JP2019529562A - 血液癌治療のためのｈｄａｃ阻害剤およびプロテアソーム抑制剤または免疫調節性薬物を含む薬学的調合物 - Google Patents

Abstract

本発明は、化学式１のヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、プロテアソーム抑制剤または免疫調節性薬物およびステロイド系抗ガン剤を共に含む血液癌治療用薬学的調合物に関するものである。本発明の薬学的調合物は、化学式１の化合物およびその薬学的に許容可能な塩、プロテアソーム抑制剤または免疫調節性薬物およびステロイド系抗ガン剤の複合的な癌に対する阻害機序によって従来ＨＤＡＣ阻害剤の問題点である毒性が低減しながらも薬理効果は同等な水準で現れることによって多発性骨髄腫のような血液癌の治療に有用に使用できる。【選択図】図１ａ

Description

本発明は、血液癌、より詳しくは、多発性骨髄腫、特に、従来の療法に対して耐性である血液癌治療のための薬学的調合物に関するものであって、具体的には、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、免疫調節性薬物およびステロイド系抗ガン剤を共に含む骨髄腫治療用薬学的調合物に関するものである。

血液癌のうちの骨髄腫（ｍｙｅｌｏｍａ）は、通常骨髄で発見される類型の細胞から構成された腫瘍を称す。さらに、多発性骨髄腫（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ、ＭＭ）は骨の痛み、病的骨折、高カルシウム血症および正球性正色素性貧血を誘発する広く広がっている骨溶解性病変に関連する、多発性骨髄腫瘍病巣およびＭ成分（モノクローナルイムノグロブリン断片）の分泌を特徴とする形質細胞の播種性悪性新生物を意味する。多発性骨髄腫は従来の、高用量化学療法使用によっては治療不可能である。

一方、ヌクレオソームヒストン（ｎｕｃｌｅｏｓｏｍａｌ ｈｉｓｔｏｎｅｓ）のアセチル化状態は遺伝子発現の調節に重要な役割を果たす。ヌクレオソームヒストンの脱アセチル化（ｄｅａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ）は１１個の知られたイソ形態があるヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣｓ）として公知された酵素の群によって促進される。ヒストン脱アセチル化は転写抑制（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）を招くクロマチン凝縮（ｃｈｒｏｍａｔｉｎ ｃｏｎｄｅｎｓａｔｉｏｎ）を誘導し、一方、アセチル化は特定染色体部位内の局所弛緩（ｌｏｃａｌｉｚｅｄ ｒｅｌａｘａｔｉｏｎ）を誘発して転写を容易にする転写機構（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｍａｃｈｉｎｅｒｙ）にさらに接近し得るように許容する。腫瘍細胞で、ＨＤＡＣ酵素の選択的抑制剤は、ヒストンの過アセチル化（ｈｙｐｅｒａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ）を招く。これは細胞周期制御、細胞分裂およびアポトーシスに含まれている多くの腫瘍抑制遺伝子を含む、遺伝子のサブセット（ｓｕｂｓｅｔ）の転写調節を変更すると知られている。また、ＨＤＡＣ抑制剤は生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）で腫瘍成長を抑制すると報告されている。腫瘍成長の抑制はヒストンおよびチューブリン過アセチル化によって伴われ、多数のメカニズムを含むことができる。ＨＤＡＣ抑制剤は試験管内（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）および生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）の両者で癌細胞増殖を遮断する。このように、多発性骨髄腫でＨＤＡＣ抑制剤が効果的に癌成長を抑制するということが知られたが、既存に開発された薬物の場合、激しい毒性によって使用が制限的であるという問題点を有していた。

一方、プロテアソーム抑制剤と免疫調節性薬物は多発性骨髄腫治療用の主要製剤としてよく知られている。

一方、免疫調節性（ＩＭｉＤ）部類の薬物は多様な多発性骨髄腫モデルで目立った抗−骨髄腫特性を示し、多発性骨髄腫患者で有意味な臨床活性を示すことが確認された。これらのうちのボルテゾミブ（また、ＶｅｌｃａｄｅまたはＰＳ−３４１とも公知されている）は不応性多発骨髄腫治療において近来にＦＤＡから承認を受けた小分子プロテアソーム抑制剤であって、ＮＳＣＬＣ細胞株で活性を有することが報告されてきたが、ここで濃度および時間−依存性Ｇ２／Ｍ細胞周期停止を誘導するということが発見された。

