TWI781117B - 基於cereblon之異二聚化之嵌合抗原受體 - Google Patents

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Abstract

本發明提供包含嵌合受體之經修飾T淋巴球及使用其之方法。

Description

基於CEREBLON之異二聚化之嵌合抗原受體
本文中之揭示內容係關於免疫學領域，且更特定言之，係關於T淋巴球或其他免疫細胞之修飾。
免疫系統之細胞(諸如，T淋巴球(亦被稱作T細胞))經由受體或受體複合體識別特異性抗原且與該特異性抗原相互作用，在識別此類抗原或與此類抗原相互作用之後受體或受體複合體引起細胞之活化。此受體之一實例為抗原特異性T淋巴球受體複合體(TCR/CD3) (八個蛋白之複合體)。T細胞受體(TCR)在T淋巴球之表面上表現。具有恆定結構之一種組分(CD3)對在TCR由配位體佔用之後的胞內信號傳導負責。用於抗原CD3複合體(TCR/CD3)之T淋巴球受體識別藉由主要組織相容複合體(MHC)之蛋白呈現於其的抗原肽。MHC及肽之複合體在抗原呈現細胞及其他T淋巴球靶標之表面上表現。刺激TCR/CD3複合體導致T淋巴球之活化及隨之而來的抗原特異性免疫反應。TCR/CD3複合體在免疫系統之效應功能及調節中發揮主要作用。 T淋巴球需要第二共刺激信號變得完全有效。在無此信號之情況下，T淋巴球不回應於與TCR結合之抗原，或變得無變應性。舉例而言，此共刺激信號由與抗原產生細胞上之CD80及CD86相互作用的CD28 (T淋巴球蛋白)提供。ICOS (誘導型共刺激) (另一T淋巴球蛋白)在與ICOS配位體結合時提供共刺激信號。 嵌合抗原受體(CAR)為經基因工程改造以含有TCR複合體之必需抗原結合、信號傳導及刺激功能之多肽。攜帶此類CAR之T淋巴球大體被稱為CAR-T細胞或CAR-T淋巴球。然而，雖然CAR可有效地將T淋巴球靶向特異性腫瘤相關或腫瘤特異性抗原，但亦可靶向亦表現此類抗原之正常、健康細胞。本文描述克服當前CAR設計之此缺點之經修飾嵌合受體。
在一個態樣中，本文提供嵌合抗原受體(CAR)，其包含：(a)第一多肽，其包含cereblon或其官能性部分；及(b)第二多肽，其包含cereblon相關蛋白或其官能性部分，其中第一多肽或第二多肽或多肽二者包含CAR之額外組分，諸如抗原結合域、跨膜域、細胞信號傳導域及/或共刺激域。當CAR之第一多肽及第二多肽在cereblon結合化合物(例如，如本文所描述)之存在下在免疫細胞(例如，T淋巴球)中一起表現時，第一多肽之cereblon (或其官能性部分，例如，如本文所描述)及第二多肽之cereblon相關蛋白(或其官能性部分，例如，如本文所描述)結合cereblon結合化合物，使得形成具有CAR官能的異二聚體。因此，本文所描述之CAR之活性(例如，活體內活性)可藉由使表現CAR之第一多肽及第二多肽的細胞(例如，經工程改造以表現該等CAR之T淋巴球)與cereblon結合化合物接觸來選擇性地控制。當在免疫細胞中表現之CAR與cereblon結合化合物接觸且CAR與抗原(例如，腫瘤相關抗原或腫瘤特異性抗原)結合時，CAR傳輸原代信號及共刺激信號兩者，由此活化免疫細胞。 在一特定實施例中，本文提供一種CAR，其包含：(a)第一多肽，其包含抗原結合域、跨膜域及cereblon或其官能性部分，其中該cereblon (或其官能性部分)能夠與cereblon結合化合物結合；以及(b)第二多肽，其包含跨膜域、cereblon相關蛋白或其官能性部分及原代細胞信號傳導域，其中該cereblon相關蛋白(或其官能性部分)能夠結合cereblon結合化合物；其中在該cereblon結合化合物之存在下，該第一多肽及該第二多肽形成異二聚體。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。在另一特定實施例中，第一多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第二多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第一多肽及第二多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第一多肽包含共刺激域且第二多肽不包含共刺激域。在另一特定實施例中，第二多肽包含共刺激域且第一多肽不包含共刺激域。在另一特定實施例中，該cereblon結合化合物為泊利度胺（pomalidomide） (4-胺基-2-[(3RS)-(2,6-二氧六氫吡啶-3-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮)。在另一特定實施例中，該cereblon結合化合物為沙立度胺(thalidomide) ((RS)-2-(2,6-二氧六氫吡啶-3-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮)。在另一特定實施例中，該cereblon結合化合物為來那度胺(lenalidomide) (3-(4-胺基-1-側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮)。在另一特定實施例中，該cereblon結合化合物為3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮。在另一特定實施例中，該cereblon結合化合物為3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 在另一特定實施例中，本文提供一種CAR，其包含：(a)第一多肽，其按自N端至C端之順序包含抗原結合域、跨膜域及cereblon或其官能性部分；及(b)第二多肽，其按自N端至C端之順序包含跨膜域、cereblon相關蛋白或其官能性部分及原代T細胞信號傳導域。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。在另一特定實施例中，第一多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第二多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第一多肽及第二多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第一多肽包含共刺激域且第二多肽不包含共刺激域。在另一特定實施例中，第二多肽包含共刺激域且第一多肽不包含共刺激域。在另一實施例中，該cereblon (或其官能性部分)及該cereblon相關蛋白(或其官能性部分)均能夠結合cereblon結合化合物，其中該cereblon結合化合物為泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 在另一特定實施例中，本文提供一種CAR，其包含：(a)第一多肽，其按自N端至C端之順序包含抗原結合域、cereblon或其官能性部分及跨膜域；及(b)第二多肽，其按自N端至C端之順序包含cereblon相關蛋白或其官能性部分、跨膜域及原代T細胞信號傳導域。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。在另一特定實施例中，第一多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第二多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第一多肽及第二多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第一多肽包含共刺激域且第二多肽不包含共刺激域。在另一特定實施例中，第二多肽包含共刺激域且第一多肽不包含共刺激域。在另一實施例中，該cereblon (或其官能性部分)及該cereblon相關蛋白(或其官能性部分)均能夠結合cereblon結合化合物，其中該cereblon結合化合物為泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 在另一特定實施例中，本文提供一種CAR，其包含：(a)第一多肽，其包含抗原結合域、跨膜域及cereblon相關蛋白或其官能性部分，其中該cereblon相關蛋白(或其官能性部分)能夠與cereblon結合化合物結合；及(b)第二多肽，其包含跨膜域、cereblon或其官能性部分及原代細胞信號傳導域，其中該cereblon (或其官能性部分)能夠結合cereblon結合化合物；其中在該cereblon結合化合物之存在下，該第一多肽及該第二多肽形成異二聚體。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。在一特定實施例中，第一多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第二多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第一多肽及第二多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第一多肽包含共刺激域且第二多肽不包含共刺激域。在另一特定實施例中，第二多肽包含共刺激域且第一多肽不包含共刺激域。在一特定實施例中，該cereblon結合化合物為泊利度胺(4-胺基-2-[(3RS)-(2,6-二氧六氫吡啶-3-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮)。在另一特定實施例中，該cereblon結合化合物為沙立度胺((RS)-2-(2,6-二氧六氫吡啶-3-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮)。在另一特定實施例中，該cereblon結合化合物為來那度胺(3-(4-胺基-1-側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮)。在另一特定實施例中，該cereblon結合化合物為3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮。在另一特定實施例中，該cereblon結合化合物為3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 在另一特定實施例中，本文提供一種CAR，其包含：(a)第一多肽，其按自N端至C端之順序包含抗原結合域、跨膜域及cereblon相關蛋白或其官能性部分；及(b)第二多肽，其按自N端至C端之順序包含跨膜域、cereblon或其官能性部分及原代T細胞信號傳導域。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。在一特定實施例中，第一多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第二多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第一多肽及第二多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第一多肽包含共刺激域且第二多肽不包含共刺激域。在另一特定實施例中，第二多肽包含共刺激域且第一多肽不包含共刺激域。在另一實施例中，該cereblon (或其官能性部分)及該cereblon相關蛋白(或其官能性部分)均能夠結合cereblon結合化合物，其中該cereblon結合化合物為泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 在另一特定實施例中，本文提供一種CAR，其包含：(a)第一多肽，其按自N端至C端之順序包含抗原結合域、cereblon相關蛋白或其官能性部分及跨膜域；及(b)第二多肽，其按自N端至C端之順序包含cereblon或其官能性部分、跨膜域及原代T細胞信號傳導域。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。在另一特定實施例中，第一多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第二多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第一多肽及第二多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第一多肽包含共刺激域且第二多肽不包含共刺激域。在另一特定實施例中，第二多肽包含共刺激域且第一多肽不包含共刺激域。在另一實施例中，該cereblon (或其官能性部分)及該cereblon相關蛋白(或其官能性部分)均能夠結合cereblon結合化合物，其中該cereblon結合化合物為泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 在另一特定實施例中，本文提供一種CAR，其包含：(a)第一多肽，其按自N端至C端之順序包含抗原結合域、跨膜域、cereblon或其官能性部分及原代細胞信號傳導域；及(b)第二多肽，其按自N端至C端之順序包含跨膜域、cereblon相關蛋白或其官能性部分及共刺激域。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。在另一實施例中，該cereblon (或其官能性部分)及該cereblon相關蛋白(或其官能性部分)均能夠結合cereblon結合化合物，其中該cereblon結合化合物為泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 在另一特定實施例中，本文提供一種CAR，其包含：(a)第一多肽，其按自N端至C端之順序包含抗原結合域、cereblon或其官能性部分、跨膜域及包含原代細胞信號傳導域之多肽；及(b)第二多肽，其按自N端至C端之順序包含cereblon相關蛋白或其官能性部分、跨膜域及共刺激域。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。在另一實施例中，該cereblon (或其官能性部分)及該cereblon相關蛋白(或其官能性部分)均能夠結合cereblon結合化合物，其中該cereblon結合化合物為泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 在另一特定實施例中，本文提供一種CAR，其包含：(a)第一多肽，其按自N端至C端之順序包含抗原結合域、跨膜域、cereblon相關蛋白或其官能性部分及原代細胞信號傳導域；及(b)第二多肽，其按自N端至C端之順序包含跨膜域、cereblon或其官能性部分及共刺激域。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。在另一實施例中，該cereblon (或其官能性部分)及該cereblon相關蛋白(或其官能性部分)均能夠結合cereblon結合化合物，其中該cereblon結合化合物為泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 在另一特定實施例中，本文提供一種CAR，其包含：(a)第一多肽，其按自N端至C端之順序包含抗原結合域、cereblon相關蛋白或其官能性部分、跨膜域及包含原代細胞信號傳導域的多肽；及(b)第二多肽，其按自N端至C端之順序包含cereblon或其官能性部分、跨膜域及共刺激域。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。在另一實施例中，該cereblon (或其官能性部分)及該cereblon相關蛋白(或其官能性部分)均能夠結合cereblon結合化合物，其中該cereblon結合化合物為泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 在某些實施例中，當本文所描述之CAR之第一多肽或第二多肽包含原代細胞信號傳導域時，該多肽為CD3ζ。