JP2022113835A - Ｌｐａの遺伝子発現の阻害のための組成物及び方法 - Google Patents

Ｌｐａの遺伝子発現の阻害のための組成物及び方法 Download PDF

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Abstract

【課題】ＬＰＡ（アポ（ａ））遺伝子の発現の阻害のためのＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤及びＲＮＡｉ剤コンジュゲートを提供すること。【解決手段】１つまたは複数のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を随意で１つまたは複数の追加の治療剤と共に含む医薬組成物も記載される。記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の肝細胞へのインビボでの送達は、ＬＰＡ遺伝子発現の阻害ならびに心血管性疾患及び心血管関連疾患の治療を提供する。本明細書において記載されるＲＮＡｉ剤は、ＬＰＡ遺伝子を発現する細胞への送達に際して、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）の生物学的プロセスを介してＬＰＡの発現をインビトロ及び／またはインビボで阻害またはノックダウンする。【選択図】なし

Description

リポタンパク質（ａ）［Ｌｐ（ａ）］は不均一な低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）様粒
子であり、脂質コア及びアポリポタンパク質Ｂ（アポＢ－１００）を、ユニークな構成物
であるアポリポタンパク質（ａ）（アポ（ａ））（ジスルフィド結合を介してアポＢ－１
００へ付加される）と共に含有する。
アポ（ａ）遺伝子（ＬＰＡ）は肝臓において優先的に発現され、発現はヒト及び非ヒト
霊長動物に限られる。ヒトにおけるＬｐ（ａ）レベルは遺伝的に規定され、食餌、運動、
または他の生活習慣の変化により有意に変化しない。ＬＰＡの長さは存在するＫｒｉｎｇ
ｌｅ ＫＩＶ２ドメインの数に依存して変動し、その発現は存在するドメインの数と逆相
関する。正常なＬｐ（ａ）レベルは０．１～２５ｍｇ／ｄｌの範囲であり、アメリカ合衆
国における集団の約２５％が３０ｍｇ／ｄｌ以上のＬｐ（ａ）のレベルを有する。
複数の研究におけるＬｐ（ａ）レベルの分析により、心血管性疾患、卒中、及び他の関
連する障害（アテローム硬化型狭窄が含まれる）についての独立危険因子として高レベル
のＬｐ（ａ）が暗示されている。加えて、ゲノムワイド関連リアルタイム分析により、Ｌ
ＰＡもアテローム性動脈硬化性狭窄等の疾患についての遺伝的危険因子として暗示された
。
治療法的リポタンパク質アフェレシスが、高脂血症患者においてＬｐ（ａ）レベル及び
ＬＤＬレベルの両方を低下させるために使用される場合に、心血管イベントの有意な低減
が観察された。したがって、これら及び他のＬＰＡ関連疾患に関連する治療剤及び治療に
ついての必要性が存在する。
選択的且つ効率的にＬＰＡ遺伝子の発現を阻害するための、ＬＰＡ（アポ（ａ）とも称
される）ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤（ＲＮＡｉトリガーまたはトリガーとも称される）及
びＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を含有する組成物が、本明細書において記載される。ＬＰＡは、ア
ポリポタンパク質（ａ）（アポ（ａ））（リポタンパク質（ａ）粒子（Ｌｐ（ａ））の重
要な構成要素）をコードする遺伝子の名称である。本明細書において記載されるＬＰＡ
ＲＮＡｉ剤は、疾患（ベルガー病、末梢動脈疾患、冠動脈疾患、メタボリック症候群、急
性冠症候群、大動脈弁狭窄症、大動脈弁閉鎖不全症、大動脈解離、網膜動脈閉塞症、脳血
管疾患、腸間膜虚血症、上腸間膜動脈閉塞症、腎動脈狭窄症、安定狭心症／不安定狭心症
、急性冠症候群、ヘテロ接合またはホモ接合の家族性高コレステロール血症、高アポβリ
ポタンパク血症、アテローム性脳動脈硬化症、脳血管疾患、及び静脈血栓症が含まれるが
これらに限定されない）の予防もしくは治療、またはこれらの疾患の予防または治療のた
めの医薬品の調製において使用され得る。
各々のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は少なくともセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む。センス鎖
及びアンチセンス鎖は、互いに対して、部分的、実質的、または全面的に相補的であり得
る。本明細書において記載される各々のＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖の長さ
は、１７～３０ヌクレオチドの長さであり得る。いくつかの実施形態において、センス鎖
及びアンチセンス鎖は、独立して１７～２６ヌクレオチドの長さである。センス鎖及びア
ンチセンス鎖は同じ長さまたは異なる長さのいずれかであり得る。本明細書において記載
されるＲＮＡｉ剤は、ＬＰＡ遺伝子を発現する細胞への送達に際して、ＬＰＡ遺伝子の発
現をインビトロまたはインビボで阻害する。
ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、少なくとも連続１７ヌクレオチドのコアストレッチ
にわたって、ＬＰＡ ｍＲＮＡ中の配列へ少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチ
ド配列を含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ｍＲＮＡ中の配列へ少なくとも９
０％の同一性を有するセンス鎖のヌクレオチド配列は、１７、１８、１９、２０、２１、
２２、または２３ヌクレオチドの長さである。ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、
少なくとも連続１６ヌクレオチドのコアストレッチにわたって、ＬＰＡ ｍＲＮＡ及び対
応するセンス鎖中の配列へ少なくとも９０％の相補性を有するヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ｍＲＮＡまたは対応するセンス鎖中の配列へ少な
くとも９０％の相補性を有するアンチセンス鎖のヌクレオチド配列は、１７、１８、１９
、２０、２１、２２、または２３ヌクレオチドの長さである。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、当技術分野に
おいて公知の任意のオリゴヌクレオチド送達技術を使用して、標的細胞または組織へ送達
される。核酸送達方法には、リポソーム中のカプセル化によるもの、イオン導入によるも
の、または他のベヒクル（ハイドロゲル、シクロデキストリン、生物分解性ナノカプセル
剤及び生体接着性マイクロスフェア等）への取り込みによるもの、タンパク性ベクターま
たはＤｙｎａｍｉｃ Ｐｏｌｙｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ（商標）（ＤＰＣ）が含まれるがこ
れらに限定されない（例えばＷＯ２０００／０５３７２２、ＷＯ２００８／００２２３０
９、ＷＯ２０１１／１０４１６９及びＷＯ２０１２／０８３１８５を参照、その各々は参
照により本明細書に援用される）。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は
標的基へコンジュゲートされる。いくつかの実施形態において、標的基には、細胞受容体
リガンド（Ｎ－アセチル－ガラクトサミン三量体を含むガラクトースクラスターが含まれ
る、ガラクトースクラスター等）が含まれ得る。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物
が記載される。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、随意で、１つまた
は複数の追加の（すなわち第２、第３などの）治療剤と組み合わせられる。追加の治療剤
は、他のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤（例えばＬＰＡ標的内の異なる配列を標的とするＬＰＡ Ｒ
ＮＡｉ剤）であり得る。追加の治療剤は、小分子薬物、抗体、抗体断片、及び／またはワ
クチンでもあり得る。ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を、１つまたは複数の追加の治療剤有りまたは
無しで１つまたは複数の賦形剤と組み合わせて、医薬組成物を形成することができる。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を肝細胞（特に肝細胞）へインビボ
で送達するための組成物であって、標的基へコンジュゲートされたＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を
含む、前記組成物が記載される。いくつかの実施形態において、標的基はアシアロ糖タン
パク質リガンドである。
ＬＰＡ発現によって少なくとも部分的に媒介される病理学的状態を有するかまたは病理
学的状態を発症するリスクがあるヒト被験体を治療する方法であって、治療有効量のＬＰ
Ａ ＲＮＡｉ剤またはＬＰＡ ＲＮＡｉ剤含有組成物を被験体へ投与するステップ（複数
可）を含む、前記方法も記載される。ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤またはＬＰＡ ＲＮＡｉ剤含有
組成物により被験体を治療する方法は、随意で、１つまたは複数の追加の（すなわち第２
の）治療剤または治療を投与する１つまたは複数のステップと組み合わせられ得る。ＬＰ
Ａ ＲＮＡｉ剤及び追加の治療剤は単一の組成物中で投与され得るか、またはそれらは個
別に投与され得る。追加の治療剤の例には、ＨＭｇ Ｃｏ－Ａリダクターゼ阻害剤（スタ
チン）、エゼチミブ、ＰＣＳＫ－９阻害剤、ＣＴＥＰ阻害剤、ＡＮＧＰＴＬ３標的療法、
ＡＰＯＣ３標的療法、及びナイアシンがを含まれるがこれらに限定されない。
記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の使用は、疾患（ベルガー病、末梢動脈疾患、冠動脈疾
患、メタボリック症候群、急性冠症候群、大動脈弁狭窄症、大動脈弁閉鎖不全症、大動脈
解離、網膜動脈閉塞症、脳血管疾患、腸間膜虚血症、上腸間膜動脈閉塞症、腎動脈狭窄症
、安定狭心症／不安定狭心症、急性冠症候群、ヘテロ接合またはホモ接合の家族性高コレ
ステロール血症、高アポβリポタンパク血症、アテローム性脳動脈硬化症、脳血管疾患、
及び静脈血栓症が含まれるがこれらに限定されない）の予防または治療のための療法にお
いて使用され得る。かかる方法は、本明細書において記載されるようなＬＰＡ ＲＮＡｉ
剤を被験体（例えばヒト被検体または動物被験体）へ投与することを含む。
医薬組成物は、局部的または全身的な治療が所望されるかどうか及び治療される領域に
依存して、多くの手法で投与され得る。投与は、当技術分野において一般的に公知の任意
の手法（局所（例えば経皮パッチによる）、経肺（例えば粉末またはエアロゾルの吸入ま
たは吹送によって（ネブライザー経由、気管内、鼻腔内が含まれる））、表皮、経皮、経
口、または非経口等であるがこれらに限定されない）によって行うことができる。非経口
投与には、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内または筋肉内の注射または点滴；皮膚下（例え
ば移植されたデバイスによって）、頭蓋内、実質内、髄腔内及び脳室内の投与が含まれる
がこれらに限定されない。いくつかの実施形態において、本明細書において記載される医
薬組成物は皮下注射によって投与される。
記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤及び／または組成物は、疾患（ベルガー病、末梢動脈疾
患、冠動脈疾患、メタボリック症候群、急性冠症候群、大動脈弁狭窄症、大動脈弁閉鎖不
全症、大動脈解離、網膜動脈閉塞症、脳血管疾患、腸間膜虚血症、上腸間膜動脈閉塞症、
腎動脈狭窄症、安定狭心症／不安定狭心症、急性冠症候群、ヘテロ接合またはホモ接合の
家族性高コレステロール血症、高アポβリポタンパク血症、アテローム性脳動脈硬化症、
脳血管疾患、及び静脈血栓症が含まれるがこれらに限定されない）の治療のための療法に
おいて使用され得る。かかる方法は、本明細書において記載されるようなＬＰＡ ＲＮＡ
ｉ剤を被験体（例えばヒト被検体または動物被験体）へ投与することを含む。
特別に定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語及び科学用語
は、本発明が属する技術分野の当業者によって共通して理解されるものと同じ意味を有す
る。本発明の実践または試験において、本明細書において記載されるものに類似するかま
たは等価である方法及び材料を使用することができるが、好適な方法及び材料が後述され
る。すべての出版物、特許出願、特許、及び本明細書において言及される他の参照文献は
、それらの全体を参照することによって援用される。矛盾する事例において、本明細書（
定義が含まれる）が優先されるだろう。加えて、材料、方法、及び例は、単に説明的なも
のであり、限定を意図したものではない。
本発明の他の特色及び利点は、以下で詳述される記載及び請求項から明らかである。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
センス鎖及びアンチセンス鎖を含むＬＰＡ ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤であって、
前記アンチセンス鎖が、
ａ）配列番号：１～１０８のうちの任意のもののヌクレオチド２～１９、または
ｂ）表１もしくは表２Ａのアンチセンス鎖のうちの任意のもの
のヌクレオチド配列を含む、前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤。
（項目２）
前記センス鎖が、
ａ）配列番号：１９０～２６８のうちの任意のもののヌクレオチド１～１９、または
ｂ）表１もしくは表２Ｂのセンス鎖のうちの任意のもの
のヌクレオチド配列を含む、項目１に記載のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤。
（項目３）
前記アンチセンス鎖が、配列番号：１２４６、配列番号：１２４２、配列番号：１２４
４、配列番号：１２４８、配列番号：１２５０、配列番号：１２５２、または配列番号：
１２５４、配列番号：１２８０、配列番号：１２８１、配列番号：１２８２、または配列
番号：１２８３のうちの任意のもののヌクレオチド配列を含む、項目１に記載のＬＰＡ
ＲＮＡｉ剤。
（項目４）
ａ）前記アンチセンス鎖が配列番号：１２４６のヌクレオチド配列を含み、前記センス
鎖が配列番号：１２４７のヌクレオチド配列を含む；
ｂ）前記アンチセンス鎖が配列番号：１２４２のヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖
が配列番号：１２４３のヌクレオチド配列を含む；
ｃ）前記アンチセンス鎖が配列番号：１２４４のヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖
が配列番号：１２４５のヌクレオチド配列を含む；
ｄ）前記アンチセンス鎖が配列番号：１２４８のヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖
が配列番号：１２４９のヌクレオチド配列を含む；
ｅ）前記アンチセンス鎖が配列番号：１２５０のヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖
が配列番号：１２５１のヌクレオチド配列を含む；
ｆ）前記アンチセンス鎖が配列番号：１２５２のヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖
が配列番号：１２５３のヌクレオチド配列を含む；または
ｇ）前記アンチセンス鎖が配列番号：１２５４のヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖
が配列番号：１２５５のヌクレオチド配列を含む；または
ｈ）前記アンチセンス鎖が配列番号：１２８０のヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖
が配列番号：１２６０のヌクレオチド配列を含む；または
ｉ）前記アンチセンス鎖が配列番号：１２８１のヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖
が配列番号：１２５８のヌクレオチド配列を含む；または
ｊ）前記アンチセンス鎖が配列番号：１２８０のヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖
が配列番号：１２８４のヌクレオチド配列を含む；または
ｋ）前記アンチセンス鎖が配列番号：１２８１のヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖
が配列番号：１２８５のヌクレオチド配列を含む；または
ｌ）前記アンチセンス鎖が配列番号：１２８２のヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖
が配列番号：１２５９のヌクレオチド配列を含む；または
ｍ）前記アンチセンス鎖が配列番号：１２８３のヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖
が配列番号：１２４９のヌクレオチド配列を含む、
項目３に記載のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤。
（項目５）
前記センス鎖及び／または前記アンチセンス鎖が、１～６ヌクレオチドの長さの３’延
長及び／または５’延長をさらに含む、項目１～４のいずれか一項に記載のＬＰＡ ＲＮ
Ａｉ剤。
（項目６）
前記アンチセンス鎖が、配列番号：１５６、配列番号：１６４、または配列番号：１８
８のうちの任意のもののヌクレオチド配列を含む、項目１～５のいずれか一項に記載のＬ
ＰＡ ＲＮＡｉ剤。
（項目７）
ａ）前記アンチセンス鎖が配列番号：１５６のヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖
が配列番号：３１０のヌクレオチド配列を含む、
ｂ）前記アンチセンス鎖が配列番号：１６４のヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖が
配列番号：３５７のヌクレオチド配列を含む、
ｃ）前記アンチセンス鎖が配列番号：１８８のヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖が
配列番号：３８４のヌクレオチド配列を含む、
ｄ）前記アンチセンス鎖が配列番号：１６４のヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖が
配列番号：３７６のヌクレオチド配列を含む、または
ｅ）前記アンチセンス鎖が配列番号：１６４のヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖が
配列番号：３８４のヌクレオチド配列を含む、
項目６に記載のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤。
（項目８）
前記センス鎖及び／またはアンチセンス鎖が独立して１つまたは複数の修飾ヌクレオチ
ドを含む、項目１～７のいずれか一項に記載のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤。
（項目９）
