JP2022188210A - 微生物細胞から微生物油を入手するための方法 - Google Patents
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Abstract
Description
[0001]本出願は、2013年12月20日に出願された米国仮特許出願第61/918,922号明細書の出願日の利益を主張するものであり、上記特許出願の開示は参照により本明細書に組み込まれる。
[0002]本明細書では、1つ以上の微生物細胞から1種以上の多価不飽和脂肪酸(PUFA)を含む微生物油を入手するための方法であって、溶解細胞組成物を形成するために細胞を溶解し、およびその後に溶解細胞組成物から油を回収することによる方法が開示される。さらに本明細書では、本明細書に記載した少なくとも1つの方法によって微生物細胞から回収される1種以上のPUFAを含む微生物油が開示される。
;および塩基BのKbは:
であると規定されている。
[実施例1]
[0107]微生物細胞(シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.))を含有する細胞ブロス(300g)を60℃で1時間低温殺菌した。未洗浄細胞ブロスを180RPMの速度で撹拌し、60℃へ加熱した。細胞はブロスのpHを7~7.5へ調整するために50重量%のNaOH溶液およびAlcalase(登録商標)2.4FG(Novozymes(ノースカロライナ州フランクリントン(Franklinton,NC))から入手可能)をブロス重量に基づいて0.5%の量で添加する工程により溶解した。撹拌を維持しながら、溶解細胞組成物のpHは、98重量%のH2SO4溶液を添加する工程によって4へ調整した。溶解細胞組成物の重量で2%の量の固体のNaClを添加し、この組成物を90℃へ加熱し、20時間保持した。50重量%のNaOH溶液を添加する工程によって組成物のpHを7.5~8.5へ調整し、その後原油を生じさせるために8000rpmで5分間遠心分離(Thermo Scientific Sorvell ST40R遠心機)すると、これは(DHAの重量で)91.7%のDHAを産生した。
[0108]微生物細胞(シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.))を含有する細胞ブロス(300g)を60℃で1時間低温殺菌した。解乳化溶解細胞組成物は、細胞ブロスのpHを2に調整するために重量で20%のH2SO4溶液を添加し、その後にこのブロスを90℃へ加熱し、45時間保持することによって形成した。組成物のpHを7.5~8.5へ調整するために50重量%のNaOH溶液を添加し、その後に原油を生じさせるためにこの組成物を8000rpmで5分間遠心分離する(Thermo Scientific製Sorvell ST40R遠心機)工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離すると、これは(DHAの重量で)51.62%のDHAを産生した。
[0109]微生物細胞(シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.))を含有する細胞ブロス(300g)を60℃で1時間低温殺菌した。解乳化溶解細胞組成物は、細胞ブロスのpHを2に調整するために、20重量%のH2SO4溶液、ブロスの重量で2%の量の固体NaClを添加する工程;およびブロスを90℃へ加熱して18時間保持する工程によって形成した。原油を生じさせるためにこの組成物を8000RPMで5分間遠心分離する(Thermo Scientific製Sorvell ST40R遠心機で)工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離すると、これは(DHAの重量で)38.82%のDHAを産生した。
[0110]微生物細胞(シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.))を含有する細胞ブロス(300g)を60℃で1時間低温殺菌した。解乳化溶解細胞組成物は、ブロスの重量で2%の、98重量%のH2SO4溶液を添加し、ブロスを90℃で4時間加熱する工程によって形成した。組成物のpHを7~8.5へ調整するために50重量%のNaOH溶液を添加し、90℃で21時間保持し、その後に原油を生じさせるためにこの組成物を8000RPMで5分間遠心分離する(Thermo Scientific製Sorvell ST40R遠心機)工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離すると、これは(DHAの重量で)72%のDHAを産生した。原油は、145のアニシジン値(AV)を有していた。
[0111]微生物細胞(シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.))を含有する細胞ブロス(300g)を60℃で1時間低温殺菌した。未洗浄細胞ブロスを180RPMの速度で撹拌し、60℃へ加熱した。細胞はブロスのpHを7~7.5へ調整するために50重量%のNaOH溶液およびAlcalase 2.4FG(Novozymes(ノースカロライナ州フランクリントン)をブロス重量に基づいて0.5%の量で添加する工程により溶解した。撹拌を維持しながら、溶解細胞組成物のpHは、98重量%のH2SO4溶液を添加する工程、およびその後に組成物を90℃へ加熱する工程によって4へ調整した。90℃で45時間放置した後、原油を生じさせるためにこの組成物を8000RPMで5分間遠心分離すると(Thermo Scientific製Sorvell ST40R遠心機)、これは(DHAの重量で)81%のDHAを産生した。原油は、14.5のAVを有している。
[0112]微生物細胞(シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.))を含有する細胞ブロス(300g)を60℃で1時間低温殺菌した。解乳化溶解細胞組成物は、ブロスの重量で2.5%の、98重量%のH2SO4溶液を添加する工程、およびその後にブロスを90℃へ5時間加熱する工程によって形成した。組成物のpHを7~8.5へ調整するために50重量%のNaOH溶液を添加し、90℃で数時間保持した後、その後に原油を生じさせるためにこの組成物を8000RPMで5分間遠心分離する(Thermo Scientific製Sorvell ST40R遠心機)工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離すると、これは(DHAの重量で)92.5%のDHAを産生した。
[0113]微生物細胞(シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.))を含有する細胞ブロス(350g)を60℃で1時間低温殺菌した。解乳化溶解細胞組成物は、ブロスの重量で2%の、98重量%のH2SO4溶液を添加する工程、およびその後にブロスを90℃へ5~6時間加熱する工程によって形成した。組成物のpHを7~8.5へ調整するために50重量%のNaOH溶液を添加し、90℃で数時間保持した後、その後に原油を生じさせるためにこの組成物を8000RPMで5分間遠心分離する(Thermo Scientific製Sorvell ST40R遠心機)工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離すると、これは(DHAの重量で)82.63%のDHAを産生した。
[0114]微生物細胞(シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.))を含有する細胞ブロス(350g)を60℃で1時間低温殺菌した。解乳化溶解細胞組成物は、ブロスの重量で1%の、98重量%のH2SO4溶液を添加する工程、およびその後にブロスを90℃へ5~10時間加熱する工程によって形成した。pHを7~8.5へ調整するために50重量%のNaOH溶液を添加する工程、および原油を生じさせるためにこの組成物を8000RPMで5分間遠心分離する(Thermo Scientific製Sorvell ST40R遠心機)工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離すると、これは(DHAの重量で)42%のDHAを産生した。
[0115]微生物細胞(シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.))を含有する細胞ブロス(350g)を60℃で1時間低温殺菌した。解乳化溶解細胞組成物は、ブロスの重量で3%の、98重量%のH2SO4溶液を添加する工程、およびその後にブロスを90℃へ1~5時間加熱する工程によって形成した。pHを7~8.5へ調整するために50重量%のNaOH溶液を添加する工程、および原油を生じさせるためにこの組成物を8000RPMで5分間遠心分離する(Thermo Scientific製Sorvell ST40R遠心機)工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離すると、これは(DHAの重量で)88%のDHAを産生した。
[0116]微生物細胞(シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.))を含有する細胞ブロス(350g)を60℃で1時間低温殺菌した。解乳化溶解細胞組成物は、ブロスの重量で4%の、70重量%の硝酸溶液を添加する工程、およびその後にブロスを90℃へ1時間加熱する工程によって形成した。pHを7~8.5へ調整するために50重量%のNaOH溶液を添加する工程、および原油を生じさせるためにこの組成物を8000RPMで5分間遠心分離する(Thermo Scientific製Sorvell ST40R遠心機)工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離すると、これは(DHAの重量で)82%のDHAを産生した。
[0117]微生物細胞(シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.))を含有する細胞ブロス(350g)を60℃で1時間低温殺菌した。解乳化溶解細胞組成物は、ブロスの重量で2%の、70重量%の硝酸溶液を添加する工程、およびブロスを90℃へ5~6時間加熱する工程によって形成した。pHを7~8.5へ調整するために50重量%のNaOH溶液を添加する工程、および原油を生じさせるためにこの組成物を8000RPMで5分間遠心分離する(Thermo Scientific製Sorvell ST40R遠心機)工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離すると、これは(DHAの重量で)58.5%のDHAを産生した。
[0118]微生物細胞(シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.))を含有する細胞ブロス(350g)を60℃で1時間低温殺菌した。解乳化溶解細胞組成物は、ブロスの重量で2.5%の、70重量%の硝酸溶液を添加する工程、およびブロスを90℃へ5時間加熱する工程によって形成した。pHを7~8.5へ調整するために50重量%のNaOH溶液を添加し、90℃で数時間保持した後、その後に原油を生じさせるためにこの組成物を8000RPMで5分間遠心分離する(Thermo Scientific製Sorvell ST40R遠心機)工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離すると、これは(DHAの重量で)74%のDHAを産生した。
[0119]微生物細胞(シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.))を含有する細胞ブロス(350g)を60℃で1時間低温殺菌した。解乳化溶解細胞組成物は、ブロスの重量で4%のリン酸を添加する工程、およびブロスを90℃へ5時間加熱する工程によって形成した。組成物のpHを7~8.5へ調整するために50重量%のNaOH溶液を添加し、90℃で数時間保持した後、その後に原油を回収するためにこの組成物を8000RPMで5分間遠心分離する(Thermo Scientific製Sorvell ST40R遠心機)工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離した。この組成物の45gのサンプルは、1.0mLの原油を産生した。
[0120]微生物細胞(シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.))を含有する細胞ブロス(350g)を60℃で1時間低温殺菌した。解乳化溶解細胞組成物は、ブロスの重量で8%のリン酸を添加する工程、およびブロスを90℃へ3時間加熱する工程によって形成した。組成物のpHを7~8.5へ調整するために50重量%のNaOH溶液を添加し、90℃で数時間保持した後、その後に原油を回収するためにこの組成物を8000RPMで5分間遠心分離する(Thermo Scientific製Sorvell ST40R遠心機)工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離した。この組成物の45gのサンプルは、0.5mLの原油を産生した。
[0121]微生物細胞(シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.))を含有する細胞ブロス(2000L)を190rpmで攪拌する処理タンク内に配置した。解乳化溶解細胞組成物は、ブロスの重量で4%の、98重量%のH2SO4溶液を添加する工程、およびブロスを90~95℃へ1時間加熱することによって形成した。組成物を75℃へ冷却し、pHを7~8.5へ調整するために50重量%のNaOH溶液を添加し、組成物を一晩混合し、原油を生じさせるために1754RPM、8L/分で組成物をインラインで遠心分離する工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離すると、(DHAの重量で)93%のDHAおよび0.69meqのペルオキシド値(PV)、23.9のAVおよび1.04の遊離脂肪酸(FFA)含量を備える原油が産生した。
[0122]微生物細胞(シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.))を含有する細胞ブロス(550L)を193rpmで攪拌する処理タンク内に配置した。細胞ブロスを60℃へ加熱し、50重量%のNaOH溶液を添加する工程によってpHを7.3~7.5に調整し、アルカラーゼをブロスの重量で0.5%の量で添加した。2時間後、98重量%のH2SO4溶液を添加する工程によって溶解細胞組成物のpHを4に調整し、撹拌を維持しながら90℃へ加熱した。90℃で20時間後、組成物を75℃へ冷却し、50重量%のNaOH溶液を添加する工程によってpHを8.5へ調整し、組成物を一晩保持し、原油を生じさせるために1754RPM、8L/分で組成物をインラインで遠心分離する工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離すると、(DHAの重量で)84%のDHAおよび0meqのPV、7.3のAVならびに0.17のFFA含量を備える原油が産生した。
[0123]微生物細胞(モルティエレラ(Mortierella)属)を含有する細胞ブロス(2500~3000L)は、沈着させるために数時間にわたりデカンテーションタンク内に配置した。沈着したら、バイオマス無含有液体の50~60%を廃棄するためにポンプ作用で排出した。濃縮未洗浄低温殺菌細胞ブロスは、その後に処理タンクとインライン関係にある高剪断ミキサー(60HzでSiemens ULTRA-Turrax UTL 1000/10)に通して通過させた。解乳化溶解細胞組成物は、pHを0.9~1.5に調整するために、ブロスの重量で3%の、98重量%のH2SO4溶液を添加する工程によって形成し、脱イオン水中のブロスの10mL希釈液中の1mLが25μm以下の粒径を生じさせるまで94℃へ20~24時間加熱した。解乳化溶解細胞組成物は、固形含量10%(Omnimark Uwave湿度計を用いて生成した数字)へ脱酸素水を用いて希釈し、水の添加が85℃未満への温度低下を引き起こした場合は85℃へ再加熱した。微生物油は、組成物を30分間混合しながら、またはサンプルの遠心分離がエマルジョン相の完全な非存在を証明するまでpHを7.8~8.2へ調整するために50%のNaOH溶液を添加することにより、および原油を回収するために1750RPMおよび7L/分の流量で7~10時間にわたりインラインで遠心分離(Seital SR1010)することにより解乳化溶解細胞組成物から分離した。