在一特定實施例中，該細胞信號傳導域為人。 在某些實施例中，當本文所描述之CAR之第一多肽或第二多肽包含原代細胞信號傳導域時，該原代細胞信號傳導域為基於免疫受體酪胺酸的活化基元(ITAM)原代細胞信號傳導域或包含該基於免疫受體酪胺酸的活化基元原代細胞信號傳導域。在一特定實施例中，該ITAM衍生自以下中之一或多者：FcRγ、FcRβ、CD3ζ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD20、CD79a、CD79b、CD278 (ICOS)、FcεRI、CD66d、DAP10及/或DAP12。在一特定實施例中，該細胞信號傳導域為人。 在某些實施例中，當本文所描述之CAR之第一多肽及/或第二多肽包含共刺激域時，共刺激域衍生自以下中之一或多者：CD28、4-1BB (CD137)、OX40、活化NK細胞受體、BTLA、Toll配位體受體、CD2、CD7、CD27、CD30、CD40、CDS、ICAM-L LFA-1 (CD11a/CD18)、B7-H3、CDS、ICAM-1、ICOS (CD278)、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM (LIGHTR)、KIRDS2、SLAMF7、NKp80 (KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、NKG2D、NKG2C、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1 (CD226)、SLAMF4 (CD244、2B4)、CD84、CD96 (Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9 (CD229)、CD160 (BY55)、PSGL1、CD100 (SEMA4D)、CD69、SLAMF6 (NTB-A、Ly108)、SLAM (SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME (SLAMF8)、SELPLG (CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD19a、DAP10、DAP12、CD83之配位體、MHC I類分子、TNF受體蛋白、免疫球蛋白類蛋白、細胞介素受體、整合素及/或信號傳導淋巴球性活化分子。在一特定實施例中，該共刺激域為人。 在某些實施例中，本文所提供之CAR之第一多肽及/或第二多肽的跨膜域包含來自以下之跨膜域：T細胞受體之α鏈、T細胞受體之β鏈、T細胞受體之ζ鏈、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137或CD154。在一特定實施例中，該跨膜域為人。 在某些實施例中，本文所描述之CAR的抗原結合域包含受體。 在某些實施例中，本文所描述之CAR的抗原結合域包含抗體或其結合片段。在一特定實施例中，該抗體之結合片段為單鏈Fv片段(scFv)。 在某些實施例中，由本文所描述之CAR的抗原結合域所結合之抗原為腫瘤細胞上之抗原。在一特定實施例中，該抗原為實體腫瘤細胞之抗原。在另一特定實施例中，該抗原為血癌細胞之抗原。 在另一特定實施例中，由本文所描述之CAR的抗原結合域所結合之抗原為腫瘤相關抗原(TAA)或腫瘤特異性抗原(TSA)。在一特定實施例中，TAA或TSA為以下或其片段中之一或多者：4-1BB、5T4、8H9、B7-H6、腺癌抗原、α-胎蛋白、B細胞成熟抗原(BCMA)、BAFF、B-淋巴瘤細胞、C242抗原、CA9、癌胚抗原、CA-125、碳酸酐酶9 (CA-IX)、CCR4、CD3、CD4、CD19、CD20、CD22、CD23 (IgE受體)、CD28、CD30 (TNFRSF8)、CD33、CD38、CD40、CD44v6、CD44v7/8、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CD123、CD152、CD171、CD200、CD221、CE7、CEA、C-MET、CNT0888、CTLA-4、DRS、EpCAM、ErbB2、ErbB3/4、EGFR、EGFRvIII、EphA2、EGP2、EGP40、FAP、胚胎AchR、纖維結合蛋白額外域B、葉酸受體-a、葉酸受體1、G250/CAIX、GD2、GD3、醣蛋白75、GPNMB、HER2/neu、HGF、HLA-AI MAGE A1、HLA-A2 NY-ES0-1、HMW-MAA、人類分散因子受體激酶、IGF-1受體、IGF-I、IgG1、IL-6、IL-13、IL-13受體a2、IL-11受體a、胰島素類生長因子I受體、整合素a5I31、整合素avI33、κ輕鏈、L1-CAM、λ輕鏈、路易斯Y (Lewis Y)、間皮素、MORAb-009、MS4A1、MUC1、MUC16、黏蛋白CanAg、NCAM、N-羥乙醯基神經胺糖酸、NKG2D配位體、NPC-1C、PDGF-R a、PDL192、磷脂醯絲胺酸、前列腺特異性癌抗原(PSCA)、前列腺癌瘤細胞、PSMA、PSC1、RANKL、RON、ROR1、SCH 900105、SDC1、SLAMF7、sp17、TAG72、肌腱蛋白C、TGF β2、TGF-I3、TL1A、TRAIL-R1、TRAIL-R2、腫瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGF受體、VEGFR-1、VEGFR2、TEM1、TEM8及/或波形蛋白。 在另一態樣中，本文提供對本文所描述之CAR進行編碼之核酸，即，對本文所描述之CAR之第一多肽進行編碼的核酸及對本文所描述之CAR之第二多肽進行編碼的核酸。在某些實施例中，本文所描述之CAR的第一多肽由第一核酸(聚核苷酸)編碼且本文所描述之CAR的第二多肽由第二核酸(聚核苷酸)編碼。在一特定實施例中，本文提供對本文所描述之CAR的第一多肽及第二多肽兩者進行編碼之核酸(聚核苷酸)。 在某些實施例中，本文所描述之CAR多肽編碼核酸包含於核酸載體內。在一特定實施例中，該載體為反轉錄病毒載體。在另一特定實施例中，該載體為慢病毒載體。 在某些實施例中，本文所描述之CAR多肽編碼核酸可操作地連接至啟動子。在一特定實施例中，該啟動子為T細胞特異性啟動子、自然殺手(NK)細胞特異性啟動子、作用於T細胞或NK細胞內之誘導型啟動子或組成型啟動子。 在另一態樣中，本文提供包含本文所描述之CAR編碼核酸及/或載體的細胞(在本文中被稱作「CAR細胞」)。該等細胞包括原核(例如，細菌)細胞及真核(例如，哺乳動物)細胞。在一特定實施例中，本文提供包含本文所描述之CAR的T細胞，例如，CD4+、CD+ T細胞、T效應細胞或T記憶細胞。在另一特定實施例中，本文提供包含本文所描述之CAR的自然殺手細胞。 本文所提供之CAR細胞(例如，包含本文所描述之CAR編碼核酸或表現本文所描述之CAR (亦即，表現本文所描述之CAR的第一多肽及第二多肽)之T細胞)可在與(i)抗原(即，由CAR之抗原結合域識別之抗原)及(ii)cereblon結合化合物接觸時經活化，CAR對該抗原具有特異性。因此，在另一態樣中，本文提供用於活化包含及/或表現本文所描述之CAR的細胞(例如，T細胞或NK細胞)之方法，該等方法包含使該細胞與結合CAR之抗原結合域的抗原接觸且使細胞與cereblon結合化合物進一步接觸。在一特定實施例中，該細胞在活體內與該抗原及該cereblon結合化合物接觸，即，接觸發生於在向個體投與該細胞之後。在另一特定實施例中，向個體投與該細胞且給定指定時段來定位並與抗原接觸，CAR對該抗原具有特異性，接著向個體投與cereblon結合化合物。 在某些實施例中，本文所提供之CAR細胞進一步包含人工細胞死亡多肽，該人工細胞死亡多肽包含細胞凋亡誘導域及二聚域，其中該人工細胞死亡多肽可使用二聚劑二聚化，且其中當人工細胞死亡多肽經二聚化時，該多肽在該細胞中產生細胞凋亡誘導信號。在一特定實施例中，該二聚劑為雷帕黴素(rapamycin)或雷帕黴素之類似物(雷帕黴素之類似物(rapalog))。在另一特定實施例中，該二聚劑為AP1903 (rimiducid)。在另一特定實施例中，該二聚劑不為cereblon結合化合物。在一特定實施例中，該二聚域為FK結合域或其類似物。在另一特定實施例中，該二聚劑為與該FK結合域結合之抗體。 在另一態樣中，本文提供用於殺滅表現由本文所描述之CAR之抗原結合域所結合的抗原之靶細胞的方法，其中該等方法包含(i)使該等靶細胞與包含/表現本文所描述之CAR的細胞(例如，T細胞或NK細胞)接觸及(ii)使該CAR表現細胞與cereblon結合化合物接觸，其中在該抗原及該cereblon結合化合物之存在下，CAR表現細胞變得活化。在一特定實施例中，該靶細胞為癌細胞，例如血癌細胞或實體腫瘤細胞。在另一特定實施例中，該靶細胞表現以下抗原或其抗原片段中之一或多者：4-1BB、5T4、8H9、B7-H6、腺癌抗原、α-胎蛋白、B細胞成熟抗原(BCMA)、BAFF、B-淋巴瘤細胞、C242抗原、CA9、癌胚抗原、CA-125、碳酸酐酶9 (CA-IX)、CCR4、CD3、CD4、CD19、CD20、CD22、CD23 (IgE受體)、CD28、CD30 (TNFRSF8)、CD33、CD38、CD40、CD44v6、CD44v7/8、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CD123、CD152、CD171、CD200、CD221、CE7、CEA、C-MET、CNT0888、CTLA-4、DRS、EpCAM、ErbB2、ErbB3/4、EGFR、EGFRvIII、EphA2、EGP2、EGP40、FAP、胚胎AchR、纖維結合蛋白額外域B、葉酸受體-a、葉酸受體1、G250/CAIX、GD2、GD3、醣蛋白75、GPNMB、HER2/neu、HGF、HLA-AI MAGE A1、HLA-A2 NY-ES0-1、HMW-MAA、人類分散因子受體激酶、IGF-1受體、IGF-I、IgG1、IL-6、IL-13、IL-13受體a2、IL-11受體a、胰島素類生長因子I受體、整合素a5I31、整合素avI33、κ輕鏈、L1-CAM、λ輕鏈、路易斯Y、間皮素、MORAb-009、MS4A1、MUC1、MUC16、黏蛋白CanAg、NCAM、N-羥乙醯基神經胺糖酸、NKG2D配位體、NPC-1C、PDGF-R a、PDL192、磷脂醯絲胺酸、前列腺特異性癌抗原(PSCA)、前列腺癌瘤細胞、PSMA、PSC1、RANKL、RON、ROR1、SCH 900105、SDC1、SLAMF7、sp17、TAG72、肌腱蛋白C、TGF β2、TGF-I3、TL1A、TRAIL-R1、TRAIL-R2、腫瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGF受體、VEGFR-1、VEGFR2、TEM1、TEM8及/或波形蛋白。 在另一態樣中，本文提供治療癌症之方法，該等方法包含：(i)向個體(例如，人類個體)投與本文所描述之CAR細胞(例如，T細胞或NK細胞)群體，該CAR細胞群體包含/表現本文所描述之CAR (例如，包含本文所描述之CAR編碼核酸或表現本文所描述之CAR)，其中該CAR包含對癌抗原(例如，TSA或TAA)具有特異性之抗原結合域；及(ii)向個體投與包含cereblon結合化合物之組合物。在一特定實施例中，首先向個體投與該細胞群體，接著在投與細胞群體後之特定時段處(例如，在投與細胞群體後之30分鐘、1小時、6小時、12小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天或1週)，投與包含cereblon結合化合物之組合物。在一特定實施例中，由該CAR結合之該抗原為：4-1BB、5T4、8H9、B7-H6、腺癌抗原、α-胎蛋白、B細胞成熟抗原(BCMA)、BAFF、B-淋巴瘤細胞、C242抗原、CA9、癌胚抗原、CA-125、碳酸酐酶9 (CA-IX)、CCR4、CD3、CD4、CD19、CD20、CD22、CD23 (IgE受體)、CD28、CD30 (TNFRSF8)、CD33、CD38、CD40、CD44v6、CD44v7/8、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CD123、CD152、CD171、CD200、CD221、CE7、CEA、C-MET、CNT0888、CTLA-4、DRS、EpCAM、ErbB2、ErbB3/4、EGFR、EGFRvIII、EphA2、EGP2、EGP40、FAP、胚胎AchR、纖維結合蛋白額外域B、葉酸受體-a、葉酸受體1、G250/CAIX、GD2、GD3、醣蛋白75、GPNMB、HER2/neu、HGF、HLA-AI MAGE A1、HLA-A2 NY-ES0-1、HMW-MAA、人類分散因子受體激酶、IGF-1受體、IGF-I、IgG1、IL-6、IL-13、IL-13受體a2、IL-11受體a、胰島素類生長因子I受體、整合素a5I31、整合素avI33、κ輕鏈、L1-CAM、λ輕鏈、路易斯Y、間皮素、MORAb-009、MS4A1、MUC1、MUC16、黏蛋白CanAg、NCAM、N-羥乙醯基神經胺糖酸、NKG2D配位體、NPC-1C、PDGF-R a、PDL192、磷脂醯絲胺酸、前列腺特異性癌抗原(PSCA)、前列腺癌瘤細胞、PSMA、PSC1、RANKL、RON、ROR1、SCH 900105、SDC1、SLAMF7、sp17、TAG72、肌腱蛋白C、TGF β2、TGF-I3、TL1A、TRAIL-R1、TRAIL-R2、腫瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGF受體、VEGFR-1、VEGFR2、TEM1、TEM8及/或波形蛋白。 在一特定實施例中，根據本文所描述之治療癌症之方法而向個體投與之cereblon結合化合物為泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 可根據本文所描述之治療方法治療之癌症的非限制性清單包括：淋巴瘤、白血病、肺癌、乳癌、前列腺癌、腎上腺皮質癌瘤、甲狀腺癌瘤、鼻咽癌瘤、黑素瘤、皮膚癌瘤、結腸直腸癌、硬纖維腫瘤、促結締組織增生性小圓細胞腫瘤(desmoplastic small round cell tumor)、內分泌腫瘤、尤文氏肉瘤(Ewing sarcoma)、周邊原始神經外胚層瘤、固體生殖細胞腫瘤、肝母細胞瘤、神經母細胞瘤、非橫紋肌肉瘤軟組織肉瘤、骨肉瘤、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、威爾姆斯腫瘤(Wilms tumor)、神經膠瘤、神經膠母細胞瘤、黏液瘤、纖維瘤及脂肪瘤。例示性淋巴瘤及白血病包括(但不限於)：慢性淋巴球性白血病(小淋巴球性淋巴瘤)、B細胞前淋巴球性白血病、淋巴漿細胞性淋巴瘤、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症(Waldenström macroglobulinemia)、脾邊緣區淋巴瘤、漿細胞骨髓瘤、漿細胞瘤、結外邊緣區B細胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、結邊緣區B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、原發性滲出性淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、T淋巴球前淋巴球性白血病、T淋巴球大顆粒淋巴球性白血病、侵襲性NK細胞白血病、成人T淋巴球白血病/淋巴瘤、結外NK/T淋巴球淋巴瘤、鼻型、腸病型T淋巴球淋巴瘤、肝脾T淋巴球淋巴瘤、母細胞性NK細胞淋巴瘤、蕈樣黴菌病、塞紮萊症候群(Sezary syndrome)、原發性皮膚多形性大細胞淋巴瘤、淋巴瘤樣丘疹病、血管免疫母細胞T淋巴球淋巴瘤、周邊T淋巴球淋巴瘤(未指定)、多形性大細胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma)或非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma)。 在另一態樣中，本文提供一種可二聚化人工細胞死亡受體，其包含：(a)第一多肽，其包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分)及cereblon (或其官能性部分)；及(b)第二多肽，其包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分)及Aiolos (或其官能性部分)，其中該cereblon (或其官能性部分)及該Aiolos (或其官能性部分)兩者均能夠結合cereblon結合化合物，且其中該第一多肽及該第二多肽在該cereblon結合化合物之存在下二聚化以產生細胞凋亡誘導信號。在一特定實施例中，該cereblon結合化合物為泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 在一特定實施例中，本文提供一種可二聚化人工細胞死亡受體，其包含：(a)第一多肽，其包含跨膜蛋白，該跨膜蛋白包含跨膜域及胞內域(包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分)及cereblon (或其官能性部分))；及(b)第二多肽，其包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分)及cereblon相關蛋白(或其官能性部分)。在一特定實施例中，該第二多肽包含跨膜蛋白，該跨膜蛋白包含跨膜域及胞內域(包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分)及cereblon相關蛋白(或其官能性部分))。在一特定實施例中，該cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。 在另一特定實施例中，本文提供一種可二聚化人工細胞死亡受體，其包含：(a)第一多肽，其包含跨膜蛋白，該跨膜蛋白包含胞外域(包含cereblon (或其官能性部分))、跨膜域及胞內域(包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分))；及(b)第二多肽，其包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分)及cereblon相關蛋白(或其官能性部分)。在另一特定實施例中，該第二多肽包含跨膜蛋白，該跨膜蛋白包含跨膜域及胞內域(包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分)及cereblon相關蛋白(或其官能性部分))。在另一特定實施例中，該第二多肽包含跨膜蛋白，該跨膜蛋白包含胞外域(包含cereblon相關蛋白(或其官能性部分))、跨膜域及胞內域(包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分))。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。 在另一特定實施例中，本文提供一種可二聚化人工細胞死亡受體，其包含：(a)第一多肽，其包含跨膜蛋白，該跨膜蛋白包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分)及cereblon (或其官能性部分)；及(b)第二多肽，其包含跨膜蛋白，該跨膜蛋白包含跨膜域及胞內域(包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分)及cereblon相關蛋白(或其官能性部分))。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。 在另一特定實施例中，本文提供一種可二聚化人工細胞死亡受體，其包含：(a)第一多肽，其包含跨膜蛋白，該跨膜蛋白包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分)及cereblon (或其官能性部分)；及(b)第二多肽，其包含跨膜蛋白，該跨膜蛋白包含胞外域(包含cereblon相關蛋白(或其官能性部分))、跨膜域及胞內域(包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分))。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。 在某些實施例中，本文提供可二聚化人工細胞死亡受體之細胞凋亡誘導域為凋亡蛋白酶。在一特定實施例中，該凋亡蛋白酶為凋亡蛋白酶9、凋亡蛋白酶8或凋亡蛋白酶3。 在另一態樣中，本文提供對本文所描述之可二聚化人工細胞死亡受體進行編碼的核酸，即對本文所描述之可二聚化人工細胞死亡受體之第一多肽進行編碼的核酸及對本文所描述之可二聚化人工細胞死亡受體之第二多肽進行編碼的核酸。在某些實施例中，本文所描述之可二聚化人工細胞死亡受體之第一多肽由第一核酸(聚核苷酸)編碼且本文所描述之可二聚化人工細胞死亡受體之第二多肽由第二核酸(聚核苷酸)編碼。在一特定實施例中，本文提供對本文所描述之可二聚化人工細胞死亡受體之第一多肽及第二多肽兩者進行編碼的核酸(聚核苷酸)。 在某些實施例中，本文所描述之可二聚化人工細胞死亡受體編碼核酸包含於核酸載體內。在一特定實施例中，該載體為反轉錄病毒載體。在另一特定實施例中，該載體為慢病毒載體。 在某些實施例中，本文所描述之可二聚化人工細胞死亡受體編碼核酸可操作地連接至啟動子。在一特定實施例中，該啟動子為T細胞特異性啟動子、自然殺手(NK)細胞特異性啟動子、作用於T細胞或NK細胞內之誘導型啟動子或組成型啟動子。 在另一態樣中，本文提供包含本文所描述之可二聚化人工細胞死亡受體編碼核酸及/或本文所描述之載體的細胞(在本文中被稱作「細胞死亡受體細胞」)。該等細胞包括原核(例如，細菌)細胞及真核(例如，哺乳動物)細胞。在一特定實施例中，本文提供包含本文所描述之可二聚化人工細胞死亡受體的T細胞，例如CD4+、CD8+ T細胞、T效應細胞或T記憶細胞。在另一特定實施例中，本文提供包含本文所描述之可二聚化人工細胞死亡受體的自然殺手細胞。 本文所提供之細胞死亡受體細胞(例如，包含本文所描述之可二聚化人工細胞死亡受體編碼核酸或表現本文所描述之可二聚化人工細胞死亡受體(亦即，表現本文所描述之可二聚化人工細胞死亡受體之第一多肽及第二多肽)的T細胞或NK細胞)可在與cereblon結合化合物接觸時(例如，在與泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮接觸時)經誘導以經受細胞凋亡。 在某些實施例中，本文所提供之細胞死亡受體細胞進一步包含CAR，例如第一代CAR、第二代CAR或第三代CAR。在一特定實施例中，該CAR包含兩個或多於兩個胞外抗原靶向域。在另一特定實施例中，該CAR包含與為T細胞活性之負調節劑之介白素結合的胞外域，及來自為T細胞活性之正調節劑之介白素受體的胞內域。在另一特定實施例中，藉由使細胞與cereblon結合化合物(例如，泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮)接觸而在包含人工細胞死亡受體及CAR的細胞中誘導細胞凋亡。
藉由表現CAR之治療性免疫細胞介導的靶向但脫靶腫瘤效應(其可能產生毒性)可藉由在為活化所需之原代信號及共刺激信號兩者的此類細胞可調節CAR中表現而減小或消除。如本文所揭示，此分離係經由使用包含兩個人工多肽之CAR而完成，其中：(i)第一多肽包含cereblon (或其官能性部分)且第二多肽包含cereblon相關蛋白(或其官能性部分)；(ii)在兩個多肽上劃分為活化所需之CAR之組分；及(iii) CAR在結合cereblon與cereblon相關蛋白的cereblon結合化合物之存在下經活化。 CAR介導之靶向但脫靶腫瘤效應亦可藉由使用可允許視需要殺滅表現此類受體之細胞的二聚化人工細胞死亡受體來減小或消除。如本文所描述，此類可二聚化人工細胞死亡受體包含第一多肽(包含細胞凋亡誘導域及二聚域，例如cereblon (或其官能性部分))及第二多肽(包含細胞凋亡誘導域及補充二聚域，例如cereblon相關蛋白(或其官能性部分))。表現此類可二聚化人工細胞死亡受體之細胞可藉由使其與能夠二聚化第一多肽及第二多肽的cereblon結合化合物接觸而經誘導以經受細胞凋亡，且因此活化細胞凋亡誘導域。4.1. 嵌合抗原受體及其用途 4.1.1 嵌合抗原受體構建體 本文提供嵌合抗原受體(CAR)，其包含：(a)第一多肽，其包含cereblon或其官能性部分；及(b)第二多肽，其包含cereblon相關蛋白或其官能性部分，其中第一多肽或第二多肽或多肽兩者包含CAR之剩餘組分，諸如抗原結合域、跨膜域、細胞信號傳導域及/或共刺激域。當CAR之第一多肽及第二多肽在cereblon結合化合物之存在下在免疫細胞中一起表現(例如，在T淋巴球或自然殺手細胞中表現)時，第一多肽之cereblon (或其官能性部分)及第二多肽之該cereblon相關蛋白(或其官能性部分)結合cereblon結合化合物，使得形成具有CAR官能之異二聚體。因此，本文所描述之CAR之活性(例如，活體內活性)可藉由使表現CAR之第一多肽及第二多肽的細胞(例如，經工程改造以表現該等CAR之T淋巴球)與cereblon結合化合物接觸來選擇性地控制。如本文中所使用，「跨膜域」包括：穿過跨膜域，其中包含跨膜域之蛋白包含胞內域及胞外域兩者；及膜錨定域，其中包含跨膜域之蛋白包含胞內域但不包含胞外域。 在一特定實施例中，本文提供一種CAR，其包含：(a)第一多肽，其包含抗原結合域、跨膜域及cereblon或其官能性部分，其中該cereblon (或其官能性部分)能夠與cereblon結合化合物結合；及(b)第二多肽，其包含跨膜域、cereblon相關蛋白或其官能性部分及原代細胞信號傳導域，其中該cereblon相關蛋白(或其官能性部分)能夠結合cereblon結合化合物；其中在該cereblon結合化合物之存在下，該第一多肽及該第二多肽形成異二聚體。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。 在另一特定實施例中，本文提供一種CAR，其包含：(a)第一多肽，其按自N端至C端之順序包含抗原結合域、跨膜域及cereblon或其官能性部分；及(b)第二多肽，其按自N端至C端之順序包含跨膜域、cereblon相關蛋白或其官能性部分及原代T細胞信號傳導域。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。在另一特定實施例中，第一多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第二多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第一多肽及第二多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第一多肽包含共刺激域且第二多肽不包含共刺激域。在另一特定實施例中，第二多肽包含共刺激域且第一多肽不包含共刺激域。在另一實施例中，該cereblon (或其官能性部分)及該cereblon相關蛋白(或其官能性部分)均能夠結合cereblon結合化合物，其中該cereblon結合化合物為泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 在另一特定實施例中，本文提供一種CAR，其包含：(a)第一多肽，其按自N端至C端之順序包含抗原結合域、cereblon或其官能性部分及跨膜域；及(b)第二多肽，其按自N端至C端之順序包含cereblon相關蛋白或其官能性部分、跨膜域及原代T細胞信號傳導域。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。在另一特定實施例中，第一多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第二多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第一多肽及第二多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第一多肽包含共刺激域且第二多肽不包含共刺激域。在另一特定實施例中，第二多肽包含共刺激域且第一多肽不包含共刺激域。在另一實施例中，該cereblon (或其官能性部分)及該cereblon相關蛋白(或其官能性部分)均能夠結合cereblon結合化合物，其中該cereblon結合化合物為泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 在另一特定實施例中，本文提供一種CAR，其包含：(a)第一多肽，其包含抗原結合域、跨膜域及cereblon相關蛋白或其官能性部分，其中該cereblon相關蛋白(或其官能性部分)能夠與cereblon結合化合物結合；及(b)第二多肽，其包含跨膜域、cereblon或其官能性部分及原代細胞信號傳導域，其中該cereblon (或其官能性部分)能夠結合cereblon結合化合物；其中在該cereblon結合化合物之存在下，該第一多肽及該第二多肽形成異二聚體。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。在一特定實施例中，該cereblon結合化合物為泊利度胺(4-胺基-2-[(3RS)-(2,6-二氧六氫吡啶-3-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮)。在另一特定實施例中，該cereblon結合化合物為沙立度胺((RS)-2-(2,6-二氧六氫吡啶-3-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮)。在另一特定實施例中，該cereblon結合化合物為來那度胺(3-(4-胺基-1-側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮)。在另一特定實施例中，該cereblon結合化合物為3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮。在另一特定實施例中，該cereblon結合化合物為3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 在另一特定實施例中，本文提供一種CAR，其包含：(a)第一多肽，其按自N端至C端之順序包含抗原結合域、跨膜域及cereblon相關蛋白或其官能性部分；及(b)第二多肽，其按自N端至C端之順序包含跨膜域、cereblon或其官能性部分及原代T細胞信號傳導域。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。在一特定實施例中，第一多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第二多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第一多肽及第二多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第一多肽包含共刺激域且第二多肽不包含共刺激域。在另一特定實施例中，第二多肽包含共刺激域且第一多肽不包含共刺激域。