JP2017501179A - 前立腺癌治療用組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明の他の一側面において、配列番号1のアミノ酸配列を含むペプチド、前記アミノ酸配列と80%以上の配列相同性を有するペプチド、またはその断片であるペプチド;及びドセタキセルまたは酢酸ロイプロリドのような既存の前立腺癌治療剤;を有効成分として含む前立腺癌治療用組成物を提供する。
ドセタキセル(docetaxel)は、「タキセン」、「微小管阻害剤(antimicrotubule agent)」、「植物性アルカロイド(plant alkaloids)」に分類される抗癌剤であり、細胞分裂過程において、分裂と自家複製との機構である微小管(microtubule)が分離される過程を妨害することにより、癌細胞の増殖を抑制する。
1.ペプチドの合成
配列番号1のペプチド(以下「pep 1」とする)を従来に知られた固相ペプチド合成法(SPPS:solid phase peptide synthesis)によって製造した。具体的には、ペプチドは、ASP48S(Peptron、Inc.,大韓民国・大田)を利用して、Fmoc固相合成法を介して、C末端からアミノ酸一つずつカップリングすることによって合成した。次のように、ペプチドのC末端の最初のアミノ酸が樹脂に付着されたものを使用した。例えば、次の通りである:
NH2−Ala−2−chloro−Trityl Resin
NH2−Arg(Pbf)−2−chloro−Trityl Resin
1)カップリング
NH2−Lys(Boc)−2−chloro−Trityl Resinで保護されたアミノ酸(8当量)と、カップリング試薬HBTU(8当量)/HOBt(8当量)/NMM(16当量)とをDMFに溶解させて添加した後、常温で2時間反応させ、DMF、MeOH、DMFの順に洗浄した。
20%のDMF中のピペリジン(piperidine in DMF)を加え、常温で5分間2回反応させ、DMF、MeOH、DMFの順に洗浄した。
実験のために使用した試薬、及び材料は、次の通りである。パウダー状態のpep1は、0.2μmフィルタで濾過された蒸溜水(0.2μm filtered sterile water)に溶かした後、−70℃で分注(aliquot)して保管し、使用時にそれを溶かして使用し、ドセタキセルは、100% EtOHに溶かした後、tween 80及びPBSで共に混合する方法で使用した。5−フルオロウラシル(5−fluorouracil)は、PBSに溶かして使用した。酢酸ロイプロリドは、PBSに直接溶かして使用した。
実験に使用された細胞株であるLNCaP細胞株は、ヒト前立腺癌転移性細胞であり、ATCC(American Type Cell Culture;Rockville,MD)から購入し、10%FBS(fetal bovine serum)、50U/mlペニシリン及び50μg/mlストレプトマイシンを含むRPMI(Roswell Park Memorial Institute medium)を培地にして、1ないし2x106/mlになるように、37℃に維持される5% CO2インキュベータで培養した。
pep1の前立腺癌に対する効果を確認するために、LNCaP細胞株を使用して、MTTアッセイを実施した。癌細胞増殖抑制確認のために実験に使用した試薬、材料及び細胞株培養方法は、前記実施例1に記載されている通りである。使用されたMTTアッセイ方法は、次の通りである。
pep1が投与されたとき、癌細胞サイズに及ぼす影響を測定するために実験を行った。
2)LNCaP移植+pep1 0.01mg/kg投与群
3)LNCaP移植+pep1 0.1mg/kg投与群
4)LNCaP移植+pep1 1mg/kg投与群
5)LNCaP移植+pep1 10mg/kg投与群
6)LNCaP移植+酢酸ロイプロリド0.1mg/kg投与群
7)LNCaP移植+酢酸ロイプロリド0.1mg/kg+pep1 0.1mg/kg投与群
9)LNCaP移植+ドセタキセル20mg/kg(週1回、腹腔内)投与群
10)LNCaP移植+pep1 30mg/kg(週3回、皮下)投与群
11)LNCaP移植+pep1 3mg/kg+ドセタキセル20mg/kg投与群
12)LNCaP移植+pep1 10mg/kg+ドセタキセル20mg/kg投与群
13)LNCaP移植+pep1 30mg/kg+ドセタキセル20mg/kg投与群
