JP2016523535A5 - - Google Patents
Download PDFInfo
- Publication number
- JP2016523535A5 JP2016523535A5 JP2016521505A JP2016521505A JP2016523535A5 JP 2016523535 A5 JP2016523535 A5 JP 2016523535A5 JP 2016521505 A JP2016521505 A JP 2016521505A JP 2016521505 A JP2016521505 A JP 2016521505A JP 2016523535 A5 JP2016523535 A5 JP 2016523535A5
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sulfotransferase
- paps
- phosphosulfate
- phosphoadenosine
- substrate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- GACDQMDRPRGCTN-KQYNXXCUSA-N 3'-phospho-5'-adenylyl sulfate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OS(O)(=O)=O)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H]1O GACDQMDRPRGCTN-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims description 186
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 110
- 102100009611 HS2ST1 Human genes 0.000 claims description 67
- 101710017156 HS2ST1 Proteins 0.000 claims description 67
- ZXNYUXIMAXVSFN-IVMDWMLBSA-N 2,2,2-trifluoro-N-[(3R,4R,5S,6R)-2,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]acetamide Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](NC(=O)C(F)(F)F)[C@@H](O)[C@@H]1O ZXNYUXIMAXVSFN-IVMDWMLBSA-N 0.000 claims description 64
- AEMOLEFTQBMNLQ-QIUUJYRFSA-N β-D-glucuronic acid Chemical compound O[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-QIUUJYRFSA-N 0.000 claims description 38
- AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N D-glucopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N 0.000 claims description 37
- 102100000917 GCNT2 Human genes 0.000 claims description 37
- 229940097043 Glucuronic Acid Drugs 0.000 claims description 37
- 108010056664 N-acetyllactosaminide beta-1,6-N-acetylglucosaminyltransferase Proteins 0.000 claims description 37
- KZWHEHSUEBTKJM-SLPGGIOYSA-N [(2R,3R,4S,5R)-3,4,5,6-tetrahydroxy-1-oxohexan-2-yl]sulfamic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](C=O)NS(O)(=O)=O KZWHEHSUEBTKJM-SLPGGIOYSA-N 0.000 claims description 37
- 230000001180 sulfating Effects 0.000 claims description 35
- 229960002897 Heparin Drugs 0.000 claims description 31
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims description 31
- -1 heparin compound Chemical class 0.000 claims description 30
- 238000006345 epimerization reaction Methods 0.000 claims description 29
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims description 25
- PZUPAGRIHCRVKN-UHFFFAOYSA-N 5-[5-[3,4-dihydroxy-6-[(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxymethyl]-5-[3,4,5-trihydroxy-6-[(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxymethyl]oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,4-dihydroxy-6-[(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxymethyl]oxan-2-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,4-triol Chemical compound OCC1OC(O)C(O)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(COC4C(C(O)C(O)CO4)O)O3)O)C(COC3C(C(O)C(O)CO3)O)O2)O)C(COC2C(C(O)C(O)CO2)O)O1 PZUPAGRIHCRVKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 claims description 15
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 11
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N Heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 claims description 9
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 claims description 9
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 claims description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-Acetylglucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 claims description 3
- 229950006780 N-Acetylglucosamine Drugs 0.000 claims description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N N-acetyl-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N 0.000 claims description 3
- 241000606856 Pasteurella multocida Species 0.000 claims description 3
- 229940051027 Pasteurella multocida Drugs 0.000 claims description 3
- 150000008134 glucuronides Chemical class 0.000 claims description 2
- ZHCAAFJSYLFLPX-UHFFFAOYSA-N nitrocyclohexatriene Chemical group [O-][N+](=O)C1=CC=C=C[CH]1 ZHCAAFJSYLFLPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 5
- 230000001809 detectable Effects 0.000 claims 4
- 108060006601 PRM1 Proteins 0.000 claims 3
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 claims 3
- 230000002441 reversible Effects 0.000 claims 3
- 206010062237 Renal impairment Diseases 0.000 claims 2
- 125000004435 hydrogen atoms Chemical group [H]* 0.000 claims 2
- 201000002574 conversion disease Diseases 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 239000003055 low molecular weight heparin Substances 0.000 claims 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims 1
- 229920002994 synthetic fiber Polymers 0.000 claims 1
