JP2019529348A - 縮合タンニン分子の含量が少ないマスカダイン局所組成物 - Google Patents

Abstract

500〜5000 kDaの精密ろ過膜を通じた限外ろ過によって、浄化した抽出物を処理し、フレーバー成分がその中に除去された第1の膜通過液を得ることによって、マスカダインポマースブドウ抽出物を脱色する方法が開示されている。膜滞留物は、第2の膜通過液および第2の膜滞留物を得るために25〜100 kDaの限外ろ過膜を通じた限外ろ過に供される。重合した縮合タンニンは、第2の膜滞留物に除去され、第2の膜通過液は、第1の膜滞留物と比較して上昇したレベルのポリフェノールと、低下したレベルの糖類および縮合タンニンとを有する脱色抽出物である。この脱色抽出物は、ベータ・グルカンおよびブドウ種子抽出物も含み得るスキンケア組成物に組み込まれ得る。スキンケア組成物は、シミのない健康な皮膚を維持するために皮膚に適用され得る。いくつかの態様において、この組成物は、紫外線照射への曝露に起因する炎症を含む皮膚における炎症を低減させるために使用される。脱色マスカダイン（ビティス・ロツンディフォリア）ポマース溶媒抽出物、ベータ・グルカン、およびブドウ種子抽出物を含む局所組成物を皮膚に適用することによって、皮膚細胞における抗炎症メディエーターの産生を阻害しかつ紫外線照射により誘導される損傷を防ぐ方法が開示される。

Description

関連出願の相互参照
本願は、2016年7月19日に出願された米国仮出願番号62/364,222および2017年5月12日に出願された米国仮出願番号62/505,543からの優先権を主張し、それらの全体を参照により本明細書に組み入れる。

分野
本開示は、ブドウポマース抽出物、例えばマスカダイン（ビティス・ロツンディフォリア（Vitis rotundifolia））ポマース溶媒抽出物、ブドウポマース抽出プロセス、およびスキンケア製品における使用に適したブドウポマース抽出物、例えばマスカダインブドウポマース抽出物の画分を取得する方法に関する。本開示はまた、皮膚に適用したときに炎症を低減させる脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、ベータ・グルカンおよびブドウ種子抽出物を含む局所組成物、および当該局所組成物を用いて皮膚炎症を低減させる方法に関する。

背景
ブドウ抽出物は、有益な抗酸化特性を有することが公知である。マスカダインブドウは、例えば、フラボノイド（例えば、フラボノール、アントシアニンおよびフラバノン、ならびにプロアントシアニジンとして公知のフラバン-3-オールおよびそれらのオリゴマー）ならびに非フラボノイド（例えば、フェノール酸、タンニンおよびスチルベン誘導体、例えばレスベラトロール）を含む、様々な生物活性ポリフェノール化合物を含む。フラボノイドの保護的および抗炎症的効果は、フリーラジカル捕捉、細胞のシグナル伝達経路および遺伝子発現に対する有益な効果、ならびに急速かつ異常に増殖する哺乳動物細胞の細胞分裂周期に対する選択的干渉によるものであると考えられる。

ブドウ抽出物の有益な特性は、栄養補給食品において利用されている。米国特許第6,190,716号（特許文献1）は、マスカダインブドウを圧搾および果汁絞り（de-juicing）し、その後にそのパルプを熱および酵素で分解することにより得られるマスカダインブドウ栄養補給サプリメントを開示した。米国特許第6,638,545号（特許文献2）は、栄養補給サプリメントおよび化粧組成物として使用するための高ポリフェノール含量を有するブドウ抽出物を開示した。米国特許第8,568,804号、米国特許第9,132,162号、および米国特許第9,173,916号（特許文献3〜5）は、ブロンズおよび紫マスカダインブドウのポマース抽出物が向上した抗酸化活性を有することを示す組成物を開示した。

マスカダインおよび他の赤ブドウ抽出物が優れた抗酸化活性を有することは理解されているものの、局所組成物におけるそれらの利用は、抽出物中の高レベルのタンニンにより制限されている。「タンニン」という用語は、もともと、収斂性樹皮タンニンが動物の皮膚を皮革に「なめす」ために使用されることから、このクラスの化合物に適用される。赤ブドウタンニンは、ドライで渋い味を呈し、このタンニンはワインを着色する。局所用ブドウ抽出調製物に含まれる場合、タンニンは、組成物およびそれを適用した皮膚を変色させる。

それらの化学組成に基づき、タンニンは、加水分解性タンニンおよび縮合タンニンまたはフラボノイドに分類される。加水分解性タンニンは、重合した単純なフェノール性物質、例えば没食子酸のおよびそれらの二量体（二没食子酸、エラグ酸）のエステルである。加水分解性タンニンはさらに、加水分解後に没食子酸を生じるガロタンニン、および加水分解後にエラグ酸を放出するエラジタンニンに分類され得る。加水分解性タンニンとは対照的に、縮合タンニンは、加水分解により分解されない。逆に、酸性媒体中で熱にさらされると、それらは徐々に重合し、赤色の非晶質アントシアニン色素、またはフロバフェンと呼ばれる高分子量の不溶性黄褐色産物を形成する。

それらの深い色に加えて、縮合タンニンは、ほとんどの他のポリフェノール有機化合物よりも多くのヒドロキシル基およびより大きな分子構造を有し、それによりそれらは悪臭分子を効果的に捕捉および保持することが可能である。この特性により、局所調製物、例えば抗酸化剤または化粧組成物におけるブドウ抽出物の使用が忌避されている。

皮膚炎症のプロセスは複雑である。皮膚が「トリガー」刺激、例えば紫外線（UV)照射、刺激物質またはアレルゲンに曝露されると、皮膚の細胞は、様々な炎症サイトカインおよびケモカインを産生する。これらのサイトカインおよびケモカインは、標的細胞上の特異的な受容体に結合し、血管拡張を起こし神経細胞を活性化させるさらなる炎症メディエーターの産生を刺激する。炎症細胞によるサイトカインおよびケモカインの発現はまた、皮膚に損傷を与える酵素、フリーラジカルおよび他の生物学的メディエーターを産生させる。初期トリガーイベントの最終的な結果は、侵入細菌による感染に対する皮膚の抵抗を助けるよう設計されたものであるものの、実際には皮膚に多大な損傷を与える大規模な炎症反応の増幅である。タンニンが少なく、かつ皮膚炎症を低減させるために使用することができる局所組成物が求められている。

米国特許第6,190,716号 米国特許第6,638,545号 米国特許第8,568,804号 米国特許第9,132,162号 米国特許第9,173,916号

要旨
脱色ブドウ溶媒抽出組成物、例えば脱色マスカダインブドウ溶媒抽出組成物を製造するための方法および組成物が、本明細書に開示される。本開示により、抽出物中のポリフェノールおよび望ましい抗酸化活性を実質的に保存しつつより低い縮合タンニン含量を有する、異なるマスカダインブドウ抽出物の組み合わせを含むがこれに限定されない、ブドウポマース抽出物を調製することが可能になる。得られる抗酸化抽出物は、従来のブドウポマース抽出物、例えば従来のマスカダインブドウポマース抽出物と比較して、皮膚を変色させにくく、改善された匂いを有する。いくつかの例において、脱色抽出物は、ブロンズおよび／または紫マスカダインブドウポマースの両方から得られる。

1つの例において、この方法は、処理前ブドウ抽出物、例えば処理前ブドウポマース抽出物、例えば処理前マスカダインブドウポマース抽出物の縮合タンニン含量を低下させ、抽出物を脱色する。処理前抽出物、例えば処理前マスカダインブドウポマース抽出物は、固形物を除去するよう精密ろ過によって浄化され、浄化された抽出物は、500〜5000 kDaの精密ろ過膜を通じた限外ろ過によって処理され、第1の膜通過液および第1の膜滞留物が得られる。フレーバー成分は、第1の膜通過液中に除去され、第1の膜滞留物は、25〜100 kDaの限外ろ過膜を通じた限外ろ過によって処理され、第2の膜通過液および第2の膜滞留物が得られる。重合した縮合タンニンは、第2の膜滞留物に除去され、第2の膜通過液は、第1の膜滞留物と比較して増加したレベルのポリフェノールならびに低下したレベルの糖類および縮合タンニンを有する脱色抽出物である。

いくつかの例において、脱色抽出物は、除臭剤、例えば活性炭、アルギン酸カルシウム、ベントナイトまたはアルミノケイ酸吸収剤で処理される。脱色抽出物はまた、脱色抽出物中の有機酸を無機化するよう、酸化マグネシウムに曝露され得る。脱色抽出物はまた、乾燥および粉末化され得る。

特定の例において、処理前ブドウポマース抽出物は、マスカダインブドウポマース抽出物、例えばブロンズおよび紫マスカダインブドウポマースの処理前抽出物の組み合わせである。処理前抽出物のいくつかの態様において、紫マスカダインポマース抽出物に対するブロンズマスカダインポマース抽出物の比は、0.1〜10（重量対重量）、例えば0.3〜3（重量対重量）の範囲である。

脱色抽出物は、先行する脱色プロセスにより得られる任意の抽出物であり得る。あるいは、脱色抽出物は、9〜10％のポリフェノールおよび4％未満の単糖類を含み、縮合タンニンは、脱色ブドウ抽出物、例えばブドウポマース抽出物、例えばマスカダインブドウポマース抽出物の総ポリフェノール含量の10％未満である。いくつかの例において、脱色抽出物中の総ポリフェノールは、少なくとも90％の、縮合タンニン以外のポリフェノールからなる。他の例において、脱色マスカダインブドウポマース抽出物は、0.5〜2％の繊維、7〜9％のタンパク質、0.5〜1.5％の脂肪および15〜17％の有機酸、例えば、1〜2％の繊維、7〜8％のタンパク質、0.05〜0.5％の脂肪および15.5〜16.5％の有機酸を含む。いくつかの例において、抽出物のフェノール成分は、2〜3％のエラグ酸および30〜31％の没食子酸、例えば、2〜3％のエラグ酸、3〜4％のエラグ酸グリコシド、30〜31％の没食子酸、2〜3％のケルセチン、10〜11％のガロタンニン、7〜8％のエラジタンニン、29〜30％のプロアントシアニジン、4〜5％のアントシアニン、2〜3％のカテキンおよび6〜7％のフェノール酸を含む。

脱色マスカダインブドウポマース抽出物を含むスキンケア組成物、およびエラスターゼ阻害、コラゲナーゼ阻害、抗酸化活性、DNA損傷の低減、DNA修復の向上、紫外線照射への曝露後の細胞生存率の増加、またはチロシナーゼ阻害の増加の1つまたは複数を改善するのに十分な期間、十分な量のスキンケア組成物を皮膚に適用することによって健康な皮膚を維持する方法も開示される。本明細書に開示されるようにして調製された脱色ブドウ溶媒抽出物を用いて作製された局所組成物は、抗酸化活性を有する。

UV照射または他の炎症促進刺激に応答して、ケラチン生成細胞は、免疫細胞が損傷部位に向かうのを助けるサイトカインを放出し得る。皮膚における炎症経路はまた、シクロオキシゲナーゼの作用を通じてアラキドン酸から合成される、プロスタグランジンE2を含むプロスタグランジンを伴う。ケラチン生成細胞を含む真皮および表皮細胞における炎症は、これらのサイトカインおよびプロスタグランジンの存在または非存在によってモニタリングされ得る。ケラチン生成細胞によって放出されるサイトカインは、TNFアルファならびにインターロイキンIL-1アルファ、IL-1ベータ、IL-3、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-18およびIL-1RAを含む。プロスタグランジンE2（PGE2)は、皮膚の炎症経路に関与することが示されており、これもまた、上記のサイトカインと共に、局所用抗炎症組成物の効果を示すマーカーとして使用され得る。

炎症マーカーのレベルを低下させる局所組成物、および局所組成物を用いて炎症を低減させる方法が、本明細書に開示される。いくつかの態様において、本明細書に開示される組成物は、それらが皮膚に局所適用された後に皮膚炎症を低減させる。炎症の低減は、対照細胞と比較して処置された皮膚細胞においてIL-1アルファ、IL-6、プロスタグランジンE2またはそれらの任意の組み合わせの産生が減少することに起因し得る。いくつかの非限定例において、対照細胞は、不活性担体化合物で処置された細胞であり得る、またはそれは未処置細胞であり得る。いくつかの例において、炎症は、紫外線A（UVA)および紫外線B（UVB）照射を含むUV照射の結果である。

脱色ブドウ溶媒抽出物製法の進歩により、そのようなブドウ抽出物を、スキンケア製品用を含む局所調製物において使用することが可能となる。本開示は、抽出物中のポリフェノールおよび望ましい抗炎症活性を実質的に保存しつつより低い縮合タンニン含量を有する脱色ブドウポマース抽出物を含む局所組成物を提供する。いくつかの例において、脱色抽出物は、ブロンズおよび／または紫の両方のマスカダイン（ビティス・ロツンディフォリア）ブドウポマースから得られる。本願で開示される組成物はまた、ブドウ種子抽出物およびベータ・グルカンも含み得る。

いくつかの態様において、局所組成物は、有効量の脱色マスカダイン（ビティス・ロツンディフォリア）ポマース溶媒抽出物、ベータ・グルカンおよびブドウ種子抽出物を含み、脱色マスカダインポマース溶媒抽出物は、液体マスカダインポマース抽出物を生成するよう液体紫マスカダインポマース抽出物と組み合わされた液体ブロンズマスカダインポマース抽出物を含み、a）ブロンズマスカダインポマース抽出物および紫マスカダインポマース抽出物は、溶媒抽出された抽出物であり、b）ブロンズマスカダインポマース抽出物と紫マスカダインポマース抽出物の混合物は、マスカダインポマース抽出物へのエラグ酸の溶解を促進し、c）ブロンズマスカダインポマース抽出物および紫マスカダインポマース抽出物は、ろ過および発酵された抽出物であり、d）マスカダインポマース抽出物は、少なくとも2％のポリフェノール含量を有する。さらなる態様において、これらの局所組成物は、皮膚の炎症を低減させるために使用される。

