KR20160018572A

KR20160018572A - 미생물에 기반한 폐수 처리 조성물 및 그 사용 방법

Info

Publication number: KR20160018572A
Application number: KR1020157035983A
Authority: KR
Inventors: 리차드 카펜터; 마이클 에스 쇼웰; 조엘라 반즈; 니루팜 팔
Original assignee: 바이오위시 테크놀로지스, 인크.; 칼 폴리 코포레이션
Priority date: 2013-05-20
Filing date: 2014-05-20
Publication date: 2016-02-17
Also published as: HK1220995A1; CA2912767A1; EP3453771A1; US10988728B2; US20140342437A1; MX359206B; AU2014268716A1; WO2014189963A1; MX2015016064A; CN105745319B; EP2999801B1; DK2999801T3; RU2015154102A; JP6359091B2; EP2999801A1; CN105745319A; JP2016528875A

Abstract

본 발명은, 폐수 처리 및 정화, 수확 후의 과일 및 채소 표면으로부터의 유기물 제거, 및 과일 및 채소의 저장 병해 감소에 유용한 미생물 조성물에 관한 것이다.

Description

미생물에 기반한 폐수 처리 조성물 및 그 사용 방법{MICROBIAL-BASED WASTE WATER TREATMENT COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF}

관련 출원

본 출원은 2013년 5월 20일에 출원된 가출원 USSN 61/825,332호를 기초로 우선권과 그 이익을 주장하며, 상기 가출원의 내용은 본원에서 그 전체가 참고로 포함된다.

발명의 분야

본 발명은 미생물 함유 폐수 처리 조성물 및 상기 조성물의 사용 방법에 관한 것이다.

다양한 하수 처리 방법 및 플랜트가 공지되어 있다. 대부분의 대형 도시 하수 처리 시스템은, 벨트 프레스와 같은 기계적 분리 수단을 통해 폐수에 포함된 고형물을 액체로부터 분리하기 위해 폴리머를 사용하거나 사용하지 않고 상기 고형물을 순차적으로 농축시키는 일련의 침전지를 이용한다. 수로로 안전하게 방출시킬 수 있는 깨끗한 방출수를 얻기 위해, 폐수 처리 공정은 유해 오염물을 제거하기 위해 3개 또는 4개의 상이한 처리 단계를 이용한다.

예비 폐수 처리는 통상적으로, 침전된 고형물을 제거하기 위해, 스크리닝된 폐수의 중력 침전을 포함한다. 폐수 중에 부유된 고형물의 절반은 1차 처리에 의해 제거된다. 이 공정으로부터의 나온 잔류 물질은 1차 슬러지라 불리는 농축 부유물이며, 이것은 추가 처리를 거쳐 바이오솔리드(biosolid)로 된다.

2차 폐수 처리는 생분해성 물질을 제거하는 생물학적 프로세스에 의해 수행된다. 이 처리 공정은 용해 및 부유된 유기물을 소비하여 이산화탄소와 다른 부산물을 생성하는 미생물을 이용한다. 유기물은 또한 미생물 군집을 유지하는 데 필요한 영양분을 제공한다. 미생물이 생육함에 따라, 그 밀도가 증가하고 이들은 처리 탱크의 바닥에 가라앉아, 2차 슬러지로 불리는 농축 부유물, 생물학적 슬러지, 폐활성 슬러지 또는 살수 여상 부식으로서 정화된 물로부터 분리된다.

식수원으로의 직접 방출과 같이 매우 고품질의 방출수가 요구될 경우 3차 또는 더 고도의 처리가 이용된다. 3차 처리를 통해 수집된 잔류 고형물은 최종 방출수를 정화하기 위해 첨가되는 화학약품으로 주로 이루어지며, 이것은 방출 전에 다시 회수되어 바이오솔리드에 혼입되지 않는다.

과잉의 원치않는 생물학적 물질 또는 다른 오염 또는 불순 화합물을 함유하는 물 등의 물질을 정화하기 위해 생물학적 정화(bioremediation)를 수행할 수 있는 조성물 및 방법이 필요하다.

다양한 측면에서, 본 발명은 폐수 처리를 증대함에 있어서 유기물을 분해시키기 위한 미생물의 혼합물을 함유하는 조성물을 제공한다. 중요한 점은, 본 발명의 조성물은 폐수에 완전히 분산되고 사용 전에 박테리아의 사전 활성화를 요하지 않는다는 것이다.

다양한 측면에서, 본 발명은 유기물 분해용 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 바실러스(Bacillus) 유기체의 혼합물 또는 바실러스와 락토바실러스(Lactobacillus)의 혼합물을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 상기 조성물은 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 바실러스 아밀로리퀴페시엔스(Bacillus amyloliquefaciens), 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis), 바실러스 푸밀러스(Bacillus pumilus), 페디오코커스 애시디락티시(Pediococcus acidilactici), 페디오코커스 펜토사세우스(Pediococcus pentosaceus) 및 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)을 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 바실러스 서브틸리스, 바실러스 아밀로리퀴페시엔스, 바실러스 리체니포르미스, 바실러스 푸밀러스, 바실러스 메가테리움(Bacillus megaterium), 바실러스 코아귤란스(Bacillus coagulans), 및 파에니바실러스 폴리믹사(Paenibacillus polymyxa)를 포함한다. 상기 혼합물 중의 각각의 유기체는 개별적으로 호기(바실러스) 또는 혐기(락토바실러스) 발효되고, 회수되고, 건조되고, 평균 입자 크기가 약 200 마이크론이고 혼합물의 약 60% 초과가 100∼800 마이크론의 크기 범위에 있는 분말을 생성하도록 분쇄된다. 몇몇 실시형태에서, 바실러스 대 락토바실러스의 비는 1:10∼10:1이다. 바람직하게는, 바실러스 대 락토바실러스의 비는 1:10의 바실러스 대 락토바실러스이다. 다른 실시형태에서, 락토바실러스의 비는 1:1:1이다.

일부 양태에서, 상기 조성물은 수분 함량이 약 5% 미만이고, 최종 박테리아 농도가 조성물 그램당 약 10⁵∼10¹¹의 콜로니 형성 단위(CFU)이다.

다양한 측면에서, 상기 조성물은 덱스트로스 일수화물과 같은 비활성 담체를 추가로 함유한다. 바람직하게는, 덱스트로스 일수화물은 75∼95%(w/w)의 농도로 존재한다.

다른 측면에서, 상기 조성물은 유기 유화제를 추가로 포함한다. 유기 유화제는, 예를 들어, 대두 레시틴이다. 바람직하게는, 유기 유화제는 약 2∼5%(w/w)의 농도로 존재한다.

