JP2017129422A - イムノクロマト処理によるアレルゲンの検出方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】液状サンプルに、ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)の存在下にイムノクロマト処理を施すアレルゲンの検出方法。前記イムノクロマト処理は、変性及び未変性のアレルゲンを共に認識することができるモノクローナル抗体に金コロイドを結合した金コロイド標識抗体を移動相とし、変性及び未変性のアレルゲンを共に認識し、前記金コロイド標識抗体と異なるエピトープを認識するモノクローナル抗体を固定相とし、特定のアレルゲンと金コロイド標識抗体の複合体が移動して固定相のモノクローナル抗体に特異的結合することにより、液状サンプル中のアレルゲンを定性的又は定量的に検出する処理である。
【選択図】なし
Description
(1)液状サンプルに、ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)の存在下にイムノクロマト処理を施すことを特徴とするアレルゲンの検出方法。
(2)液状サンプルが、拭取り溶液又は洗浄水であることを特徴とする上記(1)記載のアレルゲンの検出方法。
(3)液状サンプルから抽出処理又は加熱処理をすることなくイムノクロマト処理をすることを特徴とする上記(1)又は(2)記載のアレルゲンの検出方法。
(4)SDS濃度が、0.05〜2.0%であることを特徴とする上記(1)〜(3)のいずれか記載のアレルゲンの検出方法。
(5)液状サンプルがウシ胎児血清(FBS)を少なくとも10%さらに含むことを特徴とする上記(1)〜(4)のいずれか記載のアレルゲンの検出方法。
(6)液状サンプルがチオ硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム又はアスコルビン酸をさらに含むことを特徴とする上記(1)〜(5)のいずれか記載のアレルゲンの検出方法。
(7)変性及び未変性のアレルゲンを共に認識することができるモノクローナル抗体に標識物を結合した標識抗体と、変性及び未変性のアレルゲンを共に認識し、前記標識物を結合した標識抗体と異なるエピトープを認識するモノクローナル抗体とがそれぞれ所定の位置に固定された展開支持体と;液状サンプルを調製するための溶媒とを備えることを特徴とするアレルゲン検出キット。
(8)さらに、FBSを備えることを特徴とする上記(7)記載のアレルゲン検出キット。
(9)さらに、チオ硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム又はアスコルビン酸を備えることを特徴とする上記(8)記載のアレルゲン検出キット。
(各食品検出用イムノクロマトストリップの作製)
各食品に対応する食品検出用イムノクロマトストリップを作製した。
(1)カゼイン検出用イムノクロマトストリップの作製
1)金コロイド標識抗体の作製
2mMホウ酸緩衝液(pH9.0)で1mg/mLとなるようにPas1CN1モノクローナル抗体溶液を調製した。あらかじめ0.2M炭酸カリウム溶液でpH9.0に調製した金コロイド溶液(シグマ社製)5mLにPas1CN1モノクローナル抗体溶液を500μl加え、室温で30分間反応した後、10%BSA溶液を635μL加え、さらに15分間反応させた。遠心分離を行い、1%BSA溶液でOD525=1.0になるよう調製した。ガラスウール製コンジュゲートパッドに68μL/cm2となるよう塗布し、乾燥させた。
PBSで4mg/mLとなるようにPas1CN2モノクローナル抗体溶液を調製し、ニトロセルロースメンブレンに直線状に塗布し乾燥させた。その後、0.1%牛ゼラチンを含むTBSで37℃にて1時間ブロッキング後、TBSで洗浄し乾燥させた。
抗体固定化メンブレンに加えて、サンプル用担体部としてのガラスウール製サンプルパッド、液状サンプル吸収用のガラスウール製吸収パッドを別途用意し、サンプルパッド、抗体固定化メンブレン、吸収パッドの順にそれぞれ貼り付け、イムノクロマトストリップを作製した。
1)金コロイド標識抗体の作製においてPβLG3のモノクローナル抗体溶液を調製し、2)抗体固定化メンブレンの作製においてPβLG4のモノクローナル抗体溶液を調製したことのほかは、上記(1)カゼイン検出用イムノクロマトストリップの作製と同様の手順にて、βラクトグロブリン検出用イムノクロマトストリップを作製した。
1)金コロイド標識抗体の作製においてPDOA3のモノクローナル抗体溶液を調製し、2)抗体固定化メンブレンの作製においてPDOA4のモノクローナル抗体溶液を調製したことのほかは、上記(1)カゼイン検出用イムノクロマトストリップの作製と同様の手順にて、オボアルブミン検出用イムノクロマトストリップを作製した。
1)金コロイド標識抗体の作製においてPGL1のモノクローナル抗体溶液を調製し、2)抗体固定化メンブレンの作製においてPGL2のモノクローナル抗体溶液を調製したことのほかは、上記(1)カゼイン検出用イムノクロマトストリップの作製と同様の手順にて、小麦グリアジン検出用イムノクロマトストリップを作製した。
1)金コロイド標識抗体の作製においてPBW5のモノクローナル抗体溶液を調製し、2)抗体固定化メンブレンの作製においてPBW2のモノクローナル抗体溶液を調製したことのほかは、上記(1)カゼイン検出用イムノクロマトストリップの作製と同様の手順にて、そばアレルゲン検出用イムノクロマトストリップを作製した。
1)金コロイド標識抗体の作製においてPAh1−5のモノクローナル抗体溶液を調製し、2)抗体固定化メンブレンの作製においてPAh1−4のモノクローナル抗体溶液を調製したことのほかは、上記(1)カゼイン検出用イムノクロマトストリップの作製と同様の手順にて、落花生Ara h1タンパク質検出用イムノクロマトストリップを作製した。
1)金コロイド標識抗体の作製においてPDSY2のモノクローナル抗体溶液を調製し、2)抗体固定化メンブレンの作製においてPDSY1のモノクローナル抗体溶液を調製したことのほかは、上記(1)カゼイン検出用イムノクロマトストリップの作製と同様の手順にて、大豆7Sグロブリン検出用イムノクロマトストリップを作製した。
1)金コロイド標識抗体の作製においてPDSE2のモノクローナル抗体溶液を調製し、2)抗体固定化メンブレンの作製においてPDSE1のモノクローナル抗体溶液を調製したことのほかは、上記(1)カゼイン検出用イムノクロマトストリップの作製と同様の手順にて、大豆7Sグロブリン検出用イムノクロマトストリップを作製した。
1)金コロイド標識抗体の作製においてPDTM2のモノクローナル抗体溶液を調製し、2)抗体固定化メンブレンの作製においてPDTM1のモノクローナル抗体溶液を調製したことのほかは、上記(1)カゼイン検出用イムノクロマトストリップの作製と同様の手順にて、甲殻類タンパク質検出用イムノクロマトストリップを作製した。
本実施例では、各食物アレルゲンを検出するための以下の各食品タンパク質を調製した。
(未加熱食品タンパク質の調製)
1)未加熱卵タンパク質の調製
未加熱卵タンパク質は、「アレルギー物質を含む食品の検査方法について(参考)(平成26年3月26日、消費者庁)」に記載の標準品規格の方法に従い作製した粉末から調製した。
未加熱カゼインタンパク質は、「アレルギー物質を含む食品の検査方法について(参考)(平成26年3月26日、消費者庁)」に記載の標準品規格の方法に従い作製した粉末から調製した。
未加熱ホエータンパク質は、「アレルギー物質を含む食品の検査方法について(参考)(平成26年3月26日、消費者庁)」に記載の標準品規格の方法に従い作製した粉末から調製した。
未加熱小麦タンパク質は、「アレルギー物質を含む食品の検査方法について(参考)(平成26年3月26日、消費者庁)」に記載の標準品規格の方法に従い作製した粉末から調製した。
未加熱そばタンパク質は、「アレルギー物質を含む食品の検査方法について(参考)(平成26年3月26日、消費者庁)」に記載の標準品規格の方法に従い作製した粉末から調製した。
未加熱落花生タンパク質は、「アレルギー物質を含む食品の検査方法について(参考)(平成26年3月26日、消費者庁)」に記載の標準品規格の方法に従い作製した粉末から調製した。
未加熱大豆タンパク質は、大豆をミルサーで粉砕し、アセトンで脱脂した粉末から調製した。
未加熱ごまタンパク質は、ごまをミルサーで粉砕し、アセトンで脱脂した粉末から調製した。
甲殻類タンパク質は、「アレルギー物質を含む食品の検査方法について(参考)(平成26年3月26日、消費者庁)」に記載の標準品規格の方法に従い作製した粉末から調製した。
