JP2020506678A - アラビノースを代謝するための高性能酵母株を得ること - Google Patents
アラビノースを代謝するための高性能酵母株を得ること Download PDFInfo
- Publication number
- JP2020506678A JP2020506678A JP2019537238A JP2019537238A JP2020506678A JP 2020506678 A JP2020506678 A JP 2020506678A JP 2019537238 A JP2019537238 A JP 2019537238A JP 2019537238 A JP2019537238 A JP 2019537238A JP 2020506678 A JP2020506678 A JP 2020506678A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- arabinose
- strain
- xylose
- medium
- yeast
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
- C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
- C12P7/06—Ethanol, i.e. non-beverage
- C12P7/08—Ethanol, i.e. non-beverage produced as by-product or from waste or cellulosic material substrate
- C12P7/10—Ethanol, i.e. non-beverage produced as by-product or from waste or cellulosic material substrate substrate containing cellulosic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
- C12N1/18—Baker's yeast; Brewer's yeast
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
- C12N1/18—Baker's yeast; Brewer's yeast
- C12N1/185—Saccharomyces isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/22—Processes using, or culture media containing, cellulose or hydrolysates thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/01—Preparation of mutants without inserting foreign genetic material therein; Screening processes therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/02—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using fungi
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
- C12P7/06—Ethanol, i.e. non-beverage
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/02—Atmosphere, e.g. low oxygen conditions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/34—Sugars
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/85—Saccharomyces
- C12R2001/865—Saccharomyces cerevisiae
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Botany (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
−アラビノース代謝経路を導入することは必要であるが、アラビノースの効果的な代謝を保証するには不十分であるという事実を強調すること;
−アラビノース代謝経路を、唯一の炭素源としてアラビノースを含有する培地上に組み込んだ形質転換体を直接選択する可能性を強調すること;
−アラビノースの効率的な発酵を確実にするために、ポリオールの製造の厳密な制御に対する必要性を強調すること;
−キシロースおよびアラビノースの発酵が、安定した環境で共存できることを強調すること;
−アラビノース、キシロースおよびグルコースの発酵を同時に改善することができる酵母株の選択のためのプロトコルであって、酢酸などの発酵阻害剤の存在下での後ろ2つの糖の発酵を含むプロトコルを完成させること。
−アラビノースを代謝するための経路の酵母株中への導入;
−以下の基準:
a/唯一の炭素源としてアラビノースを含有する培養培地中に存在するアラビノースを代謝する能力、および/または
b/低いまたはゼロでさえあるアルドースレダクターゼ活性
のうちの少なくとも1つに基づいて、該経路を発現することができる株の選択。
−酵母株におけるaraA、araBおよびaraD遺伝子、有利にはB.licheniformisのaraA、E.coliのaraBおよびaraDの染色体組み込み;
−アラビノースを代謝できる株の選択のための、唯一の炭素源としてアラビノースを含有する培地中への形質転換株の直接培養に配置。
−2011年10月5日に番号I−4538の下でCNCMに登録された株;
−2013年5月16日に番号I−4749の下でCNCMに登録された株;
−2013年12月12日に番号I−4829の下でCNCMに登録された株;
−2015年4月9日に番号I−4966の下でCNCMに登録された株;
より有利には、2015年1月29日に番号I−4953の下でCNCMに登録された株。
