JP2016529489A - イオン交換クロマトグラフィーのインプットの最適化の解明 - Google Patents
イオン交換クロマトグラフィーのインプットの最適化の解明 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2016529489A JP2016529489A JP2016525805A JP2016525805A JP2016529489A JP 2016529489 A JP2016529489 A JP 2016529489A JP 2016525805 A JP2016525805 A JP 2016525805A JP 2016525805 A JP2016525805 A JP 2016525805A JP 2016529489 A JP2016529489 A JP 2016529489A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- polypeptide
- antibody
- buffer
- contaminants
- chromatography material
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 title claims description 119
- 238000005457 optimization Methods 0.000 title description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 562
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 555
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 553
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 396
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 144
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 47
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 181
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 151
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 claims description 136
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 105
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 87
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 81
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical group [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 76
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 57
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 54
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 51
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 47
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 47
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 claims description 43
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 38
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 claims description 30
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 claims description 27
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 claims description 26
- -1 (NH 4 ) 2 SO 4 Substances 0.000 claims description 22
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 claims description 20
- 239000007991 ACES buffer Substances 0.000 claims description 19
- DBXNUXBLKRLWFA-UHFFFAOYSA-N N-(2-acetamido)-2-aminoethanesulfonic acid Chemical group NC(=O)CNCCS(O)(=O)=O DBXNUXBLKRLWFA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 19
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 18
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 claims description 18
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 claims description 15
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 claims description 15
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 13
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 claims description 13
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 claims description 11
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 11
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 claims description 11
- 238000012434 mixed-mode chromatography Methods 0.000 claims description 10
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 claims description 8
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 71
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 71
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 69
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 69
- 239000000047 product Substances 0.000 description 61
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 54
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 53
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 49
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 49
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 44
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 44
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 43
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 43
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 35
- 230000006870 function Effects 0.000 description 32
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 24
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 20
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 20
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 19
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 19
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 18
- 239000012537 formulation buffer Substances 0.000 description 18
- 125000000487 histidyl group Chemical class [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 17
- 102000003670 Carboxypeptidase B Human genes 0.000 description 16
- 108090000087 Carboxypeptidase B Proteins 0.000 description 16
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 description 16
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 16
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 16
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 16
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 15
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 15
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 15
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 15
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 14
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 14
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 14
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 14
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 14
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 13
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 13
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 13
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 13
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 13
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 11
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 11
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 10
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 10
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 9
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 9
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 9
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 9
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 9
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 8
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 8
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 8
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 7
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 7
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 7
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 7
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 7
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 6
- HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N calicheamicin Chemical compound C1[C@H](OC)[C@@H](NCC)CO[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@@H]2C\3=C(NC(=O)OC)C(=O)C[C@](C/3=C/CSSSC)(O)C#C\C=C/C#C2)O[C@H](C)[C@@H](NO[C@@H]2O[C@H](C)[C@@H](SC(=O)C=3C(=C(OC)C(O[C@H]4[C@@H]([C@H](OC)[C@@H](O)[C@H](C)O4)O)=C(I)C=3C)OC)[C@@H](O)C2)[C@@H]1O HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N 0.000 description 6
- 229930195731 calicheamicin Natural products 0.000 description 6
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 6
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 6
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 6
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 6
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 6
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 6
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 6
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 6
- QWPXBEHQFHACTK-KZVYIGENSA-N (10e,12e)-86-chloro-12,14,4-trihydroxy-85,14-dimethoxy-33,2,7,10-tetramethyl-15,16-dihydro-14h-7-aza-1(6,4)-oxazina-3(2,3)-oxirana-8(1,3)-benzenacyclotetradecaphane-10,12-dien-6-one Chemical compound CN1C(=O)CC(O)C2(C)OC2C(C)C(OC(=O)N2)CC2(O)C(OC)\C=C\C=C(C)\CC2=CC(OC)=C(Cl)C1=C2 QWPXBEHQFHACTK-KZVYIGENSA-N 0.000 description 5
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 5
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 5
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 5
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 5
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 5
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 5
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 5
- 125000000151 cysteine group Chemical class N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 5
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 5
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 5
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 5
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 5
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 5
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(2-ethylhexyl) sulfosuccinate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)CC(S(O)(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 4
- 101100279186 Caenorhabditis elegans efn-4 gene Proteins 0.000 description 4
- 101100476210 Caenorhabditis elegans rnt-1 gene Proteins 0.000 description 4
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 4
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 4
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 4
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 239000000306 component Substances 0.000 description 4
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 4
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 4
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 4
- 238000012552 review Methods 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 4
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 102100029098 Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 3
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 3
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 3
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 3
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 3
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- QWPXBEHQFHACTK-UHFFFAOYSA-N Maytansinol Natural products CN1C(=O)CC(O)C2(C)OC2C(C)C(OC(=O)N2)CC2(O)C(OC)C=CC=C(C)CC2=CC(OC)=C(Cl)C1=C2 QWPXBEHQFHACTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 3
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 3
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 3
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 3
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000008676 import Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 3
- 238000003156 radioimmunoprecipitation Methods 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- QZNNVYOVQUKYSC-JEDNCBNOSA-N (2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 QZNNVYOVQUKYSC-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 2
- CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.C=CC1=CC=CC=C1C=C CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GANZODCWZFAEGN-UHFFFAOYSA-N 5-mercapto-2-nitro-benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(S)=CC=C1[N+]([O-])=O GANZODCWZFAEGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical group OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- 239000008000 CHES buffer Substances 0.000 description 2
- 102000005367 Carboxypeptidases Human genes 0.000 description 2
- 108010006303 Carboxypeptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000005600 Cathepsins Human genes 0.000 description 2
- 108010084457 Cathepsins Proteins 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 2
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 108010021468 Fc gamma receptor IIA Proteins 0.000 description 2
- 108010021472 Fc gamma receptor IIB Proteins 0.000 description 2
- 241000724791 Filamentous phage Species 0.000 description 2
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100029205 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Human genes 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 101100335081 Mus musculus Flt3 gene Proteins 0.000 description 2
- FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N N,N-bis(2-hydroxyethyl)glycine Chemical compound OCCN(CCO)CC(O)=O FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MKWKNSIESPFAQN-UHFFFAOYSA-N N-cyclohexyl-2-aminoethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCNC1CCCCC1 MKWKNSIESPFAQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004989 O-glycosylation Effects 0.000 description 2
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 2
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004695 Polyether sulfone Substances 0.000 description 2
- 239000012518 Poros HS 50 resin Substances 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 2
- 208000034953 Twin anemia-polycythemia sequence Diseases 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 2
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 2
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 2
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007998 bicine buffer Substances 0.000 description 2
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 2
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000013018 capto adhere resin Substances 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical group 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 description 2
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 229920006037 cross link polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 2
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 2
- 150000004662 dithiols Chemical class 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 108010037896 heparin-binding hemagglutinin Proteins 0.000 description 2
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 2
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 2
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 229920006393 polyether sulfone Polymers 0.000 description 2
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000009163 protein therapy Methods 0.000 description 2
- 229940043131 pyroglutamate Drugs 0.000 description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 239000013017 sartobind Substances 0.000 description 2
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 125000000542 sulfonic acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 230000002277 temperature effect Effects 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- 125000000101 thioether group Chemical group 0.000 description 2
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 229930013292 trichothecene Natural products 0.000 description 2
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 2
- KYBXNPIASYUWLN-WUCPZUCCSA-N (2s)-5-hydroxypyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC1CC[C@@H](C(O)=O)N1 KYBXNPIASYUWLN-WUCPZUCCSA-N 0.000 description 1
- IEUUDEWWMRQUDS-UHFFFAOYSA-N (6-azaniumylidene-1,6-dimethoxyhexylidene)azanium;dichloride Chemical compound Cl.Cl.COC(=N)CCCCC(=N)OC IEUUDEWWMRQUDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- BMVXCPBXGZKUPN-UHFFFAOYSA-N 1-hexanamine Chemical compound CCCCCCN BMVXCPBXGZKUPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MQLACMBJVPINKE-UHFFFAOYSA-N 10-[(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)methylidene]anthracen-9-one Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC=C1C=C1C2=CC=CC=C2C(=O)C2=CC=CC=C21 MQLACMBJVPINKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003287 1H-imidazol-4-ylmethyl group Chemical group [H]N1C([H])=NC(C([H])([H])[*])=C1[H] 0.000 description 1
- YBBNVCVOACOHIG-UHFFFAOYSA-N 2,2-diamino-1,4-bis(4-azidophenyl)-3-butylbutane-1,4-dione Chemical compound C=1C=C(N=[N+]=[N-])C=CC=1C(=O)C(N)(N)C(CCCC)C(=O)C1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 YBBNVCVOACOHIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FZDFGHZZPBUTGP-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[bis(carboxymethyl)amino]-3-(4-isothiocyanatophenyl)propyl]-[2-[bis(carboxymethyl)amino]propyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)C(C)CN(CC(O)=O)CC(N(CC(O)=O)CC(O)=O)CC1=CC=C(N=C=S)C=C1 FZDFGHZZPBUTGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WOUANPHGFPAJCA-UHFFFAOYSA-N 2-[benzyl(methyl)amino]ethanol Chemical compound OCCN(C)CC1=CC=CC=C1 WOUANPHGFPAJCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBUTXZSKZCQABC-UHFFFAOYSA-N 2-amino-1-methyl-7h-purine-6-thione Chemical compound S=C1N(C)C(N)=NC2=C1NC=N2 FBUTXZSKZCQABC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000979 2-amino-2-oxoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C(=O)N([H])[H] 0.000 description 1
- VBAOEVKQBLGWTH-UHFFFAOYSA-N 2-pyridin-4-ylethanethiol Chemical compound SCCC1=CC=NC=C1 VBAOEVKQBLGWTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LYUQWQRTDLVQGA-UHFFFAOYSA-N 3-phenylpropylamine Chemical compound NCCCC1=CC=CC=C1 LYUQWQRTDLVQGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229940117976 5-hydroxylysine Drugs 0.000 description 1
- 108010066676 Abrin Proteins 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 1
- 102000009133 Arylsulfatases Human genes 0.000 description 1
- 101000669426 Aspergillus restrictus Ribonuclease mitogillin Proteins 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- 101100022187 Caenorhabditis elegans mab-10 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100289995 Caenorhabditis elegans mac-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 101710158575 Cap-specific mRNA (nucleoside-2'-O-)-methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101710205625 Capsid protein p24 Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-NJFSPNSNSA-N Carbon-14 Chemical compound [14C] OKTJSMMVPCPJKN-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- DLGOEMSEDOSKAD-UHFFFAOYSA-N Carmustine Chemical compound ClCCNC(=O)N(N=O)CCCl DLGOEMSEDOSKAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010067225 Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 description 1
- 102000016289 Cell Adhesion Molecules Human genes 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 231100000023 Cell-mediated cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 206010057250 Cell-mediated cytotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 102000000311 Cytosine Deaminase Human genes 0.000 description 1
- 108010080611 Cytosine Deaminase Proteins 0.000 description 1
- 125000000030 D-alanine group Chemical group [H]N([H])[C@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 description 1
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710082714 Exotoxin A Proteins 0.000 description 1
- 229920006010 Fractogel SO3 Polymers 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 241000251129 Galeocerdo Species 0.000 description 1
- 108700004714 Gelonium multiflorum GEL Proteins 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 101100396606 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) iga gene Proteins 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 1
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010008212 Integrin alpha4beta1 Proteins 0.000 description 1
- 102100025390 Integrin beta-2 Human genes 0.000 description 1
- 102000008607 Integrin beta3 Human genes 0.000 description 1
- 108010020950 Integrin beta3 Proteins 0.000 description 1
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 238000012695 Interfacial polymerization Methods 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 241000282838 Lama Species 0.000 description 1
- 102100029204 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Human genes 0.000 description 1
- 108010064548 Lymphocyte Function-Associated Antigen-1 Proteins 0.000 description 1
- 101001133631 Lysinibacillus sphaericus Penicillin acylase Proteins 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- 239000004907 Macro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 229930126263 Maytansine Natural products 0.000 description 1
- 241000549168 Maytenus Species 0.000 description 1
- 244000302512 Momordica charantia Species 0.000 description 1
- 235000009811 Momordica charantia Nutrition 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 1
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101100081884 Oryza sativa subsp. japonica OSA15 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150082245 PSAG gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282520 Papio Species 0.000 description 1
- 108010073038 Penicillin Amidase Proteins 0.000 description 1
- 101710123388 Penicillin G acylase Proteins 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 description 1
- 101100413173 Phytolacca americana PAP2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 1
- 102000017975 Protein C Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 1
- 101710100969 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 description 1
- 102100029986 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Human genes 0.000 description 1
- 102100029981 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Human genes 0.000 description 1
- 101710100963 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Proteins 0.000 description 1
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 101710149279 Small delta antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108090001109 Thermolysin Proteins 0.000 description 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 1
- 102100030859 Tissue factor Human genes 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100022563 Tubulin polymerization-promoting protein Human genes 0.000 description 1
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 1
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- 101710098624 Tyrosine-protein kinase ABL1 Proteins 0.000 description 1
- 101150117115 V gene Proteins 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 108010001818 alpha-sarcin Proteins 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 238000012435 analytical chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000002494 anti-cea effect Effects 0.000 description 1
- 229940046836 anti-estrogen Drugs 0.000 description 1
- 230000001833 anti-estrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003432 anti-folate effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940127074 antifolate Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003418 antiprogestin Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 238000005460 biophysical method Methods 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000012534 cell culture medium component Substances 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000005890 cell-mediated cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000002032 cellular defenses Effects 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 238000005354 coacervation Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 230000001447 compensatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000007872 degassing Methods 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N delta-DL-hydroxylysine Natural products NCC(O)CCC(N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- 125000005442 diisocyanate group Chemical group 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N disuccinimidyl suberate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000009510 drug design Methods 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 108010028531 enomycin Proteins 0.000 description 1
- 230000009144 enzymatic modification Effects 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N erythro-5-hydroxy-L-lysine Chemical compound NC[C@H](O)CC[C@H](N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 1
- 239000000328 estrogen antagonist Substances 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- XRECTZIEBJDKEO-UHFFFAOYSA-N flucytosine Chemical compound NC1=NC(=O)NC=C1F XRECTZIEBJDKEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004413 flucytosine Drugs 0.000 description 1
- 150000002222 fluorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000004052 folic acid antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000003500 gene array Methods 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000036252 glycation Effects 0.000 description 1
- 125000003055 glycidyl group Chemical group C(C1CO1)* 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000002349 hydroxyamino group Chemical group [H]ON([H])[*] 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 1
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 150000002463 imidates Chemical class 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 1
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 1
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 1
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 108091008042 inhibitory receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 230000009878 intermolecular interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000037427 ion transport Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 230000029226 lipidation Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 238000013178 mathematical model Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- WKPWGQKGSOKKOO-RSFHAFMBSA-N maytansine Chemical compound CO[C@@H]([C@@]1(O)C[C@](OC(=O)N1)([C@H]([C@@H]1O[C@@]1(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](C)N(C)C(C)=O)CC(=O)N1C)C)[H])\C=C\C=C(C)\CC2=CC(OC)=C(Cl)C1=C2 WKPWGQKGSOKKOO-RSFHAFMBSA-N 0.000 description 1
- 229960003151 mercaptamine Drugs 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 150000004682 monohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Substances N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001668 nucleic acid synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000001293 nucleolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 108091008819 oncoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000027450 oncoproteins Human genes 0.000 description 1
- 229940043515 other immunoglobulins in atc Drugs 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 108010076042 phenomycin Proteins 0.000 description 1
- 125000000951 phenoxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(O*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920000083 poly(allylamine) Polymers 0.000 description 1
- 108010054442 polyalanine Proteins 0.000 description 1
- 229920000768 polyamine Chemical group 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003623 progesteronic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005588 protonation Effects 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000013391 scatchard analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000003007 single stranded DNA break Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- RDZTWEVXRGYCFV-UHFFFAOYSA-M sodium 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonate Chemical compound [Na+].OCCN1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 RDZTWEVXRGYCFV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- PTLRDCMBXHILCL-UHFFFAOYSA-M sodium arsenite Chemical compound [Na+].[O-][As]=O PTLRDCMBXHILCL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000012899 standard injection Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 229960001052 streptozocin Drugs 0.000 description 1
- ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N streptozocin Chemical compound O=NN(C)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N 0.000 description 1
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical group O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 108060007951 sulfatase Proteins 0.000 description 1
- AGGIJOLULBJGTQ-UHFFFAOYSA-N sulfoacetic acid Chemical group OC(=O)CS(O)(=O)=O AGGIJOLULBJGTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-imine Chemical compound N=C1CCCS1 CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 230000007888 toxin activity Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- LZAJKCZTKKKZNT-PMNGPLLRSA-N trichothecene Chemical compound C12([C@@]3(CC[C@H]2OC2C=C(CCC23C)C)C)CO1 LZAJKCZTKKKZNT-PMNGPLLRSA-N 0.000 description 1
- 150000003327 trichothecene derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
- 231100000925 very toxic Toxicity 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000003952 β-lactams Chemical class 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/86—Signal analysis
- G01N30/8658—Optimising operation parameters
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/36—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving ionic interaction
- B01D15/361—Ion-exchange
- B01D15/362—Cation-exchange
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/36—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving ionic interaction
- B01D15/361—Ion-exchange
- B01D15/363—Anion-exchange
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 - B01D15/36
- B01D15/3847—Multimodal interactions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/165—Extraction; Separation; Purification by chromatography mixed-mode chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/18—Ion-exchange chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/96—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation using ion-exchange
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Confectionery (AREA)
Abstract
Description
本出願は2013年7月12日に出願された米国仮特許出願第61/845,890号の優先権を主張し、その開示は、その全体が参照により本明細書に包含される。
本発明は、タンパク質の荷電変異体について、イオン強度勾配、イオン交換クロマトグラフィーを使用してポリペプチドの調製物を分析するための方法を提供する。
モノクローナル抗体(mAb)のようなタンパク質は、水性環境下で、大抵は電荷で極性のアミノ酸を表面に有する(Barlow, DJ and Thornton, JM (1986) Biopolymers 25:1717)。溶液成分との分子間相互作用により、表面残留物は、多数の化学的及び酵素的修飾を受ける可能性があり、これは、その静電表面上で僅かに異なるタンパク質変異体の不均一混合物をもたらす(Dick, LW et al., (2009) J. Chromatogr. B 877:3841; Liu, HW et al., (2008) Rapid Commun. Mass Spectrom. 22:4081; Miller, AK, et al., (2011) J. Pharm. Sci. 100:2543; Wang, WR et al., (2011) Mol. Immunol. 48:860)。陽イオン交換クロマトグラフィー(CEC)は、Vlasak, J and Ionescu, R (2008 Curr. Pharm. Biotechnol. 9:468)による最近の総説により、タンパク質治療の電荷不均一性をプロファイルする代表的な基準であると考えられている。電荷敏感分離方法は、製造中の生産整合性を保証するため及びタンパク質治療の分解レベルをモニターするために、規制当局により典型的に必要とされる(Miller, AK, et al., (2011) J. Pharm. Sci. 100:2543; He, XPZ (2009) Electrophoresis 30:714; Sosic, Z et al., (2008) Electrophoresis 29:4368; Kim, J et al.,(2010) J. Chromatogr. 8781973 Teshima, G et al., (2010) J. Chromatogr. 1218:2091)。
幾つかの態様において、本発明は、複数の組成物を分析するために最適なイオン交換クロマトグラフィーの分離条件を同定するための方法を提供し、ここで各組成物は一以上の混入物を有するポリペプチドを含み、該方法は、a)組成物の二以上のポリペプチドのアミノ酸組成に基づいて、選択された温度での正味電荷対pHの曲線をプロットすること、b)工程a)のプロットの二次導関数を決定することにより中性pHで又はその近傍での正味電荷対pHの曲線の変曲点を決定することを含み;ここで最適なイオン交換クロマトグラフィーの分離条件は、一以上の組成物のポリペプチドについてほぼ共通の変曲点でのpHである。幾つかの実施態様において、本方法は更に、c)組成物の二以上のポリペプチドについて温度変化による正味電荷対pH曲線の変曲点のpHの変化(dIP/dT)を決定し、d)温度変化によるバッファーの酸解離定数の変化(dpKa/dT)がポリペプチドのdIP/dTと本質的に同じである、クロマトグラフィーに使用のためのバッファーを選択することを含む。
a)ローディングバッファーがバッファーを含み、クロマトグラフィーのpH及び温度が、i)曲線が二以上の標的ポリペプチドのポリペプチドのアミノ酸組成に基づいている、選択された温度での正味電荷対pHの曲線をプロットし、ii)工程i)のプロットの二次導関数を決定することによって正味電荷対pHの曲線の変曲点を決定すること(ここで最適なイオン交換クロマトグラフィーの条件は、二以上の標的ポリペプチドについての共通の変曲点でのpHである)によって、複数の標的ポリペプチドに対して最適化される、ローディングバッファーを使用してイオン交換クロマトグラフィー材料にポリペプチド及び一以上の混入物を結合させること;b)溶出バッファーがバッファー及び塩を含み、ポリペプチド及び一以上の混入物が勾配により分離される溶出バッファーの勾配を用いてイオン交換クロマトグラフィー材料からポリペプチド及び一以上の混入物を溶出させること、及びc)ポリペプチド及び一以上の混入物を検出することを含む方法は、効果的に混入物からポリペプチドを分離する。幾つかの実施態様において、選択される温度は大気温度である。幾つかの実施態様において、バッファーが、a)二以上の標的ポリペプチドについて温度変化による正味電荷対pH曲線の変曲点のpHの変化(dIP/dT)を決定し、b)温度変化によるバッファーの酸解離定数の変化(dpKa/dT)が共通の変曲点を有する二以上の標的ポリペプチドのdIP/dTと本質的に同じであるバッファーを選択することによって同定される。幾つかの実施態様において、バッファーは、変曲点のpHで効果的な緩衝能を提供する。
本発明は、一以上の混入物と共にポリペプチドを含む組成物を分析するために最適なイオン交換クロマトグラフィーの分離条件を同定するための方法を提供し、該方法は、a)ポリペプチドのアミノ酸組成に基づいて、選択された温度での正味電荷対pHの曲線をプロットすること、b)工程a)のプロットの二次導関数を決定することにより中性pHで又はその近傍での正味電荷対pHの曲線の変曲点(IP)を決定することを含み;ここで最適なイオン交換クロマトグラフィーの分離条件は、ポリペプチドについてほぼ変曲点でのpHである。幾つかの実施態様において、電荷頻度の分布は、所定の温度において異なるpH値でのポリペプチドのシャノンエントロピーを計算することによって決定される。シャノンエントロピーが減少するにつれて、組成物中のポリペプチドの電荷分布がより均一になる。その結果、ポリペプチド及びその荷電変異体との間で分離する能力が向上する。
用語「ポリペプチド」又は「タンパク質」は、本明細書においては、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指すために互換的に使用される。ポリマーは、直鎖状でも分枝状でもよく、改変されたアミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸が割り込んでいてもよい。この用語はまた、自然に又は介入により改変されているアミノ酸ポリマーを包含しており;その例として、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、又は任意の他の操作若しくは改変、例えば、標識化成分又は毒素とのコンジュゲーションが挙げられる。この定義には、例えば、アミノ酸(例えば、非天然アミノ酸等を含む)の一又は複数の類似体を含むポリペプチド、並びに、当該技術分野において公知の他の改変体も含まれる。用語「ポリペプチド」及び「タンパク質」は、本明細書において使用される場合、特に抗体を包含する。
A.最適なイオン交換クロマトグラフィーの分離条件を決定する
本発明は、分解能の損失がpH及び温度の変化により最小化されるように、ポリペプチドにおいてIECを実行するために最適なイオン交換条件を予測するための方法を提供する。幾つかの実施態様において、イオン交換クロマトグラフィーは、ポリペプチドを含む組成物中の混入物を検出するために使用される。幾つかの実施態様において、ポリペプチドは抗体又はその抗原結合性断片である。幾つかの実施態様において、混入物は荷電変異体;例えば、抗体又は抗体断片の塩基性荷電変異体及び/又は酸性荷電変異体を含む、ポリペプチドの塩基性荷電変異体及び/又は酸性荷電変異体である。
ここで:
n=結果の可能性(n=2、プロトン化又は非プロトン化の何れか)
p=結果又は事象(xi)の確率(式1を参照)
b=#トライアル(荷電アミノ酸残基の#)
幾つかの実施態様において、本発明は、クロマトグラフィー法において使用するために最適なバッファーを選択するための方法を提供する。幾つかの実施態様において、温度変化による変曲点の変化と同様の酸解離定数(pKa)変化率を有する緩衝系がクロマトグラフィーの手順で使用される。タンパク質のdIP/dtにほぼ等しい温度の変化によるpKaの変化(すなわちdpKa/dT)を用いてバッファーを選択することは、温度のいかなる変化もタンパク質をそのIPでとどまらせることを確実にし、それによって分析クロマトグラフィーの堅牢性に貢献することとなる。幾つかの実施態様において、(dIP/dT)ポリペプチド(複数)=(dpKa/dT)バッファー。幾つかの実施態様において、バッファーはACESバッファー又はHEPESバッファーである。例えば、バッファーのACES又はHEPESを用いて、変曲点での例示的なmAbの電荷状態は30℃を超えて0.5未満変化する(図11)。
幾つかの態様において、本発明は、初期イオン強度を有するローディングバッファーを用いてポリペプチド及び一以上の混入物をイオン交換クロマトグラフィー材料に結合させ、ポリペプチド及び一以上の混入物が別個の独立した実体としてクロマトグラフィー材料から溶出するように溶出バッファーのイオン強度がイオン強度勾配によって変更される溶出バッファーを用いてイオン交換カラムからポリペプチド及び一以上の混入物を溶出させることを含む、ポリペプチド及び一以上の混入物、例えば、ポリペプチド変異体を含む組成物の分析方法を提供する。幾つかの実施態様において、クロマトグラフィー法は、様々なpIを有する複数のポリペプチド(例えば、ポリペプチド生成物)に適している。例えば、方法は、pIが6.0から9.5までの範囲を有する多数の異なる抗体生成物のために使用することができる。他の実施態様において、クロマトグラフィー法は、本明細書に記載の方法によって同定される最適なバッファーの使用を含む。
幾つかの態様において、本発明は、ポリペプチド(例えば、抗体)の組成物中にポリペプチド及び一又は複数の変異体を含む組成物中のポリペプチドの変異体を検出する方法を提供する。幾つかの実施態様において、ポリペプチドの変異体は、上記のように最適化されたイオン交換クロマトグラフィーの分離条件を用いて分析される。幾つかの実施態様において、ポリペプチドの変異体は、バッファーが上記のように最適化されたイオン交換クロマトグラフィーを用いて分析される。幾つかの実施態様において、ポリペプチドの変異体は、分離条件及びバッファーが上記のように最適化されるイオン交換クロマトグラフィーを用いて分析される。幾つかの実施態様において、イオン交換クロマトグラフィーの分離条件及び/又はバッファーは、複数のポリペプチドに対して、例えば、一以上の標的ポリペプチド(例えば、一以上の抗体)に対して共通のdIP/dTを同定することにより最適化される。方法は、初期イオン強度を有するローディングバッファーを用いてポリペプチド及び一以上の変異体をイオン交換クロマトグラフィー材料に結合させ、ポリペプチド及び一以上の混入物が別個の独立した実体としてクロマトグラフィー材料から溶出するように溶出バッファーのイオン強度がイオン強度勾配によって変更される溶出バッファーを用いてイオン交換カラムからポリペプチド及び一以上の混入物を溶出させることを含む。次いで、クロマトグラフィーの溶出物は、親ポリペプチドに関して、及び変異体の有無に関して分析される。ポリペプチドの変異体は、ポリペプチドの酸性変異体及び親ポリペプチドの塩基性変異体を含んでもよい。酸性変異体、即ち親ポリペプチドのpIより小さいpIを有する変異体の例は、一若しくは複数のグルタミン及び/又はアスパラギン残基が脱アミド化されているポリペプチドを含むが、これらに限定されない。塩基性変異体、即ち親ポリペプチドのpIより大きいpIを有する変異体の例は、アスパラギン残基がスクシンイミド部分に修飾を受けている変異体を含むが、これらに限定されない。幾つかの実施態様において、ポリペプチドは、約6.0から約9,5の範囲のpIを有する。幾つかの実施態様において、ポリペプチドは、約6.0から約9,5の範囲のpIを有する抗体である。
幾つかの態様において、本発明は、ポリペプチドを含む組成物中のポリペプチドの純度を決定する方法を提供する。幾つかの実施態様において、組成物中のポリペプチドの純度は、上記のように最適化されたイオン交換クロマトグラフィーの分離条件を用いて分析される。幾つかの実施態様において、組成物中のポリペプチドの純度は、バッファーが上記のように最適化されているイオン交換クロマトグラフィーを用いて分析される。幾つかの実施態様において、組成物中のポリペプチドの純度は、分離条件及びバッファーが上記のように最適化されるイオン交換クロマトグラフィーを用いて分析される。幾つかの実施態様において、イオン交換クロマトグラフィーの分離条件及び/又はバッファーは、複数のポリペプチドに対して、例えば、一以上の標的ポリペプチド(例えば、一以上の抗体)に対して共通のdIP/dTを同定することにより最適化される。方法は、初期イオン強度を有するローディングバッファーを用いてポリペプチド及び一以上の混入物をイオン交換クロマトグラフィー材料に結合させ、ポリペプチド及び一以上の混入物が別個の独立した実体としてクロマトグラフィー材料から溶出するように溶出バッファーのイオン強度がイオン強度勾配によって変更される溶出バッファーを用いてイオン交換カラムからポリペプチド及び一以上の混入物を溶出させることを含む。ポリペプチドの純度は、クロマトグラフィー材料から溶出するポリペプチドの量の、クロマトグラフィー材料から溶出する混入物、例えば電荷変異体の総量に対する比率を決定することによって評価することができる。幾つかの実施態様において、ポリペプチドは、約6.0から約9,5の範囲のpIを有する。幾つかの実施態様において、ポリペプチドは、約6.0から約9,5の範囲のpIを有する抗体である。
幾つかの態様において、本発明は、ポリペプチドを含む組成物中のポリペプチドの安定性を決定するための方法を提供する。幾つかの実施態様において、組成物中のポリペプチドの安定性は、分離条件が上記のように最適化されるイオン交換クロマトグラフィーを用いて決定される。幾つかの実施態様において、組成物中のポリペプチドの安定性は、バッファーが上記のように最適化されているイオン交換クロマトグラフィーを用いて決定される。幾つかの実施態様において、組成物中のポリペプチドの安定性は、分離条件及びバッファーが上記のように最適化されるイオン交換クロマトグラフィーを用いて決定される。幾つかの実施態様において、イオン交換クロマトグラフィーの分離条件及び/又はバッファーは、複数のポリペプチドに対して、例えば、一以上の標的ポリペプチド(例えば、一以上の抗体)に対して共通のdIP/dTを同定することにより最適化される。幾つかの実施態様において、ポリペプチドを含む組成物のサンプルは経時的に分析される。幾つかの実施態様において、組成物は、分析の前に様々な時点でインキュベートされる。幾つかの実施態様において、組成物は、分析前に約0℃、20℃、37℃又は40℃の何れか一つよりも高温でインキュベートされる。幾つかの実施態様において、組成物は、分析前に1日間、2日間、3日間、5日間、1週間、2週間、3週間、4週間、6週間、2か月間、3か月間、6か月間、1年間の一又は複数でインキュベートされる。次いで組成物は、初期イオン強度を有するローディングバッファーを用いてポリペプチド及び一以上の混入物をイオン交換クロマトグラフィー材料に結合させ、ポリペプチド及び一以上の混入物が別個の独立した実体としてクロマトグラフィー材料から溶出するように溶出バッファーのイオン強度がイオン強度勾配によって変更される溶出バッファーを用いてイオン交換カラムからポリペプチド及び一以上の混入物を溶出させることにより分析される。ポリペプチド対混入物の比率における変化は、組成物中のポリペプチドの安定性を示す。例えば、ポリペプチド対混入物の比率が経時的に変化しない場合、ポリペプチドは安定していると考えられてもよいのに対し、組成物中のポリペプチドの量における混入物減少を有する混入物の高速蓄積は、組成物中のポリペプチドはより不安定であることを示す。幾つかの実施態様において、組成物中のポリペプチドの安定性は、分離条件が上記のように最適化されるイオン交換クロマトグラフィーを用いて分析される。幾つかの実施態様において、組成物中のポリペプチドの安定性は、バッファーが上記のように最適化されているイオン交換クロマトグラフィーを用いて分析される。幾つかの実施態様において、組成物中のポリペプチドの安定性は、分離条件及びバッファーが上記のように最適化されるイオン交換クロマトグラフィーを用いて分析される。幾つかの実施態様において、イオン交換クロマトグラフィーの分離条件及び/又はバッファーは、複数のポリペプチドに対して、例えば、一以上の標的ポリペプチド(例えば、一以上の抗体)に対して共通のdIP/dTを同定することにより最適化される。幾つかの実施態様において、ポリペプチドは、約6.0から約9,5の範囲のpIを有する。幾つかの実施態様において、ポリペプチドは、約6.0から約9,5の範囲のpIを有する抗体である。ポリペプチドの例としては、限定されないが、抗体及び抗体断片を含む。
幾つかの実施態様において、本発明は、ポリペプチド及び一以上の混入物を含有する組成物から抗体などのポリペプチドを精製する方法を提供する。方法は、クロマトグラフィーの分離条件を最適化することを含む。幾つかの実施態様において、ポリペプチドは、バッファーが上記のように最適化されたクロマトグラフィーを用いて精製される。幾つかの実施態様において、ポリペプチドは、分離条件及びバッファーが上記のように最適化されるクロマトグラフィーを用いて精製される。幾つかの実施態様において、クロマトグラフィーの分離条件及び/又はバッファーは、複数のポリペプチドに対して、例えば、一以上の標的ポリペプチド(例えば、一以上の抗体)に対して共通のdIP/dTを同定することにより最適化される。幾つかの実施態様において、クロマトグラフィーは、イオン交換クロマトグラフィー;例えば陽オン交換クロマトグラフィー又は陰イオン交換クロマトグラフィーである。幾つかの実施態様において、クロマトグラフィーは混合モードクロマトグラフィーである。
ポリペプチドが、本明細書に記載されるように分離条件が最適化されたイオン交換クロマトグラフィーの方法の何れかで使用のために提供される。本発明の幾つかの実施態様において、ポリペプチドの組成物は、イオン交換クロマトグラフィーにより分析される。かかる方法は、組成物中のポリペプチドの電荷変異体を同定するのに有用である。幾つかの実施態様において、ポリペプチドは抗体又はその断片である。幾つかの実施態様において、ポリペプチドは、約6.0から約9,5の範囲のpIを有する。幾つかの実施態様において、ポリペプチドは、約6.0から約9,5の範囲のpIを有する抗体である。幾つかの実施態様において、ポリペプチドの電荷対pHの曲線における変曲点(IP)が、本発明の方法により提供される。幾つかの実施態様において、温度の変化によるIPの変化(dIP/dT)が本発明の方法により提供される。
幾つかの実施態様において、抗体はモノクローナル抗体である。モノクローナル抗体は、実質的に均一な抗体の集団から得られ、即ち、モノクローナル抗体の産生中に生じ得る変異体(通常少量で存在する変異体など)を除き、集団を構成する個々の抗体は同一であり、及び/又は同じエピトープに結合する。したがって、修飾語「モノクローナル」は、個別抗体又はポリクローナル抗体の混合物ではないという抗体の性質を示す。
幾つかの実施態様において、抗体はヒト化抗体である。非ヒト抗体をヒト化する方法は、当該技術分野で記載されている。幾つかの実施態様において、ヒト化抗体は、非ヒトであるソースから導入された一又は複数のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしば「インポート」残基と呼ばれ、典型的には「インポート」可変ドメインから取得される。ヒト化は、基本的には、Winter and co-workers (Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science 239:1534-1536 (1988))の方法に従って、超可変領域の配列をヒト抗体の対応する配列と置換することにより、実施され得る。したがって、そのような「ヒト化」抗体は、インタクトなヒト可変ドメインより実質的に少ないドメインが、非ヒト種由来の対応する配列により置換されている、キメラ抗体(米国特許第4816567号)である。実際には、ヒト化抗体は、典型的には、いくつかの超可変領域残基及び可能であればいくつかのFR残基が齧歯動物抗体における相似部位由来の残基により置換されているヒト抗体である。
幾つかの実施態様において、抗体はヒト抗体である。ヒト化の代替策として、ヒト抗体が生成され得る。例えば、免疫化の際に、内因性の免疫グロブリンが産生されなくてもヒト抗体の完全なレパートリーを産生する能力があるトランスジェニック動物(例えばマウス)を作製することが、現在可能である。例えば、キメラマウス及び生殖細胞系突然変異マウスにおいて、抗体の重鎖接合領域(JH)遺伝子のホモ接合性が欠失していると、内因性抗体産生は完全に阻害されることが記載されている。そのような生殖細胞系突然変異マウスにおいてヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子アレイを移入することにより、抗原による攻撃を行った際にヒト抗体が産生されるであろう。例えば、Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature 362:255-258 (1993); Bruggermann et al., Year in Immuno. 7:33 (1993);並びに米国特許第5591669号;第5589369号;及び第5545807号を参照のこと。
幾つかの実施態様において、抗体は抗体断片である。様々な技術が抗体断片の産生のために開発されてきた。従来、これらの断片は、インタクトな抗体のタンパク分解性消化を介して誘導された(例えば、Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992)及びBrennan et al., Science 229:81 (1985)を参照のこと)。しかしながら、これらの断片は、今では組換え宿主細胞により直接産生され得る。例えば、抗体断片は、前述の抗体ファージライブラリーから単離され得る。あるいは、Fab’−SH断片は、大腸菌から直接回収され、化学的に結合してF(ab’)2断片を形成し得る(Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992))。F(ab’)2断片は、別の方法によって、組換え宿主細胞培養物から直接単離され得る。抗体断片の産生のためのその他の技術は、当業者にとって明らかであろう。その他の実施態様において、抗体の選定は、一本鎖Fv断片(scFv)である。国際公開第93/16185号;米国特許第5571894号;及び米国特許第5587458号を参照のこと。抗体断片はまた、例えば、米国特許第5641870号に記載されるように「直線抗体」であってもよい。そのような直線抗体断片は、単一特異的であってよく、又は二重特異的であってもよい。
幾つかの実施態様において、抗体は二重特異的抗体である。二重特異性抗体は、少なくとも二つの異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗体である。例示的な二重特異性抗体は、二つの異なるエピトープに結合してもよい。あるいは、二重特異性抗体の結合アームは、白血球上のトリガー分子、例えばT細胞受容体分子(例えば、CD2若しくはCD3)、又は、IgGのFc受容体(FcγR)、例えばFcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)及びFcγRIII(CD16)と結合するアームと組み合わせて、細胞防御機構を細胞に集中させるようにしてもよい。二重特異性抗体は、完全長抗体又は抗体断片(例えばF(ab’)2二重特性抗体)として調製され得る。
幾つかの実施態様において、抗体は多価抗体である。多価抗体は、抗体が結合する対象である抗原を発現する細胞により、二価抗体より速く内部移行(及び/又は異化)してもよい。本明細書において提供される抗体は、三つ以上の抗原結合部位を有する多価抗体(IgMクラスの抗体以外である)であってもよく(例えば四価抗体)、そのような抗体は、抗体のポリペプチド鎖をコードしている核酸の組換え発現により、容易に産生され得る。多価抗体は、二量体化ドメイン及び三つ以上の抗原結合部位を含み得る。好ましい二量体化ドメインは、Fc領域又はヒンジ領域を含む(又は、それらからなる)。この場合、抗体は、一つのFc領域と、Fc領域のアミノ末端に三つ以上の抗原結合部位を含むであろう。本明細書における好ましい多価抗体は、三つから約八つ、ただし好ましくは四つの抗原結合部位を含む(又は、それらからなる)。多価抗体は、少なくとも一本のポリペプチド鎖(好ましくは二本のポリペプチド鎖)を含み、そのポリペプチド鎖(複数可)は、二つ以上の可変ドメインを含む。例えば、ポリペプチド鎖(複数可)は、VD1−(X1)n−VD2−(X2)n−Fc(ここで、VD1は、第1の可変ドメインであり、VD2は、第2の可変ドメインであり、Fcは、Fc領域の一方のポリペプチド鎖であり、X1及びX2は、アミノ酸又はポリペプチドを表し、nは、0又は1である)を含んでもよい。例えば、ポリペプチド鎖(複数可)は、VH−CH1−柔軟なリンカー−VH−CH1−Fc領域鎖、又はVH−CH1−VH−CH1−Fc領域鎖を含んでもよい。本明細書における多価抗体は、好ましくは、少なくとも二つ(好ましくは四つ)の軽鎖可変ドメインポリペプチドを更に含む。本明細書における多価抗体は、例えば、約二つから約八つの軽鎖可変ドメインポリペプチドを含んでもよい。ここで企図される軽鎖可変ドメインポリペプチドは、軽鎖可変ドメインを含み、場合により、CLドメインを更に含む。
本明細書において提供される抗体を改変することは、エフェクター機能、例えば、抗体の抗原依存性細胞媒介性細胞傷害性(ADCC)及び/又は補体依存性細胞傷害(CDC)を強化するためのエフェクター機能に関して、望ましい場合がある。これは、抗体のFc領域において一又は複数のアミノ酸置換基を導入することにより達成してもよい。代替的又は追加的に、システイン残基(複数可)をFc領域に導入して、それにより、この領域における鎖間ジスルフィド結合形成が可能になるようにしてもよい。このようにして生成されたホモ二量体型抗体は、内部移行の可能性が向上してもよく、及び/又は、補体媒介性細胞殺傷及び抗体依存性細胞性細胞毒性(ADCC)が増加していてもよい。Caron et al., J. Exp Med. 176:1191-1195 (1992)及びShopes, B. J., Immunol. 148:2918-2922 (1992)を参照のこと。抗腫瘍活性が強化されているホモ二量体型抗体は、Wolff et al., Cancer Research 53:2560-2565 (1993)に記載されているように、ヘテロ二官能性の架橋剤を使用して調製されてもよい。あるいは、二つのFc領域を有しており、それにより補体媒介性溶解及びADCCの能力が強化されていてもよい抗体は工学操作され得る。Stevenson et al., Anti-Cancer Drug Design 3:219-230 (1989)を参照のこと。
本明細書に記載されているポリペプチド(抗体を含む)のアミノ酸配列改変体(複数可)は、本明細書に記載されているポリペプチド(例えば、抗体)を精製する方法において使用してもよい。
「ポリペプチド変異体」は、本明細書において定義するポリペプチド、好ましくは活性のあるポリペプチドであり、完全長天然配列のポリペプチド、シグナルペプチドが欠如しているポリペプチド配列、ポリペプチドの細胞外ドメイン(シグナルペプチドの有無を問わない)と、少なくとも約80%のアミノ酸配列同一性を有するものを意味する。そのようなポリペプチド変異体は、例えば、完全長天然アミノ酸配列のN又はC末端で一又は複数のアミノ酸残基が付加され又は欠失しているポリペプチドを含む。通常、TATポリペプチド変異体は、完全長天然配列ポリペプチドの配列、シグナルペプチドが欠如しているポリペプチド配列、ポリペプチドの細胞外ドメイン(シグナルペプチドの有無を問わない)と、少なくとも約80%のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約85%、90%、95%、96%、97%、98%、又は99%の何れかのアミノ酸配列同一性を有するであろう。場合により、変異体ポリペプチドは、天然ポリペプチド配列と比較して一以下の保存的なアミノ酸置換、あるいは、天然ポリペプチド配列と比較して、約2、3、4、5、6、7、8、9、又は10の何れか以下の保存的なアミノ酸置換を有するであろう。
(1)非極性:Ala(A)、Val(V)、Leu(L)、Ile(I)、Pro(P)、Phe(F)、Trp(W)、Met(M)
(2)非電荷極性:Gly(G)、Ser(S)、Thr(T)、Cys(C)、Tyr(Y)、Asn(N)、Gln(Q)
(3)酸性:Asp(D)、Glu(E)
(4)塩基性:Lys(K)、Arg(R)、His(H)
(1)疎水性:ノルロイシン、Met、Ala、Val、Leu、Ile
(2)中性の親水性:Cys、Ser、Thr、Asn、Gln
(3)酸性:Asp、Glu;
(4)塩基性:His、Lys、Arg
(5)鎖配向に影響する残基:Gly、Pro
(6)芳香族:Trp、Tyr、Phe
本明細書に記載されているポリペプチドは、別の異種ポリペプチド又はアミノ酸配列と融合されるポリペプチドを含むキメラ分子を形成する方式で改変されてもよい。幾つかの実施態様において、キメラ分子は、ポリペプチドと、抗タグ抗体が選択的に結合することができるエピトープをもたらすタグポリペプチドとの融合を含む。エピトープタグは、一般に、ポリペプチドのアミノ又はカルボキシル末端に配置される。そのようなエピトープタグが付加された形態のポリペプチドの存在は、タグポリペプチドに対する抗体を使用して検出され得る。また、エピトープタグがもたらされることで、抗タグ抗体、又は、エピトープタグと結合する別のタイプの親和性マトリックスを使用したアフィニティー精製により、ポリペプチドを容易に精製することができるようになる。
ポリペプチド製剤において使用するためのポリペプチドは、細胞傷害剤、例えば化学療法剤、成長阻害剤、毒素(例えば、細菌、真菌、植物、若しくは動物起源の酵素活性毒素、又はそれらの断片)、又は放射性同位元素(即ち、ラジオコンジュゲート)とコンジュゲートしてもよい。
ポリペプチドの、別のタイプの共有結合性改変は、ポリペプチドを、様々な非タンパク質ポリマーの一つ、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、又は、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのコポリマーと連結させることを含む。ポリペプチドは、例えば、コアセルベーション技術又は界面重合法によって、例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ(メチルメタシレート)マイクロカプセル)、コロイド薬物送達系(例えばリポソーム、アルブミンミクロスフィア、ミクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル)又はマクロ・エマルジョンなどの調製されたマイクロカプセルに封入されてもよい。このような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, Gennaro, A.R., Ed., (1990)に開示される。
本明細書に記載されている精製方法において使用されるポリペプチドは、組換え法を含め、当該技術分野において公知の方法を使用して入手し得る。次の項では、これらの方法に関する手引きを提供する。
「ポリヌクレオチド」又は「核酸」は、本明細書においては互換的に使用され、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、その例としてはDNA及びRNAが挙げられる。
各ポリペプチド組成物に対して、該方法が、a)ローディングバッファーが約40℃でpHが約7.6で10mMのHEPESバッファーを含み、ローディングバッファーを約1mL/分の流速で使用してイオン交換クロマトグラフィー材料にポリペプチド及び一以上の荷電変異体を結合させること;b)溶出バッファーがpHが約7.6で約10mMのHEPESバッファー及びNaClを含み、NaClの濃度が約40分で約0mMから約80mMまで勾配で増加し、ポリペプチド及びその荷電変異体が勾配により分離される溶出バッファーの勾配を用いてイオン交換クロマトグラフィー材料からポリペプチド及び荷電変異体混入物を溶出させること;及びc)ポリペプチド及び一以上の荷電変異体を検出することを含む、方法。
別段の注記がない限り、以下の物質及び方法が実施例で使用された。
材料
安定したチャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞株又は大腸菌細胞を使用して、全てのmAbを製造した。
陽イオン交換クロマトグラフィー実験を、主にWaters 2796 BioAlliance液体クロマトグラフィー機器、Agilient 1200SL HPLCシステム又はUltiMate 3000 Quaternary Rapid Separation LC(Thermo Scientific Dionex)上で実施した。機器には、低圧四元勾配ポンプ又はバイナリポンプ、温度調節能力を有するオートサンプラー、正確な温度調節のための熱カラムコンパートメント、及び二波長ダイオードアレイUV検出器が含まれた。Dionex Chromeleonソフトウェア、バージョン6.8を用いて、機器制御、データ収集及びデータ分析を実施した。
電荷変異型などの混入物を検出するために、高分解能かつ堅牢な多生成物IECを開発するため、mAbが電荷平衡であるような条件を設計した。電荷平衡は、正味電荷状態(z)対pHをグラフ化することにより、多数のmAbについて決定された。mAbが平衡である条件は、pHに対するzの直線の方程式の二次導関数を0に等しく設定することによって解かれた。
リン酸塩:−0.0028
HEPES:−0.014
ACES:−0.02
トリス:−0.028
ビシン:−0.018
トリシン:−0.021
TAPS:−0.02
CHES:−0.018
Benyon, RJ & Easterby, JS, Buffer Solutions The Basics, IRL Press, 1996を参照。
変曲点並びにACES及びHEPESについてのdpKa/dTの値と多数のmAbに対して決定されたdIP/dTの値との関係を考慮して、多生成物IECプロトコルが開発された。19のmAbが試験された。mAbサンプルは、バッファーAで1mg/mLに希釈され、オートサンプラーに5±3℃で保持された。MabPac SCX−10、4×250mmカラムが、温度設定37±1℃でカラムコンパートメントに配置された。各クロマトグラフィーの実行のために、タンパク質(20μg)の10μLが注入された。バッファーAは、37℃で5mMのACES(pH7.5)であった。バッファーBはバッファーA中に180mMのNaClである。勾配はバッファーBをバッファーA中に混合することにより、100分間、1mM/分で0〜100mMのNaClであった。流速は0.8mL/分であった。タンパク質は280nmでの吸光度によって検出された。図12に示されるように、多生成物IECは、広範囲のmAb生成物に対して良好な分解能を与えた。
多生成物IECのpH堅牢性は、勾配が1.5mMのNaCl/分であり、かつ3つの異なるpH値、pH7.3、pH7.5及びpH7.7であることを除いて、実施例2に記載の方法を用いて調べられた。mAb4が、この研究のための非限定的な例示的抗体として用いられた。
ここでRは分解能であり
Tr1及びTr2は、二つの直接隣接するピークの保持時間であり
w1及びw2は、2つの直接隣接するピークのピーク幅がある。
多生成物IECの温度堅牢性は、勾配が1.5mMのNaCl/分であり、かつ3つの異なる温度、32℃、37℃、及び42℃であることを除いて、実施例2に記載の方法を用いて調べられた。mAb2、mAb6及びmAb 10が、この研究のための非限定的な例示的抗体として用いられた。
多生成物IECが、mAb8、mAb25及びmAb26に対して開発された生成物特異的IECと比較された。mAb8、mAb28及びmAb26のIECが、勾配が1.5mMのNaCl/分であるのを除き実施例2に記載される多生成物IEC法を使用して実施された[Genentech−確認して下さい]。生成物特異的な方法に対するバッファー及び温度は異なっていた。mAb8については30℃で20mMのMES(pH6.5):mAb25については42℃で20mMのHEPES(pH7.6):及びmAb26については40℃で20mMのACES(pH7.1)であった。図16に見られるように、多生成物IEC(左のパネル)が、同様に又は生成物特異的IEC法(右のパネル)よりも良好な分解能で実施された。
多生成物IECがクロマトグラフィーカラムの選択のために使用された。mAb8が、勾配が1.5mMのNaCl/分であるのを除き実施例2に記載される方法を使用して4つの異なる陽イオン交換カラムで試験された。試験されたカラムは、ProPac WCX−10、4×250、10μm;YMC、4.6×100、5μm;Antibodix NP5、4.6×250、5μm;及びMabPac SCX−10、4×250、10μmであった(実施例2で使用)。図17で見ることができるように、4つ全てのカラムは十分な分解能を生じた。ピーク面積の定量化及び主ピークとの酸性ピーク及び塩基性ピーク間の分解能が表7に示される。
異なるサイズの陽イオン交換クロマトグラフィーカラムの使用が、多生成物IECにおける使用のために評価された。カラムの長さを減らすと実行時間が短くなることとなる。mAb8は、実施例2に記載される多生成物IEC法を使用して、3つの異なるサイズのProPac WCX−10カラム上でクロマトグラフィー処理された。カラムは異なるサイズであったので、クロマトグラフィーの実行は異なる時間に対してであった。カラムのサイズ及び各実行時間が以下の通りであった:63分に対して4×250mm、19分に対して4×100mm、15分に対して4×50mm。結果は図18に提示される。一部の分解能は短いカラムで失われるものの、一貫性のある定量的結果を伴う適切な分離が、ハイスループットアプリケーション用の短いカラムを用いて得られる。ピーク面積の定量化は一貫性があり、表8に示される。
実施例8. アッセイの堅牢性
試験手順の検証は適切に堅牢である方法が必要である。堅牢性を評価するための実験の設計(DoE)アプローチが、相互作用的な効果を含むアッセイ条件下における小さな変動の効果を総合的に評価する。各実験の特異的多変量条件は、相互作用の可能性のある因子を結び付けるために選択された。連続的に変化させることはできなかったが、効果を有することが知られている因子、すなわち、カラム(例えば、ロット間の変動性、年齢)及び装置(例えば、2つのモデルタイプ)は一時一事法により検討された。効果は、標的条件での応答の変動性を、要因計画に従って変動される条件での応答の変動性に対して比較することによって決定された。
以下は、プラットフォームメソッドコントロールアプローチのための組換えモノクローナル抗体タンパク質の電荷不均一性を監視するために使用されるイオン交換条件を説明している。本研究の目的は、実験の6要因プラケット・バーマン計画を用いたアッセイの堅牢性を調査することであった(表9及び10)。検討される因子は、溶媒のpH、終了の塩濃度、カラム温度、流速、注入量、及びバッファーのモル濃度であった。この研究のための応答変数は、主ピーク、酸性及び塩基性変異体の相対的な割合を含んでいた。合計21回の実行が、12回の実行が要因条件で、9回の実行が標的で行われた。
タンパク質又は抗体の薬物物質の荷電変異体を定量するために、臨床製品の製剤又は毒性物質はプラットフォームメソッドコントロール(PMC)アプローチを用いる。プラットフォームメソッドコントロールアプローチは、この多生成物陽イオン交換クロマトグラフィー法におけるシステム適合性の決定のためのメソッドコントロールとして代表的な抗体を利用する。多生成物の試験手順は、正の正味電荷を有するタンパク質分子に適用できる(およそpI>7.2で)。
1.1 HPLCシステム:調節可能なUV(TUV)を用いるWaters UPLC H−Class Bio;Waters 2487検出器を有するWaters Alliance 2695、及びWaters 2489 UV/Vis検出器又は装置を有するWaters Alliance e2695。
1.2 280nmでのモニタリングが可能なインラインUV検出器
1.3 HPLCは、セットポイント±2℃で温度を維持することができるカラムコンパートメントが含まれている必要がある。
1.4 電子積分器及びピーク面積積分が可能なコンピュータシステム。
1.5 2−8℃に冷却することが可能なオートサンプラー。
1.6 カラム:ThermoFisher MabPacR SCX−10、10μm、4 250mm(Thermo、製品番号074625)。
1.7 温度補償付きpHメーター。
1.8 37℃±2℃で加熱が可能な水槽。
1.9 水槽中への部分的な浸漬での使用のために指定された、1℃分割で較正された温度計
記:レシピは、試薬の名目上の量のためのものでり、アッセイの要件に応じて比例的に調整することができる。
2.1 HPLC分析に適した精製水(Super−Q又は同等物)
2.2 溶媒A:5mM HEPESバッファー、pH7.5±0.1
HEPES Free Acid、試薬グレード(FW 238.3,Corning CellGro;製品番号61−034−RO)、1.87g
HEPES Sodium Salt、試薬グレード(FW 260.3,SigmaAldrich;製品番号H3784)、1.87g
精製水 3Lにメスアップ
メスシリンダー中で約2900mLの精製水により記載されている化学物質を混合する。溶解するまで攪拌する。精製水で3LまでメスアップしpHを測定する。周囲温度でpHが7.5±0.1であることを確認する。pH値が指定された範囲外にある場合、破棄し、調製を繰り返す。0.2−μmの膜を通してろ過する。
2.3 溶媒B:溶媒A中100mMの塩化ナトリウム
塩化ナトリウム(FW 58.44 J.T.Bakerカタログ番号3624−01又は同等物)、5.844g
溶媒A(工程2.2)1Lにメスアップ
メスシリンダー中で約450mLの溶媒Aにより塩化ナトリウムを混合させて、溶解するまで撹拌する。溶媒Aで1Lにメスアップし、0.2−mの膜を通してろ過する。
2.4 溶媒C:溶媒A中1Mの塩化ナトリウム
塩化ナトリウム(FW 58.44 J.T.Bakerカタログ番号3624−01)、29.22g
溶媒A(工程2.2)、500mLにメスアップ
メスシリンダー中で約450mLの溶媒Aにより塩化ナトリウムを混合させて、溶解するまで撹拌する。溶媒Aで500mLにメスアップし、0.2−mの膜を通してろ過する。
2.5 カラムストレージソリューション:溶媒B中0.05%アジ化ナトリウム、pH7.5±0.1
注意:アジ化ナトリウムは非常に毒性でかつ変異原性である。粉塵の吸入を避け、皮膚との接触を避ける(それは容易に皮膚から吸収される)。
アジ化ナトリウム(FW 65.01,EM Science 0066884R又は同等物)、2.25g;溶媒B(工程2.2)、500mLにメスアップ
メスシリンダー中で約450mLの溶媒Bによりアジ化ナトリウムを混合させて、溶解するまで撹拌する。溶媒Bで500mLにメスアップし、0.22−mの膜を通してろ過する。
2.6 カラム及びシステムクリーニング液:0.1N 水酸化ナトリウム(JT Baker 5636−02)、以下の手順ごとに調製する:
1N NaOH 100μL
精製水 900μL
記載されている化学物質を混合し、よく混ぜる。
2.7 サンプル及び標準品の処方バッファー
2.8 10%ポリソルベート20ストック(w/v)
ポリソルベート20(ポリソルベートTM20,Sigma Cat.P7949又は同等物)10g、精製水、100mLにメスアップ。
ポリソルベート20を釣り合い重りメスシリンダー中に計量する。界面活性剤とシリンダーの首との接触を避ける。気泡の形成を回避しながら、注意深く精製水で100mLにメスアップする。シリンダー内に磁気撹拌棒を穏やかに下げる。全ての界面活性剤が溶解するまで15〜20分間溶液を撹拌する。
2.9 メソッドコントロール処方バッファー
MAb8処方バッファー:20mMヒスチジンHCl、120mMスクロース、0.02%ポリソルベート20、pH6.0±0.3
L−ヒスチジンHCl、一水和物(FW 209.6) 2.31g
L−ヒスチジン、遊離塩基(FW 155.2) 1.40g
スクロース(FW 342.3) 41.08g
ポリソルベート20 0.20g
又は10%ポリソルベート20(w/v)ストック溶液 2.0mL
精製水 1.0Lにメスアップ
約800mLの精製水に記載されている化学物質を混合させて、溶解するまで撹拌する。pHが6.0±0.3であることを確認する。pH値が指定された範囲外にある場合、破棄し、調製を繰り返す。溶液を精製水で1.0Lにメスアップする。0.45−mmp膜を通してろ過する。
2.10 5mg/mL カルボキシペプチダーゼB、DFP処理型(Roche 103233)又は同等物、およそ150U/mgの活性
2.11 1mg/mL CpB
5mg/mL カルボキシペプチダーゼB、DFP処理型 20μL
精製水 80μL
精製水中に5mg/mlのカルボキシペプチダーゼBを正確に追加する。5mg/mL以外の購入されたカルボキシペプチダーゼBの濃度について、容積への調整は1mg/mLの最終濃度を確保するようになされ得る。新しく調製する。
3.1 メソッドコントロール(MAb8)、名目濃度:50mg/mL
メソッドコントロールを溶媒A(工程2.2)で最終濃度がおよそ2.0mg/mLまで希釈する(例えば、50mg/mLのメソッドコントロールに対して、40μLのサンプル及び960μLの溶媒Aを混合する)。
3.2 メソッドコントロールブランク
メソッドコントロール処方バッファーを工程3.1に記載されるのと同一の希釈スキームを使用して溶媒Aで希釈する。
3.3 サンプル及び標準品の調製
サンプル及び標準品を溶媒Aで2mg/mLに希釈する。
3.3 サンプル及び標準品ブランクの調製
3.4.1 工程3.4と同一の希釈スキームを使用して生成物用の処方バッファーを希釈する。
3.5 データシート上に希釈を記録する。
3.6 CpB消化によるサンプル調製は、CpB消化の必要性について、生成物特異的情報及び指示を言及する。
3.6.1 希釈されたメソッドコントロール、サンプル、標準品及び処方バッファーブランクへの1mg/mLのCpB(工程2.12)の1%(w/w)添加を行う(例えば、2.0mg/mLのサンプルの1000Lへ1mg/mLのCpBの20Lを添加する)。
3.6.2 CpB処理されたメソッドコントロール、サンプル、標準品及び処方バッファーブランクを37℃±2℃で20±2分間穏やかに攪拌しインキュベートする。
3.6.3 データシート上に調製を記録する。
3.7 希釈されたメソッドコントロール、標準品、サンプル及び処方バッファーブランクを分析用に適当なバイアルに移す。
3.8 HPLC分析は、サンプル調製の48時間以内に完了しなければならない。サンプルは、分析前に2〜8℃で保管されなければならない。
4.1 両方のWatersのHPLC装置に共通のクロマトグラフィー条件:
4.1.1 流速:1.5mL/分
4.1.2 オートサンプラー温度:5±3℃
4.1.3 カラム温度:40±2°C
4.1.4 UV検出波長:280nm
4.1.5 注入量:25L(〜50g)
4.2 WatersのAqcuity H−class UPLC及び多波長又はダイオードアレイ検出器のための機器の設定
4.2.1 原点オフセットアナログアウトプット:5%
4.2.2 減衰アナログ出力:500mAU
4.2.3 洗浄設定:ニードル洗浄による注入(10%のIPA)
注入前 10s
注入後 20s
4.2.4 吸引及び分注速度:100μL/分
4.2.5 加速 2.0mL/分/0.02分(100mL/分/分)
4.2.6 検出器設定:
4.2.6.1 サンプリングレート:1pt/秒
4.2.6.2 フィルター:ハミング
4.2.6.3 時定数 1.0
4.2.6.4 比率最小 最小比率 0.00 最大比率 2.00
4.2.6.5 オートゼロ チャンネルA:(時間0及び時間50)
4.2.6.6 感度:2.000AUFS
4.3 Waters 2487を備えたWaters Alliance(e)2695 HPLCの機器設定
4.3.1 行程容積:100μL
4.3.2 ニードル洗浄時間:延長される(10% IPA)
4.3.3 溶媒脱気:「on」モードに設定
4.3.4 加速 10.0mL/分/0.1分(100mL/分/分)
4.3.5 吸引及び分注速度:低(50μL/分)
4.3.6 検出器設定:
4.3.6.1 サンプリングレート:1pt/秒
4.3.6.2 フィルター:ハミング
4.3.6.3 時定数 1.0
4.3.6.4 比率の最小 0.1000
4.3.6.5 オートゼロ 時間0及び時間50でチャンネルA
4.3.6.6 感度:2.000AU
4.4 勾配:
5.1 HPLCを使用するための適切なプロトコルに従う
5.2 10%IPAによるニードル洗浄線を含む、適切な溶媒の〜20mLによるプライムライン
6.1 以下の均一濃度プログラムを使用して、システム及びカラム洗浄を行う。0.1NのNaOH100μLを注入する。
6.2 工程6.1を少なくとも5回繰り返す。
6.3 工程6.1で均一濃度プログラムを使用して、溶媒Aの100μLの単回注入を行う。
6.4 工程4.4における勾配プログラムの初期条件で〜20分間、又は安定したベースラインが観察されるまでカラムを平衡化する(1.5mL/分で100%溶媒A)。
7.1 調整:一貫性のあるクロマトグラムが最低2回の注入に対して観察されるまでCpB消化せずにメソッドコントロールを注入する。酸性領域、メインピーク及び塩基性領域の分解能は、典型的なクロマトグラムと目視で一致していなければならない。
7.2 CpB消化をしないプラットフォームメソッドコントロール(単回注入)
7.3 メソッドコントロールのための処方バッファーブランク
7.4 標準品* (単回注入)
7.5 サンプル(複数)* (重複注入)
7.6 標準品* (単回注入)
7.7 標準品(複数)のための処方バッファーブランク(複数)(単回注入)
7.8 CpB消化をしないプラットフォームメソッドコントロール(単回注入)
*生成物が保証される場合、CpBの有無にかかわらない。
記:1)処方バッファーが標準品によって異なる場合、標準品とサンプル用に別のブランクを注入する。
2)メソッドコントロールが必要とされている間に、15以上の注入の場合(標準品と各生成物処方バッファーブランク製剤バッファーブランクを含む)、メソッドコントロール注入による15回の注入ごとにひとまとめにする。試験データシートのシステム適合性セクションでは、報告されているサンプルをひとまとめにするメソッドコントロール注入のみ報告する。
3)標準品はサンプルとみなされ、試験セッションのシステム適合性を評価するために使用されない。
カラムストレージソリューション(工程2.4)の少なくとも30mLでカラムを洗浄することにより、カラムを格納する。
記:メソッドコントロールのため、メソッドコントロール処方バッファーをブランクとメソッドコントロールプロファイルを重ねることによって、積分エンドポイントを決定する。重ねプロファイルを展開し、メソッドコントロールプロファイルにブランクを比較することにより、積分エンドポイントを同定する。
9.1 タンパク質に起因する全てのピークを積分する。メソッドコントロール処方バッファーブランククロマトグラム中に存在する任意のピークは、ブランクにおける対応するピークが、PMCにおけるピークの<1%である場合を除き、含めない。
9.2 ひとまとめにするメソッドコントロール注入のクロマトグラムプロファイルの、お互いに及び典型的なクロマトグラフィープロファイルとの整合性を視覚的に確認する。典型的なクロマトグラムにおける全ての命名されたピークが存在している必要がある。
記:命名されたピークのプロファイルは、カラム及び機器の変動性に起因して、例のプロファイルからピーク形状が多少異なる場合がある。
9.3 各ひとまとめにするメソッドコントロール注入について主ピーク、酸性領域及び塩基性領域の割合を計算する。
9.4 システム適合性の範囲
9.5 システム適合性データシートに結果を記録する。
10.1 サンプル及び標準品のクロマトグラムの両方においてピークを同定するためにプロファイルを視覚的に比較する。
10.2 タンパク質に起因する全てのピークを積分する。生成物処方バッファーブランククロマトグラム中に存在する任意のピークは、ブランクにおける対応するピークが、PMCにおけるピークの<1%である場合を除き、含めない。
記:積分エンドポイントを決定するために、サンプル及び標準品プロファイルを生成物処方バッファーブランクと重ね合わせる。重ねプロファイルを展開し、生成物処方バッファーブランクをサンプル及び標準品プロファイルと比較することにより、積分エンドポイントを同定する。
10.3 主ピークのピーク面積、酸性領域及び塩基性領域の割合を計算するために各サンプル及び標準品注入を分析する。
Claims (86)
- 複数の組成物を分析するために最適なイオン交換クロマトグラフィーの分離条件を同定するための方法であって、各組成物が一以上の混入物を有するポリペプチドを含み、該方法が、
a)組成物の二以上のポリペプチドのアミノ酸組成に基づいて、選択された温度での正味電荷対pHの曲線をプロットすること、及び
b)工程a)のプロットの二次導関数を決定することにより中性pHで又はその近傍での正味電荷対pHの曲線の変曲点を決定することを含み;
最適なイオン交換クロマトグラフィーの分離条件が、一以上の組成物のポリペプチドについてほぼ共通の変曲点でのpHである、方法。 - 変曲点での正味電荷が正である場合、陽イオン交換材料がイオン交換クロマトグラフィーのために使用される、請求項1に記載の方法。
- 陽イオン交換クロマトグラフィー材料が、スルホン化クロマトグラフィー材料又はカルボキシル化クロマトグラフィー材料である、請求項2に記載の方法。
- 変曲点での正味電荷が負である場合、陰イオン交換材料がイオン交換クロマトグラフィーのために使用される、請求項1に記載の方法。
- 陰イオン交換クロマトグラフィー材料が、第四級アミンのクロマトグラフィー材料又は第三級アミンクロマトグラフィー材料である、請求項4に記載の方法。
- 混合モードクロマトグラフィー材料が、クロマトグラフィーのために使用される、請求項1に記載の方法。
- 混合モードイオン交換材料が、スルホン化クロマトグラフィー材料又はカルボキシル化クロマトグラフィー材料及び第四級アミンのクロマトグラフィー材料又は第三級アミンクロマトグラフィー材料を順次充填した混合物である、請求項6に記載の方法。
- c)組成物の二以上のポリペプチドについて温度変化による正味電荷対pH曲線の変曲点のpHの変化(dIP/dT)を決定すること、
d)温度変化によるバッファーの酸解離定数の変化(dpKa/dT)がポリペプチドのdIP/dTと本質的に同じである、クロマトグラフィーに使用のためのバッファーを選択することを更に含む、請求項1から7の何れか一項に記載の方法。 - バッファーが、変曲点のpHで効果的な緩衝能を提供する、請求項8に記載の方法。
- 一以上の組成物のポリペプチドのdIP/dTが、約−0.02pH単位である、請求項1から9の何れか一項に記載の方法。
- 温度変化が、約20℃から約70℃である、請求項1から10の何れか一項に記載の方法。
- 温度変化が、約20℃から約50℃である、請求項1から11の何れか一項に記載の方法。
- dpKa/dT=dIP/dT±50%である、請求項8から12の何れか一項に記載の方法。
- 工程d)で選択されたバッファー中のポリペプチドの正味電荷が、30℃を超えて0.5未満変化する、請求項8から13の何れか一項に記載の方法。
- 工程d)で選択されたバッファーが、約5mMから約250mMの範囲の濃度でクロマトグラフィーに使用される、請求項8から14の何れか一項に記載の方法。
- バッファー組成物が更に塩を含む、請求項1から15の何れか一項に記載の方法。
- 塩が、NaCl、KCl、(NH4)2SO4、又はNa2SO4である、請求項16に記載の方法。
- 塩の濃度が、約1mMから約1Mの範囲である、請求項16又は17に記載の方法。
- ポリペプチドが、抗体若しくはイムノアドヘシン又はその断片である、請求項1から18の何れか一項に記載の方法。
- ポリペプチドが、モノクローナル抗体又はその断片である、請求項1から19の何れか一項に記載の方法。
- 抗体が、ヒト抗体である、請求項19又は20に記載の方法。
- 抗体が、ヒト化抗体である、請求項19又は20に記載の方法。
- 抗体が、キメラ抗体である、請求項19又は20に記載の方法。
- 抗体が、抗体断片である、請求項19から23の何れか一項に記載の方法。
- 混入物が、ポリペプチドの変異体である、請求項1から14の何れか一項に記載の方法。
- 混入物が、ポリペプチドの分解生成物である、請求項1から25の何れか一項に記載の方法。
- 混入物が、ポリペプチドの電荷変異体である、請求項1から26の何れか一項に記載の方法。
- 一以上の混入物と共にポリペプチドを含む組成物を分析するために最適なイオン交換クロマトグラフィーの分離条件を同定するための方法であって、該方法は、
a)ポリペプチドのアミノ酸組成に基づいて、選択された温度での正味電荷対pHの曲線をプロットすること、及び
b)工程a)のプロットの二次導関数を決定することにより中性pHで又はその近傍での正味電荷対pHの曲線の変曲点を決定することを含み;
最適なイオン交換クロマトグラフィーの分離条件が、ポリペプチドについてほぼ変曲点でのpHである、方法。 - 変曲点での正味電荷が正である場合、陽イオン交換材料がイオン交換クロマトグラフィーのために使用される、請求項28に記載の方法。
- 陽イオン交換クロマトグラフィー材料が、スルホン化クロマトグラフィー材料又はカルボキシル化クロマトグラフィー材料である、請求項29に記載の方法。
- 変曲点での正味電荷が負である場合、陰イオン交換材料がクロマトグラフィーのために使用される、請求項28に記載の方法。
- 陰イオン交換クロマトグラフィー材料が、第四級アミンのクロマトグラフィー材料又は第三級アミンクロマトグラフィー材料である、請求項31に記載の方法。
- 混合モードクロマトグラフィー材料が、クロマトグラフィーのために使用される、請求項28に記載の方法。
- 混合モードイオン交換材料が、スルホン化クロマトグラフィー材料又はカルボキシル化クロマトグラフィー材料及び第四級アミンのクロマトグラフィー材料又は第三級アミンクロマトグラフィー材料を順次充填した混合物である、請求項33に記載の方法。
- c)ポリペプチドについて温度変化による正味電荷対pH曲線の変曲点のpHの変化(dIP/dT)を決定し、
d)温度変化によるバッファーの酸解離定数の変化(dpKa/dT)がポリペプチドのdIP/dTと本質的に同じである、クロマトグラフィーに使用のためのバッファーを選択することを更に含む、請求項28から34の何れか一項に記載の方法。 - バッファーが、変曲点のpHで効果的な緩衝能を提供する、請求項35に記載の方法。
- 一以上の組成物のポリペプチドのdIP/dTが、約−0.02pH単位である、請求項28から36の何れか一項に記載の方法。
- 温度変化が、約20℃から約70℃である、請求項28から37の何れか一項に記載の方法。
- 温度変化が、約20℃から約50℃である、請求項28から38の何れか一項に記載の方法。
- dIP/dT=dpKa/dT±50%である、請求項28から39の何れか一項に記載の方法。
- 工程d)で選択されたバッファー中のポリペプチドの正味電荷が、30℃を超えて0.5未満変化する、請求項28から40の何れか一項に記載の方法。
- 工程d)で選択されたバッファーが、約5mMから約50mMの範囲の濃度でクロマトグラフィーに使用される、請求項28から41の何れか一項に記載の方法。
- バッファー組成物が更に塩を含む、請求項28から42の何れか一項に記載の方法。
- 塩が、NaCl、KCl、(NH4)2SO4、又はNa2SO4である、請求項43に記載の方法。
- 塩の濃度が、約10mMから約1Mの範囲である、請求項43又は44に記載の方法。
- ポリペプチドが、抗体若しくはイムノアドヘシン又はその断片である、請求項28から45の何れか一項に記載の方法。
- ポリペプチドが、モノクローナル抗体又はその断片である、請求項28から46の何れか一項に記載の方法。
- 抗体が、ヒト抗体である、請求項46又は47に記載の方法。
- 抗体が、ヒト化抗体である、請求項46又は47に記載の方法。
- 抗体が、キメラ抗体である、請求項46又は47に記載の方法。
- 抗体が、抗体断片である、請求項38から50の何れか一項に記載の方法。
- 混入物が、ポリペプチドの変異体である、請求項28から51の何れか一項に記載の方法。
- 混入物が、ポリペプチドの分解生成物である、請求項28から52の何れか一項に記載の方法。
- 混入物が、ポリペプチドの電荷変異体である、請求項28から53の何れか一項に記載の方法。
- 組成物がポリペプチド及び一以上の混入物を含む組成物を分析するための方法であって、ここで、該方法は混入物からポリペプチドを効果的に分離し、該方法が、
a)請求項1の方法に従って、各組成物が標的ポリペプチド及び一以上の混入物を含有する複数の組成物についての最適pH及び温度のイオン交換分離条件を決定すること、
b)ローディングバッファーが請求項8から15の何れか一項に記載の方法によって同定されるバッファーを含むローディングバッファーを用いて、イオン交換クロマトグラフィー材料へ組成物からのポリペプチド及び一以上の混入物を結合させること;
c)溶出バッファーがバッファー及び塩を含み、塩の濃度が経時的に勾配で増加し、ポリペプチド及び一以上の混入物がその勾配によって分離される溶出バッファーの勾配を用いてイオン交換クロマトグラフィー材料からポリペプチド及び一以上の混入物を溶出させること;及び
d)ポリペプチド及び一以上の混入物を検出すること含む、方法。 - ポリペプチド及び一以上の混入物を含む組成物を分析するための方法であって、該方法は混入物からポリペプチドを効果的に分離し、該方法が、
a)ローディングバッファーがバッファーを含み、クロマトグラフィーのpH及び温度が、i)曲線が二以上の標的ポリペプチドのポリペプチドのアミノ酸組成に基づいている、選択された温度での正味電荷対pHの曲線をプロットし、ii)工程i)のプロットの二次導関数を決定することによって正味電荷対pHの曲線の変曲点を決定すること(ここで最適なイオン交換クロマトグラフィーの条件は、二以上の標的ポリペプチドについての共通の変曲点でのpHである)によって、複数の標的ポリペプチドに対して最適化される、ローディングバッファーを使用してイオン交換クロマトグラフィー材料にポリペプチド及び一以上の混入物を結合させること;
b)溶出バッファーがバッファー及び塩を含み、ポリペプチド及び一以上の混入物が勾配により分離される溶出バッファーの勾配を用いてイオン交換クロマトグラフィー材料からポリペプチド及び一以上の混入物を溶出させること;及び
c)ポリペプチド及び一以上の混入物を検出することを含む、方法。 - 選択される温度が大気温度である、請求項56に記載の方法。
- バッファーが、
a)二以上の標的ポリペプチドについて温度変化による正味電荷対pH曲線の変曲点のpHの変化(dIP/dT)を決定すること、
b)温度変化によるバッファーの酸解離定数の変化(dpKa/dT)が共通の変曲点を有する二以上の標的ポリペプチドのdIP/dTと本質的に同じであるバッファーを選択することによって同定される、請求項56又は57に記載の方法。 - バッファーが、変曲点のpHで効果的な緩衝能を提供する、請求項58に記載の方法。
- ポリペプチド及び一以上の混入物を含む組成物を分析するための方法であって、該方法は混入物からポリペプチドを効果的に分離し、該方法が、
a)ローディングバッファーがバッファーを含み、かつクロマトグラフィーのpH及び温度が複数の標的ポリペプチドに対して最適化されている、ローディングバッファーを使用してイオン交換クロマトグラフィー材料にポリペプチド及び一以上の混入物を結合させること;
b)溶出バッファーがバッファー及び塩を含み、溶出バッファーの勾配を用いてイオン交換クロマトグラフィー材料からポリペプチド及び一以上の混入物を溶出させること;及び
c)ポリペプチド及び一以上の混入物を検出することを含む、方法。 - バッファーが、N−(2−アセトアミド)−2−アミノエタンスルホン酸(ACES)又は4−(2−ヒドロキシエチル)−1−ピペラジンエタンスルホン酸(HEPES)である、請求項60に記載の方法。
- バッファーの濃度が、約5mMから約20mMの範囲である、請求項55から61の何れか一項に記載の方法。
- バッファーのpHが、約20℃から約70℃の温度範囲で約6.5から約8.5の範囲である、請求項55から62の何れか一項に記載の方法。
- バッファーのpHが、約20℃から約50℃の温度範囲で約6.5から約8.5の範囲である、請求項55から63の何れか一項に記載の方法。
- 変曲点でのバッファー及びポリペプチドのpHが、約22℃で約7.8、約37℃で約7.5、約50℃で約7.2である、請求項55から64の何れか一項に記載の方法。
- 塩勾配が、直線勾配である、請求項55から65の何れか一項に記載の方法。
- 塩勾配が、段階勾配である、請求項55から66の何れか一項に記載の方法。
- 塩勾配が、NaCl勾配、KCl勾配、(NH4)2SO4勾配又はNa2SO4勾配である、請求項55から67の何れか一項に記載の方法。
- 塩濃度が、約0mMから約1Mまで勾配で増加する、請求項55から68の何れか一項に記載の方法。
- 塩濃度が、約100分で約0mMから約100mMまで増加する、請求項69に記載の方法。
- 塩濃度が、約40分で約0mMから約80mMまで増加する、請求項69に記載の方法。
- ポリペプチドが、抗体若しくはイムノアドヘシン又はその断片である、請求項55から71の何れか一項に記載の方法。
- ポリペプチドが、モノクローナル抗体又はその断片である、請求項55から72の何れか一項に記載の方法。
- 抗体が、ヒト抗体である、請求項72又は73に記載の方法。
- 抗体が、ヒト化抗体である、請求項72又は73に記載の方法。
- 抗体が、キメラ抗体である、請求項72又は73に記載の方法。
- 抗体が、抗体断片である、請求項72から76の何れか一項に記載の方法。
- 混入物が、ポリペプチドの変異体である、請求項55から77の何れか一項に記載の方法。
- 混入物が、ポリペプチドの分解生成物である、請求項55から78の何れか一項に記載の方法。
- 混入物が、ポリペプチドの電荷変異体である、請求項55から79の何れか一項に記載の方法。
- クロマトグラフィー材料が、陽イオン交換クロマトグラフィー材料である、請求項55から80の何れか一項に記載の方法。
- 陽イオン交換クロマトグラフィー材料が、スルホン化クロマトグラフィー材料又はカルボキシル化クロマトグラフィー材料である、請求項81に記載の方法。
- 複数のポリペプチド組成物を分析するための方法であって、各ポリペプチド組成物がポリペプチド及びポリペプチドの一以上の電荷変異体を含み、該方法はポリペプチドをその電荷変異体から効果的に分離し;
各ポリペプチド組成物に対して、
a)ローディングバッファーが約40℃でpHが約7.6で10mMのHEPESバッファーを含み、ローディングバッファーを約1mL/分の流速で使用してイオン交換クロマトグラフィー材料にポリペプチド及び一以上の荷電変異体を結合させること;
b)溶出バッファーがpHが約7.6で約10mMのHEPESバッファー及びNaClを含み、NaClの濃度が約40分で約0mMから約80mMまで勾配で増加し、ポリペプチド及びその荷電変異体が勾配により分離される溶出バッファーの勾配を用いてイオン交換クロマトグラフィー材料からポリペプチド及び荷電変異体混入物を溶出させること;及び
c)ポリペプチド及び一以上の荷電変異体を検出することを含む、方法。 - 複数のポリペプチド組成物が異なるポリペプチドを含む、請求項83に記載の方法。
- 複数のポリペプチド組成物が異なるpIを有するポリペプチドを含む、請求項83又は84に記載の方法。
- ポリペプチド組成物が抗体組成物である、請求項83から85の何れか一項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201361845890P | 2013-07-12 | 2013-07-12 | |
US61/845,890 | 2013-07-12 | ||
PCT/US2014/046338 WO2015006686A1 (en) | 2013-07-12 | 2014-07-11 | Elucidation of ion exchange chromatography input optimization |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018242206A Division JP2019090818A (ja) | 2013-07-12 | 2018-12-26 | イオン交換クロマトグラフィーのインプットの最適化の解明 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2016529489A true JP2016529489A (ja) | 2016-09-23 |
JP2016529489A5 JP2016529489A5 (ja) | 2017-08-31 |
JP6462681B2 JP6462681B2 (ja) | 2019-01-30 |
Family
ID=51257626
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016525805A Active JP6462681B2 (ja) | 2013-07-12 | 2014-07-11 | イオン交換クロマトグラフィーのインプットの最適化の解明 |
JP2018242206A Pending JP2019090818A (ja) | 2013-07-12 | 2018-12-26 | イオン交換クロマトグラフィーのインプットの最適化の解明 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018242206A Pending JP2019090818A (ja) | 2013-07-12 | 2018-12-26 | イオン交換クロマトグラフィーのインプットの最適化の解明 |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US10274466B2 (ja) |
EP (2) | EP3019516B1 (ja) |
JP (2) | JP6462681B2 (ja) |
KR (1) | KR102251127B1 (ja) |
CN (1) | CN105377873B (ja) |
AU (1) | AU2014287044B2 (ja) |
BR (1) | BR112016000231A8 (ja) |
CA (1) | CA2918052A1 (ja) |
ES (1) | ES2705700T3 (ja) |
HK (1) | HK1222183A1 (ja) |
HR (1) | HRP20190071T1 (ja) |
IL (1) | IL243305B (ja) |
MX (1) | MX368107B (ja) |
PL (1) | PL3019516T3 (ja) |
RU (1) | RU2016104542A (ja) |
SG (1) | SG11201600221YA (ja) |
SI (1) | SI3019516T1 (ja) |
TR (1) | TR201818966T4 (ja) |
WO (1) | WO2015006686A1 (ja) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2015006686A1 (en) | 2013-07-12 | 2015-01-15 | Genentech, Inc. | Elucidation of ion exchange chromatography input optimization |
CN107110835B (zh) * | 2014-11-12 | 2019-07-26 | 通用电气健康护理生物科学股份公司 | 用于确定实验参数对液相色谱协议的影响的方法和系统 |
GB2539420B (en) * | 2015-06-16 | 2021-01-13 | Cytiva Sweden Ab | Determination of chromatography conditions |
KR20200139720A (ko) * | 2018-04-02 | 2020-12-14 | 암젠 인크 | 에레누맙 조성물 및 이의 용도 |
JP2021530247A (ja) * | 2018-07-05 | 2021-11-11 | オベーション ダイアグノスティクス エルエルシー | 癌の診断のためのBCl−2抗体とイムノアッセイ |
KR20200080748A (ko) * | 2018-12-27 | 2020-07-07 | 주식회사 폴루스 | 음이온 교환 크로마토그래피를 이용한 인슐린 전구체의 정제방법 |
Citations (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63263457A (ja) * | 1987-04-11 | 1988-10-31 | チバ‐ガイギー アクチェンゲゼルシャフト | 等電点電気泳動法及びそのための装置 |
JP2002529714A (ja) * | 1998-11-09 | 2002-09-10 | イルガム ナット | クロマトグラフィー分離法および選択吸着体 |
JP2005068161A (ja) * | 1999-04-05 | 2005-03-17 | Emisphere Technolgies Inc | 活性剤を送達するための二ナトリウム塩、一水和物、およびエタノール溶媒和物 |
JP2006087394A (ja) * | 2004-09-27 | 2006-04-06 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 核酸抽出方法および核酸抽出キット |
JP2007500852A (ja) * | 2003-05-16 | 2007-01-18 | クリオバイオフィジカ, インコーポレイテッド | 外部勾配クロマトフォーカシング |
JP2007536218A (ja) * | 2004-04-27 | 2007-12-13 | パーキンエルマー ラス インコーポレイテッド | 生物学的サンプル中のペプチドの改良された同定方法 |
JP2007538260A (ja) * | 2004-05-20 | 2007-12-27 | ウオーターズ・インベストメンツ・リミテツド | 混合物中のタンパク質を同定する方法および装置 |
JP2008503725A (ja) * | 2004-06-16 | 2008-02-07 | バイオ−ラッド・ラボラトリーズ・インコーポレーテッド | マルチケミストリ分画 |
JP2010504080A (ja) * | 2006-07-11 | 2010-02-12 | ピーシーアイ バイオテック エイエス | 光学的内部移行により細胞内にsiRNAを導入する方法 |
WO2011009623A1 (en) * | 2009-07-24 | 2011-01-27 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Optimizing the production of antibodies |
WO2012102104A1 (ja) * | 2011-01-24 | 2012-08-02 | シャープ株式会社 | 露光装置、液晶表示装置及びその製造方法 |
JP2012519706A (ja) * | 2009-03-06 | 2012-08-30 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗体製剤 |
WO2012129680A1 (en) * | 2011-03-31 | 2012-10-04 | Apotex Technologies Inc. | Prodrugs of d-gamma-glutamyl-d-tryptophan and d-gamma- glutamyl-l-tryptophan |
Family Cites Families (49)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2413974A1 (fr) | 1978-01-06 | 1979-08-03 | David Bernard | Sechoir pour feuilles imprimees par serigraphie |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US4666855A (en) * | 1985-07-31 | 1987-05-19 | Massachusetts Institute Of Technology | Rapid method for determining the isoelectric point for amphoteric molecules |
US4676980A (en) | 1985-09-23 | 1987-06-30 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Target specific cross-linked heteroantibodies |
US5567610A (en) | 1986-09-04 | 1996-10-22 | Bioinvent International Ab | Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor |
IL85035A0 (en) | 1987-01-08 | 1988-06-30 | Int Genetic Eng | Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same |
CA1338518C (en) | 1987-09-23 | 1996-08-13 | Joyce M. Zarling | Antibody heteroconjugates for the killing of hiv-infected cells |
GB8823869D0 (en) | 1988-10-12 | 1988-11-16 | Medical Res Council | Production of antibodies |
US5175384A (en) | 1988-12-05 | 1992-12-29 | Genpharm International | Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice |
DE3920358A1 (de) | 1989-06-22 | 1991-01-17 | Behringwerke Ag | Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung |
DE69029036T2 (de) | 1989-06-29 | 1997-05-22 | Medarex Inc | Bispezifische reagenzien für die aids-therapie |
US5208020A (en) | 1989-10-25 | 1993-05-04 | Immunogen Inc. | Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use |
US5229275A (en) | 1990-04-26 | 1993-07-20 | Akzo N.V. | In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies |
JPH06500011A (ja) | 1990-06-29 | 1994-01-06 | ラージ スケール バイオロジー コーポレイション | 形質転換された微生物によるメラニンの製造 |
US5571894A (en) | 1991-02-05 | 1996-11-05 | Ciba-Geigy Corporation | Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor |
EP0586505A1 (en) | 1991-05-14 | 1994-03-16 | Repligen Corporation | Heteroconjugate antibodies for treatment of hiv infection |
ES2206447T3 (es) | 1991-06-14 | 2004-05-16 | Genentech, Inc. | Anticuerpo humanizado para heregulina. |
IE922437A1 (en) | 1991-07-25 | 1993-01-27 | Idec Pharma Corp | Recombinant antibodies for human therapy |
US7018809B1 (en) | 1991-09-19 | 2006-03-28 | Genentech, Inc. | Expression of functional antibody fragments |
ES2136092T3 (es) | 1991-09-23 | 1999-11-16 | Medical Res Council | Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados. |
US5587458A (en) | 1991-10-07 | 1996-12-24 | Aronex Pharmaceuticals, Inc. | Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof |
WO1993008829A1 (en) | 1991-11-04 | 1993-05-13 | The Regents Of The University Of California | Compositions that mediate killing of hiv-infected cells |
JPH07501451A (ja) | 1991-11-25 | 1995-02-16 | エンゾン・インコーポレイテッド | 多価抗原結合タンパク質 |
AU675929B2 (en) | 1992-02-06 | 1997-02-27 | Curis, Inc. | Biosynthetic binding protein for cancer marker |
ATE244763T1 (de) | 1992-02-11 | 2003-07-15 | Cell Genesys Inc | Erzielen von homozygotem durch zielgerichtete genetische ereignisse |
US5573905A (en) | 1992-03-30 | 1996-11-12 | The Scripps Research Institute | Encoded combinatorial chemical libraries |
ATE149570T1 (de) | 1992-08-17 | 1997-03-15 | Genentech Inc | Bispezifische immunoadhesine |
CA2149329C (en) | 1992-11-13 | 2008-07-15 | Darrell R. Anderson | Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human b lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of b cell lymphoma |
US5534615A (en) | 1994-04-25 | 1996-07-09 | Genentech, Inc. | Cardiac hypertrophy factor and uses therefor |
US5789199A (en) | 1994-11-03 | 1998-08-04 | Genentech, Inc. | Process for bacterial production of polypeptides |
US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
US5840523A (en) | 1995-03-01 | 1998-11-24 | Genetech, Inc. | Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides |
US5641870A (en) | 1995-04-20 | 1997-06-24 | Genentech, Inc. | Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification |
US5712374A (en) | 1995-06-07 | 1998-01-27 | American Cyanamid Company | Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates |
ATE321066T1 (de) | 1998-05-06 | 2006-04-15 | Genentech Inc | Anti-her2 antikörperzusammensetzung |
IL127127A0 (en) | 1998-11-18 | 1999-09-22 | Peptor Ltd | Small functional units of antibody heavy chain variable regions |
US6451987B1 (en) * | 1999-03-15 | 2002-09-17 | Novo Nordisk A/S | Ion exchange chromatography of proteins and peptides |
CA2447832C (en) | 2000-12-22 | 2012-09-25 | Jamshid Tanha | Phage display libraries of human vh fragments |
JP2005289809A (ja) | 2001-10-24 | 2005-10-20 | Vlaams Interuniversitair Inst Voor Biotechnologie Vzw (Vib Vzw) | 突然変異重鎖抗体 |
ES2629602T5 (es) | 2002-09-11 | 2021-06-08 | Genentech Inc | Purificación de proteínas |
PT1639011E (pt) | 2003-06-30 | 2009-01-20 | Domantis Ltd | Anticorpos (dab) de domínio único peguilados |
CA2577133A1 (en) | 2004-08-19 | 2006-03-23 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
WO2006024497A1 (en) * | 2004-08-30 | 2006-03-09 | Lonza Biologics Plc. | Affinity- plus ion exchange- chromatography for purifying antibodies |
EP1791565B1 (en) | 2004-09-23 | 2016-04-20 | Genentech, Inc. | Cysteine engineered antibodies and conjugates |
JP2010089001A (ja) * | 2008-10-07 | 2010-04-22 | Japan Organo Co Ltd | クロマト分離方法 |
US9428548B2 (en) * | 2009-09-01 | 2016-08-30 | Genentech, Inc. | Enhanced protein purification through a modified protein A elution |
JP2013530406A (ja) * | 2010-07-09 | 2013-07-25 | ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・アクチボラグ | クロマトグラフィー方法及びそれに使用される媒体 |
CN105051528A (zh) | 2012-11-15 | 2015-11-11 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 离子强度介导的pH梯度离子交换色谱 |
WO2015006686A1 (en) | 2013-07-12 | 2015-01-15 | Genentech, Inc. | Elucidation of ion exchange chromatography input optimization |
-
2014
- 2014-07-11 WO PCT/US2014/046338 patent/WO2015006686A1/en active Application Filing
- 2014-07-11 TR TR2018/18966T patent/TR201818966T4/tr unknown
- 2014-07-11 KR KR1020167003178A patent/KR102251127B1/ko active IP Right Grant
- 2014-07-11 JP JP2016525805A patent/JP6462681B2/ja active Active
- 2014-07-11 BR BR112016000231A patent/BR112016000231A8/pt active Search and Examination
- 2014-07-11 MX MX2016000181A patent/MX368107B/es active IP Right Grant
- 2014-07-11 SG SG11201600221YA patent/SG11201600221YA/en unknown
- 2014-07-11 CN CN201480039460.3A patent/CN105377873B/zh active Active
- 2014-07-11 RU RU2016104542A patent/RU2016104542A/ru not_active Application Discontinuation
- 2014-07-11 US US14/904,422 patent/US10274466B2/en active Active
- 2014-07-11 EP EP14745049.8A patent/EP3019516B1/en active Active
- 2014-07-11 SI SI201431039T patent/SI3019516T1/sl unknown
- 2014-07-11 EP EP18204792.8A patent/EP3536699A1/en not_active Withdrawn
- 2014-07-11 ES ES14745049T patent/ES2705700T3/es active Active
- 2014-07-11 PL PL14745049T patent/PL3019516T3/pl unknown
- 2014-07-11 CA CA2918052A patent/CA2918052A1/en not_active Abandoned
- 2014-07-11 AU AU2014287044A patent/AU2014287044B2/en active Active
-
2015
- 2015-12-23 IL IL243305A patent/IL243305B/en active IP Right Grant
-
2016
- 2016-08-30 HK HK16110304.2A patent/HK1222183A1/zh unknown
-
2018
- 2018-12-26 JP JP2018242206A patent/JP2019090818A/ja active Pending
-
2019
- 2019-01-10 HR HRP20190071TT patent/HRP20190071T1/hr unknown
- 2019-03-12 US US16/351,372 patent/US10921297B2/en active Active
Patent Citations (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63263457A (ja) * | 1987-04-11 | 1988-10-31 | チバ‐ガイギー アクチェンゲゼルシャフト | 等電点電気泳動法及びそのための装置 |
JP2002529714A (ja) * | 1998-11-09 | 2002-09-10 | イルガム ナット | クロマトグラフィー分離法および選択吸着体 |
JP2005068161A (ja) * | 1999-04-05 | 2005-03-17 | Emisphere Technolgies Inc | 活性剤を送達するための二ナトリウム塩、一水和物、およびエタノール溶媒和物 |
JP2007500852A (ja) * | 2003-05-16 | 2007-01-18 | クリオバイオフィジカ, インコーポレイテッド | 外部勾配クロマトフォーカシング |
JP2007536218A (ja) * | 2004-04-27 | 2007-12-13 | パーキンエルマー ラス インコーポレイテッド | 生物学的サンプル中のペプチドの改良された同定方法 |
JP2007538260A (ja) * | 2004-05-20 | 2007-12-27 | ウオーターズ・インベストメンツ・リミテツド | 混合物中のタンパク質を同定する方法および装置 |
JP2008503725A (ja) * | 2004-06-16 | 2008-02-07 | バイオ−ラッド・ラボラトリーズ・インコーポレーテッド | マルチケミストリ分画 |
JP2006087394A (ja) * | 2004-09-27 | 2006-04-06 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 核酸抽出方法および核酸抽出キット |
JP2010504080A (ja) * | 2006-07-11 | 2010-02-12 | ピーシーアイ バイオテック エイエス | 光学的内部移行により細胞内にsiRNAを導入する方法 |
JP2012519706A (ja) * | 2009-03-06 | 2012-08-30 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗体製剤 |
WO2011009623A1 (en) * | 2009-07-24 | 2011-01-27 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Optimizing the production of antibodies |
JP2013500244A (ja) * | 2009-07-24 | 2013-01-07 | エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | 抗体製造の最適化 |
WO2012102104A1 (ja) * | 2011-01-24 | 2012-08-02 | シャープ株式会社 | 露光装置、液晶表示装置及びその製造方法 |
WO2012129680A1 (en) * | 2011-03-31 | 2012-10-04 | Apotex Technologies Inc. | Prodrugs of d-gamma-glutamyl-d-tryptophan and d-gamma- glutamyl-l-tryptophan |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
AHAMED; NFOR T; VERHAERT B K; VAN DEDEM P D E M; VAN DER WIELEN G W K; EPPINK L A M ET AL: "PH-GRADIENT ION-EXCHANGE CHROMATOGRAPHY: AN ANALYTICAL TOOL FOR DESIGN AND OPTIMIZATION OF PROTEIN S", JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY, vol. VOL:1164 NR:1-2, JPN5016007678, 23 August 2007 (2007-08-23), NL, pages 181 - 188, ISSN: 0003779838 * |
GE HEALTHCARE: "ION EXCHANGE CHROMATOGRAPHY & CHROMATOFOCUSING PRINCIPLES AND METHODS ION EXCHANGE CHROMATOGRAPHY &", [ONLINE], JPN5016007679, 2010, ISSN: 0003779839 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR20160030251A (ko) | 2016-03-16 |
PL3019516T3 (pl) | 2019-04-30 |
HRP20190071T1 (hr) | 2019-02-22 |
SI3019516T1 (sl) | 2019-02-28 |
US10921297B2 (en) | 2021-02-16 |
IL243305B (en) | 2019-09-26 |
WO2015006686A1 (en) | 2015-01-15 |
WO2015006686A8 (en) | 2018-10-04 |
US10274466B2 (en) | 2019-04-30 |
US20190310234A1 (en) | 2019-10-10 |
EP3019516A1 (en) | 2016-05-18 |
ES2705700T3 (es) | 2019-03-26 |
JP6462681B2 (ja) | 2019-01-30 |
KR102251127B1 (ko) | 2021-05-11 |
MX2016000181A (es) | 2016-03-09 |
TR201818966T4 (tr) | 2019-01-21 |
AU2014287044B2 (en) | 2020-02-06 |
US20160161455A1 (en) | 2016-06-09 |
CA2918052A1 (en) | 2015-01-15 |
CN105377873A (zh) | 2016-03-02 |
HK1222183A1 (zh) | 2017-06-23 |
JP2019090818A (ja) | 2019-06-13 |
IL243305A0 (en) | 2016-03-31 |
EP3019516B1 (en) | 2018-11-14 |
CN105377873B (zh) | 2021-03-30 |
EP3536699A1 (en) | 2019-09-11 |
MX368107B (es) | 2019-09-18 |
BR112016000231A8 (pt) | 2019-12-31 |
RU2016104542A (ru) | 2017-08-17 |
AU2014287044A1 (en) | 2016-02-11 |
SG11201600221YA (en) | 2016-02-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US10712322B2 (en) | Ionic strength-mediated pH gradient ion exchange chromatography | |
US10940401B2 (en) | Method for chromatography reuse | |
JP6356607B2 (ja) | オーバーロード/溶出クロマトグラフィー | |
JP7286536B2 (ja) | 非イオン性サーファクタント及びポリペプチドを含む組成物中の非イオン性サーファクタントを定量するためのクロマトグラフィー法 | |
US10921297B2 (en) | Elucidation of ion exchange chromatography input optimization |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170707 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20170707 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170721 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20180418 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180424 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20180723 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20180919 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20181023 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20181127 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20181227 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6462681 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |