団を含む医薬組成物が本明細書に提供される。

一部の実施形態では、対象において抗腫瘍免疫を提供するか、又はＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法が本明細書に提供され、これは、有効量の、本明細書に記載される細胞若しくは細胞集団又は医薬組成物を対象に投与することを含む。

一部の実施形態では、ＢＣＭＡ発現に関連する疾患は、血液癌又は固形癌、例えば、本明細書に記載される血液癌又は固形癌である。

一部の実施形態では、疾患は、急性白血病、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型若しくは大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、前立腺癌（例えば、去勢抵抗性若しくは治療抵抗性前立腺癌又は転移性前立腺癌）、膵臓癌、肺癌、形質細胞増殖異常症（例えば、無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無症候性骨髄腫）、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス若しくはＰＯＥＭＳ症候群（また、クロウ・深瀬症候群、高月病及びＰＥＰ症候群としても知られている）又はそれらの組み合わせから選択される。

一部の実施形態では、疾患は、多発性骨髄腫である。

本明細書に記載のものと同様の又は均等な方法及び材料を本発明の実施又は試験に使用することができるが、適切な方法及び材料を以下に記載する。本明細書に記載の全ての刊行物、特許出願、特許及び他の参照文献（例えば、配列データベース参照番号）は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。例えば、本明細書で（例えば、本明細書の任意の表において）言及される全てのＧｅｎＢａｎｋ、Ｕｎｉｇｅｎｅ及びＥｎｔｒｅｚ配列は、参照により組み込まれる。１つの遺伝子又はタンパク質が複数の配列受託番号を参照する場合、全ての配列変異体が包含される。

さらに、材料、方法及び例は、単なる例示であり、限定を意図するものではない。見出し、副見出し又は番号若しくは文字が振られた要素、例えば（ａ）、（ｂ）、（ｉ）等は、単に読み易いように提供される。本明細書で見出し又は番号若しくは文字が振られた要素を使用しても、ステップ若しくは要素がアルファベット順に実施される必要はないか、又はステップ若しくは要素が必ず互いに別個のものである必要はない。本発明の他の特徴、目的及び利点は、説明及び図面並びに特許請求の範囲から明らかとなるであろう。

自動化システムを用いたＪｕｒｋａｔＮＦＡＴルシフェラーゼ（ＪＮＬ）リポーターアッセイを用いて、ＢＣＭＡＣＡＲの機能を試験した。ＪＮＬリポーターアッセイでＣＡＲクローンを抗原依存性活性について評価した。表示したＣＡＲクローンを含有するＪＮＬ細胞又は非形質導入ＪＮＬ細胞（ＵＴＤ）を培地のみと一緒に（図１Ｇ及び１Ｈ）又は標的細胞株（ＢＣＭＡ陽性細胞株としてのＫＭＳ１１（図１Ａ及び１Ｃ）並びにＢＣＭＡ陰性細胞株としてのＮＡＬＭ６（図１Ｅ及び１Ｆ））と一緒に、様々な比で共培養し、ルシフェラーゼ活性をルミネセンス強度として測定した。ルミネセンス強度が、抗原発現細胞の存在下のＵＴＤ細胞のレベルの２倍を超えれば、クローンを活性とみなした。ルミネセンス読出しは、ＣＡＲ刺激の直接の測定値である。図１Ｂ及び図１Ｄは、ヒト組換え（ｒ）ＢＣＭＡ＿Ｆｃ－ＡＦ６４７を用いたフローサイトメトリーにより検出されたＪＮＬ細胞でのＢＣＭＡＣＡＲの発現レベルを示すグラフである。１×又は２×プラットフォームは、ウイルス産生のために接種された４０，０００個のＨ２９３細胞又は８０，０００個のＨ２９３を示した。同上。同上。同上。初代ヒトＴ細胞上のＢＣＭＡＣＡＲの発現レベル。ヒトｒＢＣＭＡ＿Ｆｃ－ＡＦ６４７試薬で細胞を染色した後、フローサイトメトリーによりアッセイした。細胞培養の第５日及び第９日についてＣＡＲ＋細胞及びＭＦＩのパーセンテージをグラフに示す。データを表２７にまとめるが、これは、それぞれのＣＡＲについて達成されたウイルス力価を含む。表示されるＣＡＲを発現するＴ細胞が細胞溶解及びサイトカイン産生を媒介する能力を、ホタルルシフェラーゼ（ＫＭＳ１１－ｌｕｃ）を発現するＫＭＳ１１標的細胞株に対して評価した。図３Ａ：表示のＥ：Ｔ比で、ＣＡＲＴ細胞をＫＭＳ１１－ｌｕｃ標的細胞と共培養した。細胞殺傷率（％）は、エフェクターＴ細胞を含まない標的細胞（対照）と、エフェクターＴ細胞を含む標的細胞（実験）との間のルシフェラーゼの差によって決定し、対照のパーセントとして表した。ＵＴＤは、非形質導入Ｔ細胞を示す。図３Ｂ：ＢＣＭＡ陰性株ＮＡＬＭ６についてバックグラウンド殺傷を観察した。図３Ｃ：２．５のＥ：Ｔ比で、これらの共培養系から２４ｈ時点で収集した上清中のＭＳＤによりＩＦＮγを測定した。データは全て、平均＋／－標準偏差として表される。同上。同上。ＭＯＩ＝５で形質導入したＴ細胞におけるＣＡＲ発現（ウイルス力価は、ＳｕｐＴ１細胞に発現された第１ＣＡＲにより決定される）。図４Ａは、様々な構築物のＣＡＲ１９（％）、ＢＣＭＡＣＡＲ（％）、二重陽性（％）、ＣＡＲ１９のみ（％）及びＢＣＭＡ－ＣＡＲのみ（％）をまとめた表である。図４Ｂは、表面ＢＣＭＡＣＡＲ発現（ｘ軸）及び表面ＣＤ１９ＣＡＲ発現（ｙ軸）についての細胞の染色を示す一連のフローサイトメトリープロットである。図４Ｃは、ＢＣＭＡＣＡＲＭＦＩ（上のパネル）及びＣＤ１９ＣＡＲＭＦＩ（下のパネル）を示す一対の棒グラフである。同上。同上。第８日のＣＡＲＴ細胞を用いたインビトロ殺傷アッセイ。図５Ａ～５Ｃは、表示のＥ：Ｔ比でそれぞれＢＣＭＡ陽性ＫＭＳ１１細胞、ＣＤ１９陽性Ｎａｌｍ６細胞又はＢＣＭＡ／ＣＤ１９陰性細胞に対する殺傷率（％）を示す一連のグラフである。第８日のＣＡＲＴ細胞を用いたインビトロサイトカイン産生。図６Ａ～６Ｄは、ＢＣＭＡ陽性ＫＭＳ１１細胞又はＣＤ１９陽性Ｎａｌｍ６細胞と共培養したとき、ＣＡＲＴ細胞のＩＦＮγ産生を示す一連の棒グラフである。ＡＲＭプロセスを用いて製造された細胞の個別のＣＡＲ発現。図７Ａ～７Ｂは、ＡＲＭプロセスを用いて製造されたヒト初代Ｔ細胞の形質導入から２４ｈ又は７２ｈ後の抗ＢＣＭＡ及び抗ＣＤ１９ＣＡＲ両方の発現パターンを示すヒストグラムである。これらの試験は、上流ＣＡＲの発現により決定されたＳｕｐＴ１力価に基づき、１のＭＯＩを使用した。図７Ａ及び７Ｂの各々において、左側部分は、ｒＢＣＭＡ－Ｆｃを用いた染色を示すヒストグラムのパネルであり、右側部分は、ＣＤ１９ＣＡＲに結合する抗イディオタイプ抗体を用いた染色を示すヒストグラムのパネルである。構築物＃２４４（「ｃ２４４」）及び＃２４５（「ｃ２４５」）は、それぞれモノ抗ＣＤ１９ＣＡＲ及び抗ＢＣＭＡＣＡＲである。図７Ｃは、上流ＣＡＲ力価に基づいて１のＭＯＩを用いた、ヒト初代Ｔ細胞の形質導入から７２ｈ後の抗ＢＣＭＡ及び抗ＣＤ１９ＣＡＲを示すフローサイトメトリープロットのパネルである。同上。同上。３つのマウスモデル：ルシフェラーゼリポーター遺伝子（ＫＭＳ１１－Ｌｕｃ）を発現する播種性ＫＭＳ－１１（ＢＣＭＡ＋ＣＤ１９－）多発性骨髄腫モデル（図８Ａ）、Ｎａｌｍ６－Ｌｕｃ（ＣＤ１９＋ＢＣＭＡ－）異種移植マウスモデル（図８Ｂ）及び５％ＮＡＬＭ６－Ｌｕｃ細胞を含む９５％ＫＭＳ－ｌｕｃの混合モデルを用いた構築物＃２３６（「ｃ２３６」）及び構築物＃２３８（「ｃ２３８」）のインビボ抗腫瘍活性。腫瘍負荷は、全身体発光（ｐ／ｓ）として表し、平均腫瘍負荷＋ＳＥＭとして示す。腫瘍接種後の第７日又は第８日に、表３０に示すように、指定量のＢＣＭＡＣＡＲ＋又はＣＤ１９ＣＡＲ＋Ｔ細胞（生存ＣＡＲ＋Ｔ細胞の概数）のｃ２３６及びｃ２３８で処理した。ビヒクル（ＰＢＳ）及び非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）を陰性対照として使用した。モノ抗ＢＣＭＡＣＡＲＰＩ６１及びモノ抗ＣＤ１９ＣＡＲＣＴＬ１１９も対照として使用した。移植片対宿主反応により誘発された体重減少。体重を経時的に測定することにより、Ｘ－ＧｖＨＤについての読出しとして、全てのマウスを体重減少について個別にモニターした。体重（ＢＷＴ）は、ベースラインからの変化率（％）としてプロットする。注入から４週間後まで、末梢血ＣＤ３＋Ｔ細胞のインビボ拡大をフローサイトメトリーにより分析した。注入から４週間後まで、ＣＡＲ＋Ｔ細胞（ＢＣＭＡＣＡＲ＋パーセンテージ）のインビボ拡大をフローサイトメトリーにより分析した。注入から４週間後まで、ＣＡＲ＋Ｔ細胞（二重ＣＡＲ＋細胞数）のインビボ拡大をフローサイトメトリーにより分析した。インビボ血漿ＩＦＮγ動態。ｃ２３６及びｃ２３８で処理した全３つのマウスモデル並びにそれぞれのＣＡＲ－Ｔ用量のモノＣＡＲ対照からの血漿ＩＦＮγレベルをグラフにプロットした。マウスを採血し、ＭＳＤアッセイにより血漿サイトカインを測定した。多発性骨髄腫異種移植マウスモデルにおいて２３６及びｃ２３８を用いて作製した細胞のインビボ有効性及び細胞拡大。図１４Ａ：ＮＳＧマウスに、ルシフェラーゼリポーター遺伝子を発現した多発性骨髄腫株ＫＭＳ１１を注射した。腫瘍負荷は、全身体発光（ｐ／ｃ）として表し、平均腫瘍負荷＋ＳＥＭとして示す。腫瘍接種後の第８日に、マウスを、９ｅ４ＢＣＭＡ－ＣＤ１９二重ＣＡＲ＋Ｔ細胞用量（生存ＣＡＲ＋Ｔ細胞の概数）のｃ２３６及びｃ２３８で処理した。ビヒクル（ＰＢＳ）及び非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）を陰性対照として使用した。図１４Ｂ：注入から４週間後まで、末梢血ＣＡＲ＋Ｔ細胞の拡大をフローサイトメトリーにより分析した。ｃ２３６及びｃ２３８ＣＡＲ－ＴＲｘ群において二重抗ＢＣＭＡ及びＣＤ１９ＣＡＲ＋Ｔ細胞拡大を観察した。ＡＲＭプロセスを用いて製造された細胞のＣＡＲ発現。ＡＲＭプロセスを用いて製造されたヒト初代Ｔ細胞へのウイルス添加から９６ｈ後（図１５Ａ）及び７日後（図１５Ｂ）の二重陽性抗ＢＣＭＡ及び抗ＣＤ１９ＣＡＲの発現を示すフローサイトメトリープロット。これらの試験では、ＣＤ１９ＣＡＲに結合する抗イディオタイプ抗体及びＰＩ６１又はＲ１Ｇ５に結合する組換えＢＣＭＡ＿Ｆｃ（ＡＦ６４７）により検出される二重ＣＡＲ（ＰＩ６１又はＲ１Ｇ５クローン及びＣＴＬ１１９について陽性）の発現により決定されたＳｕｐＴ１力価に基づき、２のＭＯＩを使用した。モノ抗ＢＣＭＡＣＡＲＴＰＩ６１及びＲ１Ｇ５並びにモノ抗ＣＤ１９ＣＡＲＣＴＬ１１９も対照として使用した。同上。５のＭＯＩを用いるＴＭプロセスによる第７日のＣＡＲ発現。ＴＭプロセスを用いて製造されたヒト初代Ｔ細胞へのウイルス添加後第７日の二重陽性抗ＢＣＭＡ及び抗ＣＤ１９ＣＡＲの発現を示すフローサイトメトリープロット。これらの試験では、ＣＤ１９ＣＡＲに結合する抗イディオタイプ抗体及びＰＩ６１又はＲ１Ｇ５に結合する組換えＢＣＭＡ＿Ｆｃ（ＡＦ６４７）により検出される二重ＣＡＲ（ＰＩ６１又はＲ１Ｇ５クローン及びＣＴＬ１１９について陽性）の発現により決定されたＳｕｐＴ１力価に基づき、５のＭＯＩを使用した。抗ＢＣＭＡＣＡＲ及びＣＤ１９ＣＡＲダイアボディ構築物で操作されたＴ細胞によるＢＣＭＡ－又はＣＤ１９発現腫瘍細胞のインビトロでの特異的殺傷。ＰＩ６１／ＣＴＬ１１９クローンを発現するＴ細胞が細胞溶解を媒介する能力を、ＫＭＳ１１－Ｌｕｃ又はＮＡＬＭ６－Ｌｕｃ標的細胞株に対して評価した。ＣＡＲＴ細胞をＢＣＭＡ＋ＫＭＳ－１１－ｌｕｃ又はＢＣＭＡ－ＮＡＬＭ６－Ｌｕｃ標的細胞と表示のＥ：Ｔ比で２０時間共培養し、細胞殺傷率（％）（エフェクターＴ細胞を含まない標的細胞（対照）と、エフェクターＴ細胞を含む標的細胞（実験）との間のルシフェラーゼシグナルの差によって決定される）を標的細胞溶解の代わりとして測定し、対照のパーセントとして表した。ＵＴＤは、非形質導入Ｔ細胞を示す。モノＰＩ６１又はＣＴＬ１１９も対照として使用した。ＢＣＭＡ－又はＣＤ１９発現腫瘍細胞に応答する、抗ＢＣＭＡＣＡＲ及びＣＤ１９ＣＡＲダイアボディ構築物で操作されたＴ細胞のサイトカイン産生。１．２５：１の比での殺傷アッセイ共培養からの上清中のＭＳＤによりＩＦＮγ（図１８Ａ）及びＩＬ－２（図１８Ｂ）を測定した。第４日の二重ＣＡＲ陽性集団、ＢＣＭＡＣＡＲ陽性集団及びＣＤ１９ＣＡＲのパーセンテージ。ＣＤ１９ＣＡＲに結合するｒＢＣＭＡ－Ｆｃ及び抗イディオタイプ抗体による細胞の染色を示すフローサイトメトリープロット。表示される条件下での第４日及び第７日の総ＣＡＲ陽性集団のパーセンテージ。表示される条件下での第０、１、３及び７日の細胞数（左側パネル）及び生存細胞のパーセンテージ（左側パネル）。インプット細胞（図２３Ａ）、第１日細胞（図２３Ｂ）及び第９日細胞（図２３Ｃ）についての単一細胞ＲＮＡ－ｓｅｑデータ。「ｎＧｅｎｅ」グラフは、１細胞当たりの発現細胞の数を示す。「ｎＵＭＩ」グラフは、１細胞当たりのユニークな分子識別子（ＵＭＩ）の数を示す。インプット細胞（図２４Ａ）、第１日細胞（図２４Ｂ）及び第９日細胞（図２４Ｃ）を増殖シグネチャーについて比較するＴ－分布型確率的近傍埋め込み法（ＴＳＮＥ）プロットであり、増殖シグネチャーは、遺伝子ＣＣＮＢ１、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＥ１、ＰＬＫ１及びＭＫＩ６７の発現に基づいて決定した。各点は、そのサンプル中の細胞を表す。薄いグレーとして示される細胞は、増殖遺伝子を発現しないが、濃い影付きの細胞は、１つ以上の増殖遺伝子を発現する。図２４Ｄは、第１日細胞、第９日細胞及びインプット細胞についての活性化Ｔ細胞状態に対する休止Ｔ細胞状態を特徴とする遺伝子を含む遺伝子セットの遺伝子セットスコアの分布を示すバイオリンプロットである。図２４Ｄでは、遺伝子セットスコア（Ｕｐｒｅｓｔｉｎｇｖｓ．Ｄｏｗｎａｃｔｉｖａｔｅｄ）が高いほど、休止Ｔ細胞表現型の増加を示すのに対し、遺伝子セットスコア（Ｕｐｒｅｓｔｉｎｇｖｓ．Ｄｏｗｎａｃｔｉｖａｔｅｄ）が低いほど、活性化Ｔ細胞表現型の増加を示す。インプット細胞は、第９日及び第１日細胞と比べて、全体的に休止状態の方が多かった。第１日細胞は、最も高い活性化遺伝子セットスコアを示す。同上。インプット細胞、第１日細胞及び第９日細胞についての遺伝子セット解析。図２５Ａにおいて、遺伝子セットの遺伝子セットスコア「ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＳＣＭ」が高いほど、そのサンプル中の細胞のエフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）表現型の増加を示し、遺伝子セットスコアが低いほど、幹細胞メモリーＴ細胞（ＴＳＣＭ）表現型の増加を示す。図２５Ｂでは、遺伝子セットの遺伝子セットスコア「ＵｐＴｒｅｇｖｓ．ＤｏｗｎＴｅｆｆ」が高いほど、調節Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）表現型の増加を示し、遺伝子セットスコアが低いほど、エフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）表現型の増加を示す。図２５Ｃでは、遺伝子セットの遺伝子セットスコア「Ｄｏｗｎｓｔｅｍｎｅｓｓ」が低いほど、幹細胞性表現型の増加を示す。図２５Ｄでは、遺伝子セットの遺伝子セットスコＥア「Ｕｐｈｙｐｏｘｉａ」が高いほど、低酸素表現型の増加を示す。図２５Ｅでは、遺伝子セットの遺伝子セットスコア「Ｕｐａｕｔｏｐｈａｇｙ」が高いほど、オートファジー表現型の増加を示す。第１日細胞は、メモリー、ステム様及び分化シグネチャーに関してインプット細胞と同様と思われた。これに対し、第９日細胞は、代謝ストレスについて高い濃縮を示す。同上。同上。同上。同上。インプット細胞についての遺伝子クラスター解析。図２６Ａ～２６Ｃは、インプット細胞の４つのクラスターの遺伝子セット解析からの遺伝子セットスコアを示すバイオリンプロットである。図２６Ａ～２６Ｃ中でバイオリンプロットに重なる各ドットは、細胞の遺伝子セットスコアを表す。図２６Ａでは、遺伝子セットの遺伝子セットスコア「ＵｐＴｒｅｇｖｓ．ＤｏｗｎＴｅｆｆ」が高いほど、Ｔｒｅｇ細胞表現型の増加を示し、遺伝子セットの遺伝子セットスコア「ＵｐＴｒｅｇｖｓ．ＤｏｗｎＴｅｆｆ」が低いほど、Ｔｅｆｆ細胞表現型の増加を示す。図２６Ｂでは、遺伝子セットの遺伝子セットスコア「Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅｌｙｕｐｉｎｍｅｍｏｒｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ」が高いほど、後期メモリーＴ細胞表現型の増加を示し、遺伝子セットの遺伝子セットスコア「Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅｌｙｕｐｉｎｍｅｍｏｒｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ」が低いほど、早期メモリーＴ細胞表現型の増加を示す。図２６Ｃでは、遺伝子セットの遺伝子セットスコア「ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＮ」が高いほど、エフェクターメモリーＴ細胞表現型の増加を示し、遺伝子セットの遺伝子セットスコア「ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＮ」が低いほど、ナイーブＴ細胞表現型の増加を示す。早期メモリー、低分化Ｔ細胞状態にあるクラスター１及びクラスター２の細胞と比べて、クラスター３の細胞は、後期メモリー、より分化したＴ細胞状態にあることがわかる。クラスター０は、中間Ｔ細胞状態にあると考えられる。総合すると、このデータは、インプット細胞に相当レベルの不均質性があることを示している。ＴＣＲシーケンシング及びクロノタイプ多様性の測定。第９日細胞は、クロノタイプ頻度のより平坦な分布（高い多様性）を有する。形質導入から４及び７日後のＣＡＲ発現のフローサイトメトリー解析。２４ウェルプレート内でのＡＲＭプロセスを用いて、様々な組み合わせのＭＯＩのＢＣＭＡ及びＣＤ１９ＣＡＲで細胞を共形質導入することによって作製したＣＡＲ－Ｔ細胞のフローサイトメトリー解析。図２８Ａ：フローサイトメトリープロットは、対照（ＵＴＤ及び単一ベクター）に加えて、４つの異なるＭＯＩ条件下での形質導入から４及び７日後のモノ抗ＢＣＭＡＣＡＲ、モノ抗ＣＤ１９ＣＡＲ及び二重＋ＣＡＲ発現を示した。図２８Ｂ：図２８Ａに記載される各条件下での総抗ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞、総抗ＣＤ１９ＣＡＲ＋Ｔ細胞並びに総ＣＡＲ＋Ｔ細胞（２つのモノＣＡＲ＋Ｔ細胞及び二重＋ＣＡＲＴ細胞の合計）を含むＣＡＲ＋集団のサブセットの定量。示されるデータは、一貫した結果を有する３つのドナーＴ細胞からの代表的なものである。ＣＡＲ＋細胞パーセンテージは、生存ＣＤ３＋Ｔ細胞集団についてゲーティングする。同上。同上。形質導入後の第４日のＣＡＲ発現についてのフローサイトメトリー解析。形質導入後の第４日のＣＡＲ発現についての二重ターゲティングカクテルＣＡＲＴ、モノＢＣＭＡＣＡＲＴ及びモノＣＤ１９ＣＡＲＴの最終生成物のフローサイトメトリー解析。２４ｈ時点の採取時の各生成物の小アリコートを３日間再培養した後、フローサイトメトリー染色を実施した。異種移植モデルにおけるモノＢＣＭＡＣＡＲＴ、モノＣＤ１９ＣＡＲＴと比べた二重ＣＡＲＴのインビボ有効性。ルシフェラーゼリポーター遺伝子を発現する細胞株（ＫＭＳ－１１若しくはＮａｌｍ－６又は５％Ｎａｌｍ－６－ｌｕｃ及び両方の混合物）をＮＳＧマウスに注射した。腫瘍負荷を平均腫瘍負荷＋ＳＥＭとして示される、全身体発光（ｐ／ｓ）として表す。腫瘍接種後の第７又は８日に、それぞれの用量（生存ＣＡＲ＋Ｔ細胞の概数）の二重ターゲティングカクテルＣＡＲＴ、ＢＣＭＡＣＡＲＴ又はＣＤ１９ＣＡＲＴで処置した。ビヒクル（ＰＢＳ）及び非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）を陰性対照として使用した。全ての群についてＮ＝５。ＢＣＭＡＣＡＲＴ及びＣＤ１９ＣＡＲＴを、最大用量レベルを用いるそれぞれの対照として使用した。ＣＡＲ－Ｔ投与後の第２３日に全ての実験を終了した。同上。同上。同上。同上。図３１は、形質導入後の第４日（採取後の第３日）のモノＣＤ１９ＣＡＲ＋細胞（％）、モノＢＣＭＡＣＡＲ＋細胞（％）及び二重ＢＣＭＡ／ＣＤ１９ＣＡＲ＋細胞を示す棒グラフである。Ｔ細胞サブセットの特性決定。図３２は、インプット材料中、濃縮後材料中及び採取後第１日の材料中のＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナイーブＴ細胞（Ｔｎ）、セントラルメモリーＴ細胞（Ｔｃｍ）、エフェクターメモリーＴ細胞（Ｔｅｍ）及びＣＤ４５ＲＡを再発現するエフェクターメモリーＴ細胞（Ｔｅｍｒａ）の％を示すグラフである。ＢＣＭＡ／ＣＤ１９二重ＣＡＲＴ細胞産物、ＢＣＭＡＣＡＲＴ及びＣＤ１９ＣＡＲＴ処置マウスの血漿ＩＦＮγ動態。それぞれのＣＡＲ－Ｔ用量のＰＢＳ、ＵＴＤ、ＢＣＭＡ／ＣＤ１９二重ＣＡＲＴ細胞産物、ＢＣＭＡＣＡＲＴ又はＣＤ１９ＣＡＲＴで動物を処理した。マウスを採血し、ＭＳＤアッセイにより血漿サイトカインを測定した。同上。

定義
特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての科学技術用語は、本発明が関係する技術分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。

用語「１つの（ａ）」及び「１つの（ａｎ）」は、その冠詞の文法上の指示対象の１つ又は１つより多い（すなわち少なくとも１つ）を指す。例として、「要素」は、１つの要素又は１つより多い要素を意味する。

用語「約」は、量、時間的な継続期間などの計測可能な値を参照するとき、指定される値から±２０％又は一部の例では±１０％、又は一部の例では±５％、又は一部の例では±１％、又は一部の例では±０．１％の変動が、かかる変動が本開示の方法の実施に適切であるものとして包含されることを意味する。

本発明の組成物及び方法は、指定された配列を有するポリペプチド及び核酸又はそれと実質的に同一若しくは類似の配列、例えば指定された配列と少なくとも８５％、９０％若しくは９５％以上同一の配列を包含する。アミノ酸配列に関連して、用語「実質的に同一の」は、本明細書において、第１及び第２アミノ酸配列が共通の構造ドメイン及び／若しくは共通の機能活性を有し得るように、第２アミノ酸配列内のアラインメントされたアミノ酸残基とｉ）同一であるか、又はｉｉ）その保存的置換である十分な若しくは最小数のアミノ酸残基を含有する第１アミノ酸配列、例えば参照配列、例えば本明細書に記載の配列に対して少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％の同一性を有する共通の構造ドメインを含有するアミノ酸配列を指すために使用される。

ヌクレオチド配列に関連して、用語「実質的に同一の」は、本明細書において、第１及び第２ヌクレオチド配列が共通の機能活性を有するポリペプチドをコードするか、又は共通の構造ポリペプチドドメイン若しくは共通の機能性ポリペプチド活性をコードするように、第２核酸配列内のアラインメントされたヌクレオチドと同一である十分な若しくは最小数のヌクレオチドを含有する第１核酸配列、例えば参照配列、例えば本明細書に記載の配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を指すために使用される。

用語「変異体」は、参照アミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するか、又は実質的に同一のヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドを指す。一部の実施形態では、変異体は、機能性変異体である。

用語「機能性変異体」は、参照アミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するか、又は実質的に同一のヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドで、参照アミノ酸配列の１つ以上の活性を有し得るポリペプチドを指す。

用語サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１又はＩＬ－６）は、完全長の天然に存在するサイトカイン、断片又は変異体、例えば機能性変異体（天然に存在するサイトカインの活性、例えば免疫調節活性の少なくとも１０％、３０％、５０％若しくは８０％を有するその断片及び機能性変異体を含む）を包含する。一部の実施形態では、サイトカインは、天然に存在するサイトカインと実質的に同一（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％の同一性）であるか、又はサイトカインをコードする天然に存在するヌクレオチド配列と実質的に同一（例えば、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％の同一性）であるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、文脈から理解される通り、サイトカインは、受容体ドメイン、例えばサイトカイン受容体ドメイン（例えば、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒ）をさらに含む。

本明細書で使用される場合、用語「ＢＣＭＡ」は、Ｂ細胞成熟抗原を指す。ＢＣＭＡ（ＴＮＦＲＳＦ１７、ＢＣＭ又はＣＤ２６９としても知られる）は、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）ファミリーのメンバーであり、主として、最終分化Ｂ細胞、例えば、メモリーＢ細胞及びプラズマ細胞上に発現される。そのリガンドは、ＴＮＦファミリーのＢ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）及び増殖誘発リガンド（ＡＰＲＩＬ）と呼ばれる。ＢＣＭＡは、長期液性免疫を維持するための形質細胞の生存の媒介に関与する。ＢＣＭＡの遺伝子は、染色体１６上でコードされて、９９４ヌクレオチド長の一次ｍＲＮＡ転写物（ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＭ＿００１１９２．２）を産生し、これが、１８４アミノ酸のタンパク質（ＮＰ＿００１１８３．２）をコードする。ＢＣＭＡ遺伝子座に由来する第２アンチセンス転写物が記載されており、これは、ＢＣＭＡ発現の調節に特定の役割を果たし得る。（ＬａａｂｉＹ．ｅｔａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．，１９９４，２２：１１４７－１１５４）。別の転写物変異体が記載されているが、有意性は不明である（ＳｍｉｒｎｏｖａＡＳｅｔａｌ．ＭｏｌＩｍｍｕｎｏｌ．，２００８，４５（４）：１１７９－１１８３。ＴＶ４としても知られる第２アイソフォームが同定されている（Ｕｎｉｐｒｏｔ識別子Ｑ０２２２３－２）。本明細書で使用される場合、「ＢＣＭＡ」は、完全長野生型ＢＣＭＡの突然変異、例えば、点突然変異、断片、挿入、欠失及びスプライス変異体を含むタンパク質を包含する。

「ＢＣＭＡの発現に関連する疾患」という語句は、限定はされないが、ＢＣＭＡ（例えば、野生型若しくは変異型ＢＣＭＡ）を発現する細胞に関連する疾患又はＢＣＭＡ（例えば、野生型若しくは変異型ＢＣＭＡ）を発現する細胞に関連する状態を含み、例えば、癌若しくは悪性疾患又は骨髄形成異常、骨髄異形成症候群若しくは前白血病のような前癌状態などの増殖性疾患；又はＢＣＭＡ（例えば、野生型若しくは変異型ＢＣＭＡ）を発現する細胞に関連する非癌関連適応症が挙げられる。誤解を避けるために、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患は、例えば、ＢＣＭＡをターゲティングする分子（例えば、本明細書に記載のＢＣＭＡ阻害剤）を用いた処置により、例えばＢＣＭＡ発現が下方制御されたため、ＢＣＭＡを現在発現していないが、以前にＢＣＭＡを発現した細胞に関連する病態を含み得る。一態様では、ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は変異型ＢＣＭＡ）の発現に関連する癌は、血液癌である。一態様では、血液癌は、白血病又はリンパ腫である。一態様では、ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は変異型ＢＣＭＡ）の発現に関連する癌は、分化プラズマＢ細胞の悪性疾患である。一態様では、ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は変異型ＢＣＭＡ）の発現に関連する癌は、限定されないが、例えば、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）などの急性白血病；限定されないが、例えば、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）などの慢性白血病を含む癌及び悪性疾患が挙げられるが、それらに限定されない。ＢＣＭＡ（例えば、野生型若しくは変異型ＢＣＭＡ）の発現に関連する別の癌又は血液癌は、限定されないが、例えば、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型若しくは大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含み、さらには骨髄性血液細胞の不十分な生産（又は異形成）で一致する血液病態の多様な集合体である「前白血病」、なども含まれる。一部の実施形態では、癌は、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫又は膠芽腫である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患は、形質細胞増殖異常症、例えば、無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無症候性骨髄腫）、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス並びにＰＯＥＭＳ症候群（クロウ・深瀬症候群、高月病及びＰＥＰ症候群としても知られている）を含む。ＢＣＭＡ（例えば、野生型若しくは変異型ＢＣＭＡ）の発現に関連するさらに別の疾患としては、限定されないが、例えば、ＢＣＭＡ（例えば、野生型若しくは変異型ＢＣＭＡ）の発現に関連する非定型及び／若しくは非古典的癌、悪性疾患、前癌状態又は増殖性疾患、例えば、本明細書に記載される癌、例えば、前立腺癌（例えば、去勢抵抗性若しくは治療抵抗性前立腺癌又は転移性前立腺癌）、膵臓癌又は肺癌が挙げられる。

ＢＣＭＡ（例えば、野生型若しくは変異型ＢＣＭＡ）の発現に関連する非癌関連病態としては、ウイルス感染症；例えば、ＨＩＶ、真菌感染症、例えば、Ｃ．ネオフォルマンス（Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）；自己免疫疾患；例えば、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ若しくは狼瘡）、尋常性天疱瘡及びシェーグレン症候群；炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎；粘膜免疫に関する移植関連アロ特異的免疫障害；体液性免疫が重要である場合の生物製剤（例えば、第ＶＩＩＩ因子）に対する不要な免疫反応が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡの発現に関連する非癌関連適応症として、限定されないが、例えば、自己免疫疾患（例えば、狼瘡）、炎症性疾患（アレルギー及び喘息）並びに移植が挙げられる。一部の実施形態では、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原をコードするｍＲＮＡを発現するか又はいつでも発現した。一実施形態では、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原タンパク質（例えば、野生型若しくは変異型）を産生し、腫瘍抗原タンパク質は、正常レベル又は低いレベルで存在し得る。一実施形態では、腫瘍抗原発現細胞は、ある時点で検出可能なレベルの腫瘍抗原タンパク質を産生したが、その後、検出可能な腫瘍抗原タンパク質を実質的に産生しなかった。

用語「キメラ抗原受容体」若しくは代替的に「ＣＡＲ」又は「ＣＡＲ分子」は、下に定義されるような、少なくとも細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び刺激性分子由来の機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも称する）を含む組換えポリペプチド構築物を指す。一部の実施形態では、ＣＡＲポリペプチド構築物中のドメインは、同じポリペプチド鎖内に例えばキメラ融合タンパク質を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲポリペプチド構築物内のドメインは、互いに隣接しておらず、例えば異なるポリペプチド鎖内、例えば本明細書に記載される通りＲＣＡＲ内に提供される。

一部の実施形態において、細胞質シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζの一次シグナル伝達ドメイン）を含む。一部の実施形態では、細胞質シグナル伝達ドメインは、下に定義するような少なくとも１つの共刺激分子由来の１つ以上の機能的シグナル伝達ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、共刺激分子は、４１ＢＢ（すなわちＣＤ１３７）、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ及び／又はＣＤ２８から選択される。一部の実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインを含むキメラ融合タンパク質、膜貫通ドメイン及び刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインを含むキメラ融合タンパク質、膜貫通ドメイン並びに共刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメイン及び刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインを含むキメラ融合タンパク質、膜貫通ドメイン並びに１つ以上の共刺激分子由来の２つの機能的シグナル伝達ドメイン及び刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインを含むキメラ融合タンパク質、膜貫通ドメイン並びに１つ以上の共刺激分子由来の少なくとも２つの機能的シグナル伝達ドメイン及び刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＡＲ融合タンパク質のアミノ末端（Ｎ末端）に任意選択のリーダー配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインのＮ末端のリーダー配列をさらに含み、このリーダー配列は、細胞プロセシング及びＣＡＲの細胞膜への局在化中に抗原認識ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）から任意選択で切断される。

本明細書に記載のものなどの特定の腫瘍抗原Ｘ（ここで、Ｘは、本明細書に記載されるような腫瘍マーカーであり得る）を標的とする抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体又はＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα結合ドメイン若しくはＴＣＲβ結合ドメイン））を含むＣＡＲは、ＸＣＡＲとも称される。例えば、ＢＣＭＡを標的とする抗原結合ドメインを含むＣＡＲは、ＢＣＭＡＣＡＲと称される。ＣＡＲは、任意の細胞、例えば本明細書に記載される免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞若しくはＮＫ細胞）に発現され得る。

「シグナル伝達ドメイン」という用語は、セカンドメッセンジャーを生成することにより、又はそのようなメッセンジャーに応答することによりエフェクターとして機能することにより、特定されたシグナル伝達経路を介して細胞活性を調節するために細胞内で情報を伝達することにより作用するタンパク質の機能的部分を指す。

用語「抗体」は、本明細書で使用されるとき、抗原と特異的に結合する免疫グロブリン分子に由来するタンパク質又はポリペプチド配列を指す。抗体は、ポリクローナル又はモノクローナル、多重鎖又は単鎖又はインタクトな免疫グロブリンであり得、及び天然の供給源又は組換え供給源に由来し得る。抗体は、免疫グロブリン分子の四量体であり得る。

用語「抗体フラグメント」は、インタクトな抗体の少なくとも一部又はその組換え変異体を指し、また標的、例えば抗原に対し、抗体フラグメントの認識及び特異的結合を付与する上で十分な抗原結合ドメイン、例えばインタクトな抗体の抗原決定可変領域を指す。抗体フラグメントの例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖフラグメント、ｓｃＦｖ抗体フラグメント、線形抗体、ｓｄＡｂなどの単一ドメイン抗体（ＶＬ又はＶＨのいずれか）、ラクダ科ＶＨＨドメイン並びにヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つ以上、例えば２つのＦａｂフラグメント又は連結された抗体の２つ以上、例えば２つの単離ＣＤＲ若しくは他のエピトープフラグメントを含む二価フラグメントなどの抗体フラグメントから形成される多特異性抗体を含むが、これらに限定されない。抗体フラグメントは、シングルドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ－ＮＡＲ及びビス－ｓｃＦｖにも取り込まれ得る（例えば、ＨｏｌｌｉｎｇｅｒａｎｄＨｕｄｓｏｎ，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２３：１１２６－１１３６，２００５を参照されたい）。抗体フラグメントは、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）などのポリペプチドをベースとする足場にもグラフトされ得る（フィブロネクチンポリペプチドミニボディについて記載している米国特許第６，７０３，１９９号明細書を参照されたい）。用語「ｓｃＦｖ」は、軽鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体フラグメントと、重鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体フラグメントとを含む融合タンパク質を指し、軽鎖及び重鎖可変領域は、短い可動性ポリペプチドリンカーによって近接して連結され、単鎖ポリペプチドとして発現することが可能であり、及びｓｃＦｖは、その由来であるインタクトな抗体の特異性を保持している。指定されない限り、本明細書で使用されるとき、ｓｃＦｖは、ＶＬ及びＶＨ可変領域を例えばポリペプチドのＮ端側及びＣ端側末端に対していずれの順序でも有し得、ｓｃＦｖは、ＶＬ－リンカー－ＶＨを含み得るか又はＶＨ－リンカー－ＶＬを含み得る。

一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、ＮＨ_２－Ｖ_Ｌ－リンカー－Ｖ_Ｈ－ＣＯＯＨ又はＮＨ_２－Ｖ_Ｈ－リンカー－Ｖ_Ｌ－ＣＯＯＨの構造を含み得る。

本明細書で使用される「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」という用語は、抗原特異性及び結合親和性を与える抗体可変領域内のアミノ酸の配列を指す。例えば、一般に、各重鎖可変領域（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）には３つのＣＤＲがあり、各軽鎖可変領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）には３つのＣＤＲがある。ある所与のＣＤＲの厳密なアミノ酸配列境界は、Ｋａｂａｔｅｔａｌ．（１９９１），“ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ”，５ｔｈＥｄ．ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」番号付けスキーム）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉｅｔａｌ．，（１９９７）ＪＭＢ２７３，９２７－９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号付けスキーム）により記載のもの又はその組み合わせを含む、多くの周知のスキームのいずれかを使用して決定できる。ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａを組み合わせた番号付けスキームでは、一部の実施形態において、ＣＤＲは、ＫａｂａｔＣＤＲの一部、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲの一部又はその両方であるアミノ酸残基に対応する。

抗体又はその抗体フラグメントを含む本発明のＣＡＲ組成物の部分は、種々の形態で存在し得、例えば、ここで、抗原結合ドメインは、例えば、単一ドメイン抗体フラグメント（ｓｄＡｂ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）又は例えばヒト型若しくはヒト化抗体を含め、ポリペプチド鎖の一部として発現する（Ｈａｒｌｏｗｅｔａｌ．，１９９９，ＵｓｉｎｇＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，ＮＹ；Ｈａｒｌｏｗｅｔａｌ．，１９８９，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，ＮｅｗＹｏｒｋ；Ｈｏｕｓｔｏｎｅｔａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９－５８８３；Ｂｉｒｄｅｔａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３－４２６）。一部の実施形態では、本発明のＣＡＲの抗原結合ドメインは、抗体フラグメントを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、ｓｃＦｖを含む抗体フラグメントを含む。

本明細書で使用されるとき、用語「結合ドメイン」又は「抗体分子」（本明細書では「抗標的結合ドメイン」とも称される）は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むタンパク質、例えば免疫グロブリン鎖又はそのフラグメントを指す。用語「結合ドメイン」又は「抗体分子」は、抗体及び抗体フラグメントを包含する。一部の実施形態では、抗体分子は、多重特異性抗体分子であり、例えば、これは、複数個の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、ここで、複数のうちの第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列が第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数のうちの第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列が第２のエピトープに対する結合特異性を有する。ある実施形態において、多重特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子である。二重特異性抗体は、２つ以下の抗原に対して特異性を有する。二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列と、第２のエピトープに対して結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列を特徴とする。

用語「二重特異性抗体」及び「複数の二重特異性抗体」は、単一分子内の２つの抗体の抗原結合部位を結合させる分子を指す。従って、二重特異性抗体は、同時又は順次２つの異なる抗体に結合することができる。二重特異性抗体を作製する方法は、当技術分野で公知である。２つの抗体を結合させる様々なフォーマットも当技術分野で公知である。本発明の二重特異性抗体の形態としては、当業者には周知のように、ダイアボディ、単鎖抗体、Ｆａｂ二量体化（Ｆａｂ－Ｆａｂ）、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ及びタンデム抗体が挙げられるが、これらに限定されない。

用語「抗体重鎖」は、その天然に存在するコンホメーションで抗体分子に存在する２種類のポリペプチド鎖の大きい方を指し、通常、これが抗体の属するクラスを決定する。

用語「抗体軽鎖」は、その天然に存在するコンホメーションで抗体分子に存在する２種類のポリペプチド鎖の小さい方を指す。カッパ（κ）及びラムダ（λ）軽鎖が２つの主要な抗体軽鎖アイソタイプを指す。

用語「組換え抗体」は、例えば、バクテリオファージ又は酵母発現システムによって発現される抗体など、組換えＤＮＡ技術を用いて作成される抗体を指す。この用語は、抗体をコードするＤＮＡ分子であって、抗体タンパク質を発現するＤＮＡ分子又はその抗体を指定するアミノ酸配列の合成によって作成された抗体を意味するとも解釈されるべきであり、ＤＮＡ又はアミノ酸配列は、当技術分野において利用可能な周知の組換えＤＮＡ又はアミノ酸配列技術を用いて得られたものである。

用語「抗原」又は「Ａｇ」は、免疫応答を引き起こす分子を指す。この免疫応答には、抗体産生又は特異的免疫適格細胞の活性化のいずれか又は両方が含まれ得る。当業者は、任意の巨大分子が、事実上あらゆるタンパク質又はペプチドを含め、抗原となり得ることを理解するであろう。さらに、抗原は、組換えＤＮＡ又はゲノムＤＮＡに由来し得る。当業者は、従って、免疫応答を生じさせるタンパク質をコードするヌクレオチド配列又は部分的ヌクレオチド配列を含む任意のＤＮＡが、その用語が本明細書において使用される通りの「抗原」をコードすることを理解するであろう。さらに、当業者は、抗原がある遺伝子の完全長ヌクレオチド配列によってのみコードされる必要はないことを理解するであろう。本発明には、限定されないが、２つ以上の遺伝子の部分的ヌクレオチド配列の使用が含まれること、及びそれらのヌクレオチド配列が所望の免疫応答を生じさせるポリペプチドをコードするように様々な組み合わせで配列されることが容易に明らかである。さらに、当業者は、抗原が「遺伝子」によってコードされる必要は全くないことを理解するであろう。抗原は、合成して作成され得るか、又は生体試料から得られ得るか、又はポリペプチド以外の巨大分子である可能性もあることが容易に明らかである。かかる生体試料には、限定されないが、組織試料、腫瘍試料、細胞又は体液が他の生物学的成分と共に含まれ得る。

用語「抗腫瘍効果」及び「抗癌効果」は、互換的に使用され、限定されないが、例えば腫瘍体積若しくは癌体積の減少、腫瘍細胞若しくは癌細胞の数の減少、転移の数の減少、平均余命の増加、腫瘍細胞増殖若しくは癌細胞増殖の低減、腫瘍細胞生存若しくは癌細胞生存の低減又は癌性病態に関連する多様な生理学的症状の改善を含む様々な手段によって現れ得る生物学的効果を指す。「抗腫瘍効果」又は「抗癌効果」は、本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、細胞及び抗体が腫瘍又は癌の発生を予防する能力によってもまず現れ得る。

用語「自己」は、同じ個体に由来する任意の材料であって、後にその個体に再導入されることになる材料を指す。

用語「同種異系」は、材料が導入される個体と同じ種の異なる動物に由来する任意の材料を指す。２つ以上の個体は、１つ以上の遺伝子座の遺伝子が同一でないとき、互いに同種異系であると言われる。一部の実施形態において、同じ種の個体からの同種異系材料は、抗原的に相互作用するのに十分に遺伝的に異なり得る。

用語「異種」は、異なる種の動物に由来するグラフトを指す。

本明細書で使用される用語「アフェレーシス」は、ドナー又は患者の血液をドナー又は患者から採取して、選択した特定の成分を分離する装置に通過させた後、例えば再輸血によって残りをドナー又は患者に戻すという、当技術分野で承認されている体外処置を指す。従って、「アフェレーシスサンプル」に関連して、アフェレーシスを用いて得られたサンプルを指す。

用語「癌」は、異常細胞の急速且つ無制御の成長によって特徴付けられる疾患を指す。癌細胞は、局所的に又は血流及びリンパ系を通じて体の他の部位に広がり得る。様々な癌の例が本明細書に記載され、限定されないが、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、皮膚癌、膵癌、結腸直腸癌、腎癌、肝癌、脳癌、リンパ腫、白血病、肺癌などが挙げられる。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法で処置される癌は、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫又は非ホジキンリンパ腫を含む。

用語「腫瘍」及び「癌」は、本明細書では同義的に使用され、例えば、両方の用語とも固形及び液性、例えばびまん性又は循環性腫瘍を包含する。本明細書で使用されるとき、用語「癌」又は「腫瘍」は、前癌性並びに悪性の癌及び腫瘍を含む。

「由来する」は、この用語が本明細書で使用される場合、第１の分子と第２の分子との間の関係を指す。これは、概して、第１の分子と第２の分子との間の構造的類似性に言及するものであり、第２の分子に由来する第１の分子に関する方法又は供給源を限定することを含意又は包含しない。例えば、ＣＤ３ζ分子に由来する細胞内シグナル伝達ドメインの場合、細胞内シグナル伝達ドメインは、求められる機能、すなわち適切な条件下でシグナルを生成する能力を有するような十分なＣＤ３ζ構造を保持している。これは、細胞内シグナル伝達ドメインの特定の作製方法に限定することを含意又は包含せず、例えば細胞内シグナル伝達ドメインを提供するためにＣＤ３ζ配列で開始して不要な配列を欠失させるか、又は変異を付与して細胞内シグナル伝達ドメインに至らせなければならないことを意味しない。

用語「保存的配列改変」は、そのアミノ酸配列を含む抗体又は抗体フラグメントの結合特性が大きい影響又は変化を被ることのないアミノ酸改変を指す。かかる保存的改変には、アミノ酸置換、付加及び欠失が含まれる。改変は、部位特異的突然変異誘発及びＰＣＲ媒介性突然変異誘発など、当技術分野において公知の標準技法によって本発明の抗体又は抗体フラグメントに導入することができる。保存的置換は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられるものである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野において定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。従って、本発明のＣＡＲ内の１つ以上のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基に置き換えることができ、及び変化したＣＡＲは、本明細書に記載される機能アッセイを用いて試験することができる。

刺激及び／又は共刺激分子による刺激に関連して、用語「刺激」は、刺激性分子（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体）及び／又は共刺激分子（例えば、Ｃ２８若しくは４－１ＢＢ）とその同族のリガンドとの結合によって誘導される応答、例えば一次若しくは二次応答を指し、それにより、限定されないが、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介したシグナル伝達などのシグナル伝達事象を媒介する。刺激は、特定の分子の発現変化及び／又は細胞骨格構造の再組織化などを媒介することができる。

用語「刺激性分子」は、Ｔ細胞によって発現され、Ｔ細胞シグナル伝達経路の少なくともいくつかの態様について、ＴＣＲ複合体の一次活性化を調節する一次細胞質シグナル伝達配列を提供する分子を指す。一部の実施形態では、ＣＡＲ内のＩＴＡＭ含有ドメインは、内因性ＴＣＲ複合体とは独立に一次ＴＣＲのシグナル伝達を反復する。一部の実施形態では、一次シグナルは、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体と、ペプチドを載せたＭＨＣ分子との結合により開始される一次シグナルであり、これは、限定されないが、増殖、活性化、分化などを含むＴ細胞応答の媒介をもたらす。刺激性様式で作用する初代細胞質シグナル伝達配列（「一次シグナル伝達ドメイン」とも称される）は、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。本発明において特に有用であるＩＴＡＭ含有初代細胞質シグナル伝達配列の例としては、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」としても知られる）、ＦｃεＲＩ及びＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２由来のものが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。本発明の具体的なＣＡＲにおいて、本発明の任意の１つ以上のＣＡＲＳの細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞内シグナル伝達配列、例えばＣＤ３－ζの一次シグナル伝達配列を含む。用語「抗原提示細胞」又は「ＡＰＣ」は、その表面上に主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）と複合体化した外来抗原を提示するアクセサリー細胞などの免疫系細胞（例えば、Ｂ細胞、樹状細胞など）を指す。Ｔ細胞は、そのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を用いてこうした複合体を認識し得る。ＡＰＣは、抗原をプロセシングしてそれをＴ細胞に提示する。

「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、この用語が本明細書で使用されるとき、分子の細胞内部分を指す。実施形態において、細胞内シグナルドメインは、エフェクター機能シグナルを形質導入し、細胞に特殊な機能を果たすよう指示する。細胞内シグナル伝達ドメイン全体を用いることができるが、多くの場合、鎖全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの切断された一部を使用する範囲内で、このような切断された一部を、それがエフェクター機能シグナルを伝達する限り、完全鎖の代わりに使用し得る。用語細胞内シグナル伝達ドメインは、そのため、エフェクター機能シグナルの伝達に十分な細胞内シグナル伝達ドメインのあらゆる切断された一部を含むことを意図する。

細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ含有細胞、例えばＣＡＲＴ細胞の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。例えば、ＣＡＲＴ細胞の免疫エフェクター機能の例として、細胞溶解活性及びサイトカインの分泌を含めたヘルパー活性が挙げられる。

一部の実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。例示的一次細胞内シグナル伝達ドメインには、一次刺激又は抗原依存性刺激に関与する分子に由来するものが含まれる。一部の実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内ドメインを含み得る。例示的共刺激細胞内シグナル伝達ドメインには、共刺激シグナル又は抗原非依存性刺激に関与する分子に由来するものが含まれる。例えば、ＣＡＲＴの場合、一次細胞内シグナル伝達ドメインがＴ細胞受容体の細胞質配列を含むことができ、及び共刺激細胞内シグナル伝達ドメインが共受容体又は共刺激分子からの細胞質配列を含むことができる。

一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含むことができる。ＩＴＡＭを含む一次細胞質シグナル伝達配列の例には、限定されないが、ＣＤ３ζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」としても知られる）、ＦｃεＲＩ、ＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２に由来するものが含まれる。

用語「ζ」若しくは代替的に「ζ鎖」、「ＣＤ３－ζ」又は「ＴＣＲ－ζ」は、ＣＤ２４７を指す。Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ２０９６３は、例示的なヒトＣＤ３ζアミノ酸配列を提供する。「ζ刺激ドメイン」若しくは代替的に「ＣＤ３－ζ刺激ドメイン」又は「ＴＣＲ－ζ刺激ドメイン」は、ＣＤ３ζ又はその変異体（例えば、突然変異、例えば点突然変異、フラグメント、挿入若しくは欠失を有する分子）の刺激ドメインを指す。一部の実施形態では、ζの細胞質ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＢＡＧ３６６６４．１の残基５２～１６４又はその変異体（例えば、突然変異、例えば点突然変異、フラグメント、挿入若しくは欠失を有する分子）を含む。一部の実施形態では、「ζ刺激ドメイン」又は「ＣＤ３－ζ刺激ドメイン」は、配列番号９若しくは１０として提供される配列又はその変異体（例えば、突然変異、例えば点突然変異、フラグメント、挿入若しくは欠失を有する分子）である。

「共刺激分子」という用語は、共刺激リガンドと特異的に結合し、それにより、Ｔ細胞の、限定されないが、増殖などによる共刺激応答を媒介する、Ｔ細胞上の同族結合パートナーを指す。共刺激分子は、効率的な免疫応答に必要な抗原受容体又はそのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ性活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２８－ＯＸ４０、ＣＤ２８－４－１ＢＢ及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドを含むが、これらに限定されるものではない。

共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内部分を指す。

細胞内シグナル伝達ドメインは、それが由来する分子の細胞内部分全体若しくは天然の細胞内シグナル伝達ドメイン全体又はその機能的フラグメントを含み得る。

用語「４－１ＢＢ」は、ＣＤＲ１３７又は腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９を指す。Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ２０９６３は、例示的なヒト４－１ＢＢアミノ酸配列を提供する。「４－１ＢＢ共刺激ドメイン」は、４－１ＢＢの共刺激ドメイン又はその変異体（例えば、突然変異、例えば点突然変異、フラグメント、挿入若しくは欠失を有する分子）を指す。一部の実施形態では、「４－１ＢＢ共刺激ドメイン」は、配列番号７として提供される配列又はその変異体（例えば、突然変異、例えば点突然変異、フラグメント、挿入若しくは欠失を有する分子）である。

「免疫エフェクター細胞」は、その用語が本明細書で使用される場合、免疫応答、例えば、免疫エフェクター応答の促進に関与する細胞を指す。免疫エフェクター細胞の例には、Ｔ細胞、例えばα／βＴ細胞及びγ／δＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、肥満細胞及び骨髄球由来食細胞が含まれる。

「免疫エフェクター機能又は免疫エフェクター応答」は、この用語が本明細書で使用されるとき、標的細胞の免疫攻撃を亢進させる又は促進する例えば免疫エフェクター細胞の機能又は応答を指す。例えば、免疫エフェクター機能又は応答は、標的細胞の死滅又は成長若しくは増殖阻害を促進するＴ細胞又はＮＫ細胞の特性を指す。Ｔ細胞の場合、一次刺激及び共刺激が免疫エフェクター機能又は応答の例である。

用語「エフェクター機能」は、細胞の特殊化された機能を指す。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、細胞溶解活性又はサイトカインの分泌を含むヘルパー活性であり得る。

用語「コードする」は、定義付けられたヌクレオチド配列（例えば、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ及びｍＲＮＡ）又は定義付けられたアミノ酸配列のいずれかを有する生物学的過程における他のポリマー及び巨大分子の合成の鋳型としての役割を果たす、遺伝子、ｃＤＮＡ又はｍＲＮＡなど、ポリヌクレオチド内の特異的ヌクレオチド配列の固有の特性及びそれによってもたらされる生物学的特性を指す。従って、遺伝子、ｃＤＮＡ又はＲＮＡは、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳によって細胞又は他の生体系のタンパク質が産生される場合にタンパク質をコードする。そのヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一の且つ通常配列表に提供されるものであるコード鎖及び遺伝子又はｃＤＮＡの転写鋳型として使用される非コード鎖の両方は、その遺伝子のｃＤＮＡのタンパク質又は他の産物をコードすると称することができる。

特記されない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの縮重バージョンであり、同じアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の全てを含む。タンパク質又はＲＮＡをコードするヌクレオチド配列という語句には、そのタンパク質をコードするヌクレオチド配列が何らかのバージョンで１つ又は複数のイントロンを含み得る限りにおいて、イントロンも含まれ得る。

用語「有効量」又は「治療有効量」は、本明細書において互換的に使用され、特定の生物学的結果を達成する上で有効である、本明細書に記載の化合物、製剤、材料若しくは組成物の量を指す。

「内因性」という用語は、生物体、細胞、組織若しくは系からの又はその内部で生成された任意の物質を指す。

用語「外因性」は、生物、細胞、組織又は系の外側から導入されるか又はその外側で産生される任意の材料を指す。

用語「発現」は、特定のヌクレオチド配列の転写及び／又は翻訳を指す。一部の実施形態では、発現は、細胞に導入されたｍＲＮＡの翻訳を含む。

用語「トランスファーベクター」は、単離核酸を含む組成物であって、細胞内部への単離核酸の送達に使用し得る組成物を指す。当技術分野では、限定されないが、線状ポリヌクレオチド、イオン性又は両親媒性化合物に関連するポリヌクレオチド、プラスミド及びウイルスを含め、多くのベクターが公知である。従って、用語「トランスファーベクター」には自己複製プラスミド又はウイルスが含まれる。この用語は、例えば、ポリリジン化合物、リポソームなど、細胞への核酸のトランスファーを促進する非プラスミド及び非ウイルス化合物もさらに含むものと解釈されなければならない。ウイルストランスファーベクターの例としては、限定されないが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクターなどが挙げられる。

用語「発現ベクター」は、発現させるヌクレオチド配列に作動可能に連結した発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現に十分なシス作用エレメントを含み、他の発現用エレメントは、宿主細胞によって供給されるか、又はインビトロ発現系に供給され得る。発現ベクターには、組換えポリヌクレオチドを組み込むコスミド、プラスミド（例えば、ネイキッド又はリポソームに含まれる）及びウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）を含め、当技術分野において公知のもの全てが含まれる。

用語「レンチウイルス」は、レトロウイルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）の属を指す。レンチウイルスは、非分裂細胞を感染させることができる点でレトロウイルスの中でユニークであり、レンチウイルスは、宿主細胞のＤＮＡに多量の遺伝情報を送達することができ、そのため、遺伝子デリバリーベクターの最も効率的な方法の１つである。ＨＩＶ、ＳＩＶ及びＦＩＶは、全てレンチウイルスの例である。

用語「レンチウイルスベクター」は、特に、Ｍｉｌｏｎｅｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７（８）：１４５３－１４６４（２００９）に提供される通りの自己不活性化レンチウイルスベクターを含め、レンチウイルスゲノムの少なくとも一部分に由来するベクターを指す。臨床で使用し得るレンチウイルスベクターの他の例としては、限定されないが、例えばＯｘｆｏｒｄＢｉｏＭｅｄｉｃａからのＬＥＮＴＩＶＥＣＴＯＲ（登録商標）遺伝子デリバリー技術、ＬｅｎｔｉｇｅｎからのＬＥＮＴＩＭＡＸ（商標）ベクターシステムなどが挙げられる。非臨床タイプのレンチウイルスベクターも利用可能であり、当業者に公知であろう。

用語「相同」又は「同一性」は、２つのポリマー分子間、例えば２つのＤＮＡ分子又は２つのＲＮＡ分子など、２つの核酸分子間又は２つのポリペプチド分子間におけるサブユニット配列同一性を指す。２つの分子の両方におけるサブユニット位置が同じ単量体サブユニットによって占有されるとき、例えば、２つのＤＮＡ分子の各々の位置がアデニンによって占有される場合、それらは、その位置で相同又は同一である。２つの配列間の相同性は、一致する位置又は相同な位置の数の直接の関数である。例えば、２つの配列における位置の半分（例えば、１０サブユニット長のポリマーにおける５個の位置）が相同である場合、それらの２つの配列は、５０％相同である。位置の９０％（例えば、１０個中９個）が一致するか又は相同である場合、それらの２つの配列は、９０％相同である。

「ヒト化」形態の非ヒト（例えば、マウス）抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖又はそのフラグメント（抗体のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又は他の抗原結合部分配列など）である。ほとんどの場合、ヒト化抗体及びその抗体フラグメントは、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体又は抗体フラグメント）においてレシピエントの相補決定領域（ＣＤＲ）からの残基が所望の特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラット又はウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基に置き換えられているものである。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が対応する非ヒト残基に置き換えられる。さらに、ヒト化抗体／抗体フラグメントは、レシピエント抗体にも、移入されるＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見られない残基を含むことができる。これらの改変は抗体又は抗体フラグメントの性能をさらに精緻化及び最適化し得る。一般に、ヒト化抗体又はその抗体フラグメントは、少なくとも１つ及び典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、及びＦＲ領域の全て又は大部分がヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体又は抗体フラグメントは、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのＦｃの少なくとも一部分も含むことができる。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２－５２５，１９８６；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３－３２９，１９８８；Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３－５９６，１９９２を参照されたい。

「完全にヒト」は、分子全体がヒト起源であるか、又はヒト形態の抗体又は免疫グロブリンと同一のアミノ酸配列からなる抗体又は抗体フラグメントなどの免疫グロブリンを指す。

用語「単離されている」は、自然状態から改変されているか又は取り出されていることを意味する。例えば、生きている動物に天然に存在する核酸又はペプチドは、「単離されている」のではないが、その自然状態の共存する材料から部分的又は完全に分離された同じ核酸又はペプチドは、「単離されている」。単離核酸又はタンパク質は、実質的に精製された形態で存在することができるか、又は例えば宿主細胞など、非天然環境中に存在することができる。

本発明との関連において、一般的に存在する核酸塩基に関して以下の略称が使用される。「Ａ」は、アデノシンを指し、「Ｃ」は、シトシンを指し、「Ｇ」は、グアノシンを指し、「Ｔ」は、チミジンを指し、及び「Ｕ」は、ウリジンを指す。

用語「作動可能に連結された」又は「転写制御」は、調節配列と異種核酸配列との間における後者の発現をもたらす機能的な連結を指す。例えば、第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的に関係した状態に置かれているとき、第１の核酸配列は、第２の核酸配列と作動可能に連結される。例えば、プロモーターがコード配列の転写又は発現に影響を及ぼす場合、プロモーターは、コード配列に作動可能に連結される。作動可能に連結されるＤＮＡ配列は、互いに連続し得、例えば２つのタンパク質コード領域をつなぎ合わせる必要がある場合、同じリーディングフレーム内にある。

免疫原性組成物の「非経口」投与という用語は、例えば、皮下（ｓ．ｃ．）、静脈内（ｉ．ｖ．）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、又は胸骨内注射、腫瘍内、又は輸注技法を含む。

用語「核酸」、「核酸分子」、「ポリペプチド」又は「ポリヌクレオチド分子」は、一本鎖又は二本鎖のいずれかの形態のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）又はリボ核酸（ＲＮＡ）及びそれらのポリマーを指す。具体的に限定しない限り、この用語には、参照核酸と同様の結合特性を有し、且つ天然に存在するヌクレオチドと同じように代謝される、天然ヌクレオチドの公知の類似体を含む核酸が包含される。一部の実施形態では、「核酸」、「核酸分子」、「ポリペプチド」又は「ポリヌクレオチド分子」は、ヌクレオチド／ヌクレオシド誘導体又は類似体を含む。別に指示のない限り、特定の核酸配列は、黙示的に、その保存的に改変された変異体（例えば、縮重コドン置換、例えば保存的置換）、アレル、オルソログ、ＳＮＰ及び相補配列並びに明示的に指示される配列も包含する。具体的には、縮重コドン置換、例えば保存的置換は、１つ以上の選択された（又は全ての）コドンの３番目の位置が、混合塩基及び／又はデオキシイノシン残基で置換されている配列を作製することによって達成し得る（Ｂａｔｚｅｒｅｔａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＲｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８（１９８５）；及びＲｏｓｓｏｌｉｎｉｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ８：９１－９８（１９９４））。

用語「ペプチド」、「ポリペプチド」及び「タンパク質」は、同義的に使用され、ペプチド結合によって共有結合的に連結したアミノ酸残基で構成される化合物を指す。タンパク質又はペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含有しなければならず、タンパク質の配列又はペプチドの配列を含むことのできるアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドは、互いにペプチド結合によってつなぎ合わされた２つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチド又はタンパク質を含む。本明細書で使用されるとき、この用語は、当技術分野では一般に例えばペプチド、オリゴペプチド及びオリゴマーとも称される短鎖と、当技術分野では概してタンパク質と称される、多数の種類があるより長い鎖との両方を指す。「ポリペプチド」には、例えば、生物学的に活性なフラグメント、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドの変異体、修飾ポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質が特に含まれる。ポリペプチドには、天然ペプチド、組換えペプチド又はこれらの組み合わせが含まれる。

用語「プロモーター」は、ポリヌクレオチド配列の特異的転写を開始させるのに必要である、細胞の合成機構又は導入された合成機構によって認識されるＤＮＡ配列を指す。

用語「プロモーター／調節配列」は、そのプロモーター／調節配列に作動可能に連結された遺伝子産物の発現に必要な核酸配列を指す。一部の例では、この配列は、コアプロモーター配列であり得、他の例では、この配列は、エンハンサー配列及び遺伝子産物の発現に必要な他の調節エレメントも含み得る。プロモーター／調節配列は、例えば、遺伝子産物を組織特異的に発現するものであり得る。

用語「構成的」プロモーターは、遺伝子産物をコードするか又はそれを指定するポリヌクレオチドと作動可能に連結されるとき、細胞のほとんど又は全ての生理条件下で細胞において遺伝子産物の産生を生じさせるヌクレオチド配列を指す。

用語「誘導性」プロモーターは、遺伝子産物をコードするか又はそれを指定するポリヌクレオチドと作動可能に連結されるとき、実質的にプロモーターに対応する誘発物質が細胞に存在する場合に限り細胞において遺伝子産物の産生を生じさせるヌクレオチド配列を指す。

用語「組織特異的」プロモーターは、遺伝子をコードするか又はそれによって指定されるポリヌクレオチドと作動可能に連結されるとき、実質的に細胞がプロモーターに対応する組織型の細胞である場合に限り細胞において遺伝子産物の産生を生じさせるヌクレオチド配列を指す。

用語「癌関連抗原」、「腫瘍抗原」、「過剰増殖性障害抗原」及び「過剰増殖性障害に関連する抗原」は、互換的に、特定の過剰増殖性障害に共通の抗原を指す。一部の実施形態では、これらの用語は、癌細胞の表面上に、完全に又はフラグメント（例えば、ＭＨＣ／ペプチド）として、発現する分子（典型的にはタンパク質、炭水化物若しくは脂質）であって、癌細胞に対する薬理学的薬剤の優先的な標的化に有用な分子を指す。一部の実施形態において、腫瘍抗原は、正常細胞及び癌細胞の両方が発現するマーカー、例えば系列マーカー、例えばＢ細胞上のＣＤ１９である。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、正常細胞と比べて癌細胞で過剰発現（例えば、正常細胞と比べて１倍の過剰発現、２倍の過剰発現、３倍以上の過剰発現）する細胞表面分子である。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、癌細胞で不適切に合成される細胞表面分子、例えば正常細胞に発現する分子と比べて欠失、付加又は変異を含む分子である。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、癌細胞の細胞表面にのみ、完全に又はフラグメント（例えば、ＭＨＣ／ペプチド）として発現することになり、正常細胞の表面には合成されないか又は発現しない。一部の実施形態では、本発明の過剰増殖性障害抗原は、原発性若しくは転移性黒色腫、胸腺腫、リンパ腫、肉腫、肺癌、肝臓癌、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病、子宮癌、子宮頸癌、膀胱癌、腎臓癌並びに乳癌、前立腺癌（例えば、去勢抵抗性若しくは治療抵抗性前立腺癌又は転移性前立腺癌）、卵巣癌、膵臓癌など、又は形質細胞増殖性障害、例えば無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無症候性骨髄腫）、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞腫（例えば、プラズマ細胞増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫及び多発性形質細胞腫）、全身性軽鎖アミロイドーシス及びＰＯＥＭＳ症候群（また、クロウ・深瀬症候群、高月病（Ｔａｋａｔｓｕｋｉｄｉｓｅａｓｅ）及びＰＥＰ症候群としても知られる）に由来する。一部の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＭＨＣ提示ペプチドに結合する抗原結合ドメイン（例えば、抗体又は抗体フラグメント）を含むＣＡＲを含む。通常、内因性タンパク質に由来するペプチドは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ分子のポケットに嵌まり、ＣＤ８＋Ｔリンパ球上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）によって認識される。ＭＨＣクラスＩ複合体は、あらゆる有核細胞によって構成的に発現される。癌では、ウイルス特異的及び／又は腫瘍特異的ペプチド／ＭＨＣ複合体が免疫療法用のユニークなクラスの細胞表面標的となる。ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）－Ａ１又はＨＬＡ－Ａ２のコンテクストでウイルス又は腫瘍抗原由来のペプチドを標的とするＴＣＲ様抗体が記載されている（例えば、Ｓａｓｔｒｙｅｔａｌ．，ＪＶｉｒｏｌ．２０１１８５（５）：１９３５－１９４２；Ｓｅｒｇｅｅｖａｅｔａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１１１１７（１６）：４２６２－４２７２；Ｖｅｒｍａｅｔａｌ．，ＪＩｍｍｕｎｏｌ２０１０１８４（４）：２１５６－２１６５；Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎｅｔａｌ．，ＧｅｎｅＴｈｅｒ２００１８（２１）：１６０１－１６０８；Ｄａｏｅｔａｌ．，ＳｃｉＴｒａｎｓｌＭｅｄ２０１３５（１７６）：１７６ｒａ３３；Ｔａｓｓｅｖｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＧｅｎｅＴｈｅｒ２０１２１９（２）：８４－１００を参照されたい）。例えば、ＴＣＲ様抗体は、ヒトｓｃＦｖファージディスプレイライブラリなど、ライブラリーのスクリーニングによって同定することができる。

用語「腫瘍支持抗原」又は「癌支持抗原」は、互換的に、それ自体癌性ではない細胞の表面に発現するが、例えばそれらの増殖若しくは生存、例えば免疫細胞に対する抵抗性を促進することによって癌細胞を支持する分子（典型的にはタンパク質、炭水化物若しくは脂質）を指す。このタイプの例示的な細胞として、間質細胞及び骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）が挙げられる。腫瘍支持抗原自体は、癌細胞を支持する細胞に抗原が存在する限り、腫瘍細胞を支持する役割を果たす必要はない。

用語「可動性ポリペプチドリンカー」又は「リンカー」は、ｓｃＦｖとの関連で使用されるとき、可変重鎖領域と可変軽鎖領域とを共に連結するために単独又は組み合わせで使用されるグリシン及び／又はセリン残基などのアミノ酸からなるペプチドリンカーを指す。一部の実施形態において、可動性ポリペプチドリンカーは、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーであり、アミノ酸配列（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎは、１以上の正の整数、例えばｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３、ｎ＝４、ｎ＝５及びｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９及びｎ＝１０である）（配列番号４１）を含む。一部の実施形態において、可動性ポリペプチドリンカーには、限定されないが、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４（配列番号２７）又は（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号２８）が含まれる。一部の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ２Ｓｅｒ）、（ＧｌｙＳｅｒ）又は（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）（配列番号２９）の複数の繰り返しを含む。また、国際公開第２０１２／１３８４７５号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に記載されるリンカーも本発明の範囲内に含まれる。

本明細書で使用されるとき、５’キャップ（ＲＮＡキャップ、ＲＮＡ７－メチルグアノシンキャップ又はＲＮＡｍ^７Ｇキャップとも称される）は、転写開始直後に真核生物メッセンジャーＲＮＡの「前」又は５’末端に付加された修飾グアニンヌクレオチドである。５’キャップは、１番目の転写ヌクレオチドに連結される末端基からなる。その存在は、リボソームによる認識及びＲＮアーゼからの保護に重要である。キャップ付加は転写と結び付いており、それぞれが他方に影響を与えるようにして同時転写的に起こる。転写開始直後、合成されているｍＲＮＡの５’末端に、ＲＮＡポリメラーゼに関連するキャップ合成複合体が結合する。この酵素複合体は、ｍＲＮＡキャッピングに必要な化学反応を触媒する。合成は、多段階生化学反応として進行する。キャッピング部分は、ｍＲＮＡのその安定性又は翻訳効率などの機能を調整するために改変することができる。

本明細書で使用されるとき、「インビトロ転写ＲＮＡ」は、インビトロ合成されたＲＮＡを指す。一部の実施形態では、ＲＮＡは、ｍＲＮＡである。概して、インビトロ転写ＲＮＡは、インビトロ転写ベクターから作成される。インビトロ転写ベクターは、インビトロ転写ＲＮＡの作成に使用される鋳型を含む。

本明細書で使用されるとき、「ポリ（Ａ）」は、ポリアデニル化によってｍＲＮＡに結合される一連のアデノシンである。一過性発現用の構築物の一部の実施形態において、ポリ（Ａ）は、５０～５０００である（配列番号３０）。一部の実施形態では、ポリ（Ａ）は、６４より多い。一部の実施形態では、ポリ（Ａ）は、１００より多い。一部の実施形態では、ポリ（Ａ）は、３００より多い。一部の実施形態では、ポリ（Ａ）は、４００より多い。ポリ（Ａ）配列は、局在性、安定性又は翻訳効率などのｍＲＮＡ機能を調整するために化学的又は酵素的に改変することができる。

本明細書で使用されるとき、「ポリアデニル化」は、メッセンジャーＲＮＡ分子へのポリアデニリル部分又はその改変変異体の共有結合を指す。真核生物では、ほとんどのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子が３’末端でポリアデニル化される。３’ポリ（Ａ）テールは、酵素、ポリアデニル酸ポリメラーゼの作用によってｍＲＮＡ前駆体に付加されるアデニンヌクレオチドの長い配列（多くの場合に数百個）である。高等真核生物では、ポリ（Ａ）テールは、特異的配列、ポリアデニル化シグナルを含む転写物に付加される。ポリ（Ａ）テール及びそれに結合したタンパク質は、ｍＲＮＡをエキソヌクレアーゼによる分解から保護するのに役立つ。ポリアデニル化は、転写終結、ｍＲＮＡの核外移行及び翻訳にも重要である。ポリアデニル化は、ＤＮＡからＲＮＡへの転写直後に核内で起こるが、さらに後に細胞質でも起こり得る。転写が終結した後、ＲＮＡポリメラーゼに関連するエンドヌクレアーゼ複合体の作用によってｍＲＮＡ鎖が切断される。切断部位は、通常、切断部位近傍の塩基配列ＡＡＵＡＡＡの存在によって特徴付けられる。ｍＲＮＡが切断された後、切断部位の遊離３’末端にアデノシン残基が付加される。

本明細書で使用されるとき、「一過性」は、数時間、数日間又は数週間の期間にわたる組み込まれないトランス遺伝子の発現を指し、この発現期間は、宿主細胞においてゲノムに組み込まれた場合又は安定プラスミドレプリコン中に含まれている場合の遺伝子の発現期間よりも短い。

本明細書で使用される場合、用語「処置する」、「処置」及び「処置している」は、１つ以上の療法（例えば、本発明のＣＡＲなどの１つ以上の療法剤）の投与によってもたらされる増殖性障害の進行、重症度及び／若しくは持続期間の低減若しくは改善又は増殖性障害の１つ以上の症状（好ましくは１つ以上の認識し得る症状）の改善を指す。具体的な実施形態において、用語「処置する」、「処置」及び「処置している」は、患者には必ずしも認識できない、腫瘍の増殖などの増殖性障害の少なくとも１つの計測可能な理学的パラメーターの改善を指す。他の実施形態において、用語「処置する」、「処置」及び「処置している」は、増殖性障害の進行の物理的な、例えば認識し得る症状の安定化による阻害、生理学的な、例えば理学的パラメーターの安定化による阻害のいずれか又は両方を指す。他の実施形態において、用語「処置する」、「処置」及び「処置している」は、腫瘍サイズ又は癌性細胞数の低減又は安定化を指す。

用語「シグナル伝達経路」は、細胞のある部分から細胞の別の部分へのシグナルの伝達において役割を果たす種々のシグナル伝達分子間の生化学的関係を指す。語句「細胞表面受容体」は、シグナルを受け取り、且つ細胞の膜を越えてシグナルを伝える能力を有する分子及び分子複合体を含む。

用語「対象」は、免疫応答を生じさせることのできる生きている生物（例えば、哺乳類、例えばヒト）を含むことが意図される。

用語の「実質的に精製された」細胞は、他の細胞型を本質的に含まない細胞を指す。実質的に精製された細胞とは、その天然に存在する状態でそれが通常結び付いている他の細胞型と分離されている細胞も指す。一部の例では、実質的に精製された細胞集団とは、均質な細胞集団を指す。他の例では、この用語は、単に、その自然状態でそれが天然に結び付いている細胞から分離されている細胞を指す。一部の実施形態において、これらの細胞は、インビトロで培養される。一部の実施形態において、これら細胞は、インビトロで培養されない。

本明細書で使用される用語「治療的」とは、処置を意味する。治療効果は、病態の低減、抑制、寛解又は根絶によって達成される。

本明細書で使用される用語「予防」とは、疾患若しくは病態の予防又は予防的処置を意味する。

用語「トランスフェクトされた」、又は「形質転換された」、又は「形質導入された」は、外因性核酸を宿主細胞に移入させるか又は導入するプロセスを指す。「トランスフェクトされた」、又は「形質転換された」、又は「形質導入された」細胞は、外因性核酸をトランスフェクト、形質転換又は形質導入されたものである。細胞には初代対象細胞及びその子孫が含まれる。

用語「特異的に結合する」は、試料中に存在するコグネイト結合パートナー（例えば、Ｔ細胞に存在する刺激及び／若しくは共刺激分子）タンパク質を認識して、それと結合するが、試料中の他の分子は実質的に認識しないか又はそれらに結合しない抗体又はリガンドを指す。

本明細書で使用される「調節可能なキメラ抗原受容体（ＲＣＡＲ）」という用語は、免疫エフェクター細胞中にあるとき、標的細胞、典型的には癌細胞に対する特異性及び細胞内シグナル生成を細胞に付与する一連のポリペプチド、典型的には最も単純な実施形態では２つのポリペプチドを指す。一部の実施形態では、ＲＣＡＲは、少なくとも１つの細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン並びにＣＡＲ分子に関連して本明細書で定義されるような刺激分子及び／又は共刺激分子由来の機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞腫シグナル伝達ドメイン（また、本明細書では「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも称される）を含む。一部の実施形態では、ＲＣＡＲ中のこれら一連のポリペプチドは、互いに隣接しておらず、例えば異なるポリペプチド鎖内にある。一部の実施形態では、ＲＣＡＲは、二量体化スイッチを含み、これは、二量体化分子が存在すると、ポリペプチドを互いに結合させることができ、例えば細胞内シグナル伝達ドメインに抗原結合ドメインを結合させることができる。一部の実施形態では、ＲＣＡＲは、本明細書に記載される細胞（例えば、免疫エフェクター細胞）、例えばＲＣＡＲ発現細胞（また、「ＲＣＡＲＸ細胞」とも称される）に発現される。一部の実施形態では、ＲＣＡＲＸ細胞は、Ｔ細胞であり、ＲＣＡＲＴ細胞と称される。一部の実施形態では、ＲＣＡＲＸは、ＮＫ細胞であり、ＲＣＡＲＮ細胞と称される。ＲＣＡＲは、ＲＣＡＲ発現細胞に、標的細胞、典型的には癌細胞に対する特異性及び調節可能な細胞内シグナル生成若しくは増殖を付与することができ、これらは、ＲＣＡＲ発現細胞の免疫エフェクター特性を最適化し得る。複数の実施形態では、ＲＣＡＲ細胞は、抗原結合ドメインに結合した抗原を含む標的細胞に対する特異性を取得するために、少なくとも部分的に、抗原結合ドメインに依存する。

「膜アンカー」又は「膜テザリングドメイン」は、この用語が本明細書で使用されるとき、細胞外若しくは細胞内ドメインを原形質膜に結合させる上で十分なポリペプチド若しくは部分、例えばミリストイル基を指す。

「スイッチドメイン」は、この用語が本明細書で例えばＲＣＡＲを指す場合に使用されるとき、二量体化分子の存在下で別のスイッチドメインと結合する実体、典型的には、ポリペプチドベースの実体を指す。この結合により、第１のスイッチドメインに連結、例えば融合した第１の実体と、第２のスイッチドメインに連結、例えば融合した第２の実体との機能性カップリングが起こる。第１及び第２のスイッチドメインは、集合的に二量体化スイッチと呼ばれる。複数の実施形態において、第１及び第２のスイッチドメインは、互いに同じであり、例えば、両者は、同じ一次アミノ酸配列を有するポリペプチドであり、集合的にホモ二量体化スイッチと呼ばれる。複数の実施形態において、第１及び第２のスイッチドメインは、互いに異なり、例えば、それらは、異なる一次アミノ酸配列を有するポリペプチドであり、集合的にヘテロ二量体化スイッチと呼ばれる。複数の実施形態において、スイッチは、細胞内である。複数の実施形態では、スイッチは、細胞外である。複数の実施形態において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースの実体、例えばＦＫＢＰ又はＦＲＢベースであり、二量体化分子は、小分子、例えばラパログである。複数の実施形態において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースの実体、例えばｍｙｃペプチドに結合するｓｃＦｖであり、二量体化分子は、ポリペプチド、その断片又はポリペプチドの多量体、例えばｍｙｃリガンド若しくは１つ以上のｍｙｃｓｃＦｖに結合するｍｙｃリガンドの多量体である。複数の実施形態において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースの実体、例えばｍｙｃ受容体であり、二量体化分子は、抗体又はその断片、例えばｍｙｃ抗体である。

「二量体化分子」という用語は、この用語が本明細書で例えばＲＣＡＲを指す場合に使用されるとき、第１のスイッチドメインと第２のスイッチドメインの結合を促進する分子を指す。複数の実施形態において、二量体化分子は、対象に天然に存在しないか、又は有意な二量体化を起こす濃度では存在しない。複数の実施形態では、二量体化分子は、小分子、例えばラパマイシン若しくはラパログ、例えばＲＡＤ００１である。

用量「低い免疫増強用量」は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばアロステリックｍＴＯＲ阻害剤、例えばＲＡＤ００１若しくはラパマイシン又は触媒ｍＴＯＲ阻害剤と一緒に使用されるとき、例えばＰ７０Ｓ６キナーゼ活性の阻害により測定される通り、ｍＴＯＲ活性を部分的に、しかし完全にではなく、阻害するｍＴＯＲ阻害剤の用量を指す。例えば、Ｐ７０Ｓ６キナーゼ活性の阻害によりｍＴＯＲ活性を評価する方法は、本明細書に詳述される。この用量は、完全な免疫抑制をもたらすのに不十分であるが、免疫応答を増強するには十分である。一部の実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤の低い免疫増強用量は、ＰＤ－１陽性Ｔ細胞の数の減少及び／若しくはＰＤ－１陰性Ｔ細胞の数の増加又はＰＤ－１陰性Ｔ細胞／ＰＤ－１陽性Ｔ細胞の比の増加をもたらす。一部の実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤の低い免疫増強用量は、ナイーブＴ細胞の数の増加をもたらす。一部の実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤の低い免疫増強用量は、
例えば、メモリーＴ細胞、例えばメモリーＴ細胞前駆体での下記マーカー：ＣＤ６２Ｌ^ｈｉｇｈ、ＣＤ１２７^ｈｉｇｈ、ＣＤ２７^＋及びＢＣＬ２の１つ以上の発現の増大；
例えば、メモリーＴ細胞、例えばメモリーＴ細胞前駆体でのＫＬＲＧ１の発現の減少；及び
例えば、下記の特徴：ＣＤ６２Ｌ^ｈｉｇｈの増加、ＣＤ１２７^ｈｉｇｈの増加、ＣＤ２７^＋の増加、ＫＬＲＧ１の減少及びＢＣＬ２の増加のいずれか１つ又はそれらの組み合わせを備えるメモリーＴ細胞前駆体の数の増加
の１つ以上をもたらし、ここで、前述した変化のいずれかは、例えば、非処置対象と比べて、少なくとも一時的に起こる。

「難治性」は、本明細書で使用される場合、処置に応答しない疾患、例えば癌を指す。複数の実施形態において、難治性癌は、処置の開始前又は開始時点で処置に抵抗性であり得る。他の実施形態において、難治性癌は、処置中に抵抗性になり得る。難治性癌は、抵抗性癌とも称される。

本明細書で使用される「再発した」又は「再発」は、改善若しくは応答性期間後、例えばある治療（例えば、癌治療）による以前の処置後の疾患（例えば、癌）の又は癌などの疾患の兆候及び症状の再発又は再出現を指す。初期の応答性期間は、癌細胞のレベルの、ある閾値未満、例えば２０％、１％、１０％、５％、４％、３％、２％又は１％未満への低下を含み得る。再出現は、癌細胞のレベルの、ある閾値を越える、例えば２０％、１％、１０％、５％、４％、３％、２％又は１％を超える増加を含み得る。例えば、再出現は、例えば、Ｂ－ＡＬＬに関連して、完全応答後の、例えば血液、骨髄（＞５％）又は任意の髄外部位における芽球の再出現を含み得る。これに関連して、完全応答は、＜５％のＢＭ芽球を含み得る。より一般的には、一部の実施形態において、応答（例えば、完全応答又は部分応答）は、検出可能なＭＲＤ（微小残存病変）の非存在を含み得る。一実施形態において、応答性の初期期間は、少なくとも１、２、３、４、５又は６日間；少なくとも１、２、３又は４週間；少なくとも１、２、３、４、６、８、１０又は１２ヶ月間；又は少なくとも１、２、３、４又は５年間続く。

範囲：本開示全体を通じて、本発明の様々な実施形態が範囲の形式で提示され得る。範囲の形式での記載は、単に便宜上及び簡潔にするためのものであり、本発明の範囲に対する確固たる限定と解釈されてはならないことが理解されるべきである。従って、範囲の記載は、具体的に開示される全ての可能な部分範囲並びにその範囲内にある個々の数値を有すると考えられなければならない。例えば、１～６などの範囲の記載は、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６などの具体的に開示される部分範囲並びにその範囲内にある個々の数値、例えば１、２、２．７、３、４、５、５．３及び６を有すると考えられなければならない。別の例として、９５～９９％の同一性などの範囲は、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するものを含み、及び９６～９９％、９６～９８％、９６～９７％、９７～９９％、９７～９８％及び９８～９９％の同一性などの部分範囲を含む。これは、範囲の幅に関わらず適用される。

「遺伝子編集システム」は、この用語が本明細書で使用されるとき、前記システムにより標的化されるゲノムＤＮＡの部位若しくはその付近の１つ以上の核酸の改変、例えば欠失を指令し、実行するシステム、例えば１つ以上の分子を指す。遺伝子編集システムは、当技術分野では公知であり、以下により詳しく記載する。

「組み合わせて」投与されるは、本明細書で使用される場合、疾患による対象の苦痛が継続する過程において２種（以上の）異なる処置が対象に送達されることを意味し、例えば対象が疾患を有すると診断された後且つ疾患が治癒若しくは排除されるか、又は処置が他の理由で中止される前に、２種以上の処置が送達される。一部の実施形態では、１つの処置の送達は、第２の処置の送達が開始するとき依然として続いており、これにより、投与に関して重複が存在する。これは、本明細書において、「同時」又は「同時送達」と呼ばれる場合がある。他の実施形態では、１つの処置の送達は、他の処置の送達が開始する前に終了する。いずれかの場合の一部の実施形態において、処置は、併用投与によってより有効である。例えば、第２の処置の方が有効であり、例えばより少ない第２の処置で同等の効果がみられるか、又は第２の処置は、第１の処置を行わずに第２の処置が投与される場合にみられるものより優れた程度まで症状を軽減するか若しくは第１の処置と類似の状況がみられる。一部の実施形態では、送達は、症状の軽減又は障害に関する他のパラメーターが、一方が他方なしで送達された場合に認められるものより高くなるようにする。２つの処置の効果は、部分的に相加的、完全に相加的であるか又は相加的を上回り得る。送達は、送達される第１の処置の効果が、第２の処置が送達されるときにも依然として検出可能であるようにすることができる。

本明細書で互換的に使用される「枯渇（欠失）」又は「枯渇する（欠失させる）こと」という用語は、プロセス、例えば選択ステップ、例えばネガティブ選択が実施された後の、サンプル中の細胞、タンパク質若しくは高分子のレベル又は量の減少又は低下を指す。枯渇は、細胞、タンパク質若しくは高分子の完全又は部分的な枯渇であり得る。一部の実施形態において、枯渇は、プロセスが実施される前のサンプル中の細胞、タンパク質若しくは高分子のレベル又は量と比べて、細胞、タンパク質若しくは高分子のレベル又は量の少なくとも１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％の減少又は低下である。

本明細書で使用される場合、「ナイーブＴ細胞」は、抗原未経験のＴ細胞を指す。一部の実施形態では、抗原未経験Ｔ細胞は、胸腺中でそのコグネイト抗原に遭遇しているが、末梢では遭遇していない。一部の実施形態では、ナイーブＴ細胞は、メモリーＴ細胞の前駆体である。一部の実施形態では、ナイーブＴ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ及びＣＣＲ７の両方を発現するが、ＣＤ４５ＲＯを発現しない。一部の実施形態では、ナイーブＴ細胞は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ２７、ＣＣＲ７、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ２８及びＣＤ１２７の発現並びにＣＤ９５又はＣＤ４５ＲＯアイソフォームの非存在を特徴とし得る。一部の実施形態では、ナイーブＴ細胞は、ＣＤ６２Ｌ、ＩＬ－７受容体α、ＩＬ－６受容体及びＣＤ１３２を発現するが、ＣＤ２５、ＣＤ４４、ＣＤ６９又はＣＤ４５ＲＯを発現しない。一部の実施形態では、ナイーブＴ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７及びＣＤ６２Ｌを発現するが、ＣＤ９５又はＩＬ－２受容体βを発現しない。一部の実施形態では、マーカーの表面発現レベルは、フローサイトメトリーを用いて評価される。

用語「セントラルメモリーＴ細胞」は、ヒトにおいてＣＤ４５ＲＯ陽性であり、ＣＣＲ７を発現するＴ細胞のサブセットを指す。一部の実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞は、ＣＤ９５を発現する。一部の実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞は、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－７Ｒ及び／又はＩＬ－１５Ｒを発現する。一部の実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞は、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ９５、ＩＬ－２受容体β、ＣＣＲ７及びＣＤ６２Ｌを発現する。一部の実施形態では、マーカーの表面発現レベルは、フローサイトメトリーを用いて評価される。

用語「ステムメモリーＴ細胞」、「幹細胞メモリーＴ細胞」、「幹細胞様メモリーＴ細胞」、「メモリーステムＴ細胞」、「Ｔメモリー幹細胞」、「Ｔステムセルメモリー細胞」又は「ＴＳＣＭ細胞」は、幹細胞様能力、例えば自己再生する能力並びに／又はメモリー及び／若しくはエフェクターＴ細胞サブセットを再構成する多分化能を備えたメモリーＴ細胞のサブセットを指す。一部の実施形態では、ステムメモリーＴ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ９５、ＩＬ－２受容体β、ＣＣＲ７及びＣＤ６２Ｌを発現する。一部の実施形態では、マーカーの表面発現レベルは、フローサイトメトリーを用いて評価される。一部の実施形態では、例示的なステムメモリーＴ細胞は、Ｇａｔｔｉｎｏｎｉｅｔａｌ．，ＮａｔＭｅｄ．２０１７Ｊａｎｕａｒｙ０６；２３（１）：１８－２７に開示されており、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。

明瞭化の目的で、別に注記されない限り、特定のマーカーを「発現しない」又は「それが存在しない」又は「それについて陰性である」ものとして細胞若しくは細胞の集団を分類するのは、必ずしもマーカーの非存在を意味するわけではない。当業者は、容易に、陽性及び／若しくは陰性対照に対して細胞を比較し、及び／又は所定の閾値を設定し、且つ従来の検出方法を用いて、例えばフローサイトメトリーを用いて、例えば本明細書の実施例に記載されるように、細胞が、所定の閾値に満たない発現レベルを有するか、又は細胞の集団が、所定の閾値に満たない過剰発現レベルを有するとき、マーカーを発現しないか、若しくはマーカーについて陰性であるものとして細胞若しくは細胞の集団を分類することができる。

本明細書で使用される場合、細胞の「ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＳＣＭ）」という用語は、細胞が、幹細胞メモリーＴ細胞（ＴＳＣＭ）表現型に対してエフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）表現型を示す程度を表すスコアを指す。より高いＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＳＣＭ）は、ＴＥＭ表現型の増加を示すのに対し、より低いＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＳＣＭ）は、ＴＳＣＭ表現型の増加を示す。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＳＣＭ）は、ＴＥＭ細胞で上方制御される及び／又はＴＳＣＭで下方制御される１つ以上の遺伝子、例えばＭＸＲＡ７、ＣＬＩＣ１、ＮＡＴ１３、ＴＢＣ１Ｄ２Ｂ、ＧＬＣＣＩ１、ＤＵＳＰ１０、ＡＰＯＢＥＣ３Ｄ、ＣＡＣＮＢ３、ＡＮＸＡ２Ｐ２、ＴＰＲＧ１、ＥＯＭＥＳ、ＭＡＴＫ、ＡＲＨＧＡＰ１０、ＡＤＡＭ８、ＭＡＮ１Ａ１、ＳＬＦＮ１２Ｌ、ＳＨ２Ｄ２Ａ、ＥＩＦ２Ｃ４、ＣＤ５８、ＭＹＯ１Ｆ、ＲＡＢ２７Ｂ、ＥＲＮ１、ＮＰＣ１、ＮＢＥＡＬ２、ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ、ＳＹＴＬ２、ＳＬＣ４Ａ４、ＰＩＫ３ＡＰ１、ＰＴＧＤＲ、ＭＡＦ、ＰＬＥＫＨＡ５、ＡＤＲＢ２、ＰＬＸＮＤ１、ＧＮＡＯ１、ＴＨＢＳ１、ＰＰＰ２Ｒ２Ｂ、ＣＹＴＨ３、ＫＬＲＦ１、ＦＬＪ１６６８６、ＡＵＴＳ２、ＰＴＰＲＭ、ＧＮＬＹ及びＧＦＰＴ２からなる群から選択される１つ以上の遺伝子の発現を測定することによって決定される。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＳＣＭ）は、例えば、図２５Ａを参照にして実施例７に例示される通り、ＲＮＡ－ｓｅｑ、例えば単一細胞ＲＮＡ－ｓｅｑ（ｓｃＲＮＡ－ｓｅｑ）を用いて、各細胞について決定される。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＳＣＭ）は、遺伝子セット中の遺伝子全ての平均ｌｏｇ正規化遺伝子発現値を取得することにより計算される。