−酸性pH、有利には4〜6、さらには4.5〜5.5、より有利には5または5.4に等しいpHを有する培養培地;
−28〜37℃、さらには30〜35℃、有利には32℃に等しい温度;
−24時間から数日の範囲、例えば72時間の成長時間。
−特に、有利には600nmで測定された培養培地の光学密度(OD)をモニターすることによる、それらの成長;および/または
−特に、該培養培地中に存在するアラビノースの濃度を、例えばHPLCによりモニターすることによる、またはエタノールのものと化学量論的なCO2の製造と直接相関する質量の減少を評価することによる、アラビノースの発酵。
−例えば、上記のようなYF培地上であるが、150g/Lのグルコースを含有する、唯一の炭素源としてグルコースを含有する成長培地上で、そして上で与えられる培養条件下で。該工程は、選択された株の有効性、特にグルコースを発酵する能力を確認することを可能にする。唯一の炭素源としてアラビノースを含有する培地(上記)上で、該選択された株を成長させ、表現型[ara+]が安定かつ保存されていることを確認する前に、グルコース培地上への1以上の継代(passage)を行うことができる;
−例えば、上記のようなYF培地上であるが、70g/Lのキシロースを含有する、唯一の炭素源としてキシロースを含有する成長培地(実施例におけるYF−キシロース培地)上で、そして上で与えられる培養条件下で。該工程は、選択された株が、キシロースを発酵する能力を保持し、そして、本発明の方法が使用される酵母株がキシロースを発酵することができる場合に、興味を示すことを確認することを可能にする。
−有利には0.001U/gタンパク質以上、さらにより有利には0.002U/gタンパク質以上の、強力なポリオールデヒドロゲナーゼ活性;および/または
−低いアルドースレダクターゼ活性。
−アルドースレダクターゼをコードするGRE3遺伝子の不活性化;
−HAA1遺伝子の過剰発現が、酵母株を、酢酸のみでなくバニリンに対してもより耐性にする。
−酵母抽出物10g/L;
−バクトペプトン10g/L;
−グルコース63g/L;
−キシロース28g/L(28g/L dexylose);
−アラビノース28g/L;
−酢酸4g/L(pH5で培養培地に添加される量)。
−酵母抽出物10g/L;
−バクトペプトン10g/L;
−グルコース63g/L;
−キシロース52g/L(52g/L de xylose);
−アラビノース6.1g/L;
−酢酸4g/L(pH5で培養培地に添加される量)。
−有利には4〜6、例えば5に等しい、酸性で安定したpH;
−28〜37℃、さらには30〜35℃、有利には30℃に等しい温度;
−低撹拌、たとえば100rpm;
−酸素供給の低下された条件(制限されたO2下)。実際には、製造されるCO2の排出を可能にしながら、培地中のO2の供給を減らすキャップを使用して、栓付きフラスコ中で該培養を行うことができる;
−飽和状態で24時間YPGで増殖させた0.25g/kgMS等価の株の接種源を用いた播種;
−少なくとも24時間、たとえば72時間の成長時間。
−バイオマスの製造を確実にするための、唯一の炭素源としてアラビノースを使用する能力;
−アラビノースを発酵する能力;
−非解離型の有機酸、特に酢酸の存在下でさえ、グルコース、および場合によりキシロースを発酵する能力。
−バイオマス、またはエタノールおよびCO2のいずれかに変換された培養培地に存在するグルコースおよびキシロースの95%、さらにはすべての消費;
−該培養培地中に存在するアラビノースの50%、さらには60%、70%、またはさらには80%を超える消費。
−有利には染色体レベルで、より有利には少なくとも1つのHO遺伝子座のレベルで組み込まれた、好ましくはB.licheniforma由来の遺伝子araAの少なくとも1つのコピー;
−有利には染色体レベルで、より有利には少なくとも1つのHO遺伝子座のレベルで組み込まれた、好ましくはE.coli由来の遺伝子araBの少なくとも1つのコピー;
−有利には染色体レベルで、より有利には少なくとも1つのHO遺伝子座のレベルで組み込まれた、好ましくはE.coli由来の遺伝子araDの少なくとも1つのコピー;
−有利にはClostridium phytofermentans由来の、キシロースイソメラーゼをコードする外因性遺伝子の少なくとも1つのコピー;
−キシロースの捕捉を確実にすることができるヘキソースの輸送体をコードする遺伝子GAL2の少なくとも1つの過剰コピー。別の実施形態によれば、該株は、GAL2遺伝子の少なくとも2つの過剰コピーを含む。これは、pADH1タイプの強力で構成的なプロモーターの制御下に置くことができる;
−有利には遺伝子座GRE3のレベルでのHAA1遺伝子の挿入による、GRE3によりコードされるアルドースレダクターゼ活性の抑制;
−特にプロモーターの改変または過剰コピーの導入による、キシルロキナーゼ(XKS1)の過剰製造;
−ペントースリン酸経路の発現または過剰製造(RPE1、RKL1、TKL1、TAL1など);
−キシロースレダクターゼ(XR)活性の欠如。
−バイオマスの製造のために、唯一の炭素源として、アラビノースおよびキシロースを制限された量で含有する第一の培地中での嫌気性培養;次いで
−連続した2つの嫌気性培養、1つは唯一の炭素源としてグルコースを含有する培地、もう1つは非解離型の有機酸、有利には酢酸の存在下で唯一の炭素源としてキシロースを含有する培地;
−所望により、唯一の炭素源として、厳密な呼吸炭素源、有利にはグリセロールを含有する最小培地中での好気性培養。
−唯一の炭素源としてグルコースを含有する成長培地中での1つ;および
−唯一の炭素源としてキシロースを含有する成長培地中でのもう一方。
−有利には4〜6、さらには4.5〜5.5に含まれる、さらにより有利には5または5.4に等しい酸性pH;
−28〜37°C、さらには30〜35°C、有利には32°Cに等しい温度;
−例えば100rpmに等しい、穏やかな撹拌下;
−酸素供給の制限された条件下(制限されたO2下)。実際には、キャップを使用して栓をしたフラスコ中で、製造されたCO2を排出させる一方で培地中のO2の供給を減らしながら、培養を行うことができる。
−有利には3.4g/Lの濃度での、DIFCO(登録商標)酵母窒素塩基などの塩基;
−および所望により、有利には5g/Lの濃度での硫酸アンモニウム。
−有利には4〜6、さらには4.5〜5.5に含まれる、例えば5に等しい酸性pH;