在另一實施例中，該cereblon (或其官能性部分)及該cereblon相關蛋白(或其官能性部分)均能夠結合cereblon結合化合物，其中該cereblon結合化合物為泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 在另一特定實施例中，本文提供一種CAR，其包含：(a)第一多肽，其按自N端至C端之順序包含抗原結合域、cereblon相關蛋白或其官能性部分及跨膜域；及(b)第二多肽，其按自N端至C端之順序包含cereblon或其官能性部分、跨膜域及原代T細胞信號傳導域。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。在另一特定實施例中，第一多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第二多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第一多肽及第二多肽包含共刺激域。在另一特定實施例中，第一多肽包含共刺激域且第二多肽不包含共刺激域。在另一特定實施例中，第二多肽包含共刺激域且第一多肽不包含共刺激域。在另一實施例中，該cereblon (或其官能性部分)及該cereblon相關蛋白(或其官能性部分)均能夠結合cereblon結合化合物，其中該cereblon結合化合物為泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 在另一特定實施例中，本文提供一種CAR，其包含：(a)第一多肽，其按自N端至C端之順序包含抗原結合域、跨膜域、cereblon或其官能性部分及原代細胞信號傳導域；及(b)第二多肽，其按自N端至C端之順序包含跨膜域、cereblon相關蛋白或其官能性部分及共刺激域。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。在另一實施例中，該cereblon (或其官能性部分)及該cereblon相關蛋白(或其官能性部分)均能夠結合cereblon結合化合物，其中該cereblon結合化合物為泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 在另一特定實施例中，本文提供一種CAR，其包含：(a)第一多肽，其按自N端至C端之順序包含抗原結合域、cereblon或其官能性部分、跨膜域及包含原代細胞信號傳導域之多肽；及(b)第二多肽，其按自N端至C端之順序包含cereblon相關蛋白或其官能性部分、跨膜域及共刺激域。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。在另一實施例中，該cereblon (或其官能性部分)及該cereblon相關蛋白(或其官能性部分)均能夠結合cereblon結合化合物，其中該cereblon結合化合物為泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 在另一特定實施例中，本文提供一種CAR，其包含：(a)第一多肽，其按自N端至C端之順序包含抗原結合域、跨膜域、cereblon相關蛋白或其官能性部分及原代細胞信號傳導域；及(b)第二多肽，其按自N端至C端之順序包含跨膜域、cereblon或其官能性部分及共刺激域。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。在另一實施例中，該cereblon (或其官能性部分)及該cereblon相關蛋白(或其官能性部分)均能夠結合cereblon結合化合物，其中該cereblon結合化合物為泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 在另一特定實施例中，本文提供一種CAR，其包含：(a)第一多肽，其按自N端至C端之順序包含抗原結合域、cereblon相關蛋白或其官能性部分、跨膜域及包含原代細胞信號傳導域的多肽；及(b)第二多肽，其按自N端至C端之順序包含cereblon或其官能性部分、跨膜域及共刺激域。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。在另一實施例中，該cereblon (或其官能性部分)及該cereblon相關蛋白(或其官能性部分)均能夠結合cereblon結合化合物，其中該cereblon結合化合物為泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。Cereblon 及 Cereblon 相關蛋白 本文所提供之CAR包含多肽，該等多肽包含cereblon或其官能性部分或cereblon相關蛋白(例如，Aiolos或Ikaros)或其官能性部分。如本文中所使用，將cereblon或cereblon相關蛋白之術語「官能性部分」定義為能夠結合cereblon結合化合物之cereblon或cereblon相關蛋白之一部分。在一些實施例中，cereblon或cereblon相關蛋白之官能性部分包含該cereblon或該cereblon相關蛋白之完整多肽編碼序列。在其他實施例中，cereblon或cereblon相關蛋白之官能性部分分別包含該cereblon或該cereblon相關蛋白之截斷。熟習此項技術者將識別需要用於維持官能及/或用於確保各蛋白與cereblon結合化合物之結合的各蛋白之組分。在其他實施例中，cereblon或cereblon相關蛋白之官能性部分分別包含衍生自該cereblon或該cereblon相關蛋白之肽序列。熟習此項技術者將識別需要用於維持官能及/或用於確保各蛋白與cereblon結合化合物之結合的各蛋白之組分。 在一些實施例中，本文所提供之CAR包含多肽，該多肽包含能夠結合cereblon結合化合物之cereblon或其官能性部分。在一些實施例中，本文所提供之CAR包含多肽，該多肽包含能夠結合cereblon結合化合物之cereblon相關蛋白(例如，Aiolos或Ikaros)或其官能性部分。在一些實施例中，本文所提供之CAR包含多肽，該多肽包含能夠結合cereblon結合化合物之Aiolos或其官能性部分。在特定實施例中，本文所提供之CAR包含：(i)第一多肽，其包含能夠結合cereblon結合化合物之cereblon或其官能性部分；及(ii)第二多肽，其包含能夠結合cereblon結合化合物之cereblon相關蛋白(例如，Aiolos或Ikaros)或其官能性部分。 Cereblon亦稱為蛋白「智力遲鈍非綜合型常染色體隱性2A」、CRBN、MRT2、MRT2A及AD-006。例如在Genbank Gene ID: 51185下提供編碼cereblon之例示性核酸。例如在Uniprot ID: Q96SW2-1下提供例示性cereblon胺基酸序列。熟習此項技術者將易於瞭解如何使用重組工程改造來製造並使用含cereblon之多肽。 如本文中所使用，術語「cereblon」係指天然存在之cereblon蛋白或其部分以及包含與天然存在之cereblon蛋白或其部分至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同源或序列一致的多肽，其中序列可例如在本文所描述之cereblon結合化合物之存在下結合cereblon相關蛋白。 如本文中所使用，「cereblon相關蛋白」係指例如在cereblon結合化合物之存在下充當例如可與cereblon結合及/或與cereblon相關聯的cereblon之基體的蛋白(或其部分)。參看例如Gandhi等人,2014, Br. J. Haematol. 164(6): 811-821。 在一特定實施例中，用於本文所描述之CAR中之cereblon相關蛋白為Aiolos。Aiolos亦稱為「IKAROS家族鋅指3」、「鋅指蛋白，子族1A，3」及ZNFN1A3。在Genbank Gene ID: 22806下提供編碼Aiolos之例示性核酸。例如在Uniprot ID: Q9UKT9-1下提供例示性Aiolos胺基酸序列。熟習此項技術者將易於瞭解如何使用重組工程改造來製造並使用含Aiolos之多肽。如本文中所使用，術語「Aiolos」係指天然存在之Aiolos蛋白或其部分以及包含與天然存在之Aiolos蛋白或其部分至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同源或序列一致的多肽。 在另一特定實施例中，用於本文所描述之CAR中之cereblon相關蛋白為Ikaros。Ikaros亦稱為「IKAROS家族鋅指1」、IKZF1、IK1、LYF1、LyF-1、CVID13、PPP1R92、PRO0758、ZNFN1A1及HS.54452。例如在Genbank Gene ID: 10320下提供編碼Ikaros之例示性核酸。例如在Uniprot ID: Q03267-1下提供例示性Ikaros胺基酸序列。熟習此項技術者將易於瞭解如何使用重組工程改造來製造並使用含Ikaros之多肽。如本文中所使用，術語「Ikaros」係指天然存在之Ikaros蛋白或部分其以及包含與天然存在之Ikaros蛋白或其部分至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同源或序列一致的多肽。抗原結合域 本文所提供之CAR之抗原結合域可為與抗原結合的任何多肽域、基元或序列。 在某些實施例中，本文所描述之CAR之抗原結合域為受體之抗原結合部分。在一特定實施例中，本文所描述之CAR之抗原結合域為用於由腫瘤細胞產生之配位體的受體。 在某些實施例中，本文所描述之CAR之抗原結合域為抗體之抗原結合部分。在一特定實施例中，本文所描述之CAR之抗原結合域為抗體、抗體鏈、單鏈抗體或其抗原結合部分、Fc域、糖磷脂醯肌醇錨定域或scFv抗體片段。 在某些實施例中，本文所描述之CAR之抗原結合域為基於肽之巨分子抗原結合劑，例如噬菌體呈現蛋白。 在某些實施例中，藉由本文所描述之CAR之抗原結合域結合的抗原受限於與主要組織相容性複合體(MHC)相關聯之抗原遞呈。在某些實施例中，藉由本文所描述之CAR之抗原結合域結合的抗原為MHC不受限的。 藉由本文所描述之CAR之抗原結合域所結合/識別的抗原可為任何所關注抗原。在一特定實施例中，該抗原為在細胞(例如，腫瘤細胞，諸如實體腫瘤細胞或血癌腫瘤細胞)之表面上表現的抗原。 在一特定實施例中，藉由本文所描述之CAR之抗原結合域所結合/識別的抗原為腫瘤細胞上之抗原，例如該抗原為TSA或TAA。可藉由本文所描述之CAR識別(亦即，藉由CAR之抗原結合域結合)之例示性腫瘤細胞抗原包括(但不限於)：4-1BB、5T4、8H9、B7-H6、腺癌抗原、α-胎蛋白、B細胞成熟抗原(BCMA)、BAFF、B-淋巴瘤細胞、C242抗原、CA9、癌胚抗原、CA-125、碳酸酐酶9 (CA-IX)、CCR4、CD3、CD4、CD19、CD20、CD22、CD23 (IgE受體)、CD28、CD30 (TNFRSF8)、CD33、CD38、CD40、CD44v6、CD44v7/8、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CD123、CD152、CD171、CD200、CD221、CE7、CEA、C-MET、CNT0888、CTLA-4、DRS、EpCAM、ErbB2、ErbB3/4、EGFR、EGFRvIII、EphA2、EGP2、EGP40、FAP、胚胎AchR、纖維結合蛋白額外域B、葉酸受體-a、葉酸受體1、G250/CAIX、GD2、GD3、醣蛋白75、GPNMB、HER2/neu、HGF、HLA-AI MAGE A1、HLA-A2 NY-ES0-1、HMW-MAA、人類分散因子受體激酶、IGF-1受體、IGF-I、IgG1、IL-6、IL-13、IL-13受體a2、IL-11受體a、胰島素類生長因子I受體、整合素a5I31、整合素avI33、κ輕鏈、L1-CAM、λ輕鏈、路易斯Y、間皮素、MORAb-009、MS4A1、MUC1、MUC16、黏蛋白CanAg、NCAM、N-羥乙醯基神經胺糖酸、NKG2D配位體、NPC-1C、PDGF-R a、PDL192、磷脂醯絲胺酸、前列腺特異性癌抗原(PSCA)、前列腺癌瘤細胞、PSMA、PSC1、RANKL、RON、ROR1、SCH 900105、SDC1、SLAMF7、sp17、TAG72、肌腱蛋白C、TGF β2、TGF-I3、TL1A、TRAIL-R1、TRAIL-R2、腫瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGF受體、VEGFR-1、VEGFR2、TEM1、TEM8及波形蛋白。 在另一特定實施例中，藉由本文所描述之CAR之抗原結合域所結合/識別的抗原為在以下之腫瘤細胞上表現或與以下之腫瘤細胞相關聯之抗原：淋巴瘤/白血病、肺癌、乳癌、前列腺癌、腎上腺皮質癌瘤、甲狀腺癌瘤、鼻咽癌瘤、黑素瘤(例如，惡性黑色素瘤)、皮膚癌瘤、結腸直腸癌、硬纖維腫瘤、促結締組織增生性小圓細胞腫瘤、內分泌腫瘤、尤文氏肉瘤、周邊原始神經外胚層瘤、固體生殖細胞腫瘤、肝母細胞瘤、神經母細胞瘤、非橫紋肌肉瘤軟組織肉瘤、骨肉瘤、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、威爾姆斯腫瘤、神經膠母細胞瘤、黏液瘤、纖維瘤、脂肪瘤或類似腫瘤。 在另一特定實施例中，藉由本文所描述之CAR之抗原結合域所結合/識別的抗原為在以下之腫瘤細胞上表現或與以下之腫瘤細胞相關聯之抗原：慢性淋巴球性白血病(小淋巴球性淋巴瘤)、B細胞前淋巴球性白血病、淋巴漿細胞性淋巴瘤、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、脾邊緣區淋巴瘤、漿細胞骨髓瘤、漿細胞瘤、結外邊緣區B細胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、結邊緣區B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、原發性滲出性淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、T淋巴球前淋巴球性白血病、T淋巴球大顆粒淋巴球性白血病、侵襲性NK細胞白血病、成人T淋巴球白血病/淋巴瘤、結外NK/T淋巴球淋巴瘤、鼻型、腸病型T淋巴球淋巴瘤、肝脾T淋巴球淋巴瘤、母細胞性NK細胞淋巴瘤、蕈樣黴菌病、塞紮萊症候群、原發性皮膚多形性大細胞淋巴瘤、淋巴瘤樣丘疹病、血管免疫母細胞T淋巴球淋巴瘤、周邊T淋巴球淋巴瘤(未指定)、多形性大細胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤。 在另一特定實施例中，藉由本文所描述之CAR之抗原結合域所結合/識別的抗原為非腫瘤相關抗原或非腫瘤特異性抗原。在某些實施例中，抗原係關於腫瘤之態樣，例如，腫瘤環境。舉例而言，腫瘤可在該腫瘤周圍之組織中誘導發炎性狀態，且可將促進血管生成之血管生成生長因子、介白素及/或細胞介素釋放至腫瘤中及腫瘤之周邊處。因此，在某些實施例中，抗原為生長因子、細胞介素或介白素(例如，與血管生成或血小管生成相關聯之生長因子、細胞介素或介白素)。此類生長因子、細胞介素及介白素可包括(但不限於)血管內皮生長因子(VEGF)、鹼性纖維母細胞生長因子(bFGF)、血小板衍生生長因子(PDGF)、肝細胞生長因子(HGF)、胰島素類生長因子(IGF)及介白素-8 (IL-8)。 在另一特定實施例中，藉由本文所描述之CAR之抗原結合域所結合/識別的抗原為回應於由腫瘤造成之局部損傷的由正常組織釋放之損傷相關分子模式分子(DAMP；亦稱為報警素)。可與本文所描述之CAR之抗原結合域結合的例示性DAMP包括(但不限於)熱休克蛋白、染色體相關蛋白高遷移率族匣1 (HMGB1)、S100A8 (MRP8，鈣粒蛋白A)、S100A9 (MRP14，鈣粒蛋白B)、血清澱粉樣蛋白A (SAA)、脫氧核糖核酸、腺苷三磷酸、尿酸及硫酸肝素。跨膜域 本文所描述之CAR之跨膜域可包含充當跨膜域之此項技術中已知的任何分子，例如熟習此項技術者已知的CAR背景中的官能。本文所描述之CAR之跨膜域可獲自或衍生自任何跨膜蛋白之跨膜域，且可包括此跨膜域之全部或一部分。 