本発明の上記およびその他の目的、特徴および利点は、添付図面を参照しつつ進められる以下の詳細な説明からより明確になるであろう。

図1は、ポリフェノール含量を実質的に維持しつつ縮合タンニン含量を低下させる抽出方法の態様のフローチャートである。 図2は、図1の方法を実施するためのシステムの概要である。 図3Aおよび図3Bは、本明細書に開示される方法を用いてタンニン含量を低下させる前の処理前マスカダインポマース抽出物（図3A)および低下させた後の脱色抽出物（図3B）におけるポリフェノールのクロマトグラフィープロフィールの対比トレースである。処理前抽出物の所望のポリフェノールプロフィールが維持されつつ、縮合タンニンのレベルが脱色抽出物において大きく低下している。 図3Aおよび図3Bは、本明細書に開示される方法を用いてタンニン含量を低下させる前の処理前マスカダインポマース抽出物（図3A)および低下させた後の脱色抽出物（図3B）におけるポリフェノールのクロマトグラフィープロフィールの対比トレースである。処理前抽出物の所望のポリフェノールプロフィールが維持されつつ、縮合タンニンのレベルが脱色抽出物において大きく低下している。 図4は、エラスターゼ、コラゲナーゼ、2,2-ジフェニル-1-ピクリルヒドラジル（DPPH）、TT二量体、ケラチン生成細胞生存率およびチロシナーゼ試験によって測定された、脱色マスカダインポマース抽出物の有益な効果をまとめた表である。 図5は、脱色マスカダインポマース抽出物を用いたエラスターゼ阻害試験の結果を示すグラフであり、エラスチン減少を阻害することによる皮膚の弾力性に対する効果が示されている。 図6は、脱色マスカダインポマース抽出物を用いたコラゲナーゼ阻害試験の結果を示すグラフである。増加したコラゲナーゼ阻害は、皮膚におけるコラーゲン損失を回避することにより皮膚の堅さを改善する。 図7は、トロロックス当量（TE）で示される、フリーラジカル捕捉力を測定するDPPHアッセイ（抗酸化力）の結果を示すグラフである。脱色マスカダインポマース抽出物を、様々な濃度で使用した。0.01％〜1％のマスカダイン抽出物は、DPPHアッセイにおいて高いフリーラジカル活性（TE)を示した。このアッセイにおいて最大の活性が達成された。 図8は、UVB曝露前の1％脱色マスカダインポマース前処置がDNA損傷を完全に防いだ抽出物TT二量体アッセイの結果を示す。抽出物は、陽性対照（1 mMトロロックス）よりも良好であった。UVB曝露後の1％脱色マスカダイン抽出物処置（後処置）もまた、DNA損傷の45％低減を示し、これによりDNA修復に対する効果が示唆され、前処置および後処置の両方において、0.1％からの効果は1％よりも低かった。 図9は、紫外線B曝露後の細胞生存率を示している。脱色マスカダインポマース抽出物は、未処置細胞と比較して細胞生存率を有意に増加させ、その増加は20μMトロロックス（対照）よりもさらに良好であった。 図10は、色素過剰を軽減する能力を示す、異なる濃度の脱色マスカダインポマース抽出物の下でのチロシナーゼ阻害を示す。 図11は、脱色局所マスカダインポマース抽出物（TME）と脱色されなかった経口投与マスカダインポマース抽出物（OME)の間のTT二量体DNA損傷比較アッセイのグラフであり、0.09％および0.009％のポリフェノールを含むOMEとTMEの間でDNA損傷の低減に関して統計学的な差がみられなかった。OMEは、先行米国特許第8,568,804号、米国特許第9,132,162号および米国特許第9,173,916号に開示される抽出物である。 図12は、OMEおよびTMEの両方が用量関連様式で終末糖化産物（AGE）形成の阻害に関して優れた活性（効果）を示したことを示すグラフである。AGE形成の最大阻害は、両方の抽出物において、15〜20μgポリフェノール／mlの濃度で95〜100％に達した。しかし、OMEは、AGE形成を50％阻害するのに必要とされる濃度（IC₅₀)によって示されるように、TMEよりも強力であった。OMEのIC₅₀値は、0.65μgポリフェノール/mlであり、TMEのIC₅₀値は、3.94μgポリフェノール/mlであった。これは、タンニンがAGE阻害活性に寄与しているものの、TME中に残存する他のマスカダインポリフェノールも、タンパク質の糖化の阻害に関して、OMEにおいて見出されたのと同等の効果を示すことを示唆している。 図13は、一連の局所組成物を用いた炎症試験の結果を示すグラフであり、インターロイキン1アルファ（IL-1αまたはIL-1アルファ）の産生を阻害することによる抗炎症効果を示している。 図14は、一連の局所組成物を用いた炎症試験の結果を示すグラフであり、プロスタグランジンE2（PGE2）の産生を阻害することによる抗炎症効果を示している。 図15は、一連の局所組成物を用いた炎症試験の結果を示すグラフであり、インターロイキン6（IL-6）の産生を阻害することによる抗炎症効果を示している。 図16は、組成物の重量基準で0.01％、0.005％および0.001％の脱色マスカダインポマース抽出物（TME）の組成物を用いたDPPHアッセイの結果を示すグラフである。図7も参照されたい。1グラムのTMEは、1.85グラムのトロロックスと同じ抗酸化力を有し、このことは、DPPHアッセイによって測定された場合、TMEがトロロックスよりも185％強力であることを示唆している。 図17は、脱色マスカダインポマース抽出物を含む一連のさらなる局所組成物を用いたチロシナーゼ阻害を示すグラフである。 図18は、脱色マスカダインポマース抽出物を含む一連のさらなる局所組成物を用いたTT（チミジン・チミジン）二量体DNA損傷を示すグラフである。

詳細な説明
I. 用語
以下の用語および方法の説明は、本開示をより分かりやすく説明するためおよび本開示を実施する上で当業者の手引きをするために提供される。「または、もしくは（or）」という用語は、文脈がそうでないことを明確に示していない限り、言及されている二者択一の要素のうちの単一の要素または2つ以上の要素の組み合わせを表す。本明細書で使用される場合、「含む（comprises）」は、「含む（includes）」を意味する。したがって、「AまたはBを含む（comprising A or B）」は、追加要素を排除せず、「A、B、またはAおよびBを含む（including A, B, or A and B）」を意味する。

そうでないことが説明されていない限り、本明細書で使用されるすべての技術および科学用語は、本開示の属する技術の分野における通常の知識を有する者に広く理解されているのと同じ意味を有する。本開示の実施または試験には本明細書に記載されているのと同様または同等の方法および材料を使用することができるが、以下には適当な方法および材料が記載される。そうでないことが示されていない限り、すべての百分率および比率は、重量基準で算出されている。「約」という用語は、ある値の特定範囲内の量を表す。例えば、「約」具体的分子量またはグラム量は、その分子量またはグラム量の5％以内を示す。非限定的な例において、「約」100グラムは、95グラム〜105グラムを表す。加えて、「約」具体的百分率は、0.05％以内を表す。非限定的な例において、「約」2％は、1.95％〜2.05％を表す。

投与：任意の有効な経路により対象に薬剤を提供するまたは与えること。例示的な投与経路は、局所、経口、注射（例えば、皮下、筋内、皮内、腹腔内、静脈内および腫瘍内）、舌下、経皮、経鼻、局所および吸入経路を含むがこれらに限定されない。

抗酸化組成物：抗酸化活性を有する組成物。

抗酸化有効量：その量の組成物を投与した対象において抗酸化効果を誘導するのに十分な量。

ケモカイン：走化性を媒介する走化性サイトカイン。ケモカインは、炎症部位への白血球の動員を刺激することができる小さなタンパク質（8〜10 kDa）である。炎症サイトカインは、IL-1アルファおよびIL-6を含む炎症促進刺激により誘導される。

サイトカイン：免疫系を含む細胞のシグナル伝達プロセスに関与する一群のタンパク質。サイトカインは、ケモカインおよびインターロイキン、例えばTNFアルファ、IL-1アルファ、IL-1ベータ、IL-3、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-18およびIL-1RAを含む。

脱色：「脱色」抽出物は、参照物よりも着色が少ないものを表し、着色の非存在を必要とするものではない。「脱色」抽出物は、本明細書で使用される場合、縮合タンニンのレベルが低下しており、かつ赤ブドウ、赤ブドウ抽出物および赤ワインにおいて縮合タンニンに関連するタイプの暗色の着色が少ない抽出物を表す。

有効量：単独でまたはさらなる薬剤（例えば、さらなる抗酸化物質またはさらなる抗炎症化合物）と共に、所望の応答を誘導する組成物の量。有効量は、単回量として、または複数回量として、例えば毎日、投与され得る。しかし、有効量は、処置する対象、処置する状態のタイプおよび投与の様式に依存し得る。

賦形剤：組成物の活性成分のための担体として使用される不活性物質。賦形剤は、活性成分を含む配合物を増量するため、簡便かつ正確な投与を可能にするため、活性成分を安定化させるため、ならびに送達システムを光学的および／または感覚刺激的に許容可能にするために使用される物質を含み得る。薬学的賦形剤の例は、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール等を含む。

抽出物：植物またはその一部分の1つもしくは複数、例えばその果実もしくは種子の活性成分の少なくともいくつかの溶液またはその他の調製物。本明細書に開示される抽出物は、溶媒抽出物であり、種子は、種子から活性成分を取り出すために、液体抽出溶媒（例えば、熱水）に曝露される。溶媒抽出によって最初に得られる抽出物は、乾燥形態に変換され得るが、それもまた「抽出物」とみなされ得る。「水性」または「水」抽出物は、水を用い、他の溶媒（例えば、エタノール）を用いない溶媒抽出によって得られる抽出物を表す。

フラボノイド：植物の二次代謝産物のクラスであり、乾燥重量基準で、ブドウ種子は、約4〜8％のフラボノイドを含む。フラボノイドは、植物内に広く分布している食用ポリフェノール化合物の重要なグループを構成する。4000を超える科学的に特有のフラボノイドが、植物源、例えば果実、野菜、マメ、木の実、種子、草木、薬味、花において、および飲料、例えば茶、ココア、ビール、ワインおよびブドウジュースにおいて同定されている。

ブドウ種子中のフラボノイドは、主としてフラバン-3-オール、特に(+)-カテキン、(-)-エピカテキンおよび(-)-エピカテキン 3-ガラート、ならびにそれらの複合体を表す。ブドウ種子においてフラバン-3-オールは、単量体、オリゴマーまたは多量体形態で存在する。2つまたはそれ以上の化学的に連結されたフラバン-3-オール単量体は、プロアントシアニジンまたはオリゴマー性プロアントシアニジン（「OPC」）と呼ばれ、プロシアニジンおよびプロデルフィニジンを含む。2つの単量体を含むOPCは、二量体と呼ばれ、3つの単量体は三量体、4つの単量体は四量体、5つの単量体は五量体等と呼ばれる。オリゴマーは、2〜10の鎖長を有し、多量体は、10を超える鎖長の成分を表す。したがって、ブドウ抽出物においてオリゴマーは、例えば、二量体および三量体を含み、多量体は、50〜100という多数の単位を有し得ることが証明されている。

フラボノイドは、ブドウ種子だけでなく、果皮、果汁およびパルプを含むブドウのすべての部分に存在する。ポリフェノール化合物を、ブドウ種子またはブドウポマース抽出物を含むブドウ抽出物として商業的に使用するために、これらの化合物は、より濃縮された形態でブドウから分離される必要がある。科学的研究は、プロアントシアニジンの抗酸化力がビタミンEより20倍高く、ビタミンCより50倍高いことを示している。大規模な調査は、その抗酸化効果がコラーゲンと共に若々しい肌、細胞の健康、弾力性および柔軟性を促進することから、ブドウ種子抽出物が健康の多くの面で有益であることを示唆している。他の研究は、プロアントシアニジンが、日光によるダメージからの身体の保護、視力の改善、関節、動脈および身体組織、例えば心臓の柔軟性の改善、ならびに毛細血管、動脈および静脈を強固にすることによる血液循環の改善を助けることを示している。

炎症：感染、刺激または傷害を含む損傷を与える刺激の結果として赤み、腫れおよび痛みを生じ得る局所的な生物学的反応。炎症は、慢性的または急性的であり得、かつ病原性であり得る。免疫細胞は、炎症応答を開始し、血流の増加および損傷組織への血漿液の漏出を担う炎症メディエーターを放出する。その存在が炎症の指標となる炎症メディエーターは、IL1アルファ、IL-6およびPGE2を含む。

インターロイキン：炎症反応を媒介することができるサイトカイン。多数のインターロイキン（IL）ファミリーが存在する。インターロイキン1（IL-1）は、IL-1アルファを含む少なくとも11メンバーを有するインターロイキンファミリーである。IL-1アルファは、一般に、炎症の発生を担っており、表皮細胞により産生される。インターロイキン6（IL-6）は、免疫応答を刺激することができるサイトカインであり、細胞の外傷、例えば熱傷または他の組織損傷後に分泌される。IL-6は、炎症促進メディエーターとして作用する場合、PGE2の合成を開始することができる。

マスカダインブドウ（ビティス・ロツンディフォリア）：米国南東部原産であり、デラウェアからメキシコ湾にかけてならびに西方へ向かってはミズーリ、カンザス、オクラホマおよびテキサスまで自生しているブドウ。マスカダインは、米国南東部の温暖、多湿な条件に十分に適応している。その果実は、ヨーロッパおよびアメリカブドウに特徴的な大きくぎっしり詰まった束とは大きく異なり、3〜40粒の小さく緩やかな房を形成する。丸みのある、1〜1-1/2インチの果実は、厚く丈夫な果皮を有し、最大5つの堅い楕円形の種子を含む。色の面では、その果実は緑色がかったブロンズ色からブロンズ色、ピンク色がかった赤色、紫色およびほぼ黒色の範囲である。それらは、本明細書で言うところの赤ブドウとみなされる。

Black Beauty、Black Fry、Darlene、Fry、Higgins、Jumbo、Scuppernong、Sugargate、Summit、SupremeおよびSweet Jenny等の雌（雌しべ）品種ならびにCarlos、Cowart、Dixieland、Dixie Red、Fry Seedless、Magnolia、Nesbitt、Noble、Redgate、RegaleおよびSterling等の自家受精品種を含む、多くの異なるマスカダインブドウ品種が入手可能である。

例えば、マスカダインブドウのブロンズ色品種は、Carlos、Chowan、Doreen、Higgins、Magnolia、Nevermiss、Pamlico、Roanoke、Scuppernong、SterlingおよびSummit栽培品種を含むものと、当業者によって特定されている。紫色品種は、ブロンズ色品種よりも暗色の果皮を有し、Albermarle、Bountiful、Cowart、GA-1、Hunt、NC-1、Noble、Regale、TarheelおよびJumboを含む。紫色品種の一部は、黒色品種とも称される。

ホールマスカダインブドウの植物化学的構成成分は、ビティス・ビニフェラ（Vitis vinifera）と異なる。マスカダインは、高いエラグ酸、没食子酸およびフラボノイドグリコシド濃度によって識別される高い総フェノール含量を有する。マスカダインブドウにおけるエラグ酸の存在は、特有であり、遊離エラグ酸、エラグ酸グリコシド、メトキシル化誘導体およびエラジタンニンの形態で見出される。別の特有の特徴は、マスカダインで観察されるアントシアニン化合物である。非アシル化形態のデルフィニジン、シアニジン、ペツニジン、ペオニジンおよびマルビジンの（3-グルコシドではなく）3,5-ジグルコシドとしての存在により、これらの化合物およびこのブドウ中に存在する他のアントシアニンからの自然の色の影響は、この紫色品種から得られる果汁およびポマースに暗紫色を与える。紫ポマース抽出物はアントシアニンを含むが、ブロンズポマース抽出物は含まない。

ブロンズおよび紫マスカダインブドウにおいて見出される赤色および紫色のアントシアニンは、抗酸化特性を有するポリフェノール化合物である。紫およびブロンズマスカダインブドウは、様々な他のフラボノイドクラスのポリフェノールを含み、フラバン-3-オールおよびそれらのオリゴマーが最も豊富なクラスであり、フラボノールがホールマスカダイン中に存在する2番目に豊富なフラボノイドである。マスカダイン果皮画分に関して報告されている主要なフェノールは、（降順に）エラグ酸、ミリセチン、ケルセチンおよびケンペロールであり、種子に関して報告されているのは、エピカテキン、カテキンおよび没食子酸である（Pastrana-Bonilla et al. J. Agric. Food Chem. 51: 5497-5503, 2003）。

マスカダインブドウは、ポマースおよび果汁を含む。「ホールブドウ以外」は、その果汁の少なくとも一部が抽出されたマスカダインブドウを含み、いくつかの例において、そのブドウ中の本来の果汁の95％または90％未満を含む。

薬学的に許容される媒体：本開示において有用な薬学的に許容される媒体（担体）は、従来的なものである。Remington's Pharmaceutical Sciences, by E. W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, PA, 19th Edition (1995)は、1つまたは複数の組成物、例えば1つまたは複数のブドウ抽出組成物、例えばブドウ種子抽出組成物、および本来であればそのブドウ抽出物と共に見出されないであろう追加の天然または非天然薬学的作用物質の薬学的送達に適した組成物および配合物を記載している。薬学的に許容される担体の使用は、それによって製造される製品が、薬学的用途でのみ有用であることを暗示するものではない。むしろ、それは、その製品が対象への投与または対象による摂取、例えば局所組成物に適していることを暗示している。特定の態様において、媒体は、局所組成物のための担体、例えば液体、ジェル、泡、クリーム、軟膏またはローションである。特に有用な媒体は、局所組成物に関して薬学的または美容的に許容されるもの、例えば1つまたは複数の水性システム、グリセリン、C_1〜4アルコール、脂肪アルコール、脂肪エーテル、脂肪エステル、ポリオール、グリコール、植物油、鉱物油、リポソーム、層状脂質物質、シリコーン油、水またはそれらの任意の組み合わせである。

局所組成物、例えば本明細書に開示される局所組成物の場合、マスカダインブドウ抽出組成物は、任意の適当な製品形態で配合され得る。そのような製品形態は、エアゾールスプレー、クリーム、分散物、乳濁物、発泡物、ジェル、液体、ローション、ムース、軟膏、パッチ、ポマード、粉末、ポンプスプレー、固形物、溶液、スティックまたはウェットティッシュを含むがこれらに限定されない。担体もまた、様々な既存のスキンローション、ジェル、クリーム、軟膏、トナー、クレンザー、モイスチャライザーまたは日焼け止めであり得、これにマスカダインブドウ抽出物が所望の濃度、例えば重量基準で0.025％〜0.25％で添加される。

ポリフェノール：ブドウおよびココア由来のポリフェノールは、心血管機能および認知的健康の両方を向上させることが見出されている。フラバノール（フラバン-3-オールとも呼ばれる）が、主要なブドウ種子およびココアポリフェノールであり、このクラスのフェノール化合物は、単量体種、例えばカテキンおよびエピカテキンからオリゴマー（しばしばプロアントシアニジンと称される）からポリマー（しばしばタンニンまたは縮合タンニンと称される）まで及ぶ。「フェノール」という用語は、当技術分野においておよび本明細書においてポリフェノールという用語と言い換え可能に使用される。

