JP2018139611A - ヒトサイトメガロウイルス中和抗体およびその使用 - Google Patents

ヒトサイトメガロウイルス中和抗体およびその使用 Download PDF

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Abstract

【課題】免疫抑制成人においておよび胎児に感染次第、重度の病態を生じさせ得る広く分布している病原体である、ヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）についての疾患の診断、予防、および治療における抗体、抗体断片、およびエピトープの提供。
【解決手段】ヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）ＵＬ１２８タンパク質のエピトープに結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶ感染を中和する、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【選択図】なし

Description

本出願は、２００８年７月１６日に出願された米国特許仮出願第６１／０８１，３３４号の優先権の利益を主張するものであり、その開示は、その全体が本明細書に記載されるように参照により本明細書に組み込まれる。
背景
ヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）は、免疫抑制成人においておよび胎児に感染次第、重度の病態を生じさせ得る広く分布している病原体であり、アテローム性動脈硬化等の慢性疾患に関与するとされている。ｈＣＭＶは、線維芽細胞、内皮細胞、上皮細胞、および造血細胞を含む複数の細胞型に感染する［１］。候補ワクチンとして開発されている、ｈＣＭＶの生体外で増殖される弱毒化株は、内皮細胞指向性がないが、一方で、線維芽細胞に感染する能力を保持する［２］。２つのウイルス糖タンパク質複合体が、ｈＣＭＶの向細胞性を制御すると考えられる。ｇＨ、ｇＬ、およびｇＯ等の糖タンパク質の複合体が線維芽細胞の感染に必要であるようであり、一方で、ｇＨ、ｇＬおよびＵＬ１３１−ＵＬ１２８遺伝子によってコードされたタンパク質の複合体が、内皮細胞、上皮細胞、および樹状細胞の感染に関与するとされている［２〜８］。
高力価免疫グロブリンは、移植に付随するｈＣＭＶ疾患の予防のために既に商品化されており、最新の知見により、それらが妊婦において治療効果を有することが示唆されている［９］。この治療手段は、伝達可能な少量の中和抗体によって制限されており、したがって、高中和能を持つヒト抗体（ヒトモノクローナル抗体等）の有効性が非常に所望されるであろう。ｇＨ、ｇＢ、ならびにＵＬ１２８およびＵＬ１３０遺伝子産物に対する抗体の中には生体外で中和活性を示しているものもあり［７、１０、１１］、また臨床試験（治療効果の不足により中断された）においてｇＨに対する抗体を評価したが、これまで単離された抗体の中和力価は中程度である。これらの抗体による中和は、０．５〜２０μｇ／ｍＬの範囲の抗体濃度で観察された。さらに、現在の方法は、典型的に、標的細胞として線維芽細胞を使用して抗ｈＣＭＶ抗体の中和力価を測定する。しかしながら、ｈＣＭＶは、内皮細胞、上皮細胞および白血球細胞等の他の細胞型に感染することによって病態を生じさせることも知られている。ＵＬ１２８およびＵＬ１３０に対する既知の抗体は、内皮細胞の感染の中和に非常に低い力価を示しており［７］、線維芽細胞以外の標的細胞の感染を高力価で中和する能力を持つ、利用可能なモノクローナル抗体は存在しないようである。
したがって、ｈＣＭＶ感染、特に線維芽細胞以外の標的細胞のｈＣＭＶ感染を高力価で中和する抗体の必要性、およびかかる抗体が結合する標的を解明する必要性がある。
本発明は、ｈＣＭＶ感染を高力価で中和する新規抗体および本発明の抗体が結合する新規エピトープの発見に一部基づいている。したがって、一態様において、本発明は、ｈＣＭＶの中和において高力価を有する抗体およびその抗原結合断片を含む。
本発明の一実施形態において、本発明は、ｈＣＭＶのＵＬ１２８タンパク質のエピトープに結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含み、上記抗体はｈＣＭＶ感染を中和する。本発明の別の実施形態において、本発明は、ｈＣＭＶタンパク質ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０、ｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａ、またはｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片を含み、上記抗体はｈＣＭＶ感染を中和する。
本発明のさらに別の実施形態において、本発明は、配列番号１８８〜１９３、２０４、２０５、２１０、１７４〜１７７、１４９、１７８、６５〜７０、８１〜８６、９７〜１０２、１２９〜１３４、１４５〜１５０、１１３、１６１〜１６４、１〜６、１７〜２２、３３〜３８、４９〜５４、または１１４〜１１８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、少なくとも１つの相補性決定領域（「ＣＤＲ」）配列を含む抗体またはその抗原結合断片を含み、上記抗体はｈＣＭＶ感染を中和する。
本発明のさらに別の実施形態において、本発明は、配列番号１８８、１７４、６５、８１、９７、１２９、１４５、１１３、１、１７、３３、および４９からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ１、配列番号１８９、２０４、１７５、６６、８２、９８、１３０、１４６、１６１、２、２、１８、３４、５０、および１１４からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ２、ならびに配列番号１９０、２０５、２１０、１７６、６７、８３、９９、１３１、１４７、１６２、３、１９、３５、５１、および１１５からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ３を含み、抗体はｈＣＭＶ感染を中和する。本発明のさらに別の実施形態において、本発明は、配列番号１９１、１７７、６８、８４、１００、１３２、１４８、１６３、４、２０、３６、５２、および１１６からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１９２、１４９、６９、８５、１０１、１３３、５、２１、３７、５３、および１１７からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ２、ならびに配列番号１９３、１７８、７０、８６、１０２、１３４，１５０、１６４、６、２２、３８、５４、および１１８からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合断片を含み、上記抗体はｈＣＭＶ感染を中和する。
本発明のさらなる別の実施形態において、本発明は、抗体またはその抗原結合断片を含み、上記抗体は、配列番号２００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号７７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号９４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１５７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１７１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、上記抗体はｈＣＭＶ感染を中和する。
本発明のさらなる実施形態において、本発明は、ｈＣＭＶの臨床分離株による内皮細胞、上皮細胞、網膜細胞、骨髄細胞、樹状細胞、線維芽細胞、または間葉系間質細胞の感染を中和する抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶを９０％中和するのに必要な抗体の濃度は、１．２μｇ／ｍＬ以下である、抗体またはその抗原結合断片を含む。本発明の実施形態において、本発明は、ｈＣＭＶの臨床分離株による内皮細胞、上皮細胞、網膜細胞、骨髄細胞、樹状細胞、線維芽細胞、または間葉系間質細胞の感染を中和する抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶを９０％中和するのに必要な抗体の濃度は、１０μｇ／ｍＬ以下であり、上記抗体はＭＳＬ−１０９または８Ｆ９ではない、抗体またはその抗原結合断片を含む。
本発明のさらに別の実施形態において、本発明は、配列番号２１６〜２２１、２３２−２３５、１４９、２３６、２４６〜２５１、２７８〜２８３、２９６〜３０１、３１２、３１６〜３２１、３３２、３３６〜３４１、３５２、３６０、３６１または２６２〜２６７のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する少なくとも１つのＣＤＲ配列を含む抗体またはその抗原結合断片であって、上記抗体はｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片を含む。
本発明のさらに別の実施形態において、本発明は、配列番号２１６、２３２、２４６、２７８、２９６、３１６、３３６、３５２、３６０および２６２からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ１と、配列番号２１７、２３３、２４７、２７９、２９７、３１２、３１７、３３７および２６３からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ２と、配列番号２１８、２３４、２４８、２８０、２９８、３１８、３３２、３３８、および２６４からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ３と、を含む抗体またはその抗原結合断片であって、上記抗体はｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片を含む。
本発明のさらに別の実施形態において、本発明は、配列番号２１９、２３５、２４９、２８１、２９９、３１９、３３９および２６５からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号２２０、１４９、２５０、２８２、３００、３２０、３４０および２６６からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号２２１、２３６、２５１、２８３、３０１、３２１、３４１、３６１および２６７からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ３と、を含む抗体またはその抗原結合断片であって、上記抗体はｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片を含む。
本発明のさらなる別の実施形態において、本発明は、抗体またはその抗原結合断片であって、上記抗体は、配列番号２２８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２４３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号３０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号３１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号３２８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号３３４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号３４８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３４９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号３５７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号３６７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３６８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２７４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、上記抗体はｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片を含む。
本発明は、ブダペスト条約の規定に基づき、Ｌａｒｇｏ Ｒｏｓｓａｎａ Ｂｅｎｚｉ １０，１６１３２ Ｇｅｎｏａ（Ｉｔａｌｙ）所在のＡｄｖａｎｃｅｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ（ＡＢＣ）に、２００８年７月９日付で寄託された不死化Ｂ細胞クローン８Ｉ２１、２Ｃ１２、８Ｃ１５、４Ｎ１０、１１Ｂ１２、３Ｇ１６、４Ｈ９、６Ｂ４、１０Ｃ６、または６Ｌ３（各アクセッション番号ＰＤ０８００５、ＰＤ０８００７、ＰＤ０８００６、ＰＤ０８００９、ＰＤ０８０１１、ＰＤ０８０１２、ＰＤ０８０１３、ＰＤ０８００４、ＰＤ０８０１４、およびＰＤ０８０１０）、および２００８年７月１６日付で寄託された不死化Ｂ細胞クローン７Ｈ３（アクセッション番号ＰＤ０８０１７）から産生される、抗体またはその抗原結合断片をさらに含む。上記の寄託された不死化Ｂ細胞から発現されるのと同じアミノ酸配列を有する抗原およびその抗原結合断片もまた、本発明の範囲内であると見なされる。
別の態様において、本発明は、ｈＣＭＶ感染を中和する本発明の抗体または抗体断片をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子を含む。さらに別の態様において、本発明は、本発明の抗体を発現する細胞を含む。さらに別の態様において、本発明は、本発明の抗体に結合するエピトープを含む、単離または精製された免疫原性ポリペプチドを含む。
本発明は、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片、本発明の核酸分子、または本発明の免疫原性ポリペプチドと、薬学的に許容される希釈剤もしくは担体と、を含む、医薬組成物をさらに含む。本発明はまた、第１の抗体またはその抗原結合断片と、第２の抗体またはその抗原結合断片と、を含む医薬組成物であって、上記第１の抗体は本発明の抗体であり、上記第２の抗体はｈＣＭＶ感染を中和する抗体である、医薬組成物を含む。
また、（ｉ）ｈＣＭＶ感染の治療のための医薬の製造における、（ｉｉ）ワクチンにおける、または（ｉｉｉ）ｈＣＭＶ感染の診断における、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片、本発明の核酸、本発明の免疫原性ポリペプチド、または本発明の医薬組成物の使用も、本発明の範囲内であることが企図される。さらに、抗ｈＣＭＶワクチンの抗原が正しい高次構造の特定のエピトープを含有していることを確認することにより、上記ワクチンの品質を監視するための、本発明の抗体またはその抗原結合断片の使用も、本発明の範囲内であることが企図される。
さらなる態様において、本発明は、（ｉ）治療における、（ｉｉ）ｈＣＭＶ感染の治療のための医薬の製造における、（ｉｉｉ）ワクチンとしての、または（ｉｖ）ｈＣＭＶ感染を中和することが可能なリガンドのスクリーニングにおける、使用のための、本発明のうちのいずれか１つの抗体またはその抗原結合断片に特異的に結合するエピトープを含む。
以下に、本発明の基本的な諸特徴および種々の態様を列挙する。
［１］
ヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）ＵＬ１２８タンパク質のエピトープに結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶ感染を中和する、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
［２］
ｈＣＭＶを９０％中和するのに必要な前記抗体の濃度は、１μｇ／ｍＬ以下である、［１］に記載の抗体。
［３］
ｈＣＭＶを９０％中和するのに必要な前記抗体の濃度は、０．１μｇ／ｍＬ以下である、［１］に記載の抗体。
［４］
ｈＣＭＶタンパク質ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８、およびＵＬ１３０、ｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、およびＵＬ１３１Ａ、またはｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片。
［５］
配列番号１８８〜１９３、２０４、２０５、２１０、１７４〜１７７、１４９、１７８、６５〜７０、８１〜８６、９７〜１０２、１２９〜１３４、１４５〜１５０、１１３、１６１〜１６４、１〜６、１７〜２２、３３〜３８、４９〜５４、または１１４〜１１８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含む抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片。
［６］
配列番号１８８、１７４、６５、８１、９７、１２９、１４５、１１３、１、１７、３３、および４９からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ１、配列番号１８９、２０４、１７５、６６、８２、９８、１３０、１４６、１６１、２、２、１８、３４、５０、および１１４からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ２、ならびに配列番号１９０、２０５、２１０、１７６、６７、８３、９９、１３１、１４７、１６２、３、１９、３５、５１、および１１５からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片。
［７］
配列番号１９１、１７７、６８、８４、１００、１３２、１４８、１６３、４、２０、３６、５２、および１１６からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１９２、１４９、６９、８５、１０１、１３３、５、２１、３７、５３、および１１７からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ２、ならびに配列番号１９３、１７８、７０、８６、１０２、１３４，１５０、１６４、６、２２、３８、５４、および１１８からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片。
［８］
ＣＤＲＨ１に配列番号１８８、ＣＤＲＨ２に配列番号１８９、ＣＤＲＨ３に配列番号１９０；またはＣＤＲＨ１に配列番号１８８、ＣＤＲＨ２に配列番号２０４、ＣＤＲＨ３に配列番号２０５；またはＣＤＲＨ１に配列番号１８８、ＣＤＲＨ２に配列番号１８９、ＣＤＲＨ３に配列番号２１０；またはＣＤＲＨ１に配列番号１７４、ＣＤＲＨ２に配列番号１７５、ＣＤＲＨ３に配列番号１７６；またはＣＤＲＨ１に配列番号６５、ＣＤＲＨ２に配列番号６６、ＣＤＲＨ３に配列番号６７；またはＣＤＲＨ１に配列番号８１、ＣＤＲＨ２に配列番号８２、ＣＤＲＨ３に配列番号８３；またはＣＤＲＨ１に配列番号９７、ＣＤＲＨ２に配列番号９８、ＣＤＲＨ３に配列番号９９；またはＣＤＲＨ１に配列番号１２９、ＣＤＲＨ２に配列番号１３０、ＣＤＲＨ３に配列番号１３１；またはＣＤＲＨ１に配列番号１４５、ＣＤＲＨ２に配列番号１４６、ＣＤＲＨ３に配列番号１４７；またはＣＤＲＨ１に配列番号１１３、ＣＤＲＨ２に配列番号１６１、ＣＤＲＨ３に配列番号１６２；またはＣＤＲＨ１に配列番号１、ＣＤＲＨ２に配列番号２、ＣＤＲＨ３に配列番号３；またはＣＤＲＨ１に配列番号１７、ＣＤＲＨ２に配列番号１８、ＣＤＲＨ３に配列番号１９；またはＣＤＲＨ１に配列番号３３、ＣＤＲＨ２に配列番号３４、ＣＤＲＨ３に配列番号３５；またはＣＨＲＨ１に配列番号４９、ＣＨＲＨ２に配列番号５０、ＣＤＲＨ３に配列番号５１；またはＣＤＲＨ１に配列番号１１３、ＣＤＲＨ２に配列番号１１４、ＣＤＲＨ３に配列番号１１５を含む重鎖を含む、［６］または［７］に記載の抗体。
［９］
ＣＤＲＬ１に配列番号１９１、ＣＤＲＬ２に配列番号１９２、ＣＤＲＬ３に配列番号１９３；またはＣＤＲＬ１に配列番号１７７、ＣＤＲＬ２に配列番号１４９、ＣＤＲＬ３に配列番号１７８；またはＣＤＲＬ１に配列番号６８、ＣＤＲＬ２に配列番号６９、ＣＤＲＬ３に配列番号７０；またはＣＤＲＬ１に配列番号８４、ＣＤＲＬ２に配列番号８５、ＣＤＲＬ３に配列番号８６；またはＣＤＲＬ１に配列番号１００、ＣＤＲＬ２に配列番号１０１、ＣＤＲＬ３に配列番号１０２；またはＣＤＲＬ１に配列番号１３２、ＣＤＲＬ２に配列番号１３３、ＣＤＲＬ３に配列番号１３４；またはＣＤＲＬ１に配列番号１４８、ＣＤＲＬ２に配列番号１４９、ＣＤＲＬ３に配列番号１５０；またはＣＤＲＬ１に配列番号１６３、ＣＤＲＬ２に配列番号１４９およびＣＤＲＬ３に配列番号１６４；またはＣＤＲＬ１に配列番号４、ＣＤＲＬ２に配列番号５およびＣＤＲＬ３に配列番号６；またはＣＤＲＬ１に配列番号２０、ＣＤＲＬ２に配列番号２１、ＣＤＲＬ３に配列番号２２；またはＣＤＲＬ１に配列番号３６、ＣＤＲＬ２に配列番号３７、ＣＤＲＬ３に配列番号３８；またはＣＤＲＬ１に配列番号５２、ＣＤＲＬ２に配列番号５３、ＣＤＲＬ３に配列番号５４；またはＣＤＲＬ１に配列番号１１６、ＣＤＲＬ２に配列番号１１７、ＣＤＲＬ３に配列番号１１８を含む軽鎖を含む、［６］〜［８］に記載の抗体。
［１０］
配列番号２００、２０８、２１２、１８４、７７、９３、１０９、１４１、１５７、１７０、１３、２９、４５、６１、または１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む、［１］〜［９］のうちのいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［１１］
配列番号２０１、２１３、１８５、７８、９４、１１０、１４２、１５８、１７１、１４、３０、４６、６２、または１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む、［１］〜［９］のうちのいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［１２］
前記抗体は、配列番号２００、配列番号２０８、配列番号２１２、配列番号１８４、配列番号７７、配列番号９３、配列番号１０９、配列番号１４１、配列番号１５７、配列番号１７０、配列番号１３、配列番号２９、配列番号４５、配列番号６１、または配列番号１２５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、前記抗体は、配列番号２０１、配列番号２１３、配列番号１８５、配列番号７８、配列番号９４、配列番号１１０、配列番号１４２、配列番号１５８、配列番号１７１、配列番号１４、配列番号３０、配列番号４６、配列番号６２、または配列番号１２６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、［１］〜［９］のうちのいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［１３］
抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体は、配列番号２００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号７７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号９４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１５７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１７１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片。
