WO2010073404A1 - カシューアップルのプロアントシアニジン、プロアントシアニジン含有組成物、およびその用途 - Google Patents

カシューアップルのプロアントシアニジン、プロアントシアニジン含有組成物、およびその用途 Download PDF

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cashew apple
lipase
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永峰賢一
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株式会社ニチレイバイオサイエンス
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    • C07D311/62—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4 with aryl radicals attached in position 2 with oxygen atoms directly attached in position 3, e.g. anthocyanidins
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    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Definitions

  • the present invention provides cashew apple-derived polymer proanthocyanidins, processed cashew apples containing the same, and uses thereof.
  • Cashew nutwood (Anacardium occidentale) is an evergreen tree belonging to the Ursiaceae native to Brazil.
  • the flower pattern is enlarged and a 5-6 cm yellow pear-shaped is called cashew apple.
  • cashew apple There are cases where it is used as raw food or juice.
  • a fruit with a shell covered with a curved, rounded, rounded tamatama.
  • the portion of the seeds in this shell is cashew nuts.
  • Cashew nuts are widely used for food throughout the world.
  • anthocyanidins belong to flavonoids and refer to colored aglycones obtained by hydrolyzing anthocyanins, and are roughly classified into three types, delphinidin type, cyanidin type, and pelargonidin type, depending on the number of hydroxyl groups bonded.
  • Proanthocyanidins refer to components that produce anthocyanidins when heated under acidic conditions, and are a group of compounds formed by condensation or polymerization using condensed tannins, that is, flavan-3-ols or flavan-3,4-diols as constituent units. It is.
  • Proanthocyanidins that produce delphinidin upon heating under acidic conditions are called prodelphinidin
  • proanthocyanidins that produce cyanidin are called procyanidins
  • proanthocyanidins that produce pelargonidin are called propelargonidin.
  • Prodelphinidin is a polymer of gallocatechin, epigallocatechin, gallocatechin gallate, and epigallocatechin gallate
  • procyanidin is a polymer of catechin, epicatechin, catechin gallate, and epicatechin gallate. Yes.
  • Cashew apple is known to contain components such as anacardic acid, but the presence of proanthocyanidins has not been reported.
  • Patent Document 1 Japanese Patent Laid-Open No. 9-291039 discloses an anti-obesity agent containing procyanidins having a polymerization degree of 2 to 80-mer from tamarind seed coat extract as an active ingredient.
  • Patent Document 2 Japanese Patent Laid-Open No. 2006-151944 reports a neutral fat metabolism regulator containing apple-derived polyphenols containing procyanidins. Regarding the lipase inhibitory activity of procyanidins, Non-Patent Document 2 (J. Agric. Food Chem. 2007, 55, 4604-4609) purifies procyanidins derived from apples precisely for each degree of polymerization. Is under consideration.
  • Non-Patent Document 2 the lipase inhibition IC 50 of a 9-mer or higher procyanidin is 0.9 ⁇ g / ml, and the simultaneously measured chlorogenic acid is 59.8 ⁇ g / ml. It is not known about ⁇ -amylase inhibitory activity and lipase inhibitory activity of high molecular prodelphinidin.
  • Patent Document 3 Japanese Patent Application Laid-Open No. 2008-138129
  • Amylase Inhibitor includes ⁇ -amylase containing a polymer of catechins selected from the group consisting of epicatechin, epicatechin gallate, epigallocatechin gallate, and epigallocatechin Inhibitors have been reported. This is a polymer artificially synthesized by an enzymatic reaction, and in the claims, the number average molecular weight is 10,000 or less and the degree of polymerization is 2 to 20.
  • Patent Document 3 Japanese Patent Laid-Open No. 2006-16367 reports the lipase inhibitory activity of prodelphinidin having a plurality of dimer molecular structures.
  • Patent Document 5 Japanese Patent Laid-Open No. 2006-1909 reports a novel compound having lipase inhibitory activity.
  • lipase inhibition IC 50 of epigallocatechin gallate (( ⁇ )-epigallocatechin 3-O-gallate) is 0.284 ⁇ M and 0.349 ⁇ M (0.16 ⁇ g / ml).
  • Non-Patent Document 1 J. Agric. Food Chem, 2003, 51, 7513-7521 describes the results of analyzing the constituents of proanthinidine in a plurality of plants. Those having an average degree of polymerization (mDP) of 50 or more are not described, and those having epigallocatechin gallate as a constituent component are not reported. Further, Non-Patent Document 1 describes that a dianther of (epi) catechin is present in the nuts and the proanthocyanidins of “cashew”, but there is no description of cashew apple.
  • Patent documents relating to grape-derived proanthocyanidins include the following.
  • Patent Document 6 Japanese Patent Application Laid-Open No. 2000-44472 discloses a proanthocyanidin oligomer (2 to 30-mer, preferably 2 to 10-mer) obtained from grape fruit seeds and pericarp as a “preventive or therapeutic agent for diabetic complications”. Has been reported to have an effect of suppressing an increase in blood glucose level and is effective as a therapeutic agent for diabetes. Although there is no report on amylase enzyme inhibitory activity in Patent Document 6, procyanidin B-3 (dimer) and proanthocyanidin (proanthocyanidin oligomer of grape seed extract) reduce blood glucose level in diabetic rats Examples have been reported.
  • Proanthinidine in the grape seed extract is considered to be procyanidin ((epi) catechin polymer) (Non-Patent Document 4 (Cosmetic Society Vol. No. 4 (2003)) and Non-Patent Document 1 ( J. Agric. Food Chem, 2003, 51, 7513-7521)).
  • lipase inhibitors various active ingredients are known as lipase inhibitors.
  • Patent Document 7 Japanese Patent Laid-Open No. 2008-19180 describes the experimental results of comparing the lipase inhibitory activity of Fuyubegonia extract with ibuprofen piconol and tetracycline hydrochloride as positive controls.
  • Patent Document 8 Japanese Patent Laid-Open No. 2005-53891 describes an excellent inhibitory effect on pancreatic lipase or bacterial lipase, and is excellent in safety because it is contained in many plants, and is effective against obesity, acne, dermatitis, etc.
  • the invention which makes it a solution subject to provide the lipase inhibitor which can respond to this is disclosed.
  • caffeic acid caffeic acid or 3,4 dihydroxycinnamic acid
  • gallic acid, and rosmarinic acid are described as effective as lipase inhibitors, and their measured values are also described. ing.
  • Patent Document 9 Japanese Patent Application Laid-Open No. 2004-115466 discloses a skin external preparation for preventing and treating acne containing proanthocyanidins.
  • proanthocyanidins are pine bark, grapes, blueberries, strawberries, avocados, false acacias, cowberry fruits or seeds, barley, wheat, soybeans, black soybeans, cacao, peanut skins, It is derived from ginkgo biloba leaves.
  • lipase inhibitory activity and the results of the minimum growth inhibition test of acne bacteria and the like by the pine bark extract are described.
  • Patent Document 10 (Patent No. 3966689) describes a skin disease ameliorating agent for acne that contains an extract of Iwabenkei and / or Red Scenic Sky belonging to the Benkei family.
  • Patent Document 10 a plurality of plant extracts are examined for lipase inhibitory activity derived from bovine pancreas in Examples. Among them, patent rights have been granted for extracts of Iwabenkei and Hongjing Tian with a lipase inhibitory activity IC50 of 40 ⁇ g / ml.
  • Cashew apple is often discarded when collecting cashew nuts. Effective use of cashew apple is desired.
  • an object of the present invention is to provide a useful application of cashew apple.
  • Another object of the present invention is to provide an active ingredient derived from a natural product and having beneficial activities such as ⁇ -amylase inhibitory activity and lipase inhibitory activity.
  • the present invention provides the following inventions as means for solving the above problems.
  • a composition containing cashew apple-derived proanthocyanidins which is prepared by a method comprising a step of allowing a plant fiber-degrading enzyme to act on strawberries.
  • the above method further includes a step of concentrating the enzyme degradation product obtained in the step of allowing plant fiber-degrading enzyme to act on cashew apple with an ultrafiltration membrane having a molecular weight cut-off of 10,000 or more, (1) A composition according to 1.
  • Proanthocyanidins which are polymers having an average degree of polymerization of 20 or more, containing at least (epi) gallocatechin and (epi) gallocatechin gallate as constituent units.
  • proanthocyanidins according to (7) which contain 50 to 80 mol% (epi) gallocatechin and 20 to 50 mol% (epi) gallocatechin gallate as structural units.
  • a food / beverage composition, a cosmetic composition or a pharmaceutical composition containing the proanthocyanidins according to any one of (7) to (11).
  • An ⁇ -amylase inhibitor comprising the composition according to any one of (1) to (5) as an active ingredient.
  • a prophylactic or therapeutic agent for a condition or disease in which symptoms are prevented or ameliorated by inhibiting ⁇ -amylase activity comprising as an active ingredient the composition according to any one of (1) to (5) .
  • a lipase inhibitor comprising the composition according to any one of (1) to (5) as an active ingredient.
  • a preventive or therapeutic agent for a condition or disease in which symptoms are prevented or ameliorated by inhibiting lipase activity comprising the composition according to any one of (1) to (5) as an active ingredient.
  • a lipid degradation inhibitor containing the composition according to any one of (1) to (5) as an active ingredient is not limited.
  • An ⁇ -amylase inhibitor comprising the proanthocyanidins according to any one of (7) to (11) as an active ingredient.
  • a prophylactic or therapeutic agent for a condition or disease in which symptoms are prevented or ameliorated by inhibiting ⁇ -amylase activity comprising as an active ingredient the proanthocyanidins according to any one of (7) to (11).
  • a lipase inhibitor comprising the proanthocyanidins according to any one of (7) to (11) as an active ingredient.
  • a prophylactic or therapeutic agent for a condition or disease in which symptoms are prevented or ameliorated by inhibiting lipase activity comprising the proanthocyanidins according to any one of (7) to (11) as an active ingredient.
  • a lipid degradation inhibitor comprising the proanthocyanidins according to any one of (7) to (11) as an active ingredient.
  • the present invention can also be described as follows.
  • a method of inhibiting ⁇ -amylase by applying the above-mentioned proanthocyanidin-containing composition or the above-mentioned proanthocyanidin to an in vivo or in vitro ⁇ -amylase-existing environment.
  • proanthocyanidin-containing composition or the above-mentioned proanthocyanidins for use as an ⁇ -amylase inhibitor in In vivo or in vitro.
  • proanthocyanidin-containing composition or the proanthocyanidin for the production of an ⁇ -amylase inhibitor in In ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ vivo or in vitro.
  • a method for preventing or treating a condition or disease in which a symptom is prevented or ameliorated by inhibiting ⁇ -amylase comprising administering the proanthocyanidin-containing composition or the proanthocyanidin to a patient (such as a human).
  • the proanthocyanidin-containing composition or the proanthocyanidin is administered in an effective amount for the prevention or treatment of the condition or disease.
  • a patient is a patient in need of prevention or treatment of the condition or disease.
  • the administration route is preferably oral administration.
  • a method of inhibiting lipase by applying the above-mentioned proanthocyanidin-containing composition or the above-mentioned proanthocyanidin to an in-vivo or in-vitro lipase-existing environment.
  • a method for preventing or treating a condition or disease in which symptoms are prevented or ameliorated by inhibition of lipase comprising administering the above-mentioned proanthocyanidin-containing composition or the above-mentioned proanthocyanidins to a patient (human etc.).
  • the proanthocyanidin-containing composition or the proanthocyanidin is administered in an effective amount for the prevention or treatment of the condition or disease.
  • a patient is a patient in need of prevention or treatment of the condition or disease.
  • the administration route is preferably oral administration or transdermal administration.
  • proanthocyanidin-containing composition or the proanthocyanidin for the manufacture of a medicament for the prevention or treatment of a condition or disease in which symptoms are prevented or ameliorated by lipase inhibition.
  • a lipid degradation inhibitor containing the proanthocyanidin-containing composition or the proanthocyanidin is provided.
  • a method for inhibiting lipid degradation by applying the above-mentioned proanthocyanidin-containing composition or the above-mentioned proanthocyanidin to an in vivo or in vitro lipid-existing environment (skin, lipid-containing composition, etc.).
  • the present invention makes it possible to effectively use cashew apple, which has been often discarded.
  • the present invention also provides active ingredients derived from natural products, which have high safety and useful activities such as ⁇ -amylase inhibitory activity and lipase inhibitory activity.
  • Cashew Apple In the present invention, a yellow pear-shaped portion with an enlarged handle of cashew nut can be used as a cashew apple. The cashew nuts and their shells at the tip of this part are removed before use.
  • “cashew apple” is not only the one that retains the original shape of cashew apple, but also cashew apple physically processed such as crushed cashew apple, puree, fruit juice, juice juice residue Are also included.
  • cashew apple puree is preferred for use in the present invention. Puree is a product obtained by pulverizing a ripe cashew apple from which the shell portion has been removed by pulverization with a pulverizer or a blender.
  • Ripe cashew apple has a very soft pulp and can be easily liquefied.
  • High molecular weight proanthocyanidins may be separated from water-insoluble components such as pectin by the action of plant fiber degrading enzymes such as pectinase on cashew apple. Therefore, when a plant fiber-degrading enzyme is allowed to act, water-insoluble components of cashew apple such as fruit juice residue can be used as “cashew apple”.
  • Proanthocyanidin-containing composition derived from cashew apple
  • “proanthocyanidin-containing composition” or “composition containing proanthocyanidins” means cashew apple (ground product, puree, fruit juice, water-insoluble component (fruit juice juice) A plant fiber-degrading enzyme degradation product containing proanthocyanidins in a state where it can act, and a further treatment such as concentration and purification.
  • the composition which is the cashew apple processed material containing the proanthocyanidins derived from cashew apple prepared by giving.
  • Proanthocyanidins derived from cashew apple contain prodelphinidin as the main component. Typically, in proanthocyanidins derived from cashew apple, 70 to 100 mol% of the structural units are prodelphinidin ((epi) gallocatechin and (epi) gallocatechin gallate).
  • the “plant fiber degrading enzyme” is preferably pectinase, cellulase, hemicellulase, ⁇ -amylase, an enzyme having two or more of these enzyme activities, or a mixture of these enzymes, and pectinase is particularly preferable.
  • Pectinase is known to have a fruit clarification action.
  • a commercially available enzyme preparation can be used as the plant fiber-degrading enzyme.
  • an enzyme preparation marketed as pectinase but also an enzyme preparation marketed as an enzyme having other activities such as cellulase, but can be used as pectinase can be used as pectinase in the present invention. .
  • the treatment conditions for the plant fiber-degrading enzyme may be appropriately determined according to the enzyme preparation used and the enzyme concentration, and are not particularly limited. It is preferable that the enzyme-treated product is subjected to the enzyme treatment so that the solid content can be easily settled by centrifugation or the like or can be easily separated by filtration.
  • the pH condition during the enzyme treatment can be in the range of 3 to 5
  • the temperature condition can be 50 to 60 ° C.
  • the treatment time can be 1 to 24 hours.
  • the plant fiber-degrading enzyme is preferably allowed to act on cashew apple puree or water-insoluble components.
  • Cashew apple puree may be further diluted with a solvent such as water.
  • Embodiments using water-insoluble components such as fruit juice residue are also preferable from the viewpoint of effective use of waste.
  • the enzyme degradation product obtained by the plant fiber degrading enzyme action step can be used as it is for the use of the present invention, but since proanthocyanidins are eluted in the liquid part, normal separation means such as centrifugation and filtration are used. It is preferable to separate and use only the liquid portion or to perform further processing thereafter.
  • the enzyme degradation product obtained by the plant fiber degrading enzyme action step is concentrated by an ultrafiltration membrane (hereinafter sometimes referred to as “ultrafiltration step”), polyphenol concentration or separation treatment (hereinafter “polyphenol separation step”). It is preferable to perform treatment such as concentration or separation treatment of proanthocyanidins (hereinafter sometimes referred to as “proanthocyanidin separation step”).
  • the concentrate obtained by the treatment has high ⁇ -amylase inhibitory activity and lipase inhibitory activity.
  • Ultrafiltration membranes are generally membranes that block particles and polymers in the range of 0.1 ⁇ m to 2 ⁇ m (molecular weight of several hundred to several million).
  • the ultrafiltration membrane used in the present invention is preferably a membrane having a fractional molecular weight capable of removing monosaccharides and disaccharides, preferably a membrane having a nominal fractional molecular weight of 10,000 or more, and 30,000
  • the above film is more preferable, and the film of 50,000 or more is further preferable.
  • a membrane having a nominal molecular weight cut-off of 10,000 to 200,000 or a membrane having 10,000 to 100,000 can be used.
  • the conditions for ultrafiltration are not particularly limited.
  • the constituent material of the ultrafiltration membrane is not particularly limited, and a membrane of a polyether sulfone material or a membrane of a cellulose material can be suitably used.
  • the concentrate by the ultrafiltration membrane can be used as it is, or further concentrated or dried for use in the present invention.
  • a synthetic adsorbent that adsorbs polyphenol is used to concentrate the polyphenol in the enzyme degradation product obtained by the plant fiber degrading enzyme action step or the concentrate after the ultrafiltration step.
  • separate is mentioned.
  • the concentrate after the ultrafiltration step is preferably subjected to polyphenol concentration or separation treatment.
  • Synthetic adsorbents that can be used include insoluble three-dimensional cross-linked polymer having micropores and a resin with a high specific surface area, and the chemical composition of the resin is aromatic (styrene-divinylbenzene). .
  • Specific examples of commercially available products include Diaion® Sepa Beads HP-20 (registered trademark) (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation).
  • polyphenols can be concentrated or separated by using a resin in which octadecyl (C18) or octyl (C8) is introduced as a functional group to bonded silica gel.
  • the procedure of polyphenol concentration or separation treatment using a synthetic adsorbent is not particularly limited.
  • a column packed with a synthetic adsorbent is passed through the enzyme degradation product obtained by the plant fiber degrading enzyme action step or the concentrate after the ultrafiltration step, washed with a washing solution such as water, It can be carried out by eluting polyphenols with an eluent such as acetone or an aqueous alcohol solution.
  • the eluate can be appropriately concentrated or dried.
  • the polyphenol component thus obtained contains proanthocyanidins described later as a crude product.
  • Concentration or separation treatment of proanthocyanidins is performed by using a synthetic adsorbent that adsorbs proanthocyanidins, an enzyme degradation product obtained by a plant fiber degrading enzyme action step, a concentrate after the ultrafiltration step, or a polyphenol separation.
  • separated obtained at the process is mentioned.
  • Synthetic adsorbents that can be used include resins based on hydroxypropylated dextran, in particular with a particle size of 18-111 ⁇ m when dried, a particle size of 27-163 ⁇ m when swollen with methanol, water, What has a stable property to a salt solution, an organic solvent, and a modifier
  • Specific examples of commercially available products include Sephadex® LH-20 resin (manufactured by GE® Helthcare).
  • the procedure for concentrating or separating proanthocyanidins using a synthetic adsorbent is not particularly limited.
  • the enzyme degradation product obtained by the plant fiber degrading enzyme action step, the concentrate after the ultrafiltration step, or the polyphenol concentrate or isolate obtained in the polyphenol separation step It can be carried out by allowing the solution to pass through, washing with a washing solution such as water, and then eluting proanthocyanidins with an elution solution such as acetone or alcohol.
  • the eluate can be appropriately concentrated or dried.
  • proanthocyanidin component thus obtained, proanthocyanidins described later are present in a substantially purified state.
  • the scope of the “composition containing proanthocyanidins” of the present invention also includes proanthocyanidins that exist in such a substantially purified state.
  • the polyphenol concentrate or isolate obtained through the above procedure, or the proanthocyanidin concentrate or isolate can be further fractionated according to the molecular weight using an ultrafiltration membrane.
  • the kind of ultrafiltration membrane used at this time and the conditions for ultrafiltration can be the same as described above.
  • the cashew apple-derived proanthocyanidin-containing composition obtained by the above procedure is a novel composition that does not exist in the past, and has the advantageous features of high ⁇ -amylase inhibitory activity and lipase inhibitory activity.
  • the proanthocyanidin-containing composition of the present invention is preferably a composition prepared by a method comprising a plant fiber-degrading enzyme action step for causing a plant fiber-degrading enzyme to act on cashew apple.
  • the cashew apple used in the plant fiber-degrading enzyme action step preferably contains at least a water-insoluble component such as pectin.
  • the proanthocyanidin-containing composition of the present invention includes the plant fiber degrading enzyme action step and the ultrafiltration step of concentrating the enzyme degradation product obtained in the plant fiber degrading enzyme action step using the ultrafiltration membrane.
  • the proanthocyanidin-containing composition of the present invention includes the plant fiber-degrading enzyme action step and a polyphenol separation step of concentrating or separating polyphenol from the enzyme degradation product obtained in the plant fiber-degrading enzyme action step.
  • the proanthocyanidin-containing composition of the present invention is a polyphenol separation step of concentrating or separating polyphenols from the plant fiber-degrading enzyme action step, the ultrafiltration step, and the concentrate obtained by the ultrafiltration step.
  • a composition prepared by a method comprising:
  • the proanthocyanidin-containing composition of the present invention is more preferably the plant fiber-degrading enzyme action step, and the proanthocyanidin separation step of concentrating or separating proanthocyanidins from the enzyme degradation product obtained in the plant fiber-degrading enzyme action step;
  • a composition prepared by a method comprising:
  • the proanthocyanidin-containing composition of the present invention is more preferably a proanthocyanidin that concentrates or separates proanthocyanidins from the plant fiber-degrading enzyme action step, the ultrafiltration step, and the concentrate obtained by the ultrafiltration step. And a separation step.
  • the proanthocyanidin-containing composition of the present invention is a polyphenol separation step of concentrating or separating polyphenols from the plant fiber-degrading enzyme action step, the ultrafiltration step, and the concentrate obtained by the ultrafiltration step. And a proanthocyanidin separation step of concentrating or separating proanthocyanidins from the polyphenol-containing composition obtained by the polyphenol separation step.
  • the plant fiber-degrading enzyme degradation obtained by the plant fiber-degrading enzyme action step is considered to contain proanthocyanidins in cashew apple in a state where the activity can be exhibited.
  • composition obtained through the ultrafiltration step is considered to contain a high molecular weight component that does not pass through the ultrafiltration membrane in proanthocyanidins at an increased concentration.
  • composition obtained through the polyphenol separation step contains proanthocyanidins together with other polyphenol fractions.
  • the composition corresponds to a crude product of proanthocyanidins.
  • composition obtained through the proanthocyanidin separation step is considered to contain proanthocyanidins at a further increased concentration.
  • the composition corresponds to a purified product of proanthocyanidins.
  • Proanthocyanidins Proanthocyanidins isolated from cashew apple plant fiber-degrading enzyme degradation products prepared by a method comprising the step of allowing plant fiber-degrading enzymes to act on proanthocyanidin cashew apples are novel compounds.
  • the proanthocyanidins have advantageous characteristics of high ⁇ -amylase inhibitory activity and lipase inhibitory activity as shown in the Examples. That is, the present invention also provides a novel proanthocyanidin.
  • the proanthocyanidins of the present invention include gallocatechin or epigallocatechin (referred to herein as “(epi) gallocatechin”), gallocatechin gallate or epigallocatechin gallate (referred to herein as “(epi) gallocatechin gallate”). And a polymer having an average degree of polymerization of 20 or more.
  • the average degree of polymerization is preferably 25 or more, more preferably in the range of 25 to 100, and particularly preferably in the range of 25 to 75.
  • the proanthocyanidins of the present invention preferably further contain epicatechin and epicatechin gallate as structural units.
  • the proanthocyanidins of the present invention preferably contain 50 to 80 mol% of (epi) gallocatechin and 20 to 50 mol% of (epi) gallocatechin gallate as structural units, and 50 to 75 mol% of (epi) gallocatechin, More preferably, it contains 20 to 45 mol% of (epi) gallocatechin gallate, 3 to 10 mol% of epicatechin, and 0.5 to 5 mol% of epicatechin gallate. Since the proanthocyanidins of the present invention contain (epi) gallocatechin and (epi) gallocatechin gallate as main components, they are sometimes referred to as “prodelphinidin” in the present specification.
  • the structural unit (repeating unit) of the proanthocyanidins of the present invention has the formula:
  • proanthocyanidins of the present invention are between the 4-position carbon of the chroman ring of the flavonoid skeleton, which is a structural unit, and other sites in the adjacent structural unit (presumed to be the 8-position or 6-position carbon of the chroman ring). A covalent bond is formed between the two to be polymerized.
  • proanthocyanidins In cashew apple, proanthocyanidins have epigallocatechin gallate as the repeating unit (lower end unit) at the 4-position on the carbon side. That is, the structure of the proanthocyanidins of the present invention is presumed as follows:
  • one of the broken line on the 8th carbon and the broken line on the 6th carbon is a bond linked to the 4th carbon of the adjacent repeating unit, the other is hydrogen, R 1 , and R 2 , and
  • the configuration of the —OR 2 group is as defined above.
  • R 1 is a hydroxyl group
  • R 2 is a gallate group
  • the group is a cis configuration
  • the number n (degree of polymerization) of repeating units is preferably 20 or more, preferably 25 or more, more preferably in the range of 25 to 100, and particularly preferably in the range of 25 to 75.
  • the ratio of the structural units and the average degree of polymerization are determined by reacting proanthocyanidins with benzyl mercaptan under acidic conditions to cause thiol decomposition, and by instrumental analysis such as high performance liquid chromatography (HPLC) or mass spectrometry. It refers to a value calculated based on the type of structural unit contained in the degradation product and the molar concentration of each structural unit, measured by the thiol decomposition method to be analyzed (see Non-Patent Document 3 and Example 5). It is determined that the structural unit that does not form the benzylthioether derivative in the decomposition product is the structural unit that constitutes the lower end unit.
  • HPLC high performance liquid chromatography
  • the proanthocyanidins of the present invention can be prepared from cashew apples by a method comprising the plant fiber degrading enzyme action step, the ultrafiltration step, the polyphenol separation step, and the proanthocyanidin separation step.
  • Cashew apple-derived proanthocyanidins have an ⁇ -amylase inhibitory action. By inhibiting ⁇ -amylase, a rapid increase in blood glucose after a meal can be alleviated. Therefore, cashew apple-derived proanthocyanidins can be used as an active ingredient of a prophylactic or therapeutic agent for a condition or disease in which symptoms are prevented or ameliorated by inhibition of ⁇ -amylase (blood sugar level increase inhibitor, diabetes, obesity, etc.). .
  • ⁇ -amylase blood sugar level increase inhibitor, diabetes, obesity, etc.
  • the ⁇ -amylase inhibitor of the present invention and the prophylactic or therapeutic agent for a condition or disease in which symptoms are prevented or ameliorated by inhibition of ⁇ -amylase may be in any form such as pharmaceuticals, cosmetics, and foods. That is, the present invention provides a food / beverage composition, a cosmetic composition or a pharmaceutical composition having an ⁇ -amylase inhibitory action, or a preventive or therapeutic action for a condition or disease in which symptoms are prevented or ameliorated by the inhibition of ⁇ -amylase. To do.
  • an enzyme degradation product obtained by allowing a plant fiber-degrading enzyme to act on cashew apple puree or a water-insoluble component, or a liquid part thereof, itself has an ⁇ -amylase inhibitory action or an action related thereto, It can be used as a cosmetic composition or a pharmaceutical composition.
  • Cashew apple-derived proanthocyanidins have lipase inhibitory action.
  • Cashew apple-derived proanthocyanidins have an effective inhibitory activity not only on lipases derived from pancreas but also on lipases produced by bacteria compared to known active ingredients and the like. By inhibiting lipase activity, it is possible to prevent or treat obesity and hyperlipidemia by suppressing the absorption of lipids after ingestion of lipids.
  • proanthocyanidins derived from cashew apple are used as prophylactic or therapeutic agents for conditions or diseases in which symptoms are prevented or ameliorated by inhibiting lipase activity such as obesity, hyperlipidemia, acne, etc., or as active ingredients of lipid degradation inhibitors Useful.
  • the lipase inhibitor, lipid degradation inhibitor of the present invention, and the prophylactic or therapeutic agent for a condition or disease in which symptoms are prevented or ameliorated by lipase inhibition may be in any form such as pharmaceuticals, cosmetics, and foods. . That is, the present invention relates to a food / beverage composition, a cosmetic composition or a pharmaceutical composition having a lipase inhibitory action, a lipid degradation inhibitory action, or a condition or disease preventive or therapeutic action in which symptoms are prevented or ameliorated by lipase inhibition. provide.
  • the food / beverage composition, cosmetic composition or pharmaceutical composition containing 0.001% by weight to 10% by weight of proanthocyanidins derived from cashew apple, more preferably 0.01% by weight to 5% by weight, has a lipase inhibitory action or a related action. It is particularly useful as a food / beverage composition, a cosmetic composition or a pharmaceutical composition having an action.
  • the cashew apple-derived proanthocyanidins of the present invention or a cashew apple-treated product containing the same can be used in a food / beverage composition, a cosmetic composition, or a pharmaceutical composition.
  • the form of the food / beverage product composition includes beverages, solid foods, semi-solid foods, etc., and can also be food for specified health use.
  • Specific examples of the beverage include fruit juice beverages, soft drinks, and alcoholic beverages. Further, it may be in a form of being diluted with water or the like when ingested.
  • Examples of solid food include tablets (tablets) and sugar-coated tablets including candy, troches, etc., granules, powdered beverages, powdered soups, powdered blocks, confectionery such as biscuits, capsules, jelly, etc.
  • the semi-solid food include a paste form such as jam and a gum form such as chewing gum.
  • these food and drink compositions are variously used as food ingredients as long as the desired effects of the present invention are not impaired. These components can be blended. Examples of other components include water, alcohols, sweeteners, acidulants, colorants, preservatives, fragrances, and excipients. These components can be used alone or in combination.
  • the amount of cashew apple-derived proanthocyanidins in the food / beverage composition of the present invention is preferably an effective amount that exhibits an ⁇ -amylase inhibitory activity or a lipase inhibitory activity when consumed.
  • cosmetic compositions conventional forms such as cosmetic creams, emulsions, lotions, beauty essences, packs, powders, skin care cosmetics, lip balms, lipsticks, under makeup, foundations, sun cares, bath preparations, body shampoos, It can be used in the form of body lotion, cleaning agent, ointment, jelly agent, aerosol agent and the like.
  • water, oils, surfactants, lubricants are used as long as the desired effects of the present invention are not impaired.
  • the amount of cashew apple-derived proanthocyanidins in the cosmetic composition of the present invention is preferably an effective amount that exhibits an ⁇ -amylase inhibitory activity or a lipase inhibitory activity when used as a cosmetic.
  • the pharmaceutical composition those formulated for various dosage forms can be used.
  • the formulation form is not particularly limited and is appropriately selected as necessary. Generally, tablets, capsules, granules, fine granules, powders, pills, solutions, syrups, suspensions, emulsions, elixirs, etc. Oral, or parenterals such as injections, drops, suppositories, inhalants, transmucosal absorbents, nasal preparations, enteral preparations, and external preparations for skin (for example, transdermal absorption agents, patches, ointments) As an agent, it is used alone or in combination depending on the symptoms.
  • the ⁇ -amylase inhibitor is preferably in the form of an oral preparation
  • the lipase inhibitory activity is preferably in the form of an oral preparation or an external preparation for skin.
  • the above preparation can be prepared by a conventional method using an excipient, a binder, a disintegrant, a surfactant, a lubricant, a fluidity promoter, a corrigent, a colorant, a fragrance and the like.
  • surfactants when formulated as a skin external preparation, surfactants, fats and oils, waxes, hydrocarbons, alcohols, silicone oils, water-soluble polymers, solvents, dyes, pigments, fragrances, antioxidants, Ingredients such as a humectant, vitamins, vitamin derivatives, animal and plant extracts, inorganic salts, pH adjusters, bactericides, and ultraviolet absorbers can be appropriately blended as necessary.
  • the dosage of the preparation is an effective amount that exhibits an ⁇ -amylase inhibitory activity or a lipase inhibitory activity depending on the age, body weight, degree of disease, and administration route of the patient.
  • Example 1 Effectiveness of plant fiber-degrading enzyme treatment (1) Preparation of specimens The ⁇ -amylase inhibitory activity of cashew apple puree juice and fruit juice obtained by pectinase treatment was compared. The untreated fruit juice is prepared by centrifuging the thawed puree at 18000 rpm for 20 minutes at 20 ° C., and filtering the supernatant using a 0.22 ⁇ m filter (Mirex GP, manufactured by Millipore). Untreated fruit juice.
  • pectinase-treated fruit juice 0.5% of puree weight was added to pectinase A “Amano” (manufactured by Amano Enzyme) and mixed gently at 50 ° C. for 90 minutes.
  • This enzyme-treated solution was centrifuged at 18000 rpm for 15 minutes at 20 ° C., the supernatant was filtered using a 0.22 ⁇ m filter (Mirex GP, manufactured by Millipore), and the filtrate was used as a pectinase-treated fruit juice. Since cashew apple puree cannot be sufficiently precipitated by centrifugation alone, it was easily filtered by pectinase treatment.
  • the tea beverage contains guava leaf polyphenol containing a complex tannin-like substance having a molecular weight of 5,000 to 30,000. Carbohydrates that enter the body as food are digested and decomposed by digestive enzymes and become glucose and absorbed from the intestines. Guava leaf polyphenol suppresses the action of saccharide-degrading enzymes that break down sugars such as sucrose and starch into glucose, etc., and as a result, the absorption of sugar into the blood is delayed and the postprandial blood glucose level rises slowly. effective.
  • the tea beverage has been recognized for its efficacy and has been approved as a food for specified health use by the Ministry of Health, Labor and Welfare on March 28, 2000.
  • the enzyme solution and each sample are mixed in the same manner, preincubated for 10 minutes at 37 ° C, then incubated for another 30 minutes, and then 1 ml of 0.1M hydrochloric acid is added to each test tube and mixed. After that, 100 ⁇ l of 0.5% starch / phosphate buffer was added. In addition, the absorbance was measured in the same procedure as in the sample solution test except that purified water that did not inhibit enzyme activity was used instead of each sample (purified water blank).
  • ⁇ -amylase inhibitory activity (%) (1 ⁇ (AB) / (CD)) ⁇ 100
  • the tea beverage (Osshoreicha (registered trademark)) inhibited the ⁇ -amylase activity by 50% at a concentration of 2.5% (diluted 40 times).
  • the IC 50 of the fruit juice treated with cashew apple pectinase was 0.3% (approximately 333-fold diluted solution), but the untreated fruit juice was 5.4% (approximately 18.5-fold diluted solution), and its inhibitory activity was very weak.
  • the tea drink used in this study has been approved as a food for specified health use because it has been shown to be effective in suppressing blood sugar level elevation in humans. Since cashew apple pectinase-treated fruit juice has an ⁇ -amylase inhibitory activity that is 8 times or more stronger in the IC 50 value than the tea beverage, a similar effect can be expected for humans.
  • the cashew apple-derived proanthocyanidins of the present invention can be concentrated with an ultrafiltration membrane having a molecular weight of 10,000. Therefore, this cashew apple pectinase-treated fruit juice is concentrated by ultrafiltration with a molecular weight of 10,000 to obtain fructose, which is a low molecular component. It is also possible to use a concentrated solution from which glucose has been removed.
  • Example 2 Purification of Active Ingredient (Cashew Apple-Derived Polymer Proanthocyanidin) 0.5% (23.9 g) of pectinase A “Amano” was added to 4773 g of cashew apple puree and stirred at 50 ° C. for 2.5 hours. The pectinase-treated solution was centrifuged at 4200 rpm for 60 minutes at 20 ° C., and the supernatant was filtered with a 0.2 ⁇ m filter (SUPORLIFE (registered trademark) DCF, manufactured by PALL) to recover 4230 g of pectinase-treated juice. .
  • SUPORLIFE registered trademark
  • ultrafiltration concentration is performed using an ultrafiltration membrane with a molecular weight cut off of 10,000 (Hydrosart (registered trademark) 10 KDa, manufactured by Sartorius), A concentrated solution (729 g, solid content 26.4 g) was recovered. In addition, ⁇ -amylase inhibitory activity was not detected in the fraction having a molecular weight of 10,000 or less.
  • Diaion Sepabeads HP-20 registered trademark
  • the concentrated solution is passed through the resin packed in the column, the components are adsorbed, the resin is washed thoroughly with purified water, and the components are eluted by elution with a 50% (W / W) aqueous ethanol solution. did.
  • This eluate was dried using a vacuum distillation concentrator. 3.7 g was recovered as a solid content.
  • HP-20 resin purified product The component purified with this HP-20 resin (HP-20 resin purified product) was re-purified with Sephadex LH-20 resin (GE Healthcare), which is often used for separation of proanthocyanidins.
  • the column was filled with 500 ml of resin swollen with 50% (W / W) aqueous methanol solution, HP-20 resin purified product dissolved with 50% (W / W) aqueous methanol solution was passed through the column, and unadsorbed components Was washed with a sufficient amount of 50% (W / W) aqueous methanol solution.
  • As an active ingredient a fraction eluted with 100% methanol was distilled to dryness under reduced pressure, and 226.2 mg was recovered as NBP-M (tentative name).
  • NBP-M and NBP-A are high molecular weight proanthocyanidins.
  • Example 3 Molecular weight of active ingredient and ⁇ -amylase inhibitory activity (1) Molecular weight fractionation of active ingredient
  • NBP-M and NBP-A Molecular weight fractionation treatment was performed using an Amicon Ultra-15 (registered trademark) (manufactured by Millipore), which is a filter.
  • Amicon Ultra-15 registered trademark
  • Millipore manufactured by Millipore
  • NBP-M and NBP-A were dissolved in purified water, loaded onto an ultrafiltration membrane (Ultracel-100K (registered trademark)) with a molecular weight cut off of 100,000, and the solution that passed through it was separated.
  • Ultrafiltration membrane (Ultracel-50K (registered trademark)) with molecular weight cut off 50,000
  • ultrafiltration membrane Ultracel-30K (registered trademark) with a molecular weight cut off of 30,000
  • Fractions were prepared through 10,000 ultrafiltration membranes (Ultracel-10K (registered trademark)), and each fraction was freeze-dried to examine the weight distribution ratio of each molecular weight fraction. As a result, it was found that most of cashew apple-derived polymer proanthocyanidins exist in fractions having a molecular weight cut-off of 50,000 or more.
  • NBP-A acetone-eluted fraction
  • NBP-M methanol elution fraction
  • Example 4 Analysis of molecular structure of active ingredient 1
  • Background Proanthocyanidins mean a group of compounds that are condensed or polymerized by using condensed tannins present in various plant bodies, that is, flavan-3-ols or flavan-3,4-diols as constituent units. . Therefore, proanthocyanidins produce procyanidins that generate cyanidins when heated under acidic conditions (2 of the following formulas, R1 to R3 are hydroxyl groups (OH), 1 is hydrogen (H)), and delphinidin is produced.
  • Prodelphinidin (3 of R1 to R3 in the following formula is hydroxyl group (OH))
  • Propelargonidin that produces pelargonidin (1 of R1 to R3 of formula below is hydroxyl (OH)
  • 2 are hydrogen (H))
  • other polyphenols having different molecular structures Therefore, it is possible to estimate the number of R1-R3 hydroxyl groups and the type of proanthocyanidins by heating in hydrochloric acid / butanol solution and analyzing the types of cyanidins.
  • FIG. 1a shows the analytical results of the reagents delphinidin and cyanidin.
  • the peak at 30.826 min is delphinidin and the peak at 33.088 min is cyanidin.
  • Fig. 1b shows the analysis result of NBP-A. Since the peak at 30.871 min is delphinidin and the peak at 33.145 min is cyanidin, it was found that NBP-A contains prodelphinidin as the main component and some procyanidin.
  • Fig. 1c shows the analysis result of Gravinol (registered trademark) (grape seed).
  • the peak at 33.140 min is cyanidin. This result is consistent with the fact that Gravinol® is procyanidin.
  • the following table shows the delphinidin concentration, cyanidin concentration and production ratio produced under the acidic conditions of each specimen.
  • Example 5 Analysis of molecular structure of active ingredient 2
  • Proanthocyanidins with a high degree of polymerization in which 6 or more flavan-3-ols are bonded cannot be analyzed by high-precision MS analysis or NMR analysis because of their complex structure. Therefore, as a method for analyzing the structure of proanthocyanidins, benzyl mercaptan under acidic conditions:
  • a method is used in which thiol is decomposed by reacting with thiol and the decomposition product is analyzed.
  • a schematic diagram of the decomposition reaction is shown below.
  • the lower end unit (Lower unit) of condensed tannin is released as it is (Catechin, Epicatechin: partly epimerized), and other than the lower unit is derivatized as benzylthioether.
  • benzylthioether derivative By analyzing the structure of the obtained benzylthioether derivative, it is possible to analyze the constituent unit of condensed tannin.
  • Non-Patent Document 3 shows an example in which proanthocyanidins such as blueberries are subjected to thiol decomposition and analyzed by HPLC.
  • cocoa one kind of acne (brown sorghum bran), one kind of wild bullberry (lowbush blueberry) and cranberry proanthinidine thiol degradation products are epicatechin benzyl as benzylthioether derivatives It has been reported that only thioethers could be detected.
  • This document also describes a method for calculating the average degree of polymerization of catechin and epicatechin polymers (mean DP). HPLC analysis at 280 nm is performed, and the average degree of polymerization is calculated from the area of each peak.
  • mDP ⁇ total area of catechin benzyl thioether and epicatechin benzyl thioether ⁇ / ⁇ total area of catechin and epicatechin ⁇ +1
  • HPLC analysis of thiol decomposition product of cashew apple-derived polymer proanthocyanidin The thiol decomposition was performed on the NBP-M and NBP-A fractions obtained in Example 3, and the difference in constituent components was examined.
  • the thiol degradation product of cashew apple-derived polymer proanthocyanidin is mainly composed of 5 components (36 min peak, 38 min peak, 24 min peak, 40 min peak, 41 min in the chromatogram in Fig. 2). And the components corresponding to the 36 minute peak and the 38 minute peak were found to be the main components.
  • the peak at 36 minutes and the peak at 38 minutes may correspond to components that are not included in procyanidin C1 (epicatechin trimer) or gravinol (registered trademark) thiol degradation products. found.
  • the peak at 24 minutes corresponds to epigallocatechin gallate
  • the peak at 40 minutes corresponds to the benzylthioether derivative of epicatechin
  • the peak at 41 minutes corresponds to the benzylthioether derivative of epicatechin gallate.
  • Peak 1 component is a benzylthioether derivative of (epi) gallocatechin.
  • NBP thiol-degraded purified product Peak 2 has pseudo molecular ion peaks at m / z 581 [(M + H) + ] and m / z 603 [(M + Na) + ] by ESI (+)-MS. Observed. From the data of ESI (+)-MS, 1 H NMR, and 13 C NMR, it was inferred that the molecular composition was C 29 H 25 O 11 S (Table 10). Compared with NBP thiol-degraded purified product Peak 1, both NMR spectra are similar.
  • Peak 2 component is a benzylthioether derivative of (epi) gallocatechin gallate.
  • the 10K fraction of NBP-A prepared in Example 3 was decomposed by the thiol decomposition method performed in (1) above, and the solution was used as an analysis sample, and the following analysis was performed.
  • the element composition was calculated from the precise m / z value of the MS detection peak shown in Table 14.
  • the peak at 24 minutes in FIG. 2 is the peak at 26 minutes in LC-MS (1)
  • the peak at 40 minutes in FIG. 2 is the peak at 42 minutes in LC-MS (2)
  • the peak at 41 minutes in FIG. 2 corresponds to the peak at 43 minutes (3) in LC-MS.
  • cashew apple-derived prodelphinidin is a condensate comprising (epi) gallocatechin, (epi) gallocatechin gallate, epicatechin, epicatechin gallate, and epigallocatechin gallate as a constituent, and the lower end unit being epigallocatechin gallate It is estimated that.
  • the lower end unit was epigallocatechin gallate because the component not derivatized with benzylthioether in the thiol decomposition product was only epigallocatechin gallate.
  • Example 6 Degree of polymerization of cashew apple-derived polymer proanthocyanidins
  • the components and lower end units constituting the cashew apple-derived polymer proanthocyanidins were estimated.
  • the degree of polymerization is estimated.
  • Non-Patent Document 1 J. Agric. Food.Chem, 2003, 51, 7513-7521
  • This is a method for calculating the degree of polymerization based on the area ratio of the catechins at the lower end unit and the catechins of other catechins by the HPLC analysis (detection wavelength 280 nm) of the thiol-decomposed product performed in Example 5.
  • the content ratio is a molar concentration ratio.
  • This proanthocyanidin is one in which the lower end unit is epigallocatechin gallate and the component described as a derivative is polymerized.
  • the average degree of polymerization was 25-73 mer, and it was found that the main component (epi) gallocatechin was 58.5-61.6% and (epi) gallocatechin gallate was 28.5-30.4%. Since such a natural product-derived polymer proanthocyanidin has not been reported, it is considered to be a polymer proanthocyanidin unique to cashew apple.
  • Example 7 Comparison of activities of cashew apple-derived polymer proanthocyanidins and other ⁇ -amylase inhibitory components Cashew apple-derived polymer proanthocyanidins, other ⁇ -amylase inhibitory active components, and Gravinol (registered trademark) (derived from grape seeds) IC 50 (final sample concentration) of ⁇ -amylase inhibitory activity was measured for proanthocyanidins), and the activity was compared. Measurement was performed in the same manner as in Example 1 (2), and all samples were measured on the same day.
  • C18-bonded polyphenol component derived from ⁇ refreshing tea 500 g of guava leaf polyphenol-containing tea beverage ( ⁇ ⁇ refreshing tea (registered trademark) (manufactured by Yakult)) is loaded onto C18 Cartriges (Sep-Pak Vac 35cc, manufactured by Waters)
  • the unadsorbed components are washed with sufficient purified water.
  • the component bound to the C18 resin was eluted with methanol and evaporated to dryness under reduced pressure to recover 363 mg of C18-bound polyphenol derived from Bokuryocha (registered trademark) (Banryocha PP).
  • a solution obtained by preparing this 0.2% fresh and refreshing tea PP aqueous solution and filtering with a 0.22 ⁇ m filter (Mirex GP, manufactured by Millipore) was used as a specimen.
  • Acarbose is used as a blood glucose level increase inhibitor (pharmaceutical) having a glucosidase inhibitory action. Moreover, since it has an ⁇ -amylase inhibitory activity, it was used as a comparative product. In the experiment, a 0.4% aqueous solution of acarbose reagent (LKT Laboratories, Inc.) was prepared, and a solution filtered through a 0.22 ⁇ m filter (Mirex GP, manufactured by Millipore) was used as a specimen.
  • Cashew apple-derived polymer proanthocyanidins Prepare a 0.12% aqueous solution of the ultrafiltration 100K fraction of cashew apple-derived NBP-A prepared in Example 3 and prepare a 0.22 ⁇ m filter (Mirex GP, manufactured by Millipore) The solution filtered through was used as a specimen.
  • cashew apple-derived polymer proanthocyanidins have strong ⁇ -amylase inhibitory activity.
  • This cashew apple-derived polymer proanthocyanidins is 33 times more active than Oshoshocha PP.
  • certain refreshing effects are recognized by taking 70 mg or more (guava leaf polyphenol equivalent) for each meal, and that it has been approved as a food for specified health use by the Japanese Ministry of Health, Labor and Welfare.
  • Ingestion of cashew apple-derived high molecular weight proanthocyanidins at a dose of 2.2 mg or more for each meal may achieve the same effect of suppressing an increase in blood glucose level.
  • a beverage composition having an ⁇ -amylase inhibitory activity can be provided by containing only 0.0001% or more of cashew apple-derived polymer proanthocyanidins in 220 g of purified water.
  • it can be expected that there is little influence on the flavor and the like of the blended processed food and beverage.
  • the cashew apple-derived high molecular weight proanthocyanidin of the present invention mainly composed of prodelphinidin has higher ⁇ -amylase inhibitory activity than the procyanidin, Gravinol (registered trademark). It was. From this, it can be concluded that high molecular weight proanthocyanidins containing a prodelphinidin component have higher ⁇ -amylase inhibitory activity than procyanidins.
  • Example 8 Comparison of the activities of cashew apple-derived polymer proanthocyanidins and other lipase inhibitory components It is known that it is also effective to suppress lipid absorption in order to suppress obesity, and many lipase activities Inhibitory ingredients are being researched and developed.
  • the trade name “Black Oolong Tea” (manufactured by Suntory), which is a tea beverage, is formulated by the Japanese Ministry of Health, Labor and Welfare based on the effect that the Oolong tea polyphenol is blended and the action of the Oolong tea polyphenol inhibits lipase and suppresses lipid absorption. It is approved as a health food.
  • the IC 50 (final sample concentration) of lipase activity inhibition was measured for cashew apple-derived polymer proanthocyanidins, the components of the tea beverage, and other lipase activity inhibiting components, and the inhibitory activity was compared. .
  • Non-Patent Document 2 J. Agric. Food Chem. 2007, 55, 4604-4609
  • the sample solution was added to a 96-well plate for fluorescence measurement at 25 ⁇ l / well.
  • 25 ⁇ l / well of lipase enzyme solution Lipase from porcine pancreas Type II, manufactured by SIGMA
  • PBS ( ⁇ ) was added to the blind test group at 25 ⁇ l / well.
  • a 0.1 mM fluorescent substrate solution (4-methylumbelliferyl oleate, manufactured by Fluka) prepared with PBS (-) was added thereto and reacted for 20 minutes.
  • Lipase inhibitory activity (%) (1 ⁇ (A ⁇ B) / (C ⁇ D)) ⁇ 100
  • the enzyme inhibitory activity of each sample solution was measured at a plurality of concentrations, and the concentration at which lipase enzyme was inhibited by 50% (IC 50 ) was calculated.
  • C18-bonded polyphenol component derived from black oolong tea 500 g of black oolong tea (Suntory), a commercially available tea drink, is loaded onto C18 Cartriges (Sep-Pak Vac 35cc, Waters), and unadsorbed components are washed with sufficient purified water. did.
  • the component bound to the C18 resin was eluted with methanol and dried under reduced pressure to recover 442.9 mg of black oolong tea-derived C18-bound polyphenol (black oolong tea PP).
  • Chlorogenic acid Prepare a 1.0% aqueous solution of chlorogenic acid (MP Biomedicals, Ins.) described in Non-Patent Document 2 describing the lipase measurement method, and use a 0.22 ⁇ m filter (Mirex GP, manufactured by Millipore). The filtered solution was used as a specimen.
  • Cashew apple-derived polymer proanthocyanidins Prepare a 0.2% aqueous solution of 100K or higher fraction of cashew apple-derived NBP-A prepared in Example 3 and filter 0.22 ⁇ m (Mirex GP, manufactured by Millipore) The solution filtered through was used as a specimen.
  • the IC 50 of the cashew apple-derived polymer proanthocyanidins was 0.5 ⁇ g / ml, and the chlorogenic acid measured simultaneously was 77.5 ⁇ g / ml.
  • the lipase inhibition IC 50 of a 9-mer or higher procyanidin is 0.9 ⁇ g / ml, and the simultaneously measured chlorogenic acid is 59.8 ⁇ g / ml. From these facts, it is considered that the activity of the polymer proanthocyanidins containing a prodelphinidin component is sufficiently stronger than procyanidins which are catechin and epicatechin polymers.
  • the cashew apple-derived polymer proanthocyanidin of the present invention which has prodelphinidin as a main component, has a higher lipase inhibitory activity compared to the procyanidin, Gravinol (registered trademark). It was. From this, it can be said that the high molecular weight proanthocyanidins containing a prodelphinidin component have higher lipase inhibitory activity than procyanidins.
  • the cashew apple-derived polymer proanthocyanidins have a very strong lipase inhibitory activity. Since black oolong tea PP does not dissolve sufficiently in purified water, it may cause insoluble precipitation in aqueous solution. Since the cashew apple-derived polymer proanthocyanidins showed a value smaller than the literature value, it can be said to have a very strong lipase inhibitory activity.
  • the intake of black oolong tea as a food for specified health use is 70 mg. From this measurement result, the cashew apple-derived polymer proanthocyanidins showing the same activity is 7.5 mg. That is, it is expected that a food / beverage composition having a lipase inhibitory action is provided by containing only 0.0075% or more of cashew apple-derived polymer proanthocyanidin in 100 g of processed food or beverage.
  • Example 9 Measurement of Bacterial Lipase Inhibitory Activity
  • Bacterial lipase is present in the skin surface layer, Propionibacterium acnes (commonly known as Acne), Micrococcus sp., Pseudomonas It is known that bacteria such as bacterium (Pseudomonas sp.) Are produced.
  • Propionibacterium acnes commonly known as Acne
  • Micrococcus sp. Micrococcus sp.
  • Pseudomonas Pseudomonas It is known that bacteria such as bacterium (Pseudomonas sp.) Are produced.
  • acne bacteria research has been conducted on the increase in the number of bacteria and the induction of skin inflammatory reactions by free fatty acids produced by the lipase, and it is also known that lipase inhibitors are effective against them. .
  • a commercially available lipase derived from Pseudomonas sp. was used.
  • Pseudomonas is a genus of gram-negative and aerobic true bacteria.
  • P. ⁇ aeruginosa is well known.
  • Sigma Aldrich Japan's Lipase from Pseudomonas sp. (Type XIII, ⁇ 15units / solid, L9518) was used. This lipase is a very powerful enzyme.
  • ⁇ Test substance for inhibition of bacterial lipase activity product of the present invention>
  • Freeze-dried product of 10K ultrafiltration membrane concentrate derived from cashew apple puree of the present invention From 4773 g of cashew apple puree ultrafiltration membrane having a molecular weight of 10,000 according to the procedure described in Example 2 (Hydrazalt®) 10 KDa (manufactured by Sartorius) and ultrafiltration concentration treatment was performed, and the concentrate was freeze-dried to obtain 26.4 g of powder.
  • NBP-M aqueous solution Cashew apple-derived polymer proanthocyanidins of the present invention
  • Example 2 Cashew apple-derived polymer proanthocyanidins of the present invention (NBP-A aqueous solution)
  • the LH-20 resin column fractionation treatment was carried out and eluted with a 70% aqueous acetone solution.
  • the lyophilized products of the four fractions fractionated by the ultrafiltration membrane in the procedure of Example 3 were each 0.1%.
  • a solution prepared by mixing the aqueous solution prepared at a weight ratio of each fraction was used as an NBP-A aqueous solution.
  • Tetracycline hydrochloride manufactured by Wako Pure Chemical Industries, for biochemistry, purity 90% or more, 205-08591
  • It is an antibiotic belonging to the tetracycline family. Inhibits microbial protein synthesis and exhibits a broad antibacterial spectrum.
  • Tetracycline antibiotics are widely used as internal and external preparations based on lipase inhibitory activity.
  • Patent Document 7 Japanese Patent Laid-Open No. 2008-19180
  • Gallic acid (gallic acid monohydrate, Wako Pure Chemical Industries, Wako First Grade) Described as a bacterial lipase inhibitory active ingredient in Patent Document 8 (Japanese Patent Laid-Open No. 2005-53891).
  • Non-patent document 2 J. Agric. Food Chem. 2007, 55, 4604-4609 described as a pancreatic lipase inhibitory active ingredient.
  • (9) (-)-Epigallocatechin gallate (epigallocatechin gallate, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, for biochemistry, purity 90% or more) It has been reported as a pancreatic lipase inhibitory active ingredient. Further, it is highly likely that the polymer is a part of the main constituents of the polymer proanthocyanidins of the present invention.
  • ⁇ Lipase inhibitory activity test method> The measurement was performed according to Non-Patent Document 2 (J. Agric. Food Chem. 2007, 55, 4604-4609). Add the sample diluted solution and blank solution (sample diluted solution) at 25 ⁇ l / well to a 96-well plate for fluorescence measurement. To this test group, a lipase enzyme solution (Lipase from Pseudomonas sp. TypeXIII, manufactured by SIGMA) prepared in PBS ( ⁇ ) is added at 25 ⁇ l / well, and PBS ( ⁇ ) is added at 25 ⁇ l / well in the blind group.
  • a lipase enzyme solution Lipase from Pseudomonas sp. TypeXIII, manufactured by SIGMA
  • the lipase inhibition rate was calculated from the following formula.
  • the 3,4 dihydroxycinnamic acid and gallic acid were dissolved in a 10% methanol aqueous solution, and the blank solvent was also measured with a methanol aqueous solution having the same concentration.
  • Lipase inhibitory activity (%) (1 ⁇ (A ⁇ B) / (C ⁇ D)) ⁇ 100
  • the enzyme inhibitory activity of each sample solution was measured at multiple concentrations and the concentration (IC 50 ) was calculated.
  • NBP-M and NBP-A aqueous solutions have very strong inhibitory activity against bacterial lipase.
  • 10K ultrafiltration concentrate also has stronger inhibitory activity than tetracycline hydrochloride and 3,4 dihydroxycinnamic acid, so even the crude purified product containing the polymer proanthocyanidins of the present invention works well. Turned out to be promising.
  • Example 10 Bacterial lipase inhibitory activity of ultrafiltered fraction of high molecular weight proanthocyanidins derived from cashew apple Molecular weight and bacterial lipase inhibitory activity using the powder that was ultrafiltered and freeze-dried in Example 3 was examined. The lipase inhibitory activity test was carried out by the method of Example 9. The results are shown in the following table.
  • the bacterial lipase inhibitory activity tends to increase as the molecular weight of the cashew apple-derived polymer proanthocyanidins increases. From this, it can be considered that the treatment with an ultrafiltration membrane having a molecular weight larger than 10,000 increases the bacterial lipase inhibitory activity of the crude product.
  • the type of ultrafiltration membrane can be selected from the viewpoint of the strength of lipase inhibitory activity required for the final product and the production efficiency.
  • the ultrafiltration membrane treatment is not essential in the product of the present invention, and it is the most important factor as a lipase inhibitor to contain a sufficient amount of cashew apple-derived polymer proanthocyanidins.
  • Step 7 Japanese Patent Laid-Open No. 2008-19180
  • a lipase inhibitor 5% of ibuprofen piconol described in Patent Document 7 (Japanese Patent Laid-Open No. 2008-19180) is incorporated as a lipase inhibitor.
  • an effect can be expected with a content of 5% or less even with a roughly purified product of the 10K ultrafiltration concentrate of the present invention.
  • purified 100K NBP-A contains 0.05% or more, a sufficient effect can be expected.
  • 100K NBP-A can be said to have a lipase inhibitory activity 100 times or more that of tetracycline hydrochloride having a lipase inhibitory activity equivalent to that of ibuprofenpiconol when compared with the IC 50 of the lipase inhibitory activity. Therefore, a composition containing 0.001% to 10%, desirably 0.01% to 5%, of the cashew apple-derived polymer proanthocyanidin, which is the product of the present invention, can be expected to be effective as a lipase inhibitory composition.
  • Elimination rate (%) (1-[absorbance of sample] / [absorbance of control]) x 100
  • the above-mentioned erasure rate was measured by changing the sample concentration of the sample solution stepwise, and the concentration of the sample solution at which the DPPH radical erasure rate was 50% was determined to obtain the DPPH radical 50% erasure concentration. Therefore, the lower this value, the higher the radical scavenging ability.
  • the table below shows the samples used in the test and the measurement results.
  • Sample to be measured ⁇ Invention product: the same sample as prepared in Example 9> (1) Freeze-dried product of 10K ultrafiltration membrane concentrate derived from cashew apple puree of the present invention (10K ultrafiltration concentrate) (2) Freeze-dried powder product of purified product of cashew apple-derived HP-20 resin of the present invention (HP-20 resin purified product) (3) Cashew apple-derived polymer proanthocyanidins of the present invention (NBP-M aqueous solution) (4) Cashew apple-derived polymer proanthocyanidins of the present invention (NBP-A aqueous solution) ⁇ Comparative product: same as reagent used in Example 9> (5) 3,4 dihydroxycinnamic acid (caffeic acid, caffeic acid: Wako Pure Chemical Industries, Wako first grade, purity 98% or more): used in experiments after dissolving in ethanol (6) Gallic acid (gallic acid monohydrate, Wako Pure Chemical Industries, Wako First Grade): used in experiments after dissolving in
  • NBP-M aqueous solution and (4) NBP-A aqueous solution which are purified products of the present invention, have sufficient antioxidant properties equivalent to ascorbic acid, an antioxidant component. found.
  • the 10K ultrafiltration concentrate and the purified product of HP-20 resin, which are crude purified products also have antioxidant properties. According to these results, lipase inhibitory activity and radical scavenging activity are not correlated.
  • the product of the present invention independently has a lipase inhibiting ability and an antioxidant ability.
  • Example 11 Examination of various pectinase treatments and amylase inhibitory activity (1) Experimental purpose In the above examples, pectinase A “Amano” (Amano Enzyme) is used as pectinase. In this example, it is confirmed that the processed cashew apple puree having the above activity can be obtained even when other pectinase products (pectinase G “Amano” and pectinase PL “Amano” manufactured by the same company) are used.
  • FIG. 19 shows the measurement results of ⁇ -amylase inhibitory activity.
  • Amylase inhibitory activity was confirmed in all enzyme treatment solutions.
  • Pectinase A “Amano” contains 45% pectinase, 25% ⁇ -amylase, and 30% diatomaceous earth.
  • Pectinase G “Amano” contains 90% pectinase and 10% diatomaceous earth.
  • Pectinase PL “Amano” is mainly composed of 70% pectinase, but has pectinase activity and fiber digestibility.
  • the processed cashew apple puree of the present invention was obtained by using any of these three pectinase preparations having different compositions. Therefore, any pectinase enzyme for food industry having pectinase activity can be used without any problem.
  • Example 12 Purpose The purpose of this test is to confirm ⁇ -amylase inhibitory activity when cashew apple puree and centrifuge residue are used as raw materials.
  • amylase inhibitory activity was confirmed in the puree centrifugal precipitate and the puree pectinase-treated filter filtrate.
  • Formulation Example 1 a composition shown in Table 23 for a lotion formulated with a 10K ultrafiltration concentrate derived from the cashew apple of the present invention containing the lotion polymer proanthocyanidins (prepared in Example 9 (1)) and It is possible to adjust by the manufacturing method.
  • Formulation Example 3 A cream containing 10K ultrafiltration concentrate (prepared in Example 9 (1)) derived from cashew apple of the present invention containing cream polymer proanthocyanidins according to the composition and production method shown in Table 25 It is possible to adjust.

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Abstract

　本発明は、カシューアップルの有用な用途を提供することを目的とする。本発明はまた、天然物に由来する、α－アミラーゼ阻害活性やリパーゼ阻害活性等の有益な活性を有する活性成分を提供することを目的とする。 　本発明は、シューアップルにペクチナーゼ等の植物繊維分解酵素を作用させる工程を含む方法により調製される、α－アミラーゼ阻害活性、およびリパーゼ阻害活性が優れた、カシューアップル由来プロアントシアニジンを含有する組成物を提供する。本発明はまた、新規な構造を有するプロアントシアニジン化合物を提供する。

Description

カシューアップルのプロアントシアニジン、プロアントシアニジン含有組成物、およびその用途
　本発明は、カシューアップル由来の高分子プロアントシアニジンおよびそれを含有するカシューアップル処理物、ならびにその用途を提供する。
　カシューナットノキ(Anacardium occidentale)は、ブラジル原産のウルシ科に属する常緑高木であり、花の柄が肥大し、5～6cmの黄色い洋ナシ型になったものがカシューアップルと呼ばれ、リンゴに似た芳香があり、生食やジュースなどで食用とされることがある。この肥大した柄の先端に2～3cm、湾曲したマガタマ状の、殻に被われた果実が実る。この殻の中に入っている仁の部分がカシューナッツである。カシューナッツは世界中で広く食用に用いられている。
　一方、アントシアニジンとはフラボノイドに属し、アントシアニンを加水分解して得られる着色したアグリコンを指し、水酸基の結合数に応じてデルフィニジン型、シアニジン型、ペラルゴニジン型の三種類に大別される。そしてプロアントシアニジンとは、酸性条件において加熱することによりアントシアニジンを生じる成分を指し、縮合型タンニン、すなわちフラバン-3-オールまたはフラバン-3，4-ジオールを構成単位として縮合もしくは重合により結合した化合物群である。酸性条件での加熱によりデルフィニジンを生じるプロアントシアニジンをプロデルフィニジン、シアニジンを生じるプロアントシアニジンをプロシアニジン、ペラルゴニジンを生じるプロアントシアニジンをプロペラルゴニジンと称する。プロデルフィニジンとしてはガロカテキン、エピガロカテキン、ガロカテキンガレート、およびエピガロカテキンガレートの重合体が知られており、プロシアニジンとしてはカテキン、エピカテキン、カテキンガレート、およびエピカテキンガレートの重合体が知られている。
　カシューアップル中にはアナカルド酸等の成分が含まれていることが知られているが、プロアントシアニジンの存在は報告されていない。
　特許文献1（特開平9-291039）には、タマリンド種皮抽出物から2～80量体の重合度のプロシアニジンを有効成分とする抗肥満剤が開示されている。また、特許文献2（特開2006-151944）では、プロシアニジン類を含むリンゴ由来ポリフェノールを含有する中性脂肪代謝制御剤が報告されている。このプロシアニジンのリパーゼ阻害活性については、非特許文献2（J. Agric. Food Chem. 2007, 55, 4604-4609）に、リンゴ由来のプロシアニジンを精密に重合度毎に精製し、それぞれのリパーゼ阻害活性の検討を行っている。非特許文献2では、9量体以上のプロシアニジンのリパーゼ阻害IC50は、0.9μｇ/ｍｌとされており、同時に測定しているクロロゲン酸（Chlorogenic acid）は、59.8μｇ/ｍｌである。高分子プロデルフィニジンのα-アミラーゼ阻害活性及びリパーゼ阻害活性については知られていない。
　高分子プロデルフィニジンに関しては次の報告がある。特許文献3（特開2008-138129）「アミラーゼ阻害剤」では、エピカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート、及びエピガロカテキンからなる群から選択されるカテキン類の重合体を含有するαアミラーゼ阻害剤が報告されている。これは酵素反応によって人工的に合成された重合体であり、特許請求の範囲では数平均分子量は10000以下、重合度は2～20とされている。実施例では全て、エピガロカテキンガレートの重合体とエピガロカテキンガレートとアルデヒドの重縮合物を合成した結果が記載されている。特許文献3からは、エピガロカテキンガレートが重合化したプロデルフィニジンにα-アミラーゼ阻害活性を有することが理解できる。しかしながら、特許文献3に記載の重合体は人工的な反応により得られる化合物であり、構造的に不明な点が多く、食用した場合の安全性についても留意をする
　プロデルフィニジンに関する特許文献としては次のものが挙げられる。特許文献4（特開2006-16367）には、2量体の複数の分子構造を有するプロデルフィニジンのリパーゼ阻害活性が報告されている。また特許文献5（特開2006-1909）には、リパーゼ阻害活性を有する新規化合物が報告されている。これらの特許文献には、エピガロカテキンガレート（（-）-epigallocatechin 3-O-gallate）のリパーゼ阻害IC50は、0.284μM及び0.349μM（0.16μｇ/ｍｌ）とされている。非特許文献1（J.Agric.Food Chem, 2003, 51, 7513-7521）には、複数の植物のプロアントシニジンの構成成分を分析した結果が記載されている。平均重合度（mDP）が50以上のものは記載されておらず、またエピガロカテキンガレートを構成成分とするものも報告されていない。また、非特許文献1中にnuts類に「cashew」のプロアントシアニジンが（エピ）カテキンの2量体が存在することが記載されているが、カシューアップルの記載はない。
　ブドウ由来のプロアントシアニジンに関する特許文献としては次のものが挙げられる。特許文献6（特開2000-44472）に「糖尿病合併症の予防または治療薬剤」としてブドウ果実の種子、果皮などから得られるプロアントシアニジンオリゴマー（2～30量体、好ましくは2～10量体）が血糖値上昇抑制作用を有し、糖尿病治療薬として有効であることが報告されている。特許文献6にはアミラーゼ酵素阻害活性に関する報告は記載されていないが、プロシアニジンB-3（2量体）とプロアントシアニジン（ブドウ種子抽出物のプロアントシアニジンオリゴマー）が糖尿病ラットの血糖値を低下させる実施例が報告されている。ブドウ種子中抽出物中のプロアントシニジンはプロシアニジン（（エピ）カテキン重合体）であると考えられる（非特許文献4（香粧会誌　Vol.　No.4　（2003））及び非特許文献1（J.Agric.Food Chem, 2003, 51, 7513-7521）参照）。
　一方、リパーゼ阻害剤としては種々の活性成分が知られている。
　特許文献7(特開2008-19180)ではフユベゴニア抽出物のリパーゼ阻害活性を、イブプロフェンピコノールおよびテトラサイクリン塩酸塩を陽性対照として比較した実験結果が記載されている。
　特許文献8(特開2005-53891)には、膵リパーゼあるいは細菌性リパーゼの阻害効果に優れ、しかも多くの植物に含有されて安全性に優れ、肥満化傾向あるいはニキビや皮膚炎などに有効性に対応できるリパーゼ阻害剤を提供することを解決課題とする発明が開示されている。特許文献8の実施例では、カフェー酸（カフェイン酸若しくは3,4ジヒドキシけい皮酸）、没食子酸、ロスマリン酸がリパーゼ阻害剤として有効であることが記載されており、その測定値も記載されている。
　特許文献9(特開2004-115466)には、プロアントシアニジンを含有するニキビ予防及び治療効果用皮膚外用剤が開示されている。特許文献9の特許請求の範囲によれば、プロアントシアニジンは、松樹皮、ブドウ、ブルーベリー、イチゴ、アボガド、ニセアカシア、コケモモの果実もしくは種子、大麦、小麦、大豆、黒大豆、カカオ、ピーナッツの薄皮、イチョウ葉に由来するものである。また実施例ではリパーゼ阻害活性に関する記載はなく、松樹皮抽出物によるアクネ菌等の最小発育阻止試験の結果を記載している。
　特許文献10(特許第3966689号)には、ベンケイ草科に属するイワベンケイ及び/又は紅景天の抽出物を含有するニキビ用皮膚疾患改善剤が記載されている。特許文献10では、複数の植物抽出物をウシ膵臓由来のリパーゼ阻害活性を実施例では検討している。その中でリパーゼ阻害活性IC50が40μｇ/ｍｌのイワベンケイと紅景天の抽出物に関して特許権が付与されている。
特開平9-291039号公報 特開2006-151944号公報 特開2008-138129号公報 特開2006-16367号公報 特開2006-1909号公報 特開2000-44472号公報 特開2008-19180号公報 特開2005-53891号公報 特開2004-115466号公報 特許第3966689号公報 J. Agric. Food Chem., 2003, 51, 7513-7521 J. Agric. Food Chem., 2007, 55, 4604-4609 J. Agric. Food Chem., 2002, 50, 4852-4860 香粧会誌, Vol.No.4, (2003)
　カシューアップルはカシューナッツ採取時に廃棄されることが多い。カシューアップルの有効利用が望まれている。
　そこで本発明は、カシューアップルの有用な用途を提供することを目的とする。
　本発明はまた、天然物に由来する、α－アミラーゼ阻害活性やリパーゼ阻害活性等の有益な活性を有する活性成分を提供することを目的とする。
　上記課題を解決するための手段として本発明は以下の発明を提供する。
(1) カシューアップルに植物繊維分解酵素を作用させる工程を含む方法により調製される、カシューアップル由来プロアントシアニジンを含有する組成物。
(2) 前記方法が、カシューアップルに植物繊維分解酵素を作用させる工程で得られた酵素分解物を、分画分子量が10,000以上である限外ろ過膜により濃縮する工程を更に含む、(1)に記載の組成物。
(3) 前記方法が、カシューアップルに植物繊維分解酵素を作用させる工程よりも後に行われる、ポリフェノールを濃縮または分離する工程を更に含む、(1)または(2)に記載の組成物。
(4) 前記方法が、カシューアップルに植物繊維分解酵素を作用させる工程よりも後に行われる、プロアントシアニジンを濃縮または分離する工程を更に含む、(1)～(3)のいずれか1項に記載の組成物。
(5) 前記プロアントシアニジンがプロデルフィニジンを含有する、(1)～(4)のいずれか１項に記載の組成物。
(6) (1)～(5)のいずれか１項に記載の組成物を含有する飲食品組成物、化粧品組成物または医薬組成物。
(7) （エピ）ガロカテキンと、（エピ）ガロカテキンガレートとを少なくとも構成単位として含む、平均重合度が２０以上である重合体であるプロアントシアニジン。
(8) 構成単位として（エピ）ガロカテキンを５０～８０モル％、（エピ）ガロカテキンガレートを２０～５０モル％含有する、(7)記載のプロアントシアニジン。
(9) エピカテキンとエピカテキンガレートとを構成単位として更に含む、(7)または(8)記載のプロアントシアニジン。
(10) 重合体のすくなくとも一方の末端がエピガロカテキンガレートである、(7)～(9)のいずれか１項記載のプロアントシアニジン。
(11) カシューアップルに植物繊維分解酵素を作用させて得られる酵素分解物から分離されたプロアントシアニジンである、(7)～(10)のいずれか１項記載のプロアントシアニジン。
(12) (7)～(11)のいずれか１項記載のプロアントシアニジンを含有する飲食品組成物、化粧品組成物または医薬組成物。
(13) (1)～(5)のいずれか１項に記載の組成物を有効成分として含有するα-アミラーゼ阻害剤。
(14) (1)～(5)のいずれか１項に記載の組成物を有効成分として含有する、α-アミラーゼ活性の阻害により症状が予防もしくは改善される状態もしくは疾患の予防剤または治療剤。
(15) (1)～(5)のいずれか１項に記載の組成物を有効成分として含有するリパーゼ阻害剤。
(16) (1)～(5)のいずれか１項に記載の組成物を有効成分として含有する、リパーゼ活性の阻害により症状が予防もしくは改善される状態もしくは疾患の予防剤または治療剤。
(17) (1)～(5)のいずれか１項に記載の組成物を有効成分として含有する脂質劣化抑制剤。
(18) (7)～(11)のいずれか１項記載のプロアントシアニジンを有効成分として含有するα-アミラーゼ阻害剤。
(19) (7)～(11)のいずれか１項記載のプロアントシアニジンを有効成分として含有する、α-アミラーゼ活性の阻害により症状が予防もしくは改善される状態もしくは疾患の予防剤または治療剤。
(20) (7)～(11)のいずれか１項記載のプロアントシアニジンを有効成分として含有するリパーゼ阻害剤。
(21) (7)～(11)のいずれか１項記載のプロアントシアニジンを有効成分として含有する、リパーゼ活性の阻害により症状が予防もしくは改善される状態もしくは疾患の予防剤または治療剤。
(22) (7)～(11)のいずれか１項記載のプロアントシアニジンを有効成分として含有する脂質劣化抑制剤。
　本発明は以下のように記載することもできる。
　In vivo またはin vitroにおいて上記プロアントシアニジン含有組成物または上記プロアントシアニジンの付与によりα-アミラーゼを阻害する方法。
　生体内または生体外のα-アミラーゼ存在環境に上記プロアントシアニジン含有組成物または上記プロアントシアニジンを付与することによりα-アミラーゼを阻害する方法。
　In vivo またはin vitroにおけるα-アミラーゼ阻害剤としての使用のための上記プロアントシアニジン含有組成物または上記プロアントシアニジン。
　In vivo またはin vitroにおけるα-アミラーゼ阻害剤の製造のための上記プロアントシアニジン含有組成物または上記プロアントシアニジンの使用。
　上記プロアントシアニジン含有組成物または上記プロアントシアニジンを患者（ヒト等）に投与することを含む、α-アミラーゼの阻害により症状が予防もしくは改善される状態もしくは疾患の予防または治療方法。上記プロアントシアニジン含有組成物または上記プロアントシアニジンは、当該状態または疾患の予防または治療のための有効量で投与される。患者は、当該状態または疾患の予防または治療を必要とする患者である。投与経路としては経口投与が好ましい。
　α-アミラーゼの阻害により症状が予防もしくは改善される状態もしくは疾患の予防薬又は治療薬として使用するための、上記プロアントシアニジン含有組成物または上記プロアントシアニジン。
　α-アミラーゼの阻害により症状が予防もしくは改善される状態もしくは疾患の予防又は治療のための医薬の製造のための、上記プロアントシアニジン含有組成物または上記プロアントシアニジンの使用。
　In vivo またはin vitroにおいて上記プロアントシアニジン含有組成物または上記プロアントシアニジンの付与によりリパーゼを阻害する方法。
　生体内または生体外のリパーゼ存在環境に上記プロアントシアニジン含有組成物または上記プロアントシアニジンを付与することによりリパーゼを阻害する方法。
　In vivo またはin vitroにおけるリパーゼ阻害剤としての使用のための上記プロアントシアニジン含有組成物または上記プロアントシアニジン。
　In vivo またはin vitroにおけるリパーゼ阻害剤の製造のための上記プロアントシアニジン含有組成物または上記プロアントシアニジンの使用。
　上記プロアントシアニジン含有組成物または上記プロアントシアニジンを患者（ヒト等）に投与することを含む、リパーゼの阻害により症状が予防もしくは改善される状態もしくは疾患の予防または治療方法。上記プロアントシアニジン含有組成物または上記プロアントシアニジンは、当該状態または疾患の予防または治療のための有効量で投与される。患者は、当該状態または疾患の予防または治療を必要とする患者である。投与経路としては経口投与または経皮投与が好ましい。
　リパーゼの阻害により症状が予防もしくは改善される状態もしくは疾患の予防薬又は治療薬として使用するための、上記プロアントシアニジン含有組成物または上記プロアントシアニジン。
　リパーゼの阻害により症状が予防もしくは改善される状態もしくは疾患の予防又は治療のための医薬の製造のための、上記プロアントシアニジン含有組成物または上記プロアントシアニジンの使用。
　上記プロアントシアニジン含有組成物または上記プロアントシアニジンを含有する、脂質劣化抑制剤。
　生体内または生体外の脂質存在環境（皮膚や脂質含有組成物等）に上記プロアントシアニジン含有組成物または上記プロアントシアニジンを付与することにより脂質の劣化を抑制する方法。
　脂質劣化を抑制するための、上記プロアントシアニジン含有組成物または上記プロアントシアニジンの使用。
　医薬としての使用のための、上記プロアントシアニジン含有組成物または上記プロアントシアニジン。
　本発明により、従来廃棄されることの多かったカシューアップルの有効活用が可能になる。
　また本発明により、天然物に由来する、安全性の高い、α－アミラーゼ阻害活性やリパーゼ阻害活性等の有益な活性を有する活性成分が提供される。
カシューアップル由来プロアントシアニジンの酸性条件での加熱処理物のHPLC分析結果を示す。 NBP-A（100K以上分画物）のチオール分解後のHPLC分析結果を示す。 NBP チオール分解精製品Peak 1 のESI(+)-MS スペクトル NBP チオール分解精製品Peak 1 の1H NMR スペクトル NBP チオール分解精製品Peak 1 の1H NMR スペクトル（図４－１つづき） NBP チオール分解精製品Peak 1 の1H NMRスペクトル（拡大図） NBP チオール分解精製品Peak 1 の1H NMRスペクトル（拡大図）（図５－１つづき） NBP チオール分解精製品Peak 1 の13C NMR スペクトル NBP チオール分解精製品Peak 1 の13C NMR スペクトル（図６－１つづき） NBP チオール分解精製品Peak 1 の13C NMRスペクトル（拡大図） NBP チオール分解精製品Peak 1 の13C NMRスペクトル（拡大図）（図７－１つづき） NBP チオール分解精製品Peak 2 のESI(+)-MS スペクトル NBP チオール分解精製品Peak 2 の1H NMRスペクトル NBP チオール分解精製品Peak 2 の1H NMRスペクトル（図９－１つづき） NBP チオール分解精製品Peak 2 の1H NMRスペクトル（拡大図） NBP チオール分解精製品Peak 2 の1H NMRスペクトル（拡大図）（図１０－１つづき） NBP チオール分解精製品Peak 2 の13C NMRスペクトル NBP チオール分解精製品Peak 2 の13C NMRスペクトル（図１１－１つづき） NBP チオール分解精製品Peak 2 の13C NMRスペクトル（拡大図1） NBP チオール分解精製品Peak 2 の13C NMRスペクトル（拡大図1）（図１２－１つづき） NBP チオール分解精製品Peak 2 の13C NMRスペクトル（拡大図2） NBP チオール分解精製品Peak 2 の13C NMRスペクトル（拡大図2）（図１３－１つづき） NBP-Aの10K画分のチオール分解溶液のHPLC クロマトグラム NBP-Aの10K画分のチオール分解溶液のHPLC クロマトグラムとTIC [ESI(+)] NBP-Aの10K画分のチオール分解溶液，ピーク(1)のLC-MS 測定結果 NBP-Aの10K画分のチオール分解溶液，ピーク(1)の精密質量スペクトル NBP-Aの10K画分のチオール分解溶液，ピーク(1)（m/z 459.0922）の組成演算結果 NBP-Aの10K画分のチオール分解溶液，ピーク(1)（m/z 459.0922）の組成演算結果（つづき） NBP-Aの10K画分のチオール分解溶液，ピーク(2)のLC-MS 測定結果 NBP-Aの10K画分のチオール分解溶液，ピーク(2)の精密質量スペクトル NBP-Aの10K画分のチオール分解溶液，ピーク(2)（m/z 413.1041）の組成演算結果 NBP-Aの10K画分のチオール分解溶液，ピーク(2)（m/z 413.1041）の組成演算結果（つづき） NBP-Aの10K画分のチオール分解溶液，ピーク(3)のLC-MS 測定結果 NBP-Aの10K画分のチオール分解溶液，ピーク(3)の精密質量スペクトル NBP-Aの10K画分のチオール分解溶液，ピーク(3)（m/z 565.1229）の組成演算結果 NBP-Aの10K画分のチオール分解溶液，ピーク(3)（m/z 565.1229）の組成演算結果（つづき） 三種類のペクチナーゼ製剤を使用して処理したピューレ抽出物のα－アミラーゼ阻害活性を示す。
1. カシューアップル
　本発明にはカシューアップルとして、カシューナットノキの柄が肥大した黄色い洋ナシ型部位を用いることができる。この部位の先端に実るカシューナッツおよびその殻は除去して使用する。
　本発明において「カシューアップル」とは、カシューアップルの元の形状をとどめているものだけでなく、カシューアップルの粉砕物、ピューレ、果汁、果汁搾汁残渣などの、カシューアップルを物理的に処理したものも包含される。なかでもカシューアップルのピューレが本発明の用途には好ましい。ピューレとは、殻の部分が除去された熟したカシューアップルを粉砕機やブレンダーなどで粉砕処理して液状化したものである。熟したカシューアップルは果肉が非常に柔らかく、容易に液状化することができる。
　高分子量のプロアントシアニジンは、カシューアップルにペクチナーゼ等の植物繊維分解酵素を作用することにより、ペクチン等の水不溶性成分から分離される可能性がある。そこで、植物繊維分解酵素を作用させる場合には、「カシューアップル」として果汁搾汁残渣等のカシューアップルの水不溶性成分も使用できる。
2. カシューアップルの処理物
　本発明者らは、カシューアップルの植物繊維分解酵素による分解物が高いα-アミラーゼ阻害活性、およびリパーゼ阻害活性を有することを見出した。そしてこれらの活性に、新規構造を有する高分子量のプロアントシアニジンが関与すると推定した。そこで以下に、カシューアップルの植物繊維分解酵素分解物等のプロアントシアニジン含有組成物、およびプロアントシアニジンについて詳細に説明する。
2.1. カシューアップル由来プロアントシアニジン含有組成物
　本発明において「プロアントシアニジン含有組成物」または「プロアントシアニジンを含有する組成物」とは、カシューアップル（粉砕物、ピューレ、果汁、水不溶性成分（果汁搾汁残渣）等も包含する）に植物繊維分解酵素を作用させて得られた、プロアントシアニジンを作用可能な状態で含有する植物繊維分解酵素分解物、および該分解物に濃縮、精製等の更なる処理を施して調製された、カシューアップル由来のプロアントシアニジンを含有する、カシューアップル処理物である組成物を指す。
　カシューアップル由来のプロアントシアニジンは、プロデルフィニジンを主成分として含む。典型的には、カシューアップル由来のプロアントシアニジンは、構成単位のうち７０～１００モル％がプロデルフィニジン（（エピ）ガロカテキンおよび（エピ）ガロカテキンガレート）である。
　「植物繊維分解酵素」としては、ペクチナーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、β－アミラーゼ、またはこれらの酵素活性を２つ以上有する酵素、あるいはこれらの酵素の混合物が好ましく、特にペクチナーゼが好ましい。ペクチナーゼは果汁清澄化作用を有することが知られている。本発明では植物繊維分解酵素として市販の酵素製剤を使用することができる。ペクチナーゼとして市販されている酵素製剤だけでなく、セルラーゼなどの他の活性を有する酵素として市販されているがペクチナーゼとして使用することが可能である酵素製剤も、本発明においてペクチナーゼとして使用することができる。
　植物繊維分解酵素の処理条件については、使用する酵素製剤および酵素濃度に応じて適宜決定すればよく、特に限定されない。酵素処理物が、固形分を遠心分離処理等で容易に沈降できる状態あるいはろ過により容易に分離可能な状態にまで酵素処理を行うことが好ましい。例えば酵素処理時のｐＨ条件は３～５の範囲とすることができ、温度条件は５０～６０℃とすることができ、処理時間は１～２４時間とすることができる。
　植物繊維分解酵素は、カシューアップルピューレまたは水不溶性成分に作用させることが好ましい。カシューアップルピューレは更に水等の溶媒で希釈されていてもよい。果汁搾汁残渣等の水不溶性成分を使用する実施形態は、廃棄物の有効利用という観点からも好ましい。
　植物繊維分解酵素作用工程により得られた酵素分解物はそのまま本発明の用途に使用することができるが、液体部分にプロアントシアニジンが溶出していることから、遠心分離やろ過などの通常の分離手段により液体部分のみを分離して使用することや、以後の更なる処理に供することが好ましい。
　更に、植物繊維分解酵素作用工程により得られた酵素分解物に限外ろ過膜による濃縮処理（以下「限外ろ過工程」と称することがある）、ポリフェノールの濃縮または分離処理（以下「ポリフェノール分離工程」と称することがある）、プロアントシアニジンの濃縮または分離処理（以下「プロアントシアニジン分離工程」と称することがある）などの処理を施すことが好ましい。
　限外ろ過膜による濃縮処理により、カシューアップルに含まれる果糖やブドウ糖などの単糖類および二糖類を除去することが可能であり、カシューアップル植物繊維分解酵素分解物のカロリーや甘味を抑制することができる。また限外ろ過膜による濃縮処理により濃縮される高分子成分には高分子量のプロアントシアニジンが含まれるため、当該処理による濃縮物はα-アミラーゼ阻害活性、およびリパーゼ阻害活性が高い。
　限外ろ過膜は一般に0.1μｍ～2 nｍ（分子量数百～数百万）の範囲の粒子や高分子を阻止する膜である。本発明に使用する限外ろ過膜としては、単糖類および二糖類を除去することが可能である分画分子量を有する膜が好ましく、公称されている分画分子量が10,000以上の膜が好ましく、30,000以上の膜がより好ましく、50,000以上の膜が更に好ましい。例えば公称されている分画分子量が10,000～200,000の膜や、10,000～100,000の膜を使用することができる。
　限外ろ過の条件は特に限定されない。限外ろ過膜の構成材料も特に限定されず、ポリエーテルスルホン系材料の膜でも、セルロース系材料の膜でも好適に使用できる。
　限外ろ過膜による濃縮物はそのまま、あるいは更に濃縮または乾燥させて本発明の用途に使用することができる。
　ポリフェノールの濃縮または分離処理としては、ポリフェノールを吸着する合成吸着剤を使用して、植物繊維分解酵素作用工程により得られた酵素分解物または上記限外ろ過工程後の濃縮物中のポリフェノールを濃縮または分離する処理が挙げられる。特に、上記限外ろ過工程後の濃縮物に対してポリフェノールの濃縮または分離処理を施すことが好ましい。使用できる合成吸着剤としては、マイクロポアーを有する不溶性の三次元架橋構造ポリマーの、比表面積が高い樹脂であって、樹脂の化学組成が芳香族（スチレン－ジビニルベンゼン）系のものが挙げらる。具体的な市販品としては、ダイヤイオン セパビーズHP-20（登録商標）（三菱化学株式会社製）等が挙げられる。さらに、上記芳香族系の樹脂に化学的な修飾を施したものや、マイクロポアーのサイズを変更したものも好適に使用することが可能である。さらに、結合型シリカゲルに官能基としてオクタデシル（Ｃ１８）やオクチル（Ｃ８）を導入した樹脂を用いてポリフェノールの濃縮または分離処理を行うこともできる。
　合成吸着剤を用いたポリフェノールの濃縮または分離処理の手順は特に限定されない。例えば合成吸着剤を充填したカラムに、植物繊維分解酵素作用工程により得られた酵素分解物、または上記限外ろ過工程後の濃縮物を通液させ、水などの洗浄液により洗浄し、続いて、アセトン、アルコール水溶液などの溶出液によりポリフェノールを溶出させることにより行うことができる。溶出物は適宜濃縮または乾燥させることができる。こうして得られたポリフェノール成分には、後述するプロアントシアニジンが粗精製物として含まれる。
　プロアントシアニジンの濃縮または分離処理は、プロアントシアニジンを吸着する合成吸着剤を使用して、植物繊維分解酵素作用工程により得られた酵素分解物、上記限外ろ過工程後の濃縮物、あるいは上記ポリフェノール分離工程で得られたポリフェノール濃縮物または分離物中のプロアントシアニジンを濃縮または分離する処理が挙げられる。特に、ポリフェノール濃縮物または分離物に対してプロアントシアニジンの濃縮または分離処理を施すことが好ましい。使用できる合成吸着剤としては、ヒドロキシプロピル化されたデキストランをベースにした樹脂が挙げられ、特に、乾燥時の粒子径が１８～１１１μｍ、メタノールによる膨潤時の粒子径が２７～１６３μｍで、水、塩溶液、有機溶媒および変性剤に安定な性質を有するものが好ましい。具体的な市販品としては、Sephadex LH-20樹脂（GE Helthcare製）が挙げられる。
　合成吸着剤を用いたプロアントシアニジンの濃縮または分離処理の手順は特に限定されない。例えば合成吸着剤を充填したカラムに、植物繊維分解酵素作用工程により得られた酵素分解物、上記限外ろ過工程後の濃縮物、あるいは上記ポリフェノール分離工程で得られたポリフェノール濃縮物または分離物を通液させ、水などの洗浄液により洗浄し、続いて、アセトン、アルコールなどの溶出液によりプロアントシアニジンを溶出させることにより行うことができる。溶出物は適宜濃縮または乾燥させることができる。こうして得られたプロアントシアニジン成分には、後述するプロアントシアニジンが実質的に精製された状態で存在する。本発明の「プロアントシアニジンを含有する組成物」の範囲には、このような実質的に精製された状態で存在するプロアントシアニジンも包含される。
　上記手順を経て得られたポリフェノール濃縮物または分離物、あるいはプロアントシアニジンの濃縮物または分離物は、更に、限外ろ過膜により分子量に応じて分画することもできる。このときに使用する限外ろ過膜の種類および限外ろ過の条件は、上述と同様のものが採用できる。
　上記手順により得られるカシューアップル由来プロアントシアニジン含有組成物は、従来存在しない新規組成物であり、なお且つα-アミラーゼ阻害活性、およびリパーゼ阻害活性が高いという有利な特徴を有する。
　本発明のプロアントシアニジン含有組成物は、好ましくは、カシューアップルに植物繊維分解酵素を作用させる植物繊維分解酵素作用工程を含む方法により調製される組成物である。植物繊維分解酵素作用工程に使用するカシューアップルは、ペクチン等の水不溶性成分を少なくとも含んでいることが好ましい。
　本発明のプロアントシアニジン含有組成物は、より好ましくは、前記植物繊維分解酵素作用工程と、植物繊維分解酵素作用工程で得られた酵素分解物を上記限外ろ過膜により濃縮する限外ろ過工程を含む方法により調製される組成物である。
　本発明のプロアントシアニジン含有組成物は、より好ましくは、前記植物繊維分解酵素作用工程と、前記植物繊維分解酵素作用工程で得られた酵素分解物からポリフェノールを濃縮または分離するポリフェノール分離工程とを含む方法により調製される組成物である。
　本発明のプロアントシアニジン含有組成物は、より好ましくは、前記植物繊維分解酵素作用工程と、前記限外ろ過工程と、限外ろ過工程により得られた濃縮物からポリフェノールを濃縮または分離するポリフェノール分離工程とを含む方法により調製される組成物である。
　本発明のプロアントシアニジン含有組成物は、より好ましくは、前記植物繊維分解酵素作用工程と、前記植物繊維分解酵素作用工程で得られた酵素分解物からプロアントシアニジンを濃縮または分離するプロアントシアニジン分離工程とを含む方法により調製される組成物である。
　本発明のプロアントシアニジン含有組成物は、より好ましくは、前記植物繊維分解酵素作用工程と、前記限外ろ過工程と、限外ろ過工程により得られた濃縮物からプロアントシアニジンを濃縮または分離するプロアントシアニジン分離工程とを含む方法により調製される組成物である。
　本発明のプロアントシアニジン含有組成物は、より好ましくは、前記植物繊維分解酵素作用工程と、前記限外ろ過工程と、限外ろ過工程により得られた濃縮物からポリフェノールを濃縮または分離するポリフェノール分離工程と、ポリフェノール分離工程により得られたポリフェノール含有組成物からプロアントシアニジンを濃縮または分離するプロアントシアニジン分離工程とを含む方法により調製される組成物である。
　植物繊維分解酵素作用工程により得られた植物繊維分解酵素分解には、カシューアップル中のプロアントシアニジンを、活性を発揮することができる状態で含有していると考えられる。
　限外ろ過工程を経て得られた組成物は、プロアントシアニジンのうち、限外ろ過膜を通過しない高分子量の成分を高められた濃度で含有していると考えられる。
　ポリフェノール分離工程を経て得られた組成物は、プロアントシアニジンを他のポリフェノール画分とともに含有していると考えられる。当該組成物はプロアントシアニジンの粗精製物に該当する。
　プロアントシアニジン分離工程を経て得られた組成物は、プロアントシアニジンを更に高められた濃度で含有していると考えられる。当該組成物はプロアントシアニジンの精製物に該当する。
2.2. プロアントシアニジン
　カシューアップルに植物繊維分解酵素を作用させる工程を含む方法により調製されるカシューアップル植物繊維分解酵素分解物から分離されたプロアントシアニジンは新規化合物である。そして当該プロアントシアニジンは、実施例に示されるように、α-アミラーゼ阻害活性、およびリパーゼ阻害活性が高いという有利な特徴を有する。すなわち本発明は、新規プロアントシアニジンをも提供する。
　本発明のプロアントシアニジンは、ガロカテキンまたはエピガロカテキン（本明細書では「（エピ）ガロカテキン」と記載する）と、ガロカテキンガレートまたはエピガロカテキンガレート（本明細書では「（エピ）ガロカテキンガレート」と記載する）とを少なくとも構成単位として含む、平均重合度が２０以上である重合体である。平均重合度は、２５以上が好ましく、２５～１００の範囲がより好ましく、２５～７５の範囲が特に好ましい。本発明のプロアントシアニジンは、エピカテキンとエピカテキンガレートとを構成単位として更に含むことが好ましい。
　本発明のプロアントシアニジンは、構成単位として（エピ）ガロカテキンを５０～８０モル％、（エピ）ガロカテキンガレートを２０～５０モル％含有することが好ましく、（エピ）ガロカテキンを５０～７５モル％、（エピ）ガロカテキンガレートを２０～４５モル％、エピカテキンを３～１０モル％、エピカテキンガレートを０．５～５モル％含有することがより好ましい。本発明のプロアントシアニジンは（エピ）ガロカテキンと（エピ）ガロカテキンガレートとを主成分として含有することから、本明細書では「プロデルフィニジン」と称されることもある。
　本発明のプロアントシアニジンの構成単位（繰り返し単位）は式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
［式中、
　（エピ）ガロカテキンでは、R1は水酸基であり、R2は水素原子であり、クロマン環上の2位の置換基と3位の-OR2基とはシス配置またはトランス配置であり；
　（エピ）ガロカテキンガレートでは、R1は水酸基であり、R2は：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
で表される基（ガレート基）であり、クロマン環上の2位の置換基と3位の-OR2基とはシス配置またはトランス配置であり；
　エピカテキンでは、R1は水素原子であり、R2は水素原子であり、クロマン環上の2位の置換基と3位の-OR2基とはシス配置であり；
　エピカテキンガレートでは、R1は水素原子であり、R2は上記ガレート基であり、クロマン環上の2位の置換基と3位の-OR2基とはシス配置である。］
で表される。
　本発明のプロアントシアニジンは、構成単位であるフラボノイド骨格のクロマン環の4位炭素と、隣接する構成単位における他の部位（クロマン環の8位炭素または6位炭素と推定される）との間との間に共有結合が形成されて重合されている。そしてカシューアップル中において、プロアントシアニジンは4位炭素側末端の繰り返し単位（下端ユニット）がエピガロカテキンガレートである。すなわち本発明のプロアントシアニジンの構造は以下の通りであると推定される：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
（式中、8位炭素上の破線および6位炭素上の破線の一方は隣接する繰り返し単位の4位炭素に連結された結合であり、他方は水素であり、R1、およびR2、ならびに-OR2基の立体配置は上記で定義したとおりであり、下端ユニットではR1は水酸基であり、R2はガレート基であり、クロマン環上の2位の置換基と3位の-OR2基とはシス配置であり、繰り返し単位の数ｎ（重合度）は、２０以上が好ましく、２５以上が好ましく、２５～１００の範囲がより好ましく、２５～７５の範囲が特に好ましい。）
　本発明において、構成単位の比率および平均重合度は、プロアントシアニジンを、酸性条件下でベンジルメルカプタンと反応させることにより、チオール分解させ、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)や質量分析法等の機器分析により分析するチオール分解法（非特許文献3および実施例5参照）により測定される、分解産物に含まれる構成単位の種類および各構成単位のモル濃度に基づいて算出された値を指す。分解産物中においてベンジルチオエーテル誘導体を形成していない構成単位が下端ユニットを構成している構成単位であると判断する。
　本発明のプロアントシアニジンは、前記植物繊維分解酵素作用工程と、前記限外ろ過工程と、前記ポリフェノール分離工程と、前記プロアントシアニジン分離工程とを含む方法により、カシューアップルから調製することができる。
3. 用途
　以下に、カシューアップル由来プロアントシアニジンが有する有利な活性およびその活性を利用した用途について説明する。
3.1. α－アミラーゼ阻害作用
　カシューアップル由来プロアントシアニジンはα-アミラーゼ阻害作用を有する。α-アミラーゼを阻害することにより、食後の急激な血糖上昇を緩和することができる。よってカシューアップル由来プロアントシアニジンは、α-アミラーゼの阻害により症状が予防もしくは改善される状態もしくは疾患（血糖値上昇抑制剤、糖尿病、肥満等）の予防剤又は治療剤の有効成分として用いることができる。
　本発明のα-アミラーゼ阻害剤、ならびに、α-アミラーゼの阻害により症状が予防もしくは改善される状態もしくは疾患の予防剤又は治療剤は、医薬品、化粧品、食品等の任意の形態であってよい。すなわち本発明は、α-アミラーゼ阻害作用、あるいは、α-アミラーゼの阻害により症状が予防もしくは改善される状態もしくは疾患の予防または治療作用を有する飲食品組成物、化粧品組成物または医薬品組成物を提供する。
　例えばカシューアップルのピューレまたは水不溶性成分に植物繊維分解酵素を作用させて得られた酵素分解物またはその液体部分は、それ自体がα-アミラーゼ阻害作用またはそれに関連する作用を有する飲食品組成物、化粧品組成物または医薬品組成物として利用可能である。
　カシューアップル由来プロアントシアニジンが、一食あたり2.2 mg以上、好ましくは7.5 mg以上摂取できるように配合された飲食品組成物はα-アミラーゼ阻害作用またはそれに関連する作用を有する飲食品組成物として有用である。
3.2. リパーゼ阻害作用
　カシューアップル由来プロアントシアニジンはリパーゼ阻害作用を有する。カシューアップル由来プロアントシアニジンは膵臓由来のリパーゼだけでなく、細菌が産生するリパーゼに対しても既知の有効成分等と比較して有効な阻害活性を有する。リパーゼ活性を阻害することにより、脂質摂取後の脂質の体内吸収を抑制して、肥満や高脂血症を予防又は治療することができる。またリパーゼ活性を阻害することにより、食品等の脂質を含む飲食品や化粧品中に微生物が混入した場合の微生物が産生するリパーゼによる脂質の分解を抑制し、変敗臭等の脂質の劣化を抑制することができる。更に、皮膚表面に存在する細菌が産生するリパーゼの作用を阻害することができ、それによって、リパーゼによる酵素活性に起因するニキビ等の皮膚疾患を予防または治療することが可能となる。よってカシューアップル由来プロアントシアニジンは肥満、高脂血症、ニキビ等の、リパーゼ活性の阻害により症状が予防もしくは改善される状態もしくは疾患の予防剤もしくは治療剤、あるいは、脂質劣化抑制剤の有効成分として有用である。
　本発明のリパーゼ阻害剤、脂質劣化抑制剤、ならびに、リパーゼの阻害により症状が予防もしくは改善される状態もしくは疾患の予防剤又は治療剤は、医薬品、化粧品、食品等の任意の形態であってよい。すなわち本発明は、リパーゼ阻害作用、脂質劣化抑制作用、あるいは、リパーゼの阻害により症状が予防もしくは改善される状態もしくは疾患の予防または治療作用を有する飲食品組成物、化粧品組成物または医薬品組成物を提供する。
　カシューアップル由来プロアントシアニジンが好ましくは0.001重量％～10重量％、より好ましくは0.01重量％～5重量％配合された飲食品組成物、化粧品組成物または医薬品組成物は、リパーゼ阻害作用またはそれに関連する作用を有する飲食品組成物、化粧品組成物または医薬品組成物として特に有用である。
3.3. 組成物の形態
　本発明のカシューアップル由来プロアントシアニジン、またはそれを含有するカシューアップル処理物は飲食品組成物、化粧品組成物、医薬品組成物に配合して使用することができる。
　飲食品組成物の形態としては、飲料、固形食品、半固形食品等が挙げられ、特定保健用食品にもなり得る。飲料としては、具体的には、果汁飲料、清涼飲料、アルコール飲料等が挙げられる。また、摂取時に水等を用いて希釈して摂取される形態であってもよい。固形食品としては、例えば、飴、トローチ等を含む錠剤（タブレット）や糖衣錠の形態、顆粒の形態、粉末飲料、粉末スープ等の粉末の形態、ビスケット等のブロック菓子類の形態、カプセル、ゼリー等の形態等、種々の形態が挙げられる。半固形食品としては、例えばジャムのようなペーストの形態、チューイングガムのようなガムの形態が挙げられる。これらの飲食品組成物には本発明のカシューアップル由来プロアントシアニジン、またはそれを含有するカシューアップル処理物のほかに、本発明の所望の効果が損なわれない範囲で、食品原料として通常用いられる種々の成分を配合することができる。他の成分としては例えば水、アルコール類、甘味料、酸味料、着色料、保存剤、香料、賦形剤等が挙げられる。これらの成分は単独で、または組み合わされて使用され得る。本発明の飲食品組成物中のカシューアップル由来プロアントシアニジンの量は、摂食によりα－アミラーゼ阻害活性またはリパーゼ阻害活性を奏する有効量が好ましい。
　化粧品組成物としては通常の形態、例えば化粧用クリーム、乳液、化粧水、美容エッセンス、パック剤、パウダー、スキンケア化粧料、リップクリーム、口紅、アンダーメイクアップ、ファンデーション、サンケア、浴用剤、ボディシャンプー、ボディローション、洗浄料、軟膏、ゼリー剤、エアゾール剤等の形態で用いることができる。化粧品組成物には本発明のカシューアップル由来プロアントシアニジン、またはそれを含有するカシューアップル処理物のほかに、本発明の所望の効果が損なわれない範囲で、水、油剤、界面活性剤、潤滑剤、アルコール類、水溶性高分子剤、ゲル化剤、保湿剤、緩衝剤、防腐剤、抗炎症剤、増粘剤、香料、ビタミン類、抗酸化剤、紫外線吸収剤、顔料、色素などを適宜添加することができる。本発明の化粧品組成物中のカシューアップル由来プロアントシアニジンの量は、化粧品としての使用によりα－アミラーゼ阻害活性またはリパーゼ阻害活性を奏する有効量が好ましい。
　医薬品組成物としては種々の投与形態用に製剤化されたものを使用することができる。製剤形態は特に制限はなく、必要に応じ適宜選択されるが、一般には錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、丸剤、液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤等の経口剤、又は注射剤、点滴剤、坐剤、吸入剤、経粘膜吸収剤、経鼻剤、経腸剤、皮膚外用剤（例えば経皮吸収剤、貼付剤、軟膏剤）等の非経口剤として、症状に応じて単独で、又は組み合わせて使用される。α－アミラーゼ阻害剤としては経口剤の形態が好ましく、リパーゼ阻害活性としては経口剤又は皮膚外用剤の形態が好ましい。
　上記製剤は、賦形剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料等を使用して常法により調製することができる。
　特に、皮膚外用剤として製剤化する場合には、界面活性剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、アルコール類、シリコーン油、水溶性高分子、溶剤、色素、顔料、香料、抗酸化剤、保湿剤、ビタミン、ビタミン誘導体、動植物抽出物、無機塩類、ｐＨ調整剤、殺菌剤、紫外線吸収剤などの成分を、必要に応じて適宜配合することができる。
　製剤の投与量は、患者の年令、体重、疾患の程度、投与経路に応じた、α－アミラーゼ阻害活性またはリパーゼ阻害活性を奏する有効量である。
　本発明を実施例に基づいてより詳細に説明する。
実施例1: 植物繊維分解酵素処理の有効性
(1) 検体の調製
　カシューアップルのピューレの果汁とこれをペクチナーゼ処理して得られた果汁のα-アミラーゼ阻害活性について比較検討を行った。未処理果汁の調製は、解凍したピューレを18000rpm、20分、20℃で遠心分離処理を行い、その上清を0.22μｍのフィルター（マイレクスGP、ミリポア社製）を用いてろ過し、ろ過液を未処理果汁とした。
　ペクチナーゼ処理果汁は、ペクチナーゼA「アマノ」（天野エンザイム製）をピューレ重量の0.5％を添加し、50℃で90分しんとう混合させた。この酵素処理液を18000rpm、15分、20℃で遠心分離処理を行い、その上清を0.22μｍのフィルター（マイレクスGP、ミリポア社製）を用いてろ過し、ろ過液をペクチナーゼ処理果汁とした。カシューアップルのピューレは、遠心分離のみでは十分に沈殿させることができないため、ペクチナーゼ処理することでろ過が容易になった。
　比較対照として、市販されている茶飲料（蕃爽麗茶（登録商標）（ヤクルト製））のα-アミラーゼ阻害活性も測定した。当該茶飲料には分子量5,000 ～30,000に分布する複合タンニン様物質を含有するグァバ葉ポリフェノールが配合されている。食べ物として体内に入った糖質は消化酵素によって消化・分解され、ブドウ糖となって腸から吸収される。グァバ葉ポリフェノールは、ショ糖、デンプンなどの糖質をブドウ糖などに分解する糖質分解酵素の働きを抑え、その結果、糖の血液中への吸収を遅らせ食後の血糖値の上昇をゆるやかにする効果がある。当該茶飲料は、この効能効果が認められ、日本国厚生労働省から特定保健用食品としての認可を2000年3月28日に受けている。
(2) α-アミラーゼ阻害活性の測定
　上記三種の検体各々について、精製水で希釈した試料溶液50μｌと豚膵臓由来α－アミラーゼ（SIGMA社製）/0.25Mリン酸緩衝液（ｐH7.0）50μｌを加えて混合した後、37℃で10分間プレインキュベートした。これに試料溶液群に0.5％でんぷん/リン酸緩衝液100μｌを加えて反応を開始させた。37℃で30分のインキュベートの後、各試験管に0.1M塩酸を1ｍｌ加え、酵素反応を停止させた。これらの反応液を十分に混合した後、96wellプレートに各反応液100μｌを入れ、これに0.01Mヨウ素溶液100μｌを加え未分解のでんぷんを発色させ、プレートリーダーにより660ｎｍの吸光度を測定した。酵素阻害率は、ブランクとしての対照溶液との比較で次の式により算出した。各試料のブランクとして、0.5％でんぷん/リン酸緩衝液100μｌの添加時期をプレインキュベート後ではなく塩酸による酵素反応停止後に添加した試験を行った。すなわち各試料のブランク試験では、酵素溶液と各試料を同様に混合し、37 ℃で10分間プレインキュベートした後にさらに30分間のインキュベートを行い、その後に各試験管に0.1M塩酸を1ml加えて混合した後、0.5％でんぷん/リン酸緩衝液100μｌを添加した。また、各試料の代わりに、酵素活性を阻害しない精製水を用いた以外は試料溶液の試験と同様の手順で吸光度を測定した（精製水ブランク）。
＜計算式＞
α－アミラーゼ阻害活性（％）＝（1－（A－B）/（C－D））ｘ100
A：試料溶液のブランクの吸光度
B：試料溶液の吸光度
C：精製水のブランクの吸光度
D：精製水の吸光度
また各試料溶液の酵素阻害活性は、複数の濃度で測定し、α-アミラーゼ酵素を50％阻害する濃度（IC50）を算出した。
(3) 試験結果
　カシューアップル未処理果汁、カシューアップルペクチナーゼ処理果汁、茶飲料のそれぞれの希釈前の濃度を100％濃度として比較した結果を以下に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　茶飲料（蕃爽麗茶（登録商標））は、2.5％濃度（40倍希釈液）でα-アミラーゼ活性を50％阻害した。一方、カシューアップルペクチナーゼ処理果汁のIC50は、0.3％濃度（約333倍希釈液）であったが、未処理果汁では5.4％（約18.5倍希釈液）と非常に阻害活性は弱かった。本試験に用いた茶飲料は、ヒトに対する血糖値上昇抑作用が効能として認められて特定保健用食品としての認可を受けている。カシューアップルペクチナーゼ処理果汁は当該茶飲料と比較してα－アミラーゼ阻害活性がIC50値において8倍以上強いことからヒトに対しても同様な効果が期待できる。
　また、本発明品のカシューアップル由来プロアントシアニジンは、分子量1万の限外ろ過膜で濃縮できることから、このカシューアップルペクチナーゼ処理果汁を分子量1万の限外ろ過で濃縮し、低分子成分である果糖やぶどう糖を除去した濃縮液を利用することも可能である。
実施例2：有効成分（カシューアップル由来高分子プロアントシアニジン）の精製
　カシューアップルのピューレ4773ｇに0.5％分（23.9ｇ）のペクチナーゼA「アマノ」を添加し、50℃で2.5時間攪拌した。このペクチナーゼ処理液を4200rpm、60分、20℃で遠心分離処理し、この上清を0.2μｍのフィルター（SUPORLIFE（登録商標） DCF, PALL社製）でろ過して、ペクチナーゼ処理果汁4230ｇを回収した。このペクチナーゼ処理果汁から主にぶどう糖及び果糖を除去することを目的として、分画分子量1万の限外ろ過膜（ハイドロザルト（登録商標）10KDa、ザルトリウス社製）を用いて限外ろ過濃縮を行い、濃縮液729ｇ（固形分26.4ｇ）を回収した。また分子量1万以下の画分には、α－アミラーゼ阻害活性は検出されなかった。この濃縮液からポリフェノール成分を精製することを目的として、ダイヤイオン　セパビーズHP-20（登録商標）（三菱化学株式会社製：約500ｍｌ）で処理を行った。方法は定法に従い、カラムに充填した樹脂に濃縮液を通液させ、成分を吸着させた後に精製水で樹脂を十分に洗浄し、50％（W/W）のエタノール水溶液で溶出させ成分を回収した。この溶出液は減圧蒸留濃縮器により乾固させた。固形分として3.7ｇを回収した。
　このHP-20樹脂で精製した成分（HP-20樹脂精製品）に対して、プロアントシアニジンの分離でよく行われるSephadex　LH-20樹脂（GE　Healthcare製）による再精製を実施した。50％（W/W）メタノール水溶液で膨潤させた樹脂500ｍｌをカラムに充填し、50％（W/W）メタノール水溶液で溶解させたHP-20樹脂精製品をカラムに通液し、未吸着成分を十分な量の50％（W/W）メタノール水溶液で洗浄した。有効成分は、100％メタノールで溶出させた画分を減圧蒸留乾固させNBP-M（仮称）として226.2ｍｇを回収した。さらに、メタノール溶出後の樹脂に対して70％（V/V）アセトン水溶液で溶出を行い成分を回収し、減圧蒸留乾固させた。NBP-A（仮称）として823.7ｍｇを回収した。精製方法から、NBP-MおよびNBP-Aは高分子量のプロアントシアニジンであると推定される。
実施例3: 有効成分の分子量とα-アミラーゼ阻害活性
(1) 有効成分の分子量分画
　LH-20樹脂で精製したカシューアップル高分子プロアントシアニジン（仮称：NBP-M及びNBP-A）の分子の大きさの分布を検討するために、遠心型限外ろ過器であるAmicon Ultra-15(登録商標)(Millipore製)を用いて分子量分画処理を行った。試験は、NBP-M及びNBP-A をそれぞれ精製水で溶解させ、それを分画分子量10万の限外ろ過膜（Ultracel-100K (登録商標)）に負荷し、それを通過した溶液を分画分子量5万の限外ろ過膜（Ultracel-50K (登録商標)）、その通過液を分画分子量３万の限外ろ過膜（Ultracel-30K (登録商標)）、その通過液を分画分子量1万の限外ろ過膜（Ultracel-10K (登録商標)）にかけて分画物を調製し、それぞれの画分を凍結乾燥処理して各分子量分画の重量分布率を検討した。その結果、カシューアップル由来高分子プロアントシアニジンの多くは、分画分子量5万以上の分画に存在することが判明した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
(2) 各画分のα-アミラーゼ阻害活性
　各分子量分画の分布率とα-アミラーゼ阻害活性のIC50を測定した（実施例1(2)と同一の手順により測定）。結果を以下の表に記載する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
(3) 結果まとめ
　アセトン溶出画分（NBP-A）については分子量が5万以上の画分にNBP-Aの88.6％が存在し、α-アミラーゼ阻害活性も分子量が大きくなることほど強くなる傾向があることが確認された。しかし、分子量が30K～10Kの分画物でも3.0μｇ/ｍｌという強い活性を示した。
　メタノール溶出画分（NBP-M）では、分画分子量が大きくなるほどα-アミラーゼ阻害活性が強くなる傾向はあるが大きな差ではなかった。
実施例4: 有効成分の分子構造の解析1
(1) 背景
　プロアントシアニジンは、各種の植物体に存在する縮合型タンニン、すなわちフラバン-3-オールまたはフラバン-3，4-ジオールを構成単位として縮合もしくは重合により結合した化合物群を意味している。そのため、プロアントシアニジンは、酸性条件下において加熱することによりシアニジンを生成するプロシアニジン（下記式のR1～R3の内、2個が水酸基（OH）、1個が水素（H））、デルフィニジンを生成するプロデルフィニジン（下記式のR1～R3の内、3個が水酸基（OH））、ペラルゴニジンを生成するプロペラルゴニジン（下記式のR1～R3の内、1個が水酸基（OH）、2個が水素（H））等の分子構造が異なる多くのポリフェノールの総称である。そのため、塩酸/ブタノール溶液中で加熱し、そのシアニジンの種類を分析することにより、R1～R3の水酸基の数とプロアントシアニジンの種類の推定が可能である
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
(2) 目的
　カシューアップルピューレより得られたNBP-Aの、プロアントシアニジンの種類を分析した。比較のために、エピカテキンとエピカテキンガレートから構成されるブドウ種子由来プロシアニジンであるグラヴィノール（登録商標）（キッコーマン製）についても同様の手順で分析を行った。
(3) 方法
(i) 各検体の0.1％（W/V）50％エタノール水溶液を調製し、0.45μｍフィルターろ過を行った
(ii) 5％（V/V）塩酸/ブタノール溶液と同量混合し、95℃で1時間加熱した。
(iii) HPLC（ODS-3カラム）により分析した。検出波長は532ｎｍで分析を行った。
(iv) 試薬のシアニジン及びデルフィニジン（生化学工業製）の0.1％濃度以下の検体を調製し、同じ条件でHPLC分析を行い、検量線を作成した。
(v) 各検体のアントシアニジン類量を検量線より算出した。
(4) 実験結果
　試薬のデルフィニジン及びシアニジンの分析結果を図1aに示す。図1aにおいて、30.826minのピークがデルフィニジンであり、33.088分のピークがシアニジンである。
　NBP-Aの分析結果を図1bに示す。30.871minのピークがデルフィニジンであり、33.145minのピークがシアニジンであることから、NBP-Aは、プロデルフィニジンを主成分とし、プロシアニジンを若干量含有することが判明した。
　グラヴィノール（登録商標）（ブドウ種子）の分析結果を図1cに示す。33.140minのピークがシアニジンである。この結果は、グラヴィノール（登録商標）がプロシアニジンであることと合致する。
(5) 各種検体からのデルフィニジン及びシアニジン生成
　実施例3で調製された、NBP-M及びNBP-Aの分子量分画物のそれぞれについて、上記(3)と同様の手順により酸性条件下での加熱処理を行いデルフィニジン濃度およびシアニジン濃度を測定した。
　以下の表に各検体の酸性条件下で生成されたデルフィニジン濃度、シアニジン濃度と生成比率を記載する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
実施例5: 有効成分の分子構造の解析2
　6個以上のフラバン－3－オール類が結合した高重合度のプロアントシアニジンは複雑な構造のため高精度なMS分析やNMR分析によって構造を解析することができない。そのため、プロアントシアニジンの構造を分析する方法として、酸性条件下でベンジルメルカプタン:
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
と反応させることにより、チオール分解させ、その分解産物を解析する手法が用いられている。以下に分解反応略図を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
　上記概略図ではカテキンの縮合物をチオール分解させた場合について説明しているが、（エピ）ガロカテキンまたは（エピ）ガロカテキンガレートの縮合物をチオール分解させた場合でも同様の分解物が形成される。
　本分解反応では縮合型タンニンの下端ユニット（Lower unit）はそのままの状態（Catechin, Epicatechin：一部はエピマー化）で遊離し、下端ユニット以外はそれぞれベンジルチオエーテルとして誘導体化される。得られたベンジルチオエーテル誘導体の構造を分析することにより、縮合型タンニンの構成ユニットを解析することが可能である。
　非特許文献3には、ブルーベリー等のプロアントシアニジンをチオール分解させ、HPLCにより分析した例が示されている。本文献によるとココア、きびの1種（brown sorghum bran）、野生種のブル－ベリーの1種（lowbush blueberry）及びクランベリーのプロアントシニジンのチオール分解物からはベンジルチオエーテル誘導体としてはエピカテキンベンジルチオエーテルしか検出できなかったことが報告されている。また本文献には、カテキンおよびエピカテキンの重合物の平均重合度（mean DP (degree of polymerization)）を算出する方法について記載されている。280ｎｍでのHPLC分析を行い、それぞれのピークの面積から平均重合度が計算されている。
mDP={カテキンベンジルチオエーテルおよびエピカテキンベンジルチオエーテルの総面積}/{カテキンおよびエピカテキンの総面積}+1
(1)カシューアップル由来高分子プロアントシアニジンのチオール分解物のHPLC分析
　実施例3で得たNBP-M及びNBP-A分画物についてチオール分解を行い、構成成分の相違について検討を行った。チオール分解は、0.2％（W/V）濃度でメタノールに溶解させた検体250μｌと3.3％（V/V）塩酸/メタノール溶液250μｌを混合し、これに5％ベンジルメルカプタン/メタノール溶液を500μｌ加え、チューブを密閉して、40℃で30分加温後、室温で10時間反応させた。分析は、HPLCでカラムはODS-3（4.6ｘ250ｍｍ、ジーエルサイエンス製）を用いた。流速1ｍｌ/minで0.05％TFAを添加した精製水/メタノールのリニアグラジエントにより分析した。NBP-A（100K以上分画物）のチオール分解後のHPLC分析結果（検出波長280ｎｍ）を、チオール分解後のHPLC分析結果を図2に示す。実施例3で調製した、NBP-A（100K以上分画物）以外の他のNBP-M及びNBP-A分画物からも、図2とほぼ同様のクロマトグラムが得られた。
　本検討の結果、カシューアップル由来高分子プロアントシアニジンのチオール分解物は主に5成分（図2のクロマトグラムにおける36分のピーク、38分のピーク、24分のピーク、40分のピーク、41分のピーク）から構成されていること、ならびに36分のピークおよび38分のピークに対応する成分が主成分であることが判明した。
　試薬、プロシアニジンC1（エピカテキンの3量体）のチオール分解物、ならびにエピカテキンとエピカテキンガレートから構成されるブドウ種子由来プロシアニジンであるグラヴィノール（登録商標）（キッコーマン製）のチオール分解物のHPLC分析結果との比較から、36分のピークおよび38分のピークは、プロシアニジンC1（エピカテキンの3量体）やグラヴィノール（登録商標）のチオール分解物には含まれない成分に対応することが判明した。更に、24分のピークはエピガロカテキンガレートに、40分のピークはエピカテキンのベンジルチオエーテル誘導体に、41分のピークはエピカテキンガレートのベンジルチオエーテル誘導体にそれぞれ対応すると推定された。
(2) カシューアップル由来高分子プロアントシアニジンの主構成成分の構造分析
　カシューアップル由来の高分子プロアントシアニジンの主な構成成分を明らかにするために上記(1)で行ったチオール分解法により、実施例3で精製・分離したNBP-Aの限外ろ過分画100K以上の検体を分解し、36分のピークの成分（peak1成分）と38分のピークの成分（peak2成分）の精製を行い、ESI-MSおよびNMRにより構造解析を実施した。
(2-1) 分析試料
カシューアップル由来高分子プロアントシアニジンであるNBP-A (100K以上)（分析結果の説明および図中では「NBP」と表記する） 179ｍｇを上記(1)と同様なチオール分解を行い、精製水で5倍に希釈し、C18 Cartriges(Sep-Pak Vac 35cc、Waters製)に負荷し、未吸着成分を十分な精製水で洗浄する。このC18樹脂に結合した成分を50％メタノールで溶出させた。これを減圧蒸留器により濃縮し、分取用HPLCカラム（ODS-3：20ｘ250ｍｍ、ジーエルサイエンス製）により分取した。精製物は最終的にpeak１成分を29.5ｍｇ、peak2成分を27.2ｍｇ回収した。
　得られたpeak１成分およびpeak2成分を検体として以下の分析を行った。
(2-2) 分析項目
(i) ESI-MS
(ii) 1H NMR，13C NMR
(2-3) 分析方法
(i) ESI-MS
　以下のESI-MS 条件で測定した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
(ii) 1H NMR，13C NMR
　以下のNMR 条件で測定した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
(2-4) 分析結果
(i) NBP チオール分解精製品Peak 1 のESI(+)-MS スペクトルを図3、1H NMR スペクトルを図4-1～5-2、13C NMR スペクトルを図6-1～7-2 に、データを表7～9、推定構造式1 に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000013
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000014
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000015
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
(ii) NBP チオール分解精製品Peak 2 のESI(+)-MS スペクトルを図8、1H NMR スペクトルを図9-1～10-2、13C NMR スペクトルを図11-1～13-2 に、データを表10～12、推定構造式2 に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000017
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000018
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000019
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
(2-5) 結果解析
(i) NBP チオール分解精製品Peak 1 は、ESI(+)-MS でm/z 429 [(M+H)+] とm/z 451 [(M+Na)+]に擬似分子イオンピークが観測された。ESI(+)-MS、1H NMR、13C NMR のデータより、分子組成がC22H20O7S であることが推測できた（表7）。また、 1H NMR スペクトルの解析から、9 個の芳香属プロトン［δ5.914 (1H), 6.033 (1H), 6.574 (2H), 7.234 (1H), 7.323 (2H), 7.465 (2H)］、5個の非芳香属プロトン［δ3.994～4.039 (3H), 4.081 (1H), 5.221 (1H)］の存在が明らかとなった（表 8）。9個の芳香属プロトンの中で、5 個はベンジルプロトン［δ7.234 (1H), 7.323 (2H), 7.465 (2H)］であることも明らかとなった。さらに、13C NMR スペクトルの解析から、14 種（炭素18 個と推定する）の芳香属炭素（δC 95.71, 96.73, 99.90, 106.90, 127.72, 129.28, 129.82, 131.24, 132.98, 139.86, 146.20, 157.10, 158.41, 158.89）、4 種の非芳香属炭素（δC 37.14, 43.19, 71.20, 75.42）の存在が明らかとなった（表9）。以上のデータを詳細に解析した結果、NBP チオール分解精製品Peak 1 の平面構造が推定構造式1のとおり推定された。すなわち、Peak 1成分は（エピ）ガロカテキンのベンジルチオエーテル誘導体であると推定された。以後、「（エピ）ガロカテキンベンジルチオエーテル誘導体」または「（エピ）ガロカテキン誘導体」と称する場合がある。
(ii) NBPチオール分解精製品Peak 2は、ESI(+)-MSでm/z 581 [(M+H)+] とm/z 603 [(M+Na)+]に擬似分子イオンピークが観測された。ESI(+)-MS、1H NMR、13C NMRのデータより、分子組成がC29H25O11Sであることが推測できた（表10）。NBPチオール分解精製品Peak 1と比較すると、両者のNMRスペクトルが類似している。1H NMRスペクトルの解析から、11個の芳香属プロトン［δ 6.036(1H), 6.050 (1H), 6.614 (2H), 7.001 (2H),7.233 (1H), 7.319 (2H), 7.514 (2H)］、5個の非芳香属プロトン［δ4.112 (1H), 4.205 (1H), 4.247 (1H), 5.474 (1H), 5.506 (1H)］の存在が明らかとなった（表11）。さらに、13C -NMRスペクトルの解析から、18種（炭素24個と推定する）の芳香属炭素（δC 95.70, 97.06, 98.89, 106.74, 110.02, 121.22, 127.76, 129.23, 129.94, 130.08, 133.29, 139.09, 139.70, 145.94, 146.39, 156.99, 158.22, 159.22）、5種の非芳香属炭素（δC 37.02, 40.76, 72.77, 74.26, 166.17）の存在が明らかとなった（表 12）。以上のデータを詳細に解析した結果、NBPチオール分解精製品Peak 2の平面構造が推定構造式2のとおり推定された。すなわち、Peak 2成分は（エピ）ガロカテキンガレートのベンジルチオエーテル誘導体であると推定された。以後、「（エピ）ガロカテキンガレートベンジルチオエーテル誘導体」または「（エピ）ガロカテキンガレート誘導体」と称する場合がある。
(3) NBPの他の構成成分の構造分析
　上記(1)に記載の通り、NBPのチオール分解物のHPLC分析結果と、試薬、プロシアニジンC1（エピカテキンの3量体）のチオール分解物、ならびにエピカテキンとエピカテキンガレートから構成されるブドウ種子由来プロシアニジンであるグラヴィノール（登録商標）（キッコーマン製）のチオール分解物のHPLC分析結果との比較から、NBPのチオール分解物は、主要な二成分（peak 1成分およびpeak 2成分）のほかに、エピガロカテキンガレート、エピカテキンのベンジルチオエーテル誘導体、およびエピカテキンガレートのベンジルチオエーテル誘導体である三成分により構成されることが推定された。
　そこで実施例3で調製されたNBP-Aの10K画分を上記(1)で行ったチオール分解法により分解し溶液を分析試料とし、以下の分析を行った。
(3-1) 目的
　LC-MS測定により分析試料の質量スペクトルを取得し、分子量を確認する。
(3-2) 分析試料
　NBP-Aの10K画分のチオール分解溶液
(3-3) 分析項目
　質量分析(LC-MS)
(3-4) 分析方法
　以下のLC-MS条件により測定を行った。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000021
(3-5) 結果
　得られたLC-MS 測定結果を表14 にまとめる。
　TIC で検出されたそれぞれのピークにつき、表14 に示すMS 検出ピークの精密なm/z 値より元素組成演算を行った。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000022
　LC-MS分析では実施例5(1)と同じカラムを使用しているが分析装置が異なるため図2とは若干溶出時間が異なった。他のピークとの関係より図2における24分のピークがLC-MSでの26分のピーク(1)、図2での40分のピークがLC-MSでの42分のピーク(2)、図2での41分のピークがLC-MSでの43分のピーク(3)にそれぞれ対応する。本LC-MS測定ではプロトン化分子イオン（[M+H]+）の質量電荷比(m/z)が測定されるため、LC-MSでのピーク(1)が分子量458であるエピガロカテキンガレートに、ピーク(2)が分子量412であるエピカテキンのベンジルチオエーテル誘導体に、ピーク(3)が分子量564であるエピカテキンガレートのベンジルチオエーテル誘導体とそれぞれ一致することが確認された。ピーク(2)がエピカテキンのベンジルチオエーテル誘導体であることは、プロシアニジンＣ１のチオール分解後のHPLC分析結果との比較により確認した。ピーク(3)がエピカテキンガレートのベンジルチオエーテル誘導体であることは、グラヴィノール（登録商標）のチオール分解後のHPLC分析結果との比較により確認した。また、ピーク(1)が誘導体化されていないエピガロカテキンガレートであることは、エピガロカテキンガレートの市販試薬のHPLC分析結果との比較により確認した。
(4) 構成成分分析まとめ
　本発明のカシューアップル由来プロアントシアニジンの、酸性条件下でベンジルメルカプタンを作用させて得られるチオール分解物は、推定構造式1の構造を有すると推定される化合物（表5に示す条件によるESI-MS分析により表7に示すマスピークが検出され、表6に示す条件による 1H NMRおよび13C NMR分析により表8および9に示す化学シフト値のピークが検出される化合物）と、推定構造式2の構造を有すると推定される化合物（表5に示す条件によるESI-MS分析により表10に示すマスピークが検出され、表6に示す条件による 1H NMRおよび13C NMR分析により表11および12に示す化学シフト値のピークが検出される化合物）と、エピカテキンのベンジルチオエーテル誘導体と、エピカテキンガレートのベンジルチオエーテル誘導体と、エピガロカテキンガレートとを含む。このことから、カシューアップル由来プロデルフィニジンは（エピ）ガロカテキン、（エピ）ガロカテキンガレート、エピカテキン、エピカテキンガレート、およびエピガロカテキンガレートを構成成分とし、下端ユニットがエピガロカテキンガレートである縮合物であると推定される。
　構成単位であるフラボノイド骨格のクロマン環の4位炭素と、隣接する構成単位における他の部位（クロマン環の8位炭素または6位炭素と推定される（非特許文献1等参照））との間に共有結合が形成されて重合されていることが、チオール分解物におけるベンジルチオエーテルの結合位置が4位炭素であることから確認された。
　下端ユニットがエピガロカテキンガレートであることが、チオール分解物においてベンジルチオエーテルにより誘導体化されていない成分がエピガロカテキンガレートのみであることから確認された。
実施例6:カシューアップル由来高分子プロアントシアニジンの重合度
　実施例5ではカシューアップル由来高分子プロアントシアニジンを構成する成分および下端ユニットが推定された。本実施例では重合度を推定する。
　プロアントシアニジンの重合度を推定するために非特許文献1（J.Agric.Food Chem, 2003, 51, 7513-7521）や他の書籍に記載されている方法により検討を行った。これは、実施例5で行ったチオール分解処理物のHPLC分析（検出波長280ｎｍ）により、下端ユニットのカテキン類とその他のカテキン類ベンジルチオエーテル誘導体の面積比により重合度を算出する方法である。
　非特許文献1等の論文では、多くの植物からカテキン若しくはエピカテキンの誘導体しか検出されていない為、構造が異なる他のカテキン類にはそのままの計算式は適用できない。そこで、以下の手順により平均重合度および構成成分比率を算出した。
(1) 分析手順
(i) カシューアップル由来高分子プロアントシアニジンの実施例3で調製された8つの限外ろ過分画物について実施例5記載の手順でチオール分解処理を実施した。
(ii) チオール分解物を、実施例5と同じ条件でHPLC（カラムODS-3、4.6ｘ250ｍｍ）により分析し、280ｎｍでの各ピーク面積を測定した。
(iii) 和光純薬製のエピカテキン（純度98％以上）、エピガロカテキン（純度98％以上）、エピガロカテキンガレート（純度90％以上）、エピカテキンガレート（純度98％以上）を標準品として、複数の濃度でのHPLC分析（実施例5と同条件）を実施した。
(iv) 各標準品の280ｎｍでのピーク面積から、各カテキン類化合物の濃度対ピーク面積の検量線を作成した。
(v) チオール分解物中での、エピガロカテキンガレート、（エピ）ガロカテキンベンジルチオエーテル誘導体、（エピ）ガロカテキンガレートベンジルチオエーテル誘導体、エピカテキンベンジルチオエーテル誘導体、およびエピカテキンガレートベンジルチオエーテル誘導体の濃度を、該当するカテキン類化合物の検量線より算出し、算出された濃度を分子量に基づきモル濃度に換算した。
(vi) モル濃度の比率から以下の計算式により平均重合度（mDP）を算出した。計算式：
平均重合度＝{[（エピ）ガロカテキン誘導体モル濃度]+[（エピ）ガロカテキンガレート誘導体モル濃度]+[エピカテキン誘導体モル濃度]+[エピカテキンガレート誘導体モル濃度]}/{エピガロカテキンガレートのモル濃度}+1
(vii) 含有比率は、モル濃度の比率である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000023
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000024
　本プロアントシアニジンは、下端ユニットがエピガロカテキンガレートで、誘導体と記載されている成分が重合化したものである。また平均重合度は25～73量体であり、主成分の（エピ）ガロカテキンが58.5～61.6％、（エピ）ガロカテキンガレートが28.5～30.4％であることが判明した。このような天然物由来の高分子プロアントシアニジンは報告されていないため、カシューアップル特有の高分子プロアントシアニジンと考えられる。
実施例7: カシューアップル由来高分子プロアントシアニジンと他のα-アミラーゼ阻害成分の活性比較
　カシューアップル由来高分子プロアントシアニジン、他のα-アミラーゼ阻害活性成分、およびグラヴィノール（登録商標）（ブドウ種子由来プロアントシアニジン）に関してα-アミラーゼ阻害活性のIC50（最終検体濃度）を測定し、活性の比較検討を行った。測定は実施例1(2)と同じ方法で行い、全ての検体の測定は同一日に実施した。
　各検体の調製法を以下に示す。
(i) 蕃爽麗茶（登録商標）由来C18結合ポリフェノール成分
　グァバ葉ポリフェノール配合茶飲料（蕃爽麗茶（登録商標）(ヤクルト製））500ｇをC18 Cartriges (Sep-Pak Vac 35cc、Waters製)に負荷し、未吸着成分を十分な精製水で洗浄する。このC18樹脂に結合した成分をメタノールで溶出させ、減圧蒸留乾固させて、蕃爽麗茶（登録商標）由来C18結合ポリフェノール（蕃爽麗茶PP）を363ｍｇ回収した。この0.2％蕃爽麗茶PP水溶液を調製し、0.22μｍのフィルター（マイレクスGP、ミリポア社製）でろ過した溶液を検体とした。
(ii) グラヴィノール（登録商標）（ブドウ種子由来プロアントシアニジン）
　グラヴィノール（登録商標）(Gravinol、ブドウ種子抽出物、キッコーマン製)の0.2％水溶液を調製し、0.22μｍのフィルター（マイレクスGP、ミリポア社製）でろ過した溶液を検体とした。
(iii) アカルボース
　アカルボースは、グルコシダーゼ阻害作用を有する血糖値上昇抑制剤（医薬品）として用いられている。またα-アミラーゼ阻害活性を有することから比較対照品として用いた。実験にはアカルボース試薬(LKT Laboratories,Inc.)の0.4％水溶液を調製し、0.22μｍのフィルター（マイレクスGP、ミリポア社製）でろ過した溶液を検体とした。
(iv) カシューアップル由来高分子プロアントシアニジン
　実施例3で調製したカシューアップル由来NBP-Aの限外ろ過100K以上画分の0.1％水溶液を調製し、0.22μｍのフィルター（マイレクスGP、ミリポア社製）でろ過した溶液を検体とした。
　測定結果を以下の表に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000025
　本検討の結果、カシューアップル由来高分子プロアントシアニジンが強いα-アミラーゼ阻害活性を有することが判明した。本カシューアップル由来高分子プロアントシアニジンは、蕃爽麗茶PPより33倍活性が強いことになる。蕃爽麗茶（登録商標）は食事毎に70ｍｇ以上（グァバ葉ポリフェノール換算）を摂取することで所定の効果が認められ、日本の厚生労働省により特定保健用食品として認可されていることを鑑みれば、カシューアップル由来高分子プロアントシアニジンを食事毎に2.2ｍｇ以上摂取すれば同等の血糖値上昇抑制効果が達成される可能性がある。すなわち、カシューアップル由来高分子プロアントシアニジンを精製水220ｇに僅か0.0001％またはそれ以上含有させることでα-アミラーゼ阻害活性を有する飲料組成物が提供できると期待される。また配合させた加工食品及び飲料などの風味等への影響が少ないことも期待できる。
　表17に示されるように、プロシアニジンであるグラヴィノール（登録商標）と比較して、プロデルフィニジンを主成分とする本発明のカシューアップル由来高分子プロアントシアニジンが高いα－アミラーゼ阻害活性を有していた。このことから、プロデルフィニジン成分を含んだ高分子プロアントシアニジンがプロシアニジンよりも高いα－アミラーゼ阻害活性を有していると結論付けられる。
実施例8: カシューアップル由来高分子プロアントシアニジンと他のリパーゼ阻害成分の活性比較
　肥満を抑制するためには、脂質の吸収を抑制することも有効であることが知られており、多くのリパーゼ活性阻害成分が研究開発されている。茶飲料である商品名「黒烏龍茶」（サントリー製）は、烏龍茶ポリフェノールが配合されており、当該烏龍茶ポリフェノールの働きによりリパーゼが阻害され脂質の吸収を抑制するという効果に基づき日本の厚生労働省により特定保健用食品として認可されている。
　本実施例では、カシューアップル由来高分子プロアントシアニジン、当該茶飲料の成分、およびその他のリパーゼ活性阻害成分についてリパーゼ活性阻害のIC50（最終検体濃度）を測定し、阻害活性の比較検討を行った。
　測定は、非特許文献2（J. Agric. Food Chem. 2007, 55, 4604-4609）に準じて行った。蛍光測定用96wellプレートに、検体溶液を25μｌ/wellで添加した。これに、本検群にPBS(-)で調製したリパーゼ酵素溶液（Lipase from porcine pancreas Type II、SIGMA製）を25μｌ/well、盲検群にはPBS(-)を25μｌ/wellで添加した。それらにPBS(-)で調製した0.1ｍMの蛍光基質溶液（4-methylumbelliferyl oleate、Fluka製）を50μｌ/wellを添加した後20分反応させた。反応停止液として0.1Mクエン酸ナトリウム溶液（ｐH4.2）を100μｌ/well添加し、蛍光測定用プレートリーダー（Ex365ｎｍ　Ｅｍ450ｎｍ）で蛍光強度の測定を行った。ブランク試験としては、「検体溶液」に代えて、各検体溶液の調製に用いられた溶媒を同量使用した以外は上記と同様の手順で本検群および盲検群の試料を調製し蛍光強度を測定した。リパーゼ阻害率は以下の式から算出した。
＜計算式＞
リパーゼ阻害活性（％）＝（1－（A－B）/（C－D））ｘ100
A：試料溶液の盲検の蛍光強度
B：試料溶液の本検の蛍光強度
C：ブランク溶液（希釈溶媒）の盲検の蛍光強度
D：ブランク溶液（希釈溶媒）の本検の蛍光強度
　また各試料溶液の酵素阻害活性は、複数の濃度で測定し、リパーゼ酵素を50％阻害する濃度（IC50）を算出した。
　以下に本検討に用いた各検体の種類と検体溶液の調製法について示す。
(i) 黒烏龍茶由来C18結合ポリフェノール成分
　市販の茶飲料である黒烏龍茶（サントリー製）500ｇをC18 Cartriges(Sep-Pak Vac 35cc、Waters製)に負荷し、未吸着成分を十分な精製水で洗浄した。このC18樹脂に結合した成分をメタノールで溶出させ、減圧蒸留乾固させて、黒烏龍茶由来C18結合ポリフェノール（黒烏龍茶PP）を442.9ｍｇ回収した。本来、経口用には精製水で溶解できなければ適切ではないが、精製した黒烏龍茶PPは、精製水にほとんど溶解しないため、50％（W/W）メタノール水溶液で1.0％溶液を調製し、0.22μｍのフィルター（マイレクスGP、ミリポア社製）でろ過した溶液を検体とした。また検体溶液の希釈は精製水で行った。検体の希釈率と同様に50％メタノール水溶液のリパーゼ阻害活性も測定したが、リパーゼ阻害活性は認められなかった。
(ii) エピガロカテキンガレート
　特許文献5（特開2006-1909号公報）「リパーゼ阻害活性を有する新規化合物」にリパーゼ阻害活性を有することが記載されているため、エピガロカテキンガレート（和光純薬）の0.2％水溶液を調製し、0.22μｍのフィルター（マイレクスGP、ミリポア社製）でろ過した溶液を検体とした。
(iii) グラヴィノール（登録商標）（ブドウ種子由来プロアントシアニジン）
　グラヴィノール（登録商標）(Gravinol、ブドウ種子抽出物、キッコーマン製)の0.2％水溶液を調製し、0.22μｍのフィルター（マイレクスGP、ミリポア社製）でろ過した溶液を検体とした。
(iv) クロロゲン酸
　リパーゼ測定法を記載する非特許文献2に記載されているクロロゲン酸（MP Biomedicals, Ins.）の1.0％水溶液を調製し、0.22μｍのフィルター（マイレクスGP、ミリポア社製）でろ過した溶液を検体とした。
(v) カシューアップル由来高分子プロアントシアニジン
　実施例3で調製したカシューアップル由来NBP-Aの限外ろ過100K以上画分の0.2％水溶液を調製し、0.22μｍのフィルター（マイレクスGP、ミリポア社製）でろ過した溶液を検体とした。
　測定結果を以下の表に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000026
　カシューアップル由来高分子プロアントシアニジンのIC50は、0.5μｇ/ｍｌで同時に測定したクロロゲン酸は77.5μｇ/ｍｌであった。非特許文献2では、9量体以上のプロシアニジンのリパーゼ阻害IC50は、0.9μｇ/ｍｌとされており、同時に測定しているクロロゲン酸（Chlorogenic acid）は、59.8μｇ/ｍｌである。これらのことから、カテキン及びエピカテキン重合体であるプロシアニジンより、プロデルフィニジン成分を含んだ高分子プロアントシアニジンの活性が十分に強いと考えられる。
　また、表18に示されるように、プロシアニジンであるグラヴィノール（登録商標）と比較して、プロデルフィニジンを主成分とする本発明のカシューアップル由来高分子プロアントシアニジンが高いリパーゼ阻害活性を有していた。このことから、プロデルフィニジン成分を含んだ高分子プロアントシアニジンがプロシアニジンよりも高いリパーゼ阻害活性を有しているといえる。
　以上の結果からカシューアップル由来高分子プロアントシアニジンは非常に強いリパーゼ阻害活性を有することが判明した。黒烏龍茶PPは、精製水では十分に溶解しないため水溶液では不溶性の沈殿を生じる可能性もある。カシューアップル由来高分子プロアントシアニジンは文献値より小さい値を示したことから、非常に強いリパーゼ阻害活性を有するといえる。黒烏龍茶の特定保健用食品としての摂取量は、70ｍｇである。本測定結果から同等の活性を示すカシューアップル由来高分子プロアントシアニジンは、7.5ｍｇとなる。すなわち、加工食品または飲料100g中にカシューアップル由来高分子プロアントシアニジンを僅か0.0075％またはそれ以上含有させることでリパーゼ阻害作用を有する飲食品組成物が提供されることが期待される。
実施例9: 細菌性リパーゼ阻害活性の測定
　細菌性リパーゼは、皮膚表層に存在する、プロピオニバクテリウム・アクネス(Propionibacterium acnes：通称アクネ菌)、マイクロコッカス属の細菌(Micrococcus sp.)、シュードモナス属の細菌（Pseudomonas sp.）などの細菌類が産生することが知られている。特にはアクネ菌については、そのリパーゼによって生成される遊離脂肪酸により細菌数増加や皮膚炎症反応の惹起について研究が進められており、それらに対してリパーゼ阻害剤が有効であることも知られている。
　本発明品と公知の複数の成分のリパーゼ阻害活性を広く評価するために、市販されているシュードモナス属の細菌（Pseudomonas sp.）由来のリパーゼを用いた。シュードモナス属は、グラム陰性で好気性真性細菌の一属である。代表的な菌としては緑膿菌 (P. aeruginosa)が良く知られている。実験ではシグマ　アルドリッチ　ジャパン社のLipase from Pseudomonas sp.(Type XIII,≧15units/solid、L9518)を用いた。本リパーゼは、非常に強力な酵素である。予備検討から阻害活性試験では0.1μｇ/ｍｌのリパーゼ溶液を使用した。実験では、本発明品のカシューアップル由来高分子プロアントシアニジンを含む実施例2及び3で得られた各分画物について測定した。また、比較対照品としては、以下の試薬を用いてリパーゼ阻害活性を測定した。
＜細菌性リパーゼ活性阻害試験の被検物質：本発明品＞
(1) 本発明品のカシューアップルピューレ由来10K限外ろ過膜濃縮物の凍結乾燥品
　カシューアップルピューレ4773ｇから、実施例2に記載の手順の分子量1万の限外ろ過膜（ハイドロザルト（登録商標）10KDa、ザルトリウス社製）による限外ろ過濃縮処理までを行い、濃縮液を凍結乾燥処理し、26.4ｇの粉末を得た。
(2) 本発明品のカシューアップル由来HP-20樹脂精製処理物の凍結乾燥粉品
　上記(1)で得られた10K限外ろ過濃縮物の凍結乾燥品約26ｇを試料として、実施例2に記載されている手順と同様の手順でHP-20樹脂精製処理を行い、凍結乾燥処理により3.7ｇの粉末を得た。
(3) 本発明品のカシューアップル由来高分子プロアントシアニジン（NBP-M水溶液）
　実施例2でLH-20樹脂カラム分画処理し、メタノールで溶出させ、実施例3の手順で限外ろ過膜により分画した4種の分画物の凍結乾燥物をそれぞれ0.1％水溶液に調製したものを、各画分の重量比率で混合した溶液をNBP-M水溶液とした。
(4) 本発明品のカシューアップル由来高分子プロアントシアニジン（NBP-A水溶液）
　実施例2でLH-20樹脂カラム分画処理し、70％アセトン水溶液で溶出させ、実施例3の手順で限外ろ過膜により分画した4種の分画物の凍結乾燥物をそれぞれ0.1％水溶液に調製したものを、各画分の重量比率で混合した溶液をNBP-A水溶液とした。
＜細菌性リパーゼ活性阻害試験の被検物質：比較対照品＞
(5) テトラサイクリン塩酸塩（和光純薬工業製、生化学用、純度90％以上、205-08591）
　テトラサイクリン系に属する抗生物質である。微生物のタンパク質合成を阻害し、広範囲な抗菌スペクトルを示す。リパーゼ阻害活性による内服及び外用剤としてテトラサイクリン系の抗生物質は広く使用されている。特許文献7(特開2008-19180号公報)などにもリパーゼ阻害活性の比較物質として記載されている。
(6) 3,4ジヒドキシけい皮酸（カフェイン酸、カフェー酸：和光純薬工業製、和光一級、純度98％以上）
　特許文献8（特開2005-53891号公報）に細菌性リパーゼ阻害活性成分として記載。
(7) 没食子酸（没食子酸1水和物、和光純薬工業製、和光一級）
　特許文献8（特開2005-53891号公報）に細菌性リパーゼ阻害活性成分として記載。
(8) クロロゲン酸（Chlorogenic acid,MP Biomedicals Inc.製、和光純薬工業輸入・販売）
　非特許文献2（J. Agric. Food Chem. 2007, 55, 4604-4609）に膵臓由来リパーゼ阻害活性成分として記載。
(9) （-）-没食子酸エピガロカテキン（エピガロカテキンガレート、和光純薬工業製、生化学用、純度90％以上）
　膵臓由来リパーゼ阻害活性成分として報告されている。また本発明品の高分子プロアントシアニジンの主要な構成成分の一部である可能性が高い。
＜リパーゼ阻害活性試験方法＞
　測定は、非特許文献2（J. Agric. Food Chem. 2007, 55, 4604-4609）に準じて行った。蛍光測定用96wellプレートに、検体希釈溶液及びブランク溶液（検体希釈溶液）を25μｌ/wellで添加する。これに、本検群にPBS(-)で調製したリパーゼ酵素溶液（Lipase from Pseudomonas sp. TypeXIII、SIGMA製）を25μｌ/well、盲検群にはPBS(-)を25μｌ/wellで添加する。それらにPBS(-)で調製した0.1ｍMの蛍光基質溶液（4-methylumbelliferyl oleate、Fluka製）を50μｌ/wellを添加した後20分反応させる。反応停止液として0.1Mクエン酸ナトリウム溶液（ｐH4.2）を100μｌ/well添加し、蛍光測定用プレートリーダー（Ex365ｎｍ　Ｅｍ450ｎｍ）で蛍光強度の測定を行った。リパーゼ阻害率は以下の式から算出した。尚、3,4ジヒドキシけい皮酸と没食子酸は、10％メタノール水溶液で溶解し、ブランク溶媒も同じ濃度のメタノール水溶液で測定を行った。
＜計算式＞
リパーゼ阻害活性（％）＝（1－（A－B）/（C－D））ｘ100
A：試料溶液の盲検の蛍光強度
B：試料溶液の本検の蛍光強度
C：ブランク溶液（希釈溶媒）の盲検の蛍光強度
D：ブランク溶液（希釈溶媒）の本検の蛍光強度
　また各試料溶液の酵素阻害活性は、複数の濃度で測定し対数プロットした測定点より最小二乗法によりリパーゼ酵素を50％阻害する濃度（IC50）を算出した。
(1)～(9) の検体の測定結果を次表に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000027
　この結果から、NBP-M及びNBP-A水溶液は、細菌性リパーゼに対して非常に強い阻害活性を有することが判明した。また、(1) 10K限外ろ過濃縮物でもテトラサイクリン塩酸塩や3,4ジヒドキシけい皮酸などより強い阻害活性を有することから、本発明品の高分子プロアントシアニジンを含む粗精製物でも十分に作用が期待できることが判明した。
実施例10: カシューアップル由来高分子プロアントシアニジンの限外ろ過分画物の細菌性リパーゼ阻害活性
　実施例3で限外ろ過分画し凍結乾燥処理した粉末を用いて、分子量と細菌性リパーゼ阻害活性について検討を行った。リパーゼ阻害活性試験は、実施例9の方法で行った。その結果を次表に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000028
　この結果から、カシューアップル由来高分子プロアントシアニジンの分子量が大きくなるほど細菌性リパーゼ阻害活性が強くなる傾向があることが判明した。このことから、分子量１万よりも大きな限外ろ過膜で処理を行うことにより、粗精製物の細菌性リパーゼ阻害活性がより強くなることが考えられる。これは、最終製品に求められるリパーゼ阻害活性の強さと生産効率の観点から限外ろ過膜の種類を選択することが可能であることを意味している。しかし、本発明品において限外ろ過膜処理は、必須ではなく、カシューアップル由来高分子プロアントシアニジンを十分な量を含んでいることが、リパーゼ阻害剤として最も重要な要素である。
　医薬品である「ステデルム　軟膏クリーム（鳥居薬品）」には、特許文献7（特開2008-19180号公報）にも記載されているイブプロフェンピコノールが、リパーゼ阻害剤として5％配合されている。このため、本発明品の10K限外ろ過濃縮物の粗精製物でも5％以下の含有量で効果が期待できることが推定される。更に、精製された100K NBP-Aであれば0.05％以上を含有すれば十分な効果が期待できることが推測される。なぜなら、リパーゼ阻害活性のIC50を比較すると、100K NBP-Aは、イブプロフェンピコノールと同等のリパーゼ阻害活性を有するテトラサイクリン塩酸塩の100倍以上のリパーゼ阻害活性を有すると言えるからである。これらのことから、本発明品であるカシューアップル由来高分子プロアントシアニジンを0.001％～10％、望ましくは0.01％～5％含有する組成物は、リパーゼ阻害性組成物として有効であると期待できる。
参考実験: DPPHラジカル消去による抗酸化活性測定
　安定なラジカルであるDiphenyl-p-picrylhydradil (DPPH)のエタノール液を用いて、抗酸化活性を評価した。250mM酢酸緩衝液(pH=5.5) 1600μlにエタノール 1200μl、検体 400μl(任意の濃度に調整)を混合し、30℃、5分間プレインキュベートした。この液に500μM DPPH/エタノール溶液を800μl添加混合し30℃、30分間放置後、517nmの吸光度を測定した。エタノールで溶解した比較対照品を検体とする場合には、エタノール800μｌ、検体のエタノール溶液400μｌ、精製水400μｌを混合し、30℃、5分間プレインキュベートした。この液に500μM DPPH/エタノール溶液を800μl添加混合し30℃、30分間放置後、517nmの吸光度を測定した。コントロールには、精製水を用いて同様の操作を行ったものを用いた。測定された吸光度から、次式によりラジカル消去率を算出した。
消去率(%) = (1 － [試料の吸光度] / [コントロールの吸光度]) × 100
　試料溶液の試料濃度を段階的に変更して上記消去率の測定を行い、DPPHラジカルの消去率が50%になる試料溶液の濃度を求め、DPPHラジカル50%消去濃度とした。よって、この数値が低いほど、ラジカル消去能が高い。以下に試験に使用した検体と測定結果を表に示す。
測定検体
＜本発明品：実施例9で調製したものと同じ検体＞
(1) 本発明品のカシューアップルピューレ由来10K限外ろ過膜濃縮物の凍結乾燥品（10K限外ろ過濃縮物）
(2) 本発明品のカシューアップル由来HP-20樹脂精製処理物の凍結乾燥粉品（HP-20樹脂精製品）
(3) 本発明品のカシューアップル由来高分子プロアントシアニジン（NBP-M水溶液）
(4) 本発明品のカシューアップル由来高分子プロアントシアニジン（NBP-A水溶液）
＜比較対照品：実施例9で使用した試薬と同じ＞
(5) 3,4ジヒドキシけい皮酸（カフェイン酸、カフェー酸：和光純薬工業製、和光一級、純度98％以上）：エタノールに溶解後実験に使用
(6) 没食子酸（没食子酸1水和物、和光純薬工業製、和光一級）：エタノールに溶解後実験に使用
(7) （-）-没食子酸エピガロカテキン（エピガロカテキンガレート、和光純薬工業製、生化学用、純度90％以上）：精製水に溶解後実験に使用
(8) L(+)-アスコルビン酸（関東化学製、特級）：精製水に溶解後使用
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000029
　本測定の結果、本発明品の精製物である (3) NBP-M水溶液及び (4) NBP-A水溶液には、抗酸化成分であるアスコルビン酸と同等な十分な抗酸化性があることが判明した。また、粗精製物である10K限外ろ過濃縮物及びHP-20樹脂精製品にも抗酸化性があることが確認された。これらの結果によるとリパーゼ阻害活性とラジカル消去活性は相関するものではない。本発明品は、リパーゼ阻害能力と抗酸化能力を独立して有する。
実施例11: 各種ペクチナーゼ処理とアミラーゼ阻害活性の検討
(1) 実験目的
　上記実施例ではペクチナーゼとしてペクチナーゼA「アマノ」（天野エンザイム社）を使用している。本実施例では、他のペクチナーゼ製品（同社製のペクチナーゼG「アマノ」及びペクチナーゼPL「アマノ」）を使用した場合にも、上記活性を有するカシューアップルピューレ処理物が得られることを確認する。
(2) カシューアップルピューレ原料
　実施例1～10において使用した原料とは異なるロットのカシューアップルピューレ原料を使用した。
(3) 実験手順
(i) カシューアップルピューレを50ｍｌ遠心管に各20ｇ3本に分注した。
(ii) カシューアップルピューレ20ｇにペクチナーゼA「アマノ」、ペクチナーゼG「アマノ」及びペクチナーゼPL「アマノ」を各0.1ｇ添加し、50℃の恒温槽で1時間加温処理した。これを3000rpm, 20分, 20℃で遠心分離処理し、処理後の上清を0.22μｍフィルター（マイレクスGP、ミリポア製）1個を用いてろ過し、得られたフィルターろ過液を調製し検体とした。
(iii) 検体を精製水で希釈して20％、10％、5％、2.5％、1.25％水溶液を調製し、ブタ膵臓由来のα－アミラーゼ阻害活性を測定した。
(4) 実験結果
　図19にα－アミラーゼ阻害活性の測定結果を示す。
　全ての酵素処理液でアミラーゼ阻害活性が確認できた。
(5) 実験結果の考察
　ペクチナーゼA「アマノ」には、ペクチナーゼ45％、β-アミラーゼ25％、珪藻土30％が含まれている。ペクチナーゼG「アマノ」には、ペクチナーゼ90％及び珪藻土10％が含まれている。またペクチナーゼPL「アマノ」には、ペクチナーゼ70％を主成分としているが、ペクチナーゼ活性と繊維消化力を有する。これらの組成が異なる三種のペクチナーゼ製剤のいずれを使用しても本発明のカシューアップルピューレ処理物が得られた。従って、ペクチナーゼ活性を有する食品工業用のペクチナーゼ酵素であれば問題なく使用可能である。
実施例12
(1)目的
本試験は、カシューアップルピューレ、および遠心分離残渣を原料とした場合のαアミラーゼ阻害活性を確認することを目的とする。
(2)手順
　実験手順は以下の通りである。
(i) カシューアップルピューレ40.82ｇを3000rpm20分20℃で遠心分離処理を行った。
(ii) ピューレの遠心処理の沈殿物5.6ｇに精製水14.4ｇを加え懸濁し、ペクチナーゼA「アマノ」を0.1ｇ添加し、50℃の恒温槽で1時間加温処理した。これを3000rpm20分20℃で遠心分離処理後の上清を0.22μｍフィルター（マイレクスGP、ミリポア製）1個を用いてフィルターろ過液を調製し検体1とした。
(iii) カシューアップルピューレ20ｇにペクチナーゼA「アマノ」を0.1ｇ添加し、50℃の恒温槽で1時間加温処理した。これを3000rpm20分20℃で遠心分離処理後の上清を0.22μｍフィルター（マイレクスGP、ミリポア製）1個を用いてフィルターろ過液を調製し検体2とした。
(iv) 検体1～5を精製水で希釈して25％、10％、5％水溶液を調製し、ブタ膵臓由来のα－アミラーゼ阻害活性を測定した。
(3)実験結果
　以下の表にα－アミラーゼ阻害活性の測定結果を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000030
　ピューレの遠心沈殿物及びピューレのペクチナーゼ処理フィルターろ過液には、アミラーゼ阻害活性が確認できた。
処方例1；化粧水
　高分子プロアントシアニジンを含有する本発明のカシューアップル由来10K限外ろ過濃縮物（実施例9(1)で調製されたもの）を配合した化粧水を表23に示す組成及び製法で調整することが可能である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000031
（製法）
１）成分（１）～（５）を混合して、（７）で８０にし、５０℃で攪拌しながら溶解する。
２）成分（８）～（11）を混合して、５０℃で攪拌しながら溶解する。
３）１）に２）を少量ずつ加えて、５０℃で混和攪拌する。
４）均一に混和したら、更に攪拌しながら５０℃から３０℃に下げる。
５）３０℃になったら攪拌を止め、（６）を加え（７）で１００に合わせる。
６）再度、混和攪拌し、均一に混和された化粧水を得る。
処方例２；乳液
　高分子プロアントシアニジンを含有する本発明のカシューアップル由来10K限外ろ過濃縮物（実施例9(1)で調製されたもの）を配合した乳液を表24に示す組成及び製法で調整することが可能である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000032
（製法）
１）成分（１）、（８）を混合して、（９）で７０にし、８０℃で加温する。
２）成分（２）、（３）を（９）と混合して、常温で攪拌しながら溶解する。
３）成分（４）、（５）を（９）と混合して、常温で攪拌しながら溶解する。
４）成分（６）、（７）を（９）と混合して、常温で攪拌しながら溶解する。
５）（９）に１）を少量ずつ加え、８０℃で混和攪拌する。
６）更に攪拌しながら、５）に２）、３）の順に加える。
７）均一に混和したら、攪拌しながら５０℃に下げる。
８）５０℃になったら、４）を加え（９）で１００に合わせる。
９）再に攪拌しながら３０℃に下げる。
１０）３０℃になったら攪拌を止め、均一に混和された乳液を得る。
処方例３；クリーム
　高分子プロアントシアニジンを含有する本発明のカシューアップル由来10K限外ろ過濃縮物（実施例9(1)で調製されたもの）を配合したクリームを表25に示す組成及び製法で調整することが可能である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000033
（製法）
１）成分（１）～（９）を混合して、８０℃で攪拌しながら溶解する。
２）成分（10）～（12）を混合して、８０℃で攪拌しながら溶解する。
３）２）に１）を少量ずつ加え、乳化する。
４）攪拌しながら冷却し、４０℃に下げる。
５）４０℃になったら攪拌を止め、均一に混和されたクリームを得る。
　本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。

Claims (22)

  1. 　カシューアップルに植物繊維分解酵素を作用させる工程を含む方法により調製される、カシューアップル由来プロアントシアニジンを含有する組成物。
  2. 　前記方法が、カシューアップルに植物繊維分解酵素を作用させる工程で得られた酵素分解物を、分画分子量が10,000以上である限外ろ過膜により濃縮する工程を更に含む、請求項１に記載の組成物。
  3. 　前記方法が、カシューアップルに植物繊維分解酵素を作用させる工程よりも後に行われる、ポリフェノールを濃縮または分離する工程を更に含む、請求項１または２に記載の組成物。
  4. 　前記方法が、カシューアップルに植物繊維分解酵素を作用させる工程よりも後に行われる、プロアントシアニジンを濃縮または分離する工程を更に含む、請求項１～３のいずれか1項に記載の組成物。
  5. 　前記プロアントシアニジンがプロデルフィニジンを含有する、請求項１～４のいずれか１項に記載の組成物。
  6. 　請求項１～５のいずれか１項に記載の組成物を含有する飲食品組成物、化粧品組成物または医薬組成物。
  7. 　（エピ）ガロカテキンと、（エピ）ガロカテキンガレートとを少なくとも構成単位として含む、平均重合度が２０以上である重合体であるプロアントシアニジン。
  8. 　構成単位として（エピ）ガロカテキンを５０～８０モル％、（エピ）ガロカテキンガレートを２０～５０モル％含有する、請求項７記載のプロアントシアニジン。
  9. 　エピカテキンとエピカテキンガレートとを構成単位として更に含む、請求項７または8記載のプロアントシアニジン。
  10. 　重合体のすくなくとも一方の末端がエピガロカテキンガレートである、請求項７～９のいずれか１項記載のプロアントシアニジン。
  11. 　カシューアップルに植物繊維分解酵素を作用させて得られる酵素分解物から分離されたプロアントシアニジンである、請求項７～１０のいずれか１項記載のプロアントシアニジン。
  12. 　請求項７～１１のいずれか１項記載のプロアントシアニジンを含有する飲食品組成物、化粧品組成物または医薬組成物。
  13. 　請求項１～５のいずれか１項に記載の組成物を有効成分として含有するα-アミラーゼ阻害剤。
  14. 　請求項１～５のいずれか１項に記載の組成物を有効成分として含有する、α-アミラーゼ活性の阻害により症状が予防もしくは改善される状態もしくは疾患の予防剤または治療剤。
  15. 　請求項１～５のいずれか１項に記載の組成物を有効成分として含有するリパーゼ阻害剤。
  16. 　請求項１～５のいずれか１項に記載の組成物を有効成分として含有する、リパーゼ活性の阻害により症状が予防もしくは改善される状態もしくは疾患の予防剤または治療剤。
  17. 　請求項１～５のいずれか１項に記載の組成物を有効成分として含有する脂質劣化抑制剤。
  18. 　請求項７～１１のいずれか１項記載のプロアントシアニジンを有効成分として含有するα-アミラーゼ阻害剤。
  19. 　請求項７～１１のいずれか１項記載のプロアントシアニジンを有効成分として含有する、α-アミラーゼ活性の阻害により症状が予防もしくは改善される状態もしくは疾患の予防剤または治療剤。
  20. 　請求項７～１１のいずれか１項記載のプロアントシアニジンを有効成分として含有するリパーゼ阻害剤。
  21. 　請求項７～１１のいずれか１項記載のプロアントシアニジンを有効成分として含有する、リパーゼ活性の阻害により症状が予防もしくは改善される状態もしくは疾患の予防剤または治療剤。
  22. 　請求項７～１１のいずれか１項記載のプロアントシアニジンを有効成分として含有する脂質劣化抑制剤。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2016209802A (ja) * 2015-05-07 2016-12-15 株式会社ニッピ プロアントシアニジン分離用組成物、クロマトグラフィー用担体または澱下げ剤、プロアントシアニジン分離用組成物の製造方法、およびプロアントシアニジン３〜５量体の製造方法
CN106795145A (zh) * 2014-08-04 2017-05-31 国家农艺研究院 类黄酮衍生化合物及通过缩合鞣酸的解聚制备其的方法
JP2017524373A (ja) * 2014-05-30 2017-08-31 シャクリー コーポレイション シャルドネブドウ種子抽出物

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2717722A1 (en) * 2011-06-07 2014-04-16 Dialpha Composition comprising cashew apple extract
BR102012009761A2 (pt) * 2012-04-26 2015-01-20 Embrapa Pesquisa Agropecuaria Processo de concentracao e purificacao de extrato obtido a partir de residuos de pseudofruto de caju e produto de elevado teor de carotenoides
CN102960729A (zh) * 2012-12-13 2013-03-13 百岳特生物科技（上海）有限公司 用于调节淀粉分解酶活性的花生膜萃取物及其制备方法
JP6336249B2 (ja) * 2013-05-27 2018-06-06 学校法人 京都産業大学 ウイルス不活化剤、並びに、ウイルス不活化方法
US10709751B2 (en) 2014-05-30 2020-07-14 Shaklee Corporation Chardonnay grape seed extract
EP3272351A4 (en) * 2015-05-11 2018-12-05 Meiji Co., Ltd. Composition for facilitating production of brain-derived neurotrophic factor
EP3592859A1 (en) * 2017-03-07 2020-01-15 Syddansk Universitet Methods for obtaining natural colourants from plant based materials
CN107602521B (zh) * 2017-11-01 2020-06-19 天津农学院 一种火龙果皮提取原花青素的方法及制得的原花青素与用途
CN108634143A (zh) * 2018-04-12 2018-10-12 海南仕江儿童食品有限公司 一种腰果梨果汁的制备方法
CN110003534B (zh) * 2019-04-04 2020-12-25 沈阳农业大学 一种提高淀粉中sds和rs含量的方法
CN112876671B (zh) * 2021-01-21 2022-09-02 广东省农业科学院动物科学研究所 一种植物缩合单宁的提取和纯化方法及其应用
WO2022205137A1 (zh) * 2021-03-31 2022-10-06 贝尔克斯生技股份有限公司 高聚原花青素组合物及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH09291039A (ja) * 1995-12-26 1997-11-11 Suntory Ltd プロシアニジンを有効成分とする抗肥満剤
WO2002017732A2 (en) * 2000-08-31 2002-03-07 Tempesta, Michael, S. Efficient method for producing compositions enriched in anthocyanins
JP2006151944A (ja) * 2004-10-29 2006-06-15 Asahi Breweries Ltd 中性脂肪代謝制御剤、それを含有する飲食品、食品添加物及び医薬

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6294190B1 (en) 1995-12-26 2001-09-25 Suntory Limited Antiobestic agent containing procyanidin as the active ingredient
JP2000044472A (ja) 1998-07-30 2000-02-15 Kikkoman Corp 糖尿病性合併症の予防または治療薬剤
US7306815B2 (en) 2000-08-31 2007-12-11 Phenolics, Llc Compositions enriched in phenolic compounds and methods for producing the same
JP3966689B2 (ja) 2000-12-15 2007-08-29 株式会社ファンケル リパーゼ阻害剤
JP2004115466A (ja) 2002-09-27 2004-04-15 Toyo Shinyaku:Kk 皮膚外用剤
JP4220769B2 (ja) 2002-12-10 2009-02-04 花王株式会社 抗アクネ菌組成物
JP2005053891A (ja) 2003-07-18 2005-03-03 Seresu Corporation:Kk リパーゼ阻害剤
JPWO2005030200A1 (ja) 2003-09-26 2006-12-07 麒麟麦酒株式会社 自己免疫疾患治療剤
JP2005314316A (ja) 2004-04-30 2005-11-10 Kikkoman Corp 抗ｓａｒｓコロナウイルス剤
JP5475938B2 (ja) 2004-06-21 2014-04-16 サントリーホールディングス株式会社 リパーゼ阻害活性を有する新規化合物
JP2006016367A (ja) 2004-07-05 2006-01-19 Suntory Ltd リパーゼ阻害剤
JP4828126B2 (ja) 2005-02-03 2011-11-30 日本メナード化粧品株式会社 抗菌剤
JP2008019180A (ja) 2006-07-11 2008-01-31 Shiseido Co Ltd リパーゼ阻害剤、角栓形成抑制剤、毛穴目立ち抑制剤およびニキビ抑制剤
JP2008138129A (ja) 2006-12-04 2008-06-19 Osaka Univ アミラーゼ阻害剤

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH09291039A (ja) * 1995-12-26 1997-11-11 Suntory Ltd プロシアニジンを有効成分とする抗肥満剤
WO2002017732A2 (en) * 2000-08-31 2002-03-07 Tempesta, Michael, S. Efficient method for producing compositions enriched in anthocyanins
JP2006151944A (ja) * 2004-10-29 2006-06-15 Asahi Breweries Ltd 中性脂肪代謝制御剤、それを含有する飲食品、食品添加物及び医薬

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AZEREDO, H.M.C. ET AL.: "Evaluation of the impact of pretreatments on carotenoid extraction by sequential pressing of cashew apple pomace", BOLETIM DO CENTRO DE PESQUISA E PROCESSAMENTO DE ALIMENTOS, vol. 24, no. 2, 2006, pages 397 - 404 *
LEE, Y.A. ET AL.: "Inhibitory activities of proanthocyanidins from persimmon against oxidative stress and digestive enzymes related to diabetes", JOURNAL OF NUTRITIONAL SCIENCE AND VITAMINOLOGY, vol. 53, no. 3, June 2007 (2007-06-01), pages 287 - 292 *
LOO, A.E.K. ET AL.: "Assay-guided fractionation study of alpha-amylase inhibitors from Garcinia mangostana pericarp", JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY, vol. 55, no. 24, November 2007 (2007-11-01), pages 9805 - 9810 *
MCDOUGALL, G.J. ET AL.: "Different polyphenolic components of soft fruits inhibit alpha-amylase and alpha-glucosidase", JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY, vol. 53, no. 7, 2005, pages 2760 - 2766 *
MELO, ENAYDE DE ALMEIDA ET AL.: "Polyphenol, ascorbic acid and total carotenoid contents in common fruits and vegetables", BRAZILIAN JOURNAL OF FOOD TECHNOLOGY, vol. 9, no. 2, 2006, pages 89 - 94 *
SATYANARAYANA, D. ET AL.: "Studies on the polyphenols of cashew apple (Anacardium occidentale)", LEATHER SCIENCE, vol. 25, 1978, pages 51 - 54 *
SUGIYAMA, H. ET AL.: "Oligomeric procyanidins in apple polyphenol are main active components for inhibition of pancreatic lipase and triglyceride absorption", JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY, vol. 55, no. 11, May 2007 (2007-05-01), pages 4604 - 4609 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2017524373A (ja) * 2014-05-30 2017-08-31 シャクリー コーポレイション シャルドネブドウ種子抽出物
CN106795145A (zh) * 2014-08-04 2017-05-31 国家农艺研究院 类黄酮衍生化合物及通过缩合鞣酸的解聚制备其的方法
JP2016209802A (ja) * 2015-05-07 2016-12-15 株式会社ニッピ プロアントシアニジン分離用組成物、クロマトグラフィー用担体または澱下げ剤、プロアントシアニジン分離用組成物の製造方法、およびプロアントシアニジン３〜５量体の製造方法

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