JP2016519081A - ヘパリンと結合体化した抗トロンビンβに対するモノクローナル抗体 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、PCT国際特許出願として2014年3月14日に提出され、2013年3月14日に提出された米国仮特許出願第61/784,590号に対する優先権を主張する。この出願の全開示は、それ自体において参考によって組み込まれる。
本出願は、2014年3月14日に作成され「配列−LISTING−17207.0006WOU2」と題された、65.1キロバイト(KB)のサイズを有するtxtファイルとしての電子フォーマットにおける配列表を含む。txtファイル「配列−LISTING−17207.0006WOU2」の内容は、本書中で参考によって組み込まれる。
本明細書を解釈する目的のために、以下の定義を適用する。以下に示す何らかの事象が、本書中で参考によって組み込まれる任意の文書を含め何らかの他の文書における語と矛盾する場合、(例えば、その用語が元々使用された文書において)反する意味が明らかに意図されない限り、以下に示す定義が、本書及びその添付特許請求の範囲を解釈する目的で常に支配する。
血友病においてホメオスタシスが調節解除されている場合、又は創傷がホメオスタシスの一時的な欠損をもたらしている外傷患者の場合の出血障害が、ATインヒビターによって処置され得る。抗体その抗原結合断片、及び他のAT特異的タンパク質スキャフォールドが、ATタンパク質機能のサブセットを阻害し他を保持する標的特異性を提供するために、使用され得る。ATβ(<12ug/ml)対ATα(120ug/ml)の血漿濃度における少なくとも10倍の相違があると仮定すると、何らかの潜在的ATβインヒビター治療の特異性の増大は、過剰なATαの高い循環の存在下でATβ機能をブロックすることに役立つ。ATβの抗凝固機能をブロックするATβ特異的抗体は、出血障害を有する患者のための治療として使用され得る。出血障害の例としては、血友病、インヒビター保有血友病患者、外傷誘発型凝固障害、ATによる敗血症処置の間の重症な出血患者、例えば移植、心臓手術、整形手術などの待機的手術からもたらされる出血、及び月経過多による過剰な出血が挙げられる。長い循環半減期を有する抗ATβH抗体は、血友病のような慢性疾患を処置する際に有用であり得る。より短い半減期を有するATβH抗体断片又はATβH結合タンパク質スキャフォールドは、急な使用(例えば、外傷における治療的使用)のためにより有効であり得る。ATβH結合抗体は、ヒト抗体ライブラリーを、ヘパリンとの複合体におけるヒトATβに対してパニングしてスクリーニングすることにより、同定される。同定された抗体は、ヒトATβHへの結合を示す。各単離されたモノクローナル抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を、配列決定し、そのCDR領域を、同定した。ATβH特異的モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖可変領域に対応する配列識別子の数(「配列番号」)を、表1Aにまとめる。
(a)配列番号2のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号1のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域;
(c)配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号5のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域;又は
(d)配列番号8のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号7のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域;又は
(e)配列番号10のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号9のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域。
(a)配列番号21、26及び31を含むアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、及び配列番号36、41及び46を含むアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