(加熱食品タンパク質の調製)
上記各未加熱食品タンパク質を、それぞれ75℃にて30分間、100℃にて10分間、120℃にて4分間加熱したものを、それぞれ、75℃加熱卵タンパク質、100℃加熱卵タンパク質、120℃加熱卵タンパク質、75℃加熱カゼインタンパク質、100℃加熱カゼインタンパク質、120℃加熱カゼインタンパク質、75℃加熱ホエータンパク質、100℃加熱ホエータンパク質、120℃加熱ホエータンパク質、75℃加熱小麦タンパク質、100℃加熱小麦タンパク質、120℃加熱小麦タンパク質、75℃加熱そばタンパク質、100℃加熱そばタンパク質、120℃加熱そばタンパク質、75℃加熱落花生タンパク質、100℃加熱落花生タンパク質、120℃加熱落花生タンパク質、75℃加熱大豆タンパク質、100℃加熱大豆タンパク質、120℃加熱大豆タンパク質、75℃加熱ごまタンパク質、100℃加熱ごまタンパク質、120℃加熱ごまタンパク質、75℃加熱甲殻類タンパク質、100℃加熱甲殻類タンパク質、120℃加熱甲殻類タンパク質として、それぞれの食品について、75℃加熱食品タンパク質、100℃加熱食品タンパク質、120℃加熱食品タンパク質の各加熱食品タンパク質の調製を行った。
食物アレルゲンの検出にあたり、従来の検出法(キット)の溶媒を用いるだけで、抽出処理や加熱処理を行わない場合においてもアレルゲンを検出することができるか否かを検討した。食品タンパク質としては、上記各未加熱食品タンパク質及び各加熱食品タンパク質を用い、終濃度0.1ppmになるようにそれぞれPBS10mLに溶解して、36種類からなる液状サンプルセット1とした。かかる液状サンプルセット1の各サンプルに、FBSの終濃度が30%となるよう添加した溶液0.1mLを用意し、対応する食品検出用イムノクロマトストリップを用いてイムノクロマト処理に供試し、20分後に結果を判定した。結果を表1に示す。
表1からも明らかなとおり、未加熱卵タンパク質;75℃、100℃、及び120℃加熱卵タンパク質;及び未加熱ごまタンパク質を用いたモデル液状サンプルにおいて、アレルゲンを検出することができなかった。
従来法において加熱用抽出液を構成する成分として知られている非イオン性界面活性剤の一種であるポリオキシエチレンソルビタンモノラウラート(Tween20)と、SDSと、チオ硫酸ナトリウムとを液状サンプルに添加した場合に、加熱処理を行わない場合においてもアレルゲンの検出に貢献するか否かを検討した。食品タンパク質としては、上記各未加熱食品タンパク質及び各加熱食品タンパク質を用い、終濃度0.5ppmになるようにそれぞれPBS10mLに溶解して、36種類からなる液状サンプルのセット2とした。かかる液状サンプルセット2に、終濃度が0.2%Tween20、0.5%SDS、0.1%チオ硫酸ナトリウムになるようにTween20とSDSとチオ硫酸ナトリウムとを添加して、36種類の三種添加液状サンプルセットを調製し、さらにそれぞれFBSの終濃度が30%となるよう添加し、対応する食品検出用イムノクロマトストリップを用いてイムノクロマト処理に供試し、20分後に結果を判定した。結果を表2に示す。
表2から明らかなとおり、抽出・加熱処理を行わない場合においても、0.2%Tween20と0.5%SDSと0.1%チオ硫酸ナトリウムとが添加された場合は、未加熱卵タンパク質;75℃、100℃、及び120℃加熱卵タンパク質;及び未加熱ごまタンパク質を含む上記36種類からなる三種添加液状サンプルセットの各サンプルすべてにおいてアレルゲンを検出することができた。
上記Tween20と、SDSと、チオ硫酸ナトリウムについて、抽出・加熱処理を行わない場合において、単独で液状サンプルに添加することにより、イムノクロマトストリップを用いたアレルゲンの検出に貢献するか否かを検討した。食品タンパク質としては、未加熱卵タンパク質を用い、終濃度0.5ppmになるようにPBS10mLに溶解して未加熱卵液状サンプルとした。かかる未加熱卵液状サンプルを4つ用意し、終濃度がそれぞれ0.2%Tween20、0.5%SDS、0.1%チオ硫酸ナトリウムになるように、Tween20添加未加熱卵液状サンプル、SDS添加未加熱卵液状サンプル、チオ硫酸ナトリウム添加未加熱卵液状サンプルを調製した。また、未加熱卵液状サンプルにTween20、SDS、チオ硫酸ナトリウムすべてを添加した場合を陽性コントロールとした。さらにそれぞれFBSの終濃度が30%となるよう添加し、対応する食品検出用イムノクロマトストリップを用いてイムノクロマト処理に供試し、20分後に結果を判定した。結果を表3に示す。