このような療法の毒性をはじめとする多様な問題のため、多発性骨髄腫の治療のための、さらに有効でさらに少なく毒性を示す組成物および方法が強力に要求されているのが実情である。

このような背景下で、本発明者らはさらに有効で毒性の低い血液癌、具体的には多発性骨髄腫に対する製剤に関して鋭意研究を繰り返した結果、ＨＤＡＣ抑制剤として化学式１の化合物とプロテアソーム抑制剤または免疫調節性薬物およびステロイド系抗ガン剤を組み合わせる場合、血液癌、特に従来毒性などの多様な問題点によって効果的な治療が難しかった多発性骨髄腫で既存のＨＤＡＣ抑制剤と同等な水準の薬効を示しながらも、はるかに毒性が軽減され得る上昇的な坑癌効果を確保することができるという点を確認して本発明を完成した。

したがって、本発明の目的は、ヒストンデアセチラーゼ抑制剤として、下記化学式１の化合物と、プロテアソーム抑制剤または免疫調節性薬物、およびステロイド系抗ガン剤を含む骨髄腫の治療用調合物を提供することにある。

前記のような目的を達成するための一つの態様として、本発明は、
（１）第１有効成分として、下記化学式１で表されるで表されるヒドロキサム酸誘導体、Ｎ−（７−（ヒドロキシアミノ）−７−オキソヘプチル）−４−メチル−Ｎ−（４−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル）ピペラジン−１−カルボキサミドメタンスルホネート(Ｎ−（７−（ｈｙｄｒｏｘｙａｍｉｎｏ）−７−ｏｘｏｈｅｐｔｙｌ）−４−ｍｅｔｈｙｌ−Ｎ−（４−（１−ｍｅｔｈｙｌ−１Ｈ−ｉｎｄａｚｏｌ−６−ｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ）またはその薬学的に許容可能な塩；
（２）第２有効成分として、プロテアソーム抑制剤または免疫調節性薬物；および
（３）第３有効成分として、ステロイド系抗ガン剤を含む、
血液癌の治療用薬学的調合物に関するものである。好ましくは、前記血液癌は多発性骨髄腫である。

本発明による調合物の改善された効能は治療的上昇效果を測定することによって立証できる。本発明の調合物は、ＨＤＡＣ抑制剤である第１有効成分を第２有効成分および第３有効成分と組み合わせて投与した時に上昇効果を示し、血液癌、特に多発性骨髄腫に対する坑癌活性に優れる。

ＭＭ．１ｓ異種移植マウスモデルで対照群および各実験群の癌成長グラフである。 ＭＭ．１ｓ異種移植マウスモデルで実験最後の日（ｄａｙ５７）の各実験群の個体別腫瘍大きさ変化を示した。 ＭＭ．１ｓ異種移植マウスモデルで対照群および各実験群の癌成長グラフである。 ＭＭ．１ｓ異種移植マウスモデルで実験最後の日（ｄａｙ７０）の各実験群の個体別腫瘍大きさ変化を示した。

以下でより詳しく説明する。
本発明による薬学的調合物の第１有効成分は前記化学式１の化合物であって、この化合物はヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）抑制剤としての活性を有する。前記化学式１の化合物に関する説明および製法は国際特許公報ＷＯ２０１０−１１０５４５号に詳細に記述されており、これは本発明に対する参考文献として含まれる。本発明で前記化学式１の化合物は前記文献に開示された製法によって製造することができる。一般に、人間に投与される前記化学式１の化合物は患者の個人に特異的な因子をはじめとする多様な投与因子によって使用量が変わるが、例えば、１０〜２１０ｍｇ／ｍ^２で投与され得ると知られている。

一方、本発明による薬学的調合物の第２有効成分はプロテアソーム抑制剤または免疫調節性薬物であって、プロテアソーム抑制剤は細胞分裂調節蛋白質を分解するプロテアソーム（ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ；即ち、蛋白質を分解する細胞複合体）の活性を可逆的に抑制する製剤であり、正常細胞はプロテアソームの活性がしばらく抑制されても細胞分裂能力を回復するのに反し、多様な癌細胞はプロテアソームの活性がしばらくでも抑制されれば直ちに死滅過程に入ることを用いたものである。本発明の薬学的組成物に含まれ得るプロテアソーム抑制剤は、知られている様々な等級のプロテアソーム抑制剤であってもよい。例えば、ペプチドボロネート等級としては、再発した多発性骨髄腫の治療用として米国内で承認された化合物であるボルテゾミブ（ＩＮＮ、ＰＳ０３４１；Ｖｅｌｃａｄｅ）がある。また、他のペプチドボロネートとして、ＣＥＰ−１８７７０がある。その他、他の等級のプロテアソーム抑制剤としては、ペプチドアルデヒド（例えば、ＭＧ１３２）、ペプチドビニルスルホン、ペプチドエポキシケトン（例えば、エポキソミシン、カルフィルゾミブ）、βラクトン抑制剤（例えば、ラクタシスチン、ＭＬＮ５１９、ＮＰＩ−００５２、サリノスポラミドＡ）、金属と共にジチオカルバメート複合体を生成する化合物（例えば、慢性アルコール中毒治療にも使用される医薬品であるジスルフィラム）、および特定抗酸化剤（例えば、エピガロカテキン−３−ガレート）カテキン−３−ガレート、およびサリノスポラミドＡがある。本発明の薬学的組成物に含まれるプロテアソーム抑制剤は好ましく、下記化学式２で表されるボルテゾミブまたはその薬学的に許容可能な塩である。ボルテゾミブは一般に投与計画によって１週１〜２回、０．３〜１．５ｍｇ／ｍ^２の容量で静脈内または皮下投与で投与され得るが、これに制限されるわけではない。

一方、免疫調節性薬物は免疫細胞の拡大と腫瘍細胞死滅を促進などの効果を有するものであって、具体的に、ＡＤＣＣ（ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）を向上させて免疫を調節する物質である。具体的に、本発明の薬学的組成物に含まれる免疫調節性薬物はサリドマイド、レナリドミド、ポマリドミドまたはこれらの薬学的に許容可能な塩であってもよく、好ましくは、下記化学式３で表されるレナリドミドまたはその薬学的に許容可能な塩である。レナリドミドは一般に投与計画によって１０ｍｇ〜３０ｍｇ容量で経口投与されるが、これに制限されるわけではない。

本発明による薬学的調合物の第３有効成分はステロイド系抗ガン剤であって、例えばプレドニゾンまたはデキサメタゾンであってもよいが、これに制限されるわけではない。好ましくは、下記化学式４で表されるデキサメタゾン、即ち、（８Ｓ，９Ｒ，１０Ｓ，１１Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１６Ｒ，１７Ｒ）−９−フルオロ−１１，１７−ジヒドロキシ−１７−（２−ヒドロキシアセチル）−１０，１３，１６−トリメチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オンまたは同位元素変異体；またはその薬学的に許容可能な塩、水和物または溶媒和物である。一実施態様で、デキサメタゾンは、（８Ｓ，９Ｒ，１０Ｓ，１１Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１６Ｒ，１７Ｒ）−９−フルオロ−１１，１７−ジヒドロキシ−１７−（２−ヒドロキシアセチル）−１０，１３，１６−トリメチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オンである。他の実施態様で、デキサメタゾンは、水素原子が重水素で置換された（ｄｅｕｔｅｒａｔｅｄ）（８Ｓ，９Ｒ，１０Ｓ，１１Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１６Ｒ，１７Ｒ）−９−フルオロ−１１，１７−ジヒドロキシ−１７−（２−ヒドロキシアセチル）−１０，１３，１６−トリメチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−ｄオンである。

