KR20230120543A - c-Met의 에피토프를 포함하는 암 백신 및 이의 용도 - Google Patents

c-Met의 에피토프를 포함하는 암 백신 및 이의 용도 Download PDF

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KR20230120543A
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Abstract

본 발명은 c-Met 단백질의 종양항원으로서 기능하는 에피토프를 확인하여 완성된 것으로서, 상기 에피토프 펩타이드의 암 백신 용도 등에 관한 것으로서, 본 발명의 c-Met 에피토프 펩타이드는 항원 특이적 T1 세포의 활성화를 유도하여 암의 진행을 억제하고 그 전이를 예방하기 위한 암 백신으로서 면역관문억제제와 병용 투여 용법으로 이용될 수 있다.

Description

c-Met의 에피토프를 포함하는 암 백신 및 이의 용도{Cancer Vaccine Comprising Epitopes of c-Met and Its Uses}
본 발명은 c-Met 단백질의 종양항원으로서 기능하는 에피토프를 확인하여 완성된 것으로서, 상기 에피토프의 암 백신 용도 등에 관한 것이다.
현대에 들어서 많은 질병들이 치료가 쉽게 가능하게 되었고, 치료가 불가능한 병은 거의 없어졌지만, 암은 다른 질병치료와는 달리 매우 힘들고 복잡한 치료가 요구되고 있으며, 그 복잡한 치료들 또한 완벽하게 효과적이지 못하다. 최근 면역치료 방법이 대두되고 있다. 면역치료는 환자 체내의 면역반응을 이용하여 암을 치료하는 방법이다. 이 면역치료 방법을 통하여 암의 예방까지도 꾀할 수 있다. 암 면역치료는 백신의 원리와 같이 암의 원인이 되는 항원을 투여하여 암에 특이적인 면역세포들을 활성화시킨 후, 활성화된 면역세포들이 체내에서 암을 특이적으로 공격하게 하여 치료하는 방법이다. 또한, 암에 걸리지 않은 상태에서 암에 특이적인 항원을 몸 속에 투여하면, 활성화 되지 않았던 면역세포들이 암 특이적 기억면역세포로 활성화 되면서, 암에 걸렸을 시 암 세포를 특이적으로 공격하게 된다.
MHC(Major Histocompatibility Complex) class Ⅱ 에피토프 기반 펩타이드의 암 백신은 TAA 유래 종양 특이적 펩타이드를 사용하여 종양 특이적 T 세포 반응을 유도하며, 독성이 낮기 때문에 매력적인 암 치료제로서 임상 시험 중에 있다. MHC class II 펩타이드(아미노산 13~25개)를 기반으로 하는 펩타이드 백신은 MHC class I 펩타이드(아미노산 8~10개)보다 길며 주로 CD4 T 세포를 자극한다. MHC class I 제한 펩타이드를 사용한 백신 접종은 충분한 CTL(cytotoxic T-lymphocytes)를 유도하지 않아 면역 내성을 유발할 수 있다. 그러나 MHC class Ⅱ 제한 펩타이드는 CTL과 T-helper 세포를 충분히 유도할 수 있다는 장점이 있다. 또한 IGF-IR, IGFBP-2, HER2 또는 HIF-1α class II 에피토프를 기반으로 하는 펩타이드 백신이 T-helper 세포와 CTL을 모두 유도할 수 있다는 연구도 있다. MHC class II 기반의 백신이 면역 기억 생성 및 에피토프 확산에 강점이 있다는 증거는 계속 축적되고 있다.
c-Met은 간세포성장인자(Hepatocyte growth factor, HGF)에 의해 활성화되어 세포 내의 신호전달체계를 연속적으로 활성화시킴으로서 암 발생과, 암 세포의 전이 및 공격성을 획득하는 과정에서 매우 중요한 역할을 하는 티로신 키나아제 단백질이다. C-Met은 간암, 폐암, 위암, 두경부암, 신장암, 갑상선암, 전립선암, 자궁내막암, 및 유방암 등의 암종에서 발현이 증가하는 것으로 알려져 있다.