本明細書で使用されるとき、細胞の「ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵｐＴｒｅｇｖｓ．ＤｏｗｎＴｅｆｆ）」という用語は、細胞が、エフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）表現型に対して調節Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を示す程度を表すスコアを指す。より高いＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵｐＴｒｅｇｖｓ．ＤｏｗｎＴｅｆｆ）は、Ｔｒｅｇ表現型の増加を示すのに対し、より低いＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵｐＴｒｅｇｖｓ．ＤｏｗｎＴｅｆｆ）は、Ｔｅｆｆ表現型の増加を示す。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵｐＴｒｅｇｖｓ．ＤｏｗｎＴｅｆｆ）は、Ｔｒｅｇ細胞で上方制御される及び／又はＴｅｆｆ細胞で下方制御される１つ以上の遺伝子、例えばＣ１２ｏｒｆ７５、ＳＥＬＰＬＧ、ＳＷＡＰ７０、ＲＧＳ１、ＰＲＲ１１、ＳＰＡＴＳ２Ｌ、ＳＰＡＴＳ２Ｌ、ＴＳＨＲ、Ｃ１４ｏｒｆ１４５、ＣＡＳＰ８、ＳＹＴ１１、ＡＣＴＮ４、ＡＮＸＡ５、ＧＬＲＸ、ＨＬＡ－ＤＭＢ、ＰＭＣＨ、ＲＡＢ１１ＦＩＰ１、ＩＬ３２、ＦＡＭ１６０Ｂ１、ＳＨＭＴ２、ＦＲＭＤ４Ｂ、ＣＣＲ３、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＮＴＮＧ２、ＣＬＤＮＤ１、ＢＡＲＤ１、ＦＣＥＲ１Ｇ、ＴＹＭＳ、ＡＴＰ１Ｂ１、ＧＪＢ６、ＦＧＬ２、ＴＫ１、ＳＬＣ２Ａ８、ＣＤＫＮ２Ａ、ＳＫＡＰ２、ＧＰＲ５５、ＣＤＣＡ７、Ｓ１００Ａ４、ＧＤＰＤ５、ＰＭＡＩＰ１、ＡＣＯＴ９、ＣＥＰ５５、ＳＧＭＳ１、ＡＤＰＲＨ、ＡＫＡＰ２、ＨＤＡＣ９、ＩＫＺＦ４、ＣＡＲＤ１７、ＶＡＶ３、ＯＢＦＣ２Ａ、ＩＴＧＢ１、ＣＩＩＴＡ、ＳＥＴＤ７、ＨＬＡ－ＤＭＡ、ＣＣＲ１０、ＫＩＡＡ０１０１、ＳＬＣ１４Ａ１、ＰＴＴＧ３Ｐ、ＤＵＳＰ１０、ＦＡＭ１６４Ａ、ＰＹＨＩＮ１、ＭＹＯ１Ｆ、ＳＬＣ１Ａ４、ＭＹＢＬ２、ＰＴＴＧ１、ＲＲＭ２、ＴＰ５３ＩＮＰ１、ＣＣＲ５、ＳＴ８ＳＩＡ６、ＴＯＸ、ＢＦＳＰ２、ＩＴＰＲＩＰＬ１、ＮＣＡＰＨ、ＨＬＡ－ＤＰＢ２、ＳＹＴ４、ＮＩＮＪ２、ＦＡＭ４６Ｃ、ＣＣＲ４、ＧＢＰ５、Ｃ１５ｏｒｆ５３、ＬＭＣＤ１、ＭＫＩ６７、ＮＵＳＡＰ１、ＰＤＥ４Ａ、Ｅ２Ｆ２、ＣＤ５８、ＡＲＨＧＥＦ１２、ＬＯＣ１００１８８９４９、ＦＡＳ、ＨＬＡ－ＤＰＢ１、ＳＥＬＰ、ＷＥＥ１、ＨＬＡ－ＤＰＡ１、ＦＣＲＬ１、ＩＣＡ１、ＣＮＴＮＡＰ１、ＯＡＳ１、ＭＥＴＴＬ７Ａ、ＣＣＲ６、ＨＬＡ－ＤＲＢ４、ＡＮＸＡ２Ｐ３、ＳＴＡＭ、ＨＬＡ－ＤＱＢ２、ＬＧＡＬＳ１、ＡＮＸＡ２、ＰＩ１６、ＤＵＳＰ４、ＬＡＹＮ、ＡＮＸＡ２Ｐ２、ＰＴＰＬＡ、ＡＮＸＡ２Ｐ１、ＺＮＦ３６５、ＬＡＩＲ２、ＬＯＣ５４１４７１、ＲＡＳＧＲＰ４、ＢＣＡＳ１、ＵＴＳ２、ＭＩＡＴ、ＰＲＤＭ１、ＳＥＭＡ３Ｇ、ＦＡＭ１２９Ａ、ＨＰＧＤ、ＮＣＦ４、ＬＧＡＬＳ３、ＣＥＡＣＡＭ４、ＪＡＫＭＩＰ１、ＴＩＧＩＴ、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＩＫＺＦ２、ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＦＡＮＫ１、ＲＴＫＮ２、ＴＲＩＢ１、ＦＣＲＬ３及びＦＯＸＰ３からなる群から選択される１つ以上の遺伝子の発現を測定することによって決定される。一部の実施形態において、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵｐＴｒｅｇｖｓ．ＤｏｗｎＴｅｆｆ）は、例えば、図２５Ｂを参照にして実施例７に例示される通り、ＲＮＡ－ｓｅｑ、例えば単一細胞ＲＮＡ－ｓｅｑ（ｓｃＲＮＡ－ｓｅｑ）を用いて決定される。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵｐＴｒｅｇｖｓ．ＤｏｗｎＴｅｆｆ）は、遺伝子セット中の遺伝子全ての平均ｌｏｇ正規化遺伝子発現値を取得することにより計算される。

本明細書で使用されるとき、細胞の「ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（Ｄｏｗｎｓｔｅｍｎｅｓｓ）」という用語は、細胞が、幹細胞性表現型を示す程度を表すスコアを指す。より低いＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（Ｄｏｗｎｓｔｅｍｎｅｓｓ）は、幹細胞性表現型の増加を示す。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（Ｄｏｗｎｓｔｅｍｎｅｓｓ）は、造血幹細胞中で下方制御されるのに対して、分化幹細胞中で上方制御される１つ以上の遺伝子、例えばＡＣＥ、ＢＡＴＦ、ＣＤＫ６、ＣＨＤ２、ＥＲＣＣ２、ＨＯＸＢ４、ＭＥＯＸ１、ＳＦＲＰ１、ＳＰ７、ＳＲＦ、ＴＡＬ１及びＸＲＣＣ５からなる群から選択される１つ以上の遺伝子の発現を測定することにより測定される。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（Ｄｏｗｎｓｔｅｍｎｅｓｓ）は、例えば、図２５Ｃを参照にして実施例７に例示される通り、ＲＮＡ－ｓｅｑ、例えば単一細胞ＲＮＡ－ｓｅｑ（ｓｃＲＮＡ－ｓｅｑ）を用いて決定される。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（Ｄｏｗｎｓｔｅｍｎｅｓｓ）は、遺伝子セット中の遺伝子全ての平均ｌｏｇ正規化遺伝子発現値を取得することにより計算される。

本明細書で使用されるとき、細胞の「ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵＰｈｙｐｏｘｉａ）」という用語は、細胞が低酸素表現型を示す程度を表すスコアを示す。より高いＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵＰｈｙｐｏｘｉａ）は、低酸素表現型の増加を示す。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵＰｈｙｐｏｘｉａ）は、低酸素を被っている細胞において上方制御される１つ以上の遺伝子、例えばＡＢＣＢ１、ＡＣＡＴ１、ＡＤＭ、ＡＤＯＲＡ２Ｂ、ＡＫ２、ＡＫ３、ＡＬＤＨ１Ａ１、ＡＬＤＨ１Ａ３、ＡＬＤＯＡ、ＡＬＤＯＣ、ＡＮＧＰＴ２、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＸＡ１、ＡＮＸＡ２、ＡＮＸＡ５、ＡＲＨＧＡＰ５、ＡＲＳＥ、ＡＲＴ１、ＢＡＣＥ２、ＢＡＴＦ３、ＢＣＬ２Ｌ１、ＢＣＬ２Ｌ２、ＢＨＬＨＥ４０、ＢＨＬＨＥ４１、ＢＩＫ、ＢＩＲＣ２、ＢＮＩＰ３、ＢＮＩＰ３Ｌ、ＢＰＩ、ＢＴＧ１、Ｃ１１ｏｒｆ２、Ｃ７ｏｒｆ６８、ＣＡ１２、ＣＡ９、ＣＡＬＤ１、ＣＣＮＧ２、ＣＣＴ６Ａ、ＣＤ９９、ＣＤＫ１、ＣＤＫＮ１Ａ、ＣＤＫＮ１Ｂ、ＣＩＴＥＤ２、ＣＬＫ１、ＣＮＯＴ７、ＣＯＬ４Ａ５、ＣＯＬ５Ａ１、ＣＯＬ５Ａ２、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＰ、ＣＴＳＤ、ＣＸＣＲ４、Ｄ４Ｓ２３４Ｅ、ＤＤＩＴ３、ＤＤＩＴ４、１－Ｄｅｃ、ＤＫＣ１、ＤＲ１、ＥＤＮ１、ＥＤＮ２、ＥＦＮＡ１、ＥＧＦ、ＥＧＲ１、ＥＩＦ４Ａ３、ＥＬＦ３、ＥＬＬ２、ＥＮＧ、ＥＮＯ１、ＥＮＯ３、ＥＮＰＥＰ、ＥＰＯ、ＥＲＲＦＩ１、ＥＴＳ１、Ｆ３、ＦＡＢＰ５、ＦＧＦ３、ＦＫＢＰ４、ＦＬＴ１、ＦＮ１、ＦＯＳ、ＦＴＬ、ＧＡＰＤＨ、ＧＢＥ１、ＧＬＲＸ、ＧＰＩ、ＧＰＲＣ５Ａ、ＨＡＰ１、ＨＢＰ１、ＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ９、ＨＥＲＣ３、ＨＥＲＰＵＤ１、ＨＧＦ、ＨＩＦ１Ａ、ＨＫ１、ＨＫ２、ＨＬＡ－ＤＱＢ１、ＨＭＯＸ１、ＨＭＯＸ２、ＨＳＰＡ５、ＨＳＰＤ１、ＨＳＰＨ１、ＨＹＯＵ１、ＩＣＡＭ１、ＩＤ２、ＩＦＩ２７、ＩＧＦ２、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ５、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＮＳＩＧ１、ＩＲＦ６、ＩＴＧＡ５、ＪＵＮ、ＫＤＲ、ＫＲＴ１４、ＫＲＴ１８、ＫＲＴ１９、ＬＤＨＡ、ＬＤＨＢ、ＬＥＰ、ＬＧＡＬＳ１、ＬＯＮＰ１、ＬＯＸ、ＬＲＰ１、ＭＡＰ４、ＭＥＴ、ＭＩＦ、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ２、ＭＭＰ７、ＭＰＩ、ＭＴ１Ｌ、ＭＴＬ３Ｐ、ＭＵＣ１、ＭＸＩ１、ＮＤＲＧ１、ＮＦＩＬ３、ＮＦＫＢ１、ＮＦＫＢ２、ＮＯＳ１、ＮＯＳ２、ＮＯＳ２Ｐ１、ＮＯＳ２Ｐ２、ＮＯＳ３、ＮＲ３Ｃ１、ＮＲ４Ａ１、ＮＴ５Ｅ、ＯＤＣ１、Ｐ４ＨＡ１、Ｐ４ＨＡ２、ＰＡＩＣＳ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＫ３、ＰＦＫＦＢ１、ＰＦＫＦＢ３、ＰＦＫＦＢ４、ＰＦＫＬ、ＰＧＡＭ１、ＰＧＦ、ＰＧＫ１、ＰＧＫ２、ＰＧＭ１、ＰＩＭ１、ＰＩＭ２、ＰＫＭ２、ＰＬＡＵ、ＰＬＡＵＲ、ＰＬＩＮ２、ＰＬＯＤ２、ＰＮＮ、ＰＮＰ、ＰＯＬＭ、ＰＰＡＲＡ、ＰＰＡＴ、ＰＲＯＫ１、ＰＳＭＡ３、ＰＳＭＤ９、ＰＴＧＳ１、ＰＴＧＳ２、ＱＳＯＸ１、ＲＢＰＪ、ＲＥＬＡ、ＲＩＯＫ３、ＲＮＡＳＥＬ、ＲＰＬ３６Ａ、ＲＲＰ９、ＳＡＴ１、ＳＥＲＰＩＮＢ２、ＳＥＲＰＩＮＥ１、ＳＧＳＭ２、ＳＩＡＨ２、ＳＩＮ３Ａ、ＳＩＲＰＡ、ＳＬＣ１６Ａ１、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ２０Ａ１、ＳＬＣ２Ａ１、ＳＬＣ２Ａ３、ＳＬＣ３Ａ２、ＳＬＣ６Ａ１０Ｐ、ＳＬＣ６Ａ１６、ＳＬＣ６Ａ６、ＳＬＣ６Ａ８、ＳＯＲＬ１、ＳＰＰ１、ＳＲＳＦ６、ＳＳＳＣＡ１、ＳＴＣ２、ＳＴＲＡ１３、ＳＹＴ７、ＴＢＰＬ１、ＴＣＥＡＬ１、ＴＥＫ、ＴＦ、ＴＦＦ３、ＴＦＲＣ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ３、ＴＧＦＢＩ、ＴＧＭ２、ＴＨ、ＴＨＢＳ１、ＴＨＢＳ２、ＴＩＭＭ１７Ａ、ＴＮＦＡＩＰ３、ＴＰ５３、ＴＰＢＧ、ＴＰＤ５２、ＴＰＩ１、ＴＸＮ、ＴＸＮＩＰ、ＵＭＰＳ、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、ＶＩＭ、ＶＰＳ１１及びＸＲＣＣ６からなる群から選択される１つ以上の遺伝子の発現を測定することにより決定される。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵＰｈｙｐｏｘｉａ）は、例えば、図２５Ｄを参照にして実施例７に例示される通り、ＲＮＡ－ｓｅｑ、例えば単一細胞ＲＮＡ－ｓｅｑ（ｓｃＲＮＡ－ｓｅｑ）を用いて決定される。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵＰｈｙｐｏｘｉａ）は、遺伝子セット中の遺伝子全ての平均ｌｏｇ正規化遺伝子発現値を取得することにより計算される。

本明細書で使用されるとき、細胞の「ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵＰａｕｔｏｐｈａｇｙ）」という用語は、細胞がオートファジー表現型を示す程度を表すスコアを示す。より高いＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵＰａｕｔｏｐｈａｇｙ）は、オートファジー表現型の増加を示す。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵＰａｕｔｏｐｈａｇｙ）は、オートファジーを被っている細胞において上方制御される１つ以上の遺伝子、例えばＡＢＬ１、ＡＣＢＤ５、ＡＣＩＮ１、ＡＣＴＲＴ１、ＡＤＡＭＴＳ７、ＡＫＲ１Ｅ２、ＡＬＫＢＨ５、ＡＬＰＫ１、ＡＭＢＲＡ１、ＡＮＸＡ５、ＡＮＸＡ７、ＡＲＳＢ、ＡＳＢ２、ＡＴＧ１０、ＡＴＧ１２、ＡＴＧ１３、ＡＴＧ１４、ＡＴＧ１６Ｌ１、ＡＴＧ１６Ｌ２、ＡＴＧ２Ａ、ＡＴＧ２Ｂ、ＡＴＧ３、ＡＴＧ４Ａ、ＡＴＧ４Ｂ、ＡＴＧ４Ｃ、ＡＴＧ４Ｄ、ＡＴＧ５、ＡＴＧ７、ＡＴＧ９Ａ、ＡＴＧ９Ｂ、ＡＴＰ１３Ａ２、ＡＴＰ１Ｂ１、ＡＴＰＡＦ１－ＡＳ１、ＡＴＰＩＦ１、ＢＥＣＮ１、ＢＥＣＮ１Ｐ１、ＢＬＯＣ１Ｓ１、ＢＭＰ２ＫＬ、ＢＮＩＰ１、ＢＮＩＰ３、ＢＯＣ、Ｃ１１ｏｒｆ２、Ｃ１１ｏｒｆ４１、Ｃ１２ｏｒｆ４４、Ｃ１２ｏｒｆ５、Ｃ１４ｏｒｆ１３３、Ｃ１ｏｒｆ２１０、Ｃ５、Ｃ６ｏｒｆ１０６、Ｃ７ｏｒｆ５９、Ｃ７ｏｒｆ６８、Ｃ８ｏｒｆ５９、Ｃ９ｏｒｆ７２、ＣＡ７、ＣＡＬＣＢ、ＣＡＬＣＯＣＯ２、ＣＡＰＳ、ＣＣＤＣ３６、ＣＤ１６３Ｌ１、ＣＤ９３、ＣＤＣ３７、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＨＡＦ１Ｂ、ＣＨＭＰ２Ａ、ＣＨＭＰ２Ｂ、ＣＨＭＰ３、ＣＨＭＰ４Ａ、ＣＨＭＰ４Ｂ、ＣＨＭＰ４Ｃ、ＣＨＭＰ６、ＣＨＳＴ３、ＣＩＳＤ２、ＣＬＤＮ７、ＣＬＥＣ１６Ａ、ＣＬＮ３、ＣＬＶＳ１、ＣＯＸ８Ａ、ＣＰＡ３、ＣＲＮＫＬ１、ＣＳＰＧ５、ＣＴＳＡ、ＣＴＳＢ、ＣＴＳＤ、ＣＸＣＲ７、ＤＡＰ、ＤＫＫＬ１、ＤＮＡＡＦ２、ＤＰＦ３、ＤＲＡＭ１、ＤＲＡＭ２、ＤＹＮＬＬ１、ＤＹＮＬＬ２、ＤＺＡＮＫ１、ＥＩ２４、ＥＩＦ２Ｓ１、ＥＰＧ５、ＥＰＭ２Ａ、ＦＡＢＰ１、ＦＡＭ１２５Ａ、ＦＡＭ１３１Ｂ、ＦＡＭ１３４Ｂ、ＦＡＭ１３Ｂ、ＦＡＭ１７６Ａ、ＦＡＭ１７６Ｂ、ＦＡＭ４８Ａ、ＦＡＮＣＣ、ＦＡＮＣＦ、ＦＡＮＣＬ、ＦＢＸＯ７、ＦＣＧＲ３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ７、ＦＧＦＢＰ１、ＦＩＳ１、ＦＮＢＰ１Ｌ、ＦＯＸＯ１、ＦＵＮＤＣ１、ＦＵＮＤＣ２、ＦＸＲ２、ＧＡＢＡＲＡＰ、ＧＡＢＡＲＡＰＬ１、ＧＡＢＡＲＡＰＬ２、ＧＡＢＡＲＡＰＬ３、ＧＡＢＲＡ５、ＧＤＦ５、ＧＭＩＰ、ＨＡＰ１、ＨＡＰＬＮ１、ＨＢＸＩＰ、ＨＣＡＲ１、ＨＤＡＣ６、ＨＧＳ、ＨＩＳＴ１Ｈ３Ａ、ＨＩＳＴ１Ｈ３Ｂ、ＨＩＳＴ１Ｈ３Ｃ、ＨＩＳＴ１Ｈ３Ｄ、ＨＩＳＴ１Ｈ３Ｅ、ＨＩＳＴ１Ｈ３Ｆ、ＨＩＳＴ１Ｈ３Ｇ、ＨＩＳＴ１Ｈ３Ｈ、ＨＩＳＴ１Ｈ３Ｉ、ＨＩＳＴ１Ｈ３Ｊ、ＨＫ２、ＨＭＧＢ１、ＨＰＲ、ＨＳＦ２ＢＰ、ＨＳＰ９０ＡＡ１、ＨＳＰＡ８、ＩＦＩ１６、ＩＰＰＫ、ＩＲＧＭ、ＩＳＴ１、ＩＴＧＢ４、ＩＴＰＫＣ、ＫＣＮＫ３、ＫＣＮＱ１、ＫＩＡＡ０２２６、ＫＩＡＡ１３２４、ＫＲＣＣ１、ＫＲＴ１５、ＫＲＴ７３、ＬＡＭＰ１、ＬＡＭＰ２、ＬＡＭＴＯＲ１、ＬＡＭＴＯＲ２、ＬＡＭＴＯＲ３、ＬＡＲＰ１Ｂ、ＬＥＮＧ９、ＬＧＡＬＳ８、ＬＩＸ１、ＬＩＸ１Ｌ、ＬＭＣＤ１、ＬＲＲＫ２、ＬＲＳＡＭ１、ＬＳＭ４、ＭＡＰ１Ａ、ＭＡＰ１ＬＣ３Ａ、ＭＡＰ１ＬＣ３Ｂ、ＭＡＰ１ＬＣ３Ｂ２、ＭＡＰ１ＬＣ３Ｃ、ＭＡＰ１Ｓ、ＭＡＰ２Ｋ１、ＭＡＰ３Ｋ１２、ＭＡＲＫ２、ＭＢＤ５、ＭＤＨ１、ＭＥＸ３Ｃ、ＭＦＮ１、ＭＦＮ２、ＭＬＳＴ８、ＭＲＰＳ１０、ＭＲＰＳ２、ＭＳＴＮ、ＭＴＥＲＦＤ１、ＭＴＭＲ１４、ＭＴＭＲ３、ＭＴＯＲ、ＭＴＳＳ１、ＭＹＨ１１、ＭＹＬＫ、ＭＹＯＭ１、ＮＢＲ１、ＮＤＵＦＢ９、ＮＥＦＭ、ＮＨＬＲＣ１、ＮＭＥ２、ＮＰＣ１、ＮＲ２Ｃ２、ＮＲＢＦ２、ＮＴＨＬ１、ＮＵＰ９３、ＯＢＳＣＮ、ＯＰＴＮ、Ｐ２ＲＸ５、ＰＡＣＳ２、ＰＡＲＫ２、ＰＡＲＫ７、ＰＤＫ１、ＰＤＫ４、ＰＥＸ１３、ＰＥＸ３、ＰＦＫＰ、ＰＧＫ２、ＰＨＦ２３、ＰＨＹＨＩＰ、ＰＩ４Ｋ２Ａ、ＰＩＫ３Ｃ３、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３ＣＢ、ＰＩＫ３Ｒ４、ＰＩＮＫ１、ＰＬＥＫＨＭ１、ＰＬＯＤ２、ＰＮＰＯ、ＰＰＡＲＧＣ１Ａ、ＰＰＹ、ＰＲＫＡＡ１、ＰＲＫＡＡ２、ＰＲＫＡＢ１、ＰＲＫＡＢ２、ＰＲＫＡＧ１、ＰＲＫＡＧ２、ＰＲＫＡＧ３、ＰＲＫＤ２、ＰＲＫＧ１、ＰＳＥＮ１、ＰＴＰＮ２２、ＲＡＢ１２、ＲＡＢ１Ａ、ＲＡＢ１Ｂ、ＲＡＢ２３、ＲＡＢ２４、ＲＡＢ３３Ｂ、ＲＡＢ３９、ＲＡＢ７Ａ、ＲＢ１ＣＣ１、ＲＢＭ１８、ＲＥＥＰ２、ＲＥＰ１５、ＲＦＷＤ３、ＲＧＳ１９、ＲＨＥＢ、ＲＩＭＳ３、ＲＮＦ１８５、ＲＮＦ４１、ＲＰＳ２７Ａ、ＲＰＴＯＲ、ＲＲＡＧＡ、ＲＲＡＧＢ、ＲＲＡＧＣ、ＲＲＡＧＤ、Ｓ１００Ａ８、Ｓ１００Ａ９、ＳＣＮ１Ａ、ＳＥＲＰＩＮＢ１０、ＳＥＳＮ２、ＳＦＲＰ４、ＳＨ３ＧＬＢ１、ＳＩＲＴ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ１Ａ４、ＳＬＣ２２Ａ３、ＳＬＣ２５Ａ１９、ＳＬＣ３５Ｂ３、ＳＬＣ３５Ｃ１、ＳＬＣ３７Ａ４、ＳＬＣ６Ａ１、ＳＬＣＯ１Ａ２、ＳＭＵＲＦ１、ＳＮＡＰ２９、ＳＮＡＰＩＮ、ＳＮＦ８、ＳＮＲＰＢ、ＳＮＲＰＢ２、ＳＮＲＰＤ１、ＳＮＲＰＦ、ＳＮＴＧ１、ＳＮＸ１４、ＳＰＡＴＡ１８、ＳＱＳＴＭ１、ＳＲＰＸ、ＳＴＡＭ、ＳＴＡＭ２、ＳＴＡＴ２、ＳＴＢＤ１、ＳＴＫ１１、ＳＴＫ３２Ａ、ＳＴＯＭ、ＳＴＸ１２、ＳＴＸ１７、ＳＵＰＴ３Ｈ、ＴＢＣ１Ｄ１７、ＴＢＣ１Ｄ２５、ＴＢＣ１Ｄ５、ＴＣＩＲＧ１、ＴＥＡＤ４、ＴＥＣＰＲ１、ＴＥＣＰＲ２、ＴＦＥＢ、ＴＭ９ＳＦ１、ＴＭＢＩＭ６、ＴＭＥＭ２０３、ＴＭＥＭ２０８、ＴＭＥＭ３９Ａ、ＴＭＥＭ３９Ｂ、ＴＭＥＭ５９、ＴＭＥＭ７４、ＴＭＥＭ９３、ＴＮＩＫ、ＴＯＬＬＩＰ、ＴＯＭＭ２０、ＴＯＭＭ２２、ＴＯＭＭ４０、ＴＯＭＭ５、ＴＯＭＭ６、ＴＯＭＭ７、ＴＯＭＭ７０Ａ、ＴＰ５３ＩＮＰ１、ＴＰ５３ＩＮＰ２、ＴＲＡＰＰＣ８、ＴＲＥＭ１、ＴＲＩＭ１７、ＴＲＩＭ５、ＴＳＧ１０１、ＴＸＬＮＡ、ＵＢＡ５２、ＵＢＢ、ＵＢＣ、ＵＢＱＬＮ１、ＵＢＱＬＮ２、ＵＢＱＬＮ４、ＵＬＫ１、ＵＬＫ２、ＵＬＫ３、ＵＳＰ１０、ＵＳＰ１３、ＵＳＰ３０、ＵＶＲＡＧ、ＶＡＭＰ７、ＶＡＭＰ８、ＶＤＡＣ１、ＶＭＰ１、ＶＰＳ１１、ＶＰＳ１６、ＶＰＳ１８、ＶＰＳ２５、ＶＰＳ２８、ＶＰＳ３３Ａ、ＶＰＳ３３Ｂ、ＶＰＳ３６、ＶＰＳ３７Ａ、ＶＰＳ３７Ｂ、ＶＰＳ３７Ｃ、ＶＰＳ３７Ｄ、ＶＰＳ３９、ＶＰＳ４１、ＶＰＳ４Ａ、ＶＰＳ４Ｂ、ＶＴＡ１、ＶＴＩ１Ａ、ＶＴＩ１Ｂ、ＷＤＦＹ３、ＷＤＲ４５、ＷＤＲ４５Ｌ、ＷＩＰＩ１、ＷＩＰＩ２、ＸＢＰ１、ＹＩＰＦ１、ＺＣＣＨＣ１７、ＺＦＹＶＥ１、ＺＫＳＣＡＮ３、ＺＮＦ１８９、ＺＮＦ５９３及びＺＮＦ６８１からなる群から選択される１つ以上の遺伝子の発現を測定することにより決定される。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵＰａｕｔｏｐｈａｇｙ）は、例えば、図２５Ｅを参照にして実施例７に例示される通り、ＲＮＡ－ｓｅｑ、例えば単一細胞ＲＮＡ－ｓｅｑ（ｓｃＲＮＡ－ｓｅｑ）を用いて決定される。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵＰａｕｔｏｐｈａｇｙ）は、遺伝子セット中の遺伝子全ての平均ｌｏｇ正規化遺伝子発現値を取得することにより計算される。

本明細書で使用されるとき、細胞の「ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（Ｕｐｒｅｓｔｉｎｇｖｓ．Ｄｏｗｎａｃｔｉｖａｔｅｄ）」という用語は、細胞が、活性化Ｔ細胞表現型に対して休止Ｔ細胞表現型を示す程度を表すスコアを指す。より高いＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（Ｕｐｒｅｓｔｉｎｇｖｓ．Ｄｏｗｎａｃｔｉｖａｔｅｄ）は、休止Ｔ細胞表現型の増加を示すのに対し、より低いＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（Ｕｐｒｅｓｔｉｎｇｖｓ．Ｄｏｗｎａｃｔｉｖａｔｅｄ）は、活性化Ｔ細胞表現型の増加を示す。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（Ｕｐｒｅｓｔｉｎｇｖｓ．Ｄｏｗｎａｃｔｉｖａｔｅｄ）は、休止Ｔ細胞で上方制御され、且つ／又は活性化Ｔ細胞で下方制御される１つ以上の遺伝子、例えばＡＢＣＡ７、ＡＢＣＦ３、ＡＣＡＰ２、ＡＭＴ、ＡＮＫＨ、ＡＴＦ７ＩＰ２、ＡＴＧ１４、ＡＴＰ１Ａ１、ＡＴＸＮ７、ＡＴＸＮ７Ｌ３Ｂ、ＢＣＬ７Ａ、ＢＥＸ４、ＢＳＤＣ１、ＢＴＧ１、ＢＴＧ２、ＢＴＮ３Ａ１、Ｃ１１ｏｒｆ２１、Ｃ１９ｏｒｆ２２、Ｃ２１ｏｒｆ２、ＣＡＭＫ２Ｇ、ＣＡＲＳ２、ＣＣＮＬ２、ＣＤ２４８、ＣＤ５、ＣＤ５５、ＣＥＰ１６４、ＣＨＫＢ、ＣＬＫ１、ＣＬＫ４、ＣＴＳＬ１、ＤＢＰ、ＤＣＵＮ１Ｄ２、ＤＥＮＮＤ１Ｃ、ＤＧＫＤ、ＤＬＧ１、ＤＵＳＰ１、ＥＡＰＰ、ＥＣＥ１、ＥＣＨＤＣ２、ＥＲＢＢ２ＩＰ、ＦＡＭ１１７Ａ、ＦＡＭ１３４Ｂ、ＦＡＭ１３４Ｃ、ＦＡＭ１６９Ａ、ＦＡＭ１９０Ｂ、ＦＡＵ、ＦＬＪ１００３８、ＦＯＸＪ２、ＦＯＸＪ３、ＦＯＸＬ１、ＦＯＸＯ１、ＦＸＹＤ５、ＦＹＢ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＳＰＡ１Ｌ、ＨＹＡＬ２、ＩＣＡＭ２、ＩＦＩＴ５、ＩＦＩＴＭ１、ＩＫＢＫＢ、ＩＱＳＥＣ１、ＩＲＳ４、ＫＩＡＡ０６６４Ｌ３、ＫＩＡＡ０７４８、ＫＬＦ３、ＫＬＦ９、ＫＲＴ１８、ＬＥＦ１、ＬＩＮＣ００３４２、ＬＩＰＡ、ＬＩＰＴ１、ＬＬＧＬ２、ＬＭＢＲ１Ｌ、ＬＰＡＲ２、ＬＴＢＰ３、ＬＹＰＤ３、ＬＺＴＦＬ１、ＭＡＮＢＡ、ＭＡＰ２Ｋ６、ＭＡＰ３Ｋ１、ＭＡＲＣＨ８、ＭＡＵ２、ＭＧＥＡ５、ＭＭＰ８、ＭＰＯ、ＭＳＬ１、ＭＳＬ３、ＭＹＨ３、ＭＹＬＩＰ、ＮＡＧＰＡ、ＮＤＳＴ２、ＮＩＳＣＨ、ＮＫＴＲ、ＮＬＲＰ１、ＮＯＳＩＰ、ＮＰＩＰ、ＮＵＭＡ１、ＰＡＩＰ２Ｂ、ＰＡＰＤ７、ＰＢＸＩＰ１、ＰＣＩＦ１、ＰＩ４ＫＡ、ＰＬＣＬ２、ＰＬＥＫＨＡ１、ＰＬＥＫＨＦ２、ＰＮＩＳＲ、ＰＰＦＩＢＰ２、ＰＲＫＣＡ、ＰＲＫＣＺ、ＰＲＫＤ３、ＰＲＭＴ２、ＰＴＰ４Ａ３、ＰＸＮ、ＲＡＳＡ２、ＲＡＳＡ３、ＲＡＳＧＲＰ２、ＲＢＭ３８、ＲＥＰＩＮ１、ＲＮＦ３８、ＲＮＦ４４、ＲＯＲ１、ＲＰＬ３０、ＲＰＬ３２、ＲＰＬＰ１、ＲＰＳ２０、ＲＰＳ２４、ＲＰＳ２７、ＲＰＳ６、ＲＰＳ９、ＲＸＲＡ、ＲＹＫ、ＳＣＡＮＤ２、ＳＥＭＡ４Ｃ、ＳＥＴＤ１Ｂ、ＳＥＴＤ６、ＳＥＴＸ、ＳＦ３Ｂ１、ＳＨ２Ｂ１、ＳＬＣ２Ａ４ＲＧ、ＳＬＣ３５Ｅ２Ｂ、ＳＬＣ４６Ａ３、ＳＭＡＧＰ、ＳＭＡＲＣＥ１、ＳＭＰＤ１、ＳＮＰＨ、ＳＰ１４０Ｌ、ＳＰＡＴＡ６、ＳＰＧ７、ＳＲＥＫ１ＩＰ１、ＳＲＳＦ５、ＳＴＡＴ５Ｂ、ＳＶＩＬ、ＳＹＦ２、ＳＹＮＪ２ＢＰ、ＴＡＦ１Ｃ、ＴＢＣ１Ｄ４、ＴＣＦ２０、ＴＥＣＴＡ、ＴＥＳ、ＴＭＥＭ１２７、ＴＭＥＭ１５９、ＴＭＥＭ３０Ｂ、ＴＭＥＭ６６、ＴＭＥＭ８Ｂ、ＴＰ５３ＴＧ１、ＴＰＣＮ１、ＴＲＩＭ２２、ＴＲＩＭ４４、ＴＳＣ１、ＴＳＣ２２Ｄ１、ＴＳＣ２２Ｄ３、ＴＳＰＹＬ２、ＴＴＣ９、ＴＴＮ、ＵＢＥ２Ｇ２、ＵＳＰ３３、ＵＳＰ３４、ＶＡＭＰ１、ＶＩＬＬ、ＶＩＰＲ１、ＶＰＳ１３Ｃ、ＺＢＥＤ５、ＺＢＴＢ２５、ＺＢＴＢ４０、ＺＣ３Ｈ３、ＺＦＰ１６１、ＺＦＰ３６Ｌ１、ＺＦＰ３６Ｌ２、ＺＨＸ２、ＺＭＹＭ５、ＺＮＦ１３６、ＺＮＦ１４８、ＺＮＦ３１８、ＺＮＦ３５０、ＺＮＦ５１２Ｂ、ＺＮＦ６０９、ＺＮＦ６５２、ＺＮＦ８３、ＺＮＦ８６２及びＺＮＦ９１からなる群から選択される１つ以上の遺伝子の発現を測定することにより決定される。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（Ｕｐｒｅｓｔｉｎｇｖｓ．Ｄｏｗｎａｃｔｉｖａｔｅｄ）は、例えば、図２４Ｄを参照にして実施例７に例示される通り、ＲＮＡ－ｓｅｑ、例えば単一細胞ＲＮＡ－ｓｅｑ（ｓｃＲＮＡ－ｓｅｑ）を用いて決定される。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（Ｕｐｒｅｓｔｉｎｇｖｓ．Ｄｏｗｎａｃｔｉｖａｔｅｄ）は、遺伝子セット中の遺伝子全ての平均ｌｏｇ正規化遺伝子発現値を取得することにより計算される。

本明細書で使用されるとき、細胞の「ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅｌｙｕｐｉｎｍｅｍｏｒｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）」は、メモリー分化における細胞の段階を表すスコアを指す。より高いＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅｌｙｕｐｉｎｍｅｍｏｒｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）は、後期メモリーＴ細胞表現型の増加を示すのに対し、より低いＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅｌｙｕｐｉｎｍｅｍｏｒｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）は、早期メモリーＴ細胞表現型の増加を示す。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵＰａｕｔｏｐｈａｇｙ）は、メモリー分化中に上方制御される１つ以上の遺伝子、例えばＭＴＣＨ２、ＲＡＢ６Ｃ、ＫＩＡＡ０１９５、ＳＥＴＤ２、Ｃ２ｏｒｆ２４、ＮＲＤ１、ＧＮＡ１３、ＣＯＰＡ、ＳＥＬＴ、ＴＮＩＰ１、ＣＢＦＡ２Ｔ２、ＬＲＰ１０、ＰＲＫＣＩ、ＢＲＥ、ＡＮＫＳ１Ａ、ＰＮＰＬＡ６、ＡＲＬ６ＩＰ１、ＷＤＦＹ１、ＭＡＰＫ１、ＧＰＲ１５３、ＳＨＫＢＰ１、ＭＡＰ１ＬＣ３Ｂ２、ＰＩＰ４Ｋ２Ａ、ＨＣＮ３、ＧＴＰＢＰ１、ＴＬＮ１、Ｃ４ｏｒｆ３４、ＫＩＦ３Ｂ、ＴＣＩＲＧ１、ＰＰＰ３ＣＡ、ＡＴＧ４Ｄ、ＴＹＭＰ、ＴＲＡＦ６、Ｃ１７ｏｒｆ７６、ＷＩＰＦ１、ＦＡＭ１０８Ａ１、ＭＹＬ６、ＮＲＭ、ＳＰＣＳ２、ＧＧＴ３Ｐ、ＧＡＬＫ１、ＣＬＩＰ４、ＡＲＬ４Ｃ、ＹＷＨＡＱ、ＬＰＣＡＴ４、ＡＴＧ２Ａ、ＩＤＳ、ＴＢＣ１Ｄ５、ＤＭＰＫ、ＳＴ６ＧＡＬＮＡＣ６、ＲＥＥＰ５、ＡＢＨＤ６、ＫＩＡＡ０２４７、ＥＭＢ、ＴＳＥＮ５４、ＳＰＩＲＥ２、ＰＩＷＩＬ４、ＺＳＣＡＮ２２、ＩＣＡＭ１、ＣＨＤ９、ＬＰＩＮ２、ＳＥＴＤ８、ＺＣ３Ｈ１２Ａ、ＵＬＢＰ３、ＩＬ１５ＲＡ、ＨＬＡ－ＤＱＢ２、ＬＣＰ１、ＣＨＰ、ＲＵＮＸ３、ＴＭＥＭ４３、ＲＥＥＰ４、ＭＥＦ２Ｄ、ＡＢＬ１、ＴＭＥＭ３９Ａ、ＰＣＢＰ４、ＰＬＣＤ１、ＣＨＳＴ１２、ＲＡＳＧＲＰ１、Ｃ１ｏｒｆ５８、Ｃ１１ｏｒｆ６３、Ｃ６ｏｒｆ１２９、ＦＨＯＤ１、ＤＫＦＺｐ４３４Ｆ１４２、ＰＩＫ３ＣＧ、ＩＴＰＲ３、ＢＴＧ３、Ｃ４ｏｒｆ５０、ＣＮＮＭ３、ＩＦＩ１６、ＡＫ１、ＣＤＫ２ＡＰ１、ＲＥＬ、ＢＣＬ２Ｌ１、ＭＶＤ、ＴＴＣ３９Ｃ、ＰＬＥＫＨＡ２、ＦＫＢＰ１１、ＥＭＬ４、ＦＡＮＣＡ、ＣＤＣＡ４、ＦＵＣＡ２、ＭＦＳＤ１０、ＴＢＣＤ、ＣＡＰＮ２、ＩＱＧＡＰ１、ＣＨＳＴ１１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＭＹＯ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＤＬＧ３、ＭＸＤ４、ＲＡＬＧＤＳ、Ｓ１ＰＲ５、ＷＳＢ２、ＣＣＲ３、ＴＩＰＡＲＰ、ＳＰ１４０、ＣＤ１５１、ＳＯＸ１３、ＫＲＴＡＰ５－２、ＮＦ１、ＰＥＡ１５、ＰＡＲＰ８、ＲＮＦ１６６、ＵＥＶＬＤ、ＬＩＭＫ１、ＣＡＣＮＢ１、ＴＭＸ４、ＳＬＣ６Ａ６、ＬＢＡ１、ＳＶ２Ａ、ＬＬＧＬ２、ＩＲＦ１、ＰＰＰ２Ｒ５Ｃ、ＣＤ９９、ＲＡＰＧＥＦ１、ＰＰＰ４Ｒ１、ＯＳＢＰＬ７、ＦＯＸＰ４、ＳＬＡ２、ＴＢＣ１Ｄ２Ｂ、ＳＴ７、ＪＡＺＦ１、ＧＧＡ２、ＰＩ４Ｋ２Ａ、ＣＤ６８、ＬＰＧＡＴ１、ＳＴＸ１１、ＺＡＫ、ＦＡＭ１６０Ｂ１、ＲＯＲＡ、Ｃ８ｏｒｆ８０、ＡＰＯＢＥＣ３Ｆ、ＴＧＦＢＩ、ＤＮＡＪＣ１、ＧＰＲ１１４、ＬＲＰ８、ＣＤ６９、ＣＭＩＰ、ＮＡＴ１３、ＴＧＦＢ１、ＦＬＪ０００４９、ＡＮＴＸＲ２、ＮＲ４Ａ３、ＩＬ１２ＲＢ１、ＮＴＮＧ２、ＲＤＸ、ＭＬＬＴ４、ＧＰＲＩＮ３、ＡＤＣＹ９、ＣＤ３００Ａ、ＳＣＤ５、ＡＢＩ３、ＰＴＰＮ２２、ＬＧＡＬＳ１、ＳＹＴＬ３、ＢＭＰＲ１Ａ、ＴＢＫ１、ＰＭＡＩＰ１、ＲＡＳＧＥＦ１Ａ、ＧＣＮＴ１、ＧＡＢＡＲＡＰＬ１、ＳＴＯＭ、ＣＡＬＨＭ２、ＡＢＣＡ２、ＰＰＰ１Ｒ１６Ｂ、ＳＹＮＥ２、ＰＡＭ、Ｃ１２ｏｒｆ７５、ＣＬＣＦ１、ＭＸＲＡ７、ＡＰＯＢＥＣ３Ｃ、ＣＬＳＴＮ３、ＡＣＯＴ９、ＨＩＰ１、ＬＡＧ３、ＴＮＦＡＩＰ３、ＤＣＢＬＤ１、ＫＬＦ６、ＣＡＣＮＢ３、ＲＮＦ１９Ａ、ＲＡＢ２７Ａ、ＦＡＤＳ３、ＤＬＧ５、ＡＰＯＢＥＣ３Ｄ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＡＣＴＮ４、ＴＢＫＢＰ１、ＡＴＸＮ１、ＡＲＡＰ２、ＡＲＨＧＥＦ１２、ＦＡＭ５３Ｂ、ＭＡＮ１Ａ１、ＦＡＭ３８Ａ、ＰＬＸＮＣ１、ＧＲＬＦ１、ＳＲＧＮ、ＨＬＡ－ＤＲＢ５、Ｂ４ＧＡＬＴ５、ＷＩＰＩ１、ＰＴＰＲＪ、ＳＬＦＮ１１、ＤＵＳＰ２、ＡＮＸＡ５、ＡＨＮＡＫ、ＮＥＯ１、ＣＬＩＣ１、ＥＩＦ２Ｃ４、ＭＡＰ３Ｋ５、ＩＬ２ＲＢ、ＰＬＥＫＨＧ１、ＭＹＯ６、ＧＴＤＣ１、ＥＤＡＲＡＤＤ、ＧＡＬＭ、ＴＡＲＰ、ＡＤＡＭ８、ＭＳＣ、ＨＮＲＰＬＬ、ＳＹＴ１１、ＡＴＰ２Ｂ４、ＮＨＳＬ２、ＭＡＴＫ、ＡＲＨＧＡＰ１８、ＳＬＦＮ１２Ｌ、ＳＰＡＴＳ２Ｌ、ＲＡＢ２７Ｂ、ＰＩＫ３Ｒ３、ＴＰ５３ＩＮＰ１、ＭＢＯＡＴ１、ＧＹＧ１、ＫＡＴＮＡＬ１、ＦＡＭ４６Ｃ、ＺＣ３ＨＡＶ１Ｌ、ＡＮＸＡ２Ｐ２、ＣＴＮＮＡ１、ＮＰＣ１、Ｃ３ＡＲ１、ＣＲＩＭ１、ＳＨ２Ｄ２Ａ、ＥＲＮ１、ＹＰＥＬ１、ＴＢＸ２１、ＳＬＣ１Ａ４、ＦＡＳＬＧ、ＰＨＡＣＴＲ２、ＧＡＬＮＴ３、ＡＤＲＢ２、ＰＩＫ３ＡＰ１、ＴＬＲ３、ＰＬＥＫＨＡ５、ＤＵＳＰ１０、ＧＮＡＯ１、ＰＴＧＤＲ、ＦＲＭＤ４Ｂ、ＡＮＸＡ２、ＥＯＭＥＳ、ＣＡＤＭ１、ＭＡＦ、ＴＰＲＧ１、ＮＢＥＡＬ２、ＰＰＰ２Ｒ２Ｂ、ＰＥＬＯ、ＳＬＣ４Ａ４、ＫＬＲＦ１、ＦＯＳＬ２、ＲＧＳ２、ＴＧＦＢＲ３、ＰＲＦ１、ＭＹＯ１Ｆ、ＧＡＢ３、Ｃ１７ｏｒｆ６６、ＭＩＣＡＬ２、ＣＹＴＨ３、ＴＯＸ、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＳＹＮＥ１、ＷＥＥ１、ＰＹＨＩＮ１、Ｆ２Ｒ、ＰＬＤ１、ＴＨＢＳ１、ＣＤ５８、ＦＡＳ、ＮＥＴＯ２、ＣＸＣＲ６、ＳＴ６ＧＡＬＮＡＣ２、ＤＵＳＰ４、ＡＵＴＳ２、Ｃ１ｏｒｆ２１、ＫＬＲＧ１、ＴＮＩＰ３、ＧＺＭＡ、ＰＲＲ５Ｌ、ＰＲＤＭ１、ＳＴ８ＳＩＡ６、ＰＬＸＮＤ１、ＰＴＰＲＭ、ＧＦＰＴ２、ＭＹＢＬ１、ＳＬＡＭＦ７、ＦＬＪ１６６８６、ＧＮＬＹ、ＺＥＢ２、ＣＳＴ７、ＩＬ１８ＲＡＰ、ＣＣＬ５、ＫＬＲＤ１及びＫＬＲＢ１からなる群から選択される１つ以上の遺伝子の発現を測定することにより決定される。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅｌｙｕｐｉｎｍｅｍｏｒｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）は、例えば、図２６Ｂを参照にして実施例７に例示される通り、ＲＮＡ－ｓｅｑ、例えば単一細胞ＲＮＡ－ｓｅｑ（ｓｃＲＮＡ－ｓｅｑ）を用いて決定される。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅｌｙｕｐｉｎｍｅｍｏｒｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）は、遺伝子セット中の遺伝子全ての平均ｌｏｇ正規化遺伝子発現値を取得することにより計算される。

本明細書で使用されるとき、細胞の「ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＮ）」という用語は、細胞が、ナイーブＴ細胞（ＴＮ）表現型に対してエフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）表現型を示す程度を表すスコアを指す。より高いＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＮ）は、ＴＥＭ表現型の増加を示すのに対し、より低いＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＮ）は、ＴＮ表現型の増加を示す。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＮ）は、ＴＥＭ細胞で上方制御され、且つ／又はＴＮ細胞で下方制御される１つ以上の遺伝子、例えばＭＹＯ５Ａ、ＭＸＤ４、ＳＴＫ３、Ｓ１ＰＲ５、ＧＬＣＣＩ１、ＣＣＲ３、ＳＯＸ１３、ＫＲＴＡＰ５－２、ＰＥＡ１５、ＰＡＲＰ８、ＲＮＦ１６６、ＵＥＶＬＤ、ＬＩＭＫ１、ＳＬＣ６Ａ６、ＳＶ２Ａ、ＫＰＮＡ２、ＯＳＢＰＬ７、ＳＴ７、ＧＧＡ２、ＰＩ４Ｋ２Ａ、ＣＤ６８、ＺＡＫ、ＲＯＲＡ、ＴＧＦＢＩ、ＤＮＡＪＣ１、ＪＯＳＤ１、ＺＦＹＶＥ２８、ＬＲＰ８、ＯＳＢＰＬ３、ＣＭＩＰ、ＮＡＴ１３、ＴＧＦＢ１、ＡＮＴＸＲ２、ＮＲ４Ａ３、ＲＤＸ、ＡＤＣＹ９、ＣＨＮ１、ＣＤ３００Ａ、ＳＣＤ５、ＰＴＰＮ２２、ＬＧＡＬＳ１、ＲＡＳＧＥＦ１Ａ、ＧＣＮＴ１、ＧＬＵＬ、ＡＢＣＡ２、ＣＬＤＮＤ１、ＰＡＭ、ＣＬＣＦ１、ＭＸＲＡ７、ＣＬＳＴＮ３、ＡＣＯＴ９、ＭＥＴＲＮＬ、ＢＭＰＲ１Ａ、ＬＲＩＧ１、ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ、ＣＡＣＮＢ３、ＲＮＦ１９Ａ、ＲＡＢ２７Ａ、ＦＡＤＳ３、ＡＣＴＮ４、ＴＢＫＢＰ１、ＦＡＭ５３Ｂ、ＭＡＮ１Ａ１、ＦＡＭ３８Ａ、ＧＲＬＦ１、Ｂ４ＧＡＬＴ５、ＷＩＰＩ１、ＤＵＳＰ２、ＡＮＸＡ５、ＡＨＮＡＫ、ＣＬＩＣ１、ＭＡＰ３Ｋ５、ＳＴ８ＳＩＡ１、ＴＡＲＰ、ＡＤＡＭ８、ＭＡＴＫ、ＳＬＦＮ１２Ｌ、ＰＩＫ３Ｒ３、ＦＡＭ４６Ｃ、ＡＮＸＡ２Ｐ２、ＣＴＮＮＡ１、ＮＰＣ１、ＳＨ２Ｄ２Ａ、ＥＲＮ１、ＹＰＥＬ１、ＴＢＸ２１、ＳＴＯＭ、ＰＨＡＣＴＲ２、ＧＢＰ５、ＡＤＲＢ２、ＰＩＫ３ＡＰ１、ＤＵＳＰ１０、ＰＴＧＤＲ、ＥＯＭＥＳ、ＭＡＦ、ＴＰＲＧ１、ＮＢＥＡＬ２、ＮＣＡＰＨ、ＳＬＣ４Ａ４、ＦＯＳＬ２、ＲＧＳ２、ＴＧＦＢＲ３、ＭＹＯ１Ｆ、Ｃ１７ｏｒｆ６６、ＣＹＴＨ３、ＷＥＥ１、ＰＹＨＩＮ１、Ｆ２Ｒ、ＴＨＢＳ１、ＣＤ５８、ＡＵＴＳ２、ＦＡＭ１２９Ａ、ＴＮＩＰ３、ＧＺＭＡ、ＰＲＲ５Ｌ、ＰＲＤＭ１、ＰＬＸＮＤ１、ＰＴＰＲＭ、ＧＦＰＴ２、ＭＹＢＬ１、ＳＬＡＭＦ７、ＺＥＢ２、ＣＳＴ７、ＣＣＬ５、ＧＺＭＫ及びＫＬＲＢ１からなる群から選択される１つ以上の遺伝子の発現を測定することにより決定される。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＮ）は、例えば、図２６Ｃを参照にして実施例７に例示される通り、ＲＮＡ－ｓｅｑ、例えば単一細胞ＲＮＡ－ｓｅｑ（ｓｃＲＮＡ－ｓｅｑ）を用いて決定される。一部の実施形態では、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＮ）は、遺伝子セット中の遺伝子全ての平均ｌｏｇ正規化遺伝子発現値を取得することにより計算される。

ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ値（例えば、ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値）に関連して、正のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅが１００％減少するとき、この値は０になる。負のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅが１００％増加するとき、この値は０になる。例えば、図２５Ａにおいて、第１日サンプルのＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値は、－０．０８４であり；第９日サンプルのＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値は、０．０３５であり；入力サンプルのＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値は、－０．１である。図２５Ａにおいて、入力サンプルのＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値の１００％の増加により、０のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ値が得られ；入力サンプルのＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値の２００％の増加により、０．１のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ値が得られる。図２５Ａにおいて、第９日サンプルのＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値の１００％の減少により、０のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ値が得られ；第９日サンプルのＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ中央値の２００％の減少により、－０．０３５のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ値が得られる。

本明細書で使用されるとき、用語「ビーズ」は、直径約０．１μｍ～数ミリメートルのサイズの固体表面を備える個別の粒子を指す。ビーズは、球形（例えば、ミクロスフィア）であり得るか、又は不規則な形状を有し得る。ビーズは、限定されないが、常磁性材料、セラミック、プラスチック、ガラス、ポリスチレン、メチルスチレン、アクリルポリマー、チタン、ラテックス、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）、セルロース、ナイロンなどを含め、多様な材料を含み得る。一部の実施形態では、ビーズは、比較的均一で、直径約４．５μｍの、球形、超常磁性ポリスチレンビーズであり、例えばＣＤ３（例えば、ＣＤ３ε）及びＣＤ２８に対する抗体の混合物でコーティングされている、例えばそれと結合している。一部の実施形態では、ビーズは、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）である。一部の実施形態では、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体の双方が同じビーズに結合されて、抗原提示細胞によるＴ細胞の刺激を模倣する。Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）の特性並びに細胞単離及び増殖のためのＤｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）の使用は当技術分野で公知であり、例えばＮｅｕｒａｕｔｅｒｅｔａｌ．，ＣｅｌｌｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｅｘｐａｎｓｉｏｎｕｓｉｎｇＤｙｎａｂｅａｄｓ，ＡｄｖＢｉｏｃｈｅｍＥｎｇＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ２００７；１０６：４１－７３を参照されたく、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。

本明細書で使用されるとき、用語「ナノマトリックス」は、可動性ポリマー鎖のマトリックスを含むナノ構造を指す。ナノマトリックスは、１～５００ｎｍ、例えば１０～２００ｎｍのサイズである。一部の実施形態では、可動性ポリマー鎖のマトリックスは、Ｔ細胞に活性化シグナルを提供する１つ以上のアゴニスト、例えばアゴニスト抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８抗体に結合される。一部の実施形態では、ナノマトリックスは、１つ以上の刺激分子のアゴニスト及び／又は１つ以上の共刺激分子のアゴニストに結合、例えば共有結合したコロイドポリマーナノマトリックスを含む。一部の実施形態では、１つ以上の刺激分子のアゴニストは、ＣＤ３アゴニスト（例えば、抗ＣＤ３アゴニスト抗体）である。一部の実施形態では、１つ以上の刺激分子のアゴニストは、ＣＤ２８アゴニスト（例えば、抗ＣＤ２８アゴニスト抗体）である。一部の実施形態では、ナノマトリックスは、例えば、抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８抗体などのアゴニストの結合点として、固体表面の非存在を特徴とする。一部の実施形態では、ナノマトリックスは、国際公開第２０１４／０４８９２０Ａ１号パンフレットに開示されるナノマトリックス又はＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｃｃＧｍｂＨ製のＭＡＣＳ（登録商標）ＧＭＰＴＣｅｌｌＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）キットに提供されるようなナノマトリックスであり、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＭＡＣＳ（登録商標）ＧＭＰＴＣｅｌｌＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）は、ヒトＣＤ３及びＣＤ２８に対するヒト化組換えアゴニスト抗体に共有結合されたコロイドポリマーナノマトリックスから構成される。

本明細書に記載の組成物及び方法の様々な実施形態について以下でさらに詳細に説明する。追加的定義は、本明細書全体を通して記載される。

本明細書には、１つ以上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞を用いる、癌などの疾患の処置のための物質の組成物及び使用方法が提供される。一部の実施形態では、本発明は、１つ以上のＣＡＲを発現するように操作された細胞（例えば、免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞若しくはＮＫ細胞）を提供し、ここで、ＣＡＲＴ細胞（「ＣＡＲＴ」）又はＣＡＲＮＫ細胞は、抗腫瘍特性を呈示する。

一部の実施形態では、細胞は、少なくとも２つのＣＡＲを発現する。一部の実施形態では、細胞は、第１抗原に結合する第１ＣＡＲと、第２抗原に結合する第２ＣＡＲを発現する。一部の実施形態では、第１抗原と第２抗原は異なる。一部の実施形態では、第１抗原は、ＢＣＭＡである。一部の実施形態では、第１ＣＡＲは、本明細書に開示されるＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、ｓｃＦｖ若しくはＣＡＲ配列、例えば、表３～１５、１９、２０、２２及び２６に開示される配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む抗ＢＣＭＡＣＡＲ、例えば、本明細書に開示される抗ＢＣＭＡＣＡＲである。一部の実施形態では、第２抗原は、ＣＤ１９である。一部の実施形態では、第２抗原は、本明細書に開示されるＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、ｓｃＦｖ若しくはＣＡＲ配列、例えば、表２、１９及び２２に開示される配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９ＣＡＲ、例えば、本明細書に開示される抗ＣＤ１９ＣＡＲである。一部の実施形態では、第１ＣＡＲ及び第２ＣＡＲは、単一の核酸分子に配置される核酸配列により発現される。一部の実施形態では、第１ＣＡＲをコードする核酸配列と第２ＣＡＲをコードする核酸配列は、自己切断部位をコードする核酸、例えば、Ｐ２Ａ部位、Ｔ２Ａ部位、Ｅ２Ａ部位又はＦ２Ａ部位によって隔てられる。一部の実施形態では、細胞は、本明細書に開示される二重ＣＡＲを発現する細胞である。一部の実施形態では、第１ＣＡＲ及び第２ＣＡＲは、個別の核酸分子に配置される核酸配列により発現される。一部の実施形態では、本明細書に開示される共形質導入システムを用いて、細胞を操作する。

一部の実施形態では、細胞は、第１抗原及び第２抗原に結合するＣＡＲを発現する。一部の実施形態では、ＣＡＲは、本明細書に開示されるダイアボディＣＡＲである。一部の実施形態では、ＣＡＲは、第１ＶＨ（ＶＨ１）、第１ＶＬ（ＶＬ１）、第２ＶＨ（ＶＨ２）及び第２ＶＬ（ＶＬ２）を有する結合ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＨ１及びＶＬ１は、第１抗原に結合し、且つＶＨ２及びＶＬ２は、第２抗原に結合する。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＨ１－任意選択でリンカー１（「Ｌ１」）－ＶＨ２－任意選択でリンカー２（「Ｌ２」）－ＶＬ２－任意選択でリンカー３（「Ｌ３」）－ＶＬ１、ＶＨ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＬ１、ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＨ２－任意選択でＬ２－ＶＬ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１、ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１、ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２、ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２、ＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２；又はＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２で配列される。

一部の実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗原結合ドメインを細胞内シグナル伝達分子と結合させる。例えば、一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達分子として、限定されないが、ＣＤ３ζ鎖、４－１ＢＢ及びＣＤ２８シグナル伝達モジュール及びそれらの組み合わせが挙げられる。

さらには、本発明は、疾患の中でも、癌又はいずれかの悪性疾患若しくは自己免疫疾患を治療するためのＣＡＲ組成物及び薬剤におけるそれらの使用又は方法も提供する。

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
本発明は、免疫エフェクター細胞を、癌に指向させる、１つ以上のＣＡＲを含有するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を提供する。これは、癌関連抗原に対して特異的であるＣＡＲ上の抗原結合ドメインを通して達成される。本明細書に記載のＣＡＲにより標的化され得る２つのクラスの癌関連抗原（腫瘍抗原）が存在する：（１）癌細胞の表面に発現される癌関連抗原；及び（２）それ自体は細胞内であるが、そのような抗原のフラグメント（ペプチド）がＭＨＣ（主要組織適合複合体）により癌細胞の表面に提示される、癌関連抗原。

従って、免疫エフェクター細胞（例えば、本明細書に記載の方法によって得られるもの）は、以下の癌関連抗原（腫瘍抗原）の１つを標的とするＣＡＲを含有するように操作することができる：ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＳ－１、ＣＬＬ－１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＢＣＭＡ、ＴｎＡｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソテリン、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－β、ＰＲＳＳ２１、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、Ｐｒｏｓｔａｓｅ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体β、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、レグマイン、ＨＰＶＥ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥＡ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン及びテロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ及びｍｕｔｈｓｐ７０－２。

本明細書に記載されるＣＡＲ分子の一部となり得る様々な成分の非限定的な例の配列を表１に列挙し、ここで、「ａａ」は、アミノ酸を表し、「ｎａ」は、対応するペプチドをコードする核酸を表す。

一部の実施形態において、抗原結合ドメインは、標的細胞の表面上の対リガンドに結合する分子の細胞外ドメイン又はその対リガンド結合フラグメントを含む。

免疫エフェクター細胞は、ＣＡＲをコードする配列を含む組換えＤＮＡ構築物を含むことができ、ＣＡＲは、腫瘍抗原、例えば本明細書に記載の腫瘍抗原及び細胞内シグナル伝達ドメインに特異的に結合する抗原結合ドメイン（例えば、抗体又は抗体フラグメント、ＴＣＲ又はＴＣＲフラグメント）を含む。細胞内シグナル伝達ドメインは共刺激シグナル伝達ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメイン、例えば、ζ鎖を含み得る。他の箇所に記載されるように、本明細書に記載される方法は、細胞（例えば、Ｔ制御性枯渇細胞の集団からのもの）を、ＣＡＲ、例えば、本明細書に記載されるＣＡＲをコードする核酸で形質導入することを含み得る。

一部の実施形態において、ＣＡＲはｓｃＦｖドメインを含み、ｓｃＦｖの前には、配列番号１に提供されるような任意選択のリーダー配列があり得、後ろには、配列番号２又は配列番号３６又は配列番号３８に提供されるような任意選択のヒンジ配列、配列番号６に提供されるような膜貫通領域、配列番号７又は配列番号１６を含む細胞内シグナル伝達ドメイン及び配列番号９又は配列番号１０を含むＣＤ３ζ配列があり得、例えば、これらのドメインは、連続しており、同じリーディングフレーム内にあり、単一の融合タンパク質を形成する。

一部の実施形態において、例示的ＣＡＲ構築物は、任意選択のリーダー配列（例えば、本明細書に記載されるリーダー配列）、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される抗原結合ドメイン）、ヒンジ（例えば、本明細書に記載されるヒンジ領域）、膜貫通ドメイン（例えば、本明細書に記載される膜貫通ドメイン）及び細胞内刺激ドメイン（例えば、本明細書に記載される細胞内刺激ドメイン）を含む。一部の実施形態において、例示的ＣＡＲ構築物は、任意選択のリーダー配列（例えば、本明細書に記載されるリーダー配列）、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される抗原結合ドメイン）、ヒンジ（例えば、本明細書に記載されるヒンジ領域）、膜貫通ドメイン（例えば、本明細書に記載される膜貫通ドメイン）、細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載される共刺激シグナル伝達ドメイン）及び／又は細胞内一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載される一次シグナル伝達ドメイン）を含む。

例示的なリーダー配列は、配列番号１として提供される。別の例示的なリーダーは、配列番号３５１に提供されるか、又は配列番号３５２若しくは３５３によってコードされるものを含む。例示的なヒンジ／スペーサー配列は、配列番号２、又は配列番号３６、又は配列番号３８として提供される。例示的な膜貫通ドメイン配列は、配列番号６として提供される。例示的な４－１ＢＢタンパク質の細胞内シグナル伝達ドメインの配列は、配列番号７として提供される。例示的なＣＤ２７の細胞内シグナル伝達ドメインの配列の例は、配列番号１６として提供される。例示的なＣＤ３ζドメイン配列は、配列番号９又は配列番号１０として提供される。

一部の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、ＣＡＲをコードする核酸分子を含む組換え核酸構築物を含み、核酸分子は、抗原結合ドメインをコードする核酸配列を含み、この配列は、細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列に連続しており、それと同じリーディングフレーム内にある。ＣＡＲに使用し得る例示的細胞内シグナル伝達ドメインには、限定されないが、例えばＣＤ３－ζ、ＣＤ２８、４－１ＢＢなどの１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが含まれる。一部の例では、ＣＡＲは、ＣＤ３－ζ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、４－１ＢＢなどの任意の組み合わせを含み得る。

所望の分子をコードする核酸配列は、標準的な技法を用いて、例えば核酸分子を発現する細胞からのライブラリーをスクリーニングすることによるか、それを含むことが知られるベクターから核酸分子を誘導することによるか、又はそれを含む細胞及び組織から直接単離することによるなど、当技術分野において公知の組換え方法を用いて得ることができる。代わりに、目的の核酸はクローニングでなく、むしろ合成的に作製することができる。

ＣＡＲをコードする核酸は、例えばレトロウイルス又はレンチウイルスベクター構築物を使用して、免疫エフェクター細胞に導入することができる。

ＣＡＲをコードする核酸は、例えば、細胞に直接トランスフェクトされ得るＲＮＡ構築物を使用しても免疫エフェクター細胞に導入され得る。トランスフェクションに使用するためのｍＲＮＡの作成方法には、特別に設計したプライマーによるテンプレートのインビトロ転写（ＩＶＴ）と、続くポリ（Ａ）付加が含まれ、それにより、３’及び５’非翻訳配列（「ＵＴＲ」）（例えば、本明細書に記載の３’及び／又は５’ＵＴＲ）、５’キャップ（例えば、本明細書に記載の５’キャップ）及び／又は配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）（例えば、本明細書に記載のＩＲＥＳ）、発現させようとする核酸及びポリ（Ａ）テールを含む構築物、典型的には５０～２０００塩基長（例えば、実施例に記載されるもの、例えば、配列番号３５）が産生される。このように産生されたＲＮＡは、異なる種の細胞において効率的にトランスフェクトされ得る。一部の実施形態において、テンプレートは、ＣＡＲの配列を含む。一部の実施形態において、ＲＮＡＣＡＲベクターは、電気穿孔によって細胞、例えばＴ細胞に、形質導入される。

抗原結合ドメイン
一部の実施形態において、複数の免疫エフェクター細胞、例えばＴ制御性枯渇細胞の集団は、抗原結合ドメインとも称される標的特異的結合要素を含むＣＡＲをコードする核酸を含む。結合要素の選択は、標的細胞の表面を定義するリガンドのタイプ及び数に依存する。例えば、抗原結合ドメインは、特定の病状に関連する標的細胞上の細胞表面マーカーとして作用するリガンドを認識するように選択され得る。従って、本明細書に記載のＣＡＲにおいて抗原結合ドメインのリガンドとして作用し得る細胞表面マーカーの例には、ウイルス、細菌及び寄生虫感染、自己免疫疾患並びに癌細胞に関連するものが含まれる。

一部の実施形態において、抗原結合ドメインを含むＣＡＲの一部分は、腫瘍抗原、例えば本明細書に記載される腫瘍抗原を標的とする抗原結合ドメインを含む。

抗原結合ドメインは、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体及びその機能性フラグメント、例えば、限定されないが、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及びラクダ科動物由来ナノボディの可変ドメイン（ＶＨＨ）などのシングルドメイン抗体及び組換えフィブロネクチンドメイン、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）又はそのフラグメント、例えば、単鎖ＴＣＲなど、抗原結合ドメインとして機能することが当技術分野において公知の代替的足場を含め、抗原に結合する任意のドメインであり得る。一部の例において、抗原結合ドメインは、ＣＡＲが最終的に使用されることになる同じ種に由来することが有益である。例えば、ヒトでの使用には、ＣＡＲの抗原結合ドメインが抗体又は抗体フラグメントの抗原結合ドメインにヒト又はヒト化残基を含むことが有益であり得る。

ＣＤ１９ＣＡＲ
一部の実施形態において、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ１９ＣＡＲ発現細胞（例えば、ヒトＣＤ１９に結合するＣＡＲを発現する細胞）である。

一部の実施形態において、ＣＤ１９ＣＡＲの抗原結合ドメインは、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎｅｔａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（１６－１７）：１１５７－１１６５（１９９７）に記載されるＦＭＣ６３ｓｃＦｖフラグメントと同じであるか又は類似の結合特異性を有する。一部の実施形態において、ＣＤ１９ＣＡＲの抗原結合ドメインは、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎｅｔａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（１６－１７）：１１５７－１１６５（１９９７）に記載されるｓｃＦｖフラグメントを含む。

一部の実施形態において、ＣＤ１９ＣＡＲは、国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット（参照により本明細書に組み込まれる）の表３に従う抗原結合ドメイン（例えば、ヒト化抗原結合ドメイン）を含む。国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットは、様々なＣＡＲ構築物の結合及び有効性をアッセイする方法も記載する。

一部の実施形態において、親マウスｓｃＦｖ配列は、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレット（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるＣＡＲ１９構築物である。一部の実施形態において、抗ＣＤ１９結合ドメインは、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットに記載されるｓｃＦｖである。

一部の実施形態において、ＣＡＲ分子は、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットの配列番号１２に記載される融合ポリペプチド配列を含み、これは、ヒトＣＤ１９に特異的に結合するマウス由来のｓｃＦｖフラグメントを提供する。

一部の実施形態において、ＣＤ１９ＣＡＲは、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットの配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態において、アミノ酸配列は、

又はそれに対して実質的に相動性の配列である。

一部の実施形態において、ＣＤ１９ＣＡＲは、ＵＳＡＮ名ＴＩＳＡＧＥＮＬＥＣＬＥＵＣＥＬ－Ｔを有する。実施形態において、ＣＴＬ０１９は、Ｔ細胞の遺伝子改変によって作製され、この改変は、ＥＦ－１αプロモーターの制御下のＣＴＬ０１９導入遺伝子を含有する自己不活性化、複製欠損レンチウイルス（ＬＶ）ベクターでの形質導入による安定的挿入によって媒介される。ＣＴＬ０１９は、パーセント導入遺伝子陽性Ｔ細胞に基づいて対象に送達される導入遺伝子陽性Ｔ細胞と導入遺伝子陰性Ｔ細胞の混合物であり得る。

他の実施形態において、ＣＤ１９ＣＡＲは、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットの表３に記載の抗原結合ドメイン（例えば、ヒト化抗原結合ドメイン）を含む。

マウスＣＤ１９抗体のヒト化は、マウス特異的残基が、ＣＡＲＴ１９処置、すなわちＣＡＲ１９構築物で形質導入されたＴ細胞による処置を受ける患者にヒト－抗－マウス抗原（ＨＡＭＡ）応答を誘導し得る臨床現場において望ましい。ヒト化ＣＤ１９ＣＡＲ配列の生成、特性決定及び有効性について、国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット（その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）に、実施例１～５（ｐ．１１５～１５９）を含め、記載されている。

一部の実施形態において、ＣＡＲ分子は、

のアミノ酸配列を含むヒト化ＣＤ１９ＣＡＲである。

一部の実施形態において、ＣＡＲ分子は、

のアミノ酸配列を含むヒト化ＣＤ１９ＣＡＲである。

一部の実施形態では、ＣＡＲ分子は、

のアミノ酸配列を含むヒト化ＣＤ１９ＣＡＲである。

一部の実施形態では、ＣＡＲ分子は、

のアミノ酸配列を含むヒト化ＣＤ１９ＣＡＲである。

いずれか既知のＣＤ１９ＣＡＲ、例えばいずれか既知のＣＤ１９ＣＡＲのＣＤ１９抗原結合ドメインを当技術分野において本開示に従って使用することができる。例えば、ＬＧ－７４０；米国特許第８，３９９，６４５号明細書；米国特許第７，４４６，１９０号明細書；Ｘｕｅｔａｌ．，ＬｅｕｋＬｙｍｐｈｏｍａ．２０１３５４（２）：２５５－２６０（２０１２）；Ｃｒｕｚｅｔａｌ．，Ｂｌｏｏｄ１２２（１７）：２９６５－２９７３（２０１３）；Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓｅｔａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１１８（１８）：４８１７－４８２８（２０１１）；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒｅｔａｌ．，Ｂｌｏｏｄ１１６（２０）：４０９９－１０２（２０１０）；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒｅｔａｌ．，Ｂｌｏｏｄ１２２（２５）：４１２９－３９（２０１３）；及び１６ｔｈＡｎｎｕＭｅｅｔＡｍＳｏｃＧｅｎＣｅｌｌＴｈｅｒ（ＡＳＧＣＴ）（Ｍａｙ１５－１８，ＳａｌｔＬａｋｅＣｉｔｙ）２０１３，Ａｂｓｔ１０に記載のＣＤ１９ＣＡＲである。

例示的なＣＤ１９ＣＡＲは、本明細書に記載されるＣＤ１９ＣＡＲ又はＸｕｅｔａｌ．Ｂｌｏｏｄ１２３．２４（２０１４）：３７５０－９；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒｅｔａｌ．Ｂｌｏｏｄ１２２．２５（２０１３）：４１２９－３９，Ｃｒｕｚｅｔａｌ．Ｂｌｏｏｄ１２２．１７（２０１３）：２９６５－７３、ＮＣＴ００５８６３９１、ＮＣＴ０１０８７２９４、ＮＣＴ０２４５６３５０、ＮＣＴ００８４０８５３、ＮＣＴ０２６５９９４３、ＮＣＴ０２６５０９９９、ＮＣＴ０２６４０２０９、ＮＣＴ０１７４７４８６、ＮＣＴ０２５４６７３９、ＮＣＴ０２６５６１４７、ＮＣＴ０２７７２１９８、ＮＣＴ００７０９０３３、ＮＣＴ０２０８１９３７、ＮＣＴ００９２４３２６、ＮＣＴ０２７３５０８３、ＮＣＴ０２７９４２４６、ＮＣＴ０２７４６９５２、ＮＣＴ０１５９３６９６、ＮＣＴ０２１３４２６２、ＮＣＴ０１８５３６３１、ＮＣＴ０２４４３８３１、ＮＣＴ０２２７７５２２、ＮＣＴ０２３４８２１６、ＮＣＴ０２６１４０６６、ＮＣＴ０２０３０８３４、ＮＣＴ０２６２４２５８、ＮＣＴ０２６２５４８０、ＮＣＴ０２０３０８４７、ＮＣＴ０２６４４６５５、ＮＣＴ０２３４９６９８、ＮＣＴ０２８１３８３７、ＮＣＴ０２０５０３４７、ＮＣＴ０１６８３２７９、ＮＣＴ０２５２９８１３、ＮＣＴ０２５３７９７７、ＮＣＴ０２７９９５５０、ＮＣＴ０２６７２５０１、ＮＣＴ０２８１９５８３、ＮＣＴ０２０２８４５５、ＮＣＴ０１８４０５６６、ＮＣＴ０１３１８３１７、ＮＣＴ０１８６４８８９、ＮＣＴ０２７０６４０５、ＮＣＴ０１４７５０５８、ＮＣＴ０１４３０３９０、ＮＣＴ０２１４６９２４、ＮＣＴ０２０５１２５７、ＮＣＴ０２４３１９８８、ＮＣＴ０１８１５７４９、ＮＣＴ０２１５３５８０、ＮＣＴ０１８６５６１７、ＮＣＴ０２２０８３６２、ＮＣＴ０２６８５６７０、ＮＣＴ０２５３５３６４、ＮＣＴ０２６３１０４４、ＮＣＴ０２７２８８８２、ＮＣＴ０２７３５２９１、ＮＣＴ０１８６０９３７、ＮＣＴ０２８２２３２６、ＮＣＴ０２７３７０８５、ＮＣＴ０２４６５９８３、ＮＣＴ０２１３２６２４、ＮＣＴ０２７８２３５１、ＮＣＴ０１４９３４５３、ＮＣＴ０２６５２９１０、ＮＣＴ０２２４７６０９、ＮＣＴ０１０２９３６６、ＮＣＴ０１６２６４９５、ＮＣＴ０２７２１４０７、ＮＣＴ０１０４４０６９、ＮＣＴ００４２２３８３、ＮＣＴ０１６８０９９１、ＮＣＴ０２７９４９６１又はＮＣＴ０２４５６２０７に記載される抗ＣＤ１９ＣＡＲを含み、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

一部の実施形態において、ＣＤ１９ＣＡＲは、例えば、表２に開示されるＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、ｓｃＦｖ若しくは完全ＣＡＲ配列又はそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％の同一性を有する配列を含む。

ＢＣＭＡＣＡＲ
一部の実施形態において、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞は、ＢＣＭＡＣＡＲ発現細胞（例えば、ヒトＢＣＭＡに結合するＣＡＲを発現する細胞）である。例示的なＢＣＭＡＣＡＲは、国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレット（参照により本明細書に組み込まれる）の表１又は１６に開示される配列を含み得る。ＢＣＭＡＣＡＲ構築物は、任意選択のリーダー配列；任意選択ヒンジドメイン、例えばＣＤ８ヒンジドメイン；膜貫通ドメイン、例えばＣＤ８膜貫通ドメイン；細胞内ドメイン、例えば４－１ＢＢ細胞内ドメイン；及び機能的シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζドメインを含み得る。特定の実施形態において、ドメインは、隣接しており、同じリーディングフレーム内で単一の融合タンパク質を形成する。他の実施形態において、ドメインは、例えば、本明細書に記載されるＲＣＡＲ分子と同様に、個別のポリペプチド内に存在する。

一部の実施形態において、ＢＣＭＡＣＡＲ分子は、１つ以上のＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、ｓｃＦｖ又は国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレットに開示されるＢＣＭＡ－１、ＢＣＭＡ－２、ＢＣＭＡ－３、ＢＣＭＡ－４、ＢＣＭＡ－５、ＢＣＭＡ－６、ＢＣＭＡ－７、ＢＣＭＡ－８、ＢＣＭＡ－９、ＢＣＭＡ－１０、ＢＣＭＡ－１１、ＢＣＭＡ－１２、ＢＣＭＡ－１３、ＢＣＭＡ－１４、ＢＣＭＡ－１５、１４９３６２、１４９３６３、１４９３６４、１４９３６５、１４９３６６、１４９３６７、１４９３６８、１４９３６９、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ－Ｃ１９７８－Ａ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ－Ｃ１９７８－Ｇ１、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ－Ｃ１９７９－Ｃ１、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ－Ｃ１９７８－Ｃ７、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ－Ｃ１９７８－Ｄ１０、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ－Ｃ１９７９－Ｃ１２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ－Ｃ１９８０－Ｇ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ－Ｃ１９８０－Ｄ２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ－Ｃ１９７８－Ａ１０、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ－Ｃ１９７８－Ｄ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ－Ｃ１９８０－Ａ２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ－Ｃ１９８１－Ｃ３、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ－Ｃ１９７８－Ｇ４、Ａ７Ｄ１２．２、Ｃ１１Ｄ５．３、Ｃ１２Ａ３．２若しくはＣ１３Ｆ１２．１の完全長配列又はそれと実質的に（例えば、９５～９９％）同一の配列を含む。

抗ＢＣＭＡＣＡＲ構築物に使用することができる別の例示的なＢＣＭＡ標的化配列は、国際公開第２０１７／０２１４５０号、同第２０１７／０１１８０４号、同第２０１７／０２５０３８号、同第２０１６／０９０３２７号、同第２０１６／１３０５９８号、同第２０１６／２１０２９３号、同第２０１６／０９０３２０号、同第２０１６／０１４７８９号、同第２０１６／０９４３０４号、同第２０１６／１５４０５５号、同第２０１５／１６６０７３号、同第２０１５／１８８１１９号、同第２０１５／１５８６７１号パンフレット、米国特許第９，２４３，０５８号、同第８，９２０，７７６号、同第９，２７３，１４１号、同第７，０８３，７８５号、同第９，０３４，３２４号明細書、米国特許出願第２００７／００４９７３５号、同第２０１５／０２８４４６７号、同第２０１５／００５１２６６号、同第２０１５／０３４４８４４号、同第２０１６／０１３１６５５号、同第２０１６／０２９７８８４号、同第２０１６／０２９７８８５号、同第２０１７／００５１３０８号、同第２０１７／００５１２５２号、同第２０１７／００５１２５２号、同第２０１６／０２０３３２号、同第２０１６／０８７５３１号明細書、国際公開第２０１６／０７９１７７号、同第２０１５／１７２８００号、同第２０１７／００８１６９号パンフレット、米国特許第９，３４０，６２１号、米国特許出願第２０１３／０２７３０５５号、同第２０１６／０１７６９７３号、同第２０１５／０３６８３５１号、同第２０１７／００５１０６８号、同第２０１６／０３６８９８８号及び同第２０１５／０２３２５５７号明細書に開示されており、これらは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。一部の実施形態において、別の例示的なＢＣＭＡＣＡＲ構築物は、国際公開第２０１２／０１６３８０５号パンフレット（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）からのＶＨ及びＶＬ配列を用いて作製される。

一部の実施形態において、ＢＣＭＡＣＡＲは、配列、例えば表３～１５に開示されるＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、ｓｃＦｖ若しくは完全ＣＡＲ配列又はそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒト抗体又はヒト抗体フラグメントを含む。一部の実施形態において、ヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、本明細書に（例えば、表３～１５に）記載されるヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメインの１つ以上（例えば、全３つ）のＬＣＣＤＲ１、ＬＣ、ＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３並びに／又は本明細書に（例えば、表３～１５に）記載されるヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメインの１つ以上（例えば、全３つ）のＨＣＣＤＲ１、ＨＣ、ＣＤＲ２及びＨＣＣＤＲ３を含む。一部の実施形態において、ヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、本明細書に（例えば、表３、７、１１、１１ａ及び１２）に記載のヒトＶＬ並びに／又は本明細書に（例えば、表３、７、１１、１１ａ及び１２）に記載のヒトＶＨを含む。一部の実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、表３、７、１１、１１ａ及び１２のアミノ酸配列のＶＬ及びＶＨを含むｓｃＦｖである。一部の実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、以下を含む：表３、７、１１、１１ａ及び１２に記載のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）、しかし３０、２０若しくは１０以下の修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するアミノ酸配列又は表３、７、１１、１１ａ及び１２のアミノ酸配列と９５～９９％の同一性を有する配列を含むＶＬ並びに／或いは表３、７、１１、１１ａ及び１２に記載のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）、しかし３０、２０若しくは１０以下の修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するアミノ酸配列又は表３、７、１１、１１ａ及び１２のアミノ酸配列と９５～９９％の同一性を有する配列を含むＶＨ。

一部の実施形態において、ヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３を含む。

特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ分子又は本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、以下を含む：
（１）以下から選択される１つ、２つ若しくは３つの軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ：
（ｉ）配列番号５４のＬＣＣＤＲ１、配列番号５５のＬＣＣＤＲ２及び配列番号５６のＬＣＣＤＲ３；及び／又は
（２）以下の１つからの１つ、２つ若しくは３つの重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ：
（ｉ）配列番号４４のＨＣＣＤＲ１、配列番号４５のＨＣＣＤＲ２及び配列番号８４のＨＣＣＤＲ３；（ｉｉ）配列番号４４のＨＣＣＤＲ１、配列番号４５のＨＣＣＤＲ２及び配列番号４６のＨＣＣＤＲ３；（ｉｉｉ）配列番号４４のＨＣＣＤＲ１、配列番号４５のＨＣＣＤＲ２及び配列番号６８のＨＣＣＤＲ３；又は（ｉｖ）配列番号４４のＨＣＣＤＲ１、配列番号４５のＨＣＣＤＲ２及び配列番号７６のＨＣＣＤＲ３。

特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ分子又は本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、以下を含む：
（１）以下の１つからの１つ、２つ若しくは３つの軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ：
（ｉ）配列番号９５のＬＣＣＤＲ１、配列番号１３１のＬＣＣＤＲ２及び配列番号１３２のＬＣＣＤＲ３；（ｉｉ）配列番号９５のＬＣＣＤＲ１、配列番号９６のＬＣＣＤＲ２及び配列番号９７のＬＣＣＤＲ３；（ｉｉｉ）配列番号９５のＬＣＣＤＲ１、配列番号１１４のＬＣＣＤＲ２及び配列番号１１５のＬＣＣＤＲ３；又は（ｉｖ）配列番号９５のＬＣＣＤＲ１、配列番号１１４のＬＣＣＤＲ２及び配列番号９７のＬＣＣＤＲ３；及び／又は
（２）以下の１つからの１つ、２つ若しくは３つの重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ：
（ｉ）配列番号８６のＨＣＣＤＲ１、配列番号１３０のＨＣＣＤＲ２及び配列番号８８のＨＣＣＤＲ３；（ｉｉ）配列番号８６のＨＣＣＤＲ１、配列番号８７のＨＣＣＤＲ２及び配列番号８８のＨＣＣＤＲ３；又は（ｉｉｉ）配列番号８６のＨＣＣＤＲ１、配列番号１０９のＨＣＣＤＲ２及び配列番号８８のＨＣＣＤＲ３。

特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ分子又は本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、以下を含む：
（１）以下の１つからの１つ、２つ若しくは３つの軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ：
（ｉ）配列番号１４７のＬＣＣＤＲ１、配列番号１８２のＬＣＣＤＲ２及び配列番号１８３のＬＣＣＤＲ３；（ｉｉ）配列番号１４７のＬＣＣＤＲ１、配列番号１４８のＬＣＣＤＲ２及び配列番号１４９のＬＣＣＤＲ３；又は（ｉｉｉ）配列番号１４７のＬＣＣＤＲ１、配列番号１７０のＬＣＣＤＲ２及び配列番号１７１のＬＣＣＤＲ３；及び／又は
（２）以下の１つからの１つ、２つ若しくは３つの重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ：
（ｉ）配列番号１７９のＨＣＣＤＲ１、配列番号１８０のＨＣＣＤＲ２及び配列番号１８１のＨＣＣＤＲ３；（ｉｉ）配列番号１３７のＨＣＣＤＲ１、配列番号１３８のＨＣＣＤＲ２及び配列番号１３９のＨＣＣＤＲ３；又は（ｉｉｉ）配列番号１６０のＨＣＣＤＲ１、配列番号１６１のＨＣＣＤＲ２及び配列番号１６２のＨＣＣＤＲ３。

一部の実施形態において、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４４、４５、８４、５４、５５及び５６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４４、４５、４６、５４、５５及び５６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４４、４５、６８、５４、５５及び５６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４４、４５、７６、５４、５５及び５６のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態において、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４７、４８、８４、５７、５８及び５９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４７、４８、４６、５７、５８及び５９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４７、４８、６８、５７、５８及び５９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４７、４８、７６、５７、５８及び５９のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態において、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４９、５０、８５、６０、５８及び５６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４９、５０、５１、６０、５８及び５６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４９、５０、６９、６０、５８及び５６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４９、５０、７７、６０、５８及び５６のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態において、ヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＨ（例えば、本明細書に記載のＶＨ）及びＶＬ（例えば、本明細書に記載のＶＬ）を含むｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、ＶＨは、リンカー、例えば本明細書に記載されるリンカー、例えば表１に記載のリンカーを介してＶＬに結合される。一部の実施形態において、ヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、（Ｇｌｙ_４－Ｓｅｒ）ｎリンカーを含み、ここで、ｎは、１、２、３、４、５若しくは６、好ましくは３又は４である（配列番号２６）。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、例えば、以下の配向：軽鎖可変領域－リンカー－重鎖可変領域又は重鎖可変領域－リンカー－軽鎖可変領域のいずれでもあり得る。

一部の実施形態では、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、断片、例えば単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。一部の実施形態では、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２又は二機能性（例えば、二重特異性）ハイブリッドである（例えば、Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａｅｔａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７，１０５（１９８７））。一部の実施形態では、本発明の抗体及びその断片は、野生型又は増大した親和性でＢＣＭＡタンパク質と結合する。

一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、当技術分野で公知の方法に従って調製することができる（例えば、Ｂｉｒｄｅｔａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３－４２６及びＨｕｓｔｏｎｅｔａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９－５８８３を参照）。ｓｃＦｖ分子は、柔軟なポリペプチドリンカーを用いてＶＨ及びＶＬ領域を互いに連結することによって生成することができる。ｓｃＦｖ分子は、最適化された長さ及び／又はアミノ酸組成物を備えるリンカー（例えば、Ｓｅｒ－Ｇｌｙリンカー）を含む。リンカー長さは、どのようにｓｃＦｖ分子の可変領域がフォールドし、相互作用するかに大きく影響し得る。実際、短いポリペプチドリンカー（例えば、５～１０アミノ酸）を使用すると、鎖内フォールディングが妨げられる。また、鎖間フォールディングも、２つの可変領域を一緒にして、機能性エピトープ結合部位を形成するために必要である。例えば、リンカー配向及びサイズについて、例えばＨｏｌｌｉｎｇｅｒｅｔａｌ．１９９３ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６４４４－６４４８、米国特許出願第２００５／０１００５４３号、同第２００５／０１７５６０６号、同第２００７／００１４７９４号明細書並びに国際公開第２００６／０２０２５８号パンフレット及び同第２００７／０２４７１５号パンフレット（参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。

ｓｃＦｖは、そのＶＬ及びＶＨ領域間に少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０若しくはそれを超えるアミノ酸残基のリンカーを含み得る。リンカー配列は、いずれの天然に存在するアミノ酸を含み得る。一部の実施形態では、リンカー配列は、アミノ酸グリシン及びセリンを含む。一部の実施形態では、リンカー配列は、一連のグリシン及びセリン反復、例えば（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）ｎ（ここで、ｎは、１以上の正の整数である）（配列番号２５）を含む。一部の実施形態では、リンカーは、（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_４（配列番号２７）又は（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_３（配列番号２８）であり得る。リンカー長さの変化は、活性を保持又は増大して、活性試験で優れた有効性をもたらし得る。

ＣＤ２０ＣＡＲ
一部の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ２０ＣＡＲ発現細胞（例えば、ヒトＣＤ２０に結合するＣＡＲを発現する細胞）である。一部の実施形態では、ＣＤ２０ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に参照により組み込まれる国際公開第２０１６１６４７３１号パンフレット及び同第２０１８０６７９９２号パンフレットに従う抗原結合ドメインを含む。例示的なＣＤ２０結合配列又はＣＤ２０ＣＡＲ配列は、例えば、国際公開第２０１８０６７９９２号パンフレットの表１～５に開示されている。一部の実施形態では、ＣＤ２０ＣＡＲは、国際公開第２０１８０６７９９２号パンフレット又は同第２０１６１６４７３１号パンフレットに開示されるＣＤＲ、可変領域、ｓｃＦｖ又は完全長配列を含む。

ＣＤ２２ＣＡＲ
一部の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ２２ＣＡＲ発現細胞（例えば、ヒトＣＤ２０に結合するＣＡＲを発現する細胞）である。一部の実施形態では、ＣＤ２２ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に参照により組み込まれる国際公開第２０１６１６４７３１号パンフレット及び同第２０１８０６７９９２号パンフレットに従う抗原結合ドメインを含む。例示的なＣＤ２２結合配列又はＣＤ２２ＣＡＲ配列は、例えば、国際公開第２０１６１６４７３１号パンフレットの表６Ａ、６Ｂ、７Ａ、７Ｂ、７Ｃ、８Ａ、８Ｂ、９Ａ、９Ｂ、１０Ａ及び１０Ｂ並びに国際公開第２０１８０６７９９２号パンフレットの表６～１０に開示されている。一部の実施形態では、国際公開第２０１８０６７９９２号パンフレット又は同第２０１６１６４７３１号パンフレットに開示されるＣＤ２２ＣＡＲは、ＣＤＲ、可変領域、ｓｃＦｖ又は完全長配列を含む。

一部の実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＣＤ２２に結合する抗原を含む（ＣＤ２２ＣＡＲ）。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、ヒトＣＤ２２を標的にする。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、本明細書に記載の単鎖Ｆｖ配列を含む。

ヒトＣＤＣＡＲの配列を以下に記載する。一部の実施形態では、ヒトＣＤ２２ＣＡＲは、ＣＡＲ２２－６５である。

ヒトＣＤ２２ＣＡＲｓｃＦｖ配列

ヒトＣＤ２２ＣＡＲ重鎖可変領域

ヒトＣＤ２２ＣＡＲ軽鎖可変領域
ＱＳＡＬＴＱＰＡＳＡＳＧＳＰＧＱＳＶＴＩＳＣＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹＤＶＳＮＲＰＳＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＳＹＴＳＳＳＴＬＹＶＦＧＴＧＴＱＬＴＶＬ（配列番号２８７）

一部の実施形態において、抗原結合ドメインは、表１６に挙げる任意の重鎖結合ドメインアミノ酸配列のＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２及びＨＣＣＤＲ３を含む。複数の実施形態では、抗原結合ドメインは、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３をさらに含む。一部の実施形態において、抗原結合ドメインは、表１７に挙げるＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。

一部の実施形態において、抗原結合ドメインは、表１７に挙げる任意の重鎖結合ドメインアミノ酸配列のＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３の１つ、２つ若しくは全部と、表１６に挙げる任意の重鎖結合ドメインアミノ酸配列のＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２及びＨＣＣＤＲ３の１つ、２つ若しくは全部を含む。

一部の実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバーリングスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａナンバーリングスキーム又はそれらの組み合わせに従って定義される。

ＶＬ及びＶＨドメインがｓｃＦｖ内に出現する順序は変動する可能性があり（すなわちＶＬ－ＶＨ若しくはＶＨ－ＶＬ配向）、また各サブユニットが配列ＧＧＧＧＳ（配列番号２５）（例えば、（Ｇ４Ｓ）_３（配列番号２８）又は（Ｇ４Ｓ）_４（配列番号２７）を含む「Ｇ４Ｓ」サブユニット（配列番号２５）の１つ、２つ、３つ若しくは４つのコピーのいずれかは、可変ドメインを連結して、完全なｓｃＦｖドメインを形成することができる。代わりに、ＣＡＲ構築物は、例えば、配列ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号４３）を含むリンカーを含み得る。代わりに、ＣＡＲ構築物は、例えば、配列ＬＡＥＡＡＡＫ（配列番号３０８）を含むリンカーを含み得る。一部の実施形態では、ＣＡＲ構築物は、ＶＬ及びＶＨドメイン間にリンカーを含まない。

これらのクローン、全てＣＤ３ζ鎖由来の共刺激ドメインのシグナルドメインにＱ／Ｋ残基変化を含んだ。

ＥＧＦＲＣＡＲ
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞は、ＥＧＦＲＣＡＲ発現細胞（例えば、ヒトＥＧＦＲに結合するＣＡＲを発現する細胞）である。一部の実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、ＥＧＦＲｖＩＩＩＣＡＲ発現細胞（例えば、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩに結合するＣＡＲを発現する細胞）である。例示的なＥＧＦＲｖＩＩＩＣＡＲは、本明細書に参照により組み込まれる国際公開第２０１４／１３０６５７号パンフレット、例えば国際公開第２０１４／１３０６５７号パンフレットの表２に開示される配列を含む。

例示的なＥＧＦＲｖＩＩＩ結合配列又はＥＧＦＲＣＡＲ配列は、国際公開第２０１４／１３０６５７号パンフレットに開示されるＥＧＦＲＣＡＲのＣＤＲ、可変領域、ｓｃＦｖ又は完全長ＣＡＲ配列を含み得る。

メソテリンＣＡＲ
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞は、メソテリンＣＡＲ発現細胞（例えば、ヒトメソテリンに結合するＣＡＲを発現する細胞）である。例示的なメソテリンＣＡＲは、本明細書に参照により組み込まれる国際公開第２０１５０９０２３０号パンフレット及び同第２０１７１１２７４１号パンフレット、例えば国際公開第２０１７１１２７４１号パンフレットの表２、３、４及び５に開示される配列を含み得る。

他の例示的なＣＡＲ
他の実施形態では、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ１２３に特異的に結合することができ、例えば本明細書に参照により組み込まれる国際公開第２０１４／１３０６３５号パンフレットの表１～２のＣＡＲ分子（例えば、ＣＡＲ１～ＣＡＲ８）又は抗原結合ドメインを含み得る。ＣＤ１２３ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ若しくはＣｈｏｔｈｉａに従う１つ、２つ、３つのＶＨＣＤＲ；及び１つ、２つ、３つのＶＬＣＤＲ）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１４／１３０６３５号パンフレットに明示されている。他の実施形態では、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ１２３に特異的に結合することができ、例えば本明細書に参照により組み込まれる国際公開第２０１６／０２８８９６号パンフレットの表２、６及び９に従うＣＡＲ分子（例えば、ＣＡＲ１２３－１～ＣＡＲ１２３－４及びｈｚＣＡＲ１２３－１～ｈｚＣＡＲ１２３－３２のいずれか）又は抗原結合ドメインを含み得る。ＣＤ１２３ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ若しくはＣｈｏｔｈｉａに従う１つ、２つ、３つのＶＨＣＤＲ；及び１つ、２つ、３つのＶＬＣＤＲ）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０２８８９６号パンフレットに明示されている。

一部の実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載のＣＬＬ１ＣＡＲ、例えば本明細書に参照により組み込まれる米国特許出願第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書に記載されるＣＬＬ１ＣＡＲを含む。複数の実施形態では、ＣＬＬ１ＣＡＲは、アミノ酸を含むか、又は本明細書に参照により組み込まれる米国特許出願第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書に表示されるヌクレオチド配列を有する。他の実施形態では、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＬＬ－１に特異的に結合し、例えば本明細書に参照により組み込まれる国際公開第２０１６／０１４５３５号パンフレットの表２に従うＣＡＲ分子又は抗原結合ドメインを含み得る。ＣＬＬ－１ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ若しくはＣｈｏｔｈｉａに従う１つ、２つ、３つのＶＨＣＤＲ；及び１つ、２つ、３つのＶＬＣＤＲ）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０１４５３５号パンフレットに明示されている。

一部の実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載のＣＤ３３ＣＡＲ、例えば本明細書に参照により組み込まれる米国特許出願第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書に記載されるＣＤ３３ＣＡＲを含む。複数の実施形態では、ＣＤ３３ＣＡＲは、アミノ酸を含むか、又は本明細書に参照により組み込まれる米国特許出願第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書に表示されるヌクレオチド配列を有する。他の実施形態では、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ３３に特異的に結合し、例えば本明細書に参照により組み込まれる国際公開第２０１６／０１４５７６号パンフレットの表２若しくは９に従うＣＡＲ分子（例えば、ＣＡＲ３３－１～ＣＤ３３－９のいずれか）又は抗原結合ドメインを含み得る。ＣＤ３３ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ若しくはＣｈｏｔｈｉａに従う１つ、２つ、３つのＶＨＣＤＲ；及び１つ、２つ、３つのＶＬＣＤＲ）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０１４５７６号パンフレットに明示されている。

一部の実施形態において、抗原結合ドメインは、本明細書に記載の抗体からの１つ、２つ、３つ（例えば、３つ全て）の重鎖ＣＤＲ、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２及びＨＣＣＤＲ３（例えば、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレット、米国特許出願公開第２０１５－０２８３１７８－Ａ１号明細書、２０１６－００４６７２４－Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書又は国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレットに記載の抗体）及び／又は本明細書に記載の抗体からの１つ、２つ、３つ（例えば、３つ全て）の軽鎖ＣＤＲ、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３（例えば、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレット、米国特許出願公開第２０１５－０２８３１７８－Ａ１号明細書、２０１６－００４６７２４－Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書又は国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレットに記載の抗体）を含む。一部の実施形態において、抗原結合ドメインは、上に列挙した抗体の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域を含む。

実施形態において、抗原結合ドメインは、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレット、米国特許出願公開第２０１５－０２８３１７８－Ａ１号明細書、２０１６－００４６７２４－Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書又は国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレットに記載の抗原結合ドメインである。

