JP2016535020A - 安定した水性抗体製剤 - Google Patents

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Abstract

本発明は、安定した水性抗体製剤に関する。いくつかの実施形態では、安定した水性製剤は、約２ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ５Ｒ抗体、および約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０を含む。このような抗体製剤を製造する方法、および使用する方法もまた提供される。【選択図】なし

Description

本発明は、安定した水性抗体製剤に関する。いくつかの実施形態では、安定した水性製剤は、約２ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体、および約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０を含み、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。このような抗体製剤を製造する方法、および使用する方法もまた提供される。
抗体は、それらの標的認識特異性のために、様々な疾患および病状の治療で使用され、それによって全身投与に続いて非常に選択的な成果をもたらす。抗体が有効性を保つために、それらは、製造、精製、輸送、および保存中にそれらの生物学的活性を維持しなくてはならない。製造される大量の高純度モノクローナル抗体を提供するための、新しい製造および精製技術が開発されている。しかしこれらの抗体を輸送および保存のために安定化させるという難題が依然として存在し、投与に適した剤形で抗体を提供するという、なおもさらにより大きな難題も存在する。
変性、凝集、混入、および粒子形成は、抗体の製剤と保存における著しい障害であり得る。幅広い多様な抗体があるために、全ての抗体の保存に適する普遍的な配合または条件はない。抗体の保存に適する最適配合および条件は、抗体に特異的であることが多い。したがって、抗体保存配合および方法は、市販の抗体のための研究および開発過程の顕著な一部であることが多い。
抗体安定性と関連する難題を克服するための様々な方法が提案されている。例えば、場合によっては、抗体は、頻繁に凍結乾燥され、次に投与の直前に再構成される。しかし再構成は、投与過程に追加的なステップを付け加え、製剤に汚染物質を導入し得るため、概して理想的ではない。それに加えて、再構成された抗体でさえも、凝集および粒子形成の問題を抱え得る。したがって、輸送および保存と関連する難題を克服し得る、安定した水性抗体製剤を提供する必要性が存在する。
本発明は、（ａ）約２ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体、および（ｂ）約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０を含む、安定した水性抗体製剤を対象とし、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗体製剤は、非荷電賦形剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、非荷電賦形剤は、トレハロースである。いくつかの実施形態では、非荷電賦形剤の濃度は、約２０ｍＭ〜約８０ｍＭである。いくつかの実施形態では、非荷電賦形剤の濃度は、約２００ｍＭ〜約４００ｍＭである。
抗体は、様々な濃度で存在し得る。いくつかの実施形態では、製剤は、約２〜約２０ｍｇ／ｍｌの抗体を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約２０〜約１００ｍｇ／ｍｌの抗体を含む。一実施形態では、製剤は、３０ｍｇ／ｍｌの抗体を含む。
製剤は、アルギニンをさらに含み得る。いくつかの実施形態では、アルギニンは、Ｌ−アルギニンである。いくつかの実施形態では、製剤は、約１００ｍＭ〜約２００ｍＭのＬ−アルギニンを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１２０ｍＭ〜約１４０ｍＭのＬ−アルギニン、および約４０ｍＭ〜約６０ｍＭの非荷電賦形剤を含む。一実施形態では、製剤は、約１２５ｍＭのＬ−アルギニンを含む。一実施形態では、製剤は、約１３０ｍＭのＬ−アルギニンを含む。
いくつかの実施形態では、製剤は、ヒスチジンをさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒスチジン濃度は、約１５ｍＭ〜約３０ｍＭである。一実施形態では、ヒスチジン濃度は、約２０ｍＭである。
いくつかの実施形態では、抗体は凍結乾燥されていない。
いくつかの実施形態では、本発明は、約２ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体を含む、安定した水性抗体製剤を対象とし、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、前記製剤は、約４０℃で少なくとも１ヶ月間の保存時に安定している。いくつかの実施形態では、製剤は、約２５℃で少なくとも３ヶ月間の保存時に安定している。いくつかの実施形態では、製剤は、約５℃で少なくとも１８ヶ月間の保存時に安定している。いくつかの実施形態では、約４０℃で少なくとも１ヶ月間保存された抗体は、保存されていない参照抗体と比較して、ＩＬ−５Ｒポリペプチドとの結合能力の少なくとも８０％を保つ。いくつかの実施形態では、約５℃で少なくとも６ヶ月間保存された抗体は、保存されていない参照抗体と比較して、ＩＬ−５Ｒポリペプチドとの結合能力の少なくとも８０％を保つ。いくつかの実施形態では、約４０℃で少なくとも１ヶ月間保存された抗体は、保存されていない参照抗体と比較して、ＩＬ−５Ｒポリペプチドとの結合能力の少なくとも９５％を保つ。いくつかの実施形態では、約５℃で少なくとも６ヶ月間保存された抗体は、保存されていない参照抗体と比較して、ＩＬ−５Ｒポリペプチドとの結合能力の少なくとも９５％を保つ。いくつかの実施形態では、約４０℃で少なくとも１ヶ月間の保存時に、ＨＰＳＥＣによる判定による判定で、２％未満の抗体が凝集を形成する。いくつかの実施形態では、約５°で少なくとも１２ヶ月間の保存時に、ＨＰＳＥＣによる判定で、２％未満の抗体が凝集を形成する。
いくつかの実施形態では、製剤は、約４０℃で少なくとも１ヶ月間の保存時に、目視検査による判定で粒子を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、製剤は、約５℃で少なくとも１２ヶ月間の保存時に、目視検査による判定で粒子を実質的に含まない。
いくつかの実施形態では、製剤は注射用製剤である。いくつかの実施形態では、製剤は静脈内、皮下、または筋肉内投与に適する。
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載されるような抗体製剤を含有する、密封容器を対象とする。いくつかの実施形態では、本発明は、適切な容器内に本明細書に記載されるような抗体製剤を含む、ヒトへの非経口投与に適する医薬単位用量剤形を対象とする。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、静脈内、皮下、または筋肉内投与される。いくつかの実施形態では、適切な容器は、プレフィルドシリンジである。いくつかの実施形態では、プレフィルドシリンジは、針を含む。いくつかの実施形態では、針は、２９Ｇ肉薄(thin wall)針である。いくつかの実施形態では、プレフィルドシリンジは、プラスチックシリンジまたはガラスシリンジである。いくつかの実施形態では、プレフィルドシリンジは、タングステンを実質的に含まない材料からできている。
いくつかの実施形態では、プレフィルドシリンジは、シリコーンで被覆されている。いくつかの実施形態では、プレフィルドシリンジは、フルオロポリマー樹脂ディスクを有するプランジャーを含む。いくつかの実施形態では、プレフィルドシリンジは、（ａ）約２ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの抗体、および（ｂ）約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０を含み、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態では、プレフィルドシリンジは、（ｃ）約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのトレハロース、および（ｄ）約１１０ｍＭ〜約１５０ｍＭのＬ−アルギニンをさらに含む。いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）約２０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体、および（ｂ）約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０を含む、プレフィルドシリンジを対象とし、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、（ｃ）約２００ｍＭ〜約３００ｍＭのトレハロースをさらに含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される製剤、本明細書に記載される容器、本明細書に記載される単位用量剤形、または本明細書に記載されるプレフィルドシリンジを含む、キットを対象とする。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）約２ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０、（ｃ）約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのトレハロース、（ｄ）約１１０ｍＭ〜約１５０ｍＭのＬ−アルギニン、および（ｅ）約１５〜約３０ｍＭのヒスチジンを含む、安定した水性抗体製剤を対象とし、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。一実施形態では、本発明は、（ａ）約２ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）約０．００６％のポリソルベート２０、（ｃ）約５０ｍＭのトレハロース、（ｄ）約１３０ｍＭのＬ−アルギニン、および（ｅ）約２０ｍＭのヒスチジンを含む、安定した水性抗体製剤を対象とし、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）約２０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０、（ｃ）約２００ｍＭ〜約３００ｍＭのトレハロース、および（ｄ）約１５〜約３０ｍＭのヒスチジンを含む、安定した水性抗体製剤を対象とし、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。一実施形態では、本発明は、（ａ）約２０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）約０．００６％のポリソルベート２０、（ｃ）約２５０ｍＭのトレハロース、および（ｄ）約２０ｍＭのヒスチジンを含む、安定した水性抗体製剤を対象とし、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。別の実施形態では、本発明は、（ａ）約３０ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）約０．００６％のポリソルベート２０、（ｃ）約２５０ｍＭのトレハロース、および（ｄ）約２０ｍＭのヒスチジンを含む、安定した水性抗体製剤を対象とし、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む抗体を約１ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬに精製するステップと、（ｂ）単離抗体を安定化配合に入れて、安定した水性抗体製剤を形成するステップであって、得られた安定した水性抗体製剤が、（ｉ）約２ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体、および（ｉｉ）約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０を含む、ステップとを含む、安定した水性抗体製剤を製造する方法を対象とする。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む抗体を約１ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬに精製するステップと、（ｂ）（ｉ）約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０、（ｉｉ）約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのトレハロース、および（ｉｉｉ）約１１０ｍＭ〜約１５０ｍＭのＬ−アルギニンを含む溶液中に、抗体を約２ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの抗体に希釈するステップとを含む、安定した水性抗体製剤を製造する方法を対象とする。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む抗体を約１ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬに精製するステップと、（ｂ）（ｉ）約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０、および（ｉｉ）約２００ｍＭ〜約３００ｍＭのトレハロースを含む溶液中に、抗体を約２０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体に希釈するステップとを含む、安定した水性抗体製剤を製造する方法を対象とする。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗体を含む再構成された抗体製剤を作成する方法を対象とし、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、方法は、（ａ）細胞培養物から抗体を精製するステップと；（ｂ）単離抗体を凍結乾燥するステップと；（ｃ）凍結乾燥抗体を水溶液に添加して、再構成された抗体製剤を形成するステップであって、前記再構成された抗体製剤が、（ｉ）約２ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体、および（ｉｉ）約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０を含む、ステップとを含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗体を含む抗体製剤を対象とし、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、抗体製剤は、粒子を本質的に含まない。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、抗体を含み、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、抗体製剤は、活性グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を本質的に含まない。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、ＧＳＴを本質的に含まない。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、３８〜４２℃での保存時に、少なくとも１ヶ月間にわたり粒子を本質的に含まない。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、２〜６℃での保存時に、少なくとも６ヶ月間にわたり粒子を本質的に含まない。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、２〜６℃での保存時に、少なくとも１８ヶ月間にわたり粒子を本質的に含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗体を精製する方法を対象とし、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、方法は、（ａ）抗体を含む細胞培養物を得るステップと、（ｂ）抗体にアフィニティクロマトグラフィーを実施するステップと、（ｃ）抗体にカチオン交換を実施するステップと、（ｄ）抗体に混合モードクロマトグラフィーを実施するステップとを含む。いくつかの実施形態では、方法は、ウイルス不活性化処理および／または透析濾過処理をさらに含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、対象において肺疾患または障害治療する方法であって、本明細書に記載される抗体製剤、本明細書に記載される容器、本明細書に記載される単位用量剤形、または本明細書に記載されるプレフィルドシリンジの治療有効量を投与するステップを含む、方法を対象とする。いくつかの実施形態では、肺疾患または障害は、好酸球性疾患または障害である。いくつかの実施形態では、肺疾患または障害は、喘息、ＣＯＰＤ、好酸球性喘息、混合型好酸球性・好中球喘息、アスピリン感受性喘息、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、急性および慢性好酸球性気管支炎、急性および慢性好酸球性肺炎、チャーグ・ストラウス症候群、過好酸性症候群、薬物・刺激物・放射線誘発性肺好酸球増加症、感染誘発性肺好酸球増加症（真菌、結核、寄生生物）、自己免疫関連肺好酸球増加症、好酸球性食道炎、クローン病、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、肺疾患または障害は、喘息である。いくつかの実施形態では、肺疾患または障害は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である。
抗ＩＬ５Ｒ抗体のアミノ酸配列である。 溶液中のモノマー割合に対する、ポリソルベート２０の効果を表す。モノマーレベルを完全に維持するには、０．００５％を超えるポリソルベート濃度が要求される。 ２ｇ／Ｌ溶液中の肉眼不可視粒子数に対する、ポリソルベート２０の効果を表す。粒子＞２μｍのデータは示されないが、より大型の粒子と同様のパターンを示す。データは、２ｇ／Ｌ溶液中の肉眼不可視粒子レベルが、ポリソルベートのいかなるレベルによっても制御されないことを示唆する。 １００ｇ／Ｌ溶液中の肉眼不可視粒子数に対する、ポリソルベート２０の効果を表す。粒子＞２μｍのデータは示されないが、より大型の粒子と同様のパターンを示す。データは、０．００３％を超えるポリソルベートレベルが、１００ｇ／Ｌ溶液中の肉眼不可視粒子レベルを制御することを示唆する。 溶液ｐＨおよびタンパク質濃度の関数としてのＨＰＬＣモノマー（％）およびその他（％）の結果である。モノマー損失は、５．５〜６．５のｐＨ範囲で最小化される。 肉眼不可視粒子＞１０μｍを含めた粒子形成は、ＭＦＩによって測定され、可視粒子は、溶液ｐＨおよびタンパク質濃度の関数として、標準物質との比較によって評価される。肉眼不可視粒子数は、タンパク質濃度に左右されるが、ｐＨについては明らかな傾向を示さない。５．５〜６．５のｐＨ範囲では、より低濃度のタンパク質溶液中に、より多くの可視粒子が観察される。 シリコーン油滴を除去するためにアスペクト比フィルターされた、肉眼不可視粒子数＞１０μｍ。データは、配送直後と、２５℃で１ヶ月間の保存後のＳＶＰ数を比較する。高いカウントは、ＰＳ−２０とは無関係に、低タンパク質濃度で見られる。 様々なタンパク質濃度および製剤に関する、疑似輸送後のＭＦＩによる粒子数＞１０μｍ。イオン強度がより高い製剤はより安定しており、トレハロース製剤≧１０ｇ／Ｌについても同様である。 ２ｇ／Ｌのタンパク質および異なる配合の疑似輸送後における、ＭＦＩによる粒子数＞１０μｍ。アルギニン濃度は＞５０ｍＭであるべきであり、ＮａＣｌ濃度は＞７５ｍＭであるべきである。 ２ｇ／Ｌタンパク質および異なる配合の疑似輸送後における、ＭＦＩによる粒子数＞１０μｍ。この範囲内の任意の賦形剤濃度が許容される。 ２ｇ／Ｌのタンパク質および異なる配合の疑似輸送後における、ＭＦＩによる粒子数＞１０μｍ。 バイアルおよびプレフィルドシリンジ内の２ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、および１００ｍｇ／ｍＬの製剤について、モノマー損失が示される。全てのＰＦＳは、バイアルと、および互いに同様の損失を示す。 図１２−１の続きである。 切分けストラテジーのグラフ表示が示される。青色は、アルギニンまたはＮａＣｌ含有製剤を示す。緑色は、トレハロース製剤を示す。データ点は、調製されたサンプルであり、線は、中程度の用量を得るために利用できる、切り分けオプションを示す。 安定性試験＃２のための試験計画。標識された試験は全て、抗体製剤に対して実施される。黄色の影付けは、試験がプラセボに対して実施されることを示す。「ＡＢＣ」という表記は、以下の試験の実施を示す：効力（ＢＩＯＡＳＳＡＹ）、ＲＰ−ＨＰＬＣ、ｃＩＥＦ、非還元ＢｉｏＡｎａｌｙｚｅｒ、および還元ＢｉｏＡｎａｌｙｚｅｒ。 双方の配合区分について、タンパク質およびポリソルベート２０（「ＰＳ−２０」）濃度の関数としての設計空間を画定するために調製されたサンプルを示すグラフである。 ＭＦＩによる配送後０時間目の肉眼不可視粒子のグラフである。結果は、ＰＳ−２０が存在しなければ粒子が形成するが、配送時の粒子形成を阻害するのには、０．００２％のＰＳ−２０で十分であることを示す。 可視粒子観察は出現基準に対してスコアされ、ここでは９ヶ月の時点が示される。観察は、光の非常に近くで行われた。示されるサンプルには、トレハロース製剤を含有するプレフィルドシリンジ（「ＰＦＳ」）（図３Ａ）、トレハロース製剤を含有するバイアル（図３Ｂ）、アルギニン製剤を含有するＰＦＳ（図３Ｃ）、およびアルギニン製剤を含有するバイアル（図３Ｄ）が含まれる。データは、ＰＦＳ内の０．００６％のＰＳ−２０標的と、０．００２〜０．０１％のＰＳ−２０の許容範囲を支持する。バイアルは、最悪例の比較として示される。 図１７−１の続きである。 可視粒子と相関させて、サンプル時間に伴う増大を捕捉するための様々なＳＶＰ法を比較する。フローサイトメトリー、およびＭＦＩによる小型粒子（＞１および＞２μｍ）カウントは、傾向を良好に捕捉できる。 は、ＰＦＳ（図５Ａ）およびバイアル（図５Ｂ）内のトレハロース製剤に対する、外観標準スコアと、ＭＦＩ結果（粒子＞１μｍ）との比較である。２つの方法で良好な一致が観察され、どちらもＰＳ−２０の許容範囲が０．００２〜０．０１％であることを示す。 実施例３で概説されるような区分設計、およびＡＢＣで実施されるリードロット安定性試験を表す。オレンジ色の網掛け領域はアルギニン製剤を示し、青色網掛け領域はトレハロース製剤を示し、全てに０．００６％のＰＳ−２０が添加されている。 抗体精製工程の概略図の一例を表す。 抗ＩＬ５Ｒ抗体の精製で使用されるプロテインＡカラムの通過画分の２Ｄゲル分析を表す。
本明細書に示され記載される特定の実装は例であり、本出願の範囲をどのようにも限定しないものと理解される。本明細書に記載される本発明の実施形態および特性のそれぞれは、あらゆる全ての方法で併用し得るものと理解される。
本明細書で参照される公開特許、特許出願、ウェブサイト、企業名、および学術文献は、それぞれが具体的かつ個別に参照によって援用されると示されるのと同程度に、その内容全体を参照によって本明細書に援用する。本明細書で参照されるあらゆる参考文献と、本明細書の特定の教示間のあらゆる矛盾は、本教示を支持して解決されるものとする。同様に、当該技術分野で理解される語または語句の定義と、本明細書で具体的に教示される語または語句の定義の間のあらゆる矛盾は、本教示を支持して解決されるものとする。
本明細書の用法では、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、内容が明確に指示しない限り、それが言及する用語の複数形もまた具体的に包含する。
本開示全体にわたり、百分率、比率などの全ての表現は、特に断りのない限り、「重量基準」である。本明細書の用法では、「重量基準」は、「質量基準」という用語と同義であり、本明細書で定義される比率または百分率が、容積、厚さ、またはその他の尺度でなく、重量に準拠することを示す。
「約」という用語は、本明細書では、およそ、範囲、大体、または前後を意味するために使用される。数値範囲に関連して「約」という用語が使用される場合、それは記載される数値の上下の境界を延長することで、範囲を修飾する。一般に「約」という用語は、規定値の上下の数値を１０％の差異で修飾するために、本明細書で使用される。
本明細書で使用される技術的および科学的用語は、特に断りのない限り、本出願が関係する技術分野の当業者によって通常理解される意味を有する。本明細書では、当業者に知られている様々な方法論および材料に言及する。その各開示内容全体を参照によって本明細書に援用する、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，”２ｎｄ Ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８９）；Ｋａｕｆｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．，“Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，”ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ（１９９５）；およびＭｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ｅｄ．，“Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，”ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ（１９９１）をはじめとする標準的基準研究が、組み換えＤＮＡ技術の一般的原理を記載している。
本発明は、安定した水性抗体製剤を対象とする。本明細書に記載される「抗体製剤」という用語は、１つまたは複数の抗体分子を含む組成物を指す。本発明の「抗体」という用語は、特に限定的でない。明確さのために、「抗体」はその最も広い意味で解釈され、あらゆる免疫グロブリン（Ｉｇ）、その活性変異体または所望の変異体、およびその活性断片または望ましい断片（例えばＦａｂ断片、ラクダ科動物抗体（一本鎖抗体）、およびナノボディ）を含む。「抗体」という用語はまた、二量体または多量体をも指し得る。抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナルであり得、天然にまたは組み換え的に生成され得る。したがってヒト、非ヒト、ヒト化、およびキメラ抗体は、全て「抗体」という用語に包含される。典型的に、抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＡクラスの１つのモノクローナル抗体であり、より典型的には、ＩｇＧまたはＩｇＡのモノクローナル抗体である。
本発明の抗体は、鳥および哺乳類をはじめとする、あらゆる動物起源であり得る。いくつかの実施形態では、本発明の方法の抗体は、ヒト、マウス（例えばマウスおよびラット）、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、またはニワトリである。本明細書の用法では、「ヒト」抗体としては、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体が挙げられ、ヒト免疫グロブリンライブラリーから単離された抗体、または１つまたは複数のヒト免疫グロブリンで組み換えられて内在性免疫グロブリンを発現しない動物から単離された抗体が含まれる。例えばＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらに付与された、米国特許第５，９３９，５９８号明細書を参照されたい。
本発明の抗体としては、例えば、天然抗体、無処理モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つの無処理抗体から生成される多特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、抗体断片（例えば１つまたは複数の抗原と結合しおよび／またはそれを認識する抗体断片）、ヒト化抗体、ヒト抗体（Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３（１９９３）；米国特許第５，５９１，６６９号明細書および米国特許第５，５４５，８０７号明細書）、抗体ファージライブラリーから単離される抗体群および抗体断片（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２−５５４（１９９０）；Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１０：７７９−７８３（１９９２）；Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２１：２２６５−２２６６（１９９３））が挙げられる。本発明の方法によって精製される抗体は、Ｎ−またはＣ末端で、異種ポリペプチドと組み換え的に融合し得、またはポリペプチドまたはその他の組成物と化学的に結合し得る（共有結合および非共有結合を含む）。例えば本発明の方法によって精製される抗体は、検出アッセイ中で標識として有用な分子と、および異種ポリペプチド、薬剤、または毒素などのエフェクター分子と、組み換え的に融合または共役し得る。例えばＰＣＴ公開国際公開第９２／０８４９５号パンフレット；国際公開第９１／１４４３８号パンフレット；国際公開第８９／１２６２４号パンフレット；米国特許第５，３１４，９９５号明細書；および欧州特許第３９６，３８７号明細書を参照されたい。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体製剤は、抗ＩＬ５受容体（抗ＩＬ５Ｒ）抗体を含む。本発明の抗体は、関心のある抗原またはその断片と特異的に結合し、その他の抗原またはその断片とは特異的に結合しない。例えば抗ＩＬ５Ｒ抗体は、インターロイキン−５受容体ポリペプチドと免疫特異的に結合し、その他のポリペプチドとは特異的に結合しない。好ましくは、ＩＬ−５受容体と免疫特異的に結合する抗体または抗体断片は、その他のポリペプチドまたはその他のポリペプチド断片に対する親和性と比較して、ＩＬ−５受容体またはＩＬ−５受容体ポリペプチド断片に対してより高い親和性を有する。抗体の親和性は、単一抗原−抗体部位における特異的抗原に対する結合の尺度であり、本質的に、抗体の抗原結合部位と特定のエピトープとの間の相互作用に存在する、全ての引力および斥力の総和である。特定の抗原（例えばＩＬ−５ポリペプチドまたはＩＬ−５ポリペプチド断片）に対する抗体の親和性は、式、Ｋ＝［Ａｇ Ａｂ］／［Ａｇ］［Ａｂ］によって定義される平衡定数Ｋによって表されてもよく、それは抗体結合部位の親和性であり、式中、［Ａｇ］は遊離抗原の濃度であり、［Ａｂ］は遊離抗体の濃度であり、［Ａｇ Ａｂ］は抗原−抗体複合体の濃度である。抗原および抗体が共に強力に反応する場合、遊離抗原または遊離抗体は非常にわずかとなり、したがって抗体の平衡定数または親和性は高くなる。高親和性抗体は、抗原と抗体の間に良好な適合がある場合に見られる（抗体親和性の考察については、Ｓｉｇａｌ ａｎｄ Ｒｏｎｅｄ．，１９９４，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ−Ｂａｓｉｃ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．５６−５７；およびＳｅｙｍｏｕｒ ｅｔ ａｈ，１９９５，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−Ａｎ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ，ｐｐ．３１−３２を参照されたい）。好ましくは、ＩＬ−５ポリペプチドまたはその断片と免疫特異的に結合する抗体または抗体断片は、その他の抗原と交差反応しない。すなわち、その他のポリペプチドまたはその他のポリペプチド断片に対するよりも高いエネルギーで、ＩＬ−５ポリペプチドまたはその断片と免疫特異的に結合する抗体または抗体断片（例えば抗体特異性の考察については、Ｐａｕｌ ｅｄ．，１９８９，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２ｎｄ ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３３２−３３６を参照されたい）。ＩＬ−５ポリペプチドと免疫特異的に結合する抗体または抗体断片は、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）などの免疫測定法、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、およびＢＩＡｃｏｒｅアッセイ、または当業者に知られているその他の技術によって同定し得る（例えばインビボで抗体−抗原相互作用を判定するための様々なアッセイの考察については、Ｓｅｙｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ，１９９５，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−Ａｎ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ，ｐｐ．３３−４１を参照されたい）。ＩＬ−５ポリペプチドまたはその断片と免疫特異的に結合する抗体または抗体断片は、ＩＬ−５ポリペプチドのみと拮抗し、その他の活性とは顕著に拮抗しない。
一実施形態では、ＩＬ−５Ｒポリペプチドは、ヒトＩＬ−５Ｒ、その類似体、誘導体または断片である。ヒトＩＬ−５Ｒのヌクレオチド配列は、ＧｅｎＢａｎｋデータベースに見られる（例えば受入番号Ｍ９６６５２．１を参照されたい）。ヒトＩＬ−５Ｒのアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋデータベースに見られる（例えば受入番号Ｑ０１３４４を参照されたい）。これらの受入番号のそれぞれは、明示的に参照によって本明細書に援用する。
いくつかの実施形態では、抗体製剤は、例えばヒト抗ＩＬ５Ｒ抗体などの抗ＩＬ５Ｒ抗体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ５Ｒ抗体は、配列番号２を含む軽鎖と、配列番号４を含む重鎖とを含む。いくつかのさらなる実施形態では、抗ＩＬ５Ｒ抗体は、配列番号１を含む軽鎖可変領域と、配列番号３を含む重鎖可変領域とを含む。さらなる実施形態では、抗ＩＬ５Ｒ抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。当業者は、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、Ａｂｍ定義またはその他のＣＤＲを容易に同定し得る。
一実施形態では、抗ＩＬ５Ｒ抗体は、ベンラリズマブである。本明細書で提供される方法で使用するためのベンラリズマブ（またはその断片）に関する情報は、その開示の内容全体を参照によって本明細書に援用する、米国特許出願公開第２０１０／０２９１０７３Ａ１号明細書に見られる。
本明細書の用法では、抗体の文脈で「アナログ」または「抗体アナログ」という用語は、第２の抗体、すなわち抗体と同様または同一の機能を持つが、必ずしも抗体と同様または同一のアミノ酸配列を含まず、または抗体と同様または同一の構造を有しない、抗体アナログを指す。同様のアミノ酸配列を有する抗体とは、以下の少なくとも１つを満たす抗体アナログを指す：（ａ）抗体のアミノ酸配列と、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を有する抗体アナログ；（ｂ）少なくとも５連続アミノ酸残基、少なくとも１０連続アミノ酸残基、少なくとも１５連続アミノ酸残基、少なくとも２０連続アミノ酸残基、少なくとも２５連続アミノ酸残基、少なくとも４０連続アミノ酸残基、少なくとも５０連続アミノ酸残基、少なくとも６０連続アミノ残基、少なくとも７０連続アミノ酸残基、少なくとも８０連続アミノ酸残基、少なくとも９０連続アミノ酸残基、少なくとも１００連続アミノ酸残基、少なくとも１２５連続アミノ酸残基、または少なくとも１５０連続アミノ酸残基の抗体をコードするヌクレオチド配列と、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされる抗体アナログ；および（ｃ）抗体をコードするヌクレオチド配列と、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされる抗体アナログ。抗体と同様の構造がある抗体アナログとは、抗体と同様の二次、三次または四次構造を有するタンパク性作用物質を指す。抗体アナログまたは抗体の構造は、ペプチド配列決定、Ｘ線結晶構造解析、核磁気共鳴、円二色性、および結晶学的電子顕微鏡検査をはじめとするが、これに限定されるものではない、当業者に知られている方法によって判定し得る。
２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列の％同一性を判定するために、最適比較目的で配列を整列させる（例えば第２のアミノ酸または核酸配列との最適アラインメントのために、第１のアミノ酸配列または核酸配列の中にギャップを導入し得る）。次に対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド配列部位にある、アミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第１の配列中の位置が、第２の配列中の対応する位置と同一のアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占められる場合、分子はその位置において同一である。２つの配列間の％同一性は、配列により共有される同一位置数の関数である（すなわち％同一性＝同一重複位置数／位置総数×１００％）。一実施形態では、２つの配列は長さが同じである。
２つの配列間の％同一性の判定は、数学的アルゴリズムを使用しても達成し得る。２つの配列の比較のために利用される数学的アルゴリズムの非限定的一例は、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：２２６４−２２６８に記載され、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：５８７３−５８７７に記載されるように修正されている、アルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｈ，１９９０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれている。本発明の核酸分子と相同的なヌクレオチド配列を得るために、例えばｓｃｏｒｅ＝１００、ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ＝１２のＮＢＬＡＳＴヌクレオチドプログラムパラメータセットで、ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を実施し得る。本発明のタンパク質分子と相同的なアミノ酸配列を得るために、例えばｓｃｏｒｅ＝−５０、ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ＝３のＸＢＬＡＳＴプログラムパラメータセットで、ＢＬＡＳＴタンパク質検索を実施し得る。比較目的で、ギャップありアラインメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２に記載されるＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを利用し得る。代案としては、ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴを使用して、分子間の距離関係（Ｉｄ）を検出する反復サーチを実施し得る。ＢＬＡＳＴ、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ−ＢＬＡＳＴプログラムを使用する場合、それぞれのプログラムの（例えばＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴの）デフォルトパラメータを使用し得る（例えばＮＣＢＩウェブサイトを参照されたい）。配列比較のために利用される数学的アルゴリズムの別の好ましい非限定的例は、Ｍｙｅｒｓ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ，１９８８，ＣＡＢＩＯＳ ４：１１−１７のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを使用する場合、ＰＡＭ １２０ ｗｅｉｇｈｔ ｒｅｓｉｄｕｅ ｔａｂｌｅ、ｇａｐ ｌｅｎｇｔｈ ｐｅｎａｌｔｙ＝１２、およびｇａｐ ｐｅｎａｌｔｙ＝４を使用し得る。
いくつかの実施形態では、抗体製剤中の抗体は、抗体製剤に添加される前に精製される。「単離する」および「精製する」という用語は、例えば宿主細胞タンパク質を含む組成物など、抗体がその中にある組成物中の不純物またはその他の汚染物質からの抗体の分離を指す。いくつかの実施形態では、抗体から、少なくとも５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％（ｗ／ｗ）の不純物が浄化される。例えばいくつかの実施形態では、例えば抗ＩＬ５Ｒ抗体などの抗体の精製は、組成物中に元々存在する、９９％（ｗ／ｗ）の宿主細胞タンパク質からの抗体の分離を含むであろう。
いくつかの実施形態では、「単離する」、および「精製する」という用語は、例えば世界保健機関または米国食品医薬品局など、政府機関のガイドラインに一致する程度に、例えば抗ＩＬ５Ｒ抗体などの抗体を組成物中の不純物またはその他の汚染物質から分離することを指す。
抗体を精製する方法は、当業者に知られている。精製を実施するための適切な技術としては、アフィニティクロマトグラフィー、疎水性相互作用、イオン交換（カチオン交換クロマトグラフィーまたは混合モードクロマトグラフィーなど）などの様々なタイプのクロマトグラフィー、および濾過が挙げられる。
アフィニティクロマトグラフィーは、それによって抗体が、その特異的結合特性のために抗体に対する親和性リガンドと結合する、分離法を指す。機能的親和性リガンドは、抗体を含む組成物がリガンドおよび固体担体の上を通過すると、リガンドに対する特異的結合親和性を有する抗体がリガンドに吸着され、１つまたは複数のその他の不純物は吸着されずに（またはより低い親和力で結合して）、抗体から分離されるように、固体または半固体担体上に固定化し得る。典型的に結合しない（または十分に結合しない）不純物の例としては、処理関連不純物（例えば、宿主細胞タンパク質、ＤＮＡ、培地成分）およびいくつかの生成物関連不純物（例えば抗体断片）が挙げられる。いくつかの実施形態では、吸着された抗体をリガンドおよび担体から除去する前に、リガンドを含む固体担体を緩衝液で１回または複数回洗浄して、追加的な不純物を除去する。１つまたは複数の不純物が除去された後、吸着された抗体をリガンドおよび担体から除去（溶出）して、最初の組成物からの抗体の単離をもたらし得る。リガンドおよび担体から抗体を除去する方法は、リガンドに依存して、当業者に知られており、例えば、ｐＨ、添加またはカオトロピック剤または変性剤、あるいは市販の溶出緩衝液の添加などの環境変化が挙げられる。いくつかの実施形態では、抗体組成物に対して、２つ以上の親和性精製処理を用い得る。プロテインＡおよびプロテインＧ（およびそれらの組み合わせ）をはじめとする様々な親和性リガンドが、当該技術分野で公知である。固定化リガンドは、市販される。例えば、プロテインＡアフィニティシステムとしては、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｘｔｒａ、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ ＬＸ、Ｓｅｐａｈａｒｏｓｅ ＣＬ−４Ｂ、ＰｒｏＳｅｐ ｖＡ、ＰｒｏＳｅｐ ｖＡ Ｕｌｔｒａ、およびＣｅｒａｍｉｃ ＨｙｐｅｒＤが挙げられる。
イオン交換クロマトグラフィーとしては、カチオン交換クロマトグラフィーおよび混合クロマトグラフィーが挙げられる。カチオン交換クロマトグラフィーは、カチオン交換マトリックスを使用して、電荷の差に基づいて、抗体および数種の不純物を分離させ得る任意の方法を指す。カチオン交換マトリックスは、通常は、共有結合した負荷電基を含む。弱いまたは強力なカチオン交換樹脂を用いてもよい。通常、強力なカチオン交換樹脂は、ｐＨ次第でスルホン酸またはスルホネート基を含む、担持される有機基を含む。弱いカチオン交換体樹脂は、通常、ｐＨ次第でカルボン酸またはカルボキシレート基を含む、担持される有機基を含む。特定の実施形態では、追加的な結合機構、ならびに例えば水素結合相互作用および疎水性相互作用の１つまたは複数のイオン性相互作用を組み込んだ、マルチモーダルカチオン交換樹脂を利用し得る。適切なカチオン交換樹脂の例は、当該技術分野で周知であり、フラクトゲル、カルボキシメチル（ＣＭ）、スルホエチル（ＳＥ）、スルホプロピル（ＳＰ）、ホスフェート（Ｐ）およびスルホネート（Ｓ）、ＰＲＯＰＡＣ ＷＣＸ−１０（商標）（Ｄｉｏｎｅｘ）、Ｃａｐｔｏ Ｓ、Ｓ−セファロースＦＦ、フラクトゲルＥＭＤ ＳＯ3Ｍ、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ Ｍｅｇａｃａｐ ＩＩ ＳＰ ５５０Ｃ、Ｐｏｒｏｓ ５０ ＨＳ、およびＳＰ−セファロースマトリックスが挙げられるが、これに限定されるものではない。いくつかの実施形態では、組成物に対して、２つ以上のカチオン交換クロマトグラフィー処理を用い得る。
混合モードクロマトグラフィーは、不純物（例えば、宿主細胞タンパク質、ＤＮＡなどの処理関連不純物、および／または内在性または偶発性ウイルス）からの分析物の分離を達成するために、固定層と分析物間の相互作用の２つ以上の形態を利用する方法を指す。適切なアニオン交換マトリックスの例は、当該技術分野で公知であり、Ｃａｐｔｏ Ａｄｈｅｒｅ、Ｓａｒｔｏｂｉｎｄ Ｑ、Ｎａｔｒｉｘ Ｑ、Ｃｈｒｏｍａｓｏｒｂ Ｑ、およびＭｕｓｔａｎｇ Ｑが挙げられるが、これに限定されるものではない。
いくつかの実施形態では、追加的な濾過ステップを利用して、不純物を除去し得る。例えば、いくつかの実施形態では、ナノ濾過または限外濾過が使用される。ナノ濾過は、例えば、７５ｎｍ未満、５０ｎｍ未満、および未満１５ｎｍでさえある孔径を有するマトリックスを通して、組成物を通過させ、例えばウイルスなどの不純物を抗体から分離するステップを含む。用い得る市販のナノフィルターおよびウルトラフィルターは、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，Ｍａｓｓ．、例えば、Ｖｉｒｅｓｏｌｖｅ ＰｒｏおよびＶｉｒｅｓｏｌｖｅ Ｐｒｏ＋）、ＰａｌｌＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｅａｓｔ Ｈｉｌｌｓ，Ｎ．Ｙ．）、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）、およびＳａｒｔｏｒｉｕｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｇｏｅｔｔｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）などの様々な供給業者によって製造される。
いくつかの実施形態では、例えば、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む、抗ＩＬ５Ｒなどの本発明の抗体は、１ｍｇ／ｍｌ〜２００ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ〜３０ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ〜２５ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ〜２０ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、９ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１１ｍｇ／ｍｌ、１２ｍｇ／ｍｌ、１３ｍｇ／ｍｌ、１４ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、１６ｍｇ／ｍｌ、１７ｍｇ／ｍｌ、１８ｍｇ／ｍｌ、１９ｍｇ／ｍｌ、または２０ｍｇ／ｍｌで存在する。いくつかの実施形態では、例えば抗ＩＬ５Ｒなどの本発明の抗体は、約２０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌ、４５ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、５５ｍｇ／ｍｌ、６０ｍｇ／ｍｌ、６５ｍｇ／ｍｌ、７０ｍｇ／ｍｌ、７５ｍｇ／ｍｌ、８０ｍｇ／ｍｌ、８５ｍｇ／ｍｌ、９０ｍｇ／ｍｌ、９５ｍｇ／ｍｌ、または１００ｍｇ／ｍｌの濃度である。
本発明の抗体製剤は、非荷電賦形剤を含み得る。賦形剤という用語は、本明細書に記載される抗体と共に製剤化される、薬理学的不活性物質を指す。いくつかの実施形態では、賦形剤は、変性防止を促進し、または別の方法での抗体の安定化を促進し得る。医薬組成物で使用してもよい適切な賦形剤は、当該技術分野で公知である。例は、例えば手引き書Ｇｅｎｎａｒｏ，Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．：“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９９０にある。いくつかの実施形態では、賦形剤は、「非荷電」賦形剤であり、すなわち、陽性「＋」または陰性「−」電荷のどちらも保有しない賦形剤である。いくつかの実施形態では、賦形剤は、フルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、乳糖、マルトース、スクロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、可溶性デンプン、トレハロース、ソルビトール、エリスリトール、イソモルト、ラクチトール、マルチトール、キシリトール、グリセロール、ラクチトール、ヒドロキシエチルデンプン、水溶性グルカンからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、非荷電賦形剤は、抗体製剤中に、約１ｍＭ〜約１Ｍ、約２ｍＭ〜約５００ｍＭ、約５ｍＭ〜約４００ｍＭ、約１０ｍＭ〜約３００ｍＭまたは約２０ｍＭ〜約２５０ｍＭで存在する。いくつかの実施形態では、非荷電賦形剤は、抗体製剤中に、約５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭ、約２０ｍＭ〜約８０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、または約７０ｍＭで存在し、例えば抗体製剤は、２〜２０ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。一実施形態では、非荷電賦形剤は、抗体製剤中に約５０ｍＭで存在する。いくつかの実施形態では、非荷電賦形剤は、抗体製剤中に、約５０ｍＭ〜約８００ｍＭ、約１００ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１５０ｍＭ〜約４００ｍＭ、約２００ｍＭ、約４００ｍＭ、約２００ｍＭ、約３００ｍＭ、または約２５０ｍＭで存在し、例えば、抗体製剤は、２０〜１００ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。一実施形態では、非荷電賦形剤は、抗体製剤中に約２５０ｍＭで存在する。
いくつかの実施形態では、非荷電賦形剤は、式、
Figure 2016535020
 によって表わされるトレハロースである。
いくつかの実施形態では、トレハロースは、抗体製剤中に、約１ｍＭ〜約１Ｍ、約２ｍＭ〜約５００ｍＭ、約５ｍＭ〜約４００ｍＭ、約１０ｍＭ〜約３００ｍＭまたは約２０ｍＭ〜約２５０ｍＭで存在する。いくつかの実施形態では、トレハロースは、抗体製剤中に、約５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭ、約２０ｍＭ〜約８０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、または約７０ｍＭで存在し、例えば、抗体製剤は、２〜２０ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。一実施形態では、トレハロースは、抗体製剤中に約５０ｍＭで存在する。いくつかの実施形態では、トレハロースは、抗体製剤中に、約５０ｍＭ〜約８００ｍＭ、約１００ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１５０ｍＭ〜約４００ｍＭ、約２００ｍＭ、約４００ｍＭ、約２００ｍＭ、約３００ｍＭ、または約２５０ｍＭで存在し、例えば、抗体製剤は、２０〜１００ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。一実施形態では、トレハロースは、抗体製剤中に約２５０ｍＭで存在する。
本発明の抗体製剤は、アルギニンを含む。アルギニンは、式、
Figure 2016535020
 によって表わし得る、条件的非必須アミノ酸である。本明細書の用法では、アルギニンは、アルギニンの遊離塩基形態、ならびにあらゆる全てのそれらの塩を含み得る。いくつかの実施形態では、アルギニンは、その薬学的に許容可能な塩を含む。例えばアルギニンは、塩酸アルギニンを含むであろう。本明細書の用法では、アルギニンは、全ての鏡像異性体（例えばＬ−アルギニンおよびＳ−アルギニン）、および鏡像異性体の任意の組み合わせ（例えば５０％のＬ−アルギニンと５０％のＳ−アルギニン；９０％〜１００％のＬ−アルギニンと１０％〜０％のＳ−アルギニンなど）もまた含む。いくつかの実施形態では、「アルギニン」という用語は、９９％を超えるＬ−アルギニンおよび１％未満のＳ−アルギニンを含む。いくつかの実施形態では、「アルギニン」という用語は、鏡像異性的に純粋なＬ−アルギニンを含む。いくつかの実施形態では、アルギニンは製薬等級のアルギニンである。
様々な濃度のアルギニンが、抗体製剤中に存在し得る。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、５０ｍＭを超えるアルギニン、７５ｍＭを超えるアルギニン、１００ｍＭを超えるアルギニン、１２５ｍＭを超えるアルギニン、１３０ｍＭを超えるアルギニン、１５０ｍＭを超えるアルギニン、１７５ｍＭを超えるアルギニン、または２００ｍＭを超えるアルギニンを含む。
いくつかの実施形態では、抗体製剤は、最大で８００ｍＭのアルギニン、最大で６００ｍＭのアルギニン、最大で４００ｍＭのアルギニン、最大で２００ｍＭのアルギニン、最大で１５０ｍＭのアルギニン、最大で１３０ｍＭのアルギニン、または最大で１２５ｍＭのアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、５０ｍＭ〜３００ｍＭ、７５ｍＭ〜２５０ｍＭ、１００ｍＭ〜２００ｍＭ、１１０ｍＭ〜１６０ｍＭ、１２０ｍＭ〜１５０ｍＭ、または約１２５ｍＭのアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、１２５ｍＭのアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、１３０ｍＭのアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、アルギニンは、製剤の浸透圧を保つのに十分な量で添加される。いくつかの実施形態では、アルギニンは、高張性溶液を得るのに十分な量で添加される。本出願人らは、いくつかの実施形態では、抗体製剤のイオン強度の増大が、安定性増大と粒子形成低下を提供することを見出した。
本明細書に記載される抗体製剤は、様々な粘度を有し得る。抗体製剤の粘度測定法は当業者に知られており、例えばレオメータ（例えば５０ｍｍ、４０ｍｍまたは２０ｍｍプレートアクセサリー付きＡｎｔｏｎ Ｐａａｒ ＭＣＲ３０１レオメータ）が挙げられる。本発明のいくつかの実施形態では、粘度は、毎秒剪断速度１０００の高剪断限界で報告された。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、２０センチポアズ（ｃＰ）未満、１８ｃＰ未満、１５ｃＰ未満、１３ｃＰ未満、または１１ｃＰ未満の粘度を有する。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、１３ｃＰ未満の粘度を有する。当業者は、粘度が温度に左右され、したがって特に断りのない限り、本明細書で提供される粘度は、特に断りのない限り２５℃で測定されることを理解するであろう。
「射出力」という用語は、抗体製剤を針を通過させるのに必要な圧力（ニュートン単位）である。射出力は、抗体製剤を対象に投与する際に、抗体製剤によって提供される抵抗性と相関する。射出力は、投与する針のゲージ、ならびに温度に左右される。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、２７Ｇａ肉薄ＰＦＳ針を通過する際に、１５Ｎ、１２Ｎ、１０Ｎ、または８Ｎ未満の射出力を有する。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、２９Ｇａ肉薄ＰＦＳ針を通過する際に、１５Ｎ、１２Ｎ、１０Ｎ、または８Ｎ未満の射出力を有する。
抗体製剤は、異なるモル浸透圧濃度を有し得る。抗体製剤のモル浸透圧濃度の測定法は、当業者に知られており、例えば浸透圧計（例えばＡｄｖａｎｃｅｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｉｎｃ ２０２０凝固点降下浸透圧計）が挙げられる。いくつかの実施形態では、製剤は、２００〜６００ｍｏｓｍ／ｋｇ、２６０〜５００ｍｏｓｍ／ｋｇ、または３００〜４５０ｍｏｓｍ／ｋｇのモル浸透圧濃度を有する。
本発明の抗体製剤は、様々なｐＨレベルを有し得る。いくつかの実施形態では、抗体製剤のｐＨは、４〜７、４．５〜６．５、または５〜６である。いくつかの実施形態では、抗体製剤のｐＨは５．０である。いくつかの実施形態では、抗体製剤のｐＨは６．０である。いくつかの実施形態では、抗体製剤のｐＨは≧７．０である。適切な緩衝液の添加をはじめとするが、これに限定されるものではない様々な手段を利用して、所望のｐＨレベルを得てもよい。
抗体製剤には、様々なその他の成分が含まれ得る。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、緩衝液（例えばヒスチジン、酢酸、リン酸またはクエン酸緩衝液）、界面活性剤（例えばポリソルベート）、および／または安定剤（例えばヒトアルブミン）などを含み得る。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、例えば、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸塩などの緩衝物質、スクロース、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、硫酸プロタミンなどの塩または電解質、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの物質、ポリエチレングリコール、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリアクリレート、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、およびポリエチレングリコールをはじめとする、薬学的に許容可能な担体を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、界面活性剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート、ドデシル硫酸ナトリウム、および非イオン性界面活性剤からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、界面活性剤は、式、
Figure 2016535020
 によって表わされるポリソルベート２０、すなわち、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレートである。ポリソルベート２０（ＰＳ−２０）は、例えば、Ａｌｋｅｓｔ（登録商標）ＴＷ２０（Ｏｘｉｔｅｎｏ，Ｂｒａｚｉｌ）、およびＴｗｅｅｎ（登録商標）２０（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ ＩＬ）などのいくつかの商業的供給業者から市販される。本出願人らは、抗体製剤中のＰＳ−２０の濃度を注意深く制御することで、抗体が追加的な安定性を有して、長期間保存時における粒子形成量が低下することを見出した。
いくつかの実施形態では、ＰＳ−２０は、抗体製剤の約０．００１％〜約０．０２％、約０．００２％〜約０．０１５％、約０．００２％〜約０．０１％、約０．００４％〜約０．００９％、約０．００５％〜約０．００８％、約０．００７％、または約０．００６％である。
いくつかの実施形態では、抗体製剤は、ヒスチジンをさらに含む。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、約１ｍＭ〜約１００ｍＭ、約５ｍＭ〜約８０ｍＭのヒスチジン、約１０ｍＭ〜約６０ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭ〜約５０ｍＭのヒスチジン、約１５ｍＭ〜約３０ｍＭのヒスチジン、または約２０ｍＭのヒスチジンを含む。
いくつかの実施形態では、抗体製剤から様々な成分を省くことができ、または抗体製剤は、その成分を「実質的に含まない」。「実質的に含まない」という用語は、本明細書の用法では、０．０１％未満、０．００１％未満、０．０００５％未満、０．０００３％未満、または０．０００１％未満の指定された成分を含有する、抗体製剤を指す。
いくつかの実施形態では、抗体製剤は糖類を実質的に含まず、すなわち抗体製剤、前記製剤は、０．０１％未満、０．００１％未満、０．０００５％未満、０．０００３％未満、または０．０００１％未満の糖類を含有する。「糖類」という用語は、本明細書の用法では、多価アルコール誘導体である分子のクラスを指す。糖類は、通常、炭水化物と称され、例えば、単糖類、二糖類、および多糖類などの異なる量の糖（糖類）単位を含有してもよい。いくつかの実施形態では、製剤は、二糖類を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、製剤は、還元糖、非還元糖、または糖アルコールを実質的に含まない。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、ヒスチジン、プロリン、グルタミン酸、ソルビトール、二価の金属イオン、および／またはコハク酸を実質的に含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）約２ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０、（ｃ）約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのトレハロース、および（ｄ）約１１０〜約１５０ｍＭのヒスチジンを含む、安定した水性抗体製剤を対象とし、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約２０ｍＭのヒスチジンをさらに含む。一実施形態では、本発明は、（ａ）約２ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）約０．００６％のポリソルベート２０、（ｃ）約５０ｍＭのトレハロース、（ｄ）約１３０ｍＭのＬ−アルギニン、および（ｅ）約２０ｍＭのヒスチジンを含む、安定した水性抗体製剤を対象とし、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）約２０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０、（ｃ）約２００ｍＭ〜約３００ｍＭのトレハロース、および（ｄ）約２０ｍＭのヒスチジンを含む、安定した水性抗体製剤を対象とし、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。一実施形態では、本発明は、（ａ）約２０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）約０．００６％のポリソルベート２０、（ｃ）約２５０ｍＭのトレハロース、および（ｄ）約２０ｍＭのヒスチジンを含む、安定した水性抗体製剤を対象とし、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。別の実施形態では、本発明は、（ａ）約３０ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）約０．００６％のポリソルベート２０、（ｃ）約２５０ｍＭのトレハロース、および（ｄ）約２０ｍＭのヒスチジンを含む、安定した水性抗体製剤を対象とし、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。
本発明の抗体製剤は、水溶液である。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、凍結温度にさらされず、および／または冷凍されず、すなわち、それらは液体状態のままであった。いくつかの実施形態では、抗体製剤中の抗体は凍結乾燥されなかった。
本明細書の用法では、「安定性」という用語は、一般に、タンパク質、ペプチド、または別の生理活性高分子などの生物活性作用物質の完全性維持、または分解、変性、凝集またはアンフォールディングの最小化に関連する。本明細書の用法では，「改善された安定性」とは、一般に、分解、変性、凝集またはアンフォールディングをもたらすことが知られている条件下で、関心のあるタンパク質（例えば抗ＩＬ５（ＹＴＥ）などの抗体）、ペプチドまたは別の生理活性高分子が、対照タンパク質、ペプチドまたは別の生理活性高分子と比較して、より大きな安定性を維持することを意味する。
いくつかの実施形態では、安定性とは、低から検出不能レベルの粒子形成を有する抗体製剤を指す。「低から検出不能レベルの粒子形成」という語句は、本明細書の用法では、ＨＩＡＣ分析または視覚的分析による判定で、３０個未満の粒子／ｍＬ、２０個未満の粒子／ｍｌ、２０個未満の粒子／ｍｌ、１５個未満の粒子／ｍｌ、１０個未満の粒子／ｍｌ、５個未満の粒子／ｍｌ、２個未満の粒子／ｍｌまたは１個未満の粒子／ｍｌを含有するサンプルを指す。いくつかの実施形態では、ＨＩＡＣ分析または視覚的分析のいずれによっても、抗体製剤中に粒子は検出されない。
いくつかの実施形態では、安定性は、抗体断片化の低下を指す。「低から検出不能レベルの断片化」という用語は、本明細書の用法では、例えば、ＨＰＳＥＣによる判定で単一ピーク内に、または還元キャピラリーゲル電気泳動（ｒＣＧＥ）による判定で２ピーク（例えば重鎖および軽鎖）（またはサブユニット内の全てのピーク）内に、非分解抗体またはその非分解断片に相当する、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％以上の総タンパク質を含有し、５％を超え、４％を超え、３％を超え、２％を超え、１％を超え、または０．５％を超える総タンパク質をそれぞれ有する、その他の単一ピークを含有しないサンプルを指す。「還元キャピラリーゲル電気泳動」という用語は、本明細書の用法では、抗体中のジスルフィド結合を還元するのに十分な還元条件下における、キャピラリーゲル電気泳動を指す。
当業者は、タンパク質の安定性が、製剤組成に加えて、その他の特性に左右されることを理解するであろう。例えば安定性は、温度、圧力、湿度、ｐＨ、および外的形態の放射線によって影響され得る。したがって、特に断りのない限り、本明細書で言及される安定性は、５℃、１気圧、５０％相対湿度、ｐＨ６．０、および標準的バックグラウンドレベルの放射線で測定されると見なされる。抗体製剤中の抗体安定性は、様々な手段によって判定し得る。いくつかの実施形態では、抗体安定性は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって判定される。ＳＥＣは、それらの流体力学的サイズ、拡散係数、および表面特性の組み合わせに基づいて、分析物（例えばタンパク質および抗体などの巨大分子）を分離する。したがって例えばＳＥＣは、様々な変性状態にある抗体および／または分解された抗体から、天然の三次元立体構造にある抗体を分離し得る。ＳＥＣでは、固定層は、一般に、ガラスまたは鋼鉄カラム内の緻密な三次元マトリックスに充填された、不活性粒子から構成される。移動相は、純水、水性緩衝液、有機溶剤、これらの混合物、またはその他の溶媒であり得る。固定相粒子は、特定サイズ未満の化学種のみを進入させる小さな孔および／またはチャンネルを有する。したがって大型粒子は、これらの孔およびチャンネルから排除されるが、より小型の粒子は、流動移動相から取り出される。粒子が、固定相孔内で固定化状態にある時間は、それらが孔内にどの程度浸透したかに、ある程度左右される。移動相流から取り出されることで、それらのカラムからの溶出にはより長い時間がかかり、サイズの違いに基づいて粒子間の分離がもたらされる。
いくつかの実施形態では、ＳＥＣを同定技術と組み合わせて、タンパク質またはその断片を同定し、または特性解析する。タンパク質同定および特性解析は、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）などのクロマトグラフィー技術、免疫測定法、電気泳動、紫外線／可視／赤外線分光法、ラマン分光法、表面増強ラマン分光法、質量分光分析、ガスクロマトグラフィー、静的光散乱（ＳＬＳ）、フーリエ変換赤外線分光法（ＦＴＩＲ）、円二色性（ＣＤ）、尿素誘導タンパク質アンフォールディング技術、内在性トリプトファン蛍光、示差走査熱量測定、および／またはＡＮＳタンパク質結合をはじめとするがこれに限定されない、様々な技術によって達成し得る。
いくつかの実施形態では、タンパク質同定は、高圧液体クロマトグラフィーによって達成される。ＨＰＬＣ実施するための様々な手段および装置が、当業者に知られている。一般にＨＰＬＣは、その中で分離が起きる分離カラムに、関心のあるタンパク質を含有する液体溶媒を装填することを伴う。ＨＰＬＣ分離カラムは、固体粒子（例えばシリカ、ポリマー、または吸着材）で充填され、サンプル混合物は、カラム粒子との相互作用に伴って、化合物に分離される。ＨＰＬＣ分離は、液体溶媒条件（例えば圧力、温度）、サンプル混合物と液体溶媒との化学相互作用（例えば疎水性、プロトン付加など）、およびサンプル混合物と分離カラム内に充填された固体粒子との化学相互作用（例えばリガンド親和性、イオン交換など）の影響を受ける。
いくつかの実施形態では、ＳＥＣおよびタンパク質の同定は、同一装置内で、または同時に行われる。例えばＳＥＣとＨＰＬＣは併用し得、ＳＥ−ＨＰＬＣと称されることが多い。
いくつかの実施形態では、水性製剤は、約２ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体を含み、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、前記製剤は、約４０℃で少なくとも１ヶ月間の保存時に安定している。いくつかの実施形態では、製剤は、約２５℃で少なくとも３ヶ月間の保存時に安定している。いくつかの実施形態では、製剤は、約５℃で少なくとも６ヶ月間の保存時に安定している。いくつかの実施形態では、製剤は、約５℃で少なくとも１２ヶ月間の保存時に安定している。いくつかの実施形態では、製剤は、約５℃で少なくとも１８ヶ月間の保存時に安定している。いくつかの実施形態では、製剤は、約５℃で少なくとも２４ヶ月、または３６ヶ月間の保存時に安定している。
「安定した」という用語は相対的であり得、絶対的でない。したがって、いくつかの実施形態では、抗体を２℃〜８℃で６ヶ月間保存した際に、ＳＥＣ ＨＰＬＣによる測定で、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満または２％未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。いくつかの実施形態では、抗体を２℃〜８℃で１２ヶ月間保存した際に、ＳＥＣ ＨＰＬＣによる測定で、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満または２％未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。いくつかの実施形態では、抗体を２℃〜８℃で１８ヶ月間保存した際に、ＳＥＣ ＨＰＬＣによる測定で、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満または２％未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体製剤中の抗体は安定している。いくつかの実施形態では、抗体を２℃〜８℃で２４ヶ月間保存した際に、ＳＥＣ ＨＰＬＣによる測定で、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満または２％未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体製剤中の抗体は安定している。
いくつかの実施形態では、抗体を２３℃〜２７℃で３ヶ月間保存した際に、ＳＥＣ ＨＰＬＣによる測定で、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満または２％未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。いくつかの実施形態では、抗体を２３℃〜２７℃で６ヶ月間保存した際に、ＳＥＣ ＨＰＬＣによる測定で、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満または２％未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。いくつかの実施形態では、抗体を２３℃〜２７℃で１２ヶ月間保存した際に、ＳＥＣ ＨＰＬＣによる測定で、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満または２％未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。いくつかの実施形態では、抗体を２３℃〜２７℃で２４ヶ月間保存した際に、ＳＥＣ ＨＰＬＣによる測定で、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満または２％未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。
いくつかの実施形態では、抗体を４０℃で保存した際に、ＳＥＣ ＨＰＬＣによる測定で、１ヶ月あたり、６％未満、４％未満、３％未満、２％未満または１％未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。いくつかの実施形態では、抗体を５℃で保存した際に、ＳＥＣ ＨＰＬＣによる測定で、１ヶ月あたり、６％未満、４％未満、３％未満、２％未満または１％未満の抗体が、分解、変性、凝集し、または折り畳まれていない場合に、抗体は安定している。
いくつかの実施形態では、８週間、４ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１２ヶ月または２４ヶ月間にわたり、例えばＥＬＩＳＡなどの当業者に知られている抗体結合アッセイによる測定で、抗体が、参照抗体と比較して、製剤の抗体（その抗体断片を含む）の結合活性に、非常にわずかまたは皆無の低下を示す場合に、本発明の抗体製剤は安定していると見なし得る。いくつかの実施形態では、約４０℃で少なくとも１ヶ月間保存された抗体は、保存されていない参照抗体と比較して、ＩＬ−５受容体ポリペプチドとの結合能力の少なくとも８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％を保つ。いくつかの実施形態では、約５℃で少なくとも６ヶ月間保存された抗体は、保存されていない参照抗体と比較して、ＩＬ−５受容体ポリペプチドとの結合能力の少なくとも８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％を保つ。いくつかの実施形態では、約４０℃で少なくとも１ヶ月間保存された抗体は、保存されていない参照抗体と比較して、ＩＬ−５受容体ポリペプチドとの結合能力の少なくとも９５％を保つ。いくつかの実施形態では、約５℃で少なくとも６ヶ月間保存された抗体は、保存されていない参照抗体と比較して、ＩＬ−５受容体ポリペプチドとの結合能力の少なくとも９５％を保つ。
抗体製剤は、低から検出不能レベルの抗体凝集を提供し得る。「低から検出不能レベルの凝集」という語句は、本明細書の用法では、高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）または静的光散乱（ＳＬＳ）技術による判定で、重量基準で約５％以下、約４％以下、約３％以下、約２％以下、約１％以下、および約０．５％以下のタンパク質凝集を含有するサンプルを指す。いくつかの実施形態では、約４０℃で少なくとも４週間の保存時に、ＨＰＳＥＣによる判定による判定で、２％未満の抗体が凝集を形成する。いくつかの実施形態では、約５°で少なくとも３ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、少なくとも１５ヶ月間、少なくとも１８ヶ月間、少なくとも２４ヶ月間、または少なくとも３６ヶ月間の保存時に、ＨＰＳＥＣによる判定で、２％未満の抗体が凝集を形成する。
本出願人らは、本明細書で提供される抗体製剤が、目視検査、マイクロフローイメージング（ＭＦＩ）、またはサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による判定で、粒子形成の大幅低下をもたらすことを見出した。いくつかの実施形態では、製剤は、約４０℃で少なくとも１ヶ月間の保存時に、目視検査による判定で、粒子を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、製剤は、約５℃で少なくとも６ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、少なくとも１５ヶ月間、少なくとも１８ヶ月間、少なくとも２４ヶ月間、または少なくとも３６ヶ月間の保存時に、目視検査による判定で粒子を実質的に含まない。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体製剤は、製薬目的で使用し得る。製薬用途で使用される抗体は、概して、特に細胞タンパク質汚染物質、細胞ＤＮＡ汚染物質、ウイルスおよびその他の伝染性作用物質をはじめとする、細胞培養物からの汚染物質に関して、高レベルの純度を有しなくてはならない。“ＷＨＯ Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ａｎｉｍａｌ ｃｅｌｌｓ ａｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ：Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ Ｎｏ．５０．”Ｎｏ．８７８．Ａｎｎｅｘ １，１９９８を参照されたい。汚染物質に対する懸念に応えて、世界保健機関（ＷＨＯ）は、様々な汚染物質のレベルに対する制限を設けた。例えばＷＨＯは、タンパク質製品の投与あたり１０ｎｇ未満のＤＮＡ許容限度を推奨する。同様に米国食品医薬品局（ＦＤＡ）は、０．５ｐｇ／ｍｇタンパク質以下のＤＮＡ許容限度を設定する。したがっていくつかの実施形態では、本発明は、例えば米国食品医薬品局および／または世界保健機関などの１つまたは複数の政府機関によって規定される、汚染物質制限を満たし、またはそれに優る、抗体製剤を対象とする。
いくつかの実施形態では、抗本明細書に記載される抗体製剤は、薬学的に許容可能である。「薬学的に許容可能」とは、健全な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性またはその他の合併症なしに、ヒトおよび動物組織との接触に適する、妥当な利点／リスク比が釣り合った抗体製剤を指す。
抗体製剤の純度は、変動し得る。いくつかの実施形態では、例えば抗ＩＬ５抗体などの関心のある治療用抗体は、抗体製剤中に存在する全ポリペプチドの９０％（ｗｔ／ｗｔ）を超える。いくつかの実施形態では、例えば抗ＩＬ５などの関心のある治療用抗体は、抗体製剤中に存在する全ポリペプチドの９５％（ｗｔ／ｗｔ）、９８％（ｗｔ／ｗｔ）、９９％（ｗｔ／ｗｔ）、９９．５％（ｗｔ／ｗｔ）または９９．９％（ｗｔ／ｗｔ）を超える。
本明細書で提供されるような製剤は、対象の治療に適し得る。本明細書の用法では、「対象」は、「患者」と同義的に使用し得、ヒト、ならびに飼育動物および家畜、動物園動物、スポーツ用動物、およびペットなどであるが、これに限定されるものではない、非ヒトをはじめとする、哺乳類に分類されるあらゆる動物を指す。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトを指す。
「治療する」および「治療」という用語は、治療処置と、予防的、保全的、または防止的手段との双方を指し、目的は、望まれない生理学的な病状、障害または疾患を予防または緩和（軽減）し、あるいは有益なまたは所望の臨床結果を得ることである。「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、および「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、（１つまたは複数の予防薬または治療薬の投与をはじめとするが、これに限定されるものではない）１つまたは複数の治療法の実施から得られる、このような疾患または障害（例えばＩＬ−５ポリペプチドの異常な発現および／または活性によって特徴付けられる疾患または障害、ＩＬ−５ポリペプチドまたはその１つもしくは複数のサブユニットの異常な発現および／または活性によって特徴付けられる疾患または障害、自己免疫疾患、炎症性疾患、増殖性疾患、または感染症）の進行、重症度、および／または持続期間の低下または改善、あるいはその１つまたは複数の症状の改善を指す。特定の実施形態では、このような用語は、好酸球媒介性炎症に伴う炎症の低下を指す。別の実施形態では、このような用語は、肥満細胞による炎症性作用物質放出の低下、またはこのような炎症性作用物質による生物学的効果の低下を指す。別の実施形態では、このような用語は、過剰増殖性細胞（例えばがん性細胞）の増殖、形成および／または増加の低下を指す。なおも別の実施形態では、このような用語は、気道、皮膚、胃腸管、またはそれらの組み合わせの炎症の低下を指す。なおも別の実施形態では、このような用語は、喘息に伴う症状の低減を指す。いくつかの実施形態では、このような用語は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）に伴う症状の低減を指す。
本発明の抗体製剤は、様々な手段を通じて対象に投与し得る。いくつかの実施形態では、抗体製剤は、例えば、吸入（例えば、粉末またはエアゾールスプレー）、経粘膜、静脈内、皮下、または筋肉内投与を通じた非経口投与に適する。いくつかの実施形態では、製剤は注射用製剤である。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載されるような抗体製剤のいずれかを含む、密封容器を対象とする。
いくつかの態様では、本発明は様々な医薬品剤形を対象とする。様々な剤形が、本明細書で提供される製剤に適用し得る。例えばＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｖｏｌｕｍｅ １，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎを参照されたい。一実施形態では、本発明の医薬単位用量は、例えば、バイアルまたはシリンジなどの適切な容器内の抗体製剤を構成する。一実施形態では、本発明の医薬単位用量は、静脈内、皮下、または筋肉内に送達される抗体製剤を構成する。別の実施形態では、本発明の医薬単位用量は、煙霧剤で送達される抗体製剤を構成する。特定の実施形態では、本発明の医薬単位用量は、皮下送達される抗体製剤を構成する。別の実施形態では、本発明の医薬単位用量は、煙霧剤で送達される抗体製剤を構成する。さらなる実施形態では、本発明の医薬単位用量は、鼻腔内投与される抗体製剤を構成する。
本発明の抗体製剤は、単回使用のための水性抗体製剤のアリコートを含有するバイアルを調製することで、単位用量剤形として調製し得る。例えば、バイアルあたりの単位用量は、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約３００ｍｇ／ｍｌの範囲にわたるＩＬ５受容体に特異的に結合する抗体を、１ｍｌ、２ｍｌ、３ｍｌ、４ｍｌ、５ｍｌ、６ｍｌ、７ｍｌ、８ｍｌ、９ｍｌ、１０ｍｌ、１５ｍｌ、または２０ｍｌの異なる濃度で含有してもよい。必要ならば、これらの製剤は、各バイアルに無菌希釈剤を添加することで、所望の濃度に調節し得る。特定の実施形態では、本発明の水性抗体製剤は、約２ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの抗体、約０．００２％〜約０．０１％ポリソルベート２０、約４０ｍＭ〜約６０ｍＭトレハロース、および約１１０ｍＭ〜約１５０ｍＭのＬ−アルギニンを含有する無菌液体として、単回用量バイアルに製剤化され、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。別の特定の実施形態では、本発明の水性抗体製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体、約０．００２％〜約０．０１％ポリソルベート２０、および約２００ｍＭ〜約３００ｍＭのトレハロースを含有する無菌液体として、単回用量バイアルに製剤化され、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。一実施形態では、本発明の抗体は、３ｃｃ ＵＳＰ Ｉ型ホウケイ酸琥珀色バイアル（Ｗｅｓｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｅｒｖｉｃｅｓパーツ番号６８００−０６７５）内に２〜２０ｍｇ／ｍｌで提供される。別の実施形態では、本発明の抗体は、３ｃｃ ＵＳＰ Ｉ型ホウケイ酸琥珀色バイアル内に２０〜１００ｍｇ／ｍｌで提供される。目的充填容量は、１．２ｍＬである。
本発明の抗体製剤は、単回使用のための水性抗体製剤のアリコートを含有するプレフィルドシリンジを調製することで、単位用量剤形として調製し得る。例えば、プレフィルドシリンジあたりの単位用量は、約２ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの範囲にわたるＩＬ−５ポリペプチドに特異的に結合する抗体を、０．１ｍｌ、０．２ｍｌ、０．３ｍｌ、０．４ｍｌ、０．５ｍｌ、０．６ｍｌ、０．７ｍｌ、０．８ｍｌ、０．９ｍｌ、１ｍｌ、２ｍｌ、３ｍｌ、４ｍｌ、５ｍｌ、６ｍｌ、７ｍｌ、８ｍｌ、９ｍｌ、１０ｍｌ、１５ｍｌ、または２０ｍｌの異なる濃度で含有してもよい。特定の実施形態では、本発明の水性抗体製剤は、約２ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの抗体、約０．００２％〜約０．０１％ポリソルベート２０、約４０ｍＭ〜約６０ｍＭトレハロース、および約１１０ｍＭ〜約１５０ｍＭのＬ−アルギニンを含有する無菌液体として、単回用量プレフィルドシリンジに製剤化され、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。別の特定の実施形態では、本発明の水性抗体製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体、約０．００２％〜約０．０１％ポリソルベート２０、および約２００ｍＭ〜約３００ｍＭのトレハロースを含有する無菌液体として、単回用量プレフィルドシリンジに製剤化され、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。
様々な用量が、単回使用で投与され得る。例えば、いくつかの実施形態では、単回用量で、０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、０．８ｍｇ、０．９ｍｇ、１．０ｍｇ、１．１ｍｇ、１．２ｍｇ、１．３ｍｇ、１．４ｍｇ、１．５ｍｇ、１．６ｍｇ、１．７ｍｇ、１．８ｍｇ、１．９ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１２ｍｇ、１４ｍｇ、１６ｍｇ、１８ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、７０ｍｇ、または１００ｍｇの抗体を投与し得る。
様々なタイプのシリンジを使用し得る。シリンジは、対象への投与の例えば１週間、１日、６時間、３時間、２時間、１時間、３０分間、２０分間、または１０分間未満前など、対象への投与直前に抗体製剤で充填し得る。いくつかの実施形態では、シリンジは、小売販売の時点で、または対象の治療が行われる施設によって、抗体製剤で充填される。いくつかの実施形態では、シリンジはあらかじめ充填され、例えば、シリンジは、対象への投与の１日、２日、４日、１週間、２週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、２４ヶ月、３年、または４年以上前などに、抗体製剤で充填される。いくつかの実施形態では、プレフィルドシリンジは、例えば、２７Ｇ通常針、２７Ｇ肉薄針、２９Ｇ通常針、または２９Ｇ肉薄針などの針を含む。いくつかの実施形態では、プレフィルドシリンジは、２９Ｇ肉薄針を含む。
いくつかの実施形態では、所望の対象への投与に適する任意のシリンジを使用し得る。いくつかの実施形態では、シリンジは、プラスチックシリンジまたはガラスシリンジである。いくつかの実施形態では、シリンジは、タングステンを実質的に含まない材料からできている。いくつかの実施形態では、シリンジは、シリコーンで被覆される。いくつかの実施形態では、プレフィルドシリンジは、フルオロポリマー樹脂ディスクを有するプランジャーを含む。シリンジの例としては、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｈｙｐａｋ １ｍＬ ｌｏｎｇプランジャーストッパー４０２３付きＨｙｐａｋ（商標）ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈ １ｍｌ Ｌｏｎｇ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）；Ｆｌｕｒｏｔｅｃ Ｄａｉｋｙｏ Ｓｉ１０００（カタログ番号４７２７１９１９）；Ｃ３Ｐｉｎ（ロット番号Ｅ９１２７０１）；Ｈｙｐａｋ（商標）ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈ ０．８ｍｇシリコーン油（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）；およびＣＺシリンジ（Ｗｅｓｔ、カタログ番号１９５５０８０７）が挙げられるが、これに限定されるものではない。
本発明の水性抗体製剤は、滅菌濾過、放射線などをはじめとする様々な滅菌法によって、滅菌されてもよい。特定の実施形態では、透析濾過抗体製剤は、滅菌済み０．２ミクロンフィルターによって濾過滅菌される。本発明の滅菌された水性抗体製剤は、例えば炎症応答などの免疫応答を予防、治療および／または管理するために、対象に投与されてもよい。
いくつかの実施形態では、プレフィルドシリンジは、（ａ）約２ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの抗体、および（ｂ）約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０を含み、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態では、プレフィルドシリンジは、（ｃ）約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのトレハロース、および（ｄ）約１１０ｍＭ〜約１５０ｍＭのＬ−アルギニンをさらに含む。いくつかの実施形態では、プレフィルドシリンジは、（ａ）約２０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体、および（ｂ）約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０を含み、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態では、プレフィルドシリンジは、（ｃ）約２００ｍＭ〜約３００ｍＭのトレハロースをさらに含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤、本明細書に記載される容器、本明細書に記載される単位用量剤形、または本明細書に記載されるプレフィルドシリンジのいずれかを含むキットを対象とする。
いくつかの実施形態では、本発明はまた、抗体を含む安定した水性抗体製剤を製造する方法を対象とし得、方法は、（ａ）重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む抗体を約１ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬに精製するステップと、（ｂ）単離抗体を安定化製剤に入れて、（ｉ）約２ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体、および（ｉｉ）約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０を含み、抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む、安定した水性抗体製剤を形成するステップとを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、安定した水性抗体製剤を製造する方法を対象とし、方法は、（ａ）重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む抗体を約１ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬに精製するステップと、（ｂ）（ｉ）約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０、（ｉｉ）約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのトレハロース、および（ｉｉｉ）約１１０ｍＭ〜約１５０ｍＭのＬ−アルギニンを含む溶液中に、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む抗体を約２ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの抗体に希釈するステップとを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、安定した水性抗体製剤を製造する方法を対象とし、方法は、（ａ）重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む抗体を約１ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬに精製するステップと、（ｂ）（ｉ）約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート−２０、（ｉｉ）約２００ｍＭ〜約３００ｍＭのトレハロース、および（ｉｉｉ）約２０ｍＭのヒスチジンを含む溶液中に、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む抗体を約２０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体に希釈するステップとを含む。
本発明の多くの態様は、水性製剤を対象とするが、均等物の目的で、本発明の抗体または抗体製剤は、必要に応じて凍結乾燥されてもよいことに留意すべきである。したがって、本発明は、後から水性形態に再構成される、本発明の製剤の凍結乾燥形態、または凍結乾燥抗体を包含する。いくつかの実施形態では、本発明は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む、再構成された抗体製剤を製造する方法を対象とし、方法は、（ａ）細胞培養物から抗体を精製するステップと；（ｂ）単離抗体を凍結乾燥するステップと；（ｃ）凍結乾燥抗体を水溶液に添加して、（ｉ）約２ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体、および（ｉｉ）約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０を含み、抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む、再構成された抗体製剤を形成するステップとを含む。
いくつかの実施形態では、本発明者らは、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）濃度が低下している抗ＩＬ５Ｒ抗体製剤が、粒子形成の低下（例えば検出不能）をもたらすことを見出した。粒子の除去は、潜在的免疫原性を回避し、ならびに製品品質に対する影響を制限するために重要である。いくつかの実施形態では、ＧＳＴ濃度は、アフィニティクロマトグラフィーによって低下される。いくつかの実施形態では、ＧＳＴ濃度は、プロテインＡカラムを使用して低減される。いくつかの実施形態では、プロテインＡカラムは、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）である。いくつかの実施形態では、ＧＳＴ濃度は、混合モードクロマトグラフィーを使用して低下される。いくつかの実施形態では、混合モードカラムは、Ｃａｐｔｏ（商標）Ａｄｈｅｒｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）である。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗体を含む抗体製剤を対象とし、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、抗体製剤は、粒子を本質的に含まない。いくつかの実施形態では、「粒子を本質的に含まない」をという用語は、ライトボックスの下で観察した際の可視粒子の不在を指す。いくつかの実施形態では、「粒子を本質的に含まない」という用語は、前述の「低から検出不能レベルの粒子形成」という語句と同義である。いくつかの実施形態では、粒子を本質的に含まないとは、サンプルが、３０個未満の粒子／ｍＬ、２０個未満の粒子／ｍｌ、２０個未満の粒子／ｍｌ、１５個未満の粒子／ｍｌ、１０個未満の粒子／ｍｌ、５個未満の粒子／ｍｌ、２個未満の粒子／ｍｌまたは１個未満の粒子／ｍｌを含有することを指し、粒子は２５μｍよりも大きく、粒子数はＨＩＡＣ分析または視覚的分析によって確認される。いくつかの実施形態では、粒子を本質的に含まないとは、サンプルが、１〜５０個の粒子／ｍＬ、２〜４０個の粒子／ｍｌ、３〜３０個の粒子／ｍｌ、４〜２５個の粒子／ｍｌ、または５〜２０個の粒子／ｍｌを含有することを指し、粒子は２５μｍよりも大きく、粒子数はＨＩＡＣ分析または視覚的分析によって確認される。いくつかの実施形態では、「可視粒子」という用語は、２５μｍよりも大きい粒子を指す。
いくつかの実施形態では、粒子を本質的に含まないとは、１〜２００個の粒子／ｍＬ、１０〜１５０個の粒子／ｍｌ、３０〜１００個の粒子／ｍｌ、または４０〜８０個の粒子／ｍｌを含有するサンプルを指し、粒子は５μｍよりも大きく、粒子数はＨＩＡＣ分析または視覚的分析によって確認される。いくつかの実施形態では、「可視粒子」という用語は、５μｍよりも大きい粒子を指す。いくつかの実施形態では、ＨＩＡＣ分析または視覚的分析のいずれによっても、抗体製剤中に粒子は検出されない。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗体を含む抗体製剤を対象とし、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、抗体製剤は、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を本質的に含まない。特に断りのない限り、「グルタチオンＳ−トランスフェラーゼを本質的に含まない」または「ＧＳＴを本質的に含まない」という用語は、活性ＧＳＴを欠く（しかし不活性ＧＳＴは含有し得る）組成物、ならびに活性形態または不活性形態のいずれのＧＳＴタンパク質も有しない組成物を包含する。いくつかの実施形態では、本発明は、抗体を含む抗体製剤を対象とし、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、抗体製剤は、活性ＧＳＴを本質的に含まない。「活性ＧＳＴ」という用語は、ＧＳ−ＤＮＢ抱合体を形成するための、１−クロロ−２，４−ジニトロベンゼン（ＣＤＮＢ）などの求電子性化合物へのグルタチオン（ＧＳＨ）のチオール基の形成を触媒できるＧＳＴを指す。ＧＳＴまたはグルタチオンＳ−トランスフェラーゼは酵素ファミリーを指し、それは多数の反応を触媒できるが、主にスルフヒドリル基を介した、例えば、芳香族、二重結合、Ｃ−Ｃｌxなどの求電子中心への還元グルタチオンのコンジュゲーションである反応を触媒できる。ＧＳＴモノマーは、一般に２２〜２９ｋＤａの範囲であるが、それらは、二量体、三量体、およびまた（その他のタンパク質との）ヘテロ二量体として生じ得る。いくつかの実施形態では、ＧＳＴという用語は、ＧＳ−ＤＮＢ抱合体を形成する、１−クロロ−２，４−ジニトロベンゼン（ＣＤＮＢ）へのグルタチオン（ＧＳＨ）のチオール基形成を触媒できるタンパク質を指す。
いくつかの実施形態では、本発明は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む、抗体を含む抗体製剤を対象とし、抗体製剤は、３８〜４２℃での保存時に、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、または少なくとも１８ヶ月間にわたり粒子を本質的に含まない。いくつかの実施形態では、本発明は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む、抗体を含む抗体製剤を対象とし、抗体製剤は、２〜６℃での保存時に、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、少なくとも１８ヶ月間、少なくとも２４ヶ月間、少なくとも３０ヶ月間、少なくとも３６ヶ月間、または少なくとも４８ヶ月間にわたり粒子を本質的に含まない。
いくつかの実施形態では、抗体製剤は、ＧＳＴを本質的に含まない。いくつかの実施形態では、「ＧＳＴを本質的に含まない」という用語は、約０．５単位／ｍｇ抗体未満、約０．３単位／ｍｇ抗体未満、約０．１単位／ｍｇ抗体未満、約０．０８単位／ｍｇ抗体未満、約０．０５単位／ｍｇ抗体未満、約０．０３単位／ｍｇ抗体未満、約０．０１単位／ｍｇ抗体未満、約０．００５単位／ｍｇ抗体未満、約０．００１単位／ｍｇ抗体未満、約５×１０-3単位／ｍｇ抗体未満、約１×１０-4単位／ｍｇ抗体未満、約１×１０-5単位／ｍｇ抗体、または約１×１０-6単位／ｍｇ抗体未満のＧＳＴ活性を有する抗体製剤を指す。いくつかの実施形態では、「本質的に含まない」という用語は、通常のＧＳＴ検出技術を使用して検出不能なＧＳＴのレベルを指す。
ＧＳＴ活性を判定する様々な方法が、当業者に知られている。いくつかの実施形態では、ＧＳＴ活性は、グルタチオン（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ／合計）蛍光定量的アッセイキット（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ ＣＡ）を使用して判定される。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）抗体を含む細胞培養物を得るステップと、（ｉｉ）抗体にアフィニティクロマトグラフィー実施するステップと、（ｉｖ）抗体にカチオン交換を実施するステップと、（ｖ）抗体に混合モードクロマトグラフィーを実施するステップとを含む、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む、抗体を精製する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）抗体を含む細胞培養物を得るステップと、（ｉｉ）抗体をプロテインＡカラムに結合させるステップと、（ｉｉｉ）抗体をプロテインＡカラムから溶出させるステップと、（ｉｖ）抗体にカチオン交換を実施するステップと、（ｖ）抗体に混合モードクロマトグラフィーを実施するステップとを含む、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む、抗体を精製する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、抗体を精製する方法は、ウイルス不活性化処理をさらに含む。いくつかの実施形態では、ウイルス不活性化ステップは、ｐＨを４．０未満に低下させることで実施される。いくつかの実施形態では、方法は、透析濾過処理をさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、濾過処理をさらに含む。いくつかの実施形態では、活性ウイルス粒子を除去するのに、濾過処理で十分である。
いくつかの実施形態では、本発明は、患者を治療する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、方法は、本明細書に記載される抗体製剤をそれを必要とする対象に投与するステップと、本明細書に記載される容器、本明細書に記載される単位用量剤形、または本明細書に記載されるプレフィルドシリンジを含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与することで、肺疾患または障害を治療するのに適する。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与することで、好酸球性疾患または障害がある患者を治療する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与するステップを含む、対象において肺疾患または障害を治療する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与するステップを含む、対象において好酸球性疾患または障害を治療する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、本発明は，本明細書に記載される抗体製剤を投与するステップを含む、対象における、例えば、喘息、ＣＯＰＤ、好酸球性喘息、混合型好酸球性・好中球喘息、アスピリン高感度喘息、アレルギー性気管支肺のアスペルギルス症、急性および慢性好酸球性気管支炎、急性および慢性好酸球性肺炎、チャーグ・ストラウス症候群、過好酸性症候群、薬物・刺激物・放射線誘発性肺好酸球増加症、感染誘発性肺好酸球増加症（真菌、結核、寄生生物）、己免疫関連肺好酸球増加症、好酸球性食道炎、またはクローン病またはそれらの組み合わせなどの肺疾患または障害の治療法を対象とする。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与するステップを含む、対象における喘息の治療法を対象とする。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体製剤を投与するステップを含む、対象におけるＣＯＰの治療法を対象とする。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体製剤の治療有効量が投与されて、病状が治療される。本明細書の用法では、「治療有効量」という用語は、疾患または障害（例えばＩＬ−５受容体ポリペプチドの異常な発現および／または活性によって特徴付けられる疾患または障害、ＩＬ−５受容体またはその１つまたは複数のサブユニットの異常な発現および／または活性によって特徴付けられる疾患または障害、自己免疫疾患、炎症性疾患、増殖性疾患、または感染症（好ましくは呼吸器感染症）あるいは１つまたは複数のその症状）の重症度を低下させ、呼吸器病状の持続期間を低下させ、このような疾患または障害の１つまたは複数の症状を改善し、このような疾患または障害の進行を予防し、このような疾患または障害の退縮を引き起こし、または別の治療法の治療効果を高めまたは改善するのに十分な治療法（例えばＩＬ−５ポリペプチドと免疫特異的に結合する抗体）の量を指す。いくつかの実施形態では、治療有効量は、前もって特定され得ず、例えば用量漸増などの様々な手段を使用して、例えば医師またはその他の保健医療提供者などの介護者によって判定され得る。適切な治療有効量はまた、例えば動物モデルを使用して、日常的実験法によって判定し得る。
「治療法（ｔｈｅｒａｐｉｅｓ）」および「治療法（ｔｈｅｒａｐｙ）」という用語は、疾患または障害（例えばＩＬ−５ポリペプチドの異常な発現および／または活性によって特徴付けられる疾患または障害、ＩＬ−５受容体またはその１つもしくは複数のサブユニットの異常な発現および／または活性によって特徴付けられる疾患または障害、自己免疫疾患、炎症性疾患、増殖性疾患、または感染症（好ましくは呼吸器感染症）あるいはその１つまたは複数の症状）の予防、治療、管理、または改善において使用し得る、あらゆるプロトコル、方法、および／または作用物質を指し得る。特定の実施形態では、「治療法（ｔｈｅｒａｐｙ）」および「治療法（ｔｈｅｒａｐｙ）」という用語は、熟練した医療関係者に知られている、そのような疾患または障害あるいは１つまたは複数の症状の治療、管理、予防、または改善において有用な、生物学的療法、支持療法、および／またはその他の治療法を指す。
本明細書の用法では、「治療法プロトコル」という用語は、投薬および治療的に有効な１つまたは複数の治療法（例えば治療薬）の実施のタイミングのためのレジメンを指す。
本発明の抗体製剤の投与経路は、例えば、経口、非経口、吸入または局所投与法を介し得る。非経口という用語は、本明細書の用法では、例えば静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、直腸または膣内投与を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、抗ＩＬ５Ｒ抗体であり、投与経路は筋肉内注射である。これらの投与形態は全て、本発明の範囲内として明確に検討される一方で、いくつかの実施形態では、抗体製剤は、注射、特に静脈内もしくは動脈内注射または点滴による投与に適する。
いくつかの実施形態では、本発明の組成物および方法は、コストの削減、方法段階の削減、誤りの機会の減少、安全でないまたは不適切な添加剤の導入の機会の減少、廃棄物の低減、保存時間の増加などのいずれかによって、製造会社がより効率的な方法で、ヒトへの投与に適した抗体製剤を製造できるようにする。
実施例１
製剤化試験を実施して、プレフィルドシリンジ（またはバイアルバックアップ形状）からの皮下送達を通じて、２〜１００ｍｇの用量を送達するのに適する安定した抗ＩＬ５Ｒ抗体製剤を開発した。具体的には、２〜２０ｍｇ／ｍＬの製剤と、２０〜１００ｍｇ／ｍＬの製剤の２つの別個の抗体濃度製剤が開発された。
１．材料および方法
ａ．抗ＩＬ５Ｒ原料および製剤の調製
これらの試験では、複数ロットの抗ＩＬ５Ｒが使用された。全てのロットは、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅによって様々な規模で製造されて透析濾過され、ｐＨ６で２０ｍＭのヒスチジン／ヒスチジンＨＣｌ中のおよそ１３０ｇ／Ｌに濃縮された後に届けられた。いくつかのロットはまた、透析濾過緩衝液中に２５０ｍＭのトレハロースを有した。
抗ＩＬ５Ｒは、賦形剤添加緩衝液（ＥＡＢ）に添加して、１００ｇ／Ｌの抗ＩＬ５Ｒ濃度と、適切な緩衝液および賦形剤化学種の濃度を得ることで、製剤化された。１００ｇ／Ｌの製剤から、より低濃度の原薬が作成された。
２．加速ストレス法
ａ．上昇した温度での保存
保存中に一定温度を保つために、バイアルおよびシリンジは、管理される安定性チャンバー内に保存された。チャンバーは、２〜８℃、２３〜２７℃／６０％ＲＨ、または３８〜４２℃／７５％ＲＨに保たれたが、以後、それらの中点温度である５℃、２５℃、または４０℃によって言及される。バイアルは、特に断りのない限り直立で保存され、プレフィルドシリンジは、先端を下向きにして保存された。
ｂ．凍結解凍サイクル
これらの試験では、管理されるおよび管理されない凍結解凍サイクルの双方が使用された。管理されない凍結解凍は、バイアルを−４０℃チャンバー内で凍結し、室温でそれらを解凍することで実施された。
ｃ．輸送および振盪
多様な方法を使用して、抗ＩＬ５Ｒに対する輸送の影響が調査された。バイアルの卓上振盪は、１５０ｒｐｍで２４時間の軌道振盪によって実施された。実際の輸送は、製品を離れた場所に配送することで模倣された。製品は２往復させ、４日間にわたり、地上および航空輸送した。凍結およびコールドパックの組み合わせを利用して製品温度を２〜８℃に保ち、０℃未満９℃以上の温度を示すセンサーによってモニターした。
スクリーニング試験のために、振動台（輸送シミュレータ）を使用して輸送をシミュレートした。製品は、往復輸送中に経験されるものと同様のパターンで、「航空」および「地上」輸送された。プロセスには１２時間かかり、この場合も温度をコールドパックで２〜８℃に管理し、センサーは使用されなかった。気泡移動の可能性、ならびに薬剤とバレル全体、針先端、およびストッパーとの可能な接触のために、実際のまたは疑似配送中に考えられる最悪の方向として、水平方向を選択した。
３．実験法
ａ．ＳＯＰに従ったまたはそれから派生した方法
粒子とタンパク石濁標準物質とを比較することで、目視検査を実施した。ＳＥ−ＨＰＬＣによって、凝集および断片化をモニターした。１０ｇ／Ｌ未満の抗ＩＬ５Ｒ濃度では、より大容量の注射を使用して、注射あたりで同様の総タンパク質量を得る。いくつかのサンプルは、ｃＩＥＦ測定およびＲＰ−ＨＰＬＣのためにもまた使用されて、断片化がモニターされた。
ｂ．タンパク質濃度
連続重量希釈によってタンパク質をおよそ０．５ｇ／Ｌに希釈し、吸光度を２８０ｎｍで測定して、タンパク質濃度を測定した。吸光係数および希釈係数から濃度を計算して、５０ｇ／Ｌを超える初期濃度の重量希釈液に対する密度の効果について補正した。
ｃ．肉眼不可視粒子数
ＭＦＩおよびＨＩＡＣの双方を使用して、肉眼不可視粒子数を得た。ＭＦＩでは、水で光学的照明を実施した後に、０．９ｍＬの無希釈溶液で実施した。最初の０．２ｍＬは装置をパージするために使用され、分析には包まれなかった。＜０．８５のアスペクト比フィルターを使用して、球状気泡またはシリコーン油滴を除去した。ＨＩＡＣでは、濃度＞５ｇ／Ｌの溶液をおよそ５ｇ／Ｌに希釈した一方で、希釈サンプルは無希釈で実施した。希釈は、使用直前に濾過された２０ｍＭのヒスチジン／ヒスチジンＨＣｌ、ｐＨ６緩衝液によって、層流フード内部で実施された。サンプルは、試験の少なくとも３０分前に真空下で脱気された。３回の実験の平均に希釈係数を乗じて、最終的な結果とした。ＨＩＡＣによって、シリコーン油滴はタンパク質粒子と区別されなかった。
４．データおよび考察
ａ．ポリソルベート２０濃度スクリーン
最初の目的は、水性抗体製剤中のＰＳ−２０濃度を最適化することであった。境界面における変性および凝集からタンパク質を保護するために、ポリソルベートを溶液に含め、必要な濃度は、液体製品中では凍結乾燥製品と異なることが予測された。主要な界面応力は、凍結解凍および輸送中に遭遇されたため、実験計画は、これらを模倣することに焦点を合わせた。以前の経験は、０．０２％のポリソルベート２０が、これらの双方のストレスから完全に保護するのに十分であることを示唆した（データ未掲載）。検証として、臨床用製造について予期される順序でこれらのストレスを逐次組み合わせ、ストレス後にインキュベーション期間を追加して、あらゆる可能な粒子の増殖を可能にした。最初に、原薬に３回の管理されない凍結解凍サイクルを施して、材料を濾過し、バイアルに充填した。次に、それを卓上で振盪し、ＳＥ−ＨＰＬＣおよびＭＦＩによって試験する前に、４０℃で１週間インキュベートした。試験された条件は、２４０ｍＭのトレハロース、２０ｍＭのヒスチジン／ヒスチジンＨＣｌ、ｐＨ６で、０〜０．０３％ｗ／ｖの様々なレベルのＰＳ−２０中に配合された、２〜１００ｇ／Ｌの濃度範囲の極値であった。結果は、図２、３、および４に見られる。
モノマー画分データは、２ｇ／Ｌの溶液がポリソルベートレベルとは無関係に純粋なままであったことを示し、およそ０．００５％未満の少量のポリソルベート２０は１００ｇ／Ｌで小量の凝集を引き起こしたが、これらの結果それ自体は「不適合境界」を示唆しなかった。利用されたストレスは重度であり、劣化レベルは最小であり、したがって試験された任意のＰＳ−２０レベルが、ＳＥＣ凝集の観点から適切であり得る。２ｇ／Ｌでは、肉眼不可視粒子数が非常に高く、試験された範囲のポリソルベート２０によって制御されなかった。１００ｇ／Ｌでは、高い肉眼不可視粒子数は、０．００３％以上のＰＳ−２０の存在によって制御された。総合すると、このデータは、ＰＳ−２０レベルが０．００３％以上に維持されるべきであることを示唆した。
以下で考察されるように、肉眼不可視粒子を制御する代替え方法が、低濃度溶液に対して必要であった。
ｂ．ｐＨのスクリーン
溶液ｐＨの効果は、５〜７．５のｐＨ価で、２、２０、および１００ｇ／Ｌ溶液で試験された。配合の残りは一定であり、２４０ｍＭのトレハロース、２０ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣｌ、および０．０２％のＰＳ−２０を含んだ。溶液を調製し、試験する前に４０℃で１ヶ月間保存した。全てのサンプルについて、ＳＥ−ＨＰＬＣによるモノマー損失、ＭＦＩによる肉眼不可視の粒子、および目視検査による可視粒子を評価した。１００ｇ／Ｌのサンプルについて、ＲＰ−ＨＰＬＣおよびｃＩＥＦをはじめとする追加的な試験を実施した。結果は、図５および６に提供される。
凝集および断片化は、５．５〜６．５のｐＨ範囲内で最小化された。ｃＩＥＦからの結果は、ｐＨ７．０以上の標準試料と相反した。肉眼不可視粒子数は、低いか、または溶液ｐＨに関するいかなるパターンも示さないかのどちらかであった。可視粒子スコアは、ｐＨ５．５〜６．５でより高かった。これらのスコアは高かったが、サンプルは、より高い粒子数が慣例的に見られる、光の近くで検査された。プロテインＡ上のさらなる精製によってＨＣＰレベルが低下したのは材料であったことから、原材料もまた、高い粒子レベルに寄与している可能性があった。この試験は、粒子形成視点からの最適ｐＨが、ｐＨ５またはｐＨ≧７であることを示唆した。しかし、可視粒子スコアは、ここでは過大評価されていると理解されるため、この試験の結果として、ｐＨをｐＨ６．０から変化させることはしなかった。
ｃ．配送の効果
製剤は、配送のために堅固である必要があるため、それらをプレフィルドシリンジ内の様々なタンパク質およびＰＳ−２０濃度で試験した。製剤は、２〜１００ｇ／Ｌの抗ＩＬ５Ｒおよび０〜０．０５％のＰＳ−２０で変動し、その他の条件は、２４０ｍＭのトレハロース、２０ｍＭのヒスチジン／ヒスチジンＨＣｌ、ｐＨ６で一定であった。グリシン、塩化カルシウム、ｐＨ５．５、ｐＨ６．５、および０．０２％のポリソルベート８０をはじめとするいくつかのその他の条件を２ｇ／Ｌで試験した。これらの条件のいずれも、ポリソルベート２０添加ｐＨ６のトレハロース製剤に対する改善を示さなかったため、さらに考察されなかった。
１ｍＬのサンプルが、０．４ｍｇのシリコーン油と共に、プラットフォームＰＦＳ内に充填された。サンプルは、配送され、５℃、２５℃、および４０℃で保存されて、目視検査、ＭＦＩ、およびＨＩＡＣによって２ヶ月間にわたり試験された。結果は、図７に報告される。
プロットは、２５℃で１ヶ月間の保存後におけるＭＦＩからの肉眼不可視粒子数を示す。ＨＩＡＣからの、またはその他の温度での保存後の、肉眼不可視粒子数は、示されるデータセットと同様の傾向を示した。目視検査は、塩化カルシウムを含有したものを除いて、サンプルのいずれでも高い可粒子数を示さなかった。高タンパク質濃度の溶液（≧２０ｇ／Ｌ）は、いくらかのＰＳ−２０が存在がしさえすれば配送のために堅固であった。そのため、２０〜１００ｇ／Ｌの溶液の長期安定性試験のために、トレハロース製剤を使用した。
配送データは、高く極めて変わりやすい肉眼不可視粒子数によって観察されるように、低濃度の製剤が堅固でないことを確認した。データはまた、ポリソルベート単独では問題が解決されなかったことを示し、したがって低濃度溶液には組成変更が必要であった。
ｄ．低濃度ＤＳの組成変更
低濃度組成変更スクリーンに疑似輸送によるストレスを与えて、ＭＦＩによって試験した。示される肉眼不可視粒子数は粒子＞１０μｍであり、アスペクト比フィルターされ、傾向はその他の粒度と同様であった。
製造中に、トレハロースを含有する高濃度（≧１００ｇ／Ｌ）の未処方原薬（ＵＤＳ）を製造して冷凍した。この高濃度中間体の保存は、２〜１００ｍｇ／ｍＬの製剤範囲にわたる様々な製剤への希釈を可能にするために必要である。ＵＤＳからの希釈は、いくらかの残留トレハロースをもたらし、組成の均一性のために、低用量範囲全体にわたり、単一トレハロース濃度が使用される。緩衝液およびｐＨは、変更されなかった。
最初のスクリーンを使用して、トレハロース製剤が安定している最小タンパク質濃度を判定し、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌまたは塩化ナトリウムを添加した１５０ｍＭのトレハロース中に配合することによる、イオン強度増大の効果を判定した。下に示される結果は、タンパク質濃度≧１０ｇ／Ｌが安定していることを示唆するが、堅固さのために低濃度範囲を２〜２０ｇ／Ｌに設定した。イオン強度増大は、双方の賦形剤でより安定した溶液をもたらした。例えば、図８を参照されたい。
次の試験は、アルギニンまたはＮａＣｌ濃度の最適化に焦点を合わせ、全ての試験で、最悪例として場合２ｇ／Ｌのタンパク質濃度が使用された。各賦形剤について、０．０２％のＰＳ−２０で、広いおよび狭い賦形剤濃度スクリーンを実施した。最初のアルギニンスクリーンを様々な量のトレハロースで実施し、溶液は、２７０ｍＭのアルギニンを２５０ｍＭのトレハロースと合わせることで作成された。目的は浸透圧を保つことであったが、計算が誤っていたため（アルギニンＨＣｌは二価である）、アルギニンを含有する溶液は高浸透圧性であった。残りの賦形剤濃度スクリーンは、１００ｇ／Ｌ原液からの希釈後の２０ｇ／Ｌトレハロースをベースとして、４０または５０ｍＭの一定のトレハロース濃度で実施された。結果は、図９および１０に提供される。
幅広いアルギニンおよびＮａＣｌスクリーンの結果は、安定した製剤を製造するためには、濃度が、５０ｍＭのアルギニンまたは７５ｍＭのＮａＣｌを上回る必要があることを示唆した。７５〜１５０ｍＭのアルギニンまたは１００〜２００ｍＭのＮａＣｌの狭い濃度スクリーンは、範囲全体を通じて、低い粒子数をもたらした。これは、これらの範囲中央の濃度が、堅固な製剤をもたらすことを示唆し、５０ｍＭの残留トレハロースとの組み合わせで、１３０ｍＭが等浸透圧として選択された。
同一方法を使用して、新規製剤について、ＰＳ−２０濃度の最適化をチェックした。これらの実験は、狭い賦形剤濃度スクリーンと併行して実施されたため、中間点濃度を使用した。試験された条件は、０．０１〜０．１％のＰＳ−２０、１１５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、４０ｍＭのトレハロース、および０．０１〜０．０５％のＰＳ−２０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのトレハロースであった。０．０２％のＰＳ−８０で、２、３のサンプルが試験されたが、対応するＰＳ−２０の結果よりも高いカウントが得られた（データ未掲載）。粒子数は、試験された全てのポリソルベートレベルにおいて低く、新規製剤中でレベルを０．０２％から変更する必要がないことが示唆された。例えば、図１１を参照されたい。
低濃度の抗ＩＬ５Ｒに対する組成変更の結果は、アルギニンまたはＮａＣｌのどちらも、製剤を短期間安定化できることを示唆した。検討された製剤は、２〜２０ｇ／Ｌのタンパク質濃度のための５０ｍＭのトレハロース、２０ｍＭのヒスチジン／ヒスチジンＨＣｌ、０．０２％のＰＳ−２０が添加された、１３０ｍＭのアルギニンＨＣｌまたは１３０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ６であった。
ｅ．バイアルおよびＰＦＳ考察
上で開発された３種の製剤（トレハロース中の２０〜１００ｍｇ／ｍＬ、トレハロース／アルギニン中の２〜２０ｍｇ／ｍＬ、およびトレハロース／ＮａＣｌ中の２〜２０ｍｇ／ｍＬ）は、バイアルおよびＰＦＳ形状の双方に適した。バイアル形状は、４４３２／５０ Ｗｅｓｔストッパー付きの３ｃｃ Ｓｃｈｏｔｔバイアルであった。バイアル形状に関する最大リスクは、ストッパー上のシリコーン油レベルであったため、シリコーン油レベルが、一般に使用されるもの（０．００７〜０．０２４ｍｇ／ｃｍ2）よりも、高いストッパー（０．０３９ｍｇ／ｃｍ2）で、長期安定性試験を実施した。
抗ＩＬ５Ｒ製剤と共に試験されたシリンジは、０．４ｍｇのＳｉ油を含有して、ＢＤ２６０硬質針シールドで覆われる、クリップドフランジおよびステーキド２９Ｇ肉薄針付きのプラットフォームシリンジＢＤ １ｍＬ Ｌｏｎｇ ＰＦＳであった（カタログ番号４７３６３１１９）。
ｆ．長期安定性試験
２つの長期安定性試験を実施して、スクリーニング試験からの判定を確認した。安定性試験＃１は、ＰＦＳおよびバイアル中のトレハロースおよびアルギニン／トレハロース製剤の長期安定性を調べた。さらに、ＰＦＳの比較を行ったが、これはここでは考察されない。安定性試験＃２は、試験＃１で調べた形状について別ロットの材料からのデータを提供するために、およびまたＮａＣｌ／トレハロース製剤区分と、ＰＦＳおよびバイアル内の１／２ｍＬ〜１ｍＬの充填容量の影響を調査するために開始した。
ｉ．安定性試験＃１：抗ＩＬ５ＲＰＦＳ提供形態の安定性
バイアルを対照として、シリンジ内で安定性試験を実施した。配合区分の各端点を各一次容器内で試験した。試験されたシリンジは、プラットフォームＨｙｐａｋ（商標）ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈであり、これは、実質的にタングステンを含まない、２９Ｇ肉薄針付き、０．４ｍｇのシリコーン油含有、ＢＤ ｇｌａｓｓ １ｍＬ ｌｏｎｇシリンジであった。使用されたバイアルは、Ｗｅｓｔ ４４２３／５０ストッパーおよび被覆シール付きの３ｃｃ Ｓｃｈｏｔｔバイアルであった。
充填された製剤は、次のとおりであった。
・２および２０ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ５Ｒ抗体、１２５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、５０ｍＭのトレハロース、２０ｍＭのヒスチジン／ヒスチジンＨＣｌ、０．０２％のＰＳ−２０、ｐＨ６；および
・２０および１００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ５Ｒ抗体、２５０ｍＭのトレハロース、２０ｍＭのヒスチジン／ヒスチジンＨＣｌ、０．０２％のＰＳ−２０、ｐＨ６。
ａ．抗ＩＬ５Ｒプレフィルドシリンジ提供形態の純度
いずれの製剤についても、モノマー損失に対する一次容器の有意な効果はなかった。タンパク質濃度のいくらかの影響が観察されたが、モノマー損失率は一貫して低かった。図１２Ａを参照されたい。
ｂ．抗ＩＬ５Ｒプレフィルドシリンジ提供形態の粒子分析
粒子形成は、抗ＩＬ５Ｒの主要な分解経路と考えられるため、適切なＰＦＳの判定に大きな役割を果たすと考えられる。ＨＩＡＣによる肉眼不可視粒子測定は、おそらくシリコーン油滴に起因するＰＦＳ中の粒子数の増大を示した（図１２Ｂおよび１２Ｃを参照されたい）。しかし、全粒子数は、全ての形状について、６０００個の粒子＞１０μｍ／ｍＬおよび６００個の粒子＞２５μｍ／ｍＬのＵＳＰ許容限度を十分下回ったままである。ＭＦＩが直交法として使用され、同様の結果が示されたが、シリコーン油小滴は、ＭＦＩソフトウェアの結果からフィルターして除去し得るため、容器間ではより少ない差が観察された。
ｉｉ．５℃におけるＨｙｐａｋ（商標）ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈ内の安定性の要約
表１は、アルギニン製剤では最長１６ヶ月間、トレハロース製剤では２４ヶ月間までの、５℃における、Ｈｙｐａｋ（商標）ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈシリンジ内の抗ＩＬ５Ｒについて得られる、安定性データ（安定性試験＃１）の要約を示す。視覚的粒子が検出され，それはＰＳ−２０濃度の０．０２％から０．００６％への低下を引き起した。その他の高リスクが同定されたが、肉眼不可視粒子数は変動しなかった。
Figure 2016535020
ｉｉｉ．安定性試験＃２
安定性試験＃２は、プレフィルドシリンジおよびバイアル内の切り分けされた安定性試験であり、低用量製剤および充填容量を決定して、プラセボ安定性を確認するように設計された。
ＰＦＳを選択するために利用した先の安定性試験は、１ｍＬの充填容量のみを有した。しかし、より低い充填容量には、注射時の疼痛低減、皮下のより小さいしこり、より迅速な投与、および投与部位からのより少量の漏出をはじめとする、いくつかの潜在的利益があった。
１ｍＬ充填オプションのための切分けストラテジーは、２〜２０ｇ／Ｌの低用量および２０〜１００ｇ／Ｌの高用量のタンパク質濃度の２つの区分であった。１／２ｍＬ充填のための同一区分は、１〜５０ｍｇの用量範囲をカバーし、およびまた５０〜１００ｍｇの用量のための１／２〜１ｍＬからの１００ｇ／Ｌの充填容量区分を要した。これは、明確にするために、図１３にグラフで示される。どちらの場合も、アルギニンおよびＮａＣｌベース双方の製剤中で、最低用量区分が試験された。
充填された原薬およびプラセボは、次のとおりである。
・全ての溶液：２０ｍＭのヒスチジン／ヒスチジンＨＣｌ、０．０２％のＰＳ−２０、ｐＨ６．０
・２Ａｒｇ／２０Ａｒｇ：２または２０ｇ／Ｌの抗ＩＬ５Ｒ、１２５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、５０ｍＭのトレハロース
・２ＮａＣｌ／２０ＮａＣｌ：２または２０ｇ／Ｌの抗ＩＬ５Ｒ、１３０ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのトレハロース
・２０Ｔｒｅ／１００Ｔｒｅ：２０または１００ｇ／Ｌの抗ＩＬ５Ｒ、２５０ｍＭのトレハロース
・Ａｒｇプラセボ：１２５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、５０ｍＭのトレハロース
・ＮａＣｌプラセボ：１３０ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのトレハロース
・Ｔｒｅプラセボ：２５０ｍＭのトレハロース
１／２ｍＬ充填容量は、より高い表面積対体積比のために、考えられる最悪の形状である見込みが高かったため、試験全体のサイズを低下させるために、１ｍＬの充填容量形状は、いずれのバイアル形状またはＰＦＳ内のプラセボについても試験されなかった。
全てのサンプルを配送し、次に、５、２５、および４０℃で安定させた。バイアルは、安定中に倒立して保存して、ストッパーとの接触を最大化した。その時点で、より以前の試験中に可視粒子が発見され、この定性試験について６週間のデータが収集された。さらに、この試験の３〜６ヶ月間の時点で、ＮａＣｌ製剤中で粒子が観察され（データ未掲載）、アルギニン製剤の選択につながり、ＮａＣｌ製剤が拒否された。
可視粒子形成を軽減するのに要した追加的な製剤研究が、続く実施例に記載され、ポリソルベート２０濃度の０．０２％〜０．００６％への低下がもたらされた。この製剤に関して、その他の安定性懸念は観察されず、容器または充填容量の有意な影響も観察されなかった。可視粒子スコア、ＳＥＣによる純度低下、ＨＩＡＣによる粒子数、および効力をはじめとする、１年間の安定性データが図１４に要約される（全ての形状が全ての時点で試験されたわけではない）。
実施例１の結論
凍結／解凍、撹拌、シリコーン油添加、および加速安定性をはじめとする様々なストレス方法を使用して、製剤スクリーニングが実施された。長期安定性を使用して、スクリーニング試験の結果を確認した。第２ｂ相トレハロース製剤は、ポリソルベート濃度を増大させた高濃度の液体では成功したが、低濃度の液体にすると、主に肉眼不可視粒子形成を通じて不安定性を示した。低い濃度範囲は、塩酸アルギニンまたは塩化ナトリウムのどちらかのイオン強度を増大させることで組成変更されて、安定した溶液がもたらされた。
幅広い可能な用量（２〜１００ｍｇ）をカバーするための、３つの可能な配合区分は、次のとおりであった。
・２〜２０ｇ／Ｌ、１３０ｍＭの塩酸アルギニン、５０ｍＭのトレハロース二水和物、２０ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン塩酸塩、０．０２％のポリソルベート−２０、ｐＨ６．０；
・２〜２０ｇ／Ｌ、１３０ｍＭの塩化ナトリウム、５０ｍＭのトレハロース二水和物、２０ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン塩酸塩、０．０２％のポリソルベート−２０、ｐＨ６．０；および
・２０−１００ｇ／Ｌ、２５０ｍＭのトレハロース二水和物、２０ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン塩酸塩、０．０２％ポリソルベート−２０、ｐＨ６．０。
最大で２４ヶ月間の長期安定性は、全ての３つの製剤が、２〜８℃で撹拌に対して安定しており、シリコーン油に対して比較的非感受性で、バイアルおよびＰＦＳと適合性であったことを示唆する。さらに、高温において最小の劣化が観察された。アルギニンオプションと比較して可視粒子形成が増大したために、２つの低濃度製剤の継続する観察はＮａＣｌオプションを除外し、２つの配合区分がもたらされた。データは、プレフィルドシリンジが、１ｍＬまたは１／２ｍＬ充填容量のどちらについても許容できる一次容器であることを示唆した。以下の実施例で対処されるように、可視粒子形成は、これらの製剤に関わる残された問題であった。
実施例２ − 抗ＩＬ５Ｒ製剤中の粒子形成
可視粒子は、以前の長期安定性試験において、バイアルおよびＰＦＳの双方内で抗ＩＬ５Ｒの水性製剤中に検出され、最初の検出発生は６ヶ月の時点であった（データ未掲載）。長期間にわたり保存された、ポリソルベート２０（ＰＳ−２０）を含む抗ＩＬ５Ｒ抗体製剤中の可視粒子形成を軽減するために、試験が実施された。以下の実施例は、粒子形成を軽減する上でＰＳ−２０濃度が有する重要性を確認するための、様々なＰＳ−２０およびタンパク質濃度を含む製剤の長期間試験を記載する。この試験は、０．００２〜０．０１％のＰＳ−２０の許容範囲をもたらした。
Figure 2016535020
予備試験
実施例１に記載される長期安定性試験において、粒子形成が検出された。しかし、粒子は非常に小さく、個々の粒子というよりも雲のように見えた。粒子を見るために、サンプルは光源近くで検査された。粒子は、バイアルおよびＰＦＳ標準物質セットのものと異なったため、サンプルは、互いに、ならびに各時点における標準物質と比較された。
粒子は、０．０２％のＰＳ−２０添加１００ｇ／ＬのＴｒｅバイアル内で、６ヶ月時点で最初に検出された。
（１）バイアルおよび（２）プレフィルドシリンジ（ＰＦＳ）内で、６ヶ月目および１１ヶ月目のサンプルを比較した。どちらの試験も粒子形成が、ＰＦＳよりもバイアル内でさらに重度であることを示したが、ＰＦＳ標準物質はその時点で利用できなかったため、数値的な比較は入手不能である。ＰＦＳからのサンプルは、外観試験のためにデカントしてバイアルに注入された。これらのバイアル内では、粒子はもはや観察されず、違いが経路長効果ではないことが確認された。トレハロース製剤中では、このバイアル−対−ＰＦＳの差異が、アルギニン製剤中よりもさらに顕著であった。
配送後における、バイアルおよびＰＦＳの双方内の１００ｇ／ＬのＴｒｅ製剤中の様々なＰＳ−２０濃度（０、０．０１、０．０２、および０．０３％）の比較を行った。より低いＰＳ−２０濃度である、０および０．０１％のＰＳ−２０では、１１ヶ月時点で全く粒子を含まなかった。０．０２％および０．０３％のＰＳ−２０では、バイアルおよびＰＦＳの双方内で粒子が目に見えた。２０ヶ月目には、０および０．０１％のＰＳ−２０ＰＦＳおよび０％のＰＳ−２０バイアルは、透明なままであったが、０．０１％のバイアルは、粒子の非常に小さな漏斗雲を有した。
標的化試験では、光源近くに保持した場合、１００ｇ／ＬのＴｒｅ、０．０２％のＰＳ−２０バイアルおよびＰＦＳ内で、場合によっては早くも３〜４ヶ月で、粒子が明確に視認できた。Ｔｒｅ区分の低濃度（２０ｇ／Ｌ）端では、粒子ははるかにより緩慢に形成されて、２１ヶ月目のバイアルのみで観察された。最長２１ヶ月間の利用可能データによれば、２０ｇ／ＬのＴｒｅ ＰＦＳ内では、いかなるＰＳ−２０濃度でも粒子は観察されなかった。アルギニン製剤中の粒子形成は、いくらかより緩慢であり、６〜９ヶ月目における０．０２％のＰＳ−２０で、区分の高濃度（２０ｇ／Ｌ）端で粒子が観察された。最長１６ヶ月間の利用可能データによれば、あらゆるＰＳ−２０濃度の２ｇ／ＬのＡｒｇ製剤中では、どちらの容器内にも粒子が観察された。
加速およびストレス温度試験は、粒子形成に関する洞察を提供しなかった。４０℃では、３ヶ月間の試験期間にわたり、粒子は全く形成しなかった。２５℃では、粒子形成は、５℃と比較して同様であり、またはわずかに低下した。
このデータは、区分の高タンパク質濃度端には可視粒子のリスクが高く、低端には長期的な潜在リスクがあることを示唆した。粒子形成を軽減するために、ＰＳ−２０の濃度の低減を調べた。一次容器は、プラットフォームＰＦＳのままであり、バイアル内では粒子形成がより重度でより容易に見られることから、バイアルが粒子形成の早期読み取りとして使用された。
様々なＰＳ−２０濃度の調査
大規模な安定性試験を設計して、様々な製剤、様々なＰＳ−２０濃度、および様々な抗体濃度における粒子形成を調べた。全てのサンプルをＰＦＳおよびバイアルの双方内に充填して、別々の場所に２回配送して、流通過程加工をシミュレートし、５℃で安定させた。外観試験を毎月実施した。０、３、６、および９ヶ月の時点で、サンプルの部分集合について、ＳＥＣ、ＨＩＡＣ、およびＭＦＩもまた試験した。図１５は、この試験の一部として調製されたサンプルを示す。
０時間目のＰＦＳに関する図１６のＭＦＩデータによって示されるように、いかなるＰＳ−２０もなければ、肉眼不可視粒子は配送時に形成された。試験された最低レベル以上のＰＳ−２０（０．００２％）は、配送ストレスから保護するのに十分であった。さらに、最低ＰＳ−２０濃度（０．００２％）は、規模縮小モデルを使用した、タンク内のＤＳ配送ストレスから保護するのに十分であることが確認された（本明細書にはデータ未掲載）。
粒子の外観結果は、双方の配合区分について、約０．０１％のＰＳ−２０のバイアル内に顕著な粒子形成があり、０．０２％のＰＳ−２０のＰＦＳ内にいくらかの粒子があり、双方の区分のより低い濃度端では、より少ない粒子が観察されたことを示した。図１７を参照されたい。粒子の最初の観察は、１００ｇ／ＬのＴｒｅでは３ヶ月目であり、２０ｇ／ＬのＡｒｇでは６ヶ月目であった。図は、最新の時点である９ヶ月目における粒子形成に対する、タンパク質およびＰＳ−２０濃度影響を例示する。粒子形成観察は、全て光源近くで実施されたことに留意されたい。
外観データは、ＰＳ−２０濃度の上限を０．０１％に設定し、肉眼不可視粒子数は、下限を０．００２％に設定する（利用可能データからであり、実際の限界はより低くあってもよい）。この許容範囲（０．００６％）の中点が、新規ＰＳ−２０濃度として設定された。
２ｇ／ＬのＡｒｇおよび２０ｇ／ＬのＡｒｇでは最長９ヶ月間のデータ、２０ｇ／ＬのＴｒｅおよび１００ｇ／ＬのＴｒｅでは最長１８ヶ月間のデータを含む、区分端サンプルについて、ＰＦＳの総合安定性を確認した。以下のアッセイが、試験された：
Ａ．０．００２、０．００６、および０．０１％のＰＳ−２０：外観、ＨＩＡＣ、ＭＦＩ、およびＳＥＣ。
Ｂ．０．００６％のＰＳ−２０のみ：インストロン、ＢｉｏＡｓｓａｙ、ＢｉｏＡｎａｌｙｚｅｒ、ＲＰ、およびｃＩＥＦ。
全てのデータは、新規製剤が安定しており、低リスクであったことを示唆する。データの要約は、表２に示される。
Figure 2016535020
実施例２からの利用可能データは、ＰＳ−２０濃度の０．００６％への低下が粒子形成を軽減し、その後の不良の徴候なしに、少なくとも９ヶ月間（アルギニン製剤）または１８ヶ月間（トレハロース製剤）にわたり安定している、抗体製剤製品が製造されたことを示唆した。
実施例３
粒子検出のための直交法
粒子検出および定量化のための主要方法は、実施例２に例示されるような目視検査による外観試験であった。目視検査は、いくつかの理由から変動した。一般に、目視検査は、ヒト知覚の内在的変動性のために変動し、異なる個人では異なる結果がもたらされた。これらの粒子の非常に小さなサイズのために、それらの視認性は光量に高度に左右され、それらはバイアルおよびＰＦＳの双方で、粒子標準物質とは異なった。これらの要因は、時点間および分析者間における結果の変動性を増大させた。
外観結果を確認するために、直交法を調べた。トレハロース製剤中で形成された粒子は、個々に見るには小さすぎたため、肉眼不可視粒子法を調べた。２週間、および２、５、および９ヶ月目の様々なロットからの最悪例サンプル（１００ｇ／Ｌ、Ｔｒｅ、０．０２％のＰＳ−２０、バイアル）が、ＤＬＳ、ＦＣ、ＨＩＡＣ、およびＭＦＩによって比較された。
ＤＬＳが１００ｇ／Ｌで実施され、予測されたように主要ピークの過小評価と、全てのピークサイズの不信頼性をもたらした。２、５、および９ヶ月目のサンプルでは、サイズが１．４〜２．２μｍの大きなピークが検出された。報告されたサイズは信頼できなかったが、ピークの存在は可視粒子と相関した。しかし、報告された粒度または粒子ピーク強度のどちらも、外観結果と相関しなかった。
ＨＩＡＣ結果は、全てのサンプルで同様であり、粒子は検出されなかった。
＞１０μｍおよび＞２５μｍ粒子のＭＦＩカウントは、全てのサンプルで同様であった。しかし、＞１μｍおよび＞２μｍ粒子のＭＦＩカウント、およびＦＣカウントは、外観結果と同じ傾向を示しており、試料齢の関数として増大する。これらのサンプルの結果は、図１８に示される。
さらなる実験は、ＭＦＩによる＞１μｍ粒子が、大型粒子またはＦＣカウントよりも、さらに信頼できる外観結果に関する傾向を提供することを示唆する（データ未掲載）。
可視粒子を示す２０ｇ／ＬのＡｒｇサンプルで同様の実験を実施したが、いずれの直交法も、これらの粒子の検出に成功しなかった。アルギニン製剤中に形成された粒子は、トレハロース中に形成されたものよりもはるかに大型のようであり、個々の粒子が見られたが、これが、肉眼不可視粒子法でそれらが検出されなかった理由であると思われた。
ＭＦＩを使用して、実施例２におけるＰＳ−２０濃度の効果を確認した。ＭＦＩと外観スコアの比較は、実施例２の９ヶ月時点について図１９に示される。追加的な測定値（図示せず）と共に、比較は、ＭＦＩ数が、およそ１００，０００個の粒子＞１μｍ／ｍＬを超えた場合に、粒子が目に見えたことを示唆した。ＭＦＩ結果は、０．００２〜０．０１％のＰＳ−２０によって、特にＰＦＳ内で、粒子形成が軽減されたという結論への追加的支持を提供した。バイアルデータは、最悪例を検討し、０．００６％のＰＳ−２０の標的濃度で安定していた。
実施例４
安定性試験
追加的な安定性試験を実施して、０．００６％のＰＳ−２０濃度という新しい標的で、先の試験の全ての形状を調べ、これらの製剤が安定しているという信頼性を追加した。タンパク質濃度区分ならびに充填容量区分に含まれる区分は、図２０にグラフで示される。
充填容量区分の追加は、トレハロース製剤によってカバーされる用量範囲を増大させた。これらの追加的な形状は、粒子形成がより緩慢で直交法によって検出され得ないためにより危険度の高い、アルギニン製剤と関連するリスクを低下させた。この安定性試験に含まれるサンプルは、次のとおりであった：
・０、２、および２０ｇ／Ｌの１ｍＬ充填、アルギニン製剤、０．００６％のＰＳ−２０；
・０および２ｇ／Ｌの０．３ｍＬ充填、アルギニン製剤、０．００６％のＰＳ−２０；
・０、２０、５０、および１００ｇ／Ｌの１ｍＬ充填、トレハロース製剤、０．００６％ＰＳ−２０；および
・０および２０ｇ／Ｌの０．３ｍＬ充填、トレハロース製剤、０．００６％ＰＳ−２０。
サンプルを離れた場所に２回配送して流通過程をシミュレートし、次に５℃、２５℃、および４０℃で安定させた。
アルギニン製剤では９ヶ月間のデータが収集され、トレハロース製剤では１２ヶ月間のデータが収集された。結果は、歴史的データに一致して、この時点までに、これらのサンプル中に粒子は観察されなかった。さらに、肉眼不可視粒子中に経時的傾向は観察されなかったが、中程度に高い外れ値が、少数出現した。全てのアッセイの結果の範囲は、表３に示される。
Figure 2016535020
データは、総用量範囲に関する、この製剤区分の推奨を支持した。トレハロース区分は、リスクがアルギニン区分よりも低く、６ｍｇ程度に低い用量について推奨された。
実施例２〜４の結論
以前の長期安定性試験における粒子観察は、安定性を改善するために変化させ得る製剤変数の研究に導いた。重要な変数であるタンパク質およびポリソルベート濃度が試験され、分析された。上で報告されるデータに基づいて、０．００２％〜０．０１％の許容範囲、および０．００６％のポリソルベートの標的は、抗ＩＬ５Ｒ抗体製剤に関して最適の配合と判定された。この観察は、１８および１２ヶ月間の利用可能データがある２つの安定性試験によって、主に外観試験によって支持された。
２０ｍｇ／ｍＬで０．３〜１．０ｍＬの容量区分を使用して、６〜２０ｍｇの範囲において、アルギニン製剤でなくトレハロース製剤を使用し得ることもまた、観察された。トレハロース製剤は、より大型のデータセットとより良い検出のために、アルギニン製剤よりもさらに予測可能であることが分かった。
実施例５
宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）の低減に焦点を合わせて、追加的な精製開発を実施して、粒子形成に対するＨＣＰの効果を判定した。抗ＩＬ５Ｒは、図２１に概説されるようにして精製された。
プロテインＡカラムの通過画分の２Ｄゲル分析は、いくつかのタンパク質種が存在したことを示唆した。例えば、図２２を参照されたい。逆相質量分光分析（ＲＰ−ＭＳ）による判定で、主要な不純物は、約６０％のＦａｂ断片、約５％の軽鎖（ＬＣ）および断片、および約４０％の非抗ＩＬ５Ｒ関連宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）を含んだ。非抗ＩＬ５Ｒ関連ＨＣＰは、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、フルクトース二リン酸アルドラーゼ、およびトランスアルドラーゼを含んだ。
プロテインＡカラムの通過画分をタンパク質Ｌカラムにさらに通過させて、（１）Ｆａｂ断片を（２）非抗ＩＬ５Ｒ ＨＣＰからさらに分離した。Ｆａｂ断片でなく、非抗ＩＬ５Ｒ ＨＣＰ中のいくつかの材料が、粒子形成の原因であることが分かった（データ未掲載）。
主要なＨＣＰが、粒子形成の原因であることを判定するために、ＧＳＴを最初に調べた。粒子形成におけるＧＳＴの役割は、（１）粒子形成に対する効果を判定するためのＧＳＴの選択的除去、（２）ペレット中のＧＳＴの存在を判定するための粒子ペレットの分析、および（３）粒子形成に対する効果を判定するための抗ＩＬ５Ｒ製剤へのＧＳＴ添加によって調べた。
グルタチオン−セファロース抱合体からできているアフィニティマトリックスを使用したＧＳＴの特異的除去の予備的証拠は、ＧＳＴ除去が粒子形成低下をもたらしたことを示唆した（データ未掲載）。プロテインＡ通過画分から形成されるペレット分析は、ペレット中の高濃度のＧＳＴを示唆した（データ未掲載）。
粒子を欠く精製抗ＩＬ５Ｒ製剤に、ＧＳＴを添加（すなわち、スパイク）して、粒子製剤に対するＧＳＴの効果を判定した。ＧＳＴは、商業的供給源（Ｐｒｏｓｐｅｃ）から入手された。５０ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ５Ｒ、２０ｍＭのヒスチジン−ＨＣｌ緩衝液、９％（ｗ／ｖ）のトレハロース、０．０２％のＰＳ−２０、ｐＨ６．０を含む製剤にＧＳＴを添加して、３．８μｇ／ｍｇおよび７．６μｇ／ｍｇのＧＳＴ濃度を得た。サンプルは、３８〜４２℃でインキュベートした。サンプルをライトボックスに載せて、粒子を観察した。粒子形成を観察するために必要なインキュベーション時間は、ＧＳＴの存在レベルに左右された。３．８μｇ／ｍｇおよび７．６μｇ／ｍｇの双方のＧＳＴ添加サンプルについて、３８〜４２℃で２４時間後に粒子が観察された（データ未掲載）。
これらの結果は、抗ＩＬ５Ｒ製剤へのＧＳＴ添加が、抗ＩＬ５Ｒ製剤中で粒子形成を引き起こすことを示唆した。
実施例６
様々な手段によって精製された様々な抗ＩＬ５Ｒ製剤中のＧＳＴ活性を調べた。準備事項として、ＧＳＴ（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ）の活性アッセイを使用してＧＳＴ濃度を判定し、標準曲線を形成した。ＧＳＴは、３４０ｎＭで検出されるＧＳ−ＤＮＢ抱合体を形成するために、１−クロロ−２，４−ジニトロベンゼン（ＣＤＮＢ）などの求電子性化合物へのグルタチオン（ＧＳＨ）のチオール基形成を触媒する。したがって、３４０ｎＭにおける吸収増大は、ＧＳＴ活性と正比例する。このアッセイを使用して、様々な手順を使用して精製された様々な抗ＩＬ５Ｒ製剤（サンプルＡ〜Ｊ）について、ＧＳＴの濃度を判定した。ＧＳＴ濃度と粒子形成の間の相関が、注目された。結果は、表４に提供される。
Figure 2016535020
この証拠は、ＧＳＴの存在が、粒子形成と関連があることを確認する。
実施例７
様々な精製カラムを調べて、抗ＩＬ５Ｒ製剤中のＧＳＴ濃度を低下させる最も効率的な方法を同定した。表５を参照されたい。実施例７で概説されるようにして、ＧＳＴ濃度を判定した。
Figure 2016535020
表５は、プロテインＡカラム（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ）と混合モードクロマトグラフィーカラム（ＣａｐｔｏＡｄｈｅｒｅ）の双方が、抗ＩＬ５Ｒ抗体の精製中に、ＧＳＴ濃度を検出可能レベル未満に低減することに成功したことを示唆する。
実施例８
その他の抗体製剤中のＧＳＴの存在を調べた。これらの抗体製剤中の粒子の存在もまた調べた。結果は、コメントと共に表６に報告される。
Figure 2016535020
本明細書に記載される全ての様々な実施形態または選択肢は、あらゆる全てのバリエーションで組み合わせ得る。そのいくつかの実施形態を参照して、本発明を具体的に示し説明したが、当業者は、それらが単なる例として提示され、限定でなく、本発明の趣旨および範囲を逸脱することなく、形態および詳細の様々な変更が可能であることを理解するであろう。したがって本発明の広さおよび範囲は、上記の例示的な実施形態のいずれによっても限定されるべきではなく、以下の特許請求の範囲およびそれらの均等物によってのみ定義されるべきである。
学術誌論文または抄録、公開されたまたは対応する米国または外国特許出願、付与された特許もしくは外国特許、またはあらゆるその他の文献をはじめとする、本明細書で引用される全ての文献は、引用された文献中に提示される全てのデータ、表、数値、および文章を含めて、それぞれその全体を参照によって本明細書に援用する。

Claims (70)

  1. ａ．約２ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体、および
    ｂ．約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０
    を含み、前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む、安定した水性抗体製剤。
  2. 非荷電賦形剤をさらに含む、請求項１に記載の抗体製剤。
  3. 前記非荷電賦形剤が、トレハロースである、請求項２に記載の抗体製剤。
  4. 約２〜約２０ｍｇ／ｍｌの前記抗体を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体製剤。
  5. 約２０〜約１００ｍｇ／ｍｌの前記抗体を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体製剤。
  6. 非荷電賦形剤濃度が、約２０ｍＭ〜約８０ｍＭである、請求項４に記載の抗体製剤。
  7. 非荷電賦形剤濃度が、約２００ｍＭ〜約４００ｍＭである、請求項５に記載の抗体製剤。
  8. アルギニンをさらに含む、請求項４に記載の抗体製剤。
  9. 前記アルギニンが、Ｌ−アルギニンである、請求項８に記載の抗体製剤。
  10. 約１００ｍＭ〜約２００ｍＭのＬ−アルギニンを含む、請求項８に記載の抗体製剤。
  11. 約１２０ｍＭ〜約１４０ｍＭのＬ−アルギニン、および約４０ｍＭ〜約６０ｍＭの非荷電賦形剤を含む、請求項８に記載の抗体製剤。
  12. ヒスチジンをさらに含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の抗体製剤。
  13. ヒスチジン濃度が、約１５ｍＭ〜約３０ｍＭである、請求項１２に記載の抗体製剤。
  14. 前記抗体が、凍結乾燥されていない、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体製剤。
  15. 約２ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体を含み、前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む、安定した水性抗体製剤であって、約４０℃で少なくとも１ヶ月間の保存時に安定している、安定した水性抗体製剤。
  16. ａ．約２ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの抗体、
    ｂ．約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０、
    ｃ．約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのトレハロース、
    ｄ．約１１０ｍＭ〜約１５０ｍＭのＬ−アルギニン、および
    ｅ．約１５〜約３０ｍＭのヒスチジン
    を含み、前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む、安定した水性抗体製剤。
  17. ａ．約２０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体、
    ｂ．約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０、
    ｃ．約２００ｍＭ〜約３００ｍＭのトレハロース、および
    ｄ．約１５〜約３０ｍＭのヒスチジン
    を含み、前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む、安定した水性抗体製剤。
  18. ａ．約２ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの抗体、
    ｂ．約０．００６％のポリソルベート２０、
    ｃ．約５０ｍＭのトレハロース、
    ｄ．約１３０ｍＭのＬ−アルギニン、および
    ｅ．約２０ｍＭのヒスチジン
    を含み、前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む、安定した水性抗体製剤。
  19. ａ．約２０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体、
    ｂ．約０．００６％のポリソルベート２０、
    ｃ．約２５０ｍＭのトレハロース、および
    ｄ．約２０ｍＭのヒスチジン
    を含み、前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む、安定した水性抗体製剤。
  20. ａ．約３０ｍｇ／ｍＬの抗体、
    ｂ．約０．００６％のポリソルベート２０、
    ｃ．約２５０ｍＭのトレハロース、および
    ｄ．約２０ｍＭのヒスチジン
    を含み、前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む、安定した水性抗体製剤。
  21. 約２５℃で少なくとも３ヶ月間の保存時に安定している、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗体製剤。
  22. 約５℃で少なくとも１８ヶ月間の保存時に安定している、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体製剤。
  23. 約４０℃で少なくとも１ヶ月間保存された前記抗体が、保存されていない参照抗体と比較して、ＩＬ−５Ｒポリペプチドとの結合能力の少なくとも８０％を保つ、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗体製剤。
  24. 約５℃で少なくとも６ヶ月間保存された前記抗体が、保存されていない参照抗体と比較して、ＩＬ−５Ｒポリペプチドとの結合能力の少なくとも８０％を保つ、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗体製剤。
  25. 約４０℃で少なくとも１ヶ月間保存された前記抗体が、保存されていない参照抗体と比較して、ＩＬ−５Ｒポリペプチドとの結合能力の少なくとも９５％を保つ、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の抗体製剤。
  26. 約５℃で少なくとも６ヶ月間保存された前記抗体が、保存されていない参照抗体と比較して、ＩＬ−５Ｒポリペプチドとの結合能力の少なくとも９５％を保つ、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の抗体製剤。
  27. 約４０℃で少なくとも１ヶ月間の保存時に、ＨＰＳＥＣによる判定による判定で、２％未満の前記抗体が凝集を形成する、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の抗体製剤。
  28. 約５°で少なくとも１２ヶ月間の保存時に、ＨＰＳＥＣによる判定で、２％未満の前記抗体が凝集を形成する、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の抗体製剤。
  29. 約４０℃で少なくとも１ヶ月間の保存時に、目視検査による判定で粒子を実質的に含まない、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の抗体製剤。
  30. 約５℃で少なくとも１２ヶ月間の保存時に、目視検査による判定で粒子を実質的に含まない、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の抗体製剤。
  31. 注射用製剤である、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の抗体製剤。
  32. 静脈内、皮下、または筋肉内投与に適する、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の抗体製剤。
  33. 請求項１〜３２のいずれか一項に記載の抗体製剤を含有する、密封容器。
  34. 適切な容器内に請求項１〜３２のいずれか一項に記載の抗体製剤を含む、ヒトへの非経口投与に適する医薬単位用量剤形。
  35. 前記抗体製剤が、静脈内、皮下、または筋肉内投与される、請求項３４に記載の医薬単位用量剤形。
  36. 前記適切な容器が、プレフィルドシリンジである、請求項３４または３５に記載の医薬単位用量剤形。
  37. 前記プレフィルドシリンジが、針を含む、請求項３６に記載の医薬単位用量剤形。
  38. 前記針が、２９Ｇ肉薄針である、請求項３７に記載の医薬単位用量剤形。
  39. 前記プレフィルドシリンジが、プラスチックシリンジまたはガラスシリンジである、請求項３６〜３８のいずれか一項に記載の医薬単位用量剤形。
  40. 前記プレフィルドシリンジが、タングステンを実質的に含まない材料からできている、請求項３６〜３９のいずれか一項に記載の医薬単位用量剤形。
  41. 前記プレフィルドシリンジが、シリコーンで被覆されている、請求項３６１〜４０のいずれか一項に記載の医薬単位用量剤形。
  42. 前記プレフィルドシリンジが、フルオロポリマー樹脂ディスクを有するプランジャーを含む、請求項３６〜４１のいずれか一項に記載の医薬単位用量剤形。
  43. ａ．約２ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの抗体、および
    ｂ．約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０
    を含み、前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む、プレフィルドシリンジ。
  44. ｃ．約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのトレハロース、および
    ｄ．約１１０ｍＭ〜約１５０ｍＭのＬ−アルギニン
    をさらに含む、請求項３８に記載のプレフィルドシリンジ。
  45. ａ．約２０ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの抗体、および
    ｂ．約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０
    を含み、前記抗体が、配列番号１のアミノ酸配列を含む、プレフィルドシリンジ。
  46. ｃ．約２００ｍＭ〜約３００ｍＭのトレハロース
    をさらに含む、請求項４０に記載のプレフィルドシリンジ。
  47. ａ．約２ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの抗体、および
    ｂ．約０．００６％のポリソルベート２０
    を含み、前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む、プレフィルドシリンジ。
  48. ｃ．約５０ｍＭのトレハロース、および
    ｄ．約１３０ｍＭのＬ−アルギニン
    をさらに含む、請求項４７に記載のプレフィルドシリンジ。
  49. ａ．約２０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体、および
    ｂ．約０．００６％のポリソルベート２０
    を含み、前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む、プレフィルドシリンジ。
  50. ｃ．約２５０ｍＭのトレハロース
    をさらに含む、請求項４９に記載のプレフィルドシリンジ。
  51. ａ．約３０ｍｇ／ｍＬの抗体、および
    ｂ．約０．００６％のポリソルベート２０
    を含み、前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む、プレフィルドシリンジ。
  52. ｃ．約２５０ｍＭのトレハロース
    をさらに含む、請求項５１に記載のプレフィルドシリンジ。
  53. 請求項１〜３２のいずれか一項に記載の製剤、請求項３３に記載の容器、請求項３４〜４２のいずれか一項に記載の単位用量剤形、または請求項４３〜５２のいずれか一項に記載のプレフィルドシリンジを含む、キット。
  54. ａ．重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む抗体を約１ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬに精製するステップと；
    ｂ．前記単離抗体を安定化製剤に入れて、安定した水性抗体製剤を形成するステップであって、前記得られた安定した水性抗体製剤が、
    ｉ．約２ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体、および
    ｉｉ．約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０
    を含む、ステップと
    を含む、安定した水性抗体製剤を製造する方法。
  55. ａ．重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む抗体を約１ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬに精製するステップと；
    ｂ．ｉ．約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０、
    ｉｉ．約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのトレハロース、および
    ｉｉｉ．約１１０ｍＭ〜約１５０ｍＭのＬ−アルギニン
    を含む溶液中に、前記抗体を約２ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの前記抗体に希釈するステップと
    を含む、安定した水性抗体製剤を製造する方法。
  56. ａ．重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む抗体を約１ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬに精製するステップと；
    ｂ．ｉ．約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０、および
    ｉｉ．約２００ｍＭ〜約３００ｍＭのトレハロース
    を含む溶液中に、前記抗体を約２０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの前記抗体に希釈するステップと
    を含む、安定した水性抗体製剤を製造する方法。
  57. 重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む抗体を含む、再構成された抗体製剤を作成する方法であって、
    ａ．細胞培養物から前記抗体を精製するステップと；
    ｂ．前記単離抗体を凍結乾燥するステップと；
    ｃ．前記凍結乾燥抗体を水溶液に添加して、再構成された抗体製剤を形成するステップであって、前記再構成された抗体製剤が、
    ｉ．約２ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの前記抗体、および
    ｉｉ．約０．００２％〜約０．０１％のポリソルベート２０
    を含む、ステップと
    を含む、方法。
  58. 重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む抗体を含み、粒子を本質的に含まない、抗体製剤。
  59. 重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む抗体を含み、活性グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を本質的に含まない、抗体製剤。
  60. 抗体配列が、ＧＳＴを本質的に含まない、請求項５９に記載の抗体製剤。
  61. ３８〜４２℃での保存時に、少なくとも１ヶ月間にわたり粒子を本質的に含まない、請求項５８に記載の抗体製剤。
  62. ２〜６℃での保存時に、少なくとも６ヶ月間にわたり粒子を本質的に含まない、請求項５８に記載の抗体製剤。
  63. 重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号５〜７のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号８〜１０のＫａｂａｔ定義ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む抗体を精製する方法であって、
    ａ．前記抗体を含む細胞培養物を得るステップと、
    ｂ．前記抗体にアフィニティクロマトグラフィーを実施するステップと、
    ｃ．前記抗体にカチオン交換を実施するステップと、
    ｄ．前記抗体に混合モードクロマトグラフィーを実施するステップと
    を含む、方法。
  64. ウイルス不活性化処理をさらに含む、請求項６３に記載の方法。
  65. 透析濾過処理をさらに含む、請求項６３に記載の方法。
  66. 対象において肺疾患または障害を治療する方法であって、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の抗体製剤、請求項３３に記載の容器、請求項３４〜４２のいずれか一項に記載の単位用量剤形、または請求項４３〜５２のいずれか一項に記載のプレフィルドシリンジの治療有効量を投与するステップを含む、方法。
  67. 前記肺疾患または障害が、好酸球性疾患または障害である、請求項４９に記載の方法。
  68. 前記肺疾患または障害が、喘息、ＣＯＰＤ、好酸球性喘息、混合型好酸球性・好中球喘息、アスピリン感受性喘息、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、急性および慢性好酸球性気管支炎、急性および慢性好酸球性肺炎、チャーグ・ストラウス症候群、過好酸性症候群、薬物・刺激物・放射線誘発性肺好酸球増加症、感染誘発性肺好酸球増加症（真菌、結核、寄生生物）、自己免疫関連肺好酸球増加症、好酸球性食道炎、クローン病、またはそれらの組み合わせである、請求項４９に記載の方法。
  69. 前記肺疾患または障害が、喘息である、請求項４９に記載の方法。
  70. 前記肺疾患または障害が、慢性閉塞性肺疾患である、請求項４９に記載の方法。
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