암의 발생 및 진행을 억제하기 위하여 c-Met을 저해할 수 있는 소분자 물질이 개발되었으나, 아직까지 c-Met을 이용한 종양 백신은 개발된 바 없다. 본 발명자들은 보다 효과적으로 면역반응을 유도하며 내성 발생 가능성이 낮은 MHC class II 펩타이드 기반의 암 백신 개발을 위하여 c-Met 단백질에서 종양 항원으로서 기능하는 에피토프를 발굴하여 상기 에피토프의 펩타이드가 효과적으로 마우스에서 면역반응을 야기하는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
KR 10-2184377
본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 c-Met에서 종양항원으로 작용하는 에피토프 유래의 펩타이드를 암 백신으로서 제공하는 것이다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 c-Met 에피토프 유래의 펩타이드 중에서 종양항원으로서 작용하는 펩타이드를 암 백신으로서 제공한다.
본 발명의 일 구현예로서, 상기 암 백신용 펩타이드는 서열번호 00 또는 00으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어질 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로서, 상기 펩타이드는 안정성 향상을 위하여 아미노(N-) 말단 또는 카르복시(C-) 말단의 변형을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로서, 상기 펩타이드의 아미노 말단은 아세틸기, 플루오레닐 메톡시 카르보닐기, 포르밀기, 팔미토일기, 미리스틸기, 스테아릴기 및 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 등의 보호기가 결합될 수 있으며, 펩타이드의 카르복시 말단은 히드록시기(-OH), 아미노기(-NH2), 아자이드(-NHNH2) 등으로 변형될 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로서, 상기 펩타이드는 말단 또는 아미노산의 R-잔기(R-group)에 지방산(fatty acids), 당사슬(oligosaccharides chains), 모든 나노입자(골드입자, 리포솜, 헤파린, 하이드로젤 등), 아미노산, 담체 단백질(carrier proteins) 등이 결합될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 암 백신 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현예로서, 상기 약학적 조성물은 면역관문억제제를 추가로 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 개체에 상기 펩타이드를 투여하는 단계를 포함하는 암의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현예로서, 상기 방법은 상기 개체에 면역관문억제제를 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 암의 예방 또는 치료용 약제 제조를 위한 상기 펩타이드의 용도를 제공한다.
본 발명의 다른 구현예로서, 상기 암은 유방암, 비소세포폐암, 위암, 두경부암, 신장암, 간암, 전립선암, 및 갑상선암으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상일 수 있으며, 전이성 암을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로서, 상기 면역관문억제제는 CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, BTLA, B7H3, B7H4, TIM3, KIR, TIGIT, CD47, VISTA 및 A2aR로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 면역관문 단백질을 표적으로 하는 항체일 수 있으며, 상기 항체는 단클론 항체일 수 있다.
본 발명의 c-Met 펩타이드의 암 백신은 c-Met을 과발현하는 것으로 다양한 암종에 적용될 수 있으며, 상기 암 백신은 항원 특이적 Th1 세포를 유도하여 INF-gamma의 발현 수준을 증가시키는바 암의 진행과 그 전이를 예방하기 위한 백신으로서 이용될 수 있다. 나아가 본 발명의 백신은 STING agonist 및/또는 면역관문억제제와 병용 투여 용법으로 이용될 수 있다.
도 1은 컴퓨터 알고리즘 프로그램을 이용하여 획득된 c-Met 에피토프 펩타이드의 in vitro에서 면역원성을 확인한 결과이다.
도 2 및 도 3은 in vitro에서 Th1 세포 유도 효과가 뛰어난 것으로 확인된 2종 c-Met 에피토프 펩타이드를 삼중음성유방암 동물모델에 투여한 후 INF-gamma ELISPOT 수행 결과이다.
본 발명은 컴퓨터 알고리즘을 통해 c-Met 단백질에서 HLA에 친화도가 높을 것으로 예상되는 펩타이드 서열을 스크리닝하고, 인간 말초혈액 단핵구를 이용한 INF-gamma ELISPOT과 IL-10 ELISPOT를 수행하여 Th1 면역반응을 활발하게 유도하는 2종 펩타이드를 발굴하여 완성되었다. 본 발명의 c-Met 에피토프 유래의 2종 펩타이드는 삼중음성유방암 마우스 모델에서 Th1 세포의 활성화를 유도하는바, 종양항원으로서 암 백신에 이용될 수 있다.
본 발명에서 "에피토프(epitope)"는 특정 항체에 의해 인식되는 항원결합부위의 아미노산 잔기 세트, 또는 T 세포에서는 T 세포 수용체 단백질 및/또는 주요 조직적합성 복합체(Major Histocompatibility Complex, MHC)수용체에 의해 인식되는 잔기이다. 에피토프는 항체, T 세포 수용체 또는 HLA 분자에 의해 인식되는 부위를 형성하는 분자로, 일차, 이차 및 삼차 펩티드 구조, 또는 전하를 의미한다.
