KR20170033433A - 동물 사료 조성물 및 사료 첨가제 - Google Patents
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- A23V2400/427—Pentosaceus
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- A23Y2220/67—
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- A23Y2280/15—
Abstract
본 발명은 프리바이오틱(prebiotic), 프로바이오틱(probiotic) 및 포스트바이오틱(postbiotic) 조성물, 및 상업용 가축 및 반려동물의 건강 및 영양을 향상시키기 위한 사용 방법에 관한 것이다.
Description
관련 출원
본 출원은 2014년 7월 29일자 출원된 가출원 USSN 62/030,460 및 2014년 12월 11일자 출원된 USSN 62/090,756의 우선권 및 이익을 주장하며, 이의 내용은 그 전체가 본원에 참고로 인용된다.
발명의 분야
본 발명은 프리바이오틱(prebiotic), 프로바이오틱(probiotic) 및 포스트바이오틱(postprebiotic) 물질의 혼합물을 함유하는 동물 사료 조성물 및 사료 첨가제 및 동물 생장, 건강 및 영양 증진에서의 이의 용도에 관한 것이다.
프리바이오틱스, 프로바이오틱스 및 포스트바이오틱스는 동물 건강 및 영양에 유익을 부여하는 다양한 물질을 기술하기 위해 사용되는 비교적 새로운 용어이다. 통상적으로, 용어 프리바이오틱은 유익한 건강 효과를 유도하는 동물 소화계 내 박테리아의 생장 또는 활성을 자극하는 물질을 지칭한다. 프리바이오틱스는 호스트에게 건강상의 유익을 부여하는 위장 내 미생물총(microflora)의 조성 및 활성 양쪽에서 특정 변화를 일으키는 선택적으로 발효된 성분일 수 있다. 프로바이오틱스는 일반적으로 장내 세균 균형에 기여하여 결과적으로 건강을 유지하는 역할을 하는 미생물을 지칭한다. 락토바실루스(Lactobacillus) 및 비피도박테리움(Bifidobacterium)과 같은 많은 종의 락트산 박테리아(LAB)가 일반적으로 프로바이오틱스로서 고려되지만, 일부 종의 바실루스(Bacillus), 및 일부 효모가 또한 적합한 후보로 밝혀졌다. 포스트바이오틱스는, 비생존성(non-viable) 박테리아 생성물 또는 호스트에서 생물학적 활성을 갖는 프로바이오틱 유기체 유래 물질대사 부산물을 지칭한다.
동물 건강 및 영양을 향상시키기 위한 프로바이오틱스의 사용은 문헌에 잘 기록되어 있다. 추가로, 프리바이오틱스 및 포스트바이오틱스는 생 미생물의 이용에 대한 잠재적인 대안 또는 부가적 치료요법을 제공한다. 면역 반응의 조절, 보다 구체적으로 국소적 및 전신적 수준에서 염증 반응을 제어하는 사이토카인의 발현을 조절하는 것에서의 이의 역할에 대한 프리바이오틱스, 프로바이오틱스 및 포스트바이오틱스의 영향의 이해가 증대되고 있다. 예를 들어 프로바이오틱 박테리아의 섭취는 국소 전염증성 사이토카인의 생성을 감소시킴으로써 내장(gut) 점막에서 면역학적 배리어를 잠재적으로 안정시킬 수 있다. 프로바이오틱 치료요법에 의한 자생(indigenous) 미생물총 특성의 변화는, 크론 병, 음식물 알레르기, 및 아토피성 습진의 인간 특성에서의 일부 면역학적 교란(disturbance)을 반전시키는 것으로 나타났다. [4, 7-10] 몇 가지 프로바이오틱 종 또는 이의 포스트바이오틱 생성물은 IL-10 및 TGF-베타를 비롯한 보호성 사이토카인을 유도하며, 건강한 인간 환자, 염증성 장 질환(inflammatory bowel disease)이 있는 인간 환자 및 마우스 모델의 점막에서 전염증성 사이토카인, 예컨대 TNF를 억제한다. [1, 2, 11] 동물에게서 비견할만한 유익이 실현될 것이 추정되었다. 상기 주장들 각각에 대한 암시적인 증거기 있으나, 상기 메커니즘 뒤의 분자적인 상세한 사항은 거의 전부 확인되지 않은 채이다. 이론에 제한되고자 하는 것이 아니지만, 이러한 메케니즘은 프리바이오틱, 프로바이오틱 및 포스트 바이오틱을 함유하는 사료로 사육된 동물이 면역계를 활발하게 유지하는 데 에너지를 사용하는 대신 생장 및 발달에 이를 전용하게 한다고 여겨진다.
이에 따라, 프리바이오틱, 프로바이오틱 및 포스트바이오틱 물질을 동물 사료 내에 포함시키려는 상당한 관심이 존재한다. 예를 들어, 러시아 특허 제2018313호에서는 우유에 기초하고 특정 비피도박테리아 및 스트렙토코시(streptococci)를 함유하는 분말형 스프레이 건조된 동물 사료가 개시되어 있다. 사료가 애완동물에게 제공될 수 있음이 언급되어 있지만, 동물 사료는 1차적으로 가축을 목표로 한다. 이렇게 다양한 "바이오틱(biotic)" 치료요법의 유익에 대한 관심이 증가하고 있음에도 불구하고, 동물 건강 및 영양에 대한 조합된 프리바이오틱, 프로바이오틱 및 포스트바이오틱 치료요법의 유익한 효과는 잘 보고되어있지 않다. 상업용 가축 및 반려동물 케어 산업 양쪽에서 다양한 유익을 제공하도록 이러한 치료요법과 조합하는 조성물에 대한 기회가 남아 있다.
특정 생화학 마커(예: 혈당치, 지질 화학, 간 기능, 온혈구계산, 갑상선 기능, 및 염증 마커, 예컨대 ESR 및 C-반응성 단백질), 전체 생리적 계측(예: 체중 증가, 사망률), 및/또는 사료 요구율에 의해 나타나는 것과 같은, 전체 건강 및 영영에 유용한 프리바이오틱, 프로바이오틱 및 포스트 바이오틱의 혼합물을 포함하는 동물 사료 조성물, 및 제조 방법.
다양한 양태에서 본 발명은 동물 생장, 건강 및 영양을 증진시키는 데 유용한 미생물 혼합물을 함유하는 동물 사료 조성물을 제공한다. 동물 사료 조성물은 프리바이오틱; 고상 발효(solid substrate fermentation) 및 액침 발효(submerged liquid fermentation)에 의해 생성된 락토바실루스 미생물의 혼합물을 포함하는 프로바이오틱 박테리아, 액침 발효에 의해 생성된 바실루스 프로바이오틱 박테리아; 락토바실루스 종의 액침 발효 배지로부터 유래한 포스트바이오틱; 및 필러 물질의 혼합물을 함유한다.
프리바이오틱은 이눌린, 프럭토-올리고사카라이드, 또는 글루코-올리고사카라이드이다. 락토바실루스의 혼합물은 페디오코쿠스 아시딜락티시(Pediococcus acidilactici), 페디오코쿠스 펜토사세우스(Pediococcus pentosaceus), 및 락토바실루스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)을 포함한다.
일부 양태에서 락토바실루스의 혼합물은 페디오코쿠스 아시딜락티시, 페디오코쿠스 펜토사세우스, 및 락토바실루스 플란타룸의 고상 발효물을 액침 발효에 의해 생성된 개별 락토바실루스 종과 혼합하여 제조되고, 여기서 락토바실루스 박테리아 각각은 개별적으로 혐기 발효되고, 회수되고, 건조된 후, 평균 입자 크기가 295 마이크론이고 혼합물 중 60%가 175-900 마이크론 크기 범위 내인 분말을 제조하도록 분쇄된다. 바람직하게는 고상 발효 유래의 락토바실루스와 액침 발효 유래의 락토바실루스는 동일한 중량 비율로 혼합된다.
일부 양태에서 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis)는 서열 번호 1의 16S 핵산 서열을 가진다.
포스트바이오틱은 페디오코쿠스 아시딜락티시, 페디오코쿠스 펜토사세우스 및 락토바실루스 플란타룸의 개별 혐기 발효물 각각의 원심분리로부터의 상청액을 수집하는 단계; 단계 (a)로부터 얻은 상청액들을 조합하는 단계; 혼합된 상청액을 약 5 중량% 미만의 수분 함량으로 냉동 건조하는 단계; 및 건조된 혼합된 상청액을 평균 입자 크기가 295 마이크론이고 혼합물 중 60%가 175-900 마이크론 크기 범위 내가 되도록 분쇄하는 단계에 의해 제조된다.
필러는 예를 들어 쌀겨, 대두 껍질, 또는 밀기울, 쌀가루, 대두가루, 또는 밀가루, 옥수숫가루(corn meal), 호밀, 보리, 수수, 덱스트로스, 수크로스, 프럭토스, 말토덱스트린, 녹말 또는 이들의 임의의 조합이다.
프리바이오틱 성분, 락토바실루스 프로바이오틱 성분, 및 포스트바이오틱 성분은 동일한 중량 비율로 조합된다. 다른 양태에서, 바실루스 프로바이오틱은 프리바이오틱, 락토바실루스 프로바이오틱, 및 포스트바이오틱 혼합물과 1:1 내지 1:20의 비로 혼합된다. 프리바이오틱, 프로바이오틱 및 포스트바이오틱 성분 대 곡물 필러의 비는 약 1:1 내지 약 3:1의 범위이다. 최종 박테리아 농도는 그램당 약 106~1011 콜로니 형성 단위(cfu)였다.
또한 본 발명에는 0.01% 내지 0.5%의 본 발명의 조성물을 코팅한 동물 사료 조성물이 포함된다. 일부 양태에서, 프리바이오틱, 프로바이오틱, 포스트바이오틱 혼합물은 왁스, 지방, 당 또는 폴리사카라이드 바인더를 이용하여 사료 입자 상에 코팅된다. 대안적으로, 프리바이오틱, 프로바이오틱, 포스트바이오틱 혼합물은 사료 펠릿(pellet), 매시(mash) 사료 내에 통합되거나 동물의 식수원에 용해된다. 예를 들어, 프리바이오틱, 프로바이오틱 및 포스트바이오틱 혼합물은 수원에 1000 리터당 약 0.1~1 kg으로 투여된다.
본 발명은 추가로, 동물에게 본 발명에 따른 동물 사료, 사료 첨가제 또는 보충제를 투여하는 것에 의해 동물의 건강 및 또는 질병 저항성을 향상시키는 방법을 제공한다. 상기 방법은 체중 증가를 증가시키는 것, 배설물 냄새를 감소시키는 것 또는 사료 단백질의 이용률을 증가시키는 것에 의해 동물의 건강을 향상시킨다.
동물은 예를 들어 새우, 물고기, 가금류, 돼지, 반추동물 또는 반려동물이다.
달리 정의되지 않은 한, 본원에서 사용되는 모든 기술 용어와 과학 용어는 본 발명이 속하는 분야의 통상의 기술자가 일반적으로 이해하고 있는 것과 동일한 의미를 가진다. 본원에 기재된 것과 유사 또는 동등한 방법 및 물질이 본 발명의 실시에 사용될 수 있지만, 적절한 방법 및 물질은 이하에 기재되어 있다. 본원에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허 및 기타 참고문헌은 그 전체가 명백하게 참고로 포함된다. 상충이 있는 경우, 정의를 포함하여 본 명세서가 제어할 것이다. 추가로, 본원에 기재된 물질, 방법 및 실시예는 단지 예시적인 것으로 제한을 의도한 것이 아니다.
본 발명의 다른 특징 및 이점은 하기 상세한 설명 및 특허청구범위로부터 명백하며 이들에 의해 포괄될 것이다.
도 1은 처리에 대한 평균 생장의 결과를 나타낸다.
도 2는 처리에 대한 체중에서의 평균 변화를 나타낸다.
도 3은 FCR 향상률(%) 대 투여량을 나타낸다.
도 2는 처리에 대한 체중에서의 평균 변화를 나타낸다.
도 3은 FCR 향상률(%) 대 투여량을 나타낸다.
본 발명은 동물 사료, 사료 첨가제 또는 사료 보충제로서의 용도를 위한 특정 프리바이오틱, 프로바이오틱 및 포스트바이오틱의 혼합물로 이루어진 조성물을 제공한다. 달리 명시되지 않은 한, 본원에 언급된 모든 백분율은 조성물의 총 중량을 기준으로 한 중량 백분율이다.
조성물의 프로바이오틱 성분은 프로바이오틱 박테리아 바실루스 서브틸리스, 페디오코쿠스 아시딜락티시, 페디오코쿠스 펜토사세우스, 및 락토바실루스 플란타룸의 혼합물을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은, 10 중량% 내지 20 중량%의 페디오코쿠스 아시딜락티시, 페디오코쿠스 펜토사세우스, 및 락토바실루스 플란타룸 각각, 및 1 wt% 내지 약 5 wt%의 바실루스 서브틸리스를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 바실루스 서브틸리스는 하기의 16S 서열을 가진다:
본 발명에 따라 사용된 프로바이오틱 박테리아의 농도는 이의 유형에 의존할 것이다. 본 제품이 프로바이오틱 박테리아를 1그램당 105~1011 집락 형성 단위의 양으로 함유하는 것이 바람직하다. 본 발명의 특히 바람직한 조성물에서, 락토바실루스 및 바실루스 유기체는 적어도 1 x 108 cfu/g의 농도로 존재한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "프로바이오틱 박테리아" 또는 "프로바이오틱스"는 충분한 양으로 투여시 건강적 또는 영양적 유익을 부여하는 미생물을 지칭한다. 본 발명에 따른 프로바이오틱스는 생존성(viable) 또는 비생존성일 수 있다. 프로바이오틱스가 비생존성인 경우, 이는 실질적으로 구조적으로 온전해야 하며, 이는 상기 비생존성 미생물이 여전히 충분히 온전해서 원위 장관에서의 분해를 피하거나 지연시킴으로써 비생존성 미생물의 (보존된 구조의) 면역 체계, 특히 점막 면역 체계와의 상호작용을 가능하게 한다는 것을 의미한다. 비생존성 프로바이오틱스는 대사적 활성이 있다. "대사적 활성"은 이들이 프로바이오틱의 해당 종류에 특징적인 적어도 일부의 잔류 효소 활성을 나타낸다는 것을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "비생존성"은 임의 공지된 조건 하에 복제가 불가능한 박테리아의 집단을 의미한다. 그러나, 집단에서의 통상적인 생물학적 변이로 인해, 집단 중 적은 백분율(즉 5% 이하)이 여전히 생존할 수 있고 따라서 집단에서 적합한 생장 조건 하에 복제 가능하며 그렇지 않다면 비생존성으로 정의된다는 점이 이해될 것이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "생존성 박테리아"는 복제가 가능한 적합한 조건 하에 복제할 수 있는 박테리아의 집단을 의미한다. (상기 제공된 바와 같은) "비생존성"의 정의를 만족시키지 않는 박테리아의 집단은 "생존성"으로 간주된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "생활성 성분"은 충분한 양으로 섭취되는 경우 동물에서 생리적 효과를 갖는 성분을 의미한다.