実施形態において、抗原結合ドメインはＢＣＭＡを標的とし、米国特許出願公開第２０１６－００４６７２４－Ａ１号明細書に記載されている。実施形態において、抗原結合ドメインはＣＤ１９を標的とし、米国特許出願公開第２０１５－０２８３１７８－Ａ１号明細書に記載されている。実施形態において、抗原結合ドメインはＣＤ１２３を標的とし、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書に記載されている。実施形態において、抗原結合ドメインはＣＬＬ１を標的とし、米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書に記載されている。実施形態において、抗原結合ドメインはＣＤ３３を標的とし、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書に記載されている。

ＣＡＲ発現細胞を使用して標的とすることができる例示的な標的抗原には、例えば、それぞれ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット、国際公開第２０１４／１３０６３５号パンフレット、国際公開第２０１６／０２８８９６号パンフレット、国際公開第２０１４／１３０６５７号パンフレット、国際公開第２０１６／０１４５７６号パンフレット、国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット、国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレット、国際公開第２０１６／０１４５３５号パンフレット及び国際公開第２０１６／０２５８８０号パンフレットに記載されるように、とりわけ、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ３３、メソテリン、ＢＣＭＡ及びＧＦＲＡＬＰＨＡ－４が含まれるが、これらに限定されるものではない。

他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＧＦＲＡＬＰＨＡ－４に特異的に結合することができ、例えば、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／０２５８８０号パンフレットの表２に記載のＣＡＲ分子又は抗原結合ドメインを含み得る。ＧＦＲＡＬＰＨＡ－４ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメインをコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列（例えば、１つ、２つ、３つのＶＨＣＤＲ及びＫａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＬＣＤＲを含む）は、国際公開第２０１６／０２５８８０号パンフレットで特定されている。

一部の実施形態において、本明細書に記載されるＣＡＲ分子のいずれかの抗原結合ドメイン（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ３３、メソテリン、ＢＣＭＡ及びＧＦＲＡＬＰＨＡ－４）は、上に挙げた抗体由来の１つ、２つ、３つ（例えば、全３つの）重鎖ＣＤＲ、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２及びＨＣＣＤＲ３及び／又は上に挙げた抗原結合ドメイン由来の１つ、２つ、３つ（例えば、全３つの）軽鎖ＣＤＲ、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、上に列挙若しくは記載した抗体の重鎖可変領域及び／又は可変軽鎖領域を含む。

一部の実施形態において、抗原結合ドメインは、上に挙げた抗体由来の１つ、２つ、３つ（例えば、全３つの）重鎖ＣＤＲ、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２及びＨＣＣＤＲ３及び／又は上に挙げた抗原結合ドメイン由来の１つ、２つ、３つ（例えば、全３つの）軽鎖ＣＤＲ、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、上に列挙若しくは記載した抗体の重鎖可変領域及び／又は可変軽鎖領域を含む。

一部の実施形態において、腫瘍抗原は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる２０１５年３月１３日出願の国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレットに記載の腫瘍抗原である。一部の実施形態において、腫瘍抗原は、ＣＤ１９；ＣＤ１２３；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ１７１；ＣＳ－１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、１９Ａ２４とも称される）；Ｃ型レクチン様分子１（ＣＬＬ－１又はＣＬＥＣＬ１）；ＣＤ３３；上皮増殖因子受容体変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）；ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）；ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（１－４）ｂＤＧｌｃｐ（１－１）Ｃｅｒ）；ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーＢ細胞成熟（ＢＣＭＡ）；Ｔｎ抗原（（ＴｎＡｇ）又は（ＧａｌＮＡｃα－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ））；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）；Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）；腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン１３受容体サブユニットα２（ＩＬ－１３Ｒａ２又はＣＤ２１３Ａ２）；メソテリン；インターロイキン１１受容体α（ＩＬ－１１Ｒａ）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；プロテアーゼセリン２１（テスティシン又はＰＲＳＳ２１）；血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来増殖因子受容体β（ＰＤＧＦＲ－β）；ステージ特異的胚性抗原－４（ＳＳＥＡ－４）；ＣＤ２０；葉酸受容体α；受容体チロシンタンパク質キナーゼＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）；ムチン１、細胞表面関連（ＭＵＣ１）；上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；プロテアーゼ；前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）；伸長因子２変異体（ＥＬＦ２Ｍ）；エフリンＢ２；線維芽細胞活性化タンパク質α（ＦＡＰ）；インスリン様増殖因子１受容体（ＩＧＦ－Ｉ受容体）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）；プロテアソーム（プロソーム、マクロペイン）サブユニット、βタイプ、９（ＬＭＰ２）；糖タンパク質１００（ｇｐ１００）；切断点クラスター領域（ＢＣＲ）及びアベルソンマウス白血病ウイルス癌遺伝子ホモログ１（Ａｂｌ）（ｂｃｒ－ａｂｌ）；チロシナーゼ；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）；フコシルＧＭ１；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（１－４）ｂＤＧｌｃｐ（１－１）Ｃｅｒ）；トランスグルタミナーゼ５（ＴＧＳ５）；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ－アセチル－ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；葉酸受容体β；腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；クローディン６（ＣＬＤＮ６）；甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；Ｇタンパク質共役受容体クラスＣグループ５、メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；染色体Ｘオープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨグリコセラミド（ＧｌｏｂｏＨ）の六糖部分；乳腺分化抗原（ＮＹ－ＢＲ－１）；ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体β３（ＡＤＲＢ３）；パネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲγ代替オープンリーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；癌／精巣抗原１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）；癌／精巣抗原２（ＬＡＧＥ－１ａ）；黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ－Ａ１）；染色体１２ｐ上に位置するＥＴＳ転座変異体遺伝子６（ＥＴＶ６－ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリー、メンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）；アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ２）；黒色腫癌精巣抗原－１（ＭＡＤ－ＣＴ－１）；黒色腫癌精巣抗原－２（ＭＡＤ－ＣＴ－２）；Ｆｏｓ関連抗原１；腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）；ｐ５３変異体；プロステイン（ｐｒｏｓｔｅｉｎ）；生存；テロメラーゼ；前立腺癌腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１又はガレクチン８）、Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原１（ＭｅｌａｎＡ又はＭＡＲＴ１）；ラット肉腫（Ｒａｓ）変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫転座切断点；黒色腫由来アポトーシス阻害剤（ＭＬ－ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通型プロテーゼ、セリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢ１；ｖ－ｍｙｃトリ骨髄球症ウイルス癌遺伝子神経芽腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）；ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ－２）；チトクロムＰ４５０１Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）；ＣＣＣＴＣ結合因子（ジンクフィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ、すなわちＢｒｏｔｈｅｒｏｆｔｈｅＲｅｇｕｌａｔｏｒｏｆＩｍｐｒｉｎｔｅｄＳｉｔｅｓ）；Ｔ細胞により認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ－ＴＥＳ１）；リンパ球特異的プロテインチロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ－４）；滑膜肉腫、Ｘ染色体切断点２（ＳＳＸ２）；終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ－１）；腎ユビキタス１（ＲＵ１）；腎ユビキタス２（ＲＵ２）；レグマイン；ヒトパピローマウイルスＥ６（ＨＰＶＥ６）；ヒトパピローマウイルスＥ７（ＨＰＶＥ７）；腸カルボキシルエステラーゼ；熱ショックタンパク質７０－２変異体（ｍｕｔｈｓｐ７０－２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）；ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント（ＦＣＡＲ又はＣＤ８９）；白血球関連免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；及び免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）の１つ以上から選択される。

一部の実施形態において、抗原結合ドメインは、上に列挙した抗体からの１つ、２つ、３つ（例えば、３つ全て）の重鎖ＣＤＲ、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２及びＨＣＣＤＲ３並びに／又は上に列挙した抗体からの１つ、２つ、３つ（例えば、３つ全て）の軽鎖ＣＤＲ、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３を含む。一部の実施形態において、抗原結合ドメインは、上に列挙又は記載した抗体の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域を含む。

一部の実施形態において、抗腫瘍抗原結合ドメインは、フラグメント、例えば、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。一部の実施形態において、本明細書に記載されるような抗癌関連抗原結合ドメインは、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２又は二機能性（例えば、二特異性）ハイブリッド抗体（例えば、Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａｅｔａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７，１０５（１９８７））である。一部の実施形態において、本発明の抗体及びそのフラグメントは、野生型又は増強した親和性で本明細書に記載されるような癌関連抗原に結合する。

ある例において、ｓｃＦｖｓは、当技術分野で公知の方法により製造できる（例えば、Ｂｉｒｄｅｔａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３－４２６及びＨｕｓｔｏｎｅｔａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９－５８８３を参照されたい）。ＳｃＦｖ分子は、可動性ポリペプチドリンカーを使用して、ＶＨ領域とＶＬ領域を一緒に連結することにより産生できる。ｓｃＦｖ分子は、最適長及び／又はアミノ酸組成を有するリンカー（例えば、Ｓｅｒ－Ｇｌｙリンカー）を含む。リンカー長は、ｓｃＦｖの可変領域がどのように折りたたまれ、相互作用するかに大きく影響し得る。実際、短ポリペプチドリンカーを用いる場合、（例えば、５～１０アミノ酸）、鎖内折りたたみは阻止される。鎖内折りたたみは、２可変領域が一体となって機能的エピトープ結合部位を形成させるためにも必要である。リンカー方向及びサイズの例は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒｅｔａｌ．１９９３ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６４４４－６４４８、米国特許出願公開第２００５／０１００５４３号、同第２００５／０１７５６０６号、同第２００７／００１４７９４号明細書及び国際公開第２００６／０２０２５８号パンフレット及び国際公開第２００７／０２４７１５号パンフレットを参照されたい。

ｓｃＦｖは、そのＶＬ領域とＶＨ領域との間に少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０又はそれを超えるアミノ酸残基のリンカーを含み得る。リンカー配列は、あらゆる天然に存在するアミノ酸を含み得る。一実施形態において、リンカー配列は、アミノ酸グリシン及びセリンを含む。一部の実施形態において、リンカー配列は、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ（ここで、ｎは、１以上の正の整数である）など、一連のグリシン及びセリン反復を含む（配列番号２５）。一部の実施形態において、リンカーは（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）_４（配列番号２７）又は（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）_３（配列番号２８）であり得る。リンカー長の変動は、活性を維持又は増強し、活性試験において優れた有効性を生じ得る。

一部の実施形態において、抗原結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（「ＴＣＲ」）又はそのフラグメント、例えば単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）である。そのようなＴＣＲを作製する方法は当技術分野で公知である。例えば、ｉｌｌｅｍｓｅｎＲＡｅｔａｌ，ＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ７：１３６９－１３７７（２０００）；ＺｈａｎｇＴｅｔａｌ，ＣａｎｃｅｒＧｅｎｅＴｈｅｒ１１：４８７－４９６（２００４）；Ａｇｇｅｎｅｔａｌ，ＧｅｎｅＴｈｅｒ．１９（４）：３６５－７４（２０１２）（参考文献はその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。例えば、リンカー（例えば、柔軟なペプチド）によって連結されたＴ細胞クローン由来のＶα及びＶβ遺伝子を含むｓｃＴＣＲを操作することができる。このアプローチは、それ自体が細胞内にある癌関連標的にとって非常に有用であるが、そのような抗原（ペプチド）のフラグメントは、ＭＨＣによって癌細胞の表面に提示される。

膜貫通ドメイン
膜貫通ドメインに関して、種々の実施形態において、ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに結合する膜貫通ドメインを含むように設計できる。膜貫通ドメインは、膜貫通領域に隣接した１つ以上のさらなるアミノ酸、例えば膜貫通が由来するタンパク質の細胞外領域と関係する１つ以上のアミノ酸（例えば、細胞外領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０～最大で１５のアミノ酸）及び／又は膜貫通タンパク質が由来するタンパク質の細胞内領域と関係する１つ以上のアミノ酸（例えば、細胞内領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０～最大で１５のアミノ酸）を含み得る。一部の実施形態において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲの他のドメインの１つに関連して使用されるものである。ある例において、膜貫通ドメインは、このようなドメインが、同一又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインと結合するのを避けるように、例えば受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小化するように選択され又はアミノ酸置換による改変ができる。一部の実施形態において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲＴ細胞表面上の別のＣＡＲとホモ二量体化できる。一部の実施形態において、膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、同じＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲＴに存在する天然結合パートナーの結合ドメインとの相互作用を最小化するように改変又は置換され得る。

膜貫通ドメインは、天然由来又は組換え源由来であり得る。源が天然であるとき、ドメインは、あらゆる膜結合又は膜貫通タンパク質由来であり得る。一部の実施形態において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲが標的に結合したときは常に細胞内ドメインにシグナル伝達できる。本発明において特に有用な膜貫通ドメインは、例えば、Ｔ細胞受容体のα、β又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８（例えば、ＣＤ８α、ＣＤ８β）、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４の少なくとも膜貫通領域を含み得る。一部の実施形態において、膜貫通ドメインは、少なくとも、共刺激分子、例えばＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドの膜貫通領域を含み得る。

一部の事例において、膜貫通ドメインは、ヒンジ、例えばヒトタンパク質からのヒンジを介して、ＣＡＲの細胞外領域、例えばＣＡＲの抗原結合ドメインに結合することができる。例えば、一部の実施形態において、ヒンジは、ヒトＩｇ（免疫グロブリン）ヒンジ、例えばＩｇＧ４ヒンジ又はＣＤ８ａヒンジであり得る。一部の実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号２のアミノ酸配列を含む（例えば、これから構成される）。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号６の膜貫通ドメインを含む（例えば、これから構成される）。

一部の実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、ＩｇＧ４ヒンジを含む。例えば、一部の実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号３のヒンジを含む。一部の実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号１４のヌクレオチド配列によってコードされるヒンジを含む。

一部の実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、ＩｇＤヒンジを含む。例えば、一部の実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号４のアミノ酸配列のヒンジを含む。一部の実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号１５のヌクレオチド配列によってコードされるヒンジを含む。

一部の実施形態において、膜貫通ドメインは組換えであり得、その場合、ロイシン及びバリンなどの疎水性残基を優勢に含む。一部の実施形態において、フェニルアラニン、トリプトファン及びバリンのトリプレットを、組換え膜貫通ドメインの各末端に見ることができる。

任意選択で、２～１０アミノ酸長の短オリゴ又はポリペプチドリンカーが、ＣＡＲの膜貫通ドメインと細胞質領域との間に結合を形成し得る。グリシン－セリンダブレットは特に適当なリンカーを提供する。例えば、一部の実施形態において、リンカーは、配列番号５のアミノ酸配列を含む。一実施形態において、リンカーは、配列番号１６のヌクレオチド配列によってコードされる。

一部の実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、ＫＩＲ２ＤＳ２ヒンジを含む。

細胞質ドメイン
本発明のＣＡＲの細胞質ドメイン又は領域は、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。細胞内シグナル伝達ドメインは、一般的に、ＣＡＲが導入されている免疫細胞の正常エフェクター機能の少なくとも１つの活性化を担う。

本発明のＣＡＲにおいて使用する細胞内シグナル伝達ドメインの例は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及び抗原受容体結合後にシグナル伝達を開始するために協調して機能する共受容体の細胞質配列並びにこれらのあらゆる誘導体又はバリアント及び同じ機能的能力を有するあらゆる組換え配列を含む。

ＴＣＲ単独により産生されたシグナルはＴ細胞の完全活性化には不十分であり、二次及び／又は共刺激シグナルも必要であることが知られている。そのため、Ｔ細胞活性化は、２つの異なるクラスの細胞質シグナル伝達配列が介在するということができる：ＴＣＲ（初代細胞内シグナル伝達ドメイン）を介して抗原依存性一次活性化を開始するもの及び二次又は共刺激シグナル（二次細胞質ドメイン、例えば共刺激ドメイン）を提供するように抗原非依存的方法で作用するもの。

一次シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲ複合体の一次活性化を刺激性方向又は阻害性方向のいずれかで制御する。刺激性方向で作用する初代細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。

本発明において特に有用であるＩＴＡＭ含有初代細胞内シグナル伝達ドメインの例は、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」としても知られる）、ＦｃεＲＩ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２及びＣＤ６６ｄのものを含む。一部の実施形態において、本発明のＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζの一次シグナル伝達ドメインを含む。

一部の実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、天然ＩＴＡＭドメインと比べて改変された（例えば、増加又は減少した）活性を有する、修飾ＩＴＡＭドメイン、例えば変異ＩＴＡＭドメインを含む。一部の実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、修飾ＩＴＡＭ含有初代細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば最適化及び／又は切断されたＩＴＡＭ含有初代細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、１つ、２つ、３つ、４つ又はそれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。

本発明で特に有用な一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む分子のさらに別の例としては、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２及びＣＤ３２の分子が挙げられる。

ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３－ζシグナル伝達ドメインをそれ自体で含み得るか、又は本発明のＣＡＲに関連して有用ないずれか他の所望の細胞内シグナル伝達ドメインと組み合わされ得る。例えば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζ鎖部分並びに共刺激分子伝達ドメインを含み得る。共刺激分子シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲの一部を指す。共刺激分子は、抗原に対するリンパ球の効率的な応答に必要な抗原受容体又はそのリガンド以外の細胞表面分子である。こうした分子の例として、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む。例えば、ＣＤ２７共刺激は、インビトロでヒトＣＡＲＴ細胞の拡大、エフェクター機能及び生存を増大し、ヒトＴ細胞持続性及び抗腫瘍活性をインビボで高めることが実証されている（Ｓｏｎｇｅｔａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１２；１１９（３）：６９６－７０６）。本発明のＣＡＲの細胞質部分内の細胞内シグナル伝達配列を、ランダムに又は指定された順序で互いに連結させることもできる。任意選択で、２～１０アミノ酸（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０アミノ酸）長の短いオリゴ又はポリペプチドリンカーは、細胞内シグナル伝達配列同士の連結を形成し得る。一部の実施形態では、グリシン－セリンダブレットを好適なリンカーとして使用することができる。一部の実施形態では、単一アミノ酸、例えばアラニン、グリシンを好適なリンカーとして使用することができる。

一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、２つ以上、例えば２、３、４、５つ又はそれを超える共刺激シグナル伝達ドメインを含むように設計される。一部の実施形態では、２つ以上、例えば２、３、４、５つ又はそれを超える共刺激シグナル伝達ドメインは、リンカー分子、例えば本明細書に記載のリンカー分子によって隔てられている。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、２つの共刺激シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、リンカー分子は、グリシン残基である。一部の実施形態では、リンカーは、アラニン残基である。

一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメインとＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメインと４－１ＢＢのシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一部の実施形態では、４－１ＢＢのシグナル伝達ドメインは、配列番号７のシグナル伝達ドメインである。一部の実施形態では、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメインは、配列番号９（突然変異型ＣＤ３ζ）又は配列番号１０（野生型ヒトＣＤ３ζ）のシグナル伝達ドメインである。

一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメインとＣＤ２７のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一部の実施形態では、ＣＤ２７のシグナル伝達ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＤ２７のシグナル伝達ドメインは、配列番号１９の核酸配列によってコードされる。

一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメインとＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一部の実施形態では、ＣＤ２８のシグナル伝達ドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＤ２８のシグナル伝達ドメインは、配列番号３７の核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメインとＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一部の実施形態では、ＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインは、配列番号３８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインは、配列番号３９の核酸配列によってコードされる。

ＣＡＲ構成
二重ＣＡＲ
一実施形態では、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞若しくはＮＫ細胞）は、２つのＣＡＲ、例えば、第１抗原に結合する第１ＣＡＲと、第２抗原に結合する第２ＣＡＲを発現する。一実施形態では、第１抗原及び第２抗原は異なる。一実施形態では、第１若しくは第２抗原は、Ｂ細胞に発現される抗原、急性骨髄性白血病細胞に発現される抗原又は固形腫瘍細胞上の抗原から選択される。一実施形態では、第１若しくは第２抗原は、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＢＣＭＡ、ＦＬＴ－３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ３４、ＣＬＬ－１、葉酸受容体β、ＦＬＴ３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、メソテリン、ＧＤ２、Ｔｎ抗原、ｓＴｎ抗原、Ｔｎ－Ｏ－糖ペプチド、ｓＴｎ－Ｏ－糖ペプチド、ＰＳＭＡ、ＣＤ９７、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、レグマン、ＧＤ３、ＣＤ１７１、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－β、ＳＳＥＡ－４、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ（例えば、ＥＲＢＢ２）、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、エフリンＢ２、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｓＬｅ、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体β、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＦＡＰ、レグマイン、ＨＰＶＥ６若しくはＥ７、ＭＬ－ＩＡＰ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、Ｆｏｓ関連抗原、好中球エラスターゼ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、精子タンパク質１７、βヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＡＦＰ、チログロブリン、ＰＬＡＣ１、グロボＨ、ＲＡＧＥ１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔｈｓｐ７０－２、ＮＡ－１７、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＧＰＲ２０、Ｌｙ６ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＧＦＲα４又はＭＨＣに提示されるこれらの抗原のいずれかのペプチドから選択される。

一実施形態では、第１抗原は、ＣＤ１９である。一実施形態では、第２抗原は、ＣＤ１９ではない。一実施形態では、第２抗原は、ＣＤ１９ではない、本明細書に開示される抗原である。

一実施形態では、第１抗原は、ＢＣＭＡである。一実施形態では、第２抗原は、ＢＣＭＡではない。一実施形態では、第２抗原は、ＢＣＭＡではない、本明細書に開示の抗原である。一実施形態では、第２抗原は、Ｂ細胞に発現される抗原、急性骨髄性白血病細胞に発現される抗原又は固形腫瘍細胞上の抗原から選択される。一実施形態では、第２抗原は、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ－３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ３４、ＣＬＬ－１、葉酸受容体β、ＦＬＴ３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、メソテリン、ＧＤ２、Ｔｎ抗原、ｓＴｎ抗原、Ｔｎ－Ｏ－糖ペプチド、ｓＴｎ－Ｏ－糖ペプチド、ＰＳＭＡ、ＣＤ９７、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、レグマン、ＧＤ３、ＣＤ１７１、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－β、ＳＳＥＡ－４、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ（例えば、ＥＲＢＢ２）、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、エフリンＢ２、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｓＬｅ、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体β、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＦＡＰ、レグマイン、ＨＰＶＥ６若しくはＥ７、ＭＬ－ＩＡＰ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、Ｆｏｓ関連抗原、好中球エラスターゼ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、精子タンパク質１７、βヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＡＦＰ、チログロブリン、ＰＬＡＣ１、グロボＨ、ＲＡＧＥ１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔｈｓｐ７０－２、ＮＡ－１７、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＧＰＲ２０、Ｌｙ６ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＧＦＲα４又はＭＨＣに提示されるこれらの抗原のいずれかのペプチドから選択される。一実施形態では、第１抗原は、ＢＣＭＡであり、第２抗原は、ＣＤ１９である。

一実施形態では、第１ＣＡＲは、第１核酸配列によってコードされる。一実施形態では、第２ＣＡＲは、第２核酸配列によってコードされる。一実施形態では、第１及び第２核酸配列は、単一の核酸分子上に配置される。一実施形態では、第１及び第２核酸配列は、個別の核酸分子上に配置される。一実施形態では、１つ以上の核酸分子は、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子である。いくつかの実施形態では、第１及び第２核酸配列は、同じ配向に位置し、例えば、第１及び第２核酸配列の転写は、同じ方向に進行する。いくつかの実施形態では、第１及び第２核酸配列は、異なる配向に位置する。いくつかの実施形態では、単一プロモーターが、第１及び第２核酸配列の発現を制御する。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ切断部位をコードする核酸（例えば、Ｔ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ又はＦ２Ａ切断部位）をコードする核酸が、第１及び第２核酸配列の間に位置する。一実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、細胞が第１ＣＡＲ及び第２ＣＡＲを含む融合タンパク質を発現することができるように配置され、後に、この融合タンパク質は、タンパク質分解切断によって２つのペプチドにプロセシングされる。一部の実施形態では、第１核酸配列は、第２核酸配列の上流にあるか、又は第２核酸配列が、第１核酸配列の上流にある。いくつかの実施形態では、第１プロモーターが第１核酸配列の発現を制御し、第２プロモーターが第２核酸配列の発現を制御する。いくつかの実施形態では、核酸分子は、プラスミドである。いくつかの実施形態では、核酸分子は、ウイルスパッケージングエレメントを含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ又はＦ２Ａ切断部位を切断するプロテアーゼ（例えば、内因性若しくは外因性プロテアーゼ）を含み得る。

一実施形態では、第１ＣＡＲは、第１抗原結合ドメインを含み、第２ＣＡＲは、第２抗原結合ドメインを含む。一実施形態では、第１又は第２抗原結合ドメインは、本明細書に開示されるＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ若しくはｓｃＦｖ又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、第１又は第２抗原結合ドメインは、本明細書に開示される抗ＢＣＭＡ抗原結合ドメインのＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ若しくはｓｃＦｖ（例えば、表３～１５、１９、２０、２２及び２６に開示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む。一実施形態では、第１又は第２抗原結合ドメインは、本明細書に開示される抗ＣＤ１９抗原結合ドメインのＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ若しくはｓｃＦｖ（例えば、表２、１９及び２２に開示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む。

一実施形態では、第１抗原は、ＢＣＭＡであり、第２抗原は、ＣＤ１９である。一実施形態では、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞若しくはＮＫ細胞）は、抗ＢＣＭＡＣＡＲ、例えば、本明細書に開示される抗ＢＣＭＡＣＡＲと、抗ＣＤ１９ＣＡＲ、例えば、本明細書に開示される抗ＣＤ１９ＣＡＲを発現する。一実施形態では、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞若しくはＮＫ細胞）は、抗ＢＣＭＡＣＡＲ、例えば、本明細書に開示される抗ＢＣＭＡＣＡＲをコードする第１核酸配列と、抗ＣＤ１９ＣＡＲ、例えば、本明細書に開示される抗ＣＤ１９ＣＡＲをコードする第２核酸配列とを含む。表１９は、二重ＣＡＲ構築物の例示的なアミノ酸及び核酸配列を示す。

一部の実施形態では、第１ＣＡＲポリペプチドをコードする第１核酸配列と、第２ＣＡＲポリペプチドをコードする第２核酸配列とを含む単離核酸分子が本明細書に提供され、ここで、第１ＣＡＲポリペプチドは、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン（例えば、ヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメイン）である第１抗原結合ドメイン、第１膜貫通ドメイン及び第１細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第２ＣＡＲポリペプチドは、抗ＣＤ１９結合ドメインである第２抗原結合ドメイン、第２膜貫通ドメイン及び第２細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、第１ＣＡＲポリペプチドは、表２０又は２６に列挙される抗ＢＣＭＡ配列のＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２及びＨＣＣＤＲ３を含むＶＨと、表２０又は２６に列挙される抗ＢＣＭＡ配列のＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３を含むＶＬとを含み、ＶＨ及びＶＬは、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される。一部の実施形態では、第１ＣＡＲポリペプチドは、それぞれ配列番号２３９及び２４２のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨ及びＶＬは、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される。一部の実施形態では、第１ＣＡＲポリペプチドは、配列番号２００のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、第１ＣＡＲポリペプチドは、配列番号２３０又は２２８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第２ＣＡＲポリペプチドは、表１９又は表２２に列挙される抗ＣＤ１９配列のＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及び／又はＬＣＣＤＲ３（例えば、それぞれ配列番号２９５及び２４５～２４９のアミノ酸配列を含むＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３）を含む。一部の実施形態では、第２ＣＡＲポリペプチドは、表１９又は表２２に列挙される抗ＣＤ１９配列のＶＨ及び／又はＶＬ（例えば、それぞれ配列番号２５０及び２５１のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬ）又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第２ＣＡＲポリペプチドは、表１９又は表２２に列挙される抗ＣＤ１９配列のｓｃＦｖ（例えば、配列番号２１１のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖ）又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第２ＣＡＲポリペプチドは、表１９又は表２２に列挙される抗ＣＤ１９配列のＣＡＲポリペプチド（例えば、配列番号２２５若しくは２２９のアミノ酸配列を含むＣＡＲポリペプチド）又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、核酸分子は、配列番号２２１又は２２３の核酸配列を含む。一部の実施形態では、核酸分子は、配列番号１のシグナルペプチドを含む若しくは含まない配列番号２２０又は２２２のアミノ酸配列をコードする。

多重特異性ＣＡＲ
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、多重特異性ＣＡＲである。一実施形態では、多重特異性ＣＡＲは、二重特異性ＣＡＲである。一実施形態では、二重特異性ＣＡＲは、二重特異性抗体分子である抗原結合ドメインを含む。二重特異性抗体は、２つ以下の抗原に対する特異性を有する。二重特異性抗体分子は、第１エピトープに対する結合特異性を有する第１免疫グロブリン可変ドメイン配列と、第２エピトープに対する結合特異性を有する第２免疫グロブリン可変ドメイン配列を特徴とする。一実施形態では、第１及び第２エピトープは、同じ抗原、例えば、同じタンパク質（又は多量体タンパク質のサブユニット）上にある。一実施形態では、第１及び第２エピトープは、重複する。一実施形態では、第１及び第２エピトープは、重複しない。一実施形態では、第１及び第２エピトープは、異なる抗原、例えば、異なるタンパク質（又は多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。一実施形態では、二重特異性抗体分子は、第１エピトープに対する結合特異性を含む重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列と、第２エピトープに対する結合特異性を含む重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列とを含む。一実施形態では、二重特異性抗体分子は、第１エピトープに対する結合特異性を有する半抗体と、第２エピトープに対する結合特異性を有する半抗体とを含む。一実施形態では、二重特異性抗体分子は、第１エピトープに対する結合特異性を有する半抗体又はその断片と、第２エピトープに対する結合特異性を有する半抗体又はその断片とを含む。一実施形態では、二重特異性抗体分子は、第１エピトープに対する結合特異性を有するｓｃＦｖ又はその断片と、第２エピトープに対する結合特異性を有するｓｃＦｖ又はその断片とを含む。

一部の実施形態では、本発明のＣＡＲは、多重特異性（例えば、二重特異性又は三重特異性）抗体分子である抗原結合ドメインを含む。二重特異性又はヘテロ二量体抗体分子を作製するためのプロトコルは、当技術分野で公知であり；限定されないが、例えば、以下のものが挙げられる：例えば、米国特許第５７３１１６８号明細書に記載されている「ノブ・イン・ア・ホール」アプローチ；例えば、国際公開第０９／０８９００４号パンフレット、同第０６／１０６９０５号パンフレット及び同第２０１０／１２９３０４号パンフレットに記載のような静電ステアリングＦｃペアリング；例えば、国際公開第０７／１１０２０５号パンフレットに記載のような鎖交換操作ドメイン（ＳＥＥＤ）ヘテロ二量体形成；例えば、国際公開第０８／１１９３５３号パンフレット、同第２０１１／１３１７４６号パンフレット及び同第２０１３／０６０８６７号パンフレットに記載のようなＦａｂアーム交換；例えば、米国特許第４４３３０５９号明細書に記載のような、例えば、アミン反応基及びスルフヒドリル反応基を有するヘテロ二官能性試薬を用いて二重特異性構造を作製する抗体架橋による二重抗体コンジュゲート；例えば、米国特許第４４４４８７８号明細書に記載のような、２つの重鎖間のジスルフィド結合の還元及び酸化のサイクルを介した異なる抗体に由来する半抗体（重－軽鎖対若しくはＦａｂ）の組換えによって作製される二重特異性抗体決定基；例えば、米国特許第５２７３７４３号明細書に記載のような三官能性抗体、例えば、スルフヒドリル反応基を介して架橋された３つのＦａｂ’フラグメント；例えば、米国特許第５５３４２５４号明細書に記載のような生合成結合タンパク質、例えば、好ましくはジスルフィド若しくはアミン反応性化学架橋により、Ｃ末端テールを介して架橋されたｓｃＦｖのペア；例えば、米国特許第５５８２９９６号明細書に記載のような二官能性抗体、例えば、定常ドメインが置換されたロイシンジッパー（例えば、ｃ－ｆｏｓ及びｃ－ｊｕｎ）を介して二量体化された、異なる結合特異性を有するＦａｂフラグメント；例えば、米国特許第５５９１８２８号明細書に記載のような二重特異性及びオリゴ特異性一価－及びオリゴバレント受容体、例えば、１つの抗体のＣＨ１領域と、典型的に関連軽鎖を有する他の抗体のＶＨ領域との間のポリペプチドスペーサーを介して連結された２つの抗体（２つのＦａｂ断片）のＶＨ－ＣＨ１領域；例えば、米国特許第５６３５６０２号明細書に記載のような二重特異性ＤＮＡ－抗体コンジュゲート、例えば、ＤＮＡの二本鎖部分を介した抗体若しくはＦａｂフラグメントの架橋；例えば、米国特許第５６３７４８１号明細書に記載のような二重特異性融合タンパク質、例えば、互いの間に親水性ヘリカルペプチドリンカーを有する２つのｓｃＦｖと完全定常領域とを含む発現構築物；例えば、米国特許第５８３７２４２号明細書に記載のような多価及び多重特異性結合タンパク質、例えば、Ｉｇ重鎖可変領域の結合領域を含む第１ドメインと、Ｉｇ軽鎖可変領域の結合領域を含む第２ドメインとを有するポリペプチドの二量体（一般に、ダイアボディと呼ばれる）（二重特異性、三重特異性若しくは四重特異性分子を形成する、より高次の構造も包含される；米国特許第５８３７８２１号明細書に記載のような、ペプチドスペーサーにより抗体ヒンジ領域及びＣＨ３領域とさらにつながった連結ＶＬ及びＶＨを含むミニボディ構築物（これは、二量体化されて、二重特異性／多重特異性分子を形成することができる）；短いペプチドリンカー（例えば、５若しくは１０アミノ酸）と連結しているか、又はいずれの配向にもリンカーを一切含まないＶＨ及びＶＬドメイン（これは、二量体を形成して、二重特異性ダイアボディを形成することができる）；例えば、米国特許第５８４４０９４号明細書に記載のような三量体及び四量体；例えば、米国特許第５８６４０１９号明細書に記載のような、Ｃ末端に架橋可能基を有するペプチド結合によって連結されたＶＨドメイン（若しくはファミリーメンバーのＶＬドメイン）の鎖（ＶＬドメインと結合して、一連のＦＶ（若しくはｓｃＦｖ）を形成する）；及び例えば米国特許第５８６９６２０号明細書に記載のように、ペプチドリンカーを介して連結されたＶＨ及びＶＬドメインの両方を有する単鎖結合ポリペプチドを、非共有若しくは化学架橋により組み合わせて多価構造にし、ｓｃＦｖ若しくはダイアボディ型フォーマットの両方を用いて、例えば、ホモ二価、ヘテロ二価、三価及び四価構造を形成する。別の例示的な多重特異性及び二重特異性分子並びにそれらを作製する方法は、例えば、以下に見出される：米国特許第５９１０５７３号明細書、同第５９３２４４８号明細書、同第５９５９０８３号明細書、同第５９８９８３０号明細書、同第６００５０７９号明細書、同第６２３９２５９号明細書、同第６２９４３５３号明細書、同第６３３３３９６号明細書、同第６４７６１９８号明細書、同第６５１１６６３号明細書、同第６６７０４５３号明細書、同第６７４３８９６号明細書、同第６８０９１８５号明細書、同第６８３３４４１号明細書、同第７１２９３３０号明細書、同第７１８３０７６号明細書、同第７５２１０５６号明細書、同第７５２７７８７号明細書、同第７５３４８６６号明細書、同第７６１２１８１号明細書、同第２００２００４５８７Ａ１号明細書、同第２００２０７６４０６Ａ１号明細書、同第２００２１０３３４５Ａ１号明細書、同第２００３２０７３４６Ａ１号明細書、同第２００３２１１０７８Ａ１号明細書、同第２００４２１９６４３Ａ１号明細書、同第２００４２２０３８８Ａ１号明細書、同第２００４２４２８４７Ａ１号明細書、同第２００５００３４０３Ａ１号明細書、同第２００５００４３５２Ａ１号明細書、同第２００５０６９５５２Ａ１号明細書、同第２００５０７９１７０Ａ１号明細書、同第２００５１００５４３Ａ１号明細書、同第２００５１３６０４９Ａ１号明細書、同第２００５１３６０５１Ａ１号明細書、同第２００５１６３７８２Ａ１号明細書、同第２００５２６６４２５Ａ１号明細書、同第２００６０８３７４７Ａ１号明細書、同第２００６１２０９６０Ａ１号明細書、同第２００６２０４４９３Ａ１号明細書、同第２００６２６３３６７Ａ１号明細書、同第２００７００４９０９Ａ１号明細書、同第２００７０８７３８１Ａ１号明細書、同第２００７１２８１５０Ａ１号明細書、同第２００７１４１０４９Ａ１号明細書、同第２００７１５４９０１Ａ１号明細書、同第２００７２７４９８５Ａ１号明細書、同第２００８０５０３７０Ａ１号明細書、同第２００８０６９８２０Ａ１号明細書、同第２００８１５２６４５Ａ１号明細書、同第２００８１７１８５５Ａ１号明細書、同第２００８２４１８８４Ａ１号明細書、同第２００８２５４５１２Ａ１号明細書、同第２００８２６０７３８Ａ１号明細書、同第２００９１３０１０６Ａ１号明細書、同第２００９１４８９０５Ａ１号明細書、同第２００９１５５２７５Ａ１号明細書、同第２００９１６２３５９Ａ１号明細書、同第２００９１６２３６０Ａ１号明細書、同第２００９１７５８５１Ａ１号明細書、同第２００９１７５８６７Ａ１号明細書、同第２００９２３２８１１Ａ１号明細書、同第２００９２３４１０５Ａ１号明細書、同第２００９２６３３９２Ａ１号明細書、同第２００９２７４６４９Ａ１号明細書、欧州特許第３４６０８７Ａ２号明細書、国際公開第０００６６０５Ａ２号パンフレット、同第０２０７２６３５Ａ２号パンフレット、同第０４０８１０５１Ａ１号パンフレット、同第０６０２０２５８Ａ２号パンフレット、同第２００７０４４８８７Ａ２号パンフレット、同第２００７０９５３３８Ａ２号パンフレット、同第２００７１３７７６０Ａ２号パンフレット、同第２００８１１９３５３Ａ１号パンフレット、同第２００９０２１７５４Ａ２号パンフレット、同第２００９０６８６３０Ａ１号パンフレット、同第９１０３４９３Ａ１号パンフレット、同第９３２３５３７Ａ１号パンフレット、同第９４０９１３１Ａ１号パンフレット、同第９４１２６２５Ａ２号パンフレット、同第９５０９９１７Ａ１号パンフレット、同第９６３７６２１Ａ２号パンフレット、同第９９６４４６０Ａ１号パンフレット。上に挙げた参照出願の内容は、参照によりその全体を本明細書に組み込むものとする。

二重特異性抗体分子の各抗体又は抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）において、ＶＨは、ＶＬの上流又は下流のいずれでもあり得る。一部の実施形態では、上流の抗体又は抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＨ（ＶＨ_１）がそのＶＬ（ＶＬ_１）の上流に位置するように配列され、下流の抗体又は抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＬ（ＶＬ_２）がそのＶＨ（ＶＨ_２）の上流に位置するように配列され、その結果、二重特異性抗体分子全体は、構成：ＶＨ_１－ＶＬ_１－ＶＬ_２－ＶＨ_２を有する。他の実施形態では、上流の抗体又は抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＬ（ＶＬ_１）がそのＶＨ（ＶＨ_１）の上流に位置するように配列され、下流の抗体又は抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＨ（ＶＨ_２）がそのＶＬ（ＶＬ_２）の上流に位置するように配列され、その結果、二重特異性抗体分子全体は、構成：ＶＬ_１－ＶＨ_１－ＶＨ_２－ＶＬ_２を有する。任意選択で、２つの抗体又は抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）の間に、例えば、構築物がＶＨ_１－ＶＬ_１－ＶＬ_２－ＶＨ_２として構成される場合にはＶＬ_１とＶＬ_２との間及び構築物がＶＬ_１－ＶＨ_１－ＶＨ_２－ＶＬ_２として構成される場合にはＶＨ_１とＶＨ_２との間にリンカーが配置される。リンカーは、本明細書に記載されるリンカー、例えば（Ｇｌｙ_４－Ｓｅｒ）ｎリンカー（ｎは、１、２、３、４、５又は６、好ましくは４である）（配列番号２６）であり得る。概して、２つのｓｃＦｖ間のリンカーは、２つのｓｃＦｖのドメインの間の誤対合を回避するのに十分長くなければならない。任意選択で、第１ｓｃＦｖのＶＬとＶＨの間にリンカーが配置される。任意選択で、第２ｓｃＦｖのＶＬとＶＨの間にリンカーが配置される。複数のリンカーを有する構築物において、リンカーのいずれか２つ以上は、同じであるか又は異なり得る。従って、一部の実施形態では、二重特異性ＣＡＲは、本明細書に記載の構成に、ＶＬ、ＶＨ及び任意選択で１つ以上のリンカーを含む。

一態様では、二重特異性抗体は、ＢＣＭＡに対する結合特異性を有し、例えば、本明細書に記載のｓｃＦｖを含むか、又は本明細書に記載のＢＣＭＡｓｃＦｖ由来の軽鎖ＣＤＲ及び／若しくは重鎖ＣＤＲを含む第１免疫グロブリン可変ドメイン配列、例えば、ｓｃＦｖ並びに異なる抗原上の第２エピトープに対する結合特異性を有する第２免疫グロブリン可変ドメイン配列を特徴とする。一態様では、第２免疫グロブリン可変ドメイン配列は、ＡＭＬ細胞に発現される抗原、例えば、ＢＣＭＡ以外の抗原に対する結合特異性を有する。例えば、第２免疫グロブリン可変ドメイン配列は、ＣＤ１２３に対する結合特異性を有する。別の例として、第２免疫グロブリン可変ドメイン配列は、ＣＬＬ－１に対する結合特異性を有する。別の例として、第２免疫グロブリン可変ドメイン配列は、ＣＤ３４に対する結合特異性を有する。別の例として、第２免疫グロブリン可変ドメイン配列は、ＦＬＴ３に対する結合特異性を有する。例えば、第２免疫グロブリン可変ドメイン配列は、葉酸受容体βに対する結合特異性を有する。いくつかの態様では、第２免疫グロブリン可変ドメイン配列は、Ｂ細胞に発現される抗原、例えば、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ－３、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ又はＣＤ７９ａに対する結合特異性を有する。

ダイアボディＣＡＲ
一部の実施形態では、本発明のＣＡＲは、二重特異性ＣＡＲである。一部の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ダイアボディＣＡＲである。一部の実施形態では、ダイアボディＣＡＲは、第１抗原及び第２抗原に結合する抗原結合ドメインを含む。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２を含み、ＶＨ１とＶＬ１は、第１抗原に結合し、且つＶＨ２とＶＬ２は、第２抗原に結合する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＨ１－任意選択でリンカー１（「Ｌ１」）－ＶＨ２－任意選択でリンカー２（「Ｌ２」）－ＶＬ２－任意選択でリンカー３（「Ｌ３」）－ＶＬ１を有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＨ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＬ１を有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＨ２－任意選択でＬ２－ＶＬ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１を有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１を有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２を有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２を有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２を有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２を有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＨ１－リンカー１（「Ｌ１」）－ＶＨ２－リンカー２（「Ｌ２」）－ＶＬ２－リンカー３（「Ｌ３」）－ＶＬ１を有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＨ１－Ｌ１－ＶＬ２－Ｌ２－ＶＨ２－Ｌ３－ＶＬ１を有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＬ１－Ｌ１－ＶＨ２－Ｌ２－ＶＬ２－Ｌ３－ＶＨ１を有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＬ１－Ｌ１－ＶＬ２－Ｌ２－ＶＨ２－Ｌ３－ＶＨ１を有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＨ２－Ｌ１－ＶＨ１－Ｌ２－ＶＬ１－Ｌ３－ＶＬ２を有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＨ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＶＨ１－Ｌ３－ＶＬ２を有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＬ２－Ｌ１－ＶＨ１－Ｌ２－ＶＬ１－Ｌ３－ＶＨ２を有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２を有する。一部の実施形態では、可変領域は、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むリンカーにより融合される。一部の実施形態では、可変領域は、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含むリンカーにより融合される。一部の実施形態では、Ｌ１は、配列番号５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｌ２は、配列番号６３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｌ３は、配列番号５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２若しくはＶＬ２は、本明細書に開示されるＣＤＲ、ＶＨ若しくはＶＬ配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるダイアボディは、例えば、抗体を安定化し、且つ／又はＶＨ及びＶＬの正しい対合を促進するために、操作されたジスルフィド架橋を含む。一部の実施形態では、操作されたジスルフィド架橋は、ヒンジ領域に最も近位の可変領域（例えば、ヒンジ領域に最も近位のＶＨ又はＶＬ領域）と、その対応する対合パートナー（例えば、対応するＶＬ又は対応するＶＨ）の間にある。

一部の実施形態では、第１抗原及び第２抗原は異なる。一実施形態では、第１若しくは第２抗原は、Ｂ細胞に発現される抗原、急性骨髄性白血病細胞に発現される抗原又は固形腫瘍細胞に発現される抗原から選択される。一実施形態では、第１若しくは第２抗原は、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＢＣＭＡ、ＦＬＴ－３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ３４、ＣＬＬ－１、葉酸受容体β、ＦＬＴ３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、メソテリン、ＧＤ２、Ｔｎ抗原、ｓＴｎ抗原、Ｔｎ－Ｏ－糖ペプチド、ｓＴｎ－Ｏ－糖ペプチド、ＰＳＭＡ、ＣＤ９７、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、レグマン、ＧＤ３、ＣＤ１７１、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－β、ＳＳＥＡ－４、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ（例えば、ＥＲＢＢ２）、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、エフリンＢ２、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｓＬｅ、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体β、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＦＡＰ、レグマイン、ＨＰＶＥ６若しくはＥ７、ＭＬ－ＩＡＰ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、Ｆｏｓ関連抗原、好中球エラスターゼ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、精子タンパク質１７、βヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＡＦＰ、チログロブリン、ＰＬＡＣ１、グロボＨ、ＲＡＧＥ１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔｈｓｐ７０－２、ＮＡ－１７、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＧＰＲ２０、Ｌｙ６ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＧＦＲα４又はＭＨＣに提示されるこれらの抗原のいずれかのペプチドから選択される。

一部の実施形態では、第１抗原は、ＢＣＭＡであり、第２抗原は、ＣＤ１９である。一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡ及びＣＤ１９に結合する抗原結合ドメインを含む。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡに結合するＶＨ_１及びＶＬ_１（「ＢＣＭＡＶＨ」及び「ＢＣＭＡＶＬ」）と、ＣＤ１９に結合するＶＨ_２及びＶＬ_２（「ＣＤ１９ＶＨ」及び「ＣＤ１９ＶＬ」）を含む。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＢＣＭＡＶＨ－任意選択でリンカー１（「Ｌ１」）－ＣＤ１９ＶＨ－任意選択でリンカー２（「Ｌ２」）－ＣＤ１９ＶＬ－任意選択でリンカー３（「Ｌ３」）－ＢＣＭＡＶＬを有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＢＣＭＡＶＨ－任意選択でＬ１－ＣＤ１９ＶＬ－任意選択でＬ２－ＣＤ１９ＶＨ－任意選択でＬ３－ＢＣＭＡＶＬを有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＢＣＭＡＶＬ－任意選択でＬ１－ＣＤ１９ＶＨ－任意選択でＬ２－ＣＤ１９ＶＬ－任意選択でＬ３－ＢＣＭＡＶＨを有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＢＣＭＡＶＬ－任意選択でＬ１－ＣＤ１９ＶＬ－任意選択でＬ２－ＣＤ１９ＶＨ－任意選択でＬ３－ＢＣＭＡＶＨを有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＣＤ１９ＶＨ－任意選択でＬ１－ＢＣＭＡＶＨ－任意選択でＬ２－ＢＣＭＡＶＬ－任意選択でＬ３－ＣＤ１９ＶＬを有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＣＤ１９ＶＨ－任意選択でＬ１－ＢＣＭＡＶＬ－任意選択でＬ２－ＢＣＭＡＶＨ－任意選択でＬ３－ＣＤ１９ＶＬを有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＣＤ１９ＶＬ－任意選択でＬ１－ＢＣＭＡＶＨ－任意選択でＬ２－ＢＣＭＡＶＬ－任意選択でＬ３－ＣＤ１９ＶＨを有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＣＤ１９ＶＬ－任意選択でＬ１－ＢＣＭＡＶＬ－任意選択でＬ２－ＢＣＭＡＶＨ－任意選択でＬ３－ＣＤ１９ＶＨを有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＢＣＭＡＶＨ－リンカー１（「Ｌ１」）－ＣＤ１９ＶＨ－リンカー２（「Ｌ２」）－ＣＤ１９ＶＬ－リンカー３（「Ｌ３」）－ＢＣＭＡＶＬを有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＢＣＭＡＶＨ－Ｌ１－ＣＤ１９ＶＬ－Ｌ２－ＣＤ１９ＶＨ－Ｌ３－ＢＣＭＡＶＬを有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＢＣＭＡＶＬ－Ｌ１－ＣＤ１９ＶＨ－Ｌ２－ＣＤ１９ＶＬ－Ｌ３－ＢＣＭＡＶＨを有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＢＣＭＡＶＬ－Ｌ１－ＣＤ１９ＶＬ－Ｌ２－ＣＤ１９ＶＨ－Ｌ３－ＢＣＭＡＶＨを有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＣＤ１９ＶＨ－Ｌ１－ＢＣＭＡＶＨ－Ｌ２－ＢＣＭＡＶＬ－Ｌ３－ＣＤ１９ＶＬを有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＣＤ１９ＶＨ－Ｌ１－ＢＣＭＡＶＬ－Ｌ２－ＢＣＭＡＶＨ－Ｌ３－ＣＤ１９ＶＬを有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＣＤ１９ＶＬ－Ｌ１－ＢＣＭＡＶＨ－Ｌ２－ＢＣＭＡＶＬ－Ｌ３－ＣＤ１９ＶＨを有する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＣＤ１９ＶＬ－Ｌ１－ＢＣＭＡＶＬ－Ｌ２－ＢＣＭＡＶＨ－Ｌ３－ＣＤ１９ＶＨを有する。一部の実施形態では、可変領域は、配列番号５若しくは６３のアミノ酸配列又はそれと少なくとも８０、８５、９０、９５若しくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むリンカーにより融合される。一部の実施形態では、Ｌ１は、配列番号５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｌ２は、配列番号６３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｌ３は、配列番号５のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、ＢＣＭＡＶＨは、本明細書に開示されるＣＤＲ若しくはＶＨ配列、例えば、表３～１５、１９、２０、２２、２６及び３１に開示されるＣＤＲ若しくはＶＨ配列又はそれと少なくとも８０、８５、９０、９５若しくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡＶＬは、本明細書に開示されるＣＤＲ若しくはＶＬ配列、例えば、表３～１５、１９、２０、２２、２６及び３１に開示されるＣＤＲ若しくはＶＬ配列又はそれと少なくとも８０、８５、９０、９５若しくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１９ＶＨは、本明細書に開示されるＣＤＲ若しくはＶＨ配列、例えば、表２、１９、２２及び３１に開示されるＣＤＲ若しくはＶＨ配列又はそれと少なくとも８０、８５、９０、９５若しくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１９ＶＬは、本明細書に開示されるＣＤＲ若しくはＶＬ配列、例えば、表２、１９、２２及び３１に開示されるＣＤＲ若しくはＶＬ配列又はそれと少なくとも８０、８５、９０、９５若しくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、ＣＡＲ、例えば、ダイアボディＣＡＲは、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン及び／又は細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＤ８ヒンジ領域を含む。一部の実施形態では、ヒンジ領域は、本明細書に開示されるヒンジ領域配列、例えば、配列番号２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも８０、８５、９０、９５若しくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、本明細書に開示される膜貫通ドメイン配列、例えば、配列番号６のアミノ酸配列又はそれと少なくとも８０、８５、９０、９５若しくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、本明細書に開示される共刺激シグナル伝達ドメイン配列、例えば、配列番号７のアミノ酸配列又はそれと少なくとも８０、８５、９０、９５若しくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、本明細書に開示される一次シグナル伝達ドメイン配列、例えば、配列番号９若しくは１０のアミノ酸配列又はそれと少なくとも８０、８５、９０、９５若しくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

例示的なダイアボディ配列を表３１に開示する。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号３２１～３３０からなる群から選択されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも８０、８５、９０、９５若しくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む抗原結合ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号３３９～３４８からなる群から選択されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも８０、８５、９０、９５若しくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

キメラＴＣＲ
一態様では、本発明の抗体及び抗体断片を、Ｔ細胞受容体（「ＴＣＲ」）鎖、例えば、ＴＣＲα又はＴＣＲβ鎖の１つ以上の定常ドメインに移植して、キメラＴＣＲを作製することができる。理論に束縛されるものではないが、キメラＴＣＲは、抗原結合時にＴＣＲ複合体を介してシグナル伝達すると考えられる。例えば、本明細書に開示されるｓｃＦｖは、ＴＣＲ鎖、例えば、ＴＣＲα鎖及び／又はＴＣＲβ鎖の定常ドメイン、例えば、細胞外定常ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインの少なくとも一部に移植することができる。別の例として、抗体断片、例えば本明細書に記載されるＶＬドメインをＴＣＲα鎖の定常ドメインに移植することができ、抗体断片、例えば本明細書に記載のＶＨドメインをＴＣＲβ鎖の定常ドメインに移植することができる（又はＶＬドメインをＴＣＲβ鎖の定常ドメインに移植することができ、ＶＨドメインをＴＣＲα鎖に移植することができる）。別の例として、抗体若しくは抗体断片のＣＤＲ、例えば本明細書に記載の抗体若しくは抗体断片のＣＤＲをＴＣＲα及び／又はα鎖に移植して、キメラＴＣＲを作製することもできる。例えば、本明細書に開示されるＬＣＤＲをＴＣＲα鎖の可変ドメインに移植し、本明細書に開示されるＨＣＤＲをＴＣＲβ鎖の可変ドメインに移植し得るか、又はその逆も可能である。こうしたキメラＴＣＲは、当技術分野で公知の方法により生産することができる（例えば、ＷｉｌｌｅｍｓｅｎＲＡｅｔａｌ，ＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ２０００；７：１３６９－１３７７；ＺｈａｎｇＴｅｔａｌ，ＣａｎｃｅｒＧｅｎｅＴｈｅｒ２００４；１１：４８７－４９６；Ａｇｇｅｎｅｔａｌ，ＧｅｎｅＴｈｅｒ．２０１２Ａｐｒ；１９（４）：３６５－７４）。

別の実施形態
一態様では、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、第２ＣＡＲ、例えば、同じ標的（ＢＣＭＡ）若しくは異なる標的（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０若しくはＣＳ－１又は他の多発性骨髄腫標的、例えば、κ軽鎖、ＣＤ１３８、ルイスＹ抗原若しくはＣＤ３８（Ｇａｒｆａｌｌｅｔａｌ．，ＤｉｓｃｏｖｅｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，２０１４，１７（９１）：３７－４６））に対して、異なる抗原結合ドメインを有する第２ＣＡＲをさらに含み得る。一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞は、第１抗原をターゲティングし、且つ共刺激シグナル伝達ドメインを有するが、一次シグナル伝達ドメインはない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第１ＣＡＲと、第２の異なる抗原をターゲティングし、且つ一次シグナル伝達ドメインを有するが、共刺激シグナル伝達ドメインはない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２ＣＡＲとを含む。理論に縛られることは意図しないが、共刺激シグナル伝達ドメイン、例えば、４－１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ２７ＩＣＯＳ若しくはＯＸ－４０の第１ＣＡＲ上の配置並びに一次シグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ３ζの第２ＣＡＲ上の配置は、両標的が発現される細胞に対するＣＡＲ活性を制限し得る。一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞は、ＢＣＭＡ結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激シグナル伝達ドメインを含む第１ＢＣＭＡＣＡＲと、ＢＣＭＡ以外の抗原（例えば、白血病若しくはリンパ腫細胞に発現される抗原、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＳ－１，κ軽鎖、ＣＤ１３９、ルイスＹ抗原若しくはＣＤ３８）をターゲティングし、且つ抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第２ＣＡＲとを含む。別の実施形態では、ＣＡＲ発現細胞は、ＢＣＭＡ結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第１ＢＣＭＡＣＡＲと、ＢＣＭＡ以外の抗原（例えば、白血病若しくはリンパ腫細胞に発現される抗原、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＳ－１，κ軽鎖、ＣＤ１３９、ルイスＹ抗原若しくはＣＤ３８）をターゲティングし、且つ抗原に対する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激シグナル伝達ドメインを含む第２ＣＡＲとを含む。一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に記載のＢＣＭＡＣＡＲと、ＣＤ１９をターゲティングするＣＡＲ（ＣＤ１９ＣＡＲ）とを含む。

一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に記載のＢＣＭＡＣＡＲと、阻害性ＣＡＲを含む。一実施形態では、阻害性ＣＡＲは、正常細胞に存在するが、癌細胞には存在しない抗原に結合する抗原結合ドメインを含む。一実施形態では、阻害性ＣＡＲは、阻害分子の抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含む。例えば、阻害性ＣＡＲの細胞内ドメインは、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４若しくはＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦＲβの細胞内ドメインであり得る。

一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞が２つ以上の異なるＣＡＲを含むとき、異なるＣＡＲの抗原結合ドメインは、抗原結合ドメインが互いに相互作用しないようなものであり得る。例えば、第１及び第２ＣＡＲを発現する細胞は、第２ＣＡＲの抗原結合ドメインとの結合を形成しない第１ＣＡＲの抗原結合ドメイン、例えば断片として例えばｓｃＦｖを有し得、例えば、第２ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ＶＨＨである。

一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、その相補性決定領域が単一ドメインポリペプチドの一部である分子を含め、単一ドメイン抗原結合ドメイン（ＳＤＡＢ）分子を含む。例として、限定されないが、重鎖可変ドメイン、天然に軽鎖を欠失した結合分子、一般的な４鎖抗体に由来する単一ドメイン、操作ドメイン並びに抗体由来のもの以外の単一ドメインスカフォールドが挙げられる。ＳＤＡＢ分子は、当技術分野の任意のもの又は任意の将来の単一ドメイン分子であり得る。ＳＤＡＢ分子は、限定されないが、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、ヤツメウナギ、魚類、サメ、ヤギ、ウサギ及びウシなどの任意の種に由来するものであり得る。この用語は、ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）及びサメ以外の種由来の天然に存在する単一ドメイン抗体も含む。

一態様では、ＳＤＡＢ分子は、魚類に見出される免疫グロブリンの可変領域に由来するもの、例えば、サメの血清に見出される新規な抗原受容体（ＮｏｖｅｌＡｎｔｉｇｅｎＲｅｃｅｐｔｏｒ）（ＮＡＲ）として知られる免疫グロブリンアイソタイプに由来するものであり得る。ＮＡＲの可変領域由来の単一ドメイン分子（「ＩｇＮＡＲ」）を生成する方法は、国際公開第０３／０１４１６１号パンフレット及びＳｔｒｅｌｔｓｏｖ（２００５）ＰｒｏｔｅｉｎＳｃｉ．１４：２９０１－２９０９に記載されている。

別の態様では、ＳＤＡＢ分子は、軽鎖を欠失した重鎖として知られる、天然に存在する単一ドメイン分子である。このような単一ドメイン分子は、例えば、国際公開第９４０４６７８号パンフレット及びＨａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ，Ｃ．ｅｔａｌ．（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ３６３：４４６－４４８に記載されている。明瞭化の理由で、天然に軽鎖を欠失した重鎖分子に由来するこの可変ドメインは、４鎖免疫グロブリンの一般的なＶＨから区別するために、ＶＨＨ又はナノボディとして本明細書では知られる。このようなＶＨＨ分子は、ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）、例えば、ラクダ、ラマ、ヒトコブラクダ、アルパカ及びグアナコに由来し得る。ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）以外の他の種も、天然に軽鎖を欠失した重鎖分子を産生することができ；こうしたＶＨＨは、本発明の範囲内である。

ＳＤＡＢ分子は、組換え、ＣＤＲ移植、ヒト化、ラクダ化、脱免疫化された及び／又はインビトロで産生された（例えば、ファージディスプレイにより選択された）ものであり得る。

また、受容体の抗原結合ドメイン同士で相互作用する、抗原結合ドメインを含むキメラ膜埋込み型受容体を複数備える細胞は、抗原結合ドメインの１つ以上がそのコグネイト抗原結合ドメインと結合する能力を阻害することから、望ましくない可能性があることも見出されている。従って、こうした相互作用を最小限にする抗原結合ドメインを含む第１及び第２非天然キメラ膜埋込み受容体を有する細胞が本明細書に開示される。また、こうした相互作用を最小限にする抗原結合ドメインを含む第１及び第２の天然に存在するキメラ膜埋込み受容体をコードする核酸並びにそのような細胞及び核酸を作製し、使用する方法も本明細書に開示される。一実施形態では、前記第１及び第２非天然キメラ膜埋込み受容体の一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、他方は、単一ＶＨドメイン、例えば、ラクダ科、サメ若しくはヤツメウナギ単一ＶＨドメイン又はヒト若しくはマウス配列由来の単一ＶＨドメインを含む。

一部の実施形態では、請求される本発明は、第１及び第２ＣＡＲを含み、前記第１ＣＡＲ及び前記第２ＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、可変軽鎖ドメイン及び可変重鎖ドメインを含まない。一部の実施形態では、前記第１ＣＡＲ及び前記第２ＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、他方は、ｓｃＦｖではない。一部の実施形態では、前記第１ＣＡＲ及び前記第２ＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、単一ＶＨドメイン、例えば、ラクダ科、サメ若しくはヤツメウナギ単一ＶＨドメイン又はヒト若しくはマウス配列由来の単一ＶＨドメインを含む。一部の実施形態では、前記第１ＣＡＲ及び第２ＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ナノボディを含む。一部の実施形態では、前記第１ＣＡＲ及び前記第２ＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ラクダ科ＶＨＨドメインを含む。

一部の実施形態では、前記第１ＣＡＲ及び前記第２ＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、他方は、単一ＶＨドメイン、例えば、ラクダ科、サメ若しくはヤツメウナギ単一ＶＨドメイン又はヒト若しくはマウス配列由来の単一ＶＨドメインを含む。一部の実施形態では、前記第１ＣＡＲ及び前記第２ＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、他方は、ナノボディを含む。一部の実施形態では、前記第１ＣＡＲ及び前記第２ＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、他方は、ラクダ科ＶＨＨドメインを含む。

一部の実施形態では、細胞の表面上に存在するとき、前記第１ＣＡＲの抗原結合ドメインとそのコグネイト抗原の結合は、前記第２ＣＡＲの存在によって実質的に低減されない。一部の実施形態では、前記第２ＣＡＲの存在下での前記第１ＣＡＲの抗原結合ドメインとそのコグネイト抗原の結合は、前記第２ＣＡＲの非存在下での前記第１ＣＡＲの抗原結合ドメインとそのコグネイト抗原の結合の８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。

一部の実施形態では、細胞の表面上に存在するとき、前記第１ＣＡＲ及び前記第２ＣＡＲの抗原結合ドメインは、両方がｓｃＦｖ抗原結合ドメインである場合よりも低い程度で互いに結合する。一部の実施形態では、前記第１ＣＡＲ及び前記第２ＣＡＲの抗原結合ドメインは、両方がｓｃＦｖ抗原結合ドメインである場合よりも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％低い程度で互いに結合する。

一態様において、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞は、別の薬剤、例えばＣＡＲ発現細胞の活性を増大する薬剤をさらに発現することができる。例えば、一実施形態では、薬剤は、阻害分子を阻害する薬剤、例えば本明細書に記載される薬剤であり得る。阻害分子、例えばＰＤ１は、一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を低減させる。阻害分子の例としては、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４若しくはＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦＲβが挙げられる。一部の実施形態では、阻害分子を阻害する薬剤は、細胞に正のシグナルを付与する第２ポリペプチド（例えば、細胞内シグナル伝達ドメイン）と結合した第１ポリペプチド、例えば、阻害分子を含む。一実施形態では、薬剤は、例えば、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４若しくはＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦＲβ又はこれらのいずれかの断片（例えば、これらのいずれかの細胞外ドメインの少なくとも１部分）などの阻害分子の第１ポリペプチドと、本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載されるように、例えば、４１ＢＢ、ＣＤ２７ＩＣＯＳ若しくはＣＤ２８を含む）及び／又は一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載されるＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン）である第２ポリペプチドとを含む。一実施形態では、薬剤は、ＰＤ１の第１ポリペプチド又はその断片（例えば、少なくとも、ＰＤ１の細胞外ドメインの少なくとも１部分）と、本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載のＣＤ２８シグナル伝達ドメイン及び／又は本明細書に記載のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン）の第２ポリペプチドとを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載ＣＡＲ発現細胞は、国際公開第２０１３／０１９６１５号パンフレット（その全体が、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、スイッチ共刺激受容体を含む。ＰＤ１は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ及びＢＴＬＡも含む受容体のＣＤ２８ファミリーの抑制メンバーである。ＰＤ－１は、活性化Ｂ細胞、Ｔ細胞及び骨髄細胞に発現される（Ａｇａｔａｅｔａｌ．１９９６Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ８：７６５－７５）。ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２に対する２つのリガンドが、ＰＤ１との結合時にＴ細胞の活性化を下方制御することが証明されている（Ｆｒｅｅｍａｎｅｔａ．２０００ＪＥｘｐＭｅｄ１９２：１０２７－３４；Ｌａｔｃｈｍａｎｅｔａｌ．２００１ＮａｔＩｍｍｕｎｏｌ２：２６１－８；Ｃａｒｔｅｒｅｔａｌ．２００２ＥｕｒＪＩｍｍｕｎｏｌ３２：６３４－４３）。ＰＤ－Ｌ１は、ヒト癌に豊富に存在する（Ｄｏｎｇｅｔａｌ．２００３ＪＭｏｌＭｅｄ８１：２８１－７；Ｂｌａｎｋｅｔａｌ．２００５ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ５４：３０７－３１４；Ｋｏｎｉｓｈｉｅｔａｌ．２００４ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ１０：５０９４）。ＰＤ１とＰＤ－Ｌ１の局所相互作用を阻害することにより、免疫抑制を逆転することができる。

一実施形態では、薬剤は、阻害分子、例えば、プログラム細胞死（ＰＤ１）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含み、膜貫通ドメイン並びに４１ＢＢ及びＣＤ３ζなどの細胞内シグナル伝達ドメインに融合することができる（ＰＤ１ＣＡＲとしても知られる）。一実施形態では、ＰＤ１ＣＡＲは、本明細書に記載のＢＣＭＡＣＡＲと組み合わせて使用すると、ＣＡＲ発現細胞、例えば、Ｔ細胞若しくはＮＫ細胞の持続を改善する。一実施形態では、ＣＡＲは、配列番号２４において下線部として示されるＰＤ１の細胞外ドメインを含むＰＤ１ＣＡＲである。一実施形態では、ＰＤ１ＣＡＲは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＰＤ１ＣＡＲは、以下に提供されるアミノ酸配列（配列番号２２）を含む。

一実施形態では、薬剤は、ＰＤ１ＣＡＲをコードする核酸配列、例えば、本明細書に記載されるＰＤ１ＣＡＲを含む。一実施形態では、ＰＤ１ＣＡＲに対する核酸配列は、配列番号２３として提供され、下線部のＰＤ１ＥＣＤを含む。

別の態様において、本発明は、ＣＡＲ発現細胞、例えば、ＣＡＲＴ細胞若しくはＣＡＲ発現ＮＫ細胞の集団を提供する。一部の実施形態では、ＣＡＲ発現細胞の集団は、異なるＣＡＲを発現する細胞の混合物を含む。例えば、一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲＴ細胞若しくはＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の集団は、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ結合ドメインを有するＣＡＲを発現する第１細胞と、異なる抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えば、第１細胞により発現されるＣＡＲ中の抗ＢＣＭＡ結合ドメインと異なる本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ結合ドメインを有するＣＡＲを発現する第２細胞とを含み得る。別の例として、ＣＡＲ発現細胞の集団は、例えば、本明細書に記載されるような抗ＢＣＭＡ結合ドメインを含むＣＡＲを発現する第１細胞と、ＢＣＭＡ以外の標的（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＳ－１、κ軽鎖、ＣＤ１３９、ルイスＹ抗原又はＣＤ３８）に対する抗原結合ドメインを含むＣＡＲを発現する第２細胞とを含み得る。一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞の集団は、例えば、本明細書に記載されるような抗ＢＣＭＡ結合ドメインを含むＣＡＲを発現する第１細胞と、ＣＤ１９をターゲティングする抗原結合ドメインを含むＣＡＲ（ＣＤ１９ＣＡＲ）を発現する第２細胞とを含む。一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞の集団は、例えば、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現する第１細胞と、二次シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現する第２細胞とを含む。

別の態様において、本発明は、細胞の集団を提供し、ここで、集団中の少なくとも１つの細胞は、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡドメインを有するＣＡＲを発現し、第２細胞は、別の薬剤、例えばＣＡＲ発現細胞の活性を増大する薬剤を発現する。例えば、一実施形態では、薬剤は、阻害分子を阻害する薬剤であり得る。阻害分子は、例えば、一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を減少させ得る。阻害分子の例としては、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４若しくはＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦＲβが挙げられる。一部の実施形態では、阻害分子を阻害する薬剤は、細胞に正のシグナルを付与する第２ポリペプチド（例えば、本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン）と結合した第１ポリペプチド、例えば、阻害分子を含む。一実施形態では、薬剤は、例えば、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４若しくはＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦＲβ又はこれらのいずれかの断片（例えば、これらのいずれかの細胞外ドメインの少なくとも１部分）などの阻害分子の第１ポリペプチドと、本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載されるように、例えば、４１ＢＢ、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ若しくはＣＤ２８を含む）及び／又は一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載されるＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン）である第２ポリペプチドとを含む。一実施形態では、薬剤は、ＰＤ１の第１ポリペプチド又はその断片（例えば、ＰＤ１の細胞外ドメインの少なくとも１部分）と、本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載のＣＤ２８シグナル伝達ドメイン及び／又は本明細書に記載のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン）の第２ポリペプチドとを含む。

一態様において、本発明は、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲＴ細胞若しくはＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の集団、例えば、別の薬剤、例えば、キナーゼ阻害剤（例えば、本明細書に記載のキナーゼ阻害剤）と組み合わせた、異なるＣＡＲを発現する細胞の混合物を投与することを含む方法を提供する。別の態様において、本発明は、別の薬剤、例えば、キナーゼ阻害剤（例えば、本明細書に記載のキナーゼ阻害剤）と組み合わせた細胞の集団であって、集団中の少なくとも１つの細胞が、本明細書に記載の抗癌関連抗原結合ドメインを有するＣＡＲを発現し、第２細胞が、別の薬剤、例えばＣＡＲ発現細胞の活性を増大する薬剤を発現する、細胞の集団を投与することを含む方法を提供する。

ナチュラルキラー細胞受容体（ＮＫＲ）ＣＡＲ
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ分子は、ナチュラルキラー細胞受容体（ＮＫＲ）の１つ以上の成分を含み、それにより、ＮＫＲ－ＣＡＲを形成する。ＮＫＲ成分は、以下のナチュラルキラー細胞受容体のいずれか由来の膜貫通ドメイン、ヒンジドメイン又は細胞質ドメインであり得る：キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、例えば、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／Ｌ３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＤＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＬ１／Ｓ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ３ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＰ１及びＫＩＲ３ＤＰ１；天然細胞傷害性受容体（ＮＣＲ）、例えば、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６；免疫細胞受容体のシグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭ）ファミリー、例えば、ＣＤ４８、ＣＤ２２９、２Ｂ４、ＣＤ８４、ＮＴＢ－Ａ、ＣＲＡＣＣ、ＢＬＡＭＥ及びＣＤ２Ｆ－１０；Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）、例えばＣＤ１６及びＣＤ６４；並びにＬｙ４９受容体、例えばＬＹ４９Ａ、ＬＹ４９Ｃ。本明細書に記載のＮＫＲ－ＣＡＲ分子は、アダプター分子又は細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、ＤＡＰ１２と相互作用し得る。ＮＫＲ要素を含むＣＡＲ分子の例示的な配置及び配列は、国際公開第２０１４／１４５２５２号パンフレットに記載され、その内容は参照により本明細書に援用される。

非抗体足場
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、非抗体足場、例えば、フィブロネクチン、アンキリン、ドメイン抗体、リポカリン、小モジュラー免疫医薬品、マキシボディ、プロテインＡ又はアフィリンを含む。非抗体足場は、細胞上の標的抗原に結合する能力を有する。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、細胞上で発現される天然に存在するタンパク質のポリペプチド又はその断片である。一部の実施形態において、抗原結合ドメインは、非抗体足場を含む。得られるポリペプチドが、標的細胞上の標的抗原に特異的に結合する少なくとも１つの結合領域を含む限り、多様な非抗体足場を使用することができる。

非抗体足場としては、フィブロネクチン（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、ＭＡ）、アンキリン（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰａｒｔｎｅｒｓＡＧ、Ｚｕｒｉｃｈ、スイス）、ドメイン抗体（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｌｔｄ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ及びＡｂｌｙｎｘｎｖ、Ｚｗｉｊｎａａｒｄｅ、ベルギー）、リポカリン（ＰｉｅｒｉｓＰｒｏｔｅｏｌａｂＡＧ、Ｆｒｅｉｓｉｎｇ、ドイツ）、小モジュラー免疫医薬品（ＴｒｕｂｉｏｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓＩｎｃ．、Ｓｅａｔｔｌｅ、ＷＡ）、マキシボディ（Ａｖｉｄｉａ，Ｉｎｃ．、ＭｏｕｎｔａｉｎＶｉｅｗ、ＣＡ）、プロテインＡ（ＡｆｆｉｂｏｄｙＡＧ、スウェーデン）並びにアフィリン（γクリスタリン又はユビキチン）（ＳｃｉｌＰｒｏｔｅｉｎｓＧｍｂＨ、Ｈａｌｌｅ、ドイツ）が挙げられる。

キメラ抗原受容体を制御するための戦略
ＣＡＲ活性を制御することができる多くの方法がある。一部の実施形態において、ＣＡＲ活性を制御することができる制御可能ＣＡＲ（ＲＣＡＲ）は、ＣＡＲ療法の安全性及び有効性を最適化するために望ましい。例えば、二量体化ドメインに融合したカスパーゼを用いた、例えば、アポトーシスの誘導（例えば、Ｄｉｅｔａｌ．，ＮＥｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２０１１Ｎｏｖ．３；３６５（１８）：１６７３－１６８３を参照されたい）を本発明のＣＡＲ療法の安全スイッチとして使用することができる。別の例において、ＣＡＲ発現細胞は、誘導性カスパーゼ－９（ｉＣａｓｐａｓｅ－９）分子も発現することができ、これは、二量体化因子薬物（例えば、リミズシド（ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ）（ＡＰ１９０３（ＢｅｌｌｉｃｕｍＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）又はＡＰ２０１８７（Ａｒｉａｄ）とも呼ばれる）の投与により、細胞のカスパーゼ－９の活性化及びアポトーシスを起こす。ｉＣａｓｐａｓｅ－９分子は、二量体化（ＣＩＤ）結合ドメインの化学誘導因子を含み、これは、ＣＩＤの存在下で二量体化を媒介する。これは、ＣＡＲ発現細胞の誘導的及び選択的枯渇を引き起こす。いくつかの事例では、ｉＣａｓｐａｓｅ－９分子は、ＣＡＲコードベクターとは別の核酸分子によってコードされる。いくつかの事例では、ｉＣａｓｐａｓｅ－９分子は、ＣＡＲコードベクターと同じ核酸分子によってコードされる。ｉＣａｓｐａｓｅ－９は、ＣＡＲ発現細胞のあらゆる毒性を回避するための安全スイッチを提供することができる。例えば、Ｓｏｎｇｅｔａｌ．ＣａｎｃｅｒＧｅｎｅＴｈｅｒ．２００８；１５（１０）：６６７－７５；ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌＩｄ．Ｎｏ．ＮＣＴ０２１０７９６３；及びＤｉＳｔａｓｉｅｔａｌ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２０１１；３６５：１６７３－８３を参照されたい。

本発明のＣＡＲ療法を制御するための代替的戦略は、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の誘発により、例えばＣＡＲ発現細胞を消失させることにより、ＣＡＲ活性を脱活性化若しくは遮断する小分子又は抗体の利用を含む。例えば、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、細胞死、例えば、ＡＤＣＣ又は補体誘導性細胞死を誘発することができる分子により認識される抗原も発現し得る。例えば、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、抗体又は抗体フラグメントにより標的化され得る受容体も発現し得る。このような受容体の例としては、ＥｐＣＡＭ、ＶＥＧＦＲ、インテグリン（例えば、インテグリンανβ３、α４、αΙ３／４β３、α４β７、α５β１、ανβ３、αν）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバー（例えば、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２）、ＰＤＧＦ受容体、インターフェロン受容体、葉酸受容体、ＧＰＮＭＢ、ＩＣＡＭ－１、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＥＡ、ＣＡ－１２５、ＭＵＣ１、ＴＡＧ－７２、ＩＬ－６受容体、５Ｔ４、ＧＤ２、ＧＤ３、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ１１、ＣＤ１１ａ／ＬＦＡ－１、ＣＤ１５、ＣＤ１８／ＩＴＧＢ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３／ｌｇＥ受容体、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２５、ＣＤ１４７／ベイシジン、ＣＤ１５２／ＣＴＬＡ－４、ＣＤ１５４／ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１９５／ＣＣＲ５、ＣＤ３１９／ＳＬＡＭＦ７及びＥＧＦＲ並びにその切断バージョン（例えば、１つ以上の細胞外エピトープを保持するが、細胞質ドメイン内の１つ以上の領域を欠くバージョン）を含む。例えば、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、シグナル伝達能力を欠くが、ＡＤＣＣを誘発できる分子、例えばセツキシマブ（アービタックス（登録商標））により認識されるエピトープを保持する切断型上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）も発現し得、その結果、セツキシマブの投与が、ＡＤＣＣ及び続くＣＡＲ発現細胞の枯渇を誘発する（例えば、国際公開第２０１１／０５６８９４号パンフレット及びＪｏｎｎａｌａｇａｄｄａｅｔａｌ．，ＧｅｎｅＴｈｅｒ．２０１３；２０（８）８５３－８６０を参照されたい）。別の戦略は、例えば、ＡＤＣＣによりＣＡＲ発現細胞の選択的枯渇をもたらす、リツキシマブに結合する、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞におけるＣＤ３２及びＣＤ２０抗原の両方からの標的エピトープを合わせる、高度に小型のマーカー／自殺遺伝子の発現を含む（例えば、Ｐｈｉｌｉｐｅｔａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２０１４；１２４（８）１２７７－１２８７を参照されたい）。本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を枯渇させる他の方法は、例えば、ＡＤＣＣを誘発することにより、破壊の目的で成熟リンパ球、例えばＣＡＲ発現細胞に選択的に結合して、これをターゲティングするモノクローナル抗ＣＤ５２抗体であるＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標）の投与を含む。他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＡＲリガンド、例えば抗イディオタイプ抗体を使用して選択的にターゲティングされ得る。一部の実施形態において、抗イディオタイプ抗体は、エフェクター細胞活性、例えばＡＤＣＣ又はＡＤＣ活性を引き起こし、それによりＣＡＲ発現細胞数を減らすことができる。他の実施形態において、ＣＡＲリガンド、例えば抗イディオタイプ抗体は、細胞殺傷を誘発する薬剤、例えばトキシンに結合させ、それによりＣＡＲ発現細胞数を減らすことができる。これに代わり、ＣＡＲ分子自体を、下記のように、活性を制御する、例えばオン及びオフ状態にすることができるように配置できる。

一部の実施形態において、ＲＣＡＲは、本明細書に記載の標準的ＣＡＲの要素、例えば抗原結合ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインが個別のポリペプチド又はメンバーに配置された、一連のポリペプチド、典型的には最も単純な実施形態において２つのポリペプチドを含む。一部の実施形態において、一連のポリペプチドは、二量体化分子の存在下で互いにポリペプチドと結合することできる、例えば、抗原結合ドメインを細胞内シグナル伝達ドメインに結合することができる二量体化スイッチを含む。このような制御可能なＣＡＲのさらなる説明及び例示的な配置は、本明細書及び国際公開第２０１５／０９０２２９号パンフレットに提供され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

一実施形態において、ＲＣＡＲは、２つのポリペプチド又はメンバー：１）細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、本明細書に記載の初代細胞内シグナル伝達ドメインと、第１スイッチドメインを含む細胞内シグナル伝達メンバー；２）例えば、本明細書に記載されるように、本明細書に記載の腫瘍抗原をターゲティングする抗原結合ドメインと、第２スイッチドメインを含む抗原結合メンバーを含む。任意選択で、ＲＣＡＲは、本明細書に記載の膜貫通ドメインを含む。一実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞内シグナル伝達メンバー、抗原結合メンバー又はその両方に配置され得る。（別に指示のない限り、ＲＣＡＲのメンバー若しくはエレメントが本明細書に記載される場合、順序は提供される通りであり得るが、他の順序も同様に含まれる。言い換えれば、一実施形態では、本文中に順序が記載されるが、他の実施形態では、順序は異なっている可能性がある。例えば、膜貫通領域の片側のエレメントの順序は、実施例と異なり得、例えば、細胞内シグナル伝達ドメインに対するスイッチドメインの配置は、相違し得る、例えば逆転される可能性がある）。

一実施形態において、第１及び第２スイッチドメインは、細胞内又は細胞外二量体化スイッチを形成することができる。一実施形態では、二量体化スイッチは、ホモ二量体化スイッチであり得、例えば、第１及び第２スイッチドメインは、同じであるか又はヘテロ二量体化スイッチであり、例えば、第１及び第２スイッチドメインは、互いに異なる。

一実施形態において、ＲＣＡＲは、「マルチスイッチ」を含み得る。マルチスイッチは、ヘテロ二量体化スイッチドメイン又はホモ二量体化スイッチドメインを含み得る。マルチスイッチは、第１メンバー、例えば、抗原結合メンバー及び第２メンバー、例えば、細胞内シグナル伝達メンバー上に、独立して、複数、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個のスイッチドメインを含む。一実施形態では、第１メンバーは、複数の第１スイッチドメイン、例えば、ＦＫＢＰベースのスイッチドメインを含み、第２メンバーは、複数の第２スイッチドメイン、例えば、ＦＲＢベースのスイッチドメインを含む。一実施形態では、第１メンバーは、第１及び第２スイッチドメイン、例えば、ＦＫＢＰベースのスイッチドメインとＦＲＢベースのスイッチドメインを含み、第２メンバーは、第１及び第２スイッチドメイン、例えば、ＦＫＢＰベースのスイッチドメインとＦＲＢベースのスイッチドメインを含み得る。

一実施形態において、細胞内シグナル伝達メンバーは、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、一次シグナル伝達ドメインと、１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。

一実施形態において、抗原結合メンバーは、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含み得る。一実施形態では、抗原結合メンバーは、複数、例えば、２又は３つの本明細書に記載される共刺激シグナル伝達ドメイン、例えば、４－１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ及びＯＸ－４０から選択される共刺激シグナル伝達ドメインを含み、いくつかの実施形態では、一次シグナル伝達ドメインを含まない。一実施形態では、抗原結合メンバーは、細胞外から細胞内の方向に、以下の共刺激シグナル伝達ドメイン：４－１ＢＢ－ＣＤ２７；４－１ＢＢ－ＣＤ２７；ＣＤ２７－４－１ＢＢ；４－１ＢＢ－ＣＤ２８；ＣＤ２８－４－１ＢＢ；ＯＸ４０－ＣＤ２８；ＣＤ２８－ＯＸ４０；ＣＤ２８－４－１ＢＢ；又は４－１ＢＢ－ＣＤ２８を含む。こうした実施形態では、細胞内結合メンバーは、ＣＤ３ζドメインを含む。１つのこうした実施形態では、ＲＣＡＲは、（１）抗原結合ドメイン、膜貫通ドメインと、２つの共刺激シグナル伝達ドメイン及び第１スイッチドメインを含む抗原結合メンバー；並びに（２）膜貫通ドメイン又は膜テザリングドメインと、少なくとも１つの一次シグナル伝達ドメイン及び第２スイッチドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

一実施形態は、抗原結合メンバーが、ＣＡＲ細胞の表面にテザリングされていないＲＣＡＲを提供する。これにより、抗原結合メンバーをコードする配列で細胞を形質変換することなく、細胞内シグナル伝達メンバーを有する細胞を１つ以上の抗原結合ドメインと好適に対合させることが可能になる。こうした実施形態では、ＲＣＡＲは、１）第１スイッチドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、一次シグナル伝達ドメイン及び第１スイッチドメインを含む細胞内シグナル伝達メンバー；並びに２）抗原結合ドメイン及び第２スイッチドメインを含む抗原結合メンバーを含み、抗原結合メンバーは、膜貫通ドメイン又は膜テザリングドメインを含まず、任意選択で、細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。一部の実施形態では、ＲＣＡＲは、３）第２抗原結合ドメイン、例えば、抗原結合ドメインにより結合された異なる抗原に結合する第２抗原結合ドメイン；及び第２スイッチドメインを含む第２抗原結合メンバーをさらに含み得る。

また、抗原結合メンバーが、二重特異性活性化及びターゲティング能力を含むＲＣＡＲも本明細書に提供される。この実施形態では、抗原結合メンバーは、複数、例えば、２、３、４若しくは５つの抗原結合ドメイン、例えば、ｓｃＦｖを含むことができ、各抗原結合ドメインは、標的抗原、例えば、異なる抗原又は同じ抗原、例えば、同じ抗原上の同じ若しくは異なるエピトープに結合する。一実施形態では、複数の抗原結合ドメインは、タンデムであり、任意選択で、リンカー又はヒンジ領域は、抗原結合ドメインの各々の間に配置される。好適なリンカー及びヒンジ領域は本明細書に記載される。

一実施形態は、増殖のスイッチングを可能にする構成を有するＲＣＡＲを提供する。この実施形態では、ＲＣＡＲは、１）任意選択で、膜貫通ドメイン又は膜テザリングドメイン；４－１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ及びＯＸ－４０から選択される１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメイン及びスイッチドメインを含む細胞内シグナル伝達メンバー；並びに２）抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ３ζドメインを含む抗原結合メンバーを含み、抗原結合メンバーは、スイッチドメインを含まないか、又は細胞内シグナル伝達メンバー上でスイッチドメインと二量体化するスイッチドメインを含まない。一実施形態では、抗原結合メンバーは、共刺激シグナル伝達ドメインを含まない。一実施形態では、細胞内シグナル伝達メンバーは、ホモ二量体化スイッチからのスイッチドメインを含む。一実施形態では、細胞内シグナル伝達メンバーは、ヘテロ二量体化スイッチの第１スイッチドメインを含み、ＲＣＡＲは、ヘテロ二量体化スイッチの第２スイッチドメインを含む第２細胞内シグナル伝達ドメインを含む。こうした実施形態では、第２細胞内シグナル伝達メンバーは、細胞内シグナル伝達メンバーと同じ細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態では、二量体化スイッチは、細胞内である。一実施形態では、二量体化スイッチは、細胞外である。

本明細書に記載されるＲＣＡＲ構成のいずれかにおいて、第１及び第２スイッチドメインは、本明細書に記載されるようなＦＫＢＰ－ＦＲＢベースのスイッチを含む。

また、本明細書に記載のＲＣＡＲを含む細胞も本明細書に提供される。ＲＣＡＲを発現するように操作された任意の細胞をＲＣＡＲＸ細胞として用いることができる。一実施形態では、ＲＣＡＲＸ細胞は、Ｔ細胞であり、ＲＣＡＲＴ細胞と呼ばれる。一実施形態では、ＲＣＡＲＸ細胞は、ＮＫ細胞であり、ＲＣＡＲＮ細胞と呼ばれる。

さらに、ＲＣＡＲコード配列を含む核酸及びベクターも本明細書に提供される。ＲＣＡＲの様々なエレメントをコードする配列を同じ核酸分子、例えば、同じプラスミド又はベクター、例えば、ウイルスベクター、例えば、レンチウイルスベクターに配置することができる。一実施形態では、（ｉ）抗原結合メンバーをコードする配列及び（ｉｉ）細胞内シグナル伝達メンバーをコードする配列が、同じ核酸分子、例えば、ベクター上に存在し得る。対応するタンパク質の生産は、例えば、個別のプロモーターの使用又は２シストロン性転写産物（これは、単一翻訳産物の切断又は２つの個別のタンパク質産物の翻訳により２つのタンパク質の生産をもたらし得る）に使用によって達成され得る。一実施形態では、切断可能なペプチド、例えば、Ｐ２Ａ又はＦ２Ａ配列をコードする配列は、（ｉ）と（ｉｉ）の間に配置される。一実施形態では、ＩＲＥＳをコードする配列、例えば、ＥＭＣＶ又はＥＶ７１ＩＲＥＳをコードする配列は、（ｉ）と（ｉｉ）の間に配置される。これらの実施形態では、（ｉ）及び（ｉｉ）は、単一ＲＮＡとして転写される。一実施形態では、（ｉ）及び（ｉｉ）が個別のｍＲＮＡとして転写されるように、第１プロモーターが（ｉ）と作動可能に連結され、第２プロモーターが（ｉｉ）と作動可能に連結される。

代わりに、ＲＣＡＲの様々なエレメントをコードする配列は、異なる核酸分子、例えば、異なるプラスミド又はベクター、例えばウイルスベクター、例えばレンチウイルスベクター上に配置される。例えば、（ｉ）抗原結合メンバーをコードする配列は、第１核酸、例えば第１ベクター上に存在し得、（ｉｉ）細胞内シグナル伝達メンバーをコードする配列は、第２核酸、例えば第２ベクター上に存在し得る。

二量体化スイッチ
二量体化スイッチは、非共有結合又は共有結合であり得る。非共有結合二量体化スイッチの場合、二量体化分子は、スイッチドメイン同士の非共有結合相互作用を促進する。共有結合二量体化スイッチの場合、二量体化分子は、スイッチドメイン同士の共有結合相互作用を促進する。

一実施形態では、ＲＣＡＲは、ＦＫＢＰ／ＦＲＡＰ又はＦＫＢＰ／ＦＲＢベースの二量体化スイッチを含む。ＦＫＢＰ１２（ＦＫＢＰ又はＦＫ５０６結合タンパク質）は、天然産物の免疫抑制薬、ラパマイシンの初期細胞内標的として役立つ豊富な細胞質タンパク質である。ラパマイシンは、ＦＫＢＰ及び大型ＰＩ３ＫホモログＦＲＡＰ（ＲＡＦＴ、ｍＴＯＲ）に結合する。ＦＲＢは、ＦＲＡＰの９３アミノ酸部分であり、これは、ＦＫＢＰ－ラパマイシン複合体に結合するのに十分である（Ｃｈｅｎ，Ｊ．，Ｚｈｅｎｇ，Ｘ．Ｆ．，Ｂｒｏｗｎ，Ｅ．Ｊ．＆Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｓ．Ｌ．（１９９５）Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｎ１１－ｋＤａＦＫＢＰ１２－ｒａｐａｍｙｃｉｎ－ｂｉｎｄｉｎｇｄｏｍａｉｎｗｉｔｈｉｎｔｈｅ２８９－ｋＤａＦＫＢＰ１２－ｒａｐａｍｙｃｉｎ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｃｒｉｔｉｃａｌｓｅｒｉｎｅｒｅｓｉｄｕｅ．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ９２：４９４７－５１）。

一実施形態では、ＦＫＢＰ／ＦＲＡＰ、例えば、ＦＫＢＰ／ＦＲＢベースのスイッチは、二量体化分子、例えば、ラパマイシン又はラパマイシンアナログを使用することができる。

ＦＫＢＰの例示的なアミノ酸配列は、以下の通りである。

いくつかの実施形態では、ＦＫＢＰスイッチドメインは、ラパマイシン又はラパログの存在下で、ＦＲＢ又はそのフラグメント若しくはアナログと結合する能力を有するＦＫＢＰのフラグメントを含み得る。一実施形態では、ＦＫＢＰスイッチドメインは、以下のアミノ酸配列を含む。

ＦＲＢのアミノ酸配列は、以下の通りである。
ＩＬＷＨＥＭＷＨＥＧＬＥＥＡＳＲＬＹＦＧＥＲＮＶＫＧＭＦＥＶＬＥＰＬＨＡＭＭＥＲＧＰＱＴＬＫＥＴＳＦＮＱＡＹＧＲＤＬＭＥＡＱＥＷＣＲＫＹＭＫＳＧＮＶＫＤＬＴＱＡＷＤＬＹＹＨＶＦＲＲＩＳＫ（配列番号２７７）

「ＦＫＢＰ／ＦＲＡＰ、例えば、ＦＫＢＰ／ＦＲＢベースのスイッチ」は、この用語が本明細書で使用されるとき、以下を含む二量体化スイッチを指す：ラパマイシン又はラパログ、例えば、ＲＡＤ００１の存在下で、ＦＲＢ又はそのフラグメント若しくはアナログと結合する能力を有するＦＫＢＰフラグメント若しくはそのアナログを含み、且つ配列番号２７５又は２７６のＦＫＢＰ配列と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８若しくは９９％の配列同一性を有するか、又はそれと３０、２５、２０、１５、１０、５、４、３、２若しくは１アミノ酸残基のみが相違しない第１スイッチドメイン；並びにラパマイシン又はラパログの存在下で、ＦＲＢ又はそのフラグメント若しくはアナログと結合する能力を有するＦＲＢフラグメント若しくはそのアナログを含み、且つ配列番号２７７のＦＲＢ配列と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８若しくは９９％の配列同一性を有するか、又はそれと３０、２５、２０、１５、１０、５、４、３、２若しくは１アミノ酸残基のみが相違しない第２スイッチドメイン。一実施形態では、本明細書に記載されるＲＣＡＲは、配列番号２７５（又は配列番号２７６）に開示されるアミノ酸残基を含む１つのスイッチドメインと、配列番号２７７に開示されるアミノ酸残基を含む１つのスイッチドメインを含む。

いくつかの実施形態では、ＦＫＢＰ／ＦＲＢ二量体化スイッチは、ＦＲＢベースのスイッチドメイン、例えば、修飾ＦＲＢスイッチドメイン、ＦＫＢＰベースのスイッチドメインと、二量体化分子、例えば、ラパマイシン又はラパログ、例えば、ＲＡＤ００１の間に、改変された、例えば、増強された複合体形成を呈示する修飾ＦＲＢスイッチドメインを含む。一実施形態では、修飾ＦＲＢスイッチドメインは、アミノ酸位置：Ｌ２０３１、Ｅ２０３２、Ｓ２０３５、Ｒ２０３６、Ｆ２０３９、Ｇ２０４０、Ｔ２０９８、Ｗ２１０１、Ｄ２１０２、Ｙ２１０５及びＦ２１０８における突然変異から選択される、１つ以上、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０若しくはそれを超える突然変異を含み、野生型アミノ酸は、いずれか他の天然に存在するアミノ酸に変異している。一実施形態では、突然変異型ＦＲＢは、Ｅ２０３２に突然変異を含み、Ｅ２０３２は、フェニルアラニン（Ｅ２０３２Ｆ）、メチオニン（Ｅ２０３２Ｍ）、アルギン（Ｅ２０３２Ｒ）、バリン（Ｅ２０３２Ｖ）、チロシン（Ｅ２０３２Ｙ）、イソロイシン（Ｅ２０３２Ｉ）、例えば、配列番号２７８又はロイシン（Ｅ２０３２Ｌ）、例えば、配列番号２７９に変異している。一実施形態では、突然変異ＦＲＢは、Ｔ２０９８に突然変異を含み、Ｔ２０９８は、フェニルアラニン（Ｔ２０９８Ｆ）又はロイシン（Ｔ２０９８Ｌ）、例えば、配列番号２８０に変異している。一実施形態では、突然変異型ＦＲＢは、Ｅ２０３２及びＴ２０９８に突然変異を含み、Ｅ２０３２は、任意のアミノ酸に変異し、Ｔ２０９８は、任意のアミノ酸、例えば、配列番号２８１に変異している。一実施形態では、突然変異型ＦＲＢは、Ｅ２０３２Ｉ及びＴ２０９８Ｌ突然変異、例えば、配列番号２８２を含む。一実施形態では、突然変異型ＦＲＢは、Ｅ２０３２Ｌ及びＴ２０９８突然変異、例えば、配列番号２８３を含む。

他の好適な二量体化スイッチとしては、ＧｙｒＢ－ＧｙｒＢベースの二量体化スイッチ、ジベレリン（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎ）ベースの二量体化スイッチ、タグ／バインダー二量体化スイッチ及びハロ－タグ／スナップ－タグ二量体化スイッチが挙げられる。本明細書に提供されるガイドラインに従って、こうしたスイッチ及び関連二量体化分子は、当業者には明らかであろう。

二量体化分子
二量体化分子によってスイッチドメイン同士の結合が促進される。二量体化分子の存在下で、スイッチドメイン同士の相互作用又は結合は、第１スイッチドメインと結合した、例えば、それと融合したポリペプチドと、第２スイッチドメインと結合した、例えば、それと融合したポリペプチドとの間のシグナル伝達を可能にする。非限定的なレベルの二量体化分子の存在下で、シグナル伝達は、例えば、本明細書に記載のシステムで測定して、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、５、１０、５０、１００倍増大する。

