ES2916335T3

ES2916335T3 - Receptores de antígeno quimérico heterodimerizable basados en cereblon

Info

Publication number: ES2916335T3
Application number: ES17862754T
Authority: ES
Inventors: Shuichan Xu
Original assignee: Celgene Corp
Current assignee: Celgene Corp
Priority date: 2016-10-20
Filing date: 2017-10-19
Publication date: 2022-06-30
Anticipated expiration: 2037-10-19
Also published as: WO2018075820A3; EP3528851A2; WO2018075820A2; TW201817742A; JP2022109975A; JP2019531328A; CN109983027A; US20190240304A1; CA3041284A1; JP7100028B2; EP4092049A1; US20220370580A1; EP3528851A4; EP3528851B1; TWI781117B; US11331380B2

Abstract

Un receptor de antígeno quimérico (CAR) que comprende: (a) un primer polipéptido que comprende un dominio de unión a antígeno; un dominio transmembrana; cereblon o una porción funcional del mismo, donde dicho cereblon o una porción funcional del mismo es capaz de unirse a un compuesto de unión a cereblon; y un dominio primario de señalización celular, donde dicho primer polipéptido no comprende un dominio coestimulador; y (b) un segundo polipéptido que comprende un dominio transmembrana; Aiolos o una porción funcional del mismo o Ikaros o una porción funcional del mismo; y un dominio coestimulador; donde, en presencia de dicho compuesto de unión a cereblon, dicho primer polipéptido y dicho segundo polipéptido forman un heterodímero.

Description

DESCRIPCIÓN

Receptores de antígeno quimérico heterodimerizable basados en cereblon

1. Campo

La descripción en esta invención se refiere al campo de la inmunología y, más específicamente, a la modificación de linfocitos T u otras células inmunes.

2. Antecedentes

Las células del sistema inmune como los linfocitos T (también denominados células T) reconocen e interactúan con antígenos específicos a través de receptores o complejos de receptores que, tras el reconocimiento o la interacción con dichos antígenos, provocan la activación de la célula. Un ejemplo de dicho receptor es el complejo receptor de linfocitos T específico de antígeno (TCR/CD3), un complejo de ocho proteínas. El receptor de células T (TCR) se expresa en la superficie de los linfocitos T. Un componente, CD3, que tiene una estructura invariable, es responsable de la señalización intracelular después de la ocupación del TCR por el ligando. El receptor de linfocitos T para el complejo antígeno-CD3 (TCR/CD3) reconoce los péptidos antigénicos que le son presentados por las proteínas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC). Los complejos de MHC y péptido se expresan en la superficie de las células presentadoras de antígenos y otras dianas de linfocitos T. La estimulación del complejo TCR/CD3 da como resultado la activación de los linfocitos T y la consiguiente respuesta inmune específica de antígeno. El complejo TCR/CD3 juega un papel central en la función efectora y la regulación del sistema inmune.

Los linfocitos T requieren una segunda señal coestimuladora para volverse completamente activos. Sin tal señal, los linfocitos T no responden a la unión del antígeno al TCR o se vuelven anérgicos. Dicha señal coestimuladora, por ejemplo, la proporciona CD28, una proteína de linfocitos T, que interactúa con CD80 y CD86 en las células productoras de antígenos. ICOS (Inducible COStimulator - Co-Estimulador Inducible), otra proteína de linfocitos T, proporciona una señal coestimuladora cuando se une al ligando ICOS.

Los receptores de antígenos quiméricos (CAR - Chimeric Antigen Receptors) son polipéptidos diseñados genéticamente para contener funciones esenciales de unión a antígeno, señalización y estimulación del complejo TCR. Los linfocitos T que portan dichos CAR generalmente se denominan células CAR-T o linfocitos CAR-T. Sin embargo, mientras que los CAR pueden dirigirse eficazmente a los linfocitos T para antígenos específicos de tumores o asociados a tumores específicos, también pueden dirigirse a células sanas y normales que también expresan tales antígenos. En esta invención se describen receptores quiméricos modificados que superan esta deficiencia del diseño de CAR actual.

Wu y col., Science, 2015, 450 (6258), aab4077-1 a 10 discutieron las células T diseñadas con receptores de antígenos quiméricos (CAR) para tratar enfermedades como el cáncer y la autoinmunidad.

Gandhi y col., British Journal of Haematology, 2014, 164, pp. 811 a 821 estudiaron la interacción de los factores de transcripción Ikaros y Aiolos con CRI4^crbnen presencia de lenalidomida o pomalidomida.

3. Resumen

La presente invención proporciona un receptor de antígeno quimérico (CAR) que comprende:

(a) un primer polipéptido que comprende un dominio de unión a antígeno; un dominio transmembrana; cereblon o una porción funcional del mismo, donde dicho cereblon o una porción funcional del mismo es capaz de unirse a un compuesto de unión a cereblon; y un dominio primario de señalización celular, donde dicho primer polipéptido no comprende un dominio coestimulador; y

(b) un segundo polipéptido que comprende un dominio transmembrana; Aiolos o una porción funcional del mismo o Ikaros o una porción funcional del mismo; y un dominio coestimulador;

donde, en presencia de dicho compuesto de unión a cereblon, dicho primer polipéptido y dicho segundo polipéptido forman un heterodímero.

En una realización, dicho primer polipéptido comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C: dicho dominio de unión a antígeno, dicho dominio transmembrana, dicho cereblon o porción funcional del mismo y dicho dominio primario de señalización celular; y dicho segundo polipéptido comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C: dicho dominio transmembrana, dicho Aiolos o porción funcional del mismo o dicho Ikaros o porción funcional del mismo, y dicho dominio coestimulador.

En una realización, dicho primer polipéptido comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C: dicho dominio de unión a antígeno, dicho cereblon o porción funcional del mismo, dicho dominio transmembrana y dicho dominio primario de señalización celular; y dicho segundo polipéptido comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C: dicho Aiolos o porción funcional del mismo o dicho Ikaros o porción funcional del mismo, dicho dominio transmembrana y dicho dominio coestimulador.

En una realización, dicho dominio primario de señalización celular es CD3Z. En una realización, dicho dominio primario de señalización celular es o comprende un motivo de activación basado en tirosina de inmunorreceptor (ITAM). En una realización, dicho ITAM es un dominio de señalización de uno o más de F^cRy , FcRp, CD3Z, CD3y , CD35, CD3s, CD5, CD22, CD20, CD79a, CD79b, CD278 (ICOS), FcERI, CD66d, DAP10 y DAP12.

En una realización, dicho dominio coestimulador comprende un dominio de señalización funcional de uno o más de: CD28, 4-1BB (CD137), OX40, un receptor de células NK activador, BTLA, un receptor de ligando Toll, CD2, CD7, CD27, CD30, CD40, CDS, ICAM-L, LFA-1 (CD11a/CD18), B7-H3, CDS, ICAM-1, ICOS (CD278), GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8a, CD8p, IL2Rp, IL2Ry , IL7Ra, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Táctil), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CD19a, DAP10, DAP12, un ligando de CD83, una molécula MHC de clase I, una proteína receptora de TNF, una proteína similar a inmunoglobulina, un receptor de citoquinas, una integrina y una molécula de activación linfocítica de señalización.

En una realización, dicho dominio transmembrana es un dominio transmembrana de: cadena alfa del receptor de células T, cadena beta del receptor de células T, cadena zeta del receptor de células T, CD28, CD3s, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 o CD154.

En una realización, dicho dominio de unión a antígeno es un receptor para dicho antígeno. En una realización, dicho dominio de unión a antígeno es un anticuerpo o fragmento de unión del mismo que se une a dicho antígeno.

En una realización, dicho anticuerpo o fragmento de unión del mismo es un fragmento Fv de cadena simple (scFv). En una realización, dicho antígeno es un antígeno asociado a tumor (TAA) o un antígeno específico de tumor (TSA).

En una realización, dicho TAA o TSA es uno o más de 4-1BB, 5T4, 8H9, B7-H6, antígeno de adenocarcinoma, afetoproteína, antígeno de maduración de células B (BCMA), BAFF, células de linfoma B, antígeno C242, CA9, antígeno carcinoembrionario, CA-125, anhidrasa carbónica 9 (CA-iX), Cc R4, CD3, CD4, CD19, CD20, CD22, CD23 (receptor de IgE), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD38, CD40, CD44v6, CD44v7/8, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CD123, CD152, CD171, CD200, CD221, CE7, CEA, C-MET, CNT0888, CTLA-4, DRS, EpCAM, ErbB2, ErbB3/4, EGFR, EGFRvlII, EphA2, EGP2, EGP40, Fa P, AchR fetal, fibronectina extra dominio-B, receptor de folato-a, receptor de folato 1, G250/CAIX, GD2, GD3, glicoproteína 75, GPNMB, HER2/neu, HGF, HLA-AI MAGE A1, HLA-A2 NY-ES0-1, HMW-MAA, receptor quinasa de factor de dispersión humano, receptor de IGF-1, IGF-I, IgGl, IL-6, IL-13, receptor de IL-13 a2, receptor a de IL-11, receptor de factor de crecimiento similar a la insulina I, integrina a5I31, integrina avI33, cadena ligera Kappa, L1-CAM, cadena ligera Lambda, Lewis Y, mesotelina, MORAb-009, MS4A1, MUC1, MUC16, mucina CanAg, ⁿC^aM, ácido N-glicolilneuramínico, ligandos NKG2D, NPC-1C, PDGF-R a, PDL192, fosfatidilserina, antígeno de cáncer de próstata específico (PSCA), células de carcinoma prostático, PSMA, PSC1, RANKL, RON, ROR1, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, sp17, TAG72, tenascina C, TGF p2, TGF-I3, TL1A, TRAIL-R1, TRAIL-R2, antígeno tumoral C^tA^a16.88, VEGF-A, receptores de VEGF, VEGFR-1, ^vE^gFR2, TEM1, TEM8 y vimentina.

En una realización, cuando dicho primer polipéptido y dicho segundo polipéptido se expresan dentro de una célula T o una célula NK y se heterodimerizan, el CAR transmite (i) una señal de activación primaria o (ii) una señal de activación primaria y una señal coestimuladora; donde la señal de activación primaria o la señal de activación primaria y la señal coestimuladora son capaces de activar dicha célula T o célula NK.

En una realización, dicho compuesto de unión a cereblon es talidomida ((RS)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1 H-isoindol-1,3(2H)-diona), lenalidomida (3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihidro-2H-isoindol-2-il)piperidina-2,6-diona), pomalidomida (4-amino-2-[(3RS)-(2,6-dioxopiperidina-3-il)-1 H-isoindol-1,3(2H)-diona), 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1 -oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona; o 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil) piperazin-1 -il)metil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona.

En esta invención se describen receptores de antígenos quiméricos (CAR) que comprenden (a) un primer polipéptido que comprende cereblon o una porción funcional del mismo y (b) un segundo polipéptido que comprende una proteína asociada a cereblon o una porción funcional de la misma, donde el primer polipéptido o el segundo polipéptido, o ambos polipéptidos, comprenden componentes adicionales de CAR, como un dominio de unión a antígeno, un dominio transmembrana, un dominio de señalización celular, y/o un dominio coestimulador. Cuando los polipéptidos primero y segundo de los CAR se expresan juntos en una célula inmune (por ejemplo, en un linfocito T) en presencia de un compuesto de unión a cereblon (por ejemplo, como se describe en esta invención), el cereblon (o porción funcional del mismo, por ejemplo, como se describe en esta invención) del primer polipéptido y la proteína asociada a cereblon (o porción funcional de la misma, por ejemplo, como se describe en esta invención) del segundo polipéptido se unen al compuesto de unión a cereblon dando como resultado la formación de un heterodímero con función de CAR. Por lo tanto, la actividad de los CAR descritos en esta invención (por ejemplo, actividad in vivo) puede controlarse selectivamente poniendo en contacto una célula que expresa el primer y segundo polipéptido de los CAR (por ejemplo, linfocitos T modificados para expresar dichos CAR) con un compuesto de unión a cereblon. Cuando el CAR, expresado en una célula inmune, se pone en contacto con un compuesto de unión a cereblon, y el CAR se une a un antígeno, por ejemplo, un antígeno asociado a un tumor o un antígeno específico de un tumor, el CAR transmite señales tanto primarias como coestimuladoras, activando así la célula inmune.

En un ejemplo específico, en esta invención se describe un CAR que comprende (a) un primer polipéptido que comprende un dominio de unión a antígeno, un dominio transmembrana y cereblon o una porción funcional del mismo, donde dicho cereblon (o porción funcional del mismo) es capaz de unirse a un compuesto de unión a cereblon; y (b) un segundo polipéptido que comprende un dominio transmembrana, proteína asociada a cereblon o una porción funcional de la misma, donde dicha proteína asociada a cereblon (o porción funcional de la misma) es capaz de unirse a un compuesto de unión a cereblon y un dominio primario de señalización celular; donde, en presencia de dicho compuesto de unión a cereblon, dicho primer polipéptido y dicho segundo polipéptido forman un heterodímero. En un ejemplo específico, la proteína asociada a cereblon es Aiolos o Ikaros. En otro ejemplo específico, el primer polipéptido comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el segundo polipéptido comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el primer polipéptido y el segundo polipéptido comprenden un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el primer polipéptido comprende un dominio coestimulador y el segundo polipéptido no comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el segundo polipéptido comprende un dominio coestimulador y el primer polipéptido no comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, dicho compuesto de unión a cereblon es pomalidomida (4-amino-2-[(3RS)-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1H-isoindol-1,3(2H)-diona). En otro ejemplo específico, dicho compuesto de unión a cereblon es talidomida ((RS)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1H-isoindol-1,3(2H)-diona). En otro ejemplo específico, dicho compuesto de unión a cereblon es lenalidomida (3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihidro-2H-isoindol-2-il)piperidina-2,6-diona). En otro ejemplo específico, dicho compuesto de unión a cereblon es 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1-oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona. En otro ejemplo específico, dicho compuesto de unión a cereblon es 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil)piperazin-1-il)metil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

En otro ejemplo específico, en esta invención se describe un CAR que comprende (a) un primer polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, un dominio de unión a antígeno, un dominio transmembrana y cereblon o una porción funcional del mismo, y (b) un segundo polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, un dominio transmembrana, una proteína asociada a cereblon o una porción funcional de la misma y un dominio de señalización de células T primarias. En un ejemplo específico, la proteína asociada a cereblon es Aiolos o Ikaros. En otro ejemplo específico, el primer polipéptido comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el segundo polipéptido comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el primer polipéptido y el segundo polipéptido comprenden un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el primer polipéptido comprende un dominio coestimulador y el segundo polipéptido no comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el segundo polipéptido comprende un dominio coestimulador y el primer polipéptido no comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo, dicho cereblon (o porción funcional del mismo) y dicha proteína asociada a cereblon (o porción funcional de la misma) son capaces de unirse a un compuesto de unión a cereblon, donde dicho compuesto de unión a cereblon es pomalidomida, talidomida, lenalidomida, 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1 -oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona, o 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil)piperazin-1-il)metil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

En otro ejemplo específico, en esta invención se describe un CAR que comprende (a) un primer polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, un dominio de unión a antígeno, una proteína asociada a cereblon o una porción funcional de la misma, y un dominio transmembrana, y (b) un segundo polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, cereblon o una porción funcional del mismo, un dominio transmembrana y un dominio de señalización de células T primarias. En un ejemplo específico, la proteína asociada a cereblon es Aiolos o Ikaros. En otro ejemplo específico, el primer polipéptido comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el segundo polipéptido comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el primer polipéptido y el segundo polipéptido comprenden un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el primer polipéptido comprende un dominio coestimulador y el segundo polipéptido no comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el segundo polipéptido comprende un dominio coestimulador y el primer polipéptido no comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo, dicho cereblon (o porción funcional del mismo) y dicha proteína asociada a cereblon (o porción funcional de la misma) son capaces de unirse a un compuesto de unión a cereblon, donde dicho compuesto de unión a cereblon es pomalidomida, talidomida, lenalidomida, 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1 -oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona, o 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil)piperazin-1-il)metil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