LNCaP異種移植モデルの腫瘍細胞増殖による体重変化を観察するために、実施例3で実験された1)ないし7)の実験群の体重を測定した。
実験群別に分析した結果、対照群(vehicle、実験群1))及び酢酸ロイプロリド単独及び併用投与群(実験群6及び7))と、pep1濃度別投与群(実験群2ないし5)との間に体重の急激な差が示されず、pep1投与の体内安定性を確認することができた(図6参照)。
トランスウェル分析(trans-well assay)を介して、pep1が癌細胞移動性に及ぼす影響を評価した。
癌細胞の移動性を示すmRNAマーカーMMP9(matrix metalloproteinase−9)及びMMP2(matrix metalloproteinase−2)の発現を観察するために、LNCaP異種移植された組織において、相対的な発現程度を観察した(図15及び図16参照)。
LNCaP細胞は、ヒト前立腺癌転移性細胞であり、ATCC(American Type Cel lCulture;Rockville,MD)から購入し、10% FBS、50U/mlペニシリン及び50μg/mlストレプトマイシンを含むRPMIを培地にし、1ないし2x106/mlになるように、37℃に維持される5% CO2インキュベータで培養した。
15)LNCaP移植+pep1 10mg/kg投与群
16)LNCaP移植+酢酸ロイプロリド0.1mg/kg投与群
Claims (15)
- 前立腺癌患者に投与し、前立腺癌の増殖または転移を抑制するための前立腺癌治療用組成物であって、
配列番号1のアミノ酸配列を有するペプチド、前記アミノ酸配列と少なくとも80%の配列同一性を有するペプチド、またはそれらのペプチド断片を含み、
前記ペプチド及びペプチド断片は、前立腺癌を治療するための有効量で含まれる、前記組成物。 - 前記組成物は抗癌剤と併用して投与される、請求項1に記載の組成物。
- 前記抗癌剤は、化学療法剤としてドセタキセルを含む、請求項2に記載の組成物。
- 前記抗癌剤は酢酸ロイプロリドである、請求項2に記載の組成物。
- アジュバントと組み合わされて投与される、請求項1に記載の組成物。
- 前記アジュバントはサイトカインアジュバントを含む、請求項5に記載の組成物。
- 前記サイトカインアジュバントは、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子(GM−CSF)を含む、請求項5に記載の組成物。
- 患者に投与され、ここで前記患者は、血清レベルにおいて、前記患者を含む全ての患者のエオタキシン及びMIP1αの平均濃度よりも少なくとも10%高い、エオタキシン及びMIP1αの少なくとも1つの濃度(w/v)を有する、請求項1に記載の組成物。
- ホルモン耐性を有する前立腺癌を治療するために使用される、請求項1に記載の組成物。
- 抗癌剤である酢酸ロイプロリドと併用して使用され、アジュバントとしてのGM−CSFと共に使用される、請求項1に記載の組成物。
- 請求項1〜10のいずれか1項に記載の組成物と、説明書とを含む、前立腺癌治療用キット。
- 前記説明書は、前記前立腺癌治療用組成物が、ドセタキセル及び酢酸ロイプロリドから選択される抗癌剤と併用投与され、アジュバントと組み合わせて投与され、そして患者に投与され、ここで前記患者は、血清レベルにおいて前記患者を含む前立腺癌患者の平均エオタキシン濃度よりも少なくとも10%高いエオタキシン濃度(w/v)を有する、という内容を含む、請求項11に記載のキット。
- 前立腺癌患者における前立腺癌を治療して、前立腺癌の増殖または転移を抑制するための方法であって、請求項1〜10のいずれか1項に記載の組成物を、前立腺癌の治療を必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
- 前立腺癌患者における前立腺癌を治療して、前立腺癌の増殖または転移を抑制するための方法であって、患者に請求項1〜10のいずれか1項に記載の組成物を投与することを含み、ここで前記患者は、血清レベルにおいて、前記患者を含む前立腺癌患者の平均エオタキシン濃度よりも少なくとも10%高いエオタキシン濃度(w/v)を有する、前記方法。
- 前立腺癌患者における前立腺癌を治療して、前立腺癌の増殖または転移を抑制するための組成物を製造するための、配列番号1のアミノ酸配列を有するペプチド、前記アミノ酸配列と少なくとも80%の配列同一性を有するペプチド、またはそれらの断片の使用。
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