JP2022547914A - 経皮吸収を促進するための構造体、前記構造体の製造方法、及び前記構造体を含む化粧品組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
[式]
多孔度={(W1-W2)/W1}×100
ここで、W1は、構造体の製造過程において細孔形成過程を経なかった針状体の初期重量(例えば、細孔形成前の骨片の重量)であり、
W2は、構造体の製造過程において細孔形成過程を経た針状体の初期重量(例えば、細孔形成後の骨片の重量)である。
1)骨片の洗浄
Spongilla lacustris L.から抽出された(得られた)骨片(J2KBIO Co.,Ltd.)を針状体として用い、以下の過程により洗浄した。すなわち、20gの骨片を200mlの精製水中に加えて塩を除去し、400メッシュのポリエチレン(PE)フィルターで濾過した後、フィルター上に残った骨片を精製水で2回洗浄した。続いて、洗浄された骨片を乾燥機(Hanbaek Co.,Ltd.)に入れ、50℃で乾燥させた。
200mlの1NのNaOH(Sigma-Aldrich Co.Ltd.)を20gの細孔が形成された骨片に添加し、40℃で1時間反応させた。次に、それを400メッシュのポリエチレン(PE)フィルターで濾過した後、フィルター上に残った骨片を500mlの精製水で洗浄する過程を3回繰り返した。続いて、洗浄された骨片を乾燥機に入れて50℃で乾燥させる過程を行って、親水性のヒドロキシ基が結合した骨片を得た。
0.5g(5%)のヒドロキシ基が結合した骨片及び1g(10%)の担体としての蛍光タンパク質リポソームを8.5mlの精製水に添加し、骨片及び蛍光タンパク質リポソームを室温で1時間撹拌して混合し、骨片-リポソーム結合構造体を含む混合溶液を調製した。この時、1gのL-α-レシチンを6gの1,3-ブチレングリコール(Sigma Co.,Ltd.)中に分散し、6gの精製水を添加し、80℃の温水槽中で加熱して溶解させ、50℃まで冷却して得られた溶液に、Alexafluor(登録商標)488結合タンパク質(Thermo Fisher Scientific Co.Ltd.)が5g/mlの濃度で溶解された1gの精製水を少量ずつ添加することにより、これらの溶液が互いに均一に混合された混合液を調製し、次に、前記混合液に6gの精製水を再び少量ずつ添加し、室温で撹拌し、蛍光タンパク質リポソームとして使用するために4℃で冷蔵した。
洗浄された骨片を200mlの35%過酸化水素溶液(H2O2)(Samchun Chemical Co.Ltd.)に加え、それらを16時間反応させて骨片に細孔を形成する過程をさらに行った(骨片の多孔度が向上された)以外は実施例1と同様の過程を行うことにより、構造体を得た。
骨片にヒドロキシ基を結合させる前に、細孔が形成された骨片を200mlの35%過酸化水素溶液(H2O2)(Samchun Chemical Co.Ltd.)に加え、超音波洗浄機を用いて、300w及び40kHzの条件下で1時間の超音波処理を行う過程をさらに行った(実施例2に対して超音波処理を1回加える)以外は実施例2と同様の過程を行うことにより、構造体を得た。
超音波処理過程がさらに行われた骨片を200mlの35%過酸化水素溶液(H2O2)(Samchun Chemical Co.Ltd.)に加え、超音波洗浄機を用いて、300w及び40kHzの条件下で1時間の超音波処理を行う過程を再び行った(実施例2に対して2回の超音波処理を加える)以外は実施例3と同様の過程を行うことにより、構造体を得た。
骨片-リポソーム結合構造を含む10gの混合溶液をプラスチックパックに入れて真空還元し、次に、高圧処理機(Ilshin Autoclave Co.,Ltd.、Suflux(登録商標))を用いて150Mpaの圧力で5分間加圧する過程をさらに行った以外は実施例2と同様の過程を行うことにより、構造体を得た。
骨片-リポソーム結合構造を含む10gの混合溶液をプラスチックパックに入れて真空還元し、次に、高圧処理機(Ilshin Autoclave Co.,Ltd.、Suflux(登録商標))を用いて150Mpaの圧力で5分間加圧する過程をさらに行った以外は実施例3と同様の過程を行うことにより、構造体を得た。