［１４］
ｈＣＭＶ臨床分離株による内皮細胞、上皮細胞、網膜細胞、骨髄細胞、樹状細胞、線維芽細胞、または間葉系間質細胞の感染を中和する抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶを９０％中和するのに必要な抗体の濃度は、１．２μｇ／ｍＬ以下である、抗体またはその抗原結合断片。
［１５］
ｈＣＭＶ臨床分離株による内皮細胞、上皮細胞、網膜細胞、骨髄細胞、樹状細胞、線維芽細胞、または間葉系間質細胞の感染を中和する抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶを９０％中和するのに必要な前記抗体の濃度は、１０μｇ／ｍＬ以下であり、前記抗体は、ＭＳＬ−１０９または８Ｆ９ではない、抗体またはその抗原結合断片。
［１６］
前記抗体は、ｈＣＭＶタンパク質ｇＨもしくはｇＢのエピトープ、またはｈＣＭＶタンパク質ｇＭおよびｇＮによって形成されるエピトープに結合する、［１４］または［１５］のうちのいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［１７］
配列番号２１６〜２２１、２３２〜２３５、１４９、２３６、２４６〜２５１、２７８〜２８３、２９６〜３０１、３１２、３１６〜３２１、３３２、３３６〜３４１、３５２、３６０、３６１、または２６２〜２６７のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する少なくとも１つのＣＤＲ配列を含む抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片。
［１８］
配列番号２１６、２３２、２４６、２７８、２９６、３１６、３３６、３５２、３６０、および２６２からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ１と、配列番号２１７、２３３、２４７、２７９、２９７、３１２、３１７、３３７、および２６３からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ２と、配列番号２１８、２３４、２４８、２８０、２９８、３１８、３３２、３３８、および２６４からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ３と、を含む抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片。
［１９］
配列番号２１９、２３５、２４９、２８１、２９９、３１９、３３９、および２６５からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号２２０、１４９、２５０、２８２、３００、３２０、３４０、および２６６からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号２２１、２３６、２５１、２８３、３０１、３２１、３４１、３６１、および２６７からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ３と、を含む抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片。
［２０］
ＣＤＲＨ１に配列番号２１６、ＣＤＲＨ２に配列番号２１７、ＣＤＲＨ３に配列番号２１８；またはＣＤＲＨ１に配列番号２３２、ＣＤＲＨ２に配列番号２３３、ＣＤＲＨ３に配列番号２３４；またはＣＤＲＨ１に配列番号２４６、ＣＤＲＨ２に配列番号２４７、ＣＤＲＨ３に配列番号２４８；またはＣＤＲＨ１に配列番号２７８、ＣＤＲＨ２に配列番号２７９、ＣＤＲＨ３に配列番号２８０；またはＣＤＲＨ１に配列番号２９６、ＣＤＲＨ２に配列番号２９７、ＣＤＲＨ３に配列番号２９８；またはＣＤＲＨ１に配列番号２９６、ＣＤＲＨ２に配列番号３１２、ＣＤＲＨ３に配列番号２９８；またはＣＤＲＨ１に配列番号３１６、ＣＤＲＨ２に配列番号３１７、ＣＤＲＨ３に配列番号３１８；またはＣＤＲＨ１に配列番号３１６、ＣＤＲＨ２に配列番号３１７、およびＣＤＲＨ３に配列番号３３２；またはＣＤＲＨ１に配列番号３３６、ＣＤＲＨ２に配列番号３３７、ＣＤＲＨ３に配列番号３３８；またはＣＤＲＨ１に配列番号３５２、ＣＤＲＨ２に配列番号２７９、ＣＤＲＨ３に配列番号２８０；またはＣＤＲＨ１に配列番号３６０、ＣＤＲＨ２に配列番号２７９、ＣＤＲＨ３に配列番号２８０；ＣＤＲＨ１に配列番号２６２、ＣＤＲＨ２に配列番号２６３、ＣＤＲＨ３に配列番号２６４を含む重鎖を含む、［１８］または［１９］に記載の抗体。
［２１］
ＣＤＲＬ１に配列番号２１９、ＣＤＲＬ２に配列番号２２０、ＣＤＲＬ３に配列番号２２１；またはＣＤＲＬ１に配列番号２３５、ＣＤＲＬ２に配列番号１４９、ＣＤＲＬ３に配列番号２３６；またはＣＤＲＬ１に配列番号２４９、ＣＤＲＬ２に配列番号２５０、ＣＤＲＬ３に配列番号２５１；またはＣＤＲＬ１に配列番号２８１、ＣＤＲＬ２に配列番号２８２、ＣＤＲＬ３に配列番号２８３；またはＣＤＲＬ１に配列番号２９９、ＣＤＲＬ２に配列番号３００、ＣＤＲＬ３に配列番号３０１；またはＣＤＲＬ１に配列番号３１９、ＣＤＲＬ２に配列番号３２０、ＣＤＲＬ３に配列番号３２１；またはＣＤＲＬ１に配列番号３３９、ＣＤＲＬ２に配列番号３４０、ＣＤＲＬ３に配列番号３４１；ＣＤＲＬ１に配列番号２８１、ＣＤＲＬ２に配列番号２８２、ＣＤＲＬ３に配列番号３６１；またはＣＤＲＬ１に配列番号２６５、ＣＤＲＬ２に配列番号２６６、ＣＤＲＬ３に配列番号２６７を含む軽鎖を含む、［１８］〜［２０］のうちのいずれか一項に記載の抗体。
［２２］
配列番号２２８、２４２、２５８、２９０、２９４、３０８、３１４、３２８、３３４、３４８、３５７、３６７、または２７４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む、［１４］〜［２１］のうちのいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［２３］
配列番号２２９、２４３、２５９、２９１、３０９、３２９、３４９、３６８、または２７５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む、［１４］〜［２１］のうちのいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［２４］
前記抗体は、配列番号２２８、配列番号２４２、配列番号２５８、配列番号２９０、配列番号２９４、配列番号３０８、配列番号３１４、配列番号３２８、配列番号３３４、配列番号３４８、配列番号３５７、配列番号３６７、または配列番号２７４のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、前記抗体は、配列番号２２９、配列番号２４３、配列番号２５９、配列番号２９１、配列番号３０９、配列番号３２９、配列番号３４９、配列番号３６８、または配列番号２７５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、［１４］〜［２１］のうちのいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［２５］
抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体は、配列番号２２８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２４３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号３０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号３１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号３２８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号３３４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号３４８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３４９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号３５７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号３６７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３６８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２７４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片。
［２６］
ブダペスト条約の規定に基づき、Ｌａｒｇｏ Ｒｏｓｓａｎａ Ｂｅｎｚｉ １０，１６１３２ Ｇｅｎｏａ（Ｉｔａｌｙ）所在のＡｄｖａｎｃｅｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ（ＡＢＣ）に、２００８年７月９日付で寄託された不死化Ｂ細胞のクローン８Ｉ２１、２Ｃ１２、８Ｃ１５、４Ｎ１０、１１Ｂ１２、３Ｇ１６、４Ｈ９、６Ｂ４、１０Ｃ６、または６Ｌ３（各アクセッション番号ＰＤ０８００５、ＰＤ０８００７、ＰＤ０８００６、ＰＤ０８００９、ＰＤ０８０１１、ＰＤ０８０１２、ＰＤ０８０１３、ＰＤ０８００４、ＰＤ０８０１４、およびＰＤ０８０１０）、および２００８年７月１６日付で寄託された不死化Ｂ細胞のクローン７Ｈ３（アクセッション番号ＰＤ０８０１７）から産生される、抗体またはその抗原結合断片。
［２７］
前記抗体は、ヒト抗体、モノクローナル抗体、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖである、上記［1］〜［26］のうちのいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［２８］
上記［1］〜［27］のうちのいずれか一項に記載の抗体と同じエピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片。
［２９］
上記［1］〜［28］のうちのいずれか一項に記載の抗体と交差競合する抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片。
［３０］
ｈＣＭＶ感染の治療のための、上記［1］〜［29］のうちのいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［３１］
上記［1］〜［30］のうちのいずれか一項に記載の抗体または抗体断片をコードするポリヌクレオチドを含む、核酸分子。
［３２］
前記ポリヌクレオチド配列は、配列番号１９４〜１９９、２０６、２０７、２１１、２０２、２０９、２１４、２０３、２１５、１７９〜１８２，１５５，１８３、１８６、１８７、７１〜７６、７９、８０、８７〜９２、９５、９６、１０３〜１０８、１１１、１１２、１３５〜１４０、１４３、１４４、１５１〜１５６、１５９、１６０、１６５〜１６９、１７２、１７３、７〜１２、１５、１６、２３〜２８、３１、３２、３９〜４４、４７、４８、５５〜６０、６３、６４、１１９〜１２４、１２７、１２８、２２２〜２２７、２３０、２３１、２３７〜２４１、２４４、２４５、２５２〜２５７、２６０、２６１、２８４〜２８９、２９２、２９３、２９５、３０２〜３０７、３１０、３１１、３１３、３１５、３２２〜３２７、３３０、３３１、３３３、３３５、３４２〜３４７、３５０、３５１、３５３〜３５６、３５８、３５９、３６２〜３６４、３６５、３６６、３６９、３７０、２６８〜２７３、２７６、または２７７のうちのいずれか１つと、少なくとも７５％同一である、［３１］に記載の核酸分子。
［３３］
［１］〜［３０］のうちのいずれか一項に記載の抗体を発現する、細胞。
［３４］
［１］〜［３０］のうちのいずれか一項に記載の抗体に結合するエピトープを含む、単離または精製された免疫原性ポリペプチド。
［３５］
［１］〜［３０］のうちのいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、［３１］もしくは［３２］に記載の核酸、または［３４］に記載の免疫原性ポリペプチドと、薬学的に許容される希釈剤もしくは担体と、を含む、医薬組成物。
［３６］
第１の抗体またはその抗原結合断片と、第２の抗体またはその抗原結合断片と、を含む医薬組成物であって、前記第１の抗体は、［１］〜［３０］のうちのいずれか一項に記載の抗体であり、前記第２の抗体はｈＣＭＶ感染を中和する、医薬組成物。
［３７］
（ｉ）ｈＣＭＶ感染の治療のための医薬の製造における、（ｉｉ）ワクチンにおける、または（ｉｉｉ）ｈＣＭＶ感染の診断における、［１］〜［３０］のうちのいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、［３１］もしくは［３２］に記載の核酸、［３４］に記載の免疫原性ポリペプチド、または［３５］もしくは［３６］に記載の医薬組成物の、使用。
［３８］
抗ｈＣＭＶワクチンの抗原が正しい高次構造の特定のエピトープを含有していることを確認することにより、前記ワクチンの品質を監視するための、［１］〜［３０］のうちのいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片の使用。
［３９］
（ｉ）治療における、（ｉｉ）ｈＣＭＶ感染の治療のための医薬の製造における、（ｉｉｉ）ワクチンとしての、または（ｉｖ）ｈＣＭＶ感染を中和することが可能なリガンドのスクリーニングにおける、使用のための、［１］〜［３０］のうちのいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片に特異的に結合するエピトープ。
代表的なモノクローナル抗体（１５Ｄ８、２Ｃ１２、および８Ｉ２１）による、単独または異なる組み合わせのｈＣＭＶのＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１３１Ａ、ｇＨ、およびｇＬ遺伝子でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞の染色を示す図である。 ｈＣＭＶのｇＨ（Ａ）またはｇＢ（Ｂ）遺伝子でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、最初に非標識競合抗体とともにインキュベートし、次いで、ビオチン化した抗ｇＨまたは抗ｇＢ抗体で染色した、交差競合実験を示す図である。 ヒトモノクローナル抗体１５Ｄ８および非競合的な抗ＵＬ１２８マウスモノクローナル抗体を用いた、野生型ＶＲ１８１４ＵＬ１２８遺伝子またはｐａｎ変異ＵＬ１２８遺伝子のいずれかを発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞の染色を示す図である。ｐａｎ変異ＵＬ１２８遺伝子は、ｈＣＭＶの他の臨床分離株および実験室株について記載される既知の変異体を有する野生型ＶＲ１８１４配列の置換を含有する。
本発明は、ｈＣＭＶ感染を高力価で中和する新規抗体および本発明の抗体が結合する新規エピトープの発見に一部基づいている。所定量のウイルスを中和するためには低濃度のみが必要であるため、かかる抗体が望ましい。これは、より高レベルの保護を容易にさせるとともに、抗体の投与は少量である。したがって、一態様において、本発明は、ｈＣＭＶの中和において高力価を有する抗体およびその抗原結合断片を含む。ヒトモノクローナル抗体およびかかる抗体を分泌する不死化Ｂ細胞クローンもまた本発明の範囲内に含まれる。
本明細書で使用されるとき、「断片」、「抗原結合断片」、および「抗体断片」という用語は、抗体の抗原結合活性を保持する本発明の抗体の任意の断片を意味するために交換可能に使用される。例示的な抗体断片は、これらに限定されないが、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖを含む。
本明細書で使用されるとき、「高力価」という用語は、約２μｇ／ｍＬ未満のＩＣ９０でｈＣＭＶ感染を中和する（すなわち、ｈＣＭＶ臨床分離株の９０％中和に必要とされる抗体の濃度は、約２μｇ／ｍＬ以下であり、例えば、１．９、１．８、１．７５、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２５、１．２、１．１５、１．１、または１．０５μｇ／ｍＬ以下である）本発明の抗体またはその抗原結合断片を指して使用される。一実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、１μｇ／ｍＬ以下（すなわち、０．９５、０．９、０．８５、０．８、０．７５、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、０．０５、０．０１μｇ／ｍＬ以下）のＩＣ９０を有する。別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、０．１６μｇ／ｍＬ以下（すなわち、０．１５、０．１２５、０．１、０．０７５、０．０５、０．０２５、０．０２、０．０１５、０．０１２５、０．０１、０．００７５、０．００５、０．００４、０．００３、０．００２μｇ／ｍＬ以下）のＩＣ９０を有する。別の実施形態において、抗体は、０．０１６μｇ／ｍＬ以下（すなわち、０．０１５、０．０１３、０．０１、０．００８、０．００５、０．００３、０．００２、０．００１、０．０００５μｇ／ｍＬ以下）の濃度でｈＣＭＶ感染を中和することができる。これは、ｈＣＭＶの同じ力価の中和に必要な既知の抗体、例えば、ＭＳＬ−１０９、８Ｆ９、または３Ｅ３の濃度と比較して、非常に低濃度の抗体のみが、生体外ｈＣＭＶの臨床分離株の９０％中和に必要とされることを意味する。力価は、当業者に既知であるような標準的な中和アッセイを使用して測定することができる。
一実施形態において、本発明は、ｈＣＭＶのＵＬ１２８タンパク質のエピトープに結合して、約２μｇ／ｍＬ未満、例えば、１．９、１．８、１．７５、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２５、１．２、１．１５、１．１、１．０５、１、０．９５、０．９、０．８５、０．８、０．７５、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１５、０．１２５、０．１、０．０７５、０．０５、０．０２５、０．０２、０．０１５、０．０１２５、０．０１、０．００７５、０．００５、０．００４、０．００３、０．００２、０．００１、０．０００５μｇ／ｍＬ以下のＩＣ９０でｈＣＭＶ感染を中和する抗体、例えば、モノクローナル抗体もしくはヒトモノクローナル抗体、またはその抗原結合断片を提供する。
別の実施形態において、本発明は、ｈＣＭＶタンパク質ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０によって形成されるエピトープに結合して、約２μｇ／ｍＬ未満、例えば、１．９、１．８、１．７５、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２５、１．２、１．１５、１．１、１．０５、１、０．９５、０．９、０．８５、０．８、０．７５、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１５、０．１２５、０．１、０．０７５、０．０５、０．０２５、０．０２、０．０１５、０．０１２５、０．０１、０．００７５、０．００５、０．００４、０．００３、０．００２、０．００１、０．０００５μｇ／ｍＬ以下のＩＣ９０でｈＣＭＶ感染を中和する抗体またはその抗原結合断片を提供する。
別の実施形態において、本発明は、ｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープに結合して、約２μｇ／ｍＬ未満、例えば、１．９、１．８、１．７５、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２５、１．２、１．１５、１．１、１．０５、１、０．９５、０．９、０．８５、０．８、０．７５、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１５、０．１２５、０．１、０．０７５、０．０５、０．０２５、０．０２、０．０１５、０．０１２５、０．０１、０．００７５、０．００５、０．００４、０．００３、０．００２、０．００１、０．０００５μｇ／ｍＬ以下のＩＣ９０でｈＣＭＶ感染を中和する抗体またはその抗原結合断片を提供する。
別の実施形態において、本発明は、ｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープに結合して、約２μｇ／ｍＬ未満、例えば、１．９、１．８、１．７５、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２５、１．２、１．１５、１．１、１．０５、１、０．９５、０．９、０．８５、０．８、０．７５、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１５、０．１２５、０．１、０．０７５、０．０５、０．０２５、０．０２、０．０１５、０．０１２５、０．０１、０．００７５、０．００５、０．００４、０．００３、０．００２、０．００１、０．０００５μｇ／ｍＬ以下のＩＣ９０でｈＣＭＶ感染を中和する抗体またはその抗原結合断片を提供する。
さらに別の実施形態において、本発明は、ｈＣＭＶのｇＨタンパク質のエピトープに結合して、約２μｇ／ｍＬ未満、例えば、１．９、１．８、１．７５、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２５、１．２、１．１５、１．１、１．０５、１、０．９５、０．９、０．８５、０．８、０．７５、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１５、０．１２５、０．１、０．０７５、０．０５、０．０２５、０．０２、０．０１５、０．０１２５、０．０１、０．００７５、０．００５、０．００４、０．００３、０．００２、０．００１、０．０００５μｇ／ｍＬ以下のＩＣ９０でｈＣＭＶ感染を中和する抗体またはその抗原結合断片を提供する。
さらに別の実施形態において、本発明は、ｈＣＭＶのｇＢタンパク質のエピトープに結合して、約２μｇ／ｍＬ未満、例えば、１．９、１．８、１．７５、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２５、１．２、１．１５、１．１、１．０５、１、０．９５、０．９、０．８５、０．８、０．７５、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１５、０．１２５、０．１、０．０７５、０．０５、０．０２５、０．０２、０．０１５、０．０１２５、０．０１、０．００７５、０．００５、０．００４、０．００３、０．００２、０．００１、０．０００５μｇ／ｍＬ以下のＩＣ９０でｈＣＭＶ感染を中和する抗体またはその抗原結合断片を提供する。
別の実施形態において、本発明は、ｈＣＭＶタンパク質ｇＭおよびｇＮによって形成されるエピトープに結合して、約２μｇ／ｍＬ未満、例えば、１．９、１．８、１．７５、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２５、１．２、１．１５、１．１、１．０５、１、０．９５、０．９、０．８５、０．８、０．７５、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１５、０．１２５、０．１、０．０７５、０．０５、０．０２５、０．０２、０．０１５、０．０１２５、０．０１、０．００７５、０．００５、０．００４、０．００３、０．００２ ０．００１、０．０００５μｇ／ｍＬ以下のＩＣ９０でｈＣＭＶ感染を中和する抗体またはその抗原結合断片を提供する。
本発明の抗体
本発明は、ｈＣＭＶの中和において特に高い力価を有する抗体を提供する。本明細書で使用されるとき、「中和する抗体」とは、病原体、例えばｈＣＭＶが、宿主において感染を開始および／または持続させる能力を阻止、低減、遅延、または妨害する抗体である。本発明の抗体およびその抗原結合断片は、数種類の細胞のｈＣＭＶ感染を中和することが可能である。一実施形態において、本発明による抗体は、上皮細胞、網膜細胞、内皮細胞、骨髄細胞、および樹状細胞の感染を中和する。本発明の抗体はまた、線維芽細胞および間葉系間質細胞のｈＣＭＶ感染も中和することができる。これらの抗体は、適切な処方後に予防薬もしくは治療薬として、または本明細書に記載されるような診断ツールとして使用することができる。
本発明の抗体は、モノクローナル抗体、ヒト抗体、または組換え抗体であり得る。一実施形態において、本発明の抗体は、モノクローナル抗体、例えば、ヒトモノクローナル抗体である。本発明はまた、本発明の抗体の断片、特に、抗体の抗原結合活性を保持し、ｈＣＭＶ感染を中和する断片を提供する。特許請求の範囲を含む本明細書は、いくつかの箇所において、抗体断片、変異体および／または抗体の誘導体について明示的に言及し得るが、「抗体」または「本発明の抗体」という用語は、すべての分類の抗体、すなわち、抗体断片、変異体、および抗体の誘導体を含むことを理解されたい。
一実施形態において、本発明の抗体およびその抗原結合断片は、１つ以上のｈＣＭＶタンパク質に結合する。本発明の抗体は、単一のｈＣＭＶタンパク質または２つ以上のｈＣＭＶタンパク質の組み合わせによって形成されるエピトープに結合することができる。例示的なｈＣＭＶタンパク質は、これらに限定されないが、ウイルス遺伝子ＵＬ５５（エンベロープ糖タンパク質Ｂ「ｇＢ」）、ＵＬ７５（エンベロープ糖タンパク質Ｈ「ｇＨ」）、ＵＬ１００（糖タンパク質Ｍ「ｇＭ」）、ＵＬ７３（糖タンパク質Ｎ「ｇＮ」）、ＵＬ１１５（糖タンパク質Ｌ「ｇＬ」）、ＵＬ７４（糖タンパク質Ｏ「ｇＯ」）、ＵＬ１２８（糖タンパク質ＵＬ１２８「ＵＬ１２８」）、ＵＬ１３０（糖タンパク質ＵＬ１３０「ＵＬ１３０」）、またはＵＬ１３１Ａ（糖タンパク質ＵＬ１３１Ａ、「ＵＬ１３１Ａ」）の産物を含む。一実施形態において、本発明の抗体は、単一のｈＣＭＶタンパク質によって形成されるエピトープに結合する。別の実施形態において、抗体は、２つ、３つ、またはそれ以上のｈＣＭＶタンパク質の組み合わせによって形成されるエピトープに結合する。
例示的な実施形態において、本発明は、ｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１２８のエピトープ、またはｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープ、またはｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープ、またはｈＣＭＶタンパク質ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８、およびＵＬ１３０によって形成されるエピトープ、またはｈＣＭＶタンパク質ｇＨのエピトープ、またはｈＣＭＶタンパク質ｇＢ、またはｈＣＭＶタンパク質ｇＭおよびｇＮによって形成されるエピトープに結合する抗体またはその抗体断片を含む。
一実施形態において、本発明は、ＵＬ１２８のエピトープに結合する抗体またはその抗体断片を含む。別の実施形態において、本発明は、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープに結合する抗体またはその抗原断片を含む。本明細書で使用されるとき、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープとは、そのエピトープが、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａタンパク質の両方によって形成され得るか、またはこれら２つのタンパク質のうちの１つによって形成され得、抗体の結合に他方のタンパク質の存在が必要であることを意味する。さらに別の実施形態において、本発明は、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープに結合する抗体またはその抗体断片を含む。本明細書で使用されるとき、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープとは、そのエピトープが、３つすべてのタンパク質（ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａ）によって形成され得るか、または１つ以上のこれらタンパク質によって形成され得、抗体の結合には他のこれらのタンパク質の存在が必要であることを意味する。さらに別の実施形態において、本発明は、ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８、およびＵＬ１３０によって形成されるエピトープに結合する抗体またはその抗体断片を含む。本明細書で使用されるとき、ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８、およびＵＬ１３０によって形成されるエピトープとは、そのエピトープが、４つすべてのタンパク質（ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８、およびＵＬ１３０）によって形成され得るか、または４つのタンパク質のうちの１つ以上のタンパク質によって形成され得、抗体の結合には他のこれらのタンパク質の存在が必要であることを意味する。別の実施形態において、本発明は、ｇＭおよびｇＮによって形成されるエピトープに結合する抗体またはその抗体断片を含む。本明細書で使用されるとき、ｇＭおよびｇＮによって形成されるエピトープとは、そのエピトープが、ｇＭおよびｇＮの両方によって形成され得るか、またはこれら２つのタンパク質のうちの１つによって形成され得、抗体の結合には他方のタンパク質の存在が必要であることを意味する。
それぞれが重鎖に３つのＣＤＲおよび軽鎖に３つのＣＤＲを含む、本発明のいくつかの例示的な抗体の重鎖および軽鎖の配列が決定されている。ＣＤＲのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴナンバリングシステムにしたがって定義される［１２、１３、１４］。ＣＤＲ、重鎖、軽鎖の配列、およびＣＤＲ、重鎖、軽鎖をコードする核酸分子の配列は、配列リストに開示される。表１は、本発明の例示的な抗体の６つのＣＤＲ配列の配列番号を提供する。表２および３は、それぞれ、本発明の例示的な抗体の重鎖および軽鎖の配列の配列番号を提供し、表４は、抗体のＣＤＲ、重鎖、および軽鎖をコードする核酸分子配列の配列番号を提供する。
Figure 2018139611
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Figure 2018139611
一実施形態において、本発明の抗体または抗体断片は、本発明の例示的な抗体の１つ以上の重鎖ＣＤＲまたは軽鎖ＣＤＲを含む。例示的な実施形態において、本発明の抗体または抗体断片は、配列番号１８８〜１９３、２０４〜２０５、２１０、１〜６、１７〜２２、３３〜３８、４９〜５４、１１３〜１１８、６５〜７０、８１〜８６、９７〜１０２、１２９〜１３４、１４５〜１５０、１７４〜１７８、および１６１〜１６４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態において、本発明の抗体は、配列番号１８８〜１９０、２０４、２０５、２１０、１〜３、１７〜１９、３３〜３５、４９〜５１、１１３〜１１５、６５〜６７、８１〜８３、９７〜９９、１２９〜１３１、１４５〜１４７、１７４〜１７６、１６１または１６２のうちの１つ以上のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。例えば、本発明の抗体は、ＣＤＲＨ１に配列番号１８８、ＣＤＲＨ２に配列番号１８９、ＣＤＲＨ３に配列番号１９０；ＣＤＲＨ１に配列番号１８８、ＣＤＲＨ２に配列番号２０４、ＣＤＲＨ３に配列番号２０５；ＣＤＲＨ１に配列番号１８８、ＣＤＲＨ２に配列番号１８９、ＣＤＲＨ３に配列番号２１０；ＣＤＲＨ１に配列番号１、ＣＤＲＨ２に配列番号２、ＣＤＲＨ３に配列番号３；ＣＤＲＨ１に配列番号１７、ＣＤＲＨ２に配列番号１８、ＣＤＲＨ３に配列番号１９；ＣＤＲＨ１に配列番号３３、ＣＤＲＨ２に配列番号３４、ＣＤＲＨ３に配列番号３５；ＣＨＲＨ１に配列番号４９、ＣＨＲＨ２に配列番号５０、ＣＤＲＨ３に配列番号５１；ＣＤＲＨ１に配列番号１１３、ＣＤＲＨ２に配列番号１１４、ＣＤＲＨ３に配列番号１１５；ＣＤＲＨ１に配列番号６５、ＣＤＲＨ２に配列番号６６、ＣＤＲＨ３に配列番号６７；ＣＤＲＨ１に配列番号８１、ＣＤＲＨ２に配列番号８２、ＣＤＲＨ３に配列番号８３；ＣＤＲＨ１に配列番号９７、ＣＤＲＨ２に配列番号９８、ＣＤＲＨ３に配列番号９９；ＣＤＲＨ１に配列番号１２９、ＣＤＲＨ２に配列番号１３０、ＣＤＲＨ３に配列番号１３１；ＣＤＲＨ１に配列番号１４５、ＣＤＲＨ２に配列番号１４６、ＣＤＲＨ３に配列番号１４７；ＣＤＲＨ１に配列番号１７４、ＣＤＲＨ２に配列番号１７５、ＣＤＲＨ３に配列番号１７６；およびＣＤＲＨ１に配列番号１１３、ＣＤＲＨ２に配列番号１６１、ＣＤＲＨ３に配列番号１６２を含む重鎖を含む。
さらに別の実施形態において、本発明の抗体は、配列番号１９１〜１９３、４〜６、２０〜２２、３６〜３８、５２〜５４、１１６〜１１８、６８〜７０、８４〜８６、１００〜１０２、１３２〜１３４、１４８〜１５０、１７７、１７８、１６３、または１６４のうちの１つ以上のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。例えば、本発明の抗体は、ＣＤＲＬ１に配列番号１９１、ＣＤＲＬ２に配列番号１９２、ＣＤＲＬ３に配列番号１９３；ＣＤＲＬ１に配列番号４、ＣＤＲＬ２に配列番号５およびＣＤＲＬ３に配列番号６；ＣＤＲＬ１に配列番号２０、ＣＤＲＬ２に配列番号２１、ＣＤＲＬ３に配列番号２２；ＣＤＲＬ１に配列番号３６、ＣＤＲＬ２に配列番号３７、ＣＤＲＬ３に配列番号３８；ＣＤＲＬ１に配列番号５２、ＣＤＲＬ２に配列番号５３、ＣＤＲＬ３に配列番号５４；ＣＤＲＬ１に配列番号１１６、ＣＤＲＬ２に配列番号１１７、ＣＤＲＬ３に配列番号１１８；ＣＤＲＬ１に配列番号６８、ＣＤＲＬ２に配列番号６９、ＣＤＲＬ３に配列番号７０；ＣＤＲＬ１に配列番号８４、ＣＤＲＬ２に配列番号８５、ＣＤＲＬ３に配列番号８６；ＣＤＲＬ１に配列番号１００、ＣＤＲＬ２に配列番号１０１、ＣＤＲＬ３に配列番号１０２；ＣＤＲＬ１に配列番号１３２、ＣＤＲＬ２に配列番号１３３、ＣＤＲＬ３に配列番号１３４；ＣＤＲＬ１に配列番号１４８、ＣＤＲＬ２に配列番号１４９、ＣＤＲＬ３に配列番号１５０；ＣＤＲＬ１に配列番号１７７、ＣＤＲＬ２に配列番号１４９、ＣＤＲＬ３に配列番号１７８；ＣＤＲＬ１に配列番号１６３、ＣＤＲＬ２に配列番号１４９、ならびにＣＤＲＬ３に配列番号１６４を含む軽鎖を含む。
さらに別の実施形態において、本発明の抗体は、配列番号２００、２０８、２１２、１３、２９、４５、６１、１２５、７７、９３、１０９、１４１、１５７、１８４、または１７０のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。一実施形態において、抗体は、ｈＣＭＶのＵＬ１２８タンパク質のエピトープに結合し、配列番号２００、２０８または２１２のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。一実施形態において、本発明による抗体は、配列番号２００、２０８または２１２に記載の配列を有する重鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。
別の実施形態において、抗体は、ｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープに結合し、配列番号１３、２９、４５、６１または１２５のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。一実施形態において、本発明による抗体は、配列番号１３、２９、４５、６１または１２５に記載の配列を有する重鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。
さらに別の実施形態において、抗体は、ｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープに結合し、配列番号７７、９３、１０９、１４１、１５７、または１７０のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。一実施形態において、本発明による抗体は、配列番号７７、９３、１０９、１４１、１５７、または１７０に記載の配列を有する重鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。
さらなる実施形態において、抗体は、ｈＣＭＶタンパク質ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０によって形成されるエピトープに結合し、配列番号１８４のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。一実施形態において、本発明による抗体は、配列番号１８４に記載の配列を有する重鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。
さらに別の実施形態において、本発明の抗体は、配列番号２０１、２１３、１４、３０、４６、６２、１２６、７８、９４、１１０、１４２、１５８、１８５、または１７１のアミノ酸配列と、少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。
一実施形態において、抗体は、ｈＣＭＶのＵＬ１２８タンパク質のエピトープに結合し、配列番号２０１または２１３のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。一実施形態において、本発明による抗体は、配列番号２０１または２１３に記載の配列を有する軽鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。
一実施形態において、抗体は、ｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープに結合し、配列番号１４、３０、４６、６２または１２６のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。一実施形態において、本発明による抗体は、配列番号１４、３０、４６、６２または１２６に記載の配列を有する軽鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。
別の実施形態において、抗体は、ｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープに結合し、配列番号７８、９４、１１０、１４２、１５８、または１７１のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。一実施形態において、本発明による抗体は、配列番号７８、９４、１１０、１４２、１５８、または１７１に記載の配列を有する軽鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。
さらなる実施形態において、抗体は、ｈＣＭＶタンパク質ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０によって形成されるエピトープに結合し、配列番号１８５のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。一実施形態において、本発明による抗体は、配列番号１８５に記載の配列を有する軽鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。
別の実施形態において、本発明の抗体または抗体断片は、本発明の例示的な抗体の１つ以上の重鎖ＣＤＲまたは軽鎖ＣＤＲを含む。例示的な実施形態において、本発明の抗体または抗体断片は、配列番号３１６〜３２１、３３２、３３６〜３４１、２７８〜２８３、３５２、２９６〜３０１、３１２、２３２〜２３６、１４９、２１６〜２２１、２４６〜２５１、３６０、３６１および２６２〜２６７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。
さらに別の実施形態において、本発明の抗体は、配列番号３１６〜３１８、３３２、３３６〜３３８、２７８〜２８０、３５２、２９６〜２９８、３１２、２３２〜２３４、２１６〜２１８、２４６〜２４８、３６０、３６１および２６２〜２６４のうちの１つ以上のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。例えば、本発明の抗体は、ＣＤＲＨ１に配列番号３１６、ＣＤＲＨ２に配列番号３１７、ＣＤＲＨ３に配列番号３１８；ＣＤＲＨ１に配列番号３１６、ＣＤＲＨ２に配列番号３１７、およびＣＤＲＨ３に配列番号３３２；ＣＤＲＨ１に配列番号３３６、ＣＤＲＨ２に配列番号３３７、ＣＤＲＨ３に配列番号３３８；ＣＤＲＨ１に配列番号２７８、ＣＤＲＨ２に配列番号２７９、ＣＤＲＨ３に配列番号２８０；ＣＤＲＨ１に配列番号３５２、ＣＤＲＨ２に配列番号２７９、ＣＤＲＨ３に配列番号２８０；ＣＤＲＨ１に配列番号２９６、ＣＤＲＨ２に配列番号２９７、ＣＤＲＨ３に配列番号２９８；ＣＤＲＨ１に配列番号２９６、ＣＤＲＨ２に配列番号３１２、ＣＤＲＨ３に配列番号２９８；ＣＤＲＨ１に配列番号２３２、ＣＤＲＨ２に配列番号２３３、ＣＤＲＨ３に配列番号２３４；ＣＤＲＨ１に配列番号２１６、ＣＤＲＨ２に配列番号２１７、ＣＤＲＨ３に配列番号２１８；ＣＤＲＨ１に配列番号２４６、ＣＤＲＨ２に配列番号２４７、ＣＤＲＨ３に配列番号２４８；およびＣＤＲＨ１に配列番号３６０、ＣＤＲＨ２に配列番号２７９、ＣＤＲＨ３に配列番号２８０；およびＣＤＲＨ１に配列番号２６２、ＣＤＲＨ２に配列番号２６３、ＣＤＲＨ３に配列番号２６４を含む重鎖を含む。
さらに別の実施形態において、本発明の抗体は、配列番号３１９〜３２１、３３９〜３４１、２８１〜２８３、２９９〜３０１、１４９、２３５、２３６、２１９〜２２１、２４９〜２５１、２６５〜２６７のうちの１つ以上のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。例えば、本発明の抗体は、ＣＤＲＬ１に配列番号３１９、ＣＤＲＬ２に配列番号３２０、ＣＤＲＬ３に配列番号３２１；ＣＤＲＬ１に配列番号３３９、ＣＤＲＬ２に配列番号３４０、ＣＤＲＬ３に配列番号３４１；ＣＤＲＬ１に配列番号２８１、ＣＤＲＬ２に配列番号２８２、ＣＤＲＬ３に配列番号２８３；ＣＤＲＬ１に配列番号２９９、ＣＤＲＬ２に配列番号３００、ＣＤＲＬ３に配列番号３０１；ＣＤＲＬ１に配列番号２３５、ＣＤＲＬ２に配列番号１４９、ＣＤＲＬ３に配列番号２３６；ＣＤＲＬ１に配列番号２１９、ＣＤＲＬ２に配列番号２２０、ＣＤＲＬ３に配列番号２２１；ＣＤＲＬ１に配列番号２４９、ＣＤＲＬ２に配列番号２５０、ＣＤＲＬ３に配列番号２５１；およびＣＤＲＬ１に配列番号２８１、ＣＤＲＬ２に配列番号２８２、ＣＤＲＬ３に配列番号３６１；およびＣＤＲＬ１に配列番号２６５、ＣＤＲＬ２に配列番号２６６、ＣＤＲＬ３に配列番号２６７を含む軽鎖を含む。
さらなる実施形態において、本発明の抗体は、配列番号３２８、３３４、３４８、２９０、２９４、３５７、３０８、３１４、２４２、２２８、２５８、３６７または２７４のアミノ酸配列と、少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。
一実施形態において、抗体は、ｈＣＭＶのｇＢタンパク質のエピトープに結合し、配列番号３２８、３３４、３４８、２９０、２９４、３０８、３５７、３１４または３６７のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。一実施形態において、本発明による抗体は、配列番号３２８、３３４、３４８、２９０、２９４、３０８、３５７、３１４または３６７に記載の配列を有する重鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。
別の実施形態において、抗体は、ｈＣＭＶのｇＨタンパク質のエピトープに結合し、配列番号２４２、２２８、または２５８のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。一実施形態において、本発明による抗体は、配列番号２４２、２２８、または２５８に記載の配列を有する重鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。
別の実施形態において、抗体は、ｈＣＭＶタンパク質ｇＭおよびｇＮによって形成されるエピトープに結合し、配列番号２７４のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。一実施形態において、本発明による抗体は、配列番号２７４に記載の配列を有する重鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。
さらに別の実施形態において、本発明の抗体は、配列番号３２９、３４９、２９１、３０９、２４３、２２９、２５９、３６８または２７５のアミノ酸配列と、少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。
一実施形態において、抗体は、ｈＣＭＶのｇＢタンパク質のエピトープに結合し、配列番号３２９、３４９、２９１、３０９、または３６８のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。一実施形態において、本発明による抗体は、配列番号３２９、３４９、２９１、３０９または３６８に記載の配列を有する軽鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。
別の実施形態において、抗体は、ｈＣＭＶのｇＨタンパク質のエピトープに結合し、配列番号２４３、２２９、または２５９のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。一実施形態において、本発明による抗体は、配列番号２４３、２２９、または２５９、に記載の配列を有する軽鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。
別の実施形態において、抗体は、ｈＣＭＶタンパク質ｇＭおよびｇＮによって形成されるエピトープに結合し、配列番号２７５のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。一実施形態において、本発明による抗体は、配列番号２７５に記載の配列を有する軽鎖を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する。
一実施形態において、本発明の抗体は、ＭＳＬ−１０９、８Ｆ９、３Ｅ３またはＲ５５１Ａではない。別の実施形態において、本発明の抗体は、米国特許出願番号第１１／９６９，１０４号および１２／１７４，５６８号に開示される１Ｆ１１、２Ｆ４、５Ａ２または６Ｇ４ではない。
本発明の例示的な抗体は、これらに限定されないが、１５Ｄ８、４Ｎ１０、１０Ｆ７、１０Ｐ３、４Ｉ２２、８Ｌ１３、２Ｃ１２、８Ｃ１５、９Ｉ６、７Ｂ１３、８Ｊ１６、８Ｉ２１、７Ｉ１３、７Ｈ３、６Ｂ４、５Ｆ１、１０Ｃ６、４Ｈ９、２Ｂ１１、１１Ｂ１２、１３Ｈ１１、３Ｇ１６および６Ｌ３を含む。
ｈＣＭＶ感染を中和する１５Ｄ８の変異体は、配列番号２０８（「１５Ｄ８変異体１」）および配列番号２１２（「１５Ｄ８変異体２」）に記載のアミノ酸配列を有する重鎖変異体と、配列番号２１３（１５Ｄ８変異体２）に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖とからなる。変異体重鎖をコードする核酸配列は、配列番号２０９（１５Ｄ８変異体１）および配列番号２１４（１５Ｄ８変異体２）に記載される。変異体軽鎖をコードする核酸配列は、配列番号２１５（１５Ｄ８変異体２）に記載される。よって、ｈＣＭＶ感染を中和する、１５Ｄ８変異体重鎖（配列番号２０８、２１２）および変異体軽鎖（配列番号２１３）を含む抗体は、本発明の範囲内に含まれる。
本明細書で使用されるとき、「１５Ｄ８」という用語は、例えば、配列番号２０８および２１２に対応する重鎖ならびに配列番号２１３に対応する軽鎖を有する変異体等、ｈＣＭＶ感染を中和する１５Ｄ８のいずれかおよび／またはすべての変異体を指して使用される。
ｈＣＭＶ感染を中和する７Ｈ３の変異体は、配列番号３３４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖からなる（「７Ｈ３変異体１」）。変異体重鎖をコードする核酸配列は、配列番号３３５に記載される。よって、ｈＣＭＶ感染を中和する７Ｈ３変異体重鎖（配列番号３３４）を含む抗体は、本発明の範囲内に含まれる。
本明細書で使用されるとき、「７Ｈ３」という用語は、例えば、配列番号３３４に対応する重鎖を有する変異体等、ｈＣＭＶ感染を中和する７Ｈ３のいずれかおよび／またはすべての変異体を指して使用される。
ｈＣＭＶ感染を中和する５Ｆ１の変異体は、配列番号２９４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖からなる（「５Ｆ１変異体１」）。変異体重鎖をコードする核酸配列は、配列番号２９５に記載される。よって、ｈＣＭＶ感染を中和する５Ｆ１変異体重鎖（配列番号２９４）を含む抗体は、本発明の範囲内に含まれる。
本明細書で使用されるとき、「５Ｆ１」という用語は、例えば、配列番号２９４に対応する重鎖を有する変異体等、ｈＣＭＶ感染を中和する５Ｆ１のいずれかおよび／またはすべての変異体を指して使用される。
ｈＣＭＶ感染を中和する４Ｈ９の変異体は、配列番号３１４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖からなる（「４Ｈ９変異体１」）。変異体重鎖をコードする核酸配列は、配列番号３１５に記載される。よって、ｈＣＭＶ感染を中和する４Ｈ９変異体重鎖（配列番号３１４）を含む抗体は、本発明の範囲内に含まれる。
本明細書で使用されるとき、「４Ｈ９」という用語は、例えば、配列番号３１４に対応する重鎖を有する変異体等、ｈＣＭＶ感染を中和する４Ｈ９のいずれかおよび／またはすべての変異体を指して使用される。
一実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体１５Ｄ８のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体１５Ｄ８変異体１のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体１５Ｄ８変異体２のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。さらに別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体８Ｉ２１のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。
さらに別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体４Ｎ１０のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体１０Ｆ７のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体１０Ｐ３のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体４Ｉ２２のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体８Ｌ１３のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。
さらに別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体２Ｃ１２のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体８Ｃ１５のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体９Ｉ６のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体７Ｂ１３のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体８Ｊ１６のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体７Ｉ１３のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。
さらに別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体７Ｈ３のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体７Ｈ３変異体１のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体６Ｂ４のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体５Ｆ１のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体１０Ｃ６のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体４Ｈ９のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体４Ｈ９変異体１のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体２Ｂ１１のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。
さらに別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体１１Ｂ１２のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体１３Ｈ１１のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体３Ｇ１６のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。さらに別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、表１に列記される抗体６Ｌ３のすべてのＣＤＲを含み、ヒト宿主におけるｈＣＭＶ感染を中和する。
本発明は、本発明の抗体または本発明の抗体と競合する抗体に結合する能力を持つエピトープに結合する、抗体またはその断片をさらに含む。
本発明の抗体はまた、本発明の抗体からの１つ以上のＣＤＲと、同じエピトープに対する別の抗体からの１つ以上のＣＤＲとを含む、ハイブリッド抗体分子を含む。一実施形態において、かかるハイブリッド抗体は、本発明の抗体からの３つのＣＤＲと、同じエピトープに対する別の抗体からの３つのＣＤＲとを含む。例示的なハイブリッド抗体は、ｉ）本発明の抗体からの３つの軽鎖ＣＤＲおよび同じエピトープに対する別の抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ、またはｉｉ）本発明の抗体からの３つの重鎖ＣＤＲおよび同じエピトープに対する別の抗体からの３つの軽鎖ＣＤＲを含む。
別の態様において、本発明はまた、軽鎖および重鎖の一部または全てならびに本発明の抗体のＣＤＲをコードする核酸配列も含む。一実施形態において、本発明による核酸配列は、本発明の抗体の重鎖または軽鎖をコードする核酸配列に対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含む。別の実施形態において、本発明の核酸配列は、本発明の抗体の重鎖ＣＤＲまたは軽鎖ＣＤＲをコードする核酸の配列を有する。例えば、本発明による核酸配列は、配列番号７〜１２、１５、１６、２３〜２８、３１、３２、３９〜４４、４７、４８、５５〜６０、６３、６４、７１〜７６、７９、８０、８７〜９２、９５、９６、１０３〜１０８、１１１、１１２、１１９〜１２４、１２７、１２８、１３５〜１４０、１４３、１４４、１５１〜１５６、１５９、１６０、１６５〜１６９、１７２、１７３、１７９〜１８３、１８６、１８７、１９４〜１９９、２０２、２０３、２０６、２０７、２０９、２１１、２１４、２１５、２２２〜２２７、２３０、２３１、２３７〜２４１、２４４、２４５、２５２〜２５７、２６０、２６１、２６８〜２７３、２７６、２７７、２８４〜２８９、２９２、２９３、２９５、３０２〜３０７、３１０、３１１、３１３、３１５、３２２〜３２７、３３０、３３１、３３３、３３５、３４２〜３４７、３５０、３５１、３５３〜３５６、３５８、３５９、３６２〜３６４、３６５、３６６、３６９および３７０の核酸配列と、少なくとも７５％同一である配列を含む。一実施形態において、本発明による核酸配列は、上に列記した配列番号の核酸配列と、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を含む。
遺伝暗号の冗長性に起因して、同じアミノ酸配列をコードするこれらの配列の変異体が存在するであろう。これらの変異体は本発明の範囲内に含まれる。
また、ｈＣＭＶ感染を中和する変異抗体も本発明の範囲内に含まれる。したがって、本出願に記載する配列の変異体もまた本発明の範囲内に含まれる。かかる変異体は、免疫応答の最中に生体内で、または不死化Ｂ細胞クローンを生体外で培養することで、体細胞変異が起こることにより生成される天然の変異体を含む。代替として、変異体は、上述したように遺伝暗号の縮重によって生じ得るか、または転写もしくは翻訳におけるエラーによって産生され得る。
親和性および／または力価が向上した抗体配列のさらなる変異体は、当該技術分野において既知の方法を使用して得ることができ、本発明の範囲内に含まれる。例えば、アミノ酸置換は、さらに親和性が向上した抗体を得るために使用され得る。代替として、ヌクレオチド配列のコドン最適化は、抗体を産生するための発現系において翻訳の効率を向上させるために使用され得る。さらに、本発明の核酸配列のうちのいずれかに進化分子工学法を適用することにより、抗体特異性または中和活性のために最適化された配列を含むポリヌクレオチドも本発明の範囲内である。
一実施形態において、ｈＣＭＶ感染を中和する変異抗体の配列は、本出願に記載する配列と７０％以上（すなわち、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％以上）のアミノ酸配列同一性を共有し得る。いくつかの実施形態において、かかる配列同一性は、参照配列（つまり、本出願に示した配列）の全長に関して算出される。いくつかのさらなる実施形態において、本明細書に参照される同一性の割合（％）は、ＮＣＢＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）によって指定される初期パラメータ［Ｂｌｏｓｕｍ ６２マトリックス、ギャップオープンペナルティ＝１１およびギャップ伸長ペナルティ＝１］を使用して、ＢＬＡＳＴバージョン２．１．３を用いて決定される。
ベクター、例えば、本発明による核酸配列を含む発現ベクターが本発明の範囲内にさらに含まれる。かかるベクターで形質転換された細胞も本発明の範囲内に含まれる。かかる細胞の例は、これらに限定されないが、例えば、酵母細胞、動物細胞、または植物細胞等の真核細胞を含む。一実施形態において、細胞は、例えば、ヒト、ＣＨＯ、ＨＥＫ２９３Ｔ、ＰＥＲ．Ｃ６、ＮＳ０、骨髄腫細胞、またはハイブリドーマ細胞等の哺乳類細胞である。
また、本発明は、これらに限定されないが、１５Ｄ８、４Ｎ１０、１０Ｆ７、１０Ｐ３、４Ｉ２２、８Ｌ１３、２Ｃ１２、８Ｃ１５、９Ｉ６、７Ｂ１３、８Ｊ１６、８Ｉ２１、７Ｉ１３、７Ｈ３、６Ｂ４、５Ｆ１、１０Ｃ６、４Ｈ９、１１Ｂ１２、１３Ｈ１１、３Ｇ１６、２Ｂ１１および６Ｌ３からなる群より選択されるモノクローナル抗体を含む、本発明の抗体に結合する能力を持つエピトープに結合するモノクローナル抗体にも関する。
モノクローナルおよび組換え抗体は、個々のポリペプチドまたはそれらが向けられる他の抗原の識別および精製に特に有用である。本発明の抗体は、それらが、免疫測定法、放射免疫測定法（ＲＩＡ）または酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）において試薬として用いられ得るという点で、付加的な有用性を有する。これらの用途において、抗体は、放射性同位元素、蛍光分子、または酵素等の分析的に検出可能な試薬で標識することができる。また、抗体は、抗原の分子的識別および特徴付け（エピトープマッピング）のためにも使用され得る。
本発明の抗体は、治療部位への送達のために薬物に連結することができるか、またはｈＣＭＶに感染した細胞等の目的の細胞を含む部位の画像化を容易にさせるように、検出可能な標識に連結することができる。薬物および検出可能な標識に抗体を連結するための方法は、検出可能な標識を使用して画像化するための方法のように、当該技術分野において既知である。標識された抗体は、様々な標識を用いる様々なアッセイにおいて用いられ得る。本発明の抗体と目的のエピトープ（ｈＣＭＶエピトープ）との抗体−抗原複合体の形成の検出は、抗体に検出可能な物質を付着させることによって容易にすることができる。適切な検出手段は、放射性核種、酵素、補酵素、蛍光体、化学発光物質、色素原、酵素基質または補助因子、酵素阻害薬、補欠分子族複合体、フリーラジカル、粒子、色素等の標識の使用を含む。適切な酵素の例は、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼを含み、適切な補欠分子族複合体の例は、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンを含み、適切な蛍光材料の例は、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシルまたはフィコエリトリンを含み、発光物質の例は、ルミノールであり、生物発光物質の例は、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリンを含み、ならびに適切な放射性物質の例は、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、または３Ｈを含む。かかる標識された試薬は、放射免疫測定法、酵素免疫測定法、例えば、ＥＬＩＳＡ、蛍光免疫測定法等の様々な既知のアッセイにおいて使用され得る。例えば、参考文献１５〜１８を参照されたい。
本発明による抗体は、細胞毒、治療薬、または放射性金属イオンもしくは放射性同位元素等の治療部分に抱合され得る。放射性同位元素の例としては、Ｉ−１３１、Ｉ−１２３、Ｉ−１２５、Ｙ−９０、Ｒｅ−１８８、Ｒｅ−１８６、Ａｔ−２１１、Ｃｕ−６７、Ｂｉ−２１２、Ｂｉ−２１３、Ｐｄ−１０９、Ｔｃ−９９、Ｉｎ−１１１等が挙げられるが、これらに限定されない。かかる抗体抱合体は、所与の生物学的応答を改変するために使用することができ、薬物部分は、古典的な化学治療薬に制限されると解釈されるものではない。例えば、薬物部分は、所望の生物活性を持つタンパク質またはポリペプチドであり得る。かかるタンパク質は、例えば、アブリン、リシンＡ、緑膿菌外毒素、またはジフテリア毒素等の毒素を含み得る。
かかる治療部分を抗体に抱合する技術は周知である。例えば、Ａｒｎｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８５） ”Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，” ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，ｅｄ．Ｒｅｉｓｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（Ａｌａｎ Ｒ． Ｌｉｓｓ， Ｉｎｃ．），ｐｐ．２４３−２５６；ｅｄ．Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．（１９８７） ”Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，” ｉｎ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，ｅｄ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２ｄ ｅｄ；Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．），ｐｐ．６２３−６５３；Ｔｈｏｒｐｅ（１９８５） ”Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ，” ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｅｄ．Ｐｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ．ｐｐ．４７５−５０６（Ｅｄｉｔｒｉｃｅ Ｋｕｒｔｉｓ，Ｍｉｌａｎｏ，Ｉｔａｌｙ，１９８５）； ”Ａｎａｌｙｓｉｓ， Ｒｅｓｕｌｔｓ， ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，” ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，ｅｄ． Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８５），ｐｐ．３０３−３１６；およびＴｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．（１９８２）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−１５８を参照のこと。
代替として、参考文献１９に記載されるように、抗体を第２の抗体に抱合させて、抗体のへテロ抱合体を形成することができる。また、標識と本発明の抗体との間にリンカーを使用することもできる［２０］。抗体、またはその抗原結合断片は、当該技術分野において既知の放射性ヨード、インジウム、イットリウム、または他の放射性粒子で直接標識され得る［２１］。治療は、同時に投与またはその後投与される抱合抗体と非抱合抗体の治療の組み合わせから成り得る［２２、２３］。
本発明の抗体はまた、固体支持体にも付着され得る。
さらに、本発明の抗体またはその機能的抗体断片は、ポリマーへの共有結合性抱合により化学修飾することで、例えば、循環半減期を増大することができる。ポリマーの例、およびそれらをペプチドに付着させる方法は、参考文献２４〜２７に示される。いくつかの実施形態において、ポリマーは、ポリオキシエチル化ポリオールおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）から選択され得る。ＰＥＧは、室温で水溶性であり、一般式：Ｒ（Ｏ−−ＣＨ２−−ＣＨ２）ｎＯ--Ｒを有し、Ｒは、水素、またはアルキル基もしくはアルカノール基等の保護基であることができる。一実施形態において、保護基は、１〜８個の炭素を有することができる。さらなる実施形態において、保護基はメチルである。記号ｎは、正の整数である。一実施形態において、ｎは、１〜１，０００の間である。別の実施形態において、ｎは２〜５００の間である。一実施形態において、ＰＥＧは、１，０００〜４０，０００の間の平均分子量を有する。さらなる実施形態において、ＰＥＧは、２，０００〜２０，０００の間の分子量を有する。さらなる実施形態において、ＰＥＧは、３，０００〜１２，０００の間の分子量を有する。一実施形態において、ＰＥＧは、少なくとも１つのヒドロキシ基を有する。別の実施形態において、ＰＥＧは、末端ヒドロキシ基を有する。さらに別の実施形態において、このヒドロキシル基は、阻害剤の遊離アミノ基と反応するように活性化される末端ヒドロキシ基である。しかしながら、反応基の型および量は、本発明の共有結合的に抱合されたＰＥＧ／抗体を達成するために変化し得ることが理解される。
また、水溶性ポリオキシエチル化ポリオールも本発明において有用である。それらは、ポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース、ポリオキシエチル化グリセロール（ＰＯＧ）等を含む。一実施形態において、ＰＯＧが用いられる。いずれの理論にも束縛されるものではないが、ポリオキシエチル化グリセロールのグリセロール骨格は、例えば、動物およびヒトにおいて、モノ−、ジ−、トリグリセリド中に自然に発生する骨格と同じであるため、この分岐は、必ずしも体内において異質の物質であるとは見なされない。いくつかの実施形態において、ＰＯＧは、ＰＥＧと同程度の分子量を有する。ＰＯＧの構造は、参考文献２８に記載され、ＰＯＧ／ＩＬ−２抱合体の考察は参考文献２４に見られる。
循環半減期を増大させるために使用され得る別の薬物送達系は、リポソームである。リポソーム送達系を調製する方法は、参考文献２９、３０および３１に考察される。他の薬物送達系は当該技術分野において既知であり、例えば、参考文献３２および３３に記載される。
本発明の抗体は、精製された形態で提供される。典型的には、抗体は、他のポリペプチドを実質的に含まない組成物中に存在し、例えば、組成物の９０重量％未満、通常６０％未満、およびさらに通常５０％未満が他のポリペプチドで構成される。
本発明の抗体は、非ヒト（異種）ホスト、例えばマウスにおいて免疫原性であり得る。抗体は、非ヒトホストにおいて免疫原性であるが、ヒトホストにおいては免疫原性でないイディオトープを有し得る。ヒトが使用するための本発明の抗体は、マウス、ヤギ、ウサギ、ラット、非霊長類哺乳類等のホストから容易に単離することができないもの、およびヒト化によって、または異種マウスから概して得ることができないものを含む。
本発明の抗体は、任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭつまり、α、γまたはμ重鎖）であることができるが、概してＩｇＧである。ＩｇＧアイソタイプ内で、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブクラスであり得る。本発明の抗体は、κまたはλ軽鎖を有し得る。
抗体の産生
本発明によるモノクローナル抗体は、当該技術分野において既知である任意の方法によって作製することができる。ハイブリドーマ技術を用いてモノクローナル抗体を作製するための一般的な方法論が周知である［３４、３５］。好ましくは、参考文献３６に記述される代替的なＥＢＶ不死化法が使用される。
参考文献３６に記述される方法を使用して、本発明の抗体を産生するＢ細胞は、多クローン性Ｂ細胞活性化因子の存在下においてＥＢＶで形質転換することができる。ＥＢＶでの形質転換は標準的な技術であり、多クローン性Ｂ細胞活性化因子を含むように容易に適合することができる。
細胞増殖および分化の付加的な刺激薬を、任意で、効率をさらに増強させるために形質転換ステップ時に添加することができる。これらの刺激薬は、ＩＬ−２およびＩＬ−１５等のサイトカインであり得る。一態様において、不死化効率をさらに向上させるために、不死化ステップの最中にＩＬ−２が添加されるが、その使用は必須ではない。
次いで、これらの方法を使用して産生した不死化Ｂ細胞を、当該技術分野において既知の方法を使用して培養し、抗体をそこから単離することができる。
また本発明の抗体は、英国特許出願第０８１９３７６．５号に記載される方法を使用して、マイクロウェル培養プレートにおいて単一形質細胞を培養することによっても作製することができる。さらに、当該技術分野において既知の方法を使用して、単一形質細胞の培養物からＲＮＡを抽出し、単細胞ＰＣＲを行うことができる。抗体のＶＨおよびＶＬ領域をＲＴ−ＰＣＲにより増幅し、配列決定を行い、発現ベクター中にクローン化し、次いで、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞または他の宿主細胞中にトランスフェクトする。発現ベクターにおける核酸のクローン化、宿主細胞のトランスフェクション、トランスフェクトした宿主細胞の培養、および産生された抗体の単離は、当業者に既知である任意の方法を使用して行うことができる。
モノクローナル抗体は、所望される場合、濾過、遠心分離、およびＨＰＬＣまたは親和性クロマトグラフィ等の種々のクロマトグラフ法を使用してさらに精製され得る。製薬等級抗体を産生するための技術を含む、モノクローナル抗体を精製する技術は、当該技術分野において既知である。
本発明のモノクローナル抗体の断片は、ペプシンもしくはパパイン等の酵素での消化を含む方法によって、および／または化学的還元によるジスルフィド結合の切断によって、モノクローナル抗体から得ることができる。代替として、モノクローナル抗体の断片は、重鎖または軽鎖の配列の一部のクローニングおよび発現によって得ることができる。抗体「断片」は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片を含み得る。また、本発明は、本発明のモノクローナル抗体の重鎖および軽鎖から派生する一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）も包含し、例えば、本発明は、本発明の抗体からのＣＤＲを含むｓｃＦｖを含む。また、重鎖または軽鎖単量体および二量体ならびに単鎖抗体、例えば、重鎖および軽鎖可変領域がペプチドリンカーによって連結される一本鎖Ｆｖも含む。
分子生物学の標準的な技術を、本発明の抗体または抗体の断片をコードするＤＮＡ配列を調製するために使用することができる。所望のＤＮＡ配列は、オリゴヌクレオチド合成技術を使用して、完全にまたは部分的に合成され得る。部位特異的変異誘発およびポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術を必要に応じて使用することができる。
任意の適切なホスト細胞／ベクター系が、本発明の抗体分子またはその断片をコードするＤＮＡ配列の発現のために使用され得る。ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片、特にＦｖ断片および単鎖抗体断片、例えば、一本鎖Ｆｖ等の抗体断片の発現のために、細菌、例えば大腸菌、および他の微生物系が部分的に使用され得る。真核生物、例えば哺乳類ホスト細胞発現系は、完全な抗体分子を含む、より大きな抗体分子の産生のために使用され得る。適切な哺乳類ホスト細胞は、ＣＨＯ、ＨＥＫ２９３Ｔ、ＰＥＲ．Ｃ６、ＮＳ０、骨髄腫細胞、またはハイブリドーマ細胞を含む。
また、本発明は、本発明による抗体分子を産生するための工程も提供し、本発明の抗体分子をコードするＤＮＡからのタンパク質の発現をもたらすのに適した条件下で、本発明のベクターを含むホスト細胞を培養するステップと、抗体分子を単離するステップとを含む。
抗体分子は、重鎖または軽鎖ポリペプチドのみを含み得、その場合においては、重鎖または軽鎖ポリペプチドコード配列のみを、ホスト細胞を形質移入するために使用する必要がある。重鎖および軽鎖の両方を含む産物を産生するために、細胞系は、軽鎖ポリペプチドをコードする第１のベクターおよび重鎖ポリペプチドをコードする第２のベクターの２つのベクターを形質移入され得る。代替として、単一ベクターが使用され得、ベクターは、軽鎖および重鎖ポリペプチドをコードする配列を含む。
代替として、本発明による抗体は、ｉ）細胞内で本発明による核酸配列を発現するステップ、およびｉｉ）発現された抗体産物を単離するステップによって産生され得る。加えて、方法は、ｉｉｉ）抗体を精製するステップを含み得る。
Ｂ細胞のスクリーニングおよび単離
形質転換されたＢ細胞を、所望の抗原特異性の抗体を産生するものに対してスクリーニングすることができ、次いで、個々のＢ細胞クローンは、陽性細胞から産生することができる。
スクリーニングステップは、ＥＬＩＳＡ、組織または細胞（形質移入された細胞を含む）の染色、中和アッセイまたは所望の抗原特異性を識別するための当該技術分野において既知の多くの他の方法のうちの１つによって行われ得る。アッセイは、単純抗原認識に基づいて選択し得るか、または、例えば、抗原結合抗体だけではなく中和抗体を選択し、標的細胞の特徴、たとえば、それらのシグナリングカスケード、それらの形、それらの増殖速度、他の細胞に影響するそれらの能力、他の細胞もしくは他の試薬または条件の変化による影響に対するそれらの応答、それらの分化状態等を変化させることができる抗体を選択する等のような、所望の機能にさらに基づいて選択され得る。
陽性細胞の混合物から個々のクローンを分離するクローニングステップは、限界希釈法，顕微操作、細胞分類による単細胞沈着、または当該技術分野において既知の別の方法を使用して行われ得る。
本発明の不死化Ｂ細胞クローンは、例えば、モノクローナル抗体源として、研究のための目的のモノクローナル抗体をコードする核酸（ＤＮＡまたはｍＲＮＡ）源等として、種々の方法で使用することができる。
本発明は、不死化Ｂメモリー細胞を含む組成物を提供し、細胞は、ｈＣＭＶに特異的な高中和能力を持つ抗体を産生し、抗体は、１日当たり細胞ごとに５ｐｇ以上産生される。また、本発明は、不死化Ｂメモリー細胞のクローンを含む組成物を提供し、クローンは、ｈＣＭＶに特異的な高親和性を持つモノクローナル抗体を産生し、抗体は、１日当たり細胞ごとに５ｐｇ以上産生される。好ましくは、クローンは、ｈＣＭＶ感染の中和において、高い力価を持つモノクローナル抗体を産生する。
本発明による例示的な不死化Ｂ細胞クローンは、これらに限定されないが、１５Ｄ８、４Ｎ１０、１０Ｆ７、１０Ｐ３、４Ｉ２２、８Ｌ１３、２Ｃ１２、８Ｃ１５、９Ｉ６、７Ｂ１３、８Ｊ１６、８Ｉ２１、７Ｉ１３、７Ｈ３、６Ｂ４、５Ｆ１、１０Ｃ６、４Ｈ９、１１Ｂ１２、１３Ｈ１１、３Ｇ１６、２Ｂ１１および６Ｌ３を含む。
エピトープ
上記のように、本発明の抗体は、それらが結合するエピトープをマッピングするために使用することができる。発明者らは、内皮細胞、上皮細胞、網膜細胞および樹状細胞のｈＣＭＶ感染を中和するいくつかの抗体は、ｈＣＭＶのＵＬ１２８タンパク質のエピトープ、ｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープ、ｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープ、ｈＣＭＶタンパク質ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０、ｇＢ、ｇＨ、によって形成されるエピトープ、またはｈＣＭＶタンパク質ｇＭおよびｇＮによって形成されるエピトープを指向することを発見した。本発明の抗体が結合するエピトープは、直線的（連続的）または立体構造的（非連続的）であり得、単一のｈＣＭＶタンパク質によって、または２つ、３つもしくはそれ以上のｈＣＭＶタンパク質の組み合わせによって形成され得る。
本発明の抗体によって認識されるエピトープは、多くの使用があり得る。精製された形態または合成形態でのエピトープおよびそのミモトープは、免疫学的応答（つまり、ワクチンとして、または他の使用のために抗体を産生するため）を惹起するために、またはエピトープもしくはそのミモトープと免疫反応する抗体に対して患者血清をスクリーニングするために使用することができる。一実施形態において、かかるエピトープもしくはミモトープ、またはかかるエピトープもしくはミモトープを含む抗原は、免疫反応を向上させるためのワクチンとして使用され得る。本発明の抗体および抗体断片はまた、ワクチンの品質を監視する方法においても使用することができる。具体的には、抗体は、ワクチン中の抗原が正しい高次構造の特定の免疫原性エピトープを含有していることを確認するために使用することができる。
また、エピトープは、エピトープに結合するリガンドのスクリーニングにおいても有用であり得る。これらに限定されないが、ラクダ、サメおよび他の種由来の抗体、抗体の断片、ペプチド、ファージディスプレイ技術の産物、アプタマー、アドネクチン、または他のウイルスもしくは細胞タンパク質の断片を含むかかるリガンドは、ペプチドをブロックして感染を予防することができる。このようなリガンドは、本発明の範囲内に包含される。
組換え発現
また、本発明の不死化Ｂメモリー細胞は、その後の組換え発現に対する抗体遺伝子のクローニングのために核酸源としても使用し得る。組換え源からの発現は、医薬的な目的において、例えば、安定性、再現性、培養の容易さ等の理由で、Ｂ細胞またはハイブリドーマからの発現よりも一般的である。
したがって、本発明は、組換え細胞を調製するための方法を提供し、（ｉ）目的の抗体をコードするＢ細胞クローンから１つ以上の核酸（例えば、重鎖および／または軽鎖遺伝子）を得るステップと、（ｉｉ）発現ホスト内における目的の抗体の発現を可能にするように、そのホスト内に核酸を挿入するステップとを含む。
同様に、本発明は、組換え細胞を調製するための方法を提供し、（ｉ）目的の抗体をコードするＢ細胞クローンから核酸を配列決定するステップと、（ｉｉ）ステップ（ｉ）からの配列情報を使用して、発現ホスト内における目的の抗体の発現を可能にするように、そのホスト内に挿入するために核酸を調製するステップとを含む。制限酵素部位を導入するため、コドン使用頻度を変更するため、ならびに／または転写および／もしくは翻訳制御配列を最適化するために、ステップ（ｉ）と（ｉｉ）の間で核酸を操作することができるが、その必要はない。
また、本発明は、組換え細胞を調製する方法を提供し、モノクローナル目的の抗体をコードする１つ以上の核酸でホスト細胞を形質転換するステップを含み、核酸は、本発明の不死化Ｂ細胞クローンから派生した核酸である。したがって、最初に、核酸を調製し、次いで、ホスト細胞を形質転換するためにそれを使用する手順は、異なる場所（例えば、異なる国）で異なる人々によって異なる時間に行うことができる。
次いで、本発明のこれらの組換え細胞は、発現および培養目的で使用することができる。それらは、大規模の薬剤生産のための抗体の発現に特に有用である。また、それらは、医薬組成物の活性成分としても使用することができる。任意の適切な培養技術を使用することができ、その技術には、静置培養、ローラーボトル培養、腹水、中空糸型バイオリアクターカートリッジ、モジュラーミニファーメンター、攪拌槽、マイクロキャリア培養、セラミック中子灌流等が挙げられるが、これらに限定されない。
Ｂ細胞から免疫グロブリン遺伝子を得る、および配列決定するための方法は、当該技術分野において既知である（例えば、参考文献３７を参照）。
発現ホストは、好ましくは、真核細胞であり、酵母および動物細胞、特に、哺乳類細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、ＰＥＲ．Ｃ６［Ｃｒｕｃｅｌｌ、参考文献３８］またはＨＫＢ−１１［Ｂａｙｅｒ、参考文献３９および４０］細胞、骨髄腫細胞［４１および４２］等）等のヒト細胞、ならびに植物細胞を含む。好適な発現ホストは、特に、それ自体ではヒトにおいて免疫原性ではない糖鎖構造を用いて、本発明の抗体をグリコシル化することができる。一実施形態において、発現宿主は無血清培地で成長することができる。さらなる実施形態において、発現宿主は、動物由来産物が存在しない培養物中で成長することができる。
発現ホストは、細胞系を得るために培養され得る。
本発明は、（ｉ）本発明にしたがって不死化Ｂ細胞クローンを調製するステップと、（ｉｉ）Ｂ細胞クローンから、目的の抗体をコードする核酸を得るステップとを含む、目的の抗体をコードする１つ以上の核酸分子（例えば、重鎖遺伝子および軽鎖遺伝子）を調製するための方法を提供する。本発明はまた、（ｉ）本発明にしたがって不死化Ｂ細胞クローンを調製するステップと、（ｉｉ）目的の抗体をコードするＢ細胞クローンからの核酸を配列決定するステップとを含む、目的の抗体をコードする核酸配列を得るための方法も提供する。
また、本発明は、目的の抗体をコードする核酸分子を調製する方法も提供し、本発明の形質転換されたＢ細胞から得られたＢ細胞クローンから核酸を得るステップを含む。したがって、最初に、Ｂ細胞クローンを得、次いで、それから核酸を調製する手順は、異なる場所（例えば、異なる国）で異なる人々によって異なる時間に行うことができる。
本発明は、（例えば、医薬用途のために）抗体を調製するための方法を提供し、（ｉ）目的の抗体を発現する選択したＢ細胞クローンから１つ以上の核酸（例えば、重鎖および軽鎖遺伝子）を得るステップおよび／または配列決定するステップと、（ｉｉ）核酸を挿入するか、または核酸を使用して、目的の抗体を発現することができる発現ホストを調製するステップと、（ｉｉｉ）目的の抗体が発現される条件下で、発現ホストを培養または継代培養するステップと、任意に、（ｉｖ）目的の抗体を精製するステップとを含む。
また、本発明は、抗体を調製する方法も提供し、目的の抗体が発現される条件下で、発現ホスト細胞集団を培養または継代培養するステップと、任意に、目的の抗体を精製するステップとを含み、発現ホスト細胞集団は、（ｉ）上記のように調製されたＢメモリーリンパ球の集団により産生される目的の抗体を発現する選択したＢ細胞をコードする核酸を提供するステップ、（ｉｉ）目的の抗体を発現することができる発現ホスト内に核酸を挿入するステップ、および（ｉｉｉ）発現ホスト細胞集団を産生するために、挿入した核酸を含む発現ホストを培養または継代培養するステップによって調製された。したがって、最初に、組換え発現ホストを調製し、次いで、抗体を発現するためにそれを培養する手順は、異なる場所（例えば、異なる国）で異なる人々によって異なる時間に行うことができる。
さらに、本発明の例示的な抗体４Ｎ１０、２Ｃ１２、８Ｃ１５、８Ｉ２１、６Ｂ４、１０Ｃ６、４Ｈ９、１１Ｂ１２、３Ｇ１６、および６Ｌ３（各アクセッション番号ＰＤ０８００９、ＰＤ０８００７、ＰＤ０８００６、ＰＤ０８００５、ＰＤ０８００４、ＰＤ０８０１４、ＰＤ０８０１３、ＰＤ０８０１１、ＰＤ０８０１２、およびＰＤ０８０１０）を発現する細胞株は、ブダペスト条約の規定に基づき、Ｌａｒｇｏ Ｒｏｓｓａｎａ Ｂｅｎｚｉ １０， １６１３２ Ｇｅｎｏａ（Ｉｔａｌｙ）所在のＡｄｖａｎｃｅｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ（ＡＢＣ）に、２００８年７月９日付で寄託され、７Ｈ３を発現する不死化Ｂ細胞株（アクセッション番号ＰＤ０８０１７）は、２００８年７月１６日付で寄託された。上記細胞株から発現された抗体またはその抗原結合断片、ならびに上記細胞株から発現された抗体またはその抗原結合断片と同じアミノ酸配列を有する抗体およびその抗原結合断片も、本発明の範囲内であると見なされる。
これらの寄託は、当業者の便宜のために行われるのであって、本発明を実施するためにかかる寄託が必要であること、または同等の実施形態が、本開示を考慮した場合に当該技術分野の範囲内ではないことを認めるものではない。これらの寄託物は公的に利用可能であるが、それは、この特許または任意の他の特許に基づいて寄託された材料を、製造、使用、または販売する実施権を付与することにはならない。寄託された材料の核酸配列は、参照することにより本開示に組み込まれ、本明細書に記載される任意の配列と矛盾する場合には優先する。
医薬組成物
本発明は、本発明の抗体および／または抗体断片、および／またはかかる抗体をコードする核酸、および／またはかかる抗体を発現する不死化Ｂ細胞、および／または本発明の抗体により認識されるエピトープを含有する医薬組成物を提供する。また、医薬組成物は、投与を可能にするように、薬学的に許容可能な担体も含有し得る。担体は、それ自体が、組成物を受け取る個人に有害である抗体の産生を誘導すべきではなく、毒性であるべきではない。適切な担体は、タンパク質、ポリペプチド、リポソーム、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、高分子アミノ酸、アミノ酸コポリマーおよび不活性ウイルス粒子等の大型かつ代謝速度が遅い巨大分子であり得る。
薬学的に許容可能な塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩および硫酸塩等の鉱酸塩、または酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩および安息香酸塩等の有機酸の塩を使用することができる。
治療用組成物中の薬学的に許容可能な担体は、水、生理食塩水、グリセロール、およびエタノール等の液体をさらに含有し得る。加えて、湿潤剤もしくは乳化剤またはｐＨ緩衝物質等の補助物質がかかる組成物中に存在し得る。かかる担体は、患者による経口摂取のために、錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリーおよび懸濁液として医薬組成物を製剤化することが可能である。
本発明の範囲内で、好適な投与形態は、例えば、注射または注入による、例えば、ボーラス投与または持続注入よる非経口投与に適した形態を含み得る。製品が注射または注入のためのものである場合、それは、油性または水性媒体中で懸濁液、溶液または乳濁液の形態を取り得、そしてそれは、懸濁剤、防腐剤、安定剤および／または分散剤等の製剤化剤を含有し得る。代替として、抗体分子は、使用前の適切な滅菌液との再構成のために、乾燥状態であり得る。
製剤化され次第、本発明の組成物は、対象に直接投与することができる。一実施形態において、組成物は、ヒト対象への投与に適合されることが好ましい。
本発明の医薬組成物は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、腹腔内、くも膜下腔内、脳室内、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、局所、皮下、鼻腔内、腸内、舌下、膣内または直腸経路を含むが、これらに限定されないあらゆる経路によって投与され得る。また、本発明の医薬組成物を投与するためにハイポスプレーも使用され得る。典型的には、治療用組成物は、液体溶液または懸濁液のいずれかとして注入物質として調製され得る。また、注入前に、液体媒体中の溶液または懸濁液に適した固形も調製され得る。
組成物の直接的な送達は、概して、注射、皮下、腹腔内、静脈内または筋肉内送達によって達成されるか、または組織の間質腔に送達される。また、組成物は、病変内にも投与することができる。投薬治療は、単回投与計画または複数回投与計画であってもよい。既知の抗体ベースの医薬品は、例えば、医薬品を毎日、毎週、毎月等送達すべきかどうか等の投与頻度に関する手引きを提供する。また、頻度および用量は、症状の重症度にも依存し得る。
本発明の組成物は種々の形態で調製され得る。例えば、組成物は、液体溶液または懸濁液のいずれかとして注入物質として調製され得る。また、注入前に、液体媒体中の溶液または懸濁液に適した固形も調製することができる（例えば、防腐剤を含有する滅菌水との再構成のために、シナジス（Ｓｙｎａｇｉｓ（商標））およびハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標））等の凍結乾燥された組成物）。組成物は、局所投与のために、例えば、軟膏、クリームまたは粉末として調製され得る。組成物は、経口投与のために、例えば、錠剤もしくはカプセルとして、スプレーとして、またはシロップ（任意に、香味づけたもの）として調製され得る。組成物は、微粉末またはスプレーを使用して、例えば、肺内投与のために吸入剤として調製され得る。組成物は、坐薬または膣坐薬として調製され得る。組成物は、経鼻、経耳または経眼投与のために、例えば、ドロップとして調製され得る。組成物は、組み合わされた組成物が、患者への投与直前に再構成できるように設計された、キット形態であり得る。例えば、凍結乾燥された抗体は、滅菌水または滅菌緩衝液を有するキット形態で提供することができる。
組成物中の有効成分は抗体分子、抗体断片、またはその変異体および誘導体であることが理解されよう。したがって、それは、胃腸管における分解に影響されやすい。したがって、組成物が胃腸管を用いた経路によって投与されるのであれば、組成物は、分解から抗体を保護するが、それが胃腸管から吸収され次第、抗体を放出する薬物を含有する必要がある。
薬学的に許容される担体についての徹底的な議論は、Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ、ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２において入手可能である。
本発明の医薬組成物は、通常、５．５〜８．５の間のｐＨを有し、いくつかの実施形態において、６〜８の間であり得、さらなる実施形態においては約７であり得る。緩衝液の使用によりｐＨを維持することができる。組成物は、無菌であり得るか、および／またはピロゲンを含み得ない。組成物は、ヒトに対して等張性であり得る。一実施形態において、本発明の医薬組成物は、密封容器中に供給される。
医薬組成物は、本発明の１つ以上の抗体および／または本発明の１つ以上の不死化Ｂ細胞および／または本発明の抗体に結合するエピトープを含むポリペプチドの有効量、つまり、所望の疾患または状態を治療する、寛解させる、もしくは予防するのに十分な、または検出可能な治療効果を呈するのに十分な量を含む。また、治療効果は、身体症状の軽減も含む。任意の特定の対象に対する正確な有効量は、対象のサイズおよび健康、状態の性質および程度、ならびに治療学または投与のために選択された治療学の組み合わせに依存する。所与の状況に対する有効量は、日常的な実験によって決定され、臨床従事者の判断内にある。本発明の目的で、有効用量は、概して、投与される個人における本発明の組成物の約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、または約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇである。既知の抗体ベースの医薬品は、この点における手引きを提供し、例えば、ハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標））は、２１ｍｇ／ｍＬ溶液の静脈内注入によって投与され、初期負荷用量は体重１ｋｇあたり４ｍｇであり、毎週の維持量は体重１ｋｇあたり２ｍｇであり、リツキサン（Ｒｉｔｕｘａｎ（商標））は、３７５ｍｇ／ｍ２を毎週投与される。
一実施形態において、組成物は、１つより多く（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ等）の本発明の抗体を含み、相加的または相乗的な治療効果を提供することができる。さらなる実施形態において、組成物は、１つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ等）の本発明の抗体と、ｈＣＭＶ感染を中和する１つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ等）の追加の抗体とを含むことができる。
例えば、１つの抗体が、ｈＣＭＶのＵＬ１２８タンパク質のエピトープ、ｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープ、ｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープ、ｈＣＭＶタンパク質ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０によって形成されるエピトープ、ｈＣＭＶのｇＢタンパク質のエピトープ、ｈＣＭＶのｇＨタンパク質のエピトープ、またはｈＣＭＶタンパク質ｇＭおよびｇＮによって形成されるエピトープに結合することができる一方で、別の抗体は、ｈＣＭＶのＵＬ１２８タンパク質の異なるエピトープ、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープ、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープ、ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０、ｇＢ、ｇＨ、ｇＬ、ｇＭ、ｇＮ、ｇＯによって形成されるエピトープ、またはｇＭおよびｇＮによって形成されるエピトープに結合することができる。いずれの理論にも束縛されるものではないが、１つの抗体は、線維芽細胞の感染を媒介するメカニズムに標的化され得、一方で、もう１つの抗体は、内皮細胞の感染を媒介するメカニズムに標的化され得る。最適な臨床効果が得られるように、それは、ｈＣＭＶ感染および維持の両方のメカニズムに対応するという利点があり得るだろう。
一実施形態において、本発明は、２つ以上の抗体を含む医薬組成物を提供し、第１の抗体は第１のＵＬ１２８エピトープに特異的であり、第２の抗体は、第２のＵＬ１２８エピトープ、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせ、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせ、ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０、ｇＢ、ｇＨ、ｇＬ、ｇＭ、ｇＮ、ｇＯの組み合わせ；またはｇＭおよびｇＮの組み合わせに特異的である。
別の実施形態において、本発明は、２つ以上の抗体を含む医薬組成物を提供し、第１の抗体はＵＬ１３０および１３１Ａの組み合わせの第１のエピトープに特異的であり、第２の抗体は、ＵＬ１２８；ＵＬ１３０および１３１Ａの組み合わせの第２のエピトープ；ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせ；ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０、ｇＢ、ｇＨ、ｇＬ、ｇＭ、ｇＮ、ｇＯの組み合わせ；またはｇＭおよびｇＮの組み合わせに特異的である。
さらに別の実施形態において、本発明は、２つ以上の抗体を含む医薬組成物を提供し、第１の抗体は、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０および１３１Ａの組み合わせの第１のエピトープに特異的であり、第２の抗体は、ＵＬ１２８；ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせ；ＵＬ１２８、ＵＬ１３０および１３１Ａの組み合わせの第２のエピトープ；ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０、ｇＢ、ｇＨ、ｇＬ、ｇＭ、ｇＮ、ｇＯの組み合わせ；またはｇＭおよびｇＮの組み合わせに特異的である。
さらに別の実施形態において、本発明は、２つ以上の抗体を含む医薬組成物を提供し、第１の抗体は、ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせの第１のエピトープに特異的であり、第２の抗体は、ＵＬ１２８；ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせ；ＵＬ１２８、ＵＬ１３０および１３１Ａの組み合わせ；ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０、ｇＢ、ｇＨ、ｇＬ、ｇＭ、ｇＮ、ｇＯの組み合わせの第２のエピトープ；またはｇＭおよびｇＮの組み合わせに特異的である。
さらなる実施形態において、本発明は、２つ以上の抗体を含む医薬組成物を提供し、第１の抗体は第１のｇＢエピトープに特異的であり、第２の抗体は、ＵＬ１２８；ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせ；ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせ；ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０、第２のｇＢエピトープ、ｇＨ、ｇＬ、ｇＭ、ｇＮ、ｇＯの組み合わせ；またはｇＭおよびｇＮの組み合わせに特異的である。
別の実施形態において、本発明は、２つ以上の抗体を含む医薬組成物を提供し、第１の抗体は第１のｇＨエピトープに特異的であり、第２の抗体は、ＵＬ１２８；ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせ；ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせ；ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０、ｇＢ、第２のｇＨエピトープ、ｇＬ、ｇＭ、ｇＮ、ｇＯの組み合わせ；またはｇＭおよびｇＮの組み合わせに特異的である。
さらに別の実施形態において、本発明は、２つ以上の抗体を含む医薬組成物を提供し、第１の抗体は、ｇＭおよびｇＮの組み合わせの第１のエピトープに特異的であり、第２の抗体は、ＵＬ１２８；ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせ；ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせ；ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０、ｇＢ、ｇＨ、ｇＬ、ｇＭ、ｇＮ、ｇＯの組み合わせ；またはｇＭおよびｇＮの組み合わせの第２のエピトープに特異的である。
ｈＣＭＶのＵＬ１２８タンパク質のエピトープに結合する医薬組成物における使用のための本発明の例示的な抗体は、これに限定されないが、１５Ｄ８を含む。ｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープに結合する医薬組成物における使用のための本発明の例示的な抗体は、これらに限定されないが、４Ｎ１０、１０Ｆ７、１０Ｐ３、４Ｉ２２、８Ｌ１３、１Ｆ１１、２Ｆ４、および５Ａ２を含む（２００８年１月３日に出願された米国特許出願番号第１１／９６９，１０４号を参照のこと）。ｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープに結合する医薬組成物における使用のための本発明の例示的な抗体は、これらに限定されないが、２Ｃ１２、７Ｂ１３、７Ｉ１３、８Ｃ１５、８Ｊ１６、９Ｉ６および６Ｇ４を含む（２００８年７月１６日に出願された米国特許出願番号第１２／１７４，５６８号を参照のこと）。ｈＣＭＶタンパク質ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０によって形成されるエピトープに結合する医薬組成物における使用のための本発明の例示的な抗体は、これに限定されないが、８Ｉ２１を含む。ｈＣＭＶのｇＢタンパク質のエピトープに結合する医薬組成物における使用のための本発明の例示的な抗体は、これらに限定されないが、７Ｈ３、１０Ｃ６、５Ｆ１、６Ｂ４、４Ｈ９および２Ｂ１１を含む。ｈＣＭＶのｇＨタンパク質のエピトープに結合する医薬組成物における使用のための本発明の例示的な抗体は、これらに限定されないが、１１Ｂ１２、１３Ｈ１１、および３Ｇ１６を含む。ｈＣＭＶタンパク質ｇＭおよびｇＮによって形成されるエピトープに結合する医薬組成物における使用のための本発明の例示的な抗体は、これに限定されないが、６Ｌ３を含む。本発明は、２つ以上の抗体を含む医薬組成物をさらに提供し、第１の抗体は、本発明の抗体または抗体断片であり、第２の抗体は、ｈＣＭＶ感染を中和する当該技術分野において既知の抗体または後に発見される抗体である。かかる抗体の例は、これらに限定されないが、ＭＳＬ−１０９、８Ｆ９または３Ｅ３を含む。
一実施形態において、本発明は、抗体１５Ｄ８またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、抗体１５Ｄ８変異体１またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、抗体１５Ｄ８変異体２またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、抗体８Ｉ２１またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
さらに別の実施形態において、本発明は、抗体２Ｃ１２またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、抗体８Ｃ１５またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、抗体９Ｉ６またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、抗体７Ｂ１３またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、抗体８Ｊ１６またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、抗体７Ｉ１３またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
さらに別の実施形態において、本発明は、抗体４Ｎ１０またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、抗体１０Ｆ７またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、抗体１０Ｐ３またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、抗体４Ｉ２２またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、抗体８Ｌ１３またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
さらに別の実施形態において、本発明は、抗体７Ｈ３またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において、抗体７Ｈ３変異体１またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、抗体１０Ｃ６またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、抗体５Ｆ１またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、抗体６Ｂ４またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、抗体４Ｈ９またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、抗体４Ｈ９変異体１またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、抗体２Ｂ１１またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
さらに別の実施形態において、本発明は、抗体１３Ｈ１１またはその抗原結合断片本と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、抗体１１Ｂ１２またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、抗体３Ｇ１６またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、抗体６Ｌ３またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
一実施形態において、本発明の医薬組成物は、上記抗体またはその抗原結合断片を唯一の有効成分として含むことができる。別の実施形態において、医薬組成物は、２つ以上、例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、またはそれ以上の上記抗体もしくはその抗原結合断片を含むことができる。本明細書で考察されるように、本発明の医薬組成物はまた、１つ以上の抗体またはその抗原結合断片と、ｈＣＭＶ感染を中和する第２の抗体またはその抗原結合断片とを含むことができる。
本発明の抗体は、例えば、放射線療法を用いて、化学療法化合物等の他の治療薬とともに投与する（組み合わせてまたは別個に）ことができる。好ましい治療化合物は、ガンシクロビル、ホスカルネット、およびシドホビル等の抗ウイルス化合物を含む。かかる組み合わせ治療法は、単独で投与する場合の個々の治療薬に対する治療効果の相加的または相乗的向上を提供する。「相乗作用」という用語は、各それぞれの活性薬剤の個々の効果の和よりも大きい２つ以上の活性薬剤の併用効果を説明するために使用する。したがって、２つ以上の薬剤の併用効果が活性または工程の「相乗的阻害」をもたらす場合、それは、活性または工程の阻害が、各それぞれの活性薬剤の阻害効果の和よりも大きいことを意図する。「相乗的治療効果」という用語は、２つ以上の治療の組み合わせで観察された治療効果を指し、治療効果（多数のパラメータのいずれかによって測定されたような）は、それぞれ個々の治療で観察された個々の治療効果の和よりも大きい。
抗体は、ｈＣＭＶ感染の治療に対して以前に反応を示さなかった、つまり、抗ｈＣＭＶ治療に対して抵抗性を示したそれらの患者に投与され得る。かかる治療は、抗ウイルス剤を用いた以前の治療を含み得る。これは、例えば、ｈＣＭＶの抗ウイルス耐性株による感染に起因し得る。
本発明の抗体を含む本発明の組成物において、抗体は、組成物中の総タンパク質の少なくとも５０重量％（例えば、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％以上）を占める。したがって、抗体は、精製された形態である。
本発明は、（ｉ）本発明の抗体を調製するステップと、（ｉｉ）精製した抗体を１つ以上の薬学的に許容される担体と混合するステップとを含む、医薬品を調製する方法を提供する。
また、本発明は、医薬品を調製する方法も提供し、抗体を１つ以上の薬学的に許容可能な担体とを混合するステップを含み、抗体は、本発明の形質転換されたＢ細胞から得られたモノクローナル抗体である。したがって、最初に、モノクローナル抗体を得、次いで、医薬品を調製する手順は、異なる場所（例えば、異なる国）で異なる人々によって異なる時間に行うことができる。
治療目的のために抗体またはＢ細胞を送達することの代替案として、核酸が原位置で対象内に発現され、所望の治療効果を提供できるように、目的のモノクローナル抗体（またはその活性断片）をコードする核酸（典型的には、ＤＮＡ）を対象に送達することが可能である。適切な遺伝子治療法および核酸送達ベクターは、当該技術分野において既知である。
本発明の組成物は、免疫原性組成物であり得、またいくつかの実施形態においては、ｈＣＭＶのＵＬ１２８タンパク質のエピトープ、ｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１３０および１３１Ａによって形成されるエピトープ、ｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープ、ｈＣＭＶタンパク質ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０によって形成されるエピトープ、ｈＣＭＶのｇＢタンパク質のエピトープ、ｈＣＭＶのｇＨタンパク質のエピトープ、またはｈＣＭＶタンパク質ｇＭおよびｇＮによって形成されるエピトープを含む抗原を含むワクチン組成物であり得る。代替の組成物は、（ｉ）ｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせによって形成されるエピトープを含む抗原、および（ｉｉ）ｇＢ、ｇＨ、ｇＬ、ｇＭ、ｇＮ、ｇＯ、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０もしくはＵＬ１３１Ａに見出されるエピトープを含む抗原、またはそれらの組み合わせを含むことができる。本発明によるワクチンは、予防のため（つまり、感染を防止するため）または治療のため（つまり、感染を治療するため）のいずれかであり得る。
組成物は、特に複数回投与形式でパッケージされる場合に、抗菌薬を含み得る。それらは、表面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ８０等のＴｗｅｅｎ（ポリソルベート）を含むことができる。通常、表面活性剤は低レベルで（例えば、＜０．０１％）存在する。組成物はまた、浸透圧を与えるためにナトリウム塩（例えば、塩化ナトリウム）も含み得る。１０±２ｍｇ／ｍＬ ＮａＣｌの濃度が典型的である。
組成物は、特に、それらが凍結乾燥される場合か、またはそれらが、凍結乾燥された材料から再構成された材料を含む場合に、例えば、約１５〜３０ｍｇ／ｍＬ（例えば、２５ｍｇ／ｍＬ）で、糖アルコール（例えば、マンニトール）または二糖（例えば、スクロースまたはトレハロース）を含む。凍結乾燥のための組成物のｐＨは、凍結乾燥前に約６．１に調整され得る。
また、本発明の組成物は、１つ以上の免疫調節剤も含み得る。一実施形態において、免疫調節剤のうちの１つ以上は、アジュバントを含む。
本発明のエピトープ組成物は、ｈＣＭＶ感染に効果的に対処するために、細胞媒介免疫応答および体液性免疫応答の両方を誘発することができる。この免疫学的応答は、持続性（例えば、中和）抗体と、ｈＣＭＶへの曝露後に急速に応答することができる細胞媒介の免疫との両方を誘発し得る。
医学的治療および用途
本発明の抗体、抗体断片、またはその誘導体および変異体は、ｈＣＭＶ感染の治療、ｈＣＭＶ感染の予防またはｈＣＭＶ感染の診断のために使用され得る。
診断方法は、抗体または抗体断片を試料と接触させることを含む。かかる試料は、例えば、唾液腺、肺、肝臓，膵臓、腎臓、耳、眼、胎盤、消化管、心臓、卵巣、下垂体、副腎、甲状腺、脳または皮膚から取った組織試料であり得る。また、診断方法は、抗原／抗体複合体の検出も含む。
したがって、本発明は、治療における使用のための（ｉ）本発明による抗体、抗体断片、もしくはその変異体および誘導体、（ｉｉ）本発明による不死化Ｂ細胞クローン、（ｉｉｉ）本発明の抗体に結合する能力を持つエピトープ、または（ｉｖ）本発明の抗体に結合するエピトープに結合する能力を持つ、好ましくは抗体であるリガンドを提供する。
また、（ｉ）本発明による抗体、抗体断片、もしくはその変異体および誘導体、または、本発明の抗体に結合するエピトープに結合する能力を持つ、好ましくは抗体であるリガンドを患者に投与することを含む、患者を治療する方法も提供される。
本発明はまた、ｈＣＭＶ感染の予防または治療のための医薬の製造における、（ｉ）本発明による抗体、抗体断片、もしくはその変異体および誘導体、（ｉｉ）本発明による不死化Ｂ細胞クローン、（ｉｉｉ）本発明の抗体に結合する能力を持つエピトープ、または（ｉｖ）本発明の抗体に結合する能力を持つエピトープに結合する、好ましくは抗体であるリガンドの使用も提供する。
本発明は、ｈＣＭＶ感染の予防または治療のための医薬として使用するための組成物を提供する。また、患者の治療および／または患者の診断のための医薬の製造における、抗体および／またはかかる抗体が結合するエピトープを含むタンパク質の使用も提供する。本発明はまた、本発明の組成物を対象に投与するステップを含む、治療を必要とする対象を治療するための方法も提供する。いくつかの実施形態において、対象はヒトであり得る。治療処置の有効性を確認する一方法は、本発明の組成物の投与後に、疾患症状をモニターするステップを包含する。治療は、単回投与計画または複数回投与計画であることができる。
一実施形態において、本発明の抗体、その抗原結合断片、エピトープ、または組成物は、かかる予防的または治療的な処置を必要とする対象に投与される。かかる対象は、これに限定されないが、特にｈＣＭＶ感染の危険性があるか、またはｈＣＭＶに感染し易い対象を含む。例示的な対象は、これらに限定されないが、免疫無防備状態の対象またはｈＣＭＶに対する血清反応が陰性であるかもしくは最近ｈＣＭＶに感染した妊娠中の女性を含む。例示的な免疫無防備状態の対象は、これらに限定されないが、ＨＩＶに罹患する対象または免疫抑制療法を受けている対象を含む。
本発明の抗体およびその抗原結合断片はまた、受動免疫において使用することもできる。さらに、本発明において記述したように、それらはｈＣＭＶ感染の診断のためのキットにおいても使用され得る。
本発明の抗体、例えば、モノクローナル抗体１５Ｄ８、４Ｎ１０、１０Ｆ７、１０Ｐ３、４Ｉ２２、８Ｌ１３、２Ｃ１２、８Ｃ１５、９Ｉ６、７Ｂ１３、８Ｊ１６、８Ｉ２１、７Ｉ１３、７Ｈ３、６Ｂ４、５Ｆ１、１０Ｃ６、４Ｈ９、２Ｂ１１、１１Ｂ１２、１３Ｈ１１、３Ｇ１６、および６Ｌ３に結合する能力を持つエピトープは、防御的抗ｈＣＭＶ抗体の存在を検出することによりワクチン摂取手順の効率を監視するためのキットにおいて使用することができる。
また、本発明において記述したように、抗体、抗体断片、またはその変異体および誘導体は、所望の免疫原性でのワクチン製造をモニターするためのキットにおいても使用され得る。
また、本発明は、医薬品を調製する方法を提供し、モノクローナル抗体を１つ以上の薬学的に許容可能な担体と混合するステップを含み、モノクローナル抗体は、本発明の発現ホストから得られたモノクローナル抗体である。したがって、最初に、モノクローナル抗体を得て（例えば、それを発現するおよび／またはそれを精製する）、次いで、それを医薬担体と混合する手順は、異なる場所（例えば、異なる国）で異なる人々によって異なる時間に行うことができる。
本発明の形質転換されたＢ細胞から始めて、各ステップでの任意の最適化を用いる培養、継代培養、クローニング、サブクローニング、配列決定、核酸調製等の種々のステップを、形質転換されたＢ細胞によって発現される抗体を永続化させるために行うことができる。好適な実施形態において、上記の方法は、抗体をコードする核酸に適用される最適化の技術（例えば、親和性成熟または最適化）をさらに含む。本発明は、そのようなステップ時に使用および調製される全ての細胞、核酸、ベクター、配列、抗体等を包含する。
これらの全ての方法において、発現ホスト内で使用される核酸は、ある種の核酸配列を挿入、欠失または修正するように、操作され得る。かかる操作からの変更は、制限酵素部位を導入するため、コドン使用頻度を変更するため、転写および／または翻訳制御配列を追加または最適化するため等の変更を含むが、これらに限定されない。また、コードされたアミノ酸を変化させるために、核酸を変更することも可能である。例えば、それは、抗体のアミノ酸配列に１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個等）のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を導入するために有用であり得る。このような点突然変異は、エフェクター機能、抗原結合親和性、翻訳後修飾、免疫原性等を修飾することができるか、共有結合基（例えば、標識）の付着のためにアミノ酸を導入することができるか、またはタグ（例えば、精製目的で）を導入することができる。突然変異は、特異的部位に導入することができるか、または、ランダムとその後の淘汰（例えば、分子進化）により導入することができる。例えば、本発明の抗体のＣＤＲ領域、重鎖可変領域、または軽鎖可変領域のうちのいずれかをコードする１つ以上の核酸に、無作為にまたは定方向に変異を導入して、コードしたアミノ酸に異なる特性をもたらすことができる。かかる変化は反復プロセスの結果であり得、最初の変化は保持されて、他のヌクレオチドの位置で新しい変化が導入される。さらに、独立したステップにおいて達成される変化を組み合わすことができる。コードされたアミノ酸にもたらされる異なる特性は、これに限定されないが、親和性の増大を含む。
概要
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「なる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」包含し、例えば、Ｘを「含む」組成物は、独占的にＸからなるか、または、例えばＸ＋Ｙ等の何らかの付加的なものを含み得る。
「実質的に」という用語は「完全に」を除外せず、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まない可能性がある。必要であれば、「実質的に」という用語は、本発明の定義から省略されてもよい。
数値ｘに関連する「約」という用語は、例えば、ｘ±１０％を意味する。
本明細書で用いる場合、「疾患」という用語は、概して、正常機能を損ない、そして、典型的には、特徴的な徴候および症状によって顕在化し、ヒトもしくは動物の寿命および生活の質を減少させる、ヒトもしくは動物の体の、またはその一部の異常な状態を全てが反映するという点で、「障害」および「状態」（医学的状態等の場合）と同義語であることが意図され、それらと同じ意味で使用される。
本明細書で用いる場合、患者の「治療」への言及は、予防および予防法を含むことを意図する。「患者」という用語は、ヒトを含む全ての哺乳類を意味する。患者の例としては、ヒト、ウシ、イヌ、ネコ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、およびウサギが挙げられる。概して、患者はヒトである。
以下の実施例において、本発明の例示的な実施形態を提供する。以下の実施例は、単なる例示目的として、本発明を使用する当業者の補助となるように提示される。実施例は、決して本発明の範囲を制限することを意図するものではない。
実施例１：Ｂ細胞のクローニングおよびｈＣＭＶ中和活性のスクリーニング
血清中に高いｈＣＭＶ中和抗体力価を持つドナーを確認した。参考文献３６に記載されるように、メモリーＢ細胞を単離し、ＥＢＶおよびＣｐＧを用いて不死化した。手短に述べると、ＣＤ２２ビーズを用いた負の選択によりメモリーＢ細胞を単離し、次いで、特異的抗体および細胞選別によりＩｇＭ＋、ＩｇＤ＋ＩｇＡ＋Ｂ細胞を除去した。ＣｐＧ２００６の存在下において、分類した細胞（ＩｇＧ＋）をＥＢＶで不死化し、同種単核細胞を照射した。それぞれメモリーＢ細胞５０個を含有する同型培養物を、２０個の９６ウェルＵ字形底プレートに配置した。２週間後、培養上清を採取し、別々のアッセイにおいて線維芽細胞または上皮細胞のいずれかのｈＣＭＶ感染を中和するそれらの能力を試験した。参考文献３６に記載されるように、陽性のポリクローナル培養物からＢ細胞クローンを単離した。ＩｇＧ特異的ＥＬＩＳＡを用いて、選択されたクローンの上清中のＩｇＧ濃度を決定した。
ウイルス中和アッセイのために、滴定量の臨床ｈＣＭＶ分離株を、等容積の培養上清または中和抗体を含有するヒト血清希釈と混合した。室温で１時間インキュベーションした後、９６ウェルの平底プレート中の内皮細胞（例えば、ＨＵＶＥＣ細胞もしくはＨＭＥＣ−１細胞）、上皮細胞（例えば、ＡＲＰＥ網膜細胞）、線維芽細胞（例えば、ＭＲＣ−９もしくは間葉系間質細胞）、または骨髄細胞（例えば、単球由来の樹状細胞）のいずれかのコンフルエントな単層に混合物を添加し、３７℃で２日間インキュベートした。上清を捨て、細胞を冷メタノールで固定し、ｈＣＭＶ早期抗原に対するマウスモノクローナル抗体の混合物と、続いてフルオレセイン標識ヤギ抗マウスＩｇで染色した。プレートは、蛍光顕微鏡を使用して分析した。中和抗体の非存在下において、感染した細胞は１００〜１，０００／視野であり、一方、飽和濃度の中和抗体の存在下において、感染は完全に阻害された。中和力価は、ｈＣＭＶ感染の５０％または９０％減少をもたらす抗体の濃度（μｇ／ｍＬ）として示す。
表５Ａは、線維芽細胞株（ＭＲＣ−９）およびヒト網膜上皮細胞株（ＡＲＰＥ）の両方におけるｈＣＭＶ臨床分離株（ＶＲ１８１４）の中和を示す。いくつかの抗体が上皮細胞（ＡＲＰＥ）のｈＣＭＶ感染を中和したが、それらは線維芽細胞（ＭＲＣ−９）の感染は中和しなかった。これは、異なるタンパク質が特定の細胞型に対する指向性に関与するという以前のデータと一致する［７］。ｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａタンパク質複合体のうちの１つ以上のタンパク質に特異的であるこれらの抗体のうちのほとんどが、非常に低い濃度で上皮細胞のｈＣＭＶ感染を中和した（０．０１μｇ／ｍＬ〜０．００１μｇ／ｍＬの範囲の濃度でｈＣＭＶ感染を５０％低減）。ｈＣＭＶタンパク質ｇＢ、ｇＨ、またはｇＭおよびｇＮの組み合わせに特異的な他の抗体は、線維芽細胞および上皮細胞のｈＣＭＶ感染を同程度の力価で中和した。これらの結果は、ｈＣＭＶ中和抗体のうちのいくつかは線維芽細胞および上皮細胞の両方に等しく効果的であるが、他の抗体は２つの細胞型に対して異なる活性を示すことを表している。
表５Ａに示す分析に基づいて、抗体をグループ１（線維芽細胞および上皮細胞の両方のｈＣＭＶ感染を中和する）およびグループ２（上皮細胞のｈＣＭＶ感染を中和する）にグループ分けした。表５Ｂは、精製した抗体を用いて行った独立した実験を示す。この結果は、グループ２の抗体は、０．００７μｇ／ｍＬ〜０．００３μｇ／ｍＬの範囲のＩＣ９０値（すなわち、ウイルス感染を９０％低減するために必要な抗体の濃度）で上皮細胞の感染を中和したのに対し、グループ１の抗体は、０．１μｇ／ｍＬ〜３０μｇ／ｍＬの範囲のＩＣ９０値で線維芽細胞および上皮細胞の両方の感染を中和したことを示す。グループ２の抗体は、内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）および骨髄細胞（単球由来の樹状細胞）の感染も中和した（データに示さず）。グループ１の抗体は、表５Ｃのいくつかの代表的な抗体について示すように、内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）、骨髄細胞（単球由来の樹状細胞）、および骨髄間葉系間質細胞の感染も中和した。本発明の抗体は、異なるｈＣＭＶ臨床分離株ＶＲ６９５２（尿由来）、ＶＲ３４８０Ｂ１（血液由来、ガンシクロビル耐性）、およびＶＲ４７６０（血液由来、ガンシクロビルおよびホスカルネット耐性）による内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）の感染も中和した（データに示さず）。
感染中に異なる細胞型が存在する場合、異なる細胞型の感染を中和する抗体を組み合わせて、相加的または相乗的な中和作用をもたらすことができると予想される。一例として、上皮細胞の感染の中和には効果的であるが、線維芽細胞の感染は中和しない１５Ｄ８等の中和抗体は、線維芽細胞に対してウイルス中和活性を有する３Ｇ１６と組み合わせ得る。別の例として、上皮細胞の感染の中和には効果的であるが、線維芽細胞の感染は中和しない９Ｉ６等の中和抗体は、線維芽細胞に対してウイルス中和活性を有する６Ｂ４と組み合わせ得る。
Figure 2018139611
 １）線維芽細胞（例えば、ＭＲＣ−９）または上皮細胞（例えば、ＡＲＰＥ網膜細胞）のｈＣＭＶ感染を５０％低減するために必要な抗体の濃度を示す値。濃度は以下の通り：
＋＋＋＋＜０．００１μｇ／ｍＬ、＋＋＋＜０．０１μｇ／ｍＬ、＋＋＜０．１μｇ／ｍＬ、＋≦２μｇ／ｍＬ
−：テストした最高濃度（２μｇ／ｍＬ）では中和しなかった。
２）表６に定義する特異性
Figure 2018139611
 １）線維芽細胞（例えば、ＭＲＣ−９）または上皮細胞（例えば、ＡＲＰＥ網膜細胞）のｈＣＭＶ（ＶＲ１８１４）感染を９０％低減するために必要な抗体の濃度をμｇ／ｍＬで示した値。
２）表６に定義する特異性
３）ｎｎ：テストした最高濃度（１０μｇ／ｍＬ）では中和しなかった。
Figure 2018139611
 １）初代細胞のｈＣＭＶ（ＶＲ１８１４）感染を５０％低減するために必要な抗体の濃度をμｇ／ｍＬで示した値。ＨＵＶＥＣ、ヒト臍帯静脈内皮細胞、Ｍｏ−ＤＣ、単球由来の樹状細胞、ＢＭ−ＭＳＣ、間葉系骨髄間質細胞
実施例２：モノクローナル抗体によって認識される標的抗原の識別
ｈＣＭＶ中和抗体の特異性を解析するために、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を全長ｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１３１Ａ、ｇＨ、ｇＬ、ｇＢ、ｇＭ、およびｇＮをコードする１つ以上のベクターでトランスフェクトした。３６時間後、細胞を固定し、透過処理して、ヒトモノクローナル抗体と、続いてヤギ抗ヒトＩｇＧで染色した。図１は、１つ以上のｈＣＭＶタンパク質を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞に対する代表的な抗体の結合を示す。表６は、ｈＣＭＶ遺伝子でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞に対するすべての異なる抗体の染色パターンを示す。ＵＬ１２８でトランスフェクトした細胞を染色した抗体１５Ｄ８の例外を除いて、グループ２の他のすべての抗体は、単遺伝子トランスフェクタントを染色しなかったことから、それらが１つより多くの遺伝子産物の同時発現を必要とするエピトープを認識するのであろうことが示唆される。実際に、５つの抗体（４Ｎ１０、１０Ｆ７、１０Ｐ３、４Ｉ２２および８Ｌ１３）が、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａを同時発現する細胞を染色し、６つの抗体（２Ｃ１２、７Ｂ１３、７Ｉ１３、８Ｃ１５、８Ｊ１６および９Ｉ６）が、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａを同時発現する細胞を染色し、１つの抗体（８Ｉ２１）が、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０ならびにｇＨおよびｇＬでトランスフェクトした細胞を染色した。これらのすべての抗体はまた、ｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８‐１３０複合体を形成するすべての遺伝子でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞を染色した。グループ１の抗体のうち、３つ（１１Ｂ１２、１３Ｈ１１および３Ｇ１６）がｈＣＭＶタンパク質ｇＨを発現する細胞を染色し、６つ（７Ｈ３、１０Ｃ６、５Ｆ１、６Ｂ４、４Ｈ９および２Ｂ１１）がｈＣＭＶタンパク質ｇＢを発現する細胞を染色し、１つ（６Ｌ３）がｈＣＭＶタンパク質ｇＭおよびｇＮを同時発現する細胞を染色した。
Figure 2018139611
 １）ｎｄ：実行せず。
抗体が結合する抗原部位の同一性をさらに調査するために、交差競合実験を行った。ここでは、全長ｈＣＭＶタンパク質ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１ＡをコードするベクターでＨＥＫ２９３Ｔ細胞をトランスフェクトした。その後、ビオチン化抗体を添加する前に、細胞を２０倍過剰な競合相手であるｈＣＭＶ中和抗体とともにインキュベートした。異なる競合抗体およびビオチン化抗体を用いて、この手順を数回繰り返した。この実験には、米国特許出願第１１／９６９，１０４号（１１Ｆ１１、２Ｆ４および５Ａ２）ならびに米国特許出願第１２／１７４，５６８号（６Ｇ４）に記載される４つの抗体が含まれた。そのデータを表７Ａ、Ｂに示す。
Figure 2018139611
 １）表６に定義する特異性
２）１００％未満の競合は、エピトープの部分的重複、立体障害、または低親和性に起因し得る。
Figure 2018139611
 １）表６に定義する特異性
２）１００％未満の競合は、エピトープの部分的重複、立体障害、または低親和性に起因し得る。
表７Ａ、Ｂのデータに基づいて、ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０によって形成されるｈＣＭＶ複合体上に、少なくとも７つの別個の抗原部位を識別することができる（表８）。部位１は、ＵＬ１２８に存在し、抗体１５Ｄ８によって定義される。部位２〜４は、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせによって形成され、それぞれ、抗体１０Ｆ７、４Ｉ２２、８Ｌ１３、１Ｆ１１および２Ｆ４（部位２）によって、４Ｎ１０および５Ａ２（部位３）によって、また１０Ｐ３（部位４）によって、定義される。部位５および６は、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせによって形成され、それぞれ、抗原２Ｃ１２、７Ｂ１３、８Ｃ１５、８Ｊ１６、９Ｉ６および６Ｇ４（部位５）によって、また７Ｉ１３（部位６）によって定義される。最後に、部位７は、ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０の組み合わせによって形成され、抗体８Ｉ２１によって定義される。部位７および部位３を定義する抗体は部分的に互いに競合し、これらの部位は、ｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８‐１３１Ａ複合体の構造において近い可能性があることを示唆した。
１０Ｆ７および４Ｎ１０によって、または８Ｊ１６および７Ｉ１３によって例示されるように、同じ標的上の異なるエピトープを標的にする中和抗体を組み合わせて使用することで、ウイルス感染の強力な中和を達成することができると予想される。さらに、異なる標的分子または標的分子の組み合わせを標的とする中和抗体を一緒に使用することで、強力なウイルスの中和を達成することができると予想される。一例として、表８は、１５Ｄ８および１０Ｆ７、１５Ｄ８および２Ｃ１２、または８Ｊ１６および８Ｉ２１を組み合わせて、相加的または相乗的なｈＣＭＶ中和作用をもたらすことができることを示している。
Figure 2018139611
表７に記載されるのと同様の様式で、全長ｇＨをコードするベクターでＨＥＫ２９３Ｔ細胞をトランスフェクトし、抗ｇＨ抗体の交差競合結合を調べた。図２Ａおよび表９から分かるように、少なくとも２つの異なる結合部位がｈＣＭＶのｇＨタンパク質中に認められた。抗体３Ｇ１６は一方の部位を定義し、抗体１１Ｂ１２および１３Ｈ１１は２番目の部位を定義する。最後に、全長ｇＢをコードするベクターでＨＥＫ２９３Ｔ細胞をトランスフェクトし、抗ｇＢ抗体の交差競合結合を調べた。図２Ｂおよび表１０から分かるように、少なくとも３つの異なる抗原部位がｈＣＭＶのｇＢタンパク質中に認められた。抗体６Ｂ４は一つの部位を定義し、７Ｈ３は第２の部位を定義し、一連の１０Ｃ６、５Ｆ１、４Ｈ９および２Ｂ１１は第３の部位を定義する。抗体６Ｂ４（ｇＢ部位１を認識する）をＥＬＩＳＡによりｇＢ６９‐７８ペプチドと反応させた（０．０４４μｇ／ｍＬのＥＣ５０）。同じ標的分子上であるが異なる部位を標的とする抗体を組み合わせて使用することで、強力なウイルスの中和を達成することができると予想される。
Figure 2018139611
 １）表６に定義する通り。
Figure 2018139611
 １）表６に定義する通り。
２）１００％未満の競合は、エピトープの部分的重複、立体障害、または低親和性に起因し得る。
要約すると、１５Ｄ８は、２Ｃ１２、７Ｂ１３、６Ｇ４（すべてＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせに特異的）によって認識されるエピトープとは異なり、また８Ｉ２１（ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０の組み合わせに特異的）によって認識されるエピトープとも異なるＵＬ１２８のエピトープに結合する。また、１５Ｄ８のそのエピトープへの結合は、４Ｎ１０、１０Ｆ７、１０Ｐ３および１Ｆ１１（すべてＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせに特異的）によって阻害されない。
４Ｎ１０は、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの発現を必要とし、５Ａ２（ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせに特異的）および８Ｉ２１（ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０の組み合わせに特異的）によって認識されるエピトープと同じかまたはほぼ重複するが、１０Ｆ７、４Ｉ２２、１Ｆ１１、２Ｆ４（すべてＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせに特異的）、２Ｃ１２および６Ｇ４（両方ともＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせに特異的）によって認識されるエピトープとは異なるエピトープに結合する。また、４Ｎ１０のそのエピトープへの結合は、１５Ｄ８（ＵＬ１２８に特異的）によって阻害されない。
１０Ｆ７は、４Ｉ２２、８Ｌ１３、１Ｆ１１および２Ｆ４によって認識されるエピトープと同じかまたはほぼ重複するが、４Ｎ１０および５Ａ２（両方ともＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせに特異的）によって認識されるエピトープとは異なり、また２Ｃ１２および６Ｇ４（両方ともＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせに特異的）によって認識されるエピトープとも異なる、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの発現を必要とするエピトープに結合する。また、１０Ｆ７のそのエピトープへの結合は、１５Ｄ８（ＵＬ１２８に特異的）または１３Ｈ１１（ｇＨに特異的）によって阻害されない。
４Ｉ２２は、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの発現を必要とし、２Ｆ４、１Ｆ１１および１０Ｆ７によって認識されるエピトープと同じかまたは部分的に重複するが、４Ｎ１０、１０Ｐ３および５Ａ２（すべてＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせに特異的）によって認識されるエピトープとは異なり、また２Ｃ１２、８Ｃ１５、８Ｊ１６、９Ｉ６、６Ｇ４（すべてＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせに特異的）および８Ｉ２１（ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０の組み合わせに特異的）によって認識されるエピトープとも異なるエピトープに結合する。また、４Ｉ２２のそのエピトープへの結合は、１５Ｄ８（ＵＬ１２８に特異的）または１３Ｈ１１（ｇＨに特異的）によって阻害されない。
２Ｃ１２は、ｈＣＭＶのＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａ遺伝子産物の発現を必要とし、７Ｂ１３、８Ｃ１５、８Ｊ１６、９Ｉ６および６Ｇ４によって認識されるエピトープと同じかまたはほぼ重複するが、７Ｉ１３（すべてＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせに特異的）によって認識されるエピトープとは異なり、また１５Ｄ８（ＵＬ１２８に特異的）、４Ｎ１０、１０Ｆ７、１０Ｐ３、４Ｉ２２、８Ｌ１３、１Ｆ１１、２Ｆ４、５Ａ２（すべてＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせに特異的）および８Ｉ２１（ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０の組み合わせに特異的）によって認識されるエピトープとも異なるエピトープに結合する。また、２Ｃ１２のそのエピトープへの結合は、３Ｇ１６（ｇＨに特異的）によって阻害されない。
８Ｃ１５は、ｈＣＭＶのＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａ遺伝子産物の発現を必要とし、２Ｃ１２、７Ｂ１３、８Ｊ１６、９Ｉ６および６Ｇ４によって認識されるエピトープと同じかまたはほぼ重複するが、７Ｉ１３（すべてＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせに特異的）によって認識されるエピトープとは異なるエピトープに結合する。
８Ｊ１６は、ｈＣＭＶのＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａ遺伝子産物の発現を必要とし、２Ｃ１２、７Ｂ１３、８Ｃ１５、９Ｉ６および６Ｇ４によって認識されるエピトープと同じかまたはほぼ重複するが、７Ｉ１３（すべてＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせに特異的）によって認識されるエピトープおよび４Ｉ２２（ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせに特異的）によって認識されるエピトープとは異なるエピトープに結合する。
９Ｉ６は、ｈＣＭＶのＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａ遺伝子産物の発現を必要とし、２Ｃ１２、７Ｂ１３、８Ｃ１５、８Ｊ１６および６Ｇ４によって認識されるエピトープと同じかまたはほぼ重複するが、７Ｉ１３（すべてＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせに特異的）によって認識されるエピトープならびに２Ｆ４および５Ａ２（ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせに特異的）によって認識されるエピトープとは異なるエピトープに結合する。
８Ｉ２１は、ｈＣＭＶのｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８およびＵＬ１３０遺伝子産物の発現を必要とし、４Ｎ１０および５Ａ２（両方ともＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせに特異的）によって認識されるエピトープと部分的に重複し得るが、１５Ｄ８（ＵＬ１２８に特異的）、１０Ｆ７、１０Ｐ３、４Ｉ２２、１Ｆ１１、２Ｆ４（すべてＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせに特異的）、２Ｃ１２、７Ｂ１３、７Ｉ１３、８Ｃ１５、８Ｊ１６、９Ｉ６および６Ｇ４（すべてＵＬ１２８、ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａの組み合わせに特異的）によって認識されるエピトープとは異なるエピトープに結合する。また、８Ｉ２１のそのエピトープへの結合は、３Ｇ１６（ｇＨに特異的）によって阻害されない。
３Ｇ１６は、１１Ｂ１２および１３Ｈ１１（両方ともｇＨに特異的）によって認識されるエピトープとは異なるｇＨのエピトープに結合する。
１１Ｂ１２は、１３Ｈ１１によって認識されるエピトープと同じかまたはほぼ重複し、３Ｇ１６（両方ともｇＨに特異的）によって認識されるエピトープとは異なるｇＨのエピトープに結合する。
１３Ｈ１１は、１１Ｂ１２によって認識されるエピトープと同じかまたはほぼ重複し、３Ｇ１６（両方ともｇＨに特異的）によって認識されるエピトープとは異なるｇＨのエピトープに結合する。
６Ｂ４は、７Ｈ３、４Ｈ９、５Ｆ１、１０Ｃ６および２Ｂ１１（すべてｇＢに特異的）によって認識されるエピトープとは異なるｇＢのエピトープを認識する。
７Ｈ３は、６Ｂ４、７Ｈ３、４Ｈ９、５Ｆ１、１０Ｃ６および２Ｂ１１（すべてｇＢに特異的）によって認識されるエピトープとは異なるｇＢのエピトープに結合する。
１０Ｃ６は、５Ｆ１、４Ｈ９および２Ｂ１１によって認識されるエピトープと同じかまたは部分的に重複するが、７Ｈ３および６Ｂ４（すべてｇＢに特異的）によって認識されるエピトープとは異なるｇＢのエピトープに結合する。
５Ｆ１は、１０Ｃ６、４Ｈ９および２Ｂ１１によって認識されるエピトープと同じかまたはほぼ重複するが、６Ｂ４および７Ｈ３（すべてｇＨに特異的）によって認識されるエピトープとは異なるｇＢのエピトープに結合する。
４Ｈ９は、５Ｆ１、１０Ｃ６および２Ｂ１１によって認識されるエピトープと同じかまたはほぼ重複するが、６Ｂ４および７Ｈ３（すべてｇＨに特異的）によって認識されるエピトープとは異なるｇＢのエピトープに結合する。
２Ｂ１１は、５Ｆ１、１０Ｃ６および４Ｈ９によって認識されるエピトープと同じかまたはほぼ重複するが、６Ｂ４および７Ｈ３（すべてｇＨに特異的）によって認識されるエピトープとは異なるｇＢのエピトープに結合する。
実施例３：抗体１５Ｄ８の中和活性の幅
ＵＬ１２８は、ＵＬ１３２−１２８座のうちで最も保存された遺伝子である。しかしながら、いくつかの臨床分離株に由来する配列をＶＲ１８１４配列と比較した場合に、１つ以上の変異を有する１０個の変異体の存在が明らかになった。そのため、我々は、ＵＬ１２８に特異的な抗体である１５Ｄ８の結合が、これらの変異のうちのいずれかによって影響を受けるかどうかを検討した。この目的のために、臨床分離株（ＶＲ４６０３−Ｍ、ＶＲ４８３６−Ｍ、ＶＲ５００１−Ｍ、ＶＲ４２５４−Ｍ、ＶＲ４９６９−Ｍ、ＶＲ４３１３−Ｍ、ＶＲ４１１６−Ｍ、ＶＲ５２３５−Ｔ、ＶＲ５０５５−Ｔ、ＶＲ４１６８−Ａ、ＶＲ１８１４−ＰＣＲ）からのＵＬ１２８の変異体の公開されているアミノ酸配列と、実験室株（Ｔｏｗｎｅ、ＴＢ４０／Ｅ、ＡＤ１６９、Ｍｅｒｌｉｎ ａｎｄ Ｔｏｌｅｄｏ）とを整列させ、記載したすべてのアミノ置換と、ＰＣＲ増幅を行うと生体外で非常に高い頻度で生成されることが分かった追加の変異（Ｆ３３Ｖ）とを含むタンパク質をコードして、遺伝子を合成した。合成遺伝子のヌクレオチド配列は次の通りであった。
Figure 2018139611
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞をＶＲ１８１４の本来のＵＬ１２８またはｐａｎ変異遺伝子でトランスフェクトし、１５Ｄ８抗体の段階希釈により染色した。図３に示すように、本来のＵＬ１２８タンパク質およびｐａｎ変異ＵＬ１２８タンパク質は、同程度の効率で１５Ｄ８によって認識された（およそ０．２μｇ／ｍＬで染色飽和）。これらの発見は、１５Ｄ８が、ＵＬ１２８でコードしたタンパク質中に高度に保存されたエピトープを認識することを示唆するものである。
本明細書で参照されるすべての特許および刊行物は、参照することにより、それらの全体が本明細書に明示的に組み込まれる。
本発明を実施する代替の様式が存在すること、また、本発明の範囲および主旨から逸脱することなく種々の変更を行うことが可能であることに留意されたい。したがって、本実施形態は、制限的なものではなく、実例として見なされるべきであり、本発明は、本明細書に提示した詳細に限定されるものではなく、添付の特許請求の範囲およびその均等物の範囲内で修正され得る。
参考文献（参照することにより、その内容は本明細書に組み込まれる）
Figure 2018139611
Figure 2018139611

Claims (39)

  1. ヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）ＵＬ１２８タンパク質のエピトープに結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶ感染を中和する、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
  2. ｈＣＭＶを９０％中和するのに必要な前記抗体の濃度は、１μｇ／ｍＬ以下である、請求項１に記載の抗体。
  3. ｈＣＭＶを９０％中和するのに必要な前記抗体の濃度は、０．１μｇ／ｍＬ以下である、請求項１に記載の抗体。
  4. ｈＣＭＶタンパク質ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８、およびＵＬ１３０、ｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、およびＵＬ１３１Ａ、またはｈＣＭＶタンパク質ＵＬ１３０およびＵＬ１３１Ａによって形成されるエピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片。
  5. 配列番号１８８〜１９３、２０４、２０５、２１０、１７４〜１７７、１４９、１７８、６５〜７０、８１〜８６、９７〜１０２、１２９〜１３４、１４５〜１５０、１１３、１６１〜１６４、１〜６、１７〜２２、３３〜３８、４９〜５４、または１１４〜１１８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含む抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片。
  6. 配列番号１８８、１７４、６５、８１、９７、１２９、１４５、１１３、１、１７、３３、および４９からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ１、配列番号１８９、２０４、１７５、６６、８２、９８、１３０、１４６、１６１、２、２、１８、３４、５０、および１１４からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ２、ならびに配列番号１９０、２０５、２１０、１７６、６７、８３、９９、１３１、１４７、１６２、３、１９、３５、５１、および１１５からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片。
  7. 配列番号１９１、１７７、６８、８４、１００、１３２、１４８、１６３、４、２０、３６、５２、および１１６からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１９２、１４９、６９、８５、１０１、１３３、５、２１、３７、５３、および１１７からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ２、ならびに配列番号１９３、１７８、７０、８６、１０２、１３４，１５０、１６４、６、２２、３８、５４、および１１８からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片。
  8. ＣＤＲＨ１に配列番号１８８、ＣＤＲＨ２に配列番号１８９、ＣＤＲＨ３に配列番号１９０；またはＣＤＲＨ１に配列番号１８８、ＣＤＲＨ２に配列番号２０４、ＣＤＲＨ３に配列番号２０５；またはＣＤＲＨ１に配列番号１８８、ＣＤＲＨ２に配列番号１８９、ＣＤＲＨ３に配列番号２１０；またはＣＤＲＨ１に配列番号１７４、ＣＤＲＨ２に配列番号１７５、ＣＤＲＨ３に配列番号１７６；またはＣＤＲＨ１に配列番号６５、ＣＤＲＨ２に配列番号６６、ＣＤＲＨ３に配列番号６７；またはＣＤＲＨ１に配列番号８１、ＣＤＲＨ２に配列番号８２、ＣＤＲＨ３に配列番号８３；またはＣＤＲＨ１に配列番号９７、ＣＤＲＨ２に配列番号９８、ＣＤＲＨ３に配列番号９９；またはＣＤＲＨ１に配列番号１２９、ＣＤＲＨ２に配列番号１３０、ＣＤＲＨ３に配列番号１３１；またはＣＤＲＨ１に配列番号１４５、ＣＤＲＨ２に配列番号１４６、ＣＤＲＨ３に配列番号１４７；またはＣＤＲＨ１に配列番号１１３、ＣＤＲＨ２に配列番号１６１、ＣＤＲＨ３に配列番号１６２；またはＣＤＲＨ１に配列番号１、ＣＤＲＨ２に配列番号２、ＣＤＲＨ３に配列番号３；またはＣＤＲＨ１に配列番号１７、ＣＤＲＨ２に配列番号１８、ＣＤＲＨ３に配列番号１９；またはＣＤＲＨ１に配列番号３３、ＣＤＲＨ２に配列番号３４、ＣＤＲＨ３に配列番号３５；またはＣＨＲＨ１に配列番号４９、ＣＨＲＨ２に配列番号５０、ＣＤＲＨ３に配列番号５１；またはＣＤＲＨ１に配列番号１１３、ＣＤＲＨ２に配列番号１１４、ＣＤＲＨ３に配列番号１１５を含む重鎖を含む、請求項６または７に記載の抗体。
  9. ＣＤＲＬ１に配列番号１９１、ＣＤＲＬ２に配列番号１９２、ＣＤＲＬ３に配列番号１９３；またはＣＤＲＬ１に配列番号１７７、ＣＤＲＬ２に配列番号１４９、ＣＤＲＬ３に配列番号１７８；またはＣＤＲＬ１に配列番号６８、ＣＤＲＬ２に配列番号６９、ＣＤＲＬ３に配列番号７０；またはＣＤＲＬ１に配列番号８４、ＣＤＲＬ２に配列番号８５、ＣＤＲＬ３に配列番号８６；またはＣＤＲＬ１に配列番号１００、ＣＤＲＬ２に配列番号１０１、ＣＤＲＬ３に配列番号１０２；またはＣＤＲＬ１に配列番号１３２、ＣＤＲＬ２に配列番号１３３、ＣＤＲＬ３に配列番号１３４；またはＣＤＲＬ１に配列番号１４８、ＣＤＲＬ２に配列番号１４９、ＣＤＲＬ３に配列番号１５０；またはＣＤＲＬ１に配列番号１６３、ＣＤＲＬ２に配列番号１４９およびＣＤＲＬ３に配列番号１６４；またはＣＤＲＬ１に配列番号４、ＣＤＲＬ２に配列番号５およびＣＤＲＬ３に配列番号６；またはＣＤＲＬ１に配列番号２０、ＣＤＲＬ２に配列番号２１、ＣＤＲＬ３に配列番号２２；またはＣＤＲＬ１に配列番号３６、ＣＤＲＬ２に配列番号３７、ＣＤＲＬ３に配列番号３８；またはＣＤＲＬ１に配列番号５２、ＣＤＲＬ２に配列番号５３、ＣＤＲＬ３に配列番号５４；またはＣＤＲＬ１に配列番号１１６、ＣＤＲＬ２に配列番号１１７、ＣＤＲＬ３に配列番号１１８を含む軽鎖を含む、請求項６〜８に記載の抗体。
  10. 配列番号２００、２０８、２１２、１８４、７７、９３、１０９、１４１、１５７、１７０、１３、２９、４５、６１、または１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む、請求項の１〜９のうちのいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
  11. 配列番号２０１、２１３、１８５、７８、９４、１１０、１４２、１５８、１７１、１４、３０、４６、６２、または１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む、請求項１〜９のうちのいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
  12. 前記抗体は、配列番号２００、配列番号２０８、配列番号２１２、配列番号１８４、配列番号７７、配列番号９３、配列番号１０９、配列番号１４１、配列番号１５７、配列番号１７０、配列番号１３、配列番号２９、配列番号４５、配列番号６１、または配列番号１２５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、前記抗体は、配列番号２０１、配列番号２１３、配列番号１８５、配列番号７８、配列番号９４、配列番号１１０、配列番号１４２、配列番号１５８、配列番号１７１、配列番号１４、配列番号３０、配列番号４６、配列番号６２、または配列番号１２６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１〜９のうちのいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
  13. 抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体は、配列番号２００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号７７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号９４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１５７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１７１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片。
  14. ｈＣＭＶ臨床分離株による内皮細胞、上皮細胞、網膜細胞、骨髄細胞、樹状細胞、線維芽細胞、または間葉系間質細胞の感染を中和する抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶを９０％中和するのに必要な抗体の濃度は、１．２μｇ／ｍＬ以下である、抗体またはその抗原結合断片。
  15. ｈＣＭＶ臨床分離株による内皮細胞、上皮細胞、網膜細胞、骨髄細胞、樹状細胞、線維芽細胞、または間葉系間質細胞の感染を中和する抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶを９０％中和するのに必要な前記抗体の濃度は、１０μｇ／ｍＬ以下であり、前記抗体は、ＭＳＬ−１０９または８Ｆ９ではない、抗体またはその抗原結合断片。
  16. 前記抗体は、ｈＣＭＶタンパク質ｇＨもしくはｇＢのエピトープ、またはｈＣＭＶタンパク質ｇＭおよびｇＮによって形成されるエピトープに結合する、請求項１４または１５のうちのいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
  17. 配列番号２１６〜２２１、２３２〜２３５、１４９、２３６、２４６〜２５１、２７８〜２８３、２９６〜３０１、３１２、３１６〜３２１、３３２、３３６〜３４１、３５２、３６０、３６１、または２６２〜２６７のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する少なくとも１つのＣＤＲ配列を含む抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片。
  18. 配列番号２１６、２３２、２４６、２７８、２９６、３１６、３３６、３５２、３６０、および２６２からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ１と、配列番号２１７、２３３、２４７、２７９、２９７、３１２、３１７、３３７、および２６３からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ２と、配列番号２１８、２３４、２４８、２８０、２９８、３１８、３３２、３３８、および２６４からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ３と、を含む抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片。
  19. 配列番号２１９、２３５、２４９、２８１、２９９、３１９、３３９、および２６５からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号２２０、１４９、２５０、２８２、３００、３２０、３４０、および２６６からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号２２１、２３６、２５１、２８３、３０１、３２１、３４１、３６１、および２６７からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ３と、を含む抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片。
  20. ＣＤＲＨ１に配列番号２１６、ＣＤＲＨ２に配列番号２１７、ＣＤＲＨ３に配列番号２１８；またはＣＤＲＨ１に配列番号２３２、ＣＤＲＨ２に配列番号２３３、ＣＤＲＨ３に配列番号２３４；またはＣＤＲＨ１に配列番号２４６、ＣＤＲＨ２に配列番号２４７、ＣＤＲＨ３に配列番号２４８；またはＣＤＲＨ１に配列番号２７８、ＣＤＲＨ２に配列番号２７９、ＣＤＲＨ３に配列番号２８０；またはＣＤＲＨ１に配列番号２９６、ＣＤＲＨ２に配列番号２９７、ＣＤＲＨ３に配列番号２９８；またはＣＤＲＨ１に配列番号２９６、ＣＤＲＨ２に配列番号３１２、ＣＤＲＨ３に配列番号２９８；またはＣＤＲＨ１に配列番号３１６、ＣＤＲＨ２に配列番号３１７、ＣＤＲＨ３に配列番号３１８；またはＣＤＲＨ１に配列番号３１６、ＣＤＲＨ２に配列番号３１７、およびＣＤＲＨ３に配列番号３３２；またはＣＤＲＨ１に配列番号３３６、ＣＤＲＨ２に配列番号３３７、ＣＤＲＨ３に配列番号３３８；またはＣＤＲＨ１に配列番号３５２、ＣＤＲＨ２に配列番号２７９、ＣＤＲＨ３に配列番号２８０；またはＣＤＲＨ１に配列番号３６０、ＣＤＲＨ２に配列番号２７９、ＣＤＲＨ３に配列番号２８０；ＣＤＲＨ１に配列番号２６２、ＣＤＲＨ２に配列番号２６３、ＣＤＲＨ３に配列番号２６４を含む重鎖を含む、請求項１８または１９に記載の抗体。
  21. ＣＤＲＬ１に配列番号２１９、ＣＤＲＬ２に配列番号２２０、ＣＤＲＬ３に配列番号２２１；またはＣＤＲＬ１に配列番号２３５、ＣＤＲＬ２に配列番号１４９、ＣＤＲＬ３に配列番号２３６；またはＣＤＲＬ１に配列番号２４９、ＣＤＲＬ２に配列番号２５０、ＣＤＲＬ３に配列番号２５１；またはＣＤＲＬ１に配列番号２８１、ＣＤＲＬ２に配列番号２８２、ＣＤＲＬ３に配列番号２８３；またはＣＤＲＬ１に配列番号２９９、ＣＤＲＬ２に配列番号３００、ＣＤＲＬ３に配列番号３０１；またはＣＤＲＬ１に配列番号３１９、ＣＤＲＬ２に配列番号３２０、ＣＤＲＬ３に配列番号３２１；またはＣＤＲＬ１に配列番号３３９、ＣＤＲＬ２に配列番号３４０、ＣＤＲＬ３に配列番号３４１；ＣＤＲＬ１に配列番号２８１、ＣＤＲＬ２に配列番号２８２、ＣＤＲＬ３に配列番号３６１；またはＣＤＲＬ１に配列番号２６５、ＣＤＲＬ２に配列番号２６６、ＣＤＲＬ３に配列番号２６７を含む軽鎖を含む、請求項１８〜２０のうちのいずれか１項に記載の抗体。
  22. 配列番号２２８、２４２、２５８、２９０、２９４、３０８、３１４、３２８、３３４、３４８、３５７、３６７、または２７４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む、請求項１４〜２１のうちのいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
  23. 配列番号２２９、２４３、２５９、２９１、３０９、３２９、３４９、３６８、または２７５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む、請求項１４〜２１のうちのいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
  24. 前記抗体は、配列番号２２８、配列番号２４２、配列番号２５８、配列番号２９０、配列番号２９４、配列番号３０８、配列番号３１４、配列番号３２８、配列番号３３４、配列番号３４８、配列番号３５７、配列番号３６７、または配列番号２７４のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、前記抗体は、配列番号２２９、配列番号２４３、配列番号２５９、配列番号２９１、配列番号３０９、配列番号３２９、配列番号３４９、配列番号３６８、または配列番号２７５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１４〜２１のうちのいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
  25. 抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体は、配列番号２２８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２４３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号３０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号３１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号３２８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号３３４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号３４８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３４９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号３５７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号３６７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３６８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号２７４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片。
  26. ブダペスト条約の規定に基づき、Ｌａｒｇｏ Ｒｏｓｓａｎａ Ｂｅｎｚｉ １０，１６１３２ Ｇｅｎｏａ（Ｉｔａｌｙ）所在のＡｄｖａｎｃｅｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ（ＡＢＣ）に、２００８年７月９日付で寄託された不死化Ｂ細胞のクローン８Ｉ２１、２Ｃ１２、８Ｃ１５、４Ｎ１０、１１Ｂ１２、３Ｇ１６、４Ｈ９、６Ｂ４、１０Ｃ６、または６Ｌ３（各アクセッション番号ＰＤ０８００５、ＰＤ０８００７、ＰＤ０８００６、ＰＤ０８００９、ＰＤ０８０１１、ＰＤ０８０１２、ＰＤ０８０１３、ＰＤ０８００４、ＰＤ０８０１４、およびＰＤ０８０１０）、および２００８年７月１６日付で寄託された不死化Ｂ細胞のクローン７Ｈ３（アクセッション番号ＰＤ０８０１７）から産生される、抗体またはその抗原結合断片。
  27. 前記抗体は、ヒト抗体、モノクローナル抗体、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖである、上記請求項のうちのいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
  28. 上記請求項のうちのいずれか１項に記載の抗体と同じエピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片。
  29. 上記請求項のうちのいずれか１項に記載の抗体と交差競合する抗体またはその抗原結合断片であって、ｈＣＭＶ感染を中和する、抗体またはその抗原結合断片。
  30. ｈＣＭＶ感染の治療のための、上記請求項のうちのいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
  31. 上記請求項のうちのいずれか１項に記載の抗体または抗体断片をコードするポリヌクレオチドを含む、核酸分子。
  32. 前記ポリヌクレオチド配列は、配列番号１９４〜１９９、２０６、２０７、２１１、２０２、２０９、２１４、２０３、２１５、１７９〜１８２，１５５，１８３、１８６、１８７、７１〜７６、７９、８０、８７〜９２、９５、９６、１０３〜１０８、１１１、１１２、１３５〜１４０、１４３、１４４、１５１〜１５６、１５９、１６０、１６５〜１６９、１７２、１７３、７〜１２、１５、１６、２３〜２８、３１、３２、３９〜４４、４７、４８、５５〜６０、６３、６４、１１９〜１２４、１２７、１２８、２２２〜２２７、２３０、２３１、２３７〜２４１、２４４、２４５、２５２〜２５７、２６０、２６１、２８４〜２８９、２９２、２９３、２９５、３０２〜３０７、３１０、３１１、３１３、３１５、３２２〜３２７、３３０、３３１、３３３、３３５、３４２〜３４７、３５０、３５１、３５３〜３５６、３５８、３５９、３６２〜３６４、３６５、３６６、３６９、３７０、２６８〜２７３、２７６、または２７７のうちのいずれか１つと、少なくとも７５％同一である、請求項３１に記載の核酸分子。
  33. 請求項１〜３０のうちのいずれか１項に記載の抗体を発現する、細胞。
  34. 請求項１〜３０のうちのいずれか１項に記載の抗体に結合するエピトープを含む、単離または精製された免疫原性ポリペプチド。
  35. 請求項１〜３０のうちのいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、請求項３１もしくは請求項３２に記載の核酸、または請求項３４に記載の免疫原性ポリペプチドと、薬学的に許容される希釈剤もしくは担体と、を含む、医薬組成物。
  36. 第１の抗体またはその抗原結合断片と、第２の抗体またはその抗原結合断片と、を含む医薬組成物であって、前記第１の抗体は、請求項１〜３０のうちのいずれか１項に記載の抗体であり、前記第２の抗体はｈＣＭＶ感染を中和する、医薬組成物。
  37. （ｉ）ｈＣＭＶ感染の治療のための医薬の製造における、（ｉｉ）ワクチンにおける、または（ｉｉｉ）ｈＣＭＶ感染の診断における、請求項１〜３０のうちのいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、請求項３１もしくは請求項３２に記載の核酸、請求項３４に記載の免疫原性ポリペプチド、または請求項３５もしくは請求項３６に記載の医薬組成物の、使用。
  38. 抗ｈＣＭＶワクチンの抗原が正しい高次構造の特定のエピトープを含有していることを確認することにより、前記ワクチンの品質を監視するための、請求項１〜３０のうちのいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片の使用。
  39. （ｉ）治療における、（ｉｉ）ｈＣＭＶ感染の治療のための医薬の製造における、（ｉｉｉ）ワクチンとしての、または（ｉｖ）ｈＣＭＶ感染を中和することが可能なリガンドのスクリーニングにおける、使用のための、請求項１〜３０のうちのいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片に特異的に結合するエピトープ。
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