본 발명의 바실러스 및 락토바실러스 혼합물을 함유하는 조성물을 폐수와 접촉시킴으로써 폐수를 처리하는 방법도 포함한다. 폐수는, 예를 들어, 도시 하수, 주택 하수, 또는 산업 폐수이다. 폐수는 음식물, 지방(fat), 오일(oil), 그리스(grease), 양조장, 농업, 또는 상품 폐기물을 포함한다. 이 방법은 폐수 중의 생물학적 산소 요구량(BOD), 총 부유 고형물(TSS), 총 켈달 질소(TKN) 및 유지류( FOG; fats, oils and grease)를 감소시킨다.

본 발명은 본 발명의 바실러스 및 락토바실러스 혼합물을 함유하는 조성물을 수영장 물과 접촉시키는 것을 포함하는 수영장 물 처리 방법을 더 포함한다. 몇몇 측면에서, 수영장 여과 유닛을 상기 조성물과 접촉시킴으로써 물을 접촉시킨다. 다른 측면에서, 상기 조성물은 고체 지지체 내에 매립되어 있다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 바실러스 및 락토바실러스 혼합물을 함유하는 조성물을 인조 잔디와 접촉시킴으로써 인조 잔디를 세정하는 방법을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 과일 또는 채소로부터의 폐수를 본 발명의 바실러스 혼합물과 접촉시킴으로써 상기 폐수를 정화하는 방법을 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 과일 또는 채소를 본 발명의 바실러스 혼합물과 접촉시킴으로써 과일 및 채소 표면으로부터 유기물을 제거하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 과일 또는 채소의 저장 수명 및/또는 외관을 개선한다. 과일은, 예를 들어 바나나이다.

또한, 본 발명은, 본 발명의 조성물을 제조하는 방법을 제공한다. 바실러스 및 락토바실러스를 포함하는 박테리아의 혼합물은, 각각의 바실러스 유기체를 개별적으로 호기 발효시키고; 각각의 락토바실러스 유기체를 개별적으로 혐기 발효시키고; 각각의 바실러스 및 락토바실러스 유기체를 회수하고; 회수된 유기체를 건조시키고; 건조된 유기체를 분쇄하여 분말을 생성하고; 각각의 바실러스 분말을 배합하여 바실러스 혼합물을 생성하고; 각각의 락토바실러스 분말을 등량으로 배합하여 락토바실러스 혼합물을 생성하고; 바실러스 혼합물과 락토바실러스 혼합물을 1:10∼10:1의 비로 배합함으로써 제조한다. 바실러스 유기체는 바실러스 서브틸리스, 바실러스 아밀로리퀴페시엔스, 바실러스 리체니포르미스, 및 바실러스 푸밀러스이다. 락토바실러스는 페디오코커스 애시디락티시, 페디오코커스 펜토사세우스 및 락토바실러스 플란타룸, 바실러스 메가테리움, 바실러스 코아귤란스, 및 파에니바실러스 폴리믹사를 포함한다. 상기 혼합물은 수분 함량이 약 5% 미만이고; 최종 박테리아 농도가 조성물 그램당 약 10⁵∼10¹¹의 콜로니 형성 단위(CFU)이다.

바실러스 유기체를 포함하는 박테리아 혼합물은, 바실러스 서브틸리스, 바실러스 아밀로리퀴페시엔스, 바실러스 리체니포르미스, 바실러스 푸밀러스, 바실러스 메가테리움, 바실러스 코아귤란스, 및 파에니바실러스 폴리믹사를 개별적으로 호기 발효시키고; 각각의 유기체를 회수하고; 회수된 유기체를 건조시키고; 건조된 유기체를 분쇄하여 분말을 생성하고; 각각의 바실러스 분말을 배합함으로써 제조한다. 상기 혼합물은 수분 함량이 약 5% 미만이고; 최종 박테리아 농도가 조성물 그램당 약 10⁵∼10¹¹의 콜로니 형성 단위(CFU)이다.

달리 정의하지 않는다면, 본원에서 사용되는 모든 기술 용어와 과학 용어는 본 발명이 속하는 분야의 통상의 기술자가 일반적으로 이해하고 있는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것과 유사 또는 동등한 방법 및 재료가 본 발명의 실시에 사용될 수 있지만, 적절한 방법 및 재료를 이하에 기재한다. 본원에서 언급되는 모든 간행물, 특허 출원, 특허 및 기타 참고문헌은 그 전체가 본원에 명백하게 참고로 포함된다. 상충이 있는 경우, 정의를 포함한 본 명세서는 조정될 것이다. 또한, 본원에 기재된 재료, 방법 및 실시예는 단지 예시적인 것으로 한정을 의도한 것이 아니다.

본 발명의 다른 특징 및 이점은 이하의 상세한 설명 및 청구범위로부터 명백해질 것이며 이들에 의해 포괄된다.

도 1은 본 발명의 미생물 조성물의 BOD 테스트 결과를 도시한다.
도 2는 주택(residential) LPP 시스템에서의 BOD 감소 결과를 도시한다.
도 3은 주택 LPP 시스템에서의 FOG 감소를 도시한다.
도 4는 주택 LPP 시스템에서의 TSS 감소를 도시한다.
도 5는 본 발명 조성물로 처리하였을 때의 바나나 세척수의 혼탁도 감소를 보여주는 사진이다.
도 6은 종래와 같이 처리된 바나나(a)와 본 발명의 조성물로 처리된 바나나(b)를 보여주는 사진이다.

본 발명은 폐수 처리 및 정화를 증대시키기 위한 미생물 조성물을 제공한다. 몇몇 측면에서, 미생물 조성물은 바실러스 박테리아와 락토바실러스 박테리아의 혼합물을 함유하며, 여기서 바실러스 대 락토바실러스의 비는 1:10∼10:1의 범위이다. 다른 측면에서, 미생물 조성물은 바실러스의 혼합물을 포함한다. 구체적으로, 바실러스 및 락토바실러스 조성물은 바실러스 서브틸리스, 바실러스 아밀로리퀴페시엔스, 바실러스 리체니포르미스, 바실러스 푸밀러스, 페디오코커스 애시디락티시, 페디오코커스 펜토사세우스 및 락토바실러스 플란타룸의 혼합물을 포함한다. 바실러스 조성물은 바실러스 서브틸리스, 바실러스 아밀로리퀴페시엔스, 바실러스 리체니포르미스, 바실러스 푸밀러스, 바실러스 코아귤란스, 바실러스 메가테리움, 및 파에니바실러스 폴리믹사의 혼합물을 포함한다.

중요한 점은, 상기 조성물은, 물에 첨가 시 완전히 분산되고, 다른 폐수 처리 미생물 조성물과는 달리, 상기 조성물은 사용 전에 박테리아의 사전 활성화를 필요로 하지 않는다는 것이다.

상기 미생물 조성물은 폐수 중의 생물학적 산소 요구량(BOD), 총 부유 고형물(TSS), 총 켈달 질소(TKN), 및 유지류(FOG)를 감소시킨다. 상기 조성물은 또한 라텍스를 분해시켜, 바나나, 또는 다른 과일 및 채소를 세척하는 데 사용되는 물로부터 라텍스를 제거할 수 있도록 하고, 수영장으로부터 쌓인 스컴(scum)과 조류를 제거하는 데 사용된다. 추가로, 상기 조성물은, 놀랍게도, 바나나, 또는 다른 과일 및 채소 세척으로부터 나오는 폐수로부터의 라텍스를 분해할 뿐만 아니라, 바나나 수확 시의 저장 병해(post-harvest disease)의 발생률을 감소시킨다는 것을 발견하였다.

본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "미생물의, 박테리아" 또는 "미생물"은 이익을 제공하는 미생물을 의미한다. 본 발명에 따른 미생물은 생존성 또는 비생존성일 수 있다. 비생존성 미생물은 대사적으로 활성이 있다. "대사적으로 활성이 있는"이란 이들이 적어도 어느 정도 잔류 효소 활성, 또는 해당 미생물 유형에 특징적인 2차 대사산물 활성을 나타낸다는 것을 의미한다.

본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "비생존성"이란 박테리아 집단이 임의의 알려진 조건 하에 복제할 수 없음을 의미한다. 그러나, 집단 내의 통상적인 생물학적 변이로 인해, 그 집단의 적은 비율(즉, 5% 이하)이 여전히 생존할 수 있고, 따라서 적절한 생육 조건 하에 집단 내에서 복제할 수 있으며, 이것은 다르게 비생존성으로서 정의된다.

본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "생존성 박테리아"는 복제가 가능한 적절한 조건 하에 복제할 수 있는 박테리아 집단을 의미한다. (상기에 기재된 것과 같은) "비생존성"의 정의를 충족하지 못하는 박테리아 집단은 "생존성"으로 간주된다.

본원에서 사용되는 바와 같이 "폐수 보유 설비"는 유기 폐수의 보유, 저장 및 처리를 위한 설비를 의미한다.

본원에서 사용되는 바와 같이 "폐수"는 원칙적으로 주택, 상업용 건물, 기관으로부터 나오는 생활 하수를 가리키며, 지하수, 지표수 및/또는 빗물을 포함한다. 폐수는 또한 과일 및 채소 등의 산물의 처리 또는 세척으로부터 나오는 물을 포함한다. 본 발명의 목적상, 수영장 물은 "폐수"의 정의에 포함된다.

본원에서 사용되는 바와 같이 "처리"는 유기물의 효율적인 분해를 향상시키기 위해 설계된 미생물을 유기 폐기물에 접종하는 방법을 말한다.

달리 명시하지 않는다면, 본원에서 언급된 모든 백분율은 조성물의 총 중량으로 기준으로 한 중량 백분율이다.

본 발명에 따른 생성물에 사용되는 미생물은 임의의 통상적인 중온성 박테리아일 수 있다. 박테리아는 락토바실러스과 및 바실러스과로부터 선택되는 것이 바람직하다. 더 바람직하게는, 바실러스속 및 락토바실러스속으로부터 선택되는 박테리아가 본 발명의 조성물에 포함된다.

바실러스 대 락토바실러스의 비가 1:10∼10:1인 조성물이 바람직하다. 바람직하게는, 바실러스 대 락토바실러스의 비는 1:10이다.

다른 바람직한 조성물은 락토바실러스의 비가 바람직하게는 1:1:1인 것이다.

본 발명에 따라 사용되는 박테리아의 수준은 그 유형에 따라 달라진다. 본 발명의 생성물은 그램당 약 10⁵∼10¹¹의 콜로니 형성 단위의 양으로 박테리아를 포함하는 것이 바람직하다.

본 발명에 따른 박테리아는 당업계에 공지된 임의의 표준 발효법을 이용하여 생산할 수 있다. 예를 들어, 고체 기질(solid substrate) 발효 또는 액침 발효(submerged liquid fermentation)가 있다. 발효된 배양물은 혼합 배양물 또는 단일 단리물일 수 있다.

몇몇 실시형태에서, 박테리아를 탄수화물 존재 하에 혐기 발효시킨다. 적절한 탄수화물은 이눌린, 프럭토-올리고당, 및 글루코-올리고당을 포함한다.

박테리아 조성물은 분말화된 건조된 형태이다. 대안으로, 박테리아 조성물은 액체 형태이다.

발효 후, 박테리아를 당업계에 공지된 임의의 방법으로 회수한다. 예를 들어, 박테리아를 여과 또는 원심분리에 의해 회수한다.

상기 박테리아를 당업계에 공지된 임의의 방법으로 건조시킨다. 예를 들어, 박테리아를 공기 건조시키거나, 액체 질소로 냉동시켜 건조시킨 후 동결건조시킨다.

본 발명에 따른 조성물은 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 미만의 수분 함량을 갖도록 건조된다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 조성물은 5% 미만의 수분 함량을 갖도록 건조된다.

몇몇 실시형태에서, 동결건조 분말을, 입자 크기를 줄이기 위해 분쇄한다. 박테리아를 10℃, 9℃, 8℃, 7℃, 6℃, 5℃, 4℃, 3℃, 1℃, 또는 0℃ 미만, 또는 그 미만의 온도에서 코니칼 그라인딩(conical grinding)에 의해 분쇄한다. 바람직하게는, 온도는 4℃ 미만이다.

예를 들어, 입자 크기는 1500, 1400, 1300, 1200, 1100, 1000, 900, 800, 700, 600, 또는 500 마이크론 미만이다. 바람직하게는, 동결건조된 분말을, 입자 크기가 800 마이크론 미만이 되도록 입자 크기를 줄이기 위해 분쇄한다. 약 400 마이크론 미만의 입자 크기가 가장 바람직하다. 가장 바람직한 실시형태에서, 건조된 분말은 200 마이크론의 평균 입자 크기를 가지며, 혼합물의 60%가 100∼800 마이크론 범위의 크기를 갖는다. 다양한 실시형태에서, 동결건조된 분말을 균질화한다.

다양한 실시형태에서, 박테리아 조성물을 텍스트로스 일수화물과 같은 비활성 담체와 혼합한다. 덱스트로스 일수화물은 적어도 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그보다 높은 농도로 존재한다. 바람직하게는, 덱스트로스 일수화물은 75∼95%(w/w)의 농도로 존재한다.

다른 측면에서, 박테리아 조성물은, 예를 들어 대두 레시틴과 같은 유기 유화제를 포함한다. 유기 유화제는 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9% 또는 10%의 농도로 존재한다. 바람직하게는, 유기 유화제는 2∼5%(w/w)의 농도로 존재한다.

추가로, 필요에 따라, 생존 확률을 더 증가시키기 위해 박테리아 조성물을, 예를 들어 당 매트릭스, 지방 매트릭스 또는 다당류 매트릭스에 캡슐화할 수 있다.

본 발명의 박테리아 조성물은 상업 폐수, 도시 폐수, 주택 수영장 물을 비롯하여, 상업 폐수, 도시 폐수, 산업 폐수 및 주택 폐수를 처리하는 데 사용된다. 박테리아 조성물은 또한, 예를 들어 사용된 애스트로터프(Astroturf)와 같은 인조 잔디 표면으로부터 유기물을 제거하는 데 사용될 수 있다.

하나 이상의 실시형태는 일반적으로 폐수 처리 방법에 관한 것이다. 폐수 처리 시스템은 통상적인 운전 중에 지역사회 부문, 산업 부문 또는 주거 부문의 공급원으로부터 나오는 폐수를 받아들 수 있다. 예를 들어, 폐수는 도시 또는 다른 대규모 하수 처리 시스템으로부터 운반될 수 있다. 대안으로, 폐수는, 예를 들어, 식품 가공 또는 펄프 및 제지 공장에 의해 발생할 수 있다.

폐수는 일반적으로 1종 이상의 바람직하지 않은 유기물 성분을 함유하는 임의의 폐수 스트림일 수 있다. 본 발명에 의해 처리될 수 있는 폐기물은, 이에 한정되는 것은 아니지만, 인간 및 동물 폐기물을 비롯하여 대사 과정에 의해 발생된 유기 폐기물뿐만 아니라, 산업 폐수, 오수, 하수 등을 포함한다.

본 발명에 따른 수용액 또는 건조 조성물은 하수 및 다른 폐수 중의 생물학적 산소 요구량(BOD), 총 부유 고형물(TSS), 총 켈달 질소(TKN), 및 유지류(FOG)를 감소시키는 데 이용될 수 있다. 본 발명의 조성물은 또한 스컴을 제거하고 조류를 감소시키기 위해 수영장 물을 처리하는 데 이용될 수 있다.

상기 조성물은 바나나를 세척하는 데 사용된 물의 라텍스를 생분해한다. 본 발명의 조성물은 또한, 예를 들어 과일 및 채소의 가공 또는 세척 과정에서, 과일 및 채소의 표면으로부터 유기물을 제거하는 데 유용하며, 이것은 과일의 저장 수명과 외관을 개선하고 저장 병해의 발생률을 줄이는 데 도움이 된다.

상기 조성물의 용액은 처리할 물질(액체, 슬러지, 또는 고체)에 펌핑하거나, 그 물질의 표면에 또는 그 물질 주변의 공간으로 분무하거나, 정화할 물이 통과하는 필터에 적용할 수 있다. 건조 물질을 적용 시점에 슬러리 또는 용액으로 혼입하여 유사한 방식으로 적용할 수 있다.

본 발명의 조성물은 임의의 적절한 박테리아 조성물 제조 방법에 의해 제조된다. 바람직하게는, 바실러스 및 락토바실러스를 포함하는 박테리아 혼합물을, 각각의 바실러스 유기체를 개별적으로 호기 발효시키고; 각각의 락토바실러스 유기체를 개별적으로 혐기 발효시키고; 각각의 바실러스 및 락토바실러스 유기체를 회수하고; 회수된 유기체를 건조시키고; 건조된 유기체를 분쇄하여 분말을 얻고; 각각의 바실러스 분말을 배합하여 바실러스 혼합물을 생성하고; 각각의 락토바실러스 분말을 등량으로 배합하여 락토바실러스 혼합물을 생성하고; 바실러스 혼합물과 락토바실러스 혼합물을 1:10∼10:1의 비로 배합함으로써 제조한다. 바실러스 유기체는 바실러스 서브틸리스, 바실러스 아밀로리퀴페시엔스, 바실러스 리체니포르미스, 및 바실러스 푸밀러스이다. 락토바실러스는 페디오코커스 애시디락티시, 페디오코커스 펜토사세우스 및 락토바실러스 플란타룸, 바실러스 메가테리움, 바실러스 코아귤란스, 및 파에니바실러스 폴리믹사를 포함한다. 상기 혼합물은 수분 함량이 약 5% 미만이고; 최종 박테리아 농도가 조성물 그램당 약 10⁵∼10¹¹의 콜로니 형성 단위(CFU)이다.

본 발명은 하기 실시예에 의해 보다 더 잘 이해될 수 있다. 하기 실시예는 예시를 위해 제시된 것으로 본 발명을 한정하려는 것으로 간주되어서는 안 된다.

실시예

실시예 1: 미생물 종의 준비

본 발명의 미생물 혼합물을 당업계에 공지된 표준 딥 탱크(deep tank) 액침 발효 공정을 이용하여 증식시킨다.

바실러스 종

바실러스 서브틸리스, 바실러스 아밀로리퀴페시엔스, 바실러스 리체니포르미스, 및 바실러스 푸밀러스의 개개의 스타터 배양물을 하기의 일반적 프로토콜에 따라 증식시켰다: 영양액(Nutrient Broth) 2 g, 앰버펌(AmberFerm)(효모 추출물) 2 g 및 말토덱스트린 4 g을 250 ml 에를렌마이어(Erlenmeyer) 플라스크에 첨가하였다. 100 ml의 증류된 탈이온수를 첨가하고, 모든 건조 성분들이 용해될 때까지 플라스크를 교반하였다. 플라스크에 뚜껑을 덮고, 121℃ 및 15 psi로 운전되는 오토클레이브에 넣어 30분 동안 두었다. 냉각 후, 플라스크에 순수한 미생물 균주 중 하나를 1 ml 접종하였다. 플라스크를 밀봉하고 30℃의 오비탈 쉐이커 위에 두었다. 배양물을 3∼5일 동안 증식시켰다. 이 과정은 혼합물 중의 각각의 미생물에 대해 반복하였다. 이렇게 하여, 바실러스 서브틸리스, 바실러스 아밀로리퀴페시엔스, 바실러스 리체니포르미스, 및 바실러스 푸밀러스의 스타터 배양물을 제조하였다.

영양액 18 g, 앰버펌 18 g 및 말토덱스트린 36 g을 900 ml의 증류된 탈이온수가 들어 있는 1 L 플라스크에 첨가하여 더 큰 배양물을 만들었다. 이 플라스크를 밀봉하여 상기와 같이 멸균하였다. 냉각 후, 250 ml 에를렌마이어 플라스크로부터의 미생물 배지 100 ml를 첨가하였다. 1 L 플라스크를 밀봉하고, 오비탈 쉐이커 위에 놓고, 30℃에서 3∼5일 더 증식시켰다.

발효조에 도입하기 전 최종 증식기에, 1 L 플라스크로부터의 배양물을, 멸균 조건 하에, 멸균된 6 L 용기에 옮겨서 정지상에 도달할 때까지 폭기하면서 30℃에서 발효를 계속하였다. 각각의 6 L 배양 플라스크 내의 내용물을, 역시 효모 추출물 1부와 덱스트로스 2부로 제조된 멸균 배양 배지가 충전되어 있는 개개의 발효조로 옮겼다. 개개의 발효조는 pH 7.0 및 각각의 종에 대한 최적 온도에서 호기성 조건 하에 운전되었다:

각각의 발효조를, 세포 밀도가 평균 10¹¹ CFU/ml에 도달할 때까지 가동시킨다. 그 후, 개개의 발효조를 비우고, 여과하고, 원심분리하여 박테리아 세포 덩어리를 얻고, 계속해서 이것을, 수분 함량이 5% 아래로 떨어질 때까지 진공 하에 건조시킨다. 건조된 샘플의 최종 미생물 카운트는 10¹⁰∼10¹¹ CFU/g이다.

락토바실러스 종

개개의 정제된 페디오코커스 애시디락티시, 페디오코커스 펜토사세우스 및 락토바실러스 플란타룸의 단리물을 각각의 종에 대한 최적 온도와 pH에서 표준 혐기성 액침 발효 프로토콜을 이용하여 별개의 발효조에서 증식시켰다:

발효 후, 개개의 배양물을 여과하고, 원심분리하고, 수분 함량이 약 5% 미만이 되도록 동결건조시킨 후, 약 200 마이크론의 입자 크기로 분쇄한다.

건조된 바실러스 및 락토바실러스 미생물을 배합하여, 바실러스 서브틸리스, 바실러스 아밀로리퀴페시엔스, 바실러스 리체니포르미스, 바실러스 푸밀러스, 페디오코커스 애시디락티시, 페디오코커스 펜토사세우스, 및 락토바실러스 플란타룸을, 1:10∼10:1의 총 바실러스 대 락토바실러스의 비와 10⁸∼10¹⁰ CFU/g의 미생물 활성으로 포함하는 건조된 최종 미생물 조성물을 얻는다.

실시예 2: 고체 기질 발효에 의한 미생물 종의 준비

본 발명의 미생물 혼합물은 하기 프로세스에 따라 고체 기질 발효를 통해 제조할 수 있다:

바실러스 종

낙농 12% 미네랄 믹스 4 파운드, 쌀겨 60 lbs, 및 대두 가루 30 lbs를 스크루 오거를 갖는 재킷형 수평 혼합기에 첨가하였다. 혼합하면서 물과 스팀을 첨가하여 슬러리를 얻었다. 2분 동안 혼합한 후, 300 lbs의 밀기울을 혼합기에 첨가한 후, 물과 스팀을 더 첨가하여 슬러리를 다시 만들었다. 혼합기 온도를 35∼36℃로 조절하면서, 초기 미생물 활성 약 1x10¹⁰ CFU/g으로, 바실러스 서브틸리스, 바실러스 아밀로리퀴페시엔스, 바실러스 리체니포르미스 및 바실러스 푸밀러스를 포함하는 건조 미생물 혼합물 4 lbs를 첨가하였다. 혼합기를 밀폐시키고, 온도를 34℃로 조절하고, 내용물을 최대 4일 동안 혼합하였다. 발효 후, 혼합기의 내용물을 금속 트레이에 비우고 공기 건조시켰다. 건조 후, 생성물을 약 200 마이크론 미만의 입자 크기로 분쇄하였다. 얻어진 최종 바실러스 생성물은 약 1x10¹¹ CFU/g의 미생물 카운트와 약 5% 미만의 수분을 포함하였다.

락토바실러스 종

이눌린 1부, 단리된 대두 단백질 2.2부, 쌀가루 8부와, 0.25% w/w 염화나트륨, 0.045% w/w 탄산칼슘, 0.025% w/w 황산마그네슘, 0.025% w/w 인산나트륨, 0.012% w/w 황산제일철 및 29.6% 물로 이루어진 혼합물 상에서, 페디오코커스 애시디락티시, 페디오코커스 펜토사세우스 및 락토바실러스 플란타룸의 혼합 배양물을, GMP 조건 하에, 최대 5일 동안 발효시켰다. 발효가 완료되면, 수분 함량이 5% 미만이 되도록 혼합물을 동결건조시키고, 800 마이크론 미만의 입자 크기로 분쇄하고, 균질화하였다. 분말 생성물의 최종 미생물 농도는 10⁹∼10¹¹ CFU/g이다.

최종 미생물 혼합물

건조된 바실러스 및 락토바실러스 미생물을 1:10∼10:1의 비로 배합하여, 바실러스 서브틸리스, 바실러스 아밀로리퀴페시엔스, 바실러스 리체니포르미스, 페디오코커스 애시디락티시, 페디오코커스 펜토사세우스, 및 락토바실러스 플란타룸을 포함하고, 미생물 활성이 10⁸∼10¹⁰ CFU/g인 건조된 최종 미생물 조성물을 얻었다.

실시예 3: BOD 감소를 위한 최적의 바실러스 대 락토바실러스 비의 확인

실시예 1로부터의 개개의 건조된 미생물(바실러스 및 락토바실러스)을 1:1(조성물 A) 및 1:10(조성물 B)의 비로 혼합함으로써 2종의 미생물 조성물을 제조하였다. 이들 2개의 조성물을, 낙농 라군(dairy lagoon) 폐수의 BOD를 감소시키는 능력에 대해 비교하였다(도 1). 시판되는 폐수 처리 제품(BiOWiSH Aqua, 태국 제조)를 양성 대조군으로서 포함시켰다. 이 결과는 1:10의 바실러스 대 락토바실러스 비(조성물 B)가 BOD의 신속한 감소에 바람직함을 보여준다.

실시예 4: 실시예 1로부터의 미생물을 사용한 폐수 처리 제품의 제제화

실시예 1로부터의 개개의 건조된 미생물(바실러스 및 락토바실러스)을 1:10(바실러스:락토바실러스)의 비로 함께 혼합하였다. 이러한 건조된 미생물 혼합물을 덱스트로스(Clintose® Industrial Dextrose)로 1:100으로 희석하였다. 이 혼합물에, 3 중량%의 분말 대두 레시틴(Nealanders International, Inc.)을 첨가하였다. 이 조성물의 최종 미생물 카운트는 1x10⁸ CFU/g이었다.

실시예 5: 실시예 2로부터의 공정을 이용한 폐수 처리 제품의 제제화

실시예 2로부터의 바실러스 및 락토바실러스 고체 기질 발효 생성물을 평균 입자 크기가 약 200 마이크론이 되도록 분쇄하고, 동일한 비율로 함께 혼합한 후, 3 중량%의 분말 대두 레시틴(Nealanders International, Inc.)과 혼합하였다. 10⁸∼10⁹ CFU/g의 미생물 카운트 및 5% 미만의 수분 함량을 갖는 최종 생성물을 얻었다.

실시예 6: 하수 처리에 있어서의 실시예 4로부터의 폐수 처리 제품의 성능

미국 센트럴 노스 캐롤라이나에 위치하는 3개의 주택 저압 파이프(LPP) 하수 처리 시스템을 테스트를 위해 선택하였다. 각각의 시스템에 대해 BOD(생물학적 산소 요구량), TSS(총 부유 고형물), 및 FOG(유지류)의 기준치를 측정한 후, 실시예 4로부터의 폐수 처리 제제 200 g을 각각의 시스템에 최대 8주의 기간 동안 매주 첨가하였다. 각 시스템에 대해 BOD, TSS 및 FOG를 매주 기록하였다. 3개의 LPP 하수 처리 시스템에 대해 평균한 결과는, 3개 시스템 모두에 있어서 기준치에 대비하여 주요 생화학적 척도가 유의적으로 감소하였음을 보여주었다(도 2∼4).

실시예 7: 하수 처리에 있어서 실시예 5로부터의 폐수 처리 제품의 성능

미국 센트럴 노스 캐롤라이나에 위치한 3개의 주택 LPP 하수 처리 시스템을 이 연구를 위해 선택하였다. 각각의 시스템에 대해 BOD, TSS, TKN, 및 FOG의 기준치를 측정한 후, 실시예 5로부터의 조성물 200 g을 각각의 시스템에 최대 8주의 기간 동안 매주 첨가하였다. 3개 시스템 각각에 대해 BOD, TSS, TKN, 및 FOG를 매주 기록하였다. 3개의 LPP 하수 처리 시스템에 대해 평균한 결과는, 3개 시스템 모두에 있어서 기준치에 대비하여 주요 생화학적 척도가 유의적으로 감소하였음을 보여준다:

실시예 8: 경쟁 제품과 비교한 BOD 감소

캘리포니아 센트럴 밸리 지역에 있는 현지 낙농 라군으로부터 폐수를 수집하였다. 샘플을 모아 공통의 스톡 용액(stock solution)을 만들었다. 스톡 폐수를 피펫팅하여 몇 개의 300 ml BOD 보틀에 담고, 하기 실험 설계를 셋업하였다:

각각의 보틀에 대해 초기 BOD를 측정한 후, 30℃에서 5일 동안 저장한 뒤 다시 BOD를 측정하였다. 평균적으로, 대조군은 669 mg/l의 BOD 감소를 보인 데 반해, 실시예 4의 폐수 처리 조성물은 742 mg/l의 BOD 감소를, 시판되는 제품에 대해서는 701 mg/l의 BOD 감소를 보였다.

실시예 9: 경쟁 제품에 대비한 총 부유 고형물의 감소

미국 캘리포니아 샌 루이스 오비스포 소재의 캘리포니아 폴리테크닉 주립 대학에 위치하는 낙농 라군조로부터 폐수를 수집하여, 2 L 보틀 몇 개에 분배하고, 하기 실험 설계를 셋업하였다:

보틀은 30℃에서 5주 동안 유지하였다. 매주, 총 고형물 측정을 위해, 50 ml 분액 2개를 모아, 90℃에서 건조시켰다:

실시예 5의 폐수 처리 제제를 포함하는 보틀은, 대조군과 시판되는 제품 둘 다에 비해 총 TSS 감소율이 더 높은 것으로 나타났다.

실시예 10: 경쟁 하수 처리 시스템과의 비교

미국 센트럴 노스 캐롤라이나에 위치한 몇 개의 주택 LPP 하수 처리 시스템을 이 연구를 위해 선택하였다. 각각의 시스템에 대해 BOD, TSS, TKN, 및 FOG의 기준치를 측정한 후, 실시예 5로부터의 조성물 200 g 또는 시판되는 제품(BiOWiSH™ Aqua FOG) 200 g을 매주 처리하였다. 각 시스템에 대해 BOD, TSS, TKN, 및 FOG를 매주 기록하였다. LPP 하수 처리 시스템에 대해 평균한 결과는 다음과 같다:

실시예 11: 과일 세척 폐수의 정화

바나나 세척 폐수를 처리하기 위해 실시예 4의 조성물을 사용하였다. 바나나를 수확할 때 라텍스액이 방출된다. 통상적으로, 바나나를 흐르는 물에 담가서 라텍스를 제거한다. 이 과정에서 나오는 폐수는 일반적으로 라텍스 농도가 높아서 재활용성 및 재사용성이 제한된다.

라텍스를 제거하고 저장 병해 발생률을 감소시킬 수 있는 본 발명의 폐수 처리조성물의 능력을 평가하기 위해, 코스타리카의 국립 바나나 협회(Coorporacion Bananera Nacional)와의 협업으로 테스트 프로그램을 셋업하였다.

세척한 바나나 더미로부터 나온 폐수 풀로부터 샘플을 수집하였다. 샘플은, 수중 유기물 부하가 최고인 날 늦게 수집하였다. 150∼200 ml의 폐수를 250 ml 에를렌마이어 플라스크에 넣고, 여기에 다양한 농도의 실시예 4의 폐수 처리 조성물을 첨가하였다. 이 플라스크를 24∼26℃에서 약하게 진탕시키면서(오비탈 쉐이커에서 50 rpm) 12∼72시간 동안 인큐베이트하였다. 본 발명의 미생물 조성물은 72시간 후 용액의 혼탁도를 유의적으로 감소시키는 것으로 확인되었다(도 5).

이러한 결과에 기초하여, 더 큰 현장 시험을 수행하였다. 현장 시험 1일 및 2일째, 바나나 세척수를 분산제 Bactrol® 500으로 처리하였다. 6.5 L의 Bactrol®을 60 L의 물에 희석하여, 수확 당일에 바나나 더미 1 미터 위에 배치된 드립 시스템을 통해 바나나에 투여하였다. 해당 일 전반에 걸쳐 2∼3 mg/l의 수준으로 수류에 염소를 주입하였다. 테스트 3일 및 4일째, 시트르산을 가한 실시예 4의 폐수 처리 조성물만으로 물을 처리하였다.

도 6은, 종래의 처리로 세척된 바나나와 실시예 4의 조성물로 세척된 바나나를 비교하여 보여준다.

실시예 12: 수영장 처리

실시예 5의 미생물 조성물을 리터당 건조 미생물 제품 100 g의 농도로 물에 용해시킨다. 펌프를 끈 채로, 수면 상에 현저한 스컴층이 있는 주택 수영장의 필터 유닛에 주입하여, 펌프를 켜기 전 1시간 동안 정치시킨다. 24시간 내에, 스컴이 유의적으로 감소하고, 48시간 내에 볼 수 있는 스컴이 남아있지 않았다.

실시예 13: 폐수 처리 및 과일/채소 세척을 위한 확대된 미생물 조성물

부가적인 폐수 처리 및 과일/채소 세척 이익을 제공할 수 있는 능력에 대해 선택된 추가적인 미생물과 실시예 1로부터의 박테리아 균주를 포함하는 조성물을 실시예 1에서 개발한 것과 유사한 발효 시스템을 이용하여 설계하였다:

바실러스 및 파에니바실러스 종

바실러스 서브틸리스, 바실러스 아밀로리퀴페시엔스, 바실러스 리체니포르미스, 바실러스 푸밀러스, 바실러스 코아귤란스, 바실러스 메가테리움, 및 파에니바실러스 폴리믹사의 개개의 스타터 배양물을 하기의 일반적 프로토콜에 따라 증식시켰다: 영양액 2 g, 앰버펌(효모 추출물) 2 g 및 말토덱스트린 4 g을 250 ml 에를렌마이어 플라스크에 첨가하였다. 100 ml의 증류된 탈이온수를 첨가하고, 모든 건조 성분들이 용해될 때까지 플라스크를 교반하였다. 플라스크에 뚜껑을 덮고, 121℃ 및 15 psi로 운전되는 오토클레이브에 넣어 30분 동안 두었다. 냉각 후, 플라스크에 순수한 미생물 균주 중 하나를 1 ml 접종하였다. 플라스크를 밀봉하고 30℃의 오비탈 쉐이커 위에 두었다. 배양물을 3∼5일 동안 증식시켰다. 이 과정은 혼합물 중의 각각의 미생물에 대해 반복하였다. 이렇게 하여, 바실러스 서브틸리스, 바실러스 아밀로리퀴페시엔스, 바실러스 리체니포르미스, 바실러스 푸밀러스, 바실러스 코아귤란스, 바실러스 메가테리움, 및 파에니바실러스 폴리믹사의 스타터 배양물을 제조하였다.

영양액 18 g, 앰버펌 18 g 및 말토덱스트린 36 g을 900 ml의 증류된 탈이온수가 들어 있는 1 L 플라스크에 첨가하여 더 큰 배양물을 만들었다.

이 플라스크를 밀봉하여 상기와 같이 멸균하였다. 냉각 후, 250 ml 에를렌마이어 플라스크로부터의 미생물 배지 100 ml를 첨가하였다. 1 L 플라스크를 밀봉하고, 오비탈 쉐이커 위에 놓고, 30℃에서 3∼5일 더 증식시켰다.

발효조에 도입하기 전 최종 증식기에, 1 L 플라스크로부터의 배양물을, 멸균 조건 하에, 멸균된 6 L 용기에 옮겨서 정지상에 도달할 때까지 폭기하면서 30℃에서 발효를 계속하였다. 각각의 6 L 배양 플라스크 내의 내용물을, 역시 효모 추출물 1부와 덱스트로스 2부로 제조된 멸균 배양 배지가 충전되어 있는 개개의 발효조로 옮겼다. 개개의 발효조는 pH 7 및 각각의 종에 대한 최적 온도에서 호기성 조건 하에 운전되었다:

각각의 발효조를, 세포 밀도가 평균 10¹¹ CFU/ml에 도달할 때까지 가동시켰다. 그 후, 개개의 발효조를 비우고, 여과하고, 원심분리하여 박테리아 세포 덩어리를 얻고, 계속해서 이것을, 수분 함량이 5% 아래로 떨어질 때까지 진공 하에 건조시켰다. 건조된 샘플의 최종 미생물 카운트는 10¹⁰∼10¹¹ CFU/g이었다.

락토바실러스 종

발효 후, 개개의 배양물을 여과하고, 원심분리하고, 수분 함량이 약 5% 미만이 되도록 동결건조시킨 후, 약 100 마이크론의 입자 크기가 되도록 분쇄하였다.

건조된 바실러스 및 락토바실러스 미생물을 같은 비율로 배합하여, 바실러스 서브틸리스, 바실러스 아밀로리퀴페시엔스, 바실러스 리체니포르미스, 바실러스 푸밀러스, 바실러스 코아귤란스, 바실러스 메가테리움 및 파에니바실러스 폴리믹사를 포함하는 건조된 최종 미생물 조성물을 얻었다.

실시예 14: 실시예 13의 확대된 미생물 조성물로부터의 폐수 처리 제품의 제조

실시예 13의 건조된 미생물 혼합물을 덱스트로스(Clintose® Industrial Dextrose)로 1:100으로 희석한다. 이 혼합물에, 3 중량%의 분말 대두 레시틴(Nealanders International, Inc.)을 첨가한다. 최종 미생물 카운트는 일반적으로 1x10⁹ CFU/g이다.