本明細書に記載されるＦＫＢＰ／ＦＲＢベースの二量体化スイッチにおける二量体化分子として、ラパマイシン及びラパマイシンアナログ（場合によっては、ラパログと呼ばれる）、例えば、ＲＡＤ００１を使用することができる。一実施形態では、二量体化分子は、ラパマイシン（シロリムス）、ＲＡＤ００１（エベロリムス）、ゾタロリムス、テムシロリムス、ＡＰ－２３５７３（リダホロリムス）、ビオリムス及びＡＰ２１９６７から選択することができる。ＦＫＢＰ／ＦＲＢベースの二量体化スイッチに使用するのに好適な別のラパマイシンアナログは、「併用療法」と題するセクション又は「低、免疫増強、用量のｍＴＯＲ阻害剤との併用」と題するサブセクションにさらに詳しく記載される。

スプリットＣＡＲ
一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、スプリットＣＡＲを使用する。スプリットＣＡＲアプローチは、本明細書に参照により組み込まれる国際公開第２０１４／０５５４４２号パンフレット及び同第２０１４／０５５６５７号パンフレットに、より詳細に記載されている。簡潔には、スプリットＣＡＲ系は、第１抗原結合ドメイン及び共刺激ドメイン（例えば、４１ＢＢ）を有する第１ＣＡＲを発現する細胞を含み、細胞は、第２抗原結合ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζ）を有する第２ＣＡＲも発現する。細胞が第１抗原に遭遇すると、共刺激ドメインが活性化され、細胞が増殖する。細胞が第２抗原に遭遇すると、細胞内シグナル伝達ドメインが活性化され、細胞殺傷活性が開始される。そのため、ＣＡＲ発現細胞は、両方の抗原の存在下でのみ完全活性化される。いくつかの実施形態では、第１抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡを認識し、例えば、本明細書に記載の抗原結合ドメインを含み、第２抗原結合ドメインは、急性骨髄性白血病細胞に発現される抗原、例えば、ＣＤ１２３、ＣＬＬ－１、ＣＤ３４、ＦＬＴ３若しくは葉酸受容体βを認識する。いくつかの実施形態では、第１抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡを認識し、例えば、本明細書に記載の抗原結合ドメインを含み、第２抗原結合ドメインは、Ｂ細胞に発現される抗原、例えば、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ－３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ又はＣＤ７９ａを認識する。

ＣＡＲと他の分子又は薬剤との共発現
第２のＣＡＲの共発現
一部の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、第２のＣＡＲ、例えば同じ標的（例えば、ＣＤ１９）又は異なる標的（例えば、ＣＤ１９以外の標的、例えば、本明細書に記載の標的）に対する、例えば第２のＣＡＲの異なる抗原結合ドメインをさらに含み得る。一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、第１の抗原を標的とし、共刺激シグナル伝達ドメインを有するが、一次シグナル伝達ドメインを有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第１のＣＡＲ及び第２の、異なる、抗原を標的とし、一次シグナル伝達ドメインを有するが、共刺激シグナル伝達ドメインを有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲを含む。第１のＣＡＲへの共刺激シグナル伝達ドメイン、例えば４－１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＯＸ－４０又はＩＣＯＳ及び一次シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζの第２のＣＡＲへの配置は、両標的が発現される細胞に対してＣＡＲ活性を制限する。一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激ドメインを含む第１のＣＡＲ及び他の抗原を標的とし、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲを含む。一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第１のＣＡＲ及び他の抗原を標的とし、抗原に対する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲを含む。

一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に記載のＸＣＡＲ及び阻害性ＣＡＲを含む。一部の実施形態において、阻害性ＣＡＲは、正常細胞、例えばＸも発現する正常細胞で見られるが、癌細胞で見られない抗原と結合する抗原結合ドメインを含む。一部の実施形態において、阻害性ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び阻害分子の細胞内ドメインを含む。例えば、阻害性ＣＡＲの細胞内ドメインは、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦ（例えば、ＴＧＦβ）の細胞内ドメインであり得る。

一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞が２以上の異なるＣＡＲを含むとき、異なるＣＡＲの抗原結合ドメインは、抗原結合ドメインが互いに相互作用しないようなものである。例えば、第１及び第２のＣＡＲを発現する細胞は、第２のＣＡＲの抗原結合ドメイン、例えばＶＨＨである第２のＣＡＲの抗原結合ドメインと結合を形成しない、例えばフラグメント、例えばｓｃＦｖとしての第１のＣＡＲの抗原結合ドメインを有し得る。

一部の実施形態において、抗原結合ドメインは、単一ドメイン抗原結合（ＳＤＡＢ）分子を含み、相補的決定領域が単一ドメインポリペプチドの一部である分子を含む。例は、重鎖可変ドメイン、軽鎖を天然に欠く結合分子、慣用の４鎖抗体由来の単一ドメイン、操作されたドメイン及び抗体由来のもの以外の単一ドメインスキャフォールドを含むが、これらに限定されない。ＳＤＡＢ分子は、当技術分野の又は将来的な単一ドメイン分子であり得る。ＳＤＡＢ分子は、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、ヤツメウナギ、魚類、サメ、ヤギ、ウサギ及びウシを含むが、これらに限定されない任意の種由来であり得る。この用語は、ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）及びサメ以外の種由来の天然に存在する単一ドメイン抗体分子も含む。

一部の実施形態において、ＳＤＡＢ分子は、例えば、サメの血清に見られる新規抗原受容体（ＮＡＲ）として知られる免疫グロブリンアイソタイプ由来であるような、魚類で見られる免疫グロブリンの可変領域に由来し得る。ＮＡＲ（「ＩｇＮＡＲ」）の可変領域由来の単一ドメイン分子を製造する方法は、国際公開第０３／０１４１６１号パンフレット及びＳｔｒｅｌｔｓｏｖ（２００５）ＰｒｏｔｅｉｎＳｃｉ．１４：２９０１－２９０９に記載されている。

一部の実施形態において、ＳＤＡＢ分子は、軽鎖を欠く重鎖として知られる天然に存在する単一ドメイン抗原結合分子である。このような単一ドメイン分子は、例えば、国際公開第９４０４６７８号パンフレット及びＨａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ，Ｃ．ｅｔａｌ．（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ３６３：４４６－４４８に記載されている。明確化するために、天然に軽鎖を欠く重鎖分子由来のこの可変ドメインは、ここでは、４鎖免疫グロブリンの慣用のＶＨと区別するためにＶＨＨ又はナノボディとして知られている。このようなＶＨＨ分子は、ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）種、例えばラクダ、ラマ、ヒトコブラクダ、アルパカ及びグアナコ由来であり得る。ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）以外の他の種は、天然に軽鎖を欠く重鎖分子を産生し得、このようなＶＨＨは、本発明の範囲内である。

ＳＤＡＢ分子は、組換え、ＣＤＲ移植、ヒト化、ラクダ化、脱免疫化及び／又はインビトロ産生され得る（例えば、ファージディスプレイにより選択）。

受容体の抗原結合ドメイン間を相互作用する抗原結合ドメインを含む複数のキメラ膜包埋受容体を有する細胞は、例えば、抗原結合ドメインの１つ以上がその同族抗原に結合することを阻止するため、望ましくない可能性があることも判明した。従って、本明細書に開示されるのは、このような相互作用を最小化する、抗原結合ドメインを含む第１及び第２の天然に存在しないキメラ膜包埋受容体を有する細胞である。また、本明細書に開示されるのは、このような相互作用を最小化する抗原結合ドメインを含む第１及び第２の天然に存在しないキメラ膜包埋受容体をコードする核酸並びにこのような細胞及び核酸を製造及び使用する方法である。一部の実施形態において、第１及び第２の天然に存在しないキメラ膜包埋受容体の抗原結合ドメインの一方は、ｓｃＦｖを含み、他方は、単一ＶＨドメイン、例えばラクダ科、サメ若しくはヤツメウナギ単一ＶＨドメイン又はヒト若しくはマウス配列由来の単一ＶＨドメインを含む。

一部の実施形態において、本明細書における組成物は、第１及び第２のＣＡＲを含み、ここで、第１及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、可変軽ドメイン及び可変重ドメインを含まない。一実施形態において、第１及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、他方は、ｓｃＦｖではない。一実施形態において、第１及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、単一ＶＨドメイン、例えばラクダ科、サメ若しくはヤツメウナギ単一ＶＨドメイン又はヒト若しくはマウス配列由来の単一ＶＨドメインを含む。一実施形態において、第１及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ナノボディを含む。一実施形態において、第１及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ラクダ科ＶＨＨドメインを含む。

一実施形態において、第１及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、他方は、単一ＶＨドメイン、例えばラクダ科、サメ若しくはヤツメウナギ単一ＶＨドメイン又はヒト若しくはマウス配列由来の単一ＶＨドメインを含む。一実施形態において、第１及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、他方は、ナノボディを含む。一実施形態において、第１及び第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、他方は、ラクダ科ＶＨＨドメインを含む。

一実施形態において、細胞の表面上に存在するとき、第１のＣＡＲの抗原結合ドメインのその同族抗原への結合は、第２のＣＡＲの存在により実質的に低減されない。一実施形態において、第２のＣＡＲの存在下の第１のＣＡＲの抗原結合ドメインのその同族抗原への結合は、第２のＣＡＲの非存在下の第１のＣＡＲの抗原結合ドメインのその同族抗原への結合の少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％、例えば８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。

一実施形態において、細胞の表面上に存在するとき、第１及び第２のＣＡＲの抗原結合ドメインは、両方がｓｃＦｖ抗原結合ドメインである場合より少なく互いに結合する。一実施形態において、第１及び第２のＣＡＲの抗原結合ドメインは、両方がｓｃＦｖ抗原結合ドメインである場合より少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％少なく、例えば８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％少なく互いに結合する。

ＣＡＲ活性を強化する薬剤の共発現
一部の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、別の薬剤、例えば、ＣＡＲ発現細胞の活性又は適応度を増強する薬剤をさらに発現できる。

例えば、一部の実施形態において、薬剤は、Ｔ細胞機能を調節又は制御する、例えば阻害する分子を阻害する薬剤であり得る。一部の実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御する分子は、阻害分子である。阻害分子、例えば、ＰＤ１は、一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を減少させ得る。阻害分子の例は、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン又はＴＧＦβを含む。

一部の実施形態において、例えば、本明細書に記載されるような、薬剤、例えば阻害性核酸、例えばｄｓＲＮＡ、例えばｓｉＲＮＡ若しくはｓｈＲＮＡ；又は例えば阻害性タンパク質若しくはシステム、例えば群生性等間隔短回文反復配列（ＣＲＩＳＰＲ）、転写－アクティベーター様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）又は亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を使用して、ＣＡＲ発現細胞においてＴ細胞の機能を調節又は制御する、例えば阻害する、分子の発現を阻害することができる。一部の実施形態において、薬剤は、ｓｈＲＮＡ、例えば本明細書に記載のｓｈＲＮＡである。一部の実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御する、例えば阻害する薬剤は、ＣＡＲ発現細胞内で阻害される。例えば、Ｔ細胞機能を調節又は制御する、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子は、ＣＡＲの成分、例えば全ての成分をコードする核酸に連結される。

一部の実施形態において、薬剤は、例えば、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン若しくはＴＧＦβ又はこれらのいずれかのフラグメント（例えば、これらのいずれかの少なくとも細胞外ドメインの部分）などの阻害分子の第１のポリペプチド及び本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインである第２のポリペプチド（例えば、共刺激ドメイン（例えば、本明細書に記載のような例えば４１ＢＢ、ＣＤ２７又はＣＤ２８）及び／又は一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載のＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む）である第２のポリペプチドを含む。一部の実施形態において、薬剤は、ＰＤ１又はそのフラグメント（例えば、ＰＤ１の少なくとも細胞外ドメインの部分）の第１のポリペプチド並びに本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載のＣＤ２８シグナル伝達ドメイン及び／又は本明細書に記載のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン）の第２のポリペプチドを含む。ＰＤ１は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ及びＢＴＬＡも含む受容体のＣＤ２８ファミリーの阻害性メンバーである。ＰＤ－１は、活性化Ｂ細胞、Ｔ細胞及び骨髄細胞に発現される（Ａｇａｔａｅｔａｌ．１９９６Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ８：７６５－７５）。ＰＤ１に対する２リガンド、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２は、ＰＤ１への結合によりＴ細胞活性化を下方制御することが示されている（Ｆｒｅｅｍａｎｅｔａｌ．２０００ＪＥｘｐＭｅｄ１９２：１０２７－３４；Ｌａｔｃｈｍａｎｅｔａｌ．２００１ＮａｔＩｍｍｕｎｏｌ２：２６１－８；Ｃａｒｔｅｒｅｔａｌ．２００２ＥｕｒＪＩｍｍｕｎｏｌ３２：６３４－４３）。ＰＤ－Ｌ１は、ヒト癌において豊富である（Ｄｏｎｇｅｔａｌ．２００３ＪＭｏｌＭｅｄ８１：２８１－７；Ｂｌａｎｋｅｔａｌ．２００５ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ５４：３０７－３１４；Ｋｏｎｉｓｈｉｅｔａｌ．２００４ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ１０：５０９４）。免疫抑制は、ＰＤ１とＰＤ－Ｌ１との局所相互作用の阻害により逆転できる。

一部の実施形態において、薬剤は、阻害分子、例えばプログラム細胞死１（ＰＤ１）（本明細書ではＰＤ１ＣＡＲと称する）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含み、膜貫通ドメイン及び４１ＢＢ及びＣＤ３ζなどの細胞内シグナル伝達ドメインに融合され得る。一部の実施形態において、ＰＤ１ＣＡＲは、本明細書に記載のＸＣＡＲと組み合わせで使用したとき、Ｔ細胞の残留性を改善する。一部の実施形態において、ＣＡＲは、配列番号２４において下線で示すＰＤ１の細胞外ドメインを含むＰＤ１ＣＡＲである。一部の実施形態において、ＰＤ１ＣＡＲは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態において、ＰＤ１ＣＡＲは、配列番号２２のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態において、薬剤は、ＰＤ１ＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＰＤ１ＣＡＲをコードする核酸配列を含む。一部の実施形態において、ＰＤ１ＣＡＲの核酸配列は、ＰＤ１ＥＣＤに下線を施した配列番号２３として提示される。

別の例において、一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤は、共刺激分子又は共刺激分子リガンドであり得る。共刺激分子の例には、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡ及びＴｏｌｌリガンド受容体並びにＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）が含まれる。そのような共刺激分子のさらなる例は、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、例えば本明細書に記載されるようなものを含む。共刺激分子リガンドの例には、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、ＩＣＯＳＬ、ＣＤ７０、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＧＩＴＲＬ及びＬＩＧＨＴが含まれる。実施形態において、共刺激分子リガンドは、ＣＡＲの共刺激分子ドメインと異なる共刺激分子のリガンドである。実施形態において、共刺激分子リガンドは、ＣＡＲの共刺激分子ドメインと同一の共刺激分子のリガンドである。一部の実施形態において、共刺激分子リガンドは４－１ＢＢＬである。一部の実施形態において、共刺激リガンドは、ＣＤ８０又はＣＤ８６である。一部の実施形態において、共刺激分子リガンドはＣＤ７０である。実施形態において、本明細書に記載されるＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞は、１つ以上の追加の共刺激分子又は共刺激分子リガンドを発現するようにさらに操作され得る。

ＣＡＲとケモカイン受容体の共発現
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞、例えばＣＤ１９ＣＡＲ発現細胞は、さらに、ケモカイン受容体分子を含む。Ｔ細胞におけるケモカイン受容体ＣＣＲ２ｂ又はＣＸＣＲ２のトランスジェニック発現は、黒色腫及び神経芽腫を含むＣＣＬ２－又はＣＸＣＬ１分泌固形腫瘍への輸送を促進する（Ｃｒａｄｄｏｃｋｅｔａｌ．，ＪＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１０Ｏｃｔ；３３（８）：７８０－８及びＫｅｒｓｈａｗｅｔａｌ．，ＨｕｍＧｅｎｅＴｈｅｒ．２００２Ｎｏｖ１；１３（１６）：１９７１－８０）。そのため、理論に拘束されることを望むものではないが、腫瘍、例えば、固形腫瘍により分泌されるケモカインを認識するＣＡＲ発現細胞で発現されるケモカイン受容体は、ＣＡＲ発現細胞の腫瘍への帰巣を改善し、ＣＡＲ発現細胞の腫瘍への浸潤を促進し、及びＣＡＲ発現細胞の抗腫瘍効果を増強すると考えられる。ケモカイン受容体分子は、天然に存在する又は組換えケモカイン受容体又はそのケモカイン結合フラグメントを含み得る。本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔｘ）における発現に適するケモカイン受容体分子は、ＣＸＣケモカイン受容体（例えば、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６又はＣＸＣＲ７）、ＣＣケモカイン受容体（例えば、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０又はＣＣＲ１１）、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体（例えば、ＣＸ３ＣＲ１）、ＸＣケモカイン受容体（例えば、ＸＣＲ１）又はそのケモカイン結合フラグメントを含む。一部の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲと共に発現するケモカイン受容体分子は、腫瘍により分泌されるケモカインに基づき選択する。一部の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、さらに、ＣＣＲ２ｂ受容体又はＣＸＣＲ２受容体を含む、例えば、発現する。一部の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ及びケモカイン受容体分子は、同じベクターにある又は２つの異なるベクターにある。本明細書に記載のＣＡＲ及びケモカイン受容体分子が同じベクターに実施形態において、ＣＡＲ及びケモカイン受容体分子は、各々、２つの異なるプロモーターの制御下にあるか又は同じプロモーターの制御下にある。

ＣＡＲをコードする核酸構築物
本発明は、本明細書に記載される１つ以上のＣＡＲ構築物をコードする核酸分子を含む免疫エフェクター細胞、例えば本明細書に記載の方法によって作製されたものも提供する。一部の実施形態において、核酸分子は、メッセンジャーＲＮＡ転写物として提供される。一部の実施形態において、核酸分子は、ＤＮＡ構築物として提供される。

本明細書に記載される核酸分子は、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子又はそれらの組み合わせであり得る。一部の実施形態において、核酸分子は、本明細書に記載されるようなＣＡＲポリペプチドをコードするｍＲＮＡである。他の実施形態において、核酸分子は、前述の核酸分子のいずれかを含むベクターである。

一部の実施形態において、本発明のＣＡＲの抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、その配列が哺乳動物細胞における発現のためにコドン最適化されている核酸分子によってコードされる。一部の実施形態において、本発明のＣＡＲ構築物全体は、その配列全体が哺乳動物細胞での発現のためにコドン最適化されている核酸分子によってコードされる。コドン最適化とは、コーディングＤＮＡにおける同義コドン（すなわち同じアミノ酸をコードするコドン）の出現頻度が異なる種に偏っているという発見を指す。そのようなコドン縮重は、同一のポリペプチドが様々なヌクレオチド配列によってコードされることを可能にする。様々なコドン最適化方法が当技術分野で知られており、例えば、少なくとも米国特許第５，７８６，４６４号明細書及び同第６，１１４，１４８号明細書に開示される方法が含まれる。

従って、一部の実施形態において、免疫エフェクター細胞、例えば本発明の方法によって作製されたものは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸分子を含み、ＣＡＲは、本明細書に記載の腫瘍抗原に結合する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン（例えば、本明細書に記載の膜貫通ドメイン）並びに刺激ドメイン、例えば、共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載の共刺激シグナル伝達ドメイン）及び／又は一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載の一次シグナル伝達ドメイン、例えば、本明細書に記載のζ鎖）を含む細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。

本発明は、ＣＡＲをコードする核酸分子、例えば、本明細書に記載の核酸分子が挿入されているベクターも提供する。レンチウイルスなどのレトロウイルス由来のベクターは、それらが導入遺伝子の長期の安定した組み込み及び娘細胞への伝播を可能にするため、長期遺伝子導入を達成するのに適するツールである。レンチウイルスベクターは、肝細胞などの非増殖細胞を形質導入できる点で、マウス白血病ウイルスなどのオンコ－レトロウイルス由来のベクターを超えるさらなる利点を有する。さらに、それらは、低免疫原性であるという付加的利点も有する。レトロウイルスベクターは、例えば、γレトロウイルスベクターでもあり得る。γレトロウイルスベクターは、例えば、プロモーター、パッケージングシグナル（ψ）、プライマー結合部位（ＰＢＳ）、１つ以上の（例えば、２）末端反復配列（ＬＴＲ）及び目的の導入遺伝子、例えば、ＣＡＲをコードする遺伝子を含み得る。γレトロウイルスベクターは、ｇａｇ、ｐｏｌ及びｅｎｖなどのウイルス構造的遺伝子を欠き得る。例示的なγレトロウイルスベクターは、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、脾フォーカス形成ウイルス（ＳＦＦＶ）及び骨髄増殖性肉腫ウイルス（ＭＰＳＶ）及びそれら由来のベクターを含む。他のγレトロウイルスベクターは、例えば、ＴｏｂｉａｓＭａｅｔｚｉｇｅｔａｌ．，“ＧａｍｍａｒｅｔｒｏｖｉｒａｌＶｅｃｔｏｒｓ：Ｂｉｏｌｏｇｙ，ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ”Ｖｉｒｕｓｅｓ．２０１１Ｊｕｎ；３（６）：６７７－７１３に記載される。

一部の実施形態において、所望のＣＡＲをコードする核酸を含むベクターは、アデノウイルスベクター（Ａ５／３５）である。一部の実施形態において、ＣＡＲをコードする核酸の発現は、ｓｌｅｅｐｉｎｇｂｅａｕｔｙ、ｃｒｉｓｐｅｒ、ＣＡＳ９及び亜鉛フィンガーヌクレアーゼなどのトランスポゾンを使用して達成できる。参照により本明細書に包含される下記のＪｕｎｅｅｔａｌ．２００９ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ９．１０：７０４－７１６を参照されたい。

概説すると、ＣＡＲをコードする天然又は合成核酸の発現は、典型的には、ＣＡＲポリペプチドをコードする核酸又はその一部をプロモーターに操作可能に連結させ、その構築物を発現ベクターに取り込むことにより達成される。ベクターは、真核生物での複製及び組込みに適し得る。典型的クローニングベクターは、所望の核酸配列の発現の制御に有用な転写及び翻訳ターミネーター、開始配列及びプロモーターを含む。

核酸は、多数のタイプのベクターにクローン化できる。例えば、核酸は、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルス及びコスミドを含むが、これらに限定されないベクターにクローン化できる。特に興味深いベクターは、発現ベクター、複製ベクター、プローブ産生ベクター及びシークエンシングベクターを含む。

さらに、発現ベクターは、ウイルスベクターの形で細胞に提供され得る。ウイルスベクターテクノロジーは当分野で周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，２０１２，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲＣＬＯＮＩＮＧ：ＡＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＭＡＮＵＡＬ，ｖｏｌｕｍｅｓ１－４，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ，ＮＹ及び他のウイルス学及び分子生物学マニュアルに記載されている。ベクターとして有用なウイルスは、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス及びレンチウイルスを含むが、これらに限定されない。一般に、適当なベクターは、少なくとも１生物で機能的な複製起点、プロモーター配列、便利な制限エンドヌクレアーゼ部位及び１つ以上の選択可能マーカーを含む（例えば、国際公開第０１／９６５８４号パンフレット；国際公開第０１／２９０５８号パンフレット；及び米国特許第６，３２６，１９３号明細書）。

多数のウイルスベースの系が、哺乳動物細胞への遺伝子移入のために開発されている。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達系のための簡便なプラットフォームを提供する。選択した遺伝子を、当分野で知られる技術を使用して、ベクターに挿入し、レトロウイルス粒子に包装できる。次いで、組換えウイルスが単離され、対象の細胞にインビボ又はエクスビボで送達され得る。多数のレトロウイルス系が当分野で知られる。一実施形態において、アデノウイルスベクターを使用する。多数のアデノウイルスベクターが当分野で知られる。一部の実施形態において、レンチウイルスベクターを使用する。

さらなるプロモーター要素、例えば、エンハンサーは、転写開始の頻度を制御する。典型的には、これらは、開始部位の上流３０～１１０ｂｐの領域に位置するが、多数のプロモーターが、同様に開始部位の下流に機能的要素を含むことが示されている。プロモーター要素間の空間はしばしば可動性であり、そのため、要素が互いに逆になったとき又は移動したときにプロモーター機能が保持される。チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモーターにおいて、プロモーター要素間の空間は、活性が落ち始める前、５０ｂｐ離れるまで増加し得る。プロモーターにより、個々の要素は、転写を活性化するために協調的又は独立的に機能できるように見える。代表的プロモーターは、ＣＭＶＩＥ遺伝子、ＥＦ－１α、ユビキチンＣ又はホスホグリセロキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターを含む。

哺乳動物Ｔ細胞においてＣＡＲコード核酸分子を発現することができるプロモーターの例は、ＥＦ１ａプロモーターである。天然ＥＦ１ａプロモーターは、アミノアシルｔＲＮＡのリボソームへの酵素送達を担う伸長因子－１複合体のαサブユニットの発現を駆動する。ＥＦ１ａプロモーターは、哺乳動物発現プラスミドで広く使用されており、レンチウイルスベクターにクローン化された核酸分子からＣＡＲ発現を駆動するのに有効であることが示されている。例えば、Ｍｉｌｏｎｅｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７（８）：１４５３－１４６４（２００９）を参照されたい。一部の実施形態において、ＥＦ１ａプロモーターは、実施例で提供される配列を含む。

プロモーターの別の例は、最初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列である。このプロモーター配列は、それに操作可能に連結したあらゆるポリヌクレオチド配列の高レベルの発現を駆動できる、強い構成的プロモーター配列である。しかしながら、サルウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳房腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン－バーウイルス最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーターを含むが、これらに限定されない他の構成的プロモーター配列並びにアクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、伸長因子－１αプロモーター、ヘモグロビンプロモーター及びクレアチンキナーゼプロモーターなど、しかし、これらに限定されないヒト遺伝子プロモーターも使用し得る。さらに、本発明は、構成的プロモーターの使用に限定すべきではない。誘導性プロモーターも本発明の一部であるとして意図される。誘導性プロモーターの使用は、操作可能に連結したポリヌクレオチド配列の発現を、発現が望まれるときに発現を活性化し、発現が望まれないときに発現を遮断することができる分子スイッチを提供する。誘導性プロモーターの例は、メタロチオネインプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター及びテトラサイクリンプロモーターを含むが、これらに限定されない。

プロモーターの別の例は、ホスホグリセラートキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターである。実施形態において、切断ＰＧＫプロモーター（例えば、野生型ＰＧＫプロモーター配列と比べたとき、１つ以上の、例えば、１、２、５、１０、１００、２００、３００又は４００ヌクレオチド欠失を有するＰＧＫプロモーター）が望ましいことがある。

ＰＧＫプロモーター例のヌクレオチド配列を下に提供する。
ＷＴＰＧＫプロモーター：

例示的な切断型ＰＧＫプロモーター：
ＰＧＫ１００：

ＰＧＫ２００：

ＰＧＫ３００：

ＰＧＫ４００：

ベクターは、例えば、分泌を促進するためのシグナル配列、ポリアデニル化シグナル及び転写ターミネーター（例えば、ウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）遺伝子から）、エピソーム複製及び原核生物における複製を可能にする要素（例えばＳＶ４０起源及びＣｏｌＥ１又は当分野で知られるその他）及び／又は選択を可能にする要素（例えば、アンピシリン耐性遺伝子及び／又はゼオシンマーカー）も含み得る。

ＣＡＲポリペプチド又はその一部の発現を評価するために、細胞に導入する発現ベクター遺伝子導入又はウイルスベクターによる感染が探求される細胞の集団から発現細胞から発現細胞の同定及び選択を容易にするために、選択可能マーカー遺伝子又はレポーター遺伝子又は両者も含み得る。一部の実施形態において、選択可能マーカーは、ＤＮＡの別の断面に担持され、共トランスフェクション法において使用される。選択可能マーカー及びレポーター遺伝子のいずれも、宿主細胞における発現が可能であるように、適切な制御配列が隣接し得る。有用な選択可能マーカーは、例えば、ｎｅｏなどの抗生物質耐性遺伝子を含む。

レポーター遺伝子は、恐らく遺伝子導入されている細胞を同定し、制御配列の機能性を評価するために使用される。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエント生物又は組織に存在又は発現されず、発現がある容易に検出可能な特性、例えば、酵素活性により顕在化されるポリペプチドをコードする、遺伝子である。レポーター遺伝子の発現を、ＤＮＡがレシピエント細胞に導入されてから適当な時間後にアッセイする。適当なレポーター遺伝子は、ルシフェラーゼ、β－ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌型アルカリホスファターゼ又は緑色蛍光タンパク質遺伝子をコードする遺伝子を含み得る（例えば、Ｕｉ－Ｔｅｉｅｔａｌ．，２０００ＦＥＢＳＬｅｔｔｅｒｓ４７９：７９－８２）。適当な発現系は周知であり、既知技術により製造でき又は商業的に入手できる。一般に、レポーター遺伝子の最高レベルの発現を示す最小５’フランキング領域を有する構築物をプロモーターとして同定する。このようなプロモーター領域は、レポーター遺伝子に連結し、プロモーター駆動転写を調節する能力について薬剤を評価するのに使用し得る。

実施形態において、ベクターは、ＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＡＲ、例えばＣＤ１９ＣＡＲ及び第２のＣＡＲ、例えば阻害性ＣＡＲ又はＣＤ１９以外の抗原に特異的に結合するＣＡＲをコードする２つ以上の核酸配列を含み得る。このような実施形態において、２以上のＣＡＲをコードする核酸配列は、同じフレームにおいて単一核分子により且つ単一ポリペプチド鎖としてコード化される。一部の実施形態において、２以上のＣＡＲは、例えば、１つ以上のペプチド開裂部位により分けられ得る（例えば、自己開裂部位又は細胞内プロテアーゼのための基質）。ペプチド切断部位の例には、Ｔ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ又はＦ２Ａ部位が含まれる。

細胞に遺伝子を導入し、発現させる方法は当分野で知られる。発現ベクターに関連して、ベクターは、任意の方法、例えば当技術分野で知られたものにより、宿主細胞、例えば、哺乳動物、細菌、酵母又は昆虫細胞に容易に導入できる。例えば、例えば、発現ベクターは、物理的、化学的又は生物学的手段により、宿主細胞に移入される。

宿主細胞にポリヌクレオチドを導入するための物理的方法は、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、微粒子銃、微量注入、エレクトロポレーションなどを含む。ベクター及び／又は外来性核酸を含む細胞を産生する方法は、当分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，２０１２，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲＣＬＯＮＩＮＧ：ＡＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＭＡＮＵＡＬ，ｖｏｌｕｍｅｓ１－４，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ，ＮＹを参照されたい）。宿主細胞へのポリヌクレオチドの導入するための適切な方法は、リン酸カルシウムトランスフェクションである。

宿主細胞に目的のポリヌクレオチドを導入するための生物学的方法は、ＤＮＡ及びＲＮＡベクターの使用を含む。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、哺乳動物、例えば、ヒト細胞への遺伝子挿入に最も広く使用される方法となってきている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ、アデノウイルス及びアデノ関連ウイルスなどに由来し得る。例えば、米国特許第５，３５０，６７４号明細書及び同第５，５８５，３６２号明細書を参照されたい。

宿主細胞にポリヌクレオチドを導入するための化学的手段は、巨大分子複合体、ナノカプセル、マイクロスフェア、ビーズ及び水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル及びリポソームを含む脂質ベースの系などのコロイド分散体系を含む。インビトロ及びインビボで送達媒体として使用するための代表的コロイド系は、リポソーム（例えば、人工膜小胞）である。標的化ナノ粒子又は他の適当なサブミクロンサイズの送達系を用いるポリヌクレオチドの送達など、最新式の核酸の標的化送達の他の方法が利用可能である。

非ウイルス送達系を利用する場合、代表的送達媒体はリポソームである。脂質製剤の使用は、宿主細胞への核酸の導入のために意図される（インビトロ、エクスビボ又はインビボ）。一部の実施形態において、核酸は、脂質と結合され得る。脂質と結合した核酸は、リポソームの水性内部への被包、リポソームの脂質二重層内への分散、リポソームとオリゴヌクレオチドの両者と結合する連結分子を介するリポソームへの結合、リポソームへの封入、リポソームとの複合体化、脂質含有溶液への分散、脂質との混合、脂質との組み合わせ、脂質中の懸濁液としての包含、ミセル内への包含又は複合体化又は他の方法で脂質と結合する。脂質、脂質／ＤＮＡ又は脂質／発現ベクター結合組成物は、溶液中の何らかの特定の構造に限定されない。例えば、それらは、二重層構造において、ミセルとして又は「崩壊」構造を有して存在し得る。それらは、単に溶液に分散され、恐らくサイズ又は形が均一ではない凝集体も形成し得る。脂質は、天然に存在する又は合成脂質であり得る脂肪物質である。例えば、脂質は、細胞質に天然に生じる脂肪滴並びに脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコール及びアルデヒドなどの長鎖脂肪族炭化水素を含む化合物群及びその誘導体を含む。

使用に適する脂質は、商業的供給源から得ることができる。例えば、ジミリスチルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）は、Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯから得ることができ、リン酸ジセチル（「ＤＣＰ」）はＫ＆ＫＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，ＮＹ）から得ることができ；コレステロール（「Ｃｈｏｉ」）はＣａｌｂｉｏｃｈｅｍ－Ｂｅｈｒｉｎｇから得ることができ、ジミリスチルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）及び他の脂質は、ＡｖａｎｔｉＰｏｌａｒＬｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ．）から得ることができる。クロロホルム又はクロロホルム／メタノール中の脂質の原液を、約－２０℃で保存できる。クロロホルムを、メタノールよりも容易に揮発するために、唯一の溶媒として使用する。「リポソーム」は、封入された脂質二重層又は凝集体の産生により形成される多様な単及び多層状脂質媒体を包含する一般的用語である。リポソームは、リン脂質二重層膜及び内部水性媒体を伴う小胞構造を有することにより特徴付けられる。多層状リポソームは、水性媒体により分離された、複数の脂質層を有する。それらは、リン脂質が過剰の水溶液に懸濁されたときに自然に形成される。脂質要素は、閉構造形成前に自己凝集し、水及び溶解した溶質を脂質二重層間に封入する（Ｇｈｏｓｈｅｔａｌ．，１９９１Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ５：５０５－１０）。しかしながら、通常の小胞構造と異なる構造を溶液で有する組成物も包含される。例えば、脂質は、ミセル構造であるか又は単に脂質分子の不均一凝集体として存在すると考えられ得る。リポフェクタミン－核酸複合体も考慮される。

外来性核酸を宿主細胞に導入する又はそうでなければ細胞を本発明の阻害剤に曝す方法に関係なく、宿主細胞における組換え核酸配列の存在を確認するために、多様なアッセイを行い得る。このようなアッセイは、例えば、サザン及びノーザンブロッティング、ＲＴ－ＰＣＲ及びＰＣＲなどの当業者に周知の「分子生物学的」アッセイ、薬剤の同定に使用するための、例えば、免疫学的手段（ＥＬＩＳＡ及びウェスタンブロット）により、特定のペプチドの存在又は不在を検出するような「生化学的」アッセイ又は本発明の範囲内に入る本明細書に記載のアッセイを含む。

ＲＮＡトランスフェクション
インビトロで転写されたＲＮＡＣＡＲを産生する方法が本明細書に開示される。ＲＮＡＣＡＲ及びそれを使用する方法は、例えば、２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレットの段落５５３～５７０に記載され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

免疫エフェクター細胞は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）によってコードされたＣＡＲを含み得る。一部の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲをコードするｍＲＮＡは、ＣＡＲ発現細胞の産生のために、例えば本明細書に記載される方法によって作製される、免疫エフェクター細胞に導入される。

一部の実施形態において、インビトロ転写ＲＮＡＣＡＲを一過性トランスフェクションの形態として細胞に導入できる。ＲＮＡは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）産生鋳型を使用するインビトロ転写により産生される。任意の供給源からの目的のＤＮＡを、適切なプライマー及びＲＮＡポリメラーゼを使用してインビトロｍＲＮＡ合成のための鋳型にＰＣＲにより直接変換できる。ＤＮＡの供給源は、例えば、ゲノムＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ファージＤＮＡ、ｃＤＮＡ、合成ＤＮＡ配列又はＤＮＡのあらゆる他の適切な供給源であり得る。インビトロ転写のための所望の鋳型は本明細書中に記載されるＣＡＲである。例えば、ＲＮＡＣＡＲの鋳型は、本明細書に記載の腫瘍関連抗原に対する抗体の単鎖可変ドメインを含む細胞外領域；ヒンジ領域（例えば、本明細書に記載のヒンジ領域）、膜貫通ドメイン（例えば、ＣＤ８ａの膜貫通ドメインなどの本明細書に記載の膜貫通ドメイン）；及び細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３－ζのシグナル伝達ドメイン及び４－１ＢＢのシグナル伝達ドメインを含むものを含む細胞質領域を含む。

一部の実施形態において、ＰＣＲに使用するＤＮＡは、オープンリーディングフレームを含む。ＤＮＡは、生物のゲノムからの天然に存在するＤＮＡ配列由来であり得る。一部の実施形態において、核酸は、５’及び／又は３’非翻訳領域（ＵＴＲ）のいくらか又は全てを含み得る。核酸は、エクソン及びイントロンを含み得る。一部の実施形態において、ＰＣＲに使用するＤＮＡは、ヒト核酸配列である。一部の実施形態において、ＰＣＲに使用するＤＮＡは、５’及び３’ＵＴＲを含むヒト核酸配列である。ＤＮＡは、代わりに、天然に存在する生物で通常発現されない人工ＤＮＡ配列であり得る。例示的な人工ＤＮＡ配列は、融合タンパク質をコードするオープンリーディングフレームを形成するようにライゲートされた遺伝子の部分を含むものである。ライゲートされたＤＮＡの部分は、単一生物由来又は１つを超える生物由来であり得る。

ＰＣＲを使用して、トランスフェクションに使用するｍＲＮＡのインビトロ転写のための鋳型を産生する。ＰＣＲを実施する方法は、当技術分野で周知である。ＰＣＲにおいて使用するプライマーは、ＰＣＲのための鋳型として使用するＤＮＡの領域に実質的に相補的である領域を有するように設計する。本明細書で使用する「実質的に相補的」は、プライマー配列の残基の大部分又は全てが相補的であるか又は１つ以上の塩基が非相補的又はミスマッチである、ヌクレオチドの配列を指す。実質的に相補的な配列は、ＰＣＲに使用するアニーリング条件下においてＤＮＡ標的とアニール又はハイブリダイズできる。プライマーは、ＤＮＡ鋳型の任意の部分と実質的に相補的であるように設計できる。例えば、プライマーは、５’及び３’ＵＴＲを含む、細胞において通常転写される（オープンリーディングフレーム）核酸の部分を増幅するように設計できる。プライマーは、目的の特定のドメインをコードする核酸の部分を増幅するようにも設計できる。一部の実施形態において、プライマーは、５’及び３’ＵＴＲの全て又は一部を含む、ヒトｃＤＮＡのコーディング領域を増幅するように設計される。ＰＣＲに有用なプライマーは、当技術分野で周知の合成法により産生できる。「順方向プライマー」は、増幅するＤＮＡ配列の上流であるＤＮＡ鋳型上にヌクレオチドに対して実質的に相補的であるヌクレオチドの領域を含むプライマーである。「上流」は、コード鎖に対して、増幅するＤＮＡ配列に対する５位を指すために本明細書で使用する。「逆方向プライマー」は、増幅するＤＮＡ配列の下流である、二本鎖ＤＮＡ鋳型に対して実質的に相補的なヌクレオチドの領域を含むプライマーである。「下流」は、コード鎖に対して、増幅するＤＮＡ配列に対する３’位を指すために本明細書で使用する。

ＰＣＲに有用なあらゆるＤＮＡポリメラーゼを本明細書に開示する方法で使用できる。試薬及びポリメラーゼは、多数の供給元から市販されている。

安定性及び／又は翻訳効率を促進する能力を有する化学構造も使用し得る。実施形態において、ＲＮＡは、５’及び３’ＵＴＲを有する。一部の実施形態において、５’ＵＴＲは、１～３０００ヌクレオチド長である。コーディング領域に付加する５’及び３’ＵＴＲ配列の長さは、ＵＴＲの異なる領域をアニールするＰＣＲのためのプライマーの設計を含むが、これに限定されない異なる方法により変わり得る。このアプローチを使用して、当業者は、転写ＲＮＡのトランスフェクション後、最適翻訳効率を達成するのに必要な５’及び３’ＵＴＲ長を修飾できる。

５’及び３’ＵＴＲは、目的の核酸のための天然に存在する内在性５’及び３’ＵＴＲであり得る。代わりに、目的の核酸に対して内在性ではないＵＴＲ配列を順方向及び逆方向プライマーへのＵＴＲ配列の取り込みにより又は鋳型の任意の他の修飾により付加できる。目的の核酸に対して内在性ではないＵＴＲ配列の使用は、ＲＮＡの安定性及び／又は翻訳効率の修飾のために有用であり得る。例えば、３’ＵＴＲ配列のＡＵリッチ要素は、ｍＲＮＡの安定性を低下させ得ることが知られる。従って、３’ＵＴＲを、当技術分野で周知であるＵＴＲの特性に基づき、転写されたＲＮＡの安定性を増加するように選択及び設計できる。

一部の実施形態において、５’ＵＴＲは、内在性核酸のＫｏｚａｋ配列を含み得る。代わりに、目的の核酸に対して内在性ではない５’ＵＴＲを上記のようにＰＣＲにより付加するとき、コンセンサスＫｏｚａｋ配列を５’ＵＴＲ配列の付加により再設計できる。Ｋｏｚａｋ配列は、あるＲＮＡ転写物の翻訳効率を上げることができるが、効率的翻訳を可能とするために全ＲＮＡで必要であるように見えない。多くのｍＲＮＡについてのＫｏｚａｋ配列に対する必要性は、当技術分野で公知である。他の実施形態において、５’ＵＴＲは、ＲＮＡゲノムが細胞で安定であるＲＮＡウイルスの５’ＵＴＲであり得る。他の実施形態において、種々のヌクレオチドアナログを、ｍＲＮＡのエキソヌクレアーゼ分解を妨害するために３’又は５’ＵＴＲにおいて使用できる。

遺伝子クローニングの必要性なしにＤＮＡ鋳型からのＲＮＡの合成を可能にするために、転写のプロモーターは、転写する配列の上流のＤＮＡ鋳型に結合すべきである。ＲＮＡポリメラーゼのプロモーターとして機能する配列が順方向プライマーの５’末端に追加されるとき、ＲＮＡポリメラーゼプロモーターは、転写されるオープンリーディングフレームの上流のＰＣＲ産物に取り込まれる。一部の実施形態において、プロモーターは、本明細書の他の箇所に記載するような、Ｔ７ポリメラーゼプロモーターである。他の有用なプロモーターは、Ｔ３及びＳＰ６ＲＮＡポリメラーゼプロモーターを含むが、これらに限定されない。Ｔ７、Ｔ３及びＳＰ６プロモーターのコンセンサスヌクレオチド配列が当技術分野で公知である。

一部の実施形態において、ｍＲＮＡは、リボソーム結合、翻訳開始及び細胞におけるｍＲＮＡの安定性を決定する、５’末端及び３’ポリ（Ａ）テールの両者にキャップを有する。環状ＤＮＡ鋳型、例えばプラスミドＤＮＡ上において、ＲＮＡポリメラーゼは、真核細胞における発現に適しない長いコンカテマー産物を産生する。３’ＵＴＲの末端で直線化されたプラスミドＤＮＡの転写は、転写後ポリアデニル化されても、真核トランスフェクションに有効ではない正常サイズのｍＲＮＡを生じる。

直鎖状ＤＮＡ鋳型で、ファージＴ７ＲＮＡポリメラーゼは、鋳型の最後の塩基を越えて転写物の３’末端を伸長できる（ＳｃｈｅｎｂｏｒｎａｎｄＭｉｅｒｅｎｄｏｒｆ，ＮｕｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．，１３：６２２３－３６（１９８５）；ＮａｃｈｅｖａａｎｄＢｅｒｚａｌ－Ｈｅｒｒａｎｚ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２７０：１４８５－６５（２００３））。

ＤＮＡ鋳型に伸びるポリ（Ａ）／Ｔの組込みの慣用法は、分子クローニングである。しかしながら、プラスミドＤＮＡに統合されたポリ（Ａ）／Ｔ配列は、プラスミド不安定性を生じ得、これは、細菌細胞から得たプラスミドＤＮＡ鋳型が多くの場合に欠失及び他の異常で高度に汚染されている理由である。これにより、クローニング工程は、困難で時間がかかるだけでなく、多くの場合に信頼できないものとなる。これが、クローニングを伴わないポリ（Ａ）／Ｔ３’ストレッチを有するＤＮＡ鋳型の産生を可能にする方法が非常に望ましい理由である。

転写ＤＮＡ鋳型のポリ（Ａ）／Ｔセグメントは、１００Ｔテール（配列番号３１）などのポリＴテールを含む逆方向プライマーを使用するＰＣＲ中（サイズは、５０～５０００Ｔであり得る（配列番号３２））又はＤＮＡライゲーション若しくはインビトロ組換えを含むが、これらに限定されない任意の他の方法によりＰＣＲ後に産生できる。ポリ（Ａ）テールは、ＲＮＡに安定性も提供し、その分解を減らす。一般に、ポリ（Ａ）テールの長さは、転写されたＲＮＡの安定性と正に相関する。一部の実施形態において、ポリ（Ａ）テールは、１００～５０００アデノシンである（例えば、配列番号３３）。

ＲＮＡのポリ（Ａ）テールは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ポリ（Ａ）ポリメラーゼ（Ｅ－ＰＡＰ）のなどのポリ（Ａ）ポリメラーゼの使用により、インビトロ転写後にさらに伸長できる。一部の実施形態において、ポリ（Ａ）テールの１００ヌクレオチドから３００～４００ヌクレオチドへの長さの延長（配列番号３４）は、ＲＮＡの翻訳効率の約２倍増加を生じる。さらに、３’末端への異なる化学基の付加は、ｍＲＮＡ安定性を増加させ得る。このような結合は、修飾／人工ヌクレオチド、アプタマー及び他の化合物を含み得る。例えば、ＡＴＰアナログは、ポリ（Ａ）ポリメラーゼを使用してポリ（Ａ）テールに取り込まれ得る。ＡＴＰアナログは、ＲＮＡの安定性をさらに高め得る。

５’キャップもＲＮＡ分子に安定性を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示する方法により産生されたＲＮＡは、５’キャップを含む。５’キャップは、当技術分野で公知であり、本明細書に記載の技術を使用して提供される（Ｃｏｕｇｏｔ，ｅｔａｌ．，ＴｒｅｎｄｓｉｎＢｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，２９：４３６－４４４（２００１）；Ｓｔｅｐｉｎｓｋｉ，ｅｔａｌ．，ＲＮＡ，７：１４６８－９５（２００１）；Ｅｌａｎｇｏ，ｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，３３０：９５８－９６６（２００５））。

本明細書に開示する方法により産生されたＲＮＡは、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列も含み得る。ＩＲＥＳ配列は、ｍＲＮＡへのキャップ非依存的リボソーム結合を開始し、翻訳開始を促進するあらゆるイルス、染色体又は人工設計配列であり得る。糖、ペプチド、脂質、タンパク質、抗酸化剤及び界面活性剤などの細胞透過性及び生存能を促進する因子を含有し得る、細胞電気穿孔に適した任意の溶質が含まれ得る。

ＲＮＡを、多数の異なる方法、例えば商業的に利用可能な方法のいずれかを使用して標的細胞に導入でき、これは、電気穿孔（ＡｍａｘａＮｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ－ＩＩ（ＡｍａｘａＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｃｏｌｏｇｎｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ））、（ＥＣＭ８３０（ＢＴＸ）（ＨａｒｖａｒｄＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．）又はＧｅｎｅＰｕｌｓｅｒＩＩ（ＢｉｏＲａｄ，Ｄｅｎｖｅｒ，Ｃｏｌｏ．）、Ｍｕｌｔｉｐｏｒａｔｏｒ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｔ，ＨａｍｂｕｒｇＧｅｒｍａｎｙ）、リポフェクションを使用するカチオン性リポソーム介在トランスフェクション、ポリマー封入、ペプチド介在トランスフェクション又は「遺伝子銃」などの微粒子銃粒子送達系（例えば、Ｎｉｓｈｉｋａｗａ，ｅｔａｌ．ＨｕｍＧｅｎｅＴｈｅｒ．，１２（８）：８６１－７０（２００１）を参照されたい）を含むが、これらに限定されない。

非ウイルス送達方法
一部の実施形態において、非ウイルス方法を使用して、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸を細胞又は組織又は対象に送達できる。

一部の実施形態において、非ウイルス方法は、トランスポゾン（転位因子とも呼ばれる）の使用を含む。一部の実施形態において、トランスポゾンは、ゲノムの位置にそれ自体挿入できるＤＮＡのフラグメント、例えば自己複製性であり、そのコピーをゲノムに挿入することができるＤＮＡのフラグメント又は長い核酸の外にスプライシングされ、ゲノムの別の場所に挿入されることができるＤＮＡのフラグメントである。例えば、トランスポゾンは、転位のための逆位反復フランキング遺伝子からなるＤＮＡ配列を含む。

例示的なトランスポゾンを使用する核酸送達法は、ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙトランスポゾン系（ＳＢＴＳ）及びｐｉｇｇｙＢａｃ（商標）（ＰＢ）トランスポゾン系を含む。例えば、Ａｒｏｎｏｖｉｃｈｅｔａｌ．Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．２０．Ｒ１（２０１１）：Ｒ１４－２０；Ｓｉｎｇｈｅｔａｌ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．１５（２００８）：２９６１－２９７１；Ｈｕａｎｇｅｔａｌ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６（２００８）：５８０－５８９；Ｇｒａｂｕｎｄｚｉｊａｅｔａｌ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１８（２０１０）：１２００－１２０９；Ｋｅｂｒｉａｅｉｅｔａｌ．Ｂｌｏｏｄ．１２２．２１（２０１３）：１６６；Ｗｉｌｌｉａｍｓ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＴｈｅｒａｐｙ１６．９（２００８）：１５１５－１６；Ｂｅｌｌｅｔａｌ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．２．１２（２００７）：３１５３－６５；及びＤｉｎｇｅｔａｌ．Ｃｅｌｌ．１２２．３（２００５）：４７３－８３（これらの全ては、参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。

ＳＢＴＳは２つの成分：１）導入遺伝子を含むトランスポゾン、及び２）トランスポサーゼ酵素の供給源を含む。トランスポサーゼは、担体プラスミド（又は他のドナーＤＮＡ）から、宿主細胞染色体／ゲノムなどの標的ＤＮＡにトランスポゾンを転位できる。例えば、トランスポサーゼは、担体プラスミド／ドナーＤＮＡに結合し、トランスポゾン（導入遺伝子含有）をプラスミドの外に切り出し、宿主細胞のゲノムに入れる。例えば、Ａｒｏｎｏｖｉｃｈｅｔａｌ．上掲を参照されたい。

例示的なトランスポゾンは、ｐＴ２ベースのトランスポゾンを含む。例えば、全て参照により本明細書に組み込まれるＧｒａｂｕｎｄｚｉｊａｅｔａｌ．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．４１．３（２０１３）：１８２９－４７；及びＳｉｎｇｈｅｔａｌ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．６８．８（２００８）：２９６１－２９７１を参照されたい。例示的なトランスポサーゼは、Ｔｃ１／ｍａｒｉｎｅｒ型トランスポサーゼ、例えばＳＢ１０トランスポサーゼ又はＳＢ１１トランスポサーゼを含む（例えば、サイトメガロウイルスプロモーターから発現できる機能亢進トランスポサーゼ）。例えば、全て参照により本明細書に組み込まれるＡｒｏｎｏｖｉｃｈｅｔａｌ．；Ｋｅｂｒｉａｅｉｅｔａｌ．；及びＧｒａｂｕｎｄｚｉｊａｅｔａｌ．を参照されたい。

ＳＢＴＳの使用は、導入遺伝子、例えば本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸の効率的組込み及び発現を可能にする。例えば、ＳＢＴＳなどのトランスポゾン系を使用する、本明細書に記載のＣＡＲを安定に発現する細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞を産生する方法が本明細書に提供される。

本明細書に記載の方法により、一部の実施形態において、ＳＢＴＳ成分を含む１つ以上の核酸、例えばプラスミドが細胞に送達される（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）。例えば、核酸は、核酸（例えば、プラスミドＤＮＡ）送達の標準法、例えば本明細書に記載の方法、例えば電気穿孔、トランスフェクション又はリポフェクションにより送達される。一部の実施形態において、核酸は、導入遺伝子、例えば本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸を含むトランスポゾンを含む。一部の実施形態において、核酸は、導入遺伝子（例えば、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸）を含むトランスポゾン並びにトランスポサーゼ酵素をコードする核酸配列を含む。他の実施形態において、例えば、デュアルプラスミド系、例えば第１のプラスミドが導入遺伝子を含むトランスポゾンを含み、第２のプラスミドがトランスポサーゼ酵素をコードする核酸配列を含む、２核酸の系が提供される。例えば、第１及び第２の核酸は、宿主細胞に共送達される。

一部の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲを発現する細胞、例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞は、ヌクレアーゼ（例えば、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写アクティベーター様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系又は操作されたメガヌクレアーゼ再操作ホーミングエンドヌクレアーゼ）を使用するＳＢＴＳ及び遺伝子編集の遺伝子挿入の組み合わせを使用して産生される。

一部の実施形態において、非ウイルス送達方法の使用は、細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞の再プログラミング及び対照への細胞の直接注入を可能にする。非ウイルスベクターの利点は、患者集団に見合うために必要な十分量の産生が容易且つ比較的安価であること、保存中の安定性及び免疫原性の欠如を含むが、これらに限定されない。

製造／生産の方法
本発明は、本明細書に開示される細胞を作製する方法、例えば、本明細書に記載される１つ以上のＣＡＲ構築物をコードする核酸分子を発現するように、Ｔ細胞又はＮＫ細胞を操作する方法も提供する。一部の実施形態では、本明細書に記載される製造方法を用いて、本明細書に開示される２つのＣＡＲ（例えば、本明細書に開示される抗ＢＣＭＡＣＡＲ及び抗ＣＤ１９ＣＡＲ）をコードする核酸分子を含む細胞を製造する。一部の実施形態では、本明細書に開示される製造方法を用いて、本明細書に開示のダイアボディＣＡＲ（例えば、本明細書に開示の抗ＢＣＭＡ／抗ＣＤ１９ダイアボディＣＡＲ）をコードする核酸分子を含む細胞を製造する。一部の実施形態では、本明細書に記載される製造方法を用いて、各々が本明細書に開示のＣＡＲをコードする２つの核酸分子（例えば、抗ＢＣＭＡＣＡＲをコードする１つの核酸分子と、抗ＣＤ１９ＣＡＲをコードする１つの核酸分子）を含む細胞を製造する。一部の実施形態では、本明細書に記載される製造プロセスのいずれかによって作製された細胞（例えば、免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の集団が本明細書に提供される。

活性化プロセス
一部の実施形態において、本明細書に開示される方法は、１つ以上のＣＡＲを２４時間以内に発現するように操作された免疫エフェクター細胞を製造することができる。理論に縛られることは意図しないが、本明細書に提供される方法は、製造工程中、Ｔ細胞、例えば、ナイーブＴ細胞の未分化表現型を保存する。未分化表現型を有するこれらのＣＡＲ発現細胞は、注入後インビボで、より長期に持続し、且つ／又は良好に拡大し得る。一部の実施形態では、本明細書に提供される製造方法により生産されるＣＡＲＴ細胞は、例えば、ｓｃＲＮＡ－ｓｅｑを用いて測定した場合（例えば、図２５Ａに関して、実施例７に記載の方法を用いて測定した場合）、伝統的製造方法により生産されるＣＡＲＴ細胞と比べて、増加したパーセンテージの幹細胞メモリーＴ細胞を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される製造方法により生産されるＣＡＲＴ細胞は、例えば、ｓｃＲＮＡ－ｓｅｑを用いて測定した場合（例えば、図２５Ｂに関して、実施例７に記載の方法を用いて測定した場合）、伝統的製造方法により生産されるＣＡＲＴ細胞と比べて、増加したパーセンテージのエフェクターＴ細胞を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される製造方法により生産されるＣＡＲＴ細胞は、例えば、ｓｃＲＮＡ－ｓｅｑを用いて測定した場合（例えば、図２５Ｃに関しては、実施例７に記載の方法を用いて測定した場合）、伝統的製造方法により生産されるＣＡＲＴ細胞と比べて、Ｔ細胞の幹細胞的形質をより良好に維持する。一部の実施形態では、本明細書に提供される製造方法により生産されるＣＡＲＴ細胞は、例えば、ｓｃＲＮＡ－ｓｅｑを用いて測定した場合（例えば、図２５Ｄに関しては、実施例７に記載の方法を用いて測定した場合）、伝統的製造方法により生産されるＣＡＲＴ細胞と比べて、より低レベルの低酸素症を示す。一部の実施形態では、本明細書に提供される製造方法により生産されるＣＡＲＴ細胞は、例えば、ｓｃＲＮＡ－ｓｅｑを用いて測定した場合（例えば、図２５Ｅに関しては、実施例７に記載の方法を用いて測定した場合）、伝統的製造方法により生産されるＣＡＲＴ細胞と比べて、より低レベルのオートファジーを示す。一部の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、本明細書に開示される２つのＣＡＲ（例えば、本明細書に開示される抗ＢＣＭＡＣＡＲと抗ＣＤ１９ＣＡＲ）をコードする核酸分子を含むように、操作される。一部の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、本明細書に開示されるダイアボディＣＡＲ、例えば、本明細書に開示される抗ＢＣＭＡ及び／又は抗ＣＤ１９ダイアボディＣＡＲをコードする核酸分子を含むように、操作される。一部の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、各々が本明細書に記載のＣＡＲをコードする２つの核酸分子（例えば、抗ＢＣＭＡＣＡＲをコードする１つの核酸分子と、抗ＣＤ１９ＣＡＲをコードする１つの核酸分子）を含むように、操作される。

一部の実施形態において、本明細書に開示される方法は、ビーズ、例えば、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）（例えば、ＣＤ３／ＣＤ２８Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標））の使用を含まず、従って、脱ビーズステップを含まない。一部の実施形態において、本明細書に開示の方法により製造されるＣＡＲＴ細胞は、最小のエクスビボ拡大、例えば、１日未満、１２時間未満、８時間未満、６時間未満、４時間未満、３時間未満、２時間未満、１時間未満で又はエクスビボ拡大なしで対象に投与され得る。従って、本明細書に記載される方法は、対象の疾患の処置に使用するための改善されたＣＡＲ発現細胞産物を作製する高速製造プロセスを提供する。

一部の実施形態において、本開示は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）（例えば、１つ以上のＣＡＲ、例えば、２つのＣＡＲ）を発現する細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を作製する方法を提供し、これは、（ｉ）細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば凍結された又は新鮮な白血球アフェレーシス産物から単離されたＴ細胞）の集団を、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と接触させるステップ；（ｉｉ）細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を、ＣＡＲをコードする核酸分子（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子）と接触させ、それにより核酸分子を含む細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を提供するステップ、並びに（ｉｉｉ）保存（例えば、凍結保存培地中の細胞の集団の再製剤化）又は投与のために細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を採取するステップを含み、（ａ）ステップ（ｉｉ）は、ステップ（ｉ）と一緒に、又はステップ（ｉ）の開始後の２０時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の１２、１３、１４、１５、１６、１７若しくは１８時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の１８時間以内に実施され、及びステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｉ）の開始後の２６時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の２２、２３若しくは２４時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の２４時間以内に実施されるか；（ｂ）ステップ（ｉｉ）は、ステップ（ｉ）と一緒に、又はステップ（ｉ）の開始後の２０時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の１２、１３、１４、１５、１６、１７若しくは１８時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の１８時間以内に実施され、及びステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｉｉ）の開始後の３０時間以内、例えばステップ（ｉｉ）の開始後の２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０時間以内に実施されるか；又は（ｃ）ステップ（ｉｉｉ）からの細胞の集団は、例えば、ステップ（ｉ）の開始時の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて、増殖されないか、又は５、１０、１５、２０、２５、３０、３５若しくは４０％以下、例えば１０％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）における核酸分子は、ＤＮＡ分子である。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）における核酸分子は、ＲＮＡ分子である。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）における核酸分子は、ウイルスベクター、例えば、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター又はレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクター上にある。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）における核酸分子は、非ウイルスベクター上にある。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）における核酸分子は、プラスミド上にある。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）における核酸分子は、いずれのベクター上にもない。一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）は、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を、ＣＡＲをコードする核酸分子を含むウイルスベクターで形質導入することを含む。

一部の実施形態では、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団は、対象からのアフェレーシスサンプル（例えば、白血球アフェレーシスサンプル）から採取される。

一部の実施形態では、アフェレーシスサンプル（例えば、白血球アフェレーシスサンプル）を対象から採取し、凍結サンプル（例えば、凍結保存サンプル）として細胞製造施設に輸送する。次に、凍結アフェレーシスサンプルを解凍した後、例えば、セルソーティング機（例えば、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）Ｐｒｏｄｉｇｙ（登録商標）装置）を用いて、アフェレーシスサンプルからＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）を選択する。続いて、選択されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）を、本明細書に記載の活性化プロセスを用いるＣＡＲＴ製造のために接種する。一部の実施形態では、選択されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）は、ＣＡＲＴ製造のために接種する前に、１ラウンド以上の凍結－解凍工程に付す。

一部の実施形態では、アフェレーシスサンプル（例えば、白血球アフェレーシスサンプル）を対象から採取し、新鮮な産物（例えば、凍結していない産物）として細胞製造施設に輸送する。例えば、セルソーティング機（例えば、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）Ｐｒｏｄｉｇｙ（登録商標）装置）を用いて、アフェレーシスサンプルからＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）を選択する。続いて、選択されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）を、本明細書に記載の活性化プロセスを用いるＣＡＲＴ製造のために接種する。一部の実施形態では、選択されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）は、ＣＡＲＴ製造のために接種する前に、１ラウンド以上の凍結－解凍工程に付す。

一部の実施形態では、アフェレーシスサンプル（例えば、白血球アフェレーシスサンプル）を対象から採取する。例えば、セルソーティング機（例えば、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）Ｐｒｏｄｉｇｙ（登録商標）装置）を用いて、アフェレーシスサンプルからＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）を選択する。続いて、選択されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）を凍結サンプル（例えば、凍結保存サンプル）として細胞製造施設に輸送する。選択されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）を後に解凍し、本明細書に記載の活性化プロセスを用いるＣＡＲＴ製造のために接種する。

一部の実施形態では、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体と、例えば、１２時間接触させた後、ＣＡＲ（例えば、１つ以上のＣＡＲ）をコードするベクター（例えば、レンチウイルスベクター）（例えば、１つ以上のベクター）で形質導入する。培養開始から２４時間後に細胞を洗浄し、保存又は投与のために製剤化する。

理論に縛られることは意図しないが、短時間のＣＤ３及びＣＤ２８刺激が、自己再生Ｔ細胞の効率的な形質導入を促進し得る。伝統的なＣＡＲＴ製造アプローチと比べて、本明細書に開示される活性化プロセスは、長時間にわたるエクスビボ拡大を伴わない。サイトカインプロセスと同様に、本明細書に提供される活性化プロセスも、ＣＡＲＴ製造中に未分化Ｔ細胞を維持する。

一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させる。

一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤は、ＣＤ３を刺激する薬剤である。一部の実施形態では、共刺激分子を刺激する薬剤は、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＴＩＭ１、ＣＤ２、ＣＤ２２６又はそれらの組み合わせを刺激する薬剤である。一部の実施形態では、共刺激分子を刺激する薬剤は、ＣＤ２８を刺激する薬剤である。一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤は、抗体（例えば、単一ドメイン抗体（例えば、重鎖可変ドメイン抗体）、ペプチボディ、Ｆａｂフラグメント又はｓｃＦｖ）、小分子又はリガンド（例えば、天然に存在する、組換え又はキメラリガンド）から選択される。一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤は、抗体である。一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤は、抗ＣＤ３抗体である。一部の実施形態では、共刺激分子を刺激する薬剤は、抗体（例えば、単一ドメイン抗体（例えば、重鎖可変ドメイン抗体）、ペプチボディ、Ｆａｂフラグメント又はｓｃＦｖ）、小分子又はリガンド（例えば、天然に存在する、組換え又はキメラリガンド）から選択される。一部の実施形態では、共刺激分子を刺激する薬剤は、抗体である。一部の実施形態では、共刺激分子を刺激する薬剤は、抗ＣＤ２８抗体である。一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤又は共刺激分子を刺激する薬剤は、ビーズを含まない。一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤は、コロイドポリマーナノマトリックスに共有結合された抗ＣＤ３抗体を含む。一部の実施形態では、共刺激分子を刺激する薬剤は、コロイドポリマーナノマトリックスに共有結合された抗ＣＤ２８抗体を含む。一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び共刺激分子を刺激する薬剤は、ＴＣｅｌｌＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）を含む。

一部の実施形態において、マトリックスは、例えば、細胞に対して非毒性であるポリマー、例えば、生分解性若しくは生体適合性の不活性材料を含むか又はそれから構成される。一部の実施形態では、マトリックスは、親水性ポリマー鎖から構成され、これは、鎖の水和によって水溶液中で最大可動性を取得する。一部の実施形態において、可動性マトリックスは、コラーゲン、精製タンパク質、精製ペプチド、多糖、グリコサミノグリカン又は細胞外マトリックス組成物からなるものであり得る。多糖としては、例えば、セルロースエーテル、デンプン、アラビアガム、アガロース、デキストラン、キトサン、ヒアルロン酸、ペクチン、キサンタン、グアーガム又はアルギン酸塩を挙げることができる。他のポリマーとしては、ポリエステル、ポリエーテル、ポリアクリレート、ポリアクリルアミド、ポリアミン、ポリエチレンイミン、ポリクオタニウムポリマー、ポリホスファゼン、ポリビニルアルコール、ポリ酢酸ビニル、ポリビニルピロリドン、ブロックコポリマー又はポリウレタンが挙げられる。一部の実施形態において、可動性マトリックスは、デキストランのポリマーである。

一部の実施形態では、細胞の集団を、ＣＡＲ（例えば、１つ以上のＣＡＲ）をコードする核酸分子（例えば、１つ以上の核酸分子）と接触させる。一部の実施形態では、細胞の集団を、ＣＡＲ（例えば、１つ以上のＣＡＲ）をコードするＤＮＡ分子（例えば、１つ以上のＤＮＡ分子）で形質導入する。

一部の実施形態において、２つの核酸分子（例えば、レンチウイルスベクター）の共形質導入の場合、その各々が、本明細書に開示されるＣＡＲをコードし（例えば、本明細書に開示されるように、１つの核酸分子が、抗ＢＣＭＡＣＡＲをコードし、１つの核酸分子が、抗ＣＤ１９ＣＡＲをコードする）、ＣＡＲをコードする核酸分子を含むベクターの各々は、異なる感染多重度（ＭＯＩ）で反応混合物（例えば、細胞集団を含有する）に添加することができる。

理論に縛られることは意図しないが、一部の実施形態では、異なるＣＡＲ分子をコードする核酸分子を含有するベクターについて異なるＭＯＩを使用すると、細胞集団の最終組成に影響を及ぼし得ると考えられる。例えば、抗ＢＣＭＡＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターと、抗ＣＤ１９ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターの共形質導入の場合、異なるＭＯＩを使用して、得られるモノＣＤ１９ＣＡＲＴ細胞及び未形質導入細胞をより少数にすると同時に、モノＢＣＭＡＣＡＲＴ細胞及びＢＣＭＡ／ＣＤ１９二重ＣＡＲＴ細胞のパーセントを最大化することができる。

一部の実施形態において、ＢＣＭＡＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターと、抗ＣＤ１９ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターの共形質導入の場合、第２ウイルスベクターと細胞集団を接触させる場合のＭＯＩより高いか、それと等しいか又はそれより低い感染多重度（ＭＯＩ）で第１ウイルスベクターと細胞集団を接触させる。一部の実施形態において、第２ウイルスベクターと細胞集団を接触させる場合のＭＯＩより高い感染多重度（ＭＯＩ）で第１ウイルスベクターと細胞集団を接触させる。

一部の実施形態では、細胞の集団を、第１ＭＯＩで第１ウイルスベクターと、且つ第２ＭＯＩで第２ウイルスベクターと接触され、それにより、得られる細胞の集団が、抗ＢＣＭＡＣＡＲを含むが、抗ＣＤ１９ＣＡＲを含まない第１細胞集団、抗ＣＤ１９ＣＡＲを含むが、抗ＢＣＭＡＣＡＲを含まない第２細胞集団、抗ＢＣＭＡＣＡＲと抗ＣＤ１９ＣＡＲとの両方を含む第３細胞集団を含むようにし、
（ａ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第２及び第３集団を合わせた生存細胞の総数は、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約１１０％以下（例えば、約１０５％、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％又はそれ未満以下）であり；
（ｂ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数は、第２及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約９０％以上（例えば、約１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％、５００％、７５０％、１０００％、２０００％、５０００、１００００％又はそれを超えるもの以上）であり；
（ｃ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数は、得られる集団の生存細胞の総数の約５％以上（例えば、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％以上）であり；
（ｄ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第２集団の生存細胞の総数は、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約１１０％以下（例えば、約１０５％、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％又はそれ未満以下）であるか；又は
（ｅ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数は、第２集団の生存細胞の総数の約９０％以上（例えば、約１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％、５００％、７５０％、１０００％、２０００％、５０００、１００００％又はそれを超えるもの以上）である。

一部の実施形態では、細胞の集団を第２ウイルスベクターと特定のＭＯＩで接触させる（例えば、第１ウイルスベクターと細胞の集団を接触させる場合のＭＯＩより十分に低いＭＯＩであって、それにより、得られる細胞集団において、以下が達成されるＭＯＩ：
（ａ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第２及び第３集団を合わせた生存細胞の総数が、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約１１０％以下（例えば、約１０５％、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％又はそれ未満以下）であり；
（ｂ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数が、第２及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約９０％以上（例えば、約１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％、５００％、７５０％、１０００％、２０００％、５０００、１００００％又はそれを超えるもの以上）であり；
（ｃ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数が、得られる集団の生存細胞の総数の約５％以上（例えば、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％以上）であり；
（ｄ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第２集団の生存細胞の総数が、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約１１０％以下（例えば、約１０５％、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％又はそれ未満以下）であるか；又は
（ｅ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数が、第２集団の生存細胞の総数の約９０％以上（例えば、約１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％、５００％、７５０％、１０００％、２０００％、５０００、１００００％又はそれを超えるもの以上）である。

一部の実施形態では、細胞の集団を、第１ウイルスベクターと第１ＭＯＩで接触させ、細胞の集団を、第２ウイルスベクターと第２ＭＯＩで接触させ、それにより、得られる細胞集団が、以下を含むようにする：
（ａ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第２及び第３集団を合わせた生存細胞の総数が、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約１１０％以下（例えば、約１０５％、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％又はそれ未満以下）であり；
（ｂ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数が、第２及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約９０％以上（例えば、約１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％、５００％、７５０％、１０００％、２０００％、５０００、１００００％又はそれを超えるもの以上）であり；
（ｃ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数が、得られる集団の生存細胞の総数の約５％以上（例えば、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％以上）であり；
（ｄ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第２集団の生存細胞の総数が、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約１１０％以下（例えば、約１０５％、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％又はそれ未満以下）であるか；又は
（ｅ）例えば、実施例１０に記載の方法によって決定されて、第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数が、第２集団の生存細胞の総数の約９０％以上（例えば、約１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％、５００％、７５０％、１０００％、２０００％、５０００、１００００％又はそれを超えるもの以上）である。

一部の実施形態では、細胞の集団を、
（ａ）約１～約１０（例えば、約２～約９、約３～約８、約４～約７、約５～約６、約１～約８、約１～約６、約１～約４、約８～約１０、約６～約１０、約４～約１０、約１～３、約２～約４、約３～約５、約４～約６、約５～約７、約６～約８、約７～約９、約８～約１０、約２．５～約５、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９又は約１０）のＭＯＩで第１ウイルスベクターと；
（ｂ）約０．１～約５（例えば、約０．２～約４、約０．３～約３、約０．４～約２、約０．５～約１、約０．６～約０．９、約０．７～約０．８、約０．１～約４、約０．１～約３、約０．１～約２、約０．１～約１、約０．１～約０．５、約４～約５、約３～約５、約２～約５、約１～約５、約０．５～約５、約０．２～約５、約０．１～約０．５、約０．２～約１、約０．５～約２、約１～約３、約２～約４、約３～約５、約０．５～約１、約０．１、約０．２、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１、約２、約３、約４又は約５）のＭＯＩで第２ウイルスベクターと；
（ｃ）細胞の集団を第２ウイルスベクターと接触させる際のＭＯＩより少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％若しくは９０％）高いか、若しくは少なくとも約１倍（例えば、少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０若しくは１００倍、例えば約２～約５０倍、約３～２０倍、約５～約１５倍若しくは約８～約１０倍）のＭＯＩで第１ウイルスベクターと；及び／又は
（ｄ）細胞の集団を第１ウイルスベクターと接触させる際のＭＯＩの１／Ｘ（ここで、Ｘは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０又は１００である）以下のＭＯＩで第２ウイルスベクターと
接触させる。

一部の実施形態では、細胞の集団を約２．５～約５のＭＯＩで第１ウイルスベクターと接触させる。一部の実施形態では、細胞の集団を約０．５～約１．０のＭＯＩで第２ウイルスベクターと接触させる。一部の実施形態では、細胞の集団を第２ウイルスベクターと接触させる際のＭＯＩより約８～約１０倍高いＭＯＩの第１ウイルスベクターである。一部の実施形態では、細胞集団を第１ウイルスベクターと接触させる際のＭＯＩの１／Ｘ（ここで、Ｘは、６、８、１０又は１２）以下のＭＯＩの第２ウイルスベクターである。

一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）において、細胞の集団を、
（ａ）約４～約５（例えば、約４．７５）のＭＯＩで第１ウイルスベクターと；及び／又は
（ｂ）約０．２～約１（例えば、約０．５）のＭＯＩで第２ウイルスベクターと
接触させる。

一部の実施形態では、ステップ（ｉｉ）において、細胞の集団は、約１×１０^８～約５×１０^９（例えば、約２×１０^８～約２×１０^９又は約４×１０^８～約１×１０^９個の総生存細胞を含む。一部の実施形態では、細胞は、約１×１０^６～約１×１０^７（例えば、約２×１０^６～約５×１０^６又は約３×１０^６～約４×１０^６）個の生存細胞／ｍＬの濃度で培養物中に懸濁させる。

各ベクターに用いられる正確なＭＯＩは、いくつかの要因に基づいて調節又は決定することができ、そうした要因として、限定されないが、ウイルスベクターのバッチの特性、形質導入しようとする細胞の特性及び形質導入効率が挙げられる。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップと同時に行う。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０．５時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の２０時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の１９時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の１８時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の１７時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の１６時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の１５時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の１４時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の１４時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の１３時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の１２時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の１１時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の１０時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の９時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の８時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の７時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の６時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の５時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の４時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の３時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の２時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の１時間以内に実施する。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と細胞集団を接触させるステップは、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の３０分以内に実施する。

一部の実施形態では、保存又は投与のために細胞の集団を採取する。

一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の７２、６０、４８、３６、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９又は１８時間以内に、保存又は投与の目的で細胞集団を採取する。一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の２６時間以内に、保存又は投与の目的で細胞集団を採取する。一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の２５時間以内に、保存又は投与の目的で細胞集団を採取する。一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の２４時間以内に、保存又は投与の目的で細胞集団を採取する。一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の２３時間以内に、保存又は投与の目的で細胞集団を採取する。一部の実施形態では、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と細胞集団を接触させるステップの開始後の２２時間以内に、保存又は投与の目的で細胞集団を採取する。

一部の実施形態において、細胞の集団はエクスビボで増殖されない。

一部の実施形態において、細胞集団は、例えば、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と接触させる前の細胞集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５若しくは６０％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、細胞集団は、例えば、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と接触させる前の細胞集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて５％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、細胞集団は、例えば、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と接触させる前の細胞集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて１０％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、細胞集団は、例えば、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と接触させる前の細胞集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて１５％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、細胞集団は、例えば、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と接触させる前の細胞集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて２０％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、細胞集団は、例えば、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と接触させる前の細胞集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて２５％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、細胞集団は、例えば、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と接触させる前の細胞集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて３０％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、細胞集団は、例えば、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と接触させる前の細胞集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて３５％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、細胞集団は、例えば、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前述した細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と接触させる前の細胞集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて４０％以下だけ増殖される。

一部の実施形態において、細胞集団は、例えば、前述した１つ以上のサイトカインと接触させる前の細胞集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１６、２０、２４、３６又は４８時間以下だけ増殖される。

一部の実施形態において、活性化プロセスは、無血清細胞培地中で実施される。一部の実施形態において、活性化プロセスは、ＩＬ－２、ＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））又はＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ）から選択される１つ以上のサイトカインを含む細胞培地中で実施される。一部の実施形態において、ｈｅｔＩＬ－１５は、

のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ｈｅｔＩＬ－１５は、配列番号３０９と少なくとも約７０、７５、８０、８５、９０、９５又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、活性化プロセスは、ＬＳＤ１阻害剤を含む細胞培地中で実施される。一部の実施形態において、活性化プロセスは、ＭＡＬＴ１阻害剤を含む細胞培地中で実施される。一部の実施形態において、無血清細胞培地は、血性代替品を含む。一部の実施形態において、血清代替品は、ＣＴＳ（商標）ＩｍｍｕｎｅＣｅｌｌＳｅｒｕｍＲｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＩＣＳＲ）である。一部の実施形態において、ＩＣＳＲのレベルは、例えば、最大５％、例えば約１％、２％、３％、４％又は５％であり得る。理論に縛られることは意図しないが、ＩＣＳＲ、例えば、２％ＩＣＳＲを含有する細胞培地、例えば、表２１若しくは表２５に示すラピッドメディア（ＲａｐｉｄＭｅｄｉａ）を使用すれば、本明細書に記載の製造プロセス中の細胞生存能力を向上させることができる。

一部の実施形態において、本開示は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を作製する方法を提供し、これは、（ａ）対象から採取したアフェレーシスサンプル（例えば、新鮮な又は凍結保存された白血球アフェレーシスサンプル）を用意するステップ；（ｂ）アフェレーシスサンプルからＴ細胞を選択する（例えば、ネガティブ選択、ポジティブ選択又はビーズなしの選択を用いて）ステップ；（ｃ）単離したＴ細胞を例えば１×１０^６～１×１０^７細胞／ｍＬで接種するステップ；（ｄ）Ｔ細胞を、Ｔ細胞を刺激する薬剤、例えばＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と接触させる（例えば、Ｔ細胞を抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８抗体と接触させる、例えば、Ｔ細胞をＴｒａｎｓＡｃｔと接触させる）ステップ；（ｅ）Ｔ細胞を、ＣＡＲをコードする核酸分子（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子）と、例えば６～４８時間、例えば２０～２８時間接触させる（例えば、Ｔ細胞を、ＣＡＲをコードする核酸分子を含むウイルスと接触させる）ステップ；並びに（ｆ）保存（例えば、凍結保存培地中のＴ細胞の製剤化）又は投与のためにＴ細胞を洗浄及び採取するステップを含む。一部の実施形態において、ステップ（ｆ）は、ステップ（ｄ）又は（ｅ）の開始後の３０時間以内、例えばステップ（ｄ）又は（ｅ）の開始後の２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０時間以内に実施される。

一部の実施形態では、本明細書に記載される製造プロセス（例えば、本明細書に記載の活性化プロセス）のいずれかによって作製された細胞（例えば、免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞若しくはＮＫ細胞）の集団が本明細書に提供される。

一部の実施形態において、製造プロセスの終了時（例えば、本明細書に記載のサイトカインプロセス又は活性化プロセスの終了時）の細胞集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のパーセンテージは、製造プロセスの開始時（例えば、本明細書に記載のサイトカインプロセス又は活性化プロセスの開始時）の細胞集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、（１）同じであるか、（２）例えば、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４若しくは１５％以下だけ異なるか、又は（３）少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４若しくは２５％だけ増加される。一部の実施形態において、製造プロセスの終了時（例えば、本明細書に記載のサイトカインプロセス又は活性化プロセスの終了時）の細胞集団は、２６時間超継続する（例えば、５、６、７、８、９、１０、１１若しくは１２日超継続する）か、又は３日超（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４若しくは１５日）にわたりインビトロで細胞集団を増殖させるステップを含む以外は類似の方法によって作製された細胞と比べて、より高いパーセンテージ（例えば、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５又は５０％高い）のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞を示す。

一部の実施形態において、製造プロセスの終了時（例えば、本明細書に記載のサイトカインプロセス又は活性化プロセスの終了時）の細胞集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のパーセンテージは、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５若しくは６０％以上である。

一部の実施形態において、製造プロセスの終了時（例えば、本明細書に記載のサイトカインプロセス又は活性化プロセスの終了時）の細胞集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージは、製造プロセスの開始時（例えば、本明細書に記載のサイトカインプロセス又は活性化プロセスの開始時）の細胞集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージと比べて、（１）同じであるか、（２）例えば、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４若しくは１５％以下だけ異なるか、又は（３）少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４若しくは２５％だけ減少される。一部の実施形態において、製造プロセスの終了時（例えば、本明細書に記載のサイトカインプロセス又は活性化プロセスの終了時）の細胞集団は、例えば２６時間超持続する（例えば、５、６、７、８、９、１０、１１若しくは１２日超持続する）か、又は例えば３日超にわたりインビトロで細胞集団を増殖させる（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４若しくは１５日にわたりインビトロで細胞集団を増殖させる）ステップを含む以外は類似の方法によって作製された細胞と比べて、減少した低いパーセンテージ（例えば、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５又は５０％低い）のナイーブ細胞、例えばセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞を示す。

一部の実施形態において、製造プロセスの終了時（例えば、本明細書に記載のサイトカインプロセス又は活性化プロセスの終了時）の細胞集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＤ９５＋セントラルメモリーＴ細胞のパーセンテージは、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５又は８０％以下である。

一部の実施形態において、製造プロセスの終了時（例えば、本明細書に記載のサイトカインプロセス又は活性化プロセスの終了時）の細胞集団は、インビボで投与された後、例えば２６時間超持続する（例えば、５、６、７、８、９、１０、１１若しくは１２日超持続する）か、又は例えば３日超にわたりインビトロで細胞集団を増殖させる（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４若しくは１５日にわたりインビトロで細胞集団を増殖させる）ステップを含む以外は類似の方法によって作製された細胞と比べて、長時間持続するか又は高い（例えば、少なくとも２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、７０、７５、８０、８５若しくは９０％高い）レベルで増殖する。

一部の実施形態において、細胞の集団は、製造プロセスの開始前（例えば、本明細書に記載のサイトカインプロセス又は活性化プロセスの開始前）にＩＬ６Ｒ発現細胞（例えば、ＩＬ６Ｒα及び／又はＩＬ６Ｒβ）について濃縮されている。一部の実施形態において、細胞の集団は、例えば、製造プロセスの開始時（例えば、本明細書に記載のサイトカインプロセス又は活性化プロセスの開始時）に、例えば、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５若しくは８０％以下のＩＬ６Ｒ発現細胞（例えば、ＩＬ６Ｒα及び／又はＩＬ６Ｒβについて陽性の細胞）を含む。

サイトカインプロセス
一部の実施形態では、本開示は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）（例えば、１つ以上のＣＡＲ、例えば、２つのＣＡＲ）を発現する細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を作製する方法を提供し、これは、（１）細胞の集団を、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＬ－６又はそれらの組み合わせから選択されるサイトカインと接触させるステップ、（２）細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を、ＣＡＲをコードする核酸分子（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子）と接触させ、それにより核酸分子を含む細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を提供するステップ、及び（３）保存（例えば、凍結保存培地中の細胞集団の再製剤化）又は投与のために細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を採取するステップを含み、（ａ）ステップ（２）は、ステップ（１）と一緒に、又はステップ（１）の開始後の５時間以内、例えばステップ（１）の開始後の１、２、３、４若しくは５時間以内に実施され、ステップ（３）は、ステップ（１）の開始後の２６時間以内、例えばステップ（１）の開始後の２２、２３若しくは２４時間以内、例えばステップ（１）の開始後の２４時間以内に実施されるか、又は（ｂ）ステップ（３）からの細胞の集団は、増殖されないか、又は例えばステップ（１）の開始時の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて５、１０、１５、２０、２５、３０、３５若しくは４０％以下、例えば１０％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、ステップ（２）における核酸分子は、ＤＮＡ分子である。一部の実施形態では、ステップ（２）における核酸分子は、ＲＮＡ分子である。一部の実施形態では、ステップ（２）における核酸分子は、ウイルスベクター、例えば、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター又はレトロウイルスベクターから選択されるウイルスベクター上にある。一部の実施形態では、ステップ（２）における核酸分子は、非ウイルスベクター上にある。一部の実施形態では、ステップ（２）における核酸分子は、プラスミド上にある。一部の実施形態では、ステップ（２）における核酸分子は、いずれのベクター上にもない。一部の実施形態では、ステップ（２）は、ＣＡＲをコードする核酸分子を含むウイルスベクターで、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を形質導入することを含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される２つのＣＡＲ（例えば、本明細書に開示される抗ＢＣＭＡＣＡＲ及び抗ＣＤ１９ＣＡＲ）をコードする核酸分子を含むように細胞を操作する。一部の実施形態では、本明細書に開示されるダイアボディＣＡＲ（例えば、本明細書に開示される抗ＢＣＭＡ／抗ＣＤ１９ダイアボディＣＡＲ）をコードする核酸分子を含むように細胞を操作する。一部の実施形態では、各々が本明細書に開示のＣＡＲをコードする２つの核酸分子（例えば、抗ＢＣＭＡＣＡＲをコードする１つの核酸分子と、抗ＣＤ１９ＣＡＲをコードする１つの核酸分子）を含むように細胞を操作する。

一部の実施形態では、細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団は、対象からのアフェレーシスサンプル（例えば、白血球アフェレーシスサンプル）から収集される。

一部の実施形態では、アフェレーシスサンプル（例えば、白血球アフェレーシスサンプル）を対象から採取し、凍結サンプル（例えば、凍結保存サンプル）として細胞製造施設に輸送する。次に、凍結アフェレーシスサンプルを解凍した後、例えばセルソーティング機（例えば、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）Ｐｒｏｄｉｇｙ（登録商標）装置）を用いて、アフェレーシスサンプルからＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）を選択する。続いて、選択されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）を、本明細書に記載のサイトカインプロセスを用いるＣＡＲＴ製造のために接種する。一部の実施形態では、サイトカインプロセスの終了時、ＣＡＲＴ細胞を凍結保存し、後に解凍して、対象に投与する。一部の実施形態では、選択されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）は、ＣＡＲＴ製造のために接種する前に、１ラウンド以上の凍結－解凍工程に付す。

一部の実施形態では、アフェレーシスサンプル（例えば、白血球アフェレーシスサンプル）を対象から採取し、新鮮な産物（例えば、凍結していない産物）として細胞製造施設に輸送する。例えば、セルソーティング機（例えば、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）Ｐｒｏｄｉｇｙ（登録商標）装置）を用いて、アフェレーシスサンプルからＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）を選択する。続いて、選択されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）を、本明細書に記載のサイトカインプロセスを用いるＣＡＲＴ製造のために接種する。一部の実施形態では、選択されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）は、ＣＡＲＴ製造のために接種する前に、１ラウンド以上の凍結－解凍工程に付す。

一部の実施形態では、アフェレーシスサンプル（例えば、白血球アフェレーシスサンプル）を対象から採取する。例えば、セルソーティング機（例えば、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）Ｐｒｏｄｉｇｙ（登録商標）装置）を用いて、アフェレーシスサンプルからＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）を選択する。続いて、選択されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）を凍結サンプル（例えば、凍結保存サンプル）として細胞製造施設に輸送する。選択されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）を後に解凍し、本明細書に記載のサイトカインプロセスを用いるＣＡＲＴ製造のために接種する。

一部の実施形態では、細胞（例えば、Ｔ細胞）を接種した後、１つ以上のサイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））、ＩＬ－２１若しくはＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒ）から選択される１つ以上のサイトカイン）並びにＣＡＲ（例えば、１つ以上のＣＡＲ）をコードするベクター（例えば、レンチウイルスベクター）（又は１つ以上のベクター）を細胞に添加する。２０～２４時間のインキュベーション後、細胞を洗浄してから、保存又は投与のために製剤化する。

伝統的なＣＡＲＴ製造アプローチと異なり、本明細書に提供されるサイトカインプロセスは、ＣＤ３及び／若しくはＣＤ２８刺激又はエクスビボＴ細胞拡大を伴わない。抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体と接触させて、エクスビボで広範囲に増殖するＴ細胞は、セントラルメモリー表現型に向かう分化を示す傾向がある。理論に縛られることは意図しないが、本明細書に提供されるサイトカインプロセスは、ＣＡＲＴ製造中に、Ｔ細胞の未分化表現型を保存するか又は増加させて、対象に注入された後、より長期に持続し得るＣＡＲＴ産物を生成する。

一部の実施形態では、細胞の集団を１つ以上のサイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））、ＩＬ－２１又はＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ）から選択される１つ以上のサイトカインと接触させる。

一部の実施形態では、細胞の集団をＩＬ－２と接触させる。一部の実施形態では、細胞の集団をＩＬ－７と接触させる。一部の実施形態では、細胞の集団をＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））と接触させる。一部の実施形態では、細胞の集団をＩＬ－２１と接触させる。一部の実施形態では、細胞の集団をＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ）と接触させる。一部の実施形態では、細胞の集団をＩＬ－２及びＩＬ－７と接触させる。一部の実施形態では、細胞の集団をＩＬ－２及びＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））と接触させる。一部の実施形態では、細胞の集団をＩＬ－２及びＩＬ－２１と接触させる。一部の実施形態では、細胞の集団をＩＬ－２及びＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ）と接触させる。一部の実施形態では、細胞の集団をＩＬ－７及びＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））と接触させる。一部の実施形態では、細胞の集団をＩＬ－７及びＩＬ－２１と接触させる。一部の実施形態では、細胞の集団をＩＬ－７及びＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ）と接触させる。一部の実施形態では、細胞の集団をＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））及びＩＬ－２１と接触させる。一部の実施形態では、細胞の集団をＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））及びＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ）と接触させる。一部の実施形態では、細胞の集団をＩＬ－２１及びＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ）と接触させる。一部の実施形態では、細胞の集団をＩＬ－７、ＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））及びＩＬ－２１と接触させる。一部の実施形態では、細胞の集団をＬＳＤ１阻害剤とさらに接触させる。一部の実施形態では、細胞の集団をＭＡＬＴ１阻害剤とさらに接触させる。

一部の実施形態では、細胞の集団を２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０又は３００Ｕ／ｍｌのＩＬ－２と接触させる。一部の実施形態では、細胞の集団を１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７と接触させる。一部の実施形態では、細胞の集団を１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１５と接触させる。

一部の実施形態において、ＣＡＲをコードする核酸分子と、細胞の集団を接触させるステップは、細胞の集団を前述した１つ以上のサイトカインと接触させるステップと同時に行う。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と、細胞の集団を接触させるステップは、細胞の集団を前述した１つ以上のサイトカインと接触させるステップの開始後の１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５又は１０時間以内に行う。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と、細胞の集団を接触させるステップは、細胞の集団を前述した１つ以上のサイトカインと接触させるステップの開始後の５時間以内に行う。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と、細胞の集団を接触させるステップは、細胞の集団を前述した１つ以上のサイトカインと接触させるステップの開始後の４時間以内に行う。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と、細胞の集団を接触させるステップは、細胞の集団を前述した１つ以上のサイトカインと接触させるステップの開始後の３時間以内に行う。一部の実施形態では、細胞の集団を、ＣＡＲをコードする核酸分子と接触させるステップは、前述した１つ以上のサイトカインと細胞の集団を接触させるステップの開始後の２時間以内に行う。一部の実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸分子と、細胞の集団を接触させるステップは、前述した１つ以上のサイトカインと細胞の集団を接触させるステップの開始後の１時間以内に行う。

一部の実施形態では、細胞の集団を前述した１つ以上のサイトカインと接触させるステップの開始後の７２、６０、４８、３６、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９若しくは１８時間以内に細胞の集団を保存又は投与のために採取する。一部の実施形態では、細胞の集団を前述した１つ以上のサイトカインと接触させるステップの開始後の２６時間以内に細胞の集団を保存又は投与のために採取する。一部の実施形態では、細胞の集団を前述した１つ以上のサイトカインと接触させるステップの開始後の２５時間以内に細胞の集団を保存又は投与のために採取する。一部の実施形態では、細胞の集団を前述した１つ以上のサイトカインと接触させるステップの開始後の２４時間以内に細胞の集団を保存又は投与のために採取する。一部の実施形態では、細胞の集団を前述した１つ以上のサイトカインと接触させるステップの開始後の２３時間以内に細胞の集団を保存又は投与のために採取する。一部の実施形態では、細胞の集団を前述した１つ以上のサイトカインと接触させるステップの開始後の２２時間以内に細胞の集団を保存又は投与のために採取する。

一部の実施形態では、細胞の集団は、エクスビボで増殖されない。

一部の実施形態では、細胞の集団は、例えば、前述した１つ以上のサイトカインと接触させる前の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５又は６０％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、細胞の集団は、例えば、前述した１つ以上のサイトカインと接触させる前の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて５％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、細胞の集団は、例えば、前述した１つ以上のサイトカインと接触させる前の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて１０％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、細胞の集団は、例えば、前述した１つ以上のサイトカインと接触させる前の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて１５％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、細胞の集団は、例えば、前述した１つ以上のサイトカインと接触させる前の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて２０％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、細胞の集団は、例えば、前述した１つ以上のサイトカインと接触させる前の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて２５％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、細胞の集団は、例えば、前述した１つ以上のサイトカインと接触させる前の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて３０％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、細胞の集団は、例えば、前述した１つ以上のサイトカインと接触させる前の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて３５％以下だけ増殖される。一部の実施形態では、細胞の集団は、例えば、前述した１つ以上のサイトカインと接触させる前の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて４０％以下だけ増殖される。

一部の実施形態において、細胞の集団は、例えば、前述した１つ以上のサイトカインと接触させる前の細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１６、２０、２４、３６又は４８時間以下だけ増殖される。

一部の実施形態において、細胞の集団は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤（例えば、抗ＣＤ３抗体）及び／又は細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤（例えば、抗ＣＤ２８抗体）とインビトロで接触されないか、又は接触される場合、接触させるステップは、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５若しくは５時間未満である。

一部の実施形態において、細胞の集団は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤（例えば、抗ＣＤ３抗体）及び／又は細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤（例えば、抗ＣＤ２８抗体）と２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７若しくは２８時間インビトロで接触させる。

一部の実施形態において、本明細書に記載のサイトカインプロセスを用いて製造される細胞の集団は、例えば、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体と結合する薬剤（例えば、抗ＣＤ３抗体）及び／又は細胞の表面上の共刺激分子と結合する薬剤（例えば、抗ＣＤ２８抗体）と、細胞の集団を接触させるステップをさらに含む以外には類似の方法によって作製された細胞と比べて、ＣＡＲ発現細胞の中でナイーブ細胞のより高いパーセンテージ（例えば、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５又は６０％高い）を示す。

一部の実施形態において、本明細書に記載のサイトカインプロセスは、０、０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５又は８％以下の血清を含む細胞培地中で実施される。一部の実施形態において、本明細書に記載のサイトカインプロセスは、ＬＳＤ１阻害剤、ＭＡＬＴ１阻害剤又はそれらの組み合わせを含む細胞培地中で実施される。

別の例示的な製造方法
一部の実施形態では、細胞、例えば、Ｔ細胞若しくはＮＫ細胞を、例えば、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８抗体コーティングＤｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）を用いて活性化させ、ＣＡＲ（例えば、１つ以上のＣＡＲ）をコードする１つ以上の核酸分子と接触させた後、例えば、７、８、９、１０若しくは１１日にわたってインビトロで増殖させる。一部の実施形態では、細胞、例えば、Ｔ細胞若しくはＮＫ細胞は、ポジティブ又はネガティブ選択を用いて、新鮮若しくは凍結保存白血球アフェレーシスサンプルから選択される。一部の実施形態では、ＣＡＲ（例えば、１つ以上のＣＡＲ）をコードする核酸分子（例えば、１つ以上の核酸分子）と、細胞を接触させる。一部の実施形態では、本明細書に開示される２つのＣＡＲ（例えば、抗ＢＣＭＡＣＡＲ及び抗ＣＤ１９ＣＡＲ）をコードする核酸分子と、細胞を接触させる。一部の実施形態では、２つの核酸分子（１つは、第１ＣＡＲ（例えば、抗ＢＣＭＡＣＡＲ）を発現し、他方は、第２ＣＡＲ（例えば、抗ＣＤ１９ＣＡＲ）を発現する）と、細胞を接触させる。一部の実施形態では、ダイアボディＣＡＲ（例えば、本明細書に開示される抗ＢＣＭＡ／抗ＣＤ１９ダイアボディＣＡＲ）をコードする核酸分子と、細胞を接触させる。

水簸
一部の実施形態において、本明細書に記載の方法は、不要な細胞、例えば単球及び芽細胞を除去し、これにより、ＣＡＲ発現に好適な所望の免疫エフェクター細胞の濃縮改善を達成する水簸法を特徴とする。一部の実施形態では、本明細書に記載の水簸法は、事前に凍結したサンプル、例えば解凍サンプルからのＣＡＲ発現に好適な所望の免疫エフェクター細胞の濃縮のために最適化される。一部の実施形態では、本明細書に記載の水簸法は、当技術分野で公知の水簸プロトコルから収集される細胞の調製物と比べて、純度が向上した細胞の調製物を提供する。一部の実施形態では、本明細書に記載の水簸法は、特定の等張液（例えば、ＰＢＳ）を用いた希釈による出発サンプル、例えば細胞サンプル、例えば解凍した細胞サンプルの最適化された粘度の使用並びに水簸装置により収集される各画分の流量及び収集量の最適化された組み合わせの使用を含む。本発明に適用することができる例示的な水簸法は、国際公開第２０１７／１１７１１２号パンフレット（その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）の４８～５１ページに記載されている。

密度勾配遠心分離
養子細胞治療製品の製造は、末梢血アフェレーシス出発材料中に存在する血液細胞及び血液成分の複合混合物から離れて、所望の細胞、例えば免疫エフェクター細胞をプロセシングすることを必要とする。末梢血由来のリンパ球サンプルは、フィコール溶液による密度勾配遠心分離を用いた分離に成功している。しかし、フィコールは、臨床使用に適格ではないため、フィコールは、治療用途で細胞を分離するのに好ましい試薬ではない。さらに、フィコールは、グリコールを含有し、これは、細胞に対して毒性を有する可能性がある。さらに、凍結保存後の解凍アフェレーシス産物のフィコール密度勾配遠心分離は、例えば、本明細書の実施例に記載されるように、準最適なＴ細胞産物をもたらす。例えば、フィコール溶液による密度勾配遠心分離によって分離された細胞調製物では、非Ｔ細胞、特に望ましくないＢ細胞、芽細胞及び単球の相対的な増加と共に、最終産物でのＴ細胞の喪失が観察された。

理論に縛られることを意図しないが、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、凍結保存中に脱水して、新鮮な細胞よりも密度が高くなると考えられる。理論に縛られることを意図しないが、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、他の血液細胞よりも長い間密度が高いままであるため、他の細胞よりも容易にフィコール密度勾配分離中に失われることも考えられる。従って、理論に縛られることを意図しないが、フィコールより大きい密度の培地は、フィコール又はフィコールと同じ密度、例えば１．０７７ｇ／ｍＬを有する他の培地と比べて、所望の免疫エフェクター細胞の分離の改善を提供すると考えられる。

一部の実施形態において、本明細書に記載の密度勾配遠心分離法は、イオジキサノールを含む密度勾配媒体の使用を含む。一部の実施形態において、密度勾配媒体は、水中に約６０％のイオジキサノールを含む。

一部の実施形態において、本明細書に記載の密度勾配遠心分離法は、フィコールより大きい密度を有する密度勾配媒体の使用を含む。一部の実施形態において、本明細書に記載の密度勾配遠心分離法は、１．０７７ｇ／ｍＬ超、例えば１．０７７ｇ／ｍＬ超、１．１ｇ／ｍＬ超、１．１５ｇ／ｍＬ超、１．２ｇ／ｍＬ超、１．２５ｇ／ｍＬ超、１．３ｇ／ｍＬ超、１．３１ｇ／ｍＬ超の密度を有する密度勾配媒体の使用を含む。一部の実施形態では、密度勾配媒体は、約１．３２ｇ／ｍＬの密度を有する。

密度勾配遠心分離の別の実施形態は、国際公開第２０１７／１１７１１２号パンフレット（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）の５１～５３ページに記載されている。

選択による濃縮
ＣＡＲ発現に適した所望の免疫エフェクター細胞の濃縮を改善するための特定の細胞の選択方法が本明細書に提供される。一部の実施形態において、選択は、ポジティブ選択、例えば所望の免疫エフェクター細胞の選択を含む。一部の実施形態では、選択は、ネガティブ選択、例えば望ましくない細胞の選択、例えば望ましくない細胞の除去を含む。複数の実施形態において、本明細書に記載されるポジティブ又はネガティブ選択方法は、例えば、フロースルー装置、例えば本明細書に記載のフロースルー装置の使用により、流動条件下で実施される。例示的なポジティブ及びネガティブ選択は、国際公開第２０１７／１１７１１２号パンフレット（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）の５３～５７ページに記載されている。選択方法は、細胞プロセシングシステムとも呼ばれるフロースルー装置を使用することにより流動条件下で実施して、ＣＡＲ発現に好適な所望の免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の細胞調製物をさらに濃縮することができる。例示的なフロースルー装置は、国際公開第２０１７／１１７１１２号パンフレット（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）の５７～７０ページに記載されている。例示的な細胞分離及び脱ビーズ（ｄｅｂｅａｄｉｎｇ）方法は、国際公開第２０１７／１１７１１２号パンフレット（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）の７０～７８ページに記載されている。

選択手順は、国際公開第２０１７／１１７１１２号パンフレットの５７～７０ページに記載されているものに限定されない。カラム技術（ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）Ｐｌｕｓ又はＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）Ｐｒｏｄｉｇｙ（登録商標））と組み合わせてＣＤ１９、ＣＤ１４及びＣＤ２６Ｍｉｌｔｅｎｙｉビーズを用いる不要な細胞の除去によるネガティブＴ細胞選択又はＣＤ４及びＣＤ８Ｍｉｌｔｅｎｙｉビーズ及びカラム技術（ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）Ｐｌｕｓ又はＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）Ｐｒｏｄｉｇｙ（登録商標））の組み合わせを用いたポジティブＴ細胞選択を使用することができる。代わりに、放出可能なＣＤ３ビーズ（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いたカラムフリー技術を使用することもできる。

加えて、ＴｈｅｒｍｏＧｅｎｅｓｉｓＸ－シリーズ装置などのビーズフリー技術も使用することができる。

臨床用途
本明細書に記載のプロセス、全て臨床医薬品製造（ｃＧＭＰ）基準に従って実施することができる。

これらのプロセスは、特に製造プロセス開始時の未処理の出発材料（特に細胞）の収集並びに細胞療法用の細胞の選択若しくは拡大のための製造プロセス中の細胞精製、富化、採取、洗浄、濃縮又は細胞培地交換のために使用され得る。

細胞は、任意の複数の細胞を含み得る。細胞は、同じ細胞型又は混合された細胞型のものであり得る。加えて、細胞は、一人のドナー、例えば細胞療法のための自己ドナー又は単一同種異系ドナーに由来するものであり得る。細胞は、患者から、例えば白血球アフェレーシス又はアフェレーシスから取得され得る。細胞は、Ｔ細胞を含み得、例えば５０％超のＴ細胞、６０％超のＴ細胞、７０％超のＴ細胞、８０％超のＴ細胞又は９０％超のＴ細胞を有する集団を含み得る。

選択プロセスは、培養及び拡大前に、細胞を選択する上で特に有用となり得る。例えば、抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８でコーティングされた常磁性粒子を使用して、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくは他のタンパク質をコードする核酸の伸長又は導入のためにＴ細胞を選択することができる。こうしたプロセスを使用して、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）の治療のためにＣＴＬ０１９Ｔ細胞を生産する。

本明細書に開示される脱ビーズプロセス及びモジュールは、特に、細胞療法用の細胞の製造、例えば培養及び増殖前又は後の細胞の精製に有用であり得る。例えば、抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８抗体でコーティングされた常磁性粒子を使用して、Ｔ細胞、例えばキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は他のタンパク質をコードする核酸の導入によって修飾された若しくは修飾されるであろうＴ細胞を、ＣＡＲがＴ細胞により発現されるように、選択的に増殖させることができる。こうしたＴ細胞の製造中、脱ビーズプロセス又はモジュールを用いて、Ｔ細胞を常磁性粒子から分離することができる。このような脱ビーズプロセス又はモジュールを用いて、例えば急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の処置のためのＣＴＬ０１９Ｔ細胞を生産する。

例として示される１つのこうしたプロセスでは、細胞、例えばＴ細胞をドナー（例えば、自己キメラ抗原受容体Ｔ細胞産物で処置しようとする患者）からアフェレーシス（例えば、白血球アフェレーシス）により収集する。続いて、収集した細胞を任意選択で例えば水簸ステップ又は標的細胞（例えば、Ｔ細胞）のポジティブ若しくはネガティブ選択によって精製し得る。次に、常磁性粒子、例えば抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８コーティング常磁性粒子を細胞集団に添加して、Ｔ細胞を増殖させることができる。このプロセスは、形質導入ステップも含み得、このステップにおいて、１つ以上の所望のタンパク質、例えばＣＡＲ、例えばＣＤ１９を標的化するＣＡＲをコードする核酸が細胞に導入される。核酸は、レンチウイルスベクター中に導入され得る。細胞、例えばレンチウイルスにより形質導入された細胞を例えば好適な培地の存在下で例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０若しくはそれを超える日数の期間にわたって増殖することができる。増殖の後、本明細書に開示される脱ビーズプロセス／モジュールを用いて、常磁性粒子から所望のＴ細胞を分離することができる。このプロセスは、本開示のプロセスに従う１つ以上の脱ビーズステップを含み得る。次に、脱ビーズした細胞を、患者への投与のために製剤化することができる。ＣＡＲＴ細胞及びそれらの製造の例は、例えば、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレット（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）にさらに記載されている。本開示のシステム及び方法は、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットに記載されるか又はそれに関連する任意の細胞分離／精製／脱ビーズプロセスに使用され得る。別のＣＡＲＴ製造プロセスは、例えば、国際公開第２０１６１０９４１０号パンフレット及び同第２０１７１１７１１２号パンフレット（それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。

本明細書に記載のシステム及び方法は、従来のシステム及び方法と比べて、化学物質との曝露が少ないか又は曝露せずに、望ましい細胞の無駄を少なくし、細胞外傷を低減すると共に、細胞からの磁気及びあらゆる非常磁性粒子をより確実に除去することにより、他の細胞療法製品にも同様に利益をもたらし得る。

上には本開示の例示的な実施形態のみが具体的に記載されているが、これらの例の修正及び変更は、本開示の趣旨及び意図される範囲から逸脱することなく、可能であることは理解されよう。例えば、磁気モジュール及びそれらを含むシステムは、記載されるものに加えて様々な配置に構成及び使用され得る。それ以外にも、非磁気モジュールを同様に使用することができる。加えて、システム及び方法は、本明細書に具体的に記載されていない別の成分及びステップを含み得る。例えば、方法は、プライミングを含み得、この場合、流体をまず１成分に導入して、気泡を除去し、細胞懸濁液又はバッファー運動に対する抵抗を低減する。さらに、複数の実施形態は、本明細書に記載の方法で使用するための本明細書に記載のシステムの一部のみを含む場合もある。例えば、複数の実施形態は、細胞を分離若しくは脱ビーズして細胞産物を生産することができる完全なシステムを形成するために、非使い捨て装置内で使用可能な使い捨てモジュール、ホースなどに関連し得る。

本発明と組み合わせることができる追加の製造方法及びプロセスは、当技術分野で記載されている。例えば、国際公開第２０１７／１１７１１２号パンフレットの８６～９１ページには、改善された洗浄ステップ及び改善された製造プロセスが記載されている。

免疫エフェクター細胞の供給源
この項では、所望の免疫エフェクター細胞を含むインプットサンプルを取得し、所望の免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞を分離及びプロセシングし、且つ不要な物質、例えば不要な細胞を除去するための追加の方法又はステップを提供する。この項に記載される追加の方法又はステップは、先行項に記載される水簸、密度勾配遠心分離、流動条件下での選択又は改善された洗浄ステップのいずれかと組み合わせて使用することができる。

細胞の供給源、例えばＴ細胞若しくはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、対象から取得することができる。対象の例として、ヒト、サル、チンパンジー、イヌ、ネコ、マウス、ラット及びそれらのトランスジェニック種が挙げられる。Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織及び腫瘍を含む、多数の供給源から得ることができる。

本開示の一部の実施形態において、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、当業者に周知の任意の数の技術及び本明細書に開示される方法のいずれかを使用して、それらのステップの任意の組み合わせで、対象から収集した血液の単位から得ることができる。一部の実施形態では、個体の循環血液からの細胞をアフェレーシスにより取得する。アフェレーシス産物は、典型的にはＴ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球を含めたリンパ球、赤血球及び血小板を含む。一部の実施形態では、アフェレーシスにより収集された細胞は、血漿画分を除去するために洗浄し、任意選択で、続くプロセシングステップのために細胞を適切なバッファー又は培地に入れ得る。一部の実施形態では、細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄する。一部の実施形態では、洗浄溶液はカルシウムを欠き、マグネシウムを欠き得るか、又は全てではないとしても多くの二価カチオンを欠き得る。一部の実施形態において、細胞は、本明細書に記載の改善された洗浄ステップを使用して洗浄される。

カルシウム非存在下での初期活性化ステップは、活性化の増強をもたらすことができる。当業者には容易に認識されるように、洗浄ステップは、当業者に公知の方法により、例えば製造業者の指示に従う半自動化「フロースルー」遠心分離（例えば、Ｃｏｂｅ２９９１細胞処理装置、ＢａｘｔｅｒＣｙｔｏＭａｔｅ（商標）又はＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓＣｅｌｌＳａｖｅｒ５）、ＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓＣｅｌｌＳａｖｅｒＥｌｉｔｅ（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＳｅｐａｘ若しくはＳｅｆｉａ）又はスピニングメンブレンろ過技術を利用する装置（ＦｒｅｓｅｎｉｕｓＫａｂｉＬＯＶＯ）を使用することにより達成され得る。洗浄後、細胞を、例えば無Ｃａ、無ＭｇＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅＡ、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を補充したＰＢＳ－ＥＤＴＡ又はバッファーを含む又は含まない他の食塩水溶液など、多様な生体適合性バッファーに再懸濁し得る。代わりに、アフェレーシスサンプルの望ましくない成分を除去した後、細胞を培養培地に直接再懸濁し得る。

一部の実施形態において、所望の免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、赤血球を溶解し、例えばＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配による遠心分離又は向流遠心水簸により単球を枯渇させることにより、末梢血リンパ球から単離する。

本明細書に記載の方法は、例えば、本明細書に記載の、例えばネガティブ選択技術を使用する、例えばＴ制御性細胞枯渇集団、例えばＣＤ２５＋枯渇細胞又はＣＤ２５^ｈｉｇｈ枯渇細胞である、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の、例えば特定の亜集団の選択を含み得る。一部の実施形態において、Ｔ制御性枯渇細胞の集団は、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％未満のＣＤ２５＋細胞又はＣＤ２５^ｈｉｇｈ細胞を含む。

一部の実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞又はＣＤ２５^ｈｉｇｈＴ細胞を、抗ＣＤ２５抗体若しくはそのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンド、例えばＩＬ－２を使用して集団から除去する。一部の実施形態では、抗ＣＤ２５抗体若しくはそのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンドを基質、例えばビーズにコンジュゲートするか、或いはそうでなければ基質、例えばビーズ上に被覆する。一部の実施形態では、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメントを、本明細書に記載されるような基質にコンジュゲートさせる。

一部の実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞又はＣＤ２５^ｈｉｇｈＴ細胞は、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ（商標）からのＣＤ２５枯渇剤を使用して集団から除去する。一部の実施形態では、細胞対ＣＤ２５枯渇剤の比は１ｅ７細胞対２０μＬ、又は１ｅ７細胞対１５μＬ、又は１ｅ７細胞対１０μＬ、又は１ｅ７細胞対５μＬ、又は１ｅ７細胞対２．５μＬ、又は１ｅ７細胞対１．２５μＬである。一部の実施形態では、例えばＴ制御性細胞の場合、５億細胞／ｍｌ超を使用する。一部の実施形態では、６億、７億、８億又は９億細胞／ｍｌの細胞濃度を使用する。

一部の実施形態において、枯渇させようとする免疫エフェクター細胞の集団は、約６×１０^９のＣＤ２５＋Ｔ細胞を含む。一部の実施形態では、枯渇させようとする免疫エフェクター細胞の集団は、約１×１０^９～１×１０^１０（及びその間の任意の整数値）のＣＤ２５＋Ｔ細胞を含む。一部の実施形態では、得られるＴ制御性枯渇細胞集団は、２×１０^９のＴ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞若しくはＣＤ２５^ｈｉｇｈ細胞以下（例えば、１×１０^９、５×１０^８、１×１０^８、５×１０^７、１×１０^７以下のＴ制御性細胞）を有する。

一部の実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞又はＣＤ２５^ｈｉｇｈ細胞を、例えばチュービング１６２－０１など、枯渇チュービングセットと共にＣｌｉｎｉＭＡＣ系を使用して集団から除去する。一部の実施形態では、ＣｌｉｎｉＭＡＣ系を例えばＤＥＰＬＥＴＩＯＮ２．１などの枯渇設定で作動させる。

特定の理論に縛られることを意図しないが、アフェレーシス前又はＣＡＲ発現細胞産物の製造工程中の対象における免疫細胞の負のレギュレーターのレベルの減少（例えば、不要な免疫細胞、例えばＴｒｅｇ細胞の数の減少）は、対象の再発リスクを有意に低下させる。例えば、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇させる方法は当技術分野で知られている。Ｔｒｅｇ細胞を減少させる方法は、シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体（本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体）、ＣＤ２５枯渇及びそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。

一部の実施形態において、製造方法は、ＣＡＲ発現細胞の製造前のＴｒｅｇ細胞の数の減少（例えば、枯渇）を含む。例えば、製造方法は、例えば、サンプル、例えばアフェレーシスサンプルと、抗ＧＩＴＲ抗体及び／又は抗ＣＤ２５抗体（若しくはそのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンド）を接触させ、ＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）産物の製造前にＴｒｅｇ細胞を枯渇させることを含む。

理論に縛られることを意図しないが、アフェレーシス前又はＣＡＲ発現細胞産物の製造工程中の対象における免疫細胞の負のレギュレーターのレベルの減少（例えば、不要な免疫細胞、例えばＴｒｅｇ細胞の数の減少）は、対象の再発リスクを低下させることができる。一部の実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞産物製造のための細胞採取前にＴｒｅｇ細胞を減らす１つ以上の治療で前処置されており、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置を再び必要とするリスクを低減する。一部の実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞を減少させる方法は、シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体、ＣＤ２５枯渇又はそれらの組み合わせの１つ以上の対象への投与を含むが、これに限定されない。一部の実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞を減少させる方法は、シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体、ＣＤ２５枯渇又はそれらの組み合わせの１つ以上の対象への投与を含むが、これに限定されない。シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体、ＣＤ２５枯渇又はそれらの組み合わせの１つ以上の投与は、ＣＡＲ発現細胞産物注入前、注入中又は注入後に行うことができる。シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体、ＣＤ２５枯渇又はそれらの組み合わせの１つ以上の投与は、ＣＡＲ発現細胞産物注入前、注入中又は注入後に行うことができる。

一部の実施形態において、製造方法は、ＣＡＲ発現細胞製造前のＴｒｅｇ細胞の数の減少（例えば、枯渇）を含む。例えば、製造方法は、例えば、サンプル、例えばアフェレーシスサンプルと抗ＧＩＴＲ抗体及び／又は抗ＣＤ２５抗体（若しくはそのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンド）を接触させ、ＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）産物の製造前にＴｒｅｇ細胞を枯渇させることを含む。

一部の実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞産物製造のための細胞の採取前にシクロホスファミドで前処置され、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置（例えば、ＣＴＬ０１９処置）を再び必要とするリスクを低減する。一部の実施形態では、対象は、ＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）産物製造のための細胞の採取前に抗ＧＩＴＲ抗体で前処置され、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置を再び必要とするリスクを低減する。

一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）製造プロセスは、ＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）産物（例えば、ＣＴＬ０１９産物）の製造前にＴｒｅｇ細胞を枯渇させるように修飾される。一部の実施形態では、ＣＤ２５枯渇を使用して、ＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）産物（例えば、ＣＴＬ０１９産物）の製造前に、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇させる。

一部の実施形態において、除去すべき細胞の集団は、制御性Ｔ細胞又は腫瘍細胞ではなく、ＣＡＲＴ細胞の増殖及び／又は機能に他にマイナスに影響する細胞、例えばＣＤ１４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ１５又は潜在的免疫抑制性細胞により発現される他のマーカーを発現する細胞である。一部の実施形態では、このような細胞は、制御性Ｔ細胞及び／若しくは腫瘍細胞と同時に、又は前記枯渇後、又は別の順番で除去することが意図される。

本明細書に記載の方法は、２つ以上の選択ステップ、例えば２つ以上の枯渇ステップを含み得る。ネガティブ選択によるＴ細胞集団の濃縮は、例えば、ネガティブ選択される細胞に独特な表面マーカーを指向する抗体の組み合わせにより達成することができる。１つの方法は、ネガティブ選択される細胞に存在する細胞表面マーカーを指向するモノクローナル抗体のカクテルを使用する陰性磁気免疫粘着又はフローサイトメトリーによる細胞選別及び／又は選択である。例えば、ネガティブ選択によりＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲ及びＣＤ８に対する抗体を含み得る。

本明細書に記載の方法は、腫瘍抗原、例えばＣＤ２５を含まない腫瘍抗原、例えばＣＤ１９、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ２０、ＣＤ１４又はＣＤ１１ｂを発現する細胞の集団からの除去をさらに含み、それによりＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＡＲの発現に好適なＴ制御性枯渇、例えばＣＤ２５＋枯渇又はＣＤ２５^ｈｉｇｈ枯渇及び腫瘍抗原枯渇細胞の集団を提供する。一部の実施形態では、腫瘍抗原発現細胞は、Ｔ制御性、例えばＣＤ２５＋細胞又はＣＤ２５^ｈｉｇｈ細胞と同時に除去される。例えば、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント及び抗腫瘍抗原抗体又はそのフラグメントを同じ基質、例えばビーズに結合することができ、これを細胞の除去に使用することができるか、或いは抗ＣＤ２５抗体若しくはそのフラグメント又は抗腫瘍抗原抗体若しくはそのフラグメントを別のビーズに結合することができ、その混合物を細胞の除去に使用することができる。他の実施形態では、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞又はＣＤ２５^ｈｉｇｈ細胞の除去及び腫瘍抗原発現細胞の除去は逐次的であり、例えばいずれの順番でも起こり得る。

チェックポイント阻害剤、例えば本明細書に記載のチェックポイント阻害剤を発現する細胞、例えばＰＤ１＋細胞、ＬＡＧ３＋細胞及びＴＩＭ３＋細胞の１つ以上の集団からの除去を含み、それによりＴ制御性枯渇、例えばＣＤ２５＋枯渇細胞及びチェックポイント阻害剤枯渇細胞、例えばＰＤ１＋、ＬＡＧ３＋及び／又はＴＩＭ３＋枯渇細胞の集団を提供する方法も提供される。例示的なチェックポイント阻害剤としては、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦ（例えば、ＴＧＦβ）、例えば本明細書に記載されるようなものが挙げられる。一実施形態において、チェックポイント阻害剤発現細胞は、Ｔ制御性、例えばＣＤ２５＋細胞又はＣＤ２５^ｈｉｇｈ細胞と同時に除去される。例えば、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント及び抗チェックポイント阻害剤抗体又はそのフラグメントを同じビーズに結合することができ、それを細胞の除去に使用することができるか、又は抗ＣＤ２５抗体若しくはそのフラグメント及び抗チェックポイント阻害剤抗体若しくはそのフラグメントを別のビーズに結合することができ、その混合物を細胞の除去に使用することができる。他の実施形態では、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞又はＣＤ２５^ｈｉｇｈ細胞の除去及びチェックポイント阻害剤発現細胞の除去は逐次的であり、例えばいずれの順番でも起こり得る。

本明細書に記載の方法は、ポジティブ選択ステップを含み得る。例えば、Ｔ細胞を、所望のＴ細胞のポジティブ選択に十分な時間、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）Ｍ－４５０ＣＤ３／ＣＤ２８Ｔなどの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（例えば、３ｘ２８）コンジュゲートビーズと一緒にインキュベーションすることにより単離することができる。一部の実施形態では、時間は、約３０分である。一部の実施形態では、時間は、３０分～３６時間又はそれより長い範囲及びその間の全部の整数値である。一部の実施形態では、時間は、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間又は６時間である。一部の実施形態では、時間は、１０～２４時間、例えば２４時間である。腫瘍組織又は免疫不全状態の個体から腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）を単離する場合のように、他の細胞型と比べてＴ細胞が少ないあらゆる状況において、Ｔ細胞を単離するために長いインキュベーション時間が使用され得る。さらに、長いインキュベーション時間の使用は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の捕獲効率を高め得る。そのため、単にＴ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと結合させる時間を短縮若しくは延長し、且つ／又はビーズ対Ｔ細胞比を増加又は減少させる（本明細書に詳しく記載される通り）ことにより、培養開始時又はプロセス中の他の時点でＴ細胞の亜集団を優先的に又はその反対に選択することができる。加えて、ビーズ若しくは他の表面上の抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８抗体比を増加又は減少させることにより、培養開始時又は他の所望の時点でＴ細胞の亜集団を優先的に又はその反対に選択することができる。

一実施形態において、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、グランザイムＢ及びパーフォリン又は他の適切な分子、例えば他のサイトカインの１つ以上を発現するＴ細胞集団を選択することができる。細胞発現についてスクリーニングする方法は、例えば、国際公開第２０１３／１２６７１２号パンフレットに記載される方法により決定することができる。

ポジティブ又はネガティブ選択により所望の細胞の集団を単離するために、細胞及び表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度は変わり得る。一部の実施形態において、細胞とビーズの最大接触を確実にするために、ビーズと細胞を一緒に混合する体積を有意に低下させる（例えば、細胞の濃度を増加させる）ことが望ましい場合もある。例えば、一部の実施形態では、１００億細胞／ｍｌ、９０億／ｍｌ、８０億／ｍｌ、７０億／ｍｌ、６０億／ｍｌ又は５０億／ｍｌの濃度が使用される。一部の実施形態では、１０億細胞／ｍｌの濃度が使用される。一部の実施形態では、７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万又は１億細胞／ｍｌの細胞濃度が使用される。一部の実施形態では、１億２５００万又は１億５０００万細胞／ｍｌの濃度が使用され得る。

高濃度を使用して、細胞収率、細胞活性化及び細胞増殖を増加することができる。さらに、高細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞の又は多くの腫瘍細胞が存在するサンプル（例えば、白血病性血液、腫瘍組織など）からのより効率的な捕獲を可能にする。このような細胞集団は、治療価値を有し得るため、取得することが望ましい。例えば、高濃度細胞の使用は、通常ＣＤ２８発現が弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。

一部の実施形態において、低濃度の細胞を使用することが望ましい場合がある。Ｔ細胞と表面（例えば、ビーズなどの粒子）の混合物を有意に希釈することにより、粒子と細胞の相互作用が最小化される。これは、粒子に結合する所望の抗原を高量で発現する細胞について選択する。例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、高レベルのＣＤ２８を発現し、希釈濃度でＣＤ８＋Ｔ細胞より効率的に捕獲される。一部の実施形態では、使用する細胞の濃度は、５×１０^６／ｍｌである。一部の実施形態では、使用する濃度は、約１×１０^５／ｍｌ～１×１０^６／ｍｌ及びその間の任意の整数値であり得る。

一部の実施形態において、２～１０℃又は室温のいずれかにおいて様々な長さの時間にわたり様々な速度のローテータ上で細胞をインキュベートし得る。

一部の実施形態において、集団の複数の免疫エフェクター細胞は、ジアグリセロールキナーゼ（ＤＧＫ）を発現せず、例えばＤＧＫ欠損性である。一部の実施形態では、集団の複数の免疫エフェクター細胞は、Ｉｋａｒｏｓを発現せず、例えばＩｋａｒｏｓ欠損性である。一部の実施形態では、集団の複数の免疫エフェクター細胞は、ＤＧＫ及びＩｋａｒｏｓを発現せず、例えばＤＧＫ及びＩｋａｒｏｓ両方の欠損性である。

刺激のためのＴ細胞は、洗浄ステップ後に凍結させることもできる。理論に縛られることを意図しないが、凍結及びそれに続く解凍ステップは、細胞集団から顆粒球を、またある程度まで単球を除去することにより、より均一な産物を取得する。血漿及び血小板を除去する洗浄ステップ後、細胞を凍結溶液に懸濁することができる。多くの凍結溶液及びパラメーターが当技術分野で知られ、これに関連して有用であり、ある方法は、２０％ＤＭＳＯ及び８％ヒト血清アルブミンを含むＰＢＳ又は１０％Ｄｅｘｔｒａｎ４０及び５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン及び７．５％ＤＭＳＯ又は３１．２５％Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ－Ａ、３１．２５％デキストロース５％、０．４５％ＮａＣｌ、１０％Ｄｅｘｔｒａｎ４０及び５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン及び７．５％ＤＭＳＯを含む培養培地又は例えばＨｅｓｐａｎ及びＰｌａｓｍａＬｙｔｅＡを含む他の適当な細胞凍結培地を使用することを伴い、次いで細胞を１°／分の速度で－８０℃に凍結し、液体窒素貯蔵タンクの気相に保存する。制御凍結の他の方法も、直ちに－２０℃又は液体窒素の非制御凍結と同様に使用することができる。

一部の実施形態において、凍結保存細胞を本明細書に記載されるように解凍し、洗浄し、本発明の方法を使用する活性化前に室温で１時間休息させる。

本発明に関連して、本明細書に記載されるような増殖細胞が必要となり得る時点前の期間における、対象からの血液サンプル又はアフェレーシス産物の採取も企図されている。従って、増殖させようとする細胞の供給源は、必要な任意の時点で採取することができ、Ｔ細胞などの所望の細胞は、本明細書に記載のものなど、免疫エフェクター細胞治療からの利益があるであろう任意の数の疾患又は状態について、免疫エフェクター細胞治療におけるその後の使用のために単離及び凍結することができる。一部の実施形態では、血液サンプル又はアフェレーシスは、概して健常な対象から採取する。一部の実施形態では、血液サンプル又はアフェレーシスは、疾患を発症するリスクにあるが、依然として疾患を発症していない、概して健常な対象から採取し、目的の細胞をその後の使用のために単離及び凍結する。一部の実施形態では、Ｔ細胞を増殖、凍結し、後の時点で使用することができる。一部の実施形態では、サンプルは、本明細書に記載されるような特定の疾患の診断の直後且つ何らかの処置前に患者から採取する。一部の実施形態では、任意の数の関連する処置モダリティ前に対象からの血液サンプル又はアフェレーシスから細胞を単離し、こうした処置モダリティとして、限定されないが、ナタリズマブ、エファリズマブ、抗ウイルス剤、化学療法剤、放射線、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノレート及びＦＫ５０６などの免疫抑制剤、抗体又は他の免疫除去剤、例えばＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、シトキサン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８及び照射などの薬剤による処置が挙げられる。

本発明の一部の実施形態において、Ｔ細胞は、対象に機能的Ｔ細胞を残す処置後、患者から直接取得する。この点について、特定の癌処置、特に免疫系を損傷させる薬物での処置後、処置後間もなく、患者が通常その処置から回復するまでの間、得られるＴ細胞の品質がエクスビボで増殖する能力について最適であるか又は改善され得ることが観察されている。同様に、本明細書に記載の方法を使用するエクスビボ操作後、これらの細胞は、生着及びインビボ増殖増強について好ましい状態であり得る。このように、本発明に関連して、Ｔ細胞、樹状細胞又は造血細胞系統の他の細胞を含む血液細胞をこの回復期に採取することが企図される。さらに、一部の実施形態では、可動化（例えば、ＧＭ－ＣＳＦでの可動化）及びコンディショニングレジメンを使用して、特定の細胞型の再増殖、再循環、再生及び／又は増殖に好都合である条件を、特に、治療後の定められた時間枠中に対象において形成することができる。細胞型の例としては、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞及び免疫系の他の細胞が挙げられる。

一部の実施形態において、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のＣＡＲ分子を発現する免疫エフェクター細胞は、低い、免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤を受けた対象から取得する。一部の実施形態において、ＣＡＲを発現するように操作しようとする免疫エフェクター細胞の集団、例えばＴ細胞は、対象中の又は対象から採取したＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞のレベル又はＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞／ＰＤ１陽性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の比が少なくとも一過性に増加するように、低い、免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤の投薬から十分な時間後又は十分な投薬後に採取する。

他の実施形態では、ＣＡＲを発現するように操作されているか又は操作される免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の集団を、ＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の数を増加させるか、又はＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞／ＰＤ１陽性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の比を増大する量のｍＴＯＲ阻害剤と接触させることにより、エクスビボで処理することができる。

本願の方法は、５％以下、例えば２％の、ヒトＡＢ血清を含む培養培地条件を利用することができ、既知培養培地条件及び組成物、例えばＳｍｉｔｈｅｔａｌ．，“ＥｘｖｉｖｏｅｘｐａｎｓｉｏｎｏｆｈｕｍａｎＴｃｅｌｌｓｆｏｒａｄｏｐｔｉｖｅｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙｕｓｉｎｇｔｈｅｎｏｖｅｌＸｅｎｏ－ｆｒｅｅＣＴＳ（商標）ＩｍｍｕｎｅＣｅｌｌＳｅｒｕｍＲｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ”Ｃｌｉｎｉｃａｌ＆ＴｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１５）４，ｅ３１；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｃｔｉ．２０１４．３１に記載のものを用いることができることは認識される。

一部の実施形態において、本願の方法は、少なくとも約０．１％、０．５％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％、５％、６％、７％、８％、９％又は１０％の血清を含む培地条件を利用することができる。一部の実施形態では、培地は、約０．５％～５％、約０．５％～４．５％、約０．５％～４％、約０．５％～３．５％、約０．５％～３％、約０．５％～２．５％、約０．５％～２％、約０．５％～１．５％、約０．５％～１．０％、約１．０％～５％、約１．５％～５％、約２％～５％、約２．５％～５％、約３％～５％、約３．５％～５％、約４％～５％又は約４．５％～５％の血清を含む。一部の実施形態では、培地は、約０．５％の血清を含む。一部の実施形態では、培地は、約０．５％の血清を含む。一部の実施形態では、培地は、約１％の血清を含む。一部の実施形態では、培地は、約１．５％の血清を含む。一部の実施形態では、培地は、約２％の血清を含む。一部の実施形態では、培地は、約２．５％の血清を含む。一部の実施形態では、培地は、約３％の血清を含む。一部の実施形態では、培地は、約３．５％の血清を含む。一部の実施形態では、培地は、約４％の血清を含む。一部の実施形態では、培地は、約４．５％の血清を含む。一部の実施形態では、培地は、約５％の血清を含む。一部の実施形態では、血清は、ヒト血清、例えばヒトＡＢ血清を含む。一部の実施形態では、血清は、採取後に自然凝固させたヒト血清、例えばｏｆｆ－ｔｈｅ－ｃｌｏｔ（ＯＴＣ）血清である。一部の実施形態では、血清は、血漿由来血清ヒト血清である。血漿由来血清は、抗凝固剤、例えばクエン酸ナトリウムの存在下で採取されて、プールされたヒト血漿の脱線維によって生成することができる。

一部の実施形態において、本願の方法は、無血清培地を含む培地条件を利用することができる。一部の実施形態において、無血清培地は、ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）ＣＴＳ（商標）（ＬｉｆｅＴｅｃｈ）、Ｉｍｍｕｎｏｃｕｌｔ（商標）ＸＦ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＣｅｌｌＧｒｏ（商標）（ＣｅｌｌＧｅｎｉｘ）、ＴｅｘＭａｃｓ（商標）（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）、Ｓｔｅｍｌｉｎｅ（商標）（Ｓｉｇｍａ）、Ｘｖｉｖｏ１５（商標）（Ｌｏｎｚａ）、ＰｒｉｍｅＸＶ（商標登録）（ＩｒｖｉｎｅＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）又はＳｔｅｍＸＶｉｖｏ（商標登録）（ＲａｎｄＤｓｙｓｔｅｍｓ）である。無血清培地には、ＬｉｆｅＴｅｃｈのＩＣＳＲ（免疫細胞血清代替品）などの血清代替品を添加することができる。血清代替品（例えば、ＩＣＳＲ）のレベルは、例えば、最大５％、例えば約１％、２％、３％、４％又は５％であり得る。一部の実施形態において、無血清培地は、血清、例えばヒト血清、例えばヒトＡＢ血清を添加し得る。一部の実施形態では、血清は、採取後に自然凝固させたヒト血清、例えばｏｆｆ－ｔｈｅ－ｃｌｏｔ（ＯＴＣ）血清である。一部の実施形態では、血清は、血漿由来ヒト血清である。血漿由来血清は、抗凝固剤、例えばクエン酸ナトリウムの存在下で採取されて、プールされたヒト血漿の脱線維によって生成することができる。

一部の実施形態において、Ｔ細胞集団は、ジアグリセロールキナーゼ（ＤＧＫ）欠損である。ＤＧＫ欠損細胞は、ＤＧＫＲＮＡ又はタンパク質を発現しないか、又はＤＧＫ活性が低減若しくは阻害された細胞を含む。ＤＧＫ欠損細胞は、ＤＧＫ発現を低減又は阻止するための遺伝的手法、例えばＲＮＡ干渉剤、例えばｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡの投与によって作製することができる。代わりに、ＤＧＫ欠損細胞は、本明細書に記載のＤＧＫ阻害剤での処理によって作製することもできる。

一部の実施形態において、Ｔ細胞集団は、イカロス欠損である。イカロス欠損細胞は、イカロスＲＮＡ又はタンパク質を発現しないか、又はイカロス活性が低下した又は阻害された細胞を含み、イカロス欠損細胞は、イカロス発現を低減又は阻止するための遺伝的手法、例えばＲＮＡ干渉剤、例えばｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡの投与によって作製することができる。代わりに、イカロス欠損細胞は、イカロス阻害剤、例えばレナリドマイドでの処理によって作製することができる。

複数の実施形態において、Ｔ細胞集団は、ＤＧＫ欠損及びイカロス欠損であり、例えばＤＧＫ及びイカロスを発現しないか、又はＤＧＫ及びイカロス活性が低減若しくは阻害されている。このようなＤＧＫ及びイカロス欠損細胞は、本明細書に記載の方法のいずれかによって作製することができる。

一部の実施形態では、ＮＫ細胞を対象から取得する。一部の実施形態では、ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞株、例えばＮＫ－９２細胞株（Ｃｏｎｋｗｅｓｔ）である。

同種ＣＡＲ発現細胞
本明細書に記載の複数の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、同種免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞であり得る。例えば、細胞は、同種Ｔ細胞、例えば機能的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及び／又はヒト白血球抗原（ＨＬＡ）、例えばＨＬＡクラスＩ及び／又はＨＬＡクラスＩＩの発現を欠く同種Ｔ細胞であり得る。

機能的ＴＣＲを欠くＴ細胞は、例えば、その表面に何ら機能的ＴＣＲを発現しないように操作され、機能的ＴＣＲを含む１つ以上のサブユニットを発現しないように操作される（例えば、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＴＣＲε及び／又はＴＣＲζの発現がない（又は発現の減少を示す）ように操作される）か、又はその表面にごくわずかな機能的ＴＣＲを産生するように操作され得る。代わりに、Ｔ細胞は、例えば、ＴＣＲのサブユニットの１つ以上の変異型又は切断型の発現により、実質的に障害されたＴＣＲを発現し得る。用語「実質的に障害されたＴＣＲ」とは、このＴＣＲが、宿主で有害な免疫反応を惹起しないことを意味する。

本明細書に記載のＴ細胞は、例えば、その表面に機能的ＨＬＡを発現しないように操作され得る。例えば、本明細書に記載のＴ細胞は、細胞表面発現ＨＬＡ、例えばＨＬＡクラス１及び／又はＨＬＡクラスＩＩが下方制御されるように操作され得る。一部の実施形態において、ＨＬＡの下方制御は、β－２ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）の発現の減少又は排除を伴い得る。

一部の実施形態において、Ｔ細胞は、機能的ＴＣＲ及び機能的ＨＬＡ、例えばＨＬＡクラスＩ及び／又はＨＬＡクラスＩＩを欠き得る。

機能的ＴＣＲ及び／又はＨＬＡの発現を欠く修飾Ｔ細胞は、ＴＣＲ又はＨＬＡの１つ以上のサブユニットのノックアウト又はノックダウンを含む、任意の適当な手段により得ることができる。例えば、Ｔ細胞は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、群生性等間隔短回文反復配列（ＣＲＩＳＰＲ）、転写アクティベーター様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）又は亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を使用して、ＴＣＲ及び／又はＨＬＡのノックダウンを含み得る。

一部の実施形態において、同種細胞は、例えば、本明細書に記載の方法のいずれかにより、阻害性分子を発現しないか、又は低レベルで発現する細胞であり得る。例えば、細胞は、例えば、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を低下し得る、阻害分子を発現しないか、又は低レベルで発現する細胞であり得る。阻害分子の例は、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦ（例えば、ＴＧＦβ）を含む。例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ又はタンパク質レベルでの阻害による、阻害分子の阻害は、ＣＡＲ発現細胞性能を最適化できる。複数の実施形態において、例えば本明細書に記載されるような、阻害性核酸、例えば阻害性核酸、例えばｄｓＲＮＡ、例えばｓｉＲＮＡ若しくはｓｈＲＮＡ、群生性等間隔短回文反復配列（ＣＲＩＳＰＲ）、転写アクティベーター様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）又は亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を使用することができる。

ＴＣＲ又はＨＬＡを阻害するためのｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡ
一部の実施形態において、ＴＣＲ発現及び／又はＨＬＡ発現を、細胞、例えばＴ細胞における、ＴＣＲ及び／若しくはＨＬＡ並びに／又は本明細書に記載の阻害分子（例えば、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβ）をコードする核酸を標的とするｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡを使用して、阻害することができる。

ｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡの発現系及び例示的なｓｈＲＮＡのための発現系は、例えば、２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレットの段落６４９及び６５０に記載され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

ＴＣＲ又はＨＬＡを阻害するためのＣＲＩＳＰＲ
本明細書で使用する「ＣＲＩＳＰＲ」又は「ＴＣＲ及び／又はＨＬＡに対するＣＲＩＳＰＲ」又は「ＴＣＲ及び／又はＨＬＡを阻害するためのＣＲＩＳＰＲ」は、一連の群生性等間隔短回文反復配列又はこのような一連の反復を含む系を指す。本明細書で使用する「Ｃａｓ」は、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質を指す。「ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ」系は、細胞、例えばＴ細胞における、ＴＣＲ及び／若しくはＨＬＡ遺伝子並びに／又は本明細書に記載の阻害分子（例えば、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβ）の発現抑制又は変異に使用することができる、ＣＲＩＳＰＲ及びＣａｓ由来の系を指す。

ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム及びその使用は、例えば、２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレットの段落６５１～６５８に記載され、その全体は参照により本明細書に組み込まれる。

ＴＣＲ及び／又はＨＬＡを阻害するためのＴＡＬＥＮ
「ＴＡＬＥＮ」又は「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲに対するＴＡＬＥＮ」又は「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲを阻害するためのＴＡＬＥＮ」は、細胞、例えばＴ細胞における、ＨＬＡ及び／若しくはＴＣＲ遺伝子並びに／又は本明細書に記載の阻害分子（例えば、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβ）の編集に使用することができる人工ヌクレアーゼである、転写アクティベーター様エフェクターヌクレアーゼを指す。

ＴＡＬＥＮ及びその使用は、例えば、２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレットの段落６５９～６６５に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

ＨＬＡ及び／又はＴＣＲを阻害するための亜鉛フィンガーヌクレアーゼ
「ＺＦＮ」又は「亜鉛フィンガーヌクレアーゼ」又は「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲに対するＺＦＮ」又は「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲを阻害するためのＺＦＮ」は、細胞、例えばＴ細胞における、ＨＬＡ及び／若しくはＴＣＲ遺伝子並びに／又は本明細書に記載の阻害分子（例えば、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβ）の編集に使用することができる人工ヌクレアーゼである、亜鉛フィンガーヌクレアーゼを指す。

ＺＦＮ及びその使用は、例えば、２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレットの段落６６６～６７１に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

テロメラーゼ発現
テロメアは、体細胞の持続に重要な役割を果たし、その長さはテロメラーゼ（ＴＥＲＴ）によって維持される。ＣＬＬ細胞のテロメア長は非常に短い可能性があり（Ｒｏｔｈｅｔａｌ．，“ＳｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｓｈｏｒｔｅｒｔｅｌｏｍｅｒｅｓｉｎＴ－ｃｅｌｌｓｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＺＡＰ－７０＋／ＣＤ３８ｃｈｒｏｎｉｃｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃｌｅｕｋａｅｍｉａ”ＢｒｉｔｉｓｈＪｏｕｒｎａｌｏｆＨａｅｍａｔｏｌｏｇｙ，１４３，３８３－３８６．，Ａｕｇｕｓｔ２８２００８）、製造されたＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲＴ１９細胞ではさらに短くなる可能性があるため、患者への養子移入後にそれが増殖する可能性が制限される。テロメラーゼの発現は、ＣＡＲ発現細胞を複製疲弊から救済することができる。

いずれか特定の理論に縛られることを意図しないが、一部の実施形態において、治療用Ｔ細胞は、Ｔ細胞中の短縮されたテロメアのために、患者における持続性が短期であり；従って、テロメラーゼ遺伝子を用いたトランスフェクションにより、Ｔ細胞のテロメアを延長し、患者におけるＴ細胞の持続性を改善することができる。ＣａｒｌＪｕｎｅ，“ＡｄｏｐｔｉｖｅＴｃｅｌｌｔｈｅｒａｐｙｆｏｒｃａｎｃｅｒｉｎｔｈｅｃｌｉｎｉｃ”，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１１７：１４６６－１４７６（２００７）を参照されたい。そのため、一部の実施形態では、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、異所性にテロメラーゼサブユニットを、例えばテロメラーゼの触媒的サブユニット、例えばＴＥＲＴ、例えばｈＴＥＲＴを発現する。一部の実施形態では、本開示は、細胞と、テロメラーゼサブユニット、例えばテロメラーゼの触媒的サブユニット、例えばＴＥＲＴ、例えばｈＴＥＲＴをコードする核酸を接触させることを含む、ＣＡＲ発現細胞を生産する方法を提供する。細胞は、ＣＡＲをコードする構築物と接触させる前、それと同時又はその後に核酸と接触させることができる。

テロメラーゼの発現は安定しているか（例えば、核酸が細胞のゲノムに組み込まれ得る）又は一過性である（例えば、核酸が組み込まれず、一定の時間、例えば数日後に発現が低下する）可能性がある。安定した発現は、テロメラーゼサブユニット及び選択可能なマーカーをコードするＤＮＡで細胞をトランスフェクト又は形質導入し、安定な組み込み体を選択することによって達成され得る。これに代わり又はこれと組み合わせて、安定した発現は、例えば、Ｃｒｅ／Ｌｏｘ又はＦＬＰ／ＦＲＴシステムを使用した、部位特異的組換えによって達成され得る。

一過性の発現は、核酸、例えばＤＮＡ又はｍＲＮＡなどのＲＮＡによるトランスフェクション又は形質導入を含み得る。一部の実施形態において、一過性のｍＲＮＡトランスフェクションは、ＴＥＲＴによる安定したトランスフェクションに関連する場合のある遺伝的不安定性を回避する。外因性テロメラーゼ活性の一過性発現は、例えば、国際公開第２０１４／１３０９０９号パンフレットに記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。複数の実施形態において、テロメラーゼサブユニットのｍＲＮＡベースのトランスフェクションは、ＭｏｄｅｒｎａＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによって商品化されたメッセンジャーＲＮＡＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（商標）プラットフォームに従って実施される。例えば、この方法は、米国特許第８７１０２００号明細書、同第８８２２６６３号明細書、同第８６８００６９号明細書、同第８７５４０６２号明細書、同第８６６４１９４号明細書又は同第８６８００６９号明細書に記載の方法であり得る。

一部の実施形態において、ｈＴＥＲＴは、ＧｅｎＢａｎｋタンパク質ＩＤＡＡＣ５１７２４．１のアミノ酸配列を有する（Ｍｅｙｅｒｓｏｎｅｔａｌ．，“ｈＥＳＴ２，ｔｈｅＰｕｔａｔｉｖｅＨｕｍａｎＴｅｌｏｍｅｒａｓｅＣａｔａｌｙｔｉｃＳｕｂｕｎｉｔＧｅｎｅ，ＩｓＵｐ－ＲｅｇｕｌａｔｅｄｉｎＴｕｍｏｒＣｅｌｌｓａｎｄｄｕｒｉｎｇＩｍｍｏｒｔａｌｉｚａｔｉｏｎ”ＣｅｌｌＶｏｌｕｍｅ９０，Ｉｓｓｕｅ４，２２Ａｕｇｕｓｔ１９９７，Ｐａｇｅｓ７８５－７９５）。

一部の実施形態において、ｈＴＥＲＴは、配列番号２８４の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一の配列を有する。一部の実施形態において、ｈＴＥＲＴは、配列番号２８４の配列を有する。一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、Ｎ末端、Ｃ末端又は両方に欠失（例えば、５、１０、１５、２０又は３０アミノ酸以下）を含む。一部の実施形態において、ｈＴＥＲＴは、Ｎ末端、Ｃ末端又は両方にトランスジェニックアミノ酸配列（例えば、５、１０、１５、２０又は３０アミノ酸以下）を含む。

一部の実施形態において、ｈＴＥＲＴは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ０１８１６７の核酸配列によってコードされる（Ｍｅｙｅｒｓｏｎｅｔａｌ．，“ｈＥＳＴ２，ｔｈｅＰｕｔａｔｉｖｅＨｕｍａｎＴｅｌｏｍｅｒａｓｅＣａｔａｌｙｔｉｃＳｕｂｕｎｉｔＧｅｎｅ，ＩｓＵｐ－ＲｅｇｕｌａｔｅｄｉｎＴｕｍｏｒＣｅｌｌｓａｎｄｄｕｒｉｎｇＩｍｍｏｒｔａｌｉｚａｔｉｏｎ”ＣｅｌｌＶｏｌｕｍｅ９０，Ｉｓｓｕｅ４，２２Ａｕｇｕｓｔ１９９７，Ｐａｇｅｓ７８５－７９５）。

免疫エフェクター細胞（例えばＴ細胞）の活性化及び増殖
本明細書に記載の方法により生成又は濃縮されたＴ細胞などの免疫エフェクター細胞は、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号明細書；同第６，５３４，０５５号明細書；同第６，９０５，６８０号明細書；同第６，６９２，９６４号明細書；同第５，８５８，３５８号明細書；同第６，８８７，４６６号明細書；同第６，９０５，６８１号明細書；同第７，１４４，５７５号明細書；同第７，０６７，３１８号明細書；同第７，１７２，８６９号明細書；同第７，２３２，５６６号明細書；同第７，１７５，８４３号明細書；同第５，８８３，２２３号明細書；同第６，９０５，８７４号明細書；同第６，７９７，５１４号明細書；同第６，８６７，０４１号明細書；及び米国特許出願公開第２００６０１２１００５号明細書に記載する方法を使用して、一般的に活性化及び増殖され得る。

一般に、免疫エフェクター細胞の集団を、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体結合シグナルを刺激する薬剤が結合したその表面と、Ｔ細胞の表面上の共刺激分子を刺激するリガンドを接触させることにより増殖できる。特に、Ｔ細胞集団は、表面上に固定された抗ＣＤ３抗体若しくはその抗原結合フラグメント又は抗ＣＤ２抗体との接触又はカルシウムイオノフォアと組み合わせたタンパク質キナーゼＣアクティベーター（例えば、ブリオスタチン）との接触により、本明細書に記載のように刺激し得る。Ｔ細胞表面上のアクセサリー分子の共刺激のために、アクセサリー分子と結合するリガンドである。例えば、Ｔ細胞集団を、Ｔ細胞の増殖刺激に適する条件下で抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体と接触させ得る。ＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体を使用できる。抗ＣＤ２８抗体の例は、９．３、Ｂ－Ｔ３、ＸＲ－ＣＤ２８を含み（Ｄｉａｃｌｏｎｅ，Ｂｅｓａｎｃｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）、当技術分野で一般に知られる他の方法のように使用できる（Ｂｅｒｇｅｔａｌ．，ＴｒａｎｓｐｌａｎｔＰｒｏｃ．３０（８）：３９７５－３９７７，１９９８；Ｈａａｎｅｎｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０（９）：１３１９１３２８，１９９９；Ｇａｒｌａｎｄｅｔａｌ．，Ｊ．ＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈ．２２７（１－２）：５３－６３，１９９９）。

一部の実施形態において、Ｔ細胞のための一次刺激シグナル及び共刺激シグナルは、異なるプロトコルにより提供され得る。例えば、各シグナルを提供する薬剤は、溶液中でも表面と結合し得る。表面に結合しているとき、薬剤は、同じ表面（すなわち「シス」形態）又は別の表面（すなわち「トランス」形態）に結合し得る。代わりに、一方の薬剤が表面に結合し、他方が溶液にあり得る。一部の実施形態において、共刺激シグナルを提供する薬剤は、細胞表面に結合し、一次活性化シグナルを提供する薬剤は、溶液中であるか又は表面と結合する。一部の実施形態において、両剤は、溶液中にあり得る。一部の実施形態において、薬剤は、不溶性形態であり、Ｆｃ受容体又は抗体又は薬剤と結合する他の結合剤を発現する細胞などの表面に架橋され得る。この点に関して、例えば本発明におけるＴ細胞の活性化及び増殖のために意図される人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）について、米国特許出願公開第２００４０１０１５１９号明細書及び同第２００６００３４８１０号明細書を参照されたい。

一部の実施形態において、２剤は、ビーズに、同じビーズ、すなわち「シス」又は別のビーズ、すなわち「トランス」で固定化される。例として、一次活性化シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合フラグメントであり、共刺激シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ２８抗体又はその抗原結合フラグメントであり、両剤は、均等な分子量で同じビーズに共固定化される。一部の実施形態において、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖及びＴ細胞増殖のためのビーズに結合した１：１比の各抗体を使用する。本発明の一部の実施形態において、１：１比を使用して観察された増殖と比べて、Ｔ細胞増殖の増殖が観察されるように、ビーズに結合した抗ＣＤ３：ＣＤ２８抗体の比を使用する。一部の実施形態において、１：１比を使用して観察された増殖と比べて約１～約３倍増加が観察される。一部の実施形態において、ビーズに結合したＣＤ３：ＣＤ２８抗体比は、１００：１～１：１００及びその間の全ての整数値の範囲である。一部の実施形態において、抗ＣＤ３抗体より多くの抗ＣＤ２８抗体が粒子に結合しており、すなわちＣＤ３：ＣＤ２８比が１未満である。一部の実施形態において、ビーズに結合した抗ＣＤ２８抗体対抗ＣＤ３抗体比は、２：１より大きい。一部の実施形態において、ビーズに結合した１：１００ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一部の実施形態において、ビーズに結合した１：７５ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一部の実施形態において、ビーズに結合した１：５０ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一部の実施形態において、ビーズに結合した１：３０ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一部の実施形態において、ビーズに結合した１：１０ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一部の実施形態において、ビーズに結合した１：３ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一部の実施形態において、ビーズに結合した３：１ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。

１：５００～５００：１及びその間の任意の整数値の粒子対細胞比をＴ細胞又は他の標的細胞の刺激のために使用し得る。当業者に容易に認識され得るように、粒子対細胞比は、標的細胞に対する粒子径に依存し得る。例えば、小さいサイズのビーズは、少ない細胞にのみ結合でき、大きいビーズは、多く結合できる。一部の実施形態において、細胞対粒子比は、１：１００～１００：１及びその間の任意の整数値の範囲であり、一部の実施形態において１：９～９：１及びその間の任意の整数値からなる比をＴ細胞刺激に使用し得る。Ｔ細胞刺激をもたらす抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８結合粒子対Ｔ細胞の比は、上記のように変わり得るが、しかしながら、ある好適な値は、１：１００、１：５０、１：４０、１：３０、１：２０、１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１及び１５：１を含み、１つの好適な比は少なくとも１：１粒子対Ｔ細胞である。一部の実施形態において、１：１以下の粒子対細胞比を使用する。一部の実施形態において、好適な粒子：細胞比は、１：５である。一部の実施形態において、粒子対細胞比は、刺激の日により変わり得る。例えば、一部の実施形態において、粒子対細胞比は、１日目は１：１～１０：１であり、さらなる粒子をその後１０日目まで連日又は隔日で細胞に添加し、最終比１：１～１：１０である（添加の比の細胞数に基づく）。一部の実施形態において、粒子対細胞比は、刺激１日目に１：１であり、刺激３日目及び５日目に１：５に調節する。一部の実施形態において、粒子を、１日目の１：１及び刺激３日目及び５日目の１：５の最終比に基づき、連日又は隔日で添加する。一部の実施形態において、粒子対細胞比は、刺激１日目は２：１であり、刺激３日目及び５日目に１：１０に調節する。一部の実施形態において、粒子を、１日目の１：１及び３日目及び５日目の１：１０の最終比に基づき、連日又は隔日で添加する。当業者は、多様な他の比が本発明における使用に適し得ることを認識する。特に、比は、粒子径並びに細胞サイズ及びタイプによる。一部の実施形態において、使用するための最も典型的な比は、１日目の１：１、２：１及び３：１付近である。

一部の実施形態において、Ｔ細胞などの細胞を薬剤被覆ビーズと組み合わせ、ビーズ及び細胞をその後分離し、次いで細胞を培養する。一部の実施形態において、培養前に薬剤被覆ビーズ及び細胞を分離するが、一緒に培養する。一部の実施形態において、ビーズ及び細胞を磁気力などの力の適用によりまず濃縮し、細胞表面マーカーのライゲーションを増加させ、それにより細胞刺激を誘導する。

例として、細胞表面タンパク質を、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８が結合した常磁性ビーズ（３ｘ２８ビーズ）とＴ細胞を接触させることにより、ライゲートし得る。一部の実施形態において、細胞（例えば、１０^４～１０^９Ｔ細胞）及びビーズ（例えば、ＤｙｎａビーズＳ（登録商標）Ｍ－４５０ＣＤ３／ＣＤ２８Ｔ常磁性ビーズを１：１比）を緩衝液、例えばＰＢＳ（カルシウム及びマグネシウムなどの二価カチオンなし）中で合わせる。再び、任意の細胞濃度を使用し得ることが当業者に容易に認識され得る。例えば、標的細胞は、試料中で極めて稀であり、試料の０．０１％のみが含まれるか又は試料全体（すなわち１００％）が目的の標的細胞で構成され得る。従って、あらゆる細胞数が本発明に関連して一体となる。一部の実施形態において、細胞と粒子との最大接触を確実にするために、粒子及び細胞を混合する体積を有意に減少させる（すなわち細胞の濃度を高める）ことが望ましいことがある。例えば、一部の実施形態において、約１００億細胞／ｍｌ、９０億細胞／ｍｌ、８０億細胞／ｍｌ、７０億細胞／ｍｌ、６０億細胞／ｍｌ、５０億細胞／ｍｌ又は２０億細胞／ｍｌの濃度を使用する。一部の実施形態において、１億細胞／ｍｌ超を使用する。一部の実施形態において、１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万又は５０００万細胞／ｍｌの細胞濃度を使用する。一部の実施形態において、細胞の７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万又は１億細胞／ｍｌの濃度を使用する。一部の実施形態において、１億２５００万又は１億５０００万細胞／ｍｌの濃度を使用できる。高濃度を使用して、細胞収率、細胞活性化及び細胞増殖を増加できる。さらに、高細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞のより効率的な捕獲を可能にする。このような細胞集団は、治療的価値を有し得、及び特定の態様では得ることが望ましいであろう。例えば、高濃度細胞の使用は、通常、ＣＤ２８発現が弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。

一部の実施形態において、ＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＤ１９ＣＡＲをコードする核酸が形質導入された細胞を例えば本明細書に記載の方法により増殖する。一部の実施形態において、細胞を数時間（例えば、約２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１５時間、１８時間、２１時間）～約１４日（例えば、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日又は１４日）の期間の培養により増殖する。一部の実施形態において、細胞は、４～９日の期間増殖される。一部の実施形態において、細胞は、８日以下、例えば７日、６日又は５日の期間増殖される。一部の実施形態において、細胞は、５日の培養により増殖され、得られた細胞は、同じ培養条件において９日間培養で増殖された同じ細胞よりも強力である。効力は、例えば、多様なＴ細胞機能、例えば増殖、標的細胞死、サイトカイン産生、活性化、遊走、表面ＣＡＲ発現、ＣＡＲ定量的ＰＣＲ又はそれらの組み合わせにより規定され得る。一部の実施形態において、５日増殖された細胞、例えば本明細書に記載のＣＤ１９ＣＡＲ細胞は、同じ培養条件下において９日間培養で増殖された同じ細胞と比べて、抗原刺激による細胞倍加の少なくとも１倍、２倍、３倍又は４倍増加を示す。一部の実施形態において、細胞、例えば本明細書に記載のＣＤ１９ＣＡＲ発現細胞を発現する細胞は、５日の培養により増殖され、得られた細胞は、同じ培養条件下において９日間培養で増殖された同じ細胞と比べて、高い炎症誘発性サイトカイン産生、例えばＩＦＮ－γ及び／又はＧＭ－ＣＳＦレベルを示す。一部の実施形態において、５日増殖された細胞、例えば本明細書に記載のＣＤ１９ＣＡＲ細胞は、同じ培養条件下において９日間培養で増殖された同じ細胞と比べて、炎症誘発性サイトカイン産生、例えばＩＦＮ－γ及び／又はＧＭ－ＣＳＦレベルのｐｇ／ｍｌで少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍又はそれを超えて増加する。

Ｔ細胞の培養期間が６０日以上となり得るような数サイクルの刺激も望まれ得る。Ｔ細胞培養に適する条件は、血清（例えば、胎児ウシ又はヒト血清）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インスリン、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＴＧＦβ及びＴＮＦ－α又は当業者に知られる細胞増殖のための任意の他の添加剤を含む、増殖及び生存能に必要な因子を含み得る、適切な培地（例えば、最小必須培地、α－ＭＥＭ、ＲＰＭＩ培地１６４０、ＡＩＭ－Ｖ、ＤＭＥＭ、Ｆ－１２又はＸ－ｖｉｖｏ１５（Ｌｏｎｚａ）、Ｘ－Ｖｉｖｏ２０、ＯｐＴｍｉｚｅｒ及びＩＭＤＭ）を含む。細胞の増殖のための他の添加剤は、界面活性剤、プラスマネート、及びＮ－アセチル－システイン、及び２－メルカプトエタノールなどの還元剤を含むが、これらに限定されない。培地は、限定されないが、無血清又は適切な量の血清（又は血漿）が添加されたか、又は規定されたセットのホルモン及び／又はＴ細胞の増殖及び拡大に十分な量のサイトカインが添加されたＲＰＭＩ１６４０、ＡＩＭ－Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、α－ＭＥＭ、Ｆ－１２、Ｘ－Ｖｉｖｏ１５、Ｘ－Ｖｉｖｏ２０、ＯｐＴｍｉｚｅｒ及びＩＭＤＭを含み得る。抗生物質、例えばペニシリン及びストレプトマイシンは、実験的培養においてのみ包含され、対象に注入すべき細胞の培養に含まれない。標的細胞は、増殖を支持するのに必要な条件、例えば適切な温度（例えば、３７℃）及び雰囲気（例えば、空気＋５％ＣＯ_２）で維持される。

一部の実施形態において、細胞は、例えば、フローサイトメトリーなどの本明細書に記載の方法により測定して、１４日の増殖期間にわたり、細胞の少なくとも２００倍（例えば、２００倍、２５０倍、３００倍、３５０倍）増加をもたらす１つ以上のインターロイキンを含む適切な培地（例えば、本明細書に記載の培地）で増殖させる。一部の実施形態において、細胞は、ＩＬ－１５及び／又はＩＬ－７（例えば、ＩＬ－１５及びＩＬ－７）の存在下で増殖させる。

実施形態において、本明細書に記載の方法、例えばＣＡＲ発現細胞製造法は、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞又はＣＤ２５^ｈｉｇｈＴ細胞を、例えば抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンド、ＩＬ－２を使用して細胞集団から除去することを含む。細胞集団からＴ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞又はＣＤ２５^ｈｉｇｈＴ細胞を除去する方法は、本明細書に記載される。実施形態において、方法、例えば製造法は、細胞集団（例えば、ＣＤ２５＋Ｔ細胞又はＣＤ２５^ｈｉｇｈＴ細胞などのＴ制御性細胞が枯渇されている細胞集団；又は抗ＣＤ２５抗体、そのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンドと前に接触された細胞集団）とＩＬ－１５及び／又はＩＬ－７との接触をさらに含む。例えば、細胞集団（例えば、抗ＣＤ２５抗体、そのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンドと先に接触されている）をＩＬ－１５及び／又はＩＬ－７の存在下で増殖させる。

一部の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）ポリペプチド、インターロイキン－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒａ）ポリペプチド又はＩＬ－１５ポリペプチドとＩＬ－１５Ｒａポリペプチドの組み合わせ、例えばｈｅｔＩＬ－１５を含む組成物とＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで接触させることを含む。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで、ＩＬ－１５ポリペプチドを含む組成物と接触させる。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで、ＩＬ－１５ポリペプチド及びＩＬ－１５Ｒａポリペプチドの両方の組み合わせを含む組成物と接触させる。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで、ｈｅｔＩＬ－１５を含む組成物と接触させる。

一部の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ増殖中、ｈｅｔＩＬ－１５を含む組成物と接触させる。一部の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ増殖中、ＩＬ－１５ポリペプチドを含む組成物と接触させる。一部の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ増殖中、ＩＬ－１５ポリペプチド及びＩＬ－１５Ｒａポリペプチドの両方を含む組成物と接触させる。一部の実施形態において、接触は、リンパ球亜集団、例えばＣＤ８＋Ｔ細胞の生存及び増殖をもたらす。

種々の刺激時間に曝されているＴ細胞は、異なる特徴を示し得る。例えば、典型的な血液又はアフェレーシスした末梢血単核細胞産物は、細胞毒性又はサプレッサーＴ細胞集団（ＴＣ、ＣＤ８＋）より大きいヘルパーＴ細胞集団（ＴＨ、ＣＤ４＋）を有する。ＣＤ３及びＣＤ２８受容体での刺激によるＴ細胞のエクスビボ増殖は、約８～９日目前まで主にＴＨ細胞からなるＴ細胞集団を産生するが、約８～９日目後、Ｔ細胞集団は、徐々に大きくなるＴＣ細胞集団を含む。従って、処置の目的により、主にＴＨ細胞を含むＴ細胞集団を対象に注入することは有利であり得る。同様に、ＴＣ細胞の抗原特異的サブセットが単離されている場合、このサブセットを大きい程度まで増殖させることが有利であり得る。

さらに、ＣＤ４及びＣＤ８マーカーに加えて、他の表現型マーカーは、細胞増殖過程の経過中、有意に、しかし、主に再現性よく変化する。そうして、このような再現性は、特定の目的のために活性化Ｔ細胞産物をもたらす能力を可能とする。

本明細書に記載のＣＡＲが構築されると、適切なインビトロ及び動物モデルにおける抗原刺激後にＴ細胞を増殖させる能力、再刺激の非存在下でのＴ細胞増殖の持続及び抗癌活性など、しかし、これらに限定されない分子の活性を評価するために種々のアッセイが使用され得る。本発明のＣＡＲの効果を評価するためのアッセイは、以下にさらに詳細に記載される。

初代Ｔ細胞におけるＣＡＲ発現のウェスタンブロット分析は、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレットの段落６９５に記載されるように、単量体及び二量体の存在を検出するために使用できる。

抗原刺激後のＣＡＲ^＋Ｔ細胞のインビトロ増殖をフローサイトメトリーにより測定できる。例えば、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞の混合物をαＣＤ３／αＣＤ２８ａＡＰＣで刺激し、続いて分析すべきプロモーターの制御下において、ＧＦＰを発現するレンチウイルスベクターで形質導入する。代表的プロモーターは、ＣＭＶＩＥ遺伝子、ＥＦ－１α、ユビキチンＣ又はホスホグリセロキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターを含む。ＧＦＰ蛍光を、ＣＤ４^＋及び／又はＣＤ８^＋Ｔ細胞サブセットの培養６日目にフローサイトメトリーにより評価する。例えば、Ｍｉｌｏｎｅｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＴｈｅｒａｐｙ１７（８）：１４５３－１４６４（２００９）を参照されたい。代わりに、ＣＤ４^＋とＣＤ８^＋Ｔ細胞の混合物を、０日目にαＣＤ３／αＣＤ２８被覆磁気ビーズで刺激し、２Ａリボソームスキッピング配列を使用するＣＡＲとｅＧＦＰを発現するバイシストロニックレンチウイルスベクターを使用して、１日目にＣＡＲを形質導入する。培養物を本明細書に記載されるような癌関連抗原^＋Ｋ５６２細胞（本明細書に記載されるような癌関連抗原を発現するＫ５６２）、野生型Ｋ５６２細胞（Ｋ５６２野生型）又は抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体存在下でｈＣＤ３２及び４－１ＢＢＬを発現するＫ５６２細胞（Ｋ５６２－ＢＢＬ－３／２８）でのいずれかで再刺激する。外来性ＩＬ－２を、１００ＩＵ／ｍｌを隔日で培養物に添加する。ＧＦＰ^＋Ｔ細胞を、ビーズベースの計数を使用するフローサイトメトリーにより数える。例えば、Ｍｉｌｏｎｅｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＴｈｅｒａｐｙ１７（８）：１４５３－１４６４（２００９）を参照されたい。

再刺激非存在下の持続するＣＡＲ^＋Ｔ細胞増殖も測定できる。例えば、Ｍｉｌｏｎｅｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＴｈｅｒａｐｙ１７（８）：１４５３－１４６４（２００９）を参照されたい。簡潔には、平均Ｔ細胞体積（ｆｌ）を、０日目のαＣＤ３／αＣＤ２８被覆磁気ビーズでの刺激及び１日目の記載するＣＡＲの形質導入後、培養８日目にＣｏｕｌｔｅｒＭｕｌｔｉｓｉｚｅｒＩＩＩ粒子カウンター若しくはより高いバージョン、ＮｅｘｃｅｌｏｍＣｅｌｌｏｍｅｔｅｒＶｉｓｉｏｎ、ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｃｅｐｔｅｒ又は他の細胞カウンターを使用して測定する。

動物モデルも、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレットの段落６９８に記載されるように、ＣＡＲ発現細胞活性の測定に使用できる。

用量依存的ＣＡＲ処置応答は、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレットの段落６９９に記載されるように、評価できる。

細胞増殖及びサイトカイン産生の評価は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレットの段落７００に記載されるように、以前に説明されている。

細胞毒性は、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレットの段落７０１に記載されるように、標準的５１Ｃｒ放出アッセイにより評価できる。代替的な非放射性方法も利用することができる。

細胞毒性は、例えば、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅリアルタイム細胞アナライザー（ＲＴＣＡ）を使用して、付着細胞の電気インピーダンスの変化を測定することによっても評価できる。一部の実施形態において、細胞毒性は複数の時点で測定される。

造影テクノロジーは、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレットの段落７０２に記載されるように、腫瘍担持動物モデルにおけるＣＡＲの特異的輸送及び増殖を評価するために使用することができる。

本明細書の実施例部分に記載のもの並びに当分野で知られるものを含む、他のアッセイも、本明細書に記載のＣＡＲの評価に使用できる。

ここに開示する方法の代わりに又はこれと組み合わせて、ＣＡＲリガンドの使用を含む、ＣＡＲ発現細胞（例えば、インビトロ又はインビボ（例えば、臨床モニタリング））、免疫細胞増殖及び／又は活性化及び／又はＣＡＲ特異的選択の１つ以上の検出及び／又は定量のための方法及び組成物が開示される。一部の実施形態において、ＣＡＲリガンドは、ＣＡＲ分子に結合する、例えばＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインに結合する抗体である（例えば、抗原結合ドメインに結合する抗体、例えば、抗イディオタイプ抗体；又は細胞外結合ドメインの定常領域に結合する抗体）。他の実施形態において、ＣＡＲリガンドは、ＣＡＲ抗原分子である（例えば、本明細書に記載されるようなＣＡＲ抗原分子）。

一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞を検出及び／又は定量する方法が開示される。例えば、ＣＡＲリガンドは、インビトロ又はインビボでＣＡＲ発現細胞の検出及び／又は定量に使用できる（例えば、患者におけるＣＡＲ発現細胞の臨床モニタリング又は患者への投薬）。方法は、
ＣＡＲリガンド（任意選択で標識ＣＡＲリガンド、例えばタグ、ビーズ、放射活性又は蛍光標識を含むＣＡＲリガンド）を提供し；
ＣＡＲ発現細胞を獲得し（例えば、製造サンプル又は臨床サンプルなどのＣＡＲ発現細胞含有サンプルの獲得）；
ＣＡＲ発現細胞とＣＡＲリガンドを、結合が生じる条件下で接触させ、それにより存在するＣＡＲ発現細胞のレベル（例えば、量）を検出することを含む。ＣＡＲ発現細胞とＣＡＲリガンドの結合は、ＦＡＣＳ、ＥＬＩＳＡなどのような標準技術を使用して検出できる。

一部の実施形態において、増殖及び／又は活性化細胞（例えば、免疫エフェクター細胞）を増殖する方法が開示される。方法は、
ＣＡＲ発現細胞（例えば、第１のＣＡＲ発現細胞又は一過性に発現されるＣＡＲ細胞）を提供し）；
前記ＣＡＲ発現細胞とＣＡＲリガンド、例えば、本明細書に記載されるようなＣＡＲリガンドを、免疫細胞増殖及び／又は増殖が生じる条件下で接触させ、それにより活性化及び／又は増殖集団を産生することを含む。

特定の実施形態において、ＣＡＲリガンドは基質上に存在する（例えば、基質、例えば、天然に存在しない基質に固定化又は結合される）。一部の実施形態において、基質は、非細胞基質である。非細胞基質は、例えば、プレート（例えば、マイクロタイタープレート）、膜（例えば、ニトロセルロース膜）、マトリックス、チップ又はビーズから選択される固体支持体であり得る。実施形態において、ＣＡＲリガンドは、基質に存在する（例えば、基質表面上）。ＣＡＲリガンドを、基質に共有又は非共有（例えば、架橋）により固定、結合又は会合させ得る。一部の実施形態において、ＣＡＲリガンドは、ビーズに結合（例えば、共有結合）する。前記実施形態において、免疫細胞集団をインビトロ又はエクスビボで増殖できる。方法は、例えば、本明細書に記載の方法のいずれかを使用して、ＣＡＲ分子のリガンド存在下、免疫細胞の集団を培養することをさらに含む。

他の実施形態において、細胞を増殖及び／又は活性化する方法は、さらに第２の刺激性分子、例えば、ＣＤ２８の添加を含む。例えば、ＣＡＲリガンド及び第２の刺激性分子を基質、例えば、１つ以上のビーズに固定し、それにより細胞増殖及び／又は活性化を増加させ得る。

一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞を選択又は富化する方法を提供する。方法は、ＣＡＲ発現細胞と本明細書に記載されるようなＣＡＲリガンドを接触させ、ＣＡＲリガンドの結合に基づき細胞を選択することを含む。

さらに他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞を枯渇、減少及び／又は死滅する方法が提供される。方法は、ＣＡＲ発現細胞と本明細書に記載されるようなＣＡＲリガンドを接触させ；及び細胞を、ＣＡＲリガンドの結合に基づき標的化し、それによりＣＡＲ発現細胞の数を減らす及び／又は殺傷することを含む。一部の実施形態において、ＣＡＲリガンドは、毒性剤と結合する（例えば、トキシン又は細胞除去剤）。一部の実施形態において、抗イディオタイプ抗体は、エフェクター細胞活性、例えば、ＡＤＣＣ又はＡＤＣ活性を生じ得る。

本明細書に開示する方法において使用できる例示的な抗ＣＡＲ抗体は、例えば、国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレット及びＪｅｎａｅｔａｌ．，“ＣｈｉｍｅｒｉｃＡｎｔｉｇｅｎＲｅｃｅｐｔｏｒ（ＣＡＲ）－ＳｐｅｃｉｆｉｃＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｙｔｏＤｅｔｅｃｔＣＤ１９－ＳｐｅｃｉｆｉｃＴｃｅｌｌｓｉｎＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ”，ＰＬＯＳＭａｒｃｈ２０１３８：３ｅ５７８３８に記載され、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

一部の実施形態において、本明細書における組成物及び方法は、例えば、その内容が全体として参照により本明細書に組み込まれる、２０１５年７月３１日出願の米国特許出願ＰＣＴ／米国特許出願公開第２０１５／０４３２１９号明細書に記載のような、Ｔ細胞の特定のサブセットのために最適化される。一部の実施形態において、Ｔ細胞の最適化サブセットは、対照Ｔ細胞、例えば、同じ構築物を発現する異なるタイプ（例えば、ＣＤ８＋又はＣＤ４＋）のＴ細胞と比べて、残留性の増強を示す。

一部の実施形態において、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、本明細書に記載のＣＡＲを含み、そのＣＡＲは、ＣＤ４＋Ｔ細胞に適する（例えば、最適化、例えば、残留性の増強に至る）細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、ＩＣＯＳドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、本明細書に記載のＣＡＲを含み、そのＣＡＲは、ＣＤ８＋Ｔ細胞に適する（例えば、最適化、例えば、残留性の増強に至る）細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、４－１ＢＢドメイン、ＣＤ２８ドメイン又はＩＣＯＳドメイン以外の共刺激ドメインを含む。一部の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲは、本明細書に記載の抗原結合ドメイン、例えば、抗原結合ドメインを含むＣＡＲを含む。

一部の実施形態において、本明細書に記載されるのは、対象、例えば、癌を有する対象を処置する方法である。方法は、前記対象に、有効量の、
１）抗原結合ドメイン、例えば、本明細書に記載の抗原結合ドメイン；
膜貫通ドメイン；及び
細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば第１の共刺激ドメイン、例えばＩＣＯＳドメイン
を含む、ＣＡＲを含むＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＡＲＣＤ４＋）；及び
２）ＣＡＲを含むＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＡＲＣＤ８＋）であって、
抗原結合ドメイン、例えば、本明細書に記載の抗原結合ドメイン；
膜貫通ドメイン；及び
細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば第２の共刺激ドメイン、例えば４－１ＢＢドメイン、ＣＤ２８ドメイン又はＩＣＯＳドメイン以外の別の共刺激ドメイン
を含むもの
を投与することを含み、ここで、ＣＡＲＣＤ４＋とＣＡＲＣＤ８＋は互いに異なる。任意選択で、方法は、さらに、
３）ＣＡＲを含む第２のＣＤ８＋Ｔ細胞（第２のＣＡＲＣＤ８＋）であって、
抗原結合ドメイン、例えば、本明細書に記載の抗原結合ドメイン；
膜貫通ドメイン；及び
第２のＣＡＲＣＤ８＋が、ＣＡＲＣＤ８＋上に存在しない細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば共刺激シグナル伝達ドメインを含み、任意選択でＩＣＯＳシグナル伝達ドメインを含まない、細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む。

バイオポリマー送達方法
一部の実施形態において、本明細書に開示する１つ以上のＣＡＲ発現細胞を、バイオポリマー足場、例えば、バイオポリマーインプラントにより対象に投与又は送達し得る。バイオポリマー足場は、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の送達、増殖及び／分散を支持又は強化することができる。バイオポリマー足場は、生体適合性（例えば、炎症性又は免疫応答を実質的に誘発しない）及び／又は天然に存在し得るか又は合成である生分解性ポリマーを含む。例示的なバイオポリマーは、例えば、２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレットの段落１００４～１００６に記載され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

医薬組成物及び処置
一部の実施形態において、本開示は、本明細書に記載されるように産生されたＣＡＲ発現細胞を、任意選択で１つ以上の他の治療と組み合わせて、投与することを含む、患者を処置する方法を提供する。一部の実施形態において、本開示は、本明細書に記載されるようなＣＡＲ発現細胞を含む反応混合物を、任意選択で１つ以上の他の治療と組み合わせて、投与することを含む、患者を処置する方法を提供する。一部の実施形態において、本開示は、本明細書に記載されるようなＣＡＲ発現細胞を含む反応混合物を発送又は受領する方法を提供する。一部の実施形態において、本開示は、本明細書に記載されるように産生されたＣＡＲ発現細胞を受領することを含み、ＣＡＲ発現細胞を、任意選択で１つ以上の他の治療と組み合わせて、患者に投与することをさらに含む、患者を処置する方法を提供する。一部の実施形態において、本開示は、本明細書に記載されるようなＣＡＲ発現細胞を産生することを含み、ＣＡＲ発現細胞を、任意選択で１つ以上の他の治療と組み合わせて、患者に投与することをさらに含む、患者を処置する方法を提供する。他の療法は、例えば、化学療法などの癌療法であり得る。

一部の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲを発現する細胞を、Ｔｒｅｇ細胞集団を減少させる分子と組み合わせて対象に投与する。Ｔｒｅｇ細胞数を減らす（例えば、枯渇させる）方法は当分野で知られ、例えば、ＣＤ２５枯渇、シクロホスファミド投与、ＧＩＴＲ機能修飾を含む。理論に拘束されることを望むものではないが、アフェレーシス前又は本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞投与前に対象におけるＴｒｅｇ細胞数を減らすことは、腫瘍微小環境における望まない免疫細胞（例えば、Ｔｒｅｇ）の数を減らし、対象の再発のリスクを減らすと考えられる。

一部の実施形態において、本明細書に記載の治療、例えば、ＣＡＲ発現細胞は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させるＧＩＴＲアゴニスト及び／又はＧＩＴＲ抗体などのＧＩＴＲを標的とする及び／又はＧＩＴＲ機能を調節する分子と組み合わせて対象に投与される。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲを発現する細胞を、対象にシクロホスファミドと組み合わせて投与する。一部の実施形態において、ＧＩＴＲ結合分子及び／又はＧＩＴＲ機能を調節する分子（例えば、ＧＩＴＲアゴニスト及び／又はＴｒｅｇ枯渇ＧＩＴＲ抗体）を、ＣＡＲ発現細胞の前に投与する。例えば、一部の実施形態において、ＧＩＴＲアゴニストを細胞のアフェレーシス前に投与できる。実施形態において、シクロホスファミドを、対象にＣＡＲ発現細胞の投与（例えば、注入又は再注入）前又は細胞のアフェレーシス前に投与する。実施形態において、シクロホスファミド及び抗ＧＩＴＲ抗体を、対象にＣＡＲ発現細胞の投与（例えば、注入又は再注入）前又は細胞のアフェレーシス前に投与する。一部の実施形態において、対象は癌（例えば、固形癌又はＡＬＬ又はＣＬＬなどの血液癌）を有する。一部の実施形態において、対象は、ＣＬＬを有する。実施形態において、対象はＡＬＬを有する。実施形態において、対象は固形癌、例えば、本明細書に記載の固形癌を有する。例示的なＧＩＴＲアゴニストは、例えば、米国特許第６，１１１，０９０号明細書、欧州特許第０９０５０５Ｂ１号明細書、米国特許第８，５８６，０２３号明細書、国際公開第２０１０／００３１１８号パンフレット及び同２０１１／０９０７５４号パンフレットに記載のＧＩＴＲ融合タンパク質又は例えば米国特許第７，０２５，９６２号明細書、欧州特許第１９４７１８３Ｂ１号明細書、米国特許第７，８１２，１３５号明細書、米国特許第８，３８８，９６７号明細書、米国特許第８，５９１，８８６号明細書、欧州特許出願公開第ＥＰ１８６６３３９号明細書、国際公開第２０１１／０２８６８３号パンフレット、国際公開第２０１３／０３９９５４号パンフレット、国際公開第２００５／００７１９０号パンフレット、国際公開第２００７／１３３８２２号パンフレット、国際公開第２００５／０５５８０８号パンフレット、国際公開第９９／４０１９６号パンフレット、国際公開第２００１／０３７２０号パンフレット、国際公開第９９／２０７５８号パンフレット、国際公開第２００６／０８３２８９号パンフレット、国際公開第２００５／１１５４５１号パンフレット、米国特許第７，６１８，６３２号明細書及び国際公開第２０１１／０５１７２６号パンフレットに記載される抗ＧＩＴＲ抗体など、例えば、ＧＩＴＲ融合タンパク質及び抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、二価抗ＧＩＴＲ抗体）を含む。

一部の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、ＧＩＴＲアゴニスト、例えば、本明細書に記載のＧＩＴＲアゴニストと組み合わせて対象に投与する。一部の実施形態において、ＧＩＴＲアゴニストを、ＣＡＲ発現細胞の前に投与する。例えば、一部の実施形態において、ＧＩＴＲアゴニストを細胞のアフェレーシス前に投与できる。一部の実施形態において、対象は、ＣＬＬを有する。

本明細書に記載の方法は、医薬組成物中にＣＡＲ発現細胞を製剤化することをさらに含み得る。医薬組成物は、本明細書に記載のように、ＣＡＲ発現細胞、例えば複数のＣＡＲ発現細胞を１つ以上の薬学的に又は生理学的に許容される担体、希釈剤又は添加物と組み合わせて含む。このような組成物は、中性緩衝化食塩水、リン酸緩衝化食塩水などの緩衝液；グルコース、マンノース、スクロース又はデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；グリシンなどのポリペプチド又はアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡ又はグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；及び防腐剤を含み得る。組成物は、例えば静脈内投与のために、製剤化することができる。

一部の実施形態において、医薬組成物は、例えば、エンドトキシン、マイコプラズマ、複製可能レンチウイルス（ＲＣＬ）、ｐ２４、ＶＳＶ－Ｇ核酸、ＨＩＶｇａｇ、残留抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８被覆ビーズ、マウス抗体、貯留ヒト血清、ウシ血清アルブミン、ウシ血清、培養培地要素、ベクターパッケージング細胞又はプラスミド成分、細菌及び真菌からなる群から選択される汚染物が実質的になく、例えば検出可能なレベルで存在しない。一部の実施形態において、細菌は、アルガリゲネス・フェカリス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｆａｅｃａｌｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ）、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）、シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）、ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａ）及びストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ａ群からなる群から選択される少なくとも１つである。

「免疫学的に有効量」、「抗癌有効量」、「癌阻害有効量」又は「治療量」が示されるとき、組成物の投与すべき正確な量は、年齢、体重、腫瘍サイズ、感染の程度又は転移及び患者（対象）の状態の個体差を考慮して医師が決定できる。本明細書に記載の免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を含む医薬組成物を、１０^４～１０^９細胞／ｋｇ体重、いくつかの例において１０^５～１０^６細胞／ｋｇ体重の範囲の用量（これらの範囲内の全整数値を含む）で投与し得ると一般に述べることができる。Ｔ細胞組成物をまたこの用量で複数回投与し得る。細胞を、免疫療法において一般に知られる注入技術を使用して投与できる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇｅｔａｌ．，ＮｅｗＥｎｇ．Ｊ．ｏｆＭｅｄ．３１９：１６７６，１９８８を参照されたい）。

例示的なＢＣＭＡ／ＣＤ１９ＣＡＲＴ医薬組成物
一部の実施形態において、ＢＣＭＡ／ＣＤ１９二重ＣＡＲＴ細胞組成物は、２つのユニークなベクターを用いた共形質導入により生産される。従って、一部の実施形態では、細胞組成物は、異種細胞集団を含む。一部の実施形態では、異種細胞組成物は、未形質導入Ｔ細胞、モノＢＣＭＡ特異的ＣＡＲＴ細胞、モノＣＤ１９特異的ＣＡＲＴ細胞並びにＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ分子及びＣＤ１９特異的ＣＡＲ分子の両方を発現する二重ＣＡＲＴ細胞を含む。これらの異なる細胞集団は、対象における疾患の処置に関して、異なる活性を呈示し得る。

理論に縛られることは意図しないが、例えば、多発性骨髄腫の処置に関連して、ＢＣＭＡ特異的ＣＡＲＴ細胞の活性化は、患者の抗腫瘍応答における主な要因であり得るのに対し、ＣＤ１９特異的活性は、優勢ではないＣＤ１９陽性腫瘍細胞の排除に特定の役割を果たし得る。

一部の実施形態において、細胞組成物を評価して、４つの異なる細胞集団の相対パーセンテージを算定し、例えば、モノＣＤ１９特異的ＣＡＲ細胞よりも高いパーセンテージのＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ細胞（例えば、モノＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ細胞及びＢＣＭＡ／ＣＤ１９二重ＣＡＲ細胞）を含有する細胞組成物を選択することができる。

一部の実施形態において、細胞は、
（ａ）抗ＢＣＭＡＣＡＲを含むが、抗ＣＤ１９ＣＡＲを含まない細胞の第１集団；
（ｂ）抗ＣＤ１９ＣＡＲを含むが、抗ＢＣＭＡＣＡＲを含まない細胞の第２集団；及び
（ｃ）抗ＢＣＭＡＣＡＲと抗ＣＤ１９ＣＡＲとの両方を含む細胞の第３集団
を含む。

一部の実施形態では、細胞組成物は、ＣＡＲを含まない細胞の第４集団をさらに含む。一部の実施形態では、細胞組成物は、ＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ細胞の数（例えば、モノＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ細胞及びＢＣＭＡ／ＣＤ１９二重ＣＡＲ細胞の総数）の１１０％以下（例えば、約１０５％、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％又はそれ未満以下）のモノＣＤ１９特異的ＣＡＲ細胞の集団を含む。一部の実施形態では、細胞組成物は、ＢＣＭＡ特異的ＣＡＲＴ細胞の数の約４５％～約５０％（例えば、約４７％）を含むモノＣＤ１９ＣＡＲ＋細胞の集団を含む。一部の実施形態では、細胞組成物は、ＢＣＭＡ特異的ＣＡＲＴ細胞の数の約６０％～約６５％（例えば、約６３％）を含むモノＣＤ１９ＣＡＲ＋細胞の集団を含む。一部の実施形態では、細胞組成物は、ＢＣＭＡ特異的ＣＡＲＴ細胞の数の約５０％～約５５％（例えば、約５３％）を含むモノＣＤ１９ＣＡＲ＋細胞の集団を含む。一部の実施形態では、細胞組成物は、ＢＣＭＡ特異的ＣＡＲＴ細胞の数の約８２％を含むモノＣＤ１９ＣＡＲ＋細胞の集団を含む。

一部の実施形態では、細胞組成物を評価して、十分な投与を可能にするＣＡＲ陽性生存細胞のパーセンテージを算定することができる。従って、一部の実施形態において、細胞組成物は、細胞組成物中の生存細胞の総数の５％以上（例えば、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％若しくは１００％以上）であるＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ細胞（例えば、モノＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ細胞及びＢＣＭＡ／ＣＤ１９二重ＣＡＲ細胞の総数）の集団を含む。

一部の実施形態では、ＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ細胞は、ＢＣＭＡ特異的ＣＡＲＴ細胞である。一部の実施形態では、モノＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ細胞は、モノＢＣＭＡ特異的ＣＡＲＴ細胞である。一部の実施形態では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ細胞は、ＣＤ１９特異的ＣＡＲＴ細胞である。一部の実施形態では、モノＣＤ１９特異的ＣＡＲ細胞は、モノＣＤ１９特異的ＣＡＲＴ細胞である。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ／ＣＤ１９二重ＣＡＲ細胞は、ＢＣＭＡ／ＣＤ１９二重ＣＡＲＴ細胞である。

用量設定
一部の実施形態において、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＤ１９ＣＡＲ細胞）の用量は、約１×１０^６、１．１×１０^６、２×１０^６、３．６×１０^６、５×１０^６、１×１０^７、１．８×１０^７、２×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、２×１０^８又は５×１０^８細胞／ｋｇを含む。一部の実施形態において、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＤ１９ＣＡＲ細胞）の用量は、少なくとも約１×１０^６、１．１×１０^６、２×１０^６、３．６×１０^６、５×１０^６、１×１０^７、１．８×１０^７、２×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、２×１０^８又は５×１０^８細胞／ｋｇを含む。一部の実施形態において、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＤ１９ＣＡＲ細胞）の用量は、最大約１×１０^６、１．１×１０^６、２×１０^６、３．６×１０^６、５×１０^６、１×１０^７、１．８×１０^７、２×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、２×１０^８又は５×１０^８細胞／ｋｇを含む。一部の実施形態において、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＤ１９ＣＡＲ細胞）の用量は、約１．１×１０^６～１．８×１０^７細胞／ｋｇを含む。一部の実施形態において、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＤ１９ＣＡＲ細胞）の用量は、約１×１０^７、２×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、２×１０^８、５×１０^８、１×１０^９、２×１０^９又は５×１０^９細胞を含む。一部の実施形態において、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＤ１９ＣＡＲ細胞）の用量は、少なくとも約１×１０^７、２×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、２×１０^８、５×１０^８、１×１０^９、２×１０^９又は５×１０^９細胞を含む。一部の実施形態において、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＤ１９ＣＡＲ細胞）の用量は、最大約１×１０^７、２×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、２×１０^８、５×１０^８、１×１０^９、２×１０^９又は５×１０^９細胞を含む。

一部の実施形態において、活性化された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を対象に投与し、その後、血液を再採取し（又はアフェレーシスを実施し）、そこから免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を活性化し、これらの活性化及び増殖した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を患者に再注入することが望ましい場合がある。この過程を数週間毎に複数回実施できる。一部の実施形態において、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、１０ｃｃ～４００ｃｃの採血した血液から活性化することができる。一部の実施形態において、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ又は１００ｃｃの採血した血液から活性化される。

対象組成物の投与は、任意の簡便な方法により実施し得る。本明細書に記載の組成物は、経動脈的に、皮下に、皮内に、腫瘍内に、節内に、髄内に、筋肉内に、静脈内（ｉ．ｖ．）注射により又は腹腔内に、例えば、皮内又は皮下注射により患者に投与し得る。免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の組成物を、腫瘍、リンパ節又は感染部位に直接注射し得る。

Ｔ細胞枯渇
一部の実施形態において、本明細書に開示される方法は、細胞（例えば、本明細書に記載されるような免疫エフェクター細胞）での処置後にＴ細胞枯渇剤を投与すること、それにより、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９ＣＡＲ発現細胞）を減少させる（例えば、枯渇させる）ことをさらに含む。そのようなＴ細胞枯渇剤は、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９ＣＡＲ発現細胞）を効果的に枯渇させて、毒性を緩和するために使用することができる。一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に記載の方法に従って製造され、例えば、本明細書に記載の方法に従ってアッセイされた（例えば、トランスフェクション若しくは形質導入の前又は後）。

一部の実施形態において、Ｔ細胞枯渇剤は、本明細書に記載の細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団の投与から１、２、３、４又は５週間後に投与される。

一部の実施形態において、Ｔ細胞枯渇剤は、例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）及び／又は補体誘導性細胞死を誘発することにより、ＣＡＲ発現細胞を枯渇させる薬剤である。例えば、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、細胞死、例えば、ＡＤＣＣ又は補体誘導性細胞死を誘発することができる分子により認識される抗原（例えば、標的抗原）も発現し得る。例えば、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、抗体又は抗体フラグメントによりターゲティングされ得る標的タンパク質（例えば、受容体）も発現し得る。このような標的タンパク質の例として、限定されないが、ＥｐＣＡＭ、ＶＥＧＦＲ、インテグリン（例えば、インテグリンανβ３、α４、αΙ３／４β３、α４β７、α５β１、ανβ３、αν）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバー（例えば、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２）、ＰＤＧＦ受容体、インターフェロン受容体、葉酸受容体、ＧＰＮＭＢ、ＩＣＡＭ－１、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＥＡ、ＣＡ－１２５、ＭＵＣ１、ＴＡＧ－７２、ＩＬ－６受容体、５Ｔ４、ＧＤ２、ＧＤ３、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ１１、ＣＤ１１ａ／ＬＦＡ－１、ＣＤ１５、ＣＤ１８／ＩＴＧＢ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３／ｌｇＥ受容体、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２５、ＣＤ１４７／ベイシジン、ＣＤ１５２／ＣＴＬＡ－４、ＣＤ１５４／ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１９５／ＣＣＲ５、ＣＤ３１９／ＳＬＡＭＦ７及びＥＧＦＲ並びにそれらの切断バージョン（例えば、１つ以上の細胞外エピトープを保持するが、細胞質ドメイン内の１つ以上の領域を欠くバージョン）が挙げられる。

一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＡＲ及び標的タンパク質を共発現し、例えば、天然で標的タンパク質を発現するか、又は標的タンパク質を発現するように操作される。例えば、細胞、例えば、免疫エフェクター細胞の集団は、ＣＡＲ核酸（例えば、本明細書に記載されるようなＣＡＲ核酸）及び標的タンパク質をコードする核酸を含有する核酸（例えば、ベクター）を含み得る。

一部の実施形態において、Ｔ細胞枯渇剤は、ＣＤ５２阻害剤、例えば、抗ＣＤ５２抗体分子、例えば、アレムツズマブである。

他の実施形態において、細胞、例えば、免疫エフェクター細胞の集団は、本明細書に記載されるようなＣＡＲ分子（例えば、ＣＤ１９ＣＡＲ）及びＴ細胞枯渇剤によって認識される標的タンパク質を発現する。一部の実施形態において、標的タンパク質はＣＤ２０である。標的タンパク質がＣＤ２０である実施形態において、Ｔ細胞枯渇剤は抗ＣＤ２０抗体、例えば、リツキシマブである。