表3から明らかなとおり、液状サンプルに終濃度0.5%のSDSを添加した場合に、オボアルブミンを検出することができたが、Tween20やチオ硫酸ナトリウムを単独で添加した場合はアレルゲンの検出はできなかった。
[SDSの最適濃度]
液状サンプル中のSDSの最適濃度を検討した。食品タンパク質としては、上記各未加熱食品タンパク質9種類を用い、終濃度0.5ppmになるようにそれぞれPBS10mLに溶解して、9種類からなる未加熱食品液状サンプルのセットとした。かかる未加熱食品液状サンプルセットの各サンプルに、終濃度が0.1、0.25、0.5、1.0、5.0%となるようにSDSを添加し、さらにそれぞれFBSの終濃度が30%となるよう添加して、対応する食品検出用イムノクロマトストリップを用いて、イムノクロマト処理に供試した。結果を表4に示す。
表4より明らかなとおり、液状サンプルにおけるSDSの終濃度が0.1、0.25、0.5%である場合にすべての未加熱食品液状サンプルにおいて、アレルゲンが検出された。特にSDSの濃度が0.1%の場合はカゼイン、小麦及び落花生において特に検出感度が高くなり、SDSの濃度が0.25%の場合は卵及びホエーにおいて特に検出感度が高くなり、SDSの濃度が0.5%の場合はごまにおいて特に検出感度が高くなることが確認された。しかし、SDSの終濃度が1%の場合はホエーとそばと大豆においてアレルゲンを検出することができず、SDSの終濃度が5%の場合はすべての未加熱食品液状サンプルにおいて、アレルゲンを検出することができなかった。
(拭取り液の検討1)
実際の工場設備における状況を勘案し、PBSの代わりに、生理食塩水、ハム抽出液、又は純水を用いた場合に、アレルゲンを検出することができるか否かを検討した。上記9種類の未加熱食品タンパク質を終濃度0.5ppmになるようにそれぞれ10mLの生理食塩水、10mLのハム抽出液、10mLの純水に溶解して、9種類の未加熱食品・生理食塩水液状サンプルセット1と9種類の未加熱食品・ハム抽出液液状サンプルセット1と、9種類の未加熱食品・純水液状サンプルセット1とを調製した。上記9種類の100℃加熱食品タンパク質を終濃度0.5ppmになるようにそれぞれ10mLの生理食塩水、10mLのハム抽出液、10mLの純水に溶解して、9種類の100℃加熱食品・生理食塩水液状サンプルセット1と9種類の100℃加熱食品・ハム抽出液液状サンプルセット1と、9種類の100℃加熱食品・純水液状サンプルセット1とを調製した。さらに、それぞれに終濃度が0.25%になるようにSDSを添加し、さらにそれぞれFBSの終濃度が30%となるよう添加して、対応する食品検出用イムノクロマトストリップを用いて、イムノクロマト処理に供試し、20分後に結果を判定した。上記9種類の未加熱食品タンパク質と上記9種類の100℃加熱食品タンパク質をSDS/PBSに混合したとしたものを陽性コントロールとした。結果を表5に示す。なお、ハム抽出液は、生理食塩水に対して2%の重量のハムをミキサーに供した後、濾過することにより調製した。
表5からも明らかなとおり、PBSを生理食塩水、ハム抽出液、純水に代えた場合でも0.25%SDSを展開液に加えると、すべての未加熱又は100℃加熱の食品タンパク質の液状サンプルにおいてアレルゲンを検出することができることを確認した。
(拭取り液の検討2)
上記(拭取り液の検討1)における上記9種類の未加熱食品タンパク質を終濃度0.1ppmになるようにそれぞれ10mLの生理食塩水、10mLのハム抽出液、10mLの純水に溶解して、9種類の未加熱食品・生理食塩水液状サンプルセット2と9種類の未加熱食品・ハム抽出液液状サンプルセット2と、9種類の未加熱食品・純水液状サンプルセット2とを調製し、上記9種類の100℃加熱食品タンパク質を終濃度0.1ppmになるようにそれぞれ10mLの生理食塩水、10mLのハム抽出液、10mLの純水に溶解して、9種類の100℃加熱食品・生理食塩水液状サンプルセット2と9種類の100℃加熱食品・ハム抽出液液状サンプルセット2と、9種類の100℃加熱食品・純水液状サンプルセット2とを調製した。さらに、それぞれに終濃度が0.25%になるようにSDSを添加し、さらにそれぞれFBSの終濃度が30%となるよう添加して、実施例4と同じ検討を行った。結果を表6に示す。