ポリフェノールは、果皮、果汁およびパルプを含むブドウの他の部分にも存在する。ブドウにおける最高濃度のポリフェノールは、ブドウ種子中に存在する。ブドウ種子は、ワイン醸造所およびブドウジュース工場の廃棄物である。これらの種子は、脂質、タンパク質、炭水化物および品種に依存して4〜8％のポリフェノール（乾燥重量）を含む。ブドウ種子抽出物は、したがって、早期老化、疾患および変性から身体を保護する強力な抗酸化物質である。

ポマース：果汁抽出後に残る果皮、種子およびパルプ。1つの例において、ポマース抽出物は、ブロンズマスカダインポマース抽出物、紫マスカダインポマース抽出物またはそれらの組み合わせである。多くの異なる品種のマスカダインブドウポマースが、出発物質として利用可能であり、それらは雌（雌しべ）品種、例えばBlack Beauty、Black Fry、Darlene、Fry、Higgins、Jumbo、Scuppernong、Sugargate、Summit、SupremeおよびSweet Jennyならびに自家受精品種、例えばCarlos、Cowart、Dixieland、Dixie Red、Fry Seedless、Magnolia、Nesbitt、Noble、Redgate、RegaleおよびSterlingを含む。マスカダインポマースは、抗酸化特性を有する、没食子酸およびエラグ酸を含む、フェノール化合物を含む。

ポマースは、ブドウの果汁の少なくとも90％または95％を含むホールブドウ中に存在し得、または果汁を取り出すためにブドウが圧搾された後、ポマースは、実質的に単離され、本質的にポマースのみからなり得る。

ポマース単独：例えばブドウの圧搾によって果汁を取り出したブドウのポマース部分。本明細書で使用される場合、「ポマース単独」は、その重量の百分率で1％以下の果汁を含むポマースを表す。いくつかの態様において、ポマース単独は、その重量の百分率で0.5％以下の果汁を含む。

プロスタグランジン：ペンタン環を含む、20個の炭素原子を含む生物学的に活性な脂質。プロスタグランジンは、炎症の伝達に関与し、プロスタグランジンE2（PGE2）は、シクロオキシゲナーゼおよびプロスタグランジンEシンターゼを通じてアラキドン酸から生成される。シクロオキシゲナーゼのレベルは、損傷および／または炎症細胞において増加し、それによってPGE2産生も増加する。

精製された：精製されたという用語は完全な純粋さを必要とするのではなく、それは相対的な用語であることが意図されている。したがって、例えば、精製された物質は、例えば果実（例えば、ブドウ）内のその自然環境にある同物質よりも濃縮されているものである。1つの態様において、調製物は、その物質がその調製物の全体量の少なくとも約5％（例えば、少なくとも約10％、約20％、約30％、約40％、約50％、約70％、約80％、約90％、約95％、約98％または約99％であるがこれらに限定されない）となるよう精製される。

範囲：範囲に関して、「x〜yの範囲」または「x〜y」という用語は、xとyの間の任意の値およびその終点値であるxおよびyを含む。

赤ブドウ：赤ブドウは、一般に赤ワインの元となるブドウであり、かつ一般に白ワインの元となる白ブドウよりも高レベルのタンニンを有するブドウである。「赤ワイン」は、暗色のワインの一般用語である。ワインの色の決定は、分光高度計およびLab色空間におけるインデックスの計算を用いてワインの色を評価するための方法を提供するInternational Organization of Vine and Wineにしたがい行われ得る。赤ワインの元となるブドウの例は、Syrah、Merlot、Cabernet Sauvignon、Malbec、Pinot Noir、Zinfandel、Sangiovese、BarberaおよびMuscadineを含む。マスカダインブドウ（ビティス・ロツンディフォリア）は、熟した状態で、ブロンズ色〜暗紫色〜黒色の範囲の色を有する。

選択的抽出：選択的抽出は、標的（例えば、縮合タンニン）の優先的抽出を表す。いくつかの態様において、選択的抽出は、標的が抽出される主な種であることを意味する。

スキンケア組成物：皮膚の健康的、審美的および／または美容的な見た目を改善し得る活性成分を有する局所組成物。そのような改善は、例えば、炎症マーカーのレベルの低減、または時間による老化、ホルモンによる老化および光による老化等の要因によって引き起こされる老化の皮膚科学的兆候の減少；皮膚の脆弱性、毛穴サイズの縮小、コラーゲンおよび／またはエラスチンの喪失の減少；外観の衰えならびに／または細線および／もしくは縮緬皺を含むしわ（lines）および／もしくはしわ（wrinkles）の深化；色素過剰の減少；皮膚の色合い、光沢、透明さおよび／または張りの改善；皮膚のたるみの減少；抗酸化活性の促進；皮膚の堅さ、膨らみ、質感、柔軟さおよび／または柔らかさの改善；プロコラーゲンおよび／またはコラーゲン産生の改善によって示される。

対象：ヒトおよび獣医学的対象、例えばネコ、イヌまたはウマを含むコンパニオンアニマルの両方を含むカテゴリーである生きた多細胞脊椎生物。「ミトコンドリアの生物発生および／または抗酸化活性の増加を必要とする対象」は、そのような増加からの利益を享受し得る対象、例えば加齢の兆候を減少させ、酸化により引き起こされる組織損傷を埋め合わせしおよび／または心血管の、神経学的な、腫瘍関連の、肌の見た目のもしくは酸化的ストレスに関連するその他の状態を改善することを望む対象である。「炎症の低減を必要とする対象」は、そのような低減からの利益を享受し得る対象、例えば、UV照射等の炎症により引き起こされる組織損傷を埋め合わせするまたは老化、皮膚の見た目もしくは皮膚炎症に関連する他の状態の兆候を減少させることを望む対象である。本明細書で使用される場合、「健康な対象」は、湿疹、心血管疾患または乾癬を含むがこれらに限定されない、いかなる大きな内在する医学的炎症状態も有さない。

タンニン：タンパク質、アミノ酸およびアルカロイドに結合してこれらを沈殿させる天然ポリフェノール生分子。「タンニン」という用語は、本来、動物の皮膚を皮革になめすのに使用されたオーク由来の木材なめし剤の使用を表す。しかし、タンニンという用語は、植物、例えば赤ブドウ種子、種子および茎において見出される500〜3,000超（没食子酸エステル）および最大20,000（プロアントシアニジン）の範囲の分子量を有する大型のポリフェノール化合物に広く適用される。それらの化学組成に基づき、植物タンニンは、加水分解性タンニンおよび縮合タンニンまたはフラボノイドに分類される。加水分解性タンニンは、重合した単純なフェノール物質、例えば没食子酸のおよびそれらの二量体（二没食子酸、エラグ酸）のエステルである。加水分解性タンニンはさらに、加水分解後に没食子酸を生じるガロタンニン、および加水分解後にエラグ酸を放出するエラジタンニンに分類され得る。加水分解性タンニンとは対照的に、縮合タンニンは、加水分解により分解されない。逆に、酸性媒体中で熱にさらされると、それらは徐々に重合し、赤色の非晶質アントシアニン色素、またはフロバフェンと呼ばれる高分子量の不溶性黄褐色産物を形成する。

局所適用：局所的に適用される作用物質は、皮膚の特定の表面領域にのみ適用され、体全体に適用されない。特定の例において、組成物は、皮膚または眼の、効果、例えば細線もしくは縮緬皺の減少が望まれる領域に適用される、または皮膚の、抗炎症効果が望まれる領域、例えばUV照射に曝露された領域に適用される。例えば、組成物は、局所用製剤として、顔の皮膚に適用され得る。皮膚への適用が意図されている局所組成物は、「皮膚用組成物」である。

限外ろ過：力（例えば、圧または濃度勾配）により半透過性膜を通じた分離を行うタイプの膜ろ過。限外ろ過膜は典型的に、膜の分子量カットオフ（MWCO）により特徴づけられる。高分子量の懸濁固形物および溶質は、膜滞留物に保持され、水および低分子量の溶質は、膜通過液とともに膜を通過する。限外ろ過プロセスには異なるタイプのモジュールが使用され得る。そのようなモジュールの例は、プラスチックまたは紙製チューブの内側に配置されたポリマー膜を使用するチューブ型要素；複数の中空ファイバーを含む中空ファイバー設計；平らな膜シートが中心の穴あきチューブの周囲に巻き付けられている薄いメッシュ状スペーサー材によって分離され、管状スチール製加圧容器ケースに収められているらせん巻きモジュール；ならびにろ液を通過させるメッシュ様部品によって分離された平らなプレート上に配置された膜を使用するプレートフレーム組み立て品である。

単位用量：個々にまたは共同で所望の効果、例えば治療効果を生じるよう計算された既定量の活性物質を含む物理的に独立した単位。所望の効果または活性、例えば抗酸化活性または炎症の低減を提供するために、単一の単位用量または複数の単位用量が使用され得る。1つの例において、単位用量は、心血管または認知的健康を促進する所望の量の薬剤を含む。さらなる例において、単位用量は、皮膚の炎症を低減させる所望の量の薬剤を含む。別の例において、単位用量は、複数回分の既定用量の活性物質を含む。

II. 様々な態様の説明
A. その後の脱色のためのマスカダインブドウポマース抽出物の処理前物質の入手
開示される組成物および方法は、タンニンを含む様々な植物抽出物の縮合タンニン含量を低下させるために使用され得る。タンニンは、多くのタイプの植物に広く分布している。タンニンは、葉、芽、種子、根および茎組織で見出され得る。タンニンは、単子葉植物（Wikipediaによれば、44科）および双子葉植物（Wikipediaによれば、180科）で見出され、かつ裸子植物および被子植物で見出される。以下の双子葉植物のすべての種がタンニンを含む：カエデ科（Aceraceae）、マタタビ科（Actinidiaceae）、ウルシ科（Anacardiaceae）、ベニノキ科（Bixaceae）、カンラン科（Burseraceae）、シクンシ科（Combretaceae）、フタバガキ科（Dipterocarpaceae）、ツツジ科（Ericaceae）、スグリ科（Grossulariaceae）、ヤマモモ科（Myricaceae）。イバラモ科（Najadaceae）およびガマ科（Typhaceae）（単子葉植物）のすべての種も、タンニンを含む。縮合タンニン（プロアントシアニジン、ポリフラボノイドタンニン、カテコール型タンニン、ピロカテコール型タンニン、非加水分解性タンニンまたはフラボランを含む）は、シリブカガシ（Ltihcarpus glaber）、サクラ種（Prunus sp）、アカケブラチョ（Schinopsis lorentzil）、モリシマアカシア（Acacia mollissima）、ヨーロッパブドウ（Vitis vinifera）およびコミフォラ・アンギオエンシス（Commiphora angioensis）等の植物種で見出される。マツ樹皮およびトウヒ樹皮は、縮合タンニンを含む。維管束植物（Vascular plants）（例えば、維管束植物（Tracheophytes）、維管束植物（vascular plants））もまた、縮合タンニンを含む。開示される方法は、縮合タンニンを含む任意のこれらの植物の抽出物の縮合タンニン含量を低下させるために使用される。

いくつかの態様において、植物抽出物は、ブドウポマース抽出物、例えば、非限定的に、縮合タンニンを含むマスカダインブドウポマース抽出物である。いくつかの非限定的な例において、植物抽出物は、縮合タンニンを含む赤ブドウポマース抽出物である。例示のみを目的として、この方法および組成物は、脱色前の処理前物質であるマスカダインブドウポマース抽出物を参照して記載される。この具体例において、マスカダインポマース抽出物は、（マスカダインブドウに特有の）エラグ酸の溶解度が向上したブロンズおよび紫マスカダインブドウの混合抽出物である。PCT公開番号WO 2010/014870およびPCT公開番号WO 2010/014873ならびに米国特許第8,568,804号、米国特許第9,132,162号および米国特許第9,173,916号（これらの5つの文献のすべてが参照により本明細書に組み入れられる）に開示されるように、エラグ酸溶解度が改善されたマスカダイン抽出物は、ブロンズおよび紫マスカダインポマース抽出物を組み合わせることによって取得され得る。混合抽出物を生成する様々な方法、例えば、紫マスカダインポマース抽出物に対するブロンズマスカダインポマース抽出物の比が0.1〜10（重量対重量）、例えば0.3〜3（重量対重量）の範囲となるようブロンズマスカダインポマース抽出物と紫マスカダインポマース抽出物を混合することによるマスカダインポマース抽出物の生成、が開示されている。混合抽出物は、ブロンズおよび紫マスカダインブドウの個別抽出およびその後の抽出物の混合により、または所望の比で組み合わされたブロンズおよび紫マスカダインブドウの同時抽出により生成され得る。開示される例において、処理前抽出物は、マスカダインポマースの水性抽出物である。

出願人による組み入れられるPCT公開番号WO 2010/014870、PCT公開番号WO 2010/01487、米国特許第8,568,804号、米国特許第9,132,162号および米国特許第9,173,916号は、処理前マスカダインポマース抽出組成物が、改善された抗酸化活性を有することを開示している。開示される組成物を製造する方法は、少なくとも2％のポリフェノール含量を有するマスカダイン（ビティス・ロツンディフォリア）ポマース抽出物と少なくとも5％の最低純度のマスカダイン以外の供給源由来のトランス・レスベラトロールを、マスカダインポリフェノール対トランス・レスベラトロールの比が0.1/1〜10/1（重量対重量）の範囲となるよう組み合わせる工程を含む。開示される組成物を製造する方法は、少なくとも2％のポリフェノール含量を有するマスカダイン（ビティス・ロツンディフォリア）ポマース抽出物と少なくとも5％の最低純度のマスカダイン以外の供給源由来のトランス・レスベラトロールを、マスカダインポマース抽出物対トランス・レスベラトロールの比が0.2/1〜50/1（重量対重量）、例えば、20/1〜50/1（重量対重量）、例えば18対1（重量対重量）を含む、5/1〜50/1（重量対重量）の範囲となるよう組み合わせ、それによって抗酸化活性を有するマスカダインポマース抽出物およびトランス・レスベラトロールの混合物を製造する工程を含む。

いくつかの態様において、紫に対するブロンズマスカダインポマース処理前抽出物の比は、0.1〜10、例えば0.3〜3の範囲である。例えば、ブロンズマスカダインポマース抽出物対紫マスカダインポマース抽出物の比は、約2.75対約1（重量対重量）、2.5対約1（重量対重量）、約2.25対約1（重量対重量）、約2対約1（重量対重量）、約1.5対約1（重量対重量）または約1対約1（重量対重量）である。他の例において、その比は、約10対約1、約7.5対約1、または約5対約1である。本明細書で使用される場合、「約」という用語は、±0.5と定義される。特定の例において、ブロンズマスカダインポマース抽出物対紫マスカダインポマース抽出物の比は、約2.25対約1（重量対重量）である。

特定の態様において、マスカダイン（ビティス・ロツンディフォリア）ポマース処理前抽出物は、少なくとも2％のポリフェノール含量を有する。例えば、ポリフェノール含量は、少なくとも3％、少なくとも3.5％、少なくとも4％、少なくとも4.5％、少なくとも5％、少なくとも6％、少なくとも8％、少なくとも10％、少なくとも12％または少なくとも14％である。特定の例において、マスカダイン（ビティス・ロツンディフォリア）ポマース抽出物は、約4％のポリフェノール含量を有する。

いくつかの態様において、開示されるマスカダインポマース処理前抽出物は、液体中20％〜50％の固形物、例えば少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも35％、少なくとも37％、少なくとも40％、少なくとも42％、少なくとも44％、少なくとも46％または少なくとも48％の固形物を含む。特定の態様において、抽出物は、液体中約40％の固形物を含む。

処理前抽出物は、任意の抽出方法、例えば加圧下での圧搾または溶媒を用いた抽出によって取得され得る。特定の例は、例えばアルコール、水（例えば熱水）またはアルコールと水の組み合わせを用いた溶媒抽出である。抽出物はさらに、抽出された糖を除去するために発酵され得る。1つの例において、発酵は、ブロンズマスカダインポマースおよび紫マスカダインポマースを抽出した後であるが、ブロンズマスカダインポマース抽出物と紫マスカダインポマース抽出物を組み合わせて開示されるマスカダインポマース抽出物を生成する前に行われる。他の例において、発酵は、ブロンズマスカダインポマース抽出物と紫マスカダインポマース抽出物を所望の抽出後比（例えば、非限定的に、約2：25〜約1のブロンズ対紫比）で組み合わせた後に行われる。

発酵は、当業者に公知の任意の方法によって行われ得る。例えば、酵母および酵母栄養分がポマースに添加され、そして残留する糖分がエタノールに変換されるまで発酵が継続され得る。1つの例において、1倍（未濃縮）抽出物1000ガロンあたり2ポンドの酵母が添加され；発酵は典型的に3日後に完了する。他の例において、酵母の量および／または株ならびに発酵の期間および温度は、当業者に公知の個別の方法にしたがい変更され得る。いくつかの例において、ポマース抽出物中の残留物を除去するおよび／もしくは沈殿させるためまたは抽出収量を改善するために酵素が使用される。そのような酵素の例は、Scott Laboratories等の販売元から市販されているペクチナーゼまたはアスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）由来の酵素ブレンドを含む。これらの酵素は、発酵前または発酵中にポマース抽出物に添加され得る。