(b)配列番号22、27及び32を含むアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、及び配列番号37、42及び47を含むアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
(c)配列番号23、28及び33を含むアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、及び配列番号38、43及び48を含むアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
(d)配列番号24、29及び34を含むアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、及び配列番号39、44及び49を含むアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;
(e)配列番号25、30及び35を含むアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、及び配列番号40、45及び50を含むアミノ酸配列を含む重鎖可変領域。
幾つかの実施形態において、この抗体は、例えば、ATβHに対する親和性を増大するために、ATαに対する親和性をさらに低減させるために、異なる種との交差反応性を改善するために、又はATβHのブロッキング活性を改善するために、パニングされ、スクリーニングされて、最適化されてもよい。このような最適化は、例えば、この抗体のCDR又はCDRに非常に近接したアミノ酸残基、すなわちCDRに隣接した約3又は4残基の、部位飽和突然変異誘発を用いて実施され得る。
また、ヒトATβHの予測されるエピトープに結合し得る単離されたモノクローナル抗体も提供され、ここで、このエピトープは、図11において示されるヒトATβH由来の1以上の残基を含む。
また、本書中で記載される任意のモノクローナル抗体をコードする単離された核酸分子も、提供される。従って、ヒトATβHに結合する抗体をコードする単離された核酸分子が、提供される。表3は、幾つかの抗ATβH抗体のヌクレオチド配列を示す。
モノクローナル抗体は、本実施形態の1つに従うモノクローナル抗体の可変領域をコードするヌクレオチド配列を、宿主細胞において組換え的に発現することにより、産生され得る。発現ベクターの助けにより、このヌクレオチド配列を含む核酸はトランスフェクトされ、産生のために好適な宿主細胞において発現される。従って、ヒトATβHに結合するモノクローナル抗体を産生するための例示的な方法は、以下を含む:(A)モノクローナル抗体をコードする核酸分子を宿主細胞内にトランスフェクトすること;(b)この宿主細胞を培養して、この宿主細胞においてモノクローナル抗体を発現させること、及び(c)この産生されたモノクローナル抗体を、単離し精製してもよく、ここで、この核酸分子は、モノクローナル抗体をコードするヌクレオチド配列を含む。
抗体は、6の重鎖及び軽鎖CDRに配置されるアミノ酸残基を通して、優勢に標的抗原に対して相互作用する。この理由のために、CDR内のアミノ酸配列は、CDR外の配列よりも、個々の抗体間で多様に異なる。CDR配列は、殆どの抗体−抗原相互作用に反応性であるので、種々の特性を有する種々の抗体由来のフレームワーク配列上にグラフトされた特異的な天然に存在する抗体からCDR配列を含む発現ベクターを構築することにより、天然に存在する抗体に特異的な特性を模倣する組換え抗体を発現することができる(例えば、Riechmann,L.et al.,1998,Nature 332:323−327;Jones,P.et al.,1986,Nature 321:522−525;及びQueen,C.et al.,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86:10029−10033)。このようなフレームワーク配列は、生殖系列抗体遺伝子配列を含む公のDNAデータベースから得られ得る。これらの生殖系列配列は、完全に集合した可変遺伝子を含まず、B細胞成熟の間にV(D)J結合によって形成されるので、成熟抗体遺伝子配列とは異なる。元の抗体の結合特性と類似の結合特性を有するインタクトな組換え抗体を再現するために、特定の抗体のDNA配列全体を得る必要はない(例えば、WO 99/45962)。
抗ATβH mAbの凝固促進効力を、種々のアッセイを用いて調査した。
また、治療有効量の抗ATβHモノクローナル抗体及び製薬的に許容可能なキャリアを含む製薬組成物が、提供される。「製薬的に許容可能なキャリア」は、本書中で使用される場合、調製物を処方又は安定化を助けるために、活性成分に加えられ得、患者に有害な毒物学的効果をもたらさない物質をいう。このようなキャリアの例は、当業者に周知であり、これらとしては、水、マルトース若しくはショ糖などの糖、アルブミン、塩化ナトリウムなどの塩などが挙げられる。他のキャリアは、例えば、E.W.MartinによるRemington’s Pharmaceutical Sciencesに記載される。このような組成物は、治療有効量の少なくとも1つのモノクローナル抗体を含む。
モノクローナル抗体は、凝固における遺伝的及び後天的な欠損又は不全を処置するための治療目的のために使用され得る。例えば、上述の実施形態において、モノクローナル抗体は、第Xa因子又は第IIa因子を含み得る基質と共に、ATβHの相互作用をブロックするために使用され得る。このモノクローナル抗体は、血小板減少症、血小板障害及び出血障害などの止血の障害(例えば、血友病A、血友病B及び血友病C)の処置における治療的用途を有する。このような障害は、治療有効量の抗ATβHモノクローナル抗体を、それを必要とする患者に投与することによって処置され得る。モノクローナル抗体はまた、外傷及び出血性卒中などの制御不能な出血の処置においても、治療的用途を有する。従って、また、必要とする患者に、治療有効量の抗ATβHモノクローナル抗体を投与することを含む、出血時間を短くするための方法も、提供される。
[実施例1]
ヒト及びウサギのATα及びATβの精製
ATα及びATβを、ヒト及びウサギの血漿から、以前に記載された方法に従うヘパリン−セファロース上の親和性クロマトグラフィー(Carlson and Atencio 1982;Peterson and Blackburn 1985)によって、Enzyme Research laboratory(South Bend,IN)において精製した。簡潔には、硫酸デキストラン/塩化カルシウムからの上清を、ヘパリン−セファロース親和性カラム(Pharmacia)に適用した。ATα及びATβを、NaCl勾配によって分離した:ATα及びATβを、それぞれ0.8M及び1.3M NaClにて溶出した。アニオン交換クロマトグラフィー(HiTrap−Q,Pharmacia)を、ATβのさらなる精製のために使用した。ATα及びATβの純度及びグリカンプロフィールを、タンパク質SDS−PAGE及びLC−MSによって評価した。
質量分析による、ATα及びATβにおけるグリカンの数及び位置の決定
異なる数のグリカンに起因して、duo−ESI(又はnano ChipCube)供給源、MassHunter獲得ソフトウェア及びBioconfirmを含む定性分析ソフトウェアを備えたAgilent 6520 LC−MSシステムにより、ATα及びATβを、その質量に基づいて分類した。トリプシン及びArg−cによりタンパク質が消化されるボトムアップ法、及びその後の、グリコシル化及びモノグリコシル化ペプチド配列を同定するための標的MSMSにより、グリコシル化部位を決定した。データを、2つの実験において収集した:断片化電圧175v及び430v。
AT抗原ビオチン化
ヒト及びウサギのATα及びATβを、NHS−ビオチンにより、表面リシン残基にてビオチンで標識した。リシンビオチン化のために、タンパク質を、まずPBS/Ca++緩衝液(Life Technologies Corporation,Carlsbad,CA)中で脱塩し、ビオチン化反応に対して阻害性であり得る何らかのアミンを除去した。脱塩タンパク質の濃度を、OD280により、NanoDropにて決定した。ついで、タンパク質を、1時間にわたって室温(RT)にて、1:5及び/又は1:3のモル比のAT:NHS−ビオチン(すなわち、過剰量のビオチン)にてスルホ−NHS−ビオチン(Pierce Thermo Scientific,Rockford,IL)と共に、インキュベートした。遊離のビオチンを、一晩のPBS/Ca++緩衝液中への透析によって除去した。ビオチン化タンパク質におけるビオチオンの量を、Biotin Quantitation Kit(Pierce Thermo Scientific,Rockford,IL)を用いて定量した。ビオチン化ATα及びATβを、SDS−PAGEによって分析し、ビオチン化を、ストレプトアビジン−HRP(Pierce Thermo Scientific,Rockford,IL)をプローブとして用いるウェスタンブロット分析によって確認した。ビオチン化ATの機能的活性を、FXa阻害アッセイによって評価した。ビオチン化ATα及びATβと非ビオチン化ATα及びATβとの比較において、ビオチン化後のAT阻害活性には、わずかな低下しか観察されなかった。このことは、このようにして調製されたビオチン化ATβ及びATαは、選択的抗凝固ブロッカーを代表し、選択的抗凝固ブロッカーとしてATβH結合剤についてのパニングにおいて使用され得る。
ファージディスプレイ及びパニングによる、ヒトモノクローナル抗体発見
ヒトFabライブラリー(Dyax Fab310)からATβHに対して特異的なFabを発見するために、四腕パニング戦略を設計した。このライブラリーを、まず、ビオチン化ヘパリン/フォンダパリヌクス結合ATα及びビオチン化ATαで枯渇させ、次いで、ヘパリン/フォンダパリヌクス結合ATβ及びビオチン化ATβに対して、それぞれストレプトアビジンビーズ上でパニングした。パニングの各回それぞれについて、ヘパリン結合ATα(ATαH)を、競合相手として結合緩衝液中に含めた。活性型立体構造(ヘパリン結合形態)にhATβを保つため、3回のパニングの全ての回において、ヘパリンを、洗浄緩衝液に加えた。パニングの後、プールしたクローンを、hATβ及びhATβH特異的結合についてスクリーニングし、hATαについてELISAによって逆スクリーニングした。これらのクローンをまた、ウサギATαを上回るウサギATβに対する差次的結合について試験した。hATβH及びrATβHの両方に対して、hATα及びrATαへのそれを上回る差次的結合を示すクローンを、さらにhATβを加えたFXa脱阻害アッセイに供した。陽性のヒット(Fab)を、IgG1に再フォーマットし、HEK293細胞中で発現させ、プロテインAカラムによって精製した。これらの精製IgG1を、TGAアッセイ(トロンビン産生アッセイ)及びdPT(希釈プロトロンビン時間)アッセイについてAT枯渇ヒト血漿及びhemA患者血漿において広く試験し、凝固時間を測定した。
ELISA(酵素結合免疫吸着測定法)
PBS中の2μg/mlのビオチン化AT抗原を、ストレプトアビジンマイクロプレート(Greiner,781997)上に、ヘパリン(50ug/ml,ヘパリン−ナトリウム−5000,Apotheke,Fa.Ratiopharm)含有又は非含有でコーティングした。4℃で一晩の抗原コーティング後、プレートを、PBST+/−ヘパリンで洗浄し、PBST+/−ヘパリン中5%乳にて37℃で1時間にわたってブロックした。ブロック緩衝液の除去後、次いで、ブロッキング緩衝液中(PBST+/−ヘパリン中5%乳)20ug/ml Fab又は4ug/ml IgGをプレートに加え、プレートを、室温で1時間にわたってインキュベートした。次いで、プレートを3回洗浄した。ブロック緩衝液中抗ヒトIgG POD(Sigma,A0170)をプレートに加え、次いでプレートを、室温で30分間にわたってインキュベートした。Amplex red(In vitrogen,Cat#A22170)を、検出のために、1:1000にてH2O2と共に用いた。30分間のインキュベーション後、プレートを、Ex535、Em 590で、蛍光プレートリーダーにおいて読み取った。
FXa脱阻害アッセイ−ヘパリン含有AT
ヘパリンを、ATβ又はATαと共にインキュベートし、安定なATH 複合体を形成した。次いで、抗体を、ATβH又はATαH複合体に加えた。その間に、10μlの200ng/ml FXa(HTI)及び20μlの50μg/ml Fluophen FXa蛍光発生基質(Hyphen Biomed)を、別個のプレートにおいて混合した。抗体−ATH混合物を、FXa/基質溶液に迅速に加え、蛍光運動測定を、Ex360nm及びEm465nmにて直ちに開始した。全ての必要な希釈を、100mM NaCl、20mM Tris、2.5mM CaCl2、0,1% BSA、0,1% PEG8000中で行う。
FVIII不全ヒト血漿におけるトロンビン産生アッセイ(TGA)
ATβH抗体の1:2連続希釈を、1uMから開始し、0.015uMの終濃度まで、HemAヒト血漿中で作製した。ヘパリンを、各抗体溶液中に、50nMの終濃度にて加えた。次いで、80ulの抗体−ヘパリン−血漿混合物を、各ウェルに20ulの 再構成PPP試薬及びキャリブレーターを含む96ウェルTGAプレートに加えた。プレートを、TGA装置内に配置し、この機械は、自動的に、各ウェル中に20ulのFluCa(Fluo基質+CaCl2)を分配した。この反応を、60分間行わせた。血漿のみを、陰性対照として使用した。
それぞれATα及びATβを加えたAT枯渇ヒト血漿中でのトロンビン産生アッセイ(TGA)
抗体を、15nmのATα又はATβを加えたヒトAT欠損血漿に加えた。次いで、ヘパリンを、各反応液中に、50nMの終濃度にてピペットで加えた。ATH特定基抗体、ヘパリン及びATα又はATβを含む80ulの血漿サンプルを、20ulのPPP試薬又はキャリブレーターを含む96ウェルTGAプレートのウェル内に加えた。プレートを、TGA装置内に配置し、次いで、各ウェル中に20ulのFluCa(Fluo基質+CaCl2)を分配した。反応を、60分間にわたって行わせ、続けた。
ヒトhemA血漿及びAT不全血漿における希釈プロトロンビン時間アッセイ(dPT)
抗ATβH hmAbの連続希釈を、hemA血漿中で、250nMにて開始し、0.1U/mLのヘパリンを加えて作製した。抗体、血漿及びヘパリンの混合物を、室温で20〜30分間にわたってインキュベートした。次いで、50uLのこの混合物を、50uLの希釈したInnovin(1/2000)(Dade Behring)に加え、4分間37℃にてインキュベートし、その後、50uLの25mM CaCl2(HemSil)を添加した。dPT試験プログラムを、ACL Top凝固計において、360秒の獲得時間で設定した。AT不全血漿におけるdTPについて、AT−DPに、ATα又はATβのいずれかを、0.2uMの終濃度になるように、0.1U/mlのヘパリンと共に加えた。抗ATβH mAbを、AT−DP/ヘパリン/ATα又はAT−DP/ヘパリン/ATβ混合物に、0.25uMの終濃度になるように加え、室温で20〜30分間にわたってインキュベートした。各反応物について、50uLの血漿/抗体/ヘパリン混合物を、50uLの希釈したInnovinに加え(1/4000)、4分間37℃にてインキュベートし、その後、50uLの25mM CaCl2(HemSil)を、上述のように加えた。
抗体精製
事前洗浄したプロテインAアガロースビーズを、結合緩衝液中の抗体(容量比:1:1)と共に回転させながら4℃で一晩インキュベートした。次いで、ビーズを、カラム内に詰め、1×PBSにてO.D.280<0.05まで洗浄した。残った溶液を捨てた。抗体を、溶出緩衝液で溶出し、中性化緩衝液を含むチューブ内に収集した。溶出した画分を、1×PBSに対して、少なくとも2回緩衝液交換を行って、一晩、4℃にて透析した。IgG濃度を、280nmにて、nanodropによって測定した。この抗体純度を、ELISA、SDS−PAGE又はSSCのいずれかによって試験した。
Biacoreによる抗体結合親和性研究
抗体親和性測定を、Biacore T100又はT200処理ユニットにおいて行った。抗ヒトFc 抗体又はストレプトアビジンを、CM5チップ上に固定化した。hATβH又はビオチン化hmAb抗体を、チップ上に注入し、捕捉した。ヘパリン含有/非含有の種々の濃度のATβ又はATαを、注入した。AT及びATHの抗体への結合のみが、結合定数を生じる。結合結果を、平衡解離定数(KD)として、ナノモルで報告する。AT/ヘパリン複合体を分析した場合、1uMのヘパリンが、ランニング緩衝液に含まれる。
ヘパリン化ウサギ出血モデル
ヘパリン化ウサギ出血モデルの試験計画を、図13に概説する。ウサギ頸静脈(右静脈:静脈うっ血;左静脈:カニューレ挿入)の調製後、PBS中の低分子量ヘパリン(LMWH)を、0時点でウサギにIV投与(1800U/kg)した。10分間後、試験物質を投与した。実験群は、以下を含む:ビヒクル、PBS;陽性対照、硫酸プロタミン、(28mg/kg IV);陰性対照、M14 IgG2;処置:30mg/kg;TPP2803,3mg/kg;TPP2803,30mg/kg。試験物質の投与の5分間後、耳穿刺(3〜5mM)を実施し、インサイチュの血栓形成(うっ血)を、30分間にわたってモニタリングした。切開からの血液を、出血が止まるまで、濾紙によって15秒毎に除去した。
Claims (30)
- 抗トロンビン(β)ヘパリン複合体(ATβH)に結合可能であるモノクローナル抗体であって、ここで、前記抗体の重鎖は、配列番号2のアミノ酸31〜35(AYRMG)のCDR1配列、配列番号2のアミノ酸50〜66(RIYSSGGRTRYADSVKG)のCDR2配列、及び配列番号2のアミノ酸97〜114(AREKASDLSGSFSEALDY)のCDR3配列を含み;並びに前記抗体の軽鎖は、配列番号1のアミノ酸24〜34(QGDSLRSYYAS)のCDR1配列、配列番号1のアミノ酸50〜56(GKNNRPS)のCDR2配列;及び配列番号1のアミノ酸89〜99(NSRDSSGNHLV)のCDR3配列を含む、前記抗体。
- ATβHに結合可能であるモノクローナル抗体であって、ここで、前記抗体の重鎖は、配列番号4のアミノ酸31〜35(KYKMD)のCDR1配列、配列番号4のアミノ酸50〜66(RIGPSGGKTM YADSVKG)のCDR2配列、及び配列番号4のアミノ酸97〜114(AREKASDLSG TYSEALDY)のCDR3配列を含み;並びに、前記抗体の軽鎖は、配列番号3のアミノ酸26〜37(RASQSVSSSYLA)のCDR1配列、配列番号3のアミノ酸53〜59(GASSRAT)のCDR2配列、及び配列番号3のアミノ酸92〜99(QQYGSSRT)のCDR3配列を含む、前記抗体。
- ATβHに結合可能であるモノクローナル抗体であって、ここで、前記抗体の重鎖は、配列番号6のアミノ酸31〜35(KYRMD)のCDR1配列、配列番号6のアミノ酸50〜66(RIGPSGGKTT YADSVKG)のCDR2配列、及び配列番号6のアミノ酸97〜114(AREKTSDLSG SYSEALDY)のCDR3配列を含み;並びに、前記抗体の軽鎖は、配列番号5のアミノ酸26〜36(RASQNINRNLA)のCDR1配列、配列番号5のアミノ酸52〜58(TASTRAP)のCDR2配列、及び配列番号6のアミノ酸91〜99(QQYASPPRT)のCDR3配列を含む、前記抗体。
- ATβHに結合可能であるモノクローナル抗体であって、ここで、前記抗体の重鎖は、配列番号8のアミノ酸31〜35(RYAMY)のCDR1配列、配列番号8のアミノ酸50〜66(RISPSGGKTH YADSVKG)のCDR2配列、及び配列番号8のアミノ酸97〜115(ARLSQTGYYP HYHYYGMDV)のCDR3配列を含み;並びに、前記抗体の軽鎖は、配列番号7のアミノ酸26〜37(RASQRVSSSYLT)のCDR1配列、配列番号7のアミノ酸53〜59(GASSRAT)のCDR2配列;及び配列番号7のアミノ酸92〜101(QQYDSTPPLT)のCDR3
配列を含む、前記抗体。 - ATβHに結合可能であるモノクローナル抗体であって、ここで、前記抗体の重鎖は、配列番号10のアミノ酸31〜35(SYRMS)のCDR1配列、配列番号10のアミノ酸50〜66(RIYSSGGRTR YADSVKG)のCDR2配列、及び配列番号10のアミノ酸97〜114(ARELKASDLSG SFSEALDY)のCDR3配列;並びに、前記抗体の軽鎖は、配列番号9のアミノ酸23〜33(QGDSLRSYYAS)のCDR1配列、配列番号9のアミノ酸49〜55(GKNNRPS)のCDR2配列;並びに配列番号9のアミノ酸88〜96(NSRDSSGNH)のCDR3配列を含む、前記抗体。
- ATβHに結合して抗凝血活性を阻害する単離されたモノクローナル抗体であって、配列番号2、4、6、8、及び10、並びに配列番号2、4、6、8、及び10に対し実質的な相同性を有するアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、前記抗体。
- 配列番号1、3、5、7、及び9、並びに配列番号1、3、5、7、及び9に対し実質的な相同性を有するアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をさらに含む、請求項6に記載の抗体。
- ATβHに結合して抗凝血活性を阻害する単離されたモノクローナル抗体であって、配列番号1、3、5、7、及び9、並びに配列番号1、3、5、7、及び9に対し実質的な相同性を有するアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をさらに含む、前記抗体。
- ATβHに結合して抗凝血活性を阻害する単離されたモノクローナル抗体であって、配列番号46、47、48、49及び50からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCDR3を含む、前記抗体。