본 발명에서 c-MET 에피토프 유래의 펩타이드는 공지의 화학적 합성 방법 또는 유전공학적 방법에 의해 제조될 수 있으며, 안정성 향상을 위하여 아미노(N-) 말단 또는 카르복시(C-) 말단의 변형을 포함할 수 있다. 상기 “안정성”은 생체 내(in vivo) 안정성뿐만 아니라, 저장 안정성(상온, 냉장, 냉동 보관 시 저장 안정성 포함)도 포함하는 의미이다.
본 명세서에서 c-Met 에피토프 유래의 펩타이드는 “c-Met 펩타이드”, “c-Met 에피토프”, 또는 “c-Met 에피토프 펩타이드” 용어로 서술되며, 체내에 주입되어 HLA에 c-Met 에피토프를 제공하여 면역반응을 활성화하는 것이라면 제한되지 아니한다. 예를들어, 본 발명의 암 백신은 상기 펩타이드 자체로 제공될 수 있고, 상기 c-Met 펩타이드를 암호화하는 유전물질로 제공될 수 있다. 본 발명에서 상기 c-Met 펩타이드를 암호화하는 유전물질이 암 백신으로 제공되는 경우 상기 유전물질은 RNA 및/또는 DNA로 이루어질 수 있으며, modified nucleotide를 포함할 수 있다. 상기 유전물질이 주로 RNA로 이루어지는 경우 생체 내에서 발현을 위한 공지의 구성을 포함할 수 있으며, 비제한적인 예로는 IRES, 5'-Capping 등이 있다. 또한, 상기 유전물질이 주로 DNA로 이루어지는 경우 그 발현을 위하여 작동 가능하게 연결된(operably linked) 프로모터를 포함한 재조합 벡터로 제공될 수 있다. 또한, 상기 유전물질은 세포 외부로 분비를 위하여 신호 펩타이드(signal peptide)를 포함할 수 있다.
본 발명에서 “프로모터”는 DNA의 일부분으로 전사를 개시할 수 있도록 RNA 중합효소의 결합에 관여한다. 일반적으로 표적 유전자에 인접하여 이의 상류에 위치하며, RNA 중합효소 또는 RNA 중합효소를 유도하는 단백질인 전사 인자(transcription factor)가 결합하는 자리로서 상기 효소 또는 단백질이 올바른 전사 시작 부위에 위치하도록 유도할 수 있다. 즉, 센스 가닥(sense strand)에서 전사하고자 하는 유전자의 5' 부위에 위치하여 RNA 중합효소가 직접 또는 전사인자를 통해 해당 위치에 결합하여 표적 유전자에 대한 mRNA 합성을 개시하도록 유도하는 것으로 특정한 유전자 서열을 갖는다.
본 발명에서 백신이 예방 또는 치료하고자 하는 “암”은 세포의 정상적인 분열, 분화 및 사멸의 조절 기능에 문제가 발생하여 비정상적으로는 과다 증식하여 주위 조직 및 장기에 침윤하여 덩어리를 형성하고 기존의 구조를 파괴하거나 변형시킨 상태를 의미한다.
본 발명에서 암은 유방암 외에도 비소세포폐암, 위암, 두경부암, 신장암, 간암, 전립선암, 갑상선암 등의 c-MET의 과발현이 보고된 고형암이 포함될 수 있으며, 나아가 본 발명의 백신은 전이성 암, 특히 골 전이 암을 예방 또는 치료할 수 있다.
본 발명의 암 백신은 Th1 면역반응을 유도한다.
본 발명에서 “Th1 세포”는 유전자 발현, 단백질 분비 및 기능적 활성 측면에서 특정되는 헬퍼 T 세포림포사이트의 서브세트를 의미한다. 예를 들어, Th1 세포는 IL-2 및 IFN-γ를 합성하지만 IL-4, IL-5, IL-10 및 IL-13는 합성하지 않는 사이토카인 발현 패턴을 나타낸다. Th1 세포는 다양한 세포내 병원균에 대한 세포-매개 면역반응, 기관-특이적 자가면역 질환 및 지연성 과민반응에 관여한다.
한편, 본 발명의 암 백신은 STING agonist 및/또는 면역관문억제제와 병용투여 되어 보다 현저한 항암 효과를 나타낼 수 있으며, 면역관문억제제 내성 암에서 약물 감수성을 향상시킬 수 있다.
