CN109641024A - 具有低含量缩合鞣质分子的麝香葡萄局部组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种使麝香葡萄果渣葡萄提取物脱色的方法，该方法通过用500‑5000kDa微滤膜超滤来加工澄清的提取物，以得到其中去除了风味组分的第一渗透物。将截留物通过25‑100kDa超滤膜进行超滤，得到第二渗透物和第二截留物。在第二截留物中除去聚合物缩合鞣质，而第二渗透物是与第一截留物相比多酚水平增加并且糖和缩合鞣质水平降低的脱色提取物。该脱色的提取物可以掺入皮肤护理组合物中，所述皮肤护理组合物也可以包含β‑葡聚糖和葡萄籽提取物。皮肤护理组合物可以施用于皮肤以维持健康的皮肤而不变色。在一些实施方式中，该组合物用于减轻皮肤中的炎症，包括因暴露于紫外线辐射而引起的炎症。公开了通过将包含脱色的麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣溶剂提取物、β‑葡聚糖和葡萄籽提取物的局部组合物施用于皮肤来抑制皮肤细胞中抗炎介质的产生和抑制紫外线辐射引起的损伤的方法。

Description

具有低含量缩合鞣质分子的麝香葡萄局部组合物

相关申请的交叉引用

本申请要求2016年7月19日提交的美国临时申请号62/364,222和2017年5月12日提交的美国临时申请号62/505,543的优先权，所述美国临时申请通过引用以其整体并入本文。

技术领域

本公开涉及葡萄果渣提取物，例如麝香葡萄(muscadine)(圆叶葡萄(Vitisrotundifolia))果渣溶剂提取物，葡萄果渣提取工艺，以及获得适用于护肤产品的葡萄果渣提取物、例如麝香葡萄果渣提取物的级分的方法。本公开还涉及含有脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物、β-葡聚糖和葡萄籽提取物的局部组合物，其在施用于皮肤时减轻炎症，并涉及使用所述局部组合物减轻皮肤炎症的方法。

背景技术

已知葡萄提取物具有有益的抗氧化性质。例如，麝香葡萄含有几种生物活性多酚化合物，包括黄酮类化合物(如黄酮醇、花色素苷(anthocyanins)和黄烷酮，以及被称为原花色素(proanthocyanidins)的黄烷-3-醇及其低聚物)和非黄酮类化合物(例如酚酸、鞣质和芪衍生物，例如白藜芦醇)。黄酮类化合物的保护和抗炎效应被认为是由于自由基清除、对细胞信号传导途径和基因表达的有益效应、以及对快速和异常增殖性哺乳动物细胞的细胞分裂周期的选择性干扰。

葡萄提取物的有益性质引出了它们在营养保健品中的用途。美国专利号6,190,716公开了一种麝香葡萄膳食补充剂，其通过将麝香葡萄压碎和去汁然后用热和酶分解果肉而获得。美国专利号6,638,545公开了一种具有丰富的多酚含量的葡萄提取物，用作膳食补充剂和美容组合物。美国专利号8,568,804、美国专利号9,132,162和美国专利号9,173,916公开了一种组合物，其中显示青铜色和紫色麝香葡萄的果渣提取物具有增强的抗氧化活性。

虽然认识到麝香葡萄和其它红葡萄提取物具有优异的抗氧化活性，但它们在局部组合物中的用途受限于提取物中升高的鞣质水平。术语“鞣质”最初应用于这类化合物是因为收敛性木鞣质将动物皮“鞣”成皮革的用途。红葡萄鞣质味道发干发涩，并且所述鞣质给葡萄酒赋予色泽。当包含在局部葡萄提取物制品中时，所述鞣质使组合物以及应用它们的皮肤变色。

就其化学组成而言，鞣质分为可水解鞣质和缩合鞣质或黄酮类化合物。可水解鞣质是聚合物简单酚类物质，例如没食子酸的酯及其二聚体(双没食子酸，鞣花酸)。可水解鞣质可进一步分为水解后产生没食子酸的没食子鞣质和水解后释放鞣花酸的鞣花鞣质。与可水解鞣质相反，缩合鞣质不能通过水解分解。相反，当在酸性介质中进行加热时，它们逐渐聚合并形成无定形花色素苷颜料，是高分子量的红色或不溶性黄褐色产物，称为鞣红。

除了它们的深色外，缩合鞣质比大多数其他多酚有机化合物具有更多的羟基和更大的分子结构，这使它们能够有效地捕获和保留有恶臭的分子。这种性质阻碍了葡萄提取物在局部制品、例如抗氧化剂或美容组合物中的用途。

皮肤炎症的过程很复杂。当皮肤暴露于“触发”刺激、例如紫外线(UV)辐射、刺激物或变应原时，皮肤中的细胞产生各种炎性细胞因子和趋化因子。这些细胞因子和趋化因子与靶细胞上的特异性受体结合，并刺激其它炎症介质的产生，这些介质引起血管扩张并激活神经细胞。炎性细胞表达细胞因子和趋化因子也导致酶、自由基和损害皮肤的其它生物介质的产生。初始触发事件的最终结果是放大了大的炎症反应，所述反应虽然旨在帮助皮肤抵抗入侵细菌的感染，但实际上对皮肤造成相当大的损害。对于具有减少的鞣质并可用于减轻皮肤炎症的局部组合物，仍有需要。

发明内容

本文公开了用于生产脱色的葡萄溶剂提取物组合物、例如脱色的麝香葡萄溶剂提取物组合物的方法和组合物。本公开内容使得能够制备葡萄果渣提取物，包括但不限于不同麝香葡萄提取物的组合，其具有较低的缩合鞣质含量，同时基本上保留了所述提取物中的多酚和想要的抗氧化活性。所产生的抗氧化提取物，与现有的葡萄果渣提取物、例如现有的麝香葡萄果渣提取物相比，较不易于使皮肤变色并且气味改善。在一些例子中，所述脱色的提取物得自青铜色和/或紫色这两种麝香葡萄果渣。

在一个例子中，所述方法降低前体葡萄提取物、例如前体葡萄果渣提取物、例如前体麝香葡萄果渣提取物的缩合鞣质含量，并使所述提取物脱色。所述前体提取物、例如前体麝香葡萄果渣提取物通过微滤除去固体来澄清，并将澄清的提取物通过500-5000kDa微滤膜进行超滤来加工，以获得第一渗透物和第一截留物。在第一渗透物中除去风味组分，并将第一截留物通过25-100kDa超滤膜进行超滤来加工，得到第二渗透物和第二截留物。在第二截留物中除去聚合物缩合鞣质，而第二渗透物是与第一截留物相比多酚水平增加并且糖和缩合鞣质水平降低的脱色的提取物。

在一些例子中，所述脱色的提取物用减臭剂例如活性炭、藻酸钙、膨润土或硅铝酸盐吸收剂处理。所述脱色的提取物也可以暴露于氧化镁中以矿化所述脱色的提取物中的有机酸。也可以将所述脱色的提取物干燥和研磨。

在特定例子中，所述前体葡萄果渣提取物是麝香葡萄果渣提取物，例如青铜色和紫色麝香葡萄果渣的前体提取物的组合。在前体提取物的一些实施方式中，青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率范围为0.1至10(重量/重量)，例如0.3至3(重量/重量)。

所述脱色的提取物可以是通过前述脱色工艺获得的任何提取物。或者，所述脱色的提取物包含9-10％的多酚和少于4％的单糖，其中缩合鞣质小于所述脱色的葡萄提取物、例如葡萄果渣提取物、例如麝香葡萄果渣提取物的总多酚含量的10％。在一些例子中，所述脱色的提取物中的总多酚由至少90％的缩合鞣质以外的多酚组成。在其它例子中，所述脱色的麝香葡萄果渣提取物含有0.5-2％纤维、7-9％蛋白质、0.5-1.5％脂肪和15-17％有机酸，例如1-2％纤维、7-8％蛋白质、0.05-0.5％脂肪和15.5-16.5％有机酸。在一些例子中，所述提取物的酚类含量包含2-3％鞣花酸和30-31％没食子酸，例如：2-3％鞣花酸，3-4％鞣花酸糖苷，30-31％没食子酸，2-3％槲皮素，10-11％没食子鞣质，7-8％鞣花鞣质，29-30％原花色素，4-5％花色素苷，2-3％儿茶素和6-7％酚酸。

还公开了包含所述脱色的麝香葡萄果渣提取物的护肤组合物，以及维持健康皮肤的方法，所述方法通过将足量的所述护肤组合物施用于皮肤足够长的时间段来改善弹性蛋白酶抑制、胶原酶抑制、抗氧化活性、减少DNA损伤、增强DNA修复、增加暴露于紫外线辐射后的细胞存活率或增加酪氨酸酶抑制中的一种或多种。用如本文公开所制备的脱色葡萄溶剂提取物制成的局部组合物具有抗氧化活性。

对UV辐射或其他促炎刺激做出反应，角质形成细胞可释放细胞因子以帮助将免疫细胞引导至受伤部位。皮肤中的炎性通路还涉及前列腺素，包括前列腺素E2，它们是经由环加氧酶的作用从花生四烯酸合成的。通过这些细胞因子和前列腺素的存在与否，可以监测真皮和表皮细胞、包括角质形成细胞中的炎症。由角质形成细胞释放的细胞因子包括TNFα、以及白细胞介素IL-1α、IL-1β、IL-3、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-18和IL-1RA。前列腺素E2(PGE2)已被证明参与皮肤的炎性通路，并且还可以与上文提到的细胞因子一起用作标志物，以指示局部抗炎组合物的功效。

本文公开了降低炎症标志物水平的局部组合物和使用局部组合物减轻炎症的方法。在一些实施方式中，本文公开的组合物在局部施用于皮肤后减轻皮肤炎症。炎症的减轻可归因于与对照细胞相比减少所处理的皮肤细胞中IL-1α、IL-6、前列腺素E2或其任何组合的产生。在一些非限制性例子中，所述对照细胞可以是用无活性载体化合物处理的细胞，或者它可以是未处理的细胞。在一些例子中，炎症是UV辐射、包括紫外线A(UVA)和紫外线B(UVB)辐射的结果。

脱色葡萄溶剂提取物生产中的进步允许在局部制品、包括用于护肤产品的局部制品中使用这样的葡萄提取物。本发明提供了包含脱色的葡萄果渣提取物的局部组合物，所述脱色的葡萄果渣提取物具有较低的缩合鞣质含量，同时基本上保留了所述提取物中的多酚和期望的抗炎活性。在一些例子中，所述脱色的提取物是从青铜色和/或紫色麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣中获得的。本公开的组合物还可包含葡萄籽提取物和β-葡聚糖。

在一些实施方式中，所述局部组合物包含有效量的脱色的麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣溶剂提取物、β-葡聚糖和葡萄籽提取物，其中所述脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物包含液态青铜色麝香葡萄果渣提取物与液态紫色麝香葡萄果渣提取物的组合以产生液态麝香葡萄果渣提取物，其中a)所述青铜色麝香葡萄果渣提取物和所述紫色麝香葡萄果渣提取物是溶剂提取的提取物，b)所述青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物的混合物促进鞣花酸在所述麝香葡萄果渣提取物中的溶解性，c)所述青铜色麝香葡萄果渣提取物和所述紫色麝香葡萄果渣提取物是经过滤和发酵的提取物，和d)所述麝香葡萄果渣提取物的多酚含量为至少2％。在另外的实施方式中，这些局部组合物用于减轻皮肤炎症。

从参考附图进行的以下详述描述中，本发明的上述和其它目的、特征和优点将变得更加显而易见。

附图说明

图1是提取方法的一个实施方式的流程图，所述方法降低了缩合鞣质含量，同时基本上保留了多酚含量。

图2是用于执行图1的方法的系统的示意图。

图3A和图3B是使用本文公开的方法降低鞣质含量之前的前体麝香葡萄果渣提取物(图3A)和之后的脱色提取物(图3B)中多酚的色谱图的比较迹线。在所述脱色的提取物中，前体提取物中的想要的多酚谱被保留，而缩合鞣质的水平大大降低。

图4是一个表，总结了通过弹性蛋白酶、胶原酶、2,2-二苯基-1-苦基肼基(DPPH)、TT二聚体、角质形成细胞活力和酪氨酸酶试验所测量的脱色麝香葡萄果渣提取物的有益效应。

图5是示出用所述脱色的麝香葡萄果渣提取物进行弹性蛋白酶抑制试验的结果的图，证明了通过抑制弹性蛋白减少对皮肤弹性的效应。

图6是示出用脱色的麝香葡萄果渣提取物进行胶原酶抑制试验的结果的图。增强的胶原酶抑制通过避免皮肤中的胶原损失来改善皮肤紧致度。

图7是显示测量自由基清除能力的DPPH测定(抗氧化能力)的结果的图，如以Trolox当量(TE)所示。使用了几种浓度的脱色麝香葡萄果渣提取物。0.01％至1％的麝香葡萄提取物在DPPH测定中显示出很高的自由基活性(TE)。在该测定中达到最大活性。