본 발명의 일부 실시양태에서, 사용된 프로바이오틱 박테리아는 생존성 프로바이오틱 박테리아이다. 생존성 프로바이오틱 박테리아의 사용은 상기 프로바이오틱 박테리아가 장내 미생물총의 일부가 되게 하여, 추가적 건강 유익을 부여하는 장점을 제공한다.
본 발명에 따른 프로바이오틱 박테리아는 당해 분야에 공지된 임의 표준 발효 공정을 이용하여 생산될 수 있다. 예를 들어, 고상 또는 액침 발효가 있다. 발효된 배양물은 혼합된 배양물 또는 단일 단리물일 수 있다.
포스트바이오틱 성분은 락토바실루스 유기체의 원심분리 후 남은 발효 상청액으로부터 유래하며 5 중량% 내지 약 20 중량%의 조성물을 포함한다.
프리바이오틱 성분은 이눌린의 물질대사로부터 유래한 발효 생성물을 비롯하여 글루코- 및/또는 프럭토-올리고사카라이드(예: 케스토스, 니스토스(nystose), 프럭토실니스토스, 비푸르코스(bifurcose), 이눌로비오스, 이눌로트리오스, 이눌로테트라오스)를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 포스트바이오틱 성분은 0.1 wt% 내지 10 wt%의 제조물(formula)을 포함한다.
추가로, 포뮬레이션(formulation)은 약 50 중량% 이하의 곡물 필러(cereal grain filler), 예컨대 뉴트리-슈어(Nutri-Sure)™, 덱스트로스, 또는 기타 적합한 필러 물질을 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 매시 및 펠릿을 비롯한 동물 사료에서의 투여를 위해 포뮬레이팅 되지만, 또한 식수원을 통해 전달될 수 있다. 한 바람직한 실시양태에서, 조성물은 사료 매시로 포뮬레이팅된다. 다른 바람직한 실시양태에서, 조성물은 사료 펠릿으로 포뮬레이팅된다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 조성물은 동물의 식수원에 직접 포뮬레이팅될 수 있다. 이러한 조성물은 체중 증가를 촉진하는 것, 배설물 냄새를 감소시키는 것 및/또는 사료 단백질의 이용률을 증가시키는 것을 비롯하여 동물 건강을 향상시킨다.
동물 사료를 포뮬레이팅하는 경우, 조성물은 통상적으로 사료의 1 메트릭 톤당 0.1 kg 내지 1 kg로 투여된다. 바람직하게는, 사료 조성물은 사료의 1 메트릭 톤당 50, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 그램 또는 그 이상으로 투여된다. 식수에 투여하는 경우, 조성물은 통상적으로 1000 리터당 0.1 kg 내지 1 kg으로 투여된다. 수서 동물, 즉 새우 또는 물고기에 대한 적용에 있어서, 조성물은 통상적으로 0.1 ppm 내지 10 ppm으로 투여된다. 예를 들어, 수서 동물 적용에 있어서, 사료 조성물은 0.1, 0.2, 0.25, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5 ppm으로 투여된다. 바람직하게는, 사료 조성물은 0.25 ppm 또는 2.5 ppm으로 투여된다.
일부 양태에서, 사료 조성물은 약 0.05% 내지 5%, 바람직하게는 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0. 2.0, 3.0, 4.0 또는 5.0%로 식단의 상단에 첨가된다.
조성물의 프리바이오틱, 프로바이오틱 및 포스트바이오틱 성분은 바람직하게는 분말의 건조된 형태이며, 특히 포자를 형성하는 프로바이오틱 미생물의 경우 포자 형태이다.
본 발명에 따른 조성물은 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 미만의 수분 함량으로 냉동 건조된다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 조성물은 5% 미만의 수분 함량으로 냉동 건조된다. 일부 실시양태에서 냉동 건조된 분말은 분쇄되어 입자 크기를 작게 한다. 예를 들어 입자 크기는 1000, 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, 200 마이크론 미만, 또는 그 미만이다. 바람직하게는, 냉동 건조된 분말은 입자 크기가 800 마이크론 미만이 되도록 분쇄되어 입자 크기를 작게 한다. 다양한 실시양태에서 냉동 건조된 분말은 균질화된다.
추가로, 바람직한 경우, 조성물은, 예를 들어 왁스 매트릭스, 당 매트릭스, 지방 매트릭스 또는 폴리사카라이드 매트릭스에, 캡슐화 또는 응집화되어 생존 확률을 추가로 증가시킬 수 있다.
본 발명의 조성물은 동물 사료 제품 및 보충제를 제조하는 데 사용되거나 동물 사료 첨가제로서 사용된다. 프리바이오틱, 프로바이오틱 및 포스트바이오틱 조성물을 동물 사료와 단순히 혼합함으로써 또는 조성물을 사료 보충제로서 이용함으로써 본 발명의 유익을 달성하는 것이 가능하지만, 본 발명의 목적은 균형 식단(balanced diet ration) 및 본 발명의 조성물 둘 다를 포함하는 즉석식품형 사료 제품을 제공하는 것이다.
사료 보충제는 건조된 분말 또는 액체로서 제공될 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 조성물은 "리크 블록(lick block)”으로 포뮬레이팅될 수 있다.
사료 제품은 예비 제작된 즉석식품형 동물 사료 제품을 프리바이오틱, 프로바이오틱 및 포스트바이오틱 혼합물로 코팅하여 제조될 수 있다. 동물 사료 제품을 코팅하는 것은 당해 분야에 공지된 방법에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 건조된 조성물은 동물 사료 제품이 첨가되는 저융점 그리스 또는 왁스에 분산될 수 있거나, 또는 대안적으로 프리바이오틱, 프로바이오틱 및 포스트바이오틱 혼합물을 함유하는 용융된 그리스 또는 왁스는 동물 사료 제품 상에 스프레이될 수 있다.