이에, 본 발명은 암의 예방 또는 치료를 위하여 상술한 암 백신과 STING agonist 및/또는 면역관문억제제를 병용 투여 요법을 제공한다. 이때, 암 백신과 STING agonist 및/또는 면역관문억제제는 하나의 조성물로서 제공될 수 있으며, 각각 별도로 제공되어 순차로 투여되는 것일 수 있다. 암 백신과 STING agonist 및/또는 면역관문억제제가 순차로 투여되는 경우 그 순서는 무관하지만, 바람직하게는 암 백신의 투여 이후에 STING agonist 및/또는 면역관문억제제가 투여될 수 있다.
본 발명에서 “STING(STimulator of InterferoN Gene, 인터페론 유전자의 촉진제)”은 STING에 관련된 신호전달 경로를 활성화하여 인터페론을 포함하는 염증성 사이토카인의 생산을 유도하여 항암 효과를 나타내는 물질을 의미한다.
본 발명에서 “면역관문억제제(Immune checkpoint inhibitor: ICI)”는 T세포의 면역 기능 유지를 위한 PD-L1과 PD-1의 결합 저해기능 등을 수행하는 것으로서, 종양 내부로 침윤된 T-cell의 활성을 억제하는 PD-1또는 PDL-1을 저해하므로 T-cell의 활성을 극대화하여 항암 효과를 상승시킬 수 있다. 본 발명의 백신과 병용투여되는 면역관문억제제는 T-cell 활성을 위해 면역관문 단백질을 표적으로 하는 면역관문억제제라면 제한되지 않는다. 본 발명에서 면역관문 억제제는 CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, BTLA, B7H3, B7H4, TIM3, KIR, TIGIT, CD47, VISTA 또는 A2aR의 억제제일 수 있다.
본 발명에서 "예방"이란 본 발명에 따른 백신 또는 상기 백신과 면역관문억제제 병용물의 투여로 암의 전이를 억제하거나 암의 발병 및 그 전이를 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 "치료"란 본 발명에 따른 백신 또는 상기 백신과 면역관문억제제 병용물의 투여로 암이 호전되거나 그 증상을 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 백신은 상술한 c-Met 에피토프 펩타이드 또는 상기 펩타이드를 포함하는 약학적 조성물로 제공될 수 있으며, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물에 사용될 수 있는 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 칼슘 카보네이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 광물유 등을 들 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여할 수 있으나, 비경구로 투여하는 것이 바람직하다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 정맥내, 동맥내, 암조직 내 또는 피하로 직접 투여될 수 있으며, 주사제로 투여될 수 있다. 본 발명에 따른 주사제는 환자에게 투여시 그대로 이용될 수 있도록 멸균 매질에 분산된 형태일 수 있으며, 투여시 주사용 증류수를 가해 적절한 농도로 분산시킨 다음 투여하는 형태일 수도 있다. 또한, 주사제로 제조될 때 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장화제, 안정화제 등과 혼합될 수 있고, 단위 투약 앰플 또는 다중 투약 형태로 제조될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물 형태, 투여 경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 한편, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 단독으로 사용되거나, 또는 외과적 수술요법 등의 보조 치료 방법들과 병행하여 사용될 수 있다.
본 명세서에서는 아미노산 서열을 IUPAC-IUB 명명법에 따라 아래와 같이 약어로 기재하였다.
아르기닌(Arg, R), 라이신(Lys, K), 히스티딘(His, H), 세린(Ser, S), 트레오닌(Thr, T), 글루타민(Gln, Q), 아스파라진(Asp, N), 메티오닌(Met, M), 루신(Leu, L), 이소루신(Ile, I), 발린(Val, V), 페닐알라닌(Phe, F), 트립토판(Trp, W), 티로신(Tyr, Y), 알라닌(Ala, A), 글리신(Gly, G), 프롤린(Pro, P), 시스테인(Cys, C), 아스파르트산(Asp, D) 글루탐산(Glu, E), 노르루신(Nle)
이하에서, 첨부된 도면을 참조하여 실시예들을 상세하게 설명한다. 그러나, 실시예들에는 다양한 변경이 가해질 수 있어서 특허출원의 권리 범위가 이러한 실시예들에 의해 제한되거나 한정되는 것은 아니다. 실시예들에 대한 모든 변경, 균등물 내지 대체물이 권리 범위에 포함되는 것으로 이해되어야 한다.
