JP2018086030A - Ｍｎｄプロモーターのキメラ抗原受容体 - Google Patents

Abstract

【課題】ＭＮＤプロモーターのキメラ抗原受容体を提供すること。【解決手段】キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に作動可能に連結した、骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、負の制御領域欠失、ｄｌ５８７ｒｅｖプライマー結合性部位置換（ＭＮＤ）プロモーターを含む、ベクター組成物が提供される。より詳細には、本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む改善されたベクター、これらのＣＡＲを発現するようにベクターを用いて遺伝子改変された免疫エフェクター細胞、および、種々のがんまたは腫瘍を有効に治療するための、これらの組成物の使用に関する。【選択図】なし

Description

関連出願への相互参照
この出願は、米国特許法§１１９（ｅ）の下、２０１４年４月２５日に出願された米国
仮出願第６１／９８４，５６１号（これは、その全体が参考として本明細書に援用される
）の利益を主張する。

配列表に関する記述
本出願に付随する配列表は、紙コピーの代わりにテキスト形式で提供され、これによっ
て参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含むテキストファイルの名称は、ＢＬＢ
Ｄ＿０２７＿０１ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。テキストファイルは２７ＫＢであり、
２０１５年４月２４日に作成され、本明細書の出願と同時にＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子
的に提出される。

技術分野
本発明は、がんまたは腫瘍を治療するための改善された組成物および方法に関する。よ
り詳細には、本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む改善されたベクター、これら
のＣＡＲを発現するようにベクターを用いて遺伝子改変された免疫エフェクター細胞、お
よび、種々のがんまたは腫瘍を有効に治療するための、これらの組成物の使用に関する。

がんは、世界中の重大な健康問題である。２００８〜２０１０年の率に基づくと、現在
誕生する男性および女性の４０．７６％がその生涯のうちのどこかで、何らかの形態のが
んの診断を受けることになる。男性の２０．３７％は５０歳の誕生日から７０歳の誕生日
の間にがんを発症し、比較して、女性ではそれは１５．３０％である。２０１０年１月１
日時点で、米国では、がんの病歴を有する男性および女性がおよそ１３，０２７，９１４
名（男性６，０７８，９７４名および女性６，９４８，９４０名）が生存していた。米国
では、２０１３年には１，６６０，２９０名の男性および女性（男性８５４，７９０名お
よび女性８０５，５００名）が、あらゆる部位のがんの診断を受け、５８０，３５０名の
男性および女性が死亡することが推定される。Ｈｏｗｌａｄｅｒら、２０１３年。

がんの検出、予防、および治療は進歩してきたが、普遍的に上首尾である治療戦略は未
だ実現されていない。様々な形態のがん治療の応答が混在している。化学療法および放射
線療法を含めた、がんを治療する伝統的な方法の有用性は、毒性の副作用に起因して限定
されている。治療用抗体を用いた免疫療法によってもたらされる成功も限られており、こ
れは、一部において、薬物動態プロファイルが不十分であること、抗体が血清プロテアー
ゼおよび糸球体における濾過によって迅速に排除されること、ならびに腫瘍部位への浸透
および腫瘍細胞上の標的抗原の発現レベルが限定されていることに起因する。キメラ抗原
受容体（ＣＡＲ）を発現する遺伝子改変細胞を使用するための試みでも限られた成功しか
得られておらず、これは、ＣＡＲ Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏにおける増大が不十分である
こと、細胞が注入後に迅速に消失すること、および臨床的活性が期待外れであることに起
因する。

したがって、がんを治療するための臨床的により有効な組成物および方法が当技術分野
においてなお必要とされている。

本発明は、一般に、治療用Ｔ細胞を生成するための改善されたベクター組成物を提供す
る。

種々の実施形態では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に作動可能に連結した、骨髄増殖性
肉腫ウイルスエンハンサー、負の制御領域欠失、ｄｌ５８７ｒｅｖプライマー結合性部位
置換（ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｓａｒｃｏｍａ ｖｉｒｕｓ ｅｎｈａ
ｎｃｅｒ， ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｒｅｇｉｏｎ ｄｅｌｅｔｅｄ， ｄ
ｌ５８７ｒｅｖ ｐｒｉｍｅｒ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ）
（ＭＮＤ）プロモーターを含む、ポリヌクレオチドが提供される。

特定の実施形態では、ＣＡＲは、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、αｖβ６インテグリン
、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ
３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、
ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、Ｅ
ＧＦＲファミリー、例えば、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、Ｅ
ＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ
２、ＧＤ３、’グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２
＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−
Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１
３Ｒα２、ラムダ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣ
ＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯ
Ｒ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、およびＶＥＧＦＲ２からなる群より選
択される抗原に結合する細胞外ドメイン；ＣＤ８α；ＣＤ４、ＣＤ２８、ＣＤ４５、ＰＤ
１、およびＣＤ１５２からなる群より選択されるポリペプチドに由来する膜貫通ドメイン
；ＣＤ２８、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４１ＢＢ）
、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２７３（ＰＤ−Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ−Ｌ１）、
およびＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）からなる群より選択される１種または複数種の細胞内共刺
激シグナル伝達ドメイン；ならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

一部の実施形態では、細胞外ドメインは、抗原に結合する抗体または抗原結合性断片を
含む。

特定の実施形態では、カッパ軽鎖ポリペプチドに結合する抗体または抗原結合性断片は
、ラクダＩｇ、Ｉｇ ＮＡＲ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、Ｆ（ａ
ｂ）’３断片、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ抗体（「ｓｃＦｖ」）、ビス−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２
、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタ
ンパク質（「ｄｓＦｖ」）、および単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）からなる
群より選択される。

追加的な実施形態では、カッパ軽鎖ポリペプチドに結合する抗体または抗原結合性断片
は、ｓｃＦｖである。

ある特定の実施形態では、抗体は、ヒト抗体、マウス抗体、またはヒト化抗体である。

特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８αに由来するものである。

特定の実施形態では、１種または複数種の共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８、
ＣＤ１３４、およびＣＤ１３７からなる群より選択される。

一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８、ＣＤ１３４、およびＣＤ１３７からなる群
より選択される２種またはそれ超の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。

一部の実施形態では、１種または複数種の共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８で
ある。

特定の実施形態では、１種または複数種の共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ１３４
である。

ある特定の実施形態では、１種または複数種の共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ１
３７である。

特定の実施形態では、ＣＡＲは、ヒンジ領域ポリペプチドをさらに含む。

さらなる実施形態では、ヒンジ領域ポリペプチドは、ＰＤ１、ＣＤ１５２、またはＣＤ
８αのヒンジ領域を含む。

さらなる実施形態では、ヒンジ領域ポリペプチドは、ＰＤ１のヒンジ領域を含む。

さらなる実施形態では、ヒンジ領域ポリペプチドは、ＣＤ１５２のヒンジ領域を含む。

さらなる実施形態では、ヒンジ領域ポリペプチドは、ＣＤ８αのヒンジ領域を含む。

一部の実施形態では、ＣＡＲは、スペーサー領域をさらに含む。

追加的な実施形態では、スペーサー領域ポリペプチドは、ＩｇＧ１のＣＨ２およびＣＨ
３領域を含む。

ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、シグナルペプチドをさらに含む。

特定の実施形態では、シグナルペプチドは、ＩｇＧ１重鎖シグナルポリペプチド、ＣＤ
８αシグナルポリペプチド、またはヒトＧＭ−ＣＳＦ受容体アルファシグナルペプチドを
含む。

一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２〜３のいずれか１つに示されて
いるＣＡＲをコードする。

種々の実施形態では、前述の実施形態または本明細書の他の箇所で意図されている実施
形態のいずれかにおいて意図されているＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含むベク
ターが提供される。

さらなる実施形態では、ベクターは、発現ベクターである。

追加的な実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。

特定の実施形態では、ベクターは、レトロウイルスベクターである。

特定の実施形態では、ベクターは、レンチウイルスベクターである。

追加的な実施形態では、レンチウイルスベクターは、ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ
）；ビスナ・マエディウイルス（ＶＭＶ）ウイルス；ヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ
）；ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）；ネコ免疫不全症ウイルス（ＦＩＶ）；ウシ免
疫不全症ウイルス（ＢＩＶ）；およびサル免疫不全症ウイルス（ＳＩＶ）から本質的にな
る群より選択される。

ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、左側（５’）レトロウイルスＬＴＲ、プシー（Ψ
）パッケージングシグナル、中心ポリプリントラクト／ＤＮＡフラップ（ｃＰＰＴ／ＦＬ
ＡＰ）、レトロウイルス移出エレメント；請求項１から１９までのいずれか一項に記載の
ＣＡＲに作動可能に連結したＭＮＤプロモーター；および右側（３’）レトロウイルスＬ
ＴＲをさらに含む。

追加的な実施形態では、ＣＡＲは、異種ポリアデニル化配列をさらに含む。

追加的な実施形態では、ポリアデニル化配列は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列
またはシグナルウサギβ−グロビンポリアデニル化配列である。

特定の実施形態では、ＣＡＲは、Ｂ型肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＨＰＲＥ）
またはウッドチャック転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）をさらに含む。

一部の実施形態では、５’ＬＴＲのプロモーターは、異種プロモーターで置き換えられ
ている。

ある特定の実施形態では、異種プロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロ
モーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、またはシミアンウイルス４０（
ＳＶ４０）プロモーターである。

さらなる実施形態では、５’ＬＴＲまたは３’ＬＴＲは、レンチウイルスＬＴＲである
。

追加的な実施形態では、３’ＬＴＲは、１つまたは複数の修飾を含む。

特定の実施形態では、３’ＬＴＲは、１つまたは複数の欠失を含む。

ある特定の実施形態では、３’ＬＴＲは、自己不活性化（ＳＩＮ）ＬＴＲである。

特定の実施形態では、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドは、最適化されたコザック
配列を含む。

種々の実施形態では、前述の実施形態または本明細書の他の箇所に記載の実施形態のい
ずれかに記載のベクターを含む免疫エフェクター細胞が提供される。

一部の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、Ｔリンパ球である。

種々の実施形態では、前述の実施形態または本明細書の他の箇所で意図されている実施
形態のいずれかにおいて意図されている免疫エフェクター細胞、および生理的に許容され
る賦形剤を含む組成物が提供される。

種々の実施形態では、免疫エフェクター細胞を生成する方法であって、免疫エフェクタ
ー細胞に本明細書において意図されているベクターを導入するステップと、細胞を刺激す
るステップと、細胞をＣＤ３に結合する抗体およびＣＤ２８に結合する抗体と接触させる
ことにより、細胞が増殖するように誘導するステップとを含み、それにより、免疫エフェ
クター細胞を生成する方法が提供される。

さらなる実施形態では、ベクターを導入する前に免疫エフェクター細胞を刺激し、増殖
するように誘導する。

特定の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、Ｔリンパ球を含む。

種々の実施形態では、本明細書において意図されているポリヌクレオチドを含む免疫エ
フェクター細胞を作出する方法であって、対象由来の骨髄、臍帯血または動員末梢血から
ＣＤ３４＋細胞を単離するステップと、単離されたＣＤ３４＋細胞に本明細書において意
図されているベクターを導入するステップとを含む方法が提供される。

追加的な実施形態では、ＣＤ３４＋細胞を、請求項２０から３６までのいずれか一項に
記載のベクターを導入する前に、ＦＬＴ３リガンド、ＴＰＯ、ＳＣＦ、ＩＬ−３およびＩ
Ｌ−６からなる群より選択される１種または複数種のサイトカインを用いて予備刺激する
。

種々の実施形態では、それを必要とする対象においてがんを治療する方法であって、対
象に、本明細書において意図されている組成物の治療有効量を投与するステップを含む方
法が提供される。

ある特定の実施形態では、がんは、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉腫、神経内分泌腫瘍
、神経膠芽腫、神経芽細胞腫、黒色腫、皮膚がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、前立腺
がん、肝臓がん、腎がん、膵がん、肺がん、胆管がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、食道
がん、胃がん、頭頸部がん、甲状腺髄様癌、卵巣がん、神経膠腫、リンパ腫、白血病、骨
髄腫、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性
白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、および膀胱がん（ｕｒｉｎａｒｙ ｂ
ｌａｄｄｅｒ ｃａｎｃｅｒ）からなる群より選択される。
特定の実施形態では、がんは膵がんであり、細胞外結合性ドメインはＰＳＣＡまたはＭ
ＵＣ１のエピトープに結合する。
さらなる実施形態では、がんは膀胱がん（ｂｌａｄｄｅｒ ｃａｎｃｅｒ）であり、細
胞外結合性ドメインはＰＳＣＡまたはＭＵＣ１のエピトープに結合する。

特定の実施形態では、がんは多形神経膠芽腫であり、細胞外結合性ドメインはＥＰＨＡ
２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、またはＣＳＰＧ４のエピトープに結合する。

特定の実施形態では、がんは肺がんであり、細胞外結合性ドメインはＰＳＣＡまたはＧ
Ｄ２のエピトープに結合する。

ある特定の実施形態では、がんは乳がんであり、細胞外結合性ドメインはＣＳＰＧ４ま
たはＨＥＲ２のエピトープに結合する。

一部の実施形態では、がんは黒色腫であり、細胞外結合性ドメインはＣＳＰＧ４または
ＧＤ２のエピトープに結合する。

種々の実施形態では、それを必要とする対象において血液学的悪性疾患を治療する方法
であって、対象に、本明細書において意図されている組成物の治療有効量を投与するステ
ップを含む方法が提供される。

さらなる実施形態では、血液学的悪性疾患は、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性リンパ球性
白血病（ＣＬＬ）、または非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）からなる群より選択されるＢ細
胞悪性疾患である。

特定の実施形態では、ＭＭは、顕性多発性骨髄腫、くすぶり型多発性骨髄腫、形質細胞
白血病、非分泌型骨髄腫、ＩｇＤ骨髄腫、骨硬化性骨髄腫、骨の孤立性形質細胞腫、およ
び髄外性形質細胞腫からなる群より選択される。

ある特定の実施形態では、ＮＨＬは、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病／小
リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、濾胞性リ
ンパ腫、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、およびマントル細
胞リンパ腫からなる群より選択される。
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に作動可能に連結した、骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハン
サー、負の制御領域欠失、ｄｌ５８７ｒｅｖプライマー結合性部位置換（ＭＮＤ）プロモ
ーターを含む、ポリヌクレオチド。
（項目２）
前記ＣＡＲが、以下：
ａ）アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、α_ｖβ_６インテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ
７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、
ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、Ｃ
Ｄ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲファミリー、例えば、
ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、Ｅｐ
ｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ２、ＧＤ３、’グリピカン−
３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３
＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、Ｈ
ＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３Ｒα２、ラムダ、Ｌｅｗｉ
ｓ−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、
ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＳＸ、サバイビン、
ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、およびＶＥＧＦＲ２からなる群より選択される抗原に結合する細胞
外ドメイン；
ｂ）ＣＤ８α；ＣＤ４、ＣＤ２８、ＣＤ４５、ＰＤ１、およびＣＤ１５２からなる群よ
り選択されるポリペプチドに由来する膜貫通ドメイン；
ｃ）ＣＤ２８、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４１Ｂ
Ｂ）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２７３（ＰＤ−Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ−Ｌ１
）、およびＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）からなる群より選択される１種または複数種の細胞内
共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびに
ｄ）ＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメイン
を含む、項目１に記載のポリヌクレオチド。
（項目３）
前記細胞外ドメインが、前記抗原に結合する抗体または抗原結合性断片を含む、項目２
に記載のポリヌクレオチド。
（項目４）
カッパ軽鎖ポリペプチドに結合する抗体または抗原結合性断片が、ラクダＩｇ、Ｉｇ
ＮＡＲ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、Ｆ（ａｂ）’３断片、Ｆｖ、
単鎖Ｆｖ抗体（「ｓｃＦｖ」）、ビス−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイア
ボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ
」）、および単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）からなる群より選択される、項
目２に記載のポリヌクレオチド。
（項目５）
カッパ軽鎖ポリペプチドに結合する前記抗体または前記抗原結合性断片がｓｃＦｖであ
る、項目３に記載のポリヌクレオチド。
（項目６）
前記抗体がヒト抗体、マウス抗体、またはヒト化抗体である、項目２から４までのいず
れか一項に記載のポリヌクレオチド。
（項目７）
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８αに由来するものである、項目１から６までのいずれか
一項に記載のポリヌクレオチド。
（項目８）
前記１種または複数種の共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８、ＣＤ１３４、およ
びＣＤ１３７からなる群より選択される、項目１から７までのいずれか一項に記載のポリ
ヌクレオチド。
（項目９）
前記ＣＡＲが、ＣＤ２８、ＣＤ１３４、およびＣＤ１３７からなる群より選択される２
種またはそれ超の共刺激シグナル伝達ドメインを含む、項目１から８までのいずれか一項
に記載のポリヌクレオチド。
（項目１０）
前記１種または複数種の共刺激シグナル伝達ドメインがＣＤ２８である、項目１から８
までのいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
（項目１１）
前記１種または複数種の共刺激シグナル伝達ドメインがＣＤ１３４である、項目１から
８までのいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
（項目１２）
前記１種または複数種の共刺激シグナル伝達ドメインがＣＤ１３７である、項目１から
８までのいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
（項目１３）
ヒンジ領域ポリペプチドをさらに含む、項目１から１２までのいずれか一項に記載のポ
リヌクレオチド。
（項目１４）
前記ヒンジ領域ポリペプチドが、ＣＤ８αのヒンジ領域を含む、項目１３に記載のポリ
ヌクレオチド。
（項目１５）
スペーサー領域をさらに含む、項目１から１２までのいずれか一項に記載のポリヌクレ
オチド。
（項目１６）
前記スペーサー領域ポリペプチドが、ＩｇＧ１のＣＨ２およびＣＨ３領域を含む、項目
１５に記載のポリヌクレオチド。
（項目１７）
シグナルペプチドをさらに含む、項目１から１６までのいずれか一項に記載のポリヌク
レオチド。
（項目１８）
前記シグナルペプチドが、ＩｇＧ１重鎖シグナルポリペプチド、ＣＤ８αシグナルポリ
ペプチド、またはヒトＧＭ−ＣＳＦ受容体アルファシグナルペプチドを含む、項目１７に
記載のポリヌクレオチド。
（項目１９）
配列番号２〜３のいずれか１つに示されているＣＡＲをコードする、項目１に記載のポ
リヌクレオチド。
（項目２０）
項目１から１９までのいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
（項目２１）
発現ベクターである、項目２０に記載のベクター。
（項目２２）
ウイルスベクターである、項目２０に記載のベクター。
（項目２３）
レトロウイルスベクターである、項目２０に記載のベクター。
（項目２４）
レンチウイルスベクターである、項目２０に記載のベクター。
（項目２５）
前記レンチウイルスベクターが、ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）；ビスナ・マエデ
ィウイルス（ＶＭＶ）ウイルス；ヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）；ウマ伝染性貧血
ウイルス（ＥＩＡＶ）；ネコ免疫不全症ウイルス（ＦＩＶ）；ウシ免疫不全症ウイルス（
ＢＩＶ）；およびサル免疫不全症ウイルス（ＳＩＶ）から本質的になる群より選択される
、項目２４に記載のベクター。
（項目２６）
左側（５’）レトロウイルスＬＴＲ、プシー（Ψ）パッケージングシグナル、中心ポリ
プリントラクト／ＤＮＡフラップ（ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ）、レトロウイルス移出エレメン
ト；項目１から１９までのいずれか一項に記載のＣＡＲに作動可能に連結したＭＮＤプロ
モーター；および右側（３’）レトロウイルスＬＴＲを含む、項目２０から２５までのい
ずれか一項に記載のベクター。
（項目２７）
異種ポリアデニル化配列をさらに含む、項目２６に記載のベクター。
（項目２８）
前記ポリアデニル化配列が、ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列またはシグナルウサ
ギβ−グロビンポリアデニル化配列である、項目２７に記載のベクター。
（項目２９）
Ｂ型肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＨＰＲＥ）またはウッドチャック転写後調節
エレメント（ＷＰＲＥ）をさらに含む、項目２０から２８までのいずれか一項に記載のベ
クター。
（項目３０）
前記５’ＬＴＲのプロモーターが異種プロモーターで置き換えられている、項目２６か
ら２９までのいずれか一項に記載のベクター。
（項目３１）
前記異種プロモーターがサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ラウス肉腫ウ
イルス（ＲＳＶ）プロモーター、またはシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーター
である、項目３０に記載のベクター。
（項目３２）
前記５’ＬＴＲまたは前記３’ＬＴＲがレンチウイルスＬＴＲである、項目２６から３
１までのいずれか一項に記載のベクター。
（項目３３）
前記３’ＬＴＲが１つまたは複数の修飾を含む、項目２６から３２までのいずれか一項
に記載のベクター。
（項目３４）
前記３’ＬＴＲが１つまたは複数の欠失を含む、項目２６から３３までのいずれか一項
に記載のベクター。
（項目３５）
前記３’ＬＴＲが自己不活性化（ＳＩＮ）ＬＴＲである、項目２６から３４までのいず
れか一項に記載のベクター。
（項目３６）
前記ＣＡＲをコードする前記ポリヌクレオチドが、最適化されたコザック配列を含む、
項目２６から３５までのいずれか一項に記載のベクター。
（項目３７）
項目２０から３６までのいずれか一項に記載のベクターを含む免疫エフェクター細胞。
（項目３８）
Ｔリンパ球である、項目３７に記載の免疫エフェクター細胞。
（項目３９）
項目３７または項目３８に記載の免疫エフェクター細胞および生理的に許容される賦形
剤を含む、組成物。
（項目４０）
免疫エフェクター細胞を生成する方法であって、免疫エフェクター細胞に項目２０から
３６までのいずれか一項に記載のベクターを導入するステップと、前記細胞を刺激するス
テップと、前記細胞をＣＤ３に結合する抗体およびＣＤ２８に結合する抗体と接触させる
ことにより、前記細胞が増殖するように誘導するステップとを含み、それにより、前記免
疫エフェクター細胞を生成する方法。
（項目４１）
前記ベクターを導入する前に前記免疫エフェクター細胞を刺激し、増殖するように誘導
する、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記免疫エフェクター細胞がＴリンパ球を含む、項目４０に記載の方法。
（項目４３）
項目１から１９までのいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む免疫エフェクター
細胞を作出する方法であって、対象由来の骨髄、臍帯血または動員末梢血からＣＤ３４＋
細胞を単離するステップと、単離された前記ＣＤ３４＋細胞に項目２０から３６までのい
ずれか一項に記載のベクターを導入するステップとを含む、方法。
（項目４４）
前記ＣＤ３４＋細胞を、項目２０から３６までのいずれか一項に記載のベクターを導入
する前に、ＦＬＴ３リガンド、ＴＰＯ、ＳＣＦ、ＩＬ−３およびＩＬ−６からなる群より
選択される１種または複数種のサイトカインを用いて予備刺激する、項目４３に記載の方
法。
（項目４５）
がんの治療を必要とする対象においてがんを治療する方法であって、前記対象に、項目
３９に記載の組成物の治療有効量を投与するステップを含む、方法。
（項目４６）
前記がんが、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉腫、神経内分泌腫瘍、神経膠芽腫、神経芽
細胞腫、黒色腫、皮膚がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、前立腺がん、肝臓がん、腎が
ん、膵がん、肺がん、胆管がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、頭頸部
がん、甲状腺髄様癌、卵巣がん、神経膠腫、リンパ腫、白血病、骨髄腫、急性リンパ芽球
性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキンリン
パ腫、非ホジキンリンパ腫、および膀胱がんからなる群より選択される、項目４５に記載
の方法。
（項目４７）
前記がんが膵がんであり、細胞外結合性ドメインがＰＳＣＡまたはＭＵＣ１のエピトー
プに結合する、項目４５に記載の方法。
（項目４８）
前記がんが膀胱がんであり、細胞外結合性ドメインがＰＳＣＡまたはＭＵＣ１のエピト
ープに結合する、項目４５に記載の方法。
（項目４９）
前記がんが多形神経膠芽腫であり、細胞外結合性ドメインがＥＰＨＡ２、ＥＧＦＲｖＩ
ＩＩ、またはＣＳＰＧ４のエピトープに結合する、項目４５に記載の方法。
（項目５０）
前記がんが肺がんであり、細胞外結合性ドメインがＰＳＣＡまたはＧＤ２のエピトープ
に結合する、項目４５に記載の方法。
（項目５１）
前記がんが乳がんであり、細胞外結合性ドメインがＣＳＰＧ４またはＨＥＲ２のエピト
ープに結合する、項目４５に記載の方法。
（項目５２）
前記がんが黒色腫であり、細胞外結合性ドメインがＣＳＰＧ４またはＧＤ２のエピトー
プに結合する、項目４５に記載の方法。
（項目５３）
血液学的悪性疾患の治療を必要とする対象において血液学的悪性疾患を治療する方法で
あって、前記対象に、項目３９に記載の組成物の治療有効量を投与するステップを含む、
方法。
（項目５４）
前記血液学的悪性疾患が、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、
または非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）からなる群より選択されるＢ細胞悪性疾患である、
項目５３に記載の方法。
（項目５５）
前記ＭＭが、顕性多発性骨髄腫、くすぶり型多発性骨髄腫、形質細胞白血病、非分泌型
骨髄腫、ＩｇＤ骨髄腫、骨硬化性骨髄腫、骨の孤立性形質細胞腫、および髄外性形質細胞
腫からなる群より選択される、項目５４に記載の方法。
（項目５６）
前記ＮＨＬが、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫（
ＣＬＬ／ＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、濾胞性リンパ腫、免疫芽球性大
細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、およびマントル細胞リンパ腫からなる群
より選択される、項目５４に記載の方法。

図１は、ｐＭＮＤ−ＣＤ１９ ＣＡＲ構築物の構造（Ａ）およびｐＭＮＤ−カッパＬＣ ＣＡＲ構築物の構造（Ｂ）を示す。

図２は、ｐＭＮＤ−ＣＤ１９ ＣＡＲのベクターマップを示す。

図３は、ｐＭＮＤ−カッパＬＣ ＣＡＲのベクターマップを示す。

図４は、組み込まれたｐＭＮＤ−カッパＬＣ ＣＡＲレンチウイルス粒子のベクターコピー数（ＶＣＮ）を示す。ＶＣＮを形質導入の９日後にｑ−ＰＣＲによって決定した。丸はそれぞれ、対応する改変していないＴ細胞培養物（四角）と並行して行った独特の培養物を表す。示されているデータは、６ドナーで構成された１２の独特の培養物からのものであった。平均および標準偏差が線およびエラーバーによって表されている。

図５は、ｐＭＮＤ−カッパＬＣ ＣＡＲを用いて形質導入を行ったＴ細胞におけるカッパＬＣ発現を示す。Ｔ細胞上のＣＡＲ発現を形質導入の６〜９日後にフローサイトメトリーによって決定した。丸はそれぞれ、対応する改変していないＴ細胞培養物（四角）と並行して行った独特の培養物を表す。示されているデータは、６ドナーで構成された１２の独特の培養物からのものであった。平均および標準偏差が線およびエラーバーによって表されている。

図６は、ｐＭＮＤ−ＣＤ１９ ＣＡＲレンチウイルスベクターまたはｐＥＦ１α−ＣＤ１９ ＣＡＲレンチウイルスベクターを用いて形質導入を行ったＴ細胞における同等なＣＤ１９ ＣＡＲ形質導入および発現を示す。これらのベクターを使用して、初代ヒトＴ細胞の対応する並行培養物への形質導入を行った。Ｔ細胞上のＣＡＲ発現を形質導入の６日後にフローサイトメトリーによって決定した。組み込まれたレンチウイルス粒子のベクターコピー数（ＶＣＮ）を形質導入の９日後にｑ−ＰＣＲによって決定した。

図７は、ｐＭＮＤ−カッパＬＣ ＣＡＲ−改変Ｔ細胞の腫瘍特異的反応性を示す。改変Ｔ細胞をカッパ＋Ｄａｕｄｉ細胞またはカッパ−ＨＤＬＭ−２細胞と２４時間にわたって共培養した。腫瘍特異的ＩＦＮ−γ放出をＥＬＩＳＡによってアッセイした。示されているデータは、４ドナーからの５つの独特のＴ細胞培養物からのものであった。

図８は、ｐＭＮＤ−カッパＬＣ ＣＡＲ−改変Ｔ細胞の養子移入後の、確立されたＤａｕｄｉ腫瘍の退縮を示す。確立されたＤａｕｄｉ腫瘍を有するマウスを、改変Ｔ細胞を使用して治療した。治療後の腫瘍量を、ｉｎ ｖｉｖｏイメージングにより、治療なしの対照動物と比較してモニターした。データは、２つの独立した実験を表す。

図９は、発現ＣＡＲ Ｔ細胞を使用した抗原特異的腫瘍クリアランスを示す。（Ａ）抗ＢＣＭＡ発現ＣＡＲ Ｔ細胞は、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で標識したＢＣＭＡ発現腫瘍細胞を死滅させた；蛍光をＦＡＣＳによって測定した。（Ｂ）抗ＢＣＭＡ発現ＣＡＲ Ｔ細胞を、Ｋ５６２細胞、およびＢＣＭＡを発現するように遺伝子改変したＫ５６２細胞と共培養し、２４時間後に上清を収集し、ＩＦＮ−γ放出についてＥＬＩＳＡによってアッセイした（ｎ＝３）。

配列識別子の簡単な説明
配列番号１は、骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、負の制御領域欠失、ｄｌ５８７
ｒｅｖプライマー結合性部位置換（ＭＮＤ）プロモーターのポリヌクレオチド配列を示す
。

配列番号２は、ＭＮＤプロモーター抗ＣＤ１９ ＣＡＲ構築物のポリヌクレオチド配列
を示す。

配列番号３は、ＭＮＤプロモーター抗カッパ軽鎖ＣＡＲ構築物のポリヌクレオチド配列
を示す。

詳細な説明
Ａ．概要
本発明は、一般には、これらに限定されないが、肝臓、膵臓、肺、乳房、膀胱、脳、骨
、甲状腺、腎臓、皮膚、および造血系の腫瘍またはがんを含めたがんを治療するための改
善された組成物および方法に関する。具体的には、本発明は、キメラ抗原受容体をコード
するポリヌクレオチドに作動可能に連結した、骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、負
の制御領域欠失、ｄｌ５８７ｒｅｖプライマー結合性部位置換（ＭＮＤ）プロモーターを
含むベクターを用いて遺伝子改変した免疫エフェクター細胞の養子細胞療法に関する。

遺伝学的手法により、がん細胞の免疫認識および排除を増強するための潜在的な手段が
もたらされる。有望な戦略の１つは、免疫エフェクター細胞を、腫瘍細胞に対して細胞傷
害性を向け直す（ｒｅｄｉｒｅｃｔ）キメラ抗原受容体を発現するように遺伝子操作する
ことである。しかし、腫瘍またはがんを治療するための既存の養子細胞免疫療法では、治
療用細胞におけるＣＡＲの持続的レベルの十分な発現が欠如している。したがって、その
ような療法は臨床的に望ましいものではなく、したがって、体液性免疫を節約する、Ｂ細
胞悪性疾患に対するより効率的な療法が当技術分野においてなお必要とされている。

本明細書に開示されている改善された組成物および養子細胞療法の方法により、容易に
増大させることができ、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて長期持続を示し、ＣＡＲポリペプチドの
持続的かつ十分な発現をもたらす遺伝子改変免疫エフェクター細胞がもたらされる。いか
なる特定の理論にも縛られることを望むことなく、本発明は、一部において、ＭＮＤプロ
モーターにより、休止状態のＴ細胞、活性化されたＴ細胞、および増大したＴ細胞におけ
るＣＡＲポリペプチドの持続的発現が導かれる、また、そのような発現が、本明細書にお
いて意図されている遺伝子改変免疫エフェクター細胞を、腫瘍またはがん細胞に対する細
胞傷害活性が引き出されるように効率的に向け直すために十分であるという驚くべき所見
を意図している。

一実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドに作動可
能に連結したＭＮＤプロモーターを含み、当該ＣＡＲは、標的抗原、膜貫通ドメイン、お
よび１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインに結合する細胞外ドメインを含む。

一実施形態では、Ｔ細胞を、本明細書において意図されているＣＡＲに作動可能に連結
したＭＮＤプロモーターを含むベクターを用いて遺伝子改変する。ＣＡＲを発現するＴ細
胞は、本明細書ではＣＡＲ Ｔ細胞またはＣＡＲ改変Ｔ細胞と称される。

種々の実施形態では、本明細書において意図されている遺伝子改変ＣＡＲ Ｔ細胞を、
がんまたは腫瘍を有する患者に投与する。

本発明の実施には、特にそれに反する指示がなければ、当技術分野の技術の範囲内に入
る化学、生化学、有機化学、分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ技法、遺伝学、免疫学
、および細胞生物学の従来の方法を使用し、その多くを例示目的で以下に記載する。その
ような技法は、文献において十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第３版
、２００１年）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版、１９８９年）；Ｍａｎｉａｔｉｓら、Ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（１９８２
年）；Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、２００８年７月更新
）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：
Ａ Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｒｏｍ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏ
ｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．
Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ；Ｇｌｏｖｅｒ
、ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｉ巻＆ＩＩ
巻（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ、１９８５年）；Ａｎａｎｄ、Ｔｅｃｈｎｉｑｕ
ｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｇｅｎｏｍｅｓ、（
Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９２年）；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐ
ｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ． ＨａｍｅｓおよびＳ． Ｈｉｇｇｉ
ｎｓ編、１９８４年）；Ｐｅｒｂａｌ、Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４年）；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎ
ｔｉｂｏｄｉｅｓ、（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、１９９８年）Ｃｕｒｒ
ｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｑ． Ｅ． Ｃｏｌｉｇａ
ｎ、Ａ． Ｍ． Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ、Ｄ． Ｈ． Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ、Ｅ． Ｍ．
ＳｈｅｖａｃｈおよびＷ． Ｓｔｒｏｂｅｒ編、１９９１年）；Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉ
ｅｗ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；ならびにＡｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙなどの学術誌内のモノグラフを参照されたい。

本明細書において引用された全ての刊行物、特許および特許出願は、それらの全体が参
照により本明細書に組み込まれる。

Ｂ．定義
別段の定義のない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は
、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細
書に記載の方法および材料と類似した、またはそれと等しい任意の方法および材料を本発
明の実施または試験において使用することができるが、組成物、方法および材料の好まし
い実施形態が本明細書に記載されている。本発明の目的に関して、次の用語を以下に定義
する。

「ａ（１つの）」、「ａｎ（１つの）」、および「ｔｈｅ（その）」という冠詞は、本
明細書では、その冠詞の文法上の目的語の１つまたは１つ超（すなわち、少なくとも１つ
）を指すために使用される。例として、「ａｎ（１つの）要素」とは、１つの要素または
１つ超の要素を意味する。

本明細書で使用される場合、「約」または「およそ」という用語は、参照数量、レベル
、値、数、頻度、百分率、寸法、サイズ、量、重量または長さに対して３０、２５、２０
、２５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１％と同程度変動する数量、レベ
ル、値、数、頻度、百分率、寸法、サイズ、量、重量または長さを指す。特定の実施形態
では、数値の前の「約」または「およそ」という用語は、プラスまたはマイナス１５％、
１０％、５％、または１％の範囲の値を示す。

本明細書全体を通して、文脈がそうでないことを要しない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉ
ｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と
いう単語は、規定されたステップもしくは要素またはステップもしくは要素の群を含むが
、任意の他のステップもしくは要素またはステップもしくは要素の群は排除されないこと
を意味するものと理解されたい。「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」とは、「
からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という句に続くいかなるものも含み、かつそ
れに限定されることを意味する。したがって、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ
）」という句は、列挙されている要素が必要または必須であること、および他の要素は存
在してはならないことを示す。「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎ
ｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」とは、その句の後に列挙されている要素をいずれも含み、かつ、
列挙されている要素に関して本開示に明記されている活性または作用に干渉も寄与もしな
い他の要素に限定されることを意味する。したがって、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉ
ｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という句は、列挙されている要素が必要
または必須であるが、他の要素は任意選択ではなく、それらが、列挙されている要素の活
性または作用に影響を及ぼすか否かに応じて、存在してよいまたは存在してはならないこ
とを示す。

本明細書全体を通して、「一実施形態」、「ある実施形態」、「特定の実施形態」、「
関連する実施形態」、「ある特定の実施形態」、「追加的な実施形態」または「さらなる
実施形態」またはこれらの組合せへの言及は、実施形態に関連して記載されている特定の
特徴、構造または特性が本発明の少なくとも１つの実施形態に包含されることを意味する
。したがって、本明細書全体を通して種々の箇所における前述の句の出現は、必ずしも全
てが同じ実施形態について言及しているのではない。さらに、１つまたは複数の実施形態
において、特定の特徴、構造、または特性を任意の適切な様式で組み合わせることができ
る。

Ｃ．キメラ抗原受容体
種々の実施形態では、本発明は、腫瘍細胞に対する細胞傷害性を向け直すキメラ抗原受
容体を発現するように設計されたベクターを用いて遺伝子操作した免疫エフェクター細胞
を提供する。これらの遺伝子操作された受容体は、本明細書では、キメラ抗原受容体（Ｃ
ＡＲ）と称される。ＣＡＲは、標的抗原（例えば、腫瘍抗原）に対する抗体に基づく特異
性と、Ｔ細胞受容体活性化細胞内ドメインを組み合わせて、特異的な抗腫瘍細胞免疫活性
を示すキメラタンパク質を生成する分子である。本明細書で使用される場合、「キメラ」
という用語は、異なる起源に由来する異なるタンパク質またはＤＮＡの部分で構成される
ことを記載するものである。

本明細書において意図されているベクターは、ＭＮＤプロモーター、およびＣＡＲをコ
ードするポリヌクレオチドを含む。本明細書において意図されているＣＡＲは、特異的な
標的抗原に結合する細胞外ドメイン（結合性ドメインまたは抗原特異的結合性ドメインと
も称される）、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ＣＡＲの抗原
結合性ドメインと標的細胞の表面上のその標的抗原の会合により、ＣＡＲのクラスター化
およびＣＡＲを含有する細胞への活性化刺激の送達がもたらされる。ＣＡＲの主要な特性
は、免疫エフェクター細胞特異性を向け直し、それにより、増殖、サイトカイン産生、食
作用、またはモノクローナル抗体、可溶性リガンドもしくは細胞特異的共受容体の細胞特
異的標的化能力を活用して標的抗原発現細胞の細胞死を主要組織適合性（ＭＨＣ）非依存
的に媒介することが可能な分子の産生を誘発する能力である。

特定の実施形態では、ＣＡＲは、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、α_ｖβ_６インテグリン
、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ
３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、
ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、Ｅ
ＧＦＲファミリー、例えば、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、Ｅ
ＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ
２、ＧＤ３、’グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２
＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−
Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１
３Ｒα２、ラムダ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣ
ＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯ
Ｒ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、およびＶＥＧＦＲ２からなる群より選
択される標的抗原に特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合性断片、テザーリガンド
、または共受容体の細胞外ドメインを含むがこれらに限定されない、細胞外結合性ドメイ
ン；１つまたは複数のヒンジドメインまたはスペーサードメイン；これらに限定されない
が、ＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ４５、ＰＤ１、およびＣＤ１５２由来の膜貫通ドメインを含
めた膜貫通ドメイン；これらに限定されないが、ＣＤ２８、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ
１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４１ＢＢ）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２７３
（ＰＤ−Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ−Ｌ１）、およびＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）由来の細胞
内共刺激シグナル伝達ドメインを含めた１種または複数種の細胞内共刺激シグナル伝達ド
メイン；ならびに、ＣＤ３ζまたはＦｃＲγに由来する一次シグナル伝達ドメインを含む
。

１．結合性ドメイン
特定の実施形態では、本明細書において意図されているＣＡＲは、腫瘍細胞上に発現さ
れる、標的ポリペプチド、例えば、標的抗原に特異的に結合する細胞外結合性ドメインを
含む。本明細書で使用される場合、「結合性ドメイン」、「細胞外ドメイン」、「細胞外
結合性ドメイン」、「抗原特異的結合性ドメイン」、および「細胞外抗原特異的結合性ド
メイン」という用語は、互換的に使用され、目的の標的抗原に特異的に結合する能力を有
するＣＡＲを提供する。結合性ドメインは、生体分子（例えば、細胞表面受容体または腫
瘍タンパク質、脂質、多糖、または他の細胞表面標的分子、またはその構成成分）を特異
的に認識し、それに結合する能力を有する任意のタンパク質、ポリペプチド、オリゴペプ
チド、またはペプチドを含み得る。結合性ドメインは、任意の天然に存在する、合成の、
半合成の、または組換えによって作製された、目的の生体分子の結合パートナーを含む。

「特異的な結合親和性」または「特異的に結合する」または「特異的に結合した」また
は「特異的な結合」または「特異的に標的化する」という用語は、本明細書で使用される
場合、１つの分子が別の分子にバックグラウンド結合よりも高い結合親和性で結合するこ
とを記載するものである。結合性ドメイン（または結合性ドメインを含むＣＡＲまたは結
合性ドメインを含有する融合タンパク質）は、例えば、約１０^５Ｍ^−１を超えるまたはそ
れと同等の親和性またはＫ_ａ（すなわち、単位１／Ｍの特定の結合相互作用の平衡会合定
数）で標的分子に結合するまたはそれと会合する場合、標的分子に「特異的に結合する」
。ある特定の実施形態では、結合性ドメイン（またはその融合タンパク質）は、約１０^６
Ｍ^−１、１０^７Ｍ^−１、１０^８Ｍ^−１、１０^９Ｍ^−１、１０^１０Ｍ^−１、１０^１１Ｍ^−１
、１０^１２Ｍ^−１、または１０^１３Ｍ^−１を超えるまたはそれと同等のＫａで標的に結合
する。「高親和性」結合性ドメイン（またはその単鎖融合タンパク質）とは、Ｋ_ａが少な
くとも１０^７Ｍ^−１、少なくとも１０^８Ｍ^−１、少なくとも１０^９Ｍ^−１、少なくとも１
０^１０Ｍ^−１、少なくとも１０^１１Ｍ^−１、少なくとも１０^１２Ｍ^−１、少なくとも１０
^１３Ｍ^−１、またはそれ超である結合性ドメインを指す。

あるいは、親和性は、単位Ｍの、特定の結合相互作用の平衡解離定数（Ｋ_ｄ）と定義す
ることができる（例えば、１０^−５Ｍ〜１０^−１３Ｍまたはそれ未満）。本開示による結
合性ドメインポリペプチドおよびＣＡＲタンパク質の親和性は、従来の技法を使用して、
例えば、競合ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法）によって、または結合会合、または
標識したリガンドを使用した置換アッセイによって、または、Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．
、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪから入手可能なＢｉａｃｏｒｅ Ｔ１００などの表面プラ
ズモン共鳴デバイス、またはそれぞれＣｏｒｎｉｎｇおよびＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒか
ら入手可能なＥＰＩＣ ｓｙｓｔｅｍもしくはＥｎＳｐｉｒｅなどの光学バイオセンサー
技術を使用して、容易に決定することができる（例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄら（１９４
９年）Ａｎｎ． Ｎ．Ｙ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ５１巻：６６０頁；および米国特許
第５，２８３，１７３号；同第５，４６８，６１４号、または等価物も参照されたい）。

一実施形態では、特異的な結合の親和性は、バックグラウンド結合の約２倍、バックグ
ラウンド結合の約５倍、バックグラウンド結合の約１０倍、バックグラウンド結合の約２
０倍、バックグラウンド結合の約５０倍、バックグラウンド結合の約１００倍、またはバ
ックグラウンド結合の約１０００倍またはそれ超である。

特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外結合性ドメインは、抗体またはその抗原結合性断
片を含む。「抗体」とは、免疫細胞によって認識されるものなどの、抗原決定基を含有す
るペプチド、脂質、多糖、または核酸などの抗原のエピトープを特異的に認識し、それに
結合する、少なくとも軽鎖または重鎖免疫グロブリン可変領域を含むポリペプチドである
結合性物質を指す。

「抗原（Ａｇ）」とは、動物に注射または吸収される組成物（例えば、腫瘍に特異的な
タンパク質を含むものなど）を含めた、動物における抗体の産生またはＴ細胞応答を刺激
することが可能な化合物、組成物、または物質を指す。抗原は、開示されている抗原など
の異種抗原によって誘導されるものを含めた、特定の体液性または細胞性免疫の産物と反
応する。「標的抗原」または「目的の標的抗原」とは、本明細書において意図されている
ＣＡＲの結合性ドメインが結合するように設計された抗原である。特定の実施形態では、
標的抗原は、結合性ドメインが特異的に結合するペプチド、脂質、多糖、または核酸のエ
ピトープである。好ましい実施形態では、抗原は、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、α_ｖβ
_６インテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、
ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０
、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４
、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲファミリー、例えば、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ
、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ
、ＦＲα、ＧＤ２、ＧＤ３、’グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１
、ＨＬＡ−Ａ２＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ
−１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１
Ｒα、ＩＬ−１３Ｒα２、ラムダ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍ
ｕｃ１６、ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、
ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、またはＶＥＧＦＲ２ポ
リペプチドのエピトープである。

「エピトープ」または「抗原決定基」とは、結合性物質が結合する抗原の領域を指す。
エピトープは、連続したアミノ酸、またはタンパク質の三次フォールディングによって並
置される連続していないアミノ酸のどちらで形成されたものであってもよい。連続したア
ミノ酸から形成されたエピトープは、一般には変性溶媒に曝露しても保持されるが、三次
フォールディングによって形成されたエピトープは、一般には変性溶媒で処理すると失わ
れる。エピトープは、一般には、少なくとも３、より通常は少なくとも５、約９、または
約８〜１０アミノ酸を独特の空間的コンフォメーションで含む。

抗体は、その抗原結合性断片、例えば、ラクダＩｇ、Ｉｇ ＮＡＲ、Ｆａｂ断片、Ｆａ
ｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’_２断片、Ｆ（ａｂ）’_３断片、Ｆｖ、単鎖Ｆｖタンパク質（「ｓ
ｃＦｖ」）、ビス−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）_２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボデ
ィ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、および単一ド
メイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）など、ならびに抗原結合に関与する全長抗体の一部
を含む。この用語は、キメラ抗体（例えば、ヒト化マウス抗体）、ヘテロコンジュゲート
抗体（例えば、二重特異性抗体など）およびその抗原結合性断片などの遺伝子操作された
形態も含む。Ｐｉｅｒｃｅ Ｃａｔａｌｏｇ ａｎｄ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、１９９４年〜
１９９５年（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）；Ｋ
ｕｂｙ， Ｊ．、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第３版、Ｗ． Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃ
ｏ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９７年も参照されたい。

当業者には理解され、本明細書の他の箇所に記載の通り、完全な抗体は、２つの重鎖と
２つの軽鎖を含む。各重鎖は、可変領域、ならびに第１、第２、および第３の定常領域か
らなり、各軽鎖は、可変領域および定常領域からなる。哺乳動物の重鎖はα、δ、ε、γ
およびμに分類され、哺乳動物の軽鎖はλまたはκに分類される。α、δ、ε、γおよび
μ重鎖を含む免疫グロブリンは、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ａ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、
およびＩｇＭに分類される。完全な抗体は「Ｙ」形状を形成する。Ｙの幹（ｓｔｅｍ）は
、互いと結合した２つの重鎖の第２および第３の定常領域（および、ＩｇＥおよびＩｇＭ
に関しては第４の定常領域）からなり、ヒンジにおいてジスルフィド結合（鎖間）が形成
される。重鎖γ、α、およびδは、３つのタンデムな（インライン）Ｉｇドメインで構成
される定常領域、およびさらなる柔軟性のためのヒンジ領域を有し、重鎖μおよびεは、
４つの免疫グロブリンドメインで構成される定常領域を有する。第２および第３の定常領
域は、それぞれ「ＣＨ２ドメイン」および「ＣＨ３ドメイン」と称される。Ｙの各腕（ａ
ｒｍ）は、単一の軽鎖の可変領域および定常領域と結合した単一の重鎖の可変領域および
第１の定常領域を含む。軽鎖および重鎖の可変領域は抗原結合に関与する。

軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」とも称され
る３つの超可変領域が間に存在する「フレームワーク」領域を含有する。ＣＤＲは、例え
ば、Ｋａｂａｔら（Ｗｕ， ＴＴおよびＫａｂａｔ， Ｅ． Ａ．、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ
． １３２巻（２号）：２１１〜５０頁、（１９７０年）；Ｂｏｒｄｅｎ， Ｐ．および
Ｋａｂａｔ Ｅ． Ａ．、ＰＮＡＳ、８４巻：２４４０〜２４４３頁（１９８７年）；（
これによって参照により組み込まれるＫａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏ
ｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐ
ａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、１９９
１年を参照されたい）による配列によって、または、Ｃｈｏｔｈｉａら（Ｃｈｏｉｔｈｉ
ａ， Ｃ．およびＬｅｓｋ， Ａ．Ｍ．、Ｊ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．、１９６巻（４号）
：９０１〜９１７頁（１９８７年）、Ｃｈｏｉｔｈｉａ、Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、３４２
巻：８７７〜８８３頁（１９８９年））による構造によってなど、従来の方法によって定
義または同定することができる。

異なる軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列は、ヒトなどの種の中で比較的保存
されている。構成要素である軽鎖および重鎖の組み合わせたフレームワーク領域である抗
体のフレームワーク領域はＣＤＲを３次元空間内に位置付け、整列させるのに役立つ。Ｃ
ＤＲは、主に、抗原のエピトープへの結合に関与する。各鎖のＣＤＲは、一般には、Ｎ末
端から開始して逐次的に番号が付され、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と称され、
また、一般には、特定のＣＤＲが位置する鎖によって同定される。したがって、抗体の重
鎖の可変ドメインに位置するＣＤＲはＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３と称さ
れ、抗体の軽鎖の可変ドメインに位置するＣＤＲはＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤ
ＲＬ３と称される。異なる特異性（すなわち、異なる抗原に対する異なる結合部位）を有
する抗体は異なるＣＤＲを有する。ＣＤＲは抗体間で変動するが、抗原結合に直接関与す
るのはＣＤＲ内の限られた数のアミノ酸位置である。ＣＤＲ内のこれらの位置は、特異性
決定残基（ＳＤＲ）と称される。

「Ｖ_Ｈ」または「ＶＨ」への言及は、抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、また
は本明細書に開示されている他の抗体断片のものを含めた、免疫グロブリン重鎖の可変領
域を指す。「Ｖ_Ｌ」または「ＶＬ」への言及は、抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａ
ｂ、または本明細書に開示されている他の抗体断片のものを含めた、免疫グロブリン軽鎖
の可変領域を指す。

「モノクローナル抗体」は、Ｂリンパ球の単一のクローンによって、または単一の抗体
の軽鎖遺伝子および重鎖遺伝子がトランスフェクトされた細胞によって産生される抗体で
ある。モノクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって、例えば、骨髄腫細胞と免疫
脾臓細胞の融合によるハイブリッドの抗体形成細胞を作出することにより産生される。モ
ノクローナル抗体はヒト化モノクローナル抗体を含む。

「キメラ抗体」は、１つの種、例えばヒトなどに由来するフレームワーク残基と、別の
種、例えばマウスなどに由来するＣＤＲ（一般に、抗原結合を付与する）を有する。特定
の好ましい実施形態では、本明細書において意図されているＣＡＲは、キメラ抗体または
その抗原結合性断片である抗原特異的結合性ドメインを含む。

ある特定の好ましい実施形態では、抗体は、腫瘍細胞上の表面タンパク質に特異的に結
合するヒト化抗体（例えば、ヒト化モノクローナル抗体など）である。「ヒト化」抗体は
、ヒトフレームワーク領域と非ヒト（例えば、マウス、ラット、または合成）免疫グロブ
リン由来の１つまたは複数のＣＤＲとを含む免疫グロブリンである。ＣＤＲをもたらす非
ヒト免疫グロブリンは「ドナー」と称され、フレームワークをもたらすヒト免疫グロブリ
ンは「アクセプター」と称される。一実施形態では、ヒト化免疫グロブリンにおけるＣＤ
Ｒの全てがドナー免疫グロブリンに由来するものである。定常領域は存在する必要はない
が、存在する場合には、ヒト免疫グロブリン定常領域と実質的に同一、すなわち、少なく
とも約８５〜９０％、例えば、約９５％またはそれ超同一でなければならない。したがっ
て、おそらくＣＤＲ以外のヒト化免疫グロブリンの全ての部分が、天然ヒト免疫グロブリ
ン配列の対応する部分と実質的に同一である。ヒト化または他のモノクローナル抗体は、
抗原結合または他の免疫グロブリンの機能に実質的に影響を及ぼさない追加的な保存的ア
ミノ酸置換を有してよい。ヒト化抗体は、遺伝子工学によって構築することができる（例
えば、米国特許第５，５８５，０８９号を参照されたい）。

特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外結合性ドメインは、これらに限定されないが、ラ
クダＩｇ（ラクダ科動物抗体（ＶＨＨ））、Ｉｇ ＮＡＲ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、
Ｆ（ａｂ）’２断片、Ｆ（ａｂ）’３断片、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ抗体（「ｓｃＦｖ」）、ビス
−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、ダイアボディ（ｄｉａ
ｂｏｄｙ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）
、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、および単一ドメイン抗体（ｓｄ
Ａｂ、ナノボディ（Ｎａｎｏｂｏｄｙ））を含めた、抗体またはその抗原結合性断片を含
む。

「ラクダＩｇ」または「ラクダ科動物ＶＨＨ」とは、本明細書で使用される場合、重鎖
抗体の最小の公知の抗原結合単位を指す（Ｋｏｃｈ−Ｎｏｌｔｅら、ＦＡＳＥＢ Ｊ．、
２１巻：３４９０〜３４９８頁（２００７年））。「重鎖抗体」または「ラクダ科動物抗
体」とは、ＶＨドメインを２つ含有し、軽鎖を含有しない抗体を指す（Ｒｉｅｃｈｍａｎ
ｎ Ｌ．ら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１巻：２５〜３８頁（１９
９９年）；ＷＯ９４／０４６７８；ＷＯ９４／２５５９１；米国特許第６，００５，０７
９号）。

「ＩｇＮＡＲ」または「免疫グロブリン新抗原受容体（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ
ｎｅｗ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）」とは、１つの可変新抗原受容体（ｖａ
ｒｉａｂｌｅ ｎｅｗ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）（ＶＮＡＲ）ドメインおよ
び５つの定常新抗原受容体（ｃｏｎｓｔａｎｔ ｎｅｗ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔ
ｏｒ）（ＣＮＡＲ）ドメインのホモ二量体からなるサメ免疫レパートリーに由来する抗体
のクラスを指す。ＩｇＮＡＲは、最小の公知の免疫グロブリンに基づくタンパク質足場の
いくつかを表し、高度に安定であり、効率的な結合特性を有する。固有の安定性は、（ｉ
）マウス抗体において見いだされる従来の抗体ＶＨおよびＶＬドメインと比較して、相当
数の、荷電しかつ表面に露出した親水性の残基をもたらす、基礎をなすＩｇ足場；ならび
に（ｉｉ）ループ間ジスルフィド架橋、およびループ内水素結合のパターンを含めた相補
性決定領域（ＣＤＲ）ループ内の安定化構造的特徴の両方に起因し得る。

抗体のパパイン消化により、それぞれが単一の抗原結合性部位を有する、「Ｆａｂ」断
片と称される２つの同一の抗原結合性断片、および容易に結晶化できることが名称に反映
されている、残りの「Ｆｃ」断片が生じる。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位を
有し、それでも抗原と架橋結合することが可能なＦ（ａｂ’）２断片がもたらされる。

「Ｆｖ」は、完全な抗原結合性部位を含有する最小の抗体断片である。一実施形態では
、二本鎖Ｆｖ種は、密接に非共有結合により会合した１つの重鎖可変ドメインと１つの軽
鎖可変ドメインの二量体からなる。単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）種では、１つの重鎖可変ドメイ
ンと１つの軽鎖可変ドメインを、柔軟なペプチドリンカーによって共有結合により連結す
ることができ、したがって、軽鎖および重鎖が、二本鎖Ｆｖ種におけるものと類似した「
二量体」構造に会合し得る。この立体配置では、各可変ドメインの３つの超可変領域（Ｈ
ＶＲ）が相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合性部位を規定する。集合的
に、６つのＨＶＲにより、抗体に抗原結合特異性が付与される。しかし、単一の可変ドメ
イン（または抗原に特異的な３つのＨＶＲのみを含む、Ｆｖの半分）でさえ、親和性は結
合性部位全体よりも低いが、抗原を認識し、それに結合する能力を有する。

Ｆａｂ断片は、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含有し、軽鎖の定常ドメイ
ンおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）も含有する。Ｆａｂ’断片は、Ｆａｂ断片
とは、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端において抗体ヒンジ領域由来の１つまたは複
数のシステインを含めた数個の残基が付加されていることによって異なる。Ｆａｂ’−Ｓ
Ｈは、本明細書では、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離のチオール基を有
するＦａｂ’に対する名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元々、間にヒンジシステ
インを有するＦａｂ’断片の対として作製された。抗体断片の他の化学的カップリングも
公知である。

「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合性部位を有する抗体断片を指し、この
断片は、同じポリペプチド鎖内で接続した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と軽鎖可変ドメイン
（ＶＬ）（ＶＨ−ＶＬ）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間での対形成が可能になるに
は短すぎるリンカーを使用することにより、ドメインは、強制的に別の鎖の相補的なドメ
インと対形成し、２つの抗原結合性部位が創出される。ダイアボディは二価または二特異
性であってよい。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ１９９３／０１１
６１；Ｈｕｄｓｏｎら、Ｎａｔ． Ｍｅｄ． ９巻：１２９〜１３４頁（２００３年）；
およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９０巻：６４４４〜６４４８頁（１９
９３年）においてより詳細に記載されている。トリアボディおよびテトラボディもＨｕｄ
ｓｏｎら、Ｎａｔ． Ｍｅｄ． ９巻：１２９〜１３４頁（２００３年）に記載されてい
る。

「単一ドメイン抗体」または「ｓｄＡｂ」または「ナノボディ」とは、抗体重鎖の可変
領域（ＶＨドメイン）または抗体軽鎖の可変領域（ＶＬドメイン）からなる抗体断片を指
す（Ｈｏｌｔ， Ｌ．ら、Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２１巻（
１１号）：４８４〜４９０頁）。

「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、
これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖内にいずれかの方向で存在する（例えば、Ｖ
Ｌ−ＶＨまたはＶＨ−ＶＬ）。一般に、ｓｃＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬド
メインの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、それにより、ｓｃＦｖが抗原結合のた
めの所望の構造を形成することが可能になる。ｓｃＦｖの概説については、例えば、Ｐｌ
ｕｃｋｔｈｕｅｎ、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ
Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、１１３巻、ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編、（Ｓｐｒｉ
ｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９４年）、２６９〜３１５頁を参照さ
れたい。

好ましい実施形態では、本明細書において意図されているＣＡＲは、ｓｃＦｖであり、
マウス、ヒトまたはヒト化ｓｃＦｖであってよい抗原特異的結合性ドメインを含む。単鎖
抗体は、所望の標的に特異的なハイブリドーマのＶ領域遺伝子からクローニングすること
ができる。そのようなハイブリドーマの作製は、常套的なものになっている。重鎖可変領
域（Ｖ_Ｈ）および軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）のクローニングに使用することができる技法は、
例えば、Ｏｒｌａｎｄｉら、ＰＮＡＳ、１９８９年；８６巻：３８３３〜３８３７頁に記
載されている。特定の実施形態では、ｓｃＦｖである抗原特異的結合性ドメインは、κま
たはλ軽鎖ポリペプチドに結合する。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、アルファ葉
酸受容体、５Ｔ４、α_ｖβ_６インテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩ
Ｘ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、Ｃ
Ｄ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１
７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲファミリー、例えば、ＥｒｂＢ２（ＨＥ
Ｒ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡ
Ｍ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ２、ＧＤ３、’グリピカン−３（ＧＰＣ３）、
ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、Ｈ
ＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ
−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３Ｒα２、ラムダ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、カッパ、
メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１
、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥ
Ｍ、またはＶＥＧＦＲ２ポリペプチドに結合する。

例示的なヒト化抗原特異的結合性ドメインは、少なくとも１つのヒトフレームワーク領
域を含む、腫瘍抗原に特異的な免疫グロブリン可変領域である。「ヒトフレームワーク領
域」とは、ヒト免疫グロブリン可変領域の野生型（すなわち、天然に存在する）フレーム
ワーク領域、領域内のアミノ酸の約５０％未満（例えば、好ましくは約４５％、４０％、
３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、もしくは１％未満）が欠失しているも
しくは置換されている（例えば、対応する位置の非ヒト免疫グロブリンフレームワーク領
域の１つもしくは複数のアミノ酸残基で）ヒト免疫グロブリン可変領域の変更されたフレ
ームワーク領域、または、領域内のアミノ酸の約５０％未満（例えば、４５％、４０％、
３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、または５％未満）が欠失しているもしくは置
換されている（例えば、露出した残基の位置において、および／または対応する位置のヒ
ト免疫グロブリンフレームワーク領域の１つまたは複数のアミノ酸残基で）非ヒト免疫グ
ロブリン可変領域の変更されたフレームワーク領域を指し、したがって、一態様では、免
疫原性が低下している。

ある特定の実施形態では、ヒトフレームワーク領域は、ヒト免疫グロブリン可変領域の
野生型フレームワーク領域である。ある特定の他の実施形態では、ヒトフレームワーク領
域は、１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの位置においてアミノ酸の欠失または置換を有
する、ヒト免疫グロブリン可変領域の変更されたフレームワーク領域である。他の実施形
態では、ヒトフレームワーク領域は、１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの位置において
アミノ酸の欠失または置換を有する、非ヒト免疫グロブリン可変領域の変更されたフレー
ムワーク領域である。

特定の実施形態では、抗原特異的結合性ドメインは、ヒト軽鎖ＦＲ１、ヒト重鎖ＦＲ１
、ヒト軽鎖ＦＲ２、ヒト重鎖ＦＲ２、ヒト軽鎖ＦＲ３、ヒト重鎖ＦＲ３、ヒト軽鎖ＦＲ４
、およびヒト重鎖ＦＲ４から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ
、７つまたは８つのヒトフレームワーク領域（ＦＲ）含む。

抗原特異的結合性ドメインに存在してよいヒトＦＲとしては、本明細書において提供さ
れる例示的なＦＲの１つまたは２つのアミノ酸が置換されているまたは欠失している、例
示的なＦＲのバリアントも挙げられる。

ある特定の実施形態では、ヒト化抗原特異的結合性ドメインは、（ａ）ヒト軽鎖ＦＲ１
、ヒト軽鎖ＦＲ２、ヒト軽鎖ＦＲ３、およびヒト軽鎖ＦＲ４を含むヒト化軽鎖可変領域、
ならびに（ｂ）ヒト重鎖ＦＲ１、ヒト重鎖ＦＲ２、ヒト重鎖ＦＲ３、およびヒト重鎖ＦＲ
４を含むヒト化重鎖可変領域を含む。

本明細書において提供される抗原特異的結合性ドメインは、１つ、２つ、３つ、４つ、
５つ、または６つのＣＤＲも含む。そのようなＣＤＲは、軽鎖のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２
およびＣＤＲＬ３、ならびに重鎖のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３から選択さ
れる非ヒトＣＤＲまたは変更された非ヒトＣＤＲであってよい。ある特定の実施形態では
、抗原特異的結合性ドメインは、（ａ）軽鎖ＣＤＲＬ１、軽鎖ＣＤＲＬ２、および軽鎖Ｃ
ＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域、ならびに（ｂ）重鎖ＣＤＲＨ１、重鎖ＣＤＲＨ２、および
重鎖ＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含む。

２．リンカー
ある特定の実施形態では、本明細書において意図されているＣＡＲは、分子の適切な間
隔およびコンフォメーションのために付加される、種々のドメイン間、例えば、Ｖ_Ｈドメ
インとＶ_Ｌドメインの間にリンカー残基を含んでよい。本明細書において意図されている
ＣＡＲは、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つまたはそれ超のリンカーを含み得る。特
定の実施形態では、リンカーの長さは、約１〜約２５アミノ酸、約５〜約２０アミノ酸、
または約１０〜約２０アミノ酸、または間に入る任意のアミノ酸の長さである。一部の実
施形態では、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１
３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、また
はそれ超のアミノ酸長である。

リンカーの実例としては、グリシンポリマー（Ｇ）_ｎ；グリシン−セリンポリマー（Ｇ
_１−５Ｓ_１−５）_ｎ（式中、ｎは、少なくとも１、２、３、４、または５の整数である）
；グリシン−アラニンポリマー；アラニン−セリンポリマー；および当技術分野で公知の
他の柔軟なリンカーが挙げられる。グリシンおよびグリシン−セリンポリマーは、比較的
構造化されておらず、したがって、本明細書に記載のＣＡＲなどの融合タンパク質のドメ
イン間の中性テザーとして機能することが可能であり得る。グリシンはアラニンに対して
さえ、それよりも有意に多くｐｈｉ−ｐｓｉ空間に近づき、また、側鎖が長い残基よりも
制限がはるかに少ない（Ｓｃｈｅｒａｇａ、Ｒｅｖ． Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｃ
ｈｅｍ． １１１７３〜１４２頁（１９９２年）を参照されたい）。特定の実施形態では
、ＣＡＲの設計には、全体的にまたは部分的に柔軟であるリンカーを含めることができ、
したがって、リンカーは、所望のＣＡＲ構造をもたらすために、柔軟なリンカーならびに
より柔軟性の低い構造を付与する１つまたは複数の部分を含んでよいことが当業者には認
識されよう。

他の例示的なリンカーとしては、これらに限定されないが、以下のアミノ酸配列：ＧＧ
Ｇ；ＤＧＧＧＳ（配列番号４）；ＴＧＥＫＰ（配列番号５）（例えば、Ｌｉｕら、ＰＮＡ
Ｓ ５５２５〜５５３０頁（１９９７年）を参照されたい）；ＧＧＲＲ（配列番号６）（
Ｐｏｍｅｒａｎｔｚら、１９９５年、上記）；（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（式中、＝１、２、３、
４または５）（配列番号７）（Ｋｉｍら、ＰＮＡＳ ９３巻、１１５６〜１１６０頁（１
９９６年）；ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＶＤ（配列番号８）（Ｃｈａｕｄｈａｒｙら、１
９９０年、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． ８７巻：１
０６６〜１０７０頁）；ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号９）（Ｂｉｒ
ｄら、１９８８年、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２巻：４２３〜４２６頁）、ＧＧＲＲＧＧＧＳ
（配列番号１０）；ＬＲＱＲＤＧＥＲＰ（配列番号１１）；ＬＲＱＫＤＧＧＧＳＥＲＰ（
配列番号１２）；ＬＲＱＫｄ（ＧＧＧＳ）_２ＥＲＰ（配列番号１３）が挙げられる。ある
いは、柔軟なリンカーは、ＤＮＡ結合性部位とペプチド自体の両方をモデリングすること
が可能なコンピュータプログラムを使用して（ＤｅｓｊａｒｌａｉｓおよびＢｅｒｇ、Ｐ
ＮＡＳ ９０巻：２２５６〜２２６０頁（１９９３年）、ＰＮＡＳ ９１巻：１１０９９
〜１１１０３頁（１９９４年）、またはファージディスプレイ法によって合理的に設計す
ることができる。

特定の実施形態では、ＣＡＲは、可変領域連結配列をさらに含むｓｃＦＶを含む。「可
変領域連結配列」とは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域を接続し、２つのサブ結合性ドメイ
ンの相互作用に適合するスペーサー機能をもたらすアミノ酸配列であり、したがって、結
果生じるポリペプチドは、同じ軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含む抗体と同じ標的分
子に対する特異的な結合親和性を保持する。一実施形態では、可変領域連結配列は、１、
２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、
１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、またはそれ超のアミノ酸長である。
特定の実施形態では、可変領域連結配列は、グリシン−セリンポリマー（Ｇ_１−５Ｓ_１−
５）_ｎ（式中、ｎは、少なくとも１、２、３、４、または５の整数である）を含む。別の
実施形態では、可変領域連結配列は、（Ｇ_４Ｓ）_３アミノ酸リンカーを含む。

３．スペーサードメイン
特定の実施形態では、ＣＡＲの結合性ドメインの後ろに、１つまたは複数の「スペーサ
ードメイン」が続き、これは、抗原結合性ドメインをエフェクター細胞表面から離して適
切な細胞間接触、抗原結合および活性化を可能にする領域を指す（Ｐａｔｅｌら、Ｇｅｎ
ｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、１９９９年；６巻：４１２〜４１９頁）。ヒンジドメインは、天然
、合成、半合成、または組換え供給源のいずれかに由来するものであってもよい。ある特
定の実施形態では、スペーサードメインは、これらに限定されないが、１つまたは複数の
重鎖定常領域、例えば、ＣＨ２およびＣＨ３を含めた、免疫グロブリンの部分である。ス
ペーサードメインは、天然に存在する免疫グロブリンヒンジ領域または変更された免疫グ
ロブリンヒンジ領域のアミノ酸配列を含んでよい。

一実施形態では、スペーサードメインは、ＩｇＧ１のＣＨ２およびＣＨ３を含む。

４．ヒンジドメイン
ＣＡＲの結合性ドメインの後ろには、一般に、１つまたは複数の「ヒンジドメイン」が
続き、これは、抗原結合性ドメインをエフェクター細胞表面から離して位置づけ適切な細
胞間接触、抗原結合および活性化を可能にすることにおいて役割を果たす。ＣＡＲは、一
般に、結合性ドメインと膜貫通ドメイン（ＴＭ）の間に１つまたは複数のヒンジドメイン
を含む。ヒンジドメインは、天然、合成、半合成、または組換え供給源のいずれかに由来
するものであってもよい。ヒンジドメインは、天然に存在する免疫グロブリンヒンジ領域
または変更された免疫グロブリンヒンジ領域のアミノ酸配列を含んでよい。

「変更されたヒンジ領域」とは、（ａ）最大３０％のアミノ酸の変化（例えば、最大２
５％、２０％、１５％、１０％、もしくは５％のアミノ酸の置換もしくは欠失）を有する
天然に存在するヒンジ領域、（ｂ）最大３０％のアミノ酸の変化（例えば、最大２５％、
２０％、１５％、１０％、もしくは５％アミノ酸の置換もしくは欠失）を有する、長さが
少なくとも１０アミノ酸（例えば、少なくとも１２、１３、１４もしくは１５アミノ酸）
である天然に存在するヒンジ領域の一部、または（ｃ）コアヒンジ領域（長さが４、５、
６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５、もしくは少なくとも４
、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５アミノ酸であり得
る）を含む天然に存在するヒンジ領域の一部を指す。ある特定の実施形態では、天然に存
在する免疫グロブリンヒンジ領域内の１つまたは複数のシステイン残基が、１つまたは複
数の他のアミノ酸残基（例えば、１つまたは複数のセリン残基）で置換されていてよい。
変更された免疫グロブリンヒンジ領域は、その代わりにまたはそれに加えて、別のアミノ
酸残基（例えば、セリン残基）で置換された野生型免疫グロブリンヒンジ領域のプロリン
残基を有する。

本明細書に記載のＣＡＲでの使用に適した他の例示的なヒンジドメインとしては、ＣＤ
８α、ＣＤ４、ＣＤ２８およびＣＤ７などの１型膜タンパク質の細胞外領域に由来するヒ
ンジ領域が挙げられ、これは、これらの分子由来の野生型ヒンジ領域であってもよく、変
更することもできる。別の実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αヒンジ領域を含む
。

５．膜貫通（ＴＭ）ドメイン
「膜貫通ドメイン」は、細胞外結合性部分と細胞内シグナル伝達ドメインを融合し、Ｃ
ＡＲを免疫エフェクター細胞の原形質膜に係留する、ＣＡＲの部分である。ＴＭドメイン
は、天然、合成、半合成、または組換え供給源のいずれかに由来するものであってもよい
。ＴＭドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータまたはゼータ鎖、ＣＤ３イプシロン
、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ３３、
ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＰＤ−
１、およびＣＤ１５４由来であってよい（すなわち、少なくともそれらの膜貫通領域（複
数可）を含み得る）。特定の実施形態では、ＴＭドメインは、合成されたものであり、ロ
イシンおよびバリンなどの疎水性残基を主に含む。

一実施形態では、本明細書において意図されているＣＡＲは、ＣＤ８αに由来するＴＭ
ドメインを含む。別の実施形態では、本明細書において意図されているＣＡＲは、ＣＤ８
αに由来するＴＭドメイン、ならびに、ＣＡＲのＴＭドメインと細胞内シグナル伝達ドメ
インを連結する、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸の間の長さ
であることが好ましい短いオリゴペプチドリンカーまたはポリペプチドリンカーを含む。
グリシン−セリンリンカーは、特に適切なリンカーをもたらす。

６．細胞内シグナル伝達ドメイン
特定の実施形態では、本明細書において意図されているＣＡＲは、細胞内シグナル伝達
ドメインを含む。「細胞内シグナル伝達ドメイン」とは、標的抗原への有効なＣＡＲ結合
のメッセージを免疫エフェクター細胞の内部に伝達して、エフェクター細胞機能、例えば
、ＣＡＲと結合した標的細胞への細胞傷害性因子の放出、または細胞外ＣＡＲドメインへ
の抗原結合に伴って引き出される他の細胞応答を含めた、活性化、サイトカイン産生、増
殖および細胞傷害活性を引き出すことに関与するＣＡＲの部分を指す。

「エフェクター機能」という用語は、細胞の特殊機能を指す。Ｔ細胞のエフェクター機
能は、例えば、細胞溶解活性またはサイトカインの分泌を含めた補助もしくは活性であり
得る。したがって、「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェクター機能シ
グナルを伝達し、細胞を、特殊機能を行うように誘導するタンパク質の部分を指す。通常
は、細胞内シグナル伝達ドメイン全体を使用することができるが、多くの場合、ドメイン
全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの短縮された部分を使用する範
囲内で、そのような短縮された部分を、エフェクター機能シグナルを伝達する限りは、ド
メイン全体の代わりに使用することができる。細胞内シグナル伝達ドメインという用語は
、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な、細胞内シグナル伝達ドメインの任意
の短縮された部分を包含するものとする。

ＴＣＲ単独によって生成されるシグナルはＴ細胞の完全な活性化に不十分であること、
および二次または共刺激シグナルも必要であることが公知である。したがって、Ｔ細胞の
活性化は、２つの別個のクラスの細胞内シグナル伝達ドメイン：ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲ
／ＣＤ３複合体）によって抗原依存的一次活性化を開始する一次シグナル伝達ドメインと
、抗原非依存的に作用して二次または共刺激シグナルをもたらす共刺激シグナル伝達ドメ
インとによって媒介されるということができる。好ましい実施形態では、本明細書におい
て意図されているＣＡＲは、１つまたは複数の「共刺激シグナル伝達ドメイン」および「
一次シグナル伝達ドメイン」を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

一次シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲ複合体の一次活性化を刺激性に、または阻害性に
調節する。刺激性に作用する一次シグナル伝達ドメインは、免疫受容活性化チロシンモチ
ーフ（ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｂａｓｅｄ ａｃｔｉｖａｔ
ｉｏｎ ｍｏｔｉｆ）またはＩＴＡＭとして公知であるシグナル伝達モチーフを含有して
よい。

本発明において特に使用される、一次シグナル伝達ドメインを含有するＩＴＡＭの実例
としては、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、
ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄに由来するものが挙げられる。特
定の好ましい実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインおよび１つま
たは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。細胞内一次シグナル伝達および共刺激シ
グナル伝達ドメインは、任意の順序でタンデムに膜貫通ドメインのカルボキシル末端と連
結することができる。

本明細書において意図されているＣＡＲは、ＣＡＲ受容体を発現するＴ細胞の有効性お
よび増大を増強するための１種または複数種の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。本明
細書で使用される場合、「共刺激シグナル伝達ドメイン」または「共刺激ドメイン」とい
う用語は、共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインを指す。共刺激分子は、抗原と結合
した際のＴリンパ球の効率的な活性化および機能のために必要な第２のシグナルをもたら
す、抗原受容体またはＦｃ受容体以外の細胞表面分子である。そのような共刺激分子の実
例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）
、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＣＴＬＡ４、ＬＦＡ−１、
ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、およびＮＫＤ２Ｃ、およびＣＤ８３が挙げられる。一実施
形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、およびＣＤ１３４からなる群より選択され
る１種または複数種の共刺激シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達
ドメインを含む。

別の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８およびＣＤ１３７共刺激シグナル伝達ドメイン
、ならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

さらに別の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８およびＣＤ１３４共刺激シグナル伝達ド
メイン、ならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

一実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１３７およびＣＤ１３４共刺激シグナル伝達ドメイン
、ならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

一実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１３７共刺激シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ζ一
次シグナル伝達ドメインを含む。

一実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１３４共刺激シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ζ一
次シグナル伝達ドメインを含む。

一実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ζ一次
シグナル伝達ドメインを含む。

特定の実施形態では、本明細書において意図されているＣＡＲは、腫瘍細胞上に発現す
るアルファ葉酸受容体、５Ｔ４、α_ｖβ_６インテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−
Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ
４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１
３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲファミリー、例えば、Ｅｒ
ｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ
２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ２、ＧＤ３、’グリピカン−３（
ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋Ｍ
ＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ
−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３Ｒα２、ラムダ、Ｌｅｗｉｓ−
Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ
−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡ
Ｇ７２、ＴＥＭ、またはＶＥＧＦＲ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体またはその抗
原結合性断片を含む。

一実施形態では、ＣＡＲは、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、α_ｖβ_６インテグリン、Ｂ
ＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０
、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ
７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦ
Ｒファミリー、例えば、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、ＥＧＰ
４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ２、
ＧＤ３、’グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２＋Ｍ
ＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ２
＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３Ｒ
α２、ラムダ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣＡＭ
、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１
、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、またはＶＥＧＦＲ２ポリペプチドに結合す
るｓｃＦｖ；ＣＤ８α；ＣＤ４、ＣＤ４５、ＰＤ１、およびＣＤ１５２からなる群より選
択されるポリペプチドに由来する膜貫通ドメイン；ならびに、ＣＤ２８、ＣＤ５４、ＣＤ
１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、およびＣＤ２７８からなる
群より選択される１つまたは複数の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＣＤ３
ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

別の実施形態では、ＣＡＲは、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、α_ｖβ_６インテグリン、
ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３
０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、Ｃ
Ｄ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、ＥＧ
ＦＲファミリー、例えば、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、ＥＧ
Ｐ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ２
、ＧＤ３、’グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２＋
ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ
２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３
Ｒα２、ラムダ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣＡ
Ｍ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ
１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、またはＶＥＧＦＲ２ポリペプチドに結合
するｓｃＦｖ；ＩｇＧ１ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３およびＣＤ８α、およびＣＤ８αからな
る群より選択されるヒンジドメイン；ＣＤ８α；ＣＤ４、ＣＤ４５、ＰＤ１、およびＣＤ
１５２からなる群より選択されるポリペプチドに由来する膜貫通ドメイン；ならびに、Ｃ
Ｄ２８、ＣＤ１３４、およびＣＤ１３７からなる群より選択される１つまたは複数の細胞
内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびに、ＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

さらに別の実施形態では、ＣＡＲは、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、α_ｖβ_６インテグ
リン、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、
ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９
ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ
、ＥＧＦＲファミリー、例えば、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２
、ＥＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、
ＧＤ２、ＧＤ３、’グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−
Ａ２＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬ
Ａ−Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ
−１３Ｒα２、ラムダ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、
ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、
ＲＯＲ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、またはＶＥＧＦＲ２ポリペプチド
に結合する、リンカーをさらに含むｓｃＦｖ；ＩｇＧ１ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３およびＣ
Ｄ８α、およびＣＤ８αからなる群より選択されるヒンジドメイン；ＣＤ８α；ＣＤ４、
ＣＤ４５、ＰＤ１、およびＣＤ１５２からなる群より選択されるポリペプチドに由来する
ＴＭドメインと、ＴＭドメインをＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインに連結する、１、
２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸の間の長さであることが好ましい
短いオリゴペプチドリンカーまたはポリペプチドリンカーとを含む膜貫通ドメイン；なら
びに、ＣＤ２８、ＣＤ１３４、およびＣＤ１３７からなる群より選択される１つまたは複
数の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびに、ＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメイン
を含む。

特定の実施形態では、ＣＡＲは、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、α_ｖβ_６インテグリン
、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ
３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、
ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、Ｅ
ＧＦＲファミリー、例えば、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、Ｅ
ＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ
２、ＧＤ３、’グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２
＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−
Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１
３Ｒα２、ラムダ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣ
ＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯ
Ｒ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、またはＶＥＧＦＲ２ポリペプチドに結
合するｓｃＦｖ；ＰＤ１またはＣＤ１５２ヒンジポリペプチドを含むヒンジドメイン；約
３アミノ酸のポリペプチドリンカーを含むＰＤ１またはＣＤ１５２膜貫通ドメイン；ＣＤ
１３７細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを
含む。

特定の実施形態では、ＣＡＲは、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、α_ｖβ_６インテグリン
、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ
３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、
ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、Ｅ
ＧＦＲファミリー、例えば、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、Ｅ
ＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ
２、ＧＤ３、’グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２
＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−
Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１
３Ｒα２、ラムダ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣ
ＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯ
Ｒ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、またはＶＥＧＦＲ２ポリペプチドに結
合するｓｃＦｖ；ＰＤ１またはＣＤ１５２ヒンジポリペプチドを含むヒンジドメイン；約
３アミノ酸のポリペプチドリンカーを含むＰＤ１またはＣＤ１５２膜貫通ドメイン；ＣＤ
１３４細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを
含む。

特定の実施形態では、ＣＡＲは、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、α_ｖβ_６インテグリン
、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ
３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、
ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、Ｅ
ＧＦＲファミリー、例えば、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、Ｅ
ＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ
２、ＧＤ３、’グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２
＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−
Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１
３Ｒα２、ラムダ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣ
ＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯ
Ｒ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、またはＶＥＧＦＲ２ポリペプチドに結
合するｓｃＦｖ；ＰＤ１またはＣＤ１５２ヒンジポリペプチドを含むヒンジドメイン；約
３アミノ酸のポリペプチドリンカーを含むＰＤ１またはＣＤ１５２膜貫通ドメイン；ＣＤ
２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含
む。

特定の実施形態では、ＣＡＲは、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、α_ｖβ_６インテグリン
、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ
３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、
ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、Ｅ
ＧＦＲファミリー、例えば、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、Ｅ
ＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ
２、ＧＤ３、’グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２
＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−
Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１
３Ｒα２、ラムダ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣ
ＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯ
Ｒ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、またはＶＥＧＦＲ２ポリペプチドに結
合するｓｃＦｖ；ＩｇＧ１ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３ポリペプチドおよびＣＤ８αポリペプ
チドを含むヒンジドメイン；約３アミノ酸のポリペプチドリンカーを含むＣＤ８α膜貫通
ドメイン；ＣＤ１３７細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＣＤ３ζ一次シグナ
ル伝達ドメインを含む。

特定の実施形態では、ＣＡＲは、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、α_ｖβ_６インテグリン
、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ
３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、
ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、Ｅ
ＧＦＲファミリー、例えば、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、Ｅ
ＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ
２、ＧＤ３、’グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２
＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−
Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１
３Ｒα２、ラムダ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣ
ＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯ
Ｒ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、またはＶＥＧＦＲ２ポリペプチドに結
合するｓｃＦｖ；ＣＤ８αポリペプチドを含むヒンジドメイン；約３アミノ酸のポリペプ
チドリンカーを含むＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３４細胞内共刺激シグナル伝達ドメ
イン；およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

特定の実施形態では、ＣＡＲは、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、α_ｖβ_６インテグリン
、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ
３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、
ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、Ｅ
ＧＦＲファミリー、例えば、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、Ｅ
ＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ
２、ＧＤ３、’グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２
＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−
Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１
３Ｒα２、ラムダ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣ
ＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯ
Ｒ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、またはＶＥＧＦＲ２ポリペプチドに結
合するｓｃＦｖ；ＣＤ８αポリペプチドを含むヒンジドメイン；約３アミノ酸のポリペプ
チドリンカーを含むＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメイ
ン；およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。

さらに、本明細書において意図されているベクターの設計により、細胞の寿命を通して
、改変されていないＴ細胞または他のベクターを用いて改変されたＴ細胞と比較してＴ細
胞の改善された増大、長期持続、および細胞傷害性性質ならびにＣＡＲの持続的発現が可
能になる。

Ｄ．ポリペプチド
本発明は、一部において、ＣＡＲポリペプチドおよびその断片、それを含む細胞および
組成物、ならびにポリペプチドを発現するベクターを意図している。好ましい実施形態で
は、配列番号２および３に示されているポリヌクレオチド配列によりコードされる１つま
たは複数のＣＡＲを含むポリペプチドが提供される。

「ポリペプチド」、「ポリペプチド断片」、「ペプチド」および「タンパク質」は、そ
れに反する指定がなければ、従来の意味に従って、すなわちアミノ酸の配列として、互換
的に使用される。ポリペプチドは、特定の長さに限定されず、例えば、ポリペプチドは、
全長タンパク質配列または全長タンパク質の断片を含んでよく、また、ポリペプチドの翻
訳後修飾、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化など、ならびに天然に存在する
ものと天然に存在しないものの両方の、当技術分野で公知の他の修飾を含んでよい。種々
の実施形態では、本明細書において意図されているＣＡＲポリペプチドは、タンパク質の
Ｎ末端に、翻訳時にまたは翻訳後にタンパク質の移入を導くシグナル（またはリーダー）
配列を含む。本明細書に開示されているＣＡＲにおいて有用な適切なシグナル配列（シグ
ナルペプチド）の実例としては、これらに限定されないが、ＩｇＧ１重鎖シグナルポリペ
プチド、ＣＤ８αシグナルポリペプチド、またはヒトＧＭ−ＣＳＦ受容体アルファシグナ
ルペプチドが挙げられる。ポリペプチドは、種々の周知の組換えおよび／または合成技法
のいずれかを使用して調製することができる。本明細書において意図されているポリペプ
チドは、本開示のＣＡＲ、または、本明細書に開示されているＣＡＲの１つもしくは複数
のアミノ酸からの欠失、それらへの付加、および／もしくはそれらの置換を有する配列を
特に包含する。

「単離されたペプチド」または「単離されたポリペプチド」などは、本明細書で使用さ
れる場合、ペプチドまたはポリペプチド分子の、細胞の環境から、および細胞の他の構成
成分との関連からのｉｎ ｖｉｔｒｏにおける単離および／または精製を指す、すなわち
、「単離されたペプチド」または「単離されたポリペプチド」などは、ｉｎ ｖｉｖｏ物
質と有意に関連しない。同様に、「単離された細胞」とは、ｉｎ ｖｉｖｏにおける組織
または器官から得られたものであり、細胞外マトリックスを実質的に含まない細胞を指す
。

ポリペプチドとは、「ポリペプチドバリアント」を包含する。ポリペプチドバリアント
は、天然に存在するポリペプチドと、１つまたは複数の置換、欠失、付加および／または
挿入の点で異なり得る。そのようなバリアントは、天然に存在するものであってもよく、
例えば上記のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を改変することによって合成によ
り生成することもできる。例えば、特定の実施形態では、ＣＡＲポリペプチドの結合性ド
メイン、ヒンジ、ＴＭドメイン、共刺激シグナル伝達ドメインまたは一次シグナル伝達ド
メインに１つまたは複数の置換、欠失、付加および／または挿入を導入することにより、
ＣＡＲの結合親和性および／または他の生物学的性質を改善することが望ましい場合があ
る。好ましくは、本発明のポリペプチドは、それに対して少なくとも約６５％、７０％、
７５％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％のアミノ酸の同一性を有するポ
リペプチドを含む。

ポリペプチドは、「ポリペプチド断片」を包含する。ポリペプチド断片とは、天然に存
在するまたは組換えによって作製されたポリペプチドのアミノ末端における欠失、カルボ
キシル末端における欠失、および／または内部の欠失もしくは置換を有する、単量体であ
っても多量体であってもよいポリペプチドを指す。ある特定の実施形態では、ポリペプチ
ド断片は、少なくとも５〜約５００アミノ酸長のアミノ酸の鎖を含んでよい。ある特定の
実施形態では、断片は、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４
、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、
２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４
１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０
、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１５０、２００、２５０、３００、
３５０、４００、または４５０アミノ酸長であることが理解されよう。特に有用なポリペ
プチド断片としては、抗体の抗原結合性ドメインまたは断片を含めた機能的ドメインが挙
げられる。抗カッパまたは抗ラムダ軽鎖抗体の場合では、有用な断片として、これらに限
定されないが、ＣＤＲ領域、重鎖または軽鎖のＣＤＲ３領域；重鎖または軽鎖の可変領域
；２つのＣＤＲを含めた抗体鎖または可変領域の一部などが挙げられる。

ポリペプチドはまた、ポリペプチドの合成、精製もしくは同定を容易にするため（例え
ば、ポリ−Ｈｉｓ）、またはポリペプチドの固体支持体への結合を増強するためのリンカ
ーまたは他の配列とインフレームで融合することもでき、またはコンジュゲートすること
もできる。

上記の通り、本発明のポリペプチドは、アミノ酸の置換、欠失、短縮、および挿入を含
めた種々のやり方で変更することができる。そのような操作のための方法は、一般に、当
技術分野で公知である。例えば、参照ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントを、ＤＮＡ
における変異によって調製することができる。変異誘発およびヌクレオチド配列変更のた
めの方法は当技術分野で周知である。例えば、Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５年、Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ． ８２巻：４８８〜４９２頁）、Ｋｕｎｋ
ｅｌら、（１９８７年、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ、１５４巻：３６７〜３
８２頁）、米国特許第４，８７３，１９２号、Ｗａｔｓｏｎ， Ｊ． Ｄ．ら、（Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ、第４版、Ｂｅｎｊａｍｉｎ／
Ｃｕｍｍｉｎｇｓ、Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ、Ｃａｌｉｆ．、１９８７年）およびそこに引
用されている参考文献を参照されたい。目的のタンパク質の生物活性に影響を及ぼさない
適切なアミノ酸置換に関する手引きは、Ｄａｙｈｏｆｆら、（１９７８年）Ａｔｌａｓ
ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．
Ｂｉｏｍｅｄ． Ｒｅｓ． Ｆｏｕｎｄ．、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、Ｄ．Ｃ．）のモデル
において見いだすことができる。

ある特定の実施形態では、バリアントは保存的置換を含有する。「保存的置換」とは、
あるアミノ酸により同様の性質を有する別のアミノ酸が置換されているものであり、した
がって、ポリペプチドの二次構造およびハイドロパシー的性質は実質的に変化しないこと
がペプチド化学の当業者には予想されよう。本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドの構造に改変を行っても、望ましい特性を有するバリアントまたは誘導体ポリペプチド
をコードする機能分子をまだ得ることができる。ポリペプチドのアミノ酸配列を変更して
、本発明のポリペプチドの等価物またはさらには改善されたバリアントを創出することが
望まれる場合、当業者は、例えば、表１に従って、例えば、コードするＤＮＡ配列のコド
ンのうちの１つまたは複数を変化させることができる。

生物活性を消滅させることなくどのアミノ酸残基を置換、挿入、または欠失させ得るの
かを決定することにおける手引きは、ＤＮＡＳＴＡＲ（商標）ソフトウェアなどの、当技
術分野で周知のコンピュータプログラムを使用して見いだすことができる。本明細書に開
示されているタンパク質バリアントにおけるアミノ酸の変化は、保存的アミノ酸の変化、
すなわち、同様に荷電したまたは無電荷のアミノ酸の置換が好ましい。保存的アミノ酸の
変化は、それらの側鎖が関連するアミノ酸のファミリーのうちの１つの置換を伴う。天然
に存在するアミノ酸は、一般に、４つのファミリー：酸性アミノ酸（アスパラギン酸、グ
ルタミン酸）、塩基性アミノ酸（リシン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性アミノ酸（
アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン
、トリプトファン）、および非荷電極性アミノ酸（グリシン、アスパラギン、グルタミン
、システイン、セリン、トレオニン、チロシン）に分けられる。フェニルアラニン、トリ
プトファン、およびチロシンは、時には、共に芳香族アミノ酸として分類される。ペプチ
ドまたはタンパク質において、アミノ酸の適切な保存的置換は当業者に公知であり、一般
には、結果生じる分子の生物活性を変更することなく作出することができる。当業者は、
一般に、ポリペプチドの非必須領域における単一のアミノ酸置換が生物活性を実質的に変
化させないことを認識している（例えば、Ｗａｔｓｏｎら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏ
ｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ、第４版、１９８７年、Ｔｈｅ Ｂｅｎｊａｍｉｎ／
Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕｂ． Ｃｏ．、２２４頁を参照されたい）。例示的な保存的置換
は、米国仮特許出願第６１／２４１，６４７号に記載されており、その開示は参照により
本明細書に組み込まれる。

そのような変化を作製することにおいて、アミノ酸のハイドロパシー指標を考慮するこ
とができる。タンパク質に相互作用的な生物学的機能を付与することにおけるハイドロパ
シーアミノ酸指標の重要性は当技術分野において一般に理解されている（参照により本明
細書に組み込まれるＫｙｔｅおよびＤｏｏｌｉｔｔｌｅ、１９８２年）。各アミノ酸がそ
の疎水性および電荷特性に基づいてハイドロパシー指標に割り当てられている（Ｋｙｔｅ
およびＤｏｏｌｉｔｔｌｅ、１９８２年）。これらの値は、イソロイシン（＋４．５）；
バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイ
ン／システイン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシ
ン（−０．４）；トレオニン（−０．７）；セリン（−０．８）；トリプトファン（−０
．９）；チロシン（−１．３）；プロリン（−１．６）；ヒスチジン（−３．２）；グル
タミン酸（−３．５）；グルタミン（−３．５）；アスパラギン酸（−３．５）；アスパ
ラギン（−３．５）；リシン（−３．９）；およびアルギニン（−４．５）である。

ある特定のアミノ酸は、同様のハイドロパシー指標またはスコアを有する他のアミノ酸
で置換することができ、それでもまだ同様の生物活性を有するタンパク質をもたらすこと
ができる、すなわち、生物学的機能的に等価のタンパク質をまだ得ることができることは
当技術分野で公知である。そのような変化を作製することにおいては、ハイドロパシー指
標が±２以内であるアミノ酸の置換が好ましく、±１以内であるアミノ酸の置換が特に好
ましく、±０．５以内であるアミノ酸の置換がさらに特別好ましい。当技術分野では、類
似したアミノ酸の置換を親水性に基づいて有効に行うことができることも理解されている
。

米国特許第４，５５４，１０１号において詳述されている通り、以下の親水性値がアミ
ノ酸残基に割り当てられている：アルギニン（＋３．０）；リシン（＋３．０）；アスパ
ラギン酸（＋３．０±１）；グルタミン酸（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アス
パラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；トレオニン（−０．
４）；プロリン（−０．５±１）；アラニン（−０．５）；ヒスチジン（−０．５）；シ
ステイン（−１．０）；メチオニン（−１．３）；バリン（−１．５）；ロイシン（−１
．８）；イソロイシン（−１．８）；チロシン（−２．３）；フェニルアラニン（−２．
５）；トリプトファン（−３．４）。アミノ酸を同様の親水性値を有する別のアミノ酸で
置換し、それでもまだ生物学的に等価、特に、免疫学的に等価のタンパク質を得ることが
できることが理解される。そのような変化では、親水性値が±２以内のアミノ酸の置換が
好ましく、±１以内のアミノ酸の置換が特に好ましく、±０．５以内のアミノ酸の置換が
さらに特別好ましい。

上に概説されている通り、アミノ酸置換は、アミノ酸側鎖置換基、例えば、それらの疎
水性、親水性、電荷、サイズなどの相対的な類似性に基づいてよい。

ポリペプチドバリアントは、グリコシル化された形態、他の分子との集合的コンジュゲ
ート、および無関係の化学的部分（例えば、ペグ化分子）との共有結合コンジュゲートを
さらに含む。共有結合バリアントは、当技術分野で公知の通り、アミノ酸の鎖内またはＮ
末端もしくはＣ末端の残基に見いだされる基に官能基を連結することによって調製するこ
とができる。バリアントとしては、対立遺伝子バリアント、種バリアント、および変異タ
ンパク質も挙げられる。タンパク質の機能活性に影響を及ぼさない領域の短縮または欠失
もバリアントである。

一実施形態では、２種またはそれ超のポリペプチドの発現が望まれる場合、それらをコ
ードするポリヌクレオチド配列を、本明細書の他の箇所で論じられているＩＲＥＳ配列に
よって分離することができる。別の実施形態では、２種またはそれ超のポリペプチドを、
１つまたは複数の自己切断性ポリペプチド配列を含む融合タンパク質として発現させるこ
とができる。

本発明のポリペプチドは、融合ポリペプチドを包含する。好ましい実施形態では、融合
ポリペプチドおよび融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが提供される（例え
ば、ＣＡＲ）。融合ポリペプチドおよび融合タンパク質とは、少なくとも２個、３個、４
個、５個、６個、７個、８個、９個、または１０個またはそれ超のポリペプチドセグメン
トを有するポリペプチドを指す。融合ポリペプチドは、一般には、Ｃ末端とＮ末端を連結
したものであるが、Ｃ末端とＣ末端、Ｎ末端とＮ末端、またはＮ末端とＣ末端を連結する
こともできる。融合タンパク質のポリペプチドは任意の順序であっても指定の順序であっ
てもよい。融合ポリペプチドまたは融合タンパク質は、融合ポリペプチドの所望の転写活
性が保存される限りは、保存的に改変されたバリアント、多型バリアント、対立遺伝子、
変異体、部分配列、および種間ホモログも包含し得る。融合ポリペプチドは、化学的な合
成方法によって、または２つの部分間の化学結合によって作製することもでき、一般に、
他の標準の技法を使用して調製することもできる。融合ポリペプチドを含むライゲーショ
ンされたＤＮＡ配列は、本明細書の他の箇所で論じられている適切な転写または翻訳制御
エレメントに作動可能に連結している。

一実施形態では、融合パートナーは、ネイティブな組換えタンパク質よりも高収量での
タンパク質の発現を補助する配列（発現エンハンサー）を含む。他の融合パートナーは、
タンパク質の溶解度が増加するように、またはタンパク質を所望の細胞内区画に標的化す
ることが可能になるように、または融合タンパク質の細胞膜を通る輸送が容易になるよう
に、選択することができる。

融合ポリペプチドは、本明細書に記載のポリペプチドドメインのそれぞれの間にポリペ
プチド切断シグナルをさらに含んでよい。さらに、ポリペプチド部位を任意のリンカーペ
プチド配列に入れることができる。例示的なポリペプチド切断シグナルは、プロテアーゼ
切断部位、ヌクレアーゼ切断部位（例えば、希な制限酵素認識部位、自己切断性リボザイ
ム認識部位）、および自己切断性ウイルスオリゴペプチドなどのポリペプチド切断認識部
位を含む（ｄｅＦｅｌｉｐｅおよびＲｙａｎ、２００４年、Ｔｒａｆｆｉｃ、５巻（８号
）；６１６〜２６頁を参照されたい）。

適切なプロテアーゼ切断部位および自己切断性ペプチドは当業者に公知である（例えば
、Ｒｙａｎら、１９９７年、Ｊ． Ｇｅｎｅｒ． Ｖｉｒｏｌ． ７８巻、６９９〜７２
２頁；Ｓｃｙｍｃｚａｋら（２００４年）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ． ５巻、５８
９〜５９４頁を参照されたい）。例示的なプロテアーゼ切断部位としては、これらに限定
されないが、ポティウイルスＮＩａプロテアーゼ（例えば、タバコエッチ病ウイルスプロ
テアーゼ）、ポティウイルスＨＣプロテアーゼ、ポティウイルスＰ１（Ｐ３５）プロテア
ーゼ、ビオウイルス（ｂｙｏｖｉｒｕｓ）ＮＩａプロテアーゼ、ビオウイルス（ｂｙｏｖ
ｉｒｕｓ）ＲＮＡ−２にコードされるプロテアーゼ、アフトウイルスＬプロテアーゼ、エ
ンテロウイルス２Ａプロテアーゼ、ライノウイルス２Ａプロテアーゼ、ピコルナ３Ｃプロ
テアーゼ、コモウイルス２４Ｋプロテアーゼ、ネポウイルス２４Ｋプロテアーゼ、ＲＴＳ
Ｖ（イネツングロ球状ウイルス）３Ｃ様プロテアーゼ、ＰＹＶＦ（パースニップ黄斑ウイ
ルス）３Ｃ様プロテアーゼ、ヘパリン、トロンビン、第Ｘａ因子およびエンテロキナーゼ
の切断部位が挙げられる。一実施形態では、切断ストリンジェンシーが高いことに起因し
て、ＴＥＶ（タバコエッチ病ウイルス）プロテアーゼ切断部位、例えば、ＥＸＸＹＸＱ（
Ｇ／Ｓ）（配列番号１４）、例えば、ＥＮＬＹＦＱＧ（配列番号１５）およびＥＮＬＹＦ
ＱＳ（配列番号１６）（式中、Ｘは任意のアミノ酸を表す）（ＴＥＶによる切断は、Ｑと
Ｇの間またはＱとＳの間で起こる）が好ましい。

特定の実施形態では、自己切断性ペプチドは、ポティウイルスおよびカルジオウイルス
２Ａペプチド、ＦＭＤＶ（口蹄疫ウイルス）、ウマ鼻炎Ａウイルス、Ｔｈｏｓｅａ ａｓ
ｉｇｎａウイルスおよびブタテッショウウイルスから得られるポリペプチド配列を含む。

ある特定の実施形態では、自己切断性ポリペプチド部位は、２Ａまたは２Ａ様部位、配
列またはドメインを含む（Ｄｏｎｎｅｌｌｙら、２００１年、Ｊ． Ｇｅｎ． Ｖｉｒｏ
ｌ． ８２巻：１０２７〜１０４１頁）。

好ましい実施形態では、本明細書において意図されているポリペプチドは、ＣＡＲポリ
ペプチドを含む。

Ｅ．ポリヌクレオチド
特定の実施形態では、ＭＮＤプロモーターおよび１つまたは複数のＣＡＲをコードする
ポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドが提供される。好ましい実施形態では、配列番
号２および３に示されている１つまたは複数のＣＡＲをコードするポリヌクレオチドに作
動可能に連結したＭＮＤプロモーターを含むポリヌクレオチドが提供される。本明細書で
使用される場合、「ポリヌクレオチド」または「核酸」という用語は、メッセンジャーＲ
ＮＡ（ｍＲＮＡ）、ＲＮＡ、ゲノムＲＮＡ（ｇＲＮＡ）、プラス鎖ＲＮＡ（ＲＮＡ（＋）
）、マイナス鎖ＲＮＡ（ＲＮＡ（−））、ゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）、相補ＤＮＡ（ｃＤ
ＮＡ）または組換えＤＮＡを指す。ポリヌクレオチドは、一本鎖ポリヌクレオチドおよび
二本鎖ポリヌクレオチドを含む。好ましくは、本発明のポリヌクレオチドは、本明細書に
記載の参照配列（例えば、配列表を参照されたい）のいずれかに対して少なくとも約５０
％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６
％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドまた
はバリアントを含み、一般には、その場合、バリアントは参照配列の少なくとも１つの生
物活性を維持する。種々の例示的な実施形態では、本発明は、一部において、ポリヌクレ
オチドを含む発現ベクター、ウイルスベクター、および導入プラスミド、ならびにそれを
含む組成物および細胞を意図している。

特定の実施形態では、本発明により、少なくとも約５個、１０個、２５個、５０個、１
００個、１５０個、２００個、２５０個、３００個、３５０個、４００個、５００個、１
０００個、１２５０個、１５００個、１７５０個、または２０００個またはそれ超の本発
明のポリペプチドの連続したアミノ酸残基、ならびに全ての中間の長さの本発明のポリペ
プチドの連続したアミノ酸残基をコードするポリヌクレオチドが提供される。「中間の長
さ」とは、この文脈において、引用された値の間の任意の長さ、例えば、６、７、８、９
など；１０１、１０２、１０３など；１５１、１５２、１５３など；２０１、２０２、２
０３などを意味することが容易に理解されよう。

本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチドバリアント」および「バリアント」な
どの用語は、参照ポリヌクレオチド配列に対して実質的な配列同一性を示すポリヌクレオ
チド、または下で定義されているストリンジェントな条件下で参照配列とハイブリダイズ
するポリヌクレオチドを指す。これらの用語は、参照ポリヌクレオチドと比較して、１つ
または複数のヌクレオチドが付加されているもしくは欠失している、または異なるヌクレ
オチドで置き換えられているポリヌクレオチドを包含する。この点について、参照ポリヌ
クレオチドに対して変異、付加、欠失および置換を含めたある特定の変更を行うことがで
き、それにより、変更されたポリヌクレオチドが参照ポリヌクレオチドの生物学的機能ま
たは活性を保持することは当技術分野においてよく理解されている。

「配列同一性」または、例えば、「と５０％同一の配列」を含む記述は、本明細書で使
用される場合、比較のウインドウにわたって、配列がヌクレオチドごとまたはアミノ酸ご
とに同一である程度を指す。したがって、「配列同一性の百分率」は、最適にアラインさ
れた２つの配列を比較のウインドウにわたって比較し、両方の配列に同一の核酸塩基（例
えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）または同一のアミノ酸残基（例えば、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅ
ｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ａｒ
ｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＣｙｓおよびＭｅｔ）が存在する位置の
数を決定してマッチする位置の数を得、マッチする位置の数を比較のウインドウ内の位置
の総数（すなわち、ウインドウサイズ）で割り、その結果に１００を掛けて、配列同一性
の百分率を得ることによって算出することができる。本明細書に記載の参照配列のいずれ
かに対して少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を
有するヌクレオチドおよびポリペプチドが包含され、一般には、その場合、ポリペプチド
バリアントは参照ポリペプチドの少なくとも１つの生物活性を維持する。

２つまたはそれ超のポリヌクレオチドまたはポリペプチド間の配列の関係を記載するた
めに使用される用語として、「参照配列」、「比較ウインドウ」、「配列同一性」、「配
列同一性の百分率」、および「実質的な同一性」が挙げられる。「参照配列」は、ヌクレ
オチドおよびアミノ酸残基を含めて長さが少なくとも１２単量体単位であるが、１５〜１
８単量体単位の頻度が高く、多くの場合には、少なくとも２５単量体単位である。２つの
ポリヌクレオチドはそれぞれ（１）２つのポリヌクレオチド間で類似した配列（すなわち
、完全なポリヌクレオチド配列の一部のみ）、および（２）２つのポリヌクレオチド間で
多岐にわたる配列を含み得るので、２つ（またはそれ超）のポリヌクレオチド間の配列の
比較は、一般には、２つのポリヌクレオチドの配列を「比較ウインドウ」にわたって比較
して、同定し、配列類似性の局所的な領域を比較することによって実施される。「比較ウ
インドウ」とは、配列を、２つの配列を最適にアラインした後に、同じ数の連続した位置
の参照配列と比較する、少なくとも６カ所、通常は約５０〜約１００カ所、より通常は約
１００〜約１５０カ所の連続した位置の概念的なセグメントを指す。比較ウインドウは、
２つの配列を最適にアラインするために、参照配列（付加も欠失も含まない）と比較して
約２０％またはそれ未満の付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含んでよい。比較ウ
インドウをアラインするための配列の最適なアラインメントは、アルゴリズム（ＧＡＰ、
ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉ
ｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ Ｒｅｌｅａｓｅ ７．０、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ
Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ Ｍａｄｉｓｏ
ｎ、ＷＩ、ＵＳＡ））のコンピュータによる実行によって、または選択された種々の方法
のいずれかによって生成される検査および最良のアラインメント（すなわち、比較ウイン
ドウにわたって最も高い百分率相同性がもたらされる）によって行うことができる。例と
して、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９７年、Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２５巻：
３３８９頁により開示されているプログラムのＢＬＡＳＴファミリーに対して参照を行う
こともできる。配列解析に関する詳細な論述は、Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐ
ｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ
＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ、１９９４〜１９９８年、１５章のＵｎｉｔ １９．３に見いだ
すことができる。

本明細書で使用される場合、「単離されたポリヌクレオチド」とは、天然に存在する状
態ではそれに隣接する配列から精製されたポリヌクレオチド、例えば、通常はその断片に
隣接する配列から取り出されたＤＮＡ断片を指す。「単離されたポリヌクレオチド」とは
、相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、組換えＤＮＡ、または、天然には存在せず、人間の手によっ
て作出された他のポリヌクレオチドも指す。

ポリヌクレオチドの方向を記載する用語としては、５’（通常は、遊離リン酸基を有す
るポリヌクレオチドの末端）および３’（通常は、遊離ヒドロキシル（ＯＨ）基を有する
ポリヌクレオチドの末端）が挙げられる。ポリヌクレオチド配列は、５’から３’の方向
に、または３’から５’の方向にアノテートすることができる。ＤＮＡおよびｍＲＮＡに
関して、５’から３’への鎖は、その配列がプレメッセンジャー（プレｍＲＮＡ）の配列
と同一であるので［ＤＮＡではチミン（Ｔ）であるが、ＲＮＡではその代わりにウラシル
（Ｕ）であること以外］、「センス」、「プラス」または「コード」鎖と称される。ＤＮ
ＡおよびｍＲＮＡに関して、ＲＮＡポリメラーゼによって転写された鎖である、相補的な
３’から５’への鎖は、「鋳型」、「アンチセンス」、「マイナス」または「非コード」
鎖と称される。本明細書で使用される場合、「逆方向」という用語は、３’から５’の方
向に記載された５’から３’までの配列、または５’から３’の方向に記載された３’か
ら５’までの配列を指す。

「相補的」および「相補性」という用語は、塩基対合の規則によって関連付けられるポ
リヌクレオチド（すなわち、ヌクレオチドの配列）を指す。例えば、ＤＮＡ配列５’ＡＧ
ＴＣＡＴＧ３’の相補鎖は、３’ＴＣＡＧＴＡＣ５’である。後者の配列は、多くの場合
、５’末端を左側にし、３’末端を右側にして逆相補物、５’ＣＡＴＧＡＣＴ３’として
記載される。その逆相補物と同等である配列は、パリンドローム配列であると言える。相
補性は、塩基対合の規則に従って核酸の塩基の一部のみがマッチする、「部分的な」もの
であってよい。あるいは、核酸間に「完全な」または「全」相補性が存在してもよい。

さらに、遺伝暗号の縮重の結果として、本明細書に記載の通り、ポリペプチドまたはそ
のバリアントの断片をコードするヌクレオチド配列が多く存在することは当業者には理解
されよう。これらのポリヌクレオチドのいくつかは、任意のネイティブな遺伝子のヌクレ
オチド配列に対して最小の相同性を有する。それにもかかわらず、コドン使用の差異に起
因して変動するポリヌクレオチド、例えば、ヒトおよび／または霊長類のコドン選択につ
いて最適化されたポリヌクレオチドが本発明により具体的に意図されている。さらに、本
明細書において提供されるポリヌクレオチド配列を含む遺伝子の対立遺伝子も使用するこ
とができる。対立遺伝子は、ヌクレオチドの欠失、付加および／または置換などの１つま
たは複数の変異の結果として変更される内因性遺伝子である。

「核酸カセット」という用語は、本明細書で使用される場合、ＲＮＡ、その後、タンパ
ク質を発現させることができるベクター内の遺伝子配列を指す。核酸カセットは、プロモ
ーターおよび目的の遺伝子、例えば、ＣＡＲを含有する。核酸カセットは、カセット内の
核酸がＲＮＡに転写され、必要であればタンパク質またはポリペプチドに翻訳され、形質
転換された細胞における活性のために必要な適切な翻訳後修飾を受け、かつ、適切な細胞
内区画への標的化または細胞外区画への分泌によって生物活性のために適した区画にトラ
ンスロケーションされ得るような位置および配列でベクター内に方向付けられる。好まし
くは、カセットは、ベクターへの即座の挿入に適合させたその３’および５’末端を有す
ることが好ましく、例えば、カセットは、各末端に制限エンドヌクレアーゼ部位を有する
。本発明の好ましい実施形態では、核酸カセットは、ＭＮＤプロモーターおよび本明細書
において意図されているキメラ抗原受容体の配列を含有する。カセットは、単一の単位と
してプラスミドまたはウイルスベクターから取り出すことおよびそれに挿入することがで
きる。

特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、少なくとも１つの目的のポリヌクレオチド
を含む。本明細書で使用される場合、「目的のポリヌクレオチド」という用語は、発現が
望まれる発現ベクターに挿入された、ポリペプチド（すなわち、目的のポリペプチド）を
コードするポリヌクレオチドを指す。ベクターは、１種、２種、３種、４種、５種、６種
、７種、８種、９種、または１０種の目的のポリヌクレオチドを含んでよい。ある特定の
実施形態では、目的のポリヌクレオチドは、疾患または障害の治療または予防における治
療効果をもたらすポリペプチドをコードする。目的のポリヌクレオチドおよびそれにコー
ドされるポリペプチドは、野生型ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ならびに
その機能的バリアントおよび断片をコードするポリヌクレオチドの両方を含む。特定の実
施形態では、機能的バリアントは、対応する野生型参照ポリヌクレオチドまたはポリペプ
チド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少な
くとも９９％の同一性を有する。ある特定の実施形態では、機能的バリアントまたは断片
は、対応する野生型ポリペプチドの生物活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少
なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％を有する。

一実施形態では、目的のポリヌクレオチドは、ポリペプチドをコードしないが、ｍｉＲ
ＮＡ、ｓｉＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡ、リボザイム、または他の阻害性ＲＮＡを転写する
ための鋳型としての機能を果たす。種々の他の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＣＡ
Ｒをコードする目的のポリヌクレオチド、ならびに、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮ
Ａ、およびリボザイムを含むがこれらに限定されない阻害性核酸配列を含むが、これらに
限定されない１つまたは複数の追加的な目的のポリヌクレオチドを含む。

本明細書で使用される場合、「ｓｉＲＮＡ」または「低分子干渉ＲＮＡ」という用語は
、動物における配列特異的な転写後遺伝子サイレンシング、翻訳の阻害、転写の阻害、ま
たはエピジェネティックなＲＮＡｉのプロセスを媒介する短いポリヌクレオチド配列を指
す（Ｚａｍｏｒｅら、２０００年、Ｃｅｌｌ、１０１巻、２５〜３３頁；Ｆｉｒｅら、１
９９８年、Ｎａｔｕｒｅ、３９１巻、８０６頁；Ｈａｍｉｌｔｏｎら、１９９９年、Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ、２８６巻、９５０〜９５１頁；Ｌｉｎら、１９９９年、Ｎａｔｕｒｅ、４０
２巻、１２８〜１２９頁；Ｓｈａｒｐ、１９９９年、Ｇｅｎｅｓ ＆ Ｄｅｖ．、１３巻
、１３９〜１４１頁；およびＳｔｒａｕｓｓ、１９９９年、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２８６巻、
８８６頁）。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、同じ数のヌクレオシドを有する第
１の鎖と第２の鎖を含むが、第１および第２の鎖はオフセットであり、したがって、第１
および第２の鎖の２つの末端ヌクレオシドは相補鎖の残基と対合しない。ある特定の例で
は、対合しない２つのヌクレオシドはチミジン残基である。ｓｉＲＮＡは、ｓｉＲＮＡま
たはその断片によって標的遺伝子の下方制御を媒介することができるように、標的遺伝子
に対して十分に相同性である領域を含むべきであり、また、ヌクレオチドに関して十分な
長さであるべきである。したがって、ｓｉＲＮＡは、標的ＲＮＡに対して少なくとも部分
的に相補的である領域を含む。ｓｉＲＮＡと標的の間に完全な相補性が存在する必要はな
いが、対応は、ｓｉＲＮＡまたはその切断産物によって標的ＲＮＡのＲＮＡｉ切断による
ものなどの配列特異的サイレンシングを導くことを可能にするのに十分なものでなければ
ならない。アンチセンス鎖において、標的鎖との相補性、または相同性の程度が最も重要
である。特にアンチセンス鎖において完全な相補性が望ましいことも多いが、一部の実施
形態は、標的ＲＮＡに対して１つまたは複数、しかし好ましくは１０、８、６、５、４、
３、２、またはそれ未満のミスマッチを含む。ミスマッチは、末端領域で最も許容され、
存在する場合には、末端領域、または、例えば、５’および／または３’末端から６、５
、４、または３ヌクレオチド以内の領域にあることが好ましい。センス鎖は、分子の全体
的な二本鎖特性を維持するためにアンチセンス鎖と十分に相補的であればよい。

さらに、ｓｉＲＮＡは、修飾されていてもよく、ヌクレオシド類似体を含んでもよい。
ｓｉＲＮＡの一本鎖領域は、修飾されていてもよく、ヌクレオシド類似体を含んでもよい
、例えば、対合していない領域またはヘアピン構造の領域、例えば、２つの相補的な領域
を連結する領域は修飾またはヌクレオシド類似体を有してよい。ｓｉＲＮＡの１つもしく
は複数の３’もしくは５’末端を例えばエキソヌクレアーゼに対して安定化するため、ま
たは、アンチセンスｓｉＲＮＡ作用物質のＲＩＳＣへの進入を有利にするための修飾も有
用である。修飾としては、Ｃ３（またはＣ６、Ｃ７、Ｃ１２）アミノリンカー、チオール
リンカー、カルボキシルリンカー、非ヌクレオチドスペーサー（Ｃ３、Ｃ６、Ｃ９、Ｃ１
２、脱塩基、トリエチレングリコール、ヘキサエチレングリコール）、ホスホラミダイト
として得られ、別のＤＭＴ保護されたヒドロキシル基を有し、それによりＲＮＡ合成の間
の多数のカップリングが可能になる特別なビオチンまたはフルオレセイン試薬を挙げるこ
とができる。ｓｉＲＮＡの各鎖は、３０、２５、２４、２３、２２、２１、または２０ヌ
クレオチドと等しいまたはそれ未満の長さであってよい。鎖は、少なくとも１９ヌクレオ
チドの長さであることが好ましい。例えば、各鎖は、２１から２５ヌクレオチドの間の長
さであってよい。好ましいｓｉＲＮＡは、１７、１８、１９、２９、２１、２２、２３、
２４、または２５ヌクレオチド対の２重鎖領域、および、２〜３ヌクレオチドの突出部を
１つまたは複数、好ましくは２〜３ヌクレオチドの３’突出部を１つまたは２つ有する。

本明細書で使用される場合、「ｍｉＲＮＡ」または「マイクロＲＮＡ」という用語は、
一般には、ｐｒｅ−ｍｉＲＮＡとして公知の、約７０ヌクレオチドのフォールドバック（
ｆｏｌｄｂａｃｋ）ＲＮＡ前駆体構造から切り取られた２０〜２２ヌクレオチドの小さな
非コードＲＮＡを指す。ｍｉＲＮＡは、それらの標的を、ｍｉＲＮＡと標的の間の相補性
の程度に応じて、２つの方法の一方で負に調節する。第１に、タンパク質をコードするｍ
ＲＮＡ配列に対する完全なまたはほぼ完全な相補性で結合するｍｉＲＮＡでは、ＲＮＡ媒
介性干渉（ＲＮＡｉ）経路が誘導される。ｍＲＮＡ標的の３’非翻訳領域（ＵＴＲ）内の
不完全な相補部位に結合することによって調節効果を発揮するｍｉＲＮＡでは、標的遺伝
子発現が、転写後に、見たところ翻訳のレベルで、ＲＮＡｉ経路に関して使用されるもの
と類似したまたは場合によって同一のＲＩＳＣ複合体を通じて抑制される。翻訳制御と一
致して、この機構を使用するｍｉＲＮＡにより、それらの標的遺伝子のタンパク質レベル
は低下するが、これらの遺伝子のｍＲＮＡレベルは最小の影響しか受けない。ｍｉＲＮＡ
は、任意のｍＲＮＡ配列を特異的に標的化することが可能な、天然に存在するｍｉＲＮＡ
ならびに人工的に設計されたｍｉＲＮＡの両方を包含する。例えば、一実施形態では、当
業者は、ヒトｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−３０またはｍｉＲ−２１）一次転写産物とし
て発現される低分子ヘアピン型ＲＮＡ構築物を設計することができる。この設計では、ヘ
アピン構築物にドローシャ（Ｄｒｏｓｈａ）プロセシング部位が付加され、ノックダウン
効率が著しく上昇することが示されている（Ｐｕｓｃｈら、２００４年）。ヘアピンの幹
は、２２ｎｔのｄｓＲＮＡ（例えば、アンチセンスは所望の標的に対して完全な相補性を
有する）およびヒトｍｉＲに由来する１５〜１９ｎｔのループからなる。ｍｉＲループお
よびｍｉＲ３０隣接配列をヘアピンの片側または両側に付加することにより、発現するヘ
アピンのドローシャおよびダイサー（Ｄｉｃｅｒ）プロセシングが、マイクロＲＮＡを伴
わない従来のｓｈＲＮＡデザインと比較して１０倍超増大する。ドローシャおよびダイサ
ープロセシングの増大は、ｓｉＲＮＡ／ｍｉＲＮＡ産生の増大および発現するヘアピンの
効力の増大に転換される。

本明細書で使用される場合、「ｓｈＲＮＡ」または「低分子ヘアピン型ＲＮＡ」という
用語は、単一の自己相補的ＲＮＡ鎖によって形成される二本鎖構造を指す。標的遺伝子の
コード配列または非コード配列のいずれかの一部と同一のヌクレオチド配列を含有するｓ
ｈＲＮＡ構築物が阻害のために好ましい。標的配列に対して挿入、欠失、および単一の点
変異を有するＲＮＡ配列が阻害のために有効であることも見いだされている。阻害性ＲＮ
Ａと標的遺伝子の一部の間には９０％超の配列同一性、または、さらには１００％の配列
同一性があることが好ましい。ある特定の好ましい実施形態では、ｓｈＲＮＡの２重鎖形
成部分の長さは、少なくとも２０、２１または２２ヌクレオチドの長さであり、例えば、
サイズが、ダイサー依存性切断によって生じるＲＮＡ産物と対応する。ある特定の実施形
態では、ｓｈＲＮＡ構築物は、少なくとも２５、５０、１００、２００、３００または４
００塩基の長さである。ある特定の実施形態では、ｓｈＲＮＡ構築物は４００〜８００塩
基の長さである。ｓｈＲＮＡ構築物では、ループ配列およびループサイズの変動が高度に
許容される。

本明細書で使用される場合、「リボザイム」という用語は、標的ｍＲＮＡを部位特異的
に切断することが可能な触媒として活性なＲＮＡ分子を指す。いくつかの亜型、例えば、
ハンマーヘッド型リボザイムおよびヘアピン型リボザイムが記載されている。非触媒塩基
において、リボヌクレオチドをデオキシリボヌクレオチドで置換することによってリボザ
イムの触媒活性および安定性を改善することができる。部位特異的認識配列においてｍＲ
ＮＡを切断するリボザイムを使用して特定のｍＲＮＡを破壊することができるが、ハンマ
ーヘッド型リボザイムの使用が好ましい。ハンマーヘッド型リボザイムは、標的ｍＲＮＡ
と相補的な塩基対を形成する隣接領域によって規定される場所でｍＲＮＡを切断する。唯
一の要件は、標的ｍＲＮＡが以下の２塩基の配列５’−ＵＧ−３’を有することである。
ハンマーヘッド型リボザイムの構築および作製は当技術分野において周知である。

ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、またはリボザイムを含む目的のポリヌクレオチ
ドを送達する好ましい方法は、例えば、本明細書の他の箇所に記載の通り、強力な構成的
ｐｏｌ ＩＩＩ、例えば、ヒトＵ６ ｓｎＲＮＡプロモーター、マウスＵ６ ｓｎＲＮＡ
プロモーター、ヒトおよびマウスＨ１ ＲＮＡプロモーターならびにヒトｔＲＮＡ−ｖａ
ｌプロモーター、または強力な構成的ｐｏｌ ＩＩプロモーターなどの１つまたは複数の
調節配列を含む。

本発明のポリヌクレオチドは、それ自体のコード配列の長さにかかわらず、本明細書の
他の箇所で開示されているまたは当技術分野で公知のプロモーターおよび／またはエンハ
ンサー、非翻訳領域（ＵＴＲ）、コザック配列、ポリアデニル化シグナル、追加的な制限
酵素部位、多重クローニング部位、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、リコンビナ
ーゼ認識部位（例えば、ＬｏｘＰ、ＦＲＴ、およびＡｔｔ部位）、終止コドン、転写終結
シグナル、および自己切断性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、エピトープタ
グなどの他のＤＮＡ配列と組み合わせることができ、したがって、それらの全体の長さは
相当に変動し得る。したがって、ほぼどんな長さのポリヌクレオチド断片でも使用するこ
とができ、全長は調製の容易さおよび意図された組換えＤＮＡプロトコールでの使用によ
り限定されることが好ましいことが意図されている。

ポリヌクレオチドは、当技術分野において公知であり、利用可能である種々の十分に確
立された技法のいずれかを使用して調製し、操作し、かつ／または発現させることができ
る。所望のポリペプチドを発現させるために、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配
列を適切なベクターに挿入することができる。ベクターの例は、プラスミド、自己複製配
列、および転移因子である。追加の例示的なベクターとしては、限定することなく、プラ
スミド、ファージミド、コスミド、人工染色体、たとえば、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、
細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来の人工染色体（ＰＡＣ）、ラムダファージま
たはＭ１３ファージなどのバクテリオファージ、および動物ウイルスが挙げられる。ベク
ターとして有用な動物ウイルスのカテゴリーの例としては、限定することなく、レトロウ
イルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイ
ルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピロ
ーマウイルス、およびパポーバウイルス（例えば、ＳＶ４０）が挙げられる。発現ベクタ
ーの例は、哺乳動物細胞において発現させるためのｐＣｌｎｅｏベクター（Ｐｒｏｍｅｇ
ａ）；哺乳動物細胞におけるレンチウイルス媒介性遺伝子導入および発現のためのｐＬｅ
ｎｔｉ４／Ｖ５−ＤＥＳＴ（商標）、ｐＬｅｎｔｉ６／Ｖ５−ＤＥＳＴ（商標）、および
ｐＬｅｎｔｉ６．２／Ｖ５−ＧＷ／ｌａｃＺ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）である。特定の実
施形態では、本明細書に開示されているキメラタンパク質のコード配列を、哺乳動物細胞
においてキメラタンパク質を発現させるためにそのような発現ベクターにライゲーション
することができる。

発現ベクター内に存在する「制御エレメント」または「調節配列」は、宿主細胞のタン
パク質と相互作用して転写および翻訳を行うベクターの非翻訳（ｎｏｎ−ｔｒａｎｓｌａ
ｔｅｄ）領域−複製起点、選択カセット、プロモーター、エンハンサー、翻訳開始シグナ
ル（シャイン・ダルガーノ配列またはコザック配列）イントロン、ポリアデニル化配列、
５’および３’非翻訳（ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄ）領域である。そのようなエレメント
は、それらの強度および特異性が変動し得る。利用するベクター系および宿主に応じて、
遍在プロモーターおよび誘導性プロモーターを含めた、多くの適切な転写および翻訳エレ
メントを使用することができる。

特定の実施形態では、これらに限定されないが、発現ベクターおよびウイルスベクター
を含めた、本発明の実施において使用するためのベクターは、プロモーターおよび／また
はエンハンサーなどの外因性、内因性、または異種性制御配列を含む。「内因性」制御配
列とは、ゲノム内で所与の遺伝子に天然に連結した制御配列である。「外因性」制御配列
とは、遺伝子操作（すなわち、分子生物学的技法）によって遺伝子の近位に配置された制
御配列であり、したがって、その遺伝子の転写が連結したエンハンサー／プロモーターに
よって導かれる。「異種性」制御配列とは、遺伝子操作される細胞とは異なる種に由来す
る外因性配列である。

「プロモーター」という用語は、本明細書で使用される場合、ＲＮＡポリメラーゼが結
合するポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡ）の認識部位を指す。ＲＮＡポリメラーゼ
は、プロモーターに作動可能に連結したポリヌクレオチドを惹起および転写する。特定の
実施形態では、哺乳動物細胞において作動可能なプロモーターは、転写が開始される部位
からおよそ２５〜３０塩基上流に位置するＡＴリッチ領域および／または転写開始から７
０〜８０塩基上流に見いだされる別の配列、ＣＮＣＡＡＴ領域（Ｎは任意のヌクレオチド
であってよい）を含む。

「エンハンサー」という用語は、転写の増強をもたらすことが可能な配列を含み、一部
の場合には、別の制御配列に対する方向とは独立して機能し得るＤＮＡのセグメントを指
す。エンハンサーは、プロモーターおよび／または他のエンハンサーエレメントと協同的
にまたは相加的に機能し得る。「プロモーター／エンハンサー」という用語は、プロモー
ター機能とエンハンサー機能の両方をもたらすことが可能な配列を含有するＤＮＡのセグ
メントを指す。

「作動可能に連結した」という用語は、記載されている構成成分が、それらの意図され
た様式で機能することが可能になる関係にある近位を指す。一実施形態では、この用語は
、核酸発現制御配列（例えば、プロモーターおよび／またはエンハンサーなど）と第２の
ポリヌクレオチド配列、例えば、目的のポリヌクレオチドの機能的な連結を指し、ここで
、発現制御配列は、第２の配列に対応する核酸の転写を導く。

本明細書で使用される場合、「構成的発現制御配列」という用語は、作動可能に連結し
た配列の転写を絶え間なくまたは連続的に可能にするプロモーター、エンハンサー、また
はプロモーター／エンハンサーを指す。構成的発現制御配列は、多種多様な細胞および組
織型における発現を可能にする「遍在」プロモーター、エンハンサー、またはプロモータ
ー／エンハンサーであってもよく、それぞれ制限された種類の細胞および組織型における
発現を可能にする「細胞特異的」、「細胞型特異的」、「細胞系列特異的」または「組織
特異的」プロモーター、エンハンサー、またはプロモーター／エンハンサーであってもよ
い。

本発明の特定の実施形態において使用するのに適した例示的な遍在発現制御配列として
は、これらに限定されないが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期プロモーター、ウ
イルスシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）（例えば、初期または後期）、モロニーマウス
白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）ＬＴＲプロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ＬＴ
Ｒ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）（チミジンキナーゼ）プロモーター、ワクシニアウ
イルス由来のＨ５、Ｐ７．５、およびＰ１１プロモーター、伸長因子１−アルファ（ＥＦ
１ａ）プロモーター、初期増殖応答１（ＥＧＲ１）、フェリチンＨ（ＦｅｒＨ）、フェリ
チンＬ（ＦｅｒＬ）、グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）、
真核生物翻訳開始因子４Ａ１（ＥＩＦ４Ａ１）、熱ショック７０ｋＤａタンパク質５（Ｈ
ＳＰＡ５）、熱ショックタンパク質９０ｋＤａベータ、メンバー１（ＨＳＰ９０Ｂ１）、
熱ショックタンパク質７０ｋＤａ（ＨＳＰ７０）、β−キネシン（β−ＫＩＮ）、ヒトＲ
ＯＳＡ２６遺伝子座（Ｉｒｉｏｎｓら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２
５巻、１４７７〜１４８２頁（２００７年））、ユビキチンＣプロモーター（ＵＢＣ）、
ホスホグリセリン酸キナーゼ−１（ＰＧＫ）プロモーター、サイトメガロウイルスエンハ
ンサー／ニワトリβ−アクチン（ＣＡＧ）プロモーター、β−アクチンプロモーターおよ
び骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、負の制御領域欠失、ｄｌ５８７ｒｅｖプライマ
ー結合性部位置換（ＭＮＤ）プロモーター（Ｃｈａｌｌｉｔａら、Ｊ Ｖｉｒｏｌ． ６
９巻（２号）：７４８〜５５頁（１９９５年））が挙げられる。

特定の実施形態では、ＣＡＲを含むポリヌクレオチドを、Ｔ細胞において安定かつ長期
にわたるＣＡＲ発現を、そしてＴ細胞を標的抗原を発現する細胞に向け直すのに十分なレ
ベルでもたらすプロモーターから発現させることが望ましい場合がある。好ましい実施形
態では、プロモーターは、ＭＮＤプロモーターである。

一実施形態では、本発明のベクターは、ＭＮＤプロモーター活性を増大させる、低下さ
せる、または安定化する、１つまたは複数のヌクレオチドの挿入、欠失、置換、または改
変を含むＭＮＤプロモーターを含む。

本明細書で使用される場合、「条件的発現」とは、これらに限定されないが、誘導性発
現；抑制可能な発現；特定の生理的状態、生物学的状態、または疾患状態を有する細胞ま
たは組織における発現などを含めた、任意の型の条件的発現を指し得る。この定義は、細
胞型または組織に特異的な発現を排除するものではない。本発明のある特定の実施形態は
、目的のポリヌクレオチドの条件的発現を提供し、例えば、細胞、組織、生物体などを、
ポリヌクレオチドの発現が引き起こされる処理もしくは条件、または目的のポリヌクレオ
チドによりコードされるポリヌクレオチドの発現の増加もしくは減少が引き起こされる処
理もしくは条件に供することによって発現を制御する。

誘導性プロモーター／系の実例としては、これらに限定されないが、グルココルチコイ
ドまたはエストロゲン受容体（対応するホルモンを用いた処理によって誘導可能）をコー
ドする遺伝子に対するプロモーターなどのステロイド誘導性プロモーター、メタロチオネ
イン（ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｉｎｅ）プロモーター（種々の重金属を用いた処理によ
って誘導可能）、ＭＸ−１プロモーター（インターフェロンによって誘導可能）、「Ｇｅ
ｎｅＳｗｉｔｃｈ」ミフェプリストンにより調節可能な系（Ｓｉｒｉｎら、２００３年、
Ｇｅｎｅ、３２３巻：６７頁）、クメート（ｃｕｍａｔｅ）誘導性遺伝子スイッチ（ＷＯ
２００２／０８８３４６）、テトラサイクリン依存性調節系などが挙げられる。

条件的発現は、部位特異的ＤＮＡリコンビナーゼを使用することによって達成すること
もできる。本発明のある特定の実施形態によると、ベクターは、部位特異的リコンビナー
ゼによって媒介される組換えのための少なくとも１つ（一般には、２つ）の部位を含む。
本明細書で使用される場合、「リコンビナーゼ」または「部位特異的リコンビナーゼ」と
いう用語は、１つまたは複数の組換え部位（例えば、２、３、４、５、７、１０、１２、
１５、２０、３０、５０など）が関与する組換え反応に関与する、除去的（ｅｘｃｉｓｉ
ｖｅ）または統合的なタンパク質、酵素、補因子または関連タンパク質を含み、これは、
野生型タンパク質であってもよく（Ｌａｎｄｙ、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３巻：６９９〜７０７頁（１９９３年））、その変異体
、誘導体（例えば、組換えタンパク質配列またはその断片を含有する融合タンパク質）、
断片、およびバリアントであってもよい。本発明の特定の実施形態における使用に適した
リコンビナーゼの実例としては、これらに限定されないが、Ｃｒｅ、Ｉｎｔ、ＩＨＦ、Ｘ
ｉｓ、Ｆｌｐ、Ｆｉｓ、Ｈｉｎ、Ｇｉｎ、ΦＣ３１、Ｃｉｎ、Ｔｎ３レソルバーゼ、Ｔｎ
ｄＸ、ＸｅｒＣ、ＸｅｒＤ、ＴｎｐＸ、Ｈｊｃ、Ｇｉｎ、ＳｐＣＣＥ１、およびＰａｒＡ
が挙げられる。

ベクターは、多種多様な部位特異的リコンビナーゼのいずれかのための１つまたは複数
の組換え部位を含んでよい。部位特異的リコンビナーゼの標的部位は、ベクター、例えば
、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターの組み込みに必要な任意の部位
（複数可）に加えてのものであることが理解されるべきである。本明細書で使用される場
合、「組換え配列」、「組換え部位」または「部位特異的組換え部位」という用語は、リ
コンビナーゼが認識し、結合する特定の核酸配列を指す。

例えば、Ｃｒｅリコンビナーゼのための１つの組換え部位は、ｌｏｘＰであり、これは
、８塩基対のコア配列を挟む２つの１３塩基対の逆方向反復（リコンビナーゼ結合性部位
としての機能を果たす）を含む３４塩基対の配列である（Ｓａｕｅｒ， Ｂ．、Ｃｕｒｒ
ｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ５巻：５２１〜５２７頁
（１９９４年）の図１を参照されたい）。他の例示的なｌｏｘＰ部位としては、これらに
限定されないが、ｌｏｘ５１１（Ｈｏｅｓｓら、１９９６年；ＢｅｔｈｋｅおよびＳａｕ
ｅｒ、１９９７年）、ｌｏｘ５１７１（ＬｅｅおよびＳａｉｔｏ、１９９８年）、ｌｏｘ
２２７２（ＬｅｅおよびＳａｉｔｏ、１９９８年）、ｍ２（Ｌａｎｇｅｒら、２００２年
）、ｌｏｘ７１（Ａｌｂｅｒｔら、１９９５年）、およびｌｏｘ６６（Ａｌｂｅｒｔら、
１９９５年）が挙げられる。

ＦＬＰリコンビナーゼの適切な認識部位としては、これらに限定されないが、ＦＲＴ（
ＭｃＬｅｏｄら、１９９６年）、Ｆ_１、Ｆ_２、Ｆ_３（ＳｃｈｌａｋｅおよびＢｏｄｅ、１
９９４年）、Ｆ_４、Ｆ_５（ＳｃｈｌａｋｅおよびＢｏｄｅ、１９９４年）、ＦＲＴ（ＬＥ
）（Ｓｅｎｅｃｏｆｆら、１９８８年）、ＦＲＴ（ＲＥ）（Ｓｅｎｅｃｏｆｆら、１９８
８年）が挙げられる。

認識配列の他の例は、ａｔｔＢ、ａｔｔＰ、ａｔｔＬ、およびａｔｔＲ配列であり、こ
れらは、リコンビナーゼ酵素λインテグラーゼ、例えば、ｐｈｉ−ｃ３１によって認識さ
れる。φＣ３１ ＳＳＲは、異型部位ａｔｔＢ（長さ３４ｂｐ）とａｔｔＰ（長さ３９ｂ
ｐ）の間の組換えのみを媒介する（Ｇｒｏｔｈら、２０００年）。ａｔｔＢおよびａｔｔ
Ｐは、それぞれ細菌およびファージゲノム上のファージインテグラーゼの付着部位に由来
する名称であり、これらはどちらも、φＣ３１ホモ二量体が結合する可能性がある不完全
な逆方向反復を含有する（Ｇｒｏｔｈら、２０００年）。産物部位、ａｔｔＬおよびａｔ
ｔＲは、さらなるφＣ３１媒介性組換えには有効に不活性であり（Ｂｅｌｔｅｋｉら、２
００３年）、それにより、反応が不可逆的なものになる。挿入の触媒に関して、ａｔｔＢ
を有するＤＮＡのゲノムａｔｔＰ部位への挿入は、ａｔｔＰ部位のゲノムａｔｔＢ部位へ
の挿入よりも容易であることが見いだされている（Ｔｈｙａｇａｒａｊａｎら、２００１
年；Ｂｅｌｔｅｋｉら、２００３年）。したがって、典型的な戦略では、相同組換えによ
ってａｔｔＰを有する「ドッキング部位」を定義済みの遺伝子座内に配置し、次いでこれ
を、挿入のために、ａｔｔＢを有する入ってくる配列とパートナーにする。

本明細書で使用される場合、「配列内リボソーム進入部位」または「ＩＲＥＳ」とは、
ＡＴＧなどの開始コドンへのシストロン（タンパク質をコードする領域）の直接配列内リ
ボソーム進入を促進し、それにより、キャップに依存しない遺伝子の翻訳を導くエレメン
トを指す。例えば、Ｊａｃｋｓｏｎら、１９９０年、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓ
ｃｉ １５巻（１２号）：４７７〜８３頁）およびＪａｃｋｓｏｎおよびＫａｍｉｎｓｋ
ｉ． １９９５年、ＲＮＡ １巻（１０号）：９８５〜１０００頁を参照されたい。特定
の実施形態では、本発明によって意図されているベクターは、１つまたは複数のポリペプ
チドをコードする１つまたは複数の目的のポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態では
、複数のポリペプチドのそれぞれの効率的な翻訳を達成するために、１つまたは複数のＩ
ＲＥＳ配列または自己切断性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列によってポ
リヌクレオチド配列を分離することができる。

本明細書で使用される場合、「コザック配列」という用語は、リボソームの小サブユニ
ットへのｍＲＮＡの最初の結合を著しく容易にし、翻訳を増加させる短いヌクレオチド配
列を指す。コンセンサスコザック配列は（ＧＣＣ）ＲＣＣＡＴＧＧ（配列番号２７）であ
り、ここで、Ｒはプリン（ＡまたはＧ）である（Ｋｏｚａｋ、１９８６年、Ｃｅｌｌ．
４４巻（２号）：２８３〜９２頁、およびＫｏｚａｋ、１９８７年、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａ
ｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １５巻（２０号）：８１２５〜４８頁）。特定の実施形態では、本
発明によって意図されているベクターは、コンセンサスコザック配列を有し、所望のポリ
ペプチド、例えば、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。

本発明の一部の実施形態では、ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを有する細胞
は、誘導性自殺遺伝子を含めた自殺遺伝子を利用して、毒性および／または制御されてい
ない増殖が導かれるリスクを低下させる。特定の態様では、自殺遺伝子は、ポリヌクレオ
チドまたは細胞を有する宿主に対して免疫原性ではない。使用することができる自殺遺伝
子のある特定の例は、カスパーゼ−９またはカスパーゼ−８またはシトシンデアミナーゼ
である。カスパーゼ−９は、二量体化の特定の化学的誘導因子（ＣＩＤ）を使用して活性
化することができる。

ある特定の実施形態では、ベクターは、本発明の免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞
を、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて負の選択を受けやすいものにする遺伝子セグメントを含む。
「負の選択」とは、注入された細胞を、個体のｉｎ ｖｉｖｏ条件における変化の結果と
して排除できることを意味する。負の選択可能な表現型は、投与される薬剤、例えば化合
物に対する感受性を付与する遺伝子の挿入に起因し得る。負の選択可能な遺伝子は当技術
分野で公知であり、それらとして、とりわけ、以下が挙げられる：ガンシクロビル感受性
を付与する単純ヘルペスウイルスＩ型チミジンキナーゼ（ＨＳＶ−Ｉ ＴＫ）遺伝子（Ｗ
ｉｇｌｅｒら、Ｃｅｌｌ １１巻：２２３頁、１９７７年）；細胞ヒポキサンチンホスホ
リボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）遺伝子、細胞アデニンホスホリボシルトランス
フェラーゼ（ＡＰＲＴ）遺伝子、および細菌シトシンデアミナーゼ（Ｍｕｌｌｅｎら、Ｐ
ｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ． ８９巻：３３頁（１９９２年
））。

一部の実施形態では、Ｔ細胞などの遺伝子改変免疫エフェクター細胞は、ｉｎ ｖｉｔ
ｒｏにおいて、負の選択可能な表現型の細胞の選択を可能にする陽性マーカーをさらに含
むポリヌクレオチドを含む。正の選択マーカーは、宿主細胞に導入されると、当該遺伝子
を有する細胞の正の選択を可能にする優性表現型を発現する遺伝子であってよい。この型
の遺伝子は当技術分野で公知であり、それらとして、とりわけ、ハイグロマイシンＢに対
する耐性を付与するハイグロマイシン−Ｂホスホトランスフェラーゼ遺伝子（ｈｐｈ）、
抗生物質Ｇ４１８に対する耐性をコードする、Ｔｎ５由来のアミノ配糖体ホスホトランス
フェラーゼ遺伝子（ｎｅｏまたはａｐｈ）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝
子、アデノシンデアミナーゼ遺伝子（ＡＤＡ）、および多剤耐性（ＭＤＲ）遺伝子が挙げ
られる。

正の選択マーカーと負の選択可能エレメントを連結し、したがって、負の選択可能エレ
メントが喪失すると必ず正の選択マーカーの喪失も付随することが好ましい。正の選択マ
ーカーと負の選択マーカーを融合し、したがって、一方の喪失により強制的に他方の喪失
が導かれることがなおより好ましい。発現産物として上記の所望の正の選択特徴および負
の選択特徴の両方を付与するポリペプチドをもたらす融合したポリヌクレオチドの例は、
ハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼチミジンキナーゼ融合遺伝子（ＨｙＴＫ）で
ある。この遺伝子の発現により、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける正の選択のためにハイグロマ
イシンＢ耐性を付与し、ｉｎ ｖｉｖｏにおける負の選択のためにガンシクロビル感受性
を付与するポリペプチドがもたらされる。Ｌｕｐｔｏｎ Ｓ． Ｄ．ら、Ｍｏｌ． ａｎ
ｄ Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌｏｇｙ １１巻：３３７４〜３３７８頁、１９９１年を参照さ
れたい。さらに、好ましい実施形態では、キメラ受容体をコードする本発明のポリヌクレ
オチドは、融合遺伝子、特に、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける正の選択のためにハイグロマイ
シンＢ耐性を付与し、ｉｎ ｖｉｖｏにおける負の選択のためにガンシクロビル感受性を
付与する融合遺伝子を含有するレトロウイルスベクター、例えば、Ｌｕｐｔｏｎ， Ｓ．
Ｄ．ら（１９９１年）、上記に記載のＨｙＴＫレトロウイルスベクター内にある。優性
の正の選択マーカーと負の選択マーカーを融合することによって引き出される二機能性の
選択可能な融合遺伝子の使用が記載されている、Ｓ． Ｄ． ＬｕｐｔｏｎによるＰＣＴ
ＵＳ９１／０８４４２およびＰＣＴ／ＵＳ９４／０５６０１の刊行物も参照されたい。

好ましい正の選択マーカーは、ｈｐｈ、ｎｃｏ、およびｇｐｔからなる群より選択され
る遺伝子に由来し、好ましい負の選択マーカーは、シトシンデアミナーゼ、ＨＳＶ−Ｉ
ＴＫ、ＶＺＶ ＴＫ、ＨＰＲＴ、ＡＰＲＴおよびｇｐｔからなる群より選択される遺伝子
に由来する。特に好ましいマーカーは、正の選択マーカーがｈｐｈまたはｎｅｏに由来し
、負の選択マーカーがシトシンデアミナーゼまたはＴＫ遺伝子または選択マーカーに由来
する二機能性の選択可能な融合遺伝子である。

Ｆ．ウイルスベクター
特定の実施形態では、細胞（例えば、Ｔ細胞）に、ＣＡＲをコードするレトロウイルス
ベクター（例えば、レンチウイルスベクター）を用いて形質導入を行う。例えば、ベクタ
ーは、ＭＮＤプロモーターを含み、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、α_ｖβ_６インテグリン
、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ
３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、
ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、Ｅ
ＧＦＲファミリー、例えば、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、Ｅ
ＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ
２、ＧＤ３、’グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２
＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−
Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１
３Ｒα２、ラムダ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣ
ＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯ
Ｒ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、またはＶＥＧＦＲ２ポリペプチドに結
合する抗体の抗原特異的結合性ドメインと、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、Ｏｘ４０
、またはそれらの任意の組合せの細胞内シグナル伝達ドメインを組み合わせたＣＡＲをコ
ードする。したがって、これらの形質導入されたＴ細胞は、安定であり、長期間にわたり
、持続的なＣＡＲ媒介性Ｔ細胞応答を引き出すことができる。

レトロウイルスは、遺伝子送達のための一般的なツールである（Ｍｉｌｌｅｒ、２００
０年、Ｎａｔｕｒｅ． ３５７巻：４５５〜４６０頁）。特定の実施形態では、レトロウ
イルスを使用して、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチドを細胞に
送達する。本明細書で使用される場合、「レトロウイルス」という用語は、そのゲノムＲ
ＮＡを直鎖状二本鎖ＤＮＡコピーに逆転写し、その後、そのゲノムＤＮＡを宿主ゲノムに
共有結合によって組み込むＲＮＡウイルスを指す。ウイルスは、宿主ゲノムに組み込まれ
ると、「プロウイルス」と称される。プロウイルスは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩの鋳型と
しての機能を果たし、新しいウイルス粒子を産生するために必要な構造タンパク質および
酵素をコードするＲＮＡ分子の発現を導く。

特定の実施形態における使用に適した例示的なレトロウイルスとしては、これらに限定
されないが、モロニーマウス白血病ウイルス（Ｍ−ＭｕＬＶ）、モロニーマウス肉腫ウイ
ルス（ＭｏＭＳＶ）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳房腫瘍ウ
イルス（ＭｕＭＴＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）、ネコ白血病ウイルス（
ＦＬＶ）、スプーマウイルス、フレンドマウス白血病ウイルス、マウス幹細胞ウイルス（
ＭＳＣＶ）およびラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ））およびレンチウイルスが挙げられる。

本明細書で使用される場合、「レンチウイルス」という用語は、複合レトロウイルスの
ある群（または属）を指す。例示的なレンチウイルスとしては、これらに限定されないが
、：ＨＩＶ（ヒト免疫不全症ウイルス；ＨＩＶ １型およびＨＩＶ ２型を含む）；ビス
ナ・マエディウイルス（ＶＭＶ）ウイルス；ヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）；ウマ
伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）；ネコ免疫不全症ウイルス（ＦＩＶ）；ウシ免疫不全症
ウイルス（ＢＩＶ）；およびサル免疫不全症ウイルス（ＳＩＶ）が挙げられる。一実施形
態では、ＨＩＶに基づくベクターの骨格（すなわち、ＨＩＶシス作用性配列エレメント）
が好ましい。特定の実施形態では、レンチウイルスを使用して、ＭＮＤプロモーターを含
み、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを細胞に送達する。

本発明の特定の実施形態の実施において、レトロウイルスベクター、より詳細にはレン
チウイルスベクターを使用することができる。したがって、「レトロウイルス」または「
レトロウイルスベクター」という用語は、本明細書で使用される場合、それぞれ「レンチ
ウイルス」および「レンチウイルスベクター」を包含するものとする。

「ベクター」という用語は、本明細書では、別の核酸分子を移行させるまたは運搬する
ことが可能な核酸分子を指すために使用される。移行される核酸は、一般に、ベクター核
酸分子に連結される、例えば、それに挿入される。ベクターは、細胞における自律複製を
導く配列を含んでもよく、宿主細胞ＤＮＡへの組み込みを可能にするのに十分な配列を含
んでもよい。有用なベクターとしては、例えば、プラスミド（例えば、ＤＮＡプラスミド
またはＲＮＡプラスミド）、トランスポゾン、コスミド、細菌人工染色体、およびウイル
スベクターが挙げられる。有用なウイルスベクターとしては、例えば、複製欠損性レトロ
ウイルスおよびレンチウイルスが挙げられる。

当業者には明らかになる通り、「ウイルスベクター」という用語は、一般には核酸分子
の移行もしくは細胞のゲノム内への組み込みを容易にするウイルス由来の核酸エレメント
を含む核酸分子（例えば、導入プラスミド）、または、核酸移行を媒介するウイルス粒子
のいずれかを指すために広く使用されている。ウイルス粒子は、一般には、核酸（複数可
）に加えて、種々のウイルス構成成分および時には宿主細胞構成成分も含む。

ウイルスベクターという用語は、核酸を細胞内に移行することが可能なウイルスもしく
はウイルス粒子、または移行される核酸自体のいずれかを指し得る。ウイルスベクターお
よび導入プラスミドは、主にウイルスに由来する構造的かつ／または機能的な遺伝エレメ
ントを含有する。「レトロウイルスベクター」という用語は、主にレトロウイルスに由来
する構造的かつ機能的な遺伝エレメントまたはその一部を含有するウイルスベクターまた
はプラスミドを指す。「レンチウイルスベクター」という用語は、主にレンチウイルスに
由来するＬＴＲを含めた、構造的かつ機能的な遺伝エレメントまたはその一部を含有する
ウイルスベクターまたはプラスミドを指す。「ハイブリッドベクター」という用語は、レ
トロウイルス、例えばレンチウイルス配列とレンチウイルスものではないウイルス配列の
両方を含有するベクター、ＬＴＲまたは他の核酸を指す。一実施形態では、ハイブリッド
ベクターとは、逆転写、複製、組み込みおよび／またはパッケージングのための、レトロ
ウイルス、例えばレンチウイルス配列を含むベクターまたは導入プラスミドを指す。

特定の実施形態では、「レンチウイルスベクター」、「レンチウイルス発現ベクター」
という用語は、レンチウイルス導入プラスミドおよび／または感染性レンチウイルス粒子
を指すために使用することができる。本明細書において、例えばクローニング部位、プロ
モーター、調節エレメント、異種核酸などのエレメントに言及する場合、これらのエレメ
ントの配列は、本発明のレンチウイルス粒子ではＲＮＡ形態で存在し、本発明のＤＮＡプ
ラスミドではＤＮＡ形態で存在することが理解されるべきである。

プロウイルスの各末端には、「長い末端反復」または「ＬＴＲ」と称される構造がある
。「長い末端反復（ＬＴＲ）」という用語は、レトロウイルスＤＮＡの末端に位置する、
それらの天然配列に関しては直接反復配列であり、Ｕ３、ＲおよびＵ５領域を含有する、
塩基対のドメインを指す。ＬＴＲは、一般に、レトロウイルス遺伝子の発現（例えば、促
進、開始および遺伝子転写物のポリアデニル化）のため、およびウイルス複製のための基
本的な機能をもたらす。ＬＴＲは、転写制御エレメント、ポリアデニル化シグナルならび
にウイルスゲノムの複製および組み込みのために必要な配列を含めた多数の調節シグナル
を含有する。ウイルスＬＴＲは、Ｕ３、ＲおよびＵ５と称される３つの領域に分けられる
。Ｕ３領域は、エンハンサーおよびプロモーターエレメントを含有する。Ｕ５領域は、プ
ライマー結合性部位とＲ領域の間の配列であり、ポリアデニル化配列を含有する。Ｒ（反
復）領域は、Ｕ３領域とＵ５領域に挟まれている。ＬＴＲは、Ｕ３、ＲおよびＵ５領域で
構成され、ウイルスゲノムの５’末端と３’末端の両方に見られる。５’ＬＴＲには、ゲ
ノムの逆転写に必要な配列（ｔＲＮＡプライマー結合性部位）およびウイルスＲＮＡの、
粒子への効率的なパッケージングに必要な配列（プシー部位）が隣接している。

本明細書で使用される場合、「パッケージングシグナル」または「パッケージング配列
」という用語は、ウイルスＲＮＡのウイルスカプシドまたは粒子への挿入に必要である、
レトロウイルスゲノム内に位置する配列を指す。例えば、Ｃｌｅｖｅｒら、１９９５年、
Ｊ． ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、６９巻、４号；２１０１〜２１０９頁を参照されたい。
いくつかのレトロウイルスベクターは、ウイルスゲノムのカプシド形成に必要な最小のパ
ッケージングシグナル（プシー［Ψ］配列とも称される）を使用する。したがって、本明
細書で使用される場合、「パッケージング配列」、「パッケージングシグナル」、「プシ
ー」という用語および「Ψ」という記号は、ウイルス粒子形成の間のレトロウイルスＲＮ
Ａ鎖のカプシド形成に必要な非コード配列への言及に使用されている。

種々の実施形態では、ベクターは、改変された５’ＬＴＲおよび／または３’ＬＴＲを
含む。ＬＴＲのいずれかまたは両方が、これらに限定されないが、１つまたは複数の欠失
、挿入、または置換を含めた、１つまたは複数の改変を含んでよい。３’ＬＴＲの改変は
、多くの場合、レンチウイルスまたはレトロウイルス系の安全性を改善するために、ウイ
ルスを複製欠損性にすることによって行われる。本明細書で使用される場合、「複製欠損
性」という用語は、完全な、有効な複製を行うことができず、したがって、感染性ビリオ
ンが産生されないウイルス（例えば、複製欠損性レンチウイルス後代）を指す。「複製コ
ンピテント」という用語は、複製することが可能であり、したがって、ウイルスのウイル
ス複製が感染性ビリオンを産生可能である野生型ウイルスまたは変異体ウイルス（例えば
、複製コンピテントレンチウイルス後代）を指す。

「自己不活性化」（ＳＩＮ）ベクターとは、最初のラウンドのウイルス複製を超えての
ウイルス転写を防止するために、Ｕ３領域として公知の右側（３’）ＬＴＲエンハンサー
−プロモーター領域が改変された（例えば、欠失または置換によって）複製欠損性ベクタ
ー、例えば、レトロウイルスまたはレンチウイルスベクターを指す。これは、右側（３’
）ＬＴＲ Ｕ３領域がウイルス複製の間に左側（５’）ＬＴＲ Ｕ３領域の鋳型として使
用され、したがって、ウイルス転写物はＵ３エンハンサー−プロモーターなしでは作られ
ないことに起因する。本発明のさらなる実施形態では、Ｕ５領域が、例えば理想的なポリ
（Ａ）配列で置き換えられるように、３’ＬＴＲを改変する。３’ＬＴＲ、５’ＬＴＲ、
または３’ＬＴＲと５’ＬＴＲの両方に対する改変などのＬＴＲに対する改変も本発明に
包含されることに留意するべきである。

５’ＬＴＲのＵ３領域を異種プロモーターで置き換えて、ウイルス粒子の産生の間にウ
イルスゲノムの転写を駆動することにより、追加的な安全性の増強が提供される。使用す
ることができる異種プロモーターの例としては、例えば、ウイルスシミアンウイルス４０
（ＳＶ４０）（例えば、初期または後期）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（例えば、
最初期の）、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳ
Ｖ）、および単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）（チミジンキナーゼ）プロモーターが挙げ
られる。典型的なプロモーターは、Ｔａｔ非依存的に高レベルの転写を駆動することがで
きる。この置き換えにより、ウイルス産生系に完全なＵ３配列が存在しなくなるので、複
製コンピテントウイルスを生成する組換えの可能性が低下する。ある特定の実施形態では
、異種プロモーターは、ウイルスゲノムが転写される様式の制御における追加的な利点を
有する。例えば、異種プロモーターは、誘導性であってよく、したがって、ウイルスゲノ
ムの全部または一部の転写は、誘導因子が存在する場合にのみ起こる。誘導因子としては
、これらに限定されないが、１つまたは複数の化学化合物または宿主細胞を培養する温度
またはｐＨなどの生理的条件が挙げられる。

一部の実施形態では、ウイルスベクターは、ＴＡＲエレメントを含む。「ＴＡＲ」とい
う用語は、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ）ＬＴＲのＲ領域に位置する「トランス活性
化応答」遺伝エレメントを指す。このエレメントは、レンチウイルストランス活性化因子
（ｔａｔ）遺伝エレメントと相互作用してウイルス複製を増強する。しかし、このエレメ
ントは、５’ＬＴＲのＵ３領域を異種プロモーターで置き換える実施形態では必要ない。

「Ｒ領域」とは、キャップ形成基の開始（すなわち、転写の開始）で始まり、ポリＡト
ラクトが始まる直前で終わる、レトロウイルスＬＴＲ内の領域を指す。Ｒ領域は、Ｕ３領
域とＵ５領域に挟まれているとも定義される。Ｒ領域は、逆転写の間に新生ＤＮＡのゲノ
ムの一方の末端から他方の末端への移行を可能にする役割を果たす。

本明細書で使用される場合、「ＦＬＡＰエレメント」という用語は、その配列に、レト
ロウイルス、例えば、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２の中心ポリプリントラクト（ｃｅｎｔ
ｒａｌ ｐｏｌｙｐｕｒｉｎｅ ｔｒａｃｔ）および中心終結配列（ｃＰＰＴおよびＣＴ
Ｓ）を含む核酸を指す。適切なＦＬＡＰエレメントは、米国特許第６，６８２，９０７号
およびＺｅｎｎｏｕら、２０００年、Ｃｅｌｌ、１０１巻：１７３頁に記載されている。
ＨＩＶ−１逆転写の間、中心ポリプリントラクト（ｃＰＰＴ）におけるプラス鎖ＤＮＡの
中心的な開始および中心終結配列（ＣＴＳ）における中心的な終結により、三本鎖ＤＮＡ
構造：ＨＩＶ−１中心ＤＮＡフラップの形成が導かれる。いかなる理論に縛られることも
望むものではないが、ＤＮＡフラップは、レンチウイルスゲノム核内移行のシス活性決定
因子として作用し得、かつ／またはウイルスの力価を増大させ得る。特定の実施形態では
、レトロウイルスまたはレンチウイルスベクターの骨格は、ベクター内の目的の異種遺伝
子の上流または下流の１つまたは複数のＦＬＡＰエレメントを含む。例えば、特定の実施
形態では、導入プラスミドはＦＬＡＰエレメントを含む。一実施形態では、本発明のベク
ターは、ＨＩＶ−１から単離されたＦＬＡＰエレメントを含む。

一実施形態では、レトロウイルスまたはレンチウイルス移入ベクターは、１つまたは複
数の移出エレメントを含む。「移出エレメント」という用語は、ＲＮＡ転写物の細胞の核
から細胞質への輸送を調節するシス作用性転写後調節エレメントを指す。ＲＮＡ移出エレ
メントの例としては、これらに限定されないが、ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）ｒｅ
ｖ応答エレメント（ＲＲＥ）（例えば、Ｃｕｌｌｅｎら、１９９１年、Ｊ． Ｖｉｒｏｌ
． ６５巻：１０５３頁；およびＣｕｌｌｅｎら、１９９１年、Ｃｅｌｌ ５８巻：４２
３頁を参照されたい）、およびＢ型肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＨＰＲＥ）が挙
げられる。一般に、ＲＮＡ移出エレメントは、遺伝子の３’ＵＴＲ内に配置され、また、
１つまたは多数のコピーとして挿入することができる。

特定の実施形態では、ウイルスベクター内の異種配列の発現を、転写後調節エレメント
、効率的なポリアデニル化部位、および場合によって、転写終結シグナルをベクターに組
み入れることによって増加させる。種々の転写後調節エレメント、例えば、ウッドチャッ
ク肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ；Ｚｕｆｆｅｒｅｙら、１９９９年、Ｊ
． Ｖｉｒｏｌ．、７３巻：２８８６頁）；Ｂ型肝炎ウイルスに存在する転写後調節エレ
メント（ＨＰＲＥ）（Ｈｕａｎｇら、Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ．、５巻：３８６
４頁）などは、異種核酸のタンパク質での発現を増加させることができる（Ｌｉｕら、１
９９５年、Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．、９巻：１７６６頁）。特定の実施形態では、本発明の
ベクターは、ＷＰＲＥまたはＨＰＲＥなどの転写後調節エレメントを含む。

特定の実施形態では、本発明のベクターは、ＷＰＲＥまたはＨＰＲＥなどの転写後調節
エレメントを欠くまたはそれを含まない。なぜなら、一部の場合には、これらのエレメン
トが、細胞形質転換のリスクを上昇させ、かつ／または、ｍＲＮＡ転写物の量を実質的に
もしくは有意に増加させないまたはｍＲＮＡ安定性を増加させないからである。したがっ
て、一部の実施形態では、本発明のベクターは、追加的な安全策として、ＷＰＲＥまたは
ＨＰＲＥを欠くまたはそれを含まない。

異種核酸転写物の効率的な終結およびポリアデニル化を導くエレメントは、異種遺伝子
発現を増加させる。転写終結シグナルは、一般に、ポリアデニル化シグナルの下流に見い
だされる。特定の実施形態では、ベクターは、発現させるポリペプチドをコードするポリ
ヌクレオチドの３’側にポリアデニル化配列を含む。「ポリＡ部位」または「ポリＡ配列
」という用語は、本明細書で使用される場合、ＲＮＡポリメラーゼＩＩによる新生ＲＮＡ
転写物の終結およびポリアデニル化の両方を導くＤＮＡ配列を示す。ポリアデニル化配列
は、コード配列の３’末端にポリＡ尾部を付加することによってｍＲＮＡ安定性を促進し
、したがって、翻訳効率の上昇に寄与することができる。ポリＡ尾部を欠く転写物は不安
定であり、迅速に分解されるので、組換え転写物の効率的なポリアデニル化が望ましい。
本発明のベクターに使用することができるポリＡシグナルの実例としては、理想的なポリ
Ａ配列（例えば、ＡＡＴＡＡＡ、ＡＴＴＡＡＡ、ＡＧＴＡＡＡ）、ウシ成長ホルモンポリ
Ａ配列（ＢＧＨｐＡ）、ウサギβ−グロビンポリＡ配列（ｒβｇｐＡ）、または当技術分
野で公知の別の適切な異種性もしくは内因性ポリＡ配列が挙げられる。

ある特定の実施形態では、レトロウイルスまたはレンチウイルスベクターは、１つまた
は複数のインスレーターエレメントをさらに含む。インスレーターエレメントは、レンチ
ウイルスが発現する配列、例えば、治療用ポリペプチドの、ゲノムＤＮＡに存在するシス
作用性エレメントによって媒介され得、移入配列の調節解除された発現を導き得る組込み
部位効果（すなわち、位置効果；例えば、Ｂｕｒｇｅｓｓ−Ｂｅｕｓｓｅら、２００２年
、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．、ＵＳＡ、９９巻：１６４３３頁；お
よびＺｈａｎら、２００１年、Ｈｕｍ． Ｇｅｎｅｔ．、１０９巻：４７１頁を参照され
たい）からの保護に寄与し得る。一部の実施形態では、移入ベクターは、３’ＬＴＲに１
つまたは複数のインスレーターエレメントを含み、プロウイルスが宿主ゲノムに組み込ま
れると、プロウイルスは、３’ＬＴＲを複製することにより、５’ＬＴＲまたは３’ＬＴ
Ｒの両方に１つまたは複数のインスレーターを含める。本発明における使用に適したイン
スレーターとしては、これに限定されないが、ニワトリβ−グロビンインスレーターが挙
げられる（参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｈｕｎｇら、１９９３年、Ｃｅｌｌ
７４巻；５０５頁；Ｃｈｕｎｇら、１９９７年、ＰＮＡＳ ９４巻；５７５頁；およびＢ
ｅｌｌら、１９９９年、Ｃｅｌｌ ９８巻；３８７頁を参照されたい）。インスレーター
エレメントの例としては、これに限定されないが、ニワトリＨＳ４などの、β−グロビン
遺伝子座由来のインスレーターが挙げられる。

本発明のある特定の実施形態によると、ウイルスベクター骨格配列の大部分または全て
が、レンチウイルス、例えば、ＨＩＶ−１に由来する。しかし、レトロウイルスおよび／
またはレンチウイルス配列の多くの異なる供給源を使用するまたは組み合わせることがで
き、レンチウイルス配列のいくつかにおける多数の置換および変更を、本明細書に記載の
機能を果たす移入ベクターの能力を損なうことなく適応させることができることが理解さ
れるべきである。さらに、種々のレンチウイルスベクターが当技術分野で公知であり（Ｎ
ａｌｄｉｎｉら、（１９９６ａ年、１９９６ｂ年、および１９９８年）；Ｚｕｆｆｅｒｅ
ｙら、（１９９７年）；Ｄｕｌｌら、１９９８年、米国特許第６，０１３，５１６号；お
よび同第５，９９４，１３６号を参照されたい）、その多くを本発明のウイルスベクター
または導入プラスミドの作製に適合させることができる。

種々の実施形態では、本発明のベクターは、ＣＡＲポリペプチドをコードするポリヌク
レオチドに作動可能に連結したプロモーターを含む。ベクターは１つまたは複数のＬＴＲ
を有してよく、いずれのＬＴＲも、１つまたは複数のヌクレオチドの置換、付加、または
欠失などの１つまたは複数の修飾を含む。ベクターは、形質導入効率を上昇させるための
１つまたは複数のアクセサリーエレメント（例えば、ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ）、ウイルスパ
ッケージングを増加させるための１つまたは複数のアクセサリーエレメント（例えば、プ
シー（Ψ）パッケージングシグナル、ＲＲＥ）、および／または治療用遺伝子の発現を増
加させる他のエレメント（例えば、ポリ（Ａ）配列）をさらに含んでよく、場合によって
、ＷＰＲＥまたはＨＰＲＥを含んでよい。

特定の実施形態では、本発明の移入ベクターは、左側（５’）レトロウイルスＬＴＲ；
中心ポリプリントラクト／ＤＮＡフラップ（ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ）；レトロウイルス移出
エレメント；本明細書において意図されているＣＡＲポリペプチドをコードするポリヌク
レオチドに作動可能に連結したＭＮＤプロモーター；および右側（３’）レトロウイルス
ＬＴＲ；および場合によってＷＰＲＥまたはＨＰＲＥを含む。

特定の実施形態では、本発明の移入ベクターは、左側（５’）レトロウイルスＬＴＲ；
レトロウイルス移出エレメント；本明細書において意図されているＣＡＲポリペプチドを
コードするポリヌクレオチドに作動可能に連結したＭＮＤプロモーター；右側（３’）レ
トロウイルスＬＴＲ；およびポリ（Ａ）配列；および場合によってＷＰＲＥまたはＨＰＲ
Ｅを含む。別の特定の実施形態では、本発明は、左側（５’）ＬＴＲ；ｃＰＰＴ／ＦＬＡ
Ｐ；ＲＲＥ；本明細書において意図されているＣＡＲポリペプチドをコードするポリヌク
レオチドに作動可能に連結したＭＮＤプロモーター；右側（３’）ＬＴＲ；およびポリア
デニル化配列；および場合によってＷＰＲＥまたはＨＰＲＥを含むレンチウイルスベクタ
ーを提供する。

ある特定の実施形態では、本発明は、左側（５’）ＨＩＶ−１ ＬＴＲ；プシー（Ψ）
パッケージングシグナル；ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ；ＲＲＥ；本明細書において意図されてい
るＣＡＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結したＭＮＤプロモ
ーター；右側（３’）自己不活性化（ｓｅｌｆ−ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇ）（ＳＩＮ）
ＨＩＶ−１ ＬＴＲ；およびウサギβ−グロビンポリアデニル化配列；および場合によっ
てＷＰＲＥまたはＨＰＲＥを含むレンチウイルスベクターを提供する。

別の実施形態では、本発明は、少なくとも１つのＬＴＲ；中心ポリプリントラクト／Ｄ
ＮＡフラップ（ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ）；レトロウイルス移出エレメント；および本明細書
において意図されているＣＡＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作動可能に
連結したＭＮＤプロモーター；および場合によってＷＰＲＥまたはＨＰＲＥを含むベクタ
ーを提供する。

特定の実施形態では、本発明は、少なくとも１つのＬＴＲ；ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ；ＲＲ
Ｅ；本明細書において意図されているＣＡＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
に作動可能に連結したＭＮＤプロモーター；およびポリアデニル化配列；および場合によ
ってＷＰＲＥまたはＨＰＲＥを含むベクターを提供する。

ある特定の実施形態では、本発明は、少なくとも１つのＳＩＮ ＨＩＶ−１ ＬＴＲ；
プシー（Ψ）パッケージングシグナル；ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ；ＲＲＥ；本明細書において
意図されているＣＡＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結した
ＭＮＤプロモーター；およびウサギβ−グロビンポリアデニル化配列；および場合によっ
てＷＰＲＥまたはＨＰＲＥを提供する。

多くの他の異なる実施形態を既存の本発明の実施形態から適合させることができること
が当業者には理解されよう。

「宿主細胞」とは、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、またはｉｎ ｖｉｔｒｏにおい
て本発明の組換えベクターまたはポリヌクレオチドを用いてトランスフェクト、感染、ま
たは形質導入を行った細胞を含む。宿主細胞は、パッケージング細胞、産生細胞、および
ウイルスベクターを感染させた細胞を含み得る。特定の実施形態では、本発明のウイルス
ベクターを感染させた宿主細胞を、療法を必要とする対象に投与する。ある特定の実施形
態では、「標的細胞」という用語は、宿主細胞と互換的に使用され、トランスフェクト、
感染、または形質導入を行った所望の細胞型の細胞を指す。好ましい実施形態では、標的
細胞は、Ｔ細胞である。

妥当なウイルス力価を達成するためには、多くの場合、大規模なウイルス粒子産生が必
要である。ウイルス粒子は、ウイルス構造遺伝子および／またはアクセサリー遺伝子、例
えば、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、ｔａｔ、ｒｅｖ、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、ｖｐｘ、ま
たはｎｅｆ遺伝子または他のレトロウイルス遺伝子を含むパッケージング細胞株に移入ベ
クターをトランスフェクトすることによって産生される。

本明細書で使用される場合、「パッケージングベクター」という用語は、パッケージン
グシグナルを欠き、１種、２種、３種、４種またはそれ超のウイルス構造遺伝子および／
またはアクセサリー遺伝子をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターまたはウイ
ルスベクターを指す。一般には、パッケージング細胞にパッケージングベクターを含め、
トランスフェクション、形質導入または感染によって細胞に導入する。トランスフェクシ
ョン、形質導入または感染のための方法は当業者に周知である。本発明のレトロウイルス
／レンチウイルス移入ベクターをパッケージング細胞株にトランスフェクション、形質導
入または感染によって導入して、産生細胞または細胞株を生成することができる。本発明
のパッケージングベクターは、例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、リポフ
ェクションまたは電気穿孔を含めた標準の方法によってヒト細胞または細胞株に導入する
ことができる。一部の実施形態では、パッケージングベクターを、ネオマイシン、ハイグ
ロマイシン、ピューロマイシン、ブラストサイジン、ゼオシン、チミジンキナーゼ、ＤＨ
ＦＲ、ＧｌｎシンテターゼまたはＡＤＡなどの優性選択可能マーカーと一緒に細胞に導入
し、その後、適切な薬物の存在下で選択し、クローンを単離する。選択可能マーカー遺伝
子を、パッケージングベクターによりコードされる遺伝子と、例えば、ＩＲＥＳまたは自
己切断性ウイルスペプチドによって物理的に連結することができる。

ウイルスエンベロープタンパク質（ｅｎｖ）は、細胞株から生成される組換えレトロウ
イルスによって最終的に感染および形質転換することができる宿主細胞の範囲を決定する
。ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＳＩＶ、ＦＩＶおよびＥＩＶなどのレンチウイルスの場合で
は、ｅｎｖタンパク質は、ｇｐ４１およびｇｐ１２０を含む。本発明のパッケージング細
胞によって発現されるウイルスｅｎｖタンパク質は、以前記載されている通り、ウイルス
ｇａｇおよびｐｏｌ遺伝子とは別のベクター上にコードされることが好ましい。

本発明において使用することができるレトロウイルス由来のｅｎｖ遺伝子の実例として
は、これらに限定されないが、ＭＬＶエンベロープ、１０Ａ１エンベロープ、ＢＡＥＶ、
ＦｅＬＶ−Ｂ、ＲＤ１１４、ＳＳＡＶ、エボラ、センダイ、ＦＰＶ（家禽ペストウイルス
）、およびインフルエンザウイルスエンベロープが挙げられる。同様に、ＲＮＡウイルス
（例えば、Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ、Ａｓｔｒｏｖｉ
ｒｉｄａｅ、Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、Ｃｏｒｏｎａｖｉｒ
ｉｄａｅ、Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｆｉｌｏｖ
ｉｒｉｄａｅ、Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ、Ａｒｅ
ｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｂｉｒｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｒｅｔｒｏｖ
ｉｒｉｄａｅのＲＮＡウイルスファミリー）に由来するエンベロープ、ならびにＤＮＡウ
イルス（Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｃｉｒｃｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｐａｒｖｏｖｉｒ
ｉｄａｅ、Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ、Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｈｅｒｐｅｓｖｉ
ｒｉｄａｅ、Ｐｏｘｙｉｒｉｄａｅ、およびＩｒｉｄｏｖｉｒｉｄａｅのファミリー）に
由来するエンベロープをコードする遺伝子を利用することができる。代表例としては、Ｆ
ｅＬＶ、ＶＥＥ、ＨＦＶＷ、ＷＤＳＶ、ＳＦＶ、狂犬病、ＡＬＶ、ＢＩＶ、ＢＬＶ、ＥＢ
Ｖ、ＣＡＥＶ、ＳＮＶ、ＣｈＴＬＶ、ＳＴＬＶ、ＭＰＭＶ、ＳＭＲＶ、ＲＡＶ、ＦｕＳＶ
、ＭＨ２、ＡＥＶ、ＡＭＶ、ＣＴ１０、およびＥＩＡＶが挙げられる。

他の実施形態では、本発明のウイルスをシュードタイピングするためのエンベロープタ
ンパク質として、これらに限定されないが、以下のウイルスのいずれかが挙げられる：Ｈ
１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ３Ｎ２およびＨ５Ｎ１（トリインフルエンザ）などのＡ型インフル
エンザ、Ｂ型インフルエンザ、Ｃ型インフルエンザウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝
炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、ロタウイルス、
ノーウォークウイルス群の任意のウイルス、腸内アデノウイルス、パルボウイルス、デン
グ熱ウイルス、サル痘、モノネガウイルス目、リッサウイルス、例えば、狂犬病ウイルス
、ラゴスコウモリウイルス（Ｌａｇｏｓ ｂａｔ ｖｉｒｕｓ）、モコラウイルス（Ｍｏ
ｋｏｌａ ｖｉｒｕｓ）、ドゥベンヘイジウイルス（Ｄｕｖｅｎｈａｇｅ ｖｉｒｕｓ）
、ヨーロッパコウモリウイルス１＆２およびオーストラリアコウモリウイルスなど、エフ
ェメロウイルス、ベシクロウイルス、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、ヘルペスウイル
ス、例えば、単純ヘルペスウイルス１型および２型、水痘帯状疱疹、サイトメガロウイル
ス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ヒトヘルペスウイルス（ＨＨＶ）、ヒトヘ
ルペスウイルス６型および８型、ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）、パピローマウイル
ス、マウスガンマヘルペスウイルス、アレナウイルス、例えば、アルゼンチン出血熱ウイ
ルス、ボリビア出血熱ウイルス、サビア関連出血熱ウイルス、ベネズエラ出血熱ウイルス
、ラッサ熱ウイルス、マチュポウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、
Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄｉａｅ、例えば、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、ハンタウイル
ス、腎症候群を伴う出血熱を引き起こすウイルス、リフトバレー熱ウイルス、エボラ出血
熱およびマールブルグ出血熱を含めたＦｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ（フィロウイルス）、キャ
サヌール森林病（Ｋａｙｓａｎｕｒ Ｆｏｒｅｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ）ウイルス、オムス
ク出血熱ウイルス、ダニ媒介脳炎を引き起こすウイルスを含めたＦｌａｖｉｖｉｒｉｄａ
ｅ、ならびにＰａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、例えば、ヘンドラウイルスおよびニバー
ウイルス、大痘瘡および小痘瘡（天然痘）、アルファウイルス、例えば、ベネズエラウマ
脳炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、ＳＡＲＳ関連コロナウイ
ルス（ＳＡＲＳ−ＣｏＶ）、西ナイルウイルス、任意の脳炎を引き起こすウイルス。

一実施形態では、本発明は、組換えレトロウイルス、例えば、ＶＳＶ−Ｇ糖タンパク質
を用いてシュードタイピングされたレンチウイルスを産生するパッケージング細胞を提供
する。

「シュードタイプ」または「シュードタイピング」という用語は、本明細書で使用され
る場合、ウイルスエンベロープタンパク質が、好ましい特性を有する別のウイルスのエン
ベロープタンパク質で置換されたウイルスを指す。例えば、ＨＩＶエンベロープタンパク
質（ｅｎｖ遺伝子によりコードされる）は通常ウイルスをＣＤ４＋提示細胞に標的化する
ので、ＨＩＶを水疱性口内炎ウイルスＧタンパク質（ＶＳＶ−Ｇ）エンベロープタンパク
質でシュードタイピングし、それにより、ＨＩＶをより広い範囲の細胞に感染させること
を可能にすることができる。本発明の好ましい実施形態では、レンチウイルスエンベロー
プタンパク質をＶＳＶ−Ｇでシュードタイピングする。一実施形態では、本発明は、ＶＳ
Ｖ−Ｇエンベロープ糖タンパク質を用いてシュードタイピングした組換えレトロウイルス
、例えば、レンチウイルスを産生するパッケージング細胞を提供する。

本明細書で使用される場合、「パッケージング細胞株」という用語は、パッケージング
シグナルを含有しないが、ウイルス粒子の正しいパッケージングに必要なウイルス構造タ
ンパク質および複製酵素（例えば、ｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖ）を安定にまたは一過性
に発現する細胞株に関して使用される。本発明のパッケージング細胞を調製するために、
任意の適切な細胞株を使用することができる。一般に、細胞は、哺乳動物細胞である。特
定の実施形態では、パッケージング細胞株を作製するために使用する細胞は、ヒト細胞で
ある。使用することができる適切な細胞株としては、例えば、ＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞、
ＭＤＣＫ細胞、Ｃ３Ｈ １０Ｔ１／２細胞、ＦＬＹ細胞、Ｐｓｉ−２細胞、ＢＯＳＣ ２
３細胞、ＰＡ３１７細胞、ＷＥＨＩ細胞、ＣＯＳ細胞、ＢＳＣ １細胞、ＢＳＣ ４０細
胞、ＢＭＴ １０細胞、ＶＥＲＯ細胞、Ｗ１３８細胞、ＭＲＣ５細胞、Ａ５４９細胞、Ｈ
Ｔ１０８０細胞、２９３細胞、２９３Ｔ細胞、Ｂ−５０細胞、３Ｔ３細胞、ＮＩＨ３Ｔ３
細胞、ＨｅｐＧ２細胞、Ｓａｏｓ−２細胞、Ｈｕｈ７細胞、ＨｅＬａ細胞、Ｗ１６３細胞
、２１１細胞、および２１１Ａ細胞が挙げられる。好ましい実施形態では、パッケージン
グ細胞は、２９３細胞、２９３Ｔ細胞、またはＡ５４９細胞である。別の好ましい実施形
態では、細胞はＡ５４９細胞である。

本明細書で使用される場合、「産生細胞株」という用語は、パッケージング細胞株およ
びパッケージングシグナルを含む移入ベクター構築物を含む、組換えレトロウイルス粒子
を産生することができる細胞株を指す。感染性ウイルス粒子およびウイルスストック溶液
の作製は、従来の技法を使用して行うことができる。ウイルスストック溶液を調製する方
法は当技術分野で公知であり、例えば、Ｙ． Ｓｏｎｅｏｋａら（１９９５年）Ｎｕｃｌ
． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２３巻：６２８〜６３３頁、およびＮ． Ｒ． Ｌａｎｄａ
ｕら（１９９２年）Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ６６巻：５１１０〜５１１３頁によって例示さ
れている。感染性ウイルス粒子は、従来の技法を使用してパッケージング細胞から収集す
ることができる。例えば、感染性粒子は、当技術分野で公知の通り、細胞溶解、または細
胞培養物の上清の収集により収集することができる。場合によって、所望であれば、収集
されたウイルス粒子を精製することができる。適切な精製技法は、当業者に周知である。

遺伝子（複数可）または他のポリヌクレオチド配列を、トランスフェクションではなく
、レトロウイルスまたはレンチウイルスベクターを使用してウイルス感染によって送達す
ることは、「形質導入」と称される。一実施形態では、レトロウイルスベクターを、感染
およびプロウイルスの組み込みによって細胞に形質導入する。ある特定の実施形態では、
標的細胞、例えば、Ｔ細胞は、ウイルスまたはレトロウイルスベクターを使用した感染に
よって細胞に送達された遺伝子または他のポリヌクレオチド配列を含む場合、「形質導入
」されている。特定の実施形態では、形質導入された細胞は、細胞のゲノム内に、レトロ
ウイルスまたはレンチウイルスベクターによって送達された１つまたは複数の遺伝子また
は他のポリヌクレオチド配列を含む。

特定の実施形態では、１つまたは複数のポリペプチドを発現する本発明のウイルスベク
ターを用いて形質導入を行った宿主細胞を、Ｂ細胞悪性疾患を治療および／または予防す
るために対象に投与する。本発明のある特定の実施形態に従って利用することができる、
遺伝子療法におけるウイルスベクターの使用に関する他の方法は、例えば、Ｋａｙ， Ｍ
． Ａ．（１９９７年）Ｃｈｅｓｔ １１１巻（補遺６号）：１３８Ｓ〜１４２Ｓ頁；Ｆ
ｅｒｒｙ， Ｎ．およびＨｅａｒｄ， Ｊ． Ｍ．（１９９８年）Ｈｕｍ． Ｇｅｎｅ
Ｔｈｅｒ． ９巻：１９７５〜８１頁；Ｓｈｉｒａｔｏｒｙ， Ｙ．ら（１９９９年）Ｌ
ｉｖｅｒ １９巻：２６５〜７４頁；Ｏｋａ， Ｋ．ら（２０００年）Ｃｕｒｒ． Ｏｐ
ｉｎ． Ｌｉｐｉｄｏｌ． １１巻：１７９〜８６頁；Ｔｈｕｌｅ， Ｐ． Ｍ．および
Ｌｉｕ， Ｊ． Ｍ．（２０００年）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． ７巻：１７４４〜５２頁；
Ｙａｎｇ， Ｎ． Ｓ．（１９９２年）Ｃｒｉｔ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．
１２巻：３３５〜５６頁；Ａｌｔ， Ｍ．（１９９５年）Ｊ． Ｈｅｐａｔｏｌ． ２
３巻：７４６〜５８頁；Ｂｒｏｄｙ， Ｓ． Ｌ．およびＣｒｙｓｔａｌ， Ｒ． Ｇ．
（１９９４年）Ａｎｎ． Ｎ．Ｙ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ７１６巻：９０〜１０１頁
；Ｓｔｒａｙｅｒ， Ｄ． Ｓ．（１９９９年）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ． Ｉｎｖｅｓ
ｔｉｇ． Ｄｒｕｇｓ ８巻：２１５９〜２１７２頁；Ｓｍｉｔｈ−Ａｒｉｃａ， Ｊ．
Ｒ．およびＢａｒｔｌｅｔｔ， Ｊ． Ｓ．（２００１年）Ｃｕｒｒ． Ｃａｒｄｉｏ
ｌ． Ｒｅｐ． ３巻：４３〜４９頁；およびＬｅｅ， Ｈ． Ｃ．ら（２０００年）Ｎ
ａｔｕｒｅ ４０８巻：４８３〜８頁に見いだすことができる。

Ｇ．遺伝子改変細胞
本発明は、特定の実施形態において、がんの治療において使用するための、本明細書に
おいて意図されているＣＡＲを発現するように遺伝子改変した細胞を意図している。本明
細書で使用される場合、「遺伝子操作された」または「遺伝子改変された」という用語は
、細胞内の全遺伝物質に余分の遺伝物質をＤＮＡまたはＲＮＡの形態で付加することを指
す。「遺伝子改変細胞」、「改変細胞」、および「向け直された細胞」という用語は、互
換的に使用される。本明細書で使用される場合、「遺伝子療法」という用語は、遺伝子の
発現を回復させる、補正する、もしくは改変する、または治療用ポリペプチド、例えば、
ＣＡＲを発現させる目的で、細胞内の全遺伝物質に余分の遺伝物質をＤＮＡまたはＲＮＡ
の形態で導入することを指す。

特定の実施形態では、ＭＮＤプロモーターを含み、本明細書において意図されているＣ
ＡＲをコードするベクターを免疫エフェクター細胞に導入し、発現させて、それらの特異
性を目的の標的抗原に向け直す。「免疫エフェクター細胞」とは、１つまたは複数のエフ
ェクター機能（例えば、細胞傷害性細胞死滅活性、サイトカインの分泌、ＡＤＣＣおよび
／またはＣＤＣの誘導）を有する、免疫系の任意の細胞である。

本発明の免疫エフェクター細胞は、自己由来／自原性（「自己」）であっても非自己由
来（「非自己」、例えば、同種異系、同系または異種）であってもよい。

「自己由来」とは、本明細書で使用される場合、同じ対象に由来する細胞を指す。

「同種異系」とは、本明細書で使用される場合、比較される細胞とは遺伝的に異なる同
じ種の細胞を指す。

「同系」とは、本明細書で使用される場合、比較される細胞と遺伝的に同一である異な
る対象の細胞を指す。

「異種」とは、本明細書で使用される場合、比較される細胞とは異なる種の細胞を指す
。好ましい実施形態では、本発明の細胞は同種異系である。

本明細書において意図されているＣＡＲを含むベクターと共に使用する例示的な免疫エ
フェクター細胞としては、Ｔリンパ球が挙げられる。「Ｔ細胞」または「Ｔリンパ球」と
いう用語は当技術分野で認識されており、胸腺細胞、未成熟Ｔリンパ球、成熟Ｔリンパ球
、休止状態のＴリンパ球、または活性化されたＴリンパ球を含むものとする。Ｔ細胞は、
Ｔヘルパー（Ｔｈ）細胞、例えば、Ｔヘルパー１（Ｔｈ１）またはＴヘルパー２（Ｔｈ２
）細胞であってよい。Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞（ＨＴＬ；ＣＤ４^＋Ｔ細胞）ＣＤ４^＋Ｔ
細胞、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ；ＣＤ８^＋Ｔ細胞）、ＣＤ４^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４
⁻ＣＤ８⁻Ｔ細胞、またはＴ細胞の任意の他のサブセットであってよい。特定の実施形態
における使用に適したＴ細胞の他の例示的な集団としては、ナイーブなＴ細胞およびメモ
リーＴ細胞が挙げられる。

当業者には理解される通り、ＭＮＤプロモーターを含み、ＣＡＲをコードするベクター
は、免疫エフェクター細胞として使用することもできる他の細胞に導入することができる
。具体的には、免疫エフェクター細胞として、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、好中球、およびマ
クロファージも挙げられる。免疫エフェクター細胞としては、エフェクター細胞の前駆体
も挙げられ、そのような前駆細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて免
疫エフェクター細胞に分化するように誘導することができる。したがって、特定の実施形
態では、免疫エフェクター細胞として、臍帯血、骨髄または動員末梢血に由来するＣＤ３
４^＋細胞の集団に含有される造血幹細胞（ＨＳＣ）などの免疫エフェクター細胞の前駆体
が挙げられ、これは、対象に投与されると成熟免疫エフェクター細胞に分化する、または
、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて成熟免疫エフェクター細胞に分化するように誘導することが
できる。

本明細書で使用される場合、ＭＮＤプロモーターを含み、抗原特異的ＣＡＲをコードす
るベクターを含有するように遺伝子操作された免疫エフェクター細胞は、「抗原特異的な
向け直された免疫エフェクター細胞」と称することができる。

「ＣＤ３４^＋細胞」という用語は、本明細書で使用される場合、その細胞表面上にＣＤ
３４タンパク質を発現する細胞を指す。「ＣＤ３４」とは、本明細書で使用される場合、
多くの場合、細胞間接着因子として作用し、リンパ節へのＴ細胞の進入に関与する細胞表
面糖タンパク質（例えば、シアロムチンタンパク質）を指す。ＣＤ３４^＋細胞集団は、造
血幹細胞（ＨＳＣ）を含有し、これは、患者に投与されると、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ
細胞、好中球および単球／マクロファージ系列の細胞を含めた全ての造血系列に分化し、
寄与する。

本発明は、本明細書において意図されているＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞を
作出するための方法を提供する。一実施形態では、方法は、個体から単離した免疫エフェ
クター細胞にトランスフェクトまたは形質導入を行い、したがって、免疫エフェクター細
胞に本明細書に記載の１つまたは複数のＣＡＲを発現させるステップを含む。ある特定の
実施形態では、免疫エフェクター細胞を個体から単離し、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてさら
なる操作を伴わずに遺伝子改変する。次いで、そのような細胞を個体に直接再投与するこ
とができる。さらなる実施形態では、免疫エフェクター細胞を、ＣＡＲを発現するように
遺伝子改変する前に、まずｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて活性化し、刺激して、増殖させる。
この点について、免疫エフェクター細胞は、遺伝子改変する（すなわち、本明細書におい
て意図されているＣＡＲを発現するように形質導入またはトランスフェクトを行う）前お
よび／またはその後に培養することができる。

特定の実施形態では、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏにお
いて操作または遺伝子改変する前に、細胞の供給源を対象から得る。特定の実施形態では
、ＣＡＲ−改変免疫エフェクター細胞はＴ細胞を含む。Ｔ細胞は、これらに限定されない
が、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位に由来する組織
、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を含めた、いくつかの供給源から得ることができる
。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、沈降、例えば、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離などの
当業者に公知のさまざまな任意の技法を使用して対象から収集した単位血液から得ること
ができる。一実施形態では、個体の循環血液由来の細胞をアフェレーシスによって得る。
アフェレーシス産物は、一般には、リンパ球、例えば、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、
他の有核白血球、赤血球、および血小板を含有する。一実施形態では、アフェレーシスに
よって収集した細胞を、血漿画分を除去するため、および、細胞を、その後の加工処理の
ために適切な緩衝液または培地に入れるために洗浄することができる。細胞は、ＰＢＳを
用いて、または、カルシウム、マグネシウム、および他の全てではないにせよほとんどの
二価カチオンを欠く別の適切な溶液を用いて洗浄することができる。当業者には理解され
る通り、洗浄ステップは、例えば、半自動フロースルー遠心分離機、例えば、Ｃｏｂｅ
２９９１ ｃｅｌｌ ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ、Ｂａｘｔｅｒ ＣｙｔｏＭａｔｅなどを使用
することによってなど、当業者に公知の方法によって達成することができる。洗浄後、細
胞を種々の生体適合性緩衝液または緩衝液を伴うもしくは伴わない他の食塩溶液に再懸濁
させることができる。ある特定の実施形態では、培養培地に直接再懸濁させた細胞ではア
フェレーシス試料の望ましくない構成成分を除去することができる。

ある特定の実施形態では、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から、赤血球を溶解させ、例え
ば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配による遠心分離によって単球を枯渇させることにより、
Ｔ細胞を単離する。以下のマーカー：ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ
、およびＣＤ４５ＲＯのうちの１つまたは複数を発現する特定のＴ細胞の亜集団を、正ま
たは負の選択技法によってさらに単離することができる。一実施形態では、ＣＤ３、ＣＤ
２８、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ、およびＣＤ４５ＲＯを発現する特定のＴ細胞の亜
集団を、正または負の選択技法によってさらに単離する。例えば、負の選択によるＴ細胞
集団の富化は、負の選択を受けた細胞に独特の表面マーカーを対象とする抗体の組合せを
用いて達成することができる。本発明で使用する１つの方法は、負の選択を受けた細胞上
に存在する細胞表面マーカーを対象とするモノクローナル抗体の反応混液を使用した負の
磁気免疫粘着またはフローサイトメトリーによる細胞選別および／または選択である。例
えば、ＣＤ４^＋細胞を負の選択によって富化するためには、モノクローナル抗体反応混液
は、一般に、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ、およびＣＤ８
に対する抗体を含む。フローサイトメトリーおよび細胞選別は、本発明において使用する
ための目的の細胞集団を単離するためにも使用することができる。

ＰＢＭＣは、本明細書において意図されているＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを
発現するように作動可能に連結したＭＮＤプロモーターを含むベクターを用いて直接遺伝
子改変することができる。ある特定の実施形態では、ＰＢＭＣを単離した後、Ｔリンパ球
をさらに単離し、ある特定の実施形態では、細胞傷害性Ｔリンパ球とヘルパーＴリンパ球
の両方を、遺伝子改変および／または増大の前、またはその後に、ナイーブなＴ細胞亜集
団、メモリーＴ細胞亜集団、およびエフェクターＴ細胞亜集団に選別することができる。

ＣＤ８^＋細胞は、標準の方法を使用することによって得ることができる。一部の実施形
態では、ＣＤ８^＋細胞を、ナイーブな細胞、セントラルメモリー細胞、およびエフェクタ
ー細胞に、ＣＤ８^＋細胞の型のそれぞれに関連する細胞表面抗原を同定することによって
さらに選別する。

ある特定の実施形態では、ナイーブなＣＤ８^＋Ｔリンパ球は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、
ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ１２７、およびＣＤ４５ＲＡを含めたナイーブなＴ細胞の表現型
マーカーの発現を特徴とする。

特定の実施形態では、メモリーＴ細胞は、ＣＤ８^＋末梢血リンパ球のＣＤ６２Ｌ^＋サブ
セットおよびＣＤ６２Ｌ⁻サブセットの両方に存在する。ＰＢＭＣを、抗ＣＤ８および抗
ＣＤ６２Ｌ抗体を用いて染色した後、ＣＤ６２Ｌ⁻ＣＤ８^＋画分とＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ８^＋
画分に選別する。一部の実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞の表現型マーカーの発
現はＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ３、およびＣＤ１２７を含み
、グランザイムＢについては陰性である。一部の実施形態では、セントラルメモリーＴ細
胞は、ＣＤ４５ＲＯ^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、ＣＤ８^＋Ｔ細胞である。

一部の実施形態では、エフェクターＴ細胞は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、およ
びＣＤ１２７について陰性であり、グランザイムＢおよびパーフォリンについて陽性であ
る。

ある特定の実施形態では、ＣＤ４^＋Ｔ細胞を亜集団にさらに選別する。例えば、ＣＤ４
^＋Ｔヘルパー細胞は、細胞表面抗原を有する細胞集団を同定することにより、ナイーブな
細胞、セントラルメモリー細胞、およびエフェクター細胞に選別することができる。ＣＤ
４^＋リンパ球は、標準の方法によって得ることができる。一部の実施形態では、ナイーブ
なＣＤ４^＋Ｔリンパ球は、ＣＤ４５ＲＯ⁻、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ４^＋Ｔ細
胞である。一部の実施形態では、セントラルメモリーＣＤ４^＋細胞は、ＣＤ６２Ｌ陽性か
つＣＤ４５ＲＯ陽性である。一部の実施形態では、エフェクターＣＤ４^＋細胞はＣＤ６２
ＬおよびＣＤ４５ＲＯ陰性である。

Ｔ細胞などの免疫エフェクター細胞を、公知の方法を使用して単離した後に遺伝子改変
することもでき、免疫エフェクター細胞を、遺伝子改変する前に、ｉｎ ｖｉｔｒｏにお
いて活性化し、増大させる（または、前駆体の場合では分化させる）こともできる。特定
の実施形態では、Ｔ細胞などの免疫エフェクター細胞を、本明細書において意図されてい
るキメラ抗原受容体を用いて遺伝子改変し（例えば、ＭＮＤプロモーターおよびＣＡＲを
コードする核酸を含むウイルスベクターを用いて形質導入を行う）、次いで、ｉｎ ｖｉ
ｔｒｏにおいて活性化し、増大させる。種々の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＡＲを発現す
るように遺伝子改変する前、またはその後に、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号
；同第６，５３４，０５５号；同第６，９０５，６８０号；同第６，６９２，９６４号；
同第５，８５８，３５８号；同第６，８８７，４６６号；同第６，９０５，６８１号；同
第７，１４４，５７５号；同第７，０６７，３１８号；同第７，１７２，８６９号；同第
７，２３２，５６６号；同第７，１７５，８４３号；同第５，８８３，２２３号；同第６
，９０５，８７４号；同第６，７９７，５１４号；同第６，８６７，０４１号；および米
国特許出願公開第２００６０１２１００５号に記載の方法を使用して活性化し、増大させ
ることができる。

一般に、Ｔ細胞は、ＣＤ３ ＴＣＲ複合体に関連するシグナルを刺激する薬剤およびＴ
細胞の表面上の共刺激分子を刺激するリガンドを付着させた表面と接触させることによっ
て増大させる。Ｔ細胞集団は、表面上に固定化した抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合性
断片もしくは抗ＣＤ２抗体と接触させることによって、または、カルシウムイオノフォア
と併せたプロテインキナーゼＣ活性化因子（例えば、ブリオスタチン）と接触させること
によって刺激することができる。Ｔ細胞の表面上のアクセサリー分子の共刺激も意図され
ている。

特定の実施形態では、ＰＢＭＣまたは単離されたＴ細胞を、ＩＬ−２、ＩＬ−７、およ
び／またはＩＬ−１５などの適切なサイトカインを伴う培養培地中で、一般にビーズまた
は他の表面に付着させた抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体などの刺激剤および共刺激剤と接
触させる。ＣＤ４^＋Ｔ細胞またはＣＤ８^＋Ｔ細胞のいずれかの増殖を刺激するために、抗
ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体。抗ＣＤ２８抗体の例としては、９．３、Ｂ−Ｔ３、Ｘ
Ｒ−ＣＤ２８（Ｄｉａｃｉｏｎｅ、Ｂｅｓａｎｃｏｎ、Ｆｒａｎｃｅ）が挙げられ、一般
に、当技術分野で公知の他の方法で可能であるのと同様に使用することができる（Ｂｅｒ
ｇら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｐｒｏｃ． ３０巻（８号）：３９７５〜３９７７頁、１
９９８年；Ｈａａｎｅｎら、Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １９０巻（９号）：１３１９〜
１３２８頁、１９９９年；Ｇａｒｌａｎｄら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈ． ２２
７巻（１〜２号）：５３〜６３頁、１９９９年）。同じビーズに付着させた抗ＣＤ３およ
び抗ＣＤ２８抗体は、「代理の」抗原提示細胞（ＡＰＣ）として機能する。他の実施形態
では、Ｔ細胞を、フィーダー細胞ならびに適切な抗体およびサイトカインを用い、ＵＳ６
０４０１７７；ＵＳ５８２７６４２；およびＷＯ２０１２１２９５１４に記載されている
ものなどの方法を使用して活性化し、刺激して、増殖させることができる。

他の実施形態では、Ｋ５６２、Ｕ９３７、７２１．２２１、Ｔ２、およびＣ１Ｒ細胞を
、種々の共刺激分子およびサイトカインの安定発現および分泌を導くように工学的に作製
することによって人工ＡＰＣ（ａＡＰＣ）を作出する。特定の実施形態では、Ｋ３２また
はＵ３２ ａＡＰＣを使用して、ＡＡＰＣ細胞表面上での、１種または複数種の、抗体に
基づく刺激性分子のディスプレイを導く。ａＡＰＣ上での種々の組合せの遺伝子の発現に
より、ヒトＴ細胞の活性化要件を正確に決定することが可能になり、したがって、ａＡＰ
Ｃを、特定の成長要件および別個の機能を有するＴ細胞サブセットの最適な繁殖のために
調整することができる。天然ＡＰＣの使用とは対照的に、ａＡＰＣでは、外因性サイトカ
インの添加を必要とせずに、機能的なヒトＣＤ８Ｔ細胞のｅｘ ｖｉｖｏにおける成長お
よび長期間にわたる増大が支持される。Ｔ細胞の集団は、これらに限定されないが、ＣＤ
１３７Ｌ（４−１ＢＢＬ）、ＣＤ１３４Ｌ（ＯＸ４０Ｌ）、および／またはＣＤ８０また
はＣＤ８６を含めた種々の共刺激分子を発現するａＡＰＣによって増大させることができ
る。最後に、ａＡＰＣにより、遺伝子改変Ｔ細胞を増大させるため、およびＣＤ８Ｔ細胞
上でのＣＤ２８発現を維持するための効率的なプラットフォームがもたらされる。ＷＯ０
３／０５７１７１およびＵＳ２００３／０１４７８６９において提供されるａＡＰＣは、
それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。

一実施形態では、ＣＤ３４^＋細胞に、本発明による核酸構築物を用いて形質導入を行う
。ある特定の実施形態では、形質導入されたＣＤ３４^＋細胞は、対象、一般に、最初に細
胞を単離した対象に投与された後、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて成熟免疫エフェクター細胞に
分化する。別の実施形態では、ＣＤ３４^＋細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、本明細書に
記載のＣＡＲに曝露する前、または本明細書に記載のＣＡＲを用いて遺伝子改変した後に
、以下のサイトカイン：Ｆｌｔ−３リガンド（ＦＬＴ３）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、巨核
球増殖分化因子（ＴＰＯ）、ＩＬ−３およびＩＬ−６のうちの１つまたは複数を用いて、
以前に記載されている方法（Ａｓｈｅｕｅｒら、２００４年；Ｉｍｒｅｎら、２００４年
）に従って刺激することができる。

本発明は、がんを治療するための、本明細書に開示されているＣＡＲを含む改変免疫エ
フェクター細胞の集団を提供する。例えば、改変免疫エフェクター細胞の集団は、本明細
書に記載の通りＢ細胞悪性疾患と診断された患者から得た末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）か
ら調製される（自己由来ドナー）。ＰＢＭＣは、ＣＤ４^＋、ＣＤ８^＋、またはＣＤ４^＋お
よびＣＤ８^＋であり得るＴリンパ球の不均一な集団を形成する。

ＰＢＭＣは、ＮＫ細胞またはＮＫＴ細胞などの他の細胞傷害性リンパ球も含み得る。プ
ロモーター、例えば、ＭＮＤプロモーター、および本明細書において意図されているＣＡ
Ｒのコード配列を含む発現ベクターを、ヒトドナーＴ細胞、ＮＫ細胞またはＮＫＴ細胞の
集団に導入することができる。発現ベクターを有する、首尾よく形質導入されたＴ細胞を
、フローサイトメトリーを使用して選別してＣＤ３陽性Ｔ細胞を単離し、次いで、抗ＣＤ
３抗体および／または抗ＣＤ２８抗体およびＩＬ−２、または本明細書の他の箇所に記載
されている当技術分野で公知の任意の他の方法を使用した細胞活性化に加えて、さらに繁
殖させてこれらのＣＡＲタンパク質を発現するＴ細胞の数を増加させることができる。Ｃ
ＡＲタンパク質を発現するＴ細胞をヒト対象における使用のための保管および／または調
製のために凍結保存するために標準の手順を使用する。一実施形態では、ｉｎ ｖｉｔｒ
ｏにおけるＴ細胞の形質導入、培養および／または増大を、ウシ胎仔血清（ｆｅｔａｌ
ｃａｌｆ ｓｅｒｕｍ）およびウシ胎仔血清（ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ）
などの非ヒト動物由来産物の不在下で実施する。ＰＢＭＣの不均一な集団を遺伝子改変す
るので、結果得られる形質導入された細胞は、本明細書において意図されている抗原特異
的標的化ＣＡＲを含む改変細胞の不均一な集団である。

さらなる実施形態では、例えば、１種、２種、３種、４種、５種のまたはそれ超の異な
る発現ベクターの混合物を免疫エフェクター細胞のドナー集団の遺伝子改変に使用するこ
とができ、各ベクターは、本明細書において意図されている異なるキメラ抗原受容体タン
パク質をコードする。結果として得られる改変免疫エフェクター細胞は、１種超の異なる
ＣＡＲタンパク質を発現する改変細胞を一部伴う改変細胞の混合集団を形成する。

一実施形態では、本発明は、遺伝子改変されたマウス、ヒトまたはヒト化ＣＡＲタンパ
ク質を発現する免疫エフェクター細胞を保管する方法であって、免疫エフェクター細胞を
、解凍した際に細胞が生存可能なままになるように凍結保存するステップを含む方法を提
供する。がんを患っている患者の将来の治療のために、ＣＡＲタンパク質を発現する免疫
エフェクター細胞の画分を当技術分野で公知の方法によって凍結保存して、そのような細
胞の恒久的な供給源をもたらすことができる。必要な場合には、凍結保存した形質転換さ
れた免疫エフェクター細胞を、そのような細胞をより多くするために、解凍し、成長させ
、増大させることができる。

本明細書で使用される場合、「凍結保存」とは、細胞を、氷点下の温度、例えば、（一
般には）７７Ｋまたは−１９６℃（液体窒素の沸点）などに冷却することによって保存す
ることを指す。多くの場合、細胞が低温での凍結または室温への加温に起因する損傷から
保護されるのを防ぐために氷点下の温度で凍結保護剤（ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ
ａｇｅｎｔ）を使用する。凍結保護剤（ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ ａｇｅｎｔ
）および最適な冷却速度により、細胞傷害から保護することができる。使用することがで
きる凍結保護剤としては、これらに限定されないが、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）
（ＬｏｖｅｌｏｃｋおよびＢｉｓｈｏｐ、Ｎａｔｕｒｅ、１９５９年；１８３巻：１３９
４〜１３９５頁；Ａｓｈｗｏｏｄ−Ｓｍｉｔｈ、Ｎａｔｕｒｅ、１９６１年；１９０巻：
１２０４〜１２０５頁）、グリセロール、ポリビニルピロリジン（Ｒｉｎｆｒｅｔ、Ａｎ
ｎ． Ｎ．Ｙ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．、１９６０年；８５巻；５７６頁）、およびポリ
エチレングリコール（ＳｌｏｖｉｔｅｒおよびＲａｖｄｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ、１９６２年
；１９６巻；４８頁）が挙げられる。好ましい冷却速度は、毎分１℃〜３℃である。少な
くとも２時間後、Ｔ細胞は−８０℃の温度に到達し、長期低温貯蔵用容器内などの恒久的
な保管のために液体窒素（−１９６℃）に直接入れることができる。

Ｈ．組成物および製剤
本明細書において意図されている組成物は、本明細書において意図されている１つまた
は複数のポリペプチド、ポリヌクレオチド、それを含むベクター、遺伝子改変免疫エフェ
クター細胞などを含んでよい。組成物としては、これに限定されないが、医薬組成物が挙
げられる。「医薬組成物」とは、細胞または動物に、単独で、または療法の１つまたは複
数の他のモダリティと組み合わせて投与するために、薬学的に許容されるまたは生理的に
許容される溶液に製剤化された組成物を指す。所望であれば、本発明の組成物は、他の薬
剤、例えば、サイトカイン、増殖因子、ホルモン、小分子、化学療法薬、プロドラッグ、
薬物、抗体、または他の種々の薬学的に活性な薬剤などとも組み合わせて投与することが
できることも理解されよう。同様に組成物に含めることができる他の構成成分には、追加
の薬剤が意図された療法を送達する組成物の能力に悪影響を及ぼさないものであれば、事
実上制限はない。

「薬学的に許容される」という句は、本明細書では、健全な医学的判断の範囲内で、過
剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題または合併症を伴わずにヒトおよび動
物の組織と接触させて使用するのに適した、妥当な損益比に見合う化合物、材料、組成物
、および／または剤形を指すために使用される。

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤」として
は、限定することなく、米国食品医薬品局により、ヒトまたは家畜動物における使用に関
して許容されるとして認可を受けている任意のアジュバント、担体、賦形剤、流動促進剤
（ｇｌｉｄａｎｔ）、甘味剤、希釈剤、防腐剤、色素／着色剤、香味増強剤（ｆｌａｖｏ
ｒ ｅｎｈａｎｃｅｒ）、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤、安定剤、等張剤（ｉ
ｓｏｔｏｎｉｃ ａｇｅｎｔ）、溶媒、界面活性剤、または乳化剤が挙げられる。例示的
な薬学的に許容される担体としては、これらに限定されないが、糖、例えば、ラクトース
、グルコースおよびスクロースなど；デンプン、例えば、トウモロコシデンプンおよびジ
ャガイモデンプンなど；セルロースおよびその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロ
ースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなど；トラガント；麦芽；ゼラ
チン；タルク；カカオバター、ろう、動物性および植物性脂肪、パラフィン、シリコーン
、ベントナイト、ケイ酸、酸化亜鉛；油、例えば、ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、
ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油など；グリコール、例えば、プロピ
レングリコールなど；ポリオール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトールお
よびポリエチレングリコールなど；エステル、例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン
酸エチルなど；寒天；緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムな
ど；アルギン酸；発熱物質不含水；等張性の食塩水；リンゲル液；エチルアルコール；リ
ン酸緩衝溶液；および医薬製剤に使用される任意の他の適合する物質が挙げられる。

特定の実施形態では、本発明の組成物は、本明細書において意図されている遺伝子改変
免疫エフェクター細胞のある量を含む。本明細書で使用される場合、「量」という用語は
、有益なまたは所望の、臨床結果を含めた予防または治療結果を達成するための、遺伝子
改変された治療用細胞、例えばＴ細胞の「有効量（ａｎ ａｍｏｕｎｔ ｅｆｆｅｃｔｉ
ｖｅ）」または「有効量（ａｎ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）」を指す。

「予防有効量」とは、所望の予防結果を達成するために有効な、遺伝子改変された治療
用細胞の量を指す。必ずではないが、一般には、予防用量は対象に疾患の前またはより早
い段階で使用されるので、予防有効量は、治療有効量よりも少ない。

遺伝子改変された治療用細胞の「治療有効量」は、個体の疾患状態、年齢、性別、およ
び体重、ならびに個体における所望の応答を引き出す幹細胞および前駆細胞の能力などの
因子に応じて変動し得る。治療有効量は、ウイルスまたは形質導入された治療用細胞のあ
らゆる毒性の影響または有害な影響よりも治療的に有益な影響が上回る量でもある。「治
療有効量」という用語は、対象（例えば、患者）を「治療する」ために有効である量を包
含する。治療量が示されている場合、投与される本発明の組成物の正確な量は、医師が、
年齢、体重、腫瘍サイズ、感染または転移の程度、および患者（対象）の状態の個々の差
異を考慮して決定することができる。一般に、本明細書に記載のＴ細胞を含む医薬組成物
は、体重１ｋｇ当たり細胞１０^２〜１０^１０個、好ましくは体重１ｋｇ当たり細胞１０^５
〜１０^６個（それらの範囲内の全ての整数値を含む）の投与量で投与できることを規定す
ることができる。細胞の数は、組成物に含まれる細胞型と同様に、組成物の意図された最
終的な使用に左右される。本明細書において提供される使用に関して、細胞は、一般に、
１リットルまたはそれ未満の体積であり、５００ｍＬまたはそれ未満、さらには２５０ｍ
Ｌまたは１００ｍＬまたはそれ未満であり得る。したがって、所望の細胞の密度は、一般
には、１ｍｌ当たり細胞１０^６個超であり、一般に、１ｍｌ当たり細胞１０^７個超、一般
に、１ｍｌ当たり細胞１０^８個またはそれ超である。臨床的に関連のある免疫細胞の数は
、細胞１０^５個、１０^６個、１０^７個、１０^８個、１０^９個、１０^１０個、１０^１１個、
または１０^１２個と累積的に等しいまたはそれを超える多数の注入に配分することができ
る。本発明の一部の態様では、特に、注入された細胞の全てが特定の標的抗原に向け直さ
れるので（例えば、κまたはλ軽鎖）、１キログラム当たり１０^６個（患者当たり１０^６
〜１０^１１個）の範囲の、より少ない数の細胞を投与することができる。ＣＡＲ発現細胞
組成物は、これらの範囲内の投与量で多数回投与することができる。細胞は、療法を受け
る患者に対して同種異系、同系、異種、または自己由来のものであってよい。所望であれ
ば、治療は、免疫応答の誘導を増強するために、本明細書に記載のマイトジェン（例えば
、ＰＨＡ）またはリンフォカイン、サイトカイン、および／またはケモカイン（例えば、
ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−１８、およびＴＮＦ−ベ
ータ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、Ｆｌｔ３−Ｌ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ１α
など）を投与することも含んでよい。

一般に、本明細書に記載の通り活性化され増大させた細胞を含む組成物は、免疫無防備
状態である個体において生じる疾患の治療および予防に利用することができる。具体的に
は、本明細書において意図されているＣＡＲ−改変Ｔ細胞を含む組成物を、がんの治療に
使用する。本発明のＣＡＲ−改変Ｔ細胞は、単独で、または、担体、希釈剤、賦形剤と、
ならびに／あるいは、ＩＬ−２または他のサイトカインもしくは細胞集団などの他の構成
成分と組み合わせた医薬組成物として投与することができる。特定の実施形態では、本明
細書において意図されている医薬組成物は、ある量の遺伝子改変Ｔ細胞を、１種または複
数種の薬学的にまたは生理的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と組み合わせて含む
。

ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞集団、例えばＴ細胞などを含む本発明の医薬組
成物は、緩衝液、例えば、中性緩衝食塩水、リン酸緩衝食塩水など；グルコース、マンノ
ース、スクロースまたはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；ポリ
ペプチドまたはグリシンなどのアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡまたはグルタチオンなどの
キレート化剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；および防腐剤を含んでよ
い。本発明の組成物は、非経口投与、例えば、血管内（静脈内または動脈内）、腹腔内ま
たは筋肉内投与用に製剤化することが好ましい。

液体の医薬組成物は、溶液か、懸濁物か、または他の同様の形態であるかにかかわらず
、以下のうちの１つまたは複数を含んでよい：滅菌希釈剤、例えば、注射用水、食塩溶液
、好ましくは生理的食塩水、リンゲル液、等張性塩化ナトリウム、溶媒または懸濁媒体と
しての機能を果たし得る合成モノまたはジグリセリドなどの不揮発性油、ポリエチレング
リコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の溶媒；ベンジルアルコールまた
はメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸
化剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート化剤；酢酸、クエン酸またはリン酸などの
緩衝液、および、張度を調整するための薬剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロ
ースなど。非経口用調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリン
ジまたは複数用量バイアルに封入することができる。注射用医薬組成物は滅菌されている
ことが好ましい。

特定の実施形態では、本明細書において意図されている組成物は、ＣＡＲを発現する免
疫エフェクター細胞の有効量を、単独で、または１種または複数種の治療剤と組み合わせ
て含む。したがって、ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞組成物は、単独で、または
、例えば放射線療法、化学療法、移植、免疫療法、ホルモン療法、光ダイナミック療法な
どの他の公知のがん治療と組み合わせて投与することができる。組成物は、抗生物質と組
み合わせて投与することもできる。そのような治療剤は、特定のがんなどの本明細書に記
載の特定の疾患状態に対する標準の治療として当技術分野において許容され得る。意図さ
れている例示的な治療剤としては、サイトカイン、増殖因子、ステロイド、ＮＳＡＩＤ、
ＤＭＡＲＤ、抗炎症薬、化学療法薬、放射線療法薬、治療用抗体、または他の活性な薬剤
および補助的な薬剤が挙げられる。

ある特定の実施形態では、本明細書に開示されているＣＡＲを発現する免疫エフェクタ
ー細胞を含む組成物は、多くの化学療法剤と併せて投与することができる。化学療法剤の
実例としては、チオテパおよびシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））などのア
ルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファンなどのスルホン酸
アルキル；ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパ、およびウレドパなどのアジリジン；ア
ルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド（ｔｒｉｅｔｙｌｅｎ
ｅｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリエチレンチオホスホラミドおよびトリメチルオロ
メラミンレジュメ（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ ｒｅｓｕｍｅ）を含め
たエチレンイミンおよびメチルアメラミン；クロラムブシル、クロルナファジン、コロホ
スファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド
、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベムビシン（ｎｏｖ
ｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン
、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチ
ン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなどのニ
トロソ尿素；アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａ
ｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリチアマイシン、カ
ラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、
ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソル
ビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌ
ｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシ
ン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイ
シン、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン、ストレプトニグリン、
ストレプトゾシン、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニメクス、ジノスタチ
ン、ゾルビシンなどの抗生物質；メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−Ｆ
Ｕ）などの代謝拮抗薬；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレ
キサートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン（ｔｈ
ｉａｍｉｐｒｉｎｅ）、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン
、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジ
ン、エノシタビン、フロクスウリジン、５−ＦＵなどのピリミジン類似体；カルステロン
（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メ
ピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、ト
リロスタンなどの抗副腎剤（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌ）；フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉ
ｃ ａｃｉｄ）などの葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミド配糖体（ａｌｄｏ
ｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベ
ストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エ
ダトラキセート；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジコン
（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；エルホルミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプ
チニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ）；エトグルシド；硝酸ガリウム；
ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダ
モール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビ
シン；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）；２−エチルヒドラジ
ド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニ
ウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；
ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクト
ール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−
Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸ
ＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐ
ｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ）およびドセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）（ＴＡＸＯＴＥ
ＲＥ（登録商標）、Ｒｈｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃ
ｅ）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレ
キサート；シスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金類似体；ビンブラスチン；白金
；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；
ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；
テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ−
１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ｄｉｆｌ
ｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌｏｍｉｔｈｉｎｅ）（ＤＭＦＯ）；Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（商標）（
ベキサロテン）、Ｐａｎｒｅｔｉｎ（商標）（アリトレチノイン）などのレチノイン酸誘
導体；ＯＮＴＡＫ（商標）（デニロイキンジフチトクス）；エスペラミシン；カペシタビ
ン；および上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体が挙げられる。腫瘍
に対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えば、タモ
キシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害性４（５）−イミダゾール、４−ヒドロ
キシタモキシフェン、トリオキシフェン（ｔｒｉｏｘｉｆｅｎｅ）、ケオキシフェン（ｋ
ｅｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）、
およびトレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）を含めた抗エストロゲン；ならびにフルタミド
、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、およびゴセレリンなどの抗アンドロゲン；
ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体などもこの定義に含ま
れる。

種々の他の治療剤は、本明細書に記載の組成物と併せて使用することができる。一実施
形態では、ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞を含む組成物を抗炎症剤と共に投与す
る。抗炎症剤または抗炎症薬としては、これらに限定されないが、ステロイドおよびグル
ココルチコイド（ベタメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、
ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレド
ニゾン、トリアムシノロンを含む）、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、メト
トレキサート、スルファサラジン、レフルノミド、抗ＴＮＦ薬、シクロホスファミドおよ
びミコフェノーレートを含めた非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が挙げられる。

他の例示的なＮＳＡＩＤは、イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム
、ＶＩＯＸＸ（登録商標）（ロフェコキシブ）およびＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標）（セ
レコキシブ）、およびシアリレートなどのＣｏｘ−２阻害剤からなる群より選択される。
例示的な鎮痛薬は、アセトアミノフェン、オキシコドン、トラマドールまたは塩酸プロポ
キシフェンからなる群より選択される。例示的なグルココルチコイドは、コルチゾン、デ
キサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、またはプレ
ドニゾンからなる群より選択される。例示的な生物学的反応修飾物質としては、細胞表面
マーカー（例えば、ＣＤ４、ＣＤ５など）を対象とする分子、ＴＮＦアンタゴニスト（例
えば、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登
録商標））およびインフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））などのサイトカイ
ン阻害剤、ケモカイン阻害剤および接着分子阻害剤が挙げられる。生物学的反応修飾物質
としては、モノクローナル抗体ならびに組換え型の分子が挙げられる。例示的なＤＭＡＲ
Ｄとしては、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキサート
、ペニシラミン、レフルノミド、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン、Ｇｏｌｄ（
経口用（オーラノフィン）および筋肉内用）およびミノサイクリンが挙げられる。

本明細書において意図されているＣＡＲで改変されたＴ細胞と組み合わせるのに適した
治療用抗体の実例としては、これらに限定されないが、アバゴボマブ（ａｂａｇｏｖｏｍ
ａｂ）、アデカツムマブ（ａｄｅｃａｔｕｍｕｍａｂ）、アフツズマブ（ａｆｕｔｕｚｕ
ｍａｂ）、アレムツズマブ、アルツモマブ（ａｌｔｕｍｏｍａｂ）、アマツキシマブ、ア
ナツモマブ（ａｎａｔｕｍｏｍａｂ）、アルシツモマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ
（ｂｅｃｔｕｍｏｍａｂ）、ベバシズマブ、ビバツズマブ（ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ）、
ブリナツモマブ、ブレンツキシマブ、カンツズマブ、カツマキソマブ、セツキシマブ、シ
タツズマブ（ｃｉｔａｔｕｚｕｍａｂ）、シクツムマブ（ｃｉｘｕｔｕｍｕｍａｂ）、ク
リバツズマブ（ｃｌｉｖａｔｕｚｕｍａｂ）、コナツムマブ（ｃｏｎａｔｕｍｕｍａｂ）
、ダラツムマブ、ドロジツマブ（ｄｒｏｚｉｔｕｍａｂ）、デュリゴツマブ（ｄｕｌｉｇ
ｏｔｕｍａｂ）、デュシジツマブ（ｄｕｓｉｇｉｔｕｍａｂ）、デツモマブ（ｄｅｔｕｍ
ｏｍａｂ）、ダセツズマブ（ｄａｃｅｔｕｚｕｍａｂ）、ダロツズマブ（ｄａｌｏｔｕｚ
ｕｍａｂ）、エクロメキシマブ（ｅｃｒｏｍｅｘｉｍａｂ）、エロツズマブ、エンシツキ
シマブ（ｅｎｓｉｔｕｘｉｍａｂ）、エルツマキソマブ（ｅｒｔｕｍａｘｏｍａｂ）、エ
タラシズマブ（ｅｔａｒａｃｉｚｕｍａｂ）、ファーレツズマブ（ｆａｒｉｅｔｕｚｕｍ
ａｂ）、フィクラツズマブ（ｆｉｃｌａｔｕｚｕｍａｂ）、フィギツムマブ、フランボツ
マブ（ｆｌａｎｖｏｔｕｍａｂ）、フツキシマブ（ｆｕｔｕｘｉｍａｂ）、ガニツマブ（
ｇａｎｉｔｕｍａｂ）、ゲムツズマブ、ギレンツキシマブ（ｇｉｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ）
、グレムバツムマブ（ｇｌｅｍｂａｔｕｍｕｍａｂ）、イブリツモマブ、イゴボマブ（ｉ
ｇｏｖｏｍａｂ）、イムガツズマブ（ｉｍｇａｔｕｚｕｍａｂ）、インダツキシマブ（ｉ
ｎｄａｔｕｘｉｍａｂ）、イノツズマブ、インテツムマブ（ｉｎｔｅｔｕｍｕｍａｂ）、
イピリムマブ、イラツムマブ（ｉｒａｔｕｍｕｍａｂ）、ラベツズマブ、レクサツムマブ
、リンツズマブ、ロルボツズマブ（ｌｏｒｖｏｔｕｚｕｍａｂ）、ルカツムマブ（ｌｕｃ
ａｔｕｍｕｍａｂ）、マパツムマブ、マツズマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ（ｍｉ
ｎｒｅｔｕｍｏｍａｂ）、ミツモマブ（ｍｉｔｕｍｏｍａｂ）、モキセツモマブ（ｍｏｘ
ｅｔｕｍｏｍａｂ）、ナルナツマブ（ｎａｒｎａｔｕｍａｂ）、ナプツモマブ、ネシツム
マブ、ニモツズマブ（ｎｉｍｏｔｕｚｕｍａｂ）、ノフェツモマブ（ｎｏｆｅｔｕｍｏｍ
ａｂ）、オカラツズマブ（ｏｃａｒａｔｕｚｕｍａｂ）、オファツムマブ、オララツマブ
（ｏｌａｒａｔｕｍａｂ）、オナルツズマブ（ｏｎａｒｔｕｚｕｍａｂ）、オポルツズマ
ブ（ｏｐｏｒｔｕｚｕｍａｂ）、オレゴボマブ、パニツムマブ、パルサツズマブ（ｐａｒ
ｓａｔｕｚｕｍａｂ）、パトリツマブ（ｐａｔｒｉｔｕｍａｂ）、ペムツモマブ（ｐｅｍ
ｔｕｍｏｍａｂ）、ペルツズマブ、ピンツモマブ（ｐｉｎｔｕｍｏｍａｂ）、プリツムマ
ブ（ｐｒｉｔｕｍｕｍａｂ）、ラコツモマブ（ｒａｃｏｔｕｍｏｍａｂ）、ラドレツマブ
（ｒａｄｒｅｔｕｍａｂ）、リロツムマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ（ｒｏｂａｔｕ
ｍｕｍａｂ）、サツモマブ（ｓａｔｕｍｏｍａｂ）、シブロツズマブ（ｓｉｂｒｏｔｕｚ
ｕｍａｂ）、シルツキシマブ、シムツズマブ（ｓｉｍｔｕｚｕｍａｂ）、ソリトマブ（ｓ
ｏｌｉｔｏｍａｂ）、タカツズマブ（ｔａｃａｔｕｚｕｍａｂ）、タプリツモマブ（ｔａ
ｐｌｉｔｕｍｏｍａｂ）、テナツモマブ（ｔｅｎａｔｕｍｏｍａｂ）、テプロツムマブ（
ｔｅｐｒｏｔｕｍｕｍａｂ）、ティガツズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ、ツコツ
ズマブ（ｔｕｃｏｔｕｚｕｍａｂ）、ウブリツキシマブ（ｕｂｌｉｔｕｘｉｍａｂ）、ベ
ルツズマブ、ボルセツズマブ（ｖｏｒｓｅｔｕｚｕｍａｂ）、ボツムマブ（ｖｏｔｕｍｕ
ｍａｂ）、ザルツムマブ、ＣＣ４９および３Ｆ８が挙げられる。

ある特定の実施形態では、本明細書に記載の組成物をサイトカインと併せて投与する。
「サイトカイン」とは、本明細書で使用される場合、１つの細胞集団により放出され、細
胞間メディエーターとして別の細胞に作用するタンパク質に対する一般的な用語を意味す
る。そのようなサイトカインの例は、リンフォカイン、モノカイン、および従来のポリペ
プチドホルモンである。サイトカインには、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長
ホルモン、およびウシ成長ホルモンなどの成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン
；インスリン；プロインスリン；レラキシン；プロレラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳ
Ｈ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、および黄体形成ホルモン（ＬＨ）などの糖タンパ
ク質ホルモン；肝臓増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；
腫瘍壊死因子−アルファおよび腫瘍壊死因子−ベータ；ミュラー阻害物質；マウスゴナド
トロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子；インテグリン；ト
ロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ−ベータなどの神経増殖因子；血小板増殖因子；ＴＧ
Ｆ−アルファおよびＴＧＦ−ベータなどの形質転換増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様増
殖因子−Ｉおよびインスリン様増殖因子−ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導性
因子；インターフェロン−アルファ、インターフェロン−ベータ、およびインターフェロ
ン−ガンマなどのインターフェロン；マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）などのコロ
ニー刺激因子（ＣＳＦ）；顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；および顆
粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；ＩＬ−１、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ
−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、
ＩＬ−１２、ＩＬ−１５などのインターロイキン（ＩＬ）、ＴＮＦ−アルファまたはＴＮ
Ｆ−ベータなどの腫瘍壊死因子；ならびにＬＩＦおよびｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含めた
他のポリペプチド因子が含まれる。本明細書で使用される場合、サイトカインという用語
は、天然の供給源または組換え細胞培養物に由来するタンパク質、およびネイティブな配
列のサイトカインの生物活性のある等価物を包含する。

Ｉ．標的細胞および抗原
本発明は、一部において、標的細胞、例えば、腫瘍またはがん細胞に向け直された、細
胞上の標的抗原に結合する結合性ドメインを有するＣＡＲを含む遺伝子改変免疫エフェク
ター細胞を意図している。本明細書で使用される場合、「がん」という用語は、一般に、
異常な細胞が制御されずに分裂し、近くの組織に浸潤し得る、疾患または状態のクラスに
関する。がん細胞は、血液およびリンパ系を通じて体の他の部分に拡散する可能性もある
。がんには、いくつかの主要な型がある。癌腫は、皮膚、または内臓を裏打ちするもしく
は覆う組織において生じるがんである。肉腫は、骨、軟骨、脂肪、筋肉、血管、または他
の結合組織もしくは支持組織において生じるがんである。白血病は、骨髄などの血液形成
組織において開始し、多数の異常な血液細胞の産生および血液への侵入を引き起こすがん
である。リンパ腫および多発性骨髄腫は、免疫系の細胞において生じるがんである。中枢
神経系がんは、脳および脊髄の組織において生じるがんである。

本明細書で使用される場合、「悪性」という用語は、腫瘍細胞の群が、制御されていな
い成長（すなわち、正常な限界を超えた分裂）、浸潤（すなわち、近接組織への侵入およ
びその破壊）、ならびに転移（すなわち、リンパ液または血液を介した、体内の他の場所
への拡散）のうちの１つまたは複数を示すがんを指す。本明細書で使用される場合、「転
移する」という用語は、がんが体の一部分から別の部分に拡散することを指す。拡散した
細胞によって形成される腫瘍は、「転移性腫瘍」または「転移」と称される。転移性腫瘍
は、元の（原発）腫瘍における細胞と同様の細胞を含有する。

本明細書で使用される場合、「良性」または「非悪性」という用語は、大きく成長する
可能性があるが、体の他の部分には拡散しない腫瘍を指す。良性腫瘍は自己限定的であり
、一般には浸潤も転移もしない。

「がん細胞」または「腫瘍細胞」とは、癌性増殖物または組織の個々の細胞を指す。腫
瘍とは、一般に、細胞の異常な成長によって形成される腫脹または病変を指し、これは、
良性、前悪性、または悪性であり得る。大多数のがんは腫瘍を形成するが、いくつか、例
えば、白血病は、腫瘍を必ずしも形成しない。腫瘍を形成するがんに関して、がん（細胞
）および腫瘍（細胞）という用語は、互換的に使用される。個体内の腫瘍の量は、腫瘍の
数、体積、または重量として測定することができる「腫瘍量（ｔｕｍｏｒ ｂｕｒｄｅｎ
）」である。

一実施形態では、標的細胞は、抗原、例えば、他の正常な（所望の）細胞の表面上では
実質的に見いだされない標的抗原を発現する。一実施形態では、標的細胞は、膵実質細胞
、膵管細胞、肝細胞、心筋細胞、骨格筋細胞、骨芽細胞、骨格筋芽細胞、ニューロン、血
管内皮細胞、色素細胞、平滑筋細胞、グリア細胞、脂肪細胞（ｆａｔ ｃｅｌｌ）、骨細
胞、軟骨細胞、膵島細胞、ＣＮＳ細胞、ＰＮＳ細胞、肝臓細胞、脂肪細胞（ａｄｉｐｏｓ
ｅ ｃｅｌｌ）、腎細胞、肺細胞、皮膚細胞、卵巣細胞、濾胞細胞、上皮細胞、免疫細胞
、または内皮細胞である。

ある特定の実施形態では、標的細胞は膵組織、神経組織、心臓組織、骨髄、筋組織、骨
組織、皮膚組織、肝臓組織、毛包、血管組織、脂肪組織、肺組織、および腎臓組織の一部
である。

特定の実施形態では、標的細胞は、腫瘍細胞である。別の特定の実施形態では、標的細
胞は、がんを有する患者の細胞などの、がん細胞である。開示されている方法を用いて死
滅させることができる例示的な細胞としては、以下の腫瘍の細胞が挙げられる：液性腫瘍
、例えば、急性白血病（例えば、急性リンパ球性白血病、急性骨髄球性白血病、および骨
髄芽球性白血病、前骨髄球性（ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ）白血病、骨髄単球性白血病
、単球性白血病および赤白血病など）、慢性白血病（例えば、慢性骨髄球性（顆粒球性）
白血病および慢性リンパ球性白血病など）を含めた白血病、真性赤血球増加症、リンパ腫
、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブ
リン血症、重鎖病など。

別の実施形態では、細胞は、肉腫および癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉
腫、骨原性肉腫、および他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋
筋肉腫、結腸癌、膵がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、肝細胞癌、肺がん、結腸直腸
がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌（例えば、膵臓、結腸、卵巣、肺、乳房、胃、前立
腺、子宮頸部（ｃｅｒｖｉｘ）、または食道の腺癌）、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭
状腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、ヘパトーマ、胆管癌、絨毛癌、ウィルムス
腫瘍、子宮頸がん、精巣腫瘍、膀胱癌、ＣＮＳ腫瘍（例えば、神経膠腫、星状細胞腫、髄
芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜
腫、黒色腫、神経芽細胞腫および網膜芽細胞腫など）などの固形腫瘍細胞である。

一実施形態では、がんは、請求項１に記載の方法では、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉
腫、神経内分泌腫瘍、神経膠芽腫、神経芽細胞腫、黒色腫、皮膚がん、乳がん、結腸がん
、直腸がん、前立腺がん、肝臓がん、腎がん、膵がん、肺がん、胆管がん、子宮頸がん、
子宮内膜がん、食道がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、頭頸部がん、甲状
腺髄様癌、卵巣がん、神経膠腫、リンパ腫、白血病、骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病、
急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホ
ジキンリンパ腫、および膀胱がん（ｕｒｉｎａｒｙ ｂｌａｄｄｅｒ ｃａｎｃｅｒ）か
らなる群より選択される。

一実施形態では、標的細胞は、肝臓、膵臓、肺、乳房、膀胱、脳、骨、甲状腺、腎臓、
皮膚、および造血系の悪性細胞である。別の実施形態では、標的細胞は、肝臓がん、膵が
ん、肺がん、乳がん、膀胱がん（ｂｌａｄｄｅｒ ｃａｎｃｅｒ）、脳がん、骨がん、甲
状腺がん、腎臓がん、皮膚がん、または血液学的がんの細胞である。

一実施形態では、標的抗原は、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、α_ｖβ_６インテグリン、
ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３
０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、Ｃ
Ｄ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、ＥＧ
ＦＲファミリー、例えば、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、ＥＧ
Ｐ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ２
、ＧＤ３、’グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２＋
ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ
２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３
Ｒα２、ラムダ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣＡ
Ｍ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ
１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、またはＶＥＧＦＲ２ポリペプチドのエピ
トープである。

Ｊ．治療方法
本明細書において意図されている遺伝子改変Ｔ細胞により、種々の腫瘍およびがんの治
療において使用するための養子免疫療法の改善された方法がもたらされる。特定の実施形
態では、本明細書において意図されているＣＡＲを用いて初代Ｔ細胞を遺伝子改変するこ
とにより、初代Ｔ細胞の特異性を腫瘍またはがん細胞に向け直す。種々の実施形態では、
ＭＮＤプロモーターを含み、かつ、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、α_ｖβ_６インテグリン
、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ
３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、
ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、Ｅ
ＧＦＲファミリー、例えば、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、Ｅ
ＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ
２、ＧＤ３、’グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２
＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−
Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１
３Ｒα２、ラムダ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣ
ＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯ
Ｒ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、またはＶＥＧＦＲ２ポリペプチドに結
合する抗原特異的結合性ドメイン；ヒンジドメイン；ＣＤ８α；ＣＤ４、ＣＤ４５、ＰＤ
１、およびＣＤ１５２からなる群より選択されるポリペプチドに由来するＴＭドメインを
含む膜貫通ドメイン；、ならびにＴＭドメインをＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインと
連結する、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸の間の長さである
ことが好ましい短いオリゴペプチドリンカーまたはポリペプチドリンカー；ならびに、Ｃ
Ｄ２８、ＣＤ１３４、およびＣＤ１３７からなる群より選択される１種または複数種の細
胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含むＣ
ＡＲをコードするポリヌクレオチドを用いて免疫エフェクター細胞を遺伝子改変するため
に、ウイルスベクターを使用する。

一実施形態では、本発明は、Ｔ細胞を、標的抗原を発現するがん細胞を標的化するＣＡ
Ｒを発現するように遺伝子改変し、ＣＡＲ Ｔ細胞を、それを必要とするレシピエントに
注入する、細胞療法の一種を含む。注入された細胞は、レシピエント内の腫瘍細胞を死滅
させることができる。抗体療法とは異なり、ＣＡＲ Ｔ細胞はｉｎ ｖｉｖｏで複製する
ことが可能であり、それにより、持続したがん療法をもたらすことが可能な長期持続がも
たらされる。

一実施形態では、本発明のＣＡＲ Ｔ細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏにおける頑強なＴ細胞増
大を行うことができ、また、長時間にわたって持続することができる。別の実施形態では
、本発明のＣＡＲ Ｔ細胞は、再活性化されてあらゆる追加的な腫瘍形成または成長を阻
害することが可能な特異的なメモリーＴ細胞に進化する。

特定の実施形態では、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結したＭＮ
Ｄプロモーターを含むベクターを用いて遺伝子改変した免疫エフェクター細胞を含む組成
物を、限定することなく、肝臓がん、膵がん、肺がん、乳がん、膀胱がん（ｂｌａｄｄｅ
ｒ ｃａｎｃｅｒ）、脳がん、骨がん、甲状腺がん、腎臓がん、または皮膚がんを含めた
固形腫瘍またはがんの治療に使用する。

特定の実施形態では、ＰＳＣＡまたはＭＵＣ１のエピトープに結合する抗原特異的結合
性ドメインを含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結したＭＮＤプロ
モーターを含むベクターを用いて遺伝子改変した免疫エフェクター細胞を含む組成物を、
膵がんの治療に使用する。

特定の実施形態では、ＥＰＨＡ２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、またはＣＳＰＧ４のエピトープ
に結合する抗原特異的結合性ドメインを含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドに作動
可能に連結したＭＮＤプロモーターを含むベクターを用いて遺伝子改変した免疫エフェク
ター細胞を含む組成物を、多形神経膠芽腫の治療に使用する。

特定の実施形態では、ＰＳＣＡまたはＭＵＣ１のエピトープに結合する抗原特異的結合
性ドメインを含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結したＭＮＤプロ
モーターを含むベクターを用いて遺伝子改変した免疫エフェクター細胞を含む組成物を、
膀胱がん（ｂｌａｄｄｅｒ ｃａｎｃｅｒ）の治療に使用する。

特定の実施形態では、ＰＳＣＡまたはＧＤ２のエピトープに結合する抗原特異的結合性
ドメインを含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結したＭＮＤプロモ
ーターを含むベクターを用いて遺伝子改変した免疫エフェクター細胞を含む組成物を、肺
がんの治療に使用する。

特定の実施形態では、ＣＳＰＧ４またはＨＥＲ２のエピトープに結合する抗原特異的結
合性ドメインを含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結したＭＮＤプ
ロモーターを含むベクターを用いて遺伝子改変した免疫エフェクター細胞を含む組成物を
、乳がん、例えば、トリプルネガティブ乳がんの治療に使用する。

特定の実施形態では、ＧＤ２またはＣＳＰＧ４のエピトープに結合する抗原特異的結合
性ドメインを含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結したＭＮＤプロ
モーターを含むベクターを用いて遺伝子改変した免疫エフェクター細胞を含む組成物を、
黒色腫の治療に使用する。

特定の実施形態では、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結したＭＮ
Ｄプロモーターを含むベクターを用いて遺伝子改変した免疫エフェクター細胞を含む組成
物を、急性白血病（例えば、ＡＬＬ、ＡＭＬ、および骨髄芽球性白血病、前骨髄球性（ｐ
ｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ）白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病および赤白血病）
、慢性白血病（例えば、ＣＬＬ、ＳＬＬ、ＣＭＬ、ＨＣＬ）を含めた白血病、真性赤血球
増加症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレ
ームマクログロブリン血症、および重鎖病を含めた液性腫瘍の治療に使用する。

特定の実施形態では、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結したＭＮ
Ｄプロモーターを含むベクターを用いて遺伝子改変した免疫エフェクター細胞を含む組成
物を、これらに限定されないが、多発性骨髄腫（ＭＭ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）
、および慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を含めたＢ細胞悪性疾患の治療に使用する。

多発性骨髄腫は、成熟形質細胞形態のＢ細胞悪性疾患であり、これらの型の細胞の単一
のクローンの腫瘍性形質転換を特徴とする。これらの形質細胞は、ＢＭにおいて増殖し、
近接する骨、および時には血液に浸潤し得る。多発性骨髄腫のバリアント形態としては、
顕性多発性骨髄腫、くすぶり型多発性骨髄腫、形質細胞白血病、非分泌型骨髄腫、ＩｇＤ
骨髄腫、骨硬化性骨髄腫、骨の孤立性形質細胞腫、および髄外性形質細胞腫が挙げられる
（例えば、Ｂｒａｕｎｗａｌｄら（編）、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ
ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第１５版（ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ ２
００１年）を参照されたい）。

非ホジキンリンパ腫は、リンパ球（白血球）のがんの大きな群を包含する。非ホジキン
リンパ腫は、あらゆる年齢で生じ得、多くの場合、正常よりも大きいリンパ節、発熱、お
よび体重減少を特徴とする。非ホジキンリンパ腫には多くの異なる型が存在する。例えば
、非ホジキンリンパ腫は、侵襲性（成長が早い）型と無痛性（成長が遅い）型に分けるこ
とができる。非ホジキンリンパ腫は、Ｂ細胞およびＴ細胞に由来し得るが、本明細書で使
用される場合、「非ホジキンリンパ腫」および「Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫」という用語
は、互換的に使用される。Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）としては、バーキットリ
ンパ腫、慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ）、びまん性大
細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、濾胞性リンパ腫、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ
芽球性リンパ腫、およびマントル細胞リンパ腫が挙げられる。骨髄または幹細胞移植後に
生じるリンパ腫は、通常はＢ細胞非ホジキンリンパ腫である。

慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）は、Ｂリンパ球またはＢ細胞と称される未成熟白血球
のゆっくりとした増加を引き起こす無痛性（成長が遅い）がんである。がん細胞は血液お
よび骨髄を通じて拡散し、リンパ節または肝臓および脾臓などの他の器官にも影響を及ぼ
す可能性がある。ＣＬＬは、最終的には骨髄不全を引き起こす。時には、当該疾患の後期
には、当該疾患は小リンパ球性リンパ腫と称される。

特定の実施形態では、本明細書において意図されているＣＡＲを発現する免疫エフェク
ター細胞またはそれを含む組成物の治療有効量を、それを必要とする患者に、単独で、ま
たは１種もしくは複数種の治療剤と組み合わせて投与するステップを含む方法が提供され
る。ある特定の実施形態では、本発明の細胞を、がんが発生するリスクがある患者の治療
に使用する。したがって、本発明は、がんを治療または予防するための方法であって、そ
れを必要とする対象に、本発明のＣＡＲ−改変Ｔ細胞の治療有効量を投与するステップを
含む方法を提供する。

本明細書で使用される場合、「個体」および「対象」という用語は、多くの場合、互換
的に使用され、本明細書の他の箇所で開示されている遺伝子療法ベクター、細胞に基づく
治療薬、および方法を用いて治療することができるがんの症状を示す任意の動物を指す。
適切な対象（例えば、患者）としては、実験動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ま
たはモルモットなど）、農場動物、および家畜動物または愛玩動物（例えば、ネコまたは
イヌなど）が挙げられる。非ヒト霊長類、および、好ましくは、ヒト患者が含まれる。典
型的な対象としては、がんを有するヒト患者、がんと診断されたヒト患者、またはがんを
有するリスクがあるヒト患者が挙げられる。

本明細書で使用される場合、「患者」という用語は、本明細書の他の箇所で開示されて
いる遺伝子療法ベクター、細胞に基づく治療薬、および方法を用いて治療することができ
る特定のがんと診断された対象を指す。

本明細書で使用される場合、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「治療すること（
ｔｒｅａｔｉｎｇ）」とは、疾患または病的状態の症状または病態に対するあらゆる有益
なまたは望ましい効果を含み、治療される疾患または状態、例えばがんの１種または複数
種の測定可能なマーカーの最小の減少さえ含み得る。治療は、場合によって、疾患もしく
は状態の症状の低下もしくは改善、または疾患もしくは状態の進行の遅延のいずれかを伴
い得る。「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」とは、必ずしも、疾患または状態、またはそれ
に付随する症状の完全な根絶または治癒を示すものではない。

本明細書で使用される場合、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」および「予防された（ｐ
ｒｅｖｅｎｔｅｄ）」、「予防すること（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」などの同様の単語は
、疾患または状態、例えばがんの出現または再発を予防する、阻害する、またはその可能
性を低下させる手法を示す。当該用語は、疾患もしくは状態の発症もしくは再発を遅延さ
せること、または疾患もしくは状態の症状の出現もしくは再発を遅延させることも指す。
本明細書で使用される場合、「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」および同様の単語は、疾
患または状態の強度、影響、症状および／または負荷を、疾患または状態の発症または再
発の前に低減することも包含する。

「増強する（ｅｎｈａｎｃｅ）」または「促進する（ｐｒｏｍｏｔｅ）」または「増加
させる（ｉｎｃｒｅａｓｅ）」または「増大させる（ｅｘｐａｎｄ）」とは、一般に、本
明細書において意図されている組成物、例えば、ＣＡＲをコードする遺伝子改変Ｔ細胞ま
たはベクターの、ビヒクルまたは対照分子／組成物のいずれかによって引き起こされる応
答と比較してより大きな生理応答（すなわち、下流の効果）を生じさせる、引き出す、ま
たは引き起こす能力を指す。測定可能な生理応答としては、とりわけ、当技術分野におけ
る理解および本明細書における説明から明らかである、Ｔ細胞増大、活性化、持続の増加
、および／またはがん細胞死滅能力の増加を挙げることができる。「増加した（ｉｎｃｒ
ｅａｓｅｄ）」または「増強された（ｅｎｈａｎｃｅｄ）」量とは、一般には、「統計的
に有意な」量であり、ビヒクルまたは対照組成物によって生じる応答の１．１倍、１．２
倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２
０倍、３０倍またはそれ超（例えば、５００倍、１０００倍）（中間の１を超える全ての
整数および小数点、例えば、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍などを含める）で
ある増加を含み得る。

「減少する（ｄｅｃｒｅａｓｅ）」または「低減する（ｌｏｗｅｒ）」または「減る（
ｌｅｓｓｅｎ）」または「低下する（ｒｅｄｕｃｅ）」または「軽減する（ａｂａｔｅ）
」とは、一般に、本明細書において意図されている組成物の、ビヒクルまたは対照分子／
組成物のいずれかによって引き起こされる応答と比較してより小さな生理応答（すなわち
、下流の効果）を生じさせる、引き出す、または引き起こす能力を指す。「減少した（ｄ
ｅｃｒｅａｓｅ）」または「低下した（ｒｅｄｕｃｅｄ）」量とは、一般には、「統計的
に有意な」量であり、ビヒクル、対照組成物によって生じる応答（参照応答）、または特
定の細胞系列における応答の１．１分の１、１．２分の１、１．５分の１、２分の１、３
分の１、４分の１、５分の１、６分の１、７分の１、８分の１、９分の１、１０分の１、
１５分の１、２０分の１、３０分の１またはそれ未満（例えば、５００分の１、１０００
分の１）（中間の１を超える全ての整数および小数点、例えば、１．５分の１、１．６分
の１、１．７分の１、１．８分の１などを含める）である減少を含み得る。

「維持する（ｍａｉｎｔａｉｎ）」または「保存する（ｐｒｅｓｅｒｖｅ）」または「
維持（ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ）」または「変化なし（ｎｏ ｃｈａｎｇｅ）」または「
実質的な変化なし（ｎｏ ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌ ｃｈａｎｇｅ）」または「実質的な
減少なし（ｎｏ ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌ ｄｅｃｒｅａｓｅ）」とは、一般に、本明細
書において意図されている組成物の、ビヒクル、対照分子／組成物のいずれかによって引
き起こされる応答、または特定の細胞系列における応答と比較してより小さな、細胞にお
ける生理応答（すなわち、下流の効果）を生じさせる、引き出す、または引き起こす能力
を指す。同等の応答とは、参照応答と有意に異ならないまたは測定可能なほど異ならない
応答である。

一実施形態では、それを必要とする対象においてがんを治療する方法は、本明細書にお
いて意図されている遺伝子改変免疫エフェクター細胞を含む組成物の有効量、例えば、治
療有効量を投与するステップを含む。投与の数量および頻度は、患者の状態、ならびに患
者の疾患の型および重症度などの因子によって決定されるが、適切な投与量は、臨床試験
によって決定することができる。

ある特定の実施形態では、活性化Ｔ細胞を対象に投与し、その後、再採血し（またはア
フェレーシスを実施し）、その血液から本発明に従ってＴ細胞を活性化し、患者にこれら
の活性化し増大させたＴ細胞を再注入することが望ましい場合がある。このプロセスは、
数週間ごとに複数回行うことができる。ある特定の実施形態では、１０ｃｃから４００ｃ
ｃまでの採血からＴ細胞を活性化することができる。ある特定の実施形態では、２０ｃｃ
、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ、１００ｃ
ｃ、１５０ｃｃ、２００ｃｃ、２５０ｃｃ、３００ｃｃ、３５０ｃｃ、または４００ｃｃ
またはそれ超の採血からＴ細胞を活性化する。理論に縛られずに、この複数の採血／複数
の再注入プロトコールを使用することは、ある特定のＴ細胞の集団を選択するのに役立ち
得る。

本明細書において意図されている組成物の投与は、エアロゾル吸入、注射、摂取、輸血
、埋め込みまたは移植によるものを含めた任意の都合のよい様式で行うことができる。好
ましい実施形態では、組成物を非経口的に投与する。「非経口投与」および「非経口的に
投与する」という句は、本明細書で使用される場合、経腸および局所投与以外の投与形式
、通常は注射によるものを指し、限定することなく、血管内、静脈内、筋肉内、動脈内、
髄腔内、嚢内、眼窩内、腫瘍内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内
、被膜下、くも膜下、脊髄内および胸骨内への注射および注入が挙げられる。一実施形態
では、本明細書において意図されている組成物を、対象に、腫瘍、リンパ節、または感染
部位に直接注射することによって投与する。

一実施形態では、それを必要とする対象に、対象におけるがんに対する細胞性免疫応答
を増加させるために有効量の組成物を投与する。免疫応答は、感染細胞を死滅させること
が可能な細胞傷害性Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞によって媒介される細胞性免疫応答、およびヘ
ルパーＴ細胞応答を含み得る。Ｂ細胞を活性化し、したがって、抗体産生を導くことが可
能なヘルパーＴ細胞によって主に媒介される体液性免疫応答も誘導することができる。本
発明の組成物によって誘導される免疫応答の型を分析するために様々な技法を使用するこ
とができ、それらは当技術分野で十分に記載されている。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒ
ｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｅ． Ｃｏｌｉｇａｎ、Ａｄ
ａ Ｍ． Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ、Ｄａｖｉｄ Ｈ． Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ、Ｅｔｈａｎ
Ｍ． Ｓｈｅｖａｃｈ、Ｗａｒｒｅｎ Ｓｔｒｏｂｅｒ編（２００１年）Ｊｏｈｎ Ｗｉ
ｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、ＮＹ、Ｎ．Ｙ．。

Ｔ細胞媒介性死滅の場合では、ＣＡＲ−リガンド結合により、Ｔ細胞へのＣＡＲシグナ
ル伝達が開始され、それにより、種々の機構によって標的細胞のアポトーシスを誘導する
ことができるタンパク質を産生または放出するようにＴ細胞を誘導する種々のＴ細胞シグ
ナル伝達経路が活性化される。これらのＴ細胞媒介性機構としては（これらに限定されな
いが）、細胞内細胞傷害性顆粒のＴ細胞から標的細胞への移行、標的細胞の死滅を直接（
または他のキラーエフェクター細胞の動員によって間接的に）誘導することが可能な炎症
促進性サイトカインのＴ細胞による分泌、および、標的細胞上のそれらの同族の細胞死受
容体（例えば、Ｆａｓ）に結合した後、標的細胞のアポトーシスを誘導する、Ｔ細胞表面
上の細胞死受容体リガンド（例えば、ＦａｓＬ）の上方制御が挙げられる。

一実施形態では、本発明は、がんと診断された対象を治療する方法であって、対象から
免疫エフェクター細胞を取り出すステップと、前記免疫エフェクター細胞を本明細書にお
いて意図されているＣＡＲをコードする核酸を含むベクターを用いて遺伝子改変するステ
ップと、それにより、改変免疫エフェクター細胞の集団を作製するステップと、改変免疫
エフェクター細胞の集団を同じ対象に投与するステップとを含む方法を提供する。好まし
い実施形態では、免疫エフェクター細胞はＴ細胞を含む。

ある特定の実施形態では、本発明は、対象内の標的細胞集団に対する、免疫エフェクタ
ー細胞に媒介される免疫モジュレーター応答を刺激するための方法であって、対象に、Ｃ
ＡＲ分子をコードする核酸構築物を発現する免疫エフェクター細胞集団を投与するステッ
プを含む方法も提供する。

本明細書に記載の細胞組成物を投与するための方法は、対象において本発明のＣＡＲの
いずれかを直接発現するｅｘ ｖｉｖｏで遺伝子改変された免疫エフェクター細胞の再導
入、または、対象に導入されると、ＣＡＲを発現する成熟免疫エフェクター細胞に分化す
る、免疫エフェクター細胞の遺伝子改変された前駆体の再導入をもたらすために有効な任
意の方法を含む。１つの方法は、末梢血Ｔ細胞に、ｅｘ ｖｉｖｏにおいて本発明による
核酸構築物を用いて形質導入を行い、形質導入された細胞を対象に戻すステップを含む。

ある特定の実施形態では、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、α_ｖβ_６インテグリン、ＢＣ
ＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、
ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７
９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ
ファミリー、例えば、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４
０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ２、Ｇ
Ｄ３、’グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＭＡ
ＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ２＋
ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３Ｒα
２、ラムダ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣＡＭ、
ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、
ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、またはＶＥＧＦＲ２ポリヌクレオチド、ポリ
ペプチド、ポリペプチド断片、またはそれに対する抗体は、一般には、対象または集団対
象が特定の医学的治療に好都合に応答するかどうかを評価するための、コンパニオン診断
方法の一部である。

本明細書で使用される場合、「コンパニオン診断（ｃｏｍｐａｎｉｏｎ ｄｉａｇｎｏ
ｓｔｉｃ）」という用語は、特定のＣＡＲまたは遺伝子改変免疫エフェクター細胞療法と
連結した診断検査を指す。特定の実施形態では、診断方法およびキットは、生体試料中の
アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、α_ｖβ_６インテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ
６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４
４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３
８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲファミリー、例えば、Ｅｒｂ
Ｂ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２
、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ２、ＧＤ３、’グリピカン−３（Ｇ
ＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡ
ＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−
Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３Ｒα２、ラムダ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ
、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−
ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ
７２、ＴＥＭ、またはＶＥＧＦＲ２ポリペプチドまたはポリヌクレオチド発現レベルの検
出を含み、それにより、本発明による治療に適した患者の迅速な同定が可能になる。

例えば、がんに対する所与の治療剤（例えば、本明細書において意図されているＣＡＲ
またはＣＡＲを発現する遺伝子改変免疫エフェクター細胞）を、対象（複数可）が所与の
疾患または状態に関する１種または複数種の選択されたバイオマーカーを有するかどうか
に基づいて、対象または対象のある特定の集団に適するものと同定することができる。バ
イオマーカーの例としては、血清／組織マーカーならびに医用画像技法によって同定する
ことができるマーカーが挙げられる。ある特定の実施形態では、アルファ葉酸受容体、５
Ｔ４、α_ｖβ_６インテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９
、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／
８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ
、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲファミリー、例えば、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧ
ＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、
胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ２、ＧＤ３、’グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１
＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋
ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１
、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３Ｒα２、ラムダ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、カッパ、メソテリン、
Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ
、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、またはＶ
ＥＧＦＲ２ポリペプチド断片（またはその対応するポリヌクレオチド）それ自体により、
薬物転帰を測定するため、または特定の対象もしくは対象の特定の集団における薬物使用
の望ましさを評価するために利用することができる血清および／または組織バイオマーカ
ーがもたらされる。ある特定の態様では、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、α_ｖβ_６インテ
グリン、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２
、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７
９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦ
Ｒ、ＥＧＦＲファミリー、例えば、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ
２、ＥＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα
、ＧＤ２、ＧＤ３、’グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ
−Ａ２＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、Ｈ
ＬＡ−Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、Ｉ
Ｌ−１３Ｒα２、ラムダ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６
、ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ
、ＲＯＲ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、またはＶＥＧＦＲ２ポリペプチ
ドまたはポリヌクレオチド参照配列を発現する治療可能な適応症の同定は、その配列の示
差的な発現を、選択された対象か、選択された組織か、またはその他におけるものかにか
かわらず、本明細書に記載されており、また当技術分野で公知の通り、特徴付けることを
含み得る。

特定の実施形態では、本明細書において意図されている方法は、対象のがんにおける、
アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、α_ｖβ_６インテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ
６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４
４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３
８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲファミリー、例えば、Ｅｒｂ
Ｂ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２
、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ２、ＧＤ３、’グリピカン−３（Ｇ
ＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡ
ＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−
Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３Ｒα２、ラムダ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ
、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−
ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ
７２、ＴＥＭ、またはＶＥＧＦＲ２ポリペプチドのプレｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ、またはタン
パク質発現のレベルを測定または定量化するステップを含む。一実施形態では、対象は、
生体試料中のマーカーの発現が対照試料または公知の標準物中のマーカーの発現よりも１
０倍、２５倍、５０倍、１００倍、または１０００倍またはそれ超高ければ、本明細書に
おいて意図されている組成物を用いて治療可能な特定のがんを有すると同定される。特定
の実施形態では、対象は、生体試料中のバイオマーカーの発現が検出可能であり、そのマ
ーカーの発現が同じ方法を使用した対照試料または公知の標準物の検出のレベルを下回れ
ば、治療可能な適応症を有すると同定される。

潜在的ながんにおけるバイオマーカータンパク質発現の存在、不在または相対的なレベ
ルは、例えば、組織化学的技法、免疫学的技法、電気泳動、ウエスタンブロット分析、Ｆ
ＡＣＳ分析、フローサイトメトリーなどによって分析することができる。さらに、バイオ
マーカーＲＮＡ発現の存在、不在または相対的なレベルは、例えば、ＰＣＲ技法、ノーザ
ンブロット分析、適切なオリゴヌクレオチドプローブなどの使用を用いて検出することが
できる。

本明細書において引用されている刊行物、特許出願、および発行された特許は全て、個
々の刊行物、特許出願、または発行された特許のそれぞれが参照により組み込まれること
が具体的にかつ個別に示されたものと同じく参照により本明細書に組み込まれる。

前述の発明は、明瞭な理解のために図解および実施例により少し詳細に記載されている
が、本発明の教示に照らして、添付の特許請求の範囲の主旨または範囲から逸脱すること
なく、それらに対してある特定の変化および改変を成すことができることが当業者には容
易に明らかになろう。以下の実施例は、単に例示として提供され、限定としては提供され
ない。基本的に同様の結果を得るために変化または改変することができる種々の重大でな
いパラメータは当業者には容易に認識されよう。

（実施例１）
ＣＡＲの構築
１．ＣＤ１９特異的ＣＡＲ（ｐＭＮＤ−ＣＤ１９ ＣＡＲ）
ＣＤ１９特異的ＣＡＲを、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αに由来するヒンジおよび膜
貫通ドメインならびにＣＤ１３７共刺激ドメイン、その後のＣＤ３ζ鎖の細胞内シグナル
伝達ドメインに作動可能に連結したＭＮＤプロモーターを含有するように設計した。図１
Ａ。ＣＤ１９ ＣＡＲは、免疫エフェクター細胞上での表面発現のためのＣＤ８αシグナ
ルペプチド（ＳＰ）配列を含む。ｐＭＮＤ−ＣＤ１９ ＣＡＲのポリヌクレオチド配列が
配列番号２に示されており、ベクターマップが図２に示されている。表３は、ｐＭＮＤ−
ＣＤ１９ ＣＡＲレンチウイルスベクターの種々のヌクレオチドセグメントについての正
体、Ｇｅｎｂａｎｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ、供給源の名称および引用を示す。

２．カッパ軽鎖（カッパ_ＬＣ）特異的ＣＡＲ（ｐＭＮＤ−カッパＣＡＲ）
カッパ軽鎖特異的ＣＡＲを、抗カッパ軽鎖ｓｃＦｖ、ＣＤ８αに由来するヒンジおよび
膜貫通ドメインならびにＣＤ１３７共刺激ドメイン、その後のＣＤ３ζ鎖の細胞内シグナ
ル伝達ドメインに作動可能に連結したＭＮＤプロモーターを含有するように設計した。図
１Ｂ。カッパ_ＬＣ ＣＡＲは、免疫エフェクター細胞上での表面発現のためのＣＤ８αシ
グナルペプチド（ＳＰ）配列を含む。ｐＭＮＤ−カッパ_ＬＣ ＣＡＲのポリヌクレオチド
配列が配列番号３に示されており、ベクターマップが図３に示されている。表４は、ｐＭ
ＮＤ−カッパ軽鎖ＣＡＲレンチウイルスベクターの種々のヌクレオチドセグメントについ
ての正体、Ｇｅｎｂａｎｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ、供給源の名称および引用を示す。

（実施例２）
Ｔ細胞の形質導入
レンチウイルスベクター（ＬＶ）上清をＨＥＫ ２９３Ｔ細胞において文献に記載の通
り産生させる（Ｎａｌｄｉｎｉら、１９９６年、Ｄｕｌｌら、１９９８年およびＺｕｆｆ
ｅｒｅｙら、１９９８年）。５−プラスミド（ＨＩＶ ｇａｇ−ｐｏｌをコードするＨＰ
Ｖ２７５、ＶＳＶ−Ｇエンベロープタンパク質をコードするψＮ１５、ＨＩＶ ｒｅｖタ
ンパク質をコードするｐ６３３、ＨＩＶ ｔａｔタンパク質をコードするＨＰＶ６０１、
およびＣＡＲ発現ベクター）の一過性トランスフェクションをＰＣＴ公開第ＷＯ２０１２
／１７０９１１号に記載の通り使用する。次いで、ＬＶ上清を、超遠心またはイオン交換
カラム、その後の接線流濾過（ＴＦＦ）によって濃縮し、ＳＣＧＭ（ＣｅｌｌＧｅｎｉｘ
Ｉｎｃ．、ＤＥ）培地中に配合し、使い捨てクライオバイアル中に入れて＜−７０℃で
凍結保存する。形質導入されたヒト骨肉腫（ＨＯＳ）細胞のフローサイトメトリー分析に
よって感染力価を決定する（Ｋｕｔｎｅｒら、２００９年、Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃ
ｏｌｓ ４巻：４９５〜５０５頁）。ヒトＴリンパ球の形質導入のために、健康な志願者
ドナーから、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐキット（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉ
ｅｓ）を使用した負の選択による白血球アフェレーシスに従って初代ヒトＴ細胞を単離す
る。Ｔ細胞を、１０％ＦＣＳ、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００ｇ／ｍｌの硫酸スト
レプトマイシン、１０ｍＭのＨｅｐｅｓを補充したＲＰＭＩ１６４０中で培養し、抗ＣＤ
３／抗ＣＤ２８抗体を細胞：ビーズ比１：３で用いてコーティングした磁気ビーズを用い
て刺激する。ＣＤ８Ｔ細胞については、１日おきにヒトＩＬ−２（Ｃｈｉｒｏｎ）を添加
して最終濃度を３０ＩＵ／ｍｌにする。活性化のおよそ２４時間後、Ｔ細胞にレンチウイ
ルスベクターを５のＭＯＩで用いて形質導入を行う。形質導入の７〜１０日後に、Ｔ細胞
の形質導入をウイルスベクターに特異的なプライマーを使用したポリメラーゼ連鎖反応に
よって、およびフローサイトメトリーによって評価する。

（実施例３）
ＣＡＲ形質導入されたＴ細胞のＶＣＮ
ｐＭＮＤ−カッパ_ＬＣＣＡＲレンチウイルスを用いた初代ヒトＴ細胞の形質導入につい
て、ベクターコピー数を決定した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を正常なドナーから採取
し、ＣＤ３およびＣＤ２８に特異的な抗体（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）と共に、
ＩＬ−２（ＣｅｌｌＧｅｎｉｘ）を含有する培地で培養することによって活性化した。活
性化後、ＰＢＭＣ培養物に、レンチウイルスベクターを用いて形質導入を行った、または
無処理のままにした。培養を維持してＴ細胞を成長および増大させた（７〜１０日）。採
取時に、培養物はおよそ２ｌｏｇ増大したＴ細胞を含む。

組み込まれたレンチウイルス粒子のベクターコピー数（ＶＣＮ）を形質導入の９日後に
ｑ−ＰＣＲによって決定した。６ドナーからの１２の独特の培養物の平均ＶＣＮは３．１
であった。図４。

（実施例４）
形質導入されたＴ細胞におけるＣＡＲ発現
ＭＮＤプロモーターから発現されるカッパに特異的なキメラ抗原受容体（ｐＭＮＤ−カ
ッパ_ＬＣＣＡＲ）の初代ヒトＴ細胞での細胞表面発現を決定した。末梢血単核細胞（ＰＢ
ＭＣ）を正常なドナーから採取し、ＣＤ３およびＣＤ２８に特異的な抗体（Ｍｉｌｔｅｎ
ｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）と共に、ＩＬ−２（ＣｅｌｌＧｅｎｉｘ）を含有する培地で培養す
ることによって活性化した。活性化後、ＰＢＭＣ培養物に、レンチウイルスベクターを用
いて形質導入を行った、または無処理のままにした。培養を維持してＴ細胞を成長および
増大させた（７〜１０日）。採取時に、培養物は、およそ２ｌｏｇ増大したＴ細胞を含む
。

カッパ_ＬＣ発現を、ｐＭＮＤ−カッパ_ＬＣＣＡＲ−改変Ｔ細胞上にのみ存在するマウス
Ｉｇ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に特異的な抗体を使用したフローサイトメトリー
によって決定した。形質導入の６〜９日後にフローサイトメトリーを実施した。６ドナー
からの１２の独特の培養物のカッパ_ＬＣの平均発現レベルは３５．６％であった。図５。

（実施例５）
ＭＮＤプロモーターにより、Ｔ細胞におけるＣＡＲ発現がＥＦ１αプロモーターと同等
に駆動される
ＭＮＤプロモーターにより駆動される改変Ｔ細胞上でのＣＤ１９ ＣＡＲ発現は、ＥＦ
１αプロモーターにより駆動されるＣＤ１９ ＣＡＲ発現と同等であった。末梢血単核細
胞（ＰＢＭＣ）を正常なドナーから採取し、ＣＤ３およびＣＤ２８に特異的な抗体（Ｍｉ
ｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）と共に、ＩＬ−２（ＣｅｌｌＧｅｎｉｘ）を含有する培地
で培養することによって活性化した。活性化後、ＰＢＭＣ培養物に、レンチウイルスベク
ターを用いて形質導入を行った、または無処理のままにした。培養を維持してＴ細胞を成
長および増大させた（７〜１０日）。採取時に、培養物は、およそ２ｌｏｇ増大したＴ細
胞を含む。培養の最後に、ウイルス粒子に特異的なプライマーを使用した定量的ポリメラ
ーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）によってＴ細胞の形質導入をアッセイした。形質導入の６日後
に、ＣＤ１９ ＣＡＲ−改変Ｔ細胞上にのみ存在するマウスＩｇ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅ
ｎｃｅｓ）に特異的な抗体を使用したフローサイトメトリーによってＣＤ１９ ＣＡＲ発
現を決定した。ＣＤ１９ ＣＡＲ発現およびＶＣＮのどちらも、異なる構築物の間で同等
であった。図６。

（実施例６）
ＣＡＲ Ｔ細胞の抗原特異的反応性
ｐＭＮＤカッパ_ＬＣＣＡＲ Ｔ細胞の抗原特異的反応性を決定した。末梢血単核細胞（
ＰＢＭＣ）を正常なドナーから採取し、ＣＤ３およびＣＤ２８に特異的な抗体（Ｍｉｌｔ
ｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）と共に、ＩＬ−２（ＣｅｌｌＧｅｎｉｘ）を含有する培地で培
養することによって活性化した。活性化後、ＰＢＭＣ培養物に、レンチウイルスベクター
を用いて形質導入を行った、または無処理のままにした。培養を維持してＴ細胞を成長お
よび増大させた（７〜１０日）。採取時に、培養物は、およそ２ｌｏｇ増大したＴ細胞を
含む。

培養の最後に、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮγ）放出を使用して腫瘍反応性をア
ッセイした。ｐＭＮＤ−カッパ_ＬＣＣＡＲを用いて改変したＴ細胞は、カッパ^＋Ｄａｕｄ
ｉ細胞（カッパ_ＬＣを発現する）との共培養後、ＩＦＮγを分泌する。対照的に、ｐＭＮ
Ｄ−カッパ_ＬＣＣＡＲを用いて改変したＴ細胞とカッパ陰性ＨＤＬＭ−２細胞の共培養で
は、Ｔ細胞を単独で培養した場合に観察される量と同等のＩＦＮγ放出がもたらされた。
ＩＦＮγ放出は、カッパ陽性Ｄａｕｄｉ細胞またはカッパ陰性ＨＤＬＭ−２細胞と２４時
間共培養した後にＥＬＩＳＡキットを使用して決定した。図７。

（実施例７）
ＣＡＲ Ｔ細胞の抗腫瘍機能
ｐＭＮＤ−カッパ_ＬＣＣＡＲを発現するように工学的に作製されたＣＡＲ Ｔ細胞の抗
腫瘍機能を決定した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を正常なドナーから採取し、ＣＤ３お
よびＣＤ２８に特異的な抗体（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）と共に、ＩＬ−２（Ｃ
ｅｌｌＧｅｎｉｘ）を含有する培地で培養することによって活性化した。活性化後、ＰＢ
ＭＣ培養物に、レンチウイルスベクターを用いて形質導入を行った、または無処理のまま
にした。培養を維持してＴ細胞を成長および増大させた（７〜１０日）。採取時に、培養
物は、およそ２ｌｏｇ増大したＴ細胞を含む。

ホタルルシフェラーゼ遺伝子で標識したＤａｕｄｉ細胞２×１０^６個を、静脈内注射に
より、ＮＯＤ ｓｃｉｄ ＩＬ−２受容体ガンマ鎖ノックアウトマウス（ＮＳＧ）におい
て確立させた。マウスに腫瘍細胞を注射した３日後、６日後、および９日後、ｐＭＮＤ−
カッパ_ＬＣＣＡＲ−改変Ｔ細胞１×１０^７個をマウスに養子移入し、Ｘｅｎｏｇｅｎ−Ｉ
ＶＩＳ Ｉｍａｇｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍを使用した生物発光によって腫瘍の成長をモニタ
ーした。改変ＣＡＲ Ｔ細胞を投与したマウスにおける腫瘍量は治療していないマウスに
おける腫瘍量と比較して低下した。図８。

（実施例８）
機能的なＣＡＲＴ薬品の生成
抗ＢＣＭＡ発現ＣＡＲ Ｔ細胞を上記の実施例１に記載の通り製造した。これらのＣＡ
Ｒ Ｔ細胞は抗原特異的腫瘍クリアランスを示した。抗ＢＣＭＡ発現ＣＡＲ Ｔ細胞を、
Ｋ５６２細胞、またはＢＣＭＡを発現するように改変されたＫ５６２細胞と４時間にわた
って共培養した。抗原を発現している腫瘍細胞を、カルボキシフルオレセインスクシンイ
ミジルエステル（ＣＦＳＥ）で標識し、蛍光をＦＡＣＳによって測定した。抗ＢＣＭＡ発
現ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ発現Ｋ５６２細胞を死滅させ（図９Ａ）、ＩＦＮ−γを放
出した（図９Ｂ）。（ｎ＝３）。

一般に、以下の特許請求の範囲において、使用される用語は、特許請求の範囲を本明細
書および特許請求の範囲に開示されている特定の実施形態に限定するものと解釈されるべ
きではなく、全ての可能性のある実施形態を、そのような特許請求の範囲に権利が与えら
れる等価物の全範囲と共に包含すると解釈されるべきである。したがって、特許請求の範
囲は本開示により限定されない。

Claims (1)

1. 本明細書に記載の発明。