JP2020535812A - 組換えコラーゲンおよびエラスチン分子ならびにそれらの使用 - Google Patents
組換えコラーゲンおよびエラスチン分子ならびにそれらの使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2020535812A JP2020535812A JP2020517957A JP2020517957A JP2020535812A JP 2020535812 A JP2020535812 A JP 2020535812A JP 2020517957 A JP2020517957 A JP 2020517957A JP 2020517957 A JP2020517957 A JP 2020517957A JP 2020535812 A JP2020535812 A JP 2020535812A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- collagen
- elastin
- naturally occurring
- shortened
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 title claims abstract description 445
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 title claims abstract description 445
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 title claims abstract description 436
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 title claims abstract description 219
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 title claims abstract description 214
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 title claims abstract description 211
- 241000242583 Scyphozoa Species 0.000 claims abstract description 49
- 241001435194 Rhincodon typus Species 0.000 claims abstract description 11
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 289
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 247
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 93
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 93
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 93
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 claims description 91
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 73
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 66
- 101000851054 Homo sapiens Elastin Proteins 0.000 claims description 63
- 102000054289 human ELN Human genes 0.000 claims description 63
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 45
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 45
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 44
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 claims description 40
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 claims description 40
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 claims description 40
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 claims description 39
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 claims description 39
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 37
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 32
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 31
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 30
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 claims description 29
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims description 28
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 claims description 24
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 claims description 24
- ASJWEHCPLGMOJE-LJMGSBPFSA-N ac1l3rvh Chemical compound N1C(=O)NC(=O)[C@@]2(C)[C@@]3(C)C(=O)NC(=O)N[C@H]3[C@H]21 ASJWEHCPLGMOJE-LJMGSBPFSA-N 0.000 claims description 21
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 21
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 claims description 20
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 19
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 19
- 230000035899 viability Effects 0.000 claims description 18
- 241000972619 Chondrosia reniformis Species 0.000 claims description 16
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 16
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 16
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 claims description 16
- 239000000428 dust Substances 0.000 claims description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 15
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 15
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 14
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 12
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 12
- 238000004904 shortening Methods 0.000 claims description 12
- 108010050808 Procollagen Proteins 0.000 claims description 10
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 10
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims description 10
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 9
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 8
- 230000008439 repair process Effects 0.000 claims description 8
- 230000037380 skin damage Effects 0.000 claims description 8
- ZCBNVRFFHVFMCM-GDOBSTBCSA-N 2-aminoacetic acid;(2s)-2-aminobutanedioic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound NCC(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O ZCBNVRFFHVFMCM-GDOBSTBCSA-N 0.000 claims description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 7
- MOTNKZWGBGUKMV-PBUQCQDLSA-N NCC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O Chemical compound NCC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O MOTNKZWGBGUKMV-PBUQCQDLSA-N 0.000 claims description 7
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 7
- XMSXQFUHVRWGNA-UHFFFAOYSA-N Decamethylcyclopentasiloxane Chemical compound C[Si]1(C)O[Si](C)(C)O[Si](C)(C)O[Si](C)(C)O[Si](C)(C)O1 XMSXQFUHVRWGNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 5
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000006210 lotion Substances 0.000 claims description 4
- 230000032258 transport Effects 0.000 claims description 4
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- HFOCAQPWSXBFFN-UHFFFAOYSA-N 2-methylsulfonylbenzaldehyde Chemical compound CS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1C=O HFOCAQPWSXBFFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- LEACJMVNYZDSKR-UHFFFAOYSA-N 2-octyldodecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCC(CO)CCCCCCCC LEACJMVNYZDSKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- GUQMDNQYMMRJPY-UHFFFAOYSA-N 4,4-dimethyl-1,3-oxazolidine Chemical compound CC1(C)COCN1 GUQMDNQYMMRJPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ZRCMGIXRGFOXNT-UHFFFAOYSA-N 7a-ethyl-1,3,5,7-tetrahydro-[1,3]oxazolo[3,4-c][1,3]oxazole Chemical compound C1OCN2COCC21CC ZRCMGIXRGFOXNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- LVDKZNITIUWNER-UHFFFAOYSA-N Bronopol Chemical compound OCC(Br)(CO)[N+]([O-])=O LVDKZNITIUWNER-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims description 3
- HVUMOYIDDBPOLL-XWVZOOPGSA-N Sorbitan monostearate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O HVUMOYIDDBPOLL-XWVZOOPGSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 claims description 3
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 claims description 3
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 claims description 3
- 229940081733 cetearyl alcohol Drugs 0.000 claims description 3
- 229940086555 cyclomethicone Drugs 0.000 claims description 3
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000010410 dusting Methods 0.000 claims description 3
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 claims description 3
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 claims description 3
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 claims description 3
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 claims description 3
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 claims description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 3
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 3
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 claims description 3
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 claims description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims description 3
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 claims description 3
- 229940092258 rosemary extract Drugs 0.000 claims description 3
- 235000020748 rosemary extract Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000001233 rosmarinus officinalis l. extract Substances 0.000 claims description 3
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 claims description 3
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 claims description 3
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 239000001587 sorbitan monostearate Substances 0.000 claims description 3
- 235000011076 sorbitan monostearate Nutrition 0.000 claims description 3
- 229940035048 sorbitan monostearate Drugs 0.000 claims description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 3
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 claims description 3
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 claims description 3
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 claims description 3
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003871 white petrolatum Substances 0.000 claims description 3
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 claims description 3
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims 4
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 claims 2
- GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N octadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCO GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- UPWLURAENVJIJL-UHFFFAOYSA-N adamantane;hydrochloride Chemical compound Cl.C1C(C2)CC3CC1CC2C3 UPWLURAENVJIJL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 abstract description 10
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 abstract description 10
- 241000243320 Hydrozoa Species 0.000 abstract description 3
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 abstract description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 183
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 134
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 134
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 73
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 65
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 63
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 54
- 239000000047 product Substances 0.000 description 51
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 45
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 44
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 44
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 42
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 42
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 38
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 37
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 36
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 34
- 239000000463 material Substances 0.000 description 32
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 31
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 31
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 31
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 29
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 28
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 26
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 26
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 26
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 26
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 23
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 23
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 23
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 22
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 20
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 19
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 19
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 19
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 19
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 18
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 17
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 15
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 15
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 15
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 15
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 14
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 14
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 14
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 14
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 14
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 14
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 14
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 14
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 14
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 13
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 13
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 13
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 12
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 11
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241000741114 Rhincodon Species 0.000 description 10
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 10
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 10
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 10
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 9
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 9
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 9
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 9
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 8
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 8
- 108060002894 fibrillar collagen Proteins 0.000 description 8
- 102000013373 fibrillar collagen Human genes 0.000 description 8
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 8
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 8
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 8
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 7
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 7
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 7
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 6
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical group [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 6
- 108091093078 Pyrimidine dimer Proteins 0.000 description 6
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 6
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 6
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 6
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 6
- 229960000308 fosfomycin Drugs 0.000 description 6
- YMDXZJFXQJVXBF-STHAYSLISA-N fosfomycin Chemical compound C[C@@H]1O[C@@H]1P(O)(O)=O YMDXZJFXQJVXBF-STHAYSLISA-N 0.000 description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 6
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 6
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 6
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 6
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 6
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 6
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 108010054624 red fluorescent protein Proteins 0.000 description 6
- 238000007480 sanger sequencing Methods 0.000 description 6
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 6
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 5
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 5
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 5
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 5
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 5
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 5
- 229940092782 bentonite Drugs 0.000 description 5
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 5
- FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N carbenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)C(C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N 0.000 description 5
- 229960003669 carbenicillin Drugs 0.000 description 5
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 5
- 239000000306 component Substances 0.000 description 5
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 5
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 5
- 238000011038 discontinuous diafiltration by volume reduction Methods 0.000 description 5
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 5
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 5
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 5
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 5
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 5
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 244000201986 Cassia tora Species 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 231100000948 EpiDerm Skin Irritation Test Toxicity 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 4
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 4
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N Trolox Chemical compound O1C(C)(C(O)=O)CCC2=C1C(C)=C(C)C(O)=C2C GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 239000003782 beta lactam antibiotic agent Substances 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 4
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 4
- NCAIGTHBQTXTLR-UHFFFAOYSA-N phentermine hydrochloride Chemical compound [Cl-].CC(C)([NH3+])CC1=CC=CC=C1 NCAIGTHBQTXTLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000037333 procollagen synthesis Effects 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 4