前記１つまたは複数の修飾ヌクレオチドが、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、５’
－ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、２’－デオキシ－２’－フルオロ修飾ヌク
レオチド、２’－デオキシ修飾ヌクレオチド、ロックされたヌクレオチド、脱塩基ヌクレ
オチド、デオキシチミジン、反転（ｉｎｖｅｒｔｅｄ）デオキシチミジン、２’－アミノ
修飾ヌクレオチド、２’－アルキル修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、及びヌ
クレオチドを含む非天然塩基からなる群から独立して選択される、項目８に記載のＬＰＡ
ＲＮＡｉ剤。
（項目１０）
前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤が１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオシド間リンケ
ージを含む、項目１～９のいずれか一項に記載のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤。
（項目１１）
前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤が標的基をさらに含む、項目１～１０のいずれか一項に記載の
ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤。
（項目１２）
前記標的基がアシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む、項目１１に記載のＬＰＡ
ＲＮＡｉ剤。
（項目１３）
前記アシアロ糖タンパク質受容体リガンドが、ガラクトースクラスターを含む、項目１
２に記載のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤。
（項目１４）
前記ガラクトースクラスターが、（Ｃ１１－ＰＥＧ３－ＮＡＧ３）、（Ｃ１１－ＰＥＧ
３－ＮＡＧ３）、（Ｃ６－ＰＥＧ４－ＮＡＧ３）、（ＮＡＧ３）、（ＮＡＧ４）、（ＮＡ
Ｇ３－ＡＡ２）、（ＮＡＧ３－Ｐａｌｍ）、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ
２４）、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡ
Ｇ２８）、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（Ｎ
ＡＧ１３）、（ＮＡＧ３１ｓ）、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３４）、（
ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３６）、及び（ＮＡＧ３７）からなる群から選択される、項目１
３に記載のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤。
（項目１５）
前記標的基がセンス鎖へコンジュゲートされる、項目１１～１４のいずれか一項に記載
のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤。
（項目１６）
前記標的基がセンス鎖の５’末端へコンジュゲートされる、項目１５に記載のＬＰＡ
ＲＮＡｉ剤。
（項目１７）
前記標的基がセンス鎖の３’末端へコンジュゲートされる、項目１５に記載のＬＰＡ
ＲＮＡｉ剤。
（項目１８）
前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤が連結基をさらに含む、項目１～１７のいずれか一項に記載の
ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤。
（項目１９）
前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤が１または２のオーバーハングを含む、項目１～１８のいずれ
か一項に記載のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤。
（項目２０）
前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤が１または２のほつれた末端（ｆｒａｙｅｄ ｅｎｄ）を含む
、項目１～１８のいずれか一項に記載のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤。
（項目２１）
前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤が１または２の平滑末端を含む、項目１～１８のいずれか一項
に記載のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤。
（項目２２）
前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤が表３Ａまたは表３Ｂ中の二重鎖配列のうちの任意のものを含
む、項目１～１８のいずれか一項に記載のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤。
（項目２３）
前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤が、ＡＤ０３４６０、ＡＤ０３５３６、ＡＤ０３５８１、ＡＤ
０３５８３、ＡＤ３８４７、またはＡＤ０４１１０を含む、項目１～１８のいずれか一項
に記載のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤。
（項目２４）
医薬品の製造のための、項目１～２２のいずれか一項に記載のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の使
用。
（項目２５）
１つまたは複数の追加の治療剤または治療をさらに含む、項目１～２３のいずれか一項
に記載のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤。
（項目２６）
薬学的に許容される賦形剤をさらに含む、項目１～２３のいずれか一項に記載のＬＰＡ
ＲＮＡｉ剤。
（項目２７）
前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤が、キット、容器、パック、ディスペンサー、前充填シリンジ
、またはバイアル中でパッケージングされる、項目１～２３のいずれか一項に記載のＬＰ
Ａ ＲＮＡｉ剤。
（項目２８）
細胞、組織、または被験体におけるＬＰＡ発現を阻害する方法であって、治療有効量の
項目１～２６のいずれか一項に記載のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を前記被験体へ投与することを
含む、前記方法。
（項目２９）
前記組成物が非経口的に投与される、項目２７に記載の方法。
（項目３０）
前記細胞が肝細胞である、項目２７～２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
センス配列及びアンチセンス配列を含むＬＰＡ ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤であって、
前記アンチセンス配列が、表１または表２Ａのアンチセンス配列のうちの任意のもののヌ
クレオチド１～１７、２～１８、１～１９、２～１９、１～２１、１～２３、または１～
２６のヌクレオチド配列を含む、ＬＰＡ ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤。
０．５ｍｇ／ｋｇ（破線）または２ｍｇ／ｋｇ（実線）の指示されたＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の単回の皮下投与の後の、Ｌｐ（ａ）遺伝子導入（Ｔｇ）マウスにおける血清Ｌｐ（ａ）タンパク質レベルを例証するグラフ。Ｌｐ（ａ）レベルを１日目及び食塩水対照へ正規化した。 １ｍｇ／ｋｇ（破線）または３ｍｇ／ｋｇ（実線）の指示されたＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の３回の皮下用量の投与を、３週間の間に週に１回（１日目、８日目及び１５日目での用量）投与した後の、Ｌｐ（ａ）Ｔｇマウスにおける血清Ｌｐ（ａ）タンパク質レベルを例証するグラフ。Ｌｐ（ａ）レベルを１日目及び食塩水対照へ正規化した。 １日目に送達ポリマーにより１：１（ｗｔ／ｗｔ）で投薬された単回の２ｍｇ／ｋｇのＡＤ０１１９６ ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の投与の後の、カニクイザル血清におけるＬｐ（ａ）粒子レベルを例証するグラフ。Ｌｐ（ａ）レベルを２つの用量前の値（０日目として示される）へ正規化した。 １日目及び７１日目に送達ポリマーにより１：１（ｗｔ／ｗｔ）で投薬された４ｍｇ／ｋｇまたは６ｍｇ／ｋｇのＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の投与の後の、カニクイザル血清におけるＬｐ（ａ）粒子レベルを例証するグラフ。Ｌｐ（ａ）レベルを２つの用量前の値（０日目として示される）へ正規化した。４ｍｇ／ｋｇの用量＝黒色円；６ｍｇ／ｋｇの用量＝灰色正方形。 ３ｍｇ／ｋｇのＡＤ０２８１９ ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の３回の週１回の皮下用量（１、８及び１５日目に）の後の、カニクイザル血清におけるＬｐ（ａ）粒子レベルを例証するグラフ。Ｌｐ（ａ）レベルを３つの用量前の値（０日目として示される）へ正規化した。 １日目に３ｍｇ／ｋｇのＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の単回の皮下投与の後の、カニクイザル血清におけるＬｐ（ａ）粒子レベルを例証するグラフ。ＡＤ０３４６０群及びＡＤ０３５３６群に、４８日目にＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の追加の１ｍｇ／ｋｇの用量を投与した。Ｌｐ（ａ）レベルを３つの用量前の値（０日目として示される）へ正規化した。
ＬＰＡ遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤（本明細書においてＬＰＡ ＲＮＡｉ
剤と称される）が、本明細書において記載される。本明細書において記載されるＲＮＡｉ
剤は、ＬＰＡ遺伝子を発現する細胞への送達に際して、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）の生物学
的プロセスを介してＬＰＡの発現をインビトロ及び／またはインビボで阻害またはノック
ダウンする。本明細書において使用される時、特別に具体的に指摘されない限り、ＬＰＡ
は、必要に応じて、ＬＰＡ遺伝子、ＬＰＡ ｍＲＮＡまたはＬＰ（ａ）タンパク質を指し
得る。
ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤はセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む。センス鎖及びアンチセンス
鎖は各々、１７～２３核酸塩基の長さのコア配列を含有する。アンチセンス鎖コア配列は
、ＬＰＡ ｍＲＮＡ中に存在するヌクレオチド配列（時には例えば標的配列と称される）
へ１００％（完全に）相補的であるか、または少なくとも９０％（実質的に）相補的であ
る。センス鎖コア配列は、アンチセンス鎖中の配列へ１００％（完全に）相補的であるか
、または少なくとも９０％（実質的に）相補的であり、したがって、センス鎖コア配列は
、ＬＰＡ ｍＲＮＡ中に存在するヌクレオチド配列（標的配列）に完全に同一であるか、
または少なくとも９０％同一である。センス鎖コア配列は対応するアンチセンスコア配列
と同じ長さであり得るか、または異なる長さであり得る。いくつかの実施形態において、
アンチセンス鎖コア配列は、１７、１８、１９、２０、２１、２２または２３ヌクレオチ
ドの長さである。いくつかの実施形態において、センス鎖コア配列は、１７、１８、１９
、２０、２１、２２または２３ヌクレオチドの長さである。
ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖はアニールして二重鎖を形成する。
ＬＰＡ ＲＮＡｉのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、互いに対して、部分的、実質的、ま
たは全面的に相補的である。相補的な二重鎖領域内で、センス鎖コア配列は、アンチセン
スコア配列へ少なくとも９０％相補的であるか、または１００％相補的である。いくつか
の実施形態において、センス鎖コア配列は、アンチセンス鎖コア配列の対応する１７、１
８、１９、２０または２１ヌクレオチドの配列へ、少なくとも９０％または１００％相補
的な、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０または少なく
とも２１ヌクレオチドの配列を含有する（すなわち、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖及び
アンチセンスコア配列は、少なくとも９０％塩基対を作るか、または１００％塩基対を作
る、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０または少なくと
も２１ヌクレオチドの領域を有する）。
本明細書において使用される時、及び特別の指示のない限り、「相補的」という用語は
、第１のヌクレオチド配列（例えばＲＮＡｉ剤のセンス鎖またはＬＰＡ ｍＲＮＡ）を第
２のヌクレオチド配列（例えばＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖）に関連して記載するのに使
用される場合に、特定の条件下で第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまた
はポリヌクレオチドとハイブリダイズ（塩基対水素結合を形成）し、二重鎖（または二重
らせん構造）を形成する、第１のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリ
ヌクレオチドの能力を指す。相補的な配列は、Ｗａｔｓｏｎ－Ｃｒｉｃｋ塩基対または非
Ｗａｔｓｏｎ－Ｃｒｉｃｋ塩基対を含み、ハイブリダイズする能力に関する上記の要求性
が満たされる限り、天然ヌクレオチドもしくは修飾ヌクレオチドまたはヌクレオチド模倣
体を含む。「完全に相補的」または「全面的に相補的」は、第１のポリヌクレオチドのコ
ンティグ配列中の塩基のすべて（１００％）が、第２のポリヌクレオチドのコンティグ配
列中の塩基の同じ数とハイブリダイズするだろうということを意味する。コンティグ配列
は第１のヌクレオチド配列または第２のヌクレオチド配列のすべてまたは一部分を含み得
る。本明細書において使用される時、「部分的に相補的」は、核酸塩基のハイブリダイズ
されたペアにおいて、第１のポリヌクレオチドのコンティグ配列中の塩基の少なくとも７
０％が、第２のポリヌクレオチドのコンティグ配列中の塩基の同じ数とハイブリダイズす
るだろうということを意味する。本明細書において使用される時、「実質的に相補的」は
、核酸塩基のハイブリダイズされたペアにおいて、第１のポリヌクレオチドのコンティグ
配列中の塩基の少なくとも８５％が、第２のポリヌクレオチドのコンティグ配列中の塩基
の同じ数とハイブリダイズするだろうということを意味する。本明細書において使用され
る時、「相補的」、「全面的に相補的」及び「実質的に相補的」という用語、は、ＲＮＡ
ｉ剤のセンス鎖とアンチセンス鎖、またはＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖とＬＰＡ ｍＲＮ
Ａの配列との間の塩基のマッチングに関して使用され得る。配列の同一性または相補性は
修飾に非依存的である。同一性または相補性を決定する目的のために、例えばａ及びＡｆ
は、Ｕ（またはＴ）へ相補的であり、Ａに同一である。
本明細書において記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖の長さ
は、独立して１７～３０ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態において、セン
ス鎖及びアンチセンス鎖は、独立して１７～２６ヌクレオチドの長さである。いくつかの
実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖は、１９～２６ヌクレオチドの長さであ
る。いくつかの実施形態において、記載されるＲＮＡｉ剤のセンス及びアンチセンス鎖は
、独立して、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５または２６ヌクレ
オチドの長さである。センス鎖及びアンチセンス鎖は同じ長さまたは異なる長さのいずれ
かであり得る。いくつかの実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖は各々２６ヌ
クレオチドの長さである。いくつかの実施形態において、センス鎖は２３ヌクレオチドの
長さであり、アンチセンス鎖は２１ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態にお
いて、センス鎖は２２ヌクレオチドの長さであり、アンチセンス鎖は２１ヌクレオチドの
長さである。いくつかの実施形態において、センス鎖は２１ヌクレオチドの長さであり、
アンチセンス鎖は２１ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態において、センス
鎖は１９ヌクレオチドの長さであり、アンチセンス鎖は２１ヌクレオチドの長さである。
センス鎖及び／またはアンチセンス鎖は、随意でそして独立して、３’末端、５’末端
、またはコア配列の３’末端及び５’末端の両方で、追加の１、２、３、４、５または６
ヌクレオチド（延長）を含有し得る。アンチセンス鎖追加ヌクレオチド（存在するならば
）は、ＬＰＡ ｍＲＮＡ中の対応する配列へ相補的または非相補的であり得る。センス鎖
追加ヌクレオチド（存在するならば）は、ＬＰＡ ｍＲＮＡ中の対応する配列に同一また
は非同一であり得る。アンチセンス鎖追加ヌクレオチド（存在するならば）は、対応する
センス鎖の追加ヌクレオチド（存在するならば）へ相補的または非相補的であり得る。
本明細書において使用される時、延長は、センス鎖コア配列及び／またはアンチセンス
鎖コア配列の５’及び／または３’末端で、１、２、３、４、５または６ヌクレオチドを
含む。センス鎖上の延長ヌクレオチドは、対応するアンチセンス鎖中のヌクレオチド（コ
ア配列ヌクレオチドまたは延長ヌクレオチドのいずれか）へ相補的または非相補的であり
得る。反対に、アンチセンス鎖上の延長ヌクレオチドは、対応するセンス鎖中のヌクレオ
チド（コア配列ヌクレオチドまたは延長ヌクレオチドのいずれか）へ相補的または非相補
的であり得る。いくつかの実施形態において、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖
の両方は、３’延長及び５’延長を含有する。いくつかの実施形態において、１つの鎖の
３’延長ヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、他の鎖の１つまたは複数の５’延長ヌ
クレオチドと塩基対を作る。他の実施形態において、１つの鎖の３’延長ヌクレオチドの
うちの１つまたは複数は、他の鎖の１つまたは複数の５’延長ヌクレオチドと塩基対を作
らない。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、３’延長を有するアンチ