−温度が28〜37°C、さらには30〜35°C、有利には32°Cに等しい温度;
−例えば150rpmに等しい、中程度の撹拌下;
−好気性下で。実際には、該培養は、培地中でのO2の供給を可能にする多孔性キャップにより栓をしたバッフル付きフラスコ中でなされることができる。
−キシロースおよびアラビノースの存在下での第一の嫌気性または低酸素培養;
−グルコースおよび酢酸の存在下での第二の嫌気性または低酸素培養;
−キシロースおよび酢酸の存在下での第三の嫌気性または低酸素培養;
−場合により、グリセロールの存在下での第四の嫌気性培養;
または
−キシロースおよびアラビノースの存在下での第一の嫌気性または低酸素培養;
−キシロースおよび酢酸の存在下での第二の嫌気性または低酸素培養;
−グルコースおよび酢酸の存在下での第三の嫌気性または低酸素培養;
−場合により、グリセロールの存在下での第四の嫌気性培養。
−有利には染色体レベルで、より有利には全HO遺伝子座のレベルで組み込まれた、好ましくはB.licheniforma由来のaraA遺伝子の少なくとも1つのコピー;
−有利には染色体レベルで、より有利にはすべてのHO遺伝子座のレベルで組み込まれた、好ましくは大腸菌由来のaraB遺伝子の少なくとも1つのコピー;
−有利には染色体レベルで、より有利にはすべてのHO遺伝子座のレベルで組み込まれた、好ましくは大腸菌由来のaraD遺伝子の少なくとも1つのコピー;
−有利にはクロストリジウムフィトフェルメンタンス由来の、キシロースイソメラーゼをコードする外因性遺伝子の少なくとも1つのコピー;
−キシロースの捕捉を確実にすることもできるヘキソースの輸送体をコードする、GAL2遺伝子の少なくとも1つの過剰コピー。別の実施形態によれば、該株は、GAL2遺伝子の少なくとも2つの過剰コピーを含む。これは、pADH1タイプの強力で構成的なプロモーターの制御下に置くことができる;
−有利にはGRE3遺伝子座中へのHAA1遺伝子の挿入による、GRE3によりコードされるアルドースレダクターゼ活性の抑制;
−特にプロモーターの改変または過剰コピーの導入による、キシルロキナーゼ(XKS1)の過剰製造;
−ペントースリン酸経路(RPE1、RKI1、TKL1、TAL1など)の発現または過剰製造;
−キシロースレダクターゼ(XR)活性の欠如。
−有利には0.001U/gタンパク質以上、さらにより有利には0.002U/gタンパク質以上の、強力なポリオールデヒドロゲナーゼ活性;
−0.005U/gタンパク質、さらには0.004、0.003、または0.002U/gタンパク質未満、好ましくは0.0015U/gタンパク質以下、さらには0.001U/gタンパク質以下、最も好ましくは0.0005U/gタンパク質以下の、アルドースレダクターゼ活性。
−ペントース、特にD−キシロースおよびL−アラビノース;
−ヘキソース、特にD−マンノース、D−ガラクトース、L−ラムノースおよびD−グルコース;
−ウロン酸。
−アラビノースおよび/またはキシロースおよび/またはグルコース、有利にはアラビノース、キシロースおよび酢酸を含有する材料または培地の、上記で定義された株または酵母とのインキュベーション;
−嫌気性または半嫌気性(低酸素)条件下での発酵;
−1以上の発酵産物、またはエタノールの回収。
I/アラビノースを発酵できるSaccharomyces cerevisiaeの株を得ること:
1.アラビノース経路による形質転換:
アラビノースを発酵する経路を図1に示す。
アラビノースの代謝経路を形成する酵素をコードする種々の遺伝子、特に遺伝子A、BおよびDの適切な組み込みを、マトリックスとしての形質転換体のゲノムDNA、および対応する3つのORFそれぞれの断片を増幅するオリゴヌクレオチドを使用するPCRにより確認した。該オリゴヌクレオチドおよびそれらの配列を、以下の表1に示す。
さらに研究を進めるために、アラビノース経路の発現システムを簡素化することを選択した。その趣旨で、アラビノース輸送体(araT)に対するコード配列が除かれながらも遺伝子araA、BおよびDを発現するように、カセットを修飾した。
−50mg/Lの量のブラスチシジンを含有するYPG(10g/Lの酵母抽出物;10g/Lのペプトン;20g/Lの唯一の炭素源としてのグルコース)に対応する第一の培地。目的は、カセットをゲノム中に組み込んだ細胞の数を決定することである;
−10g/Lの唯一の炭素源としてのアラビノースを含有する最小培地(YNB Difco(登録商標))に対応するYNB−Araと呼ばれる第二の培地。該培地は、表現型[ara+]を取得した細胞の数を決定することを可能にしなければならない。
−ビオチン2μg/L
−パントテン酸塩(カルシウム)400μg/L
−葉酸2μg/L
−イノシトール2000μg/L
−ナイアシン400μg/L
−p−アミノ安息香酸200μg/L
−ピリドキシン(塩素酸塩)400μg/L
−リボフラビン200μg/L
−チアミン(塩素酸塩)400μg/L
−ホウ酸500μg/L
−硫酸銅40μg/L
−ヨウ化カリウム100μg/L
−塩化第二鉄200μg/L
−硫酸マグネシウム400μg/L
−モリブデン酸ナトリウム200μg/L
−硫酸亜鉛400μg/L
−一塩基性リン酸カリウム1g/L
−硫酸マグネシウム500mg/L
−塩化ナトリウム100mg/L
−塩化カルシウム100mg/L
最終pH=5.4
硫酸アンモニウム(5g/L)
図4は、両方のタイプの培地上で得られた結果を実証する。
−遺伝子araA、BおよびDをコードするカセットは必要であるが、表現型[ara+]を得るには十分ではない;
−唯一の炭素源としてアラビノースを含有する培地上での形質転換体の直接選択は可能であり、このことは、ガラクトースの存在下での成長の前の工程は不要であることを明らかにするWisselinkらの教示(2007; Appl Environ Microbiol 73, 4881-4891)に反する。
−酵母抽出物(EXL)5g/L;
−リン酸二アンモニウム4.7g/L;
−クエン酸11.4g/L;
−クエン酸三ナトリウム13.5g/L;
−ZnSO421.2mg/L;
−MgSO47H2O1g/L;
−チアミン18.24mg/L;
−ピリドキシン5.28mg/L;
−ビオチン1.76g/L;
−パントテン酸塩3.8mg/L;
−ナイアシン20mg/L;
−ミオイノシトール50mg/L;
−リボフラビン1mg/L;
−パラアミノ安息香酸1.2mg/L;
−Tween80、1g/L。
培地YF−ara:70g/Lのアラビノースを含有する培地YF
培地YF−キシロース:70g/Lのキシロースを含有する培地YF
該培地のpHは5に保たれる。培養は32℃で行われる。
−YFCF培地上での発酵:
上記の(それぞれクローン13および126と呼ばれる)2つの単離されたクローンの性能を、炭素源としてのグルコースのみでなく、バランスよく表された(balance represented)アラビノースおよびキシロース、ならびに酢酸を含有し、ゆえに天然発酵培地に近いpH5のYFCF培地中での発酵中に比較した。
−酵母エキス10g/L;
−バクトペプトン10g/L;
−グルコース63g/L;
−キシロース28g/L;
−アラビノース28g/L;
−酢酸4g/L(pH5で該培養培地に添加される量)。
−pH:5
−温度:32°C
−O2条件:酸素供給なし
−撹拌:100rpm
−培養の持続時間:最大72時間
−前培養/インキュベーション:24時間以上YPG培地中で飽和状態で以前に増殖させた、0.25g/kg等価の乾物(DM)の酵母。
−より低いエタノール製造速度とも一致する、クローン126と比較したクローン13に対するキシロースの消費速度の低下;
−アラビノースの消費速度がクローン126よりもクローン13において低いことは注目に値する。したがって、32時間の発酵後、クローン13は12.1+/−0.6g/kg、クローン126は15.3+/−0.5g/kgのアラビノースを消費した。
アラビノースおよびキシロースの代謝経路に関与する細胞内酵素活性をテストした。
株の増殖
テストされる株を、成長させるためにリッチ培地(YPG)中に置いた。十分なバイオマスを得るために、撹拌下での、30°Cで24時間の2つの連続した増殖期が必要であった。該バイオマスを採取すると、4時間105℃のオーブンを通過させた後、各クリーム1mlについて乾物を測定した。発酵は、100gの発酵培地YF−キシロースを含有する250mlフラスコ中で行った。各フラスコに、0.5g/kg等価の乾物の割合で播種した。発酵は、3日間110rpmでの撹拌下で、32°Cで進行した。その段階で、50mlの発酵産物を回収し、次いでサンプルの様々な酵素活性およびタンパク質濃度を決定するのに役立てる。
遠心分離(4700rpm、2分、4°C)により50mlの発酵産物を回収し、次いで3mlの0.1M、pH7のリン酸カリウムバッファー中に再懸濁する。別の遠心分離後、次いで各ペレットを、1mlの0.1M、pH7のリン酸カリウムバッファー中に再懸濁する。
酵素活性の量を、340nmでの吸光度をモニターすることにより行う。測定を、サーモスタットで制御された環境で32°Cで行う。
クローン126と13との間には、キシロースおよびアラビノースを発酵する能力および、それらをそれぞれキシリトールおよびアラビトールに還元する能力における2つの主な違いがある。これらの2つの表現型が反相関するようである限り、クローン126の細胞において該活性を強化する試みをした。
−選択マーカーのターミネーターにおいてハイブリダイズするB6C2(CCTATTGCTGTTTCCTCTTCAAAGTAC;配列番号7);
−遺伝子GRE3のターミネーターの領域に相補的な、B13B1(T8)、AGTTGTCAGTGCAATCCTTC;(配列番号8)。
唯一の炭素源としてアラビノースを含有する培地上でのスクリーニングがその後に続く、S.cerevisiaeのI−4953株の遺伝子座HOのレベルでのアラビノース発酵経路、すなわち遺伝子araA(B.licheniformis)/araB(E.coli)/araD(E.coli)の組み込みは、アラビノースを発酵できる菌株を選択することを可能にした。さらに、これらの株の中で、低アルドースレダクターゼ活性を示すものが最も有益であることが示された。該骨格において、特に興味深い株、すなわちEG31株を単離し、2016年5月19日に番号CNCM I−5085の下でCNCM(Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, Institut Pasteur, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15)に登録した。
1.誘導進化によるアラビノースおよびキシロースを発酵できる株の選択:
ペントース、特にアラビノースの発酵にさらに最適化された株を選択する目的で、EG31株をバッチで誘導進化に供した。
−キシロース 4g/L
−アラビノース 5g/L
−(NH4)2HPO4(DAP) 10g/L
−クエン酸 11.4g/L
−クエン酸三ナトリウム 13.5g/L
−ZnSO4(0.004g/L)
−MgSO4 0.5g/L
−KH2PO4 1g/L
−NaCl 0.1g/L
−CaCl2 0.1g/L
−CuSO4 0.00006g/L
−H3BO3 0.0005g/L
−KI 0.0001g/L
−MnSO4 0.0004g/L
−Na2MoO4 0.0002g/L
−FeCl3 0.0002g/L
−ピリドキシン 0.002g/L
−ビオチン 0.0008g/L
−パントテン酸塩(0.002g/L)
−ニコチン酸 0.001g/L
−ミオイノシトール0.001g/L
−Tween80、1g/L
阻害剤、特に非解離型の酢酸に対する耐性の損失の可能性のあるリスクを予測するために、2つの連続培養物を、バッチで誘導進化サイクルに導入し、、グルコースまたはキシロースのいずれかを唯一の炭素源として含有する培地中に、両方の場合において強い濃度の酢酸の存在下に、導入した。
YF−グルコース酸培地は、150g/Lのグルコースを含有し、5g/Lに等しい酢酸の濃度(pH4.4で該培養培地中に導入される量)を示す上記のYF培地に対応する。
YF−キシロース酸培地は、4g/Lに等しい酢酸の濃度(pH5で該培養培地に導入される量)を有する上記のYF−キシロース培地に対応する。
培養は、培地中の酸素の供給を減らし、該培養を通して過剰圧力で製造されるCO2を逃がすのに役立つキャップにより栓をしたフラスコ中で、100rpmで撹拌しながら32℃で行う。これらの条件下で、該培養は約7日間続く。
また、産業製造方法に適合しないであろうミトコンドリアを除いた株の選択を避けるために、唯一の炭素源としてグリセロールを含有する培地上で培養する工程を追加した。該工程は、細胞が増殖できるようにする機能的な電子の細胞中への移行のためのチェーン(chain)の存在を必要とする。