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 102100033167 Elastin Human genes 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 241000270878 Hyla Species 0.000 description 3
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 3
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 3
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 description 3
- 238000010923 batch production Methods 0.000 description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 3
- 210000005175 epidermal keratinocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 3
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N glycine betaine Chemical compound C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 239000002132 β-lactam antibiotic Substances 0.000 description 3
- 229940124586 β-lactam antibiotics Drugs 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DBTMGCOVALSLOR-UHFFFAOYSA-N 32-alpha-galactosyl-3-alpha-galactosyl-galactose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(OC2C(C(CO)OC(O)C2O)O)OC(CO)C1O DBTMGCOVALSLOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000012440 Acetylcholinesterase Human genes 0.000 description 2
- 108010022752 Acetylcholinesterase Proteins 0.000 description 2
- 241001135756 Alphaproteobacteria Species 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 241000589539 Brevundimonas diminuta Species 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- RXVWSYJTUUKTEA-UHFFFAOYSA-N D-maltotriose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 RXVWSYJTUUKTEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 2
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 2
- 241001198387 Escherichia coli BL21(DE3) Species 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000192128 Gammaproteobacteria Species 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 2
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 description 2
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 2
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 2
- 241001240958 Pseudomonas aeruginosa PAO1 Species 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 2
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 101150071882 US17 gene Proteins 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 2
- WZPBZJONDBGPKJ-VEHQQRBSSA-N aztreonam Chemical compound O=C1N(S([O-])(=O)=O)[C@@H](C)[C@@H]1NC(=O)C(=N/OC(C)(C)C(O)=O)\C1=CSC([NH3+])=N1 WZPBZJONDBGPKJ-VEHQQRBSSA-N 0.000 description 2
- 229960003644 aztreonam Drugs 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000003570 cell viability assay Methods 0.000 description 2
- 108091092356 cellular DNA Proteins 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 2
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- FYGDTMLNYKFZSV-UHFFFAOYSA-N mannotriose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)C(O)C1O FYGDTMLNYKFZSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 2
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 2
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 description 2
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000002453 shampoo Substances 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 2
- 150000003536 tetrazoles Chemical class 0.000 description 2
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 2
- 229910021654 trace metal Inorganic materials 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- FYGDTMLNYKFZSV-BYLHFPJWSA-N β-1,4-galactotrioside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@@H](O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-BYLHFPJWSA-N 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQNHWIYLCRZRLR-UHFFFAOYSA-N 2-(3-hydroxy-2,5-dioxooxolan-3-yl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1(O)CC(=O)OC1=O WQNHWIYLCRZRLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CVLPPWGDNNZTRW-UHFFFAOYSA-N 2-naphthalen-1-ylindene-1,3-dione Chemical compound C1=CC=C2C(C3C(C4=CC=CC=C4C3=O)=O)=CC=CC2=C1 CVLPPWGDNNZTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010091324 3C proteases Proteins 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- WZPBZJONDBGPKJ-UHFFFAOYSA-N Antibiotic SQ 26917 Natural products O=C1N(S(O)(=O)=O)C(C)C1NC(=O)C(=NOC(C)(C)C(O)=O)C1=CSC(N)=N1 WZPBZJONDBGPKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091005502 Aspartic proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000035101 Aspartic proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010001478 Bacitracin Proteins 0.000 description 1
- 108020004256 Beta-lactamase Proteins 0.000 description 1
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 1
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 description 1
- 101100545272 Caenorhabditis elegans zif-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000863012 Caulobacter Species 0.000 description 1
- 241000010804 Caulobacter vibrioides Species 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010005843 Cysteine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000005927 Cysteine Proteases Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N D-arabinitol Chemical compound OC[C@@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 239000005696 Diammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 108010013369 Enteropeptidase Proteins 0.000 description 1
- 102100029727 Enteropeptidase Human genes 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 1
- 102000018389 Exopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010091443 Exopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- 108700041153 Filaggrin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001076388 Fimbria Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- HVIBGVJOBJJPFB-OFQRNFBNSA-N Gly-Pro-Hyp Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)C(O)CC1 HVIBGVJOBJJPFB-OFQRNFBNSA-N 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- 101001002634 Homo sapiens Interleukin-1 alpha Proteins 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100020881 Interleukin-1 alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 1
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 1
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N Methicillin Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2[C@@H](C(O)=O)C(C)(C)S[C@@H]21 RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N 0.000 description 1
- DPUYCSDGMSDKKV-MKBYFEBXSA-N N-Acetyl-L-leucyl-L-isoleucylglycyl-L-valyl-N-methyl-L-prolinamide Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NC DPUYCSDGMSDKKV-MKBYFEBXSA-N 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N Phosphorous acid Chemical compound OP(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000243280 Podocoryna carnea Species 0.000 description 1
- 101710118538 Protease Proteins 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 101800001295 Putative ATP-dependent helicase Proteins 0.000 description 1
- 101800001006 Putative helicase Proteins 0.000 description 1
- 241000589180 Rhizobium Species 0.000 description 1
- JVWLUVNSQYXYBE-UHFFFAOYSA-N Ribitol Natural products OCC(C)C(O)C(O)CO JVWLUVNSQYXYBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- 102000040739 Secretory proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091058545 Secretory proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000028990 Skin injury Diseases 0.000 description 1
- 206010040880 Skin irritation Diseases 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 108010076818 TEV protease Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 108091005501 Threonine proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000035100 Threonine proteases Human genes 0.000 description 1
- 108060008539 Transglutaminase Proteins 0.000 description 1
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 1
- 241000607365 Vibrio natriegens Species 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N aldehydo-D-glucose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005904 alkaline hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N amoxicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960003022 amoxicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960003071 bacitracin Drugs 0.000 description 1
- 229930184125 bacitracin Natural products 0.000 description 1
- CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N bacitracin A Chemical compound C1SC([C@@H](N)[C@@H](C)CC)=N[C@@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N[C@H](CCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2N=CNC=2)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCCCC1 CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- YZBQHRLRFGPBSL-RXMQYKEDSA-N carbapenem Chemical compound C1C=CN2C(=O)C[C@H]21 YZBQHRLRFGPBSL-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- 229940041011 carbapenems Drugs 0.000 description 1
- RTYJTGSCYUUYAL-YCAHSCEMSA-L carbenicillin disodium Chemical compound [Na+].[Na+].N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C([O-])=O)(C)C)C(=O)C(C([O-])=O)C1=CC=CC=C1 RTYJTGSCYUUYAL-YCAHSCEMSA-L 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- XIURVHNZVLADCM-IUODEOHRSA-N cefalotin Chemical compound N([C@H]1[C@@H]2N(C1=O)C(=C(CS2)COC(=O)C)C(O)=O)C(=O)CC1=CC=CS1 XIURVHNZVLADCM-IUODEOHRSA-N 0.000 description 1
- 229960000603 cefalotin Drugs 0.000 description 1
- OLVCFLKTBJRLHI-AXAPSJFSSA-N cefamandole Chemical compound CN1N=NN=C1SCC1=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](O)C=3C=CC=CC=3)[C@H]2SC1 OLVCFLKTBJRLHI-AXAPSJFSSA-N 0.000 description 1
- 229960003012 cefamandole Drugs 0.000 description 1
- 229960004261 cefotaxime Drugs 0.000 description 1
- AZZMGZXNTDTSME-JUZDKLSSSA-M cefotaxime sodium Chemical compound [Na+].N([C@@H]1C(N2C(=C(COC(C)=O)CS[C@@H]21)C([O-])=O)=O)C(=O)\C(=N/OC)C1=CSC(N)=N1 AZZMGZXNTDTSME-JUZDKLSSSA-M 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-KIIOPKALSA-N chembl3301825 Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)C(O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-KIIOPKALSA-N 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 description 1
- DHSUYTOATWAVLW-WFVMDLQDSA-N cilastatin Chemical compound CC1(C)C[C@@H]1C(=O)N\C(=C/CCCCSC[C@H](N)C(O)=O)C(O)=O DHSUYTOATWAVLW-WFVMDLQDSA-N 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007398 colorimetric assay Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 239000008406 cosmetic ingredient Substances 0.000 description 1
- 150000003950 cyclic amides Chemical group 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000001047 desmosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- ONCZQWJXONKSMM-UHFFFAOYSA-N dialuminum;disodium;oxygen(2-);silicon(4+);hydrate Chemical compound O.[O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[Na+].[Na+].[Al+3].[Al+3].[Si+4].[Si+4].[Si+4].[Si+4] ONCZQWJXONKSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000388 diammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019838 diammonium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000013681 dietary sucrose Nutrition 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 210000004177 elastic tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000010408 film Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N galactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N 0.000 description 1
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 108010017349 glycyl-prolyl-hydroxyproline Proteins 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001046 green dye Substances 0.000 description 1
- UBHWBODXJBSFLH-UHFFFAOYSA-N hexadecan-1-ol;octadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCO.CCCCCCCCCCCCCCCCCCO UBHWBODXJBSFLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229910052816 inorganic phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003963 intermediate filament Anatomy 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 108010075526 keratohyalin Proteins 0.000 description 1
- 150000003951 lactams Chemical class 0.000 description 1
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940061634 magnesium sulfate heptahydrate Drugs 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 229940127554 medical product Drugs 0.000 description 1
- 239000012533 medium component Substances 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229960003085 meticillin Drugs 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 229940041009 monobactams Drugs 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- UWYHMGVUTGAWSP-JKIFEVAISA-N oxacillin Chemical compound N([C@@H]1C(N2[C@H](C(C)(C)S[C@@H]21)C(O)=O)=O)C(=O)C1=C(C)ON=C1C1=CC=CC=C1 UWYHMGVUTGAWSP-JKIFEVAISA-N 0.000 description 1
- 229960001019 oxacillin Drugs 0.000 description 1
- LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N p-Hydroxyampicillin Natural products O=C1N2C(C(O)=O)C(C)(C)SC2C1NC(=O)C(N)C1=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 1
- 229940056367 penicillin v Drugs 0.000 description 1
- 150000002960 penicillins Chemical class 0.000 description 1
- WXZMFSXDPGVJKK-UHFFFAOYSA-N pentaerythritol Chemical compound OCC(CO)(CO)CO WXZMFSXDPGVJKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- BPLBGHOLXOTWMN-MBNYWOFBSA-N phenoxymethylpenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)COC1=CC=CC=C1 BPLBGHOLXOTWMN-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004260 plant-type cell wall biogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 229940027836 primaxin Drugs 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007668 pye medium Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 239000013643 reference control Substances 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N ribitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 231100000475 skin irritation Toxicity 0.000 description 1
- 230000036556 skin irritation Effects 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940080314 sodium bentonite Drugs 0.000 description 1
- 229910000280 sodium bentonite Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000000434 stratum corneum Anatomy 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- OFVLGDICTFRJMM-WESIUVDSSA-N tetracycline Chemical compound C1=CC=C2[C@](O)(C)[C@H]3C[C@H]4[C@H](N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@@]4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O OFVLGDICTFRJMM-WESIUVDSSA-N 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 102000003601 transglutaminase Human genes 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 108010087967 type I signal peptidase Proteins 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 150000003952 β-lactams Chemical group 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/39—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
- A61K8/65—Collagen; Gelatin; Keratin; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
- A61Q17/04—Topical preparations for affording protection against sunlight or other radiation; Topical sun tanning preparations
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Birds (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
本出願は、2017年9月28日に出願された米国仮特許出願第62/564,964号および2018年4月13日に出願された米国仮特許出願第62/657,591号(これらは両方とも、「RECOMBINANT COLLAGEN AND ELASTIN MOLECULES AND USES THEREOF」という表題である)の35 USC 119(e)に基づく利益を主張する「RECOMBINANT COLLAGEN AND ELASTIN MOLECULES AND USES THEREOF」という表題の2018年9月27日に出願された米国特許出願第16/144,914号の優先権を主張し、これらの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
プロトプラストタイプL型は無細胞壁状態で培養され、細胞壁、莢膜、鞭毛、線毛、芽胞およびメソソームの形成不能、変化したコロニーおよび細胞形態、細胞膜の脂質およびタンパク質成分の質的および量的な変化、細胞外タンパク分解活性の非存在、バクテリオファージに対する耐性、ならびに実験室条件以外における繁殖不能を含む極めて多面的な変化を示す遺伝的に安定な変異体である。Gumpert and Taubeneck(前掲);およびHoischenら、Lipid and fatty acid composition of cytoplasmic membranes from Streptomyces hygroscopic and its stable protoplast type L−form.J Bacteriol 1997,179:3430−3436を参照のこと。
a)マグネシウム塩を含む培地中で組換えグラム陰性細菌細胞を培養する工程であって、前記培地中のマグネシウムイオンの濃度が少なくとも約6mMであり、前記細菌細胞が、タンパク質をコードする外因性遺伝子を含む、工程;
b)抗生物質を前記培地に添加する工程であって、前記抗生物質が、前記細菌細胞におけるペプチドグリカン生合成を阻害する、工程;および
c)前記培地から前記タンパク質を回収する工程
を含む。
材料および方法:
株:
試験した生理学的スイッチおよびタンパク質産生:
大腸菌BL21(DE3)−NEB,製品#c2527より
大腸菌K12NCM3722−The Coli Genetic Stock Center,CGSC#12355より
ガンマプロテオバクテリア:
Vibrio natriegens−ATCC,製品#14048より
Pseudomonas fluorescens−ATCC,製品#31948より
Pseudomonas aeruginosa PAO1−ATCC,製品#BAA−47より
Caulobacter crescentus−ATCC,製品#19089より
Agrobacterium tumefaciens/Rhizobium radiobacter−ATCC,製品#33970より
Brevundimonas diminuta−ATCC,製品#13184より
1リットル5×m63塩:
10gの(NH4)2SO4−P212121,製品#7783−20−2より
68gのKH2PO4−P212121,製品#7778−77−0より
2.5mgのFeSO4.7H2O−Sigma Aldrich,製品#F7002より
容量をmilliQ水で最大1リットルにする。
KOH(P212121,製品#1310−58−3より)でpH7に調整する。
混合物をオートクレーブする。
246.5gのMgSO4 7H2O−P212121,(Sigma Aldrich,製品#10034−99−8)より
容量をmilliQ水で最大1リットルにする。
混合物をオートクレーブする。
133.4mLの5×m63塩
10mLの1M MgSO4
38.6gのグルコース−P212121,製品#50−99−7より
66.6gのスクロース−P212121,製品#57−50−1より
8.33gのLBmix−P212121,製品#lb−millerより
容量をmilliQ水で最大1リットルにする。
混合物を0.22μM細孔真空フィルタ(Sigma Aldrich,製品#CLS430517)で濾過滅菌する。
133.4mLの5×m63塩
10mLの1M MgSO4
38.6gのグルコース−P212121,製品#50−99−7より
66.6gのスクロース−P212121,製品#57−50−1より
10gの酵母抽出物−FisherSci.com,製品#J60287 Alより
容量をmilliQ水で最大1リットルにする。
混合物を0.22μM細孔真空フィルタ(Sigma Aldrich,製品#CLS430517)で濾過滅菌する。
5リットルのバイオリアクター培地MGZ12:
1)1Lの、DI水中濃度500g/Lグルコースをオートクレーブする。(VWR,製品#97061−170)。
2)1Lの、DI水中濃度500g/Lスクロースをオートクレーブする。(Geneseesci.com,製品#62−112)。
3)3946mLのDI水中:
20gの(NH4)2HPO4.(VWR,製品#97061−932).
