KR101687760B1 - 남성 불임증의 예방 및 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 남성 불임증의 예방 및 치료용 약학 조성물 및 건강기능식품에 관한 것으로, 상세하게는 양파 껍질 추출물이 시험관내 사람 정자 운동 증진 효능 평가법 실험을 통하여 본 발명의 추출물이 정자 운동성을 증가시킴을 확인하였으며, 생체내 정계 정맥류 동물모델 평가법을 통하여 본 발명의 추출물이 정계 정맥류 유발군 중 시료 투여군의 정관에서 얻어진 정액에서 정자 운동성이 증가함을 확인하였고, 부고환에서 정사 수가 증가함을 확인함으로써, 양파 껍질 추출물이 남성 불임증의 예방 및 치료를 위한 약학 조성물, 건강기능식품 및 건강보조식품에 유용하게 이용될 수 있다는 것을 확인하였다.

Description

남성 불임증의 예방 및 치료용 조성물{COMPOSITION FOR PREVENTION AND TREATMENT OF MALE INFERTILITY}

본 발명은 남성 불임증의 예방 및 치료용 약학 조성물 및 건강기능식품에 관한 것으로, 상세하게는 정자의 활동성을 개선하고, 동시에 정자수를 증가시킴으로서 남성 불임증을 치료 및 예방하는 효과를 가진 양파에 대하여 양파의 껍질 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물에 관한 것이다.

남성 불임이란 적어도 1년 이상 정상적인 성생활을 하였음에도 남성 쪽 원인으로 아이를 출산하지 못하는 상태이다. 결혼한 부부의 15% 정도가 불임이고, 이 중 남성 쪽 원인은 40~60%로 여겨진다 (Korean society for Sexual Medicine and Andrology. Namseonggwahak. Seoul, Gunjachulpansa. 5-54, 161-163. (2003) ; The Korean Urological Association. Textbook of Urology. 3rd. SeoulGoryeouihak. 507-22. (2001)). 남성 불임은 남성 호르몬을 포함한 호르몬 문제, 독성물질 노출이나 감염 및 외상으로 고환에 생긴 문제, 정자의 문제, 정상적인 정자라 하더라도 배출되는 길이 비정상적인 경우 등의 이유로 발생할 수 있다(Saleh RA and Agarwal A. J Androl. 23, 737-52. (2002)).

불임 치료를 위해 의료 기관을 방문한 건강보험 환자는 2006년 14만 8천명에서 2010년 18만 4천명으로 5년간 약 3만 6천명이 증가 (24.4%)하였고, 연평균 증가율은 5.8%이다. 총 진료비는 2006년 143억원에서 2010년 203억원으로 5년간 약 60억원이 증가(42.0%)했고, 연평균 증가율은 9.4% 로서 매우 중요한 질환으로 인식되고 있다.

2010년 WHO의 기준에 의하면, 정액량은 1.5 (1.4 - 1.7) ml 이상, pH 7.2 이상, 정자수는 1500 (1200-1600)만/ml 이상, 전체 정자수/사정당 3900 (3300-4600)만 이상, 운동성은 40% (38-42%)이상, 진행운동성은 32% (31-34%), 모양은 정상 모양이 4% (3-4%) 이상, 생존력 58% (55-63%)을 정상으로 평가하며, 임신을 위해서는 정자의 운동성이 가장 중요한 역할을 한다고 알려졌다. (Cooper TG, Noonan E, von Eckardstein S, Auger J, Baker HW. 2009. World Health Organization reference values for human semen characteristics. Hum Reprod Update 16: 231-245).

현재까지 불임의 치료에 많은 발전이 있었지만 정자의 운동성을 향상시키는 남성불임치료제는 부재 상태이며, 임신을 향상시킬 수 있는 약물의 개발도 매우 저조한 편이다. 종래 기술에서는 내과적, 외과적 치료에도 불구하고 원인을 알 수 없이 정액의 질이 나쁜 남성에서 정액의 질을 향상시킬 수 있는 약물로 현재 L-carnitine이 사용되고 있으나 뚜렷한 효능을 보이지 못하고 있다.(Mark sigman, Stacy Glass, Janice Campagnone, John L. Reyor, Carnitine for the treatment of idiopathic asthenospermia: a randomized, double-blind, placebo-controlled trial, Fertility and Sterility Vol 85, No 5, 2006).

양파(Allium cepa)는 백합과(Liliaceae)에 속하며 우리나라에는 조선시대 말엽에 도입된 것으로 추정된다. 양파의 수분은 약 88~90%, 탄수화물은 6.8~10.0%로서 그 조성은 과당(fructose)이 많고, 포도당(glucose)과 설탕(sucrose)은 거의 같은 양이 포함되어 있으며 다당류도 많다. 그의 구성하는 당은 갈락토스(galactose), 아라비노스(arabinose), 리보스(ribose), 람노스(rhamnose) 등이 있으며 전분은 거의 함유되어 있지 않다.

또한 수용성 탄수화물 중 스코로도스(scorodose)라고 하는 과당무수물이 존재한다. 기타 알기닌, 인산, 구연산, 사과산 등이 있으며, 티올(thiol), 디메틸설피드(dimethyl disulfide), 디아릴-디설피드(diallyl-disulfide), 카페인산(caffeic aicd), 페룰산(ferulic acid), 시나핀 산(sinapic acid) 등을 함유하는 것으로 알려져 있다 (식품과학기술대사전, 2008.4.10., 광일문화사).

양파의 효능으로는 항산화 (특허 10-2011-0005097), 체중조절, 비만 예방 및 치료효과 (특허 제 10-2009-0056088), 아토피개선을 위한 면역조절 효능 (특허 제 10-2011-0079139) 등이 보고되었다. 그러나 상기문헌 어디에도 양파, 특히 양파의 껍질 추출물이 정자의 활동성개선 및 정자수 증가를 통한 남성 불임증의 치료 및 예방에 대해서 개시나 교시도 이루어진 문헌은 없다.

이에 본 발명자들은 남성 불임 치료제를 개발하고자 노력하던 중, 양파 껍질 추출물이 사람 정액의 운동성을 증가시킴을 시험관내 시험으로 확인 하였으며, 또한 생체내 정계 정맥류 동물모델에서 정자 수를 증가시킴을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

공개특허공보 제10-2012-0083767호(2012.07.26. 공개) 등록특허공보 제10-1026523호(2011.03.25. 등록) 등록특허공보 제10-1257435호(2013.04.17. 등록)

Cooper TG et al., Hum Reprod Update 16:231-245, 2009 Saleh RA et al., J Androl. 23:737-52. 2002

본 발명의 목적은 양파 껍질 추출물을 이용한 남성 불임증 치료 및 예방용 약학적 조성물을 제공하는데 있으며, 본 발명의 또 다른 목적은 양파 껍질 추출물을 이용한 남성 불임증 치료 및 예방용 식품 조성물을 제공하는데 있다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 남성불임증의 예방 및 치료용 약학 조성물은 양파 껍질 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.

여기서, 상기 양파 껍질 추출물은 겉껍질로부터 구심방향으로 겉껍질을 포함하여 1 내지 3겹 부위의 껍질에서 추출되는 것이 바람직하다.

또한, 상기 양파 껍질 추출물은 전체 수용액 중량에 대하여 30 내지 95 중량%의 에탄올이 함유되는 에탄올 수용액을 이용하여 추출되는 것이 바람직하다.

상기 남성 불임증은 무정자증, 감정자증, 약정자증 및 기형정자증에서 선택되는 하나 이상의 정자 관련 불임증인 것이 바람직하다.

한편, 본 발명의 남성불임증의 예방 및 개선용 건강기능식품은 양파 껍질 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.

여기서, 상기 건강기능식품은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제, 현탁액, 에멀젼, 시럽제, 티백제, 침출차 또는 건강 음료 형태 등인 것이 바람직하다.

또한, 본 발명의 남성불임증의 예방 및 개선용 건강보조식품은 양파 껍질 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 양파 껍질 추출물은 사람의 정자 운동성을 증가시키고, 정자 수가를 증가시킴으로써, 남성 불임증의 예방 및 치료를 위한 약학 조성물, 건강기능식품 및 건강보조식품에 유용하게 이용될 수 있는 효과가 있다.

도 1은 양파 껍질 추출물에 의한 사람정액에서의 정자 수와 운동성에 대한 효과를 나타낸 그래프이다 (control 은 대조군, onion 은 양파껍질 추출물 투여군을 의미함).
도 2는 양파 껍질 추출물의 정계 정맥류 동물 모델의 정관에서의 정자 운동성에 대한 효과를 나타낸 그래프이다 (CTR; Control, OP; Operation을 의미하고, OP+100, OP+200의 경우 수술후 양파 껍질 추출물을 각각 100 mg/kg, 200mg/kg 으로 투여한 군을 의미함).
도 3은 양파 껍질 추출물의 정계 정맥류 동물 모델의 고환에서 정자수에 대한 효과를 나타낸 그래프이다 (CTR; Control, OP; Operation을 의미하고, OP+100, OP+200의 경우 수술후 양파 껍질 추출물을 각각 100 mg/kg, 200mg/kg 으로 투여한 군을 의미함).

본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.

본 발명의 남성 불임증 치료 및 예방용 약학 조성물은 상술한 바와 같은 목적을 달성하기 위하여 양파 껍질 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 양파 껍질 추출물은 양파의 황색 겉껍질로부터 구심방향으로 3겹 까지 추출할 수 있다.

또한, 상기 양파 껍질 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로, 바람직하게는 물 또는 물 및 에탄올 혼합용매, 보다 바람직하게는 물 및 에탄올 혼합용매로 추출 할 수 있다.

또한, 상기 양파 추출물은 정자 운동성 증가 효과를 가질 수 있다.

또한, 상기 양파 껍질 추출물은 정자수 증가 효과를 가질 수 있다.

또한, 상기 남성불임증은 무정자증(정액에 정자가 없는 경우), 감정자증(정자의 수가 2000만마리 이하인 경우), 약정자증(정자의 운동성이 있는 비율이 40%이하) 및 기형정자(정상 정자의 형태가 4% 이하)(Korean society for sexual medicine and andrology, Textbook of andrology, 2010) 등을 포함하며, 바람직하게는, 정자와 관련된 모든 불임증을 포함한다.

한편, 본 발명의 남성불임증의 예방용 건강기능식품은 양파 껍질 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다. 본 발명의 양파 껍질 추출물은 하기와 같은 통상의 추출과정을 통하여 수득될 수 있다.

상기 양파를 세척 후 겉껍질을 포함하여 1-3겹 부위를 사용하며, 추출을 위한 용매는 물, C1 내지 C5의 저급알콜 및 그 혼합물로 이루어진 군에서 선택된다. 본 발명자들은 양파 껍질을 물로 씻어 이물질 및 염분을 제거하고 건조한 후,

전체 수용액 중량에 대하여 30 내지 95 중량%의 에탄올이 함유된 에탄올 수용액을 양파 껍질 시료 중량 대비 5 내지 50배의 양 (예를 들어, 양파껍질 1kg을 추출 한다면, 전체 수용액 중량에 대하여 30 내지 95 중량%의 에탄올이 함유된 에탄올 수용액 5ℓ 내지 50ℓ를 사용)을 사용하여 50 내지 95 ℃에서 1 시간 내지 7 일 동안 추출하는 과정을 2 내지 5 회, 바람직하게는 3 회 반복 수행한 다음 감압농축 및/또는 동결건조하여 양파 껍질 추출물을 수득할 수 있다 (Harborne. J.B., Phytochemical medthods : A guide to modern techniques of plant analysis, 3rd Ed., pp.6-7, 1998).

상기에서 수득된 양파껍질 추출물은 사람정액의 정자수와 운동성 변화에 미치는 영향을 알아보기 위한 시험관내 (In vitro) 정자 운동 증진 효능 평가법 실험을 통하여 본 발명의 시료들이 정자 운동성을 증가시킴을 확인하였으며, 생체내 (In Vivo) 정계 정맥류 동물모델에서의 정자수와 운동성 변화에 미치는 영향을 알아보기 위하여 생체내 (In Vivo) 정계 정맥류 동물모델 평가법을 통하여 본 발명의 시료들이 정계 정맥류 유발군 중 시료 투여군의 정관에서 얻어진 정액에서 정자 수가 증가함을 확인하여 남성 불임증의 예방 및 치료를 위한 약학 조성물 및 건강기능식품을 제공가능하다.

본 발명에 따른 남성불임증의 예방 및 치료용 약학 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물 0.1 내지 99 중량%를 포함한다.

본 발명의 양파 껍질 추출물을 포함하는 약학 조성물은 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 추출물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용될 수도 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수도 있다.

본 발명에 따른 추출물을 포함하는 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 및 광물유를 들 수 있다.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.

경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.

경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁액, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수용성제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween), 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서 본 발명의 추출물은 1일 0.0001 내지 10 g/㎏, 바람직하게는 0.01 내지 1 g/㎏으로 투여되는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명은 또한 상기 양파껍질 추출물을 포함하는 정자 운동 증진제를 제공하며, 이러한 정자 운동 증진제는 체외수정시 수정율을 향상시키기 위한 것이다. 본 발명은 또한 상기 출물을 포함하는 정자 운동 증진의 남성 불임 치료제로서 여성용 질정 및 질세정제, 그리고 질삽입제를 제공한다. 본 발명은 또한 체외수정시 수정율을 향상시키기 위하여 상기 추출물을 포함하는 체외수정용 정자보관용 첨가제를 제공한다.

본 발명은 남성불임증의 예방 효과를 나타내는 상기 추출물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 건강기능식품을 제공한다.

양파 껍질 추출물을 첨가할 수 있는 건강기능식품으로는 예를 들어, 각종 일반식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제 등이 있다.

또한, 상기 양파 껍질 추출물은 남성불임증의 예방 효과를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 기능성 음료 조성물은 100 g을 기준으로 0.02 내지 5 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 필수 성분으로서 상기 명시된 함량범위의 상기 추출물을 함유하는 것 이외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등의 추가 성분을 더 함유할 수 있다.

상술한 천연 탄수화물의 예로는 모노사카라이드, 예를 들어 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토오스, 수크로오스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 솔비톨, 에리스리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제인 타우마틴, 스테비아 추출물, 예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등; 및 합성 향미제, 예를 들어 사카린, 아스파르탐 등을 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 함량은 본 발명의 조성물 100 g당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.

상기 외에 본 발명의 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 및 천연 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.

그밖에 본 발명의 추출물들은 천연 과일 주스, 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분들은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이때, 첨가제의 비율은 그다지 중요하지는 않지만 본 발명의 추출물 100 중량부 당 0.01 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 바람직하다.

이하, 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 또한, 하기의 설명에서는 구체적인 구성요소 등과 같은 많은 특정사항들이 설명되어 있는데, 이는 본 발명의 보다 전반적인 이해를 돕기 위해서 제공된 것일 뿐 이러한 특정 사항들 없이도 본 발명이 실시될 수 있음은 이 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게는 자명하다 할 것이다. 그리고, 본 발명을 설명함에 있어서, 관련된 공지 기능 혹은 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.

실시예

실시예 1: 양파 껍질 추출물의 제조

무안에서 구입한 양파를 잘 씻고 건조한 후 겉껍질을 포함한 양파껍질 3겹 까지 부위를 1,000g에 70% 에탄올 5ℓ를 넣고 환류 냉각 하면서 80℃ 에서 2시간 2회 반복하여 추출한 후, 여과하고 감압 조건하에서 농축하였다. 농축된 여과물은 감압 조건하에서 냉동 건조기로 동결 건조하여 15.2g (1.52%)의 추출물 분말을 얻어 4℃에서 보관하였다. 실험에 사용하기 전, 건조된 추출물을 생리식염수에 녹이고 실온에서 2분간 격렬하게 섞었다.

시험예 1 : 양파 껍질 추출물의 정자 운동 증진 효능 측정

상기 실시예의 시료의 사람정액의 정자수와 운동성 변화에 미치는 영향을 알아보기 위하여 문헌에 기재된 시험관내 (In vitro) 정자 운동 증진 효능 평가법을 이용하여 하기와 같이 실험을 수행하였다 (Martin Blomberg Jensen, Poul J.Bjerrum, Torben E.Jessen, John E. Nielsen, Ulla N.Joensen, et al. (2011) Vitamin D is positively associated with sperm motility and increases intracellular calcium in human spermatozoa. Human Reproduction, Vol.26, No.6 pp. 1307-1317). 불임으로 내원한 환자로부터 얻은 정액에서 정자의 수, 운동성을 측정하고 한 시간 동안 37℃의 인큐베이터에 넣은 후, 정액이 충분히 액화되면 200μl의 정액에 20μl의 시료 추출물을 넣어 최종 농도를 2mg/ml가 되도록 한 후에 1시간, 2시간 및 3시간 후의 정자의 운동성을 챔버 (MAKLER counting chamber; MAKLER counting chamber; self-Medical Instruments, Haifa, Israel)를 사용하여 현미경(Axiovert25, ZEISS, USA)으로 측정하였다.

대조군으로는 3H 완충액 {Hams F-10(N6635,Sigma Chemical Co., USA) + 0.4% HAS(A1653,Sigma Chemical Co., USA) + 12mM HEPES (H4034,Sigma Chemical Co., USA) [3H, pH 7.4]}을 사용하였으며, 시료들도 3H 완충액을 사용하여 녹인 후에 pH를 7.4로 맞춘 후, 원심분리기(centrifuge; A32010(1), LABOGENE)를 사용하여 원심분리(13,000rpm, 2min, 4℃)하여 상등액을 수득하여 사용하였다.

정자 운동성은 하기 수학식 1에 따라 계산되었다.

[수학식 1]

정자 운동성 (percentage of motility) = (운동성 정자의 평균 수(A: the mean number of motile sperm) / 전체 정자 수(B: total number of sperms)) ×100%

도 1에 도시된 바와 같이, 불임으로 내원한 환자로부터 얻은 정액에서 정자의 수, 운동성을 측정한 결과 대조군은 시간이 지날수록 정자의 운동성이 감소되었으나, 양파 껍질 추출물을 투여한 경우 대조군에 비하여 시간이 경과됨에 따라 운동성을 증가 시켰다.

시험예 2 : 정계 정맥류 동물모델을 통한 양파껍질 추출물의 효력 평가

상기 실시예의 시료들의 생체내 (In Vivo) 정계 정맥류 동물모델에서의 정자수와 운동성 변화에 미치는 영향을 알아보기 위하여 문헌에 기재된 생체내 (In Vivo) 정계 정맥류 동물모델 평가법을 이용하여 하기와 같이 실험을 수행하였다 (Zhang LT, Kim HK, Choi BR, Zhao C, Lee SW, Jang KY, et al.(2014) Analysis of testicular-internal spermatic vein variation and the recreation of varicocoele in a Sprague-Dawley rat model. Andrology. 2, 466-73).

실험동물은 생후 9주 된 300~350g 스프래그 다우리 (Sprague-Dawley) 흰쥐를 코아텍(㈜KOATECH, 한국의 평택)에서 제공받아 1주일간의 적응기간을 거친 뒤, 플라스틱 케이지에 4마리씩 사육하였다. 사육장은 인공조명에 의하여 아침 7시부터 저녁 7시까지 12시간으로 조절하였으며, 실내온도는 18~23℃와 40~60%의 습도를 유지하고 정수된 식수와 사료를 자유롭게 먹게 하였다.

케타민 (Ketamine) 50mg/kg 및 자일라진 (Xylazine) 25mg/kg으로 상기 스프래그 다우리 흰주를 복강마취 후, 복부정중절개를 통하여 좌측신장으로 접근한 후에 대정맥과 연접한 좌신정맥(renal vein)을 노출시켰다. 좌신정맥과 평행하게 0.85mm 프로브 (probe)를 대고 5.0 Nylon으로 결찰을 시도한 후 상기 프로브 (probe)를 제거하여 신정맥의 직경을 50%로 감소시키고, 내정계정맥 (internal spermatic vein;ISV) 분지(branch)를 결찰하여 실험군으로 만든 뒤에 4주 경과한 후에 시료를 생리 식염수에 녹여 경구 투여하였다.

좌신정맥을 부분 결찰하여 정계정맥류를 유발시킨 정계 정맥류 수술군과 정상 대조군에 대해 수술 후 28일 (대조군은 안정후 28일) 후부터 28일간 시료 또는 생리식염수 2 ml (정상 대조군: 생리식염수 2 ml/day, 양파껍질 추출물 100 mg/kg/2ml/day, 양파껍질 추출물)을 매일 복용시킨 후에 체중을 확인하고, 전신 마취하에 정관을 제거하여 정관 속 및 부고환 에서의 정자의 운동성 및 정자 수를 측정하고 양측고환, 부고환의 무게를 각각 비교하였다.

도 2에 도시된 바와 같이, 정관에서의 정자의 운동성이 생리식염수 투여군에서는 65.68 ± 15 % 였으나 수술후에는 25.26 ± 8.98 %로 감소하였다. 양파 껍질 추출물을 100 mg/kg 과 200 mg/kg 으로 투여 하였을 때 정자의 운동성은 각각 50.88±11%와 50.34±18.85 로 급격히 증가 하는 것으로 나타나 정자운동 증진 효능이 탁월한 것으로 확인되었다.

또한, 도 3에 도시된 바와 같이, 투여 후 28일에 부고환에서의 정자의 수를 측정한 결과, 정계 정맥류 유발군 중 양파껍질 추출물 투여군의 부고환에서 얻어진 정액에서 정자 수가 증가함을 관찰하였다. 정계 정맥류 유발군 중 생리 식염수 투여군에서는 정관 정액의 정자 수가 19.60±8.98 x 106/ml이었으나 100 및 200 mg/kg/2ml/day의 양파껍질 추출물에 의해서는 정자 수가 각각 24.95±10.59 x 106/ml 및 37.06±12.29 x 106/ml으로 대폭 증가함을 관찰하였다.

아래에 본 발명의 추출물을 포함하는 약학 조성물 및 건강기능식품의 제제예를 설명하나, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1 : 산제의 제조

양파 껍질 추출물 분말 20 ㎎

유당 100 ㎎

탈크 10 ㎎

상기의 성분들을 혼합하고, 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

제제예 2 : 정제의 제조

양파 껍질 추출물 분말 10 ㎎

*옥수수 전분 100 ㎎

유당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

제제예 3 : 캅셀제의 제조

양파 껍질 추출물 분말 10 ㎎

결정성 셀룰로오스 3 ㎎

락토오스 14.8 ㎎

마그네슘 스테아레이트 2 ㎎

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

제제예 4 : 주사제의 제조

양파 껍질 추출물 분말 10 ㎎

만니톨 180 ㎎

주사용 멸균 증류수 2794 ㎎

Na2HPO412H2O 26 ㎎

통상의 주사제 제조방법에 따라 1 앰플 (2 ㎖)당 상기의 성분 함량으로 제조하였다.

제제예 5 : 액제의 제조

양파 껍질 추출물 분말 10 ㎎

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적당량

통상의 액제 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고, 레몬향을 적당량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 후 정제수를 가하여 전체를 100 ㎖로 조절하고 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조하였다.

제제예 6 : 건강 음료의 제조

양파 껍질 추출물 분말 10 ㎎

비타민 C 15 g

비타민 E(분말) 100 g

젖산철 19.75 g

산화아연 3.5 g

니코틴산아미드 3.5 g

비타민 A 0.2 g

비타민 B1 0.25 g

비타민 B2 0.3 g

물 적당량

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85 ℃에서 교반 가열 후, 만들어진 용액을 여과하고 멸균된 2 ℓ의 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관하여 본 발명에 따른 건강음료 조성물 제조에 사용하였다. 상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층이나 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

이상에서는 본 발명의 바람직한 실시예에 대해서 설명하였으나, 본 발명은 상술한 특정의 실시예에 한정되지 아니하며, 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본원 발명의 요지를 벗어남이 없이 다양한 변형 실시가 가능함은 물론이다. 따라서, 본 발명의 범위는 위의 실시예에 국한해서 해석되어서는 안되며, 후술하는 특허청구범위 뿐만 아니라 이 특허청구범위와 균등한 것들에 의해 정해져야 할 것이다.

Claims (6)

1. 양파 껍질 추출물을 유효성분으로 함유하고,
   상기 양파 껍질 추출물은 겉껍질로부터 구심방향으로 겉껍질을 포함하여 1 내지 3겹 부위의 껍질에서 추출되는 것을 특징으로 하는 남성불임증의 예방 및 치료용 약학 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 양파 껍질 추출물은 전체 수용액 중량에 대하여 30 내지 95 중량%의 에탄올이 함유되는 에탄올 수용액을 이용하여 추출되는 것을 특징으로 하는 남성불임증의 예방 및 치료용 약학 조성물.
   
3. 제1항에 있어서,
   상기 남성 불임증은 무정자증, 감정자증, 약정자증 및 기형정자증에서 선택되는 하나 이상의 정자 관련 불임증인 것을 특징으로 하는 남성불임증의 예방 및 치료용 약학 조성물.
   
4. 양파 껍질 추출물을 유효성분으로 함유하고,
   상기 양파 껍질 추출물은 겉껍질로부터 구심방향으로 겉껍질을 포함하여 1 내지 3겹 부위의 껍질에서 추출되는 것을 특징으로 하는 남성불임증의 개선용 건강기능식품.
   
5. 제4항에 있어서,
   상기 건강기능식품은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제, 현탁액, 에멀젼, 시럽제, 티백제, 침출차 또는 건강 음료 형태인 것을 특징으로 하는 건강기능식품.
   
6. 양파 껍질 추출물을 유효성분으로 함유하고,
   상기 양파 껍질 추출물은 겉껍질로부터 구심방향으로 겉껍질을 포함하여 1 내지 3겹 부위의 껍질에서 추출되는 것을 특징으로 하는 남성불임증의 개선용 건강보조식품.

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