表6からも明らかなとおり、各食品タンパク質の濃度を0.1ppmにした場合でも、液状サンプルの溶媒を生理食塩水、ハム抽出液、純水に代えた場合でも0.25%SDSを添加すると、上記のすべての未加熱又は100℃加熱の食品タンパク質の液状サンプルにおいてアレルゲンを検出することができることを確認した。
(拭取り液の検討3)
上記(拭取り液の検討1)における上記9種類の未加熱食品タンパク質を終濃度0.05ppmになるようにそれぞれ10mLの生理食塩水、10mLのハム抽出液、10mLの純水に溶解して、9種類の未加熱食品・生理食塩水液状サンプルセット3と9種類の未加熱食品・ハム抽出液液状サンプルセット3と、9種類の未加熱食品・純水液状サンプルセット3とを調製し、上記9種類の100℃加熱食品タンパク質を終濃度0.05ppmになるようにそれぞれ10mLの生理食塩水、10mLのハム抽出液、10mLの純水に溶解して、9種類の100℃加熱食品・生理食塩水液状サンプルセット3と9種類の100℃加熱食品・ハム抽出液液状サンプルセット3と、9種類の100℃加熱食品・純水液状サンプルセット3とを調製した。さらに、それぞれに終濃度が0.25%になるようにSDSを添加し、さらにそれぞれFBSの終濃度が30%となるよう添加して、実施例4と同じ検討を行った。結果を表7に示す。
表7からも明らかなとおり、液状サンプルにおける食品濃度が0.05ppmの場合でも、卵、カゼイン、ホエー、小麦、そば、落花生、大豆、ごまにおいてはアレルゲンを検出することができた。甲殻類のタンパク質を含む液状サンプルからはアレルゲンを検出することができなかった。
(拭取り液の検討4)
上記(拭取り液の検討1)における上記9種類の未加熱食品タンパク質を終濃度0.01ppmになるようにそれぞれ10mLの生理食塩水、10mLのハム抽出液、10mLの純水に溶解して、9種類の未加熱食品・生理食塩水液状サンプルセット4と9種類の未加熱食品・ハム抽出液液状サンプルセット4と、9種類の未加熱食品・純水液状サンプルセット4とを調製し、上記9種類の100℃加熱食品タンパク質を終濃度0.01ppmになるようにそれぞれ10mLの生理食塩水、10mLのハム抽出液、10mLの純水に溶解して、9種類の100℃加熱食品・生理食塩水液状サンプルセット4と9種類の100℃加熱食品・ハム抽出液液状サンプルセット4と、9種類の100℃加熱食品・純水液状サンプルセット4とを調製した。さらに、それぞれに終濃度が0.25%になるようにSDSを添加し、さらにそれぞれFBSの終濃度が30%となるよう添加して、実施例4と同じ検討を行った。結果を表8に示す。
表8からも明らかなとおり、液状サンプルにおける食品濃度が0.01ppmの場合でも、卵、小麦、そば、ごまにおいてアレルゲンを検出することができた。
いずれの食品タンパク質も含まないPBS、生理食塩水、ハム抽出液、純水10mLにそれぞれに終濃度が0.25%になるようにSDSを添加し、さらにそれぞれFBSの終濃度が30%となるよう添加して、各食品に対応する食品検出用イムノクロマトストリップを用いて実施例4と同じ検討を行った。結果を表9に示す。
食品タンパク質の濃度が0ppmの場合は、すべての項目において陰性を示した。したがって、本発明の方法においては、各食品タンパク質(アレルゲン)が存在しない場合は、検出されないことが確認された。
(洗浄水の検討1)
実際の食品工場設備における状況を勘案し、設備の洗浄に水道水を用いた場合にアレルゲンを検出することができるか否かを検討した。未加熱卵タンパク質を終濃度で0.1ppm、0.05ppm、0.01ppmになるように純水又は水道水にそれぞれ溶解して10mLの液状サンプルを6種類調製した。また、卵タンパク質を含まない純水、水道水10mLに終濃度が0.25%になるようにSDSを添加したものを陰性コントロール(0ppm)として用意した。それぞれに終濃度が0.25%になるようにSDSを添加し、さらにそれぞれFBSの終濃度が30%となるよう添加して、卵検出用イムノクロマトストリップを用いて、イムノクロマト処理に供試し、20分後に結果を判定した。結果を表10に示す。