センス鎖及び５’延長を有するセンス鎖を有する。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４、５または６ヌ
クレオチドの長さの３’延長を有するアンチセンス鎖を含む。他の実施形態において、Ｌ
ＰＡ ＲＮＡｉ剤は、１、２または３ヌクレオチドの長さの３’延長を有するアンチセン
ス鎖を含む。いくつかの実施形態において、アンチセンス鎖の延長ヌクレオチドのうちの
１つまたは複数は、ウラシルヌクレオチドもしくはチミジンヌクレオチド、または対応す
るＬＰＡ ｍＲＮＡへ相補的なヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、
３’アンチセンス鎖の延長は、Ａｂ、ＡｂＡｂ、ＡＵＡ、ＵＧＣＵＵ、ＣＵＧ、ＵＧ、Ｕ
ＧＣＣ、ＣＵＧＣＣ、ＣＧＵ、ＣＵＵ、ＵＧＣＣＵＡ、ＣＵＧＣＣＵ、ＵＧＣＣＵ、ＵＧ
ＡＵＵ、ＧＣＣＵＡＵ、Ｔ、ＴＴ（各々は５’から３’へリストされる）を含むかまたは
それらからなるがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４または５ヌクレ
オチドの長さの５’延長を有するアンチセンス鎖を含む。他の実施形態において、ＬＰＡ
ＲＮＡｉ剤は、１または２ヌクレオチドの長さの５’延長を有するアンチセンス鎖を含
む。いくつかの実施形態において、アンチセンス鎖の延長ヌクレオチドのうちの１つまた
は複数は、ウラシルヌクレオチドもしくはチミジンヌクレオチド、または対応するＬＰＡ
ｍＲＮＡへ相補的なヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、５’アン
チセンス鎖の延長は、ＵＡ、ＴＵ、Ｕ、Ｔ、ＣＵＣ（各々は５’から３’へリストされる
）を含むかまたはそれらからなるがこれらに限定されない。アンチセンス鎖は、記載され
る５’アンチセンス鎖延長のうちの任意のもの（存在するならば）と組み合わせて、上記
の３’延長のうちの任意のものを有し得る。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４または５ヌクレ
オチドの長さの３’延長を有するセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、センス
鎖の延長ヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、アデノシンヌクレオチド、ウラシルヌ
クレオチドもしくはチミジンヌクレオチド、ＡＴジヌクレオチド、またはＬＰＡ ｍＲＮ
Ａの配列中のヌクレオチドに対応するヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において
、３’アンチセンス鎖の延長は、Ｔ、ＵＵＡｂ、ＵＡｂ、Ａｂ、ＵＴ、ＴＴ、ＵＵＴ、Ｔ
ＴＴ、またはＴＴＴＴ（各々は５’から３’へリストされる）を含むかまたはそれらから
なるがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４、５または６ヌ
クレオチドの長さの５’延長を有するセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、セ
ンス鎖の延長ヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、ウラシルヌクレオチドもしくはア
デノシンヌクレオチド、またはＬＰＡ ｍＲＮＡの配列中のヌクレオチドに対応するヌク
レオチドを含む。いくつかの実施形態において、センス鎖の５’延長は、ＣＡ、ＡＵＡＧ
ＧＣ、ＡＵＡＧＧ、ＡＵＡＧ、ＡＵＡ、Ａ、ＡＡ、ＡＣ、ＧＣＡ、ＧＧＣＡ、ＧＧＣ、Ｕ
ＡＵＣＡ、ＵＡＵＣ、Ａｂ、ＵＣＡ、ＵＡＵ（各々は５’から３’へリストされる）であ
り得るがこれらに限定されない。センス鎖は３’延長及び／または５’延長を有し得る。
ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の形成において使用されるヌクレオチド配列の例は、表１、２Ａ、
２Ｂ、３Ａ及び３Ｂ中で提供される。本明細書において使用される時、「配列」または「
ヌクレオチド配列」という用語は、標準的なヌクレオチド命名法及び本明細書において記
載される修飾ヌクレオチドについての手引きを使用して、修飾または非修飾にかかわらず
、文字の連続により記載される核酸塩基、ヌクレオチド及び／またはヌクレオシドの連続
または順序を指す。
ＲＮＡｉ剤には、小型干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡｓ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マ
イクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡｓ）、短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、及びダイサー基質（
例えば米国特許第８０８４５９９号、同第８３４９８０９号、及び同第８５１３２０７号
）が含まれるがこれらに限定されない。
非修飾ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖の配列は表１中で提供される
。ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の形成において、表１中でリストされる配列の各々におけるヌクレ
オチドの各々は、修飾ヌクレオチドであり得る。
Figure 2022113835000001
Figure 2022113835000002
Figure 2022113835000003
Figure 2022113835000004
Figure 2022113835000005
Figure 2022113835000006
本明細書において記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、センス鎖とアンチセンス鎖のアニ
ールによって形成される。表１または表２Ｂ中でリストされる配列を含有するセンス鎖は
、表１または表２Ａ中でリストされる配列を含有する任意のアンチセンス鎖にハイブリダ
イズされ得るが、但し、２つの配列は連続した１６、１７、１８、１９、２０または２１
ヌクレオチド配列にわたって少なくとも９０％の相補性の領域を有する。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖は、表１中の配列の
うちの任意のもののヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ Ｒ
ＮＡｉ剤アンチセンス鎖は、表１中の配列のうちの任意のもののヌクレオチドの配列１～
１７、２～１７、１～１８、２～１８、１～１９、２～１９、１～２０、２～２０、１～
２１、２～２１、１～２２、２～２２、１～２３、２～２３、１～２４、２～２４、１～
２５、２～２５、１～２６、または２～２６を含む。いくつかの実施形態において、ＬＰ
Ａ ＲＮＡｉ剤センス鎖は、表１中の配列のうちの任意のもののヌクレオチド配列を含む
。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤センス鎖は、表１中の配列のうちの
任意のもののヌクレオチドの配列１～１７、２～１７、１～１８、２～１８、１～１９、
２～１９、１～２０、２～２０、１～２１、２～２１、１～２２、２～２２、１～２３、
２～２３、１～２４、２～２４、１～２５、２～２５、１～２６、または２～２６を含む
。
いくつかの実施形態において、本明細書において記載されるＲＮＡｉ剤のセンス鎖及び
アンチセンス鎖は、同じ数のヌクレオチドを含有する。いくつかの実施形態において、本
明細書において記載されるＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖は、異なる数のヌク
レオチドを含有する。いくつかの実施形態において、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端及
びアンチセンス鎖の３’末端は平滑末端を形成する。いくつかの実施形態において、ＲＮ
Ａｉ剤のセンス鎖の３’末端及びアンチセンス鎖の５’末端は平滑末端を形成する。いく
つかの実施形態において、ＲＮＡｉ剤の両方の末端は平滑末端を形成する。いくつかの実
施形態において、ＲＮＡｉ剤のどちらの末端も平滑末端ではない。本明細書において使用
される時、平滑末端は、２つのアニールされた鎖の端部のヌクレオチドが相補的である（
相補的塩基対を形成する）二本鎖ＲＮＡｉ剤の末端を指す。いくつかの実施形態において
、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端及びアンチセンス鎖の３’末端はほつれた末端（ｆｒ
ａｙｅｄ ｅｎｄ）を形成する。いくつかの実施形態において、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の
３’末端及びアンチセンス鎖の５’末端はほつれた末端を形成する。いくつかの実施形態
において、ＲＮＡｉ剤の両方の末端はほつれた末端を形成する。いくつかの実施形態にお
いて、ＲＮＡｉ剤のどちらの末端もほつれた末端ではない。本明細書において使用される
時、ほつれた末端は、２つのアニールされた鎖の端部のヌクレオチドが対を形成する（す
なわちオーバーハングを形成しない）が、相補的ではない（すなわち非相補的な対を形成
する）二本鎖ＲＮＡｉ剤の末端を指す。本明細書において使用される時、オーバーハング
は、二本鎖ＲＮＡｉ剤の１つの鎖の末端での１つまたは複数の非対合ヌクレオチドのスト
レッチである。非対合ヌクレオチドはセンス鎖またはアンチセンス鎖上にあり得、３’オ
ーバーハングまたは５’オーバーハングのいずれかを生成する。いくつかの実施形態にお
いて、ＲＮＡｉ剤は、平滑末端及びほつれた末端、平滑末端及び５’オーバーハング末端
、平滑末端及び３’オーバーハング末端、ほつれた末端及び５’オーバーハング末端、ほ
つれた末端及び３’オーバーハング末端、２つの５’オーバーハング末端、２つの３’オ
ーバーハング末端、５’オーバーハング末端及び３’オーバーハング末端、ほつれた２つ
の末端、または２つの平滑末端を含有する。
ヌクレオチド塩基（または核酸塩基）はヘテロ環式のピリミジン化合物またはプリン化
合物であり、すべての核酸の構成物であり、それらには、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ
）、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）、及びウラシル（Ｕ）が含まれる。本明細書において
使用される時、「ヌクレオチド」という用語には、修飾ヌクレオチドもしくはヌクレオチ
ド模倣体、脱塩基部位（ＡｂまたはＸ）、または代替置換部分（ｓｕｒｒｏｇａｔｅ ｒ
ｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｍｏｉｅｔｙ）が含まれ得る。いくつかの実施形態において、Ｌ
ＰＡ ＲＮＡｉ剤は、塩、混合塩、または遊離酸として調製または提供される。
修飾ヌクレオチド
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、１つまたは複数の修飾ヌクレオ
チドを含有する。本明細書において使用される時、「修飾ヌクレオチド」は、リボヌクレ
オチド（２’－ヒドロキシルヌクレオチド）以外のヌクレオチドである。いくつかの実施
形態において、ヌクレオチドのうちの少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも
７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％が修
飾される。修飾ヌクレオチドには、デオキシヌクレオチド、ヌクレオチド模倣体、脱塩基
ヌクレオチド（Ｘ、Ａｂとして本明細書において表わされる）、２’修飾ヌクレオチド、
３’－３’リンケージ（反転（ｉｎｖｅｒｔｅｄ））ヌクレオチド（ｉｎｖｄＮ、ｉｎｖ
Ｎ、ｉｎｖｎ、ｉｎｖＸ、ｉｎｖＡｂとして本明細書において表わされる）、非天然塩基
を含むヌクレオチド、架橋されたヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、２’，３’－
セコヌクレオチド模倣体（ロックされていない核酸塩基類似体、ＮＵＮＡまたはＮＵＮＡ
として本明細書において表わされる）、ロックされたヌクレオチド（ＮＬＮＡまたはＮＬ
ＮＡとして本明細書において表わされる）、３’－Ｏ－メトキシ（２’ヌクレオシド間連
結された）ヌクレオチド（３’－ＯＭｅｎとして本明細書において表わされる）、２’－
Ｆ－アラビノヌクレオチド（ＮｆＡＮＡまたはＮｆＡＮＡとして本明細書において表わさ
れる）、５’－Ｍｅ，２’－フルオロヌクレオチド（５Ｍｅ－Ｎｆとして本明細書におい
て表わされる）、モルホリノヌクレオチド、ビニルホスホネートデオキシリボヌクレオチ
ド（ｖｐｄＮとして本明細書において表わされる）、ビニルホスホネート含有ヌクレオチ
ド、及びシクロプロピルホスホネート含有ヌクレオチド（ｃＰｒｐＮ）が含まれるがこれ
らに限定されない。２’修飾ヌクレオチド（すなわち５員糖環の２’位でヒドロキシル基
以外の基を備えたヌクレオチド）には、２’－Ｏ－メチルヌクレオチド（ヌクレオチド配
列中の小文字「ｎ」として本明細書において表わされる）、２’－デオキシ－２’－フル
オロヌクレオチド（Ｎｆとして本明細書において表わされ、２’－フルオロヌクレオチド
としても本明細書において表わされる）、２’－デオキシヌクレオチド（ｄＮとして本明
細書において表わされる）、２’－メトキシエチル（２’－Ｏ－２－メトキシルエチル）
ヌクレオチド（ＮＭまたは２’－ＭＯＥとして本明細書において表わされる）、２’－ア
ミノヌクレオチド、及び２’－アルキルヌクレオチドが含まれるがこれらに限定されない
。所与の化合物中のすべての位置が修飾される必要はない。反対に、２つ以上の修飾は、
単一のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤中に、またはその単一のヌクレオチド中にさえ取り込まれ得る
。ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖は、当技術分野において公知の方法
によって合成及び／または修飾され得る。１つのヌクレオチドでの修飾は別のヌクレオチ
ドでの修飾に非依存的である。
修飾ヌクレオチドには、修飾核酸塩基を有するヌクレオチドも含まれ得る。修飾核酸塩
基には、合成核酸塩基及び天然核酸塩基、５－置換ピリミジン、６－アザピリミジン、及
びＮ－２、Ｎ－６及びＯ－６置換プリン（２－アミノプロピルアデニンが含まれる）、５
－プロピニルウラシル及び５－プロピニルシトシン、５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ
）、５－ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン
、アデニン及びグアニンの６－メチル誘導体及び他のアルキル誘導体、アデニン及びグア
ニンの２－プロピル誘導体及び他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミン
及び２－チオシトシン、５－ハロウラシル及び５－ハロシトシン、５－プロピニルウラシ
ル及び５－プロピニルシトシン、６－アゾウラシル、６－アゾシトシン及び６－アゾチミ
ン、５－ウラシル（シュードウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ、８－アミノ、８
－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシル及び他の８－置換のアデニン及びグア
ニン、５－ハロ（特に５－ブロモ、５－トリフルオロメチル）及び他の５－置換のウラシ
ル及びシトシン、７－メチルグアニン及び７－メチルアデニン、８－アザグアニン及び８
－アザアデニン、７－デアザグアニン及び７－デアザアデニン及び３－デアザグアニン及
び３－デアザアデニンが含まれるがこれらに限定されない。
修飾ヌクレオシド間リンケージ
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の１つまたは複数ヌクレオチドは、
非標準的なリンケージまたは骨格（すなわち修飾ヌクレオシド間リンケージまたは修飾骨
格）によって連結される。いくつかの実施形態において、修飾ヌクレオシド間リンケージ
は、非ホスフェート含有共有結合のヌクレオシド間リンケージである。修飾ヌクレオシド
間リンケージまたは修飾ヌクレオシド間骨格には、５’－ホスホロチオエート基（ｓＮ、
ｓｎ、ｓＮｆまたはｓｄＮでのように、ヌクレオチドの前の小文字「ｓ」として本明細書
において表わされる）、キラルホスホロチオエート、チオホスフェート、ホスホロジチオ
エート、ホスホトリエステル、アミノアルキル－ホスホトリエステル、メチルホスホネー
ト及び他のアルキルホスホネート（３’－アルキレンホスホネート及びキラルホスホネー
トが含まれる）、ホスフィネート、ホスホロアミダート（３’－アミノホスホロアミダー
ト及びアミノアルキルホスホロアミダートが含まれる）、チオノホスホロアミダート、チ
オノアルキル－ホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、モルホリノリンケー
ジ、及び正常な３’－５’リンケージを有するボラノホスフェート、２’－５’連結され
たこれらの類似体、及び隣接するペアのヌクレオシド単位が３’－５’から５’－３’へ
または２’－５’から５’－２’へ連結された反転極性を有するものが含まれるがこれら
に限定されない。他の実施形態において、修飾ヌクレオシド間リンケージまたは修飾ヌク
レオシド間骨格は、リン原子を欠損する。リン原子を欠損する修飾ヌクレオシド間リンケ
ージには、短鎖アルキルもしくはシクロアルキルの糖間リンケージ、混合ヘテロ原子及び
アルキルもしくはシクロアルキルの糖間リンケージ、または１つもしくは複数の短鎖のヘ
テロ原子もしくはヘテロ環式の糖間リンケージが含まれるがこれらに限定されない。いく
つかの実施形態において、修飾ヌクレオシド間骨格には、シロキサン骨格、スルフィド骨
格、スルホキシド骨格及びスルホン骨格；ホルムアセチル（ｆｏｒｍａｃｅｔｙｌ）骨格
及びチオホルムアセチル（ｔｈｉｏｆｏｒｍａｃｅｔｙｌ）骨格、メチレン基を含むホル
ムアセチル骨格及びチオホルムアセチル骨格、アルケン含有骨格、スルファミン酸塩骨格
、メチレンイミノ及びメチレンヒドラジノ骨格、スルホネート骨格及びスルホンアミド骨
格、アミド骨格；及び混合されたＮ、Ｏ、Ｓ及びＣＨ２構成要素部分を有する他のものが
含まれるがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は１、２、３、４のホス
ホロチオエートリンケージを含有することができるか、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のアンチセン
ス鎖は１、２、３、もしくは４のホスホロチオエートリンケージを含有することができる
か、またはセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方は独立して１、２、３もしくは４のホスホ
ロチオエートリンケージを含有することができる。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、２つのホスホロチオ
エートヌクレオシド間リンケージを含有する。いくつかの実施形態において、２つのホス
ホロチオエートヌクレオシド間リンケージは、センス鎖の３’末端からの位置１～３のヌ
クレオチドの間である。いくつかの実施形態において、２つのホスホロチオエートヌクレ
オシド間リンケージは、センス鎖の５’末端からの位置１～３、２～４、３～５、４～６
、４～５、または６～８のヌクレオチドの間である。いくつかの実施形態において、ＬＰ
