KR20200051844A - 안정한 수성 항체 제제 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 안정한 수성 항체 제제에 관한 것이다. 일부 실시양태들에서, 안정한 수성 제제는 약 2 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항-IL5R 항체, 및 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20을 포함한다. 이러한 항체 제제를 제조하는 방법 및 사용하는 방법도 제공한다.

Description

안정한 수성 항체 제제{STABLE, AQUEOUS ANTIBODY FORMULATIONS}
본 발명은 안정한 수성 항체 제제에 관한 것이다. 일부 실시양태들에서, 상기 안정한 수성 제제는 서열번호 5 내지 7의 카바트(Kabat) 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 2 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체, 및 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20을 포함한다. 이러한 항체 제제를 제조하는 방법 및 사용하는 방법도 제공한다.
항체는 전신 투여 후 고도 선택적 결과를 생성하는 그의 표적 인식 특이성으로 인해 다양한 질환들 및 질병들의 치료에 사용되고 있다. 항체가 효과적인 상태로 유지되기 위해, 항체는 그의 제조, 정제, 수송 및 저장 동안 그의 생물학적 활성을 유지해야 한다. 생성될 다량의 고도로 정제된 단일클론 항체들을 제공하기 위해 신규 제조 및 정제 기법들이 개발되어 왔다. 그러나, 수송 및 저장을 위해 이 항체들을 안정화시켜야 한다는 과제가 여전히 존재하고, 투여에 적합한 제형으로 항체를 제공하기 위해 훨씬 더 많은 과제들이 존재한다.
변성, 응집, 오염 및 입자 형성은 항체의 제제화 및 저장에 있어서 상당한 장애물일 수 있다. 항체들의 고도 다양성으로 인해 모든 항체들의 저장에 적합한 보편적인 제제 또는 조건은 존재하지 않는다. 한 항체의 저장에 적합한 최적 제제 및 조건은 종종 그 항체에 특이적이다. 따라서, 항체 저장 제제 및 방법은 종종 상업용 항체에 대한 연구 및 개발 공정의 상당한 부분이다.
항체 안정성과 관련된 과제들을 극복하기 위해 다양한 방법들이 제안되어 왔다. 예를 들면, 일부 경우, 항체는 종종 동결건조된 후, 투여 직전에 재구성된다. 그러나, 재구성은 투여 공정에 추가 단계를 부가하고 오염물질을 제제에 도입할 수 있기 때문에 일반적으로 이상적이지 않다. 추가로, 심지어 재구성된 항체는 응집 및 입자 형성이라는 문제점을 가질 수 있다. 따라서, 수송 및 저장과 관련된 과제를 극복할 수 있는 안정한 수성 항체 제제를 제공할 필요성이 존재한다.
본 발명은 (a) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 2 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체 및 (b) 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20을 포함하는 안정한 수성 항체 제제에 관한 것이다.
일부 실시양태들에서, 항체 제제는 비하전된 부형제를 추가로 포함한다. 일부 실시양태들에서, 비하전된 부형제는 트레할로스이다. 일부 실시양태들에서, 비하전된 부형제 농도는 약 20 mM 내지 약 80 mM이다. 일부 실시양태들에서, 비하전된 부형제 농도는 약 200 mM 내지 약 400 mM이다.
항체는 다양한 농도로 존재할 수 있다. 일부 실시양태들에서, 제제는 약 2 mg/㎖ 내지 약 20 mg/㎖의 항체를 포함한다. 일부 실시양태들에서, 제제는 약 20 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체를 포함한다. 한 실시양태에서, 제제는 30 mg/㎖의 항체를 포함한다.
제제는 아르기닌을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태들에서, 아르기닌은 L-아르기닌이다. 일부 실시양태들에서, 제제는 약 100 mM 내지 약 200 mM의 L-아르기닌을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 제제는 약 120 mM 내지 약 140 mM의 L-아르기닌 및 약 40 mM 내지 약 60 mM의 비하전된 부형제를 포함한다. 한 실시양태에서, 제제는 약 125 mM의 L-아르기닌을 포함한다. 한 실시양태에서, 제제는 약 130 mM의 L-아르기닌을 포함한다.
일부 실시양태들에서, 제제는 히스티딘을 추가로 포함한다. 일부 실시양태들에서, 히스티딘 농도는 약 15 mM 내지 약 30 mM이다. 한 실시양태에서, 히스티딘 농도는 약 20 mM이다.
일부 실시양태들에서, 항체는 동결건조되지 않았다.
일부 실시양태들에서, 본 발명은 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 2 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체를 포함하는 안정한 수성 항체 제제로서, 1개월 이상 동안 약 40℃에서 저장될 때 안정한 수성 항체 제제에 관한 것이다. 일부 실시양태들에서, 상기 제제는 3개월 이상 동안 약 25℃에서 저장될 때 안정하다. 일부 실시양태들에서, 상기 제제는 18개월 이상 동안 약 5℃에서 저장될 때 안정하다. 일부 실시양태들에서, 1개월 이상 동안 약 40℃에서 저장된 항체는, 저장되지 않은 기준 항체와 비교하여 IL-5R 폴리펩티드에 대한 결합 능력의 80% 이상을 보유한다. 일부 실시양태들에서, 6개월 이상 동안 약 5℃에서 저장된 항체는, 저장되지 않은 기준 항체와 비교하여 IL-5R 폴리펩티드에 대한 결합 능력의 80% 이상을 보유한다. 일부 실시양태들에서, 1개월 이상 동안 약 40℃에서 저장된 항체는, 저장되지 않은 기준 항체와 비교하여 IL-5R 폴리펩티드에 대한 결합 능력의 95% 이상을 보유한다. 일부 실시양태들에서, 6개월 이상 동안 약 5℃에서 저장된 항체는, 저장되지 않은 기준 항체와 비교하여 IL-5R 폴리펩티드에 대한 결합 능력의 95% 이상을 보유한다. 일부 실시양태들에서, 1개월 이상 동안 약 40℃에서 저장될 때 HPSEC에 의해 측정시 항체의 2% 미만이 응집체를 형성한다. 일부 실시양태들에서, 12개월 이상 동안 약 5℃에서 저장될 때 HPSEC에 의해 측정시 항체의 2% 미만이 응집체를 형성한다.
일부 실시양태들에서, 제제는 1개월 이상 동안 약 40℃에서 저장될 때 시각적 검사에 의해 확인시 입자를 실질적으로 함유하지 않는다. 일부 실시양태들에서, 제제는 12개월 이상 동안 약 5℃에서 저장될 때 시각적 검사에 의해 확인시 입자를 실질적으로 함유하지 않는다.
일부 실시양태들에서, 제제는 주사가능한 제제이다. 일부 실시양태들에서, 제제는 정맥내, 피하 또는 근육내 투여에 적합하다.
일부 실시양태들에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체 제제를 함유하는 밀봉된 용기에 관한 것이다. 일부 실시양태들에서, 본 발명은 적합한 용기 내에 본원에 기재된 항체 제제를 포함하는, 인간에게의 비경구 투여에 적합한 약학 단위 제형에 관한 것이다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제는 정맥내로, 피하로 또는 근육내로 투여된다. 일부 실시양태들에서, 적합한 용기는 프리필드 시린지(Pre-Filled Syringe)이다. 일부 실시양태들에서, 프리필드 시린지는 니들을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 니들은 29G 박벽(thin wall) 니들이다. 일부 실시양태들에서, 프리필드 시린지는 플라스틱 시린지 또는 유리 시린지이다. 일부 실시양태들에서, 프리필드 시린지는 텅스텐을 실질적으로 함유하지 않는 물질로 만들어진다.
일부 실시양태들에서, 프리필드 시린지는 실리콘으로 코팅된다. 일부 실시양태들에서, 프리필드 시린지는 플루오로중합체 수지 디스크(disk)를 가진 플런저(plunger)를 포함한다. 일부 실시양태들에서, 프리필드 시린지는 (a) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 2 mg/㎖ 내지 약 20 mg/㎖의 항체 및 (b) 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 프리필드 시린지는 (c) 약 40 mM 내지 약 60 mM의 트레할로스 및 (d) 약 110 mM 내지 약 150 mM의 L-아르기닌을 추가로 포함한다. 일부 실시양태들에서, 본 발명은 (a) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 20 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체 및 (b) 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20을 포함하는 프리필드 시린지에 관한 것이다. 일부 실시양태들에서, 제제는 (c) 약 200 mM 내지 약 300 mM의 트레할로스를 추가로 포함한다.
일부 실시양태들에서, 본 발명은 본원에 기재된 제제, 본원에 기재된 용기, 본원에 기재된 단위 제형, 또는 본원에 기재된 프리필드 시린지를 포함하는 키트에 관한 것이다.
일부 실시양태들에서, 본 발명은 (a) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 2 mg/㎖ 내지 약 20 mg/㎖의 항체, (b) 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20, (c) 약 40 mM 내지 약 60 mM의 트레할로스, (d) 약 110 mM 내지 약 150 mM의 L-아르기닌, 및 (e) 약 15 mM 내지 약 30 mM의 히스티딘을 포함하는 안정한 수성 항체 제제에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 2 mg/㎖ 내지 약 20 mg/㎖의 항체, (b) 약 0.006%의 폴리소르베이트-20, (c) 약 50 mM의 트레할로스, (d) 약 130 mM의 L-아르기닌 및 (e) 약 20 mM의 히스티딘을 포함하는 안정한 수성 항체 제제에 관한 것이다.
일부 실시양태들에서, 본 발명은 (a) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 20 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체, (b) 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20, (c) 약 200 mM 내지 약 300 mM의 트레할로스 및 (d) 약 15 mM 내지 약 30 mM의 히스티딘을 포함하는 안정한 수성 항체 제제에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 20 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체, (b) 약 0.006%의 폴리소르베이트-20, (c) 약 250 mM의 트레할로스 및 (d) 약 20 mM의 히스티딘을 포함하는 안정한 수성 항체 제제에 관한 것이다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 30 mg/㎖의 항체, (b) 약 0.006%의 폴리소르베이트-20, (c) 약 250 mM의 트레할로스 및 (d) 약 20 mM의 히스티딘을 포함하는 안정한 수성 항체 제제에 관한 것이다.
일부 실시양태들에서, 본 발명은 안정한 수성 항체 제제를 제조하는 방법으로서, (a) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 약 1 mg/㎖ 내지 약 400 mg/㎖까지 정제하는 단계; 및 (b) 단리된 항체를 안정화 제제 내에 넣어, (i) 약 2 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체 및 (ii) 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20을 포함하는 안정한 수성 항체 제제를 형성하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
일부 실시양태들에서, 본 발명은 안정한 수성 항체 제제를 제조하는 방법으로서, (a) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 약 1 mg/㎖ 내지 약 400 mg/㎖까지 정제하는 단계; 및 (b) 상기 항체를, (i) 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20, (ii) 약 40 mM 내지 약 60 mM의 트레할로스 및 (iii) 약 110 mM 내지 약 150 mM의 L-아르기닌을 포함하는 용액으로 약 2 mg/㎖ 내지 약 20 mg/㎖의 항체까지 희석하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
일부 실시양태들에서, 본 발명은 안정한 수성 항체 제제를 제조하는 방법으로서, (a) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 약 1 mg/㎖ 내지 약 400 mg/㎖까지 정제하는 단계; 및 (b) 상기 항체를, (i) 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20 및 (ii) 약 200 mM 내지 약 300 mM의 트레할로스를 포함하는 용액으로 약 20 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체까지 희석하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
일부 실시양태들에서, 본 발명은 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 포함하는 재구성된 항체 제제를 제조하는 방법으로서, (a) 세포 배양물로부터 상기 항체를 정제하는 단계; (b) 단리된 항체를 동결건조하는 단계; 및 (c) 동결건조된 항체를 수용액에 첨가하여, (i) 약 2 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체 및 (ii) 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20을 포함하는 재구성된 항체 제제를 형성하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
일부 실시양태들에서, 본 발명은 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 포함하는 항체 제제로서, 입자를 본질적으로 함유하지 않는 항체 제제에 관한 것이다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제는 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 포함하고 활성 글루타티온 S-트랜스퍼라제(glutathione S-transferase)(GST)를 본질적으로 함유하지 않는다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제는 GST를 본질적으로 함유하지 않는다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제는 38℃ 내지 42℃에서 저장될 때 1개월 이상 동안 입자를 본질적으로 함유하지 않는다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제는 2℃ 내지 6℃에서 저장될 때 6개월 이상 동안 입자를 본질적으로 함유하지 않는다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제는 2℃ 내지 6℃에서 저장될 때 18개월 이상 동안 입자를 본질적으로 함유하지 않는다.
일부 실시양태들에서, 본 발명은 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 정제하는 방법으로서, (a) 상기 항체를 포함하는 세포 배양물을 수득하는 단계, (b) 상기 항체에 대한 친화성 크로마토그래피를 수행하는 단계, (c) 상기 항체에 대한 양이온 교환을 수행하는 단계, 및 (d) 상기 항체에 대한 혼합된-모드 크로마토그래피를 수행하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태들에서, 상기 방법은 바이러스 불활성화 공정 및/또는 정용여과 공정을 추가로 포함한다.
일부 실시양태들에서, 본 발명은 대상체에서 폐 질환 또는 장애를 치료하는 방법으로서, 치료 유효량의 본원에 기재된 항체 제제, 본원에 기재된 용기, 본원에 기재된 단위 제형, 또는 본원에 기재된 프리필드 시린지를 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태들에서, 폐 질환 또는 장애는 호산구성(eosinophilic) 질환 또는 장애이다. 일부 실시양태들에서, 폐 질환 또는 장애는 천식, COPD, 호산구성 천식, 호산구성 및 호중구성 복합 천식, 아스피린 민감성 천식, 알레르기성 기관지폐 아스페르길루스증, 급성 및 만성 호산구성 기관지염, 급성 및 만성 호산구성 폐렴, 척스트라우스 증후군, 과다호산구 증후군, 약물, 자극제 및 방사선 유발성 폐 호산구증가증, 감염 유발성 폐 호산구증가증(진균, 결핵, 기생충), 자가면역 관련 폐 호산구증가증, 호산구성 식도염, 크론병 또는 이들의 조합이다. 일부 실시양태들에서, 폐 질환 또는 장애는 천식이다. 일부 실시양태들에서, 폐 질환 또는 장애는 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD)이다.
도 1은 항-IL5R 항체의 아미노산 서열이다.
도 2는 용액 중의 단량체의 분획에 대한 폴리소르베이트-20의 효과를 나타낸다. 0.005% 초과의 폴리소르베이트 농도는 단량체 수준을 완전히 유지하기 위해 요구된다.
도 3은 2 g/ℓ 용액 중의 육안으로 보이지 않는(sub-visible) 입자 카운트(count)에 대한 폴리소르베이트-20의 효과를 나타낸다. 2 ㎛ 초과의 입자에 대한 데이터는 제시되어 있지 않으나 보다 더 큰 입자와 유사한 패턴을 나타낸다. 상기 데이터는 2 g/ℓ 용액 중의 육안으로 보이지 않는 입자 수준이 임의의 수준의 폴리소르베이트에 의해 조절되지 않는다는 것을 시사한다.
도 4는 100 g/ℓ 용액 중의 육안으로 보이지 않는 입자 카운트에 대한 폴리소르베이트-20의 효과를 나타낸다. 2 ㎛ 초과의 입자에 대한 데이터는 제시되어 있지 않으나 보다 더 큰 입자와 유사한 패턴을 나타낸다. 상기 데이터는 0.003% 초과의 폴리소르베이트 수준이 100 g/ℓ 용액 중의 육안으로 보이지 않는 입자 수준을 조절한다는 것을 시사한다.
도 5는 HPLC 단량체(%) 및 다른 (%) 결과를 용액 pH 및 단백질 농도의 함수로서 나타낸다. 단량체 손실은 5.5 내지 6.5의 pH 범위에서 최소화된다.
도 6은 MFI에 의해 측정된 10 ㎛ 초과의 육안으로 보이지 않는 입자, 및 표준물과의 비교에 의해 평가된 육안으로 보이는 입자를 포함하는 입자 형성을 용액 pH 및 단백질 농도의 함수로서 나타낸다. 육안으로 보이지 않는 입자 카운트는 단백질 농도에 의존하나, pH에 따라 뚜렷한 경향을 보이지는 않는다. 보다 더 육안으로 보이는 입자는 5.5 내지 6.5의 pH 범위에서 보다 더 낮은 단백질 농도 용액에서 관찰된다.
도 7은 실리콘 오일 소적을 제거하기 위해 여과된 10 ㎛ 초과 종횡비의 육안으로 보이지 않는 입자 카운트를 나타낸다. 데이터는 운반 직후의 SVP 카운트를 25℃에서 1개월 동안 저장된 후의 SVP 카운트와 비교한다. PS-20과 관계없이 낮은 단백질 농도의 경우 높은 카운트가 관찰된다.
도 8은 다양한 단백질 농도들 및 제제들의 경우 모의실험된 수송 후 MFI에 의해 측정된 10 ㎛ 초과의 입자 카운트를 나타낸다. 10 g/ℓ 이상의 트레할로스 제제와 같이 보다 더 높은 이온 강도 제제가 보다 더 안정하다.
도 9는 2 g/ℓ 단백질 및 다양한 제제들의 경우 모의실험된 수송 후 MFI에 의해 측정된 10 ㎛ 초과의 입자 카운트를 나타낸다. 아르기닌 농도는 50 mM를 초과해야 하고 NaCl 농도는 75 mM을 초과해야 한다.
도 10은 2 g/ℓ 단백질 및 다양한 제제들의 경우 모의실험된 수송 후 MFI에 의해 측정된 10 ㎛ 초과의 입자 카운트를 나타낸다. 이 범위 내의 임의의 부형제 농도가 허용가능하다.
도 11은 2 g/ℓ 단백질 및 다양한 제제들의 경우 모의실험된 수송 후 MFI에 의해 측정된 10 ㎛ 초과의 입자 카운트를 나타낸다.
도 12는 바이알 및 프리필드 시린지 내의 2 mg/㎖, 20 mg/㎖ 및 100 mg/㎖ 제제에 대한 단량체 손실을 보여준다. 모든 PFS가 바이알 및 서로와 유사한 손실을 보여준다.
도 13은 구간축소(bracketing) 방법의 그래픽 표현을 보여준다. 청색은 아르기닌 또는 NaCl 함유 제제를 표시한다. 녹색은 트레할로스 제제를 표시한다. 데이터 점은 제조된 샘플이고, 선은 중간 용량을 달성하기 위해 이용가능한 구간축소된 옵션을 표시한다.
도 14는 안정성 연구 #2에 대한 시험 계획이다. 모든 표시된 시험들이 항체 제제에 대해 실시될 것이다. 황색 음영은 시험이 플라세보에 대해 실시될 것임을 표시한다. 표기 "ABC"는 하기 시험들에 대한 의뢰를 표시한다: 효능(생물분석법), RP-HPLC, cIEF, 비환원된 생물분석기 및 환원된 생물분석기.
도 15는 디자인 공간을 한정하기 위해 제조된 샘플을 두 제제화 브라켓들(brackets)에 대한 단백질 및 폴리소르베이트-20("PS-20") 농도의 함수로서 보여주는 래프이다.
도 16은 운반 후 0시간에서 MFI에 의해 측정된, 육안으로 보이지 않은 입자의 그래프이다. 결과는 PS-20이 존재하지 않는 경우 입자가 형성되나, 0.002%의 PS-20이 운반 시 입자 형성을 억제하기에 충분하다는 것을 보여준다.
도 17a 내지 17d에는 육안으로 보이는 입자 관찰이 외관 표준물과 대비하여 점수화되어 있고 9개월 시점에서 본원에 제시되어 있다. 광에 매우 가까운 위치에서 관찰하였다. 제시된 샘플은 트레할로스 제제를 함유하는 프리필드 시린지("PFS")(도 3a), 트레할로스 제제를 함유하는 바이알(도 3b), 아르기닌 제제를 함유하는 PFS(도 3c) 및 아르기닌 제제를 함유하는 바이알(도 3d)을 포함한다. 데이터는 PFS에서 0.006% PS-20의 목표치 및 0.002% 내지 0.01% PS-20의 허용가능한 범위를 뒷받침한다. 바이알은 최악의 경우 비교로서 제시되어 있다.
도 18은 육안으로 보이는 입자와 상관관계를 가진, 샘플 시간에 따른 증가를 포착하는 다양한 SVP 방법들을 비교한다. 유동 세포측정(Flow cytometry) 및 MFI에 의한 작은 입자 카운트(>1 ㎛ 및 >2 ㎛)도 경향을 포착할 수 있다.
도 19는 PFS(도 5a) 및 바이알(도 5b) 내의 트레할로스 제제들에 대한 외관 표준 점수 및 MFI 결과(입자 >1 ㎛)의 비교이다. 둘 다 PS-20의 허용가능한 범위가 0.002% 내지 0.01%임을 시사하는 2종의 방법들에 대한 우수한 일치가 관찰된다.
도 20은 실시예 3에서 요약된 브라켓 디자인 및 ABC에서 수행된 리드 로트(lead lot) 안정성 연구를 나타낸다. 주황색 음영 영역은 아르기닌 제제를 표시하고, 청색 음영 영역은 트레할로스 제제를 표시하고, 이들 모두 0.006%의 PS-20을 가진다.
도 21은 항체 정제 공정의 한 도식적 예를 나타낸다.
도 22는 항-IL5R 항체의 정제에서 사용된 단백질-A 컬럼의 관류물의 2D 겔 분석을 나타낸다.
본원에 제시되어 있고 기재되어 있는 특정 실시는 예이고 본원의 범위를 어떠한 방식으로든 달리 한정하기 위한 것이 아니라는 것을 인식해야 한다. 본원에 기재된 본 발명의 실시양태들 및 특징들 각각은 임의의 모든 방식들로 조합될 수 있다는 것도 인식해야 한다.