バッチ1の原油は、86.6%のARA(ARAの重量で)ならびに26.1のAVおよび0.39meqのPVを備える乾燥濾過原油を産生した。
バッチ2の原油は、87.6%のARA(ARAの重量で)ならびに14のAVおよび0.31meqのPVを備える乾燥濾過原油を産生した。
バッチ3の原油は、85%のARA(ARAの重量で)ならびに24.7のAVおよび0.51meqのPVを備える乾燥濾過原油を産生した。
[0125]微生物細胞(モルティエレラ(Mortierella)属)を含有する細胞ブロス(1000mL)を70℃で1時間低温殺菌した。解乳化溶解細胞組成物は、pHを0.7~1.0のpHに調整するためにブロスの重量で4%の硝酸(70%溶液)を添加する工程、および200rpmの速度で30時間撹拌しながらブロスを90℃へ加熱する工程によって形成した。pHを8.0~8.2へ調整するためにNaOHの50重量/重量%溶液を添加し、その後に原油を生じさせるためにこの組成物を8,000gで5分間遠心分離する(Thermo Scientific製Sorvell 40R)工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離すると、これは(ARAの重量で)74.13%のARAおよび27.9のAVを備える原油を産生した。
[0126]微生物細胞(モルティエレラ(Mortierella)属)を含有する細胞ブロス(1000mL)を70℃で1時間低温殺菌した。解乳化溶解細胞組成物は、pHを0.7~1.5のpHに調整するためにブロスの重量で15%のリン酸(85%溶液)を添加する工程、および200rpmの速度で50時間撹拌しながら組成物を90℃へ加熱する工程によって形成した。pHを8.0~8.2へ調整するために50重量/重量%のNaOH溶液を添加する工程、およびその後に原油を生じさせるためにこの組成物を8,000gで(5分間遠心分離するThermo Scientific製Sorvell 40R)工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離すると、これは(ARAの重量で)42.61%のARAを産生した。原油は、16.1のAVを有していた。
[0127]微生物細胞(モルティエレラ(Mortierella)属)を含有する細胞ブロス(1000mL)を70℃で1時間低温殺菌した。解乳化溶解細胞組成物は、pHを0.7~1.5のpHに調整するためにブロスの重量で6%の塩酸(32%溶液)を添加する工程、および200rpmの速度で50時間撹拌しながらブロスを90℃へ加熱することによって形成した。pHを8.0~8.2へ調整するために50重量/重量%のNaOH溶液を添加し、その後に原油を生じさせるためにこの組成物を8,000gで5分間遠心分離する(Thermo Scientific製Sorvell 40R)工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離すると、これは(ARAの重量で)72.61%のARAを産生した。原油は、11.1のAVを有していた。
[0128]微生物細胞(シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.))を含有する細胞ブロス(300g)を60℃で1時間低温殺菌した。解乳化溶解細胞組成物は、pHを11へ調整するために12.5重量%のNaOH溶液を細胞ブロスに添加する工程、ブロスの重量で2%のNaClを添加する工程、および組成物を90℃へ加熱する工程によって形成した。90℃で25時間置いた後、原油を生じさせるためにこの組成物を8000RPMで5分間遠心分離する(Thermo Scientific製Sorvell ST40R遠心機)工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離すると、これは(DHAの重量で)71%のDHAを産生した。
[0129]微生物細胞(モルティエレラ(Mortierella)属)を含有する未洗浄細胞ブロスは、70℃で1時間低温殺菌し、その後に処理タンクとインライン関係にある高剪断ミキサー(Siemens ULTRA-Turrax UTL 1000/10(60Hzで))に通して通過させた。解乳化溶解細胞組成物は、pHを.07~1.5に調整するために、ブロスの重量で3.5%の、98%硫酸溶液を添加する工程;90℃へ加熱する工程;および200rpmの速度で撹拌しながら28時間保持する工程によって形成した。50%のNaOHおよび組成物の重量で2%のNaClを添加する工程によって組成物を中和してpHを8.0へ調整し、原油を生じさせるために組成物を遠心分離する(Seital SR1010)工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離すると、これは77.4%のARA(ARAの重量で)ならびに12.4のAV、2.27%のFFA含量および0.13meqのPVを備える原油を産生した。
[0130]微生物細胞(クリプトコディニウム・コーニイ(Crypthecodinium cohnii))を含有する洗浄細胞ブロス(750g)を60℃で1時間低温殺菌した。細胞は、細胞ブロスをホモジナイザー(Microfluidizer M110)に12,000PSIで2回通過させることによって機械的に溶解した。溶解細胞組成物は、丸底フラスコ内に配置し、重組成物の量で4%の硫酸(98%純粋)溶液を添加する工程によって解乳化し、200RPMで撹拌しながら90℃へ加熱し、28時間保持した。50%のNaOH溶液を添加する工程によって組成物を中和してpHを8.0へ調整し、その後に原油を生じさせるためにこの組成物を8000gで5分間遠心分離する(Thermo Scientific製Sorvell 40R)工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離すると、これは(DHAの重量で)(FAME分析に基づく)45%のDHAならびに12.35のAVおよび1.09meqのPVを備える原油を産生した。
[0131]微生物細胞(シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.))を含有する未洗浄細胞ブロス(750g)は60℃で1時間低温殺菌し、250RPMで攪拌する1Lのフラスコ内に配置した。温度は、粘度が原因で長くなる混合時間を短縮させるために60℃へ上昇させた。解乳化溶解細胞組成物は、pHを12.62に調整するために、ブロスの重量で4%の、50%のNaOHを添加する工程;90℃へ加熱する工程;およびpHが7.75へ低下するまで26時間にわたり反応させる工程によって形成した。微生物油は、原油を生じさせるためにこの組成物を(Thermo Scientific製Sorvell 40R遠心機で)8000gで5分間遠心分離する工程によって解乳化溶解細胞組成物から分離すると、これは(DHAの重量で)88%のDHAを産生した。
[0132]微生物細胞(シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.))を含有する未洗浄細胞ブロス(750g)は60℃で1時間低温殺菌し、250RPMで攪拌する1Lのフラスコ内に配置した。温度は、粘度が原因で長くなる混合時間を短縮させるために60℃へ上昇させた。解乳化溶解細胞組成物は、pHを12.93に調整するために、ブロスの重量で4%の、50%のNaOHを添加する工程;90℃へ加熱する工程;およびpHが7.95へ低下するまで26時間にわたり反応させる工程によって形成した。原油を生じさせるためにこの組成物を8000gで5分間遠心分離する(Thermo Scientific製Sorvell ST)工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離すると、これは(DHAの重量で)(FAME分析に基づく)82.5%のDHAを産生した。
[0133]微生物細胞(シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.))を含有する未洗浄細胞ブロス(750g)は60℃で1時間低温殺菌し、250RPMで攪拌する1Lのフラスコ内に配置した。温度は、粘度が原因で長くなる混合時間を短縮させるために60℃へ上昇させ、pHは7.5へ上昇した。解乳化溶解細胞組成物は、pHを12.28に調整するために、ブロスの重量で3.5%の、50%のNaOH溶液を添加する工程;90℃へ加熱する工程;およびpHが7.88へ低下するまで32時間にわたり反応させる工程によって形成した。原油を生じさせるためにこの組成物を8000gで5分間遠心分離する(Thermo Scientific製Sorvell 40R遠心機)工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離すると、これは(DHAの重量で)(FAME分析に基づく)88%のDHAを産生した。
[0134]微生物細胞(シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.))を含有する未洗浄細胞ブロス(750g)は60℃で1時間低温殺菌し、250RPMで攪拌する1Lのフラスコ内に配置した。温度は、粘度が原因で長くなる混合時間を短縮させるために60℃へ上昇させた。解乳化溶解細胞組成物は、pHを12.87に調整するために、ブロスの重量で4.0%の、50%のNaOH溶液を添加する工程;90℃へ加熱する工程;およびpHが8.15へ低下するまで36時間にわたり反応させる工程によって形成した。原油を生じさせるためにこの組成物を8000gで(Thermo Scientific製Sorvell 40R遠心機)5分間遠心分離する工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離すると、これは(DHAの重量で)(FAME分析に基づく)84%のDHAを産生した。
[0135]微生物細胞(シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.))を含有する細胞ブロス(300g)を60℃で1時間低温殺菌した。未洗浄細胞ブロスを180RPMの速度で撹拌し、60℃へ加熱した。細胞は、pHを7~7.5へ調整するために50重量%のNaOH溶液およびブロス重量に基づいて0.5%の量でAlcalase(登録商標)2.4FG(Novozymes(ノースカロライナ州フランクリントンから入手可能)を添加する工程により溶解した。撹拌を維持しながら、溶解細胞組成物はpHを10~11に調整するために12.5重量%のNaOH溶液および組成物の重量で2%の量のCaCl2を同時に添加する工程、およびその後に組成物を90℃へ加熱して68時間にわたり保持する工程によって解乳化した。原油を生じさせるためにこの組成物を8000RPMで5分間遠心分離する(Thermo Scientific製Sorvell ST40R遠心機)工程によって解乳化溶解細胞組成物から微生物油を分離すると、これは(DHAの重量で)62.5%のDHAおよび43.8のAVを備える原油を産生した。
[実施形態1]
1つ以上の微生物細胞から1種以上の多価不飽和脂肪酸を含む微生物油を入手するための方法であって:
(a)溶解細胞組成物を形成するために前記微生物油を含む前記細胞を溶解する工程;
(b)解乳化溶解細胞組成物を形成するために前記溶解細胞組成物を酸を添加することにより解乳化する工程;
(c)前記解乳化溶解細胞組成物から前記油を分離する工程;および
(d)前記油を回収する工程
を含み、(b)は前記溶解細胞組成物のpHを0.5~6.0へ低下させる工程を含む、方法。
[実施形態2]
(a)または(b)の少なくとも1つは、前記細胞または前記溶解細胞組成物を少なくとも70℃へ加熱する工程をさらに含む、実施形態1に記載の方法。
[実施形態3]
(b)は、
(e)前記溶解細胞組成物に乳化剤を添加する工程;
(f)前記溶解細胞組成物の重量で0.5%~20%の量で前記酸を添加する工程;
(g)前記溶解細胞組成物の重量で0.05%~20%の量で塩を添加する工程;及び
(h)前記溶解細胞組成物を攪拌する工程
のうちの少なくとも1の工程をさらに含む、実施形態1または2に記載の方法。
[実施形態4]
前記乳化剤は、イオン性乳化剤である、実施形態3に記載の方法。
[実施形態5]
前記イオン性乳化剤は、アニオン性硫酸塩乳化剤、アニオン性スルホン酸塩乳化剤、アニオン性リン酸塩乳化剤、アニオン性カルボン酸塩乳化剤およびそれらの組み合わせから選択されるアニオン性乳化剤である、実施形態4に記載の方法。
[実施形態6]
前記イオン性乳化剤は、ラウリル硫酸アンモニウム、ドデシル硫酸ナトリウム、ラウレス硫酸ナトリウム、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム、ミレス硫酸ナトリウムおよびそれらの組み合わせから選択されるアニオン性硫酸塩乳化剤である、実施形態4に記載の方法。
[実施形態7]
前記乳化剤は、前記溶解細胞組成物の重量で0.2%~10%の量で添加される、実施形態3~6のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態8]
前記塩は、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、硫酸塩およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、実施形態3~7のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態9]
(a)は、前記細胞を撹拌する工程をさらに含む、実施形態1~8のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態10]
前記酸は、硫酸、リン酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、次亜塩素酸、亜塩素酸、塩素酸、過塩素酸、フルオロ硫酸硝酸、フルオロアンチモン酸、フルオロホウ酸、ヘキサフルオロリン酸、クロム酸、ホウ酸、酢酸、クエン酸、ギ酸およびそれらの組み合わせから選択される、実施形態1~9のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態11]
前記酸は、硫酸である、実施形態1~10のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態12]
(a)の前記細胞は、未洗浄である、および/または、(a)の前記細胞は、発酵ブロス内に含有されている、実施形態1~11のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態13]
(c)は、前記溶解細胞組成物を遠心分離する工程をさらに含む、実施形態1~12のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態14]
前記多価不飽和脂肪酸は、ω-3脂肪酸、ω-6脂肪酸およびそれらの混合物から選択される、実施形態1~13のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態15]
前記多価不飽和脂肪酸は、ドコサヘキサエン酸(DHA)、エイコサペンタエン酸(EPA)、ドコサペンタエン酸(DPA)、アラキドン酸(ARA)、γ-リノール酸(GLA)、ジホモ-γ-リノール酸(DGLA)、ステアリドン酸(SDA)およびそれらの混合物から選択される、実施形態1~14のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態16]
前記多価不飽和脂肪酸は、ドコサヘキサエン酸(DHA)である、実施形態15に記載の方法。
[実施形態17]
前記多価不飽和脂肪酸は、アラキドン酸(ARA)である、実施形態15に記載の方法。
[実施形態18]
前記微生物細胞は、藻類、酵母、真菌、原生生物または細菌細胞である、実施形態1~17のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態19]
前記微生物細胞は、モルティエレラ(Mortierella)属、クリプトコディニウム(Crypthecodinium)属またはスラウストキトリアレス(Thraustochytriales)目に由来する、実施形態1~18のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態20]
前記微生物細胞は、スラウストキトリウム(Thraustochytrium)属、シゾキトリウム(Schizochytrium)属またはそれらの混合物に由来する、実施形態19に記載の方法。
[実施形態21]
前記微生物細胞は、モルティエレラ・アルピナ(Mortierella alpina)に由来する、実施形態19に記載の方法。
[実施形態22]
前記溶解細胞組成物は、液体、細胞断片および微生物油を含む、実施形態1~21のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態23]
有機溶媒は、前記細胞から前記油を入手するためには使用されない、実施形態1~22のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態24]
前記解乳化溶解細胞組成物の平均粒径は、25ミクロン以下である、実施形態1~23のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態25]
(d)の前記油は、原油である、実施形態1~24のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態26]
(d)は、精製油を入手するために前記原油を精製する工程をさらに含む、実施形態25に記載の方法。
[実施形態27]
前記油は、少なくとも30重量%のアラキドン酸を含む、実施形態1~26のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態28]
前記油は、少なくとも30重量%のドコサヘキサエン酸を含む、実施形態1~27のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態29]
前記油は、50未満のアニシジン値を有する、実施形態1~28のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態30]
前記油は、8ppm以下のリン含量を有する、実施形態1~29のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態31]
前記油は、5meq/kg未満のペルオキシド値を有する、実施形態1~30のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態32]
(a)および(b)は、1工程の溶解および解乳化する工程を形成するために一緒に結合される、実施形態1~31のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態33]
(c)は、前記解乳化溶解細胞組成物の前記pHを上昇させる工程をさらに含む、実施形態1~32のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態34]
1つ以上の微生物細胞から1種以上の多価不飽和脂肪酸を含む微生物油を入手するための方法であって:
(a)0.5~6.0のpHを有する解乳化溶解細胞組成物を形成するために前記微生物油を含む前記細胞を酸を添加することにより溶解する工程;
(b)前記解乳化溶解細胞組成物から前記油を分離する工程;および
(c)前記油を回収する工程
を含み、前記解乳化溶解細胞組成物は前記溶解する工程で得られる、方法。
Claims (37)
- 1つ以上の微生物細胞から1種以上の多価不飽和脂肪酸を含む微生物油を入手するための方法であって:
(a)溶解細胞組成物を形成するために前記微生物油を含む前記細胞を溶解する工程;
(b)解乳化溶解細胞組成物を形成するために前記溶解細胞組成物を酸を添加することにより解乳化する工程;
(c)前記解乳化溶解細胞組成物から前記油を分離する工程;および
(d)前記油を回収する工程
を含み、(b)は前記溶解細胞組成物のpHを2.5~6.0へ低下させる工程を含み、(a)または(b)の少なくとも1つは、前記細胞または前記溶解細胞組成物を少なくとも70℃へ加熱する工程をさらに含み、(b)は、前記酸を添加した後に前記溶解細胞組成物を少なくとも70℃へ加熱する工程を含む、方法。 - (a)または(b)の少なくとも1つは、前記細胞または前記溶解細胞組成物を70℃~100℃へ加熱する工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- (b)は、前記溶解細胞組成物に乳化剤を添加する工程をさらに含む、請求項1または2に記載の方法。
- 前記溶解細胞組成物の重量で0.5%~20%の量で前記酸を添加する、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。
- (b)は、前記溶解細胞組成物の重量で0.05%~20%の量で塩を添加する工程をさらに含む、請求項1~4のいずれか一項に記載の方法。
- (b)は、前記溶解細胞組成物を攪拌する工程をさらに含む、請求項1~5のいずれか一項に記載の方法。