−3.4g/LのDIFCO(登録商標)窒素ベースの酵母;
−5g/Lの硫酸アンモニウム;
−10g/Lの唯一の炭素源としてのグリセロール。
−GOキシロースアラビノース培地上での培養;次いで
−YFグルコース酸培地上での培養;次いで
−YFキシロース酸培地上での培養;次いで
−YNBグリセロール培地上での培養。
実際には、2サイクルの培養を行った。
Claims (14)
- アラビノースを代謝できる酵母株を得るおよび選択するための方法であって、
−酵母株におけるaraA、araBおよびaraD遺伝子、有利にはB.licheniformisのaraA、E.coliのaraBおよびaraDの染色体組み込み;
−アラビノースを代謝できる株の選択のために、該形質転換株を、唯一の炭素源としてアラビノースを含有する培地中の直接培養に置くこと;
−所望により、0.002U/gタンパク質以下、またはさらに0.0005U/gタンパク質以下のアルドースレダクターゼ活性について代謝アラビノースを有する形質転換株を選択すること
を含む、方法。 - 使用される酵母株が、Saccharomyces、Schizosaccharomyces、Pichia、Yarrowia、Paffia、Kluyveromyces、Candida、Talaromyces、Brettanomyces、Pachysolen、Hansenula、Kloeckera、SchwanniomycesおよびDebaryomyces、有利には、Saccharomyces cerevisiae株から選択されることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 使用される酵母株が、例えば酢酸などの非解離型の有機酸の存在下で、キシロースを発酵することができる、有利には、2015年1月29日に番号I−4953の下でCNCMに登録された株であることを特徴とする、請求項2に記載の方法。
- 0.002U/gタンパク質以下、またはさらに0.0005U/gタンパク質以下のアルドースレダクターゼ活性をさらに示すことを特徴とする、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法を用いて得られる酵母株。
- 2016年5月19日にCNCM(Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, Institut Pasteur, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15)に登録された、I−5085株であることを特徴とする、請求項4に記載の酵母株。
- 酢酸などの非解離型の有機酸の存在下で、アラビノース、グルコースおよびキシロースを発酵する改善された能力を有する酵母株を得るおよび選択するための方法であって、かかる能力を示す酵母株、有利には、請求項4および5の一つに記載の株が、以下の条件:
−唯一の炭素源として、アラビノースおよびキシロースをバイオマスの製造のための限界濃度で、有利にはそれぞれ5g/Lおよび4g/Lの量で含有する培地中の嫌気性または低酸素培養;次いで
−一方は、唯一の炭素源としてグルコースを含有する培地中での、他方は、唯一の炭素源としてキシロースを含有する培地中での、非解離型の有機酸、有利には酢酸の存在下での2回の連続した嫌気性または低酸素培養;
−場合により、唯一の炭素源として、厳密な呼吸用炭素源、有利にはグリセロールを含有する最小培地中での好気性培養
の下で連続的に育成される、方法。 - 種々の培地中での株の連続した培養を少なくとも2回繰り返すことを特徴とする、請求項6に記載の方法。
- 2016年5月19日にCNCM(Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, Institut Pasteur, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15)に登録されたI−5086株であることを特徴とする、請求項6〜7のいずれか一項に記載の方法により得ることができる酵母株。
- 有利にはGRE3遺伝子のレベルで挿入された、HAA1遺伝子の少なくとも1つの過剰コピーを有することを特徴とする、請求項4〜5および8のいずれか一項に記載の酵母株。
- 請求項4〜5および8〜9のいずれか一項に記載の株の培養により得られる酵母。
- 有利にはアラビノースおよび/またはキシロースを含有する、材料の発酵のための、および/またはエタノールの製造のための、請求項4〜5および8〜9のいずれか一項に記載の株、または請求項10に記載の酵母の使用。
- 以下の工程:
−アラビノースおよび/またはキシロースを含有する材料または培地と、請求項4〜5または8〜9のいずれか一項に記載の株または請求項10に記載の酵母とのインキュベーション;
−嫌気性または半嫌気性条件下での発酵;
−1以上の発酵産物、またはエタノールの回収
を含む、発酵産物またはエタノールの製造のための方法。 - 該材料または培地が、グルコースも含有することを特徴とする、請求項12に記載の発酵産物またはエタノールの製造のための方法。
- 該材料または培地が、ヘミセルロースまたは「トウモロコシ繊維」であることを特徴とする、請求項12または13に記載の発酵産物またはエタノールの製造のための方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR1750550 | 2017-01-24 | ||
FR1750550A FR3062134B1 (fr) | 2017-01-24 | 2017-01-24 | Obtention de souches de levure performantes pour la metabolisation de l'arabinose |
PCT/EP2018/051708 WO2018138135A1 (fr) | 2017-01-24 | 2018-01-24 | Obtention de souches de levure performantes pour la metabolisation de l'arabinose |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020506678A true JP2020506678A (ja) | 2020-03-05 |
