JP2016537307A - ハスカップ果実抽出物を有効成分として含む、甲状腺疾患の予防又は治療用薬学的組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
実施例1−1:水溶媒を用いた熱水抽出法
中国の黒竜江省地域で直接収穫したハスカップ(Lonicera caerulea L. car. edulis)果実を乾燥させて実験に用いた。
実施例1−1と同様に粉砕されたハスカップ果実100gに1リットルの25%エチルアルコールを加えて十分に攪拌し、次いで加熱して80〜90℃を保持する抽出温度で3時間還流抽出した。次いで、濾液を分離し、55〜65℃に生薬抽出物を減圧濃縮し、その後凍結乾燥させて生薬組成物粉末エキス19.5gを得た。
実施例1で製造した熱水抽出物又は熱水エチルアルコール混合抽出物を蒸留水に溶解し、それをマウス(1群当たり10匹)にそれぞれ500mg/kg投与し、その後7日間観察して死亡したマウスがないことから、細胞毒性がないことが明らかになった。
甲状腺機能低下症、甲状腺炎又は甲状腺結節を有する3人の志願者を対照にハスカップ果実抽出物(3g)を1日2回服用させた。各志願者の情報及び服用前後の結果は次の通りである。
(1)志願者1:女性,39才
ア.服用前の症状
・甲状腺機能低下症による疲労感と無気力症を訴える
・T4(Thyroxine) 4.98(低い)
・TSH(Thyroid-stimulating hormone) 19.17(高い)
イ.服用後
・30日間服用後にFree T4 1.33(正常)、TSH 1.97(正常)に回復した
(2)志願者2:女性,49才
ア.服用前の症状
・甲状腺機能低下症による浮腫と慢性疲労症状
・Free T4 0.85(低い),TSH 100(高い)
イ.服用後
・30日間服用後にFree T4 1.51(正常)、TSH 0.918(正常)に回復した
(3)志願者3:女性,60才
ア.服用前の症状
・甲状腺に散発的な結節が見られる甲状腺炎,悪性腫瘍
イ.服用後
・1年間服用後に甲状腺の左右両葉の結節が減少して悪性腫瘍が消えた
・T3(tri-iodothyronine) 1.34(正常),Free T4 1.29(正常),TSH 0.973(正常)
(1)甲状腺機能亢進症の動物モデルの作製
ア.実験動物
総150匹のMale SPF.VAF Outbred−Rats,Crl:CD[Sprague-Dawley, SD]ラット(6週齢,OrientBio,Seungnam,Korea)を準備し、8日間実験室環境に馴化させてから体重が一定のラット(平均233.70±10.47g,217〜252g)を選定して1群当たり8匹ずつ、計56匹を実験に用いた。本実験における全ての実験動物は大邱韓医大学校実験動物倫理委員会の動物倫理基準に従って取り扱い、事前に承認を得て実験を行った。
従来の公知の方法(非特許文献7など)により、LT4(levothyroxine)を投与することにより甲状腺機能亢進症動物モデルを作製した。具体的には、3mgのLT4を10mlの生理食塩水に溶解させ、1ml/kgの用量で1日1回ずつ27日間にわたって毎日前記動物モデルの背頸部皮下に注射することにより甲状腺機能亢進症を誘発した。一方、正常対照群においては、LT4の代わりに同一用量の生理食塩水のみ同一方法で同一期間投与した(図1)。
ア.実験物質の投与
前述したように作製した甲状腺機能亢進症動物モデルを対照に、実施例1−1で製造したハスカップ果実抽出物(BH)500、250及び125mg/kgをそれぞれ滅菌蒸留水に溶解させ、5ml/kgの用量でLT4処理開始12日後から15日間1日1回ずつ強制経口投与した。
LT4を投与した対照群においては、LT4投与11日後からLT4を投与しない正常対照群に比べて有意な体重減少を示した。
aは、最少有意差検定法(LSD法)により正常対照群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
bは、LSD法によりLT4処理対照群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
cは、LSD法によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
dは、Mann-Whitney検定法(MW検定法)により正常対照群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
最終屠殺日に全ての実験動物の左側甲状腺を摘出・分離した後、重量を測定して絶対重量(absolute weight)とし、体重の変化に伴う二次的変化を最小限に抑えるために、体重に対する甲状腺絶対重量の割合である相対重量(relative thyroid gland weights = (Absolute kidney weight / Body weight at sacrifice) × 100)を算出した。
aとbは、LSD法により正常対照群と比較したとき、それぞれ<0.01、p<0.05であることを示す。
cとdは、LSD法によりLT4処理対照群と比較したとき、それぞれ<0.01、p<0.05であることを示す。
eは、LSD法 によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、p<0.05であることを示す。
fとgは、MW検定法により正常対照群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
hとiは、MW検定法によりLT4処理対照群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
eは、LSD法によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、p<0.05であることを示す。
jとkは、MW検定法によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
Radioimmunoassay法(非特許文献8)に従って、血清中のTSH、T3及びT4含有量を、それぞれCoat A count Total TSH、T3又はT4 kit(DPC, CA, USA)を用いて、Gamma count Cobra II(Packard Co., IL, USA)にてng/ml又はμg/ml単位で測定した。
aとbは、LSD法により正常対照群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
cとdは、LSD法によりLT4処理対照群と比較したとき、p<0.01、p<0.05であることを示す。
eとfは、LSD法によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
LT4を投与した対照群においては、LT4を投与しない正常対照群に比べて甲状腺全体の厚さ及び甲状腺濾胞上皮の厚さが有意に薄いことと、濾胞直径が有意に増加したことが確認された。これは、濾胞内におけるコロイド物質の蓄積による甲状腺萎縮所見を示唆するものである。
aとbは、LSD法により正常対照群と比較したとき、それぞれp<0.01、 p<0.05であることを示す。
cとdは、LSD法によりによりLT4処理対照群と比較したとき、p<0.01、p<0.05であることを示す。
eとfは、LSD法によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
gは、MW検定法により正常対照群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
hは、MW検定法によりLT4処理対照群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
iは、MW検定法によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
(1)甲状腺機能低下症の動物モデルの作製
ア.実験動物
実験動物は実験例3で用いたものと同一である。
従来の公知の方法(非特許文献9,10,11)により、PTU(Propylthiouracil)を投与することにより甲状腺機能低下症動物モデルを作製した。具体的には、100mgのPTUを10mlの生理食塩水に溶解させ、1ml/kgの用量で1日1回ずつ28日間にわたって毎日前記動物モデルの背頸部皮下に注射することにより甲状腺機能低下症を誘発した。一方、正常対照群においては、PTUの代わりに同一用量の生理食塩水のみ同一方法で同一期間投与した(図5)。
ア.実験物質の投与
前述したように作製した甲状腺機能低下症動物モデルを対照に、実施例1−1で製造したハスカップ果実抽出物(BH)500、250及び125mg/kgをそれぞれ滅菌蒸留水に溶解させ、5ml/kgの用量でPTU処理2週間前から42日間1日1回ずつ強制経口投与した。一方、比較群であるスイカズラ熱水抽出物(LF)も滅菌蒸留水に溶解させ、250mg/kgを同一方法で同一期間経口投与した。
一般に、甲状腺機能低下症においては甲状腺ホルモン分泌の不足により代謝が遅延し、異化作用が減少して組織内の糖タンパク質が沈着するので体重増加が起こることが知られているが、甲状腺機能低下症による体重増加を補償するためにレプチン(leptin)の分泌が増加し、結果として食欲が低下し、エネルギー代謝率が上昇することにより、体重減少が起こる(非特許文献12)。しかし、実験動物において10mg/kg以上のPTU投与は著しい体重減少を引き起こすことが知られているので(非特許文献8)、一般にPTU誘発性甲状腺機能低下症動物モデルにおいては著しい体重減少が起こるものと考えられる(非特許文献13)。
aは、LSD法により正常対照群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
bとcは、LSD法 によりPTU処理対照群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
jdとkは、MW検定法によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、それぞれp<0.01、 p<0.05であることを示す。
dとeは、MW検定法によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、それぞれp<0.01、 p<0.05であることを示す。
dとkは、MW検定法によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、それぞれp<0.01、 p<0.05であることを示す。
fは、MW検定法により正常対照群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
gは、MW検定法によりPTU処理対照群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
hは、MW検定法によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、 p<0.01であることを示す。
PTUを投与した対照群においては、PTUを投与しない正常対照群に比べて著しい甲状腺増大を示し、絶対及び相対甲状腺重量も有意に増加したことが確認された。
aとbは、LSD法により正常対照群と比較したとき、それぞれp<0.01、 p<0.05であることを示す。
cは、MW検定法によりPTU処理対照群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
dは、LSD法 によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
eは、MW検定法により正常対照群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
fとgは、MW検定法によりPTU処理対照群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
hは、MW検定法によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
PTUを投与した対照群においては、PTUを投与しない正常対照群に比べて血中のTSH含有量が有意に増加し、血中のT3及びT4含有量が有意に減少した。
aとbは、MW検定法により正常対照群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
cとdは、MW検定法によりPTU 対照群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
eとfは、MW検定法によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
PTUを投与した対照群においては、PTUを投与しない正常対照群に比べて甲状腺全体の厚さが増加し、平均甲状腺濾胞直径が有意に減少したことが確認された。これは、濾胞内におけるコロイド物質の減少による甲状腺増大所見を示唆するものである。
aとbは、LSD法により正常対照群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
cは、LSD法によりPTU処理対照群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
dとeは、LSD法によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
fは、MW検定法により正常対照群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
gは、MW検定法によりPTU処理対照群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
hは、MW検定法によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
ア.生殖器官の重量変化
PTUを投与した対照群においては、正常対照群に比べて睾丸及び副睾丸の著しい萎縮が認められ、睾丸、副睾丸及び前立腺の絶対及び相対重量の有意な減少が観察された。
aとbは、LSD法により正常対照群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
cは、LSD法によりPTU処理対照群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
dは、LSD法 によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
eは、 MW検定法により正常対照群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
fとgは、MW検定法によりPTU処理対照群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
hは、MW検定法によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
aとbは、LSD法により正常対照群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
cとdは、LSD法によりPTU処理対照群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
eとfは、LSD法によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
gとhは、MW検定法により正常対照群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
iとjは、MW検定法によりPTU処理対照群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
kとlは、MW検定法によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
PTUを投与した対照群においては、正常対照群に比べて血清中の濾胞刺激ホルモン(follicle stimulating hormone)レベルの増加、並びにテストステロン(testosterone)及びジヒドロテストステロン(Dihydrotestosterone, DHT)レベルの減少が有意に観察された。
aは、LSD法により正常対照群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
bとcは、LSD法によりPTU処理対照群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
dとeは、LSD法によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
fとgは、MW検定法により正常対照群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
hとiは、MW検定法によりPTU 対照群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
jとkは、MW検定法 によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
PTUを投与した対照群においては、正常対照群に比べて睾丸内の脂質過酸化の軽微な減少が観察され、睾丸内のH2O2レベルの増加、並びにSOD(Superoxide dismutase)及びCAT(Catalase)活性の減少が有意に観察された。
aは、LSD法 により正常対照群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
bは、LSD法によりPTU処理対照群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
cとdは、LSD法によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
eとfは、MW検定法により正常対照群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
gは、MW検定法によりPTU処理対照群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
hは、MW検定法によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
PTUを投与した対照群においては、正常対照群に比べて有意な(1)精細管の平均直径及びステージ(stage)I〜IIの精細管の割合の減少、(2)副睾丸頭部導管の平均直径の減少及び副睾丸導管の割合の増加、並びに(3)前立腺導管上皮の平均厚さの減少及び前立腺導管の割合の増加現象が観察された。
aは、LSD法により正常対照群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
bは、LSD法によりPTU処理対照群と比較したとき、p<0.01であることを示す。
cは、LSD法によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、 p<0.01であることを示す。
dとeは、MW検定法により正常対照群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
fとgは、MW検定法によりPTU処理対照群と比較したとき、それぞれp<0.01、p<0.05であることを示す。
hとjは、MW検定法によりLF250mg/kg投与群と比較したとき、 p<0.01であることを示す。
定量用検液は、均質に混合したハスカップ果実の抽出物(BH)1gを水50mlに添加して1時間超音波抽出し、孔径0.45μm以下のメンブランフィルターで濾過した。
実施例1で得られた熱水抽出物100mgをラクトース14.8mg、結晶性セルロース3mg、ステアリン酸マグネシウム0.2mgと共に混合した。混合物を適切な装置にてNo.5ゼラチンカプセルに充填した。
有効成分 100mg
ラクトース 14.8mg
結晶性セルロース 3mg
ステアリン酸マグネシウム 0.2mg
実施例1で得られた熱水抽出物100mgを含有する注射液剤は次の方法で製造した。実施例1で得られた熱水抽出物100mg、塩化ナトリウム600mg及びアスコルビン酸100mgを蒸留水に溶解させて100mlにした。この溶液を瓶に入れて120℃で30分間加熱して滅菌した。
有効成分 1000mg
塩化ナトリウム 6000mg
アスコルビン酸 1000mg
蒸留水 定量
大韓薬典製剤総則中の散剤の製造方法に従って下記の成分含有量で製造した。
1)1包中
有効成分抽出物(乾燥粉末) 100mg
ラクトース 100mg
タルク 10mg
2)1包中
有効成分の水溶性分画 100mg
ラクトース 100mg
タルク 10mg
大韓薬典製剤総則中の錠剤の製造方法に従って下記の成分含有量で製造した。
1)1錠中
有効成分抽出物(乾燥粉末) 100mg
トウモロコシデンプン 100mg
ラクトース 100mg
ステアリン酸マグネシウム 2mg
2)1錠中
有効成分の水溶性分画 100mg
トウモロコシデンプン 100mg
ラクトース 100mg
ステアリン酸マグネシウム 2mg
大韓薬典製剤総則中のカプセル剤の製造方法に従って下記の成分含有量で製造した。
1)1カプセル中
有効成分抽出物(乾燥粉末) 100mg
トウモロコシデンプン 100mg
ラクトース 100mg
ステアリン酸マグネシウム 2mg
2)1カプセル中
有効成分の水溶性分画 100mg
トウモロコシデンプン 100mg
ラクトース 100mg
ステアリン酸マグネシウム 2mg
大韓薬典製剤総則中の注射剤の製造方法に従って下記の成分含有量で製造した。
1)1アンプル中(2ml)
有効成分抽出物(乾燥粉末) 50mg
注射用滅菌蒸留水 適量
pH調節剤 適量
2)1アンプル中(2ml)
有効成分の水溶性分画 50mg
注射用滅菌蒸留水 適量
pH調節剤 適量
大韓薬典製剤総則中の液剤の製造方法に従って下記の成分含有量で製造した。
1)100ml中
有効成分抽出物(乾燥粉末) 1mg
異性化糖 10g
マンニトール 5g
精製水 適量
2)100ml中
有効成分の水溶性分画 100mg
異性化糖 10g
マンニトール 5g
精製水 適量
B PTU処理対照群ラット(PTU control rats)
C LT4 0.5mg/kg処理群ラット
D LF 250mg/kg処理群ラット
E BH 500mg/kg処理群ラット
F BH 250mg/kg処理群ラット
G BH 125mg/kg処理群ラット
Claims (9)
- ハスカップ(Lonicera caerulea L. car. edulis)果実抽出物を有効成分として含む、甲状腺疾患の予防又は治療用薬学的組成物。
- 前記ハスカップ果実抽出物は、水、有機溶媒又はそれらの混合溶媒を用いて抽出されたものである、請求項1に記載の組成物。
- 前記甲状腺疾患は、甲状腺機能低下症、甲状腺機能亢進症、甲状腺結節又は甲状腺炎である、請求項1に記載の組成物。
- 前記組成物は、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤、滅菌水溶液剤、非水性溶剤、凍結乾燥剤及び坐剤からなる群から選択されるいずれかの剤形を有する、請求項1に記載の組成物。
- 前記組成物は、甲状腺機能障害による生殖器損傷を抑制又は改善することができる、請求項1に記載の組成物。
- ハスカップ(Lonicera caerulea L. car. edulis)果実抽出物を有効成分として含む、甲状腺機能改善用の食品組成物。
- ハスカップ果実抽出物を甲状腺疾患疑い個体に投与するステップを含む、甲状腺疾患の改善又は治療方法。
- 甲状腺疾患の予防又は治療のための医薬品の製造におけるハスカップ果実抽出物の用途。
- 甲状腺疾患の予防又は改善のための食品の製造におけるハスカップ果実抽出物の用途。
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