JP2016536005A5

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Info

Publication number: JP2016536005A5
Application number: JP2016543983A
Authority: JP
Filing date: 2014-09-18
Publication date: 2017-11-02
Anticipated expiration: 2034-09-18

Description

本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明、および特許請求の範囲から明らかとなる。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
治療剤に対するがん細胞の感受性を予測する方法であって、
ａ）試験細胞集団をＢＨ３ドメインペプチドと接触させるステップ；
ｂ）該試験細胞集団におけるＢＨ３ドメインペプチドにより誘導されたミトコンドリア外膜透過化の量を測定するステップ；および
ｃ）該治療剤と接触していない対照細胞集団に対して、該試験細胞集団におけるＢＨ３ドメインペプチドにより誘導されたミトコンドリア外膜透過化の前記量を比較するステップ
を含み、該対照細胞集団と比較した該試験細胞集団におけるミトコンドリア膜透過化の増大は、該細胞が該治療剤に感受性であることを示す、方法。
（項目２）
前記細胞が、前記ＢＨ３ドメインペプチドと接触する前に透過化される、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記ミトコンドリア外膜透過化が、ｉ）電位差測定用色素の発光またはｉｉ）ミトコンドリア膜間スペースからの分子の放出を測定することによって判定される、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
透過化された前記細胞を電位差測定用色素と接触させるステップをさらに含む、項目２に記載の方法。
（項目５）
前記電位差測定用色素が、ＪＣ−１またはジヒドロローダミン１２３である、項目４に記載の方法。
（項目６）
透過化された前記細胞をチトクロムＣまたはＳＭＡＣ／Ｄｉａｂｌｏに対する抗体と接触させるステップをさらに含む、項目２に記載の方法。
（項目７）
透過化された前記細胞を細胞内または細胞外マーカーに対する抗体と接触させるステップをさらに含む、項目１から６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
ミトコンドリア外膜透過化を測定する前に、前記細胞集団を固定するステップをさらに含む、項目１から７のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
前記細胞集団が、固体表面上に固定される、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記ＢＨ３ドメインペプチドが、ＢＩＤ、ＢＩＭ、ＢＡＤ、ＢＩＫ、ＮＯＸＡ、ＰＵＭＡ、ＢＭＦ、またはＨＲＫポリペプチドのＢＨ３ドメインに由来する、項目１から９のいずれか一項に記載の方法。

Claims

治療剤に対するがん細胞の感受性を予測する方法であって、
ａ）試験細胞集団をＢＨ３ドメインペプチドと接触させるステップ；
ｂ）該試験細胞集団におけるＢＨ３ドメインペプチドにより誘導されたミトコンドリア外膜透過化の量を測定するステップ；および
ｃ）該ＢＨ３ドメインペプチドと接触していない対照細胞集団に対して、該試験細胞集団におけるＢＨ３ドメインペプチドにより誘導されたミトコンドリア外膜透過化の前記量を比較するステップ
を含み、該対照細胞集団と比較した該試験細胞集団におけるミトコンドリア外膜透過化の増大は、該細胞が該治療剤に感受性であることを示す、方法。
前記試験細胞集団が、前記ＢＨ３ドメインペプチドと接触する前に透過化される、請求項１に記載の方法。
前記ミトコンドリア外膜透過化が、ｉ）電位差測定用色素の発光またはｉｉ）ミトコンドリア膜間スペースからの分子の放出を測定することによって判定される、請求項１または２に記載の方法。
前記試験細胞集団を電位差測定用色素と接触させるステップをさらに含む、請求項３に記載の方法。
前記電位差測定用色素が、ＪＣ−１またはジヒドロローダミン１２３である、請求項４に記載の方法。
前記試験細胞集団をチトクロムＣまたはＳＭＡＣ／Ｄｉａｂｌｏに対する抗体と接触させるステップをさらに含む、請求項３に記載の方法。
前記試験細胞集団を細胞内または細胞外マーカーに対する抗体と接触させるステップをさらに含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
ミトコンドリア外膜透過化を測定する前に、前記試験細胞集団を固定するステップをさらに含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
前記試験細胞集団が、固体表面上に固定される、請求項１に記載の方法。
前記ＢＨ３ドメインペプチドが、ＢＩＤ、ＢＩＭ、ＢＡＤ、ＢＩＫ、ＮＯＸＡ、ＰＵＭＡ、ＢＭＦ、またはＨＲＫポリペプチドのＢＨ３ドメインに由来する、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
前記ミトコンドリア膜間スペースからの分子の放出が、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）によって測定される、請求項３に記載の方法。
前記ミトコンドリア膜間スペースからの分子の放出が、前記ミトコンドリア膜間スペースからの分子およびミトコンドリアマーカーの細胞内染色によって判定される、請求項３に記載の方法。
前記試験細胞集団を核染色で対比染色するステップをさらに含む、請求項１２に記載の方法。
前記固定が、アルデヒド固定を含む、請求項８に記載の方法。
前記固定の後に前記試験細胞集団を透過化するステップをさらに含む、請求項８に記載の方法。
前記透過化が、メタノールまたはトリトンｘ−１００を用いた透過化を含む、請求項１５に記載の方法。