Ａ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、４つのホスホロチオエートヌクレオシド間リンケー
ジを含有する。いくつかの実施形態において、４つのホスホロチオエートヌクレオシド間
リンケージは、センス鎖の５’末端からの位置１～３のヌクレオチドの間であり、５’末
端からの位置１９～２１、２０～２２、２１～２３、２２～２４、２３～２５、または２
４～２６のヌクレオチドの間である。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤
は、センス鎖中に２つのホスホロチオエートヌクレオシド間リンケージ及びアンチセンス
鎖中に４つのホスホロチオエートヌクレオシド間リンケージを含有する。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、１つまたは複数の修飾ヌクレオ
チド及び１つまたは複数の修飾ヌクレオシド間リンケージを含有する。いくつかの実施形
態において、２’－修飾ヌクレオチドは修飾ヌクレオシド間リンケージと組み合わせられ
る。
修飾ヌクレオチドを有するＬＰＡ ＲＮＡｉ剤
修飾ヌクレオチドを含有するアンチセンス鎖の例を表２Ａ中で提供する。修飾ヌクレオ
チドを含有するセンス鎖の例を表２Ｂ中で提供する。表２Ａ及び２Ｂ中で、以下の表記を
使用して修飾ヌクレオチドを指示する。
Ｎ＝２’－ＯＨ（非修飾）リボヌクレオチド（ｆまたはｄの指示なしの大文字）
ｎ＝２’－ＯＭｅ修飾ヌクレオチド
Ｎｆ＝２’－フルオロ修飾ヌクレオチド
ｄＮ＝２’－デオキシヌクレオチド
ＮＵＮＡ＝２’，３’－セコヌクレオチド模倣体（ロックされていない核酸塩基類似体）
ＮＬＮＡ＝ロックされたヌクレオチド
ＮｆＡＮＡ＝２’－Ｆ－アラビノヌクレオチド
ＮＭ＝２’－メトキシエチルヌクレオチド
Ａｂ＝脱塩基リボース
（ｉｎｖｄＮ）＝反転デオキシリボヌクレオチド（３’－３’連結されたヌクレオチド）
（ｉｎｖＡｂ）＝反転脱塩基ヌクレオチド
（ｉｎｖｎ）＝反転２’－ＯＭｅヌクレオチド
ｓ＝ホスホロチオエート連結ヌクレオチド
ｐ＝ホスフェート
ｖｐｄＮ＝ビニルホスホネートデオキシリボヌクレオチド
（３’ＯＭｅｎ）＝３’－ＯＭｅヌクレオチド
（５Ｍｅ－Ｎｆ）＝５’－Ｍｅ，２’－フルオロヌクレオチド
ｃＰｒｐ＝シクロプロピルホスホネート
ｅｐＴｃＰｒ＝表４を参照
ｅｐＴＭ＝表４を参照。
加えて、以下の標的基及び連結基：（Ａｌｋ－ＰＥＧ５－Ｃ６）、（Ｃ１１－ＰＥＧ３
－ＮＡＧ３）、（Ｃ１２）、（Ｃ６－ＰＥＧ４－ＮＡＧ３）、（Ｃ６－ＳＳ－Ａｌｋ－Ｍ
ｅ）、（Ｃｈｏｌ－ＴＥＧ）、（Ｄｙ５４０）、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１８）、（Ｎ
ＡＧ２４）、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２８）、（Ｎ
ＡＧ２９）、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３３）、（Ｎ
ＡＧ３４）、（ＮＡＧ３５）（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ４）、（ＰＡＺ
）、（Ｓｐ１８）、（ステリル）、（Ａｌｋ－ＳＭＰＴ－Ｃ６）が、表２Ａ及び２Ｂ中で
リストされる。各々のセンス鎖及び／またはアンチセンス鎖は、配列の５’末端及び／ま
たは３’末端へコンジュゲートされた、上で指示される標的基または連結基のうちの任意
のものに加えて、他の標的基または連結基を有し得る。これらの基についての化学構造を
表４中で提供する。
Figure 2022113835000007
Figure 2022113835000008
Figure 2022113835000009
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Figure 2022113835000013
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Figure 2022113835000019
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Figure 2022113835000029
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Figure 2022113835000039
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Figure 2022113835000042
Figure 2022113835000043
表２Ｂ中でリストされる配列を含有するセンス鎖は、表２Ａ中でリストされる配列を含
有する任意のアンチセンス鎖にハイブリダイズされ得るが、但し、２つの配列は連続した
１６、１７、１８、１９、２０または２１ヌクレオチド配列にわたって少なくとも９０％
の相補性の領域を有する。代表的なＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、表３Ａ及び３Ｂ中で示される
二重鎖識別番号によって表わされる。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は本明細書において提示される二重
鎖識別番号のうちの任意のものから構成される。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ
ＲＮＡｉ剤は本明細書において提示される二重鎖識別番号のうちの任意のものからなる。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、本明細書において提示される二重
鎖識別番号のうちの任意のセンス鎖及びアンチセンス鎖のヌクレオチド配列を含む。いく
つかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、本明細書において提示される二重鎖識
別番号のうちの任意のセンス鎖及びアンチセンス鎖のヌクレオチド配列、ならびに標的基
及び／または連結基を含み、そこで、標的基及び／または連結基はセンス鎖またはアンチ
センス鎖へ共有結合で連結される（すなわちコンジュゲートされる）。いくつかの実施形
態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、本明細書において提示される二重鎖識別番号のうち
の任意のセンス鎖及びアンチセンス鎖の修飾ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形
態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、本明細書において提示される二重鎖識別番号のうち
の任意のセンス鎖及びアンチセンス鎖の修飾ヌクレオチド配列、ならびに標的基及び／ま
たは連結基を含み、そこで、標的基及び／または連結基はセンス鎖またはアンチセンス鎖
へ共有結合で連結される。
Figure 2022113835000044
Figure 2022113835000045
Figure 2022113835000046
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Figure 2022113835000048
Figure 2022113835000049
Figure 2022113835000050
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Figure 2022113835000052
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Figure 2022113835000059
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Figure 2022113835000064
Figure 2022113835000065
Figure 2022113835000066
Figure 2022113835000067
Figure 2022113835000068
Figure 2022113835000069
Figure 2022113835000070
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Figure 2022113835000072
Figure 2022113835000073
Figure 2022113835000074
Figure 2022113835000075
Figure 2022113835000076
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１２４２（ＴＣＧＵ
ＡＵＡＡＣＡＡＵＡＡＧＧＧＧＣ）のヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖を含む。い
くつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１２４４（ＵＣＧＵＡＵ
ＡＡＣＡＡＵＡＡＧＧＧＧ）のヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖を含む。いくつか
の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１２４６（ＵＣＧＵＡＵＡＡＣ
ＡＡＵＡＡＧＧＧ）のヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形
態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１２４８（ＴＧＡＧＡＡＵＧＡＧＣＣＵ
ＣＧＡＵＡＡ）のヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態に
おいて、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１２５０（ＵＧＡＧＡＡＵＧＡＧＣＣＵＣＧ
ＡＵＡ）のヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において
、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１２５２（ＵＧＡＧＡＡＵＧＡＧＣＣＵＣＧＡＵ）
のヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ
ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１２５４（ＵＧＵＡＵＡＡＣＡＡＵＡＡＧＧＧＧ）のヌクレ
オチド配列を含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡ
ｉ剤は、配列番号：１２８０（ＣＧＵＡＵＡＡＣＡＡＵＡＡＧＧＧＧＣ）のヌクレオチド
配列を含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は
、配列番号：１２８１（ＧＡＧＡＡＵＧＡＧＣＣＵＣＧＡＵＡＡ）のヌクレオチド配列を
含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列
番号：１２８２（ＵＣＧＵＡＵＡＡＣＡＡＵＡＡＧＧＧＧＣ）のヌクレオチド配列を含む
アンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号
：１２８３（ＵＧＡＧＡＡＵＧＡＧＣＣＵＣＧＡＵＡＡ）のヌクレオチド配列を含むアン
チセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、ヌクレオチドのうちの１つまたは複数
は修飾される。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１２４３（ＧＣＣＣ
ＣＵＵＡＵＵＧＵＵＡＵＡＣＧＡ）のヌクレオチド配列を含むセンス鎖を含む。いくつか
の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１２４５（ＣＣＣＣＵＵＡＵＵ
ＧＵＵＡＵＡＣＧＡ）のヌクレオチド配列を含むセンス鎖を含む。いくつかの実施形態に
おいて、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１２４７（ＣＣＣＵＵＡＵＵＧＵＵＡＵＡＣ
ＧＡ）のヌクレオチド配列を含むセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ
ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１２４９（ＵＵＡＵＣＧＡＧＧＣＵＣＡＵＵＣＵＣＡ）のヌ
クレオチド配列を含むセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ
剤は、配列番号：１２５１（ＵＡＵＣＧＡＧＧＣＵＣＡＵＵＣＵＣＡ）のヌクレオチド配
列を含むセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番
号：１２５３（ＡＵＣＧＡＧＧＣＵＣＡＵＵＣＵＣＡ）のヌクレオチド配列を含むセンス
鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１２５５（
ＣＣＣＣＵＵＡＵＵＧＵＵＡＵＡＣＡ）のヌクレオチド配列を含むセンス鎖を含む。ＬＰ
Ａ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１２８４（ＧＣＣＣＣＵＵＡＵＵＧＵＵＡＵＡＣＧ）のヌ
クレオチド配列を含むセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ
剤は、配列番号：１２８５（ＵＵＡＵＣＧＡＧＧＣＵＣＡＵＵＣＵＣ）のヌクレオチド配
列を含むセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、ヌクレオチドのうちの１つまた
は複数は修飾される。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１２４２のヌクレオ
チド配列を含むアンチセンス鎖及び配列番号：１２４３のヌクレオチド配列を含むセンス
鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１２４４の
ヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖及び配列番号：１２４５のヌクレオチド配列を含
むセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１
２４６のヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖及び配列番号：１２４７のヌクレオチド
配列を含むセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列
番号：１２４８のヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖及び配列番号：１２４９のヌク
レオチド配列を含むセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤
は、配列番号：１２５０のヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖及び配列番号：１２５
１のヌクレオチド配列を含むセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ Ｒ
ＮＡｉ剤は、配列番号：１２５２のヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖及び配列番号
：１２５３のヌクレオチド配列を含むセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、Ｌ
ＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１２５４のヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖及び
配列番号：１２５５のヌクレオチド配列を含むセンス鎖を含む。いくつかの実施形態にお
いて、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１２８０のヌクレオチド配列を含むアンチセン
ス鎖及び配列番号：１２８４のヌクレオチド配列を含むセンス鎖を含む。いくつかの実施
形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１２８１のヌクレオチド配列を含むア
ンチセンス鎖及び配列番号：１２８５のヌクレオチド配列を含むセンス鎖を含む。いくつ
かの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１２８２のヌクレオチド配列
を含むアンチセンス鎖及び配列番号：１２５９のヌクレオチド配列を含むセンス鎖を含む
。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１２８３のヌクレオ
チド配列を含むアンチセンス鎖及び配列番号：１２４９のヌクレオチド配列を含むセンス
鎖を含む。いくつかの実施形態において、ヌクレオチドのうちの１つまたは複数は修飾さ
れる。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１５６、１６４また
は１８８のヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において
、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：３１０、３５７、３８４または３７６のヌクレオチ
ド配列を含むセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配
列番号：１５６／３１０、配列番号：１６４／３５７、配列番号：１８８／３８４、配列
番号：１６４／３７６、または配列番号：１６４／３８４のヌクレオチド配列を含むアン
チセンス鎖及びセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、ヌクレオチドのうちの１
つまたは複数は修飾される。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：６３７、７０９、７
９０、７８７または７８８のヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの
実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：１１３２、１１３５、１１８９、
１１９１または１１８６のヌクレオチド配列を含むセンス鎖を含む。いくつかの実施形態
において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：６３７／１１３２、配列番号：７０９／１
１３５、配列番号：７９０／１１８９、配列番号：７８７／１１９１、または配列番号：
７８８／１１８６のヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖及びセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：６３７、７０９、７
９０、７８７または７８８を含む。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は
、配列番号：１１３２、１１３５、１１８９、１１９１または１１８６を含む。いくつか
の実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：６３７／１１３２、配列番号：