- (a)は、前記細胞を撹拌する工程をさらに含む、請求項1~6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記酸は、硫酸、リン酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、次亜塩素酸、亜塩素酸、塩素酸、過塩素酸、フルオロ硫酸硝酸、フルオロアンチモン酸、フルオロホウ酸、ヘキサフルオロリン酸、クロム酸、ホウ酸、酢酸、クエン酸、ギ酸およびそれらの組み合わせから選択される、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記酸は、硫酸である、請求項1~8のいずれか一項に記載の方法。
- (a)の前記細胞は、未洗浄である、請求項1~9のいずれか一項に記載の方法。
- (a)の前記細胞は、発酵ブロス内に含有されている、請求項1~10のいずれか一項に記載の方法。
- (c)は、前記解乳化溶解細胞組成物を遠心分離する工程をさらに含む、請求項1~11のいずれか一項に記載の方法。
- 前記多価不飽和脂肪酸は、ω-3脂肪酸、ω-6脂肪酸およびそれらの混合物から選択される、請求項1~12のいずれか一項に記載の方法。
- 前記多価不飽和脂肪酸は、ドコサヘキサエン酸(DHA)、エイコサペンタエン酸(EPA)、ドコサペンタエン酸(DPA)、アラキドン酸(ARA)、γ-リノール酸(GLA)、ジホモ-γ-リノール酸(DGLA)、ステアリドン酸(SDA)およびそれらの混合物から選択される、請求項1~13のいずれか一項に記載の方法。
- 前記多価不飽和脂肪酸は、ドコサヘキサエン酸(DHA)である、請求項14に記載の方法。
- 前記多価不飽和脂肪酸は、アラキドン酸(ARA)である、請求項14に記載の方法。
- 前記微生物細胞は、藻類、酵母、真菌、原生生物または細菌細胞である、請求項1~16のいずれか一項に記載の方法。
- 前記微生物細胞は、モルティエレラ(Mortierella)属、クリプトコディニウム(Crypthecodinium)属またはスラウストキトリアレス(Thraustochytriales)目に由来する、請求項1~17のいずれか一項に記載の方法。
- 前記微生物細胞は、スラウストキトリアレス(Thraustochytriales)目に由来する、請求項18に記載の方法。
- 前記微生物細胞は、スラウストキトリウム(Thraustochytrium)属、シゾキトリウム(Schizochytrium)属またはそれらの混合物に由来する、請求項19に記載の方法。
- 前記微生物細胞は、モルティエレラ・アルピナ(Mortierella alpina)に由来する、請求項18に記載の方法。
- 前記溶解細胞組成物は、液体、細胞断片および微生物油を含む、請求項1~21のいずれか一項に記載の方法。
- 有機溶媒は、前記細胞から前記油を入手するためには使用されない、請求項1~22のいずれか一項に記載の方法。
- 前記解乳化溶解細胞組成物の平均粒径は、25ミクロン以下である、請求項1~23のいずれか一項に記載の方法。
- (b)は、前記溶解細胞組成物に乳化剤を添加する工程をさらに含み、前記乳化剤は、イオン性乳化剤である、請求項1~24のいずれか一項に記載の方法。
- 前記イオン性乳化剤は、アニオン性硫酸塩乳化剤、アニオン性スルホン酸塩乳化剤、アニオン性リン酸塩乳化剤、アニオン性カルボン酸塩乳化剤およびそれらの組み合わせから選択されるアニオン性乳化剤である、請求項25に記載の方法。
- 前記イオン性乳化剤は、ラウリル硫酸アンモニウム、ドデシル硫酸ナトリウム、ラウレス硫酸ナトリウム、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム、ミレス硫酸ナトリウムおよびそれらの組み合わせから選択されるアニオン性硫酸塩乳化剤である、請求項26に記載の方法。
- (b)は、前記溶解細胞組成物に乳化剤を添加する工程をさらに含み、前記乳化剤は、前記溶解細胞組成物の重量で0.2%~10%の量で添加される、請求項1~27のいずれか一項に記載の方法。
- (b)は、前記溶解細胞組成物の重量で0.05%~20%の量で塩を添加する工程をさらに含み、前記塩は、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、硫酸塩およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項1~28のいずれか一項に記載の方法。
- (d)の前記油は、原油である、請求項1~29のいずれか一項に記載の方法。
- (d)は、精製油を入手するために前記原油を精製する工程をさらに含む、請求項30に記載の方法。
- 前記油は、少なくとも30重量%のアラキドン酸を含む、請求項1~31のいずれか一項に記載の方法。
- 前記油は、少なくとも30重量%のドコサヘキサエン酸を含む、請求項1~32のいずれか一項に記載の方法。
- 前記油は、50未満のアニシジン値を有する、請求項1~33のいずれか一項に記載の方法。
- 前記油は、8ppm以下のリン含量を有する、請求項1~34のいずれか一項に記載の方法。
- 前記油は、5meq/kg未満のペルオキシド値を有する、請求項1~35のいずれか一項に記載の方法。
- (a)および(b)は、1工程の溶解および解乳化する工程を形成するために一緒に結合される、請求項1~36のいずれか一項に記載の方法。
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