JP2016528875A - 微生物に基づく汚水処理組成物およびその使用方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、その内容の全体が参照により本明細書に組み入れられる、2013年5月20日に出願された米国特許仮出願USSN 61/825,332の優先権および恩典を主張する。
本発明は、微小生物(microorganism)を含む汚水処理組成物およびそれらの組成物を使用する方法に関する。
様々な下水処理方法および下水処理場が公知である。ほとんどの大規模な地方自治体システムでは、ベルトプレスのような機械的分離手段によって、液体から分離するためのポリマーを用いるかまたは用いずに、汚水中に含まれる固体を順次濃縮する、一連の沈殿池を使用する。水流に安全に放出することができる清潔な流出液を得るために、汚水処理作業では、有害な汚染物質を除去するために3つまたは4つの異なる処理段階を使用する。
本発明は、汚水処理およびレメディエーションを強化するための微生物組成物を提供する。いくつかの局面において、微生物組成物は、バチルス属細菌とラクトバチルス属細菌との混合物を含み、バチルス対ラクトバチルスの比率は1:10〜10:1である。他の局面において、微生物組成物は、バチルス属の混合物を含む。具体的には、バチルス属およびラクトバチルス属の組成物は、バチルス・サブティリスと、バチルス・アミロリケファシエンスと、バチルス・リケニフォルミスと、バチルス・プミルスと、ペディオコッカス・アシディラクティシと、ペディオコッカス・ペントサセウスと、ラクトバチルス・プランタルムとの混合物を含む。バチルス属組成物は、バチルス・サブティリスと、バチルス・アミロリケファシエンスと、バチルス・リケニフォルミスと、バチルス・プミルスと、バチルス・コアグランスと、バチルス・メガテリウムと、パエニバチルス・ポリミキサとの混合物を含む。
本発明の微生物は、当技術分野において公知の標準的な深水槽液中発酵培養プロセスを用いて増殖させる。
バチルス・サブティリス、バチルス・アミロリケファシエンス、バチルス・リケニフォルミス、およびバチルス・プミルスの個々の発端培養物を、次の一般的プロトコールに従って増殖させる。栄養ブロス2g、AmberFerm(酵母抽出物)2g、およびマルトデキストリン4gを250ml容エルレンマイヤーフラスコに加える。蒸留した脱イオン水100mlを添加し、乾燥成分すべてが溶解するまで、フラスコを撹拌する。フラスコに覆いを掛け、121℃および15psiで作動するオートクレーブ中に30分間、置く。冷却後、純粋な微生物株の内の1種を1ml、フラスコに接種する。フラスコを密閉し、30℃でオービタルシェーカー上に置く。培養物を3〜5日間増殖させる。このプロセスを、混合物中の各微生物について繰り返す。このようにして、バチルス・サブティリス、バチルス・アミロリケファシエンス、バチルス・リケニフォルミス、およびバチルス・プミルスの発端培養物を調製する。
ペディオコッカス・アシディラクティシ、ペディオコッカス・ペントサセウス、およびラクトバチルス・プランタルムの個別の精製された単離物を、各種に対して最適なpHおよび温度において、標準的な嫌気的液中発酵培養プロトコールを用いて別々の発酵槽中で増殖させる。
本発明の微生物ミックスはまた、以下のプロセスに従って固体基質発酵培養によって調製することもできる。
乳製品12%ミネラルミックス(Mineral Mix)4ポンド、米ぬか60lb、および大豆粉30lbを、ボートぎりを備えたジャケット付き水平ミキサーに加えた。混合しながら水および蒸気を加えて、スラリーを得た。2分間混合した後、小麦ふすま300lb、続いて追加の水および蒸気をミキサーに加えて、スラリーを再度作製した。ミキサーの温度を35〜36℃に制御しながら、バチルス・サブティリス、バチルス・アミロリケファシエンス、バチルス・リケニフォルミス、およびバチルス・プミルスを含み、初期微生物活性が約1×1010CFU/gである、乾燥微生物混合物4lbを添加した。ミキサーに蓋をし、温度を34℃に調節し、内容物を最長4日間、混合させた。発酵培養後、ミキサーの内容物を金属製トレー上に取り出し、空気乾燥させた。乾燥後、生成物を約200マイクロメートル未満の粒径に粉砕した。得られた最終的なバチルス生成物は、微生物数が1×1011CFU/g程度であり、水分が約5%未満であった。
ペディオコッカス・アシディラクティシ、ペディオコッカス・ペントサセウス、およびラクトバチルス・プランタルムの混合培養物を、1部のイヌリン、2.2部の単離された大豆タンパク質、8部の米粉、ならびに0.25%w/wの塩化ナトリウム、0.045%w/wの炭酸カルシウム、0.025%w/wの硫酸マグネシウム、0.025%w/wのリン酸ナトリウム、0.012%w/wの硫酸鉄、および29.6%の水からなる混合物上で最長5日間、GMP条件下で発酵培養した。発酵培養の完了時に、混合物を含水率が5%未満になるまで凍結乾燥させ、粒径が800マイクロメートル未満となるように粉砕し、均質化した。粉末化された生成物の最終微生物濃度は、109〜1011CFU/gである。
乾燥させたバチルス微生物とラクトバチルス微生物を1:10〜10:1の比率で混ぜ合わせて、バチルス・サブティリス、バチルス・アミロリケファシエンス、バチルス・リケニフォルミス、ペディオコッカス・アシディラクティシ、ペディオコッカス・ペントサセウス、およびラクトバチルス・プランタルムを含み、微生物活性が108〜1010CFU/gである、最終的な乾燥微生物組成物を得た。
実施例1の個々の乾燥微生物(バチルスおよびラクトバチルス)を1:1(組成物A)および1:10(組成物B)の比率で混合することによって、2種類の微生物組成物を調製した。これら2種の組成物を、酪農ラグーン(dairy lagoon)の汚水のBODを減少させる能力について比較した(図1)。市販の汚水用製品(BiOWiSH Aqua、タイ製)を陽性対照として含めた。これらの結果から、BODを迅速に減少させるには、バチルス属対ラクトバチルス属の比率1:10(組成物B)が好ましいことが示されている。
実施例1の個々の乾燥微生物(バチルスおよびラクトバチルス)を1:10(バチルス属:ラクトバチルス属)の比率で一緒に混合した。この乾燥微生物ミックスを、デキストロース(Clintose(登録商標)工業用デキストロース)で1:100に希釈した。このミックスに、3重量%の粉末状大豆レシチン(Nealanders International, Inc.)を添加した。この組成物の最終微生物数は、1×108CFU/gであった。
実施例2のバチルスおよびラクトバチルスの固体基質発酵培養生成物を、約200マイクロメートルの平均粒径になるまで粉砕し、等比率で一緒に混合し、次いで、3重量%の粉末状大豆レシチン(Nealanders International, Inc)と混合した。微生物数が108〜109CFU/gであり水分が5%未満である最終生成物を得た。
米国ノースカロライナ州中部に位置する、住宅用の低圧管(LPP)の汚水浄化槽を用いた下水設備システム3つを、試験のために選択した。BOD(生物学的酸素要求量)、TSS(総浮遊物質)、およびFOG(脂肪、油、およびグリース)のベースライン測定を行い、次いで、最長で8週間の期間、実施例4で得た汚水処理配合物(formulation)200gを各システムに毎週添加した。各システムについて、BOD、TSS、およびFOGを毎週記録した。LPPの汚水浄化槽を用いた下水設備システム3つを平均した結果から、3つすべてのシステムにおいて、ベースラインに対する重要な生化学的測定値の有意な減少が示された(図2〜4)。
米国ノースカロライナ州中部の、住宅用のLPPの汚水浄化槽を用いた下水設備システム3つを、この研究のために選択した。各システムについて、BOD、TSS、TKN、およびFOGのベースライン測定を行い、次いで、最長で8週間の期間、実施例5で得た組成物200gを各システムに毎週添加した。3つのシステムのそれぞれについて、BOD、TSS、TKN、およびFOGを毎週記録した。LPPの汚水浄化槽を用いた下水設備システム3つを平均した結果から、3つすべてのシステムにおいて、ベースラインに対する重要な生化学的測定値の有意な減少が示されている。
カリフォルニア州のセントラルバリー地域の地方酪農ラグーンから汚水を採取した。試料をまとめて、共通の貯蔵溶液を作った。貯蔵汚水をいくつかの300ml容BOD瓶にピペットで分注し、以下の実験計画を設定した。
カリフォルニア州サンルイスオビスポのカリフォルニア州立工科大学(California Polytechnic State University)の酪農貯水池(dairy lagoon pond)から汚水を採取し、数本の2リットル容の瓶に分配し、以下の実験計画を設定した。
米国ノースカロライナ州中部のいくつかの住宅用のLPPの汚水浄化槽を用いた下水設備システムを、この研究のために選択した。各システムについて、BOD、TSS、TKN、およびFOGのベースライン測定を行い、次いで、実施例5の組成物200gまたは市販製品(BiOWiSH(商標) Aqua FOG)200gのいずれかで、各システムを毎週処理した。各システムについて、BOD、TSS、TKN、およびFOGを毎週記録した。これらのLPPの汚水浄化槽を用いた下水設備システムを平均した結果を下記に示す。
実施例4の組成物を用いて、バナナ洗浄による汚水を処理した。バナナを収穫する際、ラテックス液体が放出される。典型的には、バナナは、ラテックスを除去するために流水(moving water)中に浸される。通常、この工程の結果として生じる汚水は、ラテックス濃度が高いため、再生および再使用の可能性が制限される。
実施例5の微生物組成物を、100g/lの乾燥微生物生成物の濃度で水中に溶解させる。ポンプのスイッチを切った状態で、顕著なかすの層を表面に有する住宅用水泳プールのフィルター装置中に微生物溶液を注ぎ、1時間放置した後、ポンプのスイッチを入れる。24時間以内に、かすは有意に減少し、48時間経つと、目に見えるかすは残っていない。
実施例1の細菌株ならびに汚水処理および果物/野菜洗浄にさらなる恩恵を与える能力に基づいて選択した追加の微生物を含む組成物を、実施例1で作り上げたものと同様の発酵培養システムを用いて設計した。
バチルス・サブティリス、バチルス・アミロリケファシエンス、バチルス・リケニフォルミス、バチルス・プミルス、バチルス・コアグランス、バチルス・メガテリウム、およびパエニバチルス・ポリミキサの個々の発端培養物を、次の一般的プロトコールに従って増殖させた。栄養ブロス2g、AmberFerm(酵母抽出物)2g、およびマルトデキストリン4gを250ml容エルレンマイヤーフラスコに加えた。蒸留した脱イオン水100mlを添加し、乾燥成分すべてが溶解するまで、フラスコを撹拌した。フラスコに覆いを掛け、121℃およびI5psiで作動するオートクレーブ中に30分間、置いた。冷却後、純粋な微生物株の内の1種を1ml、フラスコに接種した。フラスコを密閉し、30℃でオービタルシェーカー上に置いた。培養物を3〜5日間増殖させた。このプロセスを、混合物中の各微小生物について繰り返した。このようにして、バチルス・サブティリス、バチルス・アミロリケファシエンス、バチルス・リケニフォルミス、バチルス・プミルス、バチルス・コアグランス、バチルス・メガテリウム、およびパエニバチルス・ポリミキサの発端培養物を調製した。
ペディオコッカス・アシディラクティシ、ペディオコッカス・ペントサセウス、およびラクトバチルス・プランタルムの個別の精製された単離物を、各種に対して最適なpHおよび温度において、標準的な嫌気的液中発酵培養プロトコールを用いて別々の発酵槽中で増殖させた。
実施例13の乾燥させた微生物ミックスを、デキストロース(Clintose(登録商標)工業用デキストロース)で1:100に希釈する。このミックスに、3重量%の粉末状大豆レシチン(Nealanders International, Inc)を添加する。典型的には、最終的な微生物数は、1×109CFU/gである。
Claims (31)
- (a)混合物中の各バチルス属(Bacillus)が、個別に好気的に発酵培養され(fermented)、採取され、乾燥され、そして約200マイクロメートルの平均粒径を有する粉末を生じるように粉砕され、該混合物の約60%超が、100〜800マイクロメートルのサイズ範囲内にある、バチルス・サブティリス(Bacillus subtilis)、バチルス・アミロリケファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)、バチルス・リケニフォルミス(Bacillus licheniformis)、およびバチルス・プミルス(Bacillus pumilus)と、
(b)該混合物中の各ラクトバチルス属(Lactobacillus)が、個別に嫌気的に発酵培養され、採取され、乾燥され、そして約200マイクロメートルの平均粒径を有する粉末を生じるように粉砕され、該混合物の約60%超が、100〜800マイクロメートルのサイズ範囲内にある、ペディオコッカス・アシディラクティシ(Pediococcus acidilactici)、ペディオコッカス・ペントサセウス(Pediococcus pentosaceus)、およびラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum);または
(c)該混合物中の各バチルス属が、個別に好気的に発酵培養され、採取され、乾燥され、そして約200マイクロメートルの平均粒径を有する粉末を生じるように粉砕され、該混合物の60%超が、100〜800マイクロメートルのサイズ範囲内にある、バチルス・メアゲリウム(Bacillus meagerium)、バチルス・コアグランス(Bacillus coagulans)、およびパエニバチルス・ポリミキサ(Paenibacillus polymyxa)
のいずれかと
の該混合物を含み、
水に添加されると完全に分散し、かつ細菌の予備活性化を必要としない、
有機物を分解するための組成物。 - 段階(a)のバチルス属対段階(b)のラクトバチルス属の比率が1:10〜10:1である、請求項1に記載の組成物。
- 段階(a)のバチルス属対段階(b)のラクトバチルス属の比率が、バチルス属対ラクトバチルス属1:10である、請求項2に記載の組成物。
- 段階(b)のラクトバチルス属の比率が1:1:1である、請求項1に記載の組成物。
- 含水率が約5%未満であり、かつ最終細菌濃度が、前記組成物1グラム当たり約105〜1011コロニー形成単位(CFU)である、請求項1に記載の組成物。
- 不活性担体をさらに含む、請求項1に記載の組成物。
- 前記不活性担体がデキストロース一水和物である、請求項6に記載の組成物。
- 前記デキストロース一水和物が、約75〜95%(w/w)の濃度で存在する、請求項7に記載の組成物。
- 有機乳化剤をさらに含む、請求項1に記載の組成物。
- 前記有機乳化剤が、約2〜5%(w/w)の濃度で存在する、請求項9に記載の組成物。
- 前記有機乳化剤が大豆レシチンである、請求項9に記載の組成物。
- 段階(a)のバチルス属および段階(c)のバチルス属を含む、請求項1に記載の組成物。
- 段階(a)のバチルス属および段階(b)のラクトバチルス属を含む、請求項1に記載の組成物。
- 汚水を請求項13に記載の組成物と接触させる段階を含む、該汚水を処理する方法。
- 前記汚水が、都市下水、住宅用の汚水浄化槽を用いた下水設備の汚水、または産業廃水である、請求項14に記載の方法。
- 前記産業廃水が、食品廃棄物、脂肪廃棄物、油廃棄物、グリース廃棄物、醸造所廃棄物、農業廃棄物、または日用品廃棄物を含む、請求項15に記載の方法。
- 汚水の処理が、汚水中の生物学的酸素要求量(BOD)、総浮遊物質(TSS)、総ケルダール窒素(TKN)、ならびに脂肪、油、およびグリース(FOG)を減少させることを含む、請求項15に記載の方法。
- 水泳プール水を請求項13に記載の組成物と接触させる段階を含む、該水泳プール水を処理する方法。
- 水泳プールろ過装置を前記組成物と接触させることによって、前記水を接触させる、請求項18に記載の方法。
- 前記組成物が固体支持体中に埋め込まれている、請求項18に記載の方法。
- 人工芝を請求項13に記載の組成物と接触させる段階を含む、該人工芝を浄化する方法。
- 果物または野菜の洗浄による汚水を請求項12に記載の組成物と接触させる段階を含む、該汚水を汚染修復(remediate)する方法。
- 果物または野菜を請求項12に記載の組成物と接触させる段階を含む、該果物および該野菜の表面から有機物を除去する方法。
- 前記果物または前記野菜の貯蔵寿命および/または外観を改善する、請求項23に記載の方法。
- 前記果物がバナナである、請求項23に記載の方法。
- 以下の段階を含む、バチルス属とラクトバチルス属とを含む細菌の混合物を含む組成物を製造する方法:
(a)各バチルス属生物を個別に好気的に発酵培養する段階;
(b)各ラクトバチルス属生物を個別に嫌気的に発酵培養する段階;
(c)各バチルス属生物および各ラクトバチルス属生物を採取する段階;
(d)採取した該生物を乾燥させる段階;
(e)乾燥させた該生物を粉砕して粉末を作製する段階;
(f)各バチルス属粉末を混ぜ合わせて、バチルス属混合物を作製する段階;
(g)等量の各ラクトバチルス属粉末を混ぜ合わせて、ラクトバチルス属混合物を作製する段階;ならびに
(h)該バチルス属混合物と該ラクトバチルス属混合物を1:10〜10:1の比率で混ぜ合わせる段階。 - 前記バチルス属が、バチルス・サブティリス、バチルス・アミロリケファシエンス、バチルス・リケニフォルミス、およびバチルス・プミルスを含む、請求項25に記載の方法。
- 前記ラクトバチルス属が、ペディオコッカス・アシディラクティシ、ペディオコッカス・ペントサセウス、およびラクトバチルス・プランタルム、バチルス・メアゲリウム、バチルス・コアグランス、およびパエニバチルス・ポリミキサを含む、請求項25に記載の方法。
- 前記混合物が、以下の特徴を有する、請求項25に記載の方法:
(a)約5%未満の含水率、および
(b)前記組成物1グラム当たり約105〜1011コロニー形成単位(CFU)の最終細菌濃度。 - 以下の段階を含む、バチルス属生物を含む細菌の混合物を含む組成物を製造する方法:
(a)バチルス・サブティリス、バチルス・アミロリケファシエンス、バチルス・リケニフォルミス、バチルス・プミルス、バチルス・メアゲリウム、バチルス・コアグランス、およびパエニバチルス・ポリミキサを個別に好気的に発酵培養する段階;
(b)各生物を採取する段階;
(c)採取した該生物を乾燥させる段階;
(d)乾燥させた該生物を粉砕して粉末を作製する段階;ならびに
(e)各バチルス属粉末を混ぜ合わせる段階。 - 前記混合物が、以下の特徴を有する、請求項30に記載の方法:
(a)約5%未満の含水率、および
(b)前記組成物1グラム当たり約105〜1011コロニー形成単位(CFU)の最終細菌濃度。
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