JP2018507188A - Dr5結合ドメインを含む多価分子 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、米国特許出願第62/149、139号(2015年4月17日出願;係属)及び米国特許出願第62/107,871号(2015年1月26日出願;係属)に対する優先権を主張するものであり、上述の特許出願はそれぞれ、参照によりその全体が本出願に援用される。
本出願は、連邦規則法典第37巻第1.821節以下による1つ又は複数の配列表を含み、これらの配列表は、コンピュータ可読媒体(ファイル名:1301_0118PCT_Sequence_Listing_ST25.txt、2015年5月18日作成、サイズ:215,084バイト)において開示されており、上記ファイルは、参照によりその全体が本出願に援用される。
健康な動物は、腫瘍細胞に対する継続的な免疫監視を維持している。様々な成長因子、サイトカイン及びホルモンの相互作用により、このような動物は、遭遇した損傷細胞のプログラム死(アポトーシス)を仲介できる。この細胞死プロセスに対する抵抗性を獲得し、また制御されない様式での複製の能力を獲得している損傷細胞は、腫瘍細胞となり得、癌につながり得る(非特許文献1〜4)。
TRAILは、正常な細胞を保護しながら損傷細胞を認識及び殺滅する能力において極めて選択的であるため、可溶性組み換えTRAILは、癌(例えば結腸直腸癌、肝細胞癌、神経膠腫、腎臓癌、乳癌、多発性骨髄腫、膀胱癌、神経芽細胞腫、肉腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、卵巣癌、膵臓癌及び直腸癌)の治療に潜在的な有用性を有すると言われてきた(非特許文献20、12、16、21、15、1、22〜32を参照)。
(A)上記第1のポリペプチド鎖は、N末端からC末端への方向に:
(i)第1のDR5エピトープに結合できるモノクローナル抗体の可変軽鎖(VL)ドメイン(VL1);
(ii)第1のペプチドリンカー(リンカー1);
(iii)第2のDR5エピトープに結合できるモノクローナル抗体の可変重鎖(VH)ドメイン(VH2);
(iv)第2のペプチドリンカー(リンカー2);
(v)Eコイルドメイン又はKコイルドメインを含むヘテロ二量体促進ドメイン;
(vi)第3のペプチドリンカー(リンカー3);並びに
(vii)IgG免疫グロブリンFc領域のCH2及びCH3ドメインを有するIgG Fc領域のポリペプチド部分
を備え;
(B)上記第2のポリペプチド鎖は、N末端からC末端への方向に:
(i)上記第2のDR5エピトープに結合できるモノクローナル抗体のVLドメイン(VL2);
(ii)第1のペプチドリンカー(リンカー1);
(iii)上記第1のDR5エピトープに結合できるモノクローナル抗体のVHドメイン(VH1);
(iv)第2のペプチドリンカー(リンカー2);並びに
(v)Eコイルドメイン又はKコイルドメインを備えるヘテロ二量体促進ドメイン
を備え、上記第1のポリペプチド鎖の上記ヘテロ二量体促進ドメイン及び上記第2のポリペプチド鎖の上記ヘテロ二量体促進ドメインは、両方共がEコイルドメインではなく、又は両方共がKコイルドメインではなく;
(a)上記第1のポリペプチド鎖の上記VL1ドメイン及び上記第2のポリペプチド鎖の上記VH1ドメインは、DR5の第1のエピトープに特異的に結合できる抗原結合ドメインを形成し;
(b)上記第1のポリペプチド鎖の上記VH2ドメイン及び上記第2のポリペプチド鎖の上記VL2ドメインは、DR5の第2のエピトープに特異的に結合できる抗原結合ドメインを形成し;
(c)上記第1のポリペプチド鎖のペアの上記CH2‐CH3部分は、IgG Fc領域を形成する。
(i)上記リンカー1は、配列番号33のアミノ酸配列を有し、
(ii)上記リンカー1は、配列番号47のアミノ酸配列を有し、
(iii)上記Eコイルドメインは、は、配列番号41のアミノ酸配列を有し、
(iv)上記Kコイルドメインは、配列番号42のアミノ酸配列を有し、
(v)上記リンカー3は、配列番号51のアミノ酸配列を有し、
(vi)上記CH2‐CH3ドメインは、配列番号1又は配列番号102のアミノ酸配列を有し、C末端残基が任意に含まれる。
(i)上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 1の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号4、配列番号5及び配列番号6を有し、また上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 1の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号9、配列番号10及び配列番号11を有する;又は
(ii)上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号14、配列番号15及び配列番号16を有し、また上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号19、配列番号20及び配列番号21を有する;又は
(iii)上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、hDR5 mAb 2 VL‐3の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号162、配列番号15及び配列番号16を有し、また上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、hDR5 mAb 2 VH‐3の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号19、配列番号20及び配列番号21を有する;又は
(iv)上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号55、配列番号56及び配列番号57を有し、また上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号59、配列番号60及び配列番号61を有する;又は
(v)上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号63、配列番号64及び配列番号65を有し、また上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号67、配列番号68及び配列番号69を有する;又は
(vi)上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号71、配列番号72及び配列番号73を有し、また上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号75、配列番号76及び配列番号77を有する;又は
(vii)上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号79、配列番号80及び配列番号81を有し、また上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号83、配列番号84及び配列番号85を有する;又は
(viii)上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号87、配列番号88及び配列番号89を有し、また上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号91、配列番号92及び配列番号93を有する;又は
(ix)上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号95、配列番号96及び配列番号97を有し、また上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号99、配列番号100及び配列番号101を有する、多価DR5結合分子の実施形態に関する。
(i)上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 1の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号4、配列番号5及び配列番号6を有し、また上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 1の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号9、配列番号10及び配列番号11を有する;又は
(ii)上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号14、配列番号15及び配列番号16を有し、また上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号19、配列番号20及び配列番号21を有する;又は
(iii)上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号162、配列番号15及び配列番号16を有し、また上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号19、配列番号20及び配列番号21を有する;又は
(iv)上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号55、配列番号56及び配列番号57を有し、また上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号59、配列番号60及び配列番号61を有する;又は
(v)上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号63、配列番号64及び配列番号65を有し、また上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号67、配列番号68及び配列番号69を有する;又は
(vi)上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号71、配列番号72及び配列番号73を有し、また上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号75、配列番号76及び配列番号77を有する;又は
(vii)上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号79、配列番号80及び配列番号81を有し、また上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号83、配列番号84及び配列番号85を有する;又は
(viii)上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号87、配列番号88及び配列番号89を有し、また上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号91、配列番号92及び配列番号93を有する;又は
(ix)上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号95、配列番号96及び配列番号97を有し、また上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号99、配列番号100及び配列番号101を有する、多価DR5結合分子の実施形態に関する。
(i)上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 1の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号4、配列番号5及び配列番号6を有し、また上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 1の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号9、配列番号10及び配列番号11を有する;又は
(ii)上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mab 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号14、配列番号15及び配列番号16を有し、また上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号19、配列番号20及び配列番号21を有する;又は
(iii)上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号162、配列番号15及び配列番号16を有し、また上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号19、配列番号20及び配列番号21を有する。
(i)VL1の上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 1の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号4、配列番号5及び配列番号6を有し、またVH1の上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 1の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号9、配列番号10及び配列番号11を有し;またVL2の上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号14、配列番号15及び配列番号16を有し、またVH2の上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号19、配列番号20及び配列番号21を有する;又は
(ii)VL1の上上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号14、配列番号15及び配列番号16を有し、またVH1の上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号19、配列番号20及び配列番号21を有し;またVL2の上記CDRL1ドメイン、上記CDRL2ドメイン及び上記CDRL3ドメインドメインは、DR5 mAb 1の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号4、配列番号5及び配列番号6を有し、またVH2の上記CDRH1ドメイン、上記CDRH2ドメイン及び上記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 1の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号9、配列番号10及び配列番号11を有する。
(A)(i)上記VL1は、配列番号3のアミノ酸配列を有し、上記VH1は、配列番号8のアミノ酸配列を有し;又は
(ii)上記VL1は、配列番号13のアミノ酸配列を有し、上記VH1は、配列番号18のアミノ酸配列を有し;又は
(iii)上記VL1は、配列番号23のアミノ酸配列を有し、上記VH1は、配列番号31のアミノ酸配列を有し;又は
(iv)上記VL1は、配列番号25のアミノ酸配列を有し、上記VH1は、配列番号31のアミノ酸配列を有し;又は
(v)上記VL1は、配列番号27のアミノ酸配列を有し、上記VH1は、配列番号31のアミノ酸配列を有し;又は
(vi)上記VL1は、配列番号29のアミノ酸配列を有し、上記VH1は、配列番号31のアミノ酸配列を有し;又は
(vii)上記VL1は、配列番号54のアミノ酸配列を有し、上記VH1は、配列番号58のアミノ酸配列を有し;又は
(viii)上記VL1は、配列番号62のアミノ酸配列を有し、上記VH1は、配列番号66のアミノ酸配列を有し;又は
(ix)上記VL1は、配列番号70のアミノ酸配列を有し、上記VH1は、配列番号74のアミノ酸配列を有し;又は
(x)上記VL1は、配列番号78のアミノ酸配列を有し、上記VH1は、配列番号82のアミノ酸配列を有し;又は
(xi)上記VL1は、配列番号86のアミノ酸配列を有し、上記VH1は、配列番号90のアミノ酸配列を有し;又は
(xii)上記VL1は、配列番号94のアミノ酸配列を有し、上記VH1は、配列番号98のアミノ酸配列を有し、また
(B)(i)上記VL2は、配列番号3のアミノ酸配列を有し、上記VH2は、配列番号8のアミノ酸配列を有し;又は
(ii)上記VL2は、配列番号13のアミノ酸配列を有し、上記VH2は、配列番号18のアミノ酸配列を有し;又は
(iii)上記VL2は、配列番号23のアミノ酸配列を有し、上記VH2は、配列番号31のアミノ酸配列を有し;又は
(iv)上記VL2は、配列番号25のアミノ酸配列を有し、上記VH2は、配列番号31のアミノ酸配列を有し;又は
(v)上記VL2は、配列番号27のアミノ酸配列を有し、上記VH2は、配列番号31のアミノ酸配列を有し;又は
(vi)上記VL2は、配列番号29のアミノ酸配列を有し、上記VH2は、配列番号31のアミノ酸配列を有し;又は
(vii)上記VL2は、配列番号54のアミノ酸配列を有し、上記VH2は、配列番号58のアミノ酸配列を有し;又は
(viii)上記VL2は、配列番号62のアミノ酸配列を有し、上記VH2は、配列番号66のアミノ酸配列を有し;又は
(ix)上記VL2は、配列番号70のアミノ酸配列を有し、上記VH2は、配列番号74のアミノ酸配列を有し;又は
(x)上記VL2は、配列番号78のアミノ酸配列を有し、上記VH2は、配列番号82のアミノ酸配列を有し;又は
(xi)上記VL2は、配列番号86のアミノ酸配列を有し、上記VH2は、配列番号90のアミノ酸配列を有し;又は
(xii)上記VL2は、配列番号94のアミノ酸配列を有し、上記VH2は、配列番号98のアミノ酸配列を有する。
(i)上記第1のポリペプチド鎖は配列番号116若しくは配列番号120のアミノ酸配列を有し、上記第2のポリペプチド鎖は配列番号118のアミノ酸配列を有する;又は
(ii)上記第1のポリペプチド鎖は配列番号122若しくは配列番号126のアミノ酸配列を有し、上記第2のポリペプチド鎖は配列番号124のアミノ酸配列を有する;又は
(iii)上記第1のポリペプチド鎖は配列番号128若しくは配列番号132のアミノ酸配列を有し、上記第2のポリペプチド鎖は配列番号130のアミノ酸配列を有する;又は
(iv)上記第1のポリペプチド鎖は配列番号134若しくは配列番号138のアミノ酸配列を有し、上記第2のポリペプチド鎖は配列番号136のアミノ酸配列を有する;又は
(v)上記第1のポリペプチド鎖は配列番号140若しくは配列番号144のアミノ酸配列を有し、上記第2のポリペプチド鎖は配列番号142のアミノ酸配列を有する;又は
(vi)上記第1のポリペプチド鎖は配列番号146若しくは配列番号150のアミノ酸配列を有し、上記第2のポリペプチド鎖は配列番号148のアミノ酸配列を有する;又は
(vii)上記第1のポリペプチド鎖は配列番号152若しくは配列番号156のアミノ酸配列を有し、上記第2のポリペプチド鎖は配列番号154のアミノ酸配列を有する;又は
(viii)上記第1のポリペプチド鎖は配列番号158若しくは配列番号162のアミノ酸配列を有し、上記第2のポリペプチド鎖は配列番号160のアミノ酸配列を有する、上記多価DR5結合分子の実施形態に関する。
本発明の抗体は、当該免疫グロブリン分子の可変領域に位置する少なくとも1つの抗原認識部位によって、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチド等の標的に特異的に結合できる、免疫グロブリン分子である。本明細書において使用される場合、用語「抗体(antibody及びantibodies)」は、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、合成抗体、キメラ抗体、ポリクローナル抗体、ラクダ化抗体、単鎖Fv(scFv)、単鎖抗体、Fab断片、F(ab’)断片、ジスルフィド結合二重特異性Fv(sdFv)、細胞内抗体、及び以上のうちのいずれかのエピトープ結合断片を包含する。特に抗体は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性の断片、即ち抗原結合部位を含有する分子を含む。免疫グロブリン分子は、いずれのタイプ(例えばIgG、IgE、IgM、IgD、IgA及びIgY)、クラス(例えばIgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及びIgA2)又はサブクラスのものとすることができる。抗体は、診断学におけるその公知の使用法に加えて、治療剤として有用であることが示されている。この数十年、抗体の治療的潜在能力に対する関心が再び高まっており、抗体は、生命工学由来の薬剤の筆頭となるクラスの1つとなっている(Chan, C.E. et al. (2009) “The Use Of Antibodies In The Treatment Of Infectious Diseases,” Singapore Med. J. 50(7):663-666)。200近くの抗体系薬剤が使用認可済み、又は開発中である。
2つの重鎖のCH2及びCH3ドメインは、相互作用してFc領域を形成し、これは細胞Fc受容体(FcγR)によって認識されるドメインである。本明細書において使用される場合、用語「Fc領域(Fc region)」は、IgG重鎖のC末端領域を定義するために使用される。例示的なヒトIgG1のCH2‐CH3ドメインのアミノ酸配列は、以下の通りである(配列番号1):
231 240 250 260 270
APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD
280 290 300 310 320
GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA
330 340 350 360 370
PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE
380 390 400 410 420
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
430 440 447
ALHNHYTQKS LSLSPGK
231 240 250 260 270
APPVA‐GPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVQFNWYVD
280 290 300 310 320
GVEVHNAKTK PREEQFNSTF RVVSVLTVVH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPA
330 340 350 360 370
PIEKTISKTK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDISVE
380 390 400 410 420
WESNGQPENN YKTTPPMLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
430 440 447
ALHNHYTQKS LSLSPGK
231 240 250 260 270
APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVQFKWYVD
280 290 300 310 320
GVEVHNAKTK PREEQYNSTF RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA
330 340 350 360 370
PIEKTISKTK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE
380 390 400 410 420
WESSGQPENN YNTTPPMLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NIFSCSVMHE
430 440 447
ALHNRFTQKS LSLSPGK
231 240 250 260 270
APEFLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD
280 290 300 310 320
GVEVHNAKTK PREEQFNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS
330 340 350 360 370
SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSQEEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE
380 390 400 410 420
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL TVDKSRWQEG NVFSCSVMHE
430 440 447
ALHNHYTQKS LSLSLGK
抗体が抗原のエピトープに結合する能力は、抗体のVL及びVHドメインの存在並びにアミノ酸配列に依存する。抗体軽鎖と抗体重鎖との相互作用、特にそのVLドメインとVHドメインとの相互作用は、天然抗体の2つのエプトープ結合部位のうちの1つを形成する。天然抗体は、1つのエピトープ種にのみ結合できる(即ちこれらは単一特異性である)が、これらは上記種の複数の複製に結合できる(即ち2価性又は多価性を示す)。
本発明の好ましい多価DR5結合分子は、ヒトDR5の連続又は不連続(例えば配座)部分(エピトープ)に結合できる。本発明のDR5結合分子は好ましくは、1つ又は複数の非ヒト種、特にマウス、げっ歯類、イヌ及び霊長類種のDR5分子に結合する能力も呈する。ヒトDR5前駆体のアミノ酸配列(NCBI Sequence NP_003833.4)(配列番号2)は、以下の通りである:
MEQRGQNAPA ASGARKRHGP GPREARGARP GLRVPKTLVL VVAAVLLLVS
AESALITQQD LAPQQRVAPQ QKRSSPSEGL CPPGHHISED GRDCISCKYG
QDYSTHWNDL LFCLRCTRCD SGEVELSPCT TTRNTVCQCE EGTFREEDSP
EMCRKCRTGC PRGMVKVGDC TPWSDIECVH KESGTKHSGE APAVEETVTS
SPGTPASPCS LSGIIIGVTV AAVVLIVAVF VCKSLLWKKV LPYLKGICSG
GGGDPERVDR SSQRPGAEDN VLNEIVSILQ PTQVPEQEME VQEPAEPTGV
NMLSPGESEH LLEPAEAERS QRRRLLVPAN EGDPTETLRQ CFDDFADLVP
FDSWEPLMRK LGLMDNEIKV AKAEAAGHRD TLYTMLIKWV NKTGRDASVH
TLLDALETLG ERLAKQKIED HLLSSGKFMY LEGNADSAMS
DR5 mAb 1 のVLドメインのアミノ酸配列(配列番号3)を以下に示す(CDRL残基は下線を付して示す):
DIVLTQSPAS LAVSLGQRAT ISCRASKSVS SSGYSYMHWY QQKPGQPPKV
LIFLSSNLDS GVPARFSGSG SGTDFTLNIH PVEDGDAATY YCQHSRDLPP
TFGGGTKLEI K
DR5 mAb 1のCDRL1(配列番号4):RASKSVSSSGYSYMH
DR5 mAb 1のCDRL2(配列番号5):LSSNLDS
DR5 mAb 1のCDRL3(配列番号6):QHSRDLPPT
gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctcgggca
gagggccacc atctcatgca gggccagcaa aagtgtcagt tcctctggct
atagttatat gcactggtac caacagaaac caggacagcc acccaaagtc
ctcatctttc tttcatccaa cctagattct ggggtccctg ccaggttcag
tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat cctgtggagg
atggggatgc tgcaacctat tactgtcagc acagtaggga tcttcctccg
acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaa
EVKFLESGGG LVQPGGSLKL SCVASGFDFS RYWMSWVRQA PGKGLEWIGE
INPDSNTINY TPSLKDKFII SRDNAKNTLY LQMTKVRSED TALYYCTRRA
YYGNPAWFAY WGQGTLVTVSS
DR5 mAb 1のCDRH1(配列番号9):GFDFSRYWMS
DR5 mAb 1のCDRH2(配列番号10):EINPDSNTINYTPSLKD
DR5 mAb 1のCDRH3(配列番号11):RAYYGNPAWFAY
gaggtgaagt ttctcgagtc tggaggtggc ctggtgcagc ctggaggatc
cctgaaactc tcctgtgtag cctcaggatt cgattttagt agatactgga
tgagttgggt ccggcaggct ccagggaaag ggctagaatg gattggagaa
attaatccag atagcaatac gataaactat acgccatctc taaaggataa
attcatcatc tccagagaca acgccaaaaa tacgctgtat ctgcaaatga
ccaaagtgag atctgaggac acagcccttt attattgtac aagaagggcc
tactatggta acccggcctg gtttgcttac tggggccaag ggactctggt
cactgtctct tcc
1.マウス抗ヒト抗体DR5 mAb 2
DR5 mAb 2のVLドメインのアミノ酸配列(配列番号13)を以下に示す(CDRL残基は下線を付して示す):
DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITCKASQDVN TAVAWYQQKP GQSPKLLIYW
ASTRHTGVPD RFTGSGSGTD YTLTIKSVQA EDLTLYYCQQ HYITPWTFGG
GTKLEIK
DR5 mAb 2のCDRL1(配列番号14):KASQDVNTAVA
DR5 mAb 2のCDRL2(配列番号15):WASTRHT
DR5 mAb 2のCDRL3(配列番号16):QQHYITPWT
gacattgtga tgacccagtc tcacaaattc atgtccactt cagtaggaga
cagggtcagc atcacctgca aggccagtca ggatgtgaat actgctgtag
cctggtatca acaaaaacca gggcaatctc ctaaactact gatttactgg
gcatccaccc ggcacactgg agtccctgat cgcttcacag gcagtggatc
tgggacagat tatacactca ccatcaaaag tgtgcaggct gaagacctga
cactttatta ctgtcagcaa cactatatca ctccgtggac gttcggtgga
ggcaccaagc tggaaatcaaa
KVQLQQSGAE LVKPGASVKL SCKASGYTFT EYILHWVKQK SGQGLEWIGW
FYPGNNNIKY NEKFKDKATL TADKSSSTVY MELSRLTSED SAVYFCARHE
QGPGYFDYWG QGTTLTVSS
DR5 mAb 2のCDRH1(配列番号19):GYTFTEYILH
DR5 mAb 2のCDRH2(配列番号20):WFYPGNNNIKYNEKFKD
DR5 mAb 2のCDRH3(配列番号21):HEQGPGYFDY
aaggtccagc tgcagcagtc tggagctgaa ctggtgaaac ccggggcatc
agtgaagctg tcctgcaagg cttctgggta caccttcact gagtatattt
tacactgggt aaagcagaag tctggacagg gtcttgagtg gattgggtgg
ttttatcctg gaaataataa tataaagtac aatgagaaat tcaaggacaa
ggccacactg actgcggaca aatcctccag cacagtctat atggaactta
gtagattgac atctgaagac tctgcggtct atttctgtgc aagacacgaa
caaggaccag gttactttga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt
ctcctcc
上述のマウス抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2をヒト化することによって、ヒトレシピエントへの投与の際の抗原性を低減するための、抗ヒトDR5抗体のヒト化能力を実証した。上記ヒト化により、本明細書において「hDR5 mAb 2 VL‐2」、「hDR5 mAb 2 VL‐3」、「hDR5 mAb 2 VL‐4」及び「hDR5 mAb 2 VL‐5」と称される4つのヒト化VLドメイン、並びに本明細書において「hDR5 mAb 2 VH‐2」と称される1つのヒト化VHドメインが得られた。いずれの上記ヒト化VLドメインを上記ヒト化VHドメインとペアリングしてよい。従って、上記ヒト化VHドメインとペアリングされた上記ヒト化VLドメインのうちの1つを備えるいずれの抗体は、一般的に「hDR5 mAb 2」と呼ばれ、ヒト化VL/VHドメインの特定の組み合わせは、VLドメインを参照することによって呼称される。
DIQMTQSPSF LSASVGDRVT ITCKASQDVN TAVAWYQQKP GKAPKLLIYW
ASTRHTGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDVATYYCQQ HYITPWTFGG
GTKLEIK
gatattcaga tgacccagag tccctcattt ctgtccgcct ccgtcggtga
ccgcgtgact attacttgta aagcttctca ggatgtcaac accgccgtgg
cttggtacca gcagaagccc ggtaaagcac ctaagctgct gatctattgg
gccagcactc ggcacaccgg agtcccatct aggttctctg gcagtggatc
agggacagac tttaccctga caattagctc cctgcagccc gaggatgtgg
ctacttacta ttgtcagcag cactacatca ctccttggac cttcggcggg
ggcacaaaac tggaaatcaa a
DIQMTQSPSF LSASVGDRVT ITCRASQDVN TAVAWYQQKP GKAPKLLIYW
ASTRHTGVPD RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDVATYYCQQ HYITPWTFGG
GTKLEIK
gatattcaga tgacccagag tccctcattt ctgtccgcct ccgtcggtga
ccgcgtgact attacttgtc gggcttctca ggatgtcaac accgccgtgg
cttggtacca gcagaagccc ggtaaagcac ctaagctgct gatctattgg
gccagcactc ggcacaccgg agtcccagat aggttctctg gcagtggatc
agggacagac tttaccctga caattagctc cctgcagccc gaggatgtgg
ctacttacta ttgtcagcag cactacatca ctccttggac cttcggcggg
ggcacaaaac tggaaatcaa a
DIQMTQSPSF LSASVGDRVT ITCRASQDVN TAVAWYQQKP GKAPKLLIYW ASTRHTGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDIATYYCQQ HYITPWTFGG GTKLEIK
gatattcaga tgacccagag tccctcattt ctgtccgcct ccgtcggtga
ccgcgtgact attacttgtc gggcttctca ggatgtcaac accgccgtgg
cttggtacca gcagaagccc ggtaaagcac ctaagctgct gatctattgg
gccagcactc ggcacaccgg agtcccatct aggttctctg gcagtggatc
agggacagac tttaccctga caattagctc cctgcagcca gaggatatcg
ctacatacta ttgtcagcag cactacatca ctccttggac cttcggcggg
ggcacaaaac tggaaatcaa a
DIQMTQSPSF LSASVGDRVT ITCRASQDVN TAVAWYQQKP GKAPKLLIYW ASTRHTGVPD RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDIATYYCQQ HYITPWTFGG GTKLEIK
gatattcaga tgacccagag tccctcattt ctgtccgcct ccgtcggtga
ccgcgtgact attacttgtc gggcttctca ggatgtcaac accgccgtgg
cttggtacca gcagaagccc ggtaaagcac ctaagctgct gatctattgg
gccagcactc ggcacaccgg agtcccagat aggttctctg gcagtggatc
agggacagac tttaccctga caattagctc cctgcagccc gaggatatcg
ctacttacta ttgtcagcag cactacatca ctccttggac cttcggcggg
ggcacaaaac tggaaatcaa a
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT EYILHWVRQA PGQGLEWMGW
FYPGNNNIKY NEKFKDRVTI TADKSTSTVY MELSSLRSED TAVYYCARHE
QGPGYFDYWG QGTLVTVSS
caggtccagc tggtgcagag tggggcagag gtgaaaaagc caggggcatc
agtgaaagtg tcttgtaaag catcaggtta tacatttact gagtacatcc
tgcactgggt gcgacaggca ccaggacagg gactggaatg gatggggtgg
ttctaccctg gcaacaacaa cattaagtac aacgagaagt ttaaagaccg
ggtgaccatc acagcggata agtctaccag tacagtctat atggagctga
gctccctgag aagcgaagac accgccgtct actattgcgc tcgccacgaa
cagggtccag gttactttga ttattggggg cagggaactc tggtcacagt
cagctcc
上記新規の抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 1及びDR5 mAb 2に加えて、ドロジツマブ(本明細書では「DR5 mAb 3」と呼ぶ)、コナツムマブ(本明細書では「DR5 mAb 4」と呼ぶ)、チガツズマブ(本明細書では「DR5 mAb 5」と呼ぶ)、LBY135‐1(本明細書では「DR5 mAb 6」と呼ぶ)、LBY135‐2(本明細書では「DR5 mAb 7」と呼ぶ)及びKMTR2(本明細書では「DR5 mAb 8」と呼ぶ)を含む、多数の更なる抗ヒトDR5抗体が公知である。具体的には、本発明の多価DR5結合分子は、DR5 mAb 1、DR5 mAb 2、hDR5 mab 2、DR5 mAb 3、DR5 mAb 4、DR5 mAb 5、DR5 mAb 6、DR5 mAb 7及びDR5 mAb 8のうちの1つ又は複数からのVL及び/又はVH ドメインのCDRを含んでよいと考えられる。あるいは、又は任意に、本発明の多価DR5結分子は、DR5 mAb 1、DR5 mAb 2、hDR5 mab 2、DR5 mAb 3、DR5 mAb 4、DR5 mAb 5、DR5 mAb 6、DR5 mAb 7及びDR5 mAb 8のうちの1つ又は複数からの少なくとも1つの抗原結合部分を含んでよい。一実施形態では、本発明の多価DR5結合分子は、DR5 mAb 1及び/又はDR5 mAb 2からの少なくとも1つの抗原結合部分を含む。
ドロジツマブ(「DR5 mAb 3」)のVLドメインのアミノ酸配列(配列番号54)を以下に示す(CDRL残基は下線を付して示す):
SELTQDPAVS VALGQTVRIT CSGDSLRSYY ASWYQQKPG QAPVLVIYGA
NNRPSGIPDR FSGSSSGNTA SLTITGAQAE DEADYYCNSA DSSGNHVVFG
GGTKLTVLG
DR5 mAb 3のCDRL1(配列番号55):SGDSLRSYYAS
DR5 mAb 3のCDRL2(配列番号56):GANNRPS
DR5 mAb 3のCDRL3(配列番号57):NSADSSGNHVV
EVQLVQSGGG VERPGGSLRL SCAASGFTFD DYAMSWVRQA PGKGLEWVSG
INWQGGSTGY ADSVKGRVTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAKIL
GAGRGWYFDY WGKGTTVTVS S
DR5 mAb 3のCDRH1(配列番号59):GFTFDDYAMS
DR5 mAb 3のCDRH2(配列番号60):INWQGGSTGYADSVKG
DR5 mAb 3のCDRH3(配列番号61):ILGAGRGWYFDY
コナツムマブ(「DR5 mAb 4」)のVLドメインのアミノ酸配列(配列番号62)を以下に示す(CDRL残基は下線を付して示す):
EIVLTQSPGT LSLSPGERAT LSCRASQGIS RSYLAWYQQK PGQAPSLLIY
GASSRATGIP DRFSGSGSGT DFTLTISRLE PEDFAVYYCQ QFGSSPWTFG
QGTKVEIK
DR5 mAb 4のCDRL1(配列番号63):RASQGISRSYLA
DR5 mAb 4のCDRL2(配列番号64):GASSRAT
DR5 mAb 4のCDRL3(配列番号65):QQFGSSPWT
QVQLQESGPG LVKPSQTLSL TCTVSGGSIS SGDYFWSWIR QLPGKGLEWI
GHIHNSGTTY YNPSLKSRVT ISVDTSKKQF SLRLSSVTAA DTAVYYCARD
RGGDYYYGMD VWGQGTTVTV SS
DR5 mAb 4のCDRH1(配列番号67):GGSISSGDYFWS
DR5 mAb 4のCDRH2(配列番号68):HIHNSGTTYYNPSLKS
DR5 mAb 4のCDRH3(配列番号69):DRGGDYYYGMDV
チガツズマブ(「DR5 mAb 5」)のVLドメインのアミノ酸配列(配列番号70)を以下に示す(CDRL残基は下線を付して示す):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQDVG TAVAWYQQKP GKAPKLLIYW
ASTRHTGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YSSYRTFGQG
TKVEIK
DR5 mAb 5のCDRL1(配列番号71):KASQDVGTAVA
DR5 mAb 5のCDRL2(配列番号72):WASTRHT
DR5 mAb 5のCDRL3(配列番号73):QQYSSYRT
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SYVMSWVRQA PGKGLEWVAT
ISSGGSYTYY PDSVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARRG
DSMITTDYWG QGTLVTVSS
DR5 mAb 5のCDRH1(配列番号75):GFTFSSYVMS
DR5 mAb 5のCDRH2(配列番号76):TISSGGSYTYYPDSVKG
DR5 mAb 5のCDRH3(配列番号77):RGDSMITTDY
LBY135‐1(「DR5 mAb 6」)のVLドメインのアミノ酸配列(配列番号78)を以下に示す(CDRL残基は下線を付して示す):
DIAMTQSHKF MSTLVGDRVS ITCKASQDVN TAIAWYQQKP GQSPKLLIYW
ASTRHTGVPD RFYGSGSGTD YTLTISSMEA EDAATYYCQQ WSSNPLTFGA
GTKLELKRA
DR5 mAb 6のCDRL1(配列番号79):QDVNTAIA
DR5 mAb 6のCDRL2(配列番号80):WASTRHT
DR5 mAb 6のCDRL3(配列番号81):QQWSSNPLT
KVQLQQSGAE LVKPGASVKL SCKASGYTFT DYTIHWVKQR SGQGLEWIGW
FYPGGGYIKY NEKFKDRATL TADKSSNTVY MELSRLTSEG SAVYFCARHE
EGIYFDYWGQ GTTLTVSS
DR5 mAb 6のCDRH1(配列番号83):GYTFTDYTIH
DR5 mAb 6のCDRH2(配列番号84):WFYPGGGYIKYNEKFKD
DR5 mAb 6のCDRH3(配列番号85):HEEGIYFDY
LBY135‐2(「DR5 mAb 7」)のVLドメインのアミノ酸配列(配列番号86)を以下に示す(CDRL残基は下線を付して示す):
DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITCKASQDVN TAIAWYQQKP GQSPKLLIYW
ASTRHTGVPD RFTGSGSGTD YTLTISSVQA EDLALYYCQQ HYTTPFTFGS
GTKL
DR5 mAb 7のCDRL1(配列番号87):KASQDVNTAIA
DR5 mAb 7のCDRL2(配列番号88):WASTRHT
DR5 mAb 7のCDRL3(配列番号89):QQHYTTPFT
KVQLQQSGAE LVKPGASVKL SCKASGYTFT DYTIHWVKQR SGQGLEWIGW
FYPGGGYIKY NEKFKDRATL TADKSSNTVY MELSRLTSED SAVYFCARHE
EGIYFDYWGQ GTTLTVSS
DR5 mAb 7のCDRH1(配列番号91):GYTFTDYTIH
DR5 mAb 7のCDRH2(配列番号92):WFYPGGGYIKYNEKFKD
DR5 mAb 7のCDRH3(配列番号93):HEEGIYFDY
KMTR2(「DR5 mAb 8」)のVLドメインのアミノ酸配列(配列番号94)を以下に示す(CDRL残基は下線を付して示す):
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSVS SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD
ASNRATGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ RSNWPLTFGG
GTKVEIKR
DR5 mAb 8のCDRL1(配列番号95):RASQSVSSYLA
DR5 mAb 8のCDRL2(配列番号96):DASNRAT
DR5 mAb 8のCDRL3(配列番号97):QQRSNWPLT
QVQLVQSGAE MKKPGASVKV SCKTSGYTFT NYKINWVRQA PGQGLEWMGW
MNPDTDSTGY PQKFQGRVTM TRNTSISTAY MELSSLRSED TAVYYCARSY
GSGSYYRDYY YGMDVWGQGT TVTVSS
DR5 mAb 8のCDRH1(配列番号99):GYTFTNYKIN
DR5 mAb 8のCDRH2(配列番号100):WMNPDTDSTGYPQKFQG
DR5 mAb 8のCDRH3(配列番号101):SYGSGSYYRDYYYGMDV
従来の免疫機能では、抗体‐抗原複合体と免疫系の細胞との相互作用は、抗体依存性細胞傷害性、肥満細胞脱顆粒及び食作用等のエフェクタ機能から、リンパ球増殖及び抗体分泌を制御するもの等の免疫調節性信号にまで及ぶ、広範な応答をもたらす。これらの相互作用は全て、抗体又は免疫複合体のFc領域の、造血細胞上の特殊化された細胞表面受容体への結合によって開始される。抗体及び免疫複合体によってトリガされる細胞応答の多様性は、3つのFc受容体:FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)及びFcγRIII(CD16)の構造不均質性によって得られる。FcγRI(CD64)、FcγRIIA(CD32A)及びFcγRIII(CD16)は活性化(即ち免疫系増強)受容体であり;FcγRIIB(CD32B)は阻害性(即ち免疫系減衰)受容体である。例示的なIgG1 Fc領域のアミノ酸配列(配列番号1)は既に上に提示されている。
(A)F243L、R292P、Y300L、V305I、及びP396Lからなる群から選択される、少なくとも1つの置換;
(B)(1)F243L及びP396L;
(2)F243L及びR292P;並びに
(3)R292P及びV305I;
からなる群から選択される、少なくとも2つの置換;
(C)(1)F243L、R292P及びY300L;
(2)F243L、R292P及びV305I;
(3)F243L、R292P及びP396L;並びに
(4)R292P、V305I及びP396L;
からなる群から選択される、少なくとも3つの置換;
(D)(1)F243L、R292P、Y300L及びP396L;並びに
(2)F243L、R292P、V305I及びP396L;
からなる群から選択される、少なくとも4つの置換;又は
(E)(1)F243L、R292P、Y300L、V305I及びP396L;並びに
(2)L235V、F243L、R292P、Y300L及びP396L
からなる群から選択される、少なくとも5つの置換。
(A)F243L、R292P、及びY300L;
(B)L235V、F243L、R292P、Y300L、及びP396L;又は
(C)F243L、R292P、Y300L、V305I、及びP396L。
1.Fc領域を含まないダイアボディを含む多価DR5結合分子
本発明の一実施形態は、第1のエピトープ(「エピトープ1」)及び第2のエピトープ(「エピトープ2」)に結合できる二重特異性ダイアボディを含む、又は上記二重特異性ダイアボディからなる、多価DR5結合分子に関し、上記第1のエピトープはヒトDR5のエピトープであり、上記第2のエピトープはDR5の異なるエピトープである。好ましくは、このようなダイアボディは、第1のポリペプチド鎖及び第2のポリペプチド鎖を含み、最も好ましくは第1のポリペプチド鎖及び第2のポリペプチド鎖からなり、上記第1のポリペプチド鎖及び第2のポリペプチド鎖の配列は、上記ポリペプチド鎖が互いに共有結合して、第1のDR5エピトープ及び第2のDR5エピトープに同時に結合できる共有結合複合体を形成することを可能とする配列である。従ってこのようなダイアボディは、単一のDR5ポリペプチド上の第1及び第2のエピトープに結合してよく(即ち分子内で結合してよく)、又はこれらは、あるDR5ポリペプチド上の第1のエピトープと、別のDR5ポリペプチド上の第2のエピトープとに結合してよい(即ち(分子間で結合してよい)。好ましくは、このようなダイアボディは、細胞の表面上に配列されたDR5分子を架橋させる。
LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKNA 64 A 65NNAKT VEGVKALIA 79E ILAALP(配列番号44)、
又はアミノ酸配列:
LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKNLIS 66NAKS 70 VEGVKALIA 79E ILAALP(配列番号45)
を有する変異型脱免疫化ABDは、上述のような脱免疫化アルブミン‐結合ドメインが、MHCクラスII結合の減衰を提供しながら、実質的に野生型の結合を呈するため、特に好ましい。従って、アルブミン結合ドメインを有する上述のようなダイアボディの第1のポリペプチド鎖は、好ましくは上記ポリペプチド鎖のEコイル(又はKコイル)ドメインのC末端に位置決めされることによって、上記Eコイル(又はKコイル)ドメインと上記アルブミン結合ドメイン(これは好ましくは脱免疫化アルブミン結合ドメインである)との間に介在する、第3のリンカー(リンカー3)を含有する。上記リンカー3に関して好ましい配列は、配列番号46:GGGSである。
本発明の一実施形態は、Fc領域含有多価DR5結合分子に関する。ダイアボディポリペプチド鎖のうちの一方又は両方にIgG CH2‐CH3ドメインを追加することによって、これらダイアボディ鎖の複合体化によってFc領域の形成がもたらされるようにすることで、上記ダイアボディの生物学的半減期が増大する、及び/又は上記ダイアボディの価数が変化する。
(a)上記第1のポリペプチド鎖のVL1ドメイン及び上記第2のポリペプチド鎖のVH1ドメインは、DR5の第1のエピトープに特異的に結合できる抗原結合ドメインを形成し;
(b)上記第1のポリペプチド鎖のVH2ドメイン及び上記第2のポリペプチド鎖のVL1ドメインは、DR5の第2のエピトープに特異的に結合できる抗原結合ドメインを形成し;
(c)第1のポリペプチド鎖のペアのCH2‐CH3部分は、IgG Fc領域を形成する。
APEAAGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD
GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA
PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
ALHNHYTQKS LSLSPGK
APEAAGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD
GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA
PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLWCLVK GFYPSDIAVE
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
ALHNHYTQKS LSLSPGK
を有する。
APEAAGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD
GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA
PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLSCAVK GFYPSDIAVE
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLVSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
ALHNRYTQKS LSLSPGK
を有する。
A.基準抗ヒトCD3抗体
CD3は、4つの別個の鎖からなるT細胞共受容体である(Wucherpfennig, K.W. et al. (2010) “Structural Biology Of The T‐Cell Receptor: Insights Into Receptor Assembly, Ligand Recognition, And Initiation Of Signaling,” Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 2(4):a005140; pages 1‐14)。哺乳類では、上記複合体CD3γ鎖、CD3δ鎖及び2つのCD3ε鎖を含有する。これらの鎖は、T細胞受容体(TCR)として公知である分子と連結して、Tリンパ球の活性化信号を生成する。CD3が存在しない場合、TCRは適切に集合せず、劣化する(Thomas, S. et al. (2010) “Molecular Immunology Lessons From Therapeutic T‐Cell Receptor Gene Transfer,” Immunology 129(2):170-177)。CD3は、全ての成熟T細胞の膜に結合し、実質的に他の細胞タイプには結合しないことが分かっている(Janeway, C.A. et al. (2005) In: Immunobiology: The Immune System In Health And Disease,” 6th ed. Garland Science Publishing, NY, pp. 214‐ 216; Sun, Z. J. et al. (2001) “Mechanisms Contributing To T Cell Receptor Signaling And Assembly Revealed By The Solution Structure Of An Ectodomain Fragment Of The CD3ε:γ Heterodimer,” Cell 105(7):913‐923; Kuhns, M.S. et al. (2006) “Deconstructing The Form And Function Of The TCR/CD3 Complex,” Immunity. 2006 Feb;24(2):133‐139を参照)。
QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWVQQ KPGQAPRGLI
GGTNKRAPWT PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF
GGGTKLTVLG
CD3 mAb 2のCDRL1(配列番号105):RSSTGAVTTSNYAN
CD3 mAb 2のCDRL2(配列番号106):GTNKRAP
CD3 mAb 2のCDRL3(配列番号107):ALWYSNLWV
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS TYAMNWVRQA PGKGLEWVGR
IRSKYNNYAT YYADSVKDRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCVR
HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSS
CD3 mAb 2のCDRH1(配列番号109):TYAMN
CD3 mAb 2のCDRH2(配列番号110):RIRSKYNNYATYYADSVKD
CD3 mAb 2のCDRH3(配列番号111):HGNFGNSYVSWFAY
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS TYAMNWVRQA PGKGLEWVGR
IRSKYNNYAT YYADSVKGRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCVR
HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSS
QIVLTQSPAI MSASPGEKVT MTCSASSSVS YMNWYQQKSG TSPKRWIYDT
SKLASGVPAH FRGSGSGTSY SLTISGMEAE DAATYYCQQW SSNPFTFGSG
TKLEINR
QVQLQQSGAE LARPGASVKM SCKASGYTFT RYTMHWVKQR PGQGLEWIGY
INPSRGYTNY NQKFKDKATL TTDKSSSTAY MQLSSLTSED SAVYYCARYY
DDHYCLDYWG QGTTLTVSSA KTTAPSVYPL APVCGDTTGS SVTLGCLVKG
YFPEPVTLTW NSGSLSSGVH TFPAVLQSDL YTLSSSVTVT SS
抗フルオレセイン抗体4‐4‐20(Gruber, M. et al. (1994) “Efficient Tumor Cell Lysis Mediated By A Bi‐specific Single Chain Antibody Expressed In Escherichia coli,” J. Immunol. 152(11):5368‐5374; Bedzyk, W.D. et al. (1989) “Comparison Of Variable Region Primary Structures Within An Anti‐Fluorescein Idiotype Family,” J. Biol. Chem. 264(3): 1565‐1569)を、対照ダイアボディとして使用した。上記抗フルオレセイン抗体4‐4‐20の可変軽鎖及び可変重鎖ドメインのアミノ酸配列は、以下の通りである:
DVVMTQTPFS LPVSLGDQAS ISCRSSQSLV HSNGNTYLRW YLQKPGQSPK
VLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YFCSQSTHVP
WTFGGGTKLE IK
EVKLDETGGG LVQPGRPMKL SCVASGFTFS DYWMNWVRQS PEKGLEWVAQ
IRNKPYNYET YYSDSVKGRF TISRDDSKSS VYLQMNNLRV EDMGIYYCTG
SYYGMDYWGQ GTSVTVSS
上述のように、少なくとも2つ、好ましくは少なくとも4つのDR5結合部位を有する多価DR5結合分子は、様々な構造を有してよい。特に、IgG系二重特異性抗体を含むがこれに限定されない免疫グロブリンの抗原結合部分、及びダイアボディを含む分子を含む構造が好ましい。ダイアボディを含む多価DR5結合分子の具体的かつ非限定的な例が提供される。しかしながら、上で開示されているもの(例えば図1〜4参照)又はそうでなくても当業者に明らかであるものを含む代替的な構造が、本発明に包含される。
1.DR5 mAb 1×DR5 mAb 2Fc領域含有ダイアボディ
抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 1のVL及びVHドメイン並びにDR5 mAb 2のVL及びVHドメインを有する、2ペアのポリペプチド鎖からなる、DR5に関して4価である例示的な二重特異性Fc領域含有ダイアボディを構成する。「DR5 mAb 1×DR5 mAb 2Fcダイアボディ」と呼ばれる1つのFc領域含有ダイアボディは、野生型IgG1 Fc領域を含有する。このFc領域含有ダイアボディの第1のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、以下の通りである(配列番号116):
DIVLTQSPAS LAVSLGQRAT ISCRASKSVS SSGYSYMHWY QQKPGQPPKV
LIFLSSNLDS GVPARFSGSG SGTDFTLNIH PVEDGDAATY YCQHSRDLPP
TFGGGTKLEI KGGGSGGGGK VQLQQSGAEL VKPGASVKLS CKASGYTFTE
YILHWVKQKS GQGLEWIGWF YPGNNNIKYN EKFKDKATLT ADKSSSTVYM
ELSRLTSEDS AVYFCARHEQ GPGYFDYWGQ GTTLTVSSAS TKGEVAACEK
EVAALEKEVA ALEKEVAALE KLEPKSSDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF
PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE
EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP
REPQVYTLPP SREEMTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT
TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL
SPG
gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctcgggca
gagggccacc atctcatgca gggccagcaa aagtgtcagt tcctctggct
atagttatat gcactggtac caacagaaac caggacagcc acccaaagtc
ctcatctttc tttcatccaa cctagattct ggggtccctg ccaggttcag
tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat cctgtggagg
atggggatgc tgcaacctat tactgtcagc acagtaggga tcttcctccg
acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaaggaggcg gatccggcgg
cggaggcaag gtccagctgc agcagtctgg agctgaactg gtgaaacccg
gggcatcagt gaagctgtcc tgcaaggctt ctgggtacac cttcactgag
tatattttac actgggtaaa gcagaagtct ggacagggtc ttgagtggat
tgggtggttt tatcctggaa ataataatat aaagtacaat gagaaattca
aggacaaggc cacactgact gcggacaaat cctccagcac agtctatatg
gaacttagta gattgacatc tgaagactct gcggtctatt tctgtgcaag
acacgaacaa ggaccaggtt actttgacta ctggggccaa ggcaccactc
tcacagtctc ctccgcctcc accaagggcg aagtggccgc atgtgagaaa
gaggttgctg ctttggagaa ggaggtcgct gcacttgaaa aggaggtcgc
agccctggag aaactggagc ccaaatcttc tgacaaaact cacacatgcc
caccgtgccc agcacctgaa ctcctggggg gaccgtcagt cttcctcttc
cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac
atgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact
ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag
gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca
ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag
ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc
cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggagg agatgaccaa
gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat cccagcgaca
tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc
acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct
caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg
tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg
tctccgggt
である。
DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITCKASQDVN TAVAWYQQKP GQSPKLLIYW
ASTRHTGVPD RFTGSGSGTD YTLTIKSVQA EDLTLYYCQQ HYITPWTFGG
GTKLEIKGGG SGGGGEVKFL ESGGGLVQPG GSLKLSCVAS GFDFSRYWMS
WVRQAPGKGL EWIGEINPDS NTINYTPSLK DKFIISRDNA KNTLYLQMTK
VRSEDTALYY CTRRAYYGNP AWFAYWGQGT LVTVSAASTK GKVAACKEKV
AALKEKVAAL KEKVAALKE
gacattgtga tgacccagtc tcacaaattc atgtccactt cagtaggaga
cagggtcagc atcacctgca aggccagtca ggatgtgaat actgctgtag
cctggtatca acaaaaacca gggcaatctc ctaaactact gatttactgg
gcatccaccc ggcacactgg agtccctgat cgcttcacag gcagtggatc
tgggacagat tatacactca ccatcaaaag tgtgcaggct gaagacctga
cactttatta ctgtcagcaa cactatatca ctccgtggac gttcggtgga
ggcaccaagc tggaaatcaa aggaggcgga tccggcggcg gaggcgaggt
gaagtttctc gagtctggag gtggcctggt gcagcctgga ggatccctga
aactctcctg tgtagcctca ggattcgatt ttagtagata ctggatgagt
tgggtccggc aggctccagg gaaagggcta gaatggattg gagaaattaa
tccagatagc aatacgataa actatacgcc atctctaaag gataaattca
tcatctccag agacaacgcc aaaaatacgc tgtatctgca aatgaccaaa
gtgagatctg aggacacagc cctttattat tgtacaagaa gggcctacta
tggtaacccg gcctggtttg cttactgggg ccaagggact ctggtcactg
tctctgcagc ctccaccaag ggcaaagtgg ccgcatgtaa ggagaaagtt
gctgctttga aagagaaggt cgccgcactt aaggaaaagg tcgcagccct
gaaaga
である。
DIVLTQSPAS LAVSLGQRAT ISCRASKSVS SSGYSYMHWY QQKPGQPPKV
LIFLSSNLDS GVPARFSGSG SGTDFTLNIH PVEDGDAATY YCQHSRDLPP
TFGGGTKLEI KGGGSGGGGK VQLQQSGAEL VKPGASVKLS CKASGYTFTE
YILHWVKQKS GQGLEWIGWF YPGNNNIKYN EKFKDKATLT ADKSSSTVYM
ELSRLTSEDS AVYFCARHEQ GPGYFDYWGQ GTTLTVSSAS TKGEVAACEK
EVAALEKEVA ALEKEVAALE KLEPKSSDKT HTCPPCPAPE AAGGPSVFLF
PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE
EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP
REPQVYTLPP SREEMTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT
TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL
SPG
gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctcgggca
gagggccacc atctcatgca gggccagcaa aagtgtcagt tcctctggct
atagttatat gcactggtac caacagaaac caggacagcc acccaaagtc
ctcatctttc tttcatccaa cctagattct ggggtccctg ccaggttcag
tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat cctgtggagg
atggggatgc tgcaacctat tactgtcagc acagtaggga tcttcctccg
acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaaggaggcg gatccggcgg
cggaggcaag gtccagctgc agcagtctgg agctgaactg gtgaaacccg
gggcatcagt gaagctgtcc tgcaaggctt ctgggtacac cttcactgag
tatattttac actgggtaaa gcagaagtct ggacagggtc ttgagtggat
tgggtggttt tatcctggaa ataataatat aaagtacaat gagaaattca
aggacaaggc cacactgact gcggacaaat cctccagcac agtctatatg
gaacttagta gattgacatc tgaagactct gcggtctatt tctgtgcaag
acacgaacaa ggaccaggtt actttgacta ctggggccaa ggcaccactc
tcacagtctc ctccgcctcc accaagggcg aagtggccgc atgtgagaaa
gaggttgctg ctttggagaa ggaggtcgct gcacttgaaa aggaggtcgc
agccctggag aaactggagc ccaaatcttc tgacaaaact cacacatgcc
caccgtgccc agcacctgaa ctcctggggg gaccgtcagt cttcctcttc
cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac
atgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact
ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag
gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca
ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag
ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc
cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggagg agatgaccaa
gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat cccagcgaca
tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc
acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct
caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg
tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg
tctccgggt
である。
抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2のVL及びVHドメイン並びにDR5 mAb 1のVL及びVHドメインを有する、2ペアのポリペプチド鎖からなる、DR5に関して4価である例示的な二重特異性Fc領域含有ダイアボディを構成する。「DR5 mAb 2×DR5 mAb 1Fcダイアボディ」と呼ばれる1つのFc領域含有ダイアボディは、野生型IgG1 Fc領域を含有する。このFc領域含有ダイアボディの第1のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、以下の通りである(配列番号122):
DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITCKASQDVN TAVAWYQQKP GQSPKLLIYW
ASTRHTGVPD RFTGSGSGTD YTLTIKSVQA EDLTLYYCQQ HYITPWTFGG
GTKLEIKGGG SGGGGEVKFL ESGGGLVQPG GSLKLSCVAS GFDFSRYWMS
WVRQAPGKGL EWIGEINPDS NTINYTPSLK DKFIISRDNA KNTLYLQMTK
VRSEDTALYY CTRRAYYGNP AWFAYWGQGT LVTVSAASTK GEVAACEKEV
AALEKEVAAL EKEVAALEKL EPKSSDKTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP
KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ
YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE
PQVYTLPPSR EEMTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP
PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP
G
gacattgtga tgacccagtc tcacaaattc atgtccactt cagtaggaga
cagggtcagc atcacctgca aggccagtca ggatgtgaat actgctgtag
cctggtatca acaaaaacca gggcaatctc ctaaactact gatttactgg
gcatccaccc ggcacactgg agtccctgat cgcttcacag gcagtggatc
tgggacagat tatacactca ccatcaaaag tgtgcaggct gaagacctga
cactttatta ctgtcagcaa cactatatca ctccgtggac gttcggtgga
ggcaccaagc tggaaatcaa aggaggcgga tccggcggcg gaggcgaggt
gaagtttctc gagtctggag gtggcctggt gcagcctgga ggatccctga
aactctcctg tgtagcctca ggattcgatt ttagtagata ctggatgagt
tgggtccggc aggctccagg gaaagggcta gaatggattg gagaaattaa
tccagatagc aatacgataa actatacgcc atctctaaag gataaattca
tcatctccag agacaacgcc aaaaatacgc tgtatctgca aatgaccaaa
gtgagatctg aggacacagc cctttattat tgtacaagaa gggcctacta
tggtaacccg gcctggtttg cttactgggg ccaagggact ctggtcactg
tctctgcagc ctccaccaag ggcgaagtgg ccgcatgtga gaaagaggtt
gctgctttgg agaaggaggt cgctgcactt gaaaaggagg tcgcagccct
ggagaaactg gagcccaaat cttctgacaa aactcacaca tgcccaccgt
gcccagcacc tgaactcctg gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca
aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg acccctgagg tcacatgcgt
ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc aactggtacg
tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga
ctggctgaat ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc
cagcccccat cgagaaaacc atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa
ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg gaggagatga ccaagaacca
ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc gacatcgccg
tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt
ggacaagagc aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc
atgaggctct gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg
ggt
である。
DIVLTQSPAS LAVSLGQRAT ISCRASKSVS SSGYSYMHWY QQKPGQPPKV
LIFLSSNLDS GVPARFSGSG SGTDFTLNIH PVEDGDAATY YCQHSRDLPP
TFGGGTKLEI KGGGSGGGGK VQLQQSGAEL VKPGASVKLS CKASGYTFTE
YILHWVKQKS GQGLEWIGWF YPGNNNIKYN EKFKDKATLT ADKSSSTVYM
ELSRLTSEDS AVYFCARHEQ GPGYFDYWGQ GTTLTVSSAS TKGKVAACKE
KVAALKEKVA ALKEKVAALK E
gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctcgggca
gagggccacc atctcatgca gggccagcaa aagtgtcagt tcctctggct
atagttatat gcactggtac caacagaaac caggacagcc acccaaagtc
ctcatctttc tttcatccaa cctagattct ggggtccctg ccaggttcag
tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat cctgtggagg
atggggatgc tgcaacctat tactgtcagc acagtaggga tcttcctccg
acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaaggaggcg gatccggcgg
cggaggcaag gtccagctgc agcagtctgg agctgaactg gtgaaacccg
gggcatcagt gaagctgtcc tgcaaggctt ctgggtacac cttcactgag
tatattttac actgggtaaa gcagaagtct ggacagggtc ttgagtggat
tgggtggttt tatcctggaa ataataatat aaagtacaat gagaaattca
aggacaaggc cacactgact gcggacaaat cctccagcac agtctatatg
gaacttagta gattgacatc tgaagactct gcggtctatt tctgtgcaag
acacgaacaa ggaccaggtt actttgacta ctggggccaa ggcaccactc
tcacagtctc ctccgcctcc accaagggca aagtggccgc atgtaaggag
aaagttgctg ctttgaaaga gaaggtcgcc gcacttaagg aaaaggtcgc
agccctgaaa gag
である。
DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITCKASQDVN TAVAWYQQKP GQSPKLLIYW
ASTRHTGVPD RFTGSGSGTD YTLTIKSVQA EDLTLYYCQQ HYITPWTFGG
GTKLEIKGGG SGGGGEVKFL ESGGGLVQPG GSLKLSCVAS GFDFSRYWMS
WVRQAPGKGL EWIGEINPDS NTINYTPSLK DKFIISRDNA KNTLYLQMTK
VRSEDTALYY CTRRAYYGNP AWFAYWGQGT LVTVSAASTK GEVAACEKEV
AALEKEVAAL EKEVAALEKL EPKSSDKTHT CPPCPAPEAAGGPSVFLFPP
KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ
YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE
PQVYTLPPSR EEMTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP
PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP
G
gacattgtga tgacccagtc tcacaaattc atgtccactt cagtaggaga
cagggtcagc atcacctgca aggccagtca ggatgtgaat actgctgtag
cctggtatca acaaaaacca gggcaatctc ctaaactact gatttactgg
gcatccaccc ggcacactgg agtccctgat cgcttcacag gcagtggatc
tgggacagat tatacactca ccatcaaaag tgtgcaggct gaagacctga
cactttatta ctgtcagcaa cactatatca ctccgtggac gttcggtgga
ggcaccaagc tggaaatcaa aggaggcgga tccggcggcg gaggcgaggt
gaagtttctc gagtctggag gtggcctggt gcagcctgga ggatccctga
aactctcctg tgtagcctca ggattcgatt ttagtagata ctggatgagt
tgggtccggc aggctccagg gaaagggcta gaatggattg gagaaattaa
tccagatagc aatacgataa actatacgcc atctctaaag gataaattca
tcatctccag agacaacgcc aaaaatacgc tgtatctgca aatgaccaaa
gtgagatctg aggacacagc cctttattat tgtacaagaa gggcctacta
tggtaacccg gcctggtttg cttactgggg ccaagggact ctggtcactg
tctctgcagc ctccaccaag ggcgaagtgg ccgcatgtga gaaagaggtt
gctgctttgg agaaggaggt cgctgcactt gaaaaggagg tcgcagccct
ggagaaactg gagcccaaat cttctgacaa aactcacaca tgcccaccgt
gcccagcacc tgaactcctg gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca
aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg acccctgagg tcacatgcgt
ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc aactggtacg
tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga
ctggctgaat ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc
cagcccccat cgagaaaacc atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa
ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg gaggagatga ccaagaacca
ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc gacatcgccg
tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt
ggacaagagc aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc
atgaggctct gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg
ggt
である。
1.DR5 mAb 1×DR5 mAb 2ダイアボディ
抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 1のVL及びVHドメイン、並びにDR5 mAb 2のVL及びVHドメインを有する、2つのポリペプチド鎖からなるFc領域を含まない、DR5に関して二重特異性である例示的な二重特異性ダイアボディを構成する。このダイアボディの第1のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、上述の配列番号116のアミノ酸残基1〜271を含む。このダイアボディの第2のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、上述の配列番号118を含む。
抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2のVL及びVHドメイン、並びにDR5 mAb 1のVL及びVHドメインを有する、2つのポリペプチド鎖からなるFc領域を含まない、DR5に関して2価である例示的な二重特異性ダイアボディを構成する。このダイアボディの第1のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、上述の配列番号122のアミノ酸残基1〜269を含む。このダイアボディの第2のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、上述の配列番号124を含む。
1.DR5 mAb 1×DR5 mAb 1Fc領域含有ダイアボディ
抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 1のVL及びVHドメインを有する、2ペアのポリペプチド鎖からなる、DR5に関して4価である例示的な単一特異性Fc領域含有ダイアボディを構成する。「DR5 mAb 1×DR5 mAb 1Fcダイアボディ」と呼ばれる1つのFc領域含有ダイアボディは、野生型IgG1 Fc領域を含有する。このFc領域含有ダイアボディの第1のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、以下の通りである(配列番号128):
DIVLTQSPAS LAVSLGQRAT ISCRASKSVS SSGYSYMHWY QQKPGQPPKV
LIFLSSNLDS GVPARFSGSG SGTDFTLNIH PVEDGDAATY YCQHSRDLPP
TFGGGTKLEI KGGGSGGGGE VKFLESGGGL VQPGGSLKLS CVASGFDFSR
YWMSWVRQAP GKGLEWIGEI NPDSNTINYT PSLKDKFIIS RDNAKNTLYL
QMTKVRSEDT ALYYCTRRAY YGNPAWFAYW GQGTLVTVSA ASTKGEVAAC
EKEVAALEKE VAALEKEVAA LEKLEPKSSD KTHTCPPCPA PELLGGPSVF
LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVKFNWYVDG VEVHNAKTKP
REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP IEKTISKAKG
QPREPQVYTL PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY
KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL
SLSPG
gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctcgggca
gagggccacc atctcatgca gggccagcaa aagtgtcagt tcctctggct
atagttatat gcactggtac caacagaaac caggacagcc acccaaagtc
ctcatctttc tttcatccaa cctagattct ggggtccctg ccaggttcag
tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat cctgtggagg
atggggatgc tgcaacctat tactgtcagc acagtaggga tcttcctccg
acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaaggaggcg gatccggcgg
cggaggcgag gtgaagtttc tcgagtctgg aggtggcctg gtgcagcctg
gaggatccct gaaactctcc tgtgtagcct caggattcga ttttagtaga
tactggatga gttgggtccg gcaggctcca gggaaagggc tagaatggat
tggagaaatt aatccagata gcaatacgat aaactatacg ccatctctaa
aggataaatt catcatctcc agagacaacg ccaaaaatac gctgtatctg
caaatgacca aagtgagatc tgaggacaca gccctttatt attgtacaag
aagggcctac tatggtaacc cggcctggtt tgcttactgg ggccaaggga
ctctggtcac tgtctctgca gcctccacca agggcgaagt ggccgcatgt
gagaaagagg ttgctgcttt ggagaaggag gtcgctgcac ttgaaaagga
ggtcgcagcc ctggagaaac tggagcccaa atcttctgac aaaactcaca
catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga
ggtcacatgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt
tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg
cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt
cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca
acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat
gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca
gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac
aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctctacag
caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat
gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc
tccctgtctc cgggt
である。
DIVLTQSPAS LAVSLGQRAT ISCRASKSVS SSGYSYMHWY QQKPGQPPKV
LIFLSSNLDS GVPARFSGSG SGTDFTLNIH PVEDGDAATY YCQHSRDLPP
TFGGGTKLEI KGGGSGGGGE VKFLESGGGL VQPGGSLKLS CVASGFDFSR
YWMSWVRQAP GKGLEWIGEI NPDSNTINYT PSLKDKFIIS RDNAKNTLYL
QMTKVRSEDT ALYYCTRRAY YGNPAWFAYW GQGTLVTVSA ASTKGKVAAC
KEKVAALKEK VAALKEKVAA LKE
gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctcgggca
gagggccacc atctcatgca gggccagcaa aagtgtcagt tcctctggct
atagttatat gcactggtac caacagaaac caggacagcc acccaaagtc
ctcatctttc tttcatccaa cctagattct ggggtccctg ccaggttcag
tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat cctgtggagg
atggggatgc tgcaacctat tactgtcagc acagtaggga tcttcctccg
acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaaggaggcg gatccggcgg
cggaggcgag gtgaagtttc tcgagtctgg aggtggcctg gtgcagcctg
gaggatccct gaaactctcc tgtgtagcct caggattcga ttttagtaga
tactggatga gttgggtccg gcaggctcca gggaaagggc tagaatggat
tggagaaatt aatccagata gcaatacgat aaactatacg ccatctctaa
aggataaatt catcatctcc agagacaacg ccaaaaatac gctgtatctg
caaatgacca aagtgagatc tgaggacaca gccctttatt attgtacaag
aagggcctac tatggtaacc cggcctggtt tgcttactgg ggccaaggga
ctctggtcac tgtctctgca gcctccacca agggcaaagt ggccgcatgt
aaggagaaag ttgctgcttt gaaagagaag gtcgccgcac ttaaggaaaa
ggtcgcagcc ctgaaagag
である。
DIVLTQSPAS LAVSLGQRAT ISCRASKSVS SSGYSYMHWY QQKPGQPPKV
LIFLSSNLDS GVPARFSGSG SGTDFTLNIH PVEDGDAATY YCQHSRDLPP
TFGGGTKLEI KGGGSGGGGE VKFLESGGGL VQPGGSLKLS CVASGFDFSR
YWMSWVRQAP GKGLEWIGEI NPDSNTINYT PSLKDKFIIS RDNAKNTLYL
QMTKVRSEDT ALYYCTRRAY YGNPAWFAYW GQGTLVTVSA ASTKGEVAAC
EKEVAALEKE VAALEKEVAA LEKLEPKSSD KTHTCPPCPA PEAAGGPSVF
LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVKFNWYVDG VEVHNAKTKP
REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP IEKTISKAKG
QPREPQVYTL PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY
KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL
SLSPG
gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctcgggca
gagggccacc atctcatgca gggccagcaa aagtgtcagt tcctctggct
atagttatat gcactggtac caacagaaac caggacagcc acccaaagtc
ctcatctttc tttcatccaa cctagattct ggggtccctg ccaggttcag
tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat cctgtggagg
atggggatgc tgcaacctat tactgtcagc acagtaggga tcttcctccg
acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaaggaggcg gatccggcgg
cggaggcgag gtgaagtttc tcgagtctgg aggtggcctg gtgcagcctg
gaggatccct gaaactctcc tgtgtagcct caggattcga ttttagtaga
tactggatga gttgggtccg gcaggctcca gggaaagggc tagaatggat
tggagaaatt aatccagata gcaatacgat aaactatacg ccatctctaa
aggataaatt catcatctcc agagacaacg ccaaaaatac gctgtatctg
caaatgacca aagtgagatc tgaggacaca gccctttatt attgtacaag
aagggcctac tatggtaacc cggcctggtt tgcttactgg ggccaaggga
ctctggtcac tgtctctgca gcctccacca agggcgaagt ggccgcatgt
gagaaagagg ttgctgcttt ggagaaggag gtcgctgcac ttgaaaagga
ggtcgcagcc ctggagaaac tggagcccaa atcttctgac aaaactcaca
catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg cggggggacc gtcagtcttc
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga
ggtcacatgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt
tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg
cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt
cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca
acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat
gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca
gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac
aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctctacag
caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat
gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc
tccctgtctc cgggt
である。
抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2のVL及びVHドメインを有する、2ペアのポリペプチド鎖からなる、DR5に関して4価である例示的な単一特異性Fc領域含有ダイアボディを構成する。「DR5 mAb 2×DR5 mAb 2Fcダイアボディ」と呼ばれる第1のFc領域含有ダイアボディは、野生型IgG1 Fc領域を含有する。このFc領域含有ダイアボディの第1のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、以下の通りである(配列番号134):
DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITCKASQDVN TAVAWYQQKP GQSPKLLIYW
ASTRHTGVPD RFTGSGSGTD YTLTIKSVQA EDLTLYYCQQ HYITPWTFGG
GTKLEIKGGG SGGGGKVQLQ QSGAELVKPG ASVKLSCKAS GYTFTEYILH
WVKQKSGQGL EWIGWFYPGN NNIKYNEKFK DKATLTADKS SSTVYMELSR
LTSEDSAVYF CARHEQGPGY FDYWGQGTTL TVSSASTKGE VAACEKEVAA
LEKEVAALEK EVAALEKLEP KSSDKTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP
KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN
STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ
VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV
LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
gacattgtga tgacccagtc tcacaaattc atgtccactt cagtaggaga
cagggtcagc atcacctgca aggccagtca ggatgtgaat actgctgtag
cctggtatca acaaaaacca gggcaatctc ctaaactact gatttactgg
gcatccaccc ggcacactgg agtccctgat cgcttcacag gcagtggatc
tgggacagat tatacactca ccatcaaaag tgtgcaggct gaagacctga
cactttatta ctgtcagcaa cactatatca ctccgtggac gttcggtgga
ggcaccaagc tggaaatcaa aggaggcgga tccggcggcg gaggcaaggt
ccagctgcag cagtctggag ctgaactggt gaaacccggg gcatcagtga
agctgtcctg caaggcttct gggtacacct tcactgagta tattttacac
tgggtaaagc agaagtctgg acagggtctt gagtggattg ggtggtttta
tcctggaaat aataatataa agtacaatga gaaattcaag gacaaggcca
cactgactgc ggacaaatcc tccagcacag tctatatgga acttagtaga
ttgacatctg aagactctgc ggtctatttc tgtgcaagac acgaacaagg
accaggttac tttgactact ggggccaagg caccactctc acagtctcct
ccgcctccac caagggcgaa gtggccgcat gtgagaaaga ggttgctgct
ttggagaagg aggtcgctgc acttgaaaag gaggtcgcag ccctggagaa
actggagccc aaatcttctg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag
cacctgaact cctgggggga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc
aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt
ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg
gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct
gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc
ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag
gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga accaggtcag
cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt
gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa
gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg
ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggt
である。
DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITCKASQDVN TAVAWYQQKP GQSPKLLIYW
ASTRHTGVPD RFTGSGSGTD YTLTIKSVQA EDLTLYYCQQ HYITPWTFGG
GTKLEIKGGG SGGGGKVQLQ QSGAELVKPG ASVKLSCKAS GYTFTEYILH
WVKQKSGQGL EWIGWFYPGN NNIKYNEKFK DKATLTADKS SSTVYMELSR
LTSEDSAVYF CARHEQGPGY FDYWGQGTTL TVSSASTKGK VAACKEKVAA
LKEKVAALKE KVAALKE
gacattgtga tgacccagtc tcacaaattc atgtccactt cagtaggaga
cagggtcagc atcacctgca aggccagtca ggatgtgaat actgctgtag
cctggtatca acaaaaacca gggcaatctc ctaaactact gatttactgg
gcatccaccc ggcacactgg agtccctgat cgcttcacag gcagtggatc
tgggacagat tatacactca ccatcaaaag tgtgcaggct gaagacctga
cactttatta ctgtcagcaa cactatatca ctccgtggac gttcggtgga
ggcaccaagc tggaaatcaa aggaggcgga tccggcggcg gaggcaaggt
ccagctgcag cagtctggag ctgaactggt gaaacccggg gcatcagtga
agctgtcctg caaggcttct gggtacacct tcactgagta tattttacac
tgggtaaagc agaagtctgg acagggtctt gagtggattg ggtggtttta
tcctggaaat aataatataa agtacaatga gaaattcaag gacaaggcca
cactgactgc ggacaaatcc tccagcacag tctatatgga acttagtaga
ttgacatctg aagactctgc ggtctatttc tgtgcaagac acgaacaagg
accaggttac tttgactact ggggccaagg caccactctc acagtctcct
ccgcctccac caagggcaaa gtggccgcat gtaaggagaa agttgctgct
ttgaaagaga aggtcgccgc acttaaggaa aaggtcgcag ccctgaaaga
g
である。
DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITCKASQDVN TAVAWYQQKP GQSPKLLIYW
ASTRHTGVPD RFTGSGSGTD YTLTIKSVQA EDLTLYYCQQ HYITPWTFGG
GTKLEIKGGG SGGGGKVQLQ QSGAELVKPG ASVKLSCKAS GYTFTEYILH
WVKQKSGQGL EWIGWFYPGN NNIKYNEKFK DKATLTADKS SSTVYMELSR
LTSEDSAVYF CARHEQGPGY FDYWGQGTTL TVSSASTKGE VAACEKEVAA
LEKEVAALEK EVAALEKLEP KSSDKTHTCP PCPAPEAAGG PSVFLFPPKP
KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN
STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ
VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV
LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
gacattgtga tgacccagtc tcacaaattc atgtccactt cagtaggaga
cagggtcagc atcacctgca aggccagtca ggatgtgaat actgctgtag
cctggtatca acaaaaacca gggcaatctc ctaaactact gatttactgg
gcatccaccc ggcacactgg agtccctgat cgcttcacag gcagtggatc
tgggacagat tatacactca ccatcaaaag tgtgcaggct gaagacctga
cactttatta ctgtcagcaa cactatatca ctccgtggac gttcggtgga
ggcaccaagc tggaaatcaa aggaggcgga tccggcggcg gaggcaaggt
ccagctgcag cagtctggag ctgaactggt gaaacccggg gcatcagtga
agctgtcctg caaggcttct gggtacacct tcactgagta tattttacac
tgggtaaagc agaagtctgg acagggtctt gagtggattg ggtggtttta
tcctggaaat aataatataa agtacaatga gaaattcaag gacaaggcca
cactgactgc ggacaaatcc tccagcacag tctatatgga acttagtaga
ttgacatctg aagactctgc ggtctatttc tgtgcaagac acgaacaagg
accaggttac tttgactact ggggccaagg caccactctc acagtctcct
ccgcctccac caagggcgaa gtggccgcat gtgagaaaga ggttgctgct
ttggagaagg aggtcgctgc acttgaaaag gaggtcgcag ccctggagaa
actggagccc aaatcttctg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag
cacctgaagc cgcgggggga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc
aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt
ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg
gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct
gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc
ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag
gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga accaggtcag
cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt
gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa
gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg
ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggt
である。
抗ヒトDR5抗体hDR5 mAb 2 VL‐2のVLドメイン及び抗ヒトDR5抗体hDR5 mAb 2 VH‐2のVHドメインを有する、2ペアのポリペプチド鎖からなる、DR5に関して4価である例示的な単一特異性Fc領域含有ダイアボディを構成する。「hDR5 mAb 2.2×hDR5 mAb 2.2Fcダイアボディ」と呼ばれる第1のFc領域含有ダイアボディは、野生型IgG1 Fc領域を含有する。このFc領域含有ダイアボディの第1のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、以下の通りである(配列番号140):
DIQMTQSPSF LSASVGDRVT ITCKASQDVN TAVAWYQQKP GKAPKLLIYW
ASTRHTGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDVATYYCQQ HYITPWTFGG
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTEYILH
WVRQAPGQGL EWMGWFYPGN NNIKYNEKFK DRVTITADKS TSTVYMELSS
LRSEDTAVYY CARHEQGPGY FDYWGQGTLV TVSSASTKGE VAACEKEVAA
LEKEVAALEK EVAALEKLEP KSSDKTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP
KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN
STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ
VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV
LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
gatattcaga tgacccagag tccctcattt ctgtccgcct ccgtcggtga
ccgcgtgact attacttgta aagcttctca ggatgtcaac accgccgtgg
cttggtacca gcagaagccc ggtaaagcac ctaagctgct gatctattgg
gccagcactc ggcacaccgg agtcccatct aggttctctg gcagtggatc
agggacagac tttaccctga caattagctc cctgcagccc gaggatgtgg
ctacttacta ttgtcagcag cactacatca ctccttggac cttcggcggg
ggcacaaaac tggaaatcaa aggaggcgga tccggcggcg gaggccaggt
ccagctggtg cagagtgggg cagaggtgaa aaagccaggg gcatcagtga
aagtgtcttg taaagcatca ggttatacat ttactgagta catcctgcac
tgggtgcgac aggcaccagg acagggactg gaatggatgg ggtggttcta
ccctggcaac aacaacatta agtacaacga gaagtttaaa gaccgggtga
ccatcacagc ggataagtct accagtacag tctatatgga gctgagctcc
ctgagaagcg aagacaccgc cgtctactat tgcgctcgcc acgaacaggg
tccaggttac tttgattatt gggggcaggg aactctggtc acagtcagct
ccgcctccac caagggcgaa gtggccgcat gtgagaaaga ggttgctgct
ttggagaagg aggtcgctgc acttgaaaag gaggtcgcag ccctggagaa
actggagccc aaatcttctg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag
cacctgaact cctgggggga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc
aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt
ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg
gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct
gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc
ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag
gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga accaggtcag
cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt
gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa
gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg
ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggt
である。
DIQMTQSPSF LSASVGDRVT ITCKASQDVN TAVAWYQQKP GKAPKLLIYW
ASTRHTGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDVATYYCQQ HYITPWTFGG
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTEYILH
WVRQAPGQGL EWMGWFYPGN NNIKYNEKFK DRVTITADKS TSTVYMELSS
LRSEDTAVYY CARHEQGPGY FDYWGQGTLV TVSSASTKGK VAACKEKVAA
LKEKVAALKE KVAALKE
gatattcaga tgacccagag tccctcattt ctgtccgcct ccgtcggtga
ccgcgtgact attacttgta aagcttctca ggatgtcaac accgccgtgg
cttggtacca gcagaagccc ggtaaagcac ctaagctgct gatctattgg
gccagcactc ggcacaccgg agtcccatct aggttctctg gcagtggatc
agggacagac tttaccctga caattagctc cctgcagccc gaggatgtgg
ctacttacta ttgtcagcag cactacatca ctccttggac cttcggcggg
ggcacaaaac tggaaatcaa aggaggcgga tccggcggcg gaggccaggt
ccagctggtg cagagtgggg cagaggtgaa aaagccaggg gcatcagtga
aagtgtcttg taaagcatca ggttatacat ttactgagta catcctgcac
tgggtgcgac aggcaccagg acagggactg gaatggatgg ggtggttcta
ccctggcaac aacaacatta agtacaacga gaagtttaaa gaccgggtga
ccatcacagc ggataagtct accagtacag tctatatgga gctgagctcc
ctgagaagcg aagacaccgc cgtctactat tgcgctcgcc acgaacaggg
tccaggttac tttgattatt gggggcaggg aactctggtc acagtcagct
ccgcctccac caagggcaaa gtggccgcat gtaaggagaa agttgctgct
ttgaaagaga aggtcgccgc acttaaggaa aaggtcgcag ccctgaaaga
g
である。
DIQMTQSPSF LSASVGDRVT ITCKASQDVN TAVAWYQQKP GKAPKLLIYW
ASTRHTGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDVATYYCQQ HYITPWTFGG
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTEYILH
WVRQAPGQGL EWMGWFYPGN NNIKYNEKFK DRVTITADKS TSTVYMELSS
LRSEDTAVYY CARHEQGPGY FDYWGQGTLV TVSSASTKGE VAACEKEVAA
LEKEVAALEK EVAALEKLEP KSSDKTHTCP PCPAPEAAGG PSVFLFPPKP
KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN
STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ
VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV
LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
gatattcaga tgacccagag tccctcattt ctgtccgcct ccgtcggtga
ccgcgtgact attacttgta aagcttctca ggatgtcaac accgccgtgg
cttggtacca gcagaagccc ggtaaagcac ctaagctgct gatctattgg
gccagcactc ggcacaccgg agtcccatct aggttctctg gcagtggatc
agggacagac tttaccctga caattagctc cctgcagccc gaggatgtgg
ctacttacta ttgtcagcag cactacatca ctccttggac cttcggcggg
ggcacaaaac tggaaatcaa aggaggcgga tccggcggcg gaggccaggt
ccagctggtg cagagtgggg cagaggtgaa aaagccaggg gcatcagtga
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ccctggcaac aacaacatta agtacaacga gaagtttaaa gaccgggtga
ccatcacagc ggataagtct accagtacag tctatatgga gctgagctcc
ctgagaagcg aagacaccgc cgtctactat tgcgctcgcc acgaacaggg
tccaggttac tttgattatt gggggcaggg aactctggtc acagtcagct
ccgcctccac caagggcgaa gtggccgcat gtgagaaaga ggttgctgct
ttggagaagg aggtcgctgc acttgaaaag gaggtcgcag ccctggagaa
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cacctgaagc cgcgggggga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc
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gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc
ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag
gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga accaggtcag
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gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg
ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggt
である。
抗ヒトDR5抗体hDR5 mAb 2 VL‐3のVLドメイン、及び抗ヒトhDR5抗体hDR5 mAb 2 VH‐3のVHドメインを有する、2ペアのポリペプチド鎖からなる、DR5に関して4価である例示的な単一特異性Fc領域含有ダイアボディを構成する。「hDR5 mAb 2.3×hDR5 mAb 2.3Fcダイアボディ」と呼ばれる第1のFc領域含有ダイアボディは、野生型IgG1 Fc領域を含有する。このFc領域含有ダイアボディの第1のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、以下の通りである(配列番号146):
DIQMTQSPSF LSASVGDRVT ITCRASQDVN TAVAWYQQKP GKAPKLLIYW
ASTRHTGVPD RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDVATYYCQQ HYITPWTFGG
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTEYILH
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LRSEDTAVYY CARHEQGPGY FDYWGQGTLV TVSSASTKGE VAACEKEVAA
LEKEVAALEK EVAALEKLEP KSSDKTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP
KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN
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gatattcaga tgacccagag tccctcattt ctgtccgcct ccgtcggtga
ccgcgtgact attacttgtc gggcttctca ggatgtcaac accgccgtgg
cttggtacca gcagaagccc ggtaaagcac ctaagctgct gatctattgg
gccagcactc ggcacaccgg agtcccagat aggttctctg gcagtggatc
agggacagac tttaccctga caattagctc cctgcagccc gaggatgtgg
ctacttacta ttgtcagcag cactacatca ctccttggac cttcggcggg
ggcacaaaac tggaaatcaa aggaggcgga tccggcggcg gaggccaggt
ccagctggtg cagagtgggg cagaggtgaa aaagccaggg gcatcagtga
aagtgtcttg taaagcatca ggttatacat ttactgagta catcctgcac
tgggtgcgac aggcaccagg acagggactg gaatggatgg ggtggttcta
ccctggcaac aacaacatta agtacaacga gaagtttaaa gaccgggtga
ccatcacagc ggataagtct accagtacag tctatatgga gctgagctcc
ctgagaagcg aagacaccgc cgtctactat tgcgctcgcc acgaacaggg
tccaggttac tttgattatt gggggcaggg aactctggtc acagtcagct
ccgcctccac caagggcgaa gtggccgcat gtgagaaaga ggttgctgct
ttggagaagg aggtcgctgc acttgaaaag gaggtcgcag ccctggagaa
actggagccc aaatcttctg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag
cacctgaact cctgggggga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc
aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt
ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg
gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac
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gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg
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gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg
ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggt
である。
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LKEKVAALKE KVAALKE
gatattcaga tgacccagag tccctcattt ctgtccgcct ccgtcggtga
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である。
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ctgagaagcg aagacaccgc cgtctactat tgcgctcgcc acgaacaggg
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ttggagaagg aggtcgctgc acttgaaaag gaggtcgcag ccctggagaa
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ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg
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gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc
ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag
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cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt
gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa
gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg
ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggt
である。
抗ヒトDR5抗体hDR5 mAb 2 VL‐4のVLドメイン、及び抗ヒトhDR5抗体hDR5 mAb 2 VH‐4のVHドメインを有する、2ペアのポリペプチド鎖からなる、DR5に関して4価である例示的な単一特異性Fc領域含有ダイアボディを構成する。「hDR5 mAb 2.4×hDR5 mAb 2.4Fcダイアボディ」と呼ばれる第1のFc領域含有ダイアボディは、野生型IgG1 Fc領域を含有する。このFc領域含有ダイアボディの第1のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、以下の通りである(配列番号152):
DIQMTQSPSF LSASVGDRVT ITCRASQDVN TAVAWYQQKP GKAPKLLIYW
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gatattcaga tgacccagag tccctcattt ctgtccgcct ccgtcggtga
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agggacagac tttaccctga caattagctc cctgcagcca gaggatatcg
ctacatacta ttgtcagcag cactacatca ctccttggac cttcggcggg
ggcacaaaac tggaaatcaa aggaggcgga tccggcggcg gaggccaggt
ccagctggtg cagagtgggg cagaggtgaa aaagccaggg gcatcagtga
aagtgtcttg taaagcatca ggttatacat ttactgagta catcctgcac
tgggtgcgac aggcaccagg acagggactg gaatggatgg ggtggttcta
ccctggcaac aacaacatta agtacaacga gaagtttaaa gaccgggtga
ccatcacagc ggataagtct accagtacag tctatatgga gctgagctcc
ctgagaagcg aagacaccgc cgtctactat tgcgctcgcc acgaacaggg
tccaggttac tttgattatt gggggcaggg aactctggtc acagtcagct
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actggagccc aaatcttctg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag
cacctgaact cctgggggga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc
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ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggt
である。
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gatattcaga tgacccagag tccctcattt ctgtccgcct ccgtcggtga
ccgcgtgact attacttgtc gggcttctca ggatgtcaac accgccgtgg
cttggtacca gcagaagccc ggtaaagcac ctaagctgct gatctattgg
gccagcactc ggcacaccgg agtcccatct aggttctctg gcagtggatc
agggacagac tttaccctga caattagctc cctgcagcca gaggatatcg
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ggcacaaaac tggaaatcaa aggaggcgga tccggcggcg gaggccaggt
ccagctggtg cagagtgggg cagaggtgaa aaagccaggg gcatcagtga
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ccctggcaac aacaacatta agtacaacga gaagtttaaa gaccgggtga
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ctgagaagcg aagacaccgc cgtctactat tgcgctcgcc acgaacaggg
tccaggttac tttgattatt gggggcaggg aactctggtc acagtcagct
ccgcctccac caagggcaaa gtggccgcat gtaaggagaa agttgctgct
ttgaaagaga aggtcgccgc acttaaggaa aaggtcgcag ccctgaaaga
g
である。
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gatattcaga tgacccagag tccctcattt ctgtccgcct ccgtcggtga
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cttggtacca gcagaagccc ggtaaagcac ctaagctgct gatctattgg
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agggacagac tttaccctga caattagctc cctgcagcca gaggatatcg
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ggcacaaaac tggaaatcaa aggaggcgga tccggcggcg gaggccaggt
ccagctggtg cagagtgggg cagaggtgaa aaagccaggg gcatcagtga
aagtgtcttg taaagcatca ggttatacat ttactgagta catcctgcac
tgggtgcgac aggcaccagg acagggactg gaatggatgg ggtggttcta
ccctggcaac aacaacatta agtacaacga gaagtttaaa gaccgggtga
ccatcacagc ggataagtct accagtacag tctatatgga gctgagctcc
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gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga accaggtcag
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gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg
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である。
抗ヒトDR5抗体hDR5 mAb 2 VL‐5のVLドメイン、及び抗ヒトhDR5抗体hDR5 mAb 2 VH‐5のVHドメインを有する、2ペアのポリペプチド鎖からなる、DR5に関して4価である例示的な単一特異性Fc領域含有ダイアボディを構成する。「hDR5 mAb 2.5×hDR5 mAb 2.5Fcダイアボディ」と呼ばれる第1のFc領域含有ダイアボディは、野生型IgG1 Fc領域を含有する。このFc領域含有ダイアボディの第1のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、以下の通りである(配列番号158):
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gatattcaga tgacccagag tccctcattt ctgtccgcct ccgtcggtga
ccgcgtgact attacttgtc gggcttctca ggatgtcaac accgccgtgg
cttggtacca gcagaagccc ggtaaagcac ctaagctgct gatctattgg
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agggacagac tttaccctga caattagctc cctgcagccc gaggatatcg
ctacttacta ttgtcagcag cactacatca ctccttggac cttcggcggg
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ccagctggtg cagagtgggg cagaggtgaa aaagccaggg gcatcagtga
aagtgtcttg taaagcatca ggttatacat ttactgagta catcctgcac
tgggtgcgac aggcaccagg acagggactg gaatggatgg ggtggttcta
ccctggcaac aacaacatta agtacaacga gaagtttaaa gaccgggtga
ccatcacagc ggataagtct accagtacag tctatatgga gctgagctcc
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tccaggttac tttgattatt gggggcaggg aactctggtc acagtcagct
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gatattcaga tgacccagag tccctcattt ctgtccgcct ccgtcggtga
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cttggtacca gcagaagccc ggtaaagcac ctaagctgct gatctattgg
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VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV
LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG
gatattcaga tgacccagag tccctcattt ctgtccgcct ccgtcggtga
ccgcgtgact attacttgtc gggcttctca ggatgtcaac accgccgtgg
cttggtacca gcagaagccc ggtaaagcac ctaagctgct gatctattgg
gccagcactc ggcacaccgg agtcccagat aggttctctg gcagtggatc
agggacagac tttaccctga caattagctc cctgcagccc gaggatatcg
ctacttacta ttgtcagcag cactacatca ctccttggac cttcggcggg
ggcacaaaac tggaaatcaa aggaggcgga tccggcggcg gaggccaggt
ccagctggtg cagagtgggg cagaggtgaa aaagccaggg gcatcagtga
aagtgtcttg taaagcatca ggttatacat ttactgagta catcctgcac
tgggtgcgac aggcaccagg acagggactg gaatggatgg ggtggttcta
ccctggcaac aacaacatta agtacaacga gaagtttaaa gaccgggtga
ccatcacagc ggataagtct accagtacag tctatatgga gctgagctcc
ctgagaagcg aagacaccgc cgtctactat tgcgctcgcc acgaacaggg
tccaggttac tttgattatt gggggcaggg aactctggtc acagtcagct
ccgcctccac caagggcgaa gtggccgcat gtgagaaaga ggttgctgct
ttggagaagg aggtcgctgc acttgaaaag gaggtcgcag ccctggagaa
actggagccc aaatcttctg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag
cacctgaagc cgcgggggga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc
aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt
ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg
gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac
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gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc
ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag
gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga accaggtcag
cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt
gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa
gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg
ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggt
である。
1.DR5 mAb 1×DR5 mAb 1ダイアボディ
抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 1のVL及びVHドメイン、並びにDR5 mAb 1のVL及びVHドメインを有する、2つのポリペプチド鎖からなるFc領域を含まない、DR5に関して2価である例示的な単一特異性ダイアボディを構成する。このダイアボディの第1のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、上述の配列番号128のアミノ酸残基1〜273を含む。このダイアボディの第2のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、上述の配列番号130を含む。
抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2のVL及びVHドメイン、並びにDR5 mAb 2のVL及びVHドメインを有する、2つのポリペプチド鎖からなるFc領域を含まない、DR5に関して2価である例示的な単一特異性ダイアボディを構成する。このダイアボディの第1のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、上述の配列番号134のアミノ酸残基1〜267を含む。このダイアボディの第2のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、上述の配列番号136を含む。
抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2 VL‐2のVL及びVHドメイン、並びにDR5 mAb 2 VH‐2のVL及びVHドメインを有する、2つのポリペプチド鎖からなるFc領域を含まない、DR5に関して2価である例示的な単一特異性ダイアボディを構成する。このダイアボディの第1のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、上述の配列番号140のアミノ酸残基1〜267を含む。このダイアボディの第2のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、上述の配列番号142を含む。
抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2 VL‐3のVL及びVHドメイン、並びにDR5 mAb 2 VH‐3のVL及びVHドメインを有する、2つのポリペプチド鎖からなるFc領域を含まない、DR5に関して2価である例示的な単一特異性ダイアボディを構成する。このダイアボディの第1のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、上述の配列番号146のアミノ酸残基1〜267を含む。このダイアボディの第2のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、上述の配列番号148を含む。
抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2 VL‐4のVL及びVHドメイン、並びにDR5 mAb 2 VH‐4のVL及びVHドメインを有する、2つのポリペプチド鎖からなるFc領域を含まない、DR5に関して2価である例示的な単一特異性ダイアボディを構成する。このダイアボディの第1のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、上述の配列番号152のアミノ酸残基1〜267を含む。このダイアボディの第2のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、上述の配列番号154を含む。
抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2 VL‐5のVL及びVHドメイン、並びにDR5 mAb 2 VH‐5のVL及びVHドメインを有する、2つのポリペプチド鎖からなるFc領域を含まない、DR5に関して2価である例示的な単一特異性ダイアボディを構成する。このダイアボディの第1のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、上述の配列番号158のアミノ酸残基1〜267を含む。このダイアボディの第2のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、上述の配列番号160を含む。
代替実施形態では、ヒト化抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 1のVL及びVHドメイン並びに/又はヒト化DR5 mAb 2のVL及びVHドメインを有する、本発明のDR5×DR5ダイアボディを構成する。ある具体的な実施形態では、hDR5 mab 2 VL VL‐2(配列番号23)、hDR5 mab 2 VL VL‐3(配列番号25)、hDR5 mab 2 VL VL‐4(配列番号27)若しくはhDR5 mab 2 VL VL‐5(配列番号29)のVLドメインを、配列番号13に代えて上述の構成に組み込み、及び/又はhDR5 mab 2 VH‐2(配列番号31)というVHドメインを、配列番号18に代えて上述の構成に組み込む。あるいは、又は更に、DR5 mAb 1のヒト化VLドメインを、配列番号3に代えて上述の構成に組み込み、及び/又はヒト化VHドメインを、配列番号8に代えて上述の構成に組み込む。
(1)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 1のVLドメインのCDRLのうちの少なくとも1つ;
(2)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 1のVLドメインのCDRLのうちの少なくとも2つ;
(3)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 1のVLドメインの3つのCDRL;
(4)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 1のVHドメインのCDRHのうちの少なくとも1つ;
(5)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 1のVHドメインのCDRHのうちの少なくとも2つ;
(6)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 1のVHドメインの3つのCDRH;
(7)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 1のVLドメインのCDRLのうちの少なくとも1つ、及び抗ヒトDR5抗体 DR5 mAb 1のVHドメインのCDRHのうちの少なくとも1つ;
(8)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 1のVLドメインのCDRLのうちの少なくとも2つ、及び抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 1のVHドメインのCDRHのうちの少なくとも2つ;
(9)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 1のVLドメインの3つのCDRL、及び抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 1のVHドメインの3つのCDRH;
(10)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 1のVLドメイン;
(11)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 1のVHドメイン;
(12)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 1のVL及びVHドメイン
を有する;又は
(13)ヒトDR5への結合に関して抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 1と競合し得る;又は
(14)ヒトDR5への結合に関して(1)〜(13)のいずれと競合する、多価DR5結合分子も含むことが認識されるだろう。
(15)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2のVLドメインのCDRLのうちの少なくとも1つ;
(16)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2のVLドメインのCDRLのうちの少なくとも2つ;
(17)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2のVLドメインの3つのCDRL;
(18)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2のVHドメインのCDRHのうちの少なくとも1つ;
(19)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2のVHドメインのCDRHのうちの少なくとも2つ;
(20)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2のVHドメインの3つのCDRH;
(21)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2のVLドメインのCDRLのうちの少なくとも1つ、及び抗ヒトDR5抗体 DR5 mAb 2のVHドメインのCDRHのうちの少なくとも1つ;
(22)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2のVLドメインのCDRLのうちの少なくとも2つ、及び抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2のVHドメインのCDRHのうちの少なくとも2つ;
(23)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2のVLドメインの3つのCDRL、及び抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2のVHドメインの3つのCDRH;
(24)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2のVLドメイン;
(25)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2のVHドメイン;
(26)抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2のVL及びVHドメイン
を有する;
(27)ヒトDR5への結合に関して抗ヒトDR5抗体DR5 mAb 2と競合する;又は
(28)ヒトDR5への結合に関して(1)〜(13)のいずれと競合する、多価DR5結合分子も含むことが認識されるだろう。
多価DR5結合分子、並びに他のDR5アゴニスト、アンタゴニスト及びモジュレータは、当該技術分野において公知の方法によって、例えば合成又は組み換えにより、DR5 mAb 1又はDR5 mAb 2抗体のポリヌクレオチド及び/又は配列から生成できる。このようなペプチドアゴニスト、アンタゴニスト及びモジュレータを製造する1つの方法は、ポリペプチドの化学合成と、これに続く、天然立体配座、即ち正しいジスルフィド結合を得るために適切な酸化条件下での処置とを伴う。これは、当業者に公知の方法論を用いて達成できる(例えばKelley, R. F. et al. (1990) In: Genetic Engineering Principles and Methods, Setlow, J.K. Ed., Plenum Press, N.Y., vol. 12, pp 1‐19; Stewart, J.M et al. (1984) Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Co., Rockford, ILを参照;米国特許第4,105,603号;米国特許第3,972,859号;米国特許第3,842,067号;及び米国特許第3,862,925号も参照)。
本発明は、本発明の多価DR5結合分子(例えばDR5 mAb 1及びDR5 mAb 2等の抗DR5抗体又はそのヒト化誘導体からの抗原結合ドメインを含む多価DR5結合分子)、このような分子由来のポリペプチド、このような分子又はポリペプチドをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びに本明細書に記載の他の作用剤を含む、医薬組成物を含む組成物を包含する。
本発明の組成物は、医薬組成物の製造に使用できるバルク薬剤組成物(例えば不純又は非滅菌組成物)、及び単位剤形の調製に使用できる医薬組成物(即ち被験体又は患者への投与に好適な組成物)を含む。これらの組成物は、予防的又は治療的有効量の本発明の三重特異性結合分子、又はこのような作用剤と薬学的に許容可能なキャリアとの組み合わせを含む。好ましくは、本発明の組成物は、予防的又は治療的有効量の本発明の多価DR5結合分子のうちの1つ又は複数と、薬学的に許容可能なキャリアとを含む。本発明は特に、多価DR5結合分子が、DR5 mAb 1、DR5 mAb 2抗体、ヒト化DR5 mAb 1、ヒト化DR5 mAb 2抗体、又はこれらの抗体のいずれのDR5結合断片といった、抗DR5抗体からの抗原結合ドメインを含む。特に包含されるのは、DR5 mAb 1の3つのCDRL及び3つのCDRH;DR5 mAb 2の3つのCDRL及び3つのCDRH;並びに/又はhDR5 mAb 2 VL‐3の3つのCDRL及び3つのCDRHを含む分子である。
本発明の組成物は、有効量の本発明の融合タンパク質若しくはコンジュゲート分子又は本発明の融合タンパク質若しくはコンジュゲート分子を含む医薬組成物を被験体に投与することによる、疾患、障害又は感染症に関連する1つ又は複数の症状の治療、予防及び改善のために提供できる。好ましい態様では、上記組成物は実質的に精製される(即ち上記組成物の効果を制限する、又は望ましくない副作用を生成する物質を実質的に含まない)。ある具体的実施形態では、被験体は動物、好ましくは非霊長類(例えばウシ属、ウマ科、ネコ科、イヌ科、げっ歯類等)又は霊長類(例えばカニクイザル等のサル、ヒト等)といった哺乳類である。ある好ましい実施形態では、被験体はヒトである。
ここまで本発明を概説してきたが、以下の実施例を参照することにより、本発明は更に容易に理解されるだろう。これらの実施例は例示として提供されており、そうでないことが明記されていない限り本発明を制限することを意図したものではない。本開示の範囲から逸脱することなく、材料及び方法の両方に対して多数の修正を実施できることは、当業者には明らかであろう。
ヒトDR5に免疫特異的に結合できるものとして2つのモノクローナル抗体を単離し、呼称「DR5 mAb 1」及び「DR5 mAb 2」を与えた。上述のように、これらの抗体のCDRは異なっていることが分かった。抗体が異なるDR5エピトープに結合するかどうかを決定するために、ヒトDR5‐Fc融合タンパク質を調製し、不動化された表面にコーティングした。DR5 mAb 1(1μg/mL)をビオチン化し、対照IgG又はDR5 mAb 2(10μg/mL)を用いてインキュベートし、IgG又はDR5 mAb 2抗体の、(ヒトDR5‐Fc融合タンパク質との)結合に関してDR5 mAb 1と競合する能力を、不動化されたビオチン化抗体の量を測定することによって評価した。更に、IgG又はDR5 mAb 1抗体の、結合に関してビオチン化DR5 mAb 2と競合する能力を評価した。この実験の結果をテーブル5に示す。
抗ヒトDR5モノクローナル抗体DR5 mAb 1及びDR5 mAb 2の種特異性を評価するために、上記抗体の、ヒトDR5に結合する能力を、上記抗体の、カニクイザル(Macaca fascicularis)DR5に結合する能力と比較した。この実験の結果を図5に示す。結果は、これらの抗体がいずれもカニクイザルDR5に結合できるものの、それぞれヒトDR5に対してより高い結合親和性を示すことを示す。
抗ヒトDR5モノクローナル抗体DR5 mAb 1及びDR5 mAb 2の腫瘍細胞特異性を調査した。正常な組織を、DR5 mAb 1又はアイソタイプ対照(5μg/mL)と接触させ、染色の程度を可視化した。図7A、パネルA〜Lに示すように、DR5 mAb 1及びアイソタイプ対照はいずれも、正常組織の細胞を標識しなかった。対照的にDR5 mAb 1は、結腸癌組織(図7B、パネルA)及び肺癌組織(図7B、パネルB)の細胞を強力に標識することが分かった。対照的に、アイソタイプ対照は、これらいずれの組織も標識しなかった(図7B、パネルC〜D)。従って、図7A〜7Bに提示された結果は、DR5 mAb 1が癌細胞に特異的に結合できたことを示す。
本発明のDR5結合分子の、細胞傷害を仲介する能力を、標的腫瘍細胞及び末梢血単核細胞(PBMC)の存在下で、エフェクタ:標的細胞比30:1又は20:1において二重特異性DR5×CD3ダイアボディ又は対照ダイアボディを24時間インキュベートすることによって評価した。%細胞傷害は、損傷細胞による培地中への乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)の放出を測定することによって決定した。
本発明のDR5結合分子DR5 mAb 1及びDR5 mAb 2の、細胞傷害を仲介する能力を、基準抗DR5抗体:DR5 mAb 3及びDR5 mAb 4のものと比較した。このような比較を行うために、本質的に上述したように、これらの抗ヒトDR5抗体のVL及びVHドメイン並びにCD3 mAb 2のVL及びVHドメインを含有する、図1の構造を有する二重特異性 DR5×CD3 ダイアボディを調製した。調製された第1及び第2のダイアボディは「DR5 mAb 1×CD3 mAb 2」;「DR5 mAb 2×CD3 mAb 2」;「DR5 mAb 3×CD3 mAb 2」;及び「DR5 mAb 4×CD3 mAb 2」と呼ばれる。
本発明のDR5×CD3ダイアボディの、DR5及びCD3に同時に結合する能力を実証するために、可溶性ヒトDR5(ヒスチジンでタグ付けされている)を支持体表面にコーティングした。次に上記支持体を、DR5 mAb 2×CD3 mAb 2ダイアボディ、又はそのヒト化誘導体:hDR5 mAb 2(2.2)×CD3 mAb 2、hDR5 mAb 2(2.3)×CD3 mAb 2、hDR5 mAb 2(2.4)×CD3 mAb 2若しくはhDR5 mAb 2(2.5)×CD3 mAb 2のうちの1つを用いてインキュベートした。その後、ビオチンとコンジュゲートしたCD3を提供し、上記支持体に対して不動化したCD3の量を測定した。
本発明のヒト化DR5 mAb 2×CD3ダイアボディの、細胞傷害を仲介する能力を実証するために、DR5 mAb 2×CD3 mAb 2ダイアボディ、又はそのヒト化誘導体:hDR5 mAb 2(2.2)×CD3 mAb 2、hDR5 mAb 2(2.3)×CD3 mAb 2、hDR5 mAb 2(2.4)×CD3 mAb 2若しくはhDR5 mAb 2(2.5)×CD3 mAb 2のうちの1つを、pan T細胞と、ルシフェラーゼ(luc)レポータ遺伝子を発現するよう操作された標的Colo205結腸直腸癌細胞(Colo205‐Luc細胞)とを用いて、24時間インキュベートした(エフェクタ:標的細胞比10:1)。細胞傷害性を、細胞溶解時のルシフェラーゼの放出によって引き起こされるルミネセンスの増加によって測定した。
本発明のDR5結合分子DR5 mAb 1及びDR5 mAb 2の細胞傷害性を、非放射性細胞増殖アッセイを用いて、多数の細胞株において試験した。単独の、架橋された、又は組み合わせられた、DR5 mAb 1及びDR5 mAb 2の活性を試験した。
DR5 mAb 1及びDR5 mAb 2の細胞傷害機序を調査した。具体的には、アポトーシスの3つの異なる測定:(i)ヌクレオソーム富化、(ii)PARP切断、及び(iii)活性カスパーゼ3を、DR5 mAb 1若しくはDR5 mAb 2を単独で又は上記DR5 mAbを架橋させるためのαmFcの存在下で用いて処置したCOLO205細胞に対して採用した。
DR5結合分子に対する価数の影響を検査するために、DR5に関して4価の分子を生成する。この例では、Eコイル/Kコイル‐Fc領域含有ダイアボディを調製する。これらのEコイル/Kコイル‐Fc領域含有ダイアボディのうちのいくつかは、以下の実施例において特性決定される。各多価DR5結合分子は、2ペアのポリペプチド鎖からなる。
各二重特異性4価DR5結合分子(DR5 mAb 2×DR5 mAb 1Fcダイアボディ)の腫瘍細胞特異性を調査した。正常な組織を、0.625μg/mLの標識DR5 mAb 2×DR5 mAb 1Fcダイアボディ、又は標識対照ダイアボディ(4‐4‐20×CD3 mAb 2、実施例4に記載)と接触させ、染色の程度を可視化した。図15A〜Bに示すように、DR5 mAb 2×DR5 mAb 1Fcダイアボディ及び対照ダイアボディはいずれも、正常な組織の細胞の標識に失敗した。同様の結果が、図15Bに示す肝臓を含む正常な組織の追加の試料において、観察された。対照的に、DR5 mAb 2×DR5 mAb 1Fcダイアボディは、乳癌組織(図16、パネルA)、結腸癌組織(図16、パネルB)、肺癌組織(図16、パネルC)及び前立腺癌組織(図16、パネルD)の細胞を強力に標識することが分かった。対照的に、対照ダイアボディは、いずれの組織の標識にも失敗した(図16、パネルE‐H)。組織学的観察の概要を、テーブル10において提供する。従って、図15A〜15B、16及びテーブル10の結果は、(DR5の2つのエピトープに関して二重特異性である)4価DR5結合分子が癌細胞に特異的に結合できることを示す。
本発明の4価DR5結合分子の細胞傷害性を調査した。2つの例示的な二重特異性4価Eコイル/Kコイル‐Fc領域含有ダイアボディ(DR5 mAb 1×DR5 mAb 2Fcダイアボディ;及びDR5 mAb 2×DR5 mAb 1Fcダイアボディ)、並びに4つの例示的な単一特異性4価Eコイル/Kコイル‐Fc領域含有ダイアボディ(DR5 mAb 1×DR5 mAb 1Fcダイアボディ;DR5 mAb 1×DR5 mAb 1Fcダイアボディ(AA);DR5 mAb 2×DR5 mAb 2Fcダイアボディ;及びDR5 mAb 2×DR5 mAb 2Fcダイアボディ(AA)、ここで「AA」はL234A/L235A突然変異型を表す)の、多数の細胞株に対する活性を、架橋抗体を試験試料のいずれにも添加しないことを除いては基本的に上述のような非放射性細胞増殖アッセイを用いて、検査した。His‐タグ付け済みTRAIL(R&D systems)を陽性対照として使用した。
本発明の4価DR5結合分子の、アポトーシスを誘発する能力を調査した。2つの例示的な二重特異性4価Eコイル/Kコイル‐Fc領域含有ダイアボディ(DR5 mAb 1×DR5 mAb 2Fcダイアボディ;及びDR5 mAb 2×DR5 mAb 1Fcダイアボディ)、並びに2つの例示的な単一特異性4価Eコイル/Kコイル‐Fc領域含有ダイアボディ(DR5 mAb 1×DR5 mAb 1Fcダイアボディ;及びDR5 mAb 2×DR5 mAb 2Fcダイアボディ)の活性を、COLO205、A496、SKMES、LNCap、MDA‐MB‐231及びHs700T細胞株において検査した。この調査は、架橋抗体を試験試料のいずれにも添加しないことを除いては基本的に上述のようなヌクレオソーム富化アッセイを用いて、実施した。His‐タグ付け済みTRAIL(R&D systems)を陽性対照として使用した。(上述のように算出した)富化係数を図18にプロットする。
本発明の多価DR5結合分子の細胞傷害性を、細胞増殖アッセイにおいて既に報告されている抗体DR5 mAb 8(KMTR2)及びDR5 mAb 4(コナツムマブ)の細胞傷害性と比較した。1つの例示的な二重特異性4価Eコイル/Kコイル‐Fc領域含有ダイアボディ(DR5 mAb 1×DR5 mAb 2Fcダイアボディ(AA));2つの例示的な単一特異性4価Eコイル/Kコイル‐Fc領域含有ダイアボディ(DR5 mAb 1×DR5 mAb 1Fcダイアボディ(AA);及びDR5 mAb 2×DR5 mAb 2Fcダイアボディ(AA));抗DR5抗体DR5 mAb 8(AA)(KMTR2);並びに架橋した及び架橋していない抗DR5抗体DR5 mAb 4(AA)(コナツムマブ)(ここで「AA」はL234A/L235A突然変異型を表す)のCOLO205に対する活性を、架橋抗体をDR5 mAb 4の1つの試験試料のみに添加したことを除いては基本的に上述のような非放射性細胞増殖アッセイを用いて、およそ10‐3nM〜およそ102nMの濃度範囲に亘って検査した。His‐タグ付け済みTRAIL(R&D systems)を陽性対照として使用した。
本発明の多価DR5結合分子の、癌幹細胞様(CSCL)細胞に対する細胞傷害性を調査した。RECA0201は、中程度に分化した直腸腺癌(突然変異したAPC及びKRAS;CD44hi、CD133+及びA33+)から単離されたCSCL細胞である。RECA0201細胞は腫瘍形成性であり、インビボでの腫瘍形態及び多系統分化、又はインビトロでのオルガノイド形成を再現できる。
ある例示的な単一特異性4価Eコイル/Kコイル‐Fc領域含有ダイアボディ(DR5 mAb 1×DR5 mAb 1Fcダイアボディ(AA));並びに2つの抗DR5抗体(DR5 mAb 8(AA)(KMTR2)、及びDR5 mAb 4(AA)(コナツムマブ))(ここで「AA」はL234A/L235A突然変異型を表す)の抗腫瘍活性を、異種移植腫瘍モデルにおいて評価した。簡潔に言うと、0日目、メスのhCD16A FOX N1マウス(n=7/群)に、マトリゲルと1:1で混合した200μLのHam’s F12培地中に懸濁された5000000個のCOLO205細胞を皮下(SC)移植した。カリパスを用いて3〜4日毎に腫瘍を測定した。研究3日目、腫瘍サイズに基づいてマウスをランダム化し、1週間に2回、指示された用量レベルの試験物品又はビヒクル(0.5%のウシ血清アルブミンを含有する無菌生理食塩水)で処置(静脈注射)した。腫瘍の体積を研究の経過全体に亘って監視し、図21に、群の平均±SEMとしてプロットした。4価DR5結合分子は、上記研究の経過全体に亘って腫瘍成長を劇的に阻害することが観察され、また腫瘍は、0.5及び0.05mg/kg治療群において退行することが観察された。
ボリノスタット等のヒストンデアセチラーゼ(HDAC)阻害剤は、DR5によって誘発されたアポトーシスに対して腫瘍細胞を感作することが報告されている。HDAC阻害剤ボリノスタットと組み合わせたDR5 mAb 1、DR5 mAb 2、及び複数の4価DR5結合分子の細胞傷害活性を、非放射性細胞増殖アッセイを用いて調査した。
配列番号1:ヒト野生型IgGのCH2‐CH3ドメイン
配列番号2:ヒト細胞死受容体5前駆体タンパク質
配列番号3:抗DR5抗体mAb 1軽鎖可変領域
配列番号4:抗DR5抗体mAb 1軽鎖可変領域のCDRL1
配列番号5:抗DR5抗体mAb 1軽鎖可変領域のCDRL2
配列番号6:抗DR5抗体mAb 1軽鎖可変領域のCDRL3
配列番号7:抗DR5抗体mAb 1軽鎖可変領域をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号8:抗DR5抗体mAb 1重鎖可変領域
配列番号9:抗DR5抗体mAb 1重鎖可変領域のCDRH1
配列番号10:抗DR5抗体mAb 1重鎖可変領域のCDRH2
配列番号11:抗DR5抗体mAb 1重鎖可変領域のCDRH3
配列番号12:抗DR5抗体mAb 1重鎖可変領域をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号13:抗DR5抗体mAb 2軽鎖可変領域
配列番号14:抗DR5抗体mAb 2軽鎖可変領域のCDRL1
配列番号15:抗DR5抗体mAb 2軽鎖可変領域のCDRL2
配列番号16:抗DR5抗体mAb 2軽鎖可変領域のCDRL3
配列番号17:抗DR5抗体mAb 2軽鎖可変領域をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号18:抗DR5抗体mAb 2重鎖可変領域
配列番号19:抗DR5抗体mAb 2重鎖可変領域のCDRH1
配列番号20:抗DR5抗体mAb 2重鎖可変領域のCDRH2
配列番号21:抗DR5抗体mAb 2重鎖可変領域のCDRH3
配列番号22:抗DR5抗体mAb 2重鎖可変領域をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号23:ヒト化抗DR5抗体mAb 2軽鎖可変領域変異体2
配列番号24:ヒト化抗DR5抗体mAb 2軽鎖可変領域変異体2をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号25:ヒト化抗DR5抗体mAb 2軽鎖可変領域変異体3
配列番号26:ヒト化抗DR5抗体mAb 2軽鎖可変領域変異体3をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号27:ヒト化抗DR5抗体mAb 2軽鎖可変領域変異体4
配列番号28:ヒト化抗DR5抗体mAb 2軽鎖可変領域変異体4をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号29:ヒト化抗DR5抗体mAb 2軽鎖可変領域変異体5
配列番号30:ヒト化抗DR5抗体mAb 2軽鎖可変領域変異体5をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号31:ヒト化抗DR5抗体mAb 2重鎖可変領域変異体2
配列番号32:ヒト化抗DR5抗体mAb 2重鎖可変領域変異体2をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号33:リンカー1
配列番号34:システイン含有ドメイン(リンカー2)
配列番号35:ヒトIgGのヒンジドメインのシステイン含有部分の変異体
配列番号36:ヒトIgGのヒンジドメインのシステイン含有部分
配列番号37:ヒトCLドメインのシステイン含有部分の変異体
配列番号38:ヒトCLドメインのシステイン含有部分
配列番号39:Eコイルヘテロ二量体促進ドメイン
配列番号40:Kコイルヘテロ二量体促進ドメイン
配列番号41:システイン含有Eコイルヘテロ二量体促進ドメイン
配列番号42:システイン含有Kコイルヘテロ二量体促進ドメイン
配列番号43:連鎖球菌のタンパク質Gのアルブミン結合ドメイン3(ABD3)
配列番号44:連鎖球菌株G148のタンパク質Gのアルブミン結合ドメイン3(ABD3)の脱免疫化変異体
配列番号45:連鎖球菌株G148のタンパク質Gのアルブミン結合ドメイン3(ABD3)の脱免疫化変異体
配列番号46:ペプチドリンカー
配列番号47:ペプチドリンカー
配列番号48:システイン含有ペプチドリンカー(リンカー3)
配列番号49:ペプチドリンカー(リンカー3)
配列番号50:ペプチドリンカー(リンカー3)
配列番号51:代替的なシステイン含有ペプチドリンカー(リンカー3)
配列番号52:「ノブ担持」CH2‐CH3ドメイン
配列番号53:「ホール担持」CH2‐CH3ドメイン
配列番号54:ドロジツマブ抗DR5抗体軽鎖可変領域
配列番号55:ドロジツマブ抗DR5抗体軽鎖可変領域のCDRL1
配列番号56:ドロジツマブ抗DR5抗体軽鎖可変領域のCDRL2
配列番号57:ドロジツマブ抗DR5抗体軽鎖可変領域のCDRL3
配列番号58:ドロジツマブ抗DR5抗体重鎖可変領域
配列番号59:ドロジツマブ抗DR5抗体重鎖可変領域のCDRH1
配列番号60:ドロジツマブ抗DR5抗体重鎖可変領域のCDRH2
配列番号61:ドロジツマブ抗DR5抗体重鎖可変領域のCDRH3
配列番号62:コナツムマブ抗DR5抗体軽鎖可変領域
配列番号63:コナツムマブ抗DR5抗体軽鎖可変領域のCDRL1
配列番号64:コナツムマブ抗DR5抗体軽鎖可変領域のCDRL2
配列番号65:コナツムマブ抗DR5抗体軽鎖可変領域のCDRL3
配列番号66:コナツムマブ抗DR5抗体重鎖可変領域
配列番号67:コナツムマブ抗DR5抗体重鎖可変領域のCDRH1
配列番号68:コナツムマブ抗DR5抗体重鎖可変領域のCDRH2
配列番号69:コナツムマブ抗DR5抗体重鎖可変領域のCDRH3
配列番号70:チガツズマブヒト化抗DR5抗体軽鎖可変領域
配列番号71:チガツズマブヒト化抗DR5抗体軽鎖可変領域のCDRL1
配列番号72:チガツズマブヒト化抗DR5抗体軽鎖可変領域のCDRL2
配列番号73:チガツズマブヒト化抗DR5抗体軽鎖可変領域のCDRL3
配列番号74:チガツズマブヒト化抗DR5抗体重鎖可変領域
配列番号75:チガツズマブヒト化抗DR5抗体重鎖可変領域のCDRH1
配列番号76:チガツズマブヒト化抗DR5抗体重鎖可変領域のCDRH2
配列番号77:チガツズマブヒト化抗DR5抗体重鎖可変領域のCDRH3
配列番号78:LBY135‐1抗DR5抗体軽鎖可変領域
配列番号79:LBY135‐1抗DR5抗体軽鎖可変領域のCDRL1
配列番号80:LBY135‐1抗DR5抗体軽鎖可変領域のCDRL2
配列番号81:LBY135‐1抗DR5抗体軽鎖可変領域のCDRL3
配列番号82:LBY135‐1抗DR5抗体重鎖可変領域
配列番号83:LBY135‐1抗DR5抗体重鎖可変領域のCDRH1
配列番号84:LBY135‐1抗DR5抗体重鎖可変領域のCDRH2
配列番号85:LBY135‐1抗DR5抗体重鎖可変領域のCDRH3
配列番号86:LBY135‐2抗DR5抗体軽鎖可変領域
配列番号87:LBY135‐2抗DR5抗体軽鎖可変領域のCDRL1
配列番号88:LBY135‐2抗DR5抗体軽鎖可変領域のCDRL2
配列番号89:LBY135‐2抗DR5抗体軽鎖可変領域のCDRL3
配列番号90:LBY135‐2抗DR5抗体重鎖可変領域
配列番号91:LBY135‐2抗DR5抗体重鎖可変領域のCDRH1
配列番号92:LBY135‐2抗DR5抗体重鎖可変領域のCDRH2
配列番号93:LBY135‐2抗DR5抗体重鎖可変領域のCDRH3
配列番号94:KMTR2抗DR5抗体軽鎖可変領域
配列番号95:KMTR2抗DR5抗体軽鎖可変領域のCDRL1
配列番号96:KMTR2抗DR5抗体軽鎖可変領域のCDRL2
配列番号97:KMTR2抗DR5抗体軽鎖可変領域のCDRL3
配列番号98:KMTR2抗DR5抗体重鎖可変領域
配列番号99:KMTR2抗DR5抗体重鎖可変領域のCDRH1
配列番号100:KMTR2抗DR5抗体重鎖可変領域のCDRH2
配列番号101:KMTR2抗DR5抗体重鎖可変領域のCDRH3
配列番号102:IgG1のFc領域L234A/L235A変異体
配列番号103:ヒト野生型IgG4のCH2‐CH3ドメイン
配列番号104:ヒト化抗CD3「mAb 2」軽鎖可変ドメイン
配列番号105:ヒト化抗CD3「mAb 2」軽鎖可変ドメインのCDRL1
配列番号106:ヒト化抗CD3「mAb 2」軽鎖可変ドメインのCDRL2
配列番号107:ヒト化抗CD3「mAb 2」軽鎖可変ドメインのCDRL3
配列番号108:ヒト化抗CD3「mAb 2」重鎖可変ドメイン
配列番号109:ヒト化抗CD3「mAb 2」重鎖可変ドメインのCDRH1
配列番号110:ヒト化抗CD3「mAb 2」重鎖可変ドメインのCDRH2
配列番号111:ヒト化抗CD3「mAb 2」重鎖可変ドメインのCDRH3
配列番号112:ヒト化抗CD3「mAb 2」重鎖可変ドメインD65G変異体
配列番号113:ヒト化抗CD3「mAb 2」重鎖可変ドメインD65G変異体のCDRH2
配列番号114:フルオレセイン抗体4‐4‐20軽鎖可変ドメイン
配列番号115:フルオレセイン抗体4‐4‐20重鎖可変ドメイン
配列番号116:例示的なDR5 mAb 1×DR5 mAb 2Fcダイアボディの第1のポリペプチド鎖
配列番号117:例示的なDR5 mAb 1×DR5 mAb 2Fcダイアボディの第1のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号118:例示的なDR5 mAb 1×DR5 mAb 2Fcダイアボディの第2のポリペプチド鎖
配列番号119:例示的なDR5 mAb 1×DR5 mAb 2Fcダイアボディの第2のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号120:例示的なDR5 mAb 1×DR5 mAb 2FcダイアボディL234A/L235Aの第1のポリペプチド鎖
配列番号121:例示的なDR5 mAb 1×DR5 mAb 2FcダイアボディL234A/L235Aの第1のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号122:例示的なDR5 mAb 2×DR5 mAb 1Fcダイアボディの第1のポリペプチド鎖
配列番号123:例示的なDR5 mAb 2×DR5 mAb 1Fcダイアボディの第1のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号124:例示的なDR5 mAb 2×DR5 mAb 1Fcダイアボディの第2のポリペプチド鎖
配列番号125:例示的なDR5 mAb 2×DR5 mAb 1Fcダイアボディの第2のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号126:例示的なDR5 mAb 2×DR5 mAb 1FcダイアボディL234A/L235Aの第1のポリペプチド鎖
配列番号127:例示的なDR5 mAb 2×DR5 mAb 1FcダイアボディL234A/L235Aの第1のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号128:例示的なDR5 mAb 1×DR5 mAb 1Fcダイアボディの第1のポリペプチド鎖
配列番号129:例示的なDR5 mAb 1×DR5 mAb 1Fcダイアボディの第1のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号130:例示的なDR5 mAb 1×DR5 mAb 1Fcダイアボディの第2のポリペプチド鎖
配列番号131:例示的なDR5 mAb 1×DR5 mAb 1Fcダイアボディの第2のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号132:例示的なDR5 mAb 1×DR5 mAb 1FcダイアボディL234A/L235Aの第1のポリペプチド鎖
配列番号133:例示的なDR5 mAb 1×DR5 mAb 1FcダイアボディL234A/L235Aの第1のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号134:例示的なDR5 mAb 2×DR5 mAb 2Fcダイアボディの第1のポリペプチド鎖
配列番号135:例示的なDR5 mAb 2×DR5 mAb 2Fcダイアボディの第1のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号136:例示的なDR5 mAb 2×DR5 mAb 2Fcダイアボディの第2のポリペプチド鎖
配列番号137:例示的なDR5 mAb 2×DR5 mAb 2Fcダイアボディの第2のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号138:例示的なDR5 mAb 2×DR5 mAb 2FcダイアボディL234A/L235Aの第1のポリペプチド鎖
配列番号139:例示的なDR5 mAb 2×DR5 mAb 2FcダイアボディL234A/L235Aの第1のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号140:例示的なDR5 mAb 2.2×DR5 mAb 2.2Fcダイアボディの第1のポリペプチド鎖
配列番号141:例示的なDR5 mAb 2.2×DR5 mAb 2.2Fcダイアボディの第1のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号142:例示的なDR5 mAb 2.2×DR5 mAb 2.2Fcダイアボディの第2のポリペプチド鎖
配列番号143:例示的なDR5 mAb 2.2×DR5 mAb 2.2Fcダイアボディの第2のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号144:例示的なDR5 mAb 2.2×DR5 mAb 2.2FcダイアボディL234A/L235Aの第1のポリペプチド鎖
配列番号145:例示的なDR5 mAb 2.2×DR5 mAb 2.2FcダイアボディL234A/L235Aの第1のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号146:例示的なDR5 mAb 2.3×DR5 mAb 2.3Fcダイアボディの第1のポリペプチド鎖
配列番号147:例示的なDR5 mAb 2.3×DR5 mAb 2.3Fcダイアボディの第1のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号148:例示的なDR5 mAb 2.3×DR5 mAb 2.3Fcダイアボディの第2のポリペプチド鎖
配列番号149:例示的なDR5 mAb 2.3×DR5 mAb 2.3Fcダイアボディの第2のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号150:例示的なhDR5 mAb 2.3×hDR5 mAb 2.3FcダイアボディL234A/L235Aの第1のポリペプチド鎖
配列番号151:例示的なhDR5 mAb 2.3×hDR5 mAb 2.3FcダイアボディL234A/L235Aの第1のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号152:例示的なhDR5 mAb 2.4×hDR5 mAb 2.4Fcダイアボディの第1のポリペプチド鎖
配列番号153:例示的なhDR5 mAb 2.4×hDR5 mAb 2.4Fcダイアボディの第1のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号154:例示的なhDR5 mAb 2.4×hDR5 mAb 2.4Fcダイアボディの第2のポリペプチド鎖
配列番号155:例示的なhDR5 mAb 2.4×hDR5 mAb 2.4Fcダイアボディの第2のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号156:例示的なhDR5 mAb 2.4×hDR5 mAb 2.4FcダイアボディL234A/L235Aの第1のポリペプチド鎖
配列番号157:例示的なhDR5 mAb 2.4×hDR5 mAb 2.4FcダイアボディL234A/L235Aの第1のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号158:例示的なhDR5 mAb 2.5×hDR5 mAb 2.5Fcダイアボディの第1のポリペプチド鎖
配列番号159:例示的なhDR5 mAb 2.5×hDR5 mAb 2.5Fcダイアボディの第1のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号160:例示的なhDR5 mAb 2.5×hDR5 mAb 2.5Fcダイアボディの第2のポリペプチド鎖
配列番号161:例示的なhDR5 mAb 2.5×hDR5 mAb 2.5Fcダイアボディの第2のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号162:例示的なhDR5 mAb 2.5×hDR5 mAb 2.5FcダイアボディL234A/L235Aの第1のポリペプチド鎖
配列番号163:例示的なhDR5 mAb 2.5×hDR5 mAb 2.5FcダイアボディL234A/L235Aの第1のポリペプチド鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号164:ヒト野生型IgG2のCH2‐CH3ドメイン
配列番号165:ヒト化抗DR5抗体mAb 2軽鎖可変領域変異体3,4,5のCDRL1
配列番号166:OKT3抗CD3抗体軽鎖可変ドメイン
配列番号167:OKT3抗CD3抗体重鎖可変ドメイン
配列番号168:ヒト野生型IgG3のCH2‐CH3ドメイン
Claims (34)
- ヒト細胞死受容体5(DR5)の2つの異なるエピトープに同時に結合できる二重特異性結合分子である多価DR5結合分子であって、
前記多価DR5結合分子は、それぞれがヒトDR5に結合できる4つの抗原結合ドメインを含む、多価DR5結合分子。 - ヒトDR5の1つのエピトープに結合できる単一特異性結合分子である多価DR5結合分子であって、
前記多価DR5結合分子は、それぞれがヒトDR5に結合できる4つの抗原結合ドメインを含む、多価DR5結合分子。 - 前記多価DR5結合分子は、2つ、3つ又は4つのヒトDR5ポリペプチドに同時に結合できる、請求項1又は2に記載の多価DR5結合分子。
- 前記多価DR5結合分子は、Fc領域含有ダイアボディであり、
前記ダイアボディは、2ペアのポリペプチドを含む共有結合複合体であり、
各前記ペアは、第1のポリペプチド鎖及び第2のポリペプチド鎖を含む、請求項1〜3のいずれか1項に記載の多価DR5結合分子。 - (A)前記第1のポリペプチド鎖は、N末端からC末端への方向に:
(i)第1のDR5エピトープに結合できるモノクローナル抗体の可変軽鎖(VL)ドメイン(VL1);
(ii)第1のペプチドリンカー(リンカー1);
(iii)第2のDR5エピトープに結合できるモノクローナル抗体の可変重鎖(VH)ドメイン(VH2);
(iv)第2のペプチドリンカー(リンカー2);
(v)Eコイルドメイン又はKコイルドメインを含むヘテロ二量体促進ドメイン;
(vi)第3のペプチドリンカー(リンカー3);並びに
(vii)IgG免疫グロブリンFc領域のCH2及びCH3ドメインを有するIgG Fc領域のポリペプチド部分
を備え;
(B)前記第2のポリペプチド鎖は、N末端からC末端への方向に:
(i)前記第2のDR5エピトープに結合できるモノクローナル抗体のVLドメイン(VL2);
(ii)第1のペプチドリンカー(リンカー1);
(iii)前記第1のDR5エピトープに結合できるモノクローナル抗体のVHドメイン(VH1);
(iv)第2のペプチドリンカー(リンカー2);並びに
(v)Eコイルドメイン又はKコイルドメインを備えるヘテロ二量体促進ドメイン
を備え、前記第1のポリペプチド鎖の前記ヘテロ二量体促進ドメイン及び前記第2のポリペプチド鎖の前記ヘテロ二量体促進ドメインは、両方共がEコイルドメインではなく、又は両方共がKコイルドメインではなく;
(a)前記第1のポリペプチド鎖の前記VL1ドメイン及び前記第2のポリペプチド鎖の前記VH1ドメインは、DR5の第1のエピトープに特異的に結合できる抗原結合ドメインを形成し;
(b)前記第1のポリペプチド鎖の前記VH2ドメイン及び前記第2のポリペプチド鎖の前記VL2ドメインは、DR5の第2のエピトープに特異的に結合できる抗原結合ドメインを形成し;
(c)前記第1のポリペプチド鎖のペアの前記CH2‐CH3部分は、IgG Fc領域を形成する、請求項4に記載の多価DR5結合分子。 - 前記VL1は、CDRL1ドメイン、CDRL2ドメイン及びCDRL3ドメインを含み、
前記VH1は、CDRH1ドメイン、CDRH2ドメイン及びCDRH3ドメインを含み:
(i)前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 1の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号4、配列番号5及び配列番号6を有し、また前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 1の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号9、配列番号10及び配列番号11を有する;又は
(ii)前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号14、配列番号15及び配列番号16を有し、また前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号19、配列番号20及び配列番号21を有する;又は
(iii)前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、hDR5 mAb 2 VL‐3の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号162、配列番号15及び配列番号16を有し、また前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、hDR5 mAb 2 VH‐3の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号19、配列番号20及び配列番号21を有する;又は
(iv)前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号55、配列番号56及び配列番号57を有し、また前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号59、配列番号60及び配列番号61を有する;又は
(v)前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号63、配列番号64及び配列番号65を有し、また前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号67、配列番号68及び配列番号69を有する;又は
(vi)前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号71、配列番号72及び配列番号73を有し、また前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号75、配列番号76及び配列番号77を有する;又は
(vii)前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号79、配列番号80及び配列番号81を有し、また前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号83、配列番号84及び配列番号85を有する;又は
(viii)前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号87、配列番号88及び配列番号89を有し、また前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号91、配列番号92及び配列番号93を有する;又は
(ix)前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号95、配列番号96及び配列番号97を有し、また前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号99、配列番号100及び配列番号101を有する、請求項5に記載の多価DR5結合分子。 - 前記VL2は、CDRL1ドメイン、CDRL2ドメイン及びCDRL3ドメインを含み、
前記VH2は、CDRH1ドメイン、CDRH2ドメイン及びCDRH3ドメインを含み:
(i)前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 1の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号4、配列番号5及び配列番号6を有し、また前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 1の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号9、配列番号10及び配列番号11を有する;又は
(ii)前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mab 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号14、配列番号15及び配列番号16を有し、また前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号19、配列番号20及び配列番号21を有する;又は
(iii)前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号162、配列番号15及び配列番号16を有し、また前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号19、配列番号20及び配列番号21を有する;又は
(iv)前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号55、配列番号56及び配列番号57を有し、また前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号59、配列番号60及び配列番号61を有する;又は
(v)前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号63、配列番号64及び配列番号65を有し、また前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号67、配列番号68及び配列番号69を有する;又は
(vi)前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号71、配列番号72及び配列番号73を有し、また前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号75、配列番号76及び配列番号77を有する;又は
(vii)前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号79、配列番号80及び配列番号81を有し、また前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号83、配列番号84及び配列番号85を有する;又は
(viii)前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号87、配列番号88及び配列番号89を有し、また前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号91、配列番号92及び配列番号93を有する;又は
(ix)前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号95、配列番号96及び配列番号97を有し、また前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号99、配列番号100及び配列番号101を有する、請求項5又は6に記載の多価DR5結合分子。 - 前記VL1及び前記VL2は、同一のCDRL1ドメイン、CDRL2ドメイン及びCDRL3ドメインを含み、
前記VH1及び前記VH2は、同一のCDRH1ドメイン、CDRH2ドメイン及びCDRH3ドメインを含む、請求項7に記載の多価DR5結合分子。 - 前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 1の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号4、配列番号5及び配列番号6を有し;また前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 1の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号9、配列番号10及び配列番号11を有する、請求項8に記載の多価DR5結合分子。
- 前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mab 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号14、配列番号15及び配列番号16を有し;また前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号19、配列番号20及び配列番号21を有する、請求項8に記載の多価DR5結合分子。
- 前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号162、配列番号15及び配列番号16を有し;また前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号19、配列番号20及び配列番号21を有する、請求項8に記載の多価DR5結合分子。
- 前記VL1及び前記VL2は、同一のCDRL1ドメイン、CDRL2ドメイン及びCDRL3ドメインを含まず、
前記VH1及び前記VH2は、同一のCDRH1ドメイン、CDRH2ドメイン及びCDRH3ドメインを含まない、請求項7に記載の多価DR5結合分子。 - (i)VL1の前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 1の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号4、配列番号5及び配列番号6を有し;またVH1の前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 1の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号9、配列番号10及び配列番号11を有し;また
(ii)VL2の前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号14、配列番号15及び配列番号16を有し;またVH2の前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号19、配列番号20及び配列番号21を有する、請求項12に記載の多価DR5結合分子。 - (i)VL1の前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 2の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号14、配列番号15及び配列番号16を有し;またVH1の前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 2の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号19、配列番号20及び配列番号21を有し;また
(ii)VL2の前記CDRL1ドメイン、前記CDRL2ドメイン及び前記CDRL3ドメインは、DR5 mAb 1の軽鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号4、配列番号5及び配列番号6を有し、またVH2の前記CDRH1ドメイン、前記CDRH2ドメイン及び前記CDRH3ドメインは、DR5 mAb 1の重鎖CDRであり、それぞれアミノ酸配列:配列番号9、配列番号10及び配列番号11を有する、請求項12に記載の多価DR5結合分子。 - (i)前記VL1は、配列番号3のアミノ酸配列を有し、前記VH1は、配列番号8のアミノ酸配列を有し;又は
(ii)前記VL1は、配列番号13のアミノ酸配列を有し、前記VH1は、配列番号18のアミノ酸配列を有し;又は
(iii)前記VL1は、配列番号23のアミノ酸配列を有し、前記VH1は、配列番号31のアミノ酸配列を有し;又は
(iv)前記VL1は、配列番号25のアミノ酸配列を有し、前記VH1は、配列番号31のアミノ酸配列を有し;又は
(v)前記VL1は、配列番号27のアミノ酸配列を有し、前記VH1は、配列番号31のアミノ酸配列を有し;又は
(vi)前記VL1は、配列番号29のアミノ酸配列を有し、前記VH1は、配列番号31のアミノ酸配列を有し;又は
(vii)前記VL1は、配列番号54のアミノ酸配列を有し、前記VH1は、配列番号58のアミノ酸配列を有し;又は
(viii)前記VL1は、配列番号62のアミノ酸配列を有し、前記VH1は、配列番号66のアミノ酸配列を有し;又は
(ix)前記VL1は、配列番号70のアミノ酸配列を有し、前記VH1は、配列番号74のアミノ酸配列を有し;又は
(x)前記VL1は、配列番号78のアミノ酸配列を有し、前記VH1は、配列番号82のアミノ酸配列を有し;又は
(xi)前記VL1は、配列番号86のアミノ酸配列を有し、前記VH1は、配列番号90のアミノ酸配列を有し;又は
(xii)前記VL1は、配列番号94のアミノ酸配列を有し、前記VH1は、配列番号98のアミノ酸配列を有する、請求項5に記載の多価DR5結合分子。 - (i)前記VL2は、配列番号3のアミノ酸配列を有し、前記VH2は、配列番号8のアミノ酸配列を有し;又は
(ii)前記VL2は、配列番号13のアミノ酸配列を有し、前記VH2は、配列番号18のアミノ酸配列を有し;又は
(iii)前記VL2は、配列番号23のアミノ酸配列を有し、前記VH2は、配列番号31のアミノ酸配列を有し;又は
(iv)前記VL2は、配列番号25のアミノ酸配列を有し、前記VH2は、配列番号31のアミノ酸配列を有し;又は
(v)前記VL2は、配列番号27のアミノ酸配列を有し、前記VH2は、配列番号31のアミノ酸配列を有し;又は
(vi)前記VL2は、配列番号29のアミノ酸配列を有し、前記VH2は、配列番号31のアミノ酸配列を有し;又は
(vii)前記VL2は、配列番号54のアミノ酸配列を有し、前記VH2は、配列番号58のアミノ酸配列を有し;又は
(viii)前記VL2は、配列番号62のアミノ酸配列を有し、前記VH2は、配列番号66のアミノ酸配列を有し;又は
(ix)前記VL2は、配列番号70のアミノ酸配列を有し、前記VH2は、配列番号74のアミノ酸配列を有し;又は
(x)前記VL2は、配列番号78のアミノ酸配列を有し、前記VH2は、配列番号82のアミノ酸配列を有し;又は
(xi)前記VL2は、配列番号86のアミノ酸配列を有し、前記VH2は、配列番号90のアミノ酸配列を有し;又は
(xii)前記VL2は、配列番号94のアミノ酸配列を有し、前記VH2は、配列番号98のアミノ酸配列を有する、請求項5又は6に記載の多価DR5結合分子。 - 前記VL1及び前記VL2は、同一のアミノ酸配列を有し、
前記VH1及び前記VH2は、同一のアミノ酸配列を有する、請求項16に記載の多価DR5結合分子。 - 前記VL1及び前記VL2が同一のアミノ酸配列を有さず、前記VH1及び前記VH2が同一のアミノ酸配列を有しない、請求項16に記載の多価DR5結合分子。
- (i)前記リンカー1は、配列番号33のアミノ酸配列を有し、
(ii)前記リンカー1は、配列番号47のアミノ酸配列を有し、
(iii)前記Eコイルドメインは、は、配列番号41のアミノ酸配列を有し、
(iv)前記Kコイルドメインは、配列番号42のアミノ酸配列を有し、
(v)前記リンカー3は、配列番号51のアミノ酸配列を有し、
(vi)前記CH2‐CH3ドメインは、配列番号1又は配列番号102のアミノ酸配列を有し、C末端残基が任意に含まれる、請求項5〜18のいずれか1項に記載の多価DR5結合分子。 - 前記Fc領域は、FcγRに関する変異体Fc領域の親和性を低減するか又は前記Fc領域を安定化する、1つ又は複数のアミノ酸修飾を含む、請求項4〜19のいずれか1項に記載の多価DR5結合分子。
- 前記修飾は、L234A;L235A;又はL234A及びL235Aの置換を含む、請求項20に記載の多価DR5結合分子。
- (i)前記第1のポリペプチド鎖は配列番号116若しくは配列番号120のアミノ酸配列を有し、前記第2のポリペプチド鎖は配列番号118のアミノ酸配列を有する;又は
(ii)前記第1のポリペプチド鎖は配列番号122若しくは配列番号126のアミノ酸配列を有し、前記第2のポリペプチド鎖は配列番号124のアミノ酸配列を有する;又は
(iii)前記第1のポリペプチド鎖は配列番号128若しくは配列番号132のアミノ酸配列を有し、前記第2のポリペプチド鎖は配列番号130のアミノ酸配列を有する;又は
(iv)前記第1のポリペプチド鎖は配列番号134若しくは配列番号138のアミノ酸配列を有し、前記第2のポリペプチド鎖は配列番号136のアミノ酸配列を有する;又は
(v)前記第1のポリペプチド鎖は配列番号140若しくは配列番号144のアミノ酸配列を有し、前記第2のポリペプチド鎖は配列番号142のアミノ酸配列を有する;又は
(vi)前記第1のポリペプチド鎖は配列番号146若しくは配列番号150のアミノ酸配列を有し、前記第2のポリペプチド鎖は配列番号148のアミノ酸配列を有する;又は
(vii)前記第1のポリペプチド鎖は配列番号152若しくは配列番号156のアミノ酸配列を有し、前記第2のポリペプチド鎖は配列番号154のアミノ酸配列を有する;又は
(viii)前記第1のポリペプチド鎖は配列番号158若しくは配列番号162のアミノ酸配列を有し、前記第2のポリペプチド鎖は配列番号160のアミノ酸配列を有する、請求項5に記載の多価DR5結合分子。 - 請求項1〜22のいずれか1項に記載の多価DR5結合分子及び賦形剤を含む、組成物。
- ヒストンデアセチラーゼ阻害剤を更に含む、請求項23に記載の組成物。
- 細胞を、請求項1〜21のいずれか1項に記載の多価DR5結合分子に曝露することを含む、細胞死を促進する方法。
- 前記細胞は腫瘍細胞である、請求項25に記載の方法。
- 前記腫瘍細胞は、癌幹細胞様細胞である、請求項26に記載の方法。
- 前記方法は更に、前記細胞をヒストンデアセチラーゼ阻害剤に曝露することを含む、請求項25、26又は27に記載の方法。
- 前記分子は癌の治療に使用される、請求項1〜21のいずれか1項に記載の多価DR5結合分子。
- 前記分子は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤と組み合わせて使用される、請求項29に記載の多価DR5結合分子。
- 前記分子は検出可能に標識され、癌の診断又は予後に使用される、請求項1〜21のいずれか1項に記載の多価DR5結合分子。
- 前記癌は、以下の細胞:副腎腫瘍;AIDS関連癌;胞巣状軟部肉腫;星状細胞腫瘍;膀胱癌;骨癌;脳及び脊髄の癌;転移性脳腫瘍;乳癌;頸動脈球腫瘍;子宮頸癌;軟骨肉腫;脊索腫;嫌色素性腎細胞癌;明細胞癌;大腸癌;結腸直腸癌;皮膚の良性線維性組織球腫;線維形成性小円形細胞腫瘍;上衣腫;ユーイング腫瘍;骨外性粘液型軟骨肉腫;骨性線維形成不全症;線維性骨異形成;胆嚢又は胆管癌;消化器癌;妊娠性絨毛性疾患;胚細胞腫瘍;頭頸部癌;肝細胞癌;膵島細胞腫瘍;カポジ肉腫;腎癌;白血病;脂肪腫/良性脂肪腫;脂肪肉腫/悪性脂肪腫;肝癌;リンパ腫;肺癌;髄芽腫;黒色腫;髄膜腫;多発性内分泌腫瘍;多発性骨髄腫;骨髄異形成症候群;神経芽細胞腫;神経内分泌腫瘍;卵巣癌;膵臓癌;甲状腺乳頭癌;副甲状腺腫瘍;小児癌;末梢神経鞘腫瘍;褐色細胞腫;下垂体腫瘍;前立腺癌;後部ブドウ膜黒色腫;希少な血液学的障害;腎転移性癌;ラブドイド腫瘍;横紋筋肉腫;肉腫;皮膚癌;軟組織肉腫;扁平上皮癌;胃癌;滑膜肉腫;精巣癌;胸腺癌;胸腺腫;甲状腺転移癌;並びに子宮癌からなる群から選択された癌細胞の存在を特徴とする、請求項29〜31のいずれか1項に記載の多価DR5結合分子。
- 前記癌は:結腸直腸癌;肝細胞癌;神経膠腫;腎癌;乳癌;多発性骨髄腫;膀胱癌;神経芽細胞腫;肉腫;非ホジキンリンパ腫;非小細胞肺癌;卵巣癌;膵臓癌又は直腸癌である、請求項29〜31のいずれか1項に記載の多価DR5結合分子。
- 前記癌は:急性骨髄性白血病(AML);慢性骨髄性白血病(CML);;急性Bリンパ芽球性白血病(B‐ALL);慢性リンパ性白血病(CLL);有毛細胞白血病(HCL);芽形質細胞様樹状細胞腫瘍(BPDCN);マントル細胞白血病(MCL)及び小リンパ球性リンパ腫(SLL)を含む非ホジキンリンパ腫(NHL);ホジキンリンパ腫;全身性肥満細胞症;又はバーキットリンパ腫である、請求項29〜31のいずれか1項に記載の多価DR5結合分子。
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