JP2019533009A - 非病原性の細菌を含む組成物並びに真菌性、細菌性及びウィルス性疾患から植物及び動物宿主を保護する方法 - Google Patents
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Abstract
Description
a)非病原性の細菌及び1種以上の活性化剤の混合物を準備するステップ;及び
b)ステップ(a)の混合物を植物又は動物宿主種に施すステップ
を含む。
a)(i)1種以上の非病原性細菌を含む組成物;及び
(ii)1種以上の活性化剤を含む組成物
を別々に準備するステップ;並びに
b)組成物(i)及び(ii)の各々を前記宿主種に別々に施すステップ
を含む。
a)非病原性の細菌及び1種以上の活性化剤の混合物を準備するステップ;及び
b)ステップ(a)の混合物を前記宿主種に施すステップ
を含む。
a)非病原性の細菌及び1種以上の活性化剤の混合物を準備するステップ;及び
b)ステップ(a)の混合物を前記宿主種に施すステップ
によって、生産物の収量を増大する方法にも関する。
活性化剤 0.01%〜10%(より好ましくは0.05%〜5%)。
農業上又は園芸上重要な植物の収量を増大する方法であって、
a)1種以上の非病原性細菌と1種以上の活性化剤との混合物を準備するステップ;及び
b)ステップ(a)の混合物を前記宿主種に施すステップ
によって、収量を増大する方法に関する。
a)(i)1種以上の非病原性細菌を含む組成物;及び
(ii)1種以上の活性化剤を含む組成物
を別々に準備し、
b)組成物(i)及び(ii)の各々を前記宿主種に別々に施す
ことによって、収量を増大する方法も提供する。
a)(i)1種以上の非病原性細菌を含む組成物;及び
(ii)1種以上の活性化剤を含む組成物
を別々に準備し;
b)組成物(i)及び(ii)の各々を前記宿主種に別々に施す
ことによって、収量を増大する方法も包含する。
1.非病原性細菌
a)枯草菌(Bacillus subtilis)
実施例1〜18として本明細書に報告される研究のために、市販のQST 713株を使用した。この株はBayer Corporationから2つの異なる製剤:1)Serenade(R)ASO;及び2)Cease(R)として入手した。以下に挙げる実施例のほとんどで、Serenade(R)ASOを枯草菌(Bacillus subtilis)の起源として使用した。しかし、実施例3及び11では、Cease(R)をSerenade(R)の代わりに使用した。
実施例19及び20として本明細書に報告される研究のために、「Jarro Dophilus」として知られている市販のプロバイオティック混合物を使用して本発明の組成物を調製した。このプロバイオティック混合物のさらなる詳細は以下の実施例19に見られる。
数多くの候補分子の初期スクリーニングの後、次の植物化学物質を本研究の最初の部分で活性化剤として使用するために選択した:
1.スクラレオール − クラリセージ(Salvia sclarea)から抽出されたジテルペンアルコール
枯草菌(Bacillus subtilis)に対する活性化剤としての使用可能性のための植物化学物質の初期スクリーニング
序:
キュウリ(Cucumis sativus L)実生は発芽過程中実生を攻撃する真菌及び細菌病原体に極めて感染しやすく、したがって枯草菌(Bacillus subtilis)及びその活性化を引き起こすことができる植物化学物質をスクリーニングし較正するためにモデル植物として選択した。
1.植物化学物質のスクリーニング:
潜在的な植物化学物質を、ペトリ皿中の30ccのグルコース50%V/V基質、10ccの真菌病原体カクテル及び10ccの細菌病原体カクテルの混合物に加えた。真菌カクテルは、灰色かび病(Botrytis cinerea)、紋枯病菌(Rhizoctonia solani)、ピシウム属菌(Pythium spp.)及びトマトの発酵に使用される非病原性菌類を含有していた。細菌カクテルは、トマトかいよう病菌(Clavibacter michiganensis)、カンキツかいよう病菌(Xanthomonas campestris)、シュードモナス・シリンガエ(Pseudomonas syringae)及びトマトの発酵に使用される非病原性細菌を含有していた。
予備的な結果は、最適な抗真菌及び抗細菌活性は濃度2及び濃度3(上記表I参照)の試験混合物で得られたことを示していた。枯草菌(Bacillus subtilis)のコロニー発生は濃度3を用いて最適であったので、これが残りの研究で使用するために選択された濃度であった。試験した濃度3で真菌排除、細菌排除及び枯草菌(Bacillus subtilis)活性化(コロニーサイズ)に関して得られた結果をそれぞれ図1のグラフの前列、中央及び後列に要約して示す。上記表IIに要約した11の異なる処理に、グラフのX軸に沿ってT1〜T11と名前を付けて示す。
真菌インデックス:0(発生なし)〜5(最大の発生)
細菌インデックス:0(発生なし)〜5(最大の発生)
B.sインデックス(コロニー形成インデックス):0(発生なし)〜5(最大の発生)。
活性化剤組成物の変更による、枯草菌(Bacillus subtilis)の活性化並びに前記組成物の殺真菌及び殺細菌活性に対する効果
第2群の研究は、5種全ての成分の組合せから1つの植物化学物質を削除することか又は混合物中の1つ若しくは2つの成分の濃度を選択的に変更することの効果を試験することを目的とした。
実施例1と同様
さまざまな試験混合物を濃度3又は濃度4(上記実施例1に規定した通り)で使用した。これらの試験混合物の各々の組成を次の2つの表に要約して示す:
図2に見ることができるように、濃度3で使用した3又は4種の活性化剤を含有する全ての試験混合物が、培地のみ及び培地+枯草菌(Bacillus subtilis)のコントロール(それぞれ混合物1及び2)と比較したとき、真菌及び細菌インデックスの有意な低減(それぞれ上及び中央のグラフ)並びに枯草菌(Bacillus subtilis)活性化インデックスの有意な増大(下のグラフ)を引き起こした。
異なる枯草菌(Bacillus subtilis)製剤と組み合わせたさまざまな活性化剤組成物の殺真菌及び殺細菌活性
この研究では、上記実施例2で行った実験を、異なる枯草菌(B.subtilis)製剤を用いて繰り返した。
実施例1と同様。
この研究は実施例2で得られた結果を裏付ける。すなわち、図4(濃度3)及び図5(濃度4)で見られるように、3、4又は5種の活性化剤を濃度3で含有する全ての試験混合物は、真菌及び細菌インデックスの顕著な低減(それぞれ上及び中央のグラフ)を引き起こした。また、枯草菌(Bacillus subtilis)活性化インデックスの有意な増大(下のグラフ)も引き起こした。
本発明で使用した作用物質の抗炎症活性
上記実施例1〜3で報告された枯草菌(Bacillus subtilis)と5種の活性化剤のいくつか又は全てとの組合せで得られた結果の後、殺細菌、殺真菌及び枯草菌(B.subtilis)活性化能に加えて共通の機能特性を探すために前記作用物質を検討した。
RAW 264.7マクロファージ細胞株:
RAW 264.7マクロファージを、標準の増殖培地(5%FBS、抗生物質及びグルタミンを補充したDMEM)を用いて平底フラスコで増殖させた。細胞を当技術分野で周知の標準の手順に従って維持した。細胞がコンフルエンスに達した後、機械的な手段を用いてフラスコから取り出し、次いで遠心により濃縮し、少量の新鮮な培養培地に再懸濁した。細胞濃度を増殖培地で調節して、96ウェルプレートの各々のウェルに約75,000細胞を加えることができるようにした。25μg/mLのLPS及び10U/mlのIFN−γ DMEMの組合せをマクロファージの活性化に使用した。活性化の1時間前にさまざまな試験物質をウェルに加えた。次に、細胞をさらに24時間インキュベートした後、炎症性メディエイター生産及び細胞生存能力をアッセイした。
100μLの10%Alamar Blue溶液を各々のウェルに加え、37℃で1〜2時間インキュベートすることによって生存能力のAlamar Blueアッセイを行った。蛍光を測定し(励起545nm、発光595nm)、未処理コントロール細胞の値に対する百分率として表した。
さまざまな処理に付したマクロファージによるNOの生産を、Griess試薬(等容量の1%スルファニルアミド及び0.1%ナフチルエチレンジアミン(napthyethylene−diamine)、5%HCl中)を用いてアッセイした。各々の試験ウェルの上清70μLを新鮮な96ウェルプレートに移し、70μLのGriess試薬と混合し、生成したすみれ色を540nmで測定した。
サンドイッチELISAを使用してTNF−α濃度を決定した。一次抗体はPBS中0.5μg/mLの濃度で使用した。希釈剤(0.05%Tween−20、0.1%BSA、PBS中)中TNF−α標準0〜1000pg/mLの連続希釈を内部標準として使用した。TNF−αはビオチニル化された第二抗体及び検出試薬としてのTMBとのアビジンペルオキシダーゼコンジュゲートを用いて検出した。発色を655nmでモニターし、5分毎に読み取った。25分後、0.5M硫酸を用いて反応を停止させ、吸光度を450nmで測定した。
上に記載した方法を使用して、スクラレオール、ナリンギン及びステビオール、及びそれらの互いの並びに枯草菌(Bacillus subtilis)との組合せの、NO及びTNF−α生産、並びに細胞生存能力に対する効果を決定した。抗炎症活性の結果を、NO及びTNF−α生産の阻害に対するIC50値として、下記表Vに細胞生存能力の結果と共に示す。加えて、科学文献(A.S. Ravipati et al. (2012) BMC Complementary and Alternative Medicine, 12:173 ″Antioxidant and anti−inflammatory activities of selected Chinese medicinal plants and their relation with antioxidant content″)から得られた、2つの追加の植物種、すなわち、シオン(Aster tataricus)及びハマスゲ(Cyperus rotundus)の水性抽出物に関する同等な結果を表の最後に示す。これら2つの種の抽出物は、本発明者により、枯草菌(B.subtilis)と組み合わせたその殺真菌及び殺細菌効果に関して研究された。これらの研究の結果は以下の実施例5に示す。
さまざまな作用物質で処理した培養マクロファージの抗炎症性及び生存能力アッセイに対して得られた結果を以下の表Vに示す。
2つの異なる植物抽出物と枯草菌(Bacillus subtilis)の組合せの殺真菌及び殺細菌活性
抗炎症特性を有する2つの植物シオン(Aster tataricus)及びハマスゲ(Cyperus rotundus)の抽出物が枯草菌(Bacillus subtilis)の殺真菌及び殺細菌活性に対する強力な効果を有する可能性を検討した。
抗真菌及び抗細菌特性をアッセイするために上記実施例1で使用したのと同じ方法をこの研究で枯草菌(Bacillus subtilis)とシオン(Aster tataricus)及びハマスゲ(Cyperus rotundus)の水性抽出物との組合せに応用した。下記表VIに要約するように、2つの異なる濃度の抽出物及び枯草菌(B.subtilis)懸濁液を使用した。
図6は、表VIIの組合せを濃度3で用いて得られた結果をグラフで示す。上のグラフから分かるように、試験した組合せの全てが殺真菌活性を示し、この点に関して最も有効な組合せが組合せ5、すなわち枯草菌(B.subtilis)とハマスゲ(Cyperus rotundus)の抽出物の組合せであった。図7の上のグラフに示されているように、同様な結果が濃度4で得られる。しかしながら、この場合は枯草菌(B.subtilis)とシオン(Aster tataricus)の組合せも同様な結果を生じた。殺細菌活性に関しては、図6の中央のグラフが示すように、濃度3で、試験した全ての組合せのうち枯草菌(B.subtilis)とハマスゲ(Cyperus rotundus)の組合せが細菌細胞の数の最も大きい低減を引き起こす。しかし、濃度4のデータに関しては、図7の中央のグラフに示されている殺細菌性研究の結果は、上で述べた濃度4の殺真菌データの場合と同様に、枯草菌(B.subtilis)と二成分の植物抽出物の両方の組合せが最も大きい殺細菌効果を生じたことを示している。
キュウリ実生の接種
方法:
活性化剤、枯草菌(Bacillus subtilis)及び追加の成分(上記実施例1の表I及びIIに記載した細菌及び/又は真菌カクテルを含む)の各々の混合物10ccを関連のペトリ皿からサンプリングし、播種10時間後の発芽キュウリ種子の4つの複製物(replicate)に注入した。
この研究の結果を図8にグラフで示す。ここで、4つの別々のグラフは(上から下に)活性化剤を濃度1、2、3及び4で用いて得られたデータを要約して示す。
トマト実生の接種
方法:
上記実施例6と同様にして、枯草菌(Bacillus subtilis)及びさまざまな組合せの活性化性植物化学物質を含有する試験混合物をトマト実生に接種した。しかし、使用したさまざまな試験混合物の組成及び濃度は実施例6と異なっており、次の2つの表に要約して示す(濃度は全て%v/vである):
この接種研究の結果を図9にグラフで要約して示す。この図から分かるように、濃度2(上のグラフ)では、試験混合物6のみがトマト植物のほぼ最大の保護を生じた。しかし、濃度3及び4(それぞれ中央及び下のグラフ)では、両方の処理6及び7で最大の保護が得られた。
トマト植物−野外研究
序:
イスラエルでトマトが成長する主要な地方は国の南西部である。一昨年、この地方はトマトモザイクウィルス(ToMV)の新しい攻撃性の株にひどく感染した。このウィルスが植物に感染し、商業的収量は通常の収量レベルの半分未満に低下した。残念ながら、遺伝的に耐性がある品種はまだ存在していなかった。現在開示されている方法がToMVに感染したトマト植物の生存率を増大できるかどうか評価するために前記方法を用いて野外研究を実施した。
先の生育期にウィルスがひどく感染したトマトのネットハウスで枯草菌(Bacillus subtilis)及び活性化性植物化学物質の試験を実施した。
a)噴霧;
b)噴霧及び施肥潅漑;
c)施肥潅漑;
d)未処理コントロール。
この研究の結果を図10にグラフで示す。この図の最初の3つのグラフは北向きの区画で成長する植物に関し、一方次の組の3つのグラフは南向きの区画で成長する植物の結果を示す。
コショウ植物実生
方法:
上記実施例7に記載したトマト実生に接種するための方法と同じ方法を使用してコショウ植物実生に対する本発明の組成物の活性を試験した。処理プロトコルも、上記表V及びVIに記載されている、実施例7に使用したのと同じであった。
コショウ植物実生の処理の結果を図11に要約して示す。上のグラフは濃度2で使用した活性化混合物の結果を示し、中央のグラフは濃度3で使用した混合物に関し、下のグラフは濃度4の混合物の結果を示す。
トウモロコシ実生接種
方法:
上記実施例7及び9に記載したトマト及びコショウ実生に接種したのと同じ方法を使用して、実施例1の表I及びIIに規定されている活性化剤混合物(4つの異なる濃度)をトウモロコシ(Zea mays ssp. Mays)に接種した。この研究に使用した処理プロトコルと先の実施例に記載したものとの唯一の違いは、使用した細菌及び真菌カクテルの組成に関連する。すなわち、この研究で、真菌カクテルはピシウム属菌(Pythium spp.)、リゾクトニア属の種(Rizoctonia spp.)及びペニシリウム・オキサリクム(Penicilium oxalicum)を含んでいたが、細菌カクテルは黒脚病菌(Erwinia chrysanthemi)、エルウィニア・ディソルベンス(Erwinia dissolvens)及びエンテロバクター・ディソルベンス(Enterobacter dissolvens)を含有していた。
この接種研究の結果を図12にグラフを用いて要約して示すが、4つのグラフは濃度1、2、3及び4(降順)で使用した11の活性化混合物に対する結果を示す。
コムギ実生
方法:
上記実施例7及び9に記載した、トマト及びコショウ実生に接種したのと同じ方法を使用して実施例1の表I及びIIに規定した活性化剤混合物(4つの異なる濃度)をコムギ実生(Triticum aestivum)に接種した。この研究で使用した処理プロトコルと先の実施例に記載したものとの唯一の違いは使用した細菌及び真菌カクテルの組成に関する。すなわち、この研究では、真菌カクテルはリゾクトニア・ソラニ(Rizoctonia solani)、ピシウム・グラミニコラ(Pythium graminicola)、及びピシウム・ミリオチルム(Pythium myriotylum)を含んでおり、細菌カクテルはシュードモナス・シリガエ(Pseudomonas syrigae)、カンキツかいよう病菌(Xanthomonas campestris)、及びタマネギ腐敗病菌(Erwinia rhapontici)を含有していた。
この接種研究の結果を図13にグラフにより要約して示すが、4つのグラフは濃度1、2、3及び4(降順)で使用した11の活性化混合物に対する結果を示す。
イネ実生
方法:
上記実施例7及び9に記載したトマト及びコショウ実生に接種したのと同じ方法を使用して、実施例1の表I及びIIに規定した活性化剤混合物(4つの異なる濃度)をイネ実生(Oryza sativa)に接種した。この研究で使用した処理プロトコルと先の実施例に記載したものとの唯一の違いは使用した細菌及び真菌カクテルの組成に関する。すなわち、この研究では、真菌カクテルはピシウム・スピノスム(Pythium spinosum)、リゾクトニア・ソラニ(Rizoctonia solani)、ピシウム・ディソトクム(Pythium dissotocum)を含んでおり、細菌カクテルはイネ白葉枯病菌(Xanthomonas campestris pv. Oryzae)及び黒脚病菌(Erwinia chrisantemi)を含有していた。
この接種研究の結果を図14にグラフを用いて要約して示すが、4つのグラフは濃度1、2、3及び4(降順)で使用した11の活性化混合物の結果を示す。
ヒヨコマメ−野外研究
方法:
野外試験は2015年10月9日イスラエルのNahalalで重粘土に播種した。
1.2016年2月16日、1回の噴霧
2.2016年2月16日、1回の施肥潅漑
3.2016年2月16日、1回の噴霧+施肥潅漑
4.2016年2月16日及び2016年3月1日、2回の噴霧+施肥潅漑。
さまざまな処理の結果を図15にグラフで要約して示す。この図から分かるように、ヒヨコマメの品種13は両方の活性化混合物処理(青色及び赤色プロトコル)に対して、処理を施した方法に関わらず試験した他の品種よりずっと大きな程度で反応した。すなわち、青色プロトコル及び最良の施用経路での品種13の外挿収量は684kgである。
ヒト被験者における虫歯に関連する細菌病原体のインビトロ研究
序:
この予備的な研究では、ヒト被験者において虫歯の発生に関係するとされている2つの細菌種に対する本発明の組成物の効果をインビトロで試験した:
1.ソブリヌス菌(Streptococcus sobrinus)
2.ラクトバチルス(Lactobacilli)。
さまざまな処理間の比較の目的で接種インデックスを計算した(0=最大の排除、5=排除なし)。
試験細菌ソブリヌス菌(Streptococcus sobrinus)で得られた結果を図16に示し、ラクトバチルス(Lactobacilli)で得られた対応する結果を図17に示す。
カンキツグリーニング病菌(Candidatus liberibacter)による感染症に対してニンジンを保護するための本発明の組成物を用いた予備的な野外試験
序:
カンキツグリーニング病菌(Candidatus liberibacter)はリゾビウム科(hizobiaceae family)のグラム陰性菌の属である。今までのところこれらの細菌を培養維持することは可能ではなく、その検出及び定量化は通常特異的プライマーによるその16SrRNA遺伝子のPCR増幅を用いて達成される。属のメンバーは主としてキジラミにより伝染する植物病原体である。
パーライト顆粒を、枯草菌(B.subtilis)と活性化剤の組合せを含有する製剤に浸し、次いで徐放性ポリマーで被覆した。
1.播種は2017年2月8日193cmの床に付き3つの三つ組列で行った。
2.試験区域を完全な発芽までAgrinet網で覆った。
3.潅漑はミニスプリンクラーを用いて4qm/dで行った。
a)発芽中は70%ペンマン(penman)を毎日。
b)発芽後は90%ペンマンを4日毎。
4.肥料:試験の月2及び3の間:窒素10単位。
5.殺菌剤:10日毎、Polar(Amiran K Ltd., Nairobi、ケニア)、Shavit(Adama Ltd.、イスラエル)、及びAmi−oz.)を用いたうどん粉病(Oidium and Oidiopsis)白カビに対する処理
6.除草剤:
a)発芽前
b)葉が閉じる前(Before the foliage closes)。
7.ニンジンハエ媒介生物であるニンジンサビバエ(Psila rosae)に対する処理は作物に行わなかった。
a)活性化剤の乳化した混合物に浸した顆粒、この混合物は表XIIに示す活性化剤を含んでいた:
T1:10%(w/w)
T2:20%(w/w)
T1:5%(w/w)
T2:10%(w/w)
植物の葉と発育中のニンジンの両方の状態を試験期間中ずっとモニターした。
播種の5ヵ月後、3つの群(コントロール、処理T1、処理T2)の各々において、カンキツグリーニング病菌(Candidatus liberibacter)の存在により悪影響を受けた植物の百分率を評価し、平均の結果を計算し、図19に示す。この図から分かるように、処理方法T2は悪影響を受けた葉をもつ植物の百分率の顕著な低下を引き起こした(コントロール植物の40.6%に対してT2群は26.1%)。この差は統計的に有意であることが判明した(p<0.05)。
カンキツグリーニング病菌(Candidatus liberibacter)感染の存在により悪影響を受けたニンジンの平均数を、3つの群の各々について計算した。図20から分かるように、影響を受けたニンジンの平均数は、T1及びT2方法の両方でコントロール群と比較して有意に低下した。
この予備的な研究は、本発明の組成物を含有する顆粒状の製剤で成長中のニンジン植物を処理すると、カンキツグリーニング病菌(Candidatus liberibacter)感染により引き起こされた損傷を含有する植物及びニンジンの両方の数を有意に低下させることを立証している。
ミツバチの生存に対する本発明の組成物の効果の予備的な研究
序:
近年、ミツバチ(主としてセイヨウミツバチ(Apis mellifera)種)の数の劇的な減少が観察されている。農業及び園芸に関するミツバチの重要性のため、この現象(峰群崩壊症候群として知られる)は、その活動分野に厳しい結果をもたらしている。峰群崩壊症候群は、コロニーの多数の働きバチの消失により特徴付けられ、通常女王と残りの未成熟のハチの面倒を見る小数だけの看護バチと共に女王が置き去りにされる。峰群崩壊症候群の正確な原因はまだ最終的に知られていないが、ことによると(ウィルス性感染症の媒介生物として行動する)ミツバチヘギイタダニ(Varroa)のようなダニによる寄生を伴うかもしれないウィルス及び/又は菌類の感染が主要な役割を果たしている可能性がある。例えば、ミツバチヘギイタダニ(Varroa)のような破壊(destructor)ダニはミツバチコロニーに対して極めて破壊的であり、これは少なくとも部分的に、媒介され得るチヂレバネウィルス及び急性ミツバチ麻痺ウィルスを始めとするウィルスに起因することが知られている。イスラエル急性麻痺ウィルスを含めて他のウィルスもこの現象に関係している。また、ノゼマ微胞子虫(Nosema apis)及びノゼマ原虫(Nosema ceranae)のようなある種の真菌種が、峰群崩壊症候群に至る発病過程に関係している可能性があることを示す証拠もある。最後に、少なくとも1つの主要な研究によって、ウィルス性(イリドウィルス6型)及び真菌性(ノゼマ原虫(N.ceranae))の作用物質の組合せがこの現象の発症に関与している可能性があることが判明している。
この研究は、スペイン、Extremadura地方のCaminomoriscoに設置した7対のハチの巣を用いて行った。各対の1つの巣(「巣番号−A」と名付けた)を本発明の組成物で処理した。他の巣(「巣番号−B」と名付けた)は、前記組成物で処理しなかったがミツバチの巣に日常的に施される日常の慣習的維持管理処理をし続けたのでコントロールとして働かせた。
a)油相
スクラレオール98% 8.00g
ノートカトン98% 16.00g
CBD 3% 16.00g
ALDO MO、HLB=2 30.61g
MCT 68.00g
エタノール 12.25g
b)水相
Tween 80 170.10g
ナリンギン98% 8.00g
ステビア6% 14.00g
水 657.04g
(2つの相の総重量:1000g)
1対の巣(他の理由からコロニーの全てが死んだ5A及び5B)を除いて、成虫のハチ及び幼虫の数に関するデータが7対の巣から得られた。結果を図21(幼虫)及び22(成虫のハチ)に要約して示す。これらの図から分かるように、本発明の組成物による処理では(巣「A」)、未処理コントロールのハチの巣(巣「B」)よりも多数の幼虫及び成虫のハチの両方の生存が見られた。
牛乳中の体細胞数に対する本発明の組成物の効果
序:
牛乳の高い体細胞数は、酪農業で感染症の可能性の指標として使用されており、食品製造において消費及び使用のためのミルクとして不適格とされる。したがって高い体細胞数は牛乳生産業者にとってミルクを捨てる必要が生じる結果として直接金銭的損失を招き得る。加えて、生産者は罰金を払わなければならないこともあり得る。また、いくつかの地方では、高い体細胞数の2つの報告の結果、卸業者が影響を受けた生産者からのさらなるミルクの供給の受け取りを拒絶することがある。
乳中に既に高まったレベルの体細胞が存在すると確認された6頭のウシを各々次の局所ゲル製剤の1つで処理した:
1.市販のクリーム製剤(イスラエルAradのSea of Spaにより製造された、コムギクリームオイルで富化されたBio Spa)中に5%水中油エマルションを含有するゲル(2頭のウシ)。
2.市販のAloe−Veraクリーム中に5%水中油エマルションを含有するゲル(2頭のウシ)。
3.製剤(1)に対するクリームのみのコントロール(1頭のウシ)。
4.製剤(2)に対するクリームのみのコントロール(1頭のウシ)。
試験に含ませた6頭のウシの各々の乳中の体細胞の数を表XVに示す:
野外研究:本発明の組成物によるヒヨコマメ種子の直接被覆
序:
イスラエルでのヒヨコマメ(Cicer arietinum L)の通常の播種期は、主として2つの土壌伝染性の真菌病原体アスコキタ・ラビエイ(Ascochyta rabiei)及びフザリウム・オキシスポルムf.sp.シセロ(フザリウム(Fusarium) oxysporum f. sp. cicero)に直面する問題のため2月初めである。現存するヒヨコマメの品種はこれらの病原体が存在する結果としてイスラエルの冬を越すことができない。
ヒヨコマメを乳剤A(本発明の組成物−下記参照)で被覆し、その後制御放出ポリマー(E603、Sekisui Specialty Chemicals、日本)で被覆した。
Serenade(R) 0.021グラム
スクラレオール 0.034グラム
ナリンギン 0.034グラム
ノートカトン 0.034グラム
ステビア 0.003グラム
CBD 0.001グラム
Twin 80 0.723グラム
Polyaldo 0.130グラム
MCT 0.289グラム
ETOH 0.052グラム
水 2.929グラム
ロットA:流動床塗工機を用いて、7000のヒヨコマメを1.25gの乳剤A(水で40mlに希釈)で被覆した。続いて、乳剤被覆した種子を425gのポリマーE603で被覆した。
ロットB:使用した乳剤A(水で40mlに希釈する前)の量が2.5gであった以外はロットAと同様に7000のヒヨコマメを処理した。乳剤被覆した種子をロットAと全く同じ制御放出ポリマーで被覆した。
コントロール:3000のヒヨコマメを被覆しないままとし、他にいかなる処理もしなかった。
さまざまな処理の成功その他は、各々の処理区域のヒヨコマメの収量を測定し、次にその重量をKg/ドゥナム(1000m2)に外挿することによって決定した。さまざまな処理の結果を次の表に要約して示す:
プロバイオティック細菌の混合物と組み合わせたさまざまな活性化剤の殺真菌及び殺細菌活性
この研究では、プロバイオティック抗細菌種の混合物を1種以上の活性化剤と組み合わせて使用して、かかる種が前記活性化剤と組み合わせて、上で報告された細菌種が枯草菌(B.subtilis)であるときに本発明者により見られたのと同じ効果を有するかどうかを検討した。
この研究では、活性化剤と組み合わせて使用する細菌混合物が、イスラエルでAltman Health Ltd.により流通させられている商業的プロバイオティック製品である「Jarro Dophilus」である。
下記表XVIIIA−Cに見られるように、このプロバイオティック細菌の混合物を組成物の細菌成分として用いて得られた結果は、上記実施例1に報告された枯草菌(B.subtilis)を含有する混合物で得られたものと本質的に同じであった。これらの表に示す結果は、濃度4で使用した活性化剤を含有する組合せに対するものである。
プロバイオティック細菌の混合物と組み合わせたさまざまな活性化剤を用いたトウモロコシの実生の接種
この研究では、接種混合物(すなわち本発明の組成物)が枯草菌(B.subtilis)の代わりに実施例19に記載したプロバイオティック混合物「Jarro Dophilus」を含んでいた以外は上記実施例10に記載したのと同じようにしてトウモロコシの種子に接種した。
次の表は、濃度4の活性化混合物で行った接種の結果を示す:
Claims (46)
- 真菌性、細菌性及び/又はウィルス性病原体による植物又は動物宿主種の感染を予防及び/又は処理する方法であって、
a)1種以上の非病原性細菌及び1種以上の活性化剤の混合物を準備するステップ;及び
b)ステップ(a)の混合物を前記宿主種に施すステップ
を含む、前記方法。 - 真菌性、細菌性及び/又はウィルス性病原体による植物又は動物宿主種の感染を予防及び/又は処理する方法であって、
a)(i)1種以上の非病原性細菌を含む組成物;及び
(ii)1種以上の活性化剤を含む組成物
を別々に準備するステップ;並びに
b)組成物(i)及び(ii)の各々を前記宿主種に別々に施すステップ
を含む、前記方法。 - 非病原性の細菌が、枯草菌(Bacillus subtilis)及びプロバイオティック細菌からなる群から選択される、請求項1又は2に記載の方法。
- 非病原性の細菌が、枯草菌(Bacillus subtilis)種の細菌である、請求項3に記載の方法。
- 枯草菌(Bacillus subtilis)の株が、QST 713株である
、請求項4に記載の方法。 - 非病原性の細菌が、プロバイオティック細菌の1つ以上の種である、請求項4に記載の方法。
- プロバイオティック細菌が、L.ラムノサス(L.rhamnosus)、L.カゼイ(L.Casei)、L.プランタルム(L.Plantarum)、L.ヘルベティカス(L.helveticus) (アシドフィルス(acidophilus))、B.ロングム(B.Longum)、B.ブレヴェ(B.breve)、ペディオコッカス・アシディラクティシ(Pediococcus Acidilactici)、ラクトコッカス・ラクティス(Lactococcus lactis)及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項5に記載の方法。
- 宿主種に施される第1の組成物が、非病原性の細菌を含む組成物である、請求項2に記載の方法。
- 宿主種に施される第1の組成物が、1種以上の活性化剤を含む組成物である、請求項2に記載の方法。
- 非病原性の細菌を含む組成物及び1種以上の活性化剤を含む組成物が、ほぼ同時に宿主種に施される、請求項2に記載の方法。
- 1種以上の活性化剤が、抗炎症活性を有する物質である、請求項1〜10のいずれか1項に記載の方法。
- 1種以上の活性化剤が、NO及び/又はTNF−αの生産を阻害することができる物質である、請求項11に記載の方法。
- 活性化剤が、各々、NO生産の阻害に対する1.5mg/ml未満のIC50及び/又はTNF−α生産の阻害に対する2.5mg/ml未満のIC50を有する、請求項12に記載の方法。
- 活性化剤が、各々、NO生産の阻害に対する0.1mg/ml未満のIC50及び/又はTNF−α生産の阻害に対する0.2mg/ml未満のIC50を有する、請求項12に記載の方法。
- 活性化剤が、各々、NO生産の阻害に対する0.05mg/ml未満のIC50及び/又はTNF−α生産の阻害に対する0.1mg/ml未満のIC50を有する、請求項12に記載の方法。
- 1種以上の活性化剤が、スクラレオール、ナリンギン、ノートカトン、ステビオールグリコシド及びカンナビジオールからなる群から選択される、請求項1〜15のいずれか1項に記載の方法。
- 1種以上の活性化剤が、シオン(Aster tataricus)、ハマスゲ(Cyperus rotundus)及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項1〜16のいずれか1項に記載の方法。
- 宿主種が、植物種である、請求項1〜17のいずれか1項に記載の方法。
- 宿主種が、動物種である、請求項1〜18のいずれか1項に記載の方法。
- 動物種が、家畜又は農業動物である、請求項19に記載の方法。
- 動物種が、農業上重要な昆虫種、特にミツバチである、請求項19に記載の方法。
- 1種以上の非病原性細菌、1種以上の活性化剤及び/又はこれらの組合せが、葉への施用によって植物に施される、請求項18に記載の方法。
- 1種以上の非病原性細菌、1種以上の活性化剤及び/又はこれらの組合せが、植物が成長している培地にこれらの物質を加えることによって前記植物に施される、請求項18に記載の方法。
- 非病原性の細菌、1種以上の活性化剤及び/又はこれらの組合せが、これらの物質で被覆された顆粒の形態で施される、請求項23に記載の方法。
- 顆粒が、さらに放出制御ポリマーを含む、請求項24に記載の方法。
- 非病原性の細菌、1種以上の活性化剤及び/又はこれらの組合せが、植物種の種子を蒔く前に前記種子をこれらの物質で被覆することによって施される、請求項18に記載の方法。
- 被覆された種子が、さらに放出制御ポリマーを含む、請求項26に記載の方法。
- 非病原性の細菌及び1種以上の活性化剤の混合物を含む組成物であって、前記1種以上の活性化剤が抗炎症活性を有する物質である、組成物。
- 活性化剤が、各々、NO生産の阻害に対する1.5mg/ml未満のIC50及び/又はTNF−α生産の阻害に対する2.5mg/ml未満のIC50を有する、請求項28に記載の組成物。
- 活性化剤が、各々、NO生産の阻害に対する0.1mg/ml未満のIC50及び/又はTNF−α生産の阻害に対する0.2mg/ml未満のIC50を有する、請求項28に記載の組成物。
- 活性化剤が、各々、NO生産の阻害に対する0.05mg/ml未満のIC50及び/又はTNF−α生産の阻害に対する0.1mg/ml未満のIC50を有する、請求項28に記載の組成物。
- さらに、安定剤、溶剤、金属イオン封鎖剤、乳化剤及び放出制御剤からなる群から選択される1種以上の追加の作用物質を含む、請求項28〜31のいずれか1項に記載の組成物。
- 1種以上の活性化剤が、スクラレオール、ナリンギン、ノートカトン、ステビオールグリコシド及びカンナビジオールからなる群から選択される、請求項28〜32のいずれか1項に記載の組成物。
- 非病原性の細菌が、枯草菌(Bacillus subtilis)及びプロバイオティック細菌からなる群から選択される、請求項28〜33のいずれか1項に記載の組成物。
- 非病原性の細菌が、枯草菌(Bacillus subtilis)種の細菌である、請求項34に記載の組成物。
- 枯草菌(Bacillus subtilis)の株が、QST 713株である、請求項35に記載の組成物。
- 非病原性の細菌が、プロバイオティック細菌の1つ以上の種である、請求項34に記載の組成物。
- プロバイオティック細菌が、L.ラムノサス(L.rhamnosus)、L.カゼイ(L.Casei)、L.プランタルム(L.Plantarum)、L.ヘルベティカス(L.helveticus) (アシドフィルス(acidophilus))、B.ロングム(B.Longum)、B.ブレヴェ(B.breve)、ペディオコッカス・アシディラクティシ(Pediococcus Acidilactici)、ラクトコッカス・ラクティス(Lactococcus lactis)及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項37に記載の組成物。
- スクラレオール、ナリンギン、ノートカトン、ステビオールグリコシド及びカンナビジオールからなる群から選択される、枯草菌(Bacillus subtilis)の活性化を引き起こすことができる1種以上の作用物質の混合物を含む組成物。
- 農業上又は園芸上重要な植物の収量を増大する方法であって、
a)1種以上の非病原性細菌及び1種以上の活性化剤の混合物を準備するステップ;及び
b)ステップ(a)の混合物を宿主種に施すステップ
によって、収量を増大する方法。 - 農業上又は園芸上重要な植物の収量を増大する方法であって、
a)(i)1種以上の非病原性細菌を含む組成物;及び
(ii)1種以上の活性化剤を含む組成物
を別々に準備し;
b)組成物(i)及び(ii)の各々を宿主種に別々に施す
ことによって、収量を増大する方法。 - 農業上重要な動物からの生産物の収量を増大する方法であって、
a)1種以上の非病原性細菌及び1種以上の活性化剤の混合物を準備するステップ;及び
b)ステップ(a)の混合物を宿主種に施すステップ
によって、生産物の収量を増大する方法。 - 農業上重要な動物からの生産物の収量を増大する方法であって、
a)(i)1種以上の非病原性細菌を含む組成物;及び
(ii)1種以上の活性化剤を含む組成物
を別々に準備し;
b)組成物(i)及び(ii)の各々を宿主種に別々に施す
ことによって、生産物の収量を増大する方法。 - 真菌性、細菌性及び/又はウィルス性病原体により引き起こされるダメージに耐える植物又は動物宿主種の能力を増大する方法であって、
a)非病原性の細菌及び1種以上の活性化剤の混合物を準備するステップ;及び
b)ステップ(a)の混合物を植物又は動物宿主種に施すステップ
を含む、前記方法。 - 真菌性、細菌性及び/又はウィルス性病原体により引き起こされるダメージに耐える植物又は動物宿主種の能力を増大する方法であって、
a)(i)1種以上の非病原性細菌を含む組成物;及び
(ii)1種以上の活性化剤を含む組成物
を別々に準備し;
b)組成物(i)及び(ii)の各々を前記宿主種に別々に施すステップを含む、前記方法。 - 請求項3〜27のいずれか1項に記載の技術的特徴を含む、請求項40〜45のいずれか1項に記載の方法。
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