７０９／１１３５、配列番号：７９０／１１８９、配列番号：７８７／１１９１、または
配列番号：７８８／１１８６を含む。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：６３７、７０９、７
９０、７８７または７８８からなる。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤
は、配列番号：１１３２、１１３５、１１８９、１１９１または１１８６からなる。いく
つかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、配列番号：６３７／１１３２、配列番
号：７０９／１１３５、配列番号：７９０／１１８９、配列番号：７８７／１１９１、ま
たは配列番号：７８８／１１８６からなる。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、表３Ａまたは３Ｂのアンチセン
ス鎖／センス鎖の二重鎖のうちの任意のもののヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖
及びセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、表３Ａまたは３Ｂのアンチセン
ス鎖／センス鎖の二重鎖のうちの任意のもののヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖
及びセンス鎖を含み、アシアロ糖タンパク質受容体リガンド標的基をさらに含む。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、表３Ａまたは３Ｂのアンチセン
ス鎖／センス鎖の二重鎖のうちの任意のもののヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖
及びセンス鎖を含み、（Ｃ１１－ＰＥＧ３－ＮＡＧ３）、（Ｃ１１－ＰＥＧ３－ＮＡＧ３
）、（Ｃ６－ＰＥＧ４－ＮＡＧ３）、（ＮＡＧ３）、（ＮＡＧ４）、（ＮＡＧ３－ＡＡ２
）、（ＮＡＧ３－Ｐａｌｍ）、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ２４）、（Ｎ
ＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２８）、（
ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ１３）、
（ＮＡＧ３１ｓ）、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３５）
、（ＮＡＧ３６）、及び（ＮＡＧ３７）からなる群から選択される標的基をさらに含む。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、表３Ａまたは３Ｂのアンチセン
ス鎖／センス鎖の二重鎖のうちの任意のものの修飾ヌクレオチド配列を有するアンチセン
ス鎖及びセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、表３Ａまたは３Ｂのアンチセン
ス鎖／センス鎖の二重鎖のうちの任意のものの修飾ヌクレオチド配列を有するアンチセン
ス鎖及びセンス鎖を含み、アシアロ糖タンパク質受容体リガンド標的基をさらに含む。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、表３Ａまたは３Ｂのアンチセン
ス鎖／センス鎖の二重鎖のうちの任意のものの修飾ヌクレオチド配列を有するアンチセン
ス鎖及びセンス鎖を含み、（Ｃ１１－ＰＥＧ３－ＮＡＧ３）、（Ｃ１１－ＰＥＧ３－ＮＡ
Ｇ３）、（Ｃ６－ＰＥＧ４－ＮＡＧ３）、（ＮＡＧ３）、（ＮＡＧ４）、（ＮＡＧ３－Ａ
Ａ２）、（ＮＡＧ３－Ｐａｌｍ）、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ２４）、
（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２８）
、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ１３
）、（ＮＡＧ３１ｓ）、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３
５）、（ＮＡＧ３６）、及び（ＮＡＧ３７）からなる群から選択される標的基をさらに含
む。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、表３Ａまたは３Ｂの二重鎖のう
ちの任意のものを含む。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、表３Ａまたは３Ｂの二重鎖のう
ちの任意のものからなる。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列ＡＤ０３４６
０、ＡＤ０３５３６、ＡＤ０３８５１、ＡＤ０３８５３、ＡＤ３８４７、またはＡＤ０４
１１０を有するアンチセンス鎖及びセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列ＡＤ０３４６
０、ＡＤ０３５３６、ＡＤ０３８５１、ＡＤ０３８５３、ＡＤ３８４７、またはＡＤ０４
１１０を有するアンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、アシアロ糖タンパク質受容体リガン
ド標的基をさらに含む。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列ＡＤ０３４６
０、ＡＤ０３５３６、ＡＤ０３８５１、ＡＤ０３８５３、ＡＤ３８４７、またはＡＤ０４
１１０を有するアンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、（Ｃ１１－ＰＥＧ３－ＮＡＧ３）、
（Ｃ１１－ＰＥＧ３－ＮＡＧ３）、（Ｃ６－ＰＥＧ４－ＮＡＧ３）、（ＮＡＧ３）、（Ｎ
ＡＧ４）、（ＮＡＧ３－ＡＡ２）、（ＮＡＧ３－Ｐａｌｍ）、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ
１８）、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡ
Ｇ２７）、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（Ｎ
ＡＧ３１）、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ３１ｓ）、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３３）、（
ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３６）、及び（ＮＡＧ３７）からなる群から選
択される標的基をさらに含む。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、修飾ヌクレオチド配列ＡＤ０３
４６０、ＡＤ０３５３６、ＡＤ０３８５１、ＡＤ０３８５３、ＡＤ３８４７、またはＡＤ
０４１１０を有するアンチセンス鎖及びセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、修飾ヌクレオチド配列ＡＤ０３
４６０、ＡＤ０３５３６、ＡＤ０３８５１、ＡＤ０３８５３、ＡＤ３８４７、またはＡＤ
０４１１０を有するアンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、アシアロ糖タンパク質受容体リ
ガンド標的基をさらに含む。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、修飾ヌクレオチド配列ＡＤ０３
４６０、ＡＤ０３５３６、ＡＤ０３８５１、ＡＤ０３８５３、ＡＤ３８４７、またはＡＤ
０４１１０を有するアンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、（Ｃ１１－ＰＥＧ３－ＮＡＧ３
）、（Ｃ１１－ＰＥＧ３－ＮＡＧ３）、（Ｃ６－ＰＥＧ４－ＮＡＧ３）、（ＮＡＧ３）、
（ＮＡＧ４）、（ＮＡＧ３－ＡＡ２）、（ＮＡＧ３－Ｐａｌｍ）、（ＮＡＧ１３）、（Ｎ
ＡＧ１８）、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（
ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、
（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ３１ｓ）、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３３）
、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３６）、及び（ＮＡＧ３７）からなる群か
ら選択される標的基をさらに含む。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ０３４６０、ＡＤ０３５３
６、ＡＤ０３８５１、ＡＤ０３８５３、ＡＤ３８４７、またはＡＤ０４１１０を含む。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ０３４６０、ＡＤ０３５３６、ＡＤ０３８５１、ＡＤ０３８５３、ＡＤ３８４７、またはＡＤ０４１１０からなる。
非ヌクレオチド基
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、１つまたは複数の非ヌクレオチ
ド基（標的基、連結基、送達ポリマー、または送達ベヒクルが含まれるがこれらに限定さ
れない）を含有するか、またはそれらへコンジュゲートされる。非ヌクレオチド基は、Ｒ
ＮＡｉ剤の標的化、送達または付加を促進することができる。標的基及び連結基の例を表
４中で提供する。非ヌクレオチド基は、センス鎖及び／またはアンチセンス鎖のいずれか
の３’末端及び／または５’末端へ共有結合で連結され得る。いくつかの実施形態におい
て、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、センス鎖の３’末端及び／または５’末端へ連結された非ヌ
クレオチド基を含有する。いくつかの実施形態において、非ヌクレオチド基は、ＬＰＡ
ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端へ連結される。非ヌクレオチド基は、リンカー／連結基
によってＲＮＡｉ剤へ直接的にまたは間接的に連結され得る。いくつかの実施形態におい
て、非ヌクレオチド基は、不安定であるか、切断可能であるか、または可逆的である結合
またはリンカーによってＲＮＡｉ剤へ連結される。
いくつかの実施形態において、非ヌクレオチド基は、それが付加されているＲＮＡｉ剤
またはコンジュゲートの薬物動態特性または生体内分布特性を促進して、コンジュゲート
の細胞特異的または組織特異的な分布及び細胞特異的な取込みを改善する。いくつかの実
施形態において、非ヌクレオチド基は、ＲＮＡｉ剤のエンドサイトーシスを促進する。
標的基
標的基は、一価、二価、三価、四価、またはより高い原子価を有する。代表的な標的基
には、細胞表面分子への親和性を備えた化合物、細胞受容体リガンド、ハプテン、抗体、
モノクローナル抗体、抗体断片、及び細胞表面分子への親和性を備えた抗体模倣体が、限
定されずに含まれる。いくつかの実施形態において、標的基は、リンカー（ＰＥＧリンカ
ー等）または１、２もしくは３の脱塩基基及び／もしくはリビトール基を使用して、ＲＮ
Ａｉ剤へ連結される。いくつかの実施形態において、標的基はガラクトースクラスターを
含む。
本明細書において記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、５’末端での反応基（アミン基等
）を有して合成され得る。反応基は、続いて当技術分野において典型的な方法を使用して
標的部分を付加するために使用され得る。
いくつかの実施形態において、標的基はアシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む。
いくつかの実施形態において、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、１つまたは複数
のガラクトース誘導体またはガラクトースクラスターを含むかまたはそれらからなる。本
明細書において使用される時、ガラクトース誘導体という用語には、ガラクトース、及び
ガラクトースの親和性以上のアシアロ糖タンパク質受容体についての親和性を有するガラ
クトースの誘導体の両方が含まれる。ガラクトース誘導体には、ガラクトース、ガラクト
サミン、Ｎ－ホルミルガラクトサミン、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン、Ｎ－プロピオニ
ル－ガラクトサミン、Ｎ－ｎ－ブタノイル－ガラクトサミン、及びＮ－イソ－ブタノイル
ガラクトス－アミンが含まれるがこれらに限定されない（例えばＩｏｂｓｔ，Ｓ．Ｔ．ａ
ｎｄ Ｄｒｉｃｋａｍｅｒ，Ｋ．Ｊ．Ｂ．Ｃ．１９９６，２７１，６６８６を参照）。オ
リゴヌクレオチド及び他の分子の肝臓へのインビボの標的化のために有用なガラクトース
誘導体及びガラクトースクラスターは、当技術分野において公知である（例えばＢａｅｎ
ｚｉｇｅｒ ａｎｄ Ｆｉｅｔｅ，１９８０，Ｃｅｌｌ，２２，６１１－６２０；Ｃｏｎ
ｎｏｌｌｙ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５７，９３９－９
４５を参照）。ガラクトース誘導体を使用して、それらが肝細胞の表面上で発現されたア
シアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰｒ）へ結合することを介して、分子を肝細胞へイン
ビボで標的化してきた。ＡＳＧＰｒ（複数可）へのＡＳＧＰｒリガンドの結合は、肝細胞
への細胞特異的標的化、及び肝細胞の中への分子のエンドサイトーシスを促進する。ガラ
クトースクラスターは、当技術分野において公知の方法を使用して、ＲＮＡｉポリヌクレ
オチドの３’末端または５’末端へ付加され得る。
本明細書において使用される時、ガラクトースクラスターは、２～４の端部のガラクト
ース誘導体を有する分子を含む。端部のガラクトース誘導体は、そのＣ－１炭素を介して
分子へ付加される。いくつかの実施形態において、ガラクトースクラスターは、ガラクト
ース誘導体三量体、三分枝ガラクトース誘導体、または三価ガラクトース誘導体である。
いくつかの実施形態において、ガラクトースクラスターは、Ｎ－アセチルガラクトサミン
（ＧａｌＮＡｃ）を含む。いくつかの実施形態において、ガラクトースクラスターは三価
Ｎ－アセチル－ガラクトサミンを含む。いくつかの実施形態において、ガラクトースクラ
スターは、ガラクトース誘導体四量体、四分枝ガラクトース誘導体、または四価ガラクト
ース誘導体である。いくつかの実施形態において、ガラクトースクラスターは四価Ｎ‐ア
セチル－ガラクトサミンを含む。
本明細書において使用される時、ガラクトース三量体は３つのガラクトース誘導体を含
有し、各々は中央の分岐点へ連結される。本明細書において使用される時、ガラクトース
誘導体四量体は４つのガラクトース誘導体を含有し、各々は中央の分岐点へ連結される。
ガラクトース誘導体は、サッカライドのＣ－１炭素を介して中央の分岐点へ付加され得る
。いくつかの実施形態において、ガラクトース誘導体はリンカーまたはスペーサーによっ
て分岐点へ連結される。いくつかの実施形態において、リンカーまたはスペーサーは柔軟
な親水性スペーサー（ＰＥＧ基等）である（例えば米国特許第５８８５９６８号；Ｂｉｅ
ｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９５ Ｖｏｌ．３９ ｐ．１５３８
－１５４６を参照）。いくつかの実施形態において、ＰＥＧスペーサーはＰＥＧ３スペー
サーである。分岐点は３つのガラクトース誘導体の付加を許容し、ＲＮＡｉ剤への分岐点
の付加をさらに許容する任意の小分子であり得る。分岐点基の例は、ジ－リジンまたはジ
－グルタメートである。ＲＮＡｉ剤への分岐点の付加は、リンカーまたはスペーサーを介
して起こり得る。いくつかの実施形態において、リンカーまたはスペーサーは、柔軟な親
水性スペーサー（ＰＥＧスペーサー等であるがこれに限定されない）を含む。いくつかの
実施形態において、ＰＥＧスペーサーは、ＰＥＧ３スペーサー（３つのエチレン単位）で
ある。他の実施形態において、ＰＥＧスペーサーは１～２０のエチレン単位（ＰＥＧ１～
ＰＥＧ２０）を有する。いくつかの実施形態において、ガラクトース誘導体はＮ－アセチ
ルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃまたはＮＡＧ）を含む。いくつかの実施形態において、
ガラクトースクラスターはガラクトース誘導体四量体から構成され、それは例えばＮ－ア
セチル－ガラクトサミン四量体であり得る。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を肝細胞へインビボで送達するため
の医薬組成物が記載される。かかる医薬組成物は、例えば、ガラクトースクラスターへコ
ンジュゲートされるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を含み得る。いくつかの実施形態において、ガラ
クトースクラスターは、ガラクトース誘導体三量体（それは例えばＮ－アセチル－ガラク
トサミン三量体であり得る）、またはガラクトース誘導体四量体（それは例えばＮ－アセ
チル－ガラクトサミン四量体であり得る）から構成される。標的基には、（Ｃｈｏｌ－Ｔ
ＥＧ）、（ＴＥＧ－Ｃｈｏｌ）、（Ｃ１１－ＰＥＧ３－ＮＡＧ３）、（Ｃｍ－ＰＥＧｎ－
ＮＡＧ３）、（Ｃｘ－ＰＥＧｚ－ＮＡＧ３）、（ＮＡＧ３）、（ＮＡＧ４）、（ＮＡＧ３
－ＡＡ２）、（ＮＡＧ３－Ｐａｌｍ）、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ２４
）、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２
８）、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ
１３）、（ＮＡＧ３１ｓ）、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡ
Ｇ３５）、（ＮＡＧ３６）、及び（ＮＡＧ３７）が含まれるがこれらに限定されない。
連結基
いくつかの実施形態において、連結基はＲＮＡｉ剤へコンジュゲートされる。連結基は
、標的基または送達ポリマーまたは送達ベヒクルへの薬剤の共有結合を促進する。連結基
は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖またはアンチセンス鎖の３’末端または５’末端へ連結され得
る。いくつかの実施形態において、連結基はＲＮＡｉ剤センス鎖へ連結される。いくつか
の実施形態において、連結基は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端または３’末端へコン
ジュゲートされる。いくつかの実施形態において、連結基は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５
’末端へコンジュゲートされる。連結基の例には、Ａｌｋ－ＳＭＰＴ－Ｃ６、Ａｌｋ－Ｓ
Ｓ－Ｃ６、ＤＢＣＯ－ＴＥＧ、Ｍｅ－Ａｌｋ－ＳＳ－Ｃ６、及びＣ６－ＳＳ－Ａｌｋ－Ｍ
ｅ、反応基（第一級アミン及びアルキン等）、アルキル基、脱塩基リボース、リビトール
、及び／またはＰＥＧ基が含まれるがこれらに限定されない。
リンカーまたは連結基は、対象となる１つの化学基（ＲＮＡｉ剤等）またはセグメント
を、１つまたは複数の共有結合によって対象となる別の化学基（標的基または送達ポリマ