前述の方法のいずれかのさらに別の実施形態において、本方法は、細胞、例えば造血幹細胞又は骨髄を哺乳動物に移植することをさらに含む。

一部の実施形態において、本発明は、細胞移植前に哺乳動物をコンディショニングする方法を特徴とする。この方法は、哺乳動物に、ＣＡＲ核酸又はポリペプチド、例えば、ＣＤ１９ＣＡＲ核酸又はポリペプチドを含む、有効量の細胞を投与することを含む。一部の実施形態において、細胞移植は、幹細胞移植、例えば、造血幹細胞移植又は骨髄移植である。他の実施形態において、細胞移植前に対象をコンディショニングすることは、対象における標的発現細胞、例えば、ＣＤ１９発現正常細胞又はＣＤ１９発現癌細胞の数を減少させることを含む。

投薬レジメン
一部の実施形態では、１用量の生存ＣＡＲ発現細胞（例えば、生存ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０若しくはＣＤ２２ＣＡＲ発現細胞）又は前記細胞を含む医薬組成物は、約１×１０^６～約１×１０^８個（例えば、約２×１０^６～約５×１０^７、約５×１０^６～約２×１０^７、約１×１０^６～約１×１０^７、約１×１０^７～約１×１０^８、約１×１０^６～約３×１０^６、約２×１０^６～約４×１０^６、約３×１０^６～約５×１０^６、約４×１０^６～約６×１０^６、約５×１０^６～約７×１０^６、約６×１０^６～約８×１０^６、約７×１０^６～約９×１０^６、約８×１０^６～約１×１０^７、約９×１０^６～約２×１０^７、約１×１０^７～約３×１０^７、約２×１０^７～約４×１０^７、約３×１０^７～約５×１０^７、約４×１０^７～約６×１０^７、約５×１０^７～約７×１０^７、約６×１０^７～約８×１０^７、約７×１０^７～約９×１０^７、約８×１０^７～約１×１０^８、約１×１０^６、約２×１０^６、約３×１０^６、約４×１０^６、約５×１０^６、約６×１０^６、約７×１０^６、約８×１０^６、約９×１０^６、約１×１０^７、約２×１０^７、約３×１０^７、約４×１０^７、約５×１０^７、約６×１０^７、約７×１０^７、約８×１０^７、約９×１０^７又は約１×１０^８個）のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）を含む。一部の実施形態では、１用量の生存ＣＡＲ発現細胞（例えば、生存ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０又はＣＤ２２ＣＡＲ発現細胞）は、約０．５×１０^６個の生存ＣＡＲ発現細胞～約１．２５×１０^９個の生存ＣＡＲ発現細胞（例えば、０．５×１０^６個の生存ＣＡＲ発現細胞～１．２５×１０^９個の生存ＣＡＲ発現細胞）を含む。一部の実施形態では、１用量の生存ＣＡＲ発現細胞（例えば、生存ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０又はＣＤ２２ＣＡＲ発現細胞）は、約１×１０^６、約２．５×１０^６、約５×１０^６、約１．２５×１０^７、約２．５×１０^７、約５×１０^７、約５．７５×１０^７又は約８×１０^７個の生存ＣＡＲ発現細胞を含む。

一部の実施形態では、用量の計算は、本明細書に記載されるように、形質導入（第３日（７２ｈ））後の第４日（９６ｈ）にフローサイトメトリーによって測定される、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ＋生存Ｔ細胞（例えば、単一陽性ＢＣＭＡＣＡＲ細胞及び二重陽性ＢＣＭＡ＋／ＣＤ１９＋ＣＡＲ細胞）の数に基づいて行う。一部の実施形態では、生存ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ／ＣＤ１９二重ＣＡＲＴ細胞産物）の１用量は、約５×１０^６～約２×１０^７個のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）を含む。

一部の実施形態では、１用量の生存ＣＡＲ発現細胞（例えば、生存ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０若しくはＣＤ２２ＣＡＲ発現細胞）又は前記細胞を含む医薬組成物は、１回以上（例えば、２、３、４回以上）の用量で対象に投与される。一部の実施形態では、細胞又は医薬組成物は、２回用量で対象に投与される。一部の実施形態では、１回以上の用量は、１回目用量及び２回目用量を含み、１回目用量中のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）の数は、２回目用量中のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）の数を超えるか、それと同じであるか又はそれを下回る。

一部の実施形態では、１回以上の用量は、１回目用量及び２回目用量を含み、その場合、
（ａ）１回目用量は、約１×１０^６～約１×１０^７個（例えば、約２×１０^６～約８×１０^６、約４×１０^６～約６×１０^６、約１×１０^６～約５×１０^６、約５×１０^６～約１×１０^７、約１×１０^６～約３×１０^６、約２×１０^６～約４×１０^６、約３×１０^６～約５×１０^６、約４×１０^６～約６×１０^６、約５×１０^６～約７×１０^６、約６×１０^６～約８×１０^６、約７×１０^６～約９×１０^６、約８×１０^６～約１×１０^７、約１×１０^６、約２×１０^６、約３×１０^６、約４×１０^６、約５×１０^６、約６×１０^６、約７×１０^６、約８×１０^６、約９×１０^６若しくは約１×１０^７個）の生存ＣＡＲ陽性細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）を含み；
（ｂ）２回目用量は、約１×１０^７～約１×１０^８個（例えば、約２×１０^７～約８×１０^７、約４×１０^７～約６×１０^７、約１×１０^７～約５×１０^７、約５×１０^７～約１×１０^８、約１×１０^７～約３×１０^７、約２×１０^７～約４×１０^７、約３×１０^７～約５×１０^７、約４×１０^７～約６×１０^７、約５×１０^７～約７×１０^７、約６×１０^７～約８×１０^７、約７×１０^７～約９×１０^７、約８×１０^７～約１×１０^８、約１×１０^７、約２×１０^７、約３×１０^７、約４×１０^７、約５×１０^７、約６×１０^７、約７×１０^７、約８×１０^７、約９×１０^７若しくは約１×１０^８個）のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）を含み；
（ｃ）１回目用量中のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）の数は、２回目用量中のＣＡＲ陽性（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）の数の１／Ｘ（ここで、Ｘは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０又は１００である）以下であり；及び／又は
（ｄ）１回目用量中のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）の数は、２回目用量中のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）の数の約１％～約１００％（例えば、約１０％～約９０％、約２０％～約８０％、約３０％～約７０％、約４０％～約６０％、約１０％～約５０％、約５０％～約９０％、約１０％～約３０％、約２０％～約４０％、約３０％～約５０％、約５０％～約７０％、約６０％～約８０％若しくは約７０％～約９０％）である。

一部の実施形態において、１回目用量は、約５×１０^６個の生存ＣＡＲ陽性細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）を含む。一部の実施形態において、２回目用量は、約１×１０^７～約２×１０^７個の生存ＣＡＲ陽性細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）を含む。

一部の実施形態において、ＣＡＲ陽性細胞の用量は、後の投与で出発用量から増加され得る。例えば、患者は、約１×１０^６～約１×１０^７個（例えば、約５×１０^６個）の生存ＣＡＲ陽性細胞の出発用量を受けることができ、また、約１×１０^７～約１×１０^８個（例えば、約１×１０^７～約２×１０^７個）のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）の２回目用量を受けることができる。

患者の選択
対象を処置する方法又は本明細書に開示される使用のための組成物のいずれかの一部の実施形態では、対象は、癌、例えば血液癌を有する。一部の実施形態では、癌は、リンパ性白血病（ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、多発性骨髄腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（ＢＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（ＴＡＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性炎症を伴うＤＬＢＣＬ、慢性骨髄性白血病、骨髄増殖性腫瘍、濾胞性リンパ腫、小児性濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型若しくは大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫（粘膜関連リンパ組織型節外性濾胞辺縁帯リンパ腫）、辺縁帯リンパ腫、骨髄形成異常、骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、脾辺縁帯リンパ腫、脾リンパ腫／白血病、脾臓びまん性赤脾髄小細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ヘアリー細胞白血病－変異型、リンパ形質細胞性リンパ腫、Ｈ鎖病、プラズマ細胞骨髄腫、孤立性骨形質細胞腫、骨外性形質細胞腫、節性辺縁帯リンパ腫、小児性節性辺縁帯リンパ腫、原発性皮膚濾胞中心リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、原発性縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ＋大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性キャッスルマン病に発生する大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）又は分類不能なリンパ腫から選択される。一部の実施形態では、癌は、再発及び／又は難治性癌である。

対象を処置する方法又は本明細書に開示される使用のための組成物のいずれかの一部の実施形態では、対象は、ＣＬＬ又はＳＬＬを有する。一部の実施形態では、ＣＬＬ又はＳＬＬを有する対象は、以前、ＢＴＫ阻害剤療法、例えばイブルチニブを少なくとも１～１２ヶ月、例えば６カ月にわたって投与されている。一部の実施形態では、ＢＴＫ阻害剤療法、例えばイブルチニブ療法は、第二選択療法である。一部の実施形態では、対象は、部分的応答を有したか、又はＢＴＫ阻害剤療法に対する応答が安定した疾患を有した。一部の実施形態では、対象は、ＢＴＫ阻害剤療法に対して応答しなかった。一部の実施形態では、対象は、耐性を発生し、例えばイブルチニブ耐性突然変異を発生した。一部の実施形態では、イブルチニブ耐性突然変異は、ＢＴＫをコードする遺伝子及び／又はＰＬＣｇ２をコードする遺伝子の突然変異を含む。一部の実施形態では、対象は、成人、例えば少なくとも１８歳である。

対象を処置する方法又は本明細書に開示される使用のための組成物のいずれかの一部の実施形態では、対象は、ＤＬＢＣＬ、例えば再発及び／又は難治性ＤＬＢＣＬを有する。一部の実施形態では、ＤＬＢＣＬ、例えば再発及び／又は難治性ＤＬＢＣＬを有する対象は、以前、少なくとも２つの選択化学療法、例えば抗ＣＤ２０療法及び／又はアントラリンに基づく化学療法を実施されている。一部の実施形態では、対象は、以前、幹細胞療法、例えば自己幹細胞療法を受けており、前記幹細胞療法に対して応答しなかった。一部の実施形態では、対象は、幹細胞療法、例えば自己幹細胞療法に適格ではない。一部の実施形態では、対象は、成人、例えば少なくとも１８歳である。

治療への適用
ＢＣＭＡ関連疾患及び／又は障害
一態様において、本発明は、ＢＣＭＡ発現に関連する疾患を処置する方法を提供する。一態様において、本発明は、腫瘍の一部がＢＣＭＡ陰性であり、且つ腫瘍の一部がＢＣＭＡ陽性である疾患を処置する方法を提供する。例えば、本発明のＣＡＲは、ＢＣＭＡの発現増大に関連する疾患の処置を受けたことがある対象を処置するのに有用であり、その場合、ＢＣＭＡの発現増大に関連する疾患の処置を受けたことがある対象は、ＢＣＭＡの発現増大に関連する疾患を呈示する。いくつかの実施形態において、本発明のＣＡＲは、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を受けたことがある対象を処置するに有用であり、その場合、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患の処置を受けたことがある対象は、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を呈示する。

一実施形態では、本発明は、ＢＣＭＡが正常細胞及び癌細胞の両方に発現されるが、正常細胞ではより低いレベルで発現される疾患を処置する方法を提供する。一実施形態では、本方法は、ＢＣＭＡＣＡＲがＢＣＭＡを発現する癌細胞に結合して、それらを殺傷することを可能にする親和性で結合するが、その場合、例えば、本明細書に記載のアッセイにより決定して、ＢＣＭＡを発現する正常細胞の３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％以下が殺傷されるＣＡＲを選択するステップをさらに含む。例えば、Ｃｒ５１ＣＴＬに基づくフローサイトメトリーなどの殺傷アッセイを使用することができる。一実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲは、標的抗原に対して、１０^－４Ｍ～１０^－８Ｍ、例えば、１０^－５Ｍ～１０^－７Ｍ、例えば、１０^－６Ｍ～１０^－７Ｍの結合親和性ＫＤを有する抗原結合ドメインを有する。一実施形態では、ＢＣＭＡ抗原結合ドメインは、参照抗体、例えば、本明細書に記載の抗体よりも少なくとも５倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍又は１，０００倍低い結合親和性を有する。

一態様において、本発明は、哺乳動物免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞における発現用のプロモーターと作動可能に連結されたＢＣＭＡＣＡＲを含むベクターに関する。一態様において、本発明は、ＢＣＭＡ発現腫瘍の処置に使用するための、ＢＣＭＡＣＡＲを発現する組換え免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞を提供し、ここで、ＢＣＭＡＣＡＲを発現する組換え免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、ＢＣＭＡＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲＴ細胞又はＢＣＭＡＣＡＲ発現ＮＫ細胞）と呼ばれる。一態様において、ＢＣＭＡＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲＴ細胞又はＢＣＭＡＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、腫瘍細胞を、その表面に発現された本発明の少なくとも１つのＢＣＭＡＣＡＲと接触させ、それにより、ＢＣＭＡＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲＴ細胞又はＢＣＭＡＣＡＲ発現ＮＫ細胞）が、腫瘍細胞をターゲティングして、腫瘍の増殖が阻害されるようにすることができる。

一態様において、本発明は、ＢＣＭＡ発現腫瘍細胞の増殖を阻害する方法に関し、これは、ＢＣＭＡＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲＴ又はＢＣＭＡＣＡＲ発現ＮＫ細胞）が、抗原に応答して活性化されて、癌細胞をターゲティングするように、本発明のＢＣＭＡＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲＴ又はＢＣＭＡＣＡＲ発現ＮＫ細胞）と腫瘍細胞を接触させるステップを含み、腫瘍の増殖が阻害される。

一態様において、本発明は、対象の癌を処置する方法に関する。本方法は、本発明のＢＣＭＡＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲＴ又はＢＣＭＡＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を対象に投与し、それにより対象の癌を処置するステップを含む。本発明のＢＣＭＡＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲＴ又はＢＣＭＡＣＡＲ発現ＮＫ細胞）により処置が可能な癌の一例は、ＢＣＭＡの発現に関連する癌である。

本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）が、遺伝的に修飾され、且つＢＣＭＡＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲＴ又はＢＣＭＡＣＡＲ発現ＮＫ細胞）が、それを必要とするレシピエントに注入される、１タイプの細胞療法を含む。注入される細胞は、レシピエント中の腫瘍細胞を殺傷することができる。抗体療法とは違い、ＣＡＲ修飾細胞、例えば、Ｔ細胞若しくはＮＫ細胞は、インビボで複製することができ、それにより持続的な腫瘍制御を達成し得る長期持続を可能にする。様々な態様において、患者に投与された細胞（例えば、Ｔ細胞若しくはＮＫ細胞）又はその子孫は、患者への細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の投与後少なくとも４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、２年、３年、４年若しくは５年にわたって持続する。

本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を一過性発現するように、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）が、例えば、インビトロ転写ＲＮＡにより修飾され、且つ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）が、それを必要とするレシピエントに注入される、１タイプの細胞療法も含む。注入される細胞は、レシピエント中の腫瘍細胞を殺傷することができる。従って、様々な態様において、患者に投与された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、患者への免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の投与後１ヶ月未満、例えば３週間、２週間、１週間にわたって存在する。

理論に縛られることは意図しないが、ＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）により誘発される抗腫瘍免疫応答は、能動若しくは受動免疫であり得るか、又は代わりに直接対間接免疫応答によるものであり得ると考えられる。一態様において、ＣＡＲ形質導入免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、ＢＣＭＡを発現するヒト癌細胞に応答して特異的炎症性サイトカイン分泌及び強力な細胞溶解反応を呈示し、可溶性ＢＣＭＡ阻害に抵抗し、バイスタンダー殺傷を媒介すると共に、定着したヒト腫瘍の退縮を媒介する。例えば、ＢＣＭＡ発現腫瘍の不均質領域内の低抗原腫瘍細胞は、隣接する抗原陽性癌細胞に対して以前反応したＢＣＭＡ再指向免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）による間接的破壊を被りやすくなり得る。

一態様において、本発明の完全ヒトＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、エクスビボ免疫化及び／又は哺乳動物におけるインビボ療法のためのワクチンの１タイプであり得る。一態様では、哺乳動物は、ヒトである。

エクスビボ免疫化に関して、下記事項の少なくとも１つは、哺乳動物への細胞の投与前にインビトロで行われる：ｉ）細胞の増殖、ｉｉ）ＣＡＲをコードする核酸の細胞への導入又はｉｉｉ）細胞の凍結保存。

エクスビボ手順は、当技術分野で公知であり、以下により詳細に論じられる。手短には、哺乳動物（例えば、ヒト）から細胞を単離し、本明細書に開示されるＣＡＲを発現するベクターで遺伝子修飾（即ち、インビトロで形質導入又はトランスフェクト）する。治療利益を付与するために、ＣＡＲ修飾細胞を哺乳動物レシピエントに投与することができる。哺乳動物レシピエントは、ヒトであり、ＣＡＲ修飾細胞は、レシピエントに関して、自己由来であり得る。代わりに、細胞は、レシピエントに関して、同種異系、同種又は異種であり得る。

造血幹細胞及び前駆細胞のエクスビボ増殖の手順は、本明細書に参照により組み込まれる米国特許第５，１９９，９４２号明細書に記載されており、これを本発明の細胞に適用することができる。他の好適な方法は、当技術分野で公知であり、本発明は、いずれか特定のエクスビボ細胞増殖に限定されない。手短には、Ｔ細胞のエクスビボ培養及び増殖は、以下を含む：（１）末梢血採取物又は骨髄外植片からの哺乳動物由来のＣＤ３４＋造血幹細胞及び前駆細胞を収集するステップ；及び（２）こうした細胞をエクスビボで増殖するステップ。米国特許第５，１９９，９４２号明細書に記載されている細胞増殖因子に加えて、ｆｌｔ３－Ｌ、ＩＬ－１、ＩＬ－３及びｃ－ｋｉｔリガンドなどの他の因子を細胞の培養及び増殖に使用することもできる。

エクスビボ免疫に関して細胞ワクチンの使用に加えて、本発明は、患者の抗原に対する免疫応答を誘発する目的でのインビボ免疫化のための組成物及び方法も提供する。

一般に、本明細書に記載されるように活性化及び増殖された細胞は、免疫無防備状態にある個体に発生する疾患の処置及び予防に使用することができる。例えば、本発明のＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）をＢＣＭＡの発現に関連する疾患、障害及び病態の処置に使用する。いくつかの態様では、本発明の細胞を、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患、障害及び病態を発生するリスクがある患者の処置に使用する。このように、本発明は、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患、障害及び病態の処置又は予防方法を提供し、これは、治療有効量の本発明のＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に投与するステップを含む。

一態様では、癌若しくは悪性疾患などの増殖性疾患又は骨髄形成異常、骨髄異形成症候群若しくは前白血病などの前癌状態を処置するために、本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を用いることができる。一態様では、癌は、血液癌である。血液癌病態は、白血病並びに血液、骨髄及びリンパ系を冒す悪性リンパ増殖性疾患などの癌のタイプである。一態様では、血液癌は、白血病又は血液学的癌である。ＢＣＭＡに関連する疾患又は障害の１例は、多発性骨髄腫（ＭＭとしても知られる）である（Ｃｌａｕｄｉｏｅｔａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２００２，１００（６）：２１７５－８６；及びＮｏｖａｋｅｔａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．００４，０３（２）：６８９－９４を参照されたい）。プラズマ細胞骨髄腫又はケーラー病（Ｋａｈｌｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅ）としても知られる多発性骨髄腫は、骨髄中の異常又は悪性血漿Ｂ細胞の蓄積を特徴とする癌である。多くの場合、癌細胞は、隣接する骨に侵入し、骨格構造を破壊し、その結果、骨痛及び骨折を引き起こす。骨髄腫のほとんどのケースは、パラプロテイン（また、Ｍタンパク質又は骨髄腫タンパク質としても知られる）の産生も特徴とし、これは、悪性プラズマ細胞のクローン増殖により過剰に産生される異常な免疫グロブリンである。国際骨髄腫ワーキンググループ（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＭｙｅｌｏｍａＷｏｒｋｉｎｇＧｒｏｕｐ）（ＩＭＷＧ）（Ｋｙｌｅｅｔａｌ．（２００９），Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２３：３－９を参照）の診断基準によれば、３０ｇ／Ｌ超の血清中パラプロテイン濃度が多発性骨髄腫の徴候である。多発性骨髄腫の他の症状又は兆候としては、腎機能低下又は腎不全、骨病変、貧血、高カルシウム血症及び神経学的症状が挙げられる。

他のプラズマ細胞増殖障害から多発性骨髄腫を識別する基準は、国際骨髄腫ワーキンググループ（Ｋｙｌｅｅｔａｌ．（２００９），Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２３：３－９を参照）により確立されている。下記基準の３つ全てを満たさなければならない：
－クローン骨髄腫プラズマ細胞≧１０％
－血清及び／又は尿モノクローナルタンパク質の存在（真性非分泌型多発性骨髄腫患者の場合を除く）
－基礎的なプラズマ細胞増殖障害に起因する末端器官障害のエビデンス、具体的には、下記のもの：
・高カルシウム血症：血清カルシウム≧１１．５ｍｇ／１００ｍｌ
・腎不全：血清クレアチニン≧１．７３ｍｍｏｌ／ｌ
・貧血：ヘモグロビン値が、正常の下限より＞２ｇ／１００ｍｌ低いか、又はヘモグロビン値＜１０ｇ／１００ｍｌである、正色素性、正赤血球性。
・骨病変：溶解性病変、重症骨粗鬆症又は病的骨折。

本明細書に記載される組成物及び方法により処置することができる他のプラズマ細胞増殖障害として、限定されないが、無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無症候性骨髄腫）、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス並びにＰＯＥＭＳ症候群（クロウ・深瀬症候群、高月病及びＰＥＰ症候群としても知られている）が挙げられる。

多発性骨髄腫の病期分類には２つの病期分類システムが使用される：国際病期分類システム（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＳｔａｇｉｎｇＳｙｓｔｅｍ）（ＩＳＳ）（Ｇｒｅｉｐｐｅｔａｌ．（２００５），Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２３（１５）：３４１２－３４２０を参照）及びＤｕｒｉｅ－Ｓａｌｍｏｎ病期分類システム（ＤＳＳ）（Ｄｕｒｉｅｅｔａｌ．（１９７５），Ｃａｎｃｅｒ３６（３）：８４２－８５４を参照）。

多発性骨髄腫の第３の病期分類システムは、改訂版国際病期分類システム（ＲｅｖｉｓｅｄＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＳｔａｇｉｎｇＳｙｓｔｅｍ）（Ｒ－ＩＳＳ）（参照により本明細書に組み込まれる、ＰａｌｕｍｂｏＡ，Ａｖｅｔ－ＬｏｉｓｅａｕＨ，ＯｌｉｖａＳ，ｅｔａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆｃｌｉｎｉｃａｌｏｎｃｏｌｏｇｙ：ｏｆｆｉｃｉａｌｊｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＳｏｃｉｅｔｙｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙ２０１５；３３：２８６３－９を参照されたい）。Ｒ－ＩＳＳステージＩは、ＩＳＳステージＩ（血清β２－ミクログロブリン濃度＜３．５ｍｇ／Ｌ及び血清アルブミン濃度≧３．５ｇ／ｄＬ）、高リスクＣＡ［ｄｅｌ（１７ｐ）及び／又はｔ（４；１４）及び／又はｔ（１４；１６）］なし並びに正常ＬＤＨレベル（正常範囲の上限を下回る）を含む。Ｒ－ＩＳＳステージＩＩＩは、ＩＳＳステージＩＩＩ（血清β２－ミクログロブリン濃度＞５．５ｍｇ／Ｌ）及び高リスクＣＡ又は高ＬＤＨレベルを含む。Ｒ－ＩＳＳステージＩＩは、考えられる他の組み合わせを含む。

患者の応答は、ＫｕｍａｒＳ，ＰａｉｖａＢ，ＡｎｄｅｒｓｏｎＫＣ，ｅｔａｌ．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＭｙｅｌｏｍａＷｏｒｋｉｎｇＧｒｏｕｐｃｏｎｓｅｎｓｕｓｃｒｉｔｅｒｉａｆｏｒｒｅｓｐｏｎｓｅａｎｄｍｉｎｉｍａｌｒｅｓｉｄｕａｌｄｉｓｅａｓｅａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｉｎｍｕｌｔｉｐｌｅｍｙｅｌｏｍａ．ＴｈｅＬａｎｃｅｔＯｎｃｏｌｏｇｙ；１７（８）：ｅ３２８－ｅ３４６（参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているように、ＩＭＷＧ２０１６基準に基づいて決定することができる。

多発性骨髄腫及び関連疾患の標準的な処置は、化学療法、幹細胞移植（自家又は同種異系）、放射線療法及び他の薬物療法が挙げられる。よく使用される抗骨髄腫薬としては、アルキル化剤（例えば、ベンダムスチン、シクロホスファミド及びメルファラン）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、コルチコステロイド（例えば、デキサメタゾン及びプレドニゾン）並びに免疫調節薬（例えば、タリドミド及びレナリドミド若しくはレブリミド（登録商標））又はそれらの任意の組み合わせが挙げられる。また、バイホスホネート（ｂｉｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ）薬も、骨量減少を予防するために、標準的な抗ＭＭ治療薬と組み合わせて投与されることが多い。６５～７０歳超の患者は、幹細胞移植の候補となる可能性が低い。いくつかの事例では、最初の移植片に対して応答が最適ではない６０歳未満の患者の場合、二重自家幹細胞移植が選択肢となる。本発明の組成物及び方法は、多発性骨髄腫について現在処方される治療薬のいずれかと組み合わせて投与され得る。

ＢＣＭＡに関連する疾患又は障害の別の例は、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫である（Ｃｈｉｕｅｔａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２００７，１０９（２）：７２９－３９；Ｈｅｅｔａｌ．，ＪＩｍｍｕｎｏｌ．２００４，１７２（５）：３２６８－７９を参照されたい）。

ホジキン病としても知られるホジキンリンパ腫（ＨＬ）は、白血球又はリンパ球に起因するリンパ系の癌である。リンパ腫を含む異常な細胞は、リード－スタンバーグ（Ｒｅｅｄ－Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ）細胞を含む。ホジキンリンパ腫では、癌は１リンパ節から別のリンパ節に伝播する。ホジキンリンパ腫は、リード－スタンバーグ細胞の形態及びリード－スタンバーグ細胞周辺の細胞組成（リンパ節生検により決定して）に基づいて、４つの病理学的サブタイプに細分することができる：結節性硬化型ＨＬ、混合細胞型サブタイプ、リンパ球豊富型又はリンパ球優位型、リンパ球減少型。いくつかのホジキンリンパ腫は、結節型リンパ球優位型ホジキンリンパ腫又は特定不能でもあり得る。ホジキンリンパ腫の症状及び兆候としては、頸部、脇の下若しくは股間のリンパ節の痛みのない腫大、発熱、寝汗、体重減少、疲労、痒み又は腹痛が挙げられる。

非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）は、ホジキンリンパ腫以外のあらゆるタイプのリンパ腫を含む多様な血液癌の群を含む。非ホジキンリンパ腫のサブタイプは、主として、細胞形態、染色体異常及び表面マーカーにより分類される。ＮＨＬサブタイプ（又はＮＨＬ関連癌）としては、Ｂ細胞リンパ腫、例えば、限定されないが、バーキットリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病（Ｂ－ＰＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）（例えば、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫及び縦隔原発Ｂ細胞リンパ腫）、濾胞性リンパ腫（例えば、濾胞中心リンパ腫、小切れ込み核細胞型濾胞性）、ヘアリー細胞白血病、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫（バーキットリンパ腫）、リンパ形質細胞性リンパ腫（ワルデンストレームマクログロブリン血症）、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（例えば、節外辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫若しくは粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫及び脾辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫）、形質細胞腫／骨髄腫、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫（ＰＢ－ＬＢＬ／Ｌ）、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、原発性眼内リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）；並びにＴ細胞リンパ腫、例えば、限定されないが、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病（例えば、くすぶり型、慢性、急性及びリンパ腫性）、血管中心性リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（例えば、菌状息肉症、セザリー症候群など）、節外性ナチュラルキラー／Ｔ細胞リンパ腫（鼻型）、腸症型腸管Ｔ細胞リンパ腫、大顆粒リンパ腫白血球、前駆Ｔ細胞リンパ芽球性リンパ腫／白血病（Ｔ－ＬＢＬ／Ｌ）、Ｔ細胞慢性リンパ球性白血病／前リンパ球性白血病（Ｔ－ＣＬＬ／ＰＬＬ）及び特定不能な末梢性Ｔ細胞リンパ腫が挙げられる。ホジキンリンパ腫の症状及び兆候としては、頸部、脇の下若しくは股間のリンパ節の痛みのない腫大、発熱、寝汗、体重減少、疲労、痒み、腹痛、咳又は胸の痛みが挙げられる。

病期分類は、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫の両方について同じであり、身体内の癌細胞の伝播の程度を指す。ステージＩでは、リンパ腫細胞は、１つのリンパ節群内にある。ステージＩＩでは、リンパ腫細胞は、少なくとも２つのリンパ節群内にあるが、両方の群は、横隔膜の同じ側にあるか、又は組織若しくは器官の１部分内にあり、その器官付近のリンパ節は、横隔膜の同じ側にある。ステージＩＩＩでは、リンパ腫細胞は、横隔膜の両側のリンパ節内、又はこれらのリンパ節群付近の組織若しくは器官の１つの部分内、又は脾臓内にある。ステージＩＶでは、リンパ腫細胞は、少なくとも１つの器官若しくは組織の複数の部分内に見出されるか、又はリンパ腫細胞は、横隔膜の反対側の器官及びリンパ節内にある。ローマ数字の病期分類表示のほかに、Ａ、Ｂ、Ｅ及びＳの文字で病期を表すこともでき、ここで、Ａは、症状のない患者を指し、Ｂは、症状を有する患者を指し、Ｅは、リンパ腫がリンパ系外部の組織に認められる患者を指し、Ｓは、リンパ腫が脾臓内に認められる患者を指す。

ホジキンリンパ腫は、一般に、放射線療法、化学療法又は造血幹細胞移植によって処置される。非ホジキンリンパ腫の最も一般的な治療法は、Ｒ－ＣＨＯＰであり、これは、４つの異なる化学療法薬（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾロン）とリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））からなる。ＮＨＬを処置するために一般に使用される他の療法としては、他の化学療法薬、放射線療法、造血幹細胞移植（自家若しくは同種骨髄移植）又は生物学的療法、例えば、免疫療法が挙げられる。生物学的治療薬の他の例として、限定されないが、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、エプラツマブ（ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（登録商標））及びアレムツズマブ（ＭａｂＣａｍｐａｔｈ（登録商標））が挙げられる。本発明の組成物及び方法は、ホジキンリンパ腫又は非ホジキンリンパ腫について現在処方されている治療薬のいずれかと組み合わせて投与され得る。

ＢＣＭＡ発現は、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）としても知られるワルデンシュトレームマクログロブリン血症（ＷＭ）とも関連している。（Ｅｌｓａｗａｅｔａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２００６，１０７（７）：２８８２－８を参照）。ワルデンシュトレームマクログロブリン血症は、以前多発性骨髄腫に関連すると考えられていたが、近年になって、非ホジキンリンパ腫のサブタイプとして分類された。ＷＭは、制御されないＢ細胞リンパ腫増殖を特徴とし、その結果、貧血及び過剰量のパラプロテイン、即ち免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）の産生が起こり、これは、血液の粘度を高くし、その結果、過粘稠度症候群を引き起こす。ＷＭの他の症状及び兆候としては、熱、寝汗、疲労、貧血、体重減少、リンパ節腫脹又は脾腫、かすみ目、眩暈、鼻血、歯肉出血、異常な打撲傷、腎障害若しくは不全、アミロイドーシス又は末梢神経障害が挙げられる。

ＷＭの標準的な治療は、化学療法からなり、具体的にはリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））を用いる。他の化学療法薬を組み合わせて使用し得、例えばクロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｎｅｏｓａｒ（登録商標））、フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、ビンクリスチン及び／又はタリドミドが挙げられる。また、コルチコステロイド、例えばプレドニゾンを化学療法と組み合わせ投与し得る。プラスマフェレーシス、即ち血漿交換も、血液からパラプロテインを除去することによりいくつかの症状を改善するために、患者の処置全体を通して一般に使用される。いくつかの事例では、幹細胞移植が一部の患者の選択肢となる。

ＢＣＭＡに関連する疾患又は障害の別の例は、脳腫瘍である。具体的には、ＢＣＭＡの発現は、星細胞腫又は膠芽腫に関連している（Ｄｅｓｈａｙｅｓｅｔａｌ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２００４，２３（１７）：３００５－１２，Ｐｅｌｅｋａｎｏｕｅｔａｌ．，ＰＬｏＳＯｎｅ．２０１３，８（１２）：ｅ８３２５０を参照）。星細胞腫は、脳のグリア細胞の１種である星細胞から発生する腫瘍である。膠芽腫（多発性膠芽腫又はＧＢＭとしても知られる）は、星細胞腫の最も悪性形態であり、脳腫瘍の最も進行したステージ（ステージＩＶ）と考えられる。膠芽腫には２つの変異型：巨細胞性膠芽腫と膠肉腫がある。他の星細胞腫としては、若年性毛様細胞性星細胞腫（ＪＰＡ）、線維性星細胞腫、多形黄色星細胞腫（ＰＸＡ）、胚芽異形成性神経上皮腫瘍（ＤＮＥＴ）及び退形成性星細胞腫（ＡＡ）が挙げられる。

膠芽腫又は星細胞腫に関連する症状若しくは兆候としては、脳圧の上昇、頭痛、てんかん発作、記憶喪失、挙動の変化、身体片側の運動又は感覚の消失、言語障害、認知障害、視覚障害、吐気、嘔吐及び腕又は脚の虚弱が挙げられる。

腫瘍の外科的除去（又は切除）は、正常な周辺の脳を損傷せずに又は最小限の損傷で可能な限り多くの神経膠腫を除去するための標準的な処置である。手術後に、残留する癌細胞又は周囲病巣からの疾患再生を抑制し、且つ緩徐にするために、放射線療法及び／又は化学療法も往々にして使用される。放射線療法は、全脳放射線療法（従来の外部照射）、標的三次元原体照射及び標的放射線核種を含む。膠芽腫を処置するために一般に使用される化学療法薬としては、テモゾロミド、ゲフィチニブ又はエルロチニブ及びシスプラチンが挙げられる。また、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））などの血管新生阻害剤も、一般的に放射線療法及び／又は化学療法と併用される。

さらに、神経症状を軽減し、神経機能を改善するために、支持療法もよく使用され、本明細書に記載の癌療法のいずれかと組み合わせて投与される。主な支持療法薬としては、抗痙攣薬及びコルチコステロイドが挙げられる。従って、本発明の組成物及び方法は、膠芽腫又は星細胞腫を処置するための標準的若しくは支持療法のいずれかと組み合わせて使用され得る。

ＢＣＭＡ発現に関連する非癌関連疾患及び障害も、本明細書に記載の組成物及び方法によって処置することができる。ＢＣＭＡ発現に関連する非癌関連疾患及び障害の例として、限定されないが、ウイルス感染症；例えば、ＨＩＶ、真菌感染症、例えば、Ｃ．ネオフォルマンス（Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）；過敏性腸疾患；潰瘍性大腸炎；及び粘膜免疫に関連する障害が挙げられる。

本発明のＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、単独で或いは希釈剤及び／又はＩＬ－２若しくは他のサイトカインなどの他の成分若しくは細胞集団と組み合わせて投与され得る。

本発明は、癌を処置するための組成物及び方法を提供する。一態様において、癌は、血液癌であり、そうしたものとして、白血病又はリンパ腫である血液癌が挙げられる。一態様では、本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲＴ細胞若しくはＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、癌及び悪性疾患を処置するために使用することができ、そうしたものとして、限定されないが、例えば、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）などの急性白血病；限定されないが、例えば、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）などの１つ以上の慢性白血病；限定されないが、例えば、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症などの別の血液癌又は血液病態並びに骨髄性血液細胞の不十分な生産（又は異形成）で一致する血液病態の多様な集合体である「前白血病」などが挙げられる。さらには、ＢＣＭＡ発現に関連する疾患として、限定されないが、例えば、ＢＣＭＡを発現する、非定型及び／若しくは非古典的癌、悪性疾患、前癌状態又は増殖性疾患が挙げられる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物を用いて、限定されないが、形質細胞増殖異常症、例えば、無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無症候性骨髄腫）、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス並びにＰＯＥＭＳ症候群（クロウ・深瀬症候群、高月病及びＰＥＰ症候群としても知られる）を含む疾患を処置することができる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物を用いて、限定されないが、癌、例えば、本明細書に記載の癌、例えば、前立腺癌（例えば、去勢抵抗性若しくは治療抵抗性前立腺癌又は転移性前立腺癌）、膵臓癌又は肺癌が挙げられる。

本発明は、ＢＣＭＡ発現細胞集団の増殖を阻害又は低減する方法も提供し、本方法は、ＢＣＭＡ発現細胞を含む細胞の集団を、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する本発明の抗ＢＣＭＡＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲＴ細胞若しくはＢＣＭＡＣＡＲ発現ＮＫ細胞）と接触させるステップを含む。特定の態様において、本発明は、ＢＣＭＡを発現する癌細胞の増殖を阻害するか、又はその集団を低減する方法を提供し、本方法は、ＢＣＭＡ発現癌細胞の集団を、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する本発明の抗ＢＣＭＡＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲＴ細胞若しくはＢＣＭＡＣＡＲ発現ＮＫ細胞）と接触させるステップを含む。一態様では、本発明は、ＢＣＭＡを発現する癌細胞の増殖を阻害するか、又はその集団を低減する方法を提供し、本方法は、ＢＣＭＡ発現癌細胞の集団を、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する本発明の抗ＢＣＭＡＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲＴ細胞若しくはＢＣＭＡＣＡＲ発現ＮＫ細胞）と接触させるステップを含む。いくつかの態様では、本発明の抗ＢＣＭＡＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲＴ細胞若しくはＢＣＭＡＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、骨髄性白血病若しくはＢＣＭＡ発現細胞に関連する別の癌を有する対象又はそのための動物モデルにおける細胞及び／又は癌細胞の量、数、量若しくはパーセンテージを、陰性対照と比べて、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６５％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％若しくは少なくとも９９％低減する。一態様では、対象は、ヒトである。

本発明は、ＢＣＭＡ発現細胞に関連する疾患（例えば、ＢＣＭＡを発現する血液癌又は非定型癌）を予防、処置及び／又は管理する方法も提供し、本方法は、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する本発明の抗ＢＣＭＡＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲＴ細胞若しくはＢＣＭＡＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を、必要とする対象に投与するステップを含む。一態様では、対象はヒトである。ＢＣＭＡ発現細胞に関連する障害の非限定的な例として、ウイルス又は真菌感染症及び粘膜免疫に関連する障害が挙げられる。

本発明は、ＢＣＭＡ発現細胞に関連する疾患を予防、処置及び／又は管理する方法も提供し、本方法は、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する本発明の抗ＢＣＭＡＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲＴ細胞若しくはＢＣＭＡＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を、必要とする対象に投与するステップを含む。一態様では、対象はヒトである。

本発明は、ＢＣＭＡ発現細胞に関連する癌の再発を予防する方法を提供し、本方法は、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する本発明の抗ＢＣＭＡＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲＴ細胞若しくはＢＣＭＡＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を、必要とする対象に投与するステップを含む。一態様では、本方法は、有効量の別の治療薬と組み合わせて、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する本明細書に記載の抗ＢＣＭＡＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲＴ細胞若しくはＢＣＭＡＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を有効量で、必要とする対象に投与するステップを含む。

併用療法
本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞は、他の公知の薬剤及び治療法と組み合わせて使用することができる。本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞と、少なくとも１つの別の治療薬とを同じ又は個別の組成物中で同時に又は順次投与することができる。順次投与する場合、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を最初に投与し、別の薬剤を２番目に投与することができるか、又は投与の順序を逆にし得る。ＣＡＲ療法及び／若しくは他の治療薬、手順又はモダリティは、活動性疾患の期間中又は寛解若しくは低活動性疾患の期間中に投与することができる。ＣＡＲ療法は、他の処置前、それと同時、処置後又は疾患の寛解中に投与することができる。組み合わせて投与する場合、ＣＡＲ療法及び／又は追加の薬剤（例えば、第２若しくは第３薬剤）又は全部を、各薬剤が個別に、例えば、単剤療法として使用される量若しくは用量よりも高いか、低いか若しくはそれと同じ量で投与することができる。一部の実施形態では、ＣＡＲ療法、追加の薬剤（例えば、第２若しくは第３薬剤）又は全部の投与量若しくは用量は、各薬剤が個別に、例えば、単剤療法として使用される量若しくは用量よりも（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％若しくは少なくとも５０％）低い。他の実施形態では、所望の効果（例えば、癌の治療）をもたらす、ＣＡＲ療法、追加の薬剤（例えば、第２若しくは第３薬剤）又は全部の投与量若しくは用量は、同じ治療効果を達成するのに必要な、各薬剤が個別に、例えば、単剤療法として使用される量若しくは用量よりも（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％若しくは少なくとも５０％）低い。別の態様では、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、手術、化学療法、放射線、免疫抑制剤と組み合わせた処置レジメンに使用され得る。本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞と併用することができる例示的な薬剤及び治療法は、国際公開第２０１６１６４７３１号パンフレット（その全体が、参照により本明細書に組み込まれる）の第２６６～３１３頁に開示されている。

ＣＡＲ有効性を評価するためのバイオマーカー
一部の実施形態では、対象（例えば、癌、例えば血液癌を有する対象）において、ＣＡＲ発現細胞療法（例えば、ＣＤ１９若しくはＢＣＭＡＣＡＲ療法）の有効性を評価又はモニターする方法が本明細書に開示される。この方法は、ＣＡＲ療法に対する有効性の値を取得することを含み、ここで、前記値は、ＣＡＲ発現細胞療法の有効性又は適合性を示す。

複数の実施形態では、ＣＬＬ若しくはＳＬＬを有する対象におけるＣＡＲ療法に対する有効性の値は、下記パラメーターの１つ、２つ、３つ若しくは全部の尺度を含む：
（ｉ）サンプル（例えば、アフェレーシスサンプル若しくは製造されたＣＡＲ発現細胞産物サンプル）中のＢＴＫをコードする遺伝子の突然変異；
（ｉｉ）サンプル（例えば、アフェレーシスサンプル若しくは製造されたＣＡＲ発現細胞産物サンプル）中のＰＬＣｇ２をコードする遺伝子の突然変異；
（ｉｉｉ）サンプル（例えば、対象からのアフェレーシスサンプル若しくは腫瘍サンプル）中の；例えばＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４３、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ９５、Ｌａｇ３、ＰＤ－１、Ｔｉｍ－３及び／若しくはＣＤ８１のレベル及び／若しくは活性により評価される；又は免疫グロブリンディープシーケンシングにより評価されるような微小残存病変；又は
（ｉｖ）サンプル、例えば対象からのアフェレーシスサンプル中の、ＩＦＮ－ｇ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＴＮＦ－ａ、ＩＰ－１０、ＭＣＰ１，ＭＩＰ１ａから選択される１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０若しくは全部のレベル又は活性。

複数の実施形態では、ＤＬＢＣＬ、例えば再発及び／又は難治性ＤＬＢＣＬを有する対象のＣＡＲ療法に対する有効性の値は、下記パラメーターの１つ又は両方の尺度を含む：
（ｉ）サンプル（例えば、対象からのアフェレーシスサンプル若しくは腫瘍サンプル）中の；例えばＣＤ８、ＣＤ４、ＣＡＲ１９、ＣＤ３、ＣＤ２７、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ９５、Ｌａｇ３、ＰＤ－１及び／若しくはＴｉｍ－３のレベル及び／若しくは活性により評価される；又は免疫グロブリンディープシーケンシングにより評価されるような微小残存病変；又は
（ｉｉ）サンプル（例えば、対象からアフェレーシスサンプル）中の、ＩＦＮ－ｇ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＴＮＦ－ａ、ＩＰ－１０、ＭＣＰ１，ＭＩＰ１ａから選択される１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０若しくは全部のレベル又は活性。

他の実施形態では、ＣＡＲ療法に対する有効性の値は、下記パラメーターの１、２、３、４、５、６つ若しくはそれを超える（全部）の尺度をさらに含む：
（ｉ）サンプル（例えば、アフェレーシスサンプル若しくは製造されたＣＡＲ発現細胞産物サンプル）中の、休止Ｔ_ＥＦＦ細胞、休止Ｔ_ＲＥＧ細胞、より若いＴ細胞（例えば、ナイーブＴ細胞（例えば、ナイーブＣＤ４若しくはＣＤ８Ｔ細胞、ナイーブγ／δ Ｔ細胞）、若しくはステムメモリーＴ細胞（例えば、ステムメモリーＣＤ４若しくはＣＤ８Ｔ細胞若しくはステムメモリーγ／δ Ｔ細胞）、若しくは早期メモリーＴ細胞又はそれらの組み合わせの１、２、３つ若しくはそれを超えるもの（例えば、全部）のレベル又は活性；
（ｉｉ）サンプル（例えば、アフェレーシスサンプル若しくは製造されたＣＡＲ発現細胞産物サンプル）中の、活性化Ｔ_ＥＦＦ細胞、活性化Ｔ_ＲＥＧ細胞、より経時的なＴ細胞（例えば、より経時的なＣＤ４若しくはＣＤ８細胞）若しくは後期メモリーＴ細胞又はそれらの組み合わせの１、２、３つ若しくはそれを超えるもの（例えば、全部）のレベル又は活性；
（ｉｉｉ）サンプル（例えば、アフェレーシスサンプル若しくは製造されたＣＡＲ発現細胞産物サンプル）中の、免疫細胞疲弊マーカー、例えば１、２つ若しくはそれを超えるものの免疫チェックポイント阻害因子（例えば、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ及び／又はＬＡＧ－３）のレベル又は活性。一部の実施形態において、免疫細胞は、疲弊表現型を有し、例えば少なくとも２つの疲弊マーカー、例えばＰＤ－１及びＴＩＭ－３を同時発現する。他の実施形態では、免疫細胞は、疲弊表現型を有し、例えば少なくとも２つの疲弊マーカー、例えばＰＤ－１及びＬＡＧ－３を同時発現する；
（ｉｖ）サンプル（例えば、アフェレーシスサンプル若しくは製造されたＣＡＲ発現細胞産物サンプル）中の、例えばＣＤ４＋若しくはＣＤ８＋Ｔ細胞集団における、ＣＤ２７及び／又はＣＤ４５ＲＯ－（例えば、ＣＤ２７＋ＣＤ４５ＲＯ－）免疫エフェクター細胞のレベル又は活性；
（ｖ）ＣＣＬ２０、ＩＬ－１７ａ、ＩＬ－６、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＤ５７、ＣＤ２７、ＣＤ１２２、ＣＤ６２Ｌ、ＫＬＲＧ１から選択されるバイオマーカーの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１若しくは全部のレベル又は活性；
（ｖｉ）ＣＡＲ発現細胞産物サンプル、例えばＣＬＬ－１発現細胞産物サンプル中のサイトカインレベル又は活性（例えば、サイトカインレパトアの品質）；又は
（ｖｉｉ）製造されたＣＡＲ発現細胞産物サンプル中のＣＡＲ発現細胞の形質導入効率。

本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞療法は、複数のＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞（例えば、その集団）、例えば複数のＴ細胞若しくはＮＫ細胞（例えば、その集団）又はそれらの組み合わせを含む。一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞療法は、ＣＤ１９ＣＡＲ療法である。

本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、本明細書に開示される１つ以上のパラメーターの尺度は、対象から得たアフェレーシスサンプルから取得される。アフェレーシスサンプルは、注入又は再注入前に評価することができる。

本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、本明細書に開示される１つ以上のパラメーターの尺度は、対象から得た腫瘍サンプルから取得される。

本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、本明細書に開示される１つ以上のパラメーターの尺度は、製造されたＣＡＲ発現細胞産物サンプル、例えばＣＤ１９ＣＡＲ発現細胞産物サンプルから取得される。製造されたＣＡＲ発現細胞産物は、注入又は再注入前に評価することができる。

本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞療法を受ける前、療法の過程で又はそれを受けた後に評価される。

本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、本明細書に開示される１つ以上のパラメーターの尺度により、１つ以上の遺伝子発現、フローサイトメトリー又はタンパク質発現についてのプロフィールを評価する。

本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、本方法は、本明細書に開示される１つ以上のパラメーターの尺度に基づいて、対象を応答者、非応答者、再発者又は非再発者として識別することをさらに含む。

本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、応答者、例えば完全応答者は、参照値、例えばＣＤ８＋Ｔ細胞の非応答者パーセンテージと比べて、高い、例えば統計的に有意に高いパーセンテージのＣＤ８＋Ｔ細胞を有するか又は有する者として識別される。

本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、応答者、例えば完全応答者は、参照値、例えばＣＤ２７＋ＣＤ４５ＲＯ－免疫エフェクター細胞の非応答者数と比べて、例えばＣＤ８＋集団において、高いパーセンテージのＣＤ２７＋ＣＤ４５ＲＯ－免疫エフェクター細胞を有するか又は有する者として識別される。

本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、応答者、例えば完全応答者若しくは部分応答者は、参照値、例えばＣＤ４＋Ｔ細胞の非応答者パーセンテージと比べて、高い、例えば統計的に有意に高いパーセンテージのＣＤ４＋Ｔ細胞を有するか又は有する者として識別される。

本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、応答者、例えば完全応答者は、参照値、例えば休止Ｔ_ＥＦＦ細胞、休止Ｔ_ＲＥＧ細胞、より若いＴ細胞若しくは早期メモリーＴ細胞の非応答者数と比べて、増加したパーセンテージで休止Ｔ_ＥＦＦ細胞、休止Ｔ_ＲＥＧ細胞、より若いＴ細胞若しくは早期メモリーＴ細胞又はそれらの組み合わせの１、２、３つ若しくはそれを超えるもの（例えば、全部）を有するか又は有する者として識別される。

本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、非応答者は、参照値、例えば活性化Ｔ_ＥＦＦ細胞、活性化Ｔ_ＲＥＧ細胞、より経時的なＴ細胞（例えば、より経時的なＣＤ４若しくはＣＤ８細胞）又は後期メモリーＴ細胞の応答者数と比べて、増加したパーセンテージで、活性化Ｔ_ＥＦＦ細胞、活性化Ｔ_ＲＥＧ細胞、より経時的なＴ細胞（例えば、より経時的なＣＤ４若しくはＣＤ８細胞）若しくは後期メモリーＴ細胞又はそれらの組み合わせの１、２、３つ若しくはそれを超えるもの（例えば、全部）を有するか又は有する者として識別される。

本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、非応答者は、より高いパーセンテージの免疫細胞疲弊マーカー、例えば１、２つ又はそれを超える免疫チェックポイント阻害因子（例えば、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ及び／若しくはＬＡＧ－３）を有するか又は有する者として識別される。一部の実施形態では、非応答者は、応答者からのＰＤ－１若しくはＬＡＧ－３発現免疫エフェクター細胞パーセンテージと比べて、増加したパーセンテージのＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１若しくはＬＡＧ－３発現免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／若しくはＣＤ８＋Ｔ細胞）（例えば、ＣＡＲ発現ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／若しくはＣＤ８＋Ｔ細胞）を有するか又は有する者として識別される。

一部の実施形態では、非応答者は、より高いパーセンテージで、疲弊表現型を有する免疫細胞、例えば少なくとも２つの疲弊マーカーを同時発現する、例えばＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１及び／若しくはＴＩＭ－３を同時発現する免疫細胞を有するか又は有する者として識別される。他の実施形態では、非応答者は、より高いパーセンテージで、疲弊表現型を有する免疫細胞、例えば少なくとも２つの疲弊マーカーを同時発現する、例えばＰＤ－１及びＬＡＧ－３を同時発現する免疫細胞を有するか又は有する者として識別される。

本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、非応答者は、ＣＡＲ発現細胞療法に対する応答者（例えば、完全応答者）と比べて、増加したパーセンテージで、ＣＡＲ発現細胞集団（例えば、ＣＬＬ－１ＣＡＲ＋細胞集団）中にＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１＋／ＬＡＧ－３＋細胞を有するか又は有する者として識別される。

本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、応答者（例えば、完全又は部分応答者）は、下記プロフィールの１、２、３つ若しくはそれを超えるもの（又は全部）を有する：
（ｉ）参照値、例えばＣＤ２７＋免疫エフェクター細胞の非応答者数と比べて、高い数のＣＤ２７＋免疫エフェクター細胞を有する；
（ｉｉ）参照値、例えばＣＤ８＋Ｔ細胞の非応答者数と比べて、高い数のＣＤ８＋Ｔ細胞を有する；
（ｉｉｉ）参照値、例えば１つ以上のチェックポイント阻害因子を発現する細胞の非応答者数と比べて、少数の、１つ以上のチェックポイント阻害因子、例えばＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３若しくはＫＬＲＧ－１又はそれらの組み合わせから選択されるチェックポイント阻害因子を発現する免疫細胞を有する；又は
（ｉｖ）参照値、例えば休止Ｔ_ＥＦＦ細胞、休止Ｔ_ＲＥＧ細胞、ナイーブＣＤ４細胞、非刺激メモリーＴ細胞若しくは早期メモリーＴ細胞の非応答者数と比べて、高い数で、休止Ｔ_ＥＦＦ細胞、休止Ｔ_ＲＥＧ細胞、ナイーブＣＤ４細胞、非刺激メモリーＴ細胞若しくは早期メモリーＴ細胞又はそれらの組み合わせの１つ、２つ、３つ、４つ若しくはそれを超えるもの（全部）を有する。

複数の実施形態では、本明細書の方法によって特定された応答者、非応答者、再発者又は非再発者である対象は、臨床基準に従ってさらに評価することができる。例えば、完全応答者は、疾患、例えば癌を有するか又は有する者で、処置に対して完全応答、例えば完全寛解を呈示する対象として識別される。完全応答は、例えば、ＮＣＣＮＧｕｉｄｅｌｉｎｅｓ（登録商標）又はその全体が参照により本明細書に組み込まれるＨａｌｌｅｋＭｅｔａｌ．，Ｂｌｏｏｄ（２０１８）１３１：２７４５－２７６０“ｉｗＣＬＬｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓｆｏｒｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｒｅｓｐｏｎｓｅａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ，ａｎｄｓｕｐｐｏｒｔｉｖｅｍａｎａｇｅｍｅｎｔｏｆＣＬＬ，”に開示される通りのＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＷｏｒｋｓｈｏｐｏｎＣｈｒｏｎｉｃＬｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃＬｅｕｋｅｍｉａ（ｉｗＣＬＬ）２０１８を用いて識別され得る。部分応答者は、疾患、例えば癌を有するか又は有する者で、処置に対して部分応答、例えば部分寛解を呈示する対象として識別される。部分応答は、例えば、ＮＣＣＮＧｕｉｄｅｌｉｎｅｓ（登録商標）又は本明細書に記載される通りのｉｗＣＬＬ２０１８基準を用いて識別され得る。非応答者は、疾患、例えば癌を有するか又は有する者として識別され、その対象は、処置に対して応答を呈示せず、例えば、患者は、安定又は進行性疾患を有する。非応答者は、例えば、ＮＣＣＮＧｕｉｄｅｌｉｎｅｓ（登録商標）又は本明細書に記載される通りのｉｗＣＬＬ２０１８基準を用いて識別され得る。

上記に代わり又は本明細書に開示の方法と組み合わせて、前記の値に応答して、以下のステップの１つ、２つ、３つ、４つ若しくはそれを超えるものを実施する：
例えば、応答者又は非応答者に、ＣＡＲ発現細胞療法を投与する；
変更された用量設定のＣＡＲ発現細胞療法を投与する；
ＣＡＲ発現細胞療法のスケジュール又はタイムコースを変更する；
例えば、非応答者又は部分応答者に、ＣＡＲ発現細胞療法と組み合わせて、追加薬剤、例えばチェックポイント阻害因子、例えば本明細書に記載のチェックポイント阻害因子を投与する；
非応答者又は部分応答者に、ＣＡＲ発現細胞療法による処置前に対象中の若いＴ細胞の数を増加させる療法を実施する；
例えば、非応答者又は部分応答者として識別された対象の場合、ＣＡＲ発現細胞療法の製造プロセスを改変する、例えばＣＡＲをコードする核酸の導入前に若いＴ細胞を濃縮するか又は形質導入効率を高める；
例えば、非応答者若しくは部分応答者又は再発者の場合、代替療法を実施する；又は
対象が、非応答者又は再発者であるか又はそれとして識別される場合、例えばＣＤ２５枯渇、シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体の投与の１つ以上又はそれらの組み合わせにより、Ｔ_ＲＥＧ細胞集団及び／又はＴ_ＲＥＧ遺伝子シグネチャーを低減する。

本発明を、次の実験的実施例を参照してさらに詳細に記載する。これらの実施例は、説明のみを目的として提供し、特に断らない限り限定を意図しない。従って、本発明は、決して次の実施例に限定されると解釈してはならず、むしろ本明細書に提供する教示の結果として明らかとなる任意且つ全ての変形形態を含むと解釈すべきである。

実施例１：ヒトＢＣＭＡＣＡＲのインビトロ特性決定
１セットの完全ヒト一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を、ＣＤ３ζ鎖及び４－１ＢＢ刺激分子：Ｒ１Ｂ６、Ｒ１Ｆ２、Ｒ１Ｇ５、ＰＩ６１、Ｂ６１－１０、Ｂ６１－０２、Ｈｙ０３及びＨｙ５２を含むレンチウイルスＣＡＲ発現ベクターにクローニングした。初めに、自動化細胞リポーターアッセイを用いて、これらの構築物をスクリーニングした後、初代Ｔ細胞での発現並びにＢＣＭＡ発現（「ＢＣＭＡ＋」又は「ＢＣＭＡ陽性」）標的に応答するエフェクターＴ細胞応答（「ＢＣＭＡＣＡＲＴ」又は「ＢＣＭＡＣＡＲＴ細胞」）の量及び質に基づく最適クローンの選択を実施した。エフェクターＴ細胞応答として、限定されないが、細胞拡大、増殖、倍加、サイトカイン産生及び標的細胞殺傷又は細胞溶解活性（脱顆粒）が挙げられる。

ＢＣＭＡＣＡＲレンチウイルスの作製
前述したｓｃＦｖコード化レンチウイルストランスファーベクターを全て使用して、ＶＳＶｇ偽型レンチウイルス粒子にパッケージングされたゲノム物質を生成した。ＣＡＲをコードするレンチウイルストランスファーベクターＤＮＡを、３つのパッケージング成分：ＶＳＶｇ、ｇａｇ／ｐｏｌ及びｒｅｖをリポフェクタミン試薬と組み合わせて混合して、Ｌｅｎｔｉ－Ｘ２９３Ｔ細胞（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）をトランスフェクトした後、１２～１８ｈ後に培地を取り換えた。培地の交換から３０時間後、培地を収集し、濾過し、－８０℃で保存した。

自動化システムを用いたＢＣＭＡＣＡＲＪＮＬ及びＪＮＬスクリーニングリポーターアッセイ
リポーターアッセイのために、９６ウェルプレートにおいて、自動化された小規模様式で、２つの異なる細胞密度（４０，０００細胞（１×Ｈ２９３）又は８０，０００細胞（２×Ｈ２９３））のＨＥＫ２９３細胞中でＢＣＭＡＣＡＲをコードするレンチウイルスを作製し、この場合、トランスフェクションから４８ｈ後にウイルス含有上清を回収し、凍結せずに、ＪｕｒｋａｔＴ細胞リポーター細胞株の形質導入のために新鮮な状態で使用した。ＪｕｒｋａｔＮＦＡＴルシフェラーゼ（ＪＮＬ）リポーター細胞株は、急性Ｔ細胞白血病株Ｊｕｒｋａｔを基材とする。この細胞株を、活性化Ｔ細胞の核内因子（ＮＦＡＴ）応答エレメントの制御下でルシフェラーゼを発現するように修飾した。ＢＣＭＡＣＡＲでの形質導入のために、９６ウェルプレートの１０，０００ＪＮＬ細胞／ウェルを５０μｌの新鮮な、４５μｍの濾過済ウイルス含有上清で形質導入した。プレートを５日間培養した後、標的細胞と共培養した。

ＢＣＭＡＣＡＲが、ＪＮＬ細胞を活性化する機能的能力を評価するために、それらを標的癌細胞と、様々なエフェクター：標的細胞比（Ｅ：Ｔ比）で共培養して、ルシフェラーゼ発現を定量することにより、その活性化を読み出した。ｓｃＦｖベースのＣＡＲＲ１Ｂ６、Ｒ１Ｆ２、Ｒ１Ｇ５、ＰＩ６１、Ｂ６１－１０、Ｂ６１－０２、Ｈｙ０３及びＨｙ５２を評価した。ＣＤ１９ＪＮＬＣＡＲ細胞を標的特異的対照として使用し、標的細胞を含まない培地のみを陰性対照として使用した。

前述した５日間形質導入ＪＮＬＣＡＲ細胞を、ＢＣＭＡ陽性多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞株ＫＭＳ１１と一緒に、又はＢＣＭＡ陰性対照として使用されるＮＡＬＭ６（急性リンパ性白血病細胞株）と一緒に共培養した。残ったＪＮＬＣＡＲＴ細胞を、ＢＣＭＡＣＡＲ発現についてフローサイトメトリーにより評価した。共培養物を３８４ウェルプレート内に４：１、１：１及び０．５：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比でセットアップし、２４ｈインキュベートした後、活性化ＪＮＬＣＡＲＴ細胞によるルシフェラーゼの発現をＢｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ（商標）ＬｕｃｉｆｅｒａｓｅＡｓｓａｙＳｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）により定量した。各ウェルからの放射された光の量（ルミネセンス）は、それぞれのＣＡＲによるＪＮＬ活性化の直接読み出しである。ルミネセンスのレベルが、ＵＴＤ細胞の２倍以上であれば、ＪＮＬ細胞は活性化されているとみなした。ＢＣＭＡ＋ＫＭＳ１１細胞株は、Ｒ１Ｂ６、Ｒ１Ｆ２、Ｒ１Ｇ５、ＰＩ６１、Ｂ６１－１０、Ｂ６１－０２、Ｈｙ０３及びＨｙ５２を発現するＪＮＬ細胞の活性化をもたらした（図１Ａ及び１Ｃ）。ＢＣＭＡＣＡＲのいずれも、ＢＣＭＡ陰性株ＮＡＬＭ６による活性化を示さなかった（図１Ｅ及び１Ｆ）。標的細胞を含まない培地単独では、試験したＣＡＲ形質導入ＪＮＬのいずれも活性化しなかった（図１Ｇ及び１Ｈ）。ＦＡＣＳ解析により、形質導入ＪＮＬ中のＢＣＭＡ－ＣＡＲ発現が様々な程度まで検出されたことが実証された；ＣＡＲ％は、ほとんどの活性ＪＮＬＣＡＲＴにおいてＫＭＳ１１によるＪＮＬ活性化と概して正に相関する（図１Ｂ及び１Ｄ）。

ＢＣＭＡＣＡＲＴ細胞の作製
次の８つのＣＡＲを初代Ｔ細胞におけるＣＡＲ発現、安定性及び有効性の分析のために選択した：Ｒ１Ｂ６、Ｒ１Ｆ２、Ｒ１Ｇ５、ＰＩ６１、Ｂ６１－１０、Ｂ６１－０２、Ｈｙ０３及びＨｙ５２。健康なアフェレーシス済ドナー（そのＴ細胞（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋リンパ球）をＣＤ３＋Ｔ細胞についてのネガティブ選択により取得した）からの血液で開始することにより、ＢＣＭＡＣＡＲＴ細胞を作製した。これらの細胞を、Ｔ細胞培地（ＲＰＭＩ１６４０、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、２ｍＭＬ－グルタミン、１×ペニシリン／ストレプトマイシン、１００μＭ非必須アミノ酸、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１０ｍＭＨｅｐｅｓ及び５５μＭ２－メルカプトエタノール）中に、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）ＨｕｍａｎＴ－ＥｘｐａｎｄｅｒＣＤ３／ＣＤ２８，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を１：３（Ｔ細胞：ビーズ）の比で添加することにより活性化した。３７℃、５％ＣＯ_２にて、２４ウェルプレートのウェル当たり１ｍＬ培地中０．５×１０^６Ｔ細胞でＴ細胞を培養した。２４時間後、Ｔ細胞をブラスト処理し、Ｔ細胞を５の感染多重度（ＭＯＩ）でＢＣＭＡＣＡＲウイルスにより形質導入した。Ｔ細胞は対数増殖パターンで分裂を開始し、これを、１ｍＬ当たりの細胞数を測定することによりモニターし、２日毎にＴ細胞を新鮮な培地で希釈し、脱ビーズした後、第９日にさらなる分析のために採取した。Ｔ細胞のアリコートを染色して、ＦＡＣＳＦｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ）で第５及び９日にフローサイトメトリーによりＣＡＲ発現を測定した。ＢＣＭＡＣＡＲＴ細胞は全て、研究グレード（即ち、臨床グレードではない）製造条件下で生産した。

ＢＣＭＡ－ＣＡＲ表面発現及びその安定性は、ｒＢＣＭＡ＿Ｆｃ－ＡＦ６４７染色細胞のフローサイトメトリー解析を用いて、第５及び９日にＣＡＲ％及びＭＦＩ（平均蛍光強度）を測定することにより評価した（図２及び表２７）。第９日の最終産物におけるＢＣＭＡＣＡＲ発現は、１８％～４２．４％の範囲で構築物毎に異なり、ＭＦＩは、６７２～５２３８であった。ＰＡＬＬＡＳ由来のクローンＲ１Ｆ２、Ｒ１Ｂ６及びＲ１Ｇ５並びにハイブリドーマクローン、Ｈｙ０３からの構築物は、第５日～第９日までに約３０％～５０％のＣＡＲ喪失を示したのに対し、ＰＩ６１、Ｂ６１－１０及び－０２並びにＨｙ５２は、ＣＡＲ発現のパーセンテージに関して比較的安定していたが、全てのＣＡＲ構築物が、第５日～第９日までにＭＦＩの減少を示し、これは、恐らく、第９日にその休止期にあるＴ細胞のサイズが小さかったためであろう。ＣＡＲＴ細胞培養物の細胞数は、非形質導入Ｔ細胞（「ＵＴＤ」）と比べると、細胞が正常に増殖する能力に対して、ＢＣＭＡＣＡＲを担持するヒトｓｃＦｖの検出可能なマイナスの作用がないことを示した。

ＢＣＭＡＣＡＲ再指向Ｔ細胞の機能性の評価
ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞の機能的能力を評価するために、ＢＣＭＡ－陽性及び－陰性癌細胞株と一緒に共培養物をセットアップした。ＣＡＲ－Ｔ細胞を解凍し、計数した後、標的細胞と一緒に共培養して、それらの殺傷能力及びサイトカインの分泌の読み出しを行った。ＢＣＭＡＣＡＲ－クローンＲ１Ｂ６、Ｒ１Ｆ２、Ｒ１Ｇ５、ＰＩ６１、Ｂ６１－１０、Ｂ６１－０２、Ｈｙ０３及びＨｙ５２を試験した。非形質導入Ｔ細胞（「ＵＴＤ」）を非ターゲティングＴ細胞対照として使用した。

ＣＡＲＴ細胞をＫＭＳ１１－Ｌｕｃ及びＮＡＬＭ６－Ｌｕｃ標的細胞と、様々なＥ：Ｔ比で２０時間共培養することにより、ＣＡＲＴ細胞殺傷を実施した。ＣＡＲＴ細胞集団を同等パーセンテージのＣＡＲ陽性細胞に対して正規化した後、平板培養した。ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ；Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を用いて、２．５：１のエフェクター：標的比でのＣＡＲ－Ｔ細胞の２０時間共培養物からの上清中で、サイトカインＩＦＮγを測定し、既知標準を用いて、各サイトカインについての結果を算出した。アッセイは全て、単一のドナー細胞源から２回繰り返して実施した。殺傷データは、ＢＣＭＡＣＡＲクローンが、ＫＭＳ１１癌細胞を有効に殺傷することを示している（図３Ａ）。対照標的細胞ＮＡＬＭ６は、これらのＢＣＭＡ特異的ＣＡＲのいずれによっても殺傷されなかった（図３Ｂ）。ＫＭＳ１１と一緒に培養したとき、これらのＣＡＲがＩＦＮ－γを産生する能力も試験した（図３Ｃ）。ＢＣＭＡＣＡＲＲ１Ｆ２、Ｒ１Ｇ５及びＰＩ６１は、産生された最高量のＩＦＮ－γをもたらした。対照ＮＡＬＭ６細胞に対する曝露後のＢＣＭＡＣＡＲＴにより産生されたサイトカインのレベルは低かった（図３Ｃ）が、これは、ＢＣＭＡＣＡＲによる非特異的な活性化がなかったことを示している。

結論
ＣＡＲＴ細胞に関して、新しいＢＣＭＡ結合ｓｃＦｖを試験した。ＪＮＬリポーターアッセイ並びに初代Ｔ細胞において８つのＣＡＲをアッセイした：Ｒ１Ｂ６、Ｒ１Ｆ２、Ｒ１Ｇ５、Ｂ６１－０２、Ｂ６１－１０、ＰＩ６１、Ｈｙ０３及びＨｙ５２。８つのＣＡＲ－Ｔ細胞は全て、標的特異的殺傷を示した。Ｒ１Ｆ２、Ｒ１Ｇ５又はＰＩ６１を発現するＴ細胞は、標的細胞の存在下で最高量のＩＦＮ－γを産生した。全体として、初代Ｔ細胞へのＢＣＭＡＣＡＲの移入は、抗ＢＣＭＡＣＡＲ反応性を誘導したが、オフターゲット機能は誘導しなかった。

実施例２：二重ＣＡＲ発現及び抗ＢＣＭＡ及び抗ＣＤ二重ＣＡＲＴのインビトロ活性
２つの完全ＣＡＲ（キメラ抗原受容体）鎖（一方はＢＣＭＡを、他方はＣＤ１９を指向する）を含む１セットのバイシストロン構築物をレンチウイルスベクター中で操作した（表２８）。ＣＡＲ発現は、ＥＦ１αプロモーターにより駆動する。このようなＣＡＲは、ＢＣＭＡをターゲティングする１セットのヒト一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）（ｄｕＢＣＭＡ．４、ＰＩ６１、Ｒ１Ｇ５及びＲ１Ｂ６）を含む。ＣＤ１９をターゲティングする同じヒト化ｓｃＦｖを全ての構築物で操作した。各ｓｃＦｖのＮ末端で、ＣＤ８α由来のシグナルペプチドは、ＣＡＲを分泌経路にターゲティングさせる。このようなシグナルペプチドは、同時翻訳的に切断されるため、細胞表面に展示されるＣＡＲの成熟形態には存在しないと予想される。各ｓｃＦｖのＣ末端では、ＣＤ８αのヒンジ及び膜貫通ドメインが４－１ＢＢの細胞内ドメインに、続いてＣＤ３ζの細胞内ドメインに融合される。２つのＣＡＲの間で、より正確には、第１ＣＤ３ζドメインの最後のアミノ酸と、続くＣＡＲのシグナルペプチドの間で、リンカー（ＧＳＧ（配列番号２０６））、続いてブタテシオウイルス－１２Ａ由来の２Ａ自己切断ペプチド（即ち、Ｐ２Ａ配列）が操作される。他のリンカー及び／又は自己切断ペプチドも同様に使用することができる。この設計は、単一のｍＲＮＡ転写物から、２つの独立したＣＡＲの発現を可能にする。２つのＣＡＲの間の重複領域（シグナルペプチド、ヒンジ、膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ及びＣＤ３ζ）をコードするＤＮＡ配列は、組換えの可能性を最小限にするために、互いに異なっている。

構築物を用いて、ベクター物質を作製し、それを用いて、ヒト初代Ｔ細胞を感染させた。ＣＡＲ発現をフローサイトメトリーにより評価した。ＢＣＭＡ発現（「ＢＣＭＡ＋」又は「ＢＣＭＡ陽性」）及びＣＤ１９＋腫瘍標的に応答するエフェクターＴ細胞応答（「ＢＣＭＡ－ＣＤ１９二重ＣＡＲＴ」又は「Ｔ細胞」）の量及び質も測定した。エフェクターＴ細胞応答として、限定されないが、細胞拡大、増殖、倍加、サイトカイン産生及び標的細胞殺傷又は細胞溶解活性（脱顆粒）が挙げられる。

レンチウイルスの生産及び力価決定
前述した二重ＢＣＭＡ／ＣＤ１９ＣＡＲをコードする５つの構築物を使用して、ＶＳＶｇ偽型レンチウイルス粒子にパッケージングされたゲノム物質を生成した。２つの構築物を対照として使用した：一方は、ＢＣＭＡに対するモノＣＡＲをコードし（ｄｕＢＣＭＡ．４）、また他方は、ＣＤ１９に対するモノＣＡＲをコードする。７つの構築物は全て、同じプラスミドバックボーン中で操作した。これらＤＮＡの各々を、リポフェクタミン試薬と組み合わせた３つのパッケージング成分ＶＳＶｇ、ｇａｇ／ｐｏｌ及びｒｅｖと混合して、Ｌｅｎｔｉ－Ｘ２９３Ｔ細胞（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）をトランスフェクトした後、１２～１８ｈ後に培地を取り換えた。培地の交換から３０分後、培地を収集し、濾過してから、－８０℃で保存した。

組換えヒトＡｌｅｘａ－６４７－Ｆｃタグ付けＢＣＭＡタンパク質（ＢＣＭＡ－Ｆｃ）及び抗ＩＤ－ｄｕＣＤ１９．１抗体（ＰＥ）を用いて、形質導入Ｓｕｐ－Ｔ１細胞上でのＢＣＭＡ－ＣＤ１９二重ＣＡＲの表面発現を評価することにより、レンチウイルス力価を決定した。Ｓｕｐ－Ｔ１細胞は、１：３の出発希釈率を用いたウイルス上清の３倍段階希釈物で形質導入した。４日後、ＣＡＲ（ＣＡＲ＋細胞）を発現する細胞のパーセンテージを評価した。下記の式：
（％ＣＡＲ＋）×（＃接種されたＳｕｐ－Ｔ１細胞）×（希釈率）／（ウイルスの量（ｍＬ））
に従って、上流ＣＡＲ陽性又は二重陽性ＣＡＲ集団のいずれかを用いて、ウイルス力価を算出した。

ウイルス力価は、５～２５％ＣＡＲ＋細胞をもたらす線形範囲内の最も中央の希釈点から計算した（表２９）。

従来の１０日生産プロセスを用いたＢＣＭＡ－ＣＤ１９ＣＡＲＴ細胞の作製
健康なアフェレーシス済ドナーからの血液の処理時に、Ｐｒｏｄｉｇｙを用いたネガティブ選択又はポジティブ選択により取得したヒト初代Ｔ細胞（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋リンパ球）を用いて、ＢＣＭＡ－ＣＤ１９二重又はモノＢＣＭＡ若しくはモノＣＤ１９ＣＡＲＴ細胞を作製した。形質導入前に、これらのＴ細胞を、Ｔ細胞培地（ＲＰＭＩ１６４０、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、２ｍＭＬ－グルタミン、１×ペニシリン／ストレプトマイシン、１００μＭ非必須アミノ酸、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１０ｍＭＨｅｐｅｓ及び５５μＭ２－メルカプトエタノール）中に、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）ＨｕｍａｎＴ－ＥｘｐａｎｄｅｒＣＤ３／ＣＤ２８，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を１：３（Ｔ細胞：ビーズ）の比で添加することにより活性化した。３７℃、５％ＣＯ_２にて、２４ウェルプレート中ウェル当たり０．５×１０^６／ｍＬ培地の密度で細胞を培養した。２４時間後、Ｔ細胞をブラスト処理し、それらを、上流ＣＡＲ力価に基づく５の感染多重度（ＭＯＩ）で、ウイルスにより形質導入した。Ｔ細胞は対数増殖パターンで分裂を開始し、これを、１ｍＬ当たりの細胞数を測定することによりモニターし、２日毎にＴ細胞を新鮮な培地で希釈し、脱ビーズした後、細胞のサイズに応じて、第８日又はそれ以降にさらなる分析のために採取した。Ｔ細胞のアリコートを染色して、ＦＡＣＳＦｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ）で第７又は８日にフローサイトメトリーによりＣＡＲ発現を測定した。

ＢＣＭＡ－ＣＡＲ及びＣＤ１９－ＣＡＲ表面発現は、ｒＢＣＭＡ＿Ｆｃ－ＡＦ６４７及び抗ＩＤ－ｄｕＣＤ１９．１（ＰＥ）染色細胞のフローサイトメトリー解析を用いて、第８日にＣＡＲ％及びＭＦＩ（平均蛍光強度）を測定することにより評価した（図４Ａ～４Ｃ）。Ｒ１Ｇ５、Ｒ１Ｂ６又はＰＩ６１は、類似するパーセンテージの二重陽性ＣＡＲ（約１０％）をもたらし、構築物２３６（Ｒ１Ｇ５／ｄｕＣＤ１９．１）は、ＢＣＭＡ及びＣＤ１９ＣＡＲについて最も高いＭＦＩレベルを示した（図４Ａ）。モノｄｕＣＤ１９．１（構築物２４４）は、様々な構築物でＣＡＲ１９について最も高いＭＦＩレベルを示した（図４Ｂ）。

インビトロ及びインビボでの二重ＢＣＭＡ－ＣＤ１９ＣＡＲ再指向Ｄ８Ｔ細胞産物の機能性の評価
二重ＢＣＭＡ－ＣＤ１９ＣＡＲＴ細胞内のＣＡＲ各々の抗腫瘍効力を評価するために、ＢＣＭＡ陽性（ＫＭＳ１１）、ＣＤ１９陽性（ＮＡＬＭ６）及びＢＣＭＡ／ＣＤ１９陰性癌細胞株（ＣＤ１９ＫＯ；ＮＡＬＭ６由来）と一緒に共培養物をセットアップした。ＣＡＲＴ細胞を解凍し、計数した後、標的細胞と一緒に共培養して、それらの殺傷能力及びサイトカインの分泌の読み出しを行った。非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）を非ターゲティングＴ細胞対照として使用した。

ＣＡＲＴ細胞を、ルシフェラーゼを発現する標的細胞と一緒に、様々なＥ：Ｔ比で２０時間共培養することにより、インビトロ細胞毒性アッセイを実施した。ＣＡＲＴ細胞集団は、平板培養前に、それぞれの腫瘍に指向されたＣＡＲに応じて（即ち、ＣＡＲＴをＫＭＳ１１細胞と共培養したときのＢＣＭＡＣＡＲに基づく正規化；及びＣＡＲＴをＮＡＬＭ６と共培養したときのＣＡＲ１９に基づく正規化）、同等パーセンテージのＣＡＲ陽性細胞に対して正規化した。ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ；Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を用いて、１．２５：１～２．５：１の標的比に対応する２０時間共培養物からの上清中で、サイトカインＩＦＮγを測定した。既知標準を用いて、結果をｐｇ／ｍＬ単位で算出した。アッセイは全て、ドナー細胞の単一供給源から２回繰り返して実施した。殺傷データは、全ての二重ＣＡＲクローンが、ＢＣＭＡ－陽性ＫＭＳ１１細胞及びＣＤ１９陽性Ｎａｌｍ６細胞に対して有効であることを示している（それぞれ図５Ａ及び５Ｂ）。バックグラウンド殺傷は、ＢＣＭＡ／ＣＤ１９陰性腫瘍細胞に対してのみ観察された（図５Ｃ）。ＫＭＳ１１又はＮａｌｍ６と一緒に培養したとき、これらの二重ＣＡＲがＩＦＮ－γを産生する能力は、２つの異なるＥ：Ｔ比を用いて評価して、同様であった（図６Ａ～６Ｄ）。

これらのＤ８ＣＡＲＴのインビボ抗腫瘍活性を、ＮＳＧマウスにおける混合異種移植腫瘍モデル（５％Ｎａｌｍ６及び９５％ＫＭＳ１１）を用いて分析した。

活性化高速製造（ＡＲＭ）プロセスを用いた第１日抗ＢＣＭＡ－ＣＤ１９二重ＣＡＲＴの生産及び測定
一部の実施形態において、このＡＲＭプロセスは、凍結された又は新鮮な白血球アフェレーシス産物から出発する。計数及びＱＣのためのサンプルを取得した後、産物をセルソーティング機（例えば、取り付けられたＣｌｉｎｉＭＡＣＳＰｒｏｄｉｇ装置キット）に付着させて、プログラムを開始する。細胞を洗浄し、所望の表面マーカー、例えば、ＣＤ４及びＣＤ８などに結合するマイクロビーズと一緒にインキュベートする。細胞を磁気カラムに通過させることにより、ビーズ標識した細胞を選択する。単離した細胞を再度洗浄してから、分離バッファーを細胞培地と交換する。次に、単離したＴ細胞を培養するか、又は後の使用のために凍結保存する。単離したＴ細胞の純度は、フローサイトメトリー評価によるＱＣステップを通過するであろう。凍結保存した細胞を解凍し、予熱した細胞培地中で洗浄してから、細胞培地中に再懸濁させる。新鮮な細胞を培地に直接添加する。細胞を０．４～１．２ｅ６細胞／ｃｍ^２膜で、膜バイオリアクターに接種し、活性化試薬、例えば、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ／ポリマー、ナノ粒子又はナノコロイドなどを添加し、細胞培地を０．２５～２ｍｌ／ｃｍ^２膜の最終量まで添加する。インビトロＣＡＲ発現動態試験のために、２４ウェルＧｒｅｘを使用する。Ｇｒｅｘ１００、フラスコ又はｃｅｎｔｒｉｃｕｌｔを用いて、この製造プロセスが、スケーラブルであるか否かを検証すると共に、インビボ抗腫瘍効果を試験する。平板培養時に、１又は２の感染多重度（ＭＯＩ）で、ＢＣＭＡ－ＣＤ１９二重ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターを用いて、細胞を形質導入する。ＭＯＩは、２Ａ配列の上流で操作されるＣＡＲの力価に基づき、Ｓｕｐ－Ｔ１細胞で得られたウイルス力価に基づいて決定する。２４時間で、細胞を洗浄し、不要な試薬を除去した後、染色して、フローサイトメトリーによりＣＡＲ発現を測定し、インビボ試験用の「第１日ＣＡＲＴ産物」として凍結保存培地中で再製剤化する。全てのケースにおいて、形質導入から７２ｈ後に、インビトロでのＣＡＲ発現動態を測定するために細胞のアリコートを採取する。第１日ＣＡＲＴ応答として、限定されないが、インビボ細胞溶解活性及び拡大が挙げられる。

図７Ａ～７Ｂは、上流ＣＡＲの発現のみによって決定されたＳｕｐＴ１力価に基づき、１のＭＯＩを使用し、ＡＲＭプロセスを用いて製造されたヒト初代Ｔ細胞の形質導入から２４ｈ及び７２ｈ後の抗ＢＣＭＡ及び抗ＣＤ１９ＣＡＲ両方の発現パターンを示す。形質導入から２４時間後、フローサイトメトリーにおいて、生存ＣＤ３＋Ｔ細胞の前集団が、異なる程度で右にシフトしたことが観察された（図７Ａ）。この発現パターンは、ＣＡＲを発現するように形質導入された細胞の典型的なフローサイトメトリーヒストグラム（ＣＡＲ陽性集団が、陰性集団から明らかに分離される）と異なっていた。これらのデータは、「偽形質導入又は一過性発現」が、ｒＢＣＭＡ＿Ｆｃフローサイトメトリー染色試薬により検出され得ることを示唆している。ベクター添加の時点からＣＤ３４＋では２４時間まで、また２９３細胞では７２時間まで、レンチウイルス偽形質導入が観察されたことが以前報告されている（ＨａａｓＤＬ，ｅｔａｌ．ＭｏｌＴｈｅｒ．２０００．２９１：７１－８０）。インテグラーゼ欠損レンチウイルスベクターは、ＣＤ３４＋では最大１０日間、また２９３細胞では１４日間ｅＧＦＰ発現を引き起こした。Ｔ細胞形質導入後第１日に観察されたＣＡＲ発現は、恐らく偽形質導入に起因し得るが、第３日には、２つの明瞭な集団が出現し、１つはｒＢＣＭＡ＿Ｆｃ陽性であり、他方は抗ＩＤｄｕＣＤ１９．１陽性であった（図７Ｂ及び図７Ｃ）。さらに、２０～３０％の細胞は、二重構築物ｃ２３５、ｃ２３６、ｃ２３７及びｃ２３８を用いて操作された細胞中でモノＢＣＭＡＣＡＲ陽性（ＣＤ１９ＣＡＲ陰性）であった（図７Ｃ）。全体的に見て、これらの結果は、Ｒ１Ｇ５、Ｒ１Ｂ６及びＰＩ６１がｄｕＣＤ１９．１と組み合わせて使用されたとき、両方のＣＡＲが、二重ＣＡＲＴ系で十分に発現されたことを証明している。ウイルス形質導入から７２ｈ後を、インビボ用量設定戦略のためのＣＡＲ発現を測定する代替時点として使用することができた。

第１日ＡＲＭ処理ＢＣＭＡＣＡＲＴの機能性のインビボでの評価
Ｃｅｎｔｒｉｃｕｌｔ又はフラスコシステムを用いて作製した第１日ＣＡＲＴを、３つのマウスモデル：播種性ＫＭＳ－１１－ｌｕｃ（ＢＣＭＡ＋ＣＤ１９－）多発性骨髄腫モデル、Ｎａｌｍ６－Ｌｕｃ（ＣＤ１９＋ＢＣＭＡ－）異種移植マウスモデル及び９５％ＫＭＳ－ｌｕｃと５％ＮＡＬＭ６－Ｌｕｃ細胞の混合モデルを用いて、インビボでそれらの抗腫瘍活性について調べた。このインビボ試験の目標は、下記の３つからなる：（１）二重ＣＡＲＴのＢＣＭＡ及びＣＤ１９アーム両方の有効性を実証すること；（２）混合モデル（ＢＣＭＡ＋腫瘍細胞とＣＤ１９＋腫瘍細胞を含む）をＫＭＳ－１１－ｌｕｃ多発性骨髄腫モデル（ＢＣＭＡ＋ＣＤ１９－）と比べて、ＣＤ１９標的を介した二重ＣＡＲＴの潜在的活性化を理解すること；並びに（３）Ｎａｌｍ６単独モデル（ＣＤ１９＋ＢＣＭＡ－）中の二重ＣＡＲＴを試験して、ＣＤ１９アームの活性を調べること。ＢＬＩ測定は、毎週２回実施した。フローサイトメトリー解析のために、第６、１３、２０及び２７日に、末梢血を採取した。サイトカイン解析のために、第２日に加えて、前述した日に血漿を収集した。試験設計及び用量の情報を表３０にまとめる。

二重ＣＡＲＴは、試験期間にわたって、５ｅ４の用量で混合腫瘍（ＢＣＭＡ＋ＣＤ１９＋）を排除し、１ｅ４の用量で腫瘍を阻害したが、完全には排除しなかった（図８Ｃ）。ＰＩ６１又はＣＴＬ１１９のいずれも、混合腫瘍を制御することができなかった（図８Ｃ）。二重ｃ２３６及びｃ２３８は共に、ＫＭＳ１１及びＮａｌｍ６モデルにおけるモノ対応物と比べて、同等であるか又は優れた効果を示した（図８Ａ及び８Ｂ）。３つ全てのモデルで、試験期間中体重が増加した（図９Ａ～９Ｃ）。恐らくＧＶＨＤのために、ＫＭＳ１１及びＮＡＬＭ６試験の終了時に若干の減少があった。

Ｔ細胞増殖が、第６日～第２０日に起こり、その後第２０日～第２７日まで平坦になった（図１０Ａ～１０Ｃ）。増殖は、３つ全てのモデルで、用量に関連していた（図１１Ａ～１１Ｃ）。ＫＭＳ１１モデルは、より高い用量での混合モデルと比べて、３～４倍高い増殖を示した（図１０Ａ及び１０Ｃ）。二重ｃ２３６及びｃ２３８は、モノＣＡＲＴより高い増殖を示した（図１０Ａ～１０Ｃ）。

総ＢＣＭＡＣＡＲ＋パーセンテージは、第１３日にピークに達し、その後、減少し始め、これは第２７日まで続いた（図１１Ａ～１１Ｃ）。混合モデルでは、５ｅ４群が、第１３日の後に１ｅ４群と比べて低いＢＣＭＡＣＡＲ＋パーセンテージを示した（図１１Ｃ）。二重ＣＡＲ＋パーセンテージは、総ＣＤ３＋の流入に関連したが、これは、ＧＶＨＤの兆候の可能性と考えられた。３つ全てのモデルにおいて、二重抗ＢＣＭＡ及びＣＤ１９ＣＡＲ＋Ｔ細胞増殖がｃ２３６及びｃ２３８ＣＡＲＴＲｘ群に認められた（図１２Ａ～１２Ｃ）。

ＩＦＮγの誘導は、全てのモデルを通して用量反応性であった（図１３Ａ～１３Ｃ）。両用量の二重は、ＫＭＳ１１単独モデルの約３～４倍のＩＦＮγを産生した（図１３Ａ及び１３Ｃ）。ピーク誘導は、全モデルのほとんどの群で１３日以内に観察された（第２０日及び第２７日のピークは、ＧＶＨＤによる可能性が極めて高い）（図１３Ａ～１３Ｃ）。

個別の試験では、Ｇｒｅｘ１００及び６ウェルＧｒｅｘシステムを用いて作製した第１日ＣＡＲＴを、播種性ＫＭＳ－１１－ｌｕｃ多発性骨髄腫モデルを用い、インビボでの抗腫瘍活性について調べた。ルシフェラーゼリポーターにより、定量的生物発光イメージング（ＢＬＩ）による疾患負荷のモニタリングが可能になる。手短には、前述のように製造した第１日ＣＡＲＴは、腫瘍担持マウスに投与した。毎週血液サンプルを採取して、末梢血ＣＡＲＴ増殖を測定し、フローサイトメトリーにより解析した。構築物＃２３６及び構築物＃２３８を用いて操作されたＴ細胞は、インビボでＫＭＳ１１（ＢＣＭＡ＋ＣＤ１９－）モデルに対する強力な抗腫瘍活性（図１４Ａ）及び優れたＣＡＲＴ増殖（図１４Ｂ）を示した。

実施例３：ダイアボディＣＡＲＴの特性決定
この実施例は、ダイアボディＣＡＲＪＬ１～ＪＬ１０の特性決定を説明する。ＪＬ１～ＪＬ８は、ＰＩ６１／ＣＴＬ１１９ダイアボディ構築物であり、ＪＬ９～ＪＬ１０は、Ｒ１Ｇ５／ＣＴＬ１１９ダイアボディ構築物である。ＪＬ１～ＪＬ１０の配列情報は、表３１に開示する。

活性化高速製造（ＡＲＭ）プロセスを用いた第１日抗ＢＣＭＡ－ＣＤ１９ダイアボディＣＡＲＴの生産及び測定
一部の実施形態において、このＡＲＭプロセスは、凍結された又は新鮮な白血球アフェレーシス産物から出発する。計数及びＱＣのためのサンプルを取得した後、産物をセルソーティング機（例えば、取り付けられたＣｌｉｎｉＭＡＣＳＰｒｏｄｉｇ装置キット）に付着させて、プログラムを開始する。細胞を洗浄し、所望の表面マーカー、例えば、ＣＤ４及びＣＤ８などに結合するマイクロビーズと一緒にインキュベートする。細胞を磁気カラムに通過させることにより、ビーズ標識した細胞を選択する。単離したＴ細胞を再度洗浄してから、分離バッファーを細胞培地と交換する。次に、精製したＴ細胞を培養するか、又は後の使用のために凍結保存する。単離Ｔ細胞の純度は、フローサイトメトリー評価によるＱＣステップを通過するであろう。凍結保存した細胞を解凍し、予熱した細胞培地で洗浄してから、細胞培地中に再懸濁させる。新鮮な細胞を培地に直接添加する。凍結したＰａｎＴ単離細胞のアリコートを３７℃の水浴中で解凍し、ＯｐｔｉｍｉｚｅｒＣＭ（サプリメント＋１００Ｕ／ｍＬのヒトＩＬ２を含むＧｉｂｃｏＯｐｔｉｍｉｚｅｒＭｅｄｉａ）中に導入して、１５００ｒｐｍで５分スピンした。細胞を計数し、２４ウェルプレート中に、３ｅ６／ｍＬ、１ｍＬ／ウェルで平板培養した。ＴｒａｎｓＡｃｔを各ウェルに１／１００（１０μＬ／ウェル）で添加した。

ＡＲＭプロセスを用いたインビトロＣＡＲ発現動態試験のために、２４ウェルプレートを使用した。平板培養時に、２の感染多重度（ＭＯＩ）で、ＢＣＭＡ－ＣＤ１９ダイアボディＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターを用いて、細胞を形質導入した。ＭＯＩは、二重陽性ＣＡＲ発現に基づき、ＳｕｐＴ１細胞で得られたウイルス力価に基づいて決定した。２４時間の培養後に、細胞を採取し、ＰＢＳ＋１％ＨＳＡで３回洗浄した。次に、細胞を計数し、２４ウェルプレート中、最終１ｅ６／ｍＬで再平板培養した。再平板培養から７２時間後、細胞を採取し、計数した後、フローサイトメトリー解析のために、各サンプルから５ｅ５細胞のアリコートを取得した。７２時間後に、この手順を１日７時点について繰り返した。

図１５Ａ及び１５Ｂは、２のＭＯＩを用い、ＡＲＭプロセスを用いて製造されたヒト初代Ｔ細胞へのダイアボディウイルス添加から９６ｈ後（図１５Ａ）又は７日後（図１５Ｂ）の抗ＢＣＭＡ及び抗ＣＤ１９ＣＡＲの両方の発現パターンを示す。全体的に見て、これらの結果は、ウイルス添加から４日後（図１５Ａ）又は７日後（図１５Ｂ）にＲ１Ｇ５又はＰＩ６１がｄｕＣＤ１９．１と組み合わせて使用されたとき、両方のＣＡＲが、ダイアボディＣＡＲＴ系で十分に発現されたことを証明している。ＪＬ１～ＪＬ４、ＪＬ９及びＪＬ１０は、二重陽性ＣＡＲの線形発現を示したのに対し、ＪＬ５～ＪＬ８は、ＣＤ１９＋集団に対する若干のシフトを示し、これは、それぞれの検出試薬に対するＣＡＲ結合の差によるものと考えられる。ここでは、２つのドナーの１つからのデータを示す。

伝統的製造プロセスを用いたＣＡＲ－Ｔ細胞生産
伝統的製造（ＴＭ）プロセスは、活性化及び形質導入後にＴ細胞をエクスビボで８～９日間エクスビボで増殖した後に、回収するプロセスである。Ｐｒｏｄｉｇｙ処理Ｔ細胞を温かいＲＰＭＩ完全Ｔ細胞培地（ＲＰＭＩ、１０％熱不活性化ＦＢＳ、２ｍＭＬ－グルタミン、１００Ｕ／ｍＬのＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、１×ＮＥＡＡ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１０ｍＭＨＥＰＥＳ及び５５μＭβ－メルカプトエタノール）に再懸濁させてから、ウェル当たり０．５ｅ^６細胞／ｍＬで２４ウェルプレートにおいて平板培養した。３：１のビーズ：細胞比で、ヒトＴ－エキスパンダーＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと一緒に、Ｔ細胞を３７℃で一晩インキュベートした。

第１日に、Ｓｕｐ－Ｔ１力価に基づいて、５のＭＯＩでレンチウイルスを添加した。非形質導入対照（ＵＴＤ）にはウイルスを添加しなかった。Ｔ細胞を３７℃で一晩インキュベートした後、ウェル当たり１ｍＬの完全Ｔ細胞培地をさらに添加してから、３７℃で一晩インキュベートした。残る６日間の培養物増殖のために、Ｔ細胞を組織培養フラスコに移し、０．５ｅ^６細胞／ｍＬの濃度を目標にして２日毎に完全Ｔ細胞培地で希釈した。典型的なスプリット比は、増殖期の間、１：２～１：４の範囲であった。

第７日に、Ｔ細胞を脱ビーズし、採取した後、ＣｒｙｏＳｔｏｒＣＳ１０凍結保存溶液中に凍結保存し、ＣｏｏｌＣｅｌｌＣｅｌｌＦｒｅｅｚｉｎｇＣｏｎｔａｉｎｅｒｓ（Ｂｉｏｃｉｓｉｏｎ）内に－８０℃で凍結し、翌日ＬＮ_２に移した。Ｔ細胞の小アリコートをＣＡＲ発現について染色した。補正のために単色対照を加えた。サンプルをフローサイトメーター（ＢＤＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ）で測定し、データをＦｌｏｗＪｏソフトウェアで解析した。