66.5gのKH2PO4.(VWR,製品#97062−348).
22.5gのH3C6H5O7.(VWR,製品#BDH9228−2.5KG).
2.95gのMgSO4.7H2O.(VWR,製品#97062−134).
10mLの微量金属(Teknova),1000x.(Teknova,製品#T1001).
をオートクレーブする。
オートクレーブ後、400mLの(1)を(3)に添加し、65mLの10M NaOH(VWR,製品#97064−480)を(3)に添加し、666mLの(2)を(3)に添加する。
必要に応じて発酵実行中に、500g/Lのグルコースのフィードを使用し得る。
誘導時に、
50mLの1M MgSO4.7H2Oを5Lバイオリアクターに添加し、
濃度1〜10mMのIPTGに添加する。(carbosynth.com,製品#EI05931).
ホスホマイシン(50μg/mLまたはそれを超える)およびカルベニシリン(100μg/mLまたはそれを超える)を添加する。
最大1Lの容量の振盪フラスコにおける成長のために、大腸菌について1〜1.1のOD600で生理学的スイッチを最適に切り替える。試験した他の種については、培養物をスイッチ培地中で成長させ、培養物が最大OD600に達したら継代培養した。すべての場合において、100〜200ug/mLカルベニシリン(P212121,製品#4800−94−6より)および50〜100ug/mLホスホマイシン(P212121,製品#26016−99−9より)の添加により、生理学的スイッチを切り替える。集団の大部分は、数時間以内にスイッチ状態になる。細胞が生理学的スイッチを受けたことを確認するために、完全焦点システム、Nikon CFI60 Plan Apo 100X NA 1.45対物レンズ、Prior自動フィルタホイールおよびステージ、LED−CFP/YFP/mCherryおよびLED−DA/FI/TXフィルタセット(Semrock)、Lumencor Sola II SE LED照明システムならびにHamamatsu Flash 4.0 V2 CMOSカメラを備えるNikon Ti−Eにより、細胞をイメージングした。
ImageJを使用して画像を分析して、寸法を測定した。スイッチ状態では、外膜の球状輪郭を球として処理して、総体積を計算する(V=(4/3)7πr3)。球内に存在する楕円体として、細胞質体積を計算する(V=(4/3)π*(最長半径)*(短半径)2)。ペリプラズム体積を計算するために、細胞の総体積から細胞質体積を差し引く。
GFPまたはコラーゲン誘導体を有するpET28a(emd Millipore 製品#69864)およびその誘導体を含有する大腸菌BL21(DE3)(NEB 製品#c2527)を、振盪インキュベーターにおいて、50mg/mLカナマイシン(p212121 製品#2251180)を含有するスイッチ培地中、37℃で一晩成長させた。翌日、50mg/mLカナマイシンを含有する新鮮スイッチ培地に一晩培養物の1:10希釈物を入れて、継代培養を開始する。次いで、培養物を生理学的にスイッチし、タンパク質産生を1〜1.1のOD600で同時に誘導する(Molecular Devices Spectramax M2マイクロプレートリーダーによる読み取り)。100ug/mLカルベニシリン、50ug/mLホスホマイシンおよび100ug/mL IPTG(p212121 製品#367−93−1)の添加により、生理学的スイッチおよびタンパク質産生を切り替える。オービタルシェーカー上で、タンパク質発現をスイッチ状態で室温(約22℃)で8時間〜一晩継続する。総タンパク質レベルを定量するために、培養物の混合部分に対してQuick Start(商標)Bradfordタンパク質アッセイを使用し、Molecular Devices Spectramax M2マイクロプレートリーダーにより標準曲線を定量した。タンパク質集団の残りに対する標的タンパク質産生の相対強度を定量するために、Mini−PROTEAN(登録商標)TGX(商標)ゲル上で培養物の混合部分を泳動させ、Bio−Safe(商標)クマシー染色により染色した。
標準的な手順にしたがって、生理学的状態でタンパク質産生を誘導した。本発明者らは、組換えタンパク質のIPTG/ラクトース誘導性産生を駆動するプラスミドpET28aを含有し、DsbAシグナル配列を使用してそれらをペリプラズム空間にターゲティングする株BL21(DE3)を使用した。上記ペリプラズム空間にターゲティングされるGFPタンパク質を使用して、本発明者らは、同じ時間量にわたって同じ光学密度で誘導された非スイッチ細胞集団と比較した場合に、タンパク質産生を増大させて5倍増加させる能力を実証した(図)。誘導は1.1のOD600で最適であり、誘導は10時間継続し、この時点で、産生されたタンパク質を約200mg/mLと測定した。
本明細書の実施例1で議論されている発現系を使用して、全長クラゲコラーゲンを生産した。Podocoryna carnea(クラゲまたはヒドロ虫綱)コラーゲンの野生型全長アミノ酸配列は、配列番号1に提供されている。
Hisタグ、リンカーおよびトロンビン切断部位を有しない全長クラゲコラーゲンは、以下に開示されている。このコラーゲンをコードする2つのコドン最適化ヌクレオチド配列は、配列番号6および配列番号7に提供されている。ヌクレオチド配列の差異は、異なるコドン最適化戦略によるものであるが、同じタンパク質をコードする。アミノ酸配列は配列番号8に開示されている。DsbA分泌タグはヌクレオチド1〜72によりコードされ、アミノ酸1〜24をコードする。コラーゲン配列はヌクレオチド73〜1359によりコードされ、アミノ酸25〜453をコードする。
大腸菌における発現に最適化されたコドン最適化DNA配列であって、240個の内部アミノ酸の短縮を有するクラゲコラーゲンをコードするコドン最適化DNA配列を合成し、発現させた。DNA配列は以下の配列番号9に示されている。配列番号9では、DsbA分泌タグはヌクレオチド1〜72によりコードされ、配列番号10のアミノ酸1〜24をコードする。9個のヒスチジン残基を含むヒスチジンタグはヌクレオチド73〜99によりコードされ、配列番号10のアミノ酸25〜33をコードする。リンカーはヌクレオチド100〜111によりコードされ、配列番号10のアミノ酸34〜37をコードする。トロンビン切断部位はヌクレオチド112〜135によりコードされ、配列番号10のアミノ酸38〜45をコードする。短縮型コラーゲンはヌクレオチド136〜822によりコードされ、配列番号10のアミノ酸46〜274をコードする。
Hisタグ、リンカーおよびトロンビン切断部位を有しない短縮型クラゲコラーゲンは、以下に開示されている。このコラーゲンをコードするコドン最適化ヌクレオチド配列は、配列番号11に提供されている。アミノ酸配列は配列番号12に開示されている。DsbA分泌タグはヌクレオチド1〜72によりコードされ、アミノ酸1〜24をコードする。短縮型コラーゲン配列はヌクレオチド73〜639によりコードされ、アミノ酸25〜213をコードする。
GEKリピートを有するクラゲコラーゲンは、以下に開示されている。このコラーゲンをコードするコドン最適化ヌクレオチド配列は、配列番号13に提供されている。アミノ酸配列は配列番号14に開示されている。DsbA分泌タグは、ヌクレオチド1〜72によりコードされ、アミノ酸1〜24をコードする。GEKリピートはヌクレオチド73〜126によりコードされ、アミノ酸25〜42のGEKリピートをコードする。短縮型コラーゲン配列はヌクレオチド127〜693によりコードされ、アミノ酸43〜231をコードする。
GDKリピートを有するクラゲコラーゲンは、以下に開示されている。このコラーゲンをコードするコドン最適化ヌクレオチド配列は、配列番号15に示されている。アミノ酸配列は配列番号16に開示されている。DsbA分泌タグはヌクレオチド1〜72によりコードされ、アミノ酸1〜24をコードする。GDKリピートはヌクレオチド73〜126によりコードされ、アミノ酸25〜42のGDKリピートをコードする。短縮型コラーゲン配列はヌクレオチド127〜693によりコードされ、アミノ酸43〜231をコードする。
DsbA分泌タグ−Hisタグ−リンカー−トロンビン切断部位およびGFPベータラクタマーゼ融合物を有するクラゲコラーゲンは、以下に開示されている。このコラーゲンをコードするコドン最適化ヌクレオチド配列は、配列番号17に示されている。アミノ酸配列は配列番号18に開示されている。DsbA分泌タグはヌクレオチド1〜72によりコードされ、アミノ酸1〜24をコードする。Hisタグはヌクレオチド73〜99によりコードされ、アミノ酸25〜33の9つのヒスチジンタグをコードする。リンカーはヌクレオチド100〜111によりコードされ、アミノ酸34〜37をコードする。トロンビン切断部位はヌクレオチド112〜135によりコードされ、アミノ酸38〜45をコードする。リンカーを有する緑色蛍光タンパク質(GFP)はヌクレオチド136〜873によりコードされ、アミノ酸46〜291をコードする。短縮型コラーゲン配列はヌクレオチド874〜1440によりコードされ、アミノ酸292〜480をコードする。リンカーを有するベータラクタマーゼはヌクレオチド1441〜2232によりコードされ、アミノ酸481〜744をコードする。ポリペプチドが独立した分泌タグを有しない場合であっても、ベータラクタマーゼはペリプラズム空間に適切にターゲティングされた。DsbA分泌タグは、転写産物全体(DsbA分泌タグ−Hisタグ−リンカー−トロンビン切断部位およびGFPベータラクタマーゼ融合タンパク質を有する短縮型コラーゲン)をペリプラズム空間に指向させ、ベータラクタマーゼは適切に機能した。
DsbA分泌タグ−Hisタグ−リンカー−トロンビン切断部位およびGFPベータラクタマーゼ融合物を有するクラゲコラーゲンは、以下に開示されている。このコラーゲンをコードするコドン最適化ヌクレオチド配列は、配列番号19に提供されている。アミノ酸配列は配列番号20に開示されている。DsbA分泌タグはヌクレオチド1〜72によりコードされ、アミノ酸1〜24をコードする。Hisタグはヌクレオチド73〜99によりコードされ、アミノ酸25〜33の9つのヒスチジンタグをコードする。リンカーはヌクレオチド100〜111によりコードされ、アミノ酸34〜37をコードする。トロンビン切断部位はヌクレオチド112〜135によりコードされ、アミノ酸38〜45をコードする。リンカーを有する緑色蛍光タンパク質(GFP)はヌクレオチド136〜873によりコードされ、アミノ酸46〜291をコードする。短縮型コラーゲン配列はヌクレオチド874〜1440によりコードされ、アミノ酸292〜480をコードする。リンカーを有するベータラクタマーゼはヌクレオチド1441〜2232によりコードされ、アミノ酸481〜744をコードする。
以下に記載されているように、全長ヒトエラスチンを発現させた。ヒトエラスチンの野生型全長アミノ酸配列は、以下に提供されている。
DsbA分泌タグ−Hisタグ−リンカー−トロンビン切断部位を有する全長ヒトエラスチンをコードするコドン最適化ポリヌクレオチド配列は、以下に開示されている。配列番号23では、ヌクレオチド1〜72はDsbA分泌タグをコードし、配列番号24のアミノ酸1〜24をコードする;ヌクレオチド73〜99は9つのHisタグをコードし、配列番号24のアミノ酸25〜33をコードする;ヌクレオチド100〜111はリンカーをコードし、配列番号24のアミノ酸34〜37をコードする;ヌクレオチド112〜135はトロンビン切断タグをコードし、配列番号24のアミノ酸38〜45をコードする;ヌクレオチド136〜2415は、配列番号24の全長ヒトエラスチンのアミノ酸46〜805をコードする。
DsbA分泌タグを有する全長ヒトエラスチンをコードするコドン最適化ポリヌクレオチド配列は、配列番号25に開示されている。配列番号25では、ヌクレオチド1〜72はDsbA分泌タグをコードし、配列番号26のアミノ酸1〜24をコードする;ヌクレオチド73〜2355は、配列番号26の全長ヒトエラスチンのアミノ酸25〜785をコードする。
DsbA分泌タグ−Hisタグ−リンカー−トロンビン切断部位およびGFPベータラクタマーゼ融合物を有するヒトエラスチンは、以下に開示されている。このエラスチンをコードするコドン最適化ヌクレオチド配列は、配列番号27に提供されている。アミノ酸配列は配列番号28に開示されている。DsbA分泌タグはヌクレオチド1〜72によりコードされ、アミノ酸1〜24をコードする。Hisタグはヌクレオチド73〜99によりコードされ、アミノ酸25〜33の9つのヒスチジンタグをコードする。リンカーはヌクレオチド100〜111によりコードされ、アミノ酸34〜37をコードする。トロンビン切断部位はヌクレオチド112〜135によりコードされ、アミノ酸38〜45をコードする。リンカーを有する緑色蛍光タンパク質(GFP)はヌクレオチド136〜873によりコードされ、アミノ酸46〜291をコードする。全長エラスチン配列はヌクレオチド874〜3153によりコードされ、アミノ酸292〜1051をコードする。リンカーを有するベータラクタマーゼはヌクレオチド3154〜3945によりコードされ、アミノ酸1052〜1315をコードする。
実施例4に記載されている発現系を使用して、短縮型ヒトエラスチンを生産する。ネイティブ分泌タグを欠く全長アミノ酸配列は、配列番号29に開示される。
DsbA分泌およびFLAGタグを有する短縮型ヒトエラスチン1のアミノ酸配列は、配列番号98に開示されている。DsbA分泌タグは配列番号99のヌクレオチド1〜57によりコードされ、アミノ酸配列は配列番号98のアミノ酸1〜19である。エラスチンヌクレオチド配列は配列番号99のヌクレオチド58〜657であり、アミノ酸配列は配列番号98のアミノ酸20〜219である。FLAGヌクレオチド配列は配列番号99のヌクレオチド658〜684であり、アミノ酸配列は配列番号98のアミノ酸220〜228である。
DsbA分泌およびFLAGタグを有する短縮型ヒトエラスチンタイプ2のアミノ酸配列は、配列番号100に開示されている。DsbA分泌タグは配列番号101のヌクレオチド1〜57によりコードされ、アミノ酸配列は配列番号100のアミノ酸1〜19である。エラスチンヌクレオチド配列は配列番号101のヌクレオチド58〜657であり、アミノ酸配列は配列番号100のアミノ酸20〜219である。FLAGヌクレオチド配列は配列番号101のヌクレオチド658〜684であり、アミノ酸配列は配列番号100のアミノ酸220〜228である。
ヒト線維芽細胞培養物を使用して、実施例2の短縮型クラゲコラーゲン分子の能力を評価し、プロコラーゲンおよびエラスチン合成に対するその効果を決定した。また、ヒト線維芽細胞培養物を使用して、短縮型クラゲコラーゲンへの曝露後のヒト線維芽細胞の生存度の増加を決定した。
線維芽細胞を、0.5mlの線維芽細胞成長培地(FGM)中で24ウェルプレートの個々のウェルに播種し、37±2℃および5±1%CO2で一晩インキュベートした。翌日、吸引により培地を除去してあらゆる非接着細胞を除去し、0.5mlの新鮮FGMと交換した。細胞をコンフルエントまで成長させ、培地を48〜72時間ごとに交換した。コンフルエンシーに達したら、1.5%FBSを補充したDMEMで細胞を24時間処理して、通常培養培地に含まれる成長因子からのいかなる効果もウォッシュアウトした。24時間のウォッシュアウト期間の後、1.5%FBSを含むFGMに溶解させた特定の濃度の短縮型クラゲコラーゲンで細胞を処理した。コラーゲンおよびエラスチン合成の陽性対照として形質転換成長因子ベータ(TGF−β)(20ng/ml)を使用した。無処理細胞(陰性対照)は、1.5%FBSを含むDMEMのみを受けた。細胞を48時間インキュベートし、インキュベーション期間の終了時に細胞培養培地を収集し、凍結保存(−75℃)するかまたは直ぐにアッセイした。材料を三連で試験した。