ー等）またはセグメントへ連結する、２つの原子の間の接続である。不安定なリンケージ
は不安定な結合を含有する。リンケージは、２つの繋がれた原子の間の距離を増加させる
スペーサーを随意で含み得る。スペーサーは、柔軟性及び／または長さをリンケージへさ
らに加え得る。スペーサーには、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基
、アラルキル基、アラルケニル基、及びアラルキニル基が含まれ得るがこれらに限定され
ず；その各々は、１つまたは複数のヘテロ原子、ヘテロ環、アミノ酸、ヌクレオチド、及
びサッカライドを含有することができる。スペーサー基は当技術分野において周知であり
、先行するリストは、記載の範囲を限定することを意味しない。
連結基には、アルキル、ＰＥＧ、（Ｃ６－ＰＥＧｎ－Ａｌｋ）、（Ｃｎ－ＳＭＰＴ－Ａ
ｌｋ）、及び（Ｃｎ－ＳＳ－Ａｌｋ－Ｍｅ）が含まれるがこれらに限定されない。
３’もしくは５’の標的基もしくは連結基を含有する表２Ａ及び２Ｂ中でリストされる
ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のうちの任意のものは、あるいは、３’もしくは５’の標的基もしく
は連結基を含有しないか、または表４中で図示されるものが含まれるがこれらに限定され
ない異なる３’または５’の標的基もしくは連結基を含有し得る。表１、２Ａ及び２Ｂ中
でリストされるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のヌクレオチド配列のうちの任意のものは、修飾また
は非修飾にかかわらず、表４中で図示されるものが含まれるがこれらに限定されない３’
または５’の標的基または連結基を含有し得る。表３Ａ及び３Ｂ中でリストされるＬＰＡ
ＲＮＡｉ剤の二重鎖のうちの任意のものは、修飾または非修飾にかかわらず、表４中で
図示されるものが含まれるがこれらに限定されない標的基または連結基をさらに含み、標
的基または連結基は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の二重鎖のセンス鎖またはアンチセンス鎖のい
ずれかの３’または５’末端へ付加され得る。
Figure 2022113835000077
Figure 2022113835000078
Figure 2022113835000079
Figure 2022113835000080
Figure 2022113835000081
Figure 2022113835000082
Figure 2022113835000083
Figure 2022113835000084
Figure 2022113835000085
Figure 2022113835000086
Figure 2022113835000087
上記の構造の各々において、ＮＡＧは、Ｎ－アセチル－ガラクトサミンまたは別のＡＳ
ＧＰＲリガンドを含む。各々の（ＮＡＧｘ）は、リン酸基（（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ３
０）、及び（ＮＡＧ３１）でのように）、またはホスホロチオエート基（（ＮＡＧ２５）
ｓ、（ＮＡＧ３０）ｓ、及び（ＮＡＧ３１）ｓでのように）、または別の連結基によって
、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤へ付加され得る。あるいは、当技術分野において公知の他の連結基
が使用され得る。
Figure 2022113835000088
送達ベヒクル
いくつかの実施形態において、送達ベヒクルを使用して、ＲＮＡｉ剤を細胞または組織
へ送達することができる。送達ベヒクルは、細胞または組織へのＲＮＡｉ剤の送達を改善
する化合物である。送達ベヒクルは、ポリマー（両親媒性ポリマー等）、膜活性ポリマー
、ペプチド、メリチンペプチド、メリチン様ペプチド（ＭＬＰ）、脂質、可逆的に修飾さ
れたポリマーもしくはペプチド、または可逆的に修飾された膜活性ポリアミンを含むかま
たはそれらからなるがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、脂質、ナノ粒子、ポリマー、リポソーム
、ミセル、ＤＰＣまたは当技術分野において利用可能な他の送達系と組み合わせることが
できる。ＲＮＡｉ剤は、標的基、脂質（コレステロール及びコレステリルの誘導体が含ま
れるがこれらに限定されない）、ナノ粒子、ポリマー、リポソーム、ミセル、ＤＰＣ（例
えばＷＯ２０００／０５３７２２、ＷＯ２００８／００２２３０９、ＷＯ２０１１／１０
４１６９、及びＷＯ２０１２／０８３１８５、ＷＯ２０１３／０３２８２９、ＷＯ２０１
３／１５８１４１を参照、その各々は参照により本明細書に援用される）、または当技術
分野において利用可能な他の送達系へ化学的にコンジュゲートすることもできる。
医薬組成物
哺乳動物においてＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を肝細胞へインビボで送達する方法が本明細書に
おいて記載される。いくつかの実施形態において、送達ベヒクルが使用され得る。送達ベ
ヒクルは、ＲＮＡｉ剤の細胞への送達を改善する化合物である。送達ベヒクルは、ポリマ
ー（両親媒性ポリマー等）、膜活性ポリマー、ペプチド（メリチンまたはメリチン様ペプ
チド等）、可逆的に修飾されたポリマーもしくはペプチド、または脂質であり得るがこれ
らに限定されない。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、アシアロ糖タ
ンパク質リガンドを含む標的リガンドへ連結される。いくつかの実施形態において、ＬＰ
Ａ ＲＮＡｉ剤は、ガラクトースクラスターを含むかまたはそれらからなる標的リガンド
へ連結される。
ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を使用して、例えば被験体中の細胞、細胞群または組織におけるＬ
ＰＡの発現を阻害することができる。いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤
を使用して、被験体へ投与するための組成物（すなわち医薬組成物または医薬品）を製剤
化する。本明細書において使用される時、医薬組成物または医薬品は、薬理学的有効量の
記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のうちの少なくとも１つ、及び１つまたは複数の薬学的に
許容される賦形剤を含む。薬学的に許容される賦形剤（賦形剤）は、安全性について適切
に評価され、薬物送達系中に意図的に含まれる医薬品活性成分（ＡＰＩ、治療用産物、例
えばＬＰＡ ＲＮＡｉ剤）以外の物質である。賦形剤は、意図された投薬量で治療的効果
を発揮しないかまたは発揮することが意図されない。賦形剤は、ａ）製造の間の薬物送達
系のプロセシングを支援する、ｂ）ＡＰＩの安定性、バイオアベイラビリティーもしくは
患者許容性を保護、支援もしくは促進する、ｃ）製品同定を支援する、及び／またはｄ）
貯蔵もしくは使用の間のＡＰＩの送達の全体的な安全性、有効性の任意の他の属性を促進
する、ように作用し得る。薬学的に許容される賦形剤は、不活性物質であってもまたはそ
うでなくてもよい。
賦形剤には、吸収促進剤、接着阻害剤、消泡剤、酸化防止剤、結合剤、バッファー剤、担体、コーティング剤、着色料、送達促進剤、送達ポリマー、デキストラン、デキストロース、希釈液、崩壊剤、乳化剤、増量剤、充填剤、香料、流動促進剤、保湿剤、滑沢剤、油、ポリマー、防腐剤、食塩水、塩、溶媒、糖、懸濁化剤、持続放出マトリックス、甘味料、増粘剤、等張化剤、ベヒクル、撥水剤、及び湿潤剤が含まれるがこれらに限定されない。
医薬組成物は、医薬組成物中で一般的に見出される他の追加の構成要素を含有し得る。
かかる追加の構成要素には、止痒剤、収斂剤、局部麻酔剤、または抗炎症剤（例えば抗ヒ
スタミン剤、ジフェンヒドラミンなど）が含まれるがこれらに限定されない。本明細書に
おいて定義されるＲＮＡｉ剤を発現または含む細胞、組織または単離された器官が、「医
薬組成物」として使用され得ることも想定される。本明細書において使用される時、「薬
理学的有効量」、「治療有効量」、または単純に「有効量」は、意図される薬理学的、治
療的または予防的な結果を生ずるＲＮＡｉ剤のその量を指す。
いくつかの実施形態において、記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は、第２のＬＰＡ ＲＮ
Ａｉ剤もしくは他のＲＮＡｉ剤、小分子薬物、抗体、抗体断片、及び／またはワクチンが
含まれるがこれらに限定されない、１つまたは複数の追加の治療剤または治療と、組み合
わせられる。追加の治療剤の例には、ＨＭｇ Ｃｏ－Ａリダクターゼ阻害剤（スタチン）
、エゼチミブ、ＰＣＳＫ－９阻害剤、ＣＴＥＰ阻害剤、療法標的化ＡＮＧＰＴＬ３、療法
標的化ＡＰＯＣ３、及びナイアシンが含まれるがこれらに限定されない。
記載されるＲＮＡｉ剤及び本明細書において開示されるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を含む医薬
組成物は、キット、容器、パック、またはディスペンサー中にパッケージングされるかま
たは含まれ得る。ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤及び前記ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物は、
充填済みシリンジまたはバイアル中にパッケージングされ得る。
いくつかの実施形態において、記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のうちの少なくとも１つ
を含む医薬組成物が企図される。これらの医薬組成物は、細胞、組織または生物体におけ
るＬＰＡ遺伝子の発現の阻害において有用である。いくつかの実施形態において、記載さ
れる医薬組成物を使用して、ＬＰＡ発現の低減または阻害から利益を得る疾患、病態また
は障害を有する被験体を治療する。いくつかの実施形態において、記載される医薬組成物
を使用して、ＬＰＡ発現の低減または阻害から利益を得る疾患、病態または障害を発症す
るリスクがある被験体を治療する。ＬＰＡ発現の低減または阻害から利益を得る疾患、病
態または障害は、ベルガー病、末梢動脈疾患、冠動脈疾患、メタボリック症候群、急性冠
症候群、大動脈弁狭窄症、大動脈弁閉鎖不全症、大動脈解離、網膜動脈閉塞症、脳血管疾
患、腸間膜虚血症、上腸間膜動脈閉塞症、腎動脈狭窄症、安定狭心症／不安定狭心症、急
性冠症候群、ヘテロ接合またはホモ接合の家族性高コレステロール血症、高アポβリポタ
ンパク血症、アテローム性脳動脈硬化症、脳血管疾患、及び静脈血栓症が含まれるがこれ
らに限定されない。いくつかの実施形態において、被験体は、ヒト患者が含まれるがこれ
らに限定されない哺乳動物である。
本明細書において記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のうちの少なくとも１つを含む細胞、
組織及び非ヒト生物体が企図される。これらの細胞、組織または非ヒト生物体は、当技術
分野において利用可能な任意の手段による細胞、組織または非ヒト生物体へのＲＮＡｉ剤
の送達によって、作製される。いくつかの実施形態において、細胞は、ヒト細胞が含まれ
るがこれらに限定されない哺乳類細胞である。細胞、組織または非ヒト生物体は、研究の
ために、または研究ツール（例えば薬物試験または診断）として有用である。
治療の方法
いくつかの実施形態において、本明細書において記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を使用
して、ＬＰＡ発現の低減または阻害から利益を得る、疾患、病態もしくは障害を有するか
、または疾患、病態もしくは障害を有するリスクがある、被験体を治療する。ＬＰＡ遺伝
子発現の低減及び／または阻害から利益を得る被験体の治療には、治療法及び／または予
防のための治療が含まれる。疾患、病態または障害の例には、ベルガー病、末梢動脈疾患
、冠動脈疾患、メタボリック症候群、急性冠症候群、大動脈弁狭窄症、大動脈弁閉鎖不全
症、大動脈解離、網膜動脈閉塞症、脳血管疾患、腸間膜虚血症、上腸間膜動脈閉塞症、腎
動脈狭窄症、安定狭心症／不安定狭心症、急性冠症候群、ヘテロ接合またはホモ接合の家
族性高コレステロール血症、高アポβリポタンパク血症、アテローム性脳動脈硬化症、脳
血管疾患、及び静脈血栓症が含まれるるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態に
おいて、方法は、本明細書において記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を含む組成物（医薬組
成物等）を治療される哺乳動物へ投与することを含む。
いくつかの実施形態において、記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のうちの１つまたは複数
の治療有効量は、被験体へ投与され、それによって被験体におけるＬＰＡの発現を阻害す
る（例えば被験体におけるＬＰＡの発現の阻害の有効量）。いくつかの実施形態において
、本明細書において記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のうちの１つまたは複数を使用してＬ
ＰＡ発現の低減または阻害から利益を得る疾患または障害を有する被験体を治療する。い
くつかの実施形態において、記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を使用して、ＬＰＡ発現の低
減または阻害から利益を得る疾患または障害を有する被験体における少なくとも１つ症状
を治療または予防する。被験体は、治療有効量の記載されるＲＮＡｉ剤のうちの任意の１
つまたは複数を投与され、それによって症状を治療する。いくつかの実施形態において、
被験体は、予防有効量の記載されるＲＮＡｉ剤のうちの任意の１つまたは複数を投与され
、それによって少なくとも１つの症状を予防する。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を使用して臨床所見を治療または管
理し、そこで、かかる治療、予防または管理を必要とする被験体は、治療有効量または予
防有効量のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤またはＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を含有する本明細書において記
載される組成物のうちの１つまたは複数を投与される。いくつかの実施形態において、方
法は、本明細書において記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を含む組成物を治療される哺乳動
物へ投与することを含む。
いくつかの実施形態において、方法は、第２の治療剤または治療を投与するステップを
さらに含む。いくつかの実施形態において、第２の治療剤は、他のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤（
例えばＬＰＡ標的内の異なる配列を標的とするＬＰＡ ＲＮＡｉ剤）である。他の実施形
態において、第２の治療剤は、小分子薬物、抗体、抗体断片、及びワクチンを含む群から
選択され得る。
投与経路とは、ＲＮＡｉ剤が身体と接触させられる通路である。一般に、被験体の治療
のための薬物及び核酸を投与する方法は当技術分野において周知であり、本明細書におい
て記載される組成物の投与へ適用することができる。本明細書において記載される化合物
は、特定の経路に適切にあつらえた調製物において任意の好適な経路によって投与され得
る。したがって、本明細書において記載される化合物は、注射によって、例えば静脈内、
筋肉内、皮内、皮下、または腹腔内に投与され得る。
いくつかの実施形態において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤または本明細書において記載される
組成物は、当技術分野において公知のオリゴヌクレオチド送達技術を使用して、細胞、細
胞群、組織、または被験体へ送達され得る。一般に、核酸分子の送達（インビトロまたは
インビボ）のために当技術分野において認識される任意の好適な方法は、本明細書におい
て記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤による使用に適合させることができる。例えば、送達は
、局部投与（例えば直接噴射、インプランテーション、または局所投与）、全身投与、ま
たは皮下経路、静脈内経路、経口経路、腹腔内経路もしくは非経口経路（頭蓋内（例えば
脳室内、実質内及び髄腔内）投与、筋肉内投与、経皮投与、気道（エアロゾル）投与、経
鼻投与、直腸投与、局所（頬腔及び舌下が含まれる）投与が含まれる）によることができ
る。ある特定の実施形態において、組成物は、皮下または静脈内の点滴または注射によっ
て投与される。
いくつかの実施形態において、ＲＮＡｉ剤は、脂質、ナノ粒子、ポリマー、リポソーム
、ミセル、ＤＰＣまたは当技術分野において利用可能な他の送達系と組み合わせることが
できる。ＲＮＡｉ剤は、標的基、脂質（コレステロール及びコレステリルの誘導体が含ま
れるがこれらに限定されない）、ナノ粒子、ポリマー、リポソーム、ミセル、ＤＰＣ（例
えばＷＯ２０００／０５３７２２、ＷＯ２００８／００２２３０９、ＷＯ２０１１／１０
４１６９、及びＷＯ２０１２／０８３１８５を参照、その各々は参照により本明細書に援
用される）、または当技術分野において利用可能な他の送達系へ化学的にコンジュゲート
することもできる。ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤は送達ポリマーへコンジュゲートされ得る。いく
つかの実施形態において、送達ポリマーは、可逆的にマスク／修飾された両親媒性膜活性
ポリアミンである。
発現の阻害
本明細書において使用される時、「サイレンシングさせる」、「低減する」、「阻害す
る」、「ダウンレギュレートする」、または「遺伝子発現をノックダウンする」という用
語は、ＬＰＡ遺伝子を指す場合に、遺伝子から転写されるＲＮＡのレベル、またはＬＰＡ
遺伝子が転写される細胞、細胞群もしくは組織中のｍＲＮＡから翻訳されるポリペプチド
、タンパク質もしくはタンパク質サブユニットのレベルによって測定されるように、細胞
、細胞群または組織が記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤による治療される場合に、そのよう
に治療されたかもしくは治療されていない第２の細胞、細胞群もしくは組織と比較して、
またはＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の投与の前の同じ細胞、細胞群もしくは組織と比較して、遺伝
子の発現が低減することを意味する。
いくつかの実施形態において、記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤が投与される被験体にお
けるＬＰＡの遺伝子発現レベル及び／またはｍＲＮＡのレベルは、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を
投与される前の被験体またはＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を投与されない被験体と比べて、少なく
とも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０
％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または
９８％低減される。被験体における遺伝子発現レベル及び／またはｍＲＮＡのレベルは、
被験体の細胞、細胞群及び／または組織中で低減され得る。いくつかの実施形態において
