CN105385635A - 巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法，包括菌种活化、种子培养、上罐发酵培养、喷雾干燥的步骤，在进风口温度110-150℃，出风口温度60-90℃，进料速度为8-15ml/min的条件下，采用5-10%脱脂奶粉作为保护剂干燥得粉末，由于巨大芽孢杆菌能产生芽孢，而芽孢对高温、高压干燥、氧化、酸碱和毒物等不良因素抵抗力较强，因此巨大芽孢杆菌具有耐高温耐挤压及耐酸碱等特性，通过本发明制得的菌粉菌体存活率高，为后续肥料制备打下基础，适合规模化工业生产，所得菌粉它可以施于土壤中，提高土壤中微生物数量，提高植物的抗病能力。
Description
技术领域
本发明涉及微生物肥料制备的技术领域，具体说是一种巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法。
背景技术
巨大芽孢杆菌为革兰氏阳性菌及好氧菌，不但能分解有机磷物质，而且也能分解难溶性磷化合物，并将有机磷物质和磷化合物转化成易被植物吸收的磷，从而提高土壤磷素的利用率，达到提高植物磷素营养的目的。因此，巨大芽孢杆菌在农业上可用于制造磷细菌肥料。同时有些巨大芽孢杆菌的菌株可产生抑菌物质，对棉花立枯病菌等多种病原真菌具有明显的抑制作用。
在实际的使用中巨大芽孢杆菌是以固体粉状形态存在的，而现有的巨大芽孢杆菌菌粉的制备过程相对较为复杂，不利于规模化的生产，而且菌粉中菌体的存活率较低。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法。
本发明为解决公知技术中存在的技术问题所采取的技术方案是:
本发明的巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）菌种活化：
将4℃斜面保存的巨大芽孢杆菌活化，将其分别划线于相应固体培养基上，37℃、培养24h；
菌种来源：巨大芽孢杆菌,购买于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCCNo.1.223；
（2）种子培养：
挑取活化的菌落，将巨大芽孢杆菌接种于种子培养基进行种子培养，在37℃、200r/min摇床培养20h；
上述种子培养基中按质量浓度包括以下组分：
葡萄糖10-12g/L,磷酸氢二钾5-6g/L，磷酸二氢钾2-3g/L，尿素1-1.5g/L，酵母粉5-6g/L，硫酸镁0.35-0.41g/L，PH7.0；
（3）上罐发酵培养：
将上一步骤中取得的巨大芽孢杆菌种子液按照5-10%接种量接入发酵罐中，发酵培养基为上述种子培养基，通风比1:1，37℃，300r/min，培养21h后收集菌液；
（4）喷雾干燥：
将菌液利用喷雾干燥，采用5-10%脱脂奶粉作为保护剂干燥得粉末，喷雾干燥条件为：进风口温度110-150℃，出风口温度60-90℃，进料速度为8-15ml/min。
本发明还可以采用以下技术措施：
所述的菌液经喷雾干燥成为菌粉后采用无菌密封袋包装防止吸潮。
喷雾干燥步骤中，喷雾干燥条件为：进风口温度110℃，出风口温度为60℃，菌体保护剂为10%，进料速度为10ml/min。
喷雾干燥步骤中，喷雾干燥条件为：进风口温度130℃，出风口温度为80℃，菌体保护剂为8%，进料速度为8ml/min。
喷雾干燥步骤中，喷雾干燥条件为进风口温度150℃，出风口温度为90℃，菌体保护剂为5%，进料速度为15ml/min。
本发明具有的优点和积极效果是:
本发明的巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法中，利用喷雾干燥技术制备菌粉，由于巨大芽孢杆菌能产生芽孢，而芽孢对高温、高压干燥、氧化、酸碱和毒物等不良因素抵抗力较强，因此巨大芽孢杆菌具有耐高温耐挤压及耐酸碱等特性，通过本发明制得的菌粉菌体存活率高，为后续肥料制备打下基础，适合规模化工业生产，所得菌粉它可以施于土壤中，提高土壤中微生物数量，提高植物的抗病能力。
具体实施方式
实施例1：本发明的巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）菌种活化：
将4℃斜面保存的巨大芽孢杆菌活化，将其分别划线于相应固体培养基上，37℃、培养24h；
菌种来源：巨大芽孢杆菌,购买于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCCNo.1.223；
（2）种子培养：
挑取活化的菌落，将巨大芽孢杆菌接种于种子培养基进行种子培养，在37℃、200r/min摇床培养20h；
上述种子培养基中按质量浓度包括以下组分：
葡萄糖10g/L,磷酸氢二钾6g/L，磷酸二氢钾2g/L，尿素1g/L，酵母粉6g/L，硫酸镁0.41g/L，PH7.0；
（3）上罐发酵培养：
将上一步骤中取得的巨大芽孢杆菌种子液按照5%接种量接入发酵罐中，发酵培养基为与上述种子培养基相同，通风比1:1，37℃，300r/min，培养21h后收集菌液；
（4）喷雾干燥：
将菌液利用喷雾干燥，采用10%脱脂奶粉作为保护剂干燥得粉末，喷雾干燥条件为：进风口温度110℃，出风口温度60℃，进料速度为10ml/min。
菌液经喷雾干燥成为菌粉后采用无菌密封袋包装防止吸潮。
实施例2：本发明的巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）菌种活化：
