CN108440681A - 一种绿藻硫酸多糖及其作为益生元在提高肠道有益菌增殖中的应用 - Google Patents
一种绿藻硫酸多糖及其作为益生元在提高肠道有益菌增殖中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于医药生物技术领域，涉及一种绿藻硫酸多糖及其作为益生元在提高肠道有益菌增殖中的应用。硫酸多糖是以石莼、孔石莼、浒苔、条浒苔、缘管浒苔、砺菜和礁膜等绿藻为原料，经脱脂、热水提取、浓缩、氧化剂脱色、有机溶剂沉淀、干燥获得，其分子量为3～600kDa，硫酸根含量为5～35wt％，多糖中鼠李糖占20～60wt％、葡萄糖醛酸占5～20wt％、葡萄糖占0～30wt％，还有木糖、半乳糖和甘露糖，鼠李糖的连接方式为4)Rha(α1→、3)Rha(α1→及2)Rha(α1→。本发明绿藻硫酸多糖资源丰富、无毒副作用，能有效提高肠道有益菌含量，可作为益生元及治疗肠道菌群紊乱的药物和食品添加剂使用。
Description
技术领域
本发明属于医药生物技术领域，具体涉及一种绿藻来源的硫酸多糖及其作为益生元在提高肠道有益菌群增殖中的应用。
背景技术
能够促进一种或几种肠道有益菌生长的物质称为益生元(Prebiotics)。益生元作为一种重要的肠道菌群调节剂具有良好的抗肥胖(中国专利申请公开号：106659226A)、改善代谢综合征(中国专利申请公开号：107375262A)及防治便秘(中国专利申请公开号：107495383A)等生物学作用。传统的益生元主要包括菊粉、果寡糖和半乳寡糖等糖类化合物，它们主要用于增殖肠道乳酸杆菌(Lactobacillus spp.)和双歧杆菌(Bifidobacteriumspp.)，而对糖尿病和肿瘤病人肠道缺乏的Akkermansia muciniphila细菌没有增殖效果。近年来，随着人们生活水平的不断提高和保健意识的不断增强，传统的益生元产品并不能满足日益增长的市场需求。因此，寻找新型的益生元，尤其是具有促进Akkermansiamuciniphila增殖的益生元，是亟待解决的问题。
我国绿藻资源丰富，多数绿藻(如：石莼属、礁膜属、浒苔属等)具有重要营养价值和药用价值，绿藻中硫酸多糖含量最高且无毒副作用，是重要的活性物质之一，受到越来越多的关注。大量研究表明，不同绿藻来源的硫酸多糖具有抗炎、抗肥胖(Liu X,CarbohydrPolym，2017,173:732-748)、抗凝血(Li N,Carbohydr Polym,2017，159:195-206)、抗菌(中国专利申请公开号：105542022A和105399854A)、抗EV71病毒(中国发明专利申请号：201610190591.2)、抗氧化(中国专利申请公开号：105542022A)、增强免疫(中国专利申请公开号：CN105294871A)和降血脂(中国专利申请公开号：107669763A)等多种药理学作用。虽然有关绿藻硫酸多糖生物活性的研究已经得到广泛开展，但是目前尚未有关于绿藻多糖作为益生元改善肠道菌群，尤其是提高Akkermansia muciniphila增殖的研究报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种绿藻来源的硫酸多糖及其作为肠道菌群调节剂及益生元的应用，所述的绿藻硫酸多糖资源丰富、无毒副作用，能有效提高肠道有益菌含量，可作为益生元，以及因各种疾病所致肠道菌群紊乱的药物和食品添加剂。
为了实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案：