Claims

(a) 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 바실러스 아밀로리퀴페시엔스(Bacillus amyloliquefaciens), 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis), 및 바실러스 푸밀러스(Bacillus pumilus);
(b) 페디오코커스 애시디락티시(Pediococcus acidilactici), 페디오코커스 펜토사세우스(Pediococcus pentosaceus), 및 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum); 또는
(c) 바실러스 메가테리움(Bacillus megaterium), 바실러스 코아귤란스(Bacillus coagulans), 및 파에니바실러스 폴리믹사(Paenibacillus polymyxa)
의 혼합물을 포함하는, 유기물 분해용 조성물로서,
(a)에서, 상기 혼합물 중의 각각의 바실러스는 개별적으로 호기 발효되고, 회수되고, 건조되고, 평균 입자 크기가 약 200 마이크론이고 혼합물의 약 60% 초과가 100∼800 마이크론의 크기 범위에 있는 분말을 생성하도록 분쇄되고;
(b)에서, 상기 혼합물 중의 각각의 락토바실러스는 개별적으로 혐기 발효되고, 회수되고, 건조되고, 평균 입자 크기가 약 200 마이크론이고 혼합물의 약 60% 초과가 100∼800 마이크론의 크기 범위에 있는 분말을 생성하도록 분쇄되고;
(c)에서, 상기 혼합물 중의 각각의 바실러스는 개별적으로 호기 발효되고, 회수되고, 건조되고, 평균 입자 크기가 약 200 마이크론이고 혼합물의 약 60% 초과가 100∼800 마이크론의 크기 범위에 있는 분말을 생성하도록 분쇄되며;
상기 조성물은, 물에 첨가 시, 완전히 분산되고, 박테리아의 사전 활성화를 필요로 하지 않는 것인 조성물.
제1항에 있어서, 단계 (a)의 바실러스 대 단계 (b)의 락토바실러스의 비가 1:10∼10:1인 조성물.
제2항에 있어서, 단계 (a)의 바실러스 대 단계 (b)의 락토바실러스의 비가 1:10의 바실러스 대 락토바실러스인 조성물.
제1항에 있어서, 단계 (b)의 락토바실러스의 비가 1:1:1인 조성물.
제1항에 있어서, 수분 함량이 약 5% 미만이고, 최종 박테리아 농도가 조성물 그램당 약 10⁵∼10¹¹의 콜로니 형성 단위(CFU)인 조성물.
제1항에 있어서, 비활성 담체를 더 포함하는 조성물.
제6항에 있어서, 상기 비활성 담체가 덱스트로스 일수화물인 조성물.
제7항에 있어서, 상기 덱스트로스 일수화물이 약 75∼95%(w/w)의 농도로 존재하는 것인 조성물.
제1항에 있어서, 유기 유화제를 더 포함하는 조성물.
제9항에 있어서, 상기 유기 유화제가 약 2∼5%(w/w)의 농도로 존재하는 것인 조성물.
제9항에 있어서, 상기 유기 유화제가 대두 레시틴인 조성물.
제1항에 있어서, 단계 (a)의 바실러스 및 단계 (c)의 바실러스를 포함하는 조성물.
제1항에 있어서, 단계 (a)의 바실러스 및 단계 (b)의 락토바실러스를 포함하는 조성물.
폐수 처리 방법으로서, 폐수를 제13항의 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는 방법.
제14항에 있어서, 상기 폐수가 도시 하수, 주택 하수, 또는 산업 폐수인 방법.
제15항에 있어서, 산업 폐수가 음식물, 지방(fat), 오일(oil), 그리스(grease), 양조장, 농업, 또는 상품 폐기물을 포함하는 것인 방법.
제15항에 있어서, 폐수 처리가 폐수 중의 생물학적 산소 요구량(BOD), 총 부유 고형물(TSS), 총 켈달 질소(TKN), 및 유지류(FOG; fats, oils and grease)를 감소시키는 것을 포함하는 것인 방법.
수영장 물 처리 방법으로서, 수영장 물을 제13항의 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는 방법.
제18항에 있어서, 수영장 물을, 수영장 여과 유닛을 상기 조성물과 접촉시킴으로써 접촉시키는 것인 방법.
제18항에 있어서, 상기 조성물이 고체 지지체에 매립되어 있는 것인 방법.
인조 잔디 세정 방법으로서, 인조 잔디를 제13항의 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는 방법.
과일 또는 채소 세척으로부터 나오는 폐수를 정화하는 방법으로서, 상기 폐수를 제12항의 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는 방법.
과일 및 채소의 표면으로부터 유기물을 제거하는 방법으로서, 과일 또는 채소를 제12항의 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는 방법.
제23항에 있어서, 과일 또는 채소의 저장 수명 및/또는 외관을 개선시키는 것인 방법.
제23항에 있어서, 과일이 바나나인 방법.
바실러스 및 락토바실러스를 포함하는 박테리아 혼합물을 포함하는 조성물의 제조 방법으로서,
a) 각각의 바실러스 유기체를 개별적으로 호기 발효시키는 단계;
b) 각각의 락토바실러스 유기체를 개별적으로 혐기 발효시키는 단계;
c) 각각의 바실러스 및 락토바실러스 유기체를 회수하는 단계;
d) 회수된 유기체를 건조시키는 단계;
e) 건조된 유기체를 분쇄하여, 분말을 생성하는 단계;
f) 각각의 바실러스 분말을 배합하여, 바실러스 혼합물을 생성하는 단계;
g) 각각의 락토바실러스 분말을 등량으로 배합하여, 락토바실러스 혼합물을 생성하는 단계; 및
h) 상기 바실러스 혼합물과 상기 락토바실러스 혼합물을 1:10∼10:1의 비로 배합하는 단계
를 포함하는 제조 방법.
제25항에 있어서, 바실러스가 바실러스 서브틸리스, 바실러스 아밀로리퀴페시엔스, 바실러스 리체니포르미스, 및 바실러스 푸밀러스를 포함하는 것인 방법.
제25항에 있어서, 락토바실러스가 페디오코커스 애시디락티시, 페디오코커스 펜토사세우스 및 락토바실러스 플란타룸, 바실러스 메가테리움, 바실러스 코아귤란스, 및 파에니바실러스 폴리믹사를 포함하는 것인 방법.
제25항에 있어서, 혼합물이 하기 특성을 갖는 것인 방법:
a) 약 5% 미만의 수분 함량; 및
b) 조성물 그램당 약 10⁵∼10¹¹의 콜로니 형성 단위(CFU)의 최종 박테리아 농도.
바실러스 유기체를 포함하는 박테리아 혼합물을 포함하는 조성물의 제조 방법으로서,
a) 바실러스 서브틸리스, 바실러스 아밀로리퀴페시엔스, 바실러스 리체니포르미스, 바실러스 푸밀러스, 바실러스 메가테리움, 바실러스 코아귤란스, 및 파에니바실러스 폴리믹사를 개별적으로 호기 발효시키는 단계;
b) 각각의 유기체를 회수하는 단계;
c) 회수된 유기체를 건조시키는 단계;
d) 건조된 유기체를 분쇄하여, 분말을 생성하는 단계; 및
e) 각각의 바실러스 분말을 배합하는 단계
를 포함하는 제조 방법.
제30항에 있어서, 혼합물이 하기 특성을 갖는 것인 방법:
a) 약 5% 미만의 수분 함량; 및
b) 조성물 그램당 약 10⁵∼10¹¹의 콜로니 형성 단위(CFU)의 최종 박테리아 농도.