JP2016539184A

JP2016539184A - 免疫調節剤としての用いるための藻類抽出物

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Publication number: JP2016539184A
Application number: JP2016553737A
Authority: JP
Inventors: ドゥメ、エルヴェ; コラン、パイナイヴァル; ゴフ、マチュール; シュヴィリエ、イザベルル
Original assignee: アマデイト
Priority date: 2013-11-18
Filing date: 2014-11-18
Publication date: 2016-12-15
Anticipated expiration: 2034-11-18
Also published as: EP3071212B1; WO2015071497A1; RU2687498C2; FR3013222A1; EP3071212A1; FR3013222B1; US10912805B2; BR112016011157B1; CN105873596A; RU2016119154A3; MX2016006189A; DK3071212T3; HUE048949T2; JP6644002B2; US20160287648A1; ES2790678T3; RU2016119154A

Abstract

本発明は、人又は動物の免疫応答の調節に、特に、感染症への免疫応答を賦活化に用いるための、アオサ目藻類抽出物、特に、アオサ型緑藻に関する。また、本発明は、免疫応答を調節するためのアオサ型緑藻抽出物の非治療的使用に関する。【選択図】なし

Description

本発明は、人又は動物の免疫応答の調節に、特に、感染症への免疫応答の賦活化に用いるための、アオサ目藻類抽出物、特に、アオサ型緑藻に関する。また、本発明は、人又は動物で免疫応答を調節するためのアオサ型緑藻抽出物の非治療的使用に関する。

免疫応答の調節は、多くの病気で重要な治療軸である。実際、例えば、感染症に罹患した患者において免疫応答を改善することは重要である。

免疫応答の賦活化はさらに数多くの点で重要な機構である。例えば、新生児を一定の感染症から守ることを可能とする抗体であるＩｇＡが母乳に豊富であることが知られている。腸細胞、特に、その上皮細胞は、種々の病原体に曝されており、これらの病原体への抗体が産生される。こうした抗体は、次に、乳腺まで移動し、母乳でみられ、そして、乳児に防御を付与する。この免疫反応を賦活化することのできる新規物質の同定への需要は常に存在する。特に、腸上皮細胞は、経口投与された免疫賦活物質が働き得る場所であり、好ましい。さらに、ワクチン接種への応答を、免疫応答を賦活化することで、特に、ワクチン接種への追加投与を介して、増加させることのできる新規物質の同定への需要も存在する。アオサ類（アオサ目、緑藻植物綱）は、潮間帯地域や前浜で豊富にみられる藻類である。付着板に支えられた状態で、硬い基質にコロニーを形成するものの、自由生活性の遊泳型を生じる種もある。アオサ属は、成長が早く、空間や栄養吸収に関して日和見的な藻類である。水柱でのこれらの成長は、アオサ類が『グリーンタイド』として繁茂する富栄養化沿岸水域やラグーンで特に観察される（Ｆｌｅｔｃｈｅｒ、１９９６）。しばしば、大量に繁殖し、大規模に座礁し、堆積して有毒ガスが発生することとなる（ＭｏｒａｎｄとＢｒｉａｎｄ、１９９６）。これまでのところ、そのバイオマスの付加価値は極めて低く、堆肥（Ｍａｚｅ等１９９３、Ｃｕｏｍｏ等、１９９５）、メタン製造（ＢｒｉａｎｄとＭｏｒａｎｄ、１９９７）、人の食料消費（Ｐｅｒｅｚ、１９９７）又は、紙の主成分として（ＮｉｃｏｌｕｃｃｉとＭｏｎｅｇａｔｏ、１９９３）以外の使用法があればその特異性を活かすことができるかもしれない。

本発明の発明者等は、驚くべきことに、アオサ目藻類抽出物、特に、アオサ型緑藻抽出物が免疫調節作用を有することを示した。

そこで、本発明は、人又は動物の免疫応答調節に使用するための、サイズが５０ｋＤａ以下の硫酸化及び非硫酸化多価陰イオン多糖類を含む、アオサ目藻類抽出物、特に、アオサ型緑藻抽出物に関する。

また、本発明は、人又は動物の免疫応答調節のための、サイズが５０ｋＤａ以下の硫酸化及び非硫酸化多価陰イオン多糖類を含む、アオサ目藻類抽出物、特に、アオサ型緑藻抽出物の非治療的使用に関する。

具体的には、本発明は、多糖類が、マンノース及び／又はアラビノース、好ましくは、マンノースを含む、上述の藻類抽出物、又は、上述の藻類抽出物の非治療的使用に関する。さらにより具体的には、多糖類は、藻類抽出物の総乾燥重量に基いて、少なくとも０．００５重量％のマンノース及び／又は少なくとも０．００５重量％のアラビノース、好ましくは、少なくとも０．００５重量％のマンノースを含む。さらにより具体的には、多糖類は、藻類抽出物の総乾燥重量に基いて、０．００５から０．５重量％のマンノース、例えば、０．００５から０．２０重量％の若しくは０．１５から０．５重量％のマンノース、及び／又は、藻類抽出物の総乾燥重量に基いて、０．００５から０．５重量％のアラビノース、例えば、０．００５から０．２０重量％の若しくは０．１５から０．５重量％のマンノースを含む。

さらに、本発明は、より具体的には、
多糖類が
ガラクトース、及び／又は、
グルコース、及び／又は、
ラムノース、及び／又は、
キシロース、及び／又は、
グルクロン酸
を含む上述の使用のための藻類抽出物、又は、上述の藻類抽出物の非治療的使用に関する。

多糖類は、より具体的には、
０．０５から０．５重量％のガラクトース、及び／又は、
０．００５から０．５重量％のグルコース、特に、０．００５から０．０５重量％又は０．０５から０．５重量％のグルコース、及び／又は、
２から１５重量％のラムノース、及び／又は、
０．１から１重量％のキシロース、及び／又は、
１から７重量％のグルクロン酸
（但し、重量％は、藻類抽出物の総乾燥重量に基づく）
を含む。

また、本発明は、
ａ）藻類から砂を洗い流し、
ｂ）藻類を粉砕し、
ｃ）粉砕物の固相を液相から分離し、
ｄ）液相を清澄化し、
ｅ）工程ｄ）で得たジュースを５０ｋＤａ以下の膜で限外濾過し、
ｆ）工程ｅ）で得た濾過ジュースを濃縮乾燥する、調製方法により得ることのできる、人又は動物の免疫応答調節に使用するための、アオサ目藻類抽出物、特に、アオサ型緑藻抽出物に関する。

また、本発明は、
ａ）藻類から砂を洗い流し、
ｂ）藻類を粉砕し、
ｃ）粉砕物の固相を液相から分離し、
ｄ）液相を清澄化し、
ｅ）工程ｄ）で得たジュースを５０ｋＤａ以下の膜で限外濾過し、
ｆ）工程ｅ）で得た濾過ジュースを濃縮乾燥する、調製方法により得ることのできる、人又は動物の免疫応答を調節するための、アオサ目藻類抽出物、特に、アオサ型緑藻抽出物の非治療的使用に関する。

具体的には、本発明は、人又は動物の免疫応答を、特に、腸内免疫系で賦活化するための、上述の使用のための藻類抽出物に、又は、上述の藻類抽出物の非治療的使用に関する。本発明によれば、『免疫調節』作用又は『免疫応答調節』を可能とすることは、これらの用語の通常に用いる、当業者にとって周知の意味であり、特に、人体又は動物体の免疫反応を賦活化又は抑制することのできる任意の作用を指すことを理解されたい。

具体的には、本発明に係る使用のための藻類抽出物又は本発明に係る藻類抽出物の非治療的使用は、接着分子及びケモカイン、特に、ＩＬ８及び／又はＩＬ−１α及び／又はＩＬ１−β及び／又はＩＬ６及び／又はＴＮＦ−α及び／又はＣＣＬ２０の発現の誘導を可能にする。

そのため、本発明として規定される藻類抽出物は、伝染病、具体的には、パルボウィルス病、丹毒、伝染性鼻炎、インフルエンザ、豚サーコウイルス病、マイコプラズマ症、及び大腸菌病から選択される豚伝染病、マレック病、ニューカッスル病、伝染性気管支炎、ガンボロ病、鶏痘、マイコプラズマ病、鶏伝染性貧血、伝染性喉頭気管炎、ＥＤＳ、及び鳥インフルエンザから選択される鳥伝染病、ＢＶＤ（牛ウィルス性下痢症）、流行性気管支肺炎、ＩＢＲ、ヘルペスウィルス病、クロストリジウム症、大腸菌症、ブルータング病、コロナウィルス病、ロタウィルス病、及び鼻気管炎から選択される牛伝染病、並びに、造血器壊死病、ビブリオ病、せつ腫病、伝染性膵臓壊死病、及び伝染性貧血から選択される水産養殖伝染病の治療及び／又は予防に役立つ。

また、そこで、本発明は、上述のものなどの伝染病の治療及び／又は予防に使用するための本発明として記載される藻類抽出物に関する。

特に、本発明として規定される藻類抽出物は、ワクチン接種のサプリメントとしてワクチン予防に役立つ。

より具体的には、本発明は、藻類抽出物が経口投与用医薬組成物内で用いられる、上述のように使用するための藻類抽出物に関する。

本発明の別の実施形態によれば、上述のように使用するための藻類抽出物は、非経口経路を介して投与される医薬組成物内で用いられる。

また、本発明は、藻類抽出物が経口投与用フードサプリメント内で用いられる、上述の藻類抽出物の非治療的使用に関する。

特に、本発明として記載されるある藻類抽出物は仏国特許第１２６１９０９号明細書に記載されている。

上述のように、本発明として記載される藻類抽出物は、サイズが５０ｋＤａ以下の硫酸化及び非硫酸化多価陰イオン多糖類を含むアオサ目藻類抽出物、特に、アオサ型緑藻抽出物に関する。より具体的には、藻類抽出物は、サイズが４０、３０、２０、又は１５ｋＤａ未満の硫酸化及び非硫酸化多価陰イオン多糖類を含む。さらにより具体的には、藻類抽出物の硫酸化及び非硫酸化多価陰イオン多糖類は、１５ｋＤａ以下のサイズを有する。

本発明のある実施形態では、本発明として記載される藻類抽出物は、サイズが５０ｋＤａ以下の硫酸化及び非硫酸化多価陰イオン多糖類を含み、サイズが５０ｋＤａ超の硫酸化及び非硫酸化多価陰イオン多糖類を含まない。

本発明のある実施形態では、本発明として記載される藻類抽出物は、サイズが１５ｋＤａ以下の硫酸化及び非硫酸化多価陰イオン多糖類を含み、サイズが１５ｋＤａ超の硫酸化及び非硫酸化多価陰イオン多糖類を含まない。

１ダルトン（Ｄａ）は、炭素原子１２の１２分の１の質量に等しいものとして定義される。そして、質量は数種の同位体（主に、炭素原子の６個の陽子に加えてそれぞれ６及び７個の中性子を有する炭素１２及び炭素１３）の混合物から推定される。１ダルトンは、極めて精度良く、水素原子の質量（正確な値は１．００７９４ａｍｕ（原子質量単位））に等しい。キロダルトン（ｋＤａ）は１０００Ｄａに等しい。

本発明によれば、ｋＤａで示される質量は、当業者が通常用いる任意の方法で求められ、特に、藻類抽出物の硫酸化及び非硫酸化多価陰イオン多糖類の質量は、所定サイズの分子の濾過のみを許容する膜での限外濾過により区別することができる。

具体的には、上述のように、本発明として記載される藻類抽出物の多糖類は、マンノース及び／又はアラビノース、好ましくは、マンノースを含む。より具体的には、多糖類は、藻類抽出物の総乾燥重量に基いて、少なくとも０．００５重量％のマンノース及び／又は少なくとも０．００５重量％のアラビノース、特に、少なくとも０．０１重量％のマンノース及び／又は少なくとも０．０１重量％のアラビノースを含む。さらにより具体的には、多糖類は、藻類抽出物の総乾燥重量に基いて、０．０１から０．５０重量％のマンノース、例えば、０．０１から０．２０重量％の若しくは０．２０から０．５重量％のマンノース、及び／又は、藻類抽出物の総乾燥重量に基いて、０．０１から０．５重量％のアラビノースを含み、特に、０．０３から０．４５重量％のマンノース、例えば、０．０３から０．１５重量％の若しくは０．１５から０．４５重量％のマンノース、及び／又は、０．０１から０．２重量％のアラビノースを含む。

好ましくは、多糖類は、０．０１から０．５０重量％のマンノース、例えば、０．０１から０．２０重量％の又は０．２０から０．５重量％のマンノース、特に、０．０３から０．４５重量％のマンノース、例えば、０．０３から０．１５重量％の又は０．１５から０．４５重量％のマンノースを含む。

具体的には、上述のように、多糖類は、さらに、
ガラクトース、及び／又は、
グルコース、及び／又は、
ラムノース、及び／又は、
キシロース、及び／又は、
グルクロン酸を含む。

さらにより具体的には、多糖類は、
０．０５から０．５重量％のガラクトース、特に、０．１から０．４重量％のガラクトース、及び／又は、
０．００５から０．５重量％のグルコース、特に、０．００５から０．０５重量％の、特に、０．０１から０．０３重量％、又は、０．０５から０．５重量％のグルコース、及び／又は、
２から１５重量％のラムノース、特に、５から１０重量％のラムノース及び／又は、
０．１から１重量％のキシロース、特に、０．３から０．７重量％のキシロース及び／又は、
１から７重量％のグルクロン酸、特に、１から５重量％のグルクロン酸
（但し、重量％は、藻類抽出物の総乾燥重量に基づく）を含む。

そこで、例えば、
マンノース、及び／又は、
アラビノース、及び／又は、
ガラクトース、及び／又は、
グルコース、及び／又は、
ラムノース、及び／又は、
キシロース、及び／又は、
グルクロン酸
を含む、本発明に係る使用のための藻類抽出物を挙げることもできる。

より具体的には、例えば、
０．０１から０．５０重量％のマンノース、例えば、０．０１から０．２０重量％の、特に、０．０３から０．１５重量％又は０．２０から０．５重量％のマンノース、及び／又は、
０．０１から０．５重量％のアラビノース、特に、０．０１から０．２重量％のアラビノース、及び／又は、
０．０５から０．５重量％のガラクトース、特に、０．１から０．４重量％のガラクトース、及び／又は、
０．００５から０．５重量％のグルコース、特に、０．００５から０．０５重量％の、特に、０．０１から０．０３重量％、又は、０．０５から０．５重量％のグルコース、及び／又は、
２から１５重量％のラムノース、特に、５から１０重量％のラムノース及び／又は、
０．１から１重量％のキシロース、特に、０．３から０．７重量％のキシロース及び／又は、
１から７重量％のグルクロン酸、特に、１から５重量％のグルクロン酸
（但し、重量％は、藻類抽出物の総乾燥重量に基づく）
を含む、本発明に係る使用のための藻類抽出物を挙げることもできる。

さらにより具体的には、例えば、
０．０９重量％のマンノース、及び／又は、
０．１重量％のアラビノース、及び／又は、
０．３重量％のガラクトース、及び／又は、
０．０２重量％のグルコース、及び／又は、
８．１重量％のラムノース、及び／又は、
０．５重量％のキシロース、及び／又は、
２．６重量％のグルクロン酸
（但し、重量％は、藻類抽出物の総乾燥重量に基づく）
を含む、本発明に係る使用のための藻類抽出物を挙げることもできる。

また、例えば、
０．３重量％のマンノース、及び／又は、
０．２重量％のガラクトース、及び／又は、
０．４重量％のグルコース、及び／又は、
７．９重量％のラムノース、及び／又は、
０．５重量％のキシロース、及び／又は、
４．９重量％のグルクロン酸
（但し、重量％は、藻類抽出物の総乾燥重量に基づく）
を含む、本発明に係る使用のための藻類抽出物を挙げることもできる。

また、本発明は、本発明に係る藻類抽出物の非治療的使用に関し、
藻類抽出物は、
マンノース、及び／又は、
アラビノース、及び／又は、
ガラクトース、及び／又は、
グルコース、及び／又は、
ラムノース、及び／又は、
キシロース、及び／又は、
グルクロン酸を含み、
より具体的には、
０．０１から０．５０重量％のマンノース、例えば、０．０１から０．２０重量％の、特に、０．０３から０．１５重量％又は０．２０から０．５重量％のマンノース、及び／又は、
０．０１から０．５重量％のアラビノース、特に、０．０１から０．２重量％のアラビノース、及び／又は、
０．０５から０．５重量％のガラクトース、特に、０．１から０．４重量％のガラクトース、及び／又は、
０．００５から０．５重量％のグルコース、特に、０．００５から０．０５重量％の、特に、０．０１から０．０３重量％、又は、０．０５から０．５重量％のグルコース、及び／又は、
２から１５重量％のラムノース、特に、５から１０重量％のラムノース及び／又は、
０．１から１重量％のキシロース、特に、０．３から０．７重量％のキシロース及び／又は、
１から７重量％のグルクロン酸、特に、１から５重量％のグルクロン酸
（但し、重量％は、藻類抽出物の総乾燥重量に基づく）を含み、
さらにより具体的には、
０．０９重量％のマンノース、及び／又は、
０．１重量％のアラビノース、及び／又は、
０．３重量％のガラクトース、及び／又は、
０．０２重量％のグルコース、及び／又は、
８．１重量％のラムノース、及び／又は、
０．５重量％のキシロース、及び／又は、
２．６重量％のグルクロン酸
（但し、重量％は、藻類抽出物の総乾燥重量に基づく）を含み、又は、
０．３重量％のマンノース、及び／又は、
０．２重量％のガラクトース、及び／又は、
０．４重量％のグルコース、及び／又は、
７．９重量％のラムノース、及び／又は、
０．５重量％のキシロース、及び／又は、
４．９重量％のグルクロン酸
（但し、重量％は、藻類抽出物の総乾燥重量に基づく）を含む。

上述のように、本発明として記載される藻類抽出物は、
ａ）藻類から砂を洗い流し、
ｂ）藻類を粉砕し、
ｃ）粉砕物の固相を液相から分離し、
ｄ）液相を清澄化し、
ｅ）工程ｄ）で得たジュースを５０ｋＤａ以下の膜で限外濾過し、
ｆ）工程ｅ）で得た濾過ジュースを濃縮乾燥する、調製方法により得ることのできるアオサ目藻類抽出物、特に、アオサ型緑藻抽出物に関する。

本発明のある実施形態では、藻類抽出物は、
１０から５０重量％の炭素、
１から１０重量％の水素、
１から５重量％の窒素、
２０から５０重量％の酸素、及び
１から１５重量％の硫黄
（但し、重量％は、藻類抽出物の総乾燥重量に基づく）を含む。

より具体的には、藻類抽出物は、
１５から３０重量％の炭素、
３から６重量％の水素、
１から３重量％の窒素、
２５から４０重量％の酸素、及び
２．５から１０重量％の硫黄、
（但し、重量％は、藻類抽出物の総乾燥重量に基づく）を含む。

本発明の別の実施形態では、藻類抽出物は、
１０から５０重量％の炭素、
１から１０重量％の水素、
０．５から５重量％の窒素、
２０から６０重量％の酸素、及び
１から１５重量％の硫黄
（但し、重量％は、藻類抽出物の総乾燥重量に基づく）を含む。

抽出物の乾燥材料中に存在する他の化学元素は、特に、鉱物（Ｃａ、Ｋ、Ｎａ、Ｍｇ、Ａｌ、Ｃｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆｅなど）に代表される。

より具体的には、本発明として記載される藻類抽出物は、図１に示す^１ＨＮＭＲスペクトルにより特徴づけられる。

この^１ＨＮＭＲスペクトルは、５ｍｍのＴＣＩ型^１Ｈ／^１３Ｃ／^１５Ｎ極低温インバースプローブを備え付けたＢｒｕｋｅｒＡｖａｎｃｅ５００ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒを用い２９８Ｋで記録した。分析前に、サンプルを原子純度９９．９７％のＤ_２Ｏ中に溶かした。化学シフトは、外部標準（トリメチルシリルプロピオン酸）に基づきｐｐｍ単位で示す。ＨＯＤシグナルの抑制は行わなかった。

本発明のある実施形態では、サイズが５０ｋＤａ以下の硫酸化及び非硫酸化多価陰イオン多糖類を特に含む藻類抽出物は、
ａ）藻類から砂を洗い流し、
ｂ）藻類を粉砕し、
ｃ）粉砕物の固相を液相から分離し、
ｄ）液相を清澄化し、
ｅ）工程ｄ）で得たジュースを５０ｋＤａ以下の膜で限外濾過し、
ｆ）工程ｅ）で得た濾過ジュースを濃縮乾燥する、調製方法により得ることができる。

具体的には、本発明として示した方法の適用にあたって、上記工程ａ）で、藻類を真水で洗う。

藻類から砂を取り除くには当業者に利用可能な任意の手段を用いることができる。

次に、藻類を粉砕する。これは、特に、例えばリファイナーやカッターなどの粉砕機により行われる。

続いて、例えばベルト式又はプレート式圧搾機を用いた粉砕物の圧搾又は遠心分離により、粉砕物の固相（パルプ）をその液相（ジュース）から分離する。

『ジュース』は、藻類細胞の二重構造の側壁を含んでいる、細胞質のジュースのことを意味する。

次に、得られた液相を清澄化する。これは、例えば、板型清澄器で、又は、遠心分離、デカンテーション、若しくは濾過（例えば、袋濾過又は板濾過）により行われる。

次に、得られたジュースを限外濾過する。

本発明として示した方法の適用についてのある実施形態では、限外濾過は、５０ｋＤａ以下の膜、特に、４０、３０、２０、又は１５ｋＤａの膜で行われる。より具体的には、この膜は１５ｋＤａ以下の膜である。

この膜は、例えば、セラミック膜又は有機膜であってもよい。より具体的には、この膜はセラミック膜である。

次に、得られた濾過ジュースを、例えば、逆浸透、蒸発、又は沈殿により濃縮し、その後、例えば、凍結乾燥又は噴霧により乾燥させることができる。

次に、任意で、得られた抽出物を、粒子サイズに関して均一な粉末を作るために、粉砕することができる。

こうした態様の一つでは、本方法は部分的に室温で実行される。室温は５から２５℃の温度を意味する。

こうした態様のもう一つでは、本方法は、微生物の成長を避けるために、４から１０℃の温度で部分的に実行される。

本発明として示した方法の適用についてのある実施形態では、上述の方法の工程ｆ）で得られた藻類抽出物を、例えば、限外濾過（特に、限外濾過カセット上での限外濾過）により、特に鉱質部分を除去するために、精製する。

こうした態様の別の一つでは、本発明に係る使用のための藻類抽出物は上述の方法により得られる。

藻類抽出物の沈殿に関する工程を含まない点で、本方法はほとんどの先行技術に記載の方法とは異なる。また、溶媒、特に、有機溶媒を使用しない点で、本方法は従来の抽出法から際立っている。この点は、環境保護の観点から大きな利点である。

『アオサ型緑藻』は、アオサ目アオサ科アオサ属に分類される緑藻を意味する。具体例としては、Ｕｌｖａａｃａｎｔｈｏｐｈｏｒａ、Ｕｌｖａａｎａｎｄｉｉ、Ｕｌｖａａｎｇｕｓｔａ、Ｕｌｖａａｒａｓａｋｉｉ、Ｕｌｖａａｒｍｏｒｉｃａｎａ、Ｕｌｖａａｔｒｏｖｉｒｉｄｉｓ、Ｕｌｖａａｔｔｅｎｕａｔａ、Ｕｌｖａｂｅｙｔｅｎｓｉｓ、Ｕｌｖａｂｉｆｒｏｎｓ、Ｕｌｖａｂｒｅｖｉｓｔｉｐｉｔａｔａ、Ｕｌｖａｂｕｌｂｏｓａ、Ｕｌｖａｂｕｒｍａｎｉｃａ、Ｕｌｖａｂｙｓｓｏｉｄｅｓ、Ｕｌｖａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ、Ｕｌｖａｃｈａｅｔｏｍｏｒｐｈｏｉｄｅｓ、Ｕｌｖａｃｌａｔｈｒａｔａ、Ｕｌｖａｃｏｃｃｉｎｅａ、Ｕｌｖａｃｏｍｐｒｅｓｓａ、Ｕｌｖａｃｏｎｇｌｏｂａｔａ、Ｕｌｖａｃｏｒｎｕｃｏｐｉａｅ、Ｕｌｖａｃｏｒｎｕｔａ、Ｕｌｖａｃｏｖｅｌｏｎｇｅｎｓｉｓ、Ｕｌｖａｃｒａｓｓａ、Ｕｌｖａｃｒａｓｓｉｍｅｍｂｒａｎａ、Ｕｌｖａｃｕｒｖａｔａ、Ｕｌｖａｄａｃｔｙｌｉｆｅｒａ、Ｕｌｖａｄｅｎｔｉｃｕｌａｔａ、Ｕｌｖａｅｌｅｇａｎｓ、Ｕｌｖａｅｌｍｉｎｔｈｏｉｄｅｓ、Ｕｌｖａｅｎｔｅｒｏｍｏｒｐｈａ、Ｕｌｖａｅｒｅｃｔａ、Ｕｌｖａｅｘｐａｎｓａ、Ｕｌｖａｆａｓｃｉａｔａ、Ｕｌｖａｆｅｎｅｓｔｒａｔａ、Ｕｌｖａｆｌｅｘｕｏｓａ、Ｕｌｖａｇｅｌａｔｉｎｏｓａ、Ｕｌｖａｇｅｍｉｎｏｉｄｅａ、Ｕｌｖａｇｉｇａｎｔｅａ、Ｕｌｖａｇｒａｎｄｉｓ、Ｕｌｖａｈｅｎｄａｙｅｎｓｉｓ、Ｕｌｖａｈｏｏｋｅｒｉａｎａ、Ｕｌｖａｈｏｐｋｉｒｋｉｉ、Ｕｌｖａｉｎｄｉｃａ、Ｕｌｖａｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ、Ｕｌｖａｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｏｉｄｅｓ、Ｕｌｖａｉｎｔｒｉｃａｔａ、Ｕｌｖａｉｎｔｙｂａｃｅａ、Ｕｌｖａｊａｖａｎｉｃａ、Ｕｌｖａｋｙｌｉｎｉｉ、Ｕｌｖａｌａｃｔｕｃａ、Ｕｌｖａｌａｃｔｕｃａｅｆｏｌｉａ、Ｕｌｖａｌａｅｔｅｖｉｒｅｎｓ、Ｕｌｖａｌａｉｎｇｉｉ、Ｕｌｖａｌｉｎｅａｒｉｓ、Ｕｌｖａｌｉｎｇｕｌａｔａ、Ｕｌｖａｌｉｎｋｉａｎａ、Ｕｌｖａｌｉｎｚａ、Ｕｌｖａｌｉｐｐｉｉ、Ｕｌｖａｌｉｔｏｒａｌｉｓ、Ｕｌｖａｌｉｔｔｏｒｅａ、Ｕｌｖａｌｏｂａｔａ、Ｕｌｖａｌｕｂｒｉｃａ、Ｕｌｖａｍａｒｇｉｎａｔａ、Ｕｌｖａｍｉｃｒｏｃｏｃｃａ、Ｕｌｖａｍｙｒｉｏｔｒｅｍａ、Ｕｌｖａｎｅａｐｏｌｉｔａｎａ、Ｕｌｖａｎｅｍａｔｏｉｄｅａ、Ｕｌｖａｏｈｎｏｉ、Ｕｌｖａｏｌｉｖａｃｅａ、Ｕｌｖａｏｌｉｖａｃｅｕｍ、Ｕｌｖａｐａｃｉｆｉｃａ、Ｕｌｖａｐａｐｅｎｆｕｓｓｉｉ、Ｕｌｖａｐａｒａｄｏｘａ、Ｕｌｖａｐａｒｖａ、Ｕｌｖａｐａｒｖｕｌａ、Ｕｌｖａｐａｔｅｎｇｅｎｓｉｓ、Ｕｌｖａｐｅｒｃｕｒｓａ、Ｕｌｖａｐｅｒｔｕｓａ、Ｕｌｖａｐｈｙｌｌｏｓａ、Ｕｌｖａｐｏｐｅｎｇｕｉｎｅｎｓｉｓ、Ｕｌｖａｐｏｒｒｉｆｏｌｉａ、Ｕｌｖａｐｒｏｃｅｒａ、Ｕｌｖａｐｒｏｆｕｎｄａ、Ｕｌｖａｐｒｏｌｉｆｅｒａ、Ｕｌｖａｐｓｅｕｄｏｃｕｒｖａｔａ、Ｕｌｖａｐｓｅｕｄｏｌｉｎｚａ、Ｕｌｖａｐｕｌｃｈｒａ、Ｕｌｖａｐｕｒｐｕｒａｓｃｅｎｓ、Ｕｌｖａｑｕｉｌｏｎｅｎｓｉｓ、Ｕｌｖａｒａｄｉａｔａ、Ｕｌｖａｒａｌｆｓｉｉ、Ｕｌｖａｒａｎｕｎｃｕｌａｔａ、Ｕｌｖａｒｅｔｉｃｕｌａｔａ、Ｕｌｖａｒｈａｃｏｄｅｓ、Ｕｌｖａｒｉｇｉｄａ、Ｕｌｖａｒｏｔｕｎｄａｔａ、Ｕｌｖａｒｕｂｅｎｓ、Ｕｌｖａｓａｉｆｕｌｌａｈｉｉ、Ｕｌｖａｓｃａｇｅｌｉｉ、Ｕｌｖａｓｃａｎｄｉｎａｖｉｃａ、Ｕｌｖａｓｅｒｉｃｅａ、Ｕｌｖａｓｅｒｒａｔａ、Ｕｌｖａｓｉｍｐｌｅｘ、Ｕｌｖａｓｏｒｅｎｓｅｎｉｉ、Ｕｌｖａｓｐｉｎｕｌｏｓａ、Ｕｌｖａｓｔｅｎｏｐｈｙｌｌａ、Ｕｌｖａｓｔｉｐｉｔａｔａ、Ｕｌｖａｓｕｂｌｉｔｔｏｒａｌｉｓ、Ｕｌｖａｓｕｂｕｌａｔａ、Ｕｌｖａｔａｅｎｉａｔａ、Ｕｌｖａｔｅｎｅｒａ、Ｕｌｖａｔｅｔｒａｇｏｎａ、Ｕｌｖａｔｏｒｔａ、Ｕｌｖａｔｕｂｅｒｏｓａ、Ｕｌｖａｕｍｂｉｌｉｃａｔａ、Ｕｌｖａｕｎｃｉａｌｉｓ、Ｕｌｖａｕｎｃｉｎａｔａ、Ｕｌｖａｕｓｎｅｏｉｄｅｓ、Ｕｌｖａｕｔｒｉｃｕｌａｒｉｓ、Ｕｌｖａｕｔｒｉｃｕｌｏｓａ、Ｕｌｖａｕｖｏｉｄｅｓ、Ｕｌｖａｖｅｎｔｒｉｃｏｓａといった種及び亜種を挙げることができる。

そこで、本発明に係る使用のための藻類抽出物は、獣医学的用途で用いることができ、人又は動物の免疫応答調節のための、具体的には、人又は動物の免疫応答賦活化のための、より具体的には、上述のものなどの伝染病の予防及び／又は治療のための、さらにより具体的には、ワクチン接種のサプリメントとしてのワクチン予防に関する薬剤又は医薬組成物に配合できる。

また、そこで、本発明は、藻類抽出物が医薬組成物又は薬剤に配合される、上述の使用のための藻類抽出物に関する。

本発明に係る藻類抽出物の非治療的使用は、例えば、人又は動物の免疫応答調節のための、特に、人又は動物の免疫応答賦活化のための、二次的作用のない、ヘルスターゲットのフードサプリメントなどを介して、人又は動物向けの用途を対象とするものであってもよい。

また、そこで、本発明は、藻類抽出物が食物組成物に配合される、上述の藻類抽出物の非治療的使用に関する。

具体的には、食物組成物はワクチン接種のサプリメントとして役立つ。

本発明に係る使用のための藻類抽出物を含む薬剤又は医薬組成物を調製するために用いられる医薬上許容可能な添加剤は、医薬形態及び所望の投与法に応じて、当業者にとって周知の添加剤から選ばれる。

経口、舌下、皮下、静脈内、局所、局在、気管内、鼻腔内、経皮、又は直腸投与用の本発明では、上述の藻類抽出物は、単位用量で、従来の医薬添加剤との混合物として、動物及び人に、免疫応答調節のために、特に上述の伝染病の予防及び／又は治療のために、投与できる。

適切な投与形態としては、経口形態（錠剤、軟又は硬カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、及び経口液剤又は懸濁剤など）、舌下、頬、気管内、眼球内、鼻腔内、及び吸入式の投与形態、局所非経口投与形態（経皮、皮下、筋肉内、又は静脈内投与形態など）、直腸投与形態、及びインプラントが挙げられる。局所適用のために、本発明に係る使用のための藻類抽出物を、クリーム、ジェル、ポマード、又はローションに使用することができる。

錠剤型の固体組成物を調製する場合、主な活性成分を、ゼラチン、デンプン、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、滑石、アラビアガムなどの医薬担体と混ぜあわせてもよい。

また、錠剤は、サッカロース、セルロース誘導体、又は他の適切な材料で被覆されていてもよく、さらに、持続した又は遅延した活性を持ち、所定量の活性成分を継続的に放出するように処理されていてもよい。

カプセル剤としての製剤は、例えば、活性成分を希釈剤と混ぜ、得られた混合物を軟又は硬カプセル中に入れることにより得ることができる。

特定の実施形態では、本発明に係る使用のための、藻類抽出物、薬剤、又は医薬組成物は、経口投与のためのものである。別の実施形態では、本発明に係る使用のための、藻類抽出物、薬剤、又は医薬組成物は、非経口投与のためのものである。

また、本発明に係る使用のための藻類抽出物を含む薬剤又は医薬組成物は、液体形態（例えば、液剤、乳剤、懸濁剤、又はシロップ剤など）であってもよく、特に、例えば、経口又は鼻腔内投与に適合された形態であってもよい。適切な液体基質としては、例えば、水、又は、グリセロール若しくはグリコールなどの有機溶媒、及び、これらを様々な割合で水に溶かした混合物を挙げることができる。

また、シロップ剤、エリキシル剤としての、又は点滴投与のための製剤は、活性成分に加えて、例えばカロリーゼロの甘味料、防腐剤としてメチルパラベン及びプロピルパラベン、並びに、呈味剤及び適切な着色料を含んでもよい。

水中に分散可能な粉末剤又は顆粒剤は、例えば、活性成分と混合された状態で、分散剤若しくは湿潤剤、又はポリビニルピロリドンなどの懸濁剤、並びに甘味料又は矯味剤を含んでもよい。

基本的に、本発明において、藻類抽出物の毎日の服用量は、免疫賦活効果をもたらすことができる藻類抽出物の最小有効量である。

『有効量』は、求める効果、ここでは、免疫賦活効果を観察することのできる組成物の量を意味する。

その態様の一つでは、本発明に係る使用のための藻類抽出物は、上述の組成物中で、人間では、０．１から１００ｍｇ／ｋｇの間、さらにより具体的には、０．５から６０ｍｇ／ｋｇの間、例えば、１から２０ｍｇ／ｋｇの間若しくは５から３０ｍｇ／ｋｇの間の量で、又は、動物では、１から２００ｍｇ／ｋｇの間、より具体的には、１から１００ｍｇ／ｋｇの間、さらにより具体的には、２から４５ｍｇ／ｋｇの間若しくは１０から６０ｍｇ／ｋｇの間の量で投与して用いられる。

その態様の別の一つでは、本発明に係る藻類抽出物の非治療的使用として、それらは食物組成物に使うことができる。

『食物組成物』は、例えば、任意の機能食品、ヨーグルトや飲料、特に、乳飲料などの食品、任意の原材料、予め混合した状態の、薬用又は非薬用の、食料に加えるための添加物又は技術的補助剤、人又は動物用の本格的な又は補助的な任意の食料を意味する。

こうした態様の一つでは、食物組成物での藻類抽出物の非治療的使用として、これらは、人間では、０．１から１００ｍｇ／ｋｇの間、さらにより具体的には、０．５から６０ｍｇ／ｋｇの間、例えば、１から２０ｍｇ／ｋｇの間若しくは５から３０ｍｇ／ｋｇの間の量で、又は、動物では、１から２００ｍｇ／ｋｇの間、より具体的には、１から１００ｍｇ／ｋｇの間、さらにより具体的には、２から４５ｍｇ／ｋｇの間若しくは１０から６０ｍｇ／ｋｇの間の量で投与して用いられる。

また、本発明は、その態様の別の一つでは、人又は動物に本発明に係る藻類抽出物を有効量投与することを含む、人又は動物の免疫応答調節のための、特に、人又は動物の免疫応答賦活化のための方法に関する。

より具体的には、本発明に係る方法は、人又は動物の、特に、その腸内免疫系での、免疫応答を賦活化する。

さらにより具体的には、本発明に係る方法は、接着分子及びケモカイン、特に、ＩＬ８及び／又はＩＬ−１α及び／又はＩＬ１−β及び／又はＩＬ６及び／又はＴＮＦ−α及び／又はＣＣＬ２０の発現を誘導する。

本発明に係る方法で投与される藻類抽出物は、上述のように、薬剤、医薬組成物、又は食物組成物に配合してもよい。

上述の投与法に従って投与してもよい。

本発明に係る方法の適用についてのある実施形態では、本発明に係る藻類抽出物は、医薬組成物として投与される。

特に、本方法は、上述のものなどの伝染病の予防及び／又は治療に役立つ。

本発明に係る方法の適用についての別の実施形態では、本発明に係る藻類抽出物は、食物組成物として投与される。

また、特に、本発明は、人又は動物に、有効量の本発明に係る藻類抽出物を、３から３０日の間、特に、１０から２０日の間、又は、３から１０日の間、人間では、０．１から１００ｍｇ／ｋｇの間、より具体的には、０．５から６０ｍｇ／ｋｇの間、さらにより具体的には、１から２０ｍｇ／ｋｇの間若しくは５から３０ｍｇ／ｋｇの間の量で、又は、動物では、１から２００ｍｇ／ｋｇの間、より具体的には、１から１００ｍｇ／ｋｇの間、さらにより具体的には、２から４５ｍｇ／ｋｇの間若しくは１０から６０ｍｇ／ｋｇの間の量で投与することを含む、上述の方法に関する。

本発明に係る方法の適用についてのある実施形態では、上述の期間が終わった時に、藻類抽出物の投与を同じ期間繰り返してもよい。

その態様の一つでは、また、本発明は、
ａ）藻類から砂を洗い流し、
藻類を粉砕し、
粉砕物の固相を液相から分離し、
液相を清澄化し、
前記工程で得たジュースを５０ｋＤａ以下の、例えば、１５ｋＤａ以下の膜で限外濾過し、
前述の工程で得られた濾過ジュースを濃縮乾燥し、任意で、次に、例えば限外濾過カセットなどで限外濾過することを含む方法により本発明に係る藻類抽出物を調製し、
ｂ）有効量の本発明に係る藻類抽出物を、人間又は動物に、具体的には、３から３０日の間、より具体的には、１０から２０日の間、又は、３から１０日の間、人間では、０．１から１００ｍｇ／ｋｇの間、さらにより具体的には、０．５から６０ｍｇ／ｋｇの間、例えば、１から２０ｍｇ／ｋｇの間若しくは５から３０ｍｇ／ｋｇの間の量で、又は、動物では、１から２００ｍｇ／ｋｇの間、より具体的には、１から１００ｍｇ／ｋｇの間、さらにより具体的には、２から４５ｍｇ／ｋｇの間若しくは１０から６０ｍｇ／ｋｇの間の量で投与すること、
を含む上述の方法に関する。

本発明について、図面と実施例を参照しながらより詳細に説明するが、これらは本発明の範囲を制限するものではない。

本発明に係る藻類抽出物の^１ＨＮＭＲスペクトル。Ｓｈｏｄｅｘ８０２と８０３の２つで分離した本発明に係る藻類抽出物から得られたクロマトグラム。本発明に係る藻類抽出物のサンプルのトリメチルシリル化誘導体をガスクロマトグラフィーで分析して得られたクロマトグラム（Ａｒａはアラビノース、Ｇａｌはガラクトース、Ｇｌｃはグルコース、Ｘｙｌはキシロース、Ｍａｎはマンノース、Ｒｈａはラムノース、ＧｌｃＡはグルクロン酸を指す）。本発明に係る藻類抽出物ＥＡ１の最大無毒性量の評価。本発明に係る藻類抽出物ＥＡ２の最大無毒性量の評価。本発明に係る藻類抽出物ＥＡ３の最大無毒性量の評価。ｑＰＣＲ法により測定した本発明に係る藻類抽出物ＥＡ１、ＥＡ２、及びＥＡ３のＩＬ８の発現への影響。ｑＰＣＲ法により測定した本発明に係る藻類抽出物ＥＡ１、ＥＡ２、及びＥＡ３のＴＮＦ−αの発現への影響。ｑＰＣＲ法により測定した本発明に係る藻類抽出物ＥＡ１、ＥＡ２、及びＥＡ３のＣＣＬ２０の発現への影響。ｑＰＣＲ法により測定した本発明に係る藻類抽出物ＥＡ１、ＥＡ２、及びＥＡ３のＩＬ６の発現への影響。ｑＰＣＲ法により測定した本発明に係る藻類抽出物ＥＡ１、ＥＡ２、及びＥＡ３のＩＬ１αの発現への影響。ｑＰＣＲ法により測定した本発明に係る藻類抽出物ＥＡ１、ＥＡ２、及びＥＡ３のＩＬ１βの発現への影響。ｑＰＣＲ法により測定した本発明に係る藻類抽出物ＥＡ１、ＥＡ２、及びＥＡ３のＰＰＡＲγの発現への影響。ｑＰＣＲ法により測定した本発明に係る藻類抽出物ＥＡ１、ＥＡ２、及びＥＡ３のＩＬ１２ｐ３５の発現への影響。ＥＬＩＳＡ法により測定した本発明に係る藻類抽出物ＥＡ１、ＥＡ２、及びＥＡ３のＴＮＦ−αの発現への影響。ＥＬＩＳＡ法により測定した本発明に係る藻類抽出物ＥＡ１、ＥＡ２、及びＥＡ３のＩＬ‐８の発現への影響。

（実施例）
（実施例１：本発明に係る藻類抽出物の調製）
新鮮で未加工のアオサ型緑藻１トンを、藻類を洗浄するための機械を使って、真水で洗い、砂を取り除いた。

特記のない限り、本方法の各工程は室温で行った。

次に、藻類（８％の乾燥材料を有する脱水した藻類１トン）を、工業用リファイナー（Ｉｎｏｔｅｃ社のＩ１７５ＣＤＩ−７５Ｄ型）で、微粒子状にまで粉砕した。『微粒子』は、サイズが５０から１０００ｎｍの間で、二峰性であり、一方のサイズは５０から２００ｎｍの間で、他方のサイズは６００から１０００ｎｍである粒子を意味する。

次に、粉砕物を、工業用ベルト式圧搾機（Ｆｌｏｔｔｗｅｇ社のＢＦＲＵ８００ＨＫ型）で、約１トン／時間の流速で、圧搾した。

この工程により、固相（パルプ）と液相（ジュース）の分離が可能となる。得られたジュースの収率は７５％であった。

次に、得られた粗ジュース７５０ｋｇを、プレート式清澄器（Ｆｌｏｔｔｗｅｇ社のＡＣ２０００型）で、清澄化した。

こうして３．１０％の乾燥材料を有する澄んだジュース７１０ｋｇ（質量収率で９５から９８％）とクリーム（質量で２から５％）が得られた。

次に、この澄んだジュースを、１５ｋＤａのセラミック膜（ＴａｍｉＩｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）で限外濾過した。

こうして濾液と残渣が得られた。２．２％の乾燥材料を有する６４０ｋｇの濾過ジュース（体積で収率が９１％）が得られるまで、濾液を集めた。

次に、この濾過ジュース（濾液）を、蒸発により濃縮した後、凍結乾燥により乾燥させた。

濃縮は、単効用蒸発器（ＥＶＡ１０００、Ｐｉｇｎａｔ）を、強制再循環、供給流速１０Ｌ／時間、蒸気圧１バール、真空圧０．３バール、蒸発温度９０℃のパラーメーターで用い、行った。

最初の濃縮は、８Ｌ／時間の蒸発水分流速で行い、ブリックス単位は５．５（４．５％の乾燥材料濃度に等しい）から１４．７まで上昇した。

次に、この溶液を、５−６Ｌ／時間の蒸発水分流速で再び濃縮し、ブリックス単位は３４まで上昇した。この溶液の乾燥材料濃度を求めると３８．４％であった。

次に、凍結乾燥を、Ｂｉｏｂｌｏｃｋｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃａｐｐａｒａｔｕｓ（ＣＨＲＩＳＴａｌｐｈａ１−４ＬＳＣ型）を用いて、−８０℃の凍結温度（この工程での最低温度）で行った。

次に、得られた粉末を、遊星粉砕器（Ｐｈｉｌｉｐｓ社のＭｉｎｉＭｉｌｌ）で粉砕した。産物を粉砕用ボウルに入れた（粉砕用ボウル毎に産物１０ｇとジルコニア球４つ）。この全体を、１５分間、速度１０で、回転させた。

こうして藻類抽出物粉末１４ｋｇが得られた。

（実施例２：ＧＰＣ法（ゲル透過クロマトグラフィー法）による本発明に係る藻類抽出物の硫酸化及び非硫酸化多価陽イオン多糖類のサイズの決定）
実施例１で調製した本発明に係る藻類抽出物を、１０００Ｄａの膜で限外濾過し、０．５ｇ／Ｌの濃度で水に溶かした。その後、直列に配置したＳｈｏｄｅｘ８０２と８０３の２つのカラムに注入した（カラム８０２の分画領域は４×１０^３Ｄａ、カラム８０３は１．７×１０^５Ｄａ）。溶離液は、アジ化ナトリウムを０．２％含む０．１Ｍ硝酸ナトリウムであり、０．５ｍＬ／分の流速で用いた。検出はＷｙａｔｔ社の屈折計及びＷｙａｔｔ社の１８アングル光散乱検出器を用いて行った。ｄｎ／ｄｃは０．１５０ｍｌ／ｇとなった。

屈折計で検出したクロマトグラムを図２に示す。

本発明に係る藻類抽出物の多糖類の平均サイズは４．４ｋＤａであることが分かった。

（実施例３：本発明に係る藻類抽出物の組成の決定）
実施例１で調製した本発明に係る藻類抽出物を、撹拌しながらアミコンセルで全量限外濾過することにより精製した。分画閾値が１０００Ｄａの再生セルロース膜を用いた。本発明に係る藻類抽出物のサンプル５７２．１ｍｇを超高純度ミリＱ水に溶かした。１０００Ｄａ未満の質量を持つ分子を全て取り除くために水を５リットル用いた。残渣は凍結乾燥した。サンプルを測ると１１７ｍｇであった。つまり、限外濾過収率は、２０．５％（ｗ／ｗ）である。以下の分析はこの限外濾過サンプルで行った。

本発明に係る藻類抽出物の多糖類を構成する単糖類の割合を、Ｍｏｎｔｒｅｕｉｌ（Ｍｏｎｔｒｅｕｉｌ等、１９８６年）が修正したＫａｍｅｒｌｉｎｇ法（Ｋａｍｅｒｌｉｎｇ等、１９７５年）に従って求めた。単糖類の同定と定量では、モノマーのみを得るためにポリマーのメタノリシスによる加水分解が必要であった。次に、揮発性とするためグリコシド残基をトリメチルシリル化した。こうして、それらをＯ‐トリメチルシリル化メチルグリコシドの形態でガスクロマトグラフィーにより同定及び定量した。

用いた試薬は以下のとおりである。
・メタノール溶液／ＨＣＩ３Ｎ（Ｓｕｐｅｌｃｏ）、
・炭酸銀、
・ｍｙｏ‐イノシトール、
・ピリジン、
・ＳｙｌｏｎＢＦＴ試薬（ＢＳＴＦＡ＋ＴＭＣＳ９９：１）（Ｓｕｐｅｌｃｏ）、及び
・ジクロロメタン。

操作手順は以下のとおりである。上述のように調製した本発明に係る藻類抽出物４００μｇ及びｍｙｏ‐イノシトール５０μｇを、３Ｎ塩酸／メタノール混合物（Ｓｕｐｅｌｃｏ）５００μｌの存在する乾燥槽内に１００℃で４時間置いた。室温まで冷やした後に、メタノリゼートを炭酸銀で中和した。サンプルを３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上澄みを窒素ジェット下で蒸発させた。次に、化合物をピリジン８０μｌに溶かし、ｓｙｌｏｎ（ＢＳＴＦＡ：ＴＭＣＳ、９９：１、Ｓｕｐｅｌｃｏ）８０μｌを加えて８０℃で２５分間インキュベートした。余分な試薬を窒素ジェット下で穏やかに蒸発させた後、トリメチルシリル化メチルグリコシドをジクロロメタン５００μｌ内に入れ、ガスクロマトグラフ（カラム内注入、ＦＩＤ検出器：炎イオン化）に注入した。キャリアガスは窒素である。ＨＰ−５ＭＳ型（３０ｍ、内径０．２５ｍｍ）のカラムは無極性である。昇温プログラムは、１２０℃で１分維持、次に、１８０℃まで１．５℃／分の傾斜、そして、２００℃まで２℃／分の傾斜というものである。

各単糖は、内部標準に対するその保持時間を同じ条件下で処理した純粋な単糖の保持時間と比較することで、同定した。本発明に係る藻類抽出物の多糖類内の各単糖の比率を求めるために、各単糖について内部標準に対する応答係数を計算した。

得られた結果を、以下の表１及び図３に示す。

（実施例４：本発明に係る藻類抽出物の免疫調節活性の活性評価）
本発明に係る藻類抽出物の効果を分化したＩＰＥＣ−１ブタ上皮細胞で試験した。

このブタ腸管上皮細部（ＩｎｔｅｓｔｉｎａｌＰｏｒｃｉｎｅＥｐｉｔｈｅｌｉａｌＣｅｌｌ−１、ＩＰＥＣ−１）は自然に形質転換した仔豚空腸細胞である。

まず、Ｐ６プレートのウェルに投入し３日目でコンフルエンスとなるＩＰＥＣ−１細胞の最適量を求めた。０．２×１０^５細胞／ｃｍ^２の量がこの最適量として推定された。

次に、ＩＰＥＣ−１細胞の細胞増殖を阻害しない最大量を求めるために、本発明に係る藻類抽出物の最大無毒性量を調べた。

２種の本発明に係る藻類抽出物を実施例１に従って調製した（それぞれ、ＥＡ１、ＥＡ２とした）。

また、３種目の藻類抽出物ＥＡ３を、後続の精製工程を経る以外は実施例１に従って調製した。

この精製では、抽出物ＥＡ３を１ｋＤａの分画閾値を持つミニマムＰＡＬＬカセットで限外濾過した。次に、抽出物を凍結乾燥した。

３種の抽出物を完全ＤＭＥＭ／Ｆ１２培地２８ｍＬに溶かした。次に、１％溶液５０ｍＬを調製した（即ち、０．５ｇを５０ｍＬに入れた）。次に、０．２μｍの濾過で滅菌を行った。

次に、以下の表２に示すように、さまざまな濃度の藻類抽出物を試験するため、５０ｍＬのファルコンチューブで希釈を行った。

次に、以下の手順で細胞を調製した。
１）試験量毎に０．０７×１０^６細胞／ｍｌの（即ち、１．９６×１０^６細胞／服用の）細胞懸濁液２８ｍｌを調製。
２）トリプシン処理。
３）Ｃａ‐Ｍｇを含まないＰＢＳで細胞を洗浄。
４）細胞をばらばらにし剥がすためにＡＴＶトリプシン（２ｍｌ／Ｆ１７５又は０．４ｍｌ／ウェルＰ６）を投入。
５）３７℃で５分間インキュベート。
６）細胞培地中に取り分ける。
７）トリパンブルーを用いて計数。
８）１５ｍＬのファルコンチューブ６つにそれぞれ２．２３ｍＬを分注。
９）遠心分離。
１０）各チューブから細胞ペレットを取り出し各試験抽出物溶液２８ｍＬに入れ、５０ｍＬのファルコンチューブに移す。

培養は、プレート中に各懸濁液を３ｍｌ／ウェルで投入し、３７℃で、２４、４８、及び７２時間、インキュベートすることで、行った。

表３に異なるウェルの内容をまとめた。

次に、培養物を観察し、任意で写真を撮影した。

以下の手順で培養物を採取し計数した。
１）６ウェルのプレートの取り出し。
２）上清の除去。
３）Ｃａ−Ｍｇを含まないＰＢＳ１ｍＬで洗浄。
４）ＡＴＶトリプシンを０．４ｍＬ／ウェルで投入。
５）細胞が剥がれるまで３７℃で５分間インキュベート。
６）細胞培地０．６ｍｌを添加。
７）よく混ぜる。
８）０．４％のトリパンブルー（細胞５０μＬ＋０．４％トリパンブルー５０μＬ）を用い、Ｍａｌａｓｓｅｚの血球計算盤上で合計１００区画の細胞を計数。

図４から６の結果は、最大無毒性量が、ＥＡ１とＥＡ２で０．１％、ＥＡ３で０．５％であることを示す。

本発明に係る藻類抽出物ＥＡ１、ＥＡ２、及びＥＡ３による分化ＩＰＥＣ−１細胞の賦活化を、Ｄ１５、３７℃、４時間（コンフルエンスとなってから約１０日）で試験した。

３種の量（ＭＤ（最大量）、ＭＤ／１０、ＭＤ／１００）を試験し、バクテリアのＬＰＳ（陽性対照）及び分化培地（陰性対照）と比較した。

実施例１に示す方法で得られた本発明に係る藻類抽出物ＥＡ１、ＥＡ２、及びＥＡ３の溶液は、０．１％の完全ＤＭＥＭ／Ｆ１２で調製した。このため、０．０２ｇを２０ｍＬに取り分け、０．２μｍ濾過で滅菌を行った。以下の表４に示すように段階希釈を行った。

細胞ごとの藻類抽出物の量を以下の表５に示す。

次に、ＬＰＳ溶液（ＳＩＧＭＡＯ１１１：Ｂ４）を調製した（量：５０ｎｇ／１０^５細胞）。

２ｍＬの体積の１ウェルにつき２００ｎｇのＬＰＳを投入した。以下の表６は異なる調製濃度を示す。

試験培地２ｍＬをプレートの各フィルター上に、３ｍＬをその下に入れた。次に、全体を５％のＣＯ_２下、３７℃、４時間インキュベートした。

次に、分析のため以下の手順で処理ＩＰＥＣ−１細胞を採取した。
１）ウェルを緩衝生理水１ｍＬで２、３回洗浄。
２）細胞をＲＡ１緩衝液（Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ社のキット）３５０μｌに取り分ける。
３）エッペンドルフチューブに移し、１から１５までの番号をふる。

次に、Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ社のＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎＲＮＡＩＩキット（Ｒｅｆ７４０９５５．２５０、Ｂａｔｃｈ１２１１／００４）指示書に従ってＲＮＡを抽出した。

次に、得られたＲＮＡから以下の手順で逆転写によりＤＮＡを作った。
１）サンプル毎に、１μｇを処理するための取り分け量を計算。
２）冷却ブロック上に置いたストリップの各ウェルにこの量を投入。
３）必要水分量ＱＳＰ９μＬを添加。
４）ｏｌｉｇｏｄＴ＿ａｎｃｈｏｒｅｄ（１００ μＭ、Ｓａｍｐｌｅ３１５４３２５、Ｅｕｒｏｇｅｎｔｅｃ社）１．３μＬを添加。
５）ＧｅｎｅＡｍｐＰＣＲＳｙｓｔｅｍ９７００（ＵＳＥＲＫｈａｌｉｄ社）で、６５℃、１０分間、インキュベート。
６）インキュベート中に、氷上で（１サンプルにつき）コニカルチューブ１５ｍＬ内で以下のものの混合物を調製。
ｉ）５×緩衝液４μＬ
ｉｉ）ｄＮＴＰ２０ｍＭ（Ｅｕｒｏｇｅｎｔｅｃ社）２μＬ
ｉｉｉ）ミリＱ水１．９μＬ
ｉｖ）最後に、ＭｕＭＬＶｅｎｚｙｍｅｓ２５Ｕ／μｌ（ＭＥ−０１２５−４００）（Ｅｕｒｏｇｅｎｔｅｃ社）０．８μＬを添加
７）この混合物８．７μＬを各サンプルに添加し、最終量を２０μＬにする。
８）ストリップを冷却ブロック上に置く。
９）３７℃で９０分間インキュベートしポリメライゼーションを行い、ＧｅｎｅＡｍｐＰＣＲＳｙｓｔｅｍ９７００での反応の最後に９３℃で５分間インキュベートして酵素を失活させる。
１０）ＤＮＡ（１）ＭＯボックス内で−２０℃で凍結。

次に、サンプルをｑＰＣＲで分析した（一元配置分散分析検定、ノンパラメトリックなダネット法により差を検定）。

ＥＡ１抽出物の、ＩＬ８、ＴＮＦ−α、ＣＣＬ２０、ＩＬ６、ＩＬ１−α、ＩＬ１−β、ＰＰＡＲγ、及びＩＬ１２ｐ３５の発現への効果を検定した。

ＥＡ２及びＥＡ３の、ＩＬ８、ＴＮＦ−α、及びＣＣＬ２０の発現への効果を検定した。

結果を図７から１４に示す。

これらは試験した異なるサイトカインのｍＲＮＡの発現が増加することを示す。

また、本発明に係る藻類抽出物の免疫賦活活性を、分化ＩＰＥＣ−１細胞での免疫因子の賦活化をＥＬＩＳＡにより調べることで評価した。

Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ社のｐｏｒｃｉｎｅＫｉｔＤｕｏｓｅｔＣＸＣＬ８／ＩＬ８（ｒｅｆ：ＤＹ５３５）とｐｏｒｃｉｎｅＫｉｔＤｕｏｓｅｔＴＮＦ−α（ｒｅｆ：ＤＹ６９０Ｂ）の２種類の市販のキットを用いた。両キットは、キャプチャー抗体、抗体と検出系、及び各インターロイキンに特定の標準タンパク質を用いて、同様の手順に従う。

（細胞培養とサイトカイン産生のためのＥＡ１及びＥＡ３抽出物を用いたインキュベーション）
ＩＰＥＣ−１細胞（０．２５×１０^５細胞／ｃｍ^２）を、細胞がコンフルエントになるまで、３日間、カルチャーインサートで培養した。次に、ウシ胎児血清を１０^−７のデキサメタゾンで置換し、細胞を１０から１４日間、分化させた。３つの培養ウェルを、ＥＡ１及びＥＡ３抽出物の存在下、３７℃、２４時間、インキュベートした。対照群は藻類抽出物を含まない細胞培養物からなる。インサートの上下の培養上清を集め、分析までエッペンドルフチューブで−８０℃で保存した。

（ＥＬＩＳＡによるＩＬ８及びＴＮＦ−αの定量）
キャプチャー抗体（マウス由来の抗ＩＬ−８又は抗ＴＮＦ−α抗体）を、ＰＢＳで１８０分の１に希釈し、室温、オーバーナイトで、１００μＬ／ウェルで固定させた。０．０５％Ｔｗｅｅｎ含有ＰＢＳ（洗浄用バッファ）４００μＬ／ウェルを用いて、結合していない抗体を除去するため、洗いを３回行った。次に、非特異的結合部位をブロックし、これにより、試験タンパク質のプラスチックへの結合を避けるため、飽和工程を行った。このために、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）含有ＰＢＳバッファ３００μＬ／ウェルを添加した。プレートを室温で１時間インキュベートし、その後、洗浄用バッファ４００μＬ／ウェルで３回洗った。濃度を４０００、２０００、１０００、５００、２５０、１２５ｐｇ／ｍｌの希釈系列とするため、標準タンパク質（組み換えＩＬ８及びＴＮＦ−α）を、１％ＢＳＡ含有ＰＢＳバッファで半分毎に希釈した。澄んだ上清１００μＬと標準タンパク質サンプルを各ウェルに投入し、その後、室温で２時間インキュベートした。４００μＬ／ウェルのバッファで３回洗った後、プレートを、２％補体除去ヤギ血清を含有する希釈バッファで１８０分の１に希釈したビオチン結合検出抗体１００μＬ／ウェルの存在下で、インキュベートした。室温で２時間インキュベートした後、プレートを洗浄用バッファで３回洗い、その後、ストレプトアビジンーＨＲＰコンジュゲート１００μＬを用い、室温で２０分間、遮光してインキュベートした。洗浄用バッファで３回洗った後、ウェルを、基質（ｖ／ｖ試薬Ａ及びＢ）１００μＬを用い、室温で２０分間、闇所でインキュベートした。ＨＲＰ−基質反応を停止液５０μＬ／ウェルで止め、ＥＬＩＳＡｒｅａｄｅｒＬａｂｓｙｓｔｅｍｓＭｕｌｔｉｓｋａｎＲＣを用い、４５０ｎｍ８でＯＤ（光学密度）の読み取りを行った。

結果を図１５及び１６に示す。

これらは試験した異なるサイトカインのタンパク質発現増加を示す。

（結論）
このように、本発明に係る藻類抽出物の投与は、産物の免疫賦活効果を明らかにするものである。

［付記１］
人又は動物の免疫応答調節に使用するための、サイズが５０ｋＤａ以下の硫酸化及び非硫酸化多価陰イオン多糖類を含むアオサ目藻類抽出物、特に、アオサ型緑藻抽出物。

［付記２］
人又は動物の免疫応答調節のための、サイズが５０ｋＤａ以下の硫酸化及び非硫酸化多価陰イオン多糖類を含むアオサ目藻類抽出物、特に、アオサ型緑藻抽出物の非治療的使用。

［付記３］
前記多糖類がマンノース及び／又はアラビノース、特に、マンノースを含む、付記１に記載の藻類抽出物又は付記２に記載の非治療的使用。

［付記４］
前記多糖類は、前記藻類抽出物の総乾燥重量に基いて、少なくとも０．００５重量％のマンノース及び／又は少なくとも０．００５重量％のアラビノースを含む、付記３に記載の藻類抽出物又は付記３に記載の非治療的使用。

［付記５］
前記多糖類は、前記藻類抽出物の総乾燥重量に基いて、０．０１から０．５０重量％のマンノース及び／又は０．０１から０．５重量％のアラビノースを含む、付記４に記載の藻類抽出物又は付記４に記載の非治療的使用。

［付記６］
前記多糖類は、さらに、
ガラクトース、
グルコース、
ラムノース、
キシロース、及び、
グルクロン酸、を含む、付記１及び３から５のいずれか１つに記載の藻類抽出物又は付記２から５のいずれか１つに記載の非治療的使用。

［付記７］
前記多糖類は、
０．０５から０．５重量％のガラクトース、
０．００５から０．５重量％のグルコース、
２から１５重量％のラムノース、
０．１から１重量％のキシロース、及び、
１から７重量％のグルクロン酸
（但し、重量％は、藻類抽出物の総乾燥重量に基づく）
を含む、付記６に記載の藻類抽出物又は付記６に記載の非治療的使用。

［付記８］
ａ）藻類から砂を洗い流し、
ｂ）前記藻類を粉砕し、
ｃ）粉砕物の固相を液相から分離し、
ｄ）前記液相を清澄化し、
ｅ）前記工程ｄ）で得たジュースを５０ｋＤａ以下の膜で限外濾過し、
ｆ）前記工程ｅ）で得た濾過ジュースを濃縮乾燥する、
調製方法により得ることのできる、人又は動物の免疫応答調節に使用するための、アオサ目藻類抽出物、特に、アオサ型緑藻抽出物。

［付記９］
ａ）藻類から砂を洗い流し、
ｂ）前記藻類を粉砕し、
ｃ）粉砕物の固相を液相から分離し、
ｄ）前記液相を清澄化し、
ｅ）前記工程ｄ）で得たジュースを５０ｋＤａ以下の膜で限外濾過し、
ｆ）前記工程ｅ）で得た濾過ジュースを濃縮乾燥する、
調製方法により得ることのできる、人又は動物の免疫応答調節のための、アオサ目藻類抽出物、特に、アオサ型緑藻抽出物の非治療的使用。

［付記１０］
人又は動物の免疫応答を、特に、腸内免疫系で賦活化するための、付記１及び３から８のいずれか１つに記載の藻類抽出物又は付記２から７及び９のいずれか１つに記載の非治療的使用。

［付記１１］
前記藻類抽出物は、接着分子及びケモカイン、特に、ＩＬ−８及び／又はＩＬ−１α及び／又はＩＬ１−β及び／又はＩＬ−６及び／又はＴＮＦ−α及び／又はＣＣＬ２０の発現を誘導する、付記１、３から８、及び１０のいずれか１つに記載の藻類抽出物又は付記２から７、９、及び１０のいずれか１つに記載の非治療的使用。

［付記１２］
ワクチン接種のサプリメントとしての、付記１、３から８、１０、及び１１のいずれか１つに記載の藻類抽出物又は付記２から７及び９から１１のいずれか１つに記載の非治療的使用。