실시예에서 사용한 용어는 단지 설명을 목적으로 사용된 것으로, 한정하려는 의도로 해석되어서는 안된다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 명세서에서, "포함하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 명세서 상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.
다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 실시예가 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥 상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.
또한, 첨부 도면을 참조하여 설명함에 있어, 도면 부호에 관계없이 동일한 구성 요소는 동일한 참조부호를 부여하고 이에 대한 중복되는 설명은 생략하기로 한다. 실시예를 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 실시예의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.
[실시예]
실시예 1. In 알고리즘을 이용한 c-Met 항원결정기 발굴
c-Met에서 인간 MHC class II 대립형질(allele)에 결합친화성이 좋을 것으로 예상되는 15-mer 펩타이드 시퀀스를 선정하기 위하여, SYFPEITHI(Institute for Cell Biology, Heidelberg, Germany), Propred(Institute of Microbial Technology, Chandigarh, India), Average Binding matrix method, Rankpep(Harvard, Boston, MA, USA)의 컴퓨터 알고리즘을 이용하였다.
그 결과, c-Met 13-25 mer 펩타이드 시퀀스 15개를 발굴하였다(표 1).
SEQ No. c-Met 15-mer 펩타이드 아미노산 서열
1 P12-31 LVLLFTLVQRSNGECKEALA
2 P61-79 HIFLGATNYIYVLNEEDLQ
3 P193 -207 INFFVGNTINSSYFP
4 P245-269 YPIKYVHAFESNNFIYFLTVQRETL
5 p275 - 289 HTRIIRFCSINSGLH
6 p314 - 328 FNILQAAYVSKPGAQ
7 p369 - 393 YVNDFFNKIVNKNNVRCLQHFYGPN
8 P416-435 YRTEFTTALQRVDLFMGQF
9 P435 -456 SEVLLTSISTFIKGDLTIANLG
10 P590-604 FRRNNKFDLKKTRVL
11 P793 - 804 MVINVHEAGRNFT
12 P835-850 TKAFFMLDGILSKYFD
13 P851 - 866 LIYVHNPVFKPFEKPV
14 P956 - 973 VVSISTALLLLLGFFLWL
15 P974 - 998 KKRKQIKDLGSELVRYDARVHTPHL
실시예 2. In vitro에서 c-Met 에피토프 펩타이드의 면역원성 확인
상기 실시예 1에서 발굴한 15개 펩타이드를 펩타이드 합성회사에 의뢰하여 펩타이드로 합성하였다. In-vitro에서 상기 펩타이드의 면역원성을 확인하기 위하여 ELISPOT(Enzyme-linked immune spot assay) 분석을 수행하였다. 96-well filtration plate (MAIPS4510, Merck Millipore, Darmstadt, Germany)에 30ul/well의 35% 에탄올을 1분간 반응시킨 후, 200ul를 1X PBS로 3회 세척하였다. 이어서, 10 ug/ml 항-마우스 IFN-γ 항체 또는 IL-10 항체를 96- well filtration plate에 웰당 50ul씩 4℃에서 밤새 코팅하였다. 4°C에서 밤새 배양한 후 1xPBS로 3회 세척하고 200ul의 마우스 T 세포 배지를 실온에서 2시간 동안 배양하였다.
마우스 T 세포 배지를 제거한 후, 2.5 또는 3 x 106 사람의 말초혈액 단핵구를 플레이팅하였다. 상기 말초혈액 단핵구는 10㎍/ml c-MET 펩타이드가 포함된 배지에서 37℃의 인큐베이터 하에 48-72시간 동안 배양하였다. 그 다음, 플레이트를 0.05% Tween-20에 녹인 PBS 200ul로 세척한 후, 웰당 50ul씩 biotinylated anti-mouse IFN-γ 항체 또는 IL-10 항체 5㎍/ml를 첨가하고 4℃에서 밤새 배양하였다. 플레이트를 스캔하고 자동 ELISPOT 판독기 시스템을 사용하여 spot을 계산하였다. 그 결과 2종 펩타이드에서 활발한 Th1 면역반응 유도 활성을 확인하였으며(도 1). 상기 2종 펩타이드를 최종적으로 c-Met의 종양항원으로 선정하였다.
최종 종양항원으로 선정된 c-Met의 에피토프 펩타이드의 아미노산 서열은 아래와 같다.