En otro ejemplo específico, en esta invención se describe un CAR que comprende (a) un primer polipéptido que comprende un dominio de unión a antígeno, un dominio transmembrana y una proteína asociada a cereblon o una porción funcional de la misma, donde dicha proteína asociada a cereblon (o porción funcional del mismo) es capaz de unirse a un compuesto de unión a cereblon; y (b) un segundo polipéptido que comprende un dominio transmembrana, cereblon o una porción funcional del mismo, donde dicho cereblon (o porción funcional del mismo) es capaz de unirse a un compuesto de unión a cereblon y un dominio primario de señalización celular; donde, en presencia de dicho compuesto de unión a cereblon, dicho primer polipéptido y dicho segundo polipéptido forman un heterodímero. En un ejemplo específico, la proteína asociada a cereblon es Aiolos o Ikaros. En un ejemplo específico, el primer polipéptido comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el segundo polipéptido comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el primer polipéptido y el segundo polipéptido comprenden un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el primer polipéptido comprende un dominio coestimulador y el segundo polipéptido no comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el segundo polipéptido comprende un dominio coestimulador y el primer polipéptido no comprende un dominio coestimulador. En un ejemplo específico, dicho compuesto de unión a cereblon es pomalidomida (4-amino-2-[(3RS)-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1H-isoindol-1,3(2H)-diona). En un ejemplo específico, dicho compuesto de unión a cereblon es talidomida ((RS)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1H-isoindol-1,3(2H)-diona). En un ejemplo específico, dicho compuesto de unión a cereblon es lenalidomida (3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihidro-2H-isoindol-2-il)piperidina-2,6-diona). En un ejemplo específico, dicho compuesto de unión a cereblon es 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1-oxo-1,3 -dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona. En un ejemplo específico, dicho compuesto de unión a cereblon es 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil)piperazin-1-il)metil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

En otro ejemplo específico, en esta invención se describe un CAR que comprende (a) un primer polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, un dominio de unión a antígeno, una proteína asociada a cereblon o una porción funcional de la misma, y un dominio transmembrana, y (b) un segundo polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, cereblon o una porción funcional del mismo, un dominio transmembrana y un dominio de señalización de células T primarias. En un ejemplo específico, la proteína asociada a cereblon es Aiolos o Ikaros. En un ejemplo específico, el primer polipéptido comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el segundo polipéptido comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el primer polipéptido y el segundo polipéptido comprenden un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el primer polipéptido comprende un dominio coestimulador y el segundo polipéptido no comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el segundo polipéptido comprende un dominio coestimulador y el primer polipéptido no comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo, dicho cereblon (o porción funcional del mismo) y dicha proteína asociada a cereblon (o porción funcional de la misma) son capaces de unirse a un compuesto de unión a cereblon, donde dicho compuesto de unión a cereblon es pomalidomida, talidomida, lenalidomida, 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1 -oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona, o 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil)piperazin-1-il)metil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

En otro ejemplo específico, en esta invención se describe un CAR que comprende (a) un primer polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, un dominio de unión a antígeno, una proteína asociada a cereblon o una porción funcional de la misma, y un dominio transmembrana, y (b) un segundo polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, cereblon o una porción funcional del mismo, un dominio transmembrana y un dominio de señalización de células T primarias. En un ejemplo específico, la proteína asociada a cereblon es Aiolos o Ikaros. En otro ejemplo específico, el primer polipéptido comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el segundo polipéptido comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el primer polipéptido y el segundo polipéptido comprenden un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el primer polipéptido comprende un dominio coestimulador y el segundo polipéptido de ejemplo no comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el primer polipéptido comprende un dominio coestimulador y el segundo polipéptido de ejemplo no comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo, dicho cereblon (o porción funcional del mismo) y dicha proteína asociada a cereblon (o porción funcional de la misma) son capaces de unirse a un compuesto de unión a cereblon, donde dicho compuesto de unión a cereblon es pomalidomida, talidomida, lenalidomida, 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1 -oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona, o 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil)piperazin-1-il)metil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

En otra realización específica, el CAR comprende (a) un primer polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, un dominio de unión a antígeno, un dominio transmembrana, cereblon o una porción funcional del mismo, y un dominio primario de señalización celular, y (b) un segundo polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, un dominio transmembrana, Aiolos o Ikaros o una porción funcional de los mismos, y un dominio coestimulador. En otra realización, dicho cereblon (o porción funcional del mismo) y dicha proteína asociada a cereblon (o porción funcional de la misma) son capaces de unirse a un compuesto de unión a cereblon, donde dicho compuesto de unión a cereblon es pomalidomida, talidomida, lenalidomida, 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1 -oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona, o 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil)piperazin-1 -il)metil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

En otra realización específica, el CAR comprende (a) un primer polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, un dominio de unión a antígeno, cereblon o una porción funcional del mismo, un dominio transmembrana y un polipéptido que comprende un dominio primario de señalización celular, y (b) un segundo polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, Aiolos o Ikaros o una porción funcional de los mismos, un dominio transmembrana y un dominio coestimulador. En otra realización, dicho cereblon (o porción funcional del mismo) y dicha proteína asociada a cereblon (o porción funcional de la misma) son capaces de unirse a un compuesto de unión a cereblon, donde dicho compuesto de unión a cereblon es pomalidomida, talidomida, lenalidomida, 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1 -oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona, o 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil)piperazin-1-il)metil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

En otro ejemplo específico, en esta invención se describe un CAR que comprende (a) un primer polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, un dominio de unión a antígeno, un dominio transmembrana, una proteína asociada a cereblon o una porción funcional de la misma, y un dominio primario de señalización celular, y (b) un segundo polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, un dominio transmembrana, cereblon o una porción funcional del mismo, y un dominio coestimulador. En un ejemplo específico, la proteína asociada a cereblon es Aiolos o Ikaros. En otro ejemplo, dicho cereblon (o porción funcional del mismo) y dicha proteína asociada a cereblon (o porción funcional de la misma) son capaces de unirse a un compuesto de unión a cereblon, donde dicho compuesto de unión a cereblon es pomalidomida, talidomida, lenalidomida, 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1 -oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-ilil]-piperidina-2,6-diona, o 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil)piperazin-1-il)metil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

En otro ejemplo específico, en esta invención se describe un CAR que comprende (a) un primer polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, un dominio de unión a antígeno, una proteína asociada a cereblon o una porción funcional de la misma, un dominio transmembrana y un polipéptido que comprende un dominio primario de señalización celular, y (b) un segundo polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, cereblon o una porción funcional del mismo, un dominio transmembrana y un dominio coestimulador. En un ejemplo específico, la proteína asociada a cereblon es Aiolos o Ikaros. En otro ejemplo, dicho cereblon (o porción funcional del mismo) y dicha proteína asociada a cereblon (o porción funcional de la misma) son capaces de unirse a un compuesto de unión a cereblon, donde dicho compuesto de unión a cereblon es pomalidomida, talidomida, lenalidomida, 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1-oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona, o 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil)piperazin-1-il)metil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

En ciertas realizaciones, cuando el primer o segundo polipéptido de un CAR descrito en esta invención comprende un dominio primario de señalización celular, dicho polipéptido es CD3Z. En una realización específica, dicho dominio de señalización celular es humano.

En ciertas realizaciones, cuando el primer o segundo polipéptido de un CAR descrito en esta invención comprende un dominio primario de señalización celular, dicho dominio primario de señalización celular es o comprende un dominio primario de señalización celular de motivo de activación basado en tirosina de inmunorreceptor (ITAM). En una realización específica, dicho ITAM se deriva de uno o más de los siguientes: F^cRy , FcRp, CD3Z, CD3y , CD35, CD3s, CD5, CD22, CD20, CD79a, CD79b, CD278 (ICOS), FcsRI, CD66d, DAP10 y/o DAP12. En una realización específica, dicho dominio de señalización celular es humano.

En otra realización específica, el dominio coestimulador del segundo polipéptido de los CAR descritos en esta invención es o comprende CD28, 4-1BB (CD137), OX40, un receptor de células NK activador, BTLA, un receptor de ligando Toll, CD2, CD7, CD27, CD30, CD40, CDS, ICAM-L LFA-1 (CD11a/CD18), B7-H3, CDS, ICAM-1, ICOS (CD278), GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8a, CD8p, IL2Rp, IL2Ry , IL7Ra, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Táctil), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CD19a, DAP10, DAP12, un ligando de CD83, una molécula MHC de clase I, una proteína receptora de TNF, una proteína similar a inmunoglobulina, un receptor de citoquinas, una integrina y una molécula de activación linfocítica de señalización. En una realización específica, dicho dominio coestimulador es humano.

En ciertas realizaciones, el dominio transmembrana del primer polipéptido y/o el segundo polipéptido de los CAR provistos en esta invención comprende el dominio transmembrana de: la cadena alfa del receptor de células T, la cadena beta del receptor de células T, la cadena zeta del receptor de células T, CD28, CD3s, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 o CD154. En una realización específica, dicho dominio transmembrana es humano.

En ciertas realizaciones, el dominio de unión a antígeno de un CAR descrito en esta invención comprende un receptor.

En determinadas realizaciones, el dominio de unión a antígeno de un CAR descrito en esta invención comprende un anticuerpo o un fragmento de unión del mismo. En una realización específica, el fragmento de unión de dicho anticuerpo es un fragmento Fv de cadena simple (scFv).

En ciertas realizaciones, el antígeno unido por un dominio de unión a antígeno de un CAR descrito en esta invención es un antígeno en una célula tumoral. En una realización específica, dicho antígeno es un antígeno de una célula tumoral sólida. En otra realización específica, dicho antígeno es un antígeno de una célula de cáncer de la sangre.

En otra realización específica, el antígeno unido por un dominio de unión a antígeno de un CAR descrito en esta invención es un antígeno asociado a tumor (TAA) o un antígeno específico de tumor (TSA). En una realización, dicho TAA o TSA es uno o más de 4-1BB, 5T4, 8H9, B7-H6, antígeno de adenocarcinoma, a-fetoproteína, antígeno de maduración de células B (BCMA), BAFF, células de linfoma B, antígeno C242, CA9, antígeno carcinoembrionario, CA-125, anhidrasa carbónica 9 (CA-IX), CCR4, CD3, CD4, CD19, CD20, CD22, CD23 (receptor de IgE), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD38, CD40, CD44v6, CD44v7/8, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CD123, CD152, CD171, CD200, CD221, CE7, CEA, C-MET, CNT0888, CTLA-4, DRS, EpCAM, ErbB2, ErbB3/4, EGFR, EGFRvIII, EphA2, EGP2, EGP40, FAP, AchR fetal, fibronectina extra dominio-B, receptor de folato-a, receptor de folato 1, G250/CAIX, GD2, GD3, glicoproteína 75, GPNMB, HER2/neu, HGF, HLA-AI MAGE A1, HLA-A2 NY-ES0-1, HMW-MAA, receptor quinasa de factor de dispersión humano, receptor de IGF-1, IGF-I, IgGl, IL-6, IL-13, receptor de IL-13 a2, receptor a de IL-11, receptor de factor de crecimiento similar a la insulina I, integrina a5I31, integrina avI33, cadena ligera Kappa, L1-CAM, cadena ligera Lambda, Lewis Y, mesotelina, MORAb-009, MS4A1, MUC1, MUC16, mucina CanAg, NCAM, ácido N-glicolilneuramínico, ligandos NKG2D, NPC-1C, PDGF-R a, PDL192, fosfatidilserina, antígeno de cáncer de próstata específico (PSCA), células de carcinoma prostático, PSMA, PSC1, rAn KL, RON, ROR1, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, sp17, TAG72, tenascina C, TGF p2, TGF-I3, TL1A, TRAIL-R1, TRAIL-R2, antígeno tumoral CTAA16.88, VEGF-A, receptores de VEGF, VEGFR-1, VEGFR2, TEM1, TEM8 y vimentina.

En otro aspecto, en esta invención se proporcionan ácidos nucleicos que codifican los CAR descritos en esta invención, es decir, ácidos nucleicos que codifican el primer polipéptido y ácidos nucleicos que codifican el segundo polipéptido de los CAR descritos en esta invención. En ciertas realizaciones, un primer polipéptido de un CAR descrito en esta invención está codificado por un primer ácido nucleico (polinucleótido) y el segundo polipéptido de un CAR descrito en esta invención está codificado por un segundo ácido nucleico (polinucleótido). En una realización específica, en esta invención se proporciona un ácido nucleico (polinucleótido) que codifica tanto el primer polipéptido como el segundo polipéptido de un CAR descrito en esta invención.

En ciertas realizaciones, los ácidos nucleicos que codifican el polipéptido CAR descritos en esta invención están comprendidos dentro de un vector de ácido nucleico. En una realización específica, dicho vector es un vector retroviral. En otra realización específica, dicho vector es un vector lentiviral.

En ciertas realizaciones, los ácidos nucleicos que codifican el polipéptido CAR descritos en esta invención están unidos operativamente a un promotor. En una realización específica, dicho promotor es un promotor específico de células T, un promotor específico de células asesinas naturales (NK), un promotor inducible que funciona dentro de las células T o células NK, o un promotor constitutivo.

En otro aspecto, en esta invención se proporcionan células (denominadas en esta invención "células CAR") que comprenden los ácidos nucleicos que codifican CAR y/o vectores descritos en esta invención. Dichas células incluyen células procarióticas (por ejemplo, bacterianas) y células eucarióticas (por ejemplo, de mamífero). En una realización específica proporcionada en esta invención es una célula T, por ejemplo, una célula CD4+, una célula T CD+, una célula T efectora o una célula T de memoria, que comprende un CAR descrito en esta invención. En otra realización específica que se proporciona en esta invención, se proporciona una célula asesina natural que comprende un CAR descrito en esta invención.

Las células CAR proporcionadas en esta invención, por ejemplo, las células T que comprenden uno o más ácidos nucleicos que codifican CAR descritos en esta invención o que expresan un CAR descrito en esta invención (es decir, que expresan el primer y segundo polipéptido de un CAR descrito en esta invención) pueden activarse cuando se ponen en contacto con (i) el antígeno para el que el CAR es específico (es decir, el antígeno reconocido por el dominio de unión a antígeno del CAR) y (ii) un compuesto de unión a cereblon. Por consiguiente, en otro aspecto, en esta invención se proporciona un CAR de la invención para uso en procedimientos para activar una célula (por ejemplo, una célula T o una célula NK) que comprende y/o expresa dicho CAR, comprendiendo dichos procedimientos poner en contacto la célula con un antígeno que se une al dominio de unión a antígeno del CAR y además poner en contacto la célula con un compuesto de unión a cereblon. En una realización específica, dicha célula se pone en contacto con dicho antígeno y dicho compuesto de unión a cereblon in vivo, es decir, el contacto se produce tras la administración de la célula a un sujeto. En otra realización específica, dicha célula se administra a un sujeto y se le da un período de tiempo específico para localizar y entrar en contacto con el antígeno para el que el CAR es específico, seguido de la administración de un compuesto de unión a cereblon al sujeto.

En determinadas realizaciones, las células CAR proporcionadas en esta invención comprenden además un polipéptido de muerte celular artificial que comprende un dominio inductor de apoptosis y un dominio de dimerización, donde el polipéptido de muerte celular artificial es dimerizable usando un agente dimerizante, y donde cuando el polipéptido de muerte celular artificial se dimeriza, el polipéptido genera una señal inductora de apoptosis en dicha célula. En una realización específica, dicho agente dimerizante es rapamicina o un análogo de rapamicina (rapalog). En otra realización específica, dicho agente dimerizante es AP1903 (rimiducid). En otra realización específica, dicho agente dimerizante no es un compuesto de unión a cereblon. En una realización específica, dicho dominio de dimerización es un dominio de unión a FK o un análogo del mismo. En otra realización específica, dicho agente dimerizante es un anticuerpo que se une a dicho dominio de unión a FK.

En otro aspecto, en esta invención se proporciona un CAR de la invención para su uso en procedimientos para eliminar células diana que expresan un antígeno unido por el dominio de unión a antígeno de dicho CAR, donde dichos procedimientos comprenden (i) poner en contacto dichas células diana con una célula (por ejemplo, una célula T o una célula NK) que comprende/expresa un CAR descrito en esta invención y (ii) poner en contacto dicha célula que expresa el CAR con un compuesto de unión a cereblon, donde, en presencia de dicho antígeno y dicho compuesto de unión a cereblon, la célula que expresa CAR se activa. En una realización específica, dicha célula diana es una célula cancerosa, por ejemplo, una célula cancerosa de la sangre o una célula tumoral sólida. En una realización específica, dicho antígeno unido por dicho CAR es 4-1BB, 5T4, 8H9, B7-H6, antígeno de adenocarcinoma, a-fetoproteína, antígeno de maduración de células B (BCMA), BAFF, células de linfoma B, antígeno C242, CA9, antígeno carcinoembrionario, CA-125, anhidrasa carbónica 9 (CA-ⁱX), CCR4, CD3, CD4, ^cD19, CD20, CD22, CD23 (receptor de IgE), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD38, CD40, CD44v6, CD44v7/8, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CD123, CD152, CD171, CD200, CD221, CE7, CEA, C-MET, CNT0888, CTLA-4, DRS, EpCAM, ErbB2, ErbB3/4, EGFR, EGFRvlII, EphA2, EGP2, EGP40, F^aP, AchR fetal, fibronectina extra dominio-B, receptor de folato-a, receptor de folato 1, G250/CAIX, GD2, GD3, glicoproteína 75, GPNMB, HER2/neu, HGF, HLA-AI MAGE A1, HLA-A2 NY-ES0-1, HMW-MAA, receptor quinasa de factor de dispersión humano, receptor de IGF-1, IGF-I, IgGl, IL-6, IL-13, receptor de IL-13 a2, receptor a de IL-11, receptor de factor de crecimiento similar a la insulina I, integrina a5I31, integrina avI33, cadena ligera Kappa, L1-CAM, cadena ligera Lambda, Lewis Y, mesotelina, MORAb-009, MS4A1, MUC1, MUC16, mucina CanAg, ⁿC^aM, ácido N-glicolilneuramínico, ligandos NKG2D, NPC-1C, PDGF-R a, PDL192, fosfatidilserina, antígeno de cáncer de próstata específico (PSCA), células de carcinoma prostático, PSMA, PSC1, RANKL, RON, ROR1, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, sp17, TAG72, tenascina C, TGF p2, TGF-I3, TL1A, TRAIL-R1, TRAIL-R2, antígeno tumoral C^tA^a16.88, VEGF-A, receptores de VEGF, VEGFR-1, ^vE^gFR2, TEM1, TEM8 y/o vimentina.