表10から明らかなとおり、純水では未加熱卵タンパク質濃度が0.1ppm、0.05ppm、0.01ppmの場合は陽性であったが、水道水では0.1ppmの場合のみ陽性であり、水道水では感度が低下することが確認された。
(洗浄水の検討2)
水道水にチオ硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム又はアスコルビン酸を添加した場合に、アレルゲンを検出することができるか否かを検討した。5%、2%、1%、0.1%チオ硫酸ナトリウムを含む水道水、5%、2%、1%、0.1%亜硫酸ナトリウムを含む水道水、0.1%、0.01%アスコルビン酸を含む水道水のそれぞれに未加熱卵タンパク質を終濃度0.1ppm、0.05ppm、0.01ppmになるように添加して30種類の10mLの液状サンプルとした。いずれも卵タンパク質を含まない、水道水、5%、2%、1%、0.1%チオ硫酸ナトリウムを含む水道水、5%、2%、1%、0.1%亜硫酸ナトリウムを含む水道水、0.1%、0.01%アスコルビン酸を含む水道水10mLを陰性コントロール(0ppm)とした。それぞれに終濃度が0.25%になるようにSDSを添加し、さらにそれぞれFBSの終濃度が30%となるよう添加して、卵検出用イムノクロマトストリップを用いて、イムノクロマト処理に供試し、20分後に結果を判定した。結果を表11に示す。
表11から明らかなとおり、水道水にチオ硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム又はアスコルビン酸を添加した場合、未加熱卵タンパク質0.05ppmがすべて陽性となった。さらに、チオ硫酸ナトリウムを1%又は2%添加した場合、亜硫酸ナトリウムを1%、2%又は5%添加した場合、アスコルビン酸を0.1%添加した場合には、0.01ppmの卵アレルゲンを検出可能であり、表10に示した純水の場合と同等の検出感度であることが確認された。また、未加熱卵タンパク質が存在しない場合は、すべて陰性を示し、検出されないことが確認された。
(一体化キットの検討)
オボアルブミン検出用イムノクロマトストリップの先端のサンプルパッドにイムノクロマトに供するサンプルの容量(0.1mL)に対してSDSを0.125〜1%、FBSを30%となるように塗布し乾燥させた後、未加熱卵タンパク質0.5ppmを含むPBS0.1mLを供試した。結果を表12に示す。
表12から明らかなとおり、0.125%、0.250%、0.500%、1.000%のいずれにおいても、陽性を示した。
Claims (9)
- 液状サンプルに、ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)の存在下にイムノクロマト処理を施すことを特徴とするアレルゲンの検出方法。
- 液状サンプルが、拭取り溶液又は洗浄水であることを特徴とする請求項1記載のアレルゲンの検出方法。
- 液状サンプルから抽出処理又は加熱処理をすることなくイムノクロマト処理をすることを特徴とする請求項1又は2記載のアレルゲンの検出方法。
- SDS濃度が、0.05〜2.0%であることを特徴とする請求項1〜3のいずれか記載のアレルゲンの検出方法。
- 液状サンプルがウシ胎児血清(FBS)を少なくとも10%さらに含むことを特徴とする請求項1〜4のいずれか記載のアレルゲンの検出方法。
- 液状サンプルがチオ硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム又はアスコルビン酸をさらに含むことを特徴とする請求項1〜5のいずれか記載のアレルゲンの検出方法。
- 変性及び未変性のアレルゲンを共に認識することができるモノクローナル抗体に標識物を結合した標識抗体と、変性及び未変性のアレルゲンを共に認識し、前記標識物を結合した標識抗体と異なるエピトープを認識するモノクローナル抗体とがそれぞれ所定の位置に固定された展開支持体と;液状サンプルを調製するための溶媒とを備えることを特徴とするアレルゲン検出キット。
- さらに、FBSを備えることを特徴とする請求項7記載のアレルゲン検出キット。
- さらに、チオ硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム又はアスコルビン酸を備えることを特徴とする請求項8記載のアレルゲン検出キット。
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