JP2019531328A5

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Publication number: JP2019531328A5
Application number: JP2019521065A
Authority: JP
Filing date: 2017-10-19
Publication date: 2021-06-10
Anticipated expiration: 2037-10-19

Description

１．分野
本明細書において、本開示は、免疫学の分野に関し、より具体的には、Ｔリンパ球または他の免疫細胞の修飾に関する。

２.背景
Ｔリンパ球（Ｔ細胞とも呼ばれる）等の免疫系の細胞は、受容体または受容体複合体を介して特定の抗原を認識しかつこれらと相互作用し、かかる抗原を認識またはこれらと相互作用すると、これら受容体または受容体複合体は当該細胞の活性化を引き起こす。かかる受容体の一例は、８つのタンパク質の複合体である抗原特異的Ｔリンパ球受容体複合体（ＴＣＲ／ＣＤ３）である。該Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）は、Ｔリンパ球の表面で発現する。不変構造を有する一成分であるＣＤ３は、リガンドによるＴＣＲの占有後の細胞内シグナル伝達に関与する。抗原−ＣＤ３複合体（ＴＣＲ／ＣＤ３）に対するＴリンパ球受容体は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）のタンパク質によってそれに提示される抗原性ペプチドを認識する。ＭＨＣとペプチドの複合体は、抗原提示細胞及び他のＴリンパ球標的の表面で発現する。ＴＣＲ／ＣＤ３複合体の刺激は、Ｔリンパ球の活性化及びその結果として抗原特異的免疫反応をもたらす。該ＴＣＲ／ＣＤ３複合体は、エフェクター機能及び免疫系の調節において中心的な役割を果たす。

３.概要
１つの態様において、本明細書に提供するのは、（ａ）セレブロンまたはその機能部分を含む第一のポリペプチド及び（ｂ）セレブロン関連タンパク質またはその機能部分を含む第二のポリペプチドを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であり、該第一のポリペプチドもしくは第二のポリペプチド、または両方のポリペプチドは、ＣＡＲのさらなる成分、例えば、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞シグナル伝達ドメイン、及び／または共刺激ドメインを含む。該ＣＡＲの該第一及び第二のポリペプチドは、セレブロン結合化合物（例えば、本明細書に記載される）の存在下、免疫細胞中（例えば、Ｔリンパ球中）で一緒に発現されると、該第一のポリペプチドの該セレブロン（または、例えば、本明細書に記載される通り、その機能部分）及び該第二のポリペプチドのセレブロン関連タンパク質（または、例えば、本明細書に記載される通り、その機能部分）は、該セレブロン結合化合物と結合し、ＣＡＲ機能を有するヘテロ二量体の形成をもたらす。従って、本明細書に記載のＣＡＲの活性（例えば、インビボ活性）は、該ＣＡＲの該第一及び第二のポリペプチドを発現する細胞（例えば、当該ＣＡＲを発現するように操作されたＴリンパ球）をセレブロン結合化合物と接触させることによって選択的に制御することができる。免疫細胞で発現された該ＣＡＲがセレブロン結合化合物と接触され、該ＣＡＲが抗原、例えば、腫瘍関連抗原または腫瘍特異的抗原に結合すると、該ＣＡＲは、一次シグナル及び共刺激シグナルの両方を伝達し、これにより該免疫細胞を活性化する。

３．１.図面の簡単な説明
ＣＡＲＴ細胞活性を調節するためのセレブロン結合化合物（例えば、ポマリドミド）の使用。ポマリドミド及び腫瘍抗原への曝露後に活性化されるＴ細胞上の分割ＣＡＲの概略図を示す（腫瘍抗原結合ドメイン、ＣＤ２８等の共刺激ドメイン、及びセレブロンを含む第一のポリペプチド、ならびにＣＤ３ζ等のＩＴＡＭ及びＡｉｏｌｏｓ等のセレブロン関連タンパク質を含む第二のポリペプチドを備える）。ここで、ポマリドミドは、分割ＣＡＲの二量体化を誘導することによってＣＡＲ活性を調節する。ＣＲＢＮ：セレブロン、ＰＯＭ：ポマリドミド、Ｃｏｓｔｉｍ．Ｄｏｍａｉｎ：共刺激ドメイン。