在一特定實施例中，本文所描述之CAR之第一多肽及/或第二多肽的跨膜域獲自或衍生自T細胞受體，例如，本文所描述之CAR之第一多肽及/或第二多肽的跨膜域獲自或衍生自T細胞受體之α鏈、T細胞受體之β鏈、T細胞受體之ζ鏈。 在特定實施例中，本文所描述之CAR之第一多肽及/或第二多肽的跨膜域獲自或衍生自CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137或CD154、細胞介素受體、介白素受體或生長因子受體。信號傳導域 本文所描述之CAR之原代細胞信號傳導域可包含充當細胞信號傳導域之此項技術中已知的任何分子，例如熟習此項技術者已知的CAR背景中之官能。在一特定實施例中，本文所描述之CAR之細胞信號傳導域包含原代T細胞信號傳導域。 在一特定實施例中，本文所描述之CAR之原代細胞信號傳導域為ZAP-70或其信號轉導變體或包含ZAP-70或其信號轉導變體。 在另一特定實施例中，本文所描述之CAR之原代細胞信號傳導域為ITAM或包含ITAM。在一特定實施例中，該ITAM為FcRγ、FcRβ、CD3ζ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、20 CD79a、CD79b、CD278 (ICOS)、FcERI、CD66d、DAP10或DAP12之ITAM。共刺激域 在某些實施例中，本文所描述之CAR之第一多肽及/或第二多肽包含共刺激域。本文所描述之CAR之共刺激域可包含充當共刺激域之此項技術中已知任何分子，例如熟習此項技術者已知CAR背景中之官能。 在一特定實施例中，本文所描述之CAR之第一多肽及/或第二多肽的共刺激域獲自或衍生自共刺激CD27多肽序列、共刺激CD28多肽序列、共刺激OX40 (CD134)多肽序列、共刺激4-1BB (CD137)多肽序列或共刺激可誘導T細胞共刺激(ICOS)多肽序列。 在另一特定實施例中，本文所描述之CAR之第一多肽及/或第二多肽的共刺激域為以下或包含以下：CD28、4-1BB (CD137)、OX40、活化NK細胞受體、BTLA、Toll配位體受體、CD2、CD7、CD27、CD30、CD40、CDS、ICAM-L LFA-1 (CD11a/CD18)、B7-H3、CDS、ICAM-1、ICOS (CD278)、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM (LIGHTR)、KIRDS2、SLAMF7、NKp80 (KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、NKG2D、NKG2C、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1 (CD226)、SLAMF4 (CD244、2B4)、CD84、CD96 (Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9 (CD229)、CD160 (BY55)、PSGL1、CD100 (SEMA4D)、CD69、SLAMF6 (NTB-A、Ly108)、SLAM (SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME (SLAMF8)、SELPLG (CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD19a、DAP10、DAP12、CD83之配位體、MHC I類分子、TNF受體蛋白、免疫球蛋白類蛋白、細胞介素受體、整合素或信號傳導淋巴球性活化分子。其他修飾 在某些實施例中，本文所描述之CAR之第一多肽及/或第二多肽進一步包含回應於調節劑(亦即，除cereblon結合化合物以外的試劑)之二聚域。 在某些實施例中，本文所描述之CAR之第一多肽及/或第二多肽進一步包含T細胞存活基元。T細胞存活基元可為在藉由抗原刺激之後有助於T淋巴球存活之任何多肽序列或基元。在某些實施例中，T細胞存活基元為以下或衍生自以下：CD3、CD28、IL-7受體(IL-7R)之胞內信號傳導域、IL-12受體之胞內信號傳導域、IL-15受體之胞內信號傳導域、IL-21受體之胞內信號傳導域或轉型生長因子ß (TGFß)受體之胞內信號傳導域。4.1.2. CAR 多肽修飾 在某些實施例中，本文所提供之CAR之第一多肽及/或第二多肽藉由例如醯化、醯胺化、糖基化、甲基化、磷酸化、硫酸化、蘇素化及/或泛素化(或其他蛋白修飾)來修飾。 在某些實施例中，本文所提供之CAR之第一多肽及/或第二多肽標記有能夠提供可偵測信號之標記，例如放射性同位素或螢光化合物。 在某些實施例中，本文所提供之CAR之第一多肽及/或第二多肽的一或多個側鏈衍生，例如，離胺醯基及胺基端殘基用丁二酸或其他羧酸酐衍生化，或用例如醯亞胺酯(諸如吡啶甲醯亞胺酸甲酯)、磷酸吡哆醛、吡哆醛、氯硼氫化物、三硝基苯磺酸、O-甲基異脲、2,4戊二酮及與乙醛酸鹽轉胺酶催化反應衍生化。在某些實施例中，羧基側基、天冬胺醯基或麩胺醯基可藉由與碳化二亞胺 (R—N=C=N—R') (諸如1-環己基-3-(2-嗎啉基-(4-乙基)碳化二亞胺或1-乙基-3-(4-氮鎓-4,4-二甲基戊基)碳化二亞胺)反應而選擇性地經修飾。4.1.3. 核酸 本文提供對本文所描述之CAR進行編碼之核酸，亦即，對本文所描述之CAR的第一多肽進行編碼之核酸及對本文所描述之CAR的第二多肽進行編碼之核酸。在某些實施例中，本文所描述之CAR的第一多肽由第一核酸(聚核苷酸)編碼且本文所描述之CAR的第二多肽由第二核酸(聚核苷酸)編碼。在一特定實施例中，本文提供對本文所描述之CAR的第一多肽及第二多肽兩者進行編碼之核酸(聚核苷酸)。 適用於產生本文所描述之CAR之核酸包括DNA、RNA及核酸類似物。核酸類似物可在鹼基部分、糖部分或磷酸主鏈處經修飾，且可包括脫氧尿苷取代脫氧胸苷、5-甲基-2'-脫氧胞苷或5-溴-2'-脫氧胞苷取代脫氧胞苷。糖部分之修飾可包括核糖之2'羥基的修飾以形成2'-O-甲基糖或2'-O-烯丙基糖。脫氧核苷磷酸主鏈可經修飾以產生嗎啉基核酸，其中每一鹼基部分連接至六員嗎啉基環或肽核酸，其中脫氧磷酸主鏈經偽肽主鏈置換且保留四種鹼基。參見例如Summerton及Weller (1997) Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 7:187-195；及Hyrup等人 (1996) Bioorgan. Med. Chain. 4:5-23。另外，脫氧磷酸主鏈可經例如硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯主鏈、亞磷醯胺或烷基磷酸三酯主鏈置換。 在某些實施例中，本文所描述之CAR多肽編碼核酸包含於核酸載體內。舉例而言，所關注細胞(例如，T淋巴球)可使用含有對本文所描述之CAR的第一多肽及/或第二多肽進行編碼之核酸(聚核苷酸)的合成載體、慢病毒或反轉錄病毒載體、自主複寫質粒、病毒(例如，反轉錄病毒、慢病毒、腺病毒或疱疹病毒)或其類似者轉型。在一特定實施例中，包含本文所描述之CAR的第一多肽及/或第二多肽之載體為反轉錄病毒載體。在另一特定實施例中，包含本文所描述之CAR的第一多肽及/或第二多肽之載體為慢病毒載體。適用於細胞(例如，T淋巴球)之轉型的慢病毒載體包括(但不限於)美國專利第5,994,136號、第6,165,782號、第6,428,953號、第7,083,981號及第7,250,299號中所描述之慢病毒載體。適用於細胞(例如，T淋巴球)之轉型的HIV載體包括(但不限於)美國專利第5,665,577號中所描述之載體。 在某些實施例中，本文所描述之CAR多肽編碼核酸可操作地連接至啟動子。在一特定實施例中，該啟動子為T細胞特異性啟動子、自然殺手(NK)細胞特異性啟動子、作用於T細胞或NK細胞內之誘導型啟動子或組成型啟動子。4.1.4. 細胞 本文所提供之CAR可在CAR表現對細胞有效之該等細胞中表現，亦即經工程改造以包含本文所提供之CAR編碼核酸之細胞，使得在細胞中表現核酸之後，細胞表現本文所描述之CAR。舉例而言，本文所描述之CAR可在T淋巴球或自然殺手細胞中表現。表現本文所描述之CAR的本文所提供之細胞被稱為「CAR細胞」。 在某些實施例中，本文提供經修飾以表現CAR之細胞(例如，T淋巴球或自然殺手細胞)，該CAR包含：(i)第一多肽，其包含能夠結合cereblon結合化合物之cereblon或其官能性部分；及(ii)第二多肽，其包含能夠結合cereblon結合化合物之cereblon相關蛋白(例如，Aiolos或Ikaros)或其官能性部分。在一特定實施例中，第一多肽進一步包含抗原結合域及跨膜域(及視情況，共刺激域)。在一特定實施例中，第二多肽進一步包含跨膜域及原代細胞信號傳導域(及視情況，共刺激域)。 在一特定實施例中，本文所提供之CAR在T淋巴球中表現。T淋巴球可為原初T淋巴球或MHC限制性T淋巴球。在某些實施例中，T淋巴球為腫瘤浸潤性淋巴球(TIL)。在某些實施例中，T淋巴球自腫瘤生物檢體分離或由自腫瘤生物檢體分離之T淋巴球擴增。在某些其他實施例中，T淋巴球已自周邊血液、臍帶血液或淋巴分離或由自周邊血液、臍帶血液或淋巴擴增之T淋巴球擴增。 在一特定實施例中，經工程改造以包含/表現本文所描述之CAR的細胞(例如，T淋巴球)對作為本文所描述之治療方法之部分而待投與之該等細胞(例如，T淋巴球)的個體而言為自體的。在其他實施例中，經工程改造以包含/表現本文所描述之CAR的細胞(例如，T淋巴球)對待投與之該等細胞(例如，T淋巴球)的個體而言為同種異體的。在同種異體細胞(例如，T淋巴球)用於製備CAR細胞之情況下，較佳的為選擇將降低個體中之移植物抗宿主病(GVHD)之可能性的細胞(例如，T淋巴球)。舉例而言，在某些實施例中，病毒特異性T淋巴球經選擇以用於製備CAR T淋巴球；將期望此類淋巴球具有與任何受體抗原結合且因此藉由任何受體抗原變得活化的極大降低的天然能力。在某些實施例中，經受體介導之同種異體細胞(例如，T淋巴球)的排斥反應可藉由向宿主共投與一或多種免疫抑制劑來減少，該等一或多種免疫抑制劑例如環孢黴素(cyclosporine)、他克莫司(tacrolimus)、西羅莫司(sirolimus)、環磷醯胺(cyclophosphamide)或其類似物。 在一個實施例中，T淋巴球獲自個體，接著視需要擴增，且接著用對本文所描述之CAR之第一多肽進行編碼的第一載體及對本文所描述之CAR之第二多肽進行編碼的第二載體轉型，且接著視需要擴增。可使用對載體中之每一者而言獨特的可選標記來選擇雙轉型體。 在另一實施例中，T淋巴球獲自個體，接著視需要擴增，且接著用對本文所描述之CAR之第一多肽及第二多肽進行編碼的載體轉型，且接著視需要擴增。可使用可選標記來獲得含有該載體之細胞。 在某些實施例中，除人工共刺激多肽(在使用共刺激多肽之實施例中)以外或除第一多肽及第二多肽(在CAR細胞包含使抗原結合信號傳導與共刺激信號傳導分離之多肽的實施例中)以外，用於產生本文所提供之CAR細胞的T淋巴球包含天然TCR蛋白，例如能夠形成天然TCR複合體的TCR-α及TCR-β。在某些其他實施例中，對T淋巴球中之TCR-α及TCR-β進行編碼的原代基因中之任一者或兩者經修飾為非官能性的，例如缺失部分或全部或插入突變。 在某些實施例中，本文所描述之CAR之信號傳導域可用於促進包含/表現CAR之細胞(例如，T淋巴球)之增殖及擴增。舉例而言，未經修飾之T淋巴球及包含多肽(包含CD3ζ信號傳導域及CD28共刺激域)的T淋巴球可使用針對CD3及CD28之抗體(例如，連接至珠粒之抗體)而擴增；參看例如美國專利第5,948,893號、第6,534,055號、第6,352,694號、第6,692,964號、第6,887,466號及第6,905,681號。類似地，針對信號傳導基元之抗體可用於刺激包含本文所描述之CAR的細胞(例如，T淋巴球)之增殖。 在某些實施例中，本文所描述之CAR細胞包含能夠在需要時殺滅基本上所有CAR細胞的「自殺基因」或「安全切換」。舉例而言，在某些實施例中，本文所描述之CAR細胞包含HSV胸苷激酶基因(HSV-TK)，其在與更昔洛韋(gancyclovir)接觸後造成細胞死亡。在另一實施例中，CAR細胞包含誘導型凋亡蛋白酶，例如誘導型凋亡蛋白酶9 (icaspase9)、例如允許使用特異性小分子藥物二聚化的凋亡蛋白酶9與人類FK506結合蛋白之間的融合蛋白。參看Straathof等人, Blood 105(11):4247-4254 (2005)。 在某些實施例中，本文所提供之CAR細胞進一步包含人工細胞死亡多肽，該人工細胞死亡多肽包含細胞凋亡誘導域及二聚域，其中該人工細胞死亡多肽可使用二聚劑二聚化，且其中當人工細胞死亡多肽經二聚化時，該多肽在該細胞中產生細胞凋亡誘導信號。在一特定實施例中，該二聚劑為雷帕黴素或雷帕黴素之類似物(雷帕黴素類似物)。在另一特定實施例中，該二聚劑為AP1903 (rimiducid)。在另一特定實施例中，該二聚劑不為cereblon結合化合物。在一特定實施例中，該二聚域為FK結合域或其類似物。在另一特定實施例中，該二聚劑為與該FK結合域結合之抗體。4.1.5. 使用方法 本文所提供之CAR細胞(例如，經修飾以包含/表現本文所描述之CAR的T淋巴球)可用於治療具有需要由該等細胞靶向(例如，殺死)的一或多種類型之細胞的個體。 在一特定實施例中，本文提供用於殺滅表現由本文所描述之CAR之抗原結合域結合的抗原之靶細胞的方法，其中該等方法包含：(i)使該等靶細胞與包含/表現本文所描述之CAR的細胞(例如，T細胞或NK細胞)接觸；及(ii)使該CAR表現細胞與cereblon結合化合物接觸，其中在該抗原及該cereblon結合化合物之存在下，該CAR表現細胞變得活化。在一特定實施例中，該靶細胞為癌細胞，例如血癌細胞或實體腫瘤細胞。在另一特定實施例中，該靶細胞表現一或多個以下抗原或其片段：4-1BB、5T4、8H9、B7-H6、腺癌抗原、α-胎蛋白、B細胞成熟抗原(BCMA)、BAFF、B-淋巴瘤細胞、C242抗原、CA9、癌胚抗原、CA-125、碳酸酐酶9 (CA-IX)、CCR4、CD3、CD4、CD19、CD20、CD22、CD23 (IgE受體)、CD28、CD30 (TNFRSF8)、CD33、CD38、CD40、CD44v6、CD44v7/8、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CD123、CD152、CD171、CD200、CD221、CE7、CEA、C-MET、CNT0888、CTLA-4、DRS、EpCAM、ErbB2、ErbB3/4、EGFR、EGFRvIII、EphA2、EGP2、EGP40、FAP、胚胎AchR、纖維結合蛋白額外域B、葉酸受體-a、葉酸受體1、G250/CAIX、GD2、GD3、醣蛋白75、GPNMB、HER2/neu、HGF、HLA-AI MAGE A1、HLA-A2 NY-ES0-1、HMW-MAA、人類分散因子受體激酶、IGF-1受體、IGF-I、IgG1、IL-6、IL-13、IL-13受體a2、IL-11受體a、胰島素類生長因子I受體、整合素a5I31、整合素avI33、κ輕鏈、L1-CAM、λ輕鏈、路易斯Y、間皮素、MORAb-009、MS4A1、MUC1、MUC16、黏蛋白CanAg、NCAM、N-羥乙醯基神經胺糖酸、NKG2D配位體、NPC-1C、PDGF-R a、PDL192、磷脂醯絲胺酸、前列腺特異性癌抗原(PSCA)、前列腺癌瘤細胞、PSMA、PSC1、RANKL、RON、ROR1、SCH 900105、SDC1、SLAMF7、sp17、TAG72、肌腱蛋白C、TGF β2、TGF-I3、TL1A、TRAIL-R1、TRAIL-R2、腫瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGF受體、VEGFR-1、VEGFR2、TEM1、TEM8及/或波形蛋白。 在另一特定實施例中，本文提供治療癌症之方法，該等方法包含：(i)向個體(例如，人類個體)投與包含/表現本文所描述之CAR (例如，包含本文所描述之CAR編碼核酸或表現本文所描述之CAR)之本文所描述之CAR細胞(例如，T細胞或NK細胞)群體，其中該CAR包含對癌抗原(例如，TSA或TAA)具有特異性之抗原結合域；及(ii)向該個體投與包含cereblon結合化合物之組合物。在一特定實施例中，首先向個體投與該細胞群體，接著在投與細胞群體後之特定時段處(例如，在投與細胞群體後之30分鐘、1小時、6小時、12小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天或1週)，投與包含cereblon結合化合物之組合物。在一特定實施例中，由該CAR結合之該抗原為：4-1BB、5T4、8H9、B7-H6、腺癌抗原、α-胎蛋白、B細胞成熟抗原(BCMA)、BAFF、B-淋巴瘤細胞、C242抗原、CA9、癌胚抗原、CA-125、碳酸酐酶9 (CA-IX)、CCR4、CD3、CD4、CD19、CD20、CD22、CD23 (IgE受體)、CD28、CD30 (TNFRSF8)、CD33、CD38、CD40、CD44v6、CD44v7/8、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CD123、CD152、CD171、CD200、CD221、CE7、CEA、C-MET、CNT0888、CTLA-4、DRS、EpCAM、ErbB2、ErbB3/4、EGFR、EGFRvIII、EphA2、EGP2、EGP40、FAP、胚胎AchR、纖維結合蛋白額外域B、葉酸受體-a、葉酸受體1、G250/CAIX、GD2、GD3、醣蛋白75、GPNMB、HER2/neu、HGF、HLA-AI MAGE A1、HLA-A2 NY-ES0-1、HMW-MAA、人類分散因子受體激酶、IGF-1受體、IGF-I、IgG1、IL-6、IL-13、IL-13受體a2、IL-11受體a、胰島素類生長因子I受體、整合素a5I31、整合素avI33、κ輕鏈、L1-CAM、λ輕鏈、路易斯Y、間皮素、MORAb-009、MS4A1、MUC1、MUC16、黏蛋白CanAg、NCAM、N-羥乙醯基神經胺糖酸、NKG2D配位體、NPC-1C、PDGF-R a、PDL192、磷脂醯絲胺酸、前列腺特異性癌抗原(PSCA)、前列腺癌瘤細胞、PSMA、PSC1、RANKL、RON、ROR1、SCH 900105、SDC1、SLAMF7、sp17、TAG72、肌腱蛋白C、TGF β2、TGF-I3、TL1A、TRAIL-R1、TRAIL-R2、腫瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGF受體、VEGFR-1、VEGFR2、TEM1、TEM8及/或波形蛋白。 在一特定實施例中，根據本文所描述之治療癌症之方法而向個體投與之cereblon結合化合物為泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 可根據本文所描述之治療方法治療之癌症的非限制性清單包括：淋巴瘤、白血病、肺癌、乳癌、前列腺癌、腎上腺皮質癌瘤、甲狀腺癌瘤、鼻咽癌瘤、黑素瘤、皮膚癌瘤、結腸直腸癌、硬纖維腫瘤、促結締組織增生性小圓細胞腫瘤、內分泌腫瘤、尤文氏肉瘤、周邊原始神經外胚層瘤、固體生殖細胞腫瘤、肝母細胞瘤、神經母細胞瘤、非橫紋肌肉瘤軟組織肉瘤、骨肉瘤、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、威爾姆斯腫瘤、神經膠瘤、神經膠母細胞瘤、黏液瘤、纖維瘤及脂肪瘤。例示性淋巴瘤及白血病包括(但不限於)：慢性淋巴球性白血病(小淋巴球性淋巴瘤)、B細胞前淋巴球性白血病、淋巴漿細胞性淋巴瘤、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、脾邊緣區淋巴瘤、漿細胞骨髓瘤、漿細胞瘤、結外邊緣區B細胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、結邊緣區B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、原發性滲出性淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、T淋巴球前淋巴球性白血病、T淋巴球大顆粒淋巴球性白血病、侵襲性NK細胞白血病、成人T淋巴球白血病/淋巴瘤、結外NK/T淋巴球淋巴瘤、鼻型、腸病型T淋巴球淋巴瘤、肝脾T淋巴球淋巴瘤、母細胞性NK細胞淋巴瘤、蕈樣黴菌病、塞紮萊症候群、原發性皮膚多形性大細胞淋巴瘤、淋巴瘤樣丘疹病、血管免疫母細胞T淋巴球淋巴瘤、周邊T淋巴球淋巴瘤(未指定)、多形性大細胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤。 本文所描述之CAR細胞在治療疾病或病症中(例如，在治療患有癌症之個體中)之功效可藉由一般技術者已知之特定針對於特定疾病或病症的一或多個標準來評定，以指示疾病或病症之進展。大體而言，當該等準則中之一或多者可偵測地(例如，顯著地)自疾病狀態值或範圍移動至正常值或範圍或朝向正常值或範圍時，向患有疾病/病症(例如，癌症)之個體投與CAR細胞(例如，CAR T淋巴球)係有效的。 本文所描述之CAR細胞可以任何醫藥學上可接受之溶液調配，較佳為適用於遞送活細胞之溶液，例如生理鹽水溶液(諸如林格氏溶液(Ringer's solution))、明膠、碳水化合物(例如，乳糖、直鏈澱粉、澱粉或其類似者)、脂肪酸酯、羥甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷(polyvinyl pyrolidine)等。此類製劑較佳地在添加CAR細胞之前進行除菌，且可與諸如潤滑劑、防腐劑、穩定劑、乳化劑、鹽的輔助劑混合，以影響滲透壓、緩衝及著色。適用於調配本文所描述之CAR細胞的醫藥載劑為此項技術中已知的且描述於例如WO 96/05309中。 在某些實施例中，將本文所描述之CAR細胞(例如，CAR T淋巴球)調配成單個劑量，其中該單個劑包含至少、至多或約1×104 、5×104 、1×105 、5×105 、1×106 、5×106 、1×107 、5×107 、1×108 、5×108 、1×109 、5×109 、1×1010 、5×1010 或1×1011 個CAR細胞。 在某些實施例中，本文所描述之CAR細胞(例如，CAR T淋巴球)經調配以供靜脈內、動脈內、非經腸、肌內、皮下、鞘內或眼內投與，或在特定器官或組織內投與。Cereblon 結合化合物 如本文中所使用，術語「cereblon結合化合物」係指能夠結合cereblon (或其官能性部分)及能夠結合cereblon相關蛋白(或其官能性部分) (例如，Aiolos (或其官能性部分)或Ikaros (或其官能性部分))的分子(例如，小分子或蛋白/多肽(例如，抗體))。在一特定實施例中，cereblon結合化合物能夠結合cereblon (或其官能性部分)及Aiolos (或其官能性部分)兩者，導致cereblon (或其官能性部分)與Aiolos (或其官能性部分)之間的關聯，例如異質二聚體之形成。在另一特定實施例中，cereblon結合化合物能夠結合cereblon (或其官能性部分)及Ikaros (或其官能性部分)兩者，導致cereblon (或其官能性部分)與Ikaros (或其官能性部分)之間的關聯，例如異質二聚體之形成。 在一特定實施例中，根據本文所描述之方法使用之cereblon結合化合物為泊利度胺(4-胺基-2-[(3RS)-(2,6-二氧六氫吡啶-3-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮)。在另一特定實施例中，根據本文所描述之方法使用之cereblon結合化合物為沙立度胺((RS)-2-(2,6-二氧六氫吡啶-3-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮)。在另一特定實施例中，根據本文所描述之方法使用之cereblon結合化合物為來那度胺(3-(4-胺基-1-側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮)。在另一特定實施例中，根據本文所描述之方法使用之cereblon結合化合物為3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮。在另一特定實施例中，根據本文所描述之方法使用之cereblon結合化合物為3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。參看，例如針對與此等化合物相關的揭示內容的美國專利申請公開案第2014/0162282號，其以全文引用的方式併入本文中。 根據本文所描述之方法使用之cereblon結合化合物或對映異構體或其對映異構體之混合物或醫藥學上可接受之鹽、溶劑、水合物、共晶體、籠形物或其多晶型物可作為單次劑量(諸如(例如)單次快速注射或口服錠劑或丸劑)或隨時間推移(諸如(例如)隨時間推移連續輸注或隨時間推移分開的快速給藥)遞送。 根據本文所描述之方法使用之cereblon結合化合物可經調配用於靜脈內、動脈內、非經腸、肌內、皮下、鞘內或眼內投與，或在特定器官或組織內投與。4.2. 人工細胞死亡多肽 4.2.1. 細胞死亡多肽構建體 本文亦提供可二聚化人工細胞死亡受體，其包含第一多肽(包含cereblon或其官能性部分)及第二多肽(包含cereblon相關蛋白或其官能性部分)，當在細胞(例如，T淋巴球或NK細胞)中表現時，該等受體可在cereblon結合化合物之存在下導致細胞之死亡。Cereblon、cereblon相關蛋白及cereblon結合化合物詳細描述於以上章節4.1中。 在一特定實施例中，本文提供一種可二聚化人工細胞死亡受體，其包含：(a)第一多肽，其包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分)及cereblon (或其官能性部分)；及(b)第二多肽，其包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分)及Aiolos (或其官能性部分)，其中該cereblon (或其官能性部分)及該Aiolos (或其官能性部分)兩者均能夠結合cereblon結合化合物，且其中該第一多肽及該第二多肽在該cereblon結合化合物之存在下二聚以產生細胞凋亡誘導信號。在一特定實施例中，該cereblon結合化合物為泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 在另一特定實施例中，本文提供一種可二聚化人工細胞死亡受體，其包含：(a)第一多肽，其包含跨膜蛋白，該跨膜蛋白包含跨膜域及胞內域(包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分)及cereblon(或其官能性部分))；及(b)第二多肽，其包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分)及cereblon相關蛋白(或其官能性部分)。在一特定實施例中，該第二多肽包含跨膜蛋白，該跨膜蛋白包含跨膜域及胞內域(包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分)及cereblon相關蛋白(或其官能性部分))。在一特定實施例中，該cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。 在另一特定實施例中，本文提供一種可二聚化人工細胞死亡受體，其包含：(a)第一多肽，其包含跨膜蛋白，該跨膜蛋白包含胞外域(包含cereblon (或其官能性部分))、跨膜域及胞內域(包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分))；及(b)第二多肽，其包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分)及cereblon相關蛋白(或其官能性部分)。在另一特定實施例中，該第二多肽包含跨膜蛋白，該跨膜蛋白包含跨膜域及胞內域(包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分)及cereblon相關蛋白(或其官能性部分))。在另一特定實施例中，該第二多肽包含跨膜蛋白，該跨膜蛋白包含胞外域(包含cereblon相關蛋白(或其官能性部分))、跨膜域及胞內域(包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分))。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。 在另一特定實施例中，本文提供一種可二聚化人工細胞死亡受體，其包含：(a)第一多肽，其包含跨膜蛋白，該跨膜蛋白包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分)及cereblon (或其官能性部分)；及(b)第二多肽，其包含跨膜蛋白，該跨膜蛋白包含跨膜域及胞內域(包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分)及cereblon相關蛋白(或其官能性部分))。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。 在另一特定實施例中，本文提供一種可二聚化人工細胞死亡受體，其包含：(a)第一多肽，其包含跨膜蛋白，該跨膜蛋白包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分)及cereblon (或其官能性部分)；及(b)第二多肽，其包含跨膜蛋白，該跨膜蛋白包含胞外域(包含cereblon相關蛋白(或其官能性部分))、跨膜域及胞內域(包含細胞凋亡誘導域(或其官能性部分))。在一特定實施例中，cereblon相關蛋白為Aiolos或Ikaros。 細胞死亡多肽之細胞凋亡誘導域可為例如任何蛋白或其部分，該蛋白或其部分在二聚化時啟動細胞凋亡誘導信號。在某些實施例中，細胞凋亡誘導域為均二聚之任何凋亡蛋白酶。在一特定實施例中，細胞凋亡誘導域為凋亡蛋白酶或包含該凋亡蛋白酶，例如凋亡蛋白酶9、凋亡蛋白酶8或凋亡蛋白酶3 (例如，人體凋亡蛋白酶9、人體凋亡蛋白酶8或人體凋亡蛋白酶3)。包括人體凋亡蛋白酶9、人體凋亡蛋白酶8及人體凋亡蛋白酶3之人體凋亡蛋白酶之胺基酸序列為此項技術中所熟知的。舉例而言，人體凋亡蛋白酶3經指定為NCBI Gene ID: 836；人體凋亡蛋白酶8經指定為NCBI Gene ID: 841；且人體凋亡蛋白酶9經指定為NCBI Gene ID: 842。在某些實施例中，為凋亡蛋白酶域或包含該凋亡蛋白酶域之胞內域及胞外域藉由CD8α莖或CD8β莖接合，其之至少部分可充當跨膜域。4.2.2. 核酸 本文提供對本文所描述之可二聚化人工細胞死亡受體進行編碼的核酸，亦即對本文所描述之可二聚化人工細胞死亡受體的第一多肽進行編碼之核酸及對可二聚化人工細胞死亡受體的第二多肽進行編碼之核酸。在某些實施例中，本文所描述之可二聚化人工細胞死亡受體之第一多肽由第一核酸(聚核苷酸)編碼且本文所描述之可二聚化人工細胞死亡受體之第二多肽由第二核酸(聚核苷酸)編碼。在一特定實施例中，本文提供對本文所描述之可二聚化人工細胞死亡受體之第一多肽及第二多肽兩者進行編碼的核酸(聚核苷酸)。 適用於製備本文所描述之人工細胞死亡受體之核酸包括DNA、RNA及核酸類似物。核酸類似物可在鹼基部分、糖部分或磷酸主鏈處經修飾，且可包括脫氧尿苷取代脫氧胸苷、5-甲基-2'-脫氧胞苷或5-溴-2'-脫氧胞苷取代脫氧胞苷。糖部分之修飾可包括核糖之2'羥基的修飾以形成2'-O-甲基糖或2'-O-烯丙基糖。脫氧核苷磷酸主鏈可經修飾以產生嗎啉基核酸，其中每一鹼基部分連接至六員嗎啉基環或肽核酸，其中脫氧磷酸主鏈經偽肽主鏈置換且保留四種鹼基。參見例如Summerton及Weller (1997) Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 7:187-195；及Hyrup等人 (1996) Bioorgan. Med. Chain. 