、記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤が投与された被験体におけるＬＰＡのタンパク質レベル
は、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を投与される前の被験体またはＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を投与されな
い被験体と比べて、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５
％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５
％、９０％、９５％または９８％低減される。被験体におけるタンパク質レベルは、被験
体の細胞、細胞群、組織、血液及び／または他の体液中で低減され得る。遺伝子発現、ｍ
ＲＮＡまたはタンパク質レベルの低減は当技術分野において公知の任意の方法によって査
定され得る。ＬＰＡ ｍＲＮＡレベル及び／またはタンパク質レベルの低減または減少は
、まとめてＬＰＡの低減もしくは減少またはＬＰＡの発現の阻害もしくは低減と本明細書
において称される。
ＲＮＡｉ剤を指す場合に、細胞の中への導入は、ＲＮＡｉ剤を細胞の中へ機能的に送達
することを意味する。機能的送達によって、ＲＮＡｉ剤が細胞へ送達され、予想される生
物学的活性（例えば遺伝子発現の配列特異的阻害）を有することが意味される。
細胞及び組織ならびに非ヒト生物体
本明細書において記載されるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のうちの少なくとも１つを含む細胞、
組織及び非ヒト生物体が企図される。これらの細胞、組織または非ヒト生物体は、細胞、
組織または非ヒト生物体へのＲＮＡｉ剤の送達によって作製される。
上で提供される実施形態及び項目は、ここで以下の非限定的実施例で説明される。
実施例１。ＲＮＡｉ剤の合成。
Ａ）合成。オリゴヌクレオチド合成において使用される固相上のホスホロアミダイト技
術に従って、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を合成した。スケールに依存して、ＭｅｒＭａｄｅ９６
Ｅ（Ｂｉｏａｕｔｏｍａｔｉｏｎ）またはＭｅｒＭａｄｅ１２（Ｂｉｏａｕｔｏｍａｔｉ
ｏｎ）のいずれかを使用した。制御された孔径のガラスでできている固体支持体（ＣＰＧ
、５００Åまたは６００Å、Ｐｒｉｍｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ａｓｔｏｎ、ＰＡ、米国
から得られた）上で、合成を遂行した。すべてのＤＮＡ、２’－修飾ＲＮＡ、及びＵＮＡ
ホスホロアミダイトを、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｍｉｌｗ
ａｕｋｅｅ、ＷＩ、米国）から購入した。具体的には、以下の２’－Ｏ－メチルホスホロ
アミダイトを使用した。（５’－Ｏ－ジメトキシトリチル－Ｎ６－（ベンゾイル）－２’
－Ｏ－メチル－アデノシン－３’－Ｏ－（２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ－ジイソプロピイ－
ラミノ（ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙ－ｌａｍｉｎｏ））ホスホロアミダイト、５’－Ｏ－ジメ
トキシ－トリチル－Ｎ４－（アセチル）－２’－Ｏ－メチル－シチジン－３’－Ｏ－（２
－シアノエチル－Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル－アミノ）ホスホロアミダイト、（５’－Ｏ－
ジメトキシトリチル－Ｎ２－（イソブチリル）－２’－Ｏ－メチル－グアノシン－３’－
Ｏ－（２－シアノ－エチル－Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルアミノ）ホスホロアミダイト、及び
５’－Ｏ－ジメトキシ－トリチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン－３’－Ｏ－（２－シア
ノエチル－Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルアミノ）ホスホロアミダイト。２’－デオキシ－２’
－フルオロ－ホスホル－アミダイトは、２’－Ｏ－メチルＲＮＡアミダイトと同じ保護基
を保有していた。以下のＵＮＡホスホロアミダイトを使用した。５’－（４，４’－ジメ
トキシトリチル）－Ｎ－ベンゾイル－２’，３’－セコ－アデノシン、２’－ベンゾイル
－３’－［（２－シアノエチル）－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル）］－ホスホロ－アミダイ
ト、５’－（４，４’－ジメトキシトリチル）－Ｎ－アセチル－２’，３’－セコ－シト
シン、２’－ベンゾイル－３’－［（２－シアノエチル）－（Ｎ，Ｎ－ジイソ－プロピル
）］－ホスホロアミダイト、５’－（４，４’－ジメトキシトリチル）－Ｎ－イソブチリ
ル－２’，３’－セコ－グアノシン、２’－ベンゾイル－３’－［（２－シアノエチル）
－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル）］－ホスホロアミダイト、及び５’－（４，４’－ジメト
キシ－トリチル）－２’，３’－セコ－ウリジン，２’－ベンゾイル－３’－［（２－シ
アノエチル）－（Ｎ，Ｎ－ジイソ－プロピル）］－ホスホロアミダイト。すべてのアミダ
イトを無水アセトニトリル（５０ｍＭ）中で溶解し、分子篩（３Å）を添加した。オリゴ
マーの５’末端にＴＥＧ－コレステロールを導入するために、Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃ
ｈ（Ｓｔｅｒｌｉｎｇ、ＶＡ、米国）からの１－ジメトキシトリチルオキシ－３－Ｏ－（
Ｎ－コレステリル－３－アミノプロピル）－トリエチレングリコール－グルセリル－２－
Ｏ－（２－シアノエチル）－（Ｎ，Ｎ，－ジイソプロピル）－ホスホロアミダイトを用い
た。５’－修飾を合成サイクルの修飾なしに導入した。５－ベンジルチオ－１Ｈ－テトラ
ゾール（ＢＴＴ、アセトニトリル中で２５０ｍＭ）を活性化剤溶液として使用した。カッ
プリング時間は、１０分（ＲＮＡ）、１８０秒（コレステロール）、９０秒（２’ＯＭｅ
及びＵＮＡ）、及び６０秒（２’Ｆ及びＤＮＡ）であった。ホスホロチオエートリンケー
ジを導入するために、無水アセトニトリル中で３－フェニル１，２，４－ジチアゾリン－
５－オン（ＰＯＳ、ＰｏｌｙＯｒｇ，Ｉｎｃ．、Ｌｅｏｍｉｎｓｔｅｒ、ＭＡ、米国から
得られた）の１００ｍＭ溶液を用いた。具体的な配列については、表１、２Ａ及び２Ｂを
参照されたい。
Ｂ．支持体結合オリゴマーの切断及び脱保護。固相合成の最終化後に、乾燥した固体支
持体を、水中の４０重量％のメチルアミン及び２８％の水酸化アンモニウム溶液（Ａｌｄ
ｒｉｃｈ）の１：１体積溶液により、３０℃で２時間処理した。溶液を蒸発させ、固形残
留物を水中で再構成した（以下を参照）。
Ｃ．精製。粗製コレステロールを含有するオリゴマーを、Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇ
ｅ ＢＥＨ３００ Ｃ４ ５ｕ分取カラム及びＳｈｉｍａｄｚｕ ＬＣ－８システムを使
用する逆相ＨＰＬＣによって精製した。バッファーＡは１００ｍＭのＴＥＡＡ（ｐＨ７．
５）であり５％のアセトニトリルを含有し、バッファーＢは１００ｍＭのＴＥＡＡであり
９５％のアセトニトリルを含有していた。２６０ｎｍの紫外線トレースを記録した。次い
で、１００ｍＭの重炭酸アンモニウム（ｐＨ６．７）及び２０％のアセトニトリルのラン
ニングバッファーによりセファデックスＧ－２５ミディアムをパックしたＧＥ Ｈｅａｌ
ｔｈｃａｒｅ ＸＫ １６／４０カラムを使用するサイズ排除ＨＰＬＣ上で、適切な画分
を実行した。他の粗製オリゴマーを、ＴＫＳｇｅｌ ＳｕｐｅｒＱ－５ＰＷ １３ｕカラ
ム及びＳｈｉｍａｄｚｕ ＬＣ－８システムを使用する陰イオン交換ＨＰＬＣによって精
製した。バッファーＡは２０ｍＭのトリス、５ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ９．０）であり２０
％のアセトニトリルを含有し、バッファーＢはバッファーＡと同じものに１．５Ｍの塩化
ナトリウムを添加した。２６０ｎｍの紫外線トレースを記録した。適切な画分をプールし
、次いで、オリゴマーを含有するコレステロールについて、記載されるようにサイズ排除
ＨＰＬＣ上で実行した。
Ｄ．アニーリング。０．２×ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水、１×、Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｃｅ
ｌｌｇｒｏ）中の等モル溶液（センス及びアンチセンス）を組み合わせることによって、
相補鎖を混合して、ＲＮＡｉ剤を形成した。この溶液を７０℃のサーモミキサーの中へ置
き、９５℃へ加熱し、９５℃で５分間保持し、室温へ徐冷した。いくらかのＲＮＡｉ剤を
凍結乾燥し、－１５～－２５℃で保存した。０．２×ＰＢＳ中で紫外線－可視光線分光計
上での溶液吸光度を測定することによって、二重鎖濃度を決定した。次いで、２６０ｎｍ
での溶液吸光度に変換係数及び希釈係数を掛けて、二重鎖濃度を決定した。特別の指示の
無い限り、すべての変換係数は０．０３７ｍｇ／（ｍＬ・ｃｍ）であった。いくつかの実
験について、変換係数は実験的に決定した吸光係数から計算した。
実施例２。ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のインビトロの一次分析。インシリコの分析によって、
ヒトと非ヒト霊長動物で交差反応性があると同定される候補配列をスクリーニングした。
１０８のインシリコで同定された可能性のあるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を合成し、３つの群に
おいてインビトロの有効性についてスクリーニングした。スクリーニングの目的のために
、ヒトＬＰＡ ｃＤＮＡ配列（アクセッション番号ＮＭ＿００５５７７．１）を、商業的
に入手可能な哺乳類発現ベクター（Ｏｒｉｇｅｎｅ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）から、
商業的に入手可能なレポーターベースのスクリーニングプラスミド、ｐｓｉＣＨＥＣＫ２
（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）の中へサブクローニングし、それによりＲｅ
ｎｉｌｌａ属ルシフェラーゼ／ＬＰＡ融合ｍＲＮＡが生成された。ヒトバックグラウンド
におけるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の有効性のために、Ｈｅｐ３Ｂ細胞（ヒト肝細胞癌株）を、
９６ウェルフォーマット中に１ウェルあたり約１０，０００細胞でプレーティングした。
１０８のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の各々を、１ウェルあたり５０～１００ｎｇのＬＰＡ－ｐｓ
ｉＣＨＥＣＫ２プラスミドＤＮＡ及び１ウェルあたり０．２μＬのＬｉｐｏＦｅｃｔａｍ
ｉｎｅ ２０００と共に、２つまたは３つの濃度（１ｎＭ及び０．１ｎＭ、または０．０
２ｎＭ、０．２ｎＭ及び２ｎＭ）で共トランスフェクションした。Ｄｕａｌ Ｌｕｃｉｆ
ｅｒａｓｅ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）
を使用して、構成的に発現するホタルルシフェラーゼ（これもｐｓｉＣＨＥＣＫ２プラス
ミド上に存在する）のレベルへ正規化したＲｅｎｉｌｌａ属ルシフェラーゼレベルの測定
によって、遺伝子ノックダウンを決定した（表５Ａ及び５Ｂ）。
Figure 2022113835000089
Figure 2022113835000090
Figure 2022113835000091
Figure 2022113835000092
Figure 2022113835000093
Figure 2022113835000094
Figure 2022113835000095
Figure 2022113835000096
Figure 2022113835000097
実施例３。ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のＥＣ５０の決定。同じ細胞及びトランスフェクション
条件を使用して、１５０ｆＭ～３ｎＭの範囲のＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の濃度で、１０ポイン
トのＥＣ５０曲線を生成した。ＥＣ５０をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを
使用して決定した（表６）。
Figure 2022113835000098
実施例４。構造活性相関（ＳＡＲ）によりデザインされたＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のインビ
トロの分析。ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のＳＡＲセット（ＡＤ０１５３２に基づく３６４の配列
及びＡＤ０１５３３に基づく３５１の配列）を合成し、有効性についてインビトロでスク
リーニングした。スクリーニングの目的のために、２７５６ｂｐのＫＩＶ－３～ＫＩＶ－
９のヒトＬＰＡ ｃＤＮＡ配列（アクセッション番号 ＮＭ＿００５５７７．１）を合成
し、商業的に入手可能なレポーターベースのスクリーニングプラスミド、ｐｓｉＣＨＥＣ
Ｋ２（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）の中へクローニングし（ＧｅｎｅＷｉｚ
、Ｓｏｕｔｈ Ｐｌａｉｎｆｉｅｌｄ、ＮＪ）、それによりＲｅｎｉｌｌａ属ルシフェラ
ーゼ／ＬＰＡ融合ｍＲＮＡが生成された。ヒトバックグラウンドにおけるＬＰＡ ＲＮＡ
ｉ剤の有効性のために、ＨｕＨ７細胞（ヒト肝細胞癌株）を、９６ウェルフォーマット中
に１ウェルあたり約７５００細胞でプレーティングした。ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の各々を、
１ウェルあたり２５ｎｇのＬＰＡ－ｐｓｉＣＨＥＣＫ２プラスミドＤＮＡ及び１ウェルあ
たり０．２μＬのＬｉｐｏＦｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００と共に、２つの濃度（１ｎＭ及
び０．１ｎＭ、または１０ｎＭ及び１ｎＭ）で共トランスフェクションした。Ｄｕａｌ
Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏ
ｎ、ＷＩ）を使用して、構成的に発現するホタルルシフェラーゼ（これもｐｓｉＣＨＥＣ
Ｋ２プラスミド上に存在する）のレベルへ正規化したＲｅｎｉｌｌａ属ルシフェラーゼレ
ベルの測定によって、遺伝子ノックダウンを決定した（表７Ａ及び７Ｂ）。
Figure 2022113835000099
Figure 2022113835000100
Figure 2022113835000101
Figure 2022113835000102
Figure 2022113835000103
Figure 2022113835000104
Figure 2022113835000105
Figure 2022113835000106
Figure 2022113835000107
Figure 2022113835000108
実施例５。一過性遺伝子導入マウス及び遺伝子導入マウスにおけるＲＮＡｉ剤の有効性
のインビボの分析。
Ａ）投与及びサンプル採取。ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の有効性をインビボで評価するために
、一過性遺伝子導入マウスを使用した。コレステロールコンジュゲートＬＰＡ ＲＮＡｉ
剤の投与の少なくとも３０日前に、野生型マウスに、マウスアルブミンプロモーターの制
御下でＳＥＡＰ遺伝子を含有するプラスミドを、ハイドロダイナミック尾静脈注射によっ
て注射した。ＬＰＡ遺伝子標的配列はプラスミドの３’ＵＴＲでクローニングした。これ
らのマウスをＳＥＡＰ－ＬＰＡ ＨＴＶマウスとして示す。コレステロールコンジュゲー
トＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を、１日目にＭＬＰ送達ポリマーを使用して、マウスへ投与した（
ＷＯ２０１２／０８３１８５、参照により本明細書に援用される；メリチンを合成しＣＤ
Ｍ－ＮＡＧにより修飾して、その中で記載されるようなＭＬＰ送達ポリマーを得た）。各
々のマウスに、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤＋ＭＬＰ送達ポリマー（ほとんどの事例において、１
：１ｗ／ｗのＲＮＡｉ剤：ＭＬＰ送達ポリマー）の用量を含有する、２００～２５０μＬ
の溶液を尾静脈の中へ静脈内（ＩＶ）注射した。いくつかの実験において、ＬＰＡ ＲＮ
Ａｉ剤を送達ポリマーへ直接コンジュゲートした。ポリマーコンジュゲートＬＰＡ ＲＮ
Ａｉ剤を、尾静脈の中へ同様に注射した。指示されたＬＰＡ ＲＮＡｉ剤（表８Ｂ）を、
５４．４％のエトキシエチルアミノアクリレート（ＥＥＡＡ）アミン単量体及び４５．６
％のプロピルアクリレートプロピル単量体を有する、ポリアクリレートポリマー（ＡＲＦ
１１６４－１０６Ａ－５）（分子量４１９６２ｇ／ｍｏｌ、ポリマーはＷＯ２０１３／１
５８１４１中で記載されるように合成した）へコンジュゲートし、３×ＡＣｉｔ－ＮＡＧ
、６×ＡＣｉｔ－ＰＥＧによりマスクした（ポリマーはＷＯ２０１２／０９２３７３及び
ＰＣＴ／ＵＳ１６／３４５１２中で記載されるようにマスクした）。対照血清（治療前）
サンプルを、－４日目または－１日目に注射前のマウスからとった。注射後に、血清サン
プルを、マウス４、８、１５、２２、２９、３６及び４３日目からとった。何匹かのマウ
スについて、サンプルを４日目の代わりに３日目または５日目に収集した。
追加の実験において、全長ＬＰＡを一過性に発現する遺伝子導入マウスを使用して、Ｌ
ＰＡ ＲＮＡｉ剤をインビボで評価した。コレステロール標的化ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の投
与の少なくとも３０日前に、免疫不全の（Ｎｏｄ．ｓｃｉｄ）マウスに、マウスアルブミ
ンプロモーターの制御下でＬＰＡ ｃＤＮＡを含有するミニサークルを、ハイドロダイナ
ミック尾静脈注射によって注射した。これらのマウスをＬＰＡ ｍｃ ＨＴＶマウスとし
て示す。コレステロール標的ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤またはＮＡＧ（ＧａｌＮＡｃとも称され
る）コンジュゲートＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のいずれかを、１日目にマウスへ投与した。コレ
ステロール標的化ＲＮＡｉ剤について、各々のマウスに、ＲＮＡｉ剤＋ＭＬＰ送達ポリマ
ー（１：１ｗ／ｗのＲＮＡｉ剤：ＭＬＰ送達ポリマー）の用量を含有する、２００～２５
０μＬの溶液を尾静脈の中へ静脈内（ＩＶ）注射した。ＮＡＧコンジュゲートＬＰＡ Ｒ
ＮＡｉ剤について、マウスに、緩衝食塩水中のＲＮＡｉ剤の用量を含有する、３００μｌ
の溶液を肩の間の背中上の弛緩性皮膚の中へ皮下（ＳＣ）注射した。いくつかのサンプル
について、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を、ＭＬＰ送達ペプチド有りまたは無しのいずれかで投与
した。ＭＬＰ送達ペプチドにより送達されるＲＮＡｉ剤を、ＲＮＡｉ剤＋ＭＬＰ送達ポリ
マー（ほとんどの事例において、１：２ｗ／ｗのＲＮＡｉ剤：ＭＬＰ送達ポリマー）の用
量を含有する、２００～２５０μＬの溶液を尾静脈の中へ静脈内（ＩＶ）注射することよ
って投与した。対照血清（治療前）サンプルを、－４日目または－１日目に注射前のマウ
スからとった。注射後に、血清サンプルを、マウス４、８、１５、２２、２９、３６及び
４３日目からとった。何匹かのマウスについて、サンプルを４日目の代わりに３日目また
は５日目に収集した。
追加実験において、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤をアポ（ａ）及びＬｐ（ａ）遺伝子導入マウス
へ投与した（Ｆｒａｚｅｒ ＫＡ ｅｔ ａｌ １９９５，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉ
ｃｓ ９：４２４－４３１）。このマウスは、５’及び３’の両方の追加の配列を備えた
全ＬＰＡ遺伝子（アポ（ａ）タンパク質をコードする）を含有するＹＡＣからのヒトアポ
（ａ）を発現する。Ｌｐ（ａ）マウスは、ヒトａｐｏＢ－１００発現マウスへ、アポ（ａ
）ＹＡＣ含有マウスを掛け合わせることによって繁殖させた（Ｃａｌｌｏｗ ＭＪ ｅｔ
ａｌ １９９４，ＰＮＡＳ ９１：２１３０－２１３４）。コレステロール標的化ＲＮ
Ａｉ剤及びＮＡＧコンジュゲートＲＮＡｉ剤を上記のように投与した。対照血清（治療前
）サンプルを、－１日目に注射前のマウスからとった。注射後に、血清サンプルを、マウ
ス４、８、１５、２２、２９、３６、４３、５０、５７及び６４日目からとった。
Ｂ）ＬＰＡ発現ノックダウンのリアルタイム分析。ＳＥＡＰ－ＬＰＡ ＨＴＶマウスに
ついて、血清におけるＳＥＡＰタンパク質レベルを、Ｐｈｏｓｐｈａ－Ｌｉｇｈｔ（商標
）化学発光レポーター遺伝子分析システム（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使
用して、マウスからの血清のアッセイによってモニタリングした。正規化について、所定
の時間点での各々の動物についてのＳＥＡＰレベルをその動物における治療前の発現レベ
ルによって割って、「治療前へ正規化した」発現の比を決定した。次いで、特異的な時間
点での発現を群内の個体の中で平均化した。
ＬＰＡ ｍｃ ＨＴＶマウス及び遺伝子導入マウスについて、血清中のヒトアポ（ａ）
タンパク質レベルを、アポ（ａ）についてのＥＬＩＳＡ（Ａｂｃａｍ）を使用して、マウ
スからの血清をアッセイすることによってモニタリングした。正規化について、時間点で
の各々の動物についてのアポ（ａ）レベルをその動物における治療前の発現レベルによっ
て割って（この事例において１日目）、「１日目へ正規化した」発現の比を決定した。次
いで、「１日目へ正規化した」個別の動物についての比を平均の「１日目へ正規化した」
食塩水対照群中のすべてのマウスの比によって割ることによって、特異的な時間点での発
現を食塩水対照群へ正規化した。これは、対照群中のものへ正規化した各々の時間点につ
いての発現をもたらした。
Ｌｐ（ａ）レベルを、製造者の推奨に従ってＣｏｂａｓ Ｉｎｔｅｇｒａ ４００（Ｒ
ｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）上で決定した。正規化について、時間点での各々の
動物についてのアポ（ａ）レベルをその動物における治療前の発現レベルによって割って
（この事例において１日目）、「１日目へ正規化した」発現の比を決定した。次いで、「
１日目へ正規化した」個別の動物についての比を平均の「１日目へ正規化した」食塩水対
照群中のすべてのマウスの比によって割ることによって、特異的な時間点での発現を食塩
水対照群へ正規化した。これは、対照群中のものへ正規化した各々の時間点についての発
現をもたらした。
Figure 2022113835000109
Figure 2022113835000110
Figure 2022113835000111
Figure 2022113835000112
Figure 2022113835000113
Figure 2022113835000114
Figure 2022113835000115
実施例６。ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のインビボのスクリーニング及びＳＥＡＰのノックダウ
ンの時間経過。コレステロールコンジュゲートＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を、一過性遺伝子導入
マウスへ上記のように投与した。各々のマウスに、８ｍｇ／ｋｇのＭＬＰ送達ポリマーに
より８ｍｇ／ｋｇのＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の単回の静脈内（ＩＶ）用量を投与した。血清中
のＳＥＡＰタンパク質レベルを３６日までの間モニタリングした。ノックダウンレベル及
び応答の継続時間を表９中で示す。８５％を超えるＳＥＡＰ血清タンパク質レベルにおけ
る減少が、試験されたすべてのＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の投与に後続して得られ；試験された
２つのＬＰＡ ＲＮＡｉ剤以外のすべてで９９．４％を超えるノックダウンが示された。
ＡＤ０１１９６及びＡＤ０１１９９は、３６日目で＞９５％のノックダウンを示した。
実施例７。ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のインビボのスクリーニング及びより低いＬＰＡ ＲＮ
Ａｉ剤用量でのＬＰＡのノックダウンの時間経過。コレステロールコンジュゲートＬＰＡ
ＲＮＡｉ剤を、一過性遺伝子導入マウスへ上記のように投与した。各々のマウスに、２
ｍｇ／ｋｇのＭＬＰ送達ポリマーにより２ｍｇ／ｋｇのＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の単回の静脈
内（ＩＶ）用量を投与した。血清中のＳＥＡＰタンパク質レベルを４３日までの間モニタ
リングした（表１０）。
実施例８。アポ（ａ）遺伝子導入（Ｔｇ）マウスにおけるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のインビ
ボ試験。ＡＤ０１１９６をマウスへ上記のように投与した。各々のマウスに、２ｍｇ／ｋ
ｇのＭＬＰ送達ポリマーまたは食塩水のいずれかにより２ｍｇ／ｋｇのＬＰＡ ＲＮＡｉ
剤の単回の静脈内（ＩＶ）用量を投与した。血清中のヒトアポ（ａ）（アポ（ａ））レベ
ルを６４日までの間モニタリングした（表１１）。１５日目に、食塩水群中の動物に、２
ｍｇ／ｋｇのＭＬＰ送達ポリマーにより２ｍｇ／ｋｇの対照マウス第ＶＩＩ因子（Ｆ７）
ＲＮＡｉ剤の単回の静脈内用量を投与した。２２日目に、Ｆ７レベルをすべての動物にお
いて測定した。Ｆ７活性は投薬７日後に９９％までノックダウンされ、血清アポ（ａ）レ
ベルに対する効果はなかった。ＡＤ０１１９６は、最下点でアポ（ａ）レベルの＞３ｌｏ
ｇ１０のノックダウンを示し、３週間後に＞８０％のノックダウンが観察された（表１１
）。
Figure 2022113835000116
Figure 2022113835000117
Figure 2022113835000118
実施例９。ＭＬＰ送達ポリマーによるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤送達に後続する、非ヒト霊長
動物におけるアポリポタンパク質（ａ）（アポ（ａ））のノックダウン。ＭＬＰ送達ポリ
マー及びＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を作製し、薬学的に許容されるバッファー中で上記のように
組み合わせた。１日目に、２匹のカニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉ
ｓ）霊長動物（両方ともオス、それぞれ５．０ｋｇ及び８．１５ｋｇ）に、２ｍｇ／ｋｇ
のＡＤ０１１９６＋２ｍｇ／ｋｇのＭＬＰ送達ポリマーを注射した。各々の注射について
、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤＋ＭＬＰ送達ポリマー（２ｍｌ／ｋｇ）を、２２～２５ゲージの静
脈内カテーテルを使用して、伏在静脈の中へ注射した。指示された時間点（表１２中で指
示される）で、血液サンプルを採血し、アポ（ａ）レベル、脂質レベル及び毒性マーカー
について分析した。血液を大腿静脈から収集し、霊長動物はすべての血液採取の前に一晩
断食させた。血中尿素窒素（ＢＵＮ）、アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）、アスパ
ラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、クレアチニン、総コレステロール（ＴＣ
）及びトリグリセリド（ＴＧ）についての血液検査は、Ｍｅｒｉｔｅｒ ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｉｅｓで自動化化学分析器上で遂行された。リポタンパク質（ａ）（Ｌｐ（ａ））及
び低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）についての血液検査は、自動化化学分析器上で測定さ
れた。血清アポ（ａ）レベルはＥＬＩＳＡによって測定された。アポ（ａ）の有意なノッ
クダウンは２２日目で観察され、９４．５％の平均最大ノックダウンが観察された。Ｌｐ
（ａ）の平均最大ノックダウンは９１．５％であり、１５日目で観察された（図３）。用
量関連性毒性は治療された動物において観察されなかった。
Figure 2022113835000119
Figure 2022113835000120
Figure 2022113835000121
実施例１０。ＮＡＧコンジュゲートＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のインビボのスクリーニング及
びノックダウンの時間経過。ＮＡＧ－コンジュゲートＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を、一過性遺伝
子導入マウスへ上記のように投与した。各々のマウスに、１ｍｇ／ｋｇのＭＬＰ送達ポリ
マーにより２ｍｇ／ｋｇのＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の単回の静脈内（ＩＶ）用量、または１０
ｍｇ／ｋｇのＮＡＧコンジュゲートＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の単回の皮下（ＳＣ）用量のいず
れかを投与した。血清中のＳＥＡＰタンパク質レベルを２２日までの間モニタリングした
。ノックダウンレベル及び応答の継続時間を表１４～１５中で示す。ＡＤ０１５２９、Ａ
Ｄ０１５３２及びＡＤ０１５３３は、ＭＬＰ送達ポリマーによるＩＶ投与に後続してＳＥ
ＡＰレベルの≧８５％のノックダウン、及びＮＡＧコンジュゲートＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の
単独のＳＣ投与に後続してＳＥＡＰレベルの≧６０％の最大ノックダウンを示した。
Figure 2022113835000122
Figure 2022113835000123
実施例１１。修飾ＮＡＧコンジュゲートＬＰＡ ＲＮＡｉ剤のインビボのスクリーニン
グ及びノックダウンの時間経過。指示されたＮＡＧコンジュゲートＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を
、ＳＥＡＰ－ＬＰＡ ＨＴＶマウスへ上記のように投与した。各々のマウスに、１０ｍｇ
／ｋｇのＮＡＧコンジュゲートＬＰＡ ＲＮＡｉ剤の単回の皮下（ＳＣ）用量を投与した
。血清中のＳＥＡＰタンパク質レベルを２２日までの間モニタリングした。ノックダウン
レベル及び応答の継続時間を表１６～１７中で示す。ＡＤ０１７６５及びＡＤ０１７６８
は８９％のノックダウン活性を示した。
Figure 2022113835000124
Figure 2022113835000125
実施例１２。アポ（ａ）ＴｇマウスにおけるＮＡＧコンジュゲートＬＰＡ ＲＮＡｉ剤
のインビボ試験。ＮＡＧコンジュゲートＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を、アポ（ａ）Ｔｇマウスへ
上記のように投与した。各々のマウスに、１０ｍｇ／ｋｇのＬＰＡ ＲＮＡｉ剤または食
塩水のいずれかの単回の皮下（ＳＣ）用量を投与した。血清中のヒトアポ（ａ）（アポ（
ａ））レベルを２２日までの間モニタリングした（表１８）。ＡＤ０１７６５は、８日目
で９６％のノックダウンでアポ（ａ）レベルの最大ノックダウンを示し、投薬の３週間後
に＞７４％のノックダウンが観察された。
Figure 2022113835000126
実施例１３。ＬＰＡ ｍｃ ＨＴＶマウスにおけるＮＡＧコンジュゲートＬＰＡ ＲＮ
Ａｉ剤のインビボ試験。指示されたＮＡＧコンジュゲートＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を、ＬＰＡ
ｍｃ ＨＴＶマウスへ上記のように投与した。各々のマウスに、１０ｍｇ／ｋｇのＬＰ
Ａ ＲＮＡｉ剤または食塩水のいずれかの単回の皮下（ＳＣ）用量を投与した。血清中の
ヒトアポ（ａ）（アポ（ａ））レベルを４日目に分析した（表１９）。ＡＤ０２００１、
ＡＤ０１７６５及びＡＤ０１７６８は、４日目で＞９０％のノックダウンを示した。
Figure 2022113835000127
実施例１４。ＭＬＰ送達ポリマーによるＬＰＡ ＲＮＡｉ剤送達に後続する、非ヒト霊
長動物におけるアポリポタンパク質（ａ）（アポ（ａ））のノックダウン。ＭＬＰ送達ポ
リマー及びＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を作製し、薬学的に許容されるバッファー中で組み合わせ
た。１日目及び７１日目に、２匹のカニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒ
ｉｓ）霊長動物に、４ｍｇ／ｋｇのＡＤ０１１９６＋４ｍｇ／ｋｇのＭＬＰ送達ポリマー
または６ｍｇ／ｋｇのＡＤ０１１９６＋６ｍｇ／ｋｇのＭＬＰ送達ポリマーのいずれかを
注射した。各々の注射について、ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤＋ＭＬＰ送達ポリマーを、２２～２
５ゲージの静脈内カテーテルを使用して、伏在静脈の中へ注射した。指示された時間点で
（図４）、血液サンプルを採血し、前述されるようにアポ（ａ）レベル、脂質レベル及び
毒性マーカーについて分析した。アポ（ａ）の有意なノックダウンが第１の投薬後に観察
され、４ｍｇ／ｋｇの用量について１５日目に９６％、及び６ｍｇ／ｋｇの用量について
１５日目に９６％の平均最大ノックダウンが観察された。第１の投薬後のＬｐ（ａ）の平
均最大ノックダウンは、４ｍｇ／ｋｇの用量について２９日目に９８．５％及び６ｍｇ／
ｋｇの用量について２２日目に９８．５％であった。用量関連性毒性は治療された動物に
おいて観察されなかった。
実施例１５。Ｌｐ（ａ）ＴｇマウスにおけるＮＡＧコンジュゲートＬＰＡ ＲＮＡｉ剤
のインビボ試験－用量応答。ＮＡＧコンジュゲートＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を、Ｌｐ（ａ）Ｔ
ｇマウスへ上記のように投与した。各々のマウスに、０．５ｍｇ／ｋｇもしくは２ｍｇ／
ｋｇ用量レベルのＬＰＡ ＲＮＡｉ剤または食塩水のいずれかの単回の皮下（ＳＣ）用量
を投与した。血清中のＬｐ（ａ）レベルを４３日目までモニタリングした（図１、図２）
。すべてのＬＰＡ ＲＮＡｉ剤はより高い用量で用量応答を示し、１５日目と２２日目と
の間の最下点でより大きなノックダウンを示した。
実施例１６。アポ（ａ）特異的ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤分子送達に後続する、非ヒト霊長動
物におけるアポリポタンパク質（ａ）（アポ（ａ））のノックダウン。ＬＰＡ ＲＮＡｉ
剤を、皮下（ＳＣ）注射のために本明細書において記載されるように薬学的に許容される
バッファー中で調製した。１、７及び１５日目に、２匹のカニクイザル（Ｍａｃａｃａ
ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）霊長動物に、３ｍｇ／ｋｇのＡＤ０２７１３、ＡＤ０２８１
９、ＡＤ０２８２０、またはＡＤ０２８２１を皮下注射した。加えて、ＡＤ０２８１９で
処理したサルに、５７日目及び８５日目に３ｍｇ／ｋｇのＡＤ０２８１９を再び投薬した
。血液サンプルを採血し、前述されるようにアポ（ａ）レベル、脂質レベル及び毒性マー
カーについて分析した。Ｌｐ（ａ）の有意なノックダウンが観察され、ＡＤ０２７１３に
ついて４３日目に８９％の平均最大ノックダウンが観察され、ＡＤ０２８１９について３
６日目に８７％が観察され、ＡＤ０２８２０について３６日目に７９％が観察され、ＡＤ
０２８２１について２９日目に９５％が観察された（図５）。用量関連性毒性は治療され
た動物において実験時間にわたって観察されなかった。
実施例１７。ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤送達に後続する、非ヒト霊長動物におけるアポリポタ
ンパク質（ａ）（アポ（ａ））のノックダウン。ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を、皮下（ＳＣ）注
射のために本明細書において記載されるように薬学的に許容されるバッファー中で調製し
た。１日目に、２匹のカニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）霊長動
物に、３ｍｇ／ｋｇのＡＤ０３２７２、ＡＤ０３４６２、ＡＤ０３５４９、ＡＤ０３５４
７、ＡＤ０３６６８、ＡＤ０３４６０、またはＡＤ０３５３６を皮下注射した。加えて、
ＡＤ０３４６０及びＡＤ０３５３６で処理したサルに、４８日目にそれぞれの１ｍｇ／ｋ
ｇのＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を再び投薬した。血液サンプルを採血し、前述されるようにアポ
（ａ）レベル、脂質レベル及び毒性マーカーについて分析した。Ｌｐ（ａ）の有意なノッ
クダウンが観察され、ＡＤ０３２７２について１５日目に６２％、ＡＤ０３４６２につい
て１５日目に２８％、ＡＤ０３５４９について２９日目に４７％、ＡＤ０３５４７につい
て１５日目に４４％、ＡＤ０３６６８について２２日目に５３％、ＡＤ０３４６０につい
て２９日目に７９％、及びＡＤ０３５３６について２２日目に７１％の平均最大ノックダ
ウンであった（図６）。用量関連性毒性は治療された動物において実験時間にわたって観
察されなかった。
実施例１８。アポ（ａ）特異的ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤分子送達に後続する、霊長動物にお
けるアポリポタンパク質（ａ）（アポ（ａ））のノックダウン。ＬＰＡ ＲＮＡｉ剤を作
製し、皮下（ＳＱ）注射のために上記されるように薬学的に許容されるバッファー中で組
み合わせた。１日目に、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）霊長
動物に、食塩水または２ｍｇ／ｋｇのＡＤ０３４６０、ＡＤ０３５３６、ＡＤ０３８５１
、ＡＤ０３８５３、またはＡＤ０４１１０を皮下注射した。血液サンプルを採血し、前述
されるように８及び１５日目にアポ（ａ）レベル、脂質レベル及び毒性マーカーについて
分析した。Ｌｐ（ａ）レベルを３つの投薬前の値の平均へ正規化した。
Figure 2022113835000128

Claims (1)

  1. 本明細書および図面に記載の物、方法またはシステム。
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