En otro aspecto, en esta invención se proporciona un CAR de la invención para su uso en procedimientos de tratamiento del cáncer, comprendiendo dichos procedimientos (i) la administración de una población de células CAR descritas en esta invención, por ejemplo, células T o células NK, que comprenden/expresan un CAR descrito en esta invención (por ejemplo, comprende uno o más ácidos nucleicos que codifican CAR descritos en esta invención o expresa un CAR descrito en esta invención), donde dicho CAR comprende un dominio de unión a antígeno específico para un antígeno canceroso (por ejemplo, TSA o TAA) a un sujeto (por ejemplo, un sujeto humano) y (ii) administrar al sujeto una composición que comprende un compuesto de unión a cereblon. En una realización específica, dicha población de células se administra primero al sujeto, seguido de la administración de la composición que comprende un compuesto de unión a cereblon en un período de tiempo específico después de la administración de la población de células, por ejemplo, 30 minutos, 1 hora, 6 horas, 12 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días o 1 semana después de la administración de la población celular. En una realización específica, dicho antígeno unido por dicho CAR es 4-1BB, 5T4, 8H9, B7-H6, antígeno de adenocarcinoma, a-fetoproteína, antígeno de maduración de células B (BCMA), BAFF, células de linfoma B, antígeno C242, CA9, antígeno carcinoembrionario, CA-125, anhidrasa carbónica 9 (CA-IX), CCR4, CD3, CD4, CD19, CD20, CD22, CD23 (receptor de IgE), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD38, CD40, CD44v6, CD44v7/8, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CD123, CD152, CD171, CD200, CD221, CE7, CEA, C-MET, CNT0888, CTLA-4, DRS, EpCAM, ErbB2, ErbB3/4, EGFR, EGFRvlII, EphA2, EGP2, EGP40, FAP, AchR fetal, fibronectina extra dominio-B, receptor de folato-a, receptor de folato 1, G250/CAIX, GD2, GD3, glicoproteína 75, GPNMB, HER2/neu, HGF, ^hL^a-AI MAGE A1, HLA-A2 NY-ES0-1, HMW-MAA, receptor quinasa de factor de dispersión humano, receptor de IGF-1, IGF-I, IgGl, IL-6, IL-13, receptor de IL-13 a2, receptor a de IL-11, receptor de factor de crecimiento similar a la insulina I, integrina a5I31, integrina avI33, cadena ligera Kappa, L1-CAM, cadena ligera Lambda, Lewis Y, mesotelina, MORAb-009, MS4A1, MUC1, MUC16, mucina CanAg, NCAM, ácido N-glicolilneuramínico, ligandos NKG2D, NPC-1C, PDGF-R a, PDL192, fosfatidilserina, antígeno de cáncer de próstata específico (PSCA), células de carcinoma prostático, PSMA, PSC1, RANKL, RON, ROR1, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, sp17, t Ag 72, tenascina C, TGF p2, TGF-I3, TL1A, TRAIL-R1, TRAlL-R2, antígeno tumoral CTAA16.88, VEGF-A, receptores de VEGF, VEGFR-1, VEGFR2, TEM1, TEM8 y/o vimentina.

En una realización específica, el compuesto de unión a cereblon administrado a un sujeto según los procedimientos para tratar el cáncer descritos en esta invención es pomalidomida, talidomida, lenalidomida, 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetilbenciloxi)-1 -oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona, o 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil)piperazin-1 -il)metil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

Una lista no limitativa de cánceres que pueden tratarse según los procedimientos de tratamiento descritos en esta invención incluye linfoma, leucemia, cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de próstata, carcinoma adrenocortical, carcinoma de tiroides, carcinoma nasofaríngeo, melanoma, carcinoma de piel, carcinoma colorrectal, tumor desmoide, tumor aesmoplásico de células redondas pequeñas, tumor endocrino, sarcoma de Ewing, tumor neuroectodérmico primitivo periférico, tumor de células germinales sólidas, hepatoblastoma, neuroblastoma, sarcoma de tejido blando no rabdomiosarcoma, osteosarcoma, retinoblastoma, rabdomiosarcoma, tumor de Wilms, glioma, glioblastoma, mixoma, fibroma y lipoma. Linfomas y leucemias ejemplares incluyen, sin limitación, leucemia linfocítica crónica (linfoma linfocítico pequeño), leucemia prolinfocítica de células B, linfoma linfoplasmacítico, macroglobulinemia de Waldenstrom, linfoma de la zona marginal esplénica, mieloma de células plasmáticas, plasmacitoma, linfoma de células B de la zona marginal extraganglionar, linfoma MALT, linfoma de células B de la zona marginal ganglionar, linfoma folicular, linfoma de células del manto, linfoma difuso de células B grandes, linfoma de células B grandes mediastínico (tímico), linfoma de células B grandes intravascular, linfoma de efusión primaria, linfoma de Burkitt, leucemia prolinfocítica de linfocitos T, leucemia linfocítica granular grande de linfocitos T, leucemia de células NK agresiva, leucemia/linfoma de linfocitos T en adultos, linfoma de linfocitos T NK/extraganglionar, tipo nasal, linfoma de linfocitos T tipo enteropatía, linfoma de linfocitos T hepatoesplénico, linfoma de células NK blástico, micosis fungoide, síndrome de Sezary, linfoma anaplásico de células grandes cutáneo primario, papulosis linfomatoide, linfoma de linfocitos T angioinmunoblásticos, linfoma de linfocitos T periféricos (no especificado), linfoma anaplásico de células grandes, linfoma de Hodgkin o linfoma no Hodgkin.

En otro ejemplo, en esta invención se describe un receptor de muerte celular artificial dimerizable que comprende (a) un primer polipéptido que comprende un dominio inductor de apoptosis (o una porción funcional del mismo) y cereblon (o una porción funcional del mismo) y (b) un segundo polipéptido que comprende un dominio de apoptosis -dominio inductor (o porción funcional del mismo) y Aiolos (o una porción funcional del mismo), donde dicho cereblon (o porción funcional del mismo) y dicho Aiolos (o porción funcional del mismo) son ambos capaces de unirse a un compuesto de unión a cereblon, y donde dicho primer polipéptido y dicho segundo polipéptido se dimerizan en presencia de dicho compuesto de unión a cereblon para generar una señal que induce la apoptosis. En una realización específica, dicho compuesto de unión a cereblon es pomalidomida, talidomida, lenalidomida, 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1 -oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona, o 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil)piperazin-1 -il)metil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

En una realización específica, en esta invención se proporciona un receptor de muerte celular artificial dimerizable que comprende (a) un primer polipéptido que comprende una proteína transmembrana que comprende un dominio transmembrana y un dominio intracelular que comprende un dominio inductor de apoptosis (o una porción funcional del mismo) y cereblon (o porción funcional del mismo); y (b) un segundo polipéptido que comprende una proteína transmembrana que comprende un dominio transmembrana y un dominio intracelular que comprende un dominio inductor de apoptosis (o porción funcional del mismo) y Aiolos o Ikaros (o porción funcional del mismo).

En otra realización específica, en esta invención se proporciona un receptor de muerte celular artificial dimerizable que comprende (a) un primer polipéptido que comprende una proteína transmembrana que comprende un dominio extracelular que comprende cereblon (o una porción funcional del mismo), un dominio transmembrana y un dominio intracelular que comprende una apoptosis -dominio inductor (o porción funcional del mismo); y (b) un segundo polipéptido que comprende una proteína transmembrana que comprende un dominio transmembrana y un dominio intracelular que comprende un dominio inductor de apoptosis (o porción funcional del mismo) y Aiolos o Ikaros (o porción funcional de los mismos). En otra realización específica, dicho segundo polipéptido comprende una proteína transmembrana que comprende un dominio extracelular que comprende Aiolos o Ikaros (o porción funcional de los mismos), un dominio transmembrana y un dominio intracelular que comprende un dominio inductor de apoptosis (o porción funcional del mismo).

En otra realización específica, se proporciona en esta invención un receptor de muerte celular artificial dimerizable que comprende (a) un primer polipéptido que comprende una proteína transmembrana que comprende un dominio inductor de apoptosis (o una porción funcional del mismo) y cereblon (o una porción funcional del mismo); y (b) un segundo polipéptido que comprende una proteína transmembrana que comprende un dominio transmembrana y un dominio intracelular que comprende un dominio inductor de apoptosis (o porción funcional del mismo) y Aiolos o Ikaros (o porción funcional del mismo).

En otra realización específica, se proporciona en esta invención un receptor de muerte celular artificial dimerizable que comprende (a) un primer polipéptido que comprende una proteína transmembrana que comprende un dominio inductor de apoptosis (o una porción funcional del mismo) y cereblon (o una porción funcional del mismo); y (b) un segundo polipéptido que comprende una proteína transmembrana que comprende un dominio extracelular que comprende Aiolos o Ikaros (o porción funcional del mismo), un dominio transmembrana y un dominio intracelular que comprende un dominio inductor de apoptosis (o porción funcional del mismo).

En ciertas realizaciones, el dominio inductor de apoptosis de los receptores de muerte celular artificiales dimerizables proporcionados en esta invención es una caspasa. En una realización específica, dicha caspasa es la caspasa 9, la caspasa 8 o la caspasa 3.

En otro aspecto, se proporcionan en esta invención ácidos nucleicos que codifican los receptores de muerte celular artificiales dimerizables descritos en esta invención, es decir, ácidos nucleicos que codifican el primer polipéptido y ácidos nucleicos que codifican el segundo polipéptido de los receptores de muerte celular artificiales dimerizables descritos en esta invención. En ciertas realizaciones, un primer polipéptido de un receptor de muerte celular artificial dimerizable descrito en esta invención está codificado por un primer ácido nucleico (polinucleótido) y el segundo polipéptido de un receptor de muerte celular artificial dimerizable descrito en esta invención está codificado por un segundo ácido nucleico (polinucleótido). En una realización específica, en esta invención se proporciona un ácido nucleico (polinucleótido) que codifica tanto el primer polipéptido como el segundo polipéptido de un receptor de muerte celular artificial dimerizable descrito en esta invención.

En ciertas realizaciones, los ácidos nucleicos que codifican el receptor de muerte celular artificial dimerizable descritos en esta invención están comprendidos dentro de un vector de ácido nucleico. En una realización específica, dicho vector es un vector retroviral. En otra realización específica, dicho vector es un vector lentiviral.

En ciertas realizaciones, los ácidos nucleicos que codifican el receptor de muerte celular artificial dimerizable descritos en esta invención están unidos operativamente a un promotor. En una realización específica, dicho promotor es un promotor específico de células T, un promotor específico de células asesinas naturales (NK), un promotor inducible que funciona dentro de las células T o células NK, o un promotor constitutivo.

En otro aspecto, se proporcionan en esta invención células (denominadas en esta invención "células receptoras de muerte celular") que comprenden los ácidos nucleicos que codifican el receptor de muerte celular artificial dimerizable descritos en esta invención y/o vectores descritos en esta invención. Dichas células incluyen células procarióticas (por ejemplo, bacterianas) y células eucarióticas (porejemplo, de mamífero). En una realización específica proporcionada en esta invención es una célula T, por ejemplo, una célula CD4+, una célula T CD8+, una célula T efectora o una célula T de memoria, que comprende un receptor de muerte celular artificial dimerizable descrito en esta invención. En otra realización específica que se proporciona en esta invención es una célula asesina natural que comprende un receptor de muerte celular artificial dimerizable descrito en esta invención.

Las células receptoras de muerte celular proporcionadas en esta invención, por ejemplo, células T o células NK que comprenden uno o más ácidos nucleicos que codifican un receptor de muerte celular artificial dimerizable descritos en esta invención o que expresan un receptor de muerte celular artificial dimerizable descrito en esta invención (es decir, que expresan el primero y segundo polipéptido de un receptor de muerte celular artificial dimerizable descrito en esta invención) puede inducirse a sufrir apoptosis cuando se ponen en contacto con un compuesto de unión a cereblon, por ejemplo, cuando se ponen en contacto con pomalidomida, talidomida, lenalidomida, 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetilbenciloxi)-1 -oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona, o 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil)piperazin-1 -il)metil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

En ciertas realizaciones, las células receptoras de muerte celular proporcionadas en esta invención comprenden además un CAR, por ejemplo, un CAR de primera generación, un CAR de segunda generación o un CAR de tercera generación. En una realización específica, dicho CAR comprende dos o más dominios de orientación a antígenos extracelulares. En otra realización específica, dicho CAR comprende un dominio extracelular que se une a una interleucina que es un regulador negativo de la actividad de las células T, y un dominio intracelular de un receptor de interleucina que es un regulador positivo de la actividad de las células T. En otra realización específica, se induce la apoptosis en una célula que comprende un receptor de muerte celular artificial y un CAR poniendo en contacto la célula con un compuesto de unión a cereblon, por ejemplo, pomalidomida, talidomida, lenalidomida, 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1 -oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona, o 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil)piperazin-1 -il)metil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

3.1. Breve descripción de los dibujos

FIG. 1: Uso de un compuesto de unión a cereblon (por ejemplo, pomalidomida) para regular la actividad de las células T con CAR. Se muestra una representación esquemática de un CAR dividido en una célula T (con un primer polipéptido que comprende un dominio de unión al antígeno tumoral, un dominio coestimulador como CD28 y cereblon, y un segundo polipéptido que comprende un ITAM como CD3Z y un una proteína asociada a cereblon como Aiolos) que se activa tras la exposición a pomalidomida y antígeno tumoral, donde pomalidomida regula la actividad del CAR al inducir la dimerización del CAR dividido. CRBN: cereblon; POM: pomalidomida; Dominio Costim.: Dominio coestimulador.

4. Descripción detallada

Los efectos en la diana pero fuera del tumor mediados por células inmunitarias terapéuticas que expresan CAR, que potencialmente conducen a la toxicidad, pueden reducirse o eliminarse expresando en tales células CAR modulables que requieren una señal primaria y coestimuladora para la activación. Esta separación, como se describe en esta invención, se logra mediante el uso de CAR que comprenden dos polipéptidos artificiales, donde (i) el primer polipéptido comprende cereblon (o una porción funcional del mismo) y el segundo polipéptido comprende una proteína asociada a cereblon (o una porción funcional de la misma), (ii) los componentes de CAR requeridos para la activación se dividen entre los dos polipéptidos, y (iii) CAR se activa en presencia de un compuesto de unión a cereblon que se une a cereblon y la proteína asociada a cereblon.

Los efectos fuera del tumor en la diana mediados por CAR también pueden reducirse o eliminarse mediante el uso de receptores de muerte celular artificiales dimerizables, que permiten la muerte a pedido de las células que expresan dichos receptores. Dichos receptores de muerte celular artificiales dimerizables, como se describe en esta invención, comprenden un primer polipéptido que comprende un dominio inductor de apoptosis y un dominio de dimerización, por ejemplo, cereblon (o porción funcional del mismo) y un segundo polipéptido que comprende un dominio inductor de apoptosis y un dominio de dimerización complementario, por ejemplo, una proteína asociada a cereblon (o una porción funcional de la misma). Las células que expresan dichos receptores de muerte celular artificiales dimerizables pueden inducirse a sufrir apoptosis poniéndolas en contacto con un compuesto de unión a cereblon capaz de dimerizar el primer y segundo polipéptido y activar así el dominio inductor de apoptosis.

4.1. Receptores de antígenos quiméricos y usos de los mismos

4.1.1. Construcciones de receptores de antígenos quiméricos

En esta invención se describen receptores de antígenos quiméricos (CAR) que comprenden (a) un primer polipéptido que comprende cereblon o una porción funcional del mismo y (b) un segundo polipéptido que comprende una proteína asociada a cereblon o una porción funcional de la misma, donde el primer polipéptido o el segundo polipéptido, o ambos polipéptidos, comprenden componentes adicionales de CAR, como un dominio de unión a antígeno, un dominio transmembrana, un dominio de señalización celular y/o un dominio coestimulador.

donde, en presencia de dicho compuesto de unión a cereblon, dicho primer polipéptido y dicho segundo polipéptido forman un heterodímero. Cuando los polipéptidos primero y segundo de los CAR se expresan juntos en una célula inmune (porejemplo, en un linfocito T o una célula asesina natural) en presencia de un compuesto de unión a cereblon, cereblon (o porción funcional del mismo) del primer polipéptido y dicha proteína asociada a cereblon (o porción funcional de la misma) del segundo polipéptido se une al compuesto de unión a cereblon dando como resultado la formación de un heterodímero con función CAR. Por lo tanto, la actividad de los CAR descritos en esta invención (por ejemplo, actividad in vivo) puede controlarse selectivamente poniendo en contacto una célula que expresa el primer y segundo polipéptido de los CAR (por ejemplo, linfocitos T modificados para expresar dichos CAR) con un compuesto de unión a cereblon. Tal como se usa en esta invención, "dominio transmembrana" incluye dominios transmembrana de paso en los que la proteína que comprende el dominio transmembrana comprende tanto dominios intracelulares como extracelulares, y dominios de anclaje a la membrana en los que la proteína que comprende el dominio transmembrana comprende un dominio intracelular pero no un dominio extracelular.

En otro ejemplo específico, en esta invención se describe un CAR que comprende (a) un primer polipéptido que comprende un dominio de unión a antígeno, un dominio transmembrana y una proteína asociada a cereblon o una porción funcional de la misma, donde dicha proteína asociada a cereblon (o porción funcional del mismo) es capaz de unirse a un compuesto de unión a cereblon; y (b) un segundo polipéptido que comprende un dominio transmembrana, cereblon o una porción funcional del mismo, donde dicho cereblon (o porción funcional del mismo) es capaz de unirse a un compuesto de unión a cereblon y un dominio primario de señalización celular; donde, en presencia de dicho compuesto de unión a cereblon, dicho primer polipéptido y dicho segundo polipéptido forman un heterodímero. En un ejemplo específico, la proteína asociada a cereblon es Aiolos o Ikaros.

En otro ejemplo específico, en esta invención se describe un CAR que comprende (a) un primer polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, un dominio de unión a antígeno, una proteína asociada a cereblon o una porción funcional de la misma, y un dominio transmembrana, y (b) un segundo polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, cereblon o una porción funcional del mismo, un dominio transmembrana y un dominio de señalización de células T primarias. En un ejemplo específico, la proteína asociada a cereblon es Aiolos o Ikaros. En otro ejemplo específico, el primer polipéptido comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el segundo polipéptido comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el primer polipéptido y el segundo polipéptido comprenden un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el primer polipéptido comprende un dominio coestimulador y el segundo polipéptido de ejemplo no comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo específico, el segundo polipéptido comprende un dominio coestimulador y el primer polipéptido no comprende un dominio coestimulador. En otro ejemplo, dicho cereblon (o porción funcional del mismo) y dicha proteína asociada a cereblon (o porción funcional de la misma) son capaces de unirse a un compuesto de unión a cereblon, donde dicho compuesto de unión a cereblon es pomalidomida, talidomida, lenalidomida, 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1 -oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona, o 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil)piperazin-1-il)metil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

En otro ejemplo específico, en esta invención se describe un CAR que comprende (a) un primer polipéptido que comprende un dominio de unión a antígeno, un dominio transmembrana y una proteína asociada a cereblon o una porción funcional de la misma, donde dicha proteína asociada a cereblon (o porción funcional del mismo) es capaz de unirse a un compuesto de unión a cereblon; y (b) un segundo polipéptido que comprende un dominio transmembrana, cereblon o una porción funcional del mismo, donde dicho cereblon (o porción funcional del mismo) es capaz de unirse a un compuesto de unión a cereblon y un dominio primario de señalización celular; donde, en presencia de dicho compuesto de unión a cereblon, dicho primer polipéptido y dicho segundo polipéptido forman un heterodímero. En un ejemplo específico, la proteína asociada a cereblon es Aiolos o Ikaros. En un ejemplo específico, dicho compuesto de unión a cereblon es pomalidomida (4-amino-2-[(3RS)-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1H-isoindol-1,3(2H)-diona). En un ejemplo específico, dicho compuesto de unión a cereblon es talidomida ((RS)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1 H-isoindol-1,3(2H)-diona). En un ejemplo específico, dicho compuesto de unión a cereblon es lenalidomida (3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihidro-2H-isoindol-2-il)piperidina-2,6-diona). En un ejemplo específico, dicho compuesto de unión a cereblon es 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1-oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona. En un ejemplo específico, dicho compuesto de unión a cereblon es 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil)piperazin-1-il)metil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

En otra realización específica, el CAR proporcionado en esta invención comprende (a) un primer polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, un dominio de unión a antígeno, un dominio transmembrana, cereblon o una porción funcional del mismo, y un dominio primario de señalización celular, y (b) un segundo polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, un dominio transmembrana, Aiolos o Ikaros o una porción funcional de los mismos, y un dominio coestimulador. En otra realización, dicho cereblon (o porción funcional del mismo) y dicha proteína asociada a cereblon (o porción funcional de la misma) son capaces de unirse a un compuesto de unión a cereblon, donde dicho compuesto de unión a cereblon es pomalidomida, talidomida, lenalidomida, 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1-oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona, o 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil)piperazin-1-il)metil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

En otra realización específica, el CAR proporcionado en esta invención comprende (a) un primer polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, un dominio de unión a antígeno, cereblon o una porción funcional del mismo, un dominio transmembrana y un polipéptido que comprende un dominio primario de señalización celular, y (b) un segundo polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, Aiolos o Ikaros o una porción funcional de los mismos, un dominio transmembrana y un dominio coestimulador. En otra realización, dicho cereblon (o porción funcional del mismo) y dicha proteína asociada a cereblon (o porción funcional de la misma) son capaces de unirse a un compuesto de unión a cereblon, donde dicho compuesto de unión a cereblon es pomalidomida, talidomida, lenalidomida, 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1 -oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona, o 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil)piperazin-1 -il)metil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

En otro ejemplo específico, en esta invención se describe un CAR que comprende (a) un primer polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, un dominio de unión a antígeno, un dominio transmembrana, una proteína asociada a cereblon o una porción funcional de la misma, y un dominio primario de señalización celular, y (b) un segundo polipéptido que comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C, un dominio transmembrana, cereblon o una porción funcional del mismo, y un dominio coestimulador. En un ejemplo específico, la proteína asociada a cereblon es Aiolos o Ikaros. En otro ejemplo, dicho cereblon (o porción funcional del mismo) y dicha proteína asociada a cereblon (o porción funcional de la misma) son capaces de unirse a un compuesto de unión a cereblon, donde dicho compuesto de unión a cereblon es pomalidomida, talidomida, lenalidomida, 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1 -oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona, o 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil)piperazin-1-il)metil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

Cereblon y proteínas asociadas a Cereblon

Los CAR proporcionados en esta invención comprenden polipéptidos que comprenden cereblon o una porción funcional del mismo o una proteína asociada a cereblon (por ejemplo, Aiolos o Ikaros), o una porción funcional de cualquiera de los mismos. Como se usa en esta invención, el término "porción funcional" de cereblon o una proteína asociada a cereblon se define como una porción de cereblon o una proteína asociada a cereblon que es capaz de unirse a un compuesto de unión a cereblon. En algunas realizaciones, una porción funcional de cereblon o una proteína asociada a cereblon comprende la secuencia codificante del polipéptido completo de dicho cereblon o dicha proteína asociada a cereblon. En otras realizaciones, una porción funcional de cereblon o una proteína asociada a cereblon comprende un truncamiento de dicho cereblon o dicha proteína asociada a cereblon, respectivamente. Un experto en la técnica reconocerá los componentes de cada proteína necesarios para mantener la función y/o para asegurar la unión de cada proteína a un compuesto de unión a cereblon. En otras realizaciones, una porción funcional de cereblon o una proteína asociada a cereblon comprende una secuencia peptídica derivada de dicho cereblon o dicha proteína asociada a cereblon, respectivamente. Un experto en la técnica reconocerá los componentes de cada proteína necesarios para mantener la función y/o para asegurar la unión de cada proteína a un compuesto de unión a cereblon.

En algunas realizaciones, un CAR proporcionado en esta invención comprende un polipéptido que comprende cereblon o una porción funcional del mismo, que es capaz de unirse a un compuesto de unión a cereblon. En algunas realizaciones, un CAR proporcionado en esta invención comprende un polipéptido que comprende una proteína asociada a cereblon (por ejemplo, Aiolos o Ikaros) o una porción funcional de la misma, que es capaz de unirse a un compuesto de unión a cereblon. En algunas realizaciones, un CAR proporcionado en esta invención comprende un polipéptido que comprende Aiolos o una porción funcional del mismo, que es capaz de unirse a un compuesto de unión a cereblon. En realizaciones específicas, un CAR proporcionado en esta invención comprende: (i) un primer polipéptido que comprende cereblon o una porción funcional del mismo, que es capaz de unirse a un compuesto de unión a cereblon, y (ii) un segundo polipéptido que comprende proteína asociada a cereblon (por ejemplo, Aiolos o Ikaros) o una porción funcional del mismo, que es capaz de unirse a un compuesto de unión a cereblon.

Cereblon también se conoce como la proteína "retraso mental, no sindrómico, autosómico recesivo, 2A", CRBN, MRT2, MRT2A y AD-006. Se proporciona un ejemplo de cereblon que codifica un ácido nucleico, por ejemplo, bajo Genbank Gene ID: 51185. Se proporciona una secuencia de aminoácidos de cereblon ejemplar, por ejemplo, bajo Uniprot ID: Q96SW2-1. Un experto en la técnica apreciará fácilmente cómo hacer y usar polipéptidos que contienen cereblon usando ingeniería recombinante.

Tal como se usa en esta invención, el término "cereblon" se refiere a una proteína de cereblon de origen natural o porciones de la misma, así como polipéptidos que comprenden al menos 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, o 99 % de homología o identidad de secuencia con una proteína de cereblon de origen natural o una porción de la misma, donde la secuencia puede unirse a una proteína asociada a cereblon, por ejemplo, en presencia de un compuesto de unión a cereblon descrito en esta invención.

Como se usa en esta invención, "proteínas asociadas a cereblon" se refiere a proteínas (o porciones de las mismas) que sirven como sustratos de cereblon, por ejemplo, pueden unirse a y/o asociarse con cereblon, por ejemplo, en presencia de un compuesto de unión a cereblon. Véase, por ejemplo, Gandhi y col., 2014, Br. J. Haematol. 164(6):811 -821.

En una realización específica, la proteína asociada a cereblon utilizada en los CAR descritos en esta invención es Aiolos. Aiolos también se conoce como "dedo de zinc 3 de la familia IKAROS", "proteína de dedo de zinc, subfamilia 1A, 3" y ZNFN1A3. Un ácido nucleico ejemplar que codifica Aiolos se proporciona bajo Genbank Gene ID: 22806. Se proporciona una secuencia de aminoácidos de Aiolos ejemplar, por ejemplo, bajo Uniprot ID: Q9UKT9-1. Un experto en la técnica apreciará fácilmente cómo hacer y usar polipéptidos que contienen Aiolos usando ingeniería recombinante. Como se usa en esta invención, el término "Aiolos" se refiere a una proteína Aiolos natural o porciones de la misma, así como polipéptidos que comprenden al menos 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, o 99 % de homología o identidad de secuencia con una proteína Aiolos natural o una porción de la misma.

En otra realización específica, la proteína asociada a cereblon utilizada en los CAR descritos en esta invención es Ikaros. Ikaros también se conoce como "dedo de zinc 1 de la familia IKAROS", IKZF1, IK1, LYF1, LyF-1, CVID13, PPP1R92, PRO0758, ZNFN1A1 y Hs.54452. Se proporciona un ejemplo de ácido nucleico que codifica Ikaros, por ejemplo, bajo Genbank Gene ID: 10320. Se proporciona una secuencia de aminoácidos de Ikaros ejemplar, por ejemplo, bajo Uniprot ID: Q03267-1. Un experto en la técnica apreciará fácilmente cómo hacer y usar polipéptidos que contienen Ikaros usando ingeniería recombinante. Como se usa en esta invención, el término "Ikaros" se refiere a una proteína Ikaros natural o porciones de la misma, así como polipéptidos que comprenden al menos 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, o 99 % de homología o identidad de secuencia con una proteína Ikaros natural o una porción de la misma.

Dominio de unión a antígeno

Los dominios de unión a antígeno de los CAR proporcionados en esta invención pueden ser cualquier dominio, motivo o secuencia de polipéptido que se una a un antígeno.

En ciertas realizaciones, el dominio de unión a antígeno de los CAR descritos en esta invención es una porción de unión a antígeno de un receptor. En una realización específica, el dominio de unión a antígeno de los CAR descritos en esta invención es un receptor para un ligando producido por una célula tumoral.

En ciertas realizaciones, el dominio de unión a antígeno de los CAR descritos en esta invención es una porción de unión a antígeno de un anticuerpo. En una realización específica, el dominio de unión a antígeno de los CAR descritos en esta invención es un anticuerpo, una cadena de anticuerpos, un anticuerpo de cadena simple o una porción de unión a antígeno del mismo, un dominio Fc, un dominio de anclaje de glicofosfatidilinositol o un fragmento de anticuerpo scFv.

En ciertas realizaciones, el dominio de unión a antígeno de los CAR descritos en esta invención es un agente de unión a antígeno macromolecular basado en péptido, por ejemplo, una proteína de presentación de fagos.

En determinadas realizaciones, la unión al antígeno mediante un dominio de unión al antígeno de un CAR descrito en esta invención se restringe a la presentación del antígeno en asociación con los complejos principales de histocompatibilidad (MHC - Major Histocompatibility Complexes). En determinadas realizaciones, la unión al antígeno mediante un dominio de unión al antígeno de un CAR descrito en esta invención no está restringida por MHC.

El antígeno unido/reconocido por el dominio de unión a antígeno de los CAR descritos en esta invención puede ser cualquier antígeno de interés. En una realización específica, el antígeno es un antígeno que se expresa en la superficie de una célula (por ejemplo, una célula tumoral, como una célula tumoral sólida o una célula tumoral de cáncer de sangre).

En una realización específica, el antígeno unido/reconocido por el dominio de unión a antígeno de los CAR descritos en esta invención es un antígeno en una célula tumoral, por ejemplo, el antígeno es un TSA o un TAA. En una realización específica, dicho antígeno unido por dicho CAR es 4-1BB, 5T4, 8H9, B7-H6, antígeno de adenocarcinoma, a-fetoproteína, antígeno de maduración de células B (BCMA), BAFF, células de linfoma B, antígeno C242, CA9, antígeno carcinoembrionario, CA-125, anhidrasa carbónica 9 (CA-IX), CCR4, CD3, CD4, CD19, CD20, CD22, CD23 (receptor de IgE), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD38, CD40, CD44v6, CD44v7/8, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CD123, CD152, CD171, CD200, CD221, CE7, CEA, C-MET, CNT0888, CTLA-4, DRS, EpCAM, ErbB2, ErbB3/4, EGFR, EGFRvIII, EphA2, EGP2, EGP40, FAP, AchR fetal, fibronectina extra dominio-B, receptor de folato-a, receptor de folato 1, G250/CAIX, GD2, GD3, glicoproteína 75, GPNMB, HER2/neu, HGF, HLA-AI MAGE A1, HLA-A2 NY-ES0-1, HMW-MAA, receptor quinasa de factor de dispersión humano, receptor de IGF-1, IGF-I, IgGl, IL-6, IL-13, receptor de IL-13 a2, receptor a de IL-11, receptor de factor de crecimiento similar a la insulina I, integrina a5I31, integrina avI33, cadena ligera Kappa, L1-CAM, cadena ligera Lambda, Lewis Y, mesotelina, MORAb-009, MS4A1, MUC1, MUC16, mucina CanAg, NCAM, ácido N-glicolilneuramínico, ligandos NKG2D, NPC-1C, PDGF-R a, PDL192, fosfatidilserina, antígeno de cáncer de próstata específico (PSCA), células de carcinoma prostático, PSMA, PSC1, RANKL, RON, ROR1, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, sp17, TAG72, tenascina C, TGF p2, TGF-I3, TL1A, TRAIL-R1, TRAIL-R2, antígeno tumoral CTAA16.88, VEGF-A, receptores de VEGF, VEGFR-1, VEGFR2, TEM1, TEM8 y/o vimentina.

En otra realización específica, el antígeno unido/reconocido por el dominio de unión al antígeno de los CAR descritos en esta invención es un antígeno expresado en una célula tumoral de un linfoma/leucemia, un cáncer de pulmón, un cáncer de mama, un cáncer de próstata, un carcinoma adrenocortical, un carcinoma de tiroides, un carcinoma nasofaríngeo, un melanoma, por ejemplo, un melanoma maligno, un carcinoma de piel, un carcinoma colorrectal, un tumor desmoide, un tumor desmoplásico de células redondas pequeñas, un tumor endocrino, un sarcoma de Ewing, un tumor primitivo periférico neuroectodérmico, un tumor sólido de células germinales, un hepatoblastoma, un neuroblastoma, un sarcoma de tejido blando no rabdomiosarcoma, un osteosarcoma, un retinoblastoma, un rabdomiosarcoma, un tumor de Wilms, un glioblastoma, un mixoma, un fibroma, un lipoma o semejantes.

En otras realizaciones específicas, el antígeno unido/reconocido por el dominio de unión al antígeno de los CAR descritos en esta invención es un antígeno expresado en una célula tumoral de leucemia linfocítica crónica (linfoma linfocítico pequeño), leucemia prolinfocítica de células B, linfoma linfoplasmocítico, macroglobulinemia de Waldenstrom, linfoma de zona marginal esplénica, mieloma de células plasmáticas, plasmacitoma, linfoma de células B de la zona marginal extraganglionar, linfoma MALT, linfoma de células B de la zona marginal ganglionar, linfoma folicular, linfoma de células del manto, linfoma difuso de células B grandes, linfoma mediastínico (tímico) de células B grandes, linfoma intravascular de células B grandes, linfoma de derrame primario, linfoma de Burkitt, leucemia prolinfocítica de linfocitos T, leucemia linfocítica granular grande de linfocitos T, leucemia agresiva de células NK, leucemia/linfoma de linfocitos T del adulto, linfoma de linfocitos NK/T extraganglionar de tipo nasal, linfoma de linfocitos T de tipo enteropatía, linfoma de linfocitos T hepatoesplénico, linfoma de células NK blásticas, micosis fungoide, síndrome de Sezary, linfoma de células grandes anaplásico cutáneo primario, papulosis linfomatoide, linfoma de linfocitos T angioinmunoblástica, linfoma de linfocitos T periférico (no especificado), linfoma anaplásico de células grandes, linfoma de Hodgkin o linfoma no de Hodgkin.

En otra realización específica, el antígeno unido/reconocido por el dominio de unión al antígeno de los CAR descritos en esta invención es un antígeno no asociado a un tumor o un antígeno no específico de un tumor. En determinadas realizaciones, el antígeno está relacionado con un aspecto de un tumor, por ejemplo, el entorno del tumor. Por ejemplo, un tumor puede inducir un estado inflamatorio en el tejido que lo rodea y puede liberar factores de crecimiento angiogénicos, interleucinas, y/o citoquinas que promueven la angiogénesis en y en la periferia del tumor. Por lo tanto, en determinadas realizaciones, el antígeno es un factor de crecimiento, una citocina o una interleucina (por ejemplo, un factor de crecimiento, citocina o interleucina asociada con la angiogénesis o la vasculogénesis). Dichos factores de crecimiento, citoquinas o interleuquinas pueden incluir, por ejemplo, factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF), factor de crecimiento de fibroblastos básico (bFGF), factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), factor de crecimiento de hepatocitos (HGF), factor de crecimiento similar a la insulina (IGF) o interleuquina-8 (IL-8).

En otra realización específica, el antígeno unido/reconocido por el dominio de unión al antígeno de los CAR descritos en esta invención es una molécula de patrón molecular asociado al daño (DAMP; también conocida como alarmina) liberada por el tejido normal en respuesta al daño localizado causado por un tumor. En determinadas otras realizaciones específicas, por lo tanto, el antígeno es un DAMP, por ejemplo, una proteína de choque térmico, una proteína asociada a la cromatina de alta movilidad del grupo 1 (HMGB1), S100A8 (MRP8, calgranulina A), S100A9 (MRP14, calgranulina B) A amiloide sérico (SAA), o puede ser un ácido desoxirribonucleico, trifosfato de adenosina, ácido úrico o sulfato de heparina.

Dominio transmembrana

Los dominios transmembrana de los CAR descritos en esta invención pueden comprender cualquier molécula conocida en la técnica por funcionar como un dominio transmembrana, por ejemplo, conocida por un experto en la técnica por funcionar en el contexto CAR. Los dominios transmembrana de los CAR descritos en esta invención se pueden obtener o derivar del dominio transmembrana de cualquier proteína transmembrana y pueden incluir la totalidad o una parte de dicho dominio transmembrana.

En una realización específica, el dominio transmembrana del primer y/o el segundo polipéptido de los CAR descritos en esta invención se obtiene o se deriva de un receptor de células T, por ejemplo, el dominio transmembrana del primero y/o el segundo polipéptido de los CAR descritos en esta invención se obtiene o se deriva de la cadena alfa de un receptor de células T, la cadena beta de un receptor de células T, la cadena zeta de un receptor de células T.

En realizaciones específicas, el dominio transmembrana del primer y/o el segundo polipéptido de los CAR descritos en esta invención se obtiene o se deriva de CD28, CD3s, ^cD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 o CD154, un receptor de citoquinas. un receptor de interleucina o un receptor de factor de crecimiento.

Dominio de señalización

El dominio primario de señalización celular de los CAR descritos en esta invención puede comprender cualquier molécula conocida en la técnica que funcione como un dominio de señalización celular, por ejemplo, conocido por un experto en la técnica para funcionar en el contexto de CAR. En una realización específica, el dominio de señalización celular de los CAR descritos en esta invención comprende un dominio de señalización de células T primarias.

En una realización específica, el dominio primario de señalización celular de los CAR descritos en esta invención es o comprende ZAP-70, o una variante de transducción de señales del mismo.

En otra realización específica, el dominio primario de señalización celular de los CAR descritos en esta invención es o comprende un IT^aM. En una realización específica, dicho ITAM es el ITAM de F^cRy , FcRp, CD3Z, CD3y , CD35, CD3s, CD5, CD22, 20 CD79a, CD79b, CD278 (ICOS), FcERI, CD66d, DAP10, o DAP12.

Dominio coestimulador

En ciertas realizaciones, los segundos polipéptidos de los CAR descritos en esta invención comprenden un dominio coestimulador. El o los dominios coestimuladores de los CAR descritos en esta invención pueden comprender cualquier molécula conocida en la técnica por funcionar como un dominio coestimulador, por ejemplo, conocida por un experto en la técnica por funcionar en el contexto de CAR.

En una realización específica, el dominio coestimulador del segundo polipéptido de los CAR descritos en esta invención se obtiene o se deriva de una secuencia polipeptídica coestimuladora CD27, una secuencia polipeptídica coestimuladora CD28, una secuencia polipeptídica coestimuladora OX40 (CD134), una secuencia polipeptídica coestimuladora 4-1BB (CD137), o una secuencia polipeptídica coestimuladora inducible de células T (ICOS).

En otra realización específica, el dominio coestimulador del segundo polipéptido de los CAR descritos en esta invención es o comprende CD28, 4-1 BB (CD137), OX40, un receptor de células NK activador, BTLA, un receptor de ligando Toll, CD2, CD7, CD27, CD30, CD40, CDS, ICAM-L LFA-1 (CD11a/CD18), B7-H3, CDS, ICAM-1, ICOS (CD278), GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8a, CD8p, IL2Rp, IL2Ry, IL7Ra, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Táctil), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CD19a, DAP10, DAP12, un ligando de CD83, una molécula MHC de clase I, una proteína receptora de TNF, una proteína similar a inmunoglobulina, un receptor de citoquinas, una integrina y una molécula de activación linfocítica de señalización.

Otras modificaciones:

En ciertas realizaciones, el primer y/o el segundo polipéptido de los CAR descritos en esta invención comprende además un dominio de dimerización que responde a un agente modulador (es decir, un agente que no sea un compuesto de unión a cereblon).

En ciertas realizaciones, el primer y/o el segundo polipéptido de los CAR descritos en esta invención comprende además un motivo de supervivencia de células T. El motivo de supervivencia de las células T puede ser cualquier secuencia o motivo polipeptídico que facilite la supervivencia del linfocito T después de la estimulación por un antígeno. En determinadas realizaciones, el motivo de supervivencia de las células T es, o se deriva de, CD3, CD28, un dominio de señalización intracelular del receptor de IL-7 (IL-7R), un dominio de señalización intracelular del receptor de IL-12, un dominio de señalización intracelular del receptor de IL-15, un dominio de señalización intracelular del receptor de IL-21, o un dominio de señalización intracelular del receptor del factor de crecimiento p transformante (TGFp).

4.1.2. Modificaciones del polipéptido CAR

En ciertas realizaciones, los primeros y/o los segundos polipéptidos de los CAR proporcionados en esta invención se modifican, por ejemplo, mediante acilación, amidación, glicosilación, metilación, fosforilación, sulfatación, sumoilación, y/o ubiquitilación (u otras modificaciones de proteínas).

En ciertas realizaciones, los primeros y/o los segundos polipéptidos de los CAR proporcionados en esta invención están marcados con un marcador capaz de proporcionar una señal detectable, por ejemplo, un radioisótopo o un compuesto fluorescente.

En determinadas realizaciones, se derivan una o más cadenas laterales del primer y/o segundo polipéptido de los CAR proporcionados en esta invención, por ejemplo, derivación de residuos extremos amino y lisinilo con anhídridos de ácido succínico u otro ácido carboxílico, o derivación con, por ejemplo, imidoésteres tales como picolinimidato de metilo; fosfato de piridoxal; piridoxal; cloroborohidruro; ácido trinitrobencenosulfónico; O-metilisourea; 2,4 pentanodiona; y reacción catalizada por transaminasa con glioxilato. En ciertas realizaciones, los grupos laterales carboxilo, aspartilo o glutamil, pueden modificarse selectivamente por reacción con carbodiimidas (R-N=C=N-R') tales como 1 -ciclohexil-3-(2-morfolinil-(4-etil)carbodiimida o 1 -etil-3-(4-azonia-4,4-dimetilpentil)carbodiimida.

4.1.3. Ácidos Nucleicos

En esta invención se proporcionan ácidos nucleicos que codifican los CAR descritos en esta invención, es decir, ácidos nucleicos que codifican el primer polipéptido y ácidos nucleicos que codifican el segundo polipéptido de los CAR descritos en esta invención. En ciertas realizaciones, un primer polipéptido de un CAR descrito en esta invención está codificado por un primer ácido nucleico (polinucleótido) y el segundo polipéptido de un CAR descrito en esta invención está codificado por un segundo ácido nucleico (polinucleótido). En una realización específica, en esta invención se proporciona un ácido nucleico (polinucleótido) que codifica tanto el primer polipéptido como el segundo polipéptido de un CAR descrito en esta invención.

Ácidos nucleicos útiles en la producción de los CAR descritos en esta invención incluyen ADN, ARN y análogos de ácidos nucleicos. Análogos de ácidos nucleicos se pueden modificar en el resto de base, resto de azúcar o esqueleto de fosfato, y pueden incluir la sustitución de desoxiuridina por desoxitimidina, la sustitución de 5-metil-2'-desoxicitidina o 5-bromo-2'-desoxicitidina por desoxicitidina. Las modificaciones del resto de azúcar pueden incluir la modificación del hidroxilo 2' del azúcar ribosa para formar azúcares 2'-O-metilo o 2'-O-alilo. El esqueleto de desoxirribosa fosfato se puede modificar para producir ácidos morfolino nucleicos, en los que cada resto de base está unido a un anillo morfolino de seis miembros, o ácidos nucleicos peptídicos, en los que el esqueleto de desoxifosfato se reemplaza por un esqueleto de pseudopéptido y las cuatro bases se retienen. Véase, por nejemplo, Summerton y Weller (1997) Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 7:187-195; y Hyrup y col. (1996) Bioorgan. Med. Chain. 4:5-23. Además, el esqueleto de desoxifosfato se puede reemplazar con, por ejemplo, un esqueleto de fósforotioato o fósforoditioato, una fósforamidita o un esqueleto de fosfotriéster de alquilo.

En ciertas realizaciones, los ácidos nucleicos que codifican el polipéptido CAR descritos en esta invención están comprendidos dentro de un vector de ácido nucleico. Por ejemplo, las células de interés, por ejemplo, linfocitos T, pueden transformarse utilizando vectores sintéticos, vectores lentivirales o retrovirales, plásmidos de replicación autónoma, un virus (por ejemplo, un retrovirus, lentivirus, adenovirus o virus del herpes) o similares, que contienen ácido nucleico (polinucleótidos) que codifica el primer y/o segundo polipéptido de los CAR descritos en esta invención. En una realización específica, el vector que comprende el primer y/o el segundo polipéptido de los CAR descritos en esta invención es un vector retroviral. En una realización específica, el vector que comprende el primer y/o el segundo polipéptidos de los CAR descritos en esta invención es un vector lentiviral. Vectores lentivirales adecuados para la transformación de células, por ejemplo, linfocitos T, incluyen, pero no se limitan a, los vectores lentivirales descritos en las Patentes de EE.UU. N25.994.136; 6.165.782; 6.428.953; 7.083.981; y 7.250.299. Vectores de VIH adecuados para la transformación de células, por ejemplo, linfocitos T, incluyen, pero no se limitan a, los vectores descritos en la Patente de EE.UU. N2.5.665.577.

4.1.4. Células

Los CAR proporcionados en esta invención se pueden expresar en células para las que la expresión de CAR es útil, es decir, las células se modifican para comprender un ácido nucleico que codifica CAR proporcionado en esta invención, de modo que, tras la expresión del ácido nucleico en la célula, la célula expresa un CAR descrito en esta invención. Por ejemplo, los CAR descritos en esta invención pueden expresarse en linfocitos T o células asesinas naturales. Las células proporcionadas en esta invención que expresan los CAR descritos en esta invención se denominan "células CAR".

En determinadas realizaciones, en esta invención se proporciona una célula (por ejemplo, un linfocito T o una célula asesina natural) que se ha modificado para expresar un CAR que comprende: (i) un primer polipéptido que comprende un dominio de unión a antígeno, un dominio transmembrana y cereblon o una porción funcional del mismo, que es capaz de unirse a un compuesto de unión a cereblon, y (ii) un segundo polipéptido que comprende un dominio transmembrana, Aiolos o Ikaros o una porción funcional del mismo, que es capaz de unirse a un compuesto de unión a cereblon; y un dominio coestimulador; donde, en presencia de dicho compuesto de unión a cereblon, dicho primer polipéptido. y dicho segundo polipéptido forma un heterodímero.

En una realización específica, los CAR proporcionados en esta invención se expresan en linfocitos T. Los linfocitos T pueden ser linfocitos T sin tratar o linfocitos T restringidos por MHC. En determinadas realizaciones, los linfocitos T son linfocitos infiltrantes de tumores (TIL). En determinadas realizaciones, los linfocitos T se han aislado de una biopsia de tumor o se han expandido a partir de linfocitos T aislados de una biopsia de tumor. En determinadas otras realizaciones, los linfocitos T se han aislado de, o se han expandido a partir de linfocitos T expandidos a partir de sangre periférica, sangre de cordón o linfa.

En una realización específica, las células (por ejemplo, linfocitos T) diseñadas para comprender/expresar un CAR descrito en esta invención es autólogo para un individuo al que se van a administrar las células (porejemplo, linfocitos T) como parte de un procedimiento de tratamiento descrito en esta invención. En otras realizaciones, las células (por ejemplo, linfocitos T) diseñadas para comprender/expresar un CAR descrito en esta invención son alogénicas para un individuo al que se van a administrar las células (porejemplo, linfocitos T). Cuando se utilizan células alogénicas (por ejemplo, linfocitos T) para preparar células CAR, es preferible seleccionar células (por ejemplo, linfocitos T) que reduzcan la posibilidad de enfermedad de injerto contra huésped (GVHD - Graft-Versus-Host Disease) en el individuo. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, los linfocitos T específicos de virus se seleccionan para la preparación de linfocitos T con CAR; se espera que tales linfocitos tengan una capacidad nativa muy reducida para unirse a cualquier antígeno receptor y, por lo tanto, ser activados por él. En ciertas realizaciones, el rechazo de células alogénicas (por ejemplo, linfocitos T) mediado por el receptor puede reducirse mediante la coadministración al huésped de uno o más agentes inmunosupresores, por ejemplo, ciclosporina, tacrolimus, sirolimus, ciclofosfamida o similares.

En una realización, los linfocitos T se obtienen de un individuo, opcionalmente a continuación se expanden y a continuación se transforman con un primer vector que codifica el primer polipéptido de un CAR descrito en esta invención y un segundo vector que codifica el segundo polipéptido de un CAR descrito en esta invención, y a continuación opcionalmente se expanden. Los transformantes dobles pueden seleccionarse usando, por ejemplo, un marcador seleccionable único para cada uno de los vectores.

En otra realización, los linfocitos T se obtienen de un individuo, a continuación opcionalmente se expanden y a continuación se transforman con un polinucleótido que codifica un polipéptido de muerte celular y, opcionalmente, uno o más polinucleótidos que codifican uno o más CAR descritos en esta invención, y, opcionalmente, a continuación se expanden. Las células que contienen el vector se pueden obtener utilizando un marcador seleccionable.

En determinadas realizaciones, los linfocitos T utilizados para generar células CAR proporcionadas en esta invención comprenden proteínas TCR nativas, por ejemplo, TCR-a y TCR-p que son capaces de formar complejos TCR nativos, además de un polipéptido coestimulador artificial (en realizaciones en las que se usa un polipéptido coestimulador), o además del primer polipéptido y el segundo polipéptido (en realizaciones en las que las células CAR comprenden polipéptidos que separan la señalización de unión a antígeno y la señalización coestimuladora). En ciertas otras realizaciones, uno o ambos genes nativos que codifican TCR-a y TCR-p en los linfocitos T se modifican para que no sean funcionales, por ejemplo, una porción o todos se eliminan o se inserta una mutación.

En ciertas realizaciones, los dominios de señalización de un CAR descritos en esta invención se pueden usar para promover la proliferación y expansión de células (por ejemplo, linfocitos T) que comprenden/expresan el CAR. Por ejemplo, los linfocitos T no modificados y los linfocitos T que comprenden un polipéptido que comprende un dominio de señalización de CD3Z y un dominio coestimulador de CD28 pueden expandirse usando anticuerpos contra CD3 y CD28, por ejemplo, anticuerpos unidos a perlas; véase, por ejemplo, Patentes de EE.UU. N°. 5.948.893; 6.534.055; 6.352.694; 6.692.964; 6.887.466; y 6.905.681. De manera similar, se pueden usar anticuerpos contra un motivo de señalización para estimular la proliferación de células (por ejemplo, linfocitos T) que comprenden un CAR descrito en esta invención.

En ciertas realizaciones, las células CAR descritas en esta invención comprenden un "gen suicida" o "interruptor de seguridad" que permite eliminar sustancialmente todas las células CAR cuando se desee. Por ejemplo, los linfocitos CAR, en determinadas realizaciones, pueden comprender un gen de timidina quinasa de HSV (HSV-TK), que provoca la muerte de los linfocitos T al entrar en contacto con ganciclovir. En otra realización, las células CAR comprenden una caspasa inducible, por ejemplo, una caspasa 9 inducible (icaspasa9), por ejemplo, una proteína de fusión entre la caspasa 9 y la proteína de unión a FK506 humana que permite la dimerización usando un fármaco de molécula pequeña específico. Véase Straathof y col., Blood 105(11):4247-4254 (2005).

4.1.5. Procedimientos de Uso

Las células CAR proporcionadas en esta invención, por ejemplo, linfocitos T modificados para comprender/expresar un CAR descrito en esta invención, se puede usar para tratar a un individuo que tiene uno o más tipos de células que se desea que sean la diana de las células, por ejemplo, para ser eliminadas.

En una realización específica, en esta invención se proporciona un CAR de la invención para su uso en procedimientos para matar células diana que expresan un antígeno unido por el dominio de unión a antígeno del CAR, donde dichos procedimientos comprenden (i) poner en contacto dichas células diana con una célula (por ejemplo, una célula T o una célula NK) que comprende/expresa un CAR descrito en esta invención y (ii) poner en contacto dicha célula que expresa CAR con un compuesto de unión a cereblon, donde, en presencia de dicho antígeno y dicho compuesto de unión a cereblon, la célula que expresa CAR se activa. En una realización específica, dicha célula diana es una célula cancerosa, por ejemplo, una célula cancerosa de la sangre o una célula tumoral sólida. En una realización específica, dicho antígeno expresa uno o más de los siguientes antígenos, o un fragmento del mismo, es 4-1BB, 5T4, 8H9, B7-H6, antígeno de adenocarcinoma, a-fetoproteína, antígeno de maduración de células B (BCMA), BAFF, células de linfoma B, antígeno C242, CA9, antígeno carcinoembrionario, CA-125, anhidrasa carbónica 9 (CA-IX), CCR4, CD3, CD4, CD19, CD20, CD22, CD23 (receptor de IgE), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD38, CD40, CD44v6, CD44v7/8, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CD123, CD152, CD171, CD200, CD221, CE7, CEA, C-MET, CNT0888, CTLA-4, DRS, EpCAM, ErbB2, ErbB3/4, EGFR, EGFRvIII, EphA2, EGP2, EGP40, FAP, AchR fetal, fibronectina extra dominio-B, receptor de folato-a, receptor de folato 1, G250/CAIX, GD2, GD3, glicoproteína 75, GPNMB, HER2/neu, HGF, HLA-AI Ma Ge A1, HLA-A2 NY-ES0-1, HMW-MAA, receptor quinasa de factor de dispersión humano, receptor de IGF-1, IGF-I, IgGl, IL-6, IL-13, receptor de IL-13 a2, receptor a de IL-11, receptor de factor de crecimiento similar a la insulina I, integrina a5I31, integrina avI33, cadena ligera Kappa, L1 -CAM, cadena ligera Lambda, Lewis Y, mesotelina, MORAb-009, MS4A1, MUC1, MUC16, mucina CanAg, Nc Am , ácido N-glicolilneuramínico, ligandos NKG2D, NPC-1C, PDGF-R a, PDL192, fosfatidilserina, antígeno de cáncer de próstata específico (PSCA), células de carcinoma prostático, PSMA, PSC1, RANKL, RON, ROR1, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, sp17, TAG72, tenascina C, TGF p2, TGF-I3, TL1A, TRAIL-R1, TRAIL-R2, antígeno tumoral CTAA16.88, V ^eGF-A, receptores de ^vE^gF, VEGFR-1, VEGFR2, TEM1, TEM8 y/o vimentina.

En otra realización específica, en esta invención se proporciona un CAR de la invención para su uso en procedimientos para tratar el cáncer, comprendiendo dichos procedimientos (i) la administración de una población de células CAR descritas en esta invención, por ejemplo, células T o células NK, que comprenden/expresan un CAR descrito en esta invención (por ejemplo, comprenden uno o más ácidos nucleicos que codifican CAR descritos en esta invención o expresa un CAR descrito en esta invención), donde dicho CAR comprende un dominio de unión a antígeno específico para un antígeno canceroso (porejemplo, TSA o TAA) para un sujeto (por ejemplo, un sujeto humano) y (ii) administrar al sujeto una composición que comprende un compuesto de unión a cereblon. En una realización específica, dicha población de células se administra primero al sujeto, seguido de la administración de la composición que comprende un compuesto de unión a cereblon en un período de tiempo específico después de la administración de la población de células, por ejemplo, 30 minutos, 1 hora, 6 horas, 12 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días o 1 semana después de la administración de la población celular. En una realización específica, dicho antígeno unido por dicho CAR es 4-1BB, 5T4, 8H9, B7-H6, antígeno de adenocarcinoma, a-fetoproteína, antígeno de maduración de células B (BCMA), BAFF, células de linfoma B, antígeno C242, CA9, antígeno carcinoembrionario, CA-125, anhidrasa carbónica 9 (CA-IX), CCR4, CD3, CD4, CD19, CD20, CD22, CD23 (receptor de IgE), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD38, CD40, CD44v6, CD44v7/8, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CD123, CD152, CD171, CD200, CD221, CE7, CEA, C-MET, CNT0888, CTLA-4, DRS, EpCAM, ErbB2, ErbB3/4, EGFR, EGFRvIII, EphA2, EGP2, EGP40, FAP, AchR fetal, fibronectina extra dominio-B, receptor de folato-a, receptor de folato 1, G250/CAIX, GD2, GD3, glicoproteína 75, GPNMB, HER2/neu, HGF, ^hL^a-AI MAGE A1, HLA-A2 NY-ES0-1, HMW-MAA, receptor quinasa de factor de dispersión humano, receptor de IGF-1, IGF-I, IgGl, IL-6, IL-13, receptor de IL-13 a2, receptor a de IL-11, receptor de factor de crecimiento similar a la insulina I, integrina a5I31, integrina avI33, cadena ligera Kappa, L1-CAM, cadena ligera Lambda, Lewis Y, mesotelina, MORAb-009, MS4A1, MUC1, MUC16, mucina CanAg, NCAM, ácido N-glicolilneuramínico, ligandos NKG2D, NPC-1C, PDGF-R a, PDL192, fosfatidilserina, antígeno de cáncer de próstata específico (PSCA), células de carcinoma prostático, PSMA, PSC1, RANKL, RON, ROR1, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, sp17, t Ag 72, tenascina C, TGF p2, TGF-I3, TL1A, TRAIL-R1, TRAIL-R2, antígeno tumoral CTAA16.88, VEGF-A, receptores de VEGF, VEGFR-1, VEGFR2, TEM1, TEM8 y/o vimentina.

La eficacia de las células CAR descritas en esta invención en el tratamiento de una enfermedad o trastorno, por ejemplo, en el tratamiento de un individuo que tiene cáncer, puede evaluarse mediante uno o más criterios específicos de la enfermedad o trastorno en particular, conocidos por los expertos en la materia, para ser indicativo del progreso de la enfermedad o trastorno. En general, la administración de células CAR (por ejemplo, linfocitos CAR T) a un individuo que padece una enfermedad/trastorno (porejemplo, cáncer) es efectiva cuando uno o más de dichos criterios se mueve de manera detectable, por ejemplo, significativamente, y pasa de un valor o intervalo de estado de enfermedad hacia un valor o intervalo normal.

Las células CAR descritas en esta invención se pueden formular en cualquier solución farmacéuticamente aceptable, preferiblemente una solución adecuada para el suministro de células vivas, por ejemplo, solución salina (como la solución de Ringer), gelatinas, carbohidratos (porejemplo, lactosa, amilosa, almidón o similares), ésteres de ácidos grasos, hidroximetilcelulosa, polivinilpirrolidona, etc. Dichos preparados se esterilizan preferentemente antes de añadir las células CAR y se pueden mezclar con agentes auxiliares como lubricantes, conservantes, estabilizantes, emulsionantes, sales para influir en la presión osmótica, tampones y colorantes. Vehículos farmacéuticos adecuados para su uso en la formulación de las células son conocidos en la técnica y se describen, por ejemplo, en WO 96/05309.

En ciertas realizaciones, las células CAR (por ejemplo, linfocitos CAR T) descritas en esta invención se formulan en dosis individuales, donde dichas dosis individuales comprenden al menos, como máximo o aproximadamente 1x104, 5x104, 1x105, 5x1051x106, 5x106, 1x107, 5x107, 1x108, 5x108, 1x109, 5x109, 1x1010, 5x1010, o 1x10” células CAR.

En ciertas realizaciones, las células CAR (porejemplo, linfocitos CAR T) descritas en esta invención se formulan para administración intravenosa, intraarterial, parenteral, intramuscular, subcutánea, intratecal o intraocular, o administración dentro de un órgano o tejido particular.

Compuestos de unión a Cereblon

Como se usa en esta invención, el término "compuesto de unión a cereblon" se refiere a una molécula (por ejemplo, una molécula pequeña o proteína/polipéptido (por ejemplo, un anticuerpo)) capaz de unirse a cereblon (o una porción funcional del mismo) y capaz de unirse a una proteína asociada a cereblon (o una porción funcional de la misma), por ejemplo, Aiolos (o una porción funcional de la misma) o Ikaros (o una porción funcional de la misma). En una realización específica, un compuesto de unión a cereblon es capaz de unirse tanto a cereblon (o porción funcional del mismo) como a Aiolos (o porción funcional del mismo), dando como resultado una asociación entre cereblon (o porción funcional del mismo) y Aiolos (o porción funcional del mismo), por ejemplo, la formación de un heterodímero. En una realización específica, un compuesto de unión a cereblon es capaz de unirse tanto a cereblon (o porción funcional del mismo) como a Ikaros (o porción funcional del mismo), dando como resultado una asociación entre cereblon (o porción funcional del mismo) y Ikaros (o porción funcional del mismo), por ejemplo, la formación de un heterodímero.

En una realización específica, el compuesto de unión a cereblon utilizado según los procedimientos descritos en esta invención es pomalidomida (4-amino-2-[(3RS)-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1H-isoindol-1,3(2H)-diona). En otra realización específica, el compuesto de unión a cereblon utilizado según los procedimientos descritos en esta invención es talidomida ((RS)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1 H-isoindol-1,3(2H)-diona). En otra realización específica, el compuesto de unión a cereblon utilizado según los procedimientos descritos en esta invención es lenalidomida (3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihidro-2H-isoindol-2-il)piperidina-2,6-diona). En otra realización específica, el compuesto de unión a cereblon utilizado según los procedimientos descritos en esta invención es 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1-oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona. En otra realización específica, el compuesto de unión a cereblon utilizado según los procedimientos descritos en esta invención es 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil)piperazin-1-il)metil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona. Véase, por ejemplo, la Publicación de Solicitud de Patente de EE. UU. n.° 2014/0162282 para obtener información relacionada con estos compuestos.

Un compuesto de unión a cereblon usado según los procedimientos descritos en esta invención, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo; o una de sus sales, solvatos, hidratos, cocristales, clatratos o polimorfos farmacéuticamente aceptables puede administrarse como una dosis única tal como, por ejemplo, una inyección de bolo único, o comprimidos o píldoras orales; o a lo largo del tiempo, tal como, por ejemplo, infusión continua a lo largo del tiempo o dosis en bolo divididas a lo largo del tiempo.

Los compuestos de unión a cereblon usados según los procedimientos descritos en esta invención pueden formularse para administración intravenosa, intraarterial, parenteral, intramuscular, subcutánea, intratecal o intraocular, o administración dentro de un órgano o tejido particular.

4.2. Polipéptidos de muerte celular artificial

4.2.1. Construcciones de polipéptidos de muerte celular

También se describen en esta invención receptores de muerte celular artificiales dimerizables que comprenden un primer polipéptido que comprende cereblon o una porción funcional del mismo y un segundo polipéptido que comprende una proteína asociada a cereblon o una porción funcional de la misma que, cuando se expresa en una célula, por ejemplo, un linfocito T o célula NK, puede conducir a la muerte de la célula en presencia de un compuesto de unión a cereblon. Cereblon, las proteínas asociadas a cereblon y el compuesto de unión a cereblon se describen en detalle en la Sección 4.1 anterior.

En otra realización específica, en esta invención se proporciona un receptor de muerte celular artificial dimerizable que comprende (a) un primer polipéptido que comprende una proteína transmembrana que comprende un dominio transmembrana y un dominio intracelular que comprende un dominio inductor de apoptosis (o una porción funcional del mismo) y cereblon (o porción funcional del mismo); y (b) un segundo polipéptido que comprende una proteína transmembrana que comprende un dominio transmembrana y un dominio intracelular que comprende un dominio inductor de apoptosis (o porción funcional del mismo) y Aiolos o Ikaros (o porción funcional del mismo).

En otra realización específica, en esta invención se proporciona un receptor de muerte celular artificial dimerizable que comprende (a) un primer polipéptido que comprende una proteína transmembrana que comprende un dominio extracelular que comprende cereblon (o una porción funcional del mismo), un dominio transmembrana y un dominio intracelular que comprende una apoptosis -dominio inductor (o porción funcional del mismo); y (b) un segundo polipéptido que comprende una proteína transmembrana que comprende un dominio transmembrana y un dominio intracelular que comprende un dominio inductor de apoptosis (o porción funcional del mismo) y Aiolos o Ikaros (o porción funcional de los mismos). En otra realización específica, dicho segundo polipéptido comprende una proteína transmembrana que comprende un dominio extracelular que comprende una proteína asociada a cereblon (o una porción funcional de la misma), un dominio transmembrana y un dominio intracelular que comprende un dominio inductor de apoptosis (o una porción funcional del mismo).

El dominio inductor de la apoptosis del polipéptido de muerte celular puede ser, por ejemplo, cualquier proteína o porción de la misma que cuando se dimeriza inicia una señal inductora de la apoptosis en la célula. En ciertas realizaciones, el dominio inductor de apoptosis es cualquier caspasa que se homodimeriza. En una realización específica, el dominio inductor de apoptosis es o comprende una caspasa, por ejemplo, caspasa 9, caspasa 8 o caspasa 3 (porejemplo, caspasa 9 humana, caspasa 8, o caspasa 3). Las secuencias de aminoácidos de las caspasas humanas, incluyendo la caspasa 9 humana, la caspasa 8 humana y la caspasa 3 humana, son bien conocidas en la técnica. Por ejemplo, a la caspasa 3 humana se le ha asignado la NCBI Gene ID: 836; a la caspasa 8 humana se le ha asignado la NCBI Gene ID: 841; y a la caspasa humana 9 se le ha asignado la NCBI Gene ID: 842. En determinadas realizaciones, el dominio intracelular que es, o comprende, el dominio de caspasa, y el dominio extracelular, están unidos por un tallo de CD8a o tallo de CD8p, al menos parte del cual puede funcionar como un dominio transmembrana.

4.2.2. Ácidos Nucleicos

En esta invención se proporcionan ácidos nucleicos que codifican los receptores de muerte celular artificiales dimerizables descritos en esta invención, es decir, ácidos nucleicos que codifican el primer polipéptido y ácidos nucleicos que codifican el segundo polipéptido de los receptores de muerte celular artificiales dimerizables descritos en esta invención. En ciertas realizaciones, un primer polipéptido de un receptor de muerte celular artificial dimerizable descrito en esta invención está codificado por un primer ácido nucleico (polinucleótido) y el segundo polipéptido de un receptor de muerte celular artificial dimerizable descrito en esta invención está codificado por un segundo ácido nucleico (polinucleótido). En una realización específica, en esta invención se proporciona un ácido nucleico (polinucleótido) que codifica tanto el primer polipéptido como el segundo polipéptido de un receptor de muerte celular artificial dimerizable descrito en esta invención.

Ácidos nucleicos útiles en la producción de los receptores de muerte celular artificiales descritos en esta invención incluyen ADN, ARN y análogos de ácidos nucleicos. Análogos de ácidos nucleicos se pueden modificar en el resto de base, resto de azúcar o esqueleto de fosfato, y pueden incluir la sustitución de desoxiuridina por desoxitimidina, la sustitución de 5-metil-2'-desoxicitidina o 5-bromo-2'-desoxicitidina por desoxicitidina. Las modificaciones del resto de azúcar pueden incluir la modificación del hidroxilo 2' del azúcar ribosa para formar azúcares 2'-O-metilo o 2'-O-alilo. El esqueleto de desoxirribosa fosfato se puede modificar para producir ácidos morfolino nucleicos, en los que cada resto de base está unido a un anillo morfolino de seis miembros, o ácidos nucleicos peptídicos, en los que el esqueleto de desoxifosfato se reemplaza por un esqueleto de pseudopéptido y las cuatro bases se retienen. Véase, por ejemplo, Summerton y Weller (1997) Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 7:187-195; y Hyrup y col. (1996) Bioorgan. Med. Chain.

4:5-23. Además, el esqueleto de desoxifosfato se puede reemplazar con, por ejemplo, un esqueleto de fósforotioato o fósforoditioato, una fósforamidita o un esqueleto de fosfotriéster de alquilo.

En ciertas realizaciones, los ácidos nucleicos que codifican receptores de muerte celular artificial descritos en esta invención están comprendidos dentro de un vector de ácido nucleico. Por ejemplo, las células de interés, por ejemplo, linfocitos T, pueden transformarse utilizando vectores sintéticos, vectores lentivirales o retrovirales, plásmidos de replicación autónoma, un virus (por ejemplo, un retrovirus, lentivirus, adenovirus o virus del herpes) o similares, que contienen ácido nucleico (polinucleótidos) que codifica el primer y/o segundo polipéptido de los receptores de muerte celular artificiales descritos en esta invención. En una realización específica, el vector que comprende el primer y/o segundo polipéptido de los receptores de muerte celular artificiales descritos en esta invención es un vector retroviral. En otra realización específica, el vector que comprende el primer y/o segundo polipéptido de los receptores de muerte celular artificiales descritos en esta invención es un vector lentiviral. Vectores lentivirales adecuados para la transformación de células, por ejemplo, linfocitos T, incluyen, pero no se limitan a, los vectores lentivirales descritos en las Patentes de EE.UU. N25.994.136; 6.165.782; 6.428.953; 7.083.981; y 7.250.299. Vectores de VIH adecuados para la transformación de células, por ejemplo, linfocitos T, incluyen, pero no se limitan a, los vectores descritos en la Patente de EE.UU. N2.5.665.577.

En ciertas realizaciones, los ácidos nucleicos que codifican el receptor de muerte celular artificial descritos en esta invención están unidos operativamente a un promotor. En una realización específica, dicho promotor es un promotor específico de células T, un promotor específico de células asesinas naturales (NK), un promotor inducible que funciona dentro de las células T o células NK, o un promotor constitutivo.

4.2.3. Células

Los receptores de muerte celular artificiales proporcionados en esta invención pueden expresarse en células para las que la expresión es útil, es decir, las células se modifican para comprender un ácido nucleico que codifica el receptor de muerte celular artificial proporcionado en esta invención, de modo que, tras la expresión del ácido nucleico en la célula, la célula expresa un receptor de muerte celular artificial descrito en esta invención. Por ejemplo, los receptores de muerte celular artificiales descritos en esta invención pueden expresarse en linfocitos T o células asesinas naturales. Las células proporcionadas en esta invención que expresan los receptores de muerte celular artificiales descritos en esta invención se denominan "células receptoras de muerte celular".

En una realización específica, los receptores de muerte celular artificiales proporcionados en esta invención se expresan en linfocitos T. Los linfocitos T pueden ser linfocitos T sin tratar o linfocitos T restringidos por MHC. En determinadas realizaciones, los linfocitos T son linfocitos infiltrantes de tumores (TIL). En determinadas realizaciones, los linfocitos T se han aislado de una biopsia de tumor o se han expandido a partir de linfocitos T aislados de una biopsia de tumor. En determinadas otras realizaciones, los linfocitos T se han aislado de, o se han expandido a partir de linfocitos T expandidos a partir de sangre periférica, sangre de cordón o linfa.

En una realización específica, las células receptoras de muerte celular descritas en esta invención son autólogas de un individuo al que se administrarán las células (por ejemplo, linfocitos T) como parte de un procedimiento de tratamiento descrito en esta invención. En otras realizaciones, las células receptoras de muerte celular descritas en esta invención son alogénicas para un individuo al que se van a administrar las células (por ejemplo, linfocitos T). Cuando se utilizan células alogénicas (por ejemplo, linfocitos T) para preparar células que comprenden/expresan un receptor de muerte celular artificial, es preferible seleccionar células (por ejemplo, linfocitos T) que reducirán la posibilidad de enfermedad de injerto contra huésped (EICH) en el individuo. Véase Sección 4.1.

En una realización, los linfocitos T se obtienen de un individuo, a continuación se expanden opcionalmente y a continuación se transforman con un primer vector que codifica el primer polipéptido de un receptor de muerte celular artificial descrito en esta invención y un segundo vector que codifica el segundo polipéptido de un receptor de muerte celular artificial descrito en esta invención, y opcionalmente a continuación ampliado. Los transformantes dobles pueden seleccionarse usando, por ejemplo, un marcador seleccionable único para cada uno de los vectores.

En otra realización, los linfocitos T se obtienen de un individuo, opcionalmente a continuación se expanden y a continuación se transforman con un vector que codifica el primer polipéptido y el segundo polipéptido de un receptor de muerte celular artificial descrito en esta invención y opcionalmente a continuación se expanden. Las células que contienen el vector se pueden obtener utilizando un marcador seleccionable.

En ciertas realizaciones, los linfocitos T utilizados para generar células receptoras de muerte celular proporcionadas en esta invención comprenden proteínas TCR nativas, por ejemplo, TCR-a y TCR-p que son capaces de formar complejos TCR nativos, además de un polipéptido coestimulador artificial (en realizaciones en las que se usa un polipéptido coestimulador), o además del primer polipéptido y el segundo polipéptido (en realizaciones en las que las células comprenden polipéptidos que separan la señalización de unión al antígeno y la señalización coestimuladora). En ciertas otras realizaciones, uno o ambos genes nativos que codifican TCR-a y TCR-p en los linfocitos T se modifican para que no sean funcionales, por ejemplo, una porción o todos se eliminan o se inserta una mutación.

Las células receptoras de muerte celular proporcionadas en esta invención, por ejemplo, células T o células NK que comprenden uno o más ácidos nucleicos que codifican un receptor de muerte celular artificial dimerizable descritos en esta invención o que expresan un receptor de muerte celular artificial dimerizable descrito en esta invención (es decir, que expresan el primero y segundo polipéptido de un receptor de muerte celular artificial dimerizable descrito en esta invención) puede inducirse a sufrir apoptosis cuando se ponen en contacto con un compuesto de unión a cereblon, por ejemplo, cuando se ponen en contacto con pomalidomida, talidomida, lenalidomida, 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetilbenciloxi)-1 -oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona, o 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil)piperazin-1 -il)metil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

Las células receptoras de muerte celular proporcionadas en esta invención se pueden modificar para expresar un CAR, por ejemplo, un CAR que comprende un dominio de unión a antígeno específico de tumor. Los CAR se pueden seleccionar de entre, por ejemplo, CAR de primera generación (en los que el único dominio de señalización es CD3Z), CAR de segunda generación (que comprenden dominios de señalización de CD3Z y dominios coestimuladores de CD28) y CAR de tercera generación (que comprenden dominios de señalización de CD3Z y dominios coestimuladores de CD28 y otra proteína como 4-1BB). En una realización específica, el CAR de las células receptoras de muerte celular proporcionadas en esta invención comprende dos o más dominios dirigidos a antígenos extracelulares. En otra realización específica, dicho CAR de las células receptoras de muerte celular proporcionado en esta invención comprende un dominio extracelular que se une a una interleucina que es un regulador negativo de la actividad de las células T, y un dominio intracelular de un receptor de interleucina que es un regulador positivo de la actividad de las células T. En otra realización específica, se induce la apoptosis en una célula que comprende un receptor de muerte celular artificial y un CAR poniendo en contacto la célula con un compuesto de unión a cereblon, por ejemplo, pomalidomida, talidomida, lenalidomida, 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1 -oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona, o 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofenil)piperazin-1 -il)metil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

4.2.4. Procedimientos de Uso

Las células, por ejemplo, linfocitos T, proporcionadas en esta invención que comprenden un receptor de muerte celular artificial proporcionado en esta invención y un CAR, se pueden usar para tratar a un individuo que tiene uno o más tipos de células que se desea que sean la diana de las células descritas en esta invención, por ejemplo, uno o más tipos de células a destruir, donde la actividad de las células receptoras de muerte celular puede controlarse mediante la administración de un compuesto de unión a cereblon. En particular, las células receptoras de muerte celular se pueden usar en el tratamiento como resultado de su componente CAR, y se pueden destruir cuando se desee como resultado de su componente receptor de muerte celular, donde la destrucción se logra poniendo en contacto las células receptoras de muerte celular con un compuesto de unión a cereblon.

En una realización específica, el procedimiento es para la destrucción controlada de células diana, donde dicho procedimiento comprende (i) poner en contacto dichas células diana con una célula receptora de muerte celular (por ejemplo, una célula T o una célula NK) que comprende un receptor de muerte celular artificial proporcionado en esta invención y un CAR y, cuando se justifique, (ii) poner en contacto dicha célula receptora de muerte celular con un compuesto de unión a cereblon, donde, en presencia de dicho compuesto de unión a cereblon, destruye la célula receptora de muerte celular, por ejemplo, la célula receptora de muerte celular sufre apoptosis. En una realización específica, dicha célula diana es una célula cancerosa, por ejemplo, una célula cancerosa de la sangre o una célula tumoral sólida. En una realización específica, dicho antígeno unido por dicho CAR es 4-1BB, 5T4, 8H9, B7-H6, antígeno de adenocarcinoma, a-fetoproteína, antígeno de maduración de células B (BCMA), BAFF, células de linfoma B, antígeno C242, CA9, antígeno carcinoembrionario, CA-125, anhidrasa carbónica 9 (Ca -IX), CCR4, CD3, CD4, CD19, CD20, CD22, CD23 (receptor de IgE), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD38, CD40, CD44v6, CD44v7/8, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CD123, CD152, CD171, CD200, CD221, CE7, CEA, C-MET, CNT0888, CTLA-4, DRS, EpCAM, ErbB2, ErbB3/4, EGFR, EGFRvIII, EphA2, EGP2, EGP40, FAP, AchR fetal, fibronectina extra dominio-B, receptor de folato-a, receptor de folato 1, G250/CAIX, G^d2, GD3, glicoproteína 75, GPNMB, HER2/neu, HGF, HLA-AI Ma Ge A1, HLA-A2 NY-ES0-1, HMW-MAA, receptor quinasa de factor de dispersión humano, receptor de IGF-1, IGF-I, IgGl, IL-6, IL-13, receptor de IL-13 a2, receptor a de IL-11, receptor de factor de crecimiento similar a la insulina I, integrina a5I31, integrina avI33, cadena ligera Kappa, L1 -CAM, cadena ligera Lambda, Lewis Y, mesotelina, MORAb-009, MS4A1, MUC1, MUC16, mucina CanAg, N^cA^m, ácido N-glicolilneuramínico, ligandos NKG2D, NPC-1C, PDGF-R a, PDL192, fosfatidilserina, antígeno de cáncer de próstata específico (PSCA), células de carcinoma prostático, PSMA, PSC1, RANKL, RON, ROR1, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, sp17, TAG72, tenascina C, TGF p2, TGF-I3, TL1A, TRAIL-R1, TRAIL-R2, antígeno tumoral CTAA16.88, VEGF-A, receptores de VEGF, VEGFR-1, VEGFR2, TEMI, TEM8 y/o vimentina.

En otra realización específica, el procedimiento trata el cáncer, donde dicho procedimiento comprende (i) la administración de una población de células receptoras de muerte celular (por ejemplo, células T o células NK) que comprende un receptor de muerte celular artificial proporcionado en esta invención y un CAR, donde dicho CAR comprende un dominio de unión a antígeno específico para un antígeno de cáncer (por ejemplo, TSA o TAA) para un sujeto diagnosticado con cáncer (por ejemplo, un sujeto humano) y, cuando se justifique, (ii) poner en contacto con dicha célula receptora de muerte celular con un compuesto de unión a cereblon, donde, en presencia de dicho compuesto de unión a cereblon, la célula receptora de muerte celular sufre apoptosis. En una realización específica, dicha población de células se administra primero al sujeto, seguido de la administración de la composición que comprende un compuesto de unión a cereblon en un período de tiempo específico después de la administración de la población de células, por ejemplo, 30 minutos, 1 hora, 6 horas, 12 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días o 1 semana después de la administración de la población celular. En otra realización específica, dicha composición que comprende un compuesto de unión a cereblon se administra primero al sujeto, seguido de la administración de dicha población de células en un período de tiempo específico después de la administración de dicha composición que comprende un compuesto de unión a cereblon, por ejemplo, 30 minutos, 1 hora, 6 horas, 12 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días o 1 semana después de la administración de dicha composición que comprende un compuesto de unión a cereblon.

En una realización específica, dicho antígeno unido por dicho CAR es 4-1BB, 5T4, 8H9, B7-H6, antígeno de adenocarcinoma, a-fetoproteína, antígeno de maduración de células B (BCMA), BAFF, células de linfoma B, antígeno C242, CA9, antígeno carcinoembrionario, CA-125, anhidrasa carbónica 9 (c A-IX), CCR4, CD3, CD4, CD19, CD20, CD22, CD23 (receptor de IgE), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD38, CD40, CD44v6, CD44v7/8, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CD123, CD152, CD171, CD200, CD221, CE7, CEA, C-MET, CNT0888, CTLA-4, DRS, EpCAM, ErbB2, ErbB3/4, EGFR, E^gF^rvIII, EphA2, EGP2, EGP40, FAP, AchR fetal, fibronectina extra dominio-B, receptor de folato-a, receptor de folato 1, G250/CAIX, GD2, GD3, glicoproteína 75, GPNMB, HER2/neu, HGF, HLA-AI MAGE A1, HLA-A2 NY-ES0-1, HMW-MAA, receptor quinasa de factor de dispersión humano, receptor de IGF-1, IGF-I, IgGl, IL-6, IL-13, receptor de IL-13 a2, receptor a de IL-11, receptor de factor de crecimiento similar a la insulina I, integrina a5I31, integrina avI33, cadena ligera Kappa, L1-CAM, cadena ligera Lambda, Lewis Y, mesotelina, MORAb-009, MS4A1, MUC1, MUC16, mucina CanAg, N^cA^m, ácido N-glicolilneuramínico, ligandos NKG2D, NPC-1C, PDGF-R a, PDL192, fosfatidilserina, antígeno de cáncer de próstata específico (PSCA), células de carcinoma prostático, PSMA, PSC1, RANKL, RON, ROR1, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, sp17, TAG72, tenascina C, TGF p2, TGF-I3, TL1A, TRAIL-R1, TRAIL-R2, antígeno tumoral CTAA16.88, VEGF-A, receptores de VEGF, VEGFR-1, VEGFR2, TEM1, TEM8 y/o vimentina.

5. Ejemplo

Este ejemplo describe la generación y el uso de linfocitos T modificados que comprenden un receptor de antígeno quimérico (CAR), donde CAR comprende un primer polipéptido que comprende un dominio de unión a antígeno específico para un antígeno específico de tumor, un dominio coestimulador y cereblon, y un segundo polipéptido que comprende una proteína asociada a cereblon (por ejemplo, Aiolos) y un dominio primario de señalización celular con motivo de activación basado en tirosina del inmunorreceptor CD3Z (ITAM).

Construcciones de CAR

El CAR representado en la Figura 1 se prepara utilizando una metodología estándar.

Se construye un primer polinucleótido que codifica un primer polipéptido, una proteína de unión a antígeno tumoral (por ejemplo, scFv anti-HER2, scFv anti-PSCA o scFv anti-BCMA) basada en CAR de cereblon (CRBN), es decir, "primer polipéptido", que contiene un scFv de un anticuerpo anti-antígeno tumoral, un dominio transmembrana (TM) de CD28, un dominio coestimulador de CD28 y un CRBN. El primer polinucleótido se clona en un vector de lentivirus.

Se construye un segundo polinucleótido que codifica un segundo polipéptido, un CAR de ITAM basado en Aiolos, es decir, "segundo polipéptido", que contiene un dominio transmembrana (TM) de CD28, un Aiolos y un dominio ITAM de CD3Z. El segundo polinucleótido se clona en un vector de lentivirus.

Expresión de construcciones de CAR en células T

Se examina la expresión de las construcciones de CAR descritas anteriormente por las células T. Para aislar las células T, las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se separan de la sangre de un donante sano (por ejemplo, se separan las PBMC de las capas leucocitarias derivadas de sangre completa mediante centrifugación en gradiente de densidad Ficoll-Paque Plus™ (GE Healthcare, Piscataway, NJ)). Las células Pan T se seleccionan negativamente de entre las PBMC (por ejemplo, mediante el uso del kit de aislamiento Pan T II (Miltenyi Biotec, Cambridge, MA), según las instrucciones del fabricante).

Los plásmidos que comprenden las construcciones que codifican el primer polipéptido y el segundo polipéptido CAR se introducen (por ejemplo, por electroporación) en células T primarias y las células T sometidas a electroporación se cultivan a continuación en medios (por ejemplo, RPMI-10) durante la noche. Se detecta la expresión del dominio de unión al antígeno de CAR, lo que confirma la transfección estable de células T mediante la construcción que codifica el primer polipéptido. Por ejemplo, las células T se recogen 24 horas después de la electroporación y se tiñen para detectar el dominio de unión al antígeno del primer polipéptido (por ejemplo, para la detección de anti-HER2, se tiñen con la proteína quimera IgG-Fc humana HER2, seguido de una tinción con un anticuerpo IgG-Fc anti-humano conjugado con APC). Las células teñidas se analizan mediante citometría de flujo. Se confirma la transfección estable de células T por la construcción que codifica el segundo polipéptido. Por ejemplo, las células T se cultivan en medios (por ejemplo, RPMI-10) suplementados con pomalidomida o lenalidomida durante la noche. Las células T se recogen 24 horas después de la electroporación y se lisan, seguido de inmunoprecipitación con un agente que puede unirse al dominio de unión a antígeno del primer polipéptido (por ejemplo, para la detección de anti-HER2, una proteína quimérica IgG-Fc humana HER2). Los inmunoprecipitados se tratan con un agente que puede detectar y marcar el dominio Aiolos o CD3 Z del segundo polipéptido (por ejemplo, un anticuerpo Aiolos anti-humano o un anticuerpo CD3 Z anti-humano). Los inmunoprecipitados marcados se analizan mediante ELISA y se detecta el segundo polipéptido, lo que confirma la transfección estable de células T mediante la construcción que codifica el segundo polipéptido.

Uso de pomalidomida o lenalidomida para regular la actividad de las células CAR T en pacientes con cáncer

El primer polipéptido y el segundo polipéptido CAR en una célula T se activan tras la exposición a pomalidomida o lenalidomida y un antígeno tumoral. La pomalidomida y la lenalidomida son bien toleradas en humanos.

Evaluación funcional del primer y segundo polipéptido CAR

Se realiza la evaluación funcional del primer y segundo polipéptido en las células T (por ejemplo, evaluación funcional de un HER2-CAR; véase más adelante). Los linfocitos T se transfectan de forma estable con el primer y segundo polipéptido y se estimulan con la proteína quimera Fc de antígeno tumoral inmovilizada en ausencia y presencia de pomalidomida o lenalidomida. Como control positivo para la coestimulación de CD28, se genera otra construcción, que es idéntica a la construcción de CAR designada como el primer polipéptido, con la excepción de la inclusión de un dominio intracelular CD3Z ITAM y la exclusión del cereblon. Como controles negativos, son realizadas tranfecciones simuladas del primer polipéptido (es decir, solo se transfecta el segundo polipéptido), del segundo polipéptido (es decir, solo se transfecta el primer polipéptido) y tanto del primer como del segundo polipéptido (es decir, ni el primero ni el segundo polipéptido se transfecta).

Para evaluar la estimulación de las células T, se examina la expresión de los marcadores de activación de células T CD69 y CD71 48 horas después de la estimulación mediante citometría de flujo y/o ELISA. La regulación al alza de la expresión de CD69 y CD71 indica estimulación de las células T. Las células T que han sido transfectadas con las construcciones que codifican los polipéptidos primero y segundo y las construcciones que codifican los polipéptidos de control positivo y negativo se analizan para determinar la expresión de CD69 y CD71. La regulación al alza de la expresión de CD69 y CD71 en células T transfectadas con las construcciones que codifican los polipéptidos primero y segundo en relación con la expresión de CD69 y CD71 observada en las células de control negativas indica la estimulación de las células T transfectadas con construcciones que codifican los polipéptidos primero y segundo.

Tratamiento del cáncer de mama

Una persona presenta cáncer de mama en estadio 3 que se ha propagado a al menos un ganglio linfático regional. Después de la cirugía para eliminar el tejido canceroso, al individuo se le administran entre 109 y 1010 linfocitos T modificados que comprenden un primer y segundo receptor quimérico (como los polipéptidos primero y segundo descritos anteriormente), en 200 mL de solución salina por infusión intravenosa durante 30 minutos. El primer receptor quimérico comprende una región de unión a antígeno extracelular que se une a HER2, un dominio transmembrana, un dominio coestimulador intracelular de CD28 y un dominio de cereblon. El segundo receptor quimérico comprende un dominio transmembrana, una proteína asociada a cereblon (por ejemplo, un Aiolos) y un dominio de transfección de señal derivado de CD3Z.

Al individuo se le administra pomalidomida o lenalidomida en un período de tiempo específico después de la administración de los linfocitos T modificados que comprenden el primer y segundo receptor quimérico, por ejemplo, 30 minutos, 1 hora, 6 horas, 12 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días o 1 semana después de la administración de la población celular.

Alternativamente, al individuo se le administra primero pomalidomida o lenalidomida, seguido de la administración de dichos linfocitos T modificados que comprenden el primer y segundo receptor quimérico en un período de tiempo específico después de la administración de pomalidomida o lenalidomida, por ejemplo, 30 minutos, 1 hora, 6 horas, 12 horas, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días o 1 semana después de la administración de pomalidomida o lenalidomida.

Se evalúa al individuo para detectar cáncer de mama en el tejido mamario restante y la diseminación a otros ganglios linfáticos, 30, 60, 90 y 180 días después de la administración.

Tratamiento de cáncer de próstata

Un individuo presenta cáncer de próstata en etapa T2, sin diseminación a los ganglios linfáticos regionales u otros (N0, M0). Se determina que el grado histológico es G2. Globalmente, se determina que el individuo tiene cáncer de próstata en etapa II. Al individuo se le administran entre 109 y 1010 linfocitos T modificados que comprenden los receptores quiméricos primero y segundo (como los polipéptidos primero y segundo descritos anteriormente), en 200 mL de solución salina mediante infusión intravenosa durante 30 minutos. El primer receptor quimérico comprende una región de unión a antígeno extracelular que se une a PSCA, un dominio transmembrana, dominios coestimuladores intracelulares CD28 y un dominio cereblon. El segundo receptor quimérico comprende un dominio transmembrana, una proteína asociada a cereblon (por ejemplo, un Aiolos) y un dominio de transfección de señal derivado de CD3Z.

El individuo se vuelve a evaluar para determinar la etapa del cáncer de próstata y la diseminación a los ganglios linfáticos, y se realiza la histología del tejido prostático biopsiado, a los 30, 60 y 90 días después de la administración.

Tratamiento del mieloma múltiple

Una persona se presenta con mieloma múltiple en etapa III (según el Sistema internacional de estadificación o el Sistema Durie-Salmon) que ha sido tratado previamente con al menos un curso de terapia, por ejemplo, lenalidomida o pomalidomida. Al individuo se le administran entre 108 y 1010 linfocitos T modificados que comprenden los receptores quiméricos primero y segundo (como los polipéptidos primero y segundo descritos anteriormente), en 200 mL de solución salina mediante infusión intravenosa durante 30 minutos. El primer receptor quimérico comprende una región de unión a antígeno extracelular que se une a BCMA, un dominio transmembrana, dominios coestimuladores intracelulares CD28 y un dominio cereblon. El segundo receptor quimérico comprende un dominio transmembrana, una proteína asociada a cereblon (por ejemplo, un Aiolos) y un dominio de transfección de señal derivado de CD3Z.

Se vuelve a evaluar al individuo para la etapa de mieloma múltiple a los 30, 60 y 90 días después de la administración.

Equivalentes

El alcance de la presente divulgación no debe limitarse a las realizaciones específicas descritas en esta invención. De hecho, varias modificaciones del tema proporcionado en esta invención, además de las descritas, resultarán evidentes para los expertos en la técnica a partir de la descripción anterior.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un receptor de antígeno quimérico (CAR) que comprende:

2. El CAR de la reivindicación 1, donde dicho primer polipéptido comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C: dicho dominio de unión a antígeno, dicho dominio transmembrana, dicho cereblon o porción funcional del mismo y dicho dominio primario de señalización celular; y dicho segundo polipéptido comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C: dicho dominio transmembrana, dicho Aiolos o porción funcional del mismo o dicho Ikaros o porción funcional del mismo, y dicho dominio coestimulador.

3. El CAR de la reivindicación 1, donde dicho primer polipéptido comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C: dicho dominio de unión a antígeno, dicho cereblon o porción funcional del mismo, dicho dominio transmembrana y dicho dominio primario de señalización celular; y dicho segundo polipéptido comprende, en orden desde el extremo N hasta el extremo C: dicho Aiolos o porción funcional del mismo o dicho Ikaros o porción funcional del mismo, dicho dominio transmembrana y dicho dominio coestimulador.

4. El CAR de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde dicho dominio primario de señalización celular es CD3Z.

5. El CAR de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde dicho dominio primario de señalización celular es o comprende un motivo de activación basado en tirosina de inmunorreceptor (ITAM).

6. El CAR de la reivindicación 5, donde dicho ITAM es un dominio de señalización de uno o más de F^cRy , FcRp, CD3Z, CD3y , CD35, CD3e , CD5, CD22, CD20, CD79a, CD79b, CD278 (ICOS), FcERI, CD66d, DAP10 y DAP12.

7. El CAR de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde dicho dominio coestimulador comprende un dominio de señalización funcional de uno o más de: CD28, 4-1BB (CD137), OX40, un receptor de células NK activador, BTLA, un receptor de ligando Toll, CD2, CD7, CD27, CD30, CD40, CDS, Ic Am -L, LfA-1 (CD11a/CD18), B7-H3, CDS, ICAM-1, ICOS (CD278), GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8a, CD8p, IL2Rp, IL2Ry , IL7Ra, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (táctil), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CD19a, DAP10, DAP12, un ligando de CD83, una molécula MHC de clase I, una proteína receptora de TNF, una proteína similar a inmunoglobulina, un receptor de citoquinas, una integrina y una molécula de activación linfocítica de señalización.

8. El CAR de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, donde dicho dominio transmembrana es un dominio transmembrana de: cadena alfa del receptor de células T, cadena beta del receptor de células T, cadena zeta del receptor de células T, CD28, CD3e , CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 o CD154.

9. El CAR de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, donde dicho dominio de unión a antígeno es un receptor para dicho antígeno.

10. El CAR de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, donde dicho dominio de unión a antígeno es un anticuerpo o fragmento de unión del mismo que se une a dicho antígeno.

11. El CAR de la reivindicación 10, donde dicho anticuerpo o fragmento de unión del mismo es un fragmento Fv de cadena simple (scFv).

12. El CAR de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, donde dicho antígeno es un antígeno asociado a tumor (TAA) o un antígeno específico de tumor (TSA).

13. El CAR de la reivindicación 12, donde dicho TAA o TSA es uno o más de 4-1BB, 5T4, 8H9, B7-H6, antígeno de adenocarcinoma, a-fetoproteína, antígeno de maduración de células B (BCMA), BAFF, células de linfoma B, antígeno C242, CA9, antígeno carcinoembrionario, CA-125, anhidrasa carbónica 9 (Ca -IX), CCR4, CD3, CD4, CD19, CD20, CD22, CD23 (receptor de IgE), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD38, CD40, CD44v6, CD44v7/8, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CD123, CD152, CD171, CD200, CD221, CE7, CEA, C-MET, CNT0888, CTLA-4, DRS, EpCAM, ErbB2, ErbB3/4, EGFR, EGFRvIII, EphA2, EGP2, EGP40, FAP, AchR fetal, fibronectina extra dominio-B, receptor de folato-a, receptor de folato 1, G250/CAIX, Gd 2, GD3, glicoproteína 75, GPNMB, HER2/neu, HGF, HLA-AI M^aG^eA1, HLA-A2 NY-ES0-1, HMW-MAA, receptor quinasa de factor de dispersión humano, receptor de IGF-1, IGF-I, IgGl, IL-6, IL-13, receptor de IL-13 a2, receptor a de IL-11, receptor de factor de crecimiento similar a la insulina I, integrina a5I31, integrina avI33, cadena ligera Kappa, L1 -CAM, cadena ligera Lambda, Lewis Y, mesotelina, MORAb-009, MS4A1, MUC1, MUC16, mucina CanAg, Nc Am , ácido N-glicolilneuramínico, ligandos NKG2D, NPC-1C, PDGF-R a, PDL192, fosfatidilserina, antígeno de cáncer de próstata específico (PSCA), células de carcinoma prostático, PSMA, PSC1, RANKL, RON, ROR1, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, sp17, TAG72, tenascina C, TGF p2, TGF-I3, TL1A, TRAIL-R1, TRAIL-R2, antígeno tumoral CTAA16.88, V^eGF-A, receptores de ^vE^gF, VEGFR-1, VEGFR2, TEM1, TEM8 y vimentina.

14. El CAR de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, donde dicho primer polipéptido y dicho segundo polipéptido se expresan dentro de una célula T o una célula NK y se heterodimerizan, el CAR transmite (i) una señal de activación primaria o (ii) una señal de activación primaria y una señal coestimuladora; donde la señal de activación primaria o la señal de activación primaria y la señal coestimuladora son capaces de activar dicha célula T o célula NK.

15. El CAR de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, donde dicho compuesto de unión a cereblon es talidomida ((RS)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1 H-isoindol-1,3(2H)-diona), lenalidomida (3-(4-amino-1 -oxo-1,3-dihidro-2H-isoindol-2-il)piperidina-2,6-diona), pomalidomida (4-amino-2-[(3fíS)-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1 H-isoindol-1,3(2H)-diona), 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1 -oxo-1,3-dihidro-Isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona; o 3-(4-((4-((4-(2,4-difluorofeni¡)piperazin-1-il)metil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.