4:5-23。另外，脫氧磷酸主鏈可經例如硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯主鏈、亞磷醯胺或烷基磷酸三酯主鏈置換。 在某些實施例中，本文所描述之人工細胞死亡受體編碼核酸包含於核酸載體內。舉例而言，所關注細胞(例如，T淋巴球)可使用含有對本文所描述之人工細胞死亡受體之第一多肽及/或第二多肽進行編碼之核酸(聚核苷酸)的合成載體、慢病毒或反轉錄病毒載體、自主複寫質粒、病毒(例如，反轉錄病毒、慢病毒腺病毒或疱疹病毒)或其類似者轉型。在一特定實施例中，包含本文所描述之人工細胞死亡受體之第一多肽及/或第二多肽的載體為反轉錄病毒載體。在另一特定實施例中，包含本文所描述之人工細胞死亡受體之第一多肽及/或第二多肽的載體為慢病毒載體。適用於細胞(例如，T淋巴球)之轉型的慢病毒載體包括(但不限於)美國專利第5,994,136號、第6,165,782號、第6,428,953號、第7,083,981號及第7,250,299號中所描述之慢病毒載體。適用於細胞(例如，T淋巴球)之轉型的HIV載體包括(但不限於)美國專利第5,665,577號中所描述之載體。 在某些實施例中，本文所描述之人工細胞死亡受體編碼核酸可操作地連接至啟動子。在一特定實施例中，該啟動子為T細胞特異性啟動子、自然殺手(NK)細胞特異性啟動子、作用於T細胞或NK細胞內之誘導型啟動子或組成型啟動子。4.2.3. 細胞 本文所提供之人工細胞死亡受體可在表現對細胞有用之該等細胞中表現，亦即經工程改造以包含本文所提供之人工細胞死亡受體編碼核酸的細胞，使得在細胞中表現核酸之後，該細胞表現本文所描述之人工細胞死亡受體。舉例而言，本文所描述之人工細胞死亡受體可在T淋巴球或自然殺手細胞中表現。表現本文所描述之人工細胞死亡受體的本文所提供之細胞被稱為「細胞死亡受體細胞」。 在一特定實施例中，本文所提供之人工細胞死亡受體在T淋巴球中表現。T淋巴球可為原初T淋巴球或MHC限制性T淋巴球。在某些實施例中，T淋巴球為腫瘤浸潤性淋巴球(TIL)。在某些實施例中，T淋巴球自腫瘤生物檢體分離或由自腫瘤生物檢體分離之T淋巴球擴增。在某些其他實施例中，T淋巴球已自周邊血液、臍帶血液或淋巴分離或由自周邊血液、臍帶血液或淋巴擴增之T淋巴球擴增。 在一特定實施例中，本文所描述之細胞死亡受體細胞對作為本文所描述之治療方法之部分而待投與之該等細胞(例如，T淋巴球)的個體而言為自體的。在其他實施例中，本文所描述之細胞死亡受體細胞對待投與之該等細胞(例如，T淋巴球)的個體而言為同種異體的。在同種異體的細胞(例如，T淋巴球)用於製備包含/表現人工細胞死亡受體之細胞的情況下，較佳選擇將降低個體中之移植物抗宿主病(GVHD)之可能性的細胞(例如，T淋巴球)。參看章節4.1。 在一個實施例中，T淋巴球獲自個體，接著視需要擴增，且接著用對本文所描述之人工細胞死亡受體之第一多肽進行編碼的第一載體及對本文所描述之人工細胞死亡受體之第二多肽進行編碼的第二載體轉型，且接著視需要擴增。可使用對載體中之每一者而言獨特的可選標記來選擇雙轉型體。 在另一實施例中，T淋巴球獲自個體，接著視需要擴增，且接著用對本文所描述之人工細胞死亡受體之第一多肽及第二多肽進行編碼的載體轉型，且接著視需要擴增。可使用可選標記來獲得含有該載體之細胞。 在某些實施例中，除人工共刺激多肽(在使用共刺激多肽之實施例中)以外或除第一多肽及第二多肽(在細胞包含使抗原結合信號傳導及共刺激信號傳導分離之多肽的實施例中)以外，用於產生本文所提供之細胞死亡受體細胞的T淋巴球包含天然TCR蛋白，例如能夠形成天然TCR複合體之TCR-α及TCR-β。在某些其他實施例中，對T淋巴球中之TCR-α及TCR-β進行編碼的原代基因中之任一者或兩者經修飾為非官能性的，例如缺失部分或全部或插入突變。 本文所提供之細胞死亡受體細胞(例如，包含本文所描述之可二聚化人工細胞死亡受體編碼核酸或表現本文所描述之可二聚化人工細胞死亡受體(亦即，表現本文所描述之可二聚化人工細胞死亡受體之第一多肽及第二多肽)的T細胞或NK細胞)可在與cereblon結合化合物接觸時(例如，在與泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮接觸時)經誘導以經受細胞凋亡。 本文所提供之細胞死亡受體細胞可進一步經工程改造以表現CAR，例如包含腫瘤特異性抗原結合域之CAR。舉例而言，該等CAR可選自第一代CAR (其中僅信號傳導域為CD3ζ)、第二代CAR (其包含來自CD3ζ之信號傳導域及來自CD28之共刺激域)及第三代CAR (其包含來自CD3ζ之信號傳導域及來自CD28之共刺激域及諸如4-1BB的另一蛋白)。在一特定實施例中，本文所提供之細胞死亡受體細胞之CAR包含兩個或多於兩個胞外抗原靶向域。在另一特定實施例中，本文所提供之細胞死亡受體細胞之該CAR包含與為T細胞活性之負調節劑的介白素結合的胞外域，及來自為T細胞活性之正調節劑的介白素受體的胞內域。在另一特定實施例中，藉由使細胞與cereblon結合化合物(例如，泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮)接觸而在包含人工細胞死亡受體及CAR的細胞中誘導細胞凋亡。4.2.4. 使用方法 包含本文所提供之人工細胞死亡受體及CAR之本文所提供之細胞(例如，T淋巴球)可用於治療具有需要由本文所描述之該等細胞靶向的一或多種類型之細胞(例如，待殺死的一或多種類型之細胞)的個體，其中細胞死亡受體細胞之活性可藉由投與cereblon結合化合物來控制。特定言之，細胞死亡受體細胞由於其CAR組分可用於治療，且由於其細胞死亡受體組分可在需要時被殺死，其中該殺滅藉由使細胞死亡受體細胞與cereblon結合化合物接觸來完成。 在一特定實施例中，本文提供一種用於控制靶細胞之殺滅的方法，其中該方法包含：(i)使該等靶細胞與包含本文所提供之人工細胞死亡受體及CAR的細胞死亡受體細胞(例如，T細胞或NK細胞)接觸且在允許時，(ii)使該細胞死亡受體細胞與cereblon結合化合物接觸，其中在該cereblon結合化合物之存在下，殺死細胞死亡受體細胞，例如細胞死亡受體細胞經受細胞凋亡。在一特定實施例中，該靶細胞為癌細胞，例如血癌細胞或實體腫瘤細胞。在另一特定實施例中，該靶細胞表現一或多個以下抗原或其片段：4-1BB、5T4、8H9、B7-H6、腺癌抗原、α-胎蛋白、B細胞成熟抗原(BCMA)、BAFF、B-淋巴瘤細胞、C242抗原、CA9、癌胚抗原、CA-125、碳酸酐酶9 (CA-IX)、CCR4、CD3、CD4、CD19、CD20、CD22、CD23 (IgE受體)、CD28、CD30 (TNFRSF8)、CD33、CD38、CD40、CD44v6、CD44v7/8、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CD123、CD152、CD171、CD200、CD221、CE7、CEA、C-MET、CNT0888、CTLA-4、DRS、EpCAM、ErbB2、ErbB3/4、EGFR、EGFRvIII、EphA2、EGP2、EGP40、FAP、胚胎AchR、纖維結合蛋白額外域B、葉酸受體-a、葉酸受體1、G250/CAIX、GD2、GD3、醣蛋白75、GPNMB、HER2/neu、HGF、HLA-AI MAGE A1、HLA-A2 NY-ES0-1、HMW-MAA、人類分散因子受體激酶、IGF-1受體、IGF-I、IgG1、IL-6、IL-13、IL-13受體a2、IL-11受體a、胰島素類生長因子I受體、整合素a5I31、整合素avI33、κ輕鏈、L1-CAM、λ輕鏈、路易斯Y、間皮素、MORAb-009、MS4A1、MUC1、MUC16、黏蛋白CanAg、NCAM、N-羥乙醯基神經胺糖酸、NKG2D配位體、NPC-1C、PDGF-R a、PDL192、磷脂醯絲胺酸、前列腺特異性癌抗原(PSCA)、前列腺癌瘤細胞、PSMA、PSC1、RANKL、RON、ROR1、SCH 900105、SDC1、SLAMF7、sp17、TAG72、肌腱蛋白C、TGF β2、TGF-I3、TL1A、TRAIL-R1、TRAIL-R2、腫瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGF受體、VEGFR-1、VEGFR2、TEM1、TEM8及/或波形蛋白。 在另一特定實施例中，本文提供一種治療癌症之方法，其中該方法包含：(i)向經診斷患有癌症之個體(例如，人類個體)投與包含本文所提供之人工細胞死亡受體及CAR的細胞死亡受體細胞(例如，T細胞或NK細胞)群體，其中該CAR包含對癌症抗原(例如，TSA或TAA)具有特異性之抗原結合域且在允許時，(ii)使該細胞死亡受體細胞與cereblon結合化合物接觸，其中在該cereblon結合化合物之存在下，細胞死亡受體細胞經受細胞凋亡。在一特定實施例中，首先向個體投與該細胞群體，接著在投與細胞群體後之特定時段處(例如，在投與細胞群體後之30分鐘、1小時、6小時、12小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天或1週)，投與包含cereblon結合化合物之組合物。在另一特定實施例中，首先向個體投與包含cereblon結合化合物之該組合物，接著在投與包含cereblon結合化合物之該組合物後的特定時段處(例如在投與包含cereblon結合化合物之該組合物後之30分鐘、1小時、6小時、12小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天或1週)投與該細胞群體。 在一特定實施例中，由該CAR結合之該抗原為：4-1BB、5T4、8H9、B7-H6、腺癌抗原、α-胎蛋白、B細胞成熟抗原(BCMA)、BAFF、B-淋巴瘤細胞、C242抗原、CA9、癌胚抗原、CA-125、碳酸酐酶9 (CA-IX)、CCR4、CD3、CD4、CD19、CD20、CD22、CD23 (IgE受體)、CD28、CD30 (TNFRSF8)、CD33、CD38、CD40、CD44v6、CD44v7/8、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CD123、CD152、CD171、CD200、CD221、CE7、CEA、C-MET、CNT0888、CTLA-4、DRS、EpCAM、ErbB2、ErbB3/4、EGFR、EGFRvIII、EphA2、EGP2、EGP40、FAP、胚胎AchR、纖維結合蛋白額外域B、葉酸受體-a、葉酸受體1、G250/CAIX、GD2、GD3、醣蛋白75、GPNMB、HER2/neu、HGF、HLA-AI MAGE A1、HLA-A2 NY-ES0-1、HMW-MAA、人類分散因子受體激酶、IGF-1受體、IGF-I、IgG1、IL-6、IL-13、IL-13受體a2、IL-11受體a、胰島素類生長因子I受體、整合素a5I31、整合素avI33、κ輕鏈、L1-CAM、λ輕鏈、路易斯Y、間皮素、MORAb-009、MS4A1、MUC1、MUC16、黏蛋白CanAg、NCAM、N-羥乙醯基神經胺糖酸、NKG2D配位體、NPC-1C、PDGF-R a、PDL192、磷脂醯絲胺酸、前列腺特異性癌抗原(PSCA)、前列腺癌瘤細胞、PSMA、PSC1、RANKL、RON、ROR1、SCH 900105、SDC1、SLAMF7、sp17、TAG72、肌腱蛋白C、TGF β2、TGF-I3、TL1A、TRAIL-R1、TRAIL-R2、腫瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGF受體、VEGFR-1、VEGFR2、TEM1、TEM8及/或波形蛋白。 在一特定實施例中，根據本文所描述之治療癌症之方法而向個體投與之cereblon結合化合物為泊利度胺、沙立度胺、來那度胺、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 可根據本文所描述之治療方法治療之癌症的非限制性清單包括：淋巴瘤、白血病、肺癌、乳癌、前列腺癌、腎上腺皮質癌瘤、甲狀腺癌瘤、鼻咽癌瘤、黑素瘤、皮膚癌瘤、結腸直腸癌、硬纖維腫瘤、促結締組織增生性小圓細胞腫瘤、內分泌腫瘤、尤文氏肉瘤、周邊原始神經外胚層瘤、固體生殖細胞腫瘤、肝母細胞瘤、神經母細胞瘤、非橫紋肌肉瘤軟組織肉瘤、骨肉瘤、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、威爾姆斯腫瘤、神經膠瘤、神經膠母細胞瘤、黏液瘤、纖維瘤及脂肪瘤。例示性淋巴瘤及白血病包括(但不限於)：慢性淋巴球性白血病(小淋巴球性淋巴瘤)、B細胞前淋巴球性白血病、淋巴漿細胞性淋巴瘤、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、脾邊緣區淋巴瘤、漿細胞骨髓瘤、漿細胞瘤、結外邊緣區B細胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、結邊緣區B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、原發性滲出性淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、T淋巴球前淋巴球性白血病、T淋巴球大顆粒淋巴球性白血病、侵襲性NK細胞白血病、成人T淋巴球白血病/淋巴瘤、結外NK/T淋巴球淋巴瘤、鼻型、腸病型T淋巴球淋巴瘤、肝脾T淋巴球淋巴瘤、母細胞性NK細胞淋巴瘤、蕈樣黴菌病、塞紮萊症候群、原發性皮膚多形性大細胞淋巴瘤、淋巴瘤樣丘疹病、血管免疫母細胞T淋巴球淋巴瘤、周邊T淋巴球淋巴瘤(未指定)、多形性大細胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤。實例 此實例描述包含嵌合抗原受體(CAR)之經修飾T淋巴球的產生及用途，其中CAR包含：第一多肽，其包含對腫瘤特異性抗原具有特異性的抗原結合域、共刺激域及cereblon；及第二多肽，其包含cereblon相關蛋白(例如，Aiolos)及基於CD3ζ免疫受體酪胺酸的活化基元(ITAM)原代細胞信號傳導域。CAR 構建體 使用標準方法製備圖1中所描繪之CAR。 構建對第一多肽、腫瘤抗原結合蛋白(例如，抗-HER2 scFv、抗PSCA scFv或抗BCMA scFv)基於cereblon(CRBN)之CAR (亦即含有抗腫瘤抗原抗體之scFv、CD28跨膜(TM)域、CD28共刺激域及CRBN之「第一多肽」)進行編碼的第一聚核苷酸。將第一聚核苷酸選殖至慢病毒載體中。 構建對第二多肽、基於Aiolos之ITAM CAR (亦即含有CD28跨膜(TM)域、Aiolos及CD3ζ ITAM域之「第二多肽」)進行編碼的第二聚核苷酸。將第二聚核苷酸選殖至慢病毒載體中。CAR 構建體在 T 細胞 中之表現 藉由T細胞檢測上述CAR構建體之表現。為分離T細胞，將周邊血液單核細胞(PBMC)與健康供體血液分離(例如，使用Ficoll Paque PlusTM 密度梯度離心(GE Healthcare, Piscataway, NJ)將PBMC與全血衍生之白血球層分離)。Pan T細胞負性地選自PBMC (例如，根據製造商的指令藉由使用Pan T分離套組II (Miltenyi Biotec, Cambridge, MA))。 將包含對第一多肽及第二多肽CAR進行編碼之構建體的質粒引入(例如，藉由電穿孔)至原代T細胞中，且接著在介質(例如，RPMI-10)中培養經電穿孔之T細胞隔夜。偵測到CAR之抗原結合域之表現，藉由對第一多肽進行編碼之構建體來確定T細胞之穩定轉染。舉例而言，T細胞在電穿孔後24小時處經捕獲且經染色以偵測第一多肽之抗原結合域(例如，對於抗-HER2偵測，用HER2人類IgG-Fc嵌合體蛋白染色，接著用與APC共軛之抗人類IgG-Fc抗體染色)。藉由流式細胞量測術分析經染色細胞。藉由對第二多肽進行編碼之構建體來確認T細胞之穩定轉染。舉例而言，在補充有泊利度胺或來那度胺之介質(例如，RPMI-10)中培養T細胞隔夜。