추가로, 본 발명의 조성물을 함유하는 사료 제품은 프리바이오틱, 프로바이오틱 및 포스트바이오틱 조성물을 임의 적합한 성분, 예컨대 동물 사료의 제조에 통상적으로 사용되는 성분과 혼합함으로써 제조될 수 있다. 이후 동물 사료는 원하는 다양한 상이한 방식으로 제조될 수 있다. 그러나, 본 발명의 사료 제품을 제조하는 특별히 적합한 방식은 압출성형조리(extrusion cooking)에 의한 것이다. 이는 당해 기술분야에 주지된 방법에 의해 수행될 수 있다.
예를 들어, 한 적합한 방법에서, 사료 혼합물은 사전조정기에 공급된다. 사료 혼합물은 녹말 공급원 및 기타 성분, 예컨대 당, 염, 향신료, 조미료, 비타민, 미네랄, 착향료, 착색료, 항산화제, 단백질 공급원, 효모 추출물, 지방 등으로 이루어진다.
적합한 녹말 공급원은 예를 들어 옥수수, 쌀, 밀, 비트, 보리, 조류, 대두 및 귀리이다. 녹말 공급원은 곡물, 박(meal), 글루텐 또는 가루일 수 있다.
적합한 단백질 공급원은 임의 적합한 동물 또는 식물 단백질 공급원; 예를 들어 육분, 골분, 어분, 농축 대두 단백, 우유 단백질, 글루텐, 효모 추출물, 유청 등으로부터 선택될 수 있다. 단백질 공급원의 선택은 제조하는 사료 제품의 영양적 필요, 식감 고려사항 및 유형에 의해 대체적으로 결정될 것이다. 물론, 녹말 공급원이 또한 단백질의 공급원일 수 있다.
바람직한 경우, 불용성 섬유의 공급원은 또한, 예를 들어 밀기울, 옥수수 껍질, 쌀겨, 호밀 껍질 등에 포함될 수 있다. 추가로, 바람직한 경우, 가용성 섬유의 공급원은, 예를 들어 치커리 섬유, 농축 연맥강(oat bran concentrate), 구아 검, 캐롭 콩 검, 잔탄 검 등에 포함될 수 있다.
사료 제품의 원하는 형태에 따라, 사료 혼합물의 녹말 함량은 달라질 수 있다. 예를 들어, 팽창 시리얼 제품(expanded cereal product)에 있어서, 사료 혼합물은 바람직하게는 약 40 중량% 이하의 녹말을 포함한다. 그러나, 플레이크형 제품에 있어서, 사료 혼합물에 대량의 녹말을 이용할 필요는 없으며, 이는 비팽창 제품을 플레이크하는 것이 가능하기 때문이다.
사전조정기에서, 물 또는 증기 또는 그 둘 다가 사료 혼합물에 혼합된다. 충분한 물 또는 증기가 사료 혼합물에 혼합되어 사료 혼합물을 습윤시킨다. 바람직한 경우, 사료 혼합물의 온도는 사전조정기에서 약 60-90℃로 증가될 수 있다. 사료 혼합물을 사전처리(preconditioning)할 필요는 없지만, 이를 수행하는 것이 유리하다.
이후 사전조정기로부터 나온 습윤된 사료는 프리바이오틱, 프로바이오틱 및 포스트바이오틱 조성물과 함께 압출기에 공급된다. 압출기는 임의 적합한 1축 또는 2축 조리 압출기일 수 있다. 적합한 압출기는 Wenger Manufacturing Inc사, Clextral SA사, Buhler AG사 등으로부터 입수할 수 있다. 압출기를 통과하는 동안, 습윤된 사료는 조리 구역을 통과하며, 여기서 사료는 기계적 전단으로 처리되고 예를 들어 약 150℃ 이하의 최대 온도 이하로 가열되며, 형성 구역을 통과한다. 형성 구역의 게이지 압력은 원하는 대로 약 300 kPa 내지 약 10 MPa이다. 바람직한 경우, 물 또는 증기 또는 그 둘 다가 조리 구역 내에 도입될 수 있다. 바람직한 경우, 유용성 첨가제의 캐리어로서 또는 압출 공정을 용이하게 하기 위해 습윤된 사료와 함께 소량의 식용 오일을 압출기에 공급할 수 있다. 임의 적합한 오일, 예컨대 해바라기 오일, 홍화 오일, 옥수수 오일 등의 식물성 오일을 이용할 수 있다. 오일을 이용하는 경우, 단일 불포화물(mono-unsaturate)이 농후한 오일이 특히 바람직하다. 경화유 또는 경화 유지가 또한 바람직하다. 사용되는 오일의 양은 바람직하게는 약 1 중량% 미만으로 유지된다.
압출기로부터 나오는 식품 매트릭스는 적합한 다이를 통해 가압된다. 다이의 분출구(orifice)의 단면 형상에 상응하는 단면 형상을 갖는 성형된 압출물이 다이로부터 나온다.
플레이크된 생성물을 제조하려는 경우, 이후 조각(piece)들을 플레이크 장치(flaking apparatus)로 이송할 수 있다. 적합한 장치는 시리얼 산업에서 공지되어 있고 널리 사용되며, 예를 들어 스위스 소재 Buhler AG사로부터 구입할 수 있다. 바람직한 경우, 조각을 플레이크 전에 부분 건조시킬 수 있다.
이후 조각을 약 10 중량% 미만의 수분 함량으로 건조시킨다. 이는 종래대로 열풍 건조기에서 편리하게 수행된다.
건조된, 즉석 급이(ready-to-feed) 제품은 건조된 사료 제품의 1 그램(g)당 약 105 ~ 약 1011 콜로니 형성 단위(CFU), 바람직하게는 약 106 ~ 약 109 CFU/g을 포함한다. 건조된 사료 제품은 0.01 중량% 내지 0.5 중량%의 프리바이오틱, 프로바이오틱 및 포스트바이오틱 혼합물을 포함할 수 있다.
상기 기술된 실시양태에 다수의 변형이 이루어질 수 있다. 예를 들어, 시리얼 제품을 압출성형조리에 의해 제조할 필요는 없다. 대신, 시리얼 제품을 건조된 즉석식품형 시리얼 조각을 제조하는 임의의 적합한 방법으로 제조할 수 있다. 예를 들어, 사료 물질은 물과 함께 조리되어 조리 페이스트(cooked paste)를 제공할 수 있다. 이후 페이스트는 롤러 건조되어 건조된 플레이크를 제조하며, 이는 보통 두께가 약 0.6 mm 내지 약 1 mm이다.
본 발명은 하기 실시예에 의해 보다 더 잘 이해될 것이며, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위해 기술되었으며 본 발명을 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.
[
실시예
]
실시예
1: 조성물의 제조
본 발명의 조성물을 액침 발효 및 고상 발효의 조합을 통해 제조하였다.
프리믹스 A: 락토바실루스의 고상 발효: 페디오코쿠스 아시딜락티시, 페디오코쿠스 펜토사세우스 및 락토바실루스 플란타룸의 개별 정제된 단리물을 표준 혐기 액침 발효 프로토콜을 이용하여 별도의 발효기에서 생육시켰다. 개별 유기체를 원심분리를 통해 발효기로부터 회수하고, 중량 기준으로 동일한 비율로 함께 혼합한 후, 하기 혼합물에 첨가하였다: 이눌린 1 부, 단리된 대두 단백질 2.2 부, 쌀가루 8 부와, 0.25% w/w 염화나트륨, 0.045% w/w 탄산칼슘, 0.025% w/w 황산마그네슘, 0.025% w/w 인산나트륨, 0.012% w/w 황산제1철 및 29.6% 물. 이 혼합물을 30℃에서 최대 5일 동안 발효시켰다. 발효 완료시, 전체 혼합물을 5% 미만의 수분 함량으로 냉동 건조시키고, 평균 입자 크기가 295 마이크론이고 생성물 중 60%가 175-840 마이크론 크기 범위 내가 되도록 분쇄한 후, 균질화하였다. 분말화 생성물의 최종 미생물 농도는 109~1011 CFU/g였다.
프리믹스 B: 락토바실루스의 심부 발효(Submerged Fermentation): 페디오코쿠스 아시딜락티시, 페디오코쿠스 펜토사세우스, 및 락토바실루스 플란타룸의 개별 정제된 단리물을 표준 혐기 액침 발효 프로토콜을 이용하여 이눌린의 존재 하에 별도의 발효기에서 생육시켰다. 발효 후, 개별 배양물을 여과하고, 원심분리하고, 약 5% 미만의 수분 정도로 냉동 건조시킨 후, 평균 입자 크기가 295 마이크론이고 생성물 중 60%가 175-840 마이크론 크기 범위 내가 되도록 분쇄한 후, 균질화하였다. 분말화 생성물의 최종 미생물 농도는 109~1011 CFU/g였다.
프리믹스 C: 발효 상청액 : 상기 프리믹스 B의 심부 발효로부터 생성된 유기체의 원심분리 후 남은 상청액을 수집하고, 함께 혼합하고, 약 5% 미만의 수분 정도로 냉동 건조시킨 후, 평균 입자 크기가 295 마이크론이고 생성물 중 60%가 175-840 마이크론 크기 범위 내가 되도록 분쇄한 후, 균질화하였다.
프리믹스 D: 바실루스의 심부 발효: 바실루스 서브틸리스(34KLB)의 샘플을 250 ml 에를렌마이어 플라스크에 첨가하였고 이는 또한 100 ml 증류된 탈이온수, 2 g 영양 배지(Nutrient Broth), 2 g AmberFerm(효모 추출물) 및 4 g 말토덱스트린의 멸균 용액을 포함하였다. 플라스크를 밀봉하고 30℃에서 궤도 진탕기에 위치시켰다. 배양물을 3-5일간 생장시켰다.
18 g 영양 배지, 18 g AmberFerm, 및 36 g 말토덱스트린을 900 ml 증류된 탈이온수와 함께 1 리터 플라스크에 첨가하여 보다 다량의 배양물을 제조하였다. 플라스크를 밀봉하고 상기와 같이 멸균하였다. 냉각시킨 후, 250 ml 에를렌마이어 플라스크로부터의 100 ml의 미생물 배지를 첨가하였다. 1 리터 플라스크를 밀봉하고, 궤도 진탕기에 위치시킨 후, 30℃에서 추가 3-5일간 생장시켰다.
발효기에 도입하기 전 최종 생장 단계에서, 1 리터 플라스크로부터의 배양물을 멸균 조건 하에 멸균된 6 리터 용기에 이송하고 정지기가 달성되기까지 포기(aeration)시키면서 30℃에서 발효를 계속하였다. 6 리터 배양 플라스크의 내용물을, 또한 1 부 효모 추출물 및 2 부 덱스트로스로 제조된 멸균 증식 배지로 충전된 발효기에 이송하였다. 발효기를 호기성 조건 하에 pH 7.0 및 35℃에서 세포 밀도가 1011 CFU/ml에 도달하기까지 가동하였다.
건조된 생성물에 대하여, 발효기를 필터를 통해 비우고, 원심분리하여, 세포량(cell mass)을 회수하였다. 세포량을 수분 수준이 약 5% 미만으로 감소하기까지 진공 건조시켰다. 건조된 생성물의 최종 미생물 활성은 통상적으로 약 108~1011 CFU/g였다.
최종 조성물을, 프리믹스 A, B, 및 C를 동일한 중량 비율로 조합하고 균질화되도록 혼합한 후 프리믹스 D 및 필러를 혼합하여 제조하였다. 통상적으로, 최종 프리바이오틱, 프로바이오틱 및 포스트바이오틱 조성물은 50 중량%의 조합된 프리믹스 A, B, 및 C, 3.33 중량%의 프리믹스 D, 및 46.67 중량%의 뉴트리-슈어™를 포함하였다. 상기 포뮬레이션 중 락토바실루스의 최종 활성은 6.9 x 109 cfu/g였고 바실루스의 최종 활성은 3.7 x 108 cfu/g였다.
실시예
2: 동물 사료 제품의
포뮬레이션
- 코팅
실시예 1 유래의 혼합물을, 하기 방법을 통해 동물 사료 펠릿(새우, 가금류, 돼지, 및 소(cattle))으로 포뮬레이팅하였다:
A. 1 킬로그램의 저융점 그리스(예: 융점이 47-48℃인 경화된 대두유)를 가열하여 융점을 약간 초과하도록 가열하였다(50℃). 그리스가 전부 용융되면, 1 킬로그램의 실시예 1 유래의 건조된 분말화된 조성물을 빠르게 교반하면서 용융물에 분산시켰다. 이후 999 킬로그램의 동물 사료 펠릿을 상기 용융물에 빠르게 첨가하고 빠르게 교반하여 균질한 코팅을 달성하였다. 펠릿을 실온에서 밤새 공기 건조시켰다. 코팅된 펠릿의 최종 미생물 활성은 107~109 CFU/g였다.
B. 대안적으로, 저융점 그리스(예: 융점이 47-48℃인 경화된 대두유)를 탱크에 첨가하고 교반하면서 50℃로 가열하였다. 용융된 그리스를, 강제 공기로 약 45℃로 가열된 사료 펠릿의 교반 베드(stirred bed) 상에 스프레이하였다. 그리스의 최종 중량은 1~5% w/w 범위였다. 실시예 1 유래의 건조된 조성물을 코팅된 사료에 0.01~1% w/w의 중량으로 첨가하고, 가열 공기 흐름을 정지시키고, 베드가 주위 온도에 도달하기까지 혼합 및 냉각되도록 하였다.
C. 1 킬로그램의 실시예 1 유래의 건조된 분말화된 조성물을 10 킬로그램의 정어리 기름에 격렬하게 혼합하여 분산시켰다. 교반을 계속하면서, 상기 혼합물을, 1% w/w의 최종 로딩을 달성하도록, 1 kg/분의 속도로, 60 헤르츠로 가동하는 리본 블렌더(ribbon blender)에서 혼합하는 사료 펠릿의 베드 상에 스프레이하였다.
실시예
3: 동물 사료 제품의
포뮬레이션
- 압출
하기 건조 믹스 조성물을 제조하였다:
충분한 물과 혼합하여 100% 조성물을 이루고 20분간 혼합하면서 고온(120-150℃) 처리하였다. 이 공정 중에 지방(2.6% w/w)을 혼합물에 첨가하였다. 조리 후 혼합물을 운반 구성(저전단, 저마찰)의 축 셋업을 갖는 Wenger TX52 2축 압출기 내로 운반하고 물을 23.5 kg/hr의 속도로 첨가하였다. 실시예 1 유래의 분말 조성물을 AccuRate 축 피드를 통해 압출기 내로 0.1 wt% 최종 조성물을 달성하기에 충분한 속도로 계량하였다. 생성된 페이스트를 3 mm 개구를 갖는 다이를 통해 가압하였다. 압출물을 4개 날 회전 나이프를 이용하여 3 mm 길이로 절단하였다. 결과로 생성된 펠릿을 수집하고 강제 공기를 통해 운반한 후, 오븐에서 수분 수준이 10% 미만이 되기까지 대류식으로 건조하였다. 최종 조성물의 미생물 활성은 106~108 CFU/g였다.
실시예
4: 새우 사료 임상실험
53일 새우 급이 연구를 미국 텍사스주 포트 아란사스 소재 텍사스 A&M 애그리라이프 마린컬쳐 래브러토리(Texas A&M AgriLife Marineculture laboratory)에서 수행하였다. 평균 초기 중량 0.005 그램의 PL10 동물을 3개의 처리 탱크 중에 동일하게 나누었다.
● 대조군(수크로스 단독)
● 실시예 1 유래 조성물의 0.25 ppm 투여
● 실시예 1 유래 조성물의 2.5 ppm 투여
각 탱크의 수용 밀도는 3384 새우/m2였다.
모든 탱크에 시험일 0-5 동안 체감(diminishing) FCR에 기초한 40% 단백질 식단을 제공하였다. 시험일 0-3 동안, FCR에서 필요로 하는 사료 외에, 9 g의 45% 단백질 표준 참고 식단(standard reference diet, SRD)을 매일 첨가하였다. 사료 단백질 비율 및 FCR을 탱크 내 남은 사료, 물 품질, 및 바이오플락(biofloc) 수준을 고려하여 매일 평가하였다. 실시예 1 조성물을 오전 급이 중에 액체(수중 용해된 건조 조성물)로서 매일 첨가하였다. 제로 물 교환 수로 시스템(zero water exchange raceway system)을 사용하였다. 53일 후 연구를 종료하고 각 탱크의 평균 새우 체중을 측정하였다. (도 1 및 도 2).
실시예
5: 가금류 급이 연구
본 연구는 환경 제어된 가금사에서 수행하였다. 새들은 우리에 수용되었다(17 병아리/m2). 계사를 하기 6가지 처리에 배정하였다:
1. 대조군 매시 사료
2. 대조군 펠릿 사료
3. 100 g 실시예 1 조성물/1 톤 매시 사료
4. 1000 g 실시예 1 조성물/1 톤 매시 사료
5. 100 g 실시예 1 조성물/1 톤 펠릿 사료
6. 1000 g 실시예 1 조성물/1 톤 펠릿 사료
실험 우리의 분포는 가금사 내 위치로부터의 임의 효과를 회피하도록 배열하였다. 우리는, 상이한 우리의 새들 간의 물리적 접촉을 방지하고, 바실루스 포자로의 상호 오염 위험을 최소화하도록 우리 사이에 이중 와이어 그물망을 가졌다. 새에게는 사료와 물에 대한 자유로운 접근을 허용하였다. 각 우리는 매일 수동 충전되는 호퍼 피더가 구비되었다. 새로운 톱밥을 깔짚으로서 사용하였다. 초기 육추 온도를 최초 3일 동안 31℃에서 유지한 후, 실험 종료시까지 20℃가 되도록 서서히 저하시켰다. 생애 최초 2일 동안, 24 h의 광을 제공하였으며, 이를 다음 12일간 22 h로, 그리고 남은 임상 시험 동안 20 h로 감소시켰다. 아이메리아(Eimeria) 백신을 제1일에 제공된 지시서에 따라 (부화장에서 Coccivac 스프레이에 의해) 수행하였다. 닭들은 다른 질환에 대해서는 백신 접종하지 않았다. 항생제 및 무 항콕시듐제(coccidiostat) 기본 식단을 1~42일의 시험 중에 이용하였다. 성분(g/kg)은 하기와 같다: 메이즈(maize) 450, 대두박 48% 185 전지 대두(full fat soyabean) 135, 밀 200 및 비타민-미네랄 포유용 프리믹스 30. 영양 분석(g/kg)은 하기와 같다: 미정제 단백질 200; 에테르 추출물 72; 미정제 섬유 41; 회분 64; 리신 11_5; 메티오닌 4_6; 시스틴 4_4. 실시예 1의 조성물을 매시 및 펠릿화된 사료에 100 g/t 사료 및 1000 g/t 사료로 첨가하였다. 모든 새들을 부화장으로부터 도착한 후 및 시험일 7, 14, 21, 28, 35 및 42에 개별 칭량하였다. 사료 소모량을 우리 기준으로 기록하고 동시에 생체중을 기록하였다. 조정된 사료 요구율(FCR) 결과는 도 3에 나타나 있다. 실시예 1의 조성물을 함유하는 펠릿화된 사료는 대조군에 비해 FCR에서 현저한 향상을 나타내었다.
실시예
6: 가금류 급이 연구
본 연구는 진흙 바닥을 갖는 콘크리트 블록 구조물에서 수행하였다. 상시 조명을 제공하였다. 새들은 새 1마리당 0.74ft2의 수용 밀도를 제공하는 우리에 수용되었다(27/우리). 계사를 하기 6가지 처리에 배정하였다(처리당 10 동형 우리)
1. 대조군 매시 사료
2. 대조군 펠릿 사료
3. 50 그램의 5% 용량의 조성물 1/mt 매시 사료
4. 500 그램의 5% 용량의 조성물 1/mt 매시 사료
5. 500 그램의 2% 용량의 조성물 1/mt 펠릿 사료
6. 500 그램의 4% 용량의 조성물 1/mt 펠릿 사료
새로운 톱밥을 시험 0일째에 사용하고 기사용 깔짚을 시험 4일째에 우리당 동일한 양(4 lb./우리)로 도입하였다. 4일째 추가된 깔짚을 배치 전에 균질화하였으며 이는 나이브한(naive) 닭에게 온건한 공격(mild challenge)을 제공할 충분한 수준의 E. 콜리, 살모넬라 및 클로스트리다를 포함하였다. 임상시험을 시작하기 전에, 모든 우리를 신중하게 점검하여 우리에 육계에 의한 우리 간의 이동이 가능한 개구부가 없도록 보장하였다. 병아리에게 사료와 물에 대한 자유로운 접근을 허용하였다. 0일째의 칭량 및 배치 전에, 새들에게 Coccivac®-B로 콕시듐증에 대해 스프레이 백신 접종하였다. 모든 우리는 연구 중에 매일 확인하였다. 관찰은 사료와 물에 대한 접근성, 및 원하는 온도 달성을 위한 육추기 제어를 포함하였다. 매시 형태의 사료를, 각각 시험일 0 - 14, 15 - 28 및 29 - 42의 포유용(starter), 육성용(grower) 및 완료기용(Finisher) 사료의 스케쥴로 공급하였다. 각 사료 유형은 부록 A에 나타낸 대형 기본 식단으로부터 제조하고 소분(aliquot)으로 나눈 후 시험 품목과 블렌딩한 후 상기 기재된 바와 같은 3가지 식단의 펠릿화하였다.
부록 A - 사료 제조법
실시예 1의 조성물을 상기 언급된 바와 같은 매시 및 펠릿 식단에 첨가하였다. 모든 새들을 실험일 0, 35 및 42일째에 우리에 의해 칭량하고 모든 우리 사료를 시험일 14, 28 및 42일째에 칭량하였다. 시험일 42일째 체중(BW) 및 조정된 사료 요구율(FCR) 결과는 하기 나타나 있다. 펠릿화된 사료 함유 조성물 실시예 1은 대조군 식단에 비해 체중 증가에서 5.44% 향상 및 FCR에서 3.2% 향상을 나타냈다.
실시예
7: 돼지 급이 연구- USA
절차
총 144마리 새끼 돼지(72 수퇘지, 72 암퇘지; 18-21일령)를 미국 일리노이대학교 수입 돼지 연구 실험실로부터 입수하였다. 2마리 수퇘지 및 2마리 암퇘지를 우리당 할당하고 돼지들에게 임상 시험 기간 전체에 걸쳐 사료 및 물에 대한 자유로운 접근권을 주었다. 돼지들을 완전 임의 배치법으로 이유 시기에 체중 및 가계에 의해 블록화하였다. 표준 3단계 급이 프로그램을 이용하였다:
실시예 1 유래 조성물을 각 단계의 식단의 상단에 0%, 0.05%, 또는 0.5%로 첨가하여 3가지 실험용 식단 처리를 생성하였다. 단계 1 및 2를 각각 1주 동안 공급하고 단계 3 식단을 연구의 최종 2주간 공급하였다.
3가지 처리 각각에 대해 12개의 동형 우리가 존재했고, 각 우리는 4마리 돼지를 포함하였다. 식단은 NRC(2012)에 기초한 생장 단계에 대한 영양 요구치를 만족시키거나 초과하도록 포뮬레이팅되었다.
돼지 및 급이 중량을 4주 기간 동안 매주 기록하여 체중(BW), 일당 증체량(average daily gain, ADG) 및 일당 사료 섭취량(average daily feed intake, ADFI)을 측정하고 이로부터 F:G를 주당 및 전체에 대해 계산하였다. 대조군에 비한 사료 요구 향상 백분율은 도 3에 나타나 있다.
실시예
8: 돼지 급이 연구 - 태국
우리당 45마리 돼지를 수용한 육성용 헛간(shed) 중 8개 우리를 90일 생장 실험에 이용하였다(총 360, 8주령, 초기 평균 BW = 19.5 kg). 돼지에게 임상 시험 기간 동안 실시예 1의 조성물을 함유하는 통상적인 매시 식단을 공급하였다. 돼지에게 우리당 45마리의 돼지 및 4개의 동형 우리로 완전 임의 배치법으로 배정하였다. 처리는 하기와 같다:
1. 대조군(생물학적 첨가 없음)
2. 매시 사료 1톤당 200 그램의 실시예 1의 조성물
90일 후, 대조군에 비해 일당 증체량은 15%이고 사료 요구 향상 백분율은 6.3%였다.
실시예
9: 젖소 급이 연구
실시예 1의 조성물을 1200두의 젖소에 대한 완료된 급여량의 5%의 동등물로 액형 사료 첨가제에 첨가하였다. 소에게 30일 동안 상기 식단을 공급하였다. 우유 생산량을 이 기간 동안 기록하고 전달과 비교하였다. 전달에 비해 우유 생산량에서 1.9% 증가가 관찰되었으며 유지방 함량이 3.8% 증가하였다.
SEQUENCE LISTING
<110> BiOWiSH Technologies Inc.
<120> ANIMAL FEED COMPOSITIONS AND FEED ADDITIVES
<130> BIOW-009/001WO 322049-2029
<140> PCT/US2015/042656
<141> 2015-07-29
<150> 62/030,460
<151> 2014-07-29
<150> 62/090,756
<151> 2014-12-11
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1668
<212> DNA
<213> Bacillus subtilis
<400> 1
agctcggatc cactagtaac ggccgccagt gtgctggaat tcgcccttag aaaggaggtg 60
atccagccgc accttccgat acggctacct tgttacgact tcaccccaat catctgtccc 120
accttcggcg gctggctcca taaaggttac ctcaccgact tcgggtgtta caaactctcg 180
tggtgtgacg ggcggtgtgt acaaggcccg ggaacgtatt caccgcggca tgctgatccg 240
cgattactag cgattccagc ttcacgcagt cgagttgcag actgcgatcc gaactgagaa 300
cagatttgtg rgattggctt aacctcgcgg tttcgctgcc ctttgttctg tccattgtag 360
cacgtgtgta gcccaggtca taaggggcat gatgatttga cgtcatcccc accttcctcc 420
ggtttgtcac cggcagtcac cttagagtgc ccaactgaat gctggcaact aagatcaagg 480
gttgcgctcg ttgcgggact taacccaaca tctcacgaca cgagctgacg acaaccatgc 540
accacctgtc actctgcccc cgaaggggac gtcctatctc taggattgtc agaggatgtc 600
aagacctggt aaggttcttc gcgttgcttc gaattaaacc acatgctcca ccgcttgtgc 660
gggcccccgt caattccttt gagtttcagt cttgcgaccg tactccccag gcggagtgct 720
taatgcgtta gctgcagcac taaaggggcg gaaaccccct aacacttagc actcatcgtt 780
tacggcgtgg actaccaggg tatctaatcc tgttcgctcc ccacgctttc gctcctcagc 840
gtcagttaca gaccagagag tcgccttcgc cactggtgtt cctccacatc tctacgcatt 900
tcaccgctac acgtggaatt ccactctcct cttctgcact caagttcccc agtttccaat 960
gaccctcccc ggttgagccg ggggctttca catcagactt aagaaaccgc ctgcgagccc 1020
tttacgccca ataattccgg acaacgcttg ccacctacgt attaccgcgg ctgctggcac 1080
gtagttagcc gtggctttct ggttaggtac cgtcaaggtg ccgccctatt tgaacggcac 1140
ttgttcttcc ctaacaacag agctttacga tccgaaaacc ttcatcactc acgcggcgtt 1200
gctccgtcag actttcgtcc attgcggaag attccctact gctgcctccc gtaggagtct 1260
gggccgtgtc tcagtcccag tgtggccgat caccctctca ggtcggctac gcatcgtcgc 1320
cttggtgagc cgttacctca ccaactagct aatgcgccgc gggtccatct gtaagtggta 1380
gccgaagcca ccttttatgt ctgaaccatg cggttcagac aaccatccgg tattagcccc 1440
ggtttcccgg agttatccca gtcttacagg caggttaccc acgtgttact cacccgtccg 1500
ccgctaacat cagggagcaa gctcccatct gtccgctcga cttgcatgta ttaggcacgc 1560
cgccagcgtt cgtcctgagc catgaacaaa ctctaagggc gaattctgca gatatccatc 1620
acactggcgg ccgctcgagc atgcatctag agggcccaat cgccctat 1668
Claims (20)
- a. 이눌린, 프럭토-, 글루코-, 또는 갈락토-올리고사카라이드를 포함하는 군으로부터 선택되는 프리바이오틱(prebiotic);
b. 고상 발효 및 액침 발효에 의해 생성된 락토바실루스(Lactobacillus) 미생물의 혼합물을 포함하는 프로바이오틱(probiotic) 박테리아로서, 결과로 얻어진 유기체는 약 10% 미만의 수분 함량으로 건조된 후 약 800 마이크론 미만의 평균 입자 크기를 갖는 분말을 생성하도록 분쇄된 것인 프로바이오틱 박테리아;
c. 액침 발효에 의해 생성된 바실루스(Bacillus) 프로바이오틱 박테리아로서, 결과로 얻어진 유기체는 약 10% 미만의 수분 함량으로 건조된 후 약 800 마이크론 미만의 평균 입자 크기를 갖는 분말을 생성하도록 분쇄된 것인 바실루스 프로바이오틱 박테리아;
d. 락토바실루스 종의 액침 발효 배지로부터 유래한 포스트바이오틱(postbiotic); 및
e. 필러 물질
을 포함하는 동물 사료 조성물. - 제1항에 있어서, 락토바실루스의 혼합물은 페디오코쿠스 아시딜락티시(Pediococcus acidilactici), 페디오코쿠스 펜토사세우스(Pediococcus pentosaceus), 및 락토바실루스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)을 포함하는 것인 조성물.
- 제2항에 있어서, 락토바실루스의 혼합물은
a. 페디오코쿠스 아시딜락티시, 페디오코쿠스 펜토사세우스, 및 락토바실루스 플란타룸의 고상 발효물; 및
b. 액침 발효에 의해 생성된 개별 락토바실루스 종으로서, 락토바실루스 박테리아 각각이 개별 혐기 발효되고, 회수되고, 건조된 후, 평균 입자 크기가 295 마이크론이고 혼합물 중 60%가 175-900 마이크론 크기 범위 내인 분말을 생성하도록 분쇄된 것인 개별 락토바실루스 종
을 혼합함으로써 제조되는 것인 조성물. - 제3항에 있어서, 고상 발효 유래의 락토바실루스와 액침 발효 유래의 락토바실루스는 동일한 중량 비율로 혼합되는 것인 조성물.
- 제1항에 있어서, 바실루스는 서열 번호 1의 16S 핵산 서열을 갖는 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis)인 조성물.
- 제1항에 있어서, 포스트바이오틱은
a. 페디오코쿠스 아시딜락티시, 페디오코쿠스 펜토사세우스, 및 락토바실루스 플란타룸의 개별 혐기 발효물 각각의 원심분리로부터 상청액을 수집하는 단계;
b. 단계 (a)로부터 얻은 상청액들을 조합하는 단계;
c. 혼합된 상청액을 약 5 중량% 미만의 수분 함량으로 냉동 건조하는 단계; 및
d. 건조된 혼합된 상청액을 평균 입자 크기가 295 마이크론이고 혼합물 중 60%가 175-900 마이크론 크기 범위 내가 되도록 분쇄하는 단계
에 의해 제조되는 것인 조성물. - 제1항에 있어서, 필러는 쌀겨, 대두 껍질, 또는 밀기울, 쌀가루, 대두가루, 또는 밀가루, 옥수숫가루, 호밀, 보리, 수수, 덱스트로스, 수크로스, 프럭토스, 말토덱스트린, 녹말 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 것인 조성물.
- 제1항에 있어서, 프리바이오틱 성분, 락토바실루스 프로바이오틱 성분, 및 포스트바이오틱 성분을 동일한 중량 비율로 조합하는 것인 조성물.
- 제8항에 있어서, 바실루스 프로바이오틱을 프리바이오틱, 락토바실루스 프로바이오틱, 및 포스트바이오틱 혼합물과 1:1 내지 1:20의 비로 혼합하는 것인 조성물.
- 제1항에 있어서, 프리바이오틱, 프로바이오틱 및 포스트바이오틱 성분 대 곡물 필러의 비는 약 1:1 내지 약 3:1의 범위인 조성물.
- 제1항에 있어서, 최종 박테리아 농도는 약 106~1011 콜로니 형성 단위(cfu)/그램인 조성물.
- 제1항의 조성물을 0.01~10.0% 포함하는 동물 사료 조성물.
- 제12항에 있어서, 프리바이오틱, 프로바이오틱, 포스트바이오틱 혼합물은 왁스, 지방, 당, 오일 또는 폴리사카라이드 바인더를 이용하여 사료 입자 상에 코팅되는 것인 동물 사료 조성물.
- 제12항에 있어서, 프리바이오틱, 프로바이오틱, 포스트바이오틱 혼합물은 사료 펠릿 내로 통합되는 것인 동물 사료 조성물.
- 제12항에 있어서, 프리바이오틱, 프로바이오틱, 포스트바이오틱 혼합물은 매시 사료(mash feed) 내로 통합되는 것인 동물 사료 조성물.
- 제1항의 프리바이오틱, 프로바이오틱 및 포스트바이오틱 혼합물을 동물에게 투여하는 방법으로서, 상기 혼합물은 동물의 식수원에 용해되는 것인 방법.
- 제16항에 있어서, 프리바이오틱, 프로바이오틱 및 포스트바이오틱 혼합물은 수원에 1000 리터당 약 0.1~1 kg으로 투여되는 것인 방법.
- 동물에게 제1항 내지 제17항 중 어느 하나의 항에 따른 동물 사료, 사료 첨가제 또는 보충제를 투여하는 것을 포함하는, 동물의 건강 및 또는 질병 저항성을 향상시키는 방법.
- 제18항에 있어서, 동물의 건강을 향상시키는 것은 체중 증가를 증가시키는 것, 배설물 냄새를 감소시키는 것 또는 사료 단백질의 이용률을 증가시키는 것을 포함하는 것인 방법.
- 제18항 또는 제19항에 있어서, 동물은 새우, 물고기, 가금류, 돼지, 반추동물 또는 반려동물인 방법.
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