JP7181876B2 JP7181876B2 (ja) | 2022-12-01 |
Family
ID=58645200
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019537238A Active JP7181876B2 (ja) | 2017-01-24 | 2018-01-24 | アラビノースを代謝するための高性能酵母株を得ること |
Country Status (18)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10920232B2 (ja) |
EP (1) | EP3574120B1 (ja) |
JP (1) | JP7181876B2 (ja) |
CN (1) | CN110199026A (ja) |
AR (1) | AR110848A1 (ja) |
AU (1) | AU2018213056B2 (ja) |
BR (1) | BR112019014115A2 (ja) |
CA (1) | CA3049415A1 (ja) |
DK (1) | DK3574120T3 (ja) |
ES (1) | ES2912995T3 (ja) |
FR (1) | FR3062134B1 (ja) |
HR (1) | HRP20220572T1 (ja) |
HU (1) | HUE058951T2 (ja) |
MY (1) | MY193450A (ja) |
PL (1) | PL3574120T3 (ja) |
PT (1) | PT3574120T (ja) |
WO (1) | WO2018138135A1 (ja) |
ZA (1) | ZA201904267B (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110872596B (zh) * | 2018-09-04 | 2021-08-24 | 中国科学院分子植物科学卓越创新中心 | 木糖阿拉伯糖共利用的酿酒酵母菌的构建方法 |
CN113215203B (zh) * | 2021-02-26 | 2023-06-09 | 中粮生化能源(肇东)有限公司 | 共发酵酵母菌扩培发酵产乙醇的方法 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010505411A (ja) * | 2006-10-02 | 2010-02-25 | ディーエスエム アイピー アセッツ ビー.ブイ. | アラビノース発酵性酵母細胞の代謝工学 |
JP2011512854A (ja) * | 2008-03-13 | 2011-04-28 | ディーエスエム アイピー アセッツ ビー.ブイ. | 混合基質を発酵可能な生物の選択 |
JP2014512818A (ja) * | 2011-04-22 | 2014-05-29 | ディーエスエム アイピー アセッツ ビー.ブイ. | アラビノース及びキシロースを含む糖類の変換能を有する酵母細胞 |
US20140206070A1 (en) * | 2007-04-05 | 2014-07-24 | Johann Wolfgang Goethe-Universitaet Frankfurt Am Main | Vector With Codon-Optimised Genes for an Arabinose Metabolic Pathway for Arabinose Conversion in Yeast for Ethanol Production |
WO2016174349A1 (fr) * | 2015-04-27 | 2016-11-03 | Lesaffre Et Compagnie | Souche de levure presentant une capacite amelioree a fermenter le xylose en presence d'acide acetique |
Family Cites Families (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SE0202090D0 (sv) | 2002-05-08 | 2002-07-04 | Forskarpatent I Syd Ab | A modifierd yeast consuming L-arabinose |
JP5219074B2 (ja) * | 2008-01-24 | 2013-06-26 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | キシロース発酵能が優れた六炭糖・五炭糖同時発酵酵母およびそれを用いたエタノールの高効率生産方法 |
DE102008031350B4 (de) | 2008-07-02 | 2011-02-10 | Johann Wolfgang Goethe-Universität Frankfurt am Main | Prokaryotische Xylose-Isomerase zur Konstruktion Xylose-vergärender Hefen |
UA108853C2 (uk) * | 2009-07-10 | 2015-06-25 | Спосіб ферментації галактози | |
FR2953857B1 (fr) | 2009-12-15 | 2012-10-12 | Lesaffre & Cie | Nouvelles souches de levure pour la production d'alcool |
CN102869766B (zh) * | 2010-04-21 | 2015-11-25 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 适于发酵混合的糖组合物的细胞 |
KR101246780B1 (ko) * | 2010-10-06 | 2013-03-26 | 한국과학기술원 | 아라비노스 대사경로가 도입된 자일리톨 생산균주 및 이를 이용한 자일리톨 생산방법 |
