TW201808323A - 具有低含量之縮合單寧分子的麝香葡萄局部組成物 - Google Patents

Abstract

本文揭示用於使麝香葡萄果漿葡萄萃取物褪色方法，其藉由透過500-5000kDa的微過濾膜進行超過濾來處理經澄清的萃取物，以獲得第一滲透物，其中在該第一滲透物中移除風味組分。使滲餘物經受透過25-100kDa的超過濾膜之超過濾，以獲得第二滲透物和第二滲餘物。在第二滲餘物中去除聚合的縮合單寧，且第二滲透物具有相較於第一滲餘物增加水平的多酚及降低水平的糖和縮合單寧。可將該褪色萃取物併入至皮膚護理組成物中，並施用至皮膚以維持健康的皮膚不變色。

本文揭示包含褪色麝香葡萄(圓葉葡萄，Vitis rotundifolia)果漿溶劑萃取物、β-葡聚醣和葡萄籽萃取物之局部組成物。該組成物可減少皮膚之發炎，包括由暴曬於紫外線輻射所造成的發炎。本文亦揭示減少皮膚發炎的方法、抑制皮膚細胞中抗發炎介質產生的方法以及抑制紫外線輻射所誘發的損傷之方法，該等方法係藉由施用包含褪色麝香葡萄(圓葉葡萄)果漿溶劑萃取物、β-葡聚醣和葡萄籽萃取物的局部組成物至皮膚。

Description

具有低含量之縮合單寧分子的麝香葡萄局部組成物 相關申請案之交叉參考

此案以美國臨時申請案案號62/364,222(2016年7月19日提出申請)和美國臨時申請案案號62/505,543(2016年5月12日提出申請)主張優先權，該等申請案以參考的方式全部併入至本文中。

此揭示係關於葡萄果漿萃取物，諸如麝香葡萄(圓葉葡萄，Vitis rotundifolia)果漿溶劑萃取物、葡萄果漿之萃取方法及獲得葡萄果漿萃取物(諸如麝香葡萄果漿萃取物)之分液(fraction)的方法，其適合用於皮膚護理產品。此揭示亦關於含有褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物、β-葡聚醣和葡萄籽萃取物之局部組成物(topical composition)(當將其施用至皮膚時可減少發炎)以及使用該局部組成物減少皮膚發炎之方法。

已知葡萄萃取物具有有益的抗氧化劑性質。麝香葡萄(例如)含有數種生物活性的多酚化合物，包括類黃酮化合物(諸如黃酮醇(flavonol) 類、花青素類和黃烷酮類，以及黃烷-3-醇類和其已知為原花青素類的寡聚物)以及非類黃酮化合物(諸如酚酸、單寧、茋衍生物，例如白藜蘆醇)。咸信類黃酮化合物之保護性和抗發炎性功效係由於以下緣故：自由基的清除、細胞傳信路徑和基因表現上的有益功效以及對於快速地和不正常地增生之哺乳動物細胞的細胞分裂周期之選擇性干涉。

葡萄萃取物之有益性質使其有在保健營養品方面的用途。美國專利號6,190,716揭示麝香葡萄膳食補給品，其係透過以下方式獲得：將麝香葡萄壓碎並去汁(de-juicing)，然後以熱和酶分解果泥。美國專利號6,638,545揭示有豐富多酚含量之葡萄萃取物，其係用作膳食補給品和化妝品組成物。美國專利號8,568,804、美國專利號9,132,162和美國專利號9,173,916揭示組成物，其中已顯示青銅色和紫色麝香葡萄之果漿萃取物有增加的抗氧化活性。

雖然認知到麝香葡萄和其他紅葡萄萃取物具有優異的抗氧化活性，但其在局部組成物的用途受限於萃取物中的單寧之提升的水平。用語「單寧(tannin)」原先指這類化合物，其係因為以澀味木材單寧將動物皮「製革(tan)」為皮革的用途。紅葡萄單寧嘗起來乾又苦澀，而單寧賦予葡萄酒色澤。當添加至局部葡萄萃取物製劑中時，單寧會使該組成物以及其所施用至的皮膚變色。

在其化學組成物方面，單寧可分為可水解單寧和縮合單寧或類黃酮。可水解的單寧為聚合的簡單酚類物質，諸如沒食子酸和其二聚體(雙沒食子酸，土耳其鞣酸)的酯類。可水解單寧可進一步分為，在水解後產生沒食子酸之沒食子丹寧(gallotannin)，以及在水解後釋出土耳其鞣酸 之併沒食子鞣質(ellagitannin)。與可水解單寧相反，縮合單寧無法以水解來降解。相反地，當經受在酸性介質中的加熱時，其會逐漸聚合並形成高分子量之非晶型的花青素色素(紅色或不溶性黃棕色產物)，稱為樹皮棕色質(phlobaphene)。

除了其深顏色，縮合單寧比大多數其他多酚有機化合物具有更多的羥基和更大的分子結構，這使得其能有效地捕獲並留住惡臭分子。此性質阻礙了葡萄萃取物在局部製劑(諸如抗氧化劑或化妝品組成物)中的用途。

皮膚發炎的過程是錯綜複雜的。當皮膚暴露於「觸發的」刺激(諸如紫外線(UV)輻射)、刺激物或過敏原時，皮膚中的細胞產生各種發炎性細胞介素和趨化介素。這些細胞介素和趨化介素結合至目標細胞上的特定受體並刺激額外發炎介質的產生，此會造成血管擴張並激化神經細胞。經由發炎性細胞之細胞介素和趨化介素的表現也會導致損傷皮膚之酶、自由基和其他生物介質的產生。該初始觸發事件的最終結果為放大了大發炎反應，其雖然為了皮膚對抗侵入細菌的感染而設計，但實際上卻對皮膚造成相當大的損傷。仍存在對於具有減少的單寧且可用於降低皮膚發炎之局部組成物的需求。

在此揭示關於製造褪色葡萄溶劑萃取物組成物的方法和組成物，諸如褪色麝香葡萄溶劑萃取物組成物。本揭示使得葡萄果漿萃取物之製劑(包括(但不限於)不同的麝香葡萄萃取物之組合)，其具有較低的 縮合單寧含量，同時實質上保留萃取物中的多酚和所需的抗氧化活性。所得到的抗氧化劑萃取物相較於先前的葡萄果漿萃取物(諸如先前的麝香葡萄果漿萃取物)，有較少的使皮膚變色的傾向並具有改善的氣味。在一些實例中，該褪色萃取物是從青銅色及/或紫色麝香葡萄果漿兩者中獲得的。

在一實例中，該方法降低前驅物葡萄萃取物(諸如前驅物葡萄果漿萃取物，例如前驅物麝香葡萄果漿萃取物)之縮合單寧含量，並使該萃取物褪色。藉由微過濾來移除固體，使前驅物萃取物(諸如前驅物麝香葡萄果漿萃取物)澄清，並藉由透過500-5000kDa微過濾膜之超過濾來處理該澄清的萃取物以獲得第一滲透物和第一滲餘物。在第一滲透物中移除風味組分，並藉由透過25-100kDa超過濾膜之超過濾來處理第一滲餘物，以獲得第二滲透物和第二滲餘物。在該第二滲餘物中移除聚合的縮合單寧，且該第二滲透物具有相較於第一滲餘物增加水平的多酚及降低水平的糖和縮合單寧。

在一些實例中，以除臭劑(諸如活性炭、褐藻酸鈣、膨土或鋁矽酸鹽吸收劑)處理該褪色萃取物。該褪色萃取物亦可暴露於氧化鎂，以礦化該褪色萃取物中的有機酸。該褪色萃取物也可經乾燥和研磨。

在特別實例中，該前驅物葡萄果漿萃取物為麝香葡萄果漿萃取物，例如青銅色和紫色麝香葡萄果漿之前驅物萃取物的組合。在該前驅物萃取物的一些具體實例中，青銅色麝香葡萄果漿萃取物與紫色麝香葡萄果漿萃取物的比例範圍從0.1至10(重量對重量)，例如從0.3至3(重量對重量)。

該褪色萃取物可為由前述褪色方法所獲得之任何萃取物。或 者，該褪色萃取物包含9-10%多酚和少於4%單醣，其中縮合單寧少於10%的該褪色葡萄萃取物(諸如葡萄果漿萃取物，例如麝香葡萄果漿萃取物)之總多酚含量。在一些實例中，該褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物之總多酚由至少90%除了縮合單寧以外的多酚組成。在其他實例中，該褪色麝香葡萄果漿萃取物含有0.5-2%纖維、7-9%蛋白質、0.5-1.5%脂質及15-17%有機酸，諸如1-2%纖維、7-8%蛋白質、0.05-0.5%脂質和15.5-16.5%有機酸。在一些實例中，該萃取物的酚內容物包含2-3%土耳其鞣酸和30-31%沒食子酸，例如：2-3%土耳其鞣酸、3-4%土耳其鞣酸醣苷、30-31%沒食子酸、2-3%槲皮素、10-11%沒食子丹寧、7-8%併沒食子鞣質、29-30%原花青素、4-5%花青素、2-3%兒茶素和6-7%酚酸。

本文也揭示包括褪色麝香葡萄果漿萃取物之皮膚護理組成物以及維持健康的皮膚之方法，該方法藉由將足夠量之該皮膚護理組成物施用至皮膚足夠的時間週期，以改善以下一或多者：彈性蛋白酶的抑制、膠原蛋白酶的抑制、抗氧化活性、減少的DNA損傷、增加的DNA修復、在暴曬於紫外線輻射後之增加的細胞存活或增加的酪胺酸酶抑制。如本文所揭示之以製備的褪色葡萄溶劑萃取物製成之局部組合物具有抗氧化活性。

反應UV輻射或其他促發炎的刺激物，角質細胞可釋放細胞介素以幫助將免疫細胞導向損傷的位置。皮膚中的發炎途徑也涉及前列腺素，包括前列腺素E2，其係由花生四烯酸經環氧合酶作用而合成。在真皮和表皮細胞(包括角質細胞)中的發炎可由這些細胞介素和前列腺素的存在或缺乏來監測。由角質細胞釋放的細胞介素包括TNF α以及介白素IL-1 α、IL-1 β、IL-3、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-18和IL-1RA。已顯示，前列腺素E2(PGE2)涉及皮膚之發炎途徑且可用作為標記物(與前述的細胞介素一起)來表示局部抗發炎組成物的效力。

在此揭示可減少發炎之標記物的水平之局部組成物以及使用局部組成物減少發炎之方法。在一些具體實例中，將在此揭示的組成物局部地施用至皮膚後，該組成物可減少皮膚發炎。發炎的減少可歸因於：相較於對照組細胞，經處理的皮膚細胞中的IL-1 α、IL-6、前列腺素E2或其任何組合的產生減少。在一些非限制性實例中，對照組細胞可為經以非活性的載劑化合物處理的細胞，或其可為未經處理的細胞。在一些實例中，發炎為UV輻射(包括紫外線A(UVA)和紫外線B(UVB)輻射)的結果。

在褪色葡萄溶劑萃取物的生產上的進展，使得該等葡萄萃取物可用於局部製劑中，包括用於皮膚護理產品。本揭示提供包括褪色葡萄果漿萃取物之局部組成物，該葡萄果漿萃取物具有較低的縮合單寧含量並同時實質上保留該萃取物中的多酚和所需要的抗發炎活性。在一些實例中，該褪色萃取物係從青銅色及/或紫色麝香葡萄(圓葉葡萄)葡萄果漿兩者中獲得。本案所揭示的組成物也可包括葡萄籽萃取物和β-葡聚醣。

在一些具體實例中，該局部組成物包括有效量之褪色麝香葡萄(圓葉葡萄)果漿溶劑萃取物、β-葡聚醣和葡萄籽萃取物，其中該褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物包含與液態紫色麝香葡萄果漿萃取物組合之液態青銅色麝香葡萄果漿萃取物，以產生液態麝香葡萄果漿萃取物，其中a)該青銅色麝香葡萄果漿萃取物和該紫色麝香葡萄果漿萃取物為溶劑萃取的萃 取物，b)青銅色麝香葡萄果漿萃取物和紫色麝香葡萄果漿萃取物的混合物提升土耳其鞣酸在麝香葡萄果漿萃取物中的土耳其鞣酸之溶解度，c)該青銅色麝香葡萄果漿萃取物和該紫色麝香葡萄果漿萃取物係經過濾和發酵的萃取物，且d)該麝香葡萄果漿萃取物具有至少2%的多酚含量。在其他具體實例中，這些局部組成物係用於減少皮膚發炎。

從以下的詳細敘述(其參照所附的圖式來進行)中，本發明之上述和其他目的、特徵和優點將會更為清楚。

圖1為降低縮合單寧含量同時實質上保留多酚含量的萃取方法之具體實例的流程圖。

圖2為用於實施圖1之方法的系統之示意圖描繪。

圖3A和圖3B為使用在此揭示的方法降低單寧含量之前的前驅物麝香葡萄果漿萃取物(圖3A)和之後的褪色萃取物(圖3B)中的多酚之層析圖譜的比較紀錄。該前驅物中的所欲的多酚特性譜(profile)被保留，而該褪色萃取物中的縮合單寧之水平大幅地降低。

圖4為一表，其概述了藉由彈性蛋白酶、膠原蛋白酶、2,2-二苯基-1-苦味基肼基(DPPH)、TT二聚體、角質細胞活力和酪胺酸酶測試所測得之褪色麝香葡萄果漿萃取物的有益功效。

圖5為說明以褪色麝香葡萄果漿萃取物進行之彈性蛋白酶抑制測試之結果的長條圖，其證實由抑制彈性蛋白減少在皮膚彈性上的功效。

圖6為說明以褪色麝香葡萄果漿萃取物進行之膠原蛋白酶抑制測試之結果的長條圖。提高的膠原蛋白酶之抑制可藉由避免膠原蛋白損失來改善皮膚緊緻性。

圖7顯示DPPH檢驗之結果，其測量如在褪色麝香葡萄果漿萃取物之Trolox當量(TE)中所示的自由基清除力；TE值愈高，抗氧化力愈強。

圖8顯示TT二聚體檢驗之結果，其中在UVB暴曬前的1%褪色麝香葡萄果漿萃取物之前處理可完全預防DNA損傷。該萃取物優於正向對照組(1mM Trolox)。在UVB暴曬後的1%褪色麝香葡萄果漿萃取物之處理(後處理)也顯示DNA損傷減少45%，表示在DNA修復上的功效；在前和後處理兩者中，0.1%之功效低於1%之功效。

圖9顯示在紫外線B暴曬後之細胞存活；相較於未經處理的細胞，褪色麝香葡萄果漿萃取物顯著增加細胞存活，且該增加甚至優於20μM Trolox。

圖10顯示不同濃度的褪色麝香葡萄果漿萃取物之酪胺酸酶抑制，其表示減少色素過度沉積的能力。

圖11為褪色局部麝香葡萄果漿萃取物(TME)和未經褪色之口服的麝香葡萄果漿萃取物(OME)之間的TT二聚體DNA損傷之比較檢驗的長條圖；在含有0.09%和0.009%之多酚的OME和TME之間減少的DNA損傷上，沒有統計學上的差異。該OME為揭示於先前的美國專利號8,568,804、美國專利號9,132,162和美國專利號9,173,916的萃取物。

圖12為說明該OME和TME兩者證實了在以劑量相關的方 式抑制高階糖化作用終產物(AGE)的生成上的優異活性(效力)的長條圖。對於兩種萃取物而言，在15-20μg多酚/ml的濃度下，AGE生成的最大抑制達到95-100%。然而，如同抑制50%之AGE生成所需的濃度(IC₅₀)所指出，該OME比該TME更有效力。該OME之IC₅₀值為0.65μg多酚/ml，而該TME之IC₅₀值為3.94μg多酚/ml。此暗示雖然單寧有助於AGE抑制之活性，但保留在該TME中的其他麝香葡萄多酚在抑制蛋白質的糖化作用上同樣有效，如同該OME中所發現者。

圖13為說明以一系列局部組合物進行發炎測試之結果的長條圖，其證實藉由抑制介白素1 α(IL-1 α或IL-1 alpha)的產生之抗發炎功效。

圖14為說明以一系列局部組合物進行發炎測試之結果的長條圖，其證實藉由抑制前列腺素E2(PGE2)的產生之抗發炎功效。

圖15為說明以一系列局部組合物進行發炎測試之結果的長條圖，其證實藉由抑制介白素6(IL-6)的產生之抗發炎功效。

圖16為說明以0.01%、0.005%和0.001%之褪色麝香葡萄果漿萃取物(TME)的組成物進行的DPPH檢驗之結果的長條圖，以該組成物的重量計。

圖17為說明以一系列包括褪色麝香葡萄果漿萃取物之其他局部組成物進行酪胺酸酶抑制的長條圖。

圖18為說明以一系列包括褪色麝香葡萄果漿萃取物之其他局部組成物對於TT(胸苷-胸苷)二聚體DNA損傷的長條圖。

I.用語

提供以下用語和方法的解釋說明，以更佳描述本揭示並指引發明所屬技術領域中具有通常知識者實施本揭示。除非本文另有明確指出，用語「或」係指所述可替換要素的單一要素或是兩種或更多要素之組合。如在此所使用的，「包含(comprise)」意指「包括(include)」。因此，「包含A或B」意指「包括A、B或A和B」，不排除其他要素。

除非另有解釋說明，在此所使用的所有技術和科學用語具有如同此揭示所屬之技術領域中的具有通常知識者所一般理解的相同意義。雖然相似或等同於在此所述者之方法和物質可用於本揭示的實施和測試，但以下描述合適的方法和物質。除非另有指明，所有百分數和比例皆以重量計算。用語「約」是指在一值之的特定範圍內的量。例如，「約」特定分子量或公克量表示在該分子量或公克量的5%之內。在非限制性的實例中，「約」100公克係指95公克至105公克。此外，特定百分比的「約」係指在0.05%之內。在非限制性的實例中，「約」2%係指1.95%至2.05%。

投予：藉由任何有效途徑將試劑提供或給予個體。例示性之投予的途徑包括(但不限於)局部的、經口的、注射(諸如皮下的、肌內的、真皮內的、腹膜內的、靜脈內的和腫瘤內的)、舌下的、經皮的、鼻內的、局部的和吸入途徑。

抗氧化組成物：具有抗氧化活性之組成物。

抗氧化有效量：足夠在將組成物的量所投予至的個體中產生抗氧化功效的量。

趨化介素：趨化性的細胞介素，其介導趨化作用。趨化介素為小的蛋白質(在8和10kDa之間)，其可刺激白血球至發炎位置的補充。發炎性的趨化介素會被包括IL-1 α和IL-6之促發炎的刺激物誘發。

細胞介素：蛋白質之群，其涉及細胞傳信過程，包括在免疫系統中。細胞介素包括趨化介素和介白素，諸如TNF α、IL-1 α、IL-1 β、IL-3、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-18和IL-1RA。

褪色的：「褪色」萃取物係指有比參照物少的顏色者，且其不限定為缺乏顏色。如這說明書所用之「褪色」萃取物係指具有降低水平的縮合單寧和較少的與紅葡萄、紅葡萄萃取物和紅葡萄酒中的縮合單寧相關之類型的深顏色。

有效量：組成物的量，其單獨或與其他試劑(例如，其他抗氧化劑或其他抗發炎化合物)一起引起所欲的反應。該有效量可以單一劑或以數個劑投予，例如每日投予。然而，有效量可視待治療的個體、待治療的病狀之類型及投予方式而定。

賦形劑：無活性的物質，其用作組成物的活性成分之載劑。賦形劑可包括用於以下者：擴充具有活性成分之調配物的體積(考量到方便和準確劑量)之物質，使活性成分穩定化，並使得遞送系統為光學上及/或感官上可接受的。醫藥賦形劑的實例包括澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、米、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化鈉、乾的脫脂牛乳、甘油、丙二醇、水、乙醇等等。

萃取物：植物或其部分(諸如，其果實或種籽)的一或多者之至少一些活性成分的溶液或其他製劑。在此揭示的萃取物為溶劑萃取 物，其中將種籽暴露於液態萃取溶劑(諸如經加熱的水)以將活性成分從種籽中移出。藉由溶劑萃取所初始獲得的萃取物可轉變成為乾的形式且仍視為「萃取物」。「水性的(aqueous)」或「水(water)」萃取物係指以水而無其他溶劑(諸如乙醇)進行溶劑萃取所獲得的萃取物。

類黃酮：植物二級代謝物的一類，以乾重計，葡萄籽含有約4-8%類黃酮。類黃酮構成了廣泛分佈在植物中之食用多酚化合物的重要群組。於植物來源中(諸如水果、蔬菜、豆類、堅果、種籽、草本、香料、花卉)以及飲品中(諸如茶、可可亞、啤酒、葡萄酒和葡萄汁)，已鑑定了超過4000種化學上獨特的類黃酮。

葡萄籽中類黃酮主要係指黃烷-3-醇，特別是(+)-兒茶素、(-)-表兒茶素和(-)-表兒茶素3-沒食子酸酯及其複合物。葡萄籽中的黃烷-3-醇以單體的、寡聚合的或聚合的形式存在。兩種或多種化學連接的黃烷-3-醇單體稱為原花青素或寡聚合的原花青素(OPC)，其包括原矢車菊素(procyanidin)和原飛燕草素(prodelphinidin)。含有兩個單體之OPC被稱為二聚體，含有三個單體者被稱為三聚體，含有四個單體者被稱為四聚體，含有五個單體者被稱為五聚體等等。寡聚物有2至10之鏈長；聚合物代表鏈長大於10的組分。因此，葡萄萃取物中的寡聚物包括(例如)二聚體和三聚體，且很顯然地，聚合物可如50-100之多的單元。

類黃酮存在於葡萄的所有部分中，包括果皮、果汁和果泥，而非僅在葡萄籽中。為了使多酚化合物作為葡萄萃取物(包括葡萄籽或葡萄果漿萃取物)以供商業上使用這些化合物，必須以更濃縮的形式將此等化合物從葡萄中分離出。科學研究已顯示，原花青素的抗氧化力20倍大於 維生素E且50倍大於維生素C。廣泛的研析指出，葡萄籽萃取物在許多健康方面是有益的，此係因為其對於與膠原蛋白結合之抗氧化功效、促進年輕的皮膚、細胞健康、彈性和柔韌性。其他研究已顯示原花青素有助於保護身體免於日曬損傷、改善視力、改善關節，動脈和身體組織(諸如心臟)的柔韌性並藉由強化微血管、動脈和靜脈來改善血液循環。

發炎：由於損害性之刺激(stimuli)，包括感染、刺激(irritation)或受傷，而造成之局部性生物學上的反應，其可產生發紅、腫脹和疼痛。發炎可為慢性的或急性的，且可為致病性的。免疫細胞引起發炎反應並釋放發炎介質，該發炎介質為增加血液流動和血漿流體之滲漏至損傷的組織之原因。作為發炎指標存在的發炎介質包括IL 1-α、IL-6和PGE2。

介白素：可介導發炎反應的細胞介素。有多種介白素(IL)家族。介白素1(IL-1)為有至少11個成員之介白素家族，包括IL-1 α。IL-1 α一般為發炎產生的原因，且由上皮細胞所產生。介白素6(IL-6)為可刺激免疫反應的細胞介素且在諸如燒傷或其他組織損傷後被分泌出。當作為促炎介質時，IL-6可引起PGE2的合成。

麝香葡萄(圓葉葡萄，Vitis rotundifolia)：美國東南部原產的葡萄，且可見於德拉威州(Delaware)至墨西哥灣並向西至密蘇里州(Missouri)、堪薩斯州(Kansas)、奧克拉荷馬州(Oklahoma)和德州(Texas)的野地。麝香葡萄很適應於美國東南部之溫暖、潮濕的條件。其果實以3-40個葡萄之小的、鬆散的團簇之形式生成，與歐洲和美國葡萄(European and American grapes)之大的、緊密成束之特點極不相似。該圓狀、1至1又1/2英吋的果實具有厚的、堅韌的果皮並含有至多5個硬的、橢圓形的種籽。 果實在顏色上從淺綠的青銅色至青銅色、粉紅的紅色、紫色和近乎黑色。它們被視為紅葡萄，如同此說明書所用的用語。

可使用許多不同品種的麝香葡萄，包括雌性的(雌蕊的)品種，諸如Black Beauty、Black Fry、Darlene、Fry、Higgins、Jumbo、Scuppernong、Sugargate、Summit、Supreme和Sweet Jenny，以及自體受育的(self-fertile)品種，諸如Carlos、Cowart、Dixieland、Dixie Red、Fry Seedless、Magnolia、Nesbitt、Noble、Redgate、Regale和Sterling。

例如，麝香葡萄的青銅色品種被發明所屬技術領域中具有通常知識者鑑定為包括Carlos、Chowan、Doreen、Higgins、Magnolia、Nevermiss、Pamlico、Roanoke、Scuppernong、Sterling和Summit之栽培種。紫色品種相較於青銅色品種有較深色的果皮且包括Albermarle、Bountiful、Cowart、GA-1、Hunt、NC-1、Noble、Regale、Tarheel和Jumbo。一些紫色品種也被稱為是黑色的。

完整麝香葡萄的植物化學組成與釀酒葡萄(Vitis vinifera)不同。麝香葡萄具有較高的總酚含量，其特徵為高土耳其鞣酸的、沒食子酸的和類黃酮糖苷濃度。麝香葡萄中的土耳其鞣酸之存在是獨特的且呈游離的土耳其鞣酸、土耳其鞣酸醣苷、甲氧基化衍生物和併沒食子鞣質之形式。另一獨特的特徵為在麝香葡萄中所觀察到的花青素化學物質。作為3,5-雙葡萄糖苷(與3-葡萄糖苷相反)之以非醯化形式存在的飛燕草素(delphinidin)、矢車菊素、牽牛花素、芍藥素和錦葵花素(malvidin)，這些化合物和來自葡萄內存在的其他花青素之天然色素的影響將深紫色顏色賦予從紫色品種獲得的果汁和果漿。紫色果漿萃取物含有花青素，而青銅色果漿萃取物不含。

青銅色和紫色麝香葡萄中所見的紅色和紫色花青素為具有抗氧化性質之多酚化合物。紫色和青銅色麝香葡萄含有數種多酚的其他類黃酮類型，其中黃烷-3-醇和其寡聚物為最多含量的類型且黃酮醇為存在於完整麝香葡萄中第二多含量的類黃酮。被報導關於麝香葡萄果皮部分(fraction)(依遞降次序)為土耳其鞣酸、楊梅黃酮、槲皮素和番鬱金黃素(kaempferol)，而被報導關於種籽者為表兒茶素、兒茶素和沒食子酸(Pastrana-Bonilla等人，J.Agric.Food Chem.51：5497-5503,2003)。

麝香葡萄含有果漿和果汁。「除了完整葡萄以外」包括已從至少一些果汁已被萃取出的麝香葡萄，且在一些實例中，包括少於95%或90%的葡萄原汁。

醫藥上可接受的媒劑：可用於此揭示之醫藥上可接受的媒劑(載劑)係常規使用的。雷氏醫藥科學(Remington’s Pharmaceutical Sciences)(由E.W.Martin所著，Mack Publishing Co.,Easton,PA，第19版(1995))描述了適用於一或多種組成物(諸如一或多種葡萄萃取物組成物、諸如葡萄籽萃取物組成物)的醫藥遞送之組成物和調配物，以及自然中不在葡萄萃取物中的其他天然地或非天然地存在之醫藥劑。醫藥上可接受的載劑的用途並非暗示所製造的產品僅可用於醫藥目的。反之，其暗示該產品適用於投予至個體或由個體吸收，例如局部組成物。在特定的具體實例中，該媒劑為用於局部組成物的載劑，諸如液體、膠體、發泡體、乳膏、軟膏或乳液。特別有用的媒劑為醫藥上或美容上可接受用於局部施用的媒劑，諸如一或多種水性系統、甘油、C_1-4醇、脂肪醇、脂肪醚、脂肪酯、多元醇、乙二醇、蔬菜油、礦物油、脂質體、層狀液態物質、聚矽氧油、水或其任 何組合。

關於局部組成物，諸如在此揭示者，該麝香葡萄萃取物組成物可以任何合適的產品形式來調配。該產品形式包括(但不限於)氣態噴霧劑、乳膏、分散劑、乳化劑、發泡體、膠體、液體、乳液、慕思、軟膏、貼片、髮油、粉末、泵式噴霧劑、固體、溶液、棒劑或濕紙巾。該載劑亦可為各種現存的皮膚乳液、膠體、乳膏、軟膏、增色劑、清潔劑、保濕劑或日光隔離劑，其中以所欲的濃度(例如以重量計0.025%-0.25%)將該麝香葡萄萃取物添加至該載劑。

多酚：已發現來自葡萄或可可亞的多酚可增強心血管功能和認知健康兩者。黃烷醇(亦稱為黃烷-3-醇)代表大多數的葡萄籽和可可亞多酚；此類酚的化合物的範圍從單體的種類(諸如兒茶素和表兒茶素)至寡聚物(通常被稱為原花青素)至聚合物(通常被稱為單寧或縮合單寧)。在技術領域中以及在此說明書中，用語「酚的(phenolic)」和用語多酚是可交替使用的。

多酚也存在於葡萄的其他部分，包括在其果皮、果汁和果泥中。葡萄中之最高濃度的多酚在於葡萄籽中。葡萄籽為釀酒廠和葡萄汁產業之廢棄產物。這些種籽含有脂質、蛋白質、碳水化合物及4-8%多酚(乾重)，視其品種而定。因此，葡萄籽萃取物為強效的抗氧化劑，其保護身體免於早熟老化、疾病和退化。

果漿：果汁萃取後留下的果皮、種籽和果泥。在一實例中，果漿萃取物為青銅色麝香葡萄果漿萃取物、紫色麝香葡萄果漿萃取物或其組合。許多不同品種的麝香葡萄果漿可作為起始物質，且其包括雌性的(雌 蕊的)品種，諸如Black Beauty、Black Fry、Darlene、Fry、Higgins、Jumbo、Scuppernong、Sugargate、Summit、Supreme和Sweet Jenny，以及自體受育的品種，諸如Carlos、Cowart、Dixieland、Dixie Red、Fry Seedless、Magnolia、Nesbitt、Noble、Redgate、Regale和Sterling。麝香葡萄果漿含有具有抗氧化性質之酚化合物，包括沒食子酸和土耳其鞣酸。

果漿可存在於完整葡萄中，其中該完整葡萄含有至少90%或95%的葡萄果汁，或者一旦該葡萄已被壓縮以移除果汁後，該果漿可為實質上被分離的且基本上僅由果漿組成。

純果漿(pomace-only)：果汁已被移除(例如，藉由壓榨葡萄)之葡萄的果漿部分。如在此所用的，「純果漿」係指含有不超過1%果汁之果漿，以其重量的百分比計。在一些具體實例中，純果漿含有不超過0.5%果汁，以其重量的百分比計。

前列腺素：生物學上有活性的脂質，其含有20個碳原子，包括戊烷環。前列腺素涉及介導發炎，且前列腺素E2(PGE2)係由花生四烯酸經環氧合酶和前列腺素E合成酶產生。在受損的及/或發炎的細胞中，環氧合酶的水平增加，此導致增加PGE2的產生。

經純化的：用語經純化的並非要求絕對純度；反之，其意圖作為相對性的用語。因此(例如)經純化的物質為比在其自然環境下(例如，在果實(如葡萄)中)的物質更加濃縮的物質。在一具體實例中，製劑係經純化，以使得該物質代表該製劑的總含量的至少約5%(諸如(但不限於)至少約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約70%、約80%、約90%、約95%、約98%或約99%)。

範圍：關於範圍，用語「在x至y的範圍」或「從x至y」包括x和y之間的任何值以及端點x和y。

紅葡萄：紅葡萄為一般製造紅葡萄酒來源者，且其一般具有比作為製造白葡萄酒來源的白葡萄更高的單寧水平。「紅葡萄酒」為深色葡萄酒的普遍性用語。葡萄酒之顏色可根據國際葡萄與葡萄酒組織(the International Organization of Vine and Wine)來決定，其提供評估葡萄酒之顏色的方法，使用分光光度計和Lab色彩空間之指標的計算。紅葡萄酒製造來源之葡萄的實例包括Syrah、Merlot、Cabernet Sauvignon、Malbec、Pinot Noir、Zinfandel、Sangiovese、Barbera和麝香葡萄。麝香葡萄(圓葉葡萄)之顏色範圍從青銅色至深紫色至黑色(當成熟時)。

選擇性萃取：選擇性萃取係指目標物(諸如縮合單寧)之偏向萃取(preferential extraction)。在一些具體實例中，選擇性萃取意指目標物為所萃取之占多數的種類。

皮膚護理組成物：具有可改善皮膚之健康的、美學的及/或美容上外觀的活性成分之局部組成物。該改善由以下方式表現：(例如)藉由減低發炎之標記物的水平或減低由諸如隨時間的老化、激素的老化和光照老化之因素所造成的老化之皮膚病學上的徵兆；減少皮膚脆化、毛孔尺度減少、膠原蛋白及/或彈性蛋白的損失；縮減線條和/或皺紋(包括細紋和/或皺紋)的外觀和/或深度；減少色素過度沉積；改善皮膚色調、光澤、透晰度和/或繃緊度；減少皮膚鬆垂；促進抗氧化活性；改善皮膚緊緻性、豐滿度、質地、柔韌性和/或柔軟度；改善膠原蛋白原及/或膠原蛋白的產生。

個體：活體的多細胞脊椎動物有機體，包括人類和獸醫個體 之類別，諸如伴侶動物，包括貓、狗或馬。「需要增加粒線體的生源及/或抗氧化活性之個體」為可受益於該增加的個體，例如，想要減少老化徵兆、抵銷氧化作用造成的組織損傷及/或改善心血管、神經系統、腫瘤相關、皮膚外觀或其他與氧化壓力相關的病狀之個體。「需要減少發炎之個體」為可受益於該減少的個體，例如，想要抵銷發炎(諸如UV輻射)造成的組織損傷或老化徵兆、皮膚外觀或其他與發炎相關的病狀之個體。如在此所使用的，「健康的個體」沒有任何主要潛在的醫學上的發炎病狀，包括(但不限於)濕疹、心血管疾病或牛皮癬。

單寧：天然存在的多酚生物分子，其結合並使蛋白質、胺基酸和生物鹼沉澱。用語「單寧」原先係指使用來自橡木之木頭製革試劑(tanning agent)，其用於將動物皮製革(tan)為皮革。然而，現在用語單寧係廣泛地用於植物(諸如紅葡萄籽、種籽和莖)中發現的大的多酚化合物，其具有分子量範圍從500至超過3000(沒食子酸酯)且至多達20,000(原花青素)。在其化學組成物方面，植物單寧可分為可水解單寧和縮合單寧或類黃酮。可水解單寧為聚合之簡單酚的物質，諸如沒食子酸的酯類及其二聚體(雙沒食子酸，土耳其鞣酸)。可水解單寧可進一步分為，在水解後產生沒食子酸之沒食子丹寧，以及在水解後釋出土耳其鞣酸之併沒食子鞣質。與可水解單寧相反，縮合單寧無法藉由水解來降解，相反地，當經受在酸性介質中的加熱時，其會逐漸聚合並形成高分子量之非晶型的花青素色素(紅色或不溶性黃棕色產物)，稱為樹皮棕色質。

局部施用：局部施用的試劑為僅施用在皮膚的特定表面區域，而非全身。在特別實例中，依需要功效(諸如減少細紋或皺紋)的區 域將組成物施用至皮膚或眼睛，或依需要抗發炎功效的區域(諸如暴曬於UV輻射的區域)將組成物施用至皮膚。例如，可將組成物以局部製劑的方式施用至臉部皮膚。意圖用於施用至皮膚的局部組成物為「皮膚組成物」。

超過濾：一種膜過濾，其中施力(諸如壓力或濃度梯度)引導透過半透膜之分離。超過濾膜典型地以膜之分子量截斷(the molecular weight cut off，MWCO)為特徵。較高分子量的懸浮固體和溶質被留在滲餘物中，而水和較低分子量的溶質通過該膜至滲透物中。可將不同類型的模組用於超過濾程序。該等模組的實例為，使用鑄型在塑膠或紙管內側的聚合膜之管狀元件；含有多重中空纖維之中空纖維設計；螺旋環繞之模組，其中扁平的膜層以薄網狀的間隔物質來分隔，該物質圍繞中心多孔管並配置於管狀鋼壓力容器外殼中；以及板和框架組件，其使用置於平板上的膜，該平板藉由濾液通過的網狀物質來分隔。

單位劑量：物理上分離的單位，其包含經計算個別地或共同地產生所欲的功效(諸如治療功效)之預定量的活性物質。單一單位劑量或複數的單位劑量可用於提供所欲的功效或活性，諸如抗氧化活性或減少發炎。在一實例中，單位劑量包括促進心血管或認知健康之所需量的試劑。在其他實例中，單位劑量包括減少皮膚發炎之所需量的試劑。在一實例中，單位劑型含有多種預定劑量的活性物質。

II. 數個具體實例之敘述

A. 獲得用於隨後的褪色反應之麝香葡萄果漿萃取物前驅物物質

所揭示的組成物和方法可用於降低各種包括單寧之植物萃取物的縮合單寧含量。單寧廣泛地分布於許多類型的植物中。單寧可見於 葉、芽、種籽、根和莖組織中。單寧可見於單子葉植物(44個家族，根據維基百科)以及雙子葉植物(180個家族，根據維基百科)，且可見於裸子植物和被子植物。以下所有雙子葉植物的種類含有單寧：槭樹科(Aceraceae)、獼猴桃科(Actinidiaceae)、漆樹科(Anacardiaceae)、胭脂樹科(Bixaceae)、橄欖科(Burseraceae)、使君子科(Combretaceae)、龍腦樹科(Dipterocarpaceae)、杜鵑花科(Ericaceae)、茶藨子科(Grossulariaceae)、楊梅科(Myricaceae)。所有茨藻科(Najadaceae)和香蒲科(Typhaceae)(單子葉植物)的種類也含有單寧。縮合單寧(包括原花青素、聚類黃酮單寧、兒茶酚型單寧、焦兒茶酚型(pyrocatecollic type)單寧、不可水解的單寧或flavolan)可見於植物的物種，諸如柯(Ltihcarpus glaber)、李屬物種(Prunus sp)、破釜樹(Schinopsis lorentzii)、黑荊(Acacia mollissima)、釀酒葡萄和Commiphora angioensis。松樹皮和雲杉樹皮含有縮合單寧。維管束植物(如，維管束植物門(Tracheophyte)，維管束植物)也包括縮合單寧。所揭示的方法係用於降低此等含有縮合單寧之植物的任何萃取物之縮合單寧含量。

在一些具體實例中，該植物萃取物為葡萄果漿萃取物，諸如(但不限於)含有縮合單寧之麝香葡萄果漿萃取物。在一些非限制性實例中，該植物萃取物為含有縮合單寧之紅葡萄果漿萃取物。僅為了說明的目的，以參酌褪色之前的前驅物物質之麝香葡萄果漿萃取物的方式來描述該等方法和組成物。在此特定的實例中，該麝香葡萄果漿萃取物為具有增加的土耳其鞣酸(其為麝香葡萄所獨有的)溶解度之青銅色和紫色麝香葡萄的組合萃取物。如PCT公開號WO 2010/014870和PCT公開號WO 2010/014873以及美國專利號8,568,804、美國專利號9,132,162和美國專利號9,173,916(這 五者皆以參考的方式併入本文中)所揭示，可藉由組合青銅色和紫色麝香葡萄果漿萃取物來獲得具有改善的土耳其鞣酸溶解度之麝香葡萄萃取物。已揭示各種製造組合的萃取物之方法，諸如將青銅色麝香葡萄果漿萃取物與紫色麝香葡萄果漿萃取物組合來產生麝香葡萄果漿萃取物，其中青銅色麝香葡萄果漿萃取物與紫色麝香葡萄果漿萃取物的比例範圍從0.1至10(重量對重量)，諸如0.3至3(重量對重量)。可藉由分別萃取青銅色和紫色麝香葡萄並隨後組合萃取物，或者同時萃取以所欲的比例組合之青銅色和紫色麝香葡萄，來製造該組合的萃取物。在所揭示的實例中，前驅物萃取物為麝香葡萄果漿之水性的萃取物。

申請人所併入之PCT公開號WO 2010/014870、PCT公開號WO 2010/01487、美國專利號8,568,804、美國專利號9,132,162和美國專利號9,173,916揭示，前驅物麝香葡萄果漿萃取物組成物具有改善的抗氧化活性。製造所揭示之組成物的方法包括組合具有至少2%的多酚含量之麝香葡萄(圓葉葡萄)果漿萃取物和來自除麝香葡萄以外的來源之具有最小純度為至少5%的反式白藜蘆醇，其中麝香葡萄多酚與反式白藜蘆醇的比例範圍為0.1/1至10/1(重量對重量)。製造所揭示之組成物的方法包括組合具有至少2%的多酚含量之麝香葡萄(圓葉葡萄)果漿萃取物和來自除麝香葡萄以外的來源之具有最小純度為至少5%的反式白藜蘆醇，其中麝香葡萄多酚與反式白藜蘆醇的比例範圍為0.2/1至50/1(重量對重量)，諸如5/1至50/1(重量對重量)，包括20/1至50/1(重量對重量)，諸如18至1(重量對重量)，藉此產生具抗氧化活性之麝香葡萄果漿萃取物和反式白藜蘆醇的混合物。

在一些具體實例中，青銅色與紫色麝香葡萄果漿前驅物萃取 物的比例範圍從範圍從0.1至10，諸如0.3至3。例如，青銅色麝香葡萄果漿萃取物與紫色麝香葡萄果漿萃取物的比例為約2.75至約1(重量對重量)、2.5至約1(重量對重量)、約2.25至約1(重量對重量)、約2至約1(重量對重量)、約1.5至約1(重量對重量)或約1至約1(重量對重量)。在其他實例中，該比例為約10至約1、約7.5至約1或約5至約1。如在此所使用的，用語「約」係定義為±0.5。在特別實例中，青銅色麝香葡萄果漿萃取物與紫色麝香葡萄果漿萃取物的比例為約2.25至約1(重量對重量)。

在某些具體實例中，麝香葡萄(圓葉葡萄)果漿前驅物萃取物具有至少2%的多酚含量。例如，該多酚含量為至少3%、至少3.5%、至少4%、至少4.5%、至少5%、至少6%、至少8%、至少10%、至少12%或至少14%。在特別實例中，該麝香葡萄(圓葉葡萄)果漿萃取物具有約4%的多酚含量。

在一些具體實例中，所揭示的麝香葡萄果漿前驅物萃取物包括20%至50%的固體在液體中，諸如至少25%、至少30%、至少35%、至少37%、至少40%、至少42%、至少44%、至少46%或至少48%。在特別實例中，該萃取物包括約40%的固體在液體中。

可由任何萃取方法獲得前驅物萃取物，諸如在壓力下壓縮或以溶劑萃取特定的實例為溶劑萃取，例如以醇、水(諸如經加熱的水)或醇與水的組合進行。可進一步將該萃取物發酵以移除萃取的糖。在一實例中，在萃取青銅色麝香葡萄果漿和紫色麝香葡萄果漿之後，但在組合青銅色麝香葡萄果漿萃取物與紫色麝香葡萄果漿萃取物以產生所揭示的麝香葡萄果漿萃取物之前，進行發酵。在其他實例中，在以所欲的萃取後比例(諸 如(但不限於)在約2.25至1之青銅色與紫色的比例)來組合青銅色麝香葡萄果漿萃取物與紫色麝香葡萄果漿萃取物之後，進行發酵。

可藉由發明所屬技術領域中具有通常知識者已知的任何方法來進行發酵。例如，可添加酵母菌和酵母菌養分至果漿中且持續發酵直到殘餘的糖含量轉變為乙醇。在一實例中，每1000加侖之1倍(1X，未經濃縮的)萃取物添加兩英磅的酵母菌；發酵一般在三天後完成。在其他實例中，酵母菌的量及/或菌株和發酵的期間及溫度，可根據發明所屬技術領域中具有通常知識者已知的個別方法而改變。在一些實例中，可使用酶來澄清及/或沉澱殘餘物或改善果漿萃取物之萃取產率。該酶的實例包括果膠酶或來自黑麴菌(Aspergillus niger)的酶之摻合物，該黑麴菌可從諸如Scott Laboratories來源市售獲得。在發酵前或發酵期間可添加這些酶至該果漿萃取物。

在一些具體實例中，可在發酵之前及/或之後，過濾青銅色麝香葡萄果漿萃取物和紫色麝香葡萄果漿萃取物。可根據發明所屬技術領域中具有通常知識者已知的一般方法來進行過濾。在特別實例中，透過適當的網孔大小(諸如USP網孔(典型為120網孔)之篩或相似的布過濾器(例如，來自Millipore股份有限公司之市售的過濾器)來過濾萃取物。

在某些具體實例中，製造麝香葡萄果漿前驅物萃取物的方法進一步包括濃縮青銅色麝香葡萄果漿萃取物和紫色麝香葡萄果漿萃取物，以使每一萃取物包括20%至50%的固體在液體中，諸如至少25%、至少30%、至少35%、至少37%、至少40%、至少42%、至少44%、至少46%或至少48%。在特別實例中，濃縮該萃取物以使每一萃取物包括約40%的固體在液 體中。用於濃縮樣品之一般已知的方法(包括在此揭示的用於濃縮樣品之方法)可用於濃縮該青銅色和紫色萃取物。

在任何前述萃取方法的實例中，完整紫色葡萄可用於替代紫色果漿。紫色麝香葡萄果漿萃取物可包括(a)完整紫色麝香葡萄之萃取物；(b)來自除了完整葡萄之外的紫色麝香葡萄果漿之萃取物；或(c)(a)和(b)之混合物。該完整紫色葡萄含有葡萄汁，其為除了葡萄果漿之外的花青素來源，且當其從完整葡萄物溶劑萃取出時，現已發現這些花青素令人意外地提高青銅色和紫色麝香葡萄萃取物之混合物中土耳其鞣酸的溶解度。然而，藉由除了紫色麝香葡萄之外的有色水果(諸如藍莓、黑莓或蔓越莓)或有色水果之副產物也可提供其他來源的花青素。在其他實例中，花青素係來自水果加工流(processing stream)之產品，諸如果汁濃縮物或水果加工流之副產品，諸如從果泥加工流分離的水果皮。

藉由這些方法獲得的麝香葡萄果漿前驅物萃取物具有賦予該萃取物深的色彩之縮合單寧水平。因此，可以如下所述進一步處理該前驅物萃取物來減少單寧含量並產生褪色萃取物。

B. 減少萃取物之單寧含量以製造褪色萃取物

一旦獲得前驅物萃取物，使其經受褪色程序。圖1顯示用於減少麝香葡萄果漿萃取物的單寧含量之褪色程序的實例。前驅物物質為麝香葡萄果漿萃取物液體濃縮物1。在此實例中，濃縮物1為40-45%固體，如美國專利號8,512,771和9,173,916所述。藉由添加經純化的水，將濃縮物1稀釋至低於10%固體以產生8%固體溶液2(百分比固體的範圍可從2-10%)。將溶液2加熱至130-135℉，並通過微過濾裝置3以澄清該物質。 當該前驅物物質稀釋至極低的固體水平(2-5%)時，該微過濾程序更有效，且加熱亦有助於促進此程序。在此特定實例中，微過濾裝置3為有0.45微米的孔洞尺度以及200,000道耳頓(或200kDa)的NMWCO之機械式過濾器，其將微生物和懸浮粒子從用於隨後超過濾處理4的製備之溶液中移除。在開始第1階段的超過濾步驟之前，於儲存槽中快速地將澄清的萃取物冷卻至<50℉。

隨後使冷卻並澄清的萃取物經受超過濾處理4，其以1000道耳頓(或1kDa)之標準標稱分子量截斷之超過濾膜在5產生滲透物(分液(Fraction)A)。分液A包括分子量小於1000的化合物且主要含有機酸、糖類和礦物質卻令人意外地含有少於1%酚的化合物。這些酚的化合物包括痕量的酚酸和類黃酮，諸如沒食子酸和槲皮素。雖然分子量至多1,000道耳頓的分子能夠滲透該超過濾膜，但無法預期地發現其此分液含有極低的酚酸含量，這或許是前驅物物質中所含的酚酸和其他分子(可能為纖維)之間的物理化學相互作用的緣故。此無法預期的發現可藉由使用低至500道耳頓和至多5000(或5kDa)之標準標稱分子量截斷之超過濾膜來獲得。分液A可在其他產品中作為「麝香葡萄」類型的風味組分，但此物質在製備皮膚護理萃取物的程序中被丟棄。

自低分子量超過濾(如上所述)餘留的滲餘物(無法通過超過濾膜的物質)於經純化的水中重新組成約2%固體濃度且經受以30kDa截斷之超過濾膜進行的第二超過濾程序6。丟棄所得的滲餘物7(分液C)並留下含有褪色麝香葡萄果漿萃取物之滲透物8(分液B)以用於進一步加工至皮膚護理組成物。分液C主要含有聚合的縮合單寧、蛋白質和纖維。相 較之下，分液B富含多酚(9-10%乾重)、有低量的糖(<4%乾重)以及有大幅地減少之聚合的縮合單寧含量(達到最低減少初始縮合單寧含量的70%)。雖然具有分子量至多30,000道耳頓的分子能夠透過該超過濾膜，但無法預期地發現至少70%的聚合的縮合單寧留在分液C中，可能是物理化學相互作用的緣故。此無法預期的發現可能是由使用標準標稱使用低至25,000道耳頓(25kDa)和至多100,000道耳頓(或100kDa)之標準標稱分子量截斷之超過濾膜所造成的。

分液B也含有纖維(約1.0%)、蛋白質(約7.8%)、脂質(約0.1%)和有機酸(約16.0%)。分液C(其富含聚合的縮合單寧，可做為用於各種產品之抗氧化劑的來源，但此物質在製備皮膚護理萃取物的程序中被丟棄。在褪色程序中的此點上，麝香葡萄果實萃取物(分液B)具有最小的糖含量(<4%乾重)以及大幅地減少之聚合的縮合單寧。分液B用於皮膚護理產品中使用是理想的，因為其含有強效的多酚抗氧化劑，但由於縮合單寧的移除及最小的糖含量，幾乎沒有或沒有棕色變色的潛在性。當將其引入至用於局部使用的各種調配物時，沒有偵測到棕色色調。

進一步處理滲透物8(分液B)，藉由以重量對重量計0.3%之活性碳來處理該滲透物，以移除皮膚護理產品中不想要的散發氣味之組分(奶油般的/酵母菌的氣味)。在以活性碳處理後，使分液B經受最後的微過濾程序9以移除所有痕量的活性碳。在微過濾後，在用氧化鎂進行礦化以促進於乾燥後自由流動的粉末之前，將該溶液濃縮10至30-40%固體。以乾重計7.0%的輸入量將氧化鎂添加至該濃縮物以完全地促進礦化程序，使之形成存在於該萃取物中的所有有機酸的鎂鹽。最後，使該產物經受乾燥/ 研磨11以提供均勻的粒子尺度。在研磨階段的期間添加二氧化矽以防止產品結塊。

與前驅物物質相比，當經受上述程序時，分液B的質量減少75-80%但多酚含量只有減少35-40%。因此，當比較分液B與該前驅物物質時，以等量的質量計，所造成的分液B中非單寧多酚含量僅減少18-20%。因此，分液B中的多酚之主要損失係歸因於聚合的縮合單寧的化學種類；幾乎沒有偵測到其他多酚化學種類的損失(見圖3A和3B之層析圖)。因此，分液B含有(以平均計)9%之麝香葡萄多酚(主要為非單寧的)，而該前驅物物質含有(以平均計)14%之由單寧和非單寧的麝香葡萄多酚兩者組成之多酚。關於前驅物物質相較於上述程序所產生之褪色萃取物，表1-3描述了營養和多酚含量之比較，而圖3A和圖3B提供層析圖的比較。

表1比較了前驅物和褪色萃取物之營養特性譜(以乾萃取物之%呈現)。雖然該等營養特性譜十分相似；但由於該前驅物物質的質量減少，營養物種類(諸如蛋白質和簡單糖類)有一些濃縮。然而，該褪色萃取物之最終簡單糖(單醣)含量相當低(<4-5%)且因此適合用於局部地施用產品之用途。表2顯示了每一萃取物之(以乾重計)總多酚含量且進一步將多酚含量分為縮合單寧含量和除了縮合單寧以外之多酚含量。如表2所示，雖然褪色萃取物之總多酚含量降低約35%(90對140mg/g乾重)，但相較於該前驅物萃取物，該褪色萃取物之縮合單寧含量降低至少70%(6對21mg/g乾重)。因此，大部分(約略80%)的多酚損失係歸因於縮合單寧的移除，證實了相對於其他多酚，使用上述程序偏向移除縮合單寧。

褪色萃取物保留所有在該前驅物物質中發現的核心多酚(列 於表4)(酚酸、類黃酮、花青素和可水解單寧)，如圖3A和3B之層析圖所示，且進一步於表3中說明，其中剖析核心/特徵麝香葡萄多酚。使用分析方法，測得該前驅物萃取物之總多酚的大約30%(140mg中的43.84mg)為單一酚的種類及/或化合物，並與該褪色萃取物中對應的種類/化合物作比較。如表3所示，在該褪色萃取物中可偵測到重要的(且在一些情況下是獨特的)麝香葡萄多酚種類，諸如酚酸、土耳其鞣酸、沒食子酸、併沒食子鞣質和沒食子丹寧可；在一些情況下，所選化合物(如，沒食子酸)的百分比增加。因此，兩種萃取物之間多酚含量上的主要差異在於縮合單寧含量減少70%。總之，縮合單寧含量的減少以及低水平的簡單糖類，使得褪色分液B以局部調配物之典型使用量來添加時，適合用於皮膚護理施用。這些調配物可用於皮膚護理(見下文)，並且在儲存時更穩定，使得產品不會隨著時間變成棕色或變深色。

用於選擇性降低縮合單寧之所揭示的萃取方法，令人意外地且有利地保留或改善有益於皮膚處理之其他多酚的水平，同時避免高水平之縮合單寧的存在所造成之缺點。

C. 皮膚產品

具有減低量的縮合單寧之褪色麝香葡萄果漿萃取物可併入至各種皮膚護理產品中，諸如膠油清潔劑、視黃醇血清濃縮物、具日光隔離之日間保濕劑、澄清處理增色劑墊和臉部皮膚換新乳膏。麝香葡萄果漿萃取物可為皮膚護理組成物之以重量計的0.00001%至1%，諸如皮膚護理組成物之以重量計的0.0001%至1%、皮膚護理組成物之以重量計的0.001%至1%或皮膚護理組成物之以重量計的0.01%至1%。在一些具體實例中，麝香葡萄果漿萃取物為(例如)皮膚護理組成物之以重量計的0.025%至1%，諸如皮膚護理組成物之以重量計的0.025%至0.25%。在其他具體實例中，麝香 葡萄果漿萃取物為(例如)該組成物之以重量計的0.0004%至0.4%。所得到的皮膚護理組成物具有有益於皮膚之特性譜，但因其較低縮合單寧含量的緣故，該產品是相對上是褪色的。如在此所用的，「低縮合單寧含量」意指以重量計10%或更少之縮合單寧含量。

用於製備相較於未經褪色的麝香葡萄果漿萃取物具有較低水平之縮合單寧含量的褪色麝香葡萄果漿萃取物之所揭示的方法，可用於如章節C和D所述之局部皮膚組成物和治療發炎的方法。章節A和B所揭示之任一方法可用於製備經調配以投予至皮膚的組成物。

1. 生物檢驗 證實麝香葡萄果漿萃取物在皮膚上的有益功效

各種生物檢驗已證實麝香葡萄果漿萃取物在皮膚上的作用模式。對於彈性蛋白酶、膠原蛋白酶、DPPH、TT二聚體、角質細胞活力和酪胺酸酶之測試，圖4概述了含有褪色萃取物的麝香葡萄果漿萃取物之皮膚護理組成物的有益功效。如下進行這些測試。

a. 彈性蛋白酶和膠原蛋白酶之抑制

培養人類真皮纖維母細胞並用作彈性蛋白酶酵素的來源。將此酶從纖維母細胞中部分純化，其藉由在彈性蛋白酶緩衝液中裂解該細胞並保留裂解物的可溶解部分。隨後將此纖維母細胞裂解物的部分與測試物質和合成的彈性蛋白酶基質Suc-(Ala3)-對硝基苯胺(STANA)一起溫育。彈性蛋白酶作用於此基質而釋放對硝基苯胺，其可藉由分光光度計在405nm波長下測量的吸光度來偵測。藉由與未經抑制的酶相比時之釋放的對硝基苯胺之量的降低來顯示彈性蛋白酶之抑制。

基質金屬蛋白酶-1(MMP-1)為細胞外蛋白酶，其在潛伏形 式(latent form)有大約52-56kD的分子量。當酶原分裂時，22-46kD的MMP-1變成活性酶且可降解許多基質，包括膠原蛋白、膠質和內動素(entactin)。經由一些疾病狀態、暴曬於UV照射或自然老化過程的部分，可在人類皮膚中誘發增加的MMP-1活性。此可能導致膠原蛋白被MMP-1降解超過其置換率之失衡狀態因此，可抑制MMP-1活性之物質會是有益的。為了篩選MMP-1抑制劑，在硫環縮肽(thiopeptolide)基質、潛在的抑制劑和5,5’-二硫雙(2-硝基苯甲酸)(DTNB)的存在下溫育活性的人類重組MMP-1。當硫環縮肽基質被MMP-1分解時會釋放硫醇基，硫醇基可與DTNB反應並形成2-硝基-5-硫基苯甲酸，其可以分光光度法在412nm下偵測。故，MMP-1活性與在412nm下的吸光度是成比例的，且在抑制劑存在下，此吸光度會減少。

b. DPPH檢驗

此檢驗係基於抗氧化劑對於穩定的自由基2,2-二苯基-1-苦味基肼基(DPPH)之清除功效的測量。自由基DPPH在517nm有強吸光度，且當DPPH與抗氧化的化合物反應並轉變為肼時，此吸光度會減少。DPPH檢驗被認為是評估抗氧化劑的清除活性之有效且容易的檢驗，其係因為該自由基化合物是穩定的且不需要如在其他自由基清除檢驗般產生該自由基化合物。

c. TT二聚體檢驗

用於此檢驗的測試系統為MatTek EpiDerm，為皮膚模型，其由來自正常人類之表皮角質細胞培養至形成多層的、高度分化之人類表皮模型所組成。關於此研究，在UVB暴曬之前(評估預防的前處理組)或在 UVB暴曬之後(評估修復的後處理組)，以測試物質局部地處理組織至隔夜。在該等暴曬和處理後，從EpiDerm組織中萃取DNA並使用基於ELISA的方法檢驗胸腺嘧碇二聚體的含量。

d. 紫外線-B輻射暴曬對角質細胞活力的影響

以測試物質處理人類表皮角質細胞24小時並隨後將其暴曬於一劑量的UVB光(大約50mj/cm²)。然後經MTT檢驗測定UVB暴曬後24小時細胞活力的改變。MTT檢驗為細胞之代謝活性的比色檢驗，其反映細胞活力。有活力的細胞可攝入MTT，其隨後被粒線體減少，導致不溶性的紫色形態結晶生成。之後以異丙醇從該細胞中萃取出將這些結晶並以分光光度法定量。紫色的強度與有活力的細胞之數量成正比，且與測試物質之毒性成反比。

e. 酪胺酸酶之抑制

在含有L-DOPA(L-3,4-二羥基苯基丙胺酸)的磷酸鈉緩衝液中將純化的酪胺酸酶與測試物質混合並溫育。在溫育30分鐘後，經由比色檢驗來評估轉變為DOPA鉻之L-DOPA的量(反映酪胺酸酶活性)。麴酸為酪胺酸酶抑制的正向對照組。

f. 結果

圖5顯示彈性蛋白酶抑制測試的結果並證實藉由抑制彈性蛋白減少對於皮膚彈性的潛在功效。圖6顯示膠原蛋白酶抑制測試的結果，其說明藉由避免膠原蛋白減少來維持皮膚緊緻性的潛在性。圖7顯示以如Trolox當量顯示來測量自由基清除力之DPPH檢驗的結果；TE值愈高，抗氧化力愈強。褪色萃取物提供了大於1500Trolox當量之抗氧化活性。圖8 顯示TT二聚體檢驗的結果，其中在UVB暴曬之前的1%麝香葡萄萃取物前處理完全地預防DNA損傷。該萃取物優於正向對照組(1mM Trolox)；在UVB暴曬後的1%麝香葡萄萃取物處理(後處理)也顯示減少45%的DNA損傷，暗示在DNA修復上的功效；在前和後處理兩者中，0.1%之功效低於1%之功效。圖9顯示在紫外線B暴曬之細胞存活；相較於未經處理的細胞，麝香葡萄萃取物顯著增加細胞存活，且該增加甚至優於20μM之Trolox。圖10顯示酪胺酸酶抑制，其暗示防止色素過度沉積的能力。該褪色萃取物能夠實質上抑制酪胺酸酶，且會被預期有助於避免不想要的老化或暴曬相關的皮膚色素過度沉積。

圖11為比較性檢驗，其顯示該褪色萃取物保留前驅物萃取物之DNA保護的活性。圖11為褪色局部麝香葡萄果漿萃取物(TME)和未經褪色的口服麝香葡萄果漿前驅物萃取物(OME)之間的TT二聚體DNA損傷比較檢驗之長條圖。該OME為先前美國專利號8,568,804、美國專利號9,132,162和美國專利號9,173,916所揭示之萃取物。如與未經處理組比較時減少TT二聚體生成所測得的，TME和OME兩者皆顯著地防止由UV侵害造成的皮膚組織中之DNA損傷。

總之，在局部皮膚護理產品中，以重量計0.00001%至1%(諸如(但不限於)以重量計0.025%至0.25%)的濃度下使用的所揭示之麝香葡萄萃取物局部具有降低水平的縮合單寧，且亦證實與下列相關之性質：改善的皮膚彈性和皮膚緊緻性、減少黑斑生成、藉由自由基清除來改善的抗氧化活性並保護其免於紫外線-B光，包括增強皮膚修復和增加皮膚細胞存活。因為保留了該褪色萃取物之整體酚的特性譜，故該萃取物的褪色反應 沒有顯著影響該萃取物之皮膚保護性質。

2. 麝香葡萄果漿萃取物抑制蛋白質的糖化作用

高階糖化作用最產物(AGE)為由糖分子附接至細胞的和循環的蛋白質和脂質(受氧化壓力加速的過程)所產生。已在體內偵測到各式各樣的AGE分子，且重要的是，AGE之增加的水平與疾病相關，諸如糖尿病、神經退化、關節炎和慢性發炎病症。再者，大量的證據表明，AGE積累潛在於正常的老化過程，不僅AGE水平會隨著時序年齡增加，而且可延長壽命之干涉方式(諸如，卡路里限制)也會減少AGE水平。於老化期間皮膚中的AGE水平增加，且已認為膠原蛋白和其他皮膚蛋白質之糖化作用造成老化皮膚之改變的外觀和功能。

目前研究指出AEG透過兩種機制造成細胞的老化和功能障礙。第一種為，糖可能會損傷蛋白質，干擾正常功能並降低細胞的活力。第二種為，AGE被認為會透過他們與高階糖化作用終產物之受體(RAGE)的相互作用，引起發炎之惡性的循環；RAGE的活化誘發最終會導致細胞死亡的多種發炎途徑。

已顯示一些(但並非全部)多酚抑制AGE蛋白質的生成。因此，確定是否含有減少單寧水平的褪色局部麝香葡萄萃取物(TME)保留抑制蛋白質糖化作用的能力。因此，將TME的功效與原先/口服麝香葡萄萃取物(OME)的功效進行比較。使用如Farrar等人(BioFactors 30：193-200,2007)所述之標準螢光檢驗之修飾來測量AGE生成。簡言之，將血清白蛋白與果糖於磷酸鹽緩衝液中在37℃下溫育72小時，並測量在370/440激發/發射波長。將各種濃度的麝香葡萄萃取物(標準化至μg多酚/ml緩衝液) 與對照組媒劑進行比較，且以對照組(媒劑)樣品中產生的AGE生成的抑制百分比來表示結果。

如圖12所示，OME和TME兩者皆證實以劑量相關的方式抑制AGE生成之優異的活性(效力)。兩者萃取物在15μg多酚/ml的濃度下，AGE生成的最大抑制達到95-100%。然而，如抑制50%AGE生成所需的濃度(IC₅₀)所示，OME比TME更有效。OME的IC₅₀值為0.65μg多酚/ml，而TME的IC₅₀值為3.94μg多酚/ml。此暗示雖然單寧有助於AGE抑制活性，但是保留在TME中的其他麝香葡萄多酚與OME中所發現者在抑制蛋白質糖化作用上同樣有效。

D. 減少發炎之局部組成物

在此揭示者為，包括有效量的褪色麝香葡萄(圓葉葡萄)果漿溶劑萃取物、β-葡聚醣和葡萄籽萃取物之局部組成物以及其用途。該局部組成物可額外包括以可在施用時減少皮膚發炎之足夠量存在的其他成分，諸如泛醇(panthenol)、維生素C及/或超氧化物歧化酶。例如，該局部組成物也可包括有效量的維生素A、維生素E或維生素A和E。減少發炎可包括減少由皮膚細胞產生的IL-1 α、IL-6、前列腺素E2或其任何組合。

有鑑於發炎(包括UV輻射所致的發炎)對於皮膚的已知影響、許多習知的皮膚產品不足以介入真皮和表皮細胞損傷之機制、以及大眾不願經常性地穿戴足夠保護來阻隔UV光之損害性影響，需要有效的替代產品，其提供保護免於發炎(諸如(但不限於)UV光所造成的發炎)的有害影響。在此揭示之局部組成物達成這些目標，其藉由以消費者可接受的形式來組合數種成分，其同時有效地降低皮膚發炎之多種標記物的產生。

在此所述之褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物(具有降低含量的縮合單寧)可併入至各種局部組成物中。這些局部組成物具有有益於皮膚的多酚特性譜，但因為其較低的縮合單寧含量，該等組成物是相對褪色的。如在此所用的，「低縮合單寧含量」意指以重量計10%或更少的縮合單寧含量。該等組成物包括褪色麝香葡萄果漿萃取物、β葡聚醣和葡萄籽萃取物。

1. 褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物

所揭示之組成物和方法含有相較於未經褪色之麝香葡萄果漿萃取物較低水平之縮合單寧含量的褪色麝香葡萄果漿萃取物。該褪色麝香葡萄果漿前驅物萃取物可如上述章節A和B所揭示者來製備。任何在此揭示之組成物可含有褪色麝香葡萄果漿萃取物，其係經調配以用於投予至皮膚。

在此揭示之用於選擇性地降低縮合單寧的水平之萃取方法，令人意外地且有利地保留或改善其他有益於皮膚之多酚的水平，同時避免高水平之縮合單寧的存在所造成的缺點。製造所述組合的萃取物之方法包括，將青銅色麝香葡萄果漿萃取物與紫色麝香葡萄果漿萃取物組合以產生麝香葡萄果漿萃取物，其中青銅色麝香葡萄果漿萃取物與紫色麝香葡萄果漿萃取物的比例範圍從0.1至10(重量對重量)，諸如0.3至3(重量對重量)。在某些實例中，該褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物係從所述組合的前驅物萃取物來製備。

該組合的前驅物萃取物可由以下方式製造：藉由分別萃取青銅色和紫色麝香葡萄與隨後組合該等萃取物，或藉由同時萃取以所需比例組合的青銅色和紫色麝香葡萄。在所揭示之實例中，該褪色麝香葡萄果漿 溶劑萃取物為前驅物組合的液態麝香葡萄果漿之水性的萃取物。

在一些具體實例中，在前驅物液態萃取物中的青銅色與紫色麝香葡萄果漿萃取物的比例範圍從0.1至10，諸如0.3至3。例如，青銅色麝香葡萄果漿萃取物與紫色麝香葡萄果漿萃取物的比例為約2.75至約1(重量對重量)、2.5至約1(重量對重量)、約2.25至約1(重量對重量)、約2至約1(重量對重量)、約1.5至約1(重量對重量)或約1至約1(重量對重量)。在其他實例中，該比例為約10至約1、約7.5至約1或約5至約1。如在此所使用的，用語「約」係定義為±0.5。在特別實例中，青銅色麝香葡萄果漿萃取物與紫色麝香葡萄果漿萃取物的比例為約2.25至約1(重量對重量)。

在某些具體實例中，組合的前驅物麝香葡萄(圓葉葡萄)果漿液態萃取物具有至少約2%的多酚含量。例如，該多酚含量為至少約3%、至少約3.5%、至少約4%、至少約4.5%、至少約5%、至少約6%、至少約7%、至少約8%、至少約10%、至少約12%或至少約14%。在特別實例中，該組合的前驅物麝香葡萄(圓葉葡萄)果漿液態萃取物具有約4%的多酚含量。

在一些具體實例中，所揭示之組合的前驅物液態麝香葡萄果漿萃取物包括20%至50%固體在液體中，諸如至少25%、至少30%、至少35%、至少37%、至少40%、至少42%、至少44%、至少46%或至少48%。在特別實例中，該組合的前驅物萃取物包括約40%固體在液體中。

在某些具體實例中，該褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物為青銅色和紫色麝香葡萄果漿之液態萃取物的組合。在褪色麝香葡萄果漿溶劑萃 取物的一些具體實例中，青銅色麝香葡萄果漿萃取物與紫色麝香葡萄果漿萃取物的比例範圍從約0.1至約10(重量對重量)，諸如從約0.3至約3(重量對重量)。

在一些實例中，該褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物之酚內容物包括約2-3%土耳其鞣酸和約30-31%沒食子酸，例如：約2-3%土耳其鞣酸、約3-4%土耳其鞣酸醣苷、約30-31%沒食子酸、約2-3%槲皮素、約10-11%沒食子丹寧、約7-8%併沒食子鞣質、約29-30%原花青素、約4-5%花青素、約2-3%兒茶素和約6-7%酚酸。

用於局部組成物之紫色麝香葡萄果漿萃取物可由完整紫色(圓葉葡萄)麝香葡萄之萃取物、來自除了完整葡萄以外的紫色麝香葡萄果漿之萃取物或兩者組成。在具體實例中，褪色麝香葡萄(圓葉葡萄)果漿溶劑萃取物在初壓榨之後獲得，且包含果皮、種籽、果泥和殘餘的果汁。

在某些具體實例中，該褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物可包括以該萃取物的重量計約7%和約10%之間的多酚(諸如約9%至約10%的多酚)以及少於約5%的單醣(諸如少於約4%單醣)。在特別實例中，該褪色麝香葡萄(圓葉葡萄)果漿溶劑萃取物具有以該褪色萃取物的重量計約9%至約10%的多酚含量且含有少於約4%的單醣。

在一些非限制性實例中，縮合單寧少於約10%的該褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物之總多酚含量。在其他非限制性實例中，該褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物中的該褪色麝香葡萄(圓葉葡萄)果漿溶劑萃取物總多酚由至少約85%(諸如至少約90%)除了縮合單寧之外的多酚組成。

褪色麝香葡萄(圓葉葡萄)果漿溶劑萃取物可額外包括來自 葡萄果漿之天然存在的組分。例如，該褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物可含有以該萃取物的重量計約0.5%-5%纖維、約7%-14%蛋白質、約0.5%-3%脂質和約15%-20%有機酸。在某些實例中，該褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物包括約0.5%-2%或約1%-2%纖維、約7%-9%或約7%-8%蛋白質、約0.05%-1%或約0.1%-0.5%脂質和約15%-17%或約15.5-16.5%有機酸，每個百分比以該萃取物的重量計。

2. 其他組分和調配物

β-葡聚醣為天然存在的多醣，其含有β-D-葡萄糖且存在於某些穀類、酵母菌、細菌和真菌之細胞壁中。在一些實例中，β-葡聚醣係從穀類中萃取。在特別實例中，β-葡聚醣係從穀類中萃取，包括常見的燕麥(Avena sativa)。在某些實例中，β-葡聚醣有在約0.5-1.0 x 10⁶Da之間的分子量。β-葡聚醣可為葡萄糖之多醣，且可包含1,4和1,3 β醣苷鍵聯兩者。

咸信β-葡聚醣提供健康益處，包括(但不限於)使皮膚光滑、保濕皮膚、刺激纖維母細胞生長及/或膠原蛋白合成、減少疤痕的變色及刺激免疫防禦。

葡萄籽萃取物係源自完整葡萄籽且含有有益的膳食組分。葡萄籽為釀酒廠和葡萄汁產業之廢棄產物。這些種籽含有纖維、脂質、蛋白質、碳水化合物及一般約4-8%多酚(乾重)，視其品種而定。市售葡萄籽萃取物(包括釀酒葡萄之葡萄籽萃取物)，通常經標準化以提供以乾重百分比計在70-95%之間的多酚。

包括於在此揭示之局部組成物中的葡萄籽萃取物可為釀酒 葡萄之葡萄籽萃取物。在一些實例中，該葡萄籽萃取物有少於70%之總多酚含量，且在一些實例中，該多酚含量少於50%。在特別實例中，該葡萄籽萃取物含有38-50%多酚、9-12%纖維、1-2%蛋白質、25-30%糖和少於1%液體。

在具體實例中，局部組成物包含約0.001%至約1.0%之褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物，諸如約0.01%至約0.5%之褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物或約0.025%至約0.25%之褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物，以基於該局部組成物之總重量的百分比計。在某些實例中，該局部組成物包含約0.0001%至約1.0% β-葡聚醣，諸如約0.0005%至約0.1% β-葡聚醣或約0.005%至約0.05% β-葡聚醣，以基於該局部組成物之總重量的百分比計。在額外的實例中，局部組成物包含約0.00001%至約0.1%葡萄籽萃取物，諸如約0.0001%至約0.05%葡萄籽萃取物或約0.0002%至約0.01%葡萄籽萃取物，以基於該局部組成物之總重量的百分比計。

該局部組成物的具體實例可包含約0.001%至約1.0%之褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物、0.0001%至約1.0% β-葡聚醣和約0.00001%至約0.1%葡萄籽萃取物，以基於該局部組成物之重量的百分比計。例如，該局部組成物可包含約0.01%至約0.5%之褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物、約0.0005%至約0.1% β-葡聚醣和約0.0001%至約0.05%葡萄籽萃取物，以該局部組成物的重量計。在額外的實例中，該局部組成物包含約0.025%至約0.25%之褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物、約0.005%至約0.05% β-葡聚醣和約0.0002%至約0.01%葡萄籽萃取物，以該局部組成物的重量計。

在此揭示之局部組成物也可包括維生素A(視黃醇及其類似 物，諸如棕櫚酸視網酯)及/或維生素E(生育酚及其類似物，諸如乙酸生育酸酯)。在某些實例中，包含褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物、β-葡聚醣和葡萄籽萃取物之局部組成物也可包括有效量之維生素A、維生素E或維生素A和E兩者。在某些揭示的具體實例中，包含褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物、β-葡聚醣和葡萄籽萃取物之局部組成物進一步包括泛醇、維生素C(及其類似物，諸如抗壞血酸磷酸鎂、抗壞血酸棕櫚酸酯等等)和超氧化物歧化酶，其以當施用至皮膚時可減少發炎的足夠量存在。

所揭示之組成物可包括其他成分。在一些具體實例中，該局部組成物包括(以該組成物的重量計)約0.0001%至約0.5%維生素A、約0.00001至約0.1%維生素C、約0.001%至約1.0%維生素E、約0.001%至約1.0%泛醇、約0.00001%至約0.1%超氧化物歧化酶或其任何組合。含有維生素C、A及/或E的局部組成物之非限制性實例中，該維生素C可為抗壞血酸磷酸鎂的形式；該維生素A可為維生素A棕櫚酸酯的形式；且該維生素E可為維生素E醋酸酯的形式。

在某些實例中，包括泛醇、維生素C、A或E、超氧化物歧化酶或泛醇、維生素C、A和E及超氧化物歧化酶之任何組合的組成物，當局部地施用至皮膚時，可減少IL-1 α、IL-6、前列腺素E2或IL-1 α、IL-6和前列腺素E2之任何組合的產生。

包含褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物、β-葡聚醣和葡萄籽萃取物之局部組成物也可含有香水、防腐劑、染料、軟化劑和物理反射物以及為美容上或其他需要存在之任何其他類型的物質。可包括在此揭示之局部組成物的皮膚護理產品之實例包括，膠體油清潔劑、視黃醇血清濃縮物、 日間保濕劑、淨化處理棉墊和臉部活膚霜。

局部組成物可為液體、膠體或半固體的形式。成分類型和量的選擇係依據組成物之性質(即膠體或半固體)且在化妝品化學人員的技術內。例如，將較大量的蠟併入至本發明之半固體組成物中，而非併入至液體組成物中。

只有防曬劑可能不能完全地保護皮膚對抗紫外線輻射的不利影響，因此提出替換的保護模式。已顯示維生素(諸如維生素E醋酸酯)在局部施用後可使得皮膚更柔軟且更光滑，其可抵銷日光的一些損害性影響。已顯示維生素A棕櫚酸酯使得皮膚更光滑且有助於增加細胞更換的過程。此增加藉由將年輕外觀的皮膚細胞帶至表面來去除最外部的死皮層之皮膚。

以在此所述之局部組成物所製造的任何皮膚護理產品可額外包括防曬劑。可在暴曬於紫外線輻射之前或之後將所揭示之局部組成物施用至皮膚。即使沒有預期會暴曬於日光下，每日施用該局部組成物可用於減少老化性皮膚之發炎的影響

E. 減少發炎之方法

局部組成物可包括β-葡聚醣、葡萄籽萃取物或β-葡聚醣和葡萄籽萃取物兩者，以當局部地施用至皮膚時減少發炎的足夠量存在。發炎可由暴曬於UV輻射所產生，包括紫外線B(UVB)輻射。紫外線A(UVA)輻射係來自波長為315和400nm之間的光，而UVB輻射係來自波長為280和315nm之間的光。

UV輻射可以是有益的，在於其使得身體產生維生素D且可 治療某些皮膚病狀。然而，過度暴曬於UV輻射可能造成顯著的皮膚損傷，包括曬傷(紅斑)和起泡(浮腫)。暴曬於中等劑量下的紫外光也可能造成皮膚感覺乾燥和緊繃，且若暴曬於更高劑量會造成脫皮。此等急性(或短期)影響是可以很快察覺的。然而，還有更多不易察覺的細微急性的影響，諸如光-免疫抑制、去氧核糖核酸(DNA)的交聯、曬傷細胞之生成和蘭格漢氏(Langerhans)細胞的損失。甚至可能發生更嚴重的長期影響，諸如皮膚癌和皮膚之早熟老化。

減少發炎之組成物可藉由減少發炎介質(包括細胞介素和前列腺素)的產生來鑑定。在一些實例中，減少發炎包含，相較於對照組細胞中產生之發炎介質的量，減少經在此所述之局部組成物處理的細胞中之發炎介質的產生。例如，被減少的發炎介質可為IL-1 α、IL-6或前列腺素E2或IL-1 α、IL-6和前列腺素E2之任何組合。在某些實例中，對照組細胞未經該局部組成物處理的細胞。或者，對照組細胞為只經載劑、賦形劑或包含非活性成分之另一組成物處理的細胞。

在一些實例中，藉由施用包括有效量的褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物、β-葡聚醣和葡萄籽萃取物之局部組成物，來提供於個體中減少發炎(包括暴曬於UV輻射所造成的發炎)之方法。減少發炎(包括暴曬於UV輻射所造成的發炎)可減輕及/或預防對皮膚之短期和長期兩者的損害影響。令人意外地發現，包含褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物、β-葡聚醣和葡萄籽萃取物之組合的局部組成物可減少真皮細胞之發炎，如實施例2-4之檢驗所測得。

所揭示之褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物，其相較於標準麝香 葡萄果漿萃取物有較低的縮合單寧水平，令人意外地且有利地保留或改善有益於皮膚的處理之其他多酚的水平，同時避免高水平之縮合單寧的存在所造成的缺點。包括有效量之在此揭示的褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物、β-葡聚醣及/或葡萄籽萃取物之局部組成物，當施用至皮膚時能夠減少發炎，如實施例所述之生物檢驗所證實。例示性結果示於圖13-15中。這些生物檢驗已證實藉由該局部組成物減少皮膚發炎的作用模式，如藉由降低人類皮膚模型(MatTek EpiDerm)中發炎介質的產生所證實。

鑒於這些結果，在此揭示之局部組成物(包含褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物、β-葡聚醣和葡萄籽萃取物)可用於藉由減少個體之發炎的方法中，其藉由施用有效量的所揭示之局部組成物至皮膚。所述個體可為健康的或不健康的個體。所述個體可為雌性或雄性個體。該皮膚發炎可為暴曬於紫外線輻射(包括UVB輻射)的結果。

在此揭示的局部組成物(包含褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物、β-葡聚醣和葡萄籽萃取物)也可用於抑制個體之皮膚細胞中發炎介質的產生之方法，其藉由施用有效量的局部組成物至皮膚，以減少發炎介質的產生。在一些實例中，施用局部組成物抑制細胞介素之子集合(諸如IL-1 α和IL-6)的產生以及前列腺素之子集合(諸如前列腺素E2)的產生。在具體實例中，該發炎介質為IL-1 α、IL-6或前列腺素E2。在某些具體實例中，該發炎介質為IL-1 α、IL-6和前列腺素E2之任何組合。

在其他的實例中，所揭示者為在個體的皮膚中抑制由UV輻射誘發之皮膚損傷的方法。這些方法包括局部施用有效量之包含褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物、β-葡聚醣和葡萄籽萃取物的局部組成物至皮膚。在 暴曬於UV輻射後，施用此局部組成物抑制對於皮膚的損傷。該方法可減少發炎介質的產生。在某些實例中，該發炎介質為IL-1 α、IL-6或前列腺素E2。在實例中，該發炎介質為IL-1 α、IL-6和前列腺素E2之任何組合。

前述方法之任一者可用於處理健康的個體，意謂著個體沒有任何致病性皮膚狀況且在處理前僅顯示非致病性皮膚發炎。在某些實例中，該等方法用於處理雌性個體或雄性個體。

III. 實施例

實施例1：MatTek EpiDerm模型利用正常源自人類的表皮角質細胞，其已經培養形成人類表皮之多層的、高分化的模型。超微結構分析已揭示了透明角質體顆粒、張力絲束、細胞間橋體和含有細胞間層狀脂質層的多層角質層之存在，該細胞間層狀脂質層以活體內表皮的譜性特徵排列。成熟表皮特異性分化的標記物(諸如絲聚蛋白原(pro-filaggrin)、K1/K10細胞角蛋白對(cytokeratin pair)、退化素和第I型表皮轉麩醯胺酸酶已定位於此模型中。MatTek EpiDerm亦具有有絲分裂和新陳代謝上的活性。

細胞介素IL-1 α和IL-6係合成並儲存於角質細胞中，且已被鑑定為皮膚刺激和發炎的介質。可經由基於比色的酵素結合免疫吸附分析(ELISA)在組織培養基中直接測量這些細胞介素的釋放。簡言之，共價連接至固體支撐物的抗體將會與任何存在於用過的培養基樣品中之IL-1 α或IL-6結合。與乙醯膽鹼酶酵素共價連接的第二抗體將依序偵測任何經結合的IL-1 α和IL-6。在添加適當的顏色基質後，乙醯膽鹼酶酵素將會產生有色的終產物，該終產物可由分光光度法測量。

同樣地，可經由基於比色的競爭性ELISA在組織培養基中直接測量前列腺素E2之釋放。關於此檢驗，與鹼性磷酸酶酵素結合之PGE2分子和存在於組織培養基中的未標記之PGE2競爭結合至溶液中的抗PGE2抗體。然後，該抗PGE2抗體結合至與固體支撐物連接的第二抗體。添加基質溶液，其使得鹼性磷酸酶酵素連接的PGE2產生可用分光光度法測量之有色的終產物。在此試驗中，隨著回收的鹼性磷酸酶連接之PGE2的量減少，樣品中PGE2的量增加。因此，樣品中PGE2的量與所形成之有色的最終產物的量成反比。

將所揭示之局部組成物之某些具體實例的生物活性與以下作比較：作為正向對照組之非處方的局部用之氫化可體松製劑、以及作為負向對照組之未經任何局部組成物處理的經UVB暴曬的組織(「未經處理」)和未經任何局部組成物處理的未經UVB暴曬的組織(「未經UVB暴曬」)。使用2百分比的DMSO作為成分的混合物之空白對照組，因DMSO係用於幫助溶解成分，且已知DMSO會影響發炎反應。所有檢驗皆重覆做三次。

在該生物檢驗中，將未經UV輻射或局部組成物處理的組織，標示為「未經UVB暴曬」。將經含有1%氫化可體松之非處方的組成物處理的組織，標示為「1%氫化可體松」。將未經局部組成物處理但經UVB輻射暴曬的組織，標示為「未經處理」。將經2%DMSO處理的組織，標示為「2%DMSO」。表5中標示為「TME1」之TME萃取物，其用於「最小TME」組成物，含有0.025%的褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物。表5中標示為「TME2」之TME萃取物，其用於「最大TME」組成物，含有0.25%的褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物。標示為「最小摻合物」和「最大摻合物」之組成物含有 表5所列之成分的量；標示為「最小摻合物+TME1」之組成物含有最小摻合物成分和TME1成分兩者，而標示為「最大摻合物+TME2」之組成物含有最大摻合物成分和TME2成分兩者。

該等摻合物和TME/摻合物之混合物含有表5(如下)所列之成分，所列百分比基於最終組成物的總重量：

實施例2：介白素1 α(IL-1 α)

例示性局部組成物顯示MatTek EpiDerm模型的表皮角質細胞中產生之IL-1 α的量減少，如圖13和以下表6所示。使MatTek全厚度 組織(Full Thickness Tissues)在37±2℃和5±1% CO₂下溫育至少1小時。在這初始的溫育之後，將檢驗培養基置換為0.9mL的新鮮培養基(37±2℃)。為每種測試物質準備三種組織。

該等組織中的發炎反應係經由UV照射(UVB)引發。使用UV燈施加300mJ/cm²劑量的UVB輻射至該等組織。在施用發炎刺激後，立即將50μL(或50mg，固體形式)的測試物質直接施用到該組織表面上。

使用非處方的氫化可體松乳膏作為正向對照組(僅在UVB後處理)。關於「未經處理」之負向對照組，組織係經暴露於發炎性刺激物但未經任何類型的抗發炎物質處理。將另一組的組織留下而沒有使其暴露於發炎性刺激物(「未經UVB暴曬」)以提供用於細胞介素之基線測量。在暴露於發炎性刺激物後，將組織在37±2℃和5±1%CO₂下溫育24小時。在24小時溫育後，收集細胞培養基並儲存於-75℃直到將其用於細胞介素之分析。

藉由在PBS中稀釋適當的捕獲抗體來製備IL-1 α之ELISA盤。接著，將100μL之稀釋的捕獲抗體添加至96孔之ELISA盤的孔中，並將該盤於室溫下溫育至隔夜。於隔日，以300μL洗滌緩衝液(0.05%Tween 20於PBS中)洗滌該盤三次，且隨後藉由添加300μL的阻斷緩衝液(1% BSA於PBS中)至各孔中來進行阻斷。將該盤與阻斷緩衝液溫育至少一小時。在溫育後，移除阻斷緩衝液，並如上所述將該盤洗滌三次。

製備一系列IL-1 α標準品，並將100μL之這些標準品的每一者分配至適當之96孔盤中的兩個孔(一式兩份)中。隨後，將100μL的每個樣品添加至其他孔中，並將該盤在室溫下溫育兩小時。在溫育後， 如上所述將該盤洗滌三次。一旦最後一次洗滌過後，添加100μL之與生物素共軛的檢測抗體。在室溫下溫育該盤兩小時後，如上所述再次洗滌該盤。然後添加100μL的HRP-鏈親和素(streptavidin)至每個孔並將該盤在室溫下溫育20分鐘。一旦最後一次洗滌過後，添加100μL的基質溶液(過氧化氫+作為呈色劑之四甲基聯苯胺)至每個孔。一旦達到足夠顏色發展的水平後，添加50μL的終止溶液(2N硫酸)至每個孔並在460nm下讀取該盤。

該數據(在圖13中以長條圖顯示)表示，相較於2%DMSO之對照組，最小摻合物、TME1組成物(標示為最小TME)、最小摻合物+TME1和最大摻合物組成物以統計學上顯著的方式抑制發炎介質IL-1 α的釋放。此外，相較於未經處理之對照組(「未經處理」)，TME1組成物(標示為最小TME)也以統計學上顯著的方式抑制發炎介質IL-1 α的釋放。

實施例3：前列腺素E2(PGE2)

例示性局部組成物顯示MatTek EpiDerm模型之表皮角質細胞中產生的PGE2的量減少，如圖14和以下表7所示。

製備一系列PGE2標準品，範圍從7.8pg/mL至1000pg/mL。藉由從盤框移除任何不需要的條帶(strip)來準備ELISA盤，記得指定兩個孔各自用於：總活性(TA)孔、非特異性結合(NSB)孔、最大結合(MB)孔和基質空白孔(B0)。將150μL組織培養基添加至NSB孔中，同時將100μL培養基添加至B0孔中。然後將100μL標準品或樣品添加至各別的孔中。向每個使用的孔(除TA和B0之外)添加50μL的PGE2鹼性磷酸酶共軛物。接著，將50μL的PGE2鹼性磷酸酶抗體溶液添加到每個孔(除TA，NSB和SD孔之外)。將該盤覆蓋並於2-8℃下溫育18-24小時。在溫育之後，每個孔用400μL洗滌緩衝液洗滌三次。在最後一次洗滌之後，將5μL的PGE2鹼性磷酸酶共軛物添加到TA孔中，並添加200μL的新鮮愛耳門氏試劑(Ellman’s Reagent)至各孔中。將該盤於室溫下溫育，使用讀板儀定期檢視吸光度讀數(405nm)。

該數據(在圖14中以長條圖顯示)表示，相較於2%DMSO之對照組，最小摻合物和最小摻合物+TME1組成物以統計學上顯著的方式抑制發炎介質前列腺素E2釋放。

實施例4：介白素6(IL-6)

例示性局部組成物顯示MatTek EpiDerm模型之表皮角質細胞中產生的IL-6的量減少，如圖15和以下表8所示。IL-6的測量以與IL-1 α之實施例2所述相同的方式進行，用對應的IL-6特異性試劑來取代IL-1 α特異性試劑。

該數據(在圖15中以長條圖顯示)表示，相較於未經處理相較於2%DMSO之對照組，最小摻合物+TME1、最大摻合物和最大摻合物+TME2組成物以統計學上顯著的方式抑制發炎介質IL-6釋放。此外，TME1和TME2組成物以統計學上顯著的方式抑制發炎介質IL-6的釋放。

總之，所揭示之包含褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物、β-葡 聚醣和葡萄籽萃取物局部組成物於下列濃度下使用時能夠顯著減少某些發炎標記物：分別為以重量計約0.001%至約1.0%、以重量計約0.0001%至約1.0%和以重量計約0.00001%至約0.01%。這些局部組成物具有低水平的縮合單寧，但由於保留其整體酚的特性譜，仍留有該褪色萃取物之皮膚保護性質。

因此，包含褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物、β-葡聚醣和葡萄籽萃取物之局部組成物可減少發炎，包括暴曬於紫外線輻射所造成的發炎，如實施例2(減少表皮細胞之IL-1 α的產生)、實施例3(減少表皮細胞之前列腺素E2的產生)和實施例4(減少表皮細胞之IL-6的產生)之檢驗所測得之發炎的減少。

實施例5：含有褪色麝香葡萄果漿萃取物之其他組成物的活性

包含褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物之組成物展示抗氧化活性，如在以下三種檢驗中對於該等組合物的測試所示：DPPH檢驗、酪胺酸酶抑制檢驗和TT二聚體檢驗。如圖16-18所示，此測試結果指出，經在此揭示的褪色過程之葡萄萃取物保留其有益的生物活性，包括(但不限於)其抗氧化活性，但不含有高水平之單寧，該單寧會將其施用至的皮膚染色。

DPPH檢驗。此檢驗係基於抗氧化劑對於穩定的自由基2,2-二苯基-1-苦味基肼基(DPPH)之清除功效的測量。自由基DPPH在517nm有強吸光度，且當DPPH與抗氧化的化合物反應並轉化為肼時，此吸光度減少。該DPPH檢驗評估抗氧化劑的清除活性，其係因為該自由基化合物是穩定的且不需要如在其他自由基清除檢驗般產生該自由基化合物。

圖16顯示如以Trolox當量所示之測量自由基清除力之DPPH 檢驗的結果；TE值愈高，抗氧化力愈強。以該組成物的重量計0.01%、0.005%和0.001%褪色麝香葡萄果漿萃取物(TME)之組成物顯示劑量依賴性之抗氧化活性，其範圍從約27(濃度為10ug/ml)至約185(濃度為100ug/ml)Trolox當量。

酪胺酸酶抑制。將經純化的酪胺酸酶酵素在含有L-DOPA(L-3,4-二羥基苯丙胺酸)之磷酸鈉緩衝液中與測試物質混合並溫育。在溫育30分鐘後，經由比色檢驗來評估轉變為DOPA鉻之L-DOPA的量(反映酪胺酸酶活性)。使用麴酸作為酪胺酸酶抑制的正向對照組。

圖17顯示，相較於正向對照組的組成物(1%麴酸)，一系列組成物(包括含有不同量的褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物之組成物)之酪胺酸酶活性的抑制百分比。褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物(圖17中的「TME」)的量以總組成物之重量百分比顯示。如圖17指出，含有以重量計1%之TME的組成物顯示酪胺酸酶活性的38.3%抑制。

TT二聚體檢驗。用於此檢驗之測試系統為MatTek EpiDerm，為皮膚模型，其由來自正常人類之表皮角質細胞培養至形成多層的、高度分化模型之人類表皮模型所組成。關於此研究，在UVB暴曬之前，以測試物質局部地處理組織至隔夜。在該等暴曬和處理後，從EpiDerm組織中萃取DNA並使用基於ELISA的方法來檢驗胸腺嘧碇二聚體的含量。

圖18顯示，相較於未經UVB暴曬、未經處理和經含有1mM Trolox之組成物處理之細胞，以一系列組成物(包括含有不同量的褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物之組成物)處理之細胞中的TT二聚體檢驗活性的結果。在UVB暴曬之前，經含有0.25%(以總組成物之重量計)褪色麝香葡 萄果漿溶劑萃取物之組成物前處理來處理的細胞，顯示統計學上顯著減少DNA損傷。該褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物係優於正向對照組(1mM Trolox)；在UVB暴曬後，以含有0.25% TME之組成物進行的處理顯示，減少38%和44%之間的DNA損傷，且以0.1% TME之組成物進行的處理減少至多69%的DNA損傷。

鑒於所揭示之發明的原理可應用至之許多可能的具體實例，應認知到，所說明的具體實例僅為本發明的較佳實例而不應被視作限制本發明的範圍。反之，本發明之範圍係由以下請求項所界定。因此，吾人請求保護在這些請求項之範圍和概念內的所有吾人之發明。

Claims (36)

1. 一種降低前驅物葡萄果漿萃取物中的縮合單寧含量以產生褪色葡萄果漿萃取物之方法，該方法包含：藉由微過濾以移除固體，使前驅物葡萄果漿萃取物澄清；藉由透過約500至約5000kDa的微過濾膜進行超過濾來處理經澄清的萃取物，以獲得第一滲透物和第一滲餘物，其中在第一滲透物中移除風味組分；及藉由透過約25至約100kDa的超過濾膜進行超過濾來處理第一滲餘物，以獲得第二滲透物和第二滲餘物，其中聚合的縮合單寧保留於第二滲餘物中，且第二滲透物相較於第一滲餘物具有增加的多酚水平及降低的糖和縮合單寧水平，藉此產生具有低於該澄清的萃取物之單寧含量的褪色麝香葡萄果漿萃取物，其中所述葡萄視情況為麝香葡萄。
2. 如請求項1之方法，其進一步包含以除臭劑處理該第二滲透物。
3. 如請求項2之方法，其中該除臭劑為活性炭、褐藻酸鈣、膨土或鋁矽酸鹽吸收劑。
4. 如請求項1-3中任一項之方法，其進一步包含使該第二滲透物暴露於氧化鎂以礦化該第二滲透物中的有機酸。
5. 如請求項1-4中任一項之方法，其進一步包含乾燥並研磨該第二滲透物以產生局部組成物，該局部組成物相較於該澄清的萃取物具有降低的單寧含量，同時實質上保留該澄清的萃取物之多酚含量。
6. 如請求項1-5中任一項之方法，其中使該萃取物澄清包含以水稀釋該萃取物以及使該經稀釋的萃取物經微過濾。
7. 如請求項6之方法，其中所述微過濾係透過約200kDa微過濾過濾器來進行。
8. 如請求項1-7中任一項之方法，其中該前驅物葡萄果漿萃取物包含青銅色及/或紫色麝香葡萄果漿萃取物。
9. 如請求項8之方法，其中該前驅物葡萄果漿萃取物包含青銅色和紫色麝香葡萄果漿萃取物的組合。
10. 如請求項9之方法，其中青銅色麝香葡萄果漿萃取物與紫色麝香葡萄果漿萃取物之比例的範圍從a)0.1至10(重量對重量)或b)從0.3至3(重量對重量)。
11. 如請求項9或10中任一項之方法，其中藉由a)分別萃取青銅色和紫色麝香葡萄並隨後組合所得的萃取物；或b)藉由同時萃取以所欲比例組合的青銅色和紫色麝香葡萄，來獲得該前驅物葡萄果漿萃取物。
12. 一種褪色麝香葡萄果漿萃取物，其係藉由如請求項1-11中任一項之方法獲得。
13. 一種青銅色和紫色麝香葡萄果漿之褪色麝香葡萄果漿萃取物，其中該萃取物包含約9%至約10%多酚和少於約4%單醣，且其中縮合單寧少於該褪色麝香葡萄果漿萃取物之總多酚含量的約10%。
14. 如請求項13之褪色麝香葡萄果漿萃取物，其中該萃取物中的總多酚由至少約90%除了縮合單寧之外的多酚組成。
15. 如請求項13之褪色麝香葡萄果漿萃取物，其進一步包含0.5-2%纖維、7-9%蛋白質、0.5-1.5%脂質和15-17%有機酸。
16. 如請求項14之褪色麝香葡萄果漿萃取物，其包含1-2%纖維、7-8%蛋白 質、0.05-0.5%脂質和15.5-16.5%有機酸。
17. 如請求項14之褪色麝香葡萄果漿萃取物，其中a)該萃取物之酚的內容物包含2-3%土耳其鞣酸和30-31%沒食子酸，或b)該萃取物之酚的內容物包含2-3%土耳其鞣酸、3-4%土耳其鞣酸醣苷、30-31%沒食子酸、2-3%槲皮素、10-11%沒食子丹寧(gallotannin)、7-8%併沒食子鞣質(ellagitannin)、29-30%原花青素、4-5%花青素、2-3%兒茶素和6-7%酚酸。
18. 如請求項12-17中任一項之褪色麝香葡萄果漿萃取物，其併入皮膚護理組成物中。
19. 一種如請求項12-18中任一項之褪色麝香葡萄果漿萃取物的用途，其係用於a)皮膚護理；b)抑制皮膚中的彈性蛋白酶、膠原蛋白酶或酪胺酸酶；c)減少DNA損害，增強DNA修復，d)抑制皮膚的蛋白質之糖化作用或增加暴曬於紫外光下之皮膚的細胞存活；或e)作為抗氧化劑。
20. 一種局部組成物，其包含有效量之如請求項12-18中任一項之褪色麝香葡萄果漿萃取物、β-葡聚醣和葡萄籽萃取物。
21. 如請求項20之局部組成物，其係用於當施用至皮膚時減少發炎。
22. 如請求項21之局部組成物，其中減少發炎包含，與對照組細胞相比，減少皮膚細胞中IL-1 α、IL-6或前列腺素E2中至少一者的產生。
23. 如請求項21或請求項22之局部組成物，其中該對照組細胞為未經處理的細胞；其中該對照組細胞為以載劑處理的細胞；或其中該發炎為暴曬於紫外線輻射所造成。
24. 如請求項20-23中任一項之局部組成物，其中該組成物包含a)以該局部組成物的重量計，約0.001%至約1.0%之褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物，以該局部組成物的重量計，約0.0001至約1.0% β-葡聚醣，及以該局部組成物的重量計，約0.00001至約0.1%葡萄籽萃取物；b)以該局部組成物的重量計，約0.01%至約0.5%之褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物，以該局部組成物的重量計，約0.0005至約0.1%之β-葡聚醣，及以該局部組成物的重量計，約0.0001至約0.05%之葡萄籽萃取物；或c)以該局部組成物的重量計，約0.025%至約0.25%之褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物，以該局部組成物的重量計，約0.005至約0.05%之β-葡聚醣，及以該局部組成物的重量計，約0.0002至約0.01%之葡萄籽萃取物。
25. 如請求項20-24中任一項之局部組成物，其中該組成物進一步包含泛醇(panthenol)、維生素C或超氧化物歧化酶中之至少一者，其量足以在局部施用時減少皮膚中IL-1 α、IL-6、前列腺素E2中至少一者或其任何組合的產生。
26. 如請求項20-25中任一項之局部組成物，其中該組成物進一步包含有效量的維生素A、維生素E或兩者。
27. 如請求項25或請求項26之局部組成物，其中該組成物包含：以該局部組成物的重量計，約0.0001%至約0.5%維生素A， 約0.00001至約0.1%維生素C，約0.001%至約1.0%維生素E，約0.001%至約1.0%泛醇，約0.00001%至約0.1%超氧化物歧化酶，或其任何組合。
28. 如請求項20-27中任一項之局部組成物，其中該組成物包含呈抗壞血酸磷酸鎂的形式之維生素C；呈維生素A棕櫚酸酯的形式之維生素A；呈維生素E乙酸酯的形式之維生素E；或其任何組合。
29. 如請求項20-28中任一項之局部組成物，其中該褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物包含青銅色和紫色麝香葡萄果漿萃取物的組合，且其中該褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物中的青銅色麝香葡萄果漿萃取物與紫色麝香葡萄果漿萃取物的比例範圍從約0.1至約10(重量對重量)或從約0.3至約3(重量對重量)。
30. 如請求項20-29中任一項之局部組成物，其中a)該褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物包含約7%至約10%多酚和少於約5%單醣，以該萃取物的重量計，且其中該縮合單寧少於該褪色麝香葡萄果漿萃取物之總多酚含量的約10%；b)該褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物包含約9%至約10%多酚和少於約4%單醣，以該萃取物的重量計；c)該褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物之總多酚由至少約85%除了縮合單寧以外的多酚組成；或d)該褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物之總多酚由至少約90%除了縮合單 寧以外的多酚組成。
31. 如請求項20-30中任一項之局部組成物，其中該褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物進一步包含a)約0.5%-5%纖維、7%-14%蛋白質、0.05%-3%脂質和15-20%有機酸，以該萃取物的重量計；b)約0.5%-2%纖維、7%-9%蛋白質、0.05%-1%脂質和15-17%有機酸，以該萃取物的重量計；或c)約1%-2%纖維、7-8%蛋白質、0.1%-0.5%脂質和15.5-16.5%有機酸，以該萃取物的重量計。
32. 如請求項20-31中任一項之局部組成物，其中該褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物之酚的內容物包含2-3%土耳其鞣酸和30-31%沒食子酸，以該萃取物的重量計；或2-3%土耳其鞣酸、3-4%土耳其鞣酸醣苷、30-31%沒食子酸、2-3%槲皮素、10-11%沒食子丹寧、7-8%併沒食子鞣質、29-30%原花青素、4-5%花青素、2-3%兒茶素和6-7%酚酸，以該萃取物的重量計。
33. 如請求項20-32中任一項之局部組成物，其中該褪色麝香葡萄果漿溶劑萃取物包含完整紫色麝香葡萄之萃取物、來自非完整葡萄的紫色麝香葡萄果漿之萃取物或兩者。
34. 一種如請求項20-33中任一項之局部組成物的用途，其係用於減少皮膚發炎；用於減少皮膚細胞中發炎介質的產生；或用於抑制由紫外線輻射引起的皮膚損傷。
35. 如請求項34的用途，其中該發炎為個體暴曬於紫外線輻射下所造成 的；該發炎介質為IL-1 α、IL-6或前列腺素E2；該皮膚損傷包含發炎介質的產生；或其任何組合。
36. 如請求項34或35中任一項之用途，其中該個體為健康的個體。