T細胞在電穿孔後24小時處經捕獲且接著在藉由可結合第一多肽之抗原結合域(例如，對於抗-HER2偵測，HER2人類IgG-Fc嵌合體蛋白)之試劑免疫沈澱之後裂解。用可偵測且標記第二多肽之Aiolos或CD3ζ域的試劑(例如，抗人類Aiolos抗體或抗人類CD3ζ抗體)處理免疫沈澱。藉由ELISA分析經標記之免疫沈澱且偵測到第二多肽，從而藉由對第二多肽進行編碼之構建體確認T細胞之穩定轉染。使用泊利度胺或來那度胺來調節 CAR T 細胞在 癌症病患中之活性 在暴露於泊利度胺或來那度胺及腫瘤抗原後活化T細胞上之第一多肽及第二多肽CAR。泊利度胺及來那度胺在人體中具有良好耐受性。第一多肽及第二多肽 CAR 之官能性評估 對T細胞中之第一多肽及第二多肽執行官能性評估(例如，HER2-CAR之官能性評估；參看下文)。T細胞經第一多肽及第二多肽穩定轉染且在泊利度胺或來那度胺之缺失及存在下經固定化腫瘤抗原Fc嵌合體蛋白刺激。作為CD28共刺激之陽性對照，除包含CD3ζ ITAM胞內域及排除cereblon之外，產生與經指定為第一多肽之CAR構建體相同之另一構建體。作為陰性對照，執行第一多肽(亦即，僅第二多肽經轉染)、第二多肽(亦即，僅第一多肽經轉染)及第一多肽及第二多肽兩者(亦即，第一多肽或第二多肽皆未經轉染)之模擬轉染。 為評估T細胞之刺激，藉由流式細胞量測術及/或ELISA在刺激後48小時檢測T細胞激活標記CD69及CD71之表現。上調CD69及CD71表現指示T細胞之刺激。針對CD69表現及CD71表現測試經對第一多肽及第二多肽進行編碼之構建體及對陽性對照多肽及陰性對照多肽進行編碼之構建體轉染的T細胞。上調相對於在陰性對照細胞中之觀測到之CD69及CD71表現的經對第一多肽及第二多肽進行編碼之構建體轉染的T細胞中之CD69及CD71表現指示經對第一多肽及第二多肽進行編碼之構建體轉染的T細胞之刺激。乳癌之治療 個體具有已擴散至至少一個局部淋巴結之3期乳癌。在移除癌組織之手術後，藉由靜脈內注射歷時30分鐘向個體投與呈200 mL生理鹽水溶液之包含第一嵌合受體及第二嵌合受體(諸如上文所描述的第一多肽及第二多肽)的109 個與1010 之間個經修飾T淋巴球。第一嵌合受體包含與HER2結合之胞外抗原結合區、跨膜域、來自CD28之胞內共刺激域及cereblon域。第二嵌合受體包含跨膜域、cereblon相關蛋白(例如，Aiolos)及衍生自CD3ζ之信號轉染域。 在投與包含第一嵌合受體及第二嵌合受體之經修飾T淋巴球後之特定時段處(例如，投與該細胞群體後之30分鐘、1小時、6小時、12小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天或1週)，向個體投與泊利度胺或來那度胺。 替代地，首先向個體投與泊利度胺或來那度胺，接著在投與泊利度胺或來那度胺後之特定時段處(例如，投與泊利度胺或來那度胺後之30分鐘、1小時、6小時、12小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天或1週)，投與包含第一嵌合受體及第二嵌合受體之經修飾T淋巴球。 投與後30、60、90及180天，評定個體之剩餘乳房組織中之乳癌及至其他淋巴結之擴散。前列腺癌之治療 個體具有未擴散至局部或其他淋巴結(N0，M0)之T2期前列腺癌。組織學級別測定為G2。總體而言，該個體經測定患有II期前列腺癌。藉由靜脈內注射歷時30分鐘向個體投與呈200 mL生理鹽水溶液的包含第一嵌合受體及第二嵌合受體(諸如上文所描述之第一多肽及第二多肽)的109 個與1010 之間個之經修飾T淋巴球。第一嵌合受體包含與PSCA結合之胞外抗原結合區、跨膜域、胞內共刺激域CD28及cereblon域。第二嵌合受體包含跨膜域、cereblon相關蛋白(例如，Aiolos)及衍生自CD3ζ之信號轉染域。 在投與包含嵌合受體第一及第二嵌合受體之經修飾T淋巴球後之特定時段處(例如，投與該細胞群體後之30分鐘、1小時、6小時、12小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天或1週)，向個體投與泊利度胺或來那度胺。 替代地，首先向個體投與泊利度胺或來那度胺，接著在投與泊利度胺或來那度胺後之特定時段處(例如，投與泊利度胺或來那度胺後之30分鐘、1小時、6小時、12小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天或1週)，投與包含第一嵌合受體及第二嵌合受體之經修飾T淋巴球。 在投與後30、60及90天，再評定個體之前列腺癌階段及至淋巴結之擴散，且執行活檢前列腺組織之組織學分析。多發性骨髓瘤之治療 個體具有先前已用至少一個治療過程(之，例如，來那度胺或泊利度胺)治療之III期多發性骨髓瘤(藉由國際分期系統(International Staging System)或Durie-Salmon系統)的。藉由靜脈內注射歷時30分鐘向個體投與呈 200 mL生理鹽水溶液之包含第一嵌合受體及第二嵌合受體(諸如上文所描述之第一多肽及第二多肽)的介於108 個與1010 之間個經修飾T淋巴球。第一嵌合受體包含與BCMA結合之胞外抗原結合區、跨膜域、胞內共刺激域CD28及cereblon域。第二嵌合受體包含跨膜域、cereblon相關蛋白(例如，Aiolos)及衍生自CD3ζ之信號轉導域。 在投與包含第一嵌合受體及第二嵌合受體之經修飾T淋巴球後之特定時段處(例如，投與該細胞群體後之30分鐘、1小時、6小時、12小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天或1週)，向個體投與泊利度胺或來那度胺。 替代地，首先向個體投與泊利度胺或來那度胺，接著在投與泊利度胺或來那度胺後之特定時段處(例如，投與泊利度胺或來那度胺後之30分鐘、1小時、6小時、12小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天或1週)，投與包含第一嵌合受體及第二嵌合受體之經修飾T淋巴球。 投與後之30、60及90天，再評定個體之多發性骨髓瘤階段。等效物 本發明之範疇不受本文所描述之特定實施例限制。實際上，本文提供之標的物的各種修改，除所述彼等修改之外，將由以上描述而變得對熟習此項技術者顯而易見。此類修改意欲處於所附申請專利範圍之範疇內。 本文列舉各種公開案、專利及專利申請案，其揭示內容以全文引用的方式併入。
圖1：使用cereblon結合化合物(例如，泊利度胺)以調節CAR T細胞活性。所展示為在T細胞(具有包含腫瘤抗原結合域、諸如CD28之共刺激域及cereblon的第一多肽，及包含諸如CD3ζ之ITAM及諸如Aiolos之cereblon相關蛋白的第二多肽)上之分裂CAR之示意圖，該T細胞在暴露於泊利度胺及腫瘤抗原後活化，其中泊利度胺藉由誘導分裂CAR之二聚化來調節CAR活性。CRBN：cereblon；POM：泊利度胺；Costim.域：共刺激域。

Claims (23)

  1. 一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含：(a)第一多肽，其包含抗原結合域；跨膜域；cereblon；及原代細胞信號傳導域(primary cell signaling domain)，其中該cereblon能夠與cereblon結合化合物結合；其中該第一多肽不包含共刺激域；及(b)第二多肽，其包含跨膜域；Aiolos或Ikaros；及共刺激域，其中該Aiolos或Ikaros能夠結合該cereblon結合化合物；其中在該cereblon結合化合物之存在下，該第一多肽及該第二多肽形成異質二聚體。
  2. 如請求項1之CAR，其中該第一多肽按自N端至C端之順序包含：該抗原結合域、該跨膜域、該cereblon及該原代細胞信號傳導域；且該第二多肽按自N端至C端之順序包含：該跨膜域、該Aiolos或該Ikaros，及該共刺激域。
  3. 如請求項1之CAR，其中該第一多肽按自N端至C端之順序包含：該抗原結合域、該cereblon、該跨膜域及該原代細胞信號傳導域；且該第二多肽按自N端至C端之順序包含：該Aiolos或該Ikaros、該跨膜域及該共刺激域。
  4. 如請求項1之CAR，其中該原代細胞信號傳導域為CD3ζ。
  5. 一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含：(a)第一多肽，其包含抗原結合域；跨膜域；cereblon；及共刺激域，其中該cereblon能夠與cereblon結合化合物結合；其中該第一多肽不包含原代細胞信號傳導域；及(b)第二多肽，其包含跨膜域；Aiolos或Ikaros；及原代細胞信號傳導域，其中該Aiolos或Ikaros能夠結合該cereblon結合化合物；其中在該cereblon結合化合物之存在下，該第一多肽及該第二多肽形成異質二聚體。
  6. 如請求項5之CAR，其中該第一多肽按自N端至C端之順序包含：該抗原結合域、該跨膜域、該cereblon及該共刺激域；且該第二多肽按自N端至C端之順序包含：該跨膜域、該Aiolos或該Ikaros，及該原代細胞信號傳導域。
  7. 如請求項5之CAR，其中該第一多肽按自N端至C端之順序包含：該抗原結合域、該cereblon、該跨膜域及該共刺激域；且該第二多肽按自N端至C端之順序包含：該Aiolos或該Ikaros、該跨膜域及該原代細胞信號傳導域。
  8. 如請求項5之CAR，其中該原代細胞信號傳導域為CD3ζ。
  9. 如請求項1至8中任一項之CAR，其中該原代細胞信號傳導域為基於免疫受體酪胺酸的活化基元(ITAM)或包含該基於免疫受體酪胺酸的活化 基元。
  10. 如請求項9之CAR，其中該ITAM為來自以下中之一或多者的信號傳導域：FcRγ、FcRβ、CD3ζ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD20、CD79a、CD79b、CD278(ICOS)、FcERI、CD66d、DAP10及DAP12。
  11. 如請求項1至8中任一項之CAR，其中該共刺激域包含以下中之官能性信號傳導域之一或多者：CD28、4-1BB(CD137)、OX40、活化NK細胞受體、BTLA、Toll配位體受體、CD2、CD7、CD27、CD30、CD40、CDS、ICAM-L LFA-1(CD11a/CD18)、B7-H3、CDS、ICAM-1、ICOS(CD278)、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM(LIGHTR)、KIRDS2、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、ITGB7、NKG2D、NKG2C、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD19a、DAP10、DAP12、CD83之配位體、MHC I類分子、TNF受體蛋白、免疫 球蛋白類蛋白、細胞介素受體、整合素及信號傳導淋巴球性活化分子。
  12. 如請求項4之CAR，其中該共刺激域包含CD28或4-1BB(CD137)之官能性信號傳導域。
  13. 如請求項8之CAR，其中該共刺激域包含CD28或4-1BB(CD137)之官能性信號傳導域。
  14. 如請求項1至8、12及13中任一項之CAR，其中該跨膜域為來自以下的跨膜域：T細胞受體之α鏈、該T細胞受體之β鏈、該T細胞受體之ζ鏈、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137或CD154。
  15. 如請求項1至8、12及13中任一項之CAR，其中該抗原結合域為用於該抗原之受體。
  16. 如請求項1至8、12及13中任一項之CAR，其中該抗原結合域為結合該抗原之抗體或其結合片段。
  17. 如請求項1至8、12及13中任一項之CAR，其中該抗原結合域為結合該抗原之單鏈Fv片段(scFv)。
  18. 如請求項1至8、12及13中任一項之CAR，其中該抗原為腫瘤相關抗 原(TAA)或腫瘤特異性抗原(TSA)。
  19. 如請求項18之CAR，其中該TAA或TSA為以下中之一或多者：4-1BB、5T4、8H9、B7-H6、腺癌抗原、α-胎蛋白、B細胞成熟抗原(BCMA)、BAFF、B淋巴瘤細胞、C242抗原、CA9、癌胚抗原、CA-125、碳酸酐酶9(CA-IX)、CCR4、CD3、CD4、CD19、CD20、CD22、CD23(IgE受體)、CD28、CD30(TNFRSF8)、CD33、CD38、CD40、CD44v6、CD44v7/8、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CD123、CD152、CD171、CD200、CD221、CE7、CEA、C-MET、CNT0888、CTLA-4、DRS、EpCAM、ErbB2、ErbB3/4、EGFR、EGFRvIII、EphA2、EGP2、EGP40、FAP、胚胎AchR、纖維結合蛋白額外域B、葉酸受體a、葉酸受體1、G250/CAIX、GD2、GD3、醣蛋白75、GPNMB、HER2/neu、HGF、HLA-AI MAGE A1、HLA-A2 NY-ES0-1、HMW-MAA、人類分散因子受體激酶、IGF-1受體、IGF-I、IgG1、IL-6、IL-13、IL-13受體a2、IL-11受體a、胰島素類生長因子I受體、整合素a5I31、整合素avI33、κ輕鏈、L1-CAM、λ輕鏈、路易斯Y(Lewis Y)、間皮素、MORAb-009、MS4A1、MUC1、MUC16、黏蛋白CanAg、NCAM、N-羥乙醯基神經胺糖酸、NKG2D配位體、NPC-1C、PDGF-R a、PDL192、磷脂醯絲胺酸、前列腺特異性癌抗原(PSCA)、前列腺癌瘤細胞、PSMA、PSC1、RANKL、RON、ROR1、SCH 900105、SDC1、SLAMF7、sp17、TAG72、肌腱蛋白C、TGF β2、TGF-I3、TL1A、TRAIL-R1、TRAIL-R2、腫瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGF受體、VEGFR-1、VEGFR2、TEM1、TEM8及波形蛋白。
  20. 如請求項1至8、12及13中任一項之CAR，其中當該第一多肽及該第二多肽在T細胞或NK細胞內表現且異二聚時，該CAR傳輸原代活化信號及共刺激信號；其中該原代活化信號及共刺激信號能夠活化該T細胞或NK細胞。
  21. 如請求項1至8、12及13中任一項中任一項之CAR，其中該cereblon結合化合物為沙立度胺(thalidomide)((RS)-2-(2,6-二氧六氫吡啶-3-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮)、來那度胺(lenalidomide)(3-(4-胺基-1-側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮)、泊利度胺(pomalidomide)(4-胺基-2-[(3RS)-(2,6-二氧六氫吡啶-3-基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮)、3-[4-(4-嗎啉-4-基甲基-苯甲氧基)-1-側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮；或3-(4-((4-((4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯甲基)氧基)-1-側氧基異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。
  22. 一種聚核苷酸，其包含核酸序列，該核酸序列編碼包含如請求項1至21中任一項之CAR之該第一多肽及該第二多肽中的一者或兩者。
  23. 一種細胞，其包含如請求項22之聚核苷酸。
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