본원에서 언급된 공개된 특허, 특허출원, 웹사이트, 회사 명칭 및 과학 문헌은 각각이 참고로 도입되는 것으로 구체적으로 및 개별적으로 표시되어 있는 것처럼 동일한 정도로 전체로서 본원에 참고로 도입된다. 본원에서 인용된 임의의 참고문헌과 본 명세서의 구체적인 교시 사이의 임의의 불일치는 후자의 이익이 되도록 해석되어야 한다. 마찬가지로, 단어 또는 어구의 당분야에서 이해되는 정의와 본 명세서에서 구체적으로 교시된 상기 단어 또는 어구의 정의 사이의 임의의 불일치는 후자의 이익이 되도록 해석되어야 한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 문맥이 달리 명시하지 않은 한, 단수형 용어는 그의 복수형도 구체적으로 포괄한다.
달리 표시되어 있지 않은 한, 본 개시내용 전체에서 백분율, 비 등의 모든 표현들은 "중량을 기준으로" 한 것이다. 본원에서 사용된 바와 같이, "중량을 기준으로"는 용어 "질량을 기준으로"와 동의어이고, 본원에서 정의된 비 또는 백분율이 부피, 두께 또는 일부 다른 측정치보다는 오히려 중량에 따라 수행된다는 것을 표시한다.
용어 "약"은 대략적으로, 정도, 대략 또는 대충을 의미하기 위해 본원에서 사용된다. 용어 "약"이 수치 범위와 함께 사용될 때, 상기 용어는 기재된 수치 값의 상한 및 하한을 확장함으로써 그 범위를 수식한다. 일반적으로, 용어 "약"은 언급된 값보다 10%의 편차만큼 높거나 낮은 수치 값을 수식하기 위해 본원에서 사용된다.
달리 정의되어 있지 않은 한, 본원에서 사용된 기술 용어들 및 과학 용어들은 본원이 속하는 분야에서 숙련된 자에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 가진다. 당업자에게 공지된 다양한 방법들 및 물질들이 본원에서 언급된다. 재조합 DNA 기술의 일반적인 원리가 기재되어 있는 표준 참고문헌은 문헌(Sambrook et al., "Molecular Cloning: A Laboratory Manual," 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (1989)); 문헌(Kaufman et al., Eds., "Handbook of Molecular and Cellular Methods in Biology in Medicine," CRC Press, Boca Raton (1995)); 및 문헌(McPherson, Ed., "Directed Mutagenesis: A Practical Approach," IRL Press, Oxford (1991))을 포함하고, 이들 각각의 개시내용은 전체로서 본원에 참고로 도입된다.
본 발명은 안정한 수성 항체 제제에 관한 것이다. 본원에 기재된 바와 같이, 용어 "항체 제제"는 하나 이상의 항체 분자를 포함하는 조성물을 지칭한다. 본 발명에서 용어 "항체"는 구체적으로 한정되지 않는다. 명료성을 위해, "항체"는 그의 가장 넓은 의미로 사용되고 임의의 면역글로불린(Ig), 이의 활성 또는 원하는 변이체, 및 이의 활성 또는 바람직한 단편(예를 들면, Fab 단편, 낙타과 항체(단일 쇄 항체) 및 나노바디)을 포함한다. 용어 "항체"는 이량체 또는 다량체를 지칭할 수도 있다. 항체는 다중클론 또는 단일클론 항체일 수 있고 천연 생성될 수 있거나 재조합 생성될 수 있다. 따라서, 인간 항체, 비인간 항체, 인간화된 항체 및 키메라 항체 모두가 용어 "항체" 내에 포함된다. 전형적으로, 항체는 클래스 IgG, IgE, IgM, IgD 및 IgA 중 하나의 단일클론 항체이고, 보다 전형적으로 IgG 또는 IgA이다.
본 발명의 항체는 조류 및 포유동물을 포함하는 임의의 동물로부터 유래될 수 있다. 일부 실시양태들에서, 본 발명의 방법의 항체는 인간, 뮤린(예를 들면, 마우스 및 래트), 당나귀, 양, 토끼, 염소, 기니 피그, 낙타, 말 또는 닭이다. 본원에서 사용된 바와 같이, "인간" 항체는 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 가진 항체를 포함하고, 인간 면역글로불린 라이브러리로부터 단리된 항체, 또는 하나 이상의 인간 면역글로불린에 대한 형질전환체이고 내생성(endogenous) 면역글로불린을 발현하지 않는 동물로부터 단리된 항체를 포함한다. 예를 들면, 미국 특허 제5,939,598호(Kucherlapati et al.)를 참조한다.
본 발명의 항체는 예를 들면, 천연 항체, 온전한 단일클론 항체, 다중클론 항체, 2개 이상의 온전한 항체들로부터 형성된 다중특이적 항체(예를 들면, 이중특이적 항체), 항체 단편(예를 들면, 하나 이상의 항원에 결합하고/하거나 하나 이상의 항원을 인식하는 항체 단편), 인간화된 항체, 인간 항체(Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature 362:255-258 (1993); Bruggermann et al., Year in Immunol. 7:33 (1993); 미국 특허 제5,591,669호 및 제5,545,807호), 및 항체 파지 라이브러리로부터 단리된 항체 및 항체 단편(McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990); Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991); Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992); Waterhouse et al., Nucl. Acids Res. 21:2265-2266 (1993))을 포함할 수 있다. 본 발명의 방법에 의해 정제된 항체는 N-말단 또는 C-말단에서 이종 폴리펩티드에 재조합적으로 융합될 수 있거나, 폴리펩티드 또는 다른 조성물에 화학적으로 접합(공유 접합 및 비공유 접합을 포함함)될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 방법에 의해 정제된 항체는 검출 분석법에서 표지로서 유용한 분자 및 이펙터 분자, 예컨대, 이종 폴리펩티드, 약물 또는 독소에 재조합적으로 융합될 수 있거나 접합될 수 있다. 예를 들면, PCT 공보 제WO 92/08495호, 제WO 91/14438호 및 제WO 89/12624호; 미국 특허 제5,314,995호; 및 유럽 특허 제396,387호를 참조한다.
일부 실시양태들에서, 본 발명의 항체 제제는 항-IL5 수용체(항-IL5R) 항체를 포함한다. 본 발명의 항체는 관심있는 항원 또는 이의 단편에 특이적으로 결합하고, 다른 항원 또는 이의 단편에 특이적으로 결합하지 않는다. 예를 들면, 항-IL5R 항체는 인터류킨-5 수용체 폴리펩티드에 면역특이적으로 결합할 것이고 다른 폴리펩티드에 특이적으로 결합하지 않는다. 바람직하게는, IL-5 수용체에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편은 다른 폴리펩티드 또는 다른 폴리펩티드의 단편에 대한 친화성에 비해 IL-5 수용체 또는 IL-5 수용체 폴리펩티드의 단편에 대한 보다 더 높은 친화성을 가진다. 항체의 친화성은 단일 항원-항체 부위에서 항체와 특이적 항원의 결합의 척도이고, 본질적으로 항체의 항원 결합 부위와 특정 에피토프 사이의 상호작용에 존재하는 모든 인력 및 반발력의 합계이다. 특정 항원(예를 들면, IL-5 폴리펩티드 또는 IL-5 폴리펩티드의 단편)에 대한 항체의 친화성은 항체 조합 부위의 친화성인, 방정식 K = [Ag Ab]/[Ag][Ab]에 의해 정의된 평형 상수 K로 표현될 수 있고, 이때 [Ag]는 자유 항원의 농도이고, [Ab]는 자유 항체의 농도이고, [Ag Ab]는 항원-항체 복합체의 농도이다. 항원과 항체가 함께 강하게 반응하는 경우, 자유 항원 또는 자유 항체가 거의 존재하지 않을 것이므로, 항체의 평형 상수 또는 친화성은 높을 것이다. 항원과 항체 사이의 우수한 적합도가 있는 경우 높은 친화성 항체가 발견된다(항체 친화성에 대한 논의에 대해서는 문헌(Sigal and Ron ed., 1994, Immunology and Inflammation - Basic Mechanisms and Clinical Consequences, McGraw-Hill, Inc. New York at pages 56-57); 및 문헌(Seymour et al., 1995, Immunology - An Introduction for the Health Sciences, McGraw-Hill Book Company, Australia at pages 31-32) 참조). 바람직하게는, IL-5 폴리펩티드 또는 이의 단편에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편은 다른 항원과 교차반응하지 않는다. 즉, 항체 또는 항체 단편은 다른 폴리펩티드 또는 다른 폴리펩티드의 단편에 대한 에너지보다 더 높은 에너지로 IL-5 폴리펩티드 또는 이의 단편에 면역특이적으로 결합한다(항체 특이성에 대한 논의에 대해서는 예를 들면, 문헌(Paul ed., 1989, Fundamental Immunology, 2nd ed., Raven Press, New York at pages 332-336) 참조). IL-5 폴리펩티드에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편은 예를 들면, 면역분석법, 예컨대, 방사면역분석법(RIA), 효소-연결된 면역흡착 분석법(ELISA) 및 비아코어(BIAcore) 분석법, 또는 당업자에게 공지된 다른 기법에 의해 확인될 수 있다(생체내 항체-항원 상호작용을 확인하기 위한 다양한 분석법들의 논의에 대해서는 예를 들면, 문헌(Seymour et al., 1995, Immunology - An Introduction for the Health Sciences, McGraw-Hill Book Company, Australia at pages 33-41) 참조). IL-5 폴리펩티드 또는 이의 단편에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편은 IL-5 폴리펩티드만을 길항하고 다른 활성을 유의하게 길항하지 않는다.
한 실시양태에서, IL-5R 폴리펩티드는 인간 IL-5R, 또는 이의 유사체, 유도체 또는 단편이다. 인간 IL-5R의 뉴클레오티드 서열은 진뱅크(GenBank) 데이터베이스(예를 들면, 등록번호 M96652.1 참조)에서 발견될 수 있다. 인간 IL-5R의 아미노산 서열은 진뱅크 데이터베이스(예를 들면, 등록번호 Q01344 참조)에서 발견될 수 있다. 이 등록번호들 각각은 본원에 명백히 참고로 도입된다.
일부 실시양태들에서, 항체 제제는 항-IL5R 항체, 예를 들면, 인간 항-IL5R 항체를 포함한다. 일부 실시양태들에서, 항-IL5R 항체는 서열번호 2를 포함하는 경쇄 및 서열번호 4를 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 추가 실시양태들에서, 항-IL5R 항체는 서열번호 1을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 추가 실시양태에서, 항-IL5R 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함한다. 당분야에서 통상의 기술을 가진 자는 초티아(Chothia) 정의된 CDR들, Abm 정의된 CDR들 또는 다른 CDR들을 용이하게 확인할 수 있을 것이다.
한 실시양태에서, 항-IL5R 항체는 벤랄리주맙(benralizumab)이다. 본원에서 제공된 방법에서 사용될 벤랄리주맙(또는 이의 단편)에 대한 정보는 미국 특허출원 공보 제2010/0291073 A1호(이의 개시내용은 전체로서 본원에 참고로 도입됨)에서 발견될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 항체와 관련하여 용어 "유사체" 또는 "항체 유사체"는 항체와 유사한 또는 동일한 기능을 보유하되 항체의 아미노산 서열과 유사한 또는 동일한 아미노산 서열을 반드시 포함하지는 않거나, 항체의 구조와 유사한 동일한 구조를 반드시 보유하지는 않는 제2 항체, 즉 항체 유사체를 지칭한다. 유사한 아미노산 서열을 가진 항체는 하기 요건들 중 하나 이상의 요건을 충족시키는 항체 유사체를 지칭한다: (a) 항체의 아미노산 서열과 30% 이상, 35% 이상, 40% 이상, 45% 이상, 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 가진 항체 유사체; (b) 엄격한 조건 하에서 5개 이상의 인접 아미노산 잔기들, 10개 이상의 인접 아미노산 잔기들, 15개 이상의 인접 아미노산 잔기들, 20개 이상의 인접 아미노산 잔기들, 25개 이상의 인접 아미노산 잔기들, 40개 이상의 인접 아미노산 잔기들, 50개 이상의 인접 아미노산 잔기들, 60개 이상의 인접 아미노산 잔기들, 70개 이상의 인접 아미노산 잔기들, 80개 이상의 인접 아미노산 잔기들, 90개 이상의 인접 아미노산 잔기들, 100개 이상의 인접 아미노산 잔기들, 125개 이상의 인접 아미노산 잔기들, 또는 150개 이상의 인접 아미노산 잔기들의 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 혼성화하는 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩된 항체 유사체; 및 (c) 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열과 30% 이상, 35% 이상, 40% 이상, 45% 이상, 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩된 항체 유사체. 항체와 유사한 구조를 가진 항체 유사체는 항체와 유사한 이차, 삼차 또는 사차 구조를 가진 단백질성 물질을 지칭한다. 항체 유사체 또는 항체의 구조는 펩티드 서열결정, X-선 결정학, 핵 자기 공명, 원편광 이색성 및 결정학적 전자 현미경관찰을 포함하나 이들로 한정되지 않는, 당업자에게 공지된 방법에 의해 확인될 수 있다.
2개의 아미노산 서열들 또는 2개의 핵산 서열들의 퍼센트 동일성을 측정하기 위해, 최적 비교 목적으로 상기 서열들을 정렬한다(예를 들면, 제2 아미노산 또는 핵산 서열과 최적으로 정렬시키기 위해 갭을 제1 아미노산 또는 핵산 서열 내로 도입할 수 있다). 그 다음, 상응하는 아미노산 위치 또는 뉴클레오티드 위치에서 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드를 비교한다. 제1 서열 내의 한 위치가 제2 서열 내의 상응하는 위치와 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드에 의해 점유되어 있을 때, 분자들은 그 위치에서 동일하다. 2개의 서열들 사이의 퍼센트 동일성은 상기 서열들에 의해 공유된 동일한 위치의 수의 함수이다(즉, % 동일성 = 동일한 중첩 위치의 수/위치의 총수 x 100%). 한 실시양태에서, 2개의 서열들은 동일한 길이를 가진다.
수학적 알고리즘을 이용하여 2개의 서열들 사이의 퍼센트 동일성의 측정을 달성할 수도 있다. 2개의 서열들의 비교를 위해 이용되는 수학적 알고리즘의 한 비한정적 예는 문헌(Karlin and Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:5873-5877)에서와 같이 변경된, 문헌(Karlin and Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87:2264-2268)의 알고리즘이다. 이러한 알고리즘은 문헌(Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403)의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램 내로 도입된다. 예를 들면, 점수=100 및 단어길이=12로 설정된 NBLAST 뉴클레오티드 프로그램 파라미터로 BLAST 뉴클레오티드 검색을 수행함으로써 본 발명의 핵산 분자와 상동한 뉴클레오티드 서열을 수득할 수 있다. 예를 들면, 점수=50 및 단어길이=3으로 설정된 XBLAST 프로그램 파라미터를 이용하여 BLAST 단백질 검색을 수행함으로써 본 발명의 단백질 분자에 상동한 아미노산 서열을 수득할 수 있다. 비교 목적을 위한 갭핑된(gapped) 정렬을 수득하기 위해, 갭핑된 BLAST를 문헌(Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402)에 기재된 바와 같이 이용할 수 있다. 대안적으로, PSI-BLAST를 이용하여 분자들 사이의 먼 관계를 검출하는 반복된 검색을 수행할 수 있다(상기 문헌). BLAST, 갭핑된 BLAST 및 PSI-Blast 프로그램을 이용할 때, 각각의 프로그램(예를 들면, XBLAST 및 NBLAST)의 디폴트 파라미터를 이용할 수 있다(예를 들면, NCBI 웹사이트 참조). 서열들의 비교를 위해 이용되는 수학적 알고리즘의 또 다른 바람직한 비한정적 예는 문헌(Myers and Miller, 1988, CABIOS 4: 11-17)의 알고리즘이다. 이러한 알고리즘은 GCG 서열 정렬 소프트웨어 팩키지의 일부인 ALIGN 프로그램(버젼 2.0) 내로 도입된다. 아미노산 서열들을 비교하기 위해 ALIGN 프로그램을 이용할 때, PAM 120 중량 잔기 표, 12의 갭 길이 벌점 및 4의 갭 벌점을 사용할 수 있다.
일부 실시양태들에서, 항체 제제 중의 항체는 항체 제제에 첨가되기 전에 정제된다. 용어 "단리한다" 및 "정제한다"는 항체가 존재하는 조성물, 예를 들면, 숙주 세포 단백질을 포함하는 조성물 중의 불순물 또는 다른 오염물질로부터 항체를 분리하는 것을 지칭한다. 일부 실시양태들에서, 50%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9%(중량/중량) 이상의 불순물이 항체로부터 정제된다. 예를 들면, 일부 실시양태들에서, 항체, 예를 들면, 항-IL5R 항체의 정제는 조성물에 처음 존재하는 99%(중량/중량)의 숙주 세포 단백질로부터 항체를 분리하는 단계를 포함할 것이다.
일부 실시양태들에서, 용어 "단리한다" 및 "정제한다"는 정부 기구, 예를 들면, 세계보건기구 또는 미국 식품의약청의 지침과 일치하는 정도까지 조성물 중의 불순물 또는 다른 오염물질로부터 항체, 예를 들면, 항-IL5R 항체를 분리하는 것을 지칭한다.
항체를 정제하는 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 정제를 수행하기에 적합한 기법은 다양한 종류의 크로마토그래피들, 예컨대, 친화성 크로마토그래피, 소수성 상호작용, 이온 교환(예컨대, 양이온 교환 크로마토그래피 또는 혼합된-모드 크로마토그래피) 및 여과를 포함한다.
친화성 크로마토그래피는 항체가 그의 특이적 결합 성질에 의해 그 항체에 대한 친화성 리간드에 결합되는 분리 방법을 지칭한다. 기능적 친화성 리간드는 항체를 포함하는 조성물이 리간드 및 고체 지지체 상을 통과할 때 리간드에 대한 특이적 결합 친화성을 가진 항체가 리간드에 흡착되고 하나 이상의 다른 불순물이 흡착되지 않고(않거나 보다 더 낮은 친화성으로 결합되고) 항체로부터 분리되도록 고체 또는 반고체 지지체 상에 고정될 수 있다. 전형적으로 결합하지 않는(않거나 잘 결합하지 않는) 불순물의 예로는 공정 관련 불순물(예를 들면, 숙주 세포 단백질, DNA, 배지 성분) 및 일부 생성물 관련 불순물(예를 들면, 항체 단편)이 있다. 일부 실시양태들에서, 흡착된 항체가 리간드 및 지지체로부터 제거되기 전에 추가 불순물을 제거하기 위해 리간드를 포함하는 고체 지지체를 완충제로 1회 이상 세척한다. 하나 이상의 불순물이 제거된 후, 리간드 및 지지체로부터 흡착된 항체를 제거(용출)하여, 최초 조성물로부터 항체를 단리할 수 있다. 리간드 및 지지체로부터 항체를 제거하는 방법은 리간드에 의존하고 당업자에게 공지되어 있고, 예를 들면, 환경, 예를 들면, pH의 변화, 무질서화제(chaotropic agent) 또는 변성제의 첨가 또는 상업적으로 입수가능한 용출 완충제의 첨가를 포함할 수 있다. 일부 실시양태들에서, 하나 초과의 친화성 정제 공정이 항체 조성물에 대해 이용될 수 있다. 단백질 A 및 단백질 G(및 이들의 조합)를 포함하는 다양한 친화성 리간드들이 당분야에서 공지되어 있다. 고정된 리간드는 상업적으로 입수가능하다. 예를 들면, 단백질 A 친화성 시스템은 맙셀렉트(MabSelect), 맙셀렉트 슈어(MabSelect SuRe), 맙셀렉트 엑스트라(MabSelect Xtra), 맙셀렉트 슈어 LX, 세파로스(Sepaharose) CL-4B, 프로셉(ProSep) vA, 프로셉 vA 울트라(Ultra) 및 세라믹 하이퍼D(Ceramic HyperD)를 포함한다.
이온 교환 크로마토그래피는 양이온 교환 크로마토그래피 및 혼합된 크로마토그래피를 포함한다. 양이온 교환 크로마토그래피는 양이온 교환 매트릭스를 사용하여 전하 차이를 기초로 항체 및 일부 불순물 또는 불순물들을 분리할 수 있는 임의의 방법을 지칭한다. 양이온 교환 매트릭스는 일반적으로 공유결합된 음으로 하전된 기를 포함한다. 약한 또는 강한 양이온 교환 수지가 사용될 수 있다. 통상적으로, 강한 양이온 교환 수지는 pH에 따라 설폰산 또는 설포네이트 기를 포함하는 지지된 유기 기를 포함한다. 약한 양이온 교환 수지는 통상적으로 pH에 따라 카복실산 또는 카복실레이트 기를 포함하는 지지된 유기 기를 포함한다. 특정 실시양태들에서, 추가 결합 기작뿐만 아니라 이온성 상호작용, 예를 들면, 수소 결합 상호작용 및 소수성 상호작용 중 하나 이상을 도입하는 다중모드 양이온 교환 수지가 사용될 수 있다. 적합한 양이온 교환 수지의 예는 당분야에서 잘 공지되어 있고, 프락토겔(Factogel), 카복시메틸(CM), 설포에틸(SE), 설포프로필(SP), 포스페이트(P) 및 설포네이트(S), PROPAC WCX-10™(다이오넥스(Dionex)), 캡토(Capto) S, S-세파로스 FF, 프락토겔 EMD S03M, 토요펄 메가캡(Toyopearl Megacap) II SP 550C, 포로스(Poros) 50 HS, 및 SP-세파로스 매트릭스를 포함할 수 있으나 이들로 한정되지 않는다. 일부 실시양태들에서, 하나 초과의 양이온 교환 크로마토그래피 공정이 조성물에 대해 이용될 수 있다.
혼합된-모드 크로마토그래피는 불순물(예를 들면, 공정 관련 불순물, 예컨대, 숙주 세포 단백질, DNA, 및/또는 내생성 또는 외래 바이러스)로부터의 분석물의 분리를 달성하기 위해 정지상과 분석물 사이의 하나 초과 형태의 상호작용을 이용하는 방법을 지칭한다. 적합한 음이온 교환 매트릭스의 예는 당분야에서 공지되어 있고, 캡토 어드히어(Capto Adhere), 사르토바인드(Sartobind) Q, 나트릭스(Natrix) Q, 크로마솝(Chromasorb) Q 및 무스탕(Mustang) Q를 포함할 수 있으나 이들로 한정되지 않는다.
일부 실시양태들에서, 추가 여과 단계를 이용하여 불순물을 제거할 수 있다. 예를 들면, 일부 실시양태들에서, 나노여과 또는 한외여과가 이용된다. 나노여과는 조성물을 공극 크기가 예를 들면, 75 nm 미만, 50 nm 미만, 심지어 15 nm 미만인 매트릭스에 통과시켜 항체로부터 불순물, 예를 들면, 바이러스를 분리하는 단계를 포함한다. 이용될 수 있는 상업적으로 입수가능한 나노필터 및 한외필터는 다양한 판매회사들, 예컨대, 밀리포어 코포레이션(Millipore Corporation)(미국 매사추세츠주 빌러리카 소재, 예를 들면, 비레솔브 프로(Viresolve Pro) 및 비레솔브 프로+), 팔 코포레이션(Pall Corporation)(미국 뉴욕주 히스트 힐스 소재), 지이 헬쓰케어 사이언시스(GE Healthcare Sciences)(미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재) 및 사르토리우스 코포레이션(Sartorius Corporation)(독일 고에팅겐 소재)에 의해 제작된다.
일부 실시양태들에서, 본 발명의 항체, 예를 들면, 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-IL5R은 1 mg/㎖ 내지 200 mg/㎖, 2 mg/㎖ 내지 100 mg/㎖, 2 mg/㎖ 내지 30 mg/㎖, 2 mg/㎖ 내지 25 mg/㎖, 2 mg/㎖ 내지 20 mg/㎖, 3 mg/㎖, 4 mg/㎖, 5 mg/㎖, 6 mg/㎖, 7 mg/㎖, 8 mg/㎖, 9 mg/㎖, 10 mg/㎖, 11 mg/㎖, 12 mg/㎖, 13 mg/㎖, 14 mg/㎖, 15 mg/㎖, 16 mg/㎖, 17 mg/㎖, 18 mg/㎖, 19 mg/㎖, 또는 20 mg/㎖의 농도로 존재한다. 일부 실시양태들에서, 본 발명의 항체, 예를 들면, 항-IL5R은 약 20 mg/㎖, 25 mg/㎖, 30 mg/㎖, 40 mg/㎖, 45 mg/㎖, 50 mg/㎖, 55 mg/㎖, 60 mg/㎖, 65 mg/㎖, 70 mg/㎖, 75 mg/㎖, 80 mg/㎖, 85 mg/㎖, 90 mg/㎖, 95 mg/㎖ 또는 100 mg/㎖의 농도로 존재한다.
본 발명의 항체 제제는 비하전된 부형제를 포함할 수 있다. 용어 "부형제"는 본원에 기재된 항체와 함께 제제화되는 약리학적 불활성 물질을 지칭한다. 일부 실시양태들에서, 부형제는 변성의 방지에 도움이 될 수 있거나, 항체의 안정화에 도움이 될 수 있다. 약학 조성물에서 사용될 수 있는 적합한 부형제는 당분야에서 공지되어 있다. 예는 예를 들면, 문헌(the handbook: Gennaro, Alfonso R.: "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990)에서 확인될 수 있다. 일부 실시양태들에서, 부형제는 "비하전된" 부형제이다. 즉, 부형제는 양성 "+" 또는 음성 "-" 전하를 보유하지 않는다. 일부 실시양태들에서, 부형제는 프럭토스, 글루코스, 만노스, 소르보스, 자일로스, 락토스, 말토스, 수크로스, 덱스트란, 풀루란, 덱스트린, 사이클로덱스트린, 가용성 전분, 트레할로스, 소르비톨, 에리쓰리톨, 이소말트, 락티톨, 말티톨, 자일리톨, 글리세롤, 락티톨, 하이드록시에틸 전분 및 수용성 글루칸으로 구성된 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태들에서, 비하전된 부형제는 항체 제제에 약 1 mM 내지 약 1 M, 약 2 mM 내지 약 500 mM, 약 5 mM 내지 약 400 mM, 약 10 mM 내지 약 300 mM, 또는 약 20 mM 내지 약 250 mM의 농도로 존재한다. 일부 실시양태들에서, 비하전된 부형제는 항체 제제, 예를 들면, 2 내지 20 mg/㎖의 항체를 포함하는 항체 제제에 약 5 mM 내지 약 150 mM, 약 10 mM 내지 약 100 mM, 약 20 mM 내지 약 80 mM, 약 30 mM, 약 40 mM, 약 50 mM, 약 60 mM, 또는 약 70 mM의 농도로 존재한다. 한 실시양태에서, 비하전된 부형제는 항체 제제에 약 50 mM의 농도로 존재한다. 일부 실시양태들에서, 비하전된 부형제는 항체 제제, 예를 들면, 20 내지 100 mg/㎖의 항체를 포함하는 항체 제제에 약 50 mM 내지 약 800 mM, 약 100 mM 내지 약 500 mM, 약 150 mM 내지 약 400 mM, 약 200 mM, 약 400 mM, 약 200 mM, 약 300 mM 또는 약 250 mM의 농도로 존재한다. 한 실시양태에서, 비하전된 부형제는 항체 제제에 약 250 mM의 농도로 존재한다.
일부 실시양태들에서, 비하전된 부형제는 하기 화학식으로 표시된 트레할로스이다:
Figure pat00001
일부 실시양태들에서, 트레할로스는 항체 제제에 1 mM 내지 약 1 M, 약 2 mM 내지 약 500 mM, 약 5 mM 내지 약 400 mM, 약 10 mM 내지 약 300 mM, 또는 약 20 mM 내지 약 250 mM의 농도로 존재한다. 일부 실시양태들에서, 트레할로스는 항체 제제, 예를 들면, 2 내지 20 mg/㎖의 항체를 포함하는 항체 제제에 약 5 mM 내지 약 150 mM, 약 10 mM 내지 약 100 mM, 약 20 mM 내지 약 80 mM, 약 30 mM, 약 40 mM, 약 50 mM, 약 60 mM 또는 약 70 mM의 농도로 존재한다. 한 실시양태에서, 트레할로스는 항체 제제에 약 50 mM의 농도로 존재한다. 일부 실시양태들에서, 트레할로스는 항체 제제, 예를 들면, 20 내지 100 mg/㎖의 항체를 포함하는 항체 제제에 약 50 mM 내지 약 800 mM, 약 100 mM 내지 약 500 mM, 약 150 mM 내지 약 400 mM, 약 200 mM, 약 400 mM, 약 200 mM, 약 300 mM, 또는 약 250 mM의 농도로 존재한다. 한 실시양태에서, 트레할로스는 항체 제제에 약 250 mM의 농도로 존재한다.
본 발명의 항체 제제는 아르기닌을 포함한다. 아르기닌은 하기 화학식으로 표시될 수 있는 조건부 비필수 아미노산이다:
Figure pat00002
본원에서 사용된 바와 같이, 아르기닌은 아르기닌의 자유 염기 형태뿐만 아니라 그의 임의의 모든 염들도 포함할 수 있다. 일부 실시양태들에서, 아르기닌은 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다. 예를 들면, 아르기닌은 아르기닌 하이드로클로라이드를 포함할 것이다. 본원에서 사용된 바와 같이, 아르기닌은 모든 거울상이성질체들(예를 들면, L-아르기닌 및 S-아르기닌), 및 거울상이성질체들의 임의의 조합(예를 들면, 50% L-아르기닌 및 50% S-아르기닌; 90% 내지 100% L-아르기닌 및 10% 내지 0% S-아르기닌 등)도 포함한다. 일부 실시양태들에서, 용어 "아르기닌"은 99% 초과의 L-아르기닌 및 1% 미만의 S-아르기닌을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 용어 "아르기닌"은 거울상이성질체적으로 순수한 L-아르기닌을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 아르기닌은 약학적 등급의 아르기닌이다.
다양한 농도의 아르기닌이 항체 제제에 존재할 수 있다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제는 50 mM 초과의 아르기닌, 75 mM 초과의 아르기닌, 100 mM 초과의 아르기닌, 125 mM 초과의 아르기닌, 130 mM 초과의 아르기닌, 150 mM 초과의 아르기닌, 175 mM 초과의 아르기닌 또는 200 mM 초과의 아르기닌을 포함한다.
일부 실시양태들에서, 항체 제제는 800 mM 이하의 아르기닌, 600 mM 이하의 아르기닌, 400 mM 이하의 아르기닌, 200 mM 이하의 아르기닌, 150 mM 이하의 아르기닌, 130 mM 이하의 아르기닌 또는 125 mM 이하의 아르기닌을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제는 50 mM 내지 300 mM, 75 mM 내지 250 mM, 100 mM 내지 200 mM, 110 mM 내지 160 mM, 120 mM 내지 150 mM, 또는 약 125 mM의 아르기닌을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제는 125 mM의 아르기닌을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제는 130 mM의 아르기닌을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 아르기닌은 제제의 오스몰 농도를 유지하게 충분한 양으로 첨가된다. 일부 실시양태들에서, 아르기닌은 고장성 용액을 달성하기에 충분한 양으로 첨가된다. 본 발명자들은 일부 실시양태들에서 증가된 이온 강도의 항체 제제가 증가된 안정성 및 입자 형성의 감소를 제공한다는 것을 발견하였다.
본원에 기재된 항체 제제는 다양한 점도를 가질 수 있다. 항체 제제의 점도를 측정하는 방법은 당업자에게 공지되어 있고, 예를 들면, 점도계(rheometer)(예를 들면, 50 mm, 40 mm 또는 20 mm 플레이트 부속품을 갖춘 안톤 파르(Anton Paar) MCR301 점도계)를 포함할 수 있다. 본 발명의 일부 실시양태들에서, 점도는 초당 1000 전단 속도의 높은 전단 한계에서 기록되었다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제는 20 센티포아즈(centipoise)(cP) 미만, 18 cP 미만, 15 cP 미만, 13 cP 미만 또는 11 cP 미만의 점도를 가진다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제는 13 cP 미만의 점도를 가진다. 당업자는 점도가 온도에 의존한다는 것을 인식할 것이므로, 달리 특정되어 있지 않은 한, 본원에서 제공된 점도는 25℃에서 측정된다.
용어 "주입력"은 항체 제제를 니들에 통과시키기 위해 요구된 압력의 양(뉴톤)이다. 주입력은 항체 제제를 대상체에게 투여할 때 항체 제제에 의해 제공된 저항의 양과 상관관계를 가진다. 주입력은 투여 니들의 게이지 및 온도에 의존할 것이다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제는 27 Ga 박벽 PFS 니들을 통과할 때 15 N, 12 N, 10 N 또는 8 N 미만의 주입력을 가진다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제는 29 Ga 박벽 PFS 니들을 통과할 때 15 N, 12 N, 10 N 또는 8 N 미만의 주입력을 가진다.
항제 제제는 상이한 오스몰 농도를 가질 수 있다. 항체 제제의 오스몰 농도를 측정하는 방법은 당업자에게 공지되어 있고, 예를 들면, 삼투압계(osmometer)(예를 들면, 어드밴스드 인스트루먼트 인코포레이션(Advanced Instrument Inc.) 2020 동결점 강하 삼투압계)를 포함할 수 있다. 일부 실시양태들에서, 제제는 200 내지 600 mosm/kg, 260 내지 500 mosm/kg, 또는 300 내지 450 mosm/kg의 오스몰 농도를 가진다.
본 발명의 항체 제제는 다양한 pH 수준을 가질 수 있다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제의 pH는 4 내지 7, 4.5 내지 6.5, 또는 5 내지 6이다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제의 pH는 5.0이다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제의 pH는 6.0이다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제의 pH는 7.0 이상이다. 적절한 완충제의 첨가를 포함하나 이것으로 한정되지 않는 다양한 수단들이 원하는 pH 수준을 달성하는 데에 이용될 수 있다.
다양한 다른 성분들이 항체 제제에 포함될 수 있다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제는 완충제(예를 들면, 히스티딘, 아세테이트, 포스페이트 또는 시트레이트 완충제), 계면활성제(예를 들면, 폴리소르베이트) 및/또는 안정화제(예를 들면, 인간 알부민) 등을 포함할 수 있다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제는 예를 들면, 이온 교환제, 알루미나, 스테아르산알루미늄, 레시틴, 혈청 단백질, 예컨대, 인간 혈청 알부민, 완충제 물질, 예컨대, 포스페이트, 수크로스, 글리신, 소르브산, 소르브산칼륨, 포화된 식물성 지방산들의 부분적 글리세라이드 혼합물, 물, 염 또는 전해질, 예컨대, 황산프로타민, 인산수소이나트륨, 인산수소칼륨, 염화나트륨, 아연 염, 콜로이드성 실리카, 삼규산마그네슘, 폴리비닐 피롤리돈, 셀룰로스 기제의 물질, 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 카복시메틸셀룰로스, 폴리아크릴레이트, 폴리에틸렌-폴리옥시프로필렌-블록 중합체 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함하는 약학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제는 계면활성제를 추가로 포함한다. 일부 실시양태들에서, 계면활성제는 폴리소르베이트, 나트륨 도데실 설페이트 및 비이온성 계면활성제로 구성된 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태들에서, 계면활성제는 하기 화학식으로 표시되는 폴리소르베이트 20, 즉 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄 모노라우레이트이다:
Figure pat00003
폴리소르베이트 20(PS-20)은 여러 상업적 판매회사들로부터 상업적으로 입수가능하다(예를 들면, 알케스트(Alkest)® TW 20(옥시테노(Oxiteno), 브라질 소재) 및 트윈(Tween)® 20(피어스(Pierce), 미국 일리노이주 록포드 소재)). 본 발명자들은 항체 제제 중의 PS-20의 농도를 조심스럽게 조절함으로써 항체가 부가된 안정성을 갖고 연장된 기간 동안 저장될 때 감소된 양의 입자 형성을 가진다는 것을 발견하였다.
일부 실시양태들에서, PS-20은 항체 제제의 약 0.001% 내지 약 0.02%, 약 0.002% 내지 약 0.015%, 약 0.002% 내지 약 0.01%, 약 0.004% 내지 약 0.009%, 약 0.005% 내지 약 0.008%, 약 0.007% 또는 약 0.006%이다.
일부 실시양태들에서, 항체 제제는 히스티딘을 추가로 포함한다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제는 약 1 mM 내지 약 100 mM, 약 5 mM 내지 약 80 mM의 히스티딘, 약 10 mM 내지 약 60 mM의 히스티딘, 약 15 mM 내지 약 50 mM의 히스티딘, 약 15 mM 내지 약 30 mM의 히스티딘, 또는 약 20 mM의 히스티딘을 포함한다.
일부 실시양태들에서, 다양한 성분들이 항체 제제로부터 빠질 수 있거나, 그 성분을 "실질적으로 함유하지 않는" 상태일 수 있다. 본원에서 사용된 용어 "실질적으로 함유하지 않는"은 0.01% 미만, 0.001% 미만, 0.0005% 미만, 0.0003% 미만 또는 0.0001% 미만의 지정된 성분을 함유하는 항체 제제를 지칭한다.
일부 실시양태들에서, 항체 제제는 사카라이드를 실질적으로 함유하지 않는다. 즉, 항체 제제는 0.01% 미만, 0.001% 미만, 0.0005% 미만, 0.0003% 미만 또는 0.0001% 미만의 사카라이드를 함유한다. 본원에서 사용된 용어 "사카라이드"는 다가 알코올의 유도체인 한 부류의 분자들을 지칭한다. 사카라이드는 통상적으로 탄수화물로서 지칭되고, 상이한 양의 당(사카라이드) 단위, 예를 들면, 모노사카라이드, 디사카라이드 및 폴리사카라이드를 함유할 수 있다. 일부 실시양태들에서, 제제는 디사카라이드를 실질적으로 함유하지 않는다. 일부 실시양태들에서, 제제는 환원 당, 비환원 당 또는 당 알코올을 실질적으로 함유하지 않는다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제는 프롤린, 글루타메이트, 소르비톨, 이가 금속 이온 및/또는 석시네이트를 실질적으로 함유하지 않는다.
일부 실시양태들에서, 본 발명은 (a) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 2 mg/㎖ 내지 약 20 mg/㎖의 항체, (b) 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20, (c) 약 40 mM 내지 약 60 mM의 트레할로스 및 (d) 약 110 mM 내지 약 150 mM의 L-아르기닌을 포함하는 안정한 수성 항체 제제에 관한 것이다. 일부 실시양태들에서, 제제는 약 20 mM의 히스티딘을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 2 mg/㎖ 내지 약 20 mg/㎖의 항체, (b) 약 0.006%의 폴리소르베이트-20, (c) 약 50 mM의 트레할로스, (d) 약 130 mM의 L-아르기닌 및 (e) 약 20 mM의 히스티딘을 포함하는 안정한 수성 항체 제제에 관한 것이다.
일부 실시양태들에서, 본 발명은 (a) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 20 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체, (b) 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20, (c) 약 200 mM 내지 약 300 mM의 트레할로스 및 (d) 약 20 mM의 히스티딘을 포함하는 안정한 수성 항체 제제에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 20 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체, (b) 약 0.006%의 폴리소르베이트-20, (c) 약 250 mM의 트레할로스 및 (d) 약 20 mM의 히스티딘을 포함하는 안정한 수성 항체 제제에 관한 것이다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 30 mg/㎖의 항체, (b) 약 0.006%의 폴리소르베이트-20, (c) 약 250 mM의 트레할로스 및 (d) 약 20 mM의 히스티딘을 포함하는 안정한 수성 항체 제제에 관한 것이다.
본 발명의 항체 제제는 수용액이다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제는 동결 온도에 노출되어 있지 않고/않거나 동결되어 있지 않다. 즉, 상기 항체 제제는 액체 상태로 유지되어 있다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제 중의 항체는 동결건조되어 있지 않다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "안정성"은 일반적으로 생물학적 활성 물질, 예컨대, 단백질, 펩티드 또는 또 다른 생물활성 거대분자의 무결성을 유지하거나 이러한 물질의 분해, 변성, 응집 또는 언폴딩(unfolding)을 최소화하는 것과 관련되어 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, "개선된 안정성"은 일반적으로 분해, 변성, 응집 또는 언폴딩을 초래하는 것으로 공지된 조건 하에서 단백질(예를 들면, 항체, 예컨대, 항-IL5R), 펩티드 또는 또 다른 관심있는 생물활성 거대분자가 대조군 단백질, 펩티드 또는 또 다른 생물활성 거대분자에 비해 더 높은 안정성을 유지한다는 것을 의미한다.
일부 실시양태들에서, 안정성은 낮은 내지 검출불가능한 수준의 입자 형성을 가진 항체 제제를 지칭한다. 본원에서 사용된 어구 "낮은 내지 검출불가능한 수준의 입자 형성"은 HIAC 분석 또는 시각적 분석에 의해 측정시 30개 미만의 입자/㎖, 20개 미만의 입자/㎖, 20개 미만의 입자/㎖, 15개 미만의 입자/㎖, 10개 미만의 입자/㎖, 5개 미만의 입자/㎖, 2개 미만의 입자/㎖ 또는 1개 미만의 입자/㎖를 함유하는 샘플을 지칭한다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제 중의 입자는 HIAC 분석 또는 시각적 분석에 의해 검출되지 않는다.
일부 실시양태들에서, 안정성은 항체의 감소된 단편화를 지칭한다. 본원에서 사용된 용어 "낮은 내지 검출불가능한 수준의 단편화"는 예를 들면, 비분해된 항체 또는 이의 비분해된 단편을 나타내는, HPSEC에 의해 확인된 단일 피크 또는 환원 모세관 겔 전기영동(rCGE)에 의해 확인된 2개의 피크들(예를 들면, 중쇄 및 경쇄)(또는 하위단위가 존재하는 만큼 많은 피크들)에서 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 이상의 총 단백질을 함유하고 각각에서 5% 초과, 4% 초과, 3% 초과, 2% 초과, 1% 초과 또는 0.5% 초과의 총 단백질을 가진 다른 단일 피크를 함유하지 않는 샘플을 지칭한다. 본원에서 사용된 용어 "환원 모세관 겔 전기영동"은 항체에서 이황화 결합을 환원시키기에 충분한 환원 조건 하에서의 모세관 겔 전기영동을 지칭한다.
당업자는 단백질의 안정성이 제제의 조성 이외의 다른 특징에도 의존한다는 것을 인식할 것이다. 예를 들면, 안정성은 온도, 압력, 습도, pH 및 방사선의 외부 형태에 의해 영향을 받을 수 있다. 따라서, 달리 특정되어 있지 않은 한, 본원에서 언급된 안정성은 5℃, 1 대기압, 50% 상대습도, 6.0의 pH 및 정상 배경 수준의 방사선에서 측정된 것으로 간주된다. 항체 제제 중의 항체의 안정성은 다양한 수단들에 의해 측정될 수 있다. 일부 실시양태들에서, 항체 안정성은 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 측정된다. SEC는 분석물들(예를 들면, 거대분자, 예컨대, 단백질 및 항체)을 그들의 수력학적 크기, 확산 계수 및 표면 성질의 조합을 기초로 분리한다. 따라서, 예를 들면, SEC는 다양한 변성 상태의 항체 및/또는 분해된 항체로부터 천연 3차원적 입체구조의 항체를 분리할 수 있다. SEC에서, 정지상은 일반적으로 유리 또는 강철 컬럼 내의 조밀한 3차원적 매트릭스 내로 팩킹된 불활성 입자로 구성된다. 이동상은 순수한 물, 수성 완충제, 유기 용매, 이들의 혼합물 또는 다른 용매일 수 있다. 정지상 입자는 특정 크기 미만의 종만이 들어가게 할 작은 공극 및/또는 채널을 가진다. 따라서, 큰 입자는 이 공극 및 채널로부터 배제되지만, 보다 더 작은 입자는 유동 이동상으로부터 제거된다. 입자들이 정지상 공극 내에서 고정된 상태로 보내는 시간은 부분적으로 그들이 침투할 수 있는 공극까지 얼마나 멀리 있는지에 의존한다. 이동상 유동으로부터의 그들의 제거는 그들이 컬럼으로부터 용출되는 데에 오랜 시간이 걸리게 하고 입자들의 크기의 차이를 기초로 입자들을 분리시킨다.
일부 실시양태들에서, SEC는 단백질 또는 이의 단편을 식별하거나 특징규명하기 위해 식별 기법과 조합된다. 단백질 식별 및 특징규명은 크로마토그래피 기법, 예를 들면, 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC), 면역분석법, 전기영동, 자외선/가시광선/적외선 분광법, 라만 분광법, 표면 증강 라만 분광법, 질량 분광법, 기체 크로마토그래피, 정지 광 산란(SLS), 푸리에 변환 적외선 분광법(FTIR), 원편광 이색성(CD), 우레아 유도된 단백질 언폴딩 기법, 고유 트립토판 형광, 시차 주사 열량측정 및/또는 ANS 단백질 결합을 포함하나 이들로 한정되지 않는 다양한 기법들에 의해 달성될 수 있다.
일부 실시양태들에서, 단백질 식별은 고압 액체 크로마토그래피에 의해 달성된다. HPLC를 수행하기 위한 다양한 기계들 및 장치들이 당업자에게 공지되어 있다. 일반적으로, HPLC는 관심있는 단백질을 함유하는 액체 용매를, 분리가 일어나는 분리 컬럼 상에 적재하는 단계를 포함한다. HPLC 분리 컬럼은 고체 입자(예를 들면, 실리카, 중합체 또는 흡착제)로 충전되고, 샘플 혼합물은 컬럼 입자와 상호작용할 때 화합물로 분리된다. HPLC 분리는 액체 용매의 조건(예를 들면, 압력, 온도), 샘플 혼합물과 액체 용매 사이의 화학적 상호작용(예를 들면, 소수성, 양성자화 등), 및 샘플 혼합물과 분리 컬럼의 내부에 팩킹된 고체 입자 사이의 화학적 상호작용(예를 들면, 리간드 친화성, 이온 교환 등)에 의해 영향을 받는다.
일부 실시양태들에서, SEC 및 단백질 식별은 동일한 장치 내에서 또는 동시적으로 일어난다. 예를 들면, SEC 및 HPLC는 조합될 수 있다(종종 SE-HPLC로서 지칭됨).
일부 실시양태들에서, 수성 제제는 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 2 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체를 포함하고, 상기 제제는 1개월 이상 동안 약 40℃에서 저장될 때 안정하다. 일부 실시양태들에서, 제제는 3개월 이상 동안 약 25℃에서 저장될 때 안정하다. 일부 실시양태들에서, 제제는 6개월 이상 동안 약 5℃에서 저장될 때 안정하다. 일부 실시양태들에서, 제제는 12개월 이상 동안 약 5℃에서 저장될 때 안정하다. 일부 실시양태들에서, 제제는 18개월 이상 동안 약 5℃에서 저장될 때 안정하다. 일부 실시양태들에서, 제제는 24개월 또는 36개월 이상 동안 약 5℃에서 저장될 때 안정하다.
용어 "안정한"은 상대적일 수 있고 절대적이지 않을 수 있다. 따라서, 일부 실시양태들에서, 항체가 6개월 동안 2℃ 내지 8℃에서 저장될 때 SEC HPLC에 의해 측정시 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만 또는 2% 미만의 항체가 분해되거나, 변성되거나, 응집되거나 언폴딩되는 경우 항체는 안정하다. 일부 실시양태들에서, 항체가 12개월 동안 2℃ 내지 8℃에서 저장될 때 SEC HPLC에 의해 측정시 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만 또는 2% 미만의 항체가 분해되거나, 변성되거나, 응집되거나 언폴딩되는 경우 항체는 안정하다. 일부 실시양태들에서, 항체가 18개월 동안 2℃ 내지 8℃에서 저장될 때 SEC HPLC에 의해 측정시 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만 또는 2% 미만의 항체가 분해되거나, 변성되거나, 응집되거나 언폴딩되는 경우 항체 제제 중의 항체는 안정하다. 일부 실시양태들에서, 항체가 24개월 동안 2℃ 내지 8℃에서 저장될 때 SEC HPLC에 의해 측정시 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만 또는 2% 미만의 항체가 분해되거나, 변성되거나, 응집되거나 언폴딩되는 경우 항체 제제 중의 항체는 안정하다.
일부 실시양태들에서, 항체가 3개월 동안 23℃ 내지 27℃에서 저장될 때 SEC HPLC에 의해 측정시 항체의 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만 또는 2% 미만이 분해되거나, 변성되거나, 응집되거나 언폴딩되는 경우 항체는 안정하다. 일부 실시양태들에서, 항체가 6개월 동안 23℃ 내지 27℃에서 저장될 때 SEC HPLC에 의해 측정시 항체의 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만 또는 2% 미만이 분해되거나, 변성되거나, 응집되거나 언폴딩되는 경우 항체는 안정하다. 일부 실시양태들에서, 항체가 12개월 동안 23℃ 내지 27℃에서 저장될 때 SEC HPLC에 의해 측정시 항체의 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만 또는 2% 미만이 분해되거나, 변성되거나, 응집되거나 언폴딩되는 경우 항체는 안정하다. 일부 실시양태들에서, 항체가 24개월 동안 23℃ 내지 27℃에서 저장될 때 SEC HPLC에 의해 측정시 항체의 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만 또는 2% 미만이 분해되거나, 변성되거나, 응집되거나 언폴딩되는 경우 항체는 안정하다.
일부 실시양태들에서, 항체가 40℃에서 저장될 때 SEC HPLC에 의해 측정시 월당 항체의 6% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만 또는 1% 미만이 분해되거나, 변성되거나, 응집되거나 언폴딩되는 경우 항체는 안정하다. 일부 실시양태들에서, 항체가 5℃에서 저장될 때 SEC HPLC에 의해 측정시 월당 항체의 6% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만 또는 1% 미만이 분해되거나, 변성되거나, 응집되거나 언폴딩되는 경우 항체는 안정하다.
일부 실시양태들에서, 항체가 8주, 4개월, 6개월, 9개월, 12개월 또는 24개월의 기간에 걸쳐 당업자에게 공지된 항체 결합 분석법, 예컨대, ELISA 등에 의해 측정시 기준 항체와 비교하여 제제의 항체(이의 항체 단편을 포함함)의 결합 활성의 매우 적은 내지 전혀 없는 손실을 나타내는 경우 본 발명의 항체 제제는 안정한 것으로서 간주될 수 있다. 일부 실시양태들에서, 1개월 이상 동안 약 40℃에서 저장된 항체는, 저장되지 않은 기준 항체와 비교하여 IL-5 수용체 폴리펩티드에 대한 결합 능력의 80% 이상, 약 85% 이상, 약 90% 이상, 약 95% 이상, 약 98% 이상 또는 약 99% 이상을 보유한다. 일부 실시양태들에서, 6개월 이상 동안 약 5℃에서 저장된 항체는, 저장되지 않은 기준 항체와 비교하여 IL-5 수용체 폴리펩티드에 대한 결합 능력의 80% 이상, 약 85% 이상, 약 90% 이상, 약 95% 이상, 약 98% 이상 또는 약 99% 이상을 보유한다. 일부 실시양태들에서, 1개월 이상 동안 약 40℃에서 저장된 항체는, 저장되지 않은 기준 항체와 비교하여 IL-5 수용체 폴리펩티드에 대한 결합 능력의 95% 이상을 보유한다. 일부 실시양태들에서, 6개월 이상 동안 약 5℃에서 저장된 항체는, 저장되지 않은 기준 항체와 비교하여 IL-5 수용체 폴리펩티드에 대한 결합 능력의 95% 이상을 보유한다.
항체 제제는 낮은 내지 검출불가능한 수준의 항체 응집을 제공할 수 있다. 본원에서 사용된 어구 "낮은 내지 검출불가능한 수준의 응집"은 고성능 크기 배제 크로마토그래피(HPSEC) 또는 정지 광 산란(SLS) 기법에 의해 측정시 단백질의 중량을 기준으로 약 5% 이하, 약 4% 이하, 약 3% 이하, 약 2% 이하, 약 1% 이하 및 약 0.5% 이하의 응집체를 함유하는 샘플을 지칭한다. 일부 실시양태들에서, 4주 이상 동안 약 40℃에서 저장될 때 HPSEC에 의해 측정시 항체의 2% 미만이 응집체를 형성한다. 일부 실시양태들에서, 3개월 이상, 6개월 이상, 9개월 이상, 12개월 이상, 15개월 이상, 18개월 이상, 24개월 이상 또는 36개월 이상 동안 약 5℃에서 저장될 때 HPSEC에 의해 측정시 항체의 2% 미만이 응집체를 형성한다.
본 발명자들은 시각적 검사, 미세유동 영상화(MFI) 또는 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 측정시 본원에서 제공된 항체 제제가 입자 형성을 크게 감소시킨다는 것을 발견하였다. 일부 실시양태들에서, 제제는 1개월 이상 동안 약 40℃에서 저장될 때 시각적 검사에 의해 확인시 입자를 실질적으로 함유하지 않는다. 일부 실시양태들에서, 제제는 6개월 이상, 9개월 이상, 12개월 이상, 15개월 이상, 18개월 이상, 24개월 이상 또는 36개월 이상 동안 약 5℃에서 저장될 때 시각적 검사에 의해 확인시 입자를 실질적으로 함유하지 않는다.
일부 실시양태들에서, 본 발명의 항체 제제는 약학 목적으로 사용될 수 있다. 약학 적용에서 사용되는 항체는 특히, 세포 단백질 오염물질, 세포 DNA 오염물질, 바이러스 및 다른 전염가능한 물질을 포함하는, 세포 배양물로부터의 오염물질 면에서 일반적으로 고도의 순도를 가져야 한다. 문헌("WHO Requirements for the use of animal cells as in vitro substrates for the production of biologicals: Requirements for Biological Substances No. 50." No. 878. Annex 1, 1998)을 참조한다. 세계보건기구(WHO)는 오염물질에 대한 우려에 반응하여 다양한 오염물질들의 수준에 대한 한계를 확립하였다. 예를 들면, WHO는 단백질 제품의 경우 용량당 10 ng 미만의 DNA 한계를 권장하였다. 마찬가지로, 미국 식품의약청(FDA)은 0.5 pg/mg 단백질 이하의 DNA 한계를 설정하였다. 따라서, 일부 실시양태들에서, 본 발명은 하나 이상의 정부 기구, 예를 들면, 미국 식품의약청 및/또는 세계보건기구에 의해 한정된 오염물질 한계를 충족시키거나 초과하는 항체 제제에 관한 것이다.
일부 실시양태들에서, 본원에 기재된 항체 제제는 약학적으로 허용가능하다. "약학적으로 허용가능한"은 타당한 의학적 판단의 범위 내에서 합리적인 이익/위험 비에 비해 과도한 독성 또는 다른 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉되기에 적합한 항체 제제를 지칭한다.
항체 제제의 순도는 달라질 수 있다. 일부 실시양태들에서, 관심있는 치료 항체, 예를 들면, 항-IL5R 항체는 항체 제제에 존재하는 90%(중량/중량) 초과의 총 폴리펩티드이다. 일부 실시양태들에서, 관심있는 치료 항체, 예를 들면, 항-IL5R은 항체 제제에 존재하는 95%(중량/중량), 98%(중량/중량), 99%(중량/중량), 99.5%(중량/중량) 또는 99.9%(중량/중량) 초과의 총 폴리펩티드이다.
본원에서 제공된 제제는 대상체의 치료에 적합할 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, "대상체"는 "환자"와 상호교환적으로 사용될 수 있고, 인간 및 비인간, 예컨대, 가축 및 농장 동물, 동물원 동물, 스포츠 동물 및 애완동물(그러나, 이들로 한정되지 않음)을 포함하는 포유동물로서 분류된 임의의 동물을 지칭한다. 일부 실시양태들에서, 대상체는 인간을 지칭한다.
용어 "치료한다" 및 "치료"는 치유적 치료 및 예방적, 유지 또는 방지적 조치 둘 다를 지칭하고, 이때 목적은 원하지 않는 생리학적 상태, 장애 또는 질환을 예방하거나 완화시키거나(경감시키거나), 유리한 또는 원하는 임상 결과를 수득하는 것이다. 용어 "치료한다", "치료" 및 "치료하는"은 이러한 질환 또는 장애(예를 들면, IL-5 폴리펩티드의 비정상적인 발현 및/또는 활성을 특징으로 하는 질환 또는 장애, IL-5 폴리펩티드 또는 이의 하나 이상의 하위단위의 비정상적인 발현 및/또는 활성을 특징으로 하는 질환 또는 장애, 자가면역 질환, 염증성 질환, 증식성 질환, 또는 감염)의 진행, 중증도 및/또는 지속시간의 감소 또는 호전, 또는 (하나 이상의 예방제 또는 치료제의 투여를 포함하나 이것으로 한정되지 않는) 하나 이상의 요법의 투여로부터 비롯된 이의 하나 이상의 증상의 호전을 지칭한다. 특정 실시양태들에서, 이러한 용어들은 염증 관련 호산구 매개 염증의 감소를 지칭한다. 다른 실시양태들에서, 이러한 용어는 비만 세포에 의한 염증 물질의 방출의 감소, 또는 이러한 염증 물질의 생물학적 효과의 감소를 지칭한다. 다른 실시양태들에서, 이러한 용어들은 과다증식성 세포(예를 들면, 암성 세포)의 생장, 형성 및/또는 수의 증가의 감소를 지칭한다. 다른 실시양태들에서, 이러한 용어들은 기도, 피부, 위장관 또는 이들의 조합의 염증 감소를 지칭한다. 다른 실시양태들에서, 이러한 용어는 천식과 관련된 증상의 감소를 지칭한다. 일부 실시양태들에서, 이러한 용어는 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD)과 관련된 증상의 감소를 지칭한다.
본 발명의 항체 제제는 다양한 수단들을 통해 대상체에게 투여될 수 있다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제는 예를 들면, 흡입(예를 들면, 분말 또는 에어로졸 분무), 경점막, 정맥내, 피하 또는 근육내 투여를 통한 비경구 투여에 적합하다. 일부 실시양태들에서, 제제는 주사가능한 제제이다. 일부 실시양태들에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체 제제들 중 임의의 항체 제제를 포함하는 밀봉된 용기에 관한 것이다.
일부 양태들에서, 본 발명은 다양한 약학 제형들에 관한 것이다. 다양한 제형들은 본원에서 제공된 제제에 적용될 수 있다. 예를 들면, 문헌(Pharmaceutical Dosage Form: Parenteral Medications, Volume 1, 2nd Edition)을 참조한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 약학 단위 제형은 적합한 용기, 예를 들면, 바이알 또는 시린지 내에 항체 제제를 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 약학 단위 제형은 정맥내로, 피하로 또는 근육내로 전달된 항체 제제를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 약학 단위 제형은 에어로졸에 의해 전달되는 항체 제제를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 약학 단위 제형은 피하로 전달되는 항체 제제를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 약학 단위 제형은 에어로졸에 의해 전달되는 항체 제제를 포함한다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 약학 단위 제형은 코내로 투여되는 항체 제제를 포함한다.
본 발명의 항체 제제는 1회 사용을 위해 수성 항체 제제의 분취물을 함유하는 바이알을 제조함으로써 단위 제형으로서 제조될 수 있다. 예를 들면, 바이알당 단위 용량은 IL-5 수용체에 특이적으로 결합하는 약 0.1 mg/㎖ 내지 약 300 mg/㎖의 상이한 농도의 항체를 1 ㎖, 2 ㎖, 3 ㎖, 4 ㎖, 5 ㎖, 6 ㎖, 7 ㎖, 8 ㎖, 9 ㎖, 10 ㎖, 15 ㎖ 또는 20 ㎖의 양으로 함유할 수 있다. 필요하다면, 이 제제들은 멸균 희석제를 각각의 바이알에 첨가함으로써 원하는 농도까지 조절될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 수성 항체 제제는 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 2 mg/㎖ 내지 약 20 mg/㎖의 항체, 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20, 약 40 mM 내지 약 60 mM의 트레할로스 및 약 110 mM 내지 약 150 mM의 L-아르기닌을 함유하는 멸균 액체로서 단회 용량 바이알로 제제화된다. 또 다른 특정 실시양태에서, 본 발명의 수성 항체 제제는 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 20 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체, 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20 및 약 200 mM 내지 약 300 mM의 트레할로스를 함유하는 멸균 액체로서 단회 용량 바이알로 제제화된다. 한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 3 cc USP I형 보로실리케이트 앰버 바이알(웨스트 파마슈티칼 서비시스(West Pharmaceutical Services) - 제품 번호 6800-0675) 내에 2 내지 20 mg/㎖로 공급된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항체는 3 cc USP I형 보로실리케이트 앰버 바이알 내에 20 내지 100 mg/㎖로 공급된다. 목표 충전 부피는 1.2 ㎖이다.
본 발명의 항체 제제는 1회 사용을 위해 수성 항체 제제의 분취물을 함유하는 프리필드 시린지를 제조함으로써 단위 제형으로서 제조될 수 있다. 예를 들면, 프리필드 시린지당 단위 용량은 IL-5 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 약 2 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 상이한 농도의 항체를 0.1 ㎖, 0.2 ㎖, 0.3 ㎖, 0.4 ㎖, 0.5 ㎖, 0.6 ㎖, 0.7 ㎖, 0.8 ㎖, 0.9 ㎖, 1 ㎖, 2 ㎖, 3 ㎖, 4 ㎖, 5 ㎖, 6 ㎖, 7 ㎖, 8 ㎖, 9 ㎖, 10 ㎖, 15 ㎖ 또는 20 ㎖의 양으로 함유할 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 수성 항체 제제는 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 2 mg/㎖ 내지 약 20 mg/㎖의 항체, 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20, 약 40 mM 내지 약 60 mM의 트레할로스 및 약 110 mM 내지 약 150 mM의 L-아르기닌을 함유하는 멸균 액체로서 단회 용량 프리필드 시린지로 제제화된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 수성 항체 제제는 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 20 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체, 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20 및 약 200 mM 내지 약 300 mM의 트레할로스를 함유하는 멸균 액체로서 단회 용량 프리필드 시린지로 제제화된다.
다양한 용량 양이 단회 사용에서 투여될 수 있다. 예를 들면, 일부 실시양태들에서, 0.1 mg, 0.2 mg, 0.3 mg, 0.4 mg, 0.5 mg, 0.6 mg, 0.7 mg, 0.8 mg, 0.9 mg, 1.0 mg, 1.1 mg, 1.2 mg, 1.3 mg, 1.4 mg, 1.5 mg, 1.6 mg, 1.7 mg, 1.8 mg, 1.9 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg, 6 mg, 7 mg, 8 mg, 9 mg, 10 mg, 12 mg, 14 mg, 16 mg, 18 mg, 20 mg, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 70 mg 또는 100 mg의 항체가 단회 용량으로 투여될 수 있다.
다양한 종류의 시린지들이 사용될 수 있다. 시린지는 대상체에게 투여되기 직전에, 예를 들면, 대상체에게 투여되기 1주, 1일, 6시간, 3시간, 2시간, 1시간, 30분, 20분 또는 10분 미만의 시간 전에 항체 제제로 충전될 수 있다. 일부 실시양태들에서, 시린지는 소매 판매점에서 항체 제제로 충전되거나, 대상체의 치료가 수행되는 시설에 의해 항체 제제로 충전된다. 일부 실시양태들에서, 시린지는 미리 충전된다. 예를 들면, 시린지는 대상체에게 투여되기 1일, 2일, 4일, 1주, 2주, 1개월, 2개월, 3개월, 6개월, 12개월, 18개월, 24개월, 3년 또는 4년 초과의 시간 전에 항체 제제로 충전된다. 일부 실시양태들에서, 프리필드 시린지는 니들, 예를 들면, 27G 표준벽(regular wall) 니들, 27G 박벽 니들, 29G 표준벽 니들 또는 29G 박벽 니들을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 프리필드 시린지는 29G 박벽 니들을 포함한다.
일부 실시양태들에서, 원하는 대상체에게의 투여에 적합한 임의의 시린지가 사용될 수 있다. 일부 실시양태들에서, 시린지는 플라스틱 시린지 또는 유리 시린지이다. 일부 실시양태들에서, 시린지는 텅스텐을 실질적으로 함유하지 않는 물질로 만들어진다. 일부 실시양태들에서, 시린지는 실리콘으로 코팅된다. 일부 실시양태들에서, 프리필드 시린지는 플루오로중합체 수지 디스크를 가진 플런저를 포함한다. 시린지의 예로는 벡톤 딕킨슨(Becton Dickinson) 하이팍(Hypak) 1 ㎖ 긴 플런저 마개 4023 플루로텍 다이쿄(Flurotec Daikyo) Si1OOO(카탈로그 #47271919)을 가진 바이오텍(Biotech) 1 ㎖ 길이용 하이팍™(벡톤 딕킨슨), C3Pin(로트(lot) #E912701), 바이오텍 0.8 mg 실리콘 오일용 하이팍™(벡톤 딕킨슨), 및 CZ 시린지(웨스트(West), 카탈로그 #19550807)가 있을 수 있으나 이들로 한정되지 않는다.
본 발명의 수성 항체 제제는 멸균 여과, 방사선 등을 포함하는 다양한 멸균 방법들에 의해 멸균될 수 있다. 특정 실시양태에서, 정용여과된 항체 제제는 미리 멸균된 0.2 마이크론 필터에 의해 필터 멸균된다. 본 발명의 멸균된 수성 항체 제제는 면역 반응, 예를 들면, 염증성 반응을 예방하고/하거나, 치료하고/하거나 관리하기 위해 대상체에게 투여될 수 있다.
일부 실시양태들에서, 프리필드 시린지는 (a) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 2 mg/㎖ 내지 약 20 mg/㎖의 항체, 및 (b) 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 프리필드 시린지는 (c) 약 40 mM 내지 약 60 mM의 트레할로스 및 (d) 약 110 mM 내지 약 150 mM의 L-아르기닌을 추가로 포함한다. 일부 실시양태들에서, 프리필드 시린지는 (a) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 20 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체, 및 (b) 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 프리필드 시린지는 (c) 약 200 mM 내지 약 300 mM의 트레할로스를 추가로 포함한다.
일부 실시양태들에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체 제제들 중 임의의 항체 제제, 본원에 기재된 용기, 본원에 기재된 단위 제형 또는 본원에 기재된 프리필드 시린지를 포함하는 키트에 관한 것이다.
일부 실시양태들에서, 본 발명은 항체를 포함하는 안정한 수성 항체 제제를 제조하는 방법으로서, (a) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 약 1 mg/㎖ 내지 약 400 mg/㎖까지 정제하는 단계; 및 (b) 단리된 항체를 안정화 제제에 넣어, (i) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 2 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체 및 (ii) 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20을 포함하는 안정한 수성 항체 제제를 형성하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것일 수 있다. 일부 실시양태들에서, 본 발명은 안정한 수성 항체 제제를 제조하는 방법으로서, (a) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 약 1 mg/㎖ 내지 약 400 mg/㎖까지 정제하는 단계; 및 (b) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 상기 항체를, (i) 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20, (ii) 약 40 mM 내지 약 60 mM의 트레할로스 및 (iii) 약 110 mM 내지 약 150 mM의 L-아르기닌을 포함하는 용액으로 약 2 mg/㎖ 내지 약 20 mg/㎖의 항체까지 희석하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태들에서, 본 발명은 안정한 수성 항체 제제를 제조하는 방법으로서, (a) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 약 1 mg/㎖ 내지 약 400 mg/㎖까지 정제하는 단계; 및 (b) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 상기 항체를, (i) 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20, (ii) 약 200 mM 내지 약 300 mM의 트레할로스 및 (iii) 약 20 mM의 히스티딘을 포함하는 용액으로 약 20 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체까지 희석하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 많은 양태들이 수성 제제에 관한 것이지만, 본 발명의 항체 또는 항체 제제가 필요하다면 동결될 수 있다는 것이 등가물을 위해 인지되어야 한다. 따라서, 본 발명은 본 발명의 제제의 동결건조된 형태, 또는 추후에 수성 형태로 재구성되는 동결건조된 항체를 포괄한다. 일부 실시양태들에서, 본 발명은 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 재구성된 항체 제제를 제조하는 방법으로서, (a) 세포 배양물로부터 항체를 정제하는 단계; (b) 단리된 항체를 동결건조하는 단계; 및 (c) 동결건조된 항체를 수용액에 첨가하여, (i) 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 2 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체 및 (ii) 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20을 포함하는 재구성된 항체 제제를 형성하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
일부 실시양태들에서, 본 발명자들은 감소된 글루타티온 S-트랜스퍼라제(GST) 농도를 가진 항-IL5R 항체 제제가 감소된 (예를 들면, 검출불가능한) 입자 형성을 야기한다는 것을 발견하였다. 입자의 제거는 잠재적 면역원성을 피하고 생성물의 질에 대한 영향을 제한하는 데에 중요하다. 일부 실시양태들에서, GST 농도는 친화성 크로마토그래피에 의해 감소된다. 일부 실시양태들에서, GST 농도는 단백질 A 컬럼의 사용에 의해 감소된다. 일부 실시양태들에서, 단백질 A 컬럼은 맙셀렉트 슈어(MabSelect Sure)(지이 헬쓰케어 라이프 사이언시스(GE Healthcare Life Sciences))이다. 일부 실시양태들에서, GST 농도는 혼합 모드 크로마토그래피의 이용에 의해 감소된다. 일부 실시양태들에서, 혼합 모드 컬럼은 캡토™ 어드히어(지이 헬쓰케어 라이프 사이언시스)이다.
일부 실시양태들에서, 본 발명은 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 포함하는 항체 제제로서, 입자를 본질적으로 함유하지 않는 항체 제제에 관한 것이다. 일부 실시양태들에서, 용어 "입자를 본질적으로 함유하지 않는"은 라이트 박스 하에서 보았을 때 육안으로 보이는 입자의 부재를 지칭한다. 일부 실시양태들에서, 용어 "입자를 본질적으로 함유하지 않는"은 앞서 기재된 어구 "낮은 내지 검출불가능한 수준의 입자 형성"과 동의어이다. 일부 실시양태들에서, "입자를 본질적으로 함유하지 않는"은 30개 미만의 입자/㎖, 20개 미만의 입자/㎖, 20개 미만의 입자/㎖, 15개 미만의 입자/㎖, 10개 미만의 입자/㎖, 5개 미만의 입자/㎖, 2개 미만의 입자/㎖ 또는 1개 미만의 입자/㎖를 함유하는 샘플을 지칭하고, 이때 입자는 25 ㎛보다 더 크고 입자 카운트는 HIAC 분석 또는 시각적 분석에 의해 측정된다. 일부 실시양태들에서, "입자를 본질적으로 함유하지 않는"은 1개 내지 50개의 입자/㎖, 2개 내지 40개의 입자/㎖, 3개 내지 30개의 입자/㎖, 4개 내지 25개의 입자/㎖ 또는 5개 내지 20개의 입자/㎖를 함유하는 샘플을 지칭하고, 이때 입자는 25 ㎛보다 더 크고 입자 카운트는 HIAC 분석 또는 시각적 분석에 의해 측정된다. 일부 실시양태들에서, 용어 "육안으로 보이는 입자"는 25 ㎛보다 더 큰 입자를 지칭한다.
일부 실시양태들에서, "입자를 본질적으로 함유하지 않는"은 1개 내지 200개의 입자/㎖, 10개 내지 150개의 입자/㎖, 30개 내지 100개의 입자/㎖ 또는 40개 내지 80개의 입자/㎖를 함유하는 샘플을 지칭하고, 이때 입자는 5 ㎛보다 더 크고 입자 카운트는 HIAC 분석 또는 시각적 분석에 의해 측정된다. 일부 실시양태들에서, "육안으로 보이는 입자"는 5 ㎛보다 더 큰 입자를 지칭한다. 일부 실시양태들에서, 항체 제제 중의 입자는 HIAC 분석 또는 시각적 분석에 의해 검출되지 않는다.
일부 실시양태들에서, 본 발명은 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 포함하는 항체 제제로서, 글루타티온 S-트랜스퍼라제(GST)를 본질적으로 함유하지 않는 항체 제제에 관한 것이다. 달리 특정되어 있지 않은 한, 용어 "글루타티온 S-트랜스퍼라제를 본질적으로 함유하지 않는" 또는 "GST를 본질적으로 함유하지 않는"은 활성 GST를 결여하는(그러나, 불활성 GST를 함유할 수 있는) 조성물뿐만 아니라 활성 형태 또는 불활성 형태의 GST 단백질을 갖지 않는 조성물도 포괄할 것이다. 일부 실시양태들에서, 본 발명은 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 포함하는 항체 제제로서, 활성 GST를 본질적으로 함유하지 않는 항체 제제에 관한 것이다. 용어 "활성 GST"는 GS-DNB 접합체를 형성하기 위해 친전자성 화합물, 예컨대, 1-클로로-2,4-디니트로벤젠(CDNB)에 대한 글루타티온의 티올 기(GSH)의 형성을 촉진할 수 있는 GST를 지칭한다. GST 또는 글루타티온 S-트랜스퍼라제는 다수의 반응들을 촉진할 수 있되, 주로 설프하이드릴 기를 통한 환원된 글루타티온과 친전자성 중심, 예를 들면, 방향족, 이중 결합, C-C1X 등의 접합을 촉진할 수 있는 효소들의 패밀리를 지칭한다. GST 단량체는 일반적으로 22 내지 29 kDa의 범위 내에 있으나, 이량체, 삼량체 및 (다른 단백질과의) 이종이량체로서 존재할 수 있다. 일부 실시양태들에서, 용어 GST는 GS-DNB 접합체를 형성하기 위해 1-클로로-2,4-디니트로벤젠(CDNB)에 대한 글루타티온의 티올 기(GSH)의 형성을 촉진할 수 있는 단백질을 지칭한다.
일부 실시양태들에서, 본 발명은 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 포함하는 항체 제제로서, 38℃ 내지 42℃에서 저장될 때 1개월 이상, 2개월 이상, 3개월 이상, 4개월 이상, 5개월 이상, 6개월 이상, 8개월 이상, 10개월 이상, 12개월 이상 또는 18개월 이상 동안 입자를 본질적으로 함유하지 않는 항체 제제에 관한 것이다. 일부 실시양태들에서, 본 발명은 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 포함하는 항체 제제로서, 2℃ 내지 6℃에서 저장될 때 1개월 이상, 2개월 이상, 3개월 이상, 4개월 이상, 5개월 이상, 6개월 이상, 8개월 이상, 10개월 이상, 12개월 이상, 18개월 이상, 24개월 이상, 30개월 이상, 36개월 이상 또는 48개월 이상 동안 입자를 본질적으로 함유하지 않는 항체 제제에 관한 것이다.
일부 실시양태들에서, 항체 제제는 GST를 본질적으로 함유하지 않는다. 일부 실시양태들에서, 용어 "GST를 본질적으로 함유하지 않는"은 약 0.5 미만의 단위/mg 항체, 약 0.3 미만의 단위/mg 항체, 약 0.1 미만의 단위/mg 항체, 약 0.08 미만의 단위/mg 항체, 약 0.05 미만의 단위/mg 항체, 약 0.03 미만의 단위/mg 항체, 약 0.01 미만의 단위/mg 항체, 약 0.005 미만의 단위/mg 항체, 약 0.001 미만의 단위/mg 항체, 약 5 x 10-3 미만의 단위/mg 항체, 약 1 x 10-4 미만의 단위/mg 항체, 약 1 x 10-5 미만의 단위/mg 항체, 또는 약 1 x 10-6 미만의 단위/mg 항체의 GST 활성을 가진 항체 제제를 지칭한다. 일부 실시양태들에서, 용어 "본질적으로 함유하지 않는"은 통상의 GST 검출 기법을 이용할 때 검출불가능한 수준의 GST를 지칭한다.
GST 활성을 측정하는 다양한 방법들이 당업자에게 공지되어 있다. 일부 실시양태들에서, GST 활성은 글루타티온(GSH/GSSG/총) 플루오로측정 분석 키트(바이오비젼(BioVision), 미국 캘리포니아주 샌 프란시스코 소재)를 사용함으로써 측정된다.
일부 실시양태들에서, 본 발명은 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 정제하는 방법으로서, (i) 상기 항체를 포함하는 세포 배양물을 수득하는 단계, (ii) 상기 항체에 대한 친화성 크로마토그래피를 수행하는 단계, (iii) 상기 항체에 대한 양이온 교환을 수행하는 단계, 및 (iv) 상기 항체에 대한 혼합 모드 크로마토그래피를 수행하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태들에서, 본 발명은 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 정제하는 방법으로서, (i) 상기 항체를 포함하는 세포 배양물을 수득하는 단계, (ii) 상기 항체를 단백질 A 컬럼에 결합시키는 단계, (iii) 단백질 A 컬럼으로부터 상기 항체를 용출하는 단계, (iv) 상기 항체에 대한 양이온 교환을 수행하는 단계, 및 (v) 상기 항체에 대한 혼합 모드 크로마토그래피를 수행하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태들에서, 항체를 정제하는 방법은 바이러스 불활성화 공정을 추가로 포함한다. 일부 실시양태들에서, 바이러스 불활성화 단계는 pH를 4.0 미만까지 낮춤으로써 수행된다. 일부 실시양태들에서, 상기 방법은 정용여과 공정을 추가로 포함한다. 일부 실시양태들에서, 상기 방법은 여과 공정을 추가로 포함한다. 일부 실시양태들에서, 여과 공정은 활성 바이러스 입자를 제거하기에 충분하다.
일부 실시양태들에서, 본 발명은 환자를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태들에서, 상기 방법은 본원에 기재된 항체 제제, 본원에 기재된 용기, 본원에 기재된 단위 제형, 또는 본원에 기재된 프리필드 시린지를 상기 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태들에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체 제제를 투여함으로써 폐 질환 또는 장애를 치료하는 데에 적합하다. 일부 실시양태들에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체 제제를 투여함으로써 호산구성 질환 또는 장애를 가진 환자를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태들에서, 본 발명은 대상체에서 폐 질환 또는 장애를 치료하는 방법으로서, 본원에 기재된 항체 제제를 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태들에서, 본 발명은 대상체에서 호산구성 질환 또는 장애를 치료하는 방법으로서, 본원에 기재된 항체 제제를 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태들에서, 본 발명은 대상체에서 폐 질환 또는 장애, 예를 들면, 천식, COPD, 호산구성 천식, 호산구성 및 호중구성 복합 천식, 아스피린 민감성 천식, 알레르기성 기관지폐 아스페르길루스증, 급성 및 만성 호산구성 기관지염, 급성 및 만성 호산구성 폐렴, 척스트라우스 증후군, 과다호산구 증후군, 약물, 자극제 및 방사선 유발성 폐 호산구증가증, 감염 유발성 폐 호산구증가증(진균, 결핵, 기생충), 자가면역 관련 폐 호산구증가증, 호산구성 식도염 또는 크론병, 또는 이들의 조합을 치료하는 방법으로서, 본원에 기재된 항체 제제를 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태들에서, 본 발명은 대상체에서 천식을 치료하는 방법으로서, 본원에 기재된 항체 제제를 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태들에서, 본 발명은 대상체에서 COPD를 치료하는 방법으로서, 본원에 기재된 항체 제제를 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
일부 실시양태들에서, 치료 유효량의 본원에 기재된 항체 제제는 질환을 치료하기 위해 투여된다. 본원에서 사용된 용어 "치료 유효량"은 질환 또는 장애(예를 들면, IL-5 폴리펩티드의 비정상적인 발현 및/또는 활성을 특징으로 하는 질환 또는 장애, IL-5 수용체 또는 이의 하나 이상의 하위단위의 비정상적인 발현 및/또는 활성을 특징으로 하는 질환 또는 장애, 자가면역 질환, 염증성 질환, 증식 질환, 또는 감염(바람직하게는, 호흡 감염) 또는 이들의 하나 이상의 증상)의 중증도를 감소시키거나, 호흡 질환의 지속시간을 감소시키거나, 이러한 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상을 호전시키거나, 이러한 질환 또는 장애의 진행을 예방하거나, 이러한 질환 또는 장애의 퇴행을 야기하거나, 또 다른 요법의 치료 효과(들)를 향상시키거나 개선하기에 충분한 요법(예를 들면, IL-5 수용체 폴리펩티드에 면역특이적으로 결합하는 항체)의 양을 지칭한다. 일부 실시양태들에서, 치료 유효량은 미리 특정될 수 없고 다양한 수단들, 예를 들면, 용량 적정을 이용함으로써 돌보는 사람, 예를 들면, 의사 또는 다른 건강관리 제공자에 의해 결정될 수 있다. 적절한 치료 유효량은 예를 들면, 동물 모델을 사용하는 관용적인 실험에 의해 결정될 수도 있다.
용어 "요법들" 및 "요법"은 질환 또는 장애(예를 들면, IL-5 폴리펩티드의 비정상적인 발현 및/또는 활성을 특징으로 하는 질환 또는 장애, IL-5 수용체 또는 이의 하나 이상의 하위단위의 비정상적인 발현 및/또는 활성을 특징으로 하는 질환 또는 장애, 자가면역 질환, 염증성 질환, 증식 질환, 또는 감염(바람직하게는, 호흡 감염) 또는 이들의 하나 이상의 증상)의 예방, 치료, 관리 또는 호전에 사용될 수 있는 임의의 프로토콜(들), 방법(들) 및/또는 물질(들)을 지칭할 수 있다. 특정 실시양태들에서, 용어 "요법들" 및 "요법"은 이러한 질환 또는 장애, 또는 숙련된 의사에게 공지된 하나 이상의 증상의 치료, 관리, 예방 또는 호전에 유용한 생물학적 요법, 지지 요법 및/또는 다른 요법을 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료 프로토콜"은 치료 효과를 가진 하나 이상의 요법(예를 들면, 치료제)의 투여 용량 및 시간을 조정하기 위한 섭생을 지칭한다.
본 발명의 항체 제제의 투여 경로는 예를 들면, 경구, 비경구, 흡입 또는 국소 모드의 투여일 수 있다. 본원에서 사용된 용어 비경구는 예를 들면, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 피하, 직장 또는 질 투여를 포함한다. 일부 실시양태들에서, 항체는 항-IL5R 항체이고, 투여 경로는 근육내 주사이다. 모든 이들 형태의 투여가 본 발명의 범위 내에 있는 것으로서 명확히 고려되지만, 일부 실시양태들에서, 항체 제제는 주사, 특히 정맥내 또는 동맥내 주사 또는 적하를 통한 투여에 적합하다.
일부 실시양태들에서, 본 발명의 조성물 및 방법은 제조자가 비용 감소, 방법 단계 감소, 오류에 대한 기회 감소, 불안전한 또는 부적절한 첨가제의 도입에 대한 기회 감소, 폐기물 감소, 저장 시간 증가 등을 통해 보다 더 효율적인 방식으로 인간에게 투여되기에 적합한 항체 제제를 제조할 수 있게 한다.
실시예
실시예 1
프리필드 시린지(또는 바이알 백-업(back-up) 구성(configuration))로부터의 피하 전달을 통한 2 내지 100 mg 용량의 전달에 적절한 안정한 항-IL5R 항체 제제를 개발하기 위해 제제화 연구를 수행하였다. 구체적으로, 별개의 2개 항체 농도 제제들, 즉 2 내지 20 mg/㎖ 제제 및 20 내지 100 mg/㎖ 제제를 개발하였다.
1. 재료 및 방법
a. 항-IL5R의 공급원 및 제제의 제조
다수의 로트들의 항-IL5R을 이 연구들에서 사용하였다. 모든 로트들을 메디뮨(MedImmune)에 의해 다양한 스케일로 제조하고 정용여과하고 20 mM 히스티딘/히스티딘 HCl(pH 6) 중의 대략 130 g/ℓ까지 농축한 후 전달하였다. 일부 로트들은 정용여과 완충제 중의 250 mM 트레할로스도 가졌다.
항-IL5R을 부형제 첨가 완충제(EAB)에 첨가하여 100 g/ℓ의 항-IL5R 농도, 및 완충제 및 부형제 종의 적절한 농도를 달성함으로써 항-IL5R을 제제화하였다. 100 g/ℓ 제제로부터 보다 더 낮은 농도의 약물을 제조하였다.
2. 가속화된 스트레스 방법
a. 증가된 온도에서의 저장
바이알 및 시린지를 조절된 안정성 챔버 내에서 저장하여 저장 동안 일정한 온도를 유지하였다. 상기 챔버를 2℃ 내지 8℃, 23℃ 내지 27℃/60% RH, 또는 38℃ 내지 42℃/75% RH(이하, 그들의 중간점 온도인 5℃, 25℃ 또는 40℃로서 지칭될 것임)에서 유지하였다. 달리 인지되어 있지 않은 한, 바이알을 똑바로 세워 둔 상태로 저장하였고, 프리필드 시린지를 팁이 아래로 향하게 저장하였다.
b. 동결-해동 주기
조절된 동결-해동 주기 및 조절되지 않은 동결-해동 주기 둘 다를 이 연구들에서 사용하였다. 바이알을 -40℃ 챔버에서 동결시키고 이들을 실온에서 해동함으로써 조절되지 않은 동결-해동을 수행하였다.
c. 수송 및 진탕
다양한 방법들을 이용하여 항-IL5R에 대한 수송의 효과를 조사하였다. 24시간 동안 150 rpm에서 궤도 진탕함으로써 바이알의 벤치탑(Benchtop) 진탕을 수행하였다. 생성물을 멀리 떨어진 위치로 운반함으로써 실제 수송을 모방하였다. 생성물은 2회 여행을 하였고 4일에 걸쳐 지상 및 공중 수송을 겪었다. 동결된 팩과 냉각된 팩의 조합을 사용하여 생성물 온도를 2℃ 내지 8℃에서 유지하고 0℃ 미만 또는 9℃ 초과의 온도를 표시하는 센서로 모니터링하였다.
스크리닝 연구를 위해, 진동 테이블(수송 시뮬레이터)을 이용하여 수송을 모의실험하였다. 생성물은 왕복 운반 동안 겪는 패턴과 유사한 패턴으로 "공중" 및 "지상" 수송을 겪었다. 공정은 12시간을 소요하였고, 다시 온도를 2℃ 내지 8℃가 되도록 냉각된 팩으로 조절하였고, 센서를 이용하지 않았다. 기포 이동에 대한 잠재력 및 전체 원통, 니들 팁 및 마개와의 잠재적 약물 접촉으로 인해 실제 또는 모의실험된 운반 동안 수평 배향을 최악의 경우 배향으로서 선택하였다.
3. 실험 방법
a. SOP를 따르거나 SOP로부터 유도하는 방법
입자 및 유백광 표준물과 비교함으로써 시각적 검사를 수행하였다. 응집 및 단편화를 SE-HPLC로 모니터링하였다. 10 g/ℓ 미만의 항-IL5R 농도의 경우, 보다 더 큰 부피 주입을 이용하여 주입당 유사한 총 단백질 질량을 달성하였다. cIEF 측정 및 RP-HPLC에도 일부 샘플들을 사용하여 단편화를 모니터링하였다.
b. 단백질 농도
일련의 중량측정 희석으로 단백질을 대략 0.5 g/ℓ까지 희석하고 280 nm에서 흡광도를 측정함으로써 단백질 농도를 측정하였다. 흡광계수 및 희석률로부터 농도를 계산하고 50 g/ℓ 초과의 초기 농도의 경우 중량측정 희석에 대한 밀도의 효과에 대해 보정하였다.
c. 육안으로 보이지 않는 입자 카운트
MFI 및 HIAC 둘 다를 이용하여 육안으로 보이지 않는 입자 카운트를 수득하였다. MFI를 위해, 광학 조명을 실시한 후에 0.9 ㎖의 용액을 물과 함께 깨끗한 상태로 흘려보냈다. 처음 0.2 ㎖는 시스템을 퍼징하는 데에 사용되었고 분석에 포함되지 않았다. 0.85 미만의 종횡비 필터를 이용하여 구형 기포 또는 실리콘 오일 소적을 제거하였다. HIAC를 위해, 5 g/ℓ 초과의 농도를 가진 용액을 대략 5 g/ℓ까지 희석한 반면, 희석된 샘플을 깨끗한 상태로 흘려보냈다. 사용 직전에 여과된 20 mM의 히스티딘/히스티딘 HCl(pH 6) 완충제를 사용하여 층류 후드 내부에서 희석을 수행하였다. 샘플을 시험 전에 30분 이상 동안 진공 하에서 탈기하였다. 최종 결과를 위해 3회 실시의 평균을 희석률과 곱하였다. 실리콘 오일 소적은 HIAC에 의해 단백질 입자로부터 식별되지 않았다.
4. 데이터 및 논의
a. 폴리소르베이트-20 농도 스크린
첫 번째 목표는 수성 항체 제제 중의 PS-20 농도를 최적화하는 것이었다. 폴리소르베이트를 용액에 포함시켜 계면에서의 변성 및 응집으로부터 단백질을 보호하였고, 요구된 농도는 동결건조된 생성물보다 액체 생성물에서 상이할 것으로 예측되었다. 동결-해동 및 수송 동안 주요 계면 스트레스를 받게 되므로, 실험 계획은 이들을 모방하는 데에 초점을 맞추었다. 이전 경험은 0.02%의 폴리소르베이트-20이 이 스트레스들 둘 다로부터 완전히 보호하기에 충분하였다는 것을 시사하였다(데이터는 제시되어 있지 않음). 입증하기 위해, 이 스트레스들을 임상 제조의 경우 예측된 순서로 연속적으로 조합하였고, 스트레스 후 항온처리 기간을 추가하여 임의의 잠재적 입자의 성장을 가능하게 하였다. 먼저, 약물을 조절되지 않은 3회 동결-해동 주기에 노출시켰고, 물질을 여과하고 바이알 내로 충전하였다. 그 다음, 상기 약물을 벤치탑 상에서 진탕시키고 SE-HLPC 및 MFI로 시험하기 전에 40℃에서 1주 동안 항온처리하였다. 시험된 조건은 0%(중량/부피) 내지 0.03%(중량/부피)의 다양한 수준의 PS-20을 가진 240 mM 트레할로스 및 20 mM 히스티딘/히스티딘 HCl(pH 6)에서 제제화된 농도 범위인 2 내지 100 g/ℓ의 상한 및 하한이었다. 결과는 도 2, 3 및 4에서 발견된다.
단량체 분획 데이터는 2 g/ℓ 용액이 폴리소르베이트 수준과 관계 없이 순수한 상태로 유지되었으나, 대략 0.005% 미만의 낮은 양의 폴리소르베이트-20이 100 g/ℓ에서 소량의 응집을 야기하였다는 것을 시사하였지만, 이 결과들은 그 자체가 "실패의 위기"를 시사하지는 않았다. 이용된 스트레스는 극심하였고, 분해 수준은 최소한이었으므로, 시험된 PS-20의 임의의 수준이 SEC 응집체 관점에서 볼 때 적절할 수 있었다. 2 g/ℓ에서, 육안으로 보이지 않는 입자 카운트는 꽤 높았고 시험된 범위에서 폴리소르베이트-20에 의해 조절되지 않았다. 100 g/ℓ에서, 높은 육안으로 보이지 않는 입자 카운트는 0.003% 이상의 PS-20의 존재에 의해 조절되었다. 더불어, 이 데이터는 PS-20 수준이 0.003% 이상에서 유지되어야 한다는 것을 시사하였다.
육안으로 보이지 않는 입자를 조절하는 대안적 방법은 하기 논의된 바와 같이 저농도 용액의 경우 요구되었다.
b. pH의 스크린
5 내지 7.5의 pH 값을 가진 2, 20 및 100 g/ℓ 용액에서 용액 pH의 효과를 연구하였다. 나머지 제제는 일정하였고 240 mM의 트레할로스, 20 mM의 히스티딘/히스티딘-HCl 및 0.02% PS-20을 포함하였다. 용액을 제조하고 시험 전에 1개월 동안 40℃에서 저장하였다. 모든 샘플들에 대해 단량체 손실을 SE-HPLC로 평가하고 육안으로 보이지 않는 입자를 MFI로 평가하고 육안으로 보이는 입자를 시각적 검사로 평가하였다. RP-HPLC 및 cIEF를 포함하는 추가 시험을 100 g/ℓ 샘플에 대해 실시하였다. 결과는 도 5 및 6에 제공되어 있다.
응집 및 단편화는 5.5 내지 6.5의 pH 범위 내에서 최소화되었다. cIEF로부터의 결과는 pH 7.0 이상에서 기준 표준물과 일치하지 않았다. 육안으로 보이지 않는 입자 카운트는 낮았거나 용액 pH에 따라 어떠한 패턴도 보이지 않았다. 육안으로 보이는 입자 점수는 pH 5.5 내지 6.5부터 더 높았다. 이 점수가 높을지라도, 샘플은 보다 더 높은 입자 카운트가 관용적으로 관찰되는 광에 가까운 상태에서 검사되었다. 원재료가 단백질-A 상에서의 추가 정제에 의해 감소된 HCP 수준을 가진 재료이었기 때문에 이 원재료도 높은 입자 수준에 기여하였을 가능성이 있었다. 이 연구는 입자 형성 관점에서 볼 때 최적 pH가 pH 5이거나 7 이상의 pH일 것임을 시사하였다. 그러나, 육안으로 보이는 입자 점수는 여기서 과대평가치일 것으로 이해되었기 때문에, pH는 본 연구의 결과로서 pH 6.0으로부터 변화되지 않았다.
c. 운반의 효과
제제는 운반을 견딜 정도로 강할 필요가 있었기 때문에, 제제를 프리필드 시린지 내의 다양한 단백질 및 PS-20 농도에서 시험하였다. 제제는 2 내지 100 g/ℓ의 항-IL5R 및 0% 내지 0.05%의 PS-20을 갖되, 다른 조건은 240 mM 트레할로스, 20 mM 히스티딘/히스티딘 HCl 및 pH 6에서 일정하였다. 글리신, 염화칼슘, pH 5.5, pH 6.5 및 0.02% 폴리소르베이트-80을 포함하는 다수의 다른 조건들을 2 g/ℓ에서 시험하였다. 이 조건들 중 어느 조건도 폴리소르베이트-20을 가진 pH 6의 트레할로스 제제에 비해 개선을 보이지 않았으므로, 이들은 더 논의되지 않는다.
0.4 mg의 실리콘 오일을 가진 플랫폼 PFS를 1 ㎖의 샘플로 충전시켰다. 샘플을 운반하고 5℃, 25℃ 및 40℃에서 저장하고 시각적 검사, MFI 및 HIAC로 2개월에 걸쳐 시험하였다. 결과는 도 7에 제시되어 있다.
도표는 25℃에서 1개월 동안 저장된 후에 MFI로부터 수득된 육안으로 보이지 않는 입자 카운트를 보여준다. HIAC로부터 수득된 육안으로 보이지 않는 입자 카운트, 또는 다른 온도에서 저장된 후 육안으로 보이지 않는 입자 카운트는 제시된 데이터 세트와 유사한 경향을 보였다. 시각적 검사는 염화칼슘을 함유하는 샘플을 제외한 샘플들 중 임의의 샘플에 대한 높은 육안으로 보이는 입자 카운트를 표시하지 않았다. 약간의 PS-20이 존재하는 한, 높은 단백질 농도 용액(≥ 20 g/ℓ)은 운반을 견딜 정도로 강하였다. 따라서, 트레할로스 제제를 20 내지 100 g/ℓ 용액에 대한 장기간 안정성 연구에서 사용하였다.
운반 데이터는 저농도 제제가 높은 고도로 변화가능한 육안으로 보이지 않는 입자 카운트에 의해 관찰된 바와 같이 강하지 않다는 것을 입증하였다. 또한, 데이터는 문제점이 폴리소르베이트만으로 해결되지 않으므로, 저농도 용액이 재제제화될 필요가 있다는 것을 보여주었다.
d. 저농도 DS의 재제제화
모의실험된 수송으로 저농도 재제제화 스크린에 스트레스를 가하고 상기 스크린을 MFI로 시험하였다. 제시된 육안으로 보이지 않는 입자 카운트는 10 ㎛ 초과의 종횡비를 가진 여과된 입자이었고; 다른 입자 크기에 대한 경향은 유사하였다.
제조 동안, 트레할로스를 함유하는 고농도(≥ 100 g/ℓ)의 제제화되지 않은 약물(UDS)이 생성되고 동결될 것이다. 이 고농도 중간체의 저장은 2 내지 100 mg/㎖ 제제화 범위에 걸쳐 다양한 제제들로의 희석을 가능하게 하기 위해 필요하다. UDS로부터의 희석은 일부 잔류 트레할로스를 초래할 것이고; 조성물의 균일성을 위해, 전체 저용량 범위에 대해 단일 트레할로스 농도가 사용될 것이다. 완충제 및 pH는 변화되지 않았다.
제1 스크린을 이용하여 트레할로스 제제가 안정한 최소 단백질 농도를 측정하였고 75 mM 아르기닌 HCl 또는 염화나트륨으로 150 mM 트레할로스에서 제제화함으로써 증가된 이온 강도의 효과를 측정하였다. 하기 제시된 결과는 10 g/ℓ 이상의 단백질 농도가 안정하였다는 것을 시사하였지만, 강인성을 위해 저농도 범위를 2 내지 20 g/ℓ로 설정하였다. 이온 강도의 증가는 부형제 둘 다를 가진 보다 더 안정한 용액을 생성하였다. 예를 들면, 도 8을 참조한다.
다음 연구는 아르기닌 또는 NaCl 농도의 최적화에 초점을 맞추었고; 모든 연구들을 위한 최악의 경우로서 2 g/ℓ의 단백질 농도를 사용하였다. 각각의 부형제에 대해, 0.02% PS-20을 사용하여 넓은 부형제 농도 스크린 및 좁은 부형제 농도 스크린을 실시하였다. 상이한 양의 트레할로스를 사용하여 초기 아르기닌 스크린을 실시하였는데, 이때 용액은 270 mM의 아르기닌을 250 mM의 트레할로스와 조합함으로써 제조되었다. 목적은 오스몰 농도를 유지하는 것이었으나, 계산을 부정확하게 수행하였으므로(아르기닌-HCl은 2가임), 아르기닌 함유 용액은 고장성 용액이었다. 100 g/ℓ 원액으로부터의 희석 후에 20 g/ℓ의 잔류 트레할로스를 기초로, 40 또는 50 mM의 일정한 트레할로스 농도를 사용하여 나머지 부형제 농도 스크린을 수행하였다. 결과는 도 9 및 10에 제공되어 있다.
넓은 아르기닌 및 NaCl 스크린의 결과는 안정한 제제를 생성하기 위해 농도가 50 mM 아르기닌 또는 75 mM NaCl보다 더 높을 필요가 있다는 것을 시사하였다. 75 내지 150 mM 아르기닌 또는 100 내지 200 mM NaCl의 좁은 농도 스크린은 전체 범위에 걸쳐 낮은 입자 카운트를 야기하였다. 이것은 이 범위들의 중간 농도가 강한 제제를 생성할 것임을 시사하였므로; 50 mM 잔류 트레할로스와 함께 등장성을 갖기 위해 130 mM을 선택하였다.
동일한 방법을 이용하여 신규 제제들에 대해 PS-20 농도 최적화를 점검하였다. 이 실험들을 좁은 부형제 농도 스크린과 동시에 수행하였으므로, 중간점 농도를 사용하였다. 시험된 조건은 0.01% 내지 0.1%의 PS-20, 115 mM의 아르기닌 HCl, 40 mM의 트레할로스, 및 0.01% 내지 0.05%의 PS-20, 150 mM의 NaCl 및 50 mM의 트레할로스이었다. 한 쌍의 샘플들을 0.02%의 PS-80과 함께 시험하였으나, 상응하는 PS-20 결과보다 더 높은 카운트가 초래되었다(데이터는 제시되어 있지 않음). 시험된 모든 폴리소르베이트 수준들의 경우 입자 카운트가 낮았는데, 이것은 상기 수준이 신규 제제에서 0.02%로부터 변화될 필요가 없다는 것을 시사한다. 예를 들면, 도 11을 참조한다.
저농도의 항-IL5R에 대한 재제제화의 결과는 아르기닌 또는 NaCl이 짧은 기간 이내에 제제를 안정화시킬 수 있었다는 것을 시사하였다. 고려된 제제는 2 내지 20 g/ℓ의 단백질 농도의 경우 50 mM 트레할로스, 20 mM 히스티딘/히스티딘 HCl 및 0.02% PS-20, pH 6을 가진 130 mM 아르기닌 HCl 또는 130 mM NaCl 제제이었다.
e. 바이알 및 PFS 고려사항
상기 개발된 3개의 제제들(트레할로스 중의 20 내지 100 mg/㎖, 트레할로스/아르기닌 중의 2 내지 20 mg/㎖, 및 트레할로스/NaCl 중의 2 내지 20 mg/㎖)은 바이알 및 PFS 구성 둘 다에 적절하였다. 바이알 구성은 4432/50 웨스트 마개를 가진 3 cc 쇼트(Schott) 바이알이었다. 바이알 구성과 관련하여 가장 높은 위험은 마개 상의 실리콘 오일 수준이었으므로, 일반적으로 사용될 마개의 실리콘 오일 수준(0.007 내지 0.024 mg/cm2)보다 더 높은 수준의 실리콘 오일(0.039 mg/cm2)을 가진 마개를 사용하여 장기간 안정성 연구를 실시하였다.
항-IL5R 제제를 가진 시험된 시린지는 깎인 테두리 및 고정된 29G 박벽 니들을 갖고 0.4 mg Si 오일을 함유하고 BD260 강성 니들 보호덮개로 덮여진 BD 1 ㎖ 긴 PFS인 플랫폼 시린지(카탈로그 #47363119)이었다.
f. 장기간 안정성 연구
스크리닝 연구로부터 확인된 것을 입증하기 위해 2종의 장기간 안정성 연구를 실시하였다. 안정성 연구 #1은 PFS 및 바이알에서의 트레할로스 및 아르기닌/트레할로스 제제의 장기간 안정성을 조사하였다. 추가로, 여기서 논의되지 않을 PFS 비교를 수행하였다. 안정성 연구 #2는 연구 #1에서 조사된 구성들에 대한 또 다른 로트의 물질로부터의 데이터를 제공하고, NaCl/트레할로스 제제 브라켓, 및 PFS 및 바이알 내의 ½ ㎖ 내지 1 ㎖ 충전 부피의 영향을 조사하기 위해 시작되었다.
i. 안정성 연구 #1: 항-IL5R PFS 제공의 안정성
안정성 연구를 대조군으로서 바이알과 함께 시린지에서 실시하였다. 제제 브라켓의 종점 각각을 각각의 일차 용기에서 시험하였다. 시험된 시린지는 바이오텍용 플랫폼 하이팍™ 이었고; 이것은 29G 박벽 니들 및 0.4 mg의 실리콘 오일을 가진, 텅스텐을 사실상 함유하지 않는 BD 유리 1 ㎖ 긴 시린지이다. 이용된 바이알은 웨스트 4423/50 마개 및 상부밀봉부(over-seals)를 가진 3 cc 쇼트 바이알이었다.
충전된 제제는 다음과 같다:
Figure pat00004
2 및 20 mg/㎖ 항-IL5R 항체, 125 mM 아르기닌 HCl, 50 mM 트레할로스, 20 mM 히스티딘/히스티딘 HCl, 0.02% PS-20, pH 6; 및
Figure pat00005
20 및 100 mg/㎖ 항-IL5R 항체, 250 mM 트레할로스, 20 mM 히스티딘/히스티딘 HCl, 0.02% PS-20, pH 6.
A. 항-IL5R 프리필드 시린지 제공의 순도
임의의 제제들에 대한 단량체 손실에 대한 일차 용기의 유의한 영향은 없었다. 단백질 농도의 일부 영향이 관찰되었으나, 단량체 손실률은 일관되게 낮았다. 도 12a를 참조한다.
B. 항-IL5R 프리필드 시린지 제공의 입자 분석
입자 형성은 항-IL5R에 대한 주요 분해 경로인 것으로 생각되었으므로, 적합한 PFS를 결정하는 데에 있어서 큰 역할을 수행할 것으로 생각되었다. HIAC에 의한 육안으로 보이지 않는 입자 측정은 아마도 실리콘 오일 소적으로 인해 PFS 내의 입자 수의 증가를 보였다(도 12b 및 12c 참조). 그러나, 총 입자 카운트는 모든 구성들에 대해 USP 한계인 ㎖당 10 ㎛ 초과의 6000개 입자들 및 ㎖당 25 ㎛ 초과의 600개 입자들보다 충분히 낮은 수준으로 유지되었다. MFI는 오르토고날(orthogonal) 방법으로서 이용되었고, 실리콘 오일 소적이 MFI 소프트웨어에서 결과로부터 여과될 수 있기 때문에 용기들 사이에 차이가 거의 관찰되지 않았지만 유사한 결과를 보였다.
ii. 5℃에서 바이오텍 시린지용 하이팍™에서의 안정성의 요약
표 1은 아르기닌 제제의 경우 최대 16개월 동안 및 트레할로스 제제의 경우 최대 24개월 동안 5℃에서 바이오텍 시린지용 하이팍™에서 항-IL5R에 대해 입수가능한 안정성 데이터(안정성 연구 #1)의 요약을 보여준다. 육안으로 보이는 입자가 검출되었으므로, PS-20 농도를 0.02%부터 0.006%까지 감소시켰다. 육안으로 보이지 않는 입자 카운트는 변화가능하였지만, 다른 높은 위험은 확인되지 않았다.
Figure pat00006
iii. 안정성 연구 #2
안정성 연구 #2는 저용량 제제 및 충전 부피를 결정하고 플라세보 안정성을 입증하기 위해 디자인된, 프리필드 시린지 및 바이알 내에서의 구간축소된 안정성 연구이었다.
PFS를 선택하기 위해 이용된 이전 안정성 연구는 단지 1 ㎖의 충전 부피를 가졌다. 그러나, 주사 시 감소된 통증, 피부 아래의 보다 더 작은 응어리, 보다 더 빠른 투여 및 투여 부위로부터의 보다 더 적은 누출을 포함하는, 보다 더 낮은 충전 부피에 대한 다수의 잠재적 이점들이 존재하였다.
1 ㎖ 충전 옵션에 대한 구간축소 방법은 단백질 농도의 2개 브라켓들, 즉 저용량에 대한 2 내지 20 g/ℓ 및 고용량에 대한 20 내지 100 g/ℓ이었다. ½ ㎖ 충전에 대한 동일한 브라켓은 1 내지 50 mg의 용량 범위를 커버하였고, 50 내지 100 mg 용량의 경우 ½ ㎖부터 1 ㎖까지 100 g/ℓ의 충전 부피 브라켓도 요구하였다. 이것은 명확성을 위해 도 13에 그래프로 제시되어 있다. 두 경우, 아르기닌 기제의 제제 및 NaCl 기제의 제제 둘 다에서 가장 낮은 용량 브라켓을 연구하였다.
충전된 약물 및 플라세보는 다음과 같았다:
Figure pat00007
모든 용액들: 20 mM 히스티딘/히스티딘 HCl, 0.02% PS-20, pH 6.0
Figure pat00008
2 Arg/20 Arg: 2 또는 20 g/ℓ 항-IL5R, 125 mM 아르기닌 HCl, 50 mM 트레할로스
Figure pat00009
2 NaCl/20 NaCl: 2 또는 20 g/ℓ 항-IL5R, 130 mM NaCl, 50 mM 트레할로스
Figure pat00010
20 Tre/100 Tre: 20 또는 100 g/ℓ 항-IL5R, 250 mM 트레할로스
Figure pat00011
Arg 플라세보: 125 mM 아르기닌 HCl, 50 mM 트레할로스
Figure pat00012
NaCl 플라세보: 130 mM NaCl, 50 mM 트레할로스
Figure pat00013
Tre 플라세보: 250 mM 트레할로스
½㎖ 충전 부피가 보다 더 높은 표면적 대 부피 비로 인해 가장 가능성이 높은 최악의 경우 구성이었기 때문에 연구의 총 크기를 감소시키기 위해 임의의 바이알 구성 또는 PFS 내의 플라세보에 대해 1 ㎖ 충전 부피 구성을 시험하지 않았다.
모든 샘플들을 운반한 후, 5℃, 25℃ 및 40℃에서 안정하게 배치하였다. 마개와의 접촉을 최대화하기 위해 바이알을 안정성 시험 동안 뒤집어진 상태로 저장하였다. 육안으로 보이는 입자가 더 오래된 연구에서 발견되었을 시점에서, 이 안정성 연구에 대한 6주의 데이터를 수집하였다. 추가로, 이 연구의 3개월 시점과 5개월 시점 사이에 NaCl 제제에서 입자가 관찰되었으므로(데이터는 제시되어 있지 않음), NaCl 제제는 아르기닌 제제에 비해 거부되었다.
육안으로 보이는 입자의 형성을 감소시키기 위해 요구된 추가 제제화 작업은 하기 실시예에 기재되어 있고 폴리소르베이트-20 농도를 0.02%로부터 0.006%까지 감소시켰다. 이 제제의 경우 다른 안정성 문제점은 관찰되지 않았고, 용기 또는 충전 부피의 유의한 영향도 관찰되지 않았다. 육안으로 보이는 입자 점수, SEC에 의해 측정된 순도 손실, HIAC에 의해 측정된 입자 카운트 및 효능을 포함하는 1년의 안정성 데이터가 도 14에 요약되어 있다(모든 구성들이 모든 시점들에서 시험되지는 않았다).
실시예 1의 결론
동결/해동, 교반, 실리콘 오일 첨가 및 가속화된 안정성을 포함하는 다양한 스트레스 방법들을 이용하여 제제 스크리닝을 수행하였다. 장기간 안정성을 이용하여 스크리닝 방법의 결과를 입증하였다. 2b 기 트레할로스 제제는 증가된 폴리소르베이트 농도를 가진 고농도 액체의 경우 성공적이었으나, 저농도의 액체까지 확장되었을 때 주로 육안으로 보이지 않는 입자의 형성을 통해 불안정성을 보였다. 아르기닌 하이드로클로라이드 또는 염화나트륨으로 이온 강도를 증가시켜 저농도 범위를 다시 공식화함으로써 안정한 용액을 생성하였다.
넓은 범위의 가능한 용량(2 내지 100 mg)을 커버하기 위해, 3개의 잠재적 제제 브라켓들은 다음과 같았다:
Figure pat00014
2 내지 20 g/ℓ, 130 mM 아르기닌 하이드로클로라이드, 50 mM 트레할로스 이수화물, 20 mM 히스티딘/히스티딘 하이드로클로라이드, 0.02% 폴리소르베이트-20, pH 6.0;
Figure pat00015
2 내지 20 g/ℓ, 130 mM 염화나트륨, 50 mM 트레할로스 이수화물, 20 mM 히스티딘/히스티딘 하이드로클로라이드, 0.02% 폴리소르베이트-20, pH 6.0; 및
Figure pat00016
20 내지 100 g/ℓ, 250 mM 트레할로스 이수화물, 20 mM 히스티딘/히스티딘 하이드로클로라이드, 0.02% 폴리소르베이트-20, pH 6.0.
최대 24개월의 장기간 안정성은 모든 3개의 제제들이 교반에 대하여 2℃ 내지 8℃에서 안정하였고 실리콘 오일에 상대적으로 둔감하였고 바이알 및 PFS와 상용가능하였다는 것을 시사한다. 추가로, 최소 분해가 승온에서 관찰되었다. 2개의 저농도 제제들의 연속된 관찰은 아르기닌 옵션에 비해 증가된 육안으로 보이는 입자 형성으로 인해 NaCl 옵션을 제거하여, 2개의 제제 브라켓들을 생성하였다. 데이터는 프리필드 시린지가 1 ㎖ 또는 ½ ㎖ 충전 부피를 가진 허용가능한 일차 용기라는 것을 시사하였다. 육안으로 보이는 입자 형성은 하기 실시예에서 다루어진 문제점을 이 제제들에서 남겼다.
실시예 2 - 항-IL5R 제제에서의 입자 형성
육안으로 보이는 입자는 6개월 시점에서 처음 검출되면서 이전 장기간 안정성 연구에서 바이알 및 PFS 둘 다 내의 수성 항-IL5R 제제에서 검출되었다(데이터는 제시되어 있지 않음). 연장된 기간 동안 저장된, 폴리소르베이트-20(PS-20)을 포함하는 항-IL5R 항체 제제에서 육안으로 보이는 입자 형성을 감소시키기 위한 연구를 수행하였다. 하기 실시예는 입자 형성을 감소시키는 데에 있어서 PS-20 농도의 중요성을 입증하기 위해 다양한 PS-20 및 단백질 농도를 포함하는 제제의 장기간 연구를 기술한다. 이 연구는 PS-20의 허용가능한 범위가 0.002% 내지 0.01%라는 것을 보여주었다.
약어 및 정의
Figure pat00017
예비 연구
실시예 1에 기재된 장기간 안정성 연구에서 입자 형성이 검출되었다. 그러나, 입자는 매우 작고 개별 입자보다는 구름처럼 보였다. 입자를 관찰하기 위해, 샘플을 광원에 가까운 위치에서 검사하였다. 입자들이 바이알 및 PFS 표준물 세트 내의 입자들과 유사하지 않았기 때문에, 샘플들을 각각의 시점에서 서로 비교하였을 뿐만 아니라 표준물과도 비교하였다.
입자는 0.02% PS-20을 가진 100 g/ℓ Tre 바이알에서 6개월 시점에서 처음 검출되었다.
(1) 바이알 및 (2) 프리필드 시린지(PFS)에서 6개월 경과된 샘플과 11개월 경과된 샘플을 비교하였다. PFS 표준물이 그 시점에서 이용가능하지 않았으므로 수치적 비교가 이용가능하지 않을지라도, 두 연구는 입자 형성이 PFS보다 바이알에서 더 심각하다는 것을 보여주었다. 샘플들을 PFS로부터 기울여 따라내고 외관 검사를 위해 바이알들 내로 주입하였다. 이 바이알들에서 더 이상 입자가 관찰되지 않았는데, 이것은 차이가 경로 길이 효과가 아니라는 것을 입증한다. 트레할로스 제제에서, 이 바이알-대-PFS 차이는 아르기닌 제제보다 더 상당하다.
운반 후에 바이알 및 PFS 둘 다에서 100 g/ℓ Tre 제제 중의 다양한 PS-20 농도(0%, 0.01%, 0.02% 및 0.03%)를 비교하였다. 보다 더 낮은 PS-20 농도인 0% 및 0.01%의 PS-20은 11개월 시점에서 입자를 완전히 함유하지 않았다. 입자는 0.02% 및 0.03% PS-20에서 바이알 및 PFS 둘 다에서 육안으로 보였다. 20개월에서, 0% 및 0.01% PS-20 PFS 및 0% PS-20 바이알은 투명하게 유지되었으나, 0.01% 바이알은 입자의 매우 작은 토네이도를 가졌다.
표적화된 연구에서, 광원에 가깝게 유지되었을 때, 입자는 일부 경우 3개월 내지 4개월만큼 빠른 시점에서 100 g/ℓ Tre, 0.02% PS-20 바이알 및 PFS에서 명확히 육안으로 보였다. Tre 브라켓의 저농도(20 g/ℓ) 한계에서 입자는 훨씬 더 느리게 형성되었고 21개월 시점에서 바이알에서만 관찰되었다. 임의의 PS-20 농도의 20 g/ℓ Tre PFS에서 입자가 관찰되지 않았는데, 이때 데이터는 21개월까지 입수가능하였다. 아르기닌 제제에서의 입자 형성은 다소 더 느렸는데, 이때 입자는 6개월 내지 9개월에서 0.02% PS-20을 가진 브라켓의 고농도(20 g/ℓ) 한계에서 관찰되었다. 어느 용기에서도 임의의 PS-20 농도의 2 g/ℓ Arg 제제에서 입자가 결코 관찰되지 않았는데, 이때 데이터는 16개월까지 입수가능하였다.
가속화 및 스트레스 온도 연구는 입자 형성에 대한 이해를 제공하지 않았다. 40℃에서 입자는 3개월의 시험 기간에 걸쳐 전혀 형성되지 않았다. 25℃에서의 입자 형성은 5℃와 유사하였거나 5℃에 비해 다소 감소되었다.
이 데이터는 브라켓의 단백질 농도 상한이 육안으로 보이는 입자에 대한 고위험을 갖고 하한이 장기간에서 잠재적으로 위험을 가진다는 것을 시사하였다. 입자 형성을 감소시키기 위해 PS-20 농도의 감소를 조사하였다. 일차 용기는 플랫폼 PFS로 유지되었고, 바이알 내의 입자 형성이 보다 더 심각하고 관찰하기 더 용이하기 때문에 바이알을 입자 형성에 대한 초기 판독물로서 사용하였다.
다양한 PS-20 농도들의 조사
다양한 제제들, 다양한 PS-20 농도들 및 다양한 항체 농도들에서 입자 형성을 조사하기 위해 광범위한 안정성 연구를 디자인하였다. 모든 샘플들을 PFS 및 바이알 둘 다 내로 충전시키고 별개의 위치로 2회 운반하여 분배 공정을 모의실험하고 5℃에서 안정하게 배치하였다. 외관 검사를 매달 수행하였다. 0개월, 3개월, 6개월 및 9개월에서 샘플들의 서브세트에 대해 SEC, HIAC 및 MFI도 시험하였다. 도 15는 이 연구의 일부로서 제조된 샘플들을 보여준다.
임의의 PS-20을 사용하지 않았을 때, 도 16에서 0시간에서의 PFS에 대한 MFI 데이터에 의해 입증된 바와 같이 운반 시 육안으로 보이지 않는 입자가 형성되었다. 가장 낮은 시험된 수준(0.002%) 이상의 PS-20이 운반 스트레스로부터 보호하기에 충분하였다. 추가로, 가장 낮은 PS-20 농도(0.002%)는 스케일 축소 모델을 이용한 탱크에서의 DS 운반 스트레스로부터 보호하기에 충분한 것으로 입증되었다(데이터는 본원에 제시되어 있지 않음).
입자에 대한 외관 결과는 0.01% 초과의 PS-20을 가진 바이알에서 상당한 입자 형성이 있었고 제제 브라켓들 둘 다의 경우 0.02% PS-20에서 PFS 내의 일부 입자들이 존재한다는 것을 보여주었는데, 이때 보다 더 적은 입자들이 브라켓들 둘 다의 농도 하한에서 관찰되었다. 도 17을 참조한다. 입자의 최초 관찰시점은 100 g/ℓ Tre의 경우 3개월 시점이었고 20 g/ℓ 아르기닌의 경우 6개월 시점이었다. 도면은 마지막 시점인 9개월에서 입자 형성에 대한 단백질 및 PS-20 농도의 영향을 보여준다. 입자 형성 관찰은 모두 광원에 가까운 위치에서 수행되었다는 것을 인지한다.
외관 데이터는 0.01%의 PS-20 농도 상한을 설정하고 육안으로 보이지 않는 입자 카운트는 0.002%의 하한을 설정한다(입수가능한 데이터로부터 실제 한계는 더 낮을 수 있다). 이 허용가능한 범위의 중간점(0.006%)을 새로운 PS-20 농도로서 설정하였다.
2 g/ℓ Arg 및 20 g/ℓ Arg에 대한 최대 9개월의 데이터, 및 20 g/ℓ Tre 및 100 g/ℓ Tre에 대한 최대 18개월의 데이터를 포함하는, 브라켓 한계 샘플들에 대한 전체 안정성이 PFS에 대해 입증되었다. 하기 분석법들이 시험되었다:
A. 0.002%, 0.006% 및 0.01% PS-20: 외관, HIAC, MFI 및 SEC.
B. 0.006% PS-20 단독: 인스트론, 생물분석법, 생물분석기, RP 및 cIEF.
모든 데이터들은 신규 제제가 안정하였고 낮은 위험을 가졌다는 것을 시사한다. 데이터의 요약은 표 2에 제시되어 있다.
Figure pat00018
실시예 2로부터 입수가능한 데이터는 PS-20 농도를 0.006%까지 감소시킨 것이 입자 형성을 감소시키고 9개월(아르기닌 제제) 또는 18개월(트레할로스 제제) 이상 동안 안정한 항체 제제 생성물을 생성하였다는 것을 시사하였고, 이때 임박한 실패의 표시는 없었다.
실시예 3
입자 검출을 위한 오르토고날 방법
입자 검출 및 정량의 일차 방법은 실시예 2에 예시된 시각적 검사에 의한 외관 검사이었다. 시각적 검사는 다수의 이유들로 변경가능하였다. 일반적으로, 시각적 검사는 상이한 개체들에 대한 상이한 결과들을 유발하는, 인간 인지의 선천적 가변성으로 인해 변경되었다. 이 입자들의 매우 작은 크기로 인해 그들의 가시성은 광의 양에 주로 의존하였고 이들은 바이알 및 PFS 둘 다에 대한 입자 표준물과 유사하지 않았다. 이 요인들은 시점들 사이 및 분석물들 사이에 결과의 가변성을 증가시켰다.
외관 결과를 검증하기 위해 오르토고날 방법을 조사하였다. 트레할로스 제제에서 형성된 입자는 개별적으로 보기에는 너무 작았으므로, 육안으로 보이지 않는 입자 방법을 조사하였다. 2주, 2개월, 5개월 및 9개월 경과된 다양한 로트들로부터의 최악의 경우 샘플(100 g/ℓ, Tre, 0.02% PS-20, 바이알)을 DLS, FC, HIAC 및 MFI로 비교하였다.
DLS를 100 g/ℓ에서 실시함으로써, 예측된 주피크의 과소평가 및 모든 피크 크기들의 비신뢰성을 유발하였다. 2개월, 5개월 및 9개월 경과된 샘플들의 경우 크기가 1.4 내지 2.2 ㎛인 큰 피크들을 검출하였다. 보고된 크기가 신뢰할 수 없을지라도, 피크의 존재는 육안으로 보이는 입자와 상관관계를 가졌다. 그러나, 입자의 보고된 크기 및 입자 피크의 강도 중 어느 것도 시각적 외관 결과와 상관관계를 갖지 않았다.
HIAC 결과는 모든 샘플들의 경우 유사하였고; 입자는 검출되지 않았다.
10 ㎛ 초과의 입자 및 25 ㎛ 초과의 입자에 대한 MFI 카운트는 모든 샘플들의 경우 유사하였다. 그러나, 1 ㎛ 초과의 입자 및 2 ㎛ 초과의 입자에 대한 MFI 카운트 및 FC 카운트는 시각적 외관 결과와 일치하는 경향을 보이고 샘플 연령의 함수로서 증가한다. 이 샘플들에 대한 결과는 도 18에 제시되어 있다.
추가 실험은 MFI에 의해 측정된 1 ㎛ 초과의 입자가 보다 더 큰 입자 또는 FC 카운트보다 더 신뢰할만한, 시각적 외관 결과와 일치하는 경향을 제공한다는 것을 시사한다(데이터는 제시되어 있지 않음).
육안으로 보이는 입자를 보이는 20 g/ℓ Arg 샘플들을 사용하여 유사한 실험을 실시하였으나, 오르토고날 방법들 중 어느 것도 이 입자들을 검출하는 데에 성공적이지 않았다. 아르기닌 제제에서 형성된 입자들은 트레할로스 제제에서 형성된 입자들보다 훨씬 더 큰 것처럼 보였고 개별 입자로서 관찰되었는데, 이것은 이들이 육안으로 보이지 않는 입자 방법에 의해 검출되지 않은 이유인 것 같았다.
MFI를 이용하여 실시예 2에서의 PS-20 농도의 효과를 검증하였다. 9개월 시점에서 실시예 2에 대해 MFI와 외관 점수의 비교가 도 19에 제시되어 있다. 추가 측정치(제시되어 있지 않음)와 함께, 상기 비교는 MFI 카운트가 대략 100,000개 입자들 >1 ㎛/㎖를 초과할 때 입자가 육안으로 보인다는 것을 시사하였다. MFI 결과는 입자 형성이 특히 PFS에서 0.002% 내지 0.01%의 PS-20에 의해 감소되었다는 결론에 대한 추가된 뒷받침을 제공하였다. 바이알 데이터는 최악의 경우로서 간주되었고 목표 농도인 0.006% PS-20에서도 안정하였다.
실시예 4
안정성 연구
새로운 목표 PS-20 농도인 0.006%로 이전 연구의 모든 구성들을 조사하고 이 제제들이 안정하다는 확신을 추가하기 위해 추가 안정성 연구를 수행하였다. 브라켓은 단백질 농도 브라켓뿐만 아니라 충전 부피 브라켓도 포함하였고 도 20에 그래프로 제시되어 있다.
충전 부피 브라켓의 추가는 트레할로스 제제에 의해 커버되는 용량 범위를 증가시켰다. 이 추가 구성은 입자가 더 느리게 형성되고 오르토고날 방법에 의해 검출될 수 없기 때문에 더 위험한, 아르기닌 제제와 관련된 위험을 감소시켰다. 이 안정성 연구에 포함된 샘플들은 다음과 같았다:
Figure pat00019
0, 2 및 20 g/ℓ, 1 ㎖ 충전, 아르기닌 제제, 0.006% PS-20;
Figure pat00020
0 및 2 g/ℓ, 0.3 ㎖ 충전, 아르기닌 제제, 0.006% PS-20;
Figure pat00021
0, 20, 50 및 100 g/ℓ, 1 ㎖ 충전, 트레할로스 제제, 0.006% PS-20; 및
Figure pat00022
0 및 20 g/ℓ, 0.3 ㎖ 충전, 트레할로스 제제, 0.006% PS-20.
샘플을 멀리 떨어진 위치로 2회 운반하여 분배 공정을 모의실험한 후, 5℃, 25℃ 및 40℃에서 안정하게 배치하였다.
9개월의 데이터를 아르기닌 제제에 대해 수집하였고 12개월의 데이터를 트레할로스 제제에 대해 수집하였다. 결과는 과거 데이터와 일치하였고, 입자는 이 시점까지 이 샘플들에서 관찰되지 않았다. 추가로, 소수의 적당히 높은 이상치가 발생하였지만, 육안으로 보이지 않는 입자에서 시간의 경과에 따른 경향은 관찰되지 않았다. 모든 분석법들에 대한 결과의 범위는 하기 표 3에 제시되어 있다.
Figure pat00023
데이터는 전체 용량 범위에 대한 이 제제 브라켓의 권장을 뒷받침하였다. 트레할로스 브라켓은 아르기닌 브라켓보다 더 낮은 위험을 가졌고 6 mg만큼 낮은 용량의 경우 권장되었다.
실시예 2 내지 4의 결론
이전 장기간 안정성 연구에서의 입자 관찰은 안정성을 개선하기 위해 변경될 수 있는 제제 변수에 대한 조사로 이어졌다. 핵심 변수인 단백질 및 폴리소르베이트 농도를 시험하고 분석하였다. 상기 제시된 데이터를 기초로, 0.002% 내지 0.01%의 폴리소르베이트의 허용가능한 범위 및 0.006%의 목표치가 항-IL5R 항체 제제를 위한 최적 제제인 것으로서 확인되었다. 이 관찰은 주로 시각적 외관 검사에 의한, 18개월 및 12개월의 입수가능한 데이터를 사용한 2종의 안정성 연구에 의해 뒷받침되었다.
20 mg/㎖에서 0.3 내지 1.0 ㎖ 부피 브라켓을 이용함으로써 6 내지 20 mg 범위에서 아르기닌 제제보다 오히려 트레할로스 제제를 사용할 수 있다는 것도 관찰되었다. 트레할로스 제제는 보다 더 큰 데이터 세트 및 보다 더 우수한 검출로 인해 아르기닌 제제보다 더 잘 예측될 수 있다는 것도 발견되었다.
실시예 5
입자 형성에 대한 숙주 세포 단백질(HCP)의 영향을 확인하기 위해 HCP를 감소시키는 데에 초점을 맞춘 추가 정제 개발을 착수하였다. 항-IL5R을 도 21에 요약된 바와 같이 정제하였다.
단백질 A 컬럼의 관류물의 2D 겔 분석은 여러 단백질 종들이 존재하였다는 것을 시사하였다. 예를 들면, 도 22를 참조한다. 역상 질량 분광법(RP-MS)에 의해 측정된 주요 불순물은 약 60%의 Fab 단편, 약 5%의 경쇄(LC) 및 단편, 및 약 40%의 비-항-IL5R 관련 숙주 세포 단백질(HCP)을 포함하였다. 비-항-IL5R 관련 HCP들은 글루타티온 S-트랜스퍼라제(GST), 프럭토스-바이포스페이트 알돌라제(fructose-biphosphate aldolase) 및 트랜스알돌라제(transaldolase)를 포함하였다.
단백질 A 컬럼의 관류물을 단백질 L 컬럼에 더 통과시켜 (2) 비-항-IL5R HCP들로부터 (1) Fab 단편을 더 분리하였다. Fab 단편이 아니라 비-항-IL5R HCP들 중의 일부 물질이 입자 형성의 원인이라는 것을 발견하였다(데이터는 제시되어 있지 않음).
주요 HCP들 중 어떤 HCP가 입자 형성의 원인인지를 확인하기 위해, 먼저 GST를 조사하였다. 입자 형성에서의 GST의 역할을 (1) 입자 형성에 대한 영향을 확인하기 위한 GST의 선택적 제거, (2) GST가 펠렛에 존재하는지를 확인하기 위한 입자 펠렛의 분석, 및 (3) 입자 형성에 대한 영향을 확인하기 위한 항-IL5R 제제에의 GST의 첨가로 조사하였다.
글루타티온-세파로스 접합체로부터 만들어진 친화성 매트릭스를 사용한 GST의 특이적 제거의 예비 증거는 GST의 제거가 입자 형성을 감소시켰다는 것을 암시하였다(데이터는 제시되어 있지 않음). 단백질 A 관류물로부터 형성된 펠렛의 분석은 펠렛 중의 고농도의 GST를 시사하였다(데이터는 제시되어 있지 않음).
입자를 결여하는 정제된 항-IL5R 제제에 GST를 첨가하여(즉, 섞어) 입자 형성에 대한 GST의 영향을 확인하였다. GST는 상업적 공급원(프로스펙(Prospec))으로부터 입수되었다. 50 mg/㎖ 항-IL5R, 20 mM 히스티딘-HCl 완충제, 9%(중량/부피) 트레할로스 및 0.02% PS-20을 포함하는 pH 6.0의 제제에 GST를 첨가하여, 3.8 ㎍/mg 및 7.6 ㎍/mg의 GST 농도를 야기하였다. 샘플을 38℃ 내지 42℃에서 항온처리하였다. 샘플을 라이트 박스 상에 배치함으로써 입자를 관찰하였다. 입자 형성을 관찰하는 데에 요구된 항온처리 시간은 존재하는 GST의 수준에 의존하였다. 3.8 ㎍/mg 및 7.6 ㎍/mg의 GST가 첨가된 샘플들 둘 다의 경우, 입자는 38℃ 내지 42℃에서 24시간 후에 관찰되었다(데이터는 제시되어 있지 않음).
이 결과들은 항-IL5R 제제 내로의 GST의 첨가가 항-IL5R 제제에서 입자 형성을 야기한다는 것을 암시하였다.
실시예 6
다양한 수단들에 의해 정제된 다양한 항-IL5R 제제들에서 GST 활성을 조사하였다. 준비 작업으로서, GST에 대한 활성 분석법(바이오비젼)을 이용하여 GST 농도를 측정함으로써 표준 곡선을 형성하였다. GST는 340 nM에서 검출되는 GS-DNB 접합체를 형성하기 위해 친전자성 화합물, 예컨대, 1-클로로-2,4-디니트로벤젠(CDNB)에 대한 글루타티온의 티올 기(GSH)의 형성을 촉진한다. 따라서, 340 nM에서의 흡수의 증가는 GST 활성과 정비례한다. 이 분석법을 이용하여, 다양한 절차들의 이용에 의해 정제된 다양한 항-IL5R 제제들(샘플 A 내지 J)에 대한 GST의 농도를 측정하였다. GST 농도와 입자 형성 사이의 상관관계가 기록되었다. 결과는 표 4에 제공되어 있다.
Figure pat00024
이 증거는 GST의 존재가 입자의 형성과 상관관계를 가진다는 것을 확인시켜준다.
실시예 7
항-IL5R 제제 중의 GST 농도를 감소시키는 가장 효율적인 방법을 확인하기 위해 다양한 정제 컬럼들을 조사하였다. 표 5를 참조한다. GST 농도를 실시예 7에 요약된 바와 같이 측정하였다.
Figure pat00025
표 5는 단백질 A 컬럼(맙셀렉트 슈어) 및 혼합 모드 크로마토그래피 컬럼(캡토 어드히어) 둘 다가 GST의 농도를 항-IL5R 항체의 정제 동안 검출가능한 수준 미만으로 감소시키는 데에 있어서 성공적이었다는 것을 암시한다.
실시예 8
다른 항체 제제 중의 GST의 존재를 조사하였다. 항체 제제 중의 입자의 존재도 조사하였다. 결과는 논평과 함께 하기 표 6에 제시되어 있다.
Figure pat00026
본원에 기재된 다양한 실시양태들 또는 옵션들 모두가 임의의 모든 변경으로 조합될 수 있다. 본 발명이 그의 일부 실시양태들에 대하여 구체적으로 제시되어 있고 기재되어 있지만, 당업자는 이들이 한정으로서 제시되어 있는 것이 아니라 단지 예로서 제시되어 있고 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않으면서 형태 및 세부사항에서의 다양한 변화들이 그 내에서 만들어질 수 있다는 것을 이해할 것이다. 따라서, 본 발명의 범주 및 범위는 전술된 예시적 실시양태들 중 임의의 실시양태에 의해 한정되어서는 안 되고 하기 청구범위 및 그의 등가물에 따라서만 정의되어야 한다.
논문 또는 초록, 공개된 또는 대응 미국 또는 외국 특허출원, 등록 또는 외국 특허, 또는 임의의 다른 문헌들을 포함하는, 본원에서 인용된 모든 문헌들(인용된 문헌들에서 제시된 모든 데이터들, 표들, 도면들 및 본문을 포함함)은 각각 전체적으로 본원에 참고로 도입된다.
SEQUENCE LISTING <110> MEDIMMUNE, LLC <120> STABLE, AQUEOUS ANTIBODY FORMULATIONS <130> IL5R-400WO1 <140> <141> <150> 61/895,143 <151> 2013-10-24 <160> 10 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 1 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gly Thr Ser Glu Asp Ile Ile Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 2 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 2 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 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<220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 3 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Val Ile His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Ala Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Val Thr Ile Thr Ser Asp Arg Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Leu Cys 85 90 95 Gly Arg Glu Gly Ile Arg Tyr Tyr Gly Leu Leu Gly Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 4 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 4 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Val Ile His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Ala Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Val Thr Ile Thr Ser Asp Arg Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Leu Cys 85 90 95 Gly Arg Glu Gly Ile Arg Tyr Tyr Gly Leu Leu Gly Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 5 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 5 Ser Tyr Val Ile His 1 5 <210> 6 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 6 Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Arg Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 7 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 7 Glu Gly Ile Arg Tyr Tyr Gly Leu Leu Gly Asp Tyr 1 5 10 <210> 8 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 8 Gly Thr Ser Glu Asp Ile Ile Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 9 His Thr Ser Arg Leu Gln Ser 1 5 <210> 10 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 10 Gln Gln Gly Tyr Thr Leu Pro Tyr Thr 1 5

Claims (70)

  1. a. 서열번호 5 내지 7의 카바트(Kabat) 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 2 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체, 및
    b. 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20
    을 포함하는 안정한 수성 항체 제제.
  2. 제1항에 있어서, 비하전된 부형제를 추가로 포함하는 것인 항체 제제.
  3. 제2항에 있어서, 비하전된 부형제는 트레할로스인 항체 제제.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 약 2 mg/㎖ 내지 약 20 mg/㎖의 항체를 포함하는 것인 항체 제제.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 약 20 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체를 포함하는 것인 항체 제제.
  6. 제4항에 있어서, 비하전된 부형제 농도는 약 20 mM 내지 약 80 mM인 항체 제제.
  7. 제5항에 있어서, 비하전된 부형제 농도는 약 200 mM 내지 약 400 mM인 항체 제제.
  8. 제4항에 있어서, 아르기닌을 추가로 포함하는 것인 항체 제제.
  9. 제8항에 있어서, 아르기닌은 L-아르기닌인 항체 제제.
  10. 제8항에 있어서, 약 100 mM 내지 약 200 mM의 L-아르기닌을 포함하는 것인 항체 제제.
  11. 제8항에 있어서, 약 120 mM 내지 약 140 mM의 L-아르기닌 및 약 40 mM 내지 약 60 mM의 비하전된 부형제를 포함하는 것인 항체 제제.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 히스티딘을 추가로 포함하는 것인 항체 제제.
  13. 제12항에 있어서, 히스티딘 농도는 약 15 mM 내지 약 30 mM인 항체 제제.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 동결건조되지 않은 것인 항체 제제.
  15. 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 2 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체를 포함하는 안정한 수성 항체 제제로서, 1개월 이상 동안 약 40℃에서 저장될 때 안정한 수성 항체 제제.
  16. a. 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 2 mg/㎖ 내지 약 20 mg/㎖의 항체,
    b. 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20,
    c. 약 40 mM 내지 약 60 mM의 트레할로스,
    d. 약 110 mM 내지 약 150 mM의 L-아르기닌, 및
    e. 약 15 mM 내지 약 30 mM의 히스티딘
    을 포함하는 안정한 수성 항체 제제.
  17. a. 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 20 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체,
    b. 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20,
    c. 약 200 mM 내지 약 300 mM의 트레할로스, 및
    d. 약 15 mM 내지 약 30 mM의 히스티딘
    을 포함하는 안정한 수성 항체 제제.
  18. a. 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 2 mg/㎖ 내지 약 20 mg/㎖의 항체,
    b. 약 0.006%의 폴리소르베이트-20,
    c. 약 50 mM의 트레할로스,
    d. 약 130 mM의 L-아르기닌, 및
    e. 약 20 mM의 히스티딘
    을 포함하는 안정한 수성 항체 제제.
  19. a. 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 20 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체,
    b. 약 0.006%의 폴리소르베이트-20,
    c. 약 250 mM의 트레할로스, 및
    d. 약 20 mM의 히스티딘
    을 포함하는 안정한 수성 항체 제제.
  20. a. 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 30 mg/㎖의 항체,
    b. 약 0.006%의 폴리소르베이트-20,
    c. 약 250 mM의 트레할로스, 및
    d. 약 20 mM의 히스티딘
    을 포함하는 안정한 수성 항체 제제.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 3개월 이상 동안 약 25℃에서 저장될 때 안정한 것인 항체 제제.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 18개월 이상 동안 약 5℃에서 저장될 때 안정한 것인 항체 제제.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 1개월 이상 동안 약 40℃에서 저장된 항체가, 저장되지 않은 기준 항체와 비교하여 IL-5R 폴리펩티드에 대한 결합 능력의 80% 이상을 보유하는 것인 항체 제제.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 6개월 이상 동안 약 5℃에서 저장된 항체가, 저장되지 않은 기준 항체와 비교하여 IL-5R 폴리펩티드에 대한 결합 능력의 80% 이상을 보유하는 것인 항체 제제.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 1개월 이상 동안 약 40℃에서 저장된 항체가, 저장되지 않은 기준 항체와 비교하여 IL-5R 폴리펩티드에 대한 결합 능력의 95% 이상을 보유하는 것인 항체 제제.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 6개월 이상 동안 약 5℃에서 저장된 항체가, 저장되지 않은 기준 항체와 비교하여 IL-5R 폴리펩티드에 대한 결합 능력의 95% 이상을 보유하는 것인 항체 제제.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 1개월 이상 동안 약 40℃에서 저장될 때 HPSEC에 의해 측정시 항체의 2% 미만이 응집체를 형성하는 것인 항체 제제.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 12개월 이상 동안 약 5℃에서 저장될 때 HPSEC에 의해 측정시 항체의 2% 미만이 응집체를 형성하는 것인 항체 제제.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 1개월 이상 동안 약 40℃에서 저장될 때 시각적 검사에 의해 확인시 입자를 실질적으로 함유하지 않는 것인 항체 제제.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 12개월 이상 동안 약 5℃에서 저장될 때 시각적 검사에 의해 확인시 입자를 실질적으로 함유하지 않는 것인 항체 제제.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 주사가능한 제제인 항체 제제.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 정맥내, 피하 또는 근육내 투여에 적합한 것인 항체 제제.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항의 항체 제제를 함유하는 밀봉된 용기.
  34. 적합한 용기 내에 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항의 항체 제제를 포함하는, 인간에게 비경구 투여되기에 적합한 약학 단위 제형.
  35. 제34항에 있어서, 항체 제제는 정맥내로, 피하로 또는 근육내로 투여되는 것인 약학 단위 제형.
  36. 제34항 또는 제35항에 있어서, 적합한 용기는 프리필드 시린지(pre-filled syringe)인 약학 단위 제형.
  37. 제36항에 있어서, 프리필드 시린지는 니들을 포함하는 것인 약학 단위 제형.
  38. 제37항에 있어서, 니들은 29G 박벽(thin wall) 니들인 약학 단위 제형.
  39. 제36항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 프리필드 시린지는 플라스틱 시린지 또는 유리 시린지인 약학 단위 제형.
  40. 제36항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 프리필드 시린지는 텅스텐을 실질적으로 함유하지 않는 물질로 만들어진 것인 약학 단위 제형.
  41. 제361항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 프리필드 시린지는 실리콘으로 코팅되어 있는 것인 약학 단위 제형.
  42. 제36항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 프리필드 시린지는 플루오로중합체 수지 디스크를 가진 플런저(plunger)를 포함하는 것인 약학 단위 제형.
  43. a. 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 2 mg/㎖ 내지 약 20 mg/㎖의 항체, 및
    b. 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20
    을 포함하는 프리필드 시린지.
  44. 제38항에 있어서,
    c. 약 40 mM 내지 약 60 mM의 트레할로스, 및
    d. 약 110 mM 내지 약 150 mM의 L-아르기닌
    을 추가로 포함하는 것인 프리필드 시린지.
  45. a. 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 약 20 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체, 및
    b. 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20
    을 포함하는 프리필드 시린지.
  46. 제40항에 있어서,
    c. 약 200 mM 내지 약 300 mM의 트레할로스
    를 추가로 포함하는 것인 프리필드 시린지.
  47. a. 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 2 mg/㎖ 내지 약 20 mg/㎖의 항체, 및
    b. 약 0.006%의 폴리소르베이트-20
    을 포함하는 프리필드 시린지.
  48. 제47항에 있어서,
    c. 약 50 mM의 트레할로스, 및
    d. 약 130 mM의 L-아르기닌
    을 추가로 포함하는 것인 프리필드 시린지.
  49. a. 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 20 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체, 및
    b. 약 0.006%의 폴리소르베이트-20
    을 포함하는 프리필드 시린지.
  50. 제49항에 있어서,
    c. 약 250 mM의 트레할로스
    를 추가로 포함하는 것인 프리필드 시린지.
  51. a. 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 약 30 mg/㎖의 항체, 및
    b. 약 0.006%의 폴리소르베이트-20
    을 포함하는 프리필드 시린지.
  52. 제51항에 있어서,
    c. 약 250 mM의 트레할로스
    를 추가로 포함하는 것인 프리필드 시린지.
  53. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항의 제제, 제33항의 용기, 제34항 내지 제42항 중 어느 한 항의 단위 제형, 또는 제43항 내지 제52항 중 어느 한 항의 프리필드 시린지를 포함하는 키트.
  54. a. 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 약 1 mg/㎖ 내지 약 400 mg/㎖까지 정제하는 단계; 및
    b. 단리된 항체를 안정화 제제에 넣어,
    i. 약 2 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 상기 항체, 및
    ii. 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20
    을 포함하는 안정한 수성 항체 제제를 형성하는 단계
    를 포함하는, 안정한 수성 항체 제제의 제조 방법.
  55. a. 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 약 1 mg/㎖ 내지 약 400 mg/㎖까지 정제하는 단계; 및
    b. 상기 항체를,
    i. 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20,
    ii. 약 40 mM 내지 약 60 mM의 트레할로스, 및
    iii. 약 110 mM 내지 약 150 mM의 L-아르기닌
    을 포함하는 용액으로 약 2 mg/㎖ 내지 약 20 mg/㎖의 항체까지 희석하는 단계
    를 포함하는, 안정한 수성 항체 제제의 제조 방법.
  56. a. 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 약 1 mg/㎖ 내지 약 400 mg/㎖까지 정제하는 단계; 및
    b. 상기 항체를,
    i. 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20, 및
    ii. 약 200 mM 내지 약 300 mM의 트레할로스
    를 포함하는 용액으로 약 20 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체까지 희석하는 단계
    를 포함하는, 안정한 수성 항체 제제의 제조 방법.
  57. 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 포함하는 재구성된 항체 제제를 제조하는 방법으로서,
    a. 상기 항체를 세포 배양물로부터 정제하는 단계;
    b. 단리된 항체를 동결건조하는 단계; 및
    c. 동결건조된 항체를 수용액에 첨가하여,
    i. 약 2 mg/㎖ 내지 약 100 mg/㎖의 항체, 및
    ii. 약 0.002% 내지 약 0.01%의 폴리소르베이트-20
    을 포함하는 재구성된 항체 제제를 형성하는 단계
    를 포함하는, 재구성된 항체 제제의 제조 방법.
  58. 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 포함하는 항체 제제로서, 입자를 본질적으로 함유하지 않는 것인 항체 제제.
  59. 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 포함하는 항체 제제로서, 활성 글루타티온 S-트랜스퍼라제(GST)를 본질적으로 함유하지 않는 것인 항체 제제.
  60. 제59항에 있어서, 항체 서열이 GST를 본질적으로 함유하지 않는 것인 항체 제제.
  61. 제58항에 있어서, 38℃ 내지 42℃에서 저장될 때 1개월 이상 동안 입자를 본질적으로 함유하지 않는 것인 항체 제제.
  62. 제58항에 있어서, 2℃ 내지 6℃에서 저장될 때 6개월 이상 동안 입자를 본질적으로 함유하지 않는 것인 항체 제제.
  63. 서열번호 5 내지 7의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8 내지 10의 카바트 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체의 정제 방법으로서,
    a. 상기 항체를 포함하는 세포 배양물을 수득하는 단계,
    b. 상기 항체에 대한 친화성 크로마토그래피를 수행하는 단계,
    c. 상기 항체에 대한 양이온 교환을 수행하는 단계, 및
    d. 상기 항체에 대한 혼합 모드 크로마토그래피를 수행하는 단계
    를 포함하는 항체의 정제 방법.
  64. 제63항에 있어서, 바이러스 불활성화 공정을 추가로 포함하는 것인 정제 방법.
  65. 제63항에 있어서, 정용여과 공정을 추가로 포함하는 것인 정제 방법.
  66. 치료 유효량의 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항의 항체 제제, 제33항의 용기, 제34항 내지 제42항 중 어느 한 항의 단위 제형, 또는 제43항 내지 제52항 중 어느 한 항의 프리필드 시린지를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 폐 질환 또는 장애를 치료하는 방법.
  67. 제49항에 있어서, 폐 질환 또는 장애는 호산구성(eosinophilic) 질환 또는 장애인 방법.
  68. 제49항에 있어서, 폐 질환 또는 장애는 천식, COPD, 호산구성 천식, 호산구성 및 호중구성 복합 천식, 아스피린 민감성 천식, 알레르기성 기관지폐 아스페르길루스증, 급성 및 만성 호산구성 기관지염, 급성 및 만성 호산구성 폐렴, 척스트라우스(Churg-Strauss) 증후군, 과다호산구 증후군, 약물, 자극제 및 방사선 유발성 폐 호산구증가증, 감염 유발성 폐 호산구증가증(진균, 결핵, 기생충), 자가면역 관련 폐 호산구증가증, 호산구성 식도염, 크론병, 또는 이들의 조합인 방법.
  69. 제49항에 있어서, 폐 질환 또는 장애는 천식인 방법.
  70. 제49항에 있어서, 폐 질환 또는 장애는 만성 폐쇄성 폐 질환인 방법.
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Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BRPI0611901A2 (pt) 2005-06-14 2012-08-28 Amgen, Inc composição, liofilizado, kit, e, processo para preparar uma composição
AU2013256229A1 (en) * 2012-05-03 2014-10-30 Medimmune, Llc Method for analyzing sample components
TWI660972B (zh) 2012-09-10 2019-06-01 愛爾蘭商尼歐托普生物科學公司 抗ｍｃａｍ抗體及相關使用方法
EP3892288A1 (en) * 2013-10-24 2021-10-13 Astrazeneca AB Stable, aqueous antibody formulations
EP3116907A1 (en) 2014-03-12 2017-01-18 Prothena Biosciences Limited Anti-laminin4 antibodies specific for lg4-5
JP6728053B2 (ja) 2014-03-12 2020-07-22 プロセナ バイオサイエンシーズ リミテッド 抗ｍｃａｍ抗体及び関連する使用方法
JP2018530540A (ja) * 2015-09-16 2018-10-18 プロセナ バイオサイエンシーズ リミテッド 巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症又は高安動脈炎の処置又は予防のための抗ｍｃａｍ抗体の使用
JP2018535242A (ja) * 2015-11-30 2018-11-29 メディミューン，エルエルシー 高濃度のタンパク質ベースの治療剤を含有する医薬組成物中の非晶質安定化化合物としてのアミノ酸と糖との最適比
CN109803640B (zh) * 2016-08-10 2022-01-04 赛特瑞恩股份有限公司 稳定的液体抗流感病毒抗体医药调配物
AU2017345490B2 (en) * 2016-10-21 2022-07-07 Amgen Inc. Pharmaceutical formulations and methods of making the same
EP3927729A4 (en) 2019-02-18 2023-10-11 Eli Lilly and Company THERAPEUTIC ANTIBODY FORMULATION
TW202126688A (zh) 2019-09-27 2021-07-16 瑞典商阿斯特捷利康公司 使用貝那利珠單抗治療遲發性氣喘之方法
WO2021124793A1 (ja) * 2019-12-16 2021-06-24 ニプロ株式会社 凝集防止剤ならびにそれを用いた医薬組成物および医療用デバイス
CN111024963A (zh) * 2019-12-27 2020-04-17 桂林英美特生物技术研究所 一种液体稳定、抗冰冻的免疫比浊法载脂蛋白b单试剂
KR20220152540A (ko) * 2020-03-13 2022-11-16 삼성바이오에피스 주식회사 안정성이 증진된 액상 약제학적 조성물
CN113769081A (zh) * 2020-06-10 2021-12-10 三生国健药业（上海）股份有限公司 一种稳定的高浓度抗人il-5单克隆抗体液体制剂
CN116887860A (zh) * 2020-12-17 2023-10-13 阿斯利康(瑞典)有限公司 抗il5r抗体配制品

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070048304A1 (en) * 1995-09-11 2007-03-01 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Method of treating allergy using antibody against human interleukin-5 receptor alpha chain
US20090304706A1 (en) * 2006-04-21 2009-12-10 Novartis Ag Antagonist anti-cd40 antibody pharmaceutical compositions
US20100074903A1 (en) * 2008-09-19 2010-03-25 Ulla Grauschopf Novel antibody formulation

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE120454T1 (de) 1988-06-14 1995-04-15 Cetus Oncology Corp Kupplungsmittel und sterisch gehinderte, mit disulfid gebundene konjugate daraus.
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5175384A (en) 1988-12-05 1992-12-29 Genpharm International Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice
IE63847B1 (en) 1989-05-05 1995-06-14 Res Dev Foundation A novel antibody delivery system for biological response modifiers
SG48759A1 (en) 1990-01-12 2002-07-23 Abgenix Inc Generation of xenogenic antibodies
US5314995A (en) 1990-01-22 1994-05-24 Oncogen Therapeutic interleukin-2-antibody based fusion proteins
AU654811B2 (en) 1990-03-20 1994-11-24 Trustees Of Columbia University In The City Of New York, The Chimeric antibodies with receptor binding ligands in place of their constant region
JPH09506761A (ja) 1990-11-09 1997-07-08 ステファン ディー．ギリーズ サイトカインの免疫複合体
US6267958B1 (en) * 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
BRPI0410658B8 (pt) * 2003-05-26 2021-06-22 In Baik Woo seringa descartável
DE202006001995U1 (de) * 2006-02-07 2006-06-08 Sarstedt Ag & Co. Probengefäß zur Aufnahme von kleinen Flüssigkeitsmengen für Analysen
CN101541345A (zh) * 2006-09-25 2009-09-23 米迪缪尼有限公司 稳定化的抗体制剂和其应用
AU2008232902B2 (en) * 2007-03-30 2013-10-03 Medlmmune, Llc Antibody formulation
SG10201503254TA (en) 2007-05-14 2015-06-29 Medimmune Llc Methods of reducing eosinophil levels
SG174258A1 (en) * 2009-03-06 2011-10-28 Genentech Inc Antibody formulation
SG175188A1 (en) * 2009-05-04 2011-11-28 Abbott Biotech Ltd Stable high protein concentration formulations of human anti-tnf-alpha-antibodies
AR087305A1 (es) * 2011-07-28 2014-03-12 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-pcsk9, metodo de preparacion y kit
JP6220789B2 (ja) * 2011-10-18 2017-10-25 コヒラス・バイオサイエンシズ・インコーポレイテッド 糖およびポリオールの組合せによって安定化されたエタネルセプト製剤
WO2013062841A1 (en) * 2011-10-26 2013-05-02 Bio-Rad Laboratories, Inc. Removal of virucidal agents in mixed mode chromatography
EP2771033A4 (en) * 2011-10-28 2016-02-17 Integritybio Inc PROTEIN FORMULATIONS CONTAINING AMINO ACIDS
KR20140097217A (ko) * 2011-11-01 2014-08-06 메디뮨 엘엘씨 급성 천식 악화의 빈도 및 중증도를 감소시키는 방법
LT3033101T (lt) * 2013-08-12 2019-03-25 Astrazeneca Ab Astmos paūmejimo dažnio sumažinimo būdai naudojant benralizumabą
AU2014306959B2 (en) * 2013-08-12 2019-11-21 Astrazeneca Ab Methods for increasing forced expiratory volume in asthmatics using benralizumab
EP3892288A1 (en) * 2013-10-24 2021-10-13 Astrazeneca AB Stable, aqueous antibody formulations

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070048304A1 (en) * 1995-09-11 2007-03-01 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Method of treating allergy using antibody against human interleukin-5 receptor alpha chain
US20090304706A1 (en) * 2006-04-21 2009-12-10 Novartis Ag Antagonist anti-cd40 antibody pharmaceutical compositions
US20100074903A1 (en) * 2008-09-19 2010-03-25 Ulla Grauschopf Novel antibody formulation

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