CN103783085B - 一种抗病增产的生防菌多效复合制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种抗病增产的生防菌多效复合制剂及其制备方法，它以两株生防菌株枯草芽孢杆菌的复合发酵液为主要有效成分，并含有乳化剂、紫外线保护剂、增效剂、防冻剂、黏着剂。其制备方法是将乳化剂与主药共置于乳化机中搅拌乳化，再依次加入助剂继续搅拌乳化，即得枯草芽胞杆菌类乳剂成品。该产品在水中能迅速均匀分散，抑菌谱广，增产效果显著，适用范围广。

Description

一种抗病增产的生防菌多效复合制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于生物领域，具体涉及抗病增产枯草芽孢杆菌复合微生物农药及其制备方法。

背景技术

据FAO统计，全世界农林业中每年因各种病害造成的损失占总产值的12%，为了挽回损失，化学农药起了举足轻重的作用，但随着其用量的逐年增加，化学农药固有的毒性和农药残留严重污染了人类懒以生存的环境，破坏了生态平衡，给人类健康造成极大的威胁，在这种情况下，安全、低毒、高效、无污染、无残留的生物农药随之蓬勃兴起，越来越受到重视，其中，微生物农药以其防治对象不易产生抗药性，不伤害天敌，对人畜安全，繁殖生产速度快，能充分利用工农业废料，适宜于工厂化大生产等优点，成为生产无公害农副产品的首选农药种类。

枯草芽孢杆菌(bacillussubtillis)作为微生物农药中的一员，在防治植物病害方面有其独特的优势：易于生产，抗逆性强，适应性广，效果稳定，功能多(防治病害的同时，还有促进作物生长、增收、增强植物抗病虫的能力)而备受国内外关注。作为生物杀菌剂枯草芽孢杆菌制剂，美国、日本、德国等已有多个厂商进行产品登记注册，并进行商品化生产，用于防治蕃茄晚疫病，蔬菜灰霉病和小麦白粉病等，还可作为增产促进剂。我国关于枯草芽孢杆菌防治植物病害的研究，已达到了世界先进水平，现在开发成功并小规模生产的商品有亚宝、百抗、麦丰宁、纹曲宁等，田间用于防治黄瓜白粉病、草莓灰霉病、小麦水稻纹枯病等，其效果优于或者相当于常用的化学杀菌剂，各种用途的枯草芽孢杆菌其主要活性成份是活的生物体，所以与化学农药相比，剂型加工更为困难,生防枯草芽孢杆菌在剂型开发方面相对落后，现在主要有可湿性粉剂、悬浮剂和油剂，这些剂型虽然也各有优点，但依然存在芽胞死亡率高、保质期短、杀菌效果不理想、粉尘飘散、对作物附着能力低而造成农用成本增高等诸多自身克服不了的缺点。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有防病效果好，使用方便、无粉尘污染、无残留、对人畜和天敌安全、产品生产工艺简单，适用于大批量工厂化生产的环保防病增产的一种抗病增产的生防菌多效复合制剂；本发明的目的是提供一种抗病增产的生防菌多效复合制剂的制备方法。

本发明技术方案如下：一种抗病增产的生防菌多效复合制剂，由下列重量份的原料组成：主药66.5-85.5份、助剂14.4-35.5份，主药由1:1的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）Bs-16，CGMCC编号1.1216和枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）Bs-20，ACCC编号03120两菌的原液发酵液组成，助剂为乳化剂、紫外保护剂、抑菌活性增效剂、黏着剂、防冻剂的混合物，其中乳化剂12-30重量份、紫外保护剂0.1—1.0重量份、抑菌活性增效剂0.1—1.0重量份、黏着剂0.2-0.5重量份、防冻剂2.0-3.0重量份。

本发明的另一个技术方案如下：一种抗病增产的生防菌多效复合制剂，其特征在于它由下列重量份的原料组成：主药50-60份、助剂33.9-59.3份，主药由1:1的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）Bs-16，CGMCC编号1.1216和枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）Bs-20，ACCC编号03120两菌的浓缩发酵物组成，助剂为乳化剂、紫外保护剂、抑菌活性增效剂、黏着剂、防冻剂和稀释剂的混合物，其中乳化剂20-28重量份、紫外保护剂0.1—0.5重量份、抑菌活性增效剂0.1-0.5重量份、黏着剂0.2-0.5重量份、防冻剂2.0-3.0重量份、稀释剂11.5-26.8重量份；优选的，所述稀释剂为枯草芽孢杆菌Bs-16和Bs-20两菌株的共发酵液经离心后的上清液，本发明中稀释剂选用枯草芽孢杆菌发酵液经离心后的上清液代替水，具有增效和节约资源的作用。实验证明枯草芽胞杆菌发酵上清液对多数病原菌的拮抗作用也特别显著。

枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）Bs-16，CGMCC编号1.1216，购买于中国微生物菌种管理委员会普通微生物中心，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所（100015）；枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）Bs-20，ACCC编号03120，购买于中国农业微生物菌种保藏管理中心，北京市中关村南大街12号，中国农业科学院土壤肥料研究所（100081）。

优选的，所述乳化剂选自阿拉伯胶、西黄蓍胶、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、吐温-80、聚甘油酯、农乳300、农乳700、三乙醇胺中的一种或两种的混合物，两种物质可选自质量比为2:1的阿拉伯胶和西黄蓍胶，或选自质量比为2:1的聚甘油酯和十二烷基磺酸钠，或选自质量比为2:1的吐温-80和十二烷基硫酸钠，或选自质量比为2:1的吐温-80和三乙醇胺。

优选的，所述紫外保护剂选自荧光素钠、刚果红、茶多酚、七叶灵、甲基绿、对氨基苯甲酸、叶酸、吖啶黄、脱脂牛奶中的一种。

优选的，所述抑菌活性增效剂选自L-丝氨酸、磷酸二氢钠、糖蜜、蔗糖、甘油、牛血清、亮氨酸、吐温-80、海藻酸钠中的一种。

优选的，所述粘着剂选自淀粉、桐油、蓖麻油、糖蜜、脱脂乳粉、酪蛋白、聚氯乙烯胶乳中的一种；

优选的，所述防冻剂（也是助乳化剂）选自乙二醇、甘油、聚乙二醇中的一种。

本发明第一种技术方案中的一种抗病增产的生防菌多效复合制剂的制备方法，包括以下步骤：

A、制备发酵液

将枯草芽孢杆菌Bs-16和枯草芽孢杆菌Bs-20两菌分别在预制备量的现有NYDA培养液中静置发酵36-48小时得原液发酵液，菌数达10¹⁰孢子/ml以上，

B、备料

按权利要求1所列配方备料，所有固体助剂均过100目筛，紫外表面灭菌，液体助剂尽量用新的，以避免污染；

C、乳化

取主药发酵液与乳化剂和防冻剂（也是助乳化剂）共置于乳化机中搅拌乳化，

D、加助剂

依次加入紫外保护剂、抑菌活性增效剂、黏着剂于乳化液中，乳化后即得成品，成品为均一透明液体。

本发明第二种技术方案中的一种抗病增产的生防菌多效复合制剂的制备方法，包括以下步骤：

A、制备主药和稀释剂

将枯草芽孢杆菌Bs-16和枯草芽孢杆菌Bs-20两菌株分别于27-29℃恒温静置发酵36-48小时得发酵液，将两菌株发酵液一起在离心机中3500-4500转/分的转速，于5-10℃温度下离心10-15分钟得离心产物，离心沉淀物为主药，离心上清液作为稀释剂；

B、备料

按权利要求1所列配方备料，所有固体助剂均过100目筛，紫外表面灭菌，液体助剂尽量用新的，以避免污染；

C、乳化

取主药发酵液与乳化剂和防冻剂（也是助乳化剂）共置于乳化机中搅拌乳化，

D、加助剂

加入总配方量50%的稀释剂乳化30分钟,再依次加入紫外保护剂、抑菌活性增效剂、黏着剂于乳化液中，再乳化30分钟，加入剩余50%的稀释剂使其达预制备的体积量，继续搅拌乳化50分钟，即得成品。

本发明生防制剂的剂型介于乳剂和微乳剂之间,属热力学稳定体系,它是将在水中溶解度较小的微生物及其代谢产物与适量的乳化剂或乳化稳定剂，经高速剪切力最终形成粒径为0.01-20μm的水包油型或油包水型均相体系，乳化剂用量比一般乳剂大,但比微乳剂又少，制备这种制剂最关键的环节是合适乳化剂的选择，生产成本相对一般水剂和粉剂要高些，但对其生产设备的要求远比这些剂型要低。另外，它是以水为基质，加之大量乳化剂的使用改变了传统剂型与作物之间的润湿性和延展性关系，是一种具有开发应用价值的生防枯草芽孢杆菌新制剂。本发明中乳化剂是制备类乳剂的关键助剂，其选择尤为关键，应从产品防治效果和成本两方面权衡。

本发明两株枯草芽孢杆菌其发酵菌数高，对紫外线耐受，传代稳定性强(已传十五代),二者组合互补对灰葡萄孢、尖孢镰刀菌、立枯丝核菌、二孢白粉菌和腐霉菌均表现很强的拮抗作用。其生长适宜温度28-30℃，耐高温，发酵液80℃恒温处理1小时，有效菌数仍可达10⁹cfu∕ml以上；耐酸碱，PH3-9范围内都可正常生长；NYDA培养液中28℃恒温培养48h，平均菌数可达10¹¹cfu/ml以上。经室内生物活性测定证明，这两株生防菌复合使用，对茄果类灰霉病、瓜类猝倒病、白粉病、菜苗立枯病和根腐病有效，平均防效均可达80%以上，而且促进番茄、黄瓜、茄子等种子发芽和出苗，尤其对番茄灰霉病有特效，平均防效可达90%，增产率达37%。

本发明提供的的生防菌复合制剂与其组成的单菌株和阳性对照相比具有以下优点：

（1）扩大抑菌谱，降低使用量。室内外生物活性测定显示:枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）Bs-16，CGMCC编号1.1216主要对瓜果蔬菜灰霉病、猝倒病有明显的抑制作用，但对苗期立枯病、根腐病的抑制作用十分微弱；而枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）Bs-20，ACCC编号03120对瓜果蔬菜的苗期立枯病、根腐病和白粉病抑制作用十分显著，对灰霉病抑制作用弱。将二者组合成复合制剂后，可同时有效防治瓜果蔬菜的苗期立枯病、根腐病、白粉病、灰霉病和猝倒病，避免了多次重复用药。

（2）提高了抑菌活性。复合制剂中两菌株及其代谢产物之间有协同增效效应，与各单菌株制剂相比，复合制剂的抑菌活性提高了20%以上。

（3）延长了有效期。按本发明配方制备的复合制剂，其有效保质期均在2年以上，比单菌制剂和阳性对照有效时限稳定性好。

（4）增产效果显著。本发明提供的生防菌复合制剂在促进植物长高、增重方面效果显著，增产率在20%-30%。

（5）成本降低。与单菌制剂相比，延缓了靶标病原菌的抗药性的产生，共发酵使得其生产成本降低了30%以上，农用成本降低了30%-50%。

（6）环保、安全。本发明提供的生防菌复合制剂主要成份属于自然界获得的，助剂也为环保可降解产品，所以使用中无残留。用最大一次限量法，以2×10¹¹个芽孢（孢子）/千克体重的量对小白鼠的急性经口和经皮毒性实验证明，无致死、致敏和不良反应。

本发明提供的产品，每亩用该复合制剂80ml兑入50-60升水中，充分摇匀后可直接用于喷雾作物表面防治其灰霉病、白粉病、枯萎病等真菌病，也可搅种、灌根，用于预防作物幼苗期的猝倒病、立枯病和根腐病等真菌性病害或细菌性病害。同时被保护植物的生长、开花、结果，特别是增产具有十分显著的促进作用。

经田间试验证明本发明产品对灰霉菌的防治效果达95%以上，对立枯丝核菌达90%以上，对腐烂病的防治效果也达85%以上，持效期延长至12天。与其它乳剂、微乳剂的配方相比，本发明省略了有机溶剂，且乳化剂选择对人安全无毒害的产品，保质期可达2年以上，常温、避光、密封保存即可。所以，可以保证其对人畜安全、对环境友好。为生物农药增添一新成员，为枯草芽胞杆菌开辟了更为广阔的应用前景。

本发明产品生产工艺和设备要求简单，原料来源广泛易得,易于大规模工业化生产。其在水中能迅速均匀分散，抑菌谱广，增产效果显著，适用范围广。

具体实施方式

下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何形式限制本发明。

实施例1-6主药为枯草芽孢杆菌原液发酵液的多效生防制剂配方（参见表1），其中各产品均预制备100kg。

实施例1的具体制备方法如下：

A、制备发酵液

将枯草芽孢杆菌Bs-16和枯草芽孢杆菌Bs-20两菌分别在预制备量的现有NYDA培养液中静置发酵40小时得原液发酵液，菌数达10¹⁰孢子/ml以上，

B、备料

按表1所列配方备料，所有固体助剂均过100目筛，紫外表面灭菌，液体助剂尽量用新的，以避免污染；

C、乳化

取主药发酵液与乳化剂和防冻剂（也是助乳化剂）共置于乳化机中搅拌乳化30分钟；

D、加助剂

每隔5分钟依次加入紫外保护剂、抑菌活性增效剂、黏着剂于乳化液中，乳化50分钟后即得成品，成品为均一透明液体。

实施例2的具体制备方法如下：

A、制备发酵液

将枯草芽孢杆菌Bs-16和枯草芽孢杆菌Bs-20两菌分别在预制备量的现有NYDA培养液中静置发酵36小时得原液发酵液，菌数达10¹⁰孢子/ml以上，

B、备料

按表1所列配方备料，所有固体助剂均过100目筛，紫外表面灭菌，液体助剂尽量用新的，以避免污染；

C、乳化

取主药发酵液与乳化剂和防冻剂（也是助乳化剂）共置于乳化机中搅拌乳化30分钟；

D、加助剂

每隔5分钟依次加入紫外保护剂、抑菌活性增效剂、黏着剂于乳化液中，乳化50分钟后即得成品，成品为均一透明液体。

实施例3的具体制备方法如下：

A、制备发酵液

将枯草芽孢杆菌Bs-16和枯草芽孢杆菌Bs-20两菌分别在预制备量的现有NYDA培养液中静置发酵48小时得原液发酵液，菌数达10¹⁰孢子/ml以上，

B、备料

按表1所列配方备料，所有固体助剂均过100目筛，紫外表面灭菌，液体助剂尽量用新的，以避免污染；

C、乳化

取主药发酵液与乳化剂和防冻剂（也是助乳化剂）共置于乳化机中搅拌乳化30分钟；

D、加助剂

每隔5分钟依次加入紫外保护剂、抑菌活性增效剂、黏着剂于乳化液中，乳化50分钟后即得成品，成品为均一透明液体。

实施例4-实施例5制备方法同实施例1。

实施例6-10主药为枯草芽孢杆菌浓缩发酵液的多效生防制剂配方（参见表2），其中各产品均预制备100kg。

上述实施例10制得产品保质期长，持效期也长，防效好，比其它实施例产品优势更多。

实施例6的制备方法如下：

A、制备主药和稀释剂

将枯草芽孢杆菌Bs-16和枯草芽孢杆菌Bs-20两菌株分别于28℃恒温静置发酵40小时得发酵液，将两菌株发酵液一起在离心机中4000转/分的转速，于8℃温度下离心15分钟得离心产物，离心沉淀物为主药，离心上清液作为稀释剂；

B、备料

按表2所列配方备料，所有固体助剂均过100目筛，紫外表面灭菌，液体助剂尽量用新的，以避免污染；

C、乳化

取主药发酵液与乳化剂和防冻剂（也是助乳化剂）共置于乳化机中搅拌乳化30分钟，

D、加助剂

加入总配方量50%的稀释剂乳化30分钟,再每隔5分钟依次加入紫外保护剂、抑菌活性增效剂、黏着剂于乳化液中，再乳化30分钟，加入剩余50%的稀释剂使其达预制备的体积量，继续搅拌乳化50分钟，即得成品。

实施例7的制备方法如下：

A、制备主药和稀释剂

将枯草芽孢杆菌Bs-16和枯草芽孢杆菌Bs-20两菌株分别于27℃恒温静置发酵36小时得发酵液，将两菌株发酵液一起在离心机中3500转/分的转速，于10℃温度下离心10分钟得离心产物，离心沉淀物为主药，离心上清液作为稀释剂；

B、备料

按表2所列配方备料，所有固体助剂均过100目筛，紫外表面灭菌，液体助剂尽量用新的，以避免污染。

C、乳化

取主药发酵液与乳化剂和防冻剂（也是助乳化剂）共置于乳化机中搅拌乳化30分钟，

D、加助剂

加入总配方量50%的稀释剂乳化30分钟,再每隔5分钟依次加入紫外保护剂、抑菌活性增效剂、黏着剂于乳化液中，再乳化30分钟，加入剩余50%的稀释剂使其达预制备的体积量，继续搅拌乳化50分钟，即得成品。

实施例8的制备方法如下：

A、制备主药和稀释剂

将枯草芽孢杆菌Bs-16和枯草芽孢杆菌Bs-20两菌株分别于29℃恒温静置发酵48小时得发酵液，将两菌株发酵液一起在离心机中4500转/分的转速，于5℃温度下离心12分钟得离心产物，离心沉淀物为主药，离心上清液作为稀释剂；

B、备料

按表2所列配方备料，所有固体助剂均过100目筛，紫外表面灭菌，液体助剂尽量用新的，以避免污染。

C、乳化

取主药发酵液与乳化剂和防冻剂（也是助乳化剂）共置于乳化机中搅拌乳化30分钟，

D、加助剂

加入总配方量50%的稀释剂乳化30分钟,再每隔5分钟依次加入紫外保护剂、抑菌活性增效剂、黏着剂于乳化液中，再乳化30分钟，加入剩余50%的稀释剂使其达预制备的体积量，继续搅拌乳化50分钟，即得成品。

实施例9-实施例10的制备方法同实施例6。

实施例11

与实施例1不同之处在于乳化剂选自阿拉伯胶，紫外保护剂选自对氨基苯甲酸，所述抑菌活性增效剂选自牛血清，所述粘着剂选自桐油。

实施例12

与实施例1不同之处在于乳化剂选自西黄蓍胶，紫外保护剂选自叶酸，所述抑菌活性增效剂选自L-丝氨酸、磷酸二氢钠、糖蜜、蔗糖、甘油、吐温-80，所述粘着剂选自糖蜜。

实施例13

与实施例1不同之处在于乳化剂选自质量比为2:1的阿拉伯胶和西黄蓍胶，所述粘着剂选自脱脂乳粉。

实施例14

与实施例1不同之处在于所述粘着剂选自聚氯乙烯胶乳。

实施例15

与实施例6不同之处在于乳化剂选自阿拉伯胶，紫外保护剂选自对氨基苯甲酸，所述抑菌活性增效剂选自牛血清，所述粘着剂选自桐油。

实施例16

与实施例6不同之处在于乳化剂选自西黄蓍胶，紫外保护剂选自叶酸，所述抑菌活性增效剂选自L-丝氨酸、磷酸二氢钠、糖蜜、蔗糖、甘油、吐温-80，所述粘着剂选自糖蜜。

实施例17

与实施例6不同之处在于乳化剂选自质量比为2:1的阿拉伯胶和西黄蓍胶，所述粘着剂选自脱脂乳粉。

实施例18

与实施例6不同之处在于所述粘着剂选自聚氯乙烯胶乳。

以下描述小区试验（抗病、增产）

1.本发明产品生防菌多效复合制剂对黄瓜灰霉病的防效试验（结果见表3）

1.1供试药液:将本发明产品生防菌多效复合制剂以清水稀释100倍、500倍、1000倍备用,对照例1和对照例2是分别以Bs-16和Bs-20的单菌株发酵液为主药，其余助剂与实施例10相同的制剂，用清水稀释；对照例3为阳性对照，用多.嘧霉胺50%可湿性粉剂的1000倍稀释液。

注释:以上防治效果均为施药后第九天抽样测定的;表中同行数据后的小写字母表示0.05水平的差异显著性。

1.2测试过程

在日光温室点种黄瓜，待长出6-8片叶时，连片选取植株250株，平均分成5个试验小区，3个为试验药品小区，2个为对照小区，每小区之间设保护行，每个小区预处理30株（其余为保护行），先在保湿条件下接种(喷雾法)灰霉病病原菌,待发病后喷施实验药剂和对照处理，从叶片两面喷施，以叶片全湿但不滴液为度，连续处理两次，每次间隔2天,施药后的前两天遮光、保湿，以后按常规管理，施药后第九天应用随机抽样法调查植株发病情况，记录病斑面积。计算病情指数和防治效果。并用D.B.Duncan新复极差法对试验结果进行统计分析。

1.3病害分级方法(依据《农药田间试验准则》):

零级：无病斑

一级：病斑面积占整个叶片面积的5%以下

三级：病斑面积占整个叶片面积的6%-10%之间

五级：病斑面积占整个叶片面积的11%-20%之间

七级：病斑面积占整个叶片面积的21%-40%之间

九级：病斑面积占整个叶片面积的40%以上

病情指数%=∑（各级病叶数×相对级数值）／调查总叶片数×9×100

防治效果%=(对照区病情指数－处理区病情指数)／对照区病情指数×100

从表3结果可知，本发明产品生防菌多效复合制剂对黄瓜灰霉病有较好的防治效果，500倍稀释液与多.嘧霉胺1000倍稀释液的防治效果在0.05水平上无显著性差异，与单菌制剂差异显著,稀释1000倍，相对防效仍可达80%以上，并且在两年的保质期内，防效变化不大，比阳性对照稳定性好。

2.生防菌多效复合制剂对青菜的抗病增产试验（结果见表4）

2.1供试药液:将本发明试验药品以清水稀释100倍、500倍、1000倍备用,空白对照用清水。

对照例1和对照例2是分别以Bs-16和Bs-20的单菌株发酵液为主药，其余助剂与实施例10相同的制剂，用清水稀释；表中数据均为平均数，表中同行数据后的小写字母表示0.05水平的差异显著性。

2.2测试过程

首先用生防菌多效复合制剂浸泡青菜种子12小时,在日光温室内按株距15厘米点种于供试药剂和对照浇灌的穴内,覆一层薄土,常规方法管理，然后分别在第5天、第10天、第20天时再用供试药剂和对照灌根一次，菜苗长出两片子叶后，每隔10天喷施处理3次，其余按常规管理至成熟。共设4个试验小区，每小区50株菜苗，四周设三行保护。青菜成熟后分别测定株高、叶数、叶长、叶宽、每株平均质量和病害情况，叶长、叶宽统一测最外层的三片叶，每株平均质量是指擦干净叶上浮土、去根后的重量。病害主要考察霜霉病，并用D.B.Duncan新复极差法对试验结果进行统计分析。

从表4结果可知，本发明提供的生防菌多效复合制剂对青菜具有显著的增产、抗病作用，尤其在植株长高、长大、增加叶片数和提高单株质量方面以及对霜霉病的防控效果都十分显著，与单菌制剂和空白对照在0.05水平上存在极显著性差异。

Claims (5)

1.一种抗病增产的生防菌多效复合制剂，其特征在于它由下列重量份的原料组成：主药66.5-85.5份、助剂14.4-35.5份，主药由1:1的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）Bs-16，CGMCC编号1.1216和枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）Bs-20，ACCC编号03120两菌的原液发酵液组成，助剂为乳化剂、紫外保护剂、抑菌活性增效剂、黏着剂、防冻剂的混合物，其中乳化剂12-30重量份、紫外保护剂0.1—1.0重量份、抑菌活性增效剂0.1—1.0重量份、黏着剂0.2-0.5重量份、防冻剂2.0-3.0重量份；

所述乳化剂选自阿拉伯胶、西黄蓍胶、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、吐温-80、聚甘油酯、农乳300、农乳700、三乙醇胺中的一种或两种的混合物；

所述紫外保护剂选自荧光素钠、刚果红、茶多酚、七叶灵、甲基绿、对氨基苯甲酸、叶酸、吖啶黄、脱脂牛奶中的一种；

所述抑菌活性增效剂选自L-丝氨酸、磷酸二氢钠、糖蜜、蔗糖、甘油、牛血清、亮氨酸、吐温-80、海藻酸钠中的一种；

所述防冻剂选自乙二醇、甘油、聚乙二醇中的一种。

2.一种抗病增产的生防菌多效复合制剂，其特征在于它由下列重量份的原料组成：主药50-60份、助剂33.9-59.3份，主药由1:1的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）Bs-16，CGMCC编号1.1216和枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）Bs-20，ACCC编号03120两菌的浓缩发酵物组成，助剂为乳化剂、紫外保护剂、抑菌活性增效剂、黏着剂、防冻剂和稀释剂的混合物，其中乳化剂20-28重量份、紫外保护剂0.1—0.5重量份、抑菌活性增效剂0.1-0.5重量份、黏着剂0.2-0.5重量份、防冻剂2.0-3.0重量份、稀释剂11.5-26.8重量份；

所述乳化剂选自阿拉伯胶、西黄蓍胶、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、吐温-80、聚甘油酯、农乳300、农乳700、三乙醇胺中的一种或两种的混合物；

所述紫外保护剂选自荧光素钠、刚果红、茶多酚、七叶灵、甲基绿、对氨基苯甲酸、叶酸、吖啶黄、脱脂牛奶中的一种；

所述抑菌活性增效剂选自L-丝氨酸、磷酸二氢钠、糖蜜、蔗糖、甘油、牛血清、亮氨酸、吐温-80、海藻酸钠中的一种；

所述防冻剂选自乙二醇、甘油、聚乙二醇中的一种。

3.根据权利要求1或2所述的一种抗病增产的生防菌多效复合制剂，其特征在于：所述粘着剂选自淀粉、桐油、蓖麻油、糖蜜、脱脂乳粉、酪蛋白、聚氯乙烯胶乳中的一种。

4.权利要求1所述一种抗病增产的生防菌多效复合制剂的制备方法，其特征在于它包括以下步骤：

A、制备发酵液

将枯草芽孢杆菌Bs-16和枯草芽孢杆菌Bs-20两菌分别在预制备量的培养液中静置发酵36-48小时得原液发酵液，菌数达10¹⁰孢子/ml以上，

B、备料

按权利要求1所列配方备料，

C、乳化

取主药发酵液与乳化剂和防冻剂共置于乳化机中搅拌乳化，

D、加助剂

依次加入紫外保护剂、抑菌活性增效剂、黏着剂于乳化液中，乳化后即得成品，成品为均一透明液体。

5.权利要求2所述一种抗病增产的生防菌多效复合制剂的制备方法，其特征在于它包括以下步骤：

A、制备主药和稀释剂

将枯草芽孢杆菌Bs-16和枯草芽孢杆菌Bs-20两菌株分别于27-29℃恒温静置发酵36-48小时得发酵液，将两菌株发酵液一起在离心机中3500-4500转/分的转速，于5-10℃温度下离心10-15分钟得离心产物，离心沉淀物为主药，离心上清液作为稀释剂；

B、备料

按权利要求1所列配方备料，

C、乳化

取主药发酵液与乳化剂和防冻剂共置于乳化机中搅拌乳化，

D、加助剂

加入总配方量50%的稀释剂乳化30分钟,再依次加入紫外保护剂、抑菌活性增效剂、黏着剂于乳化液中，再乳化30分钟，加入剩余50%的稀释剂使其达预制备的体积量，继续搅拌乳化50分钟，即得成品。