一种绿藻硫酸多糖，绿藻硫酸多糖的分子量为3～600kDa，硫酸根含量为5～35wt％，其余为多糖；多糖中主要含有鼠李糖、葡萄糖醛酸和葡萄糖，鼠李糖含量为20～60wt％，葡萄糖醛酸含量为5～20wt％，葡萄糖含量为0～30wt％，鼠李糖的连接方式为4)Rha(α1→、3)Rha(α1→及2)Rha(α1→，葡萄糖醛酸以β构型糖苷键存在。
所述的绿藻硫酸多糖，多糖中还含有木糖、半乳糖和甘露糖；优选的，按重量百分比计，多糖的组成和含量如下：鼠李糖含量为40～60wt％，葡萄糖醛酸含量为5～20wt％，葡萄糖含量为0～30wt％，木糖含量为3～14wt％，半乳糖含量为1～3wt％，甘露糖含量为1～3wt％。
所述的绿藻硫酸多糖，绿藻硫酸多糖是以绿藻为原料，经脱脂、热水提取，浓缩，氧化剂脱色，有机溶剂沉淀、干燥而得。
所述的绿藻硫酸多糖，绿藻是指石莼(Ulva clathrata)，孔石莼(Ulva pertusa)，浒苔(Enteromorpha prolifra)，条浒苔(Enteromorpha clathrata)，缘管浒苔(Enteromorpha linza)，砺菜(Ulva conglobata)，礁膜(Monostroma nitidum)或囊礁膜(Monostroma angicava)。
所述的绿藻硫酸多糖，氧化剂是指双氧水或次氯酸钠或二氧化氯。
所述的绿藻硫酸多糖，有机溶剂是指乙醇或丙酮或异丙醇。
所述的绿藻硫酸多糖，绿藻硫酸多糖的制备过程如下：
(1)将绿藻烘干粉碎至粒度为40至100目，烘干所得的浒苔粉与有机溶剂按照1:5～15质量比例在70～90℃水浴中搅拌脱脂1～2小时，冷却至室温后，减压过滤收集残渣，重复脱脂2～3次，残渣烘干备用；
(2)将干燥残渣按照1:15～25质量比例加入蒸馏水，在90～100℃水浴中搅拌提取1～3小时，冷却至室温后，在3000～5000r/min下离心10～30min，收集上清液，残渣继续重复提取2～3次，合并提取液，经旋转蒸发浓缩后，在40～60℃水浴中加入氧化剂进行氧化脱色2～5小时，去除残余氧化剂后，加入4～6倍质量95wt％纯度的食品级乙醇，离心收集沉淀，经减压干燥后获得绿藻硫酸多糖。
所述的绿藻硫酸多糖作为益生元在提高肠道有益菌增殖中的应用，绿藻硫酸多糖对肠道菌群进行调节，提高肠道菌群物种多样性及丰度；明显增加肠道益生菌乳酸杆菌(Lactobacillus spp.)、双歧杆菌(Bifidobacterium spp.)及具有提高免疫功能细菌Akkermansia muciniphila的含量。
所述的绿藻硫酸多糖作为益生元在提高肠道有益菌增殖中的应用，绿藻硫酸多糖作为益生元，以及因各种疾病所致肠道菌群紊乱调节药物和食品添加剂。
与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在：
1)本发明首次阐明绿藻来源硫酸多糖的肠道菌群调节作用及益生元作用，拓展海洋绿藻来源硫酸多糖在食品和医药领域中的应用范围。
2)本发明所述硫酸多糖的益生元作用不仅表现在其可以促进乳酸杆菌(Lactobacillus spp.)和双歧杆菌(Bifidobacterium spp.)的生长，还表现在其能够显著促进具有减肥和免疫增强活性“新一代益生菌”Akkermansia muciniphila的生长。
3)本发明所述硫酸多糖原料丰富易得，制备工艺简单容易产业化，产品无毒副作用，具有广阔的开发应用前景。
附图说明
图1为浒苔硫酸多糖1H-NMR图。
图2为小鼠肠道菌群结构PCA分析。其中，A为雄性小鼠肠道菌群结构PCA分析，B为雌性小鼠肠道菌群结构PCA分析。
图3为绿藻硫酸多糖对小鼠肠道菌群丰度及物种多样性分析。本图中a：*P<0.05vsMN组；b：*P<0.05vs FN组。其中，A为各组小鼠肠道菌群物种多样性Chao1指数分析图，横坐标代表不同实验组小鼠，其中MN组为雄性对照组，ML组为雄性低剂量给药组，MH组为雄性高剂量给药组，FN组为雌性对照组，FL组为雌性低剂量给药组，FH组为雌性高剂量给药组，纵坐标代表各组小鼠肠道菌群物种多样性Chao1指数数值；B为各组小鼠肠道菌群物种丰度(Observed species)分析图，横坐标代表不同实验组小鼠，其中MN组为雄性对照组，ML组为雄性低剂量给药组，MH组为雄性高剂量给药组，FN组为雌性对照组，FL组为雌性低剂量给药组，FH组为雌性高剂量给药组，纵坐标代表各组小鼠肠道菌群中物种含量数值；C为各组小鼠肠道菌群物种物种多样性Shannon指数分析图，横坐标代表不同实验组小鼠，其中MN组为雄性对照组，ML组为雄性低剂量给药组，MH组为雄性高剂量给药组，FN组为雌性对照组，FL组为雌性低剂量给药组，FH组为雌性高剂量给药组，纵坐标代表各组小鼠肠道菌群物种多样性Shannon指数数值。
图4为小鼠肠道菌群门水平及属水平含量分析。其中，A为各组小鼠肠道菌群门水平组成分析，B为各组小鼠肠道菌群属水平组成分析。A图中横坐标代表不同实验组小鼠，其中MN组为雄性对照组，ML组为雄性低剂量给药组，MH组为雄性高剂量给药组，FN组为雌性对照组，FL组为雌性低剂量给药组，FH组为雌性高剂量给药组，纵坐标代表每组6只小鼠在门水平不同细菌含量的平均值；B图中横坐标代表不同实验组小鼠，其中MN组为雄性对照组，ML组为雄性低剂量给药组，MH组为雄性高剂量给药组，FN组为雌性对照组，FL组为雌性低剂量给药组，FH组为雌性高剂量给药组，纵坐标代表每组6只小鼠在属水平不同细菌含量的平均值。
图5为小鼠肠道菌群在不同分类学水平变化的LEfSe进化树分析。其中，MN组为雄性对照组，ML组为雄性低剂量给药组，MH组为雄性高剂量给药组，FN组为雌性对照组，FL组为雌性低剂量给药组，FH组为雌性高剂量给药组。图中从a到b9等不同英文字母代表LEfSe分析中检测到的不同分类学水平上的差异菌群。
图6为不同组小鼠特征肠道菌群LEfSe分析，横坐标代表LEfSe分析中特征肠道菌群LDA数值，图中展示的特征肠道菌群为LDA值大于2的特征肠道菌群，纵坐标代表不同实验组中特征肠道菌群的组成。
图7为绿藻硫酸多糖促进有益细菌增殖作用。其中，A是各组小鼠肠道菌群中双歧杆菌(Bifidobacterium spp.)的含量图，B是各组小鼠肠道菌群中乳酸杆菌(Lactobacillus spp.)的含量图，C是各组小鼠肠道菌群中“新一代益生菌”(Akkermansiamuciniphila)的含量图。上述各图中横坐标均代表不同实验组小鼠，MN组为雄性对照组，ML组为雄性低剂量给药组，MH组为雄性高剂量给药组，FN组为雌性对照组，FL组为雌性低剂量给药组，FH组为雌性高剂量给药组；纵坐标代表各组6只小鼠肠道菌群中相应益生菌的含量。
图8为小鼠体重变化及血清脂多糖结合蛋白(LBP)含量分析。其中，A为雌鼠体重随时间变化分析，横坐标代表实验时间，纵坐标代表不同实验组雌鼠体重；其中，FN组为雌性对照组，FL组为雌性低剂量给药组，FH组为雌性高剂量给药组，*P<0.05vs FN组；B为雄鼠体重变化分析，横坐标代表实验时间，纵坐标代表不同实验组雄鼠体重；其中，MN组为雄性对照组，ML组为雄性低剂量给药组，MH组为雄性高剂量给药组，*P<0.05vs MN组；C为雌鼠累计饮食量分析，横坐标代表不同实验组；其中，FN组为雌性对照组，FL组为雌性低剂量给药组，FH组为雌性高剂量给药组，纵坐标代表实验中各组小鼠累积饮食量；D为雄鼠累计饮食量分析，横坐标代表不同实验组；其中，MN组为雄性对照组，ML组为雄性低剂量给药组，MH组为雄性高剂量给药组，纵坐标代表实验中各组小鼠累积饮食量；E为雌雄各组小鼠血清脂多糖结合蛋白LBP含量分析，横坐标代表不同实验组小鼠，MN组为雄性对照组，ML组为雄性低剂量给药组，MH组为雄性高剂量给药组，FN组为雌性对照组，FL组为雌性低剂量给药组，FH组为雌性高剂量给药组；纵坐标代表各组小鼠中血清脂多糖结合蛋白LBP的含量。
具体实施方式
在具体实施过程中，本发明绿藻硫酸多糖是以石莼、孔石莼、浒苔、条浒苔、缘管浒苔、砺菜和礁膜等绿藻为原料，经脱脂、热水提取、浓缩、氧化剂脱色、有机溶剂沉淀、干燥获得，其分子量为3～600kDa，硫酸根含量为5～35wt％，其余为多糖；多糖中含有鼠李糖(Rha)、葡萄糖醛酸(GlcA)、葡萄糖(Glc)、木糖(Xyl)、半乳糖(Gal)和甘露糖(Man)，其中鼠李糖含量为20～60wt％，葡萄糖醛酸含量为5～20wt％，葡萄糖含量为0～30wt％，鼠李糖的连接方式为4)Rha(α1→、3)Rha(α1→及2)Rha(α1→，葡萄糖醛酸以β构型糖苷键存在。
本发明通过动物实验、组织生化分析及16S rRNA高通量测序技术，系统阐明绿藻硫酸多糖的肠道菌群调节作用。本发明提供的硫酸多糖用于调节肠道菌群，提高肠道菌群物种丰度及物种多样性，增加肠道益生菌乳酸杆菌(Lactobacillus spp.)、双歧杆菌(Bifidobacterium spp.)及提高免疫细菌Akkermansia muciniphila的含量。
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此。
实施例1绿藻硫酸多糖的制备及理化性质
本发明的硫酸多糖来源于石莼(Ulva clathrata)，孔石莼(Ulva pertusa)，浒苔(Enteromorpha prolifra)，条浒苔(Enteromorpha clathrata)，缘管浒苔(Entermorphalinza)，砺菜(Ulva conglobata)，礁膜(Monostroma nitidum)和囊礁膜(Monostromaangicava)，本实施例以青岛产浒苔为例进行说明。
将浒苔烘干粉碎至粒度为40至100目，烘干所得的浒苔粉与95wt％乙醇按照1:10质量比例在80℃水浴中搅拌脱脂1～2小时，冷却至室温后，减压过滤收集残渣，重复脱脂2次，残渣烘干备用。将干燥残渣按照1:20质量比例加入蒸馏水，在95℃水浴中搅拌提取1～3小时，冷却至室温后，离心(4500r/min，20min)收集上清液，残渣继续重复提取2次，合并提取液，经旋转蒸发浓缩后，在40～60℃水浴中加入双氧水进行氧化脱色2～5小时，去除残余过氧化氢后，加入5倍质量95wt％纯度的食品级乙醇，离心收集沉淀，经减压干燥后获得硫酸多糖。多糖分子量采用高效凝胶渗透色谱-多角度激光散射联用法测定，其绝对分子量在8～120kDa之间。所用色谱柱为Shodex OHpak SB-804HQ与Shodex OHpak SB-802.5HQ色谱柱，色谱流动相为0.1mol·L-1Na2SO4水溶液，柱温35℃，流动相流速0.6mL·min-1，分析时间为45min。通过PMP柱前衍生高效液相色谱法测定浒苔硫酸多糖的单糖组成，该多糖含有Man，Rha，GlcA，Glc，以及Gal和Xyl，其中鼠李糖含量50wt％，葡萄糖含量30wt％，葡萄糖醛酸含量11wt％，木糖、半乳糖和甘露糖的含量分别为7wt％、1wt％及1wt％。所用色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱，流动相为0.1mol·L-1磷酸盐-乙腈(83:17，体积分数)缓冲液，柱温30℃，245nm紫外检测器，流速1mL·min-1。采用离子色谱法测定硫酸根含量为15wt％。色谱柱为SH-AC-1阴离子色谱柱，流动相为3.5mmol·L-1Na2CO3-4.5mmol·L- 1NaHCO3(1:1，体积分数)，柱温35℃，电导检测器，流速1.5mL·min-1。
采用核磁共振氢谱(1H-NMR)确定浒苔硫酸多糖的结构(图1)。取30mg该硫酸多糖进行重水交换后转移到核磁管中，以氘代丙酮为内标，在25℃进行核磁共振碳谱分析。如图1所示，鼠李糖的甲基峰在1.31ppm，其异头氢信号出现在5.07ppm、4.98ppm、4.91ppm，经与文献比对，分别代表2)Rha(α1→、3)Rha(α1→、4)Rha(α1→连接方式，其中4)Rha(α1→鼠李糖的异头碳在98.9ppm，推测其C3位存在硫酸根。另外，葡萄糖醛酸的异头氢在4.52ppm左右，对应的异头碳信号在103.8ppm，证明它是以β糖苷键形式存在于浒苔硫酸多糖中。
实施例2浒苔硫酸多糖对肠道菌群调节作用及益生元活性
(1)动物实验设计及实验方法
实验采用6周龄雌性及雄性C57BL/6J小鼠(购自北京维通利华动物实验公司)。小鼠适应性喂养3周后开始实验，实验期间，小鼠自由饮食饮水。每周记录小鼠体重，每三天记录小鼠饮食量。浒苔硫酸多糖分100mg/kg/day(高剂量)和50mg/kg/day(低剂量)组给药，不同剂量多糖的给药时间均为4周。实验中C57BL/6J小鼠分为6组(雌、雄各3组)，每组6只。雌性3组分别为FN组(正常对照组)，FL组(低剂量组)和FH组(高剂量组)；雄性3组分别为MN组(正常对照组)，ML组(低剂量组)和MH组(高剂量组)。给药时，将浒苔硫酸多糖溶于一定量生理盐水(100μL)口服灌胃给药。对照组FN组及MN组灌胃等剂量生理盐水。实验结束，小鼠禁食不禁水12h后摘眼球取血并脱颈椎处死。小鼠取血后离心得血清，并将其放于-80℃冰箱保存。采用Cell Sciences公司试剂盒测定小鼠血清脂多糖结合蛋白(LBP)含量。取小鼠盲肠内容物，采用DNA提取试剂盒(QIAGEN，QIAamp DNA Stool Mini Kit)提取小鼠肠道菌群DNA。提取后的DNA以341F(5'-CCTACGGGRSGCAGCAG-3')和806R(5'-GGACTACCAGGGTATCTAAT-3')为引物对16S rDNA的V3-V4区进行扩增，所得16S rRNA利用Illumina HiSeq2500高通量测序平台进行基因测序。测序完成后，将所得Reads进行拼接与质控，以97％相似度为标准进行聚类分析，得到OTU(operational taxonomic unit)。根据每个OTU中Reads的条数得到OTU丰度表，基于该OTU丰度表进行物种组成分析及β-多样性分析(包括PCA分析)。
(2)动物实验结果
如图2所示(图2A为雄性小鼠肠道菌群结构PCA分析，图2B图为雌性小鼠肠道菌群结构PCA分析)，在高、低剂量下，浒苔硫酸多糖均可显著改变雌雄小鼠肠道菌群结构。由图3可知(图3A为各组小鼠肠道菌群物种多样性Chao1指数分析图，Chao1指数数值越大，物种多样性越高；图3B为各组小鼠肠道菌群物种丰度(Observed species)分析图，Observedspecies数值越大，物种丰度越高；图3C为各组小鼠肠道菌群物种物种多样性Shannon指数分析图，Shannon指数数值越大，物种多样性越高，以上数据采用one-way ANOVA进行统计学分析，a：*P<0.05vs MN组；b：*P<0.05vs FN组)，高低剂量浒苔硫酸多糖均能显著增加雌雄小鼠肠道菌群物种多样性及物种丰度。研究发现，肠道菌群物种多样性及物种丰度降低可以引起菌群紊乱并导致机体产生疾病。在本实验中，浒苔硫酸多糖可以显著增加雌雄小鼠肠道菌群物种多样性及物种丰度。上述研究表明，浒苔硫酸多糖对肠道菌群具有正面有益的调节作用。