骨片-リポソーム結合構造を含む10gの混合溶液をプラスチックパックに入れて真空還元し、次に、高圧処理機(Ilshin Autoclave Co.,Ltd.、Suflux(登録商標))を用いて150Mpaの圧力で5分間加圧する過程をさらに行った以外は実施例4と同様の過程を行うことにより、構造体を得た。
ヒドロキシ基を結合させる過程を行わなかった以外は実施例1と同様の過程を行うことにより、構造体を得た。
ヒドロキシ基を結合させる過程を行わなかった以外は実施例2と同様の過程を行うことにより、構造体を得た。
ヒドロキシ基を結合させる過程を行わなかった以外は実施例3と同様の過程を行うことにより、構造体を得た。
ヒドロキシ基を結合させる過程を行わなかった以外は実施例4と同様の過程を行うことにより、構造体を得た。
実施例1で使用された担体である蛍光タンパク質リポソームを適用した(骨片が結合されていない蛍光タンパク質リポソームのみを適用した)。
骨片の洗浄が十分に行われたことを確認するため、洗浄前の骨片及び実施例1で洗浄後の骨片を光学顕微鏡(Nikon Corporation、ECLIPSE TS2)で確認し、結果を図2に示した
ヒドロキシ基が骨片に結合されるまで洗浄、細孔形成、及び/又は超音波処理が行われた実施例2~4の骨片、及び洗浄過程のみが行われた比較例1の骨片についての多孔度の評価は以下のように行われ、結果を図3及び以下の表2に示した。
5mgの骨片を500mgの精製水に加え、これらを混合して混合溶液を調製し、次に、調製された混合溶液から10mgを取り出して血球計数器中に入れ、光学顕微鏡(Nikon Corporation、ECLIPSE TS2、40倍)で観察することにより骨片の数を測定した。
実施例2~7及び比較例1~4で得られた構造体において蛍光タンパク質リポソームの封入が十分に行われたことを確認するために、5mgの構造体を500mgの精製水に加え、混合して混合溶液を調製し、次に、調製された混合溶液から100mgを取り出して、スライドグラス上に載せ、蛍光顕微鏡(NEXCOPE Co.,Ltd.、NIB410F)GFPフィルターで観察し、結果を図4及び図5に示した。
実施例1~7で得られた構造体のそれぞれを用いて化粧品組成物を調製した。具体的には、100重量部の化粧品組成物に対して、2.0重量部のグリセリン(保湿剤)、3.0重量部のパンテノール(保湿剤)、2.0重量部のOlivem 2020(乳化剤)、及び2.0重量部のヘキサンジオールを72.0重量部の精製水に添加し、1,000rpmで10分間撹拌して、水相溶解物を調製した。次に、油相溶解物を調製するため、6.0重量部のトリ(カプリル/カプリン酸)グリセリル(油)、6.0重量部のセチルエチルヘキサノエート(油)、及び1.0重量部のOlivem 1000(乳化剤)を80℃に温めながら溶解し、調製された水相溶解物をその中に加え、1,000rpmで撹拌して、油相溶解物を調製した。続いて、0.03重量部の老化防止ペプチド、0.03重量部のニコチンアミドリボシド、3.0重量部のブチレングリコール、0.5重量部の大豆レシチン、0.7重量部の(実施例1~7のそれぞれの)構造体、及び0.04重量部のアデノシンをさらにその中に加え、60℃、2,000rpmで5分間撹拌した。最後に、0.1重量部の香料、1重量部のScutellaria baicalensis Georgi抽出物、0.5重量部のPortulaca oleracea抽出物、及び0.1重量部の済州島チェリーブロッサム抽出物をその中に加え、50℃、3,000rpmで5分間撹拌して、化粧品組成物をそれぞれ調製した。
実施例7の構造体の代わりに比較例5の蛍光タンパク質リポソームを適用した以外は処方例7と同様の過程を行うことにより、化粧品組成物を調製した。