４.詳細な説明
潜在的に毒性をもたらすＣＡＲを発現する治療的免疫細胞によって媒介される標的上であるが腫瘍外の効果は、活性化のために一次及び共刺激シグナルの両方を必要とする調節可能なＣＡＲをかかる細胞において発現させることによって低減または除去することができる。本明細書に開示するこの分離は、２つの人工ポリペプチドを含むＣＡＲの使用によって達成される。ここで、（ｉ）第一のポリペプチドは、セレブロン（またはその機能部分）を含み、第二のポリペプチドは、セレブロン関連タンパク質（またはその機能部分）を含み、（ｉｉ）活性化に必要とされる該ＣＡＲの成分は、２つのポリペプチドに分けられ、（ｉｉｉ）該ＣＡＲは、セレブロン及び該セレブロン関連タンパク質と結合するセレブロン結合化合物の存在下で活性化される。

５.実施例
本実施例は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む修飾Ｔリンパ球の生成及び使用を記載する。該ＣＡＲは、腫瘍特異的抗原に特異的な抗原結合ドメイン、共刺激ドメイン、及びセレブロンを含む第一のポリペプチド、ならびにセレブロン関連タンパク質（例えば、Ａｉｏｌｏｓ）、及びＣＤ３ζ免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）の一次細胞シグナル伝達ドメインを含む第二のポリペプチドを含む。

Ｔ細胞におけるＣＡＲ構築物の発現
上記ＣＡＲ構築物のＴ細胞による発現を調べる。Ｔ細胞を単離するため、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を健常ドナー血から分離する（例えば、Ｆｉｃｏｌｌ−ＰａｑｕｅＰｌｕｓ（商標）密度勾配遠心法（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を用いて全血から得たバフィーコートからＰＢＭＣを分離する）。汎Ｔ細胞は、ＰＢＭＣから陰性選択する（例えば、製造業者の指示に従って汎Ｔ単離キットＩＩ（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を用いて）。