将4℃斜面保存的巨大芽孢杆菌活化，将其分别划线于相应固体培养基上，37℃、培养24h；
菌种来源：巨大芽孢杆菌,购买于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCCNo.1.223；
（2）种子培养：
挑取活化的菌落，将巨大芽孢杆菌接种于种子培养基进行种子培养，在37℃、200r/min摇床培养20h；
上述种子培养基中按质量浓度包括以下组分：
葡萄糖12g/L,磷酸氢二钾5g/L，磷酸二氢钾2.5g/L，尿素1.3g/L，酵母粉5g/L，硫酸镁0.35g/L，PH7.0；
（3）上罐发酵培养：
将上一步骤中取得的巨大芽孢杆菌种子液按照8%接种量接入发酵罐中，发酵培养基为与上述种子培养基相同，通风比1:1，37℃，300r/min，培养21h后收集菌液；
（4）喷雾干燥：
将菌液利用喷雾干燥，采用8%脱脂奶粉作为保护剂干燥得粉末，喷雾干燥条件为：进风口温度130℃，出风口温度80℃，进料速度为8ml/min。
菌液经喷雾干燥成为菌粉后采用无菌密封袋包装防止吸潮。
实施例3：本发明的巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）菌种活化：
将4℃斜面保存的巨大芽孢杆菌活化，将其分别划线于相应固体培养基上，37℃、培养24h；
菌种来源：巨大芽孢杆菌,购买于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCCNo.1.223；
（2）种子培养：
挑取活化的菌落，将巨大芽孢杆菌接种于种子培养基进行种子培养，在37℃、200r/min摇床培养20h；
上述种子培养基中按质量浓度包括以下组分：
葡萄糖11g/L,磷酸氢二钾5.5g/L，磷酸二氢钾3g/L，尿素1.5g/L，酵母粉5.5g/L，硫酸镁0.38g/L，PH7.0；
（3）上罐发酵培养：
将上一步骤中取得的巨大芽孢杆菌种子液按照10%接种量接入发酵罐中，发酵培养基为与上述种子培养基相同，通风比1:1，37℃，300r/min，培养21h后收集菌液；
（4）喷雾干燥：
将菌液利用喷雾干燥，采用5%脱脂奶粉作为保护剂干燥得粉末，喷雾干燥条件为：进风口温度150℃，出风口温度90℃，进料速度为15ml/min。
所述的菌液经喷雾干燥成为菌粉后采用无菌密封袋包装防止吸潮。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例公开如上，然而，并非用以限定本发明,任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内,当然会利用揭示的技术内容作出些许更动或修饰，成为等同变化的等效实施例,但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。
Claims (5)
1.一种巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）菌种活化：
将4℃斜面保存的巨大芽孢杆菌活化，将其分别划线于相应固体培养基上，37℃、培养24h；
菌种来源：巨大芽孢杆菌,购买于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCCNo.1.223；
（2）种子培养：
挑取活化的菌落，将巨大芽孢杆菌接种于种子培养基进行种子培养，在37℃、200r/min摇床培养20h；
上述种子培养基中按质量浓度包括以下组分：
葡萄糖10-12g/L,磷酸氢二钾5-6g/L，磷酸二氢钾2-3g/L，尿素1-1.5g/L，酵母粉5-6g/L，硫酸镁0.35-0.41g/L，PH7.0；
（3）上罐发酵培养：
将上一步骤中取得的巨大芽孢杆菌种子液按照5-10%接种量接入发酵罐中，发酵培养基为上述种子培养基，通风比1:1，37℃，300r/min，培养21h后收集菌液；
（4）喷雾干燥：
将菌液利用喷雾干燥，采用5-10%脱脂奶粉作为保护剂干燥得粉末，喷雾干燥条件为：进风口温度110-150℃，出风口温度60-90℃，进料速度为8-15ml/min。
2.根据权利要求1所述的巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法，其特征在于：菌液经喷雾干燥成为菌粉后采用无菌密封袋包装防止吸潮。
3.根据权利要求1所述的巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法，其特征在于：喷雾干燥步骤中，喷雾干燥条件为：进风口温度110℃，出风口温度为60℃，菌体保护剂为10%，进料速度为10ml/min。
4.根据权利要求1所述的巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法，其特征在于：喷雾干燥步骤中，喷雾干燥条件为：进风口温度130℃，出风口温度为80℃，菌体保护剂为8%，进料速度为8ml/min。
5.根据权利要求1所述的巨大芽孢杆菌菌粉的制备方法，其特征在于：喷雾干燥步骤中，喷雾干燥条件为进风口温度150℃，出风口温度为90℃，菌体保护剂为5%，进料速度为15ml/min。
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