FR2968313B1 (fr) | 2010-12-03 | 2014-10-10 | Lesaffre & Cie | Procede de preparation d'une levure industrielle, levure industrielle et application a la production d'ethanol a partir d'au moins un pentose |
AR087423A1 (es) * | 2011-08-04 | 2014-03-19 | Dsm Ip Assets Bv | Celula capaz de fermentar azucares pentosas |
FR2991340B1 (fr) | 2012-06-01 | 2016-02-19 | Lesaffre & Cie | Procede d'obtention de souches de levure ameliorees par modification genetique et croisement |
FR2991339B1 (fr) * | 2012-06-01 | 2016-02-19 | Lesaffre & Cie | Souches de levure aptes a metaboliser le xylose et resistantes a au moins un inhibiteur de fermentation, procede d'obtention et utilisation |
JP6236634B2 (ja) * | 2012-08-24 | 2017-11-29 | 国立大学法人神戸大学 | バイオマスからのエタノールの生産方法 |
WO2014207087A1 (en) * | 2013-06-26 | 2014-12-31 | Abengoa Bioenergia Nuevas Tecnologias S.A. | Production of advanced fuels and of chemicals by yeasts on the basis of second generation feedstocks |
FR3017623B1 (fr) | 2014-02-17 | 2018-08-10 | Lesaffre Et Compagnie | Souche fermentant les pentoses a propagation optimisee |
-
2017
- 2017-01-24 FR FR1750550A patent/FR3062134B1/fr active Active
-
2018
- 2018-01-24 CN CN201880006369.XA patent/CN110199026A/zh active Pending
- 2018-01-24 AR ARP180100162A patent/AR110848A1/es unknown
- 2018-01-24 DK DK18712080.3T patent/DK3574120T3/da active
- 2018-01-24 PT PT187120803T patent/PT3574120T/pt unknown
- 2018-01-24 CA CA3049415A patent/CA3049415A1/en active Pending
- 2018-01-24 AU AU2018213056A patent/AU2018213056B2/en active Active
- 2018-01-24 ES ES18712080T patent/ES2912995T3/es active Active
- 2018-01-24 WO PCT/EP2018/051708 patent/WO2018138135A1/fr unknown
- 2018-01-24 JP JP2019537238A patent/JP7181876B2/ja active Active
- 2018-01-24 PL PL18712080T patent/PL3574120T3/pl unknown
- 2018-01-24 BR BR112019014115-4A patent/BR112019014115A2/pt unknown
- 2018-01-24 EP EP18712080.3A patent/EP3574120B1/fr active Active
- 2018-01-24 HR HRP20220572TT patent/HRP20220572T1/hr unknown
- 2018-01-24 US US16/475,845 patent/US10920232B2/en active Active
- 2018-01-24 HU HUE18712080A patent/HUE058951T2/hu unknown
- 2018-01-24 MY MYPI2019003706A patent/MY193450A/en unknown
-
2019
- 2019-06-28 ZA ZA2019/04267A patent/ZA201904267B/en unknown
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010505411A (ja) * | 2006-10-02 | 2010-02-25 | ディーエスエム アイピー アセッツ ビー.ブイ. | アラビノース発酵性酵母細胞の代謝工学 |
US20140206070A1 (en) * | 2007-04-05 | 2014-07-24 | Johann Wolfgang Goethe-Universitaet Frankfurt Am Main | Vector With Codon-Optimised Genes for an Arabinose Metabolic Pathway for Arabinose Conversion in Yeast for Ethanol Production |
JP2011512854A (ja) * | 2008-03-13 | 2011-04-28 | ディーエスエム アイピー アセッツ ビー.ブイ. | 混合基質を発酵可能な生物の選択 |
JP2014512818A (ja) * | 2011-04-22 | 2014-05-29 | ディーエスエム アイピー アセッツ ビー.ブイ. | アラビノース及びキシロースを含む糖類の変換能を有する酵母細胞 |
