JP2019500414A5 - - Google Patents
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Description
本発明のより好ましい実施態様は：（ａ）３個のアミノ酸置換Ｒ３１Ｌ，Ｖ５２Ｔ，Ｈ５９Ｆを含むポリペプチド，最も好ましくは，配列番号：３０を有するポリペプチド，（ｂ）６個のアミノ酸置換Ｒ３１Ｌ，Ｖ５２Ｔ，Ｈ５９Ｆ，Ｌ９２Ｙ，Ｃ９６Ｙ，Ｓ１０９Ｅを含むポリペプチド，最も好ましくは，配列番号：３２を有するポリペプチド，（ｃ）９個のアミノ酸置換Ｋ３０Ｉ，Ｒ３１Ｌ，Ｖ５２Ｔ，Ｅ５４Ｄ，Ｈ５９Ｆ，Ｌ９２Ｙ，Ｃ９６Ｙ，Ｅ１０８Ｈ，Ｓ１０９Ｅを含むポリペプチド，最も好ましくは，配列番号：３４を有するポリペプチド，（ｄ）９個のアミノ酸置換Ｒ３１Ｌ，Ｖ５２Ｔ，Ｅ５４Ｄ，Ｈ５９Ｆ，Ｌ９２Ｙ，Ｓ９４Ｉ，Ｃ９６Ｎ，Ｓ１０９Ｅ，Ｔ１２１Ｐを含むポリペプチド，最も好ましくは，配列番号：３６を有するポリペプチド，及び（ｅ）１１個のアミノ酸置換Ｋ３０Ｉ，Ｒ３１Ｌ，Ｖ５２Ｔ，Ｅ５４Ｄ，Ｈ５９Ｆ，Ｌ９２Ｙ，Ｓ９４Ｉ，Ｃ９６Ｎ，Ｅ１０８Ｈ，Ｓ１０９Ｅ，Ｔ１２１Ｐを含むポリペプチド，最も好ましくは，配列番号：３８を有するポリペプチドである。
第３の観点において，本発明は，有効量の本発明による熱安定性のＦＧＦ２ポリペプチド又はその断片を培地に対して１．０ng/μl〜１００ng/μlの範囲の量で含む，未分化の状態のヒト多能性幹細胞を培養するのに適する培地を提供する。好ましくは，提示された培地は，本発明による提示されたＦＧＦ２ポリペプチド又はその断片であって，アミノ酸置換（ａ）Ｒ３１Ｌ，Ｖ５２Ｔ，Ｈ５９Ｆを含むもの，最も好ましくは，配列番号：３０を有するポリペプチド，（ｂ）６個のアミノ酸置換Ｒ３１Ｌ，Ｖ５２Ｔ，Ｈ５９Ｆ，Ｌ９２Ｙ，Ｃ９６Ｙ，Ｓ１０９Ｅを含むもの，最も好ましくは，配列番号：３２を有するポリペプチド，（ｃ）９個のアミノ酸置換Ｋ３０Ｉ，Ｒ３１Ｌ，Ｖ５２Ｔ，Ｅ５４Ｄ，Ｈ５９Ｆ，Ｌ９２Ｙ，Ｃ９６Ｙ，Ｅ１０８Ｈ，Ｓ１０９Ｅを含むもの，最も好ましくは，配列番号：３４を有するポリペプチド，（ｄ）９個のアミノ酸置換Ｒ３１Ｌ，Ｖ５２Ｔ，Ｅ５４Ｄ，Ｈ５９Ｆ，Ｌ９２Ｙ，Ｓ９４Ｉ，Ｃ９６Ｎ，Ｓ１０９Ｅ，Ｔ１２１Ｐを含むもの，最も好ましくは，配列番号：３６を有するポリペプチド，及び（ｅ）１１個のアミノ酸置換Ｋ３０Ｉ，Ｒ３１Ｌ，Ｖ５２Ｔ，Ｅ５４Ｄ，Ｈ５９Ｆ，Ｌ９２Ｙ，Ｓ９４Ｉ，Ｃ９６Ｎ，Ｅ１０８Ｈ，Ｓ１０９Ｅ，Ｔ１２１Ｐを含むもの，最も好ましくは，配列番号：３８を有するポリペプチドを含む。
ここで使用される限り，用語「配列同一性」は，特定のポリペプチド及び参照配列のアミノ酸配列アラインメントが実施される場合，特定のポリペプチドのアミノ酸配列及び参照（参照配列）として寄与する配列内に同じアミノ酸残基が見出されることが意図される。配列同一性のパーセンテージは，両方の配列に同一のアミノ酸残基が生じる位置の数を決定して一致する位置の数を出し，この一致する位置の数を参照分子への比較を行ったセグメント中の位置の総数で割り，結果に１００を掛けて配列同一性のパーセンテージを出すことにより計算される。配列アラインメントの方法は当該分野でよく知られている。ここに使用される参照配列は，本発明による特定の対応するヒトＦＧＦ２タンパク質を意味する。哺乳類，例えば．マウス，ラット，ウサギ，霊長類動物，ブタ，イヌ，雌牛，ウマ及びヒトの中で，ＦＧＦ２は高度に保存され，広範囲の種にわたって少なくとも８５％の配列同一性を示す。好ましいのは，少なくとも９６％，９７％，９８％又は９９％又は１００％の配列同一性である。当業者は，例えば異なる由来のＦＧＦ２種の使用又は当該分野で一般に知られている適切な非ＦＧＦペプチド配列又はタグの添加により，本発明によるＦＧＦ２タンパク質の長さに沿って１５％以下のアミノ酸が可変であることを理解するであろう。ＦＧＦファミリーの他のメンバーは一般にはるかに低い配列同一性を有するので，野生型のＦＧＦ２に対して少なくとも８５％の同一性を有する本発明の実施態様によるＦＧＦ２タンパク質は，ＦＧＦ２に似ているもの以外のタンパク質を含まないであろう。
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