［付記１３］
伝染病、具体的には、パルボウィルス病、丹毒、伝染性鼻炎、インフルエンザ、豚サーコウイルス病、マイコプラズマ症、及び大腸菌病から選択される豚伝染病、マレック病、ニューカッスル病、伝染性気管支炎、ガンボロ病、鶏痘、マイコプラズマ病、鶏伝染性貧血、伝染性喉頭気管炎、ＥＤＳ、及び鳥インフルエンザから選択される鳥伝染病、ＢＶＤ（牛ウィルス性下痢症）、流行性気管支肺炎、ＩＢＲ、ヘルペスウィルス病、クロストリジウム症、大腸菌症、ブルータング病、コロナウィルス病、ロタウィルス病、及び鼻気管炎から選択される牛伝染病、並びに、造血器壊死病、ビブリオ病、せつ腫病、伝染性膵臓壊死病、及び伝染性貧血から選択される水産養殖伝染病の治療及び／又は予防のための、付記１、３から８、及び１０から１２のいずれか１つに記載の藻類抽出物。

［付記１４］
前記藻類抽出物は医薬組成物に配合される、付記１、３から８、及び１０から１３のいずれか１つに記載の藻類抽出物。

［付記１５］
前記藻類抽出物は食物組成物に配合される、付記２から７及び９から１２のいずれか１つに記載の非治療的使用。

［付記１６］
前記藻類抽出物は、人間では、０．１から１００ｍｇ／ｋｇの間の量で、又は、動物では、１から２００ｍｇ／ｋｇの量で、投与される、付記１４に記載の藻類抽出物又は付記１５に記載の非治療的使用。

［付記１７］
前記多糖類は１５ｋＤａ以下のサイズを有する、付記１、３から８、１０から１４、及び１６のいずれか１つに記載の藻類抽出物、又は、付記２から７、９から１２、１５、及び１６のいずれか１つに記載の非治療的使用。

［付記１８］
前記藻類抽出物は、
ａ）藻類から砂を洗い流し、
ｂ）前記藻類を粉砕し、
ｃ）粉砕物の固相を液相から分離し、
ｄ）前記液相を清澄化し、
ｅ）前記工程ｄ）で得たジュースを５０ｋＤａ以下の膜で限外濾過し、
ｆ）前記工程ｅ）で得た濾過ジュースを濃縮乾燥する、
調製方法により得ることのできる、付記１及び３から７のいずれか１つに記載の藻類抽出物、又は、付記２から７のいずれか１つに記載の非治療的使用。

［付記１９］
前記調製方法の前記工程ｄ）で得た前記ジュースは１５ｋＤａ以下の膜で限外濾過される、付記８若しくは１８に記載の藻類抽出物、又は、付記９若しくは１８に記載の非治療的使用。

［付記２０］
前記調製方法の前記工程ｆ）で得た前記藻類抽出物は、特に、限外濾過により、精製される、精製される８、１８、若しくは１９に記載の藻類抽出物、又は、精製される９、１８、若しくは１９に記載の非治療的使用。

Claims

人又は動物の免疫応答調節に使用するための、サイズが５０ｋＤａ以下の硫酸化及び非硫酸化多価陰イオン多糖類を含むアオサ目藻類抽出物、特に、アオサ型緑藻抽出物。
人又は動物の免疫応答調節のための、サイズが５０ｋＤａ以下の硫酸化及び非硫酸化多価陰イオン多糖類を含むアオサ目藻類抽出物、特に、アオサ型緑藻抽出物の非治療的使用。
前記多糖類がマンノース及び／又はアラビノース、特に、マンノースを含む、請求項１に記載の藻類抽出物又は請求項２に記載の非治療的使用。
前記多糖類は、前記藻類抽出物の総乾燥重量に基いて、少なくとも０．００５重量％のマンノース及び／又は少なくとも０．００５重量％のアラビノースを含む、請求項３に記載の藻類抽出物又は請求項３に記載の非治療的使用。
前記多糖類は、前記藻類抽出物の総乾燥重量に基いて、０．０１から０．５０重量％のマンノース及び／又は０．０１から０．５重量％のアラビノースを含む、請求項４に記載の藻類抽出物又は請求項４に記載の非治療的使用。
前記多糖類は、さらに、
ガラクトース、
グルコース、
ラムノース
キシロース、及び、
グルクロン酸、を含む、請求項１及び３から５のいずれか１項に記載の藻類抽出物又は請求項２から５のいずれか１項に記載の非治療的使用。
前記多糖類は、
０．０５から０．５重量％のガラクトース、
０．００５から０．５重量％のグルコース、
２から１５重量％のラムノース、
０．１から１重量％のキシロース、及び、
１から７重量％のグルクロン酸
（但し、重量％は、藻類抽出物の総乾燥重量に基づく）
を含む、請求項６に記載の藻類抽出物又は請求項６に記載の非治療的使用。
ａ）藻類から砂を洗い流し、
ｂ）前記藻類を粉砕し、
ｃ）粉砕物の固相を液相から分離し、
ｄ）前記液相を清澄化し、
ｅ）前記工程ｄ）で得たジュースを５０ｋＤａ以下の膜で限外濾過し、
ｆ）前記工程ｅ）で得た濾過ジュースを濃縮乾燥する、
調製方法により得ることのできる、人又は動物の免疫応答調節に使用するための、アオサ目藻類抽出物、特に、アオサ型緑藻抽出物。
ａ）藻類から砂を洗い流し、
ｂ）前記藻類を粉砕し、
ｃ）粉砕物の固相を液相から分離し、
ｄ）前記液相を清澄化し、
ｅ）前記工程ｄ）で得たジュースを５０ｋＤａ以下の膜で限外濾過し、
ｆ）前記工程ｅ）で得た濾過ジュースを濃縮乾燥する、
調製方法により得ることのできる、人又は動物の免疫応答調節のための、アオサ目藻類抽出物、特に、アオサ型緑藻抽出物の非治療的使用。
人又は動物の免疫応答を、特に、腸内免疫系で賦活化するための、請求項１及び３から８のいずれか１項に記載の藻類抽出物又は請求項２から７及び９のいずれか１項に記載の非治療的使用。
前記藻類抽出物は、接着分子及びケモカイン、特に、ＩＬ−８及び／又はＩＬ−１α及び／又はＩＬ１−β及び／又はＩＬ−６及び／又はＴＮＦ−α及び／又はＣＣＬ２０の発現を誘導する、請求項１、３から８、及び１０のいずれか１項に記載の藻類抽出物又は請求項２から７、９、及び１０のいずれか１項に記載の非治療的使用。
ワクチン接種のサプリメントとしての、請求項１、３から８、１０、及び１１のいずれか１項に記載の藻類抽出物又は請求項２から７及び９から１１のいずれか１項に記載の非治療的使用。
伝染病、具体的には、パルボウィルス病、丹毒、伝染性鼻炎、インフルエンザ、豚サーコウイルス病、マイコプラズマ症、及び大腸菌病から選択される豚伝染病、マレック病、ニューカッスル病、伝染性気管支炎、ガンボロ病、鶏痘、マイコプラズマ病、鶏伝染性貧血、伝染性喉頭気管炎、ＥＤＳ、及び鳥インフルエンザから選択される鳥伝染病、ＢＶＤ（牛ウィルス性下痢症）、流行性気管支肺炎、ＩＢＲ、ヘルペスウィルス病、クロストリジウム症、大腸菌症、ブルータング病、コロナウィルス病、ロタウィルス病、及び鼻気管炎から選択される牛伝染病、並びに、造血器壊死病、ビブリオ病、せつ腫病、伝染性膵臓壊死病、及び伝染性貧血から選択される水産養殖伝染病の治療及び／又は予防のための、請求項１、３から８、及び１０から１２のいずれか１項に記載の藻類抽出物。
前記藻類抽出物は医薬組成物に配合される、請求項１、３から８、及び１０から１３のいずれか１項に記載の藻類抽出物。
前記藻類抽出物は食物組成物に配合される、請求項２から７及び９から１２のいずれか１項に記載の非治療的使用。
前記藻類抽出物は、人間では、０．１から１００ｍｇ／ｋｇの間の量で、又は、動物では、１から２００ｍｇ／ｋｇの量で、投与される、請求項１４に記載の藻類抽出物又は請求項１５に記載の非治療的使用。
前記多糖類は１５ｋＤａ以下のサイズを有する、請求項１、３から８、１０から１４、及び１６のいずれか１項に記載の藻類抽出物、又は、請求項２から７、９から１２、１５、及び１６のいずれか１項に記載の非治療的使用。
前記藻類抽出物は、
ａ）藻類から砂を洗い流し、
ｂ）前記藻類を粉砕し、
ｃ）粉砕物の固相を液相から分離し、
ｄ）前記液相を清澄化し、
ｅ）前記工程ｄ）で得たジュースを５０ｋＤａ以下の膜で限外濾過し、
ｆ）前記工程ｅ）で得た濾過ジュースを濃縮乾燥する、
調製方法により得ることのできる、請求項１及び３から７のいずれか１項に記載の藻類抽出物、又は、請求項２から７のいずれか１項に記載の非治療的使用。
前記調製方法の前記工程ｄ）で得た前記ジュースは１５ｋＤａ未満の膜で限外濾過される、請求項８若しくは１８に記載の藻類抽出物、又は、請求項９若しくは１８に記載の非治療的使用。
前記調製方法の前記工程ｆ）で得た前記藻類抽出物は、特に、限外濾過により、精製される、精製される８、１８、若しくは１９に記載の藻類抽出物、又は、精製される９、１８、若しくは１９に記載の非治療的使用。