図１６は、５のＭＯＩを用いるＴＭプロセスによる第７日のＣＡＲ発現を示す。ＴＭ産物は、ＡＲＭ産物と類似の発現パターンを示した（図１５Ａ、１５Ｂ及び１６）。

インビトロ殺傷アッセイ
様々なダイアボディ構築物で操作されたＴ細胞が、ＢＣＭＡ又はＣＤ１９発現標的細胞に応答して殺傷する能力を、２０：１から出発する２倍Ｅ：Ｔ比の希釈で、ＣＡＲＴ細胞を標的細胞と一緒にインキュベートすることにより評価した。標的細胞の数を２．５×１０^５細胞／ウェルで固定し、細胞を９６ウェル平底プレート内で培養した。エフェクター細胞は、Ｔ細胞をダイアボディで形質導入することによる伝統的製造を用いて作製したＣＡＲＴ細胞であった。標的細胞は、ＢＣＭＡ陽性ＫＭＳ１１－ｌｕｃ細胞又はＢＣＭＡ陰性ＮＡＬＭ６－ｌｕｃ細胞を含む。このアッセイのために、ＢＣＭＡＣＡＲＴへのＵＴＤの添加により、ＣＡＲ－Ｔ細胞の％形質導入を正規化した。これにより、各サンプル中の同じ数のＣＡＲＴと同じ総Ｔ細胞数の比較が可能になった。

細胞接種から１６ｈ後にＢｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ基質を用いて、細胞殺傷により生じたルシフェラーゼシグナルの消失を測定し、特異的な溶解を下記の式に従って計算した。
特異的溶解（％）＝１００－（サンプルルミネセンス／平均最大ルミネセンス）＊１００

図１７Ａ及び１７Ｂは、ＰＩ６１／ＣＴＬ１１９の様々なダイアボディが、特定の標的細胞株ＮＡＬＭ－６（ＣＤ１９＋、ＢＣＭＡ－）（図１７Ａ）又はＫＭＳ－１１（ＣＤ１９－、ＢＣＭＡ＋）（図１７Ｂ）を有効に殺傷する能力を実証するものである。データは、クローンＪＬ６、ＪＬ５、ＪＬ３及びＪＬ８が、両方の標的細胞を同等に殺傷することを示唆している。

サイトカイン分泌アッセイ
ＭＳＤＶ－ＰＬＥＸヒトＩＦＮ－□□及びＩＬ－２分析に使用するために、２０時間インキュベーション後の上記殺傷アッセイに使用した共培養物（１．２５：１の比）から上清を収集した。ＫＭＳ１１又はＮＡＬＭ６細胞による刺激に応答して、ダイアボディ形質導入細胞によるＩＦＮ－□又はＩＬ－２の様々な程度の標的特異的誘導が観察された（図１８Ａ及び１８Ｂ）。ＵＴＤ細胞は、いずれの標的細胞に応答する非特異的ＩＦＮ－□□分泌も示さなかった（図１８Ａ）。殺傷アッセイからの結果と一致して、クローンＪＬ６、ＪＬ５、ＪＬ３及びＪＬ８は、標的細胞に応答して、より多くのサイトカインを産生した（図１８Ａ及び１８Ｂ）。

実施例４：ＢＣＭＡＣＡＲ及びＣＤ１９ＣＡＲの共形質導入
凍結されたＰａｎＴ単離細胞のアリコートを３７℃の水浴中で解凍し、ＯｐｔｉｍｉｚｅｒＣＭ（サプリメント＋１００Ｕ／ｍＬのヒトＩＬ２を含むＧｉｂｃｏＯｐｔｉｍｉｚｅｒＭｅｄｉａ）中に導入して、１５００ｒｐｍで５分スピンした。細胞を計数し、２４ウェルプレート中に、３ｅ６／ｍＬ、１ｍＬ／ウェルで平板培養した。ＴｒａｎｓＡｃｔを各ウェルに１／１００（１０μＬ／ウェル）で添加した。ＰＩ６１のＳＵＰ－Ｔ１力価又はＣＴＬ１１９のｑＰＣＲ力価のいずれかに基づく様々な感染多重度（ＭＯＩ）でウイルスを添加した。ＰＩ６１は２のＭＯＩで使用し、３つの異なるＣＴＬ１１９ＭＯＩ：１、０．５及び０．２５と組み合わせた。モノＣＡＲを、ＰＩ６１には１又は２のＭＯＩで、ＣＴＬ１１９には１のＭＯＩで添加し、ＵＴＤ対照も平板培養した。２４時間の培養後に、細胞を採取し、ＰＢＳ＋１％ＨＳＡ中で３回洗浄した。次に、細胞を計数し、２４ウェルプレートにおいて最終１ｅ６／ｍＬで再平板培養した。

再平板培養から７２時間後、細胞を採取し、計数してから、フローサイトメトリー解析のために、各サンプルから５ｅ５細胞のアリコートを取得した。細胞を１００μｌ／ウェルのＬｉｖｅ／ＤｅａｄＡｑｕａ（ＢＶ５１０）で１５分染色した後、２回洗浄した。次に、抗体ＭＭ（表３２）を５０μｌ／ウェルで、４℃で２５分添加した。細胞を再度２回洗浄した後、ＰＢＳ中１．６％ＰＦＡ（１００μｌ／ウェル）中で１５分固定した。固定の後、前述のように細胞を洗浄し、フローサイトメトリーバッファー中１５０μｌ／サンプルの最終量で再懸濁させた。ＢＤＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＳａｎＪｏｓｅＣＡ）上の各サンプルの生存ＣＤ３陽性ゲートで、５ｅ４細胞を取得し、ＦｌｏｗＪｏｖ．１０ソフトウェア（Ａｓｈｌａｎｄ，ＯＲ）を用いて、データを解析した。７２時間後に、この手順を１日７時点について繰り返した。

ウイルス添加後の第４日に、フローサイトメトリー解析は、ＢＣＭＡＣＡＲＭＯＩ２の条件で、ＣＡＲ１９陽性集団及び二重ＣＡＲ陽性集団と比べて、有意に高いパーセンテージのモノＢＣＭＡＣＡＲ＋集団を示した（図１９及び２０）。これは、両ドナーについて一致していた。ＰＩ６１を１のＭＯＩで添加したとき、全ての集団の優れた力価測定が観察された（図１９及び２０）。ＣＤ１９ＣＡＲＭＯＩが１から０．２５に低下すると、ＣＡＲ１９＋集団並びに二重ＣＡＲ＋集団も減少した（図１９）。ＣＴＬ１１９コード化ウイルスをより少量で添加すると、ＢＣＭＡＣＡＲ＋集団は、増加した（図１９）。総ＣＡＲ＋集団のパーセンテージは、各ウェルに添加された総ＭＯＩと相関した（図２１）。総ＢＣＭＡＣＡＲ及びＣＡＲ１９パーセンテージも同様に相関した。全ての傾向は第４日～第７日まで安定していた（図２１）。生存率及び増殖速度は、添加した総ＭＯＩから独立していた（図２２）。ここでは、４つのドナーの１つからのデータを示す。

実施例５：活性化高速製造（ＡＲＭ）プロセスの説明
一部の実施形態では、連続的活性化高速製造（ＡＲＭ）プロセスを用いて、約２日かけてＣＡＲＴ細胞を製造するが、これにより恐らくより多数の低分化Ｔ細胞（Ｔナイーブ及びＴ_ＳＣＭ（ステムセントラルメモリーＴ）細胞）をインビボ細胞増殖のために患者に戻すことが可能になるであろう。短い製造期間により、早期分化Ｔ細胞プロフィールは、その所望の最終分化状態に向けて、エクスビボ培養容器内ではなく、体内で増殖することが可能になる。

一部の実施形態では、ＣＡＲＴ細胞は、凍結保存白血球アフェレーシス源材料、例えば非動員自己末梢血白血球アフェレーシス（ＬＫＰＫ）材料を用いて製造される。凍結保存材料は、抗ＣＤ４／抗ＣＤ８免疫磁気システムを用いて、生産の１日目（第０日）にＴ細胞濃縮のためのプロセシングステップに付す。次に、陽性画分をＧ－ｒｅｘ培養容器に接種し、抗ＣＤ３／ＣＤ２８系（ＴｒａｎｓＡＣＴ）で活性化し、同じ日に、ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクター（ＬＶ）で形質導入する。翌日、形質導入の２０～２８時間後、Ｔ細胞を採取し、４回洗浄し、凍結培地に製剤化した後、コントロールレートフリーザー（ＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲａｔｅＦｒｅｅｚｅｒ）（ＣＲＦ）により凍結する。第０日のプロセスの開始から翌日の採取の開始まで、第０日の接種後２４時間を目標にして、細胞を２０～２８時間培養する。

第０日の培地を表２１に従って調製した。

凍結白血球アフェレーシス材料を解凍する。解凍した細胞をラピッドバッファー（表２１）で希釈し、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）Ｐｒｏｄｉｇｙ（登録商標）装置で洗浄する。Ｔ細胞をＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）ＣＤ４及びＣＤ８マイクロビーズにより選択する。Ｔ細胞選択（約３時間４０分～４時間４０分）のためのプログラムが終了したら、ラピッドメディア（表２１）に懸濁させた細胞を含むリアプリケーションバッグをトランスファーパックに移す。生存率及び細胞カウントのためにサンプルを取得した。培養容器を活性化及びベクター形質導入に接種する際、陽性画分バッグからの細胞数及び生存率データを用いて、細胞濃度を決定する。

ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）マイクロビーズ（ＣＤ４及びＣＤ８）を用いたＴ細胞のポジティブ選択後、細胞を培養容器、Ｇ－Ｒｅｘに接種する。細胞を接種したら、活性化試薬（ＴｒａｎｓＡＣＴ）を培養容器に添加する。次に、１．０（０．８～１．２）の目標ＭＯＩで、ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターにより細胞を形質導入する。ベクター添加後、培養容器をインキュベーターに移し、そこで、公称５％ＣＯ_２（作動範囲４．５～５．５％）、３７℃の公称温度（作動範囲３６～３８℃）で目標の２４時間にわたり（作動範囲２０～２８時間）それをインキュベートする。インキュベーション後、細胞をハーベスト洗浄液（ＨａｒｖｅｓｔＷａｓｈＳｏｌｕｔｉｏｎ）（表２１）で４回洗浄して、非組込みベクター及び残留ウイルス粒子並びに他のプロセス関連不純物を全て除去する。次に、細胞を溶出し、細胞数及び生存率のためのサンプルを取得して試験し、それらの結果を用いて、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０を用いた最終製剤化のために、細胞を再懸濁させるのに必要な量を決定する。続いて、細胞を遠心分離して、ハーベスト洗浄液を除去し、凍結保存を実施する。

一部の実施形態では、ＣＡＲＴ細胞中に発現したＣＡＲがＣＤ１９に結合する。一部の実施形態では、ラピッドメディア（ＲＭ）（表２１）に使用したＩＬ－２の代わりに、ＩＬ－１５、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ－１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ）、ＩＬ－６又はＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａを使用することができる。

一部の実施形態では、ＣＡＲＴ細胞中に発現したＣＡＲはＢＣＭＡに結合する。一部の実施形態では、ラピッドメディア（ＲＭ）（表２１）に使用したＩＬ－２の代わりに、ＩＬ－１５、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ－１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ）、ＩＬ－６又はＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａを使用することができる。

一部の実施形態では、ＣＡＲＴ細胞は、本明細書に開示される二重ＣＡＲ、例えば、本明細書に開示されるＢＣＭＡ／抗ＣＤ１９二重ＣＡＲを発現する。一部の実施形態では、ＣＡＲＴ細胞は、本明細書に開示されるダイアボディＣＡＲ、例えば、本明細書に開示される抗ＢＣＭＡ／抗ＣＤ１９ダイアボディＣＡＲを発現する。一部の実施形態では、ＣＡＲＴ細胞は、本明細書に開示の共形質導入を用いて、抗ＢＣＭＡＣＡＲ及び抗ＣＤ１９ＣＡＲを発現するように、操作される。

実施例６：活性化高速製造（ＡＲＭ）プロセスを用いるＣＡＲＴ細胞の製造
ＣＡＲＴ細胞のＡＲＭプロセスは、表２５に概略を示すように、培地の調製から開始する。

凍結保存された白血球アフェレーシス産物を出発材料として使用し、Ｔ細胞濃縮のために処理した。利用可能であれば、アフェレーシスペーパーワークを利用して、Ｔ細胞パーセンテージを決定する。アフェレーシスペーパーワークに基づくＴ細胞パーセンテージデータがない場合、到着した凍結保存白血球アフェレーシス産物にセンチネルバイアル試験を実施して、アフェレーシスのＴ細胞パーセンテージ目標を取得する。Ｔ細胞パーセンテージについての結果により、ＡＲＭプロセスの第０日にどの程度の個数のバッグを解凍するかを決定する。

凍結保存白血球アフェレーシスを解凍、洗浄した後、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）マイクロビーズ技術を用いて、Ｔ細胞選択及び濃縮を実施する。生存有核細胞（ＶＮＣ）をＴｒａｎｓＡＣＴ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）で活性化し、ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターで形質導入する。Ｍｉｌｔｅｎｙｉマイクロビーズで選択された生存細胞を、Ｐｒｏｄｉｇｙ（登録商標）上のｃｅｎｔｒｉｃｕｌｔ（非加湿インキュベーションチャンバーである）に接種する。培養中、ＣＴＳ（商標）サプリメント（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）、グルタマックス（Ｇｌｕｔａｍａｘ）、ＩＬ－２及び２％免疫細胞血清代替品をその成分として含むＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）ＣＴＳ（商標）ベース培地であるラピッドメディア（Ｒａｐｉｄｍｅｄｉａ）に細胞を懸濁させて、Ｔ細胞活性化及び形質導入を促進する。レンチウイルス形質導入は、ＴｒａｎｓＡＣＴを培地中の希釈細胞に添加した後、接種の日に１回実施する。レンチウイルスベクターは、接種日の使用直前に、室温で最大３０分かけて解凍する。

第０日のプロセス開始から、培養物洗浄及び採取の開始まで、ＣＡＲＴ細胞を接種から２０～２８時間培養する。培養後、細胞懸濁液をｃｅｎｔｒｉｃｕｌｔチャンバー（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃｈ）内で２回の培地洗浄及び１回の採取物洗浄に付す。

第１日のＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）Ｐｒｏｄｉｇｙ（登録商標）での採取物洗浄後、細胞懸濁液をサンプリングして、生存細胞数及び生存率を決定する。次に、細胞懸濁液を遠心分離機に移し、手動でペレット化する。上清を除去し、細胞ペレットをＣＳ１０（ＢｉｏＬｉｆｅＳｏｌｕｔｉｏｎ）に再懸濁させることにより、約１０．０％の最終ＤＭＳＯ濃度を有する産物製剤が得られる。生存細胞数は、用量設定のために採取後に公式化する。次に、用量を個別のクライオバッグに分配し、クライオバイアル中での分析サンプリングを行う。

凍結保存産物は、安全な進入制限エリア内のモニター付きＬＮ２保存タンク内に最終出荷及び発送まで保存する。

一部の実施形態では、ＣＡＲＴ細胞は、本明細書に開示される二重ＣＡＲ、例えば、本明細書に開示される抗ＢＣＭＡ／抗ＣＤ１９二重ＣＡＲを発現する。一部の実施形態では、ＣＡＲＴ細胞は、本明細書に開示されるダイアボディＣＡＲ、例えば、本明細書に開示される抗ＢＣＭＡ／抗ＣＤ１９ダイアボディＣＡＲを発現する。一部の実施形態では、ＣＡＲＴ細胞は、本明細書に開示される共形質導入を用いて、抗ＢＣＭＡＣＡＲ及び抗ＣＤ１９ＣＡＲを発現するように、操作される。

実施例７：抗ＢＣＭＡＣＡＲ及び抗ＣＤ１９ＣＡＲを発現するＣＡＲＴ細胞の製造
ＣＡＲＴ細胞の高速製造プロセスは、表３３に概略を示すように、培地の調製から開始する。

凍結保存白血球アフェレーシスを解凍した。解凍した細胞をラピッドバッファー（ＲａｐｉｄＢｕｆｆｅｒ）（表３３）で希釈し、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）Ｐｒｏｄｉｇｙ（登録商標）装置上で洗浄した。Ｔ細胞をＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）ＣＤ４及びＣＤ８マイクロビーズにより選択した。プログラムをＴ細胞について終了したら（約３時間４０分～４時間４０分）、リアプリケーションバッグは、ラピッドバッファー（ＲａｐｉｄＢｕｆｆｅｒ）（表３３）を含有している。生存率及び細胞計数のためにサンプルを取得する。この細胞数及び生存率データを用いて、活性化及びベクター形質導入用の培養容器に接種する際の細胞濃度を決定する。

ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）マイクロビーズ（ＣＤ４及びＣＤ８）を用いたＴ細胞のポジティブ選択後、細胞を培養容器、Ｐｒｏｄｉｇｙ（登録商標）中のＣｅｎｔｒｉＣｕｌｔに、約４．０×１０^６生存細胞／ｍＬの目標濃度で、４．０×１０^８～１．０×１０^９総生存細胞を目標に接種する。細胞を接種したら、活性化試薬（ＴｒａｎｓＡＣＴ）を培養容器に添加する。

次に、抗ＢＣＭＡＣＡＲをコードするレンチウイルスベクター及び抗ＣＤ１９ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターにより細胞を形質導入する。ポジティブ選択後に、Ｔ細胞の形質導入のために使用されるベクター容量は、ＢＣＭＡＣＡＲレンチウイルスベクターについては４．７５の目標感染多重度（ＭＯＩ）、ＣＤ１９ＣＡＲレンチウイルスベクターについては０．５の目標ＭＯＩに基づいて計算する。

公称５％ＣＯ_２、３７℃の温度で目標の２４時間（作動範囲２０～２８時間）のインキュベーション後、細胞をハーベスト洗浄のために処理する。

インキュベーション後、細胞をハーベスト洗浄液（ＨａｒｖｅｓｔＷａｓｈＳｏｌｕｔｉｏｎ）（表３３）で３回洗浄して、非組込みベクター及び残留ウイルス粒子並びに他のプロセス関連不純物を全て除去する。次に、細胞を溶出し、細胞計数及び生存率のためのサンプルを取得して試験し、それらの結果を用いて、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０を用いた最終製剤化のために、細胞を再懸濁させるのに必要な量を決定する。続いて、細胞を遠心分離して、ハーベスト洗浄液を除去し、凍結保存を実施する。

実施例８：ＡＲＭプロセスを用いて製造されるＣＡＲＴ細胞の遺伝子シグネチャー分析
方法
単一細胞ＲＮＡｓｅｑ
１０ＸＧｅｎｏｍｉｃｓＣｈｒｏｍｉｕｍＣｏｎｔｒｏｌｌｅｒｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ及び支持ライブラリー構築キットを用いて、単一細胞ＲＮＡｓｅｑライブラリーを作製した。

凍結保存細胞を解凍し、カウント及びフロー分別（試験課題の必要に応じて）した後、１０ＸＧｅｎｏｍｉｃｓＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔにロードした。個別の細胞を液滴にロードし、ＧｅｍＣｏｄｅビーズによって個別の液滴中のＲＮＡにバーコードを付けた。バーコード付きＲＮＡを液滴から放出させ、全トランスクリプトームＩｌｌｕｍｉｎａ適合性シーケンシングライブラリーに変換した。

作製したライブラリーをＩｌｌｕｍｉｎａＨｉＳｅｑＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔで配列決定し、１０ＸＧｅｎｏｍｉｃｓ解析パイプライン及びＬｏｕｐｅＣｅｌｌＢｒｏｗｓｅｒソフトウェアを用いて解析した。

単一細胞免疫細胞プロファイリング
全トランスクリプトーム１０ＸＧｅｎｏｍｉｃｓ単一細胞ライブラリーを鋳型材料として使用して、免疫細胞プロファイリング及びレパトア解析を作成した。Ｔ細胞受容体配列をＣｈｒｏｍｉｕｍＳｉｎｇｌｅＣｅｌｌ５‘ＬｉｂｒａｒｉｅｓからＰＣＲ増幅した後、Ｉｌｌｕｍｉｎａシーケンシング装置で解析した。

解析パイプライン
単一細胞ＲＮＡｓｅｑデータを、ＦＡＳＴＱファイルで開始するＣｅｌｌＲａｎｇｅｒ解析パイプラインで処理した。ＣｅｌｌＲａｎｇｅｒ解析パイプラインの詳細な説明は、ｓｕｐｐｏｒｔ．１０ｘｇｅｎｏｍｉｃｓ．ｃｏｍ／ｓｉｎｇｌｅ－ｃｅｌｌ－ｇｅｎｅ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ／ｓｏｆｔｗａｒｅ／ｐｉｐｅｌｉｎｅｓ／ｌａｔｅｓｔ／ｗｈａｔ－ｉｓ－ｃｅｌｌ－ｒａｎｇｅｒに見出すことができる。一般的パイプラインは、アラインメント、フィルタリング、バーコードカウント及びＵＭＩカウントを含んだ。細胞バーコードを用いて、遺伝子バーコードマトリックスを作成し、クラスターを決定して、遺伝子発現解析を実施した。遺伝子発現カウントデータは、ＳｅｕｒａｔＢｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒパッケージを用いて正規化した。２００未満の発現遺伝子を有する細胞を解析から廃棄した。２つ以下の細胞にのみ発現された遺伝子を解析から廃棄した。残ったデータを、１０，０００のスケール因子を用いてＳｅｕｒａｔｌｏｇ正規化法により正規化した。１細胞当たりの検出分子の数に対する回帰によりデータをスケーリングした。遺伝子セット内の全遺伝子の平均ｌｏｇ正規化遺伝子発現値を取得することにより、遺伝子セットスコア（ＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ）を算出した。各遺伝子は、サンプル全体の遺伝子の平均発現が０であり、標準偏差が１であるように正規化されたｚ－スコアである。次に、遺伝子セットスコアを、遺伝子セット内の遺伝子の正規化値の平均として計算する。遺伝子セットスコア計算例を以下に説明する。

本実施例の遺伝子セットスコア計算の場合、６つの遺伝子についての２つのサンプルの正規化遺伝子発現を表２３に記載する。この計算例を目的として、遺伝子セットは、遺伝子１～４から構成される。従って、サンプル１及び２の両方が、０の遺伝子セットスコアを有する。

遺伝子セット「ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＳＣＭ」は、以下の遺伝子：ＭＸＲＡ７、ＣＬＩＣ１、ＮＡＴ１３、ＴＢＣ１Ｄ２Ｂ、ＧＬＣＣＩ１、ＤＵＳＰ１０、ＡＰＯＢＥＣ３Ｄ、ＣＡＣＮＢ３、ＡＮＸＡ２Ｐ２、ＴＰＲＧ１、ＥＯＭＥＳ、ＭＡＴＫ、ＡＲＨＧＡＰ１０、ＡＤＡＭ８、ＭＡＮ１Ａ１、ＳＬＦＮ１２Ｌ、ＳＨ２Ｄ２Ａ、ＥＩＦ２Ｃ４、ＣＤ５８、ＭＹＯ１Ｆ、ＲＡＢ２７Ｂ、ＥＲＮ１、ＮＰＣ１、ＮＢＥＡＬ２、ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ、ＳＹＴＬ２、ＳＬＣ４Ａ４、ＰＩＫ３ＡＰ１、ＰＴＧＤＲ、ＭＡＦ、ＰＬＥＫＨＡ５、ＡＤＲＢ２、ＰＬＸＮＤ１、ＧＮＡＯ１、ＴＨＢＳ１、ＰＰＰ２Ｒ２Ｂ、ＣＹＴＨ３、ＫＬＲＦ１、ＦＬＪ１６６８６、ＡＵＴＳ２、ＰＴＰＲＭ、ＧＮＬＹ及びＧＦＰＴ２を含む。

遺伝子セット「ＵｐＴｒｅｇｖｓ．ＤｏｗｎＴｅｆｆ」は、以下の遺伝子：Ｃ１２ｏｒｆ７５、ＳＥＬＰＬＧ、ＳＷＡＰ７０、ＲＧＳ１、ＰＲＲ１１、ＳＰＡＴＳ２Ｌ、ＳＰＡＴＳ２Ｌ、ＴＳＨＲ、Ｃ１４ｏｒｆ１４５、ＣＡＳＰ８、ＳＹＴ１１、ＡＣＴＮ４、ＡＮＸＡ５、ＧＬＲＸ、ＨＬＡ－ＤＭＢ、ＰＭＣＨ、ＲＡＢ１１ＦＩＰ１、ＩＬ３２、ＦＡＭ１６０Ｂ１、ＳＨＭＴ２、ＦＲＭＤ４Ｂ、ＣＣＲ３、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＮＴＮＧ２、ＣＬＤＮＤ１、ＢＡＲＤ１、ＦＣＥＲ１Ｇ、ＴＹＭＳ、ＡＴＰ１Ｂ１、ＧＪＢ６、ＦＧＬ２、ＴＫ１、ＳＬＣ２Ａ８、ＣＤＫＮ２Ａ、ＳＫＡＰ２、ＧＰＲ５５、ＣＤＣＡ７、Ｓ１００Ａ４、ＧＤＰＤ５、ＰＭＡＩＰ１、ＡＣＯＴ９、ＣＥＰ５５、ＳＧＭＳ１、ＡＤＰＲＨ、ＡＫＡＰ２、ＨＤＡＣ９、ＩＫＺＦ４、ＣＡＲＤ１７、ＶＡＶ３、ＯＢＦＣ２Ａ、ＩＴＧＢ１、ＣＩＩＴＡ、ＳＥＴＤ７、ＨＬＡ－ＤＭＡ、ＣＣＲ１０、ＫＩＡＡ０１０１、ＳＬＣ１４Ａ１、ＰＴＴＧ３Ｐ、ＤＵＳＰ１０、ＦＡＭ１６４Ａ、ＰＹＨＩＮ１、ＭＹＯ１Ｆ、ＳＬＣ１Ａ４、ＭＹＢＬ２、ＰＴＴＧ１、ＲＲＭ２、ＴＰ５３ＩＮＰ１、ＣＣＲ５、ＳＴ８ＳＩＡ６、ＴＯＸ、ＢＦＳＰ２、ＩＴＰＲＩＰＬ１、ＮＣＡＰＨ、ＨＬＡ－ＤＰＢ２、ＳＹＴ４、ＮＩＮＪ２、ＦＡＭ４６Ｃ、ＣＣＲ４、ＧＢＰ５、Ｃ１５ｏｒｆ５３、ＬＭＣＤ１、ＭＫＩ６７、ＮＵＳＡＰ１、ＰＤＥ４Ａ、Ｅ２Ｆ２、ＣＤ５８、ＡＲＨＧＥＦ１２、ＬＯＣ１００１８８９４９、ＦＡＳ、ＨＬＡ－ＤＰＢ１、ＳＥＬＰ、ＷＥＥ１、ＨＬＡ－ＤＰＡ１、ＦＣＲＬ１、ＩＣＡ１、ＣＮＴＮＡＰ１、ＯＡＳ１、ＭＥＴＴＬ７Ａ、ＣＣＲ６、ＨＬＡ－ＤＲＢ４、ＡＮＸＡ２Ｐ３、ＳＴＡＭ、ＨＬＡ－ＤＱＢ２、ＬＧＡＬＳ１、ＡＮＸＡ２、ＰＩ１６、ＤＵＳＰ４、ＬＡＹＮ、ＡＮＸＡ２Ｐ２、ＰＴＰＬＡ、ＡＮＸＡ２Ｐ１、ＺＮＦ３６５、ＬＡＩＲ２、ＬＯＣ５４１４７１、ＲＡＳＧＲＰ４、ＢＣＡＳ１、ＵＴＳ２、ＭＩＡＴ、ＰＲＤＭ１、ＳＥＭＡ３Ｇ、ＦＡＭ１２９Ａ、ＨＰＧＤ、ＮＣＦ４、ＬＧＡＬＳ３、ＣＥＡＣＡＭ４、ＪＡＫＭＩＰ１、ＴＩＧＩＴ、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＩＫＺＦ２、ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＦＡＮＫ１、ＲＴＫＮ２、ＴＲＩＢ１、ＦＣＲＬ３及びＦＯＸＰ３を含む。

遺伝子セット「Ｄｏｗｎｓｔｅｍｎｅｓｓ」は、以下の遺伝子：ＡＣＥ、ＢＡＴＦ、ＣＤＫ６、ＣＨＤ２、ＥＲＣＣ２、ＨＯＸＢ４、ＭＥＯＸ１、ＳＦＲＰ１、ＳＰ７、ＳＲＦ、ＴＡＬ１及びＸＲＣＣ５を含む。

遺伝子セット「Ｕｐｈｙｐｏｘｉａ」は、以下の遺伝子：ＡＢＣＢ１、ＡＣＡＴ１、ＡＤＭ、ＡＤＯＲＡ２Ｂ、ＡＫ２、ＡＫ３、ＡＬＤＨ１Ａ１、ＡＬＤＨ１Ａ３、ＡＬＤＯＡ、ＡＬＤＯＣ、ＡＮＧＰＴ２、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＸＡ１、ＡＮＸＡ２、ＡＮＸＡ５、ＡＲＨＧＡＰ５、ＡＲＳＥ、ＡＲＴ１、ＢＡＣＥ２、ＢＡＴＦ３、ＢＣＬ２Ｌ１、ＢＣＬ２Ｌ２、ＢＨＬＨＥ４０、ＢＨＬＨＥ４１、ＢＩＫ、ＢＩＲＣ２、ＢＮＩＰ３、ＢＮＩＰ３Ｌ、ＢＰＩ、ＢＴＧ１、Ｃ１１ｏｒｆ２、Ｃ７ｏｒｆ６８、ＣＡ１２、ＣＡ９、ＣＡＬＤ１、ＣＣＮＧ２、ＣＣＴ６Ａ、ＣＤ９９、ＣＤＫ１、ＣＤＫＮ１Ａ、ＣＤＫＮ１Ｂ、ＣＩＴＥＤ２、ＣＬＫ１、ＣＮＯＴ７、ＣＯＬ４Ａ５、ＣＯＬ５Ａ１、ＣＯＬ５Ａ２、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＰ、ＣＴＳＤ、ＣＸＣＲ４、Ｄ４Ｓ２３４Ｅ、ＤＤＩＴ３、ＤＤＩＴ４、１－Ｄｅｃ、ＤＫＣ１、ＤＲ１、ＥＤＮ１、ＥＤＮ２、ＥＦＮＡ１、ＥＧＦ、ＥＧＲ１、ＥＩＦ４Ａ３、ＥＬＦ３、ＥＬＬ２、ＥＮＧ、ＥＮＯ１、ＥＮＯ３、ＥＮＰＥＰ、ＥＰＯ、ＥＲＲＦＩ１、ＥＴＳ１、Ｆ３、ＦＡＢＰ５、ＦＧＦ３、ＦＫＢＰ４、ＦＬＴ１、ＦＮ１、ＦＯＳ、ＦＴＬ、ＧＡＰＤＨ、ＧＢＥ１、ＧＬＲＸ、ＧＰＩ、ＧＰＲＣ５Ａ、ＨＡＰ１、ＨＢＰ１、ＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ９、ＨＥＲＣ３、ＨＥＲＰＵＤ１、ＨＧＦ、ＨＩＦ１Ａ、ＨＫ１、ＨＫ２、ＨＬＡ－ＤＱＢ１、ＨＭＯＸ１、ＨＭＯＸ２、ＨＳＰＡ５、ＨＳＰＤ１、ＨＳＰＨ１、ＨＹＯＵ１、ＩＣＡＭ１、ＩＤ２、ＩＦＩ２７、ＩＧＦ２、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ５、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＮＳＩＧ１、ＩＲＦ６、ＩＴＧＡ５、ＪＵＮ、ＫＤＲ、ＫＲＴ１４、ＫＲＴ１８、ＫＲＴ１９、ＬＤＨＡ、ＬＤＨＢ、ＬＥＰ、ＬＧＡＬＳ１、ＬＯＮＰ１、ＬＯＸ、ＬＲＰ１、ＭＡＰ４、ＭＥＴ、ＭＩＦ、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ２、ＭＭＰ７、ＭＰＩ、ＭＴ１Ｌ、ＭＴＬ３Ｐ、ＭＵＣ１、ＭＸＩ１、ＮＤＲＧ１、ＮＦＩＬ３、ＮＦＫＢ１、ＮＦＫＢ２、ＮＯＳ１、ＮＯＳ２、ＮＯＳ２Ｐ１、ＮＯＳ２Ｐ２、ＮＯＳ３、ＮＲ３Ｃ１、ＮＲ４Ａ１、ＮＴ５Ｅ、ＯＤＣ１、Ｐ４ＨＡ１、Ｐ４ＨＡ２、ＰＡＩＣＳ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＫ３、ＰＦＫＦＢ１、ＰＦＫＦＢ３、ＰＦＫＦＢ４、ＰＦＫＬ、ＰＧＡＭ１、ＰＧＦ、ＰＧＫ１、ＰＧＫ２、ＰＧＭ１、ＰＩＭ１、ＰＩＭ２、ＰＫＭ２、ＰＬＡＵ、ＰＬＡＵＲ、ＰＬＩＮ２、ＰＬＯＤ２、ＰＮＮ、ＰＮＰ、ＰＯＬＭ、ＰＰＡＲＡ、ＰＰＡＴ、ＰＲＯＫ１、ＰＳＭＡ３、ＰＳＭＤ９、ＰＴＧＳ１、ＰＴＧＳ２、ＱＳＯＸ１、ＲＢＰＪ、ＲＥＬＡ、ＲＩＯＫ３、ＲＮＡＳＥＬ、ＲＰＬ３６Ａ、ＲＲＰ９、ＳＡＴ１、ＳＥＲＰＩＮＢ２、ＳＥＲＰＩＮＥ１、ＳＧＳＭ２、ＳＩＡＨ２、ＳＩＮ３Ａ、ＳＩＲＰＡ、ＳＬＣ１６Ａ１、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ２０Ａ１、ＳＬＣ２Ａ１、ＳＬＣ２Ａ３、ＳＬＣ３Ａ２、ＳＬＣ６Ａ１０Ｐ、ＳＬＣ６Ａ１６、ＳＬＣ６Ａ６、ＳＬＣ６Ａ８、ＳＯＲＬ１、ＳＰＰ１、ＳＲＳＦ６、ＳＳＳＣＡ１、ＳＴＣ２、ＳＴＲＡ１３、ＳＹＴ７、ＴＢＰＬ１、ＴＣＥＡＬ１、ＴＥＫ、ＴＦ、ＴＦＦ３、ＴＦＲＣ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ３、ＴＧＦＢＩ、ＴＧＭ２、ＴＨ、ＴＨＢＳ１、ＴＨＢＳ２、ＴＩＭＭ１７Ａ、ＴＮＦＡＩＰ３、ＴＰ５３、ＴＰＢＧ、ＴＰＤ５２、ＴＰＩ１、ＴＸＮ、ＴＸＮＩＰ、ＵＭＰＳ、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、ＶＩＭ、ＶＰＳ１１及びＸＲＣＣ６を含む。

遺伝子セット「Ｕｐａｕｔｏｐｈａｇｙ」は、以下の遺伝子：ＡＢＬ１、ＡＣＢＤ５、ＡＣＩＮ１、ＡＣＴＲＴ１、ＡＤＡＭＴＳ７、ＡＫＲ１Ｅ２、ＡＬＫＢＨ５、ＡＬＰＫ１、ＡＭＢＲＡ１、ＡＮＸＡ５、ＡＮＸＡ７、ＡＲＳＢ、ＡＳＢ２、ＡＴＧ１０、ＡＴＧ１２、ＡＴＧ１３、ＡＴＧ１４、ＡＴＧ１６Ｌ１、ＡＴＧ１６Ｌ２、ＡＴＧ２Ａ、ＡＴＧ２Ｂ、ＡＴＧ３、ＡＴＧ４Ａ、ＡＴＧ４Ｂ、ＡＴＧ４Ｃ、ＡＴＧ４Ｄ、ＡＴＧ５、ＡＴＧ７、ＡＴＧ９Ａ、ＡＴＧ９Ｂ、ＡＴＰ１３Ａ２、ＡＴＰ１Ｂ１、ＡＴＰＡＦ１－ＡＳ１、ＡＴＰＩＦ１、ＢＥＣＮ１、ＢＥＣＮ１Ｐ１、ＢＬＯＣ１Ｓ１、ＢＭＰ２ＫＬ、ＢＮＩＰ１、ＢＮＩＰ３、ＢＯＣ、Ｃ１１ｏｒｆ２、Ｃ１１ｏｒｆ４１、Ｃ１２ｏｒｆ４４、Ｃ１２ｏｒｆ５、Ｃ１４ｏｒｆ１３３、Ｃ１ｏｒｆ２１０、Ｃ５、Ｃ６ｏｒｆ１０６、Ｃ７ｏｒｆ５９、Ｃ７ｏｒｆ６８、Ｃ８ｏｒｆ５９、Ｃ９ｏｒｆ７２、ＣＡ７、ＣＡＬＣＢ、ＣＡＬＣＯＣＯ２、ＣＡＰＳ、ＣＣＤＣ３６、ＣＤ１６３Ｌ１、ＣＤ９３、ＣＤＣ３７、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＨＡＦ１Ｂ、ＣＨＭＰ２Ａ、ＣＨＭＰ２Ｂ、ＣＨＭＰ３、ＣＨＭＰ４Ａ、ＣＨＭＰ４Ｂ、ＣＨＭＰ４Ｃ、ＣＨＭＰ６、ＣＨＳＴ３、ＣＩＳＤ２、ＣＬＤＮ７、ＣＬＥＣ１６Ａ、ＣＬＮ３、ＣＬＶＳ１、ＣＯＸ８Ａ、ＣＰＡ３、ＣＲＮＫＬ１、ＣＳＰＧ５、ＣＴＳＡ、ＣＴＳＢ、ＣＴＳＤ、ＣＸＣＲ７、ＤＡＰ、ＤＫＫＬ１、ＤＮＡＡＦ２、ＤＰＦ３、ＤＲＡＭ１、ＤＲＡＭ２、ＤＹＮＬＬ１、ＤＹＮＬＬ２、ＤＺＡＮＫ１、ＥＩ２４、ＥＩＦ２Ｓ１、ＥＰＧ５、ＥＰＭ２Ａ、ＦＡＢＰ１、ＦＡＭ１２５Ａ、ＦＡＭ１３１Ｂ、ＦＡＭ１３４Ｂ、ＦＡＭ１３Ｂ、ＦＡＭ１７６Ａ、ＦＡＭ１７６Ｂ、ＦＡＭ４８Ａ、ＦＡＮＣＣ、ＦＡＮＣＦ、ＦＡＮＣＬ、ＦＢＸＯ７、ＦＣＧＲ３Ｂ、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ７、ＦＧＦＢＰ１、ＦＩＳ１、ＦＮＢＰ１Ｌ、ＦＯＸＯ１、ＦＵＮＤＣ１、ＦＵＮＤＣ２、ＦＸＲ２、ＧＡＢＡＲＡＰ、ＧＡＢＡＲＡＰＬ１、ＧＡＢＡＲＡＰＬ２、ＧＡＢＡＲＡＰＬ３、ＧＡＢＲＡ５、ＧＤＦ５、ＧＭＩＰ、ＨＡＰ１、ＨＡＰＬＮ１、ＨＢＸＩＰ、ＨＣＡＲ１、ＨＤＡＣ６、ＨＧＳ、ＨＩＳＴ１Ｈ３Ａ、ＨＩＳＴ１Ｈ３Ｂ、ＨＩＳＴ１Ｈ３Ｃ、ＨＩＳＴ１Ｈ３Ｄ、ＨＩＳＴ１Ｈ３Ｅ、ＨＩＳＴ１Ｈ３Ｆ、ＨＩＳＴ１Ｈ３Ｇ、ＨＩＳＴ１Ｈ３Ｈ、ＨＩＳＴ１Ｈ３Ｉ、ＨＩＳＴ１Ｈ３Ｊ、ＨＫ２、ＨＭＧＢ１、ＨＰＲ、ＨＳＦ２ＢＰ、ＨＳＰ９０ＡＡ１、ＨＳＰＡ８、ＩＦＩ１６、ＩＰＰＫ、ＩＲＧＭ、ＩＳＴ１、ＩＴＧＢ４、ＩＴＰＫＣ、ＫＣＮＫ３、ＫＣＮＱ１、ＫＩＡＡ０２２６、ＫＩＡＡ１３２４、ＫＲＣＣ１、ＫＲＴ１５、ＫＲＴ７３、ＬＡＭＰ１、ＬＡＭＰ２、ＬＡＭＴＯＲ１、ＬＡＭＴＯＲ２、ＬＡＭＴＯＲ３、ＬＡＲＰ１Ｂ、ＬＥＮＧ９、ＬＧＡＬＳ８、ＬＩＸ１、ＬＩＸ１Ｌ、ＬＭＣＤ１、ＬＲＲＫ２、ＬＲＳＡＭ１、ＬＳＭ４、ＭＡＰ１Ａ、ＭＡＰ１ＬＣ３Ａ、ＭＡＰ１ＬＣ３Ｂ、ＭＡＰ１ＬＣ３Ｂ２、ＭＡＰ１ＬＣ３Ｃ、ＭＡＰ１Ｓ、ＭＡＰ２Ｋ１、ＭＡＰ３Ｋ１２、ＭＡＲＫ２、ＭＢＤ５、ＭＤＨ１、ＭＥＸ３Ｃ、ＭＦＮ１、ＭＦＮ２、ＭＬＳＴ８、ＭＲＰＳ１０、ＭＲＰＳ２、ＭＳＴＮ、ＭＴＥＲＦＤ１、ＭＴＭＲ１４、ＭＴＭＲ３、ＭＴＯＲ、ＭＴＳＳ１、ＭＹＨ１１、ＭＹＬＫ、ＭＹＯＭ１、ＮＢＲ１、ＮＤＵＦＢ９、ＮＥＦＭ、ＮＨＬＲＣ１、ＮＭＥ２、ＮＰＣ１、ＮＲ２Ｃ２、ＮＲＢＦ２、ＮＴＨＬ１、ＮＵＰ９３、ＯＢＳＣＮ、ＯＰＴＮ、Ｐ２ＲＸ５、ＰＡＣＳ２、ＰＡＲＫ２、ＰＡＲＫ７、ＰＤＫ１、ＰＤＫ４、ＰＥＸ１３、ＰＥＸ３、ＰＦＫＰ、ＰＧＫ２、ＰＨＦ２３、ＰＨＹＨＩＰ、ＰＩ４Ｋ２Ａ、ＰＩＫ３Ｃ３、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３ＣＢ、ＰＩＫ３Ｒ４、ＰＩＮＫ１、ＰＬＥＫＨＭ１、ＰＬＯＤ２、ＰＮＰＯ、ＰＰＡＲＧＣ１Ａ、ＰＰＹ、ＰＲＫＡＡ１、ＰＲＫＡＡ２、ＰＲＫＡＢ１、ＰＲＫＡＢ２、ＰＲＫＡＧ１、ＰＲＫＡＧ２、ＰＲＫＡＧ３、ＰＲＫＤ２、ＰＲＫＧ１、ＰＳＥＮ１、ＰＴＰＮ２２、ＲＡＢ１２、ＲＡＢ１Ａ、ＲＡＢ１Ｂ、ＲＡＢ２３、ＲＡＢ２４、ＲＡＢ３３Ｂ、ＲＡＢ３９、ＲＡＢ７Ａ、ＲＢ１ＣＣ１、ＲＢＭ１８、ＲＥＥＰ２、ＲＥＰ１５、ＲＦＷＤ３、ＲＧＳ１９、ＲＨＥＢ、ＲＩＭＳ３、ＲＮＦ１８５、ＲＮＦ４１、ＲＰＳ２７Ａ、ＲＰＴＯＲ、ＲＲＡＧＡ、ＲＲＡＧＢ、ＲＲＡＧＣ、ＲＲＡＧＤ、Ｓ１００Ａ８、Ｓ１００Ａ９、ＳＣＮ１Ａ、ＳＥＲＰＩＮＢ１０、ＳＥＳＮ２、ＳＦＲＰ４、ＳＨ３ＧＬＢ１、ＳＩＲＴ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ１Ａ４、ＳＬＣ２２Ａ３、ＳＬＣ２５Ａ１９、ＳＬＣ３５Ｂ３、ＳＬＣ３５Ｃ１、ＳＬＣ３７Ａ４、ＳＬＣ６Ａ１、ＳＬＣＯ１Ａ２、ＳＭＵＲＦ１、ＳＮＡＰ２９、ＳＮＡＰＩＮ、ＳＮＦ８、ＳＮＲＰＢ、ＳＮＲＰＢ２、ＳＮＲＰＤ１、ＳＮＲＰＦ、ＳＮＴＧ１、ＳＮＸ１４、ＳＰＡＴＡ１８、ＳＱＳＴＭ１、ＳＲＰＸ、ＳＴＡＭ、ＳＴＡＭ２、ＳＴＡＴ２、ＳＴＢＤ１、ＳＴＫ１１、ＳＴＫ３２Ａ、ＳＴＯＭ、ＳＴＸ１２、ＳＴＸ１７、ＳＵＰＴ３Ｈ、ＴＢＣ１Ｄ１７、ＴＢＣ１Ｄ２５、ＴＢＣ１Ｄ５、ＴＣＩＲＧ１、ＴＥＡＤ４、ＴＥＣＰＲ１、ＴＥＣＰＲ２、ＴＦＥＢ、ＴＭ９ＳＦ１、ＴＭＢＩＭ６、ＴＭＥＭ２０３、ＴＭＥＭ２０８、ＴＭＥＭ３９Ａ、ＴＭＥＭ３９Ｂ、ＴＭＥＭ５９、ＴＭＥＭ７４、ＴＭＥＭ９３、ＴＮＩＫ、ＴＯＬＬＩＰ、ＴＯＭＭ２０、ＴＯＭＭ２２、ＴＯＭＭ４０、ＴＯＭＭ５、ＴＯＭＭ６、ＴＯＭＭ７、ＴＯＭＭ７０Ａ、ＴＰ５３ＩＮＰ１、ＴＰ５３ＩＮＰ２、ＴＲＡＰＰＣ８、ＴＲＥＭ１、ＴＲＩＭ１７、ＴＲＩＭ５、ＴＳＧ１０１、ＴＸＬＮＡ、ＵＢＡ５２、ＵＢＢ、ＵＢＣ、ＵＢＱＬＮ１、ＵＢＱＬＮ２、ＵＢＱＬＮ４、ＵＬＫ１、ＵＬＫ２、ＵＬＫ３、ＵＳＰ１０、ＵＳＰ１３、ＵＳＰ３０、ＵＶＲＡＧ、ＶＡＭＰ７、ＶＡＭＰ８、ＶＤＡＣ１、ＶＭＰ１、ＶＰＳ１１、ＶＰＳ１６、ＶＰＳ１８、ＶＰＳ２５、ＶＰＳ２８、ＶＰＳ３３Ａ、ＶＰＳ３３Ｂ、ＶＰＳ３６、ＶＰＳ３７Ａ、ＶＰＳ３７Ｂ、ＶＰＳ３７Ｃ、ＶＰＳ３７Ｄ、ＶＰＳ３９、ＶＰＳ４１、ＶＰＳ４Ａ、ＶＰＳ４Ｂ、ＶＴＡ１、ＶＴＩ１Ａ、ＶＴＩ１Ｂ、ＷＤＦＹ３、ＷＤＲ４５、ＷＤＲ４５Ｌ、ＷＩＰＩ１、ＷＩＰＩ２、ＸＢＰ１、ＹＩＰＦ１、ＺＣＣＨＣ１７、ＺＦＹＶＥ１、ＺＫＳＣＡＮ３、ＺＮＦ１８９、ＺＮＦ５９３及びＺＮＦ６８１を含む。

遺伝子セット「Ｕｐｒｅｓｔｉｎｇｖｓ．Ｄｏｗｎａｃｔｉｖａｔｅｄ」は、以下の遺伝子：ＡＢＣＡ７、ＡＢＣＦ３、ＡＣＡＰ２、ＡＭＴ、ＡＮＫＨ、ＡＴＦ７ＩＰ２、ＡＴＧ１４、ＡＴＰ１Ａ１、ＡＴＸＮ７、ＡＴＸＮ７Ｌ３Ｂ、ＢＣＬ７Ａ、ＢＥＸ４、ＢＳＤＣ１、ＢＴＧ１、ＢＴＧ２、ＢＴＮ３Ａ１、Ｃ１１ｏｒｆ２１、Ｃ１９ｏｒｆ２２、Ｃ２１ｏｒｆ２、ＣＡＭＫ２Ｇ、ＣＡＲＳ２、ＣＣＮＬ２、ＣＤ２４８、ＣＤ５、ＣＤ５５、ＣＥＰ１６４、ＣＨＫＢ、ＣＬＫ１、ＣＬＫ４、ＣＴＳＬ１、ＤＢＰ、ＤＣＵＮ１Ｄ２、ＤＥＮＮＤ１Ｃ、ＤＧＫＤ、ＤＬＧ１、ＤＵＳＰ１、ＥＡＰＰ、ＥＣＥ１、ＥＣＨＤＣ２、ＥＲＢＢ２ＩＰ、ＦＡＭ１１７Ａ、ＦＡＭ１３４Ｂ、ＦＡＭ１３４Ｃ、ＦＡＭ１６９Ａ、ＦＡＭ１９０Ｂ、ＦＡＵ、ＦＬＪ１００３８、ＦＯＸＪ２、ＦＯＸＪ３、ＦＯＸＬ１、ＦＯＸＯ１、ＦＸＹＤ５、ＦＹＢ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＳＰＡ１Ｌ、ＨＹＡＬ２、ＩＣＡＭ２、ＩＦＩＴ５、ＩＦＩＴＭ１、ＩＫＢＫＢ、ＩＱＳＥＣ１、ＩＲＳ４、ＫＩＡＡ０６６４Ｌ３、ＫＩＡＡ０７４８、ＫＬＦ３、ＫＬＦ９、ＫＲＴ１８、ＬＥＦ１、ＬＩＮＣ００３４２、ＬＩＰＡ、ＬＩＰＴ１、ＬＬＧＬ２、ＬＭＢＲ１Ｌ、ＬＰＡＲ２、ＬＴＢＰ３、ＬＹＰＤ３、ＬＺＴＦＬ１、ＭＡＮＢＡ、ＭＡＰ２Ｋ６、ＭＡＰ３Ｋ１、ＭＡＲＣＨ８、ＭＡＵ２、ＭＧＥＡ５、ＭＭＰ８、ＭＰＯ、ＭＳＬ１、ＭＳＬ３、ＭＹＨ３、ＭＹＬＩＰ、ＮＡＧＰＡ、ＮＤＳＴ２、ＮＩＳＣＨ、ＮＫＴＲ、ＮＬＲＰ１、ＮＯＳＩＰ、ＮＰＩＰ、ＮＵＭＡ１、ＰＡＩＰ２Ｂ、ＰＡＰＤ７、ＰＢＸＩＰ１、ＰＣＩＦ１、ＰＩ４ＫＡ、ＰＬＣＬ２、ＰＬＥＫＨＡ１、ＰＬＥＫＨＦ２、ＰＮＩＳＲ、ＰＰＦＩＢＰ２、ＰＲＫＣＡ、ＰＲＫＣＺ、ＰＲＫＤ３、ＰＲＭＴ２、ＰＴＰ４Ａ３、ＰＸＮ、ＲＡＳＡ２、ＲＡＳＡ３、ＲＡＳＧＲＰ２、ＲＢＭ３８、ＲＥＰＩＮ１、ＲＮＦ３８、ＲＮＦ４４、ＲＯＲ１、ＲＰＬ３０、ＲＰＬ３２、ＲＰＬＰ１、ＲＰＳ２０、ＲＰＳ２４、ＲＰＳ２７、ＲＰＳ６、ＲＰＳ９、ＲＸＲＡ、ＲＹＫ、ＳＣＡＮＤ２、ＳＥＭＡ４Ｃ、ＳＥＴＤ１Ｂ、ＳＥＴＤ６、ＳＥＴＸ、ＳＦ３Ｂ１、ＳＨ２Ｂ１、ＳＬＣ２Ａ４ＲＧ、ＳＬＣ３５Ｅ２Ｂ、ＳＬＣ４６Ａ３、ＳＭＡＧＰ、ＳＭＡＲＣＥ１、ＳＭＰＤ１、ＳＮＰＨ、ＳＰ１４０Ｌ、ＳＰＡＴＡ６、ＳＰＧ７、ＳＲＥＫ１ＩＰ１、ＳＲＳＦ５、ＳＴＡＴ５Ｂ、ＳＶＩＬ、ＳＹＦ２、ＳＹＮＪ２ＢＰ、ＴＡＦ１Ｃ、ＴＢＣ１Ｄ４、ＴＣＦ２０、ＴＥＣＴＡ、ＴＥＳ、ＴＭＥＭ１２７、ＴＭＥＭ１５９、ＴＭＥＭ３０Ｂ、ＴＭＥＭ６６、ＴＭＥＭ８Ｂ、ＴＰ５３ＴＧ１、ＴＰＣＮ１、ＴＲＩＭ２２、ＴＲＩＭ４４、ＴＳＣ１、ＴＳＣ２２Ｄ１、ＴＳＣ２２Ｄ３、ＴＳＰＹＬ２、ＴＴＣ９、ＴＴＮ、ＵＢＥ２Ｇ２、ＵＳＰ３３、ＵＳＰ３４、ＶＡＭＰ１、ＶＩＬＬ、ＶＩＰＲ１、ＶＰＳ１３Ｃ、ＺＢＥＤ５、ＺＢＴＢ２５、ＺＢＴＢ４０、ＺＣ３Ｈ３、ＺＦＰ１６１、ＺＦＰ３６Ｌ１、ＺＦＰ３６Ｌ２、ＺＨＸ２、ＺＭＹＭ５、ＺＮＦ１３６、ＺＮＦ１４８、ＺＮＦ３１８、ＺＮＦ３５０、ＺＮＦ５１２Ｂ、ＺＮＦ６０９、ＺＮＦ６５２、ＺＮＦ８３、ＺＮＦ８６２及びＺＮＦ９１を含む。

遺伝子セット「Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅｌｙｕｐｉｎｍｅｍｏｒｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ」は、以下の遺伝子：ＭＴＣＨ２、ＲＡＢ６Ｃ、ＫＩＡＡ０１９５、ＳＥＴＤ２、Ｃ２ｏｒｆ２４、ＮＲＤ１、ＧＮＡ１３、ＣＯＰＡ、ＳＥＬＴ、ＴＮＩＰ１、ＣＢＦＡ２Ｔ２、ＬＲＰ１０、ＰＲＫＣＩ、ＢＲＥ、ＡＮＫＳ１Ａ、ＰＮＰＬＡ６、ＡＲＬ６ＩＰ１、ＷＤＦＹ１、ＭＡＰＫ１、ＧＰＲ１５３、ＳＨＫＢＰ１、ＭＡＰ１ＬＣ３Ｂ２、ＰＩＰ４Ｋ２Ａ、ＨＣＮ３、ＧＴＰＢＰ１、ＴＬＮ１、Ｃ４ｏｒｆ３４、ＫＩＦ３Ｂ、ＴＣＩＲＧ１、ＰＰＰ３ＣＡ、ＡＴＧ４Ｄ、ＴＹＭＰ、ＴＲＡＦ６、Ｃ１７ｏｒｆ７６、ＷＩＰＦ１、ＦＡＭ１０８Ａ１、ＭＹＬ６、ＮＲＭ、ＳＰＣＳ２、ＧＧＴ３Ｐ、ＧＡＬＫ１、ＣＬＩＰ４、ＡＲＬ４Ｃ、ＹＷＨＡＱ、ＬＰＣＡＴ４、ＡＴＧ２Ａ、ＩＤＳ、ＴＢＣ１Ｄ５、ＤＭＰＫ、ＳＴ６ＧＡＬＮＡＣ６、ＲＥＥＰ５、ＡＢＨＤ６、ＫＩＡＡ０２４７、ＥＭＢ、ＴＳＥＮ５４、ＳＰＩＲＥ２、ＰＩＷＩＬ４、ＺＳＣＡＮ２２、ＩＣＡＭ１、ＣＨＤ９、ＬＰＩＮ２、ＳＥＴＤ８、ＺＣ３Ｈ１２Ａ、ＵＬＢＰ３、ＩＬ１５ＲＡ、ＨＬＡ－ＤＱＢ２、ＬＣＰ１、ＣＨＰ、ＲＵＮＸ３、ＴＭＥＭ４３、ＲＥＥＰ４、ＭＥＦ２Ｄ、ＡＢＬ１、ＴＭＥＭ３９Ａ、ＰＣＢＰ４、ＰＬＣＤ１、ＣＨＳＴ１２、ＲＡＳＧＲＰ１、Ｃ１ｏｒｆ５８、Ｃ１１ｏｒｆ６３、Ｃ６ｏｒｆ１２９、ＦＨＯＤ１、ＤＫＦＺｐ４３４Ｆ１４２、ＰＩＫ３ＣＧ、ＩＴＰＲ３、ＢＴＧ３、Ｃ４ｏｒｆ５０、ＣＮＮＭ３、ＩＦＩ１６、ＡＫ１、ＣＤＫ２ＡＰ１、ＲＥＬ、ＢＣＬ２Ｌ１、ＭＶＤ、ＴＴＣ３９Ｃ、ＰＬＥＫＨＡ２、ＦＫＢＰ１１、ＥＭＬ４、ＦＡＮＣＡ、ＣＤＣＡ４、ＦＵＣＡ２、ＭＦＳＤ１０、ＴＢＣＤ、ＣＡＰＮ２、ＩＱＧＡＰ１、ＣＨＳＴ１１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＭＹＯ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＤＬＧ３、ＭＸＤ４、ＲＡＬＧＤＳ、Ｓ１ＰＲ５、ＷＳＢ２、ＣＣＲ３、ＴＩＰＡＲＰ、ＳＰ１４０、ＣＤ１５１、ＳＯＸ１３、ＫＲＴＡＰ５－２、ＮＦ１、ＰＥＡ１５、ＰＡＲＰ８、ＲＮＦ１６６、ＵＥＶＬＤ、ＬＩＭＫ１、ＣＡＣＮＢ１、ＴＭＸ４、ＳＬＣ６Ａ６、ＬＢＡ１、ＳＶ２Ａ、ＬＬＧＬ２、ＩＲＦ１、ＰＰＰ２Ｒ５Ｃ、ＣＤ９９、ＲＡＰＧＥＦ１、ＰＰＰ４Ｒ１、ＯＳＢＰＬ７、ＦＯＸＰ４、ＳＬＡ２、ＴＢＣ１Ｄ２Ｂ、ＳＴ７、ＪＡＺＦ１、ＧＧＡ２、ＰＩ４Ｋ２Ａ、ＣＤ６８、ＬＰＧＡＴ１、ＳＴＸ１１、ＺＡＫ、ＦＡＭ１６０Ｂ１、ＲＯＲＡ、Ｃ８ｏｒｆ８０、ＡＰＯＢＥＣ３Ｆ、ＴＧＦＢＩ、ＤＮＡＪＣ１、ＧＰＲ１１４、ＬＲＰ８、ＣＤ６９、ＣＭＩＰ、ＮＡＴ１３、ＴＧＦＢ１、ＦＬＪ０００４９、ＡＮＴＸＲ２、ＮＲ４Ａ３、ＩＬ１２ＲＢ１、ＮＴＮＧ２、ＲＤＸ、ＭＬＬＴ４、ＧＰＲＩＮ３、ＡＤＣＹ９、ＣＤ３００Ａ、ＳＣＤ５、ＡＢＩ３、ＰＴＰＮ２２、ＬＧＡＬＳ１、ＳＹＴＬ３、ＢＭＰＲ１Ａ、ＴＢＫ１、ＰＭＡＩＰ１、ＲＡＳＧＥＦ１Ａ、ＧＣＮＴ１、ＧＡＢＡＲＡＰＬ１、ＳＴＯＭ、ＣＡＬＨＭ２、ＡＢＣＡ２、ＰＰＰ１Ｒ１６Ｂ、ＳＹＮＥ２、ＰＡＭ、Ｃ１２ｏｒｆ７５、ＣＬＣＦ１、ＭＸＲＡ７、ＡＰＯＢＥＣ３Ｃ、ＣＬＳＴＮ３、ＡＣＯＴ９、ＨＩＰ１、ＬＡＧ３、ＴＮＦＡＩＰ３、ＤＣＢＬＤ１、ＫＬＦ６、ＣＡＣＮＢ３、ＲＮＦ１９Ａ、ＲＡＢ２７Ａ、ＦＡＤＳ３、ＤＬＧ５、ＡＰＯＢＥＣ３Ｄ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＡＣＴＮ４、ＴＢＫＢＰ１、ＡＴＸＮ１、ＡＲＡＰ２、ＡＲＨＧＥＦ１２、ＦＡＭ５３Ｂ、ＭＡＮ１Ａ１、ＦＡＭ３８Ａ、ＰＬＸＮＣ１、ＧＲＬＦ１、ＳＲＧＮ、ＨＬＡ－ＤＲＢ５、Ｂ４ＧＡＬＴ５、ＷＩＰＩ１、ＰＴＰＲＪ、ＳＬＦＮ１１、ＤＵＳＰ２、ＡＮＸＡ５、ＡＨＮＡＫ、ＮＥＯ１、ＣＬＩＣ１、ＥＩＦ２Ｃ４、ＭＡＰ３Ｋ５、ＩＬ２ＲＢ、ＰＬＥＫＨＧ１、ＭＹＯ６、ＧＴＤＣ１、ＥＤＡＲＡＤＤ、ＧＡＬＭ、ＴＡＲＰ、ＡＤＡＭ８、ＭＳＣ、ＨＮＲＰＬＬ、ＳＹＴ１１、ＡＴＰ２Ｂ４、ＮＨＳＬ２、ＭＡＴＫ、ＡＲＨＧＡＰ１８、ＳＬＦＮ１２Ｌ、ＳＰＡＴＳ２Ｌ、ＲＡＢ２７Ｂ、ＰＩＫ３Ｒ３、ＴＰ５３ＩＮＰ１、ＭＢＯＡＴ１、ＧＹＧ１、ＫＡＴＮＡＬ１、ＦＡＭ４６Ｃ、ＺＣ３ＨＡＶ１Ｌ、ＡＮＸＡ２Ｐ２、ＣＴＮＮＡ１、ＮＰＣ１、Ｃ３ＡＲ１、ＣＲＩＭ１、ＳＨ２Ｄ２Ａ、ＥＲＮ１、ＹＰＥＬ１、ＴＢＸ２１、ＳＬＣ１Ａ４、ＦＡＳＬＧ、ＰＨＡＣＴＲ２、ＧＡＬＮＴ３、ＡＤＲＢ２、ＰＩＫ３ＡＰ１、ＴＬＲ３、ＰＬＥＫＨＡ５、ＤＵＳＰ１０、ＧＮＡＯ１、ＰＴＧＤＲ、ＦＲＭＤ４Ｂ、ＡＮＸＡ２、ＥＯＭＥＳ、ＣＡＤＭ１、ＭＡＦ、ＴＰＲＧ１、ＮＢＥＡＬ２、ＰＰＰ２Ｒ２Ｂ、ＰＥＬＯ、ＳＬＣ４Ａ４、ＫＬＲＦ１、ＦＯＳＬ２、ＲＧＳ２、ＴＧＦＢＲ３、ＰＲＦ１、ＭＹＯ１Ｆ、ＧＡＢ３、Ｃ１７ｏｒｆ６６、ＭＩＣＡＬ２、ＣＹＴＨ３、ＴＯＸ、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＳＹＮＥ１、ＷＥＥ１、ＰＹＨＩＮ１、Ｆ２Ｒ、ＰＬＤ１、ＴＨＢＳ１、ＣＤ５８、ＦＡＳ、ＮＥＴＯ２、ＣＸＣＲ６、ＳＴ６ＧＡＬＮＡＣ２、ＤＵＳＰ４、ＡＵＴＳ２、Ｃ１ｏｒｆ２１、ＫＬＲＧ１、ＴＮＩＰ３、ＧＺＭＡ、ＰＲＲ５Ｌ、ＰＲＤＭ１、ＳＴ８ＳＩＡ６、ＰＬＸＮＤ１、ＰＴＰＲＭ、ＧＦＰＴ２、ＭＹＢＬ１、ＳＬＡＭＦ７、ＦＬＪ１６６８６、ＧＮＬＹ、ＺＥＢ２、ＣＳＴ７、ＩＬ１８ＲＡＰ、ＣＣＬ５、ＫＬＲＤ１及びＫＬＲＢ１を含む。

遺伝子セット「ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＮ」は、以下の遺伝子：ＭＹＯ５Ａ、ＭＸＤ４、ＳＴＫ３、Ｓ１ＰＲ５、ＧＬＣＣＩ１、ＣＣＲ３、ＳＯＸ１３、ＫＲＴＡＰ５－２、ＰＥＡ１５、ＰＡＲＰ８、ＲＮＦ１６６、ＵＥＶＬＤ、ＬＩＭＫ１、ＳＬＣ６Ａ６、ＳＶ２Ａ、ＫＰＮＡ２、ＯＳＢＰＬ７、ＳＴ７、ＧＧＡ２、ＰＩ４Ｋ２Ａ、ＣＤ６８、ＺＡＫ、ＲＯＲＡ、ＴＧＦＢＩ、ＤＮＡＪＣ１、ＪＯＳＤ１、ＺＦＹＶＥ２８、ＬＲＰ８、ＯＳＢＰＬ３、ＣＭＩＰ、ＮＡＴ１３、ＴＧＦＢ１、ＡＮＴＸＲ２、ＮＲ４Ａ３、ＲＤＸ、ＡＤＣＹ９、ＣＨＮ１、ＣＤ３００Ａ、ＳＣＤ５、ＰＴＰＮ２２、ＬＧＡＬＳ１、ＲＡＳＧＥＦ１Ａ、ＧＣＮＴ１、ＧＬＵＬ、ＡＢＣＡ２、ＣＬＤＮＤ１、ＰＡＭ、ＣＬＣＦ１、ＭＸＲＡ７、ＣＬＳＴＮ３、ＡＣＯＴ９、ＭＥＴＲＮＬ、ＢＭＰＲ１Ａ、ＬＲＩＧ１、ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ、ＣＡＣＮＢ３、ＲＮＦ１９Ａ、ＲＡＢ２７Ａ、ＦＡＤＳ３、ＡＣＴＮ４、ＴＢＫＢＰ１、ＦＡＭ５３Ｂ、ＭＡＮ１Ａ１、ＦＡＭ３８Ａ、ＧＲＬＦ１、Ｂ４ＧＡＬＴ５、ＷＩＰＩ１、ＤＵＳＰ２、ＡＮＸＡ５、ＡＨＮＡＫ、ＣＬＩＣ１、ＭＡＰ３Ｋ５、ＳＴ８ＳＩＡ１、ＴＡＲＰ、ＡＤＡＭ８、ＭＡＴＫ、ＳＬＦＮ１２Ｌ、ＰＩＫ３Ｒ３、ＦＡＭ４６Ｃ、ＡＮＸＡ２Ｐ２、ＣＴＮＮＡ１、ＮＰＣ１、ＳＨ２Ｄ２Ａ、ＥＲＮ１、ＹＰＥＬ１、ＴＢＸ２１、ＳＴＯＭ、ＰＨＡＣＴＲ２、ＧＢＰ５、ＡＤＲＢ２、ＰＩＫ３ＡＰ１、ＤＵＳＰ１０、ＰＴＧＤＲ、ＥＯＭＥＳ、ＭＡＦ、ＴＰＲＧ１、ＮＢＥＡＬ２、ＮＣＡＰＨ、ＳＬＣ４Ａ４、ＦＯＳＬ２、ＲＧＳ２、ＴＧＦＢＲ３、ＭＹＯ１Ｆ、Ｃ１７ｏｒｆ６６、ＣＹＴＨ３、ＷＥＥ１、ＰＹＨＩＮ１、Ｆ２Ｒ、ＴＨＢＳ１、ＣＤ５８、ＡＵＴＳ２、ＦＡＭ１２９Ａ、ＴＮＩＰ３、ＧＺＭＡ、ＰＲＲ５Ｌ、ＰＲＤＭ１、ＰＬＸＮＤ１、ＰＴＰＲＭ、ＧＦＰＴ２、ＭＹＢＬ１、ＳＬＡＭＦ７、ＺＥＢ２、ＣＳＴ７、ＣＣＬ５、ＧＺＭＫ及びＫＬＲＢ１を含む。

また、類似のプロセス及び／又は特徴を記述する他の遺伝子セットを用いて、前述した細胞表現型を特性決定することもできる。

ＣｅｌｌＲａｎｇｅｒＶＤＪを使用して、単一細胞ＶＤＪ配列及び各単一細胞５‘ライブラリーのアノテーションを作成した。データ解析及び視覚化のために、ＬｏｕｐｅＣｅｌｌＢｒｏｗｓｅｒソフトウェア及びＢｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒパッケージを用いた。

結果
この実施例は、インプット細胞として使用される精製Ｔ細胞、ＡＲＭプロセスを用いて製造されるＣＡＲＴ細胞（「第１日」細胞と標識される）及びＴＭプロセスを用いて製造されるＣＡＲＴ細胞（「第９日」細胞と標識される）間のＴ細胞状態を単一細胞ＲＮＡ－ｓｅｑ（ｓｃＲＮＡ－ｓｅｑ）により比較することを目標とする。加えて、単一細胞ＴＣＲ－ｓｅｑ（ｓｃＴＣＲ－ｓｅｑ）を実施して、クローン性を調べ、インプットから製造後材料への細胞分化を追跡する。

図２３Ａ～２３Ｃに示すように、インプット細胞は、最も少ない発現遺伝子及びＵＭＩを有したが、これは、これらの細胞が、転写的に活性ではなく、休止状態であることを示唆している。第１日及び第９日細胞は、より多くの遺伝子を発現し、第９日細胞が転写的に最も活性であった。同様の結果を図２４Ａ～２４Ｄに示す。インプット細胞は、増殖遺伝子を発現していない（図２４Ａ及び２４Ｄ）。

追加の遺伝子セット解析を図２５Ａ～２５Ｅに示す。メディアン遺伝子セットスコア中央値を用いて、様々な細胞集団を比較した。第１日細胞及びインプット細胞は、より若く、よりステム様メモリー状態であった（図２５Ａ～２５Ｃ）。図２５Ａでは、第１日細胞、第９日細胞及びインプット細胞のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＳＣＭ）中央値は、それぞれ－０．０８４、０．０３５及び－０．１である。図２５Ｂでは、第１日細胞、第９日細胞及びインプット細胞のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＵｐＴＥＭｖｓ．ＤｏｗｎＴＳＣＭ）中央値は、それぞれ－０．０８２、０．０８７及び－０．０７１である。図２５Ｃでは、第１日細胞、第９日細胞及びインプット細胞のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（ＤｏｗｎＳｔｅｍｎｅｓｓ）中央値は、それぞれ－０．０６２、０．１４及び－０．０８１である。

加えて、第１日細胞は、第９日細胞と比べて、より理想的代謝状態にあった（図２５Ｄ及び２５Ｅ）。図２５Ｄでは、第１日細胞、第９日細胞及びインプット細胞のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（Ｕｐｈｙｐｏｘｉａ）中央値は、それぞれ０．０１９、０．１１及び－０．０９６である。図２５Ｅでは、第１日細胞、第９日細胞及びインプット細胞のＧｅｎｅＳｅｔＳｃｏｒｅ（Ｕｐａｕｔｏｐｈａｇｙ）中央値は、それぞれ０．０６６、０．１１及び－０．０９である。

遺伝子発現に基づいて、インプット細胞は、４つのクラスターを含有する。クラスター０は、ＬＭＮＡ、Ｓ１００Ａ４などの高度発現を特徴とする。クラスター１は、ＲＰ９１３、ＰＲＫＣＱ－ＡＳ１などの高度発現を特徴とする。クラスター２は、ＰＲ１１－２９１Ｂ２１．２、ＣＤ８Ｂなどの高度発現を特徴とする。クラスター３は、ＮＫＧ７、ＧＺＭＨ、ＣＣＬ５、ＣＳＴ７、ＧＮＬＹ、ＦＧＦＢＰ２、ＧＺＭＡ、ＣＣＬ４、ＣＴＳＷ、ＣＤ８Ａなどの高度発現を特徴とする。インプット細胞のＴ分布型確率的近傍埋め込み法（Ｔ－ＤｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄＳｔｏｃｈａｓｔｉｃＮｅｉｇｈｂｏｒＥｍｂｅｄｄｉｎｇ）（ＴＳＮＥ）プロットにおいて、クラスター３は他の細胞から突出しており、クラスター１及び２は、識別するのが難しい。

図２６Ａ～２６Ｃに示す遺伝子セット解析によれば、クラスター０及びクラスター３は、Ｔエフェクター表現型が濃縮されたクラスター１及びクラスター２と比べて、Ｔ調節表現型が濃縮されていた。クラスター３は、後期メモリー／エフェクターメモリー（ＴＥＭ）細胞により占められ、クラスター１及びクラスター２は、早期メモリー及びナイーブ細胞であり、クラスター０は、中間にある。インプット細胞の大部分は、早期メモリー、ナイーブ状態にあった。理論に縛られることを意図しないが、これらの細胞が、製造工程中、最良に機能し得る。

第１日細胞及び第９日細胞に、より低い転写不均一性が認められた（データは示していない）。

インプット集団と同様に、第１日細胞は、インプット細胞のクラスター３にみられるものと類似して、ＴＳＮＥプロットにおいて早期メモリー細胞の大きいクラスターと、後期メモリー細胞のより小さいクラスターを示した。対照的に、第９日細胞は、ＴＳＮＥプロットに早期メモリー細胞の明確なクラスターは示さなかった。これは、第９日までに、細胞がより均質になったことを意味する。

ＴＣＲを配列決定し、クロノタイプ多様性を測定した。全体として、３つのクロノタイププロフィールは、非常に平坦であった（ほとんどのクローンは、１回のみ選び出された）（図２７Ａ～２７Ｃ及び表２４）。表２４のシャノンエントロピーは、分布の平坦性を測定する。インプット細胞中の優勢なクローンは、後期メモリー細胞であった。第１日細胞は、インプット細胞と類似しているようにみえたが、均一になり始めた。９日までに、優勢なクローンは実質的に均一になり、分布がはるかに平坦になった。多様性測定は、インプット細胞又は第１日細胞よりも第９日にはるかに均一且つ平坦な分布が存在したため、第９日で最も高かった。

まとめ
第１日及び第９日産物間に有意なＴ細胞状態の差があった。第１日細胞は、インプット細胞とはるかによく類似し、幹細胞性シグネチャーが豊富であったが、これは、より有効な産物を示す。

実施例９：ＢＣＭＡＣＡＲ及びＣＤ１９ＣＡＲの共形質導入、ＭＯＩの評価及び有効性試験
この実施例では、ＢＣＭＡＣＡＲをコードするレンチウイルスベクター及びＣＤ１９ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターでＴ細胞を共形質導入することにより製造されるＣＡＲＴ細胞の特性決定を説明する。ＢＣＭＡＣＡＲは、配列番号１０７のアミノ酸配列を含み、ＣＤ１９ＣＡＲは、配列番号２２５のアミノ酸配列を含む。

細胞調製及びＣＡＲ形質導入
Ｔ細胞の形質導入においてＢＣＭＡ及びＣＤ１９ＣＡＲの４つの異なるＭＯＩ組み合わせを２４ウェルフォーマットで試験した。ＢＣＭＡＣＡＲレンチウイルスベクター及びＣＤ１９ＣＡＲレンチウイルスベクターは、それぞれ５及び１のＭＯＩで（図２８Ａ及び２８Ｂの５／１）；それぞれ５及び０．５のＭＯＩで（図２８Ａ及び２８Ｂの５／０．５）；それぞれ２．５及び１のＭＯＩで（図２８Ａ及び２８Ｂの２．５／１）；又はそれぞれ２．５及び０．５のＭＯＩで（図２８Ａ及び２８Ｂの２．５／０．５）使用した。Ｐｒｏｄｉｇｙにより精製したＴ細胞を３ｅ^６／ｍＬ、１／ｍＬで２４ウェルプレートに接種し、ＢＣＭＡ及びＣＤ１９ＣＡＲベクターの両方を、上に示す異なるＭＯＩで添加した。接種時に、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８アゴニストに共役したポリマーナノマトリックスであるＴｒａｎｓＡｃｔ（ＭｉｌｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）を添加した。１００ＩＵ／ｍＬのヒト組換えＩＬ－２（Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ）及び２％ＩＣＲＳ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含有するＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）完全Ｔ細胞培地中で細胞を３７℃及び５％ＣＯ_２で２４時間インキュベートして採取した。

次に、３×用量のＰＢＳ＋１％ＨＡＳで細胞を３回洗浄した。培養及びハーベスト洗浄後、生存率及び細胞数を評価して、最終産物に対するベクター力価測定の影響を決定した。

その後、２４ウェルプレートにおいて、１×１０^６ＶＮＣ／ｍＬで細胞を再培養し、さらに６日間インキュベートした。抗ＢＣＭＡＣＡＲ発現を評価するためのＦＡＣＳ解析を形質導入から４及び７日後（採取から３及び６日後）に実施した。

ＣＡＲ発現分析
サンプルをフローサイトメーター（ＢＤＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ）で測定し、データをＦｌｏｗＪｏソフトウェアで解析した。ＡＲＭプロセスを用いた場合、ＣＡＲは、２４ｈ以内に十分に組み込まれてエクスビボで発現されない可能性があるため、ＣＡＲが安定して発現されている場合、ウイルス添加後９６ｈをインビトロ及びインビボ用量設定戦略のための代替時点として使用することができた。二重ターゲティングカクテルＣＡＲ測定のために同じ戦略を採用した。

ＦＡＣＳ解析は、Ｔ細胞へのＢＣＭＡ及びＣＤ１９ＣＡＲの共形質導入によって３つの異なるＣＡＲ＋亜集団が形成されたことを示し、その割合は、試験した４つの異なるＭＯＩ組み合わせで変動する（図２８Ａ）が、これは、カクテルＣＡＲ－Ｔ細胞産物が、ＢＣＭＡ及びＣＤ１９ＣＡＲの共形質導入により好適に産生され得ることを示している。５／０．５のＭＯＩでは、モノ抗ＢＣＭＡＣＡＲ＋（抗ＣＤ１９ＣＡＲ陰性）が、２０．７％と最も高く、次いで１６．２％の二重＋ＣＡＲ及び１０．５％のモノ抗ＣＤ１９ＣＡＲ＋と続いた。二重ＣＡＲ＋％及びモノ抗ＢＣＭＡＣＡＲ＋として算出される総ＢＣＭＡＣＡＲ＋は、３６．９％であったのに対し、総ＣＤ１９ＣＡＲ＋％は、２６．７％であった（図２８Ａ及び２８Ｂ）。２．５／０．５及び２．５／１比のＭＯＩのいずれも、二重＋％及びモノ抗ＢＣＭＡＣＡＲ＋％よりはるかに高いモノＣＤ１９ＣＡＲ＋％が得られた。さらには、二重＋ＣＡＲ％は、総ＭＯＩ使用と正に相関した（図２８Ｂ）。総ＣＡＲ＋％は、ＭＯＩ５／１及びＭＯＩ５／０．５で類似している。各集団におけるＣＡＲ発現は、ＢＣＭＡ及びＣＤ１９ＣＡＲ形質導入Ｔ細胞を含め、形質導入後第４日～第７日まで比較的安定していることが認められた（図２８Ａ及び２８Ｂ）。データは、３つのドナーで一致していた。一部の実施形態では、共形質導入のために、ＭＯＩ４～５のＢＣＭＡＣＡＲ及びＭＯＩ０．５のＣＤ１９ＣＡＲを用いて、二重ターゲティングカクテルＣＡＲＴ産物を作製した。

加えて、製剤化及び凍結保存前に、Ｔ細胞濃縮から、Ｔ細胞接種、活性化、形質導入及び培養、Ｃｅｎｔｒｉｃｕｌｔ中のハーベスト洗浄まで、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳＰｒｏｄｉｇｙで、ラージスケールラン実験を完全に実施した。ＢＣＭＡ／ＣＤ１９ＣＡＲについて４／０．５又は４．７５／０．５のＭＯＩを使用した。この試験では、７．５ｅ^８の総細胞の場合、合計２５０ｍＬ中３ｅ^６／ｍＬの接種密度を使用した。２４ｈで細胞を採取し、ＰＢＳ＋１％ＨＡＳで３×洗浄した後、下流適用のために凍結保存した。残ったＴ細胞を収集して、ＵＴＤ、ＢＣＭＡＣＡＲＴ及びＣＤ１９ＣＡＲＴとしてそれぞれの対照群を作製した。アリコートを取得し、フローサイトメトリー解析のために２４ウェルプレート中１ｅ^６／ｍＬで再培養して、形質導入後の第４日のＢＣＭＡ－ＣＡＲ発現を評価した。

図２９は、二重ターゲティングカクテルＣＡＲＴが、形質導入後の第４日に、１１．８％のモノ抗ＢＣＭＡＣＡＲＴ細胞、４．３１％の二重ＣＡＲＴ細胞及び約９％のモノ抗ＣＤ１９ＣＡＲＴ細胞を含有することを示した。この試験では、二重ＣＡＲ＋％及びモノ抗ＢＣＭＡＣＡＲ＋％として算出される総抗ＢＣＭＡＣＡＲ＋％は、１６％であったのに対し；二重ＣＡＲ＋％及びモノ抗ＣＤ１９ＣＡＲ＋％として算出される総抗ＣＤ１９ＣＡＲ＋％は、１３．４％であった。

インビボ活性に関する二重カクテルＣＡＲＴを３つの異種移植マウスモデルにおいて分析した；１）多発性骨髄腫のＫＭＳ１１－ｌｕｃモデル（このＢＣＭＡ発現モデルは、ルシフェラーゼリポーター構築物でタグ付けされ、これは、生物発光イメージングにより骨髄中の疾患を全身モニターすることを可能にする）；２）ＭＭ患者の不均一性を模倣するために、９５％のＫＭＳ－１１－ｌｕｃ骨髄腫細胞を５％のＣＤ１９＋腫瘍（例えば、Ｎａｌｍ６－ｌｕｃ）と混合することにより定着させた混合型腫瘍モデル；並びに３）二重ターゲティングカクテルＣＡＲＴの二重陽性ＣＡＲＴ集団のＣＤ１９ターゲティングの特異性及びさらなる拡大を評価するためのＮａｌｍ６－ｌｕｃモデル。ＢＣＭＡＣＡＲＴ及びＣＤ１９ＣＡＲＴは、それぞれのモデルの対照として使用した。ＣＡＲ－Ｔ細胞の用量計算のために、総抗ＢＣＭＡＣＡＲ＋％は、モデル１及び２について形質導入後の第４日に測定し、総抗ＣＤ１９ＣＡＲ＋％は、モデル３について形質導入後の第４日に測定した。ＵＴＤ用量は、それぞれのプロセスの最も高い総Ｔ細胞用量を表した。

３つのモデルにおける全ての群の腫瘍退縮曲線を図３０Ａ～Ｅに示す。ＫＭＳ－１１－ｌｕｃモデルでは、二重ターゲティングカクテルＣＡＲＴ及びＢＣＭＡＣＡＲＴの両方が、図３０Ａに示すように、腫瘍退縮を用量依存的に誘導した。１ｅ^４用量では、二重ターゲティングカクテルＣＡＲＴ及びＢＣＭＡＣＡＲＴの両方が、同様のペースで遅延した腫瘍阻害を示し、いずれも、試験の終了時には腫瘍を排除することができた。二重ターゲティングカクテルＣＡＲＴは、５ｅ^４用量のＢＣＭＡＣＡＲＴより有効な腫瘍クリアランスを示し、その場合、二重ターゲティングカクテルＣＡＲＴは、ＣＡＲ－Ｔ注入後の第１４日までに腫瘍を排除したのに対し、ＢＣＭＡＣＡＲＴは、少なくとも１週間の効果遅延を示した。より広い用量範囲（１ｅ^４、５ｅ^４、１．５ｅ^５）（図３０Ｂ）に及ぶ同じバッチからの残留細胞産物を使用することによる反復試験では、二重ターゲティングカクテルＣＡＲＴによる腫瘍退縮において用量依存性が確認された。１．５ｅ^５、５ｅ^４での二重ターゲティングカクテルＣＡＲＴと、１．５ｅ^５でのＢＣＭＡＣＡＲＴの退縮曲線は重なり合う。５ｅ^４でのＢＣＭＡＣＡＲＴは、ＣＡＲ－Ｔ注入後１４日の期間にわたって同じ用量の二重ターゲティングカクテルＣＡＲＴより若干遅い腫瘍退縮にもかかわらず、このマウスコホートにおいてＣＡＲ－Ｔ注入後の第１４日までには腫瘍を排除することができた。１ｅ^４用量では、二重ターゲティングカクテルＣＡＲＴは、ＢＣＭＡＣＡＲＴより優れた有効性を示した。手短には、ＫＭＳ－１１－ｌｕｃモデルを用いると、二重ターゲティングカクテルＣＡＲＴは、ＢＣＭＡを特異的にターゲティングすることができ、ＢＣＭＡ＋多発性骨髄腫の殺傷に際してＢＣＭＡＣＡＲＴと同等の効力があることが示され、より低い用量でＢＣＭＡＣＡＲＴより強力でもあることが実証された。

次に、ＢＣＭＡとＣＤ１９の両方が「混合型」モデルに存在するとき、５％のＮａｌｍ６－ｌｕｃ細胞と混合したＫＭＳ－１１－ｌｕｃ細胞をマウスに移植した場合の、二重ターゲティングカクテルＣＡＲＴの有効性を評価した。図３０Ｃに示す混合型腫瘍モデルにおいて、５ｅ^４及び１ｅ^４の二重ターゲティングカクテルＣＡＲＴのみが部分的な腫瘍阻害を用量依存的に示したのに対し、ＢＣＭＡＣＡＲＴ又はＣＤ１９ＣＡＲＴのいずれも５ｅ^４用量で何らの効果も示さなかった。図３０に示すように、より高い用量群を対象とする反復試験において、１．５ｅ^５の二重ターゲティングカクテルＣＡＲＴは、ＣＡＲ－Ｔ注入後の第１４日までに混合型腫瘍を排除できることが実証され、腫瘍抑制は用量依存的であった。対照的に、１．５ｅ^５のＢＣＭＡＣＡＲＴ及びＣＤ１９ＣＡＲＴは、ＢＣＭＡ及びＣＤ１９の両方が存在するとき、この混合型モデルに部分的な腫瘍阻害のみを示した。

最後に、二重ターゲティングカクテルＣＡＲＴが、ＣＤ１９＋腫瘍を特異的にターゲティングすることができるか否かを示すために、Ｎａｌｍ－６－ｌｕｃモデルを使用した。図３０Ｅに示すように、二重ターゲティングカクテルＣＡＲＴは、より高い用量のモノＣＤ１９ＣＡＲＴと同等に、且つより低い用量のモノＣＤ１９ＣＡＲＴより優れた様式で用量依存的にＮａｌｍ－６－ｌｕｃ腫瘍を排除することができた。

実施例１０：ＢＣＭＡ／ＣＤ１９ＣＡＲＴ細胞産物製造のためのＭＯＩの評価
ｑＰＣＲ力価に基づいて、ＢＣＭＡ－ＣＡＲウイルスの力価測定を実施して、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ／ＣＤ１９－ＣＡＲの最適ベクター比を決定した。手短には、Ｔ細胞を解凍し、３×１０^６ＶＮＣ／ｍＬ又は６×１０^６ＶＮＣ／ｍＬの密度で再懸濁した。試験した各ＭＯＩについて、１ｍＬの細胞懸濁物を２４ウェルプレート中に平板培養し、時点０で形質導入した後、２０～２４時間インキュベートした。次に、各１ｍＬの培養物を、３×２ｍＬのＰＢＳ＋１％ＨＳＡを用い、手で洗浄した。培養及びハーベスト洗浄の後、生存率及び細胞数を評価して、最終産物に対するベクター力価測定の影響を決定した。続いて、採取した細胞を１×１０^６ＶＮＣ／ｍＬで培養物に導入し、採取後７２時間及び１４４時間（採取後（ＰＨ）の第３日及び第６日（形質導入後の第４日及び第７日）表３４及び図３１）でＣＡＲ（ＢＣＭＡ及びＣＤ１９）発現を測定した。

一部の実施形態では、形質導入から４日後（又は採取から３日後）に、フローサイトメトリーによって測定されたＢＣＭＡＣＡＲ＋生存Ｔ細胞の総数を用量関連計算に使用した。一部の実施形態では、ＣｅｎｔｒｉＣｕｌｔに約４ｅ６ＶＮＣ／ｍＬの密度でＴ細胞を接種した。一部の実施形態では、ＢＣＭＡＣＡＲベクターは、４．７５のＭＯＩで使用し、ＣＤ１９ＣＡＲベクターは、０．５のＭＯＩで使用した。

個別の試験では、自動化閉鎖式装置、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳＰｒｏｄｉｇｙにより、ラージスケールで上記の共形質導入高速製造アプローチを用いて、ＢＣＭＡ／ＣＤ１９ＣＡＲＴ細胞を製造した。手短には、本プロセスは、凍結保存ロイコパックからのＴ細胞の選択で開始する。ＣＤ４及びＣＤ８マイクロビーズを用いて、Ｔ細胞をポジティブ選択する。選択後、Ｔ細胞をリアプリケーションバッグに溶出してから、サンプルを取り出して、細胞濃度、生存率及び純度を評価する。次に、Ｔ細胞を活性化した後、抗ＢＣＭＡＣＡＲをコードするレンチウイルスベクター及び抗ＣＤ１９ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターで形質導入する。図３２に示すように、ＰｒｏｄｉｇｙのアウトプットからのＴ細胞サブセットは、アフェレーシス用のインプットと相違しなかった。

実施例１１：抗ＢＣＭＡＣＡＲ及び抗ＣＤ１９ＣＡＲを発現するように操作されたＴ細胞のさらなる特性決定
この実施例では、実施例９に記載のように作製されたＢＣＭＡ／ＣＤ１９ＣＡＲＴ細胞産物のさらなる特性決定を説明する。この細胞産物は、３つの異なるＣＡＲ＋集団：モノ抗ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞、モノ抗ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞及び二重陽性抗ＢＣＭＡ／抗ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞を含む。加えて、この細胞産物は、非形質導入Ｔ細胞の集団も含有する。

ＢＣＭＡ／ＣＤ１９ＣＡＲＴ細胞産物で処置したマウスにおける血漿ＩＦＮ－γ
ＩＦＮ－γは、標的結合に応答するＣＡＲ－Ｔ細胞活性化の目印である。実施例９に記載したインビボ試験において血漿ＩＦＮ－γの動態を解析した。図３３Ａ及び３３Ｂに示すように、全てのＣＡＲ－Ｔ処置群が、第２日に低レベルの循環ＩＦＮ－γ（１０～５０ｐｇ／ｍｌ）を示し、その後も引き続きＩＦＮ－γ分泌を増加した。

非臨床薬物動態及び代謝
末梢血（モノ抗ＢＣＭＡ、モノ抗ＣＤ１９又は二重陽性抗ＢＣＭＡ／抗ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞を含む）中のＢＣＭＡ／ＣＤ１９二重ＣＡＲＴ細胞産物の増殖を注入から３週間後までフローサイトメトリーにより解析し、ＫＭＳ－１１－ｌｕｃモデルの基準ＢＣＭＡＣＡＲＴと比較した。ＣＤ３＋Ｔ細胞及びＣＡＲ＋Ｔ細胞増殖の両方が、全てのＣＡＲ－Ｔ処置群に観察された。二重又はモノＣＡＲ＋Ｔ細胞集団中のＢＣＭＡ／ＣＤ１９二重ＣＡＲＴ細胞産物について、用量依存的細胞増殖が観察された。２つの試験からのデータに基づいて、ＢＣＭＡ／ＣＤ１９二重ＣＡＲＴ細胞産物は、ＢＣＭＡＣＡＲＴと比べて、わずかにより高いＢＣＭＡターゲティングＣＡＲ＋Ｔ細胞及び総ＣＡＲ＋Ｔ細胞の増殖を示した。

３つのモデル（ＫＭＳ－１１、Ｎａｌｍ－６及び混合型）におけるＣＡＲ＋Ｔ細胞の増殖を評価することにより、ＢＣＭＡ／ＣＤ１９二重ＣＡＲＴ細胞産物の抗原依存的増殖を実証した。ＢＣＭＡ発現ＫＭＳ－１１異種移植モデルでは、二重陽性抗ＢＣＭＡ／抗ＣＤ１９及びモノ抗ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞が大幅に拡大したのに対し、ＣＤ１９発現Ｎａｌｍ－６異種移植モデルでは、二重陽性抗ＢＣＭＡ／抗ＣＤ１９及びモノ抗ＣＤ１９ＣＡＲ＋Ｔ細胞が大幅に拡大した。二重陽性ＣＡＲ－Ｔ細胞集団は、ＢＣＭＡ又はＣＤ１９抗原のいずれか単独からの活性化によって拡大することができた。ＫＭＳ－１１モデルにおいて、二重陽性抗ＢＣＭＡ／抗ＣＤ１９及びモノ抗ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞の初期増殖速度は同等であり、また、Ｎａｌｍ－６モデルにおける二重陽性抗ＣＡＲ及びモノ抗ＣＤ１９ＣＡＲ＋Ｔ細胞の初期増殖速度も同様であった。

結論
ＢＣＭＡ／ＣＤ１９二重ＣＡＲＴ細胞産物は、高速製造プロセスを用いて作製される新規の抗ＢＣＭＡ及び抗ＣＤ１９二重ターゲティングＣＡＲ－Ｔ細胞産物であり、これは、Ｔ細胞の幹細胞性を保存する。

３つの異種移植マウスモデル（ＫＭＳ－１１、Ｎａｌｍ－６及び混合型）において、ＢＣＭＡ／ＣＤ１９二重ＣＡＲＴ細胞産物は、抗原依存的及び用量依存的様式で、腫瘍増殖を抑制し、ＣＡＲ－Ｔ拡大及びサイトカイン産生を誘導することにより、強力なインビボ薬効薬理を示した。

二重ターゲティングＢＣＭＡ／ＣＤ１９ＣＡＲＴ細胞産物を用いることにより、混合型モデルにおける腫瘍排除が、用量依存的様式で増大する腫瘍退縮と共に達成された。モノＢＣＭＡＣＡＲＴ又はモノＣＤ１９ＣＡＲＴのいずれも、混合型モデルにおいて腫瘍退縮を示さなかった。加えて、ＢＣＭＡ／ＣＤ１９二重ＣＡＲＴ細胞産物は、持続的なインビボでのＣＡＲ－Ｔ拡大を示したのに対し、二重陽性ＣＡＲ集団は、ＢＣＭＡ又はＣＤ１９いずれか単独からの活性化と共に拡大した。多発性骨髄腫のＫＭＳ－１１－ｌｕｃモデルでは、ＢＣＭＡ／ＣＤ１９二重ＣＡＲＴ細胞産物は、より高い試験用量レベルで腫瘍増殖抑制に改善を示し、ＢＣＭＡＣＡＲＴと比べて低い試験用量レベルで優れた腫瘍増殖抑制を示した。

これらの結果は、多発性骨髄腫再発に対するＢＣＭＡ－／ＣＤ１９＋幹／前駆細胞の寄与の可能性に対処して、伝統的に製造されたか、又は単一抗原ＢＣＭＡターゲティングＣＡＲ－Ｔよりも強力且つ持続的な応答を提供することにより、臨床転帰を変化させることができる二重ターゲティングＣＡＲ－ＴとしてのＢＣＭＡ／ＣＤ１９二重ＣＡＲＴ細胞産物を支持するものである。

実施例１２：ＡＲＭプロセスを用いて作製された抗ＢＣＭＡＣＡＲＴ細胞の第Ｉ相臨床試験
この実施例では、再発及び／又は難治性多発性骨髄腫を有する成人患者におけるＡＲＭプロセスを用いて製造された抗ＢＣＭＡＣＡＲＴ細胞療法の安全性及び忍容性を評価するためのオープンラベル、第Ｉ相試験を説明する。

主要評価項目測定基準は、以下を含む：抗ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞投与後最初の２８日間の用量制限毒性（ＤＬＴ）の発生率及び性質並びに有害事象（ＡＥ）及び重篤な有害事象（ＳＡＥ）（抗ＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ細胞投与後の臨床検査値、ＥＧＧ及びバイタルサインの変化など）の発生率及び重症度。

副次評価項目測定基準は、以下を含む：製造完遂率（計画目標用量で処置される対象の数を処置された対象の総数で割った値として定義される）、ＯＲＲ（ＩＭＷＧ基準（Ｋｕｍａｒｅｔａｌ．，ＬａｎｃｅｔＯｎｃｏｌ．２０１６Ａｕｇ；１７（８）：ｅ３２８－ｅ３４６、その全体が、参照により本明細書に組み込まれる）を用いて現地の治験責任医師により決定される、３及び６ヶ月時点でｓＣＲ＋ＣＲ＋ＶＧＰＲ＋ＰＲの最良総合効果（ＢＯＲ）を有する対象の割合）、ＣＲＲ（ＩＭＷＧ基準を用いて現地の治験責任医師により決定される、３ヶ月時点でｓＣＲ＋ＣＲのＢＯＲを有する対象の割合）、現地の治験責任医師により評価されるＤＯＲ（ｓＣＲ＋ＣＲ＋ＶＧＰＲ＋ＰＲの達成からＭＭによる再発又は死亡までの時間）、末梢血及び骨髄中の経時的ｑＰＣＲ検出ＣＡＲＴのトランスジーン濃度並びにＢＣＭＡＣＡＲＴ細胞療法の既存の免疫原性及び処置誘発免疫原性（細胞及び体液性）の要約。

参加基準は以下の通りである：
ＩＭｉＤ（例えば、レナリドミド又はポマリドミド）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ）、さらに、利用可能であれば、承認済抗ＣＤ３８抗体（例えば、ダラツムマブ）を含む処置レジメンの少なくとも２週間前に再発し、且つ／又はそうした処置に対して治療不応性であり、及び疾患進行（ＩＭＷＧ）の記録を有する、ＭＭを有する対象；
プロトコルにより定義される通り、測定可能な疾患；
スクリーニング時に０又は１のいずれかであるＥＣＯＧパフォーマンスステータス；
適切な血液検査値；及び
製造に容認される非動員細胞の白血球アフェレーシス材料を有していなければならない。

除外基準は以下の通りである：
過去のＢＣＭＡＣＡＲ－Ｔ治療歴を含め、過去の遺伝子修飾細胞産物の投与歴。過去にＢＣＭＡ指向二重特異性抗体又は抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を受けたことがある患者は除外されない；
登録前の６週間以内の自家ＨＳＣＴ又は同種異系造血幹細胞移植の過去のあらゆる医療歴（ＨＳＣＴ）；
アフェレーシス前の２週間以内の化学療法又はあらゆる同時抗癌療法（プロトコル処方リンパ球枯渇（ＬＤ）化学療法以外）；
アフェレーシス収集の２週間以内又は５半減期以内のいずれか短い方の小分子標的化抗腫瘍薬による処置；並びに
アフェレーシス収集前の４週間以内に抗体又は免疫療法薬（ダラツムマブ以外）を受けたことがある。アフェレーシス収集前の３週間以内のダラツムマブ。

実施例１３：ＢＣＭＡ／ＣＤ１９ダイアボディＣＡＲＴの評価
ＮＡＬＭ－６ルシフェラーゼ処置モデルを用いて、新規の単鎖ダイアボディＣＡＲＴ中のＣＤ１９抗原応答性エレメントの有効性を評価する。１×１０^６ＮＡＬＭ－６Ｌｕｃ細胞をＣＡＲＴ投与の第－７日に、外側尾静脈注射から移植する。体重を測定し、インビボ生物発光イメージング（ＢＬＩ）を実施して、腫瘍進行を週２回実施した。動物を週２回測定し、腫瘍負荷が３×１０^６光量子束（光子／秒）に達したら、動物をその特定の群にランダム化する（第－１日）。第０日に、ダイアボディＣＡＲ－Ｔを液体窒素から取り出し、注射のために解凍する。１×１０^６二重ＣＡＲ陽性細胞を外側尾静脈注射から注射する。数週間の期間にわたって実験評価を実施して、ＢＬＩの減少を経時的に評価することにより、いずれの構築物が最良の機能的有効性を有するかを決定する。

均等物
本明細書に引用するそれぞれの及び全ての特許、特許出願及び刊行物の開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。本発明は、特定の実施形態を参照して開示しているが、本発明のさらなる実施形態及び変形形態は、本発明の真の趣旨及び範囲から逸脱することなく他の当業者によって考案され得ることが明らかである。下記の特許請求の範囲は、全てのこのような実施形態及び均等な変形形態を含むと解釈されることを意図する。

Claims

単離細胞であって、
（ａ）抗ＢＣＭＡ結合ドメインである第１抗原結合ドメインであって、前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、
（ｉ）それぞれ配列番号８６、１３０、８８、９５、１３１及び１３２；
（ｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５、８４、５４、５５及び５６；又は
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号１７９、１８０、１８１、１４７、１８２及び１８３
のアミノ酸配列を含む、第１抗原結合ドメインと；
（ｂ）第２抗原結合ドメインと
を含む単離細胞。
前記第１抗原結合ドメインと前記第２抗原結合ドメインとは、２つのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に配置されるか、又は
前記第１抗原結合ドメインと前記第２抗原結合ドメインとは、１つのＣＡＲに配置される、請求項１に記載の単離細胞。
前記ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号８６、１３０、８８、９５、１３１及び１３２のアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載の単離細胞。
前記ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、
（ｉ）それぞれ配列番号８６、８７、８８、９５、９６及び９７；
（ｉｉ）それぞれ配列番号８６、１０９、８８、９５、１１４及び１１５；又は
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号８６、１０９、８８、９５、１１４及び９７
のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の単離細胞。
（ｉ）前記ＶＨは、配列番号９３若しくは１１２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；及び／又は
（ｉｉ）前記ＶＨは、配列番号２６０、９４若しくは１１３の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる、請求項３又は４に記載の単離細胞。
（ｉ）前記ＶＬは、配列番号１０２、１１８若しくは１２４のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；及び／又は
（ｉｉ）前記ＶＬは、配列番号２６１、１０３、１１９若しくは１２５の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる、請求項３～５のいずれか一項に記載の単離細胞。
前記ＶＨ及びＶＬは、
（ｉ）それぞれ配列番号９３及び１０２；
（ｉｉ）それぞれ配列番号１１２及び１１８；又は
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号１１２及び１２４
のアミノ酸配列を含む、請求項３～６のいずれか一項に記載の単離細胞。
（ｉ）前記第１抗原結合ドメインは、配列番号１０５、１２０若しくは１２６のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み；及び／又は
（ｉｉ）前記第１抗原結合ドメインは、配列番号２５３、１０６、１２１若しくは１２７の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる、請求項３～７のいずれか一項に記載の単離細胞。
前記第１抗原結合ドメインは、第１ＣＡＲに配置され、
（ｉ）前記第１ＣＡＲは、配列番号１０７、２２６、１２２若しくは１２８のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；及び／又は
（ｉｉ）前記第１ＣＡＲは、配列番号２５９、２５８、１０８、１２３若しくは１２９の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる、請求項３～８のいずれか一項に記載の単離細胞。
前記ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４４、４５、８４、５４、５５及び５６のアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載の単離細胞。
前記ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、
（ｉ）それぞれ配列番号４４、４５、７６、５４、５５及び５６；
（ｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５、４６、５４、５５及び５６：又は
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５、６８、５４、５５及び５６
のアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の単離細胞。
（ｉ）前記ＶＨは、配列番号７８、５２若しくは７０のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；及び／又は
（ｉｉ）前記ＶＨは、配列番号７９、５３若しくは７１の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる、請求項１０又は１１に記載の単離細胞。
（ｉ）前記ＶＬは、配列番号６１のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；及び／又は
（ｉｉ）前記ＶＬは、配列番号６２の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる、請求項１０～１２のいずれか一項に記載の単離細胞。
前記ＶＨ及びＶＬは、
（ｉ）それぞれ配列番号７８及び６１；
（ｉｉ）それぞれ配列番号５２及び６１：又は
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号７０及び６１
のアミノ酸配列を含む、請求項１０～１３のいずれか一項に記載の単離細胞。
（ｉ）前記第１抗原結合ドメインは、配列番号８０、６４若しくは７２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み；及び／又は
（ｉｉ）前記第１抗原結合ドメインは、配列番号８１、６５若しくは７３の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる、請求項１０～１４のいずれか一項に記載の単離細胞。
前記第１抗原結合ドメインは、第１ＣＡＲに配置され、
（ｉ）前記第１ＣＡＲは、配列番号２２４、８２、６６若しくは７４のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；及び／又は
（ｉｉ）前記第１ＣＡＲは、配列番号８３、６７若しくは７５の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる、請求項１０～１５のいずれか一項に記載の単離細胞。
前記ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１７９、１８０、１８１、１４７、１８２及び１８３のアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載の単離細胞。
前記ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、
（ｉ）それぞれ配列番号１３７、１３８、１３９、１４７、１４８及び１４９；又は
（ｉｉ）それぞれ配列番号１６０、１６１、１６２、１４７、１７０及び１７１
のアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載の単離細胞。
（ｉ）前記ＶＨは、配列番号１４５若しくは１６８のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；及び／又は
（ｉｉ）前記ＶＨは、配列番号１４６若しくは１６９の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる、請求項１７又は１８に記載の単離細胞。
（ｉ）前記ＶＬは、配列番号１５４若しくは１７３のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；及び／又は
（ｉｉ）前記ＶＬは、配列番号１５５若しくは１７４の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる、請求項１７～１９のいずれか一項に記載の単離細胞。
前記ＶＨ及びＶＬは、
（ｉ）それぞれ配列番号１４５及び１５４、又は
（ｉｉ）それぞれ配列番号１６８及び１７３
のアミノ酸配列を含む、請求項１７～２０のいずれか一項に記載の単離細胞。
（ｉ）前記第１抗原結合ドメインは、配列番号１５６若しくは１７５のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み；
（ｉｉ）前記第１抗原結合ドメインは、配列番号１５７若しくは１７６の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる、請求項１７～２１のいずれか一項に記載の単離細胞。
前記抗原結合ドメインは、第１ＣＡＲに配置され、
（ｉ）前記第１ＣＡＲは、配列番号１５８若しくは１７７のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）前記第１ＣＡＲは、配列番号１５９若しくは１７８の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる、請求項１７～２２のいずれか一項に記載の単離細胞。
単離細胞であって、
（ａ）抗ＢＣＭＡ結合ドメインである第１抗原結合ドメインであって、前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、
（ｉ）表２０又は２６に列挙される抗ＢＣＭＡ配列のＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２及びＨＣＣＤＲ３を含むＶＨと、表２０又は２６に列挙される抗ＢＣＭＡ配列のＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３を含むＶＬとであって、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される、ＶＨ及びＶＬ；
（ｉｉ）それぞれ配列番号２３９及び２４２のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬであって、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される、ＶＨ及びＶＬ；又は
（ｉｉｉ）配列番号２００のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖ
を含む、第１抗原結合ドメインと；
（ｂ）第２抗原結合ドメインと
を含む単離細胞。
前記第１抗原結合ドメインと前記第２抗原結合ドメインとは、２つのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に配置されるか、又は
前記第１抗原結合ドメインと前記第２抗原結合ドメインとは、１つのＣＡＲに配置される、請求項２４に記載の単離細胞。
前記第２抗原結合ドメインは、ＣＤ１９、ＣＤ５、ＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ５３、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７７、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ１２３、ＣＤ１３５、ＣＤ１３８、ＣＤ１７９、ＣＤ２６９、Ｆｌｔ３、ＲＯＲ１、ＦｃＲｎ５、ＦｃＲｎ２、ＣＳ－１、ＣＸＣＲ４、５、７、ＩＬ－７／３Ｒ、ＩＬ７／４／３Ｒ又はＩＬ４Ｒから選択される抗原に結合し、任意選択で、前記Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＦｃＲｎ５、ＦｃＲｎ２、ＣＳ－１、ＣＤ１３８、ＣＤ１２３、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＬＬ－１、葉酸受容体β又はＦＬＴ３から選択され、任意選択で、前記第２抗原結合ドメインは、ＣＤ１９に結合する、請求項１～２５のいずれか一項に記載の単離細胞。
前記第２抗原結合ドメインは、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、メソテリン、ＧＤ２、Ｔｎ抗原、ｓＴｎ抗原、Ｔｎ－Ｏ－糖ペプチド、ｓＴｎ－Ｏ－糖ペプチド、ＰＳＭＡ、ＣＤ９７、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、レグマン、ＧＤ３、ＣＤ１７１、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－β、ＳＳＥＡ－４、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ（例えば、ＥＲＢＢ２）、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、エフリンＢ２、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｓＬｅ、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体β、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＦＡＰ、レグマイン、ＨＰＶＥ６若しくはＥ７、ＭＬ－ＩＡＰ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、Ｆｏｓ関連抗原、好中球エラスターゼ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、精子タンパク質１７、βヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＡＦＰ、チログロブリン、ＰＬＡＣ１、グロボＨ、ＲＡＧＥ１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔｈｓｐ７０－２、ＮＡ－１７、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＧＰＲ２０、Ｌｙ６ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＧＦＲα４又はＭＨＣに提示される前記抗原のいずれかのペプチドから選択される抗原に結合する、請求項１～２５のいずれか一項に記載の単離細胞。
前記第２抗原結合ドメインは、ＣＤ１９に結合し、任意選択で、
（ｉ）前記第２抗原結合ドメインは、表１９又は表２２に列挙される抗ＣＤ１９配列のＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及び／又はＬＣＣＤＲ３、例えばそれぞれ配列番号２９５及び２４５～２４９の配列を含むＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３を含み；
（ｉｉ）前記第２抗原結合ドメインは、表１９又は表２２に列挙される抗ＣＤ１９配列のＶＨ及び／又はＶＬ、例えばそれぞれ配列番号２５０及び２５１のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを含み；
（ｉｉｉ）前記第２抗原結合ドメインは、表１９又は表２２に列挙される抗ＣＤ１９配列のｓｃＦｖ、例えば配列番号２１１のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含み；及び／又は
（ｉｖ）前記第２抗原結合ドメインは、第２ＣＡＲに配置され、前記ＣＡＲは、表１９又は表２２に列挙される抗ＣＤ１９配列のＣＡＲ、例えば配列番号２２５若しくは２２９のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＡＲを含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載の単離細胞。
（ｉ）前記第１抗原結合ドメインは、
（ａ）それぞれ配列番号８６、８７、８８、９５、９６及び９７；
（ｂ）それぞれ配列番号４４、４５、７６、５４、５５及び５６；又は
（ｃ）それぞれ配列番号４４、４５、４６、５４、５５及び５６
のアミノ酸配列を含むＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲを含み、及び前記第２抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２９５及び２４５～２４９のアミノ酸配列を含むＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３を含むか；
（ｉｉ）前記第１抗原結合ドメインは、
（ａ）それぞれ配列番号９３及び１０２；
（ｂ）それぞれ配列番号７８及び６１；又は
（ｃ）それぞれ配列番号５２及び６１
のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを含み、及び前記第２抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２５０及び２５１のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを含むか；
（ｉｉｉ）前記第１抗原結合ドメインは、配列番号１０５、８０又は６４のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含み、及び前記第２抗原結合ドメインは、配列番号２１１のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含むか；又は
（ｉｖ）前記第１抗原結合ドメインは、配列番号２５３、１０６、８１又は６５の核酸配列によってコードされ、及び前記第２抗原結合ドメインは、配列番号２１２の核酸配列によってコードされる、請求項１～２５又は２８のいずれか一項に記載の単離細胞。
前記第１抗原結合ドメインは、第１ＣＡＲに配置され、及び前記第２抗原結合ドメインは、第２ＣＡＲに配置され、前記第１ＣＡＲは、第１膜貫通ドメインと、第１細胞内シグナル伝達ドメインとをさらに含み、及び／又は前記第２ＣＡＲは、第２膜貫通ドメインと、第２細胞内シグナル伝達ドメインとをさらに含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載の単離細胞。
前記第１ＣＡＲは、第１核酸配列によってコードされ、及び前記第２ＣＡＲは、第２核酸配列によってコードされ、前記第１及び第２核酸配列は、個別の核酸分子上に配置される、請求項３０に記載の単離細胞。
前記第１ＣＡＲは、第１核酸配列によってコードされ、及び前記第２ＣＡＲは、第２核酸配列によってコードされ、前記第１及び第２核酸配列は、単一の核酸分子上に配置される、請求項３０に記載の単離細胞。
前記単一の核酸分子は、５’から３’の方向に、以下の構成：
（ｉ）前記第１抗原結合ドメインをコードする核酸配列－第１膜貫通ドメインをコードする核酸配列－第１細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列－リンカーをコードする核酸配列－前記第２抗原結合ドメインをコードする核酸配列－第２膜貫通ドメインをコードする核酸配列－第２細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列；又は
（ｉｉ）前記第２抗原結合ドメインをコードする核酸配列－第２膜貫通ドメインをコードする核酸配列－第２細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列－リンカーをコードする核酸配列－前記第１抗原結合ドメインをコードする核酸配列－第１膜貫通ドメインをコードする核酸配列－第１細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列
を含み、
任意選択で、前記リンカーは、自己切断部位を含み、任意選択で、前記リンカーは、Ｐ２Ａ部位、Ｔ２Ａ部位、Ｅ２Ａ部位又はＦ２Ａ部位を含み、任意選択で、前記リンカーは、Ｐ２Ａ部位を含み、任意選択で、
前記リンカーは、配列番号２０９の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされるか、又は
前記リンカーは、配列番号２０８のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の単離細胞。
（ｉ）前記単一の核酸分子は、配列番号２１５、２１７、２１９、２２１若しくは２２３の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含むか；又は
（ｉｉ）前記単一の核酸分子は、配列番号２１４、２１６、２１８、２２０若しくは２２２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする、請求項３２又は３３に記載の単離細胞。
前記第１抗原結合ドメイン及び前記第２抗原結合ドメインは、１つのＣＡＲに配置され、前記ＣＡＲは、膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとをさらに含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載の単離細胞。
前記第１抗原結合ドメインは、第１ＶＨ（ＶＨ１）と第１ＶＬ（ＶＬ１）とを含み、及び第２抗原結合ドメインは、第２ＶＨ（ＶＨ２）と第２ＶＬ（ＶＬ２）とを含み、前記ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：
（ｉ）ＶＨ２－任意選択でリンカー１（「Ｌ１」）－ＶＬ１－任意選択でリンカー２（「Ｌ２」）－ＶＨ１－任意選択でリンカー３（「Ｌ３」）－ＶＬ２；
（ｉｉ）ＶＨ１－任意選択でＬ１－ＶＨ２－任意選択でＬ２－ＶＬ２－任意選択でＬ３－ＶＬ１；
（ｉｉｉ）ＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２；
（ｉｖ）ＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２；
（ｖ）ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２；
（ｖｉ）ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＨ２－任意選択でＬ２－ＶＬ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１；
（ｖｉｉ）ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１；又は
（ｖｉｉｉ）ＶＨ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＬ１
で配列される、請求項３５に記載の単離細胞。
（ｉ）前記ＶＨ１及びＶＬ１は、
（ａ）それぞれ配列番号９３及び１０２のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）；
（ｂ）それぞれ配列番号３３３及び３３４のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）；
（ｃ）それぞれ配列番号７８及び６１のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）；又は
（ｄ）それぞれ配列番号３３５及び３３６のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）
を含み、及び／又は
（ｉｉ）前記ＶＨ２及びＶＬ２は、
（ａ）それぞれ配列番号２５０及び２５１のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）；又は
（ｂ）それぞれ配列番号３３１及び３３２のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）
を含む、請求項３６に記載の単離細胞。
Ｌ１又はＬ３は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、及び／又はＬ２は、配列番号６３のアミノ酸配列を含む、請求項３６又は３７に記載の単離細胞。
（ｉ）前記ＣＡＲは、配列番号３２１～３３０からなる群から選択されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも８０、８５、９０、９５若しくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか；又は
（ｉｉ）前記ＣＡＲは、配列番号３３９～３４８からなる群から選択されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも８０、８５、９０、９５若しくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３５～３８のいずれか一項に記載の単離細胞。
前記ＣＡＲは、５’から３’の方向に、以下の構成：
（ｉ）前記第１抗原結合ドメインをコードする核酸配列－任意選択でリンカーをコードする核酸配列－前記第２抗原結合ドメインをコードする核酸配列－膜貫通ドメインをコードする核酸配列－細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列；又は
（ｉｉ）前記第２抗原結合ドメインをコードする核酸配列－任意選択でリンカーをコードする核酸配列－前記第１抗原結合ドメインをコードする核酸配列－膜貫通ドメインをコードする核酸配列－細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列
を含む核酸分子によってコードされる、請求項３５～３９のいずれか一項に記載の単離細胞。
前記ＣＡＲは、ＮからＣの方向に、以下の構成：
（ｉ）前記第１抗原結合ドメイン－任意選択でリンカー－前記第２抗原結合ドメイン－膜貫通ドメイン－細胞内シグナル伝達ドメイン；又は
（ｉｉ）前記第２抗原結合ドメイン－任意選択でリンカー－前記第１抗原結合ドメイン－膜貫通ドメイン－細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、請求項３５～４０のいずれか一項に記載の単離細胞。
前記第１抗原結合ドメイン又は第２抗原結合ドメインは、ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＨ及びＶＬは、リンカーによって連結され、任意選択で、前記リンカーは、配列番号５、６３、１０４若しくは２４３のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～４１のいずれか一項に記載の単離細胞。
（ｉ）前記膜貫通ドメイン、第１膜貫通ドメイン又は第２膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のα、β若しくはζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７又はＣＤ１５４から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含むか；
（ｉｉ）前記膜貫通ドメイン、第１膜貫通ドメイン又は第２膜貫通ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか；又は
（ｉｉｉ）前記膜貫通ドメイン、第１膜貫通ドメイン又は第２膜貫通ドメインは、配列番号１７の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる、請求項３０～４２のいずれか一項に記載の単離細胞。
前記第１抗原結合ドメイン又は第２抗原結合ドメインは、ヒンジ領域（例えば、第１又は第２ヒンジ領域）により、前記膜貫通ドメイン、第１膜貫通ドメイン又は第２膜貫通ドメインに連結され、任意選択で、
（ｉ）前記ヒンジ領域は、配列番号２、３若しくは４のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか；
（ｉｉ）前記ヒンジ領域は、配列番号１３、１４若しくは１５の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされるか；
（ｉｉｉ）前記ヒンジ領域及び前記膜貫通ドメインは、配列番号２０２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか；又は
（ｉｖ）前記ヒンジ領域及び前記膜貫通ドメインは、配列番号２０３若しくは２１３の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる、請求項３０～４３のいずれか一項に記載の単離細胞。
前記細胞内シグナル伝達ドメイン、第１細胞内シグナル伝達ドメイン又は第２細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン（例えば、第１又は第２一次シグナル伝達ドメイン）を含み、任意選択で、
（ｉ）前記一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＦｃεＲＩ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２又はＣＤ６６ｄに由来する機能性シグナル伝達ドメインを含むか；
（ｉｉ）前記一次シグナル伝達ドメインは、配列番号９若しくは１０のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか；又は
（ｉｉｉ）前記一次シグナル伝達ドメインは、配列番号２０、２１若しくは２０５の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる、請求項３０～４４のいずれか一項に記載の単離細胞。
前記細胞内シグナル伝達ドメイン、第１細胞内シグナル伝達ドメイン又は第２細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、第１又は第２共刺激シグナル伝達ドメイン）を含み、任意選択で、
（ｉ）前記共刺激シグナル伝達ドメインは、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７－Ｈ３、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２８－ＯＸ４０、ＣＤ２８－４－１ＢＢ又はＣＤ８３と特異的に結合するリガンドに由来する機能性シグナル伝達ドメインを含むか；
（ｉｉ）前記共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか；又は
（ｉｉｉ）前記共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１８若しくは２０４の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる、請求項３０～４５のいずれか一項に記載の単離細胞。
前記細胞内シグナル伝達ドメイン、第１細胞内シグナル伝達ドメイン又は第２細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢに由来する機能性シグナル伝達ドメインと、ＣＤ３ζに由来する機能性シグナル伝達ドメインとを含み、任意選択で、前記細胞内シグナル伝達ドメイン、第１細胞内シグナル伝達ドメイン又は第２細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）と、配列番号９若しくは１０のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）とを含み、任意選択で、前記細胞内シグナル伝達ドメイン、第１細胞内シグナル伝達ドメイン又は第２細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列と、配列番号９又は１０のアミノ酸配列とを含む、請求項３０～４６のいずれか一項に記載の単離細胞。
前記ＣＡＲ、第１ＣＡＲ又は第２ＣＡＲは、リーダー配列（例えば、第１又は第２リーダ配列）をさらに含み、
（ｉ）前記リーダー配列は、配列番号１のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか；又は
（ｉｉ）前記リーダー配列は、配列番号１９９若しくは２１０の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる、請求項３０～４７のいずれか一項に記載の単離細胞。
（ｉ）前記第１リーダー配列及び前記第２リーダー配列は、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ；
（ｉｉ）前記第１ヒンジ領域及び前記第２ヒンジ領域は、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ；
（ｉｉｉ）前記第１膜貫通ドメイン及び前記第２膜貫通ドメインは、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ；及び／又は
（ｉｖ）前記第１細胞内シグナル伝達ドメイン及び前記第２細胞内シグナル伝達ドメインは、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ、任意選択で、前記第１一次シグナル伝達ドメイン及び前記第２一次シグナル伝達ドメインは、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ、及び／又は前記第１共刺激シグナル伝達ドメイン及び前記第２共刺激シグナル伝達ドメインは、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされる、請求項３０～３４又は４２～４８のいずれか一項に記載の単離細胞。
（ｉ）前記第１リーダー配列及び前記第２リーダー配列は、同じアミノ酸配列を含む（例えば、前記第１リーダー配列及び前記第２リーダー配列は、配列番号１のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む）か、又は異なるアミノ酸配列を含み；
（ｉｉ）前記第１ヒンジ領域及び前記第２ヒンジ領域は、同じアミノ酸配列を含む（例えば、前記第１ヒンジ領域及び前記第２ヒンジ領域は、配列番号２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む）か、又は異なるアミノ酸配列を含み；
（ｉｉｉ）前記第１膜貫通ドメイン及び前記第２膜貫通ドメインは、同じアミノ酸配列を含む（例えば、前記第１膜貫通ドメイン及び前記第２膜貫通ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む）か、又は異なるアミノ酸配列を含み；及び／又は
（ｉｖ）前記第１細胞内シグナル伝達ドメイン及び前記第２細胞内シグナル伝達ドメインは、同じアミノ酸配列を含むか、又は異なるアミノ酸配列を含み、
任意選択で、前記第１一次シグナル伝達ドメイン及び前記第２一次シグナル伝達ドメインは、同じアミノ酸配列を含む（例えば、前記第１一次シグナル伝達ドメイン及び前記第２一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む）か、又は異なるアミノ酸配列を含み、及び／又は
前記第１共刺激シグナル伝達ドメイン及び前記第２共刺激シグナル伝達ドメインは、同じアミノ酸配列を含む（例えば、前記第１共刺激シグナル伝達ドメイン及び前記第２共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む）か、又は異なるアミノ酸配列を含む（例えば、前記第１及び第２共刺激シグナル伝達ドメインは、それぞれ４－１ＢＢ共刺激ドメイン配列及びＣＤ２８共刺激ドメイン配列を含むか；又はそれぞれＣＤ２８共刺激ドメイン配列及び４－１ＢＢ共刺激ドメイン配列を含む）、請求項４９に記載の単離細胞。
（ｉ）前記第１リーダー配列及び前記第２リーダー配列は、それぞれ配列番号１９９及び２１０を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）又はそれぞれ配列番号２１０及び１９９を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によってコードされ；
（ｉｉ）前記第１ヒンジ領域及び前記第２ヒンジ領域は、それぞれ配列番号３３７及び１３を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）又はそれぞれ配列番号１３及び３３７を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によってコードされ；
（ｉｉｉ）前記第１膜貫通ドメイン及び前記第２膜貫通ドメインは、それぞれ配列番号３３８及び１７を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）；又はそれぞれ配列番号１７及び３３８を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によってコードされ；
（ｉｖ）前記第１共刺激シグナル伝達ドメイン及び前記第２共刺激シグナル伝達ドメインは、それぞれ配列番号２０４及び１８を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）；又はそれぞれ配列番号１８及び２０４を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によってコードされ；及び／又は
（ｖ）前記第１一次シグナル伝達ドメイン及び前記第２一次シグナル伝達ドメインは、それぞれ配列番号２０５及び２１を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）；又はそれぞれ配列番号２１及び２０５を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によってコードされる、請求項４９又は５０に記載の単離細胞。
前記ＣＡＲ、第１ＣＡＲ又は第２ＣＡＲは、ウッドチャック肝炎転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）を含む核酸配列によってコードされる、請求項３０～５１のいずれか一項に記載の単離細胞。
単離核酸分子であって、
（ａ）抗ＢＣＭＡ結合ドメインである第１抗原結合ドメインをコードする第１核酸配列であって、前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、
（ｉ）それぞれ配列番号８６、１３０、８８、９５、１３１及び１３２；
（ｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５、８４、５４、５５及び５６；又は
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号１７９、１８０、１８１、１４７、１８２及び１８３
のアミノ酸配列を含む、第１核酸配列と；
（ｂ）第２抗原結合ドメインをコードする第２核酸配列と
を含む単離核酸分子。
個別の核酸分子である第１核酸分子及び第２核酸分子を含み、前記第１核酸配列は、前記第１核酸分子上に配置され、及び前記第２核酸配列は、前記第２核酸分子上に配置される、請求項５３に記載の単離核酸分子。
単離核酸分子であって、
（ａ）抗ＢＣＭＡ結合ドメインである第１抗原結合ドメインをコードする第１核酸配列であって、前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、
（ｉ）表２０又は２６に列挙される抗ＢＣＭＡ配列のＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２及びＨＣＣＤＲ３を含むＶＨと、表２０又は２６に列挙される抗ＢＣＭＡ配列のＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３を含むＶＬとであって、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される、ＶＨ及びＶＬ；
（ｉｉ）それぞれ配列番号２３９及び２４２のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬであって、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される、ＶＨ及びＶＬ；又は
（ｉｉｉ）配列番号２００のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖ
を含む、第１核酸配列と；
（ｂ）第２抗原結合ドメインをコードする第２核酸配列と
を含む単離核酸分子。
第１ＣＡＲをコードする第１核酸配列と、第２ＣＡＲをコードする第２核酸配列とを含む単離核酸分子であって、前記第１ＣＡＲは、抗ＢＣＭＡ結合ドメインである第１抗原結合ドメイン、第１膜貫通ドメイン及び第１細胞内シグナル伝達ドメインを含み、前記第２ＣＡＲは、抗ＣＤ１９結合ドメインである第２抗原結合ドメイン、第２膜貫通ドメイン及び第２細胞内シグナル伝達ドメインを含み、
（ｉ）前記第１抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号８６、８７、８８、９５、９６及び９７のアミノ酸配列を含むＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲを含み、及び前記第２抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２９５及び２４５～２４９のアミノ酸配列を含むＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲを含むか；
（ｉｉ）前記第１抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号９３及び１０２のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを含み、及び前記第２抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２５０及び２５１のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを含むか；
（ｉｉｉ）前記第１抗原結合ドメインは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含み、及び前記第２抗原結合ドメインは、配列番号２１１のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含むか；
（ｉｖ）前記第１ＣＡＲは、配列番号１０７又は２２６のアミノ酸配列を含み、及び前記第２ＣＡＲは、配列番号２２５又は２２９のアミノ酸配列を含むか；又は
（ｖ）前記単離核酸分子は、配列番号２７１の核酸配列を含む、単離核酸分子。
第１ＣＡＲをコードする第１核酸配列と、第２ＣＡＲをコードする第２核酸配列とを含む核酸分子であって、前記第１ＣＡＲは、抗ＢＣＭＡ結合ドメインである第１抗原結合ドメイン、第１膜貫通ドメイン及び第１細胞内シグナル伝達ドメインを含み、前記第２ＣＡＲは、抗ＣＤ１９結合ドメインである第２抗原結合ドメイン、第２膜貫通ドメイン及び第２細胞内シグナル伝達ドメインを含み、
（ｉ）前記第１抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号４４、４５、７６、５４、５５及び５６のアミノ酸配列を含むＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲを含み、前記第２抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２９５及び２４５～２４９のアミノ酸配列を含むＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３を含むか；
（ｉｉ）前記第１抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号７８及び６１のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを含み、及び前記第２抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２５０及び２５１のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを含むか；
（ｉｉｉ）前記第１抗原結合ドメインは、配列番号８０のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含み、及び前記第２抗原結合ドメインは、配列番号２１１のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含むか；
（ｉｖ）前記第１ＣＡＲは、配列番号８２又は２２４のアミノ酸配列を含み、及び前記第２ＣＡＲは、配列番号２２５又は２２９のアミノ酸配列を含むか；又は
（ｖ）前記単離核酸分子は、配列番号２１５の核酸配列を含む、単離核酸分子。
請求項５３～５７のいずれか一項に記載の核酸分子によってコードされる単離ポリペプチド分子。
単離ＣＡＲであって、
（ａ）抗ＢＣＭＡ結合ドメインである第１抗原結合ドメインであって、前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、
（ｉ）それぞれ配列番号８６、１３０、８８、９５、１３１及び１３２；
（ｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５、８４、５４、５５及び５６；又は
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号１７９、１８０、１８１、１４７、１８２及び１８３
のアミノ酸配列を含む、第１抗原結合ドメインと；
（ｂ）第２抗原結合ドメインと
を含む単離ＣＡＲ。
単離ＣＡＲであって、
（ａ）抗ＢＣＭＡ結合ドメインである第１抗原結合ドメインであって、前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、
（ｉ）表２０又は２６に列挙される抗ＢＣＭＡ配列のＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２及びＨＣＣＤＲ３を含むＶＨと、表２０又は２６に列挙される抗ＢＣＭＡ配列のＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３を含むＶＬとであって、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される、ＶＨ及びＶＬ；
（ｉｉ）それぞれ配列番号２３９及び２４２のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬであって、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むリンカーによって連結される、ＶＨ及びＶＬ；又は
（ｉｉｉ）配列番号２００のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖ
を含む、第１抗原結合ドメインと；
（ｂ）第２抗原結合ドメインと
を含む単離ＣＡＲ。
請求項５３～５７のいずれか一項に記載の核酸分子又は請求項５９若しくは６０に記載のＣＡＲをコードする核酸分子を含むベクターであって、任意選択で、ＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター又はレトロウイルスベクターから選択されるベクター。
配列番号１１の核酸配列を含むＥＦ－１プロモーターをさらに含む、請求項６１に記載のベクター。
請求項５３～５７のいずれか一項に記載の核酸分子、請求項５８に記載のポリペプチド分子、請求項５９若しくは６０に記載のＣＡＲ又は請求項６１若しくは６２に記載のベクターを含む単離細胞。
Ｔ細胞又はＮＫ細胞である、請求項１～５２又は６３のいずれか一項に記載の単離細胞。
細胞を作製する方法であって、請求項６２又は６３に記載のベクターで細胞を形質導入するステップを含み、任意選択で、前記細胞は、Ｔ細胞又はＮＫ細胞である、方法。
ＲＮＡ操作細胞を作製する方法であって、インビトロで転写されたＲＮＡ又は合成ＲＮＡを細胞に導入するステップを含み、前記ＲＮＡは、請求項５３～５７のいずれか一項に記載の核酸分子又は請求項５９若しくは６０に記載のＣＡＲをコードする核酸分子を含み、任意選択で、前記細胞は、Ｔ細胞又はＮＫ細胞である、方法。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を作製する方法であって、
（ｉ）細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば凍結された又は新鮮な白血球アフェレーシス産物から単離されたＴ細胞）の集団を、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前記細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と接触させる（例えば、結合させる）ステップ；
（ｉｉ）前記細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を、請求項５３～５７のいずれか一項に記載の核酸分子又は請求項５９若しくは６０に記載のＣＡＲをコードする核酸分子と接触させ、それにより前記核酸分子を含む細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を提供するステップ、及び
（ｉｉｉ）保存（例えば、凍結保存培地中の前記細胞の集団の再製剤化）又は投与のために前記細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を採取するステップ
を含み、
（ａ）ステップ（ｉｉ）は、ステップ（ｉ）と一緒に、又はステップ（ｉ）の開始後の２０時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の１２、１３、１４、１５、１６、１７若しくは１８時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の１８時間以内に実施され、及び
ステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｉ）の開始後の３０（例えば、２６）時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の２４時間以内に実施されるか、
（ｂ）ステップ（ｉｉ）は、ステップ（ｉ）と一緒に、又はステップ（ｉ）の開始後の２０時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の１２、１３、１４、１５、１６、１７若しくは１８時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の１８時間以内に実施され、及び
ステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｉｉ）の開始後の３０時間以内、例えばステップ（ｉｉ）の開始後の２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０時間以内に実施されるか、又は
（ｃ）ステップ（ｉｉｉ）からの前記細胞の集団は、増殖されないか、又は例えばステップ（ｉ）の開始時の前記細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて５、１０、１５、２０、２５、３０、３５若しくは４０％以下、例えば１０％以下だけ増殖され、
任意選択で、ステップ（ｉｉ）の前記核酸分子は、ウイルスベクター上にあり、任意選択で、ステップ（ｉｉ）の前記核酸分子は、ウイルスベクター上のＲＮＡ分子であり、任意選択で、ステップ（ｉｉ）は、前記ＣＡＲをコードする核酸分子を含むウイルスベクターで前記細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を形質導入することを含む、方法。
ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する前記薬剤は、ＣＤ３を刺激する薬剤（例えば、抗ＣＤ３抗体）であり、共刺激分子を刺激する前記薬剤は、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＴＩＭ１、ＣＤ２、ＣＤ２２６又はそれらの任意の組み合わせを刺激する薬剤であり、任意選択で、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する前記薬剤又は共刺激分子を刺激する前記薬剤は、抗体（例えば、単一ドメイン抗体（例えば、重鎖可変ドメイン抗体）、ペプチボディ、Ｆａｂフラグメント又はｓｃＦｖ）、小分子又はリガンド（例えば、天然に存在する、組換え又はキメラリガンド）から選択され、任意選択で、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する前記薬剤又は共刺激分子を刺激する前記薬剤は、ビーズを含まず、任意選択で、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する前記薬剤は、抗ＣＤ３抗体を含み、及び共刺激分子を刺激する前記薬剤は、抗ＣＤ２８抗体を含み、任意選択で、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する前記薬剤は、コロイドポリマーナノマトリックスに共有結合された抗ＣＤ３抗体を含み、及び共刺激分子を刺激する前記薬剤は、コロイドポリマーナノマトリックスに共有結合された抗ＣＤ２８抗体を含み、任意選択で、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する前記薬剤及び共刺激分子を刺激する前記薬剤は、ＴＣｅｌｌＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）を含む、請求項６７に記載の方法。
ステップ（ｉ）及び／又は（ｉｉ）は、ＩＬ－２、ＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ）、ＬＳＤ１阻害剤、ＭＡＬＴ１阻害剤又はそれらの組み合わせを含む細胞培地（例えば、無血清培地）中で実施される、請求項６７又は６８に記載の方法。
ステップ（ｉ）及び／又は（ｉｉ）は、血清代替品を含む無血清細胞培地中で実施され、任意選択で、前記血清代替品は、ＣＴＳ（商標）ＩｍｍｕｎｅＣｅｌｌＳｅｒｕｍＲｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＩＣＳＲ）である、請求項６７～６９のいずれか一項に記載の方法。
ステップ（ｉ）前に、
（ｉｖ）（任意選択で）実体、例えば研究室、病院又は医療提供者から、新鮮な白血球アフェレーシス産物（或いは新鮮な全血液産物、新鮮な骨髄産物又は新鮮な腫瘍若しくは臓器生検若しくは切除（例えば、胸腺除去からの新鮮な産物）などの造血組織の代替供給源）を受け取るステップ、及び
（ｖ）新鮮な白血球アフェレーシス産物（或いは新鮮な全血液産物、新鮮な骨髄産物又は新鮮な腫瘍若しくは臓器生検若しくは切除（例えば、胸腺除去からの新鮮な産物）などの造血組織の代替供給源）から、ステップ（ｉ）で接触される前記細胞（例えば、Ｔ細胞、例えばＣＤ８＋及び／又はＣＤ４＋Ｔ細胞）の集団を単離するステップ
をさらに含み、任意選択で、
ステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｖ）の開始後の３５時間以内、例えばステップ（ｖ）の開始後の２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４又は３５時間以内、例えばステップ（ｖ）の開始後の３０時間以内に実施されるか、又は
ステップ（ｉｉｉ）からの前記細胞の集団は、ステップ（ｖ）の終了時の前記細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて、増殖されないか、又は５、１０、１５、２０、２５、３０、３５若しくは４０％以下、例えば１０％以下だけ増殖される、請求項６７～７０のいずれか一項に記載の方法。
ステップ（ｉ）前に、実体、例えば研究室、病院又は医療提供者から、白血球アフェレーシス産物（或いは全血液、骨髄又は腫瘍若しくは臓器生検若しくは切除（例えば、胸腺除去）から単離された凍結保存Ｔ細胞などの造血組織の代替供給源）から単離された凍結保存Ｔ細胞を受け取るステップをさらに含む、請求項６７～７０のいずれか一項に記載の方法。
ステップ（ｉ）前に、
（ｉｖ）（任意選択で）実体、例えば研究室、病院又は医療提供者から、凍結保存白血球アフェレーシス産物（或いは凍結保存全血液産物、凍結保存骨髄産物又は凍結保存腫瘍若しくは臓器生検若しくは切除（例えば、胸腺除去からの凍結保存産物）などの造血組織の代替供給源）を受け取るステップ、及び
（ｖ）凍結保存白血球アフェレーシス産物（或いは凍結保存全血液産物、凍結保存骨髄産物又は凍結保存腫瘍若しくは臓器生検若しくは切除（例えば、胸腺除去からの凍結保存産物）などの造血組織の代替供給源）から、ステップ（ｉ）で接触される前記細胞（例えば、Ｔ細胞、例えばＣＤ８＋及び／又はＣＤ４＋Ｔ細胞）の集団を単離するステップ
をさらに含み、任意選択で、
ステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｖ）の開始後の３５時間以内、例えばステップ（ｖ）の開始後の２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４又は３５時間以内、例えばステップ（ｖ）の開始後の３０時間以内に実施されるか、又は
ステップ（ｉｉｉ）からの前記細胞の集団は、ステップ（ｖ）の終了時の前記細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて、増殖されないか、又は５、１０、１５、２０、２５、３０、３５若しくは４０％以下、例えば１０％以下だけ増殖される、請求項６７～７０のいずれか一項に記載の方法。
ステップ（ｖｉ）：
ステップ（ｉｉｉ）からの前記細胞の集団の一部を少なくとも２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５又は７日、例えば少なくとも２日且つ７日以下にわたって培養し、及び前記一部におけるＣＡＲ発現レベルを測定する（例えば、前記一部における生存ＣＡＲ発現細胞のパーセンテージを測定する）ステップ
をさらに含み、任意選択で、
ステップ（ｉｉｉ）は、前記細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を採取及び凍結することを含み、且つステップ（ｖｉ）は、ステップ（ｉｉｉ）からの前記細胞の集団の一部を解凍し、前記一部を少なくとも２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５又は７日、例えば少なくとも２日且つ７日以下にわたって培養し、及び前記一部におけるＣＡＲ発現レベルを測定する（例えば、前記一部における生存ＣＡＲ発現細胞のパーセンテージを測定する）ことを含む、請求項６７～７３のいずれか一項に記載の方法。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を作製する方法であって、
（１）細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば凍結白血球アフェレーシス産物から単離されたＴ細胞）の集団を、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ）、ＩＬ－２１、ＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ）又はそれらの組み合わせから選択されるサイトカインと接触させるステップ、
（２）前記細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を、請求項５３～５７のいずれか一項に記載の核酸分子又は請求項５９若しくは６０に記載のＣＡＲをコードする核酸分子と接触させ、それにより前記核酸分子を含む細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を提供するステップ、及び
（３）保存（例えば、凍結保存培地中の前記細胞の集団の再製剤化）又は投与のために前記細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を採取するステップ
を含み、
（ａ）ステップ（２）は、ステップ（１）と一緒に、又はステップ（１）の開始後の５時間以内、例えばステップ（１）の開始後の１、２、３、４又は５時間以内に実施され、及び
ステップ（３）は、ステップ（１）の開始後の２６時間以内、例えばステップ（１）の開始後の２２、２３又は２４時間以内、例えばステップ（１）の開始後の２４時間以内に実施されるか、又は
（ｂ）ステップ（３）からの前記細胞の集団は、例えば、ステップ（１）の開始時の前記細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて、増殖されないか、又は５、１０、１５、２０、２５、３０、３５若しくは４０％以下、例えば１０％以下だけ増殖され、
任意選択で、ステップ（２）の前記核酸分子は、ウイルスベクター上にあり、任意選択で、ステップ（ｉｉ）の前記核酸分子は、ウイルスベクター上のＲＮＡ分子であり、任意選択で、ステップ（ｉｉ）は、前記細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を、前記ＣＡＲをコードする核酸分子を含むウイルスベクターで形質導入することを含む、方法。
前記細胞の集団は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／若しくは前記細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤とインビトロで接触されないか、又は接触される場合、前記接触させるステップは、２時間未満、例えば１若しくは１．５時間以下である、請求項７５に記載の方法。
ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する前記薬剤は、ＣＤ３を刺激する薬剤（例えば、抗ＣＤ３抗体）であり、共刺激分子を刺激する前記薬剤は、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＴＩＭ１、ＣＤ２、ＣＤ２２６又はそれらの任意の組み合わせを刺激する薬剤であり、任意選択で、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する前記薬剤又は共刺激分子を刺激する前記薬剤は、抗体（例えば、単一ドメイン抗体（例えば、重鎖可変ドメイン抗体）、ペプチボディ、Ｆａｂフラグメント又はｓｃＦｖ）、小分子又はリガンド（例えば、天然に存在する、組換え又はキメラリガンド）から選択される、請求項７６に記載の方法。
ステップ（１）及び／又は（２）は、
５、４、３、２、１又は０％以下の血清を含む細胞培地中で実施され、任意選択で、ステップ（１）及び／又は（２）は、約２％の血清を含む細胞培地中で実施されるか、又は
ＬＳＤ１阻害剤又はＭＡＬＴ１阻害剤を含む細胞培地中で実施される、請求項７５～７７のいずれか一項に記載の方法。
実体、例えば研究室、病院又は医療提供者から、凍結保存白血球アフェレーシス産物（或いは凍結保存全血液産物、凍結保存骨髄産物又は凍結保存腫瘍若しくは臓器生検若しくは切除（例えば、胸腺除去からの凍結保存産物）などの造血組織の代替供給源）を受け取るステップをさらに含む、請求項７５～７８のいずれか一項に記載の方法。
ステップ（ｉ）又はステップ（１）の開始時の前記細胞の集団は、ＩＬ６Ｒ発現細胞（例えば、ＩＬ６Ｒα及び／又はＩＬ６Ｒβについて陽性の細胞）について濃縮されているか；又は
ステップ（ｉ）又はステップ（１）の開始時の前記細胞の集団は、５０、６０又は７０％以上のＩＬ６Ｒ発現細胞（例えば、ＩＬ６Ｒα及び／又はＩＬ６Ｒβについて陽性の細胞）を含む、請求項６７～７９のいずれか一項に記載の方法。
ステップ（ｉ）及び（ｉｉ）又はステップ（１）及び（２）は、ＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））を含む細胞培地中で実施される、請求項６７～８０のいずれか一項に記載の方法。
請求項６７～８１のいずれか一項に記載の方法によって作製される細胞の集団。
ＣＡＲを発現するように操作された細胞の集団（「ＣＡＲ発現細胞の集団」）であって、
（ａ）前記ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、ほぼ同じパーセンテージのナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞；
（ｂ）前記ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、ナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞の約５％～約１０％以内の変化；
（ｃ）前記ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、増加したパーセンテージの、例えば少なくとも１．２、１．４、１．６、１．８、２．０、２．２、２．４、２．６、２．８又は３倍増加したナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞；
（ｄ）前記ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、ほぼ同じパーセンテージのセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞；
（ｅ）前記ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、セントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞の約５％～約１０％以内の変化；
（ｆ）前記ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、減少したパーセンテージの、例えば少なくとも２０、２５、３０、３５、４０、４５又は５０％減少したセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞；
（ｇ）前記ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中の幹メモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、ほぼ同じパーセンテージの幹メモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞；
（ｈ）前記ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中の幹メモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、幹メモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の約５％～約１０％以内の変化；又は
（ｉ）前記ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中の幹メモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、増加したパーセンテージの幹メモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞
を含み、
（ａ）抗ＢＣＭＡ結合ドメインである第１抗原結合ドメインであって、前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、
（ｉ）それぞれ配列番号８６、１３０、８８、９５、１３１及び１３２；
（ｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５、８４、５４、５５及び５６；又は
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号１７９、１８０、１８１、１４７、１８２及び１８３
のアミノ酸配列を含む、第１抗原結合ドメインと；
（ｂ）第２抗原結合ドメインと
を含む細胞の集団（「ＣＡＲ発現細胞の集団」）。
請求項１～５２、６３若しくは６４のいずれか一項に記載の細胞又は請求項８２若しくは８３に記載の細胞の集団及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
対象において抗腫瘍免疫を提供する方法であって、有効量の、請求項１～５２、６３若しくは６４のいずれか一項に記載の細胞、請求項８２若しくは８３に記載の細胞の集団又は請求項８４に記載の医薬組成物を前記対象に投与するステップを含む方法。
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、有効量の、請求項１～５２、６３若しくは６４のいずれか一項に記載の細胞、請求項８２若しくは８３に記載の細胞の集団又は請求項８４に記載の医薬組成物を前記対象に投与するステップを含む方法。
ＢＣＭＡの発現に関連する前記疾患は、
（ｉ）骨髄形成異常、骨髄異形成症候群又は前白血病の１つ以上から選択される癌若しくは悪性疾患又は前癌状態、又は
（ｉｉ）ＢＣＭＡの発現に関連する非癌関連適応症
である、請求項８６に記載の方法。
前記疾患は、血液癌又は固形癌である、請求項８６又は８７に記載の方法。
前記疾患は、急性白血病、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型若しくは大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、前立腺癌（例えば、去勢抵抗性若しくは治療抵抗性前立腺癌又は転移性前立腺癌）、膵臓癌、肺癌、形質細胞増殖異常症（例えば、無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無症候性骨髄腫）、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス若しくはＰＯＥＭＳ症候群（クロウ・深瀬症候群、高月病及びＰＥＰ症候群としても知られる））又はそれらの組み合わせから選択される、請求項８６～８８のいずれか一項に記載の方法。
前記疾患は、多発性骨髄腫である、請求項８６～８９のいずれか一項に記載の方法。
前記細胞の集団又は医薬組成物は、約１×１０^６～約１×１０^８（例えば、約２×１０^６～約５×１０^７、約５×１０^６～約２×１０^７、約１×１０^６～約１×１０^７、約１×１０^７～約１×１０^８、約１×１０^６～約３×１０^６、約２×１０^６～約４×１０^６、約３×１０^６～約５×１０^６、約４×１０^６～約６×１０^６、約５×１０^６～約７×１０^６、約６×１０^６～約８×１０^６、約７×１０^６～約９×１０^６、約８×１０^６～約１×１０^７、約９×１０^６～約２×１０^７、約１×１０^７～約３×１０^７、約２×１０^７～約４×１０^７、約３×１０^７～約５×１０^７、約４×１０^７～約６×１０^７、約５×１０^７～約７×１０^７、約６×１０^７～約８×１０^７、約７×１０^７～約９×１０^７、約８×１０^７～約１×１０^８、約１×１０^６、約２×１０^６、約３×１０^６、約４×１０^６、約５×１０^６、約６×１０^６、約７×１０^６、約８×１０^６、約９×１０^６、約１×１０^７、約２×１０^７、約３×１０^７、約４×１０^７、約５×１０^７、約６×１０^７、約７×１０^７、約８×１０^７、約９×１０^７又は約１×１０^８）個のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）の用量で前記対象に投与され、
任意選択で、前記細胞の集団又は医薬組成物は、約５×１０^６～約２×１０^７個のＣＡＲ陽性生存細胞（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋Ｔ細胞）の用量で前記対象に投与される、請求項８５～９０のいずれか一項に記載の方法。
前記対象に第２治療薬を投与するステップをさらに含み、任意選択で、前記第２治療薬は、
（ｉ）ＰＤ－１阻害剤であって、任意選択で、ＰＤＲ００１、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ－０４２、ＰＦ－０６８０１５９１及びＡＭＰ－２２４からなる群から選択されるＰＤ－１阻害剤；
（ｉｉ）ＰＤ－Ｌ１阻害剤であって、任意選択で、ＦＡＺ０５３、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ及びＢＭＳ－９３６５５９からなる群から選択されるＰＤ－Ｌ１阻害剤；
（ｉｉｉ）ＬＡＧ－３阻害剤であって、任意選択で、ＬＡＧ５２５、ＢＭＳ－９８６０１６、ＴＳＲ－０３３、ＭＫ－４２８０及びＲＥＧＮ３７６７からなる群から選択されるＬＡＧ－３阻害剤；
（ｉｖ）ＴＩＭ－３阻害剤であって、任意選択で、ＭＢＧ４５３、ＴＳＲ－０２２及びＬＹ３３２１３６７からなる群から選択されるＴＩＭ－３阻害剤；
（ｖ）ＣＴＬＡ－４阻害剤であって、任意選択で、イピリムマブ又はトレメリムマブであるＣＴＬＡ－４阻害剤；
（ｖｉ）インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）ポリペプチド、インターロイキン－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒａ）ポリペプチド又はＩＬ－１５ポリペプチドとＩＬ－１５Ｒａポリペプチドとの両方の組み合わせ、例えばｈｅｔＩＬ－１５；
（ｖｉｉ）インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）ポリペプチド；又は
（ｖｉｉｉ）ｍＴＯＲ阻害剤であって、任意選択で、ＲＡＤ００１又はラパマイシンであるｍＴＯＲ阻害剤
から選択される、請求項８５～９１のいずれか一項に記載の方法。
単離細胞であって、
（ａ）第１抗原に結合する第１抗原結合ドメイン、第１膜貫通ドメイン及び第１細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、第１一次シグナル伝達ドメイン及び／又は第１共刺激シグナル伝達ドメイン）を含む第１ＣＡＲであって、任意選択で、第１リーダー配列及び／又は第１ヒンジ領域を含む、第１ＣＡＲと；
（ｂ）第２抗原に結合する第２抗原結合ドメイン、第２膜貫通ドメイン及び第２細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、第２一次シグナル伝達ドメイン及び／又は第２共刺激シグナル伝達ドメイン）を含む第２ＣＡＲであって、任意選択で、第２リーダー配列及び／又は第２ヒンジ領域を含む、第２ＣＡＲと
を含み、
（ｉ）前記第１リーダー配列及び前記第２リーダー配列は、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ、任意選択で、前記第１及び第２リーダー配列は、同じアミノ酸配列を含み；
（ｉｉ）前記第１ヒンジ領域及び前記第２ヒンジ領域は、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ、任意選択で、前記第１及び第２ヒンジ領域は、同じアミノ酸配列を含み；
（ｉｉｉ）前記第１膜貫通ドメイン及び前記第２膜貫通ドメインは、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ、任意選択で、前記第１及び第２膜貫通ドメインは、同じアミノ酸配列を含み；及び／又は
（ｉｖ）前記第１細胞内シグナル伝達ドメイン及び前記第２細胞内シグナル伝達ドメインは、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ、
任意選択で、前記第１一次シグナル伝達ドメイン及び前記第２一次シグナル伝達ドメインは、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ、及び／又は
前記第１共刺激シグナル伝達ドメイン及び前記第２共刺激シグナル伝達ドメインは、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされる、単離細胞。
単離核酸分子であって、
（ａ）第１ＣＡＲをコードする第１核酸配列であって、前記第１ＣＡＲは、第１抗原に結合する第１抗原結合ドメイン、第１膜貫通ドメイン及び第１細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、第１一次シグナル伝達ドメイン及び／又は第１共刺激シグナル伝達ドメイン）を含み、任意選択で、前記第１ＣＡＲは、第１リーダー配列及び／又は第１ヒンジ領域を含む、第１核酸配列と；
（ｂ）第２ＣＡＲをコードする第２核酸配列であって、前記第２ＣＡＲは、第２抗原に結合する第２抗原結合ドメイン、第２膜貫通ドメイン及び第２細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、第２一次シグナル伝達ドメイン及び／又は第２共刺激シグナル伝達ドメイン）を含み、任意選択で、前記第２ＣＡＲは、第２リーダー配列及び／又は第２ヒンジ領域を含む、第２核酸配列と
を含み、
（ｉ）前記第１リーダー配列及び前記第２リーダー配列は、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ、任意選択で、前記第１及び第２リーダー配列は、同じアミノ酸配列を含み；
（ｉｉ）前記第１ヒンジ領域及び前記第２ヒンジ領域は、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ、任意選択で、前記第１及び第２ヒンジ領域は、同じアミノ酸配列を含み；
（ｉｉｉ）前記第１膜貫通ドメイン及び前記第２膜貫通ドメインは、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ、任意選択で、前記第１及び第２膜貫通ドメインは、同じアミノ酸配列を含み；及び／又は
（ｉｖ）前記第１細胞内シグナル伝達ドメイン及び前記第２細胞内シグナル伝達ドメインは、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ、
任意選択で、前記第１一次シグナル伝達ドメイン及び前記第２一次シグナル伝達ドメインは、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされ、及び／又は
前記第１共刺激シグナル伝達ドメイン及び前記第２共刺激シグナル伝達ドメインは、異なる（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％異なる）核酸配列によってコードされる、単離核酸分子。
前記第１一次シグナル伝達ドメイン及び前記第２一次シグナル伝達ドメインは、同じアミノ酸配列を含むか、若しくは異なるアミノ酸配列を含み、及び／又は前記第１共刺激シグナル伝達ドメイン及び前記第２共刺激シグナル伝達ドメインは、同じアミノ酸配列を含むか、若しくは異なるアミノ酸配列を含む（例えば、前記第１及び第２共刺激シグナル伝達ドメインは、それぞれ４－１ＢＢ共刺激ドメイン配列及びＣＤ２８共刺激ドメイン配列を含むか；又はそれぞれＣＤ２８共刺激ドメイン配列及び４－１ＢＢ共刺激ドメイン配列を含む）、請求項９３に記載の単離細胞又は請求項９４に記載の単離核酸分子。
（ｉ）前記第１リーダー配列及び前記第２リーダー配列は、配列番号１のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
（ｉｉ）前記第１ヒンジ領域及び前記第２ヒンジ領域は、配列番号２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
（ｉｉｉ）前記第１膜貫通ドメイン及び前記第２膜貫通ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
（ｉｖ）前記第１共刺激シグナル伝達ドメイン及び前記第２共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；及び／又は
（ｖ）前記第１一次シグナル伝達ドメイン及び前記第２一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項９３若しくは９５に記載の単離細胞又は請求項９４若しくは９５に記載の単離核酸分子。
（ｉ）前記第１リーダー配列及び前記第２リーダー配列は、それぞれ配列番号１９９及び２１０を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）又はそれぞれ配列番号２１０及び１９９を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によってコードされ；
（ｉｉ）前記第１ヒンジ領域及び前記第２ヒンジ領域は、それぞれ配列番号３３７及び１３を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）又はそれぞれ配列番号１３及び３３７を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によってコードされ；
（ｉｉｉ）前記第１膜貫通ドメイン及び前記第２膜貫通ドメインは、それぞれ配列番号３３８及び１７を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）；又はそれぞれ配列番号１７及び３３８を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によってコードされ；
（ｉｖ）前記第１共刺激シグナル伝達ドメイン及び前記第２共刺激シグナル伝達ドメインは、それぞれ配列番号２０４及び１８を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）；又はそれぞれ配列番号１８及び２０４を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によってコードされ；及び／又は
（ｉｖ）前記第１一次シグナル伝達ドメイン及び前記第２一次シグナル伝達ドメインは、それぞれ配列番号２０５及び２１を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）；又はそれぞれ配列番号２１及び２０５を含む核酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列）によってコードされる、請求項９３、９５若しくは９６のいずれか一項に記載の単離細胞又は請求項９４～９６のいずれか一項に記載の単離核酸分子。
前記第１又は第２抗原は、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ５、ＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ５３、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７７、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ１２３、ＣＤ１３５、ＣＤ１３８、ＣＤ１７９、ＣＤ２６９、Ｆｌｔ３、ＲＯＲ１、ＦｃＲｎ５、ＦｃＲｎ２、ＣＳ－１、ＣＸＣＲ４、５、７、ＩＬ－７／３Ｒ、ＩＬ７／４／３Ｒ又はＩＬ４Ｒから選択され、任意選択で、前記Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＦｃＲｎ５、ＦｃＲｎ２、ＣＳ－１、ＣＤ１３８、ＣＤ１２３、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＬＬ－１、葉酸受容体β、ＦＬＴ３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、メソテリン、ＧＤ２、Ｔｎ抗原、ｓＴｎ抗原、Ｔｎ－Ｏ－糖ペプチド、ｓＴｎ－Ｏ－糖ペプチド、ＰＳＭＡ、ＣＤ９７、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、レグマン、ＧＤ３、ＣＤ１７１、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－β、ＳＳＥＡ－４、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ（例えば、ＥＲＢＢ２）、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、エフリンＢ２、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｓＬｅ、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体β、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＦＡＰ、レグマイン、ＨＰＶＥ６若しくはＥ７、ＭＬ－ＩＡＰ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、Ｆｏｓ関連抗原、好中球エラスターゼ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、精子タンパク質１７、βヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＡＦＰ、チログロブリン、ＰＬＡＣ１、グロボＨ、ＲＡＧＥ１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔｈｓｐ７０－２、ＮＡ－１７、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＧＰＲ２０、Ｌｙ６ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＧＦＲα４又はＭＨＣに提示される前記抗原のいずれかのペプチドから選択される、請求項９３若しくは９５～９７のいずれか一項に記載の単離細胞又は請求項９４～９７のいずれか一項に記載の単離核酸分子。
前記第１又は第２抗原結合ドメインは、本明細書に開示されるＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ若しくはｓｃＦｖ又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項９３若しくは９５～９８のいずれか一項に記載の単離細胞又は請求項９４～９８のいずれか一項に記載の単離核酸分子。
単離ＣＡＲであって、第１ＶＨ（ＶＨ１）、第１ＶＬ（ＶＬ１）、第２ＶＨ（ＶＨ２）、第２ＶＬ（ＶＬ２）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、前記ＶＨ１及びＶＬ１は、第１抗原に結合し、且つ前記ＶＨ２及びＶＬ２は、第２抗原に結合し、前記ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：
（ｉ）ＶＨ１－任意選択でリンカー１（「Ｌ１」）－ＶＨ２－任意選択でリンカー２（「Ｌ２」）－ＶＬ２－任意選択でリンカー３（「Ｌ３」）－ＶＬ１；
（ｉｉ）ＶＨ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＬ１；
（ｉｉｉ）ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＨ２－任意選択でＬ２－ＶＬ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１；
（ｉｖ）ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１；
（ｖ）ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２；
（ｖｉ）ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２；
（ｖｉｉ）ＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２；又は
（ｖｉｉｉ）ＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２
で配列される、単離ＣＡＲ。
前記ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：
（ｉ）ＶＨ１－リンカー１（「Ｌ１」）－ＶＨ２－リンカー２（「Ｌ２」）－ＶＬ２－リンカー３（「Ｌ３」）－ＶＬ１；
（ｉｉ）ＶＨ１－Ｌ１－ＶＬ２－Ｌ２－ＶＨ２－Ｌ３－ＶＬ１；
（ｉｉｉ）ＶＬ１－Ｌ１－ＶＨ２－Ｌ２－ＶＬ２－Ｌ３－ＶＨ１；
（ｉｖ）ＶＬ１－Ｌ１－ＶＬ２－Ｌ２－ＶＨ２－Ｌ３－ＶＨ１；
（ｖ）ＶＨ２－Ｌ１－ＶＨ１－Ｌ２－ＶＬ１－Ｌ３－ＶＬ２；
（ｖｉ）ＶＨ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＶＨ１－Ｌ３－ＶＬ２；
（ｖｉｉ）ＶＬ２－Ｌ１－ＶＨ１－Ｌ２－ＶＬ１－Ｌ３－ＶＨ２；又は
（ｖｉｉｉ）ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２
で配列される、請求項１００に記載の単離ＣＡＲ。
Ｌ１又はＬ３は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、及び／又はＬ２は、配列番号６３のアミノ酸配列を含む、請求項１００又は１０１に記載の単離ＣＡＲ。
Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：
（ｉ）ＶＨ１－任意選択でリンカー１（「Ｌ１」）－ＶＨ２－任意選択でリンカー２（「Ｌ２」）－ＶＬ２－任意選択でリンカー３（「Ｌ３」）－ＶＬ１－任意選択でヒンジ領域－膜貫通ドメイン－細胞内シグナル伝達ドメイン；
（ｉｉ）ＶＨ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＬ１－任意選択でヒンジ領域－膜貫通ドメイン－細胞内シグナル伝達ドメイン；
（ｉｉｉ）ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＨ２－任意選択でＬ２－ＶＬ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１－任意選択でヒンジ領域－膜貫通ドメイン－細胞内シグナル伝達ドメイン；
（ｉｖ）ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１－任意選択でヒンジ領域－膜貫通ドメイン－細胞内シグナル伝達ドメイン；
（ｖ）ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２－任意選択でヒンジ領域－膜貫通ドメイン－細胞内シグナル伝達ドメイン；
（ｖｉ）ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２－任意選択でヒンジ領域－膜貫通ドメイン－細胞内シグナル伝達ドメイン；
（ｖｉｉ）ＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２－任意選択でヒンジ領域－膜貫通ドメイン－細胞内シグナル伝達ドメイン；又は
（ｖｉｉｉ）ＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２－任意選択でヒンジ領域－膜貫通ドメイン－細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、請求項１００～１０２のいずれか一項に記載の単離ＣＡＲ。
前記第１又は第２抗原は、異なり、且つ前記第１又は第２抗原は、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ５、ＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ５３、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７７、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ１２３、ＣＤ１３５、ＣＤ１３８、ＣＤ１７９、ＣＤ２６９、Ｆｌｔ３、ＲＯＲ１、ＦｃＲｎ５、ＦｃＲｎ２、ＣＳ－１、ＣＸＣＲ４、５、７、ＩＬ－７／３Ｒ、ＩＬ７／４／３Ｒ又はＩＬ４Ｒから選択され、任意選択で、前記Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＦｃＲｎ５、ＦｃＲｎ２、ＣＳ－１、ＣＤ１３８、ＣＤ１２３、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＬＬ－１、葉酸受容体β、ＦＬＴ３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、メソテリン、ＧＤ２、Ｔｎ抗原、ｓＴｎ抗原、Ｔｎ－Ｏ－糖ペプチド、ｓＴｎ－Ｏ－糖ペプチド、ＰＳＭＡ、ＣＤ９７、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、レグマン、ＧＤ３、ＣＤ１７１、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－β、ＳＳＥＡ－４、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ（例えば、ＥＲＢＢ２）、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、エフリンＢ２、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｓＬｅ、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体β、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＦＡＰ、レグマイン、ＨＰＶＥ６若しくはＥ７、ＭＬ－ＩＡＰ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、Ｆｏｓ関連抗原、好中球エラスターゼ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、精子タンパク質１７、βヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＡＦＰ、チログロブリン、ＰＬＡＣ１、グロボＨ、ＲＡＧＥ１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔｈｓｐ７０－２、ＮＡ－１７、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＧＰＲ２０、Ｌｙ６ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＧＦＲα４又はＭＨＣに提示される前記抗原のいずれかのペプチドから選択される、請求項１００～１０３のいずれか一項に記載の単離ＣＡＲ。
（ｉ）前記ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２又はＶＬ２は、本明細書に開示されるＣＤＲ、ＶＨ若しくはＶＬ配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；及び／又は
（ｉｉ）前記ヒンジ領域、膜貫通ドメイン又は細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、一次シグナル伝達ドメイン及び／又は共刺激シグナル伝達ドメイン）は、本明細書に開示されるヒンジ領域配列、膜貫通ドメイン配列若しくは細胞内シグナル伝達ドメイン配列（例えば、一次シグナル伝達ドメイン配列及び／若しくは共刺激シグナル伝達ドメイン配列）又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１００～１０４のいずれか一項に記載の単離ＣＡＲ。
請求項１００～１０５のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする単離核酸分子。
請求項１０６に記載の核酸分子を含む単離ベクター。
請求項１００～１０５のいずれか一項に記載のＣＡＲ、請求項１０６に記載の核酸分子又は請求項１０７に記載のベクターを含む単離細胞。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を作製する方法であって、
（ｉ）細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば凍結された又は新鮮な白血球アフェレーシス産物から単離されたＴ細胞）の集団を、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／又は前記細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤と接触させる（例えば、結合させる）ステップ；
（ｉｉ）前記細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を、前記ＣＡＲをコードする核酸分子（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子）と接触させ、それにより前記核酸分子を含む細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を提供するステップ、及び
（ｉｉｉ）保存（例えば、凍結保存培地中の前記細胞の集団の再製剤化）又は投与のために前記細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を採取するステップ
を含み、
（ａ）ステップ（ｉｉ）は、ステップ（ｉ）と一緒に、又はステップ（ｉ）の開始後の２０時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の１２、１３、１４、１５、１６、１７若しくは１８時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の１８時間以内に実施され、及び
ステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｉ）の開始後の３０（例えば、２６）時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の２４時間以内に実施されるか、
（ｂ）ステップ（ｉｉ）は、ステップ（ｉ）と一緒に、又はステップ（ｉ）の開始後の２０時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の１２、１３、１４、１５、１６、１７若しくは１８時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の１８時間以内に実施され、及び
ステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｉｉ）の開始後の３０時間以内、例えばステップ（ｉｉ）の開始後の２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０時間以内に実施されるか、又は
（ｃ）ステップ（ｉｉｉ）からの前記細胞の集団は、例えば、ステップ（ｉ）の開始時の前記細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて、増殖されないか、又は５、１０、１５、２０、２５、３０、３５若しくは４０％以下、例えば１０％以下だけ増殖され、
任意選択で、ステップ（ｉｉ）の前記核酸分子は、ウイルスベクター上にあり、任意選択で、ステップ（ｉｉ）の前記核酸分子は、ウイルスベクター上のＲＮＡ分子であり、任意選択で、ステップ（ｉｉ）は、前記細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を、前記ＣＡＲをコードする核酸分子を含むウイルスベクターで形質導入することを含み、
（Ｉ）前記核酸分子は、第１ＣＡＲをコードする第１核酸配列と、第２ＣＡＲをコードする第２核酸配列とを含み、
前記第１及び第２核酸配列は、単一の核酸分子上に配置され、例えば、前記第１核酸配列及び前記第２核酸配列は、自己切断部位（例えば、Ｐ２Ａ部位、Ｔ２Ａ部位、Ｅ２Ａ部位又はＦ２Ａ部位）をコードする第３核酸配列によって隔てられるか、又は
前記第１及び第２核酸配列は、個別の核酸分子上に配置されるか；又は
（ＩＩ）前記核酸分子は、ＣＡＲをコードする核酸配列を含み、前記ＣＡＲは、第１ＶＨ（ＶＨ１）、第１ＶＬ（ＶＬ１）、第２ＶＨ（ＶＨ２）、第２ＶＬ（ＶＬ２）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、前記ＶＨ１及びＶＬ１は、第１抗原に結合し、且つ前記ＶＨ２及びＶＬ２は、第２抗原に結合し、前記ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＨ１－任意選択でリンカー１（「Ｌ１」）－ＶＨ２－任意選択でリンカー２（「Ｌ２」）－ＶＬ２－任意選択でリンカー３（「Ｌ３」）－ＶＬ１、ＶＨ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＬ１、ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＨ２－任意選択でＬ２－ＶＬ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１、ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１、ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２、ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２、ＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２；又はＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２で配列される、方法。
前記核酸分子は、第１ＣＡＲをコードする第１核酸配列と、第２ＣＡＲをコードする第２核酸配列とを含み、前記第１及び第２核酸配列は、個別の核酸分子上に配置される、請求項１０９に記載の方法。
前記第１及び第２核酸分子は、個別のウイルスベクター上にあり、ステップ（ｉｉ）は、前記第１ＣＡＲをコードする前記核酸分子を含む第１ウイルスベクターと、前記第２ＣＡＲをコードする前記第２核酸分子を含む第２ウイルスベクターとで前記細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を形質導入することを含む、請求項１１０に記載の方法。
前記第１ＣＡＲは、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン（例えば、抗ＢＣＭＡＣＡＲ）を含み、及び前記第２ＣＡＲは、抗ＣＤ１９結合ドメイン（例えば、抗ＣＤ１９ＣＡＲ）を含む、請求項１１１に記載の方法。
ステップ（ｉｉ）において、前記細胞の集団は、前記細胞の集団が前記第２ウイルスベクターと接触される感染多重度（ＭＯＩ）より高いか、それと等しいか又はそれより低いＭＯＩで前記第１ウイルスベクターと接触され、
任意選択で、ステップ（ｉｉ）において、前記細胞の集団は、前記細胞の集団が前記第２ウイルスベクターと接触される感染多重度（ＭＯＩ）より高いＭＯＩで前記第１ウイルスベクターと接触される、請求項１１２に記載の方法。
ステップ（ｉｉ）において、前記細胞の集団は、得られる細胞の集団が、前記抗ＢＣＭＡＣＡＲを含むが、前記抗ＣＤ１９ＣＡＲを含まない第１の細胞の集団、前記抗ＣＤ１９ＣＡＲを含むが、前記抗ＢＣＭＡＣＡＲを含まない第２の細胞の集団及び前記抗ＢＣＭＡＣＡＲと前記抗ＣＤ１９ＣＡＲとの両方を含む第３の細胞の集団を含むように、第１ＭＯＩで前記第１ウイルスベクターと、且つ第２ＭＯＩで前記第２ウイルスベクターと接触され、例えば実施例１０に記載の方法によって決定されて、
（ｉ）前記第２及び第３集団を合わせた生存細胞の総数は、前記第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約１１０％以下（例えば、約１０５％、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％又はそれ未満以下）であり；
（ｉｉ）前記第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数は、前記第２及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約９０％以上（例えば、約１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％、５００％、７５０％、１０００％、２０００％、５０００、１００００％又はそれを超えるもの以上）であり；及び／又は
（ｉｉｉ）前記第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数は、前記得られる集団の生存細胞の総数の約５％以上（例えば、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％以上）である、請求項１１２又は１１３に記載の方法。
ステップ（ｉｉ）において、前記細胞の集団は、
（ａ）約１～約１０（例えば、約２～約９、約３～約８、約４～約７、約５～約６、約１～約８、約１～約６、約１～約４、約８～約１０、約６～約１０、約４～約１０、約１～３、約２～約４、約３～約５、約４～約６、約５～約７、約６～約８、約７～約９、約８～約１０、約２．５～約５、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９又は約１０）のＭＯＩで前記第１ウイルスベクターと接触され、
任意選択で、前記細胞の集団は、約２．５～約５のＭＯＩで前記第１ウイルスベクターと接触され；
（ｂ）約０．１～約５（例えば、約０．２～約４、約０．３～約３、約０．４～約２、約０．５～約１、約０．６～約０．９、約０．７～約０．８、約０．１～約４、約０．１～約３、約０．１～約２、約０．１～約１、約０．１～約０．５、約４～約５、約３～約５、約２～約５、約１～約５、約０．５～約５、約０．２～約５、約０．１～約０．５、約０．２～約１、約０．５～約２、約１～約３、約２～約４、約３～約５、約０．５～約１、約０．１、約０．２、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１、約２、約３、約４又は約５）のＭＯＩで前記第２ウイルスベクターと接触され、
任意選択で、前記細胞の集団は、約０．５～約１．０のＭＯＩで前記第２ウイルスベクターと接触され；
（ｃ）前記細胞の集団が前記第２ウイルスベクターと接触されるＭＯＩより少なくとも１０％（例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％若しくは９０％）高いか、又は少なくとも約１倍（例えば、少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０若しくは１００倍、例えば約２～約５０倍、約３～２０倍、約５～約１５倍若しくは約８～約１０倍）のＭＯＩで前記第１ウイルスベクターと接触され、
任意選択で、前記細胞の集団が前記第２ウイルスベクターと接触されるＭＯＩの約８～約１０倍のＭＯＩで前記第１ウイルスベクターと接触され；及び／又は
（ｄ）前記細胞の集団が前記第１ウイルスベクターと接触されるＭＯＩの１／Ｘ（ここで、Ｘは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０又は１００である）以下のＭＯＩで前記第２ウイルスベクターと接触され、
任意選択で、前記細胞の集団が前記第１ウイルスベクターと接触されるＭＯＩの１／Ｘ（ここで、Ｘは、６、８、１０又は１２である）以下のＭＯＩで前記第２ウイルスベクターと接触される、請求項１１２又は１１３に記載の方法。
ステップ（ｉｉ）において、前記細胞の集団は、
（ａ）約４～約５（例えば、約４．７５）のＭＯＩで前記第１ウイルスベクターと；及び／又は
（ｂ）約０．２～約１（例えば、約０．５）のＭＯＩで前記第２ウイルスベクターと
と接触される、請求項１１３～１１５のいずれか一項に記載の方法。
ステップ（ｉｉ）において、前記細胞の集団は、約１×１０^８～約５×１０^９（例えば、約２×１０^８～約２×１０^９又は約４×１０^８～約１×１０^９個の総生存細胞を含み、任意選択で、前記細胞は、約１×１０^６～約１×１０^７（例えば、約２×１０^６～約５×１０^６又は約３×１０^６～約４×１０^６）個の生存細胞／ｍＬの濃度で培養物中に懸濁される、請求項１０９～１１６のいずれか一項に記載の方法。
ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する前記薬剤は、ＣＤ３を刺激する薬剤（例えば、抗ＣＤ３抗体）であり、共刺激分子を刺激する前記薬剤は、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＴＩＭ１、ＣＤ２、ＣＤ２２６又はそれらの任意の組み合わせを刺激する薬剤であり、任意選択で、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する前記薬剤又は共刺激分子を刺激する前記薬剤は、抗体（例えば、単一ドメイン抗体（例えば、重鎖可変ドメイン抗体）、ペプチボディ、Ｆａｂフラグメント又はｓｃＦｖ）、小分子又はリガンド（例えば、天然に存在する、組換え又はキメラリガンド）から選択され、任意選択で、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する前記薬剤又は共刺激分子を刺激する前記薬剤は、ビーズを含まず、任意選択で、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する前記薬剤は、抗ＣＤ３抗体を含み、及び共刺激分子を刺激する前記薬剤は、抗ＣＤ２８抗体を含み、任意選択で、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する前記薬剤は、コロイドポリマーナノマトリックスに共有結合された抗ＣＤ３抗体を含み、及び共刺激分子を刺激する前記薬剤は、コロイドポリマーナノマトリックスに共有結合された抗ＣＤ２８抗体を含み、任意選択で、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する前記薬剤及び共刺激分子を刺激する前記薬剤は、ＴＣｅｌｌＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）を含む、請求項１０９～１１７のいずれか一項に記載の方法。
ステップ（ｉ）及び／又は（ｉｉ）は、ＩＬ－２、ＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ）、ＬＳＤ１阻害剤、ＭＡＬＴ１阻害剤又はそれらの組み合わせを含む細胞培地（例えば、無血清培地）中で実施される、請求項１０９～１１８のいずれか一項に記載の方法。
ステップ（ｉ）及び／又は（ｉｉ）は、血清代替品を含む無血清細胞培地中で実施され、任意選択で、前記血清代替品は、ＣＴＳ（商標）ＩｍｍｕｎｅＣｅｌｌＳｅｒｕｍＲｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＩＣＳＲ）である、請求項１０９～１１９のいずれか一項に記載の方法。
ステップ（ｉ）前に、
（ｉｖ）（任意選択で）実体、例えば研究室、病院又は医療提供者から、新鮮な白血球アフェレーシス産物（或いは新鮮な全血液産物、新鮮な骨髄産物又は新鮮な腫瘍若しくは臓器生検若しくは切除（例えば、胸腺除去からの新鮮な産物）などの造血組織の代替供給源）を受け取るステップ、及び
（ｖ）新鮮な白血球アフェレーシス産物（或いは新鮮な全血液産物、新鮮な骨髄産物又は新鮮な腫瘍若しくは臓器生検若しくは切除（例えば、胸腺除去からの新鮮な産物）などの造血組織の代替供給源）から、ステップ（ｉ）で接触される前記細胞（例えば、Ｔ細胞、例えばＣＤ８＋及び／又はＣＤ４＋Ｔ細胞）の集団を単離するステップ
をさらに含み、任意選択で、
ステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｖ）の開始後の３５時間以内、例えばステップ（ｖ）の開始後の２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４又は３５時間以内、例えばステップ（ｖ）の開始後の３０時間以内に実施されるか、又は
ステップ（ｉｉｉ）からの前記細胞の集団は、ステップ（ｖ）の終了時の前記細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて、増殖されないか、又は５、１０、１５、２０、２５、３０、３５若しくは４０％以下、例えば１０％以下だけ増殖される、請求項１０９～１２０のいずれか一項に記載の方法。
ステップ（ｉ）前に、実体、例えば研究室、病院又は医療提供者から、白血球アフェレーシス産物（或いは全血液、骨髄又は腫瘍若しくは臓器生検若しくは切除（例えば、胸腺除去）から単離された凍結保存Ｔ細胞などの造血組織の代替供給源）から単離された凍結保存Ｔ細胞を受け取るステップをさらに含む、請求項１０９～１２０のいずれか一項に記載の方法。
ステップ（ｉ）前に、
（ｉｖ）（任意選択で）実体、例えば研究室、病院又は医療提供者から、凍結保存白血球アフェレーシス産物（或いは凍結保存全血液産物、凍結保存骨髄産物又は凍結保存腫瘍若しくは臓器生検若しくは切除（例えば、胸腺除去からの凍結保存産物）などの造血組織の代替供給源）を受け取るステップ、及び
（ｖ）凍結保存白血球アフェレーシス産物（或いは凍結保存全血液産物、凍結保存骨髄産物又は凍結保存腫瘍若しくは臓器生検若しくは切除（例えば、胸腺除去からの凍結保存産物）などの造血組織の代替供給源）から、ステップ（ｉ）で接触される前記細胞（例えば、Ｔ細胞、例えばＣＤ８＋及び／又はＣＤ４＋Ｔ細胞）の集団を単離するステップ
をさらに含み、任意選択で、
ステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｖ）の開始後の３５時間以内、例えばステップ（ｖ）の開始後の２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４又は３５時間以内、例えばステップ（ｖ）の開始後の３０時間以内に実施されるか、又は
ステップ（ｉｉｉ）からの前記細胞の集団は、ステップ（ｖ）の終了時の前記細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて、増殖されないか、又は５、１０、１５、２０、２５、３０、３５若しくは４０％以下、例えば１０％以下だけ増殖される、請求項１０９～１２０のいずれか一項に記載の方法。
ステップ（ｖｉ）：
ステップ（ｉｉｉ）からの前記細胞の集団の一部を少なくとも２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５又は７日、例えば少なくとも２日且つ７日以下にわたって培養し、及び前記一部におけるＣＡＲ発現レベルを測定する（例えば、前記一部における生存ＣＡＲ発現細胞のパーセンテージを測定する）ステップ
をさらに含み、任意選択で、
ステップ（ｉｉｉ）は、前記細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を採取及び凍結することを含み、且つステップ（ｖｉ）は、ステップ（ｉｉｉ）からの前記細胞の集団の一部を解凍し、前記一部を少なくとも２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５又は７日、例えば少なくとも２日且つ７日以下にわたって培養し、及び前記一部におけるＣＡＲ発現レベルを測定する（例えば、前記一部における生存ＣＡＲ発現細胞のパーセンテージを測定する、例えば前記一部における生存抗ＢＣＭＡＣＡＲ発現細胞のパーセンテージを測定する）ことを含む、請求項１０９～１２３のいずれか一項に記載の方法。
ステップ（ｉｉｉ）からの前記細胞は、前記一部におけるＣＡＲ発現レベルを測定する（例えば、前記一部における生存ＣＡＲ発現細胞のパーセンテージを測定する、例えば前記一部における生存抗ＢＣＭＡＣＡＲ発現細胞のパーセンテージを測定する）前に、約２～約４日、例えば約３日（例えば、採取後約７２時間）にわたって培養される、請求項１２４に記載の方法。
ＣＡＲ発現の前記測定は、ステップ（ｉｉ）から約４日（例えば、９６時間）後に行われる、請求項１２５に記載の方法。
前記ＣＡＲ発現レベルは、フローサイトメトリーによって測定される、請求項１２４～１２６のいずれか一項に記載の方法。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を作製する方法であって、
（１）細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば凍結された白血球アフェレーシス産物から単離されたＴ細胞）の集団を、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））、ＩＬ－２１、ＩＬ－６（例えば、ＩＬ－６／ｓＩＬ－６Ｒａ）又はそれらの組み合わせから選択されるサイトカインと接触させるステップ、
（２）前記細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を、前記ＣＡＲをコードする核酸分子（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子）と接触させ、それにより前記核酸分子を含む細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を提供するステップ、及び
（３）保存（例えば、凍結保存培地中の前記細胞の集団の再製剤化）又は投与のために前記細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を採取するステップ
を含み、
（ａ）ステップ（２）は、ステップ（１）と一緒に、又はステップ（１）の開始後の５時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の１、２、３、４若しくは５時間以内に実施され、及び
ステップ（３）は、ステップ（１）の開始後の２６時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の２２、２３若しくは２４時間以内、例えばステップ（ｉ）の開始後の２４時間以内に実施されるか、又は
（ｂ）ステップ（３）からの前記細胞の集団は、例えば、ステップ（１）の開始時の前記細胞の集団と比べて、生存細胞の数によって評価されて、増殖されないか、又は５、１０、１５、２０、２５、３０、３５若しくは４０％以下、例えば１０％以下だけ増殖され、
任意選択で、ステップ（２）の前記核酸分子は、ウイルスベクター上にあり、任意選択で、ステップ（ｉｉ）の前記核酸分子は、ウイルスベクター上のＲＮＡ分子であり、任意選択で、ステップ（ｉｉ）は、前記細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を、前記ＣＡＲをコードする核酸分子を含むウイルスベクターで形質導入することを含み、
（Ｉ）前記核酸分子は、第１ＣＡＲをコードする第１核酸配列と、第２ＣＡＲをコードする第２核酸配列とを含み、
前記第１及び第２核酸配列は、単一の核酸分子上に配置され、例えば、前記第１核酸配列及び前記第２核酸配列は、自己切断部位（例えば、Ｐ２Ａ部位、Ｔ２Ａ部位、Ｅ２Ａ部位又はＦ２Ａ部位）をコードする第３核酸配列によって隔てられるか、又は
前記第１及び第２核酸配列は、個別の核酸分子上に配置されるか；又は
（ＩＩ）前記核酸分子は、ＣＡＲをコードする核酸配列を含み、前記ＣＡＲは、第１ＶＨ（ＶＨ１）、第１ＶＬ（ＶＬ１）、第２ＶＨ（ＶＨ２）、第２ＶＬ（ＶＬ２）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、前記ＶＨ１及びＶＬ１は、第１抗原に結合し、且つ前記ＶＨ２及びＶＬ２は、第２抗原に結合し、前記ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＨ１－任意選択でリンカー１（「Ｌ１」）－ＶＨ２－任意選択でリンカー２（「Ｌ２」）－ＶＬ２－任意選択でリンカー３（「Ｌ３」）－ＶＬ１、ＶＨ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＬ１、ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＨ２－任意選択でＬ２－ＶＬ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１、ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１、ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２、ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２、ＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２；又はＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２で配列される、方法。
前記細胞の集団は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する薬剤及び／若しくは前記細胞の表面上の共刺激分子を刺激する薬剤とインビトロで接触されないか、又は接触される場合、前記接触させるステップは、２時間未満、例えば１若しくは１．５時間以下である、請求項１２８に記載の方法。
ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する前記薬剤は、ＣＤ３を刺激する薬剤（例えば、抗ＣＤ３抗体）であり、共刺激分子を刺激する前記薬剤は、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＴＩＭ１、ＣＤ２、ＣＤ２２６又はそれらの任意の組み合わせを刺激する薬剤であり、任意選択で、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体を刺激する前記薬剤又は共刺激分子を刺激する前記薬剤は、抗体（例えば、単一ドメイン抗体（例えば、重鎖可変ドメイン抗体）、ペプチボディ、Ｆａｂフラグメント又はｓｃＦｖ）、小分子又はリガンド（例えば、天然に存在する、組換え又はキメラリガンド）から選択される、請求項１２９に記載の方法。
ステップ（１）及び／又は（２）は、
５、４、３、２、１又は０％以下の血清を含む細胞培地中で実施され、任意選択で、ステップ（１）及び／又は（２）は、約２％の血清を含む細胞培地中で実施されるか、又は
ＬＳＤ１阻害剤又はＭＡＬＴ１阻害剤を含む細胞培地中で実施される、請求項１２８～１３０のいずれか一項に記載の方法。
実体、例えば研究室、病院又は医療提供者から、凍結保存白血球アフェレーシス産物（或いは凍結保存全血液産物、凍結保存骨髄産物又は凍結保存腫瘍若しくは臓器生検若しくは切除（例えば、胸腺除去からの凍結保存産物）などの造血組織の代替供給源）を受け取るステップをさらに含む、請求項１２８～１３１のいずれか一項に記載の方法。
ステップ（ｉ）又はステップ（１）の開始時の前記細胞の集団は、ＩＬ６Ｒ発現細胞（例えば、ＩＬ６Ｒα及び／又はＩＬ６Ｒβについて陽性の細胞）について濃縮されているか；又は
ステップ（ｉ）又はステップ（１）の開始時の前記細胞の集団は、５０、６０又は７０％以上のＩＬ６Ｒ発現細胞（例えば、ＩＬ６Ｒα及び／又はＩＬ６Ｒβについて陽性の細胞）を含む、請求項１０９～１３２のいずれか一項に記載の方法。
ステップ（ｉ）及び（ｉｉ）又はステップ（１）及び（２）は、ＩＬ－１５（例えば、ｈｅｔＩＬ－１５（ＩＬ１５／ｓＩＬ－１５Ｒａ））を含む細胞培地中で実施される、請求項１０９～１３３のいずれか一項に記載の方法。
請求項１０９～１３４のいずれか一項に記載の方法によって作製される細胞の集団。
請求項１１２～１１４のいずれか一項に記載の方法によって作製される細胞の集団。
前記細胞の集団は、
抗ＢＣＭＡＣＡＲを含むが、抗ＣＤ１９ＣＡＲを含まない第１の細胞の集団；
抗ＣＤ１９ＣＡＲを含むが、抗ＢＣＭＡＣＡＲを含まない第２の細胞の集団；及び
抗ＢＣＭＡＣＡＲと抗ＣＤ１９ＣＡＲとの両方を含む第３の細胞の集団
を含む、請求項１３６に記載の細胞の集団。
（ｉ）前記第２及び第３集団を合わせた生存細胞の総数は、前記第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約１１０％以下（例えば、約１０５％、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％又はそれ未満以下）であり；
（ｉｉ）前記第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数は、前記第２及び第３集団を合わせた生存細胞の総数の約９０％以上（例えば、約１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％、５００％、７５０％、１０００％、２０００％、５０００、１００００％又はそれを超えるもの以上）であり；及び／又は
（ｉｉｉ）前記第１及び第３集団を合わせた生存細胞の総数は、前記集団の生存細胞の総数の約５％以上（例えば、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％以上）である、請求項１３７に記載の細胞の集団。
ＣＡＲを含まない第４の細胞の集団をさらに含む、請求項１３７又は１３８に記載の細胞の集団。
ＣＡＲを発現するように操作された細胞の集団（「ＣＡＲ発現細胞の集団」）であって、
（ａ）前記ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、ほぼ同じパーセンテージのナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞；
（ｂ）前記ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、ナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞の約５％～約１０％以内の変化；
（ｃ）前記ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、増加したパーセンテージの、例えば少なくとも１．２、１．４、１．６、１．８、２．０、２．２、２．４、２．６、２．８又は３倍増加したナイーブ細胞、例えばナイーブＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞；
（ｄ）前記ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、ほぼ同じパーセンテージのセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞；
（ｅ）前記ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、セントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞の約５％～約１０％以内の変化；
（ｆ）前記ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中のセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、減少したパーセンテージの、例えば少なくとも２０、２５、３０、３５、４０、４５又は５０％減少したセントラルメモリー細胞、例えばセントラルメモリーＴ細胞、例えばＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞；
（ｇ）前記ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中の幹メモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、ほぼ同じパーセンテージの幹メモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞；
（ｈ）前記ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中の幹メモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、幹メモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の約５％～約１０％以内の変化；又は
（ｉ）前記ＣＡＲを発現するように操作される前の同じ細胞の集団中の幹メモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞のパーセンテージと比べて、増加したパーセンテージの幹メモリーＴ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ９５＋ＩＬ－２受容体β＋ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞
を含み、
前記ＣＡＲをコードする核酸配列（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子）を含む細胞を含み、
（Ｉ）前記核酸分子は、第１ＣＡＲをコードする第１核酸配列と、第２ＣＡＲをコードする第２核酸配列とを含み、
前記第１及び第２核酸配列は、単一の核酸分子上に配置され、例えば、前記第１核酸配列及び前記第２核酸配列は、自己切断部位（例えば、Ｐ２Ａ部位、Ｔ２Ａ部位、Ｅ２Ａ部位又はＦ２Ａ部位）をコードする第３核酸配列によって隔てられるか、又は
前記第１及び第２核酸配列は、個別の核酸分子上に配置されるか；又は
（ＩＩ）前記核酸分子は、ＣＡＲをコードする核酸配列を含み、前記ＣＡＲは、第１ＶＨ（ＶＨ１）、第１ＶＬ（ＶＬ１）、第２ＶＨ（ＶＨ２）、第２ＶＬ（ＶＬ２）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、前記ＶＨ１及びＶＬ１は、第１抗原に結合し、且つ前記ＶＨ２及びＶＬ２は、第２抗原に結合し、前記ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２及びＶＬ２は、Ｎ末端からＣ末端まで、以下の構成：ＶＨ１－任意選択でリンカー１（「Ｌ１」）－ＶＨ２－任意選択でリンカー２（「Ｌ２」）－ＶＬ２－任意選択でリンカー３（「Ｌ３」）－ＶＬ１、ＶＨ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＬ１、ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＨ２－任意選択でＬ２－ＶＬ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１、ＶＬ１－任意選択でＬ１－ＶＬ２－任意選択でＬ２－ＶＨ２－任意選択でＬ３－ＶＨ１、ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２、ＶＨ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＬ２、ＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＨ１－任意選択でＬ２－ＶＬ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２；又はＶＬ２－任意選択でＬ１－ＶＬ１－任意選択でＬ２－ＶＨ１－任意選択でＬ３－ＶＨ２で配列される、細胞の集団（「ＣＡＲ発現細胞の集団」）。
請求項１１２～１１４のいずれか一項に記載の方法によって作製される単離細胞又は細胞の集団であって、
（ａ）抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、第１膜貫通ドメイン及び第１細胞内シグナル伝達ドメインを含む第１ＣＡＲをコードする第１核酸分子であって、前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号８６、８７、８８、９５、９６及び９７のアミノ酸配列を含む、第１核酸分子と；
（ｂ）抗ＣＤ１９結合ドメイン、第２膜貫通ドメイン及び第２細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２ＣＡＲをコードする第２核酸分子であって、前記抗ＣＤ１９結合ドメインは、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２及びＨＣＣＤＲ３を含むＶＨと、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３を含むＶＬとを含み、前記ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２９５、３０４及び２９７～３００のアミノ酸配列を含む、第２核酸分子と
を含む単離細胞又は細胞の集団。
単離細胞であって、
（ａ）抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、第１膜貫通ドメイン及び第１細胞内シグナル伝達ドメインを含む第１ＣＡＲをコードする第１核酸分子であって、前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号８６、８７、８８、９５、９６及び９７のアミノ酸配列を含む、第１核酸分子と；
（ｂ）抗ＣＤ１９結合ドメイン、第２膜貫通ドメイン及び第２細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２ＣＡＲをコードする第２核酸分子であって、前記抗ＣＤ１９結合ドメインは、ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２及びＨＣＣＤＲ３を含むＶＨと、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３を含むＶＬとを含み、前記ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、ＨＣＣＤＲ３、ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２及びＬＣＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２９５、３０４及び２９７～３００のアミノ酸配列を含む、第２核酸分子と
を含む単離細胞。
（ｉ）前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインの前記ＶＨ及びＶＬは、それぞれ配列番号９３及び１０２のアミノ酸配列を含み；
（ｉｉ）前記抗ＣＤ１９結合ドメインの前記ＶＨ及びＶＬは、それぞれ配列番号２５０及び２５１のアミノ酸配列を含み；
（ｉｉｉ）前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含み；
（ｉｖ）前記抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号２９３のアミノ酸配列を含み；
（ｖ）前記第１ＣＡＲは、配列番号１０７のアミノ酸配列を含み；及び／又は
（ｖｉ）前記第２ＣＡＲは、配列番号２２５のアミノ酸配列を含む、請求項１４１又は１４２に記載の単離細胞又は細胞の集団。
請求項１４１～１４３のいずれか一項に記載の細胞又は細胞の集団を含む医薬組成物。
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象において抗腫瘍免疫を提供するか、又は対象を処置する方法であって、有効量の、請求項１４１～１４３のいずれか一項に記載の細胞若しくは細胞の集団又は請求項１４４に記載の医薬組成物を前記対象に投与するステップを含む方法。
ＢＣＭＡの発現に関連する前記疾患は、血液癌又は固形癌である、請求項１４５に記載の方法。
前記疾患は、急性白血病、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型若しくは大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、前立腺癌（例えば、去勢抵抗性若しくは治療抵抗性前立腺癌又は転移性前立腺癌）、膵臓癌、肺癌、形質細胞増殖異常症（例えば、無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無症候性骨髄腫）、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス若しくはＰＯＥＭＳ症候群（クロウ・深瀬症候群、高月病及びＰＥＰ症候群としても知られる））又はそれらの組み合わせから選択される、請求項１４５又は１４６に記載の方法。
前記疾患は、多発性骨髄腫である、請求項１４５～１４７のいずれか一項に記載の方法。