WO2016174349A1 (fr) * | 2015-04-27 | 2016-11-03 | Lesaffre Et Compagnie | Souche de levure presentant une capacite amelioree a fermenter le xylose en presence d'acide acetique |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ES2912995T3 (es) | 2022-05-30 |
EP3574120B1 (fr) | 2022-04-06 |
WO2018138135A1 (fr) | 2018-08-02 |
HUE058951T2 (hu) | 2022-09-28 |
AU2018213056A1 (en) | 2019-07-25 |
AU2018213056B2 (en) | 2023-10-19 |
US20190330645A1 (en) | 2019-10-31 |
AR110848A1 (es) | 2019-05-08 |
US10920232B2 (en) | 2021-02-16 |
HRP20220572T1 (hr) | 2022-06-24 |
EP3574120A1 (fr) | 2019-12-04 |
MY193450A (en) | 2022-10-13 |
PT3574120T (pt) | 2022-05-13 |
CA3049415A1 (en) | 2018-08-02 |
DK3574120T3 (da) | 2022-05-23 |
BR112019014115A2 (pt) | 2020-02-11 |
FR3062134B1 (fr) | 2023-07-21 |
ZA201904267B (en) | 2022-03-30 |
FR3062134A1 (fr) | 2018-07-27 |
PL3574120T3 (pl) | 2022-07-04 |
CN110199026A (zh) | 2019-09-03 |
JP7181876B2 (ja) | 2022-12-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20230159962A1 (en) | Recombinant yeast expressing heterologous stl1 protein | |
CA2798452C (en) | Detoxification of biomass derived acetate via metabolic conversion to ethanol, acetone, isopropanol, or ethyl acetate | |
JP6087854B2 (ja) | 組換え酵母を用いたエタノールの製造方法 | |
CA2664646A1 (en) | Metabolic engineering of arabinose- fermenting yeast cells | |
KR102281701B1 (ko) | 아세토인을 제조하는 방법 | |
FR2968313A1 (fr) | Procede de preparation d'une levure industrielle, levure industrielle et application a la production d'ethanol a partir d'au moins un pentose | |
EP3298133B1 (en) | Acetate consuming yeast cell | |
JP7181876B2 (ja) | アラビノースを代謝するための高性能酵母株を得ること | |
CN107592884B (zh) | 在乙酸的存在下具有提高的发酵木糖能力的酵母菌株 | |
WO2016088272A1 (ja) | 高効率エタノール発酵菌 | |
TWI438274B (zh) | 一種木糖代謝菌之製備方法及該木糖代謝菌 | |
JP5845210B2 (ja) | 組換え酵母、及びそれを用いたエタノールの製造方法 | |
JP6447583B2 (ja) | 組換え酵母、及びそれを用いたエタノールの製造方法 | |
US20120270290A1 (en) | Pentose transporter | |
JP2020025493A (ja) | 組換え酵母、及びそれを用いたエタノールの製造方法 | |
US20220090045A1 (en) | Methods for producing isopropanol and acetone in a microorganism | |
JP2019024451A (ja) | 組換え酵母及びこれを用いたエタノールの製造方法 | |
JP2007504813A (ja) | Nadh依存型l−キシルロース還元酵素 | |
WO2016088278A1 (ja) | 高効率エタノール発酵菌 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20201105 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20210831 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210928 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20211227 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220510 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220809 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20221101 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20221118 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7181876 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |