CN111565800A

CN111565800A - 八糖及其用途

Info

Publication number: CN111565800A
Application number: CN201880080627.9A
Authority: CN
Inventors: 洪上程; 门松健治; 坂元一真; 柯彦均; 蔡政芳; 范乔媛
Original assignee: Academia Sinica
Current assignee: Academia Sinica
Priority date: 2017-12-12
Filing date: 2018-12-12
Publication date: 2020-08-21
Also published as: EP3723862A4; TW201932125A; US11141428B2; EP3723862A1; US20210113608A1; WO2019118525A1; TWI689309B

Abstract

本发明关于一种如式(I)的硫酸化八糖，及其药学上可接受的盐类、溶剂化物或酯类：

其中R¹是‑NHAc或–NHSO₃M，R²及R³个别是H或–SO₃H。本发明也关于一种可用以治疗神经元损伤及/或与细胞自噬通量中断(disrupted autophagy flux)相关的疾病的方法。前述方法包括对一亟需相关治疗的个体施予一有效量的式(I)的硫酸化八糖。

Description

八糖及其用途

【相关先前申请案】

本申请案主张依美国专利法第119(e)条规定而于2017年12月12日提交的临时申请案USSN 62/597,474作为优先权主张，其全部内容并入本案作为参照。

【发明背景】

1.发明领域

本发明是关于新颖的硫酸化八糖及其用途。

2.背景技术说明

本发明的发明人意外发现一些新颖的硫酸化八糖，这些硫酸化八糖与受体型蛋白酪氨酸磷酸酶(receptor-type protein tyrosin phosphatase，RPTP)结合后可调控神经元的生长(outgrowth)及导引，并参与兴奋性突触(excitatory synapse)形成与维持。据此，这些新颖的硫酸化八糖可用以开发治疗神经损伤及/或与细胞自噬通量中断(disrupted autophagy flux)相关的疾病的药物。

此外，这些新颖的硫酸化八糖也可与胆管癌化(cholangio-cancerous)细胞结合，因此，适用于预断个体是否具有发生胆管癌(cholangiocarcinoma)的风险。

【发明内容】

有鉴于此，本发明提供新颖的硫酸化八糖，以及神经元损伤及/或与细胞自噬通量中断相关的疾病的治疗，同时也提供用以预断一个体是否患有或具有发生胆管癌的风险的方法。

据此，本发明第一方面是关于一种如式(I)的硫酸化八糖或其药学上可接受的盐类、溶剂化物或酯类：

其中，R¹是-NHAc或–NHSO₃M，R²及R³个别是H或–SO₃H。

根据本发明的实施方式，在式(I)中，R¹是–NHAc，且R²及R³个别是–SO₃H。

根据本发明另一实施方式，在式(I)中，R¹是–NHSO₃H，R²是H，且R³是–SO₃H。

根据本发明又一实施方式，在式(I)中，R¹是–NHSO₃H，且R²及R³个别是–SO₃H。

根据本发明又一实施方式，在式(I)中，R¹是–NHSO₃H，且R²及R³个别是H。

本发明的第二方面是关于一种用以诱导一神经元生长(outgrowth)的方法。所述方法包括以下步骤：使神经元与一有效量的式(I)硫酸化八糖接触，其中，前述硫酸化八糖会与受体型蛋白酪氨酸磷酸酶σ(receptor-type protein tyrosine phosphataseσ，RPTPσ)结合。

本发明的第三方面是一种用以治疗神经元损伤的方法。所述方法包括以下步骤：对一亟需的个体施予一有效量的式(I)硫酸化八糖，以诱导一损伤神经元的生长。

本发明第四方面是关于一种用以治疗与一细胞自噬通量中断相关的疾病的方法。前述方法包括对一亟需的个体施予一有效量的式(I)硫酸化八糖，以重建该个体细胞自噬通量中断。

根据本发明的实施方式，前述与细胞自噬通量中断相关的疾病可以是一癌症或一神经退行性疾病。

可通过本发明方法治疗的神经退行性疾病实例包括：肌肉萎缩性脊髓侧索硬化症(Amyotrophic lateral sclerosis，ALS)、阿兹海默症(Alzheimer disease，AD)、牛海绵状脑病(bovine spongiform encephalopathy)，库贾氏症(Creutzfeldt-Jakob disease，CJD)、额颞叶变性(frontotemporal lobar degeneration)、亨丁顿氏症(Huntingtondisease)、路易氏体痴呆症(Lewy body dementia)、多发性硬化症(multiple sclerosis)、帕金森氏症(Parkinson disease，PD)以及匹克症(Pick’s disease)，但不限于此。

可通过本发明方法治疗的癌症包括：膀胱癌、骨癌、骨髓癌、脑癌、乳腺癌、胆管癌(cholangiocarcinoma)、大肠癌、食道癌、胃肠癌、齿龈癌(gum cancer)、头癌、肾癌、肝癌、肺癌、鼻咽癌、血癌、颈癌、卵巢癌、前列腺癌、皮肤癌、胃癌、睪丸癌、舌癌以及子宫癌，但不限于此。

以下随附说明将详细阐明本发明的一或多个实施方式。在参阅下文实施方式以及后附的权利要求书之后，本发明所属技术领域中具有通常知识者当可轻易理解本发明的其他方面及优势。

应当理解的是，前面的一般性叙述及以下详细描述均是通过实施例、且旨在提供对所请求保护的本发明的进一步说明。

【附图说明】

本说明书内容包括至少一张彩色附图，任何人可依规定缴纳费用后，向主管机关申请取得附有彩色附图的本申请案或专利的说明书全文。

囊括在说明书中并构成说明书一部分的附图绘示出本发明各方面的各种实例系统、方法及其他示例性实施方式。为让本发明的特征、优点与实施例能更明显易懂，所附图示的说明如下：

图1绘示以硫酸化八糖复原营养不良性末端球的结果。(a)小图：经HS14及HS6(每毫升10微克，15分钟)活化的受体型蛋白酪氨酸磷酸酶σ(receptor-type proteintyrosine phosphataseσ，RPTPσ)。底部是密度分析(densitometric analysis)的结果。(b)小图：HS14及HS6(每毫升20微克)恢复营养不良性末端球的形成并促进轴突生长(如白色箭头所指)穿过蛋白聚糖梯度(黑色三角形)。(c)小图：(b)小图的结果定量(左图：**p<0.01,单因子变异数事后比较Duncan检验；右图：**p<0.01，司徒顿的t检验)。所呈现数据为平均值+SEM。每一实验组分别使用三只小鼠。C-ABC，全名为软骨素酶ABC(chondroitinaseABC)。

【发明详细说明】

为了使本发明的叙述更加详尽与完备，以下针对本发明结合附图图示提出说明性的描述；但这并非实施或运用本发明的唯一形式。

1.定义

除非另有说明，本发明使用的「病患」(patient)或「个体」(subject)一词可互换使用，并且可指任何动物。动物可以是人类个体或非人类个体。个体可以是人类，也可以是亟需兽医治疗的动物，例如：家畜或狩猎动物、农场动物以及实验动物(例如：小鼠、大鼠、天竺鼠、灵长类等)。该动物通常为非人类动物，像是非人类的灵长类。非人类灵长类包括黑猩猩、食蟹猴、蜘蛛猴以及猕猴(例如恒河猕猴(Rhesus macaque)或黑猩猩属(Pan))。家畜以及狩猎动物包括牛、马、猪、羊、鹿、美洲野牛、水牛、貂、猫科动物(feline)(例如：家猫)、犬科动物(例如：狗)、狼、狐狸、鸟禽类(例如：鸡、火鸡以及鸵鸟)、以及鱼类(例如：鳟鱼、鲶鱼以及鲑鱼)。

前述所谓“个体”，也可指经诊断或经鉴定有神经元损伤或患有与细胞自噬通量中断相关的疾病的个体。个体可以是目前未经本文所述的一药剂(例如：本发明的硫酸化八糖)治疗的个体。个体也可以是先前经诊断出一疾病，且正在接受包括本发明的硫酸化八糖的治疗方案治疗的个体，其中该疾病的特征非神经元损伤或与细胞自噬通量中断相关的疾病。

本发明使用的“接触”(contacting)一词是关于细胞(例如：一神经元)，并且是指一药剂对细胞或整个生物体的递送或「施予」(administration)的任何途径，其中使足够量的药剂(例如：本发明的硫酸化八糖)与一种或多种细胞接触，以展现其对细胞的效果。

除非另有说明，本发明使用的“治疗”或“处理”(treat、treating及treatment)预期此一行为发生在患有具体疾病或病症的个体身上时，可降低该疾病或病症的严重性或降低其一或多个症状，或是延迟或推迟该疾病或病症的进程。

本发明使用的“盐类”(salt(s)，包括单复数形式)，是指与无机及/或有机酸及碱形成的酸性及/或碱性盐类。本文使用的「盐类」一词也可包括两性离子(Zwitterion(分子内盐))，而且可以形成，举例来说R取代基包括像是羧基的酸基团(acid moiety)。本发明还包括四级铵盐例如烷基铵盐。优选的是药学上可接受(即：不具毒性、生理上可接受)的盐类，不过在制备过程中也可利用其他盐类，举例来说可在分离或纯化步骤中使用其他盐类。举例来说，可通过在一具有盐沉淀物的介质中或是在一水介质中将化合物I与一定量(例如一当量)的酸或碱发生反应，来形成式(I)化合物的盐类。

例示性的酸加成盐包括醋酸盐(像是以乙酸或三卤乙酸(例如三氟乙酸)形成的那些醋酸盐类)、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基磺酸盐、乙磺酸盐、丁烯二酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐(heptanoate)、己酸盐、氢氯酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、顺丁烯二酸盐、甲基磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟碱酸盐、硝酸盐、草酸盐、果冻酸盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐(像是以硫酸形成的)、磺酸盐(例如本文曾提及的)、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲基磺酸盐、十一烷酸盐等等。

例示性的碱性盐类(像是形成R取代基包括一酸基团(例如羧基))包括铵盐、碱金属盐(像是钠盐、锂盐以及钾盐)、碱土金属盐(像是钙盐及镁盐)、有机碱(举例来说：有机胺)盐类(像是苄星盐(benzathine)、二环己胺(dicyclohexylamine)、海巴明胺(hydrabamine)、N-甲基-D-还原葡糖胺(N-methyl-D-glucamine)、N-甲基-D-葡糖胺(N-methyl-D-glucamide)、正丁胺(t-butyl amine))以及以氨基酸(像是精氨酸、离氨酸等等)形成的盐类。碱性含氮基团可通过低级烷基卤化物(例如：甲基、乙基、丙基以及丁基氯化物、溴化物及碘化物)、硫酸二烷基化物(例如：硫酸二甲酯、二乙酯、二丁酯以及二戊酯)、长链卤化物(例如癸基、十二基、十四基及十八基氯化物、溴化物与碘化物)、芳烷基卤化物(例如：苄基及苯乙基溴化物)等试剂进行四级胺化。

本文也包括本发明化合物的溶剂化物。应当理解的是，所谓的「溶剂化物」(solvate)是指通过一溶质(例如式(I)的八糖或其盐类)以及一溶剂所形成的可变化学计量复合物。合适的溶剂实例包括但不限于：水、丙酮、甲醇、乙醇以及乙酸。优选的溶剂是药学上可接受的溶剂。合适的药学上可接受的溶剂实例包括水、乙醇以及乙酸。更优选的溶剂是水。可以本领域的熟知手段来执行盐类或溶剂化物的制备。应注意的是，由于非药学上可接受的盐类或溶剂化物可用于制备药学上可接受的盐类、溶剂化物或前驱药物，因此本发明的保护范围亦包括这些非药学上可接受的盐类或溶剂化物。

虽然用以界定本发明较广范围的数值范围与参数都是约略的数值，此处已尽可能精确地呈现具体实施例中的相关数值。然而，任何数值本质上不可避免地含有因个别测试方法所致的标准偏差。在此处，「约(about)」通常是指实际数值在一特定数值或范围的正负10％、5％、1％或0.5％之内。或者是，「约」一词代表实际数值落在平均值的可接受标准误差之内，视本发明所属技术领域中具有通常知识者的考虑而定。除了实验例之外，或除非另有明确的说明，当可理解此处所用的所有范围、数量、数值与百分比(例如用以描述材料用量、时间长短、温度、操作条件、数量比例及其他相似者)均经过「约」的修饰。因此，除非另有相反的说明，本说明书与随附权利要求书所公开的数值参数都为约略的数值，且可视需求而更动。至少应将这些数值参数理解为所指出的有效位数与套用一般进位法所得到的数值。

除非上下文另有明确说明，本文所使用的单数形式「一(a,an)」以及「该(the)」均包括复数形式。

2.本发明的硫酸化八糖

本发明内容的方面关于以下发现：特定硫酸化八糖可诱导神经元生长、恢复细胞自噬通量中断、且可结合到癌化细胞的表面，因此这些硫酸化八糖可作为用以开发治疗神经损伤或与细胞自噬通量中断相关的疾病的药物的潜在候选者。本文描述硫酸化八糖的具体实例。

本发明一方面是关于如式(I)的硫酸化八糖或其药学上可接受的盐类、溶剂化物或酯类：

其中R¹是-NHAc或–NHSO₃H；R²及R³个别是H或–SO₃H。

本发明的某些实施方式中，R¹是–NHAc，且R²及R³个别是–SO₃H。

本发明的其他实施方式中，R¹是–NHSO₃H，R²是，而R³则为–SO₃H。

在本发明的其他实施方式中，R¹是–NHSO₃H，且R²及R³个别是–SO₃H。

在本发明更进一步实施方式中，R¹是–NHSO₃H，而R²及R³个别是H。

可根据实验例所描述的程序来制备本发明的硫酸化八糖。本发明的保护范畴也包括本发明化合物的所有立体异构物，例如这些由于式(I)化合物的R取代基上不对称碳原子可能存在的立体异构物(包括镜像及非镜像形式)。本发明化合物的个别立体异构物可以实质上不含其他异构体或者可混合作为外消旋物(racemate)或与所有其他或其他选定的立体异构物混合。本发明的手性中心可具有以IUPAC 1974建议指南中定义的S或R组态。

3.使用方法

本发明的某些硫酸化八糖可与受体型蛋白酪氨酸磷酸酶σ(RPTPσ)结合，并诱导神经元的生长，因此本发明的这些硫酸化八糖可作为开发用以治疗神经元损伤及/或与细胞自噬通量中断相关的疾病的候选药物。

因此本发明也包括一种用以诱导神经元生长的方法。前述方法包括：使神经元与一有效量的式(I)硫酸化八糖接触。

本发明也包括一种用以治疗神经元损伤的方法。前述方法包括对一亟需的个体施予一有效量的式(I)硫酸化八糖，以诱导一损伤神经元的生长。

本发明也包括一种用以治疗与细胞自噬通量中断相关的疾病的方法。前述方法包括对一亟需的个体施予一有效量的式(I)硫酸化八糖，以重建该个体细胞自噬通量中断。

根据本发明的某些实施方式，前述任一种方法中使用的式(I)的硫酸化八糖中，R¹是–NHAc，且R²及R³个别是–SO₃H。

根据本发明的其他实施方式，前述任一种方法中，式(I)的硫酸化八糖中，R¹是–NHSO₃H，R²是H，且R³是–SO₃H。

根据本发明的实施方式，与细胞自噬通量中断相关的疾病可以是癌症或神经退行性疾病。神经退行性疾病的实例包括，但不限于，肌肉萎缩性脊髓侧索硬化症、阿兹海默症、牛海绵状脑病、库贾氏症、额颞叶变性、亨丁顿氏症、路易氏体痴呆症、多发性硬化症、帕金森氏症以及匹克症。

可通过本发明方法治疗的癌症包括，但不限于，膀胱癌、骨癌、骨髓癌、脑癌、乳腺癌、胆管癌(cholangiocarcinoma)、大肠癌、食道癌、胃肠癌、齿龈癌(gum cancer)、头癌、肾癌、肝癌、肺癌、鼻咽癌、血癌、颈癌、卵巢癌、前列腺癌、皮肤癌、胃癌、睪丸癌、舌癌以及子宫癌。

现参考以下实施例更具体地描述本发明，提供这些实施例的目的是为了说明而非限制。虽然这些实施例有其惯常使用的方式，但也可替代地使用本领域具有通常知识者熟知的其他程序、方法或技术。

实施例

材料与方法

细胞培养将人类胚胎肾脏的HEK293T细胞株以及来自猴子肾脏的COS-1细胞株培养在培养液(Dulbecco’s modified eagle’s medium，DMEM)中，培养液中添加有10％的热灭活胎牛血清(fetal calf serum，FCS)。将Neuro2a细胞株(从小鼠神经母细胞瘤建立)培养在添加有10％的FCS的RPMI-1640培养液中。

SNU478、HuCCT1、Huh28、BxPC3以及HCT8细胞株则分别培养在RPMI 1640培养液(供货商：

Invitrogen Co.，USA)中，其含有每毫升100U的青霉素以及每毫升100克的链霉素(品名：Pen Strep；供货商：

Invitrogen Co.，USA)以及10％的胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)(供货商：

Invitrogen Co.，USA)。KKU100、MMNK1以及HepG2则分别培养于补充有每毫升100U的青霉素、100克链霉素及10％的胎牛血清的DMEM培养液中。在37℃，含5％CO₂的环境下培养所有细胞株。

于盖玻片上制备蛋白聚糖梯度斑点。以每毫升100微克的PLL涂覆玻璃盖玻片，于室温下放置隔夜无菌水润洗之后，完全干燥。在盖玻片之上，对2毫升的蛋白聚糖(0.4毫克/毫升)以及层粘连蛋白(10微克/毫升)混合物溶于无Ca²⁺-及Mg²⁺-的平衡溶液(Hank’sbalanced salt solution，HBSS，供货商：Invitrogen)进行斑点点样及干燥。接着，在37℃将盖玻片于层粘连蛋白(每毫升10微克)的HBSS溶液中浸浴直到即将进行细胞涂盘之前(即，至少3小时)。接着将层粘连蛋白溶液移除，并在盖玻片表面尚未干掉之时将细胞涂覆在盖玻片表面上。

背根神经节(Dorsal root ganglion，DRG)神经元原代培养从C57BL/6J(SLC)成年(12–16周龄)雌性小鼠身上分离DRG。在冷的HBSS溶液中修剪经分离的DRG根部，并以离心管收集，接着于低速(500rpm)下旋转1分钟。随后移除HBSS。于37℃下，将组织培养于胶原酶-II(每毫升4毫克)/中性蛋白酶-II(每毫升4.67毫克)的HBSS溶液中15分钟。在低速旋转之后，用预热的培养液冲洗组织一次，所述培养液是由以下培养液组成：含Gluta-MAX(Gibco)的Neurobasal-A(Gibco)、抗生素-抗霉剂(商品名：Antibiotic-Antimycotic；供货商：Gibco)及B-27(Invitrogen)，旋转沉淀之后在新鲜培养液中研磨。为了细化神经元，将细胞悬浮液小心地覆盖在15％的牛血清蛋白(BSA)在HBSS溶液中并高速(1000rpm)旋转5分钟，接着轻柔地移除上清液。润洗DRG细胞一次，并于培养液中使其悬浮。于培养液中，将DRG细胞平涂至盖玻片上。

至于胚胎DRG培养，在冷的HBSS溶液中，从胚胎发育第15天(E15)的小鼠分离DRG组织，在预热的培养液(品名：Neurobasal medium(供货商：Gibco))中修剪并移植至具有层粘连蛋白涂层或具有蛋白聚糖/层粘连蛋白斑点点样的玻璃上。将DRG细胞培养于前述神经基底培养液(Neurobasal medium)中，该培养液含有Gluta-MAX、Anti-Anti、每毫升50纳克(ng)的神经生长因子2.5S(品名：NGF 2.5S，供货商：Invitrogen)以及2％的B-27增补剂。

免疫染色于–30℃下将DRG神经元与冰冷的甲醇中混合15分钟。接着用磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffered salin，PBS)润洗混合的样本三次，并于室温下，与含有5％(v/v)的山羊血清(载体)及0.2％(v/v)的曲拉通X-100(Triton-X 100，供货商：Sigma)的阻断溶液反应90分钟。置于神经元特定的第三级神经元β-微管蛋白(Tuj1)染色，将样本浸泡于经PBS稀释的1：1000小鼠单株Tuj1抗体(供货商：Covance,801201)中，于4℃放置隔夜，其中该PBS含有2.5％(v/v)的正常山羊血清。经PBS洗涤三次之后，于室温下，将神经元溶于经PBS稀释的1：250Alexa 488-共轭山羊抗小鼠IgG抗体(供货商：Molecular Probes，A11001)反应2小时，其中PBS含有2.5％(v/v)的山羊血清。

针对Tuj1及微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1lightchain，LC3)的双重标记，于4℃下，使样本溶于经PBS稀释的1：1000小鼠单株Tuj1抗体及1：500兔子单株抗-LC3B抗体(供货商：Cell Signaling Technology,3868)反应至隔夜，其中PBS含有2.5％(v/v)的山羊血清。洗涤之后，前述样本均接受第二次染色处理。于室温下，将这些样本与经PBS稀释的1：250的Alexa 488-共轭山羊抗小鼠IgG抗体及1:250的Alexa594-共轭山羊抗兔子IgG抗体(供货商：Molecular Probes,A11012)反应2小时，PBS含有2.5％(v/v)的山羊血清。前述样本接着以PBS透彻地洗涤并用FluorSave(Millipore)包埋。通过配备有一冷却CCD相机、水银灯及合适滤镜组的荧光显微镜：BZ-9000invertedfluorescent microscope(供货商：Keyence)来获得荧光影像。使用图像处理软件：PhotoShop CC软件(Adobe)处理所获得的数字影像。

凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白质印迹法以Tris缓冲盐水(Tris-buffered saline，TBS)、1％的Triton-X、蛋白酶抑制剂(商品名：Complete Mini Protease InhibitorCocktail，供货商：Roche)以及磷酸酶抑制剂(商品名：Phostop Phosphatase InhibitorCocktail，供货商：Roche)溶解细胞。将溶胞产物放置于冰上10分钟，并于4℃下，以20000g离心10分钟。将上清液与4x的SDS样本缓冲液混合并煮沸5分钟。

所有样本均在5–20％梯度凝胶(Wako)上移动并转印至硝化纤维素膜(供货商：GEHealthcare)。以5％的脱脂奶粉或BSA阻断反应之后，以一级抗体转渍前述的膜。此实验使用的一级抗体包括抗-EGFR pY1174抗体(供货商：Invitrogen，44794G)、抗-HA(供货商：Roche，clone 3F10)、抗磷酸酪胺酸抗体(商品名：4G10 Platinum，供货商：Millipore，05-1050)以及抗-β-肌动蛋白抗体(供货商：Sigma Aldrich，clone AC-15)。所有使用的一级抗体经1：1000稀释。所有与山葵过氧化酶共轭的二级抗体均来自供货商：JacksonImmunoResearch，并经1：3000稀释。转渍膜选用Novex ECL(Invitrogen)或ECL PlusSubstrate(Pierce)。

统计分析

未使用统计学方法来预测实验的样本大小。分析数据，并以平均值标准误差(standard error of the mean，SEM)或标准误差(standard deviation，SD)呈现平均值(在图示简单说明一段呈现之)。利用t检验(Student’s test)分析数据以比较两个组。在超过两组的情况下，为了多组比较，则使用单因素方差分析(One-way ANOVA)合并事后Duncan检验或Tukey检验加以校正。所有的测试均以双边检验的方式进行。判定P值为0.05或小于之结果为显著。以微软文字处理软件Excel 2013计算平均值、SD、SEM及统计结果。在本研究中没有使用包含或排除数据的基准。分析囊括所有样本或实验动物。在没有事先随机化动物且没有致盲的情况下执行实验。没有测试常态分布的假设。不同组别彼此之间没有比较其变异数。没有使用统计学方法以预测实验小鼠实验的样本大小。所示数据代表图示简单说明中指定的一至四个独立实验。

实验例1：化学合成本发明的硫酸化八糖

分别根据如流程图I及流程图II所描述的步骤合成本发明的八糖HS1-HS8及HS9-HS16。一般是使用双糖及四糖构建块(buidling block)以会聚(convergent)方式组装糖骨架，且以对甲苯硫基(thiotolyl)官能性作为脱离基(leaving group)。所使用的保护基是根据先前用于肝素及乙酰肝素合成的模式(Hu et al.,2011Nat.Chem.3,557-563；Zuluetaet al.,2012J.Am.Chem.Soc.134,8988-8995)。对于完全受保护的骨架，可以不同的方式进行官能基团的转变作用(Hu et al.,2012J.Am.Che.Soc.134,20722-20727.)，利用氨基戊基糖苷配基基团以提供差异性磺酸化的最终产物。

流程图I

流程图II

以下提供HS1至HS16的化学数据。

5-氨戊基(2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛基-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧--D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛基-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛基-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛酸酯钠盐(5-Aminopentyl(2-acetamido-2-deoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronyl-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronyl-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronyl-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronate)(HS1)¹H NMR(600MHz,D₂O):δ5.12–5.06(m,4H),4.84–4.82(m,H),4.79–4.76(m,2H),4.67–4.63(m,3H),4.42(d,J＝2.8Hz,1H),4.02–3.93(m,4H),3.90–3.83(m,5H),3.83–3.71(m,15H),3.71–3.62(m,8H),3.62–3.53(m,4H),3.53–3.49(m,1H),3.38(t,J＝9.5Hz,1H),2.90(t,J＝7.6Hz,2H),1.94(s,3H,Ac),1.93(s,6H,Ac×2),1.92(s,3H,Ac),1.63–1.54(m,4H,CH₂ linker),1.40-1.32(m,2H,CH₂ linker)；¹³C NMR(150MHz,D₂O):δ175.0(C),174.9(C),174.8(C),174.3(C),174.28(C),174.2(C),101.6(CH),100.7(CH),94.4(CH),94.3(CH),76.6(CH),76.5(CH),76.4(CH),74.5(CH),74.4(CH),74.3(CH),73.9(CH),71.9(CH),71.1(CH),71.05(CH),71.0(CH),69.9(CH),69.8(CH),69.7(CH),69.6(CH),69.4(CH),69.3(CH),68.8(CH),68.6(CH),68.0(CH₂),60.1(CH₂),60.0(CH₂),53.6(CH),53.5(CH),39.3(CH₂),28.0(CH₂),26.2(CH₂),22.2(CH₂),21.8(CH₃)；HRMS(ESI):m/z calcd for C₆₁H₉₅N₅O₄₅([M–2H]^2–):808.7650,found:808.7641

5-氨戊基(2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛基-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷糖醛基-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛基-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷糖醛酸酯钠盐(5-Aminopentyl(2-acetamido-2-deoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronyl-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-β-D-glucopyranosiduronyl-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronyl-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-β-D-glucopyranosiduronate)(HS9)¹H NMR(600MHz,D₂O):δ5.40(d,J＝3.8Hz,1H),5.38(d,J＝3.8Hz,1H),5.20(d,J＝3.7Hz,1H),5.19(d,J＝3.7Hz,1H),4.94(d,J＝3.7Hz,1H),4.93(d,J＝3.9Hz,1H),4.75(d,J＝3.1Hz,1H),4.74(d,J＝2.9Hz,1H),4.51(d,J＝7.9Hz,1H),4.46(d,J＝8.0Hz,1H),4.10(t,J＝6.8Hz,1H),4.08(t,J＝6.6Hz,1H),3.97–3.95(m,1H),3.95–3.91(m,5H),3.90–3.87(m,5H),3.86–3.83(m,7H),3.83–3.79(m,4H),3.79–3.77(m,2H),3.77–3.76(m,2H),3.76–3.74(m,2H),3.74–3.71(m,3H),3.71–3.69(m,4H),3.69–3.66(m,1H),3.49(t,J＝9.4Hz,1H),3.38(t,J＝8.6Hz,1H),3.31(t,J＝8.6Hz,1H),3.01(t,J＝7.5Hz,1H),2.06(s,6H,Ac×2),2.04(s,3H,Ac),2.03(s,3H,Ac),1.73-1.65(m,4H),1.52–1.43(m,2H)；¹³C NMR(150MHz,D₂O):δ176.0(C),175.9(C),175.82(C),175.77(C),175.3(C),175.24(C),175.20(C),103.3(CH),103.2(CH),102.8(C),102.7(CH),97.95(CH),95.4(CH),95.3(CH),79.1(CH),78.1(CH),77.91(CH),77.87(CH),77.7(CH),77.5(CH),77.3(CH),77.19(CH),77.17(CH),75.6(CH),75.3(CH),74.5(CH),74.4(CH),72.9(CH),72.1(CH),71.7(CH),71.03(CH₂),71.00(CH),70.95(CH),70.9(CH),70.8(CH),70.7(CH),70.6(CH),70.5(CH),70.4(CH),61.2(CH₂),60.7(CH₂),60.6(CH₂),60.4(CH₂),54.8(CH),54.5(CH),54.1(CH),40.4(CH₂),29.1(CH₂),27.3(CH₂),22.9(CH₂),22.9(CH₃)；HRMS(ESI):m/z calcd forC₆₁H₉₄N₅Na₅O₄₅([M+5Na–3H]²⁺):865.7355,found:865.7357

5-氨戊基(2-脱氧-2-磺酰胺--D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛基-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛基-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛基-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛酸酯钠盐(5-Aminopentyl(2-deoxy-2-sulfamido-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronyl-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronyl-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronyl-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronate)(HS2)¹H NMR(600MHz,D₂O):δ5.41–5.35(m,4H),4.98–4.94(m,2H),4.92–4.89(m,2H),4.51(d,J＝1.9Hz,1H),4.16–4.02(m,8H),3.92–3.59(m,27H),3.47(t,J＝9.4Hz,1H),3.28–3.19(m,4H),3.00(t,J＝7.4Hz,2H),1.72–1.63(m,2H),1.48–1.43(m,2H)；¹³C NMR(150MHz,D₂O):δ175.2(C),101.6(CH),100.7(CH),95.64(CH),95.6(CH),95.5(CH),95.4(CH),77.1(CH),77.0(CH),76.9(CH),74.9(CH),74.8(CH),74.7(CH),71.7(CH),71.3(CH),71.0(CH),70.9(CH),69.8(CH),69.73(CH),69.7(CH),69.3(CH),69.1(CH),69.0(CH),68.8(CH),68.5(CH),68.4(CH),68.2(CH),68.1(CH₂),60.2(CH₂),59.7(CH₂),58.0(CH),57.8(CH),39.4(CH₂),28.0(CH₂),26.2(CH₂),22.2(CH₂)；HRMS(ESI):m/zcalcd for C₅₃H₈₆N₅O₅₃S₄Na₃([M+3Na–6H]^3–):611.4177,found:611.4167

5-氨戊基(2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛基)-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛基)-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛基)-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛酸酯钠盐(5-Aminopentyl(2-acetamido-2-deoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronyl)-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronyl)-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronyl)-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronate)(HS7)¹HNMR(600MHz,D₂O):δ5.17(bs,4H),5.11–5.08(m,4H),4.90(d,J＝10.1Hz,2H),4.54(d,J＝1.9Hz,1H),4.32(bs,3H),4.30-4.25(m,4H),4.21(bs,1H),4.03–3.96(m,9H),3.90–3.83(m,9H),3.82–3.76(m,4H),3.75–3.67(m,8H),3.45(t,J＝9.3Hz,1H),2.99(t,J＝7.5Hz,2H),2.05(s,6H,Ac×2),2.04(s,6H,Ac×2),1.70–1.61(m,4H,CH₂ linker),1.50–1.40(m,2H,CH₂ linker)；¹³C NMR(150MHz,D₂O):δ175.8(C),175.2(C),174.8(C),174.7(C),99.3(CH),99.2(CH),98.6(CH),93.5(CH),93.4(CH),93.3(CH),77.2(CH),74.1(CH),73.3(CH),73.2(CH),73.1(CH),71.9(CH),71.3(CH),71.2(CH),70.7(CH),70.4(CH),70.2(CH),69.9(CH),69.8(CH),69.7(CH),68.1(CH₂),67.4(CH),67.3(CH),67.2(CH),64.0(CH),63.4(CH),63.3(CH),63.1(CH),60.2(CH₂),59.7(CH₂),39.4(CH₂),27.8(CH₂),26.2(CH₂),22.24(CH₃),22.2(CH₃),22.1(CH₃)；HRMS(ESI):m/z calcd for C₆₁H₉₄N₅O₅₇S₄([M–3H]^3–)645.4498,found 645.4489

5-氨戊基(2-脱氧-2-磺酰胺-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛基-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷糖醛基-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛基-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷糖醛酸酯钠盐(5-Aminopentyl(2-deoxy-2-sulfamido-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronyl-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-β-D-glucopyranosiduronyl-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronyl-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-β-D-glucopyranosiduronate)

(HS10)¹H NMR(600MHz,D₂O):δ5.62(d,J＝3.7Hz,1H),5.61(d,J＝3.6Hz,1H),5.41(d,J＝3.4Hz,1H),5.39(d,J＝3.4Hz,1H),4.98(bs,1H),4.96(d,J＝2.8Hz,1H),4.55(d,J＝7.9Hz,1H),4.50(d,J＝8.0Hz,1H),4.14–4.07(m,4H),3.94–3.88(m,4H),3.88–3.84(m,6H),3.84–3.81(m,7H),3.81–3.78(m,4H),3.76–3.74(m,3H),3.74–3.70(m,4H),3.68–3.63(m,3H),3.48(t,J＝9.5Hz,1H),3.43(t,J＝8.6Hz,1H),3.36(t,J＝8.6Hz,1H),3.31–3.25(m,3H),3.23(dd,J＝10.3,3.6Hz,1H),3.02(t,J＝7.5Hz,2H),1.75–1.65(m,4H),1.53–1.43(m,2H)；¹³C NMR(150MHz,D₂O):δ176.3(C),176.1(C),176.0(C),103.3(CH),103.2(CH),102.8(CH),102.7(CH),98.5(CH),98.4(CH),96.5(CH),96.4(CH),78.9(CH),78.3(CH),78.11(CH),78.06(CH),77.94(CH),77.89(CH),77.6(CH),77.5(CH),76.0(CH),75.9(CH),73.81(CH),73.76(CH),72.7(CH),72.4(CH),71.94(CH),71.91(C),71.6(CH),71.1(CH₂),70.9(CH),70.84(CH),70.80(CH),70.5(CH),70.33(CH),70.28(CH),70.0(CH),69.6(CH),61.4(CH₂),60.81(CH₂),60.79(CH₂),60.5(CH₂),59.3(CH),59.0(CH),58.6(CH),40.5(CH₂),29.2(CH₂),27.3(CH₂),23.0(CH₂)；HRMS(ESI):m/zcalcd for C₅₃H₈₁N₅Na₈O₅₃S₄([M+3Na–6H]^3–):611.4177,found:611.4176；calcd forC₅₃H₈₁N₅Na₈O₅₃S₄([M+4Na–7H]^3–):618.7449,found:618.7449

5-氨戊基(2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛基)-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-β-D-吡喃葡萄糖苷糖醛基-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛基)-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-2-O-磺酸根-β-D-吡喃葡萄糖苷糖醛酸酯钠盐(5-Aminopentyl(2-acetamido-2-deoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronyl)-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-β-D-glucopyranosiduronyl-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronyl)-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-2-O-sulfonato-β-D-glucopyranosiduronate)(HS13)¹H NMR(600MHz,D₂O):δ5.39(d,J＝3.6Hz,1H),5.38(d,J＝3.4Hz,1H),5.23–5.20(m,2H),5.14–5.12(m,2H),4.92(d,J＝1.6Hz,1H),4.89(s,1H),4.73(d,J＝7.7Hz,1H),4.63(d,J＝7.9Hz,1H),4.35(s,1H),4.34(s,1H),4.32(s,1H),4.28(s,1H),4.16(t,J＝8.3Hz,1H),4.10(t,J＝8.7Hz,1H),4.06–4.00(m,4H),4.00–3.97(m,2H),3.95–3.90(m,5H),3.88–3.85(m,10H),3.84–3.80(m,6H),3.78–3.66(m,6H),3.48(t,J＝9.3Hz,1H),3.03(t,J＝7.4Hz,2H),2.09(bs,3H,Ac),2.08(bs,3H,Ac),2.07(bs,3H,Ac),2.06(bs,3H,Ac),1.74–1.65(m,4H,CH₂ linker),1.56–1.48(m,2H,CH₂linker)；¹³C NMR(150MHz,D₂O):δ176.8(C),176.4(C),175.9(C),175.8(C),175.7(C),175.6(C),175.4(C),175.3(C),101.7(CH),101.6(CH),100.4(CH),100.3(CH),98.3(CH),98.2(CH),94.70(CH),94.65(CH),81.6(CH),81.3(CH),80.7(CH),78.4(CH),77.7(CH),77.6(CH),77.4(CH),77.2(CH),76.6(CH),76.4(CH),74.8(CH),74.4(CH),73.0(CH),72.4(CH),72.34(CH),72.30(CH),71.8(CH),71.5(CH),71.1(CH₂),70.9(CH),70.6(CH),70.5(CH),68.6(CH),68.5(CH),65.1(CH),64.4(CH),61.4(CH₂),60.7(CH₂),60.5(CH₂),55.1(CH),54.5(CH),54.1(CH),40.5(CH₂),29.0(CH₂),27.3(CH₂),23.3(CH₃),23.0(CH₂),22.9(CH₃)；HRMS(ESI):m/z calcd for C₆₁H₉₁N₅O₅₇S₄Na₈([M+8Na–6H]²⁺):1058.6221,found:1058.6226

5-氨戊基(2-乙酰胺基-2-脱氧-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛基-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷糖醛基-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛基-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷糖醛酸酯钠盐(5-Aminopentyl(2-acetamido-2-deoxy-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronyl-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-β-D-glucopyranosiduronyl-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronyl-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-β-D-glucopyranosiduronate)(HS15)¹H NMR(600MHz,D₂O):δ5.43–5.38(m,2H),5.21–5.18(m,2H),5.01–4.99(m,2H),4.62–4.58(m,2H),4.49–4.46(m,2H),4.39–4.36(m,4H),4.25–4.22(m,3H),4.12–4.10(m,3H),4.02–3.98(m,5H),3.99–3.96(m,2H),3.93–3.91(m,2H),3.85–3.82(m,3H),3.80–3.73(m,14H),3.61–3.57(m,2H),3.39–3.36(m,2H),3.35–3.31(m,1H),3.04–3.00(m,2H),2.07(bs,3H,Ac),2.06(bs,3H,Ac),2.04(bs,3H,Ac),2.03(bs,3H,Ac),1.71–1.67(m,4H,CH₂ linker),1.52–1.46(m,2H,CH₂ linker)；¹³C NMR(150MHz,D₂O):δ176.1(C),176.02(C),175.99(C),175.42(C),175.37(C),175.32(C),175.28(C),103.3(CH),103.09(CH),103.06(CH),103.03(CH),103.0(CH),102.9(CH),98.1(CH),95.5(CH),83.1(CH),80.9(CH),78.4(CH),77.9(CH),77.8(CH),77.7(CH),77.6(CH),77.5(CH),77.3(CH),76.2(CH),75.2(CH),74.62(CH),74.57(CH),74.1(CH),73.0(CH),72.2(CH),71.2(CH),71.1(CH₂),70.7(CH),70.6(CH),70.5(CH),70.4(CH),70.3(CH),70.2(CH),70.1(CH),70.0(CH),67.4(CH₂),67.2(CH₂),66.9(CH₂),54.8(CH),54.5(CH),54.1(CH),40.5(CH₂),29.2(CH₂),27.3(CH₂),23.0(CH₃)

5-氨戊基(2-乙酰胺基-2-脱氧-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛基-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛基-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛基-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛酸酯钠盐(5-Aminopentyl(2-acetamido-2-deoxy-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronyl-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronyl-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronyl-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronate)(HS3)¹H NMR(600MHz,D₂O):δ5.23–5.10(m,7H),5.03–4.93(m,3H),4.33–4.20(m,12H),4.16–3.96(m,11H),3.95–3.84(m,6H),3.83–3.66(m,10H),3.63–3.58(m,2H),3.10–3.00(m,1H),2.08(bs,6H,Ac),2.04(bs,3H,Ac),2.03(bs,3H,Ac),1.80–1.65(m,4H,CH₂ linker),1.52–1.46(m,2H,CH₂ linker)；¹³C NMR(150MHz,D₂O):δ175.5(C),175.3(C),175.2(C),175.0(C),174.8(C),174.4(C),102.0(CH),101.8(CH),100.8(CH),99.2(CH),94.4(CH),93.7(CH),74.0(CH),71.2(CH),71.0(CH),70.7(CH),70.1(CH),70.0(CH),69.8(CH),69.4(CH),69.3(CH),69.1(CH),69.0(CH),68.6(CH),68.1(CH),66.4(CH),66.2(CH),66.1(CH₂),53.6(CH),53.4(CH),53.2(CH),53.1(CH),39.4(CH₂),28.0(CH₂),26.1(CH₂),22.2(CH₃)；HRMS(MALDI):m/zcalcd for C₆₁H₉₄N₅O₅₇S₄([M–3H]^3–):645.4498,found:645.4493

5-氨戊基(2-乙酰胺基-2-脱氧-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛基)-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛基)-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛基)-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛酸酯钠盐(5-Aminopentyl(2-acetamido-2-deoxy-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronyl)-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronyl)-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronyl)-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronate)(HS5)¹H NMR(600MHz,D₂O):δ5.24–2.18(m5H),5.18–5.08(m,5H),5.04–4.89(m,2H),4.35–4.20(m,13H),4.15–3.93(m,9H),3.94–3.79(m,4H),3.79–3.59(m,10H),3.56(t,J＝9.7Hz,1H),3.00(t,J＝7.2Hz,2H),2.08(s,3H,Ac),2.06(s,3H,Ac),2.01(s,6H,Ac×2),1.73–1.59(m,4H),1.52–1.38(m,2H)；¹³C NMR(150MHz,D₂O):δ174.8(C),174.4(C),174.3(C),172.7(C),101.8(CH),100.9(CH),99.1(CH),99.0(CH),98.5(CH),95.3(CH),94.9(CH),76.3(CH),76.2(CH),73.7(CH),73.6(CH),71.0(CH),70.8(CH),70.6(CH),70.56(CH),69.7(CH),69.6(CH),68.9(CH),68.7(CH),68.6(CH₂),67.4(CH),67.3(CH),66.5(CH),66.3(CH₂),66.1(CH₂),53.4(CH),53.3(CH),53.1(CH),39.3(CH₂),27.9(CH₂),27.6(CH₂),26.4(CH₂),22.2(CH₂),22.1(CH₃),21.9(CH₃),21.8(CH₃)；HRMS(ESI):m/zcalcd for C₆₁H₉₃N₅O₆₉S₈([M–4H]^4–):563.7922,found:563.7941

5-氨戊基(2-脱氧-2-磺酰胺-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛基-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛基-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛基-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛酸酯钠盐(5-Aminopentyl(2-deoxy-2-sulfamido-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronyl-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronyl-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronyl-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronate)(HS4)¹H NMR(600MHz,D₂O):δ5.38–5.33(m,4H),5.02(bs,4H),4.89(bs,2H),4.51(d,J＝2.4Hz,1H),4.40–4.33(m,4H),4.25–4.17(m,4H),4.16–4.10(m,4H),4.10–4.05(m,4H),4.05–3.93(m,5H),3.88–3.83(m,1H),3.82–3.73(m,7H),3.70–3.65(m,5H),3.58(t,J＝9.7Hz,1H),3.30–3.20(m,4H),3.00(td,J＝2.1,7.5Hz,2H),1.73–1.64(m,4H,CH₂ linker),1.49–1.43(m,2H,CH₂ linker)；¹³C NMR(150MHz,D₂O):δ175.4(C),175.2(C),101.9(CH),100.7(CH),95.6(CH),95.58(CH),95.5(CH),77.6(CH),77.4(CH),77.3(CH),71.2(CH),69.9(CH),69.8(CH),69.0(CH),68.9(CH),68.6(CH),68.4(CH),68.3(CH),68.0(CH₂),67.8(CH),67.5(CH),66.4(CH₂),66.2(CH₂),57.8(CH),57.7(CH),39.4(CH₂),28.0(CH₂),26.2(CH₂),22.2(CH₂)；HRMS(ESI):m/zcalcdfor C₅₃H₇₈N₅O₆₅S₈Na₈([M+8Na–11H]^3–):754.6633,found:754.6641

5-氨戊基(2-脱氧-2-磺酰胺基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛基)-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-β-D-吡喃葡萄糖苷糖醛基-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛基)-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-2-O-磺酸根-β-D-吡喃葡萄糖苷糖醛酸酯钠盐(5-Aminopentyl(2-deoxy-2-sulfamido-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronyl)-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-β-D-glucopyranosiduronyl-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronyl)-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-2-O-sulfonato-β-D-glucopyranosiduronate)(HS14)¹H NMR(600MHz,D₂O):δ5.61(d,J＝3.7Hz,1H),5.60(d,J＝3.5Hz,1H),5.35–5.32(m,2H),5.27(bs,2H),4.89–4.87(m,1H),4.72(d,J＝7.7Hz,1H),4.64(d,J＝7.8Hz,1H),4.37–4.34(m,2H),4.29–4.25(m,2H),4.18(t,J＝8.5Hz,1H),4.12(t,J＝8.6Hz,1H),4.08–4.04(m,3H),4.01–3.98(m,2H),3.90–3.84(m,12H),3.83–3.80(m,4H),3.77–3.73(m,2H),3.73–3.70(m,3H),3.70–3.65(m,5H),3.48(t,J＝9.5Hz,1H),3.28(dd,J＝10.6,3.5Hz,1H),3.27–3.22(m,3H),3.02(t,J＝7.4Hz,1H),1.72–1.63(m,4H,CH₂ linker),1.57–1.46(m,2H,CH₂linker)；¹³C NMR(150MHz,D₂O):δ176.5(C),176.2(C),175.9(C),175.6(C),101.8(CH),101.7(CH),100.2(CH),98.9(CH),98.3(CH),81.1(CH),80.7(CH),80.6(CH),78.4(CH),78.2(CH),78.1(CH),77.9(CH),77.5(CH),77.4(CH),76.6(CH),76.2(CH),75.9(CH),75.7(CH),72.7(CH),72.3(CH),72.2(CH),71.7(CH),71.10(CH₂),71.08(CH),70.93(CH),70.90(CH),70.4(CH),69.5(CH),69.3(CH),69.0(CH),68.8(CH),61.4(CH₂),60.8(CH₂),60.4(CH₂),59.4(CH),59.2(CH),58.9(CH),40.6(CH₂),29.1(CH₂),27.5(CH₂),23.0(CH₂)

5-氨戊基(2-脱氧-2-磺酰胺-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛基-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-6-O-磺酸根--D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷糖醛基-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-α-L-异吡喃糖苷糖醛基-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷糖醛酸酯钠盐(5-Aminopentyl(2-deoxy-2-sulfamido-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronyl-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-β-D-glucopyranosiduronyl-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-α-L-idopyranosiduronyl-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-β-D-glucopyranosiduronate)(HS16)¹H NMR(600MHz,D₂O):δ5.58(bs,1H),5.38–5.32(m,2H),5.04-4.99(m,2H),4.76–4.72(m,2H),4.62–4.58(m,2H),4.46(d,J＝7.9Hz,1H),4.38–4.30(m,2H),4.21–4.17(m,3H),4.12–4.10(m,2H),4.03–4.00(m,1H),3.95–3.92(m,1H),3.88–3.83(m,2H),3.81–3.67(m,13H),3.66–3.62(m,2H),3.58–3.54(m,2H),3.53–3.49(m,1H),3.40–3.36(m,1H),3.34(d,J＝7.7Hz,1H),3.32–3.30(m,2H),3.29–3.24(m,3H),3.21(dd,J＝10.3,3.3Hz,1H),2.99(t,J＝7.4Hz,1H),1.71–1.60(m,4H,CH₂ linker),1.50–1.40(m,2H,CH₂ linker)；¹³C NMR(150MHz,D₂O):δ176.51(C),176.47(C),176.1(C),176.0(C),103.2(CH),103.0(CH),102.94(CH),102.91(CH),98.7(CH),98.5(CH),96.6(CH),96.4(CH),78.7(CH),78.3(CH),78.2(CH),78.1(CH),77.8(CH),77.5(CH),77.4(CH),76.9(CH),76.7(CH),76.2(CH),75.6(CH),75.44(CH),75.40(CH),74.1(CH),73.9(CH),73.8(CH),73.0(CH),72.3(CH),71.02(CH₂),70.96(CH),70.9(CH),70.7(CH),70.1(CH),70.0(CH),69.9(CH),69.8(CH),69.65(CH),69.56(CH),69.5(CH),68.8(CH),67.4(CH₂),67.3(CH₂),66.9(CH₂),59.2(CH),58.8(CH),58.3(CH),40.5(CH₂),29.2(CH₂),27.3(CH₂),23.0(CH₂)；HRMS(ESI):m/z calcd forC₅₃H₇₉N₅O₆₅S₈Na₆([M+6Na–10H]^4–):554.7546,found:554.7562

5-氨戊基(2-乙酰胺基-2-脱氧-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛基)-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-β-D-吡喃葡萄糖苷糖醛基)-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛基)-(1→4)-(2-乙酰胺基-2-脱氧-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-2-O-磺酸根-β-D-吡喃葡萄糖苷糖醛酸酯钠盐(5-Aminopentyl(2-acetamido-2-deoxy-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronyl)-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-β-D-glucopyranosiduronyl)-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronyl)-(1→4)-(2-acetamido-2-deoxy-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-2-O-sulfonato-β-D-glucopyranosiduronate)(HS11)¹H NMR(600MHz,D₂O):δ5.42(s,1H),5.38(s,1H),5.23(s,2H),5.19(s,2H),4.94(s,1H),4.89(s,1H),4.64(d,J＝7.7Hz,1H),4.60(d,J＝10.6Hz,1H),4.40–4.35(m,5H),4.33(bs,1H),4.29–4.25(m,5H),4.18(t,J＝8.4Hz,1H),4.13–4.07(m,4H),4.07–4.00(m,6H),3.98–3.91(m,5H),3.89–3.81(m,9H),3.77(d,J＝9.6Hz,1H),3.75–3.70(m,2H),3.59(t,J＝9.6Hz,1H),3.04(t,J＝7.3Hz,2H),2.09(bs,6H,CH₃×2),2.08(bs,3H,Ac),2.07(bs,3H,Ac),1.75–1.66(m,4H,CH₂ linker),1.56–1.49(m,2H,CH₂linker)；¹³C NMR(150MHz,D₂O):δ176.4(C),176.1(C),175.8(C),175.7(C),175.4(C),175.3(C),101.5(CH),101.0(CH),100.1(CH),100.0(CH),98.3(CH),98.1(CH),95.2(CH),94.8(CH),81.6(CH),81.1(CH),78.9(CH),77.8(CH),77.6(CH),77.3(CH),77.1(CH),76.9(CH),76.5(CH),76.4(CH),75.4(CH),74.9(CH),73.4(CH),72.3(CH),72.1(CH),71.13(CH),71.11(CH₂),70.5(CH),70.4(CH),70.34(CH),70.30(CH),70.26(CH),70.1(CH),69.2(CH),68.9(CH),67.5(CH₂),67.3(CH₂),66.8(CH₂),66.3(CH),65.2(CH),54.7(CH),54.3(CH),54.0(CH),40.5(CH₂),29.0(CH₂),27.3(CH₂),23.3(CH₃),22.97(CH₂),22.95(CH₃)；HRMS(ESI):m/z calcd for C₆₁H₈₇N₅O₆₉S₈Na₆([M+6Na–10H]^4–):596.7651,found:596.7657

5-氨戊基(2-脱氧-2-磺酰胺-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛基)-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛基)-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛基)-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛酸酯钠盐(5-Aminopentyl(2-deoxy-2-sulfamido-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronyl)-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronyl)-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronyl)-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronate)(HS8)¹HNMR(600MHz,D₂O):δ5.40–5.27(m,7H),5.10(d,J＝2.5Hz,1H),4.93–4.90(m,1H),4.87–4.85(m,1H),4.89–4.87(m,1H),4.48–4.47(m,1H),4.38–4.31(m,4H),4.27–4.20(m,4H),4.19–4.17(m,1H),4.11–4.00(m,5H),3.91–3.80(m,12H),3.78–3.64(m,11H),3.45(t,J＝9.6Hz,1H),3.26–3.20(m,4H),2.99(t,J＝7.9Hz,1H),1.71–1.59(m,4H,CH₂ linker),1.50–1.39(m,2H,CH₂ linker)；HRMS(ESI):m/z calcdfor C₅₃H₈₄N₅O₆₅S₈([M–5H]^5–):417.2238,found:417.2224

5-氨基戊基(2-脱氧-2-磺酰胺-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛基)-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-β-D-吡喃葡萄糖苷糖醛基)-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛基)-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-2-O-磺酸根-β-D-吡喃葡萄糖苷糖醛酸酯钠盐(5-Aminopentyl(2-deoxy-2-sulfamido-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronyl)-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-β-D-glucopyranosiduronyl)-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronyl)-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-2-O-sulfonato-β-D-glucopyranosiduronate)(HS12)¹H NMR(600MHz,D₂O):δ5.68(d,J＝3.6Hz,1H),5.64(d,J＝3.6Hz,1H),5.49–5.46(m,2H),5.30(bs,2H),4.98(d,J＝1.08Hz,1H),4.94(d,J＝1.0Hz,1H),4.66(d,J＝7.7Hz,1H),4.60(d,J＝10.8Hz,1H),4.44–4.38(m,5H),4.38-4.34(m,2H),4.33–4.28(m,2H),4.26(d,J＝10.0Hz,2H),4.24–4.20(m,3H),4.16(dd,J＝8.70,8.19Hz,1H),4.10–4.06(m,2H),4.05–3.98(m,6H),3.98–3.97(m,1H),3.97–3.92(m,4H),3.92(bs,1H),3.91–3.84(m,4H),3.79(t,J＝9.7Hz,1H),3.75–3.70(m,1H),3.61(t,J＝9.7Hz,1H),3.45(dd,J＝10.7,3.7Hz,1H),3.43–3.38(m,3H),3.05(t,J＝7.4Hz,2H),1.76–1.66(m,4H,CH₂linker),1.59–1.49(m,2H,CH₂ linker)；¹³C NMR(150MHz,D₂O):δ176.4(C),176.1(C),175.6(C),101.6(CH),101.0(CH),99.9(CH),99.6(CH),97.0(CH),96.7(CH),92.3(CH),92.2(CH),81.1(CH),80.7(CH),78.3(CH),78.0(CH),77.9(CH),77.2(CH),77.0(CH),76.9(CH),76.3(CH),76.1(CH),76.0(CH),74.0(CH),73.8(CH),71.8(CH),71.3(CH),71.1(CH₂),70.8(CH),70.7(CH),70.4(CH),69.8(CH),69.5(CH),69.3(CH),68.7(CH),68.3(CH),68.2(CH),67.14(CH₂),67.07(CH₂),66.5(CH₂),64.0(CH),63.6(CH),55.4(CH),55.2(CH),55.0(CH),40.5(CH₂),29.0(CH₂),27.2(CH₂),23.0(CH₂)

5-氨戊基(2-脱氧-2-磺酰胺-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛基)-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛基)-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛基)-(1→4)-(2-脱氧-2-磺酰胺-6-O-磺酸根-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-2-O-磺酸根-α-L-异吡喃糖苷糖醛酸酯钠盐(5-Aminopentyl(2-deoxy-2-sulfamido-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronyl)-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronyl)-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronyl)-(1→4)-(2-deoxy-2-sulfamido-6-O-sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-2-O-sulfonato-α-L-idopyranosiduronate)(HS6)¹H NMR(600MHz,D₂O):δ5.43–5.36(m 4H),5.24–5.15(m,4H),5.09–5.04(m,2H),4.76–4.75(m,2H),4.48–4.46(m,1H),4.43–4.29(m,7H),4.28–4.15(m,9H),4.12–3.95(m,8H),3.83–3.71(m,5H),3.69–3.60(m,5H),3.54(t,J＝9.4Hz,1H),3.29–3.19(m,4H),3.01–2.93(m,2H),1.69–1.51(m,4H),1.47–1.39(m,2H)；¹³C NMR(150MHz,D₂O):δ99.0(CH),97.7(CH),97.3(CH),97.2(CH),96.8(CH),76.4(CH),76.3(CH),76.2(CH),76.1(CH),76.0(CH),75.9(CH),75.8(CH),75.4(CH),68.9(CH),68.8(CH),68.6(CH),68.2(CH₂),66.4(CH₂),66.3(CH₂),57.9(CH),39.4(CH₂),27.8(CH₂),26.2(CH₂),22.2(CH₂)；HRMS(ESI):m/z calcd forC₅₃H₇₃N₅O₇₇S₁₂Na₄H₁₂([M+4Na–9H]^5–):498.7747,found:498.7736

实验例2：实验例1的硫酸化八糖可诱导轴突生长

本实验例则评估实验例1的HS1、HS6、HS10及HS14恢复营养不良性末端球(dystrophic endball)的能力。结果发现HS6、HS10及HS14的八糖能够诱导RPTPσ的磷酸化作用(图1(a))，更进一步发现HS16及HS14可防止成人DRG神经元形成营养不良性末端球，并促使这些神经元穿过蛋白聚糖梯度(图1(b))。进入蛋白聚糖环状边缘的轴突，有接近一半可穿过蛋白聚糖梯度的环状边缘(图1(c)左图)，此结果可以与经软骨素酶(chondroitinase)ABC(C-ABC)酶切的软骨素硫酸盐(CS)的结果作为对照(图1(c)右图)。

应当理解的是，前述对实施方式的描述仅是以实施例的方式给出，且本领域所属技术领域中具有通常知识者可进行各种修改。以上说明书、实施例及实验结果提供本发明的例示性实施方式的结构与用途的完整描述。虽然上文实施方式中公开了本发明的各种具体实施例，然其并非用以限定本发明，本发明所属技术领域中具有通常知识者，在不悖离本发明的原理与精神的情形下，当可对其进行各种更改与修饰，因此本发明的保护范围当以随附权利要求书所界定者为准。

Claims

1.一种如式(I)的硫酸化八糖，或其药学上可接受的盐类、溶剂化物或酯类：

其中R¹是-NHAc或–NHSO₃H；R²及R³个别是H或–SO₃H。

2.如权利要求1所述的硫酸化八糖，其中R¹是–NHAc，且R²及R³个别是–SO₃H。

3.如权利要求1所述的硫酸化八糖，其中R¹是–NHSO₃H，R²是H，且R³是–SO₃H。

4.如权利要求1所述的硫酸化八糖，其中R¹是–NHSO₃H，且R²及R³个别是–SO₃H。

5.如权利要求1所述的硫酸化八糖，其中R¹是–NHSO₃H，且R²及R³个别是H。

6.一种如权利要求1所述的式(I)硫酸化八糖在制备一药物中的用途，其中所述药物是用以诱导一神经元的生长(outgrowth)，其中所述式(I)硫酸化八糖是与受体型蛋白酪氨酸磷酸酶σ(receptor-type protein tyrosine phosphataseσ，RPTPσ)结合。

7.如权利要求6所述的用途，其中在所述式(I)硫酸化八糖中，R¹是–NHAc；且R²及R³个别是–SO₃H。

8.如权利要求6所述的用途，其中在所述式(I)硫酸化八糖中，R¹是–NHSO₃H，R²是H，且R³是–SO₃H。

9.如权利要求6所述的用途，其中在所述式(I)硫酸化八糖中，R¹是–NHSO₃H，且R²及R³个别是–SO₃H。

10.如权利要求6所述的用途，其中在所述式(I)硫酸化八糖中，R¹是–NHSO₃H，且R²及R³个别是H。

11.一种如权利要求1所述的式(I)硫酸化八糖在制备一药物中的用途，其中所述药物是治疗神经元损伤或与细胞自噬通量中断(disrupted autophagy flux)相关的疾病。

12.如权利要求11所述的用途，其中在所述式(I)硫酸化八糖中，R¹是–NHAc，且R²及R³个别是–SO₃H。

13.如权利要求11所述的用途，其中所述式(I)硫酸化八糖中，R¹是–NHSO₃H，R²是H，且R³是–SO₃H。

14.如权利要求11所述的用途，其中所述与细胞自噬通量中断相关的疾病是癌症或神经退行性疾病。

15.如权利要求14所述的用途，其中所述神经退行性疾病是肌肉萎缩性脊髓侧索硬化症、阿兹海默症、牛海绵状脑病、库贾氏症、额颞叶变性、亨丁顿氏症、路易氏体痴呆症、多发性硬化症、帕金森氏症或匹克症。

16.如权利要求14所述的用途，其中所述癌症是选自由膀胱癌、骨癌、骨髓癌、脑癌、乳腺癌、胆管癌、大肠癌、食道癌、胃肠癌、齿龈癌、头癌、肾癌、肝癌、肺癌、鼻咽癌、血癌、颈癌、卵巢癌、前列腺癌、皮肤癌、胃癌、睪丸癌、舌癌以及子宫癌所组成的群组。

17.一种诱导神经元生长的方法，包括以下步骤：使神经元与一有效量的权利要求1所述的硫酸化八糖接触，其中，前述硫酸化八糖会与受体型蛋白酪氨酸磷酸酶σ(receptor-type protein tyrosine phosphataseσ，RPTPσ)结合。

18.如权利要求17所述的方法，其中在式(I)的硫酸化八糖中，R¹是–NHAc，且R²及R³个别是–SO₃H。

19.如权利要求17所述的方法，其中在式(I)的硫酸化八糖中，R¹是–NHSO₃H，R²是H，且R³是–SO₃H。

20.一种治疗神经元损伤或是与细胞自噬通量中断相关的疾病的方法，包括以下步骤：对一亟需治疗的个体施予一有效量的式(I)的硫酸化八糖，以诱导一受损神经元生长。

21.如权利要求20所述的方法，其中在式(I)的硫酸化八糖中，R¹是–NHAc，且R²及R³个别是–SO₃H。

22.如权利要求17所述的方法，其中在式(I)的硫酸化八糖中，R¹是–NHSO₃H，R²是H，且R³是–SO₃H。

23.如权利要求20所述的方法，其中与一细胞自噬通量中断相关的疾病是癌症或是神经退行性疾病。

24.如权利要求23所述的方法，其中所述神经退行性疾病是肌肉萎缩性脊髓侧索硬化症、阿兹海默症、牛海绵状脑病、库贾氏症、额颞叶变性、亨丁顿氏症、路易氏体痴呆症、多发性硬化症、帕金森氏症或匹克症。

25.如权利要求23所述的方法，其中所述癌症是膀胱癌、骨癌、骨髓癌、脑癌、乳腺癌、胆管癌(cholangiocarcinoma)、大肠癌、食道癌、胃肠癌、齿龈癌(gumcancer)、头癌、肾癌、肝癌、肺癌、鼻咽癌、血癌、颈癌、卵巢癌、前列腺癌、皮肤癌、胃癌、睪丸癌、舌癌或子宫癌。