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 36
- WKPUACLQLIIVJJ-RHKLHVFKSA-M (2S,3R,4R,5S,6R)-4-hydroxy-3-methoxy-6-[(2S,3R,4S,5S,6R)-6-methoxy-4-oxido-5-(sulfooxyamino)-2-(sulfooxymethyl)oxan-3-yl]oxy-5-sulfooxyoxane-2-carboxylate Chemical compound [O-][C@H]1[C@H](NOS(O)(=O)=O)[C@H](OC)O[C@@H](COS(O)(=O)=O)[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@@H](OC)[C@@H](C([O-])=O)O1 WKPUACLQLIIVJJ-RHKLHVFKSA-M 0.000 description 16
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 16
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 description 5
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 4
- LNQVTSROQXJCDD-KQYNXXCUSA-N 3'-AMP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H]1O LNQVTSROQXJCDD-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 4
- 102000004896 Sulfotransferases Human genes 0.000 description 4
- 108090001033 Sulfotransferases Proteins 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- FUJCRWPEOMXPAD-UHFFFAOYSA-N Lithium oxide Chemical compound [Li+].[Li+].[O-2] FUJCRWPEOMXPAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910001947 lithium oxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 102100016908 ACKR1 Human genes 0.000 description 2
- 101710008404 GAPDH Proteins 0.000 description 2
- 229960002442 Glucosamine Drugs 0.000 description 2
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 2
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 2
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 2
- 108050000251 SPARC Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 2
- COJBCAMFZDFGFK-VCSGLWQLSA-L (2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,6-trihydroxy-5-sulfonatooxyoxane-2-carboxylate Chemical compound O[C@@H]1O[C@@H](C([O-])=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1OS([O-])(=O)=O COJBCAMFZDFGFK-VCSGLWQLSA-L 0.000 description 1
- NKCXQMYPWXSLIZ-PSRDDEIFSA-N (2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-5-amino-2-[[2-[[(2S)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-amino-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]propanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-m Chemical compound O=C([C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NKCXQMYPWXSLIZ-PSRDDEIFSA-N 0.000 description 1
- IRLPACMLTUPBCL-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylyl sulfate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OS(O)(=O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O IRLPACMLTUPBCL-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- 102100020137 HS3ST3A1 Human genes 0.000 description 1
- 101710033470 HS3ST3A1 Proteins 0.000 description 1
- 102100020136 HS3ST3B1 Human genes 0.000 description 1
- 101710033469 HS3ST3B1 Proteins 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-LECHCGJUSA-N Iduronic acid Chemical group O=C[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-LECHCGJUSA-N 0.000 description 1
- 101700015701 SPI Proteins 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- GXYKBDAKQXPXFV-SLPGGIOYSA-N [(2R,3R,4R,5R)-2-amino-4,5,6-trihydroxy-1-oxohexan-3-yl] hydrogen sulfate Chemical group O=C[C@H](N)[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H](O)CO GXYKBDAKQXPXFV-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002429 anti-coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Polymers 0.000 description 1
- 108010048322 heparin-glucosamine 3-O-sulfotransferase Proteins 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory Effects 0.000 description 1
- 239000003001 serine protease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological Effects 0.000 description 1
Description
いくつかの実施形態において、ヘパリン化合物を合成する方法が提供される。このような方法は、いくつかの実施形態において、(1) 糖基質を提供する段階、(2) この糖基質を所望の又は所定の長さの糖に伸長する段階、(3) エピマー化反応を行う段階、及び(4) 一又はそれ以上の硫酸化反応を行い、その結果ヘパリン化合物が合成される段階から成る。いくつかの実施形態において、この伸長段階では、グリコシルトランスフェラーゼを用いることができる。いくつかの実施形態において、このグリコシルトランスフェラーゼは、大腸菌K5のN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（KfiA）及び／又はパスツレラ・ムルトシダ（Pasteurella multocida）由来のヘパロサンシンターゼ-2（pmHS2）からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、この伸長段階は、グルクロン酸（GlcA）、N-アセチルグルコサミン（GlcNAc）、及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）からなる群から選択される一以上の単糖を用いることから成ることができる。
いくつかの実施形態において、(1) 単糖基質を提供する段階、(2) 酵素としてN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及びヘパロサンシンターゼ-2、基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この単糖基質を六糖に伸長する段階、(3) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(4) 該六糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(5) 該六糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(6) 該六糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）、任意に6-O-スルホトランスフェラーゼ6-O-スルホトランスフェラーゼ1及び/又は3（6-OST-1及び/又は6-OST-3）、及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、及び(7) 該六糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）、任意に3-O-スルホトランスフェラーゼ1（3-OST-1）、及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、から成るヘパリン化合物を合成する方法が提供される。いくつかの実施形態において、この単糖基質は、1-O-（パラニトロフェニル）グルクロニド（GlcA-pnp）である。
(1) 単糖基質を提供する段階、(2) 酵素としてN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及びヘパロサンシンターゼ-2、基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この単糖基質を六糖に伸長する段階、(3) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(4) 該六糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(5) 該六糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(6) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(7) ヘパロサンシンターゼ-2及び基質グルクロン酸（GlcA）を用いて、この六糖基質を七糖に伸長する段階、(8) N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及び基質N-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この七糖基質を八糖に伸長する段階、(9) 該八糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(10) 該八糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(11) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この八糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(12) 該八糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）、任意に6-O-スルホトランスフェラーゼ1及び/又は3（6-OST-1及び/又は6-OST-3）、及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(13) 該八糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）、任意に3-O-スルホトランスフェラーゼ1（3-OST-1）、及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、から成るヘパリン化合物を合成する方法が提供される。
(1) 単糖基質を提供する段階、(2) 酵素としてN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及びヘパロサンシンターゼ-2、基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この単糖基質を六糖に伸長する段階、(3) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(4) 該六糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(5) 該六糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(6) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(7) ヘパロサンシンターゼ-2及び基質グルクロン酸（GlcA）を用いて、この六糖基質を七糖に伸長する段階、(8) N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及び基質N-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この七糖基質を八糖に伸長する段階、(9) 該八糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(10) 該八糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(11) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この八糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(12) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この八糖基質を十糖に伸長する段階、(13) 該十糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(14) 該十糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(15) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この十糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(16) 該十糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）、任意に6-O-スルホトランスフェラーゼ1及び/又は3（6-OST-1及び/又は6-OST-3）、及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、及び(17) 該十糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）、任意に3-O-スルホトランスフェラーゼ1（3-OST-1）、及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、から成るヘパリン化合物を合成する方法が提供される。
(1) 単糖基質を提供する段階、(2) 酵素としてN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及びヘパロサンシンターゼ-2、基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この単糖基質を六糖に伸長する段階、(3) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(4) 該六糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(5) 該六糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(6) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(7) ヘパロサンシンターゼ-2及び基質グルクロン酸（GlcA）を用いて、この六糖基質を七糖に伸長する段階、(8) N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及び基質N-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この七糖基質を八糖に伸長する段階、(9) 該八糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(10) 該八糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(11) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この八糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(12) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この八糖基質を十糖に伸長する段階、(13) 該十糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(14) 該十糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(15) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この十糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(16) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この十糖基質を十二糖に伸長する段階、(17) 該十二糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(18) 該十二糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(19) 該十二糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）、任意に6-O-スルホトランスフェラーゼ1及び/又は3（6-OST-1及び/又は6-OST-3）、及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、及び(20) 該十二糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）、任意に3-O-スルホトランスフェラーゼ1（3-OST-1）、及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、から成るヘパリン化合物を合成する方法が提供される。
(1) 単糖基質を提供する段階、(2) 酵素としてN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及びヘパロサンシンターゼ-2、基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この単糖基質を六糖に伸長する段階、(3) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(4) 該六糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(5) 該六糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(6) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(7) ヘパロサンシンターゼ-2及び基質グルクロン酸（GlcA）を用いて、この六糖基質を七糖に伸長する段階、(8) N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及び基質N-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この七糖基質を八糖に伸長する段階、(9) 該八糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(10) 該八糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(11) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この八糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(12) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この八糖基質を十糖に伸長する段階、(13) 該十糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(14) 該十糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(15) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この十糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(16) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この十糖基質を十二糖に伸長する段階、(17) 該十二糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(18) 該十二糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(19) 該十二糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）、任意に6-O-スルホトランスフェラーゼ1及び/又は3（6-OST-1及び/又は6-OST-3）、及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(20) 該十二糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）、任意に3-O-スルホトランスフェラーゼ1（3-OST-1）、及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、及び(21) 該十二糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）、任意に3-O-スルホトランスフェラーゼ1（3-OST-5）、及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、から成るヘパリン化合物を合成する方法が提供される。
ヘパラン硫酸（HS）の生合成酵素の様々なアイソフォームの発現レベルは、特定の組織中の特定の糖配列の合成に寄与する。ヘパラン硫酸（HS）のN-デアセチラーゼ/Nスルホトランスフェラーゼ、3-O-スルホトランスフェラーゼ、6-O-スルホトランスフェラーゼは、複数のアイソフォームで存在する。各アイソフォームは、特定の硫酸化糖配列を生成するために、修飾部位の周囲の糖配列を認識すると考えられている(Liu, J., et al., (1999) J. Biol. Chem. 274:5185-5192; Aikawa, J.-I., et al., (2001) J. Biol. Chem. 276:5876-5882; Habuchi, H., et al., (2000) J. Biol. Chem. 275:2859-2868)。例えば、ヘパラン硫酸（HS）のD-グルコサミニル3-Oスルホトランスフェラーゼ（3-OST）アイソフォームは、異なる硫酸化イズロン酸残基に連結している3-O-硫酸化グルコサミン残基を生成する。3-OSTアイソフォーム1（3-OST-1）は、グルクロン酸の残基の非還元末端に結合するN硫酸化グルコサミン残基の3-OH位(GlcA-GlcNS±6S)に硫酸基を転送する。しかし、3-OSTアイソフォーム3（3-OST-3）は、2-O硫酸化イズロン酸の非還元末端に連結しているN-非置換グルコサミン残基の3-OH位(IdoUA2S-GlcNH2±6S)に硫酸を転送する(Liu, J., et al., (1999) J. Biol. Chem. 274:38155-38162)。これらの3-OSTの基質特異性の違いは、異なる生物学的機能をもたらす。例えば、3-OST-1によって修飾されたヘパラン硫酸（HS）は、アンチトロンビン（AT）に結合し、抗凝固活性を有する(Liu, J., et al., (1996) J. Biol. Chem. 271:27072-27082)。しかし、3-OST-3（3-OST-3A及び3-OST-3B）によって修飾されたヘパラン硫酸（HS）は、単純ヘルペスウイルス1型（HSV-1）の糖タンパク質D（GD）に結合し、ウイルスの侵入を仲介する(Shukla, D., et al., (1999) Cell 99:13-22)。
ヘパラン硫酸（HS）で調節される抗凝固メカニズムは広く研究されている。現時点で、ヘパリンを含むHSは、セリンプロテアーゼ阻害剤であるアンチトロンビン（AT）と相互作用して、血液凝固カスケードにおいてトロンビンと第Xa因子の活性を阻害することが知られている(Rosenberg, R. D., et al., (1997) J. Clin. Invest. 99:2062-2070)。抗凝固活性のHS（HSact）とヘパリンは、多糖鎖ごとに一つ又はそれ以上のAT結合部位を有する。この結合部位は、−GlcNS(又はAc)6S−GlcA−GlcNS3S(±6S)−IdoUA2S−GlcNS6S−の構造の特定の五糖配列を有する。GlcNS3S(±6S)残基を生成するためのグルコサミンの3-O-硫酸化は、3-OST-1によって行われ、HSactの合成過程で役割を果たしている(Liu, J., et al., (1996) J. Biol. Chem. 271:27072-27082; Shworak, N. W. , et al., (1997) J. Biol. Chem. 272:28008-28019)。
いくつかの実施形態において、この伸長段階は、グリコシルトランスフェラーゼを用いることを含んでもよい。例えば、限定するものではないが、このグリコシルトランスフェラーゼは、大腸菌K5のN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（KfiA）又はパスツレラ・ムルトシダ（Pasteurella multocida）由来のヘパロサンシンターゼ-2（pmHS2）であってもよい。いくつかの実施形態において、この伸長段階は、一又はそれ以上の単糖を用いる段階を含んでもよく、この単糖は、例えば、グルクロン酸（GlcA）、N-アセチルグルコサミン（GlcNAc）、及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）から成ってもよい。
Claims (25)
- (1) 糖基質を提供する段階、
(2) この糖基質を所望の又は所定の長さの糖に伸長する段階、
(3) エピマー化反応を行う段階、及び
(4) 一又はそれ以上の硫酸化反応を行い、その結果ヘパリン化合物が合成される段階、
から成るヘパリン化合物を合成する方法。 - 前記伸長段階において、グリコシルトランスフェラーゼが用いられる、請求項１に記載の方法。
- 前記グリコシルトランスフェラーゼが、大腸菌K5のN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（KfiA）及び／又はパスツレラ・ムルトシダ（Pasteurella multocida）由来のヘパロサンシンターゼ-2（pmHS2）からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
- 前記伸長段階が、グルクロン酸（GlcA）、N-アセチルグルコサミン（GlcNAc）、及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）からなる群から選択される一又はそれ以上の単糖を用いる段階を含む、請求項１に記載の方法。
- 更に、(3)エピマー化反応段階の前に、(5) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて、この伸長された糖上のN-スルホトランスフェラーゼ基質残基をN-スルホグルコサミン（GlcNS）残基に変換する段階を含む、請求項１に記載の方法。
- 一又はそれ以上の変換反応において、更に、塩基を用いる、請求項５に記載の方法。
- 前記エピマー化反応が、C5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いることを含む、請求項１に記載の方法。
- 前記硫酸化反応が、2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）を用いることを含む、請求項１に記載の方法。
- 前記硫酸化反応が、6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）を用いることを含む、請求項１に記載の方法。
- 前記硫酸化反応が、3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）を用いることを含む、請求項１に記載の方法。
- 前記方法が、30％以上の収率を有する、請求項１に記載の方法。
- (1) 単糖基質を提供する段階、
(2) 酵素としてN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及びヘパロサンシンターゼ-2、基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この単糖基質を六糖に伸長する段階、
(3) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(4) 該六糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(5) 該六糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(6) 該六糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、及び
(7) 該六糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、から成るヘパリン化合物を合成する方法。 - 前記単糖基質が、1-O-（パラニトロフェニル）グルクロニド（GlcA-pnp）である、請求項１２に記載の方法。
- (1) 単糖基質を提供する段階、
(2) 酵素としてN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及びヘパロサンシンターゼ-2、基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この単糖基質を六糖に伸長する段階、
(3) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(4) 該六糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(5) 該六糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(6) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(7) ヘパロサンシンターゼ-2及び基質グルクロン酸（GlcA）を用いて、この六糖基質を七糖に伸長する段階、
(8) N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及び基質N-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この七糖基質を八糖に伸長する段階、
(9) 該八糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(10) 該八糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(11) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この八糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(12) 該八糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(13) 該八糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、から成るヘパリン化合物を合成する方法。 - (1) 単糖基質を提供する段階、
(2) 酵素としてN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及びヘパロサンシンターゼ-2、基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この単糖基質を六糖に伸長する段階、
(3) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(4) 該六糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(5) 該六糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(6) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(7) ヘパロサンシンターゼ-2及び基質グルクロン酸（GlcA）を用いて、この六糖基質を七糖に伸長する段階、
(8) N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及び基質N-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この七糖基質を八糖に伸長する段階、
(9) 該八糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(10) 該八糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(11) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この八糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(12) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この八糖基質を十糖に伸長する段階、
(13) 該十糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(14) 該十糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(15) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この十糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(16) 該十糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、及び
(17) 該十糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、から成るヘパリン化合物を合成する方法。 - (1) 単糖基質を提供する段階、
(2) 酵素としてN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及びヘパロサンシンターゼ-2、基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この単糖基質を六糖に伸長する段階、
(3) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(4) 該六糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(5) 該六糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(6) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(7) ヘパロサンシンターゼ-2及び基質グルクロン酸（GlcA）を用いて、この六糖基質を七糖に伸長する段階、
(8) N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及び基質N-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この七糖基質を八糖に伸長する段階、
(9) 該八糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(10) 該八糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(11) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この八糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(12) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この八糖基質を十糖に伸長する段階、
(13) 該十糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(14) 該十糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(15) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この十糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(16) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この十糖基質を十二糖に伸長する段階、
(17) 該十二糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(18) 該十二糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(19) 該十二糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、及び
(20) 該十二糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、から成るヘパリン化合物を合成する方法。 - (1) 単糖基質を提供する段階、
(2) 酵素としてN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及びヘパロサンシンターゼ-2、基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この単糖基質を六糖に伸長する段階、
(3) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(4) 該六糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(5) 該六糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(6) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(7) ヘパロサンシンターゼ-2及び基質グルクロン酸（GlcA）を用いて、この六糖基質を七糖に伸長する段階、
(8) N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及び基質N-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この七糖基質を八糖に伸長する段階、
(9) 該八糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(10) 該八糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(11) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この八糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(12) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この八糖基質を十糖に伸長する段階、
(13) 該十糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(14) 該十糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(15) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この十糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(16) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この十糖基質を十二糖に伸長する段階、
(17) 該十二糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(18) 該十二糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(19) 該十二糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(20) 該十二糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、及び
(21) 該十二糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OS）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、から成るヘパリン化合物を合成する方法。 - 下式で表される、可逆的抗凝固活性を有する合成材料である低分子量ヘパリン化合物。
- 下記構造
- 腎障害の患者への投与に適した、請求項１９に記載のヘパリン化合物。
- (1) 下記構造
(2) ヘパロサンシンターゼ-2及び基質グルクロン酸（GlcA）を用いて、この六糖基質を七糖に伸長する段階、
(3) N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及び基質N-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この七糖基質を八糖に伸長する段階、
(4) 該八糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(5) 該八糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(6) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この八糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(7) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この八糖基質を十糖に伸長する段階、
(8) 該十糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(9) 該十糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(10) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この十糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(11) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この十糖基質を十二糖に伸長する段階、
(12) 該十二糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(13) 該十二糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(14) 該十二糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、及び
(15) 該十二糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、から成るヘパリン化合物を合成する方法。 - (1) 下記構造
(2) ヘパロサンシンターゼ-2及び基質グルクロン酸（GlcA）を用いて、この六糖基質を七糖に伸長する段階、
(3) N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及び基質N-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この七糖基質を八糖に伸長する段階、
(4) 該八糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(5) 該八糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(6) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この八糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(7) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この八糖基質を十糖に伸長する段階、
(8) 該十糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(9) 該十糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(10) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この十糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(11) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この十糖基質を十二糖に伸長する段階、
(12) 該十二糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(13) 該十二糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(14) 該十二糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(15) 該十二糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、及び
(16) 該十二糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、
から成るヘパリン化合物を合成する方法。 - 前記ヘパリン化合物の抗凝固活性がプロタミンによって可逆的であり、その抗凝固活性が１μｇ／ｍｌのプロタミンの存在下で５０％以上逆転される、請求項１８に記載の化合物。
- 請求項１８又は１９に記載の化合物を含む、患者を治療するための医薬品。
- 腎障害患者を治療するための請求項２４に記載の医薬品。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201361835875P | 2013-06-17 | 2013-06-17 | |
| US61/835,875 | 2013-06-17 | ||
| PCT/US2014/042683 WO2014204929A2 (en) | 2013-06-17 | 2014-06-17 | Reversible heparin molecules and methods of making and using the same |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2016523535A JP2016523535A (ja) | 2016-08-12 |
| JP2016523535A5 true JP2016523535A5 (ja) | 2017-08-03 |
| JP6670235B2 JP6670235B2 (ja) | 2020-03-18 |
Family
ID=52105487
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2016521505A Active JP6670235B2 (ja) | 2013-06-17 | 2014-06-17 | 可逆的ヘパリン分子、その製法及びその使用方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9951149B2 (ja) |
| EP (1) | EP3011043B1 (ja) |
| JP (1) | JP6670235B2 (ja) |
| CN (1) | CN105452479B (ja) |
| ES (1) | ES2924830T3 (ja) |
| WO (1) | WO2014204929A2 (ja) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012088416A2 (en) | 2010-12-23 | 2012-06-28 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Chemoenzymatic synthesis of structurally homogeneous ultra-low molecular weight heparins |
| US9951149B2 (en) | 2013-06-17 | 2018-04-24 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Reversible heparin molecules and methods of making and using the same |
| EP3273239A1 (en) * | 2016-07-19 | 2018-01-24 | Laboratorios Farmacéuticos Rovi, S.A. | Procedure of analysis of glycosaminoglycans, heparins and their derivatives by nuclear magnetic resonance |
| TWI769176B (zh) | 2016-09-07 | 2022-07-01 | 瑞瑟勒綜合技術協會 | 生合成肝素 |
| CN110446511B (zh) * | 2017-03-10 | 2024-04-02 | 北卡罗来纳大学查珀尔希尔分校 | 短效的基于肝素的抗凝血剂化合物和方法 |
| WO2018175464A1 (en) * | 2017-03-20 | 2018-09-27 | Rensselaer Polytechnic Institute | Enzymatic preparation of increased anticoagulant bovine sourced heparin |
| US11993627B2 (en) | 2017-07-03 | 2024-05-28 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Enzymatic synthesis of homogeneous chondroitin sulfate oligosaccharides |
| JP7495061B2 (ja) | 2017-11-03 | 2024-06-04 | ザ ユニバーシティ オブ ノース カロライナ アット チャペル ヒル | 抗炎症作用を有する硫酸化オリゴ糖 |
| CN111565800A (zh) * | 2017-12-12 | 2020-08-21 | 中央研究院 | 八糖及其用途 |
| TW201937167A (zh) * | 2018-03-01 | 2019-09-16 | 中央研究院 | 用來偵測癌細胞的裝置及方法 |
| US11633424B2 (en) | 2018-06-20 | 2023-04-25 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Cell protective methods and compositions |
| CN109321508B (zh) * | 2018-10-12 | 2022-12-27 | 北京化工大学 | 产heparosan的基因工程菌及其应用 |
| EP3911737A1 (en) | 2019-01-15 | 2021-11-24 | Optimvia, LLC | Engineered aryl sulfate-dependent enzymes |
| BR112022000255A8 (pt) | 2019-07-09 | 2022-03-22 | Optimvia Llc | Métodos para sintetizar polissacarídeos anticoagulantes |
| CN111154819B (zh) * | 2020-01-15 | 2022-08-30 | 山东大学 | 一种非动物源低分子量肝素及其制备方法与应用 |
| EP4182452A1 (en) | 2020-07-14 | 2023-05-24 | Optimvia, LLC | Methods for synthesizing non-anticoagulant heparan sulfate |
| CN113583151B (zh) * | 2021-07-07 | 2023-06-20 | 山东大学 | 含at结合序列和连续2-o-葡糖醛酸残基的肝素分子及其制备方法与应用 |
| CN113564139B (zh) * | 2021-08-02 | 2023-03-10 | 山东大学 | 巴氏杆菌肝素骨架合酶BtHS1及其突变体与应用 |
| CN116120484A (zh) * | 2022-09-01 | 2023-05-16 | 山东大学 | 一种抗凝血肝素寡糖苯联二聚体及其制备方法与应用 |
Family Cites Families (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4554101A (en) | 1981-01-09 | 1985-11-19 | New York Blood Center, Inc. | Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity |
| US4865870A (en) | 1988-07-07 | 1989-09-12 | Becton, Dickinson And Company | Method for rendering a substrate surface antithrombogenic |
| PT93847A (pt) | 1989-04-24 | 1990-11-20 | Harvard College | Processo para a preparacao de oligossacaridos de baixo peso molecular derivados de heparina ou de sulfato de heparano despolimerizados e de composicoes farmaceuticas que os contem |
| US5378829A (en) | 1990-04-23 | 1995-01-03 | Akzo N.V. | Sulfated glycosaminoglycanoid derivatives of the heparin and heparan sulfate type |
| IT1260137B (it) | 1992-04-17 | 1996-03-28 | Alfa Wassermann Spa | Glicosaminoglicani semisintetici a struttura eparinica od eparanica modificati nella posizione 2 dell'acido alfa-l-iduronico-2-0-solfato |
| JP3818676B2 (ja) | 1994-07-22 | 2006-09-06 | 生化学工業株式会社 | ヘパラン硫酸６−ｏ−硫酸基転移酵素 |
| IT1271057B (it) | 1994-11-04 | 1997-05-26 | Inalco Spa | Polisaccaridi aventi un elevato contenuto di acido iduronico |
| JP3672359B2 (ja) | 1995-07-24 | 2005-07-20 | 生化学工業株式会社 | ヘパラン硫酸 ２−ｏ−硫酸基転移酵素 |
| US5935824A (en) | 1996-01-31 | 1999-08-10 | Technologene, Inc. | Protein expression system |
| US6861254B1 (en) | 1997-10-24 | 2005-03-01 | Massachusetts Institute Of Technology | Heparan sulfate D-glucosaminyl 3-O-sulfotransferases, and uses therefor |
| US8088604B2 (en) | 1998-04-02 | 2012-01-03 | The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Production of defined monodisperse heparosan polymers and unnatural polymers with polysaccharide synthases |
| US7307159B2 (en) * | 2001-05-08 | 2007-12-11 | The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Heparin/heparosan synthase from P. multocida and methods of making and using same |
| US6624141B1 (en) * | 1999-03-17 | 2003-09-23 | The Regents Of The University Of Michigan | Protamine fragment compositions and methods of use |
| US6255088B1 (en) | 1999-05-11 | 2001-07-03 | The Scripps Research Institute | Enzymatic sulfation of biomolecules |
| CA2441984A1 (en) | 2001-03-28 | 2002-10-10 | Massachusetts Institute Of Technology | Methods of 6-o-sulfating polysaccharides and 6-o-sulfated polysaccharide preparations |
| PT2070939E (pt) * | 2001-05-25 | 2014-06-09 | Univ Duke | Moduladores de agentes farmacológicos |
| AU2002330717A1 (en) | 2001-08-30 | 2003-03-10 | University College Dublin | Monosaccharide derivatives |
| AU2003247808A1 (en) | 2002-07-05 | 2004-01-23 | Anders Malmstrom | Purified and isolated heparan sulfate 3-o-sulfotransferase isoform 5 nucleic acids and polypeptides and therapeutic and screening methods using same |
| GB0216861D0 (en) | 2002-07-19 | 2002-08-28 | Univ Birmingham | Saccharide libraries |
| WO2004017910A2 (en) * | 2002-08-23 | 2004-03-04 | Neose Technologies, Inc. | Total synthesis of heparin |
| US7259140B2 (en) * | 2003-03-28 | 2007-08-21 | Thomas Jefferson University | Heparin-binding peptides and uses thereof |
| US7655445B2 (en) | 2003-11-12 | 2010-02-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Methods for synthesis of sulfated saccharides |
| IN2014DN02837A (ja) | 2005-05-12 | 2015-07-10 | Univ North Carolina | |
| JP2009538386A (ja) * | 2006-05-25 | 2009-11-05 | モメンタ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | 低分子量ヘパリン組成物およびその使用 |
| WO2009014715A2 (en) * | 2007-07-23 | 2009-01-29 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Enzymatic synthesis of sulfated polysaccharides without iduronic acid residues |
| JP5709316B2 (ja) | 2008-11-14 | 2015-04-30 | ポートラ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド | 第Ｘａ因子阻害剤のための解毒剤および血液凝固剤と組み合わせて該解毒剤を使用する方法 |
| US20110054236A1 (en) * | 2009-08-25 | 2011-03-03 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods for targeting tumors |
| US20120322760A1 (en) * | 2009-09-23 | 2012-12-20 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treatment with a low molecular weight heparin composition |
| WO2012088416A2 (en) * | 2010-12-23 | 2012-06-28 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Chemoenzymatic synthesis of structurally homogeneous ultra-low molecular weight heparins |
| WO2012116048A1 (en) | 2011-02-22 | 2012-08-30 | Rensselaer Polytechnic Institute | Single step heparosan n-deacetylation and depolymerization for making bioengineered heparin |
| WO2012162789A1 (en) | 2011-06-01 | 2012-12-06 | University Of British Columbia | Polymers for reversing heparin-based anticoagulation |
| US9951149B2 (en) | 2013-06-17 | 2018-04-24 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Reversible heparin molecules and methods of making and using the same |
-
2014
- 2014-06-17 US US14/898,865 patent/US9951149B2/en active Active
- 2014-06-17 JP JP2016521505A patent/JP6670235B2/ja active Active
- 2014-06-17 ES ES14812890T patent/ES2924830T3/es active Active
- 2014-06-17 WO PCT/US2014/042683 patent/WO2014204929A2/en active Application Filing
- 2014-06-17 EP EP14812890.3A patent/EP3011043B1/en active Active
- 2014-06-17 CN CN201480044429.9A patent/CN105452479B/zh active Active
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2016523535A5 (ja) | ||
| Karst et al. | Recent chemical and enzymatic approaches to the synthesis of glycosaminoglycan oligosaccharides | |
| Chevolot et al. | A disaccharide repeat unit is the major structure in fucoidans from two species of brown algae | |
| Schwörer et al. | Synthesis of a Targeted Library of Heparan Sulfate Hexa‐to Dodecasaccharides as Inhibitors of β‐Secretase: Potential Therapeutics for Alzheimer’s Disease | |
| Chen et al. | Tailor design and synthesis of heparan sulfate (HS) oligosaccharide analogs using sequential one-pot multienzyme (OPME) systems | |
| EP0789777B1 (en) | Polysaccharides having a high iduronic acid content | |
| Casu et al. | Re-visiting the structure of heparin | |
| Rong et al. | Substrate specificity of the heparan sulfate hexuronic acid 2-O-sulfotransferase | |
| US8771995B2 (en) | Enzymatic synthesis of sulfated polysaccharides | |
| Petitou et al. | 1976–1983, a critical period in the history of heparin: the discoveryof the antithrombin binding site | |
| Jouault et al. | Characterization, chemical modifications and in vitro anticoagulant properties of an exopolysaccharide produced by Alteromonas infernus | |
| JP2020510119A5 (ja) | ||
| Chappell et al. | Use of biosynthetic enzymes in heparin and heparan sulfate synthesis | |
| Yu et al. | Carbohydrate post-glycosylational modifications | |
| JP2023166387A5 (ja) | ||
| Hagner-McWhirter et al. | Biosynthesis of heparin/heparan sulfate: kinetic studies of the glucuronyl C5-epimerase with N-sulfated derivatives of the Escherichia coli K5 capsular polysaccharide as substrates | |
| Rudd et al. | A highly efficient tree structure for the biosynthesis of heparan sulfate accounts for the commonly observed disaccharides and suggests a mechanism for domain synthesis | |
| CN113583151B (zh) | 含at结合序列和连续2-o-葡糖醛酸残基的肝素分子及其制备方法与应用 | |
| Liu et al. | Understanding the substrate specificity of the heparan sulfate sulfotransferases by an integrated biosynthetic and crystallographic approach | |
| Pongener et al. | Developments in the chemical synthesis of heparin and heparan sulfate | |
| Zhang et al. | “Coding” and “Decoding”: hypothesis for the regulatory mechanism involved in heparan sulfate biosynthesis | |
| Wu et al. | Facile chemoenzymatic synthesis of biotinylated heparosan hexasaccharide | |
| Rodén et al. | Heparin—an introduction | |
| Chandarajoti et al. | De novo synthesis of a narrow size distribution low-molecular-weight heparin | |
| Conrad et al. | Structural analysis of periodate-oxidized heparin |