処方例7及び比較処方例1で得られた化粧組成物の皮膚吸収(浸透)の程度を確認するために、ブタの皮膚(Franz Cell Membrane、FCM、APURES Co.,Ltd.)に各化粧品組成物を適用する過程により得られたブタ皮膚の組織切片を室温で溶解し、次に、封入溶液(National Diagnostics Corporation)を適用し、蛍光顕微鏡(Nikon Corporation、ECLIPSE TS2-FL)で観察し、結果を図6に示した。この時、0.25gの各化粧品組成物をブタの皮膚(2×2cm)上に10分間隔で4回繰り返し塗布し、室温で24時間静置し、2mlの3.7%ホルムアルデヒド(Sigma-Aldrich Co.Ltd.)中に入れて20分間固定し、1×PBSで3回洗浄し、OCT(optima1 cutting temperature compound、Sakura Finetek Co.,Ltd.)中に入れて-20℃で凍結し、凍結ミクロトーム(Leica Biosystems Co.,Ltd.)で15μmの厚さに薄切することにより組織切片を得た。
処方例7及び比較処方例1で得られた化粧品組成物の皮膚吸収(浸透)の程度を確認するために、ブタの皮膚(Franz Cell Membrane、FCM、APURES Co.,Ltd.)に各化粧品組成物を適用する過程により得られたブタの皮膚試料の150μlを96穴プレートに入れ、蛍光分光光度計(SpectraMAX M2, Molecular Devices,LLC)を用いて皮膚透過率を分析し、結果を図7に示した。この時、0.25gの各化粧品組成物過程をブタの皮膚(2×2cm)上に塗布する過程を10分間隔で4回繰り返し、次に、1.5mlのPBS中に浸漬する過程を3回繰り返し、室温で24時間静置し、皮膚に吸収された(浸透した)蛍光タンパク質をPBS中で解離させることによりブタの皮膚試料を得た。
Claims (10)
- 針状体、
前記針状体に結合した親水性基、及び
前記親水性基に結合した担体
を含む、経皮吸収を促進するための構造体。 - 前記親水性基はヒドロキシ基である、請求項1に記載の経皮吸収を促進するための構造体。
- 前記針状体は海綿動物から抽出された骨片(spicule)である、請求項1に記載の経皮吸収を促進するための構造体。
- 前記担体は、高分子ヒドロゲル、高分子ミセル、ナノエマルジョン、リポソーム、オレオソーム、ニオソーム、及びエトソームからなる群から選択される、請求項1に記載の経皮吸収を促進するための構造体。
- 針状体を洗浄するステップ、
前記洗浄された針状体を塩基性化合物と反応させて親水性基を前記針状体に結合させるステップ、及び
担体を前記親水性基が結合した針状体と混合して前記担体を前記親水性基に結合させるステップ
を含む、経皮吸収を促進するための構造体の製造方法。 - 前記塩基性化合物は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、及び水酸化リチウムからなる群から選択される1種類又は複数種類である、請求項5に記載の経皮吸収を促進するための構造体の製造方法。
- 前記洗浄された針状体を過酸化水素溶液と反応させて前記針状体に細孔を形成するステップをさらに含む、請求項5に記載の経皮吸収を促進するための構造体の製造方法。
- 前記洗浄された針状体と前記過酸化水素溶液との反応において、10kHz~70kHzの周波数及び100w~500wの出力を有する超音波が付与される、請求項7に記載の経皮吸収を促進するための構造体の製造方法。
- 前記担体と前記親水性基が結合した針状体との混合において、50Mpa~300Mpaの圧力が1分間~10分間付与される、請求項5に記載の経皮吸収を促進するための構造体の製造方法。
- 請求項1~4のいずれか一項に記載の経皮吸収を促進するための構造体、及び
前記経皮吸収を促進するための構造体中に含まれる活性成分
を含み、
前記活性成分が、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、ニコチンアミドモノヌクレオチド、ニコチンアミド、ニコチンアミドリボシド、レチノール、酢酸レチニル、パルミチン酸レチニル、アセチルヘキサペプチド-3、ペンタペプチド-3、ペンタペプチド-18、パルミトイルトリペプチド-1、パルミトイルペンタペプチド-4、及びヘキサペプチド-11からなる群から選択される1種類又は複数種類である、
化粧品組成物。
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