MTT(3−(4,5−ジメチルチアゾール−2−イル)−2,5−ジフェニルテトラゾリウムブロミド、テトラゾール)アッセイは、細胞の代謝活性を測定するために使用される比色アッセイである。MTTアッセイにより、細胞数の変化を評価した。細胞がMTTに曝露されると、生存細胞におけるミトコンドリアによるMTTの還元は、紫色の不溶性ホルマジン結晶(これは、イソプロパノールを用いて細胞から抽出され、分光光度的に定量される)の形成をもたらす。非生存細胞はMTTを還元できないので、紫色のホルマジン結晶を産生し得ない。紫色の強度は、生細胞(代謝的に活性な細胞)の数に正比例する。紫色の強度は細胞の代謝活性に正比例し、試験材料の毒性に反比例する。
線維芽細胞は、構造タンパク質であるコラーゲンおよびエラスチンを含む細胞外マトリクスペプチドの主な供給源である。プロコラーゲンは、皮膚の皮層(dermal layer)における線維芽細胞により合成される大きなペプチドであり、コラーゲンの前駆体である。前記ペプチドがプロセシングされて成熟コラーゲンタンパク質が形成され、プロペプチド部分が切断される(タイプI Cペプチド)。次いで、成熟コラーゲンタンパク質およびタイプI Cペプチド断片は両方とも、細胞外環境に放出される。コラーゲンが合成されると、タイプI Cペプチド断片は組織培養培地に蓄積する。プロコラーゲンペプチドの2つの部分の間の化学量論比は1:1であるので、タイプI Cペプチドのアッセイは、合成されたコラーゲンの量を反映するであろう。ELISAベースの方法により、タイプ1 Cペプチドをアッセイし得る。
エラスチンは弾性線維のネットワークの主要な構成要素であり、一過性の伸長後に反跳する能力を組織に与える。このタンパク質は、線維芽細胞(可溶性エラスチン)により細胞外空間に放出され、次いでその場所で他のエラスチンタンパク質と架橋されて、線維およびシート(不溶性エラスチン)の広範なネットワークを形成する。ELISAベースの方法により、細胞培養培地から可溶性エラスチンを容易に測定し得る。
ヒトケラチノサイト細胞培養モデルを使用して、細胞増殖に対する効果を発揮する試験材料の能力を評価した。加えて、UVBへの曝露後の細胞生存度に対する試験材料の影響も評価した。
増殖アッセイのために、ケラチノサイトを、成長因子を含まない96ウェルプレートに播種し、37±2℃および5±1%CO2で24時間インキュベートした。この初期インキュベーションの後、培地を、試験材料を補充した培地と交換した。(成長因子を含む)通常培地を陽性対照として使用した。試験材料の添加後、上記のように細胞を48時間培養した。インキュベーション期間の終了時に、MTTアッセイを使用して、生存細胞の数の変化を決定した。
UVB保護アッセイのために、通常培地を使用して、ケラチノサイトを96ウェルプレートに播種し、37±2℃および5±1%CO2で24時間インキュベートした。この初期インキュベーションの後、培地を100μlのリン酸緩衝生理食塩水(PBS)と交換し、細胞をUVB(40mJ/cm2)に曝露した。UVBへの曝露後、PBSを、試験材料を補充した新鮮培地に交換し(100μg/mlのアスコルビン酸は陽性対照として機能した)、細胞を37±2℃および5±1%CO2で48時間培養した。48時間のインキュベーションの終了時に、MTTアッセイを使用して、細胞生存度を決定した。
48時間のインキュベーションの後、細胞培養培地を除去し、0.5μg/ml MTTを補充した200μlの培養培地と交換した。ウェルプレートを37±2℃および5±1%CO2で1時間インキュベートした。インキュベーションの後、MTT溶液を除去し、細胞をリン酸緩衝生理食塩水で1回洗浄し、次いで、200μlのイソプロピルアルコールをウェルに添加して、紫色のホルマジン結晶を抽出した。ブランクとしてイソプロピルアルコールを使用して、96ウェルプレートを540nmで読み取った。
紫外線への曝露により、細胞中に存在するDNAのチミンダイマー(TTダイマー)の含有量は増加する。TTダイマー形成の増加は、皮膚損傷および皮膚がんを含む特定のタイプの細胞増殖性疾患と相関する。
短縮型ヒトコラーゲンタイプ21アルファ1
Hisタグ、リンカーおよびトロンビン切断部位を有しない短縮型ヒトコラーゲンタイプ21アルファ1は、以下に開示されている。このコラーゲンをコードするコドン最適化ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、以下に開示されている。配列番号73および74では、DsbA分泌タグはヌクレオチド1〜72によりコードされ、アミノ酸1〜24をコードする。配列番号73および74では、短縮型コラーゲン配列はヌクレオチド73〜633によりコードされ、アミノ酸25〜211をコードする。
Hisタグ、リンカーおよびトロンビン切断部位を有しない短縮型ヒトコラーゲンタイプ1アルファ2は、以下に開示されている。コドン最適化ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、以下に開示されている。配列番号78および79では、DsbA分泌タグはヌクレオチド1〜72によりコードされ、アミノ酸1〜24をコードする。短縮型コラーゲン配列はヌクレオチド73〜636によりコードされ、アミノ酸25〜212をコードする。
Hisタグ、リンカーおよびトロンビン切断部位を有しない短縮型ヒトコラーゲンタイプ1アルファ2は、以下に開示されている。コドン最適化ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、以下に開示されている。配列番号82および83では、DsbA分泌タグはヌクレオチド1〜72によりコードされ、アミノ酸1〜24をコードする。短縮型コラーゲン配列はヌクレオチド73〜609によりコードされ、アミノ酸25〜203をコードする。
DsbA分泌およびFLAGタグを有する短縮型ヒトコラーゲンタイプ1アルファ2短縮5のアミノ酸配列は、配列番号92に開示されている。DsbA分泌タグは配列番号93のヌクレオチド1〜57によりコードされ、アミノ酸配列は配列番号92のアミノ酸1〜19である。コラーゲンヌクレオチド配列は配列番号93のヌクレオチド58〜657であり、アミノ酸配列は配列番号92のアミノ酸20〜219である。FLAGヌクレオチド配列は配列番号93のヌクレオチド658〜684であり、アミノ酸配列はアミノ酸220〜228である。
DsbA分泌およびFLAGタグを有する短縮型ヒトコラーゲンタイプ1アルファ2短縮6のアミノ酸配列は、配列番号94に開示されている。DsbA分泌タグは配列番号95のヌクレオチド1〜57によりコードされ、アミノ酸配列は配列番号94のアミノ酸1〜19である。コラーゲンヌクレオチド配列は配列番号95のヌクレオチド58〜657であり、アミノ酸配列は配列番号94のアミノ酸20〜219である。FLAGヌクレオチド配列は配列番号95のヌクレオチド658〜684であり、アミノ酸配列は配列番号94のアミノ酸220〜228である。
DsbA分泌およびFLAGタグを有する短縮型ヒトコラーゲンタイプ1アルファ2短縮7のアミノ酸配列は、配列番号96に開示されている。DsbA分泌タグは配列番号97のヌクレオチド1〜57によりコードされ、アミノ酸配列は配列番号96のアミノ酸1〜19である。コラーゲンヌクレオチド配列は配列番号96のヌクレオチド58〜759であり、アミノ酸配列は配列番号96のアミノ酸20〜253である。FLAGヌクレオチド配列は配列番号97のヌクレオチド760〜786であり、アミノ酸配列は配列番号96のアミノ酸254〜262である。
実施例6の方法にしたがって、線維芽細胞生存度、プロコラーゲン合成およびエラスチン合成に対する短縮型ヒトコラーゲンの効果を決定する。
ケラチノサイトおよび皮膚線維芽細胞は、皮膚の免疫反応において重要な役割を果たす。刺激性化学物質またはUV照射(炎症促進性/刺激促進性(pro-irriation)刺激)に応答して、ケラチノサイトは広範なサイトカインを放出し得る。これらのサイトカインは、炎症部位への免疫細胞の関与を支援すると考えられる。ケラチノサイトにより放出されるサイトカインとしては、TNFα、IL−1α、IL−1β、IL−3、IL−6、IL−7、IL−8、IL−10、IL−18およびIL−1RAが挙げられる。
ケラチノサイト細胞培養モデルを使用して、アーバンダストへの曝露後の細胞生存を促進することにより保護効果を発揮する短縮型コラーゲンの能力を評価した。
細胞培養培地中で、試験材料を2×最終所望濃度で調製した。アーバンダスト(Sigma ChemicalsのNIST1649B)も2×溶液で調製した。前処理のために、50μlの2×試験材料を50μlの培養培地と合わせ、細胞を24時間インキュベートした。前処理期間の終了時に、試験材料含有培養培地を除去し、50μlの2×アーバンダストおよび50μlの培地と交換した。別の細胞セットを培地のみで処理し(非ダスト曝露)、100%細胞生存度を表すための参照対照として使用した。次いで、細胞を24時間インキュベートし、次いで、MTTアッセイに供して、細胞生存度の変化を決定した。
DsbA分泌およびFLAGタグを有する短縮型Chondrosia reniformis(ジンゾウナンコツカイメン)線維状コラーゲン1
DsbA分泌およびFLAGタグを有する短縮型Chondrosia reniformis線維状コラーゲン1のアミノ酸配列は、配列番号102に開示されている。DsbA分泌タグは配列番号103のヌクレオチド1〜57によりコードされ、アミノ酸配列は配列番号102のアミノ酸1〜19である。線維状コラーゲンヌクレオチド配列は配列番号103のヌクレオチド58〜792であり、アミノ酸配列は配列番号102のアミノ酸20〜264である。FLAGヌクレオチド配列は配列番号103のヌクレオチド793〜819であり、アミノ酸配列は配列番号102のアミノ酸265〜273である。
DsbA分泌およびFLAGタグを有する短縮型Chondrosia reniformis線維状コラーゲン2のアミノ酸配列は、配列番号104に開示されている。DsbA分泌タグは配列番号105のヌクレオチド1〜57によりコードされ、アミノ酸配列は配列番号104のアミノ酸1〜19である。線維状コラーゲンヌクレオチド配列は配列番号105のヌクレオチド58〜1323であり、アミノ酸配列は配列番号104のアミノ酸20〜441である。FLAGヌクレオチド配列は配列番号105のヌクレオチド1324〜1350であり、アミノ酸配列は配列番号105のアミノ酸442〜450である。
DsbA分泌およびFLAGタグを有する短縮型Chondrosia reniformis非線維状コラーゲン1のアミノ酸配列は、配列番号106に開示されている。DsbA分泌タグは配列番号107のヌクレオチド1〜57によりコードされ、アミノ酸配列は配列番号106のアミノ酸1〜19である。非線維状コラーゲンヌクレオチド配列は配列番号107のヌクレオチド58〜831であり、アミノ酸配列は配列番号106のアミノ酸20〜277である。FLAGヌクレオチド配列は配列番号107のヌクレオチド832〜858であり、アミノ酸配列は配列番号106のアミノ酸278〜286である。
DsbA分泌およびFLAGタグを有する短縮型Chondrosia reniformis非線維状コラーゲン2のアミノ酸配列は、配列番号108に開示されている。DsbA分泌タグは配列番号109のヌクレオチド1〜57によりコードされ、アミノ酸配列は配列番号108のアミノ酸1〜19である。非線維状コラーゲンヌクレオチド配列は配列番号109のヌクレオチド58〜1509であり、アミノ酸配列は配列番号108のアミノ酸20〜503である。FLAGヌクレオチド配列は配列番号109のヌクレオチド1510〜1536であり、アミノ酸配列は配列番号108のアミノ酸504〜512である。
DsbA分泌およびFLAGタグを有する短縮型Rhincodon typus(ジンベイザメ)コラーゲンタイプ1アルファ1短縮1
DsbA分泌およびFLAGタグを有する短縮型Rhincodon typusコラーゲンタイプ1短縮1のアミノ酸配列は、配列番号110に開示されている。DsbA分泌タグは配列番号111のヌクレオチド1〜57によりコードされ、アミノ酸配列は配列番号110のアミノ酸1〜19である。コラーゲンヌクレオチド配列は配列番号111のヌクレオチド58〜630であり、アミノ酸配列は配列番号110のアミノ酸20〜210である。FLAGヌクレオチド配列は配列番号111のヌクレオチド631〜657であり、アミノ酸配列は配列番号110のアミノ酸211〜219である。
DsbA分泌およびFLAGタグを有する短縮型Rhincodon typusコラーゲンタイプ6短縮2のアミノ酸配列は、配列番号112に開示されている。DsbA分泌タグは配列番号113のヌクレオチド1〜57によりコードされ、アミノ酸配列は配列番号112のアミノ酸1〜19である。コラーゲンヌクレオチド配列は配列番号113のヌクレオチド58〜684であり、アミノ酸配列は配列番号112のアミノ酸20〜228である。FLAGヌクレオチド配列は配列番号113のヌクレオチド685〜711であり、アミノ酸配列は配列番号112のアミノ酸229〜237である。
DsbA分泌およびFLAGタグを有する短縮型Rhincodon typusコラーゲンタイプ6アルファ1短縮3のアミノ酸配列は、配列番号114に開示されている。DsbA分泌タグは配列番号115のヌクレオチド1〜57によりコードされ、アミノ酸配列は配列番号114のアミノ酸1〜19である。コラーゲンヌクレオチド配列は配列番号115のヌクレオチド58〜735であり、アミノ酸配列は配列番号114のアミノ酸20〜245である。FLAGヌクレオチド配列は配列番号115のヌクレオチド736〜762であり、アミノ酸配列は配列番号114のアミノ酸246〜254である。
Claims (70)
- クラゲコラーゲン、ヒト、Chondrosia reniformis(ジンゾウナンコツカイメン)およびRhincodon typus(ジンベイザメ)からなる群より選択される、天然に存在しないコラーゲン。
- 短縮されている、請求項1に記載の天然に存在しないコラーゲン。
- 50アミノ酸〜300アミノ酸の内部短縮により短縮されている、請求項2に記載の天然に存在しない短縮型コラーゲン。
- 前記コラーゲンのアミノ酸配列が、配列番号10、配列番号12、配列番号14、配列番号16、配列番号18、配列番号20、配列番号74、配列番号76、配列番号78、配列番号80、配列番号82、配列番号84、配列番号86、配列番号89、配列番号91、配列番号92、配列番号94、配列番号96、配列番号102、配列番号104、配列番号106、配列番号配列番号108、配列番号110および配列番号112からなる群より選択される、請求項1〜3のいずれかに記載の天然に存在しないコラーゲン。
- 分泌タグ、ヒスチジンタグ、緑色蛍光タンパク質、プロテアーゼ切断部位およびベータラクタマーゼタンパク質からなる群より選択されるアミノ酸配列をさらに含む、請求項1〜4のいずれかに記載の天然に存在しないコラーゲン。
- 前記分泌タグがDsbAである、請求項5に記載の天然に存在しないコラーゲン。
- 配列グリシン−グルタミン酸−リジン(GEK)および/またはグリシン−アスパラギン酸−リジン(GDK)の1つまたはそれを超えるアミノ酸トリマーリピートをさらに含む、請求項1〜6のいずれかに記載の天然に存在しないコラーゲン。
- 2〜50個のアミノ酸トリマーリピートを含む、請求項7に記載の天然に存在しないコラーゲン。
- クラゲコラーゲンである、請求項1〜8のいずれかに記載の天然に存在しないコラーゲン。
- 0.005%〜30%w/wの請求項1〜9のいずれかに記載の天然に存在しないコラーゲンを含む組成物であって、線維芽細胞の成長を刺激し、および/またはプロコラーゲンの合成を刺激し、および/またはチミン−チミン(TT)ダイマー形成の形成を減少させる、組成物。