本発明において、薬学的に許容可能な塩は医薬業界で通常使用される塩を意味し、例えば、カルシウム、カリウム、ナトリウムおよびマグネシウムなどから製造された無機イオン塩、塩酸、硝酸、リン酸、ブロム酸、ヨード酸、過塩素酸、酒石酸および硫酸などから製造された無機酸塩、酢酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、マレイン酸、琥珀酸、シュウ酸、安息香酸、酒石酸、フマル酸、マンデル酸、プロピオン酸、クエン酸、乳酸、グリコール酸、グルコン酸、ガラクツロン酸、グルタミン酸、グルタル酸、グルクロン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、カーボン酸、バニリン酸、ヒドロヨード酸などから製造された有機酸塩、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびナフタレンスルホン酸などから製造されたスルホン酸塩、グリシン、アルギニン、リシンなどから製造されたアミノ酸塩およびトリメチルアミン、トリエチルアミン、アンモニア、ピリジン、ピコリンなどから製造されたアミン塩などがあるが、列挙されたこれら塩によって本発明で意味する塩の種類が限定されるのではない。

具体的な一態様で、第１有効成分、第２有効成分および第３有効成分は、全体薬学的調合物１００重量部に対して、第２有効性分としてボルテゾミブのようなプロテアソーム抑制剤の場合、第１有効成分２８．５５〜８５．６０重量部、第２有効成分１．２８〜８．６３重量部および第３有効成分２．７１〜６９．５５重量部で含まれてもよく、第２有効性分としてレナリドミドのような免疫調節性薬物を含む場合、第１有効成分１９．５４〜９４．６９重量部、第２有効成分２．４６〜５２．６３重量部および第３有効成分２．５２〜５９．７０重量部で含まれてもよい。

本発明の薬学的調合物は、３種の別個の製剤を含むものであってもよく、２つ或いは１つの製剤から構成されてもよい。

本発明の調合物は、目的する方法によって経口投与するか非経口投与（例えば、静脈内、皮下、腹腔内または局所に適用）することができる。本発明において、前記第１有効成分および第２有効成分は非経口または経口投与されてもよく、好ましくは非経口投与されてもよい。また、第３有効成分は非経口または経口投与されてもよく、好ましくは経口投与されてもよい。

本発明の調合物において、前記第１有効成分〜第３有効成分の適した投与量は、患者の体重、年齢、性別、健康状態、食餌、投与時間、投与方法、配設率および疾患の重症度などによってその範囲が多様である。本発明の第１有効成分の一日投与量は約１０〜８０ｍｇ／ｋｇであり、好ましくは２０〜６０ｍｇ／ｋｇである。また、本発明の第２有効成分の一日投与量は約０．１〜５ｍｇ／ｋｇであり、好ましくは０．５〜２ｍｇ／ｋｇである。

本発明の調合物において、前記第１有効成分と第２有効成分および第３有効成分の適した投与周期は、前記投与量によって決定されてもよい。例えば、本発明の第２有効成分がプロテアソーム抑制剤である場合、本発明の第１有効成分は１日１回〜２週間に１回投与されるものであってもよく、好ましくは１週間に１回投与することができる。また、本発明の第２有効成分は１日１回〜１週間に１回投与されるものであってもよく、好ましくは１週間に２回投与されるものであってもよい。本発明の第３有効成分は１日１回〜１週間に１回投与されるものであってもよく、好ましくは１週間に４回投与されるものであってもよい。また、本発明の第２有効成分が免疫調節性薬物である場合、本発明の第１有効成分は１日１回〜２週間に１回投与されるものであってもよく、好ましくは１週間に１回投与することができ、第２有効成分は１日１回〜１週間に１回投与されるものであってもよく、好ましくは１日１回投与されるものであってもよく、第３有効成分は１日１回〜１週間に１回投与されるものであってもよく、好ましくは１週間に１回投与されるものであってもよい。

本発明の薬学的調合物は、ＨＤＡＣ抑制剤である第１有効成分とプロテアソーム阻害剤または免疫調節性薬物である第２有効成分およびステロイド系抗ガン剤である第３有効成分の上昇補完効果が確認され、その結果優れた坑癌活性を示す。

したがって、本発明の坑癌調合物は坑癌治療戦略として有用に使用でき、特に血液癌の治療用であるのが好ましい。前記血液癌は、好ましくは多発性骨髄腫であり得る。

本発明において、本発明の調合物に含まれる第１有効成分、第２有効成分および第３有効成分はそれぞれ別途の薬学的組成物内に含まれてもよく、前記薬学的組成物は当該発明の属する技術分野における通常の知識を有する者が容易に実施できる方法によって、薬剤学的に許容される担体を用いて製剤化することによって単位容量形態に製造されるかまたは多用量容器内に入れて製造されてもよい。

前記薬剤学的に許容される担体は製剤時に通常用いられるものとして、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微細結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、メチルヒドロキシベンゾアート、プロピルヒドロキシベンゾアート、滑石、ステアリン酸マグネシウムおよびミネラルオイルなどを含むが、これに限定されるのではない。本発明の薬剤学的組成物は前記成分以外に、潤滑剤、湿潤剤、甘味剤、香味剤、乳化剤、懸濁剤、保存剤などを追加的に含むことができる。適した薬剤学的に許容される担体および製剤はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９ｔｈ ｅｄ．、１９９５）に詳しく記載されている。

また他の様態として、本発明は、前記薬学的調合物をこれを必要とする個体に投与することを含む癌治療方法を提供する。本発明において、前記用語“個体”とは、ほ乳動物、特に人間を含む。

以下、実施例を通じて本発明の構成および効果をさらに詳しく説明する。これら実施例はただ本発明を例示するためのものに過ぎず、本発明の範囲がこれら実施例によって限定されるのではない。

＜実施例１：ＭＭ．１ｓ異種移植モデルでの、第２有効成分としてボルテゾミブを使用した本発明による調合物の坑癌効果確認＞
１−１）実験方法
ａ．動物腫瘍モデル準備
人の多発性骨髄腫細胞株であるＭＭ．１ｓはＡＴＣＣ（米国）で購入した。ＭＭ．１ｓ細胞株は１０％ ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ；Ｇｉｂｃｏ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ、ＵＳＡ）を含むＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）で維持された。

ＮＯＤ．ＣＢ１７−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／ＮＣｒＨｓｄ雄マウスにマトリゲル（ｍａｔｒｉｇｅｌ）と混合したＭＭ．１ｓ細胞を皮下投与（２×１０^７ｃｅｌｌ／ｈｅａｄ）して腫瘍大きさが均一に分布するように群を構成した後、実験に使用した。

ｂ．有効成分の準備
前記化学式１の化合物は、生理食塩水に溶かして４ｍｇ／ｍｌ濃度で準備した。
ボルテゾミブは、生理食塩水に溶かして０．００５ｍｇ／ｍｌ濃度で準備した。
デキサメタゾンは、５ｍｇ／ｍＬ原液を生理食塩水で希釈して０．０５ｍｇ／ｍｌ濃度で準備した
使用溶液は使用当日準備し、残った溶液は廃棄した。

ｃ．抗腫瘍活性確認
前記化学式１の化合物およびボルテゾミブとデキサメタゾンの坑癌効果はＭＭ．１ｓ異種移植モデルで評価された。実験群は下記の他の投与群に分けた。
−対照群：ｖｅｈｉｃｌｅ
−前記化学式１の化合物単独投与群：前記化学式１の化合物（４０ｍｇ／ｋｇ、１週１回、注射）
−ボルテゾミブとデキサメタゾン併用投与群：ボルテゾミブ（０．０５ｍｇ／ｋｇ、１週２回、注射）、デキサメタゾン（０．５ｍｇ／ｋｇ、１週４回、注射）
−化学式１の化合物とボルテゾミブとデキサメタゾン 併用投与群：前記化学式１の化合物（４０ｍｇ／ｋｇ、１週１回、注射）、ボルテゾミブ（０．０５ｍｇ／ｋｇ、１週２回、注射）、デキサメタゾン（０．５ｍｇ／ｋｇ、１週４回、注射）

全ての実験群は５７日間腹腔投与された。毒性はマウスの体重測定で観察し、腫瘍成長は実験期間の間にキャリパを用いて測定された。腫瘍体積は下記の数式１によって計算された。
［数式１］
腫瘍体積（ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ）＝（ｌｅｎｇｔｈ）×ｗｉｄｔｈ^２）／２

ｄ．定量分析（Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ）
本実験の全ての結果に対して資料の正規性を仮定し、母数的な多重比較または非母数的な多重比較を通じて試験群間比較を実施し、統計学的分析はＰｒｉｓｍ５．０３（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いて実施し、ｐ値が０．０５未満である場合、統計学的に有意であると判定した。

１−２）実験結果
前記化学式１の化合物およびボルテゾミブ、デキサメタゾンの併用投与による抗腫瘍効果を評価するために、異種移植マウスは各物質を投与され、５７日間体重と腫瘍成長が観察された。

腫瘍成長抑制効果面で、前記化学式１の化合物投与群およびボルテゾミブとデキサメタゾン併用投与群、前記化学式１の化合物＋ボルテゾミブ＋デキサメタゾン併用投与群の腫瘍大きさは投与期間の間に賦形剤投与群と比較して腫瘍成長が大きく抑制された。

ボルテゾミブとデキサメタゾンの併用群では最初の癌大きさより若干減る傾向が現れたが、完全寛解に達するマウスは１匹だけであり、大部分のマウスは５０％以内に癌が減る効果に終わった。反面、前記化学式１の化合物＋ボルテゾミブ＋デキサメタゾン併用投与群で３匹では完全寛解が観察され、大部分のマウスが５０％以上癌が減る効果を示した。癌が完全寛解に達することは非常に驚くべき効果であり、完全寛解率が増加することはこれら薬物の組み合わせが非常に有益であるのを示唆する。

このような結果は、前記化学式１の化合物とボルテゾミブ、デキサメタゾンの３剤併用療法の坑癌効果が非常に大きいのを示唆する。

＜実施例２：ＭＭ．１ｓ異種移植モデルでの、第２有効成分としてレナリドミドを使用した本発明による調合物の坑癌効果確認＞
２−１）実験方法
ａ．動物腫瘍モデル準備
人の多発性骨髄腫細胞株であるＭＭ．１ｓはＡＴＣＣ（米国）で購入した。ＭＭ．１ｓ細胞株は１０％ ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ；Ｇｉｂｃｏ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ、ＵＳＡ）を含むＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）で維持された。

ＮＯＤ．ＣＢ１７−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／ＮＣｒＨｓｄ雄マウスにマトリゲル（ｍａｔｒｉｇｅｌ）と混合したＭＭ．１ｓ細胞を皮下投与（２×１０^７ｃｅｌｌ／ｈｅａｄ）して腫瘍大きさが均一に分布するように群を構成した後、実験に使用した。

ｂ．有効成分の準備
前記化学式１の化合物は、生理食塩水に溶かして６ｍｇ／ｍｌ濃度で準備した。
レナリドミドは、１％ ＨＣｌ ｉｎ ＰＢＳに溶かした後、中性ｐＨで滴定して１ｍｇ／ｍｌ濃度で準備した。
０．５ｍｇ／ｍｌのデキサメタゾンを食塩水で希釈することによって、 ０．２ｍｇ／ｍｌ濃度でデキサメタゾンを準備した。
使用溶液は使用当日準備し、残った溶液は廃棄した。

ｃ．抗腫瘍活性確認
前記化学式１の化合物およびレナリドミドとデキサメタゾンの坑癌効果はＭＭ．１ｓ異種移植モデルで評価された。実験群は下記の他の投与群に分けた。
−対照群：ｖｅｈｉｃｌｅ
−前記化学式１の化合物単独投与群：前記化学式１の化合物（６０ｍｇ／ｋｇ、１週１回、注射）
−レナリドミドとデキサメタゾン併用投与群：レナリドミド（１０ｍｇ／ｋｇ、１週７回、注射）、デキサメタゾン（２ｍｇ／ｋｇ、１週１回、注射）
−併用投与群：前記化学式１の化合物（６０ｍｇ／ｋｇ、１週１回、注射）、レナリドミド（１０ｍｇ／ｋｇ、１週７回、注射）、デキサメタゾン（２ｍｇ／ｋｇ、１週１回、注射）

全ての実験群は７０日間腹腔投与された。毒性はマウスの体重測定で観察し、腫瘍成長は実験期間の間にキャリパを用いて測定された。腫瘍体積は実施例１の数式１によって計算された。

ｄ．定量分析（Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ）
本実験の全ての結果に対して資料の正規性を仮定し、母数的な多重比較または非母数的な多重比較を通じて試験群間比較を実施し、統計学的分析はＰｒｉｓｍ５．０３（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いて実施し、ｐ値が０．０５未満である場合、統計学的に有意であると判定した。

２−２）実験結果
前記化学式１の化合物およびレナリドミド、デキサメタゾンの併用投与による抗腫瘍効果を評価するために、異種移植マウスは各物質を投与され、７０日間体重と腫瘍成長が観察された。

腫瘍成長抑制効果面で、前記化学式１の化合物投与群およびレナリドミドとデキサメタゾン併用投与群、前記化学式１の化合物＋レナリドミド＋デキサメタゾン併用投与群の腫瘍大きさは投与期間の間に賦形剤投与群と比較して腫瘍成長が大きく抑制された。

レナリドミドとデキサメタゾンの併用群では最初の癌大きさより若干大きくなる傾向が現れた反面、前記化学式１の化合物＋レナリドミド＋デキサメタゾン併用投与群で80％のマウスが、がんがなくなる効果を示した。

このような結果は、前記化学式１の化合物とレナリドミド、デキサメタゾンの３剤併用療法の坑癌効果が非常に大きいのを示唆する。

Claims (13)

1. １）第１有効成分として下記化学式１の化合物またはその薬学的に許容可能な塩；
   ２）第２有効成分としてプロテアソーム抑制剤または免疫調節性薬物；および
   ３）第３有効成分としてステロイド系抗ガン剤を含む、
   血液癌の治療用調合物：
   。
2. 前記プロテアソーム抑制剤が、下記化学式２のボルテゾミブまたはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１に記載の調合物：
   。
3. 前記免疫調節性薬物が、下記化学式３のレナリドミドまたはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１に記載の調合物：
   。
4. 前記ステロイド系抗ガン剤が、下記化学式４のデキサメタゾンまたはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１に記載の調合物：
   。
5. 前記化学式１の化合物の薬学的に許容可能な塩がメタンスルホン酸塩である、請求項１に記載の調合物。
6. 前記レナリドミドがレナリドマイド遊離塩基である、請求項３に記載の調合物。
7. 前記第２有効成分がプロテアソーム抑制剤であり、前記第１有効成分、第２有効成分および第３有効成分は全体薬学的調合物１００重量部に対して、第１有効成分２８．５５〜８５．６０重量部、第２有効成分１．２８〜８．６３重量部および第３有効成分２．７１〜６９．５５重量部で含まれる、請求項１に記載の調合物。
8. 前記第２有効成分が免疫調節性薬物であり、前記第１有効成分、第２有効成分および第３有効成分は全体薬学的調合物１００重量部に対して、第１有効成分１９．５４〜９４．６９重量部、第２有効成分２．４６〜５２．６３重量部および第３有効成分２．５２〜５９．７０重量部で含まれる、請求項１に記載の調合物。
9. 前記血液癌は多発性骨髄腫である、請求項１に記載の調合物。
10. 第１有効成分、第２有効成分および第３有効成分がそれぞれ別途の製剤形態に含まれる、請求項１に記載の調合物。
11. 第１有効成分、第２有効成分および第３有効成分が組み合わせられて一つの製剤形態に含まれた、請求項１に記載の調合物。
12. 第１有効成分および第２有効成分は非経口投与形態の製剤として含まれ、第３有効成分は経口投与形態の製剤として含まれる、請求項１０に記載の調合物。
13. 前記調合物の中の前記第１有効成分が含まれている製剤と第２有効成分が含まれている製剤および第３有効成分が含まれている製剤は、同時または順次に投与することができる製剤形態である、請求項１０または１２に記載の調合物。