いくつかの態様において、ブロンズマスカダインポマース抽出物および紫マスカダインポマース抽出物は、発酵前および／または後にろ過される。ろ過は、当業者に公知の一般的方法にしたがい行われ得る。特定の例において、抽出物は、適当なメッシュサイズのふるい、例えばUSPメッシュ（典型的に120メッシュ）または同等の布製フィルター（例えば、Millipore Corporationから市販されているフィルター）を通じてろ過される。

特定の態様において、マスカダインポマース処理前抽出物を生成する方法はさらに、各抽出物が液体中20％〜50％の固形物、例えば少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも35％、少なくとも37％、少なくとも40％、少なくとも42％、少なくとも44％、少なくとも46％または少なくとも48％の固形物を含むよう、ブロンズマスカダインポマース抽出物および紫マスカダインポマース抽出物を濃縮する工程を含む。特定の態様において、抽出物は、各抽出物が液体中約40％の固形物を含むよう濃縮される。本明細書に開示されるサンプル濃縮方法を含む、一般的に公知となっているサンプル濃縮方法がブロンズおよび紫抽出物を濃縮するために使用され得る。

上記の抽出方法の例のいずれにおいても、ホール紫ブドウを紫ポマースと置き換えることができる。紫マスカダインポマース抽出物は、（a）ホール紫マスカダインブドウの抽出物；（b）ホールブドウ以外に由来する紫マスカダインポマースの抽出物；または（c）（a）および（b）の混合物を含み得る。ホール紫ブドウは、ブドウポマース以外由来のアントシアニンの供給源であるブドウ果汁を含み、そしてホールブドウから溶媒抽出されたとき、これらのアントシアニンは、ブロンズおよび紫マスカダインブドウ抽出物の混合物におけるエラグ酸の溶解度を驚くほど向上させることが見出されている。しかし、アントシアニンの追加の供給源はまた、紫マスカダインブドウ以外、例えばブルーベリー、ブラックベリーまたはラズベリーの有色果実または有色果実の副産物よっても提供され得る。他の例において、アントシアニンは、果実加工工程の生産物、例えば果汁濃縮物、または果実加工工程の副産物、例えば果実ピューレ加工工程から分離される果皮由来である。

これらの方法のいずれかによって得られるマスカダインブドウポマース処理前抽出物は、抽出物に暗色を与えるレベルの縮合タンニンを有する。処理前抽出物は、したがって、以下に記載されるように、タンニン含量を減少させ脱色抽出物を生成するためにさらに処理され得る。

B. 脱色抽出物の生成のための抽出物のタンニン含量の削減
処理前抽出物が得られたら、それは脱色プロセスに供される。マスカダインブドウポマース抽出物のタンニン含量を削減する脱色プロセスの例が、図1に示されている。処理前物質は、マスカダインポマース抽出液濃縮物1である。この例において、濃縮物1は、米国特許第8,512,771号および同第9,173,916号に記載されるように40〜45％固形物である。濃縮物1は、純水を添加することによって10％未満固形物になるよう希釈され、8％固形物溶液2が生成される（固形物率は2〜10％の範囲であり得る）。溶液2は、130〜135゜Fに加熱され、物質を浄化するために精密ろ過装置3を通される。精密ろ過プロセスは、処理前物質が非常に低レベルの固形物（2〜5％）となるまで希釈されている場合により効果的であり、加熱もまたこのプロセスを助ける。この具体例において、精密ろ過装置3は、その後の限外ろ過処理4のための準備として溶液から微生物および懸濁粒子を除去する0.45ミクロン孔サイズおよび200,000ダルトン（または200 kDa）のNMWCOの機械的フィルターである。浄化された抽出物は、第1段階の限外ろ過工程を開始する前に、貯蔵タンク中でただちに＜50゜Fまで冷却される。

冷却および浄化された抽出物は、次に、1000ダルトン（または1 kDa）の標準的な名目分子量カットオフの限外ろ過膜を用いる限外ろ過処理4に供され、5で膜通過液（画分A）が得られる。画分Aは、1000未満の分子量を有する化合物を含み、主として有機酸、糖およびミネラルを含むが、驚くべきことに1％未満のフェノール化合物も含む。これらのフェノール化合物は、微量のフェノール酸およびフラボノイド、例えば没食子酸およびケルセチンを含む。最大1,000ダルトンの分子量を有する分子は限外ろ過膜を通過することができるが、この画分は、おそらくフェノール酸と処理前物質中に含まれる他の分子、おそらく繊維との間の物理化学的相互作用により、極少量のフェノール酸成分を含むことが予想外に見いだされた。この予想外の発見は、最低500ダルトンから最大5000ダルトン（または5 kDa）の標準的な名目分子量カットオフの限外ろ過膜を使用して得ることができる。画分Aは、他の製品において「マスカダイン」型フレーバー成分として利用され得るが、この物質は、スキンケア抽出物を調製するプロセスにおいては廃棄される。

低分子量限外ろ過（上記）から残存する膜滞留物（限外ろ過膜を通過しない物質）は、およそ2％固形物濃度になるよう純水で再構成され、30 kDaカットオフ限外ろ過膜を用いた第2の限外ろ過プロセス6に供される。得られる膜滞留物7（画分C）は廃棄され、脱色マスカダインポマース抽出物を含む膜通過液8（画分B）は、スキンケア組成物へのさらなる処理のために保持される。画分Cは主に、重合した縮合タンニン、タンパク質および繊維を含む。これに対して、画分Bは、ポリフェノールが濃縮されており（9〜10％乾燥重量）、糖類が少なく（＜4％乾燥重量）、重合性縮合タンニン含量が大きく減少している（最低で、初期縮合タンニン含量の70％の減少が起こる）。最大30,000ダルトンの分子量を有する分子は限外ろ過膜を通過することができるので、重合性縮合タンニンの少なくとも70％が、おそらく物理化学的相互作用により、画分Cに残存することが予想外に見いだされた。この予想外の発見は、最低25,000ダルトン（25 kDa）から最大100,000ダルトン（または100 kDa）の標準的な名目分子量カットオフの限外ろ過膜の使用によるものであり得る。

画分Bはまた、繊維（約1.0％）、タンパク質（約7.8％）、脂肪（約0.1％）および有機酸（約16.0％）を含む。重合性縮合タンニンが濃縮された画分Cは、様々な製品において抗酸化物質の供給源として利用され得るが、この物質は、スキンケア抽出物の調製プロセスにおいては廃棄される。脱色プロセスにおけるこの時点で、マスカダイン果実抽出物である画分Bは、最小限の糖含量（＜4％乾燥重量）を有し、重合性縮合タンニンが大きく減少している。画分Bは、強力なポリフェノール抗酸化物質を含むが、縮合タンニンの除去およびその最小限の糖含量により茶色への変色の可能性がほとんどまたは全くないという理由から、スキンケア製品における使用に関して理想的である。局所的使用のための様々な配合物に導入されたとき、茶系の淡色は検出されない。

膜通過液8（画分B）は、スキンケア製品において望ましくない臭気成分（バターのような／酵母のような臭い）を除去するために、重量対重量基準で0.3％の活性炭でそれを処理することによってさらに処理される。活性炭を用いた処理後、画分Bは、すべての残留する活性炭を除去するために最終精密ろ過プロセス9に供される。精密ろ過後、溶液は、乾燥後の流動性粉末化を促進するための酸化マグネシウムを用いた無機化の前に30〜40％固形物に濃縮される10。酸化マグネシウムは、抽出物中に存在するすべての有機酸のマグネシウム塩を形成させる無機化プロセスを完全に促進するために乾燥重量基準で7.0％の投入量で濃縮物に添加される。最後に、生成物は、均一な粒子サイズを提供する乾燥／粉末化11に供される。この粉末化段階で、生成物のケーキングを防ぐために二酸化ケイ素が添加される。

処理前物質と比較して、画分Bは、上記プロセスに供したとき、質量が75〜80％減少するが、ポリフェノール含量は35〜40％しか減少しない。したがって、同等質量基準で画分Bを処理前物質と比較すると、画分Bにおいておこる非タンニンポリフェノール含量の減少は、わずか18〜20％である。したがって、画分Bにおけるポリフェノールの主な損失は、重合性縮合タンニンの化学クラスに起因するものであり、他のポリフェノール化学クラスの損失は実質的に検出されなかった（図3Aおよび3Bのクロマトグラフを参照のこと）。したがって、画分Bは、平均で、9％のマスカダインポリフェノール（主に非タンニン）を含み、処理前物質は、平均で、14％の、タンニンおよび非タンニンの両方のマスカダインポリフェノールからなるポリフェノールを含む。表1〜3は、処理前物質 対 上記プロセスにより生成される脱色抽出物の、栄養素およびポリフェノール含量の比較を示し、図3Aおよび図3Bは、クロマトグラフ比較を提供する。

表1は、処理前物質および脱色抽出物の（乾燥抽出物の％で表される）栄養素プロフィールを比較している。栄養素プロフィールは非常に似ているが、処理前物質の質量減少により、タンパク質および単純糖等の一部栄養素クラスの濃縮がみられる。とはいうものの、脱色抽出物の最終単純糖（単糖）含量は、非常に低く（＜4〜5％）、したがって局所適用される製品における使用に適している。表2は、乾燥重量基準で、各抽出物の総ポリフェノール含量を示しており、ポリフェノール含量を、縮合タンニン含量および縮合タンニン以外のポリフェノールの含量にさらに分類している。表2に示されるように、総ポリフェノール含量は脱色抽出物において約35％低い（90対140 mg/g乾燥重量）が、脱色抽出物の縮合タンニン含量は、処理前抽出物で見いだされるものよりも少なくとも70％低い（6対21 mg/g乾燥重量）。したがって、ポリフェノール損失の大部分（およそ80％）は、縮合タンニンの除去に起因するものであり、これにより上記プロセスを用いた場合の他のポリフェノールに対する縮合タンニンの優先的除去が確認された。

図3Aおよび3Bのクロマトグラフに示されるように、かつ主要／特徴的なマスカダインポリフェノールがプロファイルされている表3でさらに示されているように、脱色抽出物は、処理前物質で見いだされるすべの主要ポリフェノール（表4に列挙されている）（フェノール酸、フラボノイド、アントシアニンおよび加水分解性タンニン）を保持している。分析法を用いて、処理前抽出物中の総ポリフェノールのおよそ30％（140 mg中43.84 mg）が、単一のフェノールクラスおよび／または化合物と測定され、これらを脱色抽出物における対応するクラス／化合物と比較した。表3に示されるように、重要な（およびいくつかの例においては特有の）マスカダインポリフェノールクラス、例えばフェノール酸、エラグ酸、没食子酸、エラジタンニンおよびガロタンニンが、脱色抽出物において検出可能であり、いくつかの例において、選択された化合物、例えば没食子酸の割合が増加していた。したがって、2つの抽出物間のポリフェノール含量の主たる相違は、縮合タンニン含量の70％減少である。まとめると、縮合タンニン含量が減少し、それに加えて単純糖が低レベルであるため、脱色画分Bは、典型的使用量の局所用配合物に添加される場合にスキンケア用途に適する。これらの配合物は、スキンケアに使用されるものであり（以下を参照のこと）、保管される場合も、製品が時間と共に茶色に変化するまたは暗色化することがない点でより安定的である。

縮合タンニンのレベルを選択的に低下させる開示される抽出方法は、驚くべきことにかつ有利なことに、高レベルの縮合タンニンの存在が原因となる欠点を回避しつつ、皮膚の処置に有益な他のポリフェノールのレベルを保存または向上させる。

（表１）処理前および脱色マスカダイン抽出物の栄養素プロフィール

（表２）処理前および脱色マスカダイン抽出物のポリフェノール含量

*没食子酸当量アッセイ（UV/VISを通じた総ポリフェノール） - UV/VISを通じた縮合タンニンアッセイ = 非縮合タンニン含量

（表３）処理前および脱色マスカダイン抽出物のポリフェノールプロフィール

（表４）主要なマスカダインブドウポリフェノール

C. 皮膚用製品
縮合タンニン含量が減少した脱色マスカダインポマース抽出物は、様々なスキンケア製品、例えばジェルオイルクレンザー、レチノールセラム濃縮液、日焼け止め効果を有するデイモイスチャライザー、クラリファイングトリートメントトナーパッドおよび顔用皮膚再生クリームに組み込まれ得る。マスカダインポマース抽出物は、スキンケア組成物の重量基準で0.00001％〜1％、例えばスキンケア組成物の重量基準で0.0001％〜1％、スキンケア組成物の重量基準で0.001％〜1％またはスキンケア組成物の重量基準で0.01％〜1％であり得る。いくつかの態様において、マスカダインポマース抽出物は、例えば、スキンケア組成物の重量基準で0.025％〜1％、例えば0.025〜0.25％である。他の態様において、マスカダインポマース抽出物は、例えば、組成物の重量基準で0.0004％〜0.4％である。生成されるスキンケア組成物は、皮膚にとって有益なポリフェノールプロフィールを有するが、該製品は、その低い縮合タンニン含量により相対的に脱色されている。本明細書で使用される場合、「低い縮合タンニン含量」は、重量基準で10％またはそれ未満の縮合タンニン含量を意味する。

脱色されなかったマスカダインポマース抽出物と比較して低いレベルの縮合タンニン含量を有する脱色マスカダインポマース抽出物を調製する開示される方法は、CおよびD節に記載されるように局所用皮膚用組成物および炎症の処置方法において使用され得る。AおよびB節に開示される任意の方法が、皮膚に投与するために配合された組成物を調製するために使用され得る。

1. バイオアッセイは皮膚に対するマスカダインポマース抽出物の有益な効果を示す
様々なバイオアッセイが、皮膚に対するマスカダインポマース抽出物の作用様式を実証している。脱色された抽出物を含むマスカダインポマース抽出物スキンケア組成物の有益な効果が、エラスターゼ、コラゲナーゼ、DPPH、TT二量体、ケラチン生成細胞生存率およびチロシナーゼ試験に関して、図4にまとめられている。これらの試験は、以下のように実施した。

a. エラスターゼおよびコラゲナーゼ阻害
ヒト皮膚線維芽細胞を培養し、エラスターゼ酵素の供給源として使用した。この酵素を、エラスターゼ緩衝液に細胞を溶解させ、溶解産物の可溶性部分を保持することによって線維芽細胞から部分精製した。次いで、この線維芽細胞溶解産物の一部分を、試験物質および合成性エラスターゼ基質であるSuc-(Ala3)-p-ニトロアニリン（STANA）と共にインキュベートした。エラスターゼは、この基質に対して、p-ニトロアニリンを放出するよう作用し、これを分光光度計を用いて405 nmの波長で吸光度を測定することによって検出することができる。エラスターゼ酵素の阻害は、阻害されない酵素との比較で、放出されたp-ニトロアニリンの量の減少によって示される。

マトリクスメタロプロテイナーゼ1（MMP-1）は、その潜在形態でおよそ52〜56 kDの分子量を有する細胞外プロテアーゼである。プロ酵素の切断により、22〜46 kDのMMP-1が活性酵素となり、コラーゲン、ゼラチンおよびエンタクチンを含む多くの基質を分解することができる。ヒトの皮膚において、増加したMMP-1活性は、いくつかの疾患状態、UV照射への曝露を通じてまたは自然老化プロセスの一部として誘導され得る。これによって、MMP-1によるコラーゲンの分解がその置換速度を上回る不均衡な状態が形成され得る。したがって、MMP-1活性を阻害する物質は、有益であり得る。MMP-1活性の阻害剤をスクリーニングするため、ヒト組み換えMMP-1を、チオペプトリド（thiopeptolide）基質、阻害剤候補および5,5'-ジチオビス（2-ニトロ安息香酸）（DTNB）の存在下でインキュベートする。チオペプトリド基質がMMP-1によって分解されると、それはスルフヒドリル基を放出し、これはDTNBと反応することができ、2-ニトロ-5-チオ安息香酸を形成し、これを412 nmで分光検出することができる。したがって、MMP-1活性は、412 nmでの吸光度に比例し、阻害剤の存在下で、この吸光度は低下する。

b. DPPHアッセイ
このアッセイは、安定なラジカルである2,2-ジフェニル-1-ピクリルヒドラジル（DPPH）に対する抗酸化物質の捕捉活性の測定に基づく。フリーラジカルであるDPPHは、517 nmで強い吸収を示し、この吸収は、DPPHが抗酸化化合物と反応し、ヒドラジンに変換されると低下する。DPPHアッセイは、ラジカル化合物が安定であり、かつ他のラジカル捕捉アッセイにおけるように生成する必要がないという理由から、抗酸化物質の捕捉活性を評価する有効かつ簡単なアッセイとみなされている。

c. TT二量体アッセイ
このアッセイで使用される試験システムは、多層化された、高度に分化したヒト表皮モデルを形成するよう培養された正常なヒト由来表皮ケラチン生成細胞からなる皮膚モデルである、MatTek EpiDermであった。この研究において、この組織を、UVB曝露前に試験物質を用いて一晩（予防を評価するための前処置グループ）またはUVB照射後に一晩（修復を評価するための後処置グループ）のいずれかで局所的に処置した。曝露および処置後、EpiDerm組織からDNAを抽出し、チミン二量体含量についてELISAベースの方法を用いてアッセイした。

d. ケラチン生成細胞生存率に対する紫外線B照射曝露
ヒト表皮ケラチン生成細胞を、試験物質で24時間処置し、次いでUVB光（およそ50 mj/cm²）に曝露した。次いで、細胞生存率の変化を、UVB曝露から24時間後に、MTTアッセイを通じて決定した。MTTアッセイは、細胞の生存を反映する細胞の代謝活性の比色分析である。生存細胞はMTTを取り込むことができ、これはその後にミトコンドリアによって還元され、不溶性の紫色のホルマジン結晶を形成する。次いでイソプロパノールを用いてこれらの結晶を細胞から抽出し、分光的に定量する。紫色の強度は、生存細胞の数に正比例し、試験物質の毒性に反比例する。

e. チロシナーゼ阻害
精製されたチロシナーゼ酵素を、L-DOPA（L-3,4-ジヒドロキシフェニルアラニン）を含むリン酸ナトリウム緩衝液中に混合し、試験物質と共にインキュベートした。30分間のインキュベート後に、（チロシナーゼ活性を反映する）DOPAクロムに変換されたL-DOPAの量を、比色アッセイを通じて評価する。コウジ酸が、チロシナーゼ阻害の陽性対照である。

f. 結果
図5は、エラスターゼ阻害試験の結果を示し、エラスチン減少を阻害することによる皮膚の弾力性に対する潜在的効果を実証している。図6は、コラーゲン減少を回避することにより皮膚の堅さを維持する能力を示すコラゲナーゼ阻害試験の結果を示す。図7は、トロロックス当量で示されるフリーラジカル捕捉力を測定するDPPHアッセイの結果であり、TE値が高いほど、抗酸化力が大きい。脱色抽出物は、1500トロロックス当量よりも高い抗酸化活性を提供した。図8は、UVB曝露前の1％マスカダイン抽出物前処置がDNA損傷を完全に予防したTT二量体アッセイの結果を示す。抽出物は、陽性対照（1 mMトロロックス）よりも優秀であり、UVB曝露後の1％マスカダイン抽出物処置（後処置）もDNA損傷の45％低減を示し、これによりDNA修復に対する効果が示唆され、0.1％からの効果は前および後処置の両方において1％よりも低かった。図9は、紫外線B曝露後の細胞生存率を示し、マスカダイン抽出物は、未処置細胞と比較して細胞生存を有意に増加させ、その増加は20μMトロロックスにおける場合よりも良好でさえあった。図10は、色素過剰を予防する能力を示唆する、チロシナーゼ阻害を示す。脱色抽出物は、チロシナーゼを実質的に阻害することができ、望まれない加齢または曝露に関連する皮膚の色素沈着を回避するのを助けると考えられる。

図11は、脱色抽出物が処理前抽出物のDNA保護活性を保持していることを示す比較アッセイである。図11は、脱色局所用マスカダインポマース抽出物（TME）と脱色しなかった経口投与マスカダインポマース処理前抽出物（OME）の間のTT二量体DNA損傷比較アッセイのグラフである。OMEは、米国特許第8,568,804号、米国特許第9,132,162号および米国特許第9,173,916号に開示される抽出物である。TMEおよびOMEは両方とも、未処置グループと比較して、TT二量体形成の減少により測定される皮膚組織におけるUV傷害により引き起こされるDNA損傷を有意に防いだ。DNA損傷の低減に関して、OMEとTMEの間に統計学的な差はなかった。

まとめると、局所用スキンケア製品において重量基準で0.00001％〜1％、例えば、非限定的に、重量基準で0.025％〜0.25％の濃度で使用される開示されるマスカダイン抽出物は、低下したレベルの縮合タンニンを有し得、また、皮膚修復力の向上および皮膚細胞生存率の上昇を含む、皮膚の弾力性および皮膚の堅さの改善、暗色のしみの形成の減少、フリーラジカル捕捉による抗酸化活性の改善、および紫外線B光からの保護に関連する特性を示す。抽出物の脱色は、脱色抽出物における全体的なフェノールプロフィールの維持により、抽出物の皮膚保護特性に有意に影響しない。

2. マスカダインポマース抽出物はタンパク質の糖化を阻害する
終末糖化産物（AGE）は、酸化ストレスにより加速するプロセスである、細胞性および循環性のタンパク質および脂質への糖分子の付加によって生成される。様々なAGE分子が体内で検出されており、重要なことに、AGEレベルの増加は、疾患、例えば糖尿病、神経変性、関節炎および慢性炎症障害に関連する。さらに、AGEの蓄積が正常な老化プロセスの根底にあり、AGEレベルが実年齢と共に上昇するだけでなく、寿命を延ばす介入（例えば、カロリー制限）がAGEレベルを低減させることが、多数の証拠によって示唆されている。AGEレベルは、年を取るにつれ皮膚において増加し、コラーゲンおよび他の皮膚タンパク質の糖化が、老化した皮膚の見た目および機能の変化に寄与する。

現在の研究は、AGEが2つの機構を通じて細胞の老化および機能障害に寄与することを示唆している。第1に、糖は、タンパク質に損傷を与え、正常な機能を妨害し、細胞生存率を低下させ得る。第2に、AGEは、それらの終末糖化産物受容体（RAGE）との相互作用を通じて、危害を及ぼす炎症サイクルを開始すると考えられ、RAGEの活性化は、最終的に細胞死に導く複数の炎症経路を誘導する。

すべてではないがいくつかのポリフェノールは、AGEタンパク質の形成を阻害することが示されている。したがって、低下したタンニンレベルを含む脱色局所用マスカダイン抽出物（TME）がタンパク質の糖化を阻害する能力を保持しているかどうかを決定した。そのために、TMEの効果を、元の／経口用マスカダイン抽出物（OME）のそれらと比較した。AGEの形成は、Farrar et al., BioFactors 30: 193-200, 2007に記載される標準的な蛍光アッセイの改良版を用いて測定した。簡単に説明すると、血清アルブミンを、リン酸緩衝液中でフルクトースと共に37℃で72時間インキュベートし、蛍光強度を370/440の励起／発光波長で測定する。（μgポリフェノール/ml緩衝液に標準化された）様々な濃度のマスカダイン抽出物を対照媒体と比較し、結果を対照（媒体）サンプルにおいて生成されるAGE形成のパーセント阻害で表す。

図12に示されるように、OMEおよびTMEの両方ともに、AGE形成の阻害に関して、用量関連様式で優れた活性（効果）を示した。両方の抽出物において、AGE形成の最大阻害は、15〜20μgポリフェノール/mlの濃度で95〜100％に達した。しかし、OMEは、AGE形成を50％阻害するのに必要とされる濃度（IC₅₀）により示されるように、TMEよりも強力であった。OMEのIC₅₀値は0.65μgポリフェノール/mlであり、TMEのIC₅₀値は3.94μgポリフェノール/mlであった。このことは、タンニンがAGE阻害活性に寄与するものの、TME中に残存する他のマスカダインポリフェノールも、タンパク質の糖化の阻害に関してOMEにおいて見いだされたのと同等に効果的であることを示唆している。

D. 炎症を低減させるための局所組成物
有効量の脱色マスカダイン（ビティス・ロツンディフォリア）ポマース溶媒抽出物、ベータ・グルカンおよびブドウ種子抽出物を含む局所組成物、ならびにそれらの使用が、本明細書に開示される。この局所組成物はさらに、皮膚に適用されたときに炎症を低減させるのに十分な量で存在する他の成分、例えばパンテノール、ビタミンCおよび／またはスーパーオキシドジスムターゼを含み得る。例えば、この局所組成物はまた、有効量のビタミンA、ビタミンEまたはビタミンAおよびEを含み得る。炎症の低減は、皮膚細胞によるIL-1アルファ、IL-6、プロスタグランジンE2またはそれらの任意の組み合わせの産生の減少を含み得る。

UV照射の結果としての炎症を含む、皮膚における炎症の既知の影響、真皮および表皮細胞損傷機構を妨げる上での多くの従来的な皮膚用製品の不十分さ、ならびにUV光の傷害効果を阻止するための十分な保護を日常的に身に着けることに関する公衆の不本意さから、炎症、例えば、非限定的に、UV光に起因する炎症の有害な効果からの保護を提供する効果的な代替製品が求められている。本明細書に開示される局所組成物は、様々な成分を消費者に受け入れられる形式で組み合わせつつ、同時に皮膚炎症の複数のマーカーの産生を効果的に低下させることによってこれらの目的を達成する。

減少した縮合タンニン含量を有する本明細書に記載される脱色マスカダインポマース溶媒抽出物は、様々な局所組成物に組み込むことができる。これらの局所組成物は、皮膚にとって有益なポリフェノールプロフィールを有するが、該組成物は、その低い縮合タンニン含量により相対的に脱色されている。本明細書で使用される場合、「低い縮合タンニン含量」は、重量基準で10％またはそれ未満の縮合タンニン含量を意味する。この組成物は、脱色マスカダインポマース抽出物、ベータ・グルカンおよびブドウ種子抽出物を含む。

1. 脱色マスカダインポマース溶媒抽出物
開示される組成物および方法は、脱色しなかったマスカダインポマース抽出物と比較して低いレベルの縮合タンニン含量を有する脱色マスカダインポマース抽出物を含む。脱色マスカダインポマース処理前抽出物は、上記のA節およびB節に開示されるようにして調製され得る。本明細書に開示される組成物はいずれも、皮膚への投与用に配合された脱色マスカダインポマース抽出物を含み得る。

縮合タンニンのレベルを選択的に低下させる本明細書に開示される抽出方法は、驚くべきことにかつ有利なことに、高レベルの縮合タンニンの存在に起因する欠点を回避しつつ、皮膚にとって有益な他のポリフェノールのレベルを保存または向上させる。混合抽出物を生成する方法は、ブロンズマスカダインポマース抽出物と紫マスカダインポマース抽出物を組み合わせて、紫マスカダインポマース抽出物に対するブロンズマスカダインポマース抽出物の比が0.1〜10（重量対重量）、例えば0.3〜3（重量対重量）の範囲であるマスカダインポマース抽出物を生成する工程を含む。特定の態様において、脱色マスカダインポマース溶媒抽出物は、そのような混合された処理前抽出物から調製される。

混合処理前抽出物は、ブロンズおよび紫マスカダインブドウの個別抽出ならびにその後の抽出物の混合により、または所望の比で組み合わされたブロンズおよび紫マスカダインブドウの同時抽出により生成され得る。開示される例において、脱色マスカダインポマース溶媒抽出物は、処理前混合液体マスカダインポマースの水性抽出物である。

いくつかの態様において、処理前液体抽出物における紫マスカダインポマース抽出物に対するブロンズマスカダインポマース抽出物の比は、0.1〜10、例えば0.3〜3の範囲である。例えば、ブロンズマスカダインポマース抽出物対紫マスカダインポマース抽出物の比は、約2.75対約1（重量対重量）、2.5対約1（重量対重量）、約2.25対約1（重量対重量）、約2対約1（重量対重量）、約1.5対約1（重量対重量）または約1対約1（重量対重量）である。他の例において、その比は、約10対約1、約7.5対約1、または約5対約1である。本明細書で使用される場合、「約」という用語は、±0.5と定義される。特定の例において、ブロンズマスカダインポマース抽出物対紫マスカダインポマース抽出物の比は、約2.25対約1（重量対重量）である。

特定の態様において、混合処理前マスカダイン（ビティス・ロツンディフォリア）ポマース液体抽出物は、少なくとも約2％のポリフェノール含量を有する。例えば、ポリフェノール含量は、少なくとも約3％、少なくとも約3.5％、少なくとも約4％、少なくとも約4.5％、少なくとも約5％、少なくとも約6％、少なくとも約7％、少なくとも約8％、少なくとも約10％、少なくとも約12％または少なくとも約14％である。特定の例において、混合処理前マスカダイン（ビティス・ロツンディフォリア）ポマース液体抽出物は、約4％のポリフェノール含量を有する。

いくつかの態様において、開示される混合処理前液体マスカダインポマース抽出物は、液体中20％〜50％の固形物、例えば少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも35％、少なくとも37％、少なくとも40％、少なくとも42％、少なくとも44％、少なくとも46％または少なくとも48％の固形物を含む。特定の態様において、混合処理前抽出物は、液体中約40％の固形物を含む。

特定の態様において、脱色マスカダインポマース溶媒抽出物は、ブロンズおよび紫マスカダインポマースの液体抽出物の組み合わせである。脱色マスカダインポマース溶媒抽出物のいくつかの態様において、紫マスカダインポマース抽出物に対するブロンズマスカダインポマース抽出物の比は、約0.1〜約10（重量対重量）、例えば約0.3〜約3（重量対重量）の範囲である。

いくつかの例において、脱色マスカダインポマース溶媒抽出物のフェノール成分は、約2〜3％のエラグ酸および約30〜31％の没食子酸、例えば、約2〜3％のエラグ酸、約3〜4％のエラグ酸グリコシド、約30〜31％の没食子酸、約2〜3％のケルセチン、約10〜11％のガロタンニン、約7〜8％のエラジタンニン、約29〜30％のプロアントシアニジン、約4〜5％のアントシアニン、約2〜3％のカテキンおよび約6〜7％のフェノール酸を含む。

局所組成物に使用される紫マスカダインポマース抽出物は、ホール紫（ビティス・ロツンディフォリア）マスカダインブドウの抽出物、ホールブドウ以外に由来する紫マスカダインポマースの抽出物、またはその両方からなり得る。1つの態様において、脱色マスカダイン（ビティス・ロツンディフォリア）ポマース溶媒抽出物は、最初の圧搾後に得られ、果皮、種子、パルプおよび残留果汁を含む。

特定の態様において、脱色マスカダインポマース溶媒抽出物は、抽出物の重量基準で、約7％〜約10％のポリフェノール、例えば約9％〜約10％のポリフェノール、および約5％未満の単糖類、例えば約4％未満の単糖類を含み得る。特定の例において、脱色マスカダイン（ビティス・ロツンディフォリア）ポマース溶媒抽出物は、脱色抽出物の重量基準で、約9％〜約10％のポリフェノール含量を有し、約4％未満の単糖類を含む。

いくつかの非限定的な例において、縮合タンニンは、脱色マスカダインポマース溶媒抽出物の総ポリフェノール含量の約10％未満である。さらなる非限定的な例において、脱色マスカダインポマース溶媒抽出物中の脱色マスカダイン（ビティス・ロツンディフォリア）ポマース溶媒抽出物総ポリフェノールは、少なくとも約85％、例えば少なくとも約90％の、縮合タンニン以外のポリフェノールからなる。

脱色マスカダイン（ビティス・ロツンディフォリア）ポマース溶媒抽出物はさらに、ブドウポマース由来の天然成分を含み得る。例えば、脱色マスカダインポマース溶媒抽出物は、抽出物の重量基準で、約0.5％〜5％の繊維、約7％〜14％のタンパク質、約0.5％〜3％の脂肪および約15％〜20％の有機酸を含み得る。特定の例において、脱色マスカダインポマース溶媒抽出物は、各々抽出物の重量基準の百分率で、約0.5％〜2％または約1％〜2％の繊維、約7％〜9％または約7％〜8％のタンパク質、約0.05％〜1％または約0.1％〜0.5％の脂肪および約15％〜17％または約15.5％〜16.5％の有機酸を含む。

2. さらなる成分および配合物
ベータ・グルカンは、ベータ-D-グルコースを含む天然多糖類であり、特定の穀物、酵母、細菌および真菌の細胞壁において見出される。いくつかの例において、ベータ・グルカンは、穀物から抽出される。特定の例において、ベータ・グルカンは、エンバグであるアベナ・サチバ（Avena sativa）を含むオーツ麦から抽出される。特定の例において、ベータ・グルカンは、約0.5〜1.0 x 10⁶ Daの分子量を有する。ベータ・グルカンは、グルコースの多糖類であり得、1，4および1，3の両方のベータグリコシド結合を含み得る。