- p275 - 289: HTRIIRFCSINSGLH
- p314 - 328: FNILQAAYVSKPGAQ
실시예 3. 유방암 동물모델에서 c-Met 에피토프 펩타이드의 면역원성 확인
cJeg/Jeg (C3(1)-Tag) 마우스를 Jackson Laboratories에서 구입하여 사용하였다. C3(1)-Tag 마우스는 삼중음성유방암의 기본 표현형을 가진 TNBC 동물모델이다. 이어서, 기 발굴된 HIF-1alpha의 종양원성 에피토프와 Freund's adjuvant (CFA/IFA)를 이용하여 상기 실시예 2에서 선정한 c-Met 에피토프의 면역원성을 확인하고자 하였다.
각 에피토프와 폴리펩타이드의 서열은 하기 표 2과 같다.
아미노산 서열 서열번호
cMet epitope HTRIIRFCSINSGLH (P275) 5
FNILQAAYVSKPGAQ (P314) 6
HIF1alpha epitope YELAHQLPLPHNVSSH (p38-53) 16
MRLTISYLRVRKLLDAGDLDIED (p60-82) 17
LKALDGFVMVLTDDGDMIYISDNVN (p93-117) 18
HIF1α/cMet polypeptide HTRIIRFCSINSGLH (P275)
FNILQAAYVSKPGAQ (P314)
YELAHQLPLPHNVSSH (p38-53)
MRLTISYLRVRKLLDAGDLDIED (p60-82)
LKALDGFVMVLTDDGDMIYISDNVN (p93-117)		 19
각 마우스를 complete/incomplete Freud's adjuvant (sigma), 50㎕의 HIF-1α peptide pools (p38-53, p60-82 및 p93-117; 50㎍) 및 c-MET peptide pools (p275, p314; 각각 50μg)으로 예방 접종하였다. 과발현된 자가항원에 대한 효과적인 면역반응을 유도하기 위해 7-10일 간격으로 3회 접종하였다. 마지막 백신 접종 10일 후 마우스를 희생하고, 비장에서 비장세포를 분리하였다. 이어서, 각 백신의 인터페론(IFN)-γ-분비 항원 특이적 T 세포를 유도하는 능력은 ELISPOT을 사용하여 확인하였다. 대조군과 비교하여, HIF1α/c-MET 폴리펩타이드 백신은 항원-특이적 Type I T 세포의 유의하게 더 높은 수준을 유도하였다. 비장세포에서 항원 특이적 T 세포 반응은 HIF1α 펩타이드보다는 c-MET 펩타이드로 자극되었을 때 더 두드러졌다(도 2 및 도 3).
이상과 같이 실시예들이 비록 한정된 도면에 의해 설명되었으나, 해당 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기를 기초로 다양한 기술적 수정 및 변형을 적용할 수 있다. 예를 들어, 설명된 기술들이 설명된 방법과 다른 순서로 수행되거나, 및/또는 설명된 시스템, 구조, 장치, 회로 등의 구성요소들이 설명된 방법과 다른 형태로 결합 또는 조합되거나, 다른 구성요소 또는 균등물에 의하여 대치되거나 치환되더라도 적절한 결과가 달성될 수 있다.
그러므로, 다른 구현들, 다른 실시예들 및 특허청구범위와 균등한 것들도 후술하는 청구범위의 범위에 속한다.

Claims (7)

  1. 서열번호 5 또는 6의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드.
  2. c-Met 유래의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 암 백신 조성물로서,
    상기 펩타이드는 서열번호 5 및/또는 6의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 암 백신 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 암은 유방암, 비소세포폐암, 위암, 두경부암, 신장암, 간암, 전립선암, 및 갑상선암으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것인, 암 백신 조성물.
  4. c-Met 유래의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서,
    상기 펩타이드는 서열번호 5 및/또는 6의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 약학적 조성물.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 약학적 조성물은 면역관문억제제를 추가로 포함하는 것인, 약학적 조성물.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 면역관문억제제는 CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, BTLA, B7H3, B7H4, TIM3, KIR, TIGIT, CD47, VISTA 및 A2aR로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 면역관문 단백질을 표적으로 하는 항체인 것인, 약학적 조성물.
  7. 제4항에 있어서,
    상기 암은 유방암, 비소세포폐암, 위암, 두경부암, 신장암, 간암, 전립선암, 및 갑상선암으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것인, 약학적 조성물.
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