- 0.005%〜1%の天然に存在しないコラーゲンを含む、請求項10に記載の組成物。
- 0.01%〜1%の天然に存在しないコラーゲンを含む、請求項10に記載の組成物。
- 0.02%〜0.5%の天然に存在しないコラーゲンを含む、請求項10に記載の組成物。
- 局所用担体および/または保存剤を含む少なくとも1つのさらなる成分をさらに含む局所用組成物である、請求項10〜13のいずれかに記載の組成物。
- 前記局所用組成物がマスクである、請求項14に記載の組成物。
- 前記局所用担体が、リポソーム、生分解性マイクロカプセル、ローション、スプレー、エアロゾル、ダスティングパウダー、生分解性ポリマー、鉱油、トリグリセリドオイル、シリコーンオイル、グリセリン、モノステアリン酸グリセリン、アルコール、乳化剤、流動石油、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン、ワックス、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、2−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、シクロメチコン、シクロペンタシロキサンおよび水からなる群より選択される、請求項14または15に記載の局所用組成物。
- 前記保存剤が、トコフェロール、ジヨードメチル−p−トリルスルホン、2−ブロモ−2−ニトロプロパン−1,3−ジオール、シス異性体1−(3−クロロアリル)−3,5,7−トリアザ−1−アゾニアアダマンタンクロリド、グルタルアルデヒド、4,4−ジメチルオキサゾリジン、7−エチルビシクロオキサゾリジン、メチルパラベン、ソルビン酸、GermabenII、ローズマリーエキスおよびEDTAからなる群より選択される、請求項14〜16のいずれかに記載の局所用組成物。
- 皮膚損傷を低減するか、損傷皮膚の修復を促進するか、UV損傷から皮膚を保護するか、または皮膚細胞の生存度を増加させる方法であって、請求項1〜17のいずれかに記載の組成物を被験体の皮膚または皮膚細胞に適用する工程を含む、方法。
- 前記被験体の皮膚中に存在する線維芽細胞の生存度を増加させる、請求項18に記載の方法。
- 前記被験体の皮膚中に存在する線維芽細胞によるプロコラーゲンの合成を増加させる、請求項18に記載の方法。
- クラゲエラスチン、ヒトエラスチン、Chondrosia reniformis(ジンゾウナンコツカイメン)エラスチンまたはRhincodon typusエラスチンからなる群より選択される、天然に存在しないエラスチン。
- 短縮されている、請求項21に記載の天然に存在しないエラスチン。
- 少なくとも50アミノ酸の短縮により短縮されている、請求項22に記載の天然に存在しない短縮型エラスチン。
- 前記エラスチンのアミノ酸配列が、配列番号31、配列番号33、配列番号35、配列番号37、配列番号39、配列番号41、配列番号43、配列番号45、配列番号47、配列番号49、配列番号51、配列番号53、配列番号55、配列番号57、配列番号59、配列番号61、配列番号63、配列番号65、配列番号67、配列番号69、配列番号71、配列番号98および配列番号100からなる群より選択される、請求項21〜23のいずれかに記載の天然に存在しないエラスチン。
- 分泌タグ、ヒスチジンタグ、緑色蛍光タンパク質、プロテアーゼ切断部位およびベータラクタマーゼタンパク質からなる群より選択されるアミノ酸配列をさらに含む、請求項21〜24のいずれかに記載の天然に存在しないエラスチン。
- 前記分泌タグがDsbAである、請求項25に記載の天然に存在しないエラスチン。
- 配列グリシン−グルタミン酸−リジン(GEK)および/またはグリシン−アスパラギン酸−リジン(GDK)の1つまたはそれを超えるアミノ酸トリマーリピートをさらに含む、請求項21〜26のいずれかに記載の天然に存在しないエラスチン。
- 2〜50個のアミノ酸トリマーリピートを含む、請求項27に記載の天然に存在しないエラスチン。
- ヒトのものである、請求項21〜28のいずれかに記載の天然に存在しないエラスチン。
- 0.005%〜30%w/wの請求項21〜29のいずれかに記載の天然に存在しないエラスチンを含む組成物であって、線維芽細胞の成長を刺激し、および/またはプロコラーゲンの合成を刺激する、組成物。
- 0.005%〜1%の天然に存在しないエラスチンを含む、請求項30に記載の組成物。
- 0.01%〜1%の天然に存在しないエラスチンを含む、請求項30に記載の組成物。
- 0.02%〜0.5%の天然に存在しないエラスチンを含む、請求項30に記載の組成物。
- 局所用担体および/または保存剤を含む少なくとも1つのさらなる成分をさらに含む局所用組成物である、請求項30〜33のいずれかに記載の組成物。
- 前記局所用組成物がマスクである、請求項34に記載の組成物。
- 前記局所用担体が、リポソーム、生分解性マイクロカプセル、ローション、スプレー、エアロゾル、ダスティングパウダー、生分解性ポリマー、鉱油、トリグリセリドオイル、シリコーンオイル、グリセリン、モノステアリン酸グリセリン、アルコール、乳化剤、流動石油、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン、ワックス、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、2−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、シクロメチコン、シクロペンタシロキサンおよび水からなる群より選択される、請求項34または35に記載の局所用組成物。
- 前記保存剤が、トコフェロール、ジヨードメチル−p−トリルスルホン、2−ブロモ−2−ニトロプロパン−1,3−ジオール、グルタルアルデヒド、4,4−ジメチルオキサゾリジン、7−エチルビシクロオキサゾリジン、メチルパラベン、ソルビン酸、GermabenII、ローズマリーエキスおよびEDTAからなる群より選択される、請求項34〜36のいずれかに記載の局所用組成物。
- 皮膚損傷を低減するか、損傷皮膚の修復を促進するか、またはUV損傷から皮膚を保護する方法であって、請求項21〜37のいずれかに記載の組成物を被験体の皮膚に適用する工程を含む、方法。
- 前記被験体の皮膚中に存在する線維芽細胞またはケラチノサイトの生存度を増加させる、請求項38に記載の方法。
- 前記被験体の皮膚中に存在する線維芽細胞によるプロコラーゲンの合成を増加させる、請求項38に記載の方法。
- 天然に存在しないコラーゲンをコードするポリヌクレオチドであって、配列番号9、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号19、配列番号73、配列番号75、配列番号77、配列番号79、配列番号81、配列番号83、配列番号85、配列番号90、配列番号93、配列番号95、配列番号97、配列番号103、配列番号105、配列番号107、配列番号109、配列番号111、配列番号113および配列番号105からなる群より選択される、ポリヌクレオチド。
- ベクターである、請求項41に記載のポリヌクレオチド。
- 分泌タグをコードする核酸、ヒスチジンタグをコードする核酸、緑色蛍光タンパク質をコードする核酸、プロテアーゼ切断部位をコードする核酸およびベータラクタマーゼタンパク質をコードする核酸からなる群より選択される核酸をさらに含む、請求項41または42に記載のポリヌクレオチド。
- 配列グリシン−グルタミン酸−リジン(GEK)および/またはグリシン−アスパラギン酸−リジン(GDK)の1つまたはそれを超えるアミノ酸トリマーリピートをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項41〜43のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
- 請求項41または45のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含む、宿主細胞。
- 天然に存在しないコラーゲンを宿主細胞のペリプラズム空間に輸送する、請求項48に記載の宿主細胞。
- クラゲコラーゲンを産生する、請求項45または46に記載の宿主細胞。
- グラム陰性細菌である、請求項45〜47のいずれかに記載の宿主細胞。
- 大腸菌である、請求項48に記載の方法。
- 前記大腸菌がスイッチ大腸菌である、請求項49に記載の方法。
- 天然に存在しないコラーゲンを生産する方法であって、
a.培養培地中で、請求項45〜50のいずれかに記載の宿主細胞を培養する工程;および
b.前記宿主細胞から前記天然に存在しないコラーゲンを単離する工程
を含む、方法。 - 天然に存在しないエラスチンをコードするポリヌクレオチドであって、配列番号34、配列番号36、配列番号38、配列番号40、配列番号42、配列番号44、配列番号46、配列番号48、配列番号50、配列番号52、配列番号54、配列番号56、配列番号58、配列番号60、配列番号62、配列番号64、配列番号66、配列番号68、配列番号70、配列番号72、配列番号99および配列番号101からなる群より選択される、ポリヌクレオチド。
- ベクターである、請求項52に記載のポリヌクレオチド。
- 分泌タグをコードする核酸、ヒスチジンタグをコードする核酸、緑色蛍光タンパク質をコードする核酸、プロテアーゼ切断部位をコードする核酸およびベータラクタマーゼタンパク質をコードする核酸からなる群より選択される核酸をさらに含む、請求項52または53に記載のポリヌクレオチド。
- 配列グリシン−グルタミン酸−リジン(GEK)および/またはグリシン−アスパラギン酸−リジン(GDK)の1つまたはそれを超えるアミノ酸トリマーリピートをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項52〜54のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
- 請求項52〜55のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含む、宿主細胞。
- 天然に存在しないコラーゲンを前記宿主細胞のペリプラズム空間に輸送する、請求項56に記載の宿主細胞。
- クラゲコラーゲンを産生する、請求項56または57に記載の宿主細胞。
- グラム陰性細菌である、請求項56〜58のいずれかに記載の宿主細胞。
- 大腸菌である、請求項59に記載の方法。
- 前記大腸菌がスイッチ大腸菌である、請求項60に記載の方法。
- 天然に存在しないエラスチンを生産する方法であって、
a.培養培地中で、請求項56〜61のいずれかに記載の宿主細胞を培養する工程;および
b.前記宿主細胞から前記天然に存在しないエラスチンを単離する工程
を含む、方法。 - 皮膚細胞による炎症性サイトカインの産生を減少させる方法であって、請求項1〜17のいずれかに記載の組成物を前記皮膚細胞に適用する工程を含む、方法。
- 前記炎症性サイトカインがIL−1aである、請求項63に記載の方法。
- 前記皮膚細胞がケラチノサイトである、請求項63に記載の方法。
- 皮膚細胞の生存度を増加させる方法であって、請求項1〜17のいずれかに記載の組成物を被験体の皮膚または皮膚細胞に適用する工程を含む、方法。
- 前記被験体の皮膚中に存在するケラチノサイトの生存度を増加させる、請求項66に記載の方法。
- 前記被験体の皮膚中に存在する線維芽細胞の生存度を増加させる、請求項66に記載の方法。
- アーバンダストへの曝露の影響から皮膚細胞を保護する方法であって、請求項1〜17のいずれかに記載の組成物を皮膚細胞に適用する工程を含み、ここで前記皮膚細胞の生存度が増加される、方法。
- 前記皮膚細胞がケラチノサイトまたは線維芽細胞である、請求項69に記載の方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2023171686A JP2023169436A (ja) | 2017-09-28 | 2023-10-02 | 組換えコラーゲンおよびエラスチン分子ならびにそれらの使用 |
Applications Claiming Priority (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201762564964P | 2017-09-28 | 2017-09-28 | |
US62/564,964 | 2017-09-28 | ||
US201862657591P | 2018-04-13 | 2018-04-13 | |
US62/657,591 | 2018-04-13 | ||
US16/144,914 | 2018-09-27 | ||
US16/144,914 US11180541B2 (en) | 2017-09-28 | 2018-09-27 | Recombinant collagen and elastin molecules and uses thereof |
PCT/US2018/053601 WO2019068018A2 (en) | 2017-09-28 | 2018-09-28 | RECOMBINANT COLLAGEN AND ELASTIN MOLECULES AND USES THEREOF |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023171686A Division JP2023169436A (ja) | 2017-09-28 | 2023-10-02 | 組換えコラーゲンおよびエラスチン分子ならびにそれらの使用 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020535812A true JP2020535812A (ja) | 2020-12-10 |
JP2020535812A5 JP2020535812A5 (ja) | 2021-11-04 |
JP7361021B2 JP7361021B2 (ja) | 2023-10-13 |
Family
ID=64051667
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020517957A Active JP7361021B2 (ja) | 2017-09-28 | 2018-09-28 | 組換えコラーゲンおよびエラスチン分子ならびにそれらの使用 |
JP2023171686A Pending JP2023169436A (ja) | 2017-09-28 | 2023-10-02 | 組換えコラーゲンおよびエラスチン分子ならびにそれらの使用 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023171686A Pending JP2023169436A (ja) | 2017-09-28 | 2023-10-02 | 組換えコラーゲンおよびエラスチン分子ならびにそれらの使用 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (6) | US11180541B2 (ja) |
EP (2) | EP3785727A1 (ja) |
JP (2) | JP7361021B2 (ja) |
KR (1) | KR20200122292A (ja) |
CN (2) | CN116178525A (ja) |
AU (1) | AU2018338986A1 (ja) |
BR (1) | BR112020006055A2 (ja) |
CA (1) | CA3077407A1 (ja) |