图8显示TT二聚体测定的结果，其中在UVB暴露之前用1％脱色的麝香葡萄果渣提取物预处理完全防止了DNA损伤。所述提取物好于阳性对照(1mM Trolox)。UVB暴露后1％脱色的麝香葡萄提取物处理(后处理)也显示DNA损伤减少45％，表明对DNA修复的效应；0.1％的效应在预处理和后处理中均低于1％。

图9显示紫外线B暴露后的细胞存活率。与未处理的细胞相比，所述脱色的麝香葡萄果渣提取物显著增加细胞存活率，并且所述增加甚至好于20μM Trolox(对照)。

图10显示了在不同浓度的脱色麝香葡萄果渣提取物下的酪氨酸酶抑制，表明减弱色素沉着过度的能力。

图11是在脱色的局部麝香葡萄果渣提取物(TME)和没有脱色的口服施用的麝香葡萄果渣提取物(OME)之间的TT二聚体DNA损伤比较测定的图；含有0.09％和0.009％多酚的OME和TME之间在减少DNA损伤方面没有统计学差异。OME是在先的美国专利号8,568,804、美国专利号9,132,162和美国专利号9,173,916中公开的提取物。

图12是示出OME和TME二者均表现出以剂量相关的方式抑制晚期糖化终末产物(AGE)形成的优异活性(功效)的图。对于这两种提取物，AGE形成的最大抑制在15-20μg多酚/ml浓度下达到95-100％。然而，如抑制50％AGE形成所需的浓度(IC₅₀)所指出的，OME比TME更有力。OME的IC₅₀值为0.65μg多酚/ml，而TME的IC₅₀值为3.94μg多酚/ml。这提示虽然鞣质促进了AGE抑制活性，但保留在TME中的其它麝香葡萄多酚在抑制蛋白质糖化方面与在OME中发现的那些同样有效。

图13是示出用一系列局部组合物进行炎症试验的结果的图，证明了通过抑制白细胞介素1α(IL-1α或IL-1alpha)产生所得到的抗炎效应。

图14是示出用一系列局部组合物进行炎症试验的结果的图，证明了通过抑制前列腺素E2(PGE2)产生所得到的抗炎效应。

图15是示出用一系列局部组合物进行炎症试验的结果的图，证明了通过抑制白细胞介素6(IL-6)产生所得到的抗炎效应。

图16是示出用以组合物重量计为0.01％、0.005％和0.001％的脱色麝香葡萄果渣提取物(TME)的组合物进行DPPH测定的结果的图。也参见图7。1克TME具有与1.85克Trolox相同的抗氧化能力，表明如通过DPPH测定法所测量的，TME比Trolox强185％。

图17是示出用一系列另外的包含脱色麝香葡萄果渣提取物的局部组合物抑制酪氨酸酶的图。

图18是示出用一系列另外的包含脱色麝香葡萄果渣提取物的局部组合物处理的TT(胸苷-胸苷)二聚体DNA损伤的图。

具体实施方式

I.术语

提供以下的术语和方法的解释来更好地描述本公开并在本公开的实践中指导本领域普通技术人员。术语“或”是指所陈述的供选元素的单个元素或者两个或更多个元素的组合，除非上下文另有明确指示。用于本文中时，“包含”意指“包括”。因此，“包含A或B”意指“包括A、B、或A和B”，且不排除其它元素。

除非另有解释，在本文中使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。虽然与本文中所述的相似或等效的方法和材料可用于本公开的实践或检验，但在下面描述了合适的方法和材料。除非另有说明，否则所有百分比和比率均按重量计算。术语“约”是指在某个值的特定范围内的量。例如，“约”某个特定分子量或克量表明在该分子量或克量的5％以内。在一个非限制性例子中，“约”100克是指95克至105克。另外，“约”某个特定百分比是指在0.05％以内。在一个非限制性例子中，“约”2％是指1.95％至2.05％。

施用：通过任何有效途径向对象提供或给予药剂。示例性的施用途径包括但不限于局部、口服、注射(例如皮下、肌内、皮内、腹膜内、静脉内和肿瘤内)、舌下、透皮、鼻内、局部和吸入途径。

抗氧化组合物：具有抗氧化活性的组合物。

抗氧化有效量：在施用组合物的对象中足以诱导抗氧化效应的该组合物的量。

趋化因子：一种介导趋化性的趋化细胞因子。趋化因子是可以刺激白细胞募集到炎症部位的小蛋白质(8和10kDa之间)。炎性趋化因子由包括IL-1α和IL-6在内的促炎刺激物诱导。

细胞因子：参与细胞信号传导过程、包括免疫系统中的细胞信号传导过程的一组蛋白质。细胞因子包括趋化因子和白细胞介素，例如TNFα、IL-1α、IL-1β、IL-3、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-18和IL-1RA。

脱色的：“脱色的”提取物是指颜色浅于参比的提取物，并且不需要没有着色。本说明书中使用的“脱色的”提取物是指具有较低水平的缩合鞣质以及与红葡萄、红葡萄提取物和红葡萄酒中的缩合鞣质相关类型的深色着色较少的提取物。

有效量：组合物单独或与另外的药剂(例如另外的抗氧化剂或另外的抗炎化合物)一起诱导所需反应的量。所述有效量可以按单剂或数剂施用，例如每天。然而，有效量可取决于所治疗的对象、所治疗的病症的类型和施用方式。

赋形剂：用作组合物的活性成分的载体的非活性物质。赋形剂可包括用于使具有活性成分的制剂增大、使剂量方便和准确、稳定活性成分、并使递送系统在视觉上和/或感官上可接受的物质。药物赋形剂的例子包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩(chalk)、硅胶、硬脂酸钠、甘油单硬脂酸酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇等。

提取物：植物或其一个或多个部分、例如其果实或种子的的至少一些活性成分的溶液或其它制品。本文公开的提取物是溶剂提取物，其中将种子暴露于液体提取溶剂(例如热水)以从种子中除去活性成分。最初通过溶剂提取获得的提取物可以转变成干燥形式，并仍然被认为是“提取物”。“水性”或“水”提取物是指通过用水且没有其它溶剂(例如乙醇)进行溶剂提取而获得的提取物。

黄酮类化合物：一类植物次级代谢产物，按干重计，葡萄籽含有约4-8％的黄酮类化合物。黄酮类化合物构成一组重要的膳食多酚化合物，它们广泛分布于植物中。在植物来源例如水果、蔬菜、豆类、坚果、种子、草药、香料、花中，以及饮料例如茶、可可、啤酒、葡萄酒和葡萄汁中，已经鉴定了超过4000种化学上独特的黄酮类化合物。

葡萄籽中的黄酮类化合物主要指黄烷-3-醇，特别是(+)-儿茶素、(-)-表儿茶素、和(-)-表儿茶素3-没食子酸酯，及其复合物。葡萄籽中的黄烷-3-醇以单体、低聚或聚合形式存在。两个以上化学连接的黄烷-3-醇单体被称为原花色素或低聚原花色素(“OPC”)，其包括原花青素和原花翠素。含有两个单体的OPC称为二聚体，三个单体称为三聚体，四个单体称为四聚体，五个单体称为五聚体，等等。低聚物的链长为2至10；聚合物表示链长大于10的组分。因此，葡萄提取物中的低聚物包括，例如，二聚体和三聚体，并且有证据表明聚合物可具有多达50-100个单元。

黄酮类化合物存在于葡萄的所有部分中，包括果皮、果汁和果肉，而不仅仅在葡萄籽中。为了使多酚化合物在商业上作为葡萄提取物、包括作为葡萄籽或葡萄果渣提取物使用，这些化合物必须以更浓缩的形式从葡萄中分离。科学研究显示，原花色素的抗氧化能力比维生素E高20倍，比维生素C高50倍。广泛的研究表明，葡萄籽提取物因为它与胶原蛋白结合的抗氧化效应、促进皮肤年轻、细胞健康、弹性和柔软性，所以在许多健康领域都是有益的。其它研究显示，原花色素有助于保护身体免受阳光伤害、改善视力、改善关节灵活性、动脉和身体组织例如心脏，并通过强化毛细血管、动脉和静脉而改善血液循环。

炎症：一种局部生物反应，由于包括感染、刺激或损伤在内的破坏性刺激，可产生发红、肿胀和疼痛。炎症可以是慢性或急性的，并且可以是病原性的。免疫细胞引发炎性反应，并释放炎性介质，造成血流增加和血浆流体渗漏到受损组织中。其存在表明有炎症的炎性介质包括IL1-α、IL-6和PGE2。

白细胞介素：一种可以介导炎性反应的细胞因子。白细胞介素(IL)有多个家族。白细胞介素1(IL-1)是一个白细胞介素家族，具有至少11个成员，包括IL-1α。IL-1α通常造成炎症的产生，并由上皮细胞产生。白细胞介素6(IL-6)是一种可以刺激免疫应答的细胞因子，并在细胞创伤例如烧伤或其它组织损伤后被分泌。当作为促炎介质起作用时，IL-6可以引发PGE2的合成。

麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitus rotundifolia))：原产于美国东南部的葡萄，并见于从特拉华州到墨西哥湾以及密苏里州、堪萨斯州、俄克拉荷马州和德克萨斯州以西的野外。麝香葡萄很好地适应了美国东南部温暖潮湿的条件。这种水果结成3-40颗葡萄的小而松散的簇，与欧洲和美国葡萄特征性的大而紧密的串完全不同。该圆形的1至1-1/2英寸的水果具有厚而韧的果皮，并含有多达5粒硬的长圆形籽。在颜色上，所述水果的范围从浅绿青铜色到青铜色、带粉红的红色、紫色和近乎黑色。它们被认为是红葡萄，作为用于本说明书中的术语。

有许多不同品种的麝香葡萄，包括雌性(只有雌蕊的)品种，例如Black Beauty、Black Fry、Darlene、Fry、Higgins、Jumbo、Scuppernong、Sugargate、Summit、Supreme、和Sweet Jenny，和自交品种例如Carlos、Cowart、Dixieland、Dixie Red、Fry Seedless、Magnolia、Nesbitt、Noble、Redgate、Regale和Sterling。

例如，本领域技术人员将青铜色的麝香葡萄品种鉴定为包括Carlos、Chowan、Doreen、Higgins、Magnolia、Nevermiss、Pamlico、Roanoke、Scuppernong、Sterling、和Summit cultivars。紫色品种的果皮比青铜色品种的深，并包括Albermarle、Bountiful、Cowart、GA-1、Hunt、NC-1、Noble、Regale、Tarheel和Jumbo。一些紫色品种也被称为黑色。

完整麝香葡萄的植物化学成分与葡萄(Vitis vinifera)不同。麝香葡萄具有以高鞣花、没食子和黄酮类糖苷浓度为特征的较高的总酚含量。麝香葡萄中鞣花酸的存在是独特的，并且以游离鞣花酸、鞣花酸糖苷、甲氧基化衍生物和鞣花鞣质的形式存在。另一个独特的特征是在麝香葡萄中观察到的花色素苷化学成分。以非酰化形式作为花翠素、花青素、矮牵牛花色素、芍药花青素和锦葵色素的3,5-二葡萄糖苷(而不是3-葡萄糖苷)存在，这些化合物以及葡萄内存在的其它花色素苷的天然颜色影响为从紫色品种获得的果汁和果渣赋予深紫色。紫色果渣提取物含有花色素苷，而青铜色果渣提取物则不含。

青铜色和紫色麝香葡萄中存在的红色和紫色花色素苷是具有抗氧化性质的多酚化合物。紫色和青铜色麝香葡萄含有几种其它黄酮类的多酚，其中黄烷-3-醇和它们的低聚物是存在于完整麝香葡萄中的最丰富的类别，而黄酮醇是第二丰富的黄酮类化合物。对麝香葡萄果皮级分报道的主要酚类(按递减顺序排列)是鞣花酸、杨梅树皮素、槲皮素和山奈酚，而对籽报道的那些是表儿茶素、儿茶素和没食子酸(Pastrana-Bonilla等.J.Agric.Food Chem.51：5497-5503，2003)。

麝香葡萄含有果渣和果汁。“非完整葡萄”包括已从中提取了至少一些果汁的麝香葡萄，并且在一些例子中包括葡萄中少于95％或90％的原始果汁。

可药用介质：可用于本公开的可药用介质(载体)是常规的。《雷氏药物科学》(Remington’s Pharmaceutical Sciences)，E.W.Martin撰写，Mack Publishing Co.，Easton，PA，第19版(1995)，描述了组合物和制剂，其适合于药物递送一种或多种组合物例如一种或多种葡萄提取物组合物、例如葡萄籽提取物组合物和在自然界中在葡萄提取物中不存在的另外的天然或非天然药剂。使用可药用载体并不意味着如此制备的产品只可用于药物目的。相反，它意味该产品适合施用于对象或或被对象消费，例如局部组合物。在特定实施方式中，所述介质是用于局部组合物的载体，例如液体、凝胶、泡沫、乳膏、软膏或洗液。特别有用的介质是药学上或美容上可接受用于局部应用的那些，例如一种或多种含水体系、甘油、C_1-4醇、脂肪醇、脂肪醚、脂肪酯、多元醇、二醇、植物油、矿物油、脂质体、层状脂质材料、硅油、水或其任何组合。

对于局部组合物，例如本文公开的那些，可以将所述麝香葡萄提取物组合物配制成任何合适的产品形式。这样的产品形式包括但不限于气溶胶喷雾、乳膏、分散体、乳液、泡沫、凝胶、液体、洗液、摩丝、软膏、贴剂、润发油、粉剂、泵式喷雾、固体、溶液、条棒或小毛巾。所述载体也可以是各种现有的皮肤洗液、凝胶、乳膏、软膏、爽肤水、清洁剂、保湿剂或防晒剂，在其中添加所需浓度、例如0.025-0.25重量％的麝香葡萄提取物。

多酚：已经发现来自葡萄和可可的多酚既提高心血管功能又提高认知健康。黄烷醇(也称为黄烷-3-醇)代表葡萄籽和可可多酚的大部分；这类酚类化合物的范围从单体物质例如儿茶素和表儿茶素到低聚物(经常称为原花色素)到聚合物(经常称为鞣质或缩合鞣质)。术语“酚类”与本领域和本说明书中的术语多酚可互换使用。

多酚也存在于葡萄的其它部分，包括果皮、果汁和果肉中。葡萄中多酚的最高浓度存在于葡萄籽中。葡萄籽是葡萄酒厂和葡萄汁工业的废产物。这些籽含有脂质、蛋白质、碳水化合物和取决于品种的4-8％多酚(干重)。因此，葡萄籽提取物是强大的抗氧化剂，其保护身体免于早衰、疾病和退化。

果渣：果汁提取后剩下的果皮、籽和果肉。在一个例子中，果渣提取物是青铜色麝香葡萄果渣提取物、紫色麝香葡萄果渣提取物或其组合。许多不同品种的麝香葡萄果渣可用作原料，它们包括雌性(只有雌蕊的)品种，例如Black Beauty、Black Fry、Darlene、Fry、Higgins、Jumbo、Scuppernong、Sugargate、Summit、Supreme和Sweet Jenny，和自交品种，例如Carlos、Cowart、Dixieland、Dixie Red、Fry Seedless、Magnolia、Nesbitt、Noble、Redgate、Regale和Sterling。麝香葡萄果渣含有酚类化合物，包括没食子酸和鞣花酸，具有抗氧化性质。

果渣可以存在于完整的葡萄中，其中完整的葡萄含有至少90％或95％的葡萄汁，或者一旦压榨葡萄除去果汁，果渣就可以被基本分离并基本上只由果渣组成。

纯果渣：已经去除果汁、例如通过压榨葡萄去除果汁的葡萄的果渣部分。用于本文中时，“纯果渣”是指按其重量百分比含有不超过1％果汁的果渣。在一些实施方式中，纯果渣按其重量百分比含有不超过0.5％的果汁。

前列腺素：含有20个碳原子、包括戊烷环的生物活性脂质。前列腺素参与介导炎症，前列腺素E2(PGE2)由花生四烯酸经由环加氧酶和前列腺素E合酶产生。在受损和/或发炎的细胞中环加氧酶的水平增加，这导致PGE2产生增加。

纯化：术语纯化不需要绝对纯度；相反，它旨在作为相对术语。因此，例如，纯化的物质是该物质在其中比该物质在其天然环境中、例如在果实(例如葡萄)中更富集的物质。在一个实施方式中，将制品纯化，使得该物质占所述制品的总含量的至少约5％(例如但不限于，至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约70％、约80％、约90％、约95％、约98％或约99％)。

范围：关于范围，术语“在x到y的范围内”或“从x到y”包括x和y之间的任何值，以及端点x和y。

红葡萄：红葡萄是通常用于制作红葡萄酒的葡萄，其鞣质水平通常高于用于制作白葡萄酒的白葡萄。“红葡萄酒”是深色葡萄酒的通称。葡萄酒颜色的确定可以根据国际葡萄及葡萄酒组织(International Organization of Vine and Wine)做出，该组织提供了使用分光光度计和在实验室色空间中的指数计算来评估葡萄酒颜色的方法。用于制作红葡萄酒的葡萄的例子包括Syrah、Merlot、Cabernet Sauvignon、Malbec、Pinot Noir、Zinfandel、Sangiovese、Barbera和麝香葡萄。麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitus rotundifolia))成熟时颜色范围从青铜色到深紫色到黑色。

选择性提取：选择性提取是指目标物(例如缩合鞣质)的优先提取。在一些实施方式中，选择性提取意味着目标物是被提取的主要物质。

皮肤护理组合物：一种局部组合物，其具有可改善皮肤的健康、美感和/或美容外观的活性成分。这样的改善可以通过例如以下所述来显现：炎症标志物水平降低，或由年龄老化、激素老化和光老化等因素引起的皮肤老化征兆减少；降低皮肤脆弱性、毛孔尺寸缩小、胶原蛋白和/或弹性蛋白损失；削弱线条和/或皱纹包括细纹和/或皱纹的出现和/或深度；减少色素沉着过度；改善肤色、光泽、透明度和/或绷紧度；减轻皮肤松弛；促进抗氧化活性；改善皮肤紧致度、饱满度、质地、柔软度和/或柔性；改善前胶原和/或胶原产生。

对象：活的多细胞脊椎动物生物体，类别包括人类和兽医对象二者，例如伴侣动物，包括猫、狗或马。“需要增加线粒体生物发生和/或抗氧化活性对象”是可以从这样的增加中受益的对象，例如希望减少年龄迹象、抵消由氧化引起的组织损伤和/或改善与氧化应激有关的心血管、神经、肿瘤相关、皮肤外观或其它病状的对象。“需要减轻炎症的对象”是可以从这样的减轻中受益的对象，例如希望抵消由诸如UV辐射的炎症引起的组织损伤或者减少老化迹象、与皮肤炎症有关的皮肤外观或其它病状的对象。用于本文中时，“健康对象”没有任何重大的潜在医学炎性病症，包括但不限于湿疹、心血管疾病或银屑病。

鞣质：天然存在的多酚生物分子，其结合并沉淀蛋白质、氨基酸和生物碱。术语“鞣质”最初指的是来自橡木的木鞣制剂用于将动物皮鞣制成皮革的用途。然而，术语鞣质广泛应用于分子量范围从500至超过3,000(没食子酸酯)并直至20,000(原花色素)的大型多酚化合物，其见于植物中，例如红葡萄籽、种子和茎中。就它们的化学组成而言，植物鞣质分为可水解鞣质和缩合鞣质或黄酮类化合物。可水解鞣质是聚合物简单酚类物质，例如没食子酸的酯及其二聚体(双没食子酸，鞣花酸)。可水解鞣质可进一步分为水解后产生没食子酸的没食子鞣质和水解后释放鞣花酸的鞣花鞣质。与可水解鞣质相反，缩合鞣质不能通过水解分解。相反，当在酸性介质中进行加热时，它们逐渐聚合并形成无定形花色素苷颜料，是高分子量的红色或不溶性黄褐色产物，称为鞣红。

局部应用：局部应用的药剂只施用于皮肤的特定表面区域，而不是整个身体。在特定例子中，将所述组合物施用于需要效果、例如减少细纹或皱纹的区域中的皮肤或眼睛，或施用于需要抗炎效果的区域、例如暴露于UV辐射的区域中的皮肤。例如，所述组合物可以在局部制品中施用于面部皮肤。旨在施用于皮肤的局部组合物是“皮肤组合物”。

超滤：一种膜过滤类型，其中力(例如压力或浓度梯度)导致通过半透膜分离。超滤膜通常以膜的截留分子量(MWCO)为特征。悬浮的固体和较高分子量的溶质保留在截留物中，而水和较低分子量的溶质透过所述膜到渗透物中。不同类型的模块可用于超滤过程。这样的模块的例子是：使用浇铸在塑料管或纸管内部的聚合物膜的管状元件；含有多个中空纤维的中空纤维设计；螺旋缠绕模块，其中平面膜片由薄的网状间隔材料分隔开，所述间隔材料围绕中央多孔管卷绕并装配到管状钢制压力容器壳体中；以及板和框架组件，其使用放置在平板上的膜，所述平板由网状材料隔开，滤液通过所述网状材料。

单位剂量：包含被计算出单独或共同产生期望的效应、例如治疗效应的预定量活性物质的物理离散单元。单个单位剂量或多个单位剂量可用于提供期望的效应或活性，例如抗氧化活性或减轻炎症。在一个例子，单位剂量包括促进心血管健康或认知健康的所需药剂量。在另外的例子中，单位剂量包括减轻皮肤炎症的所需药剂量。在另一个例子中，单位剂型含有活性物质的多个预定剂量。

II.几个实施方式的描述

A.获得麝香葡萄果渣提取物前体材料用于后续脱色

所公开的组合物和方法可用于降低包括鞣质的各种植物提取物的缩合鞣质含量。鞣质广泛分布在许多植物类型中。鞣质可见于叶、芽、种子、根和茎组织中。鞣质见于单子叶植物(44科，根据维基百科)和双子叶植物(180科，根据维基百科)中，并见于裸子植物和被子植物中。以下双子叶植物的所有物种都含有鞣质：槭树科(Aceraceae)，猕猴桃科(Actinidiaceae)，漆树科(Anacardiaceae)，红木科(Bixaceae)，橄榄科(Burseraceae)，使君子科(Combretaceae)，龙脑香科(Dipterocarpaceae)，杜鹃花科(Ericaceae)，茶藨子科(Grossulariaceae)，杨梅科(Myricaceae)。茨藻科(Najadaceae)和香蒲科(Typhaceae)(单子叶植物)的所有物种也含有鞣质。缩合鞣质(包括原花色素、多黄酮鞣质、儿茶酚型鞣质、焦儿茶酚(pyrocatecollic)型鞣质、不可水解的鞣质或黄烷(flavolans))见于诸如下列的植物物种中：石栎(Ltihcarpus glaber)，樱桃属(Prunus sp)，Schinopsis lorentzil，Acacia mollissima，葡萄(Vitis vinifera)，和Commiphora angioensis。松树皮和云杉树皮含有缩合鞣质。维管植物(例如，导管植物(Tracheophytes)，维管植物)也包含缩合鞣质。所公开的方法用于降低含有缩合鞣质的任何这些植物的提取物的缩合鞣质含量。

在一些实施方式中，所述植物提取物是葡萄果渣提取物，例如但不限于含有缩合鞣质的麝香葡萄果渣提取物。在一些非限制性例子中，植物提取物是含有缩合鞣质的红葡萄果渣提取物。仅出于说明的目的，所述方法和组合物参考麝香葡萄果渣提取物描述，所述麝香葡萄果渣提取物将是脱色之前的前体材料。在这个具体例子中，所述麝香葡萄果渣提取物是青铜色和紫色麝香葡萄的组合提取物，其具有增强的鞣花酸溶解度(这是麝香葡萄特有的)。如PCT公布号WO 2010/014870和PCT公布号WO 2010/014873以及美国专利号8,568,804、美国专利号9,132,162和美国专利号9,173,916中公开的(它们五个全部通过引用并入本文)，具有改善的鞣花酸溶解度的麝香葡萄糖提取物可以通过合并青铜色和紫色麝香葡萄果渣提取物而获得。公开了制造所述组合提取物的各种方法，例如将青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物合并以产生麝香葡萄果渣提取物，其中青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率范围为0.1至10(重量/重量)，例如0.3至3(重量/重量)。所述组合提取物可以通过单独提取青铜色和紫色麝香葡萄并随后将所述提取物合并或通过同时提取以所需比率组合的青铜色和紫色麝香葡萄来制备。在所公开的例子中，所述前体提取物是麝香葡萄果渣的水性提取物。

本申请人的已并入的PCT公布号WO 2010/014870、PCT公布号WO 2010/01487、美国专利号8,568,804、美国专利号9,132,162和美国专利号9,173,916公开了所述前体麝香葡萄果渣提取物组合物具有改善的抗氧化活性。制作所公开的组合物的方法包括将多酚含量为至少2％的麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物与来自麝香葡萄以外来源的最低纯度为至少5％的反式白藜芦醇合并，其中麝香葡萄多酚与反式白藜芦醇的比率在0.1/1至10/1(重量/重量)的范围内。制造所公开的组合物的方法包括将多酚含量为至少2％的麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物与来自麝香葡萄以外来源的最低纯度为至少5％的反式白藜芦醇合并，其中麝香葡萄果渣提取物与反式白藜芦醇的比率在0.2/1至50/1(重量/重量)的范围内，例如5/1至50/1(重量/重量)，包括20/1至50/1(重量/重量)，例如18/1(重量/重量)，从而产生具有抗氧化活性的麝香葡萄果渣提取物和反式白藜芦醇混合物。

在一些实施方式中，青铜色与紫色麝香葡萄果渣前体提取物的比率范围为0.1至10，例如0.3至3。例如，青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率为约2.75至约1(重量/重量)，2.5至约1(重量/重量)，约2.25至约1(重量/重量)，约2至约1(重量/重量)，约1.5至约1(重量/重量)，或约1至约1(重量/重量)。在其它例子中，该比率为约10至约1，约7.5至约1，或约5至约1。用于本文中时，术语“约”定义为±0.5。在一个特定例子中，青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率为约2.25至约1(重量/重量)。

在某些实施方式中，麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣前体提取物具有至少2％的多酚含量。例如，多酚含量是至少3％、至少3.5％、至少4％、至少4.5％、至少5％、至少6％、至少8％、至少10％、至少12％或至少14％。在一个特定例子中，麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣提取物的多酚含量为约4％。

在一些实施方式中，所公开的麝香葡萄果渣前体提取物在液体中包含20％至50％的固体，例如至少25％、至少30％、至少35％、至少37％、至少40％、至少42％、至少44％、至少46％或至少48％。在特定例子中，所述提取物在液体中包含约40％的固体。

所述前体提取物可通过任何提取方法获得，例如在压力下压制或用溶剂提取。特定的例子是溶剂提取，例如用醇、水(例如热水)或醇和水的组合。所述提取物可以进一步发酵以除去提取的糖。在一个例子中，发酵在提取青铜色麝香葡萄果渣和紫色麝香葡萄果渣之后、但在将青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物合并而产生所公开的麝香葡萄果渣提取物之前进行。在其它例子中，发酵在将青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物以所需的提取后比率(例如但不限于约2:25至1青铜色比紫色的比率)合并之后进行。

发酵可以通过本领域技术人员已知的任何方法进行。例如，可以将酵母和酵母营养素添加到所述果渣中并继续发酵，直到残余糖含量转化为乙醇。在一个例子中，每1000加仑1X(未浓缩的)提取物添加2磅酵母；发酵通常在三天后完成。在其它例子中，酵母的量和/或菌株以及发酵的持续时间和温度可根据本领域技术人员已知的个别方法而变化。在一些例子中，将酶用于澄清和/或沉淀残渣或改善所述果渣提取物中的提取率。这样的酶的例子包括果胶酶或来自黑曲霉(Aspergillusniger)的酶的掺合物，来自黑曲霉的酶可从诸如Scott Laboratories的来源商购。这些酶可以在发酵之前或期间添加到所述果渣提取物中。

在一些实施方式中，所述青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物在发酵之前和/或之后过滤。过滤可以根据本领域技术人员已知的一般方法进行。在一个特定例子中，提取物通过适当筛目尺寸的筛网、例如USP筛网(通常为120目)或类似的布滤器(例如可从Millipore Corporation商购的过滤器)进行过滤。

在某些实施方式中，制备麝香葡萄果渣前体提取物的方法还包括浓缩所述青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物，使得每种提取物在液体中包含20％至50％固体，例如至少25％、至少30％、至少35％、至少37％、至少40％、至少42％、至少44％、至少46％或至少48％。在一个特定例子中，浓缩所述提取物，使得每种提取物在液体中包含约40％固体。通常已知的浓缩样品的方法，包括本文公开的浓缩样品的方法，可用于浓缩所述青铜色和紫色提取物。

在任何前述提取方法的例子中，完整的紫葡萄可以代替紫色果渣。所述紫色麝香葡萄果渣提取物可包括(a)完整紫色麝香葡萄的提取物；(b)来自非完整葡萄的紫色麝香葡萄果渣的提取物；或(c)(a)和(b)的混合物。完整的紫色葡萄含有葡萄汁，这是来自葡萄果渣以外的花色素苷的来源，并且当溶剂从完整的葡萄中提取时，现已被发现这些花色素苷意外地提高了鞣花酸在所述青铜色和紫色麝香葡萄提取物的混合物中的溶解度。然而，另外的花色素苷来源也可以通过紫色麝香葡萄之外的有色水果或有色水果的副产物提供，例如蓝莓、黑莓或树莓。在其它例子中，花色素苷来自水果加工流的产物，例如果汁浓缩物，或水果加工流的副产物，例如从果泥加工流中分离的果皮。

通过任何这些方法获得的麝香葡萄果渣前体提取物具有赋予所述提取物深色着色的缩合鞣质水平。因此，所述前体提取物可以如下所述进行进一步加工，以降低鞣质含量并产生脱色的提取物。

B.降低提取物的鞣质含量以制备脱色的提取物

一旦获得所述前体提取物，就将其进行脱色工艺。图1中显示了用于降低麝香葡萄果渣提取物的鞣质含量的脱色工艺的实例。前体材料是麝香葡萄果渣提取物液态浓缩物1。在该实例中，所述浓缩物1有40-45％固体，如美国专利号8,512,771和9,173,916中所述。通过添加纯化水将浓缩物1稀释至小于10％固体，以产生8％固体溶液2(固体百分比范围可以从2-10％)。将溶液2加热至130-135°F，并通过微滤装置3来澄清所述材料。当所述前体材料稀释至非常低的固体水平(2-5％)时，所述微滤过程更有效，并且加热也有助于促进该过程。在该具体实例中，所述微滤装置3是孔隙尺寸为0.45微米和NMWCO为200,000道尔顿(或200kDa)的机械过滤器，其从溶液中除去微生物和悬浮粒子，为随后的超滤处理4作准备。在开始第一阶段超滤步骤之前，将所述澄清的提取物在储罐中快速冷却至<50°F。

然后将所述冷却和澄清的提取物用1000道尔顿(或1kDa)的标准额定分子量截留超滤膜进行超滤处理4，得到5处的渗透物(级分A)。级分A包含分子量小于1000的化合物且主要含有有机酸、糖和矿物质，但意外地含有少于1％的酚类化合物。这些酚类化合物包括痕量的酚酸和黄酮类化合物，例如没食子酸和槲皮素。虽然分子量至多1,000道尔顿的分子能够渗透所述超滤膜，但却出乎意料地发现该级分含有非常低的酚酸含量，这可能是由于酚酸与所述前体材料中含有的其它分子、可能是纤维之间的物理化学相互作用。使用低至500道尔顿且至多5000(或5kDa)的标准额定分子量截留超滤膜，可以获得这种意想不到的发现。级分A可以在其它产品中充当“麝香葡萄”型风味组分，但是该材料在制备所述皮肤护理提取物的过程中被弃去。

将从低分子量超滤(如上所述)中留下的截留物(未通过超滤膜的材料)在纯净水中重构至约2％固体浓度，并用30kDa截留超滤膜进行第二次超滤过程6。将所生成的截留物7(级分C)弃去，并保留含有脱色的麝香葡萄果渣提取物的渗透物8(级分B)，用于进一步加工成皮肤护理组合物。级分C主要含有聚合物缩合鞣质、蛋白质和纤维。相比之下，级分B富含多酚(9-10干重％)、低糖(<4干重％)和大为降低的聚合缩合鞣质含量(经历初始缩合鞣质含量最少降低70％)。虽然分子量至多30,000道尔顿的分子能够渗透所述超滤膜，但却出乎意料地发现至少70％的聚合缩合鞣质保留在级分C中，可能是由于物理化学相互作用。这种意想不到的发现可能是由于使用低至25,000道尔顿(25kDa)且至多100,000道尔顿(或100kDa)的标准额定分子量截留超滤膜所致。

级分B还含有纤维(约1.0％)、蛋白质(约7.8％)、脂肪(约0.1％)和有机酸(约16.0％)。富含聚合缩合鞣质的级分C可以充当用于各种产品的抗氧化剂的来源，但是这种材料在所述皮肤护理提取物的制备过程中被弃去。在脱色工艺的这个时点上，所述麝香葡萄果实提取物，级分B，具有的糖含量最少(<4干重％)并且聚合物缩合鞣质大为降低。级分B对用于皮肤护理产品是理想的，因为它含有强效的多酚抗氧化剂，然而由于去除了缩合鞣质和它最少的糖含量，变棕色的可能性很少或没有。当被引入到用于局部用途的各种制剂中时，未检测到棕色底色。

渗透物8(级分B)通过用以0.3％重量/重量计的活性炭对其处理来进一步加工，以除去皮肤护理产品中不希望的有气味(odiferous)组分(黄油/酵母气味)。用活性炭处理后，将级分B进行最终的微滤过程9以除去所有痕量的活性炭。在微滤之后，浓缩10所述溶液至30-40％固体，然后用氧化镁矿化，以促成干燥后自由流动的粉末。氧化镁按干重计以7.0％的输入量添加到所述浓缩物中，以完全促进所述矿化过程，从而形成所述提取物中存在的所有有机酸的镁盐。最后，将产物进行干燥/研磨11以提供均匀的粒度。在该研磨阶段期间添加二氧化硅以防止产物结块。

与所述前体材料相比，当进行上述工艺时，级分B的质量减少75-80％，然而多酚含量仅减少35-40％。因此，当级分B与所述前体材料比较时，以等效质量计，级分B中的非鞣质多酚含量的最终降低仅为18-20％。因此，级分B中多酚的主要损失归因于聚合缩合鞣质化学类别；实际上没有检测到其它多酚化学类别的损失(参见图3A和3B中的色谱图)。因此，级分B平均含有9％的麝香葡萄多酚(主要是非鞣质的)，而所述前体材料平均含有14％的由鞣质和非鞣质的麝香葡萄多酚组成的多酚。对于前体材料对比通过上述工艺产生的脱色提取物，表1-3描述了营养和多酚含量比较，图3A和图3B提供了色谱比较。

表1比较了所述前体和脱色提取物的营养概况(以干提取物的％呈现)。虽然营养概况非常相似；由于所述前体材料的质量减少，存在营养素类别例如蛋白质和简单糖的一定浓缩。然而，所述脱色的提取物的最终简单糖(单糖)含量相当低(<4-5％)，因此适用于局部应用产品。表2显示了，以干重计，每种提取物的总多酚含量，并进一步将多酚含量分为缩合鞣质含量和缩合鞣质以外的多酚含量。如表2所示，虽然所述脱色的提取物中的总多酚含量低约35％(90对140mg/g干重)，但所述脱色的提取物的缩合鞣质含量比所述前体提取物中存在的低至少70％(6对21mg/g干重)。因此，大部分(大约80％)的多酚损失可归因于缩合鞣质的去除，证实使用上述工艺相对于其它多酚优先除去缩合鞣质。

所述脱色的提取物保留了所述前体材料中存在的所有核心多酚(列于表4中)(酚酸，黄酮类化合物，花色素苷，和可水解鞣质)，如图3A和3B中的色谱图所示，并且在表3中进一步示出，其中描述了所述核心/标志性的麝香葡萄多酚的概况。使用分析方法，测得所述前体提取物中约30％的总多酚(140mg中的43.84mg)为单酚类别和/或化合物，并与所述脱色提取物中的相应类别/化合物进行比较。如表3所示，在所述脱色的提取物中可检测到重要的(在有些情况下独特的)麝香葡萄多酚类别，例如酚酸、鞣花酸、没食子酸、鞣花鞣质和没食子鞣质；在一些情况下，所选化合物、例如没食子酸的百分比增加。因此，所述两种提取物之间多酚含量的主要差异是缩合鞣质含量减少70％。总之，当以典型的局部制剂用量添加时，缩合鞣质含量降低加之低水平的简单糖使得脱色的级分B适于皮肤护理应用。这些制剂对于皮肤护理有用(见下文)，并且在储存时更稳定，使得产品不会随着时间的推移变成棕色或颜色变深。

所公开的用于选择性降低缩合鞣质水平的提取方法意外地且有利地保留或改善了有益于皮肤处理的其它多酚的水平，同时避免了由于存在高水平的缩合鞣质而造成的缺点。

表1.前体和脱色麝香葡萄提取物的营养概况

表2.前体和脱色麝香葡萄提取物的多酚含量

表3.前体和脱色麝香葡萄提取物的多酚概况

A.皮肤产品

缩合鞣质含量减少的脱色麝香葡萄果渣提取物可以掺入到各种皮肤护理产品中，例如凝胶油清洁剂、视黄醇浓缩精华液、兼防晒的日用保湿剂、净化处理爽肤水扑和面部皮肤再生霜。所述麝香葡萄果渣提取物可以是皮肤护理组合物的0.00001至1重量％，例如皮肤护理组合物的0.0001至1重量％，皮肤护理组合物的0.001至1重量％，或皮肤护理组合物的0.01至1重量％。在一些实施方式中，所述麝香葡萄果渣提取物是例如皮肤护理组合物的0.025至1重量％，例如0.025至0.25重量％。在其它实施方式中，所述麝香葡萄果渣提取物是，例如，所述组合物的0.0004至0.4重量％。所生成的皮肤护理组合物具有对皮肤有益的多酚概况，但由于其较低的缩合鞣质含量，产品是相对脱色的。用于本文中时，“低缩合鞣质含量”是指缩合鞣质含量为10重量％或更低。

所公开的用于制备脱色的麝香葡萄果渣提取物的方法可用于如C和D部分所述的治疗炎症的局部皮肤组合物和方法，所述脱色的麝香葡萄果渣提取物与未脱色的麝香葡萄果渣提取物相比具有较低水平的缩合鞣质含量。A和B部分中公开的任何方法都可用于制备为施用于皮肤而配制的组合物。

1.生物测定证明麝香葡萄果渣提取物对皮肤的有益效果

各种生物测定已经证明了所述麝香葡萄果渣提取物对皮肤的作用方式。在图4中针对弹性蛋白酶、胶原酶、DPPH、TT二聚体、角质形成细胞活力和酪氨酸酶试验总结了含有所述脱色提取物的麝香葡萄果渣提取物皮肤护理组合物的有益效果。这些试验如下进行。

a.弹性蛋白酶和胶原酶抑制

培养人真皮成纤维细胞并用作弹性蛋白酶的来源。通过在弹性蛋白酶缓冲液中裂解成纤维细胞并保留所述裂解物的可溶部分，从所述细胞中部分纯化该酶。然后将该成纤维细胞裂解物的部分与测试材料和合成的弹性蛋白酶底物Suc-(Ala3)-对硝基苯胺(STANA)一起温育。弹性蛋白酶作用于该底物以释放对硝基苯胺，对硝基苯胺可以用分光光度计通过测量405nm波长处的吸光度来检测。通过释放的对硝基苯胺的量与未抑制的酶相比时的减少来记录弹性蛋白酶的抑制。

基质金属蛋白酶-1(MMP-1)是一种细胞外蛋白酶，其潜伏形态的大致分子量为52-56kD。在所述酶原裂解后，22-46kD的MMP-1变成活性酶并且可以降解许多底物，包括胶原蛋白、明胶和巢蛋白。在人类皮肤中，经由一些疾病状态、暴露于紫外线照射或作为自然老化过程的一部分，可以诱导MMP-1活性增加。这可能导致MMP-1对胶原的降解超过它的更新率的不平衡状态。因此，抑制MMP-1活性的材料可能是有益的。为了筛选MMP-1的抑制剂，将活性的重组人MMP-1在硫代酯肽(thiopeptolide)底物、潜在抑制剂和5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)存在下温育。当硫代酯肽底物被MMP-1分解时，它释放出巯基，巯基可与DTNB反应并形成2-硝基-5-硫代苯甲酸，后者可在412nm处用分光光度法检测。因此，MMP-1活性将与412nm处的吸光度成正比，并且在抑制剂存在下，该吸光度将降低。

b.DPPH测定

该测定是基于抗氧化剂对稳定自由基2,2-二苯基-1-苦基肼基(DPPH)的清除效应的测量。自由基DPPH在517nm处具有强吸光度，并且当DPPH与抗氧化化合物反应并转化为肼时，该吸光度降低。DPPH测定被认为是评价抗氧化剂清除活性的有效且容易的测定，因为所述自由基化合物是稳定的并且不必像在其他自由基清除测定中那样去产生。

c.TT二聚体测定

用于该测定的测试系统是MatTek EpiDerm，其是由被培养形成多层的正常人源性表皮角质形成细胞组成的皮肤模型，是人表皮的高度分化模型。对于该研究，将组织用所述测试材料局部处理过夜然后UVB暴露(评估预防的预处理组)或在UVB暴露后处理过夜(评估修复的后处理组)。在所述暴露和处理后，从所述EpiDerm组织中提取DNA，并使用基于ELISA的方法测定胸腺嘧啶二聚体含量。

d.紫外线-B辐射暴露对于角质形成细胞活力

用所述测试材料处理人表皮角质形成细胞24小时，然后暴露于一定剂量的UVB光(约50mj/cm²)。然后经由MTT测定来确定在UVB暴露后24小时细胞活力的变化。MTT测定是细胞代谢活性的比色分析，其反映了细胞活力。活细胞可以摄取MTT，MTT然后通过线粒体还原，导致形成不溶的紫色福尔马肼晶体。然后用异丙醇从所述细胞中提取这些晶体并以分光光度法定量。紫色的强度与活细胞的数量直接成正比，与测试材料的毒性成反比。

e.酪氨酸酶抑制

将纯化的酪氨酸酶在含有L-DOPA(L-3,4-二羟基苯丙氨酸)的磷酸钠缓冲液中混合，并与所述测试材料一起温育。温育30分钟后，经由比色测定评估转化为DOPA铬的L-DOPA的量(反映酪氨酸酶活性)。曲酸是酪氨酸酶抑制的阳性对照。

f.结果

图5显示了弹性蛋白酶抑制试验的结果，并通过抑制弹性蛋白减少证明了对皮肤弹性的潜在效应。图6显示了胶原酶抑制试验的结果，说明了通过避免胶原减少来维持皮肤紧致度的可能性。图7显示了测量自由基清除能力的DPPH测定的结果，如Trolox当量所示；TE值越高，抗氧化能力越大。所述脱色提取物提供了大于1500Trolox当量的抗氧化活性。图8显示TT二聚体测定的结果，其中在UVB暴露之前用1％麝香葡萄提取物预处理完全防止了DNA损伤。所述提取物好于阳性对照(1mM Trolox)；UVB暴露后1％麝香葡萄提取物处理(后处理)也显示DNA损伤减少45％，表明对DNA修复的效应；0.1％的效应在预处理和后处理中均低于1％。图9显示紫外线B暴露后的细胞存活；与未处理的细胞相比，所述麝香葡萄提取物显著增加细胞存活率，并且所述增加甚至好于20μM Trolox。图10显示了酪氨酸酶抑制，表明防止色素沉着过度的能力。所述脱色的提取物能够显著抑制酪氨酸酶，并且将预期有助于避免不希望的年龄或暴露相关的皮肤色素沉着。

图11是比较测定，显示了所述脱色的提取物保留了所述前体提取物的DNA保护活性。图11是在脱色的局部麝香葡萄果渣提取物(TME)和没有脱色的口服施用的麝香葡萄果渣前体提取物(OME)之间的TT二聚体DNA损伤比较测定的图。OME是在先美国专利号8,568,804、美国专利号9,132,162和美国专利号9,173,916中公开的提取物。TME和ONE二者均显著防止由皮肤组织中的UV伤害引起的DNA损伤，如通过与未处理组相比时减少TT二聚体形成所测量的。在减少DNA损伤方面OME和TME之间没有统计学差异。

总之，在局部皮肤护理产品中使用浓度为0.00001至1重量％，例如但不限于0.025至0.25重量％的所公开的麝香葡萄提取物具有降低的缩合鞣质水平，并且还证明了与下述相关的性质：改善皮肤弹性和皮肤紧致度，减少黑斑形成，通过自由基清除改善抗氧化活性，以及防护紫外线-B光，包括增强皮肤修复和增加皮肤细胞存活率。由于保留了所述脱色提取物的总酚类概况，所以所述提取物的脱色不会显著影响所述提取物的皮肤保护性质。

1.麝香葡萄果渣提取物抑制蛋白质糖化

晚期糖化最终产物(AGE)是通过将糖分子附连于细胞的和循环的蛋白质和脂质上产生的，是一种通过氧化应激加速的过程。在体内已经检测到多种AGE分子，并且重要的是，AGE水平的增加与疾病例如糖尿病、神经变性、关节炎和慢性炎性病症相关。此外，大量证据表明AGE积累是正常老化过程的基础-不仅AGE水平随着自然年龄而增加，而且延长寿命的干预(例如卡路里限制)也降低AGE水平。老化期间皮肤中的AGE水平增加，并且已经提出胶原和其他皮肤蛋白质的糖化促进老化皮肤的外观和功能改变。

目前的研究提示，AGE通过两种机制促进细胞老化和功能障碍。首先，糖可以破坏蛋白质、干扰正常功能和降低细胞活力。其次，AGE被认为通过它们与晚期糖化最终产物的受体(RAGE)的相互作用引发炎症的恶性循环；RAGE的激活诱导多种炎性通路，其最终导致细胞死亡。

一些但不是全部多酚已经显示出抑制AGE蛋白的形成。所以要确定含有降低的鞣质水平的所述脱色局部麝香葡萄糖提取物(TME)是否保留了抑制蛋白质糖化的能力。因此，将TME的效应与原始/口服麝香葡萄糖提取物(OME)的效应进行比较。AGE形成使用如Farrar等，BioFactors 30：193-200，2007中所述的标准荧光测定的修改版来测量。简而言之，将血清白蛋白与果糖在磷酸盐缓冲液中于37℃温育72小时，并在370/440激发/发射波长下测量荧光强度。将各种浓度的麝香葡萄提取物(标准化为μg多酚/ml缓冲液)与对照载体进行比较，结果表示为对照(载体)样品中产生的AGE形成的抑制百分比。

如图12所示，OME和TME二者均以剂量相关的方式表现出抑制AGE形成的优异活性(功效)。对于这两种提取物，AGE形成的最大抑制在15-20μg多酚/ml浓度下达到95-100％。然而，据抑制50％AGE形成所需的浓度(IC₅₀)所指出的，OME比TME更有力。OME的IC₅₀值为0.65μg多酚/ml，而TME的IC₅₀值为3.94μg多酚/ml。这表明虽然鞣质促进了AGE抑制活性，但保留在TME中的其它麝香葡萄多酚在抑制蛋白质糖化方面与在OME中存在的那些同样有效。

B.用于减轻炎症的局部组合物

本文公开了局部组合物，其包含有效量的脱色麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitisrotundifolia))果渣溶剂提取物、β-葡聚糖和葡萄籽提取物，以及它们的用途。所述局部组合物可另外包含其它成分，其存在的量足以在施用于皮肤时减轻炎症，例如泛醇、维生素C和/或超氧化物歧化酶。例如，所述局部组合物还可包含有效量的维生素A、维生素E、或维生素A和E。炎症的减轻可包括减少皮肤细胞产生IL-1α、IL-6、前列腺素E2或其任何组合。

鉴于炎症对皮肤的已知效应，包括由于UV辐射引起的炎症，许多常规皮肤产品干扰真皮和表皮细胞损伤机制的不足，以及公众不愿意常规穿戴足够的防护来阻挡紫外光的损伤效应，因此需要有效的替代产品来保护免受炎症的有害效应，例如但不限于紫外光引起的炎症。本文公开的局部组合物通过以消费者可接受的形式组合几种成分来实现这些目的，同时有效降低了多种皮肤炎症标志物的产生。

本文所述的脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物，具有降低的缩合鞣质含量，可以掺入各种局部组合物中。这些局部用组合物具有对皮肤有益的多酚概况，但由于它们的缩合鞣质含量较低，所以所述组合物是相对脱色的。用于本文中时，“低缩合鞣质含量”是指缩合鞣质含量为10重量％或更低。所述组合物包含脱色的麝香葡萄果渣提取物、β-葡聚糖和葡萄籽提取物。

1.脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物

所公开的组合物和方法含有脱色的麝香葡萄果渣提取物，其与未脱色的麝香葡萄果渣提取物相比，具有较低水平的缩合鞣质含量。所述脱色的麝香葡萄果渣前体提取物可如上文A和B部分所述制备。本文公开的任何组合物可含有为施用于皮肤而配制的脱色麝香葡萄果渣提取物。

本文公开的用于选择性降低缩合鞣质水平的提取方法意外地且有利地保留或改善了有益于皮肤的其它多酚的水平，同时避免了由于存在高水平的缩合鞣质而造成的缺点。制造所述组合提取物的方法包括将青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物合并以产生麝香葡萄果渣提取物，其中青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率范围为0.1至10(重量/重量)，例如0.3至3(重量/重量)。在某些例子中，所述脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物由这样的组合的前体提取物制备。

所述组合的前体提取物可以通过单独提取青铜色和紫色麝香葡萄并随后将所述提取物合并、或通过同时提取以期望比率组合的青铜色和紫色麝香葡萄来制备。在所公开的例子中，所述脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物是所述前体组合液态麝香葡萄果渣的含水提取物。

在一些实施方式中，所述前体液态提出物中青铜色与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率范围为0.1至10，例如0.3至3。例如，青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率为约2.75至约1(重量/重量)，2.5至约1(重量/重量)，约2.25至约1(重量/重量)，约2至约1(重量/重量)，约1.5至约1(重量/重量)，或约1至约1(重量/重量)。在其它例子中，该比率为约10至约1，约7.5至约1，或约5至约1。用于本文中时，术语“约”定义为±0.5。在一个特定例子中，青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率为约2.25至约1(重量/重量)。

在某些实施方案中，所述组合的前体麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣液态提取物具有至少约2％的多酚含量。例如，多酚含量为至少约3％，至少约3.5％，至少约4％，至少约4.5％，至少约5％，至少约6％，至少约7％，至少约8％，至少约10％，至少约12％，或至少约14％。在一个特定例子中，所述组合的前体麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitisrotundifolia))果渣液态提取物具有约4％的多酚含量。

在一些实施方式中，所公开的组合前体液态麝香葡萄果渣提取物在液体中包含20％至50％固体，例如至少25％，至少30％，至少35％，至少37％，至少40％，至少42％，至少44％、至少46％或至少48％。在一个特定例子中，所述组合的前体提取物在液体中包含约40％的固体。

在某些实施方式中，所述脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物是青铜色和紫色麝香葡萄果渣的液体提取物的组合。在所述脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物的一些实施方式中，青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率为约0.1至约10(重量/重量)，例如约0.3至约3(重量/重量)。

在一些例子中，所述脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物的酚类含量包括约2-3％的鞣花酸和约30-31％的没食子酸，例如：约2-3％鞣花酸，约3-4％鞣花酸糖苷，约30-31％没食子酸，约2-3％槲皮素，约10-11％没食子鞣质，约7-8％鞣花鞣质，约29-30％原花色素，约4-5％花色素苷，约2-3％儿茶素和约6-7％酚酸。

用于所述局部组合物的紫色麝香葡萄果渣提取物可以包含完整的紫色(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))麝香葡萄的提取物、来自完整葡萄之外的紫色麝香葡萄果渣的提取物、或二者。在一个实施方式中，脱色的麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣溶剂提取物是在初始压制后获得的，并且包含果皮、籽、果肉和残余的果汁。

在某些实施方式中，所述脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物，以所述提取物的重量计，可包含约7％和约10％之间的多酚，例如约9％至约10％的多酚，和少于约5％的单糖，例如少于约4％的单糖。在一个特定例子中，所述脱色的麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitisrotundifolia))果渣溶剂提取物，以所述脱色提取物的重量计，具有约9％至约10％的多酚含量，并含有少于约4％的单糖。

在一些非限制性例子中，所述缩合鞣质少于所述脱色麝香葡萄果渣溶剂提取物的总多酚含量的约10％。在另外的非限制性例子中，所述脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物中的脱色麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣溶剂提取物总多酚由至少约85％、例如至少约90％的缩合鞣质以外的多酚组成。

所述脱色的麝香葡萄(圆叶葡萄(Vitis rotundifolia))果渣溶剂提取物可另外包含来自所述葡萄果渣的天然存在的组分。例如，所述脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物，以所述提取物的重量计，可含有约0.5％-5％的纤维、约7％-14％的蛋白质、约0.5％-3％的脂肪和约15％-20％的有机酸。在某些例子中，所述脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物包含约0.5％-2％或约1％-2％纤维、约7％-9％或约7％-8％蛋白质、约0.05％-1％或约0.1％-0.5％脂肪和约15％-17％或约15.5-16.5％有机酸，各百分比以所述提取物的重量计。

2.其它组分和制剂

β-葡聚糖是天然存在的含有β-D-葡萄糖的多糖，并见于某些谷物、酵母、细菌和真菌的细胞壁中。在一些例子中，Β-葡聚糖是从谷物中提取的。在特定的例子中，β-葡聚糖是从燕麦中提取的，包括普通燕麦Avena sativa。在某些例子中，β-葡聚糖的分子量在约0.5-1.0x 10⁶Da之间。β-葡聚糖可以是葡萄糖的多糖，并可以包含1,4和1,3-β糖苷键。

β-葡聚糖被认为提供健康益处，包括但不限于平滑皮肤、保湿皮肤、刺激成纤维细胞生长和/或胶原合成、减少瘢痕变色和刺激免疫防御。

葡萄籽提取物来自完整的葡萄籽并含有有益的膳食组分。葡萄籽是葡萄酒厂和葡萄汁工业的废产物。这些籽含有纤维、脂质、蛋白质、碳水化合物，以及取决于品种一般约4-8％的多酚(干重)。葡萄籽的商业提取物，包括葡萄(Vitis vinifera)的葡萄籽提取物，经常是标准化的，以干重百分比提供70-95％的多酚。

本文公开的局部组合物中包含的葡萄籽提取物可以是葡萄(Vitisvinifera)的葡萄籽提取物。在一些例子中，所述葡萄籽提取物的总多酚含量小于70％，并且在一些例子中所述多酚含量小于50％。在特定例子中，所述葡萄籽提取物含有38-50％多酚、9-12％纤维、1-2％蛋白质、25-30％糖和少于1％脂质。

在实施方式中，所述局部组合物包含约0.001％至约1.0％的脱色麝香葡萄果渣溶剂提取物，例如约0.01％至约0.5％的脱色麝香葡萄果渣溶剂提取物，或约0.025％至约0.25％的脱色麝香葡萄果渣溶剂提取物，百分比是基于所述局部组合物的总重量。在某些实例中，所述局部组合物包含约0.0001％至约1.0％的β-葡聚糖，例如约0.0005％至约0.1％的β-葡聚糖，或约0.005％至约0.05％的β-葡聚糖，百分比是基于所述局部组合物的总重量。在进一步的例子中，所述局部组合物包含约0.00001％至约0.1％的葡萄籽提取物，例如约0.0001％至约0.05％的葡萄籽提取物，或约0.0002％至约0.01％的葡萄籽提取物，百分比是基于所述局部组合物的总重量。

所述局部组合物的实施方式可包含约0.001％至约1.0％的脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物，0.0001％至约1.0％的β-葡聚糖，和约0.00001％至约0.1％的葡萄籽提取物，百分比是基于所述局部组合物的重量。例如，以所述局部组合物的重量计，所述局部组合物可包含约0.01％至约0.5％的脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物，约0.0005％至约0.1％的β-葡聚糖，和约0.0001％至约0.05％的葡萄籽提取物。在进一步的例子中，以所述局部组合物的重量计，所述局部组合物包含约0.025％至约0.25％的脱色麝香葡萄果渣溶剂提取物，约0.005％至约0.05％的β-葡聚糖，和约0.0002％至约0.01％的葡萄籽提取物。

本文公开的局部组合物还可包含维生素A(视黄醇及其类似物，例如棕榈酸视黄酯)和/或维生素E(生育酚及其类似物，例如生育酚乙酸酯)。在某些实例中，包含脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物、β-葡聚糖和葡萄籽提取物的所述局部组合物还包含有效量的维生素A、维生素E、或维生素A和E二者。在某些公开的实施方式中，包含脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物、β-葡聚糖和葡萄籽提取物的所述局部组合物还包含泛醇、维生素C(及其类似物，例如抗坏血酸磷酸酯镁、抗坏血酸棕榈酸酯等)和超氧化物歧化酶，它们的存在量足以在施用于皮肤时减轻炎症。

所公开的组合物可包含另外的成分。在一些实施方式中，所述局部组合物包含，以所述组合物的重量计，约0.0001％至约0.5％的维生素A、约0.00001至约0.1％的维生素C、约0.001％至约1.0％的维生素E、约0.001％至约1.0％的泛醇、约0.00001％至约0.1％的超氧化物歧化酶、或其任何组合。在含有维生素C、A和/或E的局部组合物的非限制性例子中，维生素C可以是抗坏血酸磷酸酯镁的形式；维生素A可以是维生素A棕榈酸酯的形式；维生素E可以是维生素E乙酸酯的形式。

在某些例子中，包含泛醇、维生素C、A或E、超氧化物歧化酶或者泛醇、维生素C、A和E以及超氧化物歧化酶的任何组合的所述组合物，当局部施用于皮肤时，可以减少IL-1α、IL-6、前列腺素E2或者IL-1α、IL-6和前列腺素E2的任何组合的产生。

包含脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物、β-葡聚糖和葡萄籽提取物的局部组合物也可以含有香料、防腐剂、染料、软化剂和物理反射剂，以及其存在可以在美容上或其它方面合乎需要的任何其它类别的材料。可包括本文公开的局部组合物的皮肤护理产品的例子包括凝胶油清洁剂、视黄醇浓缩精华液、日用保湿霜、净化处理爽肤水扑和面部皮肤再生霜。

所述局部用组合物可以是液体、凝胶或半固体的形式。成分类型和量的选择由组合物的性质、即凝胶或半固体决定，并且在化妆品化学工作者的技术范围内。例如，将较大量的蜡掺入本发明的半固体组合物中而不是掺入液体组合物中。

单独的防晒剂可能不能完全保护皮肤对抗紫外线辐射的不利效应，因此已经提出了替代的保护模式。维生素，例如维生素E乙酸酯，已经被证明可以在局部应用后使皮肤更柔软和更光滑，这可以抵消太阳的一些损伤效应。维生素A棕榈酸酯已被证明可以生成更光滑的皮肤，并有助于增强细胞更新过程。这种增强通过将显得更年轻的皮肤细胞带到表面来消除最外层死皮层的皮肤。

用本文所述的局部组合物制备的任何皮肤护理产品可另外包含防晒剂。所公开的局部组合物可在暴露于紫外线辐射之前或之后施用于皮肤。即使不预期暴露于阳光下，也可以使用所述局部组合物日常应用，以减弱皮肤中炎症的老化效应。

E.减轻炎症的方法

所述局部组合物可包含β-葡聚糖、葡萄籽提取物、或者β-葡聚糖和葡萄籽提取物二者，其量足以在局部施用于皮肤时减轻炎症。暴露于UV辐射，包括紫外线B(UVB)辐射，可能导致炎症。紫外线A(UVA)辐射来自波长在315和400nm之间的光，UVB辐射来自波长在280和315nm之间的光。

UV辐射可以是有益的，因为它会使身体产生维生素D并可治疗某些皮肤病症。然而，过度暴露于UV辐射会导致明显的皮肤损伤，包括晒伤(红斑)和水疱(水肿)。暴露于紫外光在中等剂量下也会引起皮肤感觉干燥和发紧，如果暴露在较高剂量下会引起脱皮。这些急性或短期效应容易察觉。然而，还存在更细微的不易察觉的急性效应，例如光免疫抑制、脱氧核糖核酸(DNA)的交联、晒伤细胞的形成和朗格汉斯细胞的损失。甚至可能发生更严重的长期效应，例如皮肤癌和皮肤早衰。

减轻炎症的组合物可以通过减少炎性介质、包括细胞因子和前列腺素的产生来鉴定。在一些例子中，减轻炎症包括与对照细胞中产生的炎性介质的量相比，用本文所述的局部组合物处理的细胞中炎性介质的产生减少。例如，所减少的炎性介质可以是IL-1α、IL-6或前列腺素E2，或者IL-1α、IL-6和前列腺素E2的任何组合。在某些例子中，对照细胞是未用所述局部组合物处理的细胞。或者，对照细胞是仅用载体、赋形剂或包含非活性成分的其它组合物处理的细胞。

在一些例子中，介绍了通过应用包含有效量的脱色麝香葡萄果渣溶剂提取物、β-葡聚糖和葡萄籽提取物的局部组合物来减轻对象的炎症的方法，包括作为暴露于UV辐射的结果的炎症。减轻炎症，包括由暴露于UV辐射引起的炎症，可以改善和/或防止对皮肤的破坏性短期和长期效应。意外地发现，包含脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物、β-葡聚糖和葡萄籽提取物的组合的局部组合物可以减轻真皮细胞中的炎症，如通过实施例2-4的测定所测量的。

所公开的脱色麝香葡萄果渣溶剂提取物与标准麝香葡萄果渣提取物相比具有较低水平的缩合鞣质，意外地且有利地保持或改善了有益于皮肤治疗的其它多酚的水平，同时避免了由于存在高水平的缩合鞣质而造成的缺点。包含有效量的本文所述的脱色麝香葡萄果渣溶剂提取物、β-葡聚糖和/或葡萄籽提取物的局部组合物，在局部施用于皮肤时能够减轻炎症，如实施例中所述的生物测定法所证明的。示例性结果在图13-15中呈现。这些生物测定已经证明了所述局部组合物减轻皮肤炎症的作用方式，如在人皮肤模型(MatTekEpiDerm)中通过降低炎性介质产生所证明的。

鉴于这些结果，本文公开的包含脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物、β-葡聚糖和葡萄籽提取物的局部组合物，可用于通过将有效量的所公开的局部组合物施用于皮肤来减轻对象的炎症的方法。所述对象可以是健康的或不健康的对象。所述对象可以是女性或男性对象。皮肤炎症可以是暴露于紫外线辐射、包括UVB辐射的结果。

本文公开的包含脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物、β-葡聚糖和葡萄籽提取物的局部组合物，也可以通过将有效量的局部组合物施用于皮肤来减少炎症介质的产生，用于抑制对象皮肤细胞中炎性介质产生的方法。在一些例子中，所述局部组合物的应用抑制了一部分细胞因子、例如IL-1α和IL-6的产生，以及一部分前列腺素、例如前列腺素E2的产生。在一个实施方式中，炎性介质是IL-1α、IL-6或前列腺素E2。在某些实施方式中，炎性介质是IL-1α、IL-6和前列腺素E2的任何组合。

在进一步的例子中，公开了抑制对象的皮肤中UV辐射诱导的皮肤损伤的方法。这些方法包括向皮肤局部应用有效量的局部组合物，其包含有效量的脱色麝香葡萄果渣溶剂提取物、β-葡聚糖和葡萄籽提取物。在暴露于UV辐射后应用该局部组合物抑制了对皮肤的损害。所述方法可以导致炎症介质的产生减少。在某些例子中，炎性介质是IL-1α、IL-6或前列腺素E2。在一个例子中，炎性介质是IL-1α、IL-6和前列腺素E2的任何组合。

任何前述的方法可用于治疗健康对象，这意味着对象没有任何病原性皮肤病症并且在治疗之前仅表现出非病原性皮肤炎症。在某些例子中，所述方法用于治疗女性对象或男性对象。

III.实施例

实施例1.MatTek EpiDerm模型利用已被培养至形成多层的正常人源性表皮角质形成细胞，其是人表皮的高度分化模型。超微结构分析揭示了透明角质颗粒、张力丝束、桥粒和含有细胞间层状脂质层的多层角质层的存在，所述层状脂质层以体内表皮特征性的图案排列。成熟表皮特异性分化的标志物例如原丝聚蛋白、K1/K10细胞角蛋白对、外皮蛋白和I型表皮转谷氨酰胺酶已经定位在该模型中。MatTekEpiDerm也具有有丝分裂和代谢活性。

细胞因子IL-1α和IL-6在角质形成细胞中合成并储存，并已被鉴定为皮肤刺激和炎症的介质。这些细胞因子的释放可以经由基于比色的酶联免疫吸附测定(ELISA)在组织培养基中直接测量。简而言之，与固体支持物共价连接的抗体将结合用过的培养基样品中存在的任何IL-1α或IL-6。与乙酰胆碱酯酶共价连接的第二抗体进而将检测任何结合的IL-1α和IL-6。加入适当的彩色底物后，乙酰胆碱酯酶将生成有色的最终产物，其可用分光光度法测量。

类似地，可以经由基于比色的竞争性ELISA在组织培养基中直接测量前列腺素E2的释放。对于该测定，与碱性磷酸酶结合的PGE2分子与组织培养基中存在的未标记的PGE2竞争结合溶液中的抗PGE 2抗体。然后抗PGE2抗体结合与固体支持物连接的第二抗体。添加底物溶液，其允许碱性磷酸酶连接的PGE2产生可以通过分光光度法测量的有色最终产物。在该测定中，随着回收的碱性磷酸酶连接的PGE2的量减少，样品中PGE2的量增加。因此，样品中PGE2的量与形成的有色最终产物的量成反比。

将所公开的局部组合物的某些实施方式的生物活性与作为阳性对照的非处方局部氢化可的松制品以及作为阴性对照的未用任何局部组合物处理的UVB暴露组织(“未处理”)和未用任何局部组合物处理的非UVB暴露组织(“非UVB暴露”)进行比较。使用2％DMSO作为成分混合物的空白对照，因为DMSO用于帮助溶解所述成分，并且已知DMSO影响炎性反应。所有测定一式三份地进行。

在所述生物测定中，未用UV辐射或局部组合物处理的组织被标记为“非UVB暴露”。用含有1％氢化可的松的非处方组合物处理的组织标记为“1％氢化可的松”。未用局部组合物处理但暴露于UVB辐射的组织标记为“未处理”。用2％DMSO溶液处理的组织标记为“2％DMSO”。表5中标记为“TME 1”的TME提取物，用于“最低TME”组合物，含有0.025％的脱色麝香葡萄果渣溶剂提取物。表5中标记为“TME 2”的TME提取物，其用于“最高TME”组合物，含有0.25％的脱色麝香葡萄果渣溶剂提取物。标记为“最低掺合物”和“最高掺合物”的组合物含有表5中列出的成分的量；标记为“最低掺合物+TME 1”的组合物含有最低掺合物的成分和TME 1的成分，并且标记为“最高掺合物+TME 2”的组合物含有最高掺合物的成分和TME 2的成分。

所述掺合物和TME/掺合物混合物含有表5(下面)中列出的成分，所列出的百分比基于最终组合物的总重量：

表5.实施例2-4的局部组合物中使用的成分(重量/重量)

实施例2.白细胞介素α(IL-1α).

示例性局部组合物显示所述MatTek EpiDerm模型的表皮角质形成细胞中产生的IL-1α的量减少，如下面的图13和表6所示。使MatTek全厚度组织在37±2℃和5±1％CO₂下温育至少1小时。在此初始温育后，将测定培养基用0.9mL新鲜培养基(37±2℃)更换。为每种测试材料制备三份组织。

经由UV照射(UVB)引发组织中的炎性反应。使用UV灯向组织提供300mJ/cm²剂量的UVB辐射。在施加所述炎性刺激后，立即将50μL(或50mg，对于固体形式)的测试材料直接施加到组织表面上。

非处方氢化可的松乳膏用作阳性对照(仅在UVB后处理)。对于“未处理的”阴性对照，将组织暴露于炎性刺激物但未用任何类型的抗炎材料处理。留下另一组组织没有暴露于炎性刺激物(“非UVB暴露”)以提供细胞因子的基线测量。在暴露于炎性刺激物后，将组织在37±2℃和5±1％CO₂温育24小时。温育24小时后，收集细胞培养基并在-75℃下储存，直至分析细胞因子。

IL-1αELISA板通过在PBS中稀释适当的捕获抗体来制备。接下来，将100μL所述稀释的捕获抗体添加到96孔ELISA板的孔中，并将板在室温下温育过夜。第二天，将板用300μL洗涤缓冲液(0.05％吐温20的PBS溶液)洗涤三次，然后通过向各孔添加300μL阻断缓冲液(1％BSA的PBS溶液)来阻断。将板与阻断缓冲液一起温育至少1小时。温育后，除去阻断缓冲液，将板如上所述洗涤三次。

制备一系列IL-1α标准品，并将这些标准品各100μL分配到适当的96孔板中的两个孔(一式两份)中。随后，将100μL每种样品添加到另外的孔中，并将板在室温下温育2小时。温育后，将板如上所述洗涤三次。一旦除去最后一次洗涤后，就添加100μL的生物素缀合的检测抗体。在室温下将板温育2小时后，将板再次如上所述洗涤。然后向每个孔添加100μL的HRP-链霉亲和素，并将板在室温下温育20分钟。一旦除去最后一次洗涤后，就向每个孔添加100μL底物溶液(过氧化氢+四甲基联苯胺作为色原体)。一旦发生足够水平的显色，就向每个孔添加50μL终止溶液(2N硫酸)，并在460nm下读板。

表6.示例性局部组合物的IL-1α数据。

处理	IL-1α(pg/mL)
		非UVB暴露	12.2±0.4*
1％氢化可的松	8.0±0.8*
		未处理	81.3±3.2
2％DMSO	94.5±2.2
		最低掺合物(用2％DMSO)	81.0±3.7**
最低TME(TME 1)	71.8±5.9*
		最低掺合物+TME 1(用2％DMSO)	78.3±1.6**
最高掺合物(用2％DMSO)	75.8±2.6**
		最高TME(TME 2)	81.8±2.7
最高掺合物+TME 2(用2％DMSO)	96.5±2.1

*表明数值显著不同于未处理的对照(p<0.05)

**表明数值显著不同于2％DMSO对照(p<0.05)

图13中图示的数据表明，与所述2％DMSO对照相比，所述最低掺合物、TME 1组合物(标记为最低TME)、最低掺合物+TME 1以及最高掺合物组合物以统计学显著的方式抑制炎性介质IL-1α的释放。此外，与未处理对照(“未处理”)相比，所述TME 1组合物(标记为最低TME)也以统计学显著的方式抑制炎性介质IL-1α的释放。

实施例3.前列腺素E2(PGE2).

示例性局部组合物显示所述MatTek EpiDerm模型的表皮角质形成细胞中产生的PGE2的量减少，如下面的图14和表7所示。

制备范围从7.8pg/mL至1000pg/mL的一系列PGE2标准品。ELISA板通过从所述板框中去除任何不需要的条带来制备，记住各指定两个孔用于：总活性(TA)孔，非特异性结合(NSB)孔，最大结合(MB)孔，和底物空白孔(B0)。将150μL组织培养基添加到NSB孔中，同时向B0孔添加100μL培养基。然后将100μL标准品或样品添加到相应的孔中。向所用的每个孔(TA和B0除外)添加50μL的所述PGE2碱性磷酸酶缀合物。接下来，向每个孔添加50μL的PGE2碱性磷酸酶抗体溶液(TA、NSB和SD孔除外)。盖上所述板并在2-8℃温育18-24小时。温育后，用400μL洗涤缓冲液洗涤每个孔三次。最后一次洗涤后，向TA孔添加5μL的PGE2碱性磷酸酶缀合物，并向每个孔添加200μL新鲜的Ellman试剂。将板在室温下温育，使用平板读数器定期检查吸光度读数(405nm)。

表7.示例性局部组合物的PGE2数据。

处理	PGE2(pg/mL)
		非UVB暴露	13683±1411*
1％氢化可的松	11462±461*
		未处理	27704±1289
2％DMSO	30306±1277
		最低掺合物(用2％DMSO)	22426±392**
最低TME(TME 1)	28164±891
		最低掺合物+TME 1(用2％DMSO)	22747±687**
最高掺合物(用2％DMSO)	28161±722
		最高TME(TME 2)	30375±392
最高掺合物+TME 2(用2％DMSO)	30221±1242

*表明数值显著不同于未处理的对照(p<0.05)

**表明数值显著不同于2％DMSO对照(p<0.05)

图14中图示的数据表明，与2％DMSO对照相比，所述最低掺合物和所述最低掺合物+TME 1组合物以统计学显著的方式抑制炎性介质前列腺素E2的释放。

实施例4.白细胞介素6(IL-6).

示例性局部组合物显示所述MatTek EpiDerm模型的表皮角质形成细胞中产生的IL-6的量减少，如下面的图15和表8所示。IL-6的测量以与实施例2中对IL-1α描述的相同的方式进行，用相应的IL-6特异性试剂取代IL-1α特异性试剂。

表8.示例性局部组合物的IL-6数据。

处理	IL-6(pg/mL)
		非UVB暴露	3.2±1.3*
1％氢化可的松	7.9±0.4*
		未处理	62.8±1.3
2％DMSO	38.8±2.9*
		最低掺合物(用2％DMSO)	34.5±2.4
最低TME(TME 1)	26.6±3.1*
		最低掺合物+TME 1(用2％DMSO)	18.8±1.2**
最高掺合物(用2％DMSO)	23.6±1.8**
		最高TME(TME 2)	26.2±1.5*
最高掺合物+TME 2(用2％DMSO)	25.2±0.6**

*表明数值显著不同于未处理的对照(p<0.05)

**表明数值显著不同于2％DMSO对照(p<0.05)

图15中图示的数据表明，与2％DMSO对照相比，所述最低掺合物+TME 1、最高掺合物以及最高掺合物+TME 2组合物以统计学显著的方式抑制炎性介质IL-6的释放。此外，与未处理的对照相比，所述TME 1和TME 2组合物以统计学显著的方式抑制炎性介质IL-6的释放。

总之，所公开的包含脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物、β-葡聚糖和葡萄籽提取物的局部组合物，当分别以约0.001至约1.0重量％、约0.0001至约1.0重量％和约0.00001至约0.01重量％的浓度使用时，能够显著减少某些炎症标志物。这些局部组合物具有低水平的缩合鞣质，但由于保持了其总体酚类概况，所述脱色提取物的皮肤保护性质得以保留。

因此，包含脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物、β-葡聚糖和葡萄籽提取物的局部组合物通过实施例2(表皮细胞产生的IL-1α减少)、实施例3(表皮细胞产生的前列腺素E2减少)和实施例4(表皮细胞产生的IL-6减少)的测定法测量的炎症减轻，可以减轻炎症，包括由于暴露于紫外线辐射而引起的炎症。

实施例5.含有脱色麝香葡萄果渣提取物的其它组合物的活性。

包含脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物的组合物表现出抗氧化活性，如通过在三种测定中测试这样的组合物所示：DPPH测定，酪氨酸酶抑制测定，和TT二聚体测定。如图16-18所示，该测试的结果表明，经历本文公开的脱色过程的葡萄提取物保留了它们的有益生物活性，包括但不限于它们的抗氧化活性，但不含有可将它们被应用到的皮肤染色的高水平鞣质。

DPPH测定。该测定是基于抗氧化剂对稳定自由基2,2-二苯基-1-苦基肼基(DPPH)的清除效应的测量。自由基DPPH在517nm处具有强吸光度，并且当DPPH与抗氧化化合物反应并转化为肼时，该吸光度降低。DPPH测定评价抗氧化剂的清除活性，因为所述自由基化合物是稳定的并且不必像在其它自由基清除测定中那样要进行生成。

图16显示了测量自由基清除能力的DPPH测定的结果，如Trolox当量所示；TE值越高，抗氧化能力越大。按所述组合物的重量计为0.01％、0.005％和0.001％的脱色的麝香葡萄果渣提取物(TME)的组合物，显示出范围从约27(在10μg/ml浓度下)至约185(在100μg/ml浓度下)Trolox当量的剂量依赖性抗氧化活性。

酪氨酸酶抑制。将纯化的酪氨酸酶在含有L-DOPA(L-3,4-二羟基苯丙氨酸)的磷酸钠缓冲液中混合，并与所述测试材料一起温育。温育30分钟后，经由比色测定评估转化为DOPA铬的L-DOPA的量(反映酪氨酸酶活性)。曲酸用作酪氨酸酶抑制的阳性对照。

图17显示了与阳性对照组合物(1％曲酸)相比，一系列组合物、包括含有不同量的脱色麝香葡萄果渣溶剂提取物的组合物中酪氨酸酶活性的抑制百分比。脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物(图17中的“TME”)的量显示为总组合物的重量百分比。如图17所示，含有1重量％TME的组合物显示出38.3％的酪氨酸酶活性抑制。

TT二聚体测定。用于该测定的测试系统是MatTek EpiDerm，其是由被培养形成多层的正常人源性表皮角质形成细胞组成的皮肤模型，是人表皮的高度分化模型。对于该研究，将组织用所述测试材料局部处理过夜然后UVB暴露。在所述暴露和处理后，从所述EpiDerm组织中提取DNA，并使用基于ELISA的方法测定胸腺嘧啶二聚体含量。

图18显示了与非UVB暴露、未处理和用含有1mM Trolox的组合物处理的细胞相比，用一系列组合物、包括含有不同量的脱色麝香葡萄果渣溶剂提取物的组合物处理的细胞中TT二聚体测定活性的结果。在UVB暴露之前用含有0.25％(以总组合物的重量计)脱色麝香葡萄果渣溶剂提取物的组合物预处理进行处理的细胞显示出DNA损伤的统计学显著性降低。所述脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物好于阳性对照(1mM Trolox)；UVB暴露后用含有0.25％TME的组合物处理显示DNA损伤降低38％至44％之间，并且用含有0.1％TME的组合物处理降低DNA损伤高达69％。

鉴于本发明的原理可适用的许多可能的实施方式，应该认识到，所说明的实施方式只是本发明的优选例子并且不应该被认为限制本发明的范围。相反，本发明的范围由后面的权利要求限定。因此，我们主张落入这些权利要求的范围和精神内的全部均为我们的发明。

Claims (36)

1.一种降低前体葡萄果渣提取物的缩合鞣质含量以产生脱色葡萄果渣提取物的方法，所述方法包括：

通过微滤除去固体以澄清所述前体葡萄果渣提取物；

将澄清的提取物通过约500kDa至约5000kDa微滤膜进行超滤来加工，以获得第一渗透物和第一截留物，其中在所述第一渗透物中除去风味组分；和

将所述第一截留物通过约25kDa至约100kDa超滤膜进行超滤来加工，得到第二渗透物和第二截留物，其中聚合物缩合鞣质保留在所述第二截留物中并且所述第二渗透物与所述第一截留物相比具有增加的多酚水平和降低的糖和缩合鞣质水平，从而产生脱色的麝香葡萄果渣提取物，所述脱色的麝香葡萄果渣提取物的鞣质含量低于所述澄清的提取物，其中所述葡萄任选是麝香葡萄。

2.权利要求1的方法，其还包括用减臭剂处理所述第二渗透物。

3.权利要求2的方法，其中所述减臭剂是活性炭、藻酸钙、膨润土或硅铝酸盐吸收剂。

4.权利要求1至3任一项的方法，其还包括将所述第二渗透物暴露于氧化镁下以矿化所述第二渗透物中的有机酸。

5.权利要求1至4任一项的方法，其还包括干燥和研磨所述第二渗透物，以产生与所述澄清的提取物相比鞣质含量降低、同时基本上保留所述澄清的提取物的多酚含量的局部组合物。

6.权利要求1至5任一项的方法，其中澄清所述提取物包括用水稀释所述提取物，并将稀释的提取物进行所述微滤。

7.权利要求6的方法，其中所述微滤通过约200kDa的微滤过滤器进行。

8.权利要求1至7任一项的方法，其中所述前体葡萄果渣提取物包含青铜色麝香葡萄果渣提取物和/或紫色麝香葡萄果渣提取物。

9.权利要求8的方法，其中所述前体葡萄果渣提取物包含青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物的组合。

10.权利要求9的方法，其中青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率范围为a)以重量/重量计0.1至10或b)以重量/重量计0.3至3。

11.权利要求9或10任一项的方法，其中所述前体葡萄果渣提取物通过a)分别提取青铜色麝香葡萄和紫色麝香葡萄并随后组合所生成的提取物；或b)通过同时提取以期望比例组合的青铜色麝香葡萄和紫色麝香葡萄来获得。

12.一种通过权利要求1-11任一项的方法获得的脱色的麝香葡萄果渣提取物。

13.一种脱色的麝香葡萄果渣提取物，其是青铜色麝香葡萄果渣和紫色麝香葡萄果渣的脱色的麝香葡萄果渣提取物，其中所述提取物包括约9％至约10％的多酚和低于约4％的单糖，并且其中缩合鞣质低于所述脱色的麝香葡萄果渣提取物的总多酚含量的约10％。

14.权利要求13的脱色的麝香葡萄果渣提取物，其中所述提取物中的总多酚由至少约90％的除缩合鞣质以外的多酚组成。

15.权利要求13的脱色的麝香葡萄果渣提取物，其还包含0.5-2％的纤维、7-9％的蛋白质、0.5-1.5％的脂肪和15-17％的有机酸。

16.权利要求14的脱色的麝香葡萄果渣提取物，其包含1-2％的纤维、7-8％的蛋白质、0.05-0.5％的脂肪和15.5-16.5％的有机酸。

17.权利要求14的脱色的麝香葡萄果渣提取物，其中

a)所述提取物的酚类含量包含2-3％的鞣花酸和30-31％的没食子酸，或者

b)所述提取物的酚类含量包含2-3％的鞣花酸、3-4％的鞣花酸糖苷、30-31％的没食子酸、2-3％的槲皮素、10-11％的没食子鞣质、7-8％的鞣花鞣质、29-30％的原花色素、4-5％的花色素苷、2-3％的儿茶素和6-7％的酚酸。

18.权利要求12-17任一项的脱色的麝香葡萄果渣提取物，其被掺入皮肤护理组合物中。

19.权利要求12-18任一项的脱色的麝香葡萄果渣提取物在下列各项中的应用：a)皮肤护理；b)抑制皮肤中的弹性蛋白酶、胶原酶或酪氨酸酶；c)减少DNA损伤，增强DNA修复，d)抑制皮肤蛋白质的糖化，或在暴露于紫外光下时增加皮肤中的细胞存活率；或e)作为抗氧化剂。

20.一种局部组合物，其包含有效量的权利要求12-18任一项的脱色的麝香葡萄果渣提取物、β-葡聚糖和葡萄籽提取物。

21.权利要求20的局部组合物，其用于当施用于皮肤时减轻炎症。

22.权利要求21的局部组合物，其中减轻炎症包括与对照细胞相比，减少皮肤细胞中IL-1α、IL-6或前列腺素E2中的至少一种的产生。

23.权利要求21或权利要求22的局部组合物，其中所述对照细胞是未处理的细胞；其中所述对照细胞是用载体处理的细胞；或其中所述炎症是暴露于紫外线辐射的结果。

24.权利要求20-23任一项的局部组合物，其中所述组合物包含

a)以所述局部组合物的重量计，约0.001％至约1.0％的脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物，

以所述局部组合物的重量计，约0.0001％至约1.0％的β-葡聚糖，和

以所述局部组合物的重量计，约0.00001％至约0.1％的葡萄籽提取物；

b)以所述局部组合物的重量计，约0.01％至约0.5％的脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物，

以所述局部组合物的重量计，约0.0005％至约0.1％的β-葡聚糖，和

以所述局部组合物的重量计，约0.0001％至约0.05％的葡萄籽提取物；或

c)以所述局部组合物的重量计，约0.025％至约0.25％的脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物，

以所述局部组合物的重量计，约0.005％至约0.05％的β-葡聚糖，和

以所述局部组合物的重量计，约0.0002％至约0.01％的葡萄籽提取物。

25.权利要求20-24任一项的局部组合物，其中所述组合物还包含泛醇、维生素C或超氧化物歧化酶中的至少一种，其量足以在局部施用时减少皮肤中IL-1α、IL-6、前列腺素E2中的至少一种或其任何组合的产生。

26.权利要求20-25任一项的局部组合物，其中所述组合物还包含有效量的维生素A、维生素E或二者。

27.权利要求25或权利要求26的局部组合物，其中以所述局部组合物的重量计，所述组合物包含，

约0.0001％至约0.5％维生素A，

约0.00001至约0.1％维生素C，

约0.001％至约1.0％维生素E，

约0.001％至约1.0％泛醇，

约0.00001％至约0.1％超氧化物歧化酶，

或其任何组合。

28.权利要求20-27任一项的局部组合物，其中所述组合物包含抗坏血酸磷酸酯镁形式的维生素C；维生素A棕榈酸酯形式的维生素A；维生素E乙酸酯形式的维生素E；或其任何组合。

29.权利要求20-28任一项的局部组合物，其中所述脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物包含青铜色麝香葡萄果渣提取物和紫色麝香葡萄果渣提取物的组合，其中所述脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物的青铜色麝香葡萄果渣提取物与紫色麝香葡萄果渣提取物的比率范围以重量/重量计为约0.1至约10，或约0.3至约3。

30.权利要求20-29任一项的局部组合物，其中

a)所述脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物包含以所述提取物的重量计约7％至约10％的多酚和低于约5％的单糖，并且其中所述缩合鞣质低于所述脱色的麝香葡萄果渣提取物的总多酚含量的约10％；

b)所述脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物包含以所述提取物的重量计约9％至约10％的多酚和低于约4％的单糖；

c)所述脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物中的总多酚由至少约85％的除缩合鞣质以外的多酚组成；或

d)所述脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物中的总多酚由至少约90％的除缩合鞣质以外的多酚组成。

31.权利要求20-30任一项的局部组合物，其中所述脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物还包含

a)以所述提取物的重量计，约0.5％-5％的纤维、7％-14％的蛋白质、0.0％-3％的脂肪和15-20％的有机酸；

b)以所述提取物的重量计，约0.％-2％的纤维、7％-9％的蛋白质、0.0％-1％的脂肪和15-17％的有机酸；或

c)以所述提取物的重量计，约1％-2％的纤维、7％-8％的蛋白质、0.1％-0.％的脂肪和15.5-16.％的有机酸。

32.权利要求20-31任一项的局部组合物，其中所述脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物的酚类含量包含，以所述提取物的重量计，2-3％的鞣花酸和30-31％的没食子酸；或者，以所述提取物的重量计，2-3％的鞣花酸、3-4％的鞣花酸糖苷、30-31％的没食子酸、2-3％的槲皮素、10-11％的没食子鞣质、7-8％的鞣花鞣质、29-30％的原花色素、4-5％的花色素苷、2-3％的儿茶素和6-7％的酚酸。

33.权利要求20-32任一项的局部组合物，其中所述脱色的麝香葡萄果渣溶剂提取物包括完整紫色麝香葡萄的提取物、来自除完整葡萄以外的紫色麝香葡萄果渣的提取物、或二者。

34.权利要求20-33任一项的局部组合物在下列各项中的应用：减少皮肤炎症；减少皮肤细胞中炎性介质的产生；或抑制皮肤中由紫外线辐射引起的损伤。

35.权利要求34的应用，其中所述炎症是对象暴露于紫外线辐射的结果；所述炎性介质是IL-1α、IL-6或前列腺素E2；所述皮肤损伤包括产生炎性介质；或其任何组合。

36.权利要求34或35任一项的应用，其中对象是健康对象。