ベータ・グルカンは、皮膚の平滑化、皮膚の保湿、線維芽細胞の成長の刺激および／またはコラーゲンの合成、瘢痕の変色の減少、ならびに免疫防御の刺激を含むがこれらに限定されない、健康上の利益を提供すると考えられている。

ブドウ種子抽出物は、ホールブドウ種子から得られ、有益な食事成分を含む。ブドウ種子は、ワイン醸造所およびブドウジュース工場の廃棄物である。これらの種子は、繊維、脂質、タンパク質、炭水化物および通常、品種に依存して約4〜8％のポリフェノール（乾燥重量）を含む。ビティス・ビニフェラブドウ種子抽出物を含む市販のブドウ種子抽出物は、しばしば、乾燥重量の百分率で70〜95％のポリフェノールを提供するよう標準化される。

本明細書に開示される局所組成物に含まれるブドウ種子抽出物は、ビティス・ビニフェラブドウ種子抽出物であり得る。いくつかの例において、ブドウ種子抽出物は、70％未満の総ポリフェノール含量を有し、いくつかの例において、ポリフェノール含量は50％未満である。特定の例において、ブドウ種子抽出物は、38〜50％のポリフェノール、9〜12％の繊維、1〜2％のタンパク質、25〜30％の糖類および1％未満の脂質を含む。

態様において、局所組成物は、局所組成物の総重量に基づく百分率で、約0.001％〜約1.0％の脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、例えば約0.01％〜約0.5％の脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、または約0.025％〜約0.25％の脱色マスカダインポマース溶媒抽出物を含む。特定の例において、局所組成物は、局所組成物の総重量に基づく百分率で、約0.0001％〜約1.0％のベータ・グルカン、例えば約0.0005％〜約0.1％のベータ・グルカン、または約0.005％〜約0.05％のベータ・グルカンを含む。さらなる例において、局所組成物は、局所組成物の総重量に基づく百分率で、約0.00001％〜約0.1％のブドウ種子抽出物、例えば約0.0001％〜約0.05％のブドウ種子抽出物、または約0.0002％〜約0.01％のブドウ種子抽出物を含む。

局所組成物の態様は、局所組成物の総重量に基づく百分率で、約0.001％〜約1.0％の脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、0.0001％〜約1.0％のベータ・グルカン、および約0.00001％〜約0.1％のブドウ種子抽出物を含み得る。例えば、局所組成物は、局所組成物の重量基準で、約0.01％〜約0.5％の脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、約0.0005％〜約0.1％のベータ・グルカン、および約0.0001％〜約0.05％のブドウ種子抽出物を含み得る。さらなる例において、局所組成物は、局所組成物の重量基準で、約0.025％〜約0.25％の脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、約0.005％〜約0.05％のベータ・グルカン、および約0.0002％〜約0.01％のブドウ種子抽出物を含む。

本明細書に開示される局所組成物はまた、ビタミンA（レチノールおよびそのアナログ、例えばパルミチン酸レチニル）ならびに／またはビタミンE（トコフェロールおよびそのアナログ、例えば酢酸トコフェリル）を含み得る。特定の例において、脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、ベータ・グルカンおよびブドウ種子抽出物を含む局所組成物はまた、有効量のビタミンA、ビタミンEまたはビタミンAおよびEの両方を含む。特定の開示される態様において、脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、ベータ・グルカンおよびブドウ種子抽出物を含む局所組成物はさらに、皮膚に適用されたときに炎症を低減させるのに十分な量で存在するパンテノール、ビタミンC（およびそのアナログ、例えばリン酸アスコルビルマグネシウム、パルミチン酸アスコルビル等）およびスーパーオキシドジスムターゼを含む。

開示される組成物は、さらなる成分を含み得る。いくつかの態様において、局所組成物は、組成物の重量基準で、約0.0001％〜約0.5％のビタミンA、約0.00001〜約0.1％のビタミンC、約0.001％〜約1.0％のビタミンE、約0.001％〜約1.0％のパンテノール、約0.00001％〜約0.1％のスーパーオキシドジスムターゼ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。ビタミンC、Aおよび／またはEを含む局所組成物の非限定的な例において、ビタミンCはリン酸アスコルビルマグネシウムの形態であり得、ビタミンAはパルミチン酸ビタミンAの形態であり得、ビタミンEは酢酸ビタミンEの形態であり得る。

特定の例において、パンテノール、ビタミンC、AもしくはE、スーパーオキシドジスムターゼ、またはパンテノール、ビタミンC、AおよびE、ならびにスーパーオキシドジスムターゼの任意の組み合わせを含む組成物は、皮膚に局所適用されたときに、IL-1アルファ、IL-6、プロスタグランジンE2、またはIL-1アルファ、IL-6およびプロスタグランジンE2の任意の組み合わせの産生を減少させ得る。

脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、ベータ・グルカンおよびブドウ種子抽出物を含む局所組成物はまた、香料、保存料、着色料、軟化剤、および物理的反射体、ならびにその存在が美容的または他の目的で望まれ得る任意の他のクラスの物質を含み得る。本明細書に開示される局所組成物を含み得るスキンケア製品の例は、ジェルオイルクレンザー、レチノールセラム濃縮液、デイモイスチャライザー、クラリファイングトリートメントトナーパッドおよび顔用皮膚再生クリームを含む。

局所組成物は、液体、ジェルまたは半固体の形態であり得る。成分のタイプおよび量の選択は、組成物の性質、すなわちジェルか半固体かによって決まり、それは美容化学者の技術水準で行われることである。例えば、本発明の半固体組成物には、液体組成物よりも多量のワックスが添加される。

日焼け止めは、単独では、紫外線照射の悪影響から皮膚を完全に保護することができないことがあり、したがって代替の保護様式が提案されている。ビタミン、例えば酢酸ビタミンEは、局所適用後に皮膚を柔軟かつ平滑にすることが示されており、これにより日光の損傷効果の一部を弱めることができる。パルミチン酸ビタミンAは、より平滑な皮膚を形成し、細胞のターンオーバーのプロセスを強化するのを助けることが示されている。この強化は、より若々しい見た目の皮膚細胞を表面に移動させることによって、皮膚の最も外側の死んだ層の皮膚を取り除く。

本明細書に記載される局所組成物を用いて製造される任意のスキンケア製品はさらに、日焼け止めを含み得る。開示される局所組成物は、紫外線照射への曝露の前または後に皮膚に適用され得る。局所組成物の日常的適用は、日光への曝露が予定されていない場合でさえも、皮膚における炎症の老化効果を弱めるために使用され得る。

E. 炎症を低減させる方法
局所組成物は、皮膚に局所適用されたときに炎症を低減させるのに十分な量の、ベータ・グルカン、ブドウ種子抽出物、またはベータ・グルカンおよびブドウ種子抽出物の両方を含み得る。炎症は、紫外線B（UVB)照射を含むUV照射への曝露に起因するものであり得る。紫外線A（UVA）照射は、315〜400 nmの波長を有する光によるものであり、UVB照射は、280〜315 nmの波長を有する光によるものである。

UV照射は、それが身体にビタミンDを製造させ、特定の皮膚の状態を処置することができるという点で、有益であり得る。しかし、UV照射への過剰曝露は、日焼け（紅斑）および水腫れ（浮腫）を含む有意な皮膚損傷を引き起こし得る。紫外光への曝露はまた、中程度の線量で皮膚に乾燥し突っ張った感覚を与え、高線量にさらされた場合、皮膚を剥離させ得る。これらの急性的または短期的効果は、容易に知覚可能である。しかし、容易に認識可能でないより繊細な急性的効果、例えば光免疫抑制、デオキシリボ核酸（DNA)の架橋、日焼け細胞の形成、およびランゲルハンス細胞の損失も存在する。より重篤な長期的効果、例えば皮膚癌および皮膚の早期老化さえも起こり得る。

炎症を低減させる組成物は、サイトカインおよびプロスタグランジンを含む炎症メディエーターの産生の減少により特定され得る。いくつかの例において、炎症の低減は、対照細胞において産生される炎症メディエーターの量との比較における、本明細書に記載される局所組成物で処置された細胞における炎症メディエーターの産生の減少を含む。例えば、減少する炎症メディエーターは、IL-1アルファ、IL-6、もしくはプロスタグランジンE2、またはIL-1アルファ、IL-6、およびプロスタグランジンE2の任意の組み合わせであり得る。特定の例において、対照細胞は、局所組成物で処置されていない細胞である。あるいは、対照細胞は、担体、賦形剤、または不活性成分を含む別の組成物でのみ処置される細胞である。

いくつかの例において、有効量の脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、ベータ・グルカンおよびブドウ種子抽出物を含む局所組成物を適用することによって、対象においてUV照射への曝露の結果である炎症を含む炎症を低減させる方法が、提示される。UV照射への曝露により引き起こされる炎症を含む炎症の低減は、皮膚に対する損傷を与える短期的および長期的の両方の効果を改善および／または防止し得る。驚くべきことに、脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、ベータ・グルカンおよびブドウ種子抽出物の組み合わせを含む局所組成物が、実施例2〜4のアッセイによって測定されるように、真皮細胞における炎症を低減させることができることが見出された。

標準的なマスカダインポマース抽出物と比較して低レベルの縮合タンニンを有する開示される脱色マスカダインポマース溶媒抽出物は、驚くべきことにかつ有利なことに、高レベルの縮合タンニンの存在に起因する欠点を回避しつつ、皮膚の処置に有益な他のポリフェノールのレベルを維持または向上させる。有効量の本明細書に記載される脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、ベータ・グルカンおよび／またはブドウ種子抽出物を含む局所組成物は、実施例に記載されるバイオアッセイによって示されるように、皮膚に局所適用されたときに炎症を低減させることができる。例示的な結果が、図13〜15に示されている。これらのバイオアッセイは、ヒト皮膚モデル（MatTek EpiDerm）において炎症メディエーターの産生を低下させることにより証明されるように、局所組成物による皮膚の炎症の低減の作用様式を実証した。

これらの結果から、脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、ベータ・グルカンおよびブドウ種子抽出物を含む本明細書に開示される局所組成物は、有効量の開示される局所組成物を皮膚に適用することによって対象における炎症を低減させる方法において有用であり得る。対象は、健康または不健康な対象であり得る。対象は、女性（雌）および男性（雄）対象であり得る。皮膚の炎症は、UVB照射を含む紫外線照射への曝露の結果であり得る。

脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、ベータ・グルカンおよびブドウ種子抽出物を含む本明細書に開示される局所組成物はまた、有効量の局所組成物を皮膚に適用することによって対象の皮膚細胞における炎症メディエーターの産生を阻害し、炎症メディエーターの産生を減少させる方法において有用であり得る。いくつかの例において、局所組成物の適用は、サイトカインのサブセット、例えばIL-1アルファおよびIL-6の産生を阻害し、かつプロスタグランジンのサブセット、例えばプロスタグランジンE2の産生も阻害する。1つの例において、炎症メディエーターは、IL-1アルファ、IL-6またはプロスタグランジンE2である。特定の態様において、炎症メディエーターは、IL-1アルファ、IL-6およびプロスタグランジンE2の任意の組み合わせである。

さらなる例において、対象の皮膚においてUV照射により誘導される皮膚の損傷を阻止する方法が開示される。これらの方法は、有効量の脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、ベータ・グルカンおよびブドウ種子抽出物を含む有効量の局所組成物の皮膚への局所適用を含む。UV照射への曝露後のこの局所組成物の適用は、皮膚への損傷を阻止する。この方法は、炎症メディエーターの産生を減少させ得る。特定の態様において、炎症メディエーターは、IL-1アルファ、IL-6またはプロスタグランジンE2である。1つの例において、炎症メディエーターは、IL-1アルファ、IL-6およびプロスタグランジンE2の任意の組み合わせである。

上記の方法はいずれも、その対象が処置前にいかなる病原性の皮膚状態も有さず非病原性の皮膚炎症を示すのみであることを意味する、健康な対象を処置するために使用され得る。特定の例において、この方法は、女性（雌）対象または男性（雄）対象を処置するために使用される。

III. 実施例
実施例1.
MatTek EpiDermモデルは、多層化された、高度に分化したヒト表皮モデルを形成するよう培養された正常なヒト由来表皮ケラチン生成細胞を利用する。微細構造分析は、インビボ表皮に特徴的なパターンで配置されたケラトヒアリン顆粒、トノフィラメント束、デスモソームおよび細胞間ラメラ脂質層を含む多層角質層の存在を明らかにした。成熟表皮特異的分化マーカー、例えばプロ・フィラグリン、K1/K10サイトケラチン対、インボルクリンおよびI型表皮トランスグルタミナーゼが、このモデルにおいて特定された。MatTek EpiDermはまた、有糸分裂的におよび代謝的に活性である。

サイトカインIL-1アルファおよびIL-6は、ケラチン生成細胞において合成および保管され、皮膚刺激および炎症のメディエーターであることが同定されている。これらのサイトカインの放出は、比色ベースの酵素連結免疫吸着アッセイ（ELISA）を通じて組織培養培地において直接的に測定することができる。簡単に説明すると、固体支持体に共有結合により連結された抗体が、使用後の培養培地サンプル中に存在する任意のIL-1アルファまたはIL-6に結合する。その後、アセチルコリンエステラーゼ酵素に共有結合により付加された二次抗体が、任意の結合したIL-1アルファおよびIL-6を検出する。適当な着色基質を添加すると、アセチルコリンエステラーゼ酵素は、分光的に測定することができる有色の最終産物を生成する。

同様に、プロスタグランジンE2の放出は、比色ベースの競合ELISAを通じて組織培養培地において直接的に測定することができる。このアッセイにおいて、アルカリホスファターゼ酵素に結合されたPGE2分子が、溶液中の抗PGE2抗体への結合に関して、組織培養培地中に存在する非標識PGE2と競合する。その後、抗PGE2抗体は、固体支持体に連結された二次抗体に結合する。分光的に測定することができる有色の最終産物をアルカリホスファターゼ酵素連結PGE2に生成させる基質溶液が添加される。このアッセイにおいて、サンプル中のPGE2の量が多いほど、回収されるアルカリホスファターゼ連結PGE2の量が減少する。したがって、サンプル中のPGE2の量は、形成される有色の最終産物の量に反比例する。

開示される局所組成物の特定の態様の生物活性を、陽性対照としての市販の局所用ヒドロコルチゾン製剤、ならびに陰性対照としての、いかなる局所組成物によっても処置されないUVB曝露組織（「未処置」）およびいかなる局所組成物によっても処置されない非UVB曝露組織（「非UVB曝露」）と比較した。DMSOは成分の溶解を補助するために使用され、かつDMSOは炎症反応に影響を与えることが知られているので、成分の混合に関するブランク対照として、2パーセントのDMSOを使用した。すべてのアッセイは三つ組で行った。

このバイオアッセイにおいて、UV照射または局所組成物のいずれによっても処置されなかった組織は、「非UVB曝露」と称される。1％ヒドロコルチゾンを含む市販の組成物で処置された組織は、「1％ヒドロコルチゾン」と称される。局所組成物で処置されなかったが、UVB照射に曝露された組織は、「未処置」と称される。2％ DMSOの溶液で処置された組織は、「2％ DMSO」と称される。「最小TME」組成物として使用した、表5において「TME 1」と称されているTME抽出物は、0.025％の脱色マスカダインポマース溶媒抽出物を含むものであった。「最大TME」組成物として使用した、表5において「TME 2」と称されているTME抽出物は、0.25％の脱色マスカダインポマース溶媒抽出物を含むものであった。「最小ブレンド」および「最大ブレンド」と称される組成物は、表5に列挙されている量の成分を含み、「最小ブレンド＋TME 1」と称される組成物は、最小ブレンド成分とTME 1成分の両方を含み、「最大ブレンド＋TME 2」と称される組成物は、最大ブレンド成分とTME 2成分の両方を含むものであった。

ブレンドおよびTME/ブレンド混合物は、表5（以下）に列挙されている成分を、最終組成物の総重量に基づく列挙されている割合で含むものであった。

（表５）実施例2〜4の局所組成物において使用した成分（w/w）

実施例2. インターロイキン1アルファ（IL-1アルファ）
例示的な局所組成物は、図13および以下の表6に示されるように、MatTek EpiDermモデルの表皮ケラチン生成細胞において産生されるIL-1アルファの量の減少を示した。MatTek全層組織を、37±2℃および5±1％ CO₂の下で少なくとも1時間インキュベートした。この初期インキュベートの後、アッセイ培地を0.9 mLの新しい培地と交換した（37±2℃）。3つの組織を、各試験物質用に調製した。

この組織において炎症反応を、UV照射（UVB）を通じて開始させた。UVランプを使用して組織に300 mJ/cm²線量のUVB照射を与えた。この炎症刺激の適用後直ちに、50μL（または固体形態の場合、50 mg）の試験物質を、組織の表面上に直接適用した。

市販のヒドロコルチゾンクリームを、陽性対照として使用した（UVB後処置のみ）。「未処置」陰性対照のために、組織を炎症刺激に曝露したが、いかなるタイプの抗炎症物質によっても処置しなかった。サイトカインのベースライン測定を提供するため、追加の組織群を炎症刺激に曝露せずに維持した（「非UVB曝露」）。これらの組織を、炎症刺激への曝露後、37±2℃および5±1％ CO₂の下24時間インキュベートした。24時間のインキュベート後、細胞培養培地を回収し、サイトカインについて分析するまで-75℃で保管した。

適当な捕捉抗体をPBSで希釈することによって、IL-1アルファELISAプレートを準備した。次に、100μLの希釈された捕捉抗体を、96ウェルELISAプレートのウェルに添加し、このプレートを室温で一晩インキュベートした。次の日に、プレートを300μLの洗浄緩衝液（PBS中0.05％のTween20）で3回洗浄し、次いで各ウェルに300μLのブロッキング緩衝液（PBS中1％のBSA）を添加することによってブロックした。このプレートをブロッキング緩衝液と共に少なくとも1時間インキュベートした。インキュベート後、ブロッキング緩衝液を除去し、プレートを上記のようにして3回洗浄した。

一連のIL-1アルファ標準を準備し、これらの標準の各々100μLを、適当な96ウェルプレートの2つのウェルに分配した（二重）。その後、100μLの各サンプルを別のウェルに添加し、プレートを室温で2時間インキュベートした。インキュベート後、プレートを上記のようにして3回洗浄した。最後の洗浄液を除去した後、100μLのビオチン結合検出抗体を添加した。プレートを室温で2時間インキュベートした後、プレートを再度、上記のようにして洗浄した。次いで100μLのHRP・ストレプトアビジンを各ウェルに添加し、プレートを室温で20分間インキュベートした。最後の洗浄液を除去した後、100μLの基質溶液（過酸化水素＋色素原としてのテトラメチルベンジジン）を各ウェルに添加した。十分なレベルの発色が見られたら、50μLの停止溶液（2N硫酸）を各ウェルに添加し、プレートを460 nmで読み取った。

（表６）例示的な局所組成物におけるIL-1アルファのデータ

^*は未処置対照と有意に相違する値を示す（p＜0.05）
^**は2％DMSO対照と有意に相違する値を示す（p＜0.05）

図13にグラフ表示されているデータは、最小ブレンド、TME 1組成物（最小TMEと称されている）、最小ブレンド＋TME 1および最大ブレンド組成物が、2％DMSO対照と比較して統計学的に有意な様式で炎症メディエーターIL-1アルファの放出を阻害したことを示している。加えて、TME 1組成物（最小TMEと称されている）はまた、未処置対照（「未処置」）と比較して統計学的に有意な様式で炎症メディエーターIL-1アルファの放出を阻害した。

実施例3. プロスタグランジンE2（PGE2)
例示的な局所組成物は、図14および以下の表7に示されるように、MatTek EpiDermモデルの表皮ケラチン生成細胞におて産生されるPGE2の量の減少を示した。

一連のPGE2標準を、7.8 pg/mL〜1000 pg/mLの範囲で準備した。ELISAプレートを、プレートフレームから不必要なストリップを除去することによって準備し、総活性（TA）ウェル、非特異的結合（NSB）ウェル、最大結合（MB）ウェルおよび基質ブランクウェル（B0)について各々2つのウェルを指定した。150μLの組織培養培地をNSBウェルに添加し、100μLの培地をB0ウェルに添加した。次いで、100μLの標準またはサンプルを各ウェルに添加した。使用される各ウェル（TAおよびB0を除く）に、50μLのPGE2アルカリホスファターゼコンジュゲートを添加した。次に、50μLのPGE2アルカリホスファターゼ抗体溶液を各ウェルに添加した（TA、NSBおよびSDウェルを除く）。このプレートを覆い、2〜8℃で18〜24時間インキュベートした。インキュベート後、各ウェルを400μLの洗浄緩衝液で3回洗浄した。最後の洗浄の後、5μLのPGE2アルカリホスファターゼコンジュゲートをTAウェルに添加し、200μLの新しいエルマン試薬を各ウェルに添加した。このプレートを室温でインキュベートしつつ、定期的にプレートリーダーを用いて吸光度の読み取り（405 nm）を行った。

（表７）例示的な局所組成物におけるPGE2のデータ

^*は未処置対照と有意に相違する値を示す（p＜0.05）
^**は2％DMSO対照と有意に相違する値を示す（p＜0.05）

図14にグラフ表示されているデータは、最小ブレンドおよび最小ブレンド＋TME 1組成物が、2％DMSO対照と比較して統計学的に有意な様式で炎症メディエータープロスタグランジンE2の放出を阻害したことを示している。

実施例4. インターロイキン6（IL-6）
例示的な局所組成物は、図15および以下の表8に示されるように、MatTek EpiDermモデルの表皮ケラチン生成細胞におて産生されるIL-6の量の減少を示した。IL-6の測定は、IL-1アルファに関して実施例2に記載されるのと同じ方法で、IL-1アルファ特異的試薬を対応するIL-6特異的試薬で置き換えて行った。

（表８）例示的な局所組成物におけるIL-6のデータ

^*は未処置対照と有意に相違する値を示す（p＜0.05）
^**は2％DMSO対照と有意に相違する値を示す（p＜0.05）

図15にグラフ表示されているデータは、最小ブレンド＋TME 1、最大ブレンドおよび最大ブレンド＋TME 2組成物が、2％DMSO対照と比較して統計学的に有意な様式で炎症メディエーターIL-6の放出を阻害したことを示している。加えて、TME 1およびTME 2組成物は、未処置対照と比較して統計学的に有意な様式で炎症メディエーターIL-6の放出を阻害した。

まとめると、脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、ベータ・グルカンおよびブドウ種子抽出物を含む開示される局所組成物は、重量基準で約0.001％〜約1.0％、重量基準で約0.0001％〜約1.0％および重量基準で約0.00001％〜約0.01％の濃度でそれぞれ使用された場合、特定の炎症マーカーを有意に減少させることができる。これらの局所組成物は、低レベルの縮合タンニンを有するが、その全体フェノールプロフィールの保存により、脱色抽出物の皮膚保護特性が維持されている。

したがって、脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、ベータ・グルカンおよびブドウ種子抽出物を含む局所組成物は、実施例2（表皮細胞によるIL-1アルファ産生の減少）、実施例3（表皮細胞によるプロスタグランジンE2産生の減少）および実施例4（表皮細胞によるIL-6産生の減少）のアッセイによって測定されたように、紫外線照射への曝露の結果としての炎症を含む炎症を低減させることができる。

実施例5. 脱色マスカダインポマース抽出物を含むさらなる組成物の活性
脱色マスカダインポマース溶媒抽出物を含む組成物は、そのような組成物を3つのアッセイ：DPPHアッセイ、チロシナーゼ阻害アッセイおよびTT二量体アッセイにおいて試験することによって示されるように、抗酸化活性を示す。図16〜18に示されるように、この試験の結果は、本明細書に開示される脱色プロセスを経たブドウ抽出物が、それらの抗酸化活性を含むがこれらに限定されないそれらの有益な生物学的活性を保持しているが、それらが適用された皮膚を変色させ得る高レベルのタンニンを含まない。

DPPHアッセイ。このアッセイは、安定なラジカルである2,2-ジフェニル-1-ピクリルヒドラジル（DPPH）に対する抗酸化物質の捕捉活性の測定に基づく。フリーラジカルであるDPPHは、517 nmで強い吸収を示し、この吸収は、DPPHが抗酸化化合物と反応し、ヒドラジンに変換されると低下する。そのラジカル化合物が安定であり、かつ他のラジカル捕捉アッセイのように生成する必要がないという理由で、DPPHアッセイは、抗酸化物質の捕捉活性を評価する。

図16は、トロロックス当量で示されるフリーラジカル捕捉力を測定するDPPHアッセイの結果を示しており、TE値が高いほど、抗酸化力は大きくなる。組成物の重量基準で0.01％、0.005％および0.001％の脱色マスカダインポマース抽出物の組成物（TME）は、（10 ug/mlの濃度における）約27〜（100 ug/mlの濃度における）約185トロロックス当量の範囲の、用量依存的な抗酸化活性を示した。

チロシナーゼ阻害。精製されたチロシナーゼ酵素を、L-DOPA（L-3,4-ジヒドロキシフェニルアラニン）を含むリン酸ナトリウム緩衝液に混合し、試験物質と共にインキュベートした。30分間のインキュベート後に、（チロシナーゼ活性を反映する）DOPAクロムに変換されたL-DOPAの量を、比色アッセイを通じて評価する。コウジ酸を、チロシナーゼ阻害の陽性対照として使用した。

図17は、陽性対照組成物（1％コウジ酸）と比較した、様々な量の脱色マスカダインポマース溶媒抽出物を含む組成物を含む一連の組成物におけるチロシナーゼ活性のパーセント阻害を示している。脱色マスカダインポマース溶媒抽出物（図17においては「TME」）の量は、組成物全体の重要パーセントで示されている。図17に示されるように、重量基準で1％のTMEを含む組成物は、チロシナーゼ活性の38.3％阻害を示す。

TT二量体アッセイ。このアッセイで使用される試験システムは、多層化された、高度に分化したヒト表皮モデルを形成するよう培養された正常なヒト由来表皮ケラチン生成細胞からなる皮膚モデルである、MatTek EpiDermであった。この研究において、この組織を、UVB曝露前に試験物質を用いて一晩局所的に処置した。曝露および処置後、EpiDerm組織からDNAを抽出し、チミン二量体含量についてELISAベースの方法を用いてアッセイした。

図18は、非UVB曝露、未処置および1 mMトロロックスを含む組成物で処置された細胞と比較した、様々な量の脱色マスカダインポマース溶媒抽出物を含む組成物を含む一連の組成物で処置された細胞におけるTT二量体アッセイ活性の結果を示している。（組成物全体の重量基準で）0.25％の脱色マスカダインポマース溶媒抽出物を含む組成物でUVB曝露前に前処置された細胞は、統計学的に有意なDNA損傷の低減を示した。脱色マスカダインポマース溶媒抽出物は、陽性対照（1 mMトロロックス）よりも良好であり、UVB曝露後の0.25％TMEを含む組成物を用いた処置は、38％〜44％のDNA損傷の低減を示し、0.1％TMEを含む組成物を用いた処置は、DNA損傷を最大69％低減させた。

開示されている本発明の原理が適用され得る多くの可能性のある態様に鑑みて、例示されている態様は本発明の好ましい実施例にすぎず、本発明の範囲を限定するものとみなされるべきでないことが理解されるべきである。そうではなく、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によって定義される。したがって我々は、我々の発明として、これらの特許請求の範囲および精神に包含されるすべてについて権利を主張する。

[本発明1001]
脱色ブドウポマース抽出物を製造するために、処理前ブドウポマース抽出物の縮合タンニン含量を低下させる方法であって、
精密ろ過により固形物を除去することによって処理前ブドウポマース抽出物を浄化する工程、
約500〜約5000 kDaの精密ろ過膜を通じた限外ろ過により該浄化した抽出物を処理し、第1の膜通過液および第1の膜滞留物を得る工程であって、フレーバー成分が第1の膜通過液中に除去される、工程、ならびに
約25〜約100 kDaの限外ろ過膜を通じた限外ろ過により第1の膜滞留物を処理し、第2の膜通過液および第2の膜滞留物を得る工程であって、重合した縮合タンニンが第2の膜滞留物中に維持され、第2の膜通過液が、第1の膜滞留物と比較して上昇したレベルのポリフェノールならびに低下したレベルの糖類および縮合タンニンを有し、それによって浄化した抽出物よりも低いタンニン含量を有する脱色マスカダインブドウポマース抽出物が製造される、工程
を含み、
ブドウが任意でマスカダインブドウである、方法。
[本発明1002]
第2の膜通過液を除臭剤で処理する工程をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1003]
除臭剤が、活性炭、アルギン酸カルシウム、ベントナイト、またはアルミノケイ酸吸収剤である、本発明1002の方法。
[本発明1004]
第2の膜通過液を酸化マグネシウムに曝露し、第2の膜通過液中の有機酸を無機化する工程
をさらに含む、本発明1001〜1003のいずれかの方法。
[本発明1005]
第2の膜通過液を乾燥させて粉末化し、浄化した抽出物のポリフェノール含量を実質的に維持しつつ該浄化した抽出物と比較して低下したタンニン含量を有する局所組成物を製造する工程
をさらに含む、本発明1001〜1004のいずれかの方法。
[本発明1006]
抽出物を浄化する工程が、抽出物を水で希釈し、希釈した抽出物を精密ろ過に供することを含む、本発明1001〜1005のいずれかの方法。
[本発明1007]
精密ろ過が、約200 kDaの精密ろ過フィルターを通じて行われる、本発明1006の方法。
[本発明1008]
処理前ブドウポマース抽出物が、ブロンズおよび／または紫マスカダインブドウポマース抽出物を含む、本発明1001〜1007のいずれかの方法。
[本発明1009]
処理前ブドウポマース抽出物が、ブロンズおよび紫マスカダインブドウポマース抽出物の組み合わせを含む、本発明1008の方法。
[本発明1010]
紫マスカダインポマース抽出物に対するブロンズマスカダインポマース抽出物の比が、（a）0.1〜10（重量対重量）または（b）0.3〜3（重量対重量）の範囲である、本発明1009の方法。
[本発明1011]
処理前ブドウポマース抽出物が、
（a）ブロンズおよび紫マスカダインブドウの個別の抽出およびその後の得られた抽出物の混合、または
（b）所望の比で組み合わされたブロンズおよび紫マスカダインブドウの同時抽出
によって得られる、本発明1009または1010のいずれかの方法。
[本発明1012]
本発明1001〜1011のいずれかの方法によって得られる、脱色マスカダインブドウポマース抽出物。
[本発明1013]
約9％〜約10％のポリフェノールおよび約4％未満の単糖類を含み、
縮合タンニンが脱色マスカダインポマース抽出物の総ポリフェノール含量の約10％未満である、
ブロンズおよび紫マスカダインブドウポマースの脱色マスカダインブドウポマース抽出物。
[本発明1014]
抽出物中の総ポリフェノールが、少なくとも約90％の、縮合タンニン以外のポリフェノールからなる、本発明1013の脱色マスカダインブドウポマース抽出物。
[本発明1015]
0.5〜2％の繊維、7〜9％のタンパク質、0.5〜1.5％の脂肪、および15〜17％の有機酸をさらに含む、本発明1013の脱色マスカダインブドウポマース抽出物。
[本発明1016]
1〜2％の繊維、7〜8％のタンパク質、0.05〜1.5％の脂肪、および15.5〜16.5％の有機酸を含む、本発明1014の脱色マスカダインブドウポマース抽出物。
[本発明1017]
（a）抽出物のフェノール成分が、2〜3％のエラグ酸および30〜31％の没食子酸を含むか、または
（b）抽出物のフェノール成分が、2〜3％のエラグ酸、3〜4％のエラグ酸グリコシド、30〜31％の没食子酸、2〜3％のケルセチン、10〜11％ガロタンニン、7〜8％のエラジタンニン、29〜30％のプロアントシアニジン、4〜5％アントシアニン、2〜3％のカテキン、および6〜7％のフェノール酸を含む、
本発明1014の脱色マスカダインブドウポマース抽出物。
[本発明1018]
スキンケア組成物に組み込まれた、本発明1012〜1017のいずれかの脱色マスカダインブドウポマース抽出物。
[本発明1019]
（a）スキンケアのため、（b）皮膚においてエラスターゼ、コラゲナーゼ、もしくはチロシナーゼを阻害するため、（c）DNA損傷を低減させ、DNA修復を向上させるため、（d）紫外光に曝露された皮膚において皮膚タンパク質の糖化を阻害するもしくは細胞生存率を増加させるため、または（e）抗酸化剤としての、本発明1012〜1018のいずれかの脱色マスカダインブドウポマース抽出物の使用。
[本発明1020]
有効量の本発明1012〜1018のいずれかの脱色マスカダインブドウポマース抽出物、ベータ・グルカン、およびブドウ種子抽出物を含む、局所組成物。
[本発明1021]
皮膚に適用したときに炎症を低減させるのに使用するための、本発明1020の局所組成物。
[本発明1022]
炎症の低減が、対照細胞と比較した場合の、皮膚細胞内のIL-1アルファ、IL-6、またはプロスタグランジンE2の少なくとも1つの産生の減少を含む、本発明1021の局所組成物。
[本発明1023]
対照細胞が未処置細胞であるか、対照細胞が担体で処置された細胞であるか、または炎症が紫外線照射への曝露の結果である、本発明1021または1022の局所組成物。
[本発明1024]
（a）局所組成物の重量基準で約0.001％〜約1.0％の脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、
局所組成物の重量基準で約0.0001〜約1.0％のベータ・グルカン、および
局所組成物の重量基準で約0.00001〜約0.1％のブドウ種子抽出物；
（b）局所組成物の重量基準で約0.01％〜約0.5％の脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、
局所組成物の重量基準で約0.0005〜約0.1％のベータ・グルカン、および
局所組成物の重量基準で約0.0001〜約0.05％のブドウ種子抽出物；または
（c）局所組成物の重量基準で約0.025％〜約0.25％の脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、
局所組成物の重量基準で約0.005〜約0.05％のベータ・グルカン、および
局所組成物の重量基準で約0.0002〜約0.01％のブドウ種子抽出物
を含む、本発明1020〜1023のいずれかの局所組成物。
[本発明1025]
局所適用したときに皮膚におけるIL-1アルファ、IL-6、プロスタグランジンE2の少なくとも1つまたはそれらの任意の組み合わせの産生を減少させるのに十分な量の、パンテノール、ビタミンC、またはスーパーオキシドジスムターゼの少なくとも1つをさらに含む、本発明1020〜1024のいずれかの局所組成物。
[本発明1026]
有効量のビタミンA、ビタミンE、またはその両方をさらに含む、本発明1020〜1025のいずれかの局所組成物。
[本発明1027]
局所組成物の重量基準で、
約0.0001％〜約0.5％のビタミンA
約0.00001％〜約0.1％のビタミンC、
約0.001％〜約1.0％のビタミンE、
約0.001％〜約1.0％のパンテノール、
約0.00001％〜約0.1％のスーパーオキシドジスムターゼ、
またはそれらの任意の組み合わせ
を含む、本発明1025または1026の局所組成物。
[本発明1028]
リン酸アスコルビルマグネシウムの形態のビタミンC、パルミチン酸ビタミンAの形態のビタミンA、酢酸ビタミンEの形態のビタミンE、またはそれらの任意の組み合わせを含む、本発明1020〜1027のいずれかの局所組成物。
[本発明1029]
脱色マスカダインポマース溶媒抽出物が、ブロンズおよび紫マスカダインブドウポマース抽出物の組み合わせを含み、脱色マスカダインポマース溶媒抽出物の紫マスカダインポマース抽出物に対するブロンズマスカダインポマース抽出物の比が、約0.1〜約10（重量対重量）または約0.3〜約3（重量対重量）の範囲である、本発明1020〜1028のいずれかの局所組成物。
[本発明1030]
（a）脱色マスカダインポマース溶媒抽出物が、抽出物の重量基準で約7％〜約10％のポリフェノールおよび約5％未満の単糖類を含み、縮合タンニンが、脱色マスカダインポマース抽出物の総ポリフェノール含量の約10％未満であるか、
（b）脱色マスカダインポマース溶媒抽出物が、抽出物の重量基準で約9％〜約10％のポリフェノールおよび約4％未満の単糖類を含むか、
（c）脱色マスカダインポマース溶媒抽出物の総ポリフェノールが、少なくとも約85％の、縮合タンニン以外のポリフェノールからなるか、または
（d）脱色マスカダインポマース溶媒抽出物の総ポリフェノールが、少なくとも約90％の、縮合タンニン以外のポリフェノールからなる、
本発明1020〜1029のいずれかの局所組成物。
[本発明1031]
脱色マスカダインポマース溶媒抽出物が、
（a）抽出物の重量基準で約0.5％〜5％の繊維、7％〜14％のタンパク質、0.05％〜3％の脂肪、および15％〜20％の有機酸、
（b）抽出物の重量基準で約0.5％〜2％の繊維、7％〜9％のタンパク質、0.05％〜1％の脂肪、および15％〜17％の有機酸、または
（c）抽出物の重量基準で約1％〜2％の繊維、7％〜8％のタンパク質、0.1％〜0.5％の脂肪、および15.5％〜16.5％の有機酸
をさらに含む、本発明1020〜1030のいずれかの局所組成物。
[本発明1032]
脱色マスカダインポマース溶媒抽出物のフェノール成分が、抽出物の重量基準で2〜3％のエラグ酸および30〜31％の没食子酸を含むか、または抽出物の重量基準で2〜3％のエラグ酸、3〜4％のエラグ酸グリコシド、30〜31％の没食子酸、2〜3％のケルセチン、10〜11％のガロタンニン、7〜8％のエラジタンニン、29〜30％のプロアントシアニジン、4〜5％のアントシアニン、2〜3％のカテキン、および6〜7％のフェノール酸を含む、本発明1020〜1031のいずれかの局所組成物。
[本発明1033]
脱色マスカダインポマース溶媒抽出物が、ホール紫マスカダインブドウの抽出物、ホールブドウ以外の紫マスカダインポマースの抽出物、またはその両方を含む、本発明1020〜1032のいずれかの局所組成物。
[本発明1034]
皮膚の炎症を低減させるため、皮膚細胞における炎症メディエーターの産生を減少させるため、または皮膚において紫外線照射により誘導される損傷を防ぐための、本発明1020〜1033のいずれかの局所組成物の使用。
[本発明1035]
炎症が紫外線照射への対象の曝露の結果であるか、炎症性メディエーターがIL-1アルファ、IL-6、またはプロスタグランジンE2であるか、皮膚の損傷が炎症メディエーターの産生を含むか、またはそれらの任意の組み合わせである、本発明1034の使用。
[本発明1036]
対象が健康な対象である、本発明1034または1035のいずれかの使用。
本発明の上記およびその他の目的、特徴および利点は、添付図面を参照しつつ進められる以下の詳細な説明からより明確になるであろう。

Claims (36)

1. 脱色ブドウポマース抽出物を製造するために、処理前ブドウポマース抽出物の縮合タンニン含量を低下させる方法であって、
   精密ろ過により固形物を除去することによって処理前ブドウポマース抽出物を浄化する工程、
   約500〜約5000 kDaの精密ろ過膜を通じた限外ろ過により該浄化した抽出物を処理し、第1の膜通過液および第1の膜滞留物を得る工程であって、フレーバー成分が第1の膜通過液中に除去される、工程、ならびに
   約25〜約100 kDaの限外ろ過膜を通じた限外ろ過により第1の膜滞留物を処理し、第2の膜通過液および第2の膜滞留物を得る工程であって、重合した縮合タンニンが第2の膜滞留物中に維持され、第2の膜通過液が、第1の膜滞留物と比較して上昇したレベルのポリフェノールならびに低下したレベルの糖類および縮合タンニンを有し、それによって浄化した抽出物よりも低いタンニン含量を有する脱色マスカダインブドウポマース抽出物が製造される、工程
   を含み、
   ブドウが任意でマスカダインブドウである、方法。
2. 第2の膜通過液を除臭剤で処理する工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
3. 除臭剤が、活性炭、アルギン酸カルシウム、ベントナイト、またはアルミノケイ酸吸収剤である、請求項2記載の方法。
4. 第2の膜通過液を酸化マグネシウムに曝露し、第2の膜通過液中の有機酸を無機化する工程
   をさらに含む、請求項1〜3のいずれか一項記載の方法。
5. 第2の膜通過液を乾燥させて粉末化し、浄化した抽出物のポリフェノール含量を実質的に維持しつつ該浄化した抽出物と比較して低下したタンニン含量を有する局所組成物を製造する工程
   をさらに含む、請求項1〜4のいずれか一項記載の方法。
6. 抽出物を浄化する工程が、抽出物を水で希釈し、希釈した抽出物を精密ろ過に供することを含む、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法。
7. 精密ろ過が、約200 kDaの精密ろ過フィルターを通じて行われる、請求項6記載の方法。
8. 処理前ブドウポマース抽出物が、ブロンズおよび／または紫マスカダインブドウポマース抽出物を含む、請求項1〜7のいずれか一項記載の方法。
9. 処理前ブドウポマース抽出物が、ブロンズおよび紫マスカダインブドウポマース抽出物の組み合わせを含む、請求項8記載の方法。
10. 紫マスカダインポマース抽出物に対するブロンズマスカダインポマース抽出物の比が、（a）0.1〜10（重量対重量）または（b）0.3〜3（重量対重量）の範囲である、請求項9記載の方法。
11. 処理前ブドウポマース抽出物が、
    （a）ブロンズおよび紫マスカダインブドウの個別の抽出およびその後の得られた抽出物の混合、または
    （b）所望の比で組み合わされたブロンズおよび紫マスカダインブドウの同時抽出
    によって得られる、請求項9または10のいずれか一項記載の方法。
12. 請求項1〜11のいずれか一項記載の方法によって得られる、脱色マスカダインブドウポマース抽出物。
13. 約9％〜約10％のポリフェノールおよび約4％未満の単糖類を含み、
    縮合タンニンが脱色マスカダインポマース抽出物の総ポリフェノール含量の約10％未満である、
    ブロンズおよび紫マスカダインブドウポマースの脱色マスカダインブドウポマース抽出物。
14. 抽出物中の総ポリフェノールが、少なくとも約90％の、縮合タンニン以外のポリフェノールからなる、請求項13記載の脱色マスカダインブドウポマース抽出物。
15. 0.5〜2％の繊維、7〜9％のタンパク質、0.5〜1.5％の脂肪、および15〜17％の有機酸をさらに含む、請求項13記載の脱色マスカダインブドウポマース抽出物。
16. 1〜2％の繊維、7〜8％のタンパク質、0.05〜1.5％の脂肪、および15.5〜16.5％の有機酸を含む、請求項14記載の脱色マスカダインブドウポマース抽出物。
17. （a）抽出物のフェノール成分が、2〜3％のエラグ酸および30〜31％の没食子酸を含むか、または
    （b）抽出物のフェノール成分が、2〜3％のエラグ酸、3〜4％のエラグ酸グリコシド、30〜31％の没食子酸、2〜3％のケルセチン、10〜11％ガロタンニン、7〜8％のエラジタンニン、29〜30％のプロアントシアニジン、4〜5％アントシアニン、2〜3％のカテキン、および6〜7％のフェノール酸を含む、
    請求項14記載の脱色マスカダインブドウポマース抽出物。
18. スキンケア組成物に組み込まれた、請求項12〜17のいずれか一項記載の脱色マスカダインブドウポマース抽出物。
19. （a）スキンケアのため、（b）皮膚においてエラスターゼ、コラゲナーゼ、もしくはチロシナーゼを阻害するため、（c）DNA損傷を低減させ、DNA修復を向上させるため、（d）紫外光に曝露された皮膚において皮膚タンパク質の糖化を阻害するもしくは細胞生存率を増加させるため、または（e）抗酸化剤としての、請求項12〜18のいずれか一項記載の脱色マスカダインブドウポマース抽出物の使用。
20. 有効量の請求項12〜18のいずれか一項記載の脱色マスカダインブドウポマース抽出物、ベータ・グルカン、およびブドウ種子抽出物を含む、局所組成物。
21. 皮膚に適用したときに炎症を低減させるのに使用するための、請求項20記載の局所組成物。
22. 炎症の低減が、対照細胞と比較した場合の、皮膚細胞内のIL-1アルファ、IL-6、またはプロスタグランジンE2の少なくとも1つの産生の減少を含む、請求項21記載の局所組成物。
23. 対照細胞が未処置細胞であるか、対照細胞が担体で処置された細胞であるか、または炎症が紫外線照射への曝露の結果である、請求項21または22記載の局所組成物。
24. （a）局所組成物の重量基準で約0.001％〜約1.0％の脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、
    局所組成物の重量基準で約0.0001〜約1.0％のベータ・グルカン、および
    局所組成物の重量基準で約0.00001〜約0.1％のブドウ種子抽出物；
    （b）局所組成物の重量基準で約0.01％〜約0.5％の脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、
    局所組成物の重量基準で約0.0005〜約0.1％のベータ・グルカン、および
    局所組成物の重量基準で約0.0001〜約0.05％のブドウ種子抽出物；または
    （c）局所組成物の重量基準で約0.025％〜約0.25％の脱色マスカダインポマース溶媒抽出物、
    局所組成物の重量基準で約0.005〜約0.05％のベータ・グルカン、および
    局所組成物の重量基準で約0.0002〜約0.01％のブドウ種子抽出物
    を含む、請求項20〜23のいずれか一項記載の局所組成物。
25. 局所適用したときに皮膚におけるIL-1アルファ、IL-6、プロスタグランジンE2の少なくとも１つまたはそれらの任意の組み合わせの産生を減少させるのに十分な量の、パンテノール、ビタミンC、またはスーパーオキシドジスムターゼの少なくとも1つをさらに含む、請求項20〜24のいずれか一項記載の局所組成物。
26. 有効量のビタミンA、ビタミンE、またはその両方をさらに含む、請求項20〜25のいずれか一項記載の局所組成物。
27. 局所組成物の重量基準で、
    約0.0001％〜約0.5％のビタミンA
    約0.00001％〜約0.1％のビタミンC、
    約0.001％〜約1.0％のビタミンE、
    約0.001％〜約1.0％のパンテノール、
    約0.00001％〜約0.1％のスーパーオキシドジスムターゼ、
    またはそれらの任意の組み合わせ
    を含む、請求項25または26記載の局所組成物。
28. リン酸アスコルビルマグネシウムの形態のビタミンC、パルミチン酸ビタミンAの形態のビタミンA、酢酸ビタミンEの形態のビタミンE、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項20〜27のいずれか一項記載の局所組成物。
29. 脱色マスカダインポマース溶媒抽出物が、ブロンズおよび紫マスカダインブドウポマース抽出物の組み合わせを含み、脱色マスカダインポマース溶媒抽出物の紫マスカダインポマース抽出物に対するブロンズマスカダインポマース抽出物の比が、約0.1〜約10（重量対重量）または約0.3〜約3（重量対重量）の範囲である、請求項20〜28のいずれか一項記載の局所組成物。
30. （a）脱色マスカダインポマース溶媒抽出物が、抽出物の重量基準で約7％〜約10％のポリフェノールおよび約5％未満の単糖類を含み、縮合タンニンが、脱色マスカダインポマース抽出物の総ポリフェノール含量の約10％未満であるか、
    （b）脱色マスカダインポマース溶媒抽出物が、抽出物の重量基準で約9％〜約10％のポリフェノールおよび約4％未満の単糖類を含むか、
    （c）脱色マスカダインポマース溶媒抽出物の総ポリフェノールが、少なくとも約85％の、縮合タンニン以外のポリフェノールからなるか、または
    （d）脱色マスカダインポマース溶媒抽出物の総ポリフェノールが、少なくとも約90％の、縮合タンニン以外のポリフェノールからなる、
    請求項20〜29のいずれか一項記載の局所組成物。
31. 脱色マスカダインポマース溶媒抽出物が、
    （a）抽出物の重量基準で約0.5％〜5％の繊維、7％〜14％のタンパク質、0.05％〜3％の脂肪、および15％〜20％の有機酸、
    （b）抽出物の重量基準で約0.5％〜2％の繊維、7％〜9％のタンパク質、0.05％〜1％の脂肪、および15％〜17％の有機酸、または
    （c）抽出物の重量基準で約1％〜2％の繊維、7％〜8％のタンパク質、0.1％〜0.5％の脂肪、および15.5％〜16.5％の有機酸
    をさらに含む、請求項20〜30のいずれか一項記載の局所組成物。
32. 脱色マスカダインポマース溶媒抽出物のフェノール成分が、抽出物の重量基準で2〜3％のエラグ酸および30〜31％の没食子酸を含むか、または抽出物の重量基準で2〜3％のエラグ酸、3〜4％のエラグ酸グリコシド、30〜31％の没食子酸、2〜3％のケルセチン、10〜11％のガロタンニン、7〜8％のエラジタンニン、29〜30％のプロアントシアニジン、4〜5％のアントシアニン、2〜3％のカテキン、および6〜7％のフェノール酸を含む、請求項20〜31のいずれか一項記載の局所組成物。
33. 脱色マスカダインポマース溶媒抽出物が、ホール紫マスカダインブドウの抽出物、ホールブドウ以外の紫マスカダインポマースの抽出物、またはその両方を含む、請求項20〜32のいずれか一項記載の局所組成物。
34. 皮膚の炎症を低減させるため、皮膚細胞における炎症メディエーターの産生を減少させるため、または皮膚において紫外線照射により誘導される損傷を防ぐための、請求項20〜33のいずれか一項記載の局所組成物の使用。
35. 炎症が紫外線照射への対象の曝露の結果であるか、炎症性メディエーターがIL-1アルファ、IL-6、またはプロスタグランジンE2であるか、皮膚の損傷が炎症メディエーターの産生を含むか、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項34記載の使用。
36. 対象が健康な対象である、請求項34または35のいずれか一項記載の使用。

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