- 請求項9に記載の単離されたモノクローナル抗体であって、以下:(a)配列番号36、37、38、39、及び40からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCDR1;(b)配列番号41、42、43、44、及び45からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCDR2;又は(c)配列番号36、37、38、39、及び40からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCDR1並びに配列番号41、42、43、44、及び45からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCDR2の両方、をさらに含む前記抗体。
- ATβHに結合して抗凝血活性を阻害する単離されたモノクローナル抗体であって、配列番号31、32、33、34、及び35からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCDR3を含む、前記抗体。
- 請求項11に記載の単離されたモノクローナル抗体であって、以下:(a)配列番号21、22、23、24、及び25からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCDR1;(b)配列番号26、27、28、29、及び30からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCDR2;又は(c)配列番号21、22、23、24、及び25からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCDR1並びに配列番号26、27、28、29、及び30からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCDR2の両方、をさらに含む前記抗体。
- ATβHの活性部位に結合する、単離されたモノクローナル抗体。
- ATβHに結合して抗凝固活性を提供するモノクローナル抗体であって、前記単離されたモノクローナル抗体は、ATに対する最小限の結合を示し、前記抗体は、完全ヒト抗体である、前記抗体。
- 前記抗体は、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、分泌型IgA、IgD、IgE抗体、及び抗体断片からなる群より選択される、請求項1〜14のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体。
- ヒトATβHに結合する、単離されたモノクローナル抗体。
- 前記抗体は、非ヒト種のATβHにさらに結合する、請求項16に記載の単離されたモノクローナル抗体。
- 前記抗体の存在下で、血液凝固時間が短くなる、請求項1〜14のいずれか1項に記載の単離されたモノクローナル抗体。
- 請求項1〜14のいずれか1項に記載の単離されたモノクローナル抗体と競合する抗体。
- 治療有効量の請求項1〜14のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体、及び製薬的に許容可能なキャリアを含む医薬組成物。
- 治療有効量の請求項1〜14のいずれか1項に記載の医薬組成物を患者に投与することを含む、遺伝性又は後天性の凝固における不全を処置するための方法。
- 治療有効量の請求項20に記載の医薬組成物を患者に投与することを含む、凝固障害を処置するための方法。
- 前記凝固障害は、血友病A、血友病B又は血友病Cである、請求項21又は22に記載の方法。
- 前記凝集障害は、外傷誘発型凝固障害及び重症の出血からなる群より選択される、請求項21又は22に記載の方法。
- 凝固因子を投与することをさらに含む、請求項22に記載の方法。
- 前記凝固因子は、因子VIIa、因子VIII及び因子IXからなる群より選択される、請求項25に記載の方法。
- 治療有効量の請求項20に記載の医薬組成物を患者に投与することを含む、出血時間を短くするための方法。
- ATβHに結合して抗凝血活性を阻害する抗体をコードする単離された核酸分子であって、前記抗体は、配列番号1、3、5、7、及び9からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、前記核酸分子。
- ATβHに結合して抗凝血活性を阻害する抗体をコードする単離された核酸分子であって、前記抗体は、配列番号2、4、6、8、及び10からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、前記核酸分子。
- 前記凝固における不全は、血友病A、血友病B又は血友病Cである、請求項21に記載の方法。
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