GB (1) | GB2583587A (ja) |
IL (1) | IL273620A (ja) |
SG (2) | SG11202002804SA (ja) |
WO (1) | WO2019068018A2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2022518881A (ja) * | 2019-04-01 | 2022-03-17 | ジェルター, インコーポレイテッド | 組換えコラーゲンの局所製剤 |
Families Citing this family (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US11180541B2 (en) | 2017-09-28 | 2021-11-23 | Geltor, Inc. | Recombinant collagen and elastin molecules and uses thereof |
WO2019098246A1 (ja) * | 2017-11-14 | 2019-05-23 | 国立大学法人筑波大学 | 改変されたコラーゲンタンパク質およびその用途 |
TW202104254A (zh) * | 2019-04-12 | 2021-02-01 | 美商格爾托公司 | 重組彈性蛋白及其生產 |
CN115298212A (zh) * | 2020-01-24 | 2022-11-04 | 格尔托公司 | 无动物膳食胶原蛋白 |
CN111557862A (zh) * | 2020-06-08 | 2020-08-21 | 武汉幸福益生再生医学科技有限公司 | 一种医用重组人源胶原蛋白及其制造方法 |
IL299378A (en) * | 2020-07-21 | 2023-02-01 | Amunix Pharmaceuticals Inc | Preparations and methods related to operable medical agents |
CN111956521A (zh) * | 2020-09-16 | 2020-11-20 | 上海海盈通感光材料有限公司 | 一种护发组合物及其应用,采用该组合物的护发素和头皮精华及其制备方法 |
EP4221679A1 (en) * | 2020-09-30 | 2023-08-09 | Geltor, Inc. | Compositions comprising combinations of collagen or elastin polypeptides with active ingredients and methods of using same |
JP2023548655A (ja) * | 2020-10-08 | 2023-11-20 | ジェラテック インコーポレイテッド | 動物細胞株および/または組織外植片からのコラーゲンおよび/またはゼラチンの産生、単離および/または抽出 |
CN112505331B (zh) * | 2020-11-20 | 2024-03-01 | 阿里生物技术泰州有限公司 | Iv胶原蛋白检测试剂盒 |
CN114540363B (zh) * | 2022-02-17 | 2024-05-28 | 江南大学 | 一种类人胶原蛋白重组毕赤酵母工程菌的构建和蛋白快速纯化方法 |
WO2023194333A1 (en) | 2022-04-04 | 2023-10-12 | Swiftpharma Bv | Recombinant spider silk-reinforced collagen proteins produced in plants and the use thereof |
CN116173291A (zh) * | 2023-03-08 | 2023-05-30 | 重庆医科大学附属第二医院 | 一种壳聚糖重组人源化胶原蛋白凝胶及其制备方法与应用 |
CN116218864B (zh) * | 2023-04-10 | 2024-01-09 | 山东多美康生物医药有限公司 | 一种重组Ⅲ型人源化胶原蛋白α1及其表达载体和应用 |
CN117551184A (zh) * | 2023-11-07 | 2024-02-13 | 陕西冠图生物科技有限公司 | 一种重组弹性蛋白和制备方法及其用途 |
CN118064468A (zh) * | 2024-04-12 | 2024-05-24 | 山东兴瑞生物科技有限公司 | 一种重组弹性蛋白、制备方法及其应用 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003516730A (ja) * | 1999-11-12 | 2003-05-20 | ファイブローゲン、インコーポレーテッド | 組換えゼラチン |
US6903200B1 (en) * | 2000-12-27 | 2005-06-07 | Industrial Technology Research Institute | Human α1 chain collagen |
US20130237486A1 (en) * | 2010-11-12 | 2013-09-12 | The University Of Manchester | Collagen |
JP2017523780A (ja) * | 2014-07-25 | 2017-08-24 | デルフィ ジェネティクス | タンパク質を産生させるために改善した宿主細胞 |
Family Cites Families (106)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4515893A (en) | 1979-04-26 | 1985-05-07 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Hybrid cell line for producing complement-fixing monoclonal antibody to human T cells |
ZA811368B (en) | 1980-03-24 | 1982-04-28 | Genentech Inc | Bacterial polypedtide expression employing tryptophan promoter-operator |
GB8308235D0 (en) | 1983-03-25 | 1983-05-05 | Celltech Ltd | Polypeptides |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US5672347A (en) | 1984-07-05 | 1997-09-30 | Genentech, Inc. | Tumor necrosis factor antagonists and their use |
US4946778A (en) | 1987-09-21 | 1990-08-07 | Genex Corporation | Single polypeptide chain binding molecules |
IL85035A0 (en) | 1987-01-08 | 1988-06-30 | Int Genetic Eng | Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same |
US5091313A (en) | 1988-08-05 | 1992-02-25 | Tanox Biosystems, Inc. | Antigenic epitopes of IgE present on B cell but not basophil surface |
US5720937A (en) | 1988-01-12 | 1998-02-24 | Genentech, Inc. | In vivo tumor detection assay |
ATE113846T1 (de) | 1988-06-21 | 1994-11-15 | Genentech Inc | Therapeutische zusammensetzungen für die behandlung von myocard-infarkten. |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
US5602183A (en) * | 1991-03-01 | 1997-02-11 | Warner-Lambert Company | Dermatological wound healing compositions and methods for preparing and using same |
JP3457962B2 (ja) | 1991-08-14 | 2003-10-20 | ジェネンテク,インコーポレイテッド | 特定Fcεレセプターのための免疫グロブリン変異体 |
IT1249711B (it) * | 1991-09-30 | 1995-03-09 | Boniscontro E Gazzone S R L | Composizioni farmaceutiche, per uso topico, contenenti "scavengers" di radicali liberi dell'ossigeno e antibatterici,indicate nella terapia dei tessuti superficiali. |
CA2140280A1 (en) | 1992-08-17 | 1994-03-03 | Avi J. Ashkenazi | Bispecific immunoadhesins |
WO1994004188A1 (en) | 1992-08-21 | 1994-03-03 | Genentech, Inc. | Method for treating an lfa-1-mediated disorder |
US5736137A (en) | 1992-11-13 | 1998-04-07 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma |
US6653450B1 (en) | 1993-01-28 | 2003-11-25 | Cohesion Technologies, Inc. | Mutated recombinant collagens |
CA2176811C (en) | 1993-12-10 | 2008-01-29 | David Tai Wai Fei | Methods for diagnosis of allergy and screening of anti-allergy therapeutics |
DE69501817T2 (de) | 1994-01-18 | 1998-09-10 | Genentech Inc | Verfahren zur behandlung von parasitären infektionen unter verwendung von ige-antagonisten |
US5707622A (en) | 1994-03-03 | 1998-01-13 | Genentech, Inc. | Methods for treating ulcerative colitis |
IL117645A (en) | 1995-03-30 | 2005-08-31 | Genentech Inc | Vascular endothelial cell growth factor antagonists for use as medicaments in the treatment of age-related macular degeneration |
AU6267896A (en) | 1995-06-07 | 1996-12-30 | Imclone Systems Incorporated | Antibody and antibody fragments for inhibiting the growth oftumors |
ES2183131T3 (es) | 1996-01-23 | 2003-03-16 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-cd18 utilizados contra el ictus cerebral. |
JP2000508544A (ja) | 1996-04-12 | 2000-07-11 | ファイブローゲン,インコーポレーテッド | 組換えdna系におけるヒトプロコラーゲンおよびコラーゲンの合成 |
US7147851B1 (en) | 1996-08-15 | 2006-12-12 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Humanized immunoglobulin reactive with α4β7 integrin |
DK0941344T3 (da) | 1996-11-27 | 2004-09-27 | Genentech Inc | Humaniserede anti-CD11a-antistoffer |
FR2757874B1 (fr) | 1996-12-17 | 2003-04-25 | Biocem | Collagenes recombinants et proteines derivees produits par les plantes, leurs procedes d'obtention et leurs utilisations |
WO1998045331A2 (en) | 1997-04-07 | 1998-10-15 | Genentech, Inc. | Anti-vegf antibodies |
PT1860187E (pt) | 1997-05-15 | 2011-10-04 | Genentech Inc | Receptor apo-2 |
AUPO811797A0 (en) | 1997-07-18 | 1997-08-14 | University Of Sydney, The | Tropoelastin derivatives |
US6428978B1 (en) | 1998-05-08 | 2002-08-06 | Cohesion Technologies, Inc. | Methods for the production of gelatin and full-length triple helical collagen in recombinant cells |
WO2000009018A1 (en) | 1998-08-10 | 2000-02-24 | Fibrogen, Inc. | Collagen type i and type iii hemostatic compositions for use as a vascular sealant and wound dressing |
EP1323820B1 (en) | 1998-10-28 | 2008-11-26 | Genentech, Inc. | Process for facillitated recovery of heterologous proteins from bacterial cells |
US6946129B1 (en) | 1999-06-08 | 2005-09-20 | Seattle Genetics, Inc. | Recombinant anti-CD40 antibody and uses thereof |