如图4所示(图4A为各组小鼠肠道菌群门水平组成分析，图4B图为各组小鼠肠道菌群属水平组成分析)，在雄鼠体内，浒苔硫酸多糖可以增加肠道拟杆菌门(Bacteroidetes)及变形菌门(Proteobacteria)含量，降低厚壁菌门(Firmicutes)及疣微菌门(Verrucomicrobia)含量；而在雌鼠体内，浒苔硫酸多糖则降低肠道拟杆菌门(Bacteroidetes)及变形菌门含量，升高厚壁菌门及疣微菌门含量。上述结果表明，浒苔硫酸多糖在门水平对雌雄小鼠的肠道菌群具有不同的影响。在属水平，给予浒苔硫酸多糖后，具有清除肠道中的有害细菌的巴讷斯拉菌Barnesiella的含量在雌雄小鼠体内均显著增加，而Bacteroides及Clostridium XIVa等有害菌的含量则显著降低。为了进一步研究浒苔硫酸多糖的肠道菌群调节作用，我们采用LEfSe方法对各组小鼠的肠道菌群结构组成进行细致分析。
由图5和图6的LEfSe分析结果可知，浒苔硫酸多糖在不同分类学水平上均可对小鼠肠道菌群产生影响。此外，在雌鼠体内，浒苔硫酸多糖可以显著增加肠道双歧杆菌(Bifidobacterium spp.)及Akkermansia muciniphila含量；在雄鼠体内，浒苔硫酸多糖可以显著增加肠道乳酸杆菌(Lactobacillus spp.)含量。
由图7分析可知，小鼠给予浒苔硫酸多糖后，双歧杆菌(Bifidobacterium spp.)及Akkermansia muciniphila含量可以增加3倍，而乳酸杆菌(Lactobacillus spp.)含量则增加35倍。Akkermansia muciniphila是近年来肠道菌群研究的热点菌株，因其具有良好的抗炎(中国专利申请公开号：104918626A)、抗肥胖(中国专利申请公开号：105106245A)、降血糖(中国专利申请公开号：105030841A)和降血脂(中国专利申请公开号：106535907A)等作用，Akkermansia muciniphila正作为新一代益生菌进行开发。本研究首次发现各种绿藻硫酸多糖可以作为新型益生元，能促进双歧杆菌、乳酸杆菌，尤其是Akkermansiamuciniphila的生长，这对拓展绿藻硫酸多糖的应用范围具有重要意义。
如图8所示(图8A为雌鼠体重变化分析，图8B为雄鼠体重变化分析，图8C为雌鼠累计饮食量分析，图8D图为雄鼠累计饮食量分析，图8E图为雌雄各组小鼠血清脂多糖结合蛋白LBP含量分析，所有数据采用one-way ANOVA进行统计学分析(a：*P<0.05vs MN组；b：*P<0.05vs FN组)。浒苔硫酸多糖可以显著降低雌鼠体内血清脂多糖结合蛋白(LBP)的含量，提示肠道菌群代谢产生的脂多糖入血减少，表明药物对肠道菌群具有正面有益的调节作用。此外，浒苔硫酸多糖可以进一步降低小鼠体重及小鼠饮食量，上述研究结果进一步证实浒苔硫酸多糖的益生元活性及其对肠道菌群的正面调节作用。
实施例结果表明，本发明所述绿藻硫酸多糖可以调节肠道菌群结构，提高肠道菌群物种多样性及其丰度，能明显增加小鼠肠道益生菌，尤其是乳酸杆菌(Lactobacillusspp.)、双歧杆菌(Bifidobacterium spp.)及Akkermansia muciniphila的含量，且在50～100mg/kg/day剂量下，连续口服4周后，显著降低血清脂多糖(LBP)含量，并有明显的减轻体重作用。另外，本发明所述的绿藻硫酸多糖资源丰富、无毒副作用，能有效提高肠道有益菌含量，可作为益生元，以及因各种疾病所致肠道菌群紊乱的药物和食品添加剂。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。
Claims (9)
1.一种绿藻硫酸多糖，其特征是，绿藻硫酸多糖的分子量为3～600kDa，硫酸根含量为5～35wt％，其余为多糖；多糖中主要含有鼠李糖、葡萄糖醛酸和葡萄糖，鼠李糖含量为20～60wt％，葡萄糖醛酸含量为5～20wt％，葡萄糖含量为0～30wt％，鼠李糖的连接方式为4)Rha(α1→、3)Rha(α1→及2)Rha(α1→，葡萄糖醛酸以β构型糖苷键存在。
2.按照权利要求1所述的绿藻硫酸多糖，其特征是，多糖中还含有木糖、半乳糖和甘露糖；优选的，按重量百分比计，多糖的组成和含量如下：鼠李糖含量为40～60wt％，葡萄糖醛酸含量为5～20wt％，葡萄糖含量为0～30wt％，木糖含量为3～14wt％，半乳糖含量为1～3wt％，甘露糖含量为1～3wt％。
3.按照权利要求1所述的绿藻硫酸多糖，其特征是，绿藻硫酸多糖是以绿藻为原料，经脱脂、热水提取，浓缩，氧化剂脱色，有机溶剂沉淀、干燥而得。
4.按照权利要求3所述的绿藻硫酸多糖，其特征是，绿藻是指石莼(Ulva clathrata)，孔石莼(Ulva pertusa)，浒苔(Enteromorpha prolifra)，条浒苔(Enteromorphaclathrata)，缘管浒苔(Enteromorpha linza)，砺菜(Ulva conglobata)，礁膜(Monostromanitidum)或囊礁膜(Monostroma angicava)。
5.按照权利要求3所述的绿藻硫酸多糖，其特征是，氧化剂是指双氧水或次氯酸钠或二氧化氯。
6.按照权利要求3所述的绿藻硫酸多糖，其特征是，有机溶剂是指乙醇或丙酮或异丙醇。
7.按照权利要求3所述的绿藻硫酸多糖，其特征是，绿藻硫酸多糖的制备过程如下：
(1)将绿藻烘干粉碎至粒度为40至100目，烘干所得的浒苔粉与有机溶剂按照1:5～15质量比例在70～90℃水浴中搅拌脱脂1～2小时，冷却至室温后，减压过滤收集残渣，重复脱脂2～3次，残渣烘干备用；
(2)将干燥残渣按照1:15～25质量比例加入蒸馏水，在90～100℃水浴中搅拌提取1～3小时，冷却至室温后，在3000～5000r/min下离心10～30min，收集上清液，残渣继续重复提取2～3次，合并提取液，经旋转蒸发浓缩后，在40～60℃水浴中加入氧化剂进行氧化脱色2～5小时，去除残余氧化剂后，加入4～6倍质量95wt％纯度的食品级乙醇，离心收集沉淀，经减压干燥后获得绿藻硫酸多糖。
8.一种权利要求1至7之一所述的绿藻硫酸多糖作为益生元在提高肠道有益菌增殖中的应用，其特征在于，绿藻硫酸多糖对肠道菌群进行调节，提高肠道菌群物种多样性及丰度；明显增加肠道益生菌乳酸杆菌(Lactobacillus spp.)、双歧杆菌(Bifidobacteriumspp.)及具有提高免疫功能细菌Akkermansia muciniphila的含量。
9.一种权利要求1至7之一所述的绿藻硫酸多糖作为益生元在提高肠道有益菌增殖中的应用，其特征在于，绿藻硫酸多糖作为益生元，以及因各种疾病所致肠道菌群紊乱调节药物和食品添加剂。
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