Claims

キメラ抗原受容体（CAR）であって：
（ａ）第一のポリペプチドであって：
抗原結合ドメイン；
膜貫通ドメイン；
セレブロン結合化合物に結合することができるセレブロンまたはその機能部分；及び
一次細胞シグナル伝達ドメイン、
を含み、共刺激ドメインを含まない、前記第一のポリペプチド；ならびに
（ｂ）第二のポリペプチドであって：
膜貫通ドメイン；
セレブロン結合化合物と結合することができる、Ａｉｏｌｏｓもしくはその機能部分またはＩｋａｒｏｓもしくはその機能部分；及び
共刺激ドメイン、
を含む、前記第二のポリペプチド、を含み、前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドが、前記セレブロン結合化合物の存在下でヘテロ二量体を形成する、前記ＣＡＲ。
前記第一のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の順に、前記抗原結合ドメイン、前記膜貫通ドメイン、前記セレブロンまたはその機能部分、及び前記一次細胞シグナル伝達ドメインを含み；かつ
前記第二のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の順に、前記膜貫通ドメイン、前記Ａｉｏｌｏｓもしくはその機能部分または前記Ｉｋａｒｏｓもしくはその機能部分、及び前記共刺激ドメインを含む、請求項１に記載のＣＡＲ。
前記第一のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の順に、前記抗原結合ドメイン、前記セレブロンまたはその機能部分、前記膜貫通ドメイン、及び前記一次細胞シグナル伝達ドメインを含み；かつ
前記第二のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の順に、前記Ａｉｏｌｏｓもしくはその機能部分または前記Ｉｋａｒｏｓもしくはその機能部分、前記膜貫通ドメイン、及び前記共刺激ドメインを含む、請求項１に記載のＣＡＲ。
前記一次細胞シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζである、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
前記一次細胞シグナル伝達ドメインが、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）であるか、またはこれを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
前記ＩＴＡＭが、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ２０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＦｃＥＲＩ、ＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２のうちの１つ以上に由来するシグナル伝達ドメインである、請求項５に記載のＣＡＲ。
前記共刺激ドメインが、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−ＬＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＣＤ８３のリガンド、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、及びシグナル伝達リンパ球活性化分子のうちの１つ以上の機能的シグナル伝達ドメインを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
前記膜貫通ドメインが：Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、Ｔ細胞受容体のベータ鎖、Ｔ細胞受容体のゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、またはＣＤ１５４由来の膜貫通ドメインである、請求項１〜７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
前記抗原結合ドメインが、その抗原の受容体である、請求項１〜８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
前記抗原結合ドメインが、その抗原と結合する抗体またはその結合フラグメントである、請求項１〜８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
前記抗体またはその結合フラグメントが、一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である、請求項１０に記載のＣＡＲ。
前記抗原が、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）または腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
前記ＴＡＡまたはＴＳＡが、４−１ＢＢ、５Ｔ４、８Ｈ９、Ｂ７−Ｈ６、腺癌抗原、α−フェトプロテイン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＢＡＦＦ、Ｂ−リンパ腫細胞、Ｃ２４２抗原、ＣＡ９、癌胎児抗原、ＣＡ−１２５、カルボニックアンヒドラーゼ９（ＣＡ−ＩＸ）、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＣＤ２８、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤ１５２、ＣＤ１７１、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＥ７、ＣＥＡ、Ｃ−ＭＥＴ、ＣＮＴ０８８８、ＣＴＬＡ−４、ＤＲＳ、ＥｐＣＡＭ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３／４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｐｈＡ２、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、フィブロネクチンエキストラドメイン−Ｂ、葉酸受容体−ａ、葉酸受容体１、Ｇ２５０／ＣＡＩＸ、ＧＤ２、ＧＤ３、グリコプロテイン７５、ＧＰＮＭＢ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＧＦ、ＨＬＡ−ＡＩＭＡＧＥＡ１、ＨＬＡ−Ａ２ＮＹ−ＥＳ０−１、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ヒト細胞分散因子受容体キナーゼ、ＩＧＦ−１受容体、ＩＧＦ−Ｉ、ＩｇＧｌ、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３受容体ａ２、ＩＬ−１１受容体ａ、インスリン様成長因子Ｉ受容体、インテグリンａ５Ｉ３１、インテグリンａｖＩ３３、カッパ軽鎖、Ｌ１−ＣＡＭ、ラムダ軽鎖、ルイスＹ、メソテリン、ＭＯＲＡｂ−００９、ＭＳ４Ａ１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ムチンＣａｎＡｇ、ＮＣＡＭ、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＰＣ−１Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｒａ、ＰＤＬ１９２、ホスファチジルセリン、前立腺特異的がん抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺癌細胞、ＰＳＭＡ、ＰＳＣ１、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＳＣＨ９００１０５、ＳＤＣ１、ＳＬＡＭＦ７、ｓｐ１７、ＴＡＧ７２、テネイシンＣ、ＴＧＦ β２、ＴＧＦ−Ｉ３、ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ受容体、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ２、ＴＥＭ１、ＴＥＭ８、及びビメンチンのうちの１つ以上である、請求項１２に記載のＣＡＲ。
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドが、Ｔ細胞またはＮＫ細胞内で発現され、ヘテロ二量体化すると、前記ＣＡＲが（ｉ）一次活性化シグナル、または（ｉｉ）一次活性化シグナル及び共刺激シグナルを伝達し；
前記一次活性化シグナル、または前記一次活性化シグナル及び前記共刺激シグナルが、前記Ｔ細胞またはＮＫ細胞を活性化することができる、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
請求項１〜１４のいずれか一項に記載のＣＡＲを含む、前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの一方または両方をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド。
請求項１５に記載のポリヌクレオチドを含む、細胞。
Ｔ細胞またはＮＫ細胞を活性化させる方法であって、前記Ｔ細胞またはＮＫ細胞を（ａ）抗原結合ドメインがそれに対し特異的である抗原、及び（ｂ）セレブロン結合化合物と接触させることを含み、前記Ｔ細胞は、請求項１〜１６のいずれかに記載のＣＡＲの前記第一及び第二のポリペプチドを発現するように修飾されており、前記セレブロン結合化合物は、前記第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの二量体化を引き起こし、これらに前記Ｔ細胞またはＮＫ細胞を活性化させる、前記方法。
前記セレブロン結合化合物が、サリドマイド（（ＲＳ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン）、レナリドミド（３−（４−アミノ−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン）、ポマリドミド（４−アミノ−２−［（３ＲＳ）−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン）、３−［４−（４−モルホリン−４−イルメチル−ベンジルオキシ）−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル］−ピペリジン−２，６−ジオン、または３−（４−（（４−（（４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）オキシ）−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオンである、請求項１〜１７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。