ES2309012T3 (es) | 1999-10-29 | 2008-12-16 | Genentech, Inc. | Composiciones del anticuerpo anti-psca y a sus procedimientos contra celulas cancerigenas que expresen psca. |
US6992172B1 (en) | 1999-11-12 | 2006-01-31 | Fibrogen, Inc. | Recombinant gelatins |
US20020090672A1 (en) * | 2000-01-31 | 2002-07-11 | Rosen Craig A. | Nucleic acids, proteins, and antibodies |
WO2001058943A1 (fr) * | 2000-02-14 | 2001-08-16 | Bf Research Institute, Inc. | Nouvelle proteine clac du type collagene, precurseur de ladite proteine, et genes codant pour cette proteine |
US6682760B2 (en) | 2000-04-18 | 2004-01-27 | Colbar R&D Ltd. | Cross-linked collagen matrices and methods for their preparation |
CN1177049C (zh) * | 2001-09-12 | 2004-11-24 | 上海新世界基因技术开发有限公司 | 编码具有抑制癌细胞生长功能的人蛋白的多核苷酸 |
AUPS242702A0 (en) * | 2002-05-21 | 2002-06-13 | Colltech Australia Limited | Improved method for the extraction and purification of collagen |
BRPI0316779B8 (pt) | 2002-12-16 | 2023-02-28 | Genentech Inc | Anticorpo anti-cd20 humano ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, seus usos, composição, artigo manufaturado e formulação líquida |
WO2005021772A1 (en) | 2003-08-29 | 2005-03-10 | Degussa Ag | Process for the preparation of l-lysine |
GB0321100D0 (en) | 2003-09-09 | 2003-10-08 | Celltech R&D Ltd | Biological products |
TW200517398A (en) * | 2003-11-21 | 2005-06-01 | Ind Tech Res Inst | Method for recombinant protein purification, modification and immobilization |
EP1584630A1 (en) | 2004-04-08 | 2005-10-12 | Nederlandse Organisatie voor toegepast-natuurwetenschappelijk Onderzoek TNO | Method for preparing a modified protein outside a host cell |
ES2361325T3 (es) * | 2004-06-28 | 2011-06-16 | The University Of Western Australia | Oligonucleótidos antisentido para inducir la omisión de exón y métodos de uso de los mismos. |
DE602006015289D1 (de) | 2005-02-23 | 2010-08-19 | Fujifilm Mfg Europe Bv | Nicht-glycosylierte rekombinante collagen-ähnliche polypeptide |
AU2006255140A1 (en) | 2005-06-03 | 2006-12-14 | The Texas A & M University System | Specific binding sites in collagen for integrins and use thereof |
US7495076B2 (en) | 2005-10-13 | 2009-02-24 | Gu Jennifer L | Mineral collagen chelates and methods of making and using same |
US7279329B2 (en) | 2005-10-17 | 2007-10-09 | Industrial Technology Research Institute | Expression system for producing collagen |
US8841255B2 (en) | 2005-12-20 | 2014-09-23 | Duke University | Therapeutic agents comprising fusions of vasoactive intestinal peptide and elastic peptides |
CN100391974C (zh) * | 2006-01-09 | 2008-06-04 | 浙江理工大学 | 一种重组胶原蛋白及其合成和表达纯化方法 |
EP2004753B1 (en) | 2006-03-13 | 2010-01-13 | NATURIN GmbH & CO. | Collagen powder and collagen-based thermoplastic composition por preparing conformed articles |
US7700126B2 (en) | 2006-09-29 | 2010-04-20 | Martin Kean Chong Ng | Tropoelastin-based protoelastin biomaterials |
CN101311193A (zh) * | 2007-05-21 | 2008-11-26 | 财团法人工业技术研究院 | 以重组的三股螺旋支架为基础的复合物 |
CN101311196A (zh) | 2007-05-24 | 2008-11-26 | 昭和高分子株式会社 | 乙烯-乙烯基酯共聚物水性乳液的制造方法和乙烯-乙烯基酯共聚物水性乳液 |
WO2009053985A1 (en) | 2007-10-26 | 2009-04-30 | Collplant Ltd. | Methods of processing recombinant procollagen |
US7910134B2 (en) | 2007-10-29 | 2011-03-22 | Ayman Boutros | Alloplastic injectable dermal filler and methods of use thereof |
ES2710498T3 (es) * | 2007-12-26 | 2019-04-25 | Mark A Pinsky | Formulaciones de colágeno para la mejora del cuidado de la piel |
US8507652B2 (en) | 2008-02-08 | 2013-08-13 | Luis Eduardo da Cruz | Pharmaceutical composition, dressing and method for treating skin lesion, intermediate composition and process for preparing said dressing, and use of cerium salt associated with a collagen matrix |
US9382310B2 (en) | 2009-02-06 | 2016-07-05 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Expression of triple-helical collagen-like products in E. coli |
WO2011008303A2 (en) | 2009-07-17 | 2011-01-20 | The Texas A & M University System | Designer collagens and uses thereof |
US9725498B2 (en) | 2009-07-17 | 2017-08-08 | The Texas A&M University System | Designer collagens and use thereof |
US9402857B2 (en) | 2009-07-23 | 2016-08-02 | U.S. Nutraceuticals, LLC | Composition and method to alleviate joint pain using low molecular weight hyaluronic acid and astaxanthin |
DE102010060564A1 (de) | 2010-11-15 | 2012-05-16 | Gelita Ag | Verwendung von Kollagenhydrolysat zur Verbesserung der Gesundheit der menschlichen Haut, Haare und/oder Nägel |
EP2701508A4 (en) | 2011-04-26 | 2015-01-07 | Univ Leland Stanford Junior | MANUFACTURE AND DELIVERY OF A STABLE COLLAGEN |
US9676837B2 (en) | 2011-08-03 | 2017-06-13 | Shire Human Genetic Therapies, Inc. | Collagen 7 and related methods |
TWI592421B (zh) | 2011-08-09 | 2017-07-21 | 双美生物科技股份有限公司 | 一種三重交聯之膠原蛋白、製造方法及其用途 |
US9333223B2 (en) | 2011-09-21 | 2016-05-10 | Olivo Laboratories, Llc | Compositions and methods for treating conditions of compromised skin barrier function |
JP2013095708A (ja) | 2011-11-01 | 2013-05-20 | Nicca Chemical Co Ltd | クラゲコラーゲンペプチド混合物 |
CN103987724A (zh) | 2011-11-04 | 2014-08-13 | 株式会社日皮 | Dpp-4抑制剂 |
JP2014124186A (ja) * | 2012-12-26 | 2014-07-07 | Industrial Technology Research Institute | 多価抗体フラグメントおよびその三量体化複合体 |
WO2014106830A1 (en) | 2013-01-07 | 2014-07-10 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Jellyfish-derived polymer |
JP6594293B2 (ja) | 2013-03-21 | 2019-10-23 | コモンウェルス サイエンティフィック アンド インダストリアル リサーチ オーガナイゼーション | 三重らせんタンパク質の精製 |
EP3000825A4 (en) | 2013-05-23 | 2017-02-08 | Ajou University Industry-Academic Cooperation Foundation | Trans-tumoral peptide specific to neuropilin and fusion protein having same peptide fused therein |
WO2015012682A2 (en) | 2013-07-22 | 2015-01-29 | Universiti Putra Malaysia | A method for extracting collagen from aquatic animals, collagen and products containing it |
WO2015012683A1 (en) | 2013-07-26 | 2015-01-29 | Chan Heng Hui | Wood plastering trowel with metal handle |
CN105764920B (zh) | 2013-09-09 | 2020-07-24 | 联邦科学工业研究组织 | 修饰的细菌胶原蛋白样蛋白 |
EP4389904A2 (en) | 2014-07-03 | 2024-06-26 | Genomatica, Inc. | Microorganisms for producing 4c-5c compounds with unsaturation and methods related thereto |
CN104313053B (zh) * | 2014-10-24 | 2017-01-18 | 华南农业大学 | 一种生产人源胶原蛋白ii型的方法 |
KR101721059B1 (ko) * | 2014-12-26 | 2017-03-30 | 주식회사 아이바이오코리아 | 안구 표면 질환 예방 또는 치료용 약학조성물 |
US10837041B2 (en) | 2015-08-07 | 2020-11-17 | Evolva Sa | Production of steviol glycosides in recombinant hosts |
US10232008B1 (en) | 2015-10-05 | 2019-03-19 | Michael P. Moran | Multi-purpose nutritional supplement composition |
CN108463212B (zh) | 2015-11-09 | 2021-09-03 | 株式会社资生堂 | 用于在皮肤上应用的组合物和方法 |
US9962582B2 (en) | 2015-12-24 | 2018-05-08 | Charles T. Antku | Golf club crown alignment, aiming and shot shaping aid |
US20190002644A1 (en) | 2015-12-25 | 2019-01-03 | Spiber Inc. | Method for Producing Polymer Aggregate |
GB201601136D0 (en) | 2016-01-21 | 2016-03-09 | Mörgelin Matthias And Abdillahi Suado M | Novel polypeptides and medical uses thereof |
US10226550B2 (en) | 2016-03-11 | 2019-03-12 | Brigham Young University | Cationic steroidal antimicrobial compositions for the treatment of dermal tissue |
US10669327B2 (en) | 2016-03-16 | 2020-06-02 | Phoenix Tissue Repair, Inc. | Methods of purifying collagen 7 |
SG11201808562SA (en) | 2016-03-29 | 2018-10-30 | Geltor Inc | Expression of proteins in gram-negative bacteria wherein the ratio of periplasmic volume to cytoplasmic volume is between 0.5:1 and 10:1 |
CN106554410B (zh) | 2016-06-02 | 2019-11-26 | 陕西东大生化科技有限责任公司 | 一种重组人源胶原蛋白及其编码基因和制备方法 |
CN106119322B (zh) | 2016-07-22 | 2019-10-15 | 江苏江山聚源生物技术有限公司 | 一种提高重组人源胶原蛋白生产水平的发酵工艺 |
CN109715197A (zh) | 2016-08-30 | 2019-05-03 | 嘉利达股份有限公司 | 胶原水解产物用于改善耐力表现和刺激脂质分解代谢的用途 |
FR3058142B1 (fr) | 2016-10-28 | 2023-11-24 | Gelatines Weishardt | Composition de peptides de collagene de peau de poisson et son utilisation a titre de medicament |
CL2016003387A1 (es) | 2016-12-29 | 2018-10-12 | Univ De Santiago De Chile Usach | Recubrimiento y/o película comestible para la conservación de productos cárneos |
WO2019023555A1 (en) | 2017-07-28 | 2019-01-31 | Evelo Biosciences, Inc. | POLYMER COMPOSITIONS |
WO2019046943A1 (en) | 2017-09-06 | 2019-03-14 | University Of Ottawa | PROTEINS OF THE COLLAGEN TYPE |
US11180541B2 (en) | 2017-09-28 | 2021-11-23 | Geltor, Inc. | Recombinant collagen and elastin molecules and uses thereof |
GB201717134D0 (en) | 2017-10-18 | 2017-12-06 | Univ Swansea | Monomeric collagen |
WO2019099561A1 (en) * | 2017-11-15 | 2019-05-23 | Geltor, Inc. | Textile comprising silanized symbiotic culture of bacteria and yeast |
KR20200126360A (ko) | 2017-11-22 | 2020-11-06 | 젤터, 인코포레이티드 | 콜라겐을 조작하기 위한 방법 및 시스템 |
DE102018104590A1 (de) | 2018-02-28 | 2019-08-29 | Gelita Ag | Nutrazeutische oder pharmazeutische Zusammensetzung |
SG11202110982WA (en) | 2019-04-01 | 2021-10-28 | Geltor Inc | Topical formulations of recombinant collagens |
TW202104254A (zh) | 2019-04-12 | 2021-02-01 | 美商格爾托公司 | 重組彈性蛋白及其生產 |
-
2018
- 2018-09-27 US US16/144,914 patent/US11180541B2/en active Active
- 2018-09-28 JP JP2020517957A patent/JP7361021B2/ja active Active
- 2018-09-28 SG SG11202002804SA patent/SG11202002804SA/en unknown
- 2018-09-28 KR KR1020207011986A patent/KR20200122292A/ko not_active Application Discontinuation
- 2018-09-28 CA CA3077407A patent/CA3077407A1/en active Pending
- 2018-09-28 AU AU2018338986A patent/AU2018338986A1/en active Pending
- 2018-09-28 SG SG10202009618VA patent/SG10202009618VA/en unknown
- 2018-09-28 BR BR112020006055-0A patent/BR112020006055A2/pt unknown
- 2018-09-28 EP EP20186437.8A patent/EP3785727A1/en active Pending
- 2018-09-28 EP EP18796161.0A patent/EP3687564B1/en active Active
- 2018-09-28 WO PCT/US2018/053601 patent/WO2019068018A2/en active Application Filing
- 2018-09-28 CN CN202310116462.9A patent/CN116178525A/zh active Pending
- 2018-09-28 CN CN201880076990.3A patent/CN111417404B/zh active Active
- 2018-09-28 GB GB2006164.4A patent/GB2583587A/en not_active Withdrawn
-
2020
- 2020-03-26 IL IL273620A patent/IL273620A/en unknown
- 2020-04-02 US US16/839,035 patent/US11214609B2/en active Active
- 2020-04-02 US US16/839,042 patent/US11028148B2/en active Active
- 2020-04-02 US US16/839,047 patent/US11041015B2/en active Active
- 2020-04-02 US US16/839,044 patent/US20200255497A1/en not_active Abandoned
-
2021
- 2021-11-22 US US17/532,978 patent/US20220281954A1/en active Pending
-
2023
- 2023-10-02 JP JP2023171686A patent/JP2023169436A/ja active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003516730A (ja) * | 1999-11-12 | 2003-05-20 | ファイブローゲン、インコーポレーテッド | 組換えゼラチン |
US6903200B1 (en) * | 2000-12-27 | 2005-06-07 | Industrial Technology Research Institute | Human α1 chain collagen |
US20130237486A1 (en) * | 2010-11-12 | 2013-09-12 | The University Of Manchester | Collagen |
JP2017523780A (ja) * | 2014-07-25 | 2017-08-24 | デルフィ ジェネティクス | タンパク質を産生させるために改善した宿主細胞 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2022518881A (ja) * | 2019-04-01 | 2022-03-17 | ジェルター, インコーポレイテッド | 組換えコラーゲンの局所製剤 |
JP7317964B2 (ja) | 2019-04-01 | 2023-07-31 | ジェルター, インコーポレイテッド | 組換えコラーゲンの局所製剤 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2019068018A2 (en) | 2019-04-04 |
US11028148B2 (en) | 2021-06-08 |
SG10202009618VA (en) | 2020-10-29 |
IL273620A (en) | 2020-05-31 |
US11214609B2 (en) | 2022-01-04 |
CN111417404A (zh) | 2020-07-14 |
US20190153068A1 (en) | 2019-05-23 |
EP3785727A1 (en) | 2021-03-03 |
CN111417404B (zh) | 2023-03-10 |
US20200255497A1 (en) | 2020-08-13 |
US11041015B2 (en) | 2021-06-22 |
KR20200122292A (ko) | 2020-10-27 |
JP7361021B2 (ja) | 2023-10-13 |
US11180541B2 (en) | 2021-11-23 |
GB2583587A (en) | 2020-11-04 |
US20200247874A1 (en) | 2020-08-06 |
JP2023169436A (ja) | 2023-11-29 |
CN116178525A (zh) | 2023-05-30 |
EP3687564C0 (en) | 2023-11-15 |
AU2018338986A1 (en) | 2020-04-16 |
BR112020006055A2 (pt) | 2020-10-06 |
GB2583587A8 (en) | 2021-05-19 |
US20220281954A1 (en) | 2022-09-08 |
EP3687564A2 (en) | 2020-08-05 |
EP3687564B1 (en) | 2023-11-15 |
GB202006164D0 (en) | 2020-06-10 |
US20200247875A1 (en) | 2020-08-06 |
WO2019068018A3 (en) | 2019-05-09 |
US20200247876A1 (en) | 2020-08-06 |
CA3077407A1 (en) | 2019-04-04 |
SG11202002804SA (en) | 2020-04-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7361021B2 (ja) | 組換えコラーゲンおよびエラスチン分子ならびにそれらの使用 | |
DE69434083T2 (de) | Expression eines fusionspolypeptides, das ohne leadersequenz aus dem cytoplasma transportiert wird | |
US11168126B2 (en) | Recombinant elastin and production thereof | |
KR20150136604A (ko) | 삼중 나선 단백질의 정제 | |
US20230364000A1 (en) | Compositions comprising combinations of collagen or elastin polypeptides with active ingredients and methods of using same | |
Virginia et al. | Study of HMG-CoA reductase inhibition activity of the hydrolyzed product of snakehead fish (Channa striata) skin collagen with 50 kDa collagenase from Bacillus licheniformis F11. 4 | |
WO2011119833A2 (en) | Bmp-7 peptides & methods of use | |
WO2022179556A1 (zh) | 一种经修饰的毒素多肽的制备方法 | |
JPS62501071A (ja) | 成長因子活性を有する新規なポリペプチド及び該ポリペプチドをコ−ドする核酸配列 | |
WO2005095445A1 (ja) | 新規塩基性抗菌ペプチド及びその利用 | |
Malik | A novel strategy for the periplasmic production of heterologous proteins in E. coli | |
Ohba et al. | Cumulative contents |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210927 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210927 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20220817 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220825 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20221121 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20230124 